[go: up one dir, main page]

FI102355B - Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjug aattien valmistamiseksi - Google Patents

Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjug aattien valmistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI102355B
FI102355B FI890599A FI890599A FI102355B FI 102355 B FI102355 B FI 102355B FI 890599 A FI890599 A FI 890599A FI 890599 A FI890599 A FI 890599A FI 102355 B FI102355 B FI 102355B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
adm
antibody
anthracycline
immunoconjugates
adriamycin
Prior art date
Application number
FI890599A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI890599A0 (fi
FI102355B1 (fi
FI890599A (fi
Inventor
Takushi Kaneko
Gary R Braslawsky
Robert S Greenfield
Lee J Olech
Original Assignee
Squibb Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Squibb Bristol Myers Co filed Critical Squibb Bristol Myers Co
Publication of FI890599A0 publication Critical patent/FI890599A0/fi
Publication of FI890599A publication Critical patent/FI890599A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI102355B1 publication Critical patent/FI102355B1/fi
Publication of FI102355B publication Critical patent/FI102355B/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/252—Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6881—Cluster-antibody conjugates, i.e. the modifying agent consists of a plurality of antibodies covalently linked to each other or of different antigen-binding fragments covalently linked to each other
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • H—ELECTRICITY
    • H01—ELECTRIC ELEMENTS
    • H01L—SEMICONDUCTOR DEVICES NOT COVERED BY CLASS H10
    • H01L21/00—Processes or apparatus adapted for the manufacture or treatment of semiconductor or solid state devices or of parts thereof
    • H01L21/70—Manufacture or treatment of devices consisting of a plurality of solid state components formed in or on a common substrate or of parts thereof; Manufacture of integrated circuit devices or of parts thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Power Engineering (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Computer Hardware Design (AREA)
  • Microelectronics & Electronic Packaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)

Description

102355
Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokon-jugaattien valmistamiseksi
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää immunokonjugaatin val-5 alistamiseksi, joka käsittää noin 4-10 antrasykliinimolekyyliä, jotka on liitetty vasta-aineeseen, joka reagoi tapettavaksi valitun solupopulaation kanssa, jolloin kukin antrasykliini sisältää ketoryhmän 13-asemasssa ja on kiinnittynyt vasta-aineeseen yhdistävän välikappaleen välityksellä, yhdistävän välikappaleen ollessa kovalenttisesti sitoutunut antrasykliiniin asyylihydratsonisidoksella antrasykliinin 10 13-ketoasemaan. Valmistettavat immunokonjugaatit sisältävät eliminoitavaksi valitun solupopulaation kanssa reagoivan vasta-aineen, jonka vasta-aineen rakenteeseen on kovalenttisesti kiinnitetty useita sytotoksisia antrasykliinimo-lekyylejä. Kukin antrasykliinimolekyyli on konjugoitu vasta-aineeseen yhdistyvän välikappaleen avulla antrasykliinin ollessa sitoutunut tähän välikkeeseen 15 happoherkän asyylihydratsonisidoksen välityksellä, joka sidos sijaitsee antrasykliinin 13-ketoasemassa. Suositeltava suoritustapa koskee adriamysiini-immunokonjugaattia, jossa adriamysiini on kiinnitetty välikekäsivarteen asyylihydratsonisidoksen välityksellä 13-ketoasemalla. Välike sisältää lisäksi disulfi-di- tai tioeetteriliitoksen vasta-aineen kiinnityskohtana immunokonjugaattiin. Li-20 säksi tämän keksinnön mukaisesti syntetisoidaan antrasykliinin uusia asyyli-hydratsonijohdannaisia ja käytetään niitä valmistettaessa mainittuja immuno-konjugaatteja, Tässä kuvattujen immunokonjugaattien happoherkkä asyylihydrat-sonisidos sallii antrasykliinin vapautumisen immunokonjugaatista kohdesolun ;; 25 happamassa ulkoisessa tai sisäisessä ympäristössä. Sen vuoksi esitetyt im munokonjugaatit ja menetelmät ovat käyttökelpoisia vasta-ainevälitteisissä lääkkeen kuljetussysteemeissä suosittaessa valitun populaation solutappoa hoidettaessa tauteja, kuten syöpiä ja muita kasvaimia, ei-sytosidisia virus- tai muita patogeeni-infektioita ja autoimmuunitauteja.
30 Antrasykliinit ovat antibioottiyhdisteitä, joilla on sytotoksista aktiivi- ; suutta. Tutkimukset ovat osoittaneet, että antrasykliinit voivat toimia solun tappamisessa useilla eri mekanismeilla, jotka sisältävät: 1) lääkemolekyylien sijoittumisen solun DNA-juosteiden väliin siten inhiboiden DNArsta riippuvaista nukleiinihapposynteesiä; 2) lääkkeen tuottamat vapaat radikaalit, jotka sitten 35 reagoivat solun makromolekyylien kanssa aiheuttaen vahinkoa soluille tai 3) lääkemolekyylien interaktiot solumembraanin kanssa (katso esim., C. Peterson et ai., "Transport And Storage Of Anthracyclines In Experimental Systems And 2 102355
Human Leukemia", teoksessa Anthracvcline Antibiotics In Cancer Therapy.
F.M. Muggia et ai. (toim.), sivu 132 (Martinus Nijhoff Publishers 1982); katso myös N.R. Bachur, "Free Radical Damage", id. sivuilla 97-102). Sytotoksisesta potentiaalistaan johtuen antrasykliinejä on käytetty useiden syöpien, kuten 5 leukemian, rintakarsinooman, keuhkokarsinooman, munasarjan adenokarsi-nooman, ja sarkoomien, hoidossa (katso esim., P.H. Wiernik, "Current Status Of Adriamycin And Daunomycin In Cancer Treatment", teoksessa Anthracvcli-nes: Current Status And New Developments. S.T. Crooke et ai. (toim.), sivut 273-94 (Academic Press 1980)). Yleisesti käytetyt antrasykliinit sisältävät adri-10 amysiinin ja daunomysiinin.
Vaikka nämä yhdisteet voivat olla käyttökelpoisia kasvainten ja muiden tautitilojen hoidossa, jossa yritetään eliminoida valittu solupopulaatio, niiden terapeuttista tehokkuutta usein rajoittaa niiden antamiseen liittyvä annoksesta riippuvainen myrkyllisyys. Esimerkiksi kasvainten hoidossa myelo-15 suppressio ja kardiotoksisuus ovat tyypillisiä haitallisia sivuvaikutuksia (katso S.T. Crooke, "Goals For Anthracycline Analog Development At Bristol Laboratories", Anthracvclines: Current Status And New Developments, supra, sivu 11). Sen vuoksi on kasvainten hoidossa yritetty parantaa näiden yhdisteiden terapeuttista tehokkuutta liittämällä antrasykliini vasta-aineisiin, jotka on val-20 mistettu kasvaimeen liittyviä antigeenejä vastaan. Tällä tavalla lääke voidaan kuljettaa tai "kohdistaa" kasvaimen alueelle ja sen myrkyllisiä sivuvaikutuksia kehon normaaleille soluille voidaan pienentää. Alalla tunnetaan immunokonju-gaatit, jotka koostuvat antrasykliineistä, adriamysiinistä (ADM) tai daunomysii-nistä (DAU), jotka on liitetty kasvaimeen liittyviä antigeenejä vastaan tehtyihin : 25 polyklonaalisiin tai monoklonaalisiin vasta-aineisiin (katso esim., i. Gallego et ai., "Preparation Of Four Daunomycin-Monoclonal Antibody 791T/36 Conjugates With Anti-Tumour Activity", Int. J. Cancer. 33, sivut 737-44 (1984) ja R.
Arnon et ai., "In Vitro And In Vivo Efficacy Of Conjugates Of Daunomycin With Anti-Tumor Antibodies", Immunological Rev,. 62, sivut 5-27 (1982)).
30 Useimmin käytetyissä tavoissa liitettäessä antrasykliini vasta- aineeseen on käytetty hyväksi liitosta antrasykliinin aminosokeriosassa. Esimerkiksi, aminosokeri on hapetettu natriumperiodaattikäsittelyllä ja liitetty suoraan vasta-aineen lysiinijäännöksiin Schiffin emäksen muodostuksen välityksellä (katso esim., E. Hurwitz et ai., "The Covalent Binding Of Daunomycin 35 And Adriamycin To Antobodies, With Retention Of Both Drug And Antobody Activities", Cancer Res., 35, sivut 1182-86 (1975)). Vaihtoehtoisesti antrasykliinit on liitetty vasta-aineisiin antrasykliinin aminosokerin karbodi- 3 102355 imidivälitteisellä liitoksella vasta-aineen karboksyyliryhmiin (katso esim., E. Hurwitz et ai., supra). Ja antrasykliinit on myös liitetty vasta-aineisiin ristisito-malla lääkkeen aminosokeri ja vasta-aineen aminoryhmät glutaraldehydillä (katso esim., M, Belles-lsles et ai., "In Vitro Activity Of DaunomycinAnti-5 AlphaFetoprotein Conjugate On Mouse Hepatoma Cells", Br, J. Cancer. 41, sivut 841-42 (1980)). Kuitenkin tutkimukset immunokonjugaateilla, joissa ant-rasykliinimolekyylin aminosokeriosaa modifioitiin liittämällä vasta-aineeseen, osoittavat konjugoidun lääkkeen sytotoksisuuden häviämistä (katso esim., R, Arnon et ai., supra, sivut 7-8). Lisäksi tutkimukset antrasykliinianalogeilla 10 osoittavat, että antrasykiiinien aminosokerien modifikaatiot johtavat lääkeana-login sytotoksisen aktiivisuuden pienenemiseen verrattuna emofääkkeeseen (katso esim., K. Yamamoto et ai., "Antitumor Activity Of Some Derivatives Of Daunomycin At The Amino And Methyl Ketone Functions", J. Med. Chem.. 15, sivut 872-75 (1972)).
15 On valmistettu vielä muita immunokonjugaatteja, joissa antrasykliini, daunomysiini, on konjugoitu suoraan vasta-aineeseen lääkkeen 14-hiili (C-14)-kohdasta. Kuitenkin näiden immunokonjugaattien selektiivinen sytotoksinen aktiviteetti kasvainsoluja kohtaan ei ollut helposti toistettavissa ja tuli ilmi yhdenmukaisesti vain konsentraatiossa 20 pg/ml (katso J. Gallego et ai., suora).
20 JP-patenttihakemus 274658 esittää antrasykliinin konjugoimisen vasta-aineeseen 13-keto-asyylihydratsoniliitoksen välityksellä. Tämä konjugointi saatiin aikaan käyttäen menetelmiä, jotka sisältävät vasta-aineen derivati-soinnin ja seuraavaksi tämän johdannaisen reaktion antrasykliinin kanssa. Näitä menetelmiä ei suosita, koska vastaaineen derivatisointi sisältää ei-haluttuja ·'; 25 epäspesifisiä reaktioita ja saadaan hyvin alhaiset antrasykliini.vasta- ainesuhteet,
Ensimmäisen menetelmän mukaisesti vasta-ainetta käsiteltiin kar-bodi-imidillä hydratsiinin läsnä ollessa saaden hydratsido-vasta- ainejohdannainen, jonka annettiin sitten reagoida antrasykliinin kanssa niin, 30 että antrasykliini liitettiin suoraan vasta-aineen rakenteeseen. Tuloksena syn-.· tyneet immunokonjugaatit ovat kuitenkin alttiita vasta-ainemolekyylien aggre- goitumiselle. Lisäksi, koska tämä menetelmä tarvitsee vasta-aineessa karbok-syylihapporyhmiä, joita on rajattu lukumäärä, näillä immunokonjugaateilla on matala antrasykliini.vasta-ainesuhde (noin 1,1 -1,3), 35 Toinen menetelmä sisältää vasta-aineen reagoimisen sukkinaatti- anhydridin kanssa muodostaen vasta-aineen amidihappojohdannaisen. Tämän johdannaisen annettiin seuraavaksi reagoida hydratsiinin kanssa saa- 4 102355 den vasta-aineen hydratsidijohdannainen, jonka annettiin sitten reagoida ant-rasykliinin, daunomysiinin, kanssa. Tämä toinen tapa on huono siksi, että vasta-ainejohdannaisen reaktio hydratsiinin kanssa on epäspesifinen johtaen halutun hydratsidijohdannaisen lisäksi eri vasta-ainejohdannaisista koostuvan 5 seoksen muodostumiseen. Näin ollen, kuten on osoitettu hakemuksessa 274 658, antrasykliinin molaarinen suhde vasta-aineeseen oli hyvin matala (noin 1, katso Japanin patenttihakemus, sivu 264, palsta 1).
Lopuksi, muita antrasykliinihydratsoneja ovat esittäneet G.L. Tong et ai., J. Med. Chem.. 21, sivut 732-37 (1978); T. Smith et ai., J. Med. Chem..
10 21, sivut 280-83 (1978); ja R.T.C. Brownlee et ai., J. Chem. Soc.. sivut 659-61 (1986). Katso myös US-patenttia 4 112 217, joka esittää daunomysiinin ja ad-riamysiinin bis-hydratsonit.
Muissa tutkimuksissa antrasykliinit on liitetty korkean molekyylipai-non omaaviin kantajiin, kuten dekstraaniin tai polyglutamiinihappoon, lääkkeen 15 sytotoksisen aktiivisuuden vahvistamiseksi ja toksisuuden vähentämiseksi (katso esim., R. Arnon et ai,, supra, sivu 5 ja E. Hurwitz et ai., "Soluble Ma-cromolecules As Carriers For Daunorubicin", J. AddI. Biochem.. 2, sivut 25-35 (1980)). Nämä kantajaan liitetyt antrasykliinit on myös sidottu kovalenttisesti vasta-aineisiin, jotka on valmistettu kasvaimiin assosioituneita antigeenejä 20 vastaan, muodostamaan immunokonjugaatteja sytotoksisen lääkkeen kohdistamiseksi spesifisesti kasvainsoluihin. Esimerkiksi adriamysiini on liitetty sellaiseen "kasvaimen vastaiseen" vasta-aineeseen karboksimetyylidekstraa-nihydratsidisillan välityksellä, jossa adriamysiinimolekyyli oli liitetty karboksi-metyylidekstraanin hydratsiinijohdannaiseen adriamysiinin tetrasykliinirenkaan ;; 25 karbonyylisivuketjun C-13 kohdalta muodostamaan hydratsoni. Vasta-aine lii tettiin sitten dekstraanihydratsidijohdannaiseen glutaraldehydillä muodostamaan adriamysiini-dex-vasta-ainekonjugaatti (katso R. Arnon et ai., "Monoclonal Antibodies As Carriers For Immunotargeting Of Drugs", teoksessa Monoclonal Antobodies For Cancer Detection And Therapy. R.W. Baldwin 30 et al. (toim. ) , sivut 365-83 (1985) ja E. Hurwitz et ai., "A Conjugate Of Adri-: amycin And Monoclonal Antibodies To Thy-I Antigen Inhibits Human Neurob lastoma Cells In Vitro", Ann. N.Y. Acad. Sci.. 417. sivut 125-36 (1983)).
Kuitenkin kantajien käyttö tuo mukanaan tiettyjä haittoja. Esimerkiksi kantajia sisältävät immunokonjugaatit ovat kooltaan melko suuria ja poistu-35 vat nopeasti retikuloendoteliaalisysteemin välityksellä in vivo (katso esim., R.O. Dillman et ai., "Preclinical Trials With Combinations And Conjugates Of T101 Monoclonal Antibody And Doxorubicin", Cancer Res. 46, sivut 4886-91 5 102355 (1986)). Tämä kantajia sisältävien immunokonjugaattien nopea poistaminen ei ehkä ole edullista terapialle, koska konjugoitu lääke ei ehkä koskaan saavuta sen aiottua toimintapaikkaa, so., tapettavaksi valittua soluryhmää. Lisäksi korkean molekyylipainon omaavan kantajan läsnäolo voi vaikuttaa negatiivisesti 5 immunokonjugaatin stabiilisuuteen ja sen on osoitettu alentavan konjugaatin vasta-aineen sitomisaktiivisuutta (katso esim., M.J. Embleton et ai., "Antibody Targeting Of Anti-Cancer Agents", teoksessa Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy. R.W. Baldwin et ai. (toim.), sivut 323-24 (1985)). Lisäksi kasvainsoluilla suoritetuissa tutkimuksissa ei ole mitään todistetta siitä, 10 että korkean molekyylipainon omaavan kantajan sisältävät immunokonjugaatit kykenevät kulkeutumaan kasvainsoluihin in vivo. Vertaa C.H.J. Ford et ai., "Localization And Toxicity Study Of A Vindesine-Anti-CEA Conjugate In Patients With Advanced Cancer", Br. J. Cancer. 471 35-42 (1983), joka osoittaa suoraan konjugoitujen lääke-vasta-ainekonjugaattien kulkeutumisen kasvain-15 soluihin in vivo.
Näin ollen antrasykliinien konjugointi vasta-aineisiin spesifisiä liitoksia ja kantajia käyttäen on esitetty. Kuten yllä on hahmoteltu, näiden immunokonjugaattien käyttö tuo mukanaan selviä haittoja riippuen spesifisestä liitoksesta tai kantajasta, jota on käytetty.
20 Esillä oleva keksintö esittää näin ollen uuden kemiallisen menetel män useiden sytotoksisten antrasykiiinimolekyylien liittämiseksi yhdistyvän välikappaleen eli välikekäsivarren välityksellä vasta-aineeseen, joka on valmistettu tapettavaksi valittua kohdesolupopulaatiota vastaan. Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksesa 1 esi-·’· 25 tetään. Tämän keksinnön mukaisesti kukin antrasykliini on liitetty vasta- aineeseen välikekäsivarren välityksellä, antrasykliinin ollessa sidottuna tähän välikkeeseen asyylihydratsonisidoksen välityksellä antrasykliinin 13-keto-asemalta, muodostaen uudet immunokonjugaatit. Esimerkiksi, keksinnön suositeltava suoritustapa sisältää uuden adriamysiinihydratsonijohdannaisen 30 (ADM-HZN) synteesin, joka johdannainen sitten tiivistettiin tioloidun vasta-.· aineen kanssa johtaen antrasykliinin kiinnittymiseen vasta-aineeseen välike käsivarren välityksellä. ADM:n C-13-asemaan muodostunut asyylihydratsoni-sidos toimii ADM:n kiinnittymiskohtana välikkeeseen. Lisäksi välikkeessä on läsnä disulfidisidos vasta-aineen kiinnittymiskohtana. Toisen suositeltavan 35 suoritustavan mukaisesti ADM-HZN pelkistettiin muodostaen sulfhydryyliryhmä ja tuloksena syntynyt uusi hydratsonijohdannainen tiivistettiin maleimidi-derivatisoidun vasta-aineen kanssa. Tämä johti sellaisen välikekäsivarren 6 102355 muodostumiseen, jossa oli asyylihydratsonisidos välikkeen kiinnittymiskohtana ADM:n C-13-asemaan ja tioeetterisidos välikkeessä välikkeen kiinnittymiskohtana vasta-aineeseen. Näin ollen esillä oleva keksintö koskee myös menetelmiä antrasykliinien uusien asyylihydratsonijohdannaisten valmistamiseksi, 5 jotka ovat käyttökelpoisia mainittujen immunokonjugaattien valmistuksessa. Keksinnön mukaiselle menetelmille adriamysiini-13-(3-(2-pyridyyliditio)propionyyli)hydratsonihydrokloridin (ADM-HZN) ja 13-(3-(merkaptopropionyyli)adriamysiinihydratsonin valmistamiseksi on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksissa 13 ja 14 esitetään.
10 Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettavien immunokonju gaattien molaariset antrasykliini:vasta-ainesuhteet ovat noin 4-10 ja niillä on jäljellä sekä vasta-aineen että sytotoksisen lääkkeen aktiivisuudet valittujen kohdesolujen tappamista varten. Happoherkkä hydratsonisidos. joka on läsnä antrasykliinin kiinnittymiskohdassa immunokonjugaatin välikekäsivarteen, ja 15 lisäksi tämän keksinnön suositeltavien suoritustapojen mukaisessa välikekäsi-varressa olevat disulfidi- tai tioeetteriliitokset sopivat ihanteellisesti aktiivisen lääkkeen vapauttamiseen pelkistävissä ja happamissa olosuhteissa, kuten sellaisissa, joita tyypillisesti tavataan solun sisällä, esim. lysosomivesikkeleis-sä.
20 Näitä immunokonjugaatteja voidaan käyttää farmaseuttisissa ko koonpanoissa, kuten sellaisissa, jotka koostuvat farmaseuttisesti tehokkaasta määrästä ainakin yhtä immunokonjugaattia ja farmaseuttisesti hyväksyttävästä kantajasta. Jäljempänä esitetään myös menetelmät sytotoksisten lääkkeiden selektiiviseksi kuljettamiseksi eliminoitavaksi haluttujen valittujen kohdesolujen 25 populaatioon kuin myös menetelmät nisäkkään hoitamiseksi farmaseuttisesti hyväksyttävällä tavalla farmaseuttisesti tehokkaalla määrällä kokoonpanoja.
Tässä esitetyt immunokonjugaatit, farmaseuttiset kokoonpanot ja menetelmät antavat käyttökelpoisen tavan kohdistaa sytotoksiset antrasyklii-nilääkkeet valittuun solupopulaatioon niiden kohdesolujen tappamisen suosi-30 miseksi hoidettaessa tauteja, kuten syöpiä ja muita kasvaimia, ei-sytosidisia « .· virus- tai muita patogeeni-infektioita, ja autoimmuunitauteja.
Kuvio 1 esittää kaavakuvan muodossa immunokonjugaattien valmistuksessa käytetyn uuden ADM-HZN hydratsonijohdannaisen synteesin.
Kuvio 2 esittää kaavakuvan muodossa yhden suoritustavan immu-35 nokonjugaattien synteesin, jossa monoklonaalinen vasta-aine (MAB) ensin ti-oloitiin käyttäen joko SPDP:tä (N-sukkinimidyyli-3-(2-pyridyyliditio)propionaatti) tai 2-IT:tä (2-iminotiolaani) ja tioloidun vasta-aineen annettiin sitten reagoida 102355 7 ADM-HZN:n kanssa muodostamaan immunokonjugaatti, jossa oli hydratsoni-sidos ADM:n 13-keto-kohdassa ja disulfidisidos välikekäsivarressa,
Kuvio 3 esittää hajontakuvion, jossa verrataan monoklonaalisessa vasta-aineessa substituoitujen reaktiivisten tioliryhmien määrää (SH/MAB-5 suhde) lopulliseen ADM/MAB:n molaariseen suhteeseen, joka saatiin immu-nokonjugaatteihin tiivistettäessä SPDP-tioloidut 5E9- ja 3AI- monoklonaaliset vasta-aineet ADM-HZN:n kanssa,
Kuvio 4 esittää hajontakuvion, jossa verrataan SH/MAB-suhdetta lopulliseen ADM/MAB:n molaariseen suhteeseen, joka saatiin immunokonju-10 gaatteihin, jotka tuotettiin antamalla 2-IT-tioloitujen 5E9- ja 3A1-vasta-aineiden reagoida ADM-HZN:N kanssa,
Kuvio 5 esittää hajontakuvion, joka osoittaa suhteen ADM/MAB:n molaarisen suhteen ja immunokonjugaattien proteiinisaannon välillä, jotka im-munokonjugaatit valmistettiin käyttämällä joko SPDP-tioloituja vasta-aineita tai 15 2-IT-tioloituja vasta-aineita.
Kuvio 6 esittää hajontakuvion, jossa verrataan ADM/MAB:N molaa-rista suhdetta proteiinisaannon suhteen, joka saatiin immunokonjugaattien valmistuksessa käyttäen monoklonaalisia vasta-aineita, jotka olivat joko lgGr isotyyppiä (esim, 5E9 ja 3A1) tai lgG2-ISotyyPPIä (esim. L6). Nämä vasta-20 aineet oli tioloitu SPDPillä,
Myös kuvio 7 esittää hajontakuvion, jossa verrataan ADM/MAB:n molaarista suhdetta immunokonjugaattien proteiinisaannon suhteen, joissa immunokonjugaateissa oli lgGrisotyypin vasta-aine vastaan lgG2 -isotyypin vasta-aine (kuten kuviossa 6) paitsi, että nämä vasta-aineet oli tioloitu käyttä-• 25 en 2-IT:tä.
Kuvio 8 esittää graafisesti kahden immunokonjugaatin sitoutu-miskäyrät verrattuna vastaavien ei-konjugoitujen monoklonaalisten vasta-aineiden sitoutumiskäyriin.
Kuvio 9 on HPLC-kromatografiakuva, joka esittää immunokonjuga-30 atin stabiilisuuden pH-alueella 4-7. Tämä kromatografiakuva osoittaa asyyli-*: hydratsonisidoksen happoherkkyyden, joka havaittiin vapaan ADM:n lisäänty neenä vapautumisena immunokonjugaatista, kun pH tuli happamammaksi.
Kuvio 10 on HPLC-kromatografiakuva, joka osoittaa ADM-osan vapautumisen immunokonjugaatista DTT-käsittelyn jälkeen, 35 Kuvio 11 esittää graafisesti immunokonjugaattien selektiivisen sytotoksisuuden Daudi-solulinjaa kohtaan käyttäen pehmeäagarpesäkekoetta. Nämä immunokonjugaatit oli valmistettu käyttäen 2-IT-tioloituja vastaaineita.
8 102355
Kuvio 12 esittää graafisesti immunokonjugaattien selektiivisen sytotoksisuuden Namalwa-soluja kohtaan ja immunokonjugaattien lisääntyneen vahvuuden verrattuna vapaaseen ADM:ään käyttäen rajoittavaa laimen-nusmenetelmää.
5 Kuvio 13 esittää graafisesti immunokonjugaattien selektiivisen sytotoksisuuden Daudi-soluja kohtaan käyttäen pehmeäagarpesäkekoetta. Tässä tapauksessa immunokonjugaatit oli valmistettu käyttäen SPDP-tioloituja vasta-aineita.
Kuvio 14 esittää graafisesti toisen immunokonjugaatin selektiivisen 10 sytotoksisuuden, joka immunokonjugaatti oli valmistettu käyttäen SPDP:tä ti-oloivana aineena. Tämä immunokonjugaatti oli sytotoksinen antigeenipositiivi-sia Daudi- ja Namalwa-soluja kohtaan, mutta eivät antigeeninegatiivisia HSB- 2-soluja kohtaan, pehmeäagarpesäkekoetta käyttäen.
Kuvio 15 esittää 5E9- ja 3A1-immunokonjugaattien selektiivisen 15 sytotoksisuuden ihmisen paksusuolen karsinoomasolulinjaa (5E9+, 3A1-) kohtaan pesäkekoetta käyttäen.
Kuvio 16 esittää graafisesti immunokonjugaattien sytotoksisuuden puutosta Daudi-soluja kohtaan, jotka immunokonjugaatit oli valmistettu kiinnittämällä ADM monoklonaalisiin vasta-aineisiin ADM:n aminosokerijäännök-20 sestä leu-ala-dipeptidivälikkeen välityksellä.
Kuvio 17 esittää kaavakuvan muodossa immunokonjugaatin synteesin, jossa uusi ADM-HZN-johdannainen pelkistetään ja sitten annetaan reagoida SMPB (sukkinimidyyli-4-(p-maleimidofenyyli)butyraatti)-käsitellyn vasta-aineen kanssa muodostamaan immunokonjugaatin, jossa on välikekäsivarsi, ·'; 25 jonka rakenteessa on tioeetteriliitos.
Kuvio 18 esittää graafisesti erään immunokonjugaatin sytotoksisuuden. jolla immunokonjugaatilla on, 13-keto-asyylihydratsoniliitoksen lisäksi, tioeetterisidos välikekäsivarressaan. Immunokonjugaatti osoitti suurempaa vahvuutta Namalwa-soluja kohtaan verrattuna vapaaseen ADM.ään 3H-30 tymidiinin inkorporaatiokoetta käyttäen.
.· Kuvio 19 esittää graafisesti kuvan 18 immunokonjugaatin sytotoksi suuden HSB-2-soluja kohtaan samaa 3H-tymidiinin inkorporaatiokoetta käyttäen.
Kuvio 20 esittää graafisesti immunokonjugaatin selektiivisen syto-35 toksisuuden antigeenipositiivisia soluja kohtaan verrattuna antigeeninegatiivi-siin soluihin käyttäen 3H-tymidiinin inkorporaatiokoetta, immunokonjugaatin 9 102355 omatessa, 13-keto-asyylihydratsoniliitoksen lisäksi, tioeetterisidoksen välike-käsivarressaan.
Kuvio 21 esittää graafisesti immunokonjugaatin in vivo kasvaimen vastaisen aktiivisuuden ihmisen Daudi-kasvainksenografteja vastaan hiirissä.
5 Immunokonjugaatti osoitti suurempaa kasvaimen vastaista aktiivisuutta kuin mitä havaittiin käyttäen vastaavaa annosta vapaata ADM: ää.
Kuvio 22 esittää graafisesti ADM:n in vivo kasvaimen vastaisen aktiivisuuden ihmisen Daudi-kasvainksenografteja vastaan hiirissä ajan suhteen ja vaihtelevilla ADM-annoksilla käyttäen Q7Dx3 käsittelyaikataulua ja laski-10 moon annettua antotapaa.
Kuvio 23 esittää graafisesti immunokonjugaatin in vivo kasvaimen vastaisen aktiivisuuden ihmisen Daudi-kasvainksenografteja kohtaan hiirissä verrattuna optimoidun vapaan ADM:n kasvaimen vastaiseen aktiivisuuteen (annettu laskimon sisäisesti Q7Dx3 käsittelyaikataululla annoksena 10-11 15 mg/kg/inj.). Immunokonjugaatti osoitti suurempaa kasvaimen vastaista aktiivisuutta.
Kuvio 24 esittää taulukon muodossa in vivo ADM:n kasvaimen vastaisen aktiivisuuden ihmisen Ramos-kasvainksenografteja kohtaan hiirissä käyttäen laskimon sisäistä antotapaa, mutta vaihdellen käsittelyaikataulua ja 20 annosmääriä.
Kuvio 25 esittää graafisesti ADM.n in vivo kasvaimen vastaisen aktiivisuuden ihmisen Ramos-kasvainksenografteja kohtaan hiirissä ajan suhteen ja vaihtelevilla ADM-annoksilla käyttäen yhden injektion käsittelyaikataulua ja laskimon sisäistä antotapaa.
;; 25 Kuvio 26A esittää graafisesti immunokonjugaatin in vivo kasvaimen vastaisen aktiivisuuden ihmisen Ramos-kasvainksenografteja kohtaan hiirissä verrattuna optimoidun vapaan ADM:n kasvaimen vastaiseen aktiivisuuteen (annettu laskimon sisäisesti Q1Dx1 käsittelyaikataululla annoksena 16-19 mg/kg/inj.). Immunokonjugaatti osoitti suurempaa kasvaimen vastaista aktiivi-30 suutta kuin vapaa ADM. Kuvio 26B esittää immunokonjugaatin in vivo kasvai-“ men vastaisen aktiivisuuden ajan suhteen eri konjugaattiannoksilla osoittaen konjugaatin kasvaimen vastaisen vaikutuksen annoksesta riippuvan luonteen. Kuvioissa 26A ja 26B testattujen immunokonjugaattien annokset on annettu konjugoidun antrasykliinin määrän mukaan vasta-aineen määrän ollessa an-35 nettu suluissa.
Jotta tässä esitetty keksintö olisi täydellisemmin ymmärrettävissä, esitetään seuraava yksityiskohtainen kuvaus.
10 102355
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää uusien antrasykliiniimmu-nokonjugaattien valmistamiseksi. Lisäksi esitetään uusia antrasykliiniasyyli-hydratsonijohdannaisia, menetelmiä niiden tuottamiseksi, farmaseuttisia kokoonpanoja ja menetelmiä sytotoksisten antrasykliinien kuljettamiseksi elimi-5 noitavaksi haluttuun valittuun solupopulaatioon hoidettaessa tauteja, kuten syöpiä ja muita kasvaimia, ei-sytosidisia virus- tai muita patogeeniinfektioita, ja autoimmuunitauteja. Erikoisemmin esitetään immunokonjugaatteja, jotka koostuvat vasta-aineesta, joka on valmistettu valittua solupopulaatiota vastaan, jolla vasta-aineella on useita antrasykliinimolekyylejä liitettynä rakenteese-10 ensa. Antrasykliinimolekyylit on kovalenttisesti sidottu vasta-aineeseen niin, että kunkin lääkemolekyylin ja vasta-aineen väliin muodostuu välikekäsivarsi, joka on kiinnittynyt antrasykliiniin asyylihydratsonisidoksella antrasykliinin 13-keto-asemaan. Tämä voidaan saada aikaan vaiheittaisesti muodostamalla ensin uusi antrasykliinihydratsonijohdannainen, jonka sitten annetaan reagoida 15 sopivan spesifisyyden omaavan vasta-aineen kanssa (katso esim., R.R. Hardy, "Purification And Coupling Of Fluorescent Proteins For Use In Flow Cytometry", teoksessa Handbook Of Experimental Immunology, osa 1: Immu-nochemistry, D.M. Weir et ai. (toim.), sivut 31.4-31.12 (4. painos 1986), jossa keskustellaan tavanomaisista vasta-aineen kiinnittämismenetelmistä). Immu-20 nokonjugaatin antrasykliini- ja vasta-ainekomponentteja yhdistävän välikekäsi-varren pituus voi vaihdella niin kauan, kun välielementin kiinnityskohta antra-sykliinissä on asyylihydratsonimuodossa antrasykliinin C-13-asemassa. Välikekäsivarsi voi lisäksi sisältää toisen sidoksen, kuten disulfidi-, tioeetteri-, amidi-, karbamaatti-, eetteri- tai esterisidoksen rungossaan lääkkeeseen ja vasta-; 25 aineeseen kiinnittymiskohtiensa välillä.
Immunokonjugaatteihin sisältyvät antrasykliinit voivat olla mitä tahansa antrasykliinejä, jotka sisältävät ketoryhmän 13-hiili (C-13)-asemassa. Sellaisiin antrasykliineihin kuuluu, mutta ei ole rajoitettu vain näihin, adriamy-siini, daunomysiini, detorubisiini, karminomysiini, idarubisiini, epirubisiini, eso-30 rubisiini, 4’-THP-adriamysiini, AD-32 ja 3’-deamino-3’-(3-syano-4-morfolinyyli)-·: doksorubisiini (katso A.M. Casazza., "Experimental Studies On New
Anthracyclines", teoksessa Adriamvcin: Its Expanding Role In Cancer Treatment. M. Ogawa et ai. (toim.), sivut 439-52 (Excerpta Medica 1984)).
Immunokonjugaatteihin sisältyvät vasta-aineet voivat olla mitä ta-35 hansa vasta-aineita, jotka ovat reaktiivisia spesifiselle solupopulaatiolle, joka halutaan eliminoida tai tappaa. Esimerkit sellaisista vasta-aineista sisältävät, mutta ei ole rajoitettu, vastaaineet, jotka sitoutuvat kasvaimeen assosioitunei- 11 102355 siin antigeeneihin, kuten antigeeneihin, joita löydetään karsinoomista, melanoomista, lymfoomista, luun tai pehmeän kudoksen sarkoomista kuin myös muista kasvaimista, vasta-aineet, jotka sitoutuvat virus- tai muihin patogeenein assosioituneisiin antigeeneihin ja vasta-aineet, jotka sitoutuvat epänorma-5 aleihin solun pinta-antigeeneihin. Nämä vasta-aineet voivat olla polyklonaalisia tai mieluummin monoklonaalisia ja ne voidaan tuottaa menetelmillä, jotka ovat alalla hyvin vakiintuneita (katso esim., R.A. DeWeger et ai., "Eradication Of Murine Lymphoma And Melanoma Cells By Chlorambusil-Antibody Complexes", Immunological Rev.. 62, sivut 29-45 (1982) (kasvainspesifisiä polyklonaa-10 lisiä vasta-aineita tuotettu ja käytetty konjugaateissa) ja M. Yeh et ai., "Cell Surface Antigens Of Human Melanoma Identified By Monochlonal Antibody”,
Prod. Natl. Sci.. 76, sivut 2927-31 (1979) ja J.P. Brown et al., ’’Structural Chracterization Of Human Melanoma-Associated Antigen p97 With Monochlonal Antibodies”, J. Immunol.. 127 (numero 2), sivut 539-46 15 (1981)(kasvainspesifisiä monoklonaalisia vasta-ainetta L6, joka on spesifinen ihmisen kehkokarsinoomasoluille tai monoklonaalista vasta-ainetta 791T/36, joka on spesifinen osteogeenisille sarkoomasoluille. Lisäksi voidaan käyttään ei-internalisoituvia tai mieluummin internalisoituvia vasta-aineta. Tässä hake-muksessaa käytettynä termi "vasta-aine” sisältää koskemattomat vasta-20 ainemolekyylit tai fragmentit, jotka sisältävät vasta-ainemolekyylin aktiivisen sitomisalueen, esim. Fab tai F(ab’)2. Jos käytetään monoklonaalisia vasta-aineita, vasta-aineet voivat olla, mutta eivät ole rajoitettuja, hiiri- tai ihmisalku-perää tai kimeerisiä vasta-aineita.
Näin ollen immunokonjugaattien vasta-aineet toimivat kuljettaen ;; 25 antrasykliinimolekyylit spesifiseen solupolulaatioon, jonka kanssa vasta-aine on reaktiivinen. Esimerkiksi vasta-aine, joka on valmistettu, joka on valmistettu kasvainsolujen pinnasta läytyvää antigeeniä vastaan, sitoutuu ja kuljettaja ant-rasykliininsä niihin kasvainsoluihin tai vasta-aine, joka on valmistettu AIDSia aiheuttuvan ihmisen immuunipuutosviruksen(HIV) proteiinia vastaan, kuljettaa 30 sytotoksisen antrasykliininsä HIV-infektoituihin soluihin. Lääkkeen vapautumi-·: nen tietyn, vasta-aineen kanssa ragoivan solupolpulaation sisällä tai vieressä johtaa etupäässä niiden tiettyjen solujen tappoon. Näin ollen oi ilmeistä, että immunokonjugaatit ovat käyttökelpoisisa minkä tahansa taudin hoidossa, jossa taudissa yritetään eliminoida spesifinen solupolulaatio, jolla on solun pinta-35 antigeeni, joka sallii immunokonjuggaatit ovat käyttökelpoisia, sisältävät, mutta eivät ole rajoitettuja, syövät ja muut kasvaimet, ei-sytosidiset virus- tai muut 12 102355 patogeeni-infektiot, kuten AIDS, herpes, CMV (sytomegalovirus), EBV (Epstein Barr virus) ja SSPE (subakuutti skleroosi panenkefaliitti), ja nivelreuman.
Teoriaan sitoutumatta uskotaan, että vasta-aineeseen liitetyt antra-sykliinimolekyylit, so., esitetyssä immunokonjugaattimuodossa olevat, kuljete-5 taan tapettaviin kohdesoluihin vasta-aineen spesifisyyden avulla ja ne voivat mennä solun sisälle saman endosyyttisen reitin avulla, joka johtaa membraa-niin sitoutuneiden ei-konjugoitujen vasta-aineiden ja ligandien internalisaatioon (katso esim., I. Pastan et ai., "Pathway Of Endocytosis", teoksessa Endocvto- sis. I. Pastan et ai. (toim.), sivut 1-44 (Plenum Press 1985)). Solun sisälle 10 mentyään immunokonjugaatin sisältävät endosyyttiset vesikkelit yhdistyvät primaaristen lysosomien kanssa muodostaen sekundaariset lysosomit (katso esim., M.J. Embleton et ai., supra, sivu 334). Koska antrasykliinimolekyylit ovat sitoutuneet immunokonjugaatin vastaaineeseen happoherkkien asyyli-hydratsonisidosten välityksellä, immunokonjugaatin altistaminen endosyyttis-15 ten vesikkelien ja lysosomien happamalle ympäristölle johtaa antrasykliinin vapautumiseen immunokonjugaatista. Lisäksi vapautuneen antrasykliinin uskotaan olevan suhteellisen modifioimaton lääke, joka kykenee täyteen syto-toksiseen aktiivisuuteen. Näin ollen immunokonjugaatin happoherkkä asyyli-hydratsonisidos on erittäin edullinen sytotoksisen lääkkeen vapautumiselle 20 kohdesolun sisällä parantaen immunokonjugaatin sytotoksisuutta niitä soluja kohtaan. Vaihtoehtoisesti hydratsonisidos voidaan avkasta happamissa ja pelkistävissä olosuhteissa kohdesolujen välittömässä ulkoisessa ympäristössä tai soluja ympäröivässä ympäristössä, so., kasvaimen kohdalla ja vapautunut lääke voidaan ottaa sisään kasvainsoluihin.
·; 25 Esitetyistä immunokonjugaateista ja menetelmistä niiden tuottami seksi on esimerkkeinä annettu suositeltavat suoritustavat, joissa antrasykliini, adriamysiini, konjugoitiin eri vasta-aineisiin.
Ensiksi syntetisoitiin uusi adriamysiinihydratsonijohdannainen kaksivaiheisella reaktiolla. Heterobifunktionaalisen reagenssin SPDP:n (N-30 sukkinimidyyli-3-(2-pyridyyliditio)propionaatti) annettiin reagoida hydratsiinin kanssa muodostaen 3-(2-pyridyyliditio)propionyylihydratsidia ja sitten hydratsi-din annettiin reagoida adriamysiinihydrokloridin (ADM-HCI) kanssa muodostaen uuden ADM:n asyylihydratsonijohdannaisen, joka sisälsi pyridyylisuojatun disulfidiosan. Hapanta katalyyttiä, kuten trifluoroetikkahappoa, voidaan käyttää 35 edistämään hydratsonin muodostusta. Muodostunut johdannainen nimettiin adriamysiini-13-(3-(2-pyridyyliditio)propionyyli)hydratsonihydrokloridiksi (ADM-HZN) (katso kuvio 1).
13 102355
Sitten tämän uuden ADM-hydratsonijohdannaisen annettiin reagoida monoklonaaiisen vasta-aineen kanssa, joka vasta-aine oli aiemmin tioloitu SPDPMIä, ja sitten pelkistettiin tai tioloitiin 2-IT:llä (2-iminotiolaani) (katso kuvio 2). Tuloksena syntynyt immunokonjugaatti koostui ADMmolekyyleistä, jotka oli 5 konjugoitu monoklonaaliseen vastaaineeseen välikekäsivarren välityksellä, joka välike oli kiinnittynyt kunkin ADM.n C-13-asemaan asyylihydratsonisidok-sella, välikekäsivarren sisältäessä lisäksi disulfidisidoksen, jonka välityksellä se kiinnitettiin vasta-aineeseen (katso kuvio 2).
Toinen keksinnön suoritustapa sisälsi toisen uuden adriamysiinihyd-10 ratsonijohdannaisen synteesin, jossa ylläkuvattua ADM-HZN:ää käsiteltiin edelleen pelkistävillä aineilla. DTT:llä (ditiotreitoli) tai tributyylifosfiinilla, muodostaen 13-(3-(merkaptopropionyyli)adriamysiinihydratsonin (katso kuvio 17). Tämän johdannaisen annettiin sitten reagoida monoklonaaiisen vasta-aineen kanssa, johon oli kiinnitetty maleimidiryhmiä esimerkiksi antamalla vasta-15 aineen reagoida SMPB.n (sukkinimidyyli-4-(p-maleimidofenyyli)butyraatti) kanssa. Kuten on näytetty kuviossa 17, muodostui immunokonjugaatti, jolla oli välikekäsivarsi kiinnitettynä hydratsonisidoksella kunkin ADM:n C-13-asemaan ja jolla myös oli tioeetteriliitos sen kiinnittymiskohtana vasta-aineeseen. Näin ollen on selvää, että lääkkeen ja vasta-aineen yhdistävä välikekäsivarsi voi 20 koostua useista osasista ja liitoksista niin kauan kuin nämä liitokset sisältävät happoherkän hydratsonisidoksen antrasykliinin 13-ketokohdassa.
Tässä esitetään edelleen 13-ketoryhmän sisältävien antrasykliinien uudet asyylihydratsonijohdannaiset, joilla on kaavat I, Il tai III: 25 0 c -<CHt)Ä-S -S-R* 30 1 ·: jossa: 35 R1 on CH3, CH2OH, CH2OCO(CH2)3CH3, CH2OCOCH(OC2H5)2; R2 on 14 102355 XX* tai gy*‘ jossa X = H, N02 tai halogeeni; 5 R3 on OCH3) OH tai vety; R4 on NH2i NHCOCF3i 4-morfolinyyli, 3-syano-morfolinyyli, 1-piperidinyyli, 4-metoksi-l-piperidinyyli, bentsyyliamiini, dibentsyyliamiini, sya-nometyyliamiini tai 1-syano-2-metoksietyyliamiini; R5 on OH, O-THP tai vety; 10 R6 on OH tai vety, edellyttäen, että R6 ei ole OH silloin, kun R5 on OH tai O-THP; ja n on kokonaisluku 1-10, ne mukaan lukien; 15 J' -icm,,.-,-* 20 ' jossa: R1 on CH3, CH2OH, CH2OCO(CH2)3CH3, CH2OCOCH(OC2H5)2; R3 on OCH3, OH tai vety; 25 R4 on NH2 NHCOCF3, 4-morfolinyyli, 3-syano-4-morfolinyyli, 1- piperidinyyli, 4-metoksi-1-piperidinyyli, bentsyyliamiini, dibentsyyliamiini, sya-nometyyliamiini tai 1-syano-2-metoksietyyliamiini; R5 on OH, O-THP tai vety; R6 on OH tai vety, edellyttäen, että R6 ei ole OH silloin, kun R5 on 30 OH tai O-THP; ja } n on kokonaisluku 1-10, ne mukaan lukien; ja o e -s -e* hit
o OH H
35 15 102355 jossa: R1 on CH3i CH2OH; CH2OCO(CH2)3CH3i CH2OCOH(OC2H5)2; R2 on 5 tai Xl·*' jossa X = H, N02 tai halogeeni; R3 on OCH3, OH tai vety; R4 ja R7 ovat toisistaan riippumatta vety, alkyyli, substituoitu alkyyli, 10 sykloalkyyli, substituoitu sykloalkyyli, aryyli, substituoitu aryyli, aralkyyli tai substituoitu aralkyyli; tai R4, R7 ja N yhdessä muodostavat 4-7 jäsenisen renkaan, jossa mainittu rengas voi vaihtoehtoisesti olla substituoitu; R5on OH, 0-THP tai vety; R® on OH tai vety. edellyttäen, että R® ei ole OH silloin, kun R5 on 15 OH tai O-THP; ja n on kokonaisluku 1-10, ne mukaanlukien.
Yllä kuvatut antrasykliiniasyylihydratsonit edustavat uusia välimuotoja immunokonjugaattien valmistuksessa ja niistä on annettu esimerkkeinä ADM-HZN ja 13-(3-(merkaptopropionyyli)adriamysiinihydratsoni, vastaavassa 20 järjestyksessä, kuvattuna tässä keskustelluissa suositeltavissa suoritustavoissa.
Kuten yllä olevista kaavoista voidaan havaita, asyylihydratsoniväli-muodot sisältävät hydratsonit mistä tahansa lukuisista tunnetuista antrasyklii-neistä, kuten adriamysiinistä, daunomysiinistä ja karminomysiinistä. Lisäksi “ 25 välimuodot sisältävät asyylihydratsonit. jotka on derivatisoitu antrasykliinira- kenteen spesifisiltä kohdilta (esim., 4'-THP-adriamysiinihydratsoni ja 3’-deamino-S-P-syano^-morfolinyyrOadriamysiinihydratsoni). Nämä jälkimmäiset välimuodot voidaan syntetisoida ensin derivatisoimalla antrasykliini muodostamaan haluttu analogi ja sitten käyttäen tätä analogia valmistettaessa 30 hydratsonivälimuoto. Tunnetut antrasykliinianalogit sisältävät ne, jotka on ku-vattu US-patenteissa 4 464 529 ja 4 301 277 (3’-deamino-3'-(4-morfolinyyli)-tai 3’-deamino-3’-(3-syano-4-morfolinyyli)antrasykliinianalogit), US-patenteissa 4 202 967 ja 4 314 054 (3’-deamino-3’-(1-piperdinyyli)-tai 3’-deamino-3’-(4-metoksi-1-piperdinyyli)antrasykliinianalogit), US-patentissa 4 250 303 (N-35 bentsyyli-tai Ν,Ν-dibentsyyliantrasykliinianalogit), US-patentissa 4 591 637 (N-metoksimetyyli- tai N-syanometyyliantrasykliinianalogit) ja US-patentissa 4 303 785 (antrasykliinien asetaalianaiogit). Näin ollen näiden tunnettujen antrasyk- 16 102355 liinianalogien voidaan antaa reagoida, kuten tässä on kuvattu yllä (katso kuvio 1), muodostamaan uudet asyylihydratsonit, jotka voidaan sitten konjugoida halutun spesifiteetin omaavaan vasta-aineeseen, kuten tässä on kuvattu.
Vaihtoehtoisesti voidaan ensin tuottaa ei-derivatisoitu asyylihydrat-5 sonivälimuoto, kuten tässä on kuvattu, ei-derivatisoidusta antrasykliinistä, kuten adriamysiinistä, daunomysiinistä tai karminomysiinistä, ja tämä uusi välimuoto voidaan sitten derivatisoida tuottaen uusi halutulla tavalla substituoitu asyylihydratsoni. Esimerkiksi ADM-HZN voidaan derivatisoida sen aminosoke-riosasta pelkistävällä aminaatiolla 2,2’-oksidiasetaldehydillä käyttäen mene-10 telmää, joka on kuvattu US-patentissa 4 464 529, tuottaen 3’-deamino-3’-(3-syano-4-morfolinyyli)adriamysiinihydratsonin. Samalla tavalla ADM-HZN voidaan derivatisoida aminosokeriosasta tuottaen uusia asyylihydratsonijohdan-naisia, kuten 3,-deamino-3’-(4-morfolinyyli)-ADM-hydratsonia (katso US-patentti 4 301 277), 3’-deamino-3’-(1-piperdinyyli)-ADM-hydratsonia (katso 15 US-patentti 4 202 967), 3’-deamino-3’-(4-metoksi-1-piperdinyyli)-ADM- hydratsonia (katso US-patentti 4 314 054), N-bentsyyli-ADM-hydratsonia ja Ν,Ν-dibentsyyli-ADM-hydratsonia (katso US-patentti 4 250 303) tai N-metoksimetyyli-ADM-hydratsonia ja N-syanometyyli-ADM-hydratsonia (katso US-patentti 4 591 637). Lisäksi ADM-HZN voidaan derivatisoida kaavojen l-lll 20 R5-asemaan, kuten on kuvattu US-patentissa 4 303 785, tuottaen hydratsonin asetaalijohdannaisia, kuten 4’-THP-ADM-hydratsonia,
On ymmärrettävä, että nämä uudet menetelmät asyylihydratsonien derivatisoimiseksi voivat käyttää aloitusmateriaaleina muiden antrasykliinien kuin ADM:n hydratsoneja, kuten daunomysiinin tai karminomysiinin, tuottama-25 an uusia yhdisteitä, kuten N-bentsyylidaunomysiinihydratsoni tai 3’-deamino-3'-(4-morfolinyyli)karminomysiinihydratsoni.
Tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen antrasykliini-vasta-aine-immunokonjugaattien arviointi osoitti, että immunokonjugaatit säilyttivät vasta-aineen sitoutumisaktiivisuuden ja omasivat vasta-aineohjatun solutapon sekä 30 lymfooma- että karsinoomasoluille eri koeolosuhteissa. Näin ollen solut, jotka .* omasivat antigeenin, jota vastaan konjugaatin vasta-aine oli valmistettu, tapet- tiin tehokkaasti antrasykliinin toimesta, kun taas soluja, joilla ei ollut sopivaa antigeeniä, ei tapettu. Tosiasiassa useissa kokeissa vasta-aineen avulla kuljetetun antrasykliinin todettiin olevan vahvempi kuin vastaavat määrät ei-35 konjugoitua antrasykliiniä. Erot sisäänottomekanismeissa kasvainsoluun ja solunsisäisissä kuljetusmekanismeissa voivat olla vastuussa vahvuuseroista, jotka havaittiin vapaan lääkkeen ja vastaainekonjugoidun lääkkeen välillä.
17 102355
Lisäksi tutkimukset käyttäen ihmisen kasvainksenografteja hiirissä ovat osoittaneet immunokonjugaattien kyvyn inhiboida kasvaimen kasvua m vivo, johtaen joissain tapauksissa täydelliseen kasvaimen regressioon. Immunokonjugaattien osoitettiin omaavan suuremman vahvuuden ja ne inhiboivat 5 kasvaimen kasvua suuremmassa määrin kuin ei-konjugoitu antrasykliini. Lisäksi eläimet sietivät immunokonjugaatteja suuremmassa määrin kuin vapaata lääkettä ollen ainakin 10 kertaa vähemmän myrkyllistä kuin ei-konjugoitu antrasykliini yksinään.
Immunokonjugaattien sitoutumis- ja sytotoksisuusominaisuudet 10 näyttävät edustavan parannusta immunokonjugaatteihin, jotka on julkaistu kirjallisuudessa, joissa konjugaateissa antrasykliinit olivat suoraan liitettyjä vasta-aineeseen antrasykliinin aminosokeriosan välityksellä. Ne aminosokerili-itetyt immunokonjugaatit sisälsivät usein matalammat antrasykliinhvasta-aineen molaariset suhteet ja omasivat vähentyneen sytotoksisuuden suhtees-15 sa vapaaseen lääkkeeseen ja mataloituneet vastaaineen sitoutumisominai-suudet (katso esim., R. Arnon et ai., Immunological Rev.. 62, suora: E. Hurwitz et ai., Cancer Res.. 35, supra: ia R. Yamamoto et ai., supra). Lisäksi immuno-konjugaateilla suoritetut stabiliteettikokeet osoittivat, että antrasykliini vapautui immunokonjugaateista samanlaisissa pelkistävissä ja happamissa olosuhteis-20 sa kuin joita löytyy soluympäristöstä. Näin ollen korkean sytotoksisen lääkeak-tiivisuuden säilyminen, joka havaittiin tässä kuvatuilla immunokonjugaateilla, voidaan selittää sillä tosiasialla, että kohdesoluihin kuljetetaan suhteellisen modifioimaton lääke.
Lisäksi kykenimme optimoimaan reaktio-olosuhteet sellaisiksi, että · 25 antrasykliini.vasta-aineen molaariseksi suhteeksi saavutettiin noin 4-10 käyttä en useita eri isotyypin vasta-aineita. Talteen saadun proteiinin määrä, kun oli tiivistetty AOM-HZN-johdannaisen kanssa, putosi dramaattisesti, kun yritettiin käyttää suurempia molaarisia suhteita kuin 10. Ilmeni, että pääasiallisin rajoitus sellaisten immunokonjugaattien saamiseksi, joiden molaariset suhteet oli-30 vat suuremmat kuin 10, johtui konjugaattien vähentyneestä liukoisuudesta v vesiliuoksissa ja antrasykliinin fysikaalisesta assosiaatiosta proteiinin kanssa.
In vivo tutkimuksemme, jotka osoittavat immunokonjugaattien parantunutta kasvaimen vastaista aktiivisuutta vapaaseen lääkkeeseen verrattuna kuin myös niiden alentunutta myrkyllisyyttä elimistöä vastaan, osoittavat pa-35 rantunutta terapeuttista käyttöä konjugaateille. Näin ollen esitetään farmaseuttiset kokoonpanot, yhdistelmät ja menetelmät sellaisten tautien hoitoon kuin syövät ja muut kasvaimet, ei-sytosidiset virus- tai muut patogeeni-infektiot ja 18 102355 autoimmuunisairaudet. Erikoisemmin esitetään menetelmät tautien hoitamiseksi nisäkkäissä, jolloin isäntänisäkkäälle annetaan farmaseuttisesti tehokas määrä ainakin yhtä antrasykliiniä sisältävää immunokonjugaattia farmaseuttisesti hyväksyttävässä muodossa.
5 Esitettyjen menetelmien vaihtoehtoiset suoritustavat sisältävät us eiden eri immunokonjugaattien, so., eri antrasykliinejä tai eri vasta-aineita sisältävien, antamisen joko yhtäaikaa tai peräkkäin käytettäväksi yhdistelmäke-moterapiamenetelmissä. Esimerkiksi suoritustapa voi sisältää useiden antra-sykliini-immunokonjugaattien käytön, joissa konjugaateissa vasta-aineosan 10 spesifiteetti vaihtelee, so., käytetään useita immunokonjugaatteja, joilla kullakin on vasta-aine, joka sitoutuu spesifisesti eri antigeeniin tai saman antigeenin eri kohtiin tai epitooppeihin, jotka ovat läsnä tutkitussa solupopulaatiossa. Näiden immunokonjugaattien antrasykliiniosa voi olla sama tai vaihdella. Esimerkiksi tämä suoritustapa voi olla erittäin käyttökelpoinen hoidettaessa tiet-15 tyjä kasvaimia, joissa eri antigeenien määrät kasvaimen pinnalla ovat tuntemattomia tai kasvainsolupopulaatio on heterogeeninen antigeeniekspression suhteen ja halutaan olla varmoja, että riittävä määrä lääkettä on kohdistettu kaikkiin kasvaimen alueella oleviin kasvainsoluihin. Useiden kasvainta vastaan olevien eri antigeeni- tai epitooppispesifisyyksiä omaavien konjugaattien käyttö 20 parantaa todennäköisyyttä saada riittävästi lääkettä kasvaimen alueelle. Lisäksi tämä suoritustapa on tärkeä saavutettaessa korkea spesifisyysaste kasvaimelle, koska todennäköisyys, että normaali kudos sisältäisi kaikki samat kasvaimeen assosioituneet antigeenit, on pieni (vertaa, I. Hellström et ai., "Monoclonal Antibodies To Two Determinants Of MelanomaAntogen p97 Act ·· 25 Synergistically In Complement-Dependent Cytotoxicity", J. Immunol.. 127 (numero 1), sivut 157-60 (1981)).
Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää useita eri immunokonjugaatteja, joissa vain konjugaatin antrasykliiniosa vaihtelee. Esimerkiksi tietty vasta-aine voidaan liittää adriamysiiniin muodostamaan yksi immunokonjugaatti ja se voi-30 daan liittää daunomysiiniin muodostamaan toinen immunokonjugaatti. Mo-: lemmat konjugaatit voidaan sitten antaa hoidettavalle isännälle ja ne kulkeutu vat vasta-ainespesifisyyden johdosta eliminoitavaksi halutun valitun solupopulaation kohdalle. Molemmat lääkkeet vapautuvat sitten sillä paikalla. Tämä suoritustapa voi olla tärkeä, jos on epäselvyyttä tietyn solupopulaation, kuten 35 kasvaimen, lääkeresistenttiydestä, koska tämä menetelmä sallii useiden eri lääkkeiden vapautumisen kohdesolujen paikalla tai niiden sisällä. Lisäsuoritustapa sisältää useamman kuin yhden antrasykliinin konjugoimisen tiettyyn 19 102355 vasta-aineeseen muodostamaan immunokonjugaatti, joka sisältää monenlaisia eri antrasykliinimolekyylejä pinnallaan -- kaikki liitetty vasta-aineeseen 13-ketoasyylihydratsonisidoksella. Tämän suoritustavan immunokonjugaatin antaminen johtaa useiden eri lääkkeiden vapautumiseen kohdesolujen paikalla 5 tai sisällä.
Antrasykliini-immunokonjugaatteja voidaan antaa farmaseuttisten kokoonpanojen muodossa käyttäen tavanomaisia antotapoja sisältäen, mutta ei rajoittuen, laskimoon annon, vatsaonteloon annon, suun kautta annon, intralymfaattisen annon tai annon suoraan valitun solupopulaation, kuten 10 kasvaimen kohdalle. Laskimon sisäistä antotapaa suositellaan. Lisäksi in vivo hoitoa varten voi olla käytännöllistä käyttää immunokonjugaatteja, jotka koostuvat vasta-ainefragmenteista. kuten Fab tai F(ab’)2 tai kimeerisiä vasta-aineita.
Farmaseuttiset kokoonpanot - sisältäen antrasykliini-15 immunokonjugaatit -- voivat olla erilaisissa annosmuodoissa, jotka sisältävät, mutta eivät ole rajoittuneet, kiinteät, puolikiinteät ja liuosmaiset annosmuodot, kuten tabletit, pillerit, jauheet, liuosmaiset nesteet ja suspensiot, peräpuikot, polymeeriset mikrokapselit ja mikrovesikkelit, liposomit ja injektoitavat tai infu-soitavat liuokset. Suositeltava muoto riippuu antotavasta ja terapeuttisesta so-20 vellutuksesta.
Farmaseuttiset kokoonpanot voivat myös sisältää tavanomaisia alalla tunnettuja farmaseuttisesti hyväksyttäviä kantajia, kuten seerumiproteii-neja, kuten ihmisen seerumialbumiinia, puskuriaineita, kuten fosfaatteja, vettä tai suoloja tai elektrolyyttejä.
25 Immunokonjugaattikokoonpanojen tehokkain antotapa ja annosjär- jestelmä riippuu taudin vakavuudesta ja kulusta, potilaan terveydestä ja res-ponssista hoidolle ja hoitavan lääkärin päätöksestä. Sen mukaisesti immuno-konjugaattien ja minkä tahansa mukana olevien yhdisteiden annokset pitää ti-trata potilaalle yksilöllisesti. Siitä huolimatta tämän keksinnön antrasykliini-30 immunokonjugaatin tehokas annos voi olla välillä noin 1 - noin 100 mg antra-sykliiniä/m2 tai noin 500 - 5000 mg vasta-ainetta/m2.
Jotta tässä kuvattu keksintö olisi paremmin ymmärrettävissä, on esitetty seuraavat esimerkit. On ymmärrettävä, että nämä esimerkit on esitetty vain kuvailevia tarkoituksia varten eikä niitä pidä tulkita tämän keksinnön piiriä 35 rajoittaviksi millään tavalla.
20 102355
Esimerkki 1
Seuraava esimerkki osoittaa uuden antrasykliini-immunokonjugaatin tuoton jossa lääke on liitetty suoraan monoklonaaliseen vastaaineeseen hyd-ratsonisidoksen välityksellä lääkkeen 13-ketokohdasta.
5 Tässä esimerkissä kuvattu tietty suoritustapa sisältää ADM:n konju- goimisen monoklonaaliseen vasta-aineeseen muodostamaan immunokonju-gaatti, jolla on välikekäsivarsi, jolla on asyylihydratsonisidos kiinnitymiskohta-naan immunokonjugaatin ADM-molekyyliin, välikkeen sisältäessä lisäksi disul-fidisidoksen kiinnitymisosanaan vasta-aineeseen. Tämä suoritustapa esittää 10 myös ADM:n uuden asyylihydratsonijohdannaisen (ADM-HZN).
Adriamvsiinihvdratsonin synteesi
Immunokonjugaatin valmistuksen alkuvaiheessa syntetisoitiin ensin ADM-hydratsonijohdannainen seuraavasti: 0,3 ml 1 M hydratsiiniliuosta, so., NH2NH2 isopropyylialkoholissa lisättiin jäähdytettyyn SPDP-liuokseen (70 mg, 15 0,22 mmol) 3 ml:ssa THF:ia (tetrahydrofuraani). Kun oli sekoitettu 20 minuuttia 0 °C:ssa, tuote uutettiin CH2 Cl2: Ha, pestiin suolavedellä ja kuivattiin K2C03:n yllä. Jäännös, joka saatiin liuottimien haihdutuksen jälkeen, kromatografoitiin neutraalissa alumiinissa (5 % MeOH, 95 % CH2CI2) saaden 21 mg (41 %) 3-(2-pyridyyliditiojpropionyylihydratsidia (yhdiste 2 kuviossa 1). Tämä hydratsidi ja 20 adriamysiini-HCI (saatu Sanraku Inc., Japani) (48 mg, 0,083 mmol) liuotettiin 5 ml:aan MeOH:ia ja sitten sekoitettiin pimeässä huoneen lämpötilassa 6 vuorokautta. Reaktion jälkeen suoritettiin käänteisfaasi ohutkerroskromatografia (TLC) (MeOH:H20 = 2:1, sisältäen 3 % w/v NH4OAc). Tämän ajan jälkeen liuotin haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin C18-pylväässä (MeOH:H20 = 3:2, 25 sisältäen 3 % w/v NH4OAc). Fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin ja ylimäärä NH4OAc:tä poistettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin MeOH:iin ja saostettiin lisäämällä asetonitriiliä saaden 45 mg (72 %) adriamysiini-13-(3-(2-pyridyyliditio)propionyyli)hydratsonihydrokloridia, jota tästä lähtien kutsutaan ADM-HZN:ksi (yhdiste 4 kuviossa 1). ADM-HZN karakterisoitiin seuraavasti: sp 30 > 125° tummentaa sen värin eikä ole hyvin määritetty; NMR (asetoni - d6, del-C ta) 1,25 (s, 3H, J=6Hz), 1,77 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 2,30 (m, 1H), 2,53 (d, 1H, J=15Hz), 2,89-3,18 (m, 6H), 3,71 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 4,07 (s, 3H), 4,78 (s, 2H), 5,21 (m, 1H), 5,58 (t, 1H, J=7Hz), 7,12 (m, 1H), 7,64 (d, 1H, J=8Hz), 7,75 (m, 2H), 7,90 (t, 1H, J=8Hz), 7,98 (d, 1H, J=8Hz), 8,37 (d, 1H, 35 J=4Hz), 10,50 (s, 1H), 10,52 (s, 1H), 14,19 (bs, 1H); IR (KBr) 3438, 1674, 1618, 1579, 1419, 1286, 1016, 988, 698 cm·1; FABMS (glyseroli) m le 755 (M+1), 737, 645, 625, 609.
21 102355
Monoklonaalisten vasta-aineiden tiolointi
Ennen kuin annettiin yllä kuvatulla tavalla valmistetun ADM-HZN-yhdisteen raegoida halutun monoklonaalisen vasta-aineen kanssa, vasta-aine täytyi tioloida, so., reaktiivisia sulfhydryyliryhmiä täytyi liittää vasta-5 ainemolekyyliin.
Käytetyt monoklonaaliset vasta-aineet olivat: 1) 5E9, IgG^vasta-aine, joka on reaktiivinen kaikkien jakautuvien ihmisen solujen transferriinire-septorin kanssa ja ristireagoi eri histologisen tyypin omaavien syöpäsolujen kanssa; 2) T33A1 (tästä lähtien kutsuttu "3Ar:ksi). lgG1-vasta-aine, joka on 10 reaktiivinen ihmisen 40 kd:n kokoisen T-soluantigeenin kanssa ja jota myös löytyy useista T-soluleukemioista; 3) G28.5, lgGrvasta-aine, joka on reaktiivinen ihmisen 50 kd:n kokoisen B-soluantigeenin kanssa ja joka on myös reaktiivinen ihmisen B-solulymfoomien kanssa; 4) G28.1, IgG^vasta-aine, joka on reaktiivinen ihmisen 39 kd:n B-soluantigeenin kanssa ja joka on myös reakti-15 ivinen B-solulymfoomien kanssa; ja 5) L6, lgG2-vasta-aine, joka on reaktiivinen ihmisen ei-pienisolukeuhkokarsinoomien glykolipidiantigeenin kanssa.
5E9- ja T33A1-monoklonaalisia vasta-aineita erittävät hybridoomat saatiin American Type Culture Collection'lta (ATCC). Vastaavat vasta-aineet puhdistettiin BALB/c-hiirissä tuotetusta askitesnesteestä menetelmän mukai-20 sesti. jonka menetelmän ovat kuvanneet C. Bruck et ai., "One-Step Purification Of Mouse Monoclonal Antibodies From Ascitic Fluid By DEAE-Affigel Blue Chromatography", J. Immun. Methods. 5b, sivut 313-19 (1982). Puhdistetut G28.5, G28.1 ja L6 saatiin tohtoreilta J. Ledbetter ja I. Hellström (Oncogen, Seattle, WA), L6- ja G28.5-monoklonaalisia vasta-aineita erittävät hybridoomat 25 talletettiin ATCC:hen joulukuun 6., 1984 ja toukokuun 22., 1986, vastaavassa järjestyksessä, ATCC-koodinumeroilla HB 8677 ja HB 9110. G28.1-monoklonaalinen vasta-aine on yksi useista alalla tunnetuista vasta-aineista, joka on reaktiivinen CD37-antigeenin pääepitoopille ja se on karakterisoitu teoksessa A.J. Michael (toim.), Leukocyte Typing III. Oxford University Press 30 (U.K. 1987). Useita näitä anti-CD37vasta-aineita on kaupallisesti saatavissa.
Minkä tahansa näiden vasta-aineiden tiolointi SPDP:llä suoritettiin seuraavasti; SPDP:tä (Pierce Chemical Co., IL) (50 mM) liuotettuna etanoliin lisättiin valittuun monoklonaaliseen vasta-aineeseen, esim. 5E9:ään (5-10 mg/ml) PBSissä (fosfaatilla puskuroitu suolaliuos, pH 7,2) saaden lopulliseksi 35 konsentraatioksi 5-10 mM. Reaktioseosta inkuboitiin 30 minuuttia 30 °C:ssa. Reagoimaton SPDP erotettiin SPDP-derivatisoidusta vasta-aineesta geelisuo-datuskromatografialla käyttäen PD-10-pylvästä (Pharmacia). Tiopyridyylisuo- 22 102355 jausryhmät poistettiin pelkistämällä ylimäärällä DTT:tä. Pelkistetyt vasta-aineet ajettiin PD-10-pylvään läpi ja vapaita tiolia sisältäviä vasta-aineita käytettiin tiivistettäessä ADM-HZN-johdannaisen kanssa (katso kuvio 2).
Reaktiivisia tioliryhmiä liitettiin vasta-aineproteiiniin käyttäen myös 5 2-IT:tä: vasta-aine (5-10 mg/ml 50 mM trietyyliamiini, 50 mM NaCI, 1 mM ED-TA-liuoksessa, pH 8,0) sekoitettiin 2-IT:n (Pierce Chemical Co., IL) kanssa loppukonsentraationa 5-10 mM. Reaktion annettiin edetä 90 minuuttia 4 °C: ssa ja tioloidut vasta-aineet erotettiin PD10-pylväässä, joka oli tasapainotettu 2 M NaCI/PBS:llä.
10 Vasta-aineisiin inkorporoituneiden reaktiivisten tioliryhmien määrä mitattiin käyttäen DTNB.tä (5,51-ditiobis(2-nitrobentsoaatti) (E4 , 2 = 14150) menetelmän mukaisesti, jonka menetelmän on kuvannut G,L, Ellman, Arch, Biochem. Biophvs. r 82. sivut 70-77 (1959).
Tioloituien monoklonaalisten vasta-aineiden konjugointi ADM-15 HZN.n kanssa
Seuraavaksi suoritettiin useita konjugaatioita, joissa yllä kuvatulla tavalla tioloidut monoklonaaliset vasta-aineet liitettiin kukin ADM-HZN:n kanssa (katso kuvio 2).
ADM-HZN liuotettiin metanoliin ja lisättiin SPDP-tioloituihin vasta-20 aineisiin PBS:ssä tai 2-IT-tioloituihin vasta-aineisiin 2 M NaCI/PBS-liuoksessa. Tyypillisessä kokeessa 10 ekvivalenttia ADM-HZN:ää lisätiin monoklonaalisiin vasta-aineisiin, jotka sisälsivät 10-20 reaktiivista tioliryhmää. Konjugaatioreak-tiota inkuboitiin 4 °C:ssa yli yön. Reaktioseosta sentrifugoitiin 10000 x g ja sitten konjugoitu ADM erotettiin reagoimattomasta ADM:stä ajamalla PD-10-25 pylvään läpi. Vasta-aineeseen sitoutuneen konjugoituneen antrasykliinin määrä mitattiin absorbanssilla 495 nm:ssä (E495 = 8030). Vasta-aineproteiinin määrä mitattiin absorbanssilla 280 nm:ssä (1 mg/ml =1,4 OD-yksikköä). AD-Mabsorbanssin päällekkäisyyden korjaamiseksi 280 nm:ssä käytettiin seuraa-vaa kaavaa: 30 . A280-(0,72 xA495)
Vasta-aine (mg/ml) =- 1,4 35 Immunokonjugaatit analysoitiin konjugoimattoman ADM:n tai ADM- johdannaisten läsnäolon suhteen käyttäen HPLC-analyysiä. HPLC suoritettiin käyttäen Phenomenex-pylvästä, joka oli pakattu 5 mikronin IB-SIL C18- 23 102355 partikkeleilla. Konjugoimattomia ADM-HC1, ADM-HZN (0.1 μιτιοοίϊθ) tai immu-nokonjugaatteja, jotka sisälsivät 0,5-5 μιηοοίΐθ lääkeekvivalenttia, ajettiin pylvääseen ja eluoitiin metanolilla ja 10 mM ammoniumfosfaatilla, pH 4,5 (70:30) nopeudella 1,5 ml/min. Mikään tuotettu immunokonjugaatti ei sisältänyt mer-5 kiitävää määrää (<1 %) konjugoimatonta lääkettä HPLC-analyysissä.
Immunokoniuaaattien karakterisointi Näin tuotetut immunokonjugaatit koostuivat ADM-molekyyleistä, jotka oli konjugoitu 13-ketokohdasta välikekäsivarteen, joka muodosti sillan lääkkeen ja vastaavan monoklonaalisen vasta-aineen välille. Lisäksi vapaita tio-10 liryhmiä sisältävän monoklonaalisen vasta-aineen lisäys ADM-HZN-johdannaiseen, joka sisälsi tiopyridyylisuojatun disulfidisidoksen, johti disutfidi-sidoksen muodostukseen välikkeessä, joka yhdisti ADM:n vasta-aineisiin (katso kuvio 2). Tämän suoritustavan mukaisesti tuotetut immunokonjugaatit sisältävät, mutta eivät ole rajoitettuja. 5E9-ADM-7.5-, 3A1-ADM-7.0-, L6-ADM-15 9.0- ja G28.l-ADM-9.0-immunokonjugaatit, joissa merkinnän ensimmäinen osa edustaa konjugaatin muodostuksessa käytettyä monoklonaalista vastaainetta, toinen merkinnän osa edustaa vasta-aineeseen liitettyä antrasykliiniä ja merkinnän numero edustaa ADM/vasta-aineen molaarista suhdetta tietyssä im-munokonjugaatissa.
20 Tämän suoritustavan mukaisesti saadut ADM/vasta-aineen molaa- riset suhteet riippuvat monoklonaaliseen vasta-aineeseen liitettyjen tioliryhmi-en määrästä ja tioloituun vasta-aineeseen lisätyn ADM-HZN-johdannaisen määrästä. Kuvioiden 3 ja 4 hajontakuviot osoittavat, että ADM/vastaaineen suhteet 3-4 saavutettiin, kun ADM-HZN tiivistettiin joko 5E9- tai 3A1-·· 25 monoklonaalisen vasta-aineen kanssa, ioka sisälsi noin kahdeksan tio- liryhmää. Tyypillisesti näihin reaktioihin lisättiin 10-kertainen molaarinen ylimäärä ADM-HZN:ää proteiiniin verrattuna. ADM/vasta-aineen suhteet kohosivat 8-10:een, kun käytettiin vasta-aineita, joissa oli 18-25 tioliryhmää, Mitään merkittäviä eroja ADM/vastaaineen suhteissa ei havaittu, kun käytettiin 30 SPDP:tä verrattuna 2-IT:hen monoklonaalisia vasta-aineita tioloitaessa (vertaa / kuviot 3 ja 4). Kuitenkin lopulliset proteiinisaannot lääkkeen vasta-aineeseen konjugoinnin jälkeen tuntuvat olevan hiukan korkeammat SPDP-tioloiduilla vasta-aineilla verrattuna 2-IT-tioloituihin vasta-aineisiin (katso kuvio 5). Proteiinisaannot 50-80 % saatiin yleisesti SPDP-tioloiduilla vasta-aineilla, kuten 5E9 35 ja 3A1, kun taas saannot 20-50 % saatiin samoilla vasta-aineilla, jotka oli tiolo-itu käyttäen 2-IT:tä. Lisäksi hiukan paremmat immunokonjugaattisaannot saatiin käyttäen IgG^isotyypin omaavia monoklonaalisia vasta-aineita, kuten 5E9 24 102355 ja 3AI, konjugoinneissa, jotka suoritettiin SPDP:llä tai 2-IT:llä (katso kuviot 6 ja 7).
Immunokonjugaattien sitoutumisaktiivisuus määritettiin käyttäen kil-pailukoetta, joka sisälsi 12Sl-leimatun vasta-aineen käytön. Vastaavat antigeeni-5 positiiviset ja antigeeni-negatiiviset solut (1x106) suspendoitiin 0,1 ml:aan RPMI 1640-alustaa, joka sisälsi 2 % FBS:ää, ja sekoitettiin 0,1 ml.aan 2-kertaisesti sarjalaimennettua konjugoimatonta monoklonaalista vasta-ainetta tai immunokonjugaattia konsentraatioissa, jotka alkoivat 50 pg/ml. Rinnakkaisia solususpensioita inkuboitiin samalla, kun sekoitettiin 4 °C:ssa yksi tunti, 10 Sitten solut pestiin kaksi kertaa ja suspendoitiin 0,1 ml:aan. joka sisälsi 5 pg/ml 1 2 sl-leimattua homologista vasta-ainetta (spesifinen aktiivisuus 1-50 x 104 cpm/pg vasta-aineproteiinia), Näytteitä inkuboitiin 4 °C:ssa yksi tunti ja laitettiin 0,15 ml:n päälle 1:1 dibutyyli:dinonyyliphtalaatti-seosta, joka oli jäähdytetty 4 °C:een. Näytteet sentrifugoitiin 10000 x g yksi minuutti 4 °C:ssä ja solusitoinen 15 radioaktiivisuus (pelletti) mitattiin käyttäen LKB:N gammalaskuria.
Tämän keksinnön immunokonjugaattien jäljellä oleva sitoutumisaktiivisuus on osoitettu alla olevassa taulukossa 1.
Taulukko 1
Suhteeliset sitoutumisaffiniteettiarviot ADM-HZN-konjugaation jälkeen 20
Molaarinen (It )* (Tt )b =K konjc
Inhibiittori suhde_Leima xl0~9M x!0~9M xlO7 L/M
5E9-12 51 - - 3,2 3A1-12 51 - - 5,1 SPDP-välike : 25 5E9-ADM 3,5 5E9-125I 4,2 3,4 2,6 4,0 6,7 2,1 1,0 4,9 4,2 4,0 3,0 6,8 4,2 2,1 1,6 30 8,5 0,1 2,1 0,7 : 3A1-ADM 2,6 3A1-125I 4,2 1,3 1,5 3,3 1,3 1,3 5,1 4,2 8,3 1,3 0,8 6.7 7,3 1,3 0,9 2-IT-välike 00 5E9-ADM 5,6 5E9-125I 4,1 4,0 3,1 6.7 4,7 4,0 2,7 3A1-ADM 6,0 3A1-125I 4,0 1,3 1,6 25 102355 a (IJ = Vasta-ainekonjugaatin molaarinen konsentraatio, joka aiheuttaa leimatun vasta-aineen 50 % inhibition.
b (Tt) = Vasta-aineen molaarinen konsentraatio, joka aiheuttaa leimatun vasta-aineen 50 % inhibition.
5 cKkonj = Suhteeliset (K) affiniteetit laskettiin käyttäen kaavaa:
Kkonj· = dtlKab ώ 10 «at, on konjugoimattoman Mab:n tasaapinovakio määritettynä Scatchard’in analyysillä.
Kuten taulukossa on osoitettu, 5E9-immunokonjugaatit jotka oli valmistettu SPDPitä käyttäen ja joiden molaariset suhteet olivat 3,5 ja 8,5 välillä, säilyttivät yli 80 t alkuperäisestä sitoutumisaktiivisuudestaan verrattuna 15 konjugoimattomaan 5E9:ään. 2-IT :tä käyttäen valmistetut 5E9- immunokonjugaatit myöskin säilyttivät korkeat sitoutumisaktiivisuudet, SPDP:tä käyttäen valmistetut 3A1-immunokonjugaatit osoittivat pientä vasta-aineen sitoutumisaktiivisuuden häviämistä. Yleisesti ADM:n konjugointi näihin ja muihin vasta-aineisiin johti suhteellisten pieniin tasojen laskuun vasta-20 aineen sitomisaktiivisuuksissa.
Kuvio 8 osoittaa kahden immunokonjugaatin, 5E9-ADM-7.5 ja 3A1-ADM-7.0, sitoutumiskäyrät verrattuina konjugoimattomien 5E9- ja 3A1-monoklonaalisten vasta-aineiden sitoutumiskäyriin. Näiden käyrien saamiseksi immunokonjugaatteja inkuboitiin 4 °C:ssa 0,1 mlrssa täydellistä kasvatusalus-25 taa, joka sisälsi 1 x 106 antigeenipositiivista HSB-2 kohdesolua. Tunnin kuluttua solut pestiin kahdesti alustassa ja inkuboitiin lisää 30 minuuttia 0,1 ml:ssa alustaa, joka sisälsi 1:40 laimennuksen FITC-leimattua vuohen anti-hiiri-lgG:ia (Boehringer-Mannheim). Solut analysoitiin Coulter Epics V fluoresenssisolua-nalysaattorilla. Solun pintafluoresenssia verrattiin fluoresenssiin, joka saatiin 30 käyttäen samalla tavalla laimennettua konjugoimatonta monoklonaalista vasta-\ ainetta. Kuten kuvio osoittaa, kunkin immunokonjugaatin sitoutumisaktiivisuus säilyi, jonka osoittaa se tosiasia, että immunokonjugaatin konsentraatio, joka vaadittiin kyllästämään antigeenipositiiviset solut, oli korkeimmillaan kaksinkertainen laimennus kuin se konsentraatio, joka vaadittiin konjugoimattomalta 35 vastaaineelta. Erot tasannetasojen fluoresenssivahvuuksissa konjugoimattomien vasta-aineiden ja immunokonjugaattien välillä havaittiin johtuvan matalo- 26 102355 ituneesta sekundaarisen FITC-vuohi-anti-hiiri reagenssin sitoutumisesta im-munokonjugaattiin verrattuna konjugoimattomaan vasta-aineeseen.
Tämän suoritustavan mukaisen immunokonjugaatin-L6-ADM-konjugaatin — stabiilisuus eri pH’ssa välillä 4,0-7,0, tutkittiin käyttäen HPLC-5 analyysiä. L6-ADM-9.0-konjugaattia inkuboitiin fosfaattipuskureissa kussakin osoitetussa pH'ssa 24 tuntia 37 °C:ssa. Sitten kukin liuos laitettiin HPLC-pylvääseen ja konjugoimattoman lääkkeen määrä mitattiin. Kuten on osoitettu kuviossa 9, yhden eri pH'ssa tapahtuneen 24 tunnin inkubaation jälkeen havaitun tuotteen pylväsretentioaika oli samanlainen kuin ADM-HCI-standardin 10 vastaava. 24 tunnin jälkeen immunokonjugaatista vapautuneen materiaalin määrä kohosi, kun pH aleni 7:stä 4:ään. "Käsittelemätön" kontrolli edustaa kromatografiaa konjugaatista, jota oli säilytetty -20 °C:ssa fosfaattipuskurissa, jonka pH oli 7,4. Näin ollen näyttää siltä, että immunokonjugaatilla on happo-herkkä sidosryhmä, joka johti ADM:n vapautumiseen vasta-äineproteiinista, 15 Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia hydratsonisidoksen läsnäolon suhteen, joka sidos liittää ADM:N välikekäsivarteen, kuten on kuvattu kuviossa 2.
Tämän esimerkin suoritustavan mukaisesti ADM kiinnitettiin vasta-aineeseen välikekäsivarren välityksellä, joka välike sisälsi myös disulfidisidok-sen (katso kuvio 2). Näin ollen pitäisi olla mahdollista vapauttaa ADM-osa pel-20 kistämällä tämän suoritustavan mukainen immunokonjugaatti DTT.IIä. Näin ollen L6-ADM-konjugaattia, L6-ADM-9,0, käsiteltiin 10-kertaisella DTT-ylimäärällä, inkuboitiin huoneen lämpötilassa 15 minuuttia ja laitettiin HPLC-pylvääseen. Samalla ajettiin ADM-HCI-ja ADM-HZN-standardit ja kromatogra-fiahuiput osoitetaan kuviossa 10. L6-ADM-9,0-konjugaatilla ei ollut havaittavaa : 25 konjugoimattoman lääkkeen huippua ennen DTT:n lisäystä. HPLC-analyysi osoitti yhden huipun ilmestymisen, jonka huipun pylväsretentioaika oli samanlainen kuin ADM-HCI:n vastaava mieluummin kuin ADM-HZN-johdannaisen vastaava (katso kuvio 10). DTT-käsittelyn jälkeen vapautuneen ADM:n määrä oli noin 99 % alkuperäisistä ADM-ekvivalenteista, jotka olivat sitoutuneet vas-30 ta-aineeseen. Kuvioiden 9 ja 10 koetulokset osoittavat, että ADM:N kaltainen osa vapautuu tämän keksinnön immunokonjugaateista ’’fysiologisissa” olosuhteissa, so., happamissa ja pelkistävissä olosuhteissa, jotka ovat tyypillisiä soluympäristölle.
Immunokoniuaaattien svtotoksinen aktiivisuus 35 Immunokonjugaatteja testattiin sytotoksisuuden suhteen in vitro käyttäen useita koemenetelmiä. Pehmeäagarpesäkekokeen mukaisesti Daudi-soluja (Burkittlin lymfooma) (fenotyyppi: 5E9+, 3A1-), jotka saatiin ATCC:stä, 27 102355 kasvatettiin täydellisessä alustassa (RPMI 1640-alusta plus 10 % vasikan sikiön seerumia). 1 x 105 solua 1 ml:ssa alustaa altistettiin 1,5 tunnin ajaksi sarjalaimennetuille 5E9ADM- tai 3A1-ADM-immunokonjugaateiile tai konju-goimattomalle ADM:lle. Kustakin laimennoksesta tehtiin kolme rinnakkaista 5 määritystä. Kontrollit sisälsivät samalla tavalla käsiteltyjä soluja, joita ei oltu altistettu lääkkeille. Sitten solut pestiin ja suspendoitiin RPMI 1640-alustaan, joka sisälsi 15 % FBS:ää ja 0,3 % agaroosia (Marine Colloid). Yksi ml solusus-pensiota (1 x 103 solua) laitettiin sitten 0,4 % agaroosikerroksen päälle 6-kuoppaisille mikrotiitterilevyille (Costar). Näytteitä inkuboitiin 7-10 vuorokautta 10 37 °C:ssa ja tuloksena syntyneet pesäkkeet värjättiin 0,5 ml:lla 1 mg p-jodonitrotetratsoliumviolettia/ml (Sigma) 48 tunnin ajan. Pesäkkeet laskettiin käyttäen Optimax 40-10 kuva-analysaattoria ja pesäkemuodostuksen inhibitio määritettiin vertaamalla lääkekäsiteltyjä tai immunokonjugaattikäsiteltyjä soluja käsittelemättömään kontrolliin.
15 Kuvio 11 vertaa 5E9-ADM-konjugaatin, 5E9-ADM-7.5, ja 3A1-ADM- konjugaatin, 3A1-ADM-7,0, sytotoksista aktiivisuutta 1,5 tunnin altistuksen jälkeen 5E9-antigeenipositiivisella 3A1-antigeeninegatiivisella Burkitt'in lymfoo-masolulinjalla Daudi. Nämä molemmat immunokonjugaatit oli valmistettu tio-loimalla 2-IT:llä. Annosresponssikäyrien vertaaminen osoittaa, että 5E9-ADM-20 7.5-konjugaatti, joka säilytti 93 % alkuperäisestä sitoutumisaktiivisuudestaan antigeeniä omaavia kohdesoluja vastaan (katso kuvio 8) oli merkittävästi vahvempi kuin ei-sitoutuva kontrollikonjugaatti 3A1-ADM-7.0.
Rajoittavaa laimennuskoetta, joka antaa logaritmisen solutappo-määrän, käytettiin testattaessa yllämainittujen immunokonjugaattien sytotok-: 25 sista lääkeaktiivisuutta käyttäen pidempää altistusmuotoa (24 tuntia). Tämä koe suoritettiin käyttäen Namalwa-soluja (fenotyyppi: 5E9+, 3AI-), jotka ovat oleellisesti kuvanneet M, Colombatti et ai, , "Selective Killing Of Target Cells By Antibody-Ricin A Chain Or Antibody-Gelonin Hybrid Molecules: Comparison Of Cytotoxic Potency And Use In Immunoselection Procedures", J. Immu-30 nol.. 131, sivut 3091-95 (1983). Soluja, jotka saatiin ATCC:sta, inkuboitiin immunokonjugaattien kanssa 22 tuntia, pestiin ja määritettiin logaritminen solu-tappo. Logaritminen solutappo laskettiin perustuen maljaustehokkuuksiin, jotka oli arvioitu osassa kuoppia rajoittavissa solukonsentraatioissa ilman kasvua.
Kuten on osoitettu kuviossa 12, 5E9-ADM-7.5-konjugaatti aiheutti 1-35 2 log’ia suuremman solutapon testatuissa konsentraatioissa verrattuna ei- sitoutuvaan 3A1-ADM-7.0-konjugaattiin. Solutappo aina 5 log’iin asti määritettiin korkeimmalla 5E9-ADM-7.5-annoksella. Lisäksi, kun ei-sitoutuvalla 28 102355 3AI1immunokonjugaatilla havaittiin sytotoksista aktiivisuutta, sytotoksisuustaso oli vähemmän kuin ekvivalentilla määrällä konjugoimatonta ADMiää. Kuitenkin 5E9-immunokonjugaatin aktiivisuus oli useissa konsentraatioissa suurempi kuin ekvivalentin annoksen vapaata ADM:ää. Kuten yllä on esitetty, 5E9-ADM-5 7.5- ja 3A1-ADM-7.0-immunokonjugaatit syntetisoitiin käyttäen 2-IT:tä tioloiva-na aineena, immunospesifmen sytotoksisuus havaittiin myös immunokonjuga-ateilla, jotka oli valmistettu käyttäen SPDP:tä tioloivana aineena. Kuvio 13 osoittaa 5E9-ADM- ja 3A1-ADM-immunokonjugaattien selektiivisen sytotoksi-sen aktiivisuuden, jotka immunokonjugaatit oli valmistettu käyttäen SPDPitä 10 tioloivana aineena, Daudi-soluille käyttäen yllä kuvattua pehmeäagarpesäke-koetta. Lisätodisteita SPDPitä käyttäen valmistettujen immunokonjugaattien selektiivisestä sytotoksisuudesta on esitetty kuviossa 14, jossa G28.1-ADM- 9.0-immunokonjugaattia testattiin kahdella G28,1-antigeenipositiivisella solu-linjalla, Daudi ja Namalwa, ja yhdellä G28,1-antigeeninegatiivisella ihmisen T-15 soluleukemiasolulinjalla, HSB-2, käyttäen pehmeäagarpesäkekoetta, HSB-2-solut hankittiin ATCCiltä. Kuten kuviossa on osoitettu, immunokonjugaatti oli sytotoksinen kahta antigeenipositiivista solulinjaa kohden, mutta ei antigeeni-negatiivista solulinjaa kohden.
Immunokonjugaatin 5E9-ADM-7.5 antigeenipositiivisia soluja suosi-20 va tappo havaittin myös pesäkemuodostuskokeessa käyttäen kiinnittymisestä riippuvaista ihmisen paksusuolen karsinoomasolulinjaa HCT116, joka saatiin lahjana tohtori M. Brattainllta (Bristol-Baylor Labs, Houston, TX).
Karsinoomasolujen yksisolukerrosviljelmät poistettiin viljelypulloista trypsiini-EDTA-liuoksella (GIBCO), pestiin ja vedettiin 22-gaugen väljyisen 25 neulan läpi yksittäissolususpension saamiseksi. 5E9-ADM-7.5, 3A1-ADM-7.0 tai konjugoimaton ADM sarjalaimennettiin 0,2 mliaan alustaa, joka sisälsi 1 x 105 karsinoomasolua. Kukin laimennus tehtiin kolmena rinnakkaisena. Kontrollit sisälsivät käsittelemättömät tai vasta-ainekäsitellyt solut. Soluja inkuboitiin 3 tuntia, pestiin yhden kerran alustalla ja 1 x 101 solua yhdessä mlissa maljattiin 30 12-kuoppaisille mikrotiitterilevyille (Costar). Levyjä inkuboitiin 7-10 vuorokautta \ 37 °C:ssa ja kiinnitettiin absoluuttisella metanolilla 10 minuuttia. Pesäkkeet värjättiin kristallivioletilla ja laskettiin Optimax 40-10 kuva-analysaattorilla. Kuten kuvio 15 esittää, suurempi sytotoksisuus havaittiin, kun karsinoomasolut altistettiin 5E9-ADM-7,5-konjugaatille kuin silloin, kun ne altistettiin 3AI-ADM-35 7,0-konjugaatille.
Koska monet raportit ovat osoittaneet, että ADM liitettynä vasta-aineeseen lääkkeen aminosokerista johti immunokonjugaatteihin, jotka osoit- 29 102355 tavat merkittävää lääkkeen aktiivisuuden menetystä, testasimme immunokon-jugaattien sytotoksisuuden. jotka konjugaatit valmistettiin kiinnittämällä ADM vasta-aineeseen lääkkeen aminosokerista leuala-dipeptidivälikkeen välityksellä, käyttäen pehmeäagarpesäkekoesysteemiä, Kuten on esitetty kuviossa 5 16, ei 5E9-ADM-4.0- eikä 3A1-ADM-3.9-peptidiliitetyt konjugaatit olleet syto- toksisia Daudi-soluille. ADM-leu-ala-johdannainen, jota käytettiin konjugaattien valmistuksessa, oli noin 2 log'ia vähemmän vahvempi kuin vastaavat määrät konjugoimatonta ADM:ää.
Esimerkki 2 10 Tämä esimerkki kuvaa esillä olevan keksinnön mukaisesti valmis tettua antrasykliinikonjugaattia, jossa ADM on konjugoitu monoklonaaliseen vasta-aineeseen välikekäsivarren välityksellä, jossa on asyylihydratsonisidos kiinnittymiskohtana ADM-molekyyliin ja jossa lisäksi on tioeetteriliitos osana sen vasta-aineeseen kiinnittymiskohtaa. Tämä suoritustapa esittää myös 15 ADM:N uuden asyylihydratsidijohdannaisen.
Tioeetterisidoksen välikekäsivarressaan sisältävien immunokoniu-oaattien valmistus
Monoklonaalisen vasta-aineen 5E9 (2,5 mg 2,5 ml:ssa fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta) annettiin reagoida SMPB:N (sukkinimidyyli-4-(p-20 maleimidofenyyli)butyraatti) (59,5 pg 100 pl:ssa tetrahydrofuraania) kanssa 30 °C:ssa 30 minuuttia, pH säädettiin 6,0:aan natriumsitraattipuskurilla. Seos ajettiin PD-10-geelisuodatuspylvään (Pharmacia) läpi maleimidiä sisältävän vasta-aineen erottamiseksi reagoimattomista materiaaleista. ADM-HZN-johdannainen (1 mg), joka oli valmistettu, kuten on kuvattu esimerkissä 1, li-25 uotettiin sitten 1 ml:aan MeOH/H20-liuosta (9:1) ja 0,5 pmoolin ADM-HZN:ää annettiin reagoida 0,5 pmoolin kanssa tri-n-butyylifosfiinia 4:1 asetoni:H20-liuoksessa uuden pelkistetyn ADM-HZN:N valmistamiseksi (katso kuvio 17).
10 minuutin kuluttua lisättiin 0,1 M rikkiä tolueenissa jäljellä olevan fosfiinin tuhoamiseksi. Pelkistetty ADM-HZN sekoitettiin sitten maleimidiä sisältävän 5E9-30 vasta-aineen kanssa. Näin tuotetut immunokonjugaatit puhdistettiin ajamalla \ PD-10 geelisuodatuspylvään läpi. Joissain tapauksissa, kun tolueeniliuottimen ** · poisto ei ollut täydellistä, orgaaninen kerros erottui vieden hiukan proteiinia re-aktioseoksesta. Liuottimen poistoon käytettiin heikkoa ilmavirtaa ja denaturoitu proteiini poistettiin pyörittämällä seosta 2 minuuttia 16000 x g. Sitten kirkas 35 supematantti, joka sisälsi immunokonjugaatit, geelisuodatettiin ja analysoitiin PBS:ssä pH 7,4. ADM/vasta-aineen molaarinen suhde määritettiin spektrofo-tometrisesti käyttäen OD280 ja OD495 kuten on kuvattu esimerkissä 1. Tyypilli- 30 102355 nen reaktio antoi immunokonjugaatteja, joiden molaariset suhteet olivat välillä 3 ja 4.
Tioeetteriliitoksen omaavien immunokoniuaaattien svtotoksinen aktiivisuus 5 Useiden tämän suoritustavan mukaisesti valmistettujen immuno- konjugaattien sytotoksisuus antigeenipositiivisia ja antigeeninegatiivisia kasvainsolulinjoja vastaan testattiin käyttäen 3H-tymidiini-inkorporaatiokoetta, joka mittaa DNA-synteesin inhibitiota. Tämän kokeen mukaisesti valmistettiin laimennokset immunokonjugaateista tai konjugoimattomasta ADM:stä täydelli-10 seen alustaan ja 100 μΙ kutakin laimennosta lisättiin 96-kuoppaisen mikrotiitte-rilevyn kuoppiin. Kukin laimennos tehtiin kolmena rinnakkaisena. Kasvainsolut suspendoitiin alustaan ja sitten kuhunkin kuoppaan lisättiin 100 μΙ sisältäen 1 x 105 solua. Soluja inkuboitiin 24 tuntia 37 °C:ssa kosteassa 5 % C02-ilmakehässä. Kuhunkin kuoppaan lisättiin 50 μΙ sisältäen ΐ μΙ:η Ci(6-3H)-15 tymidiiniä (New England Nuclear, 15 Ci/mmooli) ja inkuboitiin 4 tuntia 37 °C:ssa. Solut siirrettiin Millititer sv-levyille (Millipore) ja seostettiin 25 % kylmällä trikloorietikkahapolla (TCA). Saostumat pestiin kymmenen kertaa 5 % kylmällä TCAilla. Suodattimet kuivattiin, stanssattiin ja laskettiin Econofluor-tuikenesteliuoksessa (New England Nuclear). Kaikki radioaktiivisuudet korjat-20 tiin vähentämällä taustan radioaktiivisuus.
Tämän suoritustavan mukainen immunokonjugaatti-5E9-ADM-3.9 --oli erittäin sytotoksinen 5E9-antigeenipositiivisia Namalwa- ja HSB-2-soluja kohtaan (katso kuvio 18). Immunokonjugaatti oli vahvempi kuin vastaavat kon-sentraatiot konjugoimatonta ADM:ää. Toisessa kokeessa 3A1-ADM-6.0-: 25 immunokonjugaatin havaittin konsentraatioissa alle 0,1 pg ADM/ml olevan sytotoksinen 3A1-antigeenipositiivisia HSB-2-soluja, mutta ei 3A1-antigeeninegatiivisia Namalwasoluja, kohtaan (katso kuvio 20). Korkeammissa konsentraatioissa immunokonjugaatin sytotoksisuus oli lähes sama kumpaakin solulinjaa kohti.
30 Esimerkki 3
Immunokoniuaaattien in vivo kasvaimen vastainen aktiivisuus
Seuraavaksi immunokonjugaatit testattiin niiden kasvaimen vastaisen aktiivisuuden suhteen in vivo. Erikoisemmin immunokonjugaatit testattiin niiden kyvyn suhteen inhiboida ihmisen B-lymfoomakasvainten kasvua hiirissä, 35 Primaariset kiinteät Daudi- ja Ramos-kasvaimet (Burkittlin lymfoo- ma) saatiin aikaan paljaisiin BALB/c-hiiriin kudosviljelyllä ylläpidettyjen lymfoi-disolujen ihonalaisella (s.c.) istutuksella. Ramos-solulinja on saatavissa 31 102355 ATCC:stä. Sitten Daudi- ja Ramos-kasvaimet siirrettiin peräkkäin in vivo 4-6 viikon ikäisissä BALB/c-naarashiirissä (nu/nu), jotka painoivat 20-25 g (Harlan SpragueDawley) käyttäen 1 x 107 kasvainsolua/Ο,Ι ml PBS:ssä siirrettäessä ihonalaisesti hiirien kylkeen. Molemmat kasvainlinjat osoittivat lineaarisen 5 kasvunopeuden, joka oli välillä 200-4000 mm3. Kasvaintilavuuden mediaani kaksinkertaistumisaika eksponentiaalikasvun aikana oli 6,9 ± 0,8 vuorokautta Daudi-kasvaimille ja 4,4 ± 0,6 vuorokautta Ramos-kasvaimille. Kasvaintilavuu-det (V) laskettiin käyttäen kaavaa: 10 V = L x W2 2 jossa L = pituus (mm) ja W leveys (mm).
Kun kasvainten tilavuudet saavuttivat 400-600 mm3 Daudi-kasvaimilla ja 250-400 mm3 Ramos-kasvaimilla, hiiret jaettiin umpimähkäisesti 15 5-10 eläimen ryhmiin hoidettavaksi ADM-HC1:llä (so. vapaalla lääkkeellä), ADM-immunokonjugaateilla, konjugoimattomalla monoklonaalisella vasta-aineella tai monokionaalisen vasta-aineen plus ADM:N seoksella. Solutapon spesifisyys osoitettiin vertaamalla kasvaimen vastaista aktiivisuutta, joka saatiin testatuilla immunokonjugaateilla (so., joiden vasta-ainekomponentit ovat 20 reaktiivisia tapettavien kasvainsolujen kanssa) siihen aktiivisuuteen, joka saatiin käyttäen ei-sitoutuvia konjugaatteja (so., konjugaatteja, jotka eivät reagoi sen kasvainpopulaation kanssa). Vasta-aineen plus vapaan lääkkeen seos oli kontrollina osoittaen tarpeen liittää lääke kovalenttisesti vasta-aineeseen.
Tulokset esitettiin kasvaimen kasvun inhiboitumisena (T-C) tai \ 25 kasvaimen kaksinkertaistumisen viivästymisenä (TDD), jotka arvioitiin kasvai men tilavuuden kaksinkertaistumisajan (TVDT) viivästymisenä, kun käsiteltyjen ryhmien kasvukäyriä verrattiin inokuloimattomiin kontrolleihin. TDD laskettiin käyttäen kaavaa
30 TDD = T - C
\ TVDT x 3,3 • « - jossa T = aika (vuorokaudet, jossa käsitellyn ryhmän kasvaimet saavuttivat 3000 mm3, C = aika (vuorokausia), jossa kontrolliryhmän kasvaimet saavuttivat 35 3000 mm3 j a TVDT (kasvaimen tilavuuden kaksinkertaistumisaika) = aika (vuorokausia), jossa kasvaimen tilavuus kontrollihiirissä (käsittelemättömät) 32 102355 nousi 1500 mm3:stä 3000 mm3: iin. Kukin piste edustaa kasvaimen mediaani-tilavuutta koeryhmässä.
Näissä tutkimuksissa ADM-immunokonjugaattien kasvaimen vastaista aktiivisuutta Daudi- tai Ramos-kasvaimia kohtaan verrattiin: a) siihen, jo-5 ka saatiin käyttäen samansuuruista annosta vapaata lääkettä, samaa annostustapaa ja aikataulua ja b) aktiivisuuteen, joka saatiin käyttäen vapaan lääkkeen optimaalista annosta, antotapaa ja aikataulua.
Kaikissa tässä kuvatuissa tutkimuksissa lääkehoito ADM-HCI:llä suoritettiin lisäämällä 50-100 DMSO.ta pulverisoituun lääkkeeseen, laimenta-10 maila liuotettu lääke PBS:ään tietyksi annokseksi mg/kg/inj injektiopäivänä ja inokuloimalla se kasvaimen omaaviin hiiriin joko laskimon sisäisesti (i.v., hän-täsuoni) tai vatsaonteloon (i.p.). Näissä tutkimuksissa käytetyt ADM-immunokonjugaatit valmistettiin, kuten on kuvattu esimerkissä 1, ja kaikki säilyttivät enemmän kuin 90 % alkuperäisestä vasta-aineen sitoutumisaktiivisuu-15 desta. Erikoisesti monoklonaalisia vastaaineita 5E9 ja G28.1 käytettiin näissä tutkimuksissa immunokonjugaattien vasta-ainekomponenttina. ADM-immunokonjugaatteja säilytettiin 4 °C:ssa PBS:ssä ja käytettiin korkeintaan kaksi viikkoa valmistuksen jälkeen. Kaikki testatut immunokonjugaatit kuin myös konjugoimattomat vastaainekontrollit annettiin i.p.
20 Lisäksi, tässä hakemuksessa käytettynä, hoitoaikataulumerkintä "Q7Dx3" ilmaisee hoitoaikataulun, jossa kullekin hiirelle siinä lääkeryhmässä annettiin 3 injektiota, kukin injektio 7 vuorokauden etäisyydellä toisistaan, so., injektio viikottain kolmen viikon ajan. Samalla tavalla "Q5Dx2" viittaa hoitoai-katauluun, jossa hiiriin siinä ryhmässä annettiin kokonaisuudessaan 2 injek-:a 25 tiota lääkettä tai konjugaattia 5 vuorokauden välein. Q1Dx1 viittaa yhteen injektioon. Näin ollen on määritelty hoitoaikataulumerkinnät, joissa ensimmäinen merkinnän numero edustaa injektioiden väliä (vuorokausissa) ja viimeinen numero edustaa injektioiden kokonaismäärää per aikataulu.
ADM-immunokonjugaattien kasvaimen vastaiset aktiivisuudet ar-30 vioitiin niin ollen ensin vertaamalla vapaaseen ADM-HCI-lääkkeeseen samanvertaisella tai vastaavalla annoksella, annostustavalla ja aikataululla. 5E9-ADM-immunokonjugaatin, 5E9-ADM-1.8 (moolisuhde = MR = 1.8 ADM-molekyyliä/MAB), kasvaimen vastaista aktiivisuutta Daudi-kasvaimille verrattiin a) samanveroisen annoksen aktiivisuuteen konjugoimatonta ADM-HCI.ää (4,1 35 mg/kg/inj), b) samanveroisen annoksen aktiivisuuteen 5E9-monoklonaalista vasta-ainetta (630 mg/kg/inj), c) 5E9-vasta-aineen plus ADM-HCI:n seoksen 33 102355 aktiivisuuteen (4,1 mg ADM + 630 mg 5E9) ja d) ei-sitoutuvan immunokonju-gaattikontrollin. L6-ADM-8.6 (4,1 mg/kg/inj ADM), aktiivisuuteen.
Hiirille (5 hiirtä/ryhmä) annettiin annokset i.p. päivinä 20 ja 25 kasvaimen istutuksen jälkeen (so., Q5Dx2 aikataulu), kun alkuperäiset 5 kasvaimen koot olivat välillä 800-1100 mm3. Tässä kokeessa käytetty annos edusti suurinta sietoannosta (MTD) i,p, vapaalle lääkkeelle, so, lääkeannosta annettuna mitä tahansa uutta tapaa tai aikataulua noudattaen, joka annos johtaa arvoon LD10 (10% eläimistä kuolee) (katso taulukko 1 alla).
Kuten kuvio 21 osoittaa, merkittävä kasvaimen vastainen aktiivisuus 10 saatiin 5E9-ADM-konjugaatilla. Lisäksi tämä kasvaimen vastainen aktiivisuus oli suurempi kuin mitä havaittiin vastaavalla annoksella vapaata lääkettä. Ja, kuten taulukko 4 alla osoittaa, kolmella viidestä konjugaatilla hoidetusta hiirestä oli täydellinen kasvaimen regressio (parantuminen), joka vastasi >1,5 TDD:tä. ADMHCI ja konjugoimaton 5E9 kuin myöskään ei-sitoutuva L6-ADM-15 konjugaatti puolestaan eivät osoittaneet mitään kasvaimen vastaista aktiivisuutta. Pientä kasvaimen kasvun inhibitiota oli havaittavissa käytettäesgä ADM-HCL plus 5E9-seosta, mutta tämä vaikutus oli lyhytaikainen ja edusti vain tilastollisesti ei-merkittävää 0,2 TDD:tä.
Tässä kokeessa vapaan lääkkeen annos oli 4,1 mg/kg/inj johtuen 20 vapaan lääkkeen i.p.-antoon assosioituneesta myrkyllisyydestä yli 4-5 mg/kg suuruisilla annoksilla. Näillä matalilla annoksilla sekä vapaa ADM että ADM plus monoklonaalisen vasta-aineen seokset olivat inaktiivisia. Kuitenkin, kuten kuvio 21 osoittaa selvästi, jopa tällä matalalla annoksella ADM-immunokonjugaatti oli vielä aktiivinen kasvaimen kasvun inhiboimisessa.
. 25 Seuraavaksi yritimme määrittää ADM-immunokonjugaattien kasvaimen vastaisen aktiivisuuden Daudi-kasvaimilla verrattuna kasvaimen vastaiseen aktiivisuuteen, joka saatiin käyttäen konjugoimatonta lääkettä annettuna sen optimaalisena annoksena, antotapana ja aikatauluna. Näin ollen meidän piti aluksi määrittää vapaan ADM-HCI:n se annos, antotapa ja aika-30 taulu, joka johti suurimpaan kasvaimen vastaiseen aktiivisuuteen Daudi- *. soluilla. Tätä optimointitutkimusta varten hiiriä käsiteltiin ADM-HCI:llä käyttäen • · erilaisia antotapoja, annoksia ja aikatauluja. Inokulaatioiden aikaväli riippui käytetystä hoitoaikataulusta. Sitten TDD-arvot määritettiin, kuten yllä on kuvattu.
35 Tämän optimointitutkimuksen tulokset on tiivistetty allaolevassa taulukossa 2. Kuten voidaan nähdä taulukosta 2, Q7Dx3 aikataulu annettuna i.v., antoi optimaalisen kasvaimen vastaisen responsen määritettynä sekä 34 102355 kasvaimen kasvun viivästymisenä että kasvaimen regressionopeuksina annoksella 11 mg/kg/inj, joka oli myös lääkkeen MTD käytettäessä Q7Dx3 aikataulua i.v.
Taulukko 2 5 ADM-HCI:n kasvaimen vastainen aktiivisuus Daudi-kasvain ksenoarafteilla Annos Kasvaimen
Aika- (mg/kg)· inhibitio1* Myrkyllisyys0 taulu inj kum T-C CR Parant. TDD D/T (%) 10 A) i.v, antotapa QIDxl 20 20 - - 7/7 (100) 18 18 - - 6/8 ( 75) 15 15 - - 7/7 (100) 15 12 12 - 7/7 (100) Q7Dx3 12 36 >62 1 3 >2,0 4/8 ( 50) 11 33 28 0 3 1,1 2/8 ( 25) 11 33 >42 0 4 >1,3 2/10 ( 20) 11 33 21 1 0 0,7 0/8 20 10 30 18 0 1 0,7 0/8 10 30 13 0 1 0,8 0/8 10 30 27 0 3 0,8 0/7 9 27 23 0 1 0,9 0/10 5 15 6,2 2 0 0,18 1/9 ( 11) 25 B) i. p. antotapa Q5Dx2 4,5 9 - 0 0 0 0/5 4,1 8,2 0 0 0 0 1/5 4.5 9 2,2 0 0 0,1 0/8 5.5 11 2,2 0 0 0,1 0/8 30 Q8Dx2 13 26 - - 7/7 (100) •j 10 20 - - 8/8 5 10 - - 3/8 ( 37) Q4Dx3 5 15 - - 6/9 ( 67) Q7Dx3 10 30 - - 8/8 (100) 35 5 15 - - 6/9 ( 67) 35 102355 8 Tulokset yksittäisistä lääkeryhmistä.
b T^C: edustaa sitä aikaviivettä vuorokausissa lääkekasitellylle ryhmälle (T), joka meni 3000 mm3:n saavuttamiseen verrattuna käsittelemättömiin kontrolleihin (C).
5 Täydelliset regressiot (CR): väliaikainen kasvaimen tilavuuden pieneneminen alle käsin tunnistettavan kasvaimen koon.
Parant.: täydellinen regressio ilman mitään havaintoja kasvaimen uudelleen-kasvusta.
CD/T: kuolemien lukumäärä ryhmän eläinten kokonaismäärästä. Lääkekuole-10 mat tallennettiin 55 vuorokauteen asti viimeisestä lääkeannoksesta,
Vapaan lääkkeen kasvaimen vastainen aktiivisuus Daudi-kasvainsoluille on lisäksi esitetty kuvassa 22. Käyttäen Q7Dx3 aikataulua i.v. antotavalla Daudi-kasvainksenograftien kasvu inhiboitui merkittävästi annoksesta riippuvaisella tavalla annoksilla 9, 10 tai 11 mg/kg/inj, vastaavassa järje-15 styksessä, ADM-HCI-käsittelyn jälkeen. Kontrollihiiriä ei käsitelty. Kasvaimen kasvun inhibitio (TC) MTD:ssä, joka oli 11 mg/kg/inj, oli 28 vuorokautta, joka vastasi 1.1 TDD:tä.
Testattiin myös eri aikatauluja käyttäen i.p. antotapaa, Kuten yllä on keskusteltu, i.p, annetun ADM-HCI:n MTD:N määritettiin olevan välillä 4-5 20 mg/kg/inj. Kuten voidaan nähdä taulukosta 2B, vapaa lääke on inaktiivinen Daudi-soluilla sen MTD:ssä annettuna i.p. Näin ollen määritimme, että vapaan lääkkeen optimaalinen kasvaimen vastainen aktiivisuus on saavutettavissa i.v. antotavalla, jossa MTD on 11 mg/kg/inj, joka on lääkeannos, joka osoittaa Daudi-kasvainsolujen kasvun inhibitiota.
· 25 Näistä kokeista määriteltiin näin ollen, että optimaalinen ADM-HCI- annos kasvaimen vastaiselle aktiivisuudelle Daudi-kasvaimia vastaan oli noin 11 mg/kg/inj, optimaalinen aikataulu oli Q7Dx3 ja optimaalinen antotapa oli i,v.
Seuraavaksi vertailimme tämän keksinnön mukaisesti valmistettavien ADM-immunokonjugaattien kasvaimen vastaista aktiivisuutta Daudi-30 kasvaimia kohtaan vapaan ADM-HCI-lääkkeen kasvaimen vastaiseen aktiivi- « suuteen optimaalisissa olosuhteissa, kuten yllä on määritetty, G28.1-ADM-immunokonjugaattia, G28.1-ADM-7.6 (MR = 7.6 lääkettä/MAB), annettuna i.p. käyttäen Q5Dx2 aikataulua, verrattiin ADM-HCI:ään annettuna i.v, annoksina 10, 11, ja 12 mg/kg/inj Q7Dx3 aikataululla. Kuten on esitetty kuviossa 23 ja 35 alla olevassa taulukossa 3, vapaa lääke oli aktiivinen antaen 28 vuorokauden viivästymisen kasvaimen kasvussa annoksella 11 mg/kg/inj (sen MTD), jolloin kaksi kahdeksasta hiirestä osoitti täydellisen kasvaimen regression 36 102355 (parantuneita). Immunokonjugaattia siedettiin hyvin korkeimmalla testatulla annoksella (18,7 mg ADM, Q5Dx2, i.p) (ei kuolemia, ei painon vähentymistä) ja se antoi hiukan suuremman kasvaimen vastaisen aktiivisuuden kuin vapaa lääke kolmen eläimen kahdeksasta käsitellystä osoittaessa täydellisen 5 kasvaimen regression. Taaskaan ei kasvaimen vastainen aktiivisuus ollut assosioituneena eisitoutuvan L6-immunokonjugaatin, konjugoimattoman G28.1:n tai konjugoimattoman G28.1 plus ADM-HCI-seoksen kanssa. Näin ollen määritimme. että ADM-immunokonjugaatit inhiboivat kasvaimen kasvua suuremmassa määrin kuin mitä voidaan saada aikaan käyttämällä konjugoimatonta 10 lääkettä sen optimiannoksella ja aikataululla i.v. tai i.p, antotavalla.
Taulukko 3* MAB-konjugoidun ADM:n kasvaimen vastainen aktiivisuus (Q5Dx2; i.p.) verrattuna optimoituun ADM-HCI:ään (Q7Dx3; i.v.) Daudi-kasvainksenografteilla 15 Annos (mg/kg)* Kasvaimen inhibitlo* Myrkyllisyys0 ADM MAB T-C CR Parent. TDD D/T (%) ADM-HC1_Q7Dx3? i.v.
12 >33 3 3 >1,5 2/8 20 n 28 O 2 >1,1 0/8 10 18 0 1 0,8 0/8 G28.1-ADM (7.6)_Q5Dx2; i.p.
18.7 700 >31 0 3 >1,5 0/8 8.1 300 3 0 0 0,1 0/8 V 25 4,4 1 65 1 0 0 0 0/8 L6-ADM (5.5)_Q5Dx2; i.p.
18.7 965 7 0 0 0,3 0/8 8.1 415 0 0 0 0 0/8 G28.1 + ADM_Q5Dx2; i.p.
30 4,5 700 6 0 O 0,2 0/8 G28.1 Q5Dx2; i.p.
700 2 0 0 0,1 0/8 * Katso selitykset taulukosta 2 35 37 102355
Taulukossa 4 tiivistetään kasvaimen vastaiset aktiivisuudet, jotka saatiin käyttäen 5E9- ja G28.1-immunokonjugaattien eri preparaatteja Daudi-kasvainksenografteille hiirissä, joilla ei ollut kateenkorvaa. Korkein respons-sinopeus saatiin johdonmukaisesti vasta-aineannoksilla 500 mg/kg tai suu-5 remmillä, Näillä annoksilla kasvaimen vastainen aktiivisuus saatiin käyttäen konjugaatteja, joiden molaariset suhteet olivat 1.8-8.6. Kasvaimen vastainen aktiivisuus tuntui olevan riippuvainen vasta-aineannoksesta mieluummin kuin konjugoidun lääkkeen annoksesta, jonka todisti se tosiasia, että kun monoklo-naalisen vasta-aineen annos kohosi, havaittiin vastaava kohoaminen sekä 10 TDDissä. so. kasvaimen kasvun inhibitiossa, ja kasvaimen regressionopeuk-sissa. Missään kokeissa ei kasvaimen vastaista aktiivisuutta havaittu ei-sitoutuvilla L6-ADM-konjugaateilla, joita testattiin rinnan samoilla vasta-aineen ja konjugoidun lääkkeen annoksilla (tuloksia ei esitetty). Lisäksi tämä taulukko kuvaa keksinnön mukaisesti valmistettujen immunokonjugaattien kohonnutta 15 vahvuutta verrattuna vapaaseen lääkkeeseen, joka oli inaktiivinen samoilla lääkeannoksilla (vertaa yllä oleva taulukko 2).
Taulukko 4 ADM-immunokonjugaattien kasvaimen vastainen aktiivisuus Daudi-kasvainksenografteille3 20
Konjugaatti Kum. annos (mg/kg) T-Cb
- MR MAB ADM (Vuorok.) Parant. TDD
5E9-ADM-4,2d 200 4 10 0/7 0,5 25 5E9-ADM8,6 260 8,2 8 0/5 0,3 5E9-ADM-4,2d 500 5 17 1/7 0,8 5E9-ADM-5,4 1110 22,8 31 2/5 1,4 5E9-ADM-4,2d 1200 18,3 >61 2/7 >l,5f 5E9-ADM-1,8 1260 8,2 >39 3/5 >1,5 30 G28.l-ADM-4,9 200 4 8 0/7 0,4 G28.l-ADM-7,6e 330 8,8 1 0/7 0 G28.l-ADM-7,6e 600 16 3 0/7 0,1 G28.l-ADM-4.2 1110 16,8 >37 2/3 >1,7 G28. l-ADM-4,9 1200 21,4 >56 2/7 >l,5f G28.l-ADM-7,6* 1400 37,4 31 3/8 1,3 35 38 102355
Aikataulu: Q5Dx2 Antotapa: i.p. MR: lääkemolekyylit/MAB moolisuhde bT-C: edustaa sitä aikaviivettä vuorokausina lääkekäsitellylle ryhmälle (T), jossa saavutettiin 3000 mm3 verrattuna käsittelemättömiin kontrolleihin (C). cParant.: parantuneita/käsiteltyjen eläinten määrä.
5 d5E9-ADM-4.2 testattu kolmella annoksella.
eG28.1-ADM-7.6 testattu kolmella annoksella.
'Kuolema kontrolliryhmässä.
Taulukko 5 alla esittää alentuneen myrkyllisyyden, joka saavutettiin käyttäen keksinnön ADM-immunokonjugaatteja verrattuna konjugoimattomaan 10 lääkkeeseen. Kuten voidaan nähdä, immunokonjugaatit olivat ainakin 10-kertaa vähemmän myrkyllisiä kuin vapaa ADM annettuna i.p.
39 102355
Taulukko 5
Vapaan ADM:n ja MAB-ADM:n myrkyllisyys kasvaimia omaavissa paljaissa hiirissä* 5 Aika- Anto- ADM (mg/kg)c %
Yhdiste Nb taulu tapa inj Kumulat. D/T Kuolemia ADM 4 QlDxl i.v. 18 18 14/32 44 ADM 3 QlDxl i.v. 16 16 3/31 10 ADM 1 QlDxl I.v. 14 14 0/8 0 10 ADM 1 Q2DxX2 I.V. 15 30 7/7 100 ADM 2 Q2Dx2 i.v. 12 24 10/12 83 ADM 1 Q2Dx2 i.v. 10 20 3/5 60 ADM 1 Q2Dx2 i.v. 8 16 1/5 20 ADM 1 Q3Dx2 i.v. 16 32 8/8 100 ADM 1 Q3Dx2 i.v. 14 28 7/8 88 15 ADM 1 Q3Dx2 i.v. 12 24 6/8 75 ADM 1 Q4Dx2 i.v. 14 28 6/7 86 ADM 2 Q4Dx2 i.v. 12 24 7/15 47 ADM 1 Q4Dx2 i.v. 10 20 2/8 25 ADM 1 Q7Dx3 i.v. 12 36 4/8 50 20 ADM 3 Q7Dx3 i.v. 11 33 4/26 15 ADM 3 Q7Dx3 i.v. 10 30 0/24 0 ADM 1 Q8Dx2 i.p. 13 26 7/7 100 ADM 1 Q8Dx2 i.p. 10 20 8/8 100 ADM 1 Q8Dx2 i.p. 5 10 3/8 38 ADM 1 Q4Dx3 i.p. 5 15 6/9 67 25 ADM 1 Q5Dx2 i.p. 5,5 11 0/8 0 ADM 1 Q5Dx2 i.p. 4,1 8,2 1/5 20 G28.1-ADM 1 Q5Dx2 i.p. 27,2 55,4 0/8 0 1 Q5Dx2 i.p. 18,7 37,4 0/8 0 30 G28.1-ADM 1 QlDx4 I.p. 24 96 3/8 38 1 QlDx4 i.p. 14 64 0/8 0 GE28.1-ADM 1 QlDx4 i.p. 10,5 42 0/5 0 L6-ADM 1 QlDx4 i.p. 31 124 1/8 13 1 QlDx4 i.p. 18,6 74 0/8 0 35 40 102355 aDaudi- tai Ramos-kasvaimia omaavat hiiret bN = kokeiden määrä CADM = määrä annettuna joko vapaana tai konjugoituna MAB:een dD/T = kuolemat/kaikki käsitellyt 5 Lopuksi kuvio 26A ja taulukko 6 esittävät G28.1-ADM-konjugaattien kasvaimen vastaista aktiivisuutta ihmisen Ramos-kasvaimille. Jälleen verrattiin immunokonjugaattien kasvaimen vastaista vaikutusta Ramos-kasvaimille siihen, joka havaittiin käyttäen vapaata ADM-HCI:ää olosuhteissa, jotka antoivat optimaaliset tulokset, jotka olosuhteet oli aiemmin määritelty olevan yksi injek-10 tioannos määränä 16-18 mg/kg/inj (katso kuviot 24 ja 25). Korkeimmalla testatulla immunokonjugaattiannoksella (10,6 mg/kg) konjugaatin kasvaimen al-tanen aktiivisuus oli ylivoimainen verrattuna aktiivisuuteen, joka saatiin käyttäen vapaata lääkettä annoksena 18 mg/kg (25 % kuolleisuus) 0,5 TDD:llä ja aktiivisuuteen, joka saatiin käyttäen ADM-HCI:ää annoksena 16 mg/kg (12 % 15 kuolleisuus) 1,0 TDDillä. Kaikki käsitellyt eläimet sietivät hyvin konjugaattia tällä annoksella osoittamatta painon vähentymistä tai kuolemia, G28,1-ADM:n kasvaimen vastaisen aktiivisuuden havaittiin myös olevan annoksesta riippuvainen, kuten on osoitettu kuviossa 26B. Näin ollen konjugaatin annoksen vähentäminen johti TDD:N ja täydellisten regressioiden vähentymisiin. L6-ADM-20 konjugaatti (ei-sitoutuva) oli vastaavalla annoksella (10,6 mg/kg) inaktiivinen.
Taulukko 6 MAB-konjugoidun ADM:n kasvaimen vastainen aktiivisuus (Q1Dx4; i.p.) verrattuna optimoituun ADM-HCI:ään (Q1Dx1; i.v.) käyttäen Ramos- kasvainksenografteja : 25 Annos (mg/kg)« Kasvain inhibitio1 Myrkyllisyys6 ADM MAB T-C CR Parent. TDD D/T (%) ADM-HC1_Q7Dx3; l.v.
18 8 0 0 0,5 2/8 ( 25) 16 5 0 0 0,3 1/8 ( 12) 30 G28.1-ADM (4.8) QlDx4; i.p.
10,6 600 10,5 0 1 1,1 0/5 5,3 300 5 0 0 0,5 0/5 2,6 150 3,5 0 1 0,4 0/5 L6-ADM (7.9)_QlDx4; i.p.
18,2 600 - - 2/5 ( 40) 35 10,6 360 0 0 1 O 0/5 aAnnos per injektio bKatso selitykset taulukosta 2 41 102355
Yllä olevat esimerkit osoittavat näin ollen usien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistuksen, joissa sytotoksinen antrasykliinilääke konjugoidaan vastaaineeseen uuden happoherkän asyylihydratsoniliitoksen välityksellä. Immunokonjugaatit säilyttävät sekä vasta-aineen sitoutumisaktiivi-5 suuden (so. kohdesoluspesifisyyden) että sytotoksisen lääkkeen aktiivisuuden ja sallivat vapaan modifioimattoman lääkkeen vapautumisen happamissa ja pelkistävissä olosuhteissa, jotka ovat tyypillisiä kohdesolujen soluympäristölle. Näiden konjugaattien kasvaimen vastainen aktiivisuus on osoitettu sekä in vitro että in vivo ja on osoitettu olevan suurempi kuin aktiivisuus, joka saadaan 10 vapaalla konjugoimattomalla antrasykliinillä. Lisäksi immunokonjugaatteja siedettiin in vivo paljon suuremmassa määrin kuin konjugoimatonta lääkettä.
Näin ollen tämän keksinnön mukaisesti valmistetut immunokonjugaatit osoittavat parantunutta terapeuttista kykyä (kasvaimen vastainen aktiivisuus vastaan myrkyllisyys) ja ovat siksi erityisen käyttökelpoisia kuljettamaan sytotoksiset 15 lääkkeet valittuun solupopulaatioon niiden solujen ensisijaiseksi tappamiseksi hoidettaessa tauteja, kuten syöpiä ja muita kasvaimia, ei-sytosidisia virus- tai muita patogeeni-infektioita ja autoimmuunisairauksia.
Samalla kun olemme tässä aiemmin esittäneet useita tämän keksinnön suoritustapoja, on selvää, että peruskonstruktiotamme voidaan 20 muuttaa muiden suoritustapojen aikaansaamiseksi, jotka suoritustavat käyttävät hyväksi tämän keksinnön menetelmiä. 1 ·

Claims (14)

42 102355
1. Menetelmä immunokonjugaatin valmistamiseksi, joka käsittää noin 4-10 antrasykliinimolekyyliä, jotka on liitetty vasta-aineeseen, joka reagoi ta- 5 pettäväksi valitun solupopulaation kanssa, jolloin kukin antrasykliini sisältää ketoryhmän 13-asemasssa ja on kiinnittynyt vasta-aineeseen yhdistävän välikappaleen välityksellä, yhdistävän välikappaleen ollessa kovalenttisesti sitoutunut antrasykliiniin asyylihydratsonisidoksella antrasykliinin 13-keto-asemaan, tunnettu siitä, että 10 a) vasta-aine saatetaan reagoimaan tioloivan aineen kanssa; b) tioloitu vasta-aine saatetaan reagoimaan 1. antrasykliinin kanssa, jonka 13-ketoasemaan on kovalenttisesti sidottu välikappale 15 ”
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä immunokonjugaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että tioloitu vasta-aine saatetaan reagoimaan 35 1) yhdisteen kanssa, jolla on kaava 43 102355 C“, >.-! -s O OH 5 10 jossa R1 on CH3, CHzOH, CH2OCO(CH2)3CH3 tai CH2OCOCH(OC2H5)2; R2 on jo R3 on OCH3, OH tai vety; R4 on NH2, NHCOCF3i 4-morfolinyyli, 3-syano-4-morfolinyyli, 1-piperidinyyli, 4-metoksi-1-piperidinyyli, bentsyyliamiini, dibentsyyliamiini, 20 syanometyyliamiini tai 1-syano-2-metoksietyyliamiini; R5 on OH, O-THP tai vety; R6 on OH tai vety, edellyttäen, että R6 ei ole OH silloin, kun R5 on OH tai O-THP; ja n on kokonaisluku 1-10, tai 25 2) yhdisteen kanssa, jolla on kaava « e -«εμ,ι.-ϊ -m n r =· jossa
35 R1 on CH3, CH2OH, CH2OCO(CH2)3CH3 tai CH2OCOCH(OC2H5)2; R3 on OCH3, OH tai vety; 44 102355 R4 on NH2, NHCOCFj, 4-morfolinyyli, 3-syano-4-morfolinyyli, 1-piperidinyyli, 4-metoksi-1-piperidinyyli, bentsyyliamiini, dibentsyyliamiini, syanometyyliamiini tai 1-syano-2-metoksietyyliamiini; R5 on OH, O-THP tai vety;
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä im-munokonjugaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että antrasykliini on adriamysiini.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä immunokonjugaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että vasta-aine reagoi kasvainsolujen kanssa. 45 102355
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä immunokonjugaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että vasta-aine reagoi karsinoomiin, lymfoo-miin tai pehmeän kudoksen sarkoomiin assosioituneen antigeenin kanssa.
5 R8 on OH tai vety, edellyttäen, että R6 ei ole OH silloin, kun R5 on OH tai O-THP; ja n on kokonaisluku 1-10, tai 3. yhdisteen kanssa, jolla on kaava ^ -* -e· β oh » ^ 15 *· L‘.> jossa R1 on CH3, CH2OH, CH2OCO(CH2)3CH3 tai CH2OCOCH(OC2H5)2; R2on X) R3 on OCH3, OH tai vety; R4 ja R7 ovat toisistaan riippumatta vety, alkyyli, substituoitu alkyyli, 25 sykloalkyyli, substituoitu sykloalkyyli, aryyli, substituoitu aryyli, aralkyyli tai substituoitu aralkyyli; tai R4, R7 ja N yhdessä muodostavat 4-7 jäsenisen renkaan, jossa mainittu rengas voi vaihtoehtoisesti olla substituoitu; R5 on OH, O-THP tai vety; R6 on OH tai vety, edellyttäen, että R6 ei ole OH silloin, kun R5 on OH 30 tai O-THP; ja n on kokonaisluku 1-10.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä immunokonjugaatin 5 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että vasta-aine reagoi B-solulymfoomista löydetyn CD37-antigeenin kanssa.
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä immunokonjugaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että vasta-aine on monoklonaalinen vasta-aine.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä immunokonjugaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että vasta-aine on monoklonaalinen vasta-aine 5E9, 3A1, L6, jota tuottaa hybridooma ATCC HB 8677, G.28.1 tai G28.5, jota tuottaa hybridooma ATCC HB 9110, ja antrasykliini on adriamysiini.
9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, 15 että asyylihydratsoni on adriamysiini-13-(3-(2-pyridyyliditio)propionyyli)- hydratsonihydrokloridi (ADM-HZN).
10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että tioloiva aine on SPDP tai 2-lT.
10 H(^c -s -s-e* U jossa
20 R2 on X) n on kokonaisluku 1-10, tai ..25 2) antrasykliinin kanssa, jonka 13-ketoasemaan on kovalenttisesti sidottu välikappale e c -W ΗΙΓ U 30 jossa n on kokonaisluku 1-10.
11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä immunokonjugaatin 20 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) SPDP saatetaan reagoimaan hydratsiinin kanssa 3-(2-pyridyylitio)propionyylihydratsidin muodostamiseksi; b) adriamysiinihydrokloridi saatetaan reagoimaan mainitun hydratsidin kanssa adriamysiini-13-(3-(2-pyridyyliditio)propionyyli)- 25 hydratsonihydrokloridi (ADM-HZN) muodostamiseksi; ja c) ADM-HZN saatetaan reagoimaan tapettavaksi valitulle solupopulaatiolle reaktiivisen vasta-aineen kanssa, johon vasta-aineeseen on kiinnitetty tioliryhmät.
12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä immunokonjugaatin 30 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) SPDP saatetaan reagoimaan hydratsiinin kanssa 3-(2-py-ridyylitio)propionyylihydratsidin muodostamiseksi; b) adriamysiinihydrokloridi saatetaan reagoimaan mainitun hydratsidin kanssa adriamysiini-13-(3-(2-pyridyyliditio)propionyyli)- 35 hydratsonihydrokloridi (ADM-HZN) muodostamiseksi; c) mainittua ADM-HZN:ää käsitellään pelkistävällä aineella 13-(3-(merkaptopropionyyli)adriamysiinihydratsonin muodostamiseksi; ja 46 102355 d) mainittu hydratsoni saatetaan reagoimaan tapettavaksi valitulle solupopulaatiolle reaktiivisen vasta-aineen kanssa, johon vasta-aineeseen on kiinnitetty maleimidiryhmät.
13. Menetelmä adriamysiini-13-(3-(2-pyridyyliditio)propionyyli)- 5 hydratsonihydrokloridi (ADM-HZN) valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) SPDP saatetaan reagoimaan hydratsiinin kanssa 3-(2-pyridyylitio)propionyylihydratsidin muodostamiseksi; ja b) adriamysiinihydrokloridi saatetaan reagoimaan mainitun hydratsidin kanssa.
14. Menetelmä 13-(3-(merkaptopropionyyli)adriamysiinihydratsonin 10 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että adriamysiini-13-(3-(2-pyridyyli- ditiö)propionyyli)-hydratsonihydrokloridi (ADM-HZN) käsitellään pelkistävällä aineella. « •. . « . 47 102355
FI890599A 1988-02-11 1989-02-08 Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjug aattien valmistamiseksi FI102355B (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US15518188A 1988-02-11 1988-02-11
US15518188 1988-02-11
US27050988A 1988-11-16 1988-11-16
US27050988 1988-11-16

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI890599A0 FI890599A0 (fi) 1989-02-08
FI890599A FI890599A (fi) 1989-08-12
FI102355B1 FI102355B1 (fi) 1998-11-30
FI102355B true FI102355B (fi) 1998-11-30

Family

ID=26852067

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI890599A FI102355B (fi) 1988-02-11 1989-02-08 Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjug aattien valmistamiseksi

Country Status (15)

Country Link
US (1) US5122368A (fi)
EP (1) EP0328147B1 (fi)
JP (1) JP2740841B2 (fi)
KR (1) KR960015398B1 (fi)
AT (1) ATE105486T1 (fi)
DE (1) DE68915179T2 (fi)
DK (1) DK175174B1 (fi)
ES (1) ES2053828T3 (fi)
FI (1) FI102355B (fi)
IE (1) IE64650B1 (fi)
IL (2) IL106992A (fi)
MY (1) MY104944A (fi)
NO (2) NO178229C (fi)
NZ (1) NZ227911A (fi)
PT (1) PT89683B (fi)

Families Citing this family (355)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5066789A (en) * 1988-09-30 1991-11-19 Neorx Corporation Targeting substance-diagnostic/therapeutic agent conjugates having Schiff base linkages
DE68924783T2 (de) * 1988-09-30 1996-03-28 Neorx Corp Wässrige additivsysteme, verfahren und polymerteilchen.
US5576288A (en) * 1989-04-27 1996-11-19 The Salk Institute For Biological Studies Fibroblast growth factor conjugates
US5672683A (en) * 1989-09-07 1997-09-30 Alkermes, Inc. Transferrin neuropharmaceutical agent fusion protein
US6329508B1 (en) 1989-09-07 2001-12-11 Alkermes, Inc. Transferrin receptor reactive chimeric antibodies
US5527527A (en) * 1989-09-07 1996-06-18 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical agent conjugates
US5182107A (en) * 1989-09-07 1993-01-26 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates
US5977307A (en) * 1989-09-07 1999-11-02 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific ligand-neuropharmaceutical agent fusion proteins
US5154924A (en) * 1989-09-07 1992-10-13 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical agent conjugates
US6610299B1 (en) 1989-10-19 2003-08-26 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Glycosyl-etoposide prodrugs, a process for preparation thereof and the use thereof in combination with functionalized tumor-specific enzyme conjugates
US7241595B2 (en) * 1989-10-20 2007-07-10 Sanofi-Aventis Pharma Deutschland Gmbh Glycosyl-etoposide prodrugs, a process for preparation thereof and the use thereof in combination with functionalized tumor-specific enzyme conjugates
US6475486B1 (en) 1990-10-18 2002-11-05 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Glycosyl-etoposide prodrugs, a process for preparation thereof and the use thereof in combination with functionalized tumor-specific enzyme conjugates
US5137877B1 (en) * 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
GB9017024D0 (en) * 1990-08-03 1990-09-19 Erba Carlo Spa New linker for bioactive agents
CA2048089A1 (en) * 1990-09-17 1992-03-18 Wolfgang A. Wrasidlo Chemical conjugation of morpholino anthracyclines to antibodies
US5776458A (en) * 1990-12-05 1998-07-07 Pharmacia & Upjohn S.P.A. Anthracycline-conjugates
GB9026491D0 (en) * 1990-12-05 1991-01-23 Erba Carlo Spa Anthracycline-conjugates
US5272253A (en) * 1991-07-01 1993-12-21 Eli Lilly And Company Cluster conjugates of drugs with antibodies
US5622929A (en) * 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
US5505931A (en) * 1993-03-04 1996-04-09 The Dow Chemical Company Acid cleavable compounds, their preparation and use as bifunctional acid-labile crosslinking agents
GR1001459B (el) * 1992-10-08 1993-12-30 Lilly Co Eli Σύμπλεγμα συζυγών φαρμάκων με αντισώματα.
DE4236237A1 (de) * 1992-10-27 1994-04-28 Behringwerke Ag Prodrugs, ihre Herstellung und Verwendung als Arzneimittel
US5556623A (en) * 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
US6551618B2 (en) 1994-03-15 2003-04-22 University Of Birmingham Compositions and methods for delivery of agents for neuronal regeneration and survival
DE4435087A1 (de) * 1994-09-30 1996-04-04 Deutsches Krebsforsch Konjugat zur Behandlung von Infektions-, Autoimmun- und Hauterkrankungen
US6015555A (en) * 1995-05-19 2000-01-18 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates
US20030119724A1 (en) * 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
US5843903A (en) * 1995-11-27 1998-12-01 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Targeted cytotoxic anthracycline analogs
JP2000503639A (ja) * 1995-12-22 2000-03-28 ブリストル―マイヤーズ スクイブ カンパニー 分枝ヒドラゾンのリンカー類
EP0941120A4 (en) * 1996-11-05 2004-08-18 Bristol Myers Squibb Co BRANCHED PEPTIDLINKERS
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
CA2248592A1 (en) 1998-08-31 2000-02-29 Christopher D. Batich Microspheres for use in the treatment of cancer
GB9917012D0 (en) * 1999-07-20 1999-09-22 Pharmacia & Upjohn Spa Combined preparations comprising antitumor agents
US20030153500A1 (en) * 2001-10-26 2003-08-14 University Technologies International, Inc. Use of EGF to inhibit pathogenic infections
US20060014684A1 (en) * 2000-03-03 2006-01-19 University Technologies International Inc. Novel uses of EGF
US6586207B2 (en) 2000-05-26 2003-07-01 California Institute Of Technology Overexpression of aminoacyl-tRNA synthetases for efficient production of engineered proteins containing amino acid analogues
EP1294404A2 (en) * 2000-06-14 2003-03-26 Corixa Corporation Prodrug compounds with an oligopeptide having an isoleucine residue
US6624317B1 (en) 2000-09-25 2003-09-23 The University Of North Carolina At Chapel Hill Taxoid conjugates as antimitotic and antitumor agents
AU2002217980A1 (en) 2000-12-01 2002-06-11 Cell Works Inc. Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide
AU2002216864A1 (en) * 2000-12-21 2002-07-01 Mcgill University Conjugates of antibodies and anticancer drugs
US7445802B2 (en) * 2000-12-26 2008-11-04 Yeda Research And Development Co. Ltd Site-specific in situ generation of allicin using a targeted alliinase delivery system for the treatment of cancers, tumors, infectious diseases and other allicin-sensitive diseases
US7829084B2 (en) * 2001-01-17 2010-11-09 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding constructs and methods for use thereof
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
EP2335728A1 (en) 2001-05-11 2011-06-22 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Specific binding proteins and uses thereof
DE60213232T2 (de) * 2001-05-15 2007-07-26 Faulk Pharmaceuticals, Inc., Indianapolis Gezielte freisetzung von arzneimitteln zur behandlung von virusinfektionen
RU2196604C1 (ru) * 2001-12-21 2003-01-20 Северин Евгений Сергеевич Полипептид, являющийся аналогом рецепторсвязывающего фрагмента эпидермального фактора роста с 21-й по 31-ю аминокислоту, его конъюгат с доксорубицином и фармацевтическая композиция на его основе
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
DK1545613T3 (da) 2002-07-31 2011-11-14 Seattle Genetics Inc Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom
EP1572242B1 (en) * 2002-12-13 2014-04-16 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
ATE472338T1 (de) 2003-02-20 2010-07-15 Seattle Genetics Inc Anti-cd70 antikörper-arzneimittelkonjugate und ihre verwendung zur behandlung von krebs
US20040171175A1 (en) * 2003-02-28 2004-09-02 Swanson Basil I. Process for conjugating biomolecules to hydrophobic membrane-incorporated molecules
US20040219101A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for treatment of tumors
US20040220390A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for the treatment of tumors
US20040219104A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods for treatment of tumors
US20040219100A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for the treatment of tumors
US20040220084A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods for nucleic acid delivery
US20040220085A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Compositions for nucleic acid delivery
US20040220121A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods for drug delivery
US20040219103A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods useful for the diagnosis, imaging and treatment of tumors
US20040219099A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Method for the treatment of tumors
US20040219102A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Compositions for drug delivery
US20040219097A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for the diagnosis, imaging and treatment of tumors
US9011880B2 (en) * 2003-10-21 2015-04-21 Igf Oncology, Llc Compounds and methods for treating cancer
EP1680073B1 (en) * 2003-10-21 2013-01-02 IGF Oncology, LLC Compounds and method for treating cancer
NZ547633A (en) 2003-11-06 2010-08-27 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005072292A2 (en) * 2004-01-24 2005-08-11 Hugh Mctavish Methods for enhancing radiation therapy
US20050175619A1 (en) * 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
US20050287639A1 (en) 2004-05-17 2005-12-29 California Institute Of Technology Methods of incorporating amino acid analogs into proteins
WO2006047214A2 (en) * 2004-10-21 2006-05-04 Igf Oncology, Llc Toxins and radionuclides coupled to igf-1 receptor ligands for treatment of cancer
DE602005022928D1 (de) 2004-11-30 2010-09-23 Abgenix Inc Antikörper gegen gpnmb und ihre verwendungen
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
JP4896959B2 (ja) * 2005-03-30 2012-03-14 サラダックス バイオメディカル インク． ドキソルビシン免疫測定法
EP1912675B1 (en) 2005-07-25 2014-02-12 Emergent Product Development Seattle, LLC B-cell reduction using cd37-specific and cd20-specific binding molecules
US8052971B2 (en) * 2005-11-21 2011-11-08 MG Biologics Oral use of specific antibodies for intestinal health
US8653238B2 (en) * 2006-02-27 2014-02-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compositions and methods for transport of molecules with enhanced release properties across biological barriers
EP2001358B1 (en) 2006-03-27 2016-07-13 University Of Maryland, Baltimore Glycoprotein synthesis and remodeling by enzymatic transglycosylation
WO2008070593A2 (en) 2006-12-01 2008-06-12 Seattle Genetics, Inc. Variant target binding agents and uses thereof
CN104043123B (zh) 2007-01-25 2019-08-13 达娜-法勃肿瘤研究所公司 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
EP2134854B1 (en) 2007-03-15 2015-04-15 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Treatment method using egfr antibodies and src inhibitors and related formulations
KR101559595B1 (ko) 2007-07-16 2015-10-12 제넨테크, 인크. 인간화 항-ｃｄ７９ｂ 항체 및 면역접합체 및 사용 방법
PL2474557T3 (pl) 2007-07-16 2015-02-27 Genentech Inc Przeciwciała anty- CD79b i immunokoniugaty i sposoby stosowania
JP5532486B2 (ja) 2007-08-14 2014-06-25 ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ Ｅｇｆ受容体を標的とするモノクローナル抗体１７５ならびにその誘導体および用途
WO2009046407A2 (en) 2007-10-04 2009-04-09 Zymogenetics, Inc. B7 FAMILY MEMBER zB7H6 AND RELATED COMPOSITIONS AND METHODS
WO2009092011A1 (en) 2008-01-18 2009-07-23 Medimmune, Llc Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation
IL295449A (en) 2008-01-31 2022-10-01 Genentech Inc and fusion antibody-drug-cd79b engineered antibodies cysteine-
WO2009099741A1 (en) * 2008-02-01 2009-08-13 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
AU2009270988A1 (en) * 2008-07-15 2010-01-21 Genentech, Inc. Anthracycline derivative conjugates, process for their preparation and their use as antitumor compounds
WO2010014236A2 (en) * 2008-07-30 2010-02-04 The University Of North Carolina At Chapel Hill Acylhydrazone-based cleavable linkers
JP5918129B2 (ja) 2009-06-22 2016-05-18 メディミューン，エルエルシー 部位特異的共役のための操作されたＦｃ領域
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
US8785600B2 (en) 2009-10-23 2014-07-22 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-GCC antibody molecules and related compositions and methods
BR112012013975B8 (pt) 2009-12-09 2021-05-25 Inst Nat Sante Rech Med anticorpo monoclonal isolado, kit de diagnóstico, conjugado de anticorpo-fármaco, composição compreendendo o referido anticorpo, métodos in vitro para diminuir a atividade, para enfraquecer ou inibir o desenvolvimento de células e de detecção de expressão celular de b7h6, usos do anticorpo e do conjugado, e célula de produção de anticorpo
EP2533804B1 (en) 2010-02-08 2018-04-11 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 161p2f10b proteins
MY177062A (en) 2010-03-12 2020-09-03 Debiopharm Int Sa Cd37-binding molecules and immunoconjugates thereof
EP3029066B1 (en) 2010-07-29 2019-02-20 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
US8637642B2 (en) 2010-09-29 2014-01-28 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugates (ADC) that bind to 191P4D12 proteins
US9228023B2 (en) 2010-10-01 2016-01-05 Oxford Biotherapeutics Ltd. Anti-ROR1 antibodies and methods of use for treatment of cancer
MX2013005972A (es) 2010-12-02 2013-08-09 Nerviano Medical Sciences Srl Proceso para la preparacion de derivados de morfolinil antraciclina.
CA3211246A1 (en) 2010-12-06 2012-06-14 Seagen Inc. Humanized antibodies to liv-1 and use of same to treat cancer
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
WO2012135740A2 (en) 2011-04-01 2012-10-04 Immunogen, Inc. Cd37-binding molecules and immunoconjugates thereof
EP3415531B1 (en) 2011-05-27 2023-09-06 Glaxo Group Limited Bcma (cd269/tnfrsf17) - binding proteins
WO2013022855A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
CA2851534C (en) 2011-10-10 2023-02-14 Xencor, Inc. A method for purifying antibodies
PL2773671T3 (pl) 2011-11-04 2022-01-24 Zymeworks Inc. Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerycznego z mutacjami w domenie fc
EP2592103A1 (en) 2011-11-08 2013-05-15 Adriacell S.p.A. Polymer aldehyde derivatives
JP2015502397A (ja) 2011-12-23 2015-01-22 ファイザー・インク 部位特異的コンジュゲーションのための操作された抗体定常領域、ならびにそのための方法および使用
JP2015505537A (ja) 2012-01-20 2015-02-23 シー レーン バイオテクノロジーズ， エルエルシー 結合分子コンジュゲート
ES2812849T3 (es) 2012-02-24 2021-03-18 Abbvie Stemcentrx Llc Anticuerpos anti-DLL3 y procedimientos de utilización de los mismos
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
WO2013162729A1 (en) 2012-04-24 2013-10-31 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method for delivery of small molecules and proteins across the cell wall of algae using molecular transporters
CN104470544B (zh) 2012-05-01 2018-01-12 基因泰克公司 抗pmel17抗体和免疫缀合物
KR102433686B1 (ko) 2012-05-15 2022-08-19 씨젠 인크. 자가-안정화 링커 접합체
TR201802376T4 (tr) 2012-07-09 2018-03-21 Genentech Inc Anti-CD79b antikorları içeren immünokonjugatlar.
EA201590173A1 (ru) 2012-07-09 2015-09-30 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие антитела к cd22
CN112587671A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
US9382329B2 (en) 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
EA032908B1 (ru) 2012-08-23 2019-08-30 Эдженсис, Инк. Конъюгаты антитело-лекарственное средство (adc), которые связываются с белками 158p1d7
EP2922818B1 (en) 2012-11-24 2018-09-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
US9931417B2 (en) 2012-12-13 2018-04-03 Immunomedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
US10744129B2 (en) 2012-12-13 2020-08-18 Immunomedics, Inc. Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2
US10413539B2 (en) 2012-12-13 2019-09-17 Immunomedics, Inc. Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132)
DK2900277T3 (da) 2012-12-13 2022-04-04 Immunomedics Inc Doser af immunokonjugater af antistoffer og sn-38 til forbedret effektivitet og reduceret toksicitet
ES2819573T3 (es) 2012-12-13 2021-04-16 Immunomedics Inc Método para producir inmunoconjugados de anticuerpo-SN-38 con un enlazador CL2A
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
AU2014205086B2 (en) 2013-01-14 2019-04-18 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
AU2014207549B2 (en) 2013-01-15 2018-12-06 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
ES2731681T3 (es) 2013-02-22 2019-11-18 Abbvie Stemcentrx Llc Conjugados de anticuerpo anti-DLL3 y PBD y usos de los mismos
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
WO2014159835A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
KR102211176B1 (ko) 2013-03-15 2021-02-01 젠코어 인코포레이티드 이형이량체 단백질
AU2014232416B2 (en) 2013-03-15 2017-09-28 Xencor, Inc. Modulation of T Cells with Bispecific Antibodies and FC Fusions
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
PT2968440T (pt) 2013-03-15 2019-07-31 Zymeworks Inc Compostos citotóxicos e antimitóticos e métodos de utilização dos mesmos
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
CN105722534B (zh) 2013-08-01 2019-05-31 艾更斯司股份有限公司 结合cd37蛋白的抗体药物偶联物(adc)
EP3892294A1 (en) 2013-08-28 2021-10-13 AbbVie Stemcentrx LLC Site-specific antibody conjugation methods and compositions
CA2922529A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Stemcentrx, Inc. Novel sez6 modulators and methods of use
MX2016003248A (es) 2013-09-17 2016-06-07 Genentech Inc Metodos de uso de anticuerpos anti-lgr5.
MX2016003744A (es) 2013-10-11 2016-08-11 Us Health Anticuerpos tem8 y su uso.
PT3055331T (pt) 2013-10-11 2021-04-05 Oxford Bio Therapeutics Ltd Anticorpos conjugados contra ly75 para o tratamento de cancro
ES2826398T3 (es) 2013-10-15 2021-05-18 Seagen Inc Enlazadores-fármacos pegilados para una mejor farmacocinética de los conjugados ligando-fármaco
US9919002B2 (en) 2013-10-21 2018-03-20 North Carolina State University Methods and constructs for compound delivery
EP3066118B1 (en) 2013-11-06 2020-01-08 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
US10457976B2 (en) 2013-11-25 2019-10-29 Seattle Genetics, Inc. Preparing antibodies from CHO cell cultures for conjugation
SG11201604784XA (en) 2013-12-13 2016-07-28 Genentech Inc Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates
CN105873614B (zh) 2013-12-16 2020-10-30 基因泰克公司 肽模拟化合物及其抗体-药物缀合物
CN106255513B (zh) 2013-12-27 2022-01-14 酵活有限公司 用于药物偶联物的含磺酰胺连接系统
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
AU2015205755C1 (en) 2014-01-10 2020-08-13 Birdie Biopharmaceuticals Inc. Compounds and compositions for immunotherapy
EP3094339B1 (en) 2014-01-12 2019-12-11 IGF Oncology, LLC Fusion proteins containing insulin-like growth factor-1 and epidermal growth factor and variants thereof
PE20161209A1 (es) 2014-02-21 2016-11-10 Abbvie Stemcentrx Llc Conjugados de anticuerpos anti-drosophila similar a delta 3 (anti-dll3) y medicamentos para usarse en el tratamiento contra melanoma
DK3122757T3 (da) 2014-02-28 2023-10-09 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Ladede linkere og anvendelse deraf til konjugering
CN110845616A (zh) 2014-03-21 2020-02-28 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
CA2943609A1 (en) 2014-03-27 2015-10-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Metabolically-activated drug conjugates to overcome resistance in cancer therapy
WO2015149077A1 (en) 2014-03-28 2015-10-01 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3
CA2946662A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Genentech, Inc. Anti-gpc3 antibodies and immunoconjugates
CN105440135A (zh) 2014-09-01 2016-03-30 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
CA2956178A1 (en) 2014-07-24 2016-01-28 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
TW201625689A (zh) 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 抗－ｂ７－ｈ４抗體及免疫結合物
EP3191521A2 (en) 2014-09-12 2017-07-19 F. Hoffmann-La Roche AG Cysteine engineered antibodies and conjugates
US9518118B2 (en) 2014-09-12 2016-12-13 Genentech, Inc. Anti-HER2 antibodies and immunoconjugates
EA201790569A1 (ru) 2014-09-12 2017-08-31 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты против cll-1
WO2016040825A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anthracycline disulfide intermediates, antibody-drug conjugates and methods
EP4029873A1 (en) 2014-09-17 2022-07-20 Zymeworks Inc. Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
PL3262071T3 (pl) 2014-09-23 2020-08-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposób stosowania immunokoniugatów anty-CD79b
RU2730668C2 (ru) 2014-11-19 2020-08-24 Аксон Ньюросайенс Се Гуманизированные тау-антитела при болезни альцгеймера
WO2016086196A2 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
CN113735976A (zh) 2014-11-26 2021-12-03 森科股份有限公司 结合cd3和肿瘤抗原的异二聚体抗体
US10428155B2 (en) 2014-12-22 2019-10-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
US10472395B2 (en) 2015-03-05 2019-11-12 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
TWI719967B (zh) 2015-03-09 2021-03-01 美商艾澤西公司 結合至ｆｌｔ３蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ）
EP3280454A1 (en) 2015-04-07 2018-02-14 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Nanoparticle immunoconjugates
WO2016172427A1 (en) 2015-04-22 2016-10-27 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells
EP3091033A1 (en) 2015-05-06 2016-11-09 Gamamabs Pharma Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
JP6979877B2 (ja) 2015-06-08 2021-12-15 デビオファーム インターナショナル， エス． アー． 抗ｃｄ３７イムノコンジュゲートおよび抗ｃｄ２０抗体の組み合わせ
CA2989347A1 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Lentigen Technology, Inc. Method to treat cancer with engineered t-cells
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
ES2955961T3 (es) 2015-06-30 2023-12-11 Seagen Inc Anticuerpos anti-ntb-a y composiciones y métodos relacionados
CN113350518A (zh) 2015-07-12 2021-09-07 杭州多禧生物科技有限公司 与细胞结合分子的共轭偶联的桥连接体
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
MA42706A (fr) 2015-08-28 2021-04-14 Debiopharm Int Sa Anticorps et dosages pour la détection de cd37
EP3347047A1 (en) 2015-09-09 2018-07-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response
US10392441B2 (en) 2015-10-07 2019-08-27 United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services IL-7R-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
EP3660044A1 (en) 2015-10-09 2020-06-03 Miltenyi Biotec Technology, Inc. Chimeric antigen receptors and methods of use
WO2017066714A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Compugen Ltd. Anti-vsig1 antibodies and drug conjugates
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
WO2017100372A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma
EP3413914A4 (en) 2016-02-10 2019-10-16 Immunomedics, Inc. COMBINATION INHIBITORS ABCG2-SACITUZUMAB GOVITECAN (IMMU-132) OVERCOMES RESISTANCE TO SN-38 IN CANCERS EXPRESSING TOO 2
WO2017147597A1 (en) 2016-02-27 2017-08-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide vaccines comprising self-assembling polymer nanoparticles
JOP20170053B1 (ar) 2016-03-02 2021-08-17 Eisai Randd Man Co Ltd مترافقات جسم مضاد وعقار أساسها إيريبولين وطرق استخدامها
MA45324A (fr) 2016-03-15 2019-01-23 Seattle Genetics Inc Polythérapie utilisant un adc-liv1 et un agent chimiothérapeutique
CA3017527A1 (en) 2016-03-25 2017-09-28 Seattle Genetics, Inc. Process for the preparation of pegylated drug-linkers and intermediates thereof
WO2017184942A1 (en) 2016-04-21 2017-10-26 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-bmpr1b antibodies and methods of use
WO2017189483A1 (en) 2016-04-25 2017-11-02 The Johns Hopkins University Znt8 assays for drug development and pharmaceutical compositions
RU2725292C2 (ru) 2016-04-27 2020-06-30 Иммьюномедикс, Инк. Эффективность конъюгатов антитела против trop-2 с лекарственным средством sn-38 для терапии рецидивирующих/рефрактерных к ингибиторам контрольной точки опухолей
KR20180137517A (ko) 2016-05-13 2018-12-27 바이오아트라, 엘엘씨 항 ror2 항체, 항체 단편 및 이의 면역접합체와 이것들의 용도
EP3465221B1 (en) 2016-05-27 2020-07-22 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bioanalytical method for the characterization of site-specific antibody-drug conjugates
BR112018075644A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de anticorpo e fármaco
IL300274A (en) 2016-06-08 2023-04-01 Abbvie Inc Antibodies against B7–H3 and conjugates of drug and antibody
JP2019526529A (ja) 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
EP3468598A1 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
RU2767357C2 (ru) 2016-06-14 2022-03-17 Ксенкор, Инк. Биспецифические антитела-ингибиторы контрольных точек
EP3475304B1 (en) 2016-06-28 2022-03-23 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
WO2018027204A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Genentech, Inc. Multivalent and multiepitopic anitibodies having agonistic activity and methods of use
CN109562152B (zh) 2016-08-09 2024-04-02 西雅图基因公司 含有具有改善的生理化学性质的自稳定性接头的药物缀合物
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
WO2018045245A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
EP4282969A3 (en) 2016-09-02 2024-01-31 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with duocars
KR102562519B1 (ko) 2016-10-14 2023-08-02 젠코어 인코포레이티드 IL-15/IL-15Rα FC-융합 단백질 및 PD-1 항체 단편을 포함하는 이중특이성 이종이량체 융합 단백질
JP2020510608A (ja) 2016-11-02 2020-04-09 デビオファーム インターナショナル， エス． アー． 抗ｃｄ３７イムノコンジュゲート療法を改善するための方法
EP3888691A1 (en) 2016-11-14 2021-10-06 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Conjugation linkers, cell binding molecule-drug conjugates containing the likers, methods of making and uses such conjugates with the linkers
CA3036983A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Cureab Gmbh Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
CA3049252C (en) 2017-01-09 2020-11-24 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-mesothelin immunotherapy
CN110392697A (zh) 2017-03-02 2019-10-29 国家医疗保健研究所 对nectin-4具有特异性的抗体及其用途
GB201703876D0 (en) 2017-03-10 2017-04-26 Berlin-Chemie Ag Pharmaceutical combinations
US10426797B2 (en) 2017-03-24 2019-10-01 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD33 immunotherapy
CN110430901B (zh) 2017-03-24 2024-08-16 西雅图基因公司 制备葡糖苷酸药物-接头及其中间体的方法
RU2758234C2 (ru) 2017-03-27 2021-10-26 Иммьюномедикс, Инк. ЛЕЧЕНИЕ ТРИЖДЫ НЕГАТИВНОГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩЕГОСЯ ЭКСПРЕССИЕЙ Trop-2, С ПОМОЩЬЮ САЦИТУЗУМАБА ГОВИТЕКАНА И ИНГИБИТОРА Rad51
WO2018187074A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Immunomedics, Inc. Subcutaneous administration of antibody-drug conjugates for cancer therapy
IL302880A (en) 2017-04-04 2023-07-01 Avidea Tech Inc Peptide-based vaccines, methods of manufacturing, and uses thereof for inducing an immune response
WO2018187791A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Juno Therapeutics, Inc Engineered cells expressing prostate-specific membrane antigen (psma) or a modified form thereof and related methods
EP3612567B1 (en) 2017-04-19 2024-09-11 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-vtcn1 antibodies and antibody drug conjugates
AU2018259856A1 (en) 2017-04-28 2019-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Compound having substance that has affinity for soluble protein, cleavable moiety, and reactive group, or salt thereof
CN110636867B (zh) 2017-05-21 2023-09-05 Igf肿瘤公司 胰岛素样生长因子——用于治疗骨髓增生异常综合症的化学治疗缀合物
EP3645122A1 (en) 2017-06-30 2020-05-06 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric fc fusion proteins containing il-15/il-15ra and antigen binding domains
US11892457B2 (en) 2017-07-12 2024-02-06 The Johns Hopkins University Proteoliposome-based ZnT8 self-antigen for type 1 diabetes diagnosis
US10442867B2 (en) 2017-07-31 2019-10-15 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD19/CD20 immunotherapy
TW201919712A (zh) 2017-08-10 2019-06-01 法商塞勒尼斯醫療控股公司 運送子(cargomers)
CN111936510B (zh) 2017-09-15 2024-09-27 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd19免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
EP4279584A3 (en) 2017-10-16 2024-03-06 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd22 immunotherapy
CN111542344A (zh) 2017-10-23 2020-08-14 马布林克生物科学公司 包含单分子量聚肌氨酸的配体-药物-缀合物
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
EP3706793A1 (en) 2017-11-08 2020-09-16 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-pd-1 sequences
EA202091339A1 (ru) 2017-12-01 2020-10-21 Сиэтл Дженетикс, Инк. Антитела против cd47 и их применение для лечения онкологических заболеваний
CN111757892A (zh) 2017-12-01 2020-10-09 西雅图基因公司 用于治疗乳腺癌的人源化抗liv1抗体
IL275426B1 (en) 2017-12-19 2024-11-01 Xencor Inc Engineered il-2 fc fusion proteins
CN111954677A (zh) 2017-12-20 2020-11-17 莱蒂恩技术公司 用于用免疫治疗来治疗hiv/aids的组合物和方法
WO2019180150A1 (en) 2018-03-22 2019-09-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for modulating innate lymphoid cell activity, antibody drug conjugates and uses in therapy
WO2019183438A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Seattle Genetics, Inc. Use of antibody drug conjugates comprising tubulin disrupting agents to treat solid tumor
MX2020009991A (es) 2018-03-28 2020-10-14 Axon Neuroscience Se Metodos basados en anticuerpos para detectar y tratar la enfermedad de alzheimer.
US10982006B2 (en) 2018-04-04 2021-04-20 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
KR20210003814A (ko) 2018-04-18 2021-01-12 젠코어 인코포레이티드 IL-15/IL-15Rα Fc-융합 단백질 및 TIM-3 항원 결합 도메인을 함유하는 TIM-3 표적화 이종이량체 융합 단백질
MX2020010910A (es) 2018-04-18 2021-02-09 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas dirigidas a pd-1 que contienen proteinas de fusion il-15 / il-15ra fc y dominios de union al antigeno pd-1 y usos de los mismos.
CA3104729A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Avidea Technologies, Inc. Improved methods of manufacturing peptide-based vaccines
JP2021525735A (ja) 2018-05-30 2021-09-27 デビオファーム インターナショナル， エス． アー． 抗ｃｄ３７免疫コンジュゲート投薬レジメン
MX2020012997A (es) 2018-06-01 2021-03-29 Eisai R&D Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo modulador de empalme-farmaco y metodos de uso.
JP7413999B2 (ja) 2018-06-14 2024-01-16 味の素株式会社 抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩
EP4406975A3 (en) 2018-06-14 2024-11-13 Ajinomoto Co., Inc. Compound having affinity substance to antibody and bioorthogonal functional group, or salt thereof
GB201809746D0 (en) 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
PE20211091A1 (es) 2018-07-02 2021-06-14 Amgen Inc Proteina de union al antigeno anti-steap1
JP2021532116A (ja) 2018-07-23 2021-11-25 マジェンタ セラピューティクス インコーポレイテッドMagenta Therapeutics, Inc. 同種異系の細胞療法における抗−ｃｄ５抗体薬物コンジュゲート（ａｄｃ）の使用
CN113166241B (zh) 2018-08-16 2025-02-25 约翰霍普金斯大学 人类znt8抗体
JP7546553B2 (ja) 2018-09-20 2024-09-06 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 抗ｃｄ１２３免疫療法によりがんを処置するための組成物および方法
CN118581122A (zh) 2018-09-26 2024-09-03 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd19/cd22免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
EP3861016A2 (en) 2018-10-03 2021-08-11 Xencor, Inc. Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
AU2019355926A1 (en) 2018-10-03 2021-04-22 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Aromatic ring substituted amphiphilic polymers as drug delivery systems
JPWO2020090979A1 (ja) 2018-10-31 2021-09-24 味の素株式会社 抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩
EP3886895A1 (en) 2018-11-30 2021-10-06 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd38 immunotherapy
AU2019397062A1 (en) 2018-12-13 2021-05-06 Eisai R&D Management Co., Ltd. Herboxidiene antibody-drug conjugates and methods of use
US20220088204A1 (en) * 2019-01-25 2022-03-24 Yale University Anticancer drugs and methods of making and using same
JP2022519273A (ja) 2019-02-05 2022-03-22 シージェン インコーポレイテッド 抗ｃｄ２２８抗体及び抗体薬物コンジュゲート
US11472890B2 (en) 2019-03-01 2022-10-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind ENPP3 and CD3
JP2022524507A (ja) 2019-03-06 2022-05-06 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 自己駆動型キメラ抗原受容体を用いてがんを処置するための組成物および方法
CA3134055A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 The Regents Of The University Of California Claudin-6 antibodies and drug conjugates
CA3134056A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 The Regents Of The University Of California Claudin-6 bispecific antibodies
US20230026627A1 (en) 2019-04-17 2023-01-26 Vaccitech North America, Inc. Compositions and Methods of Manufacturing Star Polymers for Ligand Display and/or Drug Delivery
CN114174317A (zh) 2019-04-24 2022-03-11 海德堡医药研究有限责任公司 鹅膏毒素抗体-药物缀合物及其用途
WO2020243546A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-bcma immunotherapy
WO2020247572A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Seattle Genetics, Inc. Masked antibody formulations
US20220306727A1 (en) 2019-06-05 2022-09-29 Seagen Inc. Methods of Purifying Masked Antibodies
US20220380474A1 (en) 2019-07-02 2022-12-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Servic Monoclonal antibodies that bind egfrviii and their use
KR20220035486A (ko) 2019-07-22 2022-03-22 씨젠 인크. 암 치료를 위한 인간화 항-liv1 항체
EP4017542A1 (en) 2019-10-04 2022-06-29 Tae Life Sciences Antibody compositions comprising fc mutations and site-specific conjugation properties
CA3155634A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 Seagen Inc. Anti-pd-l1 antibodies and antibody-drug conjugates
EP3812008A1 (en) 2019-10-23 2021-04-28 Gamamabs Pharma Amh-competitive antagonist antibody
WO2021116119A1 (en) 2019-12-09 2021-06-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to her4 and uses thereof
CN115052663A (zh) 2020-01-08 2022-09-13 辛瑟斯治疗股份有限公司 Alk5抑制剂缀合物及其用途
WO2021224186A1 (en) 2020-05-04 2021-11-11 Institut Curie New pyridine derivatives as radiosensitizers
CN115551553A (zh) 2020-05-12 2022-12-30 Inserm(法国国家健康医学研究院) 治疗皮肤t细胞淋巴瘤和tfh起源淋巴瘤的新方法
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
WO2021248005A1 (en) 2020-06-05 2021-12-09 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-bcma antibody-drug conjugates and methods of use
EP4163294A4 (en) 2020-06-09 2024-07-24 Ajinomoto Co., Inc. MODIFIED FERRITIN AND METHOD FOR PRODUCING SAME
CA3171101A1 (en) 2020-06-22 2021-12-30 Dina SCHNEIDER Compositions and methods for treating cancer with tslpr-cd19 or tslpr-cd22 immunotherapy
CA3189225A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Seagen Inc. Anti-cd228 antibodies and antibody-drug conjugates
EP3970752A1 (en) 2020-09-17 2022-03-23 Merck Patent GmbH Molecules with solubility tag and related methods
AU2021347147A1 (en) 2020-09-22 2023-05-18 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Compositions and methods of manufacturing amphiphilic block copolymers that form nanoparticles in situ
JP2023543026A (ja) 2020-09-28 2023-10-12 シージェン インコーポレイテッド がんの処置のためのヒト化抗ｌｉｖ１抗体
MX2023003877A (es) 2020-10-01 2023-04-18 Abionyx Pharma Sa Composiciones que comprenden complejos basados en proteina de union a lipidos para usarse en el tratamiento de enfermedades oculares.
US20230390406A1 (en) 2020-10-19 2023-12-07 Vaccitech North America, Inc. Star Polymer Drug Conjugates
CA3196243A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Angela Marinetti Metallic trans-(n-heterocyclic carbene)-amine-platinum complexes and uses thereof for treating cancer
EP4240397A1 (en) 2020-11-05 2023-09-13 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd22 immunotherapy
AU2022207278A1 (en) 2021-01-18 2023-08-03 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody obtained therefrom
AU2022208654A1 (en) 2021-01-18 2023-08-03 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody produced using same
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
MX2023009417A (es) 2021-02-16 2023-12-01 Vaccitech North America Inc Nanopartículas de autoensamblaje basadas en péptidos anfifílicos.
WO2022192403A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
JP2024509274A (ja) 2021-03-10 2024-02-29 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｇｐｃ３に結合するヘテロ二量体抗体
EP4306535A1 (en) 2021-03-11 2024-01-17 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody obtained using same
WO2022189618A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Institut Curie Nitrogen-containing heterocycles as radiosensitizers
EP4310096A1 (en) 2021-03-16 2024-01-24 Ajinomoto Co., Inc. Complex or salt thereof, and method for manufacturing same
US12036286B2 (en) 2021-03-18 2024-07-16 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
AU2022236461A1 (en) 2021-03-19 2023-10-05 Heidelberg Pharma Research Gmbh B-lymphocyte specific amatoxin antibody conjugates
KR20220136267A (ko) 2021-03-30 2022-10-07 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 cldn18.2에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
EP4319820A1 (en) 2021-04-10 2024-02-14 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
KR20240018430A (ko) 2021-04-15 2024-02-13 아비오닉스 파마 에스에이 기관 보존 용액에서의 지질 결합 단백질-기반 복합체의 사용
CA3216459A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
EP4370211A1 (en) 2021-07-14 2024-05-22 Seagen Inc. Antibody masking domains
EP4405387A1 (en) 2021-09-24 2024-07-31 Seagen Inc. Improved antibody masking domains
CA3234692A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Ajinomoto Co., Inc. Conjugate of antibody and functional substance or salt thereof, and antibody derivative and compound used in production of the same or salts thereof
WO2023089314A1 (en) 2021-11-18 2023-05-25 Oxford Biotherapeutics Limited Pharmaceutical combinations
EP4433096A1 (en) 2021-11-19 2024-09-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
US11590169B1 (en) 2022-03-02 2023-02-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD123 immunotherapy
US20230338424A1 (en) 2022-03-02 2023-10-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Anti-CD123 Immunotherapy
IL315308A (en) 2022-03-09 2024-10-01 Astrazeneca Ab Binding molecules against frα
AU2023229967A1 (en) 2022-03-11 2024-08-08 Astrazeneca Ab A SCORING METHOD FOR AN ANTI-FRα ANTIBODY-DRUG CONJUGATE THERAPY
WO2023194797A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Abionyx Pharma Sa Methods for treating eye diseases using lipid binding protein-based complexes
AU2023251200A1 (en) 2022-04-07 2024-10-03 Heidelberg Pharma Research Gmbh Methods of improving the therapeutic index of amatoxin-antibody conjugates
WO2024026107A2 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptor therapies for treating solid tumors
WO2024044743A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with fully human anti-cd20/cd19 immunotherapy
WO2024052503A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
AR130536A1 (es) 2022-09-21 2024-12-18 Seagen Inc Anticuerpos que se unen a cd228
WO2024092028A2 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Vaccitech North America, Inc. Combination treatment regimes for treating cancer
WO2024092030A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Vaccitech North America, Inc. Self-assembling nanoparticles
WO2024094688A1 (en) 2022-11-01 2024-05-10 Heidelberg Pharma Research Gmbh Anti-gucy2c antibody and uses thereof
WO2024097816A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 Seagen Inc. Anti-avb6 antibodies and antibody-drug conjugates and their use in the treatment of cancer
EP4382120A1 (en) 2022-12-05 2024-06-12 Institut Regional du Cancer de Montpellier Anti-slc1a4 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2024121632A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Crispr Therapeutics Ag Use of anti-cd117 antibody drug conjugate (adc)
WO2024170660A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Astrazeneca Ab Combination therapies for treatment of cancer with therapeutic binding molecules
WO2024189048A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 Heidelberg Pharma Research Gmbh Subcutaneously administered antibody-drug conjugates for use in cancer treatment
WO2024236156A1 (en) 2023-05-17 2024-11-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-cathepsin-d antibodies
WO2024258967A1 (en) 2023-06-13 2024-12-19 Synthis Therapeutics, Inc. Anti-cd5 antibodies and their uses
WO2024258743A1 (en) 2023-06-13 2024-12-19 Adcentrx Therapeutics, Inc. Methods and compositions related to antibodies and antibody drug conjugates (adcs) that bind nectin-4 proteins
WO2025014896A1 (en) 2023-07-07 2025-01-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Humanized 40h3 antibody
WO2025021928A1 (en) 2023-07-25 2025-01-30 Merck Patent Gmbh Iduronidase-cleavable compounds
WO2025027529A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Advesya Anti-il-1rap antibody drug conjugates and methods of use thereof
EP4509142A1 (en) 2023-08-16 2025-02-19 Ona Therapeutics S.L. Fgfr4 as target in cancer treatment

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3965088A (en) * 1967-10-18 1976-06-22 Rhone-Poulenc S.A. Naphthacene derivatives
FR1578734A (fi) * 1967-11-28 1969-08-22
GB1541436A (en) * 1976-02-02 1979-02-28 Searle & Co Immunological materials
US4112217A (en) * 1977-09-02 1978-09-05 Sri International Bis-hydrazones of daunomycin and adriamycin
US4263428A (en) * 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
US4275192A (en) * 1979-05-03 1981-06-23 G. D. Searle & Co. Bis(4-demethoxydaunorubicin)dihydrazone derivatives and pharmacologically acceptable salts thereof
SE8102193L (sv) * 1981-04-06 1982-10-07 Pharmacia Ab Terapeutiskt aktiv organisk forening och dess anvendning
GB2116979B (en) * 1982-02-25 1985-05-15 Ward Page Faulk Conjugates of proteins with anti-tumour agents
US5162512A (en) * 1982-03-09 1992-11-10 Cytogen Corporation Amine derivatives of anthracycline antibodies
US4671958A (en) * 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
AU573529B2 (en) * 1982-05-12 1988-06-16 President And Fellows Of Harvard College Hybrid proteins
US4560512A (en) * 1982-09-30 1985-12-24 Merck & Co., Inc. Derivatives of steroid compounds linked to cyotoxic agents
US4590001A (en) * 1983-03-28 1986-05-20 Stjernholm Rune L Platinum bound to transferrin for use in the treatment of breast tumors
US4545985A (en) * 1984-01-26 1985-10-08 The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Pseudomonas exotoxin conjugate immunotoxins
US4522750A (en) * 1984-02-21 1985-06-11 Eli Lilly And Company Cytotoxic compositions of transferrin coupled to vinca alkaloids
US4542225A (en) * 1984-08-29 1985-09-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Acid-cleavable compound
JPS61155334A (ja) * 1984-12-28 1986-07-15 Teijin Ltd 殺細胞性修飾免疫グロブリン及びその製造方法
US4699784A (en) * 1986-02-25 1987-10-13 Center For Molecular Medicine & Immunology Tumoricidal methotrexate-antibody conjugate
GB8610551D0 (en) * 1986-04-30 1986-06-04 Hoffmann La Roche Polypeptide & protein derivatives
IN165717B (fi) * 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
JPH068284B2 (ja) * 1986-08-27 1994-02-02 参天製薬株式会社 ３−チオキソ−ベンゾチアジン誘導体
JPS6357569A (ja) * 1986-08-28 1988-03-12 Teijin Ltd ヒドラジド化合物及びその製造方法
US4981979A (en) * 1987-09-10 1991-01-01 Neorx Corporation Immunoconjugates joined by thioether bonds having reduced toxicity and improved selectivity
EP0318948B1 (en) * 1987-12-02 1992-08-19 Neorx Corporation Cleavable immunoconjugates for the delivery and release of agents in native form

Also Published As

Publication number Publication date
IL89220A0 (en) 1989-09-10
FI890599A0 (fi) 1989-02-08
NO178229B (no) 1995-11-06
NO890593D0 (no) 1989-02-10
EP0328147B1 (en) 1994-05-11
EP0328147A3 (en) 1991-11-13
PT89683B (pt) 1994-03-31
KR960015398B1 (ko) 1996-11-13
DK175174B1 (da) 2004-06-21
IL89220A (en) 1994-02-27
US5122368A (en) 1992-06-16
NO950099D0 (no) 1995-01-10
DE68915179D1 (de) 1994-06-16
DE68915179T2 (de) 1994-10-06
FI102355B1 (fi) 1998-11-30
MY104944A (en) 1994-07-30
KR890012658A (ko) 1989-09-18
ES2053828T3 (es) 1994-08-01
NO950099L (no) 1989-08-14
EP0328147A2 (en) 1989-08-16
IE890434L (en) 1989-08-11
DK63989D0 (da) 1989-02-10
NO303225B1 (no) 1998-06-15
NO890593L (no) 1989-08-14
ATE105486T1 (de) 1994-05-15
JP2740841B2 (ja) 1998-04-15
IE64650B1 (en) 1995-08-23
NO178229C (no) 1996-02-14
JPH01246295A (ja) 1989-10-02
PT89683A (pt) 1989-10-04
NZ227911A (en) 1990-11-27
FI890599A (fi) 1989-08-12
DK63989A (da) 1989-08-12
IL106992A (en) 1994-06-24
IL106992A0 (en) 1993-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI102355B (fi) Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjug aattien valmistamiseksi
Greenfield et al. Evaluation in vitro of adriamycin immunoconjugates synthesized using an acid-sensitive hydrazone linker
EP0871490B1 (en) Branched hydrazone linkers
EP0457250B1 (en) Novel bifunctional linking compounds, conjugates and methods for their production
FI98197C (fi) Menetelmä sytotoksisten aineiden kasvainsoluihin toimittamiseen käyttökelpoisen vasta-aine-entsyymikonjugaatin valmistamiseksi
CA2016584C (en) Anthracycline conjugates having a novel linker and methods for their production
PL172837B1 (pl) Preparat farmaceutyczny zawierajacy koniugaty tioeterowe PL PL PL PL PL
Froesch et al. Preparation and functional evaluation of new doxorubicin immunoconjugates containing an acid-sensitive linker on small-cell lung cancer cells
Trail et al. Site‐directed delivery of anthracyclines for treatment of cancer
Zhu et al. Inhibition of Epstein-Barr-virus-transformed human chronic lymphocytic leukaemic B cells with monoclonal-antibody-Adriamycin (doxorubicin) conjugates
CA2010164C (en) Anthracycline immunoconjugates having a novel linker and methods for their production
WO1992014758A1 (en) Conjugate molecules

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Owner name: BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY

MA Patent expired