JP2696436B2 - Ｒ（−）−マンデル酸の製造法 - Google Patents
Ｒ（−）−マンデル酸の製造法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はＲ（−）−マンデル酸の
製造法に関する。更に詳しくは、マンデロニトリルに対
して不斉加水分解能を有する微生物を用いて、Ｒ（−）
−マンデル酸を製造する方法に関する。Ｒ（−）−マン
デル酸は、セフェム系抗生物質の合成原料として、ま
た、多種の医農薬品の合成原料として工業的に重要であ
る。
製造法に関する。更に詳しくは、マンデロニトリルに対
して不斉加水分解能を有する微生物を用いて、Ｒ（−）
−マンデル酸を製造する方法に関する。Ｒ（−）−マン
デル酸は、セフェム系抗生物質の合成原料として、ま
た、多種の医農薬品の合成原料として工業的に重要であ
る。
【０００２】
【従来の技術とその問題点】Ｒ（−）−マンデル酸の製
造法として公知のものに化学的に合成したＲ，Ｓ−マン
デル酸（ラセミ体）を、（１）分別結晶によるラセミ分
割〔特開昭５８−１７７９３３号公報参照〕、（２）ク
ロマトグラフィーによるラセミ分割〔ＥＰ９８７０７号
公報参照〕、（３）ラセミ体エステルと成し酵素的不斉
加水分解によるラセミ分割〔Ｋ．Ｍｏｒｉ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３６，９１（１９８
０）参照〕するなどのラセミ分割法、（４）キラル試薬
を用いた化学的不斉合成法〔Ｄ．Ａ．Ｅｖａｎｓ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７，４３
４６（１９８５）参照〕などが有る。また、生物学的方
法としては、上記のエステル不斉加水分解法のほかに、
（５）ベンゾイルギ酸の微生物的不斉還元〔特開昭５７
−１９８０９６号公報参照〕、（６）Ｄ−オキシニトリ
ラーゼにより不斉合成したＲ（−）−マンデロニトリル
の加水分解〔特開昭６３−２１９３８８号公報参照〕、
（７）アルカリゲネス属、シュウドモナス属、ロドシュ
ウドモナス属、コリネバクテリウム属、アシネトバクタ
ー属、バチルス属、マイコバクテリウム属、ロドコッカ
ス属またはキャンディダ属の微生物によるラセミ体のマ
ンデロニトリルまたはマンデルアミドの不斉加水分解に
よるＲ（−）−マンデル酸の製造法〔特開平２−８４１
９８号公報参照〕などが知られている。
造法として公知のものに化学的に合成したＲ，Ｓ−マン
デル酸（ラセミ体）を、（１）分別結晶によるラセミ分
割〔特開昭５８−１７７９３３号公報参照〕、（２）ク
ロマトグラフィーによるラセミ分割〔ＥＰ９８７０７号
公報参照〕、（３）ラセミ体エステルと成し酵素的不斉
加水分解によるラセミ分割〔Ｋ．Ｍｏｒｉ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３６，９１（１９８
０）参照〕するなどのラセミ分割法、（４）キラル試薬
を用いた化学的不斉合成法〔Ｄ．Ａ．Ｅｖａｎｓ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７，４３
４６（１９８５）参照〕などが有る。また、生物学的方
法としては、上記のエステル不斉加水分解法のほかに、
（５）ベンゾイルギ酸の微生物的不斉還元〔特開昭５７
−１９８０９６号公報参照〕、（６）Ｄ−オキシニトリ
ラーゼにより不斉合成したＲ（−）−マンデロニトリル
の加水分解〔特開昭６３−２１９３８８号公報参照〕、
（７）アルカリゲネス属、シュウドモナス属、ロドシュ
ウドモナス属、コリネバクテリウム属、アシネトバクタ
ー属、バチルス属、マイコバクテリウム属、ロドコッカ
ス属またはキャンディダ属の微生物によるラセミ体のマ
ンデロニトリルまたはマンデルアミドの不斉加水分解に
よるＲ（−）−マンデル酸の製造法〔特開平２−８４１
９８号公報参照〕などが知られている。
【０００３】しかし、ラセミ分割による方法はいずれの
方法においてもプロセスの複雑化と各段階での収率の低
下を引き起こすこと、キラル試薬を触媒とした不斉合成
法ではキラル試薬が高価である上に高い光学純度の生成
物が得にくいという問題がある。生物学的方法であるベ
ンゾイルギ酸の不斉還元法においては基質の合成とＮＡ
ＤＨ再成系の維持に難点が有り、またＤ−オキシニトリ
ラーゼ法は未だ充分な工業化研究が行なわれていない。
ラセミ体のマンデロニトリルまたはマンデルアミドから
のＲ（−）−マンデル酸の生産に関しては、ラセミ体の
原料から直接優位量の光学活性体を得るものではなく、
残存する他方の光学活性を有する未反応のニトリルもし
くはアミドは回収され、酸を用いた加水分解により他方
の光学活性な有機酸に変換されるか、アルカリ処理によ
りラセミ体となし、再び原料として使用され、Ｒ（−）
−マンデル酸の生産に利用されている。この方法におい
ても残存する他方の光学活性なマンデロニトリルまたは
マンデルアミドの分離とアルカリ処理によるラセミ化反
応のプロセスは複雑となり、収率の低下も引き起こされ
ることになる。このように従来の方法は種々の問題点を
含み、いずれも工業的に有利なＲ（−）−マンデル酸の
製造法とはなり難い。
方法においてもプロセスの複雑化と各段階での収率の低
下を引き起こすこと、キラル試薬を触媒とした不斉合成
法ではキラル試薬が高価である上に高い光学純度の生成
物が得にくいという問題がある。生物学的方法であるベ
ンゾイルギ酸の不斉還元法においては基質の合成とＮＡ
ＤＨ再成系の維持に難点が有り、またＤ−オキシニトリ
ラーゼ法は未だ充分な工業化研究が行なわれていない。
ラセミ体のマンデロニトリルまたはマンデルアミドから
のＲ（−）−マンデル酸の生産に関しては、ラセミ体の
原料から直接優位量の光学活性体を得るものではなく、
残存する他方の光学活性を有する未反応のニトリルもし
くはアミドは回収され、酸を用いた加水分解により他方
の光学活性な有機酸に変換されるか、アルカリ処理によ
りラセミ体となし、再び原料として使用され、Ｒ（−）
−マンデル酸の生産に利用されている。この方法におい
ても残存する他方の光学活性なマンデロニトリルまたは
マンデルアミドの分離とアルカリ処理によるラセミ化反
応のプロセスは複雑となり、収率の低下も引き起こされ
ることになる。このように従来の方法は種々の問題点を
含み、いずれも工業的に有利なＲ（−）−マンデル酸の
製造法とはなり難い。
【０００４】
【問題点を解決するための手段】本発明者らは、Ｒ
（−）−マンデル酸の工業的に有利な製造方法の開発を
目的に検討を進めた結果、Ｒ，Ｓ−マンデロニトリル、
またはベンズアルデヒドと青酸の混合系に、中性付近な
いしは塩基性の水性媒体中で、該ニトリルに対して加水
分解能を有する微生物を作用させることにより、定量的
にＲ，Ｓ−マンデロニトリル、またはベンズアルデヒド
と青酸をＲ（−）−マンデル酸に変換し得ることを見出
し本発明を完成した。
（−）−マンデル酸の工業的に有利な製造方法の開発を
目的に検討を進めた結果、Ｒ，Ｓ−マンデロニトリル、
またはベンズアルデヒドと青酸の混合系に、中性付近な
いしは塩基性の水性媒体中で、該ニトリルに対して加水
分解能を有する微生物を作用させることにより、定量的
にＲ，Ｓ−マンデロニトリル、またはベンズアルデヒド
と青酸をＲ（−）−マンデル酸に変換し得ることを見出
し本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、シュードモナス（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属またはカセオバクター（Ｃａ
−ｓｅｏｂａｃｔｅｒ）属に属し、Ｒ，Ｓ−マンデロニ
トリルのニトリル基を立体選択的に加水分解する能力を
有する微生物または該処理物を、中性付近ないし塩基性
の水性媒体中で、Ｒ，Ｓ−マンデロニトリルまたはベン
ズアルデヒドと青酸の混合物に作用させることにより、
原料のＲ，Ｓ−マンデロニトリルまたはベンズアルデヒ
ドと青酸から直接優位量のＲ（−）−マンデル酸を生成
せしめることを特徴とするＲ（−）−マンデル酸の製造
法、である。
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属またはカセオバクター（Ｃａ
−ｓｅｏｂａｃｔｅｒ）属に属し、Ｒ，Ｓ−マンデロニ
トリルのニトリル基を立体選択的に加水分解する能力を
有する微生物または該処理物を、中性付近ないし塩基性
の水性媒体中で、Ｒ，Ｓ−マンデロニトリルまたはベン
ズアルデヒドと青酸の混合物に作用させることにより、
原料のＲ，Ｓ−マンデロニトリルまたはベンズアルデヒ
ドと青酸から直接優位量のＲ（−）−マンデル酸を生成
せしめることを特徴とするＲ（−）−マンデル酸の製造
法、である。
【０００６】上記したところを要旨とする本発明は、
Ｒ，Ｓ−マンデロニトリルが、中性付近ないしは塩基性
の水性媒体中で、ベンズアルデヒドと青酸との間で解離
平衡することによりマンデロニトリルが容易にラセミ化
するという性質を利用し、このラセミ化反応の系とマン
デロニトリルの不斉加水分解活性を有する微生物とを共
役させることにより、Ｒ，Ｓ−マンデロニトリルを直接
Ｒ−体優位にＲ（−）−マンデル酸に変換し得るとの本
発明者らにより見出された知見に基づくものである。
Ｒ，Ｓ−マンデロニトリルが、中性付近ないしは塩基性
の水性媒体中で、ベンズアルデヒドと青酸との間で解離
平衡することによりマンデロニトリルが容易にラセミ化
するという性質を利用し、このラセミ化反応の系とマン
デロニトリルの不斉加水分解活性を有する微生物とを共
役させることにより、Ｒ，Ｓ−マンデロニトリルを直接
Ｒ−体優位にＲ（−）−マンデル酸に変換し得るとの本
発明者らにより見出された知見に基づくものである。
【０００７】本発明に用いられる微生物は、シュードモ
ナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属またはカセオバクタ
ー（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅｒ）属に属するＲ（−）−マ
ンデル酸生産菌であり、具体的には、シュードモナスｓ
ｐ．ＢＣ１３−２（微工研条寄第３３１９号）、シュー
ドモナスｓｐ．ＢＣ１５−２（微工研条寄第３３２０
号）、カセオバクターｓｐ．ＢＣ４（微工研条寄第３３
１６号）およびカセオバクターｓｐ．ＢＣ２３（微工研
菌寄第１１２６１号）の菌株を挙げることができる。こ
れらの微生物は、いずれも本発明者により見出され工業
技術院微生物工業技術研究所（微工研）に上記番号にて
寄託されており、それぞれの菌学的性質は以下に示すと
おりである。
ナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属またはカセオバクタ
ー（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅｒ）属に属するＲ（−）−マ
ンデル酸生産菌であり、具体的には、シュードモナスｓ
ｐ．ＢＣ１３−２（微工研条寄第３３１９号）、シュー
ドモナスｓｐ．ＢＣ１５−２（微工研条寄第３３２０
号）、カセオバクターｓｐ．ＢＣ４（微工研条寄第３３
１６号）およびカセオバクターｓｐ．ＢＣ２３（微工研
菌寄第１１２６１号）の菌株を挙げることができる。こ
れらの微生物は、いずれも本発明者により見出され工業
技術院微生物工業技術研究所（微工研）に上記番号にて
寄託されており、それぞれの菌学的性質は以下に示すと
おりである。
【表１】
【表２】
【０００８】以上の菌学的性質をバージェーズ マニュ
アルオブ システマティック バクテリオロジー（Ｂｅ
ｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９８６）に従って分
類すると、ＢＣ１３−２およびＢＣ１５−２菌株はシュ
ードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ＢＣ４およ
びＢＣ２３菌株はカセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔ
ｅｒ）属に属する細菌と同定された。
アルオブ システマティック バクテリオロジー（Ｂｅ
ｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９８６）に従って分
類すると、ＢＣ１３−２およびＢＣ１５−２菌株はシュ
ードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ＢＣ４およ
びＢＣ２３菌株はカセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔ
ｅｒ）属に属する細菌と同定された。
【０００９】次に本発明の実施態様について説明する。
本発明に使用される微生物の培養は、資化し得る炭素源
（グリセロール、グルコース、サッカロース、カザミノ
酸、肉エキス、酵母エキス、麦芽エキス、ラクトース、
フルクトースなど）、窒素源（酵母エキスなど）、各微
生物に必須の無機塩（塩化マグネシウム、硫酸ナトリウ
ム、塩化カルシウム、硫酸マンガン、塩化鉄、硫酸亜鉛
など）等を含有した通常の培地を用いて行われる。
本発明に使用される微生物の培養は、資化し得る炭素源
（グリセロール、グルコース、サッカロース、カザミノ
酸、肉エキス、酵母エキス、麦芽エキス、ラクトース、
フルクトースなど）、窒素源（酵母エキスなど）、各微
生物に必須の無機塩（塩化マグネシウム、硫酸ナトリウ
ム、塩化カルシウム、硫酸マンガン、塩化鉄、硫酸亜鉛
など）等を含有した通常の培地を用いて行われる。
【００１０】培養初期または中期に生育を大きく阻害し
ない濃度のニトリル類（ケイ皮酸ニトリル、ベンジルシ
アニド、イソブチロニトリル、β−フェニルプロピオニ
トリル、ベンゾニトリル、２−シアノピリジン、３−シ
アノピリジン、４−シアノピリジン、フェニルスルフォ
ニルアセトニトリル、ε−カプロラクタム、γ−ブチロ
ニトリル、Ｎ（２−シアノエチル）モルホリン、アミド
類（イソブチルアミド、４−ピリジンカルボン酸アミ
ド、フェニルアセトアミドなど）の添加は、高い酵素活
性が得られるので好ましい。培養液のｐＨは４〜１０の
範囲で、培養は温度２０〜５０℃で、１〜７日程度好気
的に行われる。
ない濃度のニトリル類（ケイ皮酸ニトリル、ベンジルシ
アニド、イソブチロニトリル、β−フェニルプロピオニ
トリル、ベンゾニトリル、２−シアノピリジン、３−シ
アノピリジン、４−シアノピリジン、フェニルスルフォ
ニルアセトニトリル、ε−カプロラクタム、γ−ブチロ
ニトリル、Ｎ（２−シアノエチル）モルホリン、アミド
類（イソブチルアミド、４−ピリジンカルボン酸アミ
ド、フェニルアセトアミドなど）の添加は、高い酵素活
性が得られるので好ましい。培養液のｐＨは４〜１０の
範囲で、培養は温度２０〜５０℃で、１〜７日程度好気
的に行われる。
【００１１】マンデロニトリルの不斉加水分解は、上記
の様にして培養した微生物の培養液から分離した菌体ま
たは菌体処理物（増殖後の菌体の破砕物、乾燥菌体ある
いは分離精製されたマンデロニトリル不斉加水分解酵素
など）等を水または緩衝液に懸濁し、これにマンデロニ
トリルまたはベンズアルデヒドと青酸を共存させればよ
い。本発明においては、前述のようにマンデロニトリル
をラセミ化するために、反応中、系を中性付近ないしは
塩基性に保つことが必須であり、ｐＨを４〜１１、好ま
しくは６〜１０に調整する。その他、本発明における反
応条件は、ベンズアルデヒドや青酸に対する酵素の感受
性により一概に特定し得ないが、通常、反応液中のマン
デロニトリルは０．１〜２．０重量％、好ましくは０．
５〜１．０重量％、ベンズアルデヒドは０．１〜１．０
重量％、好ましくは０．１〜０．５重量％、青酸は０．
１〜０．５重量％、好ましくは０．１〜０．２重量％で
あり、マンデロニトリルに対する微生物の使用量は、乾
燥菌体として０．０１〜５．０重量％、反応温度は０〜
５０℃、好ましくは１０〜３０℃で０．１〜２４時間反
応させればよい。
の様にして培養した微生物の培養液から分離した菌体ま
たは菌体処理物（増殖後の菌体の破砕物、乾燥菌体ある
いは分離精製されたマンデロニトリル不斉加水分解酵素
など）等を水または緩衝液に懸濁し、これにマンデロニ
トリルまたはベンズアルデヒドと青酸を共存させればよ
い。本発明においては、前述のようにマンデロニトリル
をラセミ化するために、反応中、系を中性付近ないしは
塩基性に保つことが必須であり、ｐＨを４〜１１、好ま
しくは６〜１０に調整する。その他、本発明における反
応条件は、ベンズアルデヒドや青酸に対する酵素の感受
性により一概に特定し得ないが、通常、反応液中のマン
デロニトリルは０．１〜２．０重量％、好ましくは０．
５〜１．０重量％、ベンズアルデヒドは０．１〜１．０
重量％、好ましくは０．１〜０．５重量％、青酸は０．
１〜０．５重量％、好ましくは０．１〜０．２重量％で
あり、マンデロニトリルに対する微生物の使用量は、乾
燥菌体として０．０１〜５．０重量％、反応温度は０〜
５０℃、好ましくは１０〜３０℃で０．１〜２４時間反
応させればよい。
【００１２】加水分解反応で生成したＲ（−）−マンデ
ル酸は公知の方法、例えば遠心分離により微生物を除
き、さらに必要であれば限外ろ過などにより顆粒成分と
蛋白、多糖成分の除去を行ない、また必要であれば活性
炭処理を施した後、減圧濃縮、または酸性下での有機溶
媒による抽出を行ない、酢酸エチルエステルなどを用い
て再結晶をくり返すことにより高純度結晶を得ることが
できる。
ル酸は公知の方法、例えば遠心分離により微生物を除
き、さらに必要であれば限外ろ過などにより顆粒成分と
蛋白、多糖成分の除去を行ない、また必要であれば活性
炭処理を施した後、減圧濃縮、または酸性下での有機溶
媒による抽出を行ない、酢酸エチルエステルなどを用い
て再結晶をくり返すことにより高純度結晶を得ることが
できる。
【００１３】
【発明の効果】本発明によれば、光学純度がほぼ１００
％ｅｅでＲ（−）−マンデル酸への選択性がほぼ定量的
であり、ラセミ体のＲ，Ｓ−マンデロニトリルまたはベ
ンズアルデヒドと青酸から光学分割することなく直接優
位量（５０〜１００％）のＲ（−）−マンデル酸が製造
でき、化学量論的に全ての原料をＲ（−）−マンデル酸
に変換することも可能であり、極めて効率のよいＲ
（−）−マンデル酸の製造法を提供し得る。
％ｅｅでＲ（−）−マンデル酸への選択性がほぼ定量的
であり、ラセミ体のＲ，Ｓ−マンデロニトリルまたはベ
ンズアルデヒドと青酸から光学分割することなく直接優
位量（５０〜１００％）のＲ（−）−マンデル酸が製造
でき、化学量論的に全ての原料をＲ（−）−マンデル酸
に変換することも可能であり、極めて効率のよいＲ
（−）−マンデル酸の製造法を提供し得る。
【００１４】
【実施例】次に、本発明を実施例により更に詳細に説明
するが、本発明の範囲は実施例に限定されるものではな
い。
するが、本発明の範囲は実施例に限定されるものではな
い。
【００１５】実施例１ （１）培養 表１に示す菌株を下記の条件で培養した。 ｉ）培地 グリセロール ２．０ ％（Ｗ／Ｖ） 酵母エキス ０．３０％（Ｗ／Ｖ） リン酸一カリウム ０．６８％（Ｗ／Ｖ） リン酸二ナトリウム ０．７１％（Ｗ／Ｖ） 硫酸ナトリウム ０．２８％（Ｗ／Ｖ） 塩化マグネシウム ０．０４％（Ｗ／Ｖ） 塩化カルシウム ０．００４％（Ｗ／Ｖ） 硫酸マンガン ４×１０−４％（Ｗ／Ｖ） 塩化鉄 ６×１０−５％（Ｗ／Ｖ） 硫酸亜鉛 ３×１０−５％（Ｗ／Ｖ） 寒天 １．８０％（Ｗ／Ｖ） ベンジルシアニド ０．０２％（Ｗ／Ｖ） ｐＨ ７．５ ｉｉ）培養条件 上記平板培地にて３０℃、７２時間培養した。
【００１６】（２）マンデロニトリルの不斉加水分解 平板培地から菌体を採集し５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．５）で洗浄し、同リン酸緩衝液１０ｍｌに懸濁し、
ＯＤ６３０＝１〜５０となる様な菌体濃度の休止菌体反
応液を調整した。この液にマンデロニトリルを０．２％
（Ｗ／Ｖ）となる様に添加し、３０℃で１６〜２４時間
反応を行った。反応終了液を液体クロマトグラフィー
（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ ＯＤＳｃｏｌｕｍｎ）により分析
を行ったところ、マンデル酸とアンモニアが生成してい
た。また、光学分割用キラルセル（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ
ＷＨ ｃｏｌｕｍｎ）により光学純度を分析したとこ
ろ、高い光学純度のＲ（−）−マンデル酸を生成してい
た。結果を表１に示す。
７．５）で洗浄し、同リン酸緩衝液１０ｍｌに懸濁し、
ＯＤ６３０＝１〜５０となる様な菌体濃度の休止菌体反
応液を調整した。この液にマンデロニトリルを０．２％
（Ｗ／Ｖ）となる様に添加し、３０℃で１６〜２４時間
反応を行った。反応終了液を液体クロマトグラフィー
（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ ＯＤＳｃｏｌｕｍｎ）により分析
を行ったところ、マンデル酸とアンモニアが生成してい
た。また、光学分割用キラルセル（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ
ＷＨ ｃｏｌｕｍｎ）により光学純度を分析したとこ
ろ、高い光学純度のＲ（−）−マンデル酸を生成してい
た。結果を表１に示す。
【表３】
【００１７】実施例２ （１）培養 シュードモナスｓｐ．ＢＣ１３−２株を下記の条件で培
養した。ｉ）培地 （Ａ培地） グリセロール ２．０ ％（Ｗ／Ｖ） 酵母エキス ０．３０％（Ｗ／Ｖ） リン酸一カリウム ０．６８％（Ｗ／Ｖ） リン酸二ナトリウム ０．７１％（Ｗ／Ｖ） 硫酸ナトリウム ０．２８％（Ｗ／Ｖ） 塩化マグネシウム ０．０４％（Ｗ／Ｖ） 塩化カルシウム ０．００４％（Ｗ／Ｖ） 硫酸マンガン ４×１０ −４ ％（Ｗ／Ｖ） 塩化鉄 ６×１０ −５ ％（Ｗ／Ｖ） 硫酸亜鉛 ３×１０ −５ ％（Ｗ／Ｖ） ｐＨ ７．５ （Ｂ培地） Ａ培地に０．０２％（Ｗ／Ｖ）のベンジルシアニドを添
加したものをＢ培地とする ｉｉ）培養条件 Ａ培地にて３０℃、７２時間培養後、得られた菌体を更
にＢ培地にて３０℃、４８時間培養した。
養した。ｉ）培地 （Ａ培地） グリセロール ２．０ ％（Ｗ／Ｖ） 酵母エキス ０．３０％（Ｗ／Ｖ） リン酸一カリウム ０．６８％（Ｗ／Ｖ） リン酸二ナトリウム ０．７１％（Ｗ／Ｖ） 硫酸ナトリウム ０．２８％（Ｗ／Ｖ） 塩化マグネシウム ０．０４％（Ｗ／Ｖ） 塩化カルシウム ０．００４％（Ｗ／Ｖ） 硫酸マンガン ４×１０ −４ ％（Ｗ／Ｖ） 塩化鉄 ６×１０ −５ ％（Ｗ／Ｖ） 硫酸亜鉛 ３×１０ −５ ％（Ｗ／Ｖ） ｐＨ ７．５ （Ｂ培地） Ａ培地に０．０２％（Ｗ／Ｖ）のベンジルシアニドを添
加したものをＢ培地とする ｉｉ）培養条件 Ａ培地にて３０℃、７２時間培養後、得られた菌体を更
にＢ培地にて３０℃、４８時間培養した。
【００１８】（２）ベンズアルデヒドと青酸からのＲ
（−）−マンデル酸の生産 得られた培養液から、実施例１と同様の方法で菌体を取
得し、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）１００ｍｌ
に懸濁し、休止菌体反応液を調整した（ＯＤ６３０＝５
０．５）。この液にベンズアルデヒドと青酸を各々につ
いて終濃度１５ｍＭとなる様な濃度に添加し、３０℃で
反応を開始した。反応開始後１時間で解離平衡により生
成したマンデロニトリルおよびベンズアルデヒドが完全
に消失しＲ（−）−マンデル酸とアンモニアが定量的に
生成していた。さらにベンズアルデヒドと青酸各１５ｍ
Ｍを１時間毎に逐次添加したところ反応開始後１４時間
で２．６％（Ｗ／Ｖ）のＲ（−）−マンデル酸アンモニ
ウムが蓄積した（転換収率；８４．７％）。また、反応
終了液は遠心除菌後、酸処理によりｐＨ２とし酢酸エチ
ルエステルにてマンデル酸を抽出した。得られたマンデ
ル酸溶液は無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、有機溶媒
を溜去することにより粗結晶を得た。得られた結晶は酢
酸エチルエステルにより再結晶を行い白色粉末結晶を得
た。尚、得られた結晶と標準のマンデル酸は６Ｎアンモ
ニア水に溶解後、１．０％（Ｗ／Ｖ）の濃度となる様に
蒸留水でメスアップしてマンデル酸アンモニウムとなし
たところ、光学純度は１００％ｅｅであった。
（−）−マンデル酸の生産 得られた培養液から、実施例１と同様の方法で菌体を取
得し、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）１００ｍｌ
に懸濁し、休止菌体反応液を調整した（ＯＤ６３０＝５
０．５）。この液にベンズアルデヒドと青酸を各々につ
いて終濃度１５ｍＭとなる様な濃度に添加し、３０℃で
反応を開始した。反応開始後１時間で解離平衡により生
成したマンデロニトリルおよびベンズアルデヒドが完全
に消失しＲ（−）−マンデル酸とアンモニアが定量的に
生成していた。さらにベンズアルデヒドと青酸各１５ｍ
Ｍを１時間毎に逐次添加したところ反応開始後１４時間
で２．６％（Ｗ／Ｖ）のＲ（−）−マンデル酸アンモニ
ウムが蓄積した（転換収率；８４．７％）。また、反応
終了液は遠心除菌後、酸処理によりｐＨ２とし酢酸エチ
ルエステルにてマンデル酸を抽出した。得られたマンデ
ル酸溶液は無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、有機溶媒
を溜去することにより粗結晶を得た。得られた結晶は酢
酸エチルエステルにより再結晶を行い白色粉末結晶を得
た。尚、得られた結晶と標準のマンデル酸は６Ｎアンモ
ニア水に溶解後、１．０％（Ｗ／Ｖ）の濃度となる様に
蒸留水でメスアップしてマンデル酸アンモニウムとなし
たところ、光学純度は１００％ｅｅであった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (2)
- 【請求項１】 シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属またはカセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅ
ｒ）属に属し、Ｒ，Ｓ−マンデロニトリルのニトリル基
を立体選択的に加水分解する能力を有する微生物または
該処理物を、中性付近ないし塩基性の水性媒体中で、
Ｒ，Ｓ−マンデロニトリルに作用させることにより、原
料のＲ，Ｓ−マンデロニトリルから直接優位量のＲ
（−）−マンデル酸を生成せしめることを特徴とするＲ
（−）−マンデル酸の製造法。 - 【請求項２】 シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属またはカセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅ
ｒ）属に属し、Ｒ，Ｓ−マンデロニトリルのニトリル基
を立体選択的に加水分解する能力を有する微生物または
該処理物を、中性付近ないし塩基性の水性媒体中で、ベ
ンズアルデヒドと青酸の混合物に作用させることによ
り、原料のベンズアルデヒドと青酸から直接優位量のＲ
（−）−マンデル酸を生成せしめることを特徴とするＲ
（−）−マンデル酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8918991A JP2696436B2 (ja) | 1990-03-30 | 1991-03-29 | Ｒ（−）−マンデル酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2-80694 | 1990-03-30 | ||
| JP8069490 | 1990-03-30 | ||
| JP8918991A JP2696436B2 (ja) | 1990-03-30 | 1991-03-29 | Ｒ（−）−マンデル酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04218385A JPH04218385A (ja) | 1992-08-07 |
| JP2696436B2 true JP2696436B2 (ja) | 1998-01-14 |
Family
ID=26421668
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8918991A Expired - Lifetime JP2696436B2 (ja) | 1990-03-30 | 1991-03-29 | Ｒ（−）−マンデル酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2696436B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2696127B2 (ja) * | 1990-03-22 | 1998-01-14 | 旭化成工業株式会社 | 光学活性な２―ヒドロキシカルボン酸の製造法 |
| US5756306A (en) | 1995-11-10 | 1998-05-26 | Nitto Chemical Industry Co., Ltd. | Process for producing a-hydroxy acid or a-hydroxyamide by microorganism |
| US6582943B1 (en) | 2002-02-05 | 2003-06-24 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for producing 2-hydroxyisobutyric acid and methacrylic acid from acetone cyanohydrin |
| US7871802B2 (en) | 2007-10-31 | 2011-01-18 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Process for enzymatically converting glycolonitrile to glycolic acid |
| CN114410699B (zh) * | 2021-12-27 | 2024-08-16 | 安徽泰格生物科技有限公司 | 一种生物催化生产r-扁桃酸的方法 |
-
1991
- 1991-03-29 JP JP8918991A patent/JP2696436B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04218385A (ja) | 1992-08-07 |
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