JP3213831B2 - 被検物質の活性測定方法 - Google Patents
被検物質の活性測定方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は活性型血液凝固第ＸII因
子の生成に対する被検物質の活性測定方法、更に詳しく
は血液凝固第ＸII因子の生成に対して阻害又は促進する
物質の活性測定方法に関するものである。
子の生成に対する被検物質の活性測定方法、更に詳しく
は血液凝固第ＸII因子の生成に対して阻害又は促進する
物質の活性測定方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ハーゲマン因子とも呼ばれる血液凝固第
ＸII因子（以下ＦＸIIと略称する）は内因系血液凝固の
連鎖反応系において最初に活性化される因子である。活
性化された血液凝固第ＸII因子（活性型血液凝固第ＸII
因子、以下ＦＸIIａと略称する）は血液凝固第ＸＩ因子
を活性化し、以下図３の（１）で示される内因系血液凝
固の一連の反応系が進行し、最終的には不溶性のフィブ
リンが生成して内因系血液凝固反応が完結する。
ＸII因子（以下ＦＸIIと略称する）は内因系血液凝固の
連鎖反応系において最初に活性化される因子である。活
性化された血液凝固第ＸII因子（活性型血液凝固第ＸII
因子、以下ＦＸIIａと略称する）は血液凝固第ＸＩ因子
を活性化し、以下図３の（１）で示される内因系血液凝
固の一連の反応系が進行し、最終的には不溶性のフィブ
リンが生成して内因系血液凝固反応が完結する。
【０００３】このフィブリン塊を溶解する一連の機構が
線溶系であり、ＦＸIIａは線溶系の初期相に関与してい
ることも知られている。即ち図３の（２）に示すよう
に、線溶系の主役であるプラスミンは不活性なプラスミ
ノーゲンとして血漿中に存在するが、ＦＸIIａはプラス
ミノーゲンを活性化するアクチベーターの一つである。
このように生成されたプラスミンが凝固したフィブリン
塊を分解する反応が線溶系の最終段階である。
線溶系であり、ＦＸIIａは線溶系の初期相に関与してい
ることも知られている。即ち図３の（２）に示すよう
に、線溶系の主役であるプラスミンは不活性なプラスミ
ノーゲンとして血漿中に存在するが、ＦＸIIａはプラス
ミノーゲンを活性化するアクチベーターの一つである。
このように生成されたプラスミンが凝固したフィブリン
塊を分解する反応が線溶系の最終段階である。
【０００４】又、ＦＸIIの活性化は血漿カリクレイン・
キニン系の開始段階でもある。この血漿カリクレイン・
キニン系は、生体内においては組織に対する傷害や侵害
刺激等によりＦＸIIが活性化されることによって一連の
酵素反応系が引き起こされると考えられている。即ち図
３の（３）に示すように、活性化されたＦＸIIａは、同
じく血漿中に存在する血漿プレカリクレインに作用し
て、これを活性型酵素の血漿カリクレインに変換し、次
いでこの血漿カリクレインが血漿中の高分子キニノーゲ
ン（以下ＨＫと略称する）に作用して、ブラジキニンを
遊離させる。
キニン系の開始段階でもある。この血漿カリクレイン・
キニン系は、生体内においては組織に対する傷害や侵害
刺激等によりＦＸIIが活性化されることによって一連の
酵素反応系が引き起こされると考えられている。即ち図
３の（３）に示すように、活性化されたＦＸIIａは、同
じく血漿中に存在する血漿プレカリクレインに作用し
て、これを活性型酵素の血漿カリクレインに変換し、次
いでこの血漿カリクレインが血漿中の高分子キニノーゲ
ン（以下ＨＫと略称する）に作用して、ブラジキニンを
遊離させる。
【０００５】カリクレイン・キニン系の生成産物である
ブラジキニンなどのキニン類は、末梢血管拡張に伴う降
圧、血管透過性の亢進、平滑筋の収縮又は弛緩、発痛、
起炎、白血球の遊走、副腎皮質からのカテコールアミン
の遊離作用など種々の生理活性を有するほか、アレルギ
ー反応を含めた急性炎症のメディエーターとしても知ら
れており、生体内における存在意義は大きい。
ブラジキニンなどのキニン類は、末梢血管拡張に伴う降
圧、血管透過性の亢進、平滑筋の収縮又は弛緩、発痛、
起炎、白血球の遊走、副腎皮質からのカテコールアミン
の遊離作用など種々の生理活性を有するほか、アレルギ
ー反応を含めた急性炎症のメディエーターとしても知ら
れており、生体内における存在意義は大きい。
【０００６】このように、ＦＸIIａは内因系血液凝固
系、線溶系及び血漿カリクレイン・キニン系の開始段階
において非常に重要な因子であり、ＦＸIIａの生成に影
響を及ぼす物質は血液凝固・線溶分野での薬剤として期
待できるだけでなく、血漿カリクレイン・キニン系にお
いて遊離されるブラジキニンは前述のような種々の生理
活性を有するので、抗炎症剤、鎮痛剤、抗アレルギー剤
としても使用し得る可能性がある。
系、線溶系及び血漿カリクレイン・キニン系の開始段階
において非常に重要な因子であり、ＦＸIIａの生成に影
響を及ぼす物質は血液凝固・線溶分野での薬剤として期
待できるだけでなく、血漿カリクレイン・キニン系にお
いて遊離されるブラジキニンは前述のような種々の生理
活性を有するので、抗炎症剤、鎮痛剤、抗アレルギー剤
としても使用し得る可能性がある。
【０００７】従って、内因系血液凝固系、線溶系及び血
漿カリクレイン・キニン系の開始因子であるＦＸIIａの
生成を阻害又は促進する物質の作用活性を簡便迅速且つ
正確に測定する方法を確立することは、上記のような生
体機能の調整に役立つ作用を知るうえで、又はかかる薬
剤を開発するうえで非常に有効な手段となる。
漿カリクレイン・キニン系の開始因子であるＦＸIIａの
生成を阻害又は促進する物質の作用活性を簡便迅速且つ
正確に測定する方法を確立することは、上記のような生
体機能の調整に役立つ作用を知るうえで、又はかかる薬
剤を開発するうえで非常に有効な手段となる。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、生体
内の各種生理反応系に関与するＦＸIIａの生成を阻害又
は促進する被検物質の活性を試験管内で簡便迅速且つ正
確に測定する方法を提供することにある。
内の各種生理反応系に関与するＦＸIIａの生成を阻害又
は促進する被検物質の活性を試験管内で簡便迅速且つ正
確に測定する方法を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】即ち本発明の被検物質の
活性測定方法は、被検物質の存在下、動物血漿に血液凝
固第ＸII因子活性化剤を加え血液凝固第ＸII因子の活性
化反応を開始させた後、血液凝固第ＸII因子活性化阻害
剤及び血漿カリクレイン阻害剤を加えて前記反応を停止
させ、前記反応において生成された活性型血液凝固第Ｘ
II因子を定量することを特徴とするものである。
活性測定方法は、被検物質の存在下、動物血漿に血液凝
固第ＸII因子活性化剤を加え血液凝固第ＸII因子の活性
化反応を開始させた後、血液凝固第ＸII因子活性化阻害
剤及び血漿カリクレイン阻害剤を加えて前記反応を停止
させ、前記反応において生成された活性型血液凝固第Ｘ
II因子を定量することを特徴とするものである。
【００１０】本発明の測定方法において使用することが
できる動物血漿は、血液凝固系及び血漿カリクレイン・
キニン系を有するものであれば如何なる動物の血漿でも
よく、例えばヒトの血漿、或いは家畜又は実験動物例え
ばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギ、サル、イヌ、ネ
コ、ウサギ、モルモット、ハムスター、ラット又はマウ
スの血漿が利用でき、好ましくはヒト血漿を用いること
ができる。
できる動物血漿は、血液凝固系及び血漿カリクレイン・
キニン系を有するものであれば如何なる動物の血漿でも
よく、例えばヒトの血漿、或いは家畜又は実験動物例え
ばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギ、サル、イヌ、ネ
コ、ウサギ、モルモット、ハムスター、ラット又はマウ
スの血漿が利用でき、好ましくはヒト血漿を用いること
ができる。
【００１１】これらの血漿は、慣用の方法により調製し
たものを用いることができ、例えばクエン酸存在下で採
血した後、遠心分離して得た加クエン酸血漿等を用いる
ことができる。又、常法によって製造された凍結乾燥血
漿等の製品を使用してもよい。調製された動物血漿は、
そのままで又は反応速度などを制御するために所望によ
り適宜希釈して用いてもよい。
たものを用いることができ、例えばクエン酸存在下で採
血した後、遠心分離して得た加クエン酸血漿等を用いる
ことができる。又、常法によって製造された凍結乾燥血
漿等の製品を使用してもよい。調製された動物血漿は、
そのままで又は反応速度などを制御するために所望によ
り適宜希釈して用いてもよい。
【００１２】ＦＸII活性化剤としては、ＦＸIIの活性化
作用を有する物質であれば如何なるものでも使用でき、
例えばガラス、カオリン、セライト、コラーゲン、ホモ
シスチン、尿酸ナトリウム、血小板や他の細胞の膜等の
細胞成分、フィブロネクチン、エラジン酸、クエルセチ
ン、ルチン、硫酸化糖脂質、プロテオグリカン、ムコ多
糖類、ステアリン酸ナトリウム、硫酸デキストラン、硫
酸アミローズ、カラゲニン並びにＦＸIIを限定分解して
活性化するプロテアーゼ等を単独で若しくは適宜組み合
わせて用いることが可能であり、これらＦＸII活性化剤
の使用濃度は適宜調整することができる。
作用を有する物質であれば如何なるものでも使用でき、
例えばガラス、カオリン、セライト、コラーゲン、ホモ
シスチン、尿酸ナトリウム、血小板や他の細胞の膜等の
細胞成分、フィブロネクチン、エラジン酸、クエルセチ
ン、ルチン、硫酸化糖脂質、プロテオグリカン、ムコ多
糖類、ステアリン酸ナトリウム、硫酸デキストラン、硫
酸アミローズ、カラゲニン並びにＦＸIIを限定分解して
活性化するプロテアーゼ等を単独で若しくは適宜組み合
わせて用いることが可能であり、これらＦＸII活性化剤
の使用濃度は適宜調整することができる。
【００１３】動物血漿、ＦＸII活性化剤及び被検物質か
らなる溶液の混合反応は、内因性のインヒビターが働き
難く、且つ反応の進行の制御を行い易くするためには０
℃乃至４℃で行うことが好ましい。反応時のｐＨは適宜
設定できるが、例えばヒト血漿を用いた場合には、ｐＨ
７．０乃至９．０で反応を行うのが好ましい。又、至適
な反応条件を設定するために、塩化ナトリウム等の塩類
や亜鉛イオン等の金属イオンの他、当該技術分野で慣用
の添加剤、補助剤等を反応系に適宜加えてもよい。
らなる溶液の混合反応は、内因性のインヒビターが働き
難く、且つ反応の進行の制御を行い易くするためには０
℃乃至４℃で行うことが好ましい。反応時のｐＨは適宜
設定できるが、例えばヒト血漿を用いた場合には、ｐＨ
７．０乃至９．０で反応を行うのが好ましい。又、至適
な反応条件を設定するために、塩化ナトリウム等の塩類
や亜鉛イオン等の金属イオンの他、当該技術分野で慣用
の添加剤、補助剤等を反応系に適宜加えてもよい。
【００１４】反応の時間は、動物血漿の量、ＦＸII活性
化剤及び被検物質の濃度又は反応液のｐＨ等によって適
宜設定できるが、ＦＸIIａの生成量が飽和に達すると被
検物質の作用の正確な評価ができないので、ＦＸIIａの
生成量が飽和に達する前、即ち反応時間と生成したＦＸ
IIａとの間に明確な正の対応関係、例えば評価上好まし
くは実質的に直線的な比例関係などが成立する時間内に
設定することが好ましい。
化剤及び被検物質の濃度又は反応液のｐＨ等によって適
宜設定できるが、ＦＸIIａの生成量が飽和に達すると被
検物質の作用の正確な評価ができないので、ＦＸIIａの
生成量が飽和に達する前、即ち反応時間と生成したＦＸ
IIａとの間に明確な正の対応関係、例えば評価上好まし
くは実質的に直線的な比例関係などが成立する時間内に
設定することが好ましい。
【００１５】前記反応を停止させるための方法として
は、反応におけるＦＸIIａの生成を停止させるための物
質、例えばポリブレンなどのＦＸII活性化阻害剤、及び
血漿カリクレインを特異的に阻害する阻害剤である、Ｆ
ＸIIａには実質的に無影響な血漿カリクレイン阻害剤、
例えばＳＢＴＩ（Soy Bean Trypsin Inhibitor：大豆由
来のトイプシンインヒビター）などを用いる。これによ
り、ＦＸIIａに対する基質を用いＦＸIIａの酵素活性を
指標として生成したＦＸIIａを定量することができる。
これらの阻害剤の濃度は、ＦＸIIａ活性に実質的に影響
を及ぼさない濃度範囲になるように適宜設定することが
できる。
は、反応におけるＦＸIIａの生成を停止させるための物
質、例えばポリブレンなどのＦＸII活性化阻害剤、及び
血漿カリクレインを特異的に阻害する阻害剤である、Ｆ
ＸIIａには実質的に無影響な血漿カリクレイン阻害剤、
例えばＳＢＴＩ（Soy Bean Trypsin Inhibitor：大豆由
来のトイプシンインヒビター）などを用いる。これによ
り、ＦＸIIａに対する基質を用いＦＸIIａの酵素活性を
指標として生成したＦＸIIａを定量することができる。
これらの阻害剤の濃度は、ＦＸIIａ活性に実質的に影響
を及ぼさない濃度範囲になるように適宜設定することが
できる。
【００１６】血漿カリクレイン・キニン系においては、
生成された血漿カリクレインによってＦＸIIａの生成が
促進されるフィードバック機構が知られているが、この
フィードバック機構を介さない純粋なＦＸII活性化反応
によるＦＸIIａの生成に対する被検物質の活性も本発明
方法で測定できる。この場合は、前記ＳＢＴＩ等の血漿
カリクレインの特異的阻害剤をＦＸII活性化前に予め反
応系に加えておくか、又はプレカリクレイン欠乏血漿若
しくは正常血漿から血漿プレカリクレインを除くか不活
性化して実質的に血漿プレカリクレインを欠乏状態とし
た血漿を動物血漿として用いることによって実施でき
る。
生成された血漿カリクレインによってＦＸIIａの生成が
促進されるフィードバック機構が知られているが、この
フィードバック機構を介さない純粋なＦＸII活性化反応
によるＦＸIIａの生成に対する被検物質の活性も本発明
方法で測定できる。この場合は、前記ＳＢＴＩ等の血漿
カリクレインの特異的阻害剤をＦＸII活性化前に予め反
応系に加えておくか、又はプレカリクレイン欠乏血漿若
しくは正常血漿から血漿プレカリクレインを除くか不活
性化して実質的に血漿プレカリクレインを欠乏状態とし
た血漿を動物血漿として用いることによって実施でき
る。
【００１７】生成されたＦＸIIａの定量は、慣用の方法
に従って行うことができる。例えばＦＸIIａの酵素活性
を利用してＦＸIIａに対する基質を用いて測定する方法
を利用することができ、血漿プレカリクレイン、血液凝
固第ＸＩ因子又はプラスミン等の天然基質の他、Ｄ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、Ｄ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−
Ａｒｇ−ｐＮＡ等の発色合成基質やＢｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ
Ｂｚ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＭＣＡ、Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｇ
ｌｙ−Ａｒｇ−ＭＣＡ等の蛍光合成基質などを用いる方
法が簡便であり通常よく用いられている。又、上記の基
質を用いる測定法の他にも、ラジオイムノアッセイ法
（ＲＩＡ）やエンザイムイムノアッセイ法（ＥＩＡ）等
の免疫学的測定法、クロマトグラフィー等を用いた定量
分析法なども利用することができる。
に従って行うことができる。例えばＦＸIIａの酵素活性
を利用してＦＸIIａに対する基質を用いて測定する方法
を利用することができ、血漿プレカリクレイン、血液凝
固第ＸＩ因子又はプラスミン等の天然基質の他、Ｄ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、Ｄ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−
Ａｒｇ−ｐＮＡ等の発色合成基質やＢｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ
Ｂｚ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＭＣＡ、Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｇ
ｌｙ−Ａｒｇ−ＭＣＡ等の蛍光合成基質などを用いる方
法が簡便であり通常よく用いられている。又、上記の基
質を用いる測定法の他にも、ラジオイムノアッセイ法
（ＲＩＡ）やエンザイムイムノアッセイ法（ＥＩＡ）等
の免疫学的測定法、クロマトグラフィー等を用いた定量
分析法なども利用することができる。
【００１８】
【実施例】以下の実施例において、本発明を更に詳細に
説明する。なお、以下の実施例は本発明を説明するため
の一例であり、限定的な意味を有するものではない。
説明する。なお、以下の実施例は本発明を説明するため
の一例であり、限定的な意味を有するものではない。
【００１９】希釈ヒト血漿、所定量の被検物質（被検
薬）、９０ｍＭＮａＣｌを含む２５ｍＭトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ８）からなる溶液に、デキストラン硫酸を終濃
度が２μｇ／ｍｌとなるように加え混合し、次いで氷水
中で１５分間インキュベーションした後、ポリブレン及
びＳＢＴＩを終濃度がそれぞれ２００μｇ／ｍｌ、４０
μｇ／ｍｌとなるように反応液に加えた。この反応液
を、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）中で１ｍＭＤ−Ｐｒｏ
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ｐＮＡとともに３０℃で３０分間イ
ンキュベーションした後、クエン酸を加えて反応を停止
させ、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、得ら
れた上澄みの４０５ｎｍにおける吸光度（ＦＸIIａ生成
量に相当）を測定した。
薬）、９０ｍＭＮａＣｌを含む２５ｍＭトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ８）からなる溶液に、デキストラン硫酸を終濃
度が２μｇ／ｍｌとなるように加え混合し、次いで氷水
中で１５分間インキュベーションした後、ポリブレン及
びＳＢＴＩを終濃度がそれぞれ２００μｇ／ｍｌ、４０
μｇ／ｍｌとなるように反応液に加えた。この反応液
を、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）中で１ｍＭＤ−Ｐｒｏ
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ｐＮＡとともに３０℃で３０分間イ
ンキュベーションした後、クエン酸を加えて反応を停止
させ、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、得ら
れた上澄みの４０５ｎｍにおける吸光度（ＦＸIIａ生成
量に相当）を測定した。
【００２０】図１に、前記反応においてインキュベーシ
ョン時間を種々に変化させた場合の吸光度の変化を示
す。図中、横軸は０℃におけるインキュベーション時間
（分）を表わし、縦軸は４０５ｎｍにおける吸光度を表
わす。図１において、インキュベーション時間が１７分
間程度まではＦＸIIａが経時的にほぼ直線的に増加して
生成されるため、０〜１７分の間にインキュベーション
時間を設定するのが好ましい。
ョン時間を種々に変化させた場合の吸光度の変化を示
す。図中、横軸は０℃におけるインキュベーション時間
（分）を表わし、縦軸は４０５ｎｍにおける吸光度を表
わす。図１において、インキュベーション時間が１７分
間程度まではＦＸIIａが経時的にほぼ直線的に増加して
生成されるため、０〜１７分の間にインキュベーション
時間を設定するのが好ましい。
【００２１】図２に、本発明の測定方法を使用して、鎮
痛剤や抗アレルギー剤として用いられている４種の被検
薬（インドメタシン、ケトプロフェン、アミノピリン及
びケトチフェン）のＦＸIIａ生成阻害活性を測定した結
果を示す。図中、横軸は被検薬濃度（ｍＭ）を表わし、
縦軸はＦＸIIａ生成阻害率（％）を表わす。
痛剤や抗アレルギー剤として用いられている４種の被検
薬（インドメタシン、ケトプロフェン、アミノピリン及
びケトチフェン）のＦＸIIａ生成阻害活性を測定した結
果を示す。図中、横軸は被検薬濃度（ｍＭ）を表わし、
縦軸はＦＸIIａ生成阻害率（％）を表わす。
【００２２】
【発明の効果】ＦＸIIａは内因系血液凝固系、線溶系及
び血漿カリクレイン・キニン系の開始段階において非常
に重要な役割を果たしており、従ってＦＸIIａの生成を
阻害又は促進するような作用を有する被検物質の活性を
測定できる本発明測定方法は、血液凝固・線溶系に関与
する薬剤や血漿カリクレイン・キニン系に関係する薬
剤、例えば血圧調整剤、抗炎症剤、鎮痛剤、抗アレルギ
ー剤等の各種薬剤をスクリーニング可能な系として非常
に有用性が高い。
び血漿カリクレイン・キニン系の開始段階において非常
に重要な役割を果たしており、従ってＦＸIIａの生成を
阻害又は促進するような作用を有する被検物質の活性を
測定できる本発明測定方法は、血液凝固・線溶系に関与
する薬剤や血漿カリクレイン・キニン系に関係する薬
剤、例えば血圧調整剤、抗炎症剤、鎮痛剤、抗アレルギ
ー剤等の各種薬剤をスクリーニング可能な系として非常
に有用性が高い。
【００２３】更に本発明の測定方法は、ＦＸIIａ生成に
対する血漿カリクレインのフィードバック機構を抑える
ことによって内因系血液凝固系、線溶系、血漿カリクレ
イン・キニン系等における反応開始段階であるＦＸIIの
活性化段階にのみ関与する薬剤をスクリーニングするこ
ともできるため、明確で具体的な作用機構に基づく薬剤
のスクリーニングが可能となり、種々の新薬の開発に大
きな効果を奏する。
対する血漿カリクレインのフィードバック機構を抑える
ことによって内因系血液凝固系、線溶系、血漿カリクレ
イン・キニン系等における反応開始段階であるＦＸIIの
活性化段階にのみ関与する薬剤をスクリーニングするこ
ともできるため、明確で具体的な作用機構に基づく薬剤
のスクリーニングが可能となり、種々の新薬の開発に大
きな効果を奏する。
【図１】本発明の測定方法において、種々のインキュベ
ーション時間における吸光度の変化を示す図である。
ーション時間における吸光度の変化を示す図である。
【図２】本発明の活性測定方法を使用して種々の被検薬
のＦＸIIａ生成阻害活性を測定した結果を示す図であ
る。
のＦＸIIａ生成阻害活性を測定した結果を示す図であ
る。
【図３】ＦＸIIａの関与する生体内調節機構を説明する
ための図である。
ための図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭63−185398（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−86100（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/00 - 1/70
Claims (6)
- 【請求項１】 被検物質の存在下、動物血漿に血液凝固
第ＸII因子活性化剤を加え血液凝固第ＸII因子の活性化
反応を開始させた後、血液凝固第ＸII因子活性化阻害剤
及び血漿カリクレイン阻害剤を加えて前記反応を停止さ
せ、前記反応において生成された活性型血液凝固第ＸII
因子を定量することを特徴とする被検物質の活性測定方
法。 - 【請求項２】 活性型血液凝固第ＸII因子の生成量が飽
和に達する前に該活性型血液凝固第ＸII因子の生成を停
止させる請求項１記載の測定方法。 - 【請求項３】 活性型血液凝固第ＸII因子に対する基質
を用いて生成された活性型血液凝固第ＸII因子を定量す
る請求項１又は２記載の測定方法。 - 【請求項４】 活性型血液凝固第ＸII因子に対する合成
基質を用いる請求項３記載の測定方法。 - 【請求項５】 血液凝固第ＸII因子活性化阻害剤がポリ
ブレンである請求項１ないし４のいずれか１項に記載の
測定方法。 - 【請求項６】 血漿カリクレイン阻害剤が大豆由来のト
リプシンインヒビターである請求項１ないし５のいずれ
か１項に記載の測定方法。
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