JPS6312846B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は動物発痘組織より得られる特定物質を
有効成分とする免疫促進剤に関する。 従来免疫促進物質として例えばBCG、溶連菌
等の細菌、細菌々体成分、ある種のカワラタケ菌
糸体抽出成分、ポリヌクレオチド、レバミゾール
多糖類、その他が知られている。免疫促進物質は
ウイルス性疾患、細菌性疾患および特に各種腫瘍
の治療に、それ自体であるいは他の薬剤ならびに
治療法と併用して応用し得るものと期待されてい
る。しかし現在特に有効な免疫促進物質は知られ
ていない。 本発明者はワクシニアウイルスを接種し、発痘
させた各種動物組織、培養細胞、もしくは培養組
織（以下これらを単に発痘組織と呼ぶ）を処理し
て抽出した物質につき研究した結果、該物質が生
体の免疫グロブリンＧ（以下IgGと呼ぶ）、免疫グ
ロブリンＭ（以下IgMと呼ぶ）の産生を選択的に
促進し、免疫グロブリンＥ（以下IgEと呼ぶ）の
産生に対し実質的に影響を与えないことを見出し
た。本物質はIgGおよびIgMの免疫抗体産生能を
特異的に高めかつアトピー性疾患惹起抗体である
IgEの産生には無影響ないし抑制的傾向を示すた
め、生体に投与した場合好ましい選択的免疫促進
作用を示しかつ毒性が極めて低く、生体の異物に
対する防禦力および自然治瘉力を回復、増強する
ので、各種感染症および悪性腫瘍の治療剤、治療
補助剤ならびに予防剤として、また悪性腫瘍等術
後、免疫能低下の回復促進および病後の自然治瘉
力回復促進剤として有用である。 本発明の免疫促進物質有効成分は以下の工程で
抽出される。 (a) 無菌的に採取した発痘組織を磨砕しその１−
５倍量のフエノール加グリセリン水を加え乳状
とした後、濾過または遠心分離することによつ
て赤かつ色の液体を得る。 (b) 前記液体を等電点付近のPHに調整して加熱
し、除蛋白した後ザイツ濾過板を用いて濾過す
る。 (c) 前記濾液を弱アルカリ性として煮沸した後、
濾過し鉱酸で弱酸性とした後適当な吸着剤に吸
着させる。 (d) 前記吸着剤に水または有機溶媒を加えて溶出
し、溶出液を減圧下に蒸発乾固または凍結乾燥
することによつて、かつ色の目的物質を得る。 本発明において発痘組織とは、ワクシニアウイ
ルスの各種接種方法又は培養方法にて得たウイル
ス感染培養組織、培養細胞および各種動物のウイ
ルス感染炎症組織またはふ化鶏卵の漿尿膜等であ
る。 前記工程(c)で用いる鉱酸としては、塩酸、硫
酸、臭化水素酸等をあげることができる。また吸
着剤としては活性炭、カオリン、イオン交換樹脂
をあげることができる。 工程(d)で用いられる溶出溶媒としては水、メタ
ノール、エタノール、イソプロパノール等があ
り、またこれ等の適当な混合溶液を使用すること
もできる。 前記操作によつて抽出、精製された本発明有効
成分は、以下の物理化学的性質を有する： 性状：かつ色無定形の吸湿性粉末 溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶 紫外部吸収：λmax255−275nｍ ニンヒドリン反応：陽性 本発明物質２mgをとり、過塩素酸１mlを加
え、液が無色となるまで加熱し、希硫酸３ml、
塩酸アミドール0.4ｇおよび亜硫酸水素ナトリ
ウム８ｇに水100mlを加えて溶かした液２ml、
モリデン酸アンモニウム１ｇに水30mlを加えて
溶かした液２mlを加え放置するとき液は青色を
呈し、 本発明物質５mgをとり、水を加えて溶かし10
mlとし、この液１mlに、オルシン0.2ｇおよび
硫酸第二鉄アンモニウム0.135ｇにエタノール
５mlを加えて溶かし、この液を塩酸83mlに加
え、水を加えて100mlとした液、３mlを加え沸
騰水浴中で加熱するとき、液は緑色を呈し、 本発明物質の水溶液は硝酸銀試薬で沈澱を生
じ、そして 本発明物質に対する各種蛋白検出反応は陰性
である。 以下は本発明の抽出法の実施例である。 但し、これらは本発明の範囲を限定するもので
はない。 実施例 １ 健康な成熟家兎の皮膚にワクシニアウイルスを
接種し発痘させた後、発痘した皮膚を無菌的に剔
出し、これを細切した後フエノール加 グリセリ
ン水を加え、ホモゲナイザーで磨砕し乳状とす
る。次いでこれを遠心濾過し、得られた濾液を塩
酸でPH4.8−5.5とし、流通蒸気で100℃に加熱し、
濾過する。濾液はさらにザイツ濾過板を用いて濾
過した後水酸化ナトリウムでPH9.2とし、さらに
100℃に加熱した後、濾過する。濾液を塩酸でPH
4.5とし、活性炭1.5％を加え、１−５時間撹拌し
た後濾過する。この活性炭に水を加え、水酸化ナ
トリウムでPH9.4−10とし、３−５時間撹拌した
後濾過する。濾液を塩酸でPH7.0−7.2とし、減圧
下に乾固する。発痘皮膚１Kgからの収量は1.5−
２ｇであつた。 実施例 ２ 実施例１と同様にして得た吸着活性炭にメタノ
ールを加え、１時間撹拌した後濾過する。減圧下
に乾固して有効成分を得る。発痘皮膚１Kgからの
収量は４−６ｇであつた。 本発明物質の薬理作用について次の試験を行な
い、その結果を表にまとめた。 () 急性毒性試験 各群10匹のマウスを用いて、本発明物質の急
性毒性試験を行なつた。その結果を次の第１表
にまとめる。

【表】 () 薬理試験 (1) 免疫促進作用 (a) 溶血斑形成細胞（HPFC）産生試験 カニンガム（A.J.Cunningham；
Nature、207、1106−1107（1965））の方法
によりマウス（DDY系）をヒツジ赤血球
で免疫した後本発明物質５mg／Kgおよび10
mg／Kgおよび免疫抑制剤シクロオスフアミ
ド（以下CPと呼ぶ）10mg／Kgをそれぞれ
１群６匹のマウスに５日間投与し、免疫後
３、５および７日目に脾臓の溶血斑形成細
胞数を測定した。結果を第１図に示す。本
発明組成物投与群の免疫後５日目の溶血斑
形成細胞数は第１図中に＊（Ｐ＜0.05）お
よび＊＊（Ｐ＜0.01）のマークで示す通
り、対照群に比して有意に増加し、本実験
より本発明物質がIgGおよびIgMの産生を
促進することが判明した。 また、ヒツジ赤血球による免疫の２日及
び１日前にCP25mg／Kgを投与したマウス
について、本発明物質の効果を調べた。結
果を第２図に示す。本発明物質５mg／Kgの
投与によつて、CPにより抑制された免疫
反応が、３日目及び７日目に有意に（＜
0.05）回復した。 (b) IgE産生試験 ラツト（ウイスター系）を抗原（ブタ回
虫抽出蛋白質にジニトロフエニル基を結合
させたもの）と百日咳ワクチンで免疫した
後、本発明物質10mg／Kg、20mg／Kgおよび
50mg／Kgをそれぞれ１群８匹、CP10mg／
Kgを１群４匹に５日間投与し、９日目に採
取した血清中のIgE量を48時間ホモPCA
（受働的皮膚アナフイラキシー）反応で測
定した。結果を第３図に示す。CP投与群
の血清中IgE量（PCA力価）は、第３図中
に＊＊（Ｐ＜0.01）のマークで示す通り対
照に比して有意に減少したが、本発明組成
物投与群では対照に比して統計学的差異が
認められず、本実験により本発明物質が
IgEの産生を促進しないことが判明した。 (2) 抗癌作用 １群10匹のウイスター系ラツトを用いて、
3′−メチル−ジエチルアミノアゾベンゼン
（以下DABと呼ぶ）による肝細胞癌への本発
明物質の効果を調べた。DABは飼料に0.06
％混入させて与えた。DAB投与によつて12
週には過形成結節が著しくなり、以降DAB
投与を中止した際にも、また引続き投与した
場合にも26週までには著名な肝腫大を伴なつ
た肝細胞癌あるいは混合型肝癌が出現した。 DAB投与を12週で中止し、13週より26週
まで本発明物質48mg／Kg宛、週５日腹腔内投
与した群では、26週まで全く癌腫の形成が認
められなかつた。尚、一部27週以降再度本発
明物質の投与を中止し観察したが、31週まで
癌腫の発現はなかつた。13週以降本発明物質
をDABと同時投与した群では、10匹中４匹
に癌腫の発現がみられず、死亡例は皆無であ
つた。また、試験開始より同時投与した群で
は、癌化を完全に抑制し健常と同一であつ
た。 (3) 肝硬変抑制作用 １群10匹のウイスター系ラツトを用いて、
四塩化炭素（CCl₄）によつて惹起される肝
硬変に対する本発明物質の効果を調べた。 CCl₄は同量のオリーブ油を混合したもの
を10mg／Kg、週２回、15週皮下投与し、本発
明物質は48mg／Kg宛、週５回腹腔内投与し
た。対照群では15週に著名な偽小葉の形成や
腹水の貯溜など完成した肝硬変の所見を呈し
たが、本発明物質をCCl₄と同時に投与した
群では著変なく、肝硬変の像は全く抑えられ
ていた。 本発明物質を活性成分として含有する薬剤は例
えば錠剤、カプセル、顆粒剤、注射剤、液剤、座
剤の形態とすることができる。 錠剤、カプセル、顆粒剤を製造するための製剤
組成物としては例えばデンプン、乳糖、マンニト
ール等の賦形剤、微結晶セルロース、メチルセル
ロース、その他のセルロース誘導体、アラビアゴ
ム、ゼラチン、ポリエチレン、ポリビニルアルコ
ール、ポリビニルピロリドン等の結合剤、グリセ
ロール等の湿潤剤、カルボキシメチルセルロー
ス、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール
等の崩壊剤、セチルアルコール、グリセリン、脂
肪酸エステル類等の界面活性剤、タルク、ステア
リン酸マグネシウム、カルシウム、固体ポリエチ
レングリコール等の滑沢剤、その他被覆剤、着色
剤、矯味矯臭剤などがあげられる。 注射剤を製造するための製剤組成物としては注
射用蒸留水、生理食温水、５−20％ブドウ糖注射
液、注射用植物油、エタノール、プロピレングリ
コール、ポリエチレングリコール類等の溶剤、ピ
ロ亜硫酸ナトリウム、硫化水素ナトリウム、ｌ−
アスコルビン酸、チオグリコール酸、クエン酸
塩、酢酸塩、リン酸塩等の安定剤、塩酸プロカイ
ン、ブドウ糖等の無痛化剤、その他等張化剤、溶
解補助剤、保存剤、懸濁化剤、乳化剤等があげら
れる。注射用組成物は無菌の溶液、懸濁液、乳濁
液もしくは用時溶剤に溶解して用いる剤型とする
ことができる。 坐剤を製造するための製剤組成物はカカオ脂、
ラウリン脂、グリセロゼラチン、マクロゴール、
Witepsol（登録商標、ダイナマイト・ノーベル
Ａ・Ｇ・）等の基剤および界面活性剤、保存剤な
どがあげられる。 本発明物質は錠剤、カプセル等の形で経口的
に、注射剤の形で非経口的におよび坐剤の形で経
直腸的に投与される。 本発明物質の１日投与量は0.01mg／Kgないし10
mg／Kgが一般的であるが、疾患、症状の程度によ
り適宜変更することができる。 本発明物質を活性成分として含有する薬剤の処
方例を以下に示すが、これ等に限定されるもので
はない。 処方例 １ （全重量450mgの錠剤） 本発明物質 100mg 乳 糖 250mg 結晶セルロース 80mg ステアリン酸マグネシウム 20mg 計450mg 処方例 ２ （充填物重量230mgのカプセル） 本発明物質 10mg 乳 糖 135mg バレイシヨンデンプン 50mg ステアリン酸マグネシウム ５mg タルク 10mg 計230mg 処方例 ３ （容量１mlの注射用アンプル） 本発明物質 １mg 注射用蒸留水 適量 計１ml 処方例 ４ （全量２ｇの坐剤） 本発明物質 20mg カカオ脂 1980mg 計2000mg

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明物質の溶血斑形成細胞産生にお
よぼす影響を示すグラフ、第２図はシクロホスフ
アミドで前処置した場合の本発明物質の溶血斑形
成細胞産生におよぼす影響を示すグラフ、第３図
は本発明物質のIgE産生におよぼす影響を示すグ
ラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の物理化学的性質： 性状：かつ色無定形の吸湿性粉末 溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶 紫外部吸収：λmax255−275nｍ ニンヒドリン反応：陽性 本発明物質２mgをとり、過塩素酸１mlを加
   え、液が無色となるまで加熱し、希硫酸３ml、
   塩酸アミドール0.4ｇおよび亜硫酸水素ナトリ
   ウム８ｇに水100mlを加えて溶かした液２ml、
   モリデン酸アンモニウム１ｇに水30mlを加えて
   溶かした液２mlを加え放置するとき、液は青色
   を呈し、 本発明物質５mgをとり、水を加えて溶かし10
   mlとし、この液１mlに、オルシン0.2ｇおよび
   硫酸第二鉄アンモニウム0.135ｇにエタノール
   ５mlを加えて溶かし、この液を塩酸83mlに加
   え、水を加えて100mlとした液３mlを加え沸騰
   水浴中で加熱するとき、液は緑色を呈し、 本発明物質の水溶液は硝酸銀試薬で沈澱を生
   じ、そして 本発明物質に対する各種蛋白検出反応は陰性
   である、 を有する物質を有効成分とする選択的免疫促進
   剤。