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KR970702065A - 증강된 바이러스-매개된 DNA 전이 (Enhanced virus-mediated DNA transfer) - Google Patents

증강된 바이러스-매개된 DNA 전이 (Enhanced virus-mediated DNA transfer) Download PDF

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KR970702065A
KR970702065A KR1019960705364A KR19960705364A KR970702065A KR 970702065 A KR970702065 A KR 970702065A KR 1019960705364 A KR1019960705364 A KR 1019960705364A KR 19960705364 A KR19960705364 A KR 19960705364A KR 970702065 A KR970702065 A KR 970702065A
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데이비드 에이 윌리암즈
비크람 피 파텔
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무카이지 인드라니
인디애나 유니버시티 파운데이션
오오쓰웨스턴 유니버시티
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Publication date
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Abstract

레트로바이러스에 의해 조혈 세포 및 다른 세포의 형질도입 효능을 증가시키는 방법은 피브로넥틴 또는 피브로넥틴 단편의 존재하에 세포를 감염시킴을 포함한다. 도면으로 알 수 있는 바와 같이, 피브로넥틴 및 피브로넥틴 단편은 세포, 특히 수임 조상 및 원시 조혈 간세포를 포함하는 조혈세포내로의 레트로바이러스-매개된 유전자 전이를 현저히 증강시킨다. 또한, 본 발명은 증강된 유전자 전이를 이용한 신체 유전자 치료를 위한 개선된 방법, 세포내로의 레트로바이러스-매개된 DNA 전이를 증강시키는 조혈성 세포 모집단 및 신규한 작제물 및 이의 용도에 관한 것이다.

Description

증강된 바이러스-매개된 DNA 전이(Enhanced virus-mediated DNA transfer)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (99)

  1. 생존가능한 조혈세포를 실질적으로 순수한 피브로넥틴, 실질적으로 순수한 피브로넥틴 단편 또는 이의 혼합물의 존재하에 복제-결함 재조합 레트로바이러스로 감염시켜 레트로바이러스 벡터에 의한 조혈세포의 형질도입빈도를 증가시킴을 포함하여, 복제-결함 레트로바이러스 벡터에 의해 생존가능한 조혈세포의 형질도입 빈도를 증가시키는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 조혈세포가 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 가지며 재조합 페트로바이러스 베터가 단백질을 코딩하는 외래 유전자를 포함하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 외래 유전자가 아데노신 데아미나제를 코딩하는 유전자인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 외래 유전자가 사람 아데노신 데아미나제를 코딩하는 유전자인 방법.
  5. 제1항에 있어서, CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 제공하는 아미노산 서열 및 헤파린Ⅱ 도메인의 레트로바이러스 결합 활성을 제공하는 아미노산 서열을 포함하는 피브로넥틴 단편의 존재하에서 세포를 레트로바이러스 벡터로 감염시키는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 조혈세포가 사람 간세포를 포함하는 방법.
  7. 제6항에 있어서. 조혈세포가 부착-음성, 저밀도, 단핵세포임을 특징으로 하는 방법.
  8. 배지 중의 생존가능한 조혈세포를 부동화된 피브로넥틴, 부동화된 피브로넥틴 단편 또는 이의 부동화된 혼합물의 존재하에서 복제-결함 재조합 레트로바이러스로 감염시켜 형질도입된 조혈세포를 제조함을 포함하여, 형질도입된 조혈세포를 제조하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 형질도입된 조혈세포를 수집하는 방법.
  10. 제8항에 있어서, 조혈세포가 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 가지고 재조합 레트로바이러스 벡터가 단백질을 코딩하는 외래 유전자를 포함하는 방법.
  11. 제8항에 있어서, 조혈세포가 효소 결핍성 또는 효소 이상을 가지고 외래 유전자가 효소를 코딩하는 유전자인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 조혈세포가 효소 결핍 또는 효소 이상을 갖는 사람 조혈세포이고 외래 유전자가 효소를 코딩하는 유전자인 방법
  13. 제11항에 있어서, 조혈세포가 아데노신 데아미나제 결핍을 가지고 외래 유전자가 아데노신 데아미나제를 코딩하는 방법.
  14. 제12항에 있어서, 사람 조혈세포가 아데노신 데아미나제 결핍을 가지고 외래 유전자가 아데노신 데아미나제를 코딩하는 방법.
  15. 제12항에 있어서, CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 제공하는 아미노산 서열 및 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스 결합 활성을 제공하는 아미노산 서열을 포함하는 부동화된 피브로넥틴 단편의 존재하에서 세포를 레트로바이러스로 감염시키는 방법.
  16. 제15항에 있어서, 조혈세포가 사람 간세포를 포함하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 조혈세포가 부착-음성, 저밀도, 단핵 세포임을 특징으로 하는 방법.
  18. 동물 공여체로부터 생존가능한 조혈세포를 수득하는 방법 : 레트로바이러스 벡터에 의한 세포의 형질도입 효능을 증가시키기에 효과적인 부동화량의 피브로넥틴 및/또는 이의 단편의 존재하에서 외래 DNA를 포함하는 복제결함 재조합 레트로바이러스 벡터로 생존가능한 조혈세포를 감염시켜 형질도입된 생존가능한 조혈세포를 제조하는단계 : 형질도입된 생존가능한 조혈세포를 세포 이식으로 동물 수용체내로 도입시키는 단계를 포함하는, 세포 이식을 위한 개선된 방법.
  19. 제18항에 있어서, 세포 이식이 동물 수용체의 골수 혈액 질환을 치료하기 위한 방법.
  20. 제18항에 있어서, 세포 이식이 동물 수용체의 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 치료하기 위한 방법.
  21. 제19항에 있어서, 동물 공여체 및 동물 수용체가 사람인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 동물 수용체가 자가 공여체인 방법.
  23. 부동화된 피브로넥틴, 부동화된 피브로넥틴 단편 또는 이의 부동화된 혼합물을 포함하는 배양 배지내에 생존가능한 조혈세포를 포함하는, 레트로바이러스-매개된 유전자 전이를 수행하는데 적합한 세포 모집단.
  24. 부동화된 피브로넥틴, 부동화된 피브로넥틴 단편 또는 이의 부동화된 혼합물을 포함하는, 생존가능한 조혈세포를 유지시킬 수 있는 배양 배지.
  25. 부동화된 피브로넥틴, 부동화된 피브로넥틴 단편 또는 이의 부동화된 혼합물의 존재하에서 레트로바이러스-매개된 유전자 전이로 형질도입된 생존 가능한 조혈 세포를 포함하는 세포 모집단.
  26. 부동화된 피브로넥틴, 부동화된 피브로넥틴 단편 또는 이의 부동화된 혼합물의존재하에서 레트로바이러스-매개된 유전자 전이를 수행함을 포함하여, 생존가능한 조혈세포의 레트로바이러스-매개된 유전자 전이를 개선시키는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 조혈세포가 포유동물의 간세포를 포함하는 방법.
  28. 조혈 간세포내에 농축된 생존가능한 조혈세포의 모집단을 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 제공하는 제1아미노산 서열 및 피브로넥틴의 CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 제공하는 제2아미노산 서열을 포함하는 유효한 부동화량의 폴리펩타이드의 존재하에서 복제-결함 재조합 레트로바이러스 벡터로 감염시켜 레트로바이러스 벡터에 의한 조혈세포의 형질도입 빈도을 증가시킴을 포함하여, 복제-결함 재조합 레트로바이러스 벡터에 의한 조혈세포의 형질도입 빈도를 증가시키는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 조혈세포가 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 가지고 재조합 레트로바이러스 벡터가 단백질을 코딩하는 외래 유전자를 포함하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 외래 유전자가 아데노신 데아미나제를 코딩하는 유전자인 방법.
  31. 제30항에 있어서, 외래 유전자가 사람 아데노신 데아미나제를 코딩하는 유전자인 방법.
  32. 제29항에 있어서, 조혈세포가 부착-음성, 저밀도, 단핵 세포임을 특징으로 하는 방법.
  33. 제28항에 있어서, 감염이 (ⅰ) 서열표 1의 제1아미노산 서열, (ⅱ) 서열표 2의 제2아미노산 서열 또는 원시 조혈세포를 결합시키는 능력을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드의 존재하에서 수행되는 방법.
    서열표 1
    Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr
    Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly Tyr
    Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met Lys Glu Ile
    Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val
    Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr
    Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn Val Ser Pro
    Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile
    Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala
    Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile Sys Pro Asp
    Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys
    Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val
    Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu
    Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala
    Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Sys Pro Gly Sev Pro Pro
    Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile
    Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
    Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys Thr
    서열표 2
    Asp Glu Leu Pro Gln Leu Val Thr Leu Pro His Pro Asn Leu His Gly
    Pro Glu Ile Leu Asp Val Pro Ser Thr
  34. (ⅰ) 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 제공하는 제1아미노산 서열 및 (ⅱ) 피브로넥틴의 CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 제공하는 제2아미노산 서열을 포함하는, 레트로바이러스 벡터에 의한 조혈세포의 형질도입 빈도를 증가시키기에 효과적인 부동화량의 폴리펩타이드의 존재 및 레트로바이러스 생성 세포의 부재하에서 레트로바이러스-매개된 유전자 전이로 형질도입된 생존가능한 조혈세포를 포함하는 세포 모집단.
  35. 제34항에 있어서, 조혈 간세포내에 농축된 세포 모집단.
  36. 제35항에 있어서, 생존가능한 조혈세포가 사람 조혈 간세포내에 농축된 사람 조혈세포인 세포 모집단.
  37. 제36항에 있어서, 부착-음성, 저밀도, 단핵세포임을 특징으로 하는 사람 조혈세포의 실질적으로 균일한 모집단인 세포 모집단.
  38. 제36항에 있어서, 외래 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입시켜 세포내의 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 교정시킨 세포 모집단.
  39. 제38항에 있어서, 아데노신 데아미나제 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입시켜 세포내의 아데노신 데아미나제 결핍을 교정시킨 세포 모집단.
  40. (ⅰ) 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 제공하는 제1아미노산 서열 및 (ⅱ) 피브로넥틴의 CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 제공하는 제2아미노산을 포함하는, 레트로바이러스 벡터에 의한 조혈세포의 형질도입 빈도를 증가시키기에 효과적인 부동화량의 폴리펩타이드의 존재 및 레트로바이러스 생성 세포의 부재하에서 레트로바이러스-매개된 유전자 전이로 형질도입된 생존가능한 조혈세포를 세포 이식으로 동물내로 도입시킴을 포함하는, 세포 이식 방법.
  41. 제40항에 있어서, 생존가능한 조혈세포가 조혈 간세포내에 농축되는 세포 이식 방법.
  42. 제41항에 있어서, 생존가능한 조혈세포가 사람 조혈 간세포내에 농축된 사람 조혈세포인 세포 이식 방법.
  43. 제42항에 있어서, 조혈세포가 부착-음성, 저밀도, 단핵세포임을 특징으로 하는 사람 조혈세포의 실질적으로 균일한 모집단인 세포 이식 방법.
  44. 제42항에 있어서, 조혈세포가 세포내에서 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 교정하기 위한 외래 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입된 세포 이식 방법.
  45. 제44항에 있어서, 조혈세포가 사람 아데노신 데아미나제 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터에 의해 형질도입되어 세포내의 아데노신 데아미나제 결핍이 교정된 세포 이식 방법.
  46. 제대 혈액으로부터의 생존가능한 조혈세포를 (ⅰ) 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 제공하는 제1아미노산 서열 및 (ⅱ) 피브로넥틴의 CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 제공하는 제2아미노산 서열을 포함하는, 재조합 레트로바이러스 벡터에 의한 조혈세포의 형질도입빈도를 증가시키기에 효과적인 부동화량의 폴리펩타이드의 존재하에서 복제-결함 재조합 레트로바이러스 벡터로 감염시킴을 포함하여, 세포 이식 방법에 적합한 형질도입된 제대 혈액 세포를 수득하는 방법.
  47. 제46항에 있어서, 조혈세포가 조혈 간세포내에 농축된 제대 혈액으로부터의 사람 조혈세포인 방법.
  48. 제47항에 있어서, 조혈세포가 부착-음성, 저밀도, 단핵세포임을 특징으로 하는 제대 혈액으로부터의 사람 조혈세포의 실질적으로 균일한 모집단인 방법.
  49. 제47항에 있어서, 조혈세포가 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 가지고 재조합 레트로바이러스 벡터가 단백질을 코딩하는 사람 유전자를 포함하는 방법.
  50. 제49항에 있어서, 외래 유전자가 아데노신 데아미나제르 코딩하는 유전자인 방법.
  51. (ⅰ) 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 제공하는 제1아미노산 서열 및 (ⅱ) 피브로넥틴의 CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 제공하는 제2아미노산 서열을 포함하는, 레트로바이러스 벡터에 의한 제대 혈액으로부터 조혈세포의 형질도입빈도를 증가시키기에 효과적인 부동화량의 폴리펩타이드의 존재하에서 레트로바이러스-매개된 유전자 전이로 형질도입시킨 제대 혈액으로부터의 생존가능한 조혈세포를 포함하는 세포 모집단.
  52. 제51항에 있어서, 조혈세포가 사람 제대 혈액으로부터의 사람 조혈세포인 세포 모집단.
  53. 제52항에 있어서, 제대 혈액으로부터의 사람 조혈 간세포내에 농축된 세포 모집단.
  54. 제53항에 있어서, 부착-음성, 저밀도, 단핵 세포임을 특징으로 하는 사람 조혈세포의 실질적인 균일한 모집단인 세포 모집단.
  55. 제53항에 있어서, 세포 중의 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 교정하기 위한 외래 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입된 세포 모집단.
  56. 제55항에 있어서, 사람 아데노신 데아미나제 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입시켜 세포내의 아데노신 데아미나제 결핍성을 교정시킨 세포 모집단.
  57. (ⅰ) 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 제공하는 제1아미노산 서열 및 (ⅱ) 피브로넥틴의 CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 제공하는 제2아미노산 서열을 포함하는, 레트로바이러스 벡터에 의한 제대 간세포의 형질도입빈도를 증가시키기에 효과적인 부동화량의 폴리펩타이드의 존재하에서 레트로바이러스-매개된 유전자 전이로 형질도입시킨 제대 혈액으로부터의 생존가능한 조혈세포를 세포 이식으로 동물에 도입시킴을 포함하는, 세포 이식 방법.
  58. 제57항에 있어서, 동물이 사람이고 조혈세포가 사람 조혈 간세포내에 농축된 사람 조혈세포인 세포 이식 방법.
  59. 제58항에 있어서, 조혈세포가 부착-음성, 저밀도, 단핵 세포임을 특징으로 하는 사람 조혈세포의 실질적으로 균일한 모집단인 세포 이식 방법.
  60. 제58항에 있어서, 조혈 세포가 세포내의 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 교정하기 위한 외래 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입된 세포 이식 방법.
  61. 제60항에 있어서, 조혈세포가 사람 아데노신 데아미나제 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입되어 세포내의 아데노신 데아미나제 결핍이 교정된 세포 이식 방법.
  62. 서열표 1의 제1아미노산 서열 또는 레트로바이러스를 결합시키는 능력을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열 및 서열표 2의 제1아미노산 서열 또는 원시 조혈세포를 결합시키는 능력을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열을 포함하는 유효량의 부동화된 재조합 폴리펩타이드의 존재하에서 조혈세포를 복제-결함 재조합 레트로바이러스 벡터로 감염시킴을 포함하여, 복제-결함 재조합 레트로바이러스 벡터에 의한 조혈세포의 형질도입 빈도를 증가시키는 방법.
    서열표 1
    Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr
    Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly Tyr
    Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met Lys Glu Ile
    Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val
    Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr
    Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn Val Ser Pro
    Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile
    Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala
    Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile Sys Pro Asp
    Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys
    Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val
    Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu
    Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala
    Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Sys Pro Gly Sev Pro Pro
    Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile
    Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
    Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys Thr
    서열표 2
    Asp Glu Leu Pro Gln Leu Val Thr Leu Pro His Pro Asn Leu His Gly
    Pro Glu Ile Leu Asp Val Pro Ser Thr
  63. 제62항에 있어서, 조혈세포가 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 가지고 재조합 레트로바이러스 벡터가 단백질을 코딩하는 외래 유전자를 포함하는 방법.
  64. 제63항에 있어서, 외래 유전자가 아데노신 데아미나제를 코딩하는 유전자인 방법.
  65. 제64항에 있어서, 외래 유전자가 사람 아데노신 데아미나제를 코딩하는 유전자인 방법.
  66. 제63항에 있어서, 조혈세포가 사람 간세포를 포함하는 외래 유전자가 사람 유전인 방법.
  67. 제66항에 있어서, 조혈 세포가 부착-음성, 저밀도, 단핵 세포임을 특징으로 하는 방법.
  68. 서열표 1의 제1아미노산 서열 또는 레트로바이러스를 결합시키는 능력을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열 및 서열표 2의 제2아미노산 서열 또는 원시 조혈세포를 결합시키는 능력을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열을 포함하는, 조혈세포의 형질도입 빈도을 증가시키는 유효량의 부동화된 재조합 폴리펩타이드의 존재 및 레트로바이러스 생성 세포의 부재하에서 레트로바이러스-매개된 유전자 전이로 형질도입된 생존가능한 조혈세포를 포함하는 세포 모집단.
    서열표 1
    Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr
    Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly Tyr
    Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met Lys Glu Ile
    Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val
    Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr
    Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn Val Ser Pro
    Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile
    Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala
    Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile Sys Pro Asp
    Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys
    Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val
    Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu
    Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala
    Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Sys Pro Gly Sev Pro Pro
    Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile
    Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
    Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys Thr
    서열표 2
    Asp Glu Leu Pro Gln Leu Val Thr Leu Pro His Pro Asn Leu His Gly
    Pro Glu Ile Leu Asp Val Pro Ser Thr
  69. 제68항에 있어서, 조혈 간세포내에 농축된 세포 모집단.
  70. 제69항에 있어서, 생존가능한 조혈세포가 사람 조혈 간세포내에 농축된 사람 조혈세포인 세포 모집단.
  71. 제70항에 있어서, 부착-음성, 저밀도, 단핵 세포임을 특징으로 하는 사람 조혈세포의 실질적으로 균일한 모집단인 세포 모집단.
  72. 제70항에 있어서, 세포내의 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 교정하기 위한 외래 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입된 세포 모집단.
  73. 제72항에 있어서, 사람 아데노신 데아미나제 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입되어 세포내의 아데노신 데아미나제 결핍이 교정된 세포 모집단.
  74. 서열표 1의 제1아미노산 서열 또는 레트로바이러스를 결합시키는 능력을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열 및 서열표2의 제2아미노산 서열 또는 원시 조혈세포를 결합시키는 능력을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열을 포함하는, 조혈세포의 형질도입 빈도를 증가시키는 유효량의 부동화된 폴리펩타이드의 존재 및 레트로바이러스 생성 세포의 부재하에서 레트로바이러스-매개된 유전자 전이로 형질도입된생존가능한 조혈세포를 세포 이식에 의해 동물내로 도입함을 포함하는, 세포 이식 방법.
    서열표 1
    Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr
    Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly Tyr
    Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met Lys Glu Ile
    Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val
    Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr
    Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn Val Ser Pro
    Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile
    Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala
    Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile Sys Pro Asp
    Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys
    Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val
    Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu
    Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala
    Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Sys Pro Gly Sev Pro Pro
    Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile
    Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
    Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys Thr
    서열표 2
    Asp Glu Leu Pro Gln Leu Val Thr Leu Pro His Pro Asn Leu His Gly
    Pro Glu Ile Leu Asp Val Pro Ser Thr
  75. 제74항에 있어서, 생존가능한 조혈세포가 사람 조혈 간세포내에 농축된 사람 조혈세포인 세포 이식 방법.
  76. 제75항에 있어서, 생존가능한 조혈세포가 사람 조혈 간세포내에 농축된 사람 조혈세포인 세포 이식 방법.
  77. 제76항에 있어서, 조혈세포가 부착-음성, 저밀도, 단핵 세포임을 특징으로 하는 사람 조혈세포의 실질적으로 균일한 모집단인 세포 이식 방법.
  78. 제76항에 있어서, 조혈세포가 세포내의 단백질 결핍 또는 단백질 이상을 교정하기 위한 외래 유전자를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입된 세포 이식 방법.
  79. 제78항에 있어서, 조혈세포가 사람 아데노신 데아미나제를 포함하는 재조합 레트로바이러스 벡터로 형질도입되어 세포내의 아데노신 데아미나제 결핍이 교정된 세포이식 방법.
  80. 레트로바이러스를 포함하는 배지를 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 제공하는 아미노산 서열을 포함하는 유효한 부정화량의 폴리펩타이드와 접촉시켜 배양함을 포함하여, 레트로바이러스를 편재시키는 방법.
  81. 제80항에 있어서, 폴리펩타이드가 서열표 1의 아미노산 서열 또는 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열을 포함하는 방법.
    서열표 1
    Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr
    Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly Tyr
    Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met Lys Glu Ile
    Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val
    Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr
    Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn Val Ser Pro
    Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile
    Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala
    Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile Sys Pro Asp
    Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys
    Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val
    Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu
    Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala
    Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Sys Pro Gly Sev Pro Pro
    Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile
    Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
    Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys Thr
  82. 표적 세포에 특이적으로 결합하는 리간드를 선택하고; 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드에 상기 리간드를 공유 결합시킴을 포함하여, 미리결정된 표적세포내로의 레트로바이러스-매개된 DNA 전이를 증강시키는데 유용한 작제물을 제조하는 방법.
  83. 제82항에 있어서, 리간드가 세포 부착 단백질, 호르몬, 사이토킨, 모노클로날 항체, 탄수화물, 대사산물, 또는 피브로넥틴 이외의 단백질로부터의 폴리펩타이드인 방법.
  84. 제83항에 있어서, 표적 세포가 악성 세포이고 리간드가 호르몬인 방법.
  85. 제84항에 있어서, 표적 세포가 유방암 세포이고 리간드가 호르몬, 에스트로겐, 프로게스토겐 또는 항-프로게스토겐을 방출하는 황체 호르몬인 방법.
  86. 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고 레트로바이러스를 결합하는 폴리펩타이드와 공유 결합된 세포에 특이적으로 결함하는 리간드를 갖는 유효한 부동화량의 작제물의 존재하에서 세포를 레트로바이러스로 감염시킴을 포함하여, 레트로바이러스에 의한 생존가능한 표적 세포의 모집단의 형질도입 빈도를 증가시키는 방법.
  87. 제86항에 있어서, 리간드가 세포 부착 단백질, 호르몬, 사이토킨, 모노클로날 항체, 탄수화물, 대수산물, 또는 피브로넥틴 이외의 단백질의 폴리펩타이드인 방법.
  88. 제86항에 있어서, 폴리펩타이드가 서열표 1의 아미노산 서열 또는 레트로바이러스-결합 활성을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열을 포함하는 재조합 폴리펩타이드인 방법.
    서열표 1
    Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr
    Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly Tyr
    Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met Lys Glu Ile
    Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val
    Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr
    Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn Val Ser Pro
    Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile
    Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala
    Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile Sys Pro Asp
    Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys
    Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val
    Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu
    Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala
    Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Sys Pro Gly Sev Pro Pro
    Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile
    Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
    Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys Thr
  89. 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 레트로바이러스-결합 활성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드에 공유 결합된 표적 세포와 특이적으로 결합하는 리간드를 포함하는, 미리결정된 표적 세포내로의 레트로바이러스-매개된 유전자 전이를 증강시키는 작제물.
  90. 제86항에 있어서, 폴리펩타이드가 서열표 1의 아미노산 서열 또는 레트로바이러스-결합 활성을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열을 포함하는 재조합 폴리펩타이드인 작제물.
    서열표 1
    Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr
    Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly Tyr
    Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met Lys Glu Ile
    Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val
    Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr
    Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn Val Ser Pro
    Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile
    Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala
    Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile Sys Pro Asp
    Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys
    Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val
    Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu
    Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala
    Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Sys Pro Gly Sev Pro Pro
    Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile
    Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
    Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys Thr
  91. 제90항에 있어서, 리간드가, 부착 단백질, 호르몬, 사이토킨, 모노클로날 항체, 탄수화물, 대사 산물, 또는 피브로넥틴 이외의 단백질의 폴리펩타이드인 방법.
  92. (a) (ⅰ) 레트로 바이러스-결합 활성을 나타내는 사람 피브로넥틴의 헤파린-Ⅱ 도메인의 제1아미노산 서열 및 (ⅱ) 사람 피브로넥틴의 CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 제공하는 제2아미노산 서열을 포함하는 실질적으로 순수한 폴리펩타이드; (b) 레트로바이러스 벡터를 사람 조혈세포와 접촉시켜 배양하기 위한 인공기체; 및 (c) 조혈세포를 예비 자극하기 위한 조혈세포 성장인자를 포함하는 사람 조혈세포내로의 레트로바이러스-매개된 DNA 전이를 수행하는데 사용하기 위한 키트.
  93. 제90항에 있어서, 실질적으로 순수한 폴리펩타이드가 인공 기체상에 부동화된 키트.
  94. 제90항에 있어서, (d) 사람 조혈세포를 형질도입시키기 위한 재조합 레트로바이러스 벡터를 추가로 포함하는 키트.
  95. 제90항에 있어서, 실질적으로 순수한 폴리펩타이드(a)가 서열표 1의 아미노산 서열 또는 레트로바이러스-결합 활성을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열의 재조합 폴리펩타이드를 포함하는 키트.
    서열표 1
    Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr
    Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly Tyr
    Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met Lys Glu Ile
    Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val
    Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr
    Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn Val Ser Pro
    Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile
    Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala
    Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile Sys Pro Asp
    Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys
    Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val
    Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu
    Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala
    Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Sys Pro Gly Sev Pro Pro
    Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile
    Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
    Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys Thr
  96. 제95항에 있어서, 실질적으로 순수한 재조합 폴리펩타이드가 인공 기체상에 부동화된 키트.
  97. 제96항에 있어서, (d) 사람 조혈세포를 형질도입시키기 위한 재조합 레트로바이러스 벡터를 추가로 포함하는 키트.
  98. 생존가능한 원시 조혈세포를 포함하는 세포 모집단을 피브로넥틴의 CS-1 도메인의 세포-결합 활성을 나타내는 유효한 부동화된 폴리펩타이드와 접촉시켜 부동화량의 폴리펩타이드에 원시 조혈세포를 결합시킴을 포함하여, 생존가능한 원시 조혈세포 모집단을 제조하는 방법.
  99. 제98항에 있어서, 폴리펩타이드가 서열표 2의 아미노산 서열 또는 원시 조혈세포의 결합 능력을 나타내기에 충분히 유사한 아미노산 서열을 포함하는 방법.
    서열표 2
    Asp Glu Leu Pro Gln Leu Val Thr Leu Pro His Pro Asn Leu His Gly
    Pro Glu Ile Leu Asp Val Pro Ser Thr
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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