MXPA99003713A - Celulasa obtenible de thermomonospora fusca parautilizarse en procesos industriales - Google Patents

Abstract

Se describe un método para tratar materiales celulósicos que comprende poner en contacto el material celulósico con una celulasa obtenible de Thermomonospora fusca correspondiente a E5 o un derivado de la misma. Los métodos particularmente preferidos comprenden el lavado a la piedra y limpieza detergente de tejidos de algodón, la producción de productos de papel, como un aditivo para alimentación animal y en la producción de alimento, almidón, etanol y azúcar.

Description

CELULASA OBTENIBLE DE THERMOMONOSPORA FUSCA PARA UTILIZARSE EN PROCESOS INDUSTRIALES ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención está dirigida a métodos que comprenden el uso de celulasas en procesos industriales y a composiciones para éstas. En particular, la presente invención está relacionada a tratar textiles, por ejemplo, lavado y procesado, con celulasa derivada de Thermomonospora fusca , la cual es particularmente apropiada para ese propósito. La presente invención está relacionada además al uso de celulasa derivada de Th ermomon ospora fusca para mejorar la digestibilidad de alimento para animales, en detergentes, en el tratamiento de pulpa y papel y en la producción de almidón y el tratamiento de productos secundarios de los mismos. Las celulasas son enzimas que hidrolizan celulosa (enlaces ß-1 , 4-D-glucano) y producen como productos primarios glucosa, celobiosa y celooligosacáridos . Las celulasas son producidas por un número de microorganismos y comprenden varias diferentes clasificaciones de enzimas, incluyendo aquellas identificadas como exo-celobiohidrolasas REF.: 30012 (CBH) , endoglucanasas (EG) y ß-glucosidasas (BG) (M. Schulein, Methods in Enzymology, vol. 160, pp . 235-242 (1988)). La teoría actual sostiene que las enzimas con estas clasificaciones pueden ser separadas en componentes individuales. Por ejemplo, las composiciones de celulasa microbiana pueden consistir de uno o más componentes de CBH, uno o más componentes de EG y posiblemente ß-glucosidasa. El sistema completo de celulasa que comprende componentes de CBH, EG y BG actúa sinergísticamente para convertir la celulosa cristalina a glucosa. Las exo-celobiohidrolasas y las endoglucanasas actúan juntas para hidrolizar celulosa a celo-oligosacáridos pequeños. Los oligosacáridos (principalmente celobiosas) son subsecuentemente hidrolizadas a glucosa por una ß-glucosidasa principal. Las celulasas y componentes de las mismas, utilizadas ya sea individualmente o en combinación, se sabe que son útiles en composiciones de detergentes y para tratar textiles. En la industria textil, durante o poco después de la manufactura de tejidos que contienen algodón, es conocido tratar tales tejidos con celulasa para impartir propiedades deseables al tejido. Un propósito de este tratamiento es eliminar la pelusa, es decir, extremos de fibra desenredados que sobresalen de la superficie de un hilo o tejido, y pelotas, es decir manojos o esferas de fibras enredadas que se adhieren a la superficie de un tejido por una más fibras. Por consiguiente, en la industria textil, la celulasa se ha utilizada para mejorar el sensación y/o apariencia de tejidos que contienen algodón, para eliminar fibras superficiales de tejidos de punto que contienen algodón, y también para impartir una apariencia de lavado a la piedra a telas de mezclilla que contienen algodón. En particular, las Solicitudes de Patentes Japonesas Nos. 58-36217 y 58-54032, así como también Ohishi et al., "Reformation of Cotton Fabric by Celulase" y " hat's New - Weight Loss Treatment to Soften the Touch of Cotton Fabric" Japan Textile News, (diciembre de 1988) describe cada una que el tratamiento de tejidos que contienen algodón con celulasa resulta en una sensación mejorada para el tejido. Generalmente se cree que este tratamiento con celulasa elimina la formación de pelusa de algodón y/o las fibras superficiales, lo cual reduce el peso del tejido. La combinación de estos efectos imparte una sensación mejorada al tejido. La ropa hecha a partir de tejido de celulasa, tal como la tela de mezclilla de algodón, tiene una textura rígida debido a la presencia de composiciones de aprestado utilizadas para facilitar la manufactura, el manejo y el montaje de las prendas de ropa y típicamente tiene una apariencia teñida oscura y fresca. Una característica deseable de la ropa de mezclilla teñida de índigo es la alteración de hebras teñidas con hebras blancas, lo cual da a la tela de mezclilla una apariencia blanca o azul. Por ejemplo, después de un período de uso y lavado prolongado, la prenda de ropa, particularmente la tela de mezclilla puede desarrollar en los paneles y en la costura áreas localizadas de variación en la forma de un aclaramiento en la profundidad o densidad del color. Además, una decoloración general de la ropa, algo de arrugas en las costuras y algunas arrugas en los paneles de la tela pueden aparecer frecuentemente. En años recientes tal apariencia deformada o "lavado a la piedra", particularmente en ropa de mezclilla, ha llegado a ser muy deseable para una proporción sustancial del público. Los métodos previos para producir esta apariencia deformada incluyan el lavado a la piedra de un artículo o artículos de ropa en una cuba grande con piedra pómez que tienen un tamaño de partícula desde aproximadamente 2.54 a 25.4 cm (1 a 10 pulgadas) y con partículas de piedra pómez más pequeñas generadas por la naturaleza abrasiva del proceso. Típicamente la prenda de ropa se hace girar en un tambor con la piedra pómez mientras está húmeda por un periodo de tiempo suficiente de tal manera que la piedra pómez raspa el tejido para producir en los paneles del tejido áreas raspadas localizadas de color más claro y áreas de color más claro similares en las costuras. Adicionalmente, la piedra pómez suaviza el tejido y produce una superficie con pelusa similar a aquella producida por el uso y lavado prolongados del tejido. El uso de piedra pómez tiene varias desventajas, incluyendo daño por sobrecarga a los motores de la máquina, daño mecánico a los mecanismos de transportes y a los tambores de lavado, problemas ambientales de desechos de la arena producida y costos de trabajo altos asociados con la eliminación manual de las piedras de las bolsas de las prendas de vestir. En vista de los problemas asociados con las piedras de pómez en el lavado a la piedra, se utilizan soluciones de celulasa como un reemplazo para las piedras de pómez bajo condiciones de agitación y en cascada, es decir, en una máquina lavadora de tambor giratorio, para impartir- una apariencia de "lavado a la piedra" a la tela de mezclilla (Patente de los Estados Unidos No. 4, 832, 864) . Un sistema de celulasa derivado de la bacteria del suelo filamentosa, ter ofílica Thermomonospora fusca ha sido detectado y se han estudiado las características bioquímicas de ese sistema y de los componentes del mismo (Wilson, Critical Reviews ín Biotechnology, Vol. 12^, pp . 45-63 (1992)). Se le ha determinado la secuencia a un componente específico de la endoglucanasa del sistema de T. fusca , E5 (Lao et al., J. Bacter., vol. 173, pp 3397-3407 (1991)), y se ha descrito su disposición de disulfuro y los dominios funcionales (McGinnis et al., Biochemistry, vol. 32, pp. 8157-8161 (1993)). McGinnis describe que la E5 tratada con proteasa de Strept omyces l i vi dans resulta en un dominio de unión a celulosa de 14 unidades kD y un fragmento de 32 unidades kD catalíticamente activo, el cual había perdido la capacidad de unirse a la celulosa. La E5 tratada con la proteasa de S . l i vi dans catalíticamente activa, pura se demostró que tiene una actividad similar a la enzima intacta sobre CMC. Sin embargo, las mezclas de fragmentos de E5 catalíticamente activos, cuando se combinaron con E3 intacta de T. fusca o E3 intacta y CBHI de Tri choderma reesei , mostraron una eficiencia disminuida a mezclas similares que contenían E5 intacta en vez del fragmento (Publicación de PCT No. 96/00281) . A pesar de la investigación extensiva relacionada al uso de celulasas en los procesos industriales, las celulasas conocidas y utilizadas en la técnica han demostrado desventajas significativas. Por ejemplo, muchas celulasas han sido problemáticas debido a su baja actividad, pobre estabilidad alcalina o acida, pobre estabilidad la temperatura y pobre estabilidad oxidativa. Sorprendentemente, los solicitantes en la presente han descubierto que las celulasas de E5 poseen un complemento de características que hace su uso particularmente deseable en ciertas aplicaciones industriales.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN De acuerdo a la presente invención, se proporciona un método para tratar material celulósico que comprende poner en contacto el material celulósico con una celulasa obtenible a partir de Th ermomon ospora fus ca que corresponde a E5, una E5 truncada, o un derivado de las mismas. En una modalidad del proceso de la invención, el material celulósico comprende tejido que contiene celulosa y el resultado del método es producir un efecto de lavado a la piedra o una mejora en la sensación y/o apariencia de tejido. En una modalidad alternativa del proceso de la invención, el tejido que contiene celulosa se pone en contacto con una solución acuosa que contiene una composición detergente que comprende una celulasa obtenible a partir de T. fusca , que corresponde a E5, una E5 truncada, o un derivado de las mismas. En todavía otra modalidad del proceso de la invención, el material celulósico comprende pulpa de madera y la adición de celulasa facilita la producción de productos de papel a partir de la misma. En todavía otra modalidad del proceso de la invención, el material celulósico comprende alimento para animales, y el método resulta en un incremento en la digestibilidad o el valor del alimento para animales. En las modalidades todavía adicionales de la invención, el material celulósico comprende grano o subproducto de grano utilizados en la producción de alimento, almidón, etanol o azúcar. Los solicitantes identifican en la presente una celulasa específica obtenible de T. fusca , conocida en la literatura como E5, que tiene un conjunto de características sorprendente, las cuales son especialmente benéficas en el procesado de textiles (específicamente incluyendo el lavado a la piedra de la tela de mezclilla y el bio-pulido) , productos de limpieza y detergentes, producción de pulpa y papel, procesado de alimentos y como un aditivo para el alimento para animales. Específicamente, los Solicitantes han descubierto que E5 tiene un perfil de pH/actividad especialmente amplio sobre sustratos insolubles, siendo activo en el intervalo de pH desde aproximadamente pH 5.0 a 10.5 con muy poca disminución en la actividad en la región alcalina. Por otro lado, E5 tiene niveles de actividad significativos a pH y temperatura moderados, es estable por periodos de tiempo prolongados y a temperaturas mayores de 80°C, es esencialmente insensible a muchas composiciones y concentraciones de amortiguadores, permanece activo después de una hidrólisis proteolítica prolongada, y es estable en presencia de oxidantes tales como perborato y combinación de perborato/TAED y en detergentes. Entre los aspectos especialmente sorprendentes de E5 están su actividad excepcional a pH altos sobre sustratos insolubles tales como tejidos de algodón comparada a su actividad sobre sustratos solubles, la cual disminuye significativamente después de su pH óptimo de aproximadamente 6.0. Así, E5 es particularmente apropiada para aplicaciones de textiles de pH alto, tal como la decoloración y bio-pulido simultáneos, o en detergentes para lavandería y pre- o posttratamientos los cuales están formulados para un pH alto. Otro aspecto sorprendente es la capacidad de T. fusca , de permanecer casi inalterado por incubación en detergente líquido. Un aspecto novedoso adicional de la presente invención es que la E5 truncada también posee muchas de las mismas características excepcionales que E5. Por ejemplo, los Solicitantes descubrieron que una enzima de E5 truncada puede exhibir una actividad de eliminación de fibra superficial casi idéntica que E5. Las considerables ventajas de la celulasa E5 o celulasa de E5 truncada en aplicaciones industriales no habría sido sugerida por la técnica anterior. La invención misma, junto con objetos y ventajas acompañantes adicionales, será mejor entendida por referencia a la siguiente descripción detallada, tomada en conjunción con los dibujos anexos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 ilustra el perfil de pH de E5 a 70°C sobre sustratos solubles. La Figura 2 ilustra la actividad de E5 desde 40°C a 80°C sobre sustratos solubles. La Figura 3 ilustra la estabilidad de E5 a 20°C, 20 ppm a pH 8 y 10. La Figura 4 ilustra la estabilidad de E5 a 37°C, 20 ppm a pH 6, 8 y 10. La Figura 5 ilustra la estabilidad de E5 a 50°C, 20 ppm a pH 6, 8 y 10. La Figura 6 ilustra la estabilidad de E5 en presencia de concentraciones de perborato de 0 ppm, 90 ppm, 250 ppm, 500 ppm y 900 ppm. La Figura 7 ilustra la eliminación de fibras superficiales de E5 a pH 6, pH 7.5, pH 8.5 y pH 9.5. La Figura 8 ilustra la actividad de E5 en presencia de proteasa a 50°C y un pH de 7. La Figura 9 ilustra la respuesta al pH de E5 comparada a Cheer® comercialmente disponible y tratada con calor a 38°C. La Figura 10 ilustra la respuesta al pH de E5 comparada a Cheer® comercialmente disponible y tratada con calor a 60°C.

La Figura 11 ilustra la estabilidad de E5 en líquido extrafuerte Wisk® durante 35 días comparado a una celulasa representativa de T. l ongibra chi a t um .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN "Tejido que contiene algodón" significa tejidos cosidos o no cosidos, hilos o fibras hechas de algodón puro o mezclas de algodón que incluyen telas tejidas de algodón, tejidos de punto de algodón, telas de mezclilla de algodón, hilos de algodón, algodón en rama y similares. Cuando se emplean mezclas de algodón, la cantidad de algodón en la tela es de preferencia al menos de aproximadamente 35 por ciento en peso de algodón. Cuando se emplean como mezclas, el material acompañante empleado en el tejido puede incluir una o más fibras que no son de algodón incluyendo fibras celulósicas o sintéticas tales como fibras de poliamida (por ejemplo, nylon 6 y nylon 66), fibras acrílicas (por ejemplo, fibras de poliacrilonitrilo) , y fibras de poliéster (por ejemplo, tereftalato de polietileno), fibras de alcohol polivinílico (por ejemplo, Vinylon) , fibras de cloruro de polivinilo, fibras de cloruro de polivinilideno, fibras de poliuretano, fibras de poliurea y fibras de aramida. "Tejido que contiene celulosa" significa cualquier tejido cosido o no cosido, hilos o fibras hechos de algodón o fibra que no es algodón que contiene celulosa o algodón o fibra que no es algodón que contiene mezclas de celulosa incluyendo fibras celulósicas naturales y fibras celulósicas artificiales (tales como yute, lino, ramina, rayón y liocel). Incluidos bajo el encabezado de tejidos que contienen celulosa artificial están los tejidos regenerados que son muy conocidos en la técnica tales como el rayón. Otros tejidos que contienen celulosa artificiales incluyen las fibras de celulosa modificadas químicamente (por ejemplo celulosa derivatizada por acetato) y fibras de celulosa hilados en solvente (por ejemplo liocel). Específicamente incluidas dentro de la definición de tejidos que contienen celulosa está cualquier hilo o fibra hecho de tales materiales. "Composición de lavado a la piedra" significa una formulación para utilizarse en lavado a la piedra tejidos que contienen celulosa. Las composiciones de lavado a la piedra se utilizan para modificar tejidos que contienen celulosa antes de la presentación para la venta al consumidor, es decir, durante el proceso de manufactura. En contraste, las composiciones detergentes se proponen para la limpieza de prendas de ropa sucias. "Lavado a la piedra" significa el tratamiento de tejido que contiene celulosa con una solución de celulasa bajo condiciones de agitación y en cascada, es decir en una máquina lavadora de tambor giratorio, para impartir una apariencia de "lavado a la piedra" a la tela de mezclilla. La solución de celulasa de acuerdo a la presente invención reemplazará funcionalmente el uso de piedras en tales métodos reconocidos en la técnica, ya sea completamente o parcialmente. Los métodos para impartir una apariencia de lavado a la piedra a la tela de mezclilla están descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 4,832,864, la cual está incorporada en la presente por referencia en su totalidad. Generalmente, las técnicas de lavado a la piedra se han aplicado a tela de mezclilla de algodón teñida de índigo. "Composición detergente" significa una mezcla que se propone para utilizarse en un medio de lavado para el lavado de tejidos que contienen celulosa sucios. En el contexto de la presente invención, tales composiciones pueden incluir, además de celulasas y surfactantes, enzimas hidrolíticas adicionales, aditivos de carga, agentes blanqueadores, activadores de blanqueo, agentes de añilado y tintes fluorescentes, inhibidores de la formación tortas, agentes de enmascaramiento, activadores de celulasa, antioxidantes y solubilizantes . Tales composiciones se utilizan generalmente para limpiar prendas sucias y no se utilizan durante el proceso de manufactura, en contraste a las composiciones de lavado a la piedra. Las composiciones detergentes que comprenden celulasa están descritas en, por ejemplo, Clarkson et al., Patente de los Estados Unidos No. 5,290,474 y Publicación de EP No. 271 004, incorporadas en la presente por referencia. "Derivado" significa una proteína que se deriva de una proteína precursora (por ejemplo, la proteina natural) por adición de uno o más aminoácidos en cualquiera o ambos del extremo C- y N-ter inal, sustitución de uno o más aminoácidos en uno o un número de sitios diferentes en la secuencia de aminoácidos, supresión de uno o más aminoácidos en cualquiera o ambos extremos de la proteína, o en uno o más sitios en la secuencia de aminoácidos, o inserción de uno o más aminoácidos en uno o más sitios en la secuencia de aminoácidos. La preparación de un derivado enzimático de preferencia se realiza modificando una secuencia de ADN que codifica la proteína natural, transformación de esta secuencia de ADN en un huésped adecuado, y la expresión de la secuencia de ADN modificada para formar la enzima derivada. El derivado de la invención incluye péptidos que comprenden secuencias alteradas de aminoácidos en comparación con una secuencia de aminoácidos de la enzima precursora (por ejemplo, una enzima de tipo silvestre o en estado natural), los cuales péptidos retienen una naturaleza enzimática característica de la enzima precursora, pero que tiene propiedades alteradas en algún aspecto específico. Por ejemplo, una E5 alterada o E5 truncada alterada puede tener una estabilidad óptima a un pH incrementado, o una estabilidad incrementada a la temperatura o una estabilidad oxidativa incrementada, pero retendrá su actividad celulolítica característica. Similarmente, los derivados de acuerdo a la presente invención incluyen un dominio de unión a celulosa el cual ha sido ya sea enteramente eliminado, o modificado de tal manera para deteriorar significativamente su capacidad de unión a celulosa. Está contemplado que los derivados de acuerdo a la presente invención pueden ser derivados a partir de un fragmento de ADN que codifica una E5 o E5 truncada (como se describe más abajo) en donde la actividad funcional del derivado de E5 o E5 truncada expresada es retenida. Por ejemplo, un fragmento de ADN que codifica una E5 truncada puede además incluir una secuencia de ADN o porción de la misma que codifica una articulación o enlazador unido a la secuencia de ADN de E5 truncada en cualquiera del extremo 5' o 3' , en donde la actividad funcional del dominio de E5 truncada codificada es retenida. El derivado además incluye la modificación química para cambiar las características de la enzima. El término "E5 truncada" se refiere a una proteína que comprende un derivado (usualmente acortado) de una enzima E5 intacta que retiene la actividad celulolítica. E5 en su forma intacta se cree que contiene un núcleo catalítico y un dominio de unión. El núcleo catalítico y el dominio de unión a celulosa pueden actuar juntos de una manera sinergística para efectuar la hidrólisis eficiente y frecuentemente perjudicial de las fibras de celulosa en un tejido que contiene celulosa dando lugar frecuentemente a una pérdida de la resistencia indeseable. Una E5 truncada que carece de un dominio de unión funcional puede incluir otras entidades las cuales no incluyen actividad de unión a celulosa atribuible a un dominio de unión a celulosa. Por ejemplo, la presencia de un enlazador o articulación está contemplada específicamente. Similarmente, la unión covalente de otra entidad enzimática o un dominio de unión a celulosa que no es E5 a una E5 truncada también está contemplada específicamente. Se espera que una E5 truncada, o derivados de la misma de acuerdo a la invención retendrán al menos 10% de la actividad . exhibida por E5 cuando cada una se ensaye bajo condiciones similares y se dosifique basado en cantidades similares de proteína. Una E5 truncada puede ser hecha por cualquier medio estándar para producir una enzima truncada. Los medios particularmente efectivos incluyen el uso de proteasa o hidrólisis química (es decir, bromuro de cianógeno) para hidrolizar la enzima, o el uso de ingeniería genética para expresar directamente una E5 truncada en un huésped microbiano. McGinnis et al., s upra , sugiere que la proteasa de S . l i vi dans hidrolizó los 120 aminoácidos en el N-terminal de la enzima E5, dejando lo restante de la enzima como un núcleo catalíticamente activo. Así, una modalidad preferida de la presente invención contempla el uso de una E5 truncada que difiere de E5 en que un segmento N-terminal de la enzima menor de 121 aminoácidos de longitud es suprimido, de preferencia difiriendo de E5 en que la E5 truncada comprende la secuencia de la E5 intacta iniciando en la treonina en el residuo 121. En otra modalidad preferida de la presente invención, una E5 truncada difiere de E5 en que la secuencia de aminoácidos de E5 en la región de los aminoácidos 1-120 ha sido alterada para reducir o eliminar la actividad de unión a celulosa. De acuerdo a la presente invención, se proporciona un método para tratar material celulósico que comprende poner en contacto el material celulósico con una celulasa obtenible de Th ermomonospora fusca , que corresponde a E5, una E5 truncada, o un derivado de las mismas. En una modalidad del proceso de la invención, el material celulósico comprende tejido que contiene celulosa, y el resultado del método es producir un efecto de lavado a la piedra o una mejora en la sensación y/o apariencia del tejido. En una modalidad alternativa del proceso de la invención, el tejido que contiene celulosa se pone en contacto con una solución acuosa que contiene una composición detergente que comprende una celulasa obtenible de T fusca que corresponde a E5, una E5 truncada, o un derivado de las mismas. En todavía otra modalidad del proceso de la invención, el material celulósico comprende pulpa de madera y la adición de celulasa facilita la producción de productos de papel a partir de la misma. En todavía otra modalidad del proceso de la invención, el material celulósico comprende un alimento para animales, y el método resulta en un incremento en la digestibilidad o valor del alimento para animales. E5 como se utiliza en la presente se refiere a una celulasa que tiene un peso molecular de aproximadamente 45-47 unidades kD (deducido a partir de la secuencia de aminoácidos y confirmada por SDS-gel) y un pl de aproximadamente 4.5-4.8 (medido sobre IEF gel) y la cual es obtenible a partir de T. fusca . T. fusca es un actinomiceto termofílico, filamentoso encontrado en el suelo y común en el material orgánico en descomposición tal como madera en descomposición. La secuencia de E5 es descrita en Lao et al., s upra . Las celulasas de acuerdo a la presente invención pueden ser producidas por T. fusca cultivándolo bajo condiciones que han sido descritas en la literatura, para producir un caldo de fermentación a partir del cual puede ser purificada E5 (ver por ejemplo Walker et al., Biotechnol. Bioeng., vol. 40, pp. 1019-1026 (1992)). Alternativamente, E5 puede ser producida por un microorganismo que ha sido modificado genéticamente para producir E5 o E5 truncada como en, por ejemplo, McGinnis et al., s upra . Como se utiliza en la presente, la celulasa se propone para incluir E5, E5 truncada, o derivados de las mismas. De preferencia la E5 truncada comprende un dominio catalítico y carece de actividad de unión a celulosa significativa . En general, las composiciones que comprende la celulasa de acuerdo a la invención pueden ser obtenidas por técnicas de purificación basadas en las características y propiedades conocidas de la celulasa de la invención. Específicamente, cuando la celulasa de acuerdo a la invención es parte de una mezcla de celulasas producida por el organismo cultivado, la mezcla completa de celulasa (celulasa total) puede ser purificada en componentes sustancialmente puros por técnicas de separación reconocidas publicadas en la literatura, incluyendo cromatografía de intercambio iónico a un pH adecuado, cromatografía de afinidad y exclusión de tamaño. Por ejemplo, en la cromatografía de intercambio iónico (usualmente cromatografía de intercambio aniónico) , es posible separar los componentes de la celulasa eluyendo con un gradiente de pH, o un gradiente de sal, o ambos de un gradiente de pH y uno de sal. Después de la purificación, la cantidad requisito de los componentes deseados podría ser recombinada. Alternativamente, las técnicas de ingeniería genética pueden ser utilizadas para manipular las mezclas de celulasa producidas, por ejemplo a través del uso de cepas suprimidas en genes de celulasa en donde el gene que codifica la celulasa de acuerdo a la invención es transformado y expresado por la cepa huésped suprimida de otra manera en celulasa. El tratamiento de textiles de acuerdo a la presente invención contempla el procesado o limpieza de textiles con una composición que comprende una celulasa. Tal tratamiento incluye, pero no está limitado a, lavado a la piedra, modificación de la textura, sensación y/o apariencia de tejidos que contienen celulosa u otras técnicas utilizadas durante la manufactura o limpieza/reacondicionamiento de tejidos que contienen celulosa. Adicionalmente, el tratamiento dentro del contexto de esta invención contempla la eliminación de algodón "inmaduro" o "muerto" de tejidos o fibras celulósicos, es decir el algodón inmaduro que es significativamente más amorfo que el algodón maduro. Se sabe que el algodón muerto provoca un teñido desigual, y es indeseable. Por consiguiente, la composición contemplada en la presente invención incluye un componente de celulasa propuesta para utilizarse en el lavado o tejido que contiene celulosa manufacturado, sucio. Por ejemplo, la celulasa puede ser utilizada en una composición detergente para lavar con agua y jabón. Las composiciones detergentes útiles de acuerdo con la presente invención incluyen formulaciones especiales tales como composiciones de pre-lavado, pre-remojado y restauración del color para utilizarse en casa. Tales composiciones de tratamiento, descritas en la presente, pueden estar en forma de un concentrado, el cual requiere dilución o en forma de una solución diluida o forma que puede ser aplicada directamente al tejido que contiene celulosa. Las técnicas de tratamiento generales conocidas en la técnica para el tratamiento con celulasa de textiles están descritos en, por ejemplo, la Publicación de EP No. 220 016 y Solicitudes de GB Nos. 1,368,599 y 2,095,275.

El tratamiento de un material celulósico de acuerdo a la presente invención además contempla el tratamiento de alimento para animales, pulpa y/o papel, alimento y granos para propósitos conocidos en la técnica. Por ejemplo, se sabe que la celulasa incrementa el valor del alimento para animales, mejora la drenabilidad de la pulpa de madera, mejora los productos alimenticios y reduce la fibra en los granos durante el proceso de molienda en húmedo de los granos o el proceso de molienda en seco. De acuerdo a una modalidad preferida de la presente invención, las composiciones de celulasa descritas más arriba pueden ser empleadas como una composición de lavado a la piedra. De preferencia, el lavado a la piedra de acuerdo a la presente invención comprende preparar una solución acuosa que contiene una cantidad efectiva de celulasa junto con otros ingredientes opcionales que incluyen, por ejemplo, un amortiguador, un surfactante, y un agente de limpieza. Una cantidad efectiva de composición de enzima de celulasa es una concentración de enzima de celulasa suficiente para su propósito planeado. Así, una "cantidad efectiva" de celulasa en la composición de lavado a la piedra de conformidad a la presente invención es aquella cantidad que proporcionará el tratamiento deseado, por ejemplo, lavado a la piedra. La cantidad de celulasa empleada también es dependiente del equipo empleado, los parámetros de proceso empleados (la temperatura de la solución de tratamiento de celulasa, el tiempo de exposición a la solución de celulasa y similares) y la actividad de la celulasa (por ejemplo una solución particular requerirá una concentración menor de celulasa cuando se utiliza una composición de celulasa más activa comparada a una composición de celulasa menos activa) . La concentración exacta de celulasa en la solución de tratamiento acuosa a la cual se agrega el tejido que va a ser lavado a la piedra puede ser determinada fácilmente por el técnico experto basado en los factores de arriba, así como también el resultado deseado. De preferencia la celulasa está presente en una concentración desde 1 a 5,000 ppm y más preferiblemente de 10 a 200 ppm de proteína total . Opcionalmente, se emplea un amortiguador en la composición de lavado a la piedra de tal manera que la concentración de amortiguador es suficiente para mantener el pH de la solución dentro del intervalo en donde la celulasa empleada exhibe actividad la cual, a su vez, depende de la naturaleza de la celulasa empleada. La concentración exacta de amortiguador empleado dependerá de varios factores, los cuales el técnico experto puede fácilmente tomar en cuenta. Por ejemplo, en una modalidad preferida, el amortiguador así como también la concentración del amortiguador se selecciona para mantener el pH de la solución final de celulasa dentro del intervalo de pH requerido para la actividad óptima de la celulasa. A causa de que E5 tiene un perfil pH amplio desde aproximadamente 5.0 a aproximadamente 10.5 sobre sustratos insolubles, la celulasa puede ser utilizada en cualquiera de un pH ligeramente ácido, neutro o alcalino con actividad óptima, dependiendo de las necesidades específicas del procesador de textiles. Los amortiguadores adecuados a un pH dentro del intervalo de actividad de E5 son muy conocidos para aquellos expertos en la técnica en el campo. Además de la celulasa y un amortiguador, la composición de lavado a la piedra puede opcionalmente contener un surfactante. Los surfactantes adecuados incluyen cualquier surfactante compatible con la celulasa y el tejido incluyendo, por ejemplo, surfactantes aniónicos, no iónicos y anfolíticos. Los surfactantes aniónicos adecuados para utilizarse en la presente incluyen alquilbencensulfonatos lineales o ramificados; etersulfatos de alquilo o alquenilo que tienen grupos alquilo lineales o ramificados o grupos alquenilo; sulfatos de alquilo o alquenilo; sulfonatos de olefina; sulfonatos de alcano y similares. Los contraiones adecuados para los surfactantes aniónicos incluyen iones de metales alcalinos tales como sodio y potasio; iones de metales alcalinotérreos tales como calcio y magnesio; el ion de amonio; y alcanolaminas que tienen de 1 a 3 grupos alcanol de número de carbonos 2 ó 3. Los surfactantes anfolíticos incluyen sulfonatos de sales de amonio cuaternario, y surfactantes anfolíticos de tipo betaína. Tales surfactantes anfolíticos tienen ambos grupos cargados, el positivo y el negativo en la misma molécula. Los surfactantes no iónicos generalmente comprenden éteres de polioxialquileno, así como también alcanolamidas de ácido graso superior o aductos de óxido de alquileno de los mismos, y monoésteres de glicerina de ácido graso. Las mezclas de surfactantes también pueden ser empleadas en maneras conocidas para aquellos expertos en la técnica. En una modalidad preferida, una composición concentrada de lavado a la piedra puede ser preparada para utilizarse en los métodos descritos en' la presente. Tales concentrados contendrían cantidades concentradas de la composición de celulasa descrito arriba, amortiguador y surfactante, preferiblemente en una solución acuosa. Cuando está formulado de esta manera, el concentrado de la lavado a la piedra puede fácilmente ser diluido con agua, para preparar rápida y exactamente composiciones de lavado a la piedra de acuerdo a la presente invención y tener la concentración requisito de estos aditivos. Cuando se formulan concentrados acuosos, estos concentrados pueden ser diluidos para llegar a la concentración requisito de los componentes en la solución de celulasa indicada arriba. Como es fácilmente aparente, tales concentrados de lavado a la piedra permitirá una fácil formulación de las soluciones de celulasa, así como también permitirán una transportación viable de la concentración al sitio donde se utilizará. El concentrado de lavado a la piedra puede estar en cualquier forma reconocida en la técnica, por ejemplo, líquido, emulsión, gel o pasta. Tales formas son bien conocidas para aquellos expertos en la técnica. Cuando se emplea concentrado sólido de lavado a la piedra, la composición de celulasa puede ser un granulo, un polvo, un material aglomerado o un disco sólido. Cuando se utilizan granulos, los granulos son de preferencia formulados para que contengan un agente protector de la celulasa. Ver, por ejemplo, U.S. No. de Serie 07/642,669, presentada el 17 de enero de 1991 como No. de Expediente del Apoderado 010055-073 e intitulada "GRANULOS CONTAINING BOTH AN ENZYME AND AN ENZYME PROTECTING AGENT AND DETERGENT COMPOSITIONS CONTAINING SUCH GRANULES" (GRANULOS QUE CONTIENEN AMBOS DE UNA ENZIMA Y UN AGENTE PROTECTOR DE ENZIMA Y COMPOSICIONES DETERGENTES QUE CONTIENEN TALES GRANULOS), la solicitud está incorporada en la presente por referencia en su totalidad. Asimismo, los granulos pueden ser formulados para que contengan materiales para reducir la velocidad de disolución de los granulos en el medio de lavado. Tales materiales y granulos están descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 5,254,283 la cual está incorporada en la presente por referencia en su totalidad. Otros materiales pueden ser utilizados también con o colocados en la composición de lavado a la piedra de la presente invención como se desee, incluyendo piedras, piedra pómez, rellenadores, solventes, activadores de enzima, y agentes anti-redeposición.

El tejido que contiene celulosa se pone en contacto con la composición de lavado a la piedra que contiene una cantidad efectiva de la celulasa mezclando la composición de tratamiento con la composición de lavado a la piedra, y poniendo así la enzima celulasa en proximidad con el tejido. Consecuentemente, se agita la solución acuosa que contiene la celulasa y el tejido. Si la composición de tratamiento es una solución acuosa, el tejido puede ser directamente remojado en la solución. Similarmente, cuando la composición de lavado a la piedra es un concentrado, el concentrado se diluye en un baño de agua con el tejido que contiene celulosa. Cuando la composición de lavado a la piedra está forma sólida, por ejemplo un gel de pre-lavado o una barra sólida, la composición de lavado a la piedra puede ser puesta en contacto aplicando directamente la composición al tejido o al licor de lavado. El tejido que contiene celulosa se incuba con la solución de lavado a la piedra bajo condiciones efectivas para permitir que la acción enzimática confiera una apariencia de lavado a la piedra al tejido que contiene celulosa. Por ejemplo, durante el lavado a la piedra, el pH, la relación de licor, la temperatura y el tiempo de reacción pueden ser ajustados para optimizar las condiciones bajo las cuales actúan la composición de lavado a la piedra. "Condiciones efectivas" necesariamente se refieren al pH, relación de licor, y temperatura que permiten que la enzima celulasa reaccione eficientemente con el tejido que contiene celulosa. Las condiciones de reacción efectivas para las composiciones de lavado a la piedra de la presente invención son sustancialmente similares a los métodos bien conocidos utilizados con las composiciones de celulasa de técnica anterior correspondiente. Por consiguiente, está dentro de la experiencia de aquellos expertos en la técnica maximizar las condiciones para utilizar las composiciones de lavado a la piedra de acuerdo a la presente invención. Las relaciones de licor durante el lavado a la piedra, es decir, la relación de peso de la solución de composición de lavado a la piedra (es decir, el licor de lavado) al peso del tejido, empleadas en la presente es generalmente una cantidad suficiente para lograr el efecto deseado de lavado a la piedra en el tejido de mezclilla y es dependiente del proceso utilizado. De preferencia, las relaciones de licor son de aproximadamente 4:1 a aproximadamente 50:1; de más preferencia desde 5:1 a aproximadamente 20:1, y de mayor preferencia desde aproximadamente 10:1 a aproximadamente 15:1. Las temperaturas de reacción durante el lavado a la piedra con las composiciones de lavado a la piedra presentes están gobernadas por dos factores competitivos. Primeramente, temperaturas superiores generalmente corresponden a cinéticas de reacción incrementadas, es decir, reacciones más rápidas, lo que permite tiempos de reacción reducidos comparados a los tiempos de reacción requeridos con temperaturas inferiores. Por consiguiente, las temperaturas de reacción son generalmente al menos aproximadamente 10°C y mayores. En segundo lugar, la celulasa es una proteína que pierde su actividad más allá de una temperatura de reacción dada, cuya temperatura es dependiente de la naturaleza de la celulasa utilizada. Así, si se permite que la temperatura de reacción sea demasiado alta, se pierde la actividad celulolítica como resultado de la desnaturalización de la celulasa. A causa de que E5 muestra una termoestabilidad excelente, la temperatura del lavado a la piedra puede ser muy alta, es decir, mayor de 80°C si es necesario. Sin embargo, las temperaturas estándar en la técnica están generalmente en el intervalo de 35°C a 65°C, lo cual también será adecuado para la celulasa de la invención. Los tiempos de reacción son dependientes de las condiciones específicas bajo las cuales ocurre el lavado a la piedra. Por ejemplo, el pH, la temperatura y la concentración de celulasa efectuarán todos el tiempo de reacción óptimo. Generalmente, los tiempos de reacción son desde aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 5 horas, y de preferencia desde aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 3 horas y, de más preferencia, de aproximadamente 20 minutos a aproximadamente 1 hora. De acuerdo a todavía otra modalidad preferida de la presente invención, las composiciones de celulasa descritas más arriba pueden ser empleadas en una composición detergente. Las composiciones detergentes de acuerdo a la presente invención son útiles como composición de pre-lavado, composiciones de pre-remojo, o para limpiar durante el sitio de lavado o enjuagado regular. De preferencia, la composición detergente de la presente invención comprende una cantidad efectiva de celulasa, un surfactante, y opcionalmente incluyen otros ingredientes descritos más abajo.

Una cantidad efectiva de celulasa empleada en las composiciones detergentes de esta invención es una cantidad suficiente para impartir los efectos deseables que se sabe que son producidos por la celulasa sobre tejidos que contienen celulosa, por ejemplo deformación de pelusa, suavizado, antiformación de pelusa, eliminación de la fibra superficial y limpieza. De preferencia, la celulasa en la composición detergente se emplea en una concentración de aproximadamente 10 ppm a aproximadamente 20,000 ppm de detergente. La concentración de enzima celulasa empleada en la composición detergente es de preferencia seleccionada de tal manera que con la dilución en un medio de lavado, la concentración de enzima celulasa está en un intervalo de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 1000 ppm, de preferencia desde aproximadamente 0.02 ppm a aproximadamente 500 ppm, y de mayor preferencia desde aproximadamente 0.5 ppm a aproximadamente 250 ppm de proteína total. La cantidad de enzima celulasa empleada en la composición detergente dependerá del grado al cual el detergente sea diluido con la adición de agua para formar una solución de lavado.

Las composiciones de detergente de la presente invención pueden estar en cualquier forma reconocida en la técnica, por ejemplo, como un diluyente líquido, en granos, en emulsiones, en geles, o en pastas. Tales formas son bien conocidas para el técnico experto. Cuando se emplea una composición detergente sólida, la celulasa es de preferencia formulada como granulos. De preferencia, los granulos pueden ser formulados para contener adicionalmente un agente protector de la celulasa. Ver, por ejemplo, U.S. No. de Serie 07/642,669 presentada el 17 de enero de 1991 como Expediente del Apoderado No. 010055-073 e intitulada "GRANULES CONTAINING BOTH AN ENZYME AND AN ENZYME PROTECTING AGENT AND DETERGENT COMPOSITIONS CONTAINING SUCH GRANULES" (GRANULOS QUE CONTIENEN AMBOS, UNA ENZIMA Y UN AGENTE PROTECTOR DE ENZIMA Y COMPOSICIONES DETERGENTES QUE CONTIENEN TALES GRANULOS), la solicitud está incorporada en la presente por referencia en su totalidad. Asimismo, el granulo puede ser formulado para que contenga materiales para reducir la velocidad de disolución del granulo en el medio de lavado. Tales materiales y granulos están descritos en la Patente de los Estados Unidos No. ,254,283, la cual está incorporada en la presente por referencia en su totalidad. Las composiciones detergentes de esta invención emplean una gente de superficie activa, es decir, un surfactante, incluyendo surfactantes aniónicos, no iónicos y anfolíticos bien conocidos para su uso en composiciones detergentes. Los surfactantes aniónicos adecuados para utilizarse en la composición detergente de esta invención incluyen alquilbencensulfonatos lineales o ramificados; éter sulfatos de alquilo o alquenilo que tienen grupos alquilo o grupos alquenilo lineales o ramificados, sulfatos de alquilo o alquenilo; sulfonatos de olefina; y sulfonatos de alcano. Los contraiones adecuados para los surfactantes aniónicos incluyen iones de metal alcalino tales como sodio y potasio; iones de metal alcalinotérreo tales como calcio y magnesio; ion de amonio; y alcanolaminas que tienen de 1 a 3 grupos alcanol de número de carbono 2 ó 3. Los surfactantes anfolíticos incluyen sulfonatos de sales de amonio cuaternarios, y surfactantes anfolíticos de tipo betaína. Tales surfactantes anfolíticos tienen ambos grupos cargados positiva y negativamente en la misma molécula. Los surfactantes no iónicos generalmente comprenden éteres de polioxialquileno, así como también alcanolamidas de ácido graso superior o aductos de óxido de alquileno de los mismos, monoésteres de glicerina de ácido graso, y similares. Los surfactantes adecuados para utilizarse en esta invención están descritos en la Solicitud de Patente Británica No. 2 094 826 A, la descripción de la cual está incorporada en la presente por referencia. También pueden ser utilizadas las mezclas de tales surfactantes. El surfactante o una mezcla de surfactantes generalmente se emplea en las composiciones detergentes de esta invención en una cantidad desde aproximadamente 1 por ciento por peso a aproximadamente 95 por ciento por peso de la composición detergente total y de preferencia desde aproximadamente 5 por ciento por peso a aproximadamente 45 por ciento por peso de la composición detergente total. Además de la composición de celulasa y el surfactante o surfactantes, las composiciones detergentes de esta invención pueden opcionalmente contener uno o más de los siguientes componentes: Hidrolasas Excepto Celulasa Las hidrolasas adecuadas incluyen éster carboxilato hidrolasa, tioéster hidrolasa, fosfato monoéster hidrolasa y fosfato diéster hidrolasa, los cuales actúan sobre el enlace de éster; glicósido hidrolasa, la cual actúa sobre los compuestos glicosílicos; una enzima que hidroliza compuestos N-glicosílicos; tioéter hidrolasa, la cual actúa sobre el enlace de éter; y a-amino-acil-péptido hidrolasa, peptidil-aminoácido hidrolasa, acil-a inoácido hidrolasa, dipéptido hidrolasa, y peptidil-péptido hidrolasa, la cual actúa sobre el enlace peptídico. Preferible entre ellos son las éster de carboxilato hidrolasa, glicósido hidrolasa, y peptidil-péptido hidrolasa. Las hidrolasas adecuadas incluyen (1) proteasas que pertenecen a las peptidil-péptido hidrolasa tales como pepsina, pepsina B, renina, tripsina, quimotripsina A, quimotripsina B, elastasa, enterocinasa, catepsina C, papaína, quimopapaína, ficina, trombina, fibrinolisina, renina, subtilisina, aspergilopeptidasa A, colagenasa, clostridiopeptidasa B, calicreína, gastrisína, catepsina D, bro elina, queratinasa, quimotripsina C, pepsina C, aspergilopeptidasa B, urocinasa, carboxipeptidasa A y B, y aminopeptidasa; (2) glicósido hidrolasas (la celulasa que es un ingrediente esencial está excluida de este grupo) a-amilasa, ß-amilasa, gluco amilasa, invertasa, lisozima, pectinasa, quitinasa,' y dextranasa. De preferencia entre ellas están la a-amilasa y ß-amilasa. Funcionan en sistemas de ácido a neutro, pero una que se obtiene de bacteria exhibe alta actividad en un sistema alcalino; (3) éster de carboxilato hidrolasa incluyendo carboxilesterasa, lipasa, pectina esterasa, y clorofilasa. Especialmente efectiva entre ellos es la lipasa. La hidrolasa diferente de la celulasa se incorpora en la composición detergente tanto como se requiera de acuerdo al propósito. De preferencia debe ser incorporada en una cantidad de 0.001 a 5 por ciento por peso, y de más preferencia de 0.02 a 3 por ciento por peso, en términos de proteína purificada. Esta enzima debe ser utilizada en forma de granulos hechos de enzima cruda sola o en combinación con otros componentes en la composición detergente. Los granulos de enzima crudo se utilizan en tal cantidad que la enzima purificada sea de 0.001 a 50 por ciento por peso en los granulos. Los granulos se utilizan en una cantidad de 0.002 a 20 y de preferencia de 0.1 a 10 por ciento por peso. Como con las celulasas, estos granulos pueden ser formulados para que contengan un agente protector de enzima y un material retardante de la disolución.

Surfactantes Catiónicos y Sales de Acido Graso de Cadena Grande Tales surfactantes catiónicos y sales de ácido graso de cadena grande incluyen sales de ácido graso saturado o insaturado, sales de ácido alquil o alqueniléter carboxílico, sales o esteres de ácido a-sulfograso, surfactantes de tipo aminoácido, surfactantes de éster de sulfato, sales de amonio cuaternarias incluyendo aquellas que tienen 3 6 4 sustituyentes de alquilo y hasta 1 sustituyente de alquilo sustituido con fenilo. Los surfactantes catiónicos adecuados y las sales de ácido graso de cadena grande están descritas en la Solicitud de Patente Británica No. 2 094 826 A, la descripción de la cual está incorporada en la presente por referencia. La composición puede contener desde aproximadamente 1 a aproximadamente 20 por ciento por peso de tales surfactantes catiónicos y sales de ácido graso de cadena grande.

Aditivos de carga A. Agentes secuestrantes divalentes. La composición puede contener desde aproximadamente 0 a aproximadamente 50 por ciento por peso de uno o más componentes de aditivos de carga seleccionados del grupo que consiste de sales de metales alcalinas y sales de alcanolaminas de los siguientes compuestos: fosfatos, fosfonatos, fosfono-carboxilatos, sales de aminoácidos, aminopoli-acetatos, electrolitos de alto peso molecular, polímeros que no se disocian, sales de ácidos dicarboxí lieos, y sales de aluminosilicato. Los agentes secuestrantes divalentes adecuados están descritos en la Solicitud de Patente Británica No. 2 094 826 A, la descripción de la cual está incorporada en la presente por referencia.

B. Álcalis o electrolitos inorgánicos La composición puede contener desde aproximadamente 1 a aproximadamente 50 por ciento por peso, de preferencia desde aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento por peso, basado en la composición de una o más sales de metal alcalino de los siguientes compuestos como los álcalis o electrolitos inorgánicos: silicatos, carbonatos y sulfatos así como también álcalis orgánicos tales como trietanolamina, dietanolamina, monoetanolamina y tri isopropanolamina .

Agentes Anti-redeposición La composición puede contener desde aproximadamente 0.1 a aproximadamente 5 por ciento por peso de uno o más de los siguientes compuestos como agentes de anti-redeposición: polietilenglicol, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona y carboximetilcelulosa . Entre ellos, una combinación de carboximetilcelulosa y/o polietilenglicol con la composición de celulasa de la presente invención proporciona para una composición que elimina la suciedad especialmente útil .

Agentes Blanqueadores El uso de la celulasa de la presente invención en combinación con un agente blanqueador tal como monopersulfato de potasio, percarbonato de sodio, perborato de sodio, aducto de sulfato de sodio/peróxido de hidrógeno y aducto de cloruro de sodio/peróxido de hidrógeno o/y un tinte decolorante fotosensible tal como la sal de aluminio o cinc de ftalocianina sulfonada mejora además los efectos de detergencia. Similarmente, pueden ser utilizados los agentes blanqueadores y los catalizadores de blanqueo descritos en EP 684 304.

Agentes de Añilado y Tintes Fluorescentes Diversos agentes de añilado y tintes fluorescentes pueden ser incorporados en la composición, si es necesario. Los agentes de añilado y los tintes fluorescentes adecuados están descritos en la Solicitud de Patente Británica No. 2 094 826 A, la descripción de la cual está incorporada en la presente por referencia.

Inhibidores de la Formación de Tortas Los siguientes inhibidores de la formación de tortas pueden ser incorporados en el detergente pulverizado: sales del ácido p-toluensulfónico, sales del ácido xilensulfónico, sales de ácido acético, sales de ácido sulfosuccínico, talco, sílice pulverizada finamente, sílices amorfas, arcilla, silicato de calcio (tal como Micro-Cell of Johns Manville Co . ) , carbonato de calcio y óxido de magnesio .

Agentes de Enmascaramiento para Factores que Inhiben la Actividad de la Celulasa La composición de celulasa de esta invención es desactivada en algunos casos en presencia de iones de cobre, cinc, cromo, mercurio, plomo, manganeso o plata o sus compuestos. Diversos agentes quelantes metálicos y agentes que precipitan los metales son efectivos contra estos inhibidores. Estos incluyen, por ejemplo, agentes secuestrantes de iones metálicos divalentes enlistados en el artículo de arriba con referencia a aditivos opcionales así como también el silicato de magnesio y el sulfato de magnesio. La celobiosa, glucosa y gluconolactona actúan a veces como inhibidores. Se prefiere evitar la co-presencia de estos sacáridos con la celulasa tanto como sea posible. En el caso de que la co-presencia sea inevitable, es necesario evitar el contacto directo de los sacáridos con la celulasa por ejemplo revistiéndolos. Las sales de ácido graso de cadena grande y los surfactantes catiónicos actúan como los inhibidores en algunos casos. Sin embargo, la co-presencia de estas sustancias con la celulasa es admisible si el contacto directo entre ellos es impedido por algún medio tal como formación de tabletas o revestimiento. Los agentes de enmascaramiento mencionados en lo anterior y los métodos pueden ser empleados, si es necesario, en la presente invención.

Activadores de Celulasa Los activadores varían dependiendo de la variedad de la celulasa. En presencia de proteínas, cobalto y sus sales, magnesio y sus sales, y calcio y sus sales, potasio y sus sales, sodio y sus sales o monosacáridos tales como mañosa y xilosa, las celulasas son activadas y su poder detergente son mejorados de manera notable.

Antioxidantes Los antioxidantes incluyen, por ejemplo, ter-buti1-hidroxitolueno, 4,4' -butilidenbis ( 6-ter-butil-3-metilfenol) , 2,2' -butilidenbis ( 6-ter-buti1-4-metilfenol), cresol monoestirenado, cresol diestirenado, fenol monoestirenado, fenil diestirenado y 1 , 1-bis (4-hidroxi-fenil) ciciohexano .

Solubilizadores Los solubilizadores incluyen, por ejemplo, alcoholes inferiores tales como etanol, sales de bencensulfonato, sales de alquilbencensulfonato inferiores tales como sales de p-toluensulfonato, glicoles tales como propilenglicol, sales de acetilbencensulfonato, acetamidas, amidas del ácido piridindicarboxí lico, sales de benzoato y urea.

La composición detergente de la presente invención puede ser utilizada en un intervalo amplio de pH desde un pH ácido a alcalino. En una modalidad preferida, la composición detergente de la presente invención puede ser utilizada en un medio de lavado detergente levemente ácido, neutro o alcalino que tiene un pH desde arriba de 5 a no más de aproximadamente 12. Además de los ingredientes de arriba, pueden ser utilizados, si se desea, perfumes, amortiguadores, conservadores, tintes y similares, con las composiciones detergentes de esta invención. Tales componentes se emplean convencionalmente en cantidades utilizadas hasta ahora en la técnica. Cuando una base detergente utilizada en la presente invención está en forma de un polvo, éste puede ser uno que se prepara por cualquier método de preparación conocido incluyendo un método secado por aspersión y un método de granulación. La base detergente obtenida particularmente por el método de secado por aspersión, el método de aglomeración, el método de mezclado en seco y los métodos de ruta que no son de torre son preferidos. La base detergente obtenida por el método de secado por aspersión no está restringida con respecto a las condiciones de preparación. La base detergente obtenida por el método de secado por aspersión es granulos huecos, los cuales son obtenidos pulverizando una pasta acuosa de ingredientes resistentes al calor, tales como agentes de superficie activa y aditivos de carga en un espacio caliente. Después del secado por aspersión, pueden ser agregados los perfumes, enzimas, agentes blanqueadores, agentes de carga alcalinos inorgánicos. Con una base detergente granular altamente densa, obtenida tal como por el método de granulación por secado por aspersión o aglomeración, también pueden ser agregados diversos ingredientes después de la preparación de la base . Cuando el detergente base es un líquido, éste puede ser ya sea una solución homogénea o una dispersión no homogénea. Para eliminar la descomposición de la carboximetilcelulosa por la celulasa en el detergente, es deseable que la carboximetilcelulosa esté granulada o revestida antes de la incorporación en la composición. Las composiciones detergentes de esta invención pueden ser incubadas con tejidos que contienen celulosa, por ejemplo tejidos sucios, en usos industrial y doméstico a temperaturas, tiempos de reacción y relaciones de licor empleados convencionalmente en estos ambientes. Las condiciones de incubación, es decir las condiciones efectivas para tratar tejidos que contienen celulosa con composiciones detergentes de acuerdo a la presente invención, serán fácilmente determinadas por aquellos de ordinarios expertos en la técnica. Por consiguiente, las condiciones apropiadas efectivas para el tratamiento con los detergentes presentes corresponderán a aquellos que utilizan composiciones detergentes similares que incluyen celulasas conocidas . Los detergentes de acuerdo a la presente invención pueden adicionalmente ser formulados como un pre-lavado en la solución apropiada a un pH intermedio en donde existe suficiente actividad para proporcionar mejoras deseadas en suavizado, deformación de pelusa, prevención de la formación de pelusa, eliminación de la fibra superficial o limpieza. Cuando la composición detergente es una composición de pre-remojo (por ejemplo, pre-lavado o pre-tratamiento) , ya sea como una composición líquida, en spray, en gel o en pasta, la enzima de celulosa truncada generalmente se emplea desde aproximadamente 0.0001 a aproximadamente 1 por ciento por peso basado en el peso total de la composición de pre-remojo o pre-tratamiento. En tales composiciones, un surfactante puede opcionalmente ser empleado y cuando se emplea, está generalmente presente en una concentración de aproximadamente 0.005 a aproximadamente 20 por ciento por peso basado en el peso total de la composición de pre-remojo. Lo restante de la composición comprende los componentes convencionales utilizados en la composición de pre-remojo, es decir, diluyente, amortiguadores, otras enzimas (proteasas), y similares en sus concentraciones convencionales. Está contemplado que las composiciones que las composiciones que comprenden enzimas de celulasa truncadas descritas en la presente pueden ser utilizadas en uso doméstico como una composición independiente adecuada para restaurar el color a tejidos decolorados (ver, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 4,738,682, la cual está incorporada en la presente por referencia en su totalidad) así como también utilizada en un eliminador de manchas y para deformación de pelusa y antiformación de pelusa (prevención de la formación de pelusa) .

El uso de la celulasa de acuerdo a la invención puede ser particularmente efectiva en aditivos para alimentos y en el procesado de pulpa y papel. Estas aplicaciones industriales adicionales están descritas en, por ejemplo, la Publicación de PCT No. 95/16360 y en la Patente Concedida a Finnish No. 87372, respectivamente. Para ilustrar además la presente invención y las ventajas de la misma, los siguientes ejemplos específicos se dan con el entendimiento de que están siendo ofrecidos para ilustrar la presente invención y no debe ser interpretados en manera alguna como limitantes de su alcance.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Producción y Purificación de E5 Pueden ser utilizados los clones preparados como en McGinnis et al., Biotechnology, vol. 32, pp . 8157-8161 (1993) para expresar E5 en S trept omyces l i vi dans y deben ser cultivados bajo condiciones adecuadas para la expresión del plásmido. La enzima E5 puede entonces ser purificada del sobrenadante de fermentación resultante de acuerdo al procedimiento citado en Walker et al., Biotechnol. Bioeng., vol. 40, p. 1019-1026 (1992) y en Irwin e tal. Biotechnology and Bio engineering ibid. vol. 42. pp . 1002-1013 (1993) . Alternativamente, la pasta de E5 puede ser solubilizada en MOPS, pH 7, sometido a centrifugación y el sobrenadante extraído se prepara (E5 cruda) . Una segunda resolubilización y sometimiento a centrifugación se hace sobre los pellets sueltos. La recuperación combinada es de alrededor de 75%. El sobrenadante se precipita con sulfato de amonio 0.65 M en el cuarto frío con agitación y luego se somete a centrifugación (14,000 rpm por 20 minutos en el rotor SS-34). El pellet se vuelve a solubilizar en una solución amortiguadora que contiene sulfato de amonio 0.25 M, KP 5 mM, pH 6.0. Para eliminar el antiespumante (para hacer la filtración menos difícil) la solución se calienta a temperatura ambiente y se somete a centrifugación (15,000 rpm por 30 minutos en el rotor SS-34). La película blanca se elimina de la parte superior y la mezcla se filtra a través de una membrana de 0.45 mieras utilizando un dispositivo de filtrado desechable bajo vacío. Una columna de fenil sefarosa se pre-equilibra con sulfato de amonio 0.25 M, KPi 5 mM, pH 6. El E5 filtrado se carga y luego se lava con la solución amortiguadora de equilibración hasta que la absorbancia del flujo pasante regrese a un nivel bajo. La columna se lava luego con un volumen de sulfato de amonio 0.125 M, 5 mM KP?, pH 6 (se observa poca absorbancia) . La E5 se eluye con 5 mM KVI f pH 6; se recolectan fracciones pequeñas. Después de que la absorbancia regrese a su base, la columna se eluye luego con agua y se colectan fracciones. Alícuotas pequeñas de cada fracción de posible interés se concentran en columnas de espín, se lavan con agua, y se concentran 3-4x. Las fracciones se analizan luego por gel de IEF. Las fracciones más puras son aquellas cercanas al final de la elución con 5 M KPi, y en el inicio de la elución con agua. Sobre ambos una columna pequeña (25 ml) y una más grande (450 ml), el rendimiento de actividad de reunir las fracciones más puras obtenidas a través del procedimiento anterior fue de 30% total. Estas fracciones eran ya sea una banda sobre IEF teñido con plata, o adicionalmente contenían aproximadamente dos bandas pequeñas. Los niveles de actividad se ensayaron como sigue: Agregar de 5 a 20 µl de una solución de enzima apropiada en una concentración suficiente para proporcionar una cantidad requisito de enzima en la solución final. Agregar 250 µl de RBB-CMC al 2 por ciento por peso (Azul Brillante Re azol R-Carboximetilcelulosa - comercialmente disponible de Mega Zyme, Nórth Rocks, Australia) en solución amortiguadora de acetato de sodio 50 mm a pH 5.5. Someter a centrifugación e incubar a 40°C por 30 minutos. Enfriar en un baño de hielo por 5-10 minutos. Agregar 1000 µl de etanol al 80% que contiene acetato de sodio 0.3 M y acetato de cinc 0.02 M. Someter a centrifugación y dejar asentar por 5-10 minutos. Centrifugar y verter el sobrenadante en celdas o tubos. Medir la densidad óptica de la solución en cada celda a 590 nm. Los niveles más altos de densidad óptica corresponden a niveles mayores de actividad enzimática. Las determinaciones de proteínas se hicieron utilizando el método de BCA con BSA como el estándar de acuerdo a las instrucciones del distribuidor (Pierce, BCA Protein Assay Reagent, Prod. No. 23225). La actividad específica de la E5 cruda (pasta vuelta a solubilizar) se determinó que era de aproximadamente 1.6 unidades/mg de proteína. La E5 purificada tuvo una actividad específica de aproximadamente 11 unidades/mg.

Ejemplo 2 Tratamiento con Proteasa de E5 para Producir E5 Truncada La E5 intacta, solubilizada y purificada como en el Ejemplo 1, se trató con varias proteasas para dar variantes de E5 truncada. Cinco proteasas, Alcalase (disponible de Novo Nordisk, Dinamarca) , Purafect (disponible de Genencor International, Inc.) y tres diferentes proteasas bacterianas mutantes (BA, Bl y B2) cada teniendo un distinto comportamiento catalítico se utilizaron para proporcionar una variedad de diferentes patrones de hidrólisis en E5. Una concentración de cualquiera de 0.5 ó 5 mg/ml de E5 se incubó con 2.5 mg/ml de proteasa. Las incubaciones se hicieron a pH 5 (solución amortiguadora de NaOAc) , 7 (solución amortiguadora de TES) y 9 (solución amortiguadora de glicina) a 20, 37 y 50°C. Se agregó una concentración final de 15 gpg (granos por galón) de Ca+2. Se retiraron alícuotas a 1, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas y 24 horas y se congelaron inmediatamente. Las alícuotas tratadas con proteasa se analizaron por geles de IEF (tinción con Coomassie) y para determinar la actividad sobre RBB-CMC como en el Ejemplo 1.

Durante el curso de toda las incubaciones, dos bandas nuevas con pl's ligeramente superiores que la E5 aparecieron cuando se analizaron con IEF. Una superposición utilizando RBB-CMC demostró que al menos una de estas bandas siempre tuvo actividad. La Alcalase produjo bandas de E5 en el tiempo más rápido y así tuvo el mayor efecto sobre E5. Por ejemplo, dada una concentración de 1:5 E5:Alcalase (medida en mg de proteína/ml) a 37°C y pH 7 y 9, las tres bandas sobre un gel de IEF se formaron después de 30 minutos, y la banda de pl más alta es predominante después de 8 horas. Las otras proteasas fueron menos agresivas. Purafect a pH 5 produjo solamente una ligera actividad hacia E5 a 37°C. A pH 7 y 9, se requirieron al menos 2 horas de incubación antes de cualquier desarrollo significativo en la banda de pl alto. BA y Bl parecieron afectar a E5 menos que Alcalase y Purafect, y requirieron al menos 4 horas de incubación antes de un desarrollo significativo de la banda de pl. BA digiere E5 a las otras bandas pero también puede además degradar E5 (las bandas llegan a ser muy ligeras). Las digestiones con E5:proteasa 1:1 (medidas en mg de proteína/ml) se hicieron a 37°C y pH 9 con Purafect, B2 y Alcalase. De nuevo, la Alcalase digirió a E5 más rápidamente, a una banda después de 8 horas. Con Purafect y B2, ambas de las nuevas bandas se presentaron después de 30 horas, mostrando que estas proteasas digieren E5 más lentamente que la Alcalase. La estabilidad de E5 con Purafect contra el tiempo se muestra en la Figura 8. Como se muestra en la Figura 8, E5 retiene una porción significativa de su actividad original sobre RBB-CMC después de más de 25 horas a 50°C, pH 7. Además, cada una de las mezclas de E5 tratadas con otras proteasas retuvieron al menos 50% de su actividad.

Ejemplo 3 Estabilidad a la Temperatura, Estabilidad al pH, Estabilidad al Almacenamiento y Estabilidad Oxidativa de E5 El perfil de pH de E5 se determinó incubando alícuotas separadas de E5 cruda con RBB-CMC a 70°C por 30 minutos. Una solución amortiguadora de citrato-fosfato se utilizó desde el pH 4-9 y una solución amortiguadora de glicina se utilizó desde el pH 9-11. La actividad se determinó midiendo la absorbancia a 620 nm y los resultados se muestran en la Figura 1. Como se muestra en la Figura 1, E5 tiene un pH óptimo sobre RBB-CMC de aproximadamente 6. ' Se incubaron alícuotas de E5 cruda a pH 5.5 en solución amortiguadora de acetato de sodio 0.05 M por 30 minutos con RBB-CMC a temperaturas que varían entre 40°C y 80°C y la actividad se determinó midiendo la absorbancia a 590 nm. Los resultados se proporcionan en la Figura 2. Como se muestra en la Figura 2, E5 muestra una temperatura óptima en el intervalo de 70-75°C. La estabilidad al pH de E5 durante periodos de tiempo prolongados se midió en una concentración diluida (20 ppm) a 20°C, 37°C y 50°C a pH de 6 (solución amortiguadora de MOPS 50 mM) , 8 (solución amortiguadora de MOPS 50 mM) y 10 (solución amortiguadora de glicina 50 mM) . Durante el curso de nueve días, se retiraron alícuotas y se ensayaron utilizando el ensayo de actividad de RBB-CMC descrito en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en las Figuras 3-5. Como se muestra en las Figuras 3-5, Como se muestra en las Figuras 3-5, a 37°C y 50°C y pH 6, al menos 60-70% de la actividad permanece después de nueve días. A pH 8, ninguna de las incubaciones mostró más de 20% de pérdida en actividad después de nueve días, y a pH 10, no hubo una pérdida significativa en la actividad a 20°C y 37°C, mientras que la incubación a 50°C perdió 50% de su actividad después de nueve días. Como puede verse de los resultados mostrados en las Figuras 3-5, E5 es muy estable en cada una de las condiciones probadas por periodos de tiempo prolongados. La actividad oxidativa de E5 se probó preincubando 15 ppm de E5 cruda con 90 a 900 ppm de perborato en solución amortiguadora de MOPS (pH 7) a 40°C. Se retiraron alícuotas durante un periodo de 30 minutos y se ensayaron por RBB-CMC para determinar su actividad como en el Ejemplo 1. No hubo una pérdida detectable de actividad comparado al control de cualquiera de las incubaciones (Figura 6) . Por comparación, EGIII de Tri choderma l ongibra chi a t um es completamente inactivada por aproximadamente 500 ppm de perborato + 170 ppm de TAED a pH 5.5 y 50°C. La actividad de E5 en presencia de perborato se probó también por estudios de eliminación de fibra superficial en un medidor de lavado. La prueba de realizó poniendo en contacto la celulasa cruda a 60°C por una hora a pH 9 (solución amortiguadora de glicina) con muestras de algodón. Los resultados indican que puede haber una pequeña pérdida de actividad con el perborato, pero no es dependiente de la concentración de perborato. Aún la incubación con 900 ppm de perborato mostró una buena eliminación de fibra superficial. El control de 900 ppm de perborato sin enzima mostró una eliminación de fibra superficial reducida.

Ejemplo 4 Efecto de Varios Amortiguadores sobre la Actividad de E5 Se incubó E5 con RBB-CMC con una variedad de amortiguadores a pH que varía para determinar el efecto sobre la actividad de cada amortiguador. Cada amortiguador se probó a 20, 100 y 200 mM. A pH 5, se utilizaron citrato, succinato y acetato de sodio; a pH 7, se utilizaron fosfato, MOPS y TES; y a pH 9, se utilizaron borato y CHES. Las soluciones que contenían E5, amortiguador y RBB-CMC se incubaron por 30 minutos a 40°C, y luego se analizaron para determinar la actividad de la celulasa como se describe en el Ejemplo 1. La actividad se estandarizó a la concentración de amortiguador 20 mM bajo cada condición del amortiguador. Como se muestra en la Tabla 1 más abajo, E5 probó ser relativamente insensible a los amortiguadores o concentraciones utilizados.

TABLA 1 Actividad a pH 5 Concentración del Acetato de Sodio Citrato Succinato Amortiguador, mM 20 100 LOO 100 100 84 87 95 200 78 65 88 Actividad a pH 7 Concentración del MOPS Fosfato de Potasio TES Amortiguador, mM 20 100 100 100 100 127 118 120 200 129 83 117 Actividad a pH 9 Concentración del Borato TES Amortiguador, mM 20 100 100 100 100 113 200 130 129 Ejemplo 5 Eliminación de Fibra Superficial para E5 y E5 Tratada con Proteasa E5 se probó utilizando 100, 300, 500 y 1000 unidades de RBB-CMC en 400 ml de solución amortiguadora a pH 6, 7.5, 8.5 y 9.5 a 60°C. Se observó una dosis-respuesta, con excelente actividad de SFR observada en cualquiera de 500 ó 1000 unidades. E5 es óptimamente activa en un amplio intervalo, que se extiende al menos desde alrededor de pH 6.0 a pH 9.5. Estos resultados están resumidos en la Figura 7. Como se muestra en la Figura 7, el perfil de pH para E5 con sustrato insoluble difiere considerablemente del perfil de pH para E5 con RBB-CMC en la Figura 1. Dos series de estudios en el medidor de lavado se realizaron con E5, todas las pruebas comprendían 350 unidades de celulasa en el medidor de lavado. En el primero, la E5 se preincubó con proteasa antes de agregarla al medidor de lavado. Las dos proteasas representativas seleccionadas fueron Purafect y Alcalase. Para la pre-incubación, 40 mg de proteasa (1000 ppm, resultando en 100 ppm después de dilución en el medidor de lavado) se mezclaron con la celulasa y se dejaron reposar por 20 horas a 37°C y pH 9 (solución amortiguadora de glicina) con 15 ppm de calcio. Las condiciones utilizadas habían sido establecidas por los Solicitantes como suficientes para hidrolizar E5 a una proteína de E5 truncada. Se preparó un control con E5 que había sido preincubado con proteasa y un segundo control se preparó con amortiguador solo (sin enzima agregada) . El estudio del medidor de lavado se hizo con la mezcla pre-incubada a 60°C por 1 hora a pH 9 (solución amortiguadora de glicina) sobre muestras de algodón. Los pantalones se secaron luego en un secador de ropa y se clasificaron por un panel de 4 evaluadores. La escala de clasificación para la eliminación de fibra superficial estuvo en el intervalo desde 1 (mayor pelusa superficial) a 5 (menor pelusa superficial). Los resultados se muestran en la Tabla 2. Como se muestra en la Tabla 2, las muestras de E5 pre-incubadas con cualquier proteasa no mostraron una pérdida significativa en la actividad de eliminación de fibra superficial comparado al E5 incubada sin proteasa . Tabla 2 En la segunda serie de estudios en medidor de lavado, las muestras de E5 no fueron pretratadas, sino se agregaron al medidor de lavado con 1, 10 ó 50 ppm de cualquiera de Purafect o Alcalase. Los experimentos de control proporcionaron resultados comparativos para E5 sin proteasa, celulasa de EGII ( Tri ch oderma l ongibra chi a t um ) sin proteasa, amortiguador, y cualquiera de Alcalasa o Purafect sola. Los resultados se muestran en la Tabla 3. Como se muestra en la Tabla 3, la clasificación del panel de las muestras tratadas con E5 y proteasa mostraron solamente una reducción pequeña en la eliminación de fibra superficial comparada a E5 sin proteasa.

Tabla 3 Como se estableció en lo anterior, E5 es digerida por proteasas a una proteína truncada que tiene excelente actividad ambos sobre RBB-CMC (ver Figura 8) y sobre fibras superficiales de algodón. Esto es especialmente aparente en la prueba del medidor de lavado, la cual muestra que E5 es activa aún en presencia de un alto nivel de proteasa durante una incubación de 1 hora con la muestra.

Ejemplo 6 Abrasión de la Tela de Mezclilla con E5 y E5 truncada Se probó E5 cruda para determinar la eficiencia de abrasión sobre mezclilla para determinar la efectividad de E5 en aplicaciones de lavado a la piedra. Los experimentos de lavado a la piedra se realizaron en una Unimac. La enzima (13,500 unidades de RBB-CMC de E5 o E5 truncada hecha por incubación con Alcalase) se agregó a la solución, la cual contenía MOPS 20 mM, 9.5 g de Tritón X-100, pH 7.0, y ocho pemiles de pantalón de mezclilla previamente desaprestados. La temperatura fue de 60°C. Cuatro pemiles se retiraron después de 60 minutos y se enjuagaron en agua fría. Se regresaron a la Unimac 30 minutos después. En este tiempo, se hizo un post-lavado con detergente a 70°C utilizando 50 g de detergente. Los pemiles se secaron luego en un secador para ropa y se clasificaron por un panel de evaluadores. La escala de clasificación es un panel de muestra de mezclilla que varían en abrasión de 1 (no abrasión) a 10 (muy raspados).

TABLA 4 TABLA 5 Como puede verse de las Tablas 4 y 5, E5 tiene excelentes niveles de abrasión después de ambos de 60 y 90 minutos. Más sorprendentemente, en este ejemplo la abrasión no se reduce con el truncado de la enzima.

Ejemplo 7 Desaprestado y Decolorado Simultáneos Doce pantalones vaqueros aprestados se utilizaron para demostrar la eficacia de E5 en un proceso simultáneo de desaprestado y decolorado. Los pantalones se combinaron en una solución que tenía una concentración final de amortiguador de MOPS 40 mM, pH 7 y también contenían 10 g de Tritón X-100. A estos se agregaron 14,000 unidades de E5 cruda y 5 ml de a-amilasa derivada de Bacil l us li cheniformi s , y el ciclo corrió a 65°C y 36 rpm. La mitad de los pantalones se retiraron después de 30 minutos y se enjuagaron en agua fría, mientras que los otros continuaron hasta los 60 minutos. No se hizo post-lavado con detergente. Después de secar, los pantalones se clasificaron por un panel de evaluadores. La escala de clasificación es un panel de muestras de mezclilla que varían en la abrasión desde 1 (no abrasión) a 10 (muy raspado) .

TABLA 6 Sorprendentemente, la cantidad de abrasión y el patrón son similares a aquellos obtenidos a partir de pantalones vaqueros que han sido primero desaprestados antes del lavado a la piedra con E5 (ver, por ejemplo, el Ejemplo 6).

Ejemplo 8 Eficiencia de E5 en Detergentes La evaluación de la eliminación de fibra superficial de muestras de algodón con E5 se condujo en un Terg-O-Tómetro bajo condiciones que incluían una temperatura de 100°C ó 140°C por un ciclo de lavado de 2.5 horas a una velocidad de agitación de 125 rpm y una dureza de agua de 150 ppm (CaC03) . Se cargaron 8 muestras (4 de tejido de punto, 4 de tela tejida) por recipiente de prueba. Se probaron dos tipos de tejidos: un material de punto entrecruzado de algodón obtenido de Burlington Mills in North Carolina, y material de algodón tejido, estilo 400, de Teslfabrics, Inc. en New Jersey. Todas las pruebas se realizaron en detergentes para lavandería líquido comercialmente disponibles, Cheer® "Fee", comprado en un supermercado local. El detergente líquido se trató con calor por 30 minutos a 95°C para destruir la actividad de la celulasa (HT Cheer®) y se agregó E5 en una concentración de 5 mg/l. Se utilizaron condiciones idénticas en pruebas comparativas con Cheer® no tratado con calor y Cheer® tratado con calor sin E5. Las muestras tratadas se compararon a un grupo de muestras de clasificación estándar por un panel de evaluadores quiénes asignaron una puntuación de Clasificación de Apariencia Superficial. Las muestras con clasificaciones estándar estuvieron en el intervalo de 0= (mucha pelusa y pilled) a 7= (sin pelusa o pills) . Los resultados se promediaron y se muestran en las Figuras 9 y 10.

Ejemplo 9 Estabilidad de E5 en Detergente Líquido E5 se probó para determinar la estabilidad en detergente líquido. E5 o una celulasa aislada de Tri choderma l ongibra chi a t um se incubaron en detergente Wisk® a una temperatura de 38°C y una concentración de 1300 mg/l y 695 mg/l, respectivamente. Se extrajeron muestras en varios puntos de tiempo y la actividad remanente de celulasas se probó por el método de PAHBAH como se describe en M. Lever, Anal. Biochem., vol. 47,' pp . 273-279 (1972) (Las condiciones de ensayo incluyeron: 12 mg/ml de sustrato CMC, amortiguador de MOPS 12 mM, 30 minutos de incubación a 40°C) . Los resultados se muestran en la Figura 11. Como se muestra en la Figura 11, la actividad residual de E5 fue esencialmente inalterada después de incubación por 35 días, mientras que la actividad residual de la celulasa derivada de T . l ongibra chi a t um cayó a casi cero en menos de 15 días. Por supuesto, debe entenderse que un amplio intervalo de cambios y modificaciones puede ser hecho a la modalidad preferida descrita en lo anterior. Por lo tanto se propone que la descripción detallada anterior se entienda en el contexto de las siguientes reivindicaciones, incluyendo todos los equivalentes, las cuales se proponen para definir el alcance de esta invención. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (19)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en lo siguiente:

1. Un método para tratar material celulósico caracterizado porque comprende poner en contacto el material con una celulasa obtenible de Thermomonospora fusca que corresponde a E5, una E5 truncada, o un derivado de las mismas.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la E5 truncada se obtiene a través de hidrólisis proteolítica.

3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la E5 truncada se obtiene a través de técnicas de ingeniería genética.

4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el material celulósico comprende tejido que contiene celulosa.

5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el tejido que contiene celulosa se trata para efectuar un efecto de lavado a la piedra.

6. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el tejido que contiene celulosa se trata para mejorar la apariencia y/o sensación del tejido.

7. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la celulasa se incorpora en una composición detergente.

8. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el tejido que contiene celulosa comprende un tejido coloreado decolorado, y la mejora comprende mejorar la apariencia del tejido coloreado decolorado re uveneciendo el color del mismo.

9. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la mejora comprende una sensación más suave o más liso al tejido.

10. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el material celulósico comprende pulpa de madera.

11. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el material celulósico comprende alimento para animales o granos.

12» Una composición de lavado a la piedra caracterizada porque comprende una celulasa seleccionada del grupo que consiste de E5, E5 truncado o un derivado de las mismas.

13. La composición de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque además comprende un surfactante.

14. La composición de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque la composición es un concentrado.

15. Una composición detergente caracterizada porque comprende una celulasa seleccionada del grupo que consiste de E5, E5 truncada o un derivado de las mismas.

16. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada porque la celulasa está presente en una concentración de al menos 10 ppm.

17. Un aditivo para alimento caracterizado porque comprende E5, E5 truncada o un derivado de las mismas .

18. La composición de conformidad con las reivindicaciones 12 ó 15, caracterizada porque la E5 truncada difiere de E5 porque tiene cualquier segmento de residuos de aminoácidos 1-120 de la E5 suprimida .

19. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada porque el detergente es un líquido.