JPS6296099A - 酸性フオスフアタ−ゼ活性測定試薬 - Google Patents
酸性フオスフアタ−ゼ活性測定試薬Info
- Publication number
- JPS6296099A JPS6296099A JP23608185A JP23608185A JPS6296099A JP S6296099 A JPS6296099 A JP S6296099A JP 23608185 A JP23608185 A JP 23608185A JP 23608185 A JP23608185 A JP 23608185A JP S6296099 A JPS6296099 A JP S6296099A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent
- phosphatase activity
- acid phosphatase
- determination
- acidic phosphatase
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は酸性フォスファターゼ活性測定用試薬に関する
ものである。体液中の酸性フォスファターゼ活性の測定
は、前立腺癌の診断及び経過観察に有用な情報を与える
ものとして臨床意義が高い。
ものである。体液中の酸性フォスファターゼ活性の測定
は、前立腺癌の診断及び経過観察に有用な情報を与える
ものとして臨床意義が高い。
（従来の技術）
従来、酸性フォスファターゼ活性はリン酸の水酸基にｐ
−ニトロフェノールを結合させた基質を用いて酸性フォ
スファターゼを作用させ、遊離してくるｐ−ニトロフェ
ノールをアルカリ性下で比色する方法や酵素イムノアッ
セイ（以下ＥＩＡと略す）、ラジオイムノアッセイ（以
下ＲＩＡと略す）による方法が用いられていた。
−ニトロフェノールを結合させた基質を用いて酸性フォ
スファターゼを作用させ、遊離してくるｐ−ニトロフェ
ノールをアルカリ性下で比色する方法や酵素イムノアッ
セイ（以下ＥＩＡと略す）、ラジオイムノアッセイ（以
下ＲＩＡと略す）による方法が用いられていた。
ところが、ｐ−ニトロフェノールを用いた方法では目的
とする酵素酸性フォスファターゼの至適ｐＨ（ｐＨ５，
０付近）と発色基であるｐ−ニトロフェノールの発色ｐ
Ｈ（ｐＨ９以上）とが異なる為に酸性フォスファターゼ
活性を測定する為には酵素反応と発色反応を別々に行な
う必要がある。
とする酵素酸性フォスファターゼの至適ｐＨ（ｐＨ５，
０付近）と発色基であるｐ−ニトロフェノールの発色ｐ
Ｈ（ｐＨ９以上）とが異なる為に酸性フォスファターゼ
活性を測定する為には酵素反応と発色反応を別々に行な
う必要がある。
その為に試薬数及び操作ステップが多く必要となり、酵
素活性を求める場合に一番適当であるといわれている速
度分析（レートアッセイ〕法が８来ない欠点がある”。
素活性を求める場合に一番適当であるといわれている速
度分析（レートアッセイ〕法が８来ない欠点がある”。
ＥＩＡ、ＲＩＡによる方法では、測定が長時間を有し操
作の煩雑さ等に欠点がある。
作の煩雑さ等に欠点がある。
（発明の解決しようとする問題点）
本発明の目的は定量性に優れた酸性フォスファターゼの
レートアッセイが可能となる酸性７ オスファターゼ活
性測定試薬を提供することである。
レートアッセイが可能となる酸性７ オスファターゼ活
性測定試薬を提供することである。
（問題点を解決する為の手段）
本発明者らは、上記目的ｆｃ達成するために種々鋭意検
討したところ、一般式ＣＤで示される基質を用いること
により体液中の酸性フォスファターゼ活性を短時間に正
確簡単にレートアッセイ出来ることを見い出し本発明に
到達した。
討したところ、一般式ＣＤで示される基質を用いること
により体液中の酸性フォスファターゼ活性を短時間に正
確簡単にレートアッセイ出来ることを見い出し本発明に
到達した。
すなわち１本発明は基質として下記一般式Ｃｔ）で示さ
れる化合物を含有することを特徴とする酸性フォスファ
ターゼ活性測定試薬である。
れる化合物を含有することを特徴とする酸性フォスファ
ターゼ活性測定試薬である。
（式中、Ｘはハロゲン原子を示し、ｎお工びｍは１〜４
の数を示す。） 本発明に用いる基質としては一般式ＣＤで示される化合
物、すなわちリン酸の１つの水酸基がハロゲンおよびニ
トロ基置換フェニル基と結合したものである。ハロゲン
およびニトロ基置換フェニル基としては解裂したアグリ
コンが基質と異なったスペクトル吸収を示すものである
。解裂したアグリコンとは具体的には次の一般式： 例、ｔｌｆ、２−クロロ−４−二トロフェノール、２−
プロモー４−二トロフェノール、２−ヨード−４−二ト
ロフェノール、２，６−ジクロロ−４−二トロフェノー
ル、２．６−ジプロモー４−二トロフェノール、 ２．
６−ジヨードー４−二トロフェノール、 ２，３．６−
１−ジクロロ−４−二トロフェノール、 ２．３．６
− ）リプコモ−４−二トロフェノール、２．３．６−
ドリヨードー４−ニトロフェノ−／Ｌ／。
の数を示す。） 本発明に用いる基質としては一般式ＣＤで示される化合
物、すなわちリン酸の１つの水酸基がハロゲンおよびニ
トロ基置換フェニル基と結合したものである。ハロゲン
およびニトロ基置換フェニル基としては解裂したアグリ
コンが基質と異なったスペクトル吸収を示すものである
。解裂したアグリコンとは具体的には次の一般式： 例、ｔｌｆ、２−クロロ−４−二トロフェノール、２−
プロモー４−二トロフェノール、２−ヨード−４−二ト
ロフェノール、２，６−ジクロロ−４−二トロフェノー
ル、２．６−ジプロモー４−二トロフェノール、 ２．
６−ジヨードー４−二トロフェノール、 ２，３．６−
１−ジクロロ−４−二トロフェノール、 ２．３．６
− ）リプコモ−４−二トロフェノール、２．３．６−
ドリヨードー４−ニトロフェノ−／Ｌ／。
２．４−ジニトロ−６−クロロフェノール等があげられ
る。
る。
これら基質の合成方法は、例えばハロゲン置換（７）Ｉ
）−二トロフェノールにフオスフオリルクロフイドを反
応させてリン酸エステル化しくＣｈｅｍｉｃａｌＡｂｓ
ｔｒａｃｔ ４７ ８０３２ｂ）、さらに脱ハロゲン化
しく Ｂｕｌｌ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｊａｐａｎ ４４
２７４３）、次にＮａ塩とし再結晶化して（Ｊ、Ｂｉ
ｏｌ、Ｃｈｅｍ、 １６７ ５７）。
）−二トロフェノールにフオスフオリルクロフイドを反
応させてリン酸エステル化しくＣｈｅｍｉｃａｌＡｂｓ
ｔｒａｃｔ ４７ ８０３２ｂ）、さらに脱ハロゲン化
しく Ｂｕｌｌ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｊａｐａｎ ４４
２７４３）、次にＮａ塩とし再結晶化して（Ｊ、Ｂｉ
ｏｌ、Ｃｈｅｍ、 １６７ ５７）。
目的基Ｗを得る方法がある。
本発明の試薬のｐＨは体液中の酸性フォスファターゼの
至適９Ｈである＄）Ｈ４，０〜５．５を保つ緩衝液であ
れば、いかなるものでも艮い。例えばクエン酸緩衝液や
その他有機酸緩衝液１例えば酢酸、コハク酸、フタル酸
等の緩衝液があげられる。
至適９Ｈである＄）Ｈ４，０〜５．５を保つ緩衝液であ
れば、いかなるものでも艮い。例えばクエン酸緩衝液や
その他有機酸緩衝液１例えば酢酸、コハク酸、フタル酸
等の緩衝液があげられる。
基′Ｒａ度としては特に制限がないが、好ましくは最大
の酸性フォスファターゼの酵素活性を示すａ度が適当で
ある。例えば１ｍＭ以上である。
の酸性フォスファターゼの酵素活性を示すａ度が適当で
ある。例えば１ｍＭ以上である。
本発明の試薬には必要により、界面活性剤、防腐剤、塩
化ナトリウム、シクロデキストリン、安定化剤等を加え
てもよい。
化ナトリウム、シクロデキストリン、安定化剤等を加え
てもよい。
本発明の酸性フォスファターゼ活ｔ！１１：測定試薬を
用いて酸性フォスファターゼ活性を測定する方法として
は、試薬を該試薬と反応させて生成するアグリコンの吸
光度の変化を１合接分光光度計？用いて比色定量する方
法がある。
用いて酸性フォスファターゼ活性を測定する方法として
は、試薬を該試薬と反応させて生成するアグリコンの吸
光度の変化を１合接分光光度計？用いて比色定量する方
法がある。
（発明の効果）
本発明の酸性フオスファメーゼ活性測定試薬において、
一般式ＣＩ）で示される化合物を基質として用いること
に１９１体液中の酸性フォスファターゼ活性を短時間に
正確、かつ簡単にレートアッセイすることができる。特
にニトロフェノールを結合した基質に比べて酵素反応と
発色反応を１つの系で行なえるという優れた効果を有す
る。
一般式ＣＩ）で示される化合物を基質として用いること
に１９１体液中の酸性フォスファターゼ活性を短時間に
正確、かつ簡単にレートアッセイすることができる。特
にニトロフェノールを結合した基質に比べて酵素反応と
発色反応を１つの系で行なえるという優れた効果を有す
る。
（実施例）
以下１本発明を実施例により詳細に説明する。
実施例１
被検液中の酸性フォスファターゼ活性址を下記試薬を用
いて下記方法により測定した。
いて下記方法により測定した。
１、 試 薬
２−クロロ−４−ニトロフェニルリン酸１．０７７１Ｍ
クエン酸緩衝液 ０．１ ＭｐＨ４，
５ ２、測定方法 酸性フォスファターゼ含有被検液５０μ！に上記試薬２
ｚｌ ｋ加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長
４００ ｎｍで測定して発色速度を攻めた。反応曲線を
第１図に示し、検量線を第２図に示す。
５ ２、測定方法 酸性フォスファターゼ含有被検液５０μ！に上記試薬２
ｚｌ ｋ加えて３７℃で反応させ、その吸光度を波長
４００ ｎｍで測定して発色速度を攻めた。反応曲線を
第１図に示し、検量線を第２図に示す。
第１図および第２図から明らかなように、水溶性基質を
用いた本発明の試薬では、短時間に正確かつ蘭単にレー
トアッセイすることができる。
用いた本発明の試薬では、短時間に正確かつ蘭単にレー
トアッセイすることができる。
実施例２
被検液中の酸性フォスファターゼ活性量を下記試薬を用
いて下記方法によりｆＡＩＪ定した。
いて下記方法によりｆＡＩＪ定した。
１、 試 薬
Ａ、 ２，３．６−ドリクロロー４−二トロフエニｌレ
リン酸 １．（ＪｍＭクエン酸緩衝液
Ｕ、Ｉ ＭｐＨ４，５ Ｂ、４−ニトロフェニルリン酸 １．０ｍＭクエン
酸緩衝液 ０．１ ＭｐＨ４，５ ２、測定方法 ａ、酸性フォスファターゼ含有被検液５０μ！に上記試
薬Ａ、８２ｇ？を加えて３７℃で３分間加温後、吸光度
変化を波長４００ ｎｍで測定して１分間の吸光度変化
ｔＸめた（ブランクは酸性フォスファターゼ含有被検液
にかわり水を用いる）。
リン酸 １．（ＪｍＭクエン酸緩衝液
Ｕ、Ｉ ＭｐＨ４，５ Ｂ、４−ニトロフェニルリン酸 １．０ｍＭクエン
酸緩衝液 ０．１ ＭｐＨ４，５ ２、測定方法 ａ、酸性フォスファターゼ含有被検液５０μ！に上記試
薬Ａ、８２ｇ？を加えて３７℃で３分間加温後、吸光度
変化を波長４００ ｎｍで測定して１分間の吸光度変化
ｔＸめた（ブランクは酸性フォスファターゼ含有被検液
にかわり水を用いる）。
ｂ、酸性フォスファターゼ含有被検液５０μノに上記試
薬Ａ、８２ｇ？を加えて３７℃で５分間反応後、０．１
Ｍ炭酸ソーダ水を添加し、アルカリ条件下にして反応を
停止させ、波長４００ ｎｍの吸光度を測定した（ブラ
ンクは酸性フォスファターゼ含有被検液にかわり水を用
いる）。
薬Ａ、８２ｇ？を加えて３７℃で５分間反応後、０．１
Ｍ炭酸ソーダ水を添加し、アルカリ条件下にして反応を
停止させ、波長４００ ｎｍの吸光度を測定した（ブラ
ンクは酸性フォスファターゼ含有被検液にかわり水を用
いる）。
第１表にその結果を示す。
本発明の試薬ＡけｐＨ４，５において十分測定可能な感
度を有する試薬であるが、試薬Ｂｉｔ：ｐＨ４，５にお
いて全く測定可能レベルになく、アルカリ条件において
のみ測定可能である。
度を有する試薬であるが、試薬Ｂｉｔ：ｐＨ４，５にお
いて全く測定可能レベルになく、アルカリ条件において
のみ測定可能である。
第１図は本発明実施例１の反応曲線を示す。
第２図は本発明実施例１の検量線を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 基質として下記一般式〔 I 〕で示される化合物を含有
することを特徴とする酸性フォスファターゼ活性測定試
薬。 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 （式中、Ｘはハロゲン原子を示し、ｎおよびｍは１〜４
の数を示す。）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23608185A JPS6296099A (ja) | 1985-10-22 | 1985-10-22 | 酸性フオスフアタ−ゼ活性測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23608185A JPS6296099A (ja) | 1985-10-22 | 1985-10-22 | 酸性フオスフアタ−ゼ活性測定試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6296099A true JPS6296099A (ja) | 1987-05-02 |
| JPH0313880B2 JPH0313880B2 (ja) | 1991-02-25 |
Family
ID=16995439
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23608185A Granted JPS6296099A (ja) | 1985-10-22 | 1985-10-22 | 酸性フオスフアタ−ゼ活性測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6296099A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01197493A (ja) * | 1988-02-01 | 1989-08-09 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 新規な２−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを用いるホスファターゼ活性測定法 |
| JPH0284199A (ja) * | 1988-09-20 | 1990-03-26 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 酸性ホスフアターゼ活性測定用試液 |
| JPH02135090A (ja) * | 1988-11-16 | 1990-05-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | ペルオキシダーゼの安定化方法 |
| JPH0519054U (ja) * | 1991-02-26 | 1993-03-09 | 株式会社大館製作所 | 信号器具箱 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS586480A (ja) * | 1981-07-03 | 1983-01-14 | Ricoh Co Ltd | 反射検知装置 |
-
1985
- 1985-10-22 JP JP23608185A patent/JPS6296099A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS586480A (ja) * | 1981-07-03 | 1983-01-14 | Ricoh Co Ltd | 反射検知装置 |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01197493A (ja) * | 1988-02-01 | 1989-08-09 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 新規な２−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを用いるホスファターゼ活性測定法 |
| JPH0284199A (ja) * | 1988-09-20 | 1990-03-26 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 酸性ホスフアターゼ活性測定用試液 |
| JP2797102B2 (ja) * | 1988-09-20 | 1998-09-17 | 和光純薬工業株式会社 | 酸性ホスフアターゼ活性測定用試液 |
| JPH02135090A (ja) * | 1988-11-16 | 1990-05-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | ペルオキシダーゼの安定化方法 |
| JP2632391B2 (ja) * | 1988-11-16 | 1997-07-23 | 和光純薬工業株式会社 | ペルオキシダーゼの安定化方法 |
| JPH0519054U (ja) * | 1991-02-26 | 1993-03-09 | 株式会社大館製作所 | 信号器具箱 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0313880B2 (ja) | 1991-02-25 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |