RU1837869C

RU1837869C - Способ получени дисперсии полипептидов дл интраназольного применени

Info

Publication number: RU1837869C
Application number: SU884356382A
Authority: RU
Inventors: Эдгар Хансен Филип; Роберт Серенсен Андерс
Original assignee: Ново Нордиск А/С
Priority date: 1986-12-16
Filing date: 1988-08-15
Publication date: 1993-08-30
Also published as: EP0272097B1; FI94024B; CA1326210C; NO883627D0; HU209247B; CN87108340A; PT86370B; NZ222907A; PT86370A; AU606121B2; IL84835A; IE873408L; EP0272097A3; EP0272097A2; FI883783L; ES2044957T3; DE3780925T2; IE61110B1; MX9203640A; NO883627L

Abstract

Область использовани : изобретение относитс к области медицины. Цель: предупреждение раздражающего действи . Сущность изобретени : активное вещество - полипептид диспергируют в разбавителе , таком как жирное масло, в присутствии фосфолипида такого как фосфатидилхолин (лецитин), 7 з.п.ф-лы, 5 табл.

Description

Насто щее изобретение относитс к сНособу получени новых фармацевтических композиций (форм), предназначенных дг применени через нос.

Предпосылки насто щего изобретени .

В то врем , как неагрессивное применение препарата пр мокишечным или стоматическим способом вл етс безусловно наиболее удобным дл пациента, паренте- льное высвобождение лекарственных пр епаратов вл етс в общем случае самым эффективным, В частности, лекарственные препараты, которые дезактивируютс в же- луцочно-кишечном тракте или слабо в нем поглощаютс , и лекарственные препараты, которые подвергаютс широкому вовлечена ю в гепатический метаболизм после сто- мгтического применени , в общем случае примен ютс парентерально.

Имеютс очевидные неудобства, св - с парентеральным применением ле- кгрственных препаратов, такие, как необходимость в стерильных средствах дл их высвобождени , боли и раздражени , вызываемые повторными инъекци ми, и потенциальный риск внесени инфекции. Таким образом, ощущаетс необходимость в альтернативных средствах доставки лекарственных препаратов, равных по эффективности парентеральному применению в том смысле, чтобы обойти первый цикл процесса метаболизма. Одной такой потенциально многообещающей альтернативой вл етс применение лекарственных препаратов через нос. Однако, как и в случае с другими способами неагрессивных применений медикаментов, биовосприимчивость препарата после применени в нос в значительной степени не предсказуема и зависит, среди прочего, от химической природы этого препарата.

Так, известно, что прогрестерон и пропра- нолол абсорбируютс из носовой полости таким образом, что при этом обеспечиваютс такие их концентрации в крови, которые почти равны концентраци м при внутривенном введении.

(Л

С

00

ы

XI

со о

ч

со

Известны также другие примеры композиций дл введени через нос фармацевтически активных агентов с молекул рными весами до примерно 1 кД, например, композиции , содержащие зргопептидные алкалоиды , растворенные в водном этаноле, примен емые в форме аэрозолей (патент Швейцарии № 636011), соли фармацевтически активных аминов с жирными кислотами (патент Канады Ns 988652) и катехоламин, суспендированный в жирной кислоте (или сложном эфире), эмульгируемой полиоксиэ- тиленом (Европейска патентна публикаци № 0160501 А).

В последние дес тилети были предложены самые разнообразные (главным образом синтетические) полипептидные лекарственные препараты.. В общем случае, полипептиды примен ли парентерально из- за неполного поглощени в пищеварительном тракте и из-за их нестабильности в нем. В этом видимо заключаетс причина, почему в конкретных исследовани х достатки лекарственных препаратов через нос (в частности полипептидов) в течение последних лет усили были интенсифицированы. Было установлено, что в то врем , как некоторые полипептиды меньших размеров (до примерно 10 аминокислотных остатков) могут вполне эффективно поглощатьс через нос из простых водных композиций, в общем случае биовосприимчивость при применении через нос полипептидов больших размеров становитс неполной и нестабильной, причем этот эффект возрастает с увеличением молекул рного веса (см.обзор Л.Иллума: Archtv for Pharmaci og Cheml,T.94(1987), с. 127-135).

С тем, чтобы преодолеть те недостатки, которые возникают, в частности, при доставке через нос лекарственных препаратов , содержащих полипептиды больших размеров, были предложены дополнительные добавки, самые разнообразные биосовместимые агенты, промотирующие поглощение, или так называемые усилители .

В этой св зи следует указать Европейскую Патентную Публикацию № 0111841 А, в которой описан эффект усилени поглощени желчной кислоты, и патент США № 4476116, в котором предложено использование хелатообразующих агентов таких, как ЭДТК.

Композиции дл применени через нос, предназначенные дл доставки инсулина, были бы, разумеетс в высшей степени предпочтительными дл пациентов-диабетиков , завис щих от инсулина, по сравнению с доступными в насто щее врем

формами дл парентерального применени при условии, что инсулин достаточно эффективно поглощаетс из носовой полости и с посто нной скоростью. Дл таких компози- ций были разработаны самые разнообразные агенты, увеличивающие поглощение, главным образом поверхностно-активные агенты.

В патенте Великобритании N; 1527605

были предложены .ионные, а также неионные поверхностно-активные агенты-усилители , такие, как соли желчной кислоты и простые эфиры высших полиоксиэтилено- вых спиртов в то врем , как применение

5 специального простого эфира высшего по- лиоксиэтиленового спирта, а именно, поли- оксиэтилен-g (лаурилового простого эфира, описано в статье Р.Залцмана и др., Nev England J.of Med.,T.312 (1985) c.1078-1084).

0 Другие усилители, например, соли тауро- дигидрофузидовой кислоты, предложены в патенте США Ns 4548922.

Химическа структура усилителей, известных до насто щего времени, значительно

5 отличаетс от структуры известных составл ющих клеточных мембран, включа тех, что содержатс в носовой полости. Это свойство может быть служит объ снением их тенденции вызывать раздражени носо0 вой полости или даже посто нное воспаление носовой оболочки, в частности, при хроническом применении.

По этой причине можно было бы рассмотреть использование усилителей бо5 лее родственных другим физиологически встречающимс поверхностно-активным агентам такие, как фосфолипиды. Однако, согласно данным, приведенным в патенте Великобритании № 1527605 (см,выше), фос0 фолипиды в широко распространенной смеси лецитинов с длинными цеп ми не про вл ют усиливающее поглощение действием в инсулиновых композици х дл применени через нос.

5 в насто щее врем неожиданно было установлено, что фосфатидилхолины и фос- фатидилэтаноламины со средней длиной цепи значительно ускор ют поглощение через нос фармацевтических активных соеди0 нений, в частности, полипептидов, не причин при этом вреда или раздражений носовой слизистой оболочки. Поглощение через нос также увеличиваетс при использовании форм, в которых жировое масло,

5 например, растительное масло смешивают с фосфолипидом.

Краткое описание изобретени . Предлагаетс способ получени композиции дл применени через нос, содержащей фармацевтически активный агент и

си д

пид

стему, увеличивающую поглощение, ржащую по крайней мере один фосф общей формулы (I):

K-CH-OR

сн-ок

i

мг

Н-СН-0-РСО) (OH)-OR

в которой R и R, которые могут быть как олинаковыми, так и различными, каждый выбирают из группы, состо щей из водоро- дг,алкила,алкенила,алкилкарбонила,алке- нилкарбонила и алкадиенил-алкатриенил- лг и алкатетраенилкарбонила, содержащего дс 14 атомов углерода (общее количество) пси условии, что оба R и R не вл ютс всдородом, a представл ет гидрофильную составл ющую, выбранную из группы, сссто щей из 2(триметиламмонио)этила, 2- алгиноэтила, 2-карбокси-2-аминоэтила, 2,3- дюксипропила и пентаоксициклогексила, содержащих, таким образом, фосфатидило- вь е производные холина (лецитина), этано- ламина, глицерина, серина и инозитов, соответственно. Не об зательно, но предпочтительно , система, увеличивающа по- гл эщение, также содержит жировое масло в CNecn с фосфолипидом (фосфолипидами).

Способ получени композиции включает диспергирование по крайней мере одного фосфолипида общей формулы (I), не об зательно, но предпочтительно смешанного с жировым маслом, в жидком или твердом разбавителе вместе с фармацевтически активным агентом либо в растворе, либо в порошкообразном состо нии, причем вышеупом нутый разбавитель может (не об зательно ) содержать вспомогательные рН -буферирующие, консервирующие и регулирующие осмотическое давление агенты .

Предпочтительные варианты реализации насто щего изобретени и его подробно

э описание.

Предпочтительный подкласс соединений формулы (I) образуют соединени , в которых R и R каждый вл етс ал(илкарбонилом.

Еще один предпочтительный подкласс об эазуют соединени формулы (I), в которой представл ет 2-(триметиламмонио)этил, эти соединени известны под названием ледитины. Еще более предпочтительный подкласс образуют соединени формулы (I), в которой R1 и R каждый представл ет алкилкарбонил или алкил, содержащий от примерно 4 атомов углерода, в предпочтительном варианте до не более 12 атомов

углерода. Самый предпочтительный подкласс соединений формулы (I) образуют соединени , в которых R и R каждый представл ет нонилкарбонил.

Предпочтительным вл етс использование смеси двух фосфолипидов формулы (I), в предпочтительном варианте в весовых пропорци х от 1:10 до 10:1, в более предпочтительном варианте от 1:2 до 2:1. Одним из

этих двух фосфолипидов может быть соединение , в котором R и R оба вл ютс окта- ноилом, деканоилом или лауроилом. Вторым из этих двух фосфолипидов может быть соединение, в котором один из двух

заместителей R и R вл етс водородом, а второй из двух заместителей R и R вл етс октаноилом, деканоилом или дауроилом (додеканоилом).

Примерами предпочтительных соединений формулы (I) вл ютс :

диоктаноил L- а - фосфатидихолин, ди- октил-0-L- а -фосфатиидилхолин, дидекано- ил L- а -фосфатидилхолин, дидецил-0-L- а -фосфатидилхолин, децил-0-L-a -лизофатидилхолин , дилауроил L-a -фосфатилилхо- лин, лауроил L-a -лизофосфатидилхолин.

Получение нескольких соединений формулы (I) было известно ранее, например, Е.К. Роблес и Д. Ван Ден Берг: Biochim

Biophgs.Acta, т.187{1969), стр.520-526. Г.К. Мэнголд и Ф.Палтауф (Редакторы) в книге Липиды простых эфиров, Гл.З, Акад.Пресс 1983 г. Другие соединени формулы (I) могут быть получены аналогичными методами.

Жировое масло, которое не об зательно ввод т в систему увеличени поглощени , вл ющуюс предметом насто щего изобретени , в предпочтительном варианте вл етс растительным маслом, в более

предпочтительном варианте соевым маслом , арахисовым маслом, кокосовым маслом , маисовым маслом, оливковым маслом, подсолнечным маслом или их смес ми, В еще одном предпочтительном варианте реализации насто щего изобретени фармацевтически активным агентом вл етс полипептид.

Одной группой предпочтительных полипептидов вл етс инсулин и производные инсулина, например, инсулин, модфицированный химическими или ферментными методами, или при помощи технологии рекомбинантной ДНК, или смеси таких инсулинов, проинсулина и глюкагина,

Еще одними предпочтительными полипептидами вл ютс паратироидный гормон, антагонист паратироидного гормона, каль- цитомин, вазопрессин, ренин, пролактин, гормон роста, тироидный стимулирующий

гормон, кортикотропин, фактор, высвобождающий кортикотропин, гормон, стимулирующий фолликулы, лютеинизирующий гормон, хорионный гонадотропин, атриаль- ные пептиды, интерферон, плазминогенный активатор ткани, гаммаглобулин, фактор УП, фактор УГ, гормон, высвобождающий гормон роста, соматостатин и холецистоки- ны.

Композиции могут быть получены жидкими , например, предназначенными дл применени в виде струи, или твердыми, например, порошок, предназначенный дл вдыхани . Полученные жидкие композиции такие, например, которые основаны на водных формах, будут в общем случае включать вспомогательные агенты, например, рН-бу- ферирующие системы, и предпочтительном варианте такой буфер, как фосфатный, цит- ратный или ацетатный буфер, консервирующие и регулирующие осмотическое давление агенты, например, глицерин или хлорид натри . Полученные порошкообразные композиции могут содержать фармацевтически активный агент и систему, усиливающую поглощение, в смеси с приемлемыми дл применени через нос порошкообразными разбавител ми или их смеси, например, целлюлозу или ее производные, например, простые эфиры целлюлозы или натрий карбоксиметилцеллюлозу, крахмал, жирную кислоту с длинной цепью или ее соль, например, стеарат алюмини , органический полимер, например, производного акриловой кислоты или неорганические растворители такие, как тальк или диатомова земл . Дл улучшени адгезии порошкообразной композиции со слизистой оболочкой носовой полости может оказатьс необходимым использовать дополнительные добавки абсорбирующих воду полимеров, например, полиэтилен гликол или поливинил пирролидона.

Жидкие композиции, в которых разбавителем вл етс вода могут быть получены при помощи диспергировани системы, увеличивающей поглощение, в водной среде, содержащей фармацевтически активный агент и вспомогательные агенты, диспергирование осуществл ют при помощи любого приема, который в общем случае используют дл суспендировани или эмульгировани , например, при помощи обработки ультразвуком. Регулирование водной фазы вблизи нейтральности (например, с рН в области от примерно 6,5 до примерно 8) может быть осуществлено на любой из подготовительных стадий. В предпочтительном варианте получают микроэмульсии, в которых размер диспергированных частиц или

капель составл ет пор дка 10 нм, при этом облегчаетс их переход через слизистую оболочку носа. Такие микроэмульсии могут быть стерилизованы при помощи фильтрации . Содержание фосфолипида формулы (I) и жирового масла в предпочтительных композици х (формах), вл ющихс предметом насто щего изобретени , измен етс в области от 0,01 до 10% в предпочтительном

0 варианте от 0,5 до 5% (в/о) и от 0,01 до 50%, в предпочтительном варианте от 0,1 до 10% (в/о), соответственно, от всей композиции. Ввиду того факта, что в слизистой оболочке носа содержитс протеазы и петидазы

5 (см.Р.Е. Стрэтфорд и В.Г.Л. Ли. Int.Jeurn.Pharmceutis, т.ЗО (1986), стр.73- 82), может оказатьс желательным ввести биосовместные ингибиторы протеазы и пеп- тидазы в композиции, содержащие пол0 ипептид.

Концентраци фармацевтически активного агента будет разумеетс , зависеть от конкретного выбранного агента, от его эффективности , от сравнени его биовоспри5 имчивости при применении через нос и при применении другими способами, например, при помощи парентеральной инъекции и от необходимой частоты применени вместе с необходимой одной дозой композиции. Та0 кие фармакологические данные могут быть получены при помощи приемов, известных каждому специалисту в этой области, например , в результате экспериментов на животных , например, в терминах индексных

5 величин таких, например, которые оценивают дл композиций инсулина в примерах, приводимых ниже.

Если вз ть инсулин в качестве примера, то его концентраци в композиции, вл ю0 щейс предметом насто щего изобретени , может измен тьс в области от примерно 5 до 1000 международных единиц (М.Е.) на мл, в предпочтительном варианте от 50 до 500 М.Е. на мл.

5 В инсулиновые композиции предпочтительном варианте включают бычий, свиной или человеческий инсулин.

Иллюстрирующий процедурой получе-. ни инсулиновых композиций, вл ющихс

0 предметом насто щего изобретени , в которых разбавителем вл етс вода, вл етс процедура, содержаща растворение инсулина , например, кристаллического цинково- го инсулина, например, высокоочищенного

5 сорта инсулина, предложенного в патенте Великобритании № 1285023, в воде в присутствии кислоты, например, хлористоводородной кислоты. Водный раствор консервирующего агента, например, фено- ла. алкил фенола такого, как крезол, или

метил пэра-оксибензоата получают отдельно , он может содержать агент, обеспечива- ощий изотонность раствора, такой, как лорид натри или глицерин. Кроме того, онсервирующий раствор может содержать уферирующий агент такой, как фосфат на- ри , цитрат натри , ацетат натри или РИС (трис(оксиметил)аминометил) и ингибитор протеазы. Полученный в результате онсервирующий раствор затем смешивают кислым раствором инсулина, а затем до- авл ют основание, например, раствор гид- ата окиси натри , чтобы обеспечить )Н-значение в нейтральной области.

Фосфолипид формулы (I), не об затель- о в смеси с жировым маслом, может быть добавлен в раствор инсулина в виде раство- ia или эмульсии, которую получают при помощи растворени или суспендировани

осфолипида формулы (I) в воде и, если это

необходимо, затем подверга суспензию

бработке ультразвуком перед смешением

раствором инсулина. В качестве альтернаивы раствор или суспензи фосфолипида

может, если это необходимо, содержать бу-

ерирующий агент и концентрирующий

гент. После смешени рН-значение инсуиновой композиции можно обеспечить в

нейтральной области. Наконец, полученный

результате раствор инсулина довод т дс расчетного объема добавлением воды.

Дальнейшие подробности реализации h асто щего изобретени . Композиции, в- ющиес предметом насто щего изобре- ени , можно использовать в любой дозе, в ависимости от устройства, преднэзначен- н ого дл применени через нос. Это устрой- ство может быть сконструировано с точки рени обеспечени оптимальной точности змерений и совместимости его конструк- тивных элементов таких как контейнер, кла- п ан и привод с композиций дл применени через нос и может базироватьс на системе Механического насоса, например, на систе- fjie распылител с фиксированной дозой, или системе аэрозол под давлением. Система аэрозол требует применени распыл ющего агента, который должен быть инертным относительно композиции. Соответствующие распыл ющие агенты могут быть выбраны среди таких газов, как фторуг- лероды, углеводороды, азот и окись азота, или их смеси.

I Дальнейшие подробности реализации насто щего изобретени на практике де- н онстрируютс при помощи приводимых ниже примеров, которые, однако, не следует рассматривать в качестве каких либо ограничений области, охватываемой им.

Исходный инсулиновый материал, используемый в примерах 1-12 содержит примерно 20-30 г цинка на мг азота.

Соевое масло и арахисовое масло вл ютс очищенными сортами, соответствующими сортам U.S.Р. XXI и П.Г.ХУ, соответственно.

Пример 1. 772 мг человеческого инсулина раствор ли в 40 мл 0,02 М растворе хлористоводородной кислоты и добавл ли 1,6 г безводного глицерина. Далее, до объема 80 мл добавл ли дистиллированную воду. рН регулировали на уровне 7,4 при помощи 0,2 М раствора гидрата окиси натри . 1,0 г дидеканоил-L-a -фосфатидилхо- лина раствор ли в 2 мл этанола (96%) и с использованием подкожного шприца инъ- ектировали в 10 мл дистиллированной воды. Полученный в результате мутный раствор подвергали обработке ультразвуком с использованием ультразвукового зонда с высокой энергией в течение 10 минут и полученный в результате коллоидный раствор добавл ли в раствор инсулина при перемешивании , а затем до объема 100 мл добавл ли дистиллированную воду. Эту композицию, содержащую 200 М.Е. (мл инсулина , диспергировали в распылитель, предназначенный дл применени в нос, и затем 100 микролитров примен ли в носовую полость самца кролика NZW. Такую же композицию, но без дидеканоил-L-a -фос- фатидилхолина, также испытывали на кроликах .

В фиксированные моменты времени брали пробы крови из маргинальной ушной вены и определ ли концентрации глюкозы методом гексокиназы.

Были получены следующие результаты (см.табл.1).

Пример 2. 100 мг дидеканоил L- а -фосфатидилхолина раствор ли в 100 мг соевого масла и этот раствор добавл ли в 5 мл 0,01 М буфера фосфата натри , рН 7,4.

Смесь эмульгировали с использованием ультразвуковой обработки, 2 мл инсулино- вого раствора с 400 единицами на мл добавл ли в эту эмульсию и рН обеспечивали на уровне 7,4 затем до объема 10 мл добавл ли воду.

После применени через нос этой композиции кроликам концентрацию глюкозы в крови наблюдали в течение 120 минут. Площадь над кривой, в которой единственные значени концентрации глюкозы в крови выражены в пересчете на проценты от начального значени , оценивали методом треугольника . Далее, индекс рассчитывали по формуле:

Индекс 0,053 х А/О.в которой А - это площадь над кривой дл испытываемой композиции, D - это доза испытываемой композиции, а множитель 0,053 представл ет собой эмпирический множитель, выведенный при подножном применении сильно действующих инсулиновых препарации.

Испытываема таким образом инсули- нова эмульси дл применени через нос имеет индекс 24%.

Аналогична композици , но приготовленна без растительного масла, имела индекс 12-15%.

Примеры 3-12. Композиции из примеров 3-6,8 и 12 получали с использованием тех же приемов, что были описаны в примере 1 в то врем , как композиции из примеров 7 и 9-11 получали по методу из примера 2. В табл.2 используютс следующие сокращени :

ФосфатидилхолинPC

Дидеканолил фосфатилилхолин DDPC Дилауроил фосфатидилхолин DLPC Содержание в процентах приведено в пересчете на вес/объем. Все композиции содержали 80 М.Е./мл инсулина.

Эти данные показывают прекрасные эффекты увеличени поглощени фосфати- дилхолина с ацильными или алкильными группами со средней длиной цепи.

Пример 13. 100 мг дидеканоил L- а -фосфатидилхолина раствор ли в 100 мг соевого масла и раствор затем добавл ли в 5 мл 0,01 М буфера фосфата натри , рН 7,4, содержащего 160 мг глицерина. После эмульгировани смеси при помощи обработки ультразвуком в эмульсию добавл ли 100 мг глюкагона, рН обеспечивали на уровне 7,4 и воду добавл ли до объема 10 мл;

После применени через нос этой композиции кроликам, концентрацию глюкозы в пробах крови определ ли путем вз ти проб из маргинальной ушной вены, при этом использовали метод гексокиназы.

Во времени получали следующие концентрации глюкозы в пробах крови:

Минуты после применени 0 1530 60 120

Глюкагон без системы усилител 107 100 107 113 111

Глюкагон без системы усилител 163 100 144 178 188

Пример 14. Инсулин (4,53 мг) человека размалывают в ступке вместе с а-цикло- декстрином (395,47 мг) и получают препарат с содержанием инсулина в 0,3 МЕ/мг.

Препарат испытывают на модел х с кроликами , в которых кроликов обрабатывают путем введени через нос препарата инсулина (20 мг/животное). Спуст 0,15,30,60 и +20 мин после введени отбирают образцы крови, в которых определ ют концентрацию крови. Каждую такую концентрацию глюко- зы в крови выражают в виде процента от первоначальной концентрации глюкозы и методом треугольника рассчитывают площадь между средней концентрацией глюкозы в крови относительно кривой времени и

кривой t (врем ) 100, Затем по нижеприведенной формуле рассчитывают индекс, которым сравниваетс гипогликаэмическое действие препарата дл введени через нос с действием стандартной подкожной инъекции быстродействующего препарата инсулина .

Индекс 0,053 х A/D,

где А - площадь над кривой дл испытуемого препарата, D - доза испытуемого препарата в МЕ/животное и коэффициент 0,053 вл етс полученным эмпирически коэффициентом на основе подкожного введени быстродействующего препарата инсулина. Дл вышеприведенного препарата индеке равен 42.

Пример 15. Инсулин человека (2,91 мг) размалывают в ступке вместе с а -цик- лодекстрином (717,09 мг).

Размолотый порошок опрыскивают раствором дидеканоилфосфатидилхолина (80 мг) в необходимом объеме разбавленного этанола, содержащего около 30% (об./об.) воды, после чего оставл ют сушитьс .

Высушенный порошок просеивают через сито с размером отверстий в 0,7 мм и затем через сито с размером отверстий в 0,2 мм и получают препарат с содержанием инсулина в 0,1 МЕ/мг.

При испытании на модели с кроликами

примера А дл полученного препарата найден индекс в 88.

Пример 16. Воспроизведена методика примера В с использованием человеческого инсулина (2,3 мг), а -циклодекстрина

(537,7 мг) и дидеканоил-фосфатидилхолина (60 мг), растворенных в этаноле, содержащем около 4% (об,/об.) воды и получают препарат с содержанием инсулина в 0,1 МЕ/мг.

При испытании на модели с кроликами примера А дл полученного препарата найден индекс, равный 95.

Пример 17. Глюкогон человека (4 мг) размалывают в мельнице с а -циклодекстрином (796 мг) и получают препарат с содержанием глюкагона в 5 мг/г.

Препарат испытывают на модели с кроликами , в которой 6 кроликам ввод т через нос препарат глюкогона (20 мг/животное).

Спуст 0,15,30,60 и 120 минут после введени отбирают образцы крови, в которых определ ют концентрацию глюкозы. Каждую кэнцентрацию глюкозы в крови выражают в в/1де процента от первоначальной концентрации глюкозы и способом треугольника подсчитывают площадь между кривой f (вре- Nfl) 100 и средней концентрацией глюкозы в крови относительной кривой времени. Рассчитанную площадь, деленную на вводимую дозу, используют в качестве меры г лпергликаэмического эффекта от введени ,

В данном испытании получено значение площади на дозу, равное 74,876.

Пример 18. Воспроизведена методика примера В с применением глюкогона че- овека (4 мг), а -циклодекстрина (716 мг) и идеканоилфосфатидилхолина (80 мг), рас- воренных в этаноле, содержащем около % (об./об.) воды, и получением препарата содержанием глюкогона в 5 мг/г.

В испытании по методике примера D л полученного препарата получено значе- ие площади на дозу, равное 107,683.

Примеры 19,20. Препараты этих примеров приготовлены и испытаны по ме- одике, аналогичной методике примера 1. Индекс подсчитывают так, как описано в г)римере 2 (см.табл.З).

Пример 21.В 5,5 мл воды раствор ют -циклодекстрин (664 мг), добавл ют биосинтетический гормон роста человека (Б- ГР, поставл етс фирмой Ново Нординск /S, 35,8 мг) и раствор высушивают вымо- f аживанием. Полученный порошок (600 мг) гранулируют с 96%-ым этанолом (250 мкл), г росеивают через сита на 0,7 и 0,3 мм и сушат в эксикаторе над силикагелем. Полученный препарат содержит 3 МЕ/20 мг Б- Р.

Биодоступность препарата дл введе- йи через нос испытывают в сравнении с раствором дл в.в. введени , приготовл е- ого следующим образом.

В 1 мл воды раствор ют Б-чГР (1,364 мг) затем разбавл ют карбонат-глициновым уфером (рН 8,4), к которому добавлен 1 % льбумина сыворотки крови человека до конечного объема в 5,3 мл. Такой раствор дл нъекций содержит 0,754 МЕ/мл Б-чГР.

Испытани провод т на самцах кроли- юв линии NZW весом около 2,5 кг с шестью i роликами в группе дл введени через нос трем кроликами в группе дл в.в. введени . В ходе испытани кроликов фиксируют станке и дл отбора образцов крови в ушную артерию кроликов ввод т катетер.

В группе дл введени через нос каждому зверьку ввод т 20 мг препарата. Дл вду- вани порошка в ноздри животных используют шприц специальной конструкции , создающий строго определенное давление воздуха. Отбирают образцы крови в 0,5 мл в охлаждаемые льдом гепаринизиро- ванные пробирки за 5 мин до и 10,20,30,40,50,60,75,90,120,180 и 240 мин

после введени испытуемого препарата.

В контрольной группе каждому зверьку ввод т 250 мкл в.в. раствора дл инъекций. Образцы крови отбирают за 5 мин до и 10,20,30,40,50,60,75,90 и 120 мин после введени .

Образцы крови анализируют относительно иммунореакционноспособного чГР с помощью чГР-ELISA метода.

Подсчитанна биодоступность вводимого через нос порошка составл ет 31 %.

Пример 22. В 5 мл воды раствор ют а-циклодекстрин (608 мг), добавл ют Б-чГР (35,8 мг) и раствор высушивают вымораживанием . Полученный порошок (552 мг) гранулируют с раствором DDPC (48 мг) в 96%-ном этаноле (200 мкл), просеивают через сита на 0.7 и 0,3 мм и сушат в эксикаторе над силикагелем. Полученный порошок дл введени через нос содержит 3 МЕ/20 мг

Б-чГР. В испытании по методике примера Н биодоступность составл ет 36% (относительно в.в. инъекции).

Пример 23. В 4,6 мл воды раствор ют а-циклодекстрин (552 мг), добавл ют Б-чГР

(35,8 мг) и раствор сушат вымораживанием. Полученный порошок (504 мг) гранулируют с раствором DDPC (96 мг) в 96%-ом этаноле (200 мкл), просеивают через сита на 0,7 и 0,3 мм и сушат в эксикаторе над силикагелем.

Полученный порошковый препарат дл введени через нос содержит 3 МЕ/20 мгБ-чГР. В испытании по методике примера Н найденна биодоступность составл ет 44% (относительно в.в. инъекции).

П р и м е р ы 24, 25, 26, 27. Композиции указанных примеров получают по методике примера 2 использованием соответственно 100мг кокосового масла, кукурузного масла, оливкового масла или подсолнечного масла.

Кроме того, испытани и подсчет индекса осуществл ют согласно методике примера 2 (см. табл.4).

Пример 28. Исследование переноси- мости композиций, полученных в соответствии с изобретением, слизистой носа проводилось при использовании композиций примеров Н и I (далее обозначенных как композиции Н и I). Так, в два различных

дн каждому из 8 здоровых добровольцев делалось по 2 вдувани (1 на каждую ноздрю ) композиции Н или композиции I, причем в каждом вдувании содержитс 20 мг соответствующей композиции. Вдувание осуществл ют с помощью сменного наконечника пипетки и отмеренного небольшого количества сжатого воздуха. За 10 мин до и 180 мин после введени порошка провод т риноскопию . Сравнивают наблюдени до и после введени порошка, и вызываемое порошком раздражение оценивают как: отсутствие , слабое, умеренное или т жкое . Как сно видно из нижеприведенной таблицы, включение в композицию I дидека- ноилфосфатидилхолина почти снимают раз- дражающее действие, присущее аналогичным композици м, но без фосфо- липида {см. табл.5).

Claims

Формула изобретени 1.Способ получени дисперсии полипептидов дл ичтраназального применени , включающий диспергирование активного агента в разбавителе с поверхностно-активным веществом, добавление рН- буферирующих, консервирующих, регулирующих осмотическое давление вспомогательных веществ, отличающийс тем, что, с целью ускорени интрана- зального поглощени и предупреждени раздражающего действи конечного продукта , диспергирование провод т в жирном масле или другом разбавителе, в качестве поверхностно-активного вещества используют фосфолипид общей формулы

tt-CH OR CH-OR Н-СН-0-РСО) (ОНИЛГ

где R и R, одинаковые или различные, - водород, алкил, алкенил, алкилкарбонил, алкенилкарбонил,алкадиенилкарбонил, ал- катриенилкарбонил или алкатетраемилкар- бонил, содержащий не более 14 атомов углерода, при этом R и R не вл ютс водородом , a R1 - гидрофильна группа, выбранна из 2-(триметиламмони )этила, 2-аминоэтила, 2-карбокси-2-аминоэтила, 2,3-диоксипропила или 2,3,4,5,6-пентаокси- циклогексила.
2.Способ по п.1,отличающийс тем, что R - 2-{триметиламмонио)этилом.
3.Способ по п.2, отличаю щи и с тем, что R и R - каждый алкил или алкилкарбонил , содержащий 4-12 атомов углерода .
4.Способ по п.З, отличающийс тем, что R и R - нонилкарбонил.
5.Способ по п.2, отличающийс тем, что или R1, или R - водород.
6.Способ по п. 1,отличающийс

тем, что в качестве жирного масла берут

растительное масло, выбранное из группы

соевое, арахисовое, кокосовое, маисовое,

оливковое, подсолнечное масло.

Т.Способ по пп.1-6, отличающий- с тем, что фосфолипид берут в количестве 0,1-10,0%, предпочтительно 0,5-5,0% от всей композиции.

в.Способ по п.7, отличающийс тем, что жирное масло берут в количестве 0,01-50,0%, предпочтительно 0,1-10,0% от всей композиции.

Приоритеты по пунктам: 16.12,86 - пп.1,2,3,4,7,

16.01.81-пп.5,6,8.

Таблица 1

Глюкоза в крови в процентах от первоначального уровн

Таблица 2

Таблица 3