JPS59118711A - 新規生理活性物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規生理活性物質（以下、本発明物質と記す
）、その製法及び該物質を有効成分として含有する医薬
に関する。

本発明者は、ワクシニア・ウィルスを接種し、発痘させ
た各種動物組織、培養細胞若しくは培養組織より抽出し
た物質について研究していたところ、本発明新規生理活
性物質を得ることに成功した。

本発明物質は各種のストレス、例えばウィルス、細菌原
虫、リケッチア等の生物学的ストレス、酸素欠乏、薬物
（ＡＣＴＨ、コーチシン等）等の化学的ストレス、寒冷
　騒音、放射線等の物理的ストレス、恐怖、不安、焦蹄
感等の精神的ストレス等によって惹き起こされる生理機
能の歪みや生体機能損傷時に生ずる神経系、内分泌系、
免疫系等の歪みを調節し修復する生体恒常性維持機構に
作用し、生体の自然治癒力を高め、生体機能を正常化す
る作用を有する。

後述するように、本発明物質は、抗ストレス、鎮静、抗
潰瘍、鎮痛、免疫調整等の薬剤として有用であるばかり
でなく、広く各種ストレス、自律神経失調や免疫機能異
常に伴う各種疾患に適用でき、又、他の薬剤と併用する
ことにより該薬剤の副作用を軽減し、相乗効果を期待す
ることかできる。

本発明生理活性物質は、以下の工程で製造することかで
きる。

本発明において、発痘組織とはワタシニア・ウィルスの
各種接種方法又は培養方法にて得たウィルス感染培養組
織、培＃：細胞及び各種動物のウィルス感染炎症組織又
は卿化鶏卵の漿尿膜等である。

（ａｌ無菌的に採取した発痘組織を磨砕し、その１〜５
倍量のフェノール水を加え乳状とした後、濾過又は遠心
分離する。

（ｂ）前記液体を等電点付近のｐＨに調整して加熱し除
蛋白した後、サイフ濾過板を用いて濾過する。さらに、
濾液を弱アルカリ性として煮沸した後、濾過する。

（Ｃ１塩酸、硫酸、臭化水素酸等の鉱酸で酸性とした後
、活性炭に吸着さ・ける。このとき、好ましくは５〜２
０％の活性炭を使用する。

（ｄ＋前記吸着剤にアルカリ性水溶液を加え、とくにｐ
Ｈを１０〜１２として加温下溶出し、溶出液を減圧下に
蒸発乾固又は凍結乾燥することにより目的物を得る。

さらに、所望により、前記方法によって得られた本発明
物質を限外濾過、ゲル濾過、透析等の手段を用いて、分
子量による分画を行なって精製することができる。

以下は、本発明物質の抽出法の実施例である。

実施例１゜ 健康な成熟家兎の皮膚にワタシニア・ウィルスを接種し
発痘させた後、発痘した皮膚を無菌的に剥出し、これを
細切した後フェノール水を加え、ポモゲナイザーで磨砕
し乳状とする。次いでこれを遠心濾過し、得られた濾液
を塩酸でｐｌ＋　４．８−５．５とし、流通蒸気で１０
０℃に加熱し濾過する。濾液をさらにザイッ濾過板を用
いて濾過した後、水酸化ナトリウムでｐＨ９とし、さら
に１００°Ｃに加熱した後濾過する。

濾液を塩酸でｐＨ４，１とし、活性炭７．５％を加え４
時間攪拌した後濾過する。この活性炭に水を加え、水酸
化ナトリウムでｐＨ１０，９とし、６０℃で１．５時間
攪拌した後濾過する。濾液を塩酸でｐｌ＋６．６とし、
減圧下に乾固する。

発病皮膚ｌ　ｋｇからの収量は４〜６ｇであった。

実施例２゜ 実施例１と同様にして除蛋白を行なって得られた抽出液
を、塩酸でｐＨ３，８とし、活性炭１５％を加え５時間
攪拌した後濾過する。この活性炭にｐＨ１１，５の水酸
化ナトリウム水溶液を加え、４５℃で３時間攪拌した後
濾過する。濾液を中和して、限外濾過を行って分子（ｉ
１０００以下の分画を得、これを減圧乾固する。

発痘皮＠　１　ｋｇからの収量は４〜５．５ｇであった
。

前記方法によって得られた本発明生理活性物質は、以下
の物理化学的性質を有する。

性　状：淡黄褐色無定形の吸湿性粉末 ｆ８　％Ｔ　性：水、メタノール、アセトンに可溶、ベ
ンゼン、エーテルに不溶 ｐＨニア、Ｏ〜８．０ 分子量：　１０００以下 紫外部吸収：λｍａｘ　　　２６５〜２７５　ｎｍ呈色
反応ニアミノ酸、糖、リン・・・陽性蛋白質、フェノー
ル・・・陰性 構　成：総窒素　　　・・・１．７〜７．０％アミノ態
窒素　・・・０．５〜２．０％紫外部吸収物質・・・０
．８〜３．５％糖　　　　　　　　　・　・　・０．１
〜０．６％次に、本発明生理活性物質の薬理作用につい
て述べる。

■、急性毒性試験 ５Ｄ−ＪＣＬ系雌雄ラット、ｄｄＹ系雌雄マウス及び日
本白色種雌雄ウサギをそれぞれ一群１０匹とし、本発明
物質の各種投与経路における急性毒性試験を行った。結
果を第１表に示す。

第１表 動　物　　投与経路　　Ｉ−Ｄ　　　（ｍｇ／ｋｇ）０ 雄部 マウス　　　ｐ、ｏ、　　　　＞　１００００　　＞　
１００００ｓ、ｃ、　＞　６０００　＞　６０００ｉ、
ｐ、　＞　６０００　＞　６０００４、ｖ、　＞　６０
００　＞　６０００ラットｐ、ｏ、　　　　＞　１００
００　　＞　１００００〃ｓ、ｃ、　＞　６０００　＞
　６０００ｉ、ｐ、　＞　６０００　＞　６０００＞　
６０００　＞　６０００ ウサギ　　　ｐ、ｏ、　　　　＞　１００００　　＞　
１００００■、薬理試験 以下の動物実験に用いられた５ＡＲＴストレス動物は、
喜多等の方法〔日薬理誌、　７１．１９５−２１０（１
９７０）　）に従って飼育した。即ち、マウス（又はラ
ット）を毎日午前１０時〜午後５時の間は１時間毎に２
４℃と４°Ｃ（又は−３℃）を交替させ、午後５時〜翌
午前１０時の間は４°Ｃ（又は−３°Ｃ）という温度条
件で４〜５日間飼育した。

該方法によって飼育した５ＡＲＴストレス動物は強度の
ストレス状態を示し、体重減少、心拍数増加ＱＲ３時間
の延長、血圧時下等の循環系の異常、皮膚電気抵抗値の
低下、摘出小腸のＡｃｈ反応性低下、痛覚間（１１′Ｅ
の低下がみられるなど、環境の変化によって惹起される
人間の自律神経失調症様状態をあられす動物モデルとみ
ることができる。

（１）抗ストレス作用 （１，１）体重減少抑制作用 一群１５匹のマウスをＳへＲＴストレス条件下で飼育し
、本発明物質２０■／ｋｇ／日腹腔内投与群と非投与群
の体重変化を比較した。なお、正常環境条件下で飼育し
たマウスの体重変化も同時に測定した。結果を第２表に
示す。

第２表 体重増加率　（％） ３目止　７目止　１２日目 止　常　マウス　　　　１．３　　３．６　　８．ｌ５
ＡＲＴストレスマウス　−１，２−４，３−５，９〃　
中本発明物質　０．８　　１．９　　４．０（１，２）
呼吸数、心拍数の増加、ＰＱ時間の短縮及びＱＲ３時間
の延長に対する作用 一群１０匹のマウスに５ＡＲＴストレスを５日間負荷し
、呼吸数、心拍数、ＰＱ時間及びＱＲ３時間に対する本
発明物質の効果を調べた。本発明物質を２０ｍｇ　／　
ｋｇ　／目脂腔内投与すると、第３表に示すとおり、５
ＡＲＴストレスによって惹き起こされる呼吸数、心拍数
の増加、ＰＱ時間の短縮及びＱＲ３時間の延長を有意に
抑制した。

第３表 呼吸数　　　心拍数 （１分間）　　（１分間） 正　常　マウス　　　　１８９　　６３１ＳＡＲＴスト
レスマウス　　２５０　　　７３８〃　中本発明物質　
２１１　　　６４０第３表（つづき） ＰＱ時間　　ＱＲ３時間 ３ （１０秒）　　　（１０−３秒） 正　常　マウス　　　　　３０．１　　　　９．８ＳＡ
ＲＴストレスマウス　　　２６．９　　　　１４．６〃
　中本発明物質　　３０．０　　　　１０．９（１，３
）摘出腸管アセチルコリン（Ａｃｈ　）感受性異常の正
電化作用 ５ＡＲＴストレス負荷マウス及び拘束水浸ストレス負荷
マウス（１８時間絶食後金網で拘束し、１５℃の水浴中
の剣状突起まで浸け３時間放置した。′）の摘出腸管の
Ａｃｈ　　（１０ｇ／ｉｐ）感受性の変化に対する本発
明物質の効果を調べた。本発明物質の投与は、５ＡＲＴ
ストレス群についてはストレス負荷期間中、１００ｍｇ
／ｋｇを毎日１回腹腔内に投与し、拘束水浸ストレス群
では絶食開始前及びストレス開始前の２回１００■／　
ｋｇを腹腔内に投与した。

第４表に示すように、本発明物質は前記ストレス負荷に
より低下及び凡退した＾ｃｈ感受性を共に正常化した。

第４表 腸管収縮率（％） 正　常　マウス　　　　　　ｉｏ。

５ＡＲＴストレスマウス　　　　　３０〃　　中本発明
物質　　　９８ 拘束水ａストレスマウス　　　　１６３〃　　中本発明
物質　　１０７ （２）抗潰瘍作用 （２，１）拘束水浸ストレス潰瘍 一群１０匹のウィスター系雄性う・ノドを２４時間絶食
さ−υた後、拘束水浸ストレス（２５°Ｃ２２０時間）
を負荷して、胃粘膜における潰瘍係数をアダミ等の方法
〔八ｄａｍｉ、　　Ｅ、　　ｅｔ　　ａｌ、、　　＾ｒ
ｃｈ、　　Ｉｎｔ、　　Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎ、。

１４７、１１３　（１９６４）　）を一部改変した方法
で求め、対照（生理食塩水）に対する潰瘍抑制率を算出
した。

本発明物質はストレス負荷前に１回、又は５日間連続投
与した。結果を第５表に示す。

第５表 投与量　　投与経路　　潰瘍抑制率（％）（ｍｇ／ｋｇ
）　　　　　　　　１回投与　５回投与５０　　　　　
ｉ、ｐ、　　　　３Ｂ　、１　　　５０．７１００　　
　　　　〃’　　、　４６．３　　　６１．２１００　
　　　　ｐ、ｏ、　　　　３４．５　　　４７．１２０
０　　　　　　　　　３７．０　　　５３．８（２，２
）　　ヒスタミン潰瘍 一群１０〜２０匹の雄性アルピノ・モルモットを２４時
間絶食し、０．１％ヒスタミン・シボスフエート０．２
５ｍ１／　ｋｇを３０分間隔で８回筋肉内に投与し、最
終投与。

３０分後に十二指腸を摘出し潰瘍部の面積を測定すると
共に、胃液量、ｐＨ，酸度及び総酸度を測定した。

本発明物質は、ヒスタミン・ジホスフェート処置前に５
日間連続投与した。結果を第６表及び第７表に示す。

第６表 被験薬　　投与量　　投与経路　潰瘍抑制率（％）本発
明物質　５■／ｋｇ　　　ｉ、ｐ、　　　　　３０．１
５０〃〃’８４．３ 〃５０　　〃ｐ、ｏ、　　　　　３０．３〃’　　　１
００〃５Ｂ、１ シメチジン　５　　〃ｉ、ｐ、　　　　　３３．２５０
　　〃９６．０ 第７表 被験薬　　投与量　　投与経路　　　胃液量（ｍｉ！／
１００ｇ体重） 対照（生食）５　が　　　ｉ、ｐ、　　　　　　３．６
９本発明物！５■７ｋｇｔｔ　　　　　　３．４４５０
〃〃２．１Ｂ シメチジン　５　　〃〃３．２７ ５０　　〃〃１．８８ 第７表（つづき） ｐＨ胃酸濃度（ｍＥｑ／１） 遊離酸　　総酸度 １．１２　　　１２２．８　　１３０．２１．２３　　
　１１６．３　　１２２．４１．２９　　　　９０．８
　　１０２．７１．１０　　　１２０．８　　１３０．
０１．３３　　　１００．９　　１１２．１プ’　　０
．Ｉ　　Ｎ−Ｎａ０Ｉ＋で滴定（３）鎮痛作用 以下の鎮痛試験に用いた５ＡＲＴストレスマウスは、ス
トレスを４日間負荷したものを用いた。

（３，１）酢酸法 ０．７％酢酸加生理食塩水をマウスに０−１ｍ／１０ｇ
腹腔内投与し、投与１５分後から１５分間に発現するラ
イジング回数を測定した。効果判定は、本発明物質を皮
下投与したマウスのライジング回数が、対照群の５０％
以下に減少した場合を効果ありとし、そのマウスの割合
で示した。結果を第８表に示す。

第８表 投与量　　　ライジング抑制率（％） （■／ｋｇ）　　正”Ｍマウス　ストレスマウス１０　
　　　０　　　　　　３５ ２０　　　　５　　　　　　　５５ （３，２）尾圧法 ランダール・セリソト式圧刺激測定装置を用いてマウス
尾根部に刺激を加え、逃避反応を示すまで加圧を増加さ
せた。本発明物質腹腔内投与後３０．６０．９０及び　
１２０分後の加圧重量の平均値を投与前の値で除しこの
値を鎮痛係数として表わした。結果を第９表に示す。

第９表 投与ｉ　　　鎮痛係数 （■／ｋｇ）　　正常マウス　ストレスマウス１０　　
　　１．１３　　　　　１．４３２０　　　　１．２１
　　　　　１．６８（４）自己免疫疾患に対する作用 自己免疫疾患モデルとして知られている実験的アレルギ
ー性脳を髄炎（以下、ＥＡＥと記す）及び実験的アレル
ギー性神経炎（以下、ＥＡＮと記す）に対する本発明物
質の予防効果及び／又は治療効果を検討した。

（４，１）ＥＡＥに対する作用 ハートレー系モルモット　（６週令、雄）の足踵に抗原
として脳塩承性タンパクと結核死菌前山Ｂ株を接種して
感作した。抗原感作後連日、足麻痺（歩行障害、下肢麻
痺、四肢麻痺）、失禁、下痢等のＥＡＥ症状の発現及び
生死を観察した。本発明物質は１日当り］Ｏｍｇ／ｋｇ
の用量で、 Ｉ）抗原感作前１週より連日（ａ群）、１１）抗原感作
口より連日（ｂ群）、 １ｉｉ）ＥＡＥ症状の発現日より連ｒｌ（ｃ群）、腹腔
内投与した。

その結果、第１０表に示したように、本発明物質を投与
しなかったコントロール群では全例でＥ　Ａ　Ｅ　％＜
発現し、抗原感作前１週１３．３日で死亡したが、ＥＡ
Ｅ発症前より本発明物質を投与した群（ａ、ｂ群）では
発症の抑制と延命効果がみられ、さらにＥＡＥ発症時よ
り投与した群（Ｃ群、）においても延命効果−がみられ
た。

第１０表 群　　動物　平均発′“平均死ゞ゛平均生存　生存動ゞ
゛数（匹）発症日（日）亡Ｂ（、ｌＢ）期間ω）　　物
故（匹）コント　　２０　　１１．８　　１３．３　　
２．５　　０ローｌし １２　　　１３．７　　　１６．７　　　３．６　　　
　　ｌｂ　　　　　１２　　　１４．０　　　１７．７
　　　４．８　　　　３ｃ　　　　　１２　　　１２．
６　　　１６．３　　　４．１　　　　０・・り　　抗
原感作口を０日とした ＊＊　　抗原感作口より４０日間の生存動物数（４，２
）　ＥＡＮに対する作用 ルイス・ラット（６週令、維）の足随に抗原として末梢
神経ミニリンと　Ｆｒｅｕｄの完全アジｊバンドの１：
１混合エマルジョンを接種して感作した。抗原感作後連
日、体重変化、運動失調、麻痺等のＥＡＮ症状の発現及
び生死を観察した。本発明物質はｌＢ当り１０ｍｇ／　
ｋｇの用量で抗原感作口より連日ｍ腔内投与した。

その結果、第１１表及び第１２表に示したように、本発
明物質を投与しなかったコントロール群では約２透口か
ら体重減少と共に運動失調、後肢麻痺症状が全例にみら
れ３０日間の観察期間後においても半数以上の動物にこ
れらの症状が残った。一方、本発明物、質投与群ではＥ
ＡＮ発症が顕著に抑制され、麻痺症状等を呈した動物に
おいても、その発症期間は′極めて短く、全例が２０日
目止でに回復し著明な治療効果を示した。

第１１表 群　　　　　　　　　　　体重変化 ０　　　５　　　　１０　　　１ｓ　　　　２０　　　
２５　　３０（日）コント　　　１００　１０７　１１
０　９７　８９　８６　９０ロ一ル群 本発明物質　１００　１１５　１３０　１３２　１３２
　１５１　１６５投与群 六抗原感作日（０日）の体重を１００ としたときの体重変化の平均値 第１２表 群　　　動物数　平均発症日　平均発症　回復率（匹）
　　　　（日）　　　期間　（日）　（％）コン１６１
４．３　　　＞１３．３　　３３．３０一ル群 本発明物質　５　　　　１６．６　　　２．８　　１０
０投与群 六　抗原感作日を０日とした ゾ、７・３　　抗原感作後３０日回定おける回復率以上
の薬理試験の緋果から明らかなように、本発明物質は、
その毒性が極めて低く、かつ幅広い薬理作用、特に各種
ストレスに起因する生体機能や免疫機能の異常を調節、
修復し、生体恒常性維持に有用な生体機能調整物質であ
る。従って、本発明物質は鎮静、抗潰瘍、鎮痛、免疫調
整を目的とする薬剤として有用であるばかりでな（、突
く抗ストレス剤、自律神経調節剤、免疫調整剤などの生
体損傷時の修復剤としても適用しうる。

本発明物質の適用疾患を例示すれば、以下のごとくであ
る。

胃・十二指腸潰瘍、動脈硬化、心筋梗塞、高血圧、糖尿
病、メニュール病、下垂体機能不全、副腎皮質機能不全
、種々の精神身体的異常等のストレス起因性疾患、神経
症、頭痛、めまい、疲労感、不眠、食欲不振、便秘、下
痢、不定愁訴等の自律神経失調症〜神経痛、腰痛、頚肩
腕症候群等の有痛性疾患、自己免疫性溶血性貧血、橋本
病、ＳＬＥ、ＲＡ、潰瘍性大腸炎、脱髄疾患、重症筋無
力症等の自己免疫疾患、その他気管支喘息、アレルギー
性鼻炎、暮麻疹、湿疹等のアレルギー性疾患、各種免疫
不全症、悪性腫瘍、肝障害、造血機能障害など。

本発明物質はこれら疾患に対し、予防剤、治療剤又は治
療補助剤として、単独で若しくは他の薬剤と組み合わせ
て使用することができる。さらに、本発明物質は他の薬
剤と併用した場合には、他剤の副作用低減、用量低減及
び効果の増大なども期待できる。

本発明物質を活性成分として含有する薬剤は、例えば錠
剤、カプセル、顆粒剤、注射剤、液剤、坐剤、軟膏剤、
エアゾール剤の形態とすることができる。

錠剤、カプセル、顆粒剤を製造するために、例えばデン
プン、乳糖、マンニトール等の賦形剤、微結晶セルロー
ス、メチルセルロース、その他のセルロース誘導体、ア
ラビアゴム、ゼラチン、ポリエチレン、ボリヒニルアル
コール、ポリビニルピロリドン等の結合剤、グリセロー
ル等の湿潤剤、カルボキシメヂルセルロース、微結晶セ
ルロース、ポリエチレングリコール等の崩壊剤、セチル
アルコール、グリセリン、脂肪酸エステル類等の界面活
性剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、カルシウム
、固体ポリエチレングリコール等の滑沢剤、その他被覆
剤、着色剤、矯味矯臭剤などを用いることができる注射
剤を製造するために、注射用蒸留水、生理食塩水、５−
２０％ブドウ糖注射液、注射用植物油、エタノール、プ
ロピレングリコール、ポリエチレングリコール類等の溶
剤、ピロ亜硫酸ナトリウノ１、硫化水素すトリウム、β
−アスコルビン酸、チオグリコール酸、クエン酸塩、酢
酸塩、リン酸塩等の安定剤、塩酸プロ力イン、ブドウ糖
等の無痛化剤、その他郷張化剤、溶解補助剤、保存剤、
懸濁化剤、乳化剤等を用いることができる。注射用組成
物は無菌の溶液、懸濁液、乳濁液若しくは用時熔剤に溶
解して用いる剤型とすることができる。

軟膏剤には、脂肪油、パラフィン、ラノリン、ワセリン
、グリコール類、グリセリン、高級アルコール、その他
適当な基剤を用いて、また坐剤には、カカオ脂、マクロ
ゴール、グリセロゼラチン、ラノリン脂等の基剤を用い
て製剤することができ、適宜界面活性剤、保存剤を添加
してもよい。

さら゛に、液体若しくは微小粉体の形で、適当な噴射剤
と共にエアゾール剤とすることもでき、所望により、湿
潤剤、分散剤等の助剤を添加する。

本発明物質の１日投与量はｌｐｇ　／　ｋｇ乃至１０■
／ｋｇが一般的であるが、疾患、症状の程度により適宜
変更することができる。

本発明物質を活性成分として含有する薬剤の処方例を以
下に示すが、これ等に限定されるものではない。

処方例１．　（全重量１５０■の錠剤）本発明物質　　
　　　　　　　　１０■乳糖　　　　　　　　　　　　
　　８０〃結晶セルロース　　　　　　　　２５１１カ
ルボキシメチルセルロース　　３０〃ステアリン酸マグ
ネシウム　　　　５〃計１５０ｍｇ 処方例２．　（充填物重量２００ｍｇのカプセル）本発
明物質　　　　　　　　　　２０■乳糖　　　　　　　
　　　　　　１２５〃バレイシヨデンプン　　　　　　
４０〃ステアリン酸マグネシウム　　　　５〃タルク　
　　　　　　　　　　　１０１１計２００ｍｇ 処方例３．　（容量１献の注射用アンプル）本発明物質
　　　　　　　　　　１■ 注射用蒸留水　　　　　　　　　適量 計　　１　ｙｎｌ！ 処方例４　　（全量２ｇの坐剤） 本発明物質　　　　　　　　　　２０■カカオ脂　　　
　　　　　　　１９８０〃計　　２ｇ

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）発痘組織より抽出した新規生理活性物質。
2. （２）発痘組織を磨砕し、これにフェノール水を加えて
   抽出し、等電点付近のｐ　Ｈに調整した後加熱、濾過し
   て除蛋白を行い、これを酸性条件下５〜２０％の活性炭
   に吸着させた後、アルカリ性水溶液でｐＨを１０〜１２
   にして加温下溶出することを特徴とする新規生理活性物
   質の製法。
3. （３）新規生理活性物質を有効成分として含有する生体
   機能調整剤。
4. （４）抗ストレス剤である特許請求の範囲第（３）項記
   載の生体機能調整剤。
5. （５）自律神経調整剤である特許請求の範囲第（３）項
   記載の生体機能調整剤。
6. （６）鎮静剤である特許請求の範囲第（３）項記載の生
   体機能調整剤。
7. （７）抗潰瘍剤である特許請求の範囲第（３）項記載の
   生体機能調整剤。
8. （８）鎮痛剤である特許請求の範囲第（３）項記載の生
   体機能調整剤。
9. （９）免疫調整剤である特許請求の範囲第（３）項記載
   の生体機能調整剤。