JPH0228115A

JPH0228115A - 生理活性物質及び該物質を含有する医薬組成物

Info

Publication number: JPH0228115A
Application number: JP1111346A
Authority: JP
Inventors: Jinemon Konishi; 小西　甚右衛門; Giichi Hamada; 浜田　義一
Original assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1988-04-30
Filing date: 1989-04-28
Publication date: 1990-01-30
Anticipated expiration: 2012-11-05
Also published as: EP0341209B1; JP2673719B2; DE68909100D1; DE68909100T2; EP0341209A3; ES2059816T3; ATE94401T1; EP0341209A2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、発痘組織より抽出した新規生理活性物質、そ
の製造方法及び該物質を有効成分として含有する医薬組
成物に関する。

（従来の技術）本発明者らは、ワクチニアウィルス、牛痘ウィルス等の
各種ポックスウィルスを接種して発痘させた動物組織、
培養細胞または培養組織（以下、これらを単に発痘組織
という）中に含まれる生理活性物質について研究してい
たところ、鎮痛、抗炎症、鎮痛等の薬理作用を有し、特
にストレス負荷等によって病態状態に陥った動物におい
て顕著な薬理作用を示す有効成分の抽出に成功した。

薬剤の連用時に限らず、注射剤等に比べて経口剤は患者
にとって用いやすく好ましい剤形であるが、経口投与で
は効果を示さない薬物も多い０本発明者らは発痘組織よ
り抽出した新規生理活性物質が経口、非経口投与におい
ても優れた薬理作用を有することを見出した。

（発明が解決しようとする問題点）本発明の目的は、発痘組織より抽出した新規生理活性物
質、その製造方法及び該物質を有効成分として含有する
医薬組成物を提供することにある。

（問題点を解決するための手段）本発明生理活性物質は、発痘組織に抽出溶媒を加えて磨
砕し組織片を除去した後、除蛋白処理を行い、これを吸
着剤に吸着せしめ、次いで吸着成分を溶出し、溶出成分
の水溶液をエタノールに添加して析出した沈澱を分取し
た後、分子量による分画を行うことにより得ることがで
きる。

本発明に用いるウィルスとしては、起炎作用を有するウ
ィルス類、好ましくは、ワクチニアウィルス、手直ウィ
ルス、痘渣ウィルス、エフトロメリアウィルス、サルポ
ックスウィルス等のオルソポックスウィルス、オーツウ
ィルス、バラワクチニアウィルス、ウシ乳頭状口内炎ウ
ィルス等のパラポックスウィルス、ヒツジポックスウィ
ルス、ヤギポックスウィルス、塊成病ウィルス等のヤギ
ポックスウィルス、ニワトリポックスウィルス、ノウサ
ギ線維腫ウィルス等のトリポックスウィルス、ウサギ粘
液腫ウィルス、ウサギ線維腫ウィルス等のウサギポック
スウィルス、その他豚痘ウィルス、Ｙａｖａサル腫瘍ウ
ィルス、Ｔａｒａヒツジポックスウィルスックスウィル
ス科に属するウィルス類を挙げることができる。

感染組織を得るための動物としては、ウサギ、ヒツジ、
ヤギ、ブタ、ウシ、ウマ、サル、ハムスターモルモット
、ラット、マウス、ニワトリなど種々の哺乳動物や鳥類
を用いることができ、ポックスウィルスの種類や目的に
応じて選択できる。

又、培養組織としては、使用する種類のポックスウィル
スが増殖可能な培養細胞を用いることができ、例えば、
ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ、ウマ、サル、ハム
スター、モルモット、ラット、マウス及びそれら胎児の
腎臓、皮膚、肺臓、畢丸、肝臓、筋肉、副腎、甲状腺、
脳、神経細胞、血球など各組織の培養細胞や腫瘍細胞培
養株、Ｈｅ１ａ細胞等のヒト由来の培養組織、並びに卵
漿尿膜などが挙げられる。

これら感染組織を無菌的に採取して磨砕し、その１乃至
５倍量の抽出溶媒を加えて乳化懸濁液とする。

抽出溶媒としては、蒸留水、生理食塩水、弱酸性乃至弱
塩基性の緩衝液などを用いることができ、グリセリン等
の安定化剤、フェノール等の殺菌・防腐剤、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム等の無機塩類な
どを適宜添加してもよい、この時、凍結融解、超音波、
細胞膜溶解酵素又は界面活性剤等の処理により細胞組織
を破壊して抽出を容易にすることができる。

得られた乳状抽出液を濾過又は遠心分離して組織片を除
去した後、除蛋白処理を行う、除蛋白は、公知の方法に
より実施でき、加熱、超音波、蛋白質変性剤、例えば、
酸、塩基、尿素、グアニジン、有機溶媒、界面活性剤等
による処理、等電点沈澱、塩析等の方法を適用すること
ができる０次いで、濾紙（セルロース、ニトロセルロー
ス等）、グラスフィルター、セライト、ザイツ濾過板等
を用いた濾過、限外濾過、ゲル濾過、イオン交換樹脂、
遠心分離などにより析出してきた不溶蛋白質を除去する
。

こうして得られた有効成分含有抽出液を、塩酸、硫酸、
臭化水素酸等の酸を用いて酸性、好ましくはｐＨ３，５
乃至５．５に調整し、吸着剤への吸着操作を行う、使用
可能な吸着剤としては、活性炭、カオリン、イオン交換
樹脂などを挙げることができ、抽出液中に吸着剤を添加
し撹拌するか、吸着剤を充填したカラムを通過させるこ
とにより、有効成分を吸着させることができる。

吸着成分より、本発明有効成分含有物質を溶出するには
、前記吸着剤に溶出溶媒、好ましくは塩基性溶液を加え
ｐ）１９乃至１２として、室温又は適宜加熱して或いは
撹拌して溶出し、濾過等の通常の方法で吸着剤を除去し
て達成できる。

次いで、吸着剤からの溶出成分を濃縮又は乾固復水に溶
解して濃縮水溶液とし、これをエタノールに添加して、
６０乃至９５％、好ましくは７０乃至９０％のエタノー
ル濃度の溶液とし、析出する沈澱を濾過、遠心分離等の
通常の方法により分取する。このようにして得られたエ
タノール沈澱物を水又は水性緩衝液に溶解した後、限外
濾過、ゲル濾過等の手段を用いて分子量による分画を行
うことにより本発明生理活性物質を得ることができる。

（実施例）以下に、本発明生理活性物質の製造方法の一例を示す。

実施例１゜健康な成熟家鬼の皮膚にワクチニアウィルスを接種し発
痘させた後、発痘した皮膚を無菌的にＩＩＩ出し、これ
を細切した後フェノール水を加え、ホモゲナイザーで磨
砕し乳状物とした。次いでこれを遠心濾過し、得られた
濾液を塩酸でｐ　Ｈ４，８乃至５．５に目撃した後、流
通蒸気下１００’Ｃで加熱処理した７濾過して除蛋白し
た後、水酸化すトリウムで約ｐＨ９とし７、さらに１０
０’Ｃで加熱処理した後濾過した。濾液を塩酸でｐｌ（
３，５乃至５に調整し、活性炭７乃至１５％を加えて３
乃至５時間撹拌した後濾過した。濾取した活性炭に水を
加え、水酸化フトリウムでｐＨ１０，５乃至１１．５と
し、４５乃至６０℃で１．５乃至３時間撹拌しまた後Ｉ
！！過した。濾液を塩酸で中和した後、減圧下に乾固し
た１発痘皮膚ｉｂからの収量は４乃至６ｇであった。

天施例２゜実施例１の抽出物質を蒸留水に溶解し、濾過して不溶物
を除去した後、これを約２，５乃至９倍容のエタノール
に添加し、析出した沈澱を濾取した０次いで、この画分
を蒸留水に溶解し、分９−量ｉｏ、ｏｏｏ以下を通ず限
外濾過膜を用いて限外濾過を行った。少量にｆｉ縮して
、そこに蒸留水を加え再び濾過を行い、この操作を数回
繰り返す、二とにより、本発明生理活性物質を・濾液と
してｉｌｔだ１本発明物質は、発痘皮膚゛１ｋｇから１
乃至１，５にの収量で得られた。

該生理活性物質の性状は淡黄褐色無定形の吸湿性粉末で
、分子１１万以下であり、チ１ｍ　ｉｚン、フェニルア
ラニン、アラニン等の各種アミノ酸、ウロカニン酸、乳
酸、シュウ酸等のを機酸、アデニン、チミン、グアニン
、シトシン等の核酸塩基、糖質、ウラシル、キサンチン
、リン等の物質を含有し、わずかに特巽なにおいがあり
、水溶解時のｐ　Ｈは７乃至８を示し、２６５乃至２７
５ｎｍに紫り１部吸収（λ＋ｓｍｘ　）を有する。

又、その他特性としては、各種蛋白質検出反応において
陰性で、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン、アミ
ラーゼ、リパーゼ等各種消化酵素に対して安定であり、
抗原性は認められない。

（作用）次に本発明生理活性物質に関する毒性試験結果の一例を
示す。

■、毒性試験５Ｄ−ＪＣＬ系雌雄ラット、ｄｄＹ系雌雄マウス及び日
本白色種ウサギをそれぞれ一群１０匹とし、本発明生理
活性物質を経口投与して急性毒性試験を行った。

その結果、マウス、ラット、ウサギの動物種及び性差に
関係なくＬＤｓ。値は１０．０００ｍｇ　／　ｋｇ以上
であり、本発明生理活性物質は非常に低毒性であること
がわかった。

又、亜急性毒性及び生殖試験など各種の安全性試験を行
ったが、各Ｒ３で全く異常は認められず、生殖試験にお
いても、母体、胎仔、新生仔及び出生仔の生殖能力に対
して全く影響は見られなかった。

次に、本発明生理活性物質の薬理試験の結果について述
べる。

■、薬理試験（１）鎮痛作用酢酸前生理食塩水をマウスに腹腔内投与した後発現する
ライジング回数を測定する“酢酸法”及びランダール・
セリット式圧刺激測定装置を用いてマウス尾根部に刺激
を加え、逃避反応を示すまでの加圧重量にて判定する“
尾王法”によって本発明生理活性物質の経口投与におけ
る鎮痛作用を調べた結果、５ＡＲＴストレス動物〔日薬
理誌、７１．　１９５−２１０（１９７５）　）を用い
た場合は、ＥＤ、。値が正常動物における値の３の１乃
至２．５分の１であり、。ストレス負荷の病態状態にお
いて特に顕著な鎮痛作用が示された。

又、痛覚闇値が低下しており慢性的な痛覚過敏状態にな
っている５ＡＲＴストレス動物の痛覚闇値を本発明生理
活性物質は正常レベルに回復する効果が認められた。

（２）鎮静作用マウスを用いて本発明生理活性物質の自発運動抑制作用
及び探索連動抑制作用を調べた結果、対照群に比へて有
意な抑制作用が見られた。

（３）臨床試験本発明生理活性物質を有効成分として含有する医薬組成
物と既存薬との比較試験を行った結果の一例を以下に述
べる。

腰痛症につき、ケトプロフェンとの２群比較を行った０
、＠者に対して本発明医薬組成物を有効成分量にして１
６■／日、ケトプロフェンは１５０ｇ／日を２週間経口
投与した。本則投与群は改善度においてケトプロフェン
群と同等で、安全度においてはケトプロフェン群より極
めて優れていた。

又、変形性膝関節症について、インドメタシンとの比較
試験を行った０本発明医薬組成物は上記と同量、インド
メタシンは７に／日を４週間経口投与した結果、改善度
はインドメタシンと同等で、安全度においてはインドメ
タシン群より優れるという結果が得られた。

（発明の効果）上記の試験結果からも明らかなように、本発明生理活性
物質は神経痛、変形性膝関節症、その他腰痛症、関節リ
ウマチ、関節炎、痛風等による痛みなどの各種有痛性疾
患、特にこれら疾患の慢性症状に対して優れた治療効果
を有し、鎮痛、抗炎症、鎮静剤等の医薬として非常に有
用性が高い。

ストレスを負荷した病態動物を用いた試験結果が示すよ
うに、本発明生理活性物質は痛覚閾値が低下し異常な痛
覚過敏状態を改善し、正常の痛覚閾値に回復させる作用
を有し、特に病態状態にある動物に対して優れた効果を
示すものである。

本発明生理活性物質については、経口投与によっても優
れた治療効果が認められ、又、ケトプロフェンやインド
メタシン等の既存薬に比べて低毒性であり副作用がほと
んどないため安全に長期的な使用ができ、特に慢性的な
疾患を治療するのに有利である。

（実施例）発痘組織から抽出した生理活性物質は、例えば錠剤、カ
プセル剤、顆粒剤、丸剤、細粒剤、散剤、シロップ剤、
液剤、注射剤、座剤等の形態の医薬組成物とすることが
できる。

処方にあたっては本発明有効成分を単独で用いてもよい
し、また他の医薬活性成分との配合剤とすることも可能
である。

有効成分である生理活性物質を、そのまま或いは適当な
添加剤、例えば乳糖、マンニット、トウモロコシデンプ
ン、バレイショデンブン等の慣用の賦形剤と共に、結晶
セルロース、セルロース誘導体、アラビアゴム、トウモ
ロコシデンプン、ゼラチン等の結合剤、トウモロコシデ
ンプン、バレイショデンブン、カルボキシメチルセルロ
ースカルシウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグ
ネシウム等の滑沢剤、その他増量剤、湿潤化剤、緩衝剤
、保存剤、香料等を適宜組み合わせて錠剤、カプセル剤
、顆粒剤、丸剤、細粒剤、散剤、シロップ剤、液剤等の
経口用剤とすることができる。

又、本発明生理活性物質を通常の方法により、注射剤、
座剤等の剤形に処方することもできる。

本発明医薬の望ましい投与量は、対象となる疾患の種類
、患者の年齢、性別、体格等の個体差、投与期間等によ
って変わるが、所望の効果を得るには、一般に成人に対
して有効成分量で一日に１乃至１００■、好ましくは４
乃至４０−ｇ経口投与することができる。

非経口投与（例えば注射剤）の場合、−日投与量は、前
記投与量の３乃至１０分の１の用量レベルのものが好ま
しい。

以下に本発明医薬組成物の処方例の一例を示す。

処方例１．（錠剤）本発明有効成分乳　　　糖結晶セルロースステアリン酸マグネシウム計　　１８０　　■

Claims

【特許請求の範囲】

（１）発痘組織に抽出溶媒を加えて磨砕し組織片を除去
した後、除蛋白処理を行い、これを吸着剤に吸着せしめ
、次いで吸着成分を溶出し、溶出成分の水溶液をエタノ
ールに添加して析出した沈澱を分取した後、分子量によ
る分画を行うことにより得られる生理活性物質。
（２）発痘組織から抽出される淡黄褐色無定形の吸湿性
粉末で、分子量１万以下であり、チロシン、フェニルア
ラニン、アラニン等の各種アミノ酸、ウロカニン酸、乳
酸、シュウ酸等の有機酸、アデニン、チミン、グアニン
、シトシン等の核酸塩基、糖質、ウラシル、キサンチン
、リン等の物質を含有し、わずかに特異なにおいがあり
、水溶解時のｐＨは７乃至８を示し、２６５乃至２７５
ｎｍに紫外部吸収（λ＿ｍ＿ａ＿ｘ）を有し、各種蛋白
質検出反応において陰性で、消化酵素に対して安定であ
り、抗原性は認められない生理活性物質。
（３）特許請求の範囲第１項又は第２項記載の生理活性
物質を有効成分として含有する鎮痛、鎮静、抗炎症剤。
（４）経口剤である特許請求の範囲第３項記載の鎮痛、
鎮静、抗炎症剤。
（５）成人に対する一日投与量が１乃至１００ｍｇであ
る特許請求の範囲第４項記載の鎮痛、鎮静、抗炎症剤。
（６）発痘組織に抽出溶媒を加えて磨砕し組織片を除去
した後、除蛋白処理を行い、これを吸着剤に吸着せしめ
、次いで吸着成分を溶出し、溶出成分の水溶液をエタノ
ールに添加して析出した沈澱を分取した後、分子量によ
る分画を行うことを特徴とする生理活性物質の製造方法
。