ES2224169T3 - Detergentes que comprenden celulasas. - Google Patents
Detergentes que comprenden celulasas.Info
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Abstract
LA PRESENTE INVENCION DESCRIBE DETERGENTES QUE COMPRENDEN UN ENZIMA CON ACTIVIDAD CELULITICA, CON UNA RELACION ENTRE LA PERDIDA DE RESISTENCIA A LA TRACCION Y LAS PROPIEDADES QUE IMPIDEN LA FORMACION DE BOLITAS, INFERIOR A 1.
Description
Detergentes que comprenden celulasas.
La presente invención se refiere al uso de nuevas
celulasas con propiedades mejoradas en detergentes y en soluciones
acuosas de lavado. La invención se refiere también a detergentes y
aditivos de detergente que comprenden la nueva celulasa.
Las celulasas, denominadas también enzimas
celulolíticos, son enzimas que pueden hidrolizar los enlaces
\beta-D-glucosídicos de las
celulosas. Los enzimas celulolíticos se han dividido
tradicionalmente en tres clases: endoglucanasas, exoglucanasas o
celobiohidrolasas y \beta-glucosidasas (Knowles,
J. et al. (1987), TIBTECH 5, 255-261). Los
enzimas celulolíticos pueden producirse por un gran número de
bacterias, levaduras y hongos. Se describen microorganismos que
producen celulasas, por ejemplo, en el documento
GB-A-2094826.
Se han desarrollado varias aplicaciones para el
uso de enzimas celulolíticos:
- degradación de la pasta de celulasa (pasta
papelera) en azúcares para la producción de (bio)etanol;
- diversos tratamientos textiles tales como
"lavado a la piedra" y "biopulido":
- aplicación en composiciones de detergente.
El uso de celulasas en composiciones de
detergente comenzó con celulasas que podían reducir la dureza, es
decir, que podían suavizar tejidos que contenían algodón, como se
describe, por ejemplo, en el documento
GB-B-1358599.
Además, se sabe que las composiciones de
detergente que comprenden celulasas son eficaces para eliminar la
suciedad, es decir, para limpiar. La eficacia de los enzimas
celulolíticos, celulasas, en términos de lavado textil se ha
reconocido durante algún tiempo. Los documentos
GB-A-2075028,
GB-A-2095275 y
GB-A-2094826 describen
composiciones de detergente con celulasa para mejorar el rendimiento
de limpieza.
En la técnica también se sabe que las celulasas
pueden actuar como agente de clarificación del color en detergentes
de lavandería. Después de repetidos lavados de tejidos manchados,
los tejidos que contienen algodón parecen volverse grisáceos, muy
probablemente debido a la alteración de fibras causada por la
acción mecánica. Las fibras se desgarran produciendo fibras
desordenadas que están rotas. El uso de celulasas como agentes de
clarificación del color para tejidos teñidos se ha descrito en el
documento EP-A-0220016. En efecto,
comúnmente se usan mezclas de celulasa de la cepa fúngica Humicola
insolens (DSM 1800) en detergentes para proporcionar propiedades
contra la formación de bolitas y de reavivado del color. El sistema
de enzimas celulolíticos producido por el microorganismo de tipo
silvestre está disponible con el nombre comercial Celluzyme® de
Novo-Nordisk. Además, en detergentes también se usa
una celulasa clonada (sencilla) del mismo origen con el nombre
comercial Carezyme®.
En la técnica se sabe que el inconveniente
principal de las celulasas que muestran clarificación del color es
que estos enzimas degradan de forma agresiva los tejidos que
contienen celulosa ocasionando un daño mediante la pérdida no
deseada de la resistencia a la tracción de los tejidos.
Por otro lado, las celulasas conocidas en la
técnica que muestran buenas propiedades de limpieza apenas muestran
efectos de clarificación del color. El primer detergente comercial
con celulasas en el mundo contenía una celulasa bacteriana. Este
enzima representa una endoglucanasa alcalina mencionada
anteriormente de una especie de Bacillus que no ataca a las
fibras de celulosa. Se describe que el enzima proporciona un efecto
de limpieza durante el lavado. No se ha descrito ningún efecto
contra la formación de bolitas o con respecto al reavivado del
color para este enzima.
A partir de lo comentado anteriormente, será
evidente que sigue siendo deseable proporcionar celulasas mejoradas
en aplicaciones de detergentes. Usando mezclas de celulasas, como
se sugiere en la solicitud de patente internacional
WO-A-95/02675, se supone que se
proporcionan las características mencionadas anteriormente en el
lavado de lavandería, pero que sepamos, previamente no ha sido
posible usar enzimas individuales que proporcionen todas estas
características cuando se aplican al lavado de lavandería.
Sorprendentemente, se ha descubierto que el uso
de ciertas celulasas sencillas que son capaces de llevar a cabo la
limpieza, anti-redeposición, clarificación del
color y que previenen la formación de bolitas en el lavado de
lavandería, no conlleva en absoluto un daño inaceptable para los
tejidos lavados.
Por consiguiente, la presente invención se
refiere al uso de una celulasa individual, que se puede obtener a
partir de Bacillus sp. CBS 669.93 o CBS 670.93, o un
derivado (definido en este documento) de dicha celulasa, con una
relación entre pérdida de resistencia a la tracción (TSL, como se
define en este documento) y propiedades contra la formación de
bolitas (AP, como se define en este documento) por debajo de 1 en
soluciones acuosas de lavado.
Medir la pérdida de resistencia a la tracción es
una forma de medir el daño provocado por la tensión mecánica o la
acción enzimática en las fibras. Se entenderá que para el propósito
de la presente invención, se tienen que usar fibras de algodón. El
método mide la resistencia a la tracción de fibras individuales en
condiciones de humedad. Esto se describe en la norma alemana DIN
53.857, parte 1, así como en la norma internacional ISO 2267.
Como el efecto normalmente se pone de manifiesto
en una dimensión significativa sólo después de aproximadamente 20 a
25 ciclos de lavado, siempre hay cierta pérdida de resistencia a la
tracción debido a las fuerzas mecánicas que actúan sobre la fibra
de algodón durante el proceso de lavado. Por lo tanto, tiene que
restarse la pérdida de resistencia a la tracción de un tejido de
control lavado sin celulasas usando la misma formulación de
detergente y el mismo tipo de lavadora automática y de programa de
lavado. Para calibrar los valores, se usa como patrón una
preparación de la endoglucanasa V (sencilla) de Humicola insolens
(EG V) en cantidades iguales de proteína enzimática en el detergente
y el valor de la pérdida de resistencia a la tracción para esta
muestra menos el valor del control de detergente sin celulasa se
toma como un TSL del 100%. Esta celulasa EG V se ha descrito, por
ejemplo, en la solicitud de patente internacional WO 91/17243. La
cantidad de proteína puede medirse, por ejemplo, usando el método
BCA Pierce como se describe por R.E. Brown et al. en Anal.
Biochem. 1989, vol. 180, p. 136 - 139.
Como comparación, puede usarse una preparación de
una celulasa de Bacillus mencionada anteriormente disponible
en Kao Corp. con el nombre comercial KAC® 500 o KAC® 700, que
ocasiona de forma general una pérdida de resistencia a la tracción
muy baja en comparación con el experimento de lavado de control sin
que esté presente la celulasa.
El ataque de las celulasas en microfibrillas
salientes, bolitas y pelusas de algodón presentes en la superficie
de un tejido de algodón da lugar a una eliminación ópticamente
visible de dichas bolitas. Para ensayar el efecto, los lavados
deben realizarse usando un detergente con y sin celulasa, como se
describe para la determinación de la TSL. El efecto contra la
formación de bolitas también puede observarse mejor después de
aumentar el número de ciclos de lavado. Por lo tanto, para
demostrar este efecto de las celulasas generalmente se usa un número
de 15 a 40 ciclos de lavado.
Hay tres métodos diferentes que pueden usarse
para la cuantificación de este efecto:
1. evaluación visual mediante un grupo de ensayo
(panel)
2. medición de la reflexión de la luz (valor L
del sistema CIELAB)
3. determinación de las pelusas de algodón
mediante medición óptica.
La determinación usando el valor L del sistema
CIELAB [Commission Internationale de l'Éclairage] se describió por
U. Hotz en Tenside Surf. Det. 1993, vol. 30, página 388.
El sistema de medición óptico, que se usa en el
método preferido para determinar las propiedades contra la
formación de bolitas, consta normalmente de una fuente de luz, un
tubo microscópico y una cámara de color CCD que registra la luz
reflejada desde la superficie de un tejido. Dependiendo de la
cantidad de bolitas y de pelusas en la superficie del tejido, cambia
la cantidad de luz reflejada medida mediante análisis de imágenes
digital. Tal sistema puede usarse para medir de forma cuantitativa
la cantidad de bolitas y pelusas en los tejidos, normalmente
después de 15 a 40 ciclos de lavado dependiendo del tipo y de la
actividad de la celulasa añadida al detergente. T.
Müller-Kirschbaum y H. Grundmann, en SÖFW, vol. 118
(1992), p. 483-499, han descrito un sistema óptico
que puede usarse para medir el grado de formación de bolitas.
Independientemente del método que se use para
determinar el efecto contra la formación de bolitas de la celulasa
a ensayar, la celulasa convencional EG V tiene que ensayarse en las
mismas condiciones y su efecto tiene que determinarse por el mismo
método, teniendo en cuenta el valor resultante del uso del
detergente sin celulasa. El valor obtenido para EG V se toma como AP
= 100%.
Como puede verse a partir de esta definición, la
celulasa EG V de Humicola insolens conocida tiene una proporción
entre TSL y AP de 1. Como la celulasa de Bacillus mencionada
anteriormente disponible en Kao Corp. con el nombre comercial KAC®
500 o KAC® 700 tiene un valor de AP bajo y un valor de TSL muy bajo,
puede verse que la proporción para esta celulasa también es de
aproximadamente 1. Las celulasas de acuerdo con la definición
proporcionada anteriormente que pueden usarse de acuerdo con la
invención, especialmente en detergentes, tienen una proporción
entre TSL y AP por debajo de 1 tanto como sea posible,
preferiblemente por debajo de 0,8 y más particularmente en el
intervalo de 0,001 a 0,5. Una proporción entre TSL y AP de, por
ejemplo, 0,5 significa que sólo se observa un 50% de pérdida de
resistencia a la tracción a una concentración de enzima que produce
el mismo efecto contra la formación de bolitas que la celulasa
convencional.
La solución acuosa de lavado comprende
preferiblemente celulasa de acuerdo con la definición proporcionada
anteriormente en concentraciones de 0,01 mg/l a 0,2 mg/l, más
particularmente de 0,015 mg/l a 0,1 mg/l. Estas concentraciones se
refieren al peso de la proteína celulolítica. Además, pueden estar
presentes todos los ingredientes encontrados normalmente en
soluciones de lavado.
Otro aspecto de la presente invención es el uso
de una celulasa individual de acuerdo con la definición
proporcionada anteriormente, con una proporción entre TSL y AP por
debajo de 1, para proporcionar un efecto contra el color grisáceo
en los tejidos, especialmente en tejidos teñidos.
En otro aspecto de la invención, se usa una
celulasa individual de acuerdo con la definición proporcionada
anteriormente con una proporción entre TSL y AP por debajo de 1
para proporcionar un efecto suavizante a los tejidos.
La presente invención también se refiere al uso
de una celulasa individual de acuerdo con la definición
proporcionada anteriormente con una proporción entre TSL y AP por
debajo de 1 para proporcionar la clarificación del color o para
inhibir el deterioro del color en tejidos, especialmente en tejidos
teñidos.
La presente invención también se refiere al uso
de una celulasa individual de acuerdo con la definición
proporcionada anteriormente, con una proporción entre TSL y AP de
por debajo de 1 para inhibir las arrugas de los tejidos y para
facilitar el planchado de los tejidos.
Hemos descubierto que el uso de una celulasa
individual de acuerdo con la definición de la invención, a
diferencia de las mezclas de celulasas conocidas previamente que
proporcionan la clarificación del color, no degradan el algodón
hasta un nivel no deseado ocasionando una pérdida de resistencia a
la tracción.
Además, se ha descubierto que usando una celulasa
de la definición de acuerdo con la invención, a diferencia de las
celulasas conocidas anteriormente que proporcionan la clarificación
del color, el enzima no se acumula en el tejido después de diversos
lavados de lavandería repetidos.
En otro aspecto, la invención se refiere a
composiciones de detergente, aditivos de detergente y composiciones
suavizantes de tejidos compuestas por una celulasa individual de
acuerdo con la definición proporcionada anteriormente.
Como se ha indicado anteriormente, la presente
invención se refiere en general al uso de nuevas celulasas. Sin
embargo, antes de describir esta invención con más detalle, se
definirán los siguientes términos:
"Celulasa" es un nombre genérico para
enzimas que actúan sobre la celulosa y sus derivados, y que los
hidrolizan hasta glucosa, celobiosa o celooligosacáridos.
La expresión celulasa "individual" usado en
este documento, pretende referirse a una celulasa que se produce
por un solo gen.
"Que se puede obtener a partir de" un
organismo con respecto a una celulasa significa que tal celulasa
tiene una secuencia de aminoácidos que corresponde a la secuencia
de aminoácidos de una celulasa que puede obtenerse a partir de ese
organismo.
"Derivado" pretende indicar una proteína que
procede de la proteína nativa mediante la adición de uno o más
aminoácidos en uno o en los dos extremos C y
N-terminales de la proteína nativa, mediante la
substitución de uno o más aminoácidos en uno o varios sitios
diferentes en la secuencia de aminoácidos nativa, mediante la
deleción de uno o más aminoácidos en uno o en los dos extremos de
la proteína nativa y en uno o más sitios en la secuencia de
aminoácidos, o mediante la inserción de uno o más aminoácidos en uno
o más sitios en la secuencia de aminoácidos nativa. La preparación
de un derivado normalmente se consigue mediante la modificación de
una secuencia de ADN que codifica la proteína nativa, la
transformación de un hospedador adecuado con dicha secuencia de ADN
y la expresión de la secuencia de ADN modificada para formar la
proteína derivada. El derivado de la invención incluye péptidos que
comprenden secuencias de aminoácidos alteradas en comparación con
una secuencia de aminoácidos de un enzima precursor (por ejemplo,
un enzima de tipo silvestre o en estado nativo de acuerdo con la
presente invención) y que retienen una naturaleza enzimática
característica del enzima precursor pero que tienen propiedades
alteradas en algunos aspectos específicos. Por ejemplo, una celulasa
alterada puede tener un mayor pH óptimo o una mayor resistencia a
la temperatura, pero mantendrá su actividad celulasa
característica. Los derivados también incluyen modificaciones
químicas de restos aminoacídicos en la molécula enzimática.
"Célula hospedadora" significa una célula
que tiene la capacidad de actuar como un hospedador y un vehículo
de expresión para un vector de ADN recombinante que comprende ADN
que codifica la proteína nativa o un derivado.
El término "limpieza" se refiere a la
eliminación de la suciedad asociada a la ropa.
El término "formación de bolitas" en este
sentido es la formación de bolitas y pelusas en la superficie de
los tejidos que contienen algodón debido a la presencia de fibras
rotas o desordenadas.
El término "contra la formación de bolitas"
se usa para describir la prevención de la formación de bolitas y
pelusas en la superficie de tejidos que contienen algodón, así como
la eliminación de las bolitas y las pelusas de los tejidos que
contienen algodón. El efecto contra la formación de bolitas
normalmente da como resultado una clarificación del color cuando se
tratan tejidos que contienen algodón teñidos.
La expresión "clarificación del color" en
este sentido es el re-establecimiento del aspecto
atractivo original de los tejidos teñidos que contienen o que
constan de fibras basadas en celulosa, que han desarrollado un
aspecto grisáceo mediante tratamiento, especialmente con
detergentes de lavandería, del tejido teñido.
El término "redeposición" en este sentido es
la deposición de suciedad o de componentes de color que se
retiraron de estos materiales textiles o tejidos durante un lavado
de lavandería o tratamiento textil.
El término
"anti-redeposición" en este sentido es la
acción de la celulasa para prevenir o reducir la redeposición de
suciedad y de componentes de color en el tejido.
Por una "solución de lavado" se entiende una
solución acuosa usada para lavar, aclarar o acondicionar, por
ejemplo, suavizar, tejidos.
En un aspecto preferido, la presente invención se
refiere al uso de una celulasa que puede obtenerse a partir de
microorganismos que se depositan de acuerdo con el Tratado de
Budapest en el International Rocognition of the Deposits of
Microorganisms for the Purposes of Patents Procedures, en el
Centraal Bureau voor Schimmelcultures, Baarn, los Países Bajos, el
23 de diciembre de 1993 con los números de depósito CBS 669.93 y
CBS 670.93 (descritos en la solicitud de patente internacional
WO-A-95/18219). Estas cepas se han
clasificado como nuevas especies del género Bacillus, que no
pertenecen a ninguno de los grupos de ARNr de Bacillus
conocidos en la actualidad. En este documento, las especies
depositadas se denominarán CBS 669.93 y CBS 670.93.
Los microorganismos pueden obtenerse, por
ejemplo, a partir de muestras de agua y de tierra recogidas en
medios alcalinos tales como tierras alcalinas y lagos con aguas
carbonatadas.
Los microorganismos se han identificado
posteriormente usando un ensayo de difusión en carboximetilcelulosa
(CMC)-agar. Las cepas que mostraron una zona clara
en este ensayo se aislaron como cepas productoras de celulasa
potenciales. Se construyeron bibliotecas de genes genómicos de las
cepas que producían celulasas tolerantes a álcali. Se identificaron
clones recombinantes mediante difusión en agar en
CMC-agar. Se aislaron clones recombinantes que
mostraron zonas claras alrededor de la colonia. Se produjeron
celulasas individuales por fermentación de los clones recombinantes
en medio 4*YEP durante 48 horas a 30ºC. Las celulasas individuales
obtenidas, purificadas opcionalmente como se describe en el ejemplo
1, se ensayaron en los ensayos definidos anteriormente para medir
TSL y AP.
Sorprendentemente, se descubrió que las celulasas
que podían obtenerse a partir de CBS 670.93 o CBS 669.93 mostraban
una buena actuación en ambos ensayos y tenían una proporción entre
TSL y AP menor que 1.
En una realización preferida de la invención, se
usa una celulasa de aproximadamente 50 kD (peso calculado basándose
en la secuencia de aminoácidos (SEC ID Nº 2) de la proteína madura)
derivada de CBS 670.93 (denominada en este documento "BCE
103"). Analizando el gen que codifica la secuencia de
aminoácidos de la celulasa de aproximadamente 50 kD, se ha puesto de
manifiesto que esta celulasa tiene una identidad de secuencia del
89% y una similitud de secuencia del 92,5% a la celulasa CelA de
Bacillus sp. N-4 (Fukumori et al., J.
Bacter., vol. 168, págs. 479-485) usando el
programa TFastA (Sequence Analysis Software Package 6.0 of Genetic
Computer Group. University of Wisconsin, Biotechnology Center,
Madison, Wisconsin) descrito por Pearson y Lipman en Proc. Nat.
Acad. Sci., vol. 85, págs. 2444-2448 (1988). La
presente invención incluye, además, el uso de celulasas con una
secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia mayor
que el 89%, preferiblemente mayor que el 95% y/o una similitud de
secuencia mayor que el 92,5%, preferiblemente mayor que el 97% con
la celulasa mencionada anteriormente, y detergentes que comprenden
dichas celulasas.
En una realización igualmente preferida de la
invención, se usa una celulasa de aproximadamente 63 kD (peso
calculado basándose en la secuencia de aminoácidos de la proteína
madura) derivada de CBS 669.93 (denominada en este documento "BCE
113"). Analizando el gen que codifica la secuencia de
aminoácidos de la celulasa de aproximadamente 63 kD, se ha puesto de
manifiesto que esta celulasa tiene una identidad de secuencia del
58% y una similitud de secuencia del 72% con la celulasa CelB de
Bacillus lautus (Jorgensen et al, Gene, vol. 93
(1990), págs. 55-60) usando el programa TFastA
(Sequence Analysis Software Package 6.0 of Genetic Computer Group,
University of Wisconsin, Biotechnology Center, Madison, Wisconsin)
como describen Pearson y Lipman en Proc. Nat. Acad. Sci., vol. 85
(1990), págs. 2444-2448. La secuencia de aminoácidos
de BCE 113 se proporciona en la SEC ID Nº 3. La presente invención
también incluye el uso de celulasas con una secuencia de aminoácidos
que tiene una identidad de secuencia mayor que el 58%,
preferiblemente mayor que el 80% y más particularmente mayor que el
90% y/o una similitud de secuencia mayor que el 72%, preferiblemente
mayor que el 80% y más particularmente mayor que el 90% con la
secuencia de celulasa mencionada anteriormente, y detergentes que
comprenden dichas celulasas.
Una celulasa que puede usarse en los detergentes
de acuerdo con la presente invención, además de tener una
proporción entre TSL y AP inferior a 1, normalmente funciona bien en
el ensayo de anti-redeposición descrito en el
ejemplo 5. El mantenimiento de la blancura de los tejidos blancos
se mide por medio de la medición de la reflectancia. Cuanto más alto
sea el valor de reflectancia, más eficaz será la celulasa ensayada
en el comportamiento anti-redeposición. También se
comportan bien en el ensayo de suavidad descrito en el ejemplo 5.
La eliminación de las bolitas es la eliminación de las fibrillas
y/o microfibras que están desordenadas y/o rotas, que normalmente
hacen que un tejido teñido que contiene algodón parezca grisáceo.
Cuantas más fibrillas rotas y/o desordenadas se eliminen, mejor
aspecto tendrán los tejidos teñidos que contienen algodón. La
eficacia de la eliminación de las bolitas puede evaluarse por
jurados o puede cuantificarse mediante un sistema de análisis de
imágenes, como se ha especificado anteriormente para la medición de
AP. Las celulasas que satisfacen el requisito de la proporción
definida anteriormente normalmente presentan las siguientes
propiedades: muestran un valor de REM delta de al menos 4 unidades,
preferiblemente de al menos 5 unidades, en el ensayo
anti-redeposición como se define en los ejemplos, y
muestran un resultado de eliminación de las bolitas al menos
comparable con el de la celulasa que se puede obtener a partir de
CBS 670.93.
Las celulasas que pueden usarse de acuerdo con la
presente invención pueden producirse por un proceso que puede
desarrollarse usando ingeniería genética. Como primera etapa, el
gen que codifica la celulasa de la presente invención puede clonarse
usando vectores (de expresión) del fago \lambda y células
hospedadoras E. coli. Como alternativa, puede usarse la
clonación por PCR usando cebadores consenso diseñados sobre
dominios conservados. Se demuestra que la expresión del gen que
codifica la celulasa de la presente invención en E. coli
proporciona una proteína activa.
Después de una primera etapa de clonación en
E. coli, el gen de celulasa puede transferirse a un
hospedador de expresión industrial más preferido tal como especies
de Bacillus o Streptomyces, un hongo filamentoso tal
como Aspergillus, o una levadura. El alto nivel de expresión
y secreción que se puede obtener en estos organismos hospedadores
permite la acumulación de la celulasa de la invención en el medio
de fermentación a partir del cual pueden recuperarse
posteriormente.
Las celulasas de acuerdo con la invención se usan
preferiblemente en cantidades de 8\cdot10^{-5}% en peso (0,8
ppm) a 8\cdot10^{-3}% en peso (80 ppm), más particularmente de
1\cdot10^{-4}% en peso (1 ppm) a 4\cdot10^{-3}% en peso (40
ppm), con respecto a la proteína celulolítica, en detergentes. Las
composiciones de detergentes que comprenden una celulasa definida de
acuerdo con la invención pueden comprender adicionalmente
tensioactivos que pueden ser de tipo aniónico, no aniónico,
catiónico, anfótero o bipolar, así como mezclas de estas clases de
tensioactivos. Las composiciones de detergentes de la invención
pueden contener otros ingredientes de detergentes conocidos en la
técnica, tales como, por ejemplo, aditivos, agentes blanqueadores,
activadores de blanqueado, agentes anti-corrosión,
agentes complejantes, polímeros de liberación de suciedad,
perfumes, otros enzimas, estabilizadores enzimáticos, etc.
Son aditivos adecuados, en particular, los de las
clases de ácidos policarboxilicos, más particularmente ácidos
acrílicos, ácidos metacrílicos y ácidos maleicos poliméricos,
copolímeros de los mismos y carbohidratos oxidados, como se
describen en la solicitud de patente internacional
WO-A-93/16110, silicatos
estratificados, más particularmente bentonitas, alumosilicatos, más
particularmente zeolitas, silicatos de metal alcalino cristalinos o
amorfos, más particularmente silicato sódico, y carbonatos de metal
alcalino, más particularmente carbonato sódico. Los ácidos
policarboxílicos mencionados normalmente se usan en forma de sus
sales de metal alcalino, más particularmente en forma de sus sales
de sodio o potasio. Las zeolitas incorporadas preferiblemente son,
en particular, las de tipo A, P o X o mezclas de las mismas. Son
silicatos de metal alcalino preferidos los que tienen relaciones
molares entre SiO_{2} y óxido de metal alcalino de 1,5 a 3,0. En
los detergentes de acuerdo con la invención, los aditivos tales
como éstos están presentes preferiblemente en cantidades de un 20%
en peso a un 80% en peso.
Los tensioactivos no iónicos pueden estar
presentes en los detergentes de acuerdo con la invención
preferiblemente en cantidades de no más del 10% en peso y, más
preferiblemente, en cantidades del 2% en peso al 6% en peso, con
respecto al detergente en total. Son tensioactivos no iónicos
adecuados alquil poliglucósidos que contienen de 10 a 22 átomos de
carbono en el componente alquilo y alcoxilatos, particularmente
etoxilatos y/o propoxilatos, de alcoholes lineales o ramificados
con 10 a 22 átomos de carbono, y preferiblemente con 12 a 18 átomos
de carbono. El grado de alcoxilación de los alcoholes está
comprendido entre 1 y 20 y preferiblemente entre 3 y 10. Pueden
prepararse de una forma conocida por reacción de los
correspondientes alcoholes con los correspondientes óxidos de
alquileno. Los derivados de alcohol graso son particularmente
adecuados, aunque pueden usarse sus isómeros de cadena ramificada,
más particularmente los denominados oxoalcoholes, para la producción
de alcoxilatos utilizables. Por consiguiente, son particularmente
útiles los etoxilatos de alcoholes primarios que contienen
radicales dodecilo, tetradecilo, hexadecilo u octadecilo lineales o
mezclas de los mismos. Además, también pueden usarse los
correspondientes productos de etoxilación y/o propoxilación de
alquilaminas, dioles vecinales y amidas de ácido carboxílico, que
corresponden a los alcoholes mencionados con respecto al componente
alquilo, y de alquil fenoles que contienen de 5 a 12 átomos de
carbono en el componente alquilo.
Son tensioactivos aniónicos adecuados, en
particular, los de tipo sulfato o sulfonato, aunque también pueden
usarse otros tipos tales como jabones, N-acil
sarcosinatos de cadena larga, sales de cianamidas de ácidos grasos
o sales de éter de ácidos carboxílicos, que pueden obtenerse a
partir de alquil o alquil fenil poliglicol éteres de cadena larga y
ácido cloroacético. Los tensioactivos aniónicos se usan
preferiblemente en forma de las sales de sodio. Los tensioactivos
están presentes, preferiblemente, en cantidades del 2% en peso al
30% en peso y, más preferiblemente, en cantidades del 5% en peso al
20% en peso.
Son tensioactivos particularmente adecuados del
tipo sulfato los monoésteres de ácido sulfúrico de alcoholes
primarios de cadena larga de origen natural y sintético que
contienen de 1 a 20 átomos de carbono, es decir, los monoésteres de
ácido sulfúrico de alcoholes grasos tales como, por ejemplo,
alcoholes grasos de aceite de coco, alcoholes grasos de sebo,
alcohol oleílico, o los oxoalcoholes con 10 a 20 átomos de carbono
y los de alcoholes secundarios de la misma longitud de cadena. Son
particularmente adecuados los monoésteres de ácido sulfúrico de
alcoholes primarios alifáticos, alcoholes secundarios y alquil
fenoles etoxilados con 1 a 6 moles de óxido de etileno. También son
adecuadas alcanolamidas de ácidos grasos sulfatadas y
monoglicéridos de ácidos grasos sulfatados.
Los tensioactivos de tipo sulfonato son
principalmente los alquilbenceno sulfonatos que contienen grupos
alquilo con 9 a 15 átomos de carbono, monoésteres y diésteres de
ácido sulfosuccínico que contienen de 6 a 22 átomos de carbono en
los componentes de alcohol y los ésteres de ácidos
a-sulfograsos, por ejemplo los metil o etil ésteres
a-sulfonados de aceite de coco hidrogenado, aceite
de semilla de palma o ácidos grasos de sebo. Otros tensioactivos
adecuados de tipo sulfonato son los alcano sulfonatos que se pueden
obtener a partir de alcanos con 12 a 18 átomos de carbono por
sulfocloración o sulfoxidación y posterior hidrólisis o
neutralización, o por adición de bisulfito a olefinas y también
olefina sulfonatos, es decir mezclas de alqueno e hidroxialqueno
sulfonatos y también disulfonatos que se obtienen, por ejemplo, a
partir de monoolefinas de cadena larga con un doble enlace terminal
o interno por sulfonación con trióxido de azufre gaseoso y
posterior hidrólisis alcalina o ácida de los productos de
sulfonación.
Los agentes blanqueadores se seleccionan
preferiblemente entre el tipo que contiene peroxígeno, como
peróxido de hidrógeno, perborato de álcali, percarbonato de álcali,
persilicato de álcali y/o persulfato de álcali. Se prefieren
particularmente el perborato sódico monohidrato y percarbonato
sódico. Los blanqueadores pueden estar presentes en cantidades de un
5% en peso a un 25% en peso, más particularmente de un 7% en peso a
un 20% en peso.
Los compuestos activadores de blanqueado
incluyen, en particular, compuestos de N- u
O-acilo, por ejemplo, alquilen diaminas
poliaciladas, más particularmente tetraacetil etilendiamina,
triazinas N-aciladas, más particularmente
1,5-diacetil-2,4-dioxohexahidro-1,3,5-triazina,
glicolurilos acilados, más particularmente tetraacetil glicolurilo,
hidantoínas N-aciladas, hidrazidas, triazoles,
urazoles, dicetopiperazinas, sulfuril amidas y cianuratos, también
anhídridos carboxílicos, más particularmente anhídrido ftálico,
ésteres de ácido carboxílico, más particularmente isononanoiloxi
benceno sulfonato sódico y derivados acilados de azúcares, más
particularmente pentaacetil glucosa. El activador de blanqueado
puede aplicarse como un recubrimiento de la forma habitual con
substancias que forman envueltas o puede granularse, usando
opcionalmente adyuvantes de granulación, y si se desea puede
contener otros aditivos, por ejemplo un colorante. Preferiblemente
se usa un activador de blanqueado que forma ácidos
peroxocarboxílicos con 2 a 12 átomos de carbono, en particular ácido
peroxoacético, en las condiciones de lavado. Un activador de
blanqueo particularmente preferido es tetraacetil etilendiamina
(TAED) granulada con carboximetil celulosa con un tamaño medio de
partículas de 0,01 mm a 0,8 mm, que puede producirse por el proceso
descrito en la Patente Europea
EP-B-0 037 026. Además de los
activadores de blanqueo mencionados anteriormente, o incluso
substituyéndolos, pueden usarse los denominados catalizadores de
blanqueado, que son complejos de metales de transición, por ejemplo
como se describe en
Son enzimas que pueden estar presentes en los
detergentes de acuerdo con la invención, además de la celulasa de
acuerdo con la definición, proteasas, lipasas, cutinasas, amilasas,
pululanasas, otras celulasas, hemicelulasas, xilanasas, oxidasas y/o
peroxidasas. Pueden estar presentes en cantidades de hasta un 5% en
peso, preferiblemente de un 0,2% en peso a un 2% en peso.
Las composiciones de detergente de la invención
pueden formularse de cualquier forma conveniente, por ejemplo en
forma de un polvo o líquido. Para la producción de detergentes con
alta densidad aparente de, por ejemplo, 650 g/l a 950 g/l, se
prefiere un método que use una etapa de extrusión, como se describe
en la patente europea EP-B-0 486
592.
Las composiciones suavizantes de tejidos que
comprenden la celulasa de la invención pueden comprender además de
esta celulasa tensioactivos catiónicos, preferiblemente del tipo
denominado esterquat, que pueden suavizar los tejidos y que pueden
aumentar las propiedades suavizantes de tejidos de las
composiciones.
Se aplicaron dos métodos para el aislamiento de
microorganismos productores de celulasa:
- 1)
- las muestras de tierra y agua se suspendieron en solución salina al 0,85% y se usaron directamente en el ensayo de difusión en carboximetil celulosa (CMC)-agar para la detección de colonias productoras de celulasa.
- 2)
- las muestras de tierra y agua se enriquecieron con respecto a cepas que contenían celulasa por incubación en un medio mínimo líquido que contenía celulosa o medio GAM durante 1 a 3 días a 40ºC. En los cultivos que mostraron crecimiento bacteriano se analizó la actividad celulasa usando el ensayo de difusión en CMC-agar para la detección de colonias productoras de celulasa.
Las cepas que mostraron zonas claras en el ensayo
de difusión en agar se fermentaron en 25 mililitros de medio GAM en
matraces de agitación de 100 mililitros en un agitador incubador
(New Brunswick Scientific, Edison, NJ, Estados Unidos), a 250 r.p.m
a 40ºC durante 72 horas. Se determinó la actividad CMCasa en el
caldo de cultivo a pH 9 y a 40ºC.
Se construyeron bibliotecas de genes genómicos de
las cepas productoras de celulasas tolerantes a álcali en el
plásmido pTZ18R (Mead, D.A. et al. (1986) Protein Engineering
1, 67). Se seleccionaron clones recombinantes por difusión en agar
en CMC-agar como se describe por Wood, P.J. et
al. (1988) Methods in Enzymology 160, 59-74. Se
aislaron cepas que mostraron zonas claras alrededor de la colonia.
La actividad CMCasa de las cepas recombinantes se determinó después
de la fermentación durante 48 horas a 30ºC en medio 4*YEP. Se aisló
el ADN plasmídico de las cepas recombinantes y los insertos se
caracterizaron por análisis de enzimas de restricción y análisis de
la secuencia de nucleótidos.
El medio mínimo (pH 9,7) usado en el ensayo de
difusión en CMC-agar y en el procedimiento de
enriquecimiento, constaba de KNO_{3} al 1%, extracto de levadura
(Difco) al 0,1%, KH_{2}PO_{4} al 0,1%,
MgSO_{4}\cdot7H_{2}O al 0,02%, Na_{2}CO_{3} al 1%, NaCl al
4% y 0,25% de CMC (Sigma C-4888). Para la
solidificación se añadió agar al 1,5%.
El medio de complejo (GAM) usado para la
producción del enzima de las cepas donadoras constaba de Peptona
(Difco) al 0,5%, extracto de levadura (Difco) al 0,5%, glucosa.
H_{2}O al 1%, KH_{2}PO_{4} al 0,1%, MgSO_{4}.7H_{2}O al
0,02%, Na_{2}CO_{3} al 1%, NaCl al 4%. El pH se ajustó a 9,5
con HCl 4 M, después de lo cual se añadió CMC al 1%.
El medio de complejo (4*YEP) usado para la
producción del enzima en cepas recombinantes de E. coli
constaba de extracto de levadura (Difco) al 4%, Peptona (Difco) al
8%, lactosa al 0,2% y 100 \mug/ml de ampicilina.
Se colocaron en placas suspensiones celulares en
solución salina al 0,85% sobre medio mínimo que contenía CMC.
Después de un período de incubación de 1 a 3 días a 40ºC, las
placas se replicaron y la placa parental se inundó con Rojo Congo al
0,1% durante 15 minutos. Las placas se destiñeron con NaCl 1 M
durante 30 minutos. Las cepas que mostraron una zona clara alrededor
de la colonia se aislaron como microorganismos productores de
celulasas potenciales.
Se pipetearon alícuotas de 40 \mul de solución
enzimática o caldo de fermentación en pocillos perforados en una
capa de 5 mm de medio mínimo en una placa petri. Después de un
período de incubación de 16 horas a 40ºC, la actividad celulasa se
detectó mediante tratamiento con Rojo Congo/NaCl. El diámetro de la
zona clara es una medida de la actividad CMCasa.
Estos experimentos dieron lugar al aislamiento de
un microorganismo productor de celulasa que se depositó
posteriormente como CBS 670.93. El microorganismo se clasificó como
una nueva especie del género Bacillus. Los experimentos de
clonación con la cepa CBS 670.93 como cepa donadora dieron lugar al
aislamiento de un clon de E. coli que pudo producir una
celulasa denominada BCE 103. Se analizó la secuencia de nucleótidos
del gen que codificaba dicha celulasa. A partir de la celulasa BCE
103, se determinó la secuencia de aminoácidos
N-terminal usando métodos convencionales para
obtener y secuenciar péptidos (Finlay & Geisow (Eds.), Protein
Sequencing - a practical approach, 1989, IRL Press). La secuencia
de aminoácidos de la celulasa se dedujo a partir de la secuencia de
nucleótidos, usando la secuencia de aminoácidos
N-terminal para el punto de partida de la proteína
madura.
La secuencia de nucleótidos para BCE 103 se
muestra en la SEC ID Nº 1 y la secuencia de aminoácidos se muestra
en la SEC ID Nº 2.
Después de la fermentación, las células se
separaron del líquido de cultivo por centrifugación (8000 rpm). La
celulasa presente en el sobrenadante se precipitó con sulfato
amónico (65% de saturación). El precipitado se disolvió en tampón
fosfato 25 mM pH 7 + EDTA 5 mM hasta una conductividad de 7 mS/cm.
Esta solución se aplicó a una columna de intercambio aniónico
Q-Sepharose FF (5 cm de diámetro, 10 cm de
longitud), después de lo cual la columna se lavó con tampón fosfato
25 mM pH 7 + EDTA 5 mM hasta una absorbancia de 0,2 AU. Se aplicó
un gradiente de NaCl 0 a 0,5 M en fosfato 25 mM pH 7 a la columna
en 80 minutos seguido de un gradiente de NaCl 0,5 a 1 M en 10
minutos. Dependiendo de la celulasa aplicada a la columna, la
elución tuvo lugar en el primer o segundo gradiente. Después de la
elución, la columna se limpió (con flujo ascendente) con NaOH 1 M y
se volvió a equilibrar con fosfato 25 mM pH 7 + EDTA 5 mM.
Dependiendo de la elución, la celulasa obtenida tuvo una pureza de
hasta aproximadamente un 80%.
Los ensayos con respecto a la actividad celulasa
se realizaron usando métodos modificados del método PAHBAH (Lever
M. Anal. Biochem. 1972, 47, 273-279 y Lever
M. Anal. Biochem 1977, 81, 21-27).
Se llena un tubo de ensayo con 250 \mul de CMC
al 2,5% en tampón glicina 50 mM pH 9 (la CMC de baja viscosidad se
adquiere en Sigma) y alícuotas de 250 \mul de celulasa, diluida
en el tampón apropiado. El tubo de ensayo se incuba durante 30
minutos a 40ºC en un baño de agua, después de lo cual se añaden 1,5
ml de una solución PAHBAH preparada diariamente (PAHBAH al 1% en 100
ml de NaOH 0,5 M con 100 \mul de solución de bismuto (que
contiene 48,5 g de nitrato de bismuto, 28,2 g de tartrato sódico
potásico y 12,0 g de NaOH en 100 ml). La mezcla se calienta a 70ºC
durante 10 minutos, después de lo cual se enfría en hielo durante 2
minutos. Se mide la absorción a 410 nm. Para eliminar la
absorbancia de fondo de las muestras enzimáticas, se realiza un
experimento de control como se indica a continuación: se incuba un
tubo con substrato en las mismas condiciones que el tubo de ensayo.
Después de la incubación, se añaden 1,5 ml de PAHBAH y la
preparación enzimática (en este orden). Una unidad (U) se define
como la cantidad de enzima que produce 1 \mumol de glucosa a
partir de CMC equivalente determinada como reducción de azúcares
por minuto y por gramo de producto.
El tampón usado para la determinación de los
perfiles de pH/temperatura es un sistema fosfato/citrato. Los
perfiles de pH/temperatura se determinaron usando una concentración
enzimática fija que se ajusta en el intervalo lineal del perfil de
respuesta a la dosis medido a un pH 7 y a 40ºC. Esta concentración
enzimática se usó para la medición de las actividades estando
determinadas todas las demás condiciones.
Los resultados para la celulasa BCE 103 se
muestran en la figura 1. Esta celulasa muestra buena actividad a pH
alcalino, lo que hace que sea adecuada para aplicación en
detergentes con un pH alcalino.
Los procedimientos similares comenzando con la
cepa de Bacillus alcalófila CBS 669.93 produjeron la
celulasa BCE 113. Los resultados para esta celulasa BCE 113 se
muestran en la figura 2. Esta celulasa también muestra buena
actividad a pH alcalino, lo que hace que sea adecuada para la
aplicación en detergentes con un pH alcalino.
Como se describe para la evaluación de TSL, se
realizaron experimentos de lavado usando como matriz de detergente
un detergente de color sin blanqueador, sin perfume y sin enzimas
(105 g de detergente por ciclo de lavado, pH 10,5), y como lavadora
automática una de tipo Miele® W 717, temperatura 40ºC, programa
"normal", con agua de una dureza de 16º dH (dureza alemana),
carga de lavado de 3,5 kg, 25 lavados.
Se realizaron en paralelo en máquinas idénticas
experimentos que usaron una composición de acuerdo con la invención
(D1) así como comparaciones (C1 a C3):
C1: matriz de detergente sin celulasa
C2: matriz de detergente + 0,288 mg de
endoglucanasa V procedente de Humicola insolens
C3: matriz de detergente + mezcla de celulasa
procedente de Humicola insolens vendidos como gránulos
Celluzyme® 0,7 T
Celluzyme® 0,7 T
D1: matriz de detergente + 0,288 mg de celulasa
BCE 103
D2: matriz de detergente + 0,288 mg de celulasa
BCE 113
| Composición | TSL |
| C1 | 0 |
| C2 | 100 |
| C3 | 38 |
| D1 | 12 |
El uso de lavadoras automáticas de tipo Miele® W
914, en condiciones por lo demás idénticas, dio los siguientes
resultados:
| Composición | TSL |
| C1 | 0 |
| C2 | 100 |
| D2 | 0,6 |
La evaluación de las propiedades contra la
formación de bolitas se realizó con concentraciones crecientes de
celulasas para conseguir una mejor evaluación cuantitativa del
efecto. Se usó un detergente de color (5 g/l, 10 ciclos de lavado a
40ºC) con la adición de celulasa como se muestra en la tabla 3 en
una sudadera de algodón con "bolitas" (lavada 25 veces a 60ºC
con un detergente sin celulasa). La evaluación de la formación de
las bolitas se realizó con el sistema de medición óptico descrito
anteriormente; al material con "bolitas" se le asignó un grado
de formación de bolitas del 0%.
| Concentración de | grado de formación de bolitas | AP [%] de BCE 103 | |
| enzima | EG V | BCE 103 | |
| 25 \mug/ml | -12,8% | -8,4% | 65% |
| 37,5 \mug/ml | -16,0% | -9,6% | 59% |
| 50 \mug/ml | -22,8% | -15,6% | 68% |
Para la celulasa BCE 103, puede calcularse una AP
media del 64%. La celulasa BCE 113 mostró en las mismas condiciones
una AP media del 100%.
Usando los valores para la TSL en las tablas 1 y
2, las proporciones entre TSL y AP para las diversas celulasas son
como se muestran en la siguiente tabla 4:
| Enzima | Proporción |
| EG V | 1 |
| BCE 103 | \approx 0,2 |
| BCE 113 | \approx 0,02 |
Se incubaron, con agitación (90 rpm) con un
tejido de algodón blanco (prelavado, 5 cm de diámetro, obtenido en
Windelbleiche, Krefeld) 20 ml de tierra pigmentada al 0,5% (recién
preparada, diariamente y compuesta de caolín al 86%, hollín al 8%
(Flammru\beta 101, obtenido en Degussa AG), óxido de hierro negro
al 4% y óxido de hierro amarillo al 2% (de Henkel Genthin GmbH)), en
un detergente (Persil color® sin enzimas, 5 g/l, pH 8,5). Se añadió
celulasa hasta una concentración final de 1 mU/ml. La mezcla se
incubó durante 30 minutos a 40ºC, 90 rpm. Como control, se realizó
la misma incubación sin la adición de celulasa. Después de la
incubación, el tejido se aclaró meticulosamente con agua corriente
fría. Después del secado, se midió la blancura del tejido por
remisión (4 mediciones por tejido) usando un colorímetro Micro
colour Dr. Lange®. El valor de control se restó del valor de la
muestra. Los resultados, expresados como Rem delta, se muestran en
la tabla 5.
Se incubó una bola de algodón (100% algodón,
Warenhandels GmbH, Buchholz, Marke Olivia, agencia de venta: Aldi)
en 40 ml de líquido de lavado (Persil color® sin enzima, 5 g/l pH
8,5), se añadió celulasa hasta una concentración final de 1 mU/ml en
un matraz cerrado herméticamente y se incubó durante 20 horas a
40ºC con agitación (90 rpm). Después de la incubación, se controló
el daño en las fibras midiendo la cantidad de azúcares reductores
en la solución, usando el método PAHBAH descrito en el ejemplo 1.
Como control, se realizó la misma incubación sin la adición de
celulasa. Los resultados se muestran en la tabla 5.
Se recortaron piezas de tejido de algodón blanco
(Windelbleiche, Bielefeld) de aproximadamente 9 cm de diámetro
(aproximadamente 0,920 gramos) prelavado con Persil® alemán sin
enzimas a 60ºC. Se incubó una muestra de algodón en 50 ml de tampón
glicina-NaOH 50 mM pH 9 que incluía SDS al 0,1% y 1
ml de muestra de celulasa (600 mU/ml) durante 60 minutos a 30ºC. Se
tomaron muestras de 2 ml a T=0 y a T=60 minutos y se diluyeron
directamente (1:2) con tampón MES 50 mM pH 6,5 y se almacenaron a
4ºC hasta la medición. Como control, se realizó la misma incubación
sin la adición del tejido de algodón. La medición de la actividad
se determinó con un método PAHBAH como se describe en el ejemplo 3,
pero a pH 6,5 en tampón MES 50 mM. La adsorción se expresó como
adsorción relativa donde la actividad aplicada al comienzo del
experimento se estableció como 100%, T=0. Valor de la actividad al
100% - actividad restante (%) = adsorción (%). Los resultados se
muestran en la tabla 5.
| Enzima | Anti-redeposición | Daño en las Fibras | Adsorción [%] |
| [REM delta] | [mU] | ||
| BCE 103 | 5,0 | 0,025 | 7 |
| KAC®^{a)} | 7,5 | 0,006 | 0 |
| EG V | 1,2 | 0,155 | 36 |
| a): Celulasa de Kao Corporation |
La celulasa BCE 113 se comportó en estos ensayos
al menos tan bien como la celulasa BCE 103.
La suavidad de los tejidos tratados como en el
ejemplo 3, pero después de 15 ciclos de lavado, se evaluó por un
jurado de expertos (5 personas) que adjudicaron valores entre 0
(tejido lavado 25 veces con un detergente sin celulasa) y 6 (tejido
antes de cualquier lavado) por el tacto de los tejidos. En los
lavados se usaron composiciones como se definen en el ejemplo 2. Las
proporciones medias se proporcionan en la tabla 6. Puede observarse
que las composiciones de acuerdo con la invención mostraron el
mejor comportamiento.
| Composición | Proporción |
| C1 | 0 |
| C2 | 2,1 |
| C3 | 1,5 |
| D1 | 2,3 |
| D2 | 2,2 |
La figura 1 muestra las actividades relativas de
la celulasa BCE 103. En el ejemplo 1, esta figura se refiere a los
perfiles de pH/temperatura. Todas las actividades para 40 y 60ºC
están relacionadas con la mayor actividad que se fija en el
100%.
La figura 2 muestra las actividades relativas de
la celulasa BCE 113.
La figura 3 muestra la secuencia de ADN (SEC ID
Nº 1) y la secuencia de aminoácidos deducida (SEC ID Nº 2) de la
celulasa de 50 kD procedente de CBS 670.93 con la secuencia
peptídica líder sombreada, que tras la secreción se escinde para
producir el enzima maduro.
La figura 4 muestra la secuencia de ADN (SEC ID
Nº 4) y la secuencia de aminoácidos deducida (SEC ID Nº 3) de la
celulasa de 63 kD derivada de CBS 669.93 con la secuencia peptídica
líder subrayada, que tras la secreción se escinde para producir el
enzima maduro.
Claims (17)
1. Uso de una celulasa individual, que puede
obtenerse a partir de Bacillus sp. CBS 669.93 o CBS 670.93,
o un derivado de dicha celulasa, con una proporción entre la
pérdida de resistencia a la tracción (TSL) y las propiedades contra
la formación de bolitas (AP) inferior a 1 en soluciones acuosas de
lavado.
2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1,
caracterizado porque la solución acuosa de lavado comprende
la celulasa en concentraciones de 0,01 mg/l a 0,2 mg/l, más
particularmente de 0,015 mg/l a 0,1 mg/l.
3. Uso de una celulasa individual de acuerdo con
la reivindicación 1, para proporcionar un efecto contra la
adquisición de color grisáceo en tejidos, especialmente en tejidos
teñidos.
4. Uso de una celulasa individual de acuerdo con
la reivindicación 1, para proporcionar un efecto suavizante a los
tejidos.
5. Uso de una celulasa individual de acuerdo con
la reivindicación 1, para proporcionar clarificación de color a
tejidos, especialmente a tejidos teñidos.
6. Uso de una celulasa individual de acuerdo con
la reivindicación 1, para inhibir el deterioro de color de tejidos,
especialmente de tejidos teñidos.
7. Uso de una celulasa individual de acuerdo con
la reivindicación 1, para inhibir la formación de arrugas en
tejidos y para facilitar el planchado de tejidos.
8. Uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la proporción
entre TSL y AP está por debajo de 0,8.
9. Uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque la proporción
entre TSL y AP está en el intervalo de 0,001 a 0,5.
10. Uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la celulasa
tiene la secuencia de aminoácidos indicada a continuación o un
derivado de la misma:
11. Uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la celulasa
tiene la secuencia de aminoácidos indicada a continuación o un
derivado de la misma:
12. Uso de acuerdo con la reivindicación 10 u 11,
caracterizado porque la celulasa tiene una secuencia de
aminoácidos con una identidad de secuencia mayor que el 58% con la
secuencia de aminoácidos proporcionada en la reivindicación 10 y/o
en la reivindicación 11.
13. Uso de acuerdo con la reivindicación 10 u 11,
caracterizado porque la celulasa tiene una secuencia de
aminoácidos con una identidad de secuencia mayor que el 80% con la
secuencia de aminoácidos proporcionada en la reivindicación 10 y/o
en la reivindicación 11.
14. Uso de acuerdo con la reivindicación 10 u 11,
caracterizado porque la celulasa tiene una secuencia de
aminoácidos con una identidad de secuencia mayor que el 90% con la
secuencia de aminoácidos proporcionada en la reivindicación 10 y/o
en la reivindicación 11.
15. Una composición detergente que comprende una
celulasa individual, que puede obtenerse a partir de
Bacillus sp. CBS 669.93 o CBS 670.93, o un derivado de dicha
celulasa, con una proporción entre la pérdida de resistencia a la
tracción (TSL) y las propiedades contra la formación de bolitas
(AP) inferior a 1 en soluciones acuosas de lavado.
16. Una composición detergente de acuerdo con la
reivindicación 15, caracterizada porque comprende de 0,8 ppm
a 80 ppm de la celulasa.
17. Una composición detergente de acuerdo con la
reivindicación 15, caracterizada porque comprende de 1 ppm a
40 ppm de la celulasa.
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| JP4068167B2 (ja) * | 1997-07-04 | 2008-03-26 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | ポリエステル布帛を処理する方法 |
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| DE69829308T2 (de) * | 1997-11-19 | 2006-05-11 | Genencor International, Inc., Palo Alto | Cellulase aus actinomycetes und herstellungsverfahren dafür |
| US6190899B1 (en) | 1997-11-19 | 2001-02-20 | Genencor International, Inc. | Cellulase producing actinomycetes, cellulase produced therefrom and method of producing same |
| AU755850B2 (en) | 1998-06-10 | 2002-12-19 | Novozymes A/S | Novel mannanases |
| JP4392778B2 (ja) * | 1998-06-24 | 2010-01-06 | ジェネンコア インターナショナル インコーポレーテッド | 新規なセルラーゼを産生する放線菌、その放線菌が産生するセルラーゼ、およびそのセルラーゼを作成する方法。 |
| US6426328B2 (en) | 1998-10-27 | 2002-07-30 | Unilever Home & Personal Care, Usa Division Of Conopco Inc. | Wrinkle reduction laundry product compositions |
| US6403548B1 (en) | 1998-10-27 | 2002-06-11 | Unilever Home & Personal Care Usa, Division Of Conopco, Inc. | Wrinkle reduction laundry product compositions |
| US6376456B1 (en) | 1998-10-27 | 2002-04-23 | Unilever Home & Personal Care Usa, Division Of Conopco, Inc. | Wrinkle reduction laundry product compositions |
| DE19850100A1 (de) | 1998-10-29 | 2000-05-04 | Henkel Kgaa | Polymer-Granulate durch Wirbelschichtgranulation |
| DE10102248A1 (de) | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Clariant Gmbh | Verwendung von Übergangsmetallkomplexen mit Oxim-Liganden als Bleichkatalysatoren |
| EP1241112A3 (en) | 2001-03-15 | 2003-02-26 | The Procter & Gamble Company | Flexible multiple compartment pouch |
| US6624131B2 (en) | 2001-11-27 | 2003-09-23 | Unilever Home & Personal Care Usa Division Of Conopco, Inc. | Wrinkle reduction laundry product compositions |
| DE10257387A1 (de) | 2002-12-06 | 2004-06-24 | Henkel Kgaa | Mehrkomponenten-Flüssigwaschmittel |
| DE10260903A1 (de) | 2002-12-20 | 2004-07-08 | Henkel Kgaa | Neue Perhydrolasen |
| JP4757191B2 (ja) * | 2003-04-30 | 2011-08-24 | ジェネンコー・インターナショナル・インク | 新規なバチルスｍＨＫｃｅｌセルラーゼ |
| DE10360805A1 (de) | 2003-12-23 | 2005-07-28 | Henkel Kgaa | Neue Alkalische Protease und Wasch- und Reinigungsmittel, enthaltend diese neue Alkalische Protease |
| DE102004047776B4 (de) | 2004-10-01 | 2018-05-09 | Basf Se | Gegen Di- und/oder Multimerisierung stabilisierte Alpha-Amylase-Varianten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung |
| DE102004047777B4 (de) | 2004-10-01 | 2018-05-09 | Basf Se | Alpha-Amylase-Varianten mit erhöhter Lösungsmittelstabilität, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung |
| DE102005053529A1 (de) | 2005-11-08 | 2007-06-21 | Henkel Kgaa | System zur enzymatischen Generierung von Wasserstoffperoxid |
| DE102006038448A1 (de) | 2005-12-28 | 2008-02-21 | Henkel Kgaa | Enzym-haltiges Reinigungsmittel |
| DE102006055669A1 (de) | 2006-11-23 | 2008-07-17 | Henkel Kgaa | Enzymzubereitung mit trägergebundenen Antioxidationsmitteln |
| DE102007003143A1 (de) | 2007-01-16 | 2008-07-17 | Henkel Kgaa | Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease |
| DE102007008655A1 (de) | 2007-02-20 | 2008-08-21 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Siderophor-Metall-Komplexe als Bleichkatalysatoren |
| DE102007010785A1 (de) | 2007-03-02 | 2008-09-04 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Verwendung von Superoxid-Dismutasen in Wasch- und Reinigungsmitteln |
| DE102007017656A1 (de) | 2007-04-12 | 2008-10-16 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Biheteroaryl-Metallkomplexe als Bleichkatalysatoren |
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| DE102007017654A1 (de) | 2007-04-12 | 2008-10-16 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Bis(hydroxychinolin)-Metallkomplexe als Bleichkatalysatoren |
| DE102007028310A1 (de) | 2007-06-20 | 2008-12-24 | Clariant International Ltd. | Tensidmischungen mit synergistischen Eigenschaften |
| DE102007040326A1 (de) | 2007-08-24 | 2009-02-26 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Wäschevorbehandlungsmittel und -verfahren |
| DE102007049830A1 (de) | 2007-10-16 | 2009-04-23 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Neue Proteinvarianten durch zirkulare Permutation |
| DE102007051092A1 (de) | 2007-10-24 | 2009-04-30 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Subtilisin aus Becillus pumilus und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend dieses neue Subtilisin |
| BRPI0821874A2 (pt) * | 2008-01-04 | 2015-06-23 | Procter & Gamble | Uso de uma celulase para conferir benefícios de liberação de sujeira ao algodão durante um processo de lavanderia subsequente |
| DE102008013606A1 (de) | 2008-03-11 | 2009-09-17 | Clariant International Ltd. | Verfahren zur Herstellung fester Erdalkalimetallsalze sekundärer Paraffinsulfonsäuren |
| DE102008027375A1 (de) | 2008-06-09 | 2009-12-10 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Bacitracin-Metall-Komplexe als Bleichkatalysatoren |
| DE102011010818A1 (de) | 2011-02-10 | 2012-08-16 | Clariant International Ltd. | Verwendung von Übergangsmetallkomplexen als Bleichkatalysatoren in Wasch- und Reinigungsmitteln |
| EP2744898A1 (en) * | 2011-08-15 | 2014-06-25 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulase activity and polynucleotides encoding same |
| DE102014009836B4 (de) | 2014-07-03 | 2017-04-06 | Weylchem Wiesbaden Gmbh | Natriumsalze sekundärer Alkansulfonate enthaltende Compounds, ihre Herstellung und Verwendung sowie Wasch-, Desinfektion- und Reinigungsmittel enthaltend diese |
| WO2017037097A1 (en) * | 2015-09-01 | 2017-03-09 | Novozymes A/S | Laundry method |
| DE102016201173A1 (de) | 2016-01-27 | 2017-07-27 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Verbessertes Anti-Pilling auf Polyester Textilien durch Einsatz einer Cutinase |
| DE102016208408A1 (de) | 2016-05-17 | 2017-11-23 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend eine Polyethylenterephthalat Hydrolase |
| EP3412761A1 (en) * | 2017-06-07 | 2018-12-12 | Henkel AG & Co. KGaA | Anti-pilling laundry sheet |
| DE102017214870A1 (de) | 2017-08-24 | 2019-03-14 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Verbesserte Pflegeeigenschaften von Polyester Textilien II |
| DE102018210605A1 (de) | 2018-06-28 | 2020-01-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Mittel enthaltend rekombinante Polyesterase |
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| EP3699272A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-26 | Henkel AG & Co. KGaA | Improved caring properties on polyester textiles by use of a cutinase |
| BR112022005889A2 (pt) * | 2019-09-29 | 2022-06-21 | Novozymes As | Usos de desoxirribonuclease em composição detergente |
| WO2023274925A1 (en) | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Cleaning composition with improved anti-gray performance and/or anti-pilling performance |
| KR20240027617A (ko) | 2021-06-30 | 2024-03-04 | 헨켈 아게 운트 코. 카게아아 | 폴리에스테라제 활성을 갖는 지질분해 효소를 포함하는 세정 조성물 |
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Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4822516A (en) * | 1986-12-08 | 1989-04-18 | Kao Corporation | Detergent composition for clothing incorporating a cellulase |
| US5741693A (en) * | 1992-07-02 | 1998-04-21 | Novo Nordisk A/S | Alkalophilic bacillus SP. AC13 and protease, xylanase, cellulase obtainable therefrom |
| CN1102531A (zh) * | 1993-02-18 | 1995-05-10 | 明治制菓株式会社 | 纤维素酶制剂以及用其处理纤维素系纤维的方法 |
| CZ11096A3 (en) * | 1993-07-12 | 1996-06-12 | Novo Nordisk As | Detergent containing two cellulase components, a detergent ingredient and method of treating clothes |
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