JP2013500278A - Ｇｌｐ−１類縁体の誘導体、その薬学的に許容される塩およびその用途 - Google Patents

Abstract

本発明は、ＧＬＰ−１類縁体の一連の誘導体またはその薬学的に許容される塩を開示し、該ＧＬＰ−１類縁体は一般式（Ｉ）のアミノ酸配列を持っていて、式中、Lys*は脂溶性酸で修飾されたリジンを示す。本発明で提供されるＧＬＰ−１類縁体の誘導体はヒトＧＬＰ−１の機能を有し、またヒトＧＬＰ−１に比べin vivoでより長い半減期を有している。本発明で提供されるＧＬＰ−１類縁体の誘導体もしくはその薬学的に許容される塩、またはＧＬＰ−１類縁体の誘導体もしくはその薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物は、広くインシュリン非依存性糖尿病、インシュリン依存性糖尿病または肥満症の治療に用いることができる。

Description

本発明はヒトグルカゴン様ペプチド‐１（ＧＬＰ−１）類縁体の一連の誘導体およびそれらの薬学的に許容される塩に関する。本発明で提供されるＧＬＰ−１類縁体の誘導体はヒトＧＬＰ−１の機能を有し、またヒトＧＬＰ−１に比べin vivoでより長い半減期を有している。本発明はまたＧＬＰ−１類縁体の誘導体、その薬学的に許容される塩の用途、またはそれらのインシュリン非依存性糖尿病、インシュリン依存性糖尿病または肥満症の治療における医薬組成物としての用途に関する。

糖尿病（真正糖尿病）は世界的な流行病であり、インシュリンの完全なまたは相対的な不足によるグルコース、タンパクおよび脂質の代謝障害の症候群である（Chen Ruijie. 糖尿病治療薬研究の現状）（非特許文献１）。糖尿病は、その発生原因により１型糖尿病と２型糖尿病(２型糖尿病、Ｔ２ＤＭ、以下同様)に分けられる。糖尿病と診断された全患者の９０−９５％はＴ２ＤＭであり、それらの患者はしばしば肥満や身体活動の不足を伴っていて、年長者が多く、また糖尿病の家族歴がある場合、Ｔ２ＤＭは進行性疾患でもある。２０００年の統計データでは、世界保健機関は糖尿病を患っている人は全世界で約１億７１００万人と見積もっている；２００５年には、米国の疾病対策予防センターは糖尿病に罹っている米国人は２０８０万人と見積もっていて、これは米国人口の約７％である；２００６年には、国際糖尿病連合の統計によると、全世界の糖尿病患者数は約２億４６００万人(全世界の人口の約５．９％)で、さらに患者の４６％は、最も経験を積んだ労働力の年齢層である４０−５９歳となっている。
Ｔ２ＤＭはインシュリン分泌の抑制と膵臓のβ細胞の機能不全を特徴とし、その結果インシュリン不足と血糖値上昇をもたらす（Ferrannini E. インシュリン非依存性糖尿病に
おけるインシュリン抵抗性とインシュリン欠乏：課題と展望）（非特許文献２）。Ｔ２ＤＭ患者は典型的に食後と空腹時の高血糖(空腹時グルコース＞１２５ｍｇ／ｄＬ)に悩まされるが、この高血糖は主として膵臓のβ細胞が周囲の組織におけるインシュリン抑制によって生じたインシュリン欠乏を補うに十分なインシュリンを分泌できないことによっている（Weyer C., Bogardus C., Mott DM., et al. ２型糖尿病の病因におけるインシュリン分泌機能障害とインシュリン抵抗の自然経過）（非特許文献３）。

Ｔ２ＤＭの主要な危険因子の一つは肥満であり、これは人の健康にとって非常に有害である。Ｔ２ＤＭはしばしば肥満以外に高血圧や脂質異常症などの他の高リスク疾患と共存している；Ｔ２ＤＭ患者の６０％は網膜症や神経障害を含む毛細血管合併症を伴い、また冠動脈心疾患、心筋梗塞、ショックなどの心血管障害も伴う。米国では、循環器疾患（ＣＶＤ）が大きな死因となっていて、Ｔ２ＤＭはアテローム動脈硬化症などの大血管性合併症、心筋梗塞、ショックおよび末梢血管疾患を引き起こす主な危険因子である。糖尿病を持つ成人の心臓疾患やショックによる死亡のリスクは、糖尿病を持たない人より２−４倍高くなっている。また、ほぼ６５％の糖尿病の人は心臓疾患とショックで死亡している。

患者への身体的および生理的な害に加え、Ｔ２ＤＭは社会に大きな経済的負担をもたらす。統計によると、米国では糖尿病に随伴する合併症の治療費は約２２９億ドルで、Ｔ２ＤＭとその合併症の合わせた治療費は毎年ほぼ５７１億ドルとなっている。
スルホニル系やビグアナイド系の昔からの経口血糖降下薬、最近のインシュリン増感剤やαグルコシダーゼ阻害剤、動物インシュリンやヒトインシュリンの開発、種々の新しい製剤技術、インシュリン産生に作用する新しい方法について単にインシュリンを増加させることによる薬物療法の新しいメカニズムの探索など、Ｔ２ＤＭの治療薬が注目されている。体重増加が経口または注射による血糖降下剤投与後の一般的な副作用であるが、これが患者のコンプライアンスを低下させ、循環器疾患の発生リスクを高めている。それ故、安全性が高く、患者のコンプライアンスも良く、副作用の少ないＴ２ＤＭの新しいタイプの治療薬の開発が糖尿病研究のホットな主題となっている。

１００年ほど前には、Ｍｏｏｒｅは、十二指腸は膵臓での分泌を刺激する「化学刺激物質」を分泌することができることを提唱し、糖尿病を治療するために腸抽出物の注射を試みている。次いで、腸分泌物由来の体液性因子が膵臓の内分泌機能を高め、そして静脈内または経口投されたグルコースにより誘導されたインシュリン分泌物の約５０％が腸で産生されたペプチドの刺激に由来していることが見いだされた。それ故、ＺｕｎｚとＬａｂａｒｒｅは「インクレチン」の概念を創出した。これまで２種類のインクレチンが単離された。すなわち、グルコース依存性のインシュリン分泌性ポリペプチド（ＧＩＰ）とグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）である。ＧＩＰとＧＬＰ−１の両者は栄養分が吸収されたときに特殊な腸管の神経細胞によって分泌される。すなわち、ＧＩＰは十二指腸および近位空腸Ｋ細胞によって分泌され、ＧＬＰ−１はＬ細胞で合成されて、主として遠位小腸および結腸に存在している（Drucker DJ. ２型糖尿病の治療に対するインクレチン作用の増強）（非特許文献４）。

ＧＬＰ−１は２つの生物活性型、すなわち血漿中でＧＬＰ−１（７−３７）およびＧＬＰ−１（７−３６）アミドで存在していて、両者は一つのアミノ酸だけが異なり、それらの生物活性やin vivoでの半減期は同じである（Drucker DJ. ２型糖尿病の治療に対するインクレチン作用の増強)（非特許文献４）。

通常称されるＧＬＰ−１はＧＬＰ−１（７−３７）およびＧＬＰ−１（７−３６）アミドの一般名である。ＧＩＰとＧＬＰ−１は消化管に放出された後、迅速にジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）によって不活性型に分解され、そのためＧＩＰとＧＬＰ−１のin vivo半減期は非常に短い（ＧＩＰのin vivo半減期は約５−７分、ＧＬＰ−１のin vivo半減期は約２分）（Drucker DJ. ２型糖尿病の治療に対するインクレチン作用の増強）（非特許文献４）。殆どの分解過程はＧＩＰとＧＬＰ−１がＤＰＰ−ＩＶを含有する血管に入ったときに起こり、そして分解されなかった少量のＧＬＰ−１とＧＩＰが膵臓に入ってその結合サイトと結合してβ細胞を刺激し、インシュリンを放出させることを種々の研究が示している。機能性β細胞のインシュリン放出を直接促進するスルホニルウレアのメカニズムと異なり、インクレチンの殆どの作用はグルコース依存性である。また、動物と人についてのいくつかのin vitroの試験は、ＧＬＰ−１はα細胞抑制やグルカゴン過分泌の減少などの機能も持っていることを示している。

Ｔ２ＤＭ患者の血漿ＧＩＰ濃度は、インクレチンの機能が有意に低下または失われているときは正常であるが、Ｔ２ＤＭ患者のＧＬＰ−１濃度は低下している。それ故、ＧＬＰ−１に基づく医薬はＴ２ＤＭの治療により寄与する。ＧＬＰ−１（７−３７）とＧＬＰ−１（７−３６）アミドの両者の濃度は食後数分で増加するが、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドの含量の方が多い。そのため、ＧＬＰ−１分泌は、消化された食物が小腸と結腸に入る前に、内分泌と神経シグナルの伝達の２つの効果により大きく増大する。空腹状態下のＧＬＰ−１の血漿濃度は非常に低く(約５−１０ｐｍｏｌ／Ｌ)、食後急速に増大する（１５−５０ｐｍｏｌ／Ｌまで)。ＤＰＰ−ＩＶと腎クリアランスの２つの機能の下、循環しているＧＬＰ−１のin vivo濃度は急速に減少し、ヒト中性エンドペプチダーゼ２４・１１などの他の酵素もＧＬＰ−１クリアランスの不活化に重要な役割を果たしている。ＧＬＰ−１の２番目のアミノ酸残基がＤＰＰ−ＩＶの良い基質であるアラニンであるため、ＧＬＰ−１は不活性なペプチドフラグメントに分解され易い。事実、ＤＰＰ−ＩＶはin vivoでインクレチンの活性喪失のキーとなる根拠となっている。ＤＰＰ−ＩＶ遺伝子の発現が停止されたマウスにおけるＧＬＰ−１濃度は正常なマウスに比べて著しく高く、インシュリン分泌もまた増加していることを実験結果が示している。ＤＰＰ−ＩＶが存在しているだけで、化学構造が完全で生物学的に活性なＧＬＰ−１のin vivo含量(血漿中を除く)は、血漿中のＧＬＰ−１の全含量のたった１０−２０％である（CF, Nauck MA, Toft-Nielsen M, et al. 皮下および静脈内投与されたグルカゴン様ペプチド１は２型糖尿病患者および健常人においてＮＨ_２末端から急速に分解される）（非特許文献５）。

ＧＬＰ−１とＧＩＰは異なるＧタンパク質共役受容体(ＧＰＣＲｓ)への結合を通じてそれぞれの役割を果たす。ＧＩＰ受容体の殆どは膵臓β細胞によって発現し、ＧＩＰ受容体の少数が脂肪組織および中枢神経系により発現する。これに対し、ＧＬＰ−１受容体は主として膵臓のαならびにβ細胞および中枢ならびに抹消神経系を含む抹消組織、脳、腎臓、肺、消化管などに発現する。β細胞における２つのインクレチンの活性化は細胞におけるｃＡＭＰ濃度と細胞内カルシウムの急速な増加を生じ、その結果、グルコース依存形式で細胞外領域にそれらを分泌する。インクレチン受容体からの持続したシグナルの伝達がプロテインキナーゼＡと結びつき、遺伝子転写、インシュリン生合成の増加およびβ細胞増殖の刺激をもたらす（Gallwitz B. ２型糖尿病の治療におけるグルカゴン様ペプチド１に基づく治療）（非特許文献６）。ＧＬＰ−１受容体とＧＩＰ受容体の活性化は、げっ歯類およびヒトの膵臓β細胞のアポトーシスを抑制し、それらの生存を延ばすこともできる（Li Y, Hansotia T, Yusta B, et al. グルカゴン様ペプチド１受容体シグナルがβ細胞アポトーシスを調節）（非特許文献７）。ＧＬＰ−１受容体の発現に合わせ、ＧＬＰ−１はまたグルカゴン分泌、胃排出および食物摂取を抑制し、神経メカニズムを通じてグルコースの分解を高めることもできる。他のインシュリン分泌反応と同様、ＧＬＰ−１がグルコース濃度をコントロールする役割はグルカゴン依存性であり、そして低血糖により生じるグルカゴンの対抗的調節放出はＧＬＰ−１の薬理学的濃度でさえ十分に保持されていることに注意する必要がある。

グルコースホメオスタシスにおける内在性ＧＬＰ−１およびＧＩＰの重要な生理学的役割は受容体遮断薬または遺伝子ノックアウトマウスを用いて深く研究されている。ＧＬＰ−１またはＧＩＰの急性拮抗作用（acute antagonism）は齧歯動物のin vivoでのインシュリン分泌を減少させて血漿のグルコース含量を高める。同様に、ＧＩＰまたはＧＬＰ−１レセプターが不活性化された変異マウスはグルコース刺激によるインシュリン分泌が欠損していて、グルコース耐性が損傷している。急性の拮抗薬（acute antagonist）またはＧＬＰ−１遺伝子の損傷が齧歯動物の空腹時血糖の増加を生じさせることから、ＧＬＰ−１はまた空腹時血糖を調節する機能も有している；同時に、ＧＬＰ−１は人体におけるグルコースコントロールの基礎であり、エキセンディン（９−３９）のアンタゴニストに関する研究は、ＧＬＰ−１機能の破壊がグルコース刺激によるインシュリン分泌の欠損、グルコースクリアランス速度の減少、グルカゴン濃度の増加および胃排出の加速をもたらすことを示している。ＧＬＰ−１の生理学的役割は、（１）グルコース吸収を構築し、グルコース依存性インシュリン分泌の仲介を助けること；（２）摂食後のグルカゴン分泌を抑制し、肝臓のグルコース放出を減らすこと；（３）食物が腸管で吸収されたとき、胃排出を調節し、過剰のグルコースの循環を防ぐこと；（４）食物の摂取を抑制すること(食欲など)（Deacon CF. グルカゴン様ペプチド１に基づく治療指針）（非特許文献８）。動物研究もまたin vivoで膵臓のβ細胞の数を安定化させる生理学的役割を示している。

内在性ＧＬＰと同様、ＧＬＰ−１類縁体はin vivoでグルカゴンの放出を抑制し、グルコース依存性様式でin vivoでのインシュリン分泌を刺激することができる。従って、血糖を低下させるその役割は自己規制的で、一般的には大用量で低血糖を引き起こさない。ＧＬＰ−１は血糖を正常レベル以下の濃度に下げることができるということが文献に報告されているにもかかわらず、この効果は一過性であり、インシュリン分泌を促進するＧＬＰ−１の当然の結果と考えられる。ＧＬＰ−１は血糖を一時的に正常レベル以下の濃度に下げることができるが、重篤で持続的な低血糖は起こさない；直接血糖を下げる他、ＧＬＰ−１は食物摂取の量を減らすこともでき、齧歯動物と人で証明されている。それ故、血糖濃度は体重を間接的に減らすことによってコントロールすることができる。ＧＬＰ−１はまた食事により刺激されたガストリンと胃酸の分泌を抑制する潜在的な役割も持っていて、これらの機能はＧＬＰ−１が消化性潰瘍を抑制する役割も持っていることを示している。ＧＬＰ−１の作用メカニズムは、それ自身を２型糖尿病患者の理想的な治療薬のみならず、肥満症糖尿病患者の治療薬にもする。ＧＬＰ−１は患者の満腹感を高め、食物摂取を減らし、そして体重を維持または減量する；いくつかの研究は、ＧＬＰ−１は糖耐性障害から糖尿病への転換を防止できることを示唆しており、またいくつかの文献はＧＬＰ−１系化合物が実験動物の膵臓β細胞の成長と増殖に直接影響を持っていることを報告していて、ＧＬＰ−１が膵臓の幹細胞から機能性β細胞への分化を促進できることがいくつかの実験によって見出された。これらの結果は、ＧＬＰ−１が膵島を保護し、糖尿病の進行を遅らせる機能を持っていて、β細胞の形態と機能を維持することができ、一方、β細胞のアポトーシスを減らすことを示している。いくつかの経口薬や外因性インシュリンはＴ２ＤＭ患者の適正範囲を超えるグルカゴン分泌を抑制もしくは減少させることができないので、ＧＬＰ−１類縁体は直接グルカゴン放出を抑制することまたはインシュリン分泌促進により生じるグルカゴンを抑制することを通じてグルカゴン過分泌に作用することができる。食後の血糖値上昇はこれら２つのメカニズムを通じて効果的に低下させることができる。一方、β細胞の機能を維持することは長期の食後高血糖をコントロールする役割も果たしている。

一方、ＧＬＰ−１類縁体は皮下注射により投与されるが、最適投薬量を見積もるために炭水化物量を計算する必要がなく、また血糖を自己モニターする必要もないので、これらの種類の薬剤はインシュリンより使い易い。

天然ＧＬＰ−１の種々の効果は確認されており、Ｔ２ＤＭの治療に新たな希望をもたらしている。しかし、天然のヒトＧＬＰ−１は非常に不安定であり、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）によって分解され、その半減期はたった２分程度である。血糖を下げるために天然ＧＬＰ−１を用いると、点滴静注または連続した皮下注射が必要であり、臨床上実行し難い。このような事情により、研究者たちはＧＬＰ−１の作用時間を延ばす方法について探索を続けた。それ故、作用時間の長いＧＬＰ−１類縁体またはその誘導体の開発は、医薬品分野において重要な関心事となっている。

エクセナチドはEli Lilly社およびAmylin社により開発された、バイエッタ（Byetta）の商品名を持つ合成エキセンディン−４である。エクセナチドはＦＤＡおよびＥＭＥＡによってＴ２ＤＭの治療用として承認されている。それは哺乳動物のＧＬＰ−１と配列において５０％の相同性を有しており、ＧＬＰ−１とレセプターの類似の結合性部位を持っていて（Drucker DJ, Nauck MA. インクレチン系：２型糖尿病におけるグルカゴン様ペプチド１レセプターアゴニストおよびジペプチジルペプチダーゼ４阻害剤）（非特許文献９）、トカゲに特異的な遺伝子によってコードされている。ＧＬＰ−１に比べ、エクセナチドではＧＬＰ−１の２位のアラニンがグリシンと置き換わっていて、ＤＰＰ−ＩＶ酵素の酵素分解を効果的に阻害し、その半減期はin vivoで約６０−９０分である（Kolterman OG, Kim DD, Shen L, et al. ２型糖尿病におけるエクセナチドの薬物動態、薬力学および安全性）（非特許文献１０）。単回の皮下注射後のエクセナチドのin vivo濃度は持続的に増加し、２時間後に最高血漿濃度に到達するなど、４−６時間持続している（Nielsen LL, Baron AD. ２型糖尿病におけるエクセナチド(合成エキセンディン‐４)の薬理）(非特許文献１１)。エクセナチドの代謝は肝臓では起こらないが、主として腎糸球体でろ過された後にタンパク分解酵素によって分解されることに注意する必要がある。

エクセナチドは、インシュリン分泌のグルコース依存性増進、誤ったグルカゴンの過剰分泌のグルコース依存性抑制、遅い胃排出、食物摂取の減少などを含めた特別なグルコース調節作用を持っている。糖尿病モデルのin vitroおよびin vivoの研究からエクセナチドはまた第１ステージ(第１相)インシュリン分泌物の貯蔵、β細胞の増殖促進および前駆細胞からのインシュリン再生促進の効果も有していることが見いだされた。

血糖のより良いコントロールを達成するためには、エクセナチドの１日２回の注射が必要であり、患者にとって大きな不便となっている。さらに、エクセナチドには軽度から中程度の悪心(患者の約４０％がこの反応を持つ)、下痢および吐き気(患者の１５％以下が両方の反応を持つ)もある。約５０％のエクセナチドの投与を受けた患者は抗体を産生するが、これらの抗体は効果に影響しないか、他の臨床効果をもたらしたりしない。近年、６人の患者でバイエッタ服用後に出血もしくは壊死性膵炎の症状が生じたことが報告されている。

ＣＪＣ−１１３１はConjuChem Biotechnologies Inc.によって開発されたペプチダーゼ抵抗性を有するＧＬＰ−１類縁体であり、ＧＬＰ−１の２位のＡｌａがＤＰＰ−ＩＶ酵素分解への抵抗能を高めるためにＤ−Ａｌａと置き換えられている。その構造には共有結合(非可逆的)を通じて血清アルブミンに結合することができる活性な反応性リンカーを含んでいる（Kim JG, Baggio LL, Bridon DP, et al. グルカゴン様ペプチド１アルブミン複合体の開発と評価：グルカゴン様ペプチド１受容体のin vivo活性化能）（非特許文献１2）。また、ＧＬＰ−１‐血清アルブミン複合体はＧＬＰ−１の活性を有しているが、ＤＰＰ−ＩＶ酵素の酵素分解に対する安定性が増し、in vivoでの作用時間が延びて、その血漿中の半減期は約２０日である。

ＣＪＣ−１１３１‐血清アルブミン複合体が組替えヒト膵臓ＧＬＰ−１レセプターを形質移入したチャイニーズハムスター卵巣細胞に結合した時、Ｋｉは約１２ｎＭ（ＧＬＰ−１のＫｉは５．２ｎＭ）であり、一方ｃＡＭＰを活性化する複合体のＥＣ_５０は１１−１２ｎＭで、このＥＣ_５０はＧＬＰ−１のものと同じであることが研究から見いだされた。存在している文献は、この複合体は血糖が正常か高いマウスの食後血糖値を下げることができることを示し、そして試験は、ＣＪＣ−１１３１のこの活性はＧＬＰ−１の特定の官能性受容体に作用し、マウスではＣＪＣ−１１３１はまた胃排出を遅らせ、食物摂取を抑制するなどの効果も有していることを示している。

ＣＪＣ−１１３１の第２相臨床試験の部分は終了している。２００５年９月にConjuChem
は、得られた試験結果の解析からＣＪＣ−１１３１は慢性の投与計画には適さないと結論し、ＣＪＣ−１１３１の臨床試験を中止した。
Ａｌｂｕｇｏｎ（アルブミン‐ＧＬＰ−１）は、Human Genome Sciences Inc.から許諾を受けたGlaxoSmithKlineによって開発されたＴ２ＤＭの長時間作用型治療薬で、ＧＬＰ−１（ＤＤＰ−ＩＶに対する抵抗性を増した置換変異を持つ）とアルブミンの融合タンパクである。サルでのその半減期は３日である。その開発の基本的思想は、組換えＧＬＰ−１と血清アルブミンを結合して複合体を形成し、それによってin vivo半減期を著しく増大させるというものである。Ａｌｂｕｇｏｎの投与は、効果的にマウスの血糖値を減少させ、インシュリン分泌を増加し、胃排出を遅らせ、食物摂取などを減少させる（Baggio LL, Huang Q, Brown TJ, et al. 組換えヒトグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１−アルブミン蛋白（Ａｌｂｕｇｏｎ）の、満腹、消化管運動およびグルコース恒常性と共役するＧＬＰ−１レセプター依存性経路のペプチド作動性活性化に対する模倣）(非特許文献１３)。現在、Ａｌｂｕｇｏｎは第３相臨床試験中である。

(特許文献１)は、ＧＬＰ−１（７−３７）を脂肪酸で修飾して得られた、ＧＬＰ−１のin vivoでの半減期が著しく高められたＧＬＰ−１誘導体を開示している。(特許文献２)は、Ｎ末端が化学的に修飾されたＧＬＰ−１誘導体を開示しているが、いくつかの文献はＮ末端のアミノ酸の修飾はＧＬＰ−１誘導体全体の活性を著しく減少させることを報告している（非特許文献１４）。さらに、（特許文献３〜８）等も化学修飾またはアミノ酸置換によって製造された一連のＧＬＰ−１類縁体またはその誘導体を開示しており、最も代表的なものがNovo Nordiskによって開発されたリラグルチドで、第３相臨床試験が終了している。リラグルチドはＧＬＰ−１の誘導体で、その構造は、配列がヒトＧＬＰ−１と９７％相同であるＧＬＰ−１類縁体を含んでいる。このＧＬＰ−１類縁体はパルミチン酸と共有結合で結合してリラグルチドを形成していて、リラグルチド構造のパルミチン酸は血清アルブミンに非共有結合で結合している。そしてこの構造的特徴が、ＧＬＰ−１の活性を変えることなく注射部位からゆっくりと放出させ、in vivo半減期を延長させる決定要因となっている。一方、構造中のパルミチン酸は一定の立体障害を形成してＤＤＰ−ＩＶによる分解を防止し、腎クリアランスを減少させる。上記特徴より、皮下注射により投与した人体におけるリラグルチドの半減期は理論上約１０−１４時間であり、１日１回で投与でき、一日投与量は０．６−１．８ｍｇである。２００９年４月２３日、Novo Nordiskは、ＥＭＥＡのヒト用医薬品委員会（ＣＨＭＰ）がリラグルチドについてポジティブな評価をしてその掲載の承認を推薦したことを発表した。Novo Nordiskは、欧州委員会が２か月以内に掲載を承認することを期待している。

ＷＯ９８０８８７１ ＷＯ９９４３７０５ ＣＮ２００６８０００６３６２ ＣＮ２００６８０００６４７４ ＷＯ２００７１１３２０５ ＣＮ２００４８０００４６５８ ＣＮ２００８１０１５２１４７ ＷＯ２００６０９７５３８

Academicjournal of Guangdong College of Pharmacy, 2001, 7(2):131−133） EndocrRev. 1998, 19(4):477−490 J.Clin. Invest. 1999, 104(6): 787−794 DiabetesCare. 2003, 26(10):2929−2940 Diabetes.1995, 44(9): 1126−1131 TreatEndocrinol. 2005, 4(6):361−370 JBiol Chem. 2003, 278(1): 471−478 Diabetes.2004, 53(9):2181−2189 Lancet.2006, 368(9548):1696−1705 AmHealth Syst Pharm. 2005, 62(2): 173−181 CurrOpin Investig Drugs. 2003, 4(4):401−405 Diabetes2003, 52(3):751−759 Diabetes2004, 53(9):2492−2500 J.Med. Chem. 2000, 43, 1664 1669

本発明は、in vivoでより活性で、半減期の長いＧＬＰ−１類縁体の一連の誘導体を提供することを目的とする。本発明で提供するＧＬＰ−１類縁体の誘導体は、ヒトＧＬＰ−１の機能と同じ機能を有し、ヒトＧＬＰ−１に比べてin vivoでのより長い半減期を有している。

本発明はまた、インシュリン非依存性糖尿病、インシュリン依存性糖尿病または肥満症の治療に用いるための該ＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物を提供することも目的とする。

本発明の目的は、以下の技術的解決手段によって達成される。

本発明は、式（I）：

で表されるアミノ酸配列を持つＧＬＰ−１類縁体の一連の誘導体〔ただし、該ＧＬＰ−１類縁体の誘導体は式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）で表される脂溶性置換基を含み、X₁、 X₂、 X₁₀、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇、X₁₉、X₂₀、X₂₁、X₂₄、X₂₇、X₂₈、X₂₉、X₃₀、X₃₁、X₃₂、X₃₃、X₃₄、X₃₅、X₃₆、X₃₇、X₃₈およびX₃₉は独立して、天然もしくは非天然アミノ酸または天然もしくは非天然アミノ酸から成るペプチド断片を示す〕またはその薬学的に許容される塩を提供する。

該ＧＬＰ−１類縁体の誘導体とは、前駆体として働くヒトＧＬＰ−１（７−３７）ペプチドのアミノ酸の部分置換またはＣ末端の延長によって得られた新しいＧＬＰ−１ペプチドを言い、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドとＧＬＰ−１（７−３７）を含んでいて、ヒトＧＬＰ−１と同じ機能を持っている。

該誘導体は、脂溶性の置換基を用いることによってＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸残基に化学修飾を加えたものを言い、代表的な修飾はアミドまたはエステルを形成することであり、好ましくはアミドにすることである。

本発明の好ましい態様としては、式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）の脂溶性置換基とＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸残基のアミノ酸がアミド結合によって結合している。

本発明の他の好ましい態様としては、式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）の脂溶性置換基とＧＬＰ−１類縁体のＣ末端にあるＬｙｓのεアミノ基がアミド結合によって結合している。

本発明のさらに好ましい他の態様としては、式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数であり、１４が最も好ましい）の脂溶性置換基とＧＬＰ−１類縁体のＣ末端にあるＬｙｓのαアミノ基がアミド結合によって結合している。

本発明の他の好ましい態様としては、ＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸配列においてX₁はL-HisまたはD-Hisであり、X₂はAla、D-Ala、Gly、Val、Leu、Ile、LysまたはAibであり、X₁₀はValまたはLeuであり、X12はSer、LysまたはArgであり、X₁₃はTyrまたはGlnであり、X₁₄はLeuまたはMetであり、X₁₆はGly、GluまたはAibであり、X₁₇はGln、Glu、LysまたはArgであり、X₁₉はAlaまたはValであり、X₂₀はLys、GluまたはArgであり、X₂₁はGluまたはLeuであり、X₂₄はValまたはLysであり、X₂₇はValまたはLysであり、X₂₈はLys、Glu、AsnまたはArgであり、X₂₉はGlyまたはAibであり、X₃₀はArg、GlyまたはLysであり、X₃₁はGly、Ala、Glu、ProまたはLysであり、X₃₂はLysまたはSerであり、X₃₃はLysまたはSerであり、X₃₄はGly、AlaまたはSarであり、X₃₅はGly、AlaまたはSarであり、X₃₆はProまたはGlyであり、X₃₇はProまたはGlyであり、X₃₈はProまたはGlyであり、X₃₉はSerまたはTyrである。

本発明の一つのより好ましい態様としては、ＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸配列が配列番号１〜配列番号１２０から成る群の中から選ばれたものである。

本発明の他の好ましい態様としては、式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）の脂溶性置換基と配列が配列番号１〜配列番号１２０から成る群の中から選ばれたものであるＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸残基のアミノ基がアミド結合によって結合している。

本発明の一つのより好ましい態様としては、式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）の脂溶性置換基と、配列番号１〜配列番号１２０から成る群の中から選ばれたＧＬＰ−１類縁体のＣ末端Ｌｙｓのεアミノ基とがアミド結合によって結合している。

本発明のもう一つのより好ましい態様としては、式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数であり、好ましくはｎは８，１０，１２，１４，１６，１８，２０および２２から選ばれ、最も好ましくはｎは１４である）の脂溶性置換基と、配列番号１〜配列番号１２０から成る群の中から選ばれたＧＬＰ−１類縁体のＣ末端Ｌｙｓのαアミノ基とがアミド結合によって結合している。

本発明のもう一つのより好ましい態様としては、式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数であり、好ましくはｎは８，１０，１２，１４，１６，１８，２０および２２から選ばれ、最も好ましくはｎは１４である）の脂溶性置換基と、配列番号１〜配列番号２０から成る群の中から選ばれたＧＬＰ−１類縁体のＣ末端Ｌｙｓのαアミノ基とがアミド結合によって結合している。

本発明の他のより好ましい態様としては、式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−であり、ｎは１４である）の脂溶性置換基と、配列番号１〜配列番号８から成る群の中から選ばれたＧＬＰ−１類縁体のＣ末端Ｌｙｓのαアミノ基とがアミド結合によって結合している。

本発明で提供するＧＬＰ−１類縁体の誘導体は両性化合物に属し、当業者は酸またはアルカリ化合物を用いて公知技術によりそれらを塩に転換することができる。酸付加塩の形成に通常用いられる酸としては：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸である；塩としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、トリフルオロ酢酸塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、重リン酸塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩酸塩、シュウ化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、オクタン酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸、ヘキサン酸塩、エナント酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、１，４−ブチンジカルボン酸塩、１，６−ヘキシンジカルボン酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フェニル酢酸塩、フェンプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ‐ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、１−ナフトールスルホン酸塩、２−ナフトールスルホン酸塩、マンデル酸塩などがあげられ、好ましくはトリフルオロ酢酸塩である。アルカリ物質も、ＧＬＰ−１類縁体の誘導体との塩に変えることができ、該アルカリ物質にはアンモニア塩、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物、および炭酸塩、ビカーボネートが含まれ、代表的には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどが挙げられる。

本発明によるＧＬＰ−１誘導体を含む医薬組成物は、非経口投与の方法によりこの治療を必要とする患者の治療に用いることができる。非経口投与は、皮下、筋肉内または静脈内注射から選ぶことができる。本発明のＧＬＰ−１誘導体はまた、パッチ（イオントホレーシスなど）による投与および粘膜経由の投与などの経皮ルートによっても投与することができる。

本発明のＧＬＰ−１誘導体を含む医薬組成物は、製薬工業分野の一般的な技術によって製造することができる。これらの技術には、望みの最終組成物を得るための成分の適当な溶解や混合が含まれる。例えば、ＧＬＰ−１誘導体を一定量の水に溶解するが、水の量は得られる組成物の最終容積より僅かに少なくする。必要に応じて等張剤、保存剤、界面活性剤および緩衝剤を加える。該等張剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、グリセロール、プロピレングリコール、糖、アルジトールである。該保存剤は、フェノール、オルソクレゾール、パラクレゾ−ル、メタクレゾール、メチルパラヒドロキシ安息香酸エステル、ベンジルアルコールである。該適当な緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、グリシン、ヒスチジン、リジン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウムである。該界面活性剤は、Poloxamer、Poloxamer‐188、Poloxamer-407、Tween
80およびTween-20である。必要により、塩酸などの酸や水酸化ナトリウム溶液などのアルカリの水溶液を、水溶液のｐＨを調整するために加え、最終的に溶液容量は、必要な濃度にするため水を加えて調節する。該成分以外に、本発明の医薬組成物はまた、貯蔵中に組成物によって形成される凝集物を減らす機能を有する十分な塩基性アミノ酸または他のアルカリ試薬、リジン、ヒスチジン、アルギニン、イミダゾールなど、を含んでいる。

本発明のＧＬＰ−１類縁体の誘導体は手作業で合成される。すなわち、樹脂はＨＭＰＡ−ＡＭであり、アミノ酸誘導体のαアミノ基はＦｍｏｃ（フルオレニルオキシメチルカルボニル）によって保護し、システインの側鎖チオール、グルタミンの側鎖アミド、ヒスチジンの側鎖イミダゾールはＴｒｔ（トリフェニルメチル）で保護し、アルギニンの側鎖グアニジルはＰｂｆ（２，２，４，６，７−ペンタメチル‐ジヒドロベンゾフラン‐５‐スルホニル）で保護し、トリプトファンの側鎖インドリルおよびリジンの側鎖アミノ基はＢｏｃ（tert−ブトキシカルボニル）で保護し（Ｌｙｓのεアミノ基を通じてペプチド骨格が形成されるときは、Ｌｙｓの側鎖アミノ基はＭｔｔで保護する）、スレオニンの側鎖ヒドロキシル基、チロシンの側鎖フェニロール基、セリンの側鎖ヒドロキシル基はｔＢｕ（tert−ブチル）で保護する。合成されるＧＬＰ−１誘導体のペプチド鎖のＣ末端アミノ酸のカルボキシル基は、共有結合によって不溶性の高分子樹脂（ＨＭＰ−ＡＭ樹脂）と結合しており、そして固相担体に結合したアミノ酸はアミノ成分として作用する。アミノ保護基は、２０％ヘキサヒドロピリジン/ＤＭＦ溶液によって除去されて、過剰のアミノ酸誘導体と反応して長いペプチド鎖に結合する。操作（濃縮→洗浄→脱保護→洗浄→次のラウンドの洗浄）を繰り返して目的の長さのペプチド鎖を達成する。最後に、ペプチド鎖はＴＦＡ：水：１，２-ジチオグリコール：トリイソプロピルシラン（９２．５：２．５：２．５：２．５）の混合液を用いて樹脂から切断してエーテル中での沈殿を通じてＧＬＰ−１類縁体の誘導体の粗生成物を得る。粗生成物はＣ１８逆相カラムを用いることにより精製し、ＧＬＰ−１類縁体の目的の誘導体が得られる。縮合と脱保護段階のモニターにはニンヒドリン試験法を用いた。すなわち、樹脂にフリーのアミノ基がある場合は、ニンヒドリン試薬は青になり、樹脂にフリーのアミノ基がない場合は、色は変化しない（ニンヒドリン試薬自体は黄色である）。試験が青を示す場合は，ペプチド鎖にまだいくらかのフリーのアミノがあることを示しており、従って試験が黄色を示すまでカップリング工程をさらに繰り返すか、現在の縮合剤を替える必要がある。

本発明をより詳細に説明するために以下の実施例を記載する。しかしながら、本発明はここに記載した実施例に限定されるものではない。

実施例１ ＨＳ−２０００１の固相合成法
１．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の調製
（１）ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の乾燥と膨潤化
２４時間真空乾燥させたＨＭＰ−ＡＭ樹脂（０．６ｍｍｏｌ／ｇ）５０ｇ（３０ｍｍｏｌ）を２Ｌのバブルボトルに入れて、樹脂を５００ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３０分間膨潤させ、次いでＤＭＦを取り除いてから樹脂をＤＭＦで１分間洗浄する。洗浄工程を２度繰り返す。
（２）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の調製
ＨＭＰ−ＡＭ樹脂とＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨのカップリング
樹脂は５００ｍＬのＤＣＭで洗浄し、次いでこの洗浄工程を２度繰り返す。５６．２ｇ（９０ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨと１１．４ｇ（９０ｍｍｏｌ）のＤＩＣを１ＬのＤＣＭに溶解して、膨潤させたＨＭＰ−ＡＭ樹脂に加え、次いで３６６ｍｇ（３ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加して２４時間反応させる。
樹脂の洗浄
反応後、樹脂はＤＭＦとＩＰＡで２度交互に洗浄し、ＤＭＦで３度洗浄する。
ヒドロキシル基のキャッピング
１５．３ｇ（１５０ｍｍｏｌ）の無水酢酸と１９．４ｇ（１５０ｍｍｏｌ）のＤＩＥＡを１ＬのＤＭＦに溶解し、樹脂に加えて１０分間反応させる。
樹脂の洗浄
樹脂は１Ｌの５０％ＭｅＯＨ／ＤＭＦ、と５０％ＤＣＭ／ＤＭＦで２度洗浄し、次いでＤＣＭで３度、脱水エタノールで３度、順次洗浄する。真空乾燥して、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂を得る。
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の負荷試験
５〜１０ｍｇの樹脂を１ｍｌの２０％ヘキサヒドロピリジン／ＤＭＦ溶液に入れ、２０分間撹拌し、次いで５０μＬの上澄みをピペットで採って、２．５ｍｌのＤＭＦで希釈する。
ブランクサンプル：５０μＬの２０％ヘキサヒドロピリジン／ＤＭＦ溶液をピペットで採って、２．５ｍｌのＤＭＦで希釈する。
置換の程度は次式に従って計算する：
Ｓｕｂ＝（Ａ×５１）/（７．８×ｍ）
（式中、Ａは３０１ｎｍにおけるＵＶの吸光度；ｍは樹脂の重量、単位はｍｇである）

２．固相合成した樹脂の膨潤化
２４時間真空乾燥させた５０ｇ（２０ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂を２Ｌのバブルボトルに入れ、５００ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を加えて３０分間樹脂を膨潤させ、次いでＤＭＦ溶液を取り除く。

３．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂の４-メチルトリフェニル（Ｍｔｔ）保護基の除去
樹脂を２００ｍｌのＤＣＭで２度洗浄し、次いで１２００ｍＬの１％ＴＦＡ／ＤＣＭ（ＴＦＡは約８倍過剰）を加えて１時間Ｍｔｔ保護基を除去し、樹脂は２００ｍＬの５％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）／ＤＭＦおよびＤＭＦで交互に３回洗浄して、さらにＤＭＦで３回洗浄する。

４．パルミチン酸縮合
５０ｍｍｏｌのパルミチン酸と５０ｍｍｏｌの３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−フェントリアジン−４−ケトン（ＤＥＰＢＴ）を４００ｍｌのＤＭＦに溶解し、次いで１００ｍｍｏｌのＤＩＥＡを添加して室温で３分間撹拌し、この溶液を樹脂に添加して窒素下２時間、３７℃の水浴中で反応させる。反応後、反応液を取り除き、樹脂を、順次、ＤＭＦ、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）およびＤＭＦで洗浄する。

５．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−パルミチン酸）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂の９−Ｆｍｏｃ（フルオレニルメチルオキシカルボニル）保護基の除去
２００ｍＬの２０％ピぺリジン／ＤＭＦ溶液をＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−パルミチン酸）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂を充填したバブルボトルに入れ、５分間反応させた後、取り除いて、さらに２００ｍＬの２０％ピぺリジン／ＤＭＦ溶液を加えて室温で２０分間反応させる。反応後、樹脂は２００ｍＬのＤＭＦで４回洗浄する。

６．ＨＳ−２０００１のペプチド鎖部分の固相合成
(i)Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの縮合
５０ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを１２５ｍＬの０．４Ｍ
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）／ＤＭＦに溶解し、次いで１２５ｍＬの０．４ＭＮ，Ｎ’−ジイソプロピル カルボジイミド（ＤＩＣ）／ＤＣＭを加えて活性化して室温で１０分間反応させる；この溶液を樹脂に加えて室温で窒素による保護の下、反応させる。反応の程度を検出し、コントロールするためにニンヒドリンを用いる。反応後、反応液を除き、樹脂は、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄する。
(ii)ペプチド鎖の延長
ＨＳ−２０００１樹脂のペプチドはＨＳ−２０００１のペプチド鎖の配列に従ってアミノ末端（Ｎ末端）からカルボキシ末端（Ｃ末端）
（His-(D)-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Nle-Glu-Glu-Glu-Ala-Va
l-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Gln-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser）へ合成する。アミノ酸と縮合剤の量はＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの量と同じであり、保護されたアミノ酸は、それぞれFmoc-Pro-OH、 Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、 Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-D-Ala-OHおよびFmoc-His(Trt)-OHであり、縮合と脱保護反応を繰り返す。
(iii)ＨＳ−２０００１樹脂ペプチドの後処理
工程(ii)で得られた該ＨＳ２０００１樹脂ペプチドは、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄し、次いで無水エーテルで２度洗浄した後、真空乾燥してＨＳ−２０００１樹脂ペプチドを得る。
(iv)ＨＳ−２０００１の粗ペプチドの調製
乾燥したＨＳ−２０００１ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）：水＝９５：２．５：２．５（容積比、乾燥樹脂グラム当たり計１０ｍＬの可溶化液）の新しい可溶化液と室温で４時間反応させた。反応溶液は反応後ろ過し、樹脂はＴＦＡで２度洗浄し、路駅を集めて合わせ、ロータリーエバポレーターで元の容積の１/３まで濃縮する。ＨＳ−２０００１を沈殿させ、冷無水エーテルで洗浄して、遠心分離と真空乾燥を行った後、白色の粗ＨＳ−２０００１を得る。

(v)逆相液体クロマトグラフィーでのＨＳ−２０００１の調製
１０ｇの粗ＨＳ−２０００１を一定量の水に溶解して、０．４５μｍメンブランフィルターでろ過し、次いで逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）で精製する。移動相はＡ
０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、Ｂ ０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルで、カラムはＤｅｎａｌｉ Ｃ−１８カラム（粒子径８．３μｍ、５×３０ｃｍ）、カラム温度は４５℃、検出波長は２２０ｎｍ、流速は１２０ｍＬ／ｍｉｎ．である。生成物のピークを集め、減圧濃縮して殆どのアセトニトリルを除去した後、ＨＳ−２０００１の生成物２．２５ｇを凍結乾燥により得る。純度は９８．５％で、収率は２２．５％である。

実施例２ ＨＳ−２０００２の固相合成法
１．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の調製
実施例１参照。

２．固相合成した樹脂の膨潤化
２４時間真空乾燥させた５０ｇ（２０ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂（０．４ｍｍｏｌ／ｇ）を２Ｌのバブルボトルに入れ、樹脂は５００ｍＬのＤＭＦで３０分間膨潤させ、次いでＤＭＦ溶液を取り除く。

３．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂のＭｔｔ保護基の除去
樹脂を２００ｍｌのＤＣＭで２度洗浄し、次いで１２００ｍＬの１％ＴＦＡ／ＤＣＭ（ＴＦＡは約８倍過剰）を加えて１時間Ｍｔｔ保護基を除去した後、樹脂は２００ｍＬの５％ＤＩＥＡ／ＤＭＦおよびＤＭＦで交互に３回洗浄して、さらにＤＣＭで３回洗浄する。

４．パルミチン酸縮合
５０ｍｍｏｌのパルミチン酸と５０ｍｍｏｌのＤＥＰＢＴを４００ｍｌのＤＭＦに溶解し、次いで１００ｍｍｏｌのＤＩＥＡを添加して室温で３分間撹拌して反応させ、この溶液を樹脂に添加して窒素下２時間、３７℃の水浴中で反応させる。反応後、反応溶液を取り除き、樹脂を、順次、ＤＭＦ、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）およびＤＭＦで洗浄する。

５．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−パルミチン酸）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂のＦｍｏｃ保護基の除去
２００ｍＬの２０％ピぺリジン／ＤＭＦ溶液をＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−パルミチン酸）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂を充填したバブルボトルに入れ、５分間反応させた後、取り除いて、さらに２００ｍＬの２０％ピぺリジン／ＤＭＦ溶液を加えて室温で２０分間反応させる。反応終了後、樹脂は２００ｍＬのＤＭＦで４回洗浄する。

６．ＨＳ−２０００２のペプチド鎖部分の固相合成法
(i)Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの縮合
５０ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを１２５ｍＬの０．４Ｍ
ＨＯＢｔ／ＤＭＦに溶解し、次いで１２５ｍＬの０．４Ｍ ＤＩＣ／ＤＣＭを加えて活性化して室温で１０分間反応させる；この溶液を樹脂に加えて室温で窒素下反応させる。反応の程度を検出し、コントロールするためにニンヒドリンテストを用いる。反応後、反応液を除き、樹脂は、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄する。
(ii)ペプチド鎖の延長
ＨＳ−２０００２樹脂のペプチドはＨＳ−２０００２のペプチド鎖の配列に従ってＮ−アミノ（Ｎ末端）からカルボキシ末端（Ｃ末端）（His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser）へ合成する。アミノ酸と縮合剤の量はＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの量と同じであり、保護されたアミノ酸は、それぞれFmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OHおよびFmoc-His(Trt)-OHであり、縮合と脱保護反応を繰り返す。
(iii)ＨＳ−２０００２樹脂ペプチドの後処理
工程(ii)で得られた該ＨＳ−２０００２樹脂ペプチドは、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄し、次いで無水エーテルで２度洗浄した後、真空乾燥してＨＳ−２０００２樹脂ペプチドを最終的に得る。
(iv)ＨＳ−２０００２の粗ペプチドの調製
乾燥したＨＳ−２０００２ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）：水：１，２-エタンジチオール（ＥＤＴ）＝９４：１：２．５：２．５（容積比、乾燥樹脂グラム当たり計１０ｍＬの可溶化液）の新しい可溶化液と室温で４時間反応させた。反応溶液は反応後ろ過し、樹脂はＴＦＡで２度洗浄し、ろ液を集めて合わせ、ロータリーエバポレーターで元の容積の１/３まで濃縮する。ＨＳ−２０００２は冷無水エーテルで沈殿させ、遠心分離と真空乾燥後、白色の粗ＨＳ−２０００２を得る。
(v)逆相液体クロマトグラフィーでのＨＳ−２０００２の調製
１０ｇの粗ＨＳ−２０００２を一定量の水に溶解して、０．４５μｍメンブランフィルターでろ過した後、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）で精製する。移動相はＡ
０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、Ｂ ０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルで、カラムはＤｅｎａｌｉ Ｃ−１８カラム（粒子径８．３μｍ、５×３０ｃｍ）、カラム温度は４５℃、検出波長は２２０ｎｍ、流速は１２０ｍＬ／ｍｉｎ．である。生成物のピークを集め、減圧濃縮して殆どのアセトニトリルを除去した後、ＨＳ−２０００２の生成物２．１ｇを凍結乾燥により得る。純度は９８％で、収率は２０．５％である。

実施例３ ＨＳ−２０００３の固相合成法
１．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の調製
実施例１参照。

２．固相合成した樹脂の膨潤化
２４時間真空乾燥させた５０ｇ（２０ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂（０．４ｍｍｏｌ／ｇ）を２Ｌのバブルボトルに入れ、樹脂は５００ｍＬのＤＭＦで３０分間膨潤させ、次いでＤＭＦ溶液を取り除く。

３．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂のＦｍｏｃ保護基の除去
２００ｍｌの２０％ピぺリジン／ＤＭＦ溶液を、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂を充填したバブルボトルに入れ、５分後に溶液を取り出した後、２００ｍｌの２０％ピぺリジン／ＤＭＦ溶液を加えてさらに室温でもう２０分間反応させる。反応後、樹脂は２００ｍＬのＤＭＦで４回洗浄する。

４．パルミチン酸縮合
５０ｍｍｏｌのパルミチン酸と５０ｍｍｏｌのＤＥＰＢＴを４００ｍｌのＤＭＦに溶解した後、１００ｍｍｏｌのＤＩＥＡを添加して室温で３分間撹拌して反応させ、この溶液を樹脂に添加して窒素下２時間、３７℃の水浴中で反応させる。反応後、反応溶液を取り除き、樹脂を、順次、ＤＭＦ、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）およびＤＭＦで洗浄する。

５．Ｎ−α−パルミチン酸−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂のＭｔｔ保護基の除去
樹脂を２００ｍＬのＤＣＭで２回洗浄し、１２００ｍＬの１％ＴＦＡ／ＤＣＭ（ＴＦＡが約８倍過剰）を加えて１時間反応させてＭｔｔ保護基を除去する。樹脂は２００ｍＬの５％ＤＩＥＡ／ＤＭＦおよびＤＭＦで交互に３回洗浄した後、ＤＣＭで３回洗浄する。

６．ＨＳ−２０００３のペプチド鎖部分の固相合成法
(i)Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの縮合
５０ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨと５０ｍｍｏｌのＤＥＰＢＴを一定量のＤＣＭに溶解した後、１００ｍｍｏｌのＤＩＥＡを添加して室温で３分間活性化する。この溶液を樹脂に加え、室温で窒素下反応させる。反応の程度を検出し、コントロールするためにニンヒドリンを用いる。反応後、反応液を除き、樹脂は、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄する。
(ii)ペプチド鎖の延長
ＨＳ−２０００３樹脂のペプチドはＨＳ−２０００３のペプチド鎖の配列に従ってＮ−アミノ（Ｎ末端）からカルボキシ末端（Ｃ末端）（His-(D)-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser）へ合成する。アミノ酸と縮合剤の量はＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの量と同じであり、保護されたアミノ酸は、それぞれ、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OHであり、縮合と脱保護反応を繰り返す。
(iii)ＨＳ−２０００３樹脂ペプチドの後処理
工程(ii)で得られた該ＨＳ−２０００３樹脂ペプチドは、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄し、次いで無水エーテルで２度洗浄した後、真空乾燥してＨＳ−２０００３樹脂ペプチドを最終的に得る。
(iv)ＨＳ−２０００３の粗ペプチドの調製
乾燥したＨＳ−２０００３ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）：水＝９５：２．５：２．５（容積比、乾燥樹脂グラム当たり計１０ｍＬの可溶化液）の新しい可溶化液と室温で４時間反応さる。反応溶液は反応後ろ過し、樹脂はＴＦＡで２度洗浄し、ろ液を集めて合わせ、ロータリーエバポレーターで元の容積の１/３まで濃縮する。ＨＳ−２０００３は撹拌下、冷無水エーテルで沈殿させ、遠心分離と真空乾燥後、最終的に白色の粗ＨＳ−２０００３を得る。
(v)逆相液体クロマトグラフィーでのＨＳ−２０００３の調製
１０ｇの粗ＨＳ−２０００３を一定量の２０％酢酸／水に溶解して、少なくとも４時間撹拌した後、０．４５μｍメンブランフィルターでろ過し、次いで逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）で精製する。移動相はＡ
０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、Ｂ ０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルで、カラムはＤｅｎａｌｉ Ｃ−１８カラム（粒子径８．３μｍ、５×３０ｃｍ）、カラム温度は４５℃、検出波長は２２０ｎｍ、流速は１２０ｍＬ／ｍｉｎ．である。生成物のピークを集め、減圧濃縮して殆どのアセトニトリルを除去した後、ＨＳ−２０００３の生成物２．５ｇを凍結乾燥により得る。純度は９８．５％で、収率は２５％である。

実施例４ ＨＳ−２０００４の固相合成法
１．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の調製
実施例１参照。

２．固相合成した樹脂の膨潤化
２４時間真空乾燥させた５０ｇ（２０ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂（０．４ｍｍｏｌ／ｇ）を２Ｌのバブルボトルに入れ、５００ｍＬのＤＭＦを加えて樹脂を３０分間膨潤させた後、ＤＭＦ溶液を取り除く。

３．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂のＦｍｏｃ保護基の除去
２００ｍｌの２０％ピぺリジン／ＤＭＦ溶液を、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂を充填したバブルボトルに入れ、５分後に溶液を取り出した後、２００ｍｌの２０％ピぺリジン／ＤＭＦ溶液を加えてさらに室温で２０分間反応させる。反応後、樹脂は２００ｍＬのＤＭＦで４回洗浄する。

４．パルミチン酸縮合
５０ｍｍｏｌのパルミチン酸と５０ｍｍｏｌのＤＥＰＢＴを４００ｍｌのＤＭＦに溶解した後、１００ｍｍｏｌのＤＩＥＡを添加して室温で３分間撹拌し、この溶液を樹脂に添加して窒素下２時間、３７℃の水浴中で反応させる。反応後、反応溶液を取り除き、樹脂を、順次、ＤＭＦ、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）およびＤＭＦで洗浄する。

５．パルミチン酸−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰＡ−ＡＭ樹脂のＭｔｔ保護基の除去
樹脂は２００ｍＬのＤＣＭで２回洗浄し、１２００ｍＬの１％ＴＦＡ／ＤＣＭ（ＴＦＡが約８倍過剰）を加えて１時間反応させてＭｔｔ保護基を除去する。次いで、樹脂を５％ＤＩＥＡ／ＤＭＦおよびＤＭＦで交互に３回洗浄した後、ＤＣＭで３回洗浄する。

６．ＨＳ−２０００４のペプチド鎖部分の固相合成法
(i)Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの縮合
５０ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨと５０ｍｍｏｌのＤＥＰＢＴを一定量のＤＣＭに溶解した後、１００ｍｍｏｌのＤＩＥＡを添加して室温で３分間活性化する。この溶液を樹脂に加え、室温で窒素下反応させる。反応の程度を検出し、コントロールするためにニンヒドリンを用いる。反応後、反応液を除く。樹脂は、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄する。
(ii)ペプチド鎖の延長
ＨＳ−２０００４樹脂のペプチドはＨＳ−２０００４のペプチド鎖の配列に従ってＮ−アミノ（Ｎ末端）からカルボキシ末端（Ｃ末端）（His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser）へ合成する。アミノ酸と縮合剤の量はＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの量と同じであり、保護されたアミノ酸は、それぞれ、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Aib-OHおよびFmoc-His(Trt)-OHであり、縮合と脱保護反応を繰り返す。
（iii）HS−２０００４樹脂ペプチドの後処理
工程(ii)で得られた該ＨＳ−２０００４樹脂ペプチドは、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄し、次いで無水エーテルで２度洗浄した後、真空乾燥してＨＳ−２０００４樹脂ペプチドを最終的に得る。
(iv)粗ＨＳ−２０００４ペプチドの調製
乾燥したＨＳ−２０００４樹脂ペプチドをトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）：水＝９５：２．５：２．５（容積比、乾燥樹脂グラム当たり計１０ｍＬの可溶化液）の新しい可溶化液と室温で４時間反応さる。反応溶液は反応後ろ過し、樹脂はＴＦＡで２度洗浄し、ろ液を集めて合わせ、ロータリーエバポレーターで元の容積の１/３まで濃縮する。ＨＳ−２０００４は撹拌下、冷無水エーテルで沈殿させ、遠心分離と真空乾燥後、最終的に白色の粗ＨＳ−２０００４を得る。
(v)逆相液体クロマトグラフィーでのＨＳ−２０００４の調製
１０ｇの粗ＨＳ−２０００２を一定量の２０％酢酸／水に溶解して、少なくとも４時間撹拌した後、０．４５μｍメンブランフィルターでろ過し、次いで逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）で精製する。移動相はＡ
０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、Ｂ ０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルで、カラムはＤｅｎａｌｉ Ｃ−１８カラム（粒子径８．３μｍ、５×３０ｃｍ）、カラム温度は４５℃、検出波長は２２０ｎｍ、流速は１２０ｍＬ／ｍｉｎ．である。生成物のピークを集め、減圧濃縮して殆どのアセトニトリルを除去した後、ＨＳ−２０００４の生成物２．２５ｇを凍結乾燥により得る。純度は９８．５％で、収率は２２．５％である。

実施例５ ＨＳ−２０００５の固相合成法
ＨＳ−２０００５の合成法は、実施例４記載のものと同様であり、異なるのはアミノ酸配列が配列番号５に置き換わっている点である。ＨＳ−２０００５の生成物２．５ｇが得られ、純度は９８．５％、収率は２５％である。

実施例６ ＨＳ−２０００６の固相合成法
ＨＳ−２０００６の合成法は、実施例４記載のものと同様であり、異なるのはアミノ酸配列が配列番号６に置き換わっている点である。ＨＳ−２０００６の生成物２．２５ｇが得られ、純度は９８．５％、収率は２２．５％である。

実施例７ ＨＳ−２０００７の固相合成法
ＨＳ−２０００７の合成法は、実施例４記載のものと同様であり、異なるのはアミノ酸配列が配列番号７に置き換わっている点である。ＨＳ−２０００７の生成物２．１ｇが得られ、純度は９８％、収率は２０．５％である。

実施例８ ＨＳ−２０００８の固相合成法
ＨＳ−２０００８の合成法は、実施例４記載のものと同様であり、異なるのはアミノ酸配列が配列番号８に置き換わっている点である。ＨＳ−２０００８の生成物２．５ｇが得られ、純度は９８．５％、収率は２５％である。

参考例 リラグルチド（Liraglutide）の固相合成法
１．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の調製
（１）ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の乾燥と膨潤化
２４時間真空乾燥させたＨＭＰ−ＡＭ樹脂（０．６ｍｍｏｌ／ｇ）５０ｇ（３０ｍｍｏｌ）を２Ｌのバブルボトルに入れて、そこに５００ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を加えて３０分間、樹脂を膨潤さる。次いでＤＭＦを取り除き、ＤＭＦを加えて樹脂を１分間洗浄する。洗浄工程を２度繰り返す。
（２）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の調製
(i)Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨとＨＭＰ−ＡＭ樹脂のカップリング
樹脂は５００ｍＬのＤＣＭで３回洗浄し、５６．２ｇ（９０ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨと１１．４ｇ（９０ｍｍｏｌ）のＤＩＣを１ＬのＤＣＭに溶解した後、膨潤させたＨＭＰ−ＡＭ樹脂に加え、次いで３６６ｍｇ（３ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加して２４時間反応させる。
(ii)樹脂の洗浄
反応後、樹脂は交互にＤＭＦとＩＰＡで２度洗浄し、ＤＭＦで３度洗浄する。
(iii)ヒドロキシル基のキャッピング
１５．３ｇ（１５０ｍｍｏｌ）の無水酢酸と１９．４ｇ（１５０ｍｍｏｌ）のＤＩＥＡを１ＬのＤＭＦに溶解し、樹脂に加えて１０分間反応させる。
(iv)樹脂の洗浄
樹脂は１Ｌの５０％ＭｅＯＨ／ＤＭＦ、と５０％ＤＣＭ／ＤＭＦで２度洗浄し、次いでＤＣＭで３度、無水エタノールで３度洗浄した後、真空乾燥して、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂を得る。
（３）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂の負荷試験
５〜１０ｍｇの樹脂を１ｍｌの２０％ヘキサヒドロピリジン／ＤＭＦ溶液に入れ、２０分間撹拌した後、５０μＬの上澄みをピペットで採って、２．５ｍｌのＤＭＦで希釈する。
ブランクサンプル：５０μＬの２０％ヘキサヒドロピリジン／ＤＭＦ溶液をピペットで採って、２．５ｍｌのＤＭＦで希釈する。
置換の程度は次式に従って計算する：
Ｓｕｂ＝（Ａ×５１）/（７．８×ｍ）
（式中、Ａは３０１ｎｍにおけるＵＶの吸光度；ｍは樹脂の量、単位はｍｇである）

２．固相合成した樹脂の膨潤化
２４時間真空乾燥させた５０ｇ（２０ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＨＭＰ−ＡＭ樹脂（０．４ｍｍｏｌ／ｇ）を２Ｌのバブルボトルに入れ、５００ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を加えて３０分間樹脂を膨潤させ、次いでＤＭＦ溶液を取り除く。

３．リラグルチドのペプチド鎖部分の固相合成法
(i)Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨの縮合
５０ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨを１２５ｍＬの０．４Ｍ
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）／ＤＭＦに溶解し、次いで１２５ｍＬの０．４ＭＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）／ＤＣＭを加えて活性化して室温で１０分間反応させる；この溶液を樹脂に加えて室温で窒素下、反応させる。反応の程度を検出し、コントロールするためにニンヒドリンテストを用いる。反応後、反応液を除き、樹脂は、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄する。
(ii)ペプチド鎖の延長
リラグルチドの前駆体ペプチドは、リラグルチドのペプチド鎖の配列に従ってＮ−アミノ（Ｎ末端）からカルボキシ末端（Ｃ末端）（His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly）へ合成する。アミノ酸と縮合剤の量はＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨの量と同じであり、保護されたアミノ酸は、それぞれ、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Mtt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OHであり、縮合と脱保護反応を繰り返す。
(iii)リラグルチドの前駆体ペプチドのＭｔｔ保護基の除去
樹脂は２００ｍＬのＤＣＭで２回洗浄し、１２００ｍＬの１％ＴＦＡ／ＤＣＭ（ＴＦＡが約８倍過剰）加えて１時間反応させてＭｔｔ保護基を２回除去する。次いで、樹脂は２００ｍＬの５％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）／ＤＭＦおよびＤＭＦで交互に３回洗浄して、さらにＤＭＦで３回洗浄する。
(iv)リラグルチドの前駆体ペプチドのパルミチン酸での修飾
５０ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕを１２５ｍＬの０．４Ｍ
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）／ＤＭＦに溶解した後、１２５ｍＬの０．４Ｍ Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）／ＤＣＭを加えて活性化して室温で１０分間反応させる。この溶液を前工程（工程(iii）からの樹脂に加えて室温で窒素下、反応させる。反応の程度を検出してコントロールするためにニンヒドリンを用いる。反応後、反応液を除き、樹脂は、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄する。
１Ｌの２０％ＰＩＰ／ＤＭＦを加えて５分間Ｆｍｏｃ保護基を除去した後、溶液を取り除く。次いで１Ｌの２０％ＰＩＰ／ＤＭＦを加えて２０分間Ｆｍｏｃ保護基を除去した後、溶液を取り除き、樹脂はＤＭＦで４回洗浄する。
５０ｍｍｏｌのパルミチン酸と５０ｍｍｏｌの３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−フェントリアジン−４−ケトン（ＤＥＰＢＴ）を４００ｍｌのＤＭＦに溶解した後、１００ｍｍｏｌのＤＩＥＡを添加して室温で撹拌下３分間反応させ、この溶液を樹脂に添加して窒素下２時間、３７℃の水浴中で反応させる。反応後、反応液を取り除き、樹脂を、順次、ＤＭＦ、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）およびＤＭＦで洗浄する。

４．リラグルチドの樹脂ペプチドの後処理
工程（２）で得られた該リラグルチドの樹脂ペプチドは、順次、ＤＭＦ、ＩＰＡおよびＤＭＦで洗浄し、次いでＤＣＭで３回洗浄し、無水エーテルで２回洗浄した後、真空乾燥してリラグルチドの樹脂ペプチドを最終的に得る。
５．粗リラグルチドペプチドの調製
乾燥したリラグルチドのペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）：水＝９５：２．５：２．５（容積比、乾燥樹脂グラム当たり計１０ｍＬの可溶化液）の新しい可溶化液と室温で４時間反応さる。反応溶液は反応後ろ過し、樹脂はＴＦＡで２度洗浄し、ろ液を集めて合わせ、ロータリーエバポレーターで元の容積の１/３まで濃縮する。リラグルチドは冷無水エーテルで沈殿させ、遠心分離と真空乾燥後、白色の粗ＨＳ−２０００１を得る。
６．逆相液体クロマトグラフィーでのリラグルチドの調製
１０ｇの粗リラグルチドを一定量のＮＨ_４ＨＣＯ_３溶液に溶解し、０．４５μｍメンブランフィルターでろ過した後、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）で精製する。移動相はＡ
０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、Ｂ ０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルで、カラムはＤｅｎａｌｉ Ｃ−１８カラム（粒子径８．３μｍ、５×３０ｃｍ）、カラム温度は４５℃、検出波長は２２０ｎｍ、流速は１２０ｍＬ／ｍｉｎ．である。生成物のピークを集め、減圧濃縮して殆どのアセトニトリルを除去した後、凍結乾燥によりリラグルチドの生成物２．２５ｇを得る。純度は９８％で、収率は１２．５％である。

試験例１：グルカゴン様ペプチド‐１レセプター（ＧＬＰ１Ｒ）に対する化合物のアゴニスト活性試験
ＧＬＰ１ＲはＧｓタンパクと共役する受容体であり、そのアゴニストとの結合は細胞内ｃＡＭＰ濃度の増加をもたらす。本試験において、ＧＬＰ１ＲとｃＡＭＰ応答エレメントによって制御されるルシフェラーゼ・レポーター遺伝子プラスミドをＨＥＫ２９３細胞に同時導入する。化合物がレセプターに結合してレセプターを活性化すると、ルシフェラーゼの発現が増加する。化合物のＧＬＰ１Ｒに対する活性化状態はルシフェラーゼの活性を調べることによって知ることができる。

試験法：
１．ＧＬＰ１ＲとｐＣＲＥ−Ｌｕｃプラスミドを安定に移入したＨＥＫ２９３細胞を４００００細胞／ウェル（穴）／１００μｌの量で９６穴プレートに移植して、３７℃で２４時間培養する。
２．一定の濃度勾配を持つ化合物またはポジティブ薬剤を加えて（一濃度あたり３ウェル）、３７℃で５時間培養する。ネガティブコントロールは溶媒のＤＭＳＯである。
３．各ウェルから５０μｌの培養液を採り、５０μｌのルシフェラーゼの基質を加えた後、１０分間ボルテックスする。
４．８０μｌの反応液を採って白色９６穴プレートに移した後、Invisionマイクロプレートリーダー（酵素ラベル測定装置）で検出する。
試験結果：陽性化合物リラグルチドに比べ、本発明の化合物ＨＳ−２０００１の活性は陽性化合物の活性とほぼ同じであるが、ＨＳ−２０００２〜２０００８はずっと良いアゴニスト活性を示している。

試験例２ in vivo活性試験
２型糖尿病のｄｂ/ｄｂマウスをランダムな血糖と体重に基づいて６グループ（８匹／クループ）に分ける。生理食塩水、３または１０μｇ／ｋｇのＨＳシリーズ新化合物（リラグルチド、２０００１、２０００２、２０００３、２０００４、２００５，２００６，２００７，２００８）を単回の皮下注射により投与する。マウスのランダム血糖を投与後の異なる時間で測定する。
実験で使用した動物はｄｂ/ｄｂマウスで、これはＪａｃｋｓｏｎという名の米国法人の製品であり、上海Institute of Materia Medica of Chinese
Academy of Scienceにより保存し、繁殖されている。その適合証明書では：SCXK(HU)2008-0017、体重：３５−５０ｇ；性別：雄８５、雌８６、ＳＰＦ動物室で飼育；温度：２２−２４℃；湿度：４５−８０％；明かり：１５０−３００Ｌｘ、１２時間昼と夜が交互である。
試験の候補化合物は、ＨＳ−２０００１、ＨＳ−２０００２、ＨＳ−２０００３、ＨＳ−２０００４、ＨＳ−２０００５、ＨＳ−２０００６、ＨＳ−２０００７、ＨＳ−２０００８、リラグルチド（Novo Nordiskにより開発、ポジティブコントロールとして）である。

調製法：化合物１ビン(bottle)（２ｍｇ／bottle）を２度蒸留した蒸留水で溶かして濃度が２ｍｇ／ｍｌの無色透明の溶液を調製し、次いで溶液は生理食塩水で０．６μｇ／ｍｌおよび２μｇ／ｍｌに希釈する（塩化ナトリウム注射、Double-Crane Pharmaceutical Co., Ltd. Anhui, batch number: 080728 6C）。Rocheの“ACCU-CHEK
Advantage”血糖メーターを血糖測定に用いる。

用量設定とグループ
試験グループ１：
対照群：生理食塩水
リラグルチド群：３μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００１群：３μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００２群：３μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００３群：３μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００４群：３μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００５群：３μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００６群：３μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００７群：３μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００８群：３μｇ／ｋｇ

試験グループ２：
対照群：生理食塩水
リラグルチド群：１０μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００１群：１０μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００２群：１０μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００３群：１０μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００４群：１０μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００５群：１０μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００６群：１０μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００７群：１０μｇ／ｋｇ
ＨＳ−２０００８群：１０μｇ／ｋｇ
投与ルートと容量：単回皮下注射、用量は５ｍｌ／ｋｇ

試験法
２型糖尿病のｄｂ/ｄｂマウスの選別、グループ分けおよび投与
試験グループ１：
１７１匹のｄｂ/ｄｂマウス(雄８５、雌８６)を離乳後、１つのケージで飼育し、高脂肪食を与える。ｄｂ/ｄｂマウスが７週令になった後、ランダムおよび空腹時血糖を測定する。病気になった８０匹のｄｂ/ｄｂマウスを取り出し、ランダム血糖、空腹時血糖および体重により以下のように１０グループに分ける：モデル対照群、リラグルチド群−３μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００１群−３μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００２群−３μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００３群−３μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００４群−３μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００５群−３μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００６群−３μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００７群−３μｇ／ｋｇおよびＨＳ−２０００８群−３μｇ／ｋｇ。

試験グループ２：
ｄｂ/ｄｂマウスのランダム血糖を測定する。病気になった８０匹のｄｂ/ｄｂマウスを取り出し、ランダム血糖および体重により以下のように１０グループに分ける：モデル対照群、リラグルチド群−１０μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００１群−１０μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００２群−１０μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００３群−１０μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００４群−１０μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００５群−１０μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００６群−１０μｇ／ｋｇ、ＨＳ−２０００７群−１０μｇ／ｋｇおよびＨＳ−２０００８群−１０μｇ／ｋｇ。
各群は８匹のマウス、半分の雄および半分の雌を有する。各群の動物にそれぞれ単回の皮下注射で試験化合物または溶媒のコントロールを投与する。ランダム血糖は、投与後１時間、２時間、４時間、８時間および２４時間で測定し、血糖の減少率を計算する。
血糖の減少率＝（対照群の血糖−処置群の血糖）／対照群の血糖×１００％

試験結果
試験１：ｄｂ/ｄｂマウスのランダム血糖に対する単回投与による低用量新化合物の効果
結果は表２および表３に示す。ｄｂ/ｄｂマウスに単回の皮下注射により３μｇ／ｋｇのＨＳ−２０００２，２０００４，２０００５，２０００６，２０００７または２０００８を投与する。１時間後、該マウスのランダム血糖値は、対照群の値に比べ有意に減少し（Ｐ＜０．０５）、減少率は、それぞれ２４．５１％、１５．００％、１４．００％、１４．２５％、１３．９８％および１３．９０％であった。投与から２時間および４時間後は、ランダム血糖値は低水準を維持し、対照群の値とは有意な差がある（Ｐ＜０．０５）。投与から８時間後は、ランダム血糖値は対照群の値とは有意な差がない。マウスに皮下注射を通じて３μｇ／ｋｇのＨＳ−２０００３を投与する。１時間後、ランダム血糖値は対照群の値に比べ、１７．３３％まで有意に減少する（Ｐ＜０．０５）。投与から２時間、４時間および８時間後は、ランダム血糖値は対照群の値とは有意な差を示さない。単回の皮下注射によりｄｂ/ｄｂマウスに３μｇ／ｋｇのＨＳ−２０００１を投与すると、ランダム血糖値は対照群の値に比べて少し減少するが、有意な差はない。リラグルチドを投与したマウス群のランダム血糖値は有意な減少は見られない。

試験２：ｄｂ/ｄｂマウスのランダム血糖に対する単一用量で投与した高用量新化合物の効果
結果は表４および表５に示す。ｄｂ/ｄｂマウスに単回の皮下注射により１０μｇ／ｋｇのＨＳ−２０００２を投与する。１時間後、マウスのランダム血糖値は、対照群の値に比べ有意に減少した（Ｐ＜０．０１）。投与から２時間、４時間および８時間後は、ランダム血糖値は低水準を維持し、投与後４時間の値が最も顕著であって、減少率は４０．６７％まで上がり、対照群の値とは有意に差があり（Ｐ＜０．００１）、投与後２４時間まで、ランダム血糖値は対照群の値よりまだ有意に低い。マウスに皮下注射を通じて１０μｇ／ｋｇのＨＳ−２０００３を投与すると、１時間後、ランダム血糖値は対照群の値に比べ有意に減少し（Ｐ＜０．０１）、２３．６２％まで減少している。投与から２時間、４時間および８時間後は、ランダム血糖値はまだ低水準を維持している。投与から２４時間後は、対照群と比べて有意な差はない。ｄｂ/ｄｂマウスに単回の皮下注射により１０μｇ／ｋｇのＨＳ−２０００１を投与すると、２時間後、ランダム血糖値は対照群の値に比べ有意に減少し、投与から４時間および８時間後は、ランダム血糖値はまだ低水準を維持している。投与から２４時間後は、ランダム血糖値は対照群の値と有意な差を示さない。ＨＳ−２０００２，ＨＳ−２０００４，ＨＳ−２０００５，ＨＳ−２０００６，ＨＳ−２０００７またはＨＳ−２０００８を単回の皮下注射を通じてマウスに投与すると、ランダム血糖値は即座にかつ有意に減少し、２時間後、減少率は３６．２０％までなる。投与から４時間および８時間後は、血糖値はまだ低水準を維持していて、投与から２４時間後は、対照群の値と比べて有意な差はない。リラグルチドを投与した群のマウスのランダム血糖値は有意な減少は見られない。

試験の結論
単回の皮下注射により本発明の一連の新化合物を投与したｄｂ/ｄｂマウスのランダム血糖は有意に低下した。３μｇ／ｋｇの用量でＨＳ−２０００２，ＨＳ−２０００３，ＨＳ−２０００４，ＨＳ−２０００５，ＨＳ−２０００６，ＨＳ−２０００７およびＨＳ−２０００８によりランダム血糖は明らかに減少した。なかでも、ＨＳ−２０００２およびＨＳ−２０００４がランダム血糖の低下により良い効果を示し、単回の皮下注射後の血糖降下効果の時間は用量依存性であり、３μｇ／ｋｇの用量におけるランダム血糖低下に対するＨＳ−２０００２とＨＳ−２０００４の効果の持続時間は４時間以上である。１０μｇ／ｋｇの用量におけるランダム血糖低下に対するＨＳ−２０００１，ＨＳ−２０００２，ＨＳ−２０００３，ＨＳ−２０００４，ＨＳ−２０００５，ＨＳ−２０００６，ＨＳ−２０００７およびＨＳ−２０００８の効果の持続時間は８時間以上である。

Claims (22)

1. 式（I）：
   

   

   で表されるアミノ酸配列を持つＧＬＰ−１類縁体の一連の誘導体〔ただし、該ＧＬＰ−１類縁体の誘導体は式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）で表される脂溶性置換基を含み、X₁、X₂、X₁₀、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇、X₁₉、X₂₀、X₂₁、X₂₄、X₂₇、X₂₈、X₂₉、X₃₀、X₃₁、X₃₂、X₃₃、X₃₄、X₃₅、X₃₆、X₃₇、X₃₈およびX₃₉は独立して、天然もしくは非天然アミノ酸または天然もしくは非天然アミノ酸から成るペプチド断片を示す〕またはその薬学的に許容される塩。
2. 式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）で表される脂溶性置換基とＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸残基のアミノ基がアミド結合によって結合している請求項１記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
3. 式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）で表される脂溶性置換基とＧＬＰ−１類縁体のＣ末端Ｌｙｓのεアミノ基がアミド結合によって結合している請求項２記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
4. 式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）で表される脂溶性置換基とＧＬＰ−１類縁体のＣ末端Ｌｙｓのαアミノ基がアミド結合によって結合している請求項２記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
5. Ｒ_１がＣＨ_３−であり、ｎが８、１０、１２、１４、１６、１８、２０および２２から選択される整数である請求項４記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
6. Ｒ_１がＣＨ_３−であり、ｎが１４である請求項５記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
7. Ｒ_１がＨＯＯＣ−であり、ｎが１４、１６、１８、２０および２２から選択される整数である請求項４記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
8. Ｒ_１がＨＯＯＣ−であり、ｎが１４である請求項７記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
9. X₁がL-HisまたはD-Hisであり、X₂がAla、D-Ala、Gly、Val、Leu、Ile、LysまたはAibであり、X₁₀が ValまたはLeuであり、X₁₂が Ser、LysまたはArgであり、X₁₃が TyrまたはGlnであり、X₁₄がLeuまたはMetであり、X₁₆が Gly、GluまたはAibであり、X₁₇がGln、Glu、Lys またはArgであり、X₁₉がAlaまたはValであり、X₂₀がLys、GluまたはArgであり、X₂₁がGluまたはLeuであり、X₂₄がValまたはLysであり、X₂₇がValまたはLysであり、X₂₈がLys、Glu、AsnまたはArgであり、X₂₉がGlyまたはAiblであり、X₃₀がArg、GlyまたはLysであり、X₃₁がGly、Ala、Glu、ProまたはLysであり、X₃₂がLysまたはSerであり、X₃₃がLysまたはSerであり、X₃₄がGly、AlaまたはSarであり、X₃₅がGly、AlaまたはSarであり、X₃₆がProまたはGlyであり、X₃₇がProまたはGlyであり、X₃₈がProまたはGlyであり、X₃₉がSerまたはTyrである請求項１〜８のいずれか一項に記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
10. ＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸配列が、配列番号１ないし配列番号１２０から成る群から選択される請求項９記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
11. 式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）で表される脂溶性置換基と、配列番号１ないし配列番号１２０から成る群から選択される配列を有するＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸残基のアミノ基とがアミド結合によって結合している請求項１０記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
12. 式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）で表される脂溶性置換基と、配列番号１ないし配列番号１２０から成る群から選択される配列を有するＧＬＰ−１類縁体のＣ末端Ｌｙｓのεアミノ基とがアミド結合によって結合している請求項１１記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
13. Ｒ_１がＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎが８、１０、１２、１４、１６、１８、２０および２２から選択される整数である請求項１２記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
14. Ｒ_１がＣＨ_３−であり、ｎが１４である請求項１２記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
15. ＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸配列が、配列番号１ないし配列番号２０から成る群から選択される請求項１４記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
16. 式Ｒ_１（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯ−（式中、Ｒ_１はＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎは８−２５から選択される整数である）で表される脂溶性置換基と、ＧＬＰ−１類縁体のＣ末端Ｌｙｓのαアミノ基がアミド結合によって結合している請求項１１記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
17. Ｒ_１がＣＨ_３−またはＨＯＯＣ−であり、ｎが８、１０、１２、１４、１６、１８、２０および２２から選択される整数である請求項１６記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
18. Ｒ_１がＣＨ_３−であり、ｎが１４である請求項１７記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
19. ＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸配列が、配列番号１ないし配列番号８から成る群から選択され、Ｒ_１がＣＨ_３−であり、ｎが１４である請求項１８記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
20. ＧＬＰ−１類縁体のアミノ酸配列が配列番号４である請求項１９記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩。
21. （１）
    治療上有効な量の請求項１〜２０のいずれか一項に記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体またはその薬学的に許容される塩、および
    （２）
    薬学的に許容される賦形剤または医薬担体
    を含有する医薬組成物。
22. インシュリン非依存性糖尿病、インシュリン依存性糖尿病または肥満症の治療薬の製造における請求項１〜２０のいずれか一項に記載のＧＬＰ−１類縁体の誘導体もしくはその薬学的に許容される塩または請求項２１の医薬組成物の使用。