MXPA04009188A

MXPA04009188A - Biotejido de colageno y metodos para la preparacion y uso para el mismo.

Info

Publication number: MXPA04009188A
Application number: MXPA04009188A
Authority: MX
Inventors: A Murphy Patricia
Original assignee: Anthrogenesis Corp
Priority date: 2002-03-26
Filing date: 2003-03-26
Publication date: 2005-06-20
Also published as: JP2006507851A; EP1575572A4; AU2003226018A1; JP2014138590A; EP2702871B1; CA2479903A1; EP2700309B1; IL164220A0; AU2011201662B2; EP2700309A1; PT2702871T; JP4615223B2; AU2008202604B2; US20030187515A1; EP1575572B1; CA2479903C; ES2710024T3; EP2702871A1; DK2702871T3; HK1085384A1

Abstract

La presente invencion se relaciona a membranas colagenoticas producidas a partir de amnios aqui referidas como un biotejido de colageno. El biotejido de colageno de la invencion tiene la integridad estructural de la membrana amniotica no tratada nativa, es decir, la estructura terciaria y cuaternaria nativa. La presente invencion proporciona un metodo para preparar un biotejido de colageno de una membrana de la placenta, preferiblemente una membrana de la placenta humana que tiene una membrana corionica y aminiotica, descelularizando la membrana amniotica. En una modalidad preferida, la membrana amniotica se descelulariza completamente. El biotejido de colageno de la invencion tiene numerosas utilidades en el campo medico y quirurgico incluyendo por ejemplo la reparacion del vaso sanguineo, construccion y reemplazo de un vaso sanguineo, reemplazo del tendon y ligamento, apositos, injertos quirurgicos, usos oftalmicos, suturas y otros. Los beneficios del biotejido son, en parte, debido a sus propiedades fisicas tales como resistencia biomecanica, flexibilidad, suturabilidad y baja inmunogenicidad, particularmente cuando se deriva de la placenta humana.

Description

BIOTEJIDO DE COLÁGENO Y MÉTODOS PARA LA PREPARACIÓN Y USO PARA EL MISMO 1. CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona a membranas colagenóticas producidas a partir de placenta, referidas aquí como un biotejido de colágeno. El biotejido de colágeno de la invención tiene la integridad estructural de la membrana amniótica no tratada, nativa, es decir, la estructura terciaria y cuaternaria nativa. La presente invención, proporciona un método para preparar un biotejido de colágeno: a partir de una membrana placentaria, preferiblemente una membrana placentaria humana que tiene una membrana coriónica y amniótica, descelularizando la membrana amniótica. En una modalidad preferida, la membrana amniótica se descelulariza completamente. El biotejido de colágeno de la invención tiene numerosas utilidades en el campo médico y quirúrgico incluyendo por ejemplo, reparación de vaso sanguíneo, construcción y reemplazo de vaso sanguíneo, tendón y reemplazo de ligamento, vendaje de heridas, injertos quirúrgicos, usos oftálmicos, suturas y otros. Los beneficios del biotejido son, en parte, debido a sus propiedades físicas tales como resistencia biomédica, flexibilidad, suturabilidad e inmunogenicidad baja, particularmente cuando se deriva de placenta humana. 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 2.1 MEMBRANA AMNIÓTICA; ANATOMÍA E HISTOLOGÍA La bolsa placentaria se compone de dos capas íntimamente conectadas por tejido conectivo laxo. Estas se conocen como las capas amnióticas y coriónicas (Véase FIGURA 1) . La capa amniótica es la más interna de las dos capas y entra en contacto con el fluido amniótico que rodea el feto y juntas forman el saco amniótico. La capa amniótica es avascular y se reviste por un simple epitelio columnar traslapando una membrana basal y ésta mide 30-60 mieras de espesor. La membrana coriónica es la capa externa del saco y se celulariza densamente. Los árboles vasculares se originan en la placenta y se extienden a las membranas placentarias a través de la capa coriónica. La capa coriónica se separa de la capa amniótica por tejido conectivo laxo y se combina, las dos capas miden 120-180 mieras. Las membranas placentarias tienen una matriz de colágeno que se carga densamente con mucopolisacáridos y se cree que sirven principalmente como un saco protector para el feto en desarrollo. Las membranas también mantienen una barrera para infecciones y agentes inmunológicos presentes en la circulación materna. Las membranas placentarias tienen tanto transportes activos como pasivos. Las moléculas y proteínas más pequeñas pueden viajar libremente a través de éstas, pero las proteínas grandes tales como IgM no pueden cruzar a través de la capa basal.

La conservación de las membranas placentarias (que son ya sea de fuentes animales o humanas) en 95% de alcohol etílico o glicerol mezclado en proporciones de 50-50% con medio de cultivo de tejido ha sido utilizada para conservación de la membrana amniótica antes del congelamiento. Estos conservadores eliminan la vitalidad de los tejidos placentarios haciendo el núcleo picnótico, pero la matriz de colágeno y las membranas básales se conservan. De manera interesante, ambas formas de conservación también eliminan la antigenicidad de las membranas transplantadas y también cualesquiera agentes potencialmente virulentos. La conservación se logra usualmente después que las membranas amnióticas se separan cuidadosamente del corion. El lado de la membrana amniótica con la lámina basal y el epitelio es brillante y el lado opuesto que da de frente al corion es sin brillo . 2.2 APLICACIONES CLÍNICAS PREVIAS DE MEMBRANAS AMNIÓTICAS Los problemas potenciales posibles con tejidos xenogénicos (tejidos de otras especies) que transportan enfermedad zoonóticas o provocan rechazo de especies cruzadas han hecho estos tejidos menos deseables. Los injertos alogénicos, o injertos de diferentes individuos de la misma especie, continúan para ser la fuente preferida de materiales de injerto humanos. La escasez de tejidos de donadores humanos para injerto es un problema creciente que ha estimulado el desarrollo de nuevos materiales para injerto de tejido. Más frecuentemente, estas fuentes de materias primas biológicas son escasas, difíciles de obtener, y muy costosas. La hoja de colágeno a partir de la placenta humana, sin embargo, tiene características biomecánicas deseables útiles en aplicaciones de injerto de tejido. De este modo, las membranas amnióticas son una buena fuente de material de injerto alogénico. La membrana fetal que incluye la membrana amniótica y la coriónica ha sido utilizada en cirugías documentadas tan tempranas como 1910 y ha sido revisada por Tlelford y Trelford-Sauder en 1979 (Véase Trelford y Trelford-Sauder , 1979, A . J. Obstet. Gynecol , 833) . En 1910 Davis fue el primero en reportar el uso de membranas fetales como un material quirúrgico en transplante de piel por ejemplo en pieles quemadas y ulceradas (Davis et al., 1910, Johns Hopkíns Med. J. ; 15:307) . Estos estudios fueron principalmente en pruebas de animales y seres humanos probaron ser decepcionantes. Ya que entonces el uso de membranas amnióticas en la cirugía ha sido expandida {Véase, por ejemplo, Stern et al., 1913, JAMA, 13: 973-4; Sabella et al., 1913 Med. Record NY, 83: 478-80; de Rotth et al., 1940 Arch Opthal ol , 23; 522-5; Sorsby et al., 1946, Br. J.

Optha lol , 30: 337-45) . Se utiliza ahora como un vendaje biológico para piel quemada, heridas de la piel, y úlceras crónicas de la pierna, como un tejido complementario en reconstrucción quirúrgica de vagina artificial, y para reparar onfalóceles (Véase por ejemplo, Trelford y Trelford-Sauder, 1979, 134 Am. J. Obstet'. Gynecol . 833 ; Colocho et al., 1974 Arch. Surg . 109: 370-3; Faulk et al. 1980, Lancet, 1156; Prasad et al . , 1986, J. Trauma, 26: 945-6; subrahmanyan et al., 1995, J. Plástic Surg 48: 477-8; Gruss et al., 1978, J. Can. Med. Assoc. 118:1237-46; ard et al., 1984, Br. J. Plástic Surg. 37: 191-3; Dhall, 1984, J. Obstet. Gynaecol . 91:279-82) . Se ha utilizado también para evitar adhesión de tejido en procedimientos quirúrgicos del abdomen, cabeza y pelvis (Gharib et al., 1996, Pediatr, Surg. Int. 11: 96-9; Rennekampff et al., 1994; Invest. Surg. 7: 187-93) . En los 4 Os, varios autores reportaron el papel benéfico de la membrana amniótica para tratar una variedad de trastornos de superficie ocular (Véase por ejemplo, de Rotth et al., 1940 Arch Opthal ol, 23: 522-5; Sorsby et al., 1946, Br. J. Ophtalmol 30: 337-45; Lavery et al., 1946, Trans . Opthalmol. Soc. UK. 66 : 668) . Numerosos intentos en el campo para optimizar la preparación y conservación de las membranas amnióticas para uso en transplante han sido previamente descritos {véase por ejemplo, Dua et al., 1999, Br . J. Opthalmol. 83:748-52 ("Dua") para una revisión) . Varias preparaciones de membranas amnióticas han incluido la conservación por mezclas de solución salina y antibióticos, la deshidratación de alcohol con o sin separación de la capa amniótica a partir de la capa coriónica. Sin embargo, todos los métodos descritos en Dua, y en las referencias descritas en lo anterior todavía implican defectos que necesitan considerarse para mejoras en la preparación y conservación de membranas amnióticas. Más recientemente, han sido descritos métodos que se basan en congelar para la conservación de la membrana amniótica para la aplicación en procedimientos quirúrgicos de injerto de tejido para corregir los defectos epiteliales de la cornea. Véase por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 6,152,142 y 6,326,019B1 ("Tseng") . Tseng describe una membrana amniótica que se monta en un sustrato y se conserva en una mezcla de Medio Eagle Modificado de Dulbecco y glicerol y se congeló a -80°C. El proceso para congelar el tejido en cualquier momento durante su preparación hace la membrana amniótica Tseng quebradiza, y aún más quebradiza después de las etapas de descongelamiento y activación. Además, las etapas de descongelación y activación agregan tiempo requerido para el manejo de la membrana amniótica. Además, debido a la fragilidad de la membrana amniótica de Tseng provocada por la etapa de congelamiento en el proceso de conservación y preparación, se requiere un soporte estructural o de refuerzo para asegurar la integridad estructural de la membrana amniótica Tseng durante el almacenamiento. Esto presenta la dificultad agregada de separar la membrana amniótica conservada a partir del soporte, que, debido a su fragilidad puede ser difícil para manejarse y separarse intacta. Lá separación de la membrana amniótica a partir del soporte disminuye así la probabilidad de ruptura de la membrana, e incrementa la longitud del tiempo requerido para activar la membrana amniótica para permitir la impregnación directa de la solución de activación en la membrana amniótica congelada antes de realizar el procedimiento quirúrgico, conduciendo a tiempo de preparación incrementado en equipo quirúrgico. El almacenamiento y embarque se complican también por el requerimiento de congelamiento a -80°C. Finalmente, las membranas de Tseng no se descelularizan generalmente,- como un resultado, las membranas amnióticas así preparadas son normalmente opacas y no tienen una composición estructural uniforme. Más recientemente, Yui et al., Patentes Norteamericanas Nos. 5,618,312 (la "patente * 312") describe la preparación de hojas de colágeno a partir del estrato compacto de membrana de tejido. Aunque el material descrito es principalmente colágeno, esto es suficientemente débil debido a su procesamiento que requiere una etapa separada de reticulación para hacerlo bastante fuerte para uso médico, por ejemplo, suturable. Un método para reticulación descrito en la Patente '312 emplea tratamiento por calor elevado, preferiblemente de 100° a 110°C, que se cree que afecta adversamente la conformación nativa de colágeno. Yui et al., Patente Norteamericana No. 5,876,451 describe un material de colágeno similar derivado a partir de placenta. Este material, sin embargo, se trata durante la preparación con proteasas como parte de una etapa de descelularización, que probablemente resulta en destrucción y/o interrupción de conformación nativa de los componentes de la matriz; de este modo, la matriz de colágeno resultante no mantiene su conformación nativa. De este modo existe una necesidad en la técnica para una membrana amniótica mejorada para uso en aplicaciones médicas, de diagnóstico, y cosméticas, que tienen características estructurales mejoradas. La presente invención proporciona tal biotejido, que comprende colágeno que, a diferencia de los biotej idos a base de colágeno anteriores, retiene la estructura cuaternaria de colágeno nativa. Como un resultado, el biotejido de la presente invención se prepara fácilmente, se utiliza fácilmente y es bastante fuerte para propósitos médicos y quirúrgicos, y proporciona un sustrato superior para cicatrización de heridas . 3. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona en parte, al descubrimiento de unos métodos novedoso de preparación de un biotejido de colágeno a partir de placenta, preferiblemente una placenta humana, que resulta en un biotejido de colágeno novedosa que mejora las propiedades físicas y biofísicas. Preferiblemente, el método de preparación implica manipulación mínima de la membrana amniótica. El biotejido de colágeno de la invención a diferencia de aquellos descritos en la técnica anterior, debido a la _ manera en la cual se procesa, tiene una estructura terciaria y cuaternaria nativa intacta. La presente invención también proporciona una membrana amniótica derivada de placenta o biotejido que tiene características superiores de resistencia a la tensión incrementada, suturabilidad e inmunogenicidad reducida resultando en rechazo de injerto huésped reducido. La presente invención también proporciona una membrana amniótica derivada de placenta o biotejido que puede almacenarse como hojas deshidratadas sin congelamiento o crio-conservacion . Preferiblemente, la membrana amniótica derivada de placenta se deriva de una placenta humana para uso en pacientes humanos. Sin embargo, los mismos métodos pueden emplearse utilizando placentas a partir de varias especies animales para uso veterinario en pacientes animales. La presente invención proporciona un método para preparar un biotejido de colágeno que comprende proporcionar una placenta, preferiblemente una placenta humana, separar las capas amnióticas y coriónicas entre sí, y descelulari zar la membrana amniótica mientras se conserva la arquitectura de la matriz extracelular subyacente. El método implica además lavar y secar la membrana descelularizada . Este método produce un biotejido descelularizado , deshidratado, que puede permanecer estable bajo condiciones de almacenamiento estéril a temperatura ambiente y que se rehidrata subsecuentemente e injerta a, o implanta en un sujeto. En una modalidad específica, la placenta es de una mujer quien ha experimentado un alumbramiento por sección de cesárea o alumbramiento natural. En las modalidades preferidas, los ensayos seriológicos y bacteriológicos comunes conocidos por alguien con experiencia en la técnica se utilizan para determinar si la placenta es de un donador que está libre de una enfermedad transmisible. En una modalidad específica, la placenta ha sido probada para estar libre de al menos una enfermedad transmisible. En otra modalidad, la fuente de la placenta se sabe que incluye características de historial médico, tipo sanguíneo, datos inmunológicos , y genotipo del donador. Aunque, la placenta puede ser de cualquier mamífero, preferiblemente el donador es una mujer. En algunas modalidades, la placenta se sangra utilizando métodos comunes conocidos por alguien con c-xp ieneia en la técnica anterior para separar la membrana amniótica a partir de la membrana coriónica. La descelularización de la membrana amniótica de acuerdo con los métodos de la invención comprende remover todo el material celular visible y restos celulares a partir de la membrana amniótica, por ejemplo, del lado maternal de la membrana amniótica y el lado fetal de la membrana amniótica. La descelularización de la membrana amniótica no debe resultar en la interrupción de la integridad estructural de la membrana amniótica o alterar la composición bioquímica. Por consiguiente, descelularizar la membrana amniótica de acuerdo con los métodos de la invención no constituye congelar en ningún punto en la preparación de la membrana amniótica o poner en contacto la membrana con una proteasa. Preferiblemente, la membrana amniótica se descelulari za utilizando un detergente débil que contiene solución, por ejemplo, una solución que comprende 0.01-1.0% de monohidrato de sal de sodio del ácido desoxicólico, detergentes no iónicos, Tritón X-100, un detergente aniónico, o dodecilsulfato de sodio o una combinación de los mismos. Una vez que la membrana amniótica se descelulariza de acuerdo con los métodos de la invención, la membrana puede lavarse y secarse, preferiblemente con calor bajo, bajo vacío . En algunas modalidades, la invención proporciona un biotejido de colágeno que comprende una membrana amniótica libre de sustrato, deshidratada y descelulari zada , de manera que la membrana tiene una estructura terciaria y cuaternaria nativa. En otras modalidades, la invención proporciona un biotejido de colágeno que comprende una membrana amniótica libre de sustrato descelulari zada , que comprende colágeno, elastina y fibronectina . En aún otras modalidades, la invención proporciona un biotejido de colágeno que comprende una membrana amniótica, libre de sustrato, deshidratada, descelularizada, uniforme y translúcida, con la condición de que la membrana amniótica nunca haya estado en contacto con una proteasa. En algunas modalidades, el biotejido comprende además una o más biomoléculas , por ejemplo, agentes terapéuticos-, incluyendo, pero sin limitarse a, antibióticos, hormonas, factores de crecimientos, agentes anti-tumor, agentes anti - fúngicos , agentes anti-virales, medicamentos para el dolor, anti -histamínicos , agentes ant i - inflamatorios , anti - infecciosos , agentes de cicatrización de heridas, selladores de heridas, atrayentes celulares y reactivos de andamiaje, y similares. En un ejemplo específico, el biotejido de colágeno puede impregnarse con uno o más factores de crecimiento, por ejemplo, factor de crecimiento de fibroblasto, factor de crecimiento epitelial, etc. El biotejido puede también impregnarse con una o más moléculas pequeñas, incluyendo pero sin limitarse a pequeñas moléculas orgánicas cales como inhibidores específicos de procesos bioquímicos particulares, por ejemplo, inhibidores del receptor de membrana, inhibidores de kmasa, inhibidores de crecimiento, fármacos anti-cáncer, antibió icos, etc. En algunas modalidades, el biotejido' de colágeno se impregna con una biomolécula, durante la producción o durante la preparación de cirugía dependiendo de su uso pretendido. En algunas modalidades, la invención incluye un laminado que comprende al menos dos capas del biotejido de la invención, y métodos para preparar la misma. En otras modalidades, la invención incluye conformar los laminados en andamios tridimensionales complejos dependiendo del uso pretendido, incluyendo, pero sin limitarse a hojas, fibras, esferas, tubos. En una modalidad, la invención abarca un método para preparar un laminado de membrana amniótica que comprende : proporcionar una placenta que comprende una membrana amniótica y una membrana coriónica; separar la membrana amniótica de la membrana coriónica,- y descelulari zar la membrana amniótica. En otra modalidad, el método comprende además lavar la membrana amniótica descelularizada al menos una vez; estratificando al menos dos de las membranas amnióticas descelularizadas en contacto entre sí de manera que se forma un laminado de membrana amniótica; y secar el laminado de membrana amniótica desceluiari zada .

Alternativamente, en otra modalidad, el método para preparar un laminado de membrana amniótica comprende, secar al menos dos membranas amnióticas preparadas de acuerdo con los métodos de la invención, y estratificando al menos dos membranas amnióticas en contacto · entre sí de manera que se forma un laminado de membrana amniótica. En algunas modalidades, las capas de membrana amniótica producidas de acuerdo con los métodos de la invención pueden colocarse en contacto entre sí en la presencia ce un adhesivo para formar un laminado de membrana amniótica. El adhesivo utilizado de acuerdo con los métodos y composiciones de la invención puede ser cualquier pegamento biológico conocido por alguien con experiencia en la técnica, preferiblemente un pegamento biocompatible , incluyendo, pero sin limitarse a, pegamento natural, por ejemplo, fibronectina, fibrina, pegamento sintético. En otras modalidades, las capas de membrana amniótica preparadas de acuerdo a los métodos de la invención se reticulan entre sí para formar un laminado de membrana amniótica. Cualquier reactivo reticulante y método conocido por alguien con experiencia en la técnica está dentro del alcance de la presente invención, incluyendo, pero sin limitarse a, reticulación química, reticulación de péptido, reticulación UV, reticulación por radiación, reticulación de fibronect ina , reticulación de fibrinógeno, reticulación de hidrogel . En otras modalidades, los laminados de membrana amniótica producidos de acuerdo con los métodos de la invención no comprenden un adhesivo. En algunas modalidades, la invención abarca utilizar el biotejido de colágeno' como un injerto quirúrgico. En una modalidad específica, la invención incluye el uso del injerto quirúrgico en un procedimiento quirúrgico en un sujeto, preferiblemente un ser humano, que comprende colocar el injerto directamente en el sitio quirúrgico. La invención proporciona un biotejido de colágeno, un laminado de membrana amniótica, o un andamio tridimensional que comprende además una o más composiciones de hidrogel, y métodos para preparar la misma. La composición de hidrogel puede comprender un polímero que incluye pero no se limita a alcohol polivinílico, polietilenglicol , ácido hialurónico, y derivado y análogos de los mismos. En algunas modalidades, el biotejido de colágeno de la invención, andamios tridimensionales, aminados, o composiciones de hidrogel de los mismos, pueden poblarse además con células, tales como células madre, células adultas diferenciadas, células progenitoras , y similares, preferiblemente humanas de manera que las células son uniformes y confluentes. La invención proporciona métodos de producción de nivel elevado del biotejido de colágeno, laminados de los mismos, andamios tridimensionales de los mismos, y composiciones de hidrogel de los mismos, particularmente pero sin limitarse a, producción a escala comercial. La invención resuelve dificultades en producir cantidades a gran escala de membranas amnióticas para uso en pruebas clínicas y ventas comerciales . La invención incluye composiciones que comprenden un biotejido de colágeno de la invención adecuada para suministro de fármaco; diseño de tejido, usos relacionados urológicos, por ejemplo, corrección de incontinencia urinaria, usos oculares, por ejemplo para el tratamiento de un trastorno de superficie ocular, y como un injerto quirúrgico oftálmico; usos vasculares, por ejemplo, reparación de vaso sanguíneo, construcción y reemplazo de vaso sanguíneo,- usos cardiológicos, por ejemplo como un dispositivo protésico al construir válvulas enfermas; usos relacionados con neuronas; por ejemplo, reparación de nervios dañados, especialmente nervios periféricos divididos, como un sustituto dural , y como una prótesis alrededor de la anastomosis de nervio; usos relacionados con el hueso, por ejemplo, para el tratamiento de defectos ortopédicos, como un reemplazo de hueso; usos dermatológicos, por ejemplo, para el tratamiento de heridas (externas e internas) , heridas agudas y crónicas, heridas congénitas, y quemaduras; para el tratamiento de condiciones de la piel, por ejemplo, lesiones de la piel, piel envejecida, arrugas, líneas finas, adelgazamiento, elasticidad de la piel reducida, piel áspera, y piel dañada por el sol; como un vendaje de herida; y para el tratamiento de infecciones de heridas. En una modalidad específica, la invención abarca un método para tratar y/o evitar una enfermedad o trastorno relacionado con los ojos, por ejemplo, enfermedad superficial ocular, en un sujeto, que comprende utilizar el biotejido de colágeno de la invención, por ejemplo, colocando el biotejido como un injerto quirúrgico en la superficie de la cornea enferma del sujeto. En otra modalidad, la invención incluye un método para tratar y/o evitar una condición de la piel en un sujeto, que comprende utilizar un biotejido de la invención por ejemplo, poniendo en contacto la piel con el biotejido. En aún otra modalidad, la invención abarca tratar una herida y/o quemadura en un sujeto que comprende poner en contacto la herida y/o quemadura con un biotejido de la invención. En otra modalidad específica, la invención incluye un método para corregir incontinencia urinaria en un sujeto, preferiblemente, un ser humano que comprende utilizar un biotejido de colágeno de la invención como un implante. En otras modalidades, la invención incluye un método para suministrar un agente terapéutico a un sujeto que comprende poner en contacto el sujeto con un biotejido de i- iágeno de la invención. La invención incluye además métodos para suministrar células a un sujeto que comprende poblar un biotejido de colágeno o laminado de la invención con células vivas por ejemplo en diseño de tejido. La invención proporciona un injerto quirúrgico que comprende el biotejido de la invención para uso en un procedimiento quirúrgico. El injerto quirúrgico puede aplicarse a un sitio interno o externo del sujeto, preferiblemente un ser humano. 4. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS FIGURA 1 La membrana coriónica y amniótica de una placenta humana. FIGURA 2 FOTOMICROGRAFÍA DEL BIOTEJIDO DE COLÁGENO A. ANTES DEL PROCESAMIENTO B. DESPUÉS DEL PROCESAMIENTO FIGURA 3 EL BIOTEJIDO DE COLÁGENO. El biotejido de colágeno de la invención se ejemplifica teniendo una superficie translúcida uniforme con un patrón en relieve. FIGURA 4. TRAMA DE MALLA Y EL BIOTEJIDO QUE SE SECA EN LA MISMA.

. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona una membrana de colágeno o biotejido derivada de la placenta de un mamífero, preferiblemente de un ser humano. Los biotejidos de colágeno se preparan de manera que retienen la conformación de colágeno nativo, es decir, la conformación terciaria y cuaternaria nativa en el producto final. Además del biotej ido de colágeno, la presente invención también proporciona métodos para realizar los biotejidos de colágeno, y para utilizar el biotej ido en un esquema médico. La presente invención proporciona un biote ido de colágeno que comprende una membrana amniótica libre de sustrato, deshidratada y descelulari zada de manera que la membrana amniótica tiene una estructura terciaria y cuaternaria nativa. En algunas modalidades la invención proporciona un biotejido de colágeno libre de sustrato y descelularizada que comprende colágeno, elastina y fibronectina . En algunas modalidades, la invención proporciona un laminado de membrana amniótica que comprende un biotejido de colágeno de la invención. El laminado de membrana amniótica preparado de acuerdo con los métodos de la invención comprende al menos dos capas del biotejido de colágeno que se colocan en contacto entre sí para formar el laminado de membrana amniótica. En otras modalidades, la invención proporciona un andamio tridimensional, tal como un tubo, que comprende un biotejido de colágeno de la invención. En aún otras modalidades, la invención proporciona un biotejido de '.'¦.•iág no de la invención, un laminado de la misma, o un ANDAMIO tridimensional de la misma, que comprende además una composición de hidrogel . La invención proporciona así varias formas y configuraciones del biote ido de colágeno incluyendo, pero sin limitarse a laminados, andamios tridimensionales y composiciones de hidrogel. La invención proporciona cualquier forma útil médica de las composiciones de la invención. Independientemente de la forma particular o configuración, las composiciones de la invención pueden comprender además una o más biomoléculas , preferiblemente un agente terapéutico. Las composiciones de la invención que comprenden una biomolécula tienen utilidad numerosa en el campo médico como se describe en detalle en la presente. En algunas modalidades, la invención abarca poblar las composiciones de la invención con células vivas de manera que las células son uniformes y confluentes. Las composiciones de la invención pobladas con células tienen numerosa utilidad en el campo médico y dental por ejemplo, para propósitos de diseño de tej ido . La invención también se relaciona a métodos para preparar un biotejido de colágeno, un laminado de la misma, un andamio tridimensional de la misma, o una composición de hidrogel. En una modalidad específica, la invención proporciona un método para preparar un biotejido de colágeno a partir de una placenta que tiene una membrana amniótica y una membrana coriónica que comprende: separar la membrana amniótica de la membrana coriónica; y descelularizar la membrana amniótica de manera que la membrana amniótica no está en contacto con una enzima, por ejemplo, una proteasa. En otras modalidades, el método implica además lavar y secar la membrana amniótica descelularizada . En otra modalidad específica, la invención proporciona un método para preparar un laminado de membrana amniótico a partir de una placenta que tiene una membrana amniótica y una membrana coriónica que comprenden: separar la membrana amniótica de la membrana coriónica; descelularizar la membrana amniótica; y estratificar al menos dos de las membranas amnióticas descelularizadas en contacto entre sí de manera que un laminado de membrana amniótico se forma. En una modalidad específica, la membrana amniótica descelularizada se seca antes de la capa. En otra modalidad específica, la membrana amniótica descelularizada se seca después que se estratifica de manera que al menos dos de las membranas amnióticas descelularizadas están en contacto entre sí. La invención proporciona un método ara utilizar el biotejido de colágeno de la invención, laminados de la misma, andamios tridimensionales de la misma, o composiciones de hidrogel de la misma en un esquema médico, dental y quirúrgico. De hecho, se espera que las composiciones de la invención tengan una utilidad terapéutica y clínica mejorada en relación a los otros biomateriales conocidos en la técnica. En algunas modalidades, la invención proporciona un método para tratar y/o evitar una enfermedad o trastorno relacionado con los ojos en un sujeto utilizando una composición de la invención. En una modalidad específica, la invención proporciona un método para tratar y/o evitar una enfermedad o trastorno relacionado con los ojos en un sujeto que comprende colocar el biotejido en una superficie del ojo enferma del sujeto. En otras modalidades, la invención proporciona un método para tratar y/o evitar una condición de la piel en un sujeto, preferiblemente un ser humano, utilizando una composición de la invención. En una modalidad específica, el método comprende poner en contacto la piel del sujeto con la composición. En otra modalidad específica, la composición se coloca directamente en la superficie de la piel del sujeto, que es el sitio de la condición de la piel. La invención también proporciona un método para tratar una herida o una quemadura en un sujeto, preferiblemente un ser humano, que comprende poner en contacto la composición en el sitio de la herida o quemadura. En otras modalidades, la invención proporciona utilizar una composición de la invención (por ejemplo, un biotejido de colágeno, un laminado de membrana amniótica) en un procedimiento quirúrgico, tal como cirugía oftálmica ; cirugía cardiovascular; cirugía periodontal ; cirugía neurológica, cirugía dental y cirugía ortopédica. La invención proporciona un método para utilizar una composición de la invención para suministrar una biomolécula, preferiblemente un' agente terapéutico a un sujeto, preferiblemente un ser humano. La invención también abarca un método para suministrar células que utilizan una composición de la invención a un sujeto, preferiblemente, un ser humano, en donde la composición ha sido además poblada con células. .1 BIOTEJIDO DE COLÁGENO La invención proporciona una membrana amniótica de colágeno, en la presente referida como un biote ido de colágeno. El biotejido de colágeno de la invención mantiene la integridad estructural de la membrana amniótica no tratada, nativa, es decir, retiene la estructura terciaria y cuaternaria de las proteínas estructurales en sus composiciones tales como colágeno, elastina, y posiblemente f ibronectina . De este modo, el biotejido de colágeno de la invención se compone de las mismas proteínas estructurales como las membranas amnióticas no tratadas o nativas. Los métodos de la técnica anterior para producir membranas amnióticas requieren el uso de proteasas o tratamiento con calor elevado, como resultado estas membranas no mantienen la estructura terciaria y cuaternaria de las proteínas estructurales en su composición. En una modalidad específica, la presente invención proporciona una membrana amniótica libre de sustrato, deshidratada y descelulari zada (es decir, sin refuerzo de filtro) de manera que la membrana amniótica tiene una estructura terciaria y cuaternaria nativa (Véase las FIGURAS 2A y B) . La membrana amniótica descelularizada, deshidratada de la invención es uniforme, es decir, mínimo a material no celular, biotejido translúcido, que tiene una apariencia como se muestra en la FIGURA 3 que comprende una lámina helicoidal alfa de hélice triple izquierda de matriz descelularizada (Véase por ejemplo, Molecular Biology of the Cell, 1989, Alberts et al., ed . , Garland Publishing Inc., New York, NY ; que se incorpora en la presente para referencia en su totalidad) . El biote ido de colágeno de la invención puede derivarse de la membrana amniótica de cualquier mamífero, por ejemplo, fuentes equino, bovino, porcino o catirrino, pero se deriva más preferiblemente de placenta humana. En una modalidad preferida, el biotejido de la invención tiene la estructura terciaria y cuaternaria nativa del material colagenótico en la composición. El biotejido de colágeno de la invención en contraste a aquellas descritas en la técnica anterior se manipula mínimamente, es decir, el biotejido de colágeno de la invención se somete a lo sumo un tratamiento químico biológico o manipulación, por ejemplo, la descelularización en un detergente débil. Como se utiliza en la presente, "mínimamente manipulado" se refiere a una falta de tratamiento enzimático, por ejemplo, tratamiento con proteasa, tratamiento con calor elevado, tratamiento químico rudo, exposición a detergentes fuertes o ácidos de la membrana amniótica de la invención en cualquier etapa durante la preparación del biotejido de colágeno. El tratamiento de pro:easa de la membrana amniótica como parte de una etapa de descelularización, compromete la integridad estructural del biotejido, por ejemplo, afecta la estructura terciaria y/o cuaternaria del material de colágeno. La manipulación mínima de la membrana amniótica en la preparación del biotejido de la invención, en contraste, resulta en un producto con resistencia mecánica mejorada y un producto translúcido relativo a aquellos en la técnica anterior. El biotejido de colágeno libre de sustrato, descelularizado de la invención comprende colágeno (incluyendo, pero sin limitarse a, tipo I, IV y II de colágeno) así como fibronectina y elastina. Esta combinación es en parte responsable de la resistencia mecánica mejorada del biotejido de la invención, como se prepara de acuerdo con los métodos descritos en la presente. Como resultado del procedimiento y manipulación mínima, el biote ido de colágeno de la invención retiene la composición de la membrana nativa. El colágeno es el material estructural principal de los vertebrados y se presenta en tejidos de función mecánica principalmente. La molécula de colágeno consiste de tres cadenas polipéptidas llamadas cadenas alfa (cada una aproximadamente de 1000 aminoácidos de longitud) enroscadas alrededor una de la otra como en una de las tres cuerdas enredadas que forman una superhélice izquierda. Al menos 19 tipos de colágeno han sido identificados y todos poseen la misma organización tridimensional (Véase por ejemplo, Lee et al., 2001, International J. Of Pharmaceutics , 221: 1-22) . La membrana amniótica de la presente invención es superior en forma, características biomecánicas y estructurales a aquellas reportadas en la técnica anterior y conocidas por los inventores, en parte, en base al descubrimiento del método novedoso de preparación de la membrana amniótica y una fuente controlada y abundante de placenta humana, como se describe en la presente {Véase Sección 5.2.) . En particular, el biotejido de colágeno de la presente invención tiene una o más de las siguientes características cuado se compara con una o más de las membranas amnióticas de la técnica anterior,- resistencia a la tensión mejorada; su urabilidad superior; mmunogenicidad reducida que resulta en una respuesta de rechazo de injerto huésped reducida; facilidad de almacenamiento y embarcación sin la necesidad de congelamiento o crio-conservación; mínimo requerimiento de post -preparación para manejo y activación, es decir, rehidratación , procedimientos antes del uso; y capacidad para almacenarse a temperatura ambiente por periodos extendidos de tiempo mientras se mantiene la integridad estructural y funcional. La Tabla 1 resume las ventajas del biotejido de la invención cuando se compara con las ventajas en la técnica anterior. En modalidades alternativas, la invención proporciona un biotejido de colágeno que comprende una membrana coriónica, libre de sustrato, deshidratada, y descelulari zada , preferiblemente una membrana coriónica humana. Se espera que un biotejido de colágeno que comprende una membrana coriónica tendrá propiedades comparables como el biotejido de colágeno de la invención que comprende una membrana amniótica. La invención proporciona todas las formas médicamente útiles del biotejido de colágeno que comprende una membrana coriónica incluyendo, pero sin limitarse a laminados, andamios tridimensionales, y composiciones de hidrogel .

TABLA 1. BIOTEJIDOS DE LA INVENCIÓN CONTRA PREPARACIONES DE MEMBRANA A NIÓTICA TRADICIONALES CARACTERISTICA BIOTEJIDO DE COLAGENO DE LA MEMBRANAS AMNIOTICAS INVENCIÓN TRADICIONALES Prueba serológica COMPLETO: selección de INCOMPLETA: Sin prueba anticuerpo (ATY) ; selección de CMV de alanina amino transferasa (ALT) ; Anticuerpo de Núcleo de Hepatitis (ácido nucleico y ELISA) ,· Antígeno de Superficie de Hepatitis B (ácido nucleico y ELISA) ; Anticuerpo del Virus de la Hepatitis C (ácido nucleico y ELISA) ; HIV-1 y HIV-2; HTLV-1 y HTLV-2; prueba de Sífilis (RP ) ; prueba de anticuerpo de CMV; prueba de Hepatitis C y VIH (prueba de ácido nucleico) Conse vación SECO: Deshidratado con vacío CONGELADAS : por calor bajo; no necesario almacenadas en medio para congelación o de cultivo; requieren refrigeración; auto embarque de hielo seco almacenamiento y congelación/ refrigeración Preparación MINUTOS : Preparada dentro de PROLONGADAS: requiere Quirúrgica minutos; directamente tiempo de preparación/ hidratada en el sitio descongelación/remojo quirúrgico; por ejemplo en extenso; debe remover el ojo con gotas de solución el respaldo de filtro. salina; sin descongelar, remojar, o enjuague necesarios . Manejo Quirúrgico SIMPLE: puede cortarse TEDIOSA: Debe mientras se seca; y removerse del papel de aplicarse al sitio filtro; tiende a quirúrgico y luego "recolectarse" durante hidratarse en el sitio la cirugía; dificultad para manipulación quirúrgica Celularidad DESCELULARIZADO : células CON CELULAS MUERTAS : mínimas a no epiteliales; las células muertas restos mínimos a no presentes; la celulares; remodelación más evidencia clínica rápida sugiere tiempo de cicatrización más largo/relación de rechazo más elevado (evidencia anecdótica) Sustrato NO: Libre de sustrato (por SI : soportado en papel ejemplo, sin respaldo de de filtro) nitrocelulosa/filtro Ester i 1 i zación SI: irradiación por haz de NO: almacenada en lOpc lona I ) electrón,- al menos 18 kG ; medios que contienen confianza incrementada de antibióticos y seguridad de tejido glicerol (tóxico); sin ester 1 i zación terminal formal Claridad de TRANSLÚCIDO: Ópticamente OPACAS: apariencia Tej ico transparente lechosa o nebulosa En una modalidad preferida, el biote ido de colágeno de la invención es translúcido, es decir, ópticamente transparente. En otra modalidad preferida, el biotejido de colágeno de la invención es delgado y ligero de peso. En una modalidad específica, el biote ido de colágeno deshidratado de la invención es 0.3-0.6 mg/cm2. En una modalidad específica, el biotejido de colágeno de la invención es al menos 30 mieras de espesor. En otra modalidad específica, el biotejido de colágeno de la invención es aproximadamente 10-40 mieras de espesor. La invención abarca el uso del biotejido de colágeno de la invención en varias configuraciones, por ejemplo, insertos, capas protectoras. En general, el biotejido puede configurarse .en cualquier forma médicamente útil. Por ejemplo, el biotejido de colágeno puede configurarse para uso en su totalidad, es decir, el uso del biotejido de colágeno a partir de una placenta completa. Alternativamente, el biotejido de colágeno puede cortarse en tiras, parches o rollos, o puede tejerse en hebras. En otra modalidad, el biotejido de colágeno, ya sea como una sola hoja de espesor o laminado, puede cortarse a intervalos regulares y expandirse, por ejemplo, para formar una malla. En algunas modalidades, el biote ido de colágeno está plano, por ejemplo, tiene una superficie sin declive o curvatura. En otras modalidades el biotejido de colágeno de la invención no es completamente plano y tiene una superficie abollada, por ejemplo, la depresión o indentación en la superficie . En una modalidad específica, preferida, la invención abarca un laminado que comprende al menos dos capas del biotejido de colágeno de la invención. Las capas pueden unirse físicamente juntas, por ejemplo, a través del uso de un pegamento, un sujetador, o sellando con calor una porción de los biotejidos, por ejemplo, la periferia de al menos una de las capas, para fundir las capas. Debido a que los biotejidos tienen una "textura granular", el biotejido puede laminarse en una variedad de formas. En una modalidad, todas las capas del laminado tienen la misma orientación de textura granular. En otra modalidad, al menos una de las capas en una orientación de textura granular que se gira aproximadamente 90 grados (es decir, es aproximadamente perpendicular a) la orientación de textura granular de al menos una capa diferente. En una modalidad más específica, las capas perpendiculares están adyacentes una a la otra. En aún otra modalidad, el laminado comprende al menos tres capas del biotejido de colágeno, en donde las estructuras de textura granular de cada una de al menos tres capas se gira aproximadamente 60 grados a la estructura de textura granular de dos de las capas restantes. En otra modalidad, el laminado contiene al menos un primer material y un segundo material, en donde el primer material es el' biotejido de colágeno de la invención, y el segundo material es cualquiera otra sustancia que puede formar un laminado con el biotejido de colágeno. En una modalidad específica, el segundo material es una hoja o membrana derivada de una membrana diferente de la membrana ammótica. En otra modalidad específica, el segundo material es un material no natural, por ejemplo, polilactona, poliacetato, película plástica, o similares. En algunas modalidades, el laminado de membrana amniótica es multi-capa, que comprende al menos 6, al menos 8, al menos 10, al menos 20, al menos 80, al menos 100, al menos 1000 membranas amnióticas que han sido preparadas de acuerdo con los métodos de la invención. El laminado de membrana amniótica de la invención puede contener un número ilimitado de capas. Los laminados tienen rigidez estructural incrementada que permite al laminado conformarse en estructuras tridimensionales complejas. Tales estructuras tridimensionales pueden incluir hojas, tubos, microesferas . El biotejido de colágeno puede también asociarse con otro material, ya sea como una simple hoja o como un laminado. Por ejemplo, el biotejido puede asociarse con, por ejemplo, unirse a, película plástica flexible, gasa, laminado plástico, stents, válvulas, dispositivos ortopédicos, vendajes, parches, etc. El biotejido de colágeno puede comprender uno o más compuestos o sustancias que no son parte de la matriz de colágeno del biotejido. Por ejemplo, el biotejido de colágeno puede impregnarse, ya sea durante la producción o durante la preparación para la cirugía, con una biomolécula. Tales biomoléculas incluyen, pero no se limitan a, antibióticos (tales como Clindamicina , Minociclina, Doxiciclina, Gentamicina) , hormonas, factores de crecimiento, agentes anti-tumor, agentes anti-fúngicos , agentes antivirales, medicamentos para el dolor, anti -histamínicos , agentes antiinflamatorios, anti- infecciosos incluyendo pero sin limitarse a plata (tales como sales de plata, incluyendo pero sin limitarse a nitrato de plata y sulfadiazina de plata) , plata elemental, antibióticos, enzimas bactericidas (tales como lisozoma) , agentes de cicatrización de heridas (tales como citocinas incluyendo pero sin limitarse a PDGF, TGF; timosina) , ácido hialurónico como un agente de cicatrización de heridas, sellantes de heridas (tales como fibrina con o sin trombina) , atrayentes celulares y reactivos de andamiaje (tales como f ibronectina) y similares. En un ejemplo específico, el biotejido de colágeno puede impregnarse con al menos un factor de crecimiento, por ejemplo, factor de crecimiento de fibroblasto, factor de crecimiento epitelial, etc. El biotejido puede también impregnarse con pequeñas moléculas orgánicas tales como inhibidores específicos de procesos bioquímicos particulares, por ejemplo, inhibidores del receptor de membrana, inhibidores de cinasa, inhibidores de crecimiento, fármacos anti-cáncer, antibióticos, etc. En aún otras modalidades, el biotejido de colágeno de la invención puede combinarse con un hidrogel . Cualquier composición de hidrogel conocida por alguien con experiencia en la técnica se abarca dentro de la invención, por ejemplo, cualquiera de las composiciones de hidrogel descritas en las siguientes revisiones: Graham, 1998, Med. Device Technol . 9(1): 18-22; Pepas et al., 2000, Eur. J. Pharm. Bíopharm. 50(1) : 27-46; Nguyen et al., 2002, Biomaterials , 23(22) : 4307-14; Henincl et al., 2002, Adv. Drug Deliv. Rev 54(1) : 13-36, Skelhorne et al., 2002, Med. Device. Technol. 13(9) : 19-23; Schmedlen et al., 2002, Biomaterials 23: 4325-32; todos de los cuales se incorporan en la presente para referencia en su totalidad. En una modalidad específica, la composición de hidrogel se aplica en el biotejido de colágeno, es decir, descarga en la superficie del biotejido de colágeno. La composición de hidrogel por ejemplo, puede rociarse en el biotejido de colágeno, saturarse en la superficie del biotejido, enjuagarse con el biotejido de colágeno, bañarse con el biotej ido de colágeno o recubrirse en la superficie del biotej ido de colágeno. Los hidrogeles útiles en los métodos y composiciones de la invención pueden hacerse de cualquier polímero soluble en agua o interactivo en agua conocido en la técnica, incluyendo pero sin limitarse a, alcohol polivinílico (PVA) , metacrilato de polihidroxietilo, polietilenglicol , polivinilpirrolidona , ácido hialurónico, dextrano o derivados y análogos de los mismos . En algunas modalidades, el biotej ido de colágeno de la invención se impregna además con una o más biomoléculas antes de combinarse con un hidrogel . En otras modalidades, la composición de hidrogel se impregna además con una o más biomoléculas antes de combinarse con un biotej ido de colágeno de la invención. Tales biomoléculas incluyen, pero no se limitan a, antibióticos (tales como Cl indamicina , inociclina, Doxiciclina, Gentamicina) , hormonas, factores de crecimiento, agentes anti-tumor, agentes anti - fúngicos , agentes antivirales, medicamentos para el dolor, anti-histamínicos , agentes anti - inflamatorios , ant i - infecciosos incluyendo pero sin limitarse a plata (tal como sales de plata, incluyendo pero sin limitarse a nitrato de plata y sulfadiazina de plata), plata elemental, antibióticos, enzimas bacteriales (tales como lisozoma) , agentes de cicatrización de heridas (tales como citocinas incluyendo, pero sin limitarse a PDGF , TGF ; timos na) , ácido hialurónico como un agente de cicatrización de herida, sellantes de herida (tales como fibrina con o sin trombina) , atrayentes celulares y reactivos de andamiaje (tales como fibronectma ) y similares. En un ejemplo específico, el biotejido de colágeno de la composición de hidrogel puede impregnarse con al menos un factor de crecimiento, por ejemplo, factor de crecimiento de fibroblasto, factor de crecimiento epitelial, etc. Preferiblemente, la biomolécula es un agente terapéutico. En algunas modalidades, la composición de hidrogel se combina con un laminado que comprende el biotejido de la invención . La composición de biotejido de hidrogel/colágeno tiene utilidad en el campo médico incluyendo, pero sin limitarse a, tratamiento de heridas, quemaduras y condiciones de la piel (por ejemplo, para tratar cicatrización), usos cosméticos (por ejemplo, cirugía cosmética) y cualquier uso como un implante. En algunas . modalidades , la composición de biotejido de hidrogel/colágeno se aplica tópicamente a un sujeto, es decir, en la superficie de la piel, por ejemplo, para el tratamiento de una herida. En otras modalidades, la composición de biotejido de hidrogel/colágeno puede utilizarse en el interior de un sujeto, por ejemplo como un implante, para llegar a ser una estructura permanente o semi-permanente en el cuerpo . En algunas modal idades las composiciones de hidrogel se formulan p ra ser no biodegradables . En aún otras modalidades, la composición de hidrogel se formula para ser biodegradable . En una modalidad específica, la composición de hidrogel se formula para degradarse dentro de días. En otra modalidad específica, la composición de hidrogel se formula para degradarse dentro de meses . En algunas modalidades, el biotejido de colágeno de la invención se puebla con células, de manera que las células son uniformes y confluentes. Las células que pueden utilizarse para poblar un biotejido de la invención incluyen pero no se limitan a, células madre, preferiblemente células madre humanas, células de adulto diferenciadas humanas, células madre totipotentes , células madre pluripotentes , céluas madre mult ipotentes , células madre específicas de tejido, células madre análogas embriónicas, células prcgenitoras comprometidas, células de fibroblastoide . En otras modalidades, la invención abarca poblar el biotejido de la invención con clases específicas de células progenitoras incluyendo pero sin limitarse a condorcitos, hepatocitos, células hematopoyéticas , células parenquimales pancreáticas, neuroblastos , y células progenitoras musculares. .2 PROCESO PARA PRODUCIR BIOTEJIDOS DE COLÁGENO La presente invención proporciona un método para preparar un biotejido de colágeno de la invención. En particular, la invención abarca un método para preparar un biotejido de colágeno que comprende: proporcionar una placenta, comprende una membrana amniótica y una membrana coriónica; separar la membrana ' amniótica de la membrana coriónica; y descelularizar la membrana amniótica. En una modalidad específica, el método implica además lavar y secar la membrana amniótica descelularizada . Preferiblemente, la placenta es de una placenta humana para uso en sujetos humanos. En algunas modalidades, la invención abarca placenta a partir de especies animales para uso en un sujeto humano. En otras modalidades, la invención abarca placenta a partir de especies animales para uso veterinario en sujetos animales. En una modalidad preferida, la placenta para uso en los métodos de la invención se toma tan pronto como es posible después del suministro del recién nacido. En aún otra modalidad preferida, la placenta se toma inmediatamente después del alumbramiento de sección por cesárea de un infante saludable normal. Siempre que la placenta se recolecte bajo condiciones asépticas. En algunas modalidades, la placenta se almacena durante 48 horas a partir del tiempo de suministro anterior a cualquier tratamiento adicional . En otras modalidades, la placenta se almacena hasta por 5 días a partir del tiempo de suministro antes de cualquier tratamiento adicional. Preferiblemente, la placenta, cordón umbilical, y sangre del cordón umbilical se transportan a partir del cuarto del alumbramiento o parto a otra ubicación, por ejemplo, un laboratorio, para procesamiento adicional. La placenta se transporta preferiblemente en un dispositivo de transporte, estéril tal como una bolsa estéril o un contenedor, que se aisla de manera opcional térmicamente. En algunas modalidades, la placenta se almacena a temperatura ambiente hasta el tratamiento adicional . En otras modalidades, la placenta se refrigera hasta el tratamiento adicional, es decir, se almacena a temperatura de aproximadamente 2° a 8°C. En aún otras modalidades, la placenta se almacena bajo condiciones estériles por hasta 5 días antes del tratamiento adicional. En una modalidad más preferida, la placenta se maneja y procesa bajo condiciones asépticas, como se conoce por aquellos expertos en la técnica. El laboratorio se equipa preferiblemente con un sistema de filtración HEPA (como se define por clasificación de cuarto limpio, que tiene una clase de 1000 o mejor) . En una modalidad preferida, el sistema de filtración HEPA se hace girar en al menos 1 hora antes de utilizar el cuarto de laboratorio para llevar a cabo los métodos de la invención. En ciertas modalidades, la placenta se sangra, es decir, drena completamente de la sangre del cordón restante después del nacimiento. En algunas modalidades, la placenta es 70% sangrada, 80% sangrada, 90% sangrada, 95% sangrada, 99% sangrada. La invención abarca seleccionar la madre embarazada al tiempo del nacimiento, utilizando técnicas estándares conocidas por alguien con experiencia en el arte, para enfermedades transmisibles incluyendo pero sin limitarse a, VIH, HBV , HCV, HTLV, sífilis, CMV, y otros patógenos virales conocidos por contaminar el tejido placentario. Preferiblemente, los métodos utilizados para seleccionar una enfermedad transmisible siguen las regulaciones como se establece por la Administración de Alimentos y Drogas. La madre embarazada puede seleccionarse (por ejemplo, una muestra sanguínea se toma para propósitos de diagnóstico) dentro de un mes de nacimiento, preferiblemente dentro de dos semanas de nacimiento, aún más preferiblemente dentro de una semana de nacimiento, y más preferiblemente, al tiempo del nacimiento. Únicamente tejidos recolectados de donadores cuyas madres probadas negativas o no reactivas a los patógenos mencionados anteriormente se utilizan para producir un biote ido de la invención. Preferiblemente, una historia paterna, médica y social cuidadosa del donador de la membrana placentaria se obtiene, incluyendo por ejemplo, una historia familiar detallada.

Se clasifica al donador utilizando pruebas serológicas y bacteriológicas estándares conocidas por alguien con experiencia en la técnica. Cualquier ensayo o prueba de diagnóstico que identifica el o los patógenos está dentro del alcance del método de la invención, pero preferiblemente los ensayos son 'los que combinan exactitud elevada con capacidad de rendimiento total elevado. En una modalidad específica, la invención abarca seleccionar al donador utilizando técnicas estándares conocidas por alguien con experiencia en el arte para antígenos y/o anticuerpos. Un ejemplo no limitante de antígenos y anticuerpos incluye: seleccionar el anticuerpo (ATY) ; clasificación de alanina amino transferasa (ALT) ; Anticuerpo de Núcleo de Hepatitis (ácido nucleico y ELISA) ; Antígeno de Superficie de la Hepatitis B; Anticuerpo del Virus de la Hepatitis C; VIH-1 y VIH-2; HTLV-1 y HTLV-2; prueba de Sífilis (RPR) ; prueba de anticuerpo de CMV; y prueba de Hepatitis C y VIH. Los ensayos utilizados pueden ser ensayos basados en ácido nucleico o ensayos basados en ELISA como se conoce por alguien con experiencia en la técnica. La invención incluye además probar la sangre del cordón umbilical del recién nacido utilizando técnicas estándares conocidas por alguien con experiencia en la técnica (véase, por ejemplo, Cotorruelo et al., 2002, Clin Lab. 48(5-6); 271-81; Maine et al., 2001, Expert Rev. Mol.

Diagn. , 1 ( 1 ) : 19 -29 ; Nielsen et al., 1987, J. Clin. Microbiol . 25 (8) ; 1406-10 ; todas de las cuales se incorporan en la presente para referencia en su totalidad) . En una modalidad, la sangre del cordón umbilical del recién nacido se prueba para patógenos bacteriales (incluyendo pero sin limitarse a bacterias gram positivas y gram negativas) y hongos utilizando técnicas estándares conocidas por alguien con experiencia en el arte. En una modalidad específica, el tipo sanguíneo y factor Rh de la sangre del cordón umbilical del recién nacido se determina utilizando técnicas estándares conocidas por aquellos expertos en el arte. En otra modalidad, CBC con diferencial es obtenido a partir de la sangre del cordón umbilical del recién nacido utilizando métodos estándares conocidos por alguien con experiencia en la técnica. En aún otra modalidad, un cultivo bacterial aeróbico se toma a partir de la sangre del cordón umbilical del recién nacido, utilizando métodos estándares conocidos por alguien con experiencia en la técnica. Únicamente tejidos recolectados de donadores que tienen un CBC dentro de un límite normal (por ejemplo, ninguna anormalidad grotesca o desviación a partir del nivel normal), prueba negativa para serología y bacteriología, y prueba negativa o no reactiva para enfermedades infecciosas y contaminación se utilizan para producir un biotejido de la invención. Un método ejemplar para preparar un biote ido de colágeno de la invención comprende las siguientes etapas: Etapa I. La invención abarca procesar la membrana placentaria de manera que el cordón umbilical se separa del disco placentario (opcionalmente) , y la separación de la membrana amniótica a partir de la membrana coriónica. En una modalidad preferida, la membrana' amniótica se separa de la membrana coriónica anterior para cortar la membrana placentaria. La separación de la membrana amniótica a partir de la membrana coriónica se hace preferiblemente iniciando desde el borde de la membrana placentaria. En otra modalidad preferida, la membrana amniótica se separa de la membrana coriónica utilizando disección tosca, por ejemplo, con dedos enguantados. Después de la separación de la membrana amniótica a partir de la membrana coriónica y el disco placentario, el raigón del cordón umbilical se corta, por ejemplo con tijeras, y se desprende del disco placentario. En ciertas modalidades, cuando la separación de las membranas amnióticas y coriónicas no es posible sin desgarrar el tejido, la invención abarca cortar las membranas amnióticas y coriónicas a partir del disco placentario como una pieza y luego pelándolas aparte. La membrana amniótica se almacena entonces preferiblemente en una solución salina estéril. En algunas modalidades, la solución salina estéril se regula. En una modalidad preferida específica, la solución salina estéril para almacenar la membrana amniótica es una solución de NaCl estéril de 0.9%. Preferiblemente, la membrana amniótica se almacena por refrigeración, a una temperatura de al menos 4°C. En ciertas modalidades, la membrana amniótica se refrigera a una temperatura de al menos 2°C, al menos 6°C o hasta 8°C. En este punto, la' membrana amniótica puede almacenarse por hasta 5 días, con la condición de que se refrigere y mantenga cubierta con solución salina estéril. Preferiblemente, la membrana amniótica separada se refrigera durante un máximo de 72 horas a partir del tiempo de suministro antes de la siguiente etapa en el proceso. Etapa II. Una vez que la membrana amniótica se separa de la membrana coriónica, la invención abarca descelularizar la membrana amniótica. Cualquier proceso de descelularizar conocido por un experto en la técnica se abarca por los métodos de la invención, con la condición que el proceso para descelularizar la membrana amniótica de la invención no incluye ningún congelamiento de la membrana amniótica. Como se utiliza en- la presente, descelularizar se refiere a remover todo el material celular y restos celulares (por ejemplo, todo el material celular visible y restos celulares) a partir de las membranas amnióticas de la invención. La descelularización de la membrana amniótica asegura que sustancialmente todas las células normalmente asociadas con la matriz de colágeno de la membrana amniótica se remueven. La descelularización de la membrana amniótica de la invención que remueve "sustancialmente todo" de las células asociadas con la matriz de colágeno preferiblemente remueve al menos 90% de las células, de más preferencia remueve al menos 95% de las células, y de mayor preferencia remueve al menos 99% de las células. Las membranas amnióticas descelularizadas de acuerdo con los métodos de la invención son uniformemente delgadas, es decir, 10-40 mieras de espesor, suaves (como se determina por el tacto) y transparentes en apariencia. En una modalidad preferida, la descelularización de la membrana amniótica de la invención comprende remover sustancialmente todo el material celular y restos celulares del lado maternal de la membrana amniótica seguida, removiendo todo el material celular y los restos celulares a partir del lado fetal de la membrana amniótica. En una modalidad específica, la descelularización de la membrana amniótica de la invención comprende raspados físicos en combinación con enjuague con. una solución estéril. En otra modalidad específica, el raspado físico de la membrana amniótica comprende raspar con un raspador celular estéril . En aún otra modalidad específica, la solución estéril para enjuagar la membrana amniótica durante la descelularización en una solución acuosa, una solución que comprende un regulador fisiológico o una solución salina tal como por ejemplo, una solución de NaCl al 0.9%. La descelularizacion de la membrana amniótica comprende remover células nativas y otros antígenos y restos celulares de la membrana amniótica, y, opcionalmente , el tratamiento para inhibir la generación de nuevos sitios inmunológicos . En la descelularizacion la membrana amniótica, células viables nativas así como otras estructuras o componentes celulares y acelulares que pueden provocar una respuesta inmune adversa se remueven. La técnica de descelularizacion empleada de acuerdo con la invención no debe resultar en interrupción brusca de la anatomía de la membrana amniótica o alterar las propiedades biomecánicas de su composición estructural, es decir, la integridad estructural y bioquímica del colágeno, elastina y posiblemente fibronectina no se afectan por la descelularizacion. Específicamente, el tratamiento químico duro y tratamiento de proteasa de la membrana amniótica no están dentro del alcance de la técnica de descelularizacion de la presente invención. Preferiblemente, la descelularizacion de la membrana amniótica comprende el uso de una solución que contiene detergente. Los detergentes que pueden utilizarse de acuerdo con los métodos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, detergentes no iónicos, Tritón X-100, detergentes aniónicos, dodecilsulfato de sodio. Los detergentes que pueden utilizarse solos o en combinación con los métodos de la presente invención. Cualquier detergente aniónico suave, es decir, un detergente no cáustico, con un pH de 6 a 8, y espumación baja, puede utilizarse de acuerdo con los métodos de la invención. En una modalidad específica, se utiliza 0.01-1% de monohidrato de la sal de sodio del ácido desoxicólico en la descelularización de la membrana amniótica. Aunque no se pretende unirse por un modo particular de acción, la descelularización de la membrana amniótica de acuerdo con los métodos de la invención puede interrumpir las membranas celulares y ayudar en la remoción de los restos celulares a partir de la membrana amniótica. Sin embargo, las etapas deben tomarse para eliminar cualesquiera niveles de detergente residuales en la membrana amniótica, para que por ejemplo, se evite la interferencia con la última re-población de la membrana amniótica con las células viables. Es esencial limitar la actividad de proteasa en la preparación del biotejido de la invención. Los aditivos tales como quelantes de ión metálico por ejemplo 1 , 10-fenantrolina y ácido etilendiamintetraacético (EDTA) , crean un ambiente desfavorable para muchas enzimas proteolíticas . Proporcionar condiciones sub-óptimas para proteasas tales como colagenaza, puede ayudar en la protección de las composiciones de membrana amniótica tal como colágeno a partir de la degradación durante la etapa de lisis. Las condiciones sub-ópcimas para la proteasa pueden lograrse formulando la solución de lisis hipotónica para eliminar o limitar la cantidad de iones de calcio y zinc disponibles en solución. Muchas proteasas son activas en la presencia de iones de calcio y zinc y pierden mucha de su actividad en ambientes libres de ión de calcio y zinc. Preferiblemente, la solución de lisis hipotónica se preparará seleccionando condiciones de pH, disponibilidad reducida de iones de calcio y zinc, presencia de quelantes de ión metálico y el uso de inhibidores proteolíticos específicos para colagenaza de manera que la solución desintegrará óptimamente las células nativas mientras se protege la membrana amniótica subyacente de la degradación proteolítica adversa. Por ejemplo, una solución de lisis hipotónica puede incluir una solución regulada de agua, pH 5.5 a 8, preferiblemente pH 7 a 8 , libre de iones de calcio y zinc que incluye un quelante de ión metálico tal como EDTA. Adicionalmente , el control de los parámetros de temperatura y tiempo durante el tratamiento de la membrana amniótica con la solución de lisis hipotónica, puede emplearse también para limitar la actividad de las proteasas . Se prefiere que el tratamiento de descelulari zación de la membrana amniótica también . limite la generación de nuevos sitios inmunológicos . Ya que la degradación enzimática del colágeno se cree que conduce a inmunogenicidad intensificada, la invención abarca el tratamiento de la membrana amniótica con enzimas, por ejemplo, nucleasas que son efectivas en inhibir el metabolismo celular, producción de proteína y división celular, que minimiza la proteólisis de las composiciones de la membrana amniótica conservando así la arquitectura subyacente de la membrana amniótica. Ejemplos de nucleasas que pueden utilizarse de acuerdo con los métodos de la invención son aquellos efectivos en la digestión de ADN y ARN de célula nativa incluyendo tanto exonucleasas como endonucleasas . Un ejemplo no limitante de nucleasas que pueden utilizarse de acuerdo con los métodos de la invención incluyen exonucleasas que inhiben la actividad celular, por ejemplo, ADNasa I (SIGMA Chemical Company, St . Louis, Mo) y ARNasa A (SIGMA Chemical Company, St . Louis, Mo . ) y endonucleasas que inhiben la actividad celular, por ejemplo, EcoR I (SIGMA Chemical Company, S . Louis, Mo . ) y Hind III (SIGMA Chemical Company, St . Louis, Mo) . Es preferible que las nucleasas seleccionadas se apliquen en una solución de regulador fisiológico que contiene iones, por ejemplo, magnesio, calcio, que son óptimos para la actividad de la nucleasa. Preferiblemente, la concentración iónica de la solución regulada, la temperatura de tratamiento y la longitud del tratamiento se seleccionan por un experto en la técnica por experimentación rutinaria para asegurar el nivel deseado de la actividad de nucleasa. El regulador es preferiblemente hipotónico para promover acceso de las nucleasas en interiores celulares. En una modalidad específica, descelularizar la membrana amniótica de la invención comprende las siguientes etapas. Primera, la membrana amniótica se transfiere en un recipiente estéril limpio, y se enjuaga opcionalmente con agua estéril y se seca con una gasa estéril. La placenta se coloca entonces en una charola estéril con el lado maternal de frente hacia arriba. Utilizando un raspador celular estéril (por ejemplo, 32 cm, cuchilla PE, agarradera PS , NalgeNunc International) , la placenta se descelulariza parcialmente removiendo físicamente todo el material celular visible a partir del lado maternal de la membrana amniótica. Se utiliza agua estéril para ayudar en la remoción de las células y restos celulares, si es necesario. Después de completar la descelularizacion parcial en el lado maternal de la membrana amniótica, la membrana amniótica cambia de dirección de manera que el lado fetal da frente hacia arriba. Todos los restos celulares visibles en el lado fetal se remueven suavemente con un raspador celular utilizando presión mínima en la membrana amniótica para evitar el desgarre. El agua estéril puede utilizarse para ayudar en la remoción de las células y los restos. En una modalidad, la membrana amniótica descelularizada se coloca en un recipiente estéril relleno con una solución fisiológica estéril, por ejemplo, solución estéril de NaCl al 0.9%, antes del procesamiento adicional. De acuerdo con los métodos de la invención, la siguiente etapa de procesamiento de la membrana amniótica debe iniciar no después de 2-3 horas después que la membrana amniótica ha sido colocada en la solución fisiológica estéril. En una modalidad específica, en donde la Etapa III inmediatamente sigue la Etapa II, no es necesario colocar la membrana amniótica en un recipiente con la solución estéril. La membrana amniótica puede cortarse durante el proceso de limpieza, utilizando por ejemplo un escalpelo estéril, para formar éste para limpieza más fácil o para remover las áreas que no pueden limpiarse. Etapa III. Después de la descelularización, la membrana amniótica se lava para asegurar la remoción de los restos celulares que pueden incluir proteínas celulares, lípidos celulares, y ácidos nucleicos celulares, así como cualesquiera restos extracelulares tales como proteínas solubles extracelulares, lípidos y proteoglicanos . Aunque no se pretende unirse por cualquier mecanismo de acción, la remoción de estos restos celulares y extracelulares reduce la inmunogenicidad de la membrana amniótica. Una vez que las membranas amnióticas de la invención se descelularizan, las membranas se lavan además para lograr efectivamente la remoción completa de todo el material celular visible y restos celulares a partir de ambos lados de la membrana amniótica. La solución es preferiblemente una solución de resistencia iónica baja o hipotónica acuosa formulada para desintegrar efectivamente las células de tejido nativo. Tal solución hipotónica acuosa puede ser agua desionizada o un regulador hipotónico acuoso. Preferiblemente, el regulador hipotónico acuoso adicionalmente contiene aditivos que proporcionan condiciones sub-óptimas para la actividad de la proteasa, por ejemplo, colagenaza, que puede liberarse como un resultado de la lisis celular . Preferiblemente, la membrana amniótica se agita suavemente en el detergente, por ejemplo en una plataforma basculante, para ayudar en la descelularización. En ciertas modalidades, la membrana amniótica se agita durante al menos 15 minutos, al menos 20 minutos, al menos 30 minutos, o hasta 120 minutos. La membrana amniótica puede, después de la descelularización del detergente, nuevamente descelularizarse físicamente como se describe supra; las etapas de descelularización física y de detergente pueden repetirse como sea necesario, siempre y cuando la integridad de la membrana amniótica se mantenga, hasta que ningún material celular visible y restos celulares permanezcan. En una modalidad específica, el lavado de la membrana amniótica comprende las siguientes etapas: la membrana amniótica descelulari zada se coloca en un recipiente estéril que se llena entonces con una solución de descelularizacion en una cantidad suficiente para cubrir la membrana amniótica; el recipiente con la membrana amniótica y la solución de descelularizacion' se coloca entonces en una plataforma basculante (por ejemplo, Modelo 100, V R Scientific Products Corp., P.O. Box 640169, Pittsburg, PA 15264-0169) . La membrana amniótica en la solución de descelularizacion se agita entonces durante 15 minutos y 120 minutos en la plataforma basculante. Después de la etapa de agitación, la membrana amniótica se remueve del recipiente y se coloca en una charola estéril limpia rellena con una solución estéril, por ejemplo, solución de NaCl al 0.9%. Utilizando un nuevo Raspador Celular estéril, se remueve la solución de descelularizacion residual y cualquier material celular restante se remueve de ambos lados de la membrana amniótica. Esta etapa puede repetirse tantas veces como sea necesario para remover todo . el material celular residual visible de ambos lados de la membrana amniótica. En ciertas modalidades, la membrana amniótica se seca inmediatamente (es decir, dentro de 30 minutos) después de la etapa de descelularizacion. Alternativamente, cuando el procesamiento adicional no se hace inmediatamente, la membrana amniótica puede refrigerarse, por ejemplo, almacenarse a una temperatura de 2-8°C por hasta 28 días antes del secado. Cuando la membrana amniótica descelularizada se almacena durante más de tres días, pero menos de 28 días, la solución estéril que cubre la membrana amniótica se cambia preferiblemente de manera periódica, por ejemplo cada 1-3 días. En ciertas modalidades, cuando la membrana amniótica no se refrigera después del lavado, la membrana amniótica se lava al menos 3 veces antes de proceder la etapa IV de la preparación. En otras modalidades, cuando la membrana amniótica se ha refrigerado y la solución estéril ha sido cambiada una vez, la membrana amniótica se lava al menos dos veces antes de proceder a la Etapa IV de la preparación. En aún otra modalidad, cuando la membrana amniótica ha sido refrigerada y la solución estéril ha sido cambiada dos veces o más, la membrana amniótica se lava al menos una vez antes de proceder a la Etapa IV de la preparación. En modalidades específicas, la membrana amniótica descelularizada se almacena bajo condiciones estériles, y no se realiza ningún procesamiento adicional, es decir, no se seca. Antes de proceder a la Etapa IV, es esencial que todas las pruebas bacteriológicas y serológicas se evalúen para asegurar que todas las pruebas fueron negativas. Etapa IV: La etapa final del método de la invención comprende secar la membrana amniótica descelularizada de la invención para producir el biotejido de colágeno. Cualquier método para secar la membrana amniótica de manera que produzca una hoja plana, seca de colágeno puede utilizarse. Preferiblemente, sin embargo, la membrana amniótica se seca bajo vacío. En una modalidad específica, un método ejemplar para secar la membrana amniótica descelularizada de la invención comprende las siguientes etapas: Ensamble de la membrana amniótica descelularizada por secado. La membrana amniótica descelularizada se remueve de la solución estéril, y el fluido en exceso se comprime suavemente fuera. La membrana amniótica descelularizada se expande suavemente hasta que está plano con el lado fetal de frente en una posición descendente, por ejemplo, en una charola. La membrana amniótica descelularizada se suelta en seguida de manera que el lado fetal da de frente hacia arriba, y se coloca en un cuadro de secado, preferiblemente un cuadro de secado de malla de plástico (por ejemplo, Quick Count® Plástic Canvas , Uniek, . Inc., Waunakee, WI) . En otras modalidades, el cuadro de secado puede ser una malla de acero inoxidable autoclavable . En una modalidad más preferida, aproximadamente 0.5 centímetros de la membrana amniótica traslapa los bordes del cuadro de secado. En ciertas modalidades, la membrana amniótica traslapante que se extiende más allá del cuadro de secado se envuelve sobre la parte superior del cuadro, por ejemplo, utilizando una agarradera o hemóstato. Una vez que la membrana amniótica se coloca en el cuadro de secado, una gasa estéril se coloca en la plataforma de secado del secador de calor (o secador de gel) (por ejemplo, Modelo 583, Bio-Rad Laboratories, 200 Alfred Nobel Drive, Hercules, CA 94547), de manera que un área ligeramente mayor que la membrana amniótica que descansa en el cuadro de secado de malla plástica se cubre. Preferiblemente, el espesor total de la capa de gasa no Oaparato de secado por calor puede utilizarse, el cual es adecuado para hoja de secado similar al material. El cuadro de secado se coloca en la parte superior de la gasa en la plataforma de secado de manera que los bordes del cuadro de plástico extendidos más de allá de los bordes de la gasa, preferiblemente entre 0.1 - 1.0 cm, de más preferencia 0.5-10 cm. En una modalidad más preferida, el cuadro de secado que tiene la membrana amniótica se coloca en la parte superior de la gasa estéril con el lado fetal de la membrana amniótica de frente hacia arriba. En algunas modalidades, otra malla del cuadro de plástico se coloca en la parte superior de la membrana amniótica. Una vista del cuadro de malla y la membrana seca en la presente se muestra en la FIGURA 4. En otras modalidades, una hoja de plástico delgado (por ejemplo, S 182, PVC transparente, AEP Industries, Inc., South Hackensack, NJ 07606) o un silicón biocompat ible se coloca en la parte superior de la malla cubierta con membrana de manera que la hoja se extiende bien más allá de todos los bordes. En esta modalidad, el segundo cuadro de malla no es necesario. En una modalidad alternativa, la membrana amniótica se coloca en una o más hojas estériles del material Tyvek (por ejemplo, una hoja de Tyvek para empaquetado médico, Dupont Tyvek®, P.O. Box 80705, Wilmington, DE 19880-0705) , opcionalmente , con una hoja de Tyvek en la parte superior de la membrana (antes de colocar la película plástica) . Este proceso alterno producirá una versión más suave del biotej ido (es decir, sin el patrón de regiones de compresión de fibra diferencial junto y perpendicular al eje del material) que puede ser ventajoso para ciertas aplicaciones, tal como por ejemplo para uso como una matriz para la expansión de células, como se describe en la presente. Secar la membrana amniótica . En una modalidad preferida, la invención abarca secar por calor la membrana amniótica de la invención bajo vacío. Aunque el secado bajo vacío puede lograrse a . cualquier temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 60°C, la membrana amniótica se seca preferiblemente entre aproximadamente 35°C y aproximadamente 50°C, y de mayor preferencia de aproximadamente 50 °C. Se debe observar que alguna degradación del colágeno se esperará a temperaturas arriba de 50°C. La temperatura de secado preferiblemente se establece y verifica utilizando un termómetro digital calibrado utilizando una sonda extendida. Preferiblemente, la presión de vacío se establece a aproximadamente -22 pulgadas de Hg . La etapa de secado se continúa hasta que la matriz de colágeno de la membrana amniótica contenga menos de 3-12% de agua como se determina por ejemplo por un analizador de humedad. Para lograr esto, la membrana amniótica puede secarse por vacío de calor, por ejemplo, durante aproximadamente 60 minutos para logra una membrana amniótica deshidratada. En algunas modalidades, la membrana amniótica se seca durante aproximadamente 30 minutos a 2 horas, de preferencia de aproximadamente 60 minutos. Aunque no se pretenda unirse por cualquier mecanismo de acción, se cree que el establecimiento de calor bajo acoplado con presión al vacío permite a la membrana amniótica lograr el estado deshidratado sin desnaturalizar el colágeno. Después de la terminación del proceso de secado de acuerdo con la invención, la membrana amniótica se enfría durante aproximadamente dos minutos con la bomba de vacío en marcha. Empacado y Almacenamiento de la Membrana Amniótica . Una vez que la membrana amniótica se seca de acuerdo con los métodos de la invención como se describe, la membrana se despega suavemente del cuadro de secado. El "despegue" de la membrana puede comprender las siguientes etapas: mientras la bomba está en marcha aún, la película plástica se remueve suavemente de la membrana amniótica empezando en la esquina, mientras se mantiene la membrana amniótica desactiva; el cuadro con la membrana amniótica se despega de la plataforma de secado y se coloca en una tabla para cortar con el lado de la membrana amniótica de frente · hacia arriba; se hace una incisión, cortando a lo largo del borde 1-2 mm fuera del borde del cuadro; la membrana amniótica se pela entonces fuera del cuadro; y se corta en tamaños apropiados como se determina por su uso subsiguiente. Preferiblemente, el manejo de la membrana amniótica en esta etapa se hace con los guantes estériles. La membrana amniótica se coloca en un recipiente estéril, por ejemplo, una bolsa de pellejo, y se sella. El biotej ido producido de acuerdo con los métodos de la invención puede almacenarse a temperatura ambiente durante un periodo extendido de tiempo como se describe supra. En modalidades alternativas, la invención proporciona un método para preparar un biotejido de colágeno que comprende una membrana coriónica. Se espera que los métodos descritos anteriormente sean aplicables al método para preparar un biotejido que comprende una membrana coriónica. En una modalidad específica, la invención abarca un método para preparar un biotejido de colágeno que comprende proporcionar una placenta, que comprende una membrana amniótica y una membrana coriónica; separar la membrana amniótica a partir de la membrana coriónica; y descelularizar la membrana coriónica. En una modalidad específica, el método además implica lavar y secar la membrana coriónica descelularizada . .2.1 MÉTODOS PARA PREPARAR ANDAMIO TRIDIMENSIONALES Y LAMINADOS La invención proporciona métodos para preparar andamios tridimensionales, configuraciones tridimensionales y laminados que comprenden el biotej ido de colágeno de la invención . En algunas modalidades, la invención proporciona un método para preparar un laminado de membrana amniótica que comprende: proporciona una placenta, preferiblemente una placenta humana, que comprende una membrana amniótica y una membrana coriónica, separando la membrana amniótica de la membrana coriónica, utilizando métodos descritos en la presente; descelularizar la membrana amniótica, utilizando métodos descritos en la presente; lavando la membrana amniótica descelularizada al menos una vez utilizando métodos descritos en la presente; estratificando al menos dos de las membranas amnióticas descelularizadas en contacto entre sí de manera que un laminado de membrana amniótica se forma; y secando el laminado de membrana amniótica, utilizando métodos descritos en la presente. Alternativamente, en otra modalidad, el método para preparar un laminado de membrana amniótica comprende, secar al menos dos membranas amnióticas preparadas de acuerdo con los métodos de la invención, y estratificando al menos dos membranas amnióticas en contacto' entre sí de manera que un laminado de membrana amniótica se forma. En algunas modalidades, las capas de membrana amniótica producidos de acuerdo con los métodos de la invención pueden colocarse en contacto entre sí en la presencia de un adhesivo para formar un laminado de membrana amniótica. El adhesivo utilizado de acuerdo con los métodos y composiciones de la invención pueden ser cualquier pegamento biológico conocido por un experto en la técnica, pre eriblemente un pegamento biocompatible , incluyendo pero sin limitarse a, pegamento natural, por ejemplo, fibronectina, fibrina, pegamento sintético. En otras modalidades, las capas de membrana amniótica preparadas de acuerdo a los métodos de la invención se reticulan entre sí para formar un laminado de membrana amniótica. Cualquier reactivo y método de reticulación conocido por un experto en la técnica está dentro del alcance de la presente invención, incluyendo, pero sin limitarse a reticulación química, reticulación peptídica, reticulación por UV, reticulación por radiación, reticulación de fibronectina, reticulación de f íbrinógeno , reticulación de hidrogel . En otras modalidades, los laminados de membrana amniótica producidos de acuerdo con los métodos de la invención no comprenden un adhesivo. .3 ALMACENAMIENTO Y MANEJO del BIOTEJIDO DE COLÁGENO La invención abarca almacenar el biotejido de colágeno de la invención como hojas deshidratadas a temperatura ambiente (por ejemplo 25°C) . En ciertas modalidades, el biotejido de colágeno de la invención puede almacenarse a temperatura de al menos 10°C, al menos 15°C, al menos 20°C, al menos 25°C, o al menos 29°C. Preferiblemente, el biotejido de colágeno de la invención no se refrigera. En algunas modalidades, el biotejido de colágeno de la invención puede refrigerarse a una temperatura de aproximadamente 2 a 8°C. En otras modalidades, el biotejido de colágeno de la invención puede almacenarse a cualquiera de las temperaturas identificadas anteriormente por un periodo extendido de tiempo. En una modalidad más ¦ preferida , el biotejido de la invención se almacena bajo condiciones estériles y no oxidantes. El biotejido producido de acuerdo con los métodos de la invención puede almacenarse a cualquiera de las temperaturas especificadas durante 12 meses o más sin alteración en la integridad bioquímica o estructural (por ejemplo, sin degradación) , sin ninguna alteración de las propiedades bioquímicas o biofísicas del biotejido de colágeno. El biotejido producido de acuerdo a los métodos de la invención puede almacenarse durante varios años sin alteración en integridad bioquímica o estructural (por ejemplo, sin degradación) , sin ninguna alteración de las propiedades bioquímicas o biofísicas del biotejido de colágeno. Se espera que el biotejido de la presente invención preparado de acuerdo con los métodos de la invención durará indefinidamente. El biote ido puede almacenarse en cualquier recipiente adecuado para almacenamiento a largo plazo. Preferiblemente, el biotejido de colágeno de la invención se almacena en un empaque de bolsa de doble pellejo estéril. La invención abarca el manejo del biotejido de colágeno de la invención en su estado seco. En una modalidad específica, el biotejido de colágeno se recorta antes del uso, por ejemplo, antes de usarse como un injerto quirúrgico. La invención abarca cualquier dimensionalidad del biotejido de la invención que es compatible para su uso, como se determina por un experto en la técnica. En algunas modalidades, la invención abarca un biotejido de colágeno que es 1x2 era; 2x3 cm; 4x4 cm, 5x5 ó 6x8. El biotejido de la invención puede cortarse en cualquier tamaño necesario que está dentro de la limitación del tamaño de la membrana amniótica . La orientación superficial del biotejido de colágeno de la invención puede identificarse vi sua lmente . El biotej ido de colágeno de la invención tiene un patrón de "rejilla", que permite la identificación visual de las superficies maternas y fetales por un experto en la técnica. En una modalidad específica, la orientación superficial del biotejido de colágeno se identifica bajo amplificación. Se apreciará por un experto en la técnica que el lado fetal del biotejido de colágeno puede identificarse por su concavidad, es decir, patrón de rejilla rebajada. Inversamente, el lado maternal puede identificarse por su convexidad, es decir, patrón de rejilla elevada. El biotejido de colágeno de la invención requiere tiempo de preparación mínimo antes del uso. En una modalidad preferida, el biotejido de colágeno de la invención está listo para usarse dentro de 5 minutos o menos, dentro de 10 minutos o menos, dentro de 15 minutos o menos. El tiempo de preparación del biotejido de colágeno de la invención antes del uso por ejemplo, como un injerto quirúrgico, comprende la activación por re-hidratación del biotejido de colágeno deshidratado. En algunas modalidades, el biotejido de colágeno de la invención se hidrata en corto tiempo en el sitio quirúrgico. En otras modalidades, el biotejido de colágeno de la invención se hidrata bajo condiciones estériles en un plato. La invención abarca hidratación del biotejido de colágeno de la invención utilizando un regulador fisiológico estéril. En una modalidad específica, la invención abarca hidratar el biotejido de colágeno de la invención con una solución salina estéril, por ejemplo, solución salina de NaCl al 0.9%. En algunas modalidades de la solución salina estéril se regula. En ciertas modalidades, la hidratacion del biotejido de colágeno de la invención requiere al menos 2 minutos, al menos 5 minutos, al menos 10 minutos, al menos 15 minutos, o al menos 20 minutos. En una modalidad preferida, la hidratacion del biotejido de colágeno de la invención se completa dentro de 5 minutos. En aún otra modalidad preferida, la hidratacion del biotejido de colágeno de la invención se completa dentro de 10 minutos. En aún otra modalidad, la hidratacion del biotejido de colágeno de la invención toma no más de 10 minutos. El biotejido de colágeno de la invención una vez hidratado para uso, por ejemplo como un injerto quirúrgico, tiene capacidad de sutura mejorada con relación a las membranas amnióticas en la técnica, como se determina por un experto en al técnica. El -biote ido de colágeno de la invención no se desgarra tan fácilmente ni es tan desmenuzable como las membranas amnióticas en la técnica. La invención abarca biotejidos de colágeno que pueden efectivamente suturarse. .3.1 ESTERILIZACIÓN La esterilización del biotejido de la invención se hace preferiblemente por métodos que utilizan irradiación de haz de electrón conocidos por un experto en la técnica, por ejemplo Gorham, D. Byron (ed.), 1991, Biomaterials , Stockton Press, New York, 55-122. Cualquier dosis de radiación suficiente para eliminar al menos 99.9% de las bacterias u otros organismos potencialmente contaminantes está dentro del alcance de la invención. En una modalidad preferida, una dosis de al menos 18-25 kgy se utiliza para lograr la esterilización terminal del biotejido de la invención. La esterilización del biotejido de la invención no incluye sin embargo, almacenamiento en antibióticos o glicerol. .4 MÉTODOS PARA UTILIZAR EL BIOTEJIDO DE COLÁGENO DE LA INVENCIÓN El biotejido de colágeno de la invención tiene numerosas utilidades en el campo médico y quirúrgico debido en parte, a sus propiedades físicas, tales como resistencia biomecánica, flexibilidad, capacidad de sutura, inmunogenicidad baja en comparación con las membranas tradicionales utilizadas en la técnica. Por ejemplo, el biotejido de colágeno de la invención se espera tenga una utilidad terapéutica mejorada para regeneración de te ido guiada sobre membranas de la técnica anterior, por ejemplo, membranas de PTFE no reabsorbible sintéticas tales como Goretex™; membranas reabsorbibles sintéticas formadas a partir de copolímeros glicólidos y láctidos, membranas descritas en O-88/08305 ; DE-2631909, Patente Norteamericana No. 5,837,278. El método para preparar el biotejido de colágeno de la invención asegura la conservación de la estructura terciaria y cuaternaria del biotejido de esta manera realizando el biotejido ideal para su uso pretendido en el campo médico y quirúrgico. Como se describe en detalle posteriormente, la invención proporciona biotejidos de colágeno cuyas propiedades físicas le permite ser adecuadas para usos en una variedad de aplicaciones médicas y dentales incluyendo pero sin limitarse a reparación de vaso sanguíneo, reparación de útero, reemplazos de tendón, reemplazos de córnea, piel artificial, tratamiento de enfermedad periodontal, y cicatrización de heridas. Dependiendo de su uso pretendido, la invención abarca el uso de biotejido de colágeno como una membrana bidimensional , por ejemplo, las membranas que pueden conformarse para formar recipientes tubulares; como un andamio tridimensional, por ejemplo, un implante, o como una fibra unidimensional. .4.1 MÉTODOS PARA TRATAMIENTO QUE UTILIZAN BIOTEJIDO DE COLÁGENO DE LA INVENCIÓN 5.4.1.1 MÉTODOS PARA TRATAMIENTO DE CONDICIONES DE PIEL La piel humana es un material compuesto de la epidermis y la dermis. La parte superior de la epidermis es el estrato córneo; que es la capa rígida de la piel, así como el más afectado por el ambiente circundante. Debajo del estrato córneo es la porción interna de la epidermis. Debajo de la epidermis es la dermis papilar, que se hace de tejidos conectivos relativamente flojos que definen el micro alivio de la piel. La dermis reticular, dispuesta debajo de la dermis papilar, es fuerte, el tejido conectivo que se organiza espacialmente . La dermis reticular se asocia también con arrugas toscas. Debajo de la dermis se sitúa la capa subcutánea . Las funciones principales de la piel incluyen protección, excreción, secreción, absorción, termorregulación, pigmentogénesis , acumulación, percepción sensorial, y regulación de procesos inmunológicos . Estas funciones se afectan per udicialmente por los cambios estructurales en la piel debido a la exposición solar excesiva y envejecimiento. Los cambios fisiológicos asociados con la piel envejecida incluyen el deterioro de la función de barrera y rotación disminuida de células epidérmicas, por ejemplo, Véase, Cerimele, D. Et al., 1990, Br . J. Dermatol . , 122 Suppl . 35, p. 13-20. Los métodos y composiciones en la técnica anterior, sin embargo, han tenido éxito limitado en mejorar las condiciones de la piel, por ejemplo, mejorar la elasticidad y suavidad de la piel, o remover arrugas. El biotejido de colágeno de la invención tiene aplicaciones médicas así como cosméticas. El biotejido de colágeno de la invención tiene utilidad clínica y terapéutica en tratar condiciones de la piel incluyendo, pero sin limitarse a lesiones de piel, piel envejecida, arrugas, líneas finas, adelgazamiento, elasticidad de la piel reducida, piel áspera, condiciones de la piel congénitas y degenerativas, deficiencia de colágeno VII y piel dañada por el sol. En ciertas modalidades, el biotejido de colágeno de la invención puede utilizarse como un implante subcutáneo para condiciones de la piel tales como cicatrices de acné, surcos glabelares, cicatrices de excisión, o cualquier otro defecto de tejido suave conocido en la técnica. El biotejido de colágeno de la invención tiene utilidad clínica y terapéutica para tratar cambios asociados con enve ecimiento de la piel. En ciertas modalidades, el biotejido de colágeno de la invención tiene utilidad para mejorar arrugas en la piel, y/o otras condiciones tales como elasticidad y suavidad de la piel. El biotejido de colágeno de la invención puede utilizarse como un implante, como un laminado, o como una forma enrollada tridimensional para el tratamiento de condiciones de la piel. El biotejido de colágeno de la invención se espera tenga una utilidad clínica mejorada en relación a los métodos conocidos en al técnica para tratar tales condiciones de la piel, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 5,972,999; 5,418,875; 5,332,579; 5,198,465; en parte debido a su estabilidad puede proporcionar un efecto duradero prolongado. En una modalidad preferida, el biotej ido de colágeno de la invención se suplementa además con uno o más agentes conocidos en la técnica para tratar una condición de piel. Ejemplos de tales agentes, incluyen pero no se limitan a, vitaminas, minerales preparaciones basadas en catequina, N-acetilglucosamina , y- glucosamina (Véase por ejemplo, Neldner, 1993, AMER. Acad. Derm. Annl . Mtg . Wash. D.C. ; Lubell 1996, Cosmetic Der atol , 9(7) : 58-60; S aine et al., 1995, J. Am. Board of Family Practice, 8(3) : 206-16; Shan et al., 1994, Kidney International, 46(2) : 388-95; todos de los cuales se incorporan en la presente para referencia en su totalidad) . El biotej ido de colágeno de la invención puede impregnarse con cualquier biomolécula con utilidad en el tratamiento de una condición de piel, incluyendo pero sin limitarse a, antibióticos (tales como Clindamicina , Minociclina, Doxiciclina, Gentamicina) , hormonas, factores de crecimiento, agentes anti-tumor, agentes anti-hongos, agentes antivirales, medicamentos para el dolor, an i -histaminas , agentes anti - inf lamatorios , anti - infecciosos incluyendo pero sin limitarse a plata (tales como sales de plata, incluyendo pero sin limitarse a nitrato de plata y sulfadiazina de plata), plata elemental, antibióticos, enzimas bactericidas (tales como lisosoma) , agentes de cicatrización de herida (tales como citocinas incluyendo ¦ pero sin limitarse a PDGF, TGF; timosina) , ácido hialurónico como un agente de cicatrización de herida, sellante de herida (tales como fibrina con o sin trombina) , atrayentes celulares y reactivos de andamiaje (tales como fibronectina) y similares. En un ejemplo específico, el biotej ido de colágeno puede impregnarse con al menos un factor de crecimiento, por ejemplo, factor de crecimiento de fibroblasto, factor de crecimiento epitelial, etc. El biotej ido puede también impregnarse con pequeñas moléculas tales como moléculas orgánicas pequeñas tales como inhibidores específicos de procesos bioquímicos particulares, por ejemplo, inhibidores del receptor de membrana, inhibidores de cinasa, inhibidores de crecimiento, fármacos anti -.cáncer, antibióticos, etc. .4.1.2. HERIDAS Y QUEMADURAS El biotej ido de colágeno de la invención se espera tenga una utilidad clínica mejorada como un vendaje de herida, para aumentar la reparación del tejido suave y/o duro, como se compara a otros biomateriales conocidos en la técnica, por ejemplo, aquellos descritos en las Patentes Norteamericanas Nos. 3,157,524; 4,320,201; 3,800,792; 4,837,285; 5,116,620, debido en parte a sus propiedades físicas. El biotejido de colágeno de la invención debido a su estructura cuaternaria nativa de colágeno retenido proporciona crecimiento interior del tejido mejorado a través de la migración celular en los intersticios de la matriz de colágeno. El biotejido de la invención permite a las células unirse y crecer en la matriz de colágeno y sintetizar sus propias macromoléculas . Las células así producen una nueva matriz que permite el crecimiento de nuevo tejido. Tal desarrollo celular no se observa en otras formas conocidas de colágeno tales como fibras, vellones y colágeno soluble. En algunas modalidades, la invención abarca tratar una herida colocando el biotejido de colágeno de la invención directamente sobre la piel del sujeto, es decir, en el estrato córneo, en el sitio de la herida, de manera que la herida se cubra, por ejemplo, utilizando una cinta adhesiva. En otras modalidades, la invención abarca tratar una herida utilizando el biotejido de colágeno de la invención como un implante, por ejemplo como un implante subcutáneo. La invención abarca mejorar la velocidad de cicatrización de herida por la adición de macromolécula capaz de promover el crecimiento interior de tejido en el biotejido de colágeno de la invención. Tales macromoléculas incluyen, pero no se limitan a ácido hialurónico, fibronectina, laminina, y proteoglicanos [Véase, por ejemplo, Doillon et al. (1987) Biomateríals 8:195-200; y Doillon y Silver (1986) Biomaterials 7:3-8). La invención abarca además incorporar agentes farmacológicamente activos que incluyen pero no se limitan a factor de crecimiento derivado de plaqueta, factor de crecimiento similar a insulina, factor de crecimiento epidérmico, factor de crecimiento transformante beta, factor angiogénesis , antibióticos, agentes antifúngicos , agentes espermicidas , hormonas, enzimas, inhibidores de enzima en el biotejido de colágeno de la invención como se describe en la presente en la sección 5.4.2.7 para suministro en la piel, y cualquier biomolécula descrita anteriormente. Preferiblemente, los agentes farmacológicamente activos se proporcionan en una cantidad fisiológicamente efectiva. En algunas modalidades, el biotejido de colágeno se puebla además por célula vivientes, incluyendo pero sin limitarse a células madre alogénicas, células madre, y células adultas autólogas, antes de aplicarse al sitio de la herida . El biotejido de colágeno de la invención es particularmente útil para el tratamiento de infecciones de herida, por ejemplo, infecciones de herida seguidas por una interrupción de heridas quirúrgicas o traumáticas. En una modalidad particular, el biote ido de colágeno se impregna con una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente útil en el tratamiento de una infección de herida, incluyendo pero sin limitarse a, un antibiótico, un agente ant i -microbiano , y un agente anti-bacterial . El biotejido de colágeno de la invención tiene utilidad clínica y terapéutica en el tratamiento de infecciones de herida a partir de cualquier microorganismo conocido en la técnica, por ejemplo, microorganismos que infectan heridas que se originan a partir dentro del cuerpo humano, que es un depósito para organismos patogénicos, o de origen ambiental. Un ejemplo no limitante de los microorganismos, el crecimiento de los cuales en heridas puede reducirse o evitarse por los métodos y composiciones de la invención son S. Aureus , St. Epidermis, Streptococci beta hemolítica, E. Coli, Klebsiella y especies Pseudomonas y entre las bacterias anaeróbicas, la Clostridium welchií o tartium, que son la causa de gangrena de gas, principalmente en heridas traumáticas profundas. En otras modalidades, el biotejido de colágeno de la invención se utiliza para tratamiento de heridas, incluyendo, pero sin limitarse a heridas epidérmicas, heridas de la piel, heridas crónicas, heridas agudas, heridas externas, heridas internas (por ejemplo, el biotejido de colágeno puede enrollarse alrededor de un sitio de anastomosis durante la cirugía para evitar la fuga de sangre a partir de líneas de sutura, y para prevenir al cuerpo a partir de la formación de adhesiones en el material de sutura), heridas congénitas (por ejemplo, epidermol isi s hullosa distrófica). En particular, el biotejido de colágeno tiene utilidad mejorada en el tratamiento de úlceras de presión (por ejemplo, ulceras por decúbitos) . Las llagas de presión ocurren frecuentemente con pacientes sujetos a reposo prolongado, por ejemplo, cuadripléj icos y parapléjicos quienes sufren de pérdida de piel debido a los efectos de presión localizada. Las llagas de presión resultantes exhiben erosión dérmica y pérdida de epidermis y apéndices de piel. El biote ido de colágeno de la invención puede también utilizarse en el tratamiento de quemaduras, incluyendo pero sin limitarse a quemaduras de primer grado, quemaduras de segundo grado (quemaduras espesas parciales) , quemaduras de tercer grado (quemaduras espesas totales) , infección de heridas por quemaduras, infección de heridas por quemadura removidas y no removidas, infección de herida injertada, infección de sitio donador, pérdida de epitelio a partir de una herida quemada injertada o cicatrizada previamente o sitio de donador de injerto de piel y impétigo de herida por quemadura . .4.1.3. DISEÑO DE TEJIDO La invención abarca el uso del biotejido de colágeno de la invención como un vehículo para la transportación de células de la piel cultivadas, por ejemplo, como un soporte para el crecimiento epitelial y diferenciación. En ciertas modalidades, para poblar el biotej ido con células para formar tejido y/o organoides (es decir, parecerse en apariencia superficial o en estructura cualquiera de los órganos o glándulas del cuerpo) , el biotej ido puede tratarse con factores de adhesión celular para mejorar la unión de células en el biotej ido durante el proceso de repoblar el biotej ido con tales células nuevas. En ciertas modalidades, la extensión de unión de células se incrementa tratando la membrana amniótica con suero, por ejemplo, suero de bovino fetal o humano) . En otras modalidades, la extensión de unión de células se incrementa tratando la membrana amniótica con fibronectina . El biotej ido de colágeno de la invención puede utilizarse en técnicas de regeneración de tejido guiado, por ejemplo, para regenerar o reemplazar tejido enfermo o dañado. La invención abarca el uso del biotej ido de la invención para implantar directamente el biotej ido en el sitio de tratamiento o por la formación de un dispositivo protésico. El biote ido de colágeno de la invención es particularmente útil en cualquier situación, tal como después de la cirugía especialmente cirugía oral o dental (como se describe en mayor detalle en la Sección 5.4.2.2) en donde la cicatrización de herida mejorada y/o reemplazada de dermis es deseable. La utilidad del biotejido de colágeno de la invención en regeneración de tejido guiado se debe en parte a su capacidad para proporcionar condiciones que evitan crecimiento interior de otros tejidos en el área en donde la regeneración se requiere. Por ejemplo, en donde una porción sustancial de la raíz del diente se remueve debido a caries o enfermedad, es deseable que la regeneración de hueso saludable ocurra para reemplazar el tejido de hueso removido. Sin embargo, se ha encontrado que la cavidad pendiente por la remoción del hueso se rellena rápidamente por tejido conectivo y que este crecimiento interior de te ido conectivo efectivamente evita la regeneración del hueso. Para evitar tal crecimiento interior, el biotejido de colágeno de la invención puede insertarse quirúrgicamente alrededor de la periferia de la cavidad de la herida. El biotejido evita o impide la invasión de la cavidad de la herida por tipos celulares no deseados y permite así a las células preferidas crecer en la cavidad, por lo que se cicatriza la herida. En algunas modalidades, el biotejido de colágeno tiene utilidad como un transplante para reconstrucción superficial ocular por ejemplo en un sujeto con síndrome de Stevens Johnson, deficiencia de célula madre limbal secundaria a una quemadura química, o con quemaduras químicas y/o térmicas. El biotejido de la invención se espera tener utilidad clínica mejorada por ejemplo promoviendo epitelialización . El biotejido de la invención se espera tener una utilidad clínica mejorada en relación a las membranas amnióticas utilizadas en la técnica para propósitos de diseño de tejido, véase por ejemplo, Gomes et al., 2003, Opthalmology, 119: 166-73 ; Ti et al., 2001, Opthalmology, 108: 1209-1217; Meller et al., 2000, Opthalmology, 107:980-9 Gris et al., 2002 Opthalmology, 109:508-12; Koizumi et al., 2000, Invest. Opthal . And Visual Science, 41:2506-13; Pires et al., 1999, Arch . Opthal ol . 117:1291-7; Tseng et al., 1998, Arch. Opthalmol. 116-431:441; Heiligenhaus et al., 2001 Invest. Opthal. And Visual Science 42:1969-74; Anderson et al. 2001, Br. J. Opthalmol. 85:567-75. La invención abarca poblar el biote ido de colágeno con células vivas, incluyendo pero sin limitarse a células de tejido adulto, células autólogas, y células madre. Las células madre para uso en los métodos de la invención pueden ser totipotentes , pluripotentes o células específicas de tejido diferenciado. Las células madre para uso en los métodos de la invención pueden obtenerse por métodos estándares conocidos por un experto en al técnica. Pre eriblemente, las células madre se recolectan de acuerdo con el método descrito en la Solicitud Norteamericana No. 10/74,976, presentada el 13 de febrero del 2002, que se incorpora en la presente para referencia. La invención abarca el uso del biotejido de colágeno de la invención (por ejemplo, como andamies tridimensionales), para el desarrollo de tejido biodiseñado y organoides, incluyendo pero sin limitarse a vasos sanguíneos, válvulas cardiacas, hígado, páncreas y ligamentos. Aunque no se pretenda unirse a cualquier mecanismo de acción, la utilidad del biotejido de la invención como un tejido biodiseñado se debe en parte, a sus propiedades hemostática en promover coagulación sanguínea. El biotejido de. la invención es particularmente útil para prótesis vascular y como un transplante en cirugía de vaso sanguíneo. El biotejido de la invención puede utilizarse por ejemplo, como una cubierta circunferencial sobre los sitios anastomosis de vasos sanguíneos (o vasos sanguíneos para injertos) durante los procedimientos quirúrgicos vasculares para evitar la fuga de sangre a partir de las líneas de sutura y previene al cuerpo a partir de formar adhesiones en el material de sutura . .4.2 MÉTODOS DE USO DE LOS BIOTEJIDOS DE COLÁGENO EN PROCEDIMIENTOS QUIRÚRGICOS La invención abarca el uso del biotejido de colágeno de la invención como un injerto quirúrgico. La invención abarca un injerto quirúrgico que comprende un biotejido de colágeno de la invención o un laminado de la misma. La invención abarca además métodos para preparar y utilizar el injerto quirúrgico. En algunas modalidades, la invención abarca un método para utilizar el injerto quirúrgico en un procedimiento quirúrgico, de manera que el injerto quirúrgico se aplica directamente al sitio quirúrgico del sujeto, por ejemplo, un sitio interno, o un sitio externo. En algunas modalidades, el biotejido de colágeno se utiliza como un injerto quirúrgico durante un procedimiento quirúrgico como se describe en mayor detalle posteriormente, por ejemplo, para evitar la fuga de sangre a partir de líneas de sutura y para prevenir al cuerpo a partir de formar adhesiones en los materiales de sutura. En otras modalidades, el injerto quirúrgico se utiliza como una cubierta sobre los sitios anastomosis, por ejemplo del tracto GI durante la cirugía GI para evitar la fuga de fluido y bilis intestinal a partir de las líneas de sutura y para prevenir al cuerpo a partir de formar adhesiones a los materiales de sutura. La invención abarca utilizar el biotejido como un injerto o vendaje para cubrir heridas de piel quemada o quirúrgica; para evitar la adhesión en todas las cirugías intraperitoneales u otra reconstrucción en las superficies serosales que cubren el abdomen, cavidad de pecho y pericardio; para reconstruir todas las superficies mucosales que revisten las cavidades orales y nasales, tractos respiratorios, tractos gastrointestinales, y tractos urogenitales; como un sustrato para soportar reparación durales en cirugías de cerebro; como un sustrato para promover la regeneración de nervio en el sistema nervioso central y periférico; y para reconstruir tejidos suaves para evitar la adhesión en reparaciones de articulaciones o tendones . La invención abarca impregnar el injerto quirúrgico de la invención con una o más biomolécula, preferiblemente un agente terapéutico, dependiendo del uso quirúrgico pretendido particular. Tales biomoléculas incluyen pero no se limitan a, antibióticos (tales como Clindamicina , Minociclina, Doxiciclina, Gentamicina) , hormonas, factores de crecimiento, agentes anti-tumor, agentes anti - fúngicos , agentes antivirales, medicamentos para el dolor, ant i -hi stamínicos , agentes anti-inflamatorios, anti-infecciosos incluyendo pero sin limitarse a plata (tal como sales de plata, incluyendo pero sin limitarse a nitrato de plata y sulfadiazina de plata), plata elemental, antibióticos, enzimas bactericidas (tales como lisosoma) , agentes de cicatrización de herida (tales como citocmas incluyendo, pero sin limitarse a PDGF, TGF; timosina) , ácido hialurónico como un agente de cicatrización de herida, sellantes de herida (tales como fibrina con o sin trombina) , atrayente celular y reactivos de andamiaje (tales como fibronectina ) y similares. En un ejemplo específico, el biote ido de colágeno puede impregnarse con al menos un factor de crecimiento, por ejemplo, factor de crecimiento de fibroblasto, factor de crecimiento epitelial, etc. El biotejido puede también impregnarse con pequeñas moléculas orgánicas tales como inhibidores específicos de procesos bioquímicos particulares, por ejemplo, inhibidores del receptor de membrana, inhibidores de quinasa, inhibidores de crecimiento, fármacos anti-cáncer, antibióticos, etc. La invención abarca además poblar el injerto quirúrgico de la invención con células vivas, pero sin limitarse a, células madre, células madre totipotentes , células madre pluripotentes , células madre multipotentes , células madre específicas de tejido, células madre análogas embriónicas, células progenitoras comprometidas, células de fibroblastoide . En otras modalidades, la invención abarca poblar el injerto quirúrgico de la invención con clases específicas de células progenitoras que incluyen pero no limitadas a condrocitos, hepatocitos, células hematopoyéticas , células parenquimales pancreáticas, neuroblastos , y células progenitoras musculares. .4.2.1 OFTALMOLOGÍA El biotejido de colágeno de la invención tiene utilidad clínica y terapéutica en el tratamiento de una enfermedad o trastorno relacionado con los ojos. El biotejido del colágeno de la invención es particularmente útil para el tratamiento y/o prevención de enfermedades superficiales oculares incluyendo pero sin limitarse a, ulceraciones/perforaciones corneales, bulosa, dermoides/tumores, pterigio primario, defecto epitelial corneal persistente, quemaduras de álcali agudas y crónicas, quemaduras térmicas, aniridia, queratitis atópica, deficiencia de célula madre limbal idiopática, catarata corneal, neovascularización, fusión corneal reumatoide, pemfigoide cicatricial ocular, pústula de filtrado, tubo de válvula Ahmed expuesta, celulitis Serratia con simblefaron subsecuente, síndrome de Stevenson Jonson aguda y crónica. El biotejido de colágeno de la invención es particularmente efectiva para promover la cicatrización de defectos epiteliales corneales persistentes con ulceración; promover epitelialización; facilitación de crecimiento de células epitelial y madre; reducción de inflamación y dolor, inhibición de angiogénesis y cicatrización; restauración del fenotipo epitelial; y como un sustrato alternativo para autoinjerto conjuntival durante la remoción de esclerosis expuesta de pterigio. La invención incluye transplante utilizando el biotejido de colágeno de la invención para el tratamiento de bulosa sintomática, preferiblemente en seres humanos, más preferiblemente en seres humanos con potencial visual escaso. El biotejido de la invención se espera que tenga una utilidad terapéutica y clínica mejorada en relación a otros procedimientos estándares utilizados en la técnica para el tratamiento de queratopatia bulosa sintomática, específicamente, construcción del colgajo conjuntivo. La ventaja del transplante que utiliza el biotejido de la invención sobre procedimientos estándares utilizados en la técnica para el tratamiento de bulosa sintomática, específicamente, en la construcción de colgajo conjuntivo, incluye por ejemplo, reducción de dolor, facilidad de rendimiento, una apariencia más cosméticamente aceptable, y una reducción en las complicaciones tales como ptosis y deficiencia de célula limbal. El biotejido de colágeno de la invención proporciona una alternativa mejorada en los colgajos conjuntivos para promover la cicatrización de los defectos epiteliales corneales con ulceración; un método mejorado para la reconstrucción superficial conjuntiva para simblefaron lisis; un método mejorado para la remoción quirúrgica de tumores, lesiones o tejido de cicatriz a partir de la superficie conjuntiva o corneal; un método mejorado para cirugías de glaucoma corrigiendo el derrame de pústula; un sustrato mejorado alternativo para autoinjerto conectivo durante la remoción de "esclerosis expuesta" de pterigio; y un método mejorado para evitar la reaparición de queratopatia de banda . La invención también cubre las necesidades para el uso del biotejido como un injerto quirúrgico oftalmológico. La invención incluye la preparación de injertos que comprende el biotejido de la invención que ¦ comprende además uno o más agentes terapéuticos que puede suministrarse al recipiente cuando se une al recipiente. Ejemplos de agentes terapéuticos que pueden suministrarse utilizando el biotejido de la invención incluyen pero no se limitan a pilocarpina, eritromicina , gentamicina, vancomicina, tobramicina, netilmicina, sulfato de polimixina B , trimetroprima , anfotericina B, agentes anticancerígenos, antibióticos, ciclosporina , etc. El biotejido de colágeno de la invención también tiene utilidad para reducir enturbiamiento corneal inducido por queratectomía fotorefractiva/terapéutica de láser. El biotejido de colágeno de la invención para uso en procedimientos oftálmicos puede proporcionarse en varias configuraciones incluyendo pero sin limitarse a insertos, corazas, partículas, geles, inyecciones acuosas, esponjas, películas . Las técnicas quirúrgicas convencionales para injertos oftálmicos, conocidas por un experto en la técnica se incluyen dentro de la invención.

Un protocolo ejemplar para el uso de un biotejido de colágeno de la invención como un injerto quirúrgico oftálmico puede comprender las siguientes etapas: los tejidos conjuntivos y/o corneales enfermos se remueven; el injerto quirúrgico, preparado de acuerdo con los métodos de la invención se proporcionan bajo condiciones estériles, y se recortan por una técnica de mano libre para cubrir el epitelio corneal o esclerosis expuesta. Utilizando una sutura, el injerto se asegura a la unión de la esclerosis expuesta y conjuntiva; se colocan suturas cardinales; y luego las suturas interrumpidas se utilizan para crear una distribución pareja de la tensión sobre la superficie del injerto; de manera que cualquier espacio se evita entre el injerto y la esclerosis y cornea receptora. Toda la unión del injerto y el huésped, el extremo libre del injerto debe permanecer bajo la membrana conjuntiva receptora para permitir deslizar el epitelio huésped sobre la lámina basal en el punto de unión con el tejido donador, de otra manera el injerto se extruye por el recipiente. .4.2.2. DENTAL El biotejido de colágeno de la invención tiene utilidad particular en odontología, por ejemplo, cirugía periodontal, regeneración de tejido dirigido para la regeneración de tejido periodontal, regeneración de hueso dirigido, y cubierta de raíz. La invención incluye el uso de biotejido de colágeno de la invención para promover la regeneración de defectos intraóseos periodontales , incluyendo pero sin limitarse a defectos periodontales bilaterales acoplados, defectos intraóseos interdentales, defectos intraóseos de 3 paredes profunda defectos intraóseos de 2 paredes, y defectos 2 y 3 intraóseos. El biotejido de colágeno de la invención se espera tenga una utilidad terapéutica mejorada y parámetros clínicos mejorados para el tratamiento de defectos intraóseos periodontales en relación a otras técnicas conocidas en el arte, por ejemplo, el uso de membranas de colágeno reticuladas tales como aquellas descritas en Quteish et al., 1992, J. Clin. Periodontol . 19(7) : 476-84; Chung et al., 1990, J". Periodontol. 61(12) : 732-6; Mattson et al., 1995, J. Periodontol. 66(7) : 635-45; Benque et al., 1997, J. Clin. Periodontol. 24(8) : 544-9; Mattson et al., 1999, J. Periodontol .70 ( 5) : 510-7) . Ejemplos de parámetros clínicos que se mejoran utilizando el biotejido de colágeno de la invención .incluyen pero no se limitan a escoriaciones de índice de placa y gingival, profundidad de cavidad inquisitiva, profundidad de unión inquisitiva, y clasificación de participación de bifurcación y defecto óseo, que se conocen por aquellos en la técnica. La invención también incluye el uso del biotejido de la invención en tratar defectos de bifurcación de clase II, incluyendo pero sin limitar los defectos bilaterales, defectos de bifurcación molares mandibulares de clase II bucales apareados, y defectos de bifurcación mandibulares bilaterales. La utilidad del biotejido de colágeno de la invención para tratar defectos de bifurcación de clase II puede explicarse en parte por su capacidad para regenerar la pérdida de periodontío en los defectos de bifurcación. El biotejido de la invención se espera que tenga una utilidad terapéutica y clínica mejorada en relación a las membranas de colágeno utilizadas en la técnica para el tratamiento de defectos de bifurcación de la clase II, tales como aquellos descritos en Paul et al., 1992, Jnt. J. Periodontics Restorative Dent. 12: 123-31; ang et al., 1994, J". Periodontol. 65: 1029-35; Blumenthal, 1993, J. Periodontol . 64: 925-33 ; Black et al., 1994, J". Periodontol. 54:598-604; Yukna et al., 1995, J. Periodontol. 67:650-7). La invención incluye además el uso del biotejido de la invención en los procedimientos de cubierta de raíz. La utilidad del biotejido de la invención en la cubierta de raíz puede explicarse en parte debido a su capacidad para reemplazar el te ido gingival enfermo o dañado, perdido basado en los principios de la regeneración de tejido guiado. El biotejido de la invención se espera tenga una utilidad clínica mejorada en la cubierta de raíz como se compara a las membranas de colágeno en la técnica tradicionalmente utilizada para la cubierta de raíz tal como aquellas descritas en Shieh et al., 1997 J. Periodontol . , 68: 770-8; Zahedi et al., 1998 J. Periodontol. 69: 975-81; Ozcan et al., 1997 J. Mármara Univ. Dent. Fa . 2:588-98 ; ang et al., 1997 J. Dent. Res. 78 (Spect Issue) . 119(Abstr. 106), por razones citadas supra. La invención incluye además el uso del biotej ido de colágeno en un sujeto con una enfermedad periodontal incluyendo pero sin limitarse a, periodontitis y gingivitis. El biotejido de la invención también tiene utilidad clínica como un accesorio para procedimientos de graduar y planificación de raíz. La invención incluye tratar un sujeto con una enfermedad periodontal que utiliza un biotejido de colágeno de la invención. Un método ejemplar para tratar una enfermedad periodontal en un sujeto que utiliza un biotejido de colágeno de la invención comprende insertar un biotejido de colágeno, que se impregna preferiblemente con un antibiótico tal como gluconato de clorhexidina , en una o más cavidades periodontales en el sujeto, por ejemplo más de, o igual a 5 mm. Preferiblemente, el biotejido de colágeno es biodegradable . El biotejido de colágeno de la invención para el uso en odontología puede impregnarse con una o más biomoléculas dependiendo del tipo de trastorno dental que se trata. Cualquier biomolécula conocida en la técnica para el tratamiento de trastornos dentales se incluye en los métodos y composiciones de la invención. En una modalidad específica, el biotejido de colágeno utilizada en el tratamiento de un trastorno dental asociado con una infección puede impregnarse con uno o más antibióticos, incluyendo pero sin limitarse a doxociclina, tetraciclin , gluconato de clorhexidina , y minocicl ina . .4.2.3 NEUROLOGÍA El biotejido de colágeno de la invención es también útil para reparar nervios dañados, particularmente para reparar nervios periféricos bisectados, y procedimientos neuroquirúrgicos . La invención incluye el uso del biotejido de colágeno, por ejemplo, en reemplazo dural y en reparación del nervio periférico. El biotejido de colágeno de la invención tiene utilidad clínica mejorada como un sustituto dural o en reparación de nervio en contraste a otros métodos utilizados en la técnica, por ejemplo, Berger et al., 1970, Acta. Neurochir. 23 : 141 ; Ducker et al., 1968, Mil. Med. 133: 298, Patentes Norteamericanas Nos. 4,778,467, 4,883,618, 3,961,805, 5,354,305, para razones establecidas anteriormente . En algunas modalidades, el biote ido de colágeno de la invención puede utilizarse como una prótesis alrededor de la anastomosis del nervio, por ejemplo, puede utilizarse para envolver anastomosis del nervio periférico. El biotejido de colágeno de la invención tiene utilidad particular en la reparación del nervio, por ejemplo, promoviendo la formación de un cuadro de lectura de tejido conectivo longitudinal a través del área de reparación y dando lugar así a un patrón longitudinalmente de la célula · envainada y regeneración axonal . La reparación de los nervios periféricos se hace comúnmente utilizando suturas en un procedimiento conocidos como neurosutura (Jennings et al., 1955, Surgery. 206) . Sin embargo, este enfoque ha tenido éxito limitado ya que los métodos para suturar nervios bisectados es difícil. El biotejido de colágeno de la invención puede de este modo proporcionar una alternativa a un método de insuturación de la reparación del nervio, por lo que por e emplo, los términos del nervio se encierran en un dispositivo prostético tubular que comprende el biotejido de la invención, y trae de este modo los extremos bisectados en proximidad cercana para regeneración. .4.2.4 UROLOGÍA El biotejido de colágeno de la invención tiene utilidad particular en la corrección de incontinencia urinaria. La incontinencia urinaria resulta de la falla de la uretra para permanecer cerrada durante el almacenamiento. La causa puede ser extrínseca, por ejemplo, soporte anatómico escaso de la uretra y el cuello de la vejiga resulta en la incontinencia y responde a la resuspensión del músculo pélvico. La falla uretral, alternativamente puede ser intrínseca, es decir, función uretral escasa.

Tradicionalmente , la incontinencia urinaria se corrige utilizando agentes voluminosos tales como colágeno, grasa, silicona {Véase, la revisión de Lightner, 2002, Current Opinión in Urology, 12(4) : 333-8) . El biotej ido de colágeno de la invención tiene utilidad mejorada, es decir, mejora la continencia, en relación a los agentes voluminosos descritos en la técnica. Además, el biotej ido de colágeno de la invención tiene utilidad terapéutica mejorada, por ejemplo, complicaciones locales reducidas, infección de tracto urinario reducida, sin reacción local, durabilidad confiable y seguridad mayor. La utilidad del biotejido de colágeno de la invención para corregir la incontinencia urinaria se debe en parte a las características físicas únicas del biotejido de colágeno como se describe en la presente, particularmente, sin inmunogenicidad . En algunas modalidades, el biotejido de colágeno se utiliza como un implante, por ejemplo, como un implante uretral. Aunque no se pretende unirse por cualquier teoría particular, el biotejido de colágeno de la invención puede tener utilidad terapéutica mejorada incrementando por ejemplo, la presión de cierre uretral y resistencia a la descarga pasiva de orina. .4.2.5 ORTOPEDIA El biotejido de colágeno de la invención puede utilizarse en procedimientos quirúrgicos ortopédicos. En ciertas modalidades, el biotejido de colágeno puede utilizarse para defectos ortopédicos, por ejemplo defectos adquiridos o congénitos. La reconstrucción de defectos locales que resultan de trauma o resurrección quirúrgica de un tumor de hueso es un problema mayor en cirugía ortopédica o maxilofacial . Normalmente, los sustitutos de hueso sintéticos, o membranas de colágeno han sido utilizados debido en parte a sus actividades osteoinductivas {Véase por ejemplo, Rao et al., 1995, J. Biomater. Sci . Polymer Edn. 7(7) : 623-45) . Sin embargo, un problema común ha sido una infección sistémica como un resultado del material implantado. El biotejido de colágeno de la invención, sin embargo, es ventajoso sobre . el material utilizado en la técnica, particularmente debido a su inmunogenicidad baja como un sustituto de hueso para el uso en defectos ortopédicos. En algunas modalidades, el biotejido de colágeno puede utilizarse como una prótesis para reconstruir tendones, ligamentos y cartílagos. En otras modalidades, el biotejido e colágeno de la invención puede utilizarse como una prótesis como un reemplazo de hueso. .4.2.6 CIRUGÍA CARDIOVASCULAR El biotejido de colágeno de la invención puede utilizarse en procedimientos quirúrgicos cardiovasculares, por ejemplo, como una prótesis para construir vasos sanguíneos pequeños y grandes; para reparar malformaciones congénitas de vasos sanguíneos y válvulas enfermas. El biotejido de la invención tiene utilidad particular como un transplante en cirugía de vaso sanguíneo, por ejemplo, transplante venoso o arterial. La utilidad del biotejido en cirugía de vaso sanguíneo se debe en parte, a su nula toxicidad, nula inmunogenicidad ; estabilidad; facilidad de manejo; características an i-trombogénicas; porosidad de implante mínima de la pared del vaso sanguíneo; las disponibilidad en varios tamaños; reproducibilidad del material. En algunas modalidades, el biotejido de la invención puede utilizarse como un reemplazo de válvula. .4.2.7 SUMINISTRO DE FÁRMACO El biotejido de colágeno de la invención puede utilizarse como un vehículo de suministro de fármaco para suministro controlado de un fármaco, por ejemplo, un agente terapéutico. En algunas modalidades el biotejido de colágeno suministra uno o más agentes terapéuticos a un sujeto, preferiblemente un ser humano. Los agentes terapéuticos incluidos dentro del alcance de la invención son proteínas, péptidos, polisacáridos , conjugados de polisacáridos , vacunas de bases genéticas, vacunas atenuadas activas, células completas. Un ejemplo no limitante de fármacos para el uso en los métodos de la invención es antibióticos, agentes anticancerígenos, agentes anti -bacterianos , agentes antivirales; vacunas; anestésicos; analgésicos; agentes anti -asmáticos ; agentes anti-inflamatorios ; anti -depresivos ; agentes antiartríticos; agentes anti-diabéticos ; anti -psicóticos ; estimulantes del sistema nervioso central; hormonas; inmuno-supresores; relajantes musculares; prostaglandinas . El biotejido de colágeno puede utilizarse como un vehículo de suministro para suministro controlado de una o más moléculas pequeñas a un sujeto, preferiblemente un ser humano. En algunas modalidades, el biotejido de colágeno suministra una o más moléculas pequeñas a un sujeto, preferiblemente un ser humano. Como se utiliza en la presente, el término "molécula pequeña" y términos análogos, incluyen, pero no se limitan a, péptidos, peptidomiméticos , aminoácidos, análogos aminoácidos, polinucleótidos , análogos polinucleótidos , nucleótidos, análogos nucleótidos, compuestos orgánicos e inorgánicos (es decir, incluyendo compuestos hetero-orgánicos y organometálicos) que tienen un peso molecular menor de aproximadamente 10,000 gramos por mol, compuestos orgánicos o inorgánicos que tienen un peso molecular menor de aproximadamente 5 , 000 gramos por mol , compuestos orgánicos o inorgánicos que tienen un peso molecular menor de aproximadamente 1 , 000 gramos por mol , compuestos orgánicos e inorgánicos que tienen un peso molecular menor de aproximadamente 500 gramos por mol , compuestos orgánicos e inorgánicos que tienen un peso molecular menor de aproximadamente 100 gramos por mol, y sales, ásteres, y otras formas farmacéuticamente aceptables de tales compuestos. Las sales, ésteres y otras formas farmacéuticamente aceptables de tales compuestos se incluyen también . En ciertas modalidades, el biotejido de colágeno de la invención como un vehículo para suministro de fármaco resulta en la absorción mejorada del fármaco perfil farmacocinético mejorado, y distribución sistémica del fármaco en relación a los otros sistemas de suministro de fármaco conocidos en la técnica. Por farmacocinéticos mejorados quiere decir que- un mejoramiento del perfil farmacocinético se logra como se mide, por ejemplo, por parámetros farmacocinéticos estándares tales como tiempo para lograr la concentración de plasma máxima (Tmax) ; magnitud de concentración de plasma máxima (Cmax) ; tiempo para producir una sangre detectable o concentración de plasma (Tiag) . Por absorción mejorada se quiere decir que la absorción del fármaco se mejora como se mide por tales parámetros. La medición de los parámetros farmacocinéticos se realiza de manera rutinaria en la técnica. 6. EJEMPLOS 6.1 METODO PARA PRODUCIR EL BIOTEJIDO DE COLAGENO MATERIALES Los siguientes materiales se utilizaron en la preparación del biotej ido de colágeno. Materiales/Equipo • Copia del Registro de Suministro • Copia del Consentimiento del Historial/Informe de Salud del Material/Familia • Marca de Código de Barra de Fuente (número ID de donador) • # de Colección (Un número secuencial se asigna para material de llegada) • Registro de Procesamiento de Tejido (Documento ID # A T- 19F) ; un registro detallado de procesamiento de cada número de lote se mantiene • Placenta Humana (menos de 48 horas de edad en el inicio del procesamiento) • Pinzas/Hemostatos Quirúrgicos Estériles • Tijeras Estériles · Escalpelos Estériles • Raspador Celular Estéril (Nalgene NUNC Int. R0896) • Gasa Estéril (PSS no estéril 441S, esterilizada) • Charolas de Acero Inoxidable de Enjuague Estériles • Charolas de Acero Inoxidable de Procesamiento Desinfectadas • Depósitos de Plástico Desinfectados • Solución Estéril de NaCl al 0.9% (Baxter 2F7124) • Agua Estéril ( illi Q plus 09195 o Baxter 2F7113) • Contenedores de Espécimen Estéril (V R 15704-014) · Equipo Protector Personal (incluyendo guantes estériles y no estériles) • Cuarto Limpio Certificado • Solución de Descelularización Previamente Preparada (célula D) ; 0.01-1% de monohidrato de sodio del ácido desoxicólico • Depósito Desinfectado • Plataforma basculante (Modelo VWR 100) • Sincronizador (VWR 21376890) • Malla de Cuadro de Plástico Desinfectada · Película Enrollada de PVC • Bomba al vacío (Schuco-Vac 5711-130) • Secador de Gel (es decir, secador por calor; Modelo BioRad 583) • Tabla para Cortar de Acero Inoxidable Desinfectada · Bolsas para Empacar • Regletas de Acero Inoxidable Estériles (General Tools MFG Co 1201) • Termómetro Digital Rastreable (Modelo 61161-364, Control Company) . · Sellador Automático ACU-Seal (ACU-Seal, Modelo 630-1B6) La gestante se clasificó al tiempo del nacimiento para enfermedades transmisibles tales como HIV, HBV, HCV, HTLV, Sífilis, CMV y otros patógenos virales y otros que podrían contaminar los tejidos placentarios que se recolectan. Únicamente tejidos recolectados a partir de donadores cuyas madres negativas o no reactivas examinadas en los patógenos antes mencionados se utilizaron para producir el biotejido de colágeno. Después del nacimiento normal, la placenta, el cordón umbilical y sangre del cordón umbilical se expulsaron espontáneamente a partir del útero de contracción. La placenta, cordón umbilical y sangre del cordón umbilical se recolectaron después del nacimiento. Los materiales se transportaron al laboratorio · en donde se procesaron bajo condiciones asépticas en un cuarto esterilizado que tiene un sistema de filtración HEPA, se conectó una hora antes del procesamiento. Los guantes (estériles o no estériles, como sea apropiado) se portaron todas las veces mientras se manejaba el producto. Todos los segmentos no usados (desecho) de la placenta/corion y líquidos contaminados, generados durante el' procesamiento de tejido se desecharon tan pronto como es factible. ETAPA I. Un campo estéril se estableció con las hojas Steri-Wrap estériles y los siguientes instrumentos y accesorios para procesamiento se le colocaron. • Paquete de charola estéril • Raspador Celular estéril • Escalpelo estéril • Charola de procesamiento desinfectada Se registró el paquete estéril ID # en el Registro de Procesamiento. La placenta se removió a partir del recipiente de transporte y se colocó en la charola de acero inoxidable desinfectada. Utilizando pinzas y tijeras quirúrgicas, el cordón umbilical se cortó aproximadamente 2 pulgadas a partir del disco placentario. El cordón umbilical se colocó en un recipiente estéril separado para procesamiento adicional. El recipiente se marcó con Código de Barra de Tejido ID; y el material y soluciones almacenadas presentes (por ejemplo tipo de medio) se identificaron. En algunos casos, el cordón umbilical se desechó si no fue requerido para otros proyectos . Al inicio del extremo de la membrana placentaria, la placenta se separó del corion utilizando disección contundente con los dedos. Esto se hizo antes de cortar la membrana . Después que se separó la placenta de la superficie completa del corion y el disco placentario, la membrana amniótica se cortó alrededor de la cepa del cordón umbilical con tijeras y se separó del disco placentario. En algunos casos, si la separación de la placenta y el corion no fue posible sin desgarrar el tejido, la placenta y el corion se cortaron del disco placentario como una pieza y luego se desprendieron . El corion se colocó en un recipiente de espécimen separado para utilizarse para otros proyectos. El recipiente se marcó con el Código de Barra de Tejido ID, el material y las soluciones almacenadas presentes (por ejemplo tipo de medio) se identificaron, se les puso iniciales y fecha. Si cualquier pieza de la placenta se unión además al disco placentario, se desprendió a partir del disco y cortó alrededor del cordón umbilical con las tijeras. La placenta se colocó detrás del recipiente de transporte para utilizarse para otros proyectos. Los datos apropiados se registraron en el Registro de Procesamiento de Tejido. La membrana amniótica se mantuvo en la charola con solución de NaCl estéril al 0.9%. Preferiblemente, la membrana amniótica se almacena por refrigeración para un máximo de 72 horas del tiempo de suministro antes de la siguiente etapa en el proceso. ETAPA II. La membrana amniótica se removió del contenedor de prueba una pieza a la vez y se colocó en la charola de acero inoxidable desinfectada. Otras piezas se colocaron en una charola de acero inoxidable estéril separada rellena con agua estéril hasta que estuvieron listas para limpiarse. Las piezas extras de placenta de la charola de procesamiento se removieron y colocaron en una charola de acero inoxidable de enjuague separada rellena con agua estéril. La membrana amniótica se enjuagó con agua estéril, si se contaminó demasiado con sangre materna de fluidos/materiales fetales cambiando el agua estéril como sea necesario . La membrana amniótica se colocó en la charola de procesamiento con el lado materno mirando hacia arriba. Utilizar un Raspador Celular estéril, tanto como sea posible de contaminación visible y material celular a partir del lado maternal de la placenta se removió cuidadosamente. (Nota: debe aplicarse presión mínima para esta etapa para evitar desgarrar la membrana) . El agua estéril se utilizó para ayudar en la remoción de las células y los restos celulares. La membrana amniótica se enjuagó además con agua estéril entre ciclos de limpieza en charola de enjuague estériles separadas. El tejido se limpió varias veces (ciclos de limpieza) como sea necesario para remover la mayoría si no todo el material celular visible y restos a partir de ambos lados de la membrana. El agua estéril se cambió en las charolas de enjuague entre enjuagues. La charola de procesamiento se enjuagó con agua estéril después de cada ciclo de limpieza. Todas las otras piezas de placenta se procesaron en la misma manera y colocaron en el mismo recipiente. El Código de Barra de Tejido Id se fijó, el material y la solución o soluciones almacenadas presentes (por ejemplo tipo de medio) se identificaron, se colocaron fechas iniciales. La información apropiada y la fecha se registraron en el Registro de Procesamiento de Tejido. ETAPA III La membrana amniótica se removió de la charola de enjuague, (o del recipiente de almacenamiento) el fluido en exceso se apretó suavemente con los dedos y la membrana se colocó en el recipiente de espécimen estéril . El recipiente se llenó hasta 150 mi de la marca con solución de célula D asegurando que toda la membrana amniótica se cubriera y el recipiente se cerró. El recipiente se colocó en el depósito en la plataforma basculante. La plataforma basculante se conectó y la membrana se agitó en solución de célula D durante un mínimo de 15 minutos y un máximo de 120 minutos en el Esquema # 5. Un nuevo campo estéril se estableció con nuevos instrumentos estériles y la charola desinfectada en la misma manera como en la Etapa I. Se registro el paquete Estéril ID # en el Registro de Procesamiento.- Después que se completó la agitación, la plataforma basculante se desactivó y la membrana se removió a partir del recipiente. La membrana se colocó en una nueva charola de procesamiento de acero inoxidable estéril . La solución estéril de NaCl al 0.9% se agregó para cubrir el fondo de la charola . Utilizar un nuevo Raspador Celular estéril, material celular y de célula D residual (si hay) se removió de ambos lados del tejido. Esta etapa se repitió tantas veces como es necesario para remover tanto como sea posible el material celular residual visible de la superficie completa en ambos lados. La membrana se enjuagó con solución de NaCl estéril al 0.9% en una charola de enjuague separado entre ciclos de limpieza. La solución estéril de NaCl al 0.9% se cambió en las charolas de enjuague entre enjuagues. Después que el último ciclo de limpieza se terminó, la membrana se enjuagó con solución estéril de NaCl al 0.9% y se colocó en el nuevo contenedor de prueba estéril relleno con solución estéril de NaCl al 0.9%.

Todas las piezas restantes de la membrana amniótica se procesaron en exactamente la misma manera. Cuando todas las piezas de membrana amniótica se procesaron y en el recipiente con la solución estéril de NaCl al 0.9%, el recipiente se colocó en el depósito en la plataforma basculante para agitar durante un mínimo de 5 minutos en el esquema #6. Después que la agitación se completó, la membrana se removió a partir del recipiente de espécimen, la solución estéril de NaCl al 0.9% se cambió en el recipiente y la membrana se colocó atrás del contenedor de prueba . El contenedor de prueba se marcó con el Código de Barra de Tejido ID y marca de Cuarentena. El material y soluciones de almacenamiento presentes (por ejemplo tipo de medio) se identificaron, firmaron con iniciales y fecharon. El contenedor de prueba se colocó en una bolsa resellable limpia y se colocó en el refrigerador (2-8°C) . Todos los datos apropiados se registraron en el Registro de Procesamiento de Tejido. Cuando los resultados de serología llegan a estar disponibles, la marca apropiada (Serología Negativa o para Uso de Investigación Únicamente) se colocó en la parte superior de la marca de Cuarentena y aquellos recipientes se segregaron de las puestas en cuarentena.

ETAPA IV. Antes del procesamiento con la Etapa IV, la Revisión del Estado de Tejido se verificó para hacer seguros todos los resultados de prueba aplicables que fueron negativos . Un campo estéril se estableció con hoja Steri- rap estéril y todos los instrumentos y accesorios desinfectados y estériles se establecieron en la misma manera como en las Etapas II y III. La membrana se removió a partir del refrigerador y se colocó en una nueva charola de procesamiento de acero inoxidable estéril. Se agregó la solución estéril de NaCl al 0.9% para cubrir el fondo de la charola. Todo el material celular visible y los restos (si los hay) se removieron suavemente utilizando un Raspador Celular estéril (Nota: debe aplicarse presión mínima para esta etapa para evitar desgarre de la membrana) . Se utilizó la solución estéril de NaCl al 0.9% para ayudar a la remoción de las células y restos. La membrana se enjuagó en la charola de enjuague de acero inoxidable estéril separada rellena con solución estéril de NaCl al 0.9%. Se cambió la solución de NaCl al 0.9% entre los ciclos de limpieza. La membrana se colocó en un nuevo recipiente de espécimen estéril, el recipiente se rellenó con solución estéril fresca de NaCl al 0.9% y se colocó en la plataforma basculante para agitación durante un mínimo de 5 minutos en el Esquema #6. La etapa previa se repitió 3 veces y la solución estéril de NaCl al 0.9% se cambió entre cada agitación. Los datos apropiados se registraron en el Registro de Procesamiento de Tejido. La membrana se removió a partir del recipiente de espécimen una pieza a la vez, el fluido en exceso se apretó suavemente con los dedos y la membrana se colocó en una charola de procesamiento estéril. La membrana se expandió suavemente hasta aplastarse, asegurando el lado fetal hacia abajo . El cuadro se preparó cortando la hoja de plástico desinfectada con tijeras estériles. El tamaño del cuadro debe ser aproximadamente 0.5 cm más pequeño en cada dirección que el segmento de membrana. El cuadro se enjuagó en la charola de enjuague rellena con solución estéril de NaCl al 0.9%. El cuadro se colocó en la superficie de la membrana ligeramente expandida y se le presiona suavemente. Es de gran importancia que el lado suave del cuadro de plástico encare el tejido. Utilizando un escalpelo, la membrana se cortó alrededor del cuadro dejando aproximadamente 0.5 cm extendiéndose más allá de los extremos del cuadro. La membrana en exceso se colocó detrás del recipiente de espécimen . Los extremos de membrana que se extienden más allá del cuadro se enrollan sobre los extremos del cuadro utilizando pinzas o abrazaderas y se guardaron en la misma charola. La siguiente pieza de membrana se procesó en la misma manera. Es importante que el área total que va a secarse no exceda de 300 cm3 por secador de calor. Mientras se "enmarca" la pieza de membrana, las piezas no enmarcadas deben permanecer en el recipiente en solución estéril de NaCl al 0.9%. Las temperaturas de secado de los secadores se establecieron y verificaron utilizando un termómetro digital calibrado con sonda extendida. La temperatura de secado se estableció a 50°C. Los datos se registraron en el Registro de Procesamiento de Tejido. La bomba al vacío se encendió. Se aplicó una gasa estéril en la plataforma de secado del secador de calor, - cubriendo un área ligeramente mayor que el área de la membrana enmarcada. Es importante asegurar que el espesor total de la capa de gasa no exceda el espesor de una gasa de 4 x 4 doblada. Una malla enmarcada con hoja de plástico se colocó en la parte superior de la gasa. Los extremos de la malla de plástico deben extenderse aproximadamente 0.5 - 1. Ocm más allá de los extremos de gasa. La membrana enmarcada se elevó suavemente en la plataforma del secador de calor en la parte superior de la malla de plástico con la membrana de frente hacia arriba. Esto se repitió hasta que la cantidad máxima de la membrana (sin exceder 300 era2) estuvo en la plataforma del secado de calor (NOTA: lado fetal de la placeta de frente hacia arriba) . Una pieza de película enrollada de PVC se cortó suficientemente grande para cubrir la plataforma de secado completa del secador de calor más un pie extra. Con la bomba al vacío operando, la plataforma de secado completa del secador de calor se cubrió suavemente con la película de plástico dejando 1/2 pie extendiéndose más allá de los extremos de la plataforma de secado en ambos lados. Se tuvo cuidado que la película se deslizará estrechamente contra la membrana y la hoja de cuadro (es decir, se "absorbiera" por el vacío) y que no existiera filtraciones de aire y arrugas sobre el área tejida) . La tapa se cerró subsecuentemente. La bomba al vacío se estableció a aproximadamente -22 pulgadas de Hg de vacío. El calibrador de bomba se registró después de 2-3 minutos de ciclo de secado. La membrana se secó por vacío de calor durante aproximadamente 60 minutos. Aproximadamente 15-30 minutos en el proceso de secado, la capa de gasa estéril se reemplazó en el secador de calor con uno nuevo. El espesor total de la capa de gasa no debe exceder el espesor de una gasa de 4 x 4 doblada. Después del cambio, se tuvo cuidado de manera que la película plástica se deslizó estrechamente contra la membrana y la hoja del cuadro y no hubo derrame de aire ni arrugas sobre el área de la membrana. La integridad del sello de vacío se verificó periódicamente verificando el monómetro de presión de bomba. Después de la terminación del proceso de secado, el secador por calor se abrió y la membrana se enfrió durante aproximadamente dos minutos con la bomba en operación. Un nuevo fluido estéril se formó con envoltura Steri estéril y la tabla para cortar de acero inoxidable desinfectada debajo de ésta. En este punto se utilizaron guantes estériles. Con la bomba aún operando, la película plástica se removió suavemente a partir de la hoja de membrana iniciando en la esquina y manteniendo la hoja de membrana abajo con una mano enguantada. El cuadro se elevó ligeramente con la membrana fuera de la plataforma de secado y se colocó en el campo estéril en la parte superior de la tabla para cortar de acero inoxidable desinfectada con el lado de la membrana de frente hacia arriba. Se utiliza un escalpelo, la hoja de membrana se cortó a través de la construcción de una incisión a lo largo del extremo 1-2 mm fuera del extremo del cuadro. La membrana se mantuvo en el lugar con una mano enguantada (guante estéril) . Suavemente la hoja de membrana se despegó del cuadro pelándolo ligeramente y luego colocándolo en el campo estéril en la tabla para cortar. Utilizando el escalpelo o tijeras afiladas, la hoja de membrana se cortó en segmentos de tamaño especificado. Todas las piezas se cortaron y aseguraron en el campo estéril antes de empacar. Una pieza única de membrana se colocó en lugar del paquete de bolsa de pellejo interna con una mano (estéril) mientras se mantiene la bolsa con la otra mano (no estéril) . Se tuvo cuidado de no tocar las bolsas con la mano "estéril". Después, todas las piezas que estuvieron dentro de las bolsas internas se sellaron. Una marca se fijó con la información apropiada (por ejemplo, Parte #, Lote #, etc.) en el área designada en el exterior de la bolsa. Todas las piezas de la membrana se procesaron en la misma manera. Los paquetes de bolsa de pellejo etiquetados y sellados se colocaron en la bolsa resellable impermeable para almacenarse hasta que estuvieron listas para embarcarse en la instalación de esterilización o distribuidor. Todos los datos apropiados se registraron en el Registro de Procesamiento de Tejido. 6.2 EVALUACIÓN DEL BIOTEJIDO DE COLÁGENO PARA HIERATACIÓN/SUTURABILIDAD Para generar retroalimentación cualitativa y cuantitativa en relación al manejo quirúrgico, los periodos de hidratacion y suturabilidad de los biote idos de la presente invención, muestras de membrana amniótica preparadas de acuerdo a los métodos de la presente invención se proporcionan a cuatro cirujanos de superficie ocular bien respetados, experimentados para la evaluación. Las muestras se .evalúan por los cirujanos para realizar injertos de tejido en especímenes del ojo de un puerco para determinar las propiedades de manejo quirúrgico y suturabilidad de los biotejidos de la invención. La siguiente metodología puede utilizarse para cada ciruj ano : (1) El biotej ido se corta en seco para establecer un cuadrante único del ojo del puerco; (2) El biotej ido de corte se coloca en la superficie del ojo del puerco; (3) El biotej ido se hidrata con solución salina estéril y el injerto se deja activar, es decir, rehidratarse , en el ojo del puerco durante periodos de hidratacion de 2 , 5, 10 y 20 minutos; (4) El biotejido se sutura ' en el epitelio del ojo del puerco con varios pedazos de sutura de 9-0 vicrilo; y (5) Los cirujanos hacen notas cualitativas respecto a la calidad del tejido, consistencia y suturabilidad de la membrana amniótica hidratada.

Equivalentes : La presente invención no se limita en alcance por las modalidades específicas descritas en la presente. Ciertamente, varias modificaciones de la invención además de aquellas descritas llegarán a ser aparentes para aquellos expertos en la técnica a partir de la descripción anterior y las figuras anexas. Tales modificaciones se pretenden para caer dentro del alcance de las reivindicaciones anexas . Varias publicaciones, patentes y solicitudes de patente se citan en la presente, las descripciones de las cuales se incorporan para referencia en sus totalidades.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para preparar un biotejido de colágeno a partir de una placenta que tiene una membrana amniótica y una membrana corial, que comprende: (a) separar la membrana amniótica a partir de la membrana corial; y (b) descelularizar la membrana amniótica de manera que la membrana amniótica no esté en contacto con una enzima.
2. El método de la reivindicación 1, que comprende además lavar y secar la membrana amniótica descelularizada.
3. El método de la reivindicación 1, en donde la placenta es una placenta humana.
4. El método de la reivindicación 1, en donde la placenta es de una mujer quien ha experimentado un alumbramiento de sección de cesárea o alumbramiento natural.
5. El método de la reivindicación 1, en donde el método adicionalmente comprende la etapa de determinar que la membrana placentaria es de un donador que ha sido probado por al menos una enfermedad transmisible.
6. El método de la reivindicación 1, en donde el donador es una mujer.
7. El método de la reivindicación 1, en donde la placenta se proporciona dentro de 48 horas de nacimiento.
8. El método de la reivindicación 1, en donde el método adicionalmente comprende la etapa de almacenar la membrana amniótica por hasta 72 horas después de la etapa (a) y antes de la etapa (b) .
9. El método de la reivindicación 8, en donde el almacenamiento comprende refrigerar la membrana amniótica obtenida en la etapa (a) por hasta 5 días.
10. El método de la reivindicación 1, en donde la descelularización de la membrana amniótica en la etapa (b) comprende remover todo el material celular visible y restos celulares de la membrana amniótica.
11. El método de la reivindicación 1, en donde la descelularización de la membrana amniótica en la etapa (b) comprende remover todo el material celular visible y restos celulares del lado del material de la membrana amniótica y el lado fetal de la membrana amniótica.
12. El método de la reivindicación 1, en donde la descelularización de la membrana amniótica en la etapa (b) comprende raspar físicamente la membrana.
13. El método de la reivindicación 1, en donde la descelularización de la membrana amniótica en la etapa (b) comprende descelularizar la membrana amniótica con una solución que contiene detergente.
14. El método de la reivindicación 13, en donde la solución que contiene detergente es una solución que comprende 0.01-1.0% de monohidrato de la sal de sodio del ácido desoxicólico .
15. El método de la reivindicación 13, en donde el detergente en la solución que contiene detergente se selecciona de un grupo que consiste de detergentes no iónicos, Tritón X-100, detergentes aniónicos, y dodecilsulfato de sodio o una combinación de los mismos.
16. El método de la reivindicación 12, en donde el raspado físico comprende raspar con un raspador celular.
17. El método de la reivindicación 1, en donde la descelulari zación de la membrana amniótica en la etapa (b) se realiza en una solución estéril.
18. El método de la reivindicación 2, en donde el lavado de la membrana amniótica se realiza en una solución estéril .
19. El método de la reivindicación 2, en donde el secado de la membrana amniótica descelularizada se realiza a una temperatura de aproximadamente 35°C a aproximadamente 50°C.
20. Un método para preparar un laminado de membrana amniótica de una placenta que tiene una membrana amniótica y una membrana corial, que comprende: (a) separar la membrana amniótica de la membrana corial ; (b) descelularizar la membrana amniótica; y (c) estratificar al menos dos de las membranas amnióticas en contacto entre sí de manera que se forme un laminado de membrana amniótica.
21. El método de la reivindicación 20, que comprende además lavar la membrana amniótica descelularizada al menos una vez después de la etapa (b) y antes de la etapa (c) .
22. El método de la reivindicación 20, que comprende además secar el laminado de membrana amniótica descelularizada .
23. El método de la reivindicación 20, que comprende además ensamblar al menos dos de los laminados de membrana amnióticos en un andamiaje tridimensional complejo.
24. Un biotejido de colágeno que comprende una membrana amniótica libre de sustrato, deshidratada y descelularizada .
25. Un biotejido de colágeno libre de sustrato y descelularizada que comprende colágeno, elastina y fibronectina .
26. Un biotejido de colágeno preparado por el método de la reivindicación 1.-
27. El biotejido de colágeno de la reivindicación 24, en donde la membrana amniótica es una membrana amniótica humana .
28. El biotejido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26, en donde el biotejido es de aproximadamente 10 a 40 mieras en espesor.
29. El biotejido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26, en donde el biotejido se impregna además con una o más biomoléculas .
30. El biote ido de colágeno de la reivindicación 29, en donde la biomolécula se selecciona del grupo que consiste de antibióticos, hormonas, factores de crecimiento, agentes anti-tumorales , agentes anti-fúngicos , agentes antivirales, medicamentos para el dolor, anti-histamínicos , agentes anti - inflamatorios , anti - infecciosos , agentes de cicatrización de herida, selladores de herida, atrayentes celulares y reactivos de andamiaje.
31. El biotejido de colágeno de la reivindicación 29, en donde el biotejido se impregna además con una o más moléculas pequeñas.
32. El biotejido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26, en donde el biotejido se propaga además con células, de manera que las células son uniformes y confluentes .
33. El biotejido de colágeno de la reivindicación 32, en donde las células son células madre humanas o células adultas diferenciadas humanas.
34. El biotejido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26, que comprende además uno o más agentes terapéuticos.
35. El biotejido de colágeno de la reivindicación 34, en donde el agente terapéutico se selecciona del grupo que consiste de una hormona, un polipéptido, un antibiótico, un agente antifúngico, y una enzima.
36. El biotejido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26, que comprende además una o más composiciones de hidrogel.
37. El biote ido de colágeno de la reivindicación 36, en donde la composición de hidrogel comprende un polímero seleccionado del grupo que consiste de alcohol polivinílico, polietilenglicol , ácido hialurónico, dextrano y derivados o análogos de los mismos.
38. Un andamiaje tridimensional que comprende el biotejido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26.
39. El andamiaje tridimensional de la reivindicación 38, en donde el andamiaje es un tubo.
40. El andamiaje tridimensional de la reivindicación 38, que comprende además una o más composiciones de hidrogel .
41. El andamiaje tridimensional de la reivindicación 40, en donde la composición de hidrogel comprende un polímero seleccionado del grupo que consiste de alcohol polivinílico, polietilenglicol, ácido hialurónico, y derivados o análogos de los mismos .
42. Un laminado de membrana amniótica producido por el método de la reivindicación 20.
43. Un laminado de membrana amniótica que comprende al menos dos capas del biotej ido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26.
44. Un laminado de membrana amniótica que comprende el biotej ido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26.
45. El laminado de membrana amniótica de cualquiera de las reivindicaciones 42-44, que comprende además una o más composiciones de hidrogel .
46. El laminado de membrana amniótica de la reivindicación 45, en donde la composición de hidrogel comprende un polímero seleccionado del grupo que consiste de alcohol polivinílico, polietilenglicol , ácido hialurónico, dextrano y derivados o análogos de los mismos.
47. Un injerto quirúrgico que comprende el biotej ido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26.
48. Un método para utilizar el injerto quirúrgico de la reivindicación 47, en un procedimiento quirúrgico, en donde el injerto quirúrgico se aplica directamente al sitio quirúrgico del sujeto.
49. El método de la reivindicación 48, en donde el sitio quirúrgico se selecciona del grupo que consiste de un ojo, piel, una superficie serosal del abdomen, una superficie serosal de la cavidad del pecho, un pericardio serosal , una superficie mucosa de la cavidad oral, una superficie mucosa de la cavidad nasal, una superficie del tracto respiratorio, una superficie del tracto gastrointestinal, una superficie del tracto urogenital.
50. El método de la reivindicación 48, en donde el injerto quirúrgico se aplica a un sitio interno del cuerpo del sujeto.
51. El método de la reivindicación 48, en donde el injerto quirúrgico se aplica a un sitio externo del cuerpo del sujeto.
52. El método de la reivindicación 48, en donde el sujeto es un ser humano.
53. Un método para el tratamiento y/o prevención de cualquier enfermedad del ojo en un sujeto, que comprende colocar el biotejido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26 en una superficie del ojo enfermo del suj eto .
54. El método de la reivindicación 53, en donde la enfermedad del ojo se selecciona del grupo que consiste de ulceraciones/perforaciones, hulosa, dermoides/tumores oculares, pterigio primario, defectos epiteliales corneales persistentes, quemaduras álcali agudas y crónicas, quemaduras térmicas, aniridia, queratitis atópica, deficiencia de célula madre limbal idiopática, catarata corneal, neovascularización, fusión corneal reumatoide, perafigoide cicatricial ocular, pústular de filtrado, tubo de válvula Lamed expuesto, celulitis Serratia con simblefaron subsecuente, síndrome de Stevenson Jonson agudo y crónico.
55. Un método para utilizar el biotejido de colágeno de cualquiera de las · reivindicaciones 24-26 en procedimientos quirúrgicos seleccionados a partir del grupo que consiste de cirugía oftálmica; cirugía cardiovascular; cirugía periodontal; cirugía neurológica; cirugía dental y cirugía ortopédica.
56. Un método para utilizar el biotejido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-25 en la corrección de incontinencia urinaria en un sujeto.
57. Un método para suministrar un agente terapéutico a un sujeto que comprende poner en contacto al sujeto con el biotejido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26.
58. El método de la reivindicación 56 ó 57, en donde el sujeto es un humano. -
59. El método de la reivindicación 57, en donde el agente terapéutico se selecciona del grupo que consiste de antibióticos, agentes anti-cáncer, agentes anti -bacterianos , agentes anti-virales ; vacunas; anestésicos; agentes anti-histamínicos ; agentes anti - inflamatorios ; anti -depresivos ; agentes anti-diabéticos ; anti-psicóticos; estimulantes del sistema nervioso central; hormonas; inmunosupresores ; relajantes musculares; y prostaglandinas .
60. Un método para utilizar el biote ido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26, en donde el tiempo de preparación del biotejido de colágeno comprende hidratacion del biotejido de colágeno.
61. El método de la reivindicación 60, en donde la hidratacion del biotejido comprende hidratacion con una solución salina estéril.
62. El método de la reivindicación 60, en donde el biotejido se hidrata por al menos 2 minutos antes del uso.
63. Un método para utilizar un laminado de membrana amniótica que comprende además propagar el laminado con células vivas.
64. El método de la reivindicación 63, en donde las células vivas se seleccionan del grupo que consiste de células de tejido adulto y células madre.
65. El método de la reivindicación 64, en donde las células madre son totipotentes .
66. El método de la reivindicación 64, en donde las células madre son pluripotentes .
67. El método de la reivindicación 64, en donde las células madre son específicas de tejido.
68. Un método para tratar o prevenir una condición de la piel en un sujeto que comprende poner en contacto la condición de la piel con el biotej ido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26.
69. El método de la reivindicación 68, en donde la condición de la piel se selecciona del grupo que consiste de lesión de la piel, arrugas, líneas finas, adelgazamiento de la piel, elasticidad de la piel reducida, piel áspera, cicatrices por acné, surcos glabelares, cicatriz por excisión, defecto de tejido suave, condición de la piel congénita, condición de la piel degenerativa, deficiencia de colágeno VII, y piel dañada por el sol.
70. El método de la reivindicación 68, que comprende además administrar uno o más agentes terapéuticos al sujeto para el tratamiento de una condición de la piel.
71. El método de la reivindicación 70, en donde uno o más agentes terapéuticos se selecciona del grupo que consiste de vitaminas, minerales, preparaciones basadas en catequina, y glucosamina .
72. Un método para tratar una herida en un sujeto que comprende poner en contacto la herida con biotej ido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26.
73. El método de la reivindicación 72, en donde la herida se selecciona del grupo que consiste de herida epidérmica, una herida de la piel, una llaga de presión, una herida crónica, una herida aguda, una herida externa, una herida interna, una herida congénita, una herida por quemadura, una herida quirúrgica, y una infección por herida.
74. Un método para tratar una quemadura en un sujeto que comprende poner en contacto la quemadura con un biotej ido de colágeno de cualquiera de las reivindicaciones 24-26.
75. El método de la reivindicación 74, en donde la quemadura se selecciona del grupo que consiste de una quemadura de primer grado, quemadura de segundo grado, quemadura de tercer grado, una herida por quemadura infectada, y un impétigo de herida por quemadura.
76. El método de la reivindicación 68, 72, 74, en donde el sujeto es un ser humano.