[go: up one dir, main page]

KR20130135872A - 중화 항-ccl20 항체 - Google Patents

중화 항-ccl20 항체 Download PDF

Info

Publication number
KR20130135872A
KR20130135872A KR20137015726A KR20137015726A KR20130135872A KR 20130135872 A KR20130135872 A KR 20130135872A KR 20137015726 A KR20137015726 A KR 20137015726A KR 20137015726 A KR20137015726 A KR 20137015726A KR 20130135872 A KR20130135872 A KR 20130135872A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
antibody
ccl20
nos
antigen binding
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
KR20137015726A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101919170B1 (ko
Inventor
토시오 이마이
제임스 브래드포드 클린
테츠수 가와노
루이기 그라소
요시마사 사카모토
자레드 스피델
미유키 니시무라
켄조 무라모토
타츠수오 호리조에
Original Assignee
에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 filed Critical 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤
Publication of KR20130135872A publication Critical patent/KR20130135872A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101919170B1 publication Critical patent/KR101919170B1/ko
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A61P5/16—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4 for decreasing, blocking or antagonising the activity of the thyroid hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/521—Chemokines

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)

Abstract

본 개시내용은 인간 CC 케모카인 리간드 20(CCL20)에 특이적으로 결합하는 인간화된, 키메라 및 뮤린 항체를 제공한다. 추가로, 본 개시내용은 상기 항체의 중쇄 및 경쇄뿐만 아니라, 상기 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 서열을 포함하는 단리된 핵산, 재조합 벡터 및 숙주 세포를 제공한다. 염증 및 자가면역 장애뿐만 아니라 암을 포함하는 장애를 치료하기 위해 항-CCL20 항체를 사용하는 방법도 개시된다.

Description

중화 항-CCL20 항체{NEUTRALIZING ANTI-CCL20 ANTIBODIES}
본원은 2010년 11월 19일자로 출원된 미국 가특허출원 제61/415,614호로부터의 우선권을 주장한다. 본원의 개시내용은 전체적으로 본원에 참고로 도입된다.
본 발명은 인간 CC 케모카인 리간드 20(CCL20)에 대해 특이적으로 유도된 신규 인간화된, 키메라 및 뮤린 항체에 관한 것이다. 본 발명의 인간화된 항체는 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료를 위한 치료제로서 특히 매우 적합하다.
면역 시스템은 비-자가 물질(예를 들면, 외부 유기체 또는 물질)과 자가 물질을 구별하기 위해 신체에 의해 사용되는 고도로 정교한 생체회로이다. 체내 비-자가 물질의 검출은 염증을 초래할 수 있고, 이때 다양한 세포 및 분자 성분들이 비-자가 유기체 또는 물질에 의해 야기된 잠재적으로 유해한 사건(event)에 반응하도록 조직화된다. 염증 과정이 외부 공격으로부터 신체를 보호하는 데에 기여하지만, 면역 시스템의 이상조절은 부정적인 결과, 예컨대, 자가 공격, 예를 들면, 자가면역 질환을 초래할 수 있다. 염증 분자, 예컨대, 케모카인의 기능을 변경함으로써 면역/염증 반응과 관련된 장애의 개시 및 진행을 감소시키는 것이 가능할 수 있다.
케모카인은 염증에 있어서 중추적인 역할을 수행하는 작은(8 내지 10 kDa) 단백질들의 패밀리이다. 염증 과정 동안 케모카인은 유해한 자극의 부위에서 국소적으로 생성되고 그들의 동족 수용체인 7개의 경막 G 단백질-커플링된 수용체(GPCR)를 발현하는 면역 세포들을 동원하는 데에 있어서 중추적인 역할을 수행한다. 대안적으로 간 및 활성화-조절된 케모카인(LARC), 대식세포 염증 단백질-3 α(MIP-3α) 또는 엑소더스(Exodus)-1로서 지칭되는 CCL20은 상피세포에 의해 발현되는 가용성 케모카인이다. 상피 각질세포 및 활액 표층 세포는 항상성 상태뿐만 아니라 염증 및 병리학적 상태, 예컨대, 암, 건선 및 류마티스성 관절염 동안 다량의 CCL20을 생성하는 것으로 공지되어 있다. CCL20에 대한 동족 수용체는 CC 케모카인 수용체 6(CCR6)이고, CCL20은 CCR6과 상호작용하는 것으로 공지된 유일한 케모카인이다. CCL20 신호에 반응하여, CCR6을 프로세싱하는 면역세포, 예컨대, 미성숙 수지상세포(DC), 이펙터/기억 T 세포 및 B 세포는 이동하여 주변 조직을 침윤함으로써 염증 케스케이드를 활성화시킨다.
CCL20 발현이 염증 사이토카인, 예컨대, 인터류킨 1β(IL-1β) 및 종양 괴사 인자 α(TNF-α)에 의해 유도된 염증에서 유의하게 향상되어 있기 때문에, CCL20-CCR6 상호작용은 병리학적 염증 과정에서 일정한 역할을 수행하는 것으로 생각된다.
류마티스성 관절염(RA)은 가장 흔한 자가면역 질환들 중 한 질환이다. RA의 제1 징후는 종종 종창된 통증성 관절로서 나타나는 활막염이다. 활막염을 개시하는 특정 인자들이 비공지된 상태로 남아 있지만, 활막 표층 상피세포 및 활액 섬유모세포는 염증 반응의 일차 유도제인 것으로 생각된다. RA 환자로부터의 활액은 RA 염증 과정을 유도하고 악화시키는 인간 단핵세포 및 전구염증 T 헬퍼 17(Th17) 세포를 효과적으로 화학유인한다. 반응성 활액 세포는 (특히 IL-1β 및 TNF-α의 영향 하에서) 다량의 CCL20을 생성할 수 있는 반면, CCR6은 Th17 세포의 주요 수용체이기 때문에, CCL20-CCR6 상호작용은 염증 과정에서 핵심 역할을 수행하는 것으로 생각된다.
CCL20-CCR6 상호작용은 일부 유형의 피부염에서도 중요한 역할을 수행할 수 있다. 예를 들면, 건선은 (환경적 및/또는 유전적 인자에 의해 유도된) 피부의 유해한 건선성 사건으로 개시되고, 이어서 Th17 세포의 침윤이 일어난다. CCR6은 Th17 세포, B 세포, 수지상세포 및 조직 손상 이펙터 T 세포의 표면 상에서 발현되기 때문에, CCL20은 건선에서 이들 유형의 세포들에 대한 주요 화학유인제를 대표할 수 있다. CCL20-CCR6 상호작용의 중요성에 대한 추가 증거는 인터류킨 23(IL-23)-유도된 마우스 건선 모델을 사용한 연구에서 발견될 수 있다(Hedrick et al., J. Clin. Invest. 119:2317-2329 (2009)). 이 모델에서, IL-23의 주입은 인터류킨 22(IL-22) 의존적 건선 염증을 야기한다. 그러나, Ccr6-/- 마우스는 IL-23을 주입받았을 때 건선 유사 증상을 나타내지 않았는데, 이것은 CCR6이 건선의 발생에 필요하다는 것을 암시한다.
인간 각질세포는 특히 Th17로부터 유래된 사이토카인인 인터류킨 17(IL-17), IL-22 및 TNF-α의 영향 하에서 다량의 CCL20을 생성할 수 있다. CCL20 및 CCR6은 정상 피부에서 거의 검출되지 않지만, 둘다 아토피성 피부염 및 농포성 건선에서 증가된 발현 수준을 나타낸다. CCL20의 강한 유도 및 CCR6+ 세포의 축적은 인간 피부염 병소의 미시적 면역조직화학적 분석에서 관찰될 수 있다. 이들 관찰결과는 피부염 염증 과정에서 CCL20 및 CCR6의 역할에 대한 추가 증거를 제공한다.
면역 장애를 치료하기 위해 현재 이용가능한 MAb 생물학적 약제는 대략적으로 3개의 군으로 분류될 수 있다: 면역자극 사이토카인의 억제제(예를 들면, 항-TNF-α MAb), 면역 세포 제거제(예를 들면, 항-CD20 MAb) 및 보조 분자의 차단제(예를 들면, 아바타셉트(Abatacept)). 이들 생물학적 약제는 염증 질환의 치료에 있어서 유용할 수 있으나, 이들 치료제들에 대한 일차 비-반응 또는 반응 속도의 점진적 감소로 인해, 예를 들면, CCL20/CCR6-매개된 장애를 갖는 환자의 의학적 요구를 충족시킬 신규 작용 기작을 갖는 대안적인 생물학적 약제가 긴급히 필요하다.
본 발명의 요약
본 발명은 중화 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체는 마우스 항-인간 CCL20 항체의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함할 수 있는 인간화된 항-인간 CCL20 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체는 마우스 또는 키메라 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 CCL20에 결합한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 인간 CCL16에 결합하지 않는다.
본 발명의 항체는 CCL20에 특이적으로 결합한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 사이노몰거스(cynomolgus) 및/또는 레서스(rhesus) CCL20뿐만 아니라 인간 CCL20에도 결합한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 마우스 및/또는 래트 CCL20에 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간, 사이노몰거스 및 레서스 CCL20에 결합하지만 마우스 및 래트 CCL20에는 결합하지 않는다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 1가 표면 플라스몬 공명 분석을 이용할 때 1 nM, 500 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 70 pM, 60 pM 또는 50 pM 미만, 또는 2가 표면 플라스몬 공명 분석을 이용할 때 1 nM, 500 pM, 100 pM, 75 pM, 50 pM, 25 pM, 20 pM, 15 pM, 14 pM, 13 pM, 12 pM, 11 pM, 10 pM, 9 pM, 8 pM, 7 pM, 6 pM 또는 5 pM 미만의 인간 CCL20에 대한 결합 친화성(KD)을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 인간 CCR6의 CCL20에 대한 결합 친화성보다 더 높은 인간 CCL20에 대한 결합 친화성을 갖는다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 2가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40 또는 30(x105 M-1sec-1) 미만의 인간 CCL20에 대한 ka를 갖는다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 2가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 또는 3(x10-5 sec-1) 미만의 인간 CCL20에 대한 kd를 갖는다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 2가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40 또는 30(x105 M-1sec-1) 미만의 레서스 CCL20에 대한 ka를 갖는다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 2가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2(x10-5 sec-1) 미만의 레서스 CCL20에 대한 kd를 갖는다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 2가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 또는 10 pM 미만의 레서스 CCL20에 대한 KD를 갖는다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 2가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 500, 400, 300, 200, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40 또는 30(x105 M-1sec-1) 미만의 사이노몰거스 CCL20에 대한 ka를 갖는다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 2가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 50, 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6(x10-5 sec-1) 미만의 사이노몰거스 CCL20에 대한 kd를 갖는다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 2가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16 또는 15 pM 미만의 사이노몰거스 CCL20에 대한 KD를 갖는다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 39, 38, 37, 36, 35 또는 34 pM 미만의 EC50으로 인간 CCL20에 결합한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 500, 400, 300, 200, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 65, 60, 59, 58, 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51 또는 50 pM 미만의 EC50으로 레서스 CCL20에 결합한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 500, 400, 350, 300, 250, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 109, 108, 107, 106, 105, 104, 103 또는 102 pM 미만의 EC50으로 사이노몰거스 CCL20에 결합한다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 CX3CL1, CXCL1, CXCL2, CXCL4, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, CXCL13, CXCL16, CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL11, CCL13, CCL16, CCL17, CCL19, CCL21, CCL22, CCL24, CCL25, CCL27, CCL28 및/또는 XCL1을 포함하나 이들로 한정되지 않는 다른 인간 케모카인들에 비해 인간 CCL20에 대한 선택성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 항원 결합 부분은 상기 케모카인들 모두에 비해 인간 CCL20에 대한 선택성을 갖는다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1.7, 1.6, 1.5, 1.4, 1.3, 1.2 또는 1.1 nM 미만의 IC50으로 인간 또는 마우스 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 1.7, 1.6, 1.5, 1.4, 1.3, 1.2 또는 1.1 nM 미만의 IC50으로 인간 또는 마우스 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시킨다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 45, 40, 35, 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 4.9, 4.8, 4.7 또는 4.6 nM 미만의 IC90으로 인간 또는 마우스 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 4.9, 4.8, 4.7 또는 4.6 nM 미만의 IC90으로 인간 또는 마우스 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시킨다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8 또는 7 nM 미만의 IC95로 인간 또는 마우스 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 10, 9.9, 9.8, 9.7, 9.6, 9.5, 9.4, 9.3, 9.2, 9.1 또는 9 nM 미만의 IC95로 인간 또는 마우스 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시킨다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 시험관내에서 인간 또는 마우스 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시킨다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 생체내에서 인간 또는 마우스 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시킨다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 대상체, 예를 들면, 콜라겐-유도된 관절염(CIA) 및/또는 글루코스-6-포스페이트 이소머라제(isomerase)(G6PI)-유도된 관절염 마우스 모델에서 관절염 증상(예컨대, 팔꿈치 또는 무릎으로부터 멀리 위치한 사지의 관절 병소, 및 홍반 및 종창의 정도)의 진행을 감소시킨다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 대상체, 예를 들면, CIA 모델에서 골다공증, 골 미란 및/또는 새로운 골 형성을 포함하는 골 병소를 감소시킨다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 대상체, 예를 들면, CIA 모델에서 연골 올리고머성 매트릭스 단백질(COMP) 혈청 수준을 감소시킨다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 대상체, 예를 들면, CIA 모델의 마우스 발에서 핵 인자 κB 리간드에 대한 수용체 활성화제(RANKL), 핵 인자 κB에 대한 수용체 활성화제(RANK), 주석산염 내성 산 포스파타제(phosphatase)(TRAP) 및/또는 카텝신(cathepsin) K의 mRNA 수준을 감소시킨다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 대상체에서 아토피성 피부염 증상(예를 들면, 건조함, 각질, 홍반, 진물/딱지형성 및/또는 긁은 상처), 예를 들면, NC/Nga 품종 마우스에서 옥사졸론-유도된 아토피성 피부염의 증상을 감소시킨다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 대상체에서 알레르기성 접촉 피부염 증상, 예를 들면, 마우스 모델에서 디니트로플루오로벤젠(DNFB)-유도된 알레르기성 접촉 피부염의 증상을 감소시킨다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 67 또는 68의 서열을 포함하는 CDR3(H-CDR3)을 갖는 중쇄를 포함한다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 75의 서열을 포함하는 CDR3(L-CDR3)을 갖는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 67을 포함하는 서열을 갖는 H-CDR3 및 서열번호 75를 포함하는 서열을 갖는 L-CDR3; 또는 서열번호 68을 포함하는 서열을 갖는 H-CDR3 및 서열번호 75를 포함하는 서열을 갖는 L-CDR3을 포함한다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 하기 서열을 포함하는 CDR1(H-CDR1), CDR2(H-CDR2) 및 CDR3(H-CDR3)을 갖는 중쇄를 포함한다:
- 서열번호 60, 63 및 67;
- 서열번호 60, 64 및 67;
- 서열번호 61, 65 및 68;
- 서열번호 77, 79 및 67; 또는
- 서열번호 78, 80 및 68.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 하기 서열을 포함하는 CDR1(L-CDR1), CDR2(L-CDR2) 및 CDR3(L-CDR3)을 갖는 경쇄를 포함한다:
- 서열번호 70, 73 및 75; 또는
- 서열번호 71, 73 및 75.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
- 서열번호 60 내지 62, 77 및 78로 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 H-CDR1,
- 서열번호 63 내지 66 및 79 내지 81로 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 H-CDR2,
- 서열번호 67 또는 68의 서열을 포함하는 H-CDR3,
- 서열번호 70 내지 72로 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 L-CDR1,
- 서열번호 73 또는 74의 서열을 포함하는 L-CDR2, 또는
- 서열번호 75를 포함하는 L-CDR3; 또는
이들의 임의의 조합물을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 하기 서열을 포함하는 H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함한다:
- 서열번호 60, 63, 67, 70, 73 및 75;
- 서열번호 60, 64, 67, 70, 73 및 75;
- 서열번호 61, 65, 68, 70, 73 및 75;
- 서열번호 77, 79, 67, 70, 73 및 75;
- 서열번호 78, 80, 68, 70, 73 및 75;
- 서열번호 60, 63, 67, 71, 73 및 75;
- 서열번호 60, 64, 67, 71, 73 및 75;
- 서열번호 61, 65, 68, 71, 73 및 75;
- 서열번호 77, 79, 67, 71, 73 및 75; 또는
- 서열번호 78, 80, 68, 71, 73 및 75.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 9 내지 14로 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 39, 41 및 43으로 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 15 또는 16의 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 40, 42 및 44로 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 하기 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다:
- 서열번호 9 및 서열번호 15;
- 서열번호 10 및 서열번호 15;
- 서열번호 11 및 서열번호 15;
- 서열번호 12 및 서열번호 15;
- 서열번호 13 및 서열번호 15;
- 서열번호 14 및 서열번호 15;
- 서열번호 9 및 서열번호 16;
- 서열번호 10 및 서열번호 16;
- 서열번호 11 및 서열번호 16;
- 서열번호 12 및 서열번호 16;
- 서열번호 13 및 서열번호 16; 또는
- 서열번호 14 및 서열번호 16.
일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 하기 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다:
- 서열번호 39 및 서열번호 40;
- 서열번호 39 및 서열번호 42;
- 서열번호 39 및 서열번호 44;
- 서열번호 41 및 서열번호 40;
- 서열번호 41 및 서열번호 42;
- 서열번호 41 및 서열번호 44;
- 서열번호 43 및 서열번호 40;
- 서열번호 43 및 서열번호 42; 또는
- 서열번호 43 및 서열번호 44.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 신호 서열(존재하는 경우) 및 임의적으로 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 1 내지 6 및 108로 구성된 군으로부터 선택된 서열을 갖는 중쇄를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 신호 서열(존재하는 경우)을 갖지 않는 서열번호 7, 8, 110 및 112로 구성된 군으로부터 선택된 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체는 각각 하기 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄를 포함한다:
- 서열번호 1 및 서열번호 7,
- 서열번호 2 및 서열번호 7,
- 서열번호 3 및 서열번호 7,
- 서열번호 4 및 서열번호 7,
- 서열번호 5 및 서열번호 7,
- 서열번호 6 및 서열번호 7,
- 서열번호 1 및 서열번호 8,
- 서열번호 2 및 서열번호 8,
- 서열번호 3 및 서열번호 8,
- 서열번호 4 및 서열번호 8,
- 서열번호 5 및 서열번호 8,
- 서열번호 6 및 서열번호 8,
- 서열번호 108 및 서열번호 110, 또는
- 서열번호 108 및 서열번호 112; 또는
신호 서열을 갖지 않는 상기 서열들 둘다(서열번호 1 내지 6 및 108은 임의적으로 C-말단 라이신을 갖지 않음).
또한, 본 발명은 서열번호 25 내지 30으로 구성된 군으로부터 선택된 서열에 의해 코딩된 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 51, 53 및 55로 구성된 군으로부터 선택된 서열에 의해 코딩된 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
추가로, 본 발명은 서열번호 31 또는 32의 서열에 의해 코딩된 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 52, 54 및 56으로 구성된 군으로부터 선택된 서열에 의해 코딩된 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 하기 서열에 의해 코딩된 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다:
- 서열번호 25 및 서열번호 31;
- 서열번호 26 및 서열번호 31;
- 서열번호 27 및 서열번호 31;
- 서열번호 28 및 서열번호 31;
- 서열번호 29 및 서열번호 31;
- 서열번호 30 및 서열번호 31;
- 서열번호 25 및 서열번호 32;
- 서열번호 26 및 서열번호 32;
- 서열번호 27 및 서열번호 32;
- 서열번호 28 및 서열번호 32;
- 서열번호 29 및 서열번호 32; 또는
- 서열번호 30 및 서열번호 32.
일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 하기 서열에 의해 코딩된 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다:
- 서열번호 51 및 서열번호 52;
- 서열번호 51 및 서열번호 54;
- 서열번호 51 및 서열번호 56;
- 서열번호 53 및 서열번호 52;
- 서열번호 53 및 서열번호 54;
- 서열번호 53 및 서열번호 56;
- 서열번호 55 및 서열번호 52;
- 서열번호 55 및 서열번호 54; 또는
- 서열번호 55 및 서열번호 56.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 17 내지 22 및 109로 구성된 군으로부터 선택된 서열에 의해 코딩된 중쇄를 포함하고, 상기 서열은 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 결여하고 임의적으로 C-말단 라이신을 코딩하는 서열을 결여한다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 23, 24, 111 및 113으로 구성된 군으로부터 선택된 서열에 의해 코딩된 경쇄를 포함하고, 상기 서열은 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 결여한다. 일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체는 각각 하기 서열에 의해 코딩된 중쇄 및 경쇄를 포함한다:
- 서열번호 17 및 서열번호 23,
- 서열번호 18 및 서열번호 23,
- 서열번호 19 및 서열번호 23,
- 서열번호 20 및 서열번호 23,
- 서열번호 21 및 서열번호 23,
- 서열번호 22 및 서열번호 23,
- 서열번호 17 및 서열번호 24,
- 서열번호 18 및 서열번호 24,
- 서열번호 19 및 서열번호 24,
- 서열번호 20 및 서열번호 24,
- 서열번호 21 및 서열번호 24,
- 서열번호 22 및 서열번호 24,
- 서열번호 109 및 서열번호 111, 또는
- 서열번호 109 및 서열번호 113; 또는
신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 결여하는 상기 서열들 둘다(서열번호 17 내지 22 및 109는 임의적으로 C-말단 라이신을 코딩하는 서열을 결여함).
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간화된 또는 키메라 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 인간화된 항-CCL20 항체 또는 부분의 중쇄 골격(framework) 영역은 IGHV1-46*03 인간 생식세포주 유전자를 이용한다(예를 들면, 문헌(Altschul et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997)) 참조). 일부 실시양태에서, 상기 중쇄 골격 영역은 IGHV1-46*03 인간 생식세포주 유전자의 골격 영역에 대한 50% 이상의 상동성을 갖는다. 예를 들면, 상기 중쇄 골격 영역은 IGHV1-46*03 인간 생식세포주 유전자의 골격 영역과 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 심지어 100% 동일할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 상기 인간화된 항-CCL20 항체 또는 부분의 경쇄 골격 영역은 IGKV1D-39*01 인간 생식세포주 유전자를 이용한다(예를 들면, 상기 문헌(Altschul et al.) 참조). 일부 실시양태에서, 상기 경쇄 골격 영역은 IGKV1D-39*01 인간 생식세포주 유전자의 골격 영역에 대한 50% 이상의 상동성을 갖는다. 예를 들면, 상기 경쇄 골격 영역은 IGKV1D-39*01 인간 생식세포주 유전자의 골격 영역과 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 심지어 100% 동일할 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분(상기 부분이 중쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 정도까지)은 IgG, IgM, IgE, IgA 또는 IgD 분자이다. 일부 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위유형이다.
몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체는 단일클론 항체이다.
또한, 본 발명은 상기 분자의 N-루프 및/또는 β2-β3 헤어핀 영역에 위치하는 인간 CCL20의 에피토프에 결합하는 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항-CCL20 항체 또는 부분은 본원에 기재된 항체 또는 부분에 의해 결합되는 인간 CCL20 상의 에피토프와 동일한 인간 CCL20 상의 에피토프에 결합한다. 추가로, 본 발명은 인간 CCL20에의 결합에 대해 본원에 기재된 항체 또는 부분과 경쟁하거나 가교경쟁하는 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합되는 인간 CCL20 에피토프는 서열번호 84의 잔기 7-9, 서열번호 84의 잔기 10-19, 서열번호 84의 잔기 20-21 및 서열번호 84의 잔기 20-22로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열, 또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기들을 포함한다.
몇몇 실시양태에서, 상기 인간 CCL20 에피토프는 서열번호 84의 잔기 39-55, 서열번호 84의 잔기 39-57, 서열번호 84의 잔기 56-67 및 서열번호 84의 잔기 61-70으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열, 또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기들을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 인간 CCL20 에피토프는 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19, 20-22, 39-55, 56-57 및 61-70으로 구성된 아미노산 서열들의 임의의 조합물, 또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기들을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 인간 CCL20 에피토프는 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19 및 20-22, 또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 인간 CCL20 에피토프는 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19, 20-22, 39-55, 56-57 및 61-70, 또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 인간 CCL20 에피토프는 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19, 20-22, 39-57 및 61-70, 또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기들을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 인간 CCL20 에피토프는 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19 및 20-21, 또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 인간 CCL20 에피토프는 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19, 20-21, 39-55, 56-57 및 61-70, 또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 인간 CCL20 에피토프는 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19, 20-21, 39-57 및 61-70, 또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기들을 포함한다.
몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합되는 인간 CCL20 에피토프는 잔기 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 및 70으로부터 선택된 서열번호 84의 하나 이상의 아미노산 잔기(또는 서열번호 84의 상기 잔기들에 상응하는 야생형 인간 CCL20의 잔기), 또는 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
또한, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 항-CCL20 항체의 항원 결합 부분을 제공한다. 상기 항원 결합 부분은 예를 들면, 단일쇄 항체, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일쇄 Fv 분자(scFv), 이중특이적 단일쇄 Fv 이량체, 다가 단일쇄 Fv 다량체, 디아바디(diabody), 도메인-결실된 항체 또는 단일 도메인 항체(dAb)일 수 있다.
본 발명은 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 부분의 변이체도 제공하고, 이때 상기 변이체는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산 치환에 의해 상기 항체 또는 부분과 상이하다.
한 양태에서, 본 발명은 인간 CCL20에 대해 유도된 항체를 제공하고, 이때 상기 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 각각 하기 서열을 포함한다:
- 서열번호 9 및 15;
- 서열번호 9 및 16;
- 서열번호 10 및 16;
- 서열번호 11 및 15;
- 서열번호 11 및 16;
- 서열번호 12 및 16;
- 서열번호 13 및 16; 또는
- 서열번호 14 및 16.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 1을 포함하는 중쇄 및 서열번호 7을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 1을 포함하는 중쇄 및 서열번호 7을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 1을 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 1을 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 2를 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 2를 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 3을 포함하는 중쇄 및 서열번호 7을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 3을 포함하는 중쇄 및 서열번호 7을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 3을 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 3을 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 4를 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 4를 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 5를 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 5를 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 6을 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 6을 포함하는 중쇄 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공하고, 이때 상기 아미노산 서열은 신호 서열을 결여한다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 110을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 110을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공한다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 112를 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 112를 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자, 예를 들면, 단리된 핵산 분자를 제공하고, 이때 상기 중쇄 및 경쇄 또는 이들의 항원 결합 부분들은 결합하여 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 형성할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 분자는 서열번호 17 내지 22, 25 내지 30 및 109로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 서열번호 17 내지 22 및 109의 뉴클레오티드 서열은 C-말단 라이신(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 임의적으로 결여할 수도 있다. 몇몇 실시양태에서, 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 분자는 서열번호 23, 24, 31, 32, 111 및 113으로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 하나 이상의 핵산 분자는 본원에 기재된 항체 또는 부분의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분 및 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 1개의 핵산 분자는 상기 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분 및 상기 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분 둘다를 코딩한다.
한 실시양태에서, 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 분자, 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 분자, 또는 중쇄 및 경쇄 또는 이들의 항원 결합 부분들을 코딩하는 핵산 분자(들)는 치료를 필요로 하는 대상체의 치료를 위해 사용된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 또는 부분의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분, 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 이들 둘다를 코딩하는 핵산 서열(들)을 포함하는 벡터를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 또는 부분의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분, 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 이들 둘다를 발현하는 세포를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 또는 부분을 제조하는 방법으로서, 상기 항체 또는 부분의 발현에 적합한 조건 하에서 본원에 기재된 세포를 유지하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 상기 항체 또는 부분을 단리하는 단계를 포함한다.
본 발명은 항-CCL20 항체를 분비하는 하이브리도마를 제조하는 방법도 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 하이브리도마는 야생형 인간 CCL20에 결합하는 항체를 제조한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 제조된 하이브리도마를 제공한다. 임의적으로, 상기 하이브리도마에 의해 분비된 단일클론 항체는 수집되고 추가로 정제(예를 들면, 실질적으로 정제 또는 단리)될 수 있다. 다른 실시양태에서, 상기 방법은 상기 하이브리도마에 의해 분비된 단일클론 항체의 뉴클레오티드 서열을 확인하는 단계를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 또는 부분 및 약학적으로 허용가능한 비히클 또는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.
한 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 부분은 약제로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 부분은 치료를 필요로 하는 대상체의 치료를 위해 사용된다. 특정 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 CCR6 관련 병태(condition), CCL20 관련 병태 또는 이들 둘다의 치료를 위해 사용된다. 이러한 병태는 염증 질환 및 자가면역 질환, 특히 관절염, 특히 류마티스성 관절염, 아토피성 또는 알레르기성 피부염 및 건선을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 또 다른 특정 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 암의 치료를 위해 사용된다. 상기 항체 또는 부분은 예를 들면, 그레이브병, 백반증, 갑상선기능항진증, 류마티스성 관절염, 건선, 아토피성 피부염, 접촉 피부염, 크론병, 염증 장 질환, B 세포 악성종양, 유방 선암종, 만성 간염, 접촉 피부염, 아교모세포종, 간세포암종, 자궁경부의 인간 유두종바이러스 감염, 균상식육종, 췌장 선암종, 치주 질환, 갑상선 유두암종, 수장족저농포증, 반점구진 발진과 관련된 병태, 수포성 표피박리증, 원형탈모증, 다발성 경화증, 다발근육염, 피부근육염, 베체트병, 급성 범 발진성 농포증, 혈관염, 소아 특발성 관절염, 사르코이드증, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 신장 동종이식 거부, 이식편 대 숙주 질환, 간 동종이식 거부, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 사구체신염, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 다발성 골수종 및/또는 랑게르한스 세포 조직구증의 치료를 위해 사용될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 상기 항-CCL20 항체 또는 부분은 CCR6+ 세포의 CCL20-매개된 화학주성의 감소를 필요로 하는 대상체에서 CCR6+ 세포의 CCL20-매개된 화학주성을 감소시키기 위해 사용된다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명은 하기 실시양태들을 제공한다:
1. 서열번호 67 또는 68을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 갖는 중쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
2. 실시양태 1에 있어서, 상기 중쇄의 상보성 결정 영역 1(CDR1), 상보성 결정 영역 2(CDR2) 및 상보성 결정 영역 3(CDR3)이 각각 하기 a) 내지 e)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분:
a) 서열번호 60, 64 및 67;
b) 서열번호 60, 63 및 67;
c) 서열번호 61, 65 및 68;
d) 서열번호 77, 79 및 67; 및
e) 서열번호 78, 80 및 68.
3. 서열번호 75를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 갖는 경쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
4. 실시양태 3에 있어서, 상기 경쇄의 상보성 결정 영역 1(CDR1), 상보성 결정 영역 2(CDR2) 및 상보성 결정 영역 3(CDR3)이 각각 하기 a) 및 b)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분:
a) 서열번호 70, 73 및 75; 및
b) 서열번호 71, 73 및 75.
5. 실시양태 1 또는 3에 있어서, 상기 항체의 중쇄가 서열번호 67 또는 68을 포함하는 CDR3을 포함하고, 상기 항체의 경쇄가 서열번호 75를 포함하는 CDR3을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 부분.
6. 실시양태 2 또는 4에 있어서, 상기 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 상기 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 하기 a) 내지 j)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 부분:
a) 서열번호 60, 64, 67, 70, 73 및 75;
b) 서열번호 60, 64, 67, 71, 73 및 75;
c) 서열번호 60, 63, 67, 70, 73 및 75;
d) 서열번호 60, 63, 67, 71, 73 및 75;
e) 서열번호 61, 65, 68, 70, 73 및 75;
f) 서열번호 61, 65, 68, 71, 73 및 75;
g) 서열번호 77, 79, 67, 70, 73 및 75;
h) 서열번호 77, 79, 67, 71, 73 및 75;
i) 서열번호 78, 80, 68, 70, 73 및 75; 및
j) 서열번호 78, 80, 68, 71, 73 및 75.
7. 서열번호 9 내지 14로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인을 갖는 중쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
8. 서열번호 15 또는 16을 포함하는 가변 도메인을 갖는 경쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
9. 실시양태 7 또는 8에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인 및 상기 경쇄 가변 도메인이 각각 하기 a) 내지 h)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 부분:
a) 서열번호 9 및 15;
b) 서열번호 9 및 16;
c) 서열번호 10 및 16;
d) 서열번호 11 및 15;
e) 서열번호 11 및 16;
f) 서열번호 12 및 16;
g) 서열번호 13 및 16; 및
h) 서열번호 14 및 16.
10. 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 1 내지 6, 및 서열번호 108로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체.
11. 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 1 내지 6, 및 서열번호 108로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체로서, 이때 상기 아미노산 서열이 C-말단 라이신을 결여하는 것인 단일클론 항-인간 CCL20 항체.
12. 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 7 및 8, 및 서열번호 110 및 112로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체.
13. 실시양태 10 내지 12 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 중쇄 및 상기 경쇄가 각각 하기 a) 내지 j)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 이때 상기 아미노산 서열이 신호 서열(존재하는 경우)을 결여하고, 서열번호 1 내지 6이 임의적으로 C-말단 라이신을 결여하는 것인 항체:
a) 서열번호 1 및 7;
b) 서열번호 1 및 8;
c) 서열번호 2 및 8;
d) 서열번호 3 및 7;
e) 서열번호 3 및 8;
f) 서열번호 4 및 8;
g) 서열번호 5 및 8;
h) 서열번호 6 및 8;
i) 서열번호 108 및 110; 및
j) 서열번호 108 및 112.
14. 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 110을 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항체.
15. C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 110을 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항체.
16. 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 112를 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항체.
17. C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 112를 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항체.
18. 실시양태 1 내지 17 중 어느 한 실시양태의 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분에 의해 결합되는 인간 CCL20의 에피토프와 동일한 인간 CCL20의 에피토프에 결합하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
19. 인간 CCL20에의 결합에 대해 실시양태 1 내지 17 중 어느 한 실시양태의 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분과 경쟁하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
20. 인간 CCL20에의 결합에 대해 실시양태 1 내지 17 중 어느 한 실시양태의 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분과 교차경쟁하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
21. 실시양태 1 내지 12 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체가 인간화된 항체인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
22. 실시양태 1 내지 6 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 중쇄의 골격 영역이 IGHV1-46*03 인간 생식세포주 서열을 이용하고, 상기 경쇄의 골격 영역이 IGKV1D-39*01 인간 생식세포주 서열을 이용하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
23. 실시양태 1 내지 9 및 18 내지 22 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체가 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 불변 도메인을 포함하는 것인 단일클론 항체.
24. 서열번호 39, 41 및 43으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인을 포함하는 중쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
25. 서열번호 40, 42 및 44로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인을 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
26. 실시양태 24 또는 25에 있어서, 상기 중쇄가 서열번호 39, 41 및 43으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄가 서열번호 40, 42 및 44로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 부분.
27. 실시양태 26에 있어서, 상기 중쇄 및 상기 경쇄가 각각 하기 a) 내지 c)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체:
a) 서열번호 39 및 40;
b) 서열번호 41 및 42; 및
c) 서열번호 43 및 44.
28. 서열번호 39를 포함하는 중쇄 및 서열번호 40을 포함하는 경쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
29. 실시양태 24 내지 28 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체가 키메라 항체인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
30. 실시양태 1 내지 9, 18 내지 22 및 24 내지 28 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 부분이 단일쇄 항체, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일쇄 Fv 분자(scFv), 이중특이적 단일쇄 Fv 이량체, 디아바디, 도메인-결실된 항체 또는 단일 도메인 항체(dAb)인 항원 결합 부분.
31. 실시양태 1 내지 30 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분이 하기 a) 내지 o)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 성질을 갖는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분:
a) 인간 CCL16에 결합하지 않는 성질;
b) 사이노몰거스 또는 레서스 CCL20에 결합하지만, 마우스 또는 래트 CCL20에는 결합하지 않는 성질;
c) 1가 표면 플라스몬 공명 분석을 이용할 때 70 pM 이하의 인간 CCL20에 대한 결합 친화성을 갖는 성질;
d) 2가 표면 플라스몬 공명 분석을 이용할 때 12 pM 이하의 인간 CCL20에 대한 결합 친화성을 갖는 성질;
e) 인간 CCR6의 CCL20에 대한 결합 친화성보다 더 높은 인간 CCL20에 대한 결합 친화성을 갖는 성질;
f) 인간 CX3CL1, CXCL1, CXCL2, CXCL4, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, CXCL13, CXCL16, CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL11, CCL13, CCL16, CCL17, CCL19, CCL21, CCL22, CCL24, CCL25, CCL27, CCL28 또는 XCL1에 비해 인간 CCL20에 대한 선택성을 갖는 성질;
g) 1.7 nM 이하의 IC50으로 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시키는 성질;
h) 생체내에서 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시키는 성질;
i) 시험관내에서 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시키는 성질;
j) 대상체에서 관절염 증상의 진행을 감소시키는 성질;
k) 대상체에서 골다공증, 골 미란 또는 새로운 골 형성을 감소시키는 성질;
l) 대상체에서 연골 올리고머성 매트릭스 단백질(COMP) 혈청 수준을 감소시키는 성질;
m) 대상체에서 RANKL, RANK, TRAP 또는 카텝신 K의 mRNA 수준을 감소시키는 성질;
n) 대상체에서 아토피성 피부염의 진행을 감소시키는 성질; 및
o) 대상체에서 알레르기성 접촉 피부염의 진행을 감소시키는 성질.
32. 하기 a) 내지 c)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 인간 CCL20의 에피토프에 결합하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
a) 서열번호 84의 잔기 7-9;
b) 서열번호 84의 잔기 10-19; 및
c) 서열번호 84의 잔기 20-22.
33. 실시양태 32에 있어서, 상기 에피토프가 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19 및 20-22를 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
34. 실시양태 32에 있어서, 상기 에피토프가 하기 a) 내지 c)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 추가로 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분:
a) 서열번호 84의 잔기 39-55;
b) 서열번호 84의 잔기 56-67; 및
c) 서열번호 84의 잔기 61-70.
35. 실시양태 34에 있어서, 상기 에피토프가 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19, 20-22, 39-55, 56-67 및 61-70을 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
36. 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태에 따른 항체 또는 부분의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
37. 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태에 따른 항체 또는 부분의 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
38. 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태에 따른 항체 또는 부분의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분, 및 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
39. 단일클론 항-인간 CCL20 항체의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자로서, 서열번호 17 내지 22, 25 내지 30 및 109로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자.
40. 단일클론 항-인간 CCL20 항체의 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자로서, 서열번호 23, 24, 31, 32, 111 및 113으로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자.
41. 실시양태 39 또는 40에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 17 내지 22, 25 내지 30 및 109로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 핵산 분자가 서열번호 23, 24, 31, 32, 111 및 113으로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하는 것인 단리된 핵산 분자.
42. 약제로서, 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태에 따른 항체 또는 부분의 (1) 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 서열, (2) 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 서열, 또는 (3) 이들 둘다의 용도.
43. 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태에 따른 항체 또는 부분의 (1) 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 서열, (2) 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 서열, 또는 (3) 이들 둘다를 포함하는 재조합 벡터.
44. 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태에 따른 항체 또는 부분의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 제1 핵산 서열로서, 발현 조절 요소에 작동가능하게 연결된 제1 핵산 서열; 및 상기 항체 또는 부분의 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 제2 핵산 서열로서, 발현 조절 요소에 작동가능하게 연결된 제2 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포.
45. 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제조하는 방법으로서, 상기 항체 또는 부분의 발현에 적합한 조건 하에서 실시양태 44의 숙주 세포를 유지하는 단계를 포함하는 방법.
46. 실시양태 45에 있어서, 상기 항체 또는 부분을 단리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
47. 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태의 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분 및 약학적으로 허용가능한 비히클 또는 담체를 포함하는 조성물.
48. 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법으로서, 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 실시양태 47의 조성물을 상기 대상체에게 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
49. 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 병태를 치료하는 방법으로서, 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 실시양태 47의 조성물을 상기 대상체에게 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
50. 실시양태 49에 있어서, 상기 병태가 CCR6 관련 병태인 방법.
51. 실시양태 49에 있어서, 상기 병태가 자가면역 또는 염증 병태인 방법.
52. 실시양태 49에 있어서, 상기 병태가 류마티스성 관절염, 건선, 아토피성 피부염, 접촉 피부염, 크론병, 염증 장 질환, 그레이브병, 백반증, 갑상선기능항진증, 만성 간염, 자궁경부의 인간 유두종바이러스 감염, 균상식육종, 골다공증 또는 치주 질환인 방법.
53. 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 실시양태 47의 조성물을 대상체에게 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법.
54. 실시양태 53에 있어서, 상기 암이 B 세포 악성종양, 유방 선암종, 아교모세포종, 간세포암종, 췌장 선암종 또는 갑상선 유두암종인 방법.
55. CCR6+ 세포의 CCL20-매개된 화학주성의 감소가 필요한 대상체에서 CCR6+ 세포의 CCL20-매개된 화학주성을 감소시키는 방법으로서, 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 실시양태 47의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
56. 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 실시양태 47의 조성물을 사용하여 시험관내에서 CCR6+ 세포의 CCL20-매개된 화학주성을 감소시키는 방법.
57. 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 실시양태 47의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 병태를 치료하는 방법으로서, 상기 병태가 하기 a) 내지 g)로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법:
a) 팔꿈치 또는 무릎으로부터 멀리 위치한 사지의 관절 병소;
b) 홍반;
c) 종창;
d) 증가된 연골 올리고머성 매트릭스 단백질(COMP) 혈청 수준;
e) 핵 인자 κB 리간드에 대한 수용체 활성화제(RANKL), 핵 인자 κB에 대한 수용체 활성화제(RANK), 주석산염 내성 산 포스파타제(TRAP) 또는 카텝신 K의 증가된 mRNA 수준;
f) 아토피성 피부염; 및
g) 알레르기성 접촉 피부염.
58. 약제의 제조를 위한, 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 실시양태 47의 조성물의 용도.
59. 약제로서 실시양태 1 내지 35 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 실시양태 47의 조성물의 용도.
도 1은 CCR6 결핍 마우스가 야생형 마우스보다 콜라겐-유도된 관절염에 대한 보다 낮은 민감성을 나타낸다는 것을 보여주는 그래프이다. 야생형, CCR6+/+ 마우스; Het, CCR6+/- 마우스; 넉아웃(Knockout), CCR6-/- 마우스. 실시예 1을 참조한다.
도 2는 CCR6 결핍 마우스가 야생형 마우스에 비해 콜라겐-유도된 관절염 병소에서 (CD3 수준에 의해 표시된) T 세포의 손상된 침윤을 나타낸다는 것을 보여주는 그래프이다. 제시된 데이터는 1회 실험(군 당 n=7마리 마우스)으로부터의 평균±SEM이다. *p<0.05, **p<0.01. 실시예 1을 참조한다.
도 3은 CCR6 결핍 마우스가 야생형 마우스에 비해 콜라겐-유도된 관절염 병소에서 (F4/80 수준에 의해 표시된) 대식세포의 손상된 침윤을 나타낸다는 것을 보여주는 그래프이다. 제시된 데이터는 1회 실험(군 당 n=7마리 마우스)으로부터의 평균±SEM이다. **p<0.01. 실시예 1을 참조한다.
도 4는 CCR6 결핍 마우스가 야생형 마우스에 비해 디니트로플루오로벤젠(DNFB)-유도된 알레르기성 접촉 피부염 모델에서 증가된 귀 두께에 대한 내성을 나타낸다는 것을 보여주는 그래프이다. WT, 야생형 마우스; KO, CCR6 결핍 마우스. 실시예 1을 참조한다.
도 5는 2F5-5 MAb가 CCL20-유도된 화학주성을 억제한다는 것을 보여주는 그래프이다. 실시예 2를 참조한다.
도 6a 내지 6c는 본 발명의 항체의 가변 도메인(서열번호 9 내지 16)과, 마우스 항-인간 항체 36F7C10의 가변 도메인(VH: 서열번호 39; VL: 서열번호 40), 마우스 항-인간 항체 42G5B10의 가변 도메인(VH: 서열번호 43), 생식세포주 서열 IGHV1-46*03(서열번호 57), 생식세포주 서열 JH4(서열번호 58) 및 생식세포주 서열 IGKV1D-39*01(서열번호 59)의 서열 정렬을 도시한다. 각각의 CDR의 카바트(Kabat) 및 초티아(Chothia) 정의가 표시되어 있다. ABM67212(서열번호 82) 및 BAH04867.1(서열번호 83)은 인간 항체이고, 제시된 인간화된 항체 쇄의 골격 영역은 상기 인간 항체로부터 유도되었다. 실시예 3을 참조한다.
도 7a 내지 7c는 인간화된 항-인간 CCL20 항체 쇄들의 상이한 조합물에 의한 시험관내 화학주성의 억제를 보여주는 표이다. 표시된 경우를 제외하고 데이터는 3회의 시험을 대표한다. 실시예 4를 참조한다.
도 8a 내지 8c는 인간화된 HC2/LK3 항-인간 CCL20 항체의 억제 효과를 평가하기 위해 수행된 3회의 독립적인 시험을 도시한다. HC2/LK3 항체는 CCL20-유도된 화학주성을 억제하는 것으로 확인된다. 각각의 실험에 대한 IC50, IC90 및 IC95 값이 제시되어 있다. 실시예 4를 참조한다.
도 9a 내지 9c는 인간화된 항체 B) HC2/LK3 및 C) HC2/LC3이 경내피(transendothelial) 이동 분석에서 A) 마우스 항체 36F7C10에 필적할만한 투여량 의존적 세포 이동 억제를 나타낸다는 것을 보여주는 일련의 그래프를 도시한다. 실시예 4를 참조한다.
도 10a 및 10b는 A) HC2/LC3 및 B) HC2/LK3 인간화된 항체가 농도 의존적 방식으로 인간 CCL20에 결합한다는 것을 입증하는 비아코어(Biacore)™ 센소그램을 도시한다. 실시예 5를 참조한다.
도 11a 내지 11d는 항-인간 CCL20 항체가 인간 CCL20에 특이적으로 결합한다는 것을 입증한다. 플레이트에 결합된 CCL20 및 다른 케모카인(1 ㎍/㎖)을 사용한 ELISA 분석을 이용하여 A) 36F7C10 및 키메라 항체, 및 B) 인간화된 HC2LK3 및 HC2LC3 항체의 결합을 검출하였다. C) His-태그가 고착된 CCL20을 사용한 ELISA 분석을 이용하여 결합을 검출하였다. D) 비아코어™ 실험은 항-인간 CCL20 항체가 인간 CCL20에 결합하고 CXCL4에의 무시할만한 결합을 나타낸다는 것을 확인시켜 준다. 실시예 6을 참조한다.
도 12는 CCL20(서열번호 114) 및 CCL16(서열번호 115)의 56개-잔기 중복 부분 사이의 아미노산 서열 정렬을 보여준다. 실시예 6을 참조한다.
도 13a 및 13b는 A) 키메라 및 B) 인간화된 항-인간 CCL20 항체가 CCL20과 특이적으로 반응하고 CCL16과 반응하지 않는다는 것을 보여주는 일련의 그래프이다. 실시예 6을 참조한다.
도 14는 인간(서열번호 85), 레서스(서열번호 86), 사이노몰거스(서열번호 87) 및 마우스(서열번호 88) CCL20 오르톨로그들(orthologs) 사이의 아미노산 서열 정렬을 보여준다. 실시예 7을 참조한다.
도 15는 ELISA 분석에서 항-인간 CCL20 항체 검출을 개략적으로 나타낸다. 실시예 7을 참조한다.
도 16a 내지 16c는 A) 키메라 및 B) 인간화된 항-인간 CCL20 항체가 인간, 레서스 및 사이노몰거스 CCL20에 효과적으로 결합하지만 마우스 CCL20에는 결합하지 않는다는 것을 입증하는 일련의 그래프를 도시한다. 실시예 7을 참조한다.
도 17a 및 17b는 인간화된 및 키메라 항-인간 CCL20 항체가 인간, 레서스 및 사이노몰거스 CCL20에 효과적으로 결합하지만 래트 또는 마우스 CCL20에는 결합하지 않는다는 것을 입증하는 그래프를 도시한다. A) 마우스 항체 36F7C10으로부터 유도된 B) 인간화된 및 A) 키메라 항체는 상기 A) 마우스 항체 36F7C10의 결합 특이성을 보유한다. 실시예 7을 참조한다.
도 18a 및 18b는 수소/중수소 교환에 의한 인간 CCL20의 에피토프 맵핑의 결과를 보여준다. 이 실험은 끝에서 두 번째 잔기가 야생형 서열에서 나타난 N 대신에 D인, 알앤드디 시스템스(R&D Systems)로부터의 인간 CCL20(서열번호 84)의 변이체를 사용한다. A) CCL20의 각각의 잔기의 중수소 수준은 4개의 시점(상부부터: 150초, 500초, 1500초 및 5000초)에서 표시되어 있다. B) 본 발명의 항체에 의해 결합되는 에피토프를 표시하는 인간 CCL20의 구조. 실시예 9를 참조한다.
도 19는 마우스 CCR6-형질도입된 B300 세포가 마우스 및 인간 CCL20 둘다를 향하여 이동하는 것을 입증하는 한 쌍의 그래프이다. 실시예 10을 참조한다.
도 20은 마우스, 키메라 및 인간화된 항-인간 CCL20 항체가 투여량 의존적 방식으로 생체내에서 인간 CCL20을 향하는 마우스 T 세포 이동을 억제한다는 것을 보여주는 그래프이다. 실시예 10을 참조한다.
도 21은 햄스터 항-마우스 CCL20 MAb 2F5-5가 마우스에서 콜라겐-유도된 관절염 증상을 감소시킨다는 것을 보여주는 그래프이다. 실시예 11을 참조한다.
도 22는 2F5-5 MAb가 콜라겐-유도된 관절염 증상의 진행을 감소시킨다는 것을 입증하는 개별 동물 임상 점수의 표이다. 실시예 11을 참조한다.
도 23은 X-선 점수화에 의한 마우스 발의 등급화를 도시하는 그래프이다. 2F5-5 MAb는 콜라겐-유도된 관절염을 갖는 마우스에서 골 병상을 감소시키는 것으로 확인된다. Cont: 대조군 IgG. 실시예 11을 참조한다.
도 24는 콜라겐-유도된 관절염을 갖는 마우스의 발에서 골 병상을 표시하는 점수화된 X-선의 예를 도시한다. 0: 골다공증, E: 골 미란, N: 새로운 골 형성. 실시예 11을 참조한다.
도 25a 내지 25c는 콜라겐-유도된 관절염 마우스 모델에서 연골 파괴의 마커인 혈청 연골 올리고머성 매트릭스 단백질(COMP)의 측정을 보여준다. A) COMP 표준물을 갖는 교정기 데이터. X 축, 유닛/ℓ; Y 축, 450 nm에서의 광학 밀도. B) 햄스터 대조군 IgG 또는 2F5-5 MAb로 처리된 마우스에 대한 플레이트 주형 및 미처리 데이터. C) 개별 동물들로부터의 데이터는 대조군 IgG 항체로 처리된 동물에 비해 2F5-5 MAb로 처리된 동물에서의 감소된 COMP 수준을 입증한다. 실시예 11을 참조한다.
도 26은 2F5-5 MAb가 마우스에서 COMP의 혈청 수준을 감소시킨다는 것을 보여주는 그래프이다. Ctrl IgG: 동종형-매칭된 항체; CCL20 mAb: 2F5-5 MAb. 실시예 11을 참조한다.
도 27a 및 27b는 2F5-5 MAb가 파골세포 마커 A) RANKL 및 RANK, 및 B) TRAP 및 카텝신 K의 mRNA 발현을 감소시킨다는 것을 보여주는 그래프이다. Ctrl IgG: 동종형-매칭된 항체; CCL20 mAb: 2F5-5 MAb; Y 축: 정량 PCR 유닛. 실시예 11을 참조한다.
도 28은 2F5-5 MAb가 마우스에서 글루코스-6-포스페이트 이소머라제-유도된 관절염에 대한 예방 효과를 나타낸다는 것을 보여주는 그래프이다. 실시예 12를 참조한다.
도 29는 2F5-5 MAb가 마우스에서 옥사졸론-유도된 아토피성 피부염의 진행을 억제한다는 것을 보여주는 그래프이다. 실시예 13을 참조한다.
도 30은 2F5-5 MAb가 마우스에서 디니트로플루오로벤젠-유도된 알레르기성 접촉 피부염(귀 두께에 의해 측정됨)을 억제한다는 것을 보여주는 그래프이다. 실시예 14를 참조한다.
본 발명은 CCL20 또는 이의 일부(예를 들면, 이의 항원성 부분)에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 상기 항체는 CCL20의 하나 이상의 활성을 중화시킨다. 항체는 비-CCL20 분자에 실질적으로 결합하지 않는 경우 CCL20에 특이적으로 결합한다고 언급된다. 실질적인 결합은 예를 들면, 비아코어™(2가 형식)에 의해 측정될 때 KD가 100 nM 이하, 바람직하게는 10 nM, 1 nM, 100 pM, 50 pM, 40 pM 또는 35 pM 이하인 결합이다. 한 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 인간 CCL20 또는 이의 일부, 또는 인간 CCL20의 몇몇 서열 변이체, 예컨대, 대립형질 변이체에 특이적으로 결합하고, 다른 종들로부터의 CCL20과 교차반응할 수도 있다. 한 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 야생형(천연 발생 또는 내인성으로서도 지칭됨) 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는다. 달리 표시되어 있지 않은 한, "인간 CCL20"은 야생형 인간 CCL20을 지칭한다. 신호 서열을 갖는 야생형 인간 CCL20의 아미노산 서열은 도 14(서열번호 85)에 제시되어 있다. 신호 서열(서열번호 85의 잔기 1-26)을 갖지 않는 야생형 인간 CCL20의 아미노산 서열은 서열번호 99(표 18 참조)에서 발견된다. 도 18은 끝에서 두 번째 잔기가 야생형 서열(서열번호 85)에서의 N 대신에 D인, 신호 서열을 갖지 않는 인간 CCL20의 변이체(서열번호 84)를 도시한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 신호 서열을 갖거나 갖지 않는 야생형 인간 CCL20에 결합하거나, 끝에서 두 번째 잔기가 야생형 서열에서 나타낸 N 대신에 D인, 신호 서열을 갖거나 갖지 않는 인간 CCL20에 결합한다(예를 들면, 서열번호 84, 85 또는 99). 특정 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 인간, 레서스 및 사이노몰구스 CCL20에 특이적으로 결합하지만 마우스 또는 래트 CCL20에는 결합하지 않는다.
본원에 기재된 항체 및 이의 항원 결합 부분은 공지된 기법의 이용을 통해 정제될 수 있고/있거나 단리될 수 있다. "정제된" 또는 "단리된" 항체 또는 부분은 그들의 기원 공급원(예를 들면, 세포의 상청액; 혼합물, 예컨대, 라이브러리 내의 항체들의 혼합물 등)의 분자(예를 들면, 펩티드)로부터 분리되어 있고 본원에 기재된 방법 또는 다른 적합한 방법에 의해 수득된 항체를 포함한다. 단리된 항체는 실질적으로 순수한(예를 들면, 본질적으로 순수한) 항체뿐만 아니라, 화학적 합성, 재조합 기법 및 이들의 병용에 의해 제조된 항체도 포함한다.
보다 구체적으로, 본 발명은 항-인간 CCL20 항체, 상기 항체의 항원 결합 부분(즉, 부분), 상기 항체의 경쇄, 상기 항체의 중쇄, 및 이들 경쇄 또는 중쇄의 부분에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 중쇄 및/또는 경쇄 신호 서열을 결여하는 항체 및 글리코실화된 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 전구체 항체, 비-글리코실화된 항체, 및 신호 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 경쇄를 갖는 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 항체 중쇄 및/또는 경쇄, 또는 이들의 부분을 코딩하는 핵산 분자; 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포; 본원에 기재된 임의의 항체 중쇄 및/또는 경쇄, 또는 이들의 부분을 제조하는 방법; 및 상기 항체, 항체 쇄 또는 부분을 사용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 항체 및 이의 항원 결합 부분은 CCL20과 CCR6의 결합, CCL20-매개된 염증 및/또는 필요에 따라 CCR6+ 세포의 CCL20-매개된 화학주성을 감소시키기 위해 이를 필요로 하는 대상체(예를 들면, 인간 환자)를 치료하는 데에 사용될 수 있다.
본 발명의 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전통적인 항체를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄 중 하나 이상은 가변 도메인(본원에서 "가변 영역"으로서도 지칭됨) 및 불변 도메인(본원에서 "불변 영역"으로서도 지칭됨)을 포함한다. 존재하는 경우 완전한 가변 도메인은 아미노 말단으로부터 시작되어 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열되어 있는 4개의 골격 영역(FR) 및 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 시각적인 조사 및 서열 분석을 수행하여 CDR 경계를 확인할 수 있다. 본 발명의 경우, CDR 서열은 예를 들면, 도 6에 표시된 바와 같이 카바트 시스템(Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991)) 및/또는 초티아 시스템(Chothia & Lesk, Canonical Structures for the Hypervariable Regions of Immunoglobulins, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))의 이용을 통해 정의된다.
인간 중쇄 불변 영역을 포함하는 본 발명의 실시양태는 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE(이때, 상기 중쇄는 각각 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 또는 엡실론(ε) 유형의 중쇄임)를 포함하는 임의의 동종형, 및 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2(이때, 상기 중쇄는 각각 γ1, γ2, γ3, γ4, α1 및 α2 유형의 중쇄임)를 포함하는 임의의 하위클래스의 인간 불변 영역을 포함할 수 있다. 인간 경쇄를 포함하는 실시양태는 인간 카파(κ) 또는 인간 람다(λ) 경쇄를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 (2개의 전장 중쇄 및 2개의 전장 경쇄를 포함하는) 완전한 항체를 지칭한다. 달리 표시되어 있지 않은 한, 용어 "항원 결합 단편"은 본원에서 용어 "항원 결합 부분"과 상호교환적으로 사용된다. 항체의 항원 결합 부분은 예를 들면, 단일쇄 항체, Fv 단편, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fd 단편, 단일쇄 Fv 분자(scFv), 이중특이적 단일쇄 Fv 이량체(PCT/US92/09665), 디아바디, 도메인-결실된 항체 및 단일 도메인 항체(dAb)의 형식으로 존재할 수 있다. 예를 들면, 문헌(Jespers et al., Nature Biotechnology 22(9):1161-1165 (2004))을 참조한다. VH 및/또는 VL을 포함하는 항원 결합 분자도 본 발명 내에 있다. VH의 경우, 상기 분자는 CH1, 힌지, CH2 및 CH3 영역 중 하나 이상을 포함할 수도 있다.
항체 부분은 효소에 의한 절단 또는 재조합 기법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 파파인 또는 펩신 절단을 이용하여 각각 Fab 또는 F(ab')2 단편을 발생시킬 수 있다. 항체는 하나 이상의 정지 코돈이 천연 정지 부위의 업스트림에 도입되어 있는 항체 유전자의 사용을 통해 다양한 절두된(truncated) 형태로 제조될 수도 있다. 예를 들면, F(ab')2 단편의 중쇄를 코딩하는 재조합 구축물은 중쇄의 CH1 도메인 및 힌지 영역을 코딩하는 DNA 서열을 포함하도록 디자인될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 또 다른 폴리펩티드에 연결된 본 발명의 항-CCL20 항체의 전부 또는 일부를 포함하는 융합 항체 또는 면역어드헤신(immunoadhesin)이 제조될 수 있다. 한 실시양태에서, 항-CCL20 항체의 가변 도메인만이 상기 폴리펩티드에 연결된다. 또 다른 실시양태에서, 항-CCL20 항체의 VH 도메인은 제1 폴리펩티드에 연결되는 반면, 항-CCL20 항체의 VL 도메인은 VH 및 VL 도메인들이 서로 상호작용하여 항원 결합 부위를 형성할 수 있는 방식으로 상기 제1 폴리펩티드와 결합하는 제2 폴리펩티드에 연결된다. 또 다른 실시양태에서, VH 도메인은 VH 및 VL 도메인들이 서로 상호작용할 수 있도록 링커(linker)에 의해 VL 도메인으로부터 분리된다(하기 단일쇄 항체 단락 참조). 그 다음, VH-링커-VL 항체는 관심 있는 폴리펩티드에 연결된다. 추가로, 2개(또는 그 이상)의 단일쇄 항체들이 서로 연결되어 단일 폴리펩티드 쇄 상에서 2가 또는 다가 항체를 생성하거나 이중특이적 항체를 생성하는 융합 항체가 생성될 수 있다.
본 발명의 단일쇄 항체를 생성하기 위해, VH 및 VL 코딩 DNA 단편은 VH 및 VL 서열이 유연성 링커에 의해 연결된 VL 및 VH 도메인을 갖는 연속된 단일쇄 단백질로서 발현될 수 있도록 상기 유연성 링커를 코딩하는, 예를 들면, 아미노산 서열 (Gly4-Ser)3을 코딩하는 또 다른 단편에 작동가능하게 연결된다. 예를 들면, 문헌(Bird et al., Science 242:423-426 (1988)), 문헌(Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988)), 문헌(McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)) 등을 참조한다. 몇몇 실시양태에서, 단일쇄 항체는 1가(단일 VH 및 VL만이 사용됨), 2가(2개의 VH 및 VL이 사용됨) 또는 다가(2개 초과의 VH 및 VL이 사용됨) 단일쇄 항체이다. 본 발명은 인간 CCL20 및 또 다른 분자에 특이적으로 결합하는 이중특이적 또는 다가 항체도 고려한다.
다른 실시양태에서, 다른 변경된 항체를 항-CCL20 항체 코딩 핵산 분자를 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 본 명세서의 교시에 따라 표준 분자생물학적 기법을 이용하여 "카파 바디"(Ill et al., Protein Eng. 10:949-57 (1997)), "미니바디"(Martin et al., EMBO J. 13:5303-9 (1994)), "디아바디"(Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)), 또는 "자누신(Janusin)"(Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991) and Traunecker et al., Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52 (1992))을 제조할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 예시된 항체의 변이체, 또는 상기 변이체 항체의 항원 결합 부분을 제공하고, 이때 상기 변이체 항체는 인간 CCL20에 특이적으로 결합하지만, (예를 들면, CDR 영역, FR 영역 및/또는 불변 도메인에서) 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이상의 아미노산 치환에 의해 상기 예시된 항체와 서열 면에서 상이하다. 본 발명에 따라, 변이체 항체는 중쇄, 중쇄 가변 도메인, 경쇄, 경쇄 가변 도메인, 6개의 CDR들 또는 8개의 FR들에서 기준 항체와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상 동일할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 서열 동일성으로서도 지칭되는 폴리펩티드에 대한 서열 유사성은 전형적으로 보존적인 아미노산 치환을 포함하는 다양한 치환, 결실 및 다른 변경에 배정된 유사성의 척도를 이용하여 유사한 서열들을 매칭시키는 서열 분석 소프트웨어의 이용을 통해 측정된다. 예를 들면, 유전학 컴퓨터 그룹(GCG) 서열 분석 팩키지는 디폴트 파라미터와 함께 사용되어 밀접하게 관련된 폴리펩티드들, 예컨대, 유기체의 상이한 종들로부터의 상동성 폴리펩티드들 사이 또는 야생형 단백질과 이의 뮤테인(mutein) 사이의 서열 상동성 또는 서열 동일성을 측정할 수 있는 프로그램, 예컨대, "갭(Gap)" 및 "베스트핏(Bestfit)"을 함유한다. 예를 들면, GCG 버전 6.1을 참조한다. 폴리펩티드 서열들은 디폴트 또는 권장된 파라미터를 이용하는 GCG 버전 6.1의 프로그램인 FASTA에 의해 비교될 수도 있다. FASTA(예를 들면, FASTA2 및 FASTA3)는 질의 서열과 검색 서열 사이의 가장 우수한 중복 영역의 정렬 및 % 서열 동일성을 제공한다(Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000)). 본 발명의 서열을, 상이한 유기체로부터의 다수의 서열들을 함유하는 데이터베이스와 비교할 때 사용되는 또 다른 알고리즘은 디폴트 파라미터를 이용하는 컴퓨터 프로그램 BLAST, 특히 blastp 또는 tblastn이다. 예를 들면, 본원에 참고로 도입되는 문헌(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)) 및 문헌(Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997))을 참조한다.
본 발명에 따라, 화학적으로 반응할 수 있는, 항체 내의 하나 이상의 시스테인들은 또 다른 잔기, 예컨대, 알라닌 또는 세린(그러나, 이들로 한정되지 않음)으로 변경될 수 있다. 한 실시양태에서, 비-정규 시스테인이 치환된다. 상기 치환은 항체의 가변 도메인의 CDR 또는 골격 영역, 또는 불변 도메인에서 만들어질 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 시스테인은 정규 시스테인이다. 몇몇 실시양태에서, 항체 내의 잠재적인 단백질분해 부위는 제거된다. 이러한 부위는 항체의 가변 도메인의 CDR 또는 골격 영역, 또는 불변 도메인에서 발생할 수 있다. 시스테인 잔기의 치환 및 단백질분해 부위의 제거는 항체 생성물에서의 불균질성의 위험을 감소시킴으로써 그의 균질성을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 잠재적인 탈아미드화 부위를 형성하는 아스파라긴-글라이신 쌍은 상기 잔기들 중 하나 또는 둘다를 변경시킴으로써 제거된다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 그의 면역원성을 감소시키도록 탈면역화된다. 항체의 면역원성을 감소시키는 기법은 당분야에 잘 공지되어 있다. 예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO 98/52976호 및 제WO 00/34317호를 참조한다.
몇몇 실시양태에서, 항체는 본 발명의 예시된 항체와 비교될 때 하나 이상의 보존적인 아미노산 치환을 갖는다. "보존적인 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 성질(예를 들면, 전하 또는 소수성)을 갖는 (측쇄 R 기를 갖는) 또 다른 아미노산 잔기로 치환되는 치환이다. 일반적으로, 보존적인 아미노산 치환은 단백질의 기능적 성질을 실질적으로 변경시키지 않을 것이다. 2개 이상의 아미노산 서열들이 보존적인 치환에 의해 서로 상이한 경우, % 서열 동일성 또는 유사성 정도는 치환의 보존적인 성질을 보정하는 방향으로 조절될 수 있다. 이 조절을 달성하기 위한 수단은 당업자에게 잘 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌(Pearson, Methods Mol. Biol. 243:307-31 (1994))을 참조한다.
유사한 화학적 성질을 갖는 측쇄를 갖는 아미노산들의 군의 예에는 1) 지방족 측쇄: 글라이신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; 2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 쓰레오닌; 3) 아미드 함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 라이신, 아르기닌 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파르트산 및 글루탐산; 및 7) 황 함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌이 포함된다. 바람직한 보존적인 아미노산 치환 군은 다음과 같다: 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 라이신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파르테이트, 및 아스파라긴-글루타민. 대안적으로, 보존적인 치환은 문헌(Gonnet et al., Science 256:1443-45 (1992))에 개시된 PAM250 로그-확률 행렬에서 양의 값을 갖는 임의의 변화이다. "적절하게 보존적인" 치환은 PAM250 로그-확률 행렬에서 비-음의 값을 갖는 임의의 변화이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분에 대한 아미노산 치환은 (1) 단백질분해에 대한 민감성을 감소시키는 치환, (2) 산화에 대한 민감성을 감소시키는 치환, (3) 예를 들면, 항체의 ADCC 및 CDC 활성을 향상시키기 위해 단백질 복합체의 형성에 대한 결합 친화성을 변경시키는 치환, (4) 이러한 유사체들의 다른 물리화학적 또는 기능적 성질을 부여하거나 변경시키지만 인간 CCL20에의 특이적 결합을 여전히 보유하는 치환, (5) C-말단 라이신을 제거하는 치환, 및 (6) 글리코실화 부위를 부가하거나 제거하는 치환이다.
한 양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체의 중쇄 또는 경쇄이거나 상기 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인 함유 부분인 새로운 신규 폴리펩티드를 제공한다. 이러한 폴리펩티드는 각각 항체의 경쇄 또는 중쇄와 짝을 이루어 항-CCL20 항체를 형성할 수 있기 때문에 유용하다.
신규 마우스 항-인간 CCL20 항체의 CDR을 포함하는 신규 인간화된 중화 항-CCL20 항체, 및 상기 인간화된 항체의 항원 결합 부분이 본원에 개시된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간화된 항-CCL20 항체"는 본원에서 공여자 항체(예를 들면, 마우스 항-CCL20 항체)로서도 지칭되는 비-인간 유래의 항-CCL20 항체의 하나 이상의 CDR(CDR1, CDR2 및 CDR3), 및 인간 서열로부터의 하나 이상의 부분을 포함하는 항체를 지칭한다. 인간 항체 부분은 하나 이상의 골격 영역(예를 들면, 골격 영역의 전부) 및/또는 불변 영역의 전부 또는 일부일 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 인간 서열 골격 영역은 생식세포주 서열을 포함하지만 비-생식세포주 돌연변이를 포함할 수 있다. 비-인간 항-CCL20 항체의 6개 CDR들이 인간 골격 내로 이식된 CDR-이식된 항-CCL20 항체가 본 발명의 인간화된 항-CCL20 항체의 일례이다. 예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호(Cabilly et al.); 유럽 특허 제0,125,023 B1호(Cabilly et al.); 미국 특허 제4,816,397호(Boss et al.); 유럽 특허 제0,120,694 B1호(Boss et al.); 국제 특허출원 공보 제WO 86/01533호(Neuberger, M.S. et al.); 유럽 특허 제0,194,276 B1호(Neuberger, M.S. et al.); 미국 특허 제5,225,539호(Winter); 유럽 특허 제0,239,400 B1호(Winter); 및 유럽 특허출원 제0,519,596 A1호(Padlan, E.A. et al.)를 참조한다. 미국 특허 제4,946,778호(Ladner et al.); 미국 특허 제5,476,786호(Huston); 및 문헌(Bird et al., Science 242:423-426 (1988))도 참조한다. 몇몇 실시양태에서, 인간화된 항체는 탈면역화된 항체이다. 예를 들면, 잠재적인 T 세포 에피토프의 수를 감소시켜 인간에게의 투여시 면역 반응을 이끌어내는 항체의 성향을 감소시키도록 변경된 탈면역화된 항체에 관한 미국 특허 제7,264,806호(Carr et al.)를 참조한다.
특정 실시양태에서, 인간화된 항체는 하기 뮤린 단일클론 항-인간 CCL20 항체들 중 하나 이상의 항체의 하나 이상의 경쇄 CDR 및/또는 하나 이상의 중쇄 CDR을 포함한다: 36F7C10, 42G5B10 및 40-1C10B9(이때, 상기 CDR들은 카바트 시스템, 초티아 시스템 또는 이들의 임의의 조합 시스템에 따라 확인됨). 몇몇 실시양태에서, 인간화된 항체는 항체 36F7C10, 42G5B10 또는 40-1C10B9의 모든 3개 중쇄 CDR들 및 모든 3개 경쇄 CDR들을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 인간화된 항체는 본 발명의 뮤린 항-인간 CCL20 항체의 결합 특이성(예를 들면, 인간 CCL20에 대한 특이성, 동일한 또는 유사한 에피토프 특이성)을 갖고/갖거나 중화 활성을 갖는다. 인간화된 항체는 본원에 기재된 뮤린, 키메라 또는 인간화된 항-인간 CCL20 항체의 결합 특이성, 에피토프 특이성 및/또는 중화 활성을 가질 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 인간화된 항체는 인간 CCL20에의 결합에 대해 뮤린, 키메라 또는 인간화된 항-인간 CCL20 항체와 경쟁할 수 있고/있거나, 뮤린, 키메라 또는 인간화된 항-인간 CCL20 항체의 중화 기능을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 인간화된 항체는 마우스 항체 36F7C10, 42G5B10 및 40-1C10B9 중 어느 하나의 결합 특이성, 에피토프 특이성 및/또는 중화 활성을 갖는다.
인간화된 항체의 인간 서열 부분(예를 들면, 골격 영역; 불변 영역)은 임의의 적합한 인간 항체로부터 유도될 수 있다. 예를 들면, 인간화된 또는 키메라 항체에서 인간 불변 영역 또는 이의 부분은 인간 κ 또는 λ 경쇄 유전자, 및/또는 인간 γ(예를 들면, γ1, γ2, γ3, γ4), μ, α(예를 들면, α1, α2), δ 또는 ε 중쇄 유전자(대립형질 변이체를 포함함)에 의해 코딩될 수 있다. 구체적인 인간 불변 영역 동종형(예를 들면, IgG1; IgG2), 이의 변이체 또는 부분은 이펙터 기능을 조정하도록 선택될 수 있다. 예를 들면, Fc 수용체에의 결합 및/또는 보체를 고정시키는 능력을 감소시키기 위해 돌연변이된 불변 영역(즉, 변이체)이 항체 내로 도입될 수 있다(예를 들면, 영국 특허 제2,209,757 B호(Winter et al.), 국제 특허출원 공보 제WO 89/07142호(Morrison et al.) 및 국제 특허출원 공보 제WO 94/29351호(Morgan et al.) 참조).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "생식세포주"는 생식 세포를 통해 모체로부터 자손으로 전달되는 항체 유전자 및 유전자 절편의 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열을 지칭한다. 이 생식세포주 서열은 친화 성숙의 과정 동안 재조합 및 과다돌연변이 사건에 의해 변경된, B 세포에서 특정 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 구별된다. 특정 생식세포주를 "이용하는" 항체는 상기 생식세포주 뉴클레오티드 서열, 또는 다른 생식세포주 서열에 비해 상기 뉴클레오티드 서열이 특정하는 아미노산 서열과 가장 밀접하게 정렬되는 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열을 갖는다. 이러한 항체는 생식세포주 서열에 비해 돌연변이된 서열에 의해 코딩될 수 있거나 이 돌연변이된 서열을 포함할 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 인간 골격은 생식세포주 서열로부터의 최소한의 변경을 갖는다(예를 들면, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 미만의 수용자 골격 잔기가 항체의 하나 이상의 성질을 개선하도록 치환되어 있다). 몇몇 실시양태에서, 수용자 골격 잔기는 예를 들면, 결합 친화성을 개선하도록 공여자 골격 잔기로 치환된다(예를 들면, 미국 특허 제5,530,101호(Queen et al.) 참조). 특정 실시양태에서, 인간 CCL20에 대한 인간화된 항체 쇄를 포함하는 항체의 친화성을 증가시키기 위해, 인간화된 항체 쇄의 골격 내의 한정된 수의 아미노산(예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노산)은 수용자 서열보다는 오히려 공여자 서열 내의 해당 위치에 존재하는 아미노산과 동일하도록 선택된다(즉, "복귀-돌연변이됨").
(예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역의) 인간 골격 영역은 바람직하게는 공여자 항체(예를 들면, 뮤린 항-CCL20 항체)의 항원 결합 영역의 유사한 또는 동등한 영역(예를 들면, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역)에 대한 서열 유사성을 갖는 인간 생식세포주 서열로부터 수득되거나 유도된다. 인간화된 항체의 인간 서열 부분에 대한 골격 영역의 다른 공급원은 인간 가변 영역 컨센서스 서열을 포함한다(예를 들면, 문헌(Kettleborough et al., Protein Engineering 4:773-783 (1991)), 국제 특허출원 공보 제WO 94/04679호(Carter et al.) 및 미국 특허 제6,407,213호(Carter) 참조). 예를 들면, 비-인간 부분을 수득하기 위해 사용된 항체의 공여자 서열의 영역(예를 들면, 가변 영역의 서열)을 문헌(Kabat, E. A. et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991))에 기재된 바와 같이 인간 서열과 비교하여 인간화된 항체의 인간 부분의 구체적인 공급원, 예를 들면, 골격 영역의 공급원을 선택할 수 있다.
한 실시양태에서, 인간화된 항체 쇄의 골격 영역은 비-인간 공여자의 가변 영역에 대한 약 50% 이상, 약 55% 이상, 약 60% 이상, 약 65% 이상, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상 또는 약 95% 이상의 전체 서열 동일성을 갖는 인간 Ig 가변 영역으로부터 수득되거나 유도된다. 특정 실시양태에서, 인간화된 항체 쇄의 골격 영역은 비-인간 공여자 항체의 가변 영역의 골격 영역에 대한 약 50% 이상, 약 55% 이상, 약 60% 이상, 약 65% 이상, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상 또는 약 95% 이상의 전체 서열 동일성을 갖는 인간 가변 영역 골격 영역으로부터 수득되거나 유도된다.
한 실시양태에서, 인간화된 항체의 골격 영역들(FR) 중 하나 이상은 인간 서열의 하나 이상의 쇄로부터 수득되거나 유도된다. 따라서, FR은 하나 이상의 인간 서열 항체(예를 들면, 인간 항체 쇄, 인간 컨센서스 서열)로부터 수득되거나 유도된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함할 수 있다.
당업자는 뮤린 항-CCL20 항체(들)의 하나 이상의 CDR의 측면에 위치하는 잔기들이 몇몇 경우 기능(예를 들면, 결합)에 기여할 수 있고 몇몇 경우 기능(예를 들면, 결합)에 직접적으로 또는 간접적으로 필수적일 수 있다. 따라서, 몇몇 실시양태에서, 뮤린 골격의 하나 이상의 CDR의 측면에 위치하는 하나 이상의 아미노산(예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이상의 측면 아미노산)도 인간화된 항체에 포함된다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체의 인간 중쇄 골격 영역은 인간 IGHV1-46*03 생식세포주 서열을 이용한다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체의 인간 경쇄 골격 영역은 인간 IGKV1D-39*01 생식세포주 서열을 이용한다. 인간화된 항체의 CCL20 결합 친화성을 개선하기 위해 이들 FR 영역들, 예를 들면, 하기 실시예에 기재된 잔기들 중 하나 이상의 잔기에서 임의적으로 돌연변이(예를 들면, 복귀 돌연변이)를 만들 수 있다.
"친화성"은 결합 상호작용의 강도를 기술하고 전형적으로 항체와 항원의 결합의 전체 강도를 지칭하는 당분야의 용어이다. 항원에 대한 항체의 친화성은 전형적으로 특정 항체-항원 상호작용의 결합 친화성 평형 상수(KD)로서 표현된다.
몇몇 실시양태에서, 항체는 1가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 500 pM 이하, 400 pM 이하, 300 pM 이하, 200 pM 이하, 100 pM 이하, 90 pM 이하, 80 pM 이하, 70 pM 이하, 60 pM 이하, 50 pM 이하 또는 45 pM 이하; 또는 2가 표면 플라스몬 공명에 의해 측정될 때 12 pM 이하, 10 pM 이하, 8 pM 이하, 6 pM 이하 또는 5 pM 이하의 친화성(KD; KD=Koff(kd)/Kon(ka))으로 인간 CCL20에 결합한다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 1가 표면 플라스몬 공명(비아코어™)에 의해 측정될 때 1000 x 105 M-1sec-1 이하, 900 x 105 M-1sec-1 이하, 800 x 105 M-1sec-1 이하, 700 x 105 M-1sec-1 이하, 600 x 105 M-1sec-1 이하, 500 x 105 M-1sec-1 이하, 400 x 105 M-1sec-1 이하, 300 x 105 M-1sec-1 이하, 240 x 105 M-1sec-1 이하, 200 x 105 M-1sec-1 이하, 190 x 105 M-1sec-1 이하, 180 x 105 M-1sec-1 이하, 170 x 105 M-1sec-1 이하, 160 x 105 M-1sec-1 이하 또는 150 x 105 M-1sec-1 이하의 ka로 인간 CCL20에 결합한다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 1가 표면 플라스몬 공명(비아코어™)에 의해 측정될 때 1000 x 10-5 sec-1 이하, 900 x 10-5 sec-1 이하, 800 x 10-5 sec-1 이하, 700 x 10-5 sec-1 이하, 600 x 10-5 sec-1 이하, 500 x 10-5 sec-1 이하, 400 x 10-5 sec-1 이하, 300 x 10-5 sec-1 이하, 240 x 10-5 sec-1 이하, 200 x 10-5 sec-1 이하, 190 x 10-5 sec-1 이하, 180 x 10-5 sec-1 이하, 170 x 10-5 sec-1 이하, 160 x 10-5 sec-1 이하, 150 x 10-5 sec-1 이하, 140 x 10-5 sec-1 이하, 130 x 10-5 sec-1 이하, 120 x 10-5 sec-1 이하, 100 x 10-5 sec-1 이하, 90 x 10-5 sec-1 이하, 80 x 10-5 sec-1 이하, 70 x 10-5 sec-1 이하, 또는 65 x 10-5 sec-1 이하의 kd로 인간 CCL20에 결합한다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 다양한 방법들을 이용하여 본원에서 제공되고 당분야에 공지된 방법에 따라 제조된 항체 및 이의 항원 결합 부분이 필요한 특이성(예를 들면, 결합 특이성, 에피토프 특이성)을 갖는다는 것을 확인할 수 있다. 예를 들면, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 본 발명의 인간화된 항-CCL20 항체 또는 부분의 결합 기능은 임의의 적합한 방법, 예를 들면, 인간화된 항체 또는 부분과 인간 CCL20(또는, 예를 들면, CCL20의 아미노산 서열을 갖는 펩티드, 또는 인간 CCL20을 포함하는 고체 지지체) 사이의 복합체의 형성을 모니터링하는 분석의 이용을 통해 검출될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들면, 본 발명의 인간화된 항체 또는 부분)이 본원에 개시된 특정 뮤린, 키메라 또는 인간화된 단일클론 항체에 의해 결합되는 인간 CCL20 상의 에피토프와 동일한 인간 CCL20 상의 에피토프에 결합하거나, 본원에 개시된 특정 뮤린, 키메라 또는 인간화된 단일클론 항체에 의해 결합되는 인간 CCL20 상의 에피토프와 중복되는 인간 CCL20 상의 에피토프에 결합하는 능력은 예를 들면, 경쟁 결합 분석을 포함하는, 당업자에게 공지된 다양한 기법들의 이용을 통해 용이하게 측정될 수 있다. 이들은 상기 특정 항체의 표지된 형태의 사용, 및 본 발명의 항체의 존재 및 부재 하에서 상기 표지된 항체와 인간 CCL20의 결합의 측정을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "에피토프"는 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 단백질 결정인자를 포함한다. 항체가 결합하는 에피토프를 특징규명하는 방법은 당분야에 공지되어 있다. 본 발명의 항-CCL20 항체에 의해 결합되는 에피토프를 특징규명하는 한 방법이 실시예 9에 기재되어 있다. 일단 항원 상의 원하는 에피토프가 확인되면, 예를 들면, 본 발명에 기재된 기법을 이용하여 상기 에피토프에 대한 항체를 발생시킬 수 있다. 대안적으로, 발견 과정 동안, 항체의 발생 및 특징규명은 원하는 에피토프에 대한 정보를 제공할 수 있다. 이 정보로부터, 동일한 에피토프에의 결합에 대해 항체들을 경쟁적으로 스크리닝할 수 있다. 예를 들면, 당업자는 경쟁 연구를 수행하여 또 다른 항체와 경쟁적으로 결합하는 항체, 즉 항원에의 결합에 대해 경쟁하는 항체를 발견할 수 있다.
한 실시양태에서, 시험 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 본 발명의 인간화된 항체가 결합하는 에피토프와 동일한 또는 중복되는 에피토프에 결합하는지를 확인하기 위해, 본 발명의 항-CCL20 항체가 포화 조건 하에서 CCL20에 결합하게 한 후, CCL20에 결합하는 상기 시험 항체의 능력을 측정한다. 상기 시험 항체가 기준 항-CCL20 항체와 동시에 CCL20에 결합할 수 있다면, 상기 시험 항체는 상기 기준 항-CCL20 항체에 의해 결합되는 에피토프와 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 그러나, 상기 시험 항체가 동시에 CCL20에 결합할 수 없다면, 상기 시험 항체는 본 발명의 항-CCL20 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 에피토프 또는 중복되는 에피토프, 또는 본 발명의 항-CCL20 항체에 의해 결합되는 에피토프에 매우 인접한 에피토프에 결합할 수 있다. 이 실험을 예를 들면, ELISA, RIA, 비아코어™ 또는 유세포분석을 이용하여 수행할 수 있다. 항-CCL20 항체가 또 다른 항-CCL20 항체와 교차경쟁하는지를 시험하기 위해, 전술된 경쟁 방법을 두 방향으로, 즉 기준 항체가 시험 항체를 차단하는지를 확인하는 방향, 및 시험 항체가 기준 항체를 차단하는지를 확인하는 방향으로 이용할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 상기 실험을 비아코어™를 이용하여 수행한다.
에피토프 비닝(binning)도 본 발명의 항체를 특징규명하는 데에 유용할 수 있다. 용어 "비닝"은 항체들을 그들의 항원 결합 특징에 기초하여 분류하는 방법을 지칭한다. 항체를 "비닝"하기 위한 고효율 과정은 국제 특허출원 공보 제WO 03/48731호에 기재되어 있다. "에피토프 비닝"은 비-표지된 형태의 항-CCL20 항체 "A"를 CCL20의 서열에 상응하는 합성 펩티드 또는 CCL20 양성 세포에 결합하게 함으로써 조사될 수 있다. 그 후, 표지된 제2 항-CCL20 항체 "B"가 첨가되고, 상기 세포 또는 합성 펩티드가 항-CCL20 항체 "A"에 이전에 노출되지 않은 대조군 샘플에 비해 상대적으로 결합할 수 있는 표지된 항체의 양을 평가할 수 있다. 대안적으로, 항-CCL20 항체 "A" 및 "B" 둘다가 검출을 가능하게 하는 상이한 형광색소 또는 화학물질로 표지될 수 있고, 표지를 검출할 수 있는 장치를 이용하여 CCL20 펩티드에 동시에 결합할 수 있는 표지된 항체 둘다의 양을 측정할 수 있거나, CCL20 양성 세포에 동시에 결합하는 항체 둘다의 양을 유세포분석으로 측정할 수 있다. 비아코어™ 및 옥테트(Octet) 기술은 비-표지된 형태의 항체들의 경쟁 결합을 조사할 수 있게 한다. 비-표지된 형태의 항체의 이러한 사용은 몇몇 항체의 화학적 변경이 결합 활성을 손상시킬 수 있기 때문에 요구된다. 마찬가지로 에피토프 비닝을 수행하는 데에 유용한, 문헌(Jia et al., J. Immunol. Methods 288:91-98 (2004))에 기재된 기술도 참조한다.
본 발명의 항-CCL20 항체의 부분, 예컨대, 경쇄, 중쇄, 및 경쇄 및 중쇄의 부분도 본원에서 제공된다. 이들 항체 부분들은 (예를 들면, 환원 및/또는 절단에 의해) 항체로부터 수득되거나 유도될 수 있거나, 원하는 성질(예를 들면, 인간 CCL20에 결합하는 성질, 서열 유사성)을 갖는 항체 또는 이의 쇄의 부분을 코딩하는 핵산에 의해 제조되거나 발현될 수 있다. 이들은 예를 들면, 관련 부분의 드 노보(de novo) 합성에 의해서도 제조될 수 있다. 인간 및 비-인간 유래의 원하는 부분(예를 들면, 항원 결합 영역, CDR, FR, C 영역)을 포함하는 인간화된 항체를 합성 및/또는 재조합 핵산을 이용하여 생성함으로써 원하는 인간화된 쇄를 코딩하는 구축물(예를 들면, cDNA)을 제조할 수 있다. 예를 들면, 항체의 부분(예를 들면, 쇄의 부분)을 제조하기 위해, 하나 이상의 정지 코돈을 핵산 서열 내의 원하는 위치에서 도입할 수 있다. 인간화된 가변 영역을 코딩하는 핵산(예를 들면, DNA) 서열을 PCR 돌연변이유발 방법을 이용하여 구축함으로써 기존 DNA 서열을 변경시킬 수 있다(예를 들면, 문헌(Kamman et al., Nucl. Acids Res. 17:5404 (1989)) 참조). 새로운 CDR을 코딩하는 PCR 프라이머는 동일한 또는 매우 유사한 인간 가변 영역에 기초한 종래 인간화된 가변 영역의 DNA 주형에 혼성화될 수 있다(Sato et al., Cancer Research 53:851-856 (1993)). 유사한 DNA 서열이 주형으로서의 사용을 위해 이용될 수 없는 경우, 가변 영역 서열을 코딩하는 서열을 포함하는 핵산이 합성 올리고뉴클레오티드로부터 구축될 수 있다(예를 들면, 문헌(Kolbinger, Protein Engineering 8:971-980 (1993)) 참조). 신호 펩티드("신호 서열")를 코딩하는 서열도 (예를 들면, 합성시, 벡터 내로의 삽입시) 상기 핵산 내로 도입될 수 있다. 신호 펩티드 서열이 이용될 수 없는 경우(예를 들면, 전형적으로 존재하지 않는 경우), 또 다른 항체로부터의 신호 펩티드 서열이 사용될 수 있다(예를 들면, 문헌(Kettleborough, Protein Engineering 4:773-783 (1991)) 참조). 이들 방법들, 본원에 기재된 방법들 또는 다른 적합한 방법들을 이용하여 변이체를 용이하게 제조할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 두문자어 "mAb"(또는 "MAb")는 예를 들면, 세포의 클론 집단에 의해 합성된 항체 또는 인간화된 항체일 수 있는 단일클론 항체를 지칭한다. 단일클론 항체를 생성하는 클론 집단은 불멸화된 세포의 클론 집단일 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 클론 집단 내의 불멸화된 세포는 전형적으로 면역화된 동물로부터의 개별 B 림프구와 림프구성 종양으로부터의 개별 세포의 융합에 의해 제조된 혼성체 세포(하이브리도마)이다.
본 발명은 부분적으로, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖고 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄 및/또는 이들의 부분을 포함하는 인간화된 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 상기 인간화된 항체는 서열번호 7의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 1의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 7의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 2의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 7의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 3의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 7의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 4의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 7의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 5의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 7의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 6의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 8의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 1의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 8의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 2의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 8의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 3의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 8의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 4의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 서열번호 8의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 5의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄; 또는 서열번호 8의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 6의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체는 하기 아미노산 서열들을 갖는 중쇄(H)-CDR1, H-CDR2, H-CDR3, 경쇄(L)-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 60, 64, 67, 70, 73 및 75;
b) 각각 서열번호 60, 64, 67, 71, 73 및 75;
c) 각각 서열번호 60, 63, 67, 70, 73 및 75;
d) 각각 서열번호 60, 63, 67, 71, 73 및 75;
e) 각각 서열번호 61, 65, 68, 70, 73 및 75;
f) 각각 서열번호 61, 65, 68, 71, 73 및 75;
g) 각각 서열번호 77, 79, 67, 70, 73 및 75;
h) 각각 서열번호 77, 79, 67, 71, 73 및 75;
i) 각각 서열번호 78, 80, 68, 70, 73 및 75; 및
j) 각각 서열번호 78, 80, 68, 71, 73 및 75.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체는 서열번호 67 또는 68의 서열을 갖는 H-CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체는 각각 서열번호 67 및 75; 또는 각각 서열번호 68 및 75의 서열을 갖는 H-CDR3 및 L-CDR3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 인간화된 항체는 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖고, 서열번호 70 또는 71; 73; 및 75로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 CDR 또는 이들의 조합물을 포함하는 경쇄; 및 서열번호 60, 61, 77 또는 78; 63, 64, 65, 79 또는 80; 및 67 또는 68로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 CDR 또는 이들의 조합물을 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화된 항체는 서열번호 7, 8, 110 또는 112의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 108의 하나 이상의 CDR(예를 들면, 모든 3개의 CDR들)을 포함하는 중쇄를 포함한다.
또한, 본 발명은 본원에 기재된 인간화된 항체의 인간화된 항체 경쇄에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 상기 인간화된 항체 경쇄는 70 또는 71; 73; 및 75로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 CDR, 또는 이들의 조합물을 포함한다. 예를 들면, 인간화된 항체는 각각 서열번호 70, 73 및 75; 또는 각각 서열번호 71, 73 및 75의 아미노산 서열을 갖는 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 갖는다.
또한, 본 발명은 본원에 기재된 인간화된 항체의 인간화된 항체 중쇄에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 상기 인간화된 항체 중쇄는 서열번호 60, 61, 77 또는 78; 63, 64, 65, 79 또는 80; 및 67 또는 68로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 CDR 또는 이들의 조합물을 포함한다. 예를 들면, 상기 인간화된 항체는 하기 아미노산 서열을 갖는 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 갖는다:
a) 서열번호 60, 63 및 67;
b) 서열번호 60, 64 및 67;
c) 서열번호 61, 65 및 68;
d) 서열번호 77, 79 및 67; 또는
e) 서열번호 78, 80 및 68.
한 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체는 서열번호 15 또는 16의 가변 도메인(VL) 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 관련 실시양태에서, 상기 인간화된 항체는 서열번호 7, 8, 110 및 112 중 한 서열을 포함하거나 이러한 서열로 구성된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 인간화된 항체는 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 7 또는 8을 포함하거나 이러한 서열로 구성된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체는 서열번호 9 내지 14 중 하나의 가변 도메인(VH) 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 관련 실시양태에서, 상기 인간화된 항체는 서열번호 1 내지 6 및 108 중 한 서열을 포함하거나 이러한 서열로 구성된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 인간화된 항체는 신호 서열을 갖지 않고 임의적으로 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 1 내지 6 중 한 서열을 포함하거나 이러한 서열로 구성된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 인간화된 항체는 C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 108을 포함하거나 이러한 서열로 구성된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체는 하기 서열들을 포함하거나 하기 서열들로 구성된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함한다:
a) 서열번호 9 및 서열번호 15;
b) 서열번호 10 및 서열번호 15;
c) 서열번호 11 및 서열번호 15;
d) 서열번호 12 및 서열번호 15;
e) 서열번호 13 및 서열번호 15;
f) 서열번호 14 및 서열번호 15;
g) 서열번호 9 및 서열번호 16;
h) 서열번호 10 및 서열번호 16;
i) 서열번호 11 및 서열번호 16;
j) 서열번호 12 및 서열번호 16;
k) 서열번호 13 및 서열번호 16; 또는
l) 서열번호 14 및 서열번호 16.
한 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체는 하기 서열을 포함하거나 하기 서열로 구성된 아미노산 서열을 갖는 경쇄(LC) 및 중쇄(HC)를 포함하고, 이때 아미노산 서열은 신호 서열(존재하는 경우)을 결여하고, 서열번호 1 내지 6 및 서열번호 108은 임의적으로 C-말단 라이신을 결여한다:
a) 서열번호 1 및 서열번호 7;
b) 서열번호 2 및 서열번호 7;
c) 서열번호 3 및 서열번호 7;
d) 서열번호 4 및 서열번호 7;
e) 서열번호 5 및 서열번호 7;
f) 서열번호 6 및 서열번호 7;
g) 서열번호 1 및 서열번호 8;
h) 서열번호 2 및 서열번호 8;
i) 서열번호 3 및 서열번호 8;
j) 서열번호 4 및 서열번호 8;
k) 서열번호 5 및 서열번호 8;
l) 서열번호 6 및 서열번호 8,
m) 서열번호 108 및 서열번호 110; 및
n) 서열번호 108 및 서열번호 112.
본 발명은 본 발명의 예시된 인간화된 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분, 및 예시된 인간화된 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 임의의 조합물을 제공한다(즉, 상기 중쇄와 경쇄는 "혼합되고 매칭될" 수 있다. 임의의 이러한 조합물은 인간 CCL20에의 결합 및 화학주성 중화 활성을 보유할 가능성이 있는 것으로 이해된다. 이들 기능적 성질들을 본원에 기재된 방법을 이용하여 용이하게 시험할 수 있다. 실제로, 도 7은 본 발명의 예시된 인간화된 중쇄와 경쇄의 여러 조합물의 중화 활성을 나타낸다.
본 발명은 본원에 예시된 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 에피토프에 결합하고/하거나 이 항체와 경쟁하거나 교차경쟁하는 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분도 제공한다. 이들 항체는 예를 들면, 인간화된, 키메라 또는 마우스 항체일 수 있다. 예를 들면, 본 발명은 마우스 항-CCL20 항체 36F7C10, 40-1C10B9 및 42G5B10 중 한 항체, 또는 이들 마우스 항체들의 인간화된 또는 키메라 버전에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 에피토프에 결합하고/하거나, 이들 항체들과 경쟁하거나 교차경쟁하는 항-인간 CCL20 항체 및 부분을 제공한다. 기준 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 에피토프에 결합하거나, 기준 항체와 경쟁하거나 교차경쟁하는 항체의 능력은 본원에 기재된 바와 같이 측정될 수 있다. 비-한정적으로 예를 들면, 마우스 항체 36F7C10으로부터의 3개의 중쇄 CDR들 및 3개의 경쇄 CDR들은 마우스 항체 36F7C10에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 에피토프에 결합하고 마우스 항체 36F7C10과 경쟁하고 교차경쟁할 것으로 예측될 것이다. 이러한 항체는 예를 들면, 서열번호 9 내지 11 중 어느 하나를 포함하는 중쇄 및 서열번호 15 또는 16을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 이러한 항체는 예를 들면, 서열번호 12 내지 14 중 어느 하나를 포함하는 중쇄 및 서열번호 15 또는 16을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 추가로 포함할 수 있다.
원하는 경우, 예를 들면, 진단 또는 분석 목적(예를 들면, 치료의 모니터링을 가능하게 하는 영상화)을 위해, 인간화된 항체(또는 이의 항원 결합 부분)은 검출가능한 표지를 포함할 수 있다. 인간화된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 표지하기 위한 적합한 검출가능한 표지 및 방법은 당분야에서 잘 공지되어 있다. 적합한 검출가능한 표지는 예를 들면, 방사성동위원소(예를 들면, 인듐-111, 테크네튬-99m 또는 요오드-131), 양전자 방출 표지(예를 들면, 불소-19), 상자성 이온(예를 들면, 가들리늄(III), 망간(II)), 에피토프 표지(태그), 친화성 표지(예를 들면, 바이오틴, 아비딘), 스핀 표지, 효소, 형광 기 또는 화학발광 기를 포함한다. 표지가 사용되지 않는 경우, (예를 들면, 인간화된 항체와 인간 CCL20 사이의) 복합체 형성이 표면 플라스몬 공명, ELISA, FACS 또는 다른 적합한 방법에 의해 측정될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 예를 들면, 항체의 약동학, 예컨대, 반감기를 개선하는 다른 모이어티(moiety)(예를 들면, 페길화 모이어티)에 화학적 반응 또는 유전적 변경을 통해 접합될 수도 있다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명에서 사용된 항-CCL20 항체는 예를 들면, 화학적 접합 또는 유전적 변경을 통해 적합한 사이토카인에 연결될 수 있다(예를 들면, 사이토카인의 코딩 서열을 항체 코딩 서열에 인 프레임으로 부착시켜 항체:사이토카인 융합 단백질을 생성함).
또한, 본 발명은 본 발명의 인간화된 항체(또는 이의 항원 결합 부분)가 또 다른 치료제, 예컨대, 생체활성 화합물(예를 들면, 사이토카인, 수퍼항원, 세포독성제 또는 독소)에 커플링되어 있는 면역접합체에 관한 것이다. 예를 들면, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화된 항체(또는 이의 항원 결합 부분)는 생물학적 단백질, 식물 또는 세균 유래의 분자(또는 이의 유도체), 인터류킨-2 항체 또는 디프테리아 독소 항체에 커플링될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 마우스 단일클론 항체가 제조되었다. 본 발명의 인간화된 및 키메라 항체는 본 발명의 마우스 단일클론 항체로부터 유도될 수 있다. 즉, 몇몇 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 및 키메라 항-CCL20 항체는 본 발명의 마우스 단일클론 항체로부터 수득된 서열, 예컨대, 하나 이상의 CDR 서열(예를 들면, 모든 6개의 CDR 서열들) 또는 하나 이상의 가변 도메인(예를 들면, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인)을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "마우스 단일클론 항체"는 뮤린 항체의 경쇄 CDR들(L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3) 및 중쇄 CDR들(H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3), 및 뮤린 유래의 골격 및 불변 영역을 함유하는 항체를 지칭한다.
본 발명은 본원에 기재된 마우스 단일클론 항체 및 이 마우스 단일클론 항체의 항원 결합 부분, 상기 마우스 단일클론 항체의 경쇄, 상기 마우스 단일클론 항체의 중쇄, 및 이들 중쇄 및 경쇄의 부분에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 마우스 단일클론 항체는 36F7C10, 40-1C10B9 또는 42G5B10이다. 본 발명은 중쇄 및 경쇄 신호 서열을 결여하는 마우스 단일클론 항체, 및 글리코실화되어 있는 마우스 단일클론 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 전구체 항체, 비-글리코실화된 항체, 및 신호 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 경쇄를 갖는 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 임의의 상기 마우스 항체 중쇄 또는 경쇄, 또는 이들의 부분을 코딩하는 핵산 분자; 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포; 임의의 상기 마우스 항체 중쇄 또는 경쇄, 또는 이들의 부분을 제조하는 방법; 및 상기 마우스 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 사용하는 방법에 관한 것이다.
인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 마우스 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 결합 기능은 임의의 적합한 방법의 이용, 예를 들면, 마우스 단일클론 항체 또는 부분과 인간 CCL20(또는, 예를 들면, CCL20의 아미노산 서열을 갖는 펩티드, 또는 인간 CCL20을 포함하는 고체 지지체) 사이의 복합체의 형성을 모니터링하는 분석의 이용을 통해 검출될 수 있다.
경쇄, 중쇄, 및 경쇄 및 중쇄의 부분을 포함하는 뮤린 항체의 부분도 본원에서 제공된다. 이들 항체 부분은 예를 들면, 인간화된 항체 부분에 대해 본원에 기재된 수단에 의해 수득될 수 있거나 유도될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 마우스 단일클론 항체는 서열번호 40, 42 또는 44를 포함하는 경쇄를 포함하고, 서열번호 39, 41, 또는 43을 포함하는 중쇄를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 마우스 단일클론 항체는 서열번호 40을 포함하는 경쇄 및 서열번호 39를 포함하는 중쇄; 또는 서열번호 42를 포함하는 경쇄 및 서열번호 41을 포함하는 중쇄; 또는 서열번호 44를 포함하는 경쇄 및 서열번호 43을 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 40, 42 및 44로 구성된 군으로부터 선택된 서열 내에 경쇄 가변 영역을 포함하고 서열번호 39, 41 및 43으로 구성된 군으로부터 선택된 서열 내에 중쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 마우스 단일클론 항체에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 서열번호 40, 42 또는 44 내에 가변 영역을 포함하는 경쇄를 갖는 마우스 단일클론 항체에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 서열번호 39, 41 또는 43 내에 가변 영역을 포함하는 중쇄를 갖는 마우스 단일클론 항체에 관한 것이다.
원하는 경우, 예를 들면, 진단 또는 분석(예를 들면, 영상화) 목적을 위해, 마우스 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 예를 들면, 인간화된 항체에 대해 본원에 기재된 바와 같이 검출가능한 표지를 포함할 수 있다. 본 발명의 인간화된 항체에 대해 본원에 기재된 모든 적합한 방법들 및 기법들은 본 발명의 마우스 단일클론 항체를 위해서도 이용될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 키메라 항체가 제조되었다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "키메라 항체"는 한 종으로부터 유래된 항체의 가변 도메인 및 상이한 종으로부터 유래된 항체의 불변 도메인을 함유하는 재조합 단백질을 지칭한다. 한 실시양태에서, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 키메라 항체는 마우스 항-인간 CCL20 단일클론 항체로부터의 가변 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 상기 키메라 항체는 인간 항체로부터의 불변 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 키메라 항체는 마우스 항-인간 CCL20 단일클론 항체로부터의 가변 도메인 및 인간 항체로부터의 불변 도메인을 포함한다.
본 발명은 본원에 기재된 키메라 항체뿐만 아니라, 상기 키메라 항체의 항원 결합 부분, 상기 키메라 항체의 경쇄 및 중쇄, 및 이들 경쇄 및 중쇄의 부분에 관한 것이다. 본 발명은 중쇄 및 경쇄 신호 서열을 결여하는 키메라 항체 및 글리코실화된 키메라 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 전구체 항체, 비-글리코실화된 항체, 및 신호 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 경쇄를 갖는 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 임의의 상기 키메라 항체 중쇄 또는 경쇄, 또는 이들의 부분을 코딩하는 핵산 분자; 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포; 이들 임의의 상기 키메라 항체 중쇄 또는 경쇄, 또는 이들의 부분을 제조하는 방법; 및 상기 키메라 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 키메라 항체의 결합 기능은 임의의 적합한 방법의 이용, 예를 들면, 키메라 항체와 인간 CCL20(또는, 예를 들면, CCL20의 아미노산 서열을 갖는 펩티드, 또는 인간 CCL20을 포함하는 고체 지지체) 사이의 복합체의 형성을 모니터링하는 분석의 이용을 통해 검출될 수 있다.
경쇄, 중쇄, 및 경쇄 및 중쇄의 부분을 포함하는 키메라 항체의 부분도 본원에서 제공된다. 이들 항체 부분은 예를 들면, 인간화된 항체 부분에 대해 본원에 기재된 수단에 의해 수득될 수 있거나 유도될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 키메라 항체는 서열번호 40의 경쇄 가변 영역 및 서열번호 39의 중쇄 가변 영역; 서열번호 42의 경쇄 가변 영역 및 서열번호 41의 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 44의 경쇄 가변 영역 및 서열번호 43의 중쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명은 경쇄 가변 영역 내에 서열번호 40, 42 및 44로 구성된 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 서열을 포함하고 중쇄 가변 영역 내에 서열번호 39, 41 및 43으로 구성된 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 서열을 추가로 포함하는, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 키메라 항체에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 서열번호 40, 42 또는 44 내에 가변 영역을 포함하는 키메라 경쇄에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 서열번호 39, 41 또는 43 내에 가변 영역을 포함하는 키메라 중쇄에 관한 것이다.
원하는 경우, 예를 들면, 진단 또는 분석(예를 들면, 영상화) 목적을 위해, 키메라 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 예를 들면, 인간화된 항체에 대해 본원에 기재된 바와 같이 검출가능한 표지를 포함할 수 있다. 본 발명의 인간화된 항체에 대해 본원에 기재된 모든 적합한 방법들 및 기법들은 본 발명의 키메라 항체를 위해서도 이용될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항-CCL20 항체는 완전 인간 항체이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 가변 도메인 서열 및 불변 도메인 서열이 인간 서열인 임의의 항체를 의미한다. 상기 용어는 인간 유전자로부터 유래된 서열을 갖되 예를 들면, 가능한 면역원성의 감소, 친화성의 증가, 바람직하지 않은 폴딩을 야기할 시스테인의 제거 등을 위해 변경되어 있는 항체를 포괄한다. 상기 용어는 인간 세포에서는 전형적인 과정이 아닌 글리코실화를 부여하는 비-인간 세포에서 재조합적으로 제조된 이러한 항체도 포괄한다. 완전 인간 항체를 제조하는 방법은 당분야에서 공지되어 있다. 예를 들면, 인간 항-CCL20 항체는 시험관내 방법, 예컨대, 파지 디스플레이, 리보좀 디스플레이(CAT), 효모 디스플레이 등을 통해 확인될 수 있거나, 인간 B 세포 또는 인간 하이브리도마 세포로부터 제조될 수 있다. 대안적으로, 인간 항체는 그들의 게놈 내에 인간 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 좌위의 일부 또는 전부를 포함하는 임의의 많은 비-인간 형질전환 동물들을 CCL20 항원으로 면역화시킴으로써 제조될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 인간 면역글로불린 유전자를 포함하는 비-인간 동물은 인간 면역글로불린 "미니좌위"를 갖는 동물(예를 들면, 젠팜 인터네셔날 인코포레이티드(GenPharm International, Inc.))이다. 몇몇 실시양태에서, 제노마우스(XENOMOUSE)®(애브제닉스 인코포레이티드(Abgenix, Inc.), 미국 캘리포니아주 프레몬트 소재), HuMAb-마우스®(메다렉스 인코포레이티드(Medarex, Inc.)), 벨록이뮨(VelocImmune)® 마우스(레제네론 파마슈티칼스 인코포레이티드(Regeneron Pharmaaceuticals, Inc.)), 알리바맙(AlivaMab) 마우스(애블렉시스 엘엘씨(Ablexis, LLC)), KM™ 마우스(키린 파마 유에스에이 인코포레이티드(Kirin Pharma USA, Inc.)) 등을 사용하여 인간 항-CCL20 항체를 제조한다.
또한, 본 발명은 본 발명의 인간화된 항체, 또는 이의 경쇄 또는 중쇄; 마우스 단일클론 항체, 또는 이의 경쇄 또는 중쇄; 키메라 항체, 또는 이의 경쇄 또는 중쇄; 또는 임의의 상기 항체 또는 쇄의 항원 결합 부분을 코딩하는 서열을 포함하는 단리된 및/또는 재조합 핵산에 관한 것이다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 17 내지 32, 51 내지 56, 109, 111 및 113으로 구성된 군으로부터 선택된 핵산 서열을 제공한다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 핵산 분자는 고도로 엄격한 조건 하에서 혼성화하거나, 본원에서 언급된 핵산 서열들 중 하나 이상의 핵산 서열, 또는 임의의 제공된 VH 또는 VL 서열의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 핵산 서열을 포함한다.
본원에서 "단리된" 또는 "정제된" 핵산으로서 지칭된 핵산은 (예를 들면, 이것이 세포에 존재하거나 핵산들의 혼합물, 예컨대, 라이브러리에 존재할 때) 그의 기원 공급원의 게놈 DNA 또는 세포 RNA의 핵산으로부터 분리되어 있는 핵산이고, 본원에 기재된 방법 또는 다른 적합한 방법에 의해 수득된 핵산을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 단리된 핵산은 본질적으로 순수한 핵산, 화학적 합성에 의해 제조된 핵산, 생물학적 방법과 화학적 방법의 병용에 의해 제조된 핵산, 또는 단리된 재조합 핵산이다(예를 들면, 문헌(Daugherty et al., Nucleic Acids Res. 19(9):2471-2476 (1991)); 및 문헌(Lewis and Crowe, Gene 101:297-302 (1991)) 참조).
달리 특정되어 있지 않은 한, 뉴클레오티드 서열에 대한 언급은 그의 상보체를 포괄한다. 따라서, 특정 서열을 갖는 핵산에 대한 언급은 그의 상보적인 서열을 갖는 그의 상보적인 가닥을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 본원에서 언급된 용어 "폴리뉴클레오티드"는 길이 면에서 10개 이상의 염기를 갖는 (리보뉴클레오티드 또는 데옥시뉴클레오티드 유형의) 뉴클레오티드의 중합체 (가능하게는 단리된) 형태, 또는 어느 한 유형의 뉴클레오티드의 변경된 형태를 의미한다. 상기 용어는 단일 또는 이중 가닥 형태를 포함한다.
본원에서 "재조합" 핵산으로서 지칭된 핵산은 인공 재조합 방법, 예컨대, 중합효소 연쇄 반응(PCR) 및/또는 제한효소를 사용한 벡터 내로의 클로닝에 의존하는 절차에 의해 발생된 핵산을 포함하는, 재조합 DNA 방법에 의해 제조된 핵산이다. 몇몇 실시양태에서, 재조합 핵산은 세포의 천연 기작을 통해 일어나는 재조합 사건으로부터 발생되지만, 원하는 재조합 사건을 허용하고 가능하게 하도록 디자인된 핵산의 세포 내로의 도입 후에 선택된다.
또한, 본 발명은 보다 구체적으로 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화된 항체, 마우스 항체 또는 키메라 항체, 또는 상기 항체의 항원 결합 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 및/또는 재조합 핵산에 관한 것이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체는 본 발명의 마우스 항체; 비-인간 부분(들)이 뮤린 항-CCL20 단일클론 항체로부터 유도된 본 발명의 인간화된 항체; 또는 비-인간 부분(들)이 뮤린 항-CCL20 단일클론 항체로부터 유도된 본 발명의 키메라 항체이다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 핵산은 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화된 항체, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 마우스 항체, 및 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 키메라 항체를 제조하는 데에 사용된다. 예를 들면, 본 발명의 인간화된 항체, 마우스 항체 또는 키메라 항체를 코딩하는 하나의 핵산(예를 들면, DNA(예컨대, cDNA) 또는 RNA) 또는 하나 이상의 핵산들을 적합한 구축물(예를 들면, 재조합 벡터) 내로 도입하여 서열을 추가로 조작하거나 적합한 숙주 세포에서 코딩된 항체를 제조할 수 있다.
인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화된 항체, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 마우스 항체, 또는 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 키메라 항체의 발현에 적합한 구축물 또는 벡터도 제공된다. 숙주 세포에서 단일 카피 또는 다중 카피로 유지되거나 숙주 세포의 염색체(들) 내로 삽입되는 벡터를 포함하는 다양한 벡터들이 이용될 수 있다. 구축물 또는 벡터는 적합한 숙주 세포 내로 도입될 수 있고, 본 발명의 인간화된 항체, 마우스 항체 또는 키메라 항체를 발현하는 세포가 제조될 수 있고 배양물에서 유지될 수 있다. 단일 벡터 또는 다수의 벡터들이 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화된 항체, 마우스 항체 또는 키메라 항체의 발현을 위해 사용될 수 있다.
적합한 발현 벡터, 예를 들면, 포유동물 세포 발현 벡터는 하기 구성요소들 중 하나 이상의 구성요소를 포함하나 이들로 한정되지 않는 다수의 구성요소도 함유할 수 있다: 복제기점; 선택 마커 유전자; 하나 이상의 발현 조절 요소, 예컨대, 전사 조절 요소(예를 들면, 프로모터, 인핸서, 종결요소), 하나 이상의 번역 신호; 및/또는 막 표적화 또는 분비를 위한 ("신호 펩티드"를 코딩하는) 신호 서열 또는 리더 서열. 구축물 또는 벡터에서, 신호 서열은 상기 구축물 또는 벡터, 또는 다른 공급원에 의해 제공될 수 있다. 예를 들면, 전사 및/또는 번역 신호는 발현을 유도하는 데에 사용될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 적합한 숙주 세포에서 본 발명의 항체 또는 항체 쇄를 발현하기 위한 프로모터가 제공된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 프로모터는 항시적 프로모터이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 프로모터는 유도성 프로모터이다. 상기 프로모터는 코딩된 폴리펩티드의 발현을 유도하도록 항체 또는 항체 쇄, 또는 상기 항체 또는 쇄의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결될 수 있다. 원핵 숙주에 적합한 다양한 프로모터들(예를 들면, 이. 콜라이를 위한 lac, tac, T3, T7 프로모터), 및 진핵 숙주에 적합한 다양한 프로모터들(예를 들면, 효모 알코올 데하이드로게나제(ADH1), SV40, CMV)이 사용될 수 있다. 당업자는 본 발명의 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 발현하기에 적합한 프로모터를 선택할 수 있을 것이다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항체 쇄를 코딩하는 벡터는 이 벡터를 보유하는 숙주 세포의 선택을 위한 선택 마커를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 선택 마커는 원핵 세포에서 사용될 수 있는 항생제 또는 약물 내성을 부여하는 생성물을 코딩하는 유전자(예를 들면, β-락타마제 유전자(앰피실린 내성), Tet 유전자(테트라사이클린 내성) 등), 및 진핵 세포에서 사용될 수 있는 항생제 또는 약물 내성을 부여하는 생성물을 코딩하는 유전자(예를 들면, 네오마이신(G418 또는 제네티신), gpt(마이코페놀산), 앰피실린 또는 하이그로마이신 내성 유전자)이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 선택 마커는 다양한 숙주들에서 메토트렉세이트를 사용한 선택을 허용하는 디하이드로폴레이트 리덕타제이다. 몇몇 실시양태에서, 선택 마커는 예를 들면, 효모에서 사용될, 숙주의 영양요구성 마커를 코딩하는 유전자(예를 들면, LEU2, URA3, HIS3)이다. 몇몇 실시양태에서, 벡터는 바이러스(예를 들면, 바큘로바이러스) 또는 파지 벡터이다. 한 실시양태에서, 벡터는 숙주 세포의 게놈 내로 삽입될 수 있다(예를 들면, 레트로바이러스 벡터). 몇몇 실시양태에서, 벡터는 복제가능한 벡터이고 복제기점을 포함한다.
따라서, 본 발명은 본 발명의 인간화된 항체, 인간화된 경쇄, 인간화된 중쇄, 마우스 항체, 마우스 항체 경쇄, 마우스 항체 중쇄, 키메라 항체, 키메라 경쇄 또는 키메라 중쇄를 코딩하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 임의의 이들 항체 또는 이들의 쇄의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다. 본 발명의 핵산에 의해 코딩된 폴리펩티드 서열은 상기 설명 및 하기 실시예에 기재되어 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 핵산 또는 벡터는 본 발명의 중쇄(또는 이의 항원 결합 부분) 또는 경쇄(또는 이의 항원 결합 부분)를 코딩한다. 중쇄 코딩 핵산 및 경쇄 코딩 핵산 둘다, 또는 상기 중쇄 및 상기 경쇄의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산을 함유하는 숙주 세포를 이용하여 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체(또는 상기 항체의 항원 결합 부분)를 제조할 수 있다. 중쇄 코딩 핵산 및 경쇄 코딩 핵산은 분리된 발현 벡터 상에 배치될 수 있다. 이들은 동일한 또는 상이한 발현 조절 하에서 단일 발현 벡터 상에 배치될 수도 있다. 예를 들면, 미국 특허 제6,331,415호 및 제7,662,623호를 참조한다.
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제조하는 방법에 관한 것이다. 상기 항체 또는 부분은 예를 들면, 적합한 숙주 세포에서 상기 항체 또는 부분을 코딩하는 하나 이상의 재조합 핵산을 발현시킴으로써 제조될 수 있다. 상기 숙주 세포는 임의의 적합한 방법의 이용을 통해 제조될 수 있다. 예를 들면, 본원에 기재된 하나 이상의 발현 구축물은 적합한 숙주 세포 내로 도입될 수 있고, 발생된 세포는 상기 구축물(들) 또는 벡터(들)의 발현에 적합한 조건 하에서 유지될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 발생된 세포는 배양물, 동물 또는 식물에서 유지된다. 적합한 숙주 세포는 세균 세포, 예컨대, 이. 콜라이(E. coli)(예를 들면, 균주 DH5α™(인비트로겐(Invitrogen), 미국 캘리포니아주 칼스바드 소재), 바실러스 서브틸리스(B. subtilis) 및/또는 다른 적합한 세균을 포함하는 원핵 세포; 진핵 세포, 예컨대, 진균 또는 효모 세포(예를 들면, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 아스퍼길러스(Aspergillus) 종, 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 쉬조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)) 또는 다른 하등 진핵 세포; 및 고등 진핵생물의 세포, 예컨대, 곤충 세포(예를 들면, 드로소필라 슈네이더(Drosophila Schneider) S2 세포, Sf9 곤충 세포(WO 94/26087(O'Connor)), TN5B1-4(HIGH 5) 곤충 세포(인비트로겐), 포유동물 세포(예를 들면, COS 세포, 예컨대, COS-1(ATCC 수탁번호 CRL-1650) 및 COS-7(ATCC 수탁번호 CRL-1651), CHO(예를 들면, ATCC 수탁번호 CRL-9096), CHO DG44(Urlaub and Chasin., Proc. Natl. Acac. Sci. USA 77(7):4216-4220 (1980)), 293(ATCC 수탁번호 CRL-1573), HeLa(ATCC 수탁번호 CCL-2), CV1(ATCC 수탁번호 CCL-70), WOP(Dailey et al., J. Virol. 54:739-749 (1985)), 3T3, 293T(Pear et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:8392-8396 (1993)), NS0 세포, SP2/0 세포, HuT 78 세포 등), 또는 식물(예를 들면, 담배, 개구리밥(lemna)(좀개구리밥), 및 조류) 세포일 수 있다(예를 들면, 문헌(Ausubel et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons Inc. (1993)) 참조). 몇몇 실시양태에서, 숙주 세포는 다세포 유기체(예를 들면, 식물 또는 동물)의 일부가 아니다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 단리된 숙주 세포이거나 세포 배양물의 일부이다.
또한, 본 발명은 본 발명의 핵산 또는 벡터를 포함하는 세포에 관한 것이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 벡터는 발현 벡터이다. 몇몇 실시양태에서, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화된 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 및 경쇄, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 마우스 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 및 경쇄, 또는 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 키메라 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 하나 이상의 핵산, 또는 이러한 핵산(들)을 포함하는 하나 이상의 구축물은 선택된 숙주 세포에 적합한 방법에 의해 적합한 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 도입 방법은 예를 들면, 형질전환, 형질감염, 전기천공 또는 감염이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 핵산(들)은 하나 이상의 발현 조절 요소에 작동가능하게 연결된다. 일부 실시양태에서, 상기 핵산(들)은 벡터에 존재하거나, 세포 내의 과정에 의해 생성된 구축물에 존재하거나 숙주 세포 게놈 내로 삽입된다. 숙주 세포는 발현에 적합한 조건 하에서 유지될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 이들 조건은 유도제 또는 적합한 배지(예를 들면, 적절한 염, 성장 인자, 항생제, 영양 보충물 등으로 보충됨)의 존재를 포함하므로, 코딩된 폴리펩티드(들)가 제조된다. 이들 과정은 형질전환 동물 또는 식물(예를 들면, 담배)의 숙주 세포(예를 들면, 유선 세포)에서의 발현을 포괄한다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO 92/03918호 참조). 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 숙주 세포, 배양 배지 또는 유즙(milk)으로부터 단리된다.
본 발명은 본 발명의 항체 또는 부분(예를 들면, 인간화된 항체 또는 부분)이 융합 단백질의 N-말단 위치, C-말단 위치 또는 내부에서 또 다른 모이어티(예를 들면, 자연에서 발견되는 항체에서 존재하지 않는 모이어티)에 연결되어 있는 융합 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 융합 단백질은 항체 서열(들)을 코딩하는 핵산을 적합한 발현 벡터, 예컨대, pET 벡터(예를 들면, pET-15b, 노바겐(Novagen)), 파지 벡터(예를 들면, pCANTAB 5 E, 파마샤(Pharmacia)), 또는 다른 벡터(예를 들면, pRIT2T 단백질 A 융합 벡터, 파마샤) 내로 삽입함으로써 제조될 수 있다. 발생된 구축물은 발현에 적합한 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 발현된 융합 단백질은 적합한 친화성 매트릭스에 의해 세포 용해물로부터 단리되거나 정제된다(예를 들면, 문헌(Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., Eds., Vol. 2, Suppl. 26, pp. 16.4.1-16.7.8 (1991)) 참조).
본 발명은 본원에서 제공된 항체 또는 부분, 또는 이의 중쇄 및/또는 경쇄(예를 들면, 본 발명의 인간화된 항체, 인간화된 경쇄 또는 인간화된 중쇄, 마우스 항체, 마우스 경쇄 또는 마우스 중쇄, 키메라 항체, 또는 키메라 중쇄 또는 키메라 경쇄)를 코딩하는 재조합 핵산(들)을 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체 또는 이의 쇄의 항원 결합 부분을 코딩하는 재조합 핵산(들)을 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 몇몇 실시양태에서, 숙주 세포는 본원에서 언급된 본 발명의 재조합 벡터를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 재조합 벡터는 발현 벡터이다. 일부 실시양태에서, 상기 재조합 벡터는 포유동물 세포 발현 벡터이다.
또한, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 부분, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄를 제조하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 상기 항체 또는 부분, 또는 이들의 중쇄 및/또는 경쇄의 발현에 적합한 조건 하에서 본원에 기재된 본 발명의 숙주 세포를 유지하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 숙주 세포는 본 발명의 항체 또는 부분, 또는 이들의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 하나 이상의 단리된 핵산을 함유한다. 몇몇 실시양태에서, 숙주 세포는 기판 상에서 또는 현탁액 중에서 배양된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 방법은 상기 항체 또는 항체 쇄를 정제하거나 단리하는 단계를 추가로 포함한다.
추가로, 본 발명은 파지 디스플레이를 통해 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제조하는 방법에 관한 것이다. 몇몇 실시양태에서, CCL20 항원에 대한 천연 항체 파지 디스플레이 라이브러리가 선발된다. 몇몇 실시양태에서, 안내된 선택을 통한 항체의 제조 방법이 이용된다(예를 들면, 미국 특허공보 제2006-0251658 A1호 참조). 일부 실시양태에서, 예를 들면, 공지된 항-CCL20 항체의 고정된 중쇄(및/또는 경쇄) CDR3 영역을 중심으로 구축된 주문제작 라이브러리가 생성된다. 중쇄 및 경쇄의 CDR1 및 CDR2 영역은 천연 레퍼토리로부터 유래될 수 있다(Osburn et al., Methods 36:61-68 (2005)). 한 실시양태에서, 항-CCL20 scFv는 원하는 결합 성질을 갖는 마우스-인간 키메라 항체를 수득하는 데에 사용된 scFv 천연 항체 라이브러리로부터 발생된다. 이들 라이브러리는 원하는 결합 성질을 갖는 항체에 대해 스크리닝될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, scFv 파지 라이브러리가 사용된다. 일부 실시양태에서, 인간 CCL20을 인식하는 scFv는 본질적으로 문헌(Vaughan et al. Nature Biotech. 14:309-314 (1996))에 기재된 바와 같이 재조합 인간 CCL20에 대한 일련의 반복된 선택 주기 후 scFv 안내된 선택 라이브러리로부터 단리된다. 요약하건대, 상기 라이브러리와 함께 항온처리된 후, 상자성 비드에 미리 커플링되어 있는 고정된 항원 및 결합된 파지는 자기 분리에 의해 회수될 수 있지만, 비-결합된 파지는 세척된다. 그 다음, 결합된 파지는 문헌(Vaughan et al. (1996; 상기))에 기재된 바와 같이 레스큐(rescue)될 수 있고, 선택 과정이 반복된다.
특정 실시양태에서, 천연 인간 경쇄 가변 영역의 레퍼토리에 단일쇄 형식으로 융합된 마우스 항-CCL20 항체의 중쇄의 전체 가변 도메인으로 구성된 라이브러리가 구축된다. 선택 후, 마우스 중쇄 가변 영역에 상보적인 인간 경쇄 가변 영역이 확인된다. 그 다음, 천연 인간 CDR1 및 CDR2 영역, 및 마우스 항-CCL20 항체 중쇄 가변 도메인으로부터의 고정된 CDR3 영역으로 구성된 키메라 중쇄 가변 영역에 단일쇄 형식으로 융합된, 전술된 바와 같이 선택된 인간 경쇄 가변 영역의 레퍼토리로 구성된 라이브러리가 구축된다. CCL20 결합제에 대한 선택 후, 가장 우수한 결합 클론이 선택된다. 6개의 CDR 영역들 중 5개의 CDR 영역들은 기원이 인간일 수 있지만, 중쇄 가변 영역의 CDR3은 마우스 중쇄 가변 도메인의 원래의 CDR3과 동일할 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 제조자의 권장에 따라 DYNABEADS M-270 아민(다이날(Dynal))에 커플링된 CCL20을 사용하여 선택을 수행한다. 몇몇 실시양태에서, 바이오티닐화된 CCL20을 이용한 선택은 일차 아민 특이적 시약인 석신이미딜-6-(바이오틴아미도)헥사노에이트를 제조자의 지시(이지 링크 엔에이치에스 엘씨 바이오틴(EZ link NHS LC Biotin), 피어스(Pierce))에 따라 사용하여 준비할 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 선택으로부터의 결과물은 주변세포질 제제에 존재하는 scFv가 CCL20에의 결합에 대해 경쟁하는 능력을 측정하는 경쟁 분석에 기초한 고효율 스크린에서 주변세포질 제제로서 시험된다.
고효율 스크린에서 경쟁할 수 있는 샘플은 문헌(Vaughan et al. (1996; 상기)) 및 문헌(Osburn et al. (2005; 상기))에 기재된 바와 같이 DNA 서열분석으로 처리될 수 있다. 그 다음, 클론을 scFv 또는 IgG로서 발현하고 정제할 수 있고, 예를 들면, 분석, 예컨대, 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC) 분석 및 보체 의존적 세포독성(CDC) 분석을 이용하여 CCL20에 결합하는 그들의 능력, CCL20을 중화시키는 그들의 능력, 또는 이들의 조합된 능력을 평가할 수 있다. 그 다음, 정제된 scFv 제제를 국제 특허출원 공보 제WO 01/66754호의 실시예 3에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다. 정제된 scFv 제제의 단백질 농도를 BCA 방법(피어스)을 이용하여 측정하였다. 유사한 방법들을 이용하여 고정된 전장 항체 중쇄 또는 경쇄, 또는 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인의 최적 파트너(반대편 쇄)를 스크리닝할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 본원에 참고로 도입되는 국제 특허출원 공보 제WO 93/06213호에 기재된 에피토프 각인 방법 방법을 이용하여 CCL20에 대한 유사한 결합 활성을 갖는 중쇄 및 경쇄 서열을 선택하는 데에 먼저 이용된다. 일부 실시양태에서, 이 방법에서 사용된 항체 라이브러리는 모두 본원에 참고로 도입되는 국제 특허출원 공보 제WO 92/01047호, 문헌(McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)) 및 문헌(Griffiths et al., EMBO J. 12:725-734 (1993))에 기재된 바와 같이 제조되고 스크리닝된 scFv 라이브러리이다. 일부 실시양태에서, 인간 CCL20을 항원으로서 사용하여 scFv 항체 라이브러리를 스크리닝한다.
일단 VL 및 VH 도메인이 먼저 선택되면, "먼저 선택된 VL 및 VH 절편들의 상이한 쌍들이 CCL20 결합에 대해 스크리닝되는 "혼합 및 매치" 실험을 수행하여 바람직한 VL/VH 쌍 조합물을 선택할 수 있다. 추가로, 항체의 질을 더 개선하기 위해, 천연 면역 반응 동안 항체의 친화 성숙을 담당하는 생체내 체세포 돌연변이 과정과 유사한 과정에서 바람직한 VL/VH 쌍(들)의 VL 및 VH 절편들을 무작위적으로 돌연변이시킬 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 무작위 돌연변이는 VH 및/또는 VL의 CDR3 영역 내에서 일어난다. 일부 실시양태에서, 이 시험관내 친화 성숙은 예를 들면, 각각 VH CDR3 또는 VL CDR3에 상보적인 PCR 프라이머들을 사용하여 VH 및 VL 도메인을 증폭시킴으로써 달성되고, 이때 상기 프라이머는 생성된 PCR 생성물이 VH 및/또는 VL CDR3 영역 내로 도입된 무작위 돌연변이를 갖는 VH 및 VL 절편을 코딩하도록 일부 위치에서 4개의 뉴클레오티드 염기들의 무작위 혼합물과 "섞여" 있다. 이들 무작위로 돌연변이된 VH 및 VL 절편들은 CCL20에의 결합에 대해 재스크리닝될 수 있다.
재조합 항체 디스플레이 라이브러리로부터 본 발명의 항-CCL20 항체를 스크리닝하고 단리한 후, 선택된 항체를 코딩하는 핵산을 디스플레이 팩키지(예를 들면, 파지 게놈)로부터 회수할 수 있고 표준 재조합 DNA 기법으로 다른 발현 벡터 내로 서브클로닝할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 상기 핵산을 본원에 기재된 바와 같이 더 조작하여 본 발명의 다른 항체 형태를 생성한다. 일부 실시양태에서, 조합 라이브러리의 스크리닝에 의해 단리된 재조합 인간 항체를 발현하기 위해, 상기 항체를 코딩하는 DNA를 본원에 기재된 바와 같이 재조합 발현 벡터 내로 클로닝하고 포유동물 숙주 세포 내로 도입한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 CCL20 형질전환 마우스의 림프구를 인간 CCL20 형질전환 마우스와 동일한 품종(예를 들면, CD1)의 비-형질전환 마우스에게 투여하여 면역화된 비-형질전환 마우스를 제조하는 단계를 포함하는, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론 항체를 분비하는 하이브리도마를 제조하는 방법을 제공한다. 상기 면역화된 비-형질전환 마우스의 비장세포를 불멸화된 세포와 접촉시켜 융합된 세포를 제조하고, 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론 항체를 분비하는 하이브리도마가 제조되는 조건 하에서 상기 융합된 세포를 유지하여 인간 CCL20에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론 항체를 분비하는 하이브리도마를 제조한다.
본 발명은 본 발명의 항-CCL20 항체 및 이의 항원 결합 부분의 돌연변이된 형태를 제조하는 방법도 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 도메인 내에서 돌연변이된다. 일부 실시양태에서, 상기 돌연변이는 상기 항체 또는 부분의 하나 이상의 결합 성질을 변경시킨다. 특정 실시양태에서, 돌연변이는 상기 항-CCL20 항체 또는 부분의 KD를 증가시키거나 감소시키거나, koff를 증가시키거나 감소시키거나, 상기 항체 또는 부분의 결합 특이성을 변경시키기 위해 CDR 영역들 중 하나 이상의 CDR 영역에서 만들어진다. 부위-지정된 돌연변이유발 기법은 당분야에서 잘 공지되어 있다. 예를 들면, 상기 문헌(Sambrook et al.) 및 문헌(Ausubel et al.)을 참조한다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 본 발명의 단일클론 항체에서 생식세포주에 비해 변경되는 것으로 공지되어 있는 아미노산 잔기에서 만들어진다. 일부 실시양태에서, 상기 돌연변이는 가변 도메인의 CDR 영역 또는 골격 영역, 또는 불변 도메인에서 만들어진다. 특정 실시양태에서, 상기 돌연변이는 가변 도메인에서 만들어진다. 몇몇 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 본 발명의 항체 또는 부분의 가변 도메인의 CDR 영역 또는 골격 영역에서 생식세포주에 비해 변경되는 것으로 공지되어 있는 아미노산 잔기에서 만들어진다.
또 다른 실시양태에서, 골격 영역은 생성된 골격 영역(들)이 상응하는 생식세포주 유전자의 아미노산 서열을 갖도록 돌연변이된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이가 항-CCL20 항체 또는 부분의 반감기를 증가시키도록 골격 영역 또는 불변 도메인에서 만들어진다. 예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO 00/09560호를 참조한다. 일부 실시양태에서, 골격 영역 또는 불변 도메인 내의 돌연변이는 항체의 면역원성을 변경시키거나 또 다른 분자에의 공유 또는 비-공유 결합을 위한 부위를 제공하도록 만들어진다. 본 발명에 따라, 단일 항체 또는 부분은 가변 도메인의 CDR들 또는 골격 영역들 중 임의의 하나 이상에서 또는 불변 도메인에서 돌연변이를 가질 수 있다.
본 발명의 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 관심 있는 항체 중쇄 및 경쇄 서열에 대한 형질전환체인 포유동물 또는 식물의 발생 및 이들로부터 회수가능한 형태로의 항체의 제조를 통해 형질전환적으로 제조될 수도 있다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 또는 부분은 염소, 소 또는 다른 포유동물의 유즙에서 제조되고 이 유즙으로부터 회수된다. 예를 들면, 미국 특허 제5,827,690호, 제5,756,687호, 제5,750,172호 및 제5,741,957호를 참조한다. 몇몇 실시양태에서, 인간 항체 좌위를 포함하는 비-인간 형질전환 동물은 전술된 바와 같이 인간 CCL20 또는 이의 면역원성 부분으로 면역화된다. 식물에서 항체를 제조하는 방법은 예를 들면, 미국 특허 제6,046,037호 및 제5,959,177호에 기재되어 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항-CCL20 항체 또는 부분을 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자를 표준 형질전환 기법으로 동물 또는 식물 내로 도입함으로써 비-인간 형질전환 동물 또는 식물을 제조한다. 예를 들면, 상기 문헌(Hogan) 및 미국 특허 제6,417,429호를 참조한다. 일부 실시양태에서, 형질전환 동물의 제조에 이용되는 형질전환 세포는 배아 줄기세포, 체세포 또는 수정란일 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 비-인간 형질전환 동물 또는 식물은 키메라, 비-키메라 이형접합체 또는 비-키메라 동형접합체이다. 예를 들면, 문헌(Hogan et al., Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual 2nd ed., Cold Spring Harbor Press (1999)); 문헌(Jackson et al., Mouse Genetics and Transgenics: A Practical Approach, Oxford University Press (2000)); 및 문헌(Pinkert, Transgenic Animal Technology: A Laboratory Handbook, Academic Press (1999))을 참조한다. 몇몇 실시양태에서, 비-인간 형질전환 동물 또는 식물은 관심 있는 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 표적화 구축물에 의한 표적화된 파괴 및 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 형질전환 동물 또는 식물은 인간 CCL20에 특이적으로 결합하는 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하고 발현한다. 상기 항-CCL20 항체 또는 부분은 임의의 비-인간 형질전환 동물 또는 식물에서 만들어질 수 있다. 특정 실시양태에서, 비-인간 동물은 마우스, 래트, 양, 돼지, 염소, 소 또는 말이다. 비-인간 형질전환 동물은 혈액, 유즙, 소변, 타액, 눈물, 점액 및 다른 체액에서 코딩된 폴리펩티드를 발현할 수 있다.
본 발명의 항체 및 이의 항원 결합 부분은 예를 들면, CCR6+ 세포, 예컨대, 미성숙 수지상세포(DC), 이펙터/기억 T 세포 및 B 세포의 중화 CCL20-유도된 화학유인에 있어서 유용하다. 따라서, 상기 항체 및 부분은 다양한 질환 및 병태, 예컨대, 염증, 자가면역 질환 및 암의 치료에 있어서 유용할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분으로 치료될 수 있는 질환 및 병태의 예에는 그레이브병, 백반증, 갑상선기능항진증, 류마티스성 관절염, 건선, 아토피성 피부염, 접촉 피부염, 크론병, 염증 장 질환, B 세포 악성종양, 유방 선암종, 만성 간염, 접촉 피부염, 아교모세포종, 간세포암종, 자궁경부의 인간 유두종바이러스 감염, 균상식육종, 췌장 선암종, 치주 질환, 갑상선 유두암종, 수장족저농포증, 반점구진 발진과 관련된 병태, 수포성 표피박리증, 원형탈모증, 다발성 경화증, 다발근육염, 피부근육염, 베체트병, 급성 범 발진성 농포증, 혈관염, 소아 특발성 관절염, 사르코이드증, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 신장 동종이식 거부, 이식편 대 숙주 질환, 간 동종이식 거부, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 사구체신염, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 다발성 골수종 및 랑게르한스 세포 조직구증이 포함되나 이들로 한정되지 않는다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명은 임의의 CCR6 관련 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
따라서, 본 발명은 유효량의 본 발명의 항체 또는 부분을 염증, 자가면역 질환 또는 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하여 염증, 자가면역 질환 또는 암을 치료하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 상기 대상체는 자가면역 질환, 암 및/또는 염증을 갖고 있거나 가질 위험이 있는 인간 환자이다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 염증, 자가면역 질환 또는 암의 발병 또는 재발을 예방하기 위해 예방적으로 투여된다.
본 발명의 항체 및 이의 항원 결합 부분은 단독으로 또는 병용치료에서 또 다른 약제와 함께 개체(예를 들면, 인간)에게 투여될 수 있다. 상기 항체 또는 부분은 추가 약제의 투여 전에, 상기 추가 약제와의 혼합물로서, 상기 추가 약제와 별도로 동시에, 또는 상기 추가 약제의 투여 후에 투여될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 상기 추가 약제는 면역자극 사이토카인의 억제제(예를 들면, 항-TNF-α MAb), 면역 세포 제거제(예를 들면, 항-CD20 MAb), 보조 분자의 차단제(예를 들면, 아바타셉트), 류마티스성 질환의 질환 개선제(예를 들면, 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 메토트렉세이트, 레티노산 및 비타민 D3 유사체), 및 면역억제제(예를 들면, 칼시뉴린 억제제)를 포함하나 이들로 한정되지 않는 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 추가 약제는 스테로이드성 약제, 면역조절제, 소마토스타틴성 약제, 통상의 면역치료제, 사이토카인 또는 사이토카인 길항제, 및/또는 성장 인자 또는 성장 인자 길항제를 포함하나 이들로 한정되지 않는 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 치료는 표준 관리 암 치료, 예컨대, 화학치료, 수술 또는 방사선과 함께, 또는 또 다른 표적화된 치료, 예컨대, 항-VEGF 항체 치료와 함께 이용될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 항-CCL20 항체 치료는 예방 요법과 함께 이용될 수 있다. 한 실시양태에서, 합성 펩티드 미메틱(mimetic)이 본 발명의 항체와 함께 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 호르몬 치료가 본 발명의 항체 또는 부분과 함께 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 단독으로 또는 소염제와 함께 투여된다. 본 발명의 항체와 함께 투여될 수 있는 소염제는 코르티코스테로이드(예를 들면, 베타메타손, 부데소나이드, 코르티손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손 및 트리암시놀론), 비-스테로이드성 소염 약물(예를 들면, 발살라자이드, 셀레콕시브, 디클로페낙, 디플루니살, 에토돌락, 페노프로펜, 플록타페닌, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 메클로페나메이트, 메페남산, 멜록시캄, 나부메톤, 나프록센, 올살라진, 옥사프로진, 페닐부타존, 피록시캄, 살살레이트, 설린닥, 테녹시캄, 티아프로펜산 및 톨메틴)뿐만 아니라, 아세트아미노펜, 항히스타민, 아미노아릴카르복실산 유도체, 아릴아세트산 유도체, 아릴부티르산 유도체, 아릴카르복실산, 아릴프로피온산 유도체, 피라졸, 피라졸론, 살리실산 유도체(예를 들면, 설파살라존 및 메살라민), 티아진카르복스아미드, e-아세트아미도카프로산, S-아데노실메티오닌, 3-아미노-4-하이드록시부티르산, 아믹세트린, 벤다작, 벤지다민, 부콜롬, 디펜피라미드, 디타졸, 에모르파존, 구아이아줄렌, 나부메톤, 니메설라이드, 오르고테인, 옥사세프롤, 파라닐린, 페리속살, 피폭심, 프로쿠아존, 프록사졸 및 테니답을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
본 발명의 항체와 함께 투여될 수 있는 통상의 비-특이적 면역억제제는 스테로이드, 사이클로스포린, 사이클로스포린 유사체, 사이클로포스프아미드, 메틸프레드니손, 프레드니손, 아자티오프린, FK-506, 15-데옥시스퍼구알린, 나탈리주맙, 및 반응하는 T 세포의 기능을 억제함으로써 작용하는 다른 면역억제제를 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 면역억제제와 함께 투여된다. 본 발명의 항체와 함께 투여될 수 있는 면역억제제 제제는 오르토클론(ORTHOCLONE)™(OKT3), 산디뮨(SANDIMMUNE)™/네오랄(NEORAL)™/상디아(SANGDYA)™(사이클로스포린), 프로그라프(PROGRAF)™(타크롤리무스), 셀셉트(CELLCEPT)™(마이코페놀레이트), 아자티오프린, 글루코르티코스테로이드, 아보넥스(AVONEX)™(인터페론-베타 1A) 및 라파뮨(RAPAMUNE)™(시롤리무스)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 한 실시양태에서, 면역억제제는 장기 또는 골수 이식의 거부를 예방하기 위해 사용될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 화학치료제와 함께 투여된다. 본 발명의 항체와 함께 투여될 수 있는 화학치료제는 항생제 유도체(예를 들면, 독소루비신, 블레오마이신, 다우노루비신 및 닥티노마이신); 항에스트로겐(예를 들면, 타목시펜); 항대사물질(예를 들면, 플루오로우라실, 5-FU, 플록스유리딘, 인터페론 α-2b, 글루탐산, 플리카마이신, 머캡토푸린 및 6-티오구아닌); 세포독성제(예를 들면, 카르무스틴, BCNU, 로무스틴, CCNU, 사이토신 아라비노사이드, 사이클로포스프아미드, 에스트라무스틴, 하이드록시우레아, 프로카르바진, 미토마이신, 부설판, 시스플라틴 및 빈크리스틴 설페이트); 호르몬(예를 들면, 메드록시프로게스테론, 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨, 에티닐 에스타라디올, 에스트라디올, 에피네프린, 메게스트롤 아세테이트, 메틸테스토스테론, 디에틸스틸베스트롤 디포스페이트, 클로로트리아니센 및 테스토락톤); 질소 머스타드 유도체(예를 들면, 메팔렌, 클로람부실, 메클로르에타민(질소 머스타드) 및 티오테파); 스테로이드 및 조합물(예를 들면, 베타메타손 나트륨 포스페이트); 및 기타(예를 들면, 디카르바진, 아스파라기나제, 미토탄, 빈크리스틴 설페이트, 빈블라스틴 설페이트, 리툭시맙 및 에토포사이드)를 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 TNF 길항제와 함께 투여된다. 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분과 함께 투여될 수 있는 TNF 길항제는 인플릭시맙(레미케이드(REMICADE)™), 아달리무맙(휴미라(HUMIRA)™), 세르톨리주맙 페골(심지아(CIMZIA)™), 골리무맙(심포니(SIMPONI)™), 에타네르셉트(엔브렐(ENBREL)™), 잔틴 유도체(예를 들면, 펜톡시필린) 및 부프로피온(웰버틴(WELLBURTIN)™, 자이반(ZYBAN)™)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 단독으로 또는 하나 이상의 정맥내 면역글로불린 제제와 함께 투여된다. 본 발명의 항체 또는 부분과 함께 투여될 수 있는 정맥내 면역글로불린 제제는 감마르(GAMMAR)™, 이비감(IVEEGAM)™, 산도글로불린(SANDOGLOBULIN)™, 감마가드(GAMMAGARD) S/D™ 및 가미뮨(GAMIMUNE)™을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 이식 치료(예를 들면, 골수 이식)에서 정맥내 면역글로불린 제제와 함께 투여된다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 사이토카인 또는 사이토카인 길항제와 함께 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, 항-CD40, CD40L, IFN-γ 및 TNF-α, 또는 이들의 임의의 길항제를 포함하나 이들로 한정되지 않는 임의의 사이토카인 또는 사이토카인 길항제와 함께 투여될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20 및 IL-21, 또는 이들의 길항제를 포함하나 이들로 한정되지 않은 임의의 인터류킨 또는 인터류킨 길항제와 함께 투여될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 하나 이상의 케모카인 또는 케모카인 길항제와 함께 투여된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 γ-인터페론 유도성 단백질-10(γIP-10), 인터류킨-8(IL-8), 혈소판 인자-4(PF4), 호중구 활성화 단백질(NAP-2), GRO-α, GRO-β, GRO-γ, 호중구 활성화 펩티드(ENA-78), 과립구 화학유인제 단백질-2(GCP-2) 및 간질 세포로부터 유래된 인자-1(SDF-1 또는 전-B 세포 자극 인자(PBSF))로 구성된 군으로부터 선택된 α(CxC) 케모카인; 및/또는 RANTES(regulated on activation, normal T expressed and secreted), 대식세포 염증 단백질-1α(MIP-1α), 대식세포 염증 단백질-1β(MIP-1β), 단핵세포 화학주성 단백질-1(MCP-1), 단핵세포 화학주성 단백질-2(MCP-2), 단핵세포 화학주성 단백질-3(MCP-3), 단핵세포 화학주성 단백질-4(MCP-4), 대식세포 염증 단백질-1γ(MIP-1γ), 대식세포 염증 단백질-3α(MIP-3α), 대식세포 염증 단백질-3β(MIP-3β), 대식세포 염증 단백질-4(MIP-4/DC-CK-1/PARC), 에오탁신, 엑소더스 및 I-309로 구성된 군으로부터 선택된 β(CC) 케모카인; 및/또는 γ(C) 케모카인, 림포탁틴; 또는 이들의 임의의 길항제와 함께 투여된다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 케모카인 β-8, 케모카인 β-1 및/또는 대식세포 염증 단백질-4, 또는 이들의 임의의 길항제와 함게 투여된다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 케모카인 β-8 또는 이의 길항제와 함께 투여된다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 IL-4 길항제와 함께 투여된다. 본 발명의 항체 및 항체 조성물과 함께 투여될 수 있는 IL-4 길항제는 가용성 IL-4 수용체 폴리펩티드, 가용성 IL-4 수용체 폴리펩티드의 다량체 형태, IL-4에 의해 발생된 생물학적 신호를 형질도입하지 않으면서 IL-4 수용체에 결합하는 항-IL-4 수용체 항체, 하나 이상의 IL-4 수용체와 IL-4의 결합을 차단하는 항-IL-4 항체, 및 IL-4 수용체에 결합하되 IL-4에 의해 발생된 생물학적 신호를 형질도입하지 않는 IL-4의 뮤테인을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 바람직하게는, 본 방법에 따라 사용되는 항-IL4 항체는 단일클론 항체이고, 이의 항원 결합 부분도 사용될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 TNF 패밀리의 구성원 또는 이의 길항제와 함께 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분은 가용성 형태의 TNF-α, 림포톡신-α(TNF-β로서도 공지되어 있는 LT-α), (복합체 이종삼량체 LT-α2-β에서 발견되는) LT-β, OPGL, FasL, CD27L, CD30L, CD40L, 4-1BBL, DcR3, OX40L, TNF-γ(국제 특허출원 공보 제WO 96/14328호), AIM-I(국제 특허출원 공보 제WO 97/33899호), 엔도카인-α(국제 특허출원 공보 제WO 98/07880호), OPG, 뉴트로카인-α(국제 특허출원 공보 제WO 98/18921호), OX40, 신경 성장 인자(NGF), 가용성 형태의 Fas, CD30, CD27, CD40 4-IBB, TR2(국제 특허출원 공보 제WO 96/34095호), DR3(국제 특허출원 공보 제WO 97/33904호), DR4(국제 특허출원 공보 제WO 98/32856호), TR5(국제 특허출원 공보 제WO 98/30693호), TR6(국제 특허출원 공보 제WO 98/30694호), TR7(국제 특허출원 공보 제WO 98/41629호), TRANK, TR9(국제 특허출원 공보 제WO 98/56892호), TR10(국제 특허출원 공보 제WO 98/54202호), 312C2(국제 특허출원 공보 제WO 98/06842호), TR12, 및 가용성 형태 CD154, CD70 및 CD153; 또는 이들의 임의의 길항제를 포함하나 이들로 한정되지 않는 약제와 함께 투여된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료 유효량"은 치료될 장애의 증상들 중 하나 이상의 증상을 어느 정도까지 경감시키거나 예방할 투여된 치료제의 양을 지칭한다. 질환의 치료를 위한 항-CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 유효량은 치료된 대상체가 하나 이상의 원하는 임상 종점에 도달하는 것을 돕는 양이다.
몇몇 실시양태에서, 면역원성을 최소화하기 위해, 인간화된 항체 또는 부분이 본 발명의 치료 방법 및 조성물에서 인간 환자를 치료하는 데에 사용된다. 몇몇 실시양태에서, 반복된 투여가 필요하지 않은 경우, 본 발명의 마우스 또는 키메라 항체 또는 부분을 인간 환자에게 투여하는 것이 적절할 수도 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 예를 들면, 면역자극 사이토카인의 억제제(예를 들면, 항-TNF-α MAb), 면역 세포 제거제(예를 들면, 항-CD20 MAb), 및/또는 보조 분자의 차단제(예를 들면, 아바타셉트)로 이전에 치료받은 개체를 치료하는 데에 사용될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 이들 다른 치료들에 대한 일차 비-반응 또는 반응 속도의 점진적인 감소를 발생시킨 환자를 치료하는 데에 사용된다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 건강 관리 제공자에 의해 적절한 것으로 간주되는 임의의 시점에서 단회 유닛 투여량 또는 다회 투여량으로 투여될 수 있다. 투여량은 당분야에서 공지되어 있는 방법에 의해 결정될 수 있고 예를 들면, 개체의 연령, 민감성, 내약성 및 전체적인 건강에 의존할 수 있다. 비경구(예를 들면, 정맥내, 동맥내, 근육내, 경막내, 복강내, 피하 주사), 경구(예를 들면, 식이), 국소, 국부, 흡입(예를 들면, 기관지내, 비강내 또는 경구 흡입, 비강내 적하), 또는 직장을 포함하나 반드시 이들로 한정되지 않는, 당분야에서 허용되는 임의의 투여 방법이 치료될 질환 또는 병태에 따라 본 발명의 항체 또는 부분에 적합하게 이용될 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 비경구 투여된다.
제제는 선택된 투여 경로에 따라 달라질 것이다(예를 들면, 용액, 유화액). 투여될 항체 또는 부분을 포함하는 적절한 조성물은 생리학적으로 허용가능한 비히클 또는 담체에서 제조될 수 있다. 상기 조성물은 다회 투여량을 포함할 수 있거나 단회 유닛 투여량 조성물일 수 있다. 용액 또는 유화액의 경우, 적합한 담체는 예를 들면, 식염수 및 완충된 매질을 포함하는 수성 또는 알코올성/수성 용액, 유화액 또는 현탁액을 포함한다. 비경구 비히클은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 젖산 첨가된 링거 또는 고정유를 포함할 수 있다. 정맥내 비히클은 다양한 첨가제, 방부제, 또는 유체, 영양분 또는 전해질 보충제를 포함할 수 있다(일반적으로, 문헌(Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, Mack Publishing Co., PA, 1985) 참조). 흡입을 위한 경우, 화합물을 가용화시키고 투여에 적합한 분배기(예를 들면, 분사기, 분무기 또는 가압된 에어로졸 분배기) 내에 적재할 수 있다.
투약 요법은 최적 원하는 반응을 제공하도록 조절될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단회 볼루스가 투여될 수 있거나, 여러 분할된 투여량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나, 투여량이 치료 상황의 긴급성에 의해 표시되는 바와 같이 비례적으로 감소될 수 있거나 증가될 수 있다. 투여의 용이함 및 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 유닛 제형으로 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용된 바와 같이, 유닛 제형은 치료될 환자/대상체에 대한 단위 투여량으로서 맞추어진 물리적으로 이산된 유닛을 지칭하고, 각각의 유닛은 요구되는 약학 담체와 함께 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 예정된 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 유닛 제형에 대한 요건은 일반적으로 기재되어 있고 (a) 치료제의 독특한 특징 및 달성될 구체적인 치료 또는 예방 효과, 및 (b) 조제 분야에서 내재하는 한계점, 예컨대, 개체의 민감성을 치료하기 위한 활성 화합물에 직접적으로 의존한다.
따라서, 당업자는 본원에서 제공된 개시내용에 기초하여 투여량 및 투약 요법이 치료 분야에서 잘 공지되어 있는 방법에 따라 조절된다는 것을 인식할 것이다. 즉, 최대 내약 투여량이 용이하게 확립될 수 있고, 환자에게 검출가능한 치료 이점을 제공하는 유효량도 각각의 약제를 투여하여 환자에게 검출가능한 치료 이점을 제공하기 위한 일시적 요건일 수 있기 때문에 결정될 수 있다. 따라서, 일정 투여량 및 투여 요법이 본원에 예시되어 있지만, 이들 예는 본 발명의 실시에 있어서 환자에게 제공될 수 있는 투여량 및 투여 요법을 어떠한 방식으로든 한정하지 않는다.
투여량 값은 완화될 병태의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있고 단회 또는 다회 투여량을 포함할 수 있다는 것이 인식되어야 한다. 임의의 특정 대상체에 대해 특정 투약 요법이 개체 필요성, 및 조성물을 투여하거나 조성물의 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간에 걸쳐 조절되어야 하고, 본원에 기재된 투여량 범위가 단지 예시적이고 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 한정하기 위한 것이 아니라는 것도 이해되어야 한다. 추가로, 본 발명의 조성물을 사용한 투약 요법은 질환의 유형, 환자의 연령, 체중, 성별 및 의학적 상태, 병태의 중증도, 투여 경로 및 사용되는 구체적인 항체를 포함하는 다양한 인자들에 기초할 수 있다. 따라서, 투약 요법은 광범위하게 달라질 수 있지만 표준 방법의 이용을 통해 관용적으로 결정될 수 있다. 예를 들면, 투여랑은 임상 효과, 예컨대, 독성 효과 및/또는 실험 값을 포함할 수 있는 약동학 또는 약력학 파라미터에 기초하여 조절될 수 있다. 따라서, 본 발명은 당업자에 의해 결정된 환자내 투여량 상승을 포괄한다. 적절한 투여량 및 요법을 결정하는 방법은 관련 분야에서 잘 공지되어 있고 일단 본원에 개시된 교시가 제공되면 당업자에 의해 포괄되는 것으로 이해될 것이다.
몇몇 실시양태에서, 인간 대상체에게 투여하기 위해, 본 발명의 항체 또는 항체 부분의 총 매월 투여량은 물론 투여 방식에 따라 환자 당 0.5 내지 1200 mg의 범위 내에 있다. 일부 실시양태에서, 정맥내 매월 투여량은 약 1 내지 1000 mg/환자를 필요로 한다. 총 매월 투여량은 단회 또는 분할 투여량으로 투여될 수 있고 의사의 재량에 따라 본원에서 제공된 전형적인 범위를 벗어날 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항체 부분의 치료 또는 예방 유효량에 대한 범위는 1 내지 1000 mg/kg/환자/월이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항체 부분은 약 1 내지 200 또는 1 내지 150 mg/환자/월의 양으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 매달 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 주사에 의해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mg/kg/환자의 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 상기 항체 또는 부분은 매달 1 또는 2회 주사에 의해 1 내지 5 mg/kg/환자의 양으로 투여된다.
또한, 본 발명의 항체 및 이의 항원 결합 부분은 연구 및 진단에서 적용되는 다양한 과정에서 유용하다. 몇몇 실시양태에서, 상기 항체 및 부분은 (예를 들면, 친화성 정제 또는 다른 적합한 방법, 예컨대, 유세포분석(예를 들면, 현탁액 중의 세포, 예컨대, 림프구의 경우)에 의한) 인간 CCL20 또는 이의 변이체의 검출, 단리 및/또는 정제, 및 인간 CCL20 구조(예를 들면, 입체구조) 및 기능의 연구에 사용된다. 항체의 면역원성이 문제가 되지 않는 시험관내 적용의 경우, 본 발명의 마우스 및 키메라 항체, 및 이들의 항원 결합 부분이 인간화된 항체와 더불어 유용할 것이다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 진단 적용(예를 들면, 시험관내, 생체외)에서 사용될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명의 인간화된 항체 또는 부분은 샘플에서 인간 CCL20의 수준을 검출하고/하거나 측정하는 데에 사용된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 예를 들면, 인간 CCL20을 발현하는 세포 또는 조직, 및/또는 인간 CCL20을 보유하는 체액, 예컨대, 염증 삼출물, 혈액, 혈청 및/또는 장액을 포함한다. 샘플은 개체로부터 수득될 수 있고, 본원에 기재된 항체 또는 부분은 방법, 예컨대, 유세포분석(예를 들면, 현탁액 중의 세포, 예컨대, 림프구의 경우), 효소-연결된 면역흡착 분석(ELISA)(화학발광 분석을 포함함), 방사면역분석 및 면역조직학을 포함하는, 인간 CCL20 발현의 검출 및/또는 측정에 적합한 면역학적 방법에서 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 샘플에서 인간 CCL20을 검출하는 방법은 본 발명의 항체 또는 부분과 인간 CCL20의 특이적 결합에 적합한 조건 하에서 상기 샘플을 상기 항체 또는 부분과 접촉시키는 단계 및 형성된 항-CCL20 복합체를 검출하는 단계를 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 부분은 인간 CCL20 반응성 및/또는 발현에 대해 (예를 들면, 인간으로부터의) 정상 대 염증 조직을 (예를 들면, 면역조직학적으로) 분석하여 (예를 들면, 영향받은 조직에서) 인간 CCL20의 증가된 발현과 하기 장애들(그러나, 이들로 한정되지 않음)로부터 선택된 하나 이상의 장애 사이의 관련성을 검출하는 데에 사용될 수 있다: 그레이브병, 백반증, 갑상선기능항진증, 류마티스성 관절염, 건선, 아토피성 피부염, 접촉 피부염, 크론병, 염증 장 질환, B 세포 악성종양, 유방 선암종, 만성 간염, 접촉 피부염, 아교모세포종, 간세포암종, 자궁경부의 인간 유두종바이러스 감염, 균상식육종, 췌장 선암종, 치주 질환, 갑상선 유두암종, 수장족저농포증, 반점구진 발진과 관련된 병태, 수포성 표피박리증, 원형탈모증, 다발성 경화증, 다발근육염, 피부근육염, 베체트병, 급성 범 발진성 농포증, 혈관염, 소아 특발성 관절염, 사르코이드증, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 신장 동종이식 거부, 이식편 대 숙주 질환, 간 동종이식 거부, 만성 폐쇄성 폐 질환, 낭성 섬유증, 사구체신염, 호흡기 세포융합 바이러스 감염, 다발성 골수종, 랑게르한스 세포 조직구증, 또는 다른 병태. 따라서, 본 발명의 항체는 정상 및 염증 조직에서 인간 CCL20의 존재를 평가하는 면역학적 방법을 가능하게 하고, 이 방법을 통해 질환, 예를 들면, 염증 및/또는 면역 질환의 치료에 있어서 질환의 존재, 질환 경과 및/또는 항-인간 CCL20 치료의 효능이 평가될 수 있다.
달리 표시되어 있지 않은 한, 본 발명의 방법 및 기법은 당분야에서 잘 공지되어 있고 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되어 있고 논의되어 있는 다양한 일반적 참고문헌들 및 보다 구체적인 참고문헌들에 기재된 통상적인 방법에 따라 일반적으로 수행된다. 예를 들면, 문헌(Sambrook J. & Russell D. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2000)); 문헌(Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, John & Sons, Inc. (2002)); 문헌(Harlow and Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1998)); 및 문헌(Coligan et al., Short Protocols in Protein Science, Wiley, John & Sons, Inc. (2003))을 참조한다. 효소적 반응 및 정제 기법은 당분야에서 통상적으로 달성된 바와 같이 또는 본원에 기재된 바와 같이 제조자의 설명서에 따라 수행된다. 본원에 기재된 분석화학, 합성 유기화학 및 의약품 화학과 함께 사용되는 명명법, 및 이들 화학의 실험 절차 및 기법은 당분야에서 잘 공지되어 있고 통상적으로 사용되는 명명법, 및 실험 절차 및 기법이다.
달리 정의되어 있지 않은 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어들 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 방법 및 재료와 유사하거나 동등한 방법 및 재료도 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 예시적 방법 및 재료가 이하에 기재된다. 본원에서 언급된 모든 공개문헌들 및 다른 참고문헌들은 전체적으로 참고로 도입된다. 모순이 있는 경우, 정의를 포함하는 본 명세서가 우선할 것이다. 다수의 문헌들이 본원에서 인용되어 있지만, 이 인용은 이들 문헌들 중 어떠한 문헌도 당분야에서 통상의 일반적인 지식의 일부를 형성한다는 것을 인정하는 것이 아니다. 본 명세서 및 특허청구범위 전체에서, 용어 "포함한다", 또는 이의 어미변화, 예컨대, "포함하고" 또는 "포함하는"은 언급된 정수 또는 정수 군의 포함을 함축하지만 임의의 다른 정수 또는 정수 군을 배제하지 않는 것으로 이해될 것이다. 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시하기 위한 것이고 한정하기 위한 것이 아니다.
본 발명이 더 잘 이해될 수 있도록 하기 실시예가 기재되어 있다. 이들 실시예는 단지 예시를 위한 것이고 어떠한 방식으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것으로서 해석되어서는 안 된다.
실시예 1: 자가면역/염증 장애에서 CCL20의 관여
자가면역 및 염증 병태에 있어서 CCL20의 관여에 대한 증거를 수득하기 위해, 본 발명자들은 II형 콜라겐-유도된 관절염(CIA) 마우스 류마티스성 관절염(RA) 모델에서 CCL20 수용체 CCR6을 넉아웃시킨 효과를 연구하였다. CCR6 야생형 마우스, CCR6+/-(이형접합) 마우스 및 CCR6-/-(동형접합) 넉아웃 마우스(각각 n=10)를 완전 프로인트 항원보강제(콘드렉스(Chondrex), #7001)에 유화된 소 II형 콜라겐(150 ㎍/마우스)으로 꼬리의 기저부에서 면역화시켰다. 3주 후, 불완전 항원보강제 중의 동일한 양의 소 II형 콜라겐 유화액의 부스터 주사를 꼬리의 기저부에서 투여하였다. 본 발명자들은 문헌(Griswold et al., Arthritis & Rheumatism 31(11):1406-1412 (1988))에 기재된 바와 같이 각각의 마우스의 발에서 관절염 증상의 중증도를 등급화하였다. 요약하건대, 본 발명자들은 팔꿈치 또는 무릎으로부터 멀리 위치한 사지의 관절염 병소를 관여된 관절의 수, 및 홍반 및 종창의 정도에 기초하여 0 내지 4의 등급으로 등급화하였다. 관절염 점수는 각각의 동물에 대한 모든 4개 발의 점수의 합계로서 계산되었다. CCR6 야생형 동물은 관절염을 발생시킨 반면, CCR6-/- 동물은 이 질환에 대한 강한 내성을 보였다(도 1). 흥미롭게도, CCR6+/- 동물도 일정 수준의 내성을 나타내었는데, 이것은 CCL20 기능의 전체 제거가 관절염 표현형을 방지하는 데에 요구되지 않는다는 것을 암시한다.
추가로, 본 발명자들은 CD3 양성 T 세포 또는 F4/80 양성 대식세포의 존재에 대해 마우스의 뒷발을 면역조직화학적으로 분석하였다. 43일째 날, 마우스를 포획하고, 그들의 뒷발을 포르말린으로 고정시켰다. 그 다음, 상기 뒷발을 절편으로 절단하여 슬라이드 상에 배치하였다. 발 샘플의 탈석회화 후, 상기 슬라이드를 항-CD3(#N1580, 다코(DAKO)) 및 F4/80 항체(클론 CI:A3-1, AbD 세로텍(Serotec))로 면역조직화학적으로 염색하였다. 상기 샘플을 아페리오(Aperio) 기계(아페리오 테크놀로지스(Aperio Technologies))로 스캐닝함으로써 2명의 독립적인 관찰자가 염색의 강도를 점수화하였다. 점수화 등급은 다음과 같았다: 0, 정상; 1, 발 전체에서의 약한 염색 또는 한 발가락에서의 강한 염색; 2, 다수의 발가락에서의 중간 염색; 3, 다수의 발가락에서의 강한 염색 또는 전체에 걸친 중간 염색; 4, 모든 발가락들 및 발 전체에 걸친 강한 염색. CIA-유도된 병소를 침윤하는 T 세포(도 2) 및 대식세포(도 3)의 수는 CCR6+/- 마우스 및 CCR6-/- 마우스 둘다에서 강하게 감소되었다.
본 발명자들은 디니트로플루오로벤젠(DNFB)-유도된 알레르기성 접촉 피부염 마우스 모델에서 CCR6을 넉아웃시킨 효과도 연구하였다. (4:1 아세톤:올리브유 중의) 25 ㎕의 0.4% DNFB 용액을 면도된 복부 상에 연속 2일(0일째 날 및 1일째 날) 동안 브러싱함으로써 각각 6마리의 마우스들로 구성된 2개의 군(CCR6에 대한 야생형 마우스의 한 군 및 CCR6 결핍에 대한 한 군)을 감작하였다. 5일째 날, (4:1 아세톤:올리브유 중의) 20 ㎕의 0.1% DNFB를 한 귀의 한쪽 면에 도포함으로써 마우스를 다시 챌린징하였다. DNFB 챌린지 전 및 5일째 날 마지막 챌린지로부터 24시간 후, 두께 게이지를 이용하여 귀 두께를 홍반의 표시자로서 측정하였다. CCR6 결핍 마우스는 DNFB를 사용한 처리 후 증가된 귀 두께를 거의 나타내지 않았는데, 이것은 DNFB-유도된 접촉 과민증에 대한 내성을 암시한다(도 4).
이들 데이터는 자가면역/염증 장애에 있어서 CCR6 및 CCL20에 대한 역할을 뒷받침한다.
실시예 2: 햄스터 항-마우스 CCL20 2F5-5 MAb에 의한 CCL20-유도된 화학주성의 억제
잠재적인 치료 표적으로서의 CCL20의 역할을 더 조사하기 위해, 본 발명자들은 햄스터 항-마우스 CCL20 항체(2F5-5)를 사용하여 실험을 수행하였다. 본 발명자들은 먼저 마우스, 인간 및 레서스 CCL20에 결합하는 2F5-5 MAb의 능력을 특징규명하였다. 각각의 종의 가용성 CCL20-분비된 알칼리성 포스파타제(SEAP) 항원을 다음과 같이 준비하였다. 인간, 사이노몰거스 원숭이, 레서스 원숭이, 래트 및 마우스의 CCL20을 코딩하는 cDNA를 증폭시켰고, SEAP cDNA를 함유하고 그의 SalI 부위가 결실되어 있는 pcDNA3.1(+) dSalI SEAP 벡터(인비트로겐으로부터 구입된 pcDNA 3.1(+); pSEAP-인핸서 벡터로부터 유도된 SEAP cDNA, 클론텍(Clontech)) 내로 서브클로닝하였다. 이 발현 벡터들을 인간 배아 신장세포주 HEK293EBNA(HEK293E, 인비트로겐) 내로 형질감염시켰다. HEK293E 세포는 형질감염 전날 10% 태아소 혈청으로 보충된 DMEM(인비트로겐)으로 접종되었다. 형질감염 당일, 배양 배지를 OPTI-MEM II 혈청 무함유 배지(인비트로겐)로 교체하였다. 제조자의 프로토콜에 따라 TransIT LT1(타카라 바이오 인코포레이티드(TAKARA Bio Inc.), 일본 시가 소재)을 사용하여 발현 벡터를 형질감염시켰다. 5% CO2 및 37℃에서 3일 동안 항온처리한 후, 배양물 상청액을 수거하였다. 그레이트(Great) EscAPe SEAP 화학발광 키트 2.0(클론텍)을 사용하여 각각의 배양물 중의 CCL20-SEAP의 농도를 측정하였다.
그 다음, 본 발명자들은 마우스, 인간, 레서스 및 사이노몰거스 CCL20-SEAP 항원과 2F5-5 MAb의 결합을 측정하기 위해 표면 플라스몬 공명(비아코어™) 결합 연구를 수행하였다. 표준 NHS/EDC 아민 커플링 절차를 이용하여 항-SEAP(단일클론 항-마우스 태반 알칼리성 포스파타제, 써모 사이언티픽(Thermo Scientific), 카달로그 번호 MAI-19354, Lot # KL12748M)를 CM5 센서 칩(지이 헬쓰케어) 상에 고정시켰다. SEAP-태그부착된(tagged) 마우스 CCL20(상청액 중의 100 nM, ID735, Lot # 091130)을, 0.005 % Tween-20을 함유하는 TBS-P로 5 nM까지 희석하고 상기 CM5 센서 칩 상에서 포획하였다. TBS-P 중의 햄스터 항-마우스 CCL20(2F5-5, Lot # 060215, 2 mg/㎖)의 0.2 nM 내지 80 nM 희석물을 30 ㎕/분의 유속으로 상기 센서 칩 상에서 주입하였다. 햄스터 항-마우스 CCL20과 마우스 CCL20의 결합 및 해리를 각각 4분 및 16분 동안 모니터링하였다. 주입 사이에 10 mM 글라이신(pH 2.25)을 사용하여 상기 칩 표면을 재생시켰다. 햄스터 항-마우스 CCL20 주입을, 포획된 마우스 CCL20을 갖지 않는 기준 셀 및 포획된 마우스 CCL20 상에서의 TBS-P 주입으로부터 차감함으로써 이중 기준을 이용하여 센소그램을 작도하였다. 비아에발루션(BIAevaluation) 소프트웨어(지이 헬쓰케어, 버전 3.2)에서 1:1 랭뮤어(Langmuir) 결합 모델을 이용하여 상기 센소그램을 분석하였다. 이 분석에서, 2F5-5 MAb는 32 pM의 친화성으로 마우스 CCL20에 결합하지만, 인간, 레서스 또는 사이노몰거스 CCL20에는 결합하지 않는다(표 1).
Figure pct00001
CCL20 기능에 대한 2F5-5 MAb의 효과를 시험하기 위해, 본 발명자들은 시험관내 화학주성 분석을 이용하여 마우스 CCL20에 대한 그의 중화 활성을 평가하였다. CCR6-형질도입된 B300.19 세포 및 재조합 마우스 CCL20(1 nM)을 트랜스웰 배양 플레이트에 첨가하였다. 4시간 후, 보다 낮은 챔버 내로 이동된 세포를 형광-활성화된 세포 분류(FACS)로 카운팅하였다. 2F5-5 MAb는 0.04 ㎍/㎖(0.27 nM)의 평가된 IC50 값으로 1 ㎍/㎖에서 화학주성을 완전히 억제하였다(도 5). 대조적으로, 대조군 햄스터 항체(10 ㎍/㎖)는 화학주성을 억제하지 못하였다(100% 대조군; 데이터는 제시되지 않음).
실시예 3: 마우스 항-CCL20 MAb의 인간화
인간 CCL20에 대한 단일클론 항체를 수득하기 위해, 본 발명자들은 마우스 항-인간 CCL20 항체의 패널을 발생시켰다. 프로인트 완전 항원보강제(미츠비시-카가꾸 야트론(Mitsubishi-Kagaku Yatron), RM606-1)로 유화된 재조합 인간 CCL20(알앤드디, #360-MP-025/CF, 17.5 ㎍/마리)을 마우스의 발바닥 내로 피하 주사하였다. 그 다음, 2회 연속 주사를 3일마다 투여하였다. 최종 면역화로부터 3일 후, 동물들을 희생시켰고, 서혜부 림프절 세포를 50% 폴리에틸렌 글리콜의 존재 하에서 2:1 내지 10:1 비로 P3U1 골수종 세포와 융합시켰다. 그 다음, 상기 세포를 96웰 플라스틱 플레이트에서 배양하였다.
샌드위치 ELISA를 일차 스크리닝에 이용하였다. 96웰 플레이트를 다중클론 항-인간 IgG 항체(잭슨(Jackson), #709-005-149, PBS(-) 중의 2 ㎍/㎖)로 코팅하였다. 4℃에서 밤새 항온처리한 후, 상기 웰을 실온에서 1 x 블록(Block)-Ace(다이니폰 수미토모 파마((Dainippon Sumitomo Pharma), UK-B80)로 1시간 동안 차단하였다. 그 다음, 상기 웰을 0.02% Tween 20/PBS(-)로 세척한 후, 0.02% Tween 20/PBS(-) 중의 1 nM 인간 CCL20-hIgG Fc 키메라 단백질을 상기 웰에 첨가하였다(50 ㎕/웰). 실온에서 1시간 동안 항온처리한 후, 3회의 추가 세척을 전술된 바와 같이 수행하였다. 그 다음, 각각의 하이브리도마로부터의 배양물 상청액을 0.02% Tween 20/PBS(-) 중의 20% FBS 및 200 ㎍/㎖ 인간 IgG(미츠비시 웰파마(Mitsubishi Welpharma))로 2배 희석하고 상기 웰에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 3회의 추가 세척 후, 상기 웰을 실온에서 호스라디쉬 퍼록시다제-접합된 항-마우스 IgG 항체(잭슨, #715-035-150, 0.02% Tween 20/PBS(-)로 희석된 5000배 희석물)와 함께 1시간 동안 항온처리하였다. 그 다음, 상기 웰을 3회 세척하고 TMBZ(3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘) 용액에서 15 내지 30분 동안 항온처리하였다. 그 다음, 동등한 부피의 2 M H2SO4을 첨가하여 반응을 중단시키고, 광학 밀도를 ARVO(퍼킨엘머)로 450 nm에서 판독하였다. 샌드위치 ELISA는 24개의 양성 웰을 확인시켜 주었다.
그 다음, 본 발명자들은 이차 스크린으로서 화학주성 분석을 수행하였다. 화학주성 분석은 트랜스웰 배양 플레이트(멀티스크린 공극 5 ㎛, 밀리포어, #MAMIC 5S10)에서 수행되었다. 먼저, 화학주성 완충제(RPMI1640(인비트로겐) 중의 0.5% BSA, 0.5% FBS, 20 mM HEPES(pH 7.4) 및 50 μM 2-머캡토에탄올) 중의 50 ㎕/웰의 300 ng/㎖ 재조합 인간 CCL20(알앤드디, #360-MP-025/CF)을 실온에서 상기 플레이트의 하부 웰 내에서 상기 하이브리도마로부터의 100 ㎕/웰의 배양물 상청액과 함께 30분(100 ng/㎖의 최종 CCL20 농도의 경우) 동안 예비항온처리하였다. 30분 후, 인간 CCR6(서열번호 104)으로 형질감염된 B300.19 세포(2x105개 세포/75 ㎕)를 상부 웰에 적용하고 37℃에서 5% CO2 항온처리기 내에서 4시간 동안 항온처리하였다. 항온처리 후, 상기 하부 웰로부터 150 ㎕를 수거하고 50 ㎕의 4% PFA/PBS(-)로 고정시켰다. 30 ㎕의 각각의 샘플을 FACSCantoII 세포 분석기(비디 바이오사이언시스(BD Biosciences))에 적용하여 이동된 세포를 카운팅하였다. 중화 활성을 4개의 웰에서 발견하였다.
그 다음, 본 발명자들은 표준 제한 희석을 이용하여 상기 4개의 양성 웰로부터 하이브리도마 클론을 수득하였다. 본 발명자들은 시험관내 화학주성 분석을 이용하여 각각의 클론으로부터 상청액의 중화 활성을 확인하였다. 이들 클론들에 의해 제조된 3개의 마우스 항-인간 CCL20 단일클론 항체들(항체 36F7C10(표 2), 42G5B10(표 3) 및 40-1C10B9(표 4))은 인간 CCL20에 대한 중화 활성을 나타내었다.
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
그 다음, 36F7C10, 42G5B10 및 40-1C10B9 마우스 항체를 사용하여 인간화된 항체 중쇄 및 경쇄를 제조하였다. 인간화 방법은 카바트 넘버링에 따라 카바트 및/또는 초티아 정의 방법에 의해 확인된 마우스 상보성 결정 영역들(CDR들)을, 상기 CDR들이 유도된 원래의 마우스 서열과 가장 우수한 골격 매치를 나타내는 인간 중쇄 및 경쇄 생식세포주 서열 내로 이식하는 단계를 포함하였다(도 6a 내지 6c; 굵은 활자체는 마우스 항체와 인간 생식세포주 서열 사이에 상이한 잔기를 표시하고; 밑줄로 표시된 굵은 활자체는 이식된 마우스 CDR들을 표시하고; 굵은 이탤릭 활자체는 상응하는 마우스 항체 잔기로 치환된 골격 잔기를 표시하고; 굵은 이탤릭 활자체는 상응하는 인간 생식세포주 잔기로 치환된 CDR 잔기를 표시함). 문헌(Altschul et al., Nucl. Acids Res. 25:3389-3402 (1997))에 기재된 방법에 따라 IgBlast 데이터베이스를 이용하여 골격 매치를 확인하였다. 대안적인 인간화된 쇄 버전을 유도하기 위해, 본 발명자들은 2종의 방법을 이용하였다: 1) CDR 잔기와 상호작용하는 골격 내의 임계적 뮤린 잔기를 예측하기 위한 3D 모델링 기법, 및 2) 정규 CDR 서열에 바로 인접한 뮤린 잔기를 확인하기 위한 서열 정렬.
인간화된 서열을 발현 벡터 내로 구축하고 항체 제조를 위해 포유동물 세포주(예를 들면, HEK293E 세포(인비트로겐)) 내로 형질감염시켰다. 그 후, 이 과정에 의해 수득된 항체를 기능적 및 물리화학적 분석에서 특징규명하였다.
실시예 4: 인간화된 항-인간 CCL20 Ab의 중화 활성을 나타내는 시험관내 화학주성 분석
본 발명자들은 CCR6-형질도입된 B300.19 세포를 사용하여 시험관내 화학주성 분석을 수행함으로써 인간 CCL20 리간드를 능동적으로 중화시키는 인간화된 항체를 확인하였다. IC50, IC90 및 IC95 값의 측정시(도 7a 내지 7c), IC95 표에서 감소된 값을 나타내는 항체는 유의한 중화 활성을 보유하는 것으로 간주되었다(도 7c). 본 발명자들은 제조된 14개의 인간화된 중쇄들 및 26개의 인간화된 경쇄들 중에서 41개의 조합물들을 시험하였다. 이들 조합물들 중 8개가 화학주성을 유의하게 중화시키는 것으로 밝혀졌다. 이들 8개의 인간화된 항체들은 하기 나열되어 있다:
Figure pct00005
36LK3/36HKK3
Figure pct00006
36LK3/42HKK1
Figure pct00007
36LK3/42HKK2
Figure pct00008
36LK3/42HKK3
Figure pct00009
36LK3/36HC2
Figure pct00010
36LK3/36HC3
Figure pct00011
36LC3/36HKK3
Figure pct00012
36LC3/36HC2
인간화된 중쇄 HC2, HC3, 36HKK3, 42HKK1, 42HKK2 및 42HKK3, 및 인간화된 경쇄 LC3 및 LK3의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 표 5 내지 12에 제시되어 있다. 이들 중쇄들 및 경쇄들에 의해 이용된 인간 생식세포주 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열은 표 13에 제시되어 있다.
[표 5]
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
[표 6]
Figure pct00017
Figure pct00018
[표 7]
Figure pct00019
Figure pct00020
[표 8]
Figure pct00021
Figure pct00022
[표 9]
Figure pct00023
Figure pct00024
[표 10]
Figure pct00025
Figure pct00026
[표 11]
Figure pct00027
Figure pct00028
[표 12]
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
평가 결과에 기초하여, 본 발명자들은 추가 연구를 위해 36LK3/36HC2("HC2/LK3") 및 36LC3/36HC2("HC2/LC3")를 선택하였다. 이들 2개의 항체들의 경우, 시험관내 화학주성 분석은 모 마우스 클론 36F7C10 및 이의 키메라 형태(인간 Fc 부분을 포함함)와 동시에 수행되었다. 이 분석에서, 본 발명자들은 상부 층에 시딩된 B300.19 CCR6+ 세포 및 하부 층 내의 재조합 인간 CCL20 리간드를 갖는 트랜스웰 배양 플레이트를 이용하였다. 재조합 인간 CCL20(10 nM 최종, 알앤드디 시스템스)을 실온에서 인간화된 항-CCL20 항체와 함께 예비항온처리하였다. 30분 후, 인간 CCR6-형질도입된 뮤린 전-B 세포(B300.19, 도쿄 대학 가와사키 박사(Dr. H. Kawasaki at Tokyo University)에 의해 제공됨)를 상부 층에 적용하였고 화학주성을 37℃에서 4시간 동안 발생시켰다. 항온처리 말기에, FACS를 이용하여 이동된 세포를 측정하였다. 그 다음, HC2/LK3 및 HC2/LC3에 대한 50%, 90% 및 95% 억제 농도(각각 IC50, IC90 및 IC95)를 계산하였다(표 14). 인간화된 항체들 중 어느 항체도 모 마우스 MAb에 비해 중화 활성을 상실하지 않았고, IC50 값은 약 1 nM에서 계산되었다.
Figure pct00032
HC2/LK3 항체를 사용한 대표적인 시험에 대한 투여량 반응은 도 8a 내지 8c에 제시되어 있다. 3회의 독립적인 실험이 도시되어 있다.
본 발명자들은 CCR6-형질도입된 인공 세포 대신에 새롭게 단리된 인간 말초혈 단핵세포가 사용된 경내피 이동(TEM) 분석을 이용하여 HC2/LK3 및 HC2/LC3의 중화 활성을 추가로 확인하였다. CD3+CD4+CD45RO+ 기억 T 세포 및 CD19+ B 세포에는 CCR6 양성 세포가 풍부하다는 것이 잘 공지되어 있기 때문에, 본 발명자들은 HC2/LK3 및 HC2/LC3 항체뿐만 아니라 모 마우스 항체 36F7C10의 존재 또는 부재 하에서 이들 집단들의 이동된 세포 수를 측정하였다. 인간화된 항체 둘다(도 9b 및 9c)가 36F7C10(도 9a)에 필적할만한 세포 이동의 투여량 의존적 억제를 나타내었는데, 이것은 그들의 중화 활성의 추가 증거를 제공한다.
실시예 5: 인간화된 항-인간 CCL20 MAb와 인간 CCL20의 결합
인간화된 항체 HC2/LC3 및 HC2/LK3의 결합 친화성을 표면 플라스몬 공명(비아코어™)으로 측정하기 위해, 본 발명자들은 일시적으로 형질감염된 HEK293F 세포의 컨디셔닝된 배지로부터 상기 항체들을 발현시키고 정제하고, 항-인간 Fc 단일클론 항체로 코팅된 CM5 칩 상에서 런닝 완충제로서 HBS-EP를 사용하여 상기 항체들을 포획하였다. 그 다음, 본 발명자들은 인간 CCL20 단백질(알앤드디 시스템스)의 여러 희석물(100, 20, 4, 0.8, 0.16 및 0 nM)을 코팅된 칩 표면 상에서 주입하고 결합된 CCL20의 해리를 최대 20분 동안 관찰하였다(도 10a 및 10b). 본 발명자들은 결합 데이터를 1:1 랭뮤어 모델에 전체적으로 피팅하였다. 결과는 표 15에 제시되어 있고 2회 독립적인 실험의 평균을 나타낸다. CCL20과 그의 수용체 CCR6 사이의 친화성은 일차 인간 세포에서 500 pM로서 보고되어 있는데(Liao et al., J. Immunol. 168(10):4871-4880 (2002)), 이들 데이터는 CCL20에 대한 HC2/LC3 및 HC2/LK3 항체의 친화성이 CCL20에 대한 CCR6의 친화성보다 대략 10배 더 높다는 것을 입증한다.
Figure pct00033
실시예 6: 인간화된 항-인간 CCL20 MAb와 케모카인 파랄로그(paralog)의 교차반응성
본 발명자들은 효소-연결된 면역흡착 분석(ELISA)을 이용하여 케모카인 패널(표 16)에 대한 HC2/LK3 및 HC2/LC3의 교차반응성을 분석함으로써 인간 CCL20에 대한 그들의 특이성에 대해 HC2/LK3 및 HC2/LC3을 조사하였다.
[표 16]
Figure pct00034
Figure pct00035
96웰 플레이트의 웰을 PBS(-) 중의 1 ㎍/㎖ 재조합 인간 케모카인으로 코팅하였다. 4℃에서 밤새 항온처리한 후, 상기 웰을 실온에서 1x 블록-Ace(다이니폰 수미토모 파마, UK-B80)로 1시간 동안 차단하였다. 0.02% Tween 20/PBS(-)로 2회 세척한 후, 본 발명자들은 0.02% Tween 20/PBS(-) 중의 50 ㎕의 10 ㎍/㎖ 정제된 36F7C10, 키메라 36F710, HC2/LK3 또는 HC2/LC3을 각각의 웰에 첨가하였다. 상기 웰을 실온에서 1시간 동안 항온처리하고 실시예 3에 기재된 바와 같이 3회 세척하였다. 그 다음, 호스라디쉬 퍼록시다제(HRP)-접합된 항-마우스 IgG 항체(잭슨, #715-035-150, 36F7C10의 경우) 또는 HRP-접합된 항-인간 IgG Fcγ 단편(잭슨, #109-035-098, 키메라 및 인간화된 mAb들의 경우)을 (0.02% Tween 20/PBS(-)로 희석된 5000배 희석물 형태로) 첨가하고, 상기 웰을 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 5회 세척한 후, TMBZ(3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘) 용액(N,N-디메틸포름아미드 중의 1%)을 상기 웰에 첨가하고 15 내지 30분 동안 항온처리하였다. 동등한 부피의 2 M H2SO4 중단 용액을 첨가하여 반응을 중단시키고, ARVO(퍼킨엘머)로 광학 밀도를 450 nm에서 판독하였다. 도 11b에서 입증된 바와 같이, HC2/LK3 및 HC2/LC3은 패널에서 다른 케모카인들에 비해 인간 CCL20에 특이적으로 결합한다.
이들 분석에서, HC2/LK3이 플레이트에 결합된 인간 CCL20에 대한 반응성을 나타내었지만, 마우스 36F7C10 또는 키메라 36F7C10-hFc 항체보다 덜 강력한 것으로 보였다(도 11a). 그러나, HC2/LK3은 모든 CCL20 부분들이 용매에 노출되게 하는 ELISA 분석에서 His-태그를 통해 고착된 CCL20에 대해 명확하고 강한 결합을 보였다(도 11c). 이것은 HC2/LK3에 대한 CCL20 에피토프(들)가 제1 분석 형식에서 CCL20을 플레이트 표면에 결합시키는 데에 이용된 절차에서 파묻혀 있거나 가려져 있다는 것을 암시할 수 있다. 이 가능한 인위적 결과를 피하기 위해, 본 발명자들은 자유 CCL20이 센서 칩 상에 포획된 MAb들 상에서 적용되는 비아코어™ 분석을 이용하였다. 비아코어™ 분석에서, HC2/LK3 및 HC2/LC3은 36F7C10-hFc 키메라 항체에 필적할만한 강한 CCL20 결합을 보였다(도 11d). 추가로, 도 11b에서 관찰된 CXCL4에 대한 작은 반응은 비아코어™ 분석에서 무시할만한 것으로 발견되었다(도 11d).
문헌(Dereeper et al., Nucleic Acids Res. 1(36):W465-469 (2008))에 의한 계통발생적 분석은, CCL20과 CCL16 사이의 % 동일성이 37.5% 미만이지만(성숙 CCL20 펩티드를 포함하는 70개 아미노산들 중 단지 56개 아미노산들에서의 상동성(SIM - 단백질 서열에 대한 정렬 수단, 스위스 생물정보학 연구소)), CCL16이 서열 면에서 CCL20에 가장 가까운 케모카인이라는 것을 암시한다(도 12). 본 발명자들은 HC2/LK3 및 HC2/LC3이 CCL16과 교차반응하는지를 시험하기 위해 비아코어™ 분석을 이용하였다. 0.2 mg/㎖ BSA를 함유하는 HBS-EP 완충제를 사용하여 단일클론 마우스 항-인간 Fc를 25 ㎕/분의 유속으로 CM5 칩의 모든 4개 유동 셀들 상에 고정시켰다. 그 후, 0.2 mg/㎖ BSA를 갖는 HBS-EP 완충제 중의 50 ㎕의 1 ㎍/㎖ 키메라, HC2/LC3 또는 HC2/LK3 항체 용액을 각각 유동 셀 2, 3 및 4 상에서 주입하였다. 그 다음, 0.2 mg/㎖ BSA를 갖는 HBS-EP 완충제(또는 완충제 단독) 중의 150 ㎕의 100 nM CCL20 또는 CCL16 용액을 40 ㎕/분의 유속으로 모든 4개 유동 셀들 상에서 주입하였다. 20분 동안 해리시켰다. 유동 셀 1(항-인간 Fc 항체 단독)을 모든 유동 셀들에 대한 기준으로서 사용하였다.
이들 조건들 하에서, 인간 CCL20은 상기 칩 상에 포획된 키메라(도 13a), HC2/LC3(도 13b) 및 HC2/LK3(도 13b)에 유사한 강도로 결합하였다. 대조적으로, 인간 CCL16이 상기 칩을 통과할 때 유의한 결합이 관찰되지 않았는데, 이것은 CCL16이 서열 면에서 CCL20에 가장 가까운 케모카인이지만, CCL20 및 CCL16이 인간화된 항-CCL20 항체와 CCL16의 교차반응을 허용하기에 충분한 상동성을 보유하지 않는다는 것(상기 논의된 바와 같이 <37%)을 암시한다.
이들 데이터는 HC2/LK3 및 HC2/LC3이 다른 케모카인들에 비해 인간 CCL20에 대해 특이적이라는 것을 암시한다.
실시예 7: 인간화된 항-인간 CCL20 MAb와 종 오르톨로그의 교차반응성
이어서, 본 발명자들은 HC2/LC3 및 HC2/LK3 MAb들과 다른 종들로부터의 CCL20의 교차반응성을 확인하였다. CCL20 오르톨로그들 사이의 아미노산 서열 정렬(SIM(단백질 서열에 대한 정렬 수단, 스위스 생물정보학 연구소)을 이용하여 수득함)은 사이노몰거스/레서스 CCL20과 인간 CCL20 사이의 동일성이 86%인 반면, 마우스 CCL20과 인간 CCL20 사이의 상동성이 64%라는 것을 보여준다(도 14; 인간 CCL20 - 서열번호 85; 레서스 CCL20 - 서열번호 86; 사이노몰거스 CCL20 - 서열번호 87; 부분적인 마우스 CCL20 - 서열번호 88(전체 마우스 CCL20 아미노산 서열은 서열번호 102에서 발견될 수 있고, 잔기 1-27은 신호 서열을 구성함; 표 18 참조).
키메라 및 인간화된 항체들이 마우스, 사이노몰거스 또는 레서스 마카크 CCL20 오르톨로그들에 결합할 수 있는지를 시험하기 위해, 본 발명자들은 도 15에 예시된 바와 같이 ELISA 분석을 이용하였다. 재조합 분비된 알칼리성 포스파타제(SEAP)-케모카인 융합 단백질을 실시예 2에 기재된 바와 같이 조작하고 발현시키고 시험된 CCL20 오르톨로그들 모두에 대해 정제하였다. 넌크 맥시소르브(Nunc MaxiSorb) 평저 검정 플레이트를 4℃에서 50 mM 중탄산나트륨(pH 9.4) 중의 1 ㎍/㎖ 마우스 항-태반 알칼리성 포스파타제 항체(피어스, 카달로그 번호 MA1-19354)로 코팅하였다. 그 다음, 5% 소 혈청 알부민(BSA)과 함께 Tween-20을 갖는 1X 인산염 완충 식염수(PBST)를 사용하여 플레이트를 실온에서 2시간 동안 차단하였다. 20 nM SEAP-CCL20 융합 단백질을 Opti-MEM 배지(인비트로겐)로 연속적으로 5배 희석하였다. 키메라 및 인간화된 (HC2/LC3 및 HC2/LK3) 항체들을 5% BSA를 갖는 1X PBST로 1 ㎍/㎖까지 희석하고 상기 플레이트에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 그 다음, 상기 플레이트를 5% BSA를 갖는 1X PBST로 3회 세척하였다. 염소 항-인간 IgG+IgM(H+L) HRP 접합체(잭슨 이뮤노리서치(Jackson ImmunoResearch) 카달로그 번호 109-035-127)를 80 ng/㎖까지 희석하고 상기 플레이트에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 몰레큘라 디바이시스(Molecular Devices) M5(여기 325 nm/방사 420 nm) 플레이트 판독기에서 형광도를 측정함으로써 결합된 항체를 검출하기 위해 퀀타블루(QuantaBlu) 형광 HRP 기질(피어스, 카달로그 번호 15169)을 첨가하였다.
햄스터 항-마우스 CCL20 항체 2F5-5 MAb는 64 pM의 50% 유효 투여량(EC50)으로 마우스 CCL20에 결합하였지만(데이터는 제시되지 않음), 키메라 및 인간화된 항-인간 CCL20 항체들 중 어느 것도 전술된 조건들 하에서 마우스 CCL20 또는 래트 CCL20에 검출가능하게 결합하지 못하였다. 대조적으로, 키메라 및 인간화된 항체들 둘다가 인간, 레서스 및 사이노몰거스 CCL20에 효과적으로 결합하였다(도 16a 내지 16c, 17a 및 17b). 인간 및 레서스 CCL20에 대한 EC50은 유사한 것으로 보였지만(예를 들면, HC2/LC3의 경우 62 및 101 pM), 사이노몰거스 CCL20에 대한 EC50은 HC2/LC3의 경우 340 pM(인간 CCL20에 비해 5.4배 차이)이었다. 유사한 결과가 HC2/LK3에 대해 관찰되었다. 이것은 인간 또는 레서스 CCL20에의 결합과 동일한 양의 사이노몰거스 CCL20에의 결합을 달성하기 위해 훨씬 더 높은 농도의 항체가 요구되었다는 것을 암시한다.
실시예 8: 인간화된 항- CCL20 MAb 와 CCL20 종 오르톨로그의 교차반응성에 대한 표면 플라스몬 공명 분석
또한, 본 발명자들은 HC2/LC3 및 HC2/LK3이 마우스, 사이노몰거스 또는 레서스 마카크 CCL20 오르톨로그에 결합할 수 있는지를 시험하기 위해 표면 플라스몬 공명(비아코어™)을 이용하였다. 단일클론 마우스 항-인간 태반 알칼리성 포스파타제를 25 ㎕/분의 유속으로 CM5 칩의 모든 4개 유동 셀들 상에 고정시켰다. HBS-EP 완충제 중의 25 ㎕의 2 nM 인간, 레서스, 사이노몰거스 또는 마우스 CCL20-SEAP 용액을 유동 셀 2, 3 또는 4 상에서 주입하였다. 항체 결합을 위해, HBS-EP 완충제(또는 완충제 단독) 중의 240 ㎕의 0 내지 80 nM HC2/LC3, HC2/LK3 또는 2F5-5 MAb 희석물을 50 ㎕/분의 유속으로 모든 4개 유동 셀들 상에서 주입하였다. 45분 동안 해리시켰다. 유동 셀 1(항-SEAP 단독)을 모든 유동 셀들에 대한 기준으로서 사용하였다. 10 mM 글라이신(pH 2.25)을 사용하여 상기 유동 셀들의 재생을 수행하였다. 칩의 포획 성능에 대한 재생 효과로 인해, 항체 주입을 저 농도부터 고 농도까지 순차적으로 수행하였다. 1:1 랭뮤어 모델을 이용하여 데이터 피팅을 수행하였다.
상기 조건들 하에서, 햄스터 항-마우스 CCL20 항체 2F5-5는 4.9 pM의 (2가) KD로 마우스 CCL20에 결합하였지만, 인간, 레서스 또는 사이노몰거스 CCL20에는 유의하게 결합하지 못하였다. 대조적으로, 키메라, HC2/LC3 및 HC2/LK3 항체들은 인간, 레서스 및 사이노몰거스 CCL20에 효과적으로 결합하였다(표 17).
이 분석에서 측정된 겉보기 친화성 값은 (표 15에 제시된 데이터에 대해 이용된 1가 형식에 비해) 이용된 분석 형식의 2가(보다 높은 친화성) 성질로 인해 실시예 5에서 이전에 검출된 값보다 더 높았다(예를 들면, 본 분석에서 HC2/LC3에 대해 4.7 pM 대 표 3에서 44 pM). 레서스 및 사이노몰거스 CCL20에 대한 KD 값들은 인간 CCL20에 대한 KD 값보다 일반적으로 더 높았는데(3배), 이것은 상기 항체들이 인간 CCL20에 더 특이적으로 결합하였다는 것을 암시한다. 그러나, 실시예 7로부터의 ELISA 데이터와 대조적으로, 본 발명자들은 레서스 CCL20에 대한 결합 친화성과 사이노몰거스 CCL20에 대한 결합 친화성 사이의 유의한 차이를 관찰하지 못하였다.
Figure pct00036
실시예 9: 마우스 항-인간 CCL20 클론 36F7C10에 대한 에피토프 맵핑
마우스 항-인간 CCL20 단일클론 항체 36F7C10이 결합하는 인간 CCL20 에피토프(들)를 확인하기 위해, 본 발명자들은 항체 결합이 에피토프의 중수소화를 보호하여 보존하는 수소/중수소 교환 방법을 이용하였다. 도 18a에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들은 잔기 7-9, 10-19 및 20-22에서 인간 CCL20의 N-말단 근처에서 매우 강한 변동(pertubation)(에피토프(들)를 나타낼 수 있음)을 관찰하였다. 미미한 보호가 잔기 39-55, 56-67 및 61-70에서 C-말단 근처에서도 관찰되었다. 이들 절편들은 에피토프의 주변일 수 있거나, 그들의 순간 움직임은 에피토프와 결부될 수 있다. 각각의 표시된 아미노산의 중수소 수준은 4개의 시점에서 제시되어 있다: 상부에서 하부로, 150초, 500초, 1,500초 및 5,000초.
36F7C10에 대한 에피토프로서 확인된 영역은 CCR6 결합 및 신호전달에 매우 중요한 것으로 공지되어 있는 CCL20의 N-말단 및 루프 영역 내에 있다(Malik et al., Acta Cryst F62:631-634 (2006))(도 18b). 36F7C10으로부터 유도된 키메라 및 인간화된 항체들, 특히 36F7C10과 동일한 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열, 또는 36F7C10과 유사한 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열을 갖는(예를 들면, 36F7C10의 CDR들에 비해 3, 2 또는 1개 미만의 아미노산 치환을 갖는) 항체들은 동일한 에피토프에 결합할 것으로 예측된다. 따라서, 이 에피토프의 확인은 CCL20 활성을 중화시키는 36F7C10 MAb, 및 이로부터 유도된 키메라 및 인간화된 항체들의 능력을 설명할 수 있다.
실시예 10: 인간화된 항-인간 CCL20 항체에 대한 생체내 화학주성 분석
HC2/LC3 및 HC2/LK3이 생체내에서 CCL20-유도된 화학주성을 억제할 수 있는지를 시험하기 위해, 본 발명자들은 인간 CCL20이 마우스 CCR6(서열번호 106)과 상호작용하여 마우스 T 세포의 화학주성을 유도할 수 있다는 사실을 이용하였다(도 19). 본 발명자들은 피내 주사된 인간 CCL20을 향한 마우스 T 세포의 이동을 측정하는 혼성체 생체내 시스템을 이용하였다(도 20).
재조합 인간 CCL20(10 ng/마리) 및 비히클을 시험 마우스(군 당 n=3)의 등의 각각 좌측 면 및 우측 면 상의 면도된 피부 내로 피내 주사하였다. 그 다음, 칼세인-AM-표지된 마우스 비장 T 세포(5x106개 세포/마우스)를 꼬리 정맥 내로 정맥내 전달하였고, 이와 동시에 표시된 항체를 도 20에 기재된 투여량으로 꼬리 정맥 내로 주사하였다. 1시간 후, 피내 주사 부위에서 입체 현미경을 이용하여 형광 양성 세포를 카운팅하였다.
HC2/LK3 및 HC2/LC3 둘다가 모 마우스 항체 36F7C10 및 이의 키메라 형태에 필적할만한 수준으로 CCL20-주사된 부위로의 세포 이동을 유의하게 억제하였다. T 세포의 화학주성이 염증 케스케이드에서 핵심 단계이기 때문에, 이 이동의 방지는 자가면역 및 염증 병태의 치료를 위한 임상 결과를 갖는다.
실시예 11: II형 콜라겐-유도된 관절염에 대한 2F5-5 MAb의 효과
치료적 조치를 위한 항-CCL20 항체의 사용을 더 평가하기 위해, 본 발명자들은 햄스터 항-마우스 2F5-5 MAb를 사용하여 마우스에서 추가 생체내 연구를 수행하였다. 먼저, 본 발명자들은 CIA 마우스(류마티스성 관절염의 동물 모델)에서 CCL20-매개된 화학주성을 중화시키는 2F5-5의 능력을 평가하였다. CIA는 본질적으로 실시예 1에 기재된 바와 같이 유도되었다. 관절염(관절염 점수 1 내지 3)의 발생 후, 마우스를 무작위적으로 나누고 500 ㎍/마우스의 2F5-5 MAb 또는 대조군 IgG 항체로 치료하였다. 두 경우에서, 항체를 이틀마다 정맥내로 투여하였다. 대조군 IgG에 비해 2F5-5 MAb는 관절염 증상의 추가 발생을 억제하였다(도 21 및 22).
또한, 본 발명자들은 류마티스성 관절염에서 종종 관찰된 골 병소에 대한 2F5-5 MAb의 효과를 측정하기 위해 X-선 점수화를 이용하였다. 점수화는 문헌(Inoue et al., Agents Actions 39:187-194 (1993))에 기재된 바와 같이 수행되었다. 요약하건대, X-선 영상에 따라 CIA 마우스의 각각의 발을 골다공증(O), 골 미란(E) 및 새로운 골 형성(N)의 중증도에 기초하여 0 내지 3의 등급으로 등급화하였다. 이용된 등급은 다음과 같았다: 0, 변화 없음; 1, 약간의 변화; 2, 중간 변화; 및 3, 중증 변화. 골 병소에 대한 누적 X-선 점수를 발생시키기 위해 각각의 인자에 대한 점수를 더하였다. 2F5-5 MAb로 치료된 마우스가 대조군 IgG로 치료된 마우스에 비해 39일째 날 현저히 더 낮은 중증 X-선 점수를 나타내었다(도 23 및 24).
본 발명자들은 ELISA를 이용하여 여러 생체마커들을 분석함으로써 골 병상에 대한 2F5-5 MAb의 효과를 확인하였다. CIA 마우스를 전술된 바와 같이 500 ㎍의 2F5-5 또는 대조군 IgG 항체로 면역화시키고 치료하였다. 제2 면역화 후 11일째 날 또는 12일째 날 상기 마우스로부터 혈장 샘플을 준비하였다. 동물 혈장 샘플이 1:20으로 희석되었다는 점을 제외하고 제조자의 지시(본원에 참고로 도입됨)에 따라 동물 COMP ELISA 효소 면역분석 키트(아나마르 메디칼(AnaMar Medical))를 사용하여 연골 파괴의 마커, 즉 혈청 연골 올리고머성 매트릭스 단백질(COMP)을 정량하였다. COMP가 플레이트 상에 미리 코팅되어 있기 때문에, 이것은 경쟁 ELISA이고, 이에 따라 COMP 표준물 또는 COMP 함유 혈장의 첨가는 OD450의 감소를 초래한다(도 25a). 샘플 분석으로부터의 미처리 데이터는 도 25b 및 25c에 제시되어 있다. CIA 마우스에서의 COMP 혈청 수준은 2F5-5 MAb를 사용한 치료에 의해 거의 정상 수준으로 감소되었는데(도 26), 이것은 연골 파괴를 억제하는 2F5-5의 능력을 입증한다.
파골세포의 형성 및 분화가 RA 관련 골다공증 및 미란의 원인이 되기 때문에, 본 발명자들은 파골세포 유도 분자인 핵 인자 κB 리간드에 대한 수용체 활성화제(RANKL), 및 파골세포 마커, 예컨대, 핵 인자 κB에 대한 수용체 활성화제(RANK), 주석산염 내성 산 포스파타제(TRAP) 및 카텝신 K의 수준을 관절염 치료의 표시자로서 측정하였다. 본 발명자들은 균질화된 마우스 발로부터 단리된 총 RNA를 사용하는 정량 PCR로 이들 마커들의 mRNA 발현 수준을 평가하였다. 먼저, 상기 발을 트리아졸 시약(인비트로겐, 미국 캘리포니아주 소재)을 함유하는 조직 용해 완충제에 담군 후 균질화기로 균질화하였다. 클로로포름을 첨가한 후, 샘플을 4℃에서 15분 동안 14,000 rpm으로 원심분리하여 용액을 수성 층과 유기성 층으로 분리하였다. 상기 수성 층을 제거하고, 이소프로판올을 상기 수성 층에 첨가한 후, 4℃에서 15분 동안 14,000 rpm으로 원심분리하여 RNA 펠렛을 수득하였다. RNAse 무함유 물로 용해시킨 RNA 펠렛을 RNAeasy 미니 키트(퀴아젠(QIAGEN), 미국 캘리포니아주 발렌시아 소재)에서 사용하여 RNA를 단리하고 DNAse로 처리하여 임의의 DNA를 제거하였다. 제조자의 프로토콜에 따라 RT 반응 키트(RNA PCR 키트, 타카라 바이오 인코포레이티드, 일본 시가 소재)를 사용하여 RNA로부터 상보적인 DNA(cDNA)를 발생시켰다. 각각의 cDNA 종에 대한 정량 실시간 PCR을 수행하고 하우스킵핑 유전자인 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HPRT)의 수준과 비교하였다. 하기 정방향 및 역방향 프라이머 세트를 PCR 반응에서 사용하였다:
RANKL, 5'-CATTTGCACACCTCACCATC-3'(서열번호 89) 및
5'-TCCGTTGCTTAACGTCATGT-3'(서열번호 90);
RANK, 5'-CGGCGTTTACTACAGGAAGG-3'(서열번호 91) 및
5'-TTCTTGCTGACTGGAGGTTG-3'(서열번호 92);
TRAP, 5'-GCTGGAAACCATGATCACCT-3'(서열번호 93) 및
5'-GGTAGTAAGGGCTGGGGAAG-3'(서열번호 94);
카텝신 K, 5'-CAGTGTTGGTGGTGGGCTAT-3'(서열번호 95) 및
5'-CCGAGCCAAGAGAGCATATC-3'(서열번호 96); 및
HPRT, 5'-CAGGCCAGACTTTGTTGGAT-3'(서열번호 97) 및
5'-TTGCGCTCATCTTAGGCTTT-3'(서열번호 98).
웹에 기초한 소프트웨어 프라이머 3(화이트헤드 생체의학 연구소(Whitehead Institute for Biomedical Research), 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재)을 사용하여 RNA의 비-특이적 증폭을 피하도록 모든 프라이머들을 디자인하였다. cDNA 주형, 프라이머, 유라실 DNA 글리코실라제(인비트로겐, 미국 캘리포니아주 소재) 및 콴티텍(QuantiTect) SYBR 그린 PCR 마스터 믹스(퀴아젠, 미국 캘리포니아주 발렌시아 소재)를 갖는 반응 혼합물을 ABI PRISM 7700 서열 검출 시스템(어플라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems), 미국 캘리포니아주 포스터 소재) 내의 증폭 반응에서 사용하였다. 발현 수준을 ABI PRISM 7700 서열 검출기 소프트웨어로 자동적으로 정량하였다.
2F5-5 MAb 치료 후, 관절 조직에서 모든 마커들에 대한 mRNA 수준이 억제되었는데(도 27a 및 27b; 하우스킵핑 유전자 HPRT에 비해 발현 수준에서의 배수 변화를 보여줌), 이것은 2F5-5가 생체내에서 골 병상을 억제한다는 추가 증거를 제공한다.
실시예 12: 글루코스-6-포스페이트 이소머라제-유도된 관절염에 대한 2F5-5 MAb의 효과
본 발명자들은 RA에 대한 또 다른 마우스 모델인 글루코스-6-포스페이트 이소머라제(G6PI)-유도된 관절염을 갖는 마우스에서 2F5-5 MAb 치료의 항-관절염 효과를 시험하였다. 완전 프로인트 항원보강제에 유화되었고 DBA/1 마우스의 꼬리의 기저부에서 주사된 재조합 GST-G6PI(300 ㎍/마우스)를 사용한 피내 감작으로 관절염을 유도하였다. G6PI 면역화로부터 6일 후 및 관절 종창 발병 직전에, 마우스를 무작위적으로 나누고 500 ㎍/마우스의 동종형-매칭된 항체 또는 2F5-5 MAb로 치료하였다. 각각의 마우스의 발에서 관절염 증상의 중증도를 실시예 1에 이미 기재된 바와 같이 등급화하였다. 2F5-5 MAb로 치료받은 마우스는 동종형-매칭된 항체로 치료받은 마우스보다 유의하게 더 낮은 관절염 점수를 나타내었는데, 이것은 2F5-5가 대조군에 비해 관절염 발생을 강하게 억제한다는 것을 보여주었다(도 28).
이들 데이터는 생체내 관절염 모델에서 항-CCL20 항체 치료의 효과를 입증하고, 항-CCL20 항체의 사용이 류마티스성 관절염의 치료에 유리할 수 있다는 것을 암시한다.
실시예 13: 옥사졸론-유도된 아토피성 피부염에 대한 2F5-5 MAb의 효과
이어서, 본 발명자들은 마우스 피부염 모델에서 2F5-5 MAb 치료의 효과를 평가하였다. 한 모델에서, 옥사졸론을 사용하여 상기 질병에 민감한 마우스(NC/Nga 품종)에서 아토피성 피부염을 유도하였다. 마우스의 복부 피부를 면도하고 0일째 날, 5일째 날 및 8일째 날에 옥사졸론에 노출시켰다. 13일째 날, 피부염의 징후(점수 2)를 보인 마우스를 선택하고 옥사졸론으로 다시 면역화시켰다. 그 후, 2F5-5 MAb 또는 동종형-매칭된 대조군 IgG 항체를 사용한 치료(500 ㎍/마우스, 이틀마다 정맥내로 투여됨)를 위해 마우스를 6마리로 구성된 군으로 무작위적으로 나누었다. 본 발명자들은 다음과 같이 맹검 연구에서 피부염 점수를 분석하였다: (문헌(Leung et al., J. Allergy Clin. Immunol. 85(5):927-933 (1990))에 기재된 바와 같이) 각각의 피부염 증상, 예컨대, 건조함, 각질, 홍반, 진물/딱지형성 및 긁은 상처를 0 내지 3의 등급으로 점수화한 후(0 = 부재, 1 = 경미함, 2 = 중간, 3 = 중증), 이들 점수들을 누적 피부염 점수를 위해 더하였다. 본 발명자들은 13일째 날부터 18일째 날까지 곡선 하의 면적("AUC")을 정량하여 2개의 군 사이의 질환 억제 규모를 비교하였다. 본 피부염 모델에서, 2F5-5 MAb는 대조군 IgG에 비해 질환 진행의 통계적으로 유의한(p<0.05) 억제를 유도하였다(도 29).
실시예 14: DNFB-유도된 알레르기성 접촉 피부염에 대한 2F5-5 MAb의 효과
본 발명자들은 제2 마우스 피부염 모델인 디니트로플루오로벤젠(DNFB)-유도된 알레르기성 접촉 피부염에서 2F5-5 MAb 치료의 효과를 시험하였다. 마우스를 6마리로 구성된 군으로 나누고, 25 ㎕의 DNFB 용액(4:1 아세톤:올리브유 용액 중의 0.4% DNFB)을 면도된 복부 상에 연속 2일(0일째 날 및 1일째 날) 동안 브러싱함으로써 감작하였다. 한 군을 2F5-5 MAb로 치료한 반면, 다른 군을 동종형-매칭된 대조군 항체로 치료하였다(0일째 날, 2일째 날 및 5일째 날 정맥내로 투여된 500 ㎍/마우스). 5일째 날, (4:1 아세톤:올리브유 중의) 20 ㎕의 0.2% DNFB 용액을 한 귀의 한쪽 면에 도포함으로써 상기 마우스를 다시 챌린지하였다. 6일째 날에 두께 게이지를 이용하여 귀 두께를 홍반의 표시자로서 측정하였다. 2F5-5 MAb를 사용한 치료는 귀 두께를 감소시켰는데, 이것은 피부염 발생의 성공적인 예방을 암시한다(도 30).
본 명세서에서 인용된 모든 공개문헌들, 특허들 및 특허출원들은 본원에 참고로 도입된다. 상기 본 발명이 명확한 이해를 목적으로 예시 및 실시예에 의해 다소 상세히 기재되어 있지만, 첨부된 특허청구범위의 사상 또는 범주를 벗어나지 않으면서 본 발명에 대한 일부 변화 및 변경을 만들 수 있다는 것이 본 발명의 교시에 비추어 볼 때 당분야에서 통상의 기술을 가진 자에게 용이하게 자명할 것이다.
[표 18]
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
[표 19]
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
[표 20]
Figure pct00044
Figure pct00045
SEQUENCE LISTING <110> IMAI, TOSHIO KLINE, BRAD KAWANO, TETSU GRASSO, LUIGI SAKAMOTO, YOSHIMASA SPIDEL, JARED NISHIMURA, MIYUKI MURMOTO, KENZO HORIZOE, TASTUO <120> NEUTRALIZING ANTI-CCL20 ANTIBODIES <130> 106806-0008-WO1 <140> PCT/US2011/061525 <141> 2011-11-18 <150> 61/415,614 <151> 2010-11-19 <160> 117 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Ala 65 70 75 80 Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Ala Met Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 210 215 220 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 225 230 235 240 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 2 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 2 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Ala Met Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 210 215 220 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 225 230 235 240 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 3 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 3 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Ala Met Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 210 215 220 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 225 230 235 240 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 4 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 4 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Lys Tyr Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Gly Met Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 210 215 220 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 225 230 235 240 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 5 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 5 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Lys Tyr Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Gly Met Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 210 215 220 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 225 230 235 240 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 6 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 6 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Lys Tyr Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Gly Met Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 210 215 220 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 225 230 235 240 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 7 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 7 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ile 100 105 110 Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr 115 120 125 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 130 135 140 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 145 150 155 160 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 165 170 175 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 180 185 190 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 195 200 205 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 210 215 220 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 8 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 8 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser 35 40 45 Glu Asn Ile Tyr Gly Ala Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn 100 105 110 Val Leu Ile Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 9 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 11 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 12 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Lys Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 13 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 13 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Lys Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 14 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 14 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Lys Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 15 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ile Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 16 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 16 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ile Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 17 <211> 1410 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 17 atgggctggt cctgcatcat tctgttcctg gtggccactg ctaccggagt gcacagccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaaacccg gtgcaagtgt gaaggtgtca 120 tgtaaagcat ccggctatac attcactaac tactggatgc attgggtgag gcaggctcca 180 ggacagggac tggaatggat gggcgtgatc gacccttcag attcctacac cacatatgcc 240 cagaagtttc agggcagggt gaccatgaca gtggacacta gcacctctac agtgtacatg 300 gagctgtcca gcctgagaag tgaagataca gcagtgtact attgcgcccg cggcaattac 360 ggagtggact atgccatgga ttactggggg cagggtactc tggtgaccgt gtctagtgct 420 tctaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 720 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 780 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 960 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc cgggaaatga 1410 <210> 18 <211> 1410 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 18 atgggctggt cctgcatcat tctgttcctg gtggcaactg ccaccggagt gcacagccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaaacccg gtgcaagtgt gaaagtgtca 120 tgcaaggcat ccggctatac attcactaac tactggatgc attgggtgaa gcaggcacca 180 ggacagggac tggaatggat cggcgtgatc gacccttcag attcctacac cacatataat 240 cagaagttta aaggcaaggc taccatgaca agggacacta gcacctctac agtgtacatg 300 gagctgtcca gcctgaggtc cgaagataca gccgtgtact attgcactcg gggcaactac 360 ggagtggact atgctatgga ttactggggg cagggtacta gtgtgaccgt gtctagtgca 420 tctaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 720 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 780 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 960 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc cgggaaatga 1410 <210> 19 <211> 1410 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 19 atggactgga catggagaat cctgttcctg gtggccgctg caaccggagc acacagccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aagaaacccg gtgctagtgt gaaagtgtca 120 tgcaaggcct ccgggtatac tttcaccaac tactggatgc attgggtgag gcaggctcca 180 ggacagggac tggaatggat gggcgtgatt gacccttcag attcctacac cacatataat 240 cagaagttta aaggaaaggc aacactgact gtggacacca gcacatctac tgcctacatg 300 gagctgtcca gcctgaggtc cgaagatact gccgtgtact attgtacccg gggcaactac 360 ggagtggact atgcaatgga ttactggggg cagggtaccc tggtgacagt gtctagtgct 420 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 720 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 780 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 960 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1410 <210> 20 <211> 1410 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 20 atggactgga cctggcgaat cctgttcctg gtggccgctg caacaggagc acactcacag 60 gtgcagctgg tgcagtccgg ggcagaggtg aagaaacccg gtgccagcgt gaaggtgtct 120 tgcaaagcta gtggctatac cttcacaagc tactggatgc attgggtgcg gcaggcacca 180 ggacagggac tggaatggat gggcctgatt gacccttctg ataagtacac taactacaac 240 cagaagttta aaggaagggt gactatgacc cgggacacat caacttccac cgtgtacatg 300 gagctgtcca gcctgagatc cgaagatacc gccgtgtact attgtgctcg cggcaactac 360 ggagtggact atggcatgga ttactggggg cagggtacac tggtgaccgt gtccagtgct 420 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 720 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 780 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 960 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1410 <210> 21 <211> 1410 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 21 atggactgga cttggaggat cctgttcctg gtggccgctg caaccggagc tcactcacag 60 gtgcagctgg tgcagtccgg agcagaggtg aagaaacccg gtgcctccgt gaaggtgtct 120 tgcaaagcaa gtggctatac cttcacaagc tactggatgc attgggtgag acaggcacca 180 ggacagggac tggaatggat gggcctgatt gacccttctg ataagtacac caactacaac 240 cagaagttta aaggacgcgt gactctgacc gtggacacat caacttccac cgtgtacatg 300 gagctgtcca gcctgaggtc cgaagatacc gcagtgtact attgtacacg gggcaactac 360 ggagtggact atggcatgga ttactggggg cagggtacac tggtgaccgt gtccagtgct 420 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 720 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 780 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 960 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1410 <210> 22 <211> 1410 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 22 atggactgga cttggagaat cctgttcctg gtggccgctg caaccggagc tcactcacag 60 gtgcagctgg tgcagtccgg agcagaggtg aagaaacccg gtgcctccgt gaaagtgtct 120 tgcaaggcta gtggctatac cttcacaagc tactggatgc attgggtgag gcaggcacca 180 ggacagggac tggaatggat gggcctgatt gacccttctg ataagtacac caactacaac 240 cagaagttta aaggaaaggc aactctgacc gtggacacat caacttccac cgcctacatg 300 gagctgtcca gcctgaggtc cgaagatacc gccgtgtact attgtacacg gggcaactac 360 ggagtggact atggcatgga ttactggggg cagggtacac tggtgaccgt gtccagtgct 420 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 720 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 780 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 960 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1410 <210> 23 <211> 702 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 23 atgggctggt cctgcatcat tctgttcctg gtggcaaccg ccacaggagt gcacagcgac 60 atccagatga cccagtctcc atccagcctg agtgcctcag tgggcgatag ggtgactatc 120 acctgtcggg ccagcgagaa catctacggc gctctgaatt ggtatcagca gaagccagga 180 aaagctccca agctgctgat ctacggggct acaaacctgg cagacggtgt gcccagtcga 240 ttctccggta gcggctctgg acgacagtat tcactgacta tctctagtct gcagcctgaa 300 gatttcgcca cttactattg ccagaatgtg ctgattactc catatacctt tggcggaggg 360 acaaaactgg agatcaagag aactgtggcc gctcccagtg tgttcatttt tcccccttca 420 gacgaacagc tgaaatcagg gaccgcttcc gtggtgtgtc tgctgaacaa tttctaccct 480 cgcgaggcaa aagtgcagtg gaaggtggat aacgccctgc agagtggcaa ttcacaggag 540 tccgtgaccg aacaggacag caaagattct acatatagtc tgtcatccac cctgacactg 600 agcaaggctg attacgagaa gcacaaagtg tatgcatgcg aagtgactca tcaggggctg 660 agctctcccg tgaccaagtc ttttaaccgg ggtgaatgtt ga 702 <210> 24 <211> 711 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 24 atggacatga gggtgcctgc tcagctgctg ggactgctgc tgctgtggct gaggggagca 60 cgatgcgaca tccagatgac tcagagccca tccagcctgt cagcctccgt gggcgacagg 120 gtgaccatca catgtggagc atccgagaac atctacgggg ccctgaattg gtatcagagg 180 aagcccggca aagctcctaa gctgctgatc tacggtgcca caaacctggc tgatggcgtg 240 ccctccagat tcagcggctc tggaagtggg cgcgactata ctctgaccat ttctagtctg 300 cagccagagg atttcgccac ctactattgc cagaatgtgc tgatcacacc ctacactttt 360 ggtcagggca caaaactgga aattaagcgt acggtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgttg a 711 <210> 25 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 25 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaaac ccggtgcaag tgtgaaggtg 60 tcatgtaaag catccggcta tacattcact aactactgga tgcattgggt gaggcaggct 120 ccaggacagg gactggaatg gatgggcgtg atcgaccctt cagattccta caccacatat 180 gcccagaagt ttcagggcag ggtgaccatg acagtggaca ctagcacctc tacagtgtac 240 atggagctgt ccagcctgag aagtgaagat acagcagtgt actattgcgc ccgcggcaat 300 tacggagtgg actatgccat ggattactgg gggcagggta ctctggtgac cgtgtctagt 360 <210> 26 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 26 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaaac ccggtgcaag tgtgaaagtg 60 tcatgcaagg catccggcta tacattcact aactactgga tgcattgggt gaagcaggca 120 ccaggacagg gactggaatg gatcggcgtg atcgaccctt cagattccta caccacatat 180 aatcagaagt ttaaaggcaa ggctaccatg acaagggaca ctagcacctc tacagtgtac 240 atggagctgt ccagcctgag gtccgaagat acagccgtgt actattgcac tcggggcaac 300 tacggagtgg actatgctat ggattactgg gggcagggta ctagtgtgac cgtgtctagt 360 <210> 27 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 27 caggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaagaaac ccggtgctag tgtgaaagtg 60 tcatgcaagg cctccgggta tactttcacc aactactgga tgcattgggt gaggcaggct 120 ccaggacagg gactggaatg gatgggcgtg attgaccctt cagattccta caccacatat 180 aatcagaagt ttaaaggaaa ggcaacactg actgtggaca ccagcacatc tactgcctac 240 atggagctgt ccagcctgag gtccgaagat actgccgtgt actattgtac ccggggcaac 300 tacggagtgg actatgcaat ggattactgg gggcagggta ccctggtgac agtgtctagt 360 <210> 28 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 28 caggtgcagc tggtgcagtc cggggcagag gtgaagaaac ccggtgccag cgtgaaggtg 60 tcttgcaaag ctagtggcta taccttcaca agctactgga tgcattgggt gcggcaggca 120 ccaggacagg gactggaatg gatgggcctg attgaccctt ctgataagta cactaactac 180 aaccagaagt ttaaaggaag ggtgactatg acccgggaca catcaacttc caccgtgtac 240 atggagctgt ccagcctgag atccgaagat accgccgtgt actattgtgc tcgcggcaac 300 tacggagtgg actatggcat ggattactgg gggcagggta cactggtgac cgtgtccagt 360 <210> 29 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 29 caggtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaagaaac ccggtgcctc cgtgaaggtg 60 tcttgcaaag caagtggcta taccttcaca agctactgga tgcattgggt gagacaggca 120 ccaggacagg gactggaatg gatgggcctg attgaccctt ctgataagta caccaactac 180 aaccagaagt ttaaaggacg cgtgactctg accgtggaca catcaacttc caccgtgtac 240 atggagctgt ccagcctgag gtccgaagat accgcagtgt actattgtac acggggcaac 300 tacggagtgg actatggcat ggattactgg gggcagggta cactggtgac cgtgtccagt 360 <210> 30 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 30 caggtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaagaaac ccggtgcctc cgtgaaagtg 60 tcttgcaagg ctagtggcta taccttcaca agctactgga tgcattgggt gaggcaggca 120 ccaggacagg gactggaatg gatgggcctg attgaccctt ctgataagta caccaactac 180 aaccagaagt ttaaaggaaa ggcaactctg accgtggaca catcaacttc caccgcctac 240 atggagctgt ccagcctgag gtccgaagat accgccgtgt actattgtac acggggcaac 300 tacggagtgg actatggcat ggattactgg gggcagggta cactggtgac cgtgtccagt 360 <210> 31 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 31 gacatccaga tgacccagtc tccatccagc ctgagtgcct cagtgggcga tagggtgact 60 atcacctgtc gggccagcga gaacatctac ggcgctctga attggtatca gcagaagcca 120 ggaaaagctc ccaagctgct gatctacggg gctacaaacc tggcagacgg tgtgcccagt 180 cgattctccg gtagcggctc tggacgacag tattcactga ctatctctag tctgcagcct 240 gaagatttcg ccacttacta ttgccagaat gtgctgatta ctccatatac ctttggcgga 300 gggacaaaac tggagatcaa g 321 <210> 32 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 32 gacatccaga tgactcagag cccatccagc ctgtcagcct ccgtgggcga cagggtgacc 60 atcacatgtg gagcatccga gaacatctac ggggccctga attggtatca gaggaagccc 120 ggcaaagctc ctaagctgct gatctacggt gccacaaacc tggctgatgg cgtgccctcc 180 agattcagcg gctctggaag tgggcgcgac tatactctga ccatttctag tctgcagcca 240 gaggatttcg ccacctacta ttgccagaat gtgctgatca caccctacac ttttggtcag 300 ggcacaaaac tggaaattaa g 321 <210> 33 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Met Arg Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val Asn Ser <210> 34 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 34 Met Gly Val Pro Thr Gln Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr Val Val Val 1 5 10 15 Val Arg Cys <210> 35 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Ile Ala Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser <210> 36 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Met Gly Val Pro Thr Gln Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr Val Val Val 1 5 10 15 Val Arg Cys <210> 37 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Met Arg Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val Asn Ser <210> 38 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 38 Met Gly Val Pro Thr Gln Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr Val Val Val 1 5 10 15 Val Arg Cys <210> 39 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 39 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 40 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 40 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Met Ser Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Ser Leu His Pro 65 70 75 80 Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ile Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 41 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 41 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Val His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Asp Pro Glu Thr Thr Ser Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Lys Cys Tyr Tyr Gly Ser Ala Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Met Ser Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Ser Leu His Pro 65 70 75 80 Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 43 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 43 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Lys Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 44 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 44 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Met Ser Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Ser Leu His Pro 65 70 75 80 Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 45 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 45 atgagatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggtgt caactcc 57 <210> 46 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 46 atgggtgtac ccactcagct cctgttgctg tggcttacag tcgtagttgt cagatgt 57 <210> 47 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 47 atggaatgga gctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ttgcaggtgt ccaatcc 57 <210> 48 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 48 atgggtgtac ccactcagct cctgttgctg tggcttacag tcgtagttgt cagatgt 57 <210> 49 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 49 atgagatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggtgt caactcc 57 <210> 50 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 50 atgggtgtac ccactcagct cctgttgctg tggcttacag tcgtagttgt cagatgt 57 <210> 51 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 51 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc aactactgga tgcactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gatcggagtg attgatcctt ctgatagtta tactacctac 180 aatcaaaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca catcctccag cacagcctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagaggtaac 300 tacggagtag actatgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctcg 360 <210> 52 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 52 gacatccaga tgactcagtc tccagcttca ctgtctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtg gagcaagtga gaatatttac ggtgctttaa attggtatca gcggaaacag 120 ggaaaatctc ctcagctcct gatctatggt gcaaccaact tggcagatgg catgtcatcg 180 aggttcagtg gcagtggatc tggtagacag tattctctca agatcagtag cctgcatcct 240 gacgatgttg caacgtatta ctgtcaaaat gtgttaatta ctccgtacac gttcggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa a 321 <210> 53 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 53 caggttcaac tgcagcagtc tggggctgag ctggtgaggc ctggggcttc agtgacgctg 60 tcctgcaagg cttcgggcta cacatttact gactatgaaa tgcactgggt gaagcagaca 120 cctgtgcatg gcctggaatg gattggagct attgatcctg aaactactag tactgcctac 180 aatcagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtac caaatgttac 300 tacggtagcg cggactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 54 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 54 gacatccaga tgactcagtc tccagcttca ctgtctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtg gagcaagtga gaatatttac ggtgctttaa attggtatca gcggaaacag 120 ggaaaatctc ctcagctcct gatctatggt gcaaccaact tggcagatgg catgtcatcg 180 aggttcagtg gcagtggatc tggtagacag tattctctca agatcagtag cctgcatcct 240 gacgatgttg caacgtatta ctgtcaaaat gtgttaagta ctccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggaaatcaa a 321 <210> 55 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 55 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactgga tgcactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gatcggactg attgatcctt ctgataagta tactaactac 180 aatcaaaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca catcctccag cacagcctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagaggtaac 300 tacggagtag actatggtat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360 <210> 56 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 56 gacatccaga tgactcagtc tccagcttca ctgtctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtg gagcaagtga gaatatttac ggtgctttaa attggtatca gcggaaacag 120 ggaaaatctc ctcagctcct gatctatggt gcaaccaact tggcagatgg catgtcatcg 180 aggttcagtg gcagtggatc tggtagacag tattctctca agatcagtag cctgcatcct 240 gacgatgttg caacgtatta ctgtcaaaat gtgttaagta ctccgtacac gttcggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa a 321 <210> 57 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 58 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 15 <210> 59 <211> 96 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 <210> 60 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 60 Asn Tyr Trp Met His 1 5 <210> 61 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 61 Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 62 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 62 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 63 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 63 Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 64 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 64 Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 65 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 65 Leu Ile Asp Pro Ser Asp Lys Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 66 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 66 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 67 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 67 Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 68 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 68 Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Gly Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 69 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 69 Glu Gly Asp Gly Tyr Ile Gln Ala Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 70 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 70 Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala Leu Asn 1 5 10 <210> 71 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 71 Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala Leu Asn 1 5 10 <210> 72 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 72 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 73 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 73 Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp 1 5 <210> 74 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 74 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 75 Gln Asn Val Leu Ile Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 76 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 76 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 77 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 77 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 1 5 <210> 78 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 78 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 1 5 <210> 79 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 79 Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr 1 5 10 <210> 80 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 80 Leu Ile Asp Pro Ser Asp Lys Tyr Thr Asn 1 5 10 <210> 81 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 81 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser 1 5 10 <210> 82 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 82 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Asp Gly Tyr Ile Gln Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 83 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 83 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 84 <211> 70 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Ala Ser Asn Phe Asp Cys Cys Leu Gly Tyr Thr Asp Arg Ile Leu His 1 5 10 15 Pro Lys Phe Ile Val Gly Phe Thr Arg Gln Leu Ala Asn Glu Gly Cys 20 25 30 Asp Ile Asn Ala Ile Ile Phe His Thr Lys Lys Lys Leu Ser Val Cys 35 40 45 Ala Asn Pro Lys Gln Thr Trp Val Lys Tyr Ile Val Arg Leu Leu Ser 50 55 60 Lys Lys Val Lys Asp Met 65 70 <210> 85 <211> 96 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Met Cys Cys Thr Lys Ser Leu Leu Leu Ala Ala Leu Met Ser Val Leu 1 5 10 15 Leu Leu His Leu Cys Gly Glu Ser Glu Ala Ala Ser Asn Phe Asp Cys 20 25 30 Cys Leu Gly Tyr Thr Asp Arg Ile Leu His Pro Lys Phe Ile Val Gly 35 40 45 Phe Thr Arg Gln Leu Ala Asn Glu Gly Cys Asp Ile Asn Ala Ile Ile 50 55 60 Phe His Thr Lys Lys Lys Leu Ser Val Cys Ala Asn Pro Lys Gln Thr 65 70 75 80 Trp Val Lys Tyr Ile Val Arg Leu Leu Ser Lys Lys Val Lys Asn Met 85 90 95 <210> 86 <211> 96 <212> PRT <213> Macaca mulatta <400> 86 Met Cys Cys Thr Lys Ser Leu Leu Leu Ala Ala Leu Met Ser Val Leu 1 5 10 15 Leu Leu Tyr Leu Cys Ser Glu Ser Glu Ala Ala Ser Asn Phe Asp Cys 20 25 30 Cys Leu Arg Tyr Thr Asp Arg Ile Leu His Pro Lys Phe Ile Val Gly 35 40 45 Phe Thr Gln Gln Leu Ala Asn Glu Thr Cys Asp Ile Asn Ala Val Val 50 55 60 Phe His Thr Lys Lys Gly Leu Ser Val Cys Ala Asn Pro Lys Gln Thr 65 70 75 80 Trp Val Lys Leu Ile Val Arg Arg Leu Ser Lys Lys Ile Asn Lys Met 85 90 95 <210> 87 <211> 96 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 87 Met Cys Cys Ser Lys Ser Leu Leu Leu Ala Ala Leu Met Ser Val Leu 1 5 10 15 Leu Leu Tyr Leu Cys Ser Glu Ser Glu Ala Ala Ser Asn Phe Asp Cys 20 25 30 Cys Leu Arg Tyr Thr Asp Arg Ile Leu His Pro Lys Phe Ile Val Gly 35 40 45 Phe Thr Gln Gln Leu Ala Asn Glu Thr Cys Asp Ile Asn Ala Val Ile 50 55 60 Phe His Thr Lys Lys Gly Leu Ser Val Cys Ala Asn Pro Lys Gln Thr 65 70 75 80 Trp Val Lys Leu Ile Val Arg Arg Leu Ser Lys Lys Ile Asn Lys Met 85 90 95 <210> 88 <211> 95 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 88 Cys Gly Gly Lys Arg Leu Leu Phe Leu Ala Leu Ala Trp Val Leu Leu 1 5 10 15 Ala His Leu Cys Ser Gln Ala Glu Ala Ala Ser Asn Tyr Asp Cys Cys 20 25 30 Leu Ser Tyr Ile Gln Thr Pro Leu Pro Ser Arg Ala Ile Val Gly Phe 35 40 45 Thr Arg Gln Met Ala Asp Glu Ala Cys Asp Ile Asn Ala Ile Ile Phe 50 55 60 His Thr Lys Lys Arg Lys Ser Val Cys Ala Asp Pro Lys Gln Asn Trp 65 70 75 80 Val Lys Arg Ala Val Asn Leu Leu Ser Leu Arg Val Lys Lys Met 85 90 95 <210> 89 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 89 catttgcaca cctcaccatc 20 <210> 90 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 90 tccgttgctt aacgtcatgt 20 <210> 91 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 91 cggcgtttac tacaggaagg 20 <210> 92 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 92 ttcttgctga ctggaggttg 20 <210> 93 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 93 gctggaaacc atgatcacct 20 <210> 94 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 94 ggtagtaagg gctggggaag 20 <210> 95 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 95 cagtgttggt ggtgggctat 20 <210> 96 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 96 ccgagccaag agagcatatc 20 <210> 97 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 97 caggccagac tttgttggat 20 <210> 98 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 98 ttgcgctcat cttaggcttt 20 <210> 99 <211> 70 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Ala Ser Asn Phe Asp Cys Cys Leu Gly Tyr Thr Asp Arg Ile Leu His 1 5 10 15 Pro Lys Phe Ile Val Gly Phe Thr Arg Gln Leu Ala Asn Glu Gly Cys 20 25 30 Asp Ile Asn Ala Ile Ile Phe His Thr Lys Lys Lys Leu Ser Val Cys 35 40 45 Ala Asn Pro Lys Gln Thr Trp Val Lys Tyr Ile Val Arg Leu Leu Ser 50 55 60 Lys Lys Val Lys Asn Met 65 70 <210> 100 <211> 210 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 100 gcaagcaact ttgactgctg tcttggatac acagaccgta ttcttcatcc taaatttatt 60 gtgggcttca cacggcagct ggccaatgaa ggctgtgaca tcaatgctat catctttcac 120 acaaagaaaa agttgtctgt gtgcgcaaat ccaaaacaga cttgggtgaa atatattgtg 180 cgtctcctca gtaaaaaagt caagaacatg 210 <210> 101 <211> 288 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 101 atgtgctgta ccaagagttt gctcctggct gctttgatgt cagtgctgct actccacctc 60 tgcggcgaat cagaagcagc aagcaacttt gactgctgtc ttggatacac agaccgtatt 120 cttcatccta aatttattgt gggcttcaca cggcagctgg ccaatgaagg ctgtgacatc 180 aatgctatca tctttcacac aaagaaaaag ttgtctgtgt gcgcaaatcc aaaacagact 240 tgggtgaaat atattgtgcg tctcctcagt aaaaaagtca agaacatg 288 <210> 102 <211> 97 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 102 Met Ala Cys Gly Gly Lys Arg Leu Leu Phe Leu Ala Leu Ala Trp Val 1 5 10 15 Leu Leu Ala His Leu Cys Ser Gln Ala Glu Ala Ala Ser Asn Tyr Asp 20 25 30 Cys Cys Leu Ser Tyr Ile Gln Thr Pro Leu Pro Ser Arg Ala Ile Val 35 40 45 Gly Phe Thr Arg Gln Met Ala Asp Glu Ala Cys Asp Ile Asn Ala Ile 50 55 60 Ile Phe His Thr Lys Lys Arg Lys Ser Val Cys Ala Asp Pro Lys Gln 65 70 75 80 Asn Trp Val Lys Arg Ala Val Asn Leu Leu Ser Leu Arg Val Lys Lys 85 90 95 Met <210> 103 <211> 291 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 103 atggcctgcg gtggcaagcg tctgctcttc cttgctttgg catgggtact gctggctcac 60 ctctgcagcc aggcagaagc agcaagcaac tacgactgtt gcctctcgta catacagacg 120 cctcttcctt ccagagctat tgtgggtttc acaagacaga tggccgatga agcttgtgac 180 attaatgcta tcatctttca cacgaagaaa agaaaatctg tgtgcgctga tccaaagcag 240 aactgggtga aaagggctgt gaacctcctc agcctaagag tcaagaagat g 291 <210> 104 <211> 374 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Met Ser Gly Glu Ser Met Asn Phe Ser Asp Val Phe Asp Ser Ser Glu 1 5 10 15 Asp Tyr Phe Val Ser Val Asn Thr Ser Tyr Tyr Ser Val Asp Ser Glu 20 25 30 Met Leu Leu Cys Ser Leu Gln Glu Val Arg Gln Phe Ser Arg Leu Phe 35 40 45 Val Pro Ile Ala Tyr Ser Leu Ile Cys Val Phe Gly Leu Leu Gly Asn 50 55 60 Ile Leu Val Val Ile Thr Phe Ala Phe Tyr Lys Lys Ala Arg Ser Met 65 70 75 80 Thr Asp Val Tyr Leu Leu Asn Met Ala Ile Ala Asp Ile Leu Phe Val 85 90 95 Leu Thr Leu Pro Phe Trp Ala Val Ser His Ala Thr Gly Ala Trp Val 100 105 110 Phe Ser Asn Ala Thr Cys Lys Leu Leu Lys Gly Ile Tyr Ala Ile Asn 115 120 125 Phe Asn Cys Gly Met Leu Leu Leu Thr Cys Ile Ser Met Asp Arg Tyr 130 135 140 Ile Ala Ile Val Gln Ala Thr Lys Ser Phe Arg Leu Arg Ser Arg Thr 145 150 155 160 Leu Pro Arg Ser Lys Ile Ile Cys Leu Val Val Trp Gly Leu Ser Val 165 170 175 Ile Ile Ser Ser Ser Thr Phe Val Phe Asn Gln Lys Tyr Asn Thr Gln 180 185 190 Gly Ser Asp Val Cys Glu Pro Lys Tyr Gln Thr Val Ser Glu Pro Ile 195 200 205 Arg Trp Lys Leu Leu Met Leu Gly Leu Glu Leu Leu Phe Gly Phe Phe 210 215 220 Ile Pro Leu Met Phe Met Ile Phe Cys Tyr Thr Phe Ile Val Lys Thr 225 230 235 240 Leu Val Gln Ala Gln Asn Ser Lys Arg His Lys Ala Ile Arg Val Ile 245 250 255 Ile Ala Val Val Leu Val Phe Leu Ala Cys Gln Ile Pro His Asn Met 260 265 270 Val Leu Leu Val Thr Ala Ala Asn Leu Gly Lys Met Asn Arg Ser Cys 275 280 285 Gln Ser Glu Lys Leu Ile Gly Tyr Thr Lys Thr Val Thr Glu Val Leu 290 295 300 Ala Phe Leu His Cys Cys Leu Asn Pro Val Leu Tyr Ala Phe Ile Gly 305 310 315 320 Gln Lys Phe Arg Asn Tyr Phe Leu Lys Ile Leu Lys Asp Leu Trp Cys 325 330 335 Val Arg Arg Lys Tyr Lys Ser Ser Gly Phe Ser Cys Ala Gly Arg Tyr 340 345 350 Ser Glu Asn Ile Ser Arg Gln Thr Ser Glu Thr Ala Asp Asn Asp Asn 355 360 365 Ala Ser Ser Phe Thr Met 370 <210> 105 <211> 1122 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 105 atgagcgggg aatcaatgaa tttcagcgat gttttcgact ccagtgaaga ttattttgtg 60 tcagtcaata cttcatatta ctcagttgat tctgagatgt tactgtgctc cttgcaggag 120 gtcaggcagt tctccaggct atttgtaccg attgcctact ccttgatctg tgtctttggc 180 ctcctgggga atattctggt ggtgatcacc tttgcttttt ataagaaggc caggtctatg 240 acagacgtct atctcttgaa catggccatt gcagacatcc tctttgttct tactctccca 300 ttctgggcag tgagtcatgc caccggtgcg tgggttttca gcaatgccac gtgcaagttg 360 ctaaaaggca tctatgccat caactttaac tgcgggatgc tgctcctgac ttgcattagc 420 atggaccggt acatcgccat tgtacaggcg actaagtcat tccggctccg atccagaaca 480 ctaccgcgca gcaaaatcat ctgccttgtt gtgtgggggc tgtcagtcat catctccagc 540 tcaacttttg tcttcaacca aaaatacaac acccaaggca gcgatgtctg tgaacccaag 600 taccagactg tctcggagcc catcaggtgg aagctgctga tgttggggct tgagctactc 660 tttggtttct ttatcccttt gatgttcatg atattttgtt acacgttcat tgtcaaaacc 720 ttggtgcaag ctcagaattc taaaaggcac aaagccatcc gtgtaatcat agctgtggtg 780 cttgtgtttc tggcttgtca gattcctcat aacatggtcc tgcttgtgac ggctgcaaat 840 ttgggtaaaa tgaaccgatc ctgccagagc gaaaagctaa ttggctatac gaaaactgtc 900 acagaagtcc tggctttcct gcactgctgc ctgaaccctg tgctctacgc ttttattggg 960 cagaagttca gaaactactt tctgaagatc ttgaaggacc tgtggtgtgt gagaaggaag 1020 tacaagtcct caggcttctc ctgtgccggg aggtactcag aaaacatttc tcggcagacc 1080 agtgagaccg cagataacga caatgcgtcg tccttcacta tg 1122 <210> 106 <211> 367 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 106 Met Asn Ser Thr Glu Ser Tyr Phe Gly Thr Asp Asp Tyr Asp Asn Thr 1 5 10 15 Glu Tyr Tyr Ser Ile Pro Pro Asp His Gly Pro Cys Ser Leu Glu Glu 20 25 30 Val Arg Asn Phe Thr Lys Val Phe Val Pro Ile Ala Tyr Ser Leu Ile 35 40 45 Cys Val Phe Gly Leu Leu Gly Asn Ile Met Val Val Met Thr Phe Ala 50 55 60 Phe Tyr Lys Lys Ala Arg Ser Met Thr Asp Val Tyr Leu Leu Asn Met 65 70 75 80 Ala Ile Thr Asp Ile Leu Phe Val Leu Thr Leu Pro Phe Trp Ala Val 85 90 95 Thr His Ala Thr Asn Thr Trp Val Phe Ser Asp Ala Leu Cys Lys Leu 100 105 110 Met Lys Gly Thr Tyr Ala Val Asn Phe Asn Cys Gly Met Leu Leu Leu 115 120 125 Ala Cys Ile Ser Met Asp Arg Tyr Ile Ala Ile Val Gln Ala Thr Lys 130 135 140 Ser Phe Arg Val Arg Ser Arg Thr Leu Thr His Ser Lys Val Ile Cys 145 150 155 160 Val Ala Val Trp Phe Ile Ser Ile Ile Ile Ser Ser Pro Thr Phe Ile 165 170 175 Phe Asn Lys Lys Tyr Glu Leu Gln Asp Arg Asp Val Cys Glu Pro Arg 180 185 190 Tyr Arg Ser Val Ser Glu Pro Ile Thr Trp Lys Leu Leu Gly Met Gly 195 200 205 Leu Glu Leu Phe Phe Gly Phe Phe Thr Pro Leu Leu Phe Met Val Phe 210 215 220 Cys Tyr Leu Phe Ile Ile Lys Thr Leu Val Gln Ala Gln Asn Ser Lys 225 230 235 240 Arg His Arg Ala Ile Arg Val Val Ile Ala Val Val Leu Val Phe Leu 245 250 255 Ala Cys Gln Ile Pro His Asn Met Val Leu Leu Val Thr Ala Val Asn 260 265 270 Thr Gly Lys Val Gly Arg Ser Cys Ser Thr Glu Lys Val Leu Ala Tyr 275 280 285 Thr Arg Asn Val Ala Glu Val Leu Ala Phe Leu His Cys Cys Leu Asn 290 295 300 Pro Val Leu Tyr Ala Phe Ile Gly Gln Lys Phe Arg Asn Tyr Phe Met 305 310 315 320 Lys Ile Met Lys Asp Val Trp Cys Met Arg Arg Lys Asn Lys Met Pro 325 330 335 Gly Phe Leu Cys Ala Arg Val Tyr Ser Glu Ser Tyr Ile Ser Arg Gln 340 345 350 Thr Ser Glu Thr Val Glu Asn Asp Asn Ala Ser Ser Phe Thr Met 355 360 365 <210> 107 <211> 1101 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 107 atgaattcca cagagtccta ctttggaacg gatgattatg acaacacaga gtattattct 60 attcctccag accatgggcc atgctcccta gaagaggtca gaaacttcac caaggtattt 120 gtgccaattg cctactcctt aatatgtgtc tttggcctcc tgggcaacat tatggtggtg 180 atgacctttg ccttctacaa gaaagccaga tccatgactg acgtctacct gttgaacatg 240 gccatcacag acatactctt tgtcctcacc ctaccgttct gggcagttac tcatgccacc 300 aacacttggg ttttcagcga tgcactgtgt aaactgatga aaggcacata tgcggtcaac 360 tttaactgtg ggatgctgct cctggcctgt atcagcatgg accggtacat tgccatcgtc 420 caggcaacca aatctttccg ggtacgctcc agaacactga cgcacagtaa ggtcatctgt 480 gtggcagtgt ggttcatctc catcatcatc tcaagcccta catttatctt caacaagaaa 540 tacgagctgc aggatcgtga tgtctgtgag ccacggtaca ggtctgtctc agagcccatc 600 acgtggaagc tgctgggtat gggactggag ctgttctttg ggttcttcac ccctttgctg 660 tttatggtgt tctgctatct gttcattatc aagaccttgg tgcaggccca gaactccaag 720 aggcacagag caatccgagt cgtgatcgct gtggttctcg tgttcctggc ttgtcagatc 780 cctcacaaca tggtcctcct cgtgactgcg gtcaacacgg gcaaagtggg ccggagctgc 840 agcaccgaga aagtcctcgc ctacaccagg aacgtggccg aggtcctggc tttcctgcat 900 tgctgcctca accccgtgtt gtatgcgttt attggacaga aattcagaaa ctacttcatg 960 aagatcatga aggatgtgtg gtgtatgaga aggaagaata agatgcctgg cttcctctgt 1020 gcccgggttt actcggaaag ctacatctcc aggcagacca gtgagaccgt cgaaaatgat 1080 aatgcatcgt cctttaccat g 1101 <210> 108 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 108 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asn Tyr Gly Val Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 109 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 109 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaaac ccggtgcaag tgtgaaggtg 60 tcatgtaaag catccggcta tacattcact aactactgga tgcattgggt gaggcaggct 120 ccaggacagg gactggaatg gatgggcgtg atcgaccctt cagattccta caccacatat 180 gcccagaagt ttcagggcag ggtgaccatg acagtggaca ctagcacctc tacagtgtac 240 atggagctgt ccagcctgag aagtgaagat acagcagtgt actattgcgc ccgcggcaat 300 tacggagtgg actatgccat ggattactgg gggcagggta ctctggtgac cgtgtctagt 360 gcttctacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tcccgggaaa tga 1353 <210> 110 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 110 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ile Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 111 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 111 gacatccaga tgacccagtc tccatccagc ctgagtgcct cagtgggcga tagggtgact 60 atcacctgtc gggccagcga gaacatctac ggcgctctga attggtatca gcagaagcca 120 ggaaaagctc ccaagctgct gatctacggg gctacaaacc tggcagacgg tgtgcccagt 180 cgattctccg gtagcggctc tggacgacag tattcactga ctatctctag tctgcagcct 240 gaagatttcg ccacttacta ttgccagaat gtgctgatta ctccatatac ctttggcgga 300 gggacaaaac tggagatcaa gagaactgtg gccgctccca gtgtgttcat ttttccccct 360 tcagacgaac agctgaaatc agggaccgct tccgtggtgt gtctgctgaa caatttctac 420 cctcgcgagg caaaagtgca gtggaaggtg gataacgccc tgcagagtgg caattcacag 480 gagtccgtga ccgaacagga cagcaaagat tctacatata gtctgtcatc caccctgaca 540 ctgagcaagg ctgattacga gaagcacaaa gtgtatgcat gcgaagtgac tcatcagggg 600 ctgagctctc ccgtgaccaa gtcttttaac cggggtgaat gttga 645 <210> 112 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 112 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ile Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 113 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 113 gacatccaga tgactcagag cccatccagc ctgtcagcct ccgtgggcga cagggtgacc 60 atcacatgtg gagcatccga gaacatctac ggggccctga attggtatca gaggaagccc 120 ggcaaagctc ctaagctgct gatctacggt gccacaaacc tggctgatgg cgtgccctcc 180 agattcagcg gctctggaag tgggcgcgac tatactctga ccatttctag tctgcagcca 240 gaggatttcg ccacctacta ttgccagaat gtgctgatca caccctacac ttttggtcag 300 ggcacaaaac tggaaattaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttga 645 <210> 114 <211> 56 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114 Cys Cys Leu Gly Tyr Thr Asp Arg Ile Leu His Pro Lys Phe Ile Val 1 5 10 15 Gly Phe Thr Arg Gln Leu Ala Asn Glu Gly Cys Asp Ile Asn Ala Ile 20 25 30 Ile Phe His Thr Lys Lys Lys Leu Ser Val Cys Ala Asn Pro Lys Gln 35 40 45 Thr Trp Val Lys Tyr Ile Val Arg 50 55 <210> 115 <211> 53 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115 Cys Cys Leu Lys Tyr Tyr Glu Lys Val Leu Pro Arg Arg Leu Val Val 1 5 10 15 Gly Tyr Arg Lys Ala Leu Asn Cys His Leu Pro Ala Ile Ile Phe Val 20 25 30 Thr Lys Arg Asn Arg Glu Val Cys Thr Asn Pro Asn Asp Asp Trp Val 35 40 45 Gln Glu Tyr Ile Lys 50 <210> 116 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 116 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 117 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10

Claims (59)

  1. 서열번호 67 또는 68을 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 갖는 중쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  2. 제1항에 있어서, 상기 중쇄의 상보성 결정 영역 1(CDR1), 상보성 결정 영역 2(CDR2) 및 상보성 결정 영역 3(CDR3)이 각각 하기 a) 내지 e)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분:
    a) 서열번호 60, 64 및 67;
    b) 서열번호 60, 63 및 67;
    c) 서열번호 61, 65 및 68;
    d) 서열번호 77, 79 및 67; 및
    e) 서열번호 78, 80 및 68.
  3. 서열번호 75를 포함하는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 갖는 경쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  4. 제3항에 있어서, 상기 경쇄의 상보성 결정 영역 1(CDR1), 상보성 결정 영역 2(CDR2) 및 상보성 결정 영역 3(CDR3)이 각각 하기 a) 및 b)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분:
    a) 서열번호 70, 73 및 75; 및
    b) 서열번호 71, 73 및 75.
  5. 제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 항체의 중쇄가 서열번호 67 또는 68을 포함하는 CDR3을 포함하고, 상기 항체의 경쇄가 서열번호 75를 포함하는 CDR3을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 부분.
  6. 제2항 또는 제4항에 있어서, 상기 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 상기 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3이 각각 하기 a) 내지 j)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 부분:
    a) 서열번호 60, 64, 67, 70, 73 및 75;
    b) 서열번호 60, 64, 67, 71, 73 및 75;
    c) 서열번호 60, 63, 67, 70, 73 및 75;
    d) 서열번호 60, 63, 67, 71, 73 및 75;
    e) 서열번호 61, 65, 68, 70, 73 및 75;
    f) 서열번호 61, 65, 68, 71, 73 및 75;
    g) 서열번호 77, 79, 67, 70, 73 및 75;
    h) 서열번호 77, 79, 67, 71, 73 및 75;
    i) 서열번호 78, 80, 68, 70, 73 및 75; 및
    j) 서열번호 78, 80, 68, 71, 73 및 75.
  7. 서열번호 9 내지 14로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인을 갖는 중쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  8. 서열번호 15 또는 16을 포함하는 가변 도메인을 갖는 경쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인 및 상기 경쇄 가변 도메인이 각각 하기 a) 내지 h)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 부분:
    a) 서열번호 9 및 15;
    b) 서열번호 9 및 16;
    c) 서열번호 10 및 16;
    d) 서열번호 11 및 15;
    e) 서열번호 11 및 16;
    f) 서열번호 12 및 16;
    g) 서열번호 13 및 16; 및
    h) 서열번호 14 및 16.
  10. 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 1 내지 6, 및 서열번호 108로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체.
  11. 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 1 내지 6, 및 서열번호 108로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체로서, 이때 상기 아미노산 서열이 C-말단 라이신을 결여하는 것인 단일클론 항-인간 CCL20 항체.
  12. 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 7 및 8, 및 서열번호 110 및 112로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 및 상기 경쇄가 각각 하기 a) 내지 j)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 이때 상기 아미노산 서열이 신호 서열(존재하는 경우)을 결여하고, 서열번호 1 내지 6이 임의적으로 C-말단 라이신을 결여하는 것인 항체:
    a) 서열번호 1 및 7;
    b) 서열번호 1 및 8;
    c) 서열번호 2 및 8;
    d) 서열번호 3 및 7;
    e) 서열번호 3 및 8;
    f) 서열번호 4 및 8;
    g) 서열번호 5 및 8;
    h) 서열번호 6 및 8;
    i) 서열번호 108 및 110; 및
    j) 서열번호 108 및 112.
  14. 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 110을 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항체.
  15. C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 110을 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항체.
  16. 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 112를 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항체.
  17. C-말단 라이신을 갖지 않는 서열번호 108을 포함하는 중쇄 및 서열번호 112를 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분에 의해 결합되는 인간 CCL20의 에피토프와 동일한 인간 CCL20의 에피토프에 결합하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  19. 인간 CCL20에의 결합에 대해 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분과 경쟁하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  20. 인간 CCL20에의 결합에 대해 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분과 교차경쟁하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  21. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간화된 항체인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
  22. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄의 골격 영역이 IGHV1-46*03 인간 생식세포주 서열을 이용하고, 상기 경쇄의 골격 영역이 IGKV1D-39*01 인간 생식세포주 서열을 이용하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
  23. 제1항 내지 제9항 및 제18항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 불변 도메인을 포함하는 것인 단일클론 항체.
  24. 서열번호 39, 41 및 43으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인을 포함하는 중쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  25. 서열번호 40, 42 및 44로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변 도메인을 포함하는 경쇄를 갖는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  26. 제24항 또는 제25항에 있어서, 상기 중쇄가 서열번호 39, 41 및 43으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄가 서열번호 40, 42 및 44로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 부분.
  27. 제26항에 있어서, 상기 중쇄 및 상기 경쇄가 각각 하기 a) 내지 c)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체:
    a) 서열번호 39 및 40;
    b) 서열번호 41 및 42; 및
    c) 서열번호 43 및 44.
  28. 서열번호 39를 포함하는 중쇄 및 서열번호 40을 포함하는 경쇄를 포함하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  29. 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 키메라 항체인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
  30. 제1항 내지 제9항, 제18항 내지 제22항 및 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 부분이 단일쇄 항체, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일쇄 Fv 분자(scFv), 이중특이적 단일쇄 Fv 이량체, 디아바디, 도메인-결실된 항체 또는 단일 도메인 항체(dAb)인 항원 결합 부분.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분이 하기 a) 내지 o)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 성질을 갖는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분:
    a) 인간 CCL16에 결합하지 않는 성질;
    b) 사이노몰거스(cynomolgus) 또는 레서스(rhesus) CCL20에 결합하지만, 마우스 또는 래트 CCL20에는 결합하지 않는 성질;
    c) 1가 표면 플라스몬 공명 분석을 이용할 때 70 pM 이하의 인간 CCL20에 대한 결합 친화성을 갖는 성질;
    d) 2가 표면 플라스몬 공명 분석을 이용할 때 12 pM 이하의 인간 CCL20에 대한 결합 친화성을 갖는 성질;
    e) 인간 CCR6의 인간 CCL20에 대한 결합 친화성보다 더 높은 인간 CCL20에 대한 결합 친화성을 갖는 성질;
    f) 인간 CX3CL1, CXCL1, CXCL2, CXCL4, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, CXCL13, CXCL16, CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL11, CCL13, CCL16, CCL17, CCL19, CCL21, CCL22, CCL24, CCL25, CCL27, CCL28 또는 XCL1에 비해 인간 CCL20에 대한 선택성을 갖는 성질;
    g) 1.7 nM 이하의 IC50으로 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시키는 성질;
    h) 생체내에서 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시키는 성질;
    i) 시험관내에서 CCR6+ 세포의 인간 CCL20-유도된 화학주성을 감소시키는 성질;
    j) 대상체에서 관절염 증상의 진행을 감소시키는 성질;
    k) 대상체에서 골다공증, 골 미란 또는 새로운 골 형성을 감소시키는 성질;
    l) 대상체에서 연골 올리고머성 매트릭스 단백질(COMP) 혈청 수준을 감소시키는 성질;
    m) 대상체에서 RANKL, RANK, TRAP 또는 카텝신(cathepsin) K의 mRNA 수준을 감소시키는 성질;
    n) 대상체에서 아토피성 피부염의 진행을 감소시키는 성질; 및
    o) 대상체에서 알레르기성 접촉 피부염의 진행을 감소시키는 성질.
  32. 하기 a) 내지 c)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 인간 CCL20의 에피토프에 결합하는 단일클론 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
    a) 서열번호 84의 잔기 7-9;
    b) 서열번호 84의 잔기 10-19; 및
    c) 서열번호 84의 잔기 20-22.
  33. 제32항에 있어서, 상기 에피토프가 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19 및 20-22를 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
  34. 제32항에 있어서, 상기 에피토프가 하기 a) 내지 c)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 추가로 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분:
    a) 서열번호 84의 잔기 39-55;
    b) 서열번호 84의 잔기 56-67; 및
    c) 서열번호 84의 잔기 61-70.
  35. 제34항에 있어서, 상기 에피토프가 서열번호 84의 잔기 7-9, 10-19, 20-22, 39-55, 56-67 및 61-70을 포함하는 것인 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 부분의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
  37. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 부분의 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
  38. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 부분의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분, 및 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
  39. 단일클론 항-인간 CCL20 항체의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자로서, 서열번호 17 내지 22, 25 내지 30 및 109로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자.
  40. 단일클론 항-인간 CCL20 항체의 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자로서, 서열번호 23, 24, 31, 32, 111 및 113으로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 17 내지 22, 25 내지 30 및 109로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 핵산 분자가 서열번호 23, 24, 31, 32, 111 및 113으로 구성된 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 또는 신호 서열(존재하는 경우)을 코딩하는 서열을 갖지 않는 상기 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하는 것인 단리된 핵산 분자.
  42. 약제로서, 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 부분의 (1) 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 서열, (2) 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 서열, 또는 (3) 이들 둘다의 용도.
  43. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 부분의 (1) 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 서열, (2) 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 서열, 또는 (3) 이들 둘다를 포함하는 재조합 벡터.
  44. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 부분의 중쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 제1 핵산 서열로서, 발현 조절 요소에 작동가능하게 연결된 제1 핵산 서열; 및 상기 항체 또는 부분의 경쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 제2 핵산 서열로서, 발현 조절 요소에 작동가능하게 연결된 제2 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포.
  45. 항-인간 CCL20 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제조하는 방법으로서, 상기 항체 또는 부분의 발현에 적합한 조건 하에서 제44항의 숙주 세포를 유지하는 단계를 포함하는 방법.
  46. 제45항에 있어서, 상기 항체 또는 부분을 단리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  47. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 단일클론 항체 또는 항원 결합 부분 및 약학적으로 허용가능한 비히클 또는 담체를 포함하는 조성물.
  48. 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 제47항의 조성물을 상기 대상체에게 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  49. 병태(condition)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 병태를 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 제47항의 조성물을 상기 대상체에게 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 병태가 CCR6 관련 병태인 방법.
  51. 제49항에 있어서, 상기 병태가 자가면역 또는 염증 병태인 방법.
  52. 제49항에 있어서, 상기 병태가 류마티스성 관절염, 건선, 아토피성 피부염, 접촉 피부염, 크론병, 염증 장 질환, 그레이브병, 백반증, 갑상선기능항진증, 만성 간염, 자궁경부의 인간 유두종바이러스 감염, 균상식육종, 골다공증 또는 치주 질환인 방법.
  53. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 제47항의 조성물을 대상체에게 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  54. 제53항에 있어서, 상기 암이 B 세포 악성종양, 유방 선암종, 아교모세포종, 간세포암종, 췌장 선암종 또는 갑상선 유두암종인 방법.
  55. CCR6+ 세포의 CCL20-매개된 화학주성의 감소가 필요한 대상체에서 CCR6+ 세포의 CCL20-매개된 화학주성을 감소시키는 방법으로서, 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 제47항의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  56. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 제47항의 조성물을 사용하여 시험관내에서 CCR6+ 세포의 CCL20-매개된 화학주성을 감소시키는 방법.
  57. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 제47항의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 병태를 치료하는 방법으로서, 상기 병태가 하기 a) 내지 g)로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법:
    a) 팔꿈치 또는 무릎으로부터 멀리 위치한 사지의 관절 병소;
    b) 홍반;
    c) 종창;
    d) 증가된 연골 올리고머성 매트릭스 단백질(COMP) 혈청 수준;
    e) 핵 인자 κB 리간드에 대한 수용체 활성화제(RANKL), 핵 인자 κB에 대한 수용체 활성화제(RANK), 주석산염 내성 산 포스파타제(TRAP) 또는 카텝신 K의 증가된 mRNA 수준;
    f) 아토피성 피부염; 및
    g) 알레르기성 접촉 피부염.
  58. 약제의 제조를 위한, 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 제47항의 조성물의 용도.
  59. 약제로서 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 부분, 또는 제47항의 조성물의 용도.
KR1020137015726A 2010-11-19 2011-11-18 중화 항-ccl20 항체 Expired - Fee Related KR101919170B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41561410P 2010-11-19 2010-11-19
US61/415,614 2010-11-19
PCT/US2011/061525 WO2012068540A2 (en) 2010-11-19 2011-11-18 Neutralizing anti-ccl20 antibodies

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20130135872A true KR20130135872A (ko) 2013-12-11
KR101919170B1 KR101919170B1 (ko) 2018-11-15

Family

ID=46084688

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020137015726A Expired - Fee Related KR101919170B1 (ko) 2010-11-19 2011-11-18 중화 항-ccl20 항체

Country Status (25)

Country Link
US (3) US8491901B2 (ko)
EP (1) EP2640744A4 (ko)
JP (3) JP5996549B2 (ko)
KR (1) KR101919170B1 (ko)
CN (1) CN103874707B (ko)
AR (1) AR084141A1 (ko)
AU (2) AU2011329647B2 (ko)
BR (1) BR112013012396A2 (ko)
CA (1) CA2818548A1 (ko)
CL (1) CL2013001403A1 (ko)
CO (1) CO6761352A2 (ko)
CR (1) CR20130228A (ko)
DO (1) DOP2013000111A (ko)
EA (1) EA029419B1 (ko)
IL (1) IL226383B (ko)
MA (1) MA34738B1 (ko)
MX (1) MX361929B (ko)
NZ (1) NZ611269A (ko)
PE (2) PE20180249A1 (ko)
PH (1) PH12013500990A1 (ko)
SG (2) SG191716A1 (ko)
TW (1) TWI589587B (ko)
UA (1) UA114077C2 (ko)
WO (1) WO2012068540A2 (ko)
ZA (3) ZA201303571B (ko)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI589587B (zh) * 2010-11-19 2017-07-01 衛材Ｒ＆Ｄ企管股份有限公司 中和性抗－ｃｃｌ２０抗體
CN104220094A (zh) 2012-02-17 2014-12-17 西雅图基因公司 针对整联蛋白αvβ6的抗体和使用该抗体治疗癌症
WO2014062659A2 (en) * 2012-10-15 2014-04-24 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating ocular diseases
EP3689325A1 (en) 2014-04-08 2020-08-05 Boston Pharmaceuticals Inc. Binding molecules specific for il-21 and uses thereof
CN106413751A (zh) 2014-05-21 2017-02-15 辉瑞大药厂 用于治疗癌症的抗ccr4抗体和4‑1bb激动剂的组合
MA41480A (fr) * 2014-10-17 2017-12-19 Glenmark Pharmaceuticals Sa Anticorps qui se lient au ccr6 et leurs utilisations
WO2016096640A2 (en) * 2014-12-17 2016-06-23 Cancer Research Technology Ltd Anti-cxcl12 antibody molecules and their uses
US10738095B2 (en) 2015-06-03 2020-08-11 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Engineered CCL20 locked dimer polypeptide
US11571462B2 (en) 2015-06-03 2023-02-07 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Engineered CCL20 locked dimer polypeptide
SG10201912086QA (en) * 2015-07-14 2020-02-27 Medimmune Llc Compositions and methods for treating cancer
WO2017064564A2 (en) * 2015-10-16 2017-04-20 Glaxosmithkline Intellectual Property Limited Therapeutic regimens for treating psoriatic arthritis with an anti-ccl20 antibody
BR112018014908A2 (pt) * 2016-01-21 2018-12-18 The Scripps Research Institute vacina de opioide sintético
MX378572B (es) 2016-01-22 2025-03-11 Merck Sharp & Dohme Llc Anticuerpos anti-factor de la coagulacion xi.
CN116425879A (zh) 2016-06-14 2023-07-14 默沙东有限责任公司 抗-凝血因子xi抗体
MX2019005491A (es) * 2016-11-14 2019-08-12 Dinona Anticuerpo que enlaza especificamente a cd66c y uso del mismo.
FR3072779A1 (fr) * 2017-10-19 2019-04-26 Sinnovial Procede d'estimation de l'efficacite d'un modulateur de la costimulation des lymphocytes t contre la polyarthrite rhumatoide apres reponse inadequate a une biotherapie
WO2019094608A1 (en) 2017-11-08 2019-05-16 Denali Therapeutics Inc. Anti-bace1 antibodies and methods of use thereof
WO2019094595A2 (en) * 2017-11-09 2019-05-16 Pinteon Therapeutics Inc. Methods and compositions for the generation and use of humanized conformation-specific phosphorylated tau antibodies
US20220144961A1 (en) * 2019-03-11 2022-05-12 Xyence Therapeutics, Inc. Cd27-binding antibodies and uses thereof
TW202134281A (zh) 2019-12-05 2021-09-16 美商西健公司 抗αＶβ６抗體及抗體-藥物結合物
CN113087795A (zh) * 2019-12-23 2021-07-09 上海普铭生物科技有限公司 针对趋化因子cx3cl1的抗体及其应用
WO2023028451A2 (en) * 2021-08-25 2023-03-02 Ibio, Inc. Anti-cd-25 antibody
CN117209603B (zh) * 2021-12-02 2024-02-27 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗tslp的单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009156994A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-30 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. Ccl20-specific antibodies for cancer therapy

Family Cites Families (113)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4897348A (en) 1983-08-25 1990-01-30 Sri International Recombinant materials and methods for producing human connective tissue-activating peptide-III and analogs thereof
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5011912A (en) 1986-12-19 1991-04-30 Immunex Corporation Hybridoma and monoclonal antibody for use in an immunoaffinity purification system
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
WO1988009344A1 (en) 1987-05-21 1988-12-01 Creative Biomolecules, Inc. Targeted multifunctional proteins
US5750172A (en) 1987-06-23 1998-05-12 Pharming B.V. Transgenic non human mammal milk
WO1989007142A1 (en) 1988-02-05 1989-08-10 Morrison Sherie L Domain-modified constant region antibodies
CH681625A5 (ko) 1988-12-08 1993-04-30 Sandoz Ag
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5179078A (en) 1989-05-12 1993-01-12 Dana Farber Cancer Institute Method of suppressing tumor formation in vivo
US5212073A (en) 1989-05-12 1993-05-18 Genetics Institute, Inc. Process for producing human JE cytokine
ATE124421T1 (de) 1989-09-25 1995-07-15 Genetics Inst Verfahren zur wachstumshemmung von stammzellen.
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6750325B1 (en) 1989-12-21 2004-06-15 Celltech R&D Limited CD3 specific recombinant antibody
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
NZ237202A (en) 1990-02-23 1994-01-26 Bristol Myers Squibb Co Composition containing beta-lactam antibiotic and cationic oligopeptide
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ES2246502T3 (es) 1990-08-29 2006-02-16 Genpharm International, Inc. Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
ATE177472T1 (de) 1990-09-14 1999-03-15 Chiron Corp Expression von makrophagen-induzierbaren proteinen (mips) in hefezellen
FR2669930A1 (fr) 1990-11-29 1992-06-05 Sanofi Sa Proteine presentant une activite de type cytokine, adn recombinant, vecteur d'expression et hotes permettant son obtention.
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
US6800738B1 (en) 1991-06-14 2004-10-05 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US6407213B1 (en) 1991-06-14 2002-06-18 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
AU665025B2 (en) 1991-09-23 1995-12-14 Cambridge Antibody Technology Limited Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5401651A (en) 1991-10-16 1995-03-28 Walz; Alfred DNA encoding ENA-78, a neutrophil activating factor
US5306709A (en) 1991-11-15 1994-04-26 The University Of Pennsylvania Suppression of megakaryocytopoiesis by macrophage inflammatory proteins
US5413778A (en) 1992-10-05 1995-05-09 The Regents Of The University Of Michigan Labelled monocyte chemoattractant protein material and medical uses thereof
US5346686A (en) 1992-10-05 1994-09-13 Mallinckrodt Medical, Inc. Labelled interleukin-8 and medical uses thereof
PT804070E (pt) 1993-03-09 2000-11-30 Genzyme Corp Isolamento de componentes de interesse a partir do leite.
US5474983A (en) 1993-03-15 1995-12-12 The Research Foundation Of State University Of New York Method of inhibiting pro-inflammatory mediator release from basophils and mast cells
WO1994026087A2 (en) 1993-05-14 1994-11-24 Connor Kim C O Recombinant protein production and insect cell culture and process
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
JPH0789866A (ja) 1993-09-21 1995-04-04 Nippon Kayaku Co Ltd 感染防御剤
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
PT735818E (pt) 1993-12-22 2004-07-30 Human Genome Sciences Inc Proteinas inflamatorias de macrofagos pim-3 pim-4 e pim-1y
JPH10500301A (ja) 1994-05-16 1998-01-13 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド マクロファージ遊走阻止因子−３
ATE206162T1 (de) 1994-05-16 2001-10-15 Human Genome Sciences Inc Chemotaktisches protein
US5981230A (en) 1994-08-23 1999-11-09 Human Genome Sciences, Inc. Polynucleotide encoding chemokine β-4
ATE290080T1 (de) 1994-08-23 2005-03-15 Human Genome Sciences Inc Menschliches beta-9 chemokin
EP1006188B1 (en) 1994-08-23 2006-12-27 Human Genome Sciences, Inc. Human chemokine polypeptides
DE69433648T2 (de) 1994-08-23 2005-02-17 Human Genome Sciences, Inc. Menschliche chemokin-polypeptide
EP0777494B1 (en) 1994-08-23 2004-03-24 Human Genome Sciences, Inc. Human chemokine polypeptides
US6458349B1 (en) 1995-06-02 2002-10-01 Human Genome Sciences, Inc. Chemokine β-4 polypeptides
US6174995B1 (en) 1994-08-23 2001-01-16 Haodong Li Human chemokines, CKβ4 and CKβ10/MCP-4
AU3681795A (en) 1994-09-23 1996-04-09 University Of Nebraska Board Of Regents Polypeptide agonists and antagonists of human interleukin-8
KR100507431B1 (ko) 1994-11-07 2005-12-21 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 종양괴사인자-γ
US5602008A (en) 1994-11-29 1997-02-11 Incyte Pharmaceuticals, Inc. DNA encoding a liver expressed chemokine
US6046037A (en) 1994-12-30 2000-04-04 Hiatt; Andrew C. Method for producing immunoglobulins containing protection proteins in plants and their use
AU2363695A (en) 1995-04-27 1996-11-18 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor receptors
KR19990022283A (ko) 1995-06-05 1999-03-25 벤슨 로버트 에이치. 인체 케모킨 베타-11 및 인체 케모킨 알파-1
WO1996039521A1 (en) 1995-06-06 1996-12-12 Human Genome Sciences, Inc. Human chemokine beta-13
AU2698795A (en) 1995-06-06 1996-12-24 Human Genome Sciences, Inc. Human chemokine beta-12
EP0871664B1 (en) 1995-10-24 2004-01-02 Smithkline Beecham Corporation Mobilization of hematopoietic stem cells using a chemokine
ZA968896B (en) 1995-10-24 1997-04-24 Smithkline Beecham Corp Method of mobilizing hematopoietic stem cells
EP0885293B1 (en) 1996-02-23 2006-06-07 Human Genome Sciences, Inc. Human chemokine polypeptides
WO1997033904A1 (en) 1996-03-12 1997-09-18 Human Genome Sciences, Inc. Death domain containing receptors
AU5711196A (en) 1996-03-14 1997-10-01 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule i
JP2000508527A (ja) 1996-03-27 2000-07-11 アイコス コーポレイション 単球走化性タンパク質―５物質及び方法
US6290948B1 (en) 1996-05-14 2001-09-18 Smithkline Beecham Corporation Method of treating sepsis and ARDS using chamohine beta-10
JP2000514295A (ja) 1996-07-05 2000-10-31 シェーリング コーポレイション 哺乳動物のケモカイン試薬
EP0920505B1 (en) 1996-08-16 2008-06-04 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
CA2264200A1 (en) 1996-08-16 1998-02-26 Human Genome Sciences, Inc. Human endokine alpha
GB9617923D0 (en) 1996-08-28 1996-10-09 Smithkline Beecham Plc Novel receptor
AU4243097A (en) 1996-09-10 1998-04-02 Schering Corporation Mammalian chemokines, related reagents
WO1998014573A1 (en) 1996-09-30 1998-04-09 The General Hospital Corporation Mcp-4 and mcp-5: novel chemokines
WO1998017800A1 (fr) 1996-10-17 1998-04-30 Shionogi & Co., Ltd. Larc, nouvelle chimiokine cc humaine
AU731553B2 (en) 1996-10-25 2001-04-05 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine alpha
US6096300A (en) 1996-11-15 2000-08-01 Advanced Research And Technology Institute Treatment of myeloproliferative disease with exodus chemokine
US7101987B2 (en) * 1996-11-27 2006-09-05 Schering Corporation CCL27 polypeptides
DE69837996T2 (de) 1997-01-14 2008-02-28 Human Genome Sciences, Inc. Tumornekrosefaktor-rezeptoren 6 alpha& 6 beta
EP0990031B1 (en) 1997-01-14 2006-03-29 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor receptor 5
EP1012274B2 (en) 1997-01-28 2011-06-15 Human Genome Sciences, Inc. Death domain containing receptor 4 (dr4: death receptor 4), member of the tnf-receptor superfamily and binding to trail (ap0-2l)
CA2285040C (en) 1997-03-17 2009-01-27 Human Genome Sciences, Inc. Death domain containing receptor 5
US6972323B1 (en) * 1997-04-01 2005-12-06 Sankyo Company, Limited Anti-Fas antibodies
EP0979282A1 (en) 1997-04-30 2000-02-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Rat st38.2 chemokine
DE69833755T2 (de) 1997-05-21 2006-12-28 Biovation Ltd. Verfahren zur herstellung von nicht-immunogenen proteinen
WO1998054202A1 (en) 1997-05-30 1998-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor receptor tr10
EP0988371A4 (en) 1997-06-11 2002-11-04 Human Genome Sciences Inc TR9 HUMAN RECEPTOR OF TUMOR NECROSIS FACTOR
ES2277432T3 (es) 1998-03-18 2007-07-01 Corixa Corporation Compuestos y metodos para terapia y diagnosis de cancer de pulmon.
AU770555B2 (en) 1998-08-17 2004-02-26 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
ATE352559T1 (de) 1998-12-08 2007-02-15 Biovation Ltd Verfahren zur verminderung der immunogenität von proteinen
US6645491B1 (en) 1999-02-03 2003-11-11 Schering Corporation Method for treating inflammatory conditions using an antibody to MIP-3α
WO2000046248A1 (en) * 1999-02-03 2000-08-10 Schering Corporation Use of agonists or antagonists of mip-3a in therapy
DE60136527D1 (de) 2000-03-03 2008-12-24 Cambridge Antibody Tech Antikörper gegen eotaxin und deren verwendung
US20040197329A1 (en) 2000-10-13 2004-10-07 Yasunori Nakayama Remedies or preventives for rheumatoid arthritis
DK1642910T3 (da) * 2000-12-05 2012-05-07 Alexion Pharma Inc Rationelt designede atistoffer
US7468253B2 (en) 2001-06-07 2008-12-23 Chemocentryx, Inc. Method for multiple chemokine receptor screening for antagonists using RAM assay
WO2002101350A2 (en) 2001-06-07 2002-12-19 Chemocentryx Cell migration assay
US7442512B2 (en) 2001-11-30 2008-10-28 Chemocentryx, Inc. Compositions and methods for detecting and treating diseases and conditions related to chemokine receptors
DE60226641D1 (de) 2001-12-03 2008-06-26 Amgen Fremont Inc Antikörperkategorisierung auf der grundlage von bindungseigenschaften
ATE518884T1 (de) 2002-05-01 2011-08-15 Human Genome Sciences Inc Spezifisch an chemokin beta-4 bindende antikörper
EP2484381A1 (en) * 2003-01-24 2012-08-08 Elan Pharmaceuticals Inc. Composition for a treatment of demyelinating diseases and paralysis by administration of remyelinating agents
JP4644663B2 (ja) 2003-06-03 2011-03-02 セル ジェネシス インコーポレイテッド ペプチド開裂部位を用いた単一ベクターからの組換えポリペプチドの高められた発現のための構成と方法
BRPI0416141B8 (pt) 2003-11-01 2021-05-25 Biovation Ltd anticorpo anti-cd52 modificado, composição farmacêutica, vetores de expressão, e método para preparar uma imunoglobulina
US7780963B2 (en) * 2004-10-25 2010-08-24 Merck & Co., Inc. Anti-ADDL antibodies and uses thereof
US7723486B2 (en) 2005-02-08 2010-05-25 Optein, Inc. Antibodies to TGF-β
JP2009096716A (ja) * 2006-01-19 2009-05-07 Eisai R & D Management Co Ltd 抗ｃｃｌ２０抗体による自己免疫疾患の治療
EP3967712B1 (en) 2007-11-08 2024-01-03 Precision Biologics, Inc. Recombinant monoclonal antibodies and corresponding antigens for colon and pancreatic cancers
CA2982321C (en) * 2007-12-14 2021-01-05 Novo Nordisk A/S Antibodies against human nkg2d and uses thereof
HRP20160857T4 (hr) * 2008-10-01 2022-12-09 Amgen Research (Munich) Gmbh Bispecifična jednolančana protutijela, specifična za visokomolekulske ciljne antigene
TWI589587B (zh) * 2010-11-19 2017-07-01 衛材Ｒ＆Ｄ企管股份有限公司 中和性抗－ｃｃｌ２０抗體
WO2013005649A1 (ja) * 2011-07-01 2013-01-10 協和発酵キリン株式会社 抗ヒトｃｃｒ６抗体
JP7089866B2 (ja) 2017-12-22 2022-06-23 セーレン株式会社 開口部を有するシート状物およびその製造方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009156994A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-30 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. Ccl20-specific antibodies for cancer therapy

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2007 May, 292(5):G1263-71. *

Also Published As

Publication number Publication date
TWI589587B (zh) 2017-07-01
IL226383B (en) 2018-07-31
CO6761352A2 (es) 2013-09-30
US20120148592A1 (en) 2012-06-14
EA029419B1 (ru) 2018-03-30
AR084141A1 (es) 2013-04-24
SG191716A1 (en) 2013-08-30
MA34738B1 (fr) 2013-12-03
PE20180249A1 (es) 2018-02-02
IL226383A0 (en) 2013-07-31
JP6289520B2 (ja) 2018-03-07
AU2011329647B2 (en) 2015-10-22
CL2013001403A1 (es) 2014-08-08
MX361929B (es) 2018-12-19
PH12013500990A1 (en) 2022-11-23
KR101919170B1 (ko) 2018-11-15
EP2640744A2 (en) 2013-09-25
AU2011329647A1 (en) 2013-05-02
UA114077C2 (xx) 2017-04-25
ZA201303571B (en) 2014-12-23
AU2016200359A1 (en) 2016-02-11
CA2818548A1 (en) 2012-05-24
PE20140633A1 (es) 2014-05-30
JP2016093195A (ja) 2016-05-26
JP5996549B2 (ja) 2016-09-21
ZA201406017B (en) 2017-06-28
US9133273B2 (en) 2015-09-15
EA201390738A1 (ru) 2013-12-30
ZA201701051B (en) 2018-05-30
SG10201509499RA (en) 2015-12-30
CN103874707A (zh) 2014-06-18
WO2012068540A3 (en) 2012-09-27
MX2013005532A (es) 2013-09-26
CR20130228A (es) 2013-09-18
BR112013012396A2 (pt) 2020-11-10
WO2012068540A2 (en) 2012-05-24
JP2018042578A (ja) 2018-03-22
US9809647B2 (en) 2017-11-07
US20140045215A1 (en) 2014-02-13
US20160046707A1 (en) 2016-02-18
EP2640744A4 (en) 2014-05-28
DOP2013000111A (es) 2014-06-15
NZ611269A (en) 2015-03-27
AU2016200359B2 (en) 2018-05-24
US8491901B2 (en) 2013-07-23
CN103874707B (zh) 2017-04-19
JP2014502154A (ja) 2014-01-30
TW201305204A (zh) 2013-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101919170B1 (ko) 중화 항-ccl20 항체
KR102612930B1 (ko) Cd127에 대한 항체
KR101601387B1 (ko) c-KIT 항체 및 이의 용도
KR102444717B1 (ko) 인간화 항-pacap 항체 및 그의 용도
KR102330653B1 (ko) Il-18 결합 분자
JP6140777B2 (ja) ヒトｉｌ−６受容体に対する高親和性抗体
KR102255099B1 (ko) 2 이상의 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 조성물
TW201023890A (en) Antagonists of IL-6 to prevent or thrombosis
TW201130973A (en) Human antigen binding proteins that bind β-klotho, FGF receptors and complexes thereof
KR20090088950A (ko) 가공된 항-ｔｓｌｐ 항체
CN114685658B (zh) Ox40的靶向抗体及其制备方法和应用
KR20200135331A (ko) 고양이 맥도너 육종(fms)-유사 티로신 키나제 3 수용체 리간드(flt3l)에 대한 항체 및 자가면역 및 염증 질환을 치료하기 위한 이의 용도
RU2781553C2 (ru) Антитела к pac1 и варианты их применения

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

Patent event date: 20130618

Patent event code: PA01051R01D

Comment text: International Patent Application

N231 Notification of change of applicant
PN2301 Change of applicant

Patent event date: 20131111

Comment text: Notification of Change of Applicant

Patent event code: PN23011R01D

PG1501 Laying open of application
A201 Request for examination
PA0201 Request for examination

Patent event code: PA02012R01D

Patent event date: 20161118

Comment text: Request for Examination of Application

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20180130

Patent event code: PE09021S01D

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20180627

Patent event code: PE09021S01D

E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

Patent event code: PE07011S01D

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event date: 20181008

PR0701 Registration of establishment

Comment text: Registration of Establishment

Patent event date: 20181109

Patent event code: PR07011E01D

PR1002 Payment of registration fee

Payment date: 20181109

End annual number: 3

Start annual number: 1

PG1601 Publication of registration
PC1903 Unpaid annual fee