HU229870B1 - Targeted cytotoxic anthracycline analogs - Google Patents

Description

Célzottan cíiotöxilms antraciklln-szérffiazékok lalálmánytínk tárgyát a rákellenes antraeikiin-származékok célzottá tételének kémiája képezi. Részletesebben, a találmány tárgyai a óoxornticin CICI vagy daunozami.ana:l. módosított származéka (DM-DGX) kovalens kapcsolása peptídhormonok — mist amilyen az LH-Rü, bombezin és szomatosztatin — analógjaihoz... Szék a kovalens ken j ágér tnmek cé lzo tt an al kalás zba tok kniöo.bozo t náoro k· ellen,, amelyek a pentidhormon-analógok receptorai fc hordozzák.

a hatos helyzetben cltotoxlkus csoportokat feondozó LH-Rn analógokat az EE-C 450.461 Bl számú szabadalmi iratban írtak le.

a dO 9Ö/99799 szánó szabadalmi iratban gonadotrop hormonokat semlegesi hé CnRH iLB~RH> analógokat írnak le, Ebben a találmányban IH-nh analógokhoz kapcsolt hexánokat — mint amilyen a ricin

.....: alkalmaznak a gonaÓQtrop hormonok semlegesítésére és ezáltal a szexhormonokhől függő rosszindnlató daganatok kezelése. Említik áz LB-RH dob©lüb3..cln_:-s<z:ánmn-zéRá;t Is anélkül:,, hogy pontosan megadnák a kapcsolás kémiáját.

Ci tót oxi ks zamatos z tat in analógok vannak leírva az 96 98/070.946 száma szabadalmi iratban.

összefoglaló: közleményében. R.v, Sehally részletesen leírja a küldnbönő hámorok sejtmembránján található LB-RR, bombezin- vagy szomatoaztatln-analog receptorokat (áni .c-lanoer Rrags, g, 115139 ilRRájl.

* ί :

** <?

S. Weckbeofcer számos hivatkozást sorol fel összefoglaló közlenényében, amelyek a szomatoaxtatin és a szómatosztat in-aralogo k rooept o r a1n ak é s re ce ptor-a 11ipu s a1nak j: e1»:1érét 1g a zο1iák számos n orma fis és tumorszövetben iparosé. 7her„ 66, 245-261

U9S3) } ..

A bőmbezin típusú pepiidekkel és a bom£;ezl.s/GRP receptorok jelenlétével a normális és trmbrstövetekben töglaikozik A. Boabet t Llb Get Begtideso Bioobemist.ry ana Physiolögy, 423-445; eás. J, oaish és G.ü. Dookray, haver Press, bev? York, 1994} és E. Spindell (la Recent Progreas in hormoné Research, 48; öcademic Press, 1993} ..

Ez idő szerint a doxorubroin a legszélesebb körben használt,, igen hatásos rákellenes hatóanyag. Azonban szaros tumor egyáltaIán nem reagál, rá, és alkalmazását korlátozza s többszörös gyögyszerreriszteno:la fmultibrug resistance, MER}, a kardiotoxicitás és a neutroípánia is, amelyek a tartós kezelés következményei.. Annak, érdekében., hogy ezeket a hátrányokat kiküszöböljék és tovább fokozzák az antraciklin antibiotikamok. szerkőzetében jelen levő, rendkívüli dagsnatsejt-pusztito képességét, szintetikus származékok ezreit írták le, köztük a célzottá tett analógokat is, amelyeket különböző hordozó makromolekulákhoz kapcsoltat .

A DOX és analógjai történetének nagy részét D.Rh Henry írta meg ú, Adri árnyéin , ÁCS Symp. Ser. bo. 3c., car.oer Chemotberapy, hm, Chem. loc. 15-17 {1975} es ,, Roxorubicín, Asz. Press,

1931} .

A nagy aktivitású, aikiiező, keresztrezzszterólát nem okozó 3’‘' -dezamrno-3' - (A-oiano-i-mórfo 1 ind. 1} -POX-or és származékait, valamint tumoréi lenes hatásukat az US 4.464.. 52 9 számú szabadalmi * * * r

% ι,:.

iratban írták le. á v egy tietek szintézisét és biológiai vizsgálatát szintén leírták dáoshor és munkatársai, X dac. (tea, 27, 122-625 (1994};.

Gac és munkatársai., leírták egy bbs-szekvenoia. tormaidebidközvetitésö sitii esését egy tantorubicin-szármasékkal (aroo. ka U. Acad. Sói. öiá, 25, 2926-462? (1391)}.

Látens alkilezd szubsztítuenssket hordozó autrsoikiin~ans~ lógok vannak leírva a a. Módi Crec. 35, 3266-3212 (1.932) közleményben. .

Sgy, a OOX dac nos ami n-ni.tregén jenek alkilezésére hasznai! a, m-dijcő-vegyuiot és egy áj merfall.rl. 1 -OOX származék előállítása van leírva az E? llt.liy nmámá szabadalmi iratban.

Az US 4,299.822' számé szabadalmi iratban az ö~ (trlflccr-aeetii.) -adrra.micini^-O-valerát · AD-32 ) fokozottan vi zoldékony -berni gitt arát és -bemi.adipát analógjai vannak leírva.

horton és áriéba kaiönbözö antracrkl.it analógok számos 14-0-észterét Írták le, és tóm találták lényeges változást a tumorellenes hatásban a 14-OR anyavegytiefhoz kémest iái ántibiorica, XXXV!, 1211-1215} .

Ahhoz, hogy célzott kemoterápiás hatóanyagokat tervezzünk, a kővetkező szempontokat keli figyelembe venni:

1. a hordozó molekula és a kemoterápiás hatóanyag közötti kötés a célpont eléréséig stabil legyen;

2. a hordozó molekula őrizze meg biológiai, tulajdonságait a konjugaromban, igy tartsa meg kötődőképosságét;

3. a kemoterápiás hatóanyag őrizze mse; farmakoiógiai aktivitását a kon)ugaromon beiéi, így tartsa meg oitotozikus aktivitását; es

1. a konjugálás eredményeként a származékok aktivrt.ása rokozot’ - » » χ V «r * Ά 2*JL *** *** *** * * V * Λ φ *··* * :** »* tabb és/vagy általános toxieitáse kisebb legyen, aint. a nem kor3 eg ált c s op o r t o ké »

Az ŐS 4.263,273 számú szabadairsi iratban .leírták a ©OX konysgáeását a datnozaeíngeoport nábriem-per j-odátos oxídá.iááán kérészről, amit a bordáié moiekniS: agy primer amincsáporriáVai. ue'--'!y, jek.kiP’ a,k^_ezos kever, á, daunezamin :n.itrogénafe.oeda. egy iáisb-akex.íík.sav stasasö kő ebei k tat é sava I, pn- ér z a kény köbé s sel kapcsolna tő tna krcwol ekniás hordozókhoz íSioeáor?. Bíopltys- áss, C'ownuri. 102, 1048-1Ö54 tliél} 1 , lkáig© és mo.nkáéárssi<, észter- és 0--->-k©bések kialakítását í’3< a a 1 i--0-,73-00 a a© rvK r, n ts fefot’cb vaay pmaminosava < körött rAuítí©ri_z 11, ©21--124 (11811 és Sir, 17 őanoer Ilin. bárói. 27, 121-421 713«}), üarfQ.li.nö-DQX-”©b_: ja SSé egy erősen akbiv, a dan'noeami_:n-re οροί; tón módosított analógba.) keni ágálták, a obit estekbe z egy hidro·^ lizáihato ílizoszomotrop, pH-érzékenyi hidrazon-kötéssel, a ©ibolaxikba hatóanyag ^:o~l2 oboásogortjár igénybe véve táls©©rIngébe Cbemlstry,· 1, yS) 121-231 (1330} } .

Sí kérésén használták .fel. egy lenetncsoport karboxramid-kötésének érzékenységét az enzimes lebontással eremben azokban a ©ÖX-kenjngábneokban, amelyek egy „tavtartő pepiidet, előnyösen Aia~Íeo-Ala--j7ey~t tartalma znak, ahol a karbont 1~ terminális len aciiezi a darnozamin nitrogénatomját a DOX-ban, ás az amino-tar-minális él a kapcsolódik a horóozohoe egy dikarbonsav közbeiktatásával (Froo. Xatl, Arad, ©ei, 77.7,- ?§y 826-22S f. 1382} ) .

A ©OX daanoramin nirrogonatooját gintársavval aoiiezve és így kapcsolva 1H-RH analógokhoz.,- a citót©síkas akti vitás súlyos veszteséget szenved {Proc. .háti, Acad- lei. dSA_z SS, 972-517

További közlemények, amelyek a találmány szerinti vegyület kuiönhoaő humán tumorok kezelésére történő alkalmazását tárgyalják , az a1á hb iak;

1. Fohaily és munkatársai* in Treatment vith enhfi ánaiogs; Conzrcverzi.es and Perspectives; tds. SÍ. Fi.l.itcri ás Ct Fismioni (Far the non, Cárntoréh* ü.37, 1986)

•p »	lány és mi	un ka társai* Rroc. Táti.. átad.	Tói,	7F.9, 93*	72 69-
727 3	(19963
.3.	Fano és tm	unka társai, áros. Fáéi, .átad.	Fez .	JFR, 91,	799(1-
70 90	(19308
0 .	Re k a s i és 9 \	munka társai, andocricol egy,	2.2.2 '	(55 199)	1-2900
k n. 3“ . c.	·> / Okra iövre	és munkatársai, Canoer Reá. 50	, :801-180 6 (lí	190)
6 .	Emcns és munkatársai, Center Rés. 53* 54	38 - O0:	0 6 (1993)
7.	Rmons és	munkatársai, Journal oá C.	? γ yj	Redocrizr,	, and

dezacoi:.. 77* (67 Ti oh (1993)

8. é.v. Schally, Cancar Tea. 08, 6O'^?7-6965 (1988;

9,. Schally és munkatársai, Jntsvcational <.Tv;.rnal oá Rsncreaáoiogy, 16, 277-280 (1990) ¢9- Srkarov.le és mun Tat ár sah, oi Ciin... Fadotrinoi. Measrt. 79* (35 51.)-Ili (:.900)

11, Radulövic és munkatársai, Ca.noer Fez tere* 62, 263-271 (1592;

„ QA.n és munkatársai* int , dl Cancer* 60, 600-700 (1993)

13. Raouicvie és munkatársai * P.F.. F.F.F1 200, 390-001 (19923 lé, Radulövic és munkatársai* éoáa öre.oicaáca_z 33*· (6) 693-701 (d. 990)

15. Pinaki és munkatársai, Canoer letiers* 71, 189-196 (1993)

16. 0' Byrne és munkatársai, Far. dl Cancar, 2Oá, (11) 1,682-1687 « * > * » χ.

*

1.8. Pina ki és Etánkat ár esi,

19.

0 ,

09913

1'?. Pinski és munkatársai, Sr- 21 Canoer, 70_; 826-892 (1994) Canoer Kés. 54,, 5995-5901 (1994)

Pinski és munkatársai, int. 91 Carcer, 95, 870-874: (19993 Banks és munkatársai, ánticaooex; Prugs, 3, 519-523 (1932)

2:1. Reutu ás Kvol.s, ártér Pest 52, 9074-8078 (3 ^? 1. >

22. Halmos és munkatársai, Oa.ncer Pes. 55, 220-287 (12953

23. Halmos és munkatársai, Center lettors, 35, 111-213 (19943 22. Qin és munkatársai, 21 Canoor Pes, Cián. Cntel. <20, 513-523 (1299:3

25. Qin és munkatársai, Cártar üss. 54, 103:5-1091 (1994)

26.	□itt ép máj	akatársái,, lök.: P. Csüngi:, 95, 257-	-282:	(1995)
27 ,	Per le: és munkatársai,	The áros taté, 25, 23-	33 (1	999)
28.	Pinski és	munkatársai.	Int. J. Caooer, 57,	574-5	80: (1984:3
29.	Paátlovi o	és munkatársai, P. C, E..S .M. 2:00, 3	99-0	1 (19:92)
30, < 0 O C	áüdul.övio	és munkatársai, ázás Oncologias,	ráz	(6) 893-701
V .L d·' d) :3:.1 .	P.i.nskí és	műn ka há z sál..	Center let tors, 71,	39-4,9	9 (19933
7 9	Pinski, és	munkatársai,	3rt J, Caooer, 70, 8	86-892 (1294)
33.	Pinski és	munkatáras1,	Caooer Pes. 54, 5895	- 53 Ö l:	(19843 .
	Λ találmány szerinti	vegyületek áj, célzóttan	citotoxikus

peptidhormonok, amelyek egy antrgciklin citotoxi.kus hatóanyagot, például DOX-öt vagy Dk-DOX-ot tartalmasnak egy pop ti duó rmon, például m 143-0.2, oomhezrn és szomatosxtátin analógjaival komángálva, Ezeket a eitoeoxikus peptidHormon konjugátnmokat olyan tumorok kezelésére tervez tök, amelyek a konjugátumra spéci alkus receptorokat hordoznak., mint amilyenen as emlőrák, petefészekrák, a Híéhnyáikahártys rákja, a prosztatarák, a hasnyálmirigy rákja, a vastagbaarák, a gyomorrák és a tüdőrák. Etek kozni szá* -* mos (nem konjogált) citotoxikus sntraci kiin hatéanyag, amelyet itt , fh’ t\ r .. c m v, azonban toxicitásuk túl nagy ahhoz, hogy koniogáiahlan formában ns alralcazhatök lennének.

A. találmányunkban bemutat ott, a dauwz'a.ffiin--cs-oporton módos-ltot t DOX~szároazékokat egy olyan kutatási program során fedeztük tel, amelynek célja űj, nagy aktivitásé, keresztre^rsztentiát nem keltő, hordozö pepiidekkel kovalens k?'\ „ca:_v ^w '< keozoseze a 1 κ a 1 m a a DO X - s z á r m a z é ko k e i δ á 111 s á a a v o 1 r..

A stabil, kovalens kötéssel összekapcsolt Kong ugátumok — amelyekben az alkotórészek teljes mértékig negőrzik biológiai aktivitásukat — képzését egy drkarbonsav (mint amilyen a gintarsav) összekötő csoport alkalmazásával értük el. Az összekötő egyik karboxilosoportia egy észterkötést képez a OCX vagy ufe-DOX ri-hidretil-csoportjavai, míg a másik karbont lesöpörtja egy karbevarrd, ö kötést képez a horöozo peptid. egy jól regvél asz tolt, szabad aminocsoportjévei.

A találmány szerinti vegyületek a qí4...„ó—r—p m általános képlettel irhatok le, aoelyoen jelentése az alábbi általános képletű csoport

afeeiynek: a tu CSO'pOX feá jelentése egy olyan 1 általános képi le-es:-hely tetben agy Gidailánca van;

jelentése egyse kötés vsay egy ----0(0}.....(CHy)p-C<0) általános képletű csoport, amelyben n értéke 1, 1, 2, 3, 2, 5, 6 vagy 7 lehat; fe jelentése attaocsoport vagy agy aromás., telített vagy réstlegesan telített., öt- vagy hatésgá betsaociklas, amelynek'

s.r 2:t- ^2a “S egy nitrogénatofe van, é-s adott esetben, van agy batsdlén-cooportja, amely a gyáré két: stomstédos aréna tófej é:hnt kéoeeelédvé. agy élal.kluaes réhösaert 'képet.;

fe jelentése hidrogénatom vagy egy gégéidé songét,, alkalmasan egy LR-RH-, botbetin- vagy stometosrtatin-enalög, de nincs kitárva más, élettanilag aktív peptid sec..

kfelönéden kívánatosak attak ar ld-~feS---snalégek:, amelyek afri--;

Oltással hlrnak s, rossslndalatü daganat sej tek receptorai iránt, különösen pedig ások at analógok, amelyekben egy D-Lys csoport van: a: hatos: helyréében, valamint, a megkentltot! s romát Oísrtat Ines hofebe:ehn---anslbg<gh. Mindemellett áöbhfesr:, amennyiben fe jelentése aminccsöpört, agy jelentése hidrogénatomtól eltérő, .kmenryloem a és 1 jelentése hidrogénatom, ágy fe jelentése amiao őseget t tol el téro,

Munkánk során egy áj stiniérisreakcldé fedettünk re!, bem csak art találtak, hegy a dorerublcin és s tárna te kai egy dikarbórsav .csepetéph. keresetni:, a lé-ér helyréénél kapósa ina tok· fej, farmakolégiáilag hatásos konjagatúrokká, de egy áj utat la talál tant rést legesen telített, heterónikiadós csoportok előállítására vicinális vagy dlsrjanké isset ο,β- vagy e, y-hiferoxt-( yrivér aminofcből, lalálmányrnk egy különös aiksltatása a 2'' -pirrolinil~ és az fej, fe-tesrshidropirrdil-csoportok kialakítása •o. xci/sa w* *,* « fc * fc* fcfcfc * > fc

A* «fc * ♦ Μ * fc fcfcfcfc »♦ « ♦ *X «

4« « dannozaml.t cvtorcsoportou. E< reakció alkaimazhatósáya azonban szélesebb bóra. öt- vagy hattagú, részlegesen telített, heterociklusos csoportok állíthatók elő ágy- hogy egy vicinális vagy diszjunkt hídroxi -amint egy olyat, halogénét ómmal azubsztituáit aldehiddel reagá: 1 táróink, arteiyben kettő vagy három csoport van az aldehid-szénatom és a halogénatomot hordozó szénatom között. Etek a csoportok lehetnek mind metiléncsoportok, vagy egy heterootom, például oxigénatom lehat közöttük, k reakoio három lépésben vi belezhető k.l. először a halogénezett, aldehid rgen nagy feleslegét reagálhattok: a. hidroxi-amzn savas sójával, alkalmasan egy ínért, poláros, vizmentes., szerves oldószerben. Ekkor keletkezik egy öttagú oxazoildzngyürű (vagy egy hattagú 1,3-tetrahídrooxazin-cyürű) az aldehidcsoport és a hidroxiiesoport, valamint az aminesoport kondenzációjával, hot a terméket egy szerves bázissal, alkalmasat egy tercier aminnal reagáitatjuk, mire egy hidogét-halogenű.d lép ki a korábbi halogénezett aldehid halogénatomja és az oxazoltdit- vagy I, 3-tetrahidrooxazín-gyűrő szekunder ami.tocsoportja között, és kialakul egy fúziónál! gyűrűszerkezet az öt- vagy hattagú gyűrűhöz kapcsolódva. A oázist egy gyenge savval, alkalmasan egy szerves savval., példáéi jégeeetfcei közömbösítjök. Ezután egy vizes savval, alkalmsat egy szerves savval reagáltatvs felnyitjuk: a fuzionált gyűrűs szerkezet Guszolid.it- vagy 1, 3-takrahidroouazin-részét - A szakemberek számra nyilvánvaló, hogy a kiindulási aidehiotöi függően a keletkezett, tidrogénatomot tartalmazó gyűrű legalább egy további betereátömet tartalmazhat, amint azt már említettük, az általános reakciővázlat. a kővetkező;

** « X φ φ >' φ

V X Φ

(nagy felesleg) vízmentes, aprntikus oldószerben * φ » φ « * «χχ*

C ········ 2 C

ΟΗ

ΠΗ>

ΝΗΖ α

Ο

X <Χ €

C— Ζ —C........

i«

C — <CK₂ αχ • 1

W

W

X’ bázis (vízmentes tercier amin) (IV) cI o

z ~~c r---_CH, víz a sav

P - Z· tó·

C~~ Z ÓH

C (VI) z \

HC CK, •w jelentése naiogénaterfp alkalmasan kgéra- vag-y jédatoag előnyösen ρ oda r om;

jelentése métáién-, jseéilén-cxr- - A?y ·;a: cr.cs 'om .- es j elen céa a s emmi vágy met iIén c sορ o rt.

Ha. X jelen lése semei_f akkor ao a.ioehidkői egy öttagú cxarolisin.....gyorri keletkezik a reakció első lépésében. Ha X jelentése ceiiiencscpcrt _f akkor ao aldehid egy hattagú I,3-tetra~ hiérooxazin-győrűt képes, Bar az ilyen gyűröképzőbések jól isseriek, esek koséi nácinja a halogénéként atkán oloailánc gyűrőoáró hatáséval bázikus közegben - mint amilyen sgy tercier arain egy vizrentes oidosocrber — új és meglepő reakció.

*9

Áss ábrák rövid leírása

1, ábra. Az ösztrogén-füögetlsn MÁT egér émlőfümor cRS-29) térfogatának változásai a találmány szerinti vegyülőtok és a DOX különböző dózisainak hatására (a dőlt számok az otoisé mérés időpontjában még élő állatok száma).

2,. ábra. Az osztrogén-független TXT egér omlötumor (17-71: térfogatának változásai néhány találmány szerinti vegyület, egy korábbi vegyület és a DOX különböző dózisainak tatáséra fváiogst o t1 c s ο ρ o r t o k) ,

1. ábra. héhány eitotoxikas Üi-RH analóg hatása ösztrogén-fügyetlen MXT egér emiőtamores egerek tölelésére .

é. ábra, A patkány prosztata-karcinőma (Dunnlng χ-3327-R) térfocistának változásai t.bn Copenhagen patkányokban egy korábbi agonistávai és néhány találmány szerinti vegyülettei végzett kezelés hatására.

5. ábra. A patkány pr osztata-xaromóma iDnnning R-3327-H} térfoi -.-, 1 i r = n-η ό < t lett zot'.t c jlettel és egy megfelelt, ezzotoxikts tn~RR anaióggai végzett kezelés hatására.

á, ábra. A patkány prosztata-kareínömáh (Donning R-3327-X) hordozó Copenhagen patkányok festtömegének változásai néhány talál' ·· k ~ ⁴ vx i t - '?s v < i< \ citotoxikns Lh~RR analóggal végzett kezelés hatására.

7. ábra. Az QV 10-63 humán petefeszek-tenor térfogatának változásai meztelen egérben néhány találmány szerinti vegyül ette! és oexorotioinnoi (Cg} végzett kezelés hatására 7MTD ^:::: tolerált dózis).

maximális

>z előnyös megvalósítások leírása

A Q csoportot ···· ha R¹ helyen előnyös csoportok állnak -- Qy Qn alcsoportoknak, nevezzük, amelyek közül Qy ~ Qg áj, cltotorik n s cső ρ o r tok.

Ö előnyös jelentései, amelyek a zárójelben feltüntetett Q_x alcsoportokat eredményezik, a kővetkezők: amino- ίζη), pirroli.din-i-il- (Qy} , izolnőolin-2-il- IQyi , 3-pirrolln-l-áldd} , S-pirroiidon-l-il·- tied 2-pirrolin-.1.-11- CQr) , 3-piperídon-l-il~ (öyl vagy 1,3~tetrsöidropiridin~1-11- RQní csoport.

így tehát ha R-P jelentése hidrogénatom és Rt jelentése sminocsoport, akkor Q- a doxornbioln; ha. A--P jelentése hidrogénatom és Rt jelentése pirroiidin-l-il-osoport, akkor Qy a 3' -dezsgd.pe—K - Rprr rolidin'-l-il }-dozörnbioin; ha F-R? Iriöregénatom és Rt jelentése 1 zoindolln-2-ii-csoport, akkor Qg a h -zezr.rr-? - ytzotndoizn-2'-rl;-doxorobtcin; ha R-P jelentése· hidrogénatom és Ft jelentése 3-pirroiin-l-il~csoport, akkor Qr a 3' -dezaminc-3' - ti -pzrroiin-i'-iiö -doxorobicin; ha R-R jelentése hidrogénatom. és Rt jelentése 3-pirroliöon-l-l1-csoport, akkor Qy a h -dezamino-3'' - (3 -pirrolidon-1 -11} -öoxorubicin; na R-P jelentése hidrogénatom és ?t jelentése 2~pirrolón~r-íl-csoport, akkor Qy a 3' -de zárni no ~3^? - ;2-pzrrniin-V^?-11)-donoruhlcrn; ha R-P jelentése, hidrogénatom és F^? (elöntése 3^piperidon-l-ii-csoport, akkor Qy a 3' -oezaml.no-3’ - {3^f/ ~pipeti.őon~l~ii} -donor ubicin ; és ha. R-P jelentése hidrogénatom és F' jelentése 1,3-tetrahidropiridis-l-iicsoport, akkor Qg a d ~dezamino~3^? - Olt, 3 - tetrahidropiridin-l -11} -doxörerdőin, áros a vegyületek, amelyekben a daunozamdn nitrogénatomja egy öttagú, alkilezö toiajdenságá gyűrűbe van foglalva, IS - 5Sazer hatásosabbaA in vitro, piát homológ ellenpár jaek., amelyekβ ben a óaonoramln nitrogénatomj a. egy hattagú gyűrűbe van foglalta (ilyen párok a Qy és ló, valamint a Qr és Qg) ..

lólélmáryenk előnybe vfegvéldéitéeálba-n, a_: qP^íí?---G:--p.-'P áltálénos képletü vegyűletben p_;„p jelentése hidrogénatomtól eltérő. Ahol e jelentése hidrogénatomtól elférd, tton a'n-. m P; vagy Po, ott Py egy IH-nH agonrsta hordozó, egy LH-P.H anfagonista hozom zfn vagy egy meg kor ti tóét Ih-Pn analóg bőrön ed, Pg egy megkertitett szomatosztatin-analög és Po egy bomheoin-antagonisiaρ p a. lkai ita sas léi éaa-Pbh-űb d~ Ser-lye-lmh y a (Íny 1 -leu-Arg· Pr t -Doh: általános kép leél oeyhld, amelyben

XAn jelentése hidrogénatom: vagy egy dl ami no_:~ s zabé étit ven: s;, példa ni AgSu vagy AyPr, és ahol ha

Aaa jelentése Gin, akkor Sbb jelentése Sis, Cos jelentése Ing és bed jel érit ése oly-Ady;

Aaa jel ént ése Ao-o-bel (Íj , Ao-P-Phe vagy Ao- d-Phe íé-dl-}, akkor phb jelentése P-Phsjé-Gi) vagy d-Phe, Geo jelentése b-Pal (ii vagy G-lrp, és Sód j elen.Οόοο d-Ala-hHyy és ha

Aaa-Sbb-Goe jelentése A.e, akkor Idd jelentése: egy -Ihl·-Cég-CHy o söpört r

:.............. .............................I

P 2 egy A a a -€ y s - Bbh- D - Irt- L y s - C eo - C y s -dód. - ílHg általános képlet! pepiid, amelyben ha

Aaa jelentése P-Phe, akkor Itt jelentése Tyr, Geo jelentése bal és dód jéiehrééé Pór vagy Izpr és ha

Aaa jelentése D-drp, akkor Seb jelentése Phe, Geo és Ddd j elentése· ihrr es

P 3 egy Aaa-G1n-lrp-AIa-Pal-A1y~His-dea-Bbd-hHy áltálános képie™ sammt/yn ts peptid, amatyóén

Aaa jelentése sermt, D-Tel vagy i-Pne, és Bob jelentése (GBy-kH}Len, (Cho-bB)éhe.

(CBy-bh)Trp, ;CΒ ρ~h}lac vagy (CHy-b)CbTac.

A találmány ti vegyi letek közé tartozó Lh---B.B analógok esetében a eitotoxikts Q csoport az AB-kH analógok D~lys~ jének oidaliáneához, vagy sz ahhoz kapcsolt (Xx?n csoporthoz kapcsolódik egy dikarbonsav összekötőn keresztül a (VII) általáét s· képlet szerint:

Aa a - Bbb-C c c-S e t -lyr- D - lys {Xxx} _m (jó 4__q—p) _n~ Len -Arg - Pro- Dö ö ( V 11} amely képletben m értéke 1 vagy 0, és n értéke 1 vagy x, azzal a kikötéssel, hogy ha m érteke I, azaz (Xnx) jelentése AgBt vagy Agár, akkor n értéke 1 vagy 1, és ha m értéke 0, azaz (Xxx) jelentése Aid rögén átért, akkor n értéke 1.

A találmány szerinti, ót vegyületek kézé tartózó szonazosztatin-analögok esetében a citotoxikus C csoport a szomazosxtatin-analögok soai no-termináliséhoz: kapcsolódik egy dikarbonsav összekötőn keresztel a (Vili) általános képlet szerint:

Qi^ÍJ —O—R - Aa a - G y s - bob - D- Ír p - lg s - C ο o - C y s - Ddd - kép (Vili)

A találmány szerinti, út vegyületek közé tartozó bomhezin-antagonisták esetében a cltotoxikns Q csoport a hombezin-anragóniaták ami.no-terminál isátoz kapcsolódik a. (IX) általános képlet szerint:

Q · ό Aa a -Gi n ~y rp~ Ai a ~VaI -Ö1y-η1 s -len -bbb-kdy ( 1a;

Találmáeynok különöséé előnyöd oeynalcsitásaj. azok a peplidkenü egén nmek, amelyek citotoaikoö csopor ekénk Qy- ^;;noy öp-t tartaimaznak és glntársav In - 3) bennük a diksrbeasav összekötő, amely egy 14-G-észz.erkenést képes a Qy-gyel (öoxeroP/.oin) vagy Qy~tai {k-pirreline-doxornbicin? , és egy xareoxasrdd-közést a kordoné pepiiddel,

Találmaaycck. legelőnyösebb magva les i tésai aa alábbi ellőt c ni k n s L d - R d ars a logo k:

I, Glp-lbs - Top- bet-r y r-Ö-bys (Gr¹ -G-göl.) -ben -A r g - kre-üly-Rég;

. GLo-dis-Trp-Ser-Üy:: “ö--d.ys íQgL4-g-git) -beíí-Árg-Pzo-Gi y-Rdy;

az alábbi eizotoxikns eaemaiosztatdo-analogoK:

ό'''.................. ...............~~j

3. Q: --0 ~ g 1 t - D -· Rk e - Cy s - T y r - ö - T rp -1. y s - V a 1 - C y s -i n r - RH y;

i............... ............... ...............

, Q g a * - 0 - g 11 - o - F n e - C y s - T y r - D - ϊ r p - L y s - V a 1 ~ C y s - i h r - Η H y ;

í................ ................-........._?

5, py - -0 -g 11 - D ~ 1 rp ~ e y s - Fka - D~ T rp~ t y s - Tör - Cys - T k r -kH g;

Γ............ .............-.........Ί . QR '^! -O-g:.:. -C-Trp-Cys-Fke-O-Trp-Lys-Tnr-Cya-Tcr-ikig;

i ................. .................... i . Qy -''^s~á-010-0-1110-005-150-D-örp-üys-vaz-Cys-lrp-kkg; es { ............. ............. i b, Q y-^i: - v - g 11 - D~ F ne - C y s -i y r - b- T r p ~ k y s - b a 1 - C y s - i r p - d H y;

es as alábbi eltetoxikns bősbezin-a.ötayonista aaalőgok;

. Q g ¹ 9 -0 - g 11 - G l η - T rp -A 1 a - Va 1 - GI y - H i s - ke a (C H y - d a) L e n - k H y;

. Q£5 4 ...g...gy y -gy n-Trc-Ala~Vai -Gly-Ris-ken LCdg-drb ken-döy;

II. Gy¹ -b-'gl t'-b-ipi.-GIn-Trp-Aia-Cal.-Giy-bis-ke« (Cdy~b«í kea-kbyy * φ * φ φ ο

φ*φ ♦·«*

12, égŐé»Q...gÍh-g~ygr^

A részleges: telitett keterccrxlesős gyűrő kialakításának éj eljárásában, ahol egy vicinális vagy diszjunkt, az-az α,β- vagy m,y~hidroxi-amin nitrogénsbsmóát casználjuk fel, a reakció első lépését egy inért, vizmentes, szerves, poláros, apoiáros (hidrorí lesepertet nem tartalmasét oddőszerben , alkalmasan dimetil~ t or romádb an pejé jak végre,, a haíoyéoesett. aldehidet seámoftevő (alkalmasan 3ö—szoros) ieiesiegken használva; különösen hatásos aldehidek a 4-jód-bntiraldehid és az .5-jód-vaderaldehid- Találmányunk azonban nem korlátozódik ezekre, a jód helyett faré® is használható. Est a reakciót, és a következő lépéseket is szobahőmérsékleten végestük.

é bázison kezelést egy szerves bázis feleslegébe;';, alkalmasan 2-4-szeres feleslegében hajtőnk végre, Erre a célra tercier aminek, példátd tricikli-aminek a megfelelőek.

éz igy kialaknit biciklnsos gyűrűt a vicinális vagy deszjnnkt hidr oxi lesepert f el szabadé tá savai nyitják fel. egy szerves savval, váz jelenlétében végzett kezeléssel. Hígított, vizes trifInor-eeetsavat használhatónk, alkalmasan egy inért, szerves oldószerben, példán! acetonitrilfoen, A terméket az illékony vegyedetek váknnmban való eltávolításával tisztitick, a haiogénvegylüet feleslegét hexánnal extranáijek és a maradékot HPmC-val tisztitjók.

&öv.idxbés«gk b oa iá imán y szerinte peptrdek és származékaik le Írásánál az aminosavak pontidkémiában általánosan elfogadott rövidítéseit használjak a lüPbC-IdB Commisslon on Biochemfead. Bomenclatnre ajánlása szerint ínnro áh Hioekem. 138, 9-87 (1984)0 .

$ « χ *.

** ** *χ

S * ♦ « *♦· «·* ♦«

Az egyes ami sósavak .rövid! lése az aminosavak triviális nevén alapszik, azaz Gíp pirogittaminsavaé* Sie tisztidibt, Trp őrigtóiért jelent* és a többi. A. rövidítések az aminosavak t-izoderjét jelentik — hacsak másként nem adjak meg ....., assz Ser i-szerent, mig te kys D~leziht telebΙΑ nem. szokványos ami sósava k taeáimányvnkban használt rövidítéséé a következők:

D-ö a1i 25 D-3- (2-na r ti1) -a 1a nin, ö-Bal;3) D-3-(3-piríöil)-alanin* és

D-shed 0 -Cl) D- í 4-klór™lórii) -alanin .

A péptid-szekveneiákat a szokásos módon írjak, azat aa X-termiaális aminosav áll a bal oldalon és a C-termzráiea ami nana v a jobb oldalon, például Cip-Bis-Trp.

A beméCAg-bd)ren-bkg képlet egy reönkárt geytldkötást jelené ogy leneie es egy .teöeénaméa kötött egy papáid™ szék vendig C-termi na lesénél.

További használt rövidítések;

A g Sv: diamiη o - va j s a v

AgPrtiiamire ··prop ionsav

BN: nembemin

BOB-reagens: benzo-triazoe-l-ii-oxi-Írisz elemezii-aminc;-lösztön i um - hess fi nor - fos z lát

D1BSA ; d, b-de ezogropii -etil -amin bM-DCX: danroramib-csoporton mödositott PCX ötéa o : 5, 5 -oemetel-tisztáidin- 4 -karbonsav

DOX: domorubicin tmoo : 9-11. norerii-metil - oxi-karbon ii y 11: giat ar i 1- —C (C) -<éo“éB2-~CB2-'^:C Öl) — il. s -0 ; dl btársavaahedtid ke avar; ess

HOSt:

-- h.i dr ex i -bent o -tria tol nt-gt-Oh;

ár sav

h- hi dr ©xl - s rakná ad mid tH-dh

HALÓ::

in tel árrá ló: IsSaBb féisoaoadito hormon nagy te:I les i tmén.y S f ο 1 y a.dék-- k r oma togr á f la t r1fiaor- ' m' v a v há g zo lIbin-Ί-karbgnsav

3, é,9~tétrabtere-1H-píridd 3, 4-öl indol-3-karbonsav

A kémiai reakciók követésére es a találmány szerinti vegyi·letek tisztaságának ellenőrzésére egy Bookman analitikai HPLCrendszert használunk egy kodéi 163 diőaasor-detektorral és System Gold (Seokman) kromatográfiás szoftverrel felszerelve. Az oszlop Oynemax C~i8, 250 x 4,6 mm, porasméret 3ö^: nm, szemesomé~ rét 12 hm. Az oldószer-rendszer két komponensből állt: (i) ö,X tömeg % TFA vrzoen, es fii) ö, 1 tömeg % TEA 70 %-os, vizes acetonr.trlsen; lineáris gradienst használ tank a kémiai reakciók nyomon követésére ágy, hogy a fii i koncentrációját percenként 1 h-kal növeltük, h tisztaság ellenőrzésére a rendszert izokratikos üzemmódban hasznai tor.

A találmány szerinti vegyület izolálására és tisztítására egy iél-preparativ, Beckman 342 hPlC-rendszert tasznáitunk. áz oszlop ágaapere Omtyi, 250 x 11 mm, pórüsmérst 30 nm, szemesemérét 15 μη. Az oldószer-rendszer azonos volt az analitikus -HPLCá boxörahicin-származékok szerkezetének azonosítására egy Bróker AAkJöo HMB-ssektrométért ClöO MHz IH-frekvencia, 25 MHz i3C-frekvencia> és egy rh.nnigan-MAi TSO'laöO siskát ooszörásos tömegspektrométert használtank, ϊ

* φ **φφ

il

ΦΦ *' * φ ΧΦΦ φ»χ· φφ

A találmány szerinti paptidekét gyakran alkalmazzák gyógyszsrészetlleg elfogadható, nem toxikus sók, paládul savadoloiös sók formájában, Az ilyen savaddiciós sókra példaként ersiitgük a hidroklorldokat, hiárobromidókao szulfátokat, fossd átokarr, fukaratokat,· glíhonátokat, kannátokat, maieá. t okát, aoetátokat, arifroor-aeetátokat, taksátokat, oer.soátckaz, ssokoinátokat, alginétokat, pamoátokat, maiatokat, sszsorbánokat, tarsarákokat és hasonlókat, Ba a hatóanyagot tahiatka formában alkalmazzák, a tabletták tartaimazhatnsk gyógyszerészetiieg elfogadható torzóanyagokat, amelyek kösd tartoznak a kötőanyagok, mint amilyen a trsgakant-mézga, őskorioaketnényltő vagy zselatin, agy oszlatószart, mint amilyen az aiginsav, és egy császtatót, mint amolyan a ma g ·^rre z i. sm- s z t ssr át.

Ha az alkalmazás folyadék formában a kívánatos, ágy éoesltő és/vagy Ízesítőszereket használhatónk a gyógyszerészeti1eg elfogadhasd higltoszer részeként, őrig intravénás alkalmazáshoz /során i ás szórásiét, fősziétpuffer-olnatokát vagy hasonlókat használhatónk,

A gyógyszerkészítmények a peptideket szokásosan egy hagyományos, gyógynzerésaetiieg el f ogadható bordosóval együtt tarta imassák, A peptidek dózisa szokásosan körülbelül 1 ··· löö ug/kq testtömeg intravénás alkalmazás esetén; az orális dózisnak magasabbnak keli lennie. Általában a betegek kezelése ezekkel a peptidekkei azonos módon történik, mint az l,H-hH és a szórnafosstatin más analógjaival és a donorobicin-analógokkal végzett klinikai kezeléssel.

Ezek a peptidek az emlősöknek intravénásán, szubkután, intramuszkulári san, orálisan, intranazáli.san vagy intravaginálisar adhatok ba, hogy kiváltsák a biológiai hermenhatást a speo.;.fikas *« * * ♦ 3>

«*» « ·* .* *’ ** receptorhoz való kötődésen keresztdi. Az 1H-R3 analógok eseteden ezen hatások közé tartozik az ivarmirígyek aktivitásának rovetzibliis szupresszi.oja, a ©tornatesztatín esetében pedig gesztreíntosstináíís funkciók gátlása. A hatásos dózis az alkalmazás módjáról es a karéit emhösrajtói idegien változik:. Így tipikus alkalmazási -torta egy rizigleylás sootóst, amely a peptidst oldott alakban tartalmazza, és az adagolást kötúióeidl Ö/l — 2,5 •tg/kg testtömeg dózisban biztosítja. A pepiidet orális alkalmazása történhet szilárd vagy folyékony formában,

A találmány szerinti hordozó peptioek szintézise a szakterületen ismert bármely peptidkémiaí technikával megoldható. Az ilyen technikás összefoglalását megtaláljak Ah Bodanszky; „Brtnoiples of tanti se Synthesis (Soringer-bering, Heideiberg, 1384) cimd könyvében. A szilárd fázisú peptídszintézis technikáit dlkh Stemart és J.b. Young „Soiid Phase léptédé Synthesis (Pierce Chem. Co., Rookrord, el,1124} című kézikönyvben, valamint: éh Sarabb mogrelelő összefog lale: közleményében őrré:. 11 lep fi he ard Protszr sec, 80, 705-239 11187}} találjak meg.

a találmányunkban hasznait LB-RH analóg hordozók szintézise részletesen az bS 5.258.492 számú szabadalmi iratban, valamint Bajusz és munkatársai hPrco. háti, Avas. Por. őrá, 35, 1637-1641 (1383); 81, 1313-6322 (1889)), és ú'anaky és munkatársai (Írót.

hali. Acah. Sói- ISA, 83, 1023-1022 és 972-876 (1992)) közleményeiben van leírva.

A találmányunkban használt szomatoszfafcin-analög httidze^z szintézise részletesen az US 4.150.782 számú szabadalmi iratban van leírva. A szintézis egy leírását meg talál ha tg ek még Cai és munka társai köz lemén veiben is iPrvo. heti. Arad. Sói, CS.A, .83, 1891-1900 -:1881} és 34, 2501-2506 (1937}) .

; ** «* *« ’ν ,ρ ♦ ρ .

Λ talál', uuy, nrran használt bcmbezin-anragcnrsta imraozók szintézise részletesen Coy és munkatársai (v. élei, Cherre 263, 5056-5060 (1988) és 264, 14691-14697 01989)), valamint. Cal és munka társai (Pepiebes 13, 267-271 (1992) és áros. dali, Átad. kin, 6.99, 91, 12664-12688 (1899)) köt reményei ben van leírva.

A taiál.mányunkban hasznait doxorubioin-származékok. szintézisét és a különböze hordozó peplidekkel. képezett konjugátumok ki elakifásat az alábbi példákban írjük le részletesen, amelyeket bemé tatásnak szénánk és non találmányunk kőrise: Szására .

1. példa. Az ^“FmocmSOX^^-O-hamigletaráfc előállítása. és izolálása ke) oldunk 50 mg (86 pmöi) zXiX-HCI sőt 1 ml dinét). 1-tprmamid.bán, hozzáadunk 30 mg (90 umöi) Emoc-OSu-t, majd. 31 μΐ (180 umol) DiáSA-t. A reazc .1 oeiegyet 3 órán át keveri ük, a reakció befejeződését analitikai WbC-vsl ál, lepi tjük meg.. Az: elegyet bpeed dac vákbneieg az lóban szárazra, gá.eöl juk és a ia rabé két 0, X é~oe 1FAban :tl bort só ive ki kristályosít jak. A kristályokat átérjük es hideg dietil-éterrel mocsok, hogy e.1 távolítsuk az Emoc-OSu nyomait. Szárítás után. 62 mg, 98 %-os tiszt, sságá X-Fmoc-DOX-Ot kapunk; a kitermelés 94 1.

Ezt . -·. /' itt ti eket egy éjszakán át reagál tat jak 11,9 mg (100 pmöz) GltgO-vai 1 ml vízmentes d.imetii~íormami.dban, 26,1 μΐ () 59- gmál) űlaEA jelenlétében. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a visszamaradt olajat 0,1 térik-os, vizes TEA-tan szilárd anyaggá dörzsöljük. Az így kapott nyers anyag 70 % X-Fmot:902^5-9-0001003.0 tar át öt, 29 8 el nem reagált b— Ernőt-txöX-ot. és IS % más szennyeződést tartalmaz ez: analitikai Ha 1.6 szerint. Ezt a nyers terméket további. Ír.szír lás nélkül haaználgnk fel a pepiid* * * φ

Φ * χ **·φ ΦΦ* φ φ * ** 44

Dö.H kon j ugátumok előállításához, Ha ezt a nyers anyagot 10 ml, n,l 1 TFA-ab tartalmazó, vizes aoetonitrilbeu feloldjuk ős féipreparativ BAbC-vai tisztitjók, 45,7 mg, 03 %-os tisztaságé h:~Fmec-lÍ3b--^-ii’he;figiU:tar:át végterméket kapónk; Mtermelőt oi á .

2. példa . Á 3' -de zárni no-3'' - (pirrolxdia-lj'-il):mdoxorubicin TFA sójának (Q2) és 14-O~hemi.glutarátja <AN-1.§35 TFA sójának előállítása

Feloldunk 58 mg (ŐS gmőlj 00Χ--·30ΐ. sók 1 ed. áimétil-fo-rmaádő:··han és 171 pi (1,3 mmól, 15-szÖrős felesleg;: 1,4-dijőd-batánt, majd 45 μΐ (360: prcői, 3-szoros felesleg} DlFHá-t adunk hozza, A reakcíóelegyet egy éjszakán át keverjük scobaáővérsékieleo. -v analitikai üFTó szerint a reakció 16 óra alatt teljesen végbemegy. áz oldószert vákramban eltávolítjuk, a maradék olajat 3 ml 0,1 %-os, vizes TFA-oid&tban feloldjuk és díetii-éterrel extrahál juk, hogy eitávoiitsuk az 1,4-di jőd-bután. feleslegét . A vizes extrakfumoói HPLC-val izolálva 41,6 mg '13 %-os tisztaságé SOXszármazékot kapunk; a kitermelés 66 3.

Az igy kapott 41,6 mg (56: pmól): 3^;í-^dezaminovó^ “:(|pír:rolidá.nv: -b'-il}-doxorubioin IFA sémát 1,2 egyenerték Gltvö-val reagálhatjuk vízmentes dimetil-formamidben, az l, példában teirt módon. 16, 5 mg, 36 5~os tisztaságú terméket kapunk; a kzterme5.es

3.

3. példa .1 3‘ -desamúno- 3^; - (isoiodol in~2 ·' - χ 1.) -doxorubioin

TFA sójának (Q3) előállítása. és Izolálása 'FeiO:ldánk 53 mg (56 (pmóil Wk-'Fól sőt 1 ml diméf 11-formamldbán és 226 mg (1,3 mmól, 15-azórós felesleg} «,«.'-diklőr-ortoeziioit, majd 43 ul (266 gmól, 3~szcros felesleg} DiFFA-t és tv. und ·*.** ·«·♦♦ * ο *·*· ·♦·♦ * katalitikus mennyiségű nátrium-jodídot adunk hozzá. Tizenhat éra máivá az. oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot i ml lg 1 é;s. vizes IFA-nihatban feloldjuk és 3 ml dietil“éterrel exfraháljuk, hegy eltávolitsuk a halogénvegyúiet feleslegét. Az Így kapott nyers anyagot kFLC-val tisztítjuk. A tisztítás után 33 mg, 98 kos tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 5 5 %.

4. példa, A 3t “deKamino-S'™ (pirroli»-!'!!}-doxoxu&icin TFA séjénak (£5¾) éldéllifcása és ixolálssa

Feloldunk ii mg (8u gmól? 19X-HC1 sót 1 ml dimetii-fermamidban és 138x8 μ.Ι. íi,3 mmél , .; 5-szoros teles légi ousz-1, i-dlklőr-k-buténbx majd 45 μΐ. (255 urnái, 3—szo.res felesleg; DlPEA-t adunk hozzá. Tizenhat óra múlva az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékéi 3 ml bénámnál ex t rákéi juk/ hogy oltáséi itsuk a halógénvegyölet feleslegét. Az igy kapott nyers anyagot HtLC-vei tisztítjuk, A tisztítás után 22,5 mg, 93 %-os tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 3? %.

5, példa, A 4“bzóm-l-klór-2“feufcanoA és a« S-bróm-l-klér-2-pentánon előállításé és izolálása

158,3 μΐ (1 mmdlj 1 - bt ám-grog ion is -ki esi dót: reagál tatunk diszo-metan feleslegével dietii-éterben, Sgy óra múlva az éreres oldatot elváljuk és vékonyréreg-kromatográfiaval (TLC 5 vizsgáljuk,. A TEC-hoz derek ko, 5554 jelzésű, sziiikagéiisi. 850 F25i) bevont aluminium-lemezt használunk álló fázisként és kloroform/metanol 95 ; 5 térfogata.:: ányi elegyet mozgó fázisként. Az előhívást 2, 4~dinitro~fenli-hldrazin reagenssel végezzük {Vegei: „A vextbcok of Practioal Organie Chemistry, Xoucmaus, lem York, 3. kiadás). Az igy keletkező diázo-metil-keton származék sárga

* * * * * ** X foltét mutat Ff === 0.3-néi . Szatén az éteres oldatot vízmentes hidrogén-klóríddel reagálta!jók eteti!-éterben, hogy a ötazo-meti 1-ketont a kívánt végtermékké, 4-.brem-l-kiér---2-butarenná alakítsuk . Sz a termék az οκο-vegy tietekre jellemző sárga foltot mutatja Rf - 0, 8~nei a fent leirt oldoszer-rendszerrei es reagenssel vizsgálva. St oldösser elpárologta zása után a nyersterméket egy sziiikagél oszlopra (15 g sziiikagél, Marok 3385, 230 ~ 4-0 ö vesd, port sméret 6 re) visszük lel. A ,.····< . , ----- .. χ_αt.-.s tészta kloroform. A kívánt végterméket tartalmazó frakciókat La fent leírt ThC-val kiválasztva; összekeverjak éa szárazra pároljak.: 1,5 g tiszta, olajat kapunk; a kitermelés -80 %.

Az S-brőm-l-klőr-2-pentanont 4-bróm-ottirti-xxor.röból állítjuk ele pontosan ugyanolyan módon, mint ahogy azt a 4-bróm~i~ •-klór-z-pentanon: előállításánál ioirt.uk, azzal, az eltéréssel,hogy 4 - brém-Out1 r 11 - k 1 o r 1 d o t ü a s z n á 1 u n k 3- brön · -ρ r opleniI- ktorid helyett:. 1,0 g tiszta olajat kapunk; a kitermelés dd %,

6, példa. A 3' ~-dezajax-no-“3^f - <3- ~-plr roll din ~1 ^?'~11) -ddáorubxcin

TFA-sógáo&k (Qg) előállítása és izolálása

Feloldunk 50 mg (86 pmói) 5-1X-HC1 sót 1 Sir díszét 11-formámrabán és 241 mg (1,1 mmoi, 15-szörae felesleg; 4-orér-i-klö-r-2-butanont, majd: 45 μ.ΐ (260 űrnél, 3-szo-ios felesleg; Dxkö.á-t adunk hozzá. Tizenhat óra múlva az oldószert vákuumban eltávolítják és a maradékot 3 mi hexánnal extrahált ak, hogy eltarol ittuk a halogénvegyaiet feleslegét. Az igy kapott nyers anyagot tkiC-vai tisztítjuk. A tisztítás után 20,6 mg, 93 k-os tisztaságú végterméket kapintk; a kitermelés 33 %, á 3^? -de z ara no ~ 3 ·' - (3 · -pr per időn- X xl.} -doxo rabi cin fc

IFA sójának (Qm) előállítása és izolálása

Feloldunk 50 mg (86 gmői) OGX-Hdi sót 1 ml dimetil-f orinani?i~ bán és 260 uv 11,3 mól, 15-szöros felesleg) 5-bröín~l--k.lér~2“

-pantanont, maid 4 5 ul. (2S0 űrnél, k-storos felesleg; OlFFA-t adnák hozzá, Tizenhat ere múlva az oldószert vákuumban eltávolát luk és: a maradékot 3 mi hexárv.al eztraháljak, hogy aitavoizfsuk a halogénvegyület feleslegét. Az Így kapott nyers anyagot. üEll-vai tisztítjuk. A tlsotitéa után. la mg, 55 %~os tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 2S i.

8. példa. A 4-jód-butiraldáhid és az 5-jód~valera.Idehid előállítása és izolálása

Feloldunk 1,3 mi <10 maiéi) 2~ (ü-kiör-propil;~1, Ő-dloxoIánt pé-kibr-btitiraigehid-afilén-aoetált) 200 mi acebonban, ami 30 g (200 «él, 20~szoros felesleg) nátrium~itúldót tartalmaz. Az oldatot 24 érán át vissz a csepegd hűtő alatt far tál iák, majd szárazra pároljak. A szarvas anyagot 100 ml dietii-éterrei excrahéijuk a szervetlen, szilárd maradékból. Az éteres oldatot 50 ml vízzel, 50 mi 5 %-os, vizes nátrrnm-tzosznlíát-cláacüal és miég bázomezer 00 mi vízzel, mbéduk:. Az étert vákuumban el tivoli tg dk és a maradék olajat 1 ml Sö l~os, vizes eoafsavban feloldjuk. Az oldathoz 1 éra múlva 100 ml csati 1 -étert adunk e.s az eoetsavet, valamint az et 1 ,lén-gl1kelt 50 níl vízzel háromszor mosva eltávolítjuk. A főtermék áLC-val, tiszta kloroformban futtatva Rt ^:=== 0,3-ei mutat. Az eldohidősöpört kimutatására ugyanazt a reagenst használjuk, mint a ketonokhoz (5. példa). Ezután a diétái-étert eltávolítjuk és a fekete olajat agy oszlopra visszük <15 cm hosszú, 2,5 cm átmérőjű}, ami 15 g merek S305 szil lka gél. lel van töltve fizu -- évé mean,: & nmt porusméret) . A folyékony, mobil Ιόν, un ;o.

«

/. S.Í., *»

Λ» «*« zis kloroform, A kívánt végterméket tartóImazó frakciókat összekeverjük és szárazra, pároljak, 1,6 g olajat kapónk; a kitermelés öv 1,

Az 5-jőd.-valeraldehidet porcosán ugyanilyen módón állítják eic 2- (4~klór~bstii)-i,3-dioxolánbdi Indáivá, 1,65 g sárga olajat kapónk; a kitermelés 5 0

9, példa . A 3' ~dezaxaxno-3^z - (2'^ν~·ρ1χηο11η-!^ίΖ”Ί1} -doxorubie.in Tíé. sójának (Qg) előállítása és izolálása keioldfepk 11 mg Oá mmol) IBb-ECI sót 1 ml dimet!ö-tormamibban és 515 mg 12,6 mmol, 3>-szoros teles légi A-jód- bakira lés bibét, majd 45 pl (260 pmől, 5-szoros felesleg) EIPEA-t adunk hozza. A reakciöelegyhez 1 óra múlva 160 ul jégecetet adnak, majd noczáosepegtetünk 5 mi 0,1 %-os lEA-at W %-os, vizes aoetonlον élben (a HALC-rendszer (ii; oldószere), Ezt az oldatot 2 ml 0,1 1-os TFA-oldattal feibigitjak, majd az aoetonitrllt vákuumban eltávolít jak. A. kapott oldatot hexánnal eztraháljnk a tslogenvegyulát feleslegének eltávolítása céljából, áz így kapott anyagot hábC-völ tisztítjuk. A tisztítás után 52 mg, 98 1-os tisztaságú \ 'Kem v , a kitermelés 85 %, lö , példa. A 3^f -dezamino-3' - (i'^v , 3^?z-fce:tps.ki4xopiridin”l'^z-il) -4oxor5ifoxclé TF& sójának (Qg) előállítása és izolálása

Feloldunk Sö mg (86 gmól) ólX-HCÍ sót 1 mi dimetil-formamidbán és 552 mg (2,6 mmol, Aö-szozos felesleg) S-möd-vaieraidehidet, .majd 4 5 ul (26ö μηόΐ, 3-szoros felesleg; Dl IFA-1 adunk, hozzá. A reakolóeiegybez 1 óra múlva 100 pi jégecetet adunk, majd hozzácsepegtet int 5 ml 6,1 %-os TFA-st 7ö %-os, vizes acetonitriibea (a avaC-readszer (ii) Glóbusért: .. Ezt az oldatot 2 mi »**♦ * ·» * * * * * X u, I 'y-os TFA-cidsttal felhigítjuk, majd az aceconltriit vákuumban eltávolítjuk. A kopott oldatot hexánnal extránáljak a harcgenvegyúiet feleslegének eltávolítása céljától, ke Igy kopott anyagot hánC-val tisztítjuk. A tisztítás étén 46 ny 95 1-os tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 75 %.

11. példa. DöX-ofc tartalss&zó, citotoxikus LK-RK analóg, a [D-Lys^ő(DOX¹⁴-0-glt}]L»~RH, Qx^I4gL előállítása ée izolálása

Feloldunk 60 t»g (oly 5 úrnői; [ D-lysús 12(-RH-t és 12 mg (64 %~ os tisztaságú, 37,5 úrnői; h-Fmoe-F2X —-0-n.emigi usarátor {lásd .1, példát) 1 tol almot11-iormamrobau és horráadunk 22 mg (52 úrnői ( BOF-reegensf _; 13,5 tg il&O gmól, H2fír~t, és 52 μΐ (350: umó.1;

faPSA~t. t r^r·,'· _v yj <t -y y > > a d* o oi a 'sm c ·» \ »tu. J ?-~ sen végbemegy. Az ©Időséért elpárologtatjuk, a maradék olajat 3 ml etil-aoetátban kikristályosítjuk, majd az anyagot kétszer 3 ml etil-acetáttal mossuk. A 38 mg nyers, szilárd anyagot 3 ml dlmet11-formamtdban feloldjak és hoz ráadunk 300 μΐ sípos leint. Öt perc múlva a reakcióéi egyet jég fartőké tesszük és megsavanyíjuk 300 ni TFá, '11 pl piridin és 2 ml dimetil-formamíd keverékével. As ölhessem elpárologtatjak, a maradékot etil-acetáttal ki.kristáiy:ű:eit,j:ök. Az így kapót,! nyara, exi..táfö anyagot 1 mi vő k~oe, vizes, 0,1 % TFA-at tartalmazó aoetoni t.x ilben iil feloldjuk, 3 ml 2,1 á-os, v.tzas FF A-o Ida.t tál (ii; hiyitjak és féipreyaraiiv HérC-val tisztítjuk. 40 mg (14,8 poci;, 9S j-cs tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 48 %.

12. példa. 2-Rixrolinc-DOX-ot tartalmazó, citotoxikus AH-AB analóg, a [D“X»ys&(S-pixrolíno-DÖX^-Ö-gltH Qg^gi előállítása és izolálása

Feloldunk 11,2 mg (3 pmőlj jd-'igf-t (lásd 11. példát; 222 p,l *·* * * dimetil-fei.maítiotan, és 30 rag (ISO μηοΐ, 31-szoros fölösleg} 4yod.-dntiraldeniaat :(8.. gdlos·, majd 3 μ.'. (17 nmői} 61PPA-1. adtok fossa. Egy éra múlva a roaksió befed ezddlk (lásd 9, példái, ek~

- -'Γ te ul zzeos’-te oa..uk a reakcíoeiegyfez, majd fozsáosemegfetönk 1 mi 8,1 %-os TEA-af 70 %~os, vizes aoetonitrilbeo, Est az oldatot fsibigitjsk 1 ml 0,1 %-os, vizes TFÁ^oldattal, majd az aoetenitriit váksnmban eltávolít juk. 1 visszamaradó vizes oldatot 1 síi hezárrnai extraháltak és KPLC-val megtisztít jak. 7,6 mg. Pl l-es tisztaságú végterméket kaptak; a kitermelés 15 1.

13, példa. DOX-ot tartalmad, cxtotoxikus sxomteaatatia analóg, a DOX¹⁴-0~grt-öte8hs-Cys~Tyr~D~7rp~I,ys -Val-Cys-Thr-NHg, Qy-^gS előállítása és izolálása

Pelei átok kö: mg 114,5 gmdi} o-?úe-Cys~Tyr--il··Trp-Lys (Emec) -l'ai-ly s-Thr-NKg-^ isset. dali. Arat. Pete APA, 118 5-1090 (19861} és IC mg (61 %-os tisztaságú, 11,5 prolii Ι-Ά.αΆΧ^-Ιbemigltbarátét (1. példa} 151 _uy óimetl1-formamsetan, és foszásáról 8,8 mg (10 nmei} SOP-reagenst, 5,1 mg (10 uroii KDSb-t és 17 el (18© gmol,}: diPEA-f.. A reakció 1 dia kévetéé alatt szfbahdmérsekietet teljesen végbemegy, Az oldószert vákuumban eitávolitjak, a maradékot efil-acetátbsn. kíkrlstályosifegok. Est a szilárd. anyagot feioldbuk 1 mi dimebrl-formamióban és 160 μΐ gr tetetettem. adtok fossá. Hét perc múlva a reakcideiegyet jégfürdóee tesszük és megsavanyit j tk 100 ti TEA, 388 μΐ piridin és 2 ml dimeti 1-formámig keverékével.. Az oldószert elpárologtatjtk és a visszamaradó olajat etil-ecetatban kikristályositgtk. Az Így kapott nyers, szilárd anyagot 1 mi 70 1-os, vizes, 0,1 1 TFA~ab Sattatmú.td áééfoblfrilbep: (ii fejglgjnk, 3 ml 8,1 %-os,- vizes **** * * *

2$

IFé-oldattal Iii í felhígít jak, és félpreparaslv HFic-vgi tispti. s jak. 9,7 reg ;5,1 μ.οοί ; , 95 %-os f mm aságú végé érmékét kapunk; a kitermelés 35 %.

14. példa. 2-Glxnoilno-OGk-ot tartalmazó, cxbotoxitus szórna tesz tátin. analóg, a j

2-pí rrölinQ-DQX^~C>-~glfc”D~Phe-Cys~Tyr--5-Trp~Lys~Val--Cys--Thr--NB2, Qg-^gS előállítása és izolálása

Feloldunk S,9 mg íé gmol) P“Fhe'--Gge~Fyr~F-Trp-Lye-vai-Cys” -Th.r-455u-f IM pl őimetii-iormamidban, és 4,1 mg (5 pmél; 2~ -plrrolieo-^ .magé 1,4 mg jlé gmoll BGF-rea gensi,, löö pmől HO.Bt-t és 51 pmöl 51FFX-t adunk hassá. A reakcióelegyet 2 érán át keverjék szobabémérsék 1 siet, majd 30 ul AuOHvsl megaaranyitjuk és felhígítjuk ütő pl 13 %-os, vizes, 0,1 illat tartalmazó acetonitrilééi és 700: μΐ 5, 1 1-os, vizes TFAeídattal, magé BPLC-vai megtisztítjuk. 3,9 mg, 33 %-os tisztáségé végterméket kapunk; a kitermelés 4u %,

A 2-pimollno-íkOXi^-ö-hemígiutarátot úgy állítjak elő·, hogy Fáké.y -é -hamigu- oiar át o h reggé Itatunk 4 - j oé-ka 1 zaaldeb id.de 1 a 3. géléében 1el r t módén.

A DOX-·^ --ö--hsun.g Itaarátos az l-5ooc--DOXé1^:-O-hemigiutaráébol állítják elő az Fmoo védocsoport lehssltásával a 11. példában leért s.ééon (a kitermelés 4 0 %g .

15. példa. GGX-ot tarfeaiasazó, oítotoxikus bor&bazina n tagon i s é a (DÖ.X ·*· - O - g I1 - Gin - Txp-Al a - Va. X - Gly - H is - Le u (CH n -UH 5 Len ♦ «·«-* * ♦ * * * <

Φ» χ előállítása ás Izolálása

Feioidtnr 2ő mg (IS,8 pmőt.) Ólri-Trp-Aáa-Val-óiy-Prs-Leu Olö,''' -EH) Εοη-ΕΗρ-Ί (Int. .7. Pépeidé Protein Per. 38, 593-605 (155135 és 23 mg (64 %~os tisztaságig 15,5 pmői? E-Ea?oc“DGX^x4-0-Pemi· glntarétot <1. példa? 205 pi dimetil-formamrdfcar, és 8,5 mg (25 úrnői? ECP-reagenst, 5,4 mg (40 úrnői.) HöBt-t és 17 pl 1105 pmői)

DIPEA-t adunk bozzá. A reakció 1 éra alatt szobahőmérsékletet, teljesen, végbemegy. Az oldószert. vákuumban eltávozjtjuk és a maredéket etii-acetáttan kitzistáiyotit jük.. Est a szilárd anyagot 1 ml. d.mnetii-iormáuldtan feloldjuk és hozzáadunk 105 pl piperecím.. öt pete: máivá a rea/kclőé:legyet jégfiitdbbs tesszük és lö: pi 3F«, 305 ui piridín és 2 ml dimetil--tormámra keverékével megsamanyitjuk. Az oldószer eipároicgtatása után visszamaradt olajat éti1-acetálkán kikrlatálmosát jak, As igy kapott nyers, szilárd anyagot fel&ldju.fe: 1 mi 75 i-os, vizes. 0,1 3 TFé-at tartalmazó aóeteóitriilaan (i) és: fclfelgitluk 3 el 0,5 %~os PEA-oldattai (ii) , majd ieiprsparativ HPLb-val megtisztít juk.. 13,5 mg (5,1 pmé i? , 98 %-os tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 45 %.

IS. példa. á-Edrrolloo-böX-ot tarfealsiazo, cltöfeoxlkus bőmbe®In antagonlsta (2-pirrollno-DOX^^~Ö-glt“GIn-Trp-Ala~VaI~ -Gly-His-Lauleu-éffig, ög^gB) előállítása és Izolálása

Feloldunk 9,5 mg (5 gmól) Ocg^gS-t (15. példa) 205 pl dómétii-fermamidőar és 30 mg 0-50 peől, 30:-szeroe felesleg) i~ jőd-buti.::aldehidet (3, példa? , majd 3 pl (17 pmél.) OIFSA-t adunk Pózzá. Egy óra alatt a reakció befejeződik (3. példa), akkor nozzáedznk lö pi jégecetet és a reakoioelegyet 1 ml, 0,1 1 TFP-at tartalmaző, vizes acstonitriifoe csepegtetjük. Ezt az oldatot 1 ;si 5, 1 7-os, vizes T Fé~ oldat tat febógótjuk es az aoetorm trilt

* ♦ *

»« χ*

X *:·»:

·*·* vákuumban eltávolít jak, A visszamaradó vizes oldatét 1 mi hexánnal extránál. juk és H.KhC-vai megtisztitjuh, 6 uo, 93 i-os tisztaságé végterméket kapunk; a kitermelés 60 %.

Az ars vikrc ozfcotoxikus aktivitás megkatározasa

Az Akt észtrogén-független egér eml akar clnoma sejtvonalat G. bernhardt (Universrty of Eegensburg, ESEK) botsajtóttá rendelkezésünkre., A találmány szerinti vegyületek sejtszaporodást gátié aktivitásának meghatározására használt összes többi se j tvooaiat: az: American. Type Cultur Collec tton-bél (.ATCC; szereztük be.

A származékok aktivitásának meghatározására egy fcoiorimetriás oltotoxioitás-mérést végeztünk cukrot ikráié lemezekben; a mérés a kristályába igával festődé sejtek biomasszájának megtakaró-

zásán alapszik és	igen jé körrelác.	rét mutat a sejt	szám méghatá-
rozásávál (Kei ie	és írnunk a tá a saá	Arai.. El cehem:.	137, 262-267
(19905; éornnardf	és munkatársai,	dk caroer Ess.	Clzc,. ér col.
118^ 3:9-92 (19921	; Spruss és munkatársai, c. éancer Esc. Ciin,.

dacol . Ii 1, 439^443 «19911? Gzllies és munkatársai, Anai. A jerkém, 19 9, 109-113 (19365? Kueng és munkatársai, Anai, Sicchem. 182, 16-19 (19895} ,

A vizsgálat menete

Egy vagy két nappal azután, hogy a sejteket a 96 lukas lemezekbe tesszük, a. tápfoiyadékot. friss, a. vizsgáit vegyűletet tartalmazó tápfolyadékra, vagy a kontroli sejttenyészet esetében csak friss tapfciyaoérra. cseréljük. Különböző időtartamú inkubáiás: után a sejteket gintárdiaidehiddei fixáljuk és magzati borjüszérom (ABS) alatt, 4 hőmérsékleten tároljuk a kísérlet vé« * $2 géíg, Λ sejteket kristály ibolyával festjük és^ a megkötött festéket 70 %~os, vi.zea atanobial extraháijuk. Az oldat optikai deszórását so Elé. teaser (Bio-lek Instruments; vagy Boomer lövő leves fotométerrel mérjük rendre 590 és Síi nm-nel. Ar egyes adatpontok 3 luktenyészet átlagát jelentik. A T/C értékeket az alábbi képlettel számítjuk ki:

- 00

T/ü - .............................. x ICO ahol — 00

T a kezelt tenyészet optikai denzitása,

O a kontrol tenyészet optikai denzitása,

CO a tenyészet optikai oenzitása az inkubálás kezdetekor (t^:::ű) , , példa. & TO3£ á&unos&mriem módosított s-stárjsaazékainak ia vsára citotoxikus aktivitása

A 17-1. táblázatban a dcxorubicrnnek és dann.czamimen módosított e zárttá tékái rák. batáta láthat ó a dte-v humán emlokaroindma sej tvonalra.

Azok a eitofozikus csoportok, amelyekben a daunozamin nitrogénatomja egy reaktív csoportot hordozó, öttagú gyűrűbe van beépitve, 5 - 50-szer aktívabbak, mint a hattagú gyűrűs, homológ párjuk, mint például a 3-pirxolidooo-DOX (Or) és 3-piperrdino-BCX (yyh, és a a-pirtolinn-Bök (Qyi és I, Ó-teirahidropiridíno-OCX (Qnj .

A sejteket 5 t Hl-DCC-EBS-t (hővel inaktivált dextránnai bevont faszén, magzati botjűszerummai kezelve) tartalmazó IdEh tágról vadakban ináubáljuk Só lukas lemezekben, A relatív sejtszámot a kezeit és kontroll lemezokben kristályibolyáé festéssel határózzuk meg és a l/Ő értékekben adjuk meg. Az alacsonyain Ívd értékek a ráksejtek szaporodásának csökkenését jelzik a kezeié® hatására. így? például '75 azt jelenti, hogy c kontrolihoz (löt %) képest 75 % szaporodó sejt van a. tenyészessen, and 25 t-ss gátlást jelent,

17-1, táblázat. A dózernélcin és dau ne zaminon m 6ács! főtt származékai hat á s a az MFC-? humán emlő karc inómasejt vonalra Ír

vf fe rs.
Veovüiet	Inasnácios	77C érték	koldnó·	O Z. 0
	idő (óra)	konoent rác.	lóknál	(mól í
		5.x! 0“K: 10“ 4 3x10'	-9 1.0-«	Oxitri	) lö~7
éoáoretd o én	72		23	32	54
dódé	Ízt		35	Se	33
Pirroliáíno-·	70		ée	25	-26
-fo qqg	121		94	17	—lé
Piperldf.no-	72	124	70	4
-ok ádO-lS3;	ize	léé::	07	0
Isozodcld no-	72		112	3 3	-11
-tok (Q3í	12 0		léé	77	-2 9
3-Pirrolino-	70	10 f:	? o	-3
-70X éo	12®	37	3 3	-5
3™P i r re1idono-	70	37	33	-28
-fék légi	120	07	2 2	-iÓ:
3 - Pipa r .1 d ono-	70:	át	32	33
-1OX 1QP	12 Ö	37	70	ér
2-Pírrólino-	70	Sé -3 -13
-DOX iQpi	lét	2© 2 -é

ín. nsíoe;:

«**; * «» «» »» • » » » t X »

- X hí» ^{444 444 444} ** * ** ** >4.

1ί 3-Tet r ah i dro ~ ~P1ridi no~ ÓOX

Ί&

Idd

3 3

9 62

18. példa, & DÖX .íjs vitro cltotoxikus aktivitásának t©lj:«s^: fokú megmaradása a Gi^gA, és a ssupsraktxv d-pIrroIino-ÖOk-é

ÍQg) & £g'~^gL LB-RH agonista péptid-konjágétűdben

A 18-1. táblázatban a doxorubicin és dannozarinon mónosizott származéké, a 2-pirrolino-doxorublcxn (Qgj hatása látható a ( D~ -Lyséj 1B-BB agonista analóggal képzett konpangtusaikhoz (Qfeégy és QíbfeL; képest az TFC-d barnán emlőkor tinóra sajtvenalra és az MXT ösztroaén---íüggetlen egér emlőkarcinóma sejr, vonalra ir? alázó.

áz MFC-7 sejteket 5 % hl ··dCC-FBS- t tartalmazó 1MEM sápiéivádákban, 96 lakos lemezekben inknbáijuk. az MXT sej teket 0, 6 g/1 h-glutarlnt és 10 % FSS-~t tartalmazó nádi 1630 táploiyadókban Inkábóljuk.

XX * Χ· :

***

18-1. tábláza t

begyület	Inkába elé (orz)	T/C érték a z MC2--7 sejtvoralen, kilőni	sez a a!7
©xit	kenten árát laknál, (mbll
37 ia-17	lx3.n37 iSl axlCV'A 1Q-1 Sj.sO-1
Soxo-	7©			53 82	54
zablaín*	12©			9 5 6 6	J.J
2y74gh	7©			1.11 88	63
	12©			7 8 SS	7: ’7
	71		ab	-.3 -18
			... ..
	zz©			*”b 'H
he14lb	78		71	28 -24
	12©		60	1 6 -14
begyül, et	Inka-	271	1 érték	. az AZT sejtvonalon, különböző
	bánié			k a no a n t r a n 1 1 k n á .1 (vő 1 ·
	(óra ?	3x17'-·	ila i <!' I ü	3x1 €:-72 yg-2 y@~ó .Mit'®	tü”'·
Doxo-	1			8 3 80	58
táblái n	SS			74 ó©	4 3
Öy^yb	.2 6			87 81	7 7
	5©			21 39	s©
A6	28	á©	78	5 6
	8 5	52	6	-13
bg14ab	28	81	78	64
	62	15	ts	:~12.
* leghatárézva	mint. a	17-1,,	táblán	?abhan,

19. példa.

A 19-1. táblázatos?·; látható, hogy a DGX-ot tartalmazó szórnatosatatin-analógok teljen mértékben megőrzik in vit.ro ettotoztk s a k ti vitásakat.

* * ,, .<

«' « « »♦ »·♦ ♦».* »«<

19-1, táblázat, Λ doxorubitint tartalmazó, eltet őrikés azcmatosztatln-analőeck hatása, az M1IA PaCa-2 humán hasnyál• X— . ..................................................................................................Λ —' mi rxgyrák ze jtvonalra in va t:ro.

Inkubációs Ί/C érték különböző

Idő (éra? koncentrációknál (mól) ia~*· ttr⁷ ír·'^δ

Dlx’^-C-gj i~ 3-98* (Q x14gS'9'8}·	28 21	92 103	95 11	—-' <·< ~ 3
he h be zé aha 1 be	21		-	91
s-99*	/ 6			98
y>XÍ4-0-elt-	2S		12	35
5-521' ' (Qg14gSi2lÍ	19	97	19	~á
hordozó ábsiöy	28	-	-	71
5-121--	W	—	“·	96
Dózerebicin	21	93	14	-28
	71	71	iö	„7
A sejteket ló	% FBó-t	tartalmazó .-.22 5 5.	6sö táptóly	adókban

lukas lemezekben iηkubaijuk ) í

9-2 re - C y s - aha - D- Tr ρ -1 y s -- Thr - C y s - Tb r ~ .2 H y;

; íi * «-ike-Cvs-Wr-D~^

2G. példa. & doxorubleimt tartalmazó, eitotoxikus bomfeealnantagonista analógok hatása a CFPAC-I humán hasnyáimirigysák sejtvonalra ia vitro.

A 29-5, táblázatban látható, hegy a 'DOX-ot tartalmazd, ba«·*·>-» φ *<frx

XJ. χ« (>(· ΑΧ

Iáimsny szerinti bombezi.n. antagoniata analógok teljes mértekben megérzik in ntro citotoxikus aktivitásokat.

2tiltÁin. a;n

vegyülsz	Inkubációs iáé (óra)	T/C érték különböző
kon< mlO~*	zentrési óknál	(moll -7 I9~b
19”?	2x1:0-
ICX'^-ö-git	69	95	31	93	9
B-34	ég	95	57	28	4
Wi°gW	137	93	28	19	0
B---94*	66	99	196	:IS9	100:
	25	27	39	99	96
	137	93	38	190	39
B0a14-ti-gl t-ó-50	96	109	78	39	5
	35	37	£ s? -.·	29	-1
	137	92	38	19	„8> <8
B - :S 0 * *	66	100:	83	99	93
	95	23	100	102	98
	137	97	23	99	38
iCX	66	68	fi.··?	13	...·?
	95	73	32	19	-9
	133	4 3	20	7	-4
á se j t e k e i	19 1 53S-Z tartalmazó	IMDé táp(	G.i '*/·&<	(ókban inda
kálóok >4 lukas:	lemezekben.
* si n -lep- Al a- be l	~ G ly ~ H l s - les ~ g (6	big-b) -Len-23g
'**o-phe-Gln-Trp-	éia-vai-GlyHis-	Len ·~ψ (7	Hg-b) -Tac·	-bog
A hormonézármazékok kö tői	lesi tu(	Lajdonságe	inak	megőrzése
21, példa	. A citotoxikus	LH-BH á	gonista as		Qt^^gL és

Qgáágp hormonális aktivitása és reoeptorkötödési képessége a (D-Lys^fe1LH-RH hordozó pepiidhez viszonyítva

21-1. táblázat ?s hagyóintek 4 <gó í D~ óy 0¾ hh~s.il·

Η ο ·; m ο η á 1 ί s a k fc i v i fc á s * (hü-válasz az Lh~kiBi válasz hoz képest '} ilyn-örték* * patkány agyalapi mirigy receptörökhöz (nmél)

ICoo-erték** emlőrák r e c epf oro kho z (nmó15

7,24

6, lö é, BS ház Ltí-választ öiszpergáit patkány agyalapi mirigysejtek szoperiúzoos rendszerén, Vigh és ochaiiy módszerévei mérjük (ieptioes 5, 241-247 (Ildin **az analógok kötődési aktivitását a patkány agyalapi mirigy LH-RB reoeptoraihoz és a honán emlőrák receptorokhoz konpelifciv kötődési ki séri sóé kdén mérjük i^-h-dai jelzett: ( S~ltpé) hh-Rh radioiigandnmöfc használva: (Szőke és munkatársai, PoptldoSz lö, 35Ü--B&Ö (1224) n á kötődési affinitást az. ICvg-értékke 1 adjuk meg, azaz a nem jelzett analóg azon koncentráció javai, amely Sü ü-han gátolja a rádióifganöom specifikus kötődését.

á szomatosztatin-analógok gátolják a növekedési hormon (ShI kiválasztását a perrundált patkány agyalapi mjrigyfcöi (Garlson és munkatársai, hndoorino.lagp, 24, 1709 (19745 1. Ezt a módszert használjuk a találmány szerinti citotoxikus szomatosztat'.n-analógok hormonbafásénak vizsgálatára a kongngáiatlan horóctő molekólákhoz képest,

B humán növekedési hormon elválasztást serkentő^ hormon (bóh♦ X *< 5 φ φ

Φ χ Φ Φ *

Φ

Χβ»

RH(1-29)bég) által kiváltott növekedési hormon kiválasztás gátlása patkány agyalapi mitigyaeilek szuperfúziós rendszeren az 3-93-1

O-lrp-Cys -1 ne -D - Trp-Ly s-Thr ~ Cy a - Th r - húg; és az S-121

S-th. o - Cy s T y r --S 'Trp- tg s - t ál~Gy s -Th r -hű g ;

surctoeztatin-anslógok által a megfelelő cikotorikue származé~ keikhez ílg-· 7 _:-_;g93-b a«. zOggazzg képest.

A patkány agyalapi mirigy szuperfurics rendszerben a szórnat gsz tátim-eret. egokat 3 percen át adagoljak: 1 epéi. dózisban, együtt a hGÜ-kH(1-23}tag-vei. a szovatosztazzn-analógok infúzióját további 6 percen át végezzük. A GE-vátaszt az 1 rázol hGH-EH (1-29) NHg 3 perces adagolására a szomatosztatún—analögok perfúziója alatt (ö, perc} és az adagolás vége utáni 30., 60. és 90. percben határozzuk meg. Az adatok a 22-1, táblázatban láthatók ,

22-d . táblázat

s ζ o ma tor ζ n a. t i n ~		G3-kiválás	ztás**
arra! egok	Öt	33 .	60 ,	90i. pév
S-93-1	2,9	91, ?	I tt, 6
Üt 4Iqgss	0	90	öl, 7	-
3-121	7,3	62,2	57, 3	72, 9
^lA^Itl	3,8	33, 5	54,2	67,7

Az 1 nmői nGH-EB(1-29)PHg 3 perces infúziója által kiváltott, a szomatosztafin-analógok adagolása előtti GH-felszabadulás ·<··· á ba n ki f e j e z.ve .

23. példa. Receptorkötődési vizsgálatok cltotoxlkus *

»·«·.» :* « « ♦ » * ♦·»

Χ«Φ # ♦

X* bombaζ in-&ηtagonísdákkal

A ( Tyr'b Bb radioaktív jődizotópos jelölését egy Bio-Rad knzynobeaö Rádió Iodinatl.cn készlettel, a ( --t-bcik izolálát:3'. - z ->s és munkatársai leírása szerint végezzük (Canoer

Lecters, 35, Χ11-Ϊ18 (1 974)}. A jelzett f Tyr^;C eb kötődését és a citotönikus bombezin-artagon:sta analóg, a lyi-'C_?i általi kiszorítását kontinens Suiss 3T3 sejteken (az ATCC-töi} vizsgáljak a Cél és munkatársai (kroc, Pari., Arad. Col. C3A, 91, 12661--12663 (d.édá}} által mádonibott, orda és munkatársai ÍCC. Bioi, Cdenc 2C2, 11245-11220 (19371} módszerével. A telepítés után 3 - 5 nappal a kontinens sejteket kétszer mossuk HBSS.....tai (Ranks-téle kiegyenlített adóidat} és 30 percen át inkuháljuk 37 C nömérsékleten, 50 pmői ( i<-^:-d-lyr'C BR-uel a jelöletlen kompét: tor töífe-gB: vagy Bh} kulönbözd kcncentraoröinsk jelenlétében vagy hiányában:, összesen v,o ni térxbgatö pútierben (ilhÉH 30 máéi SBRBB-sei., 0,1 á BBA-vai, 3 wtsl magnézium-klerídöal: és 10:1( gykml. has: tracinnai.; pH =- 7, 4} . A nem specifikus kötődést 1 nmöl jelöletlen iiganöum jelenlétében határozzuk meg. Miután háromszor mossuk jéghideg, 0,1 2 ESA-t tartalmazó SBSS-tal (pH - 7,4}, a sejteket 0,05 á trlpszin/0,53 mmől BőTA oldattal szaszpenziőba visszük és kémcsövekbe töltjük át. A radioaktivitást egy gammaszámié lóval mérjük Cíicromeó Systems:, rne., Rantsvilie,· Al,} . A kötődési adatokat hckhoison rádióirgandum analízis programjával értékeljük (C. .Pöarmaeo. áéthods, 14, 213-225 (1985}}. A 23-1.

táblázatban bemutatott io-értekeket Cbeng és árusait képletével számoljak ivrit, Anarma;zo.i. 22, 3099-3108 (1973)}.

3-1, táblázat' A oltstczíkns bnnóezln-antagonrsta Qp-^gB (2:~plrrol 1 r·o-DOX^J- ^z;-O~gi t~GIn~Trp~Al.a~Vai-G1 y~Η1 s-teu-JOH?-M} -keu-NH2' ^specif1kos kötődése a Sw1sa 313 sejtvonal bowzinreceptoraihoz a dombosinhez képest-,

Wgyű lei pl í néi

Booőezsz 1,2

A hormookonjugátumok és a szabad citotoxikus csoportok hatásénak és toxloztásanak összehasonlítása

24, példa, As össtrogán-fággatlen MkT egér emlőkarclnóísa (RS-49) kezelése 2-pirreXino~DQX~szal (Qg), a exfcotoxxkns AH-RH agonlsta analóg Qg^gL-Iei (ÍD-Lys^lLH-RH a Qg^^-Ö-hemlglataráf” hoz kapcsolva) és bOX-szal

A eitotoxikus donor vbl ott--szármáz ék Qs, ennek cél 2 ott oitctoxj-kus pepiid-konjogatorna (Qp-^qio , valamint a jól ismert rákellenes szer, a úOX tumorgázió hatásának ösazshaaonXitása., és az aoagolán optimális módjának, valamint a nem toxikus dózisok meghatározása érdekében LH-kK receptort hordozó dXX (1,2) tumordarabkákat (I mm-) rmpiantálunk szubkután nőstény Bpigt'l egerekbe. Egy nappal a transzulantálás ntán az egereket véletlenszerűen Ötbe csoportokba osztjuk és megkezdjük a kezelésűket, A vegYbleteket ő, X %-os trifloor-eoetsavban (ph - 2; feloldjuk és intraperitoneáliaan adjuk be. A csoportokat, kezeléseket, a kísérlet lefolyását oa a dózisokat, valamint az átlagos túlélési időt a 24-1, táblázatban főutat jók be, Az eredményeket a 24--2. táblázatban, és az 1, ábrán foglaljuk össze.

st .szein

ΑΧ Φ η

*:»: ΦΦ *:*:

X φ Φ X Φ

ΦΧ* φφΦφΦφ

X Φ « φ·

Φ* ΑΧ *:♦:

Α 24-2. táblázatban látható a Qg-tai és a cit.otoxik.us LH-EB analóg Οη^'ϋΐ-Ιοί végzett kezelés hatása a tumor térfogatára és az ösztragén-rleget ion emlörákos egerek túlélésére. Amint az a 24-2. táblázatban iárhato, 1,25 rabi Q§ az 1., 2., 7., 8., 14.

ás 15.. napokon adva (2. csoport; erős taxi cl tás t matatott; az átlagos tűiérési idő 17,4 nap, ami jelentősen rövidebb, mint a kezeletlen kontroli csoporté. Ezzel szemben az ugyanígy adagolt yü. íg. csöbört) átlagos túlélési ideje 30, & nap, amely szignifikánsan hosszabb, mint a kezeletlen kontroll csoporté. A Qr^J-^ZigL nagyobb hatásosságát a Qy-hoz képest a két csoport átla·.. s r... ' , a;.' < ; ’ - a csoport: üti mmd a 16. napon;

5, csoport;: 853 né a 31. napon) Összehasonlítása is brzonyitja.

Hasonló következ te tésekre juthatunk a Qy és a Qy-^yk osszahasor.ll tásáva) más kezelési, program esetén ís, ahol 3,5 nmei hatóanyagot adagolunk öt napon át egy héten, három héten kérészen 1

A döxorublcin toxikus dózisa (reijes mennyiség 1560 nmei, átlagos túlélési idő 20 nap) nem tudta felszámolni. a tumort, még a de^{Á 4}gk nem: toxikus dózisával ; tel jes mennyiség 7 omol, átlagos túlélési idő >31 nap) végzett kezelés eredményeként az öt állat . két áll atban, nem fej lődd tt ki a tűnőt..

«ίψχ A φ* Χ« * « φ ««« φχ* *»» φ: φ :·«»:♦.»: χ Φ <

* χ Φ Φ Φ χ λ φΦ

24-1. táblázat

port s;toPs	Kese- les	tézis / in). létéi.)	Dóris/ iel, ipp)	χοχχ Oet	Xspss ·; r> ί 1	Késelés Peték	telkes kopott tiéne y ,	át Le ges tálé lés: lnne)
I.	Kontrol1						2 2
·> >·.. ,	lg	Ί '3'.' :J. / ZZ	1,33	/3	:C	3	1,5	33,5
d		3, 5	9,3?	§	2	9	··,· :< .· / Z	X3,s
4.		9, 3 5x	3,15	3	•y		j 5	X i, ó
5 .,		lé 2	9,15	5	·.>	3	33	lapé
ék	ági4pX	1, 35	3, 3	3	9	•s	7 A	.5 0, 5
7 .,		1, 5	X, XX	s	2	z	7,5	Mj
a.		3, SIÓ	3,33	3	·;	3:	9, X	Oj 4
ti			5, 35	5	.<	3	31	13, 5
10		3, 5	0 y 1.4	X.	5		•r	>31
ti.		4	5?. z c:	X	e	y.	3
13.		5	XX, t	X:	s	2:	XS	13,4
13.	05 X	53!	339	1.	él	3	..ésS	díjé
*A 2	- 12.	napokon	a dózist	2,5	rotál-	ra nmeitök, A 9	- 12. rapó

kon a dózist 5,0 noci-ra emeltük.

fc X fc«X fcfcfc * * « x fc fcX ·^ν> $ * fc X β fcfcfc fcfcfc

A. ©só $»;:t e ZíÚksí	Ke;:i- 3 is	tll/ili ön) <3 Iné > hát inlői;	24-2. táblásat	lelj: 215© ίίϊίΚΒ	SS
;fe/5c:l la) - liléit	Késéit© Kezek
í .,	Köfeti'oili.
7	lg	5,55 3:	5	3	3,	'1
6.		1 '2 5< '? •λ, t. :<. 5	3	3	•y	5
3 v	* v	3,3 S	:2	3	7	5:
'? A	ir-’M	5,5 3	•7	%	·'' >	c:
ti?,:	ι34<ό·	.3,5 3	5	2	Ί·'.
12: .	ir-bgt	S,5ö 1	6·	'2	ö?9
13.	t:3X	123/ 1	í<		isit
		24-2 ,	táblázás (folytatás)
A í'l’l	Ks.se-	légii íssö/fe-	bírás	áböazífes;	11® 133:5551 115512
5S/55	25s	léi/lsia i	Π6φ j: a:	ansles	sild	5 25Iliiéi
S 2:lsl		fevsfe;		isatii	7 >1 .·.·:«-· .	33.. sasén
3 ...	Koí’ít Ilii 3	5323	25	.2 2,6:±3, 6	5	5
·';	;'· .«ja	33 55	5 5	5 3,45.5 ,2	5	6
1.	yyl45L·	g 55	33	3/9/, 555,4*	* 2:	5
fe	Öv	2333	12	5 3,636,3	5	5
·]	Ο§1;59?3	3/9:33	32	26,/633, 6*	* 1	3
2.5.		665	35 ::	/•33* *	4	7
'1.		5	/55	15,4	5	3
33..	35X	3/5:6/5	23	16	ö.	0

Λ X ,φ * Φ *ΧΛ *Φ * ί« * φ φ φ Φ φ ♦ «-> φ. V Φ φ ♦ *· X- Φ ** φ·» ' * A túlélés szignifikánsan hosszabb vagy rövidebb (ρ<0,01 vagy P<1,Cl; Dunnán-próba;

25. példa. A DOX-sza.1, a T-1Ö7 citotovikus LH-RH analóggal és a Qy^gL-Xel végaatfc kaaalés bahasa az; és ahrogén-faggat lan

MXT egér emlöksrciftómáre (XS-55}

A vizsgáit vegyületek;

rgi égi; doxíorubd/oin-lé-S-heníigl.ufarát ( b-bys^ tii-Bö-hoz kt;n jógáivá

T-107; h-gi ut a ri I -dovorobicin ( D-hys^l LH-BH-noz kon jogéivá í B ro ·.;;. ha ti, Ac a o. Bt1. USA, 89, 972 -97 6 (19925 5

ÜŐX: doxorubicxn

A kísérlet lefolytatása a következő.

A maximális tolerált dózis megáiiapitása és a hatások osszehasonlítása ér de kében KJ (3.2; tuhbcöé<rabkák.at (1 tóm} lmp tantálunk szubkután nőstény BgEgFl egerekbe. Egy nappal a beültetés után aa állatokat ötös csoportokra osztjuk és egyetlen ip. injekcióval kezeljük. A csoportok és dózisok a 25-1, táblázatban láthatok. A táblázatban féltőntettük azon egerek számát is, amely, akton tamor volt a tumorok térfogatának mérésekor, és az átlagos túlélési időt az egyes csoportokban, A tamortérfogat változásai a 2 , ábrán láthatok, á vegy illet eket Cji fFA-ban oldjuk fel (pH ~ 2,0). A tömöttértogatot. a iö., 13., 17. és 2C. napon mérjük.

Amint az a 25-1. tábláz; áu-n és a 2. ábrán Látható, a X-1C7 <{ D-hysbj hh-RH b-glutarli-DüX-ssag. konjugálval teljesen hatástalan a tumor növekedésére 350 nmcl/Sö g egér dözrzoan. Ezzel szemtan a Qy -^L^gL (; ö-LysM 1B-RH 14-O~gie.rar 11-DöX-sza.l konjugálva; erős: tumor.növekedést gátlód hatást mutat (ábrái a nem tóul* * *·* * φ * «χ xx *♦ χ Φ * X ΦΦ* -X X X Χ*Φ * * « χχ φφ φ* kts,_: 350 nmól/20 g egér dózisban. A OCX önmagában erősen toxikus

(átlagos túlélési	idő láb 6 nap)	egyetlen^ 550 néei/W	g egér dó-
zásban., és s	’z £ Crni. ,S	lkánsár kevés	né hatásos, mint a On/'*	gú (2. áh-
Λ. Cl ί o		25-1.	zabla zat
Csoport		özls	Tumo ro s e g<a re k /	.Átlagos
			/túlélő egerek	túlélés
hméll	eg/ goéi/	10. 13. 17, 2 öt	(hap)
	/20 g	/20 g /kg	napodon
i, bontroli			3/3 S/á 5/5 5/5	21,215,3
r, bgWú	68 0	1520 34	1/4 2/4 2/4 3/4	28, Oz/;//
				5,3125**
3. /ptol	710	1537 13,5	2/4 3/4 3/4 3/4	26,02663
				2,0134*
4. Cgi'-gp	765	16 38 3 δ	3/5 4/5 4/3 sio.	cin.
5,. 10X	55ö	417 32,5	3/3 2/2 1/1 1/1	13, 612 5
E. 0CX	700:	4 Eb 35	2/3 2/3 2/2	15,2124
7 . PO X	756·'	493 37;5	1/1	7,éli,3
3. 7-107	710	1676 Alá	5/5 5/5 5/5 4/4	21,3105
9 , 1-1S ~	§55	1100 44,4	5/5 5/5 5/5 4/4	21,5167
oly; elpttt'	ti tva
*A túlélés szignifikánsan (ρ<0,	64b révidebb, mint a kontrolié
>:t·. túlélés	szi g η1fi kársán ho	sszabb )p<0,0l; vagy	(p<5, 05) a
kontrolihoz	viszonyítva (egy~egy egér elpusztult a	2 , napon,
ezért ezeket	k i hág	yt uk a két csoportnál),

26. példa. A el bo toxikus LH--RH analógok hatása aa osmogénfaggafcXea *30 agár «flórákra (KS-47)

A kezeléshez használt vágyé letek a következek..

Egy korábbi kísérlet szerint a Qg 20 nőéi napi ögzisban, 11 napon át adva csak mérsékelt tnmornövekedést gatlö katá.st mutat, és 40 nmei dózisban toxikus (az átlagos túlélési zen 14,6 nap}.

et/Sía/íi *

4?

* * ♦ * # < ·♦·♦.♦. «·** # * * « » ** »9 * « Μ

9 ♦ «» ** X*

Ezért, ebben a kísérletben 80 nméi~os dózist választottunk, amit a ggüyL :g a | D-lys^j lh-8H-hcz konj ugálvs; , a Qg {pirrcildinc~öoxorubzcin} , a í ő-fysk LE-EH és a [ ő-Lys^} LH-RH a gy keverék hatásával és toxicitásával hasonlítunk Össze.

AXT <3.2} tumorbarabiakat (1 mn-1 implan tálunk szubkután BgDyFl nőstény egerekbe. A kezelést egy nappal az implantáció után kezdjük és 12 napon át folytatjuk napi egy rp. Injekcióval. Az összes csoport ekvimolárls mennyiséget kapott a vegy tietekből, amint az a Itt. táblazátban látható. A tumorokat a 10.,

14. és IS. napon bérjói és kiszámítjuk a térfogainkat. Az adatok a 26~i. te'·' -t .teán. ;v __k uti<o tt'.b.x.

A: Őt iímólinap^: dózist, daunozaminon módosítóik doncrubiclnanalöggal (Qy, pirroiidino-DOX} végzett kezelés erős tumor·növekedést gátié hatást eredményezett (tumortérfogat 144 mit- a 14. napon, szemben a kontroli csoport 1391 mm^-es átlagával}, de az állatok súlyos mérgezésben elhullottak a kísérlet vége előtt (átlagos túlélési idő 1'?, 9 nap} . Hasonló módén, a Qg és a [ n-Lysl LH-'RH keveréke turzcrgátiő hatást mutatott (tumor tér fogat 81 mmd a 14. napon}, de az átlagos tóiérési idő (18,6 nap} ©zignifIkánsan rbvibebb, mint a kezeletlen kontroli csoporté (23,1 nap}. A Qg-^gl-lal végzett kezelés eredményeként két állat hullott ei csak, az egyik a 16., a másik a 26. napon, A 8 thiélö állatból csak egyben fejlődött ki a tumor a 18., utolsó mérésnapra, és mind égészségesnsk látszottak, bár később mindben megindult a tumor növekedése. E csoport átlagos túlélési ideje szrgnifikánsan hosszabb volt (26,3 nap·, mint a kontroli csoporté. A [ D~Lys'b Fh-RH-vai önmagában végzett kezelés nem. befolyásolta a tumoráévekedést.

Ez a kísérlet azt bizonyltja, begy a Qgi^gl nagyobb haté*x ♦·♦ » * 9

X * ** **

konyságe és alacsonyabb átlagos toxlcitása a Qy eitotoxlkus csőporthoz képest, a ciéotoxíkas csoportnak a célzott hordozóhoz, az XH-xH analóghoz kovalens kötéssel történő kapcsolásának eredménye ..

26-1, táblázat. A oitot.oxl.kus LH-RA analógok, hatása az ös z t regé n - függő t1 en AKT egét emlőrák növekedésére és a tumoros

egerek	túlélésére
	Kezelés	Dózis Egerek	Átlagos tumor-	Átlagos fúl-
		pg. / n ap s z ác a	térfogat imm-g	élés a be-
			lö, 14, 13.	ültetés után
			napokon	(napokban)
1 .	Kontrol1	15	233 1391 4794	2 3,1
2,	gyWgh	és, 7 ID	3 3 lé 23	23,3*
3 <	Oá	21,3 10:	1S3 144 137	17, 9
4-,	f b-bys'íb bH~RA	0,2 12	l.é'S lkáé 4 2á3	to, 5
5.	í. C-Lys6] LH-RH	43,5- 10	121 SÖ 27	13,5
	+ Oá	21, 3

Az összes napi dózis 3c^; nmól-nak megfelelő mennyiség volt.

* S: z i g n i f i k án s a n hess a abc, mint a kon t rol lé (ρ < 0,01, Don c an próba!

27. példa. A 2-pirrolinö-DÖ3£ (Qg) és & dtofedscikws LH-AH agonista analóg Qg^gt (Qg^-O-hemiglut&ráfct&X konjugéiw) hatása az aadrogénfüggd Sonning R-3327-H patkány p rosztata-karcinéma nove kodé s e re.

A hormonttggő tömbre K-3327-H orosz tata-karcinerát horeozc, him Copenhagen out m.nyokat Cb-fezb-iel, a iutelnizálő hormont felszabadító hormon ÍLK-Rh) egy át, cátotoxikus analógjával ·amely az agonista { i-ípt LK-RH-hoz kapcsolt 2-pirrolino-doxoru*« χ* Φ« '· * ♦ Φ * φφφ «♦« φ * χ· ”ί ί picin - kezelünk. Az első ktserletbec a 2“p!rra,tno-duxortbioznt 50 nmől/kg dőztsbat hatóanyagként (Qg) ős a í Ö^:-l«ys·⁰} ŐH-RA hordozó vai nem kenj ng árva, keverékként, valamint a r.oroczőva! koniugálva (Qg^gld adtuk be- Az ezt követő második, 50 nmői/kg-os doz.ss hatáséra a Qg-ot önmagában és a keveréket kapott csoport Összes állata általános mérgezés tünetei között elpusztult, ®i;g a titofoxixus LK-Ak konjagátumot kapott állatok, mind életben maradtak. Az összesen 150 nmöi/kg Qg¹^oL-lel végzett kezelés 5 hetit után a tumor az eredeti, 8,35 ± 1,7 emm-es térfogatnőd 4,47 ± 0,8 cm«~ne ősökként, míg a kontroli csoportban tovább növekedve, a kísérlet végére 1.7,84 t 2,2 om--es térfogatot ért el. A Qgá-ebes kezelés a tumor tömegét és kiterjedését is csökkentette, A. ΐΛ.-.nl rí s-Ί letoen, sm^’tnvk célja a ez és ög^J'⁴gb hatásosságának és toxioizásának összehasoniifása volt, a terápia 25 nmcl/kg dg és 50 pmó!/kg Qg-^^gt háromszori leadása volt, A kezeién kezdetén a tömör térfogata minőén csoportban. 3,2 - 4,5 esd volt. A kezelés 5 hete után. az 50 nmöi/kg Qg-^gf-lei kezelt patkányokban a tumor térfogata 2,3 ± 0,51 om^;:-re ősökként, míg a 25 nmol/kg Qg még mindig toxikus; volt és csak 6,70 ± 1,4 cmi-re cs dkken tette: a végső tnmortérfogatot, hasonlóan a 25 nmöi/kg Ίη^οΐ-ηοζ fő, 74 ± 1 cm-l, szemben a kezelőt len állatokban mért 15,6 ± 2,2 ov--rel, & r -· - ’ ' <d la n , ⁵ v o , r ' -G i ->' ⁺, -> . , i r 'csökkenését egyedi! a ön--lel kezelt csoportban mutatta ki. A kezeletlen benning tömör®infákban nagy kötő kapacitású IH-Rü receptorokat lehetett kamutatni a sejthártyákon, de a kezelés után mar nem találtunk kötőhelyeket, A tumor növekedés gátlása Ad-2111-gyei. és ögj-^gL-lel az EGA-receptorok kötökepesséyének szignifikáns csökkenésével is jár. Amint az a 4 - 6. ábrákon látható, a Qíb^gL célzottan oitofoxikus rd-Hh analóg egy hatásos

SS. SS; / SS:

* * *« * » * y * * * ♦ * « * * » * * * * «*»· »#♦ *Φ* * X ♦*«* » * X

50: ·· » »· ’» «* tumoréi. lenes natóatyagu amely a ilunniny' R-3327-H patkány présttata-karoinőma vi.sszafejludasét okozza. Azt is kimutattuk, hogy a citotoxükun LH-hu analóg Qyó⁴gb sokkal kevésbé toxikus, mist a tumorellenes hatású, heleép.tfett ág csoport, . íuooo,. ..·,? jobban gátolja a tumornövefcebést,

Magyarázatok a 27. példa ábráihoz.

4. ábra, 1. Kisérletu a Dunni.ng R-3327-h patkány orosztana~kar~ oiuőmát hordozó, hím Copenhagen patkányok tumorának térfogata a kezelés során, amely 50 nmei/kg· agonista } ó-l.ys't lö-RK és 50 nmöl/kg uitozoxrkus kh-Eü analóg dg-igl háromszori adagolásából állt, A függőleges vonalak ,v u hu: hibáját tüntetik fel. *p<O,öS; **ρ<ό,05 a kootrollhoz képest, hatóan-próbával vizsgálva, A. kezeléseket nyilak jelzik az 1.., 5. és 22. napokon. A kereszt az elhullott, állatokat jelzi a 2, héten, a Qu-tal vagy a konjogálatlan keverékkel végzett kezelés hatására. Ebben a két csoportban a tumor térfogatát a 8, napon határoztuk meg.

1. ábra. 11. kísérlet: 25 nmöl/kg 2-pirrellno-donorubicín (dg), nmői/kg· és bő nmei/kg oá te toxi kos ha-RE analóg y.gf-gi hatása a Dnnning 8-3327-0: patkány prosztata-karoinéma térfogatára. A függőleges vonalak az átlag hibáját jelzik, *p<0,05 és ^y*p<O,öl a kontrolihoz képest. A kezeléseket nyilak jelzik at I,5. és 2 3. napokon .

. ábra, 11, Kísérlet: 25 nmói/kg 2-pirroiino-őoxerubicln (Qg; , nmól/kg és Su nmói/kg citotoxikus 1.2-8E analóg Qzá^ge hatása a Dnnning E-3327-R patkány orosztana-karóinótát noroozo állatok testtbmegére_:, A függőleges vonalak az átlag hibáját jelzik. *p<O,Oő és **p<O,őI a kontrolihoz képest. A xezeioseket nyilak jelzik az 1., 8, és 22. napokon.

* ♦·♦·» * ·»« X? »» * ♦ * * * * * * » ♦ *KS **« Χ«Φ * χ *.*»* « * <fr * *♦ ¢- ♦* «♦ «#

A DOX és a célzottan citotoxikus LRARB analóg hatásának bsszehasonlitö vizsgálata az OV-löő3 humán. pebsfóazak-kaxcinóma növekedésébe csapass egérhee

As 0V-I283 humán, epiteiiái.i.s petefészekrák sej tusnál egy 57 éves nő petefészkének áttételes, paprilárrs tisztaáeno-karcinőmetánéi eres (horovitz es munkatárséi, Oncclogy, 42, 332-337 (13854;. áz OV-10S3 lö millió sejtjét injekciózzuk szubkután hárem csupasz egérbe, hegy kiváltsuk a tsmornővekeöást. Egy mm--es tumordzrabkákat imp taxit álunk 14 állatba az in vifro növekedésgátlás vizsgálatához. A kisériet célja annak, bemutatása, hegy az nk-Rü receptorok jelenlétének következtében az öt-lCd sejteken a cl tetőzi kus L.H-R.H konjugátum hatásosabb és kevésbe toxikus, mint a DOX, a hordozott citotoxikus csoport. így tehát a ci.tohoalkus L«~RR konjugátum hatásét a DOk-éhoz, a EOX és a hordozó molekula keverékéhez, a htreozóéhoz és a kezeletlen kontroll csoporthoz hasonlítjuk. Az összes kezelést ip. injekciévai végezzük. A vegyudetefc 3,5 tömeg %-os fiátrium-klorid-oldatban oldjuk fel .

A körülbelül 15 ima- átlagos térfogatú tumorokat hordozó egereket hat csoportba osztjuk egyenként 3 állattal, amelyek a következő kezeléseket lápját az implantáció utáni csoport' fiziológiás sóddal; 2. csoport; t'dt testtömeg; 1, csoport; Qdtgh, 413 nmói/20 g testtömeg (a DOX maximális eltűrt dózisa, KTDj j 4. csoport; Itt, Ili nmöl/21 g testtömeg iMTDj; 5. csoport: 7(ti nmói/20 g DOX és 70Q nmei/23 g testtömeg [ D-tyső i2h-Ae keveréke; 6. csoport; ( D-Lyső EH-Rm hordozó agonista analóg, 720 nmed 120 g testtömeg· dóéi ab an.

Az 0^:V-100:3 recept órainak vizsgálata kimutatta az uü-EH nagy afiini táeh köhöhdveit.

t napon; 1. 30 nmől./20 g

Ψ4»·».* β « X > * * * * « * W **♦ ««« ·«** χ * ««:«» « «γ « « ς·} ** ♦ X* 9 9 *βί

Amint az a 7, ábrán látható, a tumor növekedésének eres gátlását értük ei a im^zt 413 árnál/ 20 g testtömeg dóméban végzett kezeléssel ni. csoport}. Az állatok nem matattak súlyos mérgezési tüneteket. Kezei szerűben a DOX 413 zmöl/20 g-es dózisa (12: mg/kg, MID, 4 . eaopert} sem eredményeze t1 sz1goif1kans tnmereövekedés-gátlást a három állatban, -'hv' ' a < a kísérlet végét. Három állat az 5. és 1 a 5. napon pusztult ei mérgezés következtésen, A erre sa;/' hozásban (7üá nmól/rö g, 2. stopért; a vg 4^gb Ígér erét tűmet; neve kedést gátié: hatást: mutatott ('7. ábra; . A 9 állatból kettő mérgezésben, egy pedig balesetben pusztult el. A hat túlélő állat felépült a körülbelül 20 1-os tömegesökkenésból a kisér let végére. A 0. csoportban a 700 nmc.l/lú g DOX és 700 nmál/2ú g j b-éúss®! áh-Rá 'keve rért el, a osepert minden állata mérgezésbe;'; hullott el.

Következtetésünk szerint kísérleteink világosan foizenyitették, begy az 1H~AH receptoroknak az OV-löül· epiteliáiis: petefészekrák sejtjein való ieienléte következtében a célzottan oltstozikns AR-RH kongugátum (ζρ-^οΑΙ kevésbé toxikus és hatásosabb sutitumor hatóanyag, mint a donorabicin iQo1, a konúugátumban lévő eitotoxikus csoport.

Claims (5)

1., Egy (1) általános képietű vegyüíet, (lj amely képletben

Q jelentése a Cili általános képietű csoport

E jelentése egyes kötés vagy egy -€ (0) - iCH₂I) _a· bános képleté csoport ? amelyben ama— n értébe 0, 1, 2, 3, 4, d, 6 vagy 7 lehet;

E’ jelentése sminocsoport., vagy egy aromás vagy telített étvágy hattagú heterooiklns, amelynek gyűrűjében legalább egy nitrogénatom van és adott esetben van egy butadién-csoportja, amely a gyűrű két Szomszédos szénatomjához kapcsolódva egy bíciklusos rendszert képez; és

E jelentése hidrogénatom vagy egy paptidesoport, azzal a megszorítással, hogy anennyihen E' jelentése aminocsoport, ügy

E~P jelentése hidrogénatomtól eltérd és amennyiben

E-P jelentése hidrogénatom, úgy E^? jelentése aminocsoporttci eltérd v

2. az I, igénypont szerinti vegyüíet, azzal jellemezve, hogy R·' jelentése a következő csoportok egyike; smlno-, plrroizd_n~ *·*'. * χ * .#·*« **« * * *« ** te Jt **# ♦ * <«i

-· I. ~ 1 1 ~, 1 ζ ο i n do 1 in- 2 - i 1 ~, 3 ~ ρ 1 r ro 1 in-1 ~ 1 1 - , 3 - p i r r o l i dón -1 II™, 2-pi rrolin-l-il 3~piperidon~I~ii~ vagy 1,3-tétrahidroprridiη-1-il-csoport, és jelentése py, Pg vagy Pg, adni £’i egy Aas-Bbb-Coc-Ser-Tyr-D-bys CXxx} -Leo-Arg-Bro·-- Ddd általános képletű LH-PH analóg, aataiy képletben Xxx jelentése hidrogénatom, dramino-vajsav vagy diasfino-propronsav., ás ahol da Aaa jelentése Glp, akkor Bbb jelentése kis, Coc jelentése Trp és Bdd jelentése Gly-dHg;

Aaa jelentése Pc-D-dal(2j, hc-D-Phe vagy Ao-C-Bneíl-Cl), akkor Bob jelentése P-Pde(i-ti} vagy D-Pne, Itt jelentése D--Palé3) vagy B-ley, és ódé. jelentése C-Aia-bHg;

ás da áas-Bbb-Crc jelentése As, akkor Edd jelentése egy -dfí-CHp-CHg csoport?

ahol a i-^:'--l-3 csoport egy karfooxaeid-kötést létesít a t-igs szabad aminocaoportjával, vagy a oiamino-vaj sávvá gy o i am;. η ο- ρ rop .1 on s a v s zabad ami no o s opo z t j adnak lég ~ alább egyikével, ba az Xxx csoportként jelen vannak;

Po ‘-dk éaa-Cys-Bbb-O-Trp-tys-Cco-Cys-Sdd-dHg általános képleté sroestosztatis-analóg, amely képletben na.

Aaa jelentése O-Pbe, akkor Bob jelentése Tyr, Coc jelentése Val és Dód jelentése Thr vagy Pro? és ha éaa jelentése C-Trp, akkor Sbb jelentése Pde, Coc és

Bdd jelentése Thr?

ahol a á - e 1 ’3?μ·ι; Λ?.:?'’ az

Aaa csoport terminális aminocsoportjavai;

?y egy éaa-él n-irp-éia-éal-Gly-iíis-neu-Bhb-bHg áltaianos kép I e t ü bőmbe zi n -an tagon 1 s t a ana 1 óg, ase 1 y képi ötben Aaa jelentése semmi, D-Tpi vagy D~Phe, és

3bb jelentése (Cár-bÜ)Len, (Ghy-kü éhe, (Cuy-ha 5Trg, (PSp-lPTao vagy bíb'-iWac?

ahol a Q-^-O-R csoport: egy karfooxamid-kötést létesít az Aaa csoport terminális aminoesoportiával, ha Aaa jelen van,· vágy a Gén téétónália áré nőén épért jávái, he: éaa hiány ti k.

3 , A 2 . igénypont szerinti vegyület, ástál jet. lemet ve, hogy n értéke 3. 4.. A 4. igénypont ; szerinti vegyület, azzal jellemetve, hogy 1b jelentése aminocsopta 11. s. a 3. i génypönt ; szerinti vegyület, azzal j e ileme zve,. hogy k^z ielöntése .M' r “-pírról in- é~il-csoport. 6 . A 4 . igénypont szerinti vegyelet, azzal iellemezve, — hogy P jelentése él> 7 . ét 5 . igénypont s zarInti vegy ület, azzal j e 1 reme zve, hogy P jelentése 8l- 1. é éh tgénypont szerinti vegyület, azzal. t elreme zve, hogy P jelentése pé V rí 9, Az 5 . igénypont szerinti vegyület, azzal jeli eres zve, hogy P jelentése Pr - e- lé. A 4. •η: üt y Ό ín i·· rt:- £· igénypont n·.-, szerinti vegyület, aszal jellemezve. hogy 1 11. ér 3 r * . igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy A jelentése 71.

:>.G b .·: j,pi.

12. Az 1. igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy ha

R~P jelentése egyaránt 'hidrogénatom* akkor 7 jelentése amin orsómért tar. eltere,

13. 7 12, igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy 7 jelen t e s e g r r r o_: i i d i η -1 - í i ··· c s op ott,

17. A Ízt igénypont szerinti vegyület, ázzál jellemezve* hogy 7 j elenzés e i zed prolin -2 - i 1 -seeeoz i IS* A 12. igénypont szerinti vegyület* ázzál jeilapezve* hogy 7 je ierzésá 3 -pár roh i n.- 1-11~cszport..

lé. A 12, igénypont szelt hál vegyület.., .azzal jel len® zve.,, hogy 7 j elán t a se ü - p Írrel idő n -1~ i 1- c. roprrrt.

17. 7 17. igénypozZ ezer inti vegyület, azzal lelievezve* hogy 7 jele rt e se 2 -pl. r r el in -1. ~ il ~ e seper e.

18. A. 12. igénypont zzerihti vegyület* azzal jellemezve* hogy 7^: jelentése 3~piperidon-l-i,l-oarport.

le. 7 12.. igénypont szer inti. vegyület* azzal jel leráz ve* hogy 1 jelentése 1*l-tetr&hidropirrdin-1-ii-osöpört.

21. Az 1, igénypont szerinti*

Slp-üls “Irp ~ Ser ~Tyr-tj-iyz 77 -1---7---gitj ---700-100---110---13. y ~7üy képletü vegyület, azzal jellemezve* hogy Qy®® jelentése donotu--él c in ~ 1A -11 -eztgoiz..

21. áz 1. .igénypont szerinti* aip~ö i s ~trp~ Sar~lyr ~z® itt Üg re -,ρ- gy y -yen-Arg- 2te-é.i y ~ü hg képiéin vegyület.* azzal jellemezve,· hegy lg¹⁴ jajeetége 7 ~1©ζanlno-S⁷ - <2 ~pirroiin~i'---il) ---donoron! cin-17-ti -csoport..

22. Az 1. igénypont ezer inti*.

* í...................................................... ......i yy l -p-glt~ü^:-Ahe—üys-lyr—n-lrp-lye-yai—t.ys- tár—hág

-étit; '-o/lr, azzal jellemezve* hogy Qpⁱ⁴ jelentése doxcto♦.·» «φ φ ** *Φ Φ··φ * * * Φ Φ χ φ * * * ***· ΦΦ* Φ*«

Φ. « Χ*ΦΦ Κ φ Φ X _ν ίζ·-; '** φ. ΦΦ Φ* bioiη-14-11-ο sοpert.

23. Az 1, igénypont szerinti,

........................................................................1:

Qr^^-O-git-'D-'Ene-Cys-Tyr-o-Trp-Lys-'Voi-Cys-Ttr-bn^ képlete vegyület, azzal jellemezve, begy jelentése 3' -deza zni η o ~ 3' -.(A -pi r r o i i η -1 '· ~ il, - de χ o r ab i e i η -14 ~ i 1 - o a op o r t.

24. Az 1. igénypont szerinti,

I............ ............................ I

0 y 19... g - g χ y - ρ - m r p - C y s - é r. e - o - T r p - k y s - Tn r - C y s - in r - bég képletű vegyület, azzal jellemezve, begy ζη-^ζϊ jelentése doxorublein-I

4-11-eaegot'fc23. az 1,. idédyponi szerinti,

5 ............................. ...................ii

Qy n 7 -S-gi t - P ~Trp -ilyo - bha^:~b~Tkp-by o - i a z~dye -Ah m-teo képletű vegyület, azzal jellemezve, begy Qg-^ jelentése 3^f -dezamino-3^? - (2 -pirrelűn-l -ii) -üoxortdici η-14-i I-csoport..

26. Az i, igénypont szerinti, ι ..................... .....................=

Q: £ z s ...g _ g : ·ί· _ g.... p·;·, „ C y S ~ 1Vt ~ 0-7 r p -.... V S ~ A .. A y í ~ ’lr p~ Üli 2 képlett vegyület, azzal jellemezve, begy Qgj·'* jelentése donortbio i n-14-i1-o s eper t,

27, Az 1. igénypont szerinti,

;........................... .......................~s g g 71 -o -g 11 - D- 2 he - C y s - i y r - b - 2 rp - Lys- V a I - C y s - T t o- b 2 y képletű vegyület, azzal jellemezve, hogy QA·¹* jelentése 3^?-dezamino-3' - í 2^f? ~pzrro A.r- A -il) -doxortioicin-l4- ii-csoport.

28.. Az 1. igénypont szerinti,

g., ti ..<....yit-Gin-7Ap-Aia-Val-Ό y-Hie-Let Ak-mü Len-NHy képletű vegyület, azzal jellemezre, hogy űi^i<3 jelentése donort··· bioin-14-11-csoport,

29, Az í. igénypont szerinti,

0?⁴-O-glt-Gin-Trp-Aia-Val-Giy-Hls-leu : C?b~kö} Leu-KK·?

képletű vegyölet, azzal jellemezve, hogy a jé jelentése 3^fdezamíno-37-(l^-pítrolldín-l-!!s-doKorubicín-iá-il-csoport.

30, Az 1, igénypont, szerinti

Qé’-ö-git-D-Tpí-Gin-lrp-Aia-val-Gly-dis-Lea > CHg-hHj -Leu-NH?;

képlete vegyölet, ezzel jellemezve. Hogy Qy^ jelentése donorobic iη-1«- í1-csoport,

31, Az 1. igénypont szerinti,

Qg'-Q-glt-D-Tpí-Gin-'Trp-Ala-Val-Gly-Hís-éenioig-dHlLeg-ÖIb képletű vegyület, azzal jellemezve, hogy Qi¹⁴ jelentése donor né 1oiη-14-11-cseppr t.

32, Gyógyszerészeti készítmény, azzal jellemezve, hogy egy 1, igénypont szerinti vegyületet és gyógyszerészetHeg elfogadható vívöanyagot tartalmaz.

33, Az 1, igénypont szerinti vegyöletek alkalmazása emlősök r á k. be t eg s é géné k kezelésére szolgáló gyógys zer készi tmény élőéi ütés ára,

34, A 20, és 21, Igénypont szerinti vegyületek alkalmazása LHEH receptorokkal rendelkező humán tumorok, így az emlő-, petefészek-, mébnyáikádártya~, prosztatahasnyálmirigy' és vas t a gfoélrá k ke ze1é söre szolgálö gydg y s z e r ké s z í tmén y előállítására .·

35, A 22-27, igénypontok szerinti, vegyöletek alkalmazása szemetesztatin-analóg receptorokkal rendelkező humán tumorok, így az emlő-, gyomor-, vastag- és véghél- vagy prosztatarák, az aprósejtes és nem apröaejfces tüdőkarcínöma, a vesekarcin óma, csonté zár kóma·, és az. agy tumorok kezelésére szolgáló gyógysserké s z ítmény előállítására.

3β. .« 28-31. igénypontok szerinti vegyüietek alkalmazása GRP és bőmbe2in-típusú peptidreceptorOkknl rendelkező humán tumorok, igy az emlő-, gyomor-, hasnyálmirigy-, vastag- és végbél- vagy prosztatarák, az aprésejtes és nem; aprósejtes tüóőkarolnőma, a vese karc! nőma és az agytumorok kezelésére s z ο 1 g á 1 b g y ó g y s z e r ké s sí ítmény e I óé 11 i t és ára , é méghata ima sótt: