[go: up one dir, main page]

HUP0303358A2 - Új peptidek mint hepatitis C vírus NS3 szerin-proteáz inhibitorok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények - Google Patents

Új peptidek mint hepatitis C vírus NS3 szerin-proteáz inhibitorok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények

Info

Publication number
HUP0303358A2
HUP0303358A2 HU0303358A HUP0303358A HUP0303358A2 HU P0303358 A2 HUP0303358 A2 HU P0303358A2 HU 0303358 A HU0303358 A HU 0303358A HU P0303358 A HUP0303358 A HU P0303358A HU P0303358 A2 HUP0303358 A2 HU P0303358A2
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
group
formula
compound
groups
conhch
Prior art date
Application number
HU0303358A
Other languages
English (en)
Inventor
Ashok Arasappan
Frank Bennett
Stephane L. Bogen
Tin-Yau Chan
Kevin X. Chen
Ashit K. Ganguly
Viyyoor Moopil Girijavallabhan
Edwin E. Jao
Scott Jeffrey Kemp
Odile Esther Levy
Marguerita Lim-Wilby
Yi-Tsung Liu
Raymond G. Lovey
Jinping L. Mccormick
F. George Njoroge
Tejal N. Parekh
Russell E. Pike
Patrick A. Pinto
Anil K. Saksena
Bama Santhanam
Susan Y. Tamura
Henry A. Vaccaro
Srikanth Venkatraman
Haiyan Wang
Zhaoning Zhu
Original Assignee
Corvas International, Inc.
Schering Corp.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Corvas International, Inc., Schering Corp. filed Critical Corvas International, Inc.
Publication of HUP0303358A2 publication Critical patent/HUP0303358A2/hu
Publication of HUP0303358A3 publication Critical patent/HUP0303358A3/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/27—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carbamic or thiocarbamic acids, meprobamate, carbachol, neostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/385—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having two or more sulfur atoms in the same ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/49—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C07C205/50—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C205/51—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

A találmány tárgyát HCV-proteáz - különösen NS3/NS4a-proteáz -inhibitor hatású, peptidszerkezetű, új (I) általános képletűvegyületek és enantiomereik, sztereoizomereik, rotamereik,tautomereik, racemátjaik, gyógyszerészetileg elfogadható sóik vagyszolvátjaik, ezek előállítására szolgáló eljárások, ezeket és adottesetben egy vírusellenes hatóanyagot és/vagy egy interferont istartalmazó gyógyszerkészítmények, továbbá a gyógyászatban valóalkalmazásuk, és a hepatitis C vírussal kapcsolatba hozható betegségekkezelésére szolgáló eljárások képezik. Az általános képletű vegyületek- amely képletben G, J és Y jelentése azonos vagy különböző, ígyegymástól függetlenül hidrogénatom, alkil-, alkil-aril-, heteroalkil-,heteroaril-, aril-heteroaril-, alkil-heteroaril-, cikloalkil-,alkoxi-, (alkil-aril)-oxi-, aril-oxi-, heteroaril-oxi-,heterocikloalkil-oxi-, cikloalkil-oxi-, alkil-amino-, aril-amino-,(alkil-aril)-amino-, aril-amino-, heteroaril-amino-, cikloalkil-amino-vagy heterocikloalkil-amino-csoport R1 jelentése -COR5 vagy -B(OR)2általános képletű csoport, amelyekben R5 hidrogénatomot vagyhidroxicsoportot, -OR8 vagy -NR9R10 általános képletű csoportot,trifluor-metil- vagy pentafluor-etil-csoportot, -C3F7 képletűcsoportot, valamint -CF2R6, -R6 vagy -COR7 általános képletű csoportotjelenthet Z jelentése oxigén- vagy nitrogénatom vagy hidrogénatomothordozó szénatom; W ha jelen van a képletben, akkor jelentésekarbonil-, tiokarbonil- vagy szulfonilcsoport, vagy nincs jelen; és R,R' R2, R3 és R4 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-10szénatomos alkil-, 2-10 szénatomos alkenil-, 3-8 szénatomoscikloalkil-, 3-8 szénatomos heterocikloalkil-, alkoxi-, aril-oxi-,alkil-tio-, aril-tio- vagy aminocsoport, savamid- vagy észtercsoport,karboxicsoport, karbamátot képező csoport, ureido-, oxo-, formil-,ciano- vagy nitrocsoport, oxigén-, nitrogén-, kén- vagy foszforatom,amely oxigén-, nitrogén-, kén- vagy foszforatomok száma 0-6 lehet,cikloalkil-alkil- vagy heterocikloalkil-alkil-csoport, ahol acikloalkilcsoport 3-8 szénatomból és 0-6 oxigén-, nitrogén-, kén- vagyfoszforatomból áll, és az alkilcsoport 1-6 szénatomos, valamint aril-,heteroaril-, alkil-aril- vagy alkil-heteroaril-csoport. Ó

Description

7.5.3 41/BE
H-it .
Telefon:
í’Vvívő; Iroda • Andrassy út 113.
401 Fax: 461-1099
Új peptidek mint hepatitis C vírus NS3 szerin-proteáz inhibitorok t s
KÖZZÉTÉTEL! PÉLDÁNY
A találmány tárgyát a hepatitis C vírus (HCV) ellen hatásos új proteáz inhibitorok, egy vagy több ilyen inhibitort tartalmazó gyógyszerkészítmények, valamint ilyen inhibitorok előállítá sára és a hepatitis C vírus okozta fertőzések vagy azzal kapcsolatba hozható betegségek kezelésére szolgáló eljárások képezik. Közelebbről meghatározva, a találmány a HCV NS3/NS4a szerin-proteázok inhibitoraiként hasznosítható, új, peptid szerkezetű vegyületekre vonatkozik.
A hepatitis C vírus (HCV) egy pozitív, egyszálú RNS-vírus, amelynek meghatározó szerepe van a nem A és nem B hepatitis (NANBH) néven ismert betegség, különösen a vér-asszociált NANBH (BB—NANBH) kialakulásában (lásd WO 89/04669 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi irat és EP 381 216 számú európai szabadalmi bejelentés) . Az NANBH-t meg kell különböztetni a más típusú, vírus, például hepatitis A vírus (HAV)·, hepatitis B vírus (HBV) , delta hepatitis vírus, (HDV) , citomegalovírus (CMV) és Eppstein— -Barr-vírus (EBV) okozta májbetegségektől, valamint a májbetegségek egyéb formáitól, így az alkoholizmusbetegségtől és a primer biliáris cirrózistól.
Mostanában sikerült azonosítani, klónozni és expresszáltatni (lásd U.S. 5,712,145 számú szabadalmi irat) egy HCV-proteázt, amely elengedhetetlenül szükséges a vírus-polipeptid processzálásához és a vírusreplikációhoz. Ez a mintegy 3000 aminosavból álló poliprotein az N-terminális résztől a C-terminális rész felé haladva tartalmaz egy nukleokapszid-fehérjét (C) , két burokfehérjét (El és E2), valamint több nemszerkezeti fehérjét (NS1, NS2,
NS3, NS4a, NS5a és NS5b). Az NS3 egy hozzávetőleg 68 kda molekulatömegű fehérje, amelyet a HCV-genom mintegy 1893 nukleotidja kódol, és amely két jól elhatárolható domént foglal magában: a) egy szerin-proteáz domént, amely hozzávetőleg 200 aminosavból áll, és az N-terminális részen található; b) egy RNS-dependens ATP-áz domént, amely a fehérje C-terminális részén helyezkedik el. Az NS3-proteázról úgy vélik, hogy a kimotripszin-családba sorolható, részint az aminosav-szekvencia, részint a teljes háromdimenziós szerkezet és a katalízis mechanizmusa alapján. Más, a kimotripszinhez hasonló enzimek például az elasztáz, a Xa faktor, a trombin, a tripszin, a plazmin, az urokináz, a tPA és a PSA. A HCV NS3 szerin-proteáz a felelős az NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a és NS5a/NS5b kapcsolódási pontokban történő hasításért a polipeptid (poliprotein) proteolízise során, következésképpen rajta múlik a vírusreplikáció folyamán négy vírusfehérje létrejötte. Ez a tény teszi vonzóvá azt az elgondolást, hogy a vírusellenes kemoterápia támadási pontjaként a HCV NS3 szerin-proteázt válasszuk.
Megállapították, hogy az NS4a fehérje, amely egy hozzávetőleg 6 kda molekulatömegű polipeptid, az NS3 szerin-proteáz aktivitásában kofaktorként játszik szerepet. Az NS3/NS4a kapcsolódási pont hasítása az NS3/NS4a szerin-proteáz által intramolekulárisan megy végbe (azaz cisz-konfigurációjú), míg az összes többi hasítási hely esetében intermolekulárisan történik a hasítás (azaz transz-konfigurációjú).
A HCV-proteáz természetes hasítási helyeinek analízise folytán kiderült, hogy Pl helyzetben cisztein, Pl' helyzetben pedig szerin van jelen, és ezek az aminosav-maradékok szigorú állandósággal fordulnak elő az NS4/NS4a, NS4b/NS5a és NS5a/NS5b kapcso
75.841/BE lódási helyeken. Az NS3/NS4a kapcsolódási pontban Pl helyzetben treonin, és Pl' helyzetben szerin található. A Cys-Thr helyettesítés az NS4a/NS4b kapcsolódási pontban azzal a következménnyel jár, hogy transz-konfiguráció helyett itt cisz-konfiguráció felel meg a processzálás kívánalmainak [lásd például Pizzi et al.: Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 91, 888-892 (1994); Failla et al.: Folding & Design 1, 35-42 (1996)]. Az NS3/NS4a hasítási hely azonfelül a mutagenezissel szemben is toleránsabbnak bizonyult, mint a többi hasítási hely [lásd például Kollykhalov et al. : J. Virol 68, 7525-7533 (1994)]. Ugyancsak megállapítást nyert, hogy a hasítási helytől felfelé található régióban savas maradékok szükségesek ahhoz, hogy a hasítás megfelelő hatékonysággal történhessen [lásd például Komoda et al.: J. Virol. 68, 7351-7357 (1994)].
A HCV-proteáz inhibitoraiként számon tartott vegyületek között vannak antioxidánsok (lásd például WO 98/14181 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi irat), bizonyos peptidek és peptidanalógok [lásd például WO 98/17679 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi irat; Landro et al.: Biochem. 36, 9340-9348 (1997); Ingallinella et al.: Biochem. 37, 8906-8914 (1998); Llinas-Brunet et al.: Bioorg. Med. Chem. Lett. 8, 1713-1718 (1998)], inhibitorok, amelyek alapját a 70 aminosavból álló polipeptid, az eglin c képezi [Martin et al.: Biochem 37, 11459-11468 (1998)], inhibitorok, amelyek humán hasnyálmirigy-szekréciós tripszin inhibitor (hPSTI-C3) és minitest repertoárból (MBip) affinitás-szelekcióval lettek kiválasztva [Dimasi et al. : J. Virol 71, 7461-7469 (1997)], cVHE2 (egy camelized változtatható domén-antitest fragment) [Martin et al.: Protein Eng. 10, 607-614 (1997)] és αΐ-antikimotripszin (ACT) [Elzouki et al.: J. Hepat. 27, 42-28
75.841/BE (1997)]. Legújabban vált ismertté egy ribozim, amelyet a hepatitis C vírus-RNS szelektív elpusztítására terveztek [lásd BioWorld Today 9(217), 4 (1998)].
A fentiekkel kapcsolatban megemlíthetjük még a WO 98/17679, WO 98/22496 és WO 99/007734 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi iratokat.
A HCV kapcsolatba hozható a májcirrózissal és a hepatocelluláris karcinóma indukciójával. A HCV-fertőzött páciensek prognózisa jelenleg meglehetősen kilátástalan. A HCV-fertőzés az immunválasz és az átmeneti javulási szakaszok hiányából adódóan sokkal nehezebben kezelhető, mint a hepatitis egyéb formái. A legújabban közzétett adatok szerint a cirrózis diagnózisát követően a 4 éves túlélési arány nem éri el az 50%-ot. Azoknál a pácienseknél, akiknél műtétileg eltávolítható rákos májdaganatot diagnosztizáltak, az 5 éves túlélési ráta 10% és 30% közöttire tehető, ezzel szemben nem reszekálható hepatocelluláris karcinóma esetén a páciensek kevesebb, mint 1%-a él 5 esztendőnél tovább.
Meg kell említenünk A. Marchettit és munkatársait [Synlett SÍ, 1000-1002 (1999)], akik egy HCV NS3-proteáz biciklusos analógjainak szintézisét írták le. Az általuk ismertetett vegyület képlete a következő
75.841/BE
W. Han és munkatársai [Bioorganic and Medicinal Chem. Lett. 10, 711-713 (2000)] bizonyos allil- és etilcsoportokat tartalmazó α-ketoamidok, α-ketoészterek és α-diketonok szintézisét írták le.
A WO 00/09558 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi iratból ismertek az
általános képletű peptidszármazékok. Ahelyett, hogy foglalkoznánk a leírásban részletesen ismertetett szerkezeti elemek defi níciójával, szemléltetésképpen bemutatjuk a sorozatba tartozó egyik vegyületet, amely a
képlettel ábrázolható.
A WO 00/09543 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi iratból váltak ismertté azok az
75.841/BE
általános képletű peptidek, amelyekre a Boehringer Ingelheim Li mited kért szabadalmi oltalmat. A képletben található szimbólu mok jelentésének ismertetésétől itt eltekintünk, de a vegyület család egyik tagját, a
képletű vegyületet szemléltetés végett bemutatjuk.
Napjainkban a C típusú hepatitis kezelésében az a-interferoné (INFa) a főszerep, a kombinációs terápia ribavirinnel és interferonnal történik [lásd például Beremguer et al.: Proc. Assoc. Am. Physicians 110(2), 98-112 (1998)]. Ezekre a kezelési módokra azonban tartósan kevés beteg reagál, és igen nagy a mellékhatások előfordulási aránya [lásd például Hoofnagle et al. : N. Engl. Med. 336, 347 (1997)]. A HCV-fertőzés megelőzésére vakcina jelenleg nem létezik.
75.841/BE
Megadásra váró amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésekben különféle peptideket és/vagy más vegyületeket ismertetnek a hepatitis C virus NS3 szerin-proteáz inhibitoraiként.
A fentiekből megállapíthatjuk, hogy kívánatos lenne új terápiás lehetőségeket találni a HCV-fertőzés kezelésére. A találmány célja tehát, hogy rendelkezzünk olyan vegyületekkel, amelyek a C típusú hepatitis kezelésére, megelőzésére vagy egy vagy több tünetének elviselhetőbbé tételére használhatók.
A találmány további célja, hogy rendelkezzünk a találmány szerinti vegyületeket hasznosító, a C típusú hepatitis kezelésére, megelőzésére vagy egy vagy több tünetének elviselhetőbbé tételére szolgáló eljárásokkal.
A találmány még további célja, hogy rendelkezzünk a találmány szerinti vegyületeket hasznosító, a szerin-proteázok, különösen a HCV NS3/NS4a szerin-proteáz aktivitásának modulálására szolgáló eljárásokkal.
További célként azt jelöltük meg, hogy rendelkezzünk a találmány szerinti vegyületeket hasznosító, a HCV-polipeptid processzálását moduláló eljárásokkal.
A találmány tárgyát tehát számos megvalósításban egy új osztályába sorolható, HCV-proteáz inhibitor hatású vegyületek, egy vagy több ilyen vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmények, és a C típusú hepatitis kezelésére, megelőzésére vagy egy vagy több tünetének elviselhetőbbé tételére szolgáló eljárások képezik. A találmány tárgya továbbá eljárás egy HCV-polipetid és a HCV—proteáz közötti kölcsönhatás modulálására. A találmány szerinti vegyületek közül különösen előnyösnek tartjuk azokat, amelyek a 75.841/BE
HCV NS3/NS4a szerin-proteáz működését gátolják. Itt a leírásban elsőként ismertetünk olyan peptid szerkezetű vegyületeket, amelyekben az aminosavak elrendezése a P3-tól P2'-ig terjedő szakaszéval megegyező.
A találmány tárgyát tehát, annak első megvalósításában az
általános képletű, azaz (I) általános képletű vegyületek — amely képletben
G, J és Y jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil-, alkil-aril-, heteroalkil-, heteroaril-, aril-heteroaril-, alkil-heteroaril-, cikloalkil-, alkoxi-, (alkil-aril)-oxi-, aril-oxi-, heteroaril-oxi-, heterocikloalkil-oxi-, cikloalkil—oxi—, alkil-amino-, aril-amino-, (alkil-aril)-amino-, aril-amino-, heteroaril-amino-, cikloalkil-amino- vagy heterocikloalkil-amino-csoport, azzal a kiegészítéssel, hogy Y jelentéseként ezen csoportok mindegyike adott esetben -X11 vagy -X12 általános képletű csoporttal szubsztituált lehet;
X11 jelentése alkil-, alkenil-, alkinil-, cikloalkil-, cikloalkil-alkil-, heterociklil-, heterociklil-alkil-, aril-, alkil-aril-, aralkil-, heteroaril-, alkil-heteroaril- vagy heteroaril-alkil-csoport, amelyek mindegyike adott esetben -X12 általános képletű csoporttal ugyancsak szubsztituált lehet;
X12 jelentése hidroxi-, alkoxi-, aril-oxi-, merkapto-, alkil-tio-, aril-tio-, amino-, alkil-amino-, aril-amino-, alkil-szulfonil-, aril-szulfonil-, (alkil-szulfonil)-amino-, (aril75.841/BE
-szulfonil)-amino-, karboxi-, alkoxi-karbonil-, karbamoil—, (alkoxi-karbonil)-amino-, (alkoxi-karbonil)-oxi-, alkil-ureido- vagy aril-ureido-csoport, halogénatom, ciano- vagy nitrocsoport, azzal a kiegészítéssel, hogy az alkil-, alkoxi- és arilcsoportok adott esetben az X12 jelentéseként felroroltak közül mindentől függetlenül választható további szubsztituenseket hordozhatnak;
R1 jelentése -COR5 vagy -B(OR)2 általános képletű csoport, amelyekben R5 hidrogénatomot vagy hidroxicsoportot, -OR8 vagy -NR9R10 általános képletű csoportot, trifluor-metil- vagy pentafluor-etil-csoportot, -C3F7 képletű csoportot, valamint -CF2R6, -R6 vagy -COR7 általános képletű csoportot jelenthet, ahol R7 jelentése hidrogénatom vagy hidroxicsoport vagy -OR8, -CHR9R10 vagy -NR9R10 általános képletű csoport, továbbá R6, R , R es R jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil-, aril-, heteroalkil-, heteroaril-, cikloalkil-, cikloalkil-, aralkil- vagy heteroaril-alkil-csoport, vagy a -CH (R1') COOR11, -CH (R1') CONR12R13 , -CH (R1') CONHCH (R2 ') COOR11, CH (R1') CONHCH (R2')CONR12R13, -CH (R1') CONHCH (R2') R', -CH(R1')CO-NHCH (R2') CONHCH (R3') COOR11, -CH (R1') CONHCH (R2') CONHCH (R3') CO-NR12R13, -CH (R1’) CONHCH (R2' ) CONHCH (R3’ ) CONHCH (R4') COOR11, -CH (R1') CONHCH (R2 ’) CONHCH (R3') CONHCH (R4') CONR12R13, -CH (R1 ’) CO-NHCH (R2') CONHCH (R3') CONHCH (R4') CONHCH (R5') COOR11 és -CH(R1')CO-NHCH (R2’) CONHCH (R3’) CONHCH (R4') CONHCH (R5') CONR12R13 általános képletű csoportok valamelyike, amelyekben R1', R2', R3', R4', R , R , R , R és R' jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil-, aril-, heteroalkil-, heteroaril-,
75.841/BE τ
cikloalkil-, alkil-aril-, alkil-heteroaril-, aralkil- vagy heteroaril-alkil-csoport;
Z jelentése oxigén- vagy nitrogénatom vagy hidrogénatomot hordozó szénatom;
W vagy jelen van a képletben, vagy nincs jelen, és ha jelen van a jelentése karbonil-, tiokarbonil- vagy szulfonilcsoport; és
R, R2, R3 és R4 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-10 szénatomos alkil-, 2-10 szénatomos alkenil-, 3-8 szénatomos cikloalkil-, 3-8 szénatomos heterocikloalkil-, alkoxi-, aril-oxi-, alkil-tio-, aril-tio- vagy aminocsoport, savamidvagy észtercsoport, karboxicsoport, karbamátot képező csoport, ureido-, oxo-, formil-, ciano- vagy nitrocsoport, oxigén-, nitrogén-, kén- vagy foszforatom, amely oxigén-, nitrogén-, kén- vagy foszforatomok száma 0-6 lehet, cikloalkil-alkil- vagy heterocikloalkil-alkil-csoport, ahol a cikloalkilcsoport 3-8 szénatomból és 0-6 oxigén-, nitrogén-, kénvagy foszforatomból áll, és az alkilcsoport 1-6 szénatomos, valamint aril-, heteroaril-, alkil-aril- vagy alkil-heteroari1-csoport;
azzal a kiegészítéssel, hogy az alkil-, heteroalkil-, alkenil-, heteroalkenil-, aril-, heteroaril-, cikloalkil- és heterocikloalkilcsoportok adott esetben kémiailag adekvát módon szubsztituáltak, és a szubsztituált kifejezés alatt mindig azt értjük, hogy az illető csoport vagy molekularész adott esetben egy vagy több kémiailag megfelelő szubsztituenst hordoz, és ezek a szubsztituensek alkil-, alkenil-, alkinil-, aril-, aralkil-,
75.841/BE cikloalkil- vagy heterociklilcsoport, halogénatom, hidroxi-, merkapto-, alkoxi-, aril-oxi-, alkil-tio-, aril-tio- vagy aminocsoport, savamid- vagy észtercsoport, karboxicsoport, karbamátot képező csoport, ureido-, oxo-, formil-, ciano-, nitro- vagy szulfamoilcsoport, valamint szulfoxidot, szulfont, szulfamidot, hidrazidot vagy hidroxamátot képező csoport közül kerülhetnek ki — képezik.
Az itt következő részben megadjuk azokat a csoportokat, amelyek az (I) általános képlettel kapcsolatban használt szimbólumok jelentéseként az előzőekben felsoroltak közül előnyösek:
R1 előnyös jelentése -COR5 általános képletű csoport, amelyben R hidrogénatomot, hidroxicsoportot vagy -COOR vagy -CONRR általános képletű csoportot jelent, ahol R8, R9 és R10 az előzőekben megadott jelentésűek. R1 előnyös jelentése továbbá -COCONR9R10 általános képletű csoport, amelyben R9 hidrogénatomot, és R10 hidrogénatomot vagy -CH (R1') COOR11, -CH (R1') COONR12R13, -CH(R1')CO-NHCH (R2 ) COOR11, -CH (R1 ’) CONHCH (R2') CONR12R13 vagy -CH(R1')CO-NHCH(R2') (R') általános képletű csoportot jelent. Az R10 jelentéseként felsoroltak közül előnyösnek tartjuk a -CH (R1')CO-NHCH(R2') COOR11, -CH (R1') CONHCH (R2') CONR12R13 és -CH (R1') CO-NHCH (R2') (R') általános képletű csoportokat, amelyekben R1' jelentése hidrogénatom vagy alkil- vagy heteroalkilcsoport, és R2' jelentése fenii-, szubsztituált fenii-, heteroatom-szubsztituált fenii-, tienil-, cikloalkil-, heteroatom-szubsztituált cikoalkil-, piperidinil- vagy piridilcsoport. Különösen előnyös, ha R1' hidrogénatomot, R11 hidrogénetomot vagy terc-butil-csoportot, R' pedig hidroxi-metil-csoportot jelent, és R2' jelentése a
75.841/BE
képletű vagy általános képletű csoportok — a képletekben U1 és U2 jelentése azonos vagy különböző, így hidrogén- vagy fluoratom, karboxi-metil-, (metoxi-karbonil)-metil-, karbamoil-metil-, (N-metil-karbamoil)-metil-, (N,N-dimetil-karbamoil)-metil-, azido-, amino-, hidroxi-, szubsztituált amino- vagy szubsztituált hidroxicsoport; U3 és U4 jelentése azonos vagy különböző, így oxigénvagy kénatom; és U5 jelentése alkil-szulfonil-, arilszulfonil-, heteroalkil-szulfonil-, heteroaril-szulfonil-, alkil-karbonil-, aril—karbonil-, heteroalkil—karbonil—, heteroaril-karbonil-, alkoxi-karbonil-, (aril-oxi)-karbonil-, (heteroaril-oxi)-karbonil-, N—alkil-karbamoil—, N-aril-karbamoil- vagy N-heteroaril-karbamoil— -csoport, vagy ezek valamilyen kombinációja — közül kerül ki, továbbá az -NR12R13 általános képletű csoportnak megfelelő csoportot az amino-, metil-amino-, N-metoxi-metil-amino- vagy dimetil-amino-csoport, valamint az
-NH2, -NHMe, -N(Me)OMe, -NMe2,
Me
-HN-^ -«A, -HN'Eí
75.841/BE
-ΗΝ
képletű vagy általános képletű csoportok — a képletekben U6 jelentése hidrogénatom vagy hidroxi- vagy hidroxi-metil-csoport — közül választjuk.
R2 előnyös jelentésének a
képletű csoportok valamelyike felel meg.
R3 előnyösen a
75.841/BE
CH3
COOH
SBn
Q^ch3
CH3<uch3 ‘COOH
CH3U
H3?SCH3
COOEt képletekkel vagy általános képletekkel — az általános képletekben R jelentése hidroxi- vagy alkoxicsoport —- ábrázolható csoportok valamelyikét jelenti.
R3 jelenthet továbbá egy
75.841/BE
általános képletű csoportot, amelyben R19 helyén a
képletű csoportok valamelyike áll.
R3 azonfelül még
általános képletű csoportot is jelenthet, amelyben az R20 jelen tésének megfelelő csoport a
képletű csoportok közül kerül ki.
75.841/BE
Különösen előnyös, ha R3 jelentése a
0-4
képletű, illetve általános képletű csoportok valamelyike.
Az (I) általános képletben, ha az R4 szimbólumot nem létezőnek tekintjük, a Z-C-R3 szerkezeti elem megfelelőjeként választhatjuk a
képletű csoportokat is.
Néhány más szimbólumot illetően előnyös, ha Z jelentése nitrogénatom, ha R4 jelentése hidrogénatom, és ha W jelentése karbonil- vagy szulfonilcsoport csoport.
Y jelentéseként előnyösek a
75.841/BE
képletű vagy általános képletű csoportok, ahol az általános képletekben
Y jelentese hidrogénatom vagy karboxi-, etoxi-karbonil-, metoxi-, fenii-, fenoxi-, metil-amino-, acetil-amino-, fenil-amino-, izopropil-, 1-triazolil-, 1-imidazolil- vagy (karboxi-metil)-amino-csoport; és
75.841/BE
Y12 jelentése hidrogénatom, karboxi-, metoxi-karbonil- vagy metoxicsoport, valamint fluor-, klór- vagy brómatom.
Y jelenthet azonfelül olyan
általános képletű csoportot is, amelyben
Y13 jelentése a
képletű csoportok valamelyike; és
Y14 jelentése metil-szulfonil-, acetil-, (terc-butoxi)-karbonil-, izobutoxi-karbonil-, (benzil-oxi)-karbonil- vagy (allil-oxi)-karbonil-csoport.
Y előnyös jelentésének megfelelő további csoportokat ábrázolnak a
HOOC
CH3 ηοοΛ
75.841/BE
képletek és általános képletek, amelyekben Y15 és Y16 jelentése azonos vagy különböző, így egymástól függetlenül alkil-, aril-, heteroalkil- vagy heteroarilcsoport.
Az Y szimbólum jelentésének megfelelő csoportot választhatjuk továbbá a
75.841/BE
75.84L/BÉ
képletű vagy általános képletű csoportok közül is, ahol
Y17 jelentése trifluor-metil-, nitro-, karbamoil-, hidroxi-, metoxi-karbonil-, metoxi-, fenoxi-, fenil-, benzoil-, aminovagy karboxicsoport; és
Y18 jelentése metoxi-karbonil-, nitro- vagy dimetil-amino-csoport, fluoratom, metoxi-, karboxi-metil-, karboxi-, szulfamoilvagy acetil-amino-csoport.
J jelentéseként a
75.841/BE
n=1-4
képletű csoportok, illetve általános képletű csoportok, és Q jelentéseként a
75.841/BE
képletű csoportok előnyösek.
A leírásban használt szakkifejezések és elnevezések jelentése eltérő meghatározás hiányában megegyezik azzal, amely a találmány tárgyának megfelelő szakterület művelői előtt általánosan ismertnek és elfogadottnak mondható. így például az alkilcsoport megnevezés (beleértve az alkoxicsoportok alkilcsoportjait is) az egyértékű, egyenes vagy elágazó láncú, telített szénhidrogénekből származtatható, egyetlen hidrogénatom elvételével létrejött csoportokra vonatkozik. Az alkilcsoportok 1-8, előnyösen 1-6 szénatomosak lehetnek.
Az arilcsoport kifejezés értelmezésünk szerint 6-14 szénatomos, legalább egy benzolgyűrűt magában foglaló karbociklusos csoportot jelent, amely az aromás gyűrű bármely szubsztituálható szénatomjával kapcsolódhat a molekula többi részéhez. Előnyös arilcsoportok például a fenii-, az 1-naftil-, a 2-naftil- és az indanilcsoport, de különösen a fenilcsoport és a szpbsztituált fenilesöpörtok.
Az aralkilcsoport olyan arilcsoport, amely egy rövid szén75.841/BE láncú alkilcsoporton keresztül kapcsolódik a molekula többi részéhez.
Az alkil-aril-csoport olyan alkilcsoport, amely árucsoporton keresztül kapcsolódik a molekula többi részéhez.
Cikloalkilcsoport alatt 3-8, előnyösen 5 vagy 6 szénatomos, telített, adott esetben szubsztituált karbociklusos csoportot értünk.
A heterociklusos csoport vagy heterociklilcsoport kifejezés a később tárgyalandó heteroarilcsoporton kívül jelenthet olyan telített vagy telítetlen, szerves, ciklusos csoportot is, amely állhat egyetlen gyűrűből, vagy két gyűrű képezhet kondenzált gyűrűrendszert, és minden egyes gyűrű 5-, 6- vagy 7-tagú lehet, továbbá a gyűrűben, amely vagy tartalmaz, vagy nem tartalmaz kettős kötéseket, nincsenek jelen delokalizált pi-elektronok, és a 2-8, előnyösen 3-6 szénatom közé legalább egy oxigén-, kénés/vagy nitrogénatom ékelődik. Ilyen csoport például a 2- vagy 3-piperidinil-, a 2- vagy 3-piperazinil-, a 2- vagy 3-morfolinil- és a 2- vagy 3-tiomorfolinil-csoport.
A halogénatom megnevezés fluor-, klór-, bróm- vagy jódatomot egyaránt jelenthet.
Heteroarilcsoport alatt itt a leírásban olyan ciklusos, szerves csoportot értünk, amelyben a gyűrűt alkotó 2-14, előnyösen 4 vagy 5 szénatom közé legalább egy oxigén-, kén- és/vagy nitrogénatom ékelődik, és delokalizált pi-elektronok éppen az aromás karakternek megfelelő számban vannak jelen. Ilyen aromás heteociklusos csoport a 2-, 3- és 4-piridil-, a 2- vagy 3-furil-, a 2- vagy 3-tienil-, a 2-, 4- vagy 5-tiazolil-, a 2- vagy 475.841/BE
-imidazolil-, a 2-, 4- vagy 5-pirimidinil-, és a 2-, 3- vagy 4-pirazinil-csoport stb. Előnyös heteroarilcsoport a 2-, 3- és 4-piridil-csoport. A heteroarilcsoportok adott esetben szubsztituáltak is lehetnek.
Eltérő közlés hiányában, amint már korábban is tárgyaltuk, a szubsztituált vagy szubsztituálatlan és adott esetben szubsztituált kifejezések azt jelentik, hogy az illető csoport, molekularész vagy molekula, amelyre a kifejezés vonatkozik, adott esetben, kémiailag adekvát módon szubsztituált az R12 és R13 jelentéseként felsorolt csoportok valamelyikével.
A találmány tárgyát képezik azonfelül az (I) általános képletű vegyületek tautomerei, rotamerei, enantiomerei és más optikai izomerei, valamint gyógyszerészetileg elfogadható sói és szolvátjai vagy egyéb származékai is.
Ugyancsak a találmány tárgyát képezik a gyógyszerkészítmények, amelyek hatóanyagként egy (I) általános képletű vegyületet — a sókat, szolvátokat és izomereket is beleértve — tartalmaznak gyógyszerészetileg elfogadható hordozókkal vagy hígítókkal kombinálva.
A találmány tárgya továbbá eljárás az (I) általános képletű vegyületek előállítására, és a vegyületek alkalmazására egyes betegségek, például HCV-betegség és hasonlók kezelésére. A kezelési eljárás abból áll, hogy az említett betegségek valamelyikében szenvedő páciensnek egy (I) általános képletű vegyület vagy egy (I) általános képletű vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmény terápiásán hatásos mennyiségét adjuk be.
A találmány még további tárgyát képezi egy (I) általános
75.841/BE képletű vegyület alkalmazása a HCV vagy hasonló betegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
Egyik előnyös megvalósításban tehát a találmány tárgyát a HCV-proteáz, de különösen a HCV NS3/NS4a szerin-proteáz inhibitoraként hasznosítható (I) általános képletű vegyületek — a szimbólumok jelentése a korábban megadott — és gyógyszerészeti— leg elfogadható származékaik képezik.
A találmány szerinti vegyületek közül kiválasztottuk azokat, amelyek kiváló HCV-proteáz inhibitorok, és ezeknek a hatóanyagoknak a nM-ban kifejezett Ki*-értékét az 1. táblázatban adjuk meg.
1. táblázat
A vegyületek és HCV-proteáz aktivitásuk;
folyamatos mérési eredmények
Vegyület példaszáma Kj*-érték
1 C
2 B
3 C
4 C
5 B
6 C
7 C
8 C
9 C
10 C
11 A
12 r C
13 B
14 C
15 B
16 A
17 B
18 A
19 nem mértük
75.841/BE
20 C
21 B
22 C
23 C
24 B
25 A
26 C
27 C
28 B
29 C
30 B
31 C
32 B
33 C
34 B
35 C
36 C
37 C
38 B
39 C
40 C
41 B
42 C
43 A
44 C
45 C
47 C
48 B
49 A
50 C
51 B
52 B
53 B
54 B
55 C
56 B
57 B
58 C
59 B
60 C
61 C
62 A
63 C
64 B
65 C
66 B
67 C
68 B
75.841/BE
69 B
70 B
71 B
72 B
73 A
74 B
75 B
76 B
77 C
78 B
79 C
80 B
81 B
82 C
83 C
84 C
85 C
86 C
87 B
88 B
89 C
90 B
91 B
92 C
93 C
94 B
95 B
96 A
97 A
98 A
99 B
100 B
101 B
102 B
103 C
104 C
105 B
106 A
107 C
108 B
109 B
110 A
111 B
112 B
113 A
114 A
115 C
116 B
75.841/BE
117 B
118 B
119 B
120 A
121 B
122 A
123 C
124 B
125 A
126 A
127 A
128 B
129 C
130 A
131 C
132 B
133 B
A folyamatos monitorozással kapott Ki*-értékek minősítésére használt betűk a következő kategóriákat jelölik: A = 0-100 nM; B = 101-1000 nM; C >1000 nM.
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek egyes típusait, és az egyes típusokba tartozó vegyületek szintézisét az alábbi felsorolás, majd reakcióvázlatok ismertetik, ezt követően szemléltető példákat adunk meg.
75.841/BE
75.841/BE
X = O*Bu
X = OH
X = NH2
X = NMeOMe
X = NMe2
X = o‘Bu X=OH
75.841/BE
R = propargil
R = allil
X = OH
75.841/BE
X = otutii X = OH
X = NMe2
X = Ο*Βυ X = OH
R = tBu R = H R = Me
X = Η, Y = COOH
X = COOH, Y = H
75.841/BE
Me
75.841/BE
A szerkezetüktől függően a találmány szerinti vegyületek szerves és szervetlen savakkal vagy szerves és szervetlen bázisokkal gyógyszerészetileg elfogadható sókat képezhetnek. A sóképzéshez megfelelő savak például a következők: hidrogén-klorid, kénsav, foszforsav, ecetsav, citromsav, malonsav, szalicilsav, almasav, fumársav, borostyánkősav, aszkorbinsav, maleinsav, metánszulfonsav és más, a képzett szakemberek előtt jól ismert ásványi savak vagy karbonsavak. A bázisokkal képzett sg>k esetében a bázisokra példaként szolgálhat a nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid és ammónium-hidroxid, de hasonlóképpen megfelelőek 75.841/BE
például a tetraalkil-ammónium-hidroxidok és más hasonló bázisok.
Egy másik megvalósításban a találmány tárgyát a találmány szerinti peptideket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények képezik. A gyógyszerkészítmények a hatóanyagon kívül rendszerint hígítószereket, kötőanyagokat vagy vivőanyagokat — a következőkben ezeket együttesen hordozónak nevezzük — tartalmaznak. Ezeket a gyógyszerkészítményeket, a HCV inhibitor hatásuk folytán, a C típusú hepatitis és a vele kapcsolatban hozható betegségek kezelésére használhatjuk.
Egy még további megvalósítását tekintve, a találmány tárgya eljárás a találmány szerinti vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. Gyógyszerkészítményeket az (I) általános képletű vegyületekből úgy állíthatunk elő, hogy a hatóanyagokat a szándékozott alkalmazás módjának, és a hagyományos gyógyszerészeti gyakorlatnak megfelelő hordozókkal kombináljuk. A választott gyógyszerforma lehet például orális beadásra szánt tabletta, kapszula (szilárd anyaggal, félig szilárd anyaggal vagy folyadékkal töltött) , porkészítmény, orális zselé, kanalas orvosság, diszpergálható granulátum, szirup, szuszpenzió és hasonlók. Például az orális beadásra szánt tabletta vagy kapszula előállítása során a hatóanyagot az orális készítményeknél használatos bármely nemtoxikus, gyógyszerészetileg elfogadható, inert hordozóval így laktózzal, keményítővel, szacharózzal, cellulózzal, magnézium-sztearáttal, dikalcium-foszfáttal, kalcium-szulfáttal, mannittal, etanollal (folyékony formák esetén) és hasonlókkal kombinálhatjuk. Kívánt esetben, vagy ha szükséges, az ilyen készítmények tartalmazhatnak még megfele75.841/BE lő kötőanyagokat, lubrikánsokat, a szétesést elősegítő szereket és színezékeket. A porkészítmények és tabletták mintegy 5-95%-át teheti ki a hatóanyag. Megfelelő kötőanyagok többek között a keményítő, a zselatin, a természetes cukrok, a dextróz, a természetes és szintetikus gyanták, így a gumiarábikum, a nátrium-alginát, a (karboxi-metil)-cellulóz, a polietilénglikol és a viaszok. Ezeknél a gyógyszerformáknál használatos lubrikánsok közül a bórsavat, a nátrium-benzoátot, a nátrium-acetátot, a nátrium-kloridot és hasonlókat említhetjük. A szétesést elősegítő szerek (dezintegránsok) például keményítő, metil-cellulóz, guargyanta és hasonlók közül kerülhetnek ki.
Bizonyos gyógyszerkészítmények tartalmazhatnak édesítőszereket, ízjavító anyagokat és tartósítószereket is. Az előzőekben említett gyógyszerészeti segédanyagokról, így a dezintegránsokról, hígítókról, lubrikánsokról, kötőanyagokról és hasonlókról a későbbiekben még részletesebb ismertetést adunk.
A találmány szerinti gyógyszerkészítmények lehetnek azonfelül nyújtott hatású készítmények, amelyek olyan formulálási eljárásokkal készülnek, hogy annak eredményeképpen egy vagy több összetevő vagy hatóanyag szabályozott formában válik szabaddá, így biztosítva az optimális terápiás hatást, például a HCV inhibitor vagy más hasonló hatást. Ilyen, a hatóanyag szabaddá válásának időtartamát meghosszabbítani képes gyógyszerformák például a bevonatos tabletták, amelyeknél az egyes bevonatok biztosítják a különböző szétesési sebességet, és a hatóanyaggal átitatott, szabályozott szétesésű polimer beágyazószerek, amelyek tablettává préselhetők vagy kapszulába tölthetők.
75.841/BE
A folyékony gyógyszerforma lehet például oldat, szuszpenzió vagy emulzió. Példaként említhetjük többek között a parenterális beadásra szánt, vízzel vagy víz és propilénglikol elegyével készített injekciós oldatokat, továbbá az édesítőszerek és csillapítószerek felhasználásával készült, orális beadásra szánt oldatokat, szuszpenziókat és emulziókat. A folyékony gyógyszerkészítmények lehetnek azonfelül intranazális alkalmazásra szánt oldatok is.
Az inhalációs alkalmazásra szánt, úgynevezett aeroszol készítmények oldatként vagy finom porrá őrölt szilárd anyagként, gyógyszerészetileg elfogadható hordozókkal, például valamilyen sűrített inert gázzal, így nitrogéngázzal kombinált formában tartalmazhatják a hatóanyagot.
Kúpok előállításánál úgy járhatunk el, hogy alacsony olvadáspontú viaszokat vagy zsírsav-glicerideket, például kakaóvajat először megömlesztünk, a hatóanyagot hozzáadva, keveréssel homogén diszperziót készítünk, majd a homogén keveréket megfelelő méretű kúpformákba kiöntjük, ahol az hűtésre megszilárdul.
Ismeretesek olyan szilárd gyógyszerkészítmények, amelyeket közvetlenül a felhasználás előtt alakíthatunk át orális vagy parenterális beadásra szánt folyékony gyógyszerformává. Az így készített folyékony gyógyszerforma szintén lehet oldat, szuszpenzió vagy emulzió.
A találmány szerinti vegyületeket transzdermális készítmények formájában is alkalmazhatjuk. A transzdermális készítmény gyógyszerformája lehet krém, borogatószer, aeroszol és/vagy emulzió, de ide sorolhatjuk a transzdermális tapaszokat, amelyeknek kétféle típusa is ismert a szakterület művelői előtt, az 75.841/BE egyik a hatóanyagot valamilyen beágyazóanyagban eloszlatva tartalmazza, a másiknál pedig kis tartályban található a hatóanyag.
Előnyösen a találmány szerinti vegyületeket orálisan, illetve intravénásán vagy a bőr alá fecskendezve adjuk be a páciensnek.
Előnyösen a gyógyszerkészítmények egységnyi dózisok beadására alkalmas gyógyszerformában vannak kiszerelve, vagyis a készítmény olyan egységekből áll, amelyek a hatóanyagnak éppen a megfelelő, a kívánt cél eléréséhez szükséges dózisait tartalmazzák.
Az egységnyi dózis beadására szánt készítményekben a hatóanyag mennyisége változó lehet, így az alkalmazás módjától függően hozzávetőleg 1,0 mg és 1000 mg, előnyösen 1,0 mg és 500 mg, azonban tipikus esetben 1,0 mg és 250 mg közötti mennyiség felel meg egy adagnak. A ténylegesen alkalmazandó dózisok tág határok között változhatnak a páciens kora, neme, testtömege és a kezelendő állapot súlyosságától függően. Az ilyen technikákat a szakterület művelői jól ismerik.
Általában a hatóanyagot tartalmazó, emberi alkalmazásra szánt gyógyszerkészítményt naponta egy vagy két alkalommal kaphatja a beteg, bár a dózisok nagyságát és a beadás gyakoriságát a kezelőorvos határozza meg. Orális alkalmazásnál a tipikus napi dózis hozzávetőleg az 1,0 mg és 1000 mg közötti tartományba esik, és ezt egyetlen adagban vagy részletekben adhatjuk be.
Az itt következő részben néhány fogalom jelentését magyarázzuk.
Kapszula alatt olyan metil-cellulózból, poli(vinil-alkohol)-okból vagy denaturált zselatinokból vagy keményítőből készített speciális tartályt vagy tokot kell érteni, amely a hatóanyagból és más összetevőkből álló keveréket tartalmazza vagy körülveszi.
75.841/BE
A kemény héjú kapszulák rendszerint viszonylag erős, csontból és disznóbőrből gyártott zselatinokból készülnek. A kapszula anyaga maga is tartalmazhat kismennyiségű festéket, átlátszatlanságot biztosító anyagot, lágyítót és tartósítószert.
A tabletta préselt vagy öntött, szilárd gyógyszerforma, amely megfelelő hígítókkal együtt tartalmazza a hatóanyagot. Tablettát úgy állíthatunk elő, hogy a porkeveréket magát, vagy az abból nedves granulálással, száraz granulálással vagy tömörítéssel készült granulátumot tablettává préseljük.
Az orális zselé a hatóanyagot félig szilárd, hidrofil beágyazóanyagban diszpergált vagy szolubilizált formában tartalmazza.
A porkészítmények olyan porkeverékek, amelyek a hatóanyag mellett megfelelő hígítószereket is tartalmaznak, és ezeket általában vízben vagy valamilyen ivólében szuszpendálva alkalmazzák.
A hígító vagy hígítószer kifejezések olyan anyagokra vonatkoznak, amelyek általában egy keverék vagy gyógyszerforma nagyobbik részét teszik ki. Megfelelő hígítószerek a cukrok, például a laktóz, szacharóz, mannit és szorbit; a keményítők, így a búzakeményítő, kukoricakeményítő, rizskeményítő és burgonyakeményítő; és a cellulózok, például a mikrokristályos cellulóz. A hígítószer a teljes készítmény tömegének mintegy 10-90%-át, előnyösen 25-75%-át, még előnyösebben 30-60%-át, és egészen különösen előnyösen 12-60%-át teszi ki.
A szétesést elősegítő szerek (dezintegránsok) a készítményhez adva meggyorsítják a gyógyszerforma szétesését és a hatóanyag szabaddá válását. Megfelelő dezintegránsok a keményítők; a hideg vízben oldódó módosított keményítőféleségek, például a 75.841/BE (karboxi-metil)-keményítő-nátrium-só; a természetes és szintetikus gyanták, így a szentjánoskenyér-gyanta, az indiai tragakantgyanta (karayagyanta), a guargyanta, a tragakantgyanta és az agar; a cellulózszármazékok, így a metil-cellulóz, a (karboxi-metil)-cellulóz-nátrium-só, a mikrokristályos cellulózok és a térhálósított mikrokristályos cellulózféleségek, például kroszkarmellóz-nátrium; az alginátok, például alginsav és nátriumalginát; az agyagféleségek, például bentonit; és az effervescens keverékek. A dezintegráns mennyisége a készítményben mintegy 2-15 tömeg%, előnyösen 4-10 töneg%.
A kötőanyagok szerepe abban nyilvánul meg, hogy a porszemcséket egymáshoz kötik vagy ragasztják, így azok kohéziója folytán a porszemcséket granulátummá alakíthatjuk, vagyis a kötőanyag szolgál ragasztószerként a formulálási műveletben. A kötőanyagok tulajdonképpen a hígítószerek vagy térjedelmesítő anyagok már meglevő adhéziós erejét növelik meg. Megfelelő kötőanyagok a cukrok, például szacharóz; a keményítők, így a búzakeményítő, kukoricakeményítő, rizskeményítő és burgonykeményítő; a természetes gyanták, például gumiarábikum, zselatin és tragakantgyanta; egyes tengeri eredetű anyagok, például alginsav, nátrium-alginát és ammonium-kalcium-alginát; a cellulózszerű anyagok, például metil-cellulóz, (karboxi-metil)-cellulóz-nátrium-só és (hidroxi-propil)-cellulóz; a poli(vinil-pirrolidon); és bizonyos szervetlen anyagok, például magnézium-alumínium-szilikátok. A kötőanyagok 2%-tól 20%-ig terjedő részét tehetik ki a készítmény tömegének, előnyösen azonban a kötőanyag mennyisége a készítményben 3-10 tömeg%, még előnyösebben 3-6 tömeg%.
75.841/BE
............ ,.
Lubrikánsnak nevezzük azokat az adalékokat, amelyeket azért adnak bizonyos gyógyszerformák, például tabletta, granulátum stb. előállítása során a keverékhez, hogy a préselést követően könnyebb legyen kiszabadítani a tablettát az öntőformából vagy présszerszámból, illetve hogy csökkentsék a súrlódást vagy a kopást. A lubrikánsok általában a fém-sztearátok, például magnéziumsztearát, kalcium-sztearát vagy kálium-sztearát; sztearinsav; magas olvadáspontú viaszok; és a vízben oldódó lubrikánsok, például nátrium-klorid, nátrium-benzoát, nátrium-acetát, nátrium-oleát, polietilénglikolok és d,1-leucin közül kerülhetnek ki. A lubrikánsokat rendszerint a formulálás legutolsó fázisában, közvetlenül a préselés előtt adják a masszához, mivel annak a szemcsék felületén, vagyis a granulátum szemcséi és a présszerszám részei között kell elhelyezkednie. A lubrikáns mennyisége a préselésre előkészített keverékben 0,2 és 5 tömeg% között lehet, előnyösen azonban 0,5-2 tömeg%, még előnyösebben 0,3-1,5 tömeg%.
A glidánsnak nevezett adalékanyagok biztosítják, hogy a granulátum ne tömörödjék össze, hanem megtartsa folyási tulajdonságait, és így simán és egyenletes eloszlásban jusson el a présszerszámhoz. Megfelelő glidánsok például a szilicium-dioxid és a talkum. A glidáns mennyisége általában a keverék teljes tömegének 0,1% és 5% közötti részét teszi ki, előnyösen azonban 0,5-2 tömeg% mennyiségben van jelen a préselésre váró keverékben.
A színezékek gyógyszerészeti segédanyagként arra szolgálnak, hogy a keveréket vagy az adott gyógyszerformát színessé tegyék. Színezékként használhatunk élelmiszeripari minőségű festékeket, amelyeket megfelelő adszorbensre, például derítőföldre vagy alu75.841/BE
mínium-oxidra adszorbeáltatunk. A színezőanyag mennyisége változó lehet, általában a keverék tömegének 0,1-5%-át, előnyösen 0,1-1%-át teszi ki.
Biológiai hozzáférhetőség alatt azt az arányszámot értjük, amely megmutatja, hogy a beadott dózis hatóanyagának vagy a hatásért felelős molekulának a standardhoz vagy kontrolihoz viszonyítva milyen mennyisége szívódik fel és jut a keringésbe.
A tabletta hagyományos előállítási módja jól ismert. Tablettát gyárthatunk például száraz eljárással, amikor is a porkeveréket közvetlenül, vagy előzőleg tömörítéssel granulátummá alakítva préselhetjük tablettává, továbbá előállíthatunk tablettát nedves eljárással vagy más speciális eljárásokkal. Más, ugyancsak a hatóanyag beadására szolgáló gyógyszerformák, például kapszula, kúp és hasonlók előállítására szintén jól ismert eljárások állnak rendelkezésünkre.
Egy másik megvalósítást tekintve a találmány tárgyát képezi a fenti gyógyszerkészítmények alkalmazása bizonyos betegségek, például a C típusú hepatitis és hasonlók kezelésére. Az alkalmazás abból áll, hogy ilyen betegségben vagy betegségekben szenvedő, illetve ilyen kezelést igénylő páciensnek egy, a találmány szerinti gyógyszerkészítmény hatásos mennyiségét adjuk be.
Egy még további megvalósításban a találmány szerinti vegyületeket a humán HCV-betegség kezelésére monoterápiát vagy kombinációs terápiát alkalmazva használhatjuk, így a találmány szerinti vegyületeket kombinálhatjuk vírusellenes hatóanyagokkal például ribavirinnel és/vagy interferonnal, például alfa-interferonnal és hasonlókkal.
75.841/BE .·-. .··. ··♦: '·» . ··« · · ···
Amint korábban már tárgyaltuk, a találmány vonatkozik a találmány szerinti vegyületek tautomereire, rotamereire, enantiomereire és más sztrereoizomereire is. A megfelelő képzettségű szakember számára tejesen nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti vegyületek némelyike izomerek formájában létezhet. A találmány oltalmi köre kiterjed ezekre módosulatokra is.
Egy még további megvalósításban a találmány tárgya eljárás a találmány szerinti vegyületek előállítására. A vegyületeket néhány, a szintetikus kémiában jól ismert eljárással állíthatjuk elő, ezekre szemléltető példaként szolgálnak az itt következő részben bemutatásra kerülő reakcióvázlatok. Könnyen belátható azonban, hogy bár a reakcióvázlatokban csupán néhány vegyület szerepel szemléltetés végett, akár a természetes, akár a természetben elő nem forduló aminosavak megfelelő helyettesítésével kívánság szerint további vegyületek állíthatók elő. Ezek a változatok is magától értetődően a találmány részét képezik, és beletartoznak annak oltalmi körébe.
A példákban a szintézisek leírása során, valamint a reakcióvázlatokban különböző rövidítéseket használunk, ezek jelentése a következő: THF = tetrahidrofurán; DMF = N,N-dimetil-formamid; EtOAc = etil-acetát; AcOH = ecetsav; HOOBt = 3-hidroxi-l, 2,3-benzotriazin-4(3H)-on; EDCI = 1-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidroklorid; DEC = 1-[3-(dimetil-amino)-propil] -3-etil-karbodiimid-hidroklorid; NMM = N-metil-morfolin; ADDP = 1,1'-(azo-dikarbonil)-piperidin; DEAD = dietil-(azo-dikarboxilát); MeOH = metanol; EtOH = etanol; Et2O = dietil-éter; DMSO = dimetil-szulfoxid; HOBt = 1-hidroxi-benzotriazol; PyBrOP = bróm75.841/BE • w ·· ··♦· ♦-*'!
··· · ·· <j··Γ
-tri (1-pirrolidinil)-foszfónium-[hexafluoro-foszfát]; Bn = benzilcsoport; Bzl = benzilcsoport; Et = etilcsoport; Ph = fenilcsoport; iBoc = izobutoxi-karbonil-csoport; iPr = izopropilcsoport; fcBu vagy Bufc = terc-butil-csoport; Boc = (terc-butoxi) -karbonil-csoport; Cbz = (benzil-oxi)-karbonil-csoport; Cp ciklopentadienilcsoport; Ts = (4-tolil)-szulfonil-csoport; Me = metilcsoport; THP = tetrahidropiranilcsoport; iBOC = izobutoxi-karbonil-csoport; Chg = 2-ciklohexil-glicin.
A következő reakcióvázlatok a köztitermékként hasznosítható építőelemek szintézisét szemléltetik.
1. reakcióvázlat:
BocHN
HCI-^N-Phg-OBu1 (1.2)
COOH HOOBt
EDCI NMM
OH BocHN
BocHN
H N (1-5)
H N .
CI2CHCO2H DMSO DCC
Q Ph
N COOBu1
Π | 4M HCI dioxán * 7 perc
Ph
COOBu1
HCI H2N
OH
4M HCI dioxán [ 7 perc 1
H S Ph A
N COOBu1 rí (1.4)
HCI
H2N
Ο h í? Ph nA Λ
N COOBu1
Π (1.6)
75.841/BE ·ϊ j~ «Λ·- »«* *· *·
2. reakcióvázlat:
Ph N^CONMez Η
I 4Μ HCI dioxán perc
3. reakcióvázlat:
MeSO2H2C
Boc-Chg-OH+ «AyJDBzI
HOOBL EDCI *
NMM
MeSO2H2C
Boc-Chg-N^Sf0021 Me II
O
O
CHzSOzMe (3.4) 0
HCI
H2N
OH H 2 ?h
COOBi?
HOOBt EDCI NMM
MeSO2H2C
Boc-Cha-N^if
Me £
75.841/BE
4. reakcióvázlat:
MeSO2H2C h OH Η O X dkAzM Boc-Chg-N if | || Me o f O 1 (35)
Ph
N COOBu* H
MeSO2H2C h OH H X -N H-Chg-N^T< Me q
4M HCI dioxán 7 perc
Ph
N H c°OBu' h2o o
MeSO2H2C H OH H » ?h
Me q
MeSO2H2C h A Iboc-Chg-NIf
Me 8
Ph
Dess-Martin perjodinán
N COOBu‘ Π , A j TFA MeSO2H2C H
N^COOBu1 -► 2 X^N
H Iboc-Cha-N
MeSO2H2C h
X Iboc-Chg-N Me 8
Ph
N CONMe2 Π
e2NH HOOBt EDCL NMM
Me o
Ph
N COOH H
Az itt következő részben a köztitermékek előállítását ismertetjük.
1. előkészületi példa:
A lépés: (1.09) képletű vegyület
(1 08) (1.09)
75.841/BE
3,00 g (12,0 mmol) (1.08) képletű vegyületet [lásd S.L. Harbeson, S.M. Abelleira, A. Akiyama, R. Barrett, R.M. Caroll et al.: J. Med. Chem. 37(18), 2918-2929 (1994)] feloldunk 15 ml N,N-dimetil-formamid és 15 ml metilén-diklorid elegyében, azután az oldathoz -20 °C-on, keverés közben előbb 1,97 g (12,0 mmol) 3-hidroxi-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-ont, 4,0 ml (36,0 mmol) N-metil-morfolint és 2,79 g (14,5 mmol) 1-[3-(dimetil-amino) -propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot, majd 10 percnyi kevertetést követően 2,56 g (13,0 mmol) glicin-benzil-észter-hidrokloridot (HC1 •H2N-Gly-OBn) adunk. A reakcióelegyet 2 óra hosszáig -20 °C-on keverjük, éjszakán át hűtőszekrényben tartjuk, és másnap szárazra pároljuk. A párlási maradékot 150 ml etil-acetáttal meghígítjuk, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kétszer, vízzel, 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd a szerves fázist nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (1.09) képletű vegyület tömege 4,5 g, a kitermelés 94%.
Tömegspektrum (LRMS): m/z = 395, 1 (MH+) .
B lépés: (1.1) képletű vegyület
(1.09) (1.1)
7,00 g (17,8 mmol) (1.09) képletű vegyületet feloldunk 300
75.841/BE ml vízmentes etanolban, és az oldatot 300 mg 10%-os csontszenes palládiumkatalizátor jelenlétében, hidrogéngáz atmoszférában, szobahőmérsékleten keverjük, miközben vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálattal követjük a reakció előrehaladását. 2 órányi reagáltatás után az elegyet Celite-rétegen megszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk, aminek eredményeképpen 5,40 g (1.1) képletű vegyületet kapunk, a kitermelés 100%.
Tömegspektrum (LRMS) : m/z = 305,1 (MH+) .
2. előkészületi példa:
A lépés: (1.3) képletű vegyület
(1-1) (1.2) (1.3) ekvivalens, az 1. előkészületi példa B lépésénél leírtak szerint előállított (1.1) képletű vegyület, 1,03 ekvivalens (1.2) képletű vegyület (Novabiochem, katalógusszám: 04-12-5147), 1,03 ekvivalens 3-hidroxi-l,2,3-benzotriazin-4(3H)-on, 2,2 ekvivalens N-metil-morfolin és N,N-dimetil-formamid (70 ml/g) elegyét -20 °C-on keverjük, hozzáadunk 1,04 ekvivalens 1-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot, és folytatjuk a kevertetést további 48 órán át. Ezt követően a reakcióelegyet 5%-os, vizes kálium-dihidrogén-foszfát-oldatra öntjük, a vizes keveréket etil-acetáttal kétszer extraháljuk, majd az egyesített szerves oldószeres extraktumot hideg, 5%-os, vizes kálium-karbonát-oldattal, 5%-os, vizes kálium-dihidrogén-foszfát-oldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szá
75.841/BE rítjuk, szűrjük, azután a szűrletet vákuumban bepároljuk. A párlási maradékot dietil-éter és hexán elegyével eldörzsöljük, végül a szilárd anyagot kiszűrjük, aminek eredményeképpen 86%-os kitermeléssel megkapjuk az (1.3) képletű vegyületet.
Tömegspektrum (FAB): M+l = 494,3; a C25H39N3O7 összegképletre számított relatív molekulatömeg: 493,60.
B lépés: (1.4) képletű vegyület
(1-3) (1.4)
3,0 g, a fenti A lépésben leírtak szerint előállított (1.3) képletű vegyülethez 36 ml 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldatot adunk, az elegyet 7 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd 1500 ml hideg (5 °C) hexánra öntjük. A hexános elegyet előbb keverjük, azután 0,5 óra hosszáig 0 °C-on állni hagyjuk, végül vízmentes atmoszférában szívatással megszűrjük. A kiszűrt szilárd anyagot tovább szárítva 2,3 g (1.4) képletű vegyületet (C2oH3iN305*HCl) kapunk, a kitermelés 88%.
H-NMR-spektrum (DMSO-dg/NaOD, 4,3-4,1 (m, 1H) ; 3,8 (m, 2H) ; 1,7-1,1 (m, 4H); 1,35 (s, 9H); 3. előkészületi példa: (1.5) képletű vegyület 0 BocHN^Jk. J 0 δ): 7,38 (m, 5H) ; 5,25 (m, 1H) ; 3,4-3,3 (m, D2O jelekkel takart); 0,83 (m, 3H). O Ph
15.841/BE
A 2. előkészületi példa A lépésében megadottak szerint előállított (1.3) képletű vegyületet lényegében a 7. előkészületi példa A lépésében leírtakkal azonos módon eljárva reagáltatunk, így megkapjuk az (1.5) képletű vegyületet.
4. előkészületi példa:
(1.6) képletű vegyület
A 3. előkészületi példában megadottak szerint előállított (1.5) képletű vegyületet lényegében a 2. előkészületi példa B lépésében leírtakkal azonos módon eljárva reagáltatunk, így megkapjuk az (1.6) képletű vegyületet.
5. előkészületi példa:
Ά lépés: (2.09) képletű vegyület
1,61 g (19,7 mmol) dimetil-ammónium-klorid, 2,08 g N-Boc-2-fenil-glicin, 4,50 g (17,9 mmol) (2.08) képletű vegyület (Bachem Co. # A-2225),
3,07 g (18,8 mmol) 3-hidroxi-l, 2,375.841/BE
-benzotriazin-4(3H)-on és 4,12 g (21,5 mmol) 1-[3-(dimetilamino) —propil]—3—etil —karbodiimid—hidroklorid 200 ml vízmentes N,N-dimetil-formamid és 150 ml metilén-diklorid elegyével készített oldatához -20 C—on 5,90 ml (53,7 mmol) N—metil—morfolint adunk. A reakcióelegyet változatlan hőmérsékleten keverjük 30 percig, majd éjszakán át (18 óra) fagyasztószekrényben tartjuk. Másnap hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni az elegyet, 450 ml etil-acetátot, 100 ml telített nátrium-klorid-oldatot és 100 ml 5%-os foszforsavoldatot adunk hozzá, azután a nem elegyedő rétegeket elválasztjuk. A szerves fázist 100 ml 5%—os foszforsavoldattal, kétszer 150 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, 150 ml vízzel és 150 ml telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. Az így kapott 4,86 g fehér, szilárd anyag a (2.09) képletű vegyület. A terméket minden további tisztítás nélkül felhasználjuk a következő reakciólépéshez.
B lépés: (2.1) képletű vegyület
4,70 g, a fenti A lépésben leírtak szerint kapott (2.09) képletű vegyületet (nyerstermék) feloldunk 60 ml (240 mmol) 4 M sósavban, és az oldatot szobahőmérsékleten keverjük, miközben a reakció előrehaladását vékonyréteg-kromatográfiás analízissel követjük. 4 óra elteltével az oldatot vákuumban bepároljuk, így
75.841/BE feher, szilárd anyagként megkapjuk a (2.1) képletű vegyületet. A nyersterméket minden további tisztítás nélkül felhasználjuk a következő reakciólépéshez.
Tömegspektrum (LRMS): m/z = 179,0 (MH+) .
6. előkészületi pél^a·
A lépés: (2.2) képletű vegyület
Lényegében a 2. előkészületi példa A lépésében megadottakkal azonos módon járunk el, azonban fenil-glicin-(terc-butil)-észter-hidroklorid helyett 2-fenil-N,N-dimetil-glicin-amid-hidrokloridot reagáltatunk, így megkapjuk a (2.2) képletű vegyületet.
Tömegspektrum (FAB): M+l = 465,3.
B lépés: (2.3) képletű vegyület
(2.2)
1,85 g, a fenti A lépésben leírtak szerint kapott (2.2) képletű vegyületet 50 ml 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldattal szobahőmérsékleten reagáltatunk 1 óra hosszáig, majd az elegyet 20 °C-os vízfürdőn vákuumban bepároljuk. A párlási maradékot diizopropil-éterrel eldörzsöljük, azután a szilárd anyagot kiszűrjük és megszárítjuk. Az Így kapott termék a (2.3) képletű vegyü75.841/BE let (Ci8H28N4O4«HCl) , a tömege 1,57 g, a kitermelés 98%.
Tömegspektrum (FAB): M+l = 365,3.
7. előkészületi példa:
A lépés: (2.4) képletű vegyület
(2.2) (2.4)
2,0 g, az 5. előkészületi példa A lépésében leírtak szerint előállított (2.2) képletű vegyületet feloldunk 60 ml metilén— -dikloridban, és az oldathoz 3,0 ml dimetil-szulfoxidot és 0,70 ml 2,2-diklór-ecetsavat adunk. Az elegyet keverés közben 5 °C-ra hűtjük, beadagolunk 8,5 ml 1 M metilén-dikloridos diciklohexil-karbodiimid-oldatot, azután eltávolítjuk a hűtőfürdőt. A reakcioelegyet 22 órán át keveredni hagyjuk, majd 0,5 ml izopropil— -alkoholt adunk hozzá, és még egy óra hosszat folytatjuk a kevertetést. Ezt követően megszűrjük a reakcióelegyet, 50 ml jéghideg 1 M nátrium-hidroxid-oldattal, 50 ml jéghideg 1 M sósavval, utána 5%-os, vizes kálium-dihidrogén-foszfát-oldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd a szerves fázist izzított magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. A párlási maradékot kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítjuk, etil-acetáttal eluálva az oszlopot, aminek eredményeképpen 1,87 g (2.3) képletű (C23H34N4O6) vegyületet kapunk, a kitermelés 94%.
Tömegspektrum (FAB): M+l = 463,3.
75.841/BE
B lépés; (2.5) képletű vegyület
Lényegében ugyanúgy járunk el, mint ahogyan azt a 2. előkészületi példa B lépésénél megadtuk, így megkapjuk a (2.5) képletű vegyületet.
8. előkészületi példa;
A lépés: (3.3) képletű vegyület
A~1 lépés: (3.02) képletű vegyület
Me—S. Me—S.
Me—N COOH ---► Me—hJ^COOBzI
B°c Boc (301) (3.02)
150 ml N,N-dimetil-formamidban feloldunk 4,6 g, N-Boc-S-metil-ciszteinből (Bachem Biosciences, Inc.), a szakirodalomban leírtak [Boger: J. Org. Chem. 53(3), 487 (1988)] szerint előállított (3.01) képletű vegyületet, és az oldathoz előbb 6,1 g cézium-karbonátot, majd 2,3 ml benzil-bromidot adunk. A reakcióelegyet 4 óra hosszáig szobahőmérsékleten keverjük, azután vákuumban bepároljuk, és a párlási maradékot 200 ml etil-acetátban felszuszpendáljuk. Az elegyet 5%-os kálium-dihidrogén-foszfát-oldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd a szerves fázist izzított magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük
75.841/BE
és az oldószert elpárologtatjuk, így visszamarad 6,2 g (3.02) képletű vegyület. [a]D = -33,7° (c = 1,3; kloroform).
A-2 lépés: (3.03) képletű vegyület
O2
Me—S. Me—S.
Me—hT^COOBzI---► Me—IV^COOBzI
Boc Boc (3.02) (3.03)
U. Larsson és munkatársai eljárását [Acta Chern. Scan. 48(6), 517-525 (1994)] követve, 6,1 g (3.02) képletű vegyületet feloldunk 150 ml metanolban, és 0 °C-on, lassan hozzáadjuk 16,4 g Oxone® (Aldrich Chemical Co.) 90 ml vízzel készített oldatát. A reakcióelegyet 4 óra hosszáig szobahőmérsékleten keverjük, utána egy rotációs készülékben az eredeti térfogatának felére bepároljuk. A párlási maradékhoz 100 ml hideg vizet adunk, és a vizes keveréket etil-acetáttal extraháljuk. A szerves oldószeres extraktumot telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, izzított magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, majd az oldószert elpárologtatjuk. Az így visszamaradó termék a (3.03) képletű vegyület, a tömege 5,9 g. [a]D = -26,3° (c = 0,9; kloroform) .
Ά-3 lépés: (3.2) képletű vegyület 0202
Me—S.Me—S.
Me—IJT^COOBzI---► Me—N^^COOBzI BocHHCI (3.03)(3.2)
A fenti A-3 lépésben kapott (3.03) képletű vegyületet 0,5 óra hosszáig 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldattal reagálhatjuk,
75.841/BE igy megkapjuk a (3.2) képletű vegyületet.
Tömegspektrum (FAB): M+l = 272,0; a C12H17NO4S.HC1 összegképletre számított relatív molekulatömeg 307,79.
A (3.3) képletű vegyület előállítása
MeSO2H2C
Boc-Chg-N M O
OBzI (3.3)
A (3.2) képletű S-metil-cisztein-benzil-észter-S,S-dioxidhidrokloridot lényegében a 2. előkészületi példa A lépésben leírtakkal azonos módon eljárva, N-Boc-2-ciklohexil-glicinnel (3.1) reagáltatjuk, így megkapjuk a (3.3) képletű (C25H38N2O7S; 510,64) vegyületet.
B lépés: (3.4) képletű vegyület
MeSO2H2C
Boc-Chg-N
OBzI
O
CH2SO2Me
JL QLJ
Boc-Chg-N^
Me II O (3·3) (3.4)
Bemérünk 0,7 g, a fenti A lépésben leírtak szerint előállított (3.3) képletű vegyületet, 0,05 g 10%-os csontszenes palládiumkatalizátort és 100 ml etanol-dioxán oldószerelegyet, 3 bar nyomású hidrogángáz atmoszférában keverjük a reakcióelegyet 5 óra hosszáig, majd megszűrjük, és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. Az így kapott termék a (3.4) képletű vegyület, a tömege 0,56 g, a kitermelés 97%.
Tömegspektrum (FAB): M+l = 421,2; a C18H32N2O7S összegképletre számított relatív molekulatömeg 420,52.
75.841/BE
C lépés: (3.5) képletű •vegyület
A fenti B lépésben leírtak szerint előállított (3.4) képletű vegyületet, lényegében a 2. előkészületi példa A lépésében leírtak szerint eljárva, a 2. előkészületi példa B lépésében megadottak szerint előállított (1.4) képletű vegyülettel reagáltatjuk, így megkapjuk a (3.5) képletű vegyületet.
Tömegspektrum (FAB) : M+l = 796, 3; a C38H61N5O11S összegképletre számított relatív molekulatömeg 795,98.
9. előkészületi példa:
(4.1) képletű vegyület
Lényegében a 2. hivatkozási példa B lépésében megadott módon eljárva reagáltatjuk a 8. hivatkozási példa C lépésében leírtak szerint előállított vegyületet, így megkapjuk a (4.1) képletű (C38H53N5O9S*HC1; 732,33) vegyületet.
10. előkészületi példa:
(4.2) képletű vegyület
75.841/BE .· -t··(· » · · t
J*j «t· ·* K »<
0,7 g, a 9. hivatkozási példában leírtak szerint előállított vegyületet 0,38 ml N,N-diizopropil-etil-aminnal együtt feloldunk 15 ml N, N-dimetil-formamidban, és az oldathoz 5 °C-on 0,15 ml izobutil-(klór—formiat)—ot adunk. Ezt követően eltávolítjuk a hűtőfürdőt, 6 óra hosszáig folytatjuk a kevertetést, majd az elegyet 100 ml 5%—os, vizes kálium—dihidrogén-foszfát-oldatra öntjük, és a vizes keveréket kétszer 100 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves oldószeres extraktumot 5%-os, vizes kálium-karbonát-oldattal, 5%-os, vizes kálium-dihidrogén-foszfát-oldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, izzított magnézium—szulfáton szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet vákuumban beparoljuk. A parlasi maradékot dietil—éter és hexán ele— gyével eldörzsöljük, így megkapjuk a (4.2) képletű vegyületet.
11. előkészületi példa:
(4.3) képletű vegyület
Lényegében a 14. hivatkozási példa H lépésében megadottakkal azonos módon eljárva állítjuk elő a (4.3) képletű vegyületet.
12. előkészületi példa:
(4.4) képletű vegyület
75.841/BE
Hozzávetőleg 0,10 g, a 11. hivatkozási példában leírtak szerint előállított vegyületet 2 óra hosszáig 10 ml 1:1 arányú, vízmentes trifluor-ecetsav-metilén-diklorid eleggyel reagáltatunk. Ezt követően mintegy 50 ml xilollal meghígítjuk a reakcióelegyet, vákuumban bepároljuk, a párlási maradékot dietil-éterrel eldörzsöljük, majd megszűrjük, így megkapjuk a (4.4) képletű vegyületet.
13. előkészületi példa:
(4.5) képletű vegyület
Lényegében a 2. előkészületi példa A lépésében megadott eljárást követjük, azonban a 12. példában leírtak szerint előállított (4.4) képletű vegyületet dimetil-aminnal reagálta!juk. Az így kapott termék a (4.5) képletű vegyület.
14, előkészületi példa:
A lépés; (5.2) képletű vegyület
(5·°1) (5.1) (52)
1,11 g (7,0 mmol) (5.01) képletű vegyületet feloldunk 10 ml vízmentes N,N-dimetil-formamid és 10 ml vízmentes metilén-diklorid elegyében, majd az oldathoz 0 °C-on 1,19 g (7,25 mmol) 1hidroxi—benzotriazolt, 2,3 ml (21,0 mmol) N—metil—morfolint és
1,6 g (8,4 mmol) 1-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid
75.841/BE
-hidrokloridot adunk. 15 percnyi 0 °C-on folytatott kevertetést követően beadagolunk 1,54 g (7,35 mmol) valin-(terc-butil)-észtert (H-Val-O^Bu) , és éjszakára fagyasztószekrénybe helyezzük a reakcióelegyet. Másnap az oldatot, amelyben jó sok kiválás látható, szárazra pároljuk, azután a párlási maradékot etil— -acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk. A szerves fázist 5%-os foszforsavoldattal, vízzel és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szántjuk, majd megszűrjük, így nyerstermékként 2,4 g (5.1) képletű vegyületet kapunk, a kitermelés 98%.
A fenti nyersterméket 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldatban oldjuk fel, és az oldatot 7 órányi szobahőmérsékleten folytatott kevertetés után szárazra pároljuk, így visszamarad az (5.2) képletű vegyület.
B lépés: (5.4) képletű vegyület
17,5 g (0,086 mmol) (5.3) képletű vegyületet [F.L. Bach Jr. et al.: J. Amer. Chem. Soc. 77, 6049 (1955)] feloldunk 300 ml 1:1 arányú metanol-víz elegyben, az oldathoz 47,0 g (0,215 mól) di(terc-butil)-dikarbonátot adunk, majd cseppenként 50%-os nátrium hidroxid-oldatot beadagolva, a pH—jat 9,5—re állítjuk. Ezt követően a reakcióelegyet éjszakán át keverjük, másnap tömény sósavval 8-as pH-ra semlegesítjük, azután citromsavval 2,94-es pH-ra savanyítjuk, és a vizes keveréket metilén-dikloriddal extraháljuk. Az egyesített szerves oldószeres extraktumot magné75.841/BE zium-szulfáton szárítjuk, így 27,16 kapunk, a kitermelés 95%.
C lépés: (5.5) képletű vegyület (5.4) képletű vegyületet
BOG
N
o (5.5) mmol) szulfinil(5.4) °C-on összeöntünk 3,37 ml (0, és 3,59 ml (0, 046 mol) N,N-dimetil-formamidot, az elegyet hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, 35 percig keverjük, azután ismét 0 °C-ra hűtjük. Ezt követően beadagoljuk 15,0 g (0,045 mól), a fenti B pontban leírtak szerint előállított vegyület és 3,73 ml (0,046 mól) piridin 150 ml acetonitrillel készített oldatát, éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet, majd 700 ml jeges vízre öntjük, és a vizes keveréket háromszor 150 ml etil acetattal extrahaljuk. Az egyesített szerves oldószeres extraktumot telített natrium—klorid—oldattal mossuk, nátrium— -szulfáton szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. Az így kapott (5.5) képletű vegyület tömege 10,8 g.
D lépés: (1.08) képletű vegyület
6,5 g (0,044 mol), a 15. előkészületi példa D pontja alatt
75.841/BE leírtak szerint előállított (6.6) képletű vegyületet feloldunk 130 ml metilén-dikloridban, majd keverés közben beadagoljuk 9,65 di(terc-butil)—dikarbonát 50 ml N,N-dimetil-formamiddal készített oldatát. A reakcióelegyet hét végén szobahőmérsékleten keveredni hagyjuk, utána szárazra pároljuk, a párlási maradékhoz 120 ml vizet adunk, és 50%-os nátrium-hidroxid-oldattal 10 és 11 közötti pH—ra lúgosítjuk. Ezt követően 2 óra hosszat keverjük az elegyet, utána hozzáadunk további 1,93 g di (terc-butil)-dikarbonátot, és éjszakán át szobahőmérsékleten folytatjuk a kevertetést. Másnap a vizes keveréket metilén—dikloriddal összerázzuk, majd a vizes részt 1 M sósavval 4-es pH-ra savanyítjuk, azután metilén-dikloriddal háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves oldószeres extraktumot telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium—szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk, aminek eredményeképpen 4,50 g (1.08) képletű vegyületet kapunk, a kitermelés 41%.
Tömegspektrum: M-tBu+2 = 192.
E lépés: (5. 7) képletű vegyület
4,5 g (0,018 mol), a fenti D lépésben leírtak szerint előállított (1.08) képletű vegyületet feloldunk 22 ml N,N-dimetil-formamid és 22 ml metilén-diklorid elegyében. Az oldathoz keverés közben 2,7 g (0,02 mól) 1-hidroxi-benzo-triazolt, 6 ml (0,054 mól) N-metil-morfolint, 4,17 g (0,022 mol) 1-[3-(dimetil75.841/BE
-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 6,1 g (0,02 mol) 4-toluolszufonsavat adunk, az elegyet egy hét végén szobahőmérsékleten keverjük, azután szárazra pároljuk. A párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, majd az egyesített szerves oldószeres extraktumot 10%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, végül megszűrjük, és a nyersterméket 50 ml 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldatban oldjuk fel. 50 percig szobahőmérsékleten keverjük az elegyet, utána az oldószert elpárologtatjuk, így 4,79 g (5.7) képletű vegyületet kapunk, a kitermelés 94%.
Tömegspektrum: MH+ = 245,1.
F lépés: (5.8) képletű vegyület
<5-7) (5.8)
3/1 g (0,011 mol), a fenti E lépésben megadottak szerint előállított (5.7) képletű vegyületet feloldunk 55 ml vízmentes metilén-dikloridban, majd keverés közben, 13 perc alatt cseppenként beadagoljuk 1,69 ml (0,012 mól) trietil-amin és 2,83 g (0,011 mol), a fenti C lépésben leírtak szerint kapott (5.5) képletű vegyület 55 ml vízmentes metilén-dikloriddal készített oldatát. A reakcióelegyet 1,5 óra hosszáig szobahőmérsékleten keverjük, utána telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, a szerves fázist nátrium-szulfáton szárítjuk, és az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (5.8) képletű vegyület tömege 4,67 g.
75.841/BE
Tömegspektrum: MH+ = 457,2
G lépés: (S.9) képletű vegyület
tott ml
0-34 g (1,31 mmol), az A lépésben leirtak (5-2) képletű vegyületet feloldunk 5 ml metilén-diklorid és
N,N-dimetil-formamid elegyében, majd keverés közben,
0-214 9 (1,31 mmol) 1-hidroxi-benzo-triazolt, °C-on
N-metil-morfolint és 0,5 g (l,09 mmol)
-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot
0,43 ml (3,9 mmol)
[3-(dimetil-amino)adunk az oldathoz. A reakcióelegyet 15 percig szobahőmérsékleten keverjük, adagolunk 0,5 g (1,09 mmol), utána berint kapott (5.8) képletű vegyületet, a fenti F lépésben megadottak szeéjszakán át fagyasztószekrényb és a keletkezett oldatot juk az elegyet, a párlási en tartjuk. Másnap szárazra párolmaradékot etil-acetát és között megoszlatjuk, azután az eavAqítoft egyesített szerves oldószeres extraktumot kétszer telített foszforsavoldattal és nátrium-szulfáton natrium hidrogén-karbonát-oldattal, 5%-os telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, logtatjuk. Az szárítjuk, szűrjük, végűi az oldószert elpáro.
Tömegspektrum:
így kapott (5.9) képletű vegyület tömege 0,65 g.
MH+ = 697,4.
H lépés: (5.10) képletű vegyület
75.841/BE
0,6 g (0,8 mmol), a fenti G lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 8 ml vízmentes metilén-dikloridban, az oldathoz keverés közben 0,732 g (1,72 mmol) Dess-Martin-reagenst adunk, és szobahőmérsékleten folytatjuk a kevertetést még egy óra hosszáig. Ezt követően cseppenként 0,031 ml vizet adunk az elegyhez, továbbá beadagoljuk 0,373 g (0,86 mmol) Dess—Martin-reagens 12 ml metilén-dikloriddal készített oldatát. A reakcióelegyet 2,5 óra hosszat szobahőmérsékleten keveredni hagyjuk, majd 20 ml, 1:1 arányban telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot és telített nátrium-tioszulfát-oldatot tartalmaz sóoldatot adunk hozzá, és újabb 1,5 órán át gyors keverés mellett szobahőmérsékleten folytatjuk a reagáltatást. A szerves fázist ezután vízzel és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és szárazra pároljuk, így 0,588 g (5.10) képletű vegyületet kapunk, a kitermelés 100%. Tömegspektrum: MH+ = 695,2.
15. előkészületi példa:
A lépés: (6.2) képletű vegyület
(6.1) (6-2)
5,0 g (19,89 mmol) (6.1) képletű vegyületet feloldunk 20 ml metilén-diklorid és 10 ml N,N-dimetil-formamid elegyében, és az oldathoz -20 °C-on, keverés közben 3,25 g (19,89 mmol) 1-hidroxi
75.841/BE benzotriazolt, 4,58 g (23,87 mmol) 1-[3-(dimetil—amino)-propil] -3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 6,56 ml (59,69 mmol) N—metil-morfolint adunk. Ezt követően 10 percig szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet, majd 1,38 g ammónium-klorid hozzaadasa után, éjszakán át 0 °C—on tartjuk. Másnap az elegyet be— pároljuk, a párlási maradékot etil-acetát és víz között megoszlatjuk, azután az egyesített szerves oldószeres extraktumot kétszer telített nátrium—hidrogén—karbonát—oldattál, foszforsavol— dattal és telített natrium—klorid—oldattal mossuk, nátrium— —szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Ά nyersterméket kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítjuk, 2,5% metanolt és 97,5% metilén-dikloridot tartalmazó oldószereleggyel eluálva az oszlopot, így 1,95 g (6.2) képletű vegyületet kapunk.
Tömegspektrum: MH+ = 251,1.
B lépés: (6.3) képletű vegyület
12,32 g (49,28 mmol), a fenti A lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 270 ml (43,08 mmol) 4 M dioxános hidrogén-klorid—oldatban, majd 2 órányi szobahőmérsékleten folytatott kevertetés után az elegyet szárazra pároljuk. Az így kapott (6.3) képletű vegyület tömege 8,40 g, a kitermelés 100%.
75.841/BE
C lépés: (1.08) képletű vegyület (szintézisváltozat)
OH (6.4) (6.5)
16,5 g (0,16 mól) 1-nitro-bután és 28,1 g (0,305 mól) glioxilsav—víz (1/1) 122 ml metanollal készített oldatához 0 °C és —5 C közötti hőmérsékleten, keverés közben, cseppenként, mintegy 2 óra alatt 93 ml (0,667 mól) trietil-amint adunk. A reakcióelegyet ezután hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, éjszakán át keverjük, majd másnap szárazra pároljuk. A visszamaradó olajat vízzel elkeverjük, 10%-os sósavval 1-es pH-ra savanyítjuk, és a vizes keveréket etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves oldószeres extraktumot telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, és az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (6.5) képletű vegyület tömege 28,1 g, a kitermelés 99%.
D lépés: (6.6) képletű vegyület
(6.5) (6.6)
240 g (1,35 mmol), a fenti C lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 1250 ml ecetsavban, keverés közben 37 g 10%-os csontszenes palládiumkatalizátort adunk az oldathoz, majd az elegyet 3 óra hosszáig 4,07 bar, és éjszakán át 4,13 bar
75.841/BE ♦ · * · ·♦ « ^9 ft nyomáson hidrogénezzük. Ezt követően az ecetsavat elpárologtatjuk, a párlási maradékot toluollal háromszor azeotrop desztillációnak vetjük alá, azután metanollal és dietil-éterrel eldörzsoljuk. Az oldatot előbb megszűrjük, és kétszer ismét toluollal végzünk azeotrop desztillációt, így megkapjuk a (6.6) képletű vegyületet. A termék tömege 131 g, a kitermelés 66%.
E lépés: (1.08) képletű vegyület
2,0 g (0,0136 mol), a fenti D lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 10 ml dioxán és 5 ml víz elegyében, keverés közben, 0 °C-on hozzáadunk 4,3 ml (0,014 mol) 1 M vizes nátrium-hidroxid-oldatot, és 10 percnyi kevertetés után beadagolunk 0,11 g (0,014 mól) di(terc-butil)-dikarbonátot. Még 15 percig 0 °C-on keverjük az elegyet, azután hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, folytatjuk a kevertetést további 45 percig, majd éjszakára hűtőszekrénybe tesszük. Másnap az oldószert elpárologtatjuk, a visszamaradó nyersterméket feloldjuk etil-acetát-ban, jeget adunk hozzá, és beadagoljuk 3,36 g kálium-hidrogén-szulfát 32 ml vízzel készített oldatát. 4-6 percnyi kevertetés után a szerves fázist elválasztjuk, a vizes részt még kétszer etil-acetáttal extraháljuk, majd az egyesített szerves oldószeres extraktumot vízzel és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük és szárazra pároljuk. Az így kapott (1.08) képletű vegyület tömege 3,0 g, a kitermelés 89,2%. 75.841/BE
ΊΟ & lépés: (1.08) képletű vegyület
3,0 g (0,012 mol), a fenti E lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 15 ml N,N-dimetil-formamid és 15 ml metilén-diklorid elegyében, azután az oldathoz -20 °C-on, keverés közben 1,97 g (0,012 mól) 1-hidroxi-benzo-triazolt, 4,0 ml (0,036 mól) N-metil-morfolint és 2,79 g (0,0145 mol) 1-[3- (dimetil-ammo) -propil] -3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adunk. A reakcióelegyet 10 percig keverjük, utána beadagolunk 2,56 g (0,013 mól) glicin-benzil-észter-hidrokloridot (Gly-OBz-HCl), majd 2 óra hoszszáig -20 °C-on folytatjuk a kevertetést. Éjszakára hűtőszekrényben helyezzük el az elegyet, másnap szárazra pároljuk, azután a párlási maradékot felvesszük etil-acetátban, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, a szerves fázist nátrium-szulfáton szántjuk, szűrjük, és az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (1.09) képletű vegyület tömege 4,5 g, a kitermelés 94%. Tömegspektrum: MH+ = 395,1.
® lépés: (6.9) képletű vegyület
75.841/BE
4,5 g (0,0114 mol), a fenti F lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 45 ml 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldatban, majd 45 percnyi szobahőmérsékleten folytatott kevertetes után az elegyet szárazra pároljuk. Az így kapott (6.9) képletű vegyület tömege 4,5 g.
Tömegspektrum: MH+ = 295,1.
® lépés: (6.11) képletű vegyin et
0,398 g (1,58 mmol) N-Boc-2-fenil-glicint (6.1) egy 100 ml-es gömblombikban feloldunk 5 ml metilén-diklorid és 5 ml N,N-dimetil-formamid elegyében, és keverés közben, -20 °C-on 0,258 g (1,58 mmol) 1-hidroxi-benzo-triazolt, 0, 364 g (1, 903 mmol) l-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 0,523 ml (4,759 mmol) N-metil-morfolint adunk az oldathoz. 5 percnyi kevertetés után beadagolunk 0,5 g (1,51 mmol), a fenti G lépésben leírtak szerint előállított vegyületet és 5 ml metilén-dikloridot, ezt követően még 10 percig -20 °C-on keverjük a reakcioelegyet, majd éjszakára fagyasztószekrénybe tesszük. Másnap szarazra pároljuk az elegyet, a párlási maradékot etil-acetát és telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, azután az egyesített szerves oldószeres extraktumot kétszer 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldat
75.841/BE tál mossuk, nátrium szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (6.11) képletű vegyület tömege 0,75 g, a kitermelés 94%.
Tömegspektrum: MH+ = 528,1.
J lépés: (6.12) képletű vegyület
0,75 g (1,423 mmol), a fenti H lépésben leírtak szerint előállított (6.11) képletű vegyületet feloldunk 21 ml 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldatban, és 3 órányi szobahőmérsékleten folytatott kevertetés után az elegyet szárazra pároljuk. Az így kapott (6.12) képletű vegyület tömege 0,68 g, a kitermelés 100%.
K lépés: (6.14) képletű vegyület
0,44 g (1,725 mmol) (6.13) képletű vegyületet feloldunk 5 ml metilén-diklorid és 5 ml N,N-dimetil-formamid elegyében, és keverés közben, -20 °C-on 0,39 g (2,07 mmol) 1-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot, 0,18 g (1,725 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt és 0,523 ml (4,76 mmol) N-metil-morfolint adunk az oldathoz. 5 percnyi kevertetés után beada
75.841/BE góljuk 0,68 g (1,64 nmol), a fenti J lépésben leírtak szerint előállított vegyület 5 ml metllén-dikloriddal készített oldatát, ezt követően még 10 percig -20 »c-on keverjük a reakcióelegyet, majd éjszakára fagyasztószekrénybe tesszük. Másnap szárazra pároljuk az elegyet, a párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, azután az egyesített szerves oldószeres extraktumot kétszer 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorld-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (6.14) képletű vegyület tömege 0,59 g, a kitermelés 54%.
Tömegspektrum: MH+ = 667,3.
2épés; (6.15) képletű vegyület
0,593 g (0,89 mmol), a fenti K lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 20 ml metilén-dikloridban, keverés közben 0,76 g (1,748 mmol) Dess-Martin-téle perjodinánt adunk az oldathoz, és szobahőmérsékleten folytatjuk a kevertetést 2 óra hosszáig. Ezt követően előbb vlz-metilén-diklorid elegyet, majd további 45 percnyi kevertetés után 10 ml, fele-fele arányban telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatból és nátrium-tioszulfát-oldatból álló vizes sóoldatot adunk a reakclóelegyhez. űjabb 1,5 óra elteltével metilén-dikloriddal hígítjuk meg a reakoiöelegyet, a szerves fázist elválasztjuk, telített nátrium-klorid75.841/BE
-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül szárazra pároljuk. A párlási maradékot kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítjuk, 2,5% metanolt és 97,5% metilén-dikloridot tartalmazó oldószereleggyel eluálva az oszlopot, így 0,48 g (6.15) képletű vegyületet kapunk, a kitermelés 82%.
M lépés: (6.16) képletű vegyület
(615) (6.16)
0,16 g (0,24 mmol), a fenti L lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 10 ml vízmentes etanolban, és az oldathoz keverés közben 40,8 mg csontszenes palládiumkatalizátort adunk. Az elegyet erőteljesen keverjük, 1 csepp ecetsavat adunk hozzá, azután hidrogéngáz atmoszférában folytatjuk a kevertetést 2 óra hosszáig. Ezt követően Celite-rétegen megszűrjük a reakcióelegyet, így megkapjuk a (6.16) képletű vegyületet. A termék tömege 0,133 g, a kitermelés 95%.
Tömegspektrum: MH+ = 575,3.
N lépés: (6.18) képletű vegyület
75.841/BE
0,5 g (1,59 mmol) (6.17) képletű vegyületet feloldunk 5 ml metilén-diklorid és 5 ml N,N-dimetil-formamid elegyében, és keverés közben, -20 °C-on 0,259 g (1,59 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt, 0,48 g (4,77 mmol) N-metil-morfolint és 0,366 g (1,91 mmol) 1-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adunk az oldathoz. 5 percnyi kevertetés után beadagolunk 0,5 g (1,51 mmol), a fenti G lépésben leírtak szerint előállított (6.9) képletű vegyületet és 5 ml metilén-dikloridot, ezt követően még 10 percig -20 °C-on keverjük a reakcióelegyet, majd éjszakára fagyasztószekrénybe tesszük. Másnap szárazra pároljuk az elegyet, a párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, azután az egyesített szerves oldószeres extraktumot 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium—klorid—oldattal kétszer mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (6.18) képletű vegyület tömege 0,95 g. Tömegspektrum: MH+ = 592,1.
O lépés: (6.19) képletű vegyület
(6-18) (6.19)
0,93 g (1,58 mmol), a fenti N lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 26 ml 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldatban, és 2 órányi szobahőmérsékleten folytatott kevertetés után az elegyet szárazra pároljuk. Az így kapott (6.19)
75.841/BE képletű vegyület tömege 0,96 g, a kitermelés 100%.
Tömegspektrum: MH+ = 492,1.
P lépés: (6.20) képletű vegyület
(6.13) (6.20)
0,51 g (2,02 mmol) (6.13) képletű vegyületet feloldunk 5 ml metilén-diklorid és 5 ml N,N-dimetil-formamid elegyében, és keverés közben, -20 °C-on 0,33 g (2,02 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt, 0,61 g (6,06 mmol) N-metil-morfolint és 0,46 g (2,42 mmol) 1-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adunk az oldathoz. 5 percnyi kevertetés után beadagolunk 0,94 g (1,92 mmol), a fenti 0 lépésben leírtak szerint előállított (6.19) képletű vegyületet, és ezt követően még 10 percig -20 °C-on keverjük a reakcióelegyet, majd éjszakán át hűtőszekrényben tároljuk. Másnap szárazra pároljuk az elegyet, a párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, azután az egyesített szerves oldószeres extraktumot 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (6.20) képletű vegyület tömege 1,29 g, a kitermelés 87%.
75.841/BE
Q lépés: (6.21) képletű vegyület
1,2Ί g (1,74 mmol), a fenti P lépésben leírtak szerint előállított (6.20) képletű vegyületet feloldunk 50 ml vízmentes etanolban, es az oldathoz keveres közben 100 mg csontszenes pa1ladiumkatalizatort adunk. Ezt követően erőteljesen keverjük az elegyet, két csepp ecetsavat adunk hozzá, utána 2 óra hosszáig hidrogénezzük, majd Celite-rétegen megszűrjük. Az így kapott (6.21) képletű vegyület tömege 1,07 g, a kitermelés 96%.
Tömegspektrum: MH+ = 641,1.
Λ lépés: (6.22) képletű vegyület
0,25 g (0,39 mmol) , a fenti Q lépésben leírtak szerint előállított (6.21) képletű vegyületet feloldunk 5 ml metiléndiklorid és 5 ml N,N—dimetil—formamid elegyében, és keverés közben, -25 C-on 0,06 g (0,39 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt, 0,12 g (1,17 mmol) N-metil-morfolint és 0,089 g (0,469 mmol) 175.841/BE
- [3- (dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adunk az oldathoz. 10 percnyi kevertetés után beadagolunk 0,069 g (0,37 mmol), a B lépésben leírtak szerint előállított (6.3) képletű vegyületet, és ezt követően még 15 percig -25 °C-on keverjük, éjszakán át hűtőszekrényben tartjuk, majd másnap szárazra pároljuk a reakcióelegyet. A párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, azután az egyesített szerves oldószeres extraktumot 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott termék a (6.22) képletű vegyület.
S lépés: (6.23) képletű vegyület
(6·22) (6 23)
0,23 g (0,302 mmol), a fenti R lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 10 ml metilén—dikloridban, keverés közben 0,256 g (0,60 mmol) Dess—Martin-féle perjodinánt adunk az oldathoz, és szobahőmérsékleten folytatjuk a kevertetést 2 óra hosszáig. Ezt követően előbb víz—metilén-diklorid elegyet, majd további 45 percnyi kevertetés után 10 ml, fele-fele arányban telített nátrium-hidrogén—karbonát-oldatból és nátrium—tioszulfátoldatból álló vizes sóoldatot adunk a reakcióelegyhez. Újabb 1,5 óra elteltével metilén-dikloriddal hígítjuk meg a reakcióelegyet, a szerves fázist elválasztjuk, telített nátrium-klorid75.841/BE oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül szárazra pároljuk. A párlási maradékot kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítjuk, 1-3% metanolt és 99-97% metilén-dikloridot tartalmazó oldószereleggyel eluálva az oszlopot, így 0,08 g (6.23) képletű vegyületet kapunk, a kitermelés 34%.
Tömegspektrum: MH+ = 771,2.
16. előkészületi példa:
A lépés: (7.2) képletű vegyület
0,467 g (1,51 mmol) (7.1) képletű vegyületet feloldunk 60 ml metilén-diklorid és 60 ml N,N-dimetil-formamid elegyében, és keverés közben, -20 °C-on 0,246 g (1,51 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt, 0,458 g (4,53 mmol) N-metil-morfolint és 0,351 g (1,51 mmol) 1-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adunk az oldathoz. 5 percnyi kevertetés után beadagolunk 0,5 g (1,51 mmol), a 15. előkészületi példa F lépésében leírtak szerint előállított (6.8) képletű vegyületet, és ezt követően még 3 óra hosszáig -20 °C-on keverjük, éjszakán át fagyasztószekrényben tartjuk, majd másnap szárazra pároljuk a reakcióelegyet. A párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, azután az egyesített szerves oldószeres ext75.841/BE raktumot kétszer 5%—os foszforsavoldattal, egyszer vízzel és egyszer telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (7.2) képletű vegyület tömege 0,82 g, a kitermelés 94%.
Tömegspektrum: MH+ = 592,1.
B lépés: (7.3) képletű vegyület
0,82 g (1,39 mmol), a fenti A lépésben leírtak szerint előállított (7.2) képletű vegyületet feloldunk 20 ml 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldatban, majd 2 órányi szobahőmérsékleten folytatott kevertetés után az elegyet szárazra pároljuk. Az így kapott (7.3) képletű vegyület tömege 0,84 g, a kitermelés 100%. Tömegspektrum: MH+ = 492,3.
C lépés: (7.4) képletű vegyület
0,36 g (1,40 mmol) (6.13) képletű vegyületet feloldunk 60 ml metilén-diklorid és 60 ml N,N-dimetil-formamid elegyében, és keverés közben, -20 °C-on 0,228 g (1,40 mmol) 1-hidroxi-benzotri75.841/BE ·♦ ··· ν « ·· « < -V φ · * azolt, 0,425 g (4,20 mmol) N-metil-morfolint és 0,322 g (1,68 mmol) 1-[3- (dimetil-amino) -propil] -3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adunk az oldathoz. 5 percnyi kevertetés után beadagolunk 0,84 g (1,40 mmol), a fenti B lépésben leírtak szerint előállított (7.3) képletű vegyületet, és ezt követően még 3 óra hosszáig -20 C-on keverjük, éjszakán át fagyasztószekrényben tartjuk, majd másnap szárazra pároljuk a reakcióelegyet. A párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, azután az egyesített szerves oldószeres extraktumot 5% os foszforsavoldattal, vízzel és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (7.4) képletű vegyület tömege 0,57 g, a kitermelés 57%.
Tömegspektrum: MH+ = 731,3.
D lépés: (7.5) képletű vegyület
0,55 g (0,75 mmol), a fenti C lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 5 ml metilén-dikloridban, keverés közben 0,64 g (1,50 mmol) Dess-Martin-féle perjodinánt adunk az oldathoz, és szobahőmérsékleten folytatjuk a kevertetést 2 óra hosszáig. Ezt követően előbb víz-metilén-diklorid elegyet, majd további 45 percnyi kevertetés után fele-fele arányban telített
75.841/BE
nátrium—hidrogén-karbonát-oldatból és nátrium-tioszulfát—oldatból álló vizes oldatot adunk a reakcióelegyhez. Újabb 1,5 óra elteltével metilén-dikloriddal hígítjuk meg a reakcióelegyet, a szerves fázist elválasztjuk, telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium—szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül szárazra pároljuk. Az így kapott (7.5) képletű vegyület tömege 0,24 g, a kitermelés 44%.
Tömegspektrum: MH+ = 729,5.
E lépés: (7.6) képletű vegyület
í7·5) (7.6)
0,10 g (0,14 mmol), a fenti D lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 20 ml vízmentes etanolban, és keverés közben 20 mg csontszenes palládiumkatalizátort adunk az oldathoz. Ezt követően egy 100 ml-es gömblombikban erőteljesen keverjük az elegyet, miközben hidrogéngázzal átöblítjük a lombikot, majd éjszakán át hidrogéngáz atmoszférában folytatjuk a kevertetést. Másnap Celite-rétegen megszűrjük a reakcióelegyet, a szűrőt etanollal mossuk, azután az oldatot szárazra pároljuk, így 93 mg (7.6) képletű vegyületet kapunk, a kitermelés 100%. Tömegspektrum: MH+ = 639,1.
75.841/BE
17. előkészületi példa:
R= benzil (8.2)
R= H (8-3)
Lényegében azonos módon járunk el, mint ahogyan azt a 16.
előkészületi példa A-E lépéseinél megadtuk, azonban itt az A lé pésben a (7.1) képletű vegyület helyett a (8.1) képletű vegyületet reagáltatjuk, így a (8.2) és (8.3) képletű vegyületeket kapjuk.
18. előkészületi példa:
A lépés: (7.2) képletű vegyület
15,0 g (0,099 mol) (S)-(+)-2-fenil-glicint feloldunk 350 ml benzolban, keverés közben 20,76 g (0,116 mól) 4-toluolszulfonsav-víz (1/1) reagenst és 30 ml (0,29 mól) benzil-alkoholt adunk az oldathoz, azután a reakcióelegyet éjszakán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk. Az így keletkezett szuszpenziót másnap szobahőmérsékletre hűtjük, dietil-étert adunk hozzá, majd a szilárd csapadékot zsugorított üvegszűrőn kiszűrjük, dietil-éterrel kétszer mossuk, és nitrogéngáz atmoszférában megszárítjuk. A szi75.841/BE
lárd terméket, amelynek a tömege 35,4 g, feloldjuk metilén-dikloridban, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal összerázzuk, azután az egyesített szerves oldószeres fázist szárazra pároljuk, aminek eredményeképpen 18,1 g szabad amin marad vissza, a kitermelés 75,7%. A szabad amint dietil-éterben oldjuk fel, hidrogén-klorid-gázt buborékoltatunk át az oldaton, és a levált fehér csapadékot szűrőre gyűjtjük, dietil-éterrel mossuk, végül vákuumban megszárítjuk. Az így kapott (9.2) képletű vegyület tömege 15,2 g.
B lépés: (9.4) képletű vegyület
11,35 g (0,0648 mól) N-Boc-glicint (9.3) feloldunk 100 ml vízmentes N,N-dimetil-formamid és 100 ml vízmentes metilén-diklorid elegyében. Az oldathoz keverés közben, -20 °C-on 10,5 g (0,065 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, 13,6 g (0,0712 mol) l-[3- (dimetil-amino) -propil] -3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 21,3 ml (0,194 mól) N-metil-morfolint adunk, azután még 10 percig -20 °C-on keverjük az elegyet. Ezt követően beadagolunk 18,0 g (0,065 mol), a fenti A lépésben leírtak szerint előállított (9.2) képletű vegyületet, 45 percig -20 °C-on folytatjuk a kevertetést, és a reakcióelegyet éjszakára fagyasztószekrénybe tesszük. Másnap az elegyet szárazra pároljuk, a párlási maradékot etil-acetát és telített natrium—hidrogen—karbonát—oIdat között megoszlatjuk,
75.841/BE majd az egyesített szerves oldószeres extraktumot vízzel és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (9.4) képletű vegyület tömege 26,48 g, a kitermelés 100%.
Tömegspektrum: MH+ = 399,2.
C lépés: (9.5) képletű vegyület
(9·4) (9.5)
26,4 g (0,065 mol), a fenti B lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 100 ml 4 M dioxános hidrogén-klorid-oldatban, majd 1 órányi szobahőmérsékleten folytatott kevertetés után az elegyet szárazra pároljuk. Az így kapott (9.5) képletű vegyület tömege 22,69 g, a kitermelés 100%. Tömegspektrum: MH+ = 299,1.
D lépés: (9.6) képletű vegyület
15,5 g (0,0627 mol), a 15. előkészületi példa E lépésében leírtak szerint előállított (1.08) képletű vegyületet feloldunk 150 ml vízmentes N,N-dimetil—formamid és 150 ml vízmentes meti
75.841/BE lén-diklorid elegyében. Az oldathoz keverés közben, -20 °C-on 10,22 g (0,0626 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, 13,2 g (0,069 mól) 1- [3- (dimetil-amino) -propil] -3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 20, 67 g (0,188 mól) N-metil-morfolint adunk, azután még 10 percig -20 °C-on keverjük az elegyet. Ezt követően beadagolunk 21,0 g (0,063 mol), a fenti C lépésben leírtak szerint előállított (9.5) képletű vegyületet, utána 1 óra hosszáig -20 °C-on folytatjuk a kevertetést, és a reakcióelegyet éjszakán át fagyasztószekrényben tartjuk. Másnap az elegyet szárazra pároljuk, a párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, majd az egyesített szerves oldószeres extraktumot vízzel, 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (9.6) képletű vegyület tömege 30,3 g, a kitermelés 92%. Tömegspektrum: MH+ = 528,1.
E lépés: (9.7) képletű vegyület
(θ·6) (9.7)
Alapvetően a 18. előkészületi példa C lépésében megadottakkal azonos módon járunk el, így állítjuk elő (9.7) képletű vegyületet. A termék tömege 30,0 g, a kitermelés 100%. Tömegspektrum: MH+ = 428,1.
F lépés: (9.9) képletű vegyület
75.841/BE
θ,5 g (1,28 mmol), Boc-His(Z)-OH képletű vegyületet (9.8) feloldunk 5 ml N, N-dimetil-formamid és 5 ml metilén-diklorid elegyében, Az oldathoz keverés közben, -20 °C-on 0,209 g (1,28 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt, 0,27 g (1,41 mmol) 1-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 0,42 ml (3,85 mmol) N-metil-morfolint adunk, azután még 10 percig -20 °C-on keverjük az elegyet. Ezt követően beadagolunk 0,673 g (1,28 mmol), a fenti E lépésben leírtak szerint előállított (9.7) képletű vegyületet, és 2 óra hosszáig -20 °C-on folytatjuk a kevertetést. A reakcióelegyet éjszakán át fagyasztószekrényben tartjuk, másnap szárazra pároljuk, majd a párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk. Az egyesített szerves oldószeres extraktumot vízzel, 5%-os foszfor-savoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal rítjuk, szűrjük, végül az oldószert (9.9) képletű vegyület tömege 0,858 Tömegspektrum: MH+ = 799.
mossuk, nátrium-szulfáton száelpárologtatjuk. Az így kapott g, a kitermelés 84%.
G lépés: (9.11) képletű vegyület
(9.9) (9.11)
75.841/BE
Alapvetően a 18. előkészületi példa C lépésében megadottakkal azonos módon járunk el, így állítjuk elő (9.11) képletű vegyületet. A termék tömege 0,76 g, a kitermelés 100%. Tömegspektrum: MH+ = 699,2.
H lépés: (9.12) képletű vegyület
(9.11) (9.12)
0,263 g (1,026 mmol), N-Boc-2-ciklohexil-glicint feloldunk 5 ml N,N-dimetil-formamid és 5 ml metilén-diklorid elegyében, az oldathoz keverés közben, -20 °C-on 0,167 g (1,026 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt, 0,216 g (1,13 mmol) l-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 0,383 g (3,078 mmol) N-metil-morfolint adunk, azután még 10 percig -20 °C-on keverjük az elegyet. Ezt követően beadagolunk 0,754 g (1,03 mmol), a fenti G lépésben leírtak szerint előállított (9.11) képletű vegyületet, és 1 óra hosszáig -20 °C-on folytatjuk a kevertetést. A reakcióelegyet éjszakán át fagyasztószekrényben tartjuk, másnap szárazra pároljuk, majd a párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk. Az egyesített szerves oldószeres extraktumot vízzel, 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (9.12) képletű vegyület tömege 0,735 g. Tömegspektrum: MH+ = 938,4.
75.841/BE
I lépés: (9.13) képletű vegyület
0,367 g (0,377 mmol), a fenti H lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 10 ml metilén-dikloridban, keverés közben 0,32 g (0,75 mmol) Dess—Martin-féle perjodinánt adunk az oldathoz, és szobahőmérsékleten folytatjuk a kevertetést 2 óra hosszá ig. Ezt követően metilén-dikloridot, telített nátrium-tioszulfát-oldatot és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot adunk az elegyhez, majd további 1 órányi kevertetés után a szerves fázist elválasztjuk, vízzel és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül szárazra pároljuk. Az így kapott nyersterméket, amelynek a tömege 340 mg, kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítjuk, előbb metilén-dikloriddal, majd 4% metanolt és metilén-dikloridot tartalmazó oldószereleggyel eluálva az oszlopot, így 150 mg (9.13) képletű vegyületet kapunk. Tömegspektrum: MH+ = 936,3.
J lépés: (9.14) képletű vegyület
75.841/BE
0,15 g (1,6 mmol), a fenti I lépésben leírtak szerint előállított (9.13) képletű vegyületet feloldunk 40 ml vízmentes etanolban, az oldathoz keverés közben 10%-os, 50 tömeg% vizet tartalmazó csontszenes palládiumkatalizátort adunk, azután a lombikot nitrogéngázzal átöblítjük. Ezt követően hidrogéngázzal töltött ballont helyezünk a lombikra, az elegyet 45 percig keverjük, majd Celite-rétegen megszűrjük, a szűrőt etanol és metilén-diklorid elegyével mossuk, és a szűrletet szárazra pároljuk. Az így kapott (9.14) képletű vegyület tömege 0,116 g. Tömegspektrum: MH+ = 712,2.
19. előkészületi példa:
A lépés: (10.2) képletű vegyület
(10.1) (10.2)
Egy 500 ml-es lombikba bemérünk 2,0 g (9,34 mmol) 3-(l-naftil)-L-alanint, felszuszpendáljuk 200 ml vízmentes etanolban, és száraz hidrogén-klorid-gázt (2 ml) vezetünk a szuszpenzióba, így a szilárd anyag teljes mennyisége oldatba megy. Az oldatot 45 perc alatt hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni, az oldószert elpárologtatjuk, majd a párlási maradékhoz 50 ml etanolt, 300 mg 10%-os csontszenes palládiumkatalizátort és 300 mg 5%-os csontszenes ródiumkatalizátort adunk. Az elegyet áttöltjük egy Parr-féle rázókészülékbe, 4,13 bar nyomáson hidrogénezzük, utána
75.841/BE
Celite-rétegen megszűrjük, a szűrőt etanollal mossuk, és a szűrletet szárazra pároljuk, így visszamarad a nyerstermék, amelynek a tömege 2,4 g.
Tömegspektrum: MH+ = 254,2.
A fenti nyersterméket feloldjuk metilén-dikloridban, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal összerázzuk, majd a szerves fázist bepároljuk, és a párlási maradékot kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítjuk, 5-20% etil-acetátot és metilén-dikloridot tartalmazó oldószereleggyel eluálva az oszlopot. Az így kapott (10.2) képletű vegyület tömege 0,65 g.
B lépés: (10.3) képletű vegyület
0,643 g (2,5 mmol) N-Boc-2-ciklohexil-glicint feloldunk 5 ml N,N-dimetil-formamid és 5 ml metilén-diklorid elegyében, az oldathoz keverés közben, -20 °C-on 0,407 g (2,5 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt, 0,527 g (2,75 mmol) 1-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 0,825 ml (7,5 mmol) N-metil-morfolint adunk, azután még 10 percig -20 °C-on keverjük az elegyet. Ezt követően 3 ml metilén-dikloriddal együtt beadagoljuk a fenti A lépésben leírtak szerint előállított (10.2) képletű vegyületet, és a reakcióelegyet éjszakán át fagyasztószekrényben tartjuk, majd másnap szárazra pároljuk. A párlási maradékot
75.841/BE etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, az egyesített szerves oldószeres extraktumot vízzel, 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (10.3) képletű vegyület tömege 1,12 g, a kitermelés 92%.
C lépés: (10.4) képletű vegyület
(10.3) (10.4)
1,1 g (2,25 mmol), a fenti B lépésben leírtak szerint előállított (10.3) képletű vegyületet feloldunk 30 ml metanol és 7,5 ml víz elegyében, és az oldathoz keverés közben 0,283 g (6,75 mmol) lítium-hidroxidot adunk. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, másnap 5%-os foszforsavoldatot adunk hozzá, ami csapadékképződéssel jár, majd a metanolt elpárologtatjuk. A vizes maradékot metilén-dikloriddal összerázzuk, azután a szerves fázist elválasztjuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. Az így kapott (10.4) képletű vegyület tömege 1,068 g, a kitermelés 100%. Tömegspektrum: MH+ = 459,1.
D lépés: (10.5) képletű vegyület
75.841/BE
(10.4) (10.5)
1,0 g (2,17 mmol), a fenti C lépésben leírtak szerint előállított (10.4) képletű vegyületet feloldunk 10 ml N,N-dimetil·-formamid és 10 ml metilén-diklorid elegyében, az oldathoz keverés közben 0,353 g (2,17 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt, 0,457 g (2,38 mmol) 1- [3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot és 0,715 ml (6,51 mmol) N-metil-morfolint adunk, azután még 10 percig -20 °C-on keverjük az elegyet. Ezt követően beadagolunk 1,13 g (2,17 mmol), a 18. előkészületi példa E lépésben leírtak szerint előállított (9.7) képletű vegyületet, és a reakcióelegyet 0,5 óra hosszáig -20 °C-on keveredni hagyjuk, éjszakán át fagyasztószekrényben tartjuk, majd másnap szárazra pároljuk. A párlási maradékot etil-acetát és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk, az egyesített szerves oldószeres extraktumot vízzel, 5%-os foszforsavoldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott (10.5) képletű vegyület tömege 1,8 g. Tömegspektrum: M-Na = 890,4.
E lépés: (10.6) képletű vegyület
75.841/BE
1,8 g (2,07 mmol), a fenti D lépésben leírtak szerint előállított vegyületet feloldunk 40 ml vízmentes metilén-dikloridban., keverés közben 1,76 g (4,15 mmol) Dess—Martin-féle perjodinánt adunk az oldathoz, és szobahőmérsékleten folytatjuk a kevertetést 1 óra hosszáig. Ezt követően 1,5 óra alatt, cseppenként 40 ml vízmentes metilén-dikloridot és 0,074 ml vizet, majd további 2 órányi kevertetés után 40 ml, fele-fele arányban telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatból és telített nátrium-tioszulfát-oldatból álló vizes sóoldatot adunk az elegyhez. Újabb 0,5 óra hosszat erőteljesen keverjük a reakcióelegyet, majd a szerves fázist elválasztjuk, vízzel mossuk, végül szárazra pároljuk. A visszamaradó nyersterméket kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítjuk, 2-3% metanolt és metilén-dikloridot tartalmazó oldószereleggyel eluálva az oszlopot, így 0,95 g (10.6) képletű vegyületet kapunk.
Tömegspektrum: MH+ = 866,2.
F lépés: (10. 7) képletű vegyület (10.6) (10.7)
Lényegében a 18. előkészületi példa K lépésében megadottakkal azonos módon eljárva állítjuk elő a (10.7) képletű vegyületet.
A 2. táblázatban felsorolt vegyületeket, amelyek példaként szolgának a találmány szerinti vegyületekre, úgy állítjuk elő, hogy a fenti előkészületi példákban leírtak szerint kapott, illetve a kereskedelemből beszerezhető vagy a szakirodalomból ismert α-aminosavakat szükség szerint különféle módon kombinálva,
75.841/BE a kapcsolást az 1. előkészületi példa A lépésében és a 2. előkészületi példa F lépésében leírtak szerint; a védőcsoportként használt észteresítőcsoportok eltávolítását az 1. előkészületi példa B lépésében, az 1. előkészületi példa F lépésében, a 2. előkészületi példa D lépésében és a 4. előkészületi példa J lépésében leírtak szerint; az amin-védőcsoportok eltávolítását a 2. előkészületi példa E lépésében és a 4. előkészületi példa J lépésében leírtak szerint; és a hidroxiamidok ketoamiddá oxidálását a 4. előkészületi példa H lépésében leírtak szerint végezzük.
Szilárd fázisú szintézis:
Általánost eljárás a komponensek szilárd fázisú összekapcsolására.
A szintézis kivitelezéséhez használt reakcióedény egy polipropilén fecskendő, amelyet úgy alakítottunk át, hogy az aljába zsugorított üvegszűrőt helyeztünk el. A [(9-fluorenil)-metoxi] -karbonil-csoporttal védett (Fmoc-védett) aminosav kapcsolásához a standard szilárd fázisú eljárást alkalmazzuk. Minden egyes reakcióedénybe bemérünk 100 mg (hozzávetőleg 0,035 mmol) Fmoc— -Sieber-gyantát, ezt kétszer 2 ml N,N-dimetil-formamiddal mossuk, azután a [(9-fluorenil)-metoxi]-karbonil-csoport lehasítása végett 2 ml, N,N-dimetil-formamiddal készített, 20 térfogat%-os piperidinoldattal 20 percig reagáltatjuk. Ezt követően a gyantát négyszer 2 ml N,N-dimetil-formamiddal mossuk, majd hozzáadunk 2 ml N,N-dimetil-formamidot, 0,12 mmol Fmoc-aminosavat, 0,12 mmol 0-(7-aza-benzotriazol-l-il)-Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametil-urónium-[hexafluoro-foszfát]-ot és 0,24 mmol N,N-diizopropil-etil-amint. 2 óráig rázatjuk a reakcióelegyet, utána a folyadékot leszívatjuk, és a gyantát ezúttal is négyszer 2 ml N,N-dimetil-formamiddal mossuk. Ezt a kapcsolási műveletet ezután megismételjük a következő Fmoc-aminosavval vagy a végcsoportnak megfelelő vegyülettel.
75.841/BE
Általános eljárás szilárd fázisú Dess—Martin-oxidációra
Az oxidáció kivitelezéséhez használt reakcióedény egy polipropilén fecskendő, amelyet úgy alakítottunk át, hogy az aljába zsugorított üvegszűrőt helyeztünk el. A hozzávetőleg 0,035 mmol, gyantához kötött hidroxi-vegyülethez 0,14 mmol Dess—Martin-féle perjodinán és 0,14 mmol terc-butil-alkohol 2 ml metilén-dikloriddal készített oldatát adjuk, majd 4 órányi reagáltatás után a gyantát a következő mosófolyadékokkal mossuk: 2 ml, 20 térfogat% izopropil-alkoholt tartalmazó metilén-diklorid, 2 ml tetrahidrofurán, négyszer 2 ml 50 térfogat%-os tetrahidrofurán-víz elegy, négyszer 2 ml tetrahidrofurán és négyszer 2 ml metilén-diklorid.
20. előkészületi példa:
N-Fmoc-2-(2,3-dimetoxi-fenil)-glicin [(901) képletű vegyület] előállítása
(901A) (901B) (901C)
FmocOSu vizes Na2CO3
HO
OMe (901)
75.841/BE
1,465 g (22,5 mmol) kálium-cianidot és 5,045 g (52,5 mmol) ammonium-karbonátot feloldunk 15 ml vízben, hozzáadjuk 2,5 g (15 mmol) 2,3-dimetoxi-benzaldehid (901A) 15 ml etanollal készített oldatát, és az elegyet 24 óra hosszáig 40 °C-on reagálhatjuk. Ezt követően vákuumban mintegy 10 ml-re betöményítjük a reakcióelegyet, majd hozzáadunk 15 ml tömény sósavat, aminek eredményeképpen fehér csapadék formájában leválik a (901B) képletű vegyület. A csapadékot kiszűrjük, és az így kapott 2,2 g (9,3 mmol) (901B) képletű vegyületet feloldjuk 15 ml 10 tömeg%os, vizes nátrium-hidroxid-oldatban. 24 órányi visszafolyató hűtő alatt folytatott forralás után a pH-t tömény sósavval 7-re állítjuk, és az oldatot, amely a (901C) képletű vegyületet tartalmazza, vákuumban bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk 150 ml 5 tömeg%-os, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban, az oldatot jégfürdővel 0 °C-ra hűtjük, majd 0 °C-on hozzáadunk 30 ml 1,4-dioxánt, továbbá 30 ml 1,4-dioxánban oldva 2,7 g (8 mmol) [ ( 9-fluorenil)-metil]-szukcinimidil-karbonátot. A reakcióelegyet hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük, azután az 1,4-dioxánt vákuumban elpárologtatjuk. A vizes oldatot dietil-éterrel összerázzuk, majd a vizes fázist elválasztjuk, tömény sósavval 1-es pH-ra savanyítjuk, etil-ace-táttal extraháljuk, és a szerves oldószeres extraktumot vízzel és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, izzított nátrium-szulfáton szárítjuk, végül vákuumban bepároljuk. Az így kapott 3,44 g (7,9 mmol) habos, szilárd anyag a várt (901) képletű vegyület. Tömegspektrum (LCMS-ES): 434,1 (MH+) .
21. előkészületi példa:
(801) képletű vegyület
75.841/BE
g (12,9 mmol) N-Fmoc-fenilalanint (801A) feloldunk 22 ml vízmentes metilén-dikloridban, az oldatot acetonos szárazjégfürdővel lehűtjük -30 °C-ra, majd egymás után beadagolunk 1,96 ml (16,1 mmol) N-metil-pirrolidint és 1,2 ml (15,5 mmol) metil-(klór-formiát)-ot. A reakcióelegyet 1 óra hosszáig -30 °C-on keverjük, azután hozzáadjuk 1,51 g (15,5 mmol) N, O-dimetil-hidroxil-ammónium-klorid és 1,96 ml (16,1 mmol) N-metil-pirrolidin 8 ml vízmentes metilén-dikloriddal készített oldatát. Ezt követően hagyjuk az elegyet szobahőmérsékletre melegedni, és éjszakán át szobahőmérsékleten folytatjuk a kevertetést. Másnap toluolt adunk a reakcióelegyhez, a szerves fázist híg sósavval, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, izzított nátrium-szulfáton szárítjuk, végül vákuumban bepároljuk. Az így kapott (801B) képletű vegyület tömege 4 g (9,29 mmol).
6,28 ml (21,4 mmol) Red-Al reagens 8 ml vízmentes toluollal készített oldatát acetonos szárazjégfürdővel -20 °C-ra hűtjük, azután 12 ml vízmentes toluolban oldva hozzáadunk 4 g (9,29 mmol) (801B) képletű vegyületet. A reakcióelegyet 1,5 óra hoszszáig -20 °C-on keverjük, majd egymást követően híg sósavval, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített nátrium-klorid-oldattal összerázzuk. A szerves fázist izzított nátrium-szulfáton
75.841/BE szárítjuk, és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, így nyerstermékként visszamarad a (801C) képletű vegyület, ezt minden további tisztítás nélkül felhasználjuk a következő reakciólépéshez.
A fent leírtak szerint kapott (801C) képletű vegyületet (hozzávetőleg 9,29 mmol) feloldjuk 15 ml hexánban, azután az oldathoz 4 ml vízben oldva 24 mg (0,37 mmol) kálium-cianidot és 34 mg (0,092 mmol) tetrabutil-ammónium-jodidot, valamint 1,27 ml (13,9 mmol) 2-hidroxi-izobutironitrilt adunk. A reakcióelegyet 24 óra hosszáig szobahőmérsékleten keverjük, majd etil-acetátot adunk hozzá, a szerves fázist vízzel és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, izzított nátrium-szulfáton szárítjuk, végül vákuumban bepároljuk. Az így kapott termék a (801D) képletű vegyület, a tömege 2,4 g (6,03 mmol).
2,4 g (6,03 mmol) (801D) képletű vegyületet feloldunk 11 ml 1,4-dioxánban, hozzáadunk 11 ml tömény sósavat, és az elegyet 3 óra hosszáig 80 °C-on reagálhatjuk. Ezt követően 25 ml etil-acetát és 25 ml víz között megoszlatjuk reakcióelegyet, majd a szerves fázist telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, izzított nátrium-szulfáton szárítjuk, és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. Az így kapott 2 g (4,8 mmol) habos, szilárd anyag a várt (801) képletű vegyület. Tömegspektrum (LCMS-ES): 418,1 (MH+) .
101J. példa:
(101J) képletű vegyület (5. reakcióvázlat)
75.841/BE
100
75.841/BE
101
A (101B), (101C), (101D), (101E), (101F) és (101G) képletű vegyületeket 100 mg (0,035 mmol) Fmoc-Sieber-gyantából kiindulva, a szilárd fázisú kapcsolásra megadott általános eljárást követve állítjuk elő. A gyantához kötött (101G) képletű vegyületet a szilárd fázisú Dess—Martin-reakció kivitelezésére megadott általános eljárás szerint oxidáljuk, majd az igy kapott terméket, a gyantához kötött (101H) képletű vegyületet 4 ml, 2 térfogat% trifluor-ecetsavat tartalmazó metilén-dikloriddal reagáltatjuk 5 percig. A szűrletet 1 ml ecetsavhoz adjuk, azután az oldatot vákuumcentrifugálással betöményitjük, így 0,011 g (101J) képletű vegyületet kapunk, a kitermelés 45%.
Tömegspektrum (LCMS-ES): 703,2 (MH+) .
Az előzőekben részletesen ismertetett szilárd fázisú szintézismódszerrel állítottuk elő a
általános képletű vegyületeket, amely képletben az egyes szerkezeti elemek a következő képletekkel ábrázolt csoportokat jelentik:
-X jelentése:
75.841/BE
102
75.841/BE
103
νο2 ο
75.841/BE
75.Θ41/ΒΕ
75.841/BE
75.841/BE
-X1 jelentése:
75.841/BE
108
—pla és —ρ^3 egyike hidrogénatomot
P1' jelentése:
jelent, és a másik jelentése:
H CH3
-Z- jelentése:
O
* —P jelentése:
75.841/BE t
109
τζ
75.841/BE
110
Ill
A fent ismertetett eljárásokat követve állítjuk elő azokat a vegyületeket, amelyek szerkezetet az aktivitás szerinti besorolásukkal együtt a 3. táblázatban adjuk meg.
Az előállított vegyületek közül továbbiakat mutatunk be a 4. táblázatban, és ugyanott közöljük a vegyületek aktivitási adatait is.
A következő részben a 4. táblázatban felsorolt vegyületek szilárd hordozón végzett szintézisére használható általános eljárásokat ismertetjük.
A szilárd fázisú szintézis a találmány szerinti vegyületek kis mennyiségeinek előállítására használható. Ugyanúgy, mint a hagyományos szilárd fázisú peptidszintézisek esetében, a peptidil-ketoamidok szilárd fázisú szintéziséhez is olyan reaktorokat használhatunk, amelyekben legalább egy, az oldószert és az oldott reagenseket áteresztő, de a szintézishez megfelelő méretű gyantát visszatartó szűrőréteget található. Ilyen reaktorok készülnek üvegből, zsugorított üvegszűrővel ellátva, de használhatunk szűrőbetéttel (frittel) felszerelt polipropilén csövet vagy oszlopot, továbbá az Irori Inc. (San Diego CA) által gyártott Kans™-féle reaktort. A reaktor típusát a szükséges szilárd gyanta mennyiségétől függően választjuk ki, és a szintézis különböző lépéseihez különböző típusú reaktorokat használhatunk. Az itt ismertetendő eljárásokra később, a példákban fogunk hivatkozni.
A eljárás: kapcsolási reakció
Ά gyantát N-metil-pirrolidonban (NMP) szuszpendáljuk fel, 1 g gyantára mintegy 10-15 ml oldószert számítva, majd a szuszpenzióhoz 2 ekvivalens N-Fmoc- vagy N-Boc-aminosavat, 2 ekvivalens 75.841/BE
112 l-hidroxi-7-aza-benzotriazolt, 2 ekvivalens 0-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',Ν'-tetrametil-urónium-[hexafluoro-foszfát]-ot és 4 ekvivalens N,N-diizopropil-etil-amint adunk. Az elegyet 4-48 óra hosszáig reagálhatjuk, azután a reaktánsokat leszívatjuk, és a gyantát egymást követően N,N-dimetil-formamiddal, metilén-dikloriddal, metanollal, metilén-dikloriddal es dietil—éterrel mossuk, 1 g gyantára itt is minden esetben 10-15 ml oldószert számítva. A gyantát végül vákuumban megszárítjuk.
B eljárás: védőcsoport (Emac) eltávolítása
A Fmoc-védett gyantát 20% piperidint tartalmazó N,N-dimetil-formamiddal (10 ml reagens/g gyanta) reagáltatjuk 30 percig, azután az oldatot leszívatjuk, és a gyantát egymást követően N,N-dimetil-formamiddal, metilén-dikloriddal, metanollal, metilén-dikloriddal és dietil-éterrel mossuk, 1 g gyantára minden esetben 10 ml oldószert számítva.
C eljárás: védőcsoport (Boc) eltávolítása
A Boc-védett gyantát metilén-diklorid és trifluor-ecetsav 1:1 arányú elegyével (10 ml oldószer/g gyanta) reagáltatjuk 20—60 percig, azutan az oldatot leszivatjuk, es a gyantát egymást követően metilén-dikloriddal, N,N-dimetil-formamiddal, 5% n,N-diizopropil-etil-amint tartalmazó N, N-dimetil-formamiddal, N,N-dimetil-formamiddal, metilén-dikloriddal és N,N-dimetil-formamiddal mossuk, 1 g gyantára minden esetben 10 ml oldószert számítva .
D eljárás: szemikarbazon-hídrolízís
A gyantát felszuszpendáljuk a hasítási koktélban (10 ml/g gyanta), amely trifluor-ecetsav, piroszőlősav, metilén-diklorid 75.841/BE
113 és víz 9:2:2:1 arányú elegye, azután 2 óra hosszáig reagálhatjuk az elegyet. Ezt követően a reaktánsokat leszívatjuk, a műveletet még háromszor megismételjük, majd a gyantát egymás után metilén-dikloriddal, vízzel és metilén-dikloriddal mossuk, végül vákuumban megszárítjuk.
E eljárás: hidrogén-fluoridős hasítás mg megszárított peptid-nVal(CO)-G-O-PAM-gyantát egy kis keverőpálcával ellátott hidrogén-fluoridos reakcióedénybe helyezünk el, és gyökfogóként hozzáadunk a teljes térfogatra számított 10% anizolt. Olyan esetben, amikor glutaminsav és cisztein van jelen, 10% tioanizolt és 0,2% 1,2-etánditiolt is adunk a reakcióelegyhez. A hidrogén-fluoridos reakcióedényt ezután rákapcsoljuk a hidrogén-fluorid-készülékre (Immuno Dynamics), a rendszert 5 percig nitrogéngázzal öblítjük át, és a reakcióedényt izopropil-alkoholos szárazjégfürdővel -70 °C-ra hűtjük. 20 perc múlva 1 g gyantára számítva 10 ml hidrogén-fluoridot desztillálunk az edénybe, azután 1,5 óra hosszáig 0 °C-on reagálhatjuk az elegyet. A feldolgozás abból áll, hogy a hidrogén-fluorid teljes mennyiségét nitrogéngázzal kihajtjuk a rendszerből, a gyantához metilén-dikloridot adunk, és az elegyet 5 percig keveredni hagyjuk. Ezt követően 4 ml 20%-os, vizes ecetsavat adunk az elegyhez, 20 perccel később a gyantát zsugorított üvegszűrőn kiszűrjük, és a metilén-dikloridot vákuumban elpárologtatjuk. A párlási maradékot a gyökfogóként alkalmazott anizol eltávolítása végett hexánnal háromszor mossuk, közben a gyantát 1 ml metanolban áztatjuk. A 20% ecetsavat tartalmazó vizes szűrletet visszavisz— szűk a gyantára, a szuszpenziót 5 percig keverjük, azután ismét 75.841/BE
114 szűrjük, vákuumban elpárologtatjuk a metanolt, és a vizes részt liofilizáljuk. A peptidet ezt követően 10-25%-os, 0,1% trifluor—ecetsavat tartalmazó metanolban oldjuk fel, és fordított fázisú nagynyomású-folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk.
A következőkben előbb a köztitermékek szintézisét tárgyaljuk.
I. példa:
N-Boc-3- ( alkil-szülfinil)-alaain előállítása
O
800 mg (20 mmol) 60%-os, olajban diszpergált nátrium-hidridet hexánnal lemosunk, a hexánnal mosott hidridet 30 ml tetrahidrofuránban felszuszpendáljuk, és 0 °C-on, mintegy 10 perc alatt 20 mmol merkaptovegyületet (R = fenil; R = 1-naftil; R = 2-naftil; R = fenetil; vagy R = etil) adunk hozzá. A hűtőfürdőt eltávolítjuk, 10 percig keveredni hagyjuk az elegyet, majd beadagolunk 3,74 g (20 mmol) (S)-2-(Boc-amino)-propiolaktont [lásd Synthetic Communications 25(16), 2475-2482 (1995)]. Közben jégfürdővel hűtjük az elegyet, hogy a hőmérséklet ne emelkedjék 30 C fölé. A reakcióelegyet 16 óra hosszáig szobahőmérsékleten keverjük, utána bepároljuk, és a párlási maradékot feloldjuk 200 ml 1 M vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldat és 40 ml 1 M sósav keverékében. A vizes keveréket kétszer 200 ml metilén-dikloriddal extraháljuk, majd az egyesített szerves oldószeres extraktu—
75.841/BE
115 mot nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, és az oldószert elpárologtatjuk. A párlási maradékot feloldjuk 200 ml vízből, 40 ml metanolból és 5,5 g (40 mmol) kálium-karbonátból készített elegyben, az oldathoz szobahőmérsékleten, hűtés mellett, kis részletekben 13,0 g (21 mmol) Oxone márkanevű oxidálószert adunk, azután a reakcióelegyet 18 órán át keverjük. Ezt követően elpárologtatjuk a metanolt, a vizes oldatot 2 M kálium-hidrogén-szulfát-oldattal 1-es pH-ra savanyítjuk, kétszer 100 ml etil-acetáttal extraháljuk, majd a szerves oldószeres extraktumokat összeöntjük, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A visszamaradó nyersterméket fordított fázisú nagynyomású— folyadékkromatográ-fias eljárással tisztítjuk, és az így tisztított anyagot savas-bázisos extrakcióval tovább tisztítjuk, hogy a védőcsoportját elvesztett mellékterméktől megszabaduljunk. A végterméket N,N-diizopropil-etil-ammónium-só formájában tároljuk, így megakadályozzuk a további bomlást, azaz a védőcsoport lehasadását.
II. példa:
2-Izopropil-7-met±l-4-okténsav előállítása.
Ezt a köztiterméket a szakirodalomban közölt eljárást követve [lásd P.G.M. Wuts, A.R. Ritter, L.E. Pruit: J. Org. Chem. 57 6696-6700 (1952)] állítjuk elő.
III. példa:
75.841/BE
I
116
Emoc-nV- (dpsc) -Gly-OH előállítása.
NH-CH(Ph)2
1. lépés: Allil-(ízociano-acetát) előállítása
a) Izociano-ecetsav—káliwi-só előállítása
59,52 g (1,0 mol) kálium-hidroxid 1500 ml etanollal készített és jéggel hűtött oldatához cseppenként 96,6 ml (0,88 mól) etil—(izociano—acetát)—ot adunk, majd az elegyet lassan hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. Két óra múlva a levált csapadékot szűrőre gyűjtjük, és a kiszűrt anyagot néhányszor hideg etanollal mossuk. Az így kapott izociano-ecetsav-kálium-só vákuumban megszárítva aranybarna, szilárd anyag, a tömege 99,92 g, a kitermelés 91,8%.
b) Allil-(ízociano-acetát) előállítása
99,92 g (0,81 mol), a fenti a) pontban leírtak szerint kapott terméket feloldunk 810 ml acetonitrilben, az oldathoz 92 ml (1,05 mól) allil-bromidot adunk, és az elegyet 4 óra hosszáig visszafolyató hűtő alatt forraljuk. Az így keletkezett sötétbar
75.841/BE
117 na oldatot bepároljuk, a párlási maradékot feloldjuk 1500 ml dietil-éterben, háromszor 500 ml vízzel mossuk, majd a szerves fázist szárítjuk, szűrjük, és az oldószert elpárologtatjuk. A visszamaradó sötétbarna szirupot vákumdesztillációval tisztítjuk, és a 7 mmHg nyomáson 98 °C-on forró párlatot gyűjtjük össze. Az így kapott 78,92 g víztiszta olaj a címben megnevezett vegyület, a kitermelés 78%.
NMR-spektrum (CDC13, δ, ppm): 5,9 (m, 1H) ; 5,3 (m, 2H) ; 4,7 (d, 2H) ; 4,25 (s, 2H).
2-lépés: N-{ [ (9-Fluorenil) -metoxi] -karbonil} -norvalinal előállítása
Fmoc-HN >| O
a) N-{ [(9-Fluorenil) -metoxi] -karbonil} -L-norvalin-metil-
-észter [Fmoc-nVal-OMe] előállítása /V ,OH ___► Λ
Fmoc-HN γ Fmoc-HN
O O g (73,75 mmol), kereskedelmi áruként beszerezhető Fmoc-L-norvalín 469 ml vízmentes metanollal készített és jéggel hűtött oldatához 1 óra alatt 53,76 ml (737,5 mmol) szulfinil-kloridot adunk. A beadagolást követő 1 óra múlva a vékonyréteg-kromatográfiás analízis (etil-acetát; Rf = 0,85) azt mutatja, hogy a reakció teljessé vált. Ekkor az elegyet bepároljuk, a pár75.841/BE
118 lási maradékot feloldjuk etil-acetátban, háromszor 200 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és 200 ml telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd a szerves fázist szárítjuk, szűrjük, és az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott 26,03 g fehér, szilárd anyag az Fmoc-norVal-OMe, a kitermelés 100%. NMR-spektrum (CD3OD, δ, ppm): 7,7 (m, 2H) ; 7,6 (m, 2H) ; 7,4 (m,
2H) ; 7,3 (m, 2H); 4,3 (m, 2H) ; 4,1 (m, 2H); 3,7 (s, 3H) ; 1,7 (m,
1H); 1,6 (m, 1H); 1,4 (m, 2H) ; 0,95 (t, 3H) .
b) N-{ [(9-Fluorenil) -metoxi] -karbonil} -L-norvalinol [Fmoa-
-norvalinol] előállítása
26,03 g (73,75 mmol) Fmoc-nVal—OMe, 123 ml tetrahidrofurán és 246 ml metanol elegyéhez előbb 16,37 g (147,49 mmol) kalcium-kloridot adunk, majd 0 °C-on, több részletben beadagolunk 11,16 g (294,98 mmol) nátrium-[tetrahidrido-borát]-ot. A keletkezett sűrű péphez 500 ml metanolt adunk, es az elegyet 90 percig szobahőmersekleten keverjük, amikor is a vékonyréteg—kromatográfiás vizsgálat (etil-acetát:hexán = 2:3; Rf = 0,25) azt jelzi, hogy a reakció teljessé vált. A reakcióelegyet ekkor 0 °C-on 100 ml víz lassú beadagolásával megbontjuk, a metanolt vákuumban elpárologtatjuk, és a visszamaradó vizes részt etil-acetáttal összerázzuk. Ezt követően a szerves fázist háromszor 500 ml vízzel, háromszor 500 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és 500 ml telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton szá
75.841/BE
119 rítjuk, szűrjük és bepároljuk. Az így kapott 21,70 g fehér, szilárd anyag a címben megnevezett vegyület, a kitermelés 90,5%.
NMR-spektrum (CD3OD, Ő, ppm) : 7,8 (m, 2H) ; 7,7 (m, 2H) ; 7,4 (m, 2H) ; 7,3 (m, 2H); 4,3-4,5 (m, 2H) ; 4,2 (m, 1H) ; 3,6 (s, 1H) ; 3,5 (s, 2H); 1,5 (m, 1H) ; 1,3-1,4 (m, 3H); 0,99 (m, 3H).
a) N~{ [ (9-Fluoreníl) -metoxi] -karboníl} -L-norvalínal [Finoc-
-nVal-CHO] előállítása
O
21,70 g (66,77 mmol) Fmoc-norvalinolt feloldunk 668 ml metilén-dikloridban, hozzáadunk 37,23 ml (267 mmol) trietil-amint, és az oldatot 0 °C-ra hűtjük. Ezt követően 42,51 g (267 mmol) pi~ ridin—kén-trioxid komplex 96 ml dimetil-szulfoxiddal készített szuszpenzióját adjuk a hűtött oldathoz, így 1 óra múlva a vékonyréteg-kromatográfiás analízis (etil-acetát:hexán = 2:3) azt mutatja, hogy a reakció teljessé vált. Ekkor a metilén-dikloridot vákuumban elpárologtatjuk, a párlási maradékot feloldjuk etil-acetátban, kétszer 50 ml vízzel, kétszer 50 ml 1 M telített nátrium-hidrogén-szulfát-oldattal, kétszer 50 ml telített, vizes natrium-hidrogén—karbonát—oldattal és 50 ml telített nátrium— -klorid-oldattal mossuk, majd a szerves fázist bepároljuk. A visszamaradó 21,57 g (100%) fehér, szilárd anyagot minden további tisztítás nélkül felhasználjuk a következő reakciólépéshez.
3. lépés: (Difenil-metil)-szemikarbazid (dpsc) trifluor-acetát-sójának előállítása
a) (l-Boc-4-szemikarbazido)-difeníl-metán előállítása
75.841/BE
120
16,2 g (0,10 mol) karbonil-diimidazolt feloldunk 225 ml N,N-dimetil-formamidban, és cseppenként, 30 perc alatt hozzáadjuk 13,2 g (0,100 mól) (terc-butil)-karbazát 225 ml N,N-dimetil-formamiddal készített oldatát. Ezt követően 30 perc alatt beadagolunk 18,3 g (0,10 mól) difenil-metil-amint, a reakcióelegyet 1 óra hosszáig szobahőmérsékleten hagyjuk keveredni, majd 10 ml vizet adunk hozza, és vákuumban mintegy 150 ml térfogatra betöményítjük. A párlási maradékot 500 ml vízre öntjük, a vizes keveréket 400 ml etil-acetáttal extraháljuk, azután a szerves oldószeres extraktumot 1 M sósav, víz, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat és telített nátrium-klorid-oldat kétszer 75 ml-es adagjaival mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, végül az oldószert elpárologtatjuk. A visszamaradó fe — hér hab tömege 29,5 g, a kitermelés 85%. Ezt a nyersterméket etil-acetát és hexán elegyéből átkristályosítva tisztíthatjuk, azonban így is elég tiszta ahhoz, hogy minden további tisztítás nélkül felhasználjuk a következő reakciólépéshez. A termék olvadáspontja: 142-143 °C.
1H-NMR-spektrum (CDC13, δ, ppm): 1,45 (s, 9H) ; 6,10 (dd, 2H) ; 6,42 (s, 1H) ; 6,67 (széles s, 1H) ; 7,21-7,31 (m, 10H) .
Az elemanalízis értékéi a CigH23N3O3 összegképletre: Sámított (%): C 66,84; H 6,79; N 12,31.
75.841/BE
121
Talált (%): C 66,46; H 6,75; N 12,90.
d) (Dífeníl-metíl)-szemíkarbazid (dpsc) trífluor-acetát-sójának előállítása
3,43 g (10 mmol) (l-Boc-4-szemikarbazido)-difenil-metánt feloldunk 12,5 ml metilén-dikloridban, az oldathoz 12,5 ml trifluor—ecetsavat adunk, és az elegyet 30 percig szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet cseppenként 75 ml dietil-éterhez adjuk, és a levált szilárd csapadékot kiszűrjük. Az igy kapott termék tömege 2,7 g, az olvadáspontja: 182-184 °C, a kitermelés 80%.
xH-NMR-spektrum (CD3OD, 5): 6,05 (s, 1H); 7,21-7,35 (m, 10H) . 13C-NMR-spektrum CD3OD, δ): 57,6; 118,3 (q, CF3) ; 126,7; 127,9; 141,6; 156,9; 160,9 (q, CF3CO2H) .
4. lépés: Fmoc-nVal-(CHOH)-Gly-Oallíl előállítása
5,^1 g (16,90 mmol), a fenti 2. lépésben leírtak szerint előállított Fmoc—nVal-CHO 170 ml metilén-dikloriddal készített oldatához 2,46 ml (20,28 mmol), a fenti 1. lépés b) pontjában megadottak szerint kapott allil-(izociano-acetát)-ot és 5,47 ml (67,61 mmol) piridint adunk. Az elegyet 0 °C-ra hűtjük, cseppenként beadagolunk 3,38 ml (33,80 mmol) trifluor-ecetsavat, és 75.841/BE
I
122 folytatjuk a kevertetést 0 °C-on 1 óra hosszáig, majd szobahőmérsékleten 48 órán át, amikor is a vékonyréteg-kromatográfiás analízis (etil-acetát) azt mutatja, hogy a reakció teljessé vált. A reakcióelegyet ekkor bepároljuk, a párlási maradékot flash-kromatográfiás eljárással tisztítjuk, 20-70% etil-acetátot és hexánt tartalmazó oldószereleggyel eluálva az oszlopot, azután a kívánt terméket tartalmazó frakciókat összeöntjük, és az oldószert elpárologtatjuk. Az így kapott 6,88 g fehér hab a címben megnevezett vegyület, a kitermelés 87,3%. A termék vékonyrétegkromatográfiás Rf-értéke: 0,37 (etil-acetát:hexán = 1:1), egyetlen folt detektálható.
NMR-spektrum (CD3OD, δ, ppm): 7,8 (m, 2H) ; 7,65 (m, 2H) ; 7,4 (m, 2H) ; 7,3 (m, 2H) ; 5,9 (m, 1H) ; 5,1-5,4 (m, 2H) ; 4,55-4,65 (m, 2H) ; 4,3-4,4 (m, 2H) ; 4,15-4,25 (m, 1H) ; 4,01 (s, 1H) ; 3,9-4,0 (m, 3H) ; 1,5-1,6 (m, 2H) ; 1,35-1,45 (m, 3H) ; 0,9 (m, 3H) .
5. lépés: Fmoc-nVal-(CO)-Gly-Oallil előállítása
dimetil-szulfoxid, toluol
5,01 g (10,77 mmol), a 4. lépésben leírtak szerint előállított Fmoc-nVal-(CHOH)-Gly-Oallil 100 ml dimetil-szulfoxid és 100 ml toluol elegyével készített oldatához 20,6 g (107,7 mmol) l-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adunk. A reakcióelegyet 0 °C-on keverjük, közben cseppenként beadagolunk 4,44 ml (53,83 mmol) diklór-ecetsavat, azután még 15 percig 0 °C-on, majd 1 óra hosszat szobahőmérsékleten folytatjuk a kevertetést. Ezt követően visszahűtjük az elegyet 0 °C-ra, 70 ml vizet adunk hozzá, és a toluolt vákuumban elpárologtatjuk. A vizes ma75.841/BE
123 radékot etil-acetáttal meghígítjuk, néhányszor telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, 1 M nátrium-hidrogén-szulf át-oldattal es telített natrium—klorid—oldattal mossuk, azután a szerves fázist nátrium—szulfáton szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A visszamaradó nyersterméket, amelynek a tömege 4,99 g, vagyis az elméletileg számítottal azonos, minden további tisztítás nélkül felhasználjuk a következő reakciólépéshez. A kapott termék vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke: 0,73 (etil-acetát:hexán = 1:1), egyetlen folt detektálható.
6. lépés: Emoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallil előállítása
4,99 g (10,75 mmol), a fenti 5. lépésben megadott módon előállított Fmoc-nVal-(CO)-Gly-Oallil 130 ml etanol és 42 ml víz elegyével készített oldatához sorjában 7,6 g (21,5 mmol), a 3. lépés b) pontjában leírtak szerint kapott (difenil-metil)—szemikarbazid-(trifluor—acetát)—sót és 1,76 g (12,9 mmol) nátrium-acetát—víz (1/3) reagenst adunk. A reakcióelegyet 90 percig visszafolyató hűtő alatt forraljuk, amikor is a vékonyréteg— —kromatográfiás analízis (etil—acetát:hexán = 1:1) azt mutatja, hogy a reakció teljessé vált, ezért az etanolt vákuumban elpárologtatjuk. A párlási maradékot feloldjuk etil-acetátban, kétszer 10 ml 1 M nátrium-hidrogén-szulfát-oldattal, kétszer 10 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és 10 ml telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd a szerves fázist szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A visszamaradó nyersterméket flash-kroma75.841/BE
124 tográfiás eljárással tisztítjuk, 20-50% etil-acetátot és hexánt tartalmazó oldószereleggyel eluálva az oszlopot. Az így kapott 5,76 g fehér, szilárd anyag a címben megnevezett vegyület, a kitermelés 78%. A termék vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke: 0,42 és 0,5 (etil-acetát: hexán = 1:1), a két folt cisz- és transz-izomerek jelenlétére utal.
4,53 g (6,59 mmol), a fenti 6. lépésben leírtak szerint előállított Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallil 300 ml tetrahidrofuránnal készített oldatához 4,62 g (32,97 mmol) dimedont és 0,76 g (0,66 mmol) [tetrakisz(trifenil-foszfin)-palládium (0) ] katalizátort adunk. 90 percnyi reagáltatás után a vékonyréteg-kromatográfiás analízis (metilén-diklorid:metanol = 9:1) azt mutatja, hogy a reakció teljessé vált, ekkor az elegyet bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk etil-acetátban, háromszor 50 ml 0,1 M kálium-dihidrogén-foszfát-oldattal mossuk, azután a szerves fázishoz 50 ml nátrium-hidrogén-szulfit-oldatot adunk, és a kétfázisú elegyet 15 percig keverjük. Ezt követően a két nem elegyedő fázist elválasztjuk, és a műveletet még kétszer megismételjük, végül a szerves fázist szárítjuk, az oldószert elpárologtatjuk, és a visszamaradó nyersterméket flash-kromatográfiás eljárással tisztítjuk, előbb 20-100% etil-acetátot és hexánt tartalmazó oldószereleggyel, majd metilén-diklorid és metanol 9:1 arányú
75.841/BE
125 elegyével eluálva az oszlopot. A megfelelő frakciókat összeöntjük és bepároljuk, így 3,99 g fehér, szilárd anyagot kapunk, a kitermelés 94%. A termék vékonyréteg-kromatográfiás analízise (metilén-diklorid:metanol = 9:1) során két folt jelenik meg, a cisz- és transz-izomerek jelenlétéből adódóan.
NMR-spektrum (CD3OD, δ, ppm): 7,75 (m, 2H) ; 7,6 (m, 3H) ; 7,2-7,4 (m, 14H) ; 6,1-6,2 (m, 1H) ; 4,25-4,4 (m, 2H) ; 4,1-4,2 (m, 2H) ;
3,85 (s, 2H); 1,6-1,8 (m, 2H) ; 1,3-1,5 (m, 2H); 0,95 (t, 3H).
IV. példa:
H-nVal (dpsc) -Gly-Phg-MBHA-gyanta előállítása
1. lépés: H-Phg-MBHA-gyanta előállítása
2,6 g (1,12 mmol/g; 2,91 mmol), kereskedelmi áruként beszerezhető MBHA-gyantát mérünk be egy 250 ml-es, zsugorított üvegszűrővel és nitrogéngáz bevezetésére szolgáló csonkkal ellátott,
75.841/BE
126 szilárd fázisú reakcióedénybe. A gyantát 30-30 ml metilén-dikloriddal, metanollal, N,N-dimetil-formamiddal és ismét metilén-dikloriddal mossuk, azután az A eljárást követve, 18 órányi reakcióidőt hagyva, összekapcsoljuk 2,17 g (5,82 mmol), a kereskedelemben kapható N-Fmoc-2-fenil-glicinnel (Fmoc-Phg-OH). A kapcsolás hatásfoka 99,82%. A gyantát ezután a B eljárás szerint reagáltatjuk, ilyen módon eltávolitva a Fmoc védőcsoportot. Egy kis mintát ninhidrines kvalitatív vizsgálatnak vetünk alá, amikor is a sötétkék gyanta és oldat azt jelzi, hogy a reakció sikeresen végbement.
2. lépés: H-nVal (dpsc) -Gly-Phg-MBHA-gyanta előállítása
2,6 g (0,8 mmol/g; 2,91 mmol), az 1. lépésben megadottak szerint kapott gyantát az A eljárást követve, 5,82 g (3,77 mmol), a III. példa 7. lépésében leírtak szerint előállított Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallil képletű vegyülettel reagáltatunk. 18 óra elteltével a kvantitatív ninhidrines analízis 99,91%-os kapcsolási hatásfokot mutat, ekkor a B eljárást követve eltávolítjuk a Fmoc védőcsoportot. Egy kis mintát ninhidrines kvalitatív vizsgálatnak vetünk alá, amikor is a sötétkék gyanta és oldat azt jelzi, hogy a reakció sikeresen végbement.
Az itt következő részben a hepatitis C inhibitorok tipikus szilárd fázisú szintézisére adunk meg példákat.
75.841/BE
127
V. példa:
(2, 5-Difluor-6-karboxi-benzoil) -G(Chx) -Leu-nVal (CO) -Gly-Phg-NH2 szilárd fázisú szintézise
1. lépés: Foioc-Leu-nVal (dpsc) -Gly-Phg-MBHA-gyanta előállítása
Egy zsugorított üvegszűrővel ellátott polipropilén csőbe bemérünk 1,5 g (1,12 mmol/g; 1,68 mmol), a IV. példa 2. lépésében leírtak szerint kapott H-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA-gyantát, és az
75.841/BE
128
A eljárást követve hozzákapcsolunk 890 mg (2,52 mmol) N-Fmoc-leucint (Fmoc-Leu-OH). 18 órányi reagáltatás után a kvalitatív ninhidrines analízis során a gyanta és az oldat színtelen maradt.
2. lépés: Fnioc-G (Chx)-Len-nVal (dpsa)-Gly-Phg-MBHA-gyanta elő áll! tása
A fenti 1. lépésben leírtak szerint kapott 1,68 mmol Fmoc-Leu-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA-gyantát a B eljárásnak vetjük alá, így hasítjuk le a Fmoc védőcsoportot, majd a kapott terméket az A eljárást követve, 0,956 g (0,252 mmol) kereskedelmi áruként beszerezhető N-Fmoc-2-ciklohexil-glicinnel [Fmoc-G(Chx)-OH] kapcsoljuk össze. 18 órányi reagáltatás után a kvantitatív ninhidrines analízis 98%-os kapcsolási hatásfokot jelez.
3. lépés: (2,5-dífluor-6-karboxi-benzoil)-G(Chx)-Leu-riVál (dpsc) -Gly-Phg-ΜΒΗΆ-gyanta előállítása
75.841/BE
129
A fenti 2. lépésben leírtak szerint kapott Fmoc-G(Chx)-Leu-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA-gyantát a B eljárásnak vetjük alá, így hasítjuk le a Fmoc védőcsoportot. Egy kis mintával elvégzett ninhidrines próba során a gyanta és az oldat sötétkék színe azt jelzi, hogy a reakció végbement. Ezt követően 150 mg (0,168 mmol) gyantát felszuszpendálunk 1 ml N-metil-pirrolidonban, a szuszpenzióhoz előbb 91 mg (0,42 mmol) 3,6-difluor-ftálsavanhidridet, utána 0,146 ml (84 mmol) N,N-diizopropil-etil-amint adunk, majd az elegyet 18 óra hosszáig szobahőmérsékleten reagáltatjuk. Ekkor a kvantitatív ninhidrines analízis 97,8%-os kapcsolási hatásfokot jelez.
75.841/BE
130
4. lépés: (2, 5-Di fluor- 6-karboxi -benzoil) -G (Chx) -Leu-nVal (CO)
-Gly-Phg-MBHA-gyanta előállítása
200 mg, a fenti 3. lépésben leírtak szerint előállított (2,5-difluor-6-karboxi-benzoil)-G(Chx)-Leu-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA-gyantát a D eljárásnak vetünk alá, vagyis lehasítjuk a szemikarbazonocsoportot.
5. lépés: (2 , 5-dífluor-6-karboxi-benzoil) -G (Chx) -Leu-nVal (CO) -Gly-Phg-NH2 előáll!tása
75.841/BE
131
100 mg, a fenti 4. lépésben leírtaknak megfelelően előállított (2,5-difluor-6-karboxi-benzoil)-G(Chx)-Leu-nVal(CO)-Gly-Phg-MBHA-gyantát az E eljárás szerinti hidrogén-fluoridos hasításnak vetünk alá, így megkapjuk a kívánt nyersterméket. Ezt az anyagot nagynyomású-folyadékkromatográfiás eljárással, egy 2,2 x 25 cm méretű, C-18 gyantával (a gélrészecskék szemcsemérete 10 μιη, a pórusméret 300 angström) töltött, fordított fázisú oszlopon, 20-50% acetonitrilt és vizet tartalmazó oldószereleggyel gradienselúciót végezve tisztítjuk. A nagynyomású-folyadékkromatográfiás analízishez használt, C-18 gyantával töltött, fordított fázisú oszlop mérete 4,6 x 250 mm, a gélrészecskék szemcsemérete 5 μιη, a pórusméret 30 nM (300 A), az eluens 0,1% trifluor-ecetsavat tartalmazó, 10-60%-os acetonitril-víz elegy. Ilyen körülmények között végezve a vizsgálatot, egyetlen csúcs jelenik meg 17,2 percnél. A kisfelbontású tömegspektrometriás vizsgálat megerősítette, hogy a várt molekulatömegű (MH+ = 771,5) vegyületet kaptuk.
75.841/BE
132
VI. példa:
iBoc-G (Chx) -Cys [ (O2) Et] -nVal (CO) -Gly-Phg-NH2 szilárd fázisú
1. lépés: Feoc-Cys[ (O2)Et] -nVal(φεα) -Gly-Phg-MBHA-gyanta elő állítása
Egy zsugorított üvegszűrővel ellátott polipropilén csőbe bemérünk 0,17 g (0,8 mmol/g; 0,19 mmol), a IV. példa 2. lépésében
75.841/BE
133
leírtak szerint kapott H-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA-gyantát, és az A eljárást követve hozzákapcsolunk 160 mg (0,38 mmol) Boc-Cys[(O2)Et]-OH képletű vegyületet. 18 órányi reagáltatás után a kvantitatív ninhidrines analízis azt jelzi, hogy a kapcsolás 99, 98%-ig teljessé vált.
2. lépés: Pinoc-G (Chx) -Cys [ (O2) Et] -nVal (dpsc) -Gly-Phg-MBHA-gyanta előállítása
NH-CH(Ph)2
A fenti 1. lépésben leírtak szerint kapott 0,19 mmol Boc-Cys [ (O2)Et]-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA-gyantát a C eljárásnak vetjük alá, így hasítjuk le a Boc védőcsoportot, majd a kapott terméket az A eljárást követve, 0,170 g (0,45 mmol) N-Fnoc-2ciklohexil-glicinnel [Fmoc-G(Chx)-OH] kapcsoljuk össze. 18 órányi reagáltatás után, kvantitatív ninhidrines analízis alapján a 75.841/BE
134 kapcsolás hatásfoka 99,92%.
3. lépés: iBoc-G (Chx) -Cys [ (02) Et] -nVal (dpsc) -Gly-Phg-MBHA
-gyanta előállítása
A fenti 2. lépésben leírtak szerint kapott Fmoc-G(Chx)-Cys[(02)Et]-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA-gyantát a B eljárásnak vetjük alá, miáltal lehasítjuk a Fmoc védőcsoportot. Egy kis mintával elvégzett ninhidrines próba során a gyanta és az oldat sötétkék színe azt jelzi, hogy a reakció végbement. Ezt követően 170 mg (0,19 mmol) gyantát felszuszpendálunk 1 ml N-metil-pirrolidonban, a szuszpenzióhoz előbb 0,06 ml (0,45 mmol) izobutil-(klór-formiát)-ot, utána 0,16 ml (0,90 mmol) N,N75.841/BE
135
-diizopropil-etil-amint adunk, majd az elegyet 18 óra hosszáig szobahőmérsékleten reagáltatjuk. Ekkor a kvantitatív ninhidrines analízis 99,35%-os kapcsolási hatásfokot jelez.
4. lépés: iBoa-G (Chx) -Cys [ (O^t] -nVal (CO) -Gly-Phg-MBHA-gyanta előéllítása
170 mg, a fenti 3. lépésben leírtak szerint kapott iBoc-G (Chx)-Cys [ (02) Et]-nVal (dpsc)-Gly-Phg-MBHA-gyantát a D eljárásnak vetünk alá, vagyis lehasítjuk a szemikarbazonocsoportot.
5. lépés: ÍBoc-G (Chx) -Cys [ (O2) Et] -nVal (CO) -Gly-Phg-NH2 előállítása
75.841/BE
136
170 mg, a fenti 4. lépésben leírtaknak megfelelően előállított iBoc-G(Chx)-Cys[ (02)Et]-nVal(CO)-Gly-Phg-MBHA-gyantát az E eljárás szerinti hidrogén-fluoridos hasításnak vetünk alá, így megkapjuk a kívánt nyersterméket. Ezt az anyagot nagynyomásúfolyadékkromatográfiás eljárással, egy 2,2 x 25 cm méretű, C-18 gyantával (a gélrészecskék szemcsemérete 10 gm, a pórusméret 300 angstrom) töltött, fordított fázisú oszlopon tisztítjuk, 20-50% acetonitrilt és vizet tartalmazó oldószereleggyel gradienselú— ciót végezve. A nagynyomású-folyadékkromatográfiás analízishez használt, C-18 gyantával töltött, fordított fázisú oszlop mérete 4,6 x 250 mm, a gélrészecskék szemcsemérete 5 μm, a pórusméret 300 angstrom, az eluens 0,1% trifluor-ecetsavat tartalmazó, 10-60%-os acetonitril-viz elegy. Ilyen körülmények között végezve a vizsgálatot, egyetlen csúcs látható 16,94 percnél. A kisfel
75.841/BE
137 bontású tömegspektrometriás vizsgálat megerősítette, hogy a várt molekulatömegű (MH+ = 737,5) vegyületet kaptuk.
Az itt következő részben ismertetjük a találmány szerinti vegyületek HCV-proteáz inhibitor hatásának meghatározására szolgáló vizsgálati módszereket.
Spektrofotometriás vizsgálat:
A találmány szerinti vegyületeknek a HCV szerin-proteázra gyakorolt hatását a Zhang és munkatársai [Analytical Biochemistry 270, 268-275 (1999)] által közölt spektrofotometriás eljárással vizsgáltuk. A vizsgálat egy kromogén észter-szubsztrát proteolízisén alapszik, és alkalmas a HCV NS3-proteáz aktivitás folyamatos monitorozására. A szubsztrát az NS5a/NS5b kapcsolódási szekvencia P oldaláról származtatható [Ac-DTEDWX (Nva), ahol X = A vagy P], és a C-terminális karboxicsoport van észteresítva 4 különböző kromofor alkohol — ezek a következők: 3- vagy 4-nitro-fenol, 7-hidroxi-4-metil-kumarin és 4-(fenil-azo)-fenol — valamelyikével. Az alábbiakban részletesen foglalkozunk ezeknek az új, nagy átbocsátóképességű szűrésre, valamint a HCV NS3-proteáz inhibitorok kinetikai vizsgálatára lehetőséget nyújtó spektrofotometriás észter-szubsztrátoknak a szintézisével és jellemző tulajdonságaival.
Anyagok és módszerek:
A vizsgálathoz használt pufferoldatok készítéséhez a reagenseket a Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri) szállította. A peptidszintézishez szükséges vegyszereket az Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) és Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts) cégektől vásároltuk. A peptideket vagy manuálisan
75.841/BE
138 állítottuk elő, vagy egy automatizált ABI (model 431A) szintetizátort (Applied Biosystems) alkalmazva szintetizáltuk. A vizsgálatokhoz Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) LAMBDA 12 UV/VIS spektrométert és a Corning (Corning, New York) cégtől beszerzett 96 kísérleti helyes mikrotitráló UV-tálcákat használtunk. Az előmelegítő blokk szállítója: USA Scientific (Ocala, Florida), és a 96 kísérleti helyes mikrotitráló tálcák mozgatását a Labline Intruments (Melrose Park, Illinois) örvénymozgású rázógépével végeztük. Monokromátorral felszerelet Spektramax Plus (Molecular Devices, Sunnyvale, Cali-fornia) mikroleolvasó berendezést használtunk a monitorozáshoz.
Enzim:
A korábban már a szakirodalomban közölt eljárást követve [D.L. Sáli et al. : Biochemistry 37, 3392-3401 (1998)] állítottunk elő rekombináns heterodimer HCV NS3/NS4a proteázt (la törzs). A fehérjekoncentrációt Biorad festési eljárással, előzőleg aminosav analízisnek alávetett rekombináns HCV-proteáz standardok alkalmazásával határoztuk meg. A vizsgálat kezdete előtt a tárolási puffért [50 mM nátrium-foszfát (pH = 8,0), 300 mM nátrium-klorid, 10% glicerin, 0,05% lauril-maltozid és 10 mM ditiotreit] egy Biorad Bio-Spin P6 gyárilag készített oszlop segítségével mérési pufferra [25 mM 3-morfolino-propánszulfonsav (pH = 6,5), 300 mM nátrium-klorid, 10% glicerin, 0,05% lauril-maltozid, 5 μΜ etilén-diamin-tetraecetsav és 5 μΜ ditiotreit] cseréltük fel.
Szúbsztzát szintézise és tisztítása:
A szubsztrátok szintézise során R. Zhang már korábban idézett közleménye szerint jártunk el, azzal indítva a műveletet,
75.841/BE
139 hogy a szokásos módszert alkalmazva [lásd K. Barlos et al. : J. Pept. Protein Rés. 37, 513-520 (1991)] az Fmoc-Nva-OH képletű vegyületet 2-klór-tritil-klorid-gyantához kapcsoltuk. A peptidlánc felépítését ezután vagy manuálisan, vagy egy ABI (model 431) peptidszintetizátorral végeztük, az Fmoc-eljárás néven ismert megoldást választva. Az N-acilezett, teljesen védett peptidfragmentnek a gyantáról való lehasítására 2 eljárás szolgált: az egyik szerint 10% ecetsavat és 10% trifluor-etanolt tartalmazó metilén-dikloriddal 30 percig reagáltatjuk a gyantát, míg a másik esetben 2% trifluor-ecetsavat tartalmazó metilén-dikloridban, 10 perces reakcióidővel történik a hasítás. A szűrlet és a mosófolyadék (metilén-diklorid) egyesítésével kapott oldatot a hasításhoz használt sav eltávolítása végett vagy azeotrop desztillációnak vetjük alá, vagy vizes nátrium-karbonát-oldattal többször extraháljuk. A metilén-dikloridos oldatot végül nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk.
Az észter-szubsztrátokat a jól ismert sav-alkohol kapcsolási eljárásokat [lásd K. Holmber et al.: Acta Chern. Scand. B33, 410-412 (1979)] követve állítottuk elő. Az eljárás menete a következő: A peptidfragmentet feloldjuk vízmentes piridinben, majd a 30-60 mg/ml töménységű oldathoz 10 mólekvivalens kromofort és katalitikus mennyiségű (0,1 ekvivalens) 4-toluolszulfonsavat adunk. A kapcsolási reakciót 3 ekvivalens diciklohexil-karbodiimid hozzáadásával indítjuk el, és az előrehaladását nagynyomású-folyadékkromatográfiás eljárással követjük. Szobahőmérsékleten a reakció 12-72 óra alatt válik teljessé, ekkor a piridint vákuumban elpárologtatjuk, és az utolsó nyomok eltávolítása végett a terméket toluollal azeotrop desztillációnak vetjük alá. A
75.841/BE
140 peptidésztert ezután 2 óra hosszáig 95% trifluor-ecetsavat és metilén-dikloridot tartalmazó oldószereleggyel kezeljük, így hasítjuk le védőcsoportot, majd vízmentes dietil—éterrel háromszor extraháljuk, így távolítjuk el a kromofor feleslegét. A védőcsoportjától megfosztott szubsztrátot végül egy C3 vagy C8 oszlopon nagynyomású-folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk, amikor is az oszloptérfogat hatszorosának megfelelő mennyiségű 30-60%os víz-acetonitril eleggyel, gradienst képezve eluáljuk a terméket. A teljes műveletre számított kitermelés, beleértve a tisztítást is, hozzávetőleg 20-30%. A molekulatömeg meghatározását elektrospray ionizációs tömegspektrometriával végeztük. A szubsztrátot végül megszárítjuk, és száraz por formájában tároljuk.
A szubsztrátok és termékek spektrofotometriás mérése:
A szubsztrátok és a megfelelő kromofor termékek spektrumait 6,5 pH-jú mérési pufferban vettük fel. Az extinciós koefficienst az optimális csúcson kívüli hullámhossznál [3—nitro-fenol és 7 — -hidroxi-4-metil-kumarin 340 nm; 4-(fenil-azo)-fenol: 370 nm; 4-nitro—fenol: 400 nm] határoztuk meg, 1 cm méretű küvettákat használva a méréshez, és többszörös hígítást végezve. Optimális csúcson kívüli hullámhossznak azt a hullámhosszt tekintettük, amelynél a legnagyobb a szubsztrat és a termék abszorbanciája közötti, tört alakban kifejezett különbség (termék OD-szubsztrát OD/szubsztrát OD) .
Proteáz aktivitásának mérése:
A proteáz aktivitást 30 °C-on, 200 μΐ térfogatú reakcióelegyben, 96 kísérleti helyes mikrotitráló tálcán mértük. A mérési puffer összetétele [25 mM 3-morfolino-propánszulfonsav (pH = 6,5), 300 mM nátrium-klorid, 10% glicerin, 0,05% lauril
75.841/BE
141
-maltozid, 5 μΜ etilén-diamin-tetraecetsav és 5 μΜ ditiotreit] az NS3/NS4a heterodimerre optimalizált [D.L. Sáli et al.: lásd fentebb] . Tipikus esetben a szubsztráttal és a inhibitorral együtt 150 μΐ mérési puffért (a dimetil-szulfoxid végső koncentrációja 4 térfogat%) helyezünk el a lyukakban, és 3 percig 30 °C-on előinkubáljuk az elegyet. Az enzimreakciót úgy indítjuk el, 50 μΐ előmelegített mérési pufferban (a végső térfogat 200 μΐ) az elegyhez adjuk a proteázt (12 nM) , és ettől kezdve a mérés teljes ideje alatt (60 perc) egy monokromátorral felszerelt Spectromax Plus mikroleolvasó berendezésben (elfogadható eredményt azokkal a leolvasókkal kaphatunk, amelyekben levágószűrőt használnak) követjük, hogy a tálcák egyes kísérleti helyein, a megfelelő hullámhosszon [3-nitro-fenol és 7-hidroxi-4-metil-kumarin 340 nm; 4- (fenil-azo)-fenol: 370 nm; 4-nitro-fenol: 400 nm] milyen abszorbanciaváltozás megy végbe. Az Nva és a kromofor csoport közötti észterkötés proteolitikus hasítását megfelelő hullámhosszon enzim nélküli vakkísérletben is követjük, ezzel a kontrollvizsgálattal állapítjuk meg a nem emzimatikus hidrolízis mértékét. A szubsztrát kinetikai paramétereinek kiértékelését 30-szoros koncentrációtartományban (-6-200 μΜ) végeztük el, a kezdeti sebességet lineáris regresszióval határoztuk meg, és a kinetikus állandót úgy kaptuk, hogy nemlineáris regressziós analízist alkalmazva (Mac Curve Fit 1.1, K. Raner) , az adatokat a Michaelis-Menten-egyenlethez illesztettük. A váltásszámokat (kcat) azzal a feltétellel számítottuk, hogy az enzim teljesen aktív.
Az inhibitorok és inaktivátorok kiértékelése:
Az Ac-D-(D-Gla)-L-I-(Cha)-C-OH (27), Ac-DTEDVVA(Nva)-OH és Ac-DTEDVVP(Nva)-OH kompetitív inhibitorokra vonatkozó inhibiciós
75.841/BE
142 ·*? C: . :.
állandókat (Ki*) kísérleti úton, az enzim és szubsztrát állandó koncentrációja mellett, a vq/ví értékeket az inhibitorkoncentrá— ció ([I]o) függvényében a kompetitív inhibitorok kinetikáját leíró, átrendezett Michaelis-Menten-egyenlet
VO/V1 = 1 + [I]0/[Ki(l + [S]0/Km)] szerint — ahol v0 a nem gátolt kezdeti reakciósebesség, Vi bármely adott inhibitorkoncentráció mellett, az inhibitor jelenlétében mért reakciósebesség, és [S]o a alkalmazott szubsztrátkoncentráció — ábrázolva határoztuk meg. A kapott adatokat lineáris regressziós módszerrel illesztettük, és az 1/[Ki (1+ [S] O/Km] képlet alapján számítottuk ki a Ki*-értéket.
A találmány szerinti vegyületekre a fenti módon kapott K±*-értékeket adtuk meg a korábban bemutatott táblázatokban, ahol a vegyületeket éppen a Ki*-értéküknek megfelelően állítottuk sorba. A képzett szakember számára a közölt eredmények azt jelzik, hogy a találmány szerinti vegyületek mint kiemelkedő hatású NS3 szerin-proteáz inhibitorok hasznosíthatók.
A találmányt az előzőekben speciális megvalósításokkal kapcsolatban ismertettük, így nyilvánvaló, hogy a megfelelő képzettségű szakember ezekre vonatkozóan számos alternatív megoldást, módosítást vagy változatot képes javasolni. Az ilyen, alternatív megoldások, módosítások és változatok azonban a lényegüket tekintve nem haladják meg a szakember köteles tudását, így mind a találmány oltalmi körébe tartoznak.
75.841/BE
143
2. táblázat:
Vegyület példaszáma SZERKEZETI KÉPLET ÖSSZEGKÉPLET LRMS (FAB) M+H
1 ’ 1C44 H68 N6 08 809^5
2 |C40 H60 N6 08 ch, 1 0^0 o Cj Ű CH, I 753,5
3 £^Y |C42 H62 N6 08 CH> 1 o^° ? CH> ° i 779.5 /
4 XX CH, C39 H54 N6 08 r 'ó | 735j4
5 H _ ,CH’ C35 H54 N6 08 CH, /¾. 8 f 0 ϊT yAÁ^y*' 0 < Ο O X/ ch3 687.4 /
6» Λ XX C38 H51 Br N6 I 720,4
75.841/BE
144
7 F~\ z“F F F C38 H47 F5 N6 08 811,3
8 C41 H53 N7O10 804,4
9 C42 H54 N6 08 771,4
10 r 5-^C0 . Os/ 1^/*** V'un/ ^S3 o^/ Ϊ s C38 H49 F3 N6 08 775,4
11 CH, 0 X O < 0 0 kJ u C35 H53 N5 09 688,4
12 i * o o >L ο=ξ V—/ -¾^ O=^o~J 4 z O”^ z JX C39 H51 F3 N6 08 789,4
13 & o 0 o Jl <o o C42 H57 N5 09 776,4
75.841/BE
145
14 4 θ U X C34 Η49 F3 Ν6 08 727,4
15 C47 Η59 Ν5 010 854,4
16 Λ 0 ϊ C40H53N5 Ο10 764,4
17 _ 7- 0 Λ C48H61 Ν5 Ο10 868,4
18 %Χ θ 0 L 0 0 CH» 041 H55 Ν5 Ο10 778,4
19 “>° ’Ó C33 Η49 Ν5 09 S 692,3
20 > Λ ^AjV^-A' ° y^ ° °Χ Q C42 Η59 Ν5 09 778,4
75.841/BE
146
21 C38 H50 F N5 09 740,4
22 . . A .Q °ó °v 0 C38 H50 Cl N5 09 756,3
23 ! δ /=^ \=O vr\ “3 yXs y~o o=z A° C38 H50 F N5 09 740,4
24 r X o yy^AtvV^Aí*^ kö ° X ° C45H61 N5O10 832,4
25 w7-^ Q οχ >—y £ ο—<\° ληΓ * 5<4“° S C38 H57 N5 O10 744,4
26 u % u X C47 H68 N6 09 861,5
27 Λ ό ’ H v ó ·γ X X C43 H68 N6 09 813,5
75.841/BE
147
28 ö -Ύ λ ,0^ ó r C41 H56 N6 O10 793,4
29 ° \ O 0 A y-o^ σο H|C C37 H57 N5 09 716,4
30 o o o p JU. JL^,ikJL JL JL JL JJ f * jp '^C<>s^·0 ° Ο O V OH C39 H55 N5 O10 754,4
31 o«/ >—/ 5 X Ó^o 8 C46 H59 N5 O10 842,4
32 o A. ο 1 ο o \Z* CHj C36 H55 N5 09 702,4
33 T 0 o / 04 ο i/ ° 0 °* C40 H63 N5 09 758,5
34 ír CH, /^s CH, 0 / 0 0 ^V^A'VV^'Ar o A. o J ο o kJ k C34 H49 N5 09 672,4
75.841/BE
148
35 1 Γ Q 0 ( o 0 | O A. Ο > Ο O CM, LJ °* C38 Η57 Ν5 09 728,4
36 & 1 Λ-Λ )-° CM ° A ί Μ·<Ο J WO / ¾ C56 Η71 Ν5 09 S 990,5
37 . Q1 044 Η55 Ν5 09 798,4
38 ^OyM« ο ο 0 035 Η49 Ν7 09 712,4
39 ο=5*~^ 040 Η61 Ν5 Ο10 S2 836,4
40 ίΗ ο λ ο ο ^Υι “ As. 0 \ θ 0 Of, χζ Gt C39 Η59 Ν5 09 S2 806,4
41 * Ρ 0 ps ? / α ο γ ^^γΑΑγγΜ'Α-»' 0 Α. ο < 0 'i χζ C36 Η53 Ν5 09 S2 764,3 »
75.841/BE
149
42 0 zK O I o O ch^ X/ CH, C40 Η61 Ν5 09 S2 820,4
43 C35 Η51 Ν5 09 S2 750,3
44 sr“CH» ' o k o o CH, X—CHa r n C40H64N6 011 Si 805,5
45 - °>° °ό 034 Η52 Ν6 09 689,4
47 δ ^-o i5\^° /—\ Z“O 0=\>° Ö ο • 037 Η46 CI2 Ν6 O1D 805,3
48 ο 3¾ ο=\ ^3 036 Η54 F Ν5 09 720/1
49 » 8λ ο=Ζ \^ο £S~\ ί °5>2 . 035 Η52 F Ν5 09 706,4 ί
75.841/BE
150
50 n J*1* ».= ---|f'M'T^O» ’ Lr-™. 0 * r^S H,C l^JI C49H62N6O11 911,5
51 z y_ o=y^ O-t 8 C41 Η56Ν6Ο10 793,4
52 - 0=/ i “-A V® 5 i 5 ”$A i 4 / * 1 </ \—Λ \ A T C42 Η56 Ν6 012 837,4
53 O. J> ’ V-· 0 C41 Η57Ν7Ο12 S 872,4
54 A^vuJ-o-A. CH. 0 Vch, ° 0 J^. η/* C36H54N6O10 731,4
55 ÍJ Γ ο ο ο ο “’ \-CH, C40 Η62Ν6Ο10 787,5
56 ^AaUvAyJL. - ’A’ °ό C42 Η64Ν6Ο10 813,5
75.841/BE
151
57 Γ* 1 CH’ Lh, 0 \-ch, ° ’ A H,C C40 Η60Ν6Ο10 785/
58 AH n y.„ j1 8 C38 Η57 Ν7 Ο11 788/
59 CB> A W f**! fH’ aaSulXjl^^ X w*e^Z oZ^M*ir 'T*^w^Kjr”^*r^|r 'X^°H ’ o x. ο o JL CM, y—CM, ΓΗ m/ ^feX* C41 Η65 Ν7 012 S 880/
60 si. ö—ζ <**ο Ζ UrvA \»ο Oa=\ Ζ~\ ^° C40H61 Ν5Ο11 788/
61 fn. 1? ( ο ο γ CH, C39 Η59 Ν5 09 742/
62 δ ο^° ^eO C35 Η51 Ν5 09 686/
53 CH, 041 Η55 Ν5 09 S2 826/
75.841/BE
152
64 C36 Η53 Ν5 011 732,4
65 ° rX ο ( ο ο «η, C4 C39 Η59 Ν5 011 774,4
66 ο h° ο ο 0 C35H51 Ν5Ο11 718,4
67 λμ. Υ ΓXj-L Ο k _rul ° jv HP kJ C45 Η53 Ν5 09 808,4
68 ο 9*0 ο / Η-Κ ° \ ° ο \_/^ fii C38 Η47 Ν5 09 718,3
69 ο >. ο L ο ο <η kJ Qi C39 Η61 Ν5 09 744,5
70 » δ Υο r ^-χ0^0 ί °=< λ-ο \...,Ζ 3f --- \s=O °5-κ Ο' C37 Η50 Ν6 08 707,4
75.841/BE
153
71 0 ^r’ ό C37 H49 N5 09 708,4
72 L/° °”x '—J J Ζ\ ° l /© o“0K~í /=o o=^ o..... 2 C34 H51 N5 09 674,4
73 δ ar o=/ L θ i J' $ I r-x /’”0 C36H56N6O10 S 765,4
74 0 036 H48N6O10 S 757,3
75 δ °>o r 8\O“C.° M. j o=^ ___ \=O L—' \: o o=^_δ 037 H47 N5 010 722,3
76 4 O=^ — .....Y, ο=>ό\3 .....? \=> /^=0 2 037 H45 CI2 N5 010 790,3
77 °i-o r n Oss/ Λ if .....As Qg/ ^-^3° o=< % 034 H51 N5 010 S 722,3 »
75.841/BE
154
78 CH, Hp C36 H56 N6 01 S2 813,4
79 O^X Q X /s° N—Z °“O3 5 C36 H48 N6 011 S2 805,3
80 T / CH· r π OH H3C k^Jl C37 H47N5O11 S 770,3
81 o />Y“ ° y ο o λ OH HjC x4 037 H45 CI2 N5 O11 S 838,2
82 ο p /A δ^Ο^τ-Λ ο»/ n /=o o.....ς s I---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 039 H49 CI2 N5 010 818,3
83 I /\\ / *o V.....q O=C\£ /=o 4 O4= £ 337 H57 N5 08 700,4
84 O ( yJ/jU/Y-J... r /· ’Ó 138 H60 N6 010 793,4 »
75.841/BE
155
85 0 7 F °F °ό C38 H52 N6O10 S 785,4
86 Fi 041 F O ξ O 0 J! J. O O \ 0 O Frr> r®1 ri F CH R0 C39 H47 F4 N5 O10 822,3 ·
87 T 0 FyyFFF·'” %> 0 Y C33 H51 N5 09 S 694,3
88 °» ? Ft TF^F^F'-ór™ ° Y ° C32 H49 N5 09 S 680,3
89 X ° '—CH, C40H63 N5 Oil S 822,4
90 *FT v / CH, b C39 H55 N5 09 S 770,4
91 fl» 5 F J a? *A^WFr A ° '-CH, C36 H55 N5 O11 S 766,4 1
75.841/BE
156 ··♦· V».
92 0 1 0 k 0 O 0-i ’ kJ os C38 H57 N5 010 744,4
93 Y Q ^νΫ'Λ'Ϋγ’^^τ” 0 /. O k 0 CH kJ ®S C34 H51 N5 011 706,4
94 / 0 ch, 0 / 00 ^Ϋ'Α'γν^ΜίΎΐ 0 A. 0 k 0 O CH, 3 C40 H59 N5 09 754,4
95 oá 0 L 0 00^' kz °* C38 H55 N5 09 725,4
96 CHj 0/00 Y ^ywAWf 0 A. 0 I 0 CH 036 H51 N5 09 698,4
97 CH, Ο < 0 O ^γ 0 JI 0 L 0 CH I J k C34 H47 N5 09 670,3
98 H/ZpcH, H,C OH 0 A. 0 L 0 O kJ os C42 H57 N5 O10 792,4 *
75.841/BE
157
99 CM. HA μ>°4- ch, Ύ-0** Fj CH, M,\ C(t 2 040 H61 N5 O10 772,4 |
100 kYr%x,4^ ο >. o L ο o kJ «Η C37 H48 F N5 08 710,4
101 s-J o >< o L ο o kJ CH» 036 H49 N5 08 S 712,3
102 HP CH ? / o o U? 040 H54 Cl N5 08 768,4 I
103 a 0 04, o / O o Ν' 'A'vA'Y^ 039 H57 N5 09 740,4
104 \> /«o o=\ >b 2 035 H49 N5 09 684,4
105 4» r f, -9 ‘ τ^ΎΥ^^τ °A ° V 337 H53 N5 09 712,4 »
75.841/BE
158
106 C36 Η52 Ν6 08 697,4
107 ο Δ Ρ) ? I ° ° τ 0 Á 0^1 χΖ (¾ C48 Η66 Ν8 Ο10 915,5
108 0 Α A ° ι ° 0 τ OÁ 0 \ Ο (Η C44 Η58 Ν8 Ο10 859,4
109 υ > C48 Η65 Ν5Ο10 872,5
110 οκ ο4δ ^ι \==ο ι χ^ o=y ~ 1 J~V / oj° 1 5 C39 Η49 Ν5 09 732,4
111 CH, 0 ζ Ο 0 ST ^Y^W^Arvs ο 0 Ιο ο ορ C37 Η53 Ν5 09 712,4
112 ^ΎΎ^Χα^^^01 ° Λ 0 X0 0 C33 Η45 Ν5 09 656^ »
75.841/BE
159
113 °φ 0 V C38 H56 N6 09 741,4
114 0 JI 0 0 C37 H54 N6 09 727,4
115 r* ? 1 ? il o JI o l ο o oj C41 H61 N5 09 768,5
116 AyvAAAA'0· o JL c>% o I o o C37 H53 N5 09 7Ϊ2,4
117 / 0 ο < ο o o$ Λγ/Α'Λ^ 0 A. 04, 0 I O 0 C39 H58 N6 08 739,4
118 ρΐ p ο p 1 I III n rex o A. 0 I 0 O 04, C40 H60 N6 08 753,5
119 a 0 04, ° | ° ° 1 AγΫ'/γW',^lvΎ, ,<',' 0 Á CH, 0 I 0 O C39 H58 N6 09 755,4
75.841/BE
160
120 o 0 0 ητ CH ο Á. o l ο o C3B H56 N6 08 725,4
121 Pi 0 \ o ° 'y o i O I 0 0 CH^ V C38 H57 N5 09 728,4
122 (^γγλΧ^γ\ί^ ο I 0 l ο o V C34 H49 N5 09 672,4
123 £> ( ο ο I T I T T WT r°< O >< O k O o 0¾ C40 H55 N5 09 750,4
124 / °X ° \, L> o®^ v“° C39 H53 N5 09 736,4
125 AS ^vY/rA^X Y ” V 0 039 H53 N5 09 736,4
126 zs. « A o oV ^yv^VyYAV Ó ° y ° 035 H45 N5 09 680,3
75.841/BE
161
127 C36 H47 N5 09 694,3
128 0 0 C38 H60 N6 08 729,5
129 O 0 ° °>T F^ x* o ’ (r>r ηρ n 'γ η<^ο o o J< u 041 H58 N6 08 763,4
130 W ° y C35 H54 N6 08 699,4
131 0 a 0 nPiTi nur C43 H57 N5 08 772,4
132 0 Á. 0 l o o C39 H49 N5 08 716,4
133 Oy^Av1^ C42 H55 N5 09 774,4
75.841/BE
162
3. táblázat:
SZERKEZETI KÉPLET Kí*-osztály
B
crS/x. B
B
8óoí^b B
°^0H B
AW-yíy B
AthAyo B
X 0 aX θχνΑί4\Υγ> O^CH ° L^O 1^ B _
75.841/BE
163
75.841/BE
164
4. táblázat:
SZERKEZETI KÉPLET NÉV Ki*-tartomány
γγ*” ν° °Á “<> 0 CH, V5 (2-CO2.3Me)PhCO-G(Chx)· L-nV-(CO)-GG(Ph)-Am a
ch, |(2,5-diF,6- _ „kJ J CO2)PhCO-G(Chx 1 11 í Íí » L-nV-(CO)-G- M ; Ml O' W)-Am 0 X^CH, O ° 1. 1 F O CH, M a )
Z\ (2-CO2)BnCO- IJ J G(Chx)-L-nV-(CO) «Ao ° v01· ° ° A °s 0 | c
M (2-SO3)PhCO- „LJ n ) G(Chx)-L-nV-(CO)- o -vx ° ° a X 0 1 b
Ml °S p2“ I J J |CO2)cyclopentenoy í 1 Μ I Á í N f MchxK-nV- <| ? Μι O' 5 (CO)-G-G(Ph)-Am V-\,CH 0 o O A. 1 O CH, kz c
M OS (2-002,3- 11 ) OH)PhCO-G(Chx)- JÍJL Μ X I 1 m í »--nV-(CO)-GG(Ph)-Am CH 0 CH, lyA1 I a
a YY ch, |(2,3,4,5-tetraF,6- IJ ) CO2)PhCO-G(Chx) F 11° 1 11? 1 l-v-(C0)-g- Yl Ο ' Ml OaX G(Ph)-Am A\Z#L_CH 0 \ytH, O 0 A. 1 F 0 ot 0 1 a
75.841/BE
165
r01 a >° □ r il 0 f ο o A°0 Ϊ ° ° (2CO2)PhCOG(Chx)-C((O2)Et) nV-(CO)-G-G(Ph Am b
X ° φ ° [J o ° (2CO2)PhCOG(Chx)-C((O2)Ph)nV-(CO)-G-G(Ph)Am b
5W-íw^ L^J CM» (2CO2)PhCOG(Chx)C«O2)EtPh)-nV(CO)-G-G(Ph)-Am b
A A U Λ ? I B ? 1 O A. O J O o kJ ÍBoc-G(Chx)C((O2)Et)-nV-(CO)G-G(Ph)-Am b
Λ°Α ο Ο kJ (2CO2)PhCOG(Chx)-C((02)Np)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am b
A OT O Γ il » 1 0 ° ty - A ά Aj * > O ^H> '2CO2)PhCOG(Chx)-C((O2)2Np)-nV-(CO)-G3(Ph)-Am b
A * T A ^° 1J as o r^ ο o ► V^r/y^v^ ο o J ο o kx Boc-G(Chx)((O2)Ph)-nV-(CO) -G(Ph)-Am b ------------------------------------------:___________________________________________________________________________________________________________________________
75.941/BE
166
r 0 /-> P f 04 o 0 Y 0 A. O J 0 0 U b ((3-tetrahydrofuran) CH2O)CO*G(Chx)L-nV-(CO)-GG(Ph)-Am b
Λ-xixax° f ° ° at 7-Me-2-iPr-Oct-4ene-(CO)-L-nV(C0)-G-G(Ph)-0H c
75.941/BE

Claims (39)

167
Szabadalmi igénypontok
1. Az
Yx
W O G (1)
R3 i o R2 általános képletű vegyületek — amely képletben
G, J és Y jelentése azonos vagy különböző, így egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil-, alkil-aril-, heteroalkil-, heteroaril-, aril-heteroaril-, alkil-heteroaril-, cikloalkil-, alkoxi-, (alkil-aril)-oxi-, aril-oxi-, heteroaril-oxi-, heterocikloalkil-oxi—, cikloalkil—oxi-, alkil—amino—, aril-amino—, (alkil-aril)-amino-, aril-amino-, heteroaril-amino-, cikloalkil-amino- vagy heterocikloalkil-amino-csoport, azzal a fenntartással, hogy Y jelentéseként ezen csoportok mindegyike adott esetben -X11 vagy -X12 általános képletű csoporttal szubsztituált lehet;
X11 jelentése alkil-, alkenil-, alkinil-, cikloalkil-, cikloalkil-alkil-, heterociklil-, heterociklil-alkil-, aril-, alkil-aril-, aralkil-, heteroaril-, alkil-heteroaril- vagy heteroaril-alkil-csoport, amelyek mindegyike adott esetben -X12 általános képletű csoporttal ugyancsak szubsztituált lehet;
X12 jelentése hidroxi-, alkoxi-, aril-oxi-, merkapto-, alkil—tio—, aril-tio-, amino-, alkil-amino-, aril-amino-, alkilszulfonil—, ári1—szulfonil—, (alkil—szulfonil)—amino—, (aril— ~szulfonil)-amino-, karboxi-, alkoxi-karbonil-, karbamoil—, (alkoxi-karbonil)-amino-, (alkoxi-karbonil)-oxi-, alkil75.841/BE
168
-ureido- vagy aril-ureido-csoport, halogénatom, valamint ciano- vagy nitrocsoport, azzal a fenntartással, hogy az alkil-, alkoxi- és arilcsoportok adott esetben az X12 jelentéseként felsoroltak közül függetlenül választható további szubsztituenseket hordozhatnak;
R1 jelentése -COR5 vagy -B(OR)2 általános képletű csoport, amelyekben R5 hidrogénatomot vagy hidroxicsoportot, -OR8 vagy Λ 1 A
-NR R altalános képletű csoportot, trifluor-metil- vagy pentafluor-etil-csoportot, -C3F7 képletű csoportot, valamint -CF2R , -R vagy -COR általános képletű csoportot jelenthet, ahol R7 jelentése hidrogénatom vagy hidroxicsoport vagy -OR8, -CHR9R10 vagy -NR9R10 általános képletű csoport, továbbá R6, R , R es R jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil-, aril-, heteroalkil-, heteroaril-, cikloalkil-, cikloalkil-, aralkil- vagy heteroaril-alkil-csoport, vagy a -CH (R1')COOR11, -CH ( R1') CONR12R13, -CH (R1') CONHCH (R2') COOR11, -CH (R1’) CONHCH (R2') CONR^R13, -CH (R1') CONHCH (R2') R ' , -CH (R1') CO-NHCH (R2') CONHCH (R3') COOR11,
-CH (R1') CONHCH (R2') CONHCH (R3') CO-NR12R13,
-CH (R1') CONHCH (R2' ) CONHCH (R3') CONHCH (R4 ' ) COOR11,
-CH (R1') CONHCH (R2') CONHCH (R3') CONHCH (R4') CONR12R13,
-CH (R1') CO-NHCH (R2') CONHCH (R3') CONHCH (R4') CONHCH (R5') COOR11 és
-CH (R1') CO-NHCH (R2') CONHCH (R3 ’) CONHCH (R4') CONHCH (R5') CONR12R13 általános képletű csoportok valamelyike, amelyekben R1', R2', R3 , R4 , R5 , R11, R12, R13 és R' jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil-, aril-, heteroalkil-, heteroaril-, cikloalkil-, alkil-aril-, alkil-heteroaril-, aralkil- vagy heteroaril-alkil-csoport;
75.841/BE
169
Z jelentése oxigén- vagy nitrogénatom vagy hidrogénatomot hordozó szénatom;
W ha jelen van a képletben, akkor jelentése karbonil-, tiokarbonil- vagy szulfonil-csoport, vagy nincs jelen; és
R, R' R2, R3 és R4 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-10 szénatomos alkil-, 2-10 szénatomos alkenil-, 3-8 szénatomos cikloalkil-, 3-8 szénatomos heterocikloalkil-, alkoxi-, aril-oxi-, alkil-tio-, aril-tio- vagy aminocsoport, savamidvagy észtercsoport, karboxicsoport, karbamátot képező csoport, ureido-, oxo-, formil-, ciano- vagy nitrocsoport, oxigén-, nitrogén-, kén- vagy foszforatom, amely oxigén-, nitrogén-, kén- vagy foszforatomok száma 0-6 lehet, cikloalkil-alkil- vagy heterocikloalkil-alkil-csoport, ahol a cikloalkilcsoport 3-8 szénatomból és 0-6 oxigén-, nitrogén-, kén— vagy foszforatomból all, es az alkilcsoport 1—6 szénatomos, valamint aril-, heteroaril-, alkil-aril- vagy alkil-heteroaril-csoport;
ahol az alkil-, heteroalkil-, alkenil-, heteroalkenil-, aril-, heteroaril-, cikloalkil- és heterocikloalkil-csoportok adott esetben szubsztituáltak lehetnek, és a szubsztituált kifejezés alatt mindig azt értjük, hogy az illető csoport vagy molekularész adott esetben egy vagy több kémiailag megfelelő szubsztitu enst hordoz az alkil—, alkenil—, alkinil—, aril—, aralkil—, cikloalkil- vagy heterociklil-csoportok, halogénatomok, hidroxi-, merkapto-, alkoxi-, aril-oxi-, alkil-tio-, aril-tio- vagy amino—, savamid- vagy észter-csoportok, karboxicsoport, karbamátot képező csoportok, ureido-, oxo-, formil-, ciano-, nitro- vagy
75.841/BE
170 szulfamoil csoport, valamint szulfoxidot, szulfont, szulfamidot, hidrazidot vagy hidroxamátot képező csoportok közül _ és enantiomereik, sztereoizomereik, rotamereik, tautomereik, valamint gyógyszerészetileg elfogadható sóik vagy szolvátjaik.
2. Az 1. igénypont szerinti vegyületek, amelyekben R1 jelentése -COOR5 általános képletű csoport, amelyben R5 hidrogénatom, hidroxicsoport vagy -COOR8 vagy -CONR9R10 általános képletű csoport.
3. A 2. igénypont szerinti vegyületek, amelyekben
R jelentése -COCONR9R10 általános képletű csoport, amelyben R9 hidrogénatomot, és R10 hidrogénatomot vagy -CH (R1') COOR11, -CH (R1’) CONR12R13, -CH (R1') CONHCH (R2') COOR11, -CH (R1') CONHCH (R2') C0NR12R13 vagy —CH(R )CONHCH(R ) (R1 ) általános képletű csoportot jelent.
4. A3, igénypont szerinti vegyületek, amelyekben R10 je- lentése a -CH (R1') CONHCH (R2') COOR11, -CH (R1') CONHCH (R2') CONR12R13 vagy -CH(R )CONHCH(R2 ) (R') általános képletű csoportok valamelyike, ahol R1 jelentése hidrogénatom vagy alkil- vagy heteroalkilcsoport, és R2 jelentése fenil-, szubsztituált fenil-, heteroatom-szubsztituált fenil-, tienil-, cikloalkil-, piperidi— nil- vagy piridilcsoport.
5. A 4. igénypont szerinti vegyületek, amelyben R1’ jelentése hidrogénatom.
6. Az 5. igénypont szerinti vegyületek, amelyben R11 jelentése hidrogénatom vagy terc-butil-csoport;
R' jelentése hidroxi-metil-csoport;
R jelentése egymástól függetlenül a
75.841/BE
171
képletű vagy általános képletű csoportok valamelyike, ahol az általános képletekben
U és U jelentese azonos vagy különböző, így hidrogén— vagy fluoratom, karboxi-metil·-, (metoxi-karbonil)-metil-, karbamoil-metil-, (N-metil-karbamoil)-metil-, (N,N-dimetilkarbamoil)-metil-, azido—, amino—, hidroxi —, szubszti— tuált amino- vagy szubsztituált hidroxicsoport;
U és U jelentése azonos vagy különböző, így oxigén- vagy kénatom; és
U5 jelentése alkil-szulfonil-, aril-szulfonil-, heteroalkil-szulfonil-, heteroaril-szulfonil-, alkil-karbonil-, sri1—karboni1—, heteroalkil—karbonil-, heteroaril—
-karbonil-, alkoxi-karbonil-, (aril-oxi)-karbonil-, (heteroaril-oxi)-karbonil-, N-alkil-karbamoil-, N-aril-karbamoil- vagy N-heteroaril-karbamoil-csoport, vagy ezek valamilyen kombinációja; és jelentése amino-, metil-amino-, N-metil-N-metoxi-aminovagy dimetil-amino-csoport vagy a
-HN^^
Me
75.841/BE
172 — -ΗΝ-γΟΗ Μ®
Me Me
képletű vagy általános képletű csoportok — ahol U6 jelentése hidrogénatom vagy hidroxi- vagy hidroxi-metil-csoport _ valamelyike.
7. A 2. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében R2 jelentése a
IVIC Me J Me YY -Yk | ς Me f k Me Me [foe Me Z képletekkel ábrázolható csoportok valamelyike
8. A 7. igénypont szerinti vegyületek, R3 jelentése 75.841/BE Lf l^F Me amelyek képletében i
173
ch3 < CH3 vn3
AYV*
Q 'CH3
CH3JJCH3
Ah3
és
képletű vagy általános képletű csoportok közül kerül ki, ahol az
75.841/BE
174 általános képletekben R31 jelentése hidroxi- vagy alkoxicsoport,
Y19 helyén pedig a
képletű csoportok, és Y20 helyén a
képletű csoportok valamelyike áll.
9. A 8. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében
R3 jelentése a
75.841/BE
175
képletű, illetve általános képletű csoportok valamelyike, vagy 3,3,3-trifluor-propil-csoport.
10. A 9. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében Z jelentése nitrogénatom, és R4 jelentése hidrogénatom.
11. A 10. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében W jelentése karbonilcsoport vagy szulfonilcsoport.
12. A 11. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében Y jelentése a
75.841/BE.
176
177 ^^ΟΎΗΡ (A. i-3y Y X 1-3 H3C^ COOH F cX^Xci > AcHN^^^ COOH 75.841/BE OH I yis X HOOC^/^^ cooh yy yy X γΑ» \Y T7 CH\ Z c6h5A ^00^ CH3 HOO^^^ Ο A /x pooh m EtO'^N-'X Ϊ J< HN 7 L I Ν=χ N^y C ^9° O8 rV x’7 y Y'1^ 5c pt 3 CH3 H3C ch3 XC rt rV k^^cf, cYaY JL Ji 3 by cr^y F Cl 9H3 >3 r^Ayi Η3Ο^γΑΑ ^xA kA U AI COOH T F3C^^CF3 COOH
178
képletű, illetve általános képletű csoportok valamelyike, ahol az általános képletekben
Y 11 jelentése hidrogénatom vagy karboxi-, etoxi-karbonil-, metoxi-, fenil-, fenoxi—, metil—amino-, acetil-amino—, fenil— -amino-, izopropil-, 1-triazolil-, 1-imidazolil- vagy (karboxi-metil)-amino-csoport;
Y 12 jelentése hidrogénatom, karboxi-, metoxi-karbonil- vagy metoxicsoport, valamint fluor—, klór— vagy brómatom;
Y 13 jelentése a
képletű csoportok valamelyike;
75.841/BE
179
Y 14 jelentése metil-szulfonil-, acetil-, (terc-butoxi)-karbonil-, izobutoxi-karbonil-, (benzil-oxi)-karbonil- vagy (allil-oxi)-karbonil-csoport;
Y 15 és Y16 jelentése azonos vagy különböző, így egymástól függetlenül alkil-, aril-, heteroalkil- vagy heteroarilcsoport;
Y 17 jelentése trifluor-metil-, nitro-, karbamoil-, hidroxi-, metoxi-karbonil-, metoxi-, fenoxi-, fenii-, benzoil-, aminovagy karboxicsoport; és
Y 18 jelentése metoxi-karbonil-, nitro- vagy dimetil-amino-csoport, fluoratom, metoxi-, karboxi-metil-, karboxi-, szulfamoilvagy acetil-amino-csoport.
13. A 12. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében Y jelentése a
75.841/BE.
180
képletű vagy általános képletű csoportok valamelyike, ahol az általános képletekben
Y17 jelentése trifluor-metil-, nitro-, karbamoil-, hidroxi-, amino- vagy karboxicsoport; és
Y18 jelentése fluoratom vagy karboxicsoport.
14. A 13. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében
J jelentése a
képletű csoportok valamelyike.
15. A 14. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében J jelentése hidrogénatom vagy metil— vagy benzilcsoport.
16. A 15. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében
G jelentése a
75.841/BE
181
képletű csoportok valamelyike vagy
75.841/BE
182
NHQ általános képletű csoport, amelyben Q jelentése a
képletekkel ábrázolható csoportok közül kerül ki.
17 .
A 16. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében
G jelentése a
75.841/BE
183
képletű csoportok valamelyike.
18. Gyógyszerkészítmény, amely hatóanyagként egy 1. igénypont szerinti vegyületet tartalmaz.
19. A 18. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény hepatitis C vírussal kapcsolatba hozható betegségek kezelésére való alkalmazásra.
20. A 18. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely tartalmaz még egy gyogyszerészetileg elfogadható hordozót is.
21. Eljárás a hepatitis C vírusproteázzal kapcsolatba hozható betegségek kezelésére, azzal jellemezve, hogy ilyen kezelést igénylő páciensnek egy 1. igénypont szerinti vegyület terápiásán hatásos mennyiségét tartalmazó gyógyszerkészítményt adunk be.
22. A 21. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadás a bőr alá fecskendezve történik.
23. Egy 1. igénypont szerinti vegyület alkalmazása a hepatitis C vírusproteázzal kapcsolatba hozható betegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására.
24. Eljárás a hepatitis C vírusproteázzal kapcsolatba hozható betegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy 1. igénypont szerinti ve— gyületet egy gyogyszerészetileg elfogadható hordozóval kombinálunk.
75.841/BE .
184
25. HCV-proteáz inhibitor hatású vegyületek, amelyek szer kezete a következő képletekkel ábrázolható:
75.841/BE
185
X = OfBu
X = OH
X = NH2
X = NMeOMe
X = NMe2
X = Ο*Βυ
X = OH
75.841/BE
186
HOOC HOOC^X Me Me Me·^” * HO' 75.841/BE Me Me _<s. Á _ >-Me (U Μ. Y 0H M X^ Me Me x<5s K _ >—Me Hj l Λ H S J H g H ST VV^A Χ*χ^ΟΗ U = η π T rf n π Y ° A 0 ο H o Yx Me X = Η, Y = tBu; X = tBu, Y = H Me >—Me hH I H O H ° '°Y ΓΊ I H o R r propargil R = allil °ό 0 Γ> H ° X= OlBu; X=OH ? ο Λ o M = H K 1 Π τΓ ° <X ° X η Η II 1 J Γχ 0
187
X = OH
x - otutii X = OH X = NMe2
X = o‘Bu
X = OH
R = *Bu
R = H
R = Me
75.841/BE
188
X = Η, Y = COOH X = COOH, Υ = Η
és enantiomereik, sztereoizomereik, rotamereik és tautomereik, valamint mindezek gyógyszerészetileg elfogadható sói vagy szol— 75.841/BE
189 vátjai.
26. Gyógyszerkészítmény a hepatitis C vírus proteázzal kapcsolatba hozható betegségek kezelésére, amely egy vagy több 25. igénypont szerinti vegyület terápiásán hatásos mennyiségét tartalmazza egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval kombinálva.
27. A 26. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely továbbá egy vírusellenes hatóanyagot is tartalmaz.
28. A 26. vagy 27. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely továbbá még egy interferont is tartalmaz.
29. A 28. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amelyben a vírusellenes hatóanyag ribavirin, és az interferon a-interferőn.
30. HCV inhibitor hatású
75.841/BE
190
CH, képletű vegyületek, valamint ezek enantioemerei, sztereoizomerei, rotamerei, tautomerei, gyógyszerészetileg elfogadható sói vagy szolvátjai.
75.841/BE
191
31. Gyógyszerkészítmény, amely egy vagy több 30. igénypont szerinti vegyületet tartalmaz.
32. Eljárás a hepatitis C vírussal kapcsolatba hozható betegségek kezelésére, azzal jellemezve, hogy egy vagy több 30. igénypont szerinti vegyület hatásos mennyiségét adjuk be.
33. Eljárás a hepatitis C vírusproteáz (HCV-proteáz) aktivitásának modulálására, azzal jellemezve, hogy a HCV-proteázt egy vagy több 30. igénypont szerinti vegyülettel hozzuk érintkezésbe .
34. Eljárás a C típusú hepatitis kezelésére, megelőzésére vagy egy vagy több tünetének elviselhetőbbé tételére, azzal jellemezve, hogy egy vagy több 30. igénypont szerinti vegyület hatásos mennyiségét adjuk be.
35. A 33. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a HCV-proteáz NS3/NS4a-proteáz.
36. A 35. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vegyület vagy vegyületek a HCV NS3/NS4a-proteáz működését gátolják.
37. Eljárás a hepatitis C vírus-polipeptid (HCV-polipeptid) processzálásának modulálására, azzal jellemezve, hogy egy, a HCV-polipeptidet tartalmazó kompozíciót a polipeptid-processzálás körülményei között egy vagy több 30. igénypont szerinti vegyülettel hozunk érintkezésbe.
38. A 7. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében R3 jelentése ciklohexilcsoport.
39. A 11. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében Y jelentése 3-hidroxi-2-karboxi-fenil-, (3-tetrahidrofuranil)-
75.841/BE
192
-metoxi- vagy 2-szulfo-fenil-csoport.
40. A 15. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében G jelentése (etil-szulfonil)-metil-, (fenil-szulfonil) -metil-, (fenetil-szulfonil)-metil- vagy [(1-naftil)-szulfonil]-metil-csoport.
A meghatalmazott:
75.841/BE
HU0303358A 2000-07-21 2001-07-19 Novel peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus and pharmaceutical compositions containing them HUP0303358A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22010700P 2000-07-21 2000-07-21
PCT/US2001/022813 WO2002008187A1 (en) 2000-07-21 2001-07-19 Novel peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUP0303358A2 true HUP0303358A2 (hu) 2004-01-28
HUP0303358A3 HUP0303358A3 (en) 2005-10-28

Family

ID=22822091

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0303358A HUP0303358A3 (en) 2000-07-21 2001-07-19 Novel peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus and pharmaceutical compositions containing them

Country Status (22)

Country Link
US (2) US7169760B2 (hu)
EP (1) EP1303487A4 (hu)
JP (2) JP4452441B2 (hu)
KR (1) KR20030081297A (hu)
CN (1) CN1446201A (hu)
AR (1) AR030249A1 (hu)
AU (1) AU8063701A (hu)
BR (1) BR0112666A (hu)
CA (1) CA2410682A1 (hu)
CZ (1) CZ2003195A3 (hu)
EC (1) ECSP034439A (hu)
HU (1) HUP0303358A3 (hu)
IL (1) IL153669A0 (hu)
MX (1) MXPA03000626A (hu)
NO (1) NO20030271L (hu)
NZ (1) NZ523781A (hu)
PE (1) PE20020266A1 (hu)
PL (1) PL365695A1 (hu)
RU (1) RU2003105221A (hu)
SK (1) SK742003A3 (hu)
WO (1) WO2002008187A1 (hu)
ZA (1) ZA200210311B (hu)

Families Citing this family (171)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EE04023B1 (et) 1996-10-18 2003-04-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Seriinproteaaside, eriti C-hepatiidi viiruse NS3-proteaasi inhibiitorid
DE60035218D1 (de) 1999-11-18 2007-07-26 Dendreon Corp Nukleinsäuren, welche für endotheliasen kodieren, endotheliasen, sowie deren verwendung
US7700341B2 (en) 2000-02-03 2010-04-20 Dendreon Corporation Nucleic acid molecules encoding transmembrane serine proteases, the encoded proteins and methods based thereon
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
JP4368581B2 (ja) * 2000-12-12 2009-11-18 シェーリング コーポレイション Ｃ型肝炎ウイルスのｎｓ３−セリンプロテアーゼ阻害剤としてのジアリールペプチド
US7125703B2 (en) 2001-03-13 2006-10-24 Dendreon Corporation Nucleic acid molecules encoding a transmembrane serine protease 7, the encoded polypeptides and methods based thereon
JP2004535166A (ja) 2001-03-22 2004-11-25 デンドレオン・サンディエゴ・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー セリンプロテアーゼｃｖｓｐ１４をコードする核酸分子、コードされるポリペプチドおよびそれに基づく方法
US7105333B2 (en) 2001-03-27 2006-09-12 Deadreon Corporation Nucleic acid molecules encoding a transmembrane serine protease 9, the encoded polypeptides and methods based thereon
KR20040080940A (ko) 2001-05-14 2004-09-20 덴드레온 코포레이션 트랜스막 세린 프로테아제 10을 암호화하는 핵산 분자,암호화된 폴리펩티드 및 이에 근거한 방법
US7119072B2 (en) 2002-01-30 2006-10-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US6642204B2 (en) 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
AU2003223602B8 (en) 2002-04-11 2010-05-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus NS3-NS4 protease
JP2005533817A (ja) 2002-06-28 2005-11-10 イデニクス（ケイマン）リミテツド フラビウィルス科ウィルス感染治療用の修飾２′および３′−ヌクレオシドプロドラッグ
US7408078B2 (en) 2002-10-08 2008-08-05 Wyeth Anthranilic acid derivatives useful in treating infection with hepatitis C virus
US20050075279A1 (en) 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
DK1654261T3 (da) 2003-05-21 2008-01-14 Boehringer Ingelheim Int Hepatitis C-inhibitorforbindelser
CN100503628C (zh) 2003-05-30 2009-06-24 法莫赛特股份有限公司 修饰的氟化核苷类似物
RU2006105640A (ru) 2003-07-25 2007-09-10 Айденикс (Кайман) Лимитед (Ky) Аналоги пуриновых нуклеозидов для лечения flaviviridae, включая гепатит с
US7223745B2 (en) 2003-08-14 2007-05-29 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
US7576206B2 (en) 2003-08-14 2009-08-18 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
WO2005021584A2 (en) 2003-08-26 2005-03-10 Schering Corporation Novel peptidomimetic ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
AR045596A1 (es) 2003-09-05 2005-11-02 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas de serina en particular proteasa ns3-ns4a del vhc
MXPA06003141A (es) 2003-09-22 2006-06-05 Boehringer Ingelheim Int Peptidos macrociclicos activos contra el virus de la hepatitis c.
TWI280964B (en) * 2003-09-26 2007-05-11 Schering Corp Macrocyclic inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
EP1692157B1 (en) 2003-10-10 2013-04-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
WO2005043118A2 (en) 2003-10-27 2005-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
EP1944042A1 (en) 2003-10-27 2008-07-16 Vertex Pharmceuticals Incorporated Combinations for HCV treatment
GB0500020D0 (en) 2005-01-04 2005-02-09 Novartis Ag Organic compounds
WO2005070955A1 (en) 2004-01-21 2005-08-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
AU2005212257A1 (en) 2004-02-04 2005-08-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
JP4143669B2 (ja) 2004-02-24 2008-09-03 日本たばこ産業株式会社 ４環縮合複素環化合物及びそのｈｃｖポリメラーゼ阻害剤としての利用
US7635694B2 (en) 2004-02-27 2009-12-22 Schering Corporation Cyclobutenedione-containing compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
NZ549223A (en) 2004-02-27 2010-10-29 Schering Corp Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
DE602005015093D1 (de) 2004-02-27 2009-08-06 Schering Corp Neue verbindungen als inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis-c-virus
JP2007525521A (ja) * 2004-02-27 2007-09-06 シェーリング　コーポレイション Ｃ型肝炎ウイルスｎｓ３セリンプロテアーゼのインヒビターとしてのシクロブテンジオン基含有化合物
US7816326B2 (en) 2004-02-27 2010-10-19 Schering Corporation Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
ATE438622T1 (de) 2004-02-27 2009-08-15 Schering Corp 3,4-(cyclopentyl)kondensierte prolinverbindungen als inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis-c-virus
JP4745327B2 (ja) 2004-02-27 2011-08-10 シェーリング コーポレイション Ｃ型肝炎ウイルスｎｓ３プロテアーゼのインヒビター
KR20060127162A (ko) 2004-02-27 2006-12-11 쉐링 코포레이션 Ｃ형 간염 바이러스 ｎｓ3 세린 프로테아제의 억제제로서의화합물
ES2328596T3 (es) 2004-05-20 2009-11-16 Schering Corporation Prolinas sustituidas como inhibidores de la serina proteasa del virus ns3 de la hepatitis c.
UY29016A1 (es) 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
WO2006007708A1 (en) 2004-07-20 2006-01-26 Boehringer Engelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
CN101023094B (zh) 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
EP1781687A1 (en) * 2004-08-25 2007-05-09 Santhera Pharmaceuticals (Schweiz) AG Alpha-keto carbonyl calpain inhibitors
WO2006026352A1 (en) 2004-08-27 2006-03-09 Schering Corporation Acylsulfonamide compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
AU2005285045B2 (en) 2004-09-14 2011-10-13 Gilead Sciences, Inc. Preparation of 2'fluoro-2'- alkyl- substituted or other optionally substituted ribofuranosyl pyrimidines and purines and their derivatives
US7659263B2 (en) 2004-11-12 2010-02-09 Japan Tobacco Inc. Thienopyrrole compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
US7468383B2 (en) 2005-02-11 2008-12-23 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
US20060276404A1 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Anima Ghosal Medicaments and methods combining a HCV protease inhibitor and an AKR competitor
NZ563361A (en) 2005-06-02 2011-02-25 Schering Corp HCV protease inhibitors in combination with food
KR20080021634A (ko) * 2005-06-02 2008-03-07 쉐링 코포레이션 약제학적 조성물 및 이를 사용한 치료 방법
US20070237818A1 (en) * 2005-06-02 2007-10-11 Malcolm Bruce A Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same
CA2611151A1 (en) 2005-06-17 2006-12-28 Novartis Ag Use of sanglifehrin in hcv
US20110104109A1 (en) * 2005-07-13 2011-05-05 Frank Bennett Tetracyclic indole derivatives and their use for treating or preventing viral infections
JP2009505966A (ja) * 2005-08-02 2009-02-12 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド セリンプロテアーゼのインヒビター
US8399615B2 (en) 2005-08-19 2013-03-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
JP5203203B2 (ja) * 2005-08-19 2013-06-05 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 製造工程および中間体
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
KR20140098867A (ko) 2005-11-11 2014-08-08 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ｃ형 간염 바이러스 변이체
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
US7816348B2 (en) 2006-02-03 2010-10-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
CN101489557B (zh) 2006-02-27 2013-12-18 弗特克斯药品有限公司 包含vx-950的共晶体和包含所述共晶体的药物组合物
WO2007109080A2 (en) 2006-03-16 2007-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Deuterated hepatitis c protease inhibitors
US20070287664A1 (en) * 2006-03-23 2007-12-13 Schering Corporation Combinations of HCV protease inhibitor(s) and CYP3A4 inhibitor(s), and methods of treatment related thereto
EP2007789B1 (en) 2006-04-11 2015-05-20 Novartis AG Spirocyclic HCV/HIV inhibitors and their uses
CN101421292A (zh) * 2006-04-11 2009-04-29 诺瓦提斯公司 Hcv抑制剂
US8017612B2 (en) 2006-04-18 2011-09-13 Japan Tobacco Inc. Piperazine compound and use thereof as a HCV polymerase inhibitor
KR20090027752A (ko) * 2006-06-30 2009-03-17 피라말 라이프 사이언시스 리미티드 구강 질환 치료를 위한 약초 조성물
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
BRPI0716060A2 (pt) 2006-08-17 2013-09-17 Boehringer Ingelheim Int inibidores de polimerase viral.
EP2099430A2 (en) * 2006-12-07 2009-09-16 Schering Corporation Ph sensitive matrix formulation
EP2064181A1 (en) * 2006-12-22 2009-06-03 Schering Corporation 4, 5-ring annulated indole derivatives for treating or preventing of hcv and related viral infections
EP2064180B1 (en) 2006-12-22 2016-07-13 Merck Sharp & Dohme Corp. 4,5-ring annulated indole derivatives for treating or preventing of hcv and related viral infections
MX2009006877A (es) 2006-12-22 2009-09-28 Schering Corp Derivados indolicos con anillo unido en las posiciones 5,6 y metodos de uso de los mismos.
EP2134717A2 (en) 2007-02-27 2009-12-23 Vertex Pharmceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
EP2463284A1 (en) 2007-02-27 2012-06-13 Vertex Pharmceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
ATE525068T1 (de) 2007-02-28 2011-10-15 Conatus Pharmaceuticals Inc Verfahren zur behandlung von chronischer viraler hepatitis c mithilfe von ro 113-0830
WO2008106167A1 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy comprising matrix metalloproteinase inhibitors and caspase inhibitors for the treatment of liver diseases
CA2681593A1 (en) * 2007-03-23 2008-10-02 Nisshin Pharma Inc. Preventive or therapeutic composition for liver disease
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
ES2381410T3 (es) 2007-05-04 2012-05-28 Vertex Pharmceuticals Incorporated Terapia de combinación paa el tratamiento de infecciones por VHC
CA2693997C (en) 2007-08-03 2013-01-15 Pierre L. Beaulieu Viral polymerase inhibitors
EP2197842B1 (en) * 2007-08-29 2012-05-23 Schering Corporation 2, 3-substituted indole derivatives for treating viral infections
AU2008295484B2 (en) * 2007-08-29 2013-09-26 Merck Sharp & Dohme Llc Substituted indole derivatives and methods of use thereof
CN101842374A (zh) * 2007-08-29 2010-09-22 先灵公司 用于治疗病毒感染的2，3-取代的氮杂吲哚衍生物
JP5443360B2 (ja) 2007-08-30 2014-03-19 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 共結晶体およびそれを含む医薬組成物
US8765757B2 (en) * 2007-11-16 2014-07-01 Merck Sharp & Dohme Corp. 3-heterocyclic substituted indole derivatives and methods of use thereof
CN102317285A (zh) * 2007-11-16 2012-01-11 先灵公司 3-氨基磺酰基取代的吲哚衍生物及其使用方法
EP2234977A4 (en) 2007-12-19 2011-04-13 Boehringer Ingelheim Int VIRAL POLYMERASE INHIBITORS
MX2010008523A (es) 2008-02-04 2010-08-31 Idenix Pharmaceuticals Inc Inhibidores macrociclicos de serina proteasa.
TW200946541A (en) 2008-03-27 2009-11-16 Idenix Pharmaceuticals Inc Solid forms of an anti-HIV phosphoindole compound
CA2727620A1 (en) * 2008-06-13 2009-12-17 Schering Corporation Tricyclic indole derivatives and methods of use thereof
AU2009277172B2 (en) 2008-07-02 2014-05-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
EP2326628A1 (en) 2008-08-20 2011-06-01 Schering Corporation Azo-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
AU2009282574B2 (en) 2008-08-20 2014-08-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Ethenyl-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
EP2331511A1 (en) 2008-08-20 2011-06-15 Schering Corporation Ethynyl-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
EP2326627A1 (en) 2008-08-20 2011-06-01 Schering Corporation Substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
PT2376088T (pt) 2008-12-23 2017-05-02 Gilead Pharmasset Llc Fosforamidatos de nucleósidos de 2-amino-purina 6-osubstituída
TW201031675A (en) 2008-12-23 2010-09-01 Pharmasset Inc Synthesis of purine nucleosides
MX2011006890A (es) 2008-12-23 2011-07-20 Pharmasset Inc Analogos de nucleosidos.
MX2011007195A (es) 2009-01-07 2013-07-12 Scynexis Inc Derivado de ciclosporina para el uso en el tratamiento de infección de virus de hepatitis c (vhc) y virus de inmunodeficiencia humana (vih).
US8102720B2 (en) * 2009-02-02 2012-01-24 Qualcomm Incorporated System and method of pulse generation
WO2010101967A2 (en) 2009-03-04 2010-09-10 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Phosphothiophene and phosphothiazole hcv polymerase inhibitors
EP2417134B1 (en) 2009-04-08 2017-05-17 Idenix Pharmaceuticals LLC. Macrocyclic serine protease inhibitors
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
MX2011011105A (es) * 2009-04-25 2011-11-18 Hoffmann La Roche Procedimientos para mejorar la farmocinetica.
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI576352B (zh) 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
AU2010253791A1 (en) 2009-05-29 2011-11-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral compounds composed of three linked Aryl moieties to treat diseases such as Hepatitis C
AR077712A1 (es) 2009-08-05 2011-09-14 Idenix Pharmaceuticals Inc Inhibidores de serina proteasa macrociclica
US20110117055A1 (en) 2009-11-19 2011-05-19 Macdonald James E Methods of Treating Hepatitis C Virus with Oxoacetamide Compounds
WO2011066241A1 (en) 2009-11-25 2011-06-03 Schering Corporation Fused tricyclic compounds and derivatives thereof useful for the treatment of viral diseases
BR112012014899A2 (pt) 2009-12-18 2017-03-14 Idenix Pharmaceuticals Inc composto, composição farmacêutica, método para tratar ou prevenir uma infecção por vírus de hepatite c em um sujeito, método para tratar , prevenir ou melhorar um ou mais sintomas de uma doença hepática ou distúrbio associado a uma infecção por vírus de hepatite c em um sujeito, método para inibir a replicação de um vírus em um hospedeiro, método para inibir a replicação de um vírus
CA2785300A1 (en) 2009-12-22 2011-07-21 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and processes for their preparation, purification and use
WO2011087740A1 (en) 2009-12-22 2011-07-21 Schering Corporation Fused tricyclic compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
GB201001070D0 (en) 2010-01-22 2010-03-10 St George's Hospital Medical School Theraputic compounds and their use
EP2536410B1 (en) 2010-02-18 2015-09-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
JP2013522202A (ja) 2010-03-09 2013-06-13 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 縮合三環式シリル化合物およびウイルス疾患の治療のためのその使用方法
CL2011000716A1 (es) 2010-03-31 2012-04-20 Gilead Pharmasset Llc Formas cristalinas 1 6 de (s)-isopropil-2-(((s)-(((2r.3r.4r.5r)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2h)-il)-4-fluoro-3-hidroxi-4-metil tetrahidrofuran-2-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato; composicion y combinacion farmaceutica; y su uso para tratar una infeccion por el virus de la hepatitis c.
MX2012011222A (es) 2010-04-01 2013-01-18 Centre Nat Rech Scient Compuestos y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales.
EP2598149A4 (en) 2010-07-26 2014-09-10 Merck Sharp & Dohme SUBSTITUTED BIPHENYLENE COMPOUNDS AND METHOD FOR USE THEREOF FOR THE TREATMENT OF VIRUS DISEASES
WO2012050848A1 (en) 2010-09-29 2012-04-19 Schering Corporation Fused tetracycle derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
BR112013008510A2 (pt) 2010-10-08 2016-07-05 Novartis Ag vitamina e formulações de inibidores de sulfamida ns3
US8841275B2 (en) 2010-11-30 2014-09-23 Gilead Pharmasset Llc 2′-spiro-nucleosides and derivatives thereof useful for treating hepatitis C virus and dengue virus infections
US9353100B2 (en) 2011-02-10 2016-05-31 Idenix Pharmaceuticals Llc Macrocyclic serine protease inhibitors, pharmaceutical compositions thereof, and their use for treating HCV infections
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
US9243025B2 (en) 2011-03-31 2016-01-26 Idenix Pharmaceuticals, Llc Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US20120252721A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor
BR112013026345A2 (pt) 2011-04-13 2019-04-24 Merck Sharp & Dohe Corp. composto, composição farmacêutica, uso de um composto, e, método para tratar um paciente infectado com hcv
WO2012142075A1 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-azido substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2013033900A1 (en) 2011-09-08 2013-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2013033901A1 (en) 2011-09-08 2013-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Heterocyclic-substituted benzofuran derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2013033899A1 (en) 2011-09-08 2013-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted benzofuran compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
JP2014526474A (ja) 2011-09-12 2014-10-06 アイディニックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ウイルス感染の治療のための化合物および薬学的組成物
EP2755983B1 (en) 2011-09-12 2017-03-15 Idenix Pharmaceuticals LLC. Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
WO2013039876A1 (en) 2011-09-14 2013-03-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Silyl-containing heterocyclic compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2013056046A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3',5'-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
WO2013082476A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Emory University Antiviral jak inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections
US20130217644A1 (en) 2012-02-13 2013-08-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical Compositions of 2'-C-Methyl-Guanosine, 5'-[2[(3-Hydroxy-2,2-Dimethyl-1-Oxopropyl)Thio]Ethyl N-(Phenylmethyl)Phosphoramidate]
US9296778B2 (en) 2012-05-22 2016-03-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′,5′-cyclic phosphate prodrugs for HCV infection
WO2013177219A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid compounds for liver disease
WO2013177188A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
GEP201706723B (en) 2012-10-08 2017-08-25 Idenix Pharmaceuticals Llk 2'-chloro nucleoside analogs for hcv infection
EP2909223B1 (en) 2012-10-19 2017-03-22 Idenix Pharmaceuticals LLC Dinucleotide compounds for hcv infection
EP2909222B1 (en) 2012-10-22 2021-05-26 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-bridged nucleosides for hcv infection
EP2938624A1 (en) 2012-11-14 2015-11-04 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of sp-nucleoside analog
WO2014078427A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of rp-nucleoside analog
EP2935304A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
US9309275B2 (en) 2013-03-04 2016-04-12 Idenix Pharmaceuticals Llc 3′-deoxy nucleosides for the treatment of HCV
WO2014137930A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv
US9187515B2 (en) 2013-04-01 2015-11-17 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
US10005779B2 (en) 2013-06-05 2018-06-26 Idenix Pharmaceuticals Llc 1′,4′-thio nucleosides for the treatment of HCV
US20150037282A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
PL3650014T3 (pl) 2013-08-27 2022-01-31 Gilead Pharmasset Llc Preparat złożony dwóch związków przeciwwirusowych
EP3046924A1 (en) 2013-09-20 2016-07-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus inhibitors
WO2015061683A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv
WO2015065817A1 (en) 2013-10-30 2015-05-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Pseudopolymorphs of an hcv ns5a inhibitor and uses thereof
US20160271162A1 (en) 2013-11-01 2016-09-22 Idenix Pharmacueticals, Llc D-alanine phosphoramide pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv
EP3074399A1 (en) 2013-11-27 2016-10-05 Idenix Pharmaceuticals LLC 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
WO2015095419A1 (en) 2013-12-18 2015-06-25 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 4'-or nucleosides for the treatment of hcv
EP3114122A1 (en) 2014-03-05 2017-01-11 Idenix Pharmaceuticals LLC Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof
WO2015134561A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection
US20170066795A1 (en) 2014-03-05 2017-03-09 Idenix Pharmaceuticals Llc Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv
EP3131914B1 (en) 2014-04-16 2023-05-10 Idenix Pharmaceuticals LLC 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
PT3472149T (pt) 2016-06-21 2023-11-23 Orion Opthalmology Llc Derivados de prolinamida heterocíclicos
WO2017222914A1 (en) 2016-06-21 2017-12-28 Inception 4, Inc. Carbocyclic prolinamide derivatives
WO2022265577A2 (en) * 2021-06-15 2022-12-22 Agency For Science, Technology And Research Coronavirus enzyme modulators, methods of synthesis and uses thereof

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5496927A (en) * 1985-02-04 1996-03-05 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
AU600226B2 (en) 1985-02-04 1990-08-09 Merrell Pharmaceuticals Inc. Novel peptidase inhibitors
DE318216T1 (de) 1987-11-18 1990-06-13 Chiron Corp., Emeryville, Calif. Nanbv-diagnostika und vakzine.
ZA897514B (en) * 1988-10-07 1990-06-27 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
US5359138A (en) * 1989-04-15 1994-10-25 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Poststatin and related compounds or salts thereof
WO1990012805A1 (en) * 1989-04-15 1990-11-01 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Postostatin and related compound thereof, or their salts
ATE270326T1 (de) 1990-04-04 2004-07-15 Chiron Corp Protease von hepatitis-c-virus
JP2804817B2 (ja) 1990-04-13 1998-09-30 財団法人微生物化学研究会 ３―アミノ―２―オキソ脂肪酸誘導体の製造法
JPH04149166A (ja) 1990-10-12 1992-05-22 Nippon Kayaku Co Ltd 新規ケト酸アミド誘導体
AU667463B2 (en) 1990-12-28 1996-03-28 Cortex Pharmaceuticals, Inc. Use of calpain inhibitors in the inhibition and treatment of neurodegeneration
AU666176B2 (en) * 1992-01-31 1996-02-01 Abbott Laboratories Mammalian expression systems for HCV proteins
EP0650368A1 (en) 1992-06-24 1995-05-03 Cortex Pharmaceuticals, Inc. Use of calpain inhibitors in the inhibition and treatment of medical conditions associated with increased calpain activity
US5514694A (en) * 1992-09-21 1996-05-07 Georgia Tech Research Corp Peptidyl ketoamides
US5414018A (en) 1993-09-24 1995-05-09 G. D. Searle & Co. Alkylaminoalkyl-terminated sulfide/sulfonyl-containing propargyl amino-diol compounds for treatment of hypertension
US5843450A (en) * 1994-02-14 1998-12-01 Abbott Laboratories Hepatitis GB Virus synthetic peptides and uses thereof
IT1272179B (it) * 1994-02-23 1997-06-16 Angeletti P Ist Richerche Bio Metodologia per riprodurre in vitro l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 del virus hcv.
US5843752A (en) 1995-05-12 1998-12-01 Schering Corporation Soluble active hepatitis C virus protease
US5919765A (en) * 1995-06-07 1999-07-06 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitors of factor XA
GB9517022D0 (en) 1995-08-19 1995-10-25 Glaxo Group Ltd Medicaments
US5763576A (en) * 1995-10-06 1998-06-09 Georgia Tech Research Corp. Tetrapeptide α-ketoamides
TW442452B (en) * 1996-03-01 2001-06-23 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors having an alkynylamino side chain
US5633388A (en) * 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
IT1285158B1 (it) 1996-09-17 1998-06-03 Angeletti P Ist Richerche Bio Polipeptidi solubili con l'attivita' di serino-proteasi di ns3 del virus dell'epatite c, e procedimento per la loro preparazione e il
EP0929636B1 (en) * 1996-09-24 2002-12-04 The Procter & Gamble Company Liquid detergents containing proteolytic enzyme, peptide aldehyde and a source of boric acid
US5922757A (en) 1996-09-30 1999-07-13 The Regents Of The University Of California Treatment and prevention of hepatic disorders
EE04023B1 (et) * 1996-10-18 2003-04-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Seriinproteaaside, eriti C-hepatiidi viiruse NS3-proteaasi inhibiitorid
GB9623908D0 (en) * 1996-11-18 1997-01-08 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
US6291640B1 (en) 1996-12-27 2001-09-18 Boehringer Ingelheim Ltd. Peptidomimetic inhibitors of the human cytomegalovirus protease
WO1998037180A2 (en) 1997-02-22 1998-08-27 Abbott Laboratories Hcv fusion protease and polynucleotide encoding same
PT1003775E (pt) 1997-08-11 2005-07-29 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Peptidos inibidores da hepatite c
AU757072B2 (en) 1997-08-11 2003-01-30 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptide analogues
GB9809664D0 (en) 1998-05-06 1998-07-01 Hoffmann La Roche a-Ketoamide derivatives
AU4556999A (en) 1998-06-09 1999-12-30 Neurogen Corporation Pyrido[2,3-b]indolizine derivatives and aza analogues thereof; crf1 specific ligands
GB9812523D0 (en) 1998-06-10 1998-08-05 Angeletti P Ist Richerche Bio Peptide inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US6576613B1 (en) 1998-07-24 2003-06-10 Corvas International, Inc. Title inhibitors of urokinase
US6323180B1 (en) 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
AR022061A1 (es) 1998-08-10 2002-09-04 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Peptidos inhibidores de la hepatitis c, una composicion farmaceutica que los contiene, el uso de los mismos para preparar una composicion farmaceutica, el uso de un producto intermedio para la preparacion de estos peptidos y un procedimiento para la preparacion de un peptido analogo de los mismos.
JP2000256396A (ja) 1999-03-03 2000-09-19 Dainippon Pharmaceut Co Ltd 複素環式化合物およびその中間体ならびにエラスターゼ阻害剤
CA2390349A1 (en) * 1999-12-03 2001-06-07 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Alpha-ketoamide inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
PT1268519E (pt) 2000-04-03 2005-08-31 Vertex Pharma Inibidores de serina protease, particularmente protease ns3 do virus da hepatite c
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m

Also Published As

Publication number Publication date
ZA200210311B (en) 2004-03-19
NO20030271L (no) 2003-03-18
CN1446201A (zh) 2003-10-01
US7595299B2 (en) 2009-09-29
JP4452441B2 (ja) 2010-04-21
NO20030271D0 (no) 2003-01-20
PE20020266A1 (es) 2002-05-11
MXPA03000626A (es) 2004-07-30
EP1303487A4 (en) 2005-11-23
WO2002008187A1 (en) 2002-01-31
IL153669A0 (en) 2003-07-06
KR20030081297A (ko) 2003-10-17
PL365695A1 (en) 2005-01-10
US20020160962A1 (en) 2002-10-31
ECSP034439A (es) 2003-03-10
NZ523781A (en) 2004-10-29
HUP0303358A3 (en) 2005-10-28
BR0112666A (pt) 2003-06-10
JP2004513881A (ja) 2004-05-13
WO2002008187A9 (en) 2003-01-03
EP1303487A1 (en) 2003-04-23
RU2003105221A (ru) 2004-09-20
US20050176648A1 (en) 2005-08-11
US7169760B2 (en) 2007-01-30
SK742003A3 (en) 2003-06-03
AR030249A1 (es) 2003-08-13
CA2410682A1 (en) 2002-01-31
AU8063701A (en) 2002-02-05
JP2009292832A (ja) 2009-12-17
CZ2003195A3 (cs) 2003-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUP0303358A2 (hu) Új peptidek mint hepatitis C vírus NS3 szerin-proteáz inhibitorok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
EP1301486B1 (en) Imidazolidinones as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
JP4748912B2 (ja) アルキルおよびアリールアラニンｐ２部分を含むｃ型肝炎ウイルスに対する大員環ｎｓ３−セリンプロテアーゼ阻害剤
EP1385870B1 (en) Peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
US6800434B2 (en) Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
WO2002008251A2 (en) Peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
HUP0303436A2 (hu) Diaril-peptidek mint a hepatitis C vírus NS3-szerin proteáz inhibitorai, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
AU2001280637B2 (en) Novel peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
AU2001280637A1 (en) Novel peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus

Legal Events

Date Code Title Description
FD9A Lapse of provisional protection due to non-payment of fees