[go: up one dir, main page]

EA037044B1 - Антитело, связывающее склеростин, и его применение - Google Patents

Антитело, связывающее склеростин, и его применение Download PDF

Info

Publication number
EA037044B1
EA037044B1 EA201400933A EA201400933A EA037044B1 EA 037044 B1 EA037044 B1 EA 037044B1 EA 201400933 A EA201400933 A EA 201400933A EA 201400933 A EA201400933 A EA 201400933A EA 037044 B1 EA037044 B1 EA 037044B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
bone
antibody
sclerostin
amino acid
Prior art date
Application number
EA201400933A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201400933A1 (ru
Inventor
Кристофер Пашти
Мартин Ким Робинсон
Кевин Грэхам
Элистер Джеймс Генри
Келли Сью Хоффманн
Джон Лэтам
Эластэйр Лоусон
Сиэн Сэнь Лу
Энди Поупплвелл
Вэньянь Шэнь
Дэвид Уинклер
Аарон Джордж Уинтерс
Original Assignee
Юсб Фарма С.А.
Эмджен Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=36992590&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA037044(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Юсб Фарма С.А., Эмджен Инк. filed Critical Юсб Фарма С.А.
Publication of EA201400933A1 publication Critical patent/EA201400933A1/ru
Publication of EA037044B1 publication Critical patent/EA037044B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/12—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for climacteric disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A61P5/16—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4 for decreasing, blocking or antagonising the activity of the thyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/79—Transferrins, e.g. lactoferrins, ovotransferrins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/51—Bone morphogenetic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к антителу, которое связывается с фрагментом склеростина, к его вариантам и различным способам его применения.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение главным образом относится к эпитопам белка склеростина, включая белок склеростина человека, и связывающим агентам (таким как антитела), способным связываться со склеростином или его фрагментами.
Уровень техники
На протяжении жизни человека наблюдаются две или три различные фазы изменений костной массы (см. Riggs, West J., Med. 154:63-77 (1991)). Первая фаза наступает у мужчин и женщин и продолжается до достижения пика костной массы. Указанная первая фаза достигается посредством линейного роста хрящевых ростовых пластинок и радиального роста вследствие определенной степени утолщения надкостницы. Вторая фаза начинается примерно в возрасте 30 лет в случае трабекулярной кости (плоские кости, такие как позвонки и кости таза) и в возрасте примерно 40 лет в случае трубчатой кости (например, длинных костей, имеющихся в конечностях) и продолжается до старости. Данная фаза характеризуется медленной потерей костной массы и происходит как у мужчин, так и у женщин. У женщин также имеет место третья фаза потери костной массы, наиболее вероятно вследствие постменопаузной недостаточности эстрогенов. Во время указанной фазы женщины могут дополнительно терять костную массу из трубчатых костей и из трабекулярной части (см. Riggs, выше). Потеря содержания минеральных веществ в костях может быть вызвана широким множеством состояний и может приводить к существенным медицинским проблемам. Например, остеопороз является подрывающим здоровье заболеванием человека и характеризуется заметным снижением массы и минеральной плотности костей скелета, повреждением структуры костей, включая разрушение микроархитектуры костей, и соответствующим увеличением ломкости костей (т.е. снижением прочности костей) и чувствительности к переломам у страдающих заболеванием людей. Остеопорозу у людей обычно предшествует клиническая остеопения (минеральная плотность костей, которая более чем на одно стандартное отклонение, но менее чем на 2,5 стандартных отклонений ниже среднего значения для костей взрослых молодых людей), состояние, встречающееся примерно у 25 млн людей в Соединенных Штатах Америки. У других 7-8 млн людей в США диагностирован клинический остеопороз (определяемый как состояние, при котором содержание минеральных веществ в костях более чем на 2,5 стандартных отклонения ниже, чем в костях взрослых молодых людей). Частота встречаемости остеопороза в популяции человека увеличивается с возрастом. Среди европеоидов остеопороз преобладает у женщин, которые в США составляют 80% от всех пациентов, больных остеопорозом. Повышенная ломкость и чувствительность к переломам костей скелета у пожилых людей усугубляются более высоким риском случайных падений в данной популяции. Переломы бедра, запястья и позвонков являются наиболее распространенными повреждениями, связанными с остеопорозом. Переломы бедра, в частности, вызывают наибольший дискомфорт, и их лечение является дорогостоящим для пациента, а для женщин переломы бедра коррелируют с высоким уровнем смертности и заболеваемости.
Хотя остеопороз рассматривают как увеличение риска переломов вследствие пониженной массы костей, некоторые имеющиеся в настоящее время способы лечения заболеваний скелета могут увеличивать плотность костей у взрослых людей, и большинство доступных в настоящее время способов лечения главным образом действуют посредством ингибирования дальнейшей резорбции костей, а не за счет стимуляции образования новой костной ткани. В настоящее время назначают эстроген для того, чтобы замедлить потерю костной массы. Однако существуют некоторые расхождения во мнениях по поводу того, получают ли пациенты какую-либо долговременную пользу, и оказывает ли эстроген какое-либо влияние на пациентов старше 75 лет. Кроме того, полагают, что применение эстрогена увеличивает риск развития рака молочной железы и эндометриального рака. Для женщин в постменопаузный период также предлагали кальцитонин, остеокальцин с витамином K или высокие дозы кальция в продуктах питания с витамином D или без него. Однако высокие дозы кальция часто имеют нежелательные побочные эффекты в желудочно-кишечном тракте, и необходимо постоянно контролировать уровни кальция в сыворотке и моче (например, Khosla and Riggs, Mayo Clin. Proc. 70:978982, 1995).
Другие современные терапевтические способы лечения остеопороза включают применение бифосфонатов (например, Fosamax™, Actonel™, Bonviva™, Zometa™, олпадронат, неридронат, скелид, бонефос), паратиреоидного гормона, кальцийлитиков, миметиков кальция (например, цинакальцета), статинов, анаболических стероидов, солей лантана и стронция, и фторида натрия. Однако такие терапевтические средства часто связаны с нежелательными побочными эффектами (см. Khosla and Riggs, выше).
Склеростин, продукт гена SOST, отсутствует при склеростеозе, заболевании скелета, характеризующемся чрезмерным ростом костей и высокой плотностью костей (Brunkow et al., Am. J. Hum. Genet., 68:577-589, 2001; Balemans et al., Hum. Mol. Genet., 10:537-543, 2001). Аминокислотная последовательность склеростина человека сообщается в Brunkow et al., там же, и указана в данном описании в виде SEQ ID NO: 1.
- 1 037044
Сущность изобретения
В данном описании раскрыты композиции и способы, которые могут быть использованы для увеличения по меньшей мере одного признака: остеогенеза, минеральной плотности костей, содержания минеральных веществ в костях, костной массы, качества костей и прочности костей, и которые поэтому можно применять для лечения широкого множества состояний, при которых требуется увеличение по меньшей мере одного из признаков: остеогенеза, минеральной плотности костей, содержания минеральных веществ в костях, костной массы, качества костей и прочности костей. Настоящее изобретение также обеспечивает другие связанные преимущества, указанные в данном описании.
Изобретение относится к областям (эпитопам) склеростина человека, узнаваемым связывающими агентами, описанными в данном описании, к способам применения таких эпитопов и способам получения таких эпитопов.
Изобретение также относится к эпитопам, специфичным к области склеростина, идентифицированной в виде петли 2, и к связывающим агентам, которые специфично связываются с данной областью.
Изобретение также относится к эпитопам, специфичным к области цистинового узла склеростина, и к связывающим агентам, таким как антитела, специфично связывающиеся с такой областью.
Изобретение относится к связывающим агентам, таким как антитела, которые специфично связываются со склеростином. Связывающие агенты можно характеризовать по их способности перекрестно блокировать связывание по меньшей мере одного антитела, раскрытого в данном описании, со склеростином и/или перекрестно блокироваться в отношении связывания со склеростином по меньшей мере одним антителом, раскрытым в данном описании. Антитела и другие связывающие агенты также можно охарактеризовать по картине связывания с пептидами склеростина человека в анализе конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека, который описан в данной описании.
Изобретение относится к связывающим агентам, таким как антитела, которые могут увеличивать по меньшей мере один из признаков: остеогенез, минеральную плотность костей, содержание минеральных веществ в костях, костную массу, качество костей и прочность костей у млекопитающего.
Изобретение относится к связывающим агентам, таким как антитела, которые могут блокировать ингибирующее действие склеростина в анализе минерализации, основанном на клетках.
Изобретение, кроме того, относится к конструкциям полипептидов, содержащим два, три или четыре полипептидных фрагмента, связанных по меньшей мере одной дисульфидной связью, представляющих собой коровую область цистинового узла склеростина, и к антителам, способным специфично связываться с ними.
Изобретение относится к способам получения эпитопов, подходящих для применения в качестве иммуногенов для образования у млекопитающих связывающих агентов, таких как антитела, способные специфично связываться со склеростином; в некоторых вариантах образованные связывающие агенты способны нейтрализовать активность склеростина in vivo.
Изобретение относится к композиции, вызывающей образование антитела, специфичного по отношению к склеростину, при введении композиции животному, при этом композиция содержит полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 или SEQ ID NO: 69.
Изобретение также относится к композиции, вызывающей образование антитела, специфичного по отношению к склеростину при введении композиции животному, при этом композиция содержит по меньшей мере один полипептид, по существу состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5; композиция может содержать по меньшей мере две или по меньшей мере три аминокислотных последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, и композиция может содержать все четыре аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5.
Изобретение, кроме того, относится к композиции, вызывающей образование антитела, специфичного по отношению к склеростину, при введении композиции животному, при этом композиция содержит полипептид, имеющий аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, в котором последовательности SEQ ID NO: 2 и 4 связаны дисульфидной связью в положениях аминокислот 57 и 111 относительно SEQ ID NO: 1, и SEQ ID NO: 3 и 5 связаны по меньшей мере одной связью из (а) дисульфидной связи в положениях аминокислот 82 и 142 относительно SEQ ID NO: 1, и (b) дисульфидной связи в положениях аминокислот 86 и 144 относительно SEQ ID NO: 1; полипептид может сохранять третичную структуру соответствующей области полипептида склеростина человека с последовательностью SEQ ID NO: 1.
Изобретение также относится к полипептиду T20.6, по существу состоящему из многократно укороченного белка склеростина человека с последовательностью SEQ ID NO: 1, в котором аминокислоты 1-50, 65-72, 91-100, 118-137 и 150-190 последовательности полипептида SEQ ID NO: 1 отсутствуют; такой полипептид может быть получен расщеплением склеростина человека трипсином, и белок может быть выделен ВЭЖХ-фракционированием.
Изобретение, кроме того, относится к иммуногенной части T20.6 склеростина человека, содержащей аминокислоты 51-64, 73-90, 101-117 и 138-149 последовательности SEQ ID NO: 1, при этом иммуно
- 2 037044 генная часть содержит по меньшей мере одну из связей:
(а) дисульфидную связь между аминокислотами 57 и 111;
(b) дисульфидную связь между аминокислотами 82 и 142; и (c) дисульфидную связь между аминокислотами 86 и 144; иммуногенная часть может иметь по меньшей мере две из указанных дисульфидных связей; и иммуногенная часть может иметь все три дисульфидных связи.
Изобретение, кроме того, относится к иммуногенной части T20.6, полученной из склеростина человека, содержащей аминокислоты 57-64, 73-86, 111-117 и 138-144 последовательности SEQ ID NO: 1, при этом иммуногенная часть содержит по меньшей мере одну из связей:
(a) дисульфидную связь между аминокислотами 57 и 111;
(b) дисульфидную связь между аминокислотами 82 и 142; и (c) дисульфидную связь между аминокислотами 86 и 144; иммуногенная часть может иметь по меньшей мере две из указанных дисульфидных связей; и иммуногенная часть может иметь все три дисульфидных связи.
Изобретение также относится к полипептиду, по существу состоящему из белка склеростина человека с последовательностью SEQ ID NO: 1, укороченной на С-конце и N-конце, при этом в полипептиде отсутствуют аминокислоты 1-85 и 112-190 последовательности SEQ ID NO: 1.
Изобретение также относится к иммуногенной части склеростина человека, содержащей аминокислоты 86-111 последовательности SEQ ID NO: 1, при этом иммуногенная часть в основном может состо ять из непрерывно связанных аминокислот CGPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC (SEQ ID NO: 6)
Изобретение, кроме того, относится к иммуногенной части склеростина крыс, содержащей аминокислоты 92-109 последовательности SEQ ID NO: 98, при этом иммуногенная часть в основном может состоять из непрерывно связанных аминокислот PNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO: 96)
Изобретение также относится к иммуногенной части склеростина крысы, содержащей аминокислоты 99-120 последовательности SEQ ID NO: 98, при этом иммуногенная часть в основном может состоять из непрерывно связанных аминокислот KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV (SEQ ID NO:97)
Изобретение относится к способу получения иммуногенной части склеростина человека, включаю щему стадии:
(a) обработки склеростина человека для получения полного расщепления трипсином;
(b) сбора образца после расщепления трипсином, имеющего среднюю молекулярную массу 7122,0 дальтон (теоретическая масса 7121,5 дальтон) или время удержания примерно 20,6 мин, определяемое при элюировании с колонки для обращенно-фазовой ВЭЖХ с линейным градиентом от 0,05% трифторуксусной кислоты до 90% ацетонитрила в 0,05% TFA со скоростью потока 0,2 мл/мин; и (c) очистки иммуногенной части.
Изобретение относится к способу получения антитела, способного специфично связываться со склеростином, включающему:
(a) иммунизацию животного композицией, содержащей полипептид SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 96 или SEQ ID NO: 97;
(b) сбор сыворотки от животного; и (c) выделение из сыворотки антитела, способного специфично связываться со склеростином.
Изобретение также относится к способу получения антитела, способного специфично связываться со склеростином, включающему:
(а) иммунизацию животного композицией, содержащей полипептид T20.6 или производное T20.6;
(b) сбор сыворотки от животного; и (с) выделение из сыворотки антитела, способного специфично связываться со склеростином.
Изобретение, кроме того, относится к способу выявления антитела против склеростина в биологическом образце, включающему стадии:
(а) контактирования биологического образца с полипептидом, по существу состоящим из последовательности SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 96 или SEQ ID NO: 97, в условиях, обеспечивающих образование комплекса между антителом и полипептидом; и (b) выявления присутствия или отсутствия комплекса, при этом присутствие комплекса свидетельствует о том, что биологический образец содержит антитело против склеростина.
Изобретение также относится к способу выявления антитела против склеростина в биологическом образце, включающему стадии:
(а) контактирования биологического образца с полипептидом T20.6 или производным T20.6 в условиях, обеспечивающих образование комплекса между антителом и полипептидом; и (b) выявления присутствия или отсутствия комплекса, при этом присутствие комплекса свидетельствует, что биологический образец содержит антитело против склеростина.
Изобретение, кроме того, относится к связывающему склеростин агенту, такому как антитело, ко
- 3 037044 торый перекрестно блокирует связывание по меньшей мере одного из антител Ab-A, Ab-В, Ab-С или AbD с белком склеростином. Связывание связывающего склеростин агента со склеростином также может быть перекрестно блокировано по меньшей мере одним из антител Ab-А, Ab-В, Ab-С или Ab-D. Изолированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может быть поликлональным антителом, моноклональным антителом, гуманизированным антителом, антителом человека, химерным антителом или тому подобным.
Изобретение, кроме того, относится к связывающему склеростин агенту, такому как антитело, связывание которого со склеростином перекрестно блокируется по меньшей мере одним из антител Ab-A, Ab-B, Ab-C или Ab-D. Изолированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может быть поликлональным антителом, моноклональным антителом, гуманизированным антителом, антителом человека, химерным антителом или тому подобным.
Изобретение, кроме того, относится к связывающему склеростин агенту, такому как изолированное антитело, которое перекрестно блокирует связывание по меньшей мере одного из антител 1-24 (Ab-1-Ab24) с белком склеростином. Связывание связывающего склеростин агента со склеростином также может быть перекрестно блокировано по меньшей мере одним из антител 1-24 (Ab-1-Ab-24). Изолированным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом может быть поликлональное антитело, моноклональное антитело, гуманизированное антитело, антитело человека или химерное антитело.
Изобретение, кроме того, относится к связывающему склеростин агенту, такому как изолированное антитело, связывание которого со склеростином перекрестно блокируется по меньшей мере одним из антител 1-24 (Ab-1-Ab-24), при этом изолированным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом может быть поликлональное антитело, моноклональное антитело, гуманизированное антитело, антитело человека или химерное антитело.
Изобретение, кроме того, относится к связывающему агенту, такому как изолированное антитело, которое проявляет картину связывания с пептидами склеростина человека в анализе конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека, сходную с картиной связывания, проявляемой по меньшей мере одним из антител Ab-А, Ab-В, Ab-С или Ab-D, при этом изолированным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом может быть поликлональное антитело, моноклональное антитело, гуманизированное антитело, антитело человека или химерное антитело.
Изобретение также относится к способу лечения заболевания костей, связанного по меньшей мере с одним из признаков: недостаточным остеогенезом, низкой минеральной плотностью костей, низким содержанием минеральных веществ в костях, низкой костной массой, низким качеством костей и низкой прочностью костей у млекопитающего, который включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, количества связывающего агента против склеростина, достаточного для увеличения по меньшей мере одного из признаков: остеогенеза, минеральной плотности костей, содержания минеральных веществ в костях, костной массы, качества костей и прочности костей, при этом связывающий против склеростина агент включает антитело или его связывающий склеростин фрагмент.
Изобретение также относится к изолированному полипептиду склеростина или его фрагментам, при этом полипептид содержит 6 консервативных остатков цистеина, и его фрагменты содержат от 7 до 14 аминокислот последовательности SEQ ID NO: 2, от 8 до 17 аминокислот последовательности SEQ ID NO: 3, от 8 до 18 остатков последовательности SEQ ID NO: 4 и от 6 до 12 остатков последовательности SEQ ID NO: 5; и полипептид или его фрагменты стабилизированы дисульфидными связями между последовательностями SEQ ID NO: 2 и 4 и между последовательностями SEQ ID NO: 3 и 5, полипептид или фрагменты могут содержать 10-14 аминокислот последовательности SEQ ID NO: 2, от 14 до 17 аминокислот последовательности SEQ ID NO: 3, от 13 до 18 аминокислот последовательности SEQ ID NO: 4 и от 8 до 12 остатков последовательности SEQ ID NO: 5; и полипептид или фрагменты могут содержать последовательности SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5.
В настоящем изобретении предлагаются антитела, которые специфично связываются со склеростином человека. Антитела характеризуются их способностью перекрестно блокировать связывание по меньшей мере одного антитела, указанного в данном описании, со склеростином человека и/или характеризуются перекрестным блокированием их связывания со склеростином человека по меньшей мере одним антителом, указанным в данном описании.
Также предлагается изолированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые могут увеличивать по меньшей мере один из признаков: остеогенез, минеральную плотность костей, содержание минеральных веществ в костях, костную массу, качество костей и прочность костей у млекопитающего.
Также предлагается изолированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые могут блокировать ингибирующее действие склеростина в анализе минерализации, основанном на клетках.
Также предлагается связывающий агент, такой как антитело, который специфично связывается со склеростином человека и имеет по меньшей мере одну последовательность CDR, выбранную из SEQ ID NO: 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 78, 79, 80, 81, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263,
- 4 037044
264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285,
286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 351, 352, 353, 358, 359 и 360, и их вариантов, при этом антитело или его антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует склеростин.
Также предлагается связывающий агент, такой как антитело, который специфично связывается со склеростином человека и имеет по меньшей мере одну последовательность CDR, выбранную из SEQ ID NO: 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 78, 79, 80, 81, 99,
100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 237, 238, 239, 240,241,
242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262,263,
264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284,285,
286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 351, 352, 353, 358, 359 и 360, и их вариантов.
Также предлагаются области склеростина человека, которые имеют важное значение для активности белка in vivo.
Указанные и другие аспекты настоящего изобретения станут очевидными при обращении к следующему подробному описанию и прилагаемым чертежам. Все ссылки, приведенные в данном описании, включены при этом в виде ссылки в полном объеме, также как в случае, когда каждую ссылку включают по отдельности.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 изображены аминокислотные последовательности зрелой формы (после отщепления сигнальных пептидов) легкой цепи (фиг. 1А) (SEQ ID NO: 23) и тяжелой цепи (фиг. 1B) (SEQ ID NO: 27) антитела против склеростина человека и против склеростина мыши Ab-А.
На фиг. 2 изображены аминокислотные последовательности зрелой формы (после отщепления сигнальных пептидов) легкой цепи (фиг. 2А) (SEQ ID NO: 31) и тяжелой цепи (фиг. 2В) (SEQ ID NO: 35) антитела против склеростина человека и против склеростина мыши Ab-В.
На фиг. 3 изображены аминокислотные последовательности зрелой формы (после отщепления сигнальных пептидов) легкой цепи (фиг. 3А) (SEQ ID NO: 15) и тяжелой цепи (фиг. 3В) (SEQ ID NO: 19) антитела против склеростина человека и против склеростина мыши Ab-С.
На фиг. 4 изображены аминокислотные последовательности зрелой формы (после отщепления сигнальных пептидов) легкой цепи (фиг. 4А) (SEQ ID NO: 7) и тяжелой цепи (фиг. 4В) (SEQ ID NO: 11) антитела против склеростина человека и против склеростина мыши Ab-D.
На фиг. 5 показана минеральная плотность костей у мышей, измеренная в двух местах скелета (поясничные позвонки и метафиз большеберцовой кости) после 3 недель обработки наполнителем, РТН (134), Ab-А или Ab-В.
На фиг. 6 показана минеральная плотность костей у мышей, измеренная в двух местах скелета (поясничные позвонки и метафиз большеберцовой кости) после 2 недель обработки наполнителем, РТН (134) или Ab-С.
На фиг. 7 показана минеральная плотность костей у мышей, измеренная в двух местах скелета (поясничные позвонки и метафиз большеберцовой кости) после 3 недель обработки наполнителем или AbD.
На фиг. 8 изображена аминокислотная последовательность зрелой формы (после отщепления сигнального пептида) склеростина человека (SEQ ID NO: 1). Также изображена нуклеотидная последовательность кодирующей области склеростина человека, которая кодирует зрелую форму склеростина человека. Восемь цистеинов пронумерованы от С1 до С8. Цистиновый узел образован тремя дисульфидными связями (С1-С5; С3-С7; С4-С8). С2 и С6 также образуют дисульфидную связь, однако данный дисульфид не является частью цистинового узла.
На фиг. 9 показана схема основной структуры склеростина человека. Имеется N-концевое плечо (от первого Q до С1) и С-концевое плечо (от С8 до концевого Y). Между указанными плечами находится структура цистинового узла (образованного тремя дисульфидами: С1-С5; С3-С7; С4-С8) и три петли, которые обозначены - петля 1, петля 2 и петля 3. Дистальные области петли 1 и петли 3 связаны С2-С6дисульфидом. Указаны потенциальные сайты расщепления трипсином (аргинин=R и лизин=R). Указаны некоторые потенциальные сайты расщепления AspN (показаны только остатки аспарагиновой кислоты (D)).
На фиг. 10 показаны полученные посредством ВЭЖХ пептидные карты склеростина человека после расщепления либо трипсином, либо AspN. Показаны пептиды склеростина человека, образованные при расщеплении трипсином (T19.2, T20, T20.6 и T21-22), также как пептиды склеростина человека, образованные при расщеплении AspN (AspN14.6, AspN18.6 и AspN22.7-23.5).
На фиг. 11 показана информация о последовательности и массе изолированных связанных дисульфидной связью пептидов склеростина человека, образованных при расщеплении трипсином. Пол послед. = положение в последовательности. Набл. = наблюдаемая. Наблюдаемую массу определяли в ESI-ЖХ-МС-анализе.
На фиг. 12 показана информация о последовательности и массе изолированных пептидов склеростина человека, образованных при расщеплении AspN. Пептид AspN22.7-23.5 содержит 4 дисульфидные связи. Пол.послед. = положение в последовательности. Набл. = наблюдаемая. Наблюдаемую массу опре- 5 037044 деляли в ESI-ЖХ-МС-анализе.
На фиг. 13 показана линейная схема четырех пептидов склеростина человека (T19.2, T20, T20.6 и
T21-22), образованных при расщеплении трипсином.
На фиг. 14 показана линейная схема пяти пептидов склеростина человека (AspN14.6, AspN18.6 и AspN22.7-23.5), образованных при расщеплении AspN. Пик ВЭЖХ AspN14.6 состоит из трех пептидов, не связанных дисульфидными связями.
На фиг. 15 показан резонансный сигнал в единицах (Ru) в основанном на Biacore анализе конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека. Оценивали относительное связывание мАт с различными пептидами склеростина человека (в растворе) по сравнению со связыванием мАт с интактной зрелой формой склеростина человека (иммобилизованного на чипе Biacore). Данные показаны для Ab-А. Использовали следующие пептиды склеростина человека: T19.2, T20, T20.6, T21-22, AspN14.6, AspN18.6 и AspN22.7-23.5.
На фиг. 16 показан резонансный сигнал в единицах (Ru) в основанном на Biacore анализе конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека. Оценивали относительное связывание мАТ с различными пептидами склеростина человека (в растворе) по сравнению со связыванием мАт с интактной зрелой формой склеростина человека (иммобилизованной на чипе Biacore). Данные показаны для Ab-В. Использовали следующие пептиды склеростина человека T19.2, T20, T20.6, T21-22, AspN14.6, AspN18.6 и AspN22.7-23.5.
На фиг. 17 показан резонансный сигнал в единицах (Ru) в основанном на Biacore анализе конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека. Оценивали относительное связывание мАт с различными пептидами склеростина человека (в растворе) по сравнению со связыванием мАт с интактной зрелой формой склеростина человека (иммобилизованной на чипе Biacore). Данные показаны для Ab-С. Использовали следующие пептиды склеростина человека T19.2, T20, T20.6, T21-22, AspN14.6, AspN18.6 и AspN22.7-23.5.
На фиг. 18 показан резонансный сигнал в единицах (Ru) в основанном на Biacore анализе конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека. Оценивали относительное связывание мАт с различными пептидами склеростина человека (в растворе) по сравнению со связыванием мАт с интактной зрелой формой склеростина человека (иммобилизованной на чипе Biacore). Данные показаны для Ab-D. Использовали следующие пептиды склеростина человека T19.2, T20, T20.6, T21-22, AspN14.6, AspN18.6 и AspN22.7-23.5.
На фиг. 19 показаны два связывающих мАт эпитопа склеростина человека. На фиг. 19А показана последовательность эпитопа петли 2 для связывания Ab-А и Ab-В со склеростином человека (SEQ ID NO: 6). На фиг. 19В показаны последовательность, дисульфидные связи и схема эпитопа T20.6 для связывания Ab-С и Ab-D со склеростином человека (SEQ ID NO: 2-5).
На фиг. 20 изображены полученные посредством ВЭЖХ пептидные карты склеростина человека после расщепления трипсином. На фиг. 20А показано расщепление комплекса склеростина человека и Ab-D. На фиг. 20В показано расщепление склеростина человека отдельно. Указаны пики пептидов T19.2, T20, T20.6 и T21-22.
На фиг. 21 показаны последовательность, дисульфидные связи и схема эпитопа производного 1 T20.6 (цистиновый узел + 4 плеча) для связывания Ab-D со склеростином человека (SEQ ID NO: 70-73).
На фиг. 22 показаны результаты анализа минерализации клеточной линии остеобластов MC3T3-E1BF, используемого для идентификации нейтрализующих мАт против склеростина. Использовали склеростин мыши (Sc1) в концентрации 1 мкг/мл. Моноклональные антитела использовали в концентрации 10 и 5 мкг/мл. Количественно оценивали степень минерализации (различные типы нерастворимого фосфата кальция), измеряя уровень кальция.
На фиг. 23 изображены результаты анализа минерализации клеточной линии остеобластов MC3T3E1-BF, используемого для идентификации нейтрализующих мАт против склеростина.
Использовали склеростин человека (Sc1) в концентрации 1 мкг/мл. Моноклональные антитела использовали в концентрации 8 и 4 мкг/мл. Количественно оценивали степень минерализации (различные типы нерастворимого фосфата кальция), измеряя уровень кальция.
На фиг. 24 показаны результаты анализа минерализации клеточной линии остеобластов MC3T3-E1BF, используемого для идентификации нейтрализующих мАт против склеростина. Использовали склеростин человека (Sc1) в концентрации 1 мкг/мл. Моноклональные антитела использовали в концентрации 10 мкг/мл. Количественно оценивали степень минерализации (различные типы нерастворимого фосфата кальция), измеряя уровень кальция.
На фиг. 25 изображены результаты, полученные в модели индуцированной воспалением потери массы костей у мышей SCID. Обработка Ab-А защищала мышей от связанной с воспалением потери массы при колите, которую измеряли по общей минеральной плотности костей (фиг. 25А), плотности костной ткани позвонков (фиг. 25В) и плотности бедренной кости (фиг. 25С).
- 6 037044
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к областям белка склеростина человека, которые содержат эпитопы, узнаваемые антителами, которые также связываются с полноразмерным склеростином, и к способам получения и применения таких эпитопов. Изобретение также относится к связывающим агентам (таким как антитела), которые специфично связываются со склеростином или частями склеростина, и к способам применения таких связывающих агентов. Связывающие агенты применимы для блокирования или уменьшения связывания склеростина человека с одним или несколькими лигандами.
Рекомбинантный склеростин человека/SOST коммерчески доступен из R&D Systems (Minneapolis, MN, USA; 2006, № в каталоге 1406-ST-025). Кроме того, коммерчески доступен рекомбинантный склеростин мыши/SOST из R&D Systems (Minneapolis, MN, USA; 2006, № в каталоге 1589-ST-025). Очищенные для исследования связывающие склеростин моноклональные антитела коммерчески доступны из R&D Systems (Minneapolis, MN, USA; мышиное моноклональное: 2006, № в каталоге МАВ1406; моноклональное крысы: 2006, № в каталоге МАВ1589). Патенты США № 6395511 и 6803453 и публикации патентов США 20040009535 и 20050106683, в общем, относятся к антителам против склеростина.
В используемом в данном описании смысле подразумевается, что термин склеростин человека включает белок с последовательностью SEQ ID NO: 1 и его аллельные варианты. Склеростин может быть очищен из клеток-хозяев 293T, которые были трансфицированы геном, кодирующим склеростин, посредством элюирования профильтрованного надосадка культуральной жидкости клеток-хозяев на колонке с гепарином HP, используя градиент соли. Получение и последующая очистка с использованием катионообменной хроматографии описаны в примерах 1 и 2.
Связывающие агенты согласно изобретению предпочтительно представляют собой антитела, которые определены в данном описании. Термин антитело относится к интактному антителу или его связывающему фрагменту. Антитело может содержать полную молекулу антитела (включая варианты в виде поликлонального, моноклонального, химерного, гуманизированного или антитела человека, имеющего полноразмерные тяжелые и/или легкие цепи) или может содержать его антигенсвязывающий фрагмент. Фрагменты антител включают F(ab')2, Fab, Fab', Fv, Fc и Fd-фрагменты, и они могут быть включены в однодоменные антитела, одноцепочечные антитела, макси-антитела, мини-антитела, внутриклеточные антитела, димерные антитела, тримерные антитела, тетрамерные антитела, v-NAR и bis-scFv (см., например, Hollinger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9, 1126-1136). Полипептиды антител также описаны в патенте США № 6703199, включая полипептидные моноантитела против фибронектина. Другие полипептиды антител описаны в публикации патента США 2005/0238646, которые представляют собой одноцепочечные полипептиды.
Антигенсвязывающие фрагменты, получаемые из антитела, могут быть получены, например, протеолитическим гидролизом антитела, например, расщеплением пепсином или папаином целых антител обычными способами. В качестве примера фрагменты антител могут быть получены ферментативным расщеплением антител пепсином с образованием 5S-фрагмента, названного F(ab')2. Указанный фрагмент может быть дополнительно расщеплен с использованием восстанавливающего тиол агента с получением моновалентных 3,5S Fab'-фрагментов. Необязательно реакцию расщепления можно осуществлять с использованием группы, блокирующей сульфгидрильные группы, которые образуются в результате расщепления дисульфидных связей. В качестве альтернативы ферментативное расщепление с использованием папаина непосредственно дает два моновалентных Fab-фрагмента и Fc-фрагмент. Указанные способы описаны, например, Goldenberg в патенте США № 4331647, Nisonoff et al., Arch. Biochem. Biophys. 89:230, 1960; Porter, Biochem. J. 73:119, 1959; Edelman et al., Methods in Enzymology 1:422 (Academic Press 1967); и Andrews, S.M. and Titus, J.A. Current Protocols in Immunology (Coligan J.E., et al., eds), John Wiley and Sons, New York (2003), страницы 2.8.1-2.8.10 и 2.10A. 1-2.10A.5. Также можно применять другие способы расщепления антител, такие как разделение тяжелых цепей, с образованием моновалентных фрагментов, состоящих из легкой и тяжелой цепей (Fd), дополнительное расщепление фрагментов или другие ферментативные, химические или генетические способы, при условии, что фрагменты связываются с антигеном, который узнается интактным антителом.
Фрагмент антитела также может представлять собой любой синтетический или генетически сконструированный белок. Например, фрагменты антител включают изолированные фрагменты, состоящие из вариабельной области легкой цепи, Fv-фрагменты, состоящие из вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, рекомбинантные одноцепочечные полипептидные молекулы, в которых вариабельные области легкой и тяжелой цепей связаны пептидным линкером (scFv-белки).
Другой формой фрагмента антитела является пептид, содержащий одну или несколько определяющих комплементарность областей (CDR) антитела. CDR (также называемые минимальными единицами узнавания или гипервариабельной областью) могут быть получены конструированием полинуклеотидов, которые кодируют представляющие интерес CDR. Такие полинуклеотиды получают, например, используя полимеразную цепную реакцию, чтобы синтезировать вариабельную область, используя мРНК из продуцирующих антитела клеток в качестве матрицы (см., например, Larrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 2:106, 1991; Courtenay-Luck, Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies, in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering and Clinical Application, Ritter et al. (eds.), page
- 7 037044
166 (Cambridge University Press 1995); и Ward et al., Genetic Manipulation and Expression of Antibodies, in
Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al., (eds.), page 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995)).
Таким образом, в одном варианте связывающий агент содержит по меньшей мере одну CDR, которая описана в данной публикации. Связывающий агент может содержать по меньшей мере две, три, четыре, пять или шесть CDR, которые описаны в данной публикации. Связывающий агент, кроме того, может содержать по меньшей мере один домен вариабельной области антитела, указанного в данном описании. Домен вариабельной области может быть любого размера или иметь любой аминокислотный состав, и, как правило, будет содержать по меньшей мере одну последовательность CDR, ответственную за связывание со склеростином человека, например, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3 и/или CDR легкой цепи, специально описанные в данной публикации, которая расположена рядом или в рамке считывания с одной или несколькими каркасными последовательностями. В общих чертах, домен вариабельной (V) области может иметь любую подходящую структуру вариабельных доменов тяжелой (VH) и/или легкой (VL) цепи иммуноглобулина. Таким образом, например, домен V-области может быть мономерным и может быть VH-доменом или VL-доменом, который способен независимо связывать склеростин человека с аффинностью по меньшей мере равной 1х10-7 M или меньшей, как описано ниже. Альтернативно, домен V-области может быть димерным и может содержать димеры VH-VH, VH-VL или VL-VL. Димер Vобласти содержит по меньшей мере одну VH- и по меньшей мере одну VL-цепь, которые могут быть нековалентно связаны (в дальнейшем называемые FV). При желании цепи могут быть ковалентно связаны либо непосредственно, например, дисульфидной связью между двумя вариабельными доменами, либо через линкер, например, пептидный линкер, с образованием одноцепочечного FV (scFV).
Доменом вариабельной области может быть любой встречающийся в природе вариабельный домен или его сконструированный вариант. Под сконструированным вариантом подразумевается домен вариабельной области, который был создан с использованием методики конструирования рекомбинантной ДНК. Такие сконструированные варианты включают варианты, созданные, например, из вариабельной области специфичного антитела посредством инсерций, делеций или замен в аминокислотных последовательностях специфичного антитела. Конкретные примеры включают сконструированные домены вариабельной области, содержащие по меньшей мере одну CDR и, необязательно, одну или несколько аминокислот каркаса из первого антитела, и остальную часть домена вариабельной области из второго антитела.
Домен вариабельной области может быть ковалентно связан С-концевой аминокислотой по меньшей мере с одним другим доменом антитела или его фрагментом. Таким образом, например VH-домен, который присутствует в домене вариабельной области, может быть связан с доменом CH1 иммуноглобулина или его фрагментом. Подобным образом VL-домен может быть связан с CK-доменом или его фрагментом. Таким образом, антитело может представлять собой, например, Fab-фрагмент, в котором антигенсвязывающий домен содержит ассоциированные VH- и VL-домены, ковалентно связанные на своих Сконцах с доменом CH1 и CK соответственно. Домен CH1 может быть удлинен дополнительными аминокислотами, например, чтобы получить шарнирную область или часть домена шарнирной области, которая имеется в Fab'-фрагменте, или чтобы получить дополнительные домены, такие как домены СН2 и CH3 антитела.
Как описано в данной публикации, связывающие агенты содержат по меньшей мере одну из CDR. Например, одна или несколько CDR могут быть введены в известные каркасные области антител (IgG1, IgG2 и т.д.) или конъюгированы с подходящим носителем, чтобы увеличить время их полужизни. Подходящие носители включают без ограничения Fc, полиэтиленгликоль (ПЭГ), альбумин, трансферрин и тому подобное. Указанные и другие подходящие носители известны в данной области. Такие конъюгированные пептиды CDR могут быть в мономерной, димерной, тетрамерной или другой форме. В одном варианте один или несколько растворимых в воде полимеров связаны в одном или нескольких конкретных положениях, например, на амино-конце, связывающего агента.
В некоторых предпочтительных вариантах связывающий агент содержит один или несколько связанных растворимых в воде полимеров, включая без ограничения полиэтиленгликоль, полиоксиэтиленгликоль или полипропиленгликоль. См., например, патенты США № 4640835, 4496689, 4301144, 4670417, 4791192 и 4179337. В некоторых вариантах производный связывающий агент содержит один или несколько полимеров: монометоксиполиэтиленгликоль, декстран, целлюлозу или другие основанные на углеводах полимеры, поли(N-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропиленгликоля, сополимер полипропиленоксид/этиленоксид, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин) и поливиниловый спирт, а также смеси таких полимеров.
В некоторых вариантах один или несколько растворимых в воде полимеров случайным образом связаны с одной или несколькими боковыми цепями. В некоторых вариантах ПЭГ может действовать, улучшая терапевтическую способность связывающего агента, такого как антитело. Некоторые такие способы обсуждаются, например, в патенте США № 6133426, который включен в данное описание в виде ссылки для любых целей.
Будет понятно, что связывающий агент согласно настоящему изобретению может иметь по меньшей мере одну аминокислотную замену, при условии, что связывающий агент сохраняет специфичность
- 8 037044 связывания. Таким образом, модификации структур связывающих агентов входят в объем изобретения. Модификации могут включать аминокислотные замены, которые могут быть консервативными или неконсервативными, которые не нарушают способность связывающего агента связывать склеростин. Консервативные аминокислотные замены могут включать не встречающиеся в природе аминокислотные остатки, которые обычно вводят с помощью химического синтеза пептидов, а не синтезом в биологических системах. Они включают пептидомиметики и другие обратные или инвертированные формы аминокислотных остатков. Консервативная аминокислотная замена также может включать замену нативного аминокислотного остатка стандартным остатком, так чтобы она оказывала небольшое влияние или не оказывала влияния на полярность или заряд аминокислотного остатка в данном положении.
Неконсервативные замены могут включать замену представителем одного класса аминокислот или миметиками аминокислот представителя из другого класса с другими физическими свойствами (например, размером, полярностью, гидрофобностью, зарядом). Такие замены остатков могут быть введены в области антитела человека, которые гомологичны антителам животных, отличных от человека, или в негомологичные области молекулы.
Кроме того, специалист в данной области может создать варианты для тестирования, содержащие одну аминокислотную замену в каждом требуемом положении аминокислот. Затем варианты могут быть подвергнуты скринингу с использованием анализов активности, известных специалистам в данной области. Такие варианты могут быть использованы для получения информации о подходящих вариантах. Например, если обнаружено, что замена на конкретный аминокислотный остаток приводит к нарушенной, нежелательно пониженной или неподходящей активности, то от вариантов с такой заменой можно отказаться. Другими словами, на основании информации, полученной в результате таких обычных экспериментов, специалист в данной области легко может определить аминокислоты, дополнительные замены которых либо отдельно, либо в комбинации с другими мутациями необходимо избегать.
Специалист в данной области может определить подходящие варианты полипептида, который указан в данном описании, используя хорошо известные способы. В некоторых вариантах специалист в данной области может идентифицировать подходящие области молекулы, которые могут быть изменены без нарушения активности целенаправленным воздействием на области, которые не считаются важными для активности. В некоторых вариантах можно идентифицировать остатки и части молекулы, которые являются консервативными в сходных полипептидах. В некоторых вариантах даже те области, которые могут быть важными для биологической активности или для структуры, могут быть подвергнуты консервативным аминокислотным заменам без нарушения биологической активности или без неблагоприятного влияния на структуру полипептида.
Кроме того, специалист в данной области может проанализировать исследования структурыфункции, в которых в сходных полипептидах идентифицированы остатки, важные для активности или структуры. На основе такого сравнения можно предсказать значение аминокислотных остатков в белке, которые соответствуют аминокислотным остаткам, которые имеют важное значение для активности или структуры в сходных белках. Специалист в данной области может выбрать химически сходные аминокислотные замены для таких предсказанных важных аминокислотных остатков.
Специалист в данной области также может проанализировать трехмерную структуру и аминокислотную последовательность в сравнении с трехмерной структурой сходных полипептидов. На основании такой информации специалист в данной области может предсказать положение аминокислотных остатков антитела относительно трехмерной структуры. В некоторых вариантах специалист в данной области может предпочесть не делать радикальных изменений аминокислотных остатков, которые, судя по прогнозу, находятся на поверхности белка, так как такие остатки могут быть вовлечены в важные взаимодействия с другими молекулами.
Ряд научных публикаций был посвящен предсказанию вторичной структуры. См. Moult J., Curr. Op. in Biotech., 7(4):422-427 (1996), Chou et al., Biochemistry, 13 (2):222-245 (1974); Chou et al., Biochemistry, 113 (2):211-222 (1974); Chou et al., Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 47:45-148 (1978); Chou et al., Ann. Rev. Biochem., 47:251-276 и Chou et al., Biophys. J., 26:367-384 (1979). Кроме того, в настоящее время доступны компьютерные программы, помогающие предсказывать вторичную структуру. Один из способов предсказания вторичной структуры основан на моделировании гомологии. Например, два полипептида или белка, которые имеют последовательность, идентичную более чем на 30% или сходную более чем на 40%, часто имеют сходную структурную топологию. Увеличение базы данных о структуре белков (PDB) в настоящее время обеспечило более высокую предсказуемость вторичной структуры, включая возможное количество изгибов в структуре полипептида или белка. См. Holm et al., Nucl. Acid. Res., 27 (1):244-247 (1999). Было сделано предположение (Brenner et al., Curr. Op. Struct. Biol., 7(3):369376 (1997)), что существует ограниченное количество изгибов в данном полипептиде или белке, и что после того, как будет выяснено критическое количество структур, структурное прогнозирование станет значительно более точным.
Дополнительные способы предсказания вторичной структуры включают протягивание нити (Jones, D., Curr. Opin. Struct. Biol., 7(3):377-87 (1997); Sippl et al., Structure, 4(1):15-19 (1996)), анализ профиля (Bowie et al., Science, 253:164-170 (1991); Gribskov et al., Meth. Enzym., 183:146-159 (1990);
- 9 037044
Gribskov et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 84(13): 4355-4358 (1987)) и эволюционное связывание (см. Holm, выше, (1999), и Brenner, выше (1997)).
В некоторых вариантах осуществления изобретения варианты связывающих агентов включают варианты гликозилирования, в которых количество и/или тип сайтов гликозилирования изменено по сравнению с аминокислотными последовательностями исходного полипептида. В некоторых вариантах осуществления изобретения варианты содержат большее или меньшее количество N-связанных сайтов гликозилирования, чем в нативном белке. N-связанный сайт гликозилирования характеризуется последовательностью: Asn-X-Ser или Asn-X-Thr, где аминокислотный остаток, обозначенный X, может представлять собой любой аминокислотный остаток, за исключением пролина. Замена аминокислотных остатков с образованием такой последовательности создает потенциальный новый сайт для добавления Nсвязанной углеводной цепи. Альтернативно, замены, которые устраняют такую последовательность, будут удалять существующую N-связанную углеводную цепь. Также предлагается перестановка Nсвязанных углеводных цепей, при которой удаляют один или несколько N-связанных сайтов гликозилирования (обычно сайтов гликозилирования, встречающихся в природе) и создают один или несколько новых N-связанных сайтов. Дополнительные предпочтительные варианты антител включают варианты по цистеину, в которых один или несколько остатков цистеина делетированы или заменены другой аминокислотой (например, серином) по сравнению с исходной аминокислотной последовательностью. Цистеиновые варианты могут быть применимы в том случае, когда антитела должны быть подвергнуты рефолдингу с образованием биологически активной конформации, например, после выделения нерастворимых телец включения. Цистеиновые варианты, как правило, имеют меньше остатков цистеина, чем нативный белок, и обычно имеют четное количество, чтобы минимизировать взаимодействия из-за наличия неспаренных цистеинов.
Требуемые аминокислотные замены (либо консервативные, либо неконсервативные) могут быть определены специалистами в данной области, когда такие замены потребуются. В некоторых вариантах аминокислотные замены могут быть использованы для идентификации важных остатков антител к склеростину или для увеличения или уменьшения аффинности антител к склеростину, указанных в данном описании.
Согласно некоторым вариантам предпочтительными аминокислотными заменами являются замены, которые: (1) уменьшают чувствительность к протеолизу, (2) уменьшают чувствительность к окислению, (3) изменяют аффинность связывания для образования комплексов с белками, (4) изменяют аффинности связывания и/или (4) придают или модифицируют другие физико-химические или функциональные свойства таких полипептидов. Согласно некоторым вариантам одиночные или множественные аминокислотные замены (в некоторых вариантах консервативные аминокислотные замены) могут быть осуществлены в природной последовательности (в некоторых вариантах в части полипептида вне домена(ов), образующего межмолекулярные контакты). В некоторых вариантах консервативная аминокислотная замена обычно существенно не изменяет структурные признаки исходной последовательности (например, замена аминокислоты не должна вести к разрушению спирали, которая имеется в исходной последовательности, или разрушению других типов вторичной структуры, которые характерны для исходной последовательности). Примеры известных в данной области вторичных и третичных структур полипептидов описаны в Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N. Y. (1991)); и Thornton et al., Nature 354:105 (1991), каждая из публикаций включена в данное описание в виде ссылки.
В некоторых вариантах связывающие агенты согласно изобретению могут быть химически связаны с полимерами, липидами или другими остатками.
Связывающие агенты могут содержать по меньшей мере одну из CDR, описанных в данной публикации, введенную в биосовместимую каркасную структуру. В одном примере биосовместимая каркасная структура содержит полипептид или его часть, которая является достаточной для образования конформационно стабильной структурной опоры или каркаса или скелета, которая способна выводить одну или несколько последовательностей аминокислот, которые связываются с антигеном (например, CDR, вариабельная область и т.д.), на локализованной области поверхности. Такие структуры могут представлять собой встречающийся в природе полипептид или укладку полипептида (структурный мотив) или могут иметь одну или несколько модификаций, таких как добавления, делеции или замены аминокислот по сравнению с природным полипептидом или укладкой. Такие каркасы могут быть получены из полипептида любого вида (или более чем одного вида), такого как человек, другое млекопитающее, другое позвоночное, беспозвоночное, растение, бактерия или вирус.
Обычно биосовместимые каркасные структуры основаны на каркасах или скелетах белков, отличных от доменов иммуноглобулинов. Например, можно использовать каркасные структуры, основанные на фибронектине, анкирине, липокалине, неокарциностатине, цитохроме b, цинковом пальце СР1, PST1, двойной спирали, LACI-D1, Z-домене и доменах тендрамизата (см., например, Nygren and Uhlen, 1997, Current Opinion in Structural Biology, 7, 463-469).
В предпочтительных вариантах будет понятно, что связывающие агенты согласно изобретению
- 10 037044 включают гуманизированные антитела, описанные в данной публикации. Гуманизированные антитела, такие как антитела, указанные в данном описании, могут быть получены с использованием способов, известных специалистам в данной области (Zhang, W., et al., Molecular Immunology. 42 (12):1445-1451,
2005; Hwang W. et al., Methods, 36(l):35-42, 2005; Dall'Acqua WF, et al., Methods, 36(1):43-60, 2005; и
Clark, M., Immunology Today. 21(8):397-402, 2000).
Кроме того, специалисту в данной области будет понятно, что подходящие связывающие агенты включают части указанных антител, такие как одна или несколько CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, которые специально описаны в данной публикации. По меньшей мере одна из областей CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 может иметь по меньшей мере одну аминокислотную замену, при условии, что связывающий агент сохраняет специфичность связывания не содержащей замен CDR. Не относящаяся к CDR часть связывающего агента может представлять собой небелковую молекулу, при этом связывающий агент перекрестно блокирует связывание антитела, раскрытого в данном описании, со склеростином и/или нейтрализует склеростин. Не относящаяся к CDR часть связывающего агента может представлять собой небелковую молекулу, при этом связывающий агент имеет картину связывания с пептидами склеростина человека в анализе конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека, сходную с картиной связывания, которую имеет по меньшей мере одно из антител Ab-А, Ab-В, Ab-С, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab- 7, Ab-8, Ab-9, Ab10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24, и/или нейтрализует склеростин. Не относящаяся к CDR часть связывающего агента может состоять из аминокислот, при этом связывающий агент представляет собой рекомбинантный связывающий белок или синтетический пептид, и рекомбинантный связывающий белок перекрестно блокирует связывание антитела, раскрытого в данном описании, со склеростином и/или нейтрализует склеростин. Не относящаяся к CDR часть связывающего агента может состоять из аминокислот, при этом связывающий агент представляет собой рекомбинантный связывающий белок, и рекомбинантный связывающий белок имеет картину связывания с пептидами склеростина человека в анализе конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека (описанном ниже), сходную с картиной связывания по меньшей мере одного из антител Ab-А, Ab-В, Ab-С, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24, и/или нейтрализует склеростин.
В том случае, когда антитело содержит одну или несколько CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, которые описаны выше, его можно получить экспрессией в клетке-хозяине, содержащей ДНК, кодирующую указанные последовательности. ДНК, кодирующую каждую последовательность CDR, можно определить на основе аминокислотной последовательности CDR и синтезировать вместе с любыми требуемыми последовательностями ДНК каркаса вариабельной области антитела и константной области, используя методику синтеза олигонуклеотидов, способы сайт-направленного мутагенеза и полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соответствующих случаях. ДНК, кодирующая каркасы вариабельной области и константные области, широко доступна специалистам в данной области из баз данных генетических последовательностей, таких как GenBank®. Каждая из указанных выше CDR, как правило, будет расположена в каркасе вариабельной области в положениях 31-35 (CDR-H1), 50-65 (CDRH2) и 95-102 (CDR-H3) тяжелой цепи и в положениях 24-34 (CDR-L1), 50-56 (CDR-L2) и 89-97 (CDR-L3) легкой цепи согласно системе нумерации Кабата (Rabat et al., 1987, в Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, NIH, USA).
После синтеза ДНК, кодирующая антитело согласно изобретению или его фрагмент, может быть размножена и экспрессирована согласно любому из множества хорошо известных способов вырезания нуклеиновой кислоты, лигирования, трансформации и трансфекции с использованием ряда известных экспрессирующих векторов. Таким образом, в некоторых вариантах экспрессия фрагмента антитела может быть предпочтительно осуществлена в прокариотической клетке, такой как Escherichia coli (см., например, Pluckthun et al., 1989 Methods Enzymol. 178:497-515). В некоторых других вариантах экспрессия антитела или его фрагмента может быть предпочтительно осуществлена в эукариотической клеткехозяине, включая дрожжи (например, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe и Pichia pastoris), клетки животных (включая клетки млекопитающих) или клетки растений. Примеры подходящих клеток животных включают без ограничения клетки миеломы (такие как мышиная линия NSO), COS, CHO или клетки гибридомы. Примеры растительных клеток включают клетки табака, кукурузы, сои и риса.
Можно получить один или несколько реплицируемых экспрессирующих векторов, содержащих ДНК, кодирующую вариабельную и/или константную область антитела, и использовать для трансформации подходящей линии клеток, например, непродуцирующей линии клеток миеломы, такой как линия NSO мыши, или бактерий, таких как Е. coli, в которых будет происходить продуцирование антитела. Чтобы получить эффективную транскрипцию и трансляцию последовательность ДНК в каждом векторе должна содержать подходящие регуляторные последовательности, в частности промотор и лидерную последовательность, функционально связанные с последовательностью вариабельного домена. Конкретные способы получения антител таким образом, как правило, хорошо известны и применяются в повсе- 11 037044 дневной практике. Например, основные способы молекулярной биологии описаны Maniatis et al. (Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989; см. также Maniatis et al., 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York, (2001)). Секвенирование ДНК можно осуществить, как описано в Sanger et al. (PNAS 74:5463, (1977)) и в руководстве по секвенированию Amersham International plc, и сайт-направленный мутагенез можно осуществить согласно способам, известным в данной области (Kramer et al., Nucleic Acids Res. 12:9441, (1984); Kunkel Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-92 (1985); Kunkel et al., Methods in Enzymol. 154:367-82 (1987); руководство Anglian Biotechnology Ltd). Кроме того, в многочисленных публикациях описаны способы, подходящие для получения антител посредством обработки ДНК, создания экспрессирующих векторов и трансформации и культивирования подходящих клеток (Mountain A. and Adair, J. R. в Biotechnology and Genetic Engineering Reviews (ed. Tombs, M P, 10, Chapter 1, 1992, Intercept, Andover, UK); Current Protocols in Molecular Biology, 1999, F.M. Ausubel (ed.), Wiley Interscience, New York).
В том случае, когда требуется улучшить аффинность антител согласно изобретению, содержащих одну или несколько из указанных выше CDR, можно использовать ряд протоколов созревания аффинности, включая сохранение CDR (Yang et al., J. Mol. Biol., 254, 392-403, 1995), перестановку цепей (Marks et al., Bio/Technology, 10, 779-783, 1992), применение мутантных штаммов E.coli (Low et al., J. Mol. Biol., 250, 350-368, 1996), перетасовку ДНК (Patten et al., Curr. Opin. Biotechnol., 8, 724-733, 1997), фаговый дисплей (Thompson et al., J. Mol. Biol., 256, 7-88, 1996) и половую ПЦР (Crameri, et al., Nature, 391, 288291, 1998). Все указанные способы созревания аффинности обсуждаются Vaughan et al. (Nature Biotechnology, 16, 535-539, 1998).
Другие антитела согласно изобретению могут быть получены обычными способами иммунизации и слияния клеток, которые описаны в данной публикации и известны в данной области. Моноклональные антитела согласно изобретению могут быть созданы с использованием различных известных способов. В общем, моноклональные антитела, которые связываются со специфичными антигенами, могут быть получены способами, известными специалистам в данной области (см., например, Kohler et al., Nature 256:495, 1975; Coligan et al. (eds.), Current Protocols in Immunology, 1:2.5.12.6.7 (John Wiley and Sons 1991); патенты США № RE 32011, 4902614, 4543439 и 4411993; Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Plenum Press, Kennett, McKearn, и Bechtol (eds.) (1980); и Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988); Picksley et al., Production of monoclonal antibodies against proteins expressed in E. coli, в DNA Cloning 2: Expression Systems, 2nd Edition, Glover et al. (eds.), page 93 (Oxford University Press 1995)). Из них могут быть получены фрагменты антител с использованием любого подходящего стандартного способа, такого как протеолитическое расщепление, или, необязательно, посредством протеолитического расщепления (например, с использованием папаина или пепсина) с последующим мягким восстановлением дисульфидных связей и алкилированием. Альтернативно, такие фрагменты также могут быть созданы способами рекомбинантной генетической инженерии, которые описаны в данной публикации.
Моноклональные антитела могут быть получены посредством инъекции животному, например, крысе, хомячку, кролику или предпочтительно мыши, включая, например, трансгенных или нокаутированных животных, которые известны в данной области, иммуногена, содержащего склеростин человека с последовательностью SEQ ID NO: 1 или его фрагмент, способами, известными в данной области и описанными в данной публикации. Можно наблюдать наличие продукции специфичных антител после первой инъекции и/или после бустер-инъекции, получая образец сыворотки и выявляя присутствие антитела, которое связывается со склеростином человека или пептидом, с использованием любого из нескольких способов иммунологического анализа, известных в данной области и описанных в данной публикации. Из организма животных, продуцирующих требуемые антитела, извлекают лимфоидные клетки, чаще всего клетки из селезенки или лимфатического узла, чтобы получить В-лимфоциты. Затем Влимфоциты сливают с сенсибилизованными лекарственным средством клетками миеломы, являющимися партнерами для слияния, предпочтительно клетками, которые являются сингенными по отношению к иммунизируемому животному и которые необязательно обладают другими требуемыми свойствами (например, не способны экспрессировать эндогенные продукты генов Ig, например, Р3Х63 -Ag 8.653 (АТСС № CRL 1580); NSO, SP20), чтобы получить гибридомы, которые представляют собой бессмертные линии эукариотических клеток. Лимфоидные клетки (например, клетки селезенки) и клетки миеломы можно объединять в течение нескольких минут с агентом, стимулирующим слияние мембран, таким как полиэтиленгликоль или неионогенный детергент, и затем высевать при низкой плотности на селективную среду, которая поддерживает рост клеток гибридомы, но не поддерживает рост неслитых клеток миеломы. Предпочтительной селективной средой является среда HAT (гипоксантин, аминоптерин, тимидин). После достаточного периода времени, обычно от одной до двух недель, наблюдают колонии клеток. Отдельные колонии выделяют, и антитела, продуцируемые клетками, можно тестировать в отношении активности связывания со склеростином человека, используя любой из множества иммуноанализов, известных в данной области и описанных в данной публикации. Гибридомы клонируют (например, клонированием на основе лимитирующего разведения или выделением бляшек на мягком агаре), и позитивные клоны, которые продуцируют антитело, специфичное по отношению к склеростину, отбирают и культи
- 12 037044 вируют. Моноклональные антитела из культур гибридом могут быть выделены из надосадков культур гибридом. Альтернативный способ получения мышиного моноклонального антитела заключается в инъекции клеток гибридом в брюшную полость сингенной мыши, например мыши, которая была подвергнута обработке (например, примированы пристаном), стимулирующей образование асцитной жидкости, содержащей моноклональное антитело. Моноклональные антитела могут быть выделены и очищены различными хорошо известными способами. Такие способы выделения включают аффинную хроматографию на белок А-сефарозе, эксклюзионную хроматографию по размеру и ионообменную хроматографию (см., например, Coligan на страницах 2.7.1-2.7.12 и страницах 2.9.1-2.9.3; Baines et al., Purification of Immunoglobulin G (IgG), в Methods in Molecular Biology, Vol. 10, pages 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992)). Моноклональные антитела могут быть очищены аффинной хроматографией с использованием подходящего лиганда, выбранного на основе конкретных свойств антитела (например, изотипа тяжелой или легкой цепи, специфичности связывания и т.д.). Примеры подходящих лигандов, иммобилизованных на твердой подложке, включают белок А, белок G, антитело против константной области (легкой цепи или тяжелой цепи), анти-идиотипическое антитело и белок, связывающий TGF-бета, или их фрагмент или вариант.
Антитело согласно настоящему изобретению также может быть моноклональным антителом человека. Моноклональные антитела человека могут быть созданы любым из ряда способов, которые будут известны специалистам в данной области. Такие способы включают без ограничения трансформацию вирусом Эпштейна-Барра (EBV) клеток периферической крови человека (например, содержащих Влимфоциты), иммунизацию in vitro В-клеток человека, слияние клеток селезенки от иммунизированных трансгенных мышей, несущих встроенные гены иммуноглобулинов человека, выделение из фаговых библиотек V-областей иммуноглобулинов человека или другие способы, которые известны в данной области и описаны в данной публикации. Например, моноклональные антитела человека могут быть получены от трансгенных мышей, которые были сконструированы так, чтобы получить специфичные антитела человека в ответ на антигенную стимуляцию. Способы получения антител человека от трансгенных мышей описаны, например, в Green et al., Nature Genet. 7:13, 1994; Lonberg et al., Nature 368:856, 1994; Taylor et al., Jnt. Immun. 6:579, 1994; в патенте США № 5877397; Bruggemann et al., 1997 Curr. Opin. Biotechnol. 8:455-58; Jakobovits et al., 1995 Ann. N. Y. Acad. Sci. 764:525-35. При использовании такого способа элементы локуса тяжелой и легкой цепи человека вводят в линии мышей, полученные из линий эмбриональных стволовых клеток, которые содержат целенаправленные нарушения эндогенных локусов тяжелой цепи и легкой цепи (см. также Bruggemann et al., Curr. Opin. Biotechnol. 8:455-58 (1997)). Например, трансгены иммуноглобулинов человека могут представлять собой конструкции мини-генов или транслокулы в искусственных дрожжевых хромосомах, которые подвергаются специфичной для Вклеток реаранжировке и гипермутированию ДНК в лимфоидной ткани мышей. Моноклональные антитела человека могут быть получены иммунизацией трансгенных мышей, которые после этого могут продуцировать антитела человека, специфичные для склеростина. Лимфоидные клетки иммунизированных трансгенных мышей можно использовать для получения секретирующих антитела человека гидридом способами, описанными в данной публикации. Также из крови иммунизированных животных могут быть получены поликлональные сыворотки, содержащие антитела человека.
Другой способ создания антител человека согласно изобретению заключается в иммортализации клеток периферической крови человека трансформацией EBV. См., например, патент США № 4464456. Такая линия иммортализованных В-клеток (или линия лимфобластоидных клеток), продуцирующих моноклональное антитело, которое специфично связывается со склеростином, может быть идентифицирована способами иммунологического анализа, которые предлагаются в данном описании, например ELISA, и затем выделена стандартными способами клонирования. Стабильность линии лимфобластоидных клеток, продуцирующих антитело против склеростина, может быть повышена слиянием трансформированной линии клеток с миеломой мышей с получением линии гибридных клеток мышь-человек согласно способам, известным в данной области (см., например, Glasky et al., Hybridoma 8:377-89 (1989)). Еще одним способом создания моноклональных антител человека является иммунизация in vitro, которая заключается в примировании В-клеток селезенки человека склеростином человека с последующим слиянием примированных В-клеток с партнером для слияния, дающего гетерогибридомы. См., например, Boerner et al., 1991 J. Immunol. 147:86-95.
В некоторых вариантах отбирают В-клетку, которая продуцирует антитело против склеростина человека, и из В-клетки клонируют вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи способами молекулярной биологии, известными в данной области (WO 92/02551; патент США 5627052; Babcook et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7843-48 (1996)) и описанными в данной публикации. В-клетки иммунизированного животного могут быть выделены из селезенки, лимфатического узла или образца периферической крови в результате отбора клеток, которые продуцируют антитело, которое специфично связывается со склеростином. В-клетки также могут быть выделены из организма человека, например, из образца периферической крови. Способы выявления отдельных В-клеток, которые продуцируют антитело требуемой специфичности, хорошо известны в данной области, например, образование бляшек, активируемая флюоресценцией сортировка клеток, стимуляция in vitro с последующей регистрацией специфичного
- 13 037044 антитела и тому подобное. Способы отбора В-клеток, продуцирующих специфичные антитела, включают, например, получение суспензии отдельных В-клеток в мягком агаре, который содержит склеростин человека. Связывание специфичного антитела, продуцируемого В-клеткой, с антигеном, приводит к образованию комплекса, который может быть видимым в виде иммунопреципитата. После отбора Вклеток, продуцирующих требуемое антитело, гены специфичных антител могут быть клонированы посредством выделения и амплификации ДНК или мРНК согласно способам, известным в данной области и описанным в данной публикации.
Другим способом получения антител согласно изобретению является фаговый дисплей. См., например, Winter et al., 1994 Annu. Rev. Immunol. 12:433-55; Burton et al., 1994 Adv. Immunol. 57:191-280. Комбинаторные библиотеки генов вариабельных областей иммуноглобулинов человека или мыши могут быть созданы в фаговых векторах, которые могут быть подвергнуты скринингу для отбора фрагментов Ig (Fab, Fv, sFv или их мультимеров), которые специфично связываются с белком, связывающим TGF-бета, или с его вариантом или фрагментом. См., например, патент США № 5223409; Huse et al., 1989 Science 246:1275-81; Sastry et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5728-32 (1989); Alting-Mees et al., Strategies in Molecular Biology 3:1-9 (1990); Rang et al., 1991 Proc. Natl Acad. Sci. USA 88:4363-66; Hoogenboom et al., 1992 J. Molec. Biol. 227:381-388; Schlebusch et al., 1997 Hybridoma 16:47-52 и ссылки, цитированные в указанных публикациях. Например, библиотека, содержащая множество полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты вариабельной области Ig, может быть встроена в геном нитчатого бактериофага, такого как М13 или его вариант, в рамке с последовательностью, кодирующей белок оболочки фага. Слитый белок может представлять собой слияние белка оболочки с доменом вариабельной области легкой цепи и/или доменом вариабельной области тяжелой цепи. Согласно некоторым вариантам Fabфрагменты иммуноглобулина также могут быть представлены на поверхности фаговой частицы (см., например, патент США № 5698426).
Библиотеки, экспрессирующие кДНК тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина, также могут быть получены в фаге лямбда, например, с использованием векторов λImmunoZap™ (H) и λImmunoZap™ (L) (Stratagene, La Jolla, California). Коротко, мРНК выделяют из популяции В-клеток и используют для создания библиотек, экспрессирующих кДНК тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина, в векторах λImmunoZap(H) и λImmunoZap(L). Указанные векторы могут быть подвергнуты скринингу отдельно или могут быть экспрессированы совместно с образованием Fab-фрагментов или антител (см. Huse et al., выше; см. также Sastry et al., выше). Позитивные бляшки могут быть затем преобразованы в нелитическую плазмиду, которая обеспечивает высокий уровень экспрессии фрагментов моноклональных антител в Е. coli.
В одном варианте в гибридоме вариабельные области гена, экспрессирующего представляющее интерес моноклональное антитело, амплифицируют с использованием нуклеотидных праймеров. Указанные праймеры могут быть синтезированы специалистом в данной области или могут быть приобретены из коммерчески доступных источников (см., например, Stratagene (La Jolla, California), которые продают праймеры для вариабельных областей мыши и человека, включая наряду с другими праймеры для областей VHa, VHb, VHc, VHd, CHi, VL и CL). Указанные праймеры могут быть использованы для амплификации вариабельных областей тяжелой или легкой цепи, которые затем могут быть встроены в векторы, такие как ImmunoZAP™H или ImmunoZAP™L (Stratagene) соответственно. Указанные векторы затем могут быть введены в системы экспрессии, основанные на Е. coli, дрожжах или млекопитающих. С использованием указанных способов могут быть получены большие количества одноцепочечного белка, содержащего слияние доменов VH и VL (см. Bird et al., Science 242:423-426, 1988).
После получения клеток, продуцирующих антитела согласно изобретению, с использованием любого из описанных выше способов иммунизации и других способов гены специфичных антител могут быть клонированы посредством выделения и амплификации ДНК или мРНК стандартными способами, которые описаны в данной публикации. Антитела, получаемые с таких генов, могут быть секвенированы и могут быть идентифицированы CDR, а ДНК, кодирующие CDR, могут быть подвергнуты обработке, как описано ранее, чтобы получить другие антитела согласно изобретению.
Предпочтительно, связывающие агенты специфично связываются со склеростином. Как и в случае всех других связывающих агентов и анализов связывания, специалисту в данной области будет понятно, что различные остатки, с которыми связывающий агент не должен явно связываться, чтобы быть терапевтически эффективным и подходящим, трудно и нецелесообразно перечислять. Поэтому в случае связывающего агента, раскрытого в данном описании, термин специфично связывается относится к способности связывающего агента связываться со склеростином, предпочтительно склеростином человека, с более высокой аффинностью, чем он связывается с неродственным контрольным белком. Предпочтительно, контрольным белком является лизоцим яичного белка кур. Предпочтительно, связывающие агенты связываются со склеростином с аффинностью, которая по меньшей мере в 50, 100, 250, 500, 1000 или 10000 раз выше, чем аффинность по отношению к контрольному белку. Связывающий агент может обладать аффинностью связывания по отношению к склеростину человека, меньшей или равной 1х10-7 М, меньшей или равной 1х10-8 М, меньшей или равной 1х10-9 М, меньшей или равной 1х 10-10 М, меньшей
- 14 037044 или равной 1х10-11 M или меньшей или равной 1х10-12 М.
Аффинность можно определить анализом аффинности в ELISA. В некоторых вариантах аффинность можно определить в анализе BIAcore. В некоторых вариантах аффинность можно определить кинетическим способом. В некоторых вариантах аффинность можно определить способом уравновешивания/растворения. Такие способы описаны более подробно в данном описании или известны в данной области.
Связывающие склеростин агенты согласно настоящему изобретению предпочтительно модулируют функцию склеростина в анализе, основанном на клетках, описанном в данной публикации, и/или в анализе in vivo, описанном в данной публикации, и/или связываются с одним или несколькими эпитопами, описанными в данной публикации, и/или перекрестно блокируют связывание одного из антител, описанных в данной заявке, и/или их связывание со склеростином перекрестно блокируется одним из антител, описанных в данной заявке. Соответственно, такие связывающие агенты могут быть идентифицированы с использованием анализов, описанных в данной публикации.
В некоторых вариантах связывающие агенты образованы первыми идентифицирующими антителами, которые связываются с одним или несколькими эпитопами, предлагаемыми в данном описании, и/или нейтрализуют в основанных на клетках анализах и/или в анализах in vivo, описанных в данной публикации, и/или перекрестно блокируют антитела, описанные в данном изобретении, и/или их связывание со склеростином перекрестно блокируется одним из антител, описанных в патенте. CDR-области из указанных антител затем используют для встраивания в подходящие биосовместимые каркасы, чтобы создать связывающие склеростин агенты. Не относящаяся к CDR часть связывающего агента может состоять из аминокислот или может представлять собой небелковую молекулу. Анализы, описанные в данной публикации, позволяют характеризовать связывающие агенты. Предпочтительно, связывающие агенты согласно настоящему изобретению представляют собой антитела, которые определены в данном описании.
Специалисту в данной области будет понятно, что некоторые белки, такие как антитела, могут подвергаться разнообразным посттрансляционным модификациям. Тип и степень таких модификаций часто зависят от линии клеток-хозяев, используемой для экспрессии белка, а также от условий культивирования. Такие модификации могут включать варианты гликозилирования, окисление метионина, образование дикетопиперазина, изомеризацию аспартата и дезамидирование аспарагина. Частой модификацией является потеря основного остатка на карбоксильном конце (такого как лизин или аргинин) в результате действия карбоксипептидаз (которые описаны в Harris, R. J. Journal of Chromatography 705:129-134, 1995).
Антитела, называемые Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D и Ab-1, описаны ниже. НС относится к тяжелой цепи, и LC относится к легкой цепи. В случае некоторых указанных ниже антител CDR заключены в прямоугольники, а константные (С) области показаны жирным курсивом.
Ab-D
Антитело D (также называемое в данном описании Ab-D и Mab-D) является мышиным антителом, которое имеет высокую аффинность связывания со склеростином. Картина связывания в анализе BIAcore для Ab-D показана на фиг. 18.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) легкой цепи Ab-D:
DVQMIQSPSS LSASLGDIVT MTCQASQGTS INLNWFQQKP GKAPKLLIYG
SSNLEDGVPS RFSGSRYGTD FTLTISSLED EDLATYFCLQ HSYLPYTFGG
101 GTKLEIKRA2) AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPKDINVKWKI
151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT
201STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO:7)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-D, показана ниже:
GATGTCCAGA TGATTCAGTC ТССАТССТСС CTGTCTGCAT CTTTGGGAGA
CATAGTCACC ATGACTTGCC AGGCAAGTCA GGGCACTAGC АТТААТТТАА
101 ACTGGTTTCA GCAAAAACCA GGGAAGGCTC CTAAGCTCCT GATCTATGGT
151 TCAAGCAACT TGGAAGATGG GGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTAGATA
201 TGGGACAGAT ТТСАСТСТСА CCATCAGCAG CCTGGAGGAT GAAGATCTGG
251 СААСТТАТТТ CTGTCTACAA CATAGTTATC TCCCGTACAC GTTCGGAGGG
301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT
351 СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT
401 GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT
451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 8)
Аминокислотная последовательность LC Ab-D, включая сигнальный пептид, показана ниже:
- 15 037044
MNTRAPAEFL GFLLLWFLGA RCDVQMIQSP SSLSASLGDIVTMTCQASQG 51 TSINLNWFQQ KPGKAPKLLIYGSSNLEDGV PSRFSGSRYG TDFTLTISSL 101 EDEDLATYFC LQHSYLPYTF GGGTKLEIKR ADAAPTVSIF PPSSEQLTSG 151 GASWCFLNN FYPKDINVKW KTDGSERQNG VLNSWTDQDS KDSTYSMSST 201 LTLTKDEYER HNSYTCEATH KTSTSPIVKS FNRNEC (SEQ ID NO:9)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-D, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGAACACGA GGGCCCCTGC TGAGTTCCTT GGGTTCCTGT TGCTCTGGTT 51 TTTAGGTGCC AGATGTGATG TCCAGATGAT TCAGTCTCCA TCCTCCCTGT 101 CTGCATCTTT GGGAGACATA GTCACCATGA CTTGCCAGGC AAGTCAGGGC 151 ACTAGCATTA ATTTAAACTG GTTTCAGCAA AAACCAGGGA AGGCTCCTAA 201 GCTCCTGATC TATGGTTCAA GCAACTTGGA AGATGGGGTC CCATCAAGGT 251 TCAGTGGCAG TAGATATGGG ACAGATTTCA СТСТСАССАТ CAGCAGCCTG 301 GAGGATGAAG ATCTGGCAAC TTATTTCTGT СТАСААСАТА GTTATCTCCC 351 GTACACGTTC GGAGGGGGGA CCAAGCTGGA AATAAAACGG GCTGATGCTG 401 CACCAACTGT АТССАТСТТС ССАССАТССА GTGAGCAGTT AACATCTGGA 451 GGTGCCTCAG TCGTGTGCTT CTTGAACAAC ТТСТАССССА AAGACATCAA 501 TGTCAAGTGG AAGATTGATG GCAGTGAACG ACAAAATGGC GTCCTGAACA 551 GTTGGACTGA TCAGGACAGC AAAGACAGCA CCTACAGCAT GAGCAGCACC 601 CTCACGTTGA CCAAGGACGA GTATGAACGA CATAACAGCT ATACCTGTGA 651 GGCCACTCAC AAGACATCAA СТТСАСССАТ TGTCAAGAGC TTCAACAGGA 701 ATGAGTGTTA G (SEQ ID NO: 10)
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) тяжелой цепи HC Ab-D показана ниже:
EVQLQQSGPE LVTPGASVKI SCKASGYTFT DHYMSWVKQS HGKSLEWIGD 51INPYSGETTY NQKFKGTATL TVDKSSSIAY MEIRGLTSED SAVYYCARDD 101 YDASPFAYWG QGTLVTVSAA KTTPPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG 151 YFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT 201 CNVAHPASSTKVDKKIVPRD CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTIT 251LTPKVTCVWDISKDDPEVQ FSWFVDDVEVHTAQTQPREE QFNSTFRSVS 301ELPIMHQDWL NGKEFKCRVN SPAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP 351KEQMAKDKVS LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMDTDGSY 401 FIYSKLNVQK SNWEAGNTFT CSVLHEGLHNHHTEKSLSHS PGK (SEQ ID NO: 11) Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-D:
GAGGTCCAGC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTGGTGACGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATA TCTTGTAAGG CTTCTGGATA САСАТТСАСТ GACCACTACA 101 TGAGCTGGGT GAAGCAGAGT CATGGAAAAA GCCTTGAGTG GATTGGAGAT 151 АТТААТСССТ ATTCTGGTGA AACTACCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAC 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCTTCCAG TATAGCCTAC ATGGAGATCC 251 GCGGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGAGATGAT 301 TACGACGCCT CTCCGTTTGC TTACTGGGGC CAAGGGACTC TGGTCACTGT 351 CTCTGCAGCC AAAACGACAC CCCCATCTGT CTATCCACTG GCCCCTGGAT . 401 CTGCTGCCCA ААСТААСТСС ATGGTGACCC TGGGATGCCT GGTCAAGGGC 451 TATTTCCCTG AGCCAGTGAC AGTGACCTGG AACTCTGGAT CCCTGTCCAG 501 CGGTGTGCAC ACCTTCCCAG CTGTCCTGCA GTCTGACCTC TACACTCTGA 551 GCAGCTCAGT GACTGTCCCC TCCAGCACCT GGCCCAGCGA GACCGTCACC 601 TGCAACGTTG CCCACCCGGC CAGCAGCACC AAGGTGGACA AGAAAATTGT 651 GCCCAGGGAT TGTGGTTGTA AGCCTTGCAT ATGTACAGTC CCAGAAGTAT 701 CATCTGTCTT САТСТТСССС CCAAAGCCCA AGGATGTGCT САССАТТАСТ 751 CTGACTCCTA AGGTCACGTG TGTTGTGGTA GACATCAGCA AGGATGATCC 801 CGAGGTCCAG TTCAGCTGGT TTGTAGATGA TGTGGAGGTG CACACAGCTC 851 AGACGCAACC CCGGGAGGAG CAGTTCAACA GCACTTTCCG CTCAGTCAGT 901 GAACTTCCCA TCATGCACCA GGACTGGCTC AATGGCAAGG AGTTCAAATG 951 CAGGGTCAAC AGTCCAGCTT TCCCTGCCCC CATCGAGAAA АССАТСТССА 1001 AAACCAAAGG CAGACCGAAG GCTCCACAGG TGTAC АССАТ ТССАССТССС 1051 AAGGAGCAGA TGGCCAAGGA TAAAGTCAGT CTGACCTGCA TGATAACAGA 1101 СТТСТТСССТ GAAGACATTA CTGTGGAGTG GCAGTGGAAT GGGCAGCCAG 1151 CGGAGAACTA CAAGAACACT CAGCCCATCA TGGACACAGA TGGCTCTTAC 1201 ТТСАТСТАСА GCAAGCTCAA TGTGCAGAAG AGCAACTGGG AGGCAGGAAA 1251 ТАСТТТСАСС TGCTCTGTGT TACATGAGGG CCTGCACAAC CACCATACTG 1301 AGAAGAGCCT СТСССАСТСТ CCTGGTAAAT GA (SEQ ID NO: 12) Аминокислотная последовательность Ab-D, включая сигнальный пептид:
- 16 037044
MRCRWIFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL VTPGASVKIS CKASGYTFTD
HYMSWVKQSH GKSLEWIGDINPYSGETTYN QKFKGTATLT VDKSSSIAYM
101 EIRGLTSEDS AVYYCARDDY DASPFAYWGQ GTLVTVSAAK TTPPSVYPLA
151 PGSAAQINSM VTLGCLVKGY FPEPVTVTWN SGSLSSGVHT FPAVLQSDLY
201 TLSSSVTVPS STWPSETVTC NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP
251 EVSSVFIFPP KPKDVLTITL TPKVTCVWDISKDDPEVQF SWFVDDVEVH
301 TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS PAFPAPIEKT
351ISKTKGRPKA PQVYTIPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG
401 QPAENYKNTQ PIMDTDGSYFIYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH
451 HTEKSLSHSP GK (SEQ ID NO:13)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-D, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGAGATGCA GGTGGATCTT ТСТСТТТСТС CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT
CCTCTCTGAG GTCCAGCTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTG GTGACGCCTG
101 GGGCTTCAGT GAAGATATCT TGTAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC
151 CACTACATGA GCTGGGTGAA GCAGAGTCAT GGAAAAAGCC TTGAGTGGAT
201 TGGAGATATT ААТСССТАТТ CTGGTGAAAC ТАССТАСААС CAGAAGTTCA
251 AGGGCACGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CTTCCAGTAT AGCCTACATG
301 GAGATCCGCG GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG
351 AGATGATTAC GACGCCTCTC CGTTTGCTTA CTGGGGCCAA GGGACTCTGG
401 TCACTGTCTC TGCAGCCAAA ACGACACCCC CATCTGTCTA TCCACTGGCC
451 CCTGGATCTG CTGCCCAAAC TAACTCCATG GTGACCCTGG GATGCCTGGT
501 CAAGGGCTAT TTCCCTGAGC CAGTGACAGT GACCTGGAAC TCTGGATCCC
551 TGTCCAGCGG TGTGCACACC TTCCCAGCTG TCCTGCAGTC TGACCTCTAC
601 ACTCTGAGCA GCTCAGTGAC TGTCCCCTCC AGCACCTGGC CCAGCGAGAC
651 CGTCACCTGC AACGTTGCCC ACCCGGCCAG CAGCACCAAG GTGGACAAGA
701 AAATTGTGCC CAGGGATTGT GGTTGTAAGC CTTGCATATG TACAGTCCCA
751 GAAGTATCAT CTGTCTTCAT СТТССССССА AAGCCCAAGG ATGTGCTCAC
801 CATTACTCTG ACTCCTAAGG TCACGTGTGT TGTGGTAGAC ATCAGCAAGG
851 ATGATCCCGA GGTCCAGTTC AGCTGGTTTG TAGATGATGT GGAGGTGCAC
901 ACAGCTCAGA CGCAACCCCG GGAGGAGCAG TTCAACAGCA CTTTCCGCTC
951 AGTCAGTGAA СТТСССАТСА TGCACCAGGA CTGGCTCAAT GGCAAGGAGT
1001 TCAAATGCAG GGTCAACAGT CCAGCTTTCC CTGCCCCCAT CGAGAAAACC
1051 АТСТССАААА CCAAAGGCAG ACCGAAGGCT CCACAGGTGT АСАССАТТСС
1101 ACCTCCCAAG GAGCAGATGG CCAAGGATAA AGTCAGTCTG ACCTGCATGA
1151 TAACAGACTT CTTCCCTGAA GACATTACTG TGGAGTGGCA GTGGAATGGG
1201 CAGCCAGCGG AGAACTACAA GAACACTCAG CCCATCATGG ACACAGATGG
1251 СТСТТАСТТС ATCTACAGCA AGCTCAATGT GCAGAAGAGC AACTGGGAGG
1301 CAGGAAATAC TTTCACCTGC TCTGTGTTAC ATGAGGGCCT GCACAACCAC 1351 CATACTGAGA AGAGCCTCTC ССАСТСТССТ GGTAAATGA (SEQ ID NO: 14)
Последовательности CDR (определяющей комплементарность области) в вариабельной области тяжелой цепи Ab-D показаны ниже.
CDR-H1: DHYMS (SEQ ID NO:39)
CDR-H2: DINPYSGETTYNQKFKG (SEQ ID NO:40)
CDR-H3: DDYDASPFAY (SEQ ID NO:41)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-D: CDR-Ll: QASQGTSINLN (SEQ ID NO:42)
CDR-L2: GSSNLED (SEQ ID NO:43)
CDR-L3: LQHSYLPYT (SEQ ID NO:44)
Ab-С.
Антитело С (также называемое в данном описании Ab-С и Mab-С) является мышиным антителом, которое имеет высокую аффинность связывания со склеростином. Картина связывания в анализе BIAcore для Ab-С показана на фиг. 17. Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) легкой цепи Ab-С показана ниже:
DIVLTQSPAS LTVSLGLRATISCKASQSVD YDGDSYMNWY QQKPGQPPKL
LIYAASNLES GIPARFSGNG SGTDFTLNIH PVEEEDAVTY YCQQSiNEDPW
101 TFGGGTKLEIKRADAAPTVS1FPPSSEQLT SGGASWCFL NNFYPRblNV
151KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS STLTLTKDEY ERHNSYTCEA
201 THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQ ID NO:15)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-С:
- 17 037044
GACATTGTGC TGACCCAATC TCCAGCTTCT TTGACTGTGT CTCTAGGCCT 51 GAGGGCCACC ATCTCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT TATGATGGTG 101 ATAGTTATAT GAACTGGTAC CAGCAGAAAC CAGGACAGCC ACCCAAACTC 151 CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GGGATCCCAG CCAGGTTTAG 201 TGGCAATGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT CCTGTGGAGG 251 AGGAGGATGC TGTAACCTAT TACTGTCAAC AAAGTAATGA GGATCCGTGG 301 ACGTTCGGTG GAGGCACCAA GCTGGAAATC AAACGGGCTG ATGCTGCACC 351 AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA TCTGGAGGTG 401 CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA CATCAATGTC 451 AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC TGAACAGTTG 501 GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC AGCACCCTCA 551 CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC CTGTGAGGCC 601 ACTCACAAGA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA ACAGGAATGA
651 GTGTTAG (SEQ ID NO: 16)
Аминокислотная последовательность LC Ab-С, включая сигнальный пептид:
METDTILLWV LLLWVPGSTG DIVLTQSPAS LTVSLGLRATISCKASQSVD 51 YDGDSYMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNLES GIPARFSGNG SGTDFTLNIH 101 PVEEEDAVTY YCQQSNEDPW TFGGGTKLEIKRADAAPTVS IFPPSSEQLT
151 SGGASWCFL NNFYPKDINV KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS 201 STLTLTKDEY ERHNSYTCEA THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQ ID NO: 17)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-С, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGAGACAG АСАСААТССТ GCTATGGGTG CTGCTGCTCT GGGTTCCAGG 51 CTCCACTGGT GACATTGTGC TGACCCAATC TCCAGCTTCT TTGACTGTGT 101 CTCTAGGCCT GAGGGCCACC ATCTCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT 151 TATGATGGTG ATAGTTATAT GAACTGGTAC CAGCAGAAAC CAGGACAGCC 201 ACCCAAACTC CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GGGATCCCAG 251 CCAGGTTTAG TGGCAATGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT 301 CCTGTGGAGG AGGAGGATGC TGTAACCTAT TACTGTCAAC AAAGTAATGA 351 GGATCCGTGG ACGTTCGGTG GAGGCACCAA GCTGGAAATC AAACGGGCTG 401 ATGCTGCACC AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA 451 TCTGGAGGTG CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA 501 CATCAATGTC AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC 551 TGAACAGTTG GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC 601 AGCACCCTCA CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC 651 CTGTGAGGCC ACTCACAAGA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA 701 ACAGGAATGA GTGTTAG (SEQ ID NO: 18)
Тяжелая цепь Ab-С.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-С:
EVQLQQSGPE LVKPGTSVKM SCKASGYTFT DCYMN WVKQS HGKSLEWIGD 51INPFNGGTTY NQKFKGKATL TVDKSSSTAY MQLNSLTSDD SAVYYCARSS 101 YYFDGRVPWD AMDYWGQGTS VTVSSAKTTPPSVYPLAPGS AAQTNSMVTL 151 GCLVKGYFPE PVTVTWNSGSLSSGVHTFPA VLQSDLYTLS SSVTVPSSTW 201PSETVTCNVA HPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVS SVFIFPPKPK 251DVLTITLTPK VTCVWDISK DDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPREEQFNS 301 TFRSVSELPIMHQDWLNGKE FKCRVNSAAF PAPIEKTISK TKGRPKAPQV 351 YTIPPPKEQM AKDKVSLTCMITDFFPEDIT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM 401DTDGSYFIYS KLNVQKSNWE A GNTFTCSVL HEGLHNHHTE KSLSHSPGK (SEQ ID NO: 19)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-С, показана ниже:
- 18 037044
GAGGTCCAGC TGCAACAATC TGGACCTGAG CTGGTGAAGC CTGGGACTTC
AGTGAAGATG TCCTGTAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTGCTACA
101 TGAACTGGGT GAAGCAGAGC CATGGGAAGA GCCTTGAATG GATTGGAGAT
151 ATTAATCCTT TCAACGGTGG TACTACCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA
201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AATCCTCCAG CACAGCCTAC ATGCAGCTCA
251 ACAGCCTGAC ATCTGACGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATCCCAT
301 TATTACTTCG ATGGTAGAGT CCCTTGGGAT GCTATGGACT ACTGGGGTCA
351 AGGAACCTCA GTCACCGTCT CCTCAGCCAA AACGACACCC CCATCTGTCT
401 ATCCACTGGC CCCTGGATCT GCTGCCCAAA CTAACTCCAT GGTGACCCTG
451 GGATGCCTGG TCAAGGGCTA TTTCCCTGAG CCAGTGACAG TGACCTGGAA
501 CTCTGGATCC CTGTCCAGCG GTGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTGCAGT
551 CTGACCTCTA CACTCTGAGC AGCTCAGTGA CTGTCCCCTC CAGCACCTGG
601 CCCAGCGAGA CCGTCACCTG CAACGTTGCC CACCCGGCCA GCAGCACCAA
651 GGTGGACAAG AAAATTGTGC CCAGGGATTG TGGTTGTAAG CCTTGCATAT
701 GTACAGTCCC AGAAGTATCA TCTGTCTTCA TCTTCCCCCC AAAGCCCAAG
751 GATGTGCTCA CCATTACTCT GACTCCTAAG GTCACGTGTG TTGTGGTAGA
801 CATCAGCAAG GATGATCCCG AGGTCCAGTT CAGCTGGTTT GTAGATGATG
851 TGGAGGTGCA CACAGCTCAG ACGCAACCCC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC
901 ACTTTCCGCT CAGTCAGTGA ACTTCCCATC ATGCACCAGG ACTGGCTCAA
951 TGGCAAGGAG TTCAAATGCA GGGTCAACAG TGCAGCTTTC CCTGCCCCCA
1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGCA GACCGAAGGC TCCACAGGTG
1051 TACACCATTC CACCTCCCAA GGAGCAGATG GCCAAGGATA AAGTCAGTCT
1101 GACCTGCATG ATAACAGACT TCTTCCCTGA AGACATTACT GTGGAGTGGC
1151 AGTGGAATGG GCAGCCAGCG GAGAACTACA AGAACACTCA GCCCATCATG
1201 GACACAGATG GCTCTTACTT CATCTACAGC AAGCTCAATG TGCAGAAGAG
1251 CAACTGGGAG GCAGGAAATA CTTTCACCTG CTCTGTGTTA CATGAGGGCC
1301 TGCACAACCA CCATACTGAG AAGAGCCTCT CCCACTCTCC TGGTAAATGA (SEQ ID NO:20)
Аминокислотная последовательность HC Ab-С, включая сигнальный пептид:
MGWNWIFLFL LSGTAGVYSE VQLQQSGPEL VKPGTSVKMS CKASGYTFTD
CYMNWVKQSH GKSLEWIGDINPFNGGTTYN QKFKGKATLT VDKSSSTAYM
101 QLNSLTSDDS AVYYCARSHY YFDGRVPWDA MDYWGQGTSV TVSSAKTTPP
151 SVYPLAPGSA AQTNSMVTLG CLVKGYFPEP VTVTWNSGSL SSGVHTFPAV
201 LQSDLYTLSS SVTVPSSTWP SETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKP
251 CICTVPEVSS VFIFPPKPKD VLTITLTPKV TCVWDISKD DPEVQFSWFV
301 DDVEVHTAQT QPREEQFNST FRSVSELPIM HQDWLNGKEF KCRVNSAAFP
351 APIEKTISKT KGRPKAPQVY TIPPPKEQMA KDKVSLTCMI TDFFPEDITV
401 EWQWNGQPAE NYKNTQPIMD TDGSYFIYSK LNVQKSNWEA GNTFTCSVLH
451 EGLHNHHTEK SLSHSPGK (SEQ ID NO:21)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-С, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGGATGGA ACTGGATCTT ТСТСТТССТС TTGTCAGGAA CTGCAGGTGT
CTACTCTGAG GTCCAGCTGC AACAATCTGG ACCTGAGCTG GTGAAGCCTG
101 GGACTTCAGT GAAGATGTCC TGTAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC
151 TGCTACATGA ACTGGGTGAA GCAGAGCCAT GGGAAGAGCC TTGAATGGAT
201 TGGAGATATT ААТССТТТСА ACGGTGGTAC ТАССТАСААС CAGAAGTTCA
251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAAT CCTCCAGCAC AGCCTACATG
301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGACGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG
351 АТСССАТТАТ TACTTCGATG GTAGAGTCCC TTGGGATGCT ATGGACTACT
401 GGGGTCAAGG AACCTCAGTC ACCGTCTCCT CAGCCAAAAC GACACCCCCA
451 TCTGTCTATC CACTGGCCCC TGGATCTGCT GCCCAAACTA ACTCCATGGT
501 GACCCTGGGA TGCCTGGTCA AGGGCTATTT CCCTGAGCCA GTGACAGTGA
551 CCTGGAACTC TGGATCCCTG TCCAGCGGTG TGCACACCTT CCCAGCTGTC
601 CTGCAGTCTG АССТСТАСАС TCTGAGCAGC TCAGTGACTG TCCCCTCCAG
651 CACCTGGCCC AGCGAGACCG TCACCTGCAA CGTTGCCCAC CCGGCCAGCA
701 GCACCAAGGT GGACAAGAAA ATTGTGCCCA GGGATTGTGG TTGTAAGCCT
751 TGCATATGTA CAGTCCCAGA AGTATCATCT GTCTTCATCT ТССССССААА
801 GCCCAAGGAT GTGCTCACCA TTACTCTGAC TCCTAAGGTC ACGTGTGTTG
851 TGGTAGACAT CAGCAAGGAT GATCCCGAGG TCCAGTTCAG CTGGTTTGTA
901 GATGATGTGG AGGTGCACAC AGCTCAGACG CAACCCCGGG AGGAGCAGTT
951 CAACAGCACT TTCCGCTCAG TCAGTGAACT TCCCATCATG CACCAGGACT
1001 GGCTCAATGG CAAGGAGTTC AAATGCAGGG TCAACAGTGC AGCTTTCCCT
1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT СТССААААСС AAAGGCAGAC CGAAGGCTCC
1101 ACAGGTGTAC АССАТТССАС CTCCCAAGGA GCAGATGGCC AAGGATAAAG
1151 TCAGTCTGAC CTGCATGATA ACAGACTTCT TCCCTGAAGA CATTACTGTG
1201 GAGTGGCAGT GGAATGGGCA GCCAGCGGAG AACTACAAGA ACACTCAGCC
1251 CATCATGGAC ACAGATGGCT СТТАСТТСАТ CTACAGCAAG CTCAATGTGC
1301 AGAAGAGCAA CTGGGAGGCA GGAAATACTT TCACCTGCTC TGTGTTACAT
1351 GAGGGCCTGC АСААССАССА TACTGAGAAG AGCCTCTCCC ACTCTCCTGG
1401 TAAATGA (SEQ ID NO:22)
Последовательности CDR (определяющей комплементарность области) в вариабельной области тяжелой цепи Ab-С показаны ниже.
- 19 037044
CDR-Hl: DCYMN (SEQ ID NO:45)
CDR-H2: DINPFNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:46)
CDR-H3: SHYYFDGRVPWDAMDY (SEQ ID NO:47)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-С:
CDR-Ll: KASQSVDYDGDSYMN (SEQ ID NO:48)
CDR-L2: AASNLES (SEQ ID NO:49)
CDR-L3: QQSNEDPWT (SEQ ID NO:50)
Ab-А.
Антитело А (также называемое в данном описании Ab-А и Mab-А) представляет собой химерное антитело кролика-мыши, которое имеет высокую аффинность связывания со склеростином. Картина связывания в анализе BIAcore для Ab-А показана на фиг. 15.
Легкая цепь Ab-А.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-А:
AQVLTQTPAS VSAAVGGTVTINCQSSQSVY DNNWLAWFQQ KPGQPPKLLI
YDASDLASGV PSRFSGSGSG TQFTLTISGV QCADAATYYC QGAYNDVIYA
101 FGGGYEVVNK RTDAAPTVSIFPPSSEQLTS GGASWCFLNNFYPKDINVK
151 WKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT
201HKTSTSPIVK SFNRNEC (SEQ ID NO:23)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-А:
GCGCAAGTGC TGACCCAGAC TCCAGCCTCC GTGTCTGCAG CTGTGGGAGG
CACAGTCACC ATCAATTGCC AGTCCAGTCA GAGTGTTTAT GATAACAACT
101 GGTTAGCCTG GTTTCAGCAG AAACCAGGGC AGCCTCCCAA GCTCCTGATT
151 TATGATGCAT CCGATCTGGC ATCTGGGGTC CCATCGCGGT TCAGTGGCAG
201 TGGATCTGGG ACACAGTTCA СТСТСАССАТ CAGCGGCGTG CAGTGTGCCG
251 ATGCTGCCAC TTACTACTGT CAAGGCGCTT ATAATGATGT TATTTATGCT
301 TTCGGCGGAG GGACCGAGGT GGTGGTCAAA CGTACGGATG CTGCACCAAC
351 TGTATCCATC ТТСССАССАТ CCAGTGAGCA GTTAACATCT GGAGGTGCCT
401 CAGTCGTGTG CTTCTTGAAC ААСТТСТАСС CCAAAGACAT CAATGTCAAG
451 TGGAAGATTG ATGGCAGTGA ACGACAAAAT GGCGTCCTGA ACAGTTGGAC
501 TGATCAGGAC AGCAAAGACA GCACCTACAG CATGAGCAGC ACCCTCACGT
551 TGACCAAGGA CGAGTATGAA CGACATAACA GCTATACCTG TGAGGCCACT
601 CACAAGACAT СААСТТСАСС CATTGTCAAG AGCTTCAACA GGAATGAGTG
651TTAG (SEQIDNO:24)
Аминокислотная последовательность LC Ab-А, включая сигнальный пептид:
MDTRAPTQLL GLLLLWLPGA TFAQVLTQTP ASVSAAVGGT VTINCQSSQS
VYDNNWLAWF QQKPGQPPKL LIYDASDLAS GVPSRFSGSG SGTQFTLTIS
101 GVQCADAATY YCQGAYNDVIYAFGGGTEW VKRTDAAPTV SIFPPSSEQL
151 TSGGASWCF LNNFYPKDIN VKWKIDGSER QNGVLNSWTD QDSKDSTYSM
201 SSTLTLTKDE YERHNSYTCE ATHKTSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO:25)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-А, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGACACGA GGGCCCCCAC TCAGCTGCTG GGGCTCCTGC TGCTCTGGCT
CCCAGGTGCC ACATTTGCGC AAGTGCTGAC CCAGACTCCA GCCTCCGTGT
101 CTGCAGCTGT GGGAGGCACA GTCACCATCA ATTGGCAGTC CAGTCAGAGT
151 GTTTATGATA ACAACTGGTT AGCCTGGTTT CAGCAGAAAC CAGGGCAGCC
201 TCCCAAGCTC CTGATTTATG ATGCATCCGA TCTGGCATCT GGGGTCCCAT
251 CGCGGTTCAG TGGCAGTGGA TCTGGGACAC AGTTCACTCT CACCATCAGC
301 GGCGTGCAGT GTGCCGATGC TGCCACTTAC TACTGTCAAG GCGCTTATAA
351 TGATGTTATT TATGCTTTCG GCGGAGGGAC CGAGGTGGTG GTCAAACGTA
401 CGGATGCTGC ACCAACTGTA ТССАТСТТСС CACCATCCAG TGAGCAGTTA
451 ACATCTGGAG GTGCCTCAGT CGTGTGCTTC TTGAACAACT ТСТАССССАА
501 AGACATCAAT GTCAAGTGGA AGATTGATGG CAGTGAACGA CAAAATGGCG
551 TCCTGAACAG TTGGACTGAT CAGGACAGCA AAGACAGCAC CTACAGCATG
601 AGCAGCACCC TCACGTTGAC CAAGGACGAG TATGAACGAC ATAACAGCTA
651 TACCTGTGAG GCCACTCACA AGACATCAAC ТТСАСССАТТ GTCAAGAGCT
701 TCAACAGGAA TGAGTGTTAG (SEQ ID NO:26)
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-А:
QSLEESGGRL VTPGTPLTLT CTASGFSLSS YWMNWVRQAP GEGLEWIGTI
DSGGR.TDYAS WAKGRFTISR TSTTMDLKMT SLTTGDTARY FC ARN WNLWG
101 QGTLVTVSSA STKGPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YFPEPVTVTW
151NSGSLSSGVH TFPA VLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT CNVAHPASST
201KVDKKIVPRD CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVW
251DISKDDPEVQ FSWFVDDVEVHTAQTQPREE QFNSTFRSVSELPIMHQDWL
301NGKEFKCRVN SAAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP KEQMAKDKVS
351LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMNTNGSY FVYSKLNVQK
401SNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK (SEQ ID NO:27)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным
- 20 037044 пептидом) HC Ab-А:
CAGTCGCTGG AGGAGTCCGG GGGTCGCCTG GTCACGCCTG GGACACCCCT
GACACTCACC TGCACAGCCT CTGGATTCTC CCTCAGTAGT TATTGGATGA
101 ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGGGAGGGGC TGGAATGGAT CGGAACCATT
151 GATTCTGGTG GTAGGACGGA CTACGCGAGC TGGGCAAAAG GCCGATTCAC
201 CATCTCCAGA ACCTCGACTA CGATGGATCT GAAAATGACC AGTCTGACGA
251 CCGGGGACAC GGCCCGTTAT TTCTGTGCCA GAAATTGGAA CTTGTGGGGC
301 CAAGGCACCC TCGTCACCGT CTCGAGCGCT TCTACAAAGG GCCCATCTGT
351 CTATCCACTG GCCCCTGGAT CTGCTGCCCA AACTAACTCC ATGGTGACCC
401 TGGGATGCCT GGTCAAGGGC TATTTCCCTG AGCCAGTGAC AGTGACCTGG
451 AACTCTGGAT CCCTGTCCAG CGGTGTGCAC ACCTTCCCAG CTGTCCTGCA
501 GTCTGACCTC TACACTCTGA GCAGCTCAGT GACTGTCCCC TCCAGCACCT
551 GGCCCAGCGA GACCGTCACC TGCAACGTTG CCCACCCGGC CAGCAGCACC
601 AAGGTGGACA AGAAAATTGT GCCCAGGGAT TGTGGTTGTA AGCCTTGCAT
651 ATGTACAGTC CCAGAAGTAT CATCTGTCTT CATCTTCCCC CCAAAGCCCA
701 AGGATGTGCT CACCATTACT CTGACTCCTA AGGTCACGTG TGTTGTGGTA
751 GACATCAGCA AGGATGATCC CGAGGTCCAG TTCAGCTGGT TTGTAGATGA
801 TGTGGAGGTG CACACAGCTC AGACGCAACC CCGGGAGGAG CAGTTCAACA
851 GCACTTTCCG CTCAGTCAGT GAACTTCCCA TCATGCACCA GGACTGGCTC
901 AATGGCAAGG AGTTCAAATG CAGGGTCAAC AGTGCAGCTT TCCCTGCCCC
951 CATCGAGAAA ACCATCTCCA AAACCAAAGG CAGACCGAAG GCTCCACAGG
1001 TGTACACCAT TCCACCTCCC AAGGAGCAGA TGGCCAAGGA TAAAGTCAGT
1051 CTGACCTGCA TGATAACAGA CTTCTTCCCT GAAGACATTA CTGTGGAGTG
1101 GCAGTGGAAT GGGCAGCCAG CGGAGAACTA CAAGAACACT CAGCCCATCA
1151 TGGACACAGA TGGCTCTTAC TTCGTCTACA GCAAGCTCAA TGTGCAGAAG
1201 AGCAACTGGG AGGCAGGAAA TACTTTCACC TGCTCTGTGT TACATGAGGG
1251 CCTGCACAAC CACCATACTG AGAAGAGCCT CTCCCACTCT CCTGGTAAAT
1301 GA (SEQ ID NO:28)
Аминокислотная последовательность HC Ab-А, включая сигнальный пептид:
METGLRWLLL VAVLKGVHCQ SLEESGGRLV TPGTPLTLTC TASGFSLSSY
WMNWVRQAPG EGLEWIGTID SGGRTDYASW AKGRFTISRT STTMDLKMTS
101 LTTGDTARYF CARNWNLWGQ GTLVTVSSAS TKGPSVYPLA PGSAAQTNSM
151 VTLGCLVKGY FPEPVTVTWN SGSLSSGVHT FPAVLQSDLY TLSSSVTVPS
201 STWPSETVTC NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP EVSSVFIFPP
251 KPKDVLTITL TPKVTCVVVDISKDDPEVQF SWFVDDVEVH TAQTQPREEQ
301 FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS AAFPAPIEKTISKTKGRPKA
351 PQVYTIPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ
401 PIMNTNGSYF VYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH HTEKSLSHSP
451 GK (SEQ ID NO:29)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-А, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGAGACTG GGCTGCGCTG GCTTCTCCTG GTCGCTGTGC TCAAAGGTGT
CCACTGTCAG TCGCTGGAGG AGTCCGGGGG TCGCCTGGTC ACGCCTGGGA
101 CACCCCTGAC ACTCACCTGC ACAGCCTCTG GATTCTCCCT CAGTAGTTAT
151 TGGATGAACT GGGTCCGCCA GGCTCCAGGG GAGGGGCTGG AATGGATCGG
201 AACCATTGAT TCTGGTGGTA GGACGGACTA CGCGAGCTGG GCAAAAGGCC
251 GATTCACCAT CTCCAGAACC TCGACTACGA TGGATCTGAA AATGACCAGT
301 CTGACGACCG GGGACACGGC CCGTTATTTC TGTGCCAGAA ATTGGAACTT
351 GTGGGGCCAA GGCACCCTCG TCACCGTCTC GAGCGCTTCT ACAAAGGGCC
401 CATCTGTCTA TCCACTGGCC CCTGGATCTG CTGCCCAAAC TAACTCCATG
451 GTGACCCTGG GATGCCTGGT CAAGGGCTAT TTCCCTGAGC CAGTGACAGT
501 GACCTGGAAC TCTGGATCCC TGTCCAGCGG TGTGCACACC TTCCCAGCTG
551 TCCTGCAGTC TGACCTCTAC ACTCTGAGCA GCTCAGTGAC TGTCCCCTCC
601 AGCACCTGGC CCAGCGAGAC CGTCACCTGC AACGTTGCCC ACCCGGCCAG
651 CAGCACCAAG GTGGACAAGA AAATTGTGCC CAGGGATTGT GGTTGTAAGC
701 CTTGCATATG TACAGTCCCA GAAGTATCAT CTGTCTTCAT СТТССССССА
751 AAGCCCAAGG ATGTGCTCAC CATTACTCTG ACTCCTAAGG TCACGTGTGT
801 TGTGGTAGAC ATCAGCAAGG ATGATCCCGA GGTCCAGTTC AGCTGGTTTG
851 TAGATGATGT GGAGGTGCAC ACAGCTCAGA CGCAACCCCG GGAGGAGCAG
901 TTCAACAGCA CTTTCCGCTC AGTCAGTGAA СТТСССАТСА TGCACCAGGA
951 CTGGCTCAAT GGCAAGGAGT TCAAATGCAG GGTCAACAGT GCAGCTTTCC
1001 CTGCCCCCAT CGAGAAAACC АТСТССАААА CCAAAGGCAG ACCGAAGGCT
1051 CCACAGGTGT АСАССАТТСС ACCTCCCAAG GAGCAGATGG CCAAGGATAA
1101 AGTCAGTCTG ACCTGCATGA TAACAGACTT CTTCCCTGAA GACATTACTG
1151 TGGAGTGGCA GTGGAATGGG CAGCCAGCGG AGAACTACAA GAACACTCAG
1201 CCCATCATGG ACACAGATGG СТСТТАСТТС GTCTACAGCA AGCTCAATGT
1251 GCAGAAGAGC AACTGGGAGG CAGGAAATAC TTTCACCTGC TCTGTGTTAC
1301 ATGAGGGCCT GCACAACCAC CATACTGAGA AGAGCCTCTC ССАСТСТССТ
1351 GGTAAATGA (SEQ ID NO:30)
Последовательности CDR (определяющей комплементарность области) в вариабельной области тяжелой цепи Ab-А показаны ниже.
- 21 037044
CDR-Hl: SYWMN (SEQ ID NO:51)
CDR-H2: TIDSGGRTDYASWAKG (SEQ ID NO :52)
CDR-H3: NWNL (SEQ ID NO:53)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-А:
CDR-Ll: QSSQSVYDNNWLA (SEQ ID NO :54)
CDR-L2: DASDLAS (SEQ ID NO:55)
CDR-L3: QGAYNDVIYA (SEQ ID NO:56)
Ab-А гуманизировали, и оно названо антителом 1 (также называемым в данном описании Ab-1), имеющим следующие последовательности:
Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области LC Ab-1, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGT GCCACATTTGCTCAAGTTCTGACCCAGAGTCCAAGCAGTCTCTCCGCCAGCGTAGGC GATCGTGTGACTATTACCTGTCAATCTAGTCAGAGCGTGTATGATAACAATTGGCTG GCGTGGTACCAGCAAAAACCGGGCAAAGCCCCGAAGCTGCTCATCTATGACGCGTC CGATCTGGCTAGCGGTGTGCCAAGCCGTTTCAGTGGCAGTGGCAGCGGTACTGACT TTACCCTCACAATTTCGTCTCTCCAGCCGGAAGATTTCGCCACTTACTATTGTCAAG GTGCTTACAACGATGTGATTTATGCCTTCGGTCAGGGCACTAAAGTAGAAATCAAA CGT (SEQ ID NO:74)
Аминокислотная последовательность вариабельной области LC Ab-1, включая сигнальный пептид: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAOVLTOSPSSLSASVGDRVTITC'OSSOSVYDNNWLA
WYQQKPGKAPKLLIYDASDLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQGAYN DVIYAFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:75) .....
Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области HC Ab-1, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCACTGT GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGAGGCGGGCTTGTCCAGCCTGGAGGGAGCCTGCG TCTCTCTTGTGCAGCAAGCGGCTTCAGCTTATCCTCTTACTGGATGAATTGGGTGCG GCAGGCACCTGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCACCATTGATTCCGGAGGCCGTA CAGACTACGCGTCTTGGGCAAAGGGCCGTTTCACCATTTCCCGCGACAACTCCAAA AATACCATGTACCTCCAGATGAACTCTCTCCGCGCAGAGGACACAGCACGTTATTA CTGTGCACGCAACTGGAATCTGTGGGGTCAAGGTACTCTTGTAACAGTCTCGAGC (SEQIDNO:76)
Аминокислотная последовательность вариабельной области HC Ab-1, включая сигнальный пептид METGLRWLLLVAVLKGVHCEVOLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYWMNWVR QAPGKGLEWVGTIDSGGRTDYASWAKGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTARYYC ARNWNLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:77 )
Последовательности CDR (определяющей комплементарность области) в вариабельной области тяжелой цепи Ab-1 показаны ниже.
CDR-Hl: SYWMN (SEQ ID NO:51)
CDR-H2: TIDSGGRTDYASWAKG (SEQ ID NO :52)
CDR-H3: NWNL (SEQ ID NO :53)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-1:
CDR-Ll: QSSQSVYDNNWLA (SEQ ID NO :54)
CDR-L2: DASDLAS (SEQ ID NO:55)
CDR-L3: QGAYNDVIYA (SEQ ID NO:56)
Ab-B.
Антитело В (также называемое в данном описании Ab-В и Mab-В) представляет собой антитело мыши, которое имеет высокую аффинность связывания со склеростином. Картина связывания в анализе BIAcore для Ab-В показана на фиг. 16.
Легкая цепь Ab-В.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-В:
QIVLTQSPTI VSASPGEKVT LICSASSSVS FVDWFQQKPG TSPKRWIYRT
SNLGFGVPAR FSGGGSGTSH SLTISRMEAE DAATYYC'QQR STYPPTFGAG
101 TKLELKKADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS WCELNNFYP KDZNVKWKID
151 GSERQNGVLN SWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS
201 TSPIVKSFNR №C(SEQ IDNO:31)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-В:
- 22 037044
CAAATTGTTC TCACCCAGTC TCCAACAATC GTGTCTGCAT CTCCAGGGGA
GAAGGTCACC CTAATCTGCA GTGCCAGTTC AAGTGTAAGT TTCGTGGACT
101 GGTTCCAGCA GAAGCCAGGC ACTTCTCCCA AACGCTGGAT TTACAGAACA
151 TCCAACCTGG GTTTTGGAGT CCCTGCTCGC TTCAGTGGCG GTGGATCTGG
201 GACCTCTCAC TCTCTCACAA TCAGCCGAAT GGAGGCTGAA GATGCTGCCA
251 CTTATTACTG CCAGCAAAGG AGTACTTACC CACCCACGTT CGGTGCTGGG
301 ACCAAGCTGG AACTGAAACG GGCTGATGCT GCACCAACTG TATCCATCTT
351 CCCACCATCC AGTGAGCAGT TAACATCTGG AGGTGCCTCA GTCGTGTGCT
401 TCTTGAACAA CTTCTACCCC AAAGACATCA ATGTCAAGTG GAAGATTGAT
451 GGCAGTGAAC GACAAAATGG CGTCCTGAAC AGTTGGACTG ATCAGGACAG
501 CAAAGACAGC ACCTACAGCA TGAGCAGCAC CCTCACGTTG ACCAAGGACG
551 AGTATGAACG ACATAACAGC TATACCTGTG AGGCCACTCA CAAGACATCA
601 ACTTCACCCA TTGTCAAGAG CTTCAACAGG AATGAGTGTT AG (SEQ IDNO:32)
Аминокислотная последовательность LC Ab-В, включая сигнальный пептид:
MHFQVQIFSF LLISASVIVS RGQIVLTQSP TIVSASPGEK VTLICSASSS
VSFVDWFQQK PGTSPKRWIY RTSNLGFGVP ARFSGGGSGT SHSLTISRME
101 AEDAATYYCQ QRSTYPPTFG AGTKLELKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG
151 ASVVCFLNNF YPKDINVKWK IDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL
201 TLTKDEYERH NSYTCEATHK TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO:33)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-В, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGCATTTTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTGCTAATCA GTGCCTCAGT
CATAGTGTCC AGAGGGCAAA TTGTTCTCAC CCAGTCTCCA ACAATCGTGT
101 CTGCATCTCC AGGGGAGAAG GTCACCCTAA TCTGCAGTGC CAGTTCAAGT
151 GTAAGTTTCG TGGACTGGTT CCAGCAGAAG CCAGGCACTT CTCCCAAACG
201 CTGGATTTAC AGAACATCCA ACCTGGGTTT TGGAGTCCCT GCTCGCTTCA
251 GTGGCGGTGG ATCTGGGACC ТСТСАСТСТС TCACAATCAG CCGAATGGAG
301 GCTGAAGATG CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAAAGGAGTA СТТАСССАСС
351 CACGTTCGGT GCTGGGACCA AGCTGGAACT GAAACGGGCT GATGCTGCAC
401 CAACTGTATC САТСТТСССА CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT
451 GCCTCAGTCG TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT
501 CAAGTGGAAG ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT
551 GGACTGATCA GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC
601 ACGTTGACCA AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC
651 CACTCACAAG АСАТСААСТТ CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG
701 AGTGTTAG (SEQ ID NO:34)
Тяжелая цепь Ab-В
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-В:
QVTLKESGPG ILQPSQTLSL TCSFSGFSLS .TSGMGVGWIR HPSGKNLEWL
AHIWWDDVKR YNPVLKSRLT ISKDTSNSQV FLKIANVDTA DTATYYCARI
101 EDFDYDEEYY AMDYWGQGTS V1VSSAKTTP PSVYPLAPGS AAQTNSMVTL
151 GCLVKGYFPE PVTVTWNSGS LSSGVHTFPA VLQSDLYTLS SSVTVPSSTW
201 PSETVTCNVA HPASSTKVDK KIVPRDCGCK PCICTVPEVS SVFIFPPKPK
251 DVLTITLTPK VTCVWDISK DDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPPEEQFNS
301 TFRSVSELPI MHQDWLNGKE FKCRVNSAAF PAPIEKTISK TKGRPKAPQV
351 YTIPPPKEQM AKDKVSLTCM ITDFFPEDIT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM
401 DTDGSYFVYS KLNVQKSNWE AGNTFTCSVL HEGLHNHHTE KSLSHSPGK(SEQ
IDNO:35)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-В:
- 23 037044
CAGGTTACTC TGAAAGAGTC TGGCCCTGGG ATATTGCAGC CCTCCCAGAC
CCTCAGTCTG ACTTGTTCTT TCTCTGGGTT TTCACTGAGC ACTTCTGGTA
101 TGGGTGTAGG CTGGATTCGT CACCCATCAG GGAAGAATCT GGAGTGGCTG
151 GCACACATTT GGTGGGATGA TGTCAAGCGC TATAACCCAG TCCTGAAGAG
201 CCGACTGACT ATCTCCAAGG ATACCTCCAA CAGCCAGGTA TTCCTCAAGA
251 TCGCCAATGT GGACACTGCA GATACTGCCA CATACTACTG TGCTCGAATA
301 GAGGACTTTG ATTACGACGA GGAGTATTAT GCTATGGACT ACTGGGGTCA
351 AGGAACCTCA GTCATCGTCT CCTCAGCCAA AACGACACCC CCATCTGTCT
401 ATCCACTGGC CCCTGGATCT GCTGCCCAAA CTAACTCCAT GGTGACCCTG
451 GGATGCCTGG TCAAGGGCTA TTTCCCTGAG CCAGTGACAG TGACCTGGAA
501 CTCTGGATCC CTGTCCAGCG GTGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTGCAGT
551 CTGACCTCTA CACTCTGAGC AGCTCAGTGA CTGTCCCCTC CAGCACCTGG
601 CCCAGCGAGA CCGTCACCTG CAACGTTGCC CACCCGGCCA GCAGCACCAA
651 GGTGGACAAG AAAATTGTGC CCAGGGATTG TGGTTGTAAG CCTTGCATAT
701 GTACAGTCCC AGAAGTATCA TCTGTCTTCA TCTTCCCCCC AAAGCCCAAG
751 GATGTGCTCA CCATTACTCT GACTCCTAAG GTCACGTGTG TTGTGGTAGA
801 CATCAGCAAG GATGATCCCG AGGTCCAGTT CAGCTGGTTT GTAGATGATG
851 TGGAGGTGCA CACAGCTCAG ACGCAACCCC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC
901 ACTTTCCGCT CAGTCAGTGA ACTTCCCATC ATGCACCAGG ACTGGCTCAA
951 TGGCAAGGAG TTCAAATGCA GGGTCAACAG TGCAGCTTTC CCTGCCCCCA
1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGCA GACCGAAGGC TCCACAGGTG
1051 TACACCATTC CACCTCCCAA GGAGCAGATG GCCAAGGATA AAGTCAGTCT
1101 GACCTGCATG ATAACAGACT TCTTCCCTGA AGACATTACT GTGGAGTGGC
1151 AGTGGAATGG GCAGCCAGCG GAGAACTACA AGAACACTCA GCCCATCATG
1201 GACACAGATG GCTCTTACTT CGTCTACAGC AAGCTCAATG TGCAGAAGAG
1251 CAACTGGGAG GCAGGAAATA CTTTCACCTG CTCTGTGTTA CATGAGGGCC
1301 TGCACAACCA CCATACTGAG AAGAGCCTCT CCCACTCTCC TGGTAAATGA (SEQIDNO:36)
Аминокислотная последовательность HC Ab-В, включая сигнальный пептид:
MGRLTSSFLL LIVPAYVLSQ VTLKESGPGI LQPSQTLSLT CSFSGFSLST
SGMGVGWIRH PSGKNLEWLA HIWWDDVKRY NPVLKSRLTI SKDTSNSQVF
101 LKIANVDTAD TATYYCARIE DFDYDEEYYA MDYWGQGTSV IVSSAKTTPP
151 SVYPLAPGSA AQTNSMVTLG CLVKGYFPEP VTVTWNSGSL SSGVHTFPAV
201 LQSDLYTLSS SVTVPSSTWP SETVTCNVAH PASSTKVDKK IVPRDCGCKP
251 CICTVPEVSS VFIFPPKPKD VLTITLTPKV TCVVVDISKD DPEVQFSWFV
301 DDVEVHTAQT QPREEQFNST FRSVSELPIM HQDWLNGKEF KCRVNSAAFP
351 APIEKTISKT KGRPKAPQVY TIPPPKEQMA KDKVSLTCMI TDFFPEDITV
401 EWQWNGQPAE NYKNTQPIMD TDGSYFVYSK LNVQKSNWEA GNTFTCSVLH
451 EGLHNHHTEK SLSHSPGK (SEQ IDNO:37)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-В, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGGCAGGC ТТАСТТСТТС ATTCCTGCTA CTGATTGTCC CTGCATATGT
CCTGTCCCAG GTTACTCTGA AAGAGTCTGG CCCTGGGATA TTGCAGCCCT
101 CCCAGACCCT CAGTCTGACT TGTTCTTTCT CTGGGTTTTC ACTGAGCACT
151 TCTGGTATGG GTGTAGGCTG GATTCGTCAC CCATCAGGGA AGAATCTGGA
201 GTGGCTGGCA CACATTTGGT GGGATGATGT CAAGCGCTAT AACCCAGTCC
251 TGAAGAGCCG ACTGACTATC TCCAAGGATA CCTCCAACAG CCAGGTATTC
301 CTCAAGATCG CCAATGTGGA CACTGCAGAT ACTGCCACAT ACTACTGTGC
351 TCGAATAGAG GACTTTGATT ACGACGAGGA GTATTATGCT ATGGACTACT
401 GGGGTCAAGG AACCTCAGTC ATCGTCTCCT CAGCCAAAAC GACACCCCCA
451 TCTGTCTATC CACTGGCCCC TGGATCTGCT GCCCAAACTA ACTCCATGGT
501 GACCCTGGGA TGCCTGGTCA AGGGCTATTT CCCTGAGCCA GTGACAGTGA
551 CCTGGAACTC TGGATCCCTG TCCAGCGGTG TGCACACCTT CCCAGCTGTC
601 CTGCAGTCTG АССТСТАСАС TCTGAGCAGC TCAGTGACTG TCCCCTCCAG
651 CACCTGGCCC AGCGAGACCG TCACCTGCAA CGTTGCCCAC CCGGCCAGCA
701 GCACCAAGGT GGACAAGAAA ATTGTGCCCA GGGATTGTGG TTGTAAGCCT
751 TGCATATGTA CAGTCCCAGA AGTATCATCT GTCTTCATCT ТССССССААА
801 GCCCAAGGAT GTGCTCACCA TTACTCTGAC TCCTAAGGTC ACGTGTGTTG
851 TGGTAGACAT CAGCAAGGAT GATCCCGAGG TCCAGTTCAG CTGGTTTGTA
901 GATGATGTGG AGGTGCACAC AGCTCAGACG CAACCCCGGG AGGAGCAGTT
951 CAACAGCACT TTCCGCTCAG TCAGTGAACT TCCCATCATG CACCAGGACT
1001 GGCTCAATGG CAAGGAGTTC AAATGCAGGG TCAACAGTGC AGCTTTCCCT
1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT СТССААААСС AAAGGCAGAC CGAAGGCTCC
1101 ACAGGTGTAC АССАТТССАС CTCCCAAGGA GCAGATGGCC AAGGATAAAG
1151 TCAGTCTGAC CTGCATGATA ACAGACTTCT TCCCTGAAGA CATTACTGTG
1201 GAGTGGCAGT GGAATGGGCA GCCAGCGGAG AACTACAAGA ACACTCAGCC
1251 CATCATGGAC ACAGATGGCT CTTACTTCGT CTACAGCAAG CTCAATGTGC
1301 AGAAGAGCAA CTGGGAGGCA GGAAATACTT TCACCTGCTC TGTGTTACAT
1351 GAGGGCCTGC АСААССАССА TACTGAGAAG AGCCTCTCCC ACTCTCCTGG
1401 TAAATGA(SEQIDNO:38)
Последовательности CDR (определяющей комплементарность области) в вариабельной области тяжелой цепи Ab-В показаны ниже.
- 24 037044
CDR-Hl: TSGMGVG (SEQ ID NO :57)
CDR-H2: HIWWDDVKRYNPVLKS (SEQ ID NO:58)
CDR-H3: EDFDYDEEYYAMDY (SEQ ID NO:59)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-В:
CDR-Ll: SASSSVSFVD (SEQ ID NO:60)
CDR-L2: RTSNLGF (SEQ ID NO:61)
CDR-L3: QQRSTYPPT (SEQ ID NO:62)
Антитела, раскрытые в данном описании, связываются с областями склеростина человека, которые важны для активности белка in vivo. Связывание антитела со склеростином может коррелировать, например, с увеличением минеральной плотности костей, достигаемой в случае применения антитела in vivo, например, как описано в примерах 5 и 9 (мыши) и примере 12 (обезьяны). Увеличение по меньшей мере одного из показателей: остеогенеза, содержания минеральных веществ в костях, костной массы, качества костей и прочности костей, также может быть достигнуто в случае применения антитела in vivo, например как описано в примерах 5 и 9 (мыши) и примере 12 (обезьяны). Так как связывание антитела со склеростином главным образом определяется последовательностями CDR, то антитело для практического осуществления изобретения может быть получено со всеми или некоторыми из описанных последовательностей CDR в подходящем каркасе, при этом антитело сохраняет способность специфично связываться со склеростином, и можно ожидать, например, что будет достигнуто увеличение минеральной плотности костей. Такие антитела применимы для лечения состояний человека или животного, которые вызваны, связаны или приводят по меньшей мере к одному из последствий: низкому остеогенезу, низкой минеральной плотности костей, низкому содержанию минеральных веществ в костях, низкой костной массе, низкому качеству костей и низкой прочности костей. Способы конструирования и экспрессии антител и их фрагментов, содержащих CDR согласно настоящему изобретению, известны специалистам в данной области.
Таким образом, настоящее изобретение в одном варианте осуществления относится к изолированному антителу, включая Ab-А, или к его антигенсвязывающему фрагменту, который специфично связывается со склеростином, и в котором вариабельный домен тяжелой цепи содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательности, указанные в виде SEQ ID NO: 51 для CDR-H1, SEQ ID NO: 52 для CDR-H2 и SEQ ID NO: 53 для CDR-H3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельный домен тяжелой цепи, в котором CDR состоят по меньшей мере из одного из пептидов с последовательностями SEQ ID NO: 51 для CDR-H1, SEQ ID NO: 52 для CDR-H2 и SEQ ID NO: 53 для CDR-H3.
В том случае, когда в антителах согласно изобретению присутствует легкая цепь, легкая цепь может представлять собой любую подходящую комплементарную цепь и в частности может быть выбрана из легкой цепи, в которой вариабельный домен содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательности, приведенные в виде SEQ ID NO: 54 для CDR-L1, SEQ ID NO: 55 для CDR-L2 и SEQ ID NO: 56 для CDR-L3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельный домен легкой цепи, в котором CDR состоят по меньшей мере из одного из пептидов с последовательностями SEQ ID NO: 54 для CDR-L1, SEQ ID NO: 55 для CDR-L2 и SEQ ID NO: 56 для CDR-L3.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к изолированному антителу, включая Ab-В, или к его антигенсвязывающему фрагменту, который специфично связывается со склеростином и в котором вариабельный домен тяжелой цепи содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательности, указанные в виде SEQ ID NO: 57 для CDR-H1, SEQ ID NO: 58 для CDR-B2 и SEQ ID NO: 59 для CDR-H3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельный домен тяжелой цепи, в котором CDR состоят по меньшей мере из одного из пептидов с последовательностями SEQ ID NO: 57 для CDR-H1, SEQ ID NO: 58 для CDR-H2 и SEQ ID NO: 59 для CDR-H3.
В том случае, когда в антителах согласно изобретению присутствует легкая цепь, легкая цепь может представлять собой подходящую комплементарную цепь и в частности может быть выбрана из легкой цепи, в которой вариабельный домен содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательности, указанные в виде SEQ ID NO: 60 для CDR-L1, SEQ ID NO: 61 для CDR-L2 и SEQ ID NO: 62 для CDR-L3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельный домен легкой цепи, в котором CDR состоят по меньшей мере из одного из пептидов с последовательностями SEQ ID NO: 60 для CDR-L1, SEQ ID NO: 61 для CDR-L2 и SEQ ID NO: 62 для CDR-L3.
Настоящее изобретение также относится к изолированному антителу, включая Ab-С, или к его антигенсвязывающему фрагменту, который специфично связывается со склеростином и в котором вариабельный домен тяжелой цепи содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательности, указанные в виде SEQ ID NO: 45 для CDR-H1, SEQ ID NO: 46 для CDR-H2 и SEQ ID NO: 47 для CDR-H3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельный домен тяжелой цепи, в котором CDR состоят по меньшей мере из одного из пептидов с последовательностями SEQ ID NO: 45 для CDR-H1, SEQ ID NO: 46 для CDR-H2 и SEQ ID NO: 47 для CDR-H3.
В том случае, когда в антителах согласно изобретению присутствует легкая цепь, легкая цепь мо
- 25 037044 жет представлять собой любую подходящую комплементарную цепь и в частности может быть выбрана из легкой цепи, в которой вариабельный домен содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательности, указанные в виде SEQ ID NO: 48 для CDR-L1, SEQ ID NO: 49 для CDR-L2 и SEQ ID NO: 50 для CDR-L3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельный домен легкой цепи, в котором CDR состоят по меньшей мере из одного из пептидов с последовательностями SEQ ID NO: 48 для CDR-L1, SEQ ID NO: 49 для CDR-L2 и SEQ ID NO: 50 для CDR-L3.
Настоящее изобретение также относится к изолированному антителу, включая Ab-D, или к его антигенсвязывающему фрагменту, который специфично связывается со склеростином и в котором вариабельный домен тяжелой цепи содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательности, указанные в виде SEQ ID NO: 39 для CDR-H1, SEQ ID NO: 40 для CDR-H2 и SEQ ID NO: 41 для CDR-H3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельный домен тяжелой цепи, в котором CDR состоят по меньшей мере из одного из пептидов с последовательностями SEQ ID NO: 39 для CDR-H1, SEQ ID NO: 40 для CDR-H2 и SEQ ID NO: 41 для CDR-H3.
В том случае, когда в антителах согласно изобретению присутствует легкая цепь, легкая цепь может представлять собой любую подходящую комплементарную цепь и в частности может быть выбрана из легкой цепи, в которой вариабельный домен содержит по меньшей мере одну CDR, имеющую последовательности, указанные в виде SEQ ID NO: 42 для CDR-L1, SEQ ID NO: 43 для CDR-L2 и SEQ ID NO: 44 для CDR-L3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельный домен легкой цепи, в котором CDR состоят по меньшей мере из одного из пептидов с последовательностями SEQ ID NO: 42 для CDR-L1, SEQ ID NO: 43 для CDR-L2 и SEQ ID NO: 44 для CDR-L3.
Дополнительные антитела против склеростина описаны ниже. Для некоторых аминокислотных последовательностей области, определяющие комплементарность (CDR) заключены в прямоугольники, а константные области показаны жирным курсивом.
Ab-2.
Последовательности LC и HC антитела 2 (также называемого Ab-2) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-2.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-2:
QIVLSQSPAI LSTSPGEKVT MTCRASSSVY YMHWYQQKPG SSPKPWIYXT
SNLASGVPVRFSGSGSGTSY SLTITRVEAE DAATYYCQQW SSDPLTFGAG
101 ТКЕЕЫОгЛ/Ы APTVSIFPPS SEQLTSGGAS WCFLNNFYP KDINVKWKID 151 GSERQNGVLN SWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS 201 TSPIVKSFNR NEC (SEQ ID NO: 117)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-2:
CAAATTGTTC TCTCCCAGTC TCCAGCAATC CTGTCTACAT CTCCAGGGGA
GAAGGTCACA ATGACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTGTATAT TACATGCACT
101 GGTACCAGCA GAAGCCAGGA TCCTCCCCCA AACCCTGGAT TTATGCCACA
151 TCCAACCTGG CTTCTGGAGT CCCTGTTCGC TTCAGTGGCA GTGGGTCTGG
201 GACCTCTTAC TCTCTCACAA TCACCAGAGT GGAGGCTGAA GATGCTGCCA 251 CTTATTACTG CCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGTGCTGGG 301 ACCAAGCTGG AGCTGAAACG GGCTGATGCT GCACCAACTG TATCCATCTT 351 CCCACCATCC AGTGAGCAGT TAACATCTGG AGGTGCCTCA GTCGTGTGCT 401 TCTTGAACAA CTTCTACCCC AAAGACATCA ATGTCAAGTG GAAGATTGAT 451 GGCAGTGAAC GACAAAATGG CGTCCTGAAC AGTTGGACTG ATCAGGACAG 501 CAAAGACAGC ACCTACAGCA TGAGCAGCAC CCTCACGTTG ACCAAGGACG 551 AGTATGAACG ACATAACAGC TATACCTGTG AGGCCACTCA CAAGACATCA 601 ACTTCACCCA TTGTCAAGAG CTTCAACAGG AATGAGTGTT AG (SEQ ID
NO: 118)
Аминокислотная последовательность LC Ab-2, включая сигнальный пептид:
MDFQVQIFSF LLISASVIMS RGQIVLSQSP AILSTSPGEK VTMTCRASSS
VYYMHWYQQK PGSSPKPWIY ATSNLASGVP VRFSGSGSGT SYSLTITRVE
101 AEDAATYYCQ QWSSDPLTFG AGTKLELKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG 151 ASWCFLNNF YPKDINVKWKIDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL 201 TLTKDEYERH NSYTCEATHK TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO:119)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-2, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 26 037044
ATGGATTTTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTGCTAATCA GTGCTTCAGT
CATTATGTCC AGGGGACAAA TTGTTCTCTC CCAGTCTCCA GCAATCCTGT
101 CTACATCTCC AGGGGAGAAG GTCACAATGA CTTGCAGGGC CAGCTCAAGT
151 GTATATTACA TGCACTGGTA CCAGCAGAAG CCAGGATCCT CCCCCAAACC
201 CTGGATTTAT GCCACATCCA ACCTGGCTTC TGGAGTCCCT GTTCGCTTCA
251 GTGGCAGTGG GTCTGGGACC TCTTACTCTC TCACAATCAC CAGAGTGGAG
301 GCTGAAGATG CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAGTGGAGTA GTGACCCACT
351 CACGTTCGGT GCTGGGACCA AGCTGGAGCT GAAACGGGCT GATGCTGCAC
401 CAACTGTATC CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT
451 GCCTCAGTCG TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT
501 CAAGTGGAAG ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT
551 GGACTGATCA GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC
601 ACGTTGACCA AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC
651 CACTCACAAG ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG
701 AGTGTTAG (SEQ ID NO:120)
Тяжелая цепь Ab-2.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-2:
EVQVQQSGPE LVKPGASVKL SCTASGFNIK DYFIHWVKQR PEQGLEWIGR
LDPFDGLSDY APKFQDKAIM TADTSSNTAY LQLRSLTSED TAIYYCERFD
101 YDGTYPFFPY WGQGTLVTVS AAKTTPPSVY PLAPGSAAQT NSMVTLGCLV
151KGYFPEPVTV TWNSGSLSSG VHTFPAVLQS DLYTLSSSVT VPSSTWPSET
201 VTCNVAHPAS STKVDKK1VP RDCGCKPCIC TVPEVSSVFIFPPKPKDVLT
251ITLTPKVTCV WDISKDDPE VQFSWFVDDVEVHTAQTQPR EEQFNSTFRS
301 VSELPIMHQD WLNGKEFKCR VNSAAFPAPIEKTISKTKGR PKAPQVYTIP
351PPKEQMAKDK VSLTCMITDFFPED1TVEWQ WNGQPAENYKNTQPIMDTDG
401SYFIYSKLNV QKSNWEAGNT FTCSVLHEGL HNHHTEKSLS HSPGK (SEQ ID
NO:121)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-2:
GAGGTTCAGG TGCAGCAGTC TGGGCCAGAA CTTGTGAAGC CAGGGGCCTC
AGTCAAGTTG TCCTGCACAG CTTCTGGCTT СААСАТТААА GACTACTTTA
101 TACACTGGGT GAAGCAGAGG CCTGAACAGG GCCTGGAGTG GATTGGAAGG
151 CTTGATCCTG AGGATGGTGA AAGTGATTAT GCCCCGAAGT TCCAGGACAA
201 GGCCATTATG ACAGCAGACA САТСАТССАА CACAGCCTAT CTTCAGCTCA
251 GAAGCCTGAC ATCTGAGGAC ACTGCCATCT ATTATTGTGA GAGAGAGGAC
301 TACGATGGTA ССТАСАССТТ ТТТТССТТАС TGGGGCCAAG GGACTCTGGT
351 CACTGTCTCT GCAGCCAAAA CGACACCCCC ATCTGTCTAT CCACTGGCCC
401 CTGGATCTGC TGCCCAAACT AACTCCATGG TGACCCTGGG ATGCCTGGTC
451 AAGGGCTATT TCCCTGAGCC AGTGACAGTG ACCTGGAACT CTGGATCCCT 501 GTCCAGCGGT GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTGCAGTCT GACCTCTACA 551 CTCTGAGCAG CTCAGTGACT GTCCCCTCCA GCACCTGGCC CAGCGAGACC 601 GTCACCTGCA ACGTTGCCCA CCCGGCCAGC AGCACCAAGG TGGACAAGAA 651 AATTGTGCCC AGGGATTGTG GTTGTAAGCC TTGCATATGT ACAGTCCCAG 701 AAGTATCATC TGTCTTCATC ТТССССССАА AGCCCAAGGA TGTGCTCACC 751 ATTACTCTGA CTCCTAAGGT CACGTGTGTT GTGGTAGACA TCAGCAAGGA 801 TGATCCCGAG GTCCAGTTCA GCTGGTTTGT AGATGATGTG GAGGTGCACA 851 CAGCTCAGAC GCAACCCCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC TTTCCGCTCA 901 GTCAGTGAAC ТТСССАТСАТ GCACCAGGAC TGGCTCAATG GCAAGGAGTT 951 CAAATGCAGG GTCAACAGTG CAGCTTTCCC TGCCCCCATC GAGAAAACCA 1001 ТСТССААААС CAAAGGCAGA CCGAAGGCTC CACAGGTGTA САССАТТССА 1051 CCTCCCAAGG AGCAGATGGC CAAGGATAAA GTCAGTCTGA CCTGCATGAT 1101AACAGACTTC TTCCCTGAAG ACATTACTGT GGAGTGGCAG TGGAATGGGC 1151 AGCCAGCGGA GAACTACAAG AACACTCAGC CCATCATGGA CACAGATGGC 1201 ТСТТАСТТСА TCTACAGCAA GCTCAATGTG CAGAAGAGCA ACTGGGAGGC 1251 AGGAAATACT TTCACCTGCT CTGTGTTACA TGAGGGCCTG САСААССАСС 1301 ATACTGAGAA GAGCCTCTCC CACTCTCCTG GTAAATGA (SEQ ID NO:122) Аминокислотная последовательность HC Ab-2, включая сигнальный пептид:
MKCSWVIFFL MAWTGVNSE VQVQQSGPEL VKPGASVKLS CTASGFNIKD
YFIHWVKQRP EQGLEWIGRL DPEDGESDYA PKFQDKAIMT ADTSSNTAYL
101 QLRSLTSEDT AIYYCEREDY DGTYTFFPYW GQGTLVTVSA AKTTPPSVYP
151 LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPVTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD
201 LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKIVPR DCGCKPCICT
251 VPEVSSVFIF PPKPKDVLTITLTPKVTCW VDISKDDPEV QFSWFVDDVE
301 VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE
351 KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW 401NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFIYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH 451 NHHTEKSLSH SPGK (SEQ Ю NO: 123)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-2, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 27 037044
ATGAAATGCA GCTGGGTCAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT
CAATTCAGAG GTTCAGGTGC AGCAGTCTGG GCCAGAACTT GTGAAGCCAG 101 GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGCTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC 151 TACTTTATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT 201 TGGAAGGCTT GATCCTGAGG ATGGTGAAAG TGATTATGCC CCGAAGTTCC 251 AGGACAAGGC CATTATGACA GCAGACACAT CATCCAACAC AGCCTATCTT 301 CAGCTCAGAA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCATCTATT ATTGTGAGAG 351 AGAGGACTAC GATGGTACCT ACACCTTTTT TCCTTACTGG GGCCAAGGGA 401 CTCTGGTCAC TGTCTCTGCA GCCAAAACGA CACCCCCATC TGTCTATCCA 451 CTGGCCCCTG GATCTGCTGC CCAAACTAAC TCCATGGTGA CCCTGGGATG 501 CCTGGTCAAG GGCTATTTCC CTGAGCCAGT GACAGTGACC TGGAACTCTG 551 GATCCCTGTC CAGCGGTGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT GCAGTCTGAC 601 CTCTACACTC TGAGCAGCTC AGTGACTGTC CCCTCCAGCA CCTGGCCCAG 651 CGAGACCGTC ACCTGCAACG TTGCCCACCC GGCCAGCAGC ACCAAGGTGG 701ACAAGAAAAT TGTGCCCAGG GATTGTGGTT GTAAGCCTTG CATATGTACA 751 GTCCCAGAAG TATCATCTGT CTTCATCTTC CCCCCAAAGC CCAAGGATGT 801 GCTCACCATT ACTCTGACTC CTAAGGTCAC GTGTGTTGTG GTAGACATCA 851 GCAAGGATGA TCCCGAGGTC CAGTTCAGCT GGTTTGTAGA TGATGTGGAG 901 GTGCACACAG CTCAGACGCA ACCCCGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACTTT 951 CCGCTCAGTC AGTGAACTTC CCATCATGCA CCAGGACTGG CTCAATGGCA 1001 AGGAGTTCAA ATGCAGGGTC AACAGTGCAG CTTTCCCTGC CCCCATCGAG 1051 AAAACCATCT CCAAAACCAA AGGCAGACCG AAGGCTCCAC AGGTGTACAC 1101 CATTCCACCT CCCAAGGAGC AGATGGCCAA GGATAAAGTC AGTCTGACCT 1151 GCATGATAAC AGACTTCTTC CCTGAAGACA TTACTGTGGA GTGGCAGTGG 1201 AATGGGCAGC CAGCGGAGAA CTACAAGAAC ACTCAGCCCA TCATGGACAC 1251 AGATGGCTCT TACTTCATCT ACAGCAAGCT CAATGTGCAG AAGAGCAACT 1301 GGGAGGCAGG AAATACTTTC ACCTGCTCTG TGTTACATGA GGGCCTGCAC 1351 AACCACCATA CTGAGAAGAG CCTCTCCCAC TCTCCTGGTA AATGA (SEQ ID NO: 124)
Ab-3.
Последовательности LC и HC антитела 3 (также называемого в данном описании Ab-3) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-3.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-3:
EIVLTQSPAL MAASPGEKVTITCSVSSTIS SNHLHWFQQK SDTSPKPWIY
GTSNLASGVP VRFSGSGSGT SYSLTISSME AEDAATYYCQ QWSSYPLTFG
101 AGTKLELR/M DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG ASWCFLNNF YPKDINVKWK
151IDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL TLTKDEYERH NSYTCEATHK
201 TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO: 125)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-3:
GAAATTGTGC TCACCCAGTC TCCAGCACTC ATGGCTGCAT CTCCGGGGGA
GAAGGTCACC ATCACCTGCA GTGTCAGTTC AACTATAAGT ТССААССАСТ
101 TGCACTGGTT CCAGCAGAAG TCAGACACCT СССССАААСС CTGGATTTAT
151 GGCACATCCA ACCTGGCTTC TGGAGTCCCT GTTCGCTTCA GTGGCAGTGG
201 ATCTGGGACC ТСТТАТТСТС TCACAATCAG CAGCATGGAG GCTGAGGATG
251 CTGCCACTTA TTACTGTCAA CAGTGGAGTA GTTACCCACT CACGTTCGGC
301 GCTGGGACCA AGCTGGAGCTGAGACGGGCTGATGCTGCAC CAACTGTATC
351 САТСТТСССА CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT GCCTCAGTCG
401 TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT CAAGTGGAAG
451 ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT GGACTGATCA
501 GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC ACGTTGACCA
551 AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC CACTCACAAG
601 АСАТСААСТТ CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG AGTGTTAG (SEQ
ID NO: 126)
Аминокислотная последовательность LC Ab-3, включая сигнальный пептид:
WFHVQWWSVTVILS SGEIVLTQSP ALMAASPGEK VTITCSVSST
51ISSNHLHWFQ QKSDTSPKPWIYGTSNLASG VPVRFSGSGS GTSYSLTISS
101 MEAEDAATYY CQQWSSYPLT FGAGTKLELR RADAAPTVSIFPPSSEQLTS
151 GGASWCFLN NFYPKDINVK WKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS
201 TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT HKTSTSPIVK SFNRNEC (SEQ ID NO: 127)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-3, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 28 037044
ATGGATTTTC ATGTGCAGAT TTTCAGCTTC ATGCTAATCA GTGTCACAGT
CATTTTGTCC AGTGGAGAAA TTGTGCTCAC CCAGTCTCCA GCACTCATGG
101 CTGCATCTCC GGGGGAGAAG GTCACCATCA CCTGCAGTGT CAGTTCAACT
151 ATAAGTTCCA ACCACTTGCA CTGGTTCCAG CAGAAGTCAG ACACCTCCCC
201 CAAACCCTGG ATTTATGGCA CATCCAACCT GGCTTCTGGA GTCCCTGTTC
251 GCTTC AGTGG CAGTGGATCT GGGACCTCTT ATTCTCTCAC AATCAGC AGC
301 ATGGAGGCTG AGGATGCTGC CACTTATTAC TGTCAACAGT GGAGTAGTTA
351 CCCACTCACG TTCGGCGCTG GGACCAAGCT GGAGCTGAGA CGGGCTGATG
401 CTGCACCAAC TGTATCCATC TTCCCACCAT CCAGTGAGCA GTTAACATCT
451 GGAGGTGCCTCAGTCGTGTG CTTCTTGAAC AACTTCTACC CCAAAGACAT
501 CAATGTCAAG TGGAAGATTG ATGGCAGTGA ACGACAAAAT GGCGTCCTGA
551 ACAGTTGGAC TGATCAGGAC AGCAAAGACA GCACCTACAG CATGAGCAGC
601 ACCCTCACGT TGACCAAGGA CGAGTATGAA CGACATAACA GCTATACCTG
651 TGAGGCCACT CACAAGACAT CAACTTCACC CATTGTCAAG AGCTTCAACA
701 GGAATGAGTG TTAG (SEQ ID NO: 128)
Тяжелая цепь Ab-3.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-3:
EVQLQQSGAE LVRPGALVKL SCTASDFNIK DFYLHWMRQR PEQGLDWIGR
51IDPENGDTLY DPKTQDKATL TTDTSSNTAY LQLSGLTSET TAVYYCSREA
101 DYFHDGTSYW YFDVWGAGTTITNSSAKTTP PSVYPLAPGS AAQTNSMVTL
151 GCLVKGYFPE PVTVTWNSGS LSSGVHTFPA VLQSDLYTLS SSVTVPSSTW
201PSETVTCNVA HPASSTKVDK K1VPRDCGCK PCICTVPEVS SVFIFPPKPK
251DVLTITLTPK VTCVWDISKDDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPREEQFNS
301 TFRSVSELPIMHQDWLNGKE FKCRVNSAAF PAPIEKTISK TKGRPKAPQV
351 YTIPPPKEQM AKDKVSLTCMITDFFPEDIT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM
401DTDGSYFIYS KLNVQKSNWE AGNTFTCSVL HEGLHNHHTE KSLSHSPGK (SEQ
ID NO: 129)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-3:
GAGGTTCAGC TGCAGCAGTC TGGGGCTGAA CTTGTGAGGC CAGGGGCCTT
AGTCAAGTTG TCCTGCACAG CTTCTGACTT СААСАТТААА GACTTCTATC
101 TACACTGGAT GAGGCAGCGG CCTGAACAGG GCCTGGACTG GATTGGAAGG
151 ATTGATCCTG AGAATGGTGA ТАСТТТАТАТ GACCCGAAGT TCCAGGACAA
201 GGCCACTCTT ACAACAGACA САТССТССАА CACAGCCTAC CTGCAGCTCA
251 GCGGCCTGAC ATCTGAGACC ACTGCCGTCT ATTACTGTTC TAGAGAGGCG
301 GATTATTTCC ACGATGGTAC CTCCTACTGG TACTTCGATG TCTGGGGCGC
351 AGGGACCACA ATCACCGTCT CCTCAGCCAA AACGACACCC CCATCTGTCT
401ATCCACTGGC CCCTGGATCT GCTGCCCAAA СТААСТССАТ GGTGACCCTG
451 GGATGCCTGG TCAAGGGCTA TTTCCCTGAG CCAGTGACAG TGACCTGGAA
501 CTCTGGATCC CTGTCCAGCG GTGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTGCAGT
551 CTGACCTCTA CACTCTGAGC AGCTCAGTGA CTGTCCCCTC CAGCACCTGG
601 CCCAGCGAGA CCGTCACCTG CAACGTTGCC CACCCGGCCA GCAGCACCAA
651 GGTGGACAAG AAAATTGTGC CCAGGGATTG TGGTTGTAAG CCTTGCATAT
701 GTACAGTCCC AGAAGTATCA TCTGTCTTCA ТСТТСССССС AAAGCCCAAG
751 GATGTGCTCA ССАТТАСТСТ GACTCCTAAG GTCACGTGTG TTGTGGTAGA
801 CATCAGCAAG GATGATCCCG AGGTCCAGTT CAGCTGGTTT GTAGATGATG
851 TGGAGGTGCA CACAGCTCAG ACGCAACCCC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC
901ACTTTCCGCT CAGTCAGTGA АСТТСССАТС ATGCACCAGG ACTGGCTCAA
951 TGGCAAGGAG TTCAAATGCA GGGTCAACAG TGCAGCTTTC CCTGCCCCCA
1001 TCGAGAAAAC САТСТССААА ACCAAAGGCA GACCGAAGGC TCCACAGGTG
1051 ТАСАССАТТС САССТСССАА GGAGCAGATG GCCAAGGATA AAGTCAGTCT
1101 GACCTGCATG ATAACAGACT TCTTCCCTGA AGACATTACT GTGGAGTGGC
1151 AGTGGAATGG GCAGCCAGCG GAGAACTACA AGAACACTCA GCCCATCATG
1201 GACACAGATG GCTCTTACTT CATCTACAGC AAGCTCAATG TGCAGAAGAG
1251 CAACTGGGAG GCAGGAAATA CTTTCACCTG CTCTGTGTTA CATGAGGGCC
1301 TGCACAACCA CCATACTGAG AAGAGCCTCT СССАСТСТСС TGGTAAATGA (SEQ ID NO: 130)
Аминокислотная последовательность HC Ab-3, включая сигнальный пептид:
MKCSWVIFFL MAWTGVNSE VQLQQSGAEL VRPGALVKLS CTASDFNIKD
FYLHWMRQRP EQGLDWIGRIDPENGDTLYD PKFQDKATLT TDTSSNTAYL
101 QLSGLTSETT AVYYCSREAD YFEDDGTSYWY FDVWGAGTTITVSSAKTTPP
151 SVYPLAPGSA AQTNSMVTLG CLVKGYFPEP VTVTWNSGSL SSGVHTFPAV
201 LQSDLYTLSS SVTVPSSTWP SETVTCNVAH PASSTKVDKKIVPRDCGCKP
251 CICTVPEVSS VFIFPPKPKD VLTITLTPKV TCVWDISKD DPEVQFSWFV
301 DDVEVHTAQT QPREEQFNST FRSVSELPIM HQDWLNGKEF KCRVNS AAFP
351 APIEKTISKT KGRPKAPQVY TIPPPKEQMA KDKVSLTCMITDFFPEDITV
401 EWQWNGQPAENYKNTQPIMD TDGSYFIYSK LNVQKSNWEA GNTFTCSVLH
451 EGLHNHHTEK SLSHSPGK (SEQ ID NO: 131)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-3, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 29 037044
ATGAAATGCA GCTGGGTCAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT 51 CAATTCAGAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCTGAACTT GTGAGGCCAG 101 GGGCCTTAGT CAAGTTGTCC TGCACAGCTT CTGACTTCAA CATTAAAGAC 151 TTCTATCTAC ACTGGATGAG GCAGCGGCCT GAACAGGGCC TGGACTGGAT 201 TGGAAGGATT GATCCTGAGA ATGGTGATAC TTTATATGAC CCGAAGTTCC 251 AGGACAAGGC CACTCTTACA ACAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTG 301 CAGCTCAGCG GCCTGACATC TGAGACCACT GCCGTCTATT ACTGTTCTAG 351 AGAGGCGGAT TATTTCCACG ATGGTACCTC CTACTGGTAC TTCGATGTCT 401 GGGGCGCAGG GACCACAATC ACCGTCTCCT CAGCCAAAAC GACACCCCCA 451 TCTGTCTATC CACTGGCCCC TGGATCTGCT GCCCAAACTA ACTCCATGGT 501 GACCCTGGGA TGCCTGGTCA AGGGCTATTT CCCTGAGCCA GTGACAGTGA 551 CCTGGAACTC TGGATCCCTG TCCAGCGGTG TGCACACCTT CCCAGCTGTC 601 CTGCAGTCTG ACCTCTACAC TCTGAGCAGC TCAGTGACTG TCCCCTCCAG 651 CACCTGGCCC AGCGAGACCG TCACCTGCAA CGTTGCCCAC CCGGCCAGCA 701 GCACCAAGGT GGACAAGAAA ATTGTGCCCA GGGATTGTGG TTGTAAGCCT 751 TGCATATGTA CAGTCCCAGA AGTATCATCT GTCTTCATCT TCCCCCCAAA 801 GCCCAAGGAT GTGCTCACCA TTACTCTGAC TCCTAAGGTC ACGTGTGTTG 851 TGGTAGACAT CAGCAAGGAT GATCCCGAGG TCCAGTTCAG CTGGTTTGTA 901 GATGATGTGG AGGTGCACAC AGCTCAGACG CAACCCCGGG AGGAGCAGTT 951 CAACAGCACT TTCCGCTCAG TCAGTGAACT TCCCATCATG CACCAGGACT ГООГООСТ'Ж AAATGCAGGG TCAACAGTGC AGCTTTCCCT
1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGCAGAC CGAAGGCTCC 1101 ACAGGTGTAC ACCATTCCAC CTCCCAAGGA GCAGATGGCC AAGGATAAAG 1151 TCAGTCTGAC CTGCATGATA ACAGACTTCT TCCCTGAAGA CATTACTGTG 1201 GAGTGGCAGT GGAATGGGCA GCCAGCGGAG AACTACAAGA ACACTCAGCC 1251 CATCATGGAC ACAGATGGCT CTTACTTCAT CTACAGCAAG CTCAATGTGC 1301 AGAAGAGCAA CTGGGAGGCA GGAAATACTT TCACCTGCTC TGTGTTACAT 1351 GAGGGCCTGC ACAACCACCA TACTGAGAAG AGCCTCTCCC ACTCTCCTGG 1401 TAAATGA (SEQ ID NO: 132)
Ab-4.
Последовательности LC и HC антитела 4 (также называемого в данном описании Ab-4) приведены ниже:
Легкая цепь Ab-4.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-4: 1 DIQMTQITSS LSASLGDRVSISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY 51 TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG 101 GTKLEIK2WD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPKDINVKWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT 201STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 133)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-4:
GATATCCAGA TGACACAGAT ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC ААТТАТТТАА 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT ТТАААСТССТ ТАТСТТСТАС 151 ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА ССАТТТАСАА CCTGGAGCAA GAAGATTTTG 251 ССАСТТАСТТ TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA
601 ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 134)
Аминокислотная последовательность LC Ab-4, включая сигнальный пептид:
MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQITSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS
NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ 101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SWCFLNNFYPKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 13 5)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-4, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 30 037044
ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG
TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAT TACATCCTCC CTGTCTGCCT ϊδϊ ctctgggagaVXgggtctcc ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC 151 AATTATTTAA ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 TATCTTCTAC ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATTTTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC 351 TTTCGGAGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQ ID NO: 136)
Тяжелая цепь Ab-4.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-4: 1EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQN QGKTLEWIGE 511NPNSGGAGYNQ&KGKATLTVDKSSTTAY MELRSLTSED SAVYYCARLO 101 YDDIYDDWYF DVWGAGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPEPV TVTWNSGSLS SGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDV 251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELPIMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAK DKVSLTCMIT DFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYF1YSKL NVQKSNWEAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ID
NO: 137) '
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-4:
GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA ТАСАТТСАСТ GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA CCCTAGAGTG GATAGGAGAA 151 АТТААТССТА ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC АСССССАТСТ GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC АСАССТТССС AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 ТСТАСАСТСТ GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC ТТСАТСТТСС CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 СТСАССАТТА CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 8D1 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 АААССАТСТС CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC
1051 АТТССАССТС CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT АСТТСАТСТА CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA ААТАСТТТСА CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301АССАССАТАС TGAGAAGAGC СТСТСССАСТ CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID NO: 138)
Аминокислотная последовательность HC Ab-4, включая сигнальный пептид:
MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQNQ GKTLEWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VWDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 139)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-4, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 31 037044
ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGAACCAA GGAAAGACCC TAGAGTGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA 251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCACCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQ ID NO: 140)
Ab-4 гуманизировали, чтобы создать Ab-5.
Ab-5.
Последовательности LC и HC антитела 5 (также называемого в данном описании Ab-5) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-5.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-5:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCRASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKLLIYY 51 TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ GDTLPYTFGG 101 GTKNEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SWCLLNNFYPREAKVQWKV 151DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHK VYACEVTHQG 201LSSPVTKSFN RGEC (SEQ ID NO: 141)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-5:
GACATCCAGA TGACCCAGTC ТССАТССТСС CTCTCCGCAT CCGTAGGCGA 51 CCGCGTAACC ATAACATGTA GAGCATCTCA AGATATTTCC AACTATTTGA 101 ATTGGTACCA АСАААААССС GGCAAAGCAC СТАААСТССТ САТТТАСТАТ 151 ACATCAAGAC TCCTCTCCGG CGTTCCATCA CGATTCTCAG GCTCCGGCTC 201 CGGCACAGAT ТТСАСАСТСА СТАТТТССТС ССТССААССА GAAGATTTTG 251 СААССТАТТА CTGTCAACAA GGCGATACAC ТСССАТАСАС ATTCGGCGGC 301 GGCACAAAAG TTGAAATTAA ACGTACGGTG GCTGC АССАТ CTGTCTTCAT 351 CTTCCCGCCA TCTGATGAGC AGTTGAAATC TGGAACTGCC TCTGTTGTGT 401 GCCTGCTGAA ТААСТТСТАТ CCCAGAGAGG CCAAAGTACA GTGGAAGGTG 451 GATAACGCCC TCCAATCGGG TAACTCCCAG GAGAGTGTCA CAGAGCAGGA 501 CAGCAAGGAC AGCACCTACA GCCTCAGCAG CACCCTGACG CTGAGCAAAG 551 CAGACTACGA GAAACACAAA GTCTACGCCT GCGAAGTCAC CCATCAGGGC 601 CTGAGCTCGC CCGTCACAAA GAGCTTCAAC AGGGGAGAGT GT (SEQ ID
NO: 142)
Аминокислотная последовательность LC Ab-5, включая сигнальный пептид:
MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RCDIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRASQD 51ISNYLNWYQQ KPGKAPKLLIYYTSRLLSGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL 101 QPEDFATYYC QQGDTLPYTF GGGTKVEIKR TVAAPSVFIF PPSDEQLKSG 151 TASWCLLNN FYPREAKVQW KVDNALQSGN SQESVTEQDS KDSTYSLSST 201 LTLSKADYEK HKVYACEVTH QGLSSPVTKS FNRGEC (SEQ ID NO: 143)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-5, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 32 037044
ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TACTCTGGCT 51 CCGAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTCT 101 CCGCATCCGT AGGCGACCGC GTAACCATAA CATGTAGAGC ATCTCAAGAT 151 ATTTCCAACT ATTTGAATTG GTACCAACAA AAACCCGGCA AAGCACCTAA 201 ACTCCTCATT TACTATACAT CAAGACTCCT CTCCGGCGTT CCATCACGAT 251 TCTCAGGCTC CGGCTCCGGC ACAGATTTCA CACTCACTAT TTCCTCCCTC 301 CAACCAGAAG ATTTTGCAAC CTATTACTGT CAACAAGGCG ATACACTCCC 351 ATACACATTC GGCGGCGGCA CAAAAGTTGA AATTAAACGT ACGGTGGCTG 401 CACCATCTGT CTTCATCTTC CCGCCATCTG ATGAGCAGTT GAAATCTGGA 451 ACTGCCTCTG TTGTGTGCCT GCTGAATAAC TTCTATCCCA GAGAGGCCAA 501 AGTACAGTGG AAGGTGGATA ACGCCCTCCA ATCGGGTAAC TCCCAGGAGA 551 GTGTCACAGA GCAGGACAGC AAGGACAGCA CCTACAGCCT CAGCAGCACC 601 CTGACGCTGA GCAAAGCAGA CTACGAGAAA CACAAAGTCT ACGCCTGCGA 651 AGTCACCCAT CAGGGCCTGA GCTCGCCCGT CACAAAGAGC TTCAACAGGG 701 GAGAGTGT (SEQ ID NO:144)
Тяжелая цепь Ab-5.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-5:
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE
51INPNSGGAGY NQKFKGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCARLG
101 YDDIYDDWYF DVWGQGTTVT NSSASTKGPS VFPLAPCSRS TSESTAALGC 151LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSS WTVPSSNFG 201 TQTYTCNVDH KPSNTKVDKT VERKCCVECP PCPAPPVAGP SVFLFPPKPK 251DTLMISRTPE VTCVWDVSHEDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS 301 TFRWSVLTV VHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PAPIEKTISK TKGQPREPQV 351 YTLPPSREEMTKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPML 401DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK^Q ID NO: 145)
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-5 без лизина на карбоксильном конце:
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE
INPNSGGAGY NQKFKGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCARLG
101 YDDIYDDWYF DVWGQGTTVT NSSASTKGPS VFPLAPCSRS TSESTAALGC 151LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSS WTVPSSNFG 201 TQTYTCNVDH KPSNTKVDKT VERKCCVECPPCPAPPVAGP SVFLFPPKPK 251 DTLMISRTPE VTCVWDVSHEDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS 301 TFRWSVLTV VHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PAPIEKTISKTKGQPREPQV 351 YTLPPSREEMTKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPML 401 DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ IDNO:392)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-5:
GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTAAAAAAAC CAGGAGCAAG
CGTTAAAGTT TCTTGTAAAG CAAGCGGATA ТАСАТТТАСА GATTACAACA
101 TGCATTGGGT AAGACAAGCG CCAGGACAAG GATTGGAATG GATGGGCGAA
151 АТТААСССТА ATAGTGGAGG AGCAGGCTAC AATCAAAAAT TCAAAGGGAG
201 AGTTACAATG ACAACAGACA CAAGCACTTC AACAGCATAT ATGGAACTGC
251 GATCACTTAG AAGCGACGAT ACAGCTGTAT ACTATTGCGC ACGACTTGGG
301 TATGATGATA TATATGATGA CTGGTATTTC GATGTTTGGG GCCAGGGAAC
351 AACAGTTACC GTCTCTAGTG ССТССАССАА GGGCCCATCG GTCTTCCCCC
401 TGGCGCCCTG CTCCAGGAGC ACCTCCGAGA GCACAGCGGC CCTGGGCTGC
451 CTGGTCAAGG АСТАСТТССС CGAACCGGTG ACGGTGTCGT GGAACTCAGG
501 CGCTCTGACC AGCGGCGTGC АСАССТТССС AGCTGTCCTA CAGTCCTCAG
551 GACTCTACTC CCTCAGCAGC GTGGTGACCG TGCCCTCCAG CAACTTCGGC
601 ACCCAGACCT ACACCTGCAA CGTAGATCAC AAGCCCAGCA ACACCAAGGT
651 GGACAAGACA GTTGAGCGCA AATGTTGTGT CGAGTGCCCA CCGTGCCCAG
701 CACCACCTGT GGCAGGACCG TCAGTCTTCC ТСТТСССССС AAAACCCAAG
751 GACACCCTCA TGATCTCCCG GACCCCTGAG GTCACGTGCG TGGTGGTGGA
801 CGTGAGCCAC GAAGACCCCG AGGTCCAGTT CAACTGGTAC GTGGACGGCG
851 TGGAGGTGCA TAATGCCAAG ACAAAGCCAC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC
901 ACGTTCCGTG TGGTCAGCGT CCTCACCGTT GTGCACCAGG ACTGGCTGAA
951 CGGCAAGGAG TACAAGTGCA AGGTCTCCAA CAAAGGCCTC CCAGCCCCCA
1001 TCGAGAAAAC САТСТССААА ACCAAAGGGC AGCCCCGAGA ACCACAGGTG
1051 TACACCCTGC CCCCATCCCG GGAGGAGATG ACCAAGAACC AGGTCAGCCT
1101 GACCTGCCTG GTCAAAGGCT TCTACCCCAG CGACATCGCC GTGGAGTGGG
1151 AGAGCAATGG GCAGCCGGAG AACAACTACA AGACCACACC TCCCATGCTG
1201 GACTCCGACG GCTCCTTCTT CCTCTACAGC AAGCTCACCG TGGACAAGAG
1251 CAGGTGGCAG CAGGGGAACG TCTTCTCATG CTCCGTGATG CATGAGGCTC
1301 TGCACAACCA CTACACGCAG AAGAGCCTCT CCCTGTCTCC GGGTAAA (SEQ ID NO: 146)
- 33 037044
Аминокислотная последовательность HC Ab-5, включая сигнальный пептид:
MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGYTFTD
YNMHWVRQAP GQGLEWMGEINPNSGGAGYN QKFKGRVTMT TDTSTSTAYM
101 ELRSLRSDDT AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGQGTTVTV SSASTKGPSV
151 FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ 201 SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ERKCCVECPP 251 CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVWDVSHE DPEVQFNWYV
301 DGVEVHNAKT KPREEQFNST FRWSVLTW HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP
351 APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV
401 EWESNGQPENNYKTTPPMLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH
451 EALHNHYTQK SLSLSPGK (SEQ ID NO: 147)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-5, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGAGCGG CGCCGAGGTA AAAAAACCAG 101 GAGCAAGCGT TAAAGTTTCT TGTAAAGCAA GCGGATATAC ATTTACAGAT 151 TACAACATGC ATTGGGTAAG ACAAGCGCCA GGACAAGGAT TGGAATGGAT 201 GGGCGAAATT AACCCTAATA GTGGAGGAGC AGGCTACAAT САААААТТСА 251 AAGGGAGAGT TACAATGACA ACAGACACAA GCACTTCAAC AGCATATATG 301 GAACTGCGAT CACTTAGAAG CGACGATACA GCTGTATACT ATTGCGCACG
351 ACTTGGGTAT GATGATATAT ATGATGACTG GTATTTCGAT GTTTGGGGCC
401 AGGGAACAAC AGTTACCGTC TCTAGTGCCT CCACCAAGGG CCCATCGGTC 451 TTCCCCCTGG CGCCCTGCTC CAGGAGCACC TCCGAGAGCA CAGCGGCCCT 501 GGGCTGCCTG GTCAAGGACT ACTTCCCCGA ACCGGTGACG GTGTCGTGGA 551ACTCAGGCGC TCTGACCAGC GGCGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTACAG 601 TCCTCAGGAC ТСТАСТСССТ CAGCAGCGTG GTGACCGTGC CCTCCAGCAA 651 CTTCGGCACC CAGACCTACA CCTGCAACGT AGATCACAAG CCCAGCAACA 701 CCAAGGTGGA CAAGACAGTT GAGCGCAAAT GTTGTGTCGA GTGCCCACCG 751 TGCCCAGCAC CACCTGTGGC AGGACCGTCA GTCTTCCTCT ТССССССААА 801 ACCCAAGGAC ACCCTCATGA TCTCCCGGAC CCCTGAGGTC ACGTGCGTGG 851 TGGTGGACGT GAGCCACGAA GACCCCGAGG TCCAGTTCAA CTGGTACGTG 901 GACGGCGTGG AGGTGCATAA TGCCAAGACA AAGCCACGGG AGGAGCAGTT
951 CAACAGCACG TTCCGTGTGG TCAGCGTCCT CACCGTTGTG CACCAGGACT
1001 GGCTGAACGG CAAGGAGTAC AAGTGCAAGG ТСТССААСАА AGGCCTCCCA 1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT СТССААААСС AAAGGGCAGC CCCGAGAACC 1101ACAGGTGTAC ACCCTGCCCC CATCCCGGGA GGAGATGACC AAGAACCAGG 1151 TCAGCCTGAC CTGCCTGGTC AAAGGCTTCT ACCCCAGCGA CATCGCCGTG 1201 GAGTGGGAGA GCAATGGGCA GCCGGAGAAC AACTACAAGA ССАСАССТСС 1251 CATGCTGGAC TCCGACGGCT ССТТСТТССТ CTACAGCAAG CTCACCGTGG 1301 ACAAGAGCAG GTGGCAGCAG GGGAACGTCT TCTCATGCTC CGTGATGCAT 1351 GAGGCTCTGC АСААССАСТА CACGCAGAAG AGCCTCTCCC TGTCTCCGGG 1401 ТААА (SEQ ID NO: 148)
Вариабельные домены Ab-5.
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи Ab-5 (без сигнальной последовательности):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCRASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKLLIYY
TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ GDTLPYTFGG
101 GTKVEIK (SEQ ID NO:376) '........
Последовательность ДНК вариабельного домена легкой цепи Ab-5 (без сигнальной последовательности):
GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTCTCCGCAT CCGTAGGCGA
CCGCGTAACC ATAACATGTA GAGCATCTCA AGATATTTCC AACTATTTGA
101 ATTGGTACCA ACAAAAACCC GGCAAAGCAC CTAAACTCCT CATTTACTAT
151 ACATCAAGAC TCCTCTCCGG CGTTCCATCA CGATTCTCAG GCTCCGGCTC
201 CGGCACAGAT TTCACACTCA CTATTTCCTC CCTCCAACCA GAAGATTTTG
251 CAACCTATTA CTGTCAACAA GGCGATACAC TCCCATACAC ATTCGGCGGC
301 GGCACAAAAG TTGAAATTAA A (SEQ ID NO:377)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи Ab-5 (без сигнальной последовательности):
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE
51INPNSGGAGY NQKFKGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCARLG
101 YDDIYDDWYF DVWGQGTTVT VSS (SEQ ID NO:378)
Последовательность ДНК вариабельного домена тяжелой цепи Ab-5 (без сигнальной последовательности):
- 34 037044
GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTAAAAAAAC CAGGAGCAAG
CGTTAAAGTT TCTTGTAAAG CAAGCGGATA TACATTTACA GATTACAACA
101 TGCATTGGGT AAGACAAGCG CCAGGACAAG GATTGGAATG GATGGGCGAA
151 ATTAACCCTA ATAGTGGAGG AGCAGGCTAC AATCAAAAAT TCAAAGGGAG
201 AGTTACAATG AC A AC AGAC A CAAGCACTTC AACAGCATAT ATGGAACTGC
251 GATCACTTAG AAGCGACGAT ACAGCTGTAT ACTATTGCGC ACGACTTGGG
301 TATGATGATA TATATGATGA CTGGTATTTC GATGTTTGGG GCCAGGGAAC
351 AACAGTTACC GTCTCTAGT (SEQ ID NO:379)
Последовательности CDR (определяющей комплементарность области) в вариабельной области тяжелой цепи Ab-5 показаны ниже.
CDR-H1: DTNMH (SEQ ID NO;245)
CDR-H2: EINPNSGGAGYNQKFKG (SEQ ID NO:246)
CDR-H3: LGYDDIYDDWYFDV (SEQ ID NO:247)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-5:
CDR-L1: RASQDISNYLN (SEQ ID NO:78)
CDR-L2: YTSRLLS (SEQ ID NO:79)
CDR-L3: QQGDTLPYT (SEQ ID NO:80)
Ab-6.
Последовательности LC и HC антитела 6 (также называемого в данном описании Ab-6) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-6.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-6:
DIQMTQTTSS LSASLGDRVTISCRASQDIS NYLNWFQQKP DGTLKLLIFY
TSRLI1SGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG
101 GYKLEFRRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SVVCFLNNFY PKDINVKWKI
151 DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKT
201 STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 149)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-6:
GATATCCAGA TGACACAGAC ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA
CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC ААТТАТТТАА
101 ACTGGTTTCA GCAGAAACCA GATGGAACTC ТТАААСТССТ GATCTTCTAC
151 ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTTCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC
201 TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА CCATTAGCAA CCTGGAGCAA GAAGATATTG
251 ССАСТТАСТТ TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC GTTCGGGGGG
301 GGGACCAAGC TGGAAATAAG ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT
351 СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT
401 GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT
451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA
501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG
551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA
601 ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID
NO: 150)
Аминокислотная последовательность LC Ab-6, включая сигнальный пептид:
MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDIS
NYLNWFQQKP DGTLKLLIFY TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ
101 EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIRRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA
151 SVVCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT
201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 151)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-6, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG
TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT
101 CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC
151 ААТТАТТТАА ACTGGTTTCA GCAGAAACCA GATGGAACTC ТТАААСТССТ
201 GATCTTCTAC ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTTCCATCA AGGTTCAGTG
251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА CCATTAGCAA CCTGGAGCAA
301 GAAGATATTG ССАСТТАСТТ TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC
351 GTTCGGGGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAG ACGGGCTGAT GCTGCACCAA
401 CTGTATCCAT СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC
451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA
501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA
551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG
601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC
651 TCACAAGACA ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT
701 GTTAG (SEQ ID NO: 152)
Тяжелая цепь Ab-6.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-6:
- 35 037044
EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQN QGKSLEWIGE 511NPNSGGSGY NQKFKQKATL TVDKSSSTAY MELRSLTSED SAVYYCARLV 101 YDGSYEDWYF DVWGAGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPEPVTVTWNSGSLS SGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHP ASSTKVDKKIVPRJDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDV 251 LTITLTPKVT CVVVDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELPIMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAK DKVSLTCMIT DFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAGNTFTCSVLHE GLHNHHTEKSLSHSPGK (SEQ ID NO: 153)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-6:
GAGGTCCAGC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA САСАТТСАСТ GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAACAGAAC CAAGGAAAGA GCCTAGAGTG GATAGGAGAA 151 АТТААТССТА ACAGTGGTGG TAGTGGCTAC AACCAAAAGT TCAAAGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCTTCCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGTC 301 TACGATGGCA GCTACGAGGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC АСССССАТСТ GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC АСАССТТССС AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 ТСТАСАСТСТ GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC ТТСАТСТТСС CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 СТСАССАТТА CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC
901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 АААССАТСТС CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051 АТТССАССТС CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT АСТТСАТСТА CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA ААТАСТТТСА CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301 АССАССАТАС TGAGAAGAGC СТСТСССАСТ CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID NO: 154)
Аминокислотная последовательность HC Ab-6, включая сигнальный пептид:
MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQNQ GKSLEWIGEINPNSGGSGYN QKFKGKATLT VDKSSSTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLVY DGSYEDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VVVDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 155)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-6, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGGATGGA GCTGGACCTT ТСТСТТССТС CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAGCTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA ACAGAACCAA GGAAAGAGCC TAGAGTGGAT 201 AGGAGAAATT ААТССТААСА GTGGTGGTAG TGGCTACAAC CAAAAGTTCA 251 AAGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CTTCCAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGTCTAC GATGGCAGCT ACGAGGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA АСТААСТССА TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC АТСТТССССС CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC АССАТТАСТС TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG ААСТТСССАТ CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC
- 36 037044
1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGATGGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQ ID NO: 156)
Ab-7.
Последовательности LC и HC антитела 7 (также называемого в данном описании Ab-7) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-7.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-7:
DIQMTQTTSS LSASLGDRVTICCRASQVIT NYLYWYQQKP DGTFKLLIYY;
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG
101 GTKLEIKR4D AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPKDINVKWKI
151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT
201STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 157)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-7:
GATATCCAGA TGACACAGAC ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA
CAGAGTCACC ATCTGTTGCA GGGCAAGTCA GGTCATTACC ААТТАТТТАТ
101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT ТТАААСТССТ GATCTACTAC
151 ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC
201 TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА CCATTAGCAA CCTGGAACAG GAAGATATTG
251 ССАСТТАСТТ TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC GTTCGGAGGG
301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT
351 СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT
401 GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT
451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA
501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG
551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA
601 ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GT (SEQ ID .
NO: 158)
Аминокислотная последовательность LC Ab-7, включая сигнальный пептид:
MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ICCRASQVIT
NYLYWYQQKP DGTFKLLIYY TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ
101 EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA
151 SWCFLNNFYPKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT
201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 159)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-7, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG
TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT
101 CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCTGTTGCA GGGCAAGTCA GGTCATTACC
151 ААТТАТТТАТ ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT ТТАААСТССТ
201 GATCTACTAC ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG
251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА CCATTAGCAA CCTGGAACAG
301 GAAGATATTG ССАСТТАСТТ TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC
3'51'-GTTCGG'AGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA
401 CTGTATCCAT СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC
451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA
501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA
551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG
601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC
651 TCACAAGACA ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT
701 GT (SEQ ID NO: 160)
Тяжелая цепь Ab-7.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-7:
EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWMKQN QGKSLEWIGE
51INPNSGGAGY NQQFKGKATL TVDKSSRTAY MELRSLTSED SAVYYCARLG
101 YVGNYEDWYF DVWGAGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC
151LVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS
201ETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDV
251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF
301RSVSELPIMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT
351IPPPKEQMAK DKVSLTCMIT DFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT
401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAGNTFTCSVLHE GLHNHHTEKSLSHSPGK(SEQ ID
NO: 161)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-7:
- 37 037044
GAGGTCCAGC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC
AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACAACA
101 TGCACTGGAT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA GCCTAGAATG GATAGGAGAA
151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGCAGT TCAAAGGCAA
201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAG GACAGCCTAC ATGGAGCTCC
251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC
301 TACGTTGGTA ATTACGAGGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC
351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC
401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC
451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG
501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC
551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC
601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA
651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG
701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG
751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG
801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG
851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC
901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA
951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA
1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC
1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG
1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA
1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA
1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG
1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA ПОТА'ССАССАТАС TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA A (SEQ ID NO: 162)
Аминокислотная последовательность HC Ab-7, включая сигнальный пептид:
MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD
YNMHWMKQNQ GKSLEWIGEINPNSGGAGYN QQFKGKATLT VDKSSRTAYM
101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY VGNYEDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV
151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ
201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI
251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VVVDISKDDP EVQFSWFVDD
301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP
351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW
401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG
451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 163)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-7, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGGATGGA GCTGGACCTT ТСТСТТССТС CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT
CCTCTCTGAG GTCCAGCTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG
101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC
151 TACAACATGC ACTGGATGAA GCAGAACCAA GGAAAGAGCC TAGAATGGAT
201 AGGAGAAATT ААТССТААСА GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGCAGTTCA
251 AAGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCAGGAC AGCCTACATG
301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG
351 ATTGGGCTAC GTTGGTAATT ACGAGGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG
401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC
451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA АСТААСТССА TGGTGACCCT
501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA
551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG
601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG
651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA
701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA
751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC АТСТТССССС CAAAGCCCAA
801 GGATGTGCTC АССАТТАСТС TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG
851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT
901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG
951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG ААСТТСССАТ CATGCACCAG GACTGGCTCA
1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC
1051 ATCGAGAAAA ССАТСТССАА AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT
1101 GTACACCATT ССАССТСССА AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC
1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG
1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT
1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA
1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT АСТТТСАССТ GCTCTGTGTT ACATGAGGGC
1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC ТСССАСТСТС CTGGTAAA (SEQ ID NO: 164)
Ab-8.
Последовательности LC и HC антитела 8 (также называемого в данном описании Ab-8) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-8.
- 38 037044
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-8:
DIQMTQTTSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY
TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG
101 GTKLEIK/bW AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFY PKDINVKWKI
151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKT
201 STSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 165)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-8:
GATATCCAGA TGACACAGAC ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA
CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC ΑΑΊΤΑΤΤΤΑΑ
101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT ТТАААСТССТ ТАТСТТСТАС
151 ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC
201 TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА ССАТТТАСАА CCTGGAGCAA GAAGATTTTG
251 CCACTTACTTTTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG
301 GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT
351 СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT
401 GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT
451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA
501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG
551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA
601 ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 166)
Аминокислотная последовательность LC Ab-8, включая сигнальный пептид:
MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS
NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ
101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA
151 SWCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT
201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 167)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-8, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG
TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT
101 CTCTGGGAGA CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC
151 ΑΑΊΤΑΤΤΤΑΑ ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT ТТАААСТССТ
201 ТАТСТТСТАС ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG
251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА ССАТТТАСАА CCTGGAGCAA
301 GAAGATTTTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC
351 TTTCGGAGGG GGGACCAAAC.TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA
401 CTGTATCCAT СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC
451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA
501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA
551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG
601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC
651 TCACAAGACA ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT
701 GTTAG (SEQ ID NO: 168)
Тяжелая цепь Ab-8.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-8:
EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQN QGKTLDWIGE
JNPNSGGAGY NQKFKGKATL TVDKSSTTAY MELRSLTSED SAVYYCARLG
101 ;YDDIYDDWYF DVWGAGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC
151LVKGYFPEPV TVTWNSGSLS SGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS
201ETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDV
251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF
301RSVSELPIMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT
351IPPPKEQMAK DKVSLTCMIT DFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT
401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAGNTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ID
NO: 169)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-8:
- 39 037044
GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC
AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA ТАСАТТСАСТ GACTACAACA
101 TGCACTGGGT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA CCCTAGACTG GATAGGAGAA
151 АТТААТССТА ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA
201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC
251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC
301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC
351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC АСССССАТСТ GTCTATCCAC
401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC
451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG
501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC АСАССТТССС AGCTGTCCTG CAGTCTGACC
551 ТСТАСАСТСТ GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC
601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA
651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG
701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC ТТСАТСТТСС CCCCAAAGCC CAAGGATGTG
751 СТСАССАТТА CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG
801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG
851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC
901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA
951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA
1001 АААССАТСТС CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC
1051 АТТССАССТС CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG
1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA
1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA
1201 GATGGCTCTT АСТТСАТСТА CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG
1251 GGAGGCAGGA ААТАСТТТСА CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA
1301 АССАССАТАС TGAGAAGAGC СТСТСССАСТ CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID NO: 170)
Аминокислотная последовательность HC Ab-8, включая сигнальный пептид:
MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD
YNMHWVKQNQ GKTLDWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM
101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV
151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ
201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI
251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VVVDISKDDP EVQFSWFVDD
301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP
351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW
401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG
451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 171)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-8, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGGATGGA GCTGGACCTT ТСТСТТССТС CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT
CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG
101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC
151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGAACCAA GGAAAGACCC TAGACTGGAT
201 AGGAGAAATT ААТССТААСА GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA
251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT ССТССАССАС AGCCTACATG
301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG
351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG
401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC
451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA АСТААСТССА TGGTGACCCT
501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA
551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG
601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG
651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA
701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA
751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC АТСТТССССС CAAAGCCCAA
801 GGATGTGCTC АССАТТАСТС TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG
851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT
901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG
951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG ААСТТСССАТ CATGCACCAG GACTGGCTCA
1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC
1051 ATCGAGAAAA ССАТСТССАА AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT
1101 GTACACCATT ССАССТСССА AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC
1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG
1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT
1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA
1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT АСТТТСАССТ GCTCTGTGTT ACATGAGGGC
1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC ТСССАСТСТС CTGGTAAATG
1401 A(SEQIDNO:172)
Ab-9.
Последовательности LC и HC антитела 9 (также называемого в данном описании Ab-9) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-9.
- 40 037044
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-9:
DIQMTQITSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY
TSRLFSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ EDFATYFCQ0 GDTLPYTFGG
101 GYKVEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPKDINVKWKI
151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT
201STSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 173)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-9:
GATATCCAGA TGACACAGAT ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA
CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC ААТТАТТТАА
101 ATTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT ТТАААСТССТ ТАТСТТСТАС
151 ACATCAAGAT TATTTTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC
201 TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА ССАТТТАСАА CCTGGAGCAA GAAGATTTTG
251 ССАСТТАСТТ TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG
301 GGGACCAAGG TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT
351 СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT
401 GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT
451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA
501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG
551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA
601 ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GT (SEQ ID NO: 174)
Аминокислотная последовательность LC Ab-9, включая сигнальный пептид:
MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQITSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS
NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLFSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ
101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKVEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA
151 SWCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT
201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 175)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-9, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG
TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAT ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT
101 CTCTGGGAGA CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC
151 ААТТАТТТАА ATTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT ТТАААСТССТ
201 ТАТСТТСТАС ACATCAAGAT TATTTTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG
251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА ССАТТТАСАА CCTGGAGCAA
301 GAAGATTTTG ССАСТТАСТТ TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC
351 TTTCGGAGGG GGGACCAAGG TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA
401 CTGTATCCAT СТТСССАССА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC
451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA
501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA
551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG
601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC
651 TCACAAGACA ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT
701 GT (SEQ ID NO: 176)
Тяжелая цепь Ab-9.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-9:
EVQLQQSGPE LMKPGTSVKM SCKASGYTFT DYNMECWVKQT QGKTLEWIGE
51INPNSGGAGYNQKFKGKATLTVDKSSTTAYMELRSLTSED SAVYYCAKLG
101 YDDIYDDWYF DVWGAGTTVT VSSAKTTAPS VYPLAPVCGD TTGSSVTLGC
151LVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSDVHTFPALL QSGLYTLSSS VTVTTWPSQT
201ITCNVAHPAS STKVDKKIEP RGSPTHKPCP PCPAPNLLGG PSVFIFPPKI
251KDVLMISLSP MVTCVWDVS EDDPDVHVSW FVNNVEVHTA QTQTHREDYN
301STIRWSALPIQHQDWMSGK EFKCKVNNKA LPAPIERTISKPKGPVRAPQ
351 VYVLPPPEEE MTKKQVTLTC MITDFMPEDIYVEWTNNGQT ELNYKNTEPV
401LDSDGSYFMY SKLRVEKKNW VERNSYSCSV VHEGLHNHHT TKSFSRTPGK (SEQ ID NO: 177)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-9:
- 41 037044
GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGACTTC
AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA TACATTCACT GACTACAACA
101 TGCACTGGGT GAAGCAGACC CAAGGAAAGA CCCTAGAGTG GATAGGAGAA
151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA
201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC
251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAAATTGGGC
301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTATTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC
351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACAAC AGCCCCATCG GTCTATCCAC
401 TGGCCCCTGT GTGTGGAGAT ACAACTGGCT CCTCGGTGAC TCTAGGATGC
451 CTGGTCAAGG GTTATTTCCC TGAGCCAGTG ACCTTGACCT GGAACTCTGG
501 ATCCCTGTCC AGTGATGTGC ACACCTTCCC AGCTCTCCTG CAGTCTGGCC
551 TCTACACCCT CAGCAGCTCA GTGACTGTAA CCACCTGGCC CAGCCAGACC
601 ATCACCTGCA ATGTGGCCCA CCCGGCAAGC AGCACCAAAG TGGACAAGAA
651 AATTGAGCCC AGAGGGTCCC CAACACATAA ACCCTGTCCT CCATGCCCAG
701 CTCCTAACCT CTTGGGTGGA CCATCCGTCT TCATCTTCCC TCCAAAGATC
751 AAGGATGTAC TCATGATCTC CCTGAGCCCC ATGGTCACGT GTGTGGTGGT
801 GGATGTGAGC GAGGATGACC CAGATGTCCA TGTCAGCTGG TTCGTGAACA
851 ACGTGGAAGT ACACACAGCT CAGACACAAA CCCATAGAGA GGATTACAAC
901 AGTACTATCC GGGTGGTCAG TGCCCTCCCC ATCCAGCACC AGGACTGGAT
951 GAGTGGCAAG GAGTTCAAAT GCAAGGTCAA CAACAAAGCC CTCCCAGCGC
1001 CCATCGAGAG AACCATCTCA AAACCCAAAG GGCCAGTAAG AGCTCCACAG
1051 GTATATGTCT TGCCTCCACC AGAAGAAGAG ATGACTAAGA AACAGGTCAC
1101 TCTGACCTGC ATGATCACAG ACTTCATGCC TGAAGACATT TACGTGGAGT
1151 GGACCAACAA CGGGCAAACA GAGCTAAACT AC AAGAAC AC TGAACCAGTC
1201 CTGGACTCTG ATGGTTCTTA CTTCATGTAC AGCAAGCTGA GAGTGGAAAA
1251 GAAGAACTGG GTGGAAAGAA ATAGCTACTC CTGTTCAGTG GTCCACGAGG
1301 GTCTGCACAA TCACCACACG ACTAAGAGCT TCTCCCGGAC TCCGGGTAAA (SEQ ID NO:178)
Аминокислотная последовательность HC Ab-9, включая сигнальный пептид:
MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGTSVKMS CKASGYTFTD
YNMHWVKQTQ GKTLEWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM
101 ELRSLTSEDS AVYYCAKLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTAPSV
151 YPLAPVCGDT TGSSVTLGCL VKGYFPEPVT LTWNSGSLSS DVHTFPALLQ
201 SGLYTLSSSV TVTTWPSQTI TCNVAHPASS TKVDKKIEPR GSPTHKPCPP
251 CPAPNLLGGP SVFIFPPKIK DVLMISLSPM VTCVVVDVSE DDPDVHVSWF
301 VNNVEVHTAQ TQTHREDYNS TIRWSALPIQHQDWMSGKE FKCKVNNKAL
351 PAPIERTISK PKGPVRAPQV YVLPPPEEEM TKKQVTLTCMITDFMPEDIY
401 VEWTNNGQTE LNYKNTEPVL DSDGSYFMYS KLRVEKKNWV ERNSYSCSVV
451 HEGLHNHHTT KSFSRTPGK (SEQ ID NO: 179)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-9, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGGATGGA GCTGGACCTT ТСТСТТССТС CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT
CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG
101 GGACTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC
151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGACCCAA GGAAAGACCC TAGAGTGGAT
201 AGGAGAAATT ААТССТААСА GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA
251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT ССТССАССАС AGCCTACATG
301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAA
351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTATTTCGAT GTCTGGGGCG
401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACAACAGC CCCATCGGTC
451 TATCCACTGG CCCCTGTGTG TGGAGATACA ACTGGCTCCT CGGTGACTCT
501 AGGATGCCTG GTCAAGGGTT ATTTCCCTGA GCCAGTGACC TTGACCTGGA
551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGT GATGTGCACA CCTTCCCAGC TCTCCTGCAG
601 TCTGGCCTCT ACACCCTCAG CAGCTCAGTG ACTGTAACCA CCTGGCCCAG
651 CCAGACCATC ACCTGCAATG TGGCCCACCC GGCAAGCAGC ACCAAAGTGG
701 ACAAGAAAAT TGAGCCCAGA GGGTCCCCAA САСАТАААСС CTGTCCTCCA
751 TGCCCAGCTC СТААССТСТТ GGGTGGACCA TCCGTCTTCA ТСТТСССТСС
801 AAAGATCAAG GATGTACTCA TGATCTCCCT GAGCCCCATG GTCACGTGTG
851 TGGTGGTGGA TGTGAGCGAG GATGACCCAG ATGTCCATGT CAGCTGGTTC
901 GTGAACAACG TGGAAGTACA CACAGCTCAG ACACAAACCC ATAGAGAGGA
951 TTACAACAGT ACTATCCGGG TGGTCAGTGC ССТССССАТС CAGCACCAGG
1001 ACTGGATGAG TGGCAAGGAG TTCAAATGCA AGGTCAACAA CAAAGCCCTC
1051 CCAGCGCCCA TCGAGAGAAC САТСТСАААА CCCAAAGGGC CAGTAAGAGC
1101 TCCACAGGTA TATGTCTTGC CTCCACCAGA AGAAGAGATG ACTAAGAAAC
1151 AGGTCACTCT GACCTGCATG ATCACAGACT TCATGCCTGA AGACATTTAC
1201 GTGGAGTGGA CCAACAACGG GCAAACAGAG СТАААСТАСА AGAACACTG4
1251 ACCAGTCCTG GACTCTGATG GTTCTTACTT CATGTACAGC AAGCTGAGAG
1301 TGGAAAAGAA GAACTGGGTG GAAAGAAATA GCTACTCCTG TTCAGTGGTC
1351 CACGAGGGTC TGCACAATCA CCACACGACT AAGAGCTTCT CCCGGACTCC
1401 GGGTAAA (SEQ ID NO:180)
Ab-10.
Последовательности LC и HC антитела 10 (также называемого в данном описании Ab-10) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-10.
- 42 037044
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab10:
DIQMTQTTSS LSASLGDRVSISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY
TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG
101 GTKLEIKRAD AAPTVSIFPL SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPKDINVKWKI
151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT
201STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 181)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-10:
GATATCCAGA TGACACAGAC ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA
CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC ААТТАТТТАА
101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT ТТАААСТССТ ТАТСТТСТАС
151 ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC
201 TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА ССАТТТАСАА CCTGGAGCAA GAAGATTTTG
251 ССАСТТАСТТ TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG
301 GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT
351 СТТСССАСТА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT
401 GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT
451 GATGGCAGTGAACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA
501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG
551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA
601 ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 182)
Аминокислотная последовательность LC Ab-10, включая сигнальный пептид:
MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS
NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ
101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPL SSEQLTSGGA
151 SVVCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT
201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 183)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-10, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG
TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC ТАСАТССТСС CTGTCTGCCT
101 CTCTGGGAGA CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC
151 ААТТАТТТАА ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT ТТАААСТССТ
201 ТАТСТТСТАС ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG
251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT ТАТТСТСТСА ССАТТТАСАА CCTGGAGCAA
301 GAAGATTTTG ССАСТТАСТТ TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC
351 TTTCGGAGGG GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA
401 CTGTATCCAT СТТСССАСТА TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC
451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA СААСТТСТАС CCCAAAGACA TCAATGTCAA
501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA
551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG
601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC
651 TCACAAGACA ТСААСТТСАС CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT
701 GTTAG (SEQ ID NO: 184)
Тяжелая цепь Ab-10.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab10:
EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQN QGKTLEWIGE
INPNSGGAGYNQKFKGKATL TVDKSSTTAY MELRSLTSED SAVYYCARLG
101 Yddiyddwyf dvwgagttvt nssakttpps vyplapgsaa qtnsmvtlgc
151LVKGYFPEPVTVTWNSGSLS SGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS
201ETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKDV
251LTITLTPKVT CWVDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF
301RSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPA PIEKTISKTKGRPKAPQVYT
351IPPPKEQMAK DKVSLTCMIT DFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT
401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEKSLSHSPGK (SEQ ID
NO: 185)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-10:
GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC
AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA ТАСАТТСАСТ GACTACAACA
101 TGCACTGGGT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA CCCTAGAATG GATAGGAGAA
- 43 037044
151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA
201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC
251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC
301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC
351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC
401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC
451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG
501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC
551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC
601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA
651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG
701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG
751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG
801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG
851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC
901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA
951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA
1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC
1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG
1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA
1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA
1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG
1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA
1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID NO: 186)
Аминокислотная последовательность HC Ab-10, включая сигнальный пептид:
MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD
YNMHWVKQNQ GKTLEWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM
101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV
151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ
201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI
251 CTVPEVSSVF IFPPKPKDVL TITLTPKVTC VVVDISKDDP EVQFSWFVDD
301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP
351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW
401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG
451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 187)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-10, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGGATGGA GCTGGACCTT ТСТСТТССТС CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT
CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG
101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC
151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGAACCAA GGAAAGACCC TAGAATGGAT
201 AGGAGAAATT ААТССТААСА GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA
251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT ССТССАССАС AGCCTACATG
301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG
351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG
401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC
451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA АСТААСТССА TGGTGACCCT
501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA
551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG
601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG
651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA
701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA
751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC АТСТТССССС CAAAGCCCAA
801 GGATGTGCTC АССАТТАСТС TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG
851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT
901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG
951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG ААСТТСССАТ CATGCACCAG GACTGGCTCA
1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC
1051 ATCGAGAAAA ССАТСТССАА AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT
1101 GTACACCATT ССАССТСССА AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC
1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG
1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACАСТС AGCCCATCAT
1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA
1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT АСТТТСАССТ GCTCTGTGTT ACATGAGGGC
1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC ТСССАСТСТС CTGGTAAATG
1401 A (SEQ ГО NO: 188)
Ab-11.
Последовательности LC и HC антитела 11 (также называемого в данном описании Ab-11) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-11.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab11:
- 44 037044
QIVLSQSPAF LSVSPGDKVT MTCRASSSISYniWFQQKPG SSPRSWIYAT
SNLASGVPGR FSGSGSGTSY SLTISRVEAE DAATYYCQQW SSDPETFGAG
101 TKLELKJMZM APTVS1FPPS SEQLTSGGAS VVCFLNNFYP KDINVKWKID
151 GSERQNGVLNSWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS
201 TSPIVKSFNR NEC
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-11:
CAAATTGTTC TCTCCCAGTC TCCAGCATTC CTGTCTGTAT CTCCAGGGGA
TAAGGTCACA ATGACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTATAAGT TACATACACT
101 GGTTTCAGCA GAAGCCAGGA TCCTCCCCCA GATCCTGGAT TTATGCCACA
151 TCCAACCTGG CTTCTGGAGT CCCTGGTCGC TTCAGTGGCA GTGGGTCTGG
201 GACCTCTTAC TCTCTCACAA TCAGCAGAGT GGAGGCTGAG GATGCTGCCA
251 CTTATTACTG CCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGTGCTGGG
301 ACCAAGCTGG AGCTGAAACG GGCTGATGCT GCACCAACTG TATCCATCTT
351 CCCACCATCC AGTGAGCAGT TAACATCTGG AGGTGCCTCA GTCGTGTGCT
401 TCTTGAACAA CTTCTACCCC AAAGACATCA ATGTCAAGTG GAAGATTGAT
451 GGCAGTGAAC GACAAAATGG CGTCCTGAAC AGTTGGACTG ATCAGGACAG
501 CAAAGACAGC ACCTACAGCA TGAGCAGCAC CCTCACGTTG ACCAAGGACG
551 AGTATGAACG ACATAACAGC TATACCTGTG AGGCCACTCA CAAGACATCA
601 ACTTCACCCA TTGTCAAGAG CTTCAACAGG AATGAGTGTT AG (SEQ ID '
NO: 190)
Аминокислотная последовательность LC Ab-11, включая сигнальный пептид:
MDFQVQIFSF LLISASVIMS RGQIVLSQSP AFLSVSPGDK VTMTCRASSS
51ISYIHWFQQK PGSSPRSWIY ATSNLASGVP GRFSGSGSGT SYSLTISRVE
101 AEDAATYYCQ QWSSDPLTFG AGTKLELKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG
151 ASVVCFLNNF YPKDINVKWKIDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL
201 TLTKDEYERH NSYTCEATHK TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO: 191)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-11, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGATTTTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTGCTAATCA GTGCTTCAGT
CATAATGTCC AGAGGACAAA TTGTTCTCTC CCAGTCTCCA GCATTCCTGT
101 CTGTATCTCC AGGGGATAAG GTCACAATGA CTTGCAGGGC CAGCTCAAGT
151 ATAAGTTACA TACACTGGTT TCAGCAGAAG CCAGGATCCT CCCCCAGATC
201 CTGGATTTAT GCCACATCCA ACCTGGCTTC TGGAGTCCCT GGTCGCTTCA
251 GTGGCAGTGG GTCTGGGACC TCTTACTCTC TCACAATCAG CAGAGTGGAG
301 GCTGAGGATG CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAGTGGAGTA GTGACCCACT
351 CACGTTCGGT GCTGGGACCA AGCTGGAGCT GAAACGGGCT GATGCTGCAC
401 CAACTGTATC CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT
451 GCCTCAGTCG TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT
501 CAAGTGGAAG ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT
551 GGACTGATCA GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC
601 ACGTTGACCA AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC
651 CACTCACAAG ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG
701 AGTGTTAG (SEQ ID NO: 192)
Тяжелая цепь Ab-11.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab11:
EVQLQQSGAD LVQPGASVKV SCTASGFDIK DYYIHWMKQR PDQGLEWIGR
VDPDNGETEF APKFPGKATF TTDTSSNTAY LQLRGLTSED TAIYYCGRED
101 YDGTYTWFPY WGQGTLVTVS AAKTTPPSVY PLAPGSAAQT NSMVTLGCLV
151KGYFPEPVTVTWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVT VPSSTWPSET
201 VTCNVAHPAS STKVDKKIVP RDCGCKPCIC TVPEVSSVFIFPPKPKDVLT
251ITLTPKVTCV WDISKDDPE VQFSWFVDDV EVHTAQTQPR EEQFNSTFRS
301 VSELPIMHQD WLNGKEFKCR VNSAAFPAPIEKTISKTKGR PKAPQVYTIP
351PPKEQMAKDK VSLTCMITDFFPEDITVEWQ WNGQPAENYKNTQPIMDTDG
401 SYFIYSKLNV QKSNWEA GNT FTCSVLHEGL HNHHTEKSLS HSPGK (SEQ ID
NO: 193)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-11:
GAAGTTCAGC TGCAACAGTC TGGGGCAGAC CTTGTGCAGC CAGGGGCCTC
AGTCAAGGTG TCCTGCACAG CTTCTGGCTT CGACATTAAG GACTACTATA
101 TACACTGGAT GAAACAGAGG CCTGACCAGG GCCTGGAGTG GATTGGAAGG
151 GTTGATCCTG ACAATGGTGA GACTGAATTT GCCCCGAAGT TCCCGGGCAA
201 GGCCACTTTT ACAACAGACA САТССТССАА CACAGCCTAC СТАСААСТСА
251 GAGGCCTGAC ATCTGAGGAC ACTGCCATCT ATTACTGTGG GAGAGAAGAC
301 TACGATGGTA CCTACACCTG GTTTCCTTAT TGGGGCCAAG GGACTCTGGT
351 CACTGTCTCT GCAGCCAAAA CGACACCCCC ATCTGTCTAT CCACTGGCCC
401 CTGGATCTGC TGCCCAAACT AACTCCATGG TGACCCTGGG ATGCCTGGTC
451 AAGGGCTATT TCCCTGAGCC AGTGACAGTG ACCTGGAACT CTGGATCCCT
501 GTCCAGCGGT GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTGCAGTCT GACCTCTACA
551 CTCTGAGCAG CTCAGTGACT GTCCCCTCCA GCACCTGGCC CAGCGAGACC
- 45 037044
601 GTCACCTGCA'A'CGTTGCCCA cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa 651 AATTGTGCCC agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag 701 aagtatcatc tgtcttcatc ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc
751 ATTACTCTGA CTCCTAAGGT CACGTGTGTT GTGGTAGACATCAGCAAGGA
801 TGATCCCGAG GTCCAGTTCA GCTGGTTTGT AGATGATGTG GAGGTGCACA
851 CAGCTCAGAC GCAACCCCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC TTTCCGCTCA
901 GTCAGTGAAC TTCCCATCAT GCACCAGGAC TGGCTCAATG GCAAGGAGTT
951 CAAATGCAGG GTCAACAGTG CAGCTTTCCC TGCCCCCATC GAGAAAACCA
1001 TCTCCAAAAC CAAAGGCAGA CCGAAGGCTC CACAGGTGTA CACCATTCCA
1051 CCTCCCAAGG AGCAGATGGC CAAGGATAAA GTCAGTCTGA CCTGCATGAT
1101 AACAGACTTC TTCCCTGAAG ACATTACTGT GGAGTGGCAG TGGAATGGGC
1151 AGCCAGCGGA GAACTACAAG AACACTCAGC CCATCATGGA CACAGATGGC
1201 TCTTACTTCA TCTACAGCAA GCTCAATGTG CAGAAGAGCA ACTGGGAGGC
1251 AGGAAATACT TTCACCTGCT CTGTGTTACA TGAGGGCCTG CACAACCACC
1301 ATACTGAGAA GAGCCTCTCC CACTCTCCTG GTAAATGA (SEQ ID NO: 194)
Аминокислотная последовательность HC Ab-11, включая сигнальный пептид:
MKCSWVIFFL MAVVTGVNSE VQLQQSGADL VQPGASVKVS CTASGFDIKD
YYIHWMKQRP DQGLEWIGRV DPDNGETEFA PKFPGKATFT TDTSSNTAYL
101 QLRGLTSEDT AIYYCGREDY DGTYTWFPYW GQGTLVTVSA AKTTPPSVYP
151 LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPVTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD
201 LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKIVPR DCGCKPCICT
251 VPEVSSVFIF PPKPKDVLTITLTPKVTCVV VDISKDDPEV QFSWFVDDVE
301 VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE
351 KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW
401 NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFIYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH
451 NHHTEKSLSH SPGK (SEQ ID NO: 195)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-11, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGAAATGCA GCTGGGTCAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT
CAATTCAGAA GTTCAGCTGC AACAGTCTGG GGCAGACCTT GTGCAGCCAG
101 GGGCCTCAGT CAAGGTGTCC TGCACAGCTT CTGGCTTCGA CATTAAGGAC
151 ТАСТАТАТАС ACTGGATGAA ACAGAGGCCT GACCAGGGCC TGGAGTGGAT
201 TGGAAGGGTT GATCCTGACA ATGGTGAGAC TGAATTTGCC CCGAAGTTCC
251 CGGGCAAGGC САСТТТТАСА ACAGACACAT ССТССААСАС AGCCTACCTA
301 CAACTCAGAG GCCTGACATC TGAGGACACT GCCATCTATT ACTGTGGGAG
351 AGAAGACTAC GATGGTACCT ACACCTGGTT TCCTTATTGG GGCCAAGGGA
401 CTCTGGTCAC TGTCTCTGCA GCCAAAACGA САСССССАТС TGTCTATCCA
451 CTGGCCCCTG GATCTGCTGC ССАААСТААС TCCATGGTGA CCCTGGGATG
501 CCTGGTCAAG GGCTATTTCC CTGAGCCAGT GACAGTGACC TGGAACTCTG
551 GATCCCTGTC CAGCGGTGTG САСАССТТСС CAGCTGTCCT GCAGTCTGAC
601 СТСТАСАСТС TGAGCAGCTC AGTGACTGTC CCCTCCAGCA CCTGGCCCAG
651 CGAGACCGTC ACCTGCAACG TTGCCCACCC GGCCAGCAGC ACCAAGGTGG
701 ACAAGAAAAT TGTGCCCAGG GATTGTGGTT GTAAGCCTTG CATATGTACA
751 GTCCCAGAAG TATCATCTGT СТТСАТСТТС CCCCCAAAGC CCAAGGATGT
801 GCTCACCATT ACTCTGACTC CTAAGGTCAC GTGTGTTGTG GTAGACATCA
851 GCAAGGATGA TCCCGAGGTC CAGTTCAGCT GGTTTGTAGA TGATGTGGAG
901 GTGCACACAG CTCAGACGCA ACCCCGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACTTT
951 CCGCTCAGTC AGTGAACTTC CCATCATGCA CCAGGACTGG CTCAATGGCA
1001 AGGAGTTCAA ATGCAGGGTC AACAGTGCAG CTTTCCCTGC CCCCATCGAG
1051 ААААССАТСГССААААССАА AGGCAGACCG AAGGCTCCAC AGGTGTACAC
1101 САТТССАССТ CCCAAGGAGC AGATGGCCAA GGATAAAGTC AGTCTGACCT
1151 GCATGATAAC AGACTTCTTC CCTGAAGACA TTACTGTGGA GTGGCAGTGG
1201 AATGGGCAGC CAGCGGAGAA CTACAAGAAC ACTCAGCCCA TCATGGACAC
1251 AGATGGCTCT ТАСТТСАТСТ ACAGCAAGCT CAATGTGCAG AAGAGCAACT
1301 GGGAGGCAGG АААТАСТТТС ACCTGCTCTG TGTTACATGA GGGCCTGCAC
1351 AACCACCATA CTGAGAAGAG ССТСТСССАС TCTCCTGGTA AATGA (SEQ ID NO: 196)
Ab-12.
Последовательности LC и HC антитела 12 (также называемого в данном описании Ab-12) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-12.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab12:
DLQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQD1S NYLNWYQQKP DGTVKLLIFY
TSTLQSGVPS RFSGSGSGTN YSLTITNLEQ DDAATYFCQQ GDTLPYTFGG
101 GTKLEIKR/W AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPKDINVKWKI
151 DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT
201 STSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 197)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-12:
- 46 037044
GATCTCCAGA TGACACAGAC TACTTCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA
CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC AATTATTTAA
101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTG TTAAGCTCCT GATCTTCTAC
151 ACATCAACAT TACAGTCAGG AGTCCCATCG AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC
201 TGGAACAAAT TATTCTCTCA CCATTACCAA CCTGGAGCAA GATGATGCTG
251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC GTTCGGAGGG
301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT
351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT
401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT
451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA
501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG
551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA
601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 198)
Аминокислотная последовательность LC Ab-12, включая сигнальный пептид:
MMSSAQFLGL LLLCFQGSRC DLQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDIS
NYLNWYQQKP DGTVKLLIFY TSTLQSGVPS RFSGSGSGTN YSLTITNLEQ
101 DDAATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA
151 SVVCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT
201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 199)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-12, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG
TTCCAGATGT GATCTCCAGA TGACACAGAC TACTTCCTCC CTGTCTGCCT
101 CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC
151 AATTATTTAA ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTG TTAAGCTCCT
201 GATCTTCTAC ACATCAACAT TACAGTCAGG AGTCCCATCG AGGTTCAGTG
251 GCAGTGGGTC TGGAACAAAT TATTCTCTCA CCATTACCAA CCTGGAGCAA
301 GATGATGCTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC
351 GTTCGGAGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA
401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC
451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA
501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA
551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG
601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC
651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT
701 GTTAG (SEQ ID N0:200)
Тяжелая цепь Ab-12.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab12:
EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWMKQN QGKSLEWIGE
51INPNSGGSGY NQKFKGKATL TVDKSSSTAY MELRSLTSED SAVYYCARLG
101 YYGNYEDWYF DVWGAGTTVT NSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC
151LVKGYFPEPV TVTWNSGSLS SGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS
201ETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDV
251LT1TLTPKVT CWVDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF
301RSVSELPIMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT
351IPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT
401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ID
NO:201)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-12:
- 47 037044
GAGGTCCAGT TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC
AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA САСАТТСАСТ GACTACAACA
101 TGCACTGGAT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA GCCTAGAGTG GATAGGAGAG
151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TTCTGGTTAC AACCAGAAGT TCAAAGGCAA
201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTCC
251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC
301 TACTATGGTA ACTACGAGGA CTGGTATTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC
351 CACGGTCACC GTCTCCTCTG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC
401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC
451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG
501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC
551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC
601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA
651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG
701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG
751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG
801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG
851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC
901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA
951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA
1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC
1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG
1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA
1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA
1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG
1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA
1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID NO:202)
Аминокислотная последовательность HC Ab-12, включая сигнальный пептид:
MGWSWTFLFL LSGTSGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD
YNMHWMKQNQ GKSLEWIGEINPNSGGSGYN QKFKGKATLT VDKSSSTAYM
101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY YGNYEDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV
151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ
201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI
251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC WVDISKDDP EVQFSWFVDD
301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP
351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW
401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG
451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO:203)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-12, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGGATGGA GCTGGACCTT ТСТСТТССТС CTGTCAGGAA CTTCGGGTGT
CCTCTCTGAG GTCCAGTTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG
101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC
151 TACAACATGC ACTGGATGAA GCAGAACCAA GGAAAGAGCC TAGAGTGGAT
201 AGGAGAGATT ААТССТААСА GTGGTGGTTC TGGTTACAAC CAGAAGTTCA
251 AAGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCAGCAC AGCCTACATG
301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG
351 ATTGGGCTAC TATGGTAACT ACGAGGACTG GTATTTCGAT GTCTGGGGCG
401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCTGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC
451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA АСТААСТССА TGGTGACCCT
501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA
551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG
601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG
651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA
701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA
751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC АТСТТССССС CAAAGCCCAA
801 GGATGTGCTC АССАТТАСТС TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG
851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT
901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG
951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG ААСТТСССАТ CATGCACCAG GACTGGCTCA
1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC
1051 ATCGAGAAAA ССАТСТССАА AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT
1101 GTACACCATT ССАССТСССА AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC
1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG
1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT
1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA
1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT АСТТТСАССТ GCTCTGTGTT ACATGAGGGC
1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC ТСССАСТСТС CTGGTAAATG
1401 A (SEQ ID NO:204)
Ab-13.
Последовательности LC и HC антитела 13 (также называемого в данном описании Ab-13) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-13.
- 48 037044
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab13:
QIVLTQSPAIMSASPGEKVT MTCRASSSVT SSYLNWYQQK PGSSPKLWIY
STSNLASGVP ARFSGSGSGT SYSLTISSVE AEDAATYYQQ QYDFFPSTFG
101 GGTKLEIKLRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGGASWCFLNNF YPKDINVKWK
151IDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL TLTKDEYERHNSYTCEATHK
201 TSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO:205)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-13:
CAGATTGTTC TCACCCAGTC TCCAGCAATC ATGTCTGCAT CTCCAGGGGA
GAAGGTCACC ATGACCTGCA GGGCCAGCTC AAGTGTAACT TCCAGTTACT
101 TGAACTGGTA CCAGCAGAAG CCAGGATCTT CCCCCAAACT CTGGATTTAT
151 AGCACATCCA ACCTGGCTTC AGGAGTCCCA GCTCGCTTCA GTGGCAGTGG
201 GTCTGGGACC TCTTACTCTC TCACAATCAG CAGTGTGGAG GCTGAGGATG
251 CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAGTATGATT TTTTCCCATC GACGTTCGGT
301 GGAGGCACCA AGCTGGAAAT CAAGCGGGCT GATGCTGCAC CAACTGTATC
351 CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT GCCTCAGTCG
401 TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT CAAGTGGAAG
451 ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT GGACTGATCA
501 GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC ACGTTGACCA
551 AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC CACTCACAAG
601 ACATCAACTT CACCCATCGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG AGTGT (SEQ ID NO:206)
Аминокислотная последовательность LC Ab-13, включая сигнальный пептид:
MDSQVQIFSF LLISALVKMS RGQIVLTQSP AIMSASPGEK VTMTCRASSS
VTSSYLNWYQ QKPGSSPKLWIYSTSNLASG VPARFSGSGS GTSYSLTISS
101 VEAEDAATYY CQQYDFFPST FGGGTKLEIK RADAAPTVSIFPPSSEQLTS
151 GGASVVCFLN NFYPKDINVK WKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS
201 TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT HKTSTSPIVK SFNRNEC (SEQ ID NO:207)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-13, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGATTCTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC СТТСТААТСА GTGCCTTAGT
CAAAATGTCC AGAGGACAGA TTGTTCTCAC CCAGTCTCCA GCAATCATGT
101 CTGCATCTCC AGGGGAGAAG GTCACCATGA CCTGCAGGGC CAGCTCAAGT
151 GTAACTTCCA GTTACTTGAA CTGGTACCAG CAGAAGCCAG GATCTTCCCC
201 CAAACTCTGG ATTTATAGCA САТССААССТ GGCTTCAGGA GTCCCAGCTC
251 GCTTCAGTGG CAGTGGGTCT GGGACCTCTT АСТСТСТСАС AATCAGCAGT
301 GTGGAGGCTG AGGATGCTGC САСТТАТТАС TGCCAGCAGT ATGATTTTTT
351 CCCATCGACG TTCGGTGGAG GCACCAAGCT GGAAATCAAG CGGGCTGATG
401 CTGCACCAAC TGTATCCATC ТТССС АССАТ CCAGTGAGCA GTTAACATCT
451 GGAGGTGCCT CAGTCGTGTG CTTCTTGAAC ААСТТСТАСС CCAAAGACAT
501 CAATGTCAAG TGGAAGATTG ATGGCAGTGA ACGACAAAAT GGCGTCCTGA
551 ACAGTTGGAC TGATCAGGAC AGCAAAGACA GCACCTACAG CATGAGCAGC
601 ACCCTCACGT TGACCAAGGA CGAGTATGAA CGACATAACA GCTATACCTG
651 TGAGGCCACT CACAAGACAT СААСТТСАСС CATCGTCAAG AGCTTCAACA
701 GGAATGAGTG Т (SEQ ID NO:208)
Тяжелая цепь Ab-13.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab13:
EVQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKASGYTFT DYYMNWVKQS HGESLEWIGD 51INPYNDDTTY NHKFKGKATL TVDKSSNTAY MQLNSLTSED SAVYYCARET 101 AVITTNAMDY WGQGTSVTVS 3AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLV 151KGYFPEPVTV TWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVT VPSSTWPSET 201 VTCNVAHPAS STKVDKKIVP RDCGCKPCIC TVPEVSSVFIFPPKPKDVLT 251ITLTPKVTCV WDISKDDPE VQFSWFVDDV EVHTAQTQPR EEQFNSTFRS 301 VSELPIMHQD WLNGKEFKCR VNSAAFPAPIEKTISKTKGR PKAPQVYTIP 351PPKEQMAKDK VSLTCMITDFFPEDITVEWQ WNGQPAENYKNTQPIMDTDG 401SYFIYSKLNV QKSNWEA GNT FTCSVLHEGL HNHHTEKSLS HSPGK (SEQ ID NO:209)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-13:
- 49 037044
GAGGTCCAGC TGCAACAATC TGGACCTGAG CTGGTGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGTAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACTACA 101 TGAACTGGGT GAAGCAGAGC CATGGAGAGA GCCTTGAGTG GATTGGAGAT 151 ATTAATCCTT ACAACGATGA TACTACCTAC AACCACAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AATCCTCCAA CACAGCCTAC ATGCAGCTCA 251 ACAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGAGAGACG 301 GCCGTTATTA CTACGAATGC TATGGACTAC TGGGGTCAAG GAACCTCAGT 351 CACCGTCTCC TCAGCCAAAA CGACACCCCC ATCTGTCTAT CCACTGGCCC 401 CTGGATCTGC TGCCCAAACT AACTCCATGG TGACCCTGGG ATGCCTGGTC 451 AAGGGCTATT TCCCTGAGCC AGTGACAGTG ACCTGGAACT CTGGATCCCT 501 GTCCAGCGGT GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTGCAGTCT GACCTCTACA 551 CTCTGAGCAG CTCAGTGACT GTCCCCTCCA GCACCTGGCC CAGCGAGACC 601 GTCACCTGCA ACGTTGCCCA CCCGGCCAGC AGCACCAAGG TGGACAAGAA 651 AATTGTGCCC AGGGATTGTG GTTGTAAGCC TTGCATATGT ACAGTCCCAG 701 AAGTATCATC TGTCTTCATC TTCCCCCCAA AGCCCAAGGA TGTGCTCACC 751 ATTACTCTGA CTCCTAAGGT CACGTGTGTT GTGGTAGACA TCAGCAAGGA 801 TGATCCCGAG GTCCAGTTCA GCTGGTTTGT AGATGATGTG GAGGTGCACA 851 CAGCTCAGAC GCAACCCCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC TTTCCGCTCA 901 GTCAGTGAAC TTCCCATCAT GCACCAGGAC TGGCTCAATG GCAAGGAGTT 951 CAAATGCAGG GTCAACAGTG CAGCTTTCCC TGCCCCCATC GAGAAAACCA 1001 TCTCCAAAAC CAAAGGCAGA CCGAAGGCTC CACAGGTGTA CACCATTCCA 1051 CCTCCCAAGG AGCAGATGGC CAAGGATAAA GTCAGTCTGA CCTGCATGAT 1101 AACAGACTTC TTCCCTGAAG ACATTACTGT GGAGTGGCAG TGGAATGGGC 1151 AGCCAGCGGA GAACTACAAG AACACTCAGC CCATCATGGA CACAGATGGC 1201 TCTTACTTCA TCTACAGCAA GCTCAATGTG CAGAAGAGCA ACTGGGAGGC 1251 AGGAAATACT TTCACCTGCT CTGTGTTACA TGAGGGCCTG CACAACCACC 1301 ATACTGAGAA GAGCCTCTCC CACTCTCCTG GTAAA (SEQ ID NO:210)
Аминокислотная последовательность HC Ab-13, включая сигнальный пептид:
MGWNWIFLFL LSGTAGVYSE VQLQQSGPEL VKPGASVKMS CKASGYTFTD
YYMNWVKQSH GESLEWIGDINPYNDDTTYN HKFKGKATLT VDKSSNTAYM 101 QLNSLTSEDS AVYYCARETA VITTNAMDYW GQGTSVTVSS AKTTPPSVYP 151 LAPGSAAQIN SMVTLGCLVK GYFPEPVTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD 201 LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKIVPR DCGCKPCICT 251 VPEVSSVFIF PPKPKDVLTITLTPKVTCVV VDISKDDPEV QFSWFVDDVE 301 VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE 351 KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW 401 NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFIYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH 451 NHHTEKSLSH SPGK (SEQ ID NO:211)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-13, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGGATGGA ACTGGATCTT ТСТСТТССТС TTGTCAGGAA CTGCAGGTGT
CTACTCTGAG GTCCAGCTGC AACAATCTGG ACCTGAGCTG GTGAAGCCTG
101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGTAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC
151 TACTACATGA ACTGGGTGAA GCAGAGCCAT GGAGAGAGCC TTGAGTGGAT
201 TGGAGATATT ААТССТТАСА ACGATGATAC ТАССТАСААС CACAAGTTCA
251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAAT ССТССААСАС AGCCTACATG
301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG
351 AGAGACGGCC GTTATTACTA CGAATGCTAT GGACTACTGG GGTCAAGGAA
401 CCTCAGTCAC CGTCTCCTCA GCCAAAACGA САСССССАТС TGTCTATCCA
451 CTGGCCCCTG GATCTGCTGC ССАААСТААС TCCATGGTGA CCCTGGGATG
501 CCTGGTCAAG GGCTATTTCC CTGAGCCAGT GACAGTGACC TGGAACTCTG
551 GATCCCTGTC CAGCGGTGTG САСАССТТСС CAGCTGTCCT GCAGTCTGAC
601 СТСТАСАСТС TGAGCAGCTC AGTGACTGTC CCCTCCAGCA CCTGGCCCAG
651 CGAGACCGTC ACCTGCAACG TTGCCCACCC GGCCAGCAGC ACCAAGGTGG
701 ACAAGAAAAT TGTGCCCAGG GATTGTGGTT GTAAGCCTTG CATATGTACA
751 GTCCCAGAAG TATCATCTGT СТТСАТСТТС CCCCCAAAGC CCAAGGATGT
801 GCTCACCATT ACTCTGACTC CTAAGGTCAC GTGTGTTGTG GTAGACATCA
851 GCAAGGATGA TCCCGAGGTC CAGTTCAGCT GGTTTGTAGA TGATGTGGAG
901 GTGCACACAG CTCAGACGCA ACCCCGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACTTT
951 CCGCTCAGTC AGTGAACTTC CCATCATGCA CCAGGACTGG CTCAATGGCA
1001 AGGAGTTCAA ATGCAGGGTC AACAGTGCAG CTTTCCCTGC CCCCATCGAG
1051 ААААССАТСТ ССААААССАА AGGCAGACCG AAGGCTCCAC AGGTGTACAC
1101 САТТССАССТ CCCAAGGAGC AGATGGCCAA GGATAAAGTC AGTCTGACCT
1151 GCATGATAAC AGACTTCTTC CCTGAAGACA TTACTGTGGA GTGGCAGTGG
1201 AATGGGCAGC CAGCGGAGAA CTACAAGAAC ACTCAGCCCA TCATGGACAC
1251 AGATGGCTCT ТАСТТСАТСТ ACAGCAAGCT CAATGTGCAG AAGAGCAACT
1301 GGGAGGCAGG АААТАСТТТС ACCTGCTCTG TGTTACATGA GGGCCTGCAC
1351 AACCACCATA CTGAGAAGAG ССТСТСССАС TCTCCTGGTA АА (SEQ ID NO:212)
Ab-13 гуманизировали, чтобы создать Ab-14.
Последовательности LC и HC антитела 14 (также называемого в данном описании Ab-14) показаны
- 50 037044 ниже.
Легкая цепь Ab-14.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab14:
DIQLTQSPSF LSASVGDRVTITCRASSSVT SSYLNWYQQK PGKAPKLLIY
STSNLASGVP SRFSGSGSGT EFTLTISSLQ PEDFATYYCjQ QYDFFPSTFG
101 GGTKVEIOT VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT ASWCLLNNF YPREAKVQWK
151 VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQ
201 GLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO:213)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-14:
GACATCCAGC TGACCCAGAG CCCCAGCTTC CTTTCCGCAT CCGTTGGTGA
CCGAGTAACA ATCACATGCC GCGCCTCATC TTCAGTTACA ТСТТСТТАТС
101 TTAATTGGTA ТСААСААААА CCAGGAAAAG САССТАААСТ ТСТТАТАТАС
151 ТСТАСАТСТА ATCTCGCATC AGGAGTTCCC TCTCGATTTT CAGGATCTGG
201 ATCAGGCACA GAATTTACAC ТТАСТАТАТС АТСАСТССАА CCAGAAGACT
251 TCGCCACTTA TTACTGCCAA CAATACGATT TTTTTCCAAG CACATTCGGA
301 GGAGGTACAA AAGTAGAAAT CAAGCGTACG GTGGCTGCAC CATCTGTCTT
351 CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT GCCTCTGTTG
401 TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT ACAGTGGAAG
451 GTGGATAACG СССТССААТС GGGTAACTCC CAGGAGAGTG TCACAGAGCA
501 GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG ACGCTGAGCA
551 AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT CACCCATCAG
601 GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG AGTGT (SEQ ID NO:214)
Аминокислотная последовательность LC Ab-14, включая сигнальный пептид:
MDMRVPAQLL GLLLLWLPGA RCDIQLTQSP SFLSASVGDR VTITCRASSS
VTSSYLNWYQ QKPGKAPKLLIYSTSNLASG VPSRFSGSGS GTEFTLTISS
101 LQPEDFATYY CQQYDFFPST FGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKS
151 GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS
201 TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC (SEQ ID NO:215)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-14, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TACTCTGGCT
CCCAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGCTGAC CCAGAGCCCC AGCTTCCTTT
101 CCGCATCCGT TGGTGACCGA GTAACAATCA CATGCCGCGC СТСАТСТТСА
151 GTTACATCTT СТТАТСТТАА TTGGTATCAA CAAAAACCAG GAAAAGCACC
201 ТАААСТТСТТ АТАТАСТСТА САТСТААТСТ CGCATCAGGA GTTCCCTCTC
251 GATTTTCAGG ATCTGGATCA GGCACAGAAT ТТАСАСТТАС ТАТАТСАТСА
301 CTCCAACCAG AAGACTTCGC САСТТАТТАС TGCCAACAAT ACGATTTTTT
351 TCCAAGCACA TTCGGAGGAG GTACAAAAGT AGAAATCAAG CGTACGGTGG
401 CTGCACCATC TGTCTTCATC TTCCCGCCAT CTGATGAGCA GTTGAAATCT
451 GGAACTGCCT CTGTTGTGTG CCTGCTGAAT ААСТТСТАТС CCAGAGAGGC
501 CAAAGTACAG TGGAAGGTGG ATAACGCCCT CCAATCGGGT AACTCCCAGG
551 AGAGTGTCAC AGAGCAGGAC AGCAAGGACA GCACCTACAG CCTCAGCAGC
601 ACCCTGACGC TGAGCAAAGC AGACTACGAG AAACACAAAG TCTACGCCTG
651 CGAAGTCACC CATCAGGGCC TGAGCTCGCC CGTCACAAAG AGCTTCAACA
701 GGGGAGAGTG Т (SEQ ID NO:216)
Тяжелая цепь Ab-14.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab14:
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMNWVRQA PGQRLEWMGD 51INPYNDDTTY NHKFKGRVT1TRDTSASTAY MELSSLRSED TAVYYCARET “ 101 AVITTNAMDY WGQGTTVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV 151KDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPA VLQS SGLYSLSSW TVPSSNFGTQ 201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT 251LMISRTPEVT CVWDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTF 301RWSVLTWH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT 351LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS 401DGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:217)
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-14 без лизина на карбоксильном конце:
- 51 037044
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMNWVRQA PGQRLEWMGD.
511NPYNDDTTY NHKFKGRVTITRDTSASTAY MELSSLRSED TAVYYCARET
101 aviitnamdy'wgqgttvtvs sastkgpsvf plapcsrsts estaalgclv
151KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQ 201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVA GPSV FLFPPKPKDT 251LMISRTPEVTCVWDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTF 301 RWSVLTWH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT 351LPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS 401DGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:393)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-14:
GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTCAAGAAAC CTGGAGCAAG 51 CGTAAAGGTT AGTTGCAAAG CATCTGGATA САСАТТТАСС GACTACTACA 101 TGAATTGGGT ACGACAAGCC CCTGGACAAA GACTTGAATG GATGGGAGAC 151 АТТААСССТТ ATAACGACGA САСТАСАТАС ААТСАТАААТ TTAAAGGAAG 201 AGTTACAATT ACAAGAGATA CATCCGCATC AACCGCCTAT ATGGAACTTT 251 CCTCATTGAG ATCTGAAGAC ACTGCTGTTT ATTACTGTGC AAGAGAAACT 301 GCCGTTATTA CTACTAACGC TATGGATTAC TGGGGTCAAG GAACCACTGT 351 TACCGTCTCT AGTGCCTCCA CCAAGGGCCC ATCGGTCTTC CCCCTGGCGC 401 CCTGCTCCAG GAGCACCTCC GAGAGCACAG CGGCCCTGGG CTGCCTGGTC 451 AAGGACTACT TCCCCGAACC GGTGACGGTG TCGTGGAACT CAGGCGCTCT 501 GACCAGCGGC GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTACAGTCC TCAGGACTCT 551 ACTCCCTCAG CAGCGTGGTG ACCGTGCCCT CCAGCAACTT CGGCACCCAG 601 АССТАСАССТ GC AACGTAGA TCACAAGCCC AGC AAC АССА AGGTGGACAA 651 GACAGTTGAG CGCAAATGTT GTGTCGAGTG CCCACCGTGC CCAGCACCAC 701 CTGTGGCAGG ACCGTCAGTC ТТССТСТТСС ССССААААСС CAAGGACACC 751 CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACG TGCGTGGTGG TGGACGTGAG 801 CCACGAAGAC CCCGAGGTCC AGTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG 851 TGCATAATGC CAAGACAAAG CCACGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACGTTC 901 CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTTGTGCAC CAGGACTGGC TGAACGGCAA 951 GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGG CCTCCCAGCC CCCATCGAGA 1001 АААССАТСТС СААААСС AAA GGGCAGCCCC GAGAACC AC A GGTGTACACC 1051 CTGCCCCCAT CCCGGGAGGA GATGACCAAG AACCAGGTCA GCCTGACCTG 1101 CCTGGTCAAA GGCTTCTACC CCAGCGAC AT CGCCGTGGAG TGGGAGAGCA 1151 ATGGGCAGCC GGAGAACAAC TACAAGACCА САССТСССАТ GCTGGACTCC 1201 GACGGCTCCT ТСТТССТСТА CAGCAAGCTC ACCGTGGACA AGAGC AGGTG 1251 GCAGCAGGGG AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG GCTCTGC АС А 1301 АССАСТАСАС GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGGTAA A (SEQ ID NO:218)
Аминокислотная последовательность HC Ab-14, включая сигнальный пептид:
MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGYTFTD 51 YYMNWVRQAP GQRLEWMGDI NPYNDDTTYN HKFKGRVTIT RDTSASTAYM 101 ELSSLRSEDT AVYYCARETA VITTNAMDYW GQGTTVTVSS ASTKGPSVFP 151 LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 201 GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP 251 APPVAGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVQFNWYVDG 301 VEVHNAKTKP REEQFNSTFR VVSVLTVVHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP 351IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW 401 ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA 451 LHNHYTQKSL SLSPGK (SEQ ID NO:219)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-14, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 52 037044
ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC
CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGAGCGG CGCCGAGGTC AAGAAACCTG
101 GAGCAAGCGT AAAGGTTAGT TGCAAAGCAT CTGGATACAC ATTTACCGAC
151 TACTACATGA ATTGGGTACG ACAAGCCCCT GGACAAAGAC TTGAATGGAT
201 GGGAGACATT AACCCTTATA ACGACGAC AC TACATACAAT С ATAAATTTA
251 AAGGAAGAGT TACAATTACA AGAGATACAT CCGCATCAAC CGCCTATATG
301 GAACTTTCCT CATTGAGATC TGAAGACACT GCTGTTTATT ACTGTGCAAG
51 AGAAACTGCC GTTATTACTA CTAACGCTAT GGATTACTGG GGTCAAGGAA
401 CCACTGTTAC CGTCTCTAGT GCCTCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC
451 CTGGCGCCCT GCTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCGG CCCTGGGCTG
501 CCTGGTCAAG GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG
51 GCGCTCTGAC CAGCGGCGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT ACAGTCCTCA
601 GGACTCTACT CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAACTTCGG
651 CACCCAGACC TACACCTGCA ACGTAGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG
701 TGGACAAGAC AGTTGAGCGC AAATGTTGTG TCGAGTGCCC ACCGTGCCCA
751 GCACCACCTG TGGCAGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA
801 GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACGTGC GTGGTGGTGG
851 ACGTGAGCCA CGAAGACCCC GAGGTCCAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC
901 GTGGAGGTGC ATAATGCCAA GACAAAGCCA CGGGAGGAGC AGTTCAACAG
951 CACGTTCCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT TGTGCACCAG GACTGGCTGA
1001 ACGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGGCCT CCCAGCCCCC
1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT
1101 GTAC ACCCTG CCCCCATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTC AGCC
1151 TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTACCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG
1201 GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAAC AACTAC AAGACC AC AC CTCCC ATGCT
1251 GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA
1301 GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT
1351 CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAA (SEQ ID N0:220)
Последовательности CDR в вариабельной области тяжелой цепи
Ab-14:
CDR-Hl: DYYMN (SEQ ID NO:296)
CDR-H2: DINPYNDDTTYNHKFKG (SEQ ID NO :297)
CDR-H3: ETAVITTNAMD (SEQ ID NO:298)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-14:
CDR-L1: RASSSVTSSYLN (SEQ ID NO:284)
CDR-L2: STSNLAS (SEQ ID NO:285)
CDR-L3: QQYDFFPST (SEQ ID NO:286)
Вариабельные домены Ab-14.
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи Ab-14 (без сигнальной последовательности):
DIQLTQSPSF LSASVGDRVTITCRASSSVT SSYLNWYQQK PGKAPKLLIY
STSNLASGVP SRFSGSGSGT EFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QYDFFPSTFG
101 GGTKVEIK (SEQ ID NO:380)
Последовательность ДНК вариабельного домена легкой цепи Ab-14 (без сигнальной последовательности):
GACATCCAGC TGACCCAGAG CCCCAGCTTC CTTTCCGCAT CCGTTGGTGA
CCGAGTAACA ATCACATGCC GCGCCTCATC TTCAGTTACA ТСТТСТТАТС
101 TTAATTGGTA ТСААСААААА CCAGGAAAAG САССТАААСТ ТСТТАТАТАС
151 ТСТАСАТСТА ATCTCGCATC AGGAGTTCCC TCTCGATTTT CAGGATCTGG
201 ATCAGGCACA GAATTTACAC ТТАСТАТАТС АТСАСТССАА CCAGAAGACT
251 TCGCCACTTA TTACTGCCAA CAATACGATT TTTTTCCAAG CACATTCGGA
301 GGAGGTACAA AAGTAGAAAT CAAG (SEQ ID NO:381)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи Ab-14 (без сигнальной последовательности):
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMNWVRQA PGQRLEWMGD.
51INPYNDDTTY NHKFKGRVTITRDTSASTAY MELSSLRSED TAVYYCARET
101 AVITTNAMDY WGQGTTVTVS S (SEQ ID NO:382)
Последовательность ДНК вариабельного домена тяжелой цепи Ab-14 (без сигнальной последовательности):
GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTCAAGAAAC CTGGAGCAAG
CGTAAAGGTT AGTTGCAAAG CATCTGGATA CACATTTACC GACTACTACA
101 TGAATTGGGT ACGACAAGCC CCTGGACAAA GACTTGAATG GATGGGAGAC
151 ATTAACCCTT ATAACGACGA С ACTACATAC AATCATAAAT TTAAAGGAAG
201 AGTTACAATT AC AAGAGATA CATCCGCATC AACCGCCTAT ATGGAACTTT
251 CCTCATTGAG ATCTGAAGAC ACTGCTGTTT ATTACTGTGC AAGAGAAACT
301 GCCGTTATTA CTACTAACGC TATGGATTAC TGGGGTCAAG GAACCACTGT
351 TACCGTCTCT AGT (SEQ ID NO:383)
Ab-3 гуманизировали, чтобы создать Ab-15.
- 53 037044
Ab-15.
Последовательности LC и HC антитела 15 (также называемого в данном описании Ab-15) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-15.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab15:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCSVSSTIS SNHLHWFQQK PGKAPKSLIY 51 GTSNLASGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QWSSYPLTFG 101 GGTKVEIKRT VAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASWCLLNNF YPREAKVQWK 151 VDNALQSGNS QESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQ 201 GLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:221)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-15:
GACATCCAGA TGACCCAGTC ТССАТССТСС CTCTCAGCAT CCGTAGGCGA 51 TAGAGTTACA ATAACATGCA GCGTATCATC ААСТАТАТСА ТСАААТСАТС 101 TTCATTGGTT CCAACAGAAA CCCGGCAAAG САССТАААТС АСТТАТАТАС 151 GGCACATCAA ATCTCGCATC AGGCGTTCCT TCAAGATTTT CAGGCTCTGG 201 CTCAGGCACC GACTTTACTC ТТАСААТАТС СТСССТССАА CCCGAAGACT 251 TCGCAACCTA TTACTGTCAA CAATGGTCCT САТАТССАСТ CACATTTGGC 301 GGCGGCACAA AAGTAGAAAT TAAACGTACG GTGGCTGCAC CATCTGTCTT 351 CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT GCCTCTGTTG 401 TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT ACAGTGGAAG 451 GTGGATAACG СССТССААТС GGGTAACTCC CAGGAGAGTG TCACAGAGCA 501 GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG ACGCTGAGCA 551 AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT CACCCATCAG
601 GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG AGTGT (SEQ ID NO:222)
Аминокислотная последовательность LC Ab-15, включая сигнальный пептид:
MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RCDIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCSVSST 51ISSNHLHWFQ QKPGKAPKSLIYGTSNLASG VPSRFSGSGS GTDFTLTISS 101 LQPEDFATYY CQQWSSYPLT FGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKS 151 GTASVVCLLNNFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS 201 TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC (SEQ ID NO:223)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-15, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TACTCTGGCT 51 CCGAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA ТССТСССТСТ 101 CAGCATCCGT AGGCGATAGA GTTACAATAA CATGCAGCGT АТСАТСААСТ 151 АТАТСАТСАА АТСАТСТТСА TTGGTTCCAA CAGAAACCCG GCAAAGCACC 201 TAAATCACTT ATATACGGCA САТСАААТСТ CGCATCAGGC GTTCCTTCAA 251 GATTTTCAGG CTCTGGCTCA GGCACCGACT ТТАСТСТТАС ААТАТССТСС 301 CTCCAACCCG AAGACTTCGC AACCTATTAC TGTCAACAAT GGTCCTCATA 351 ТССАСТСАСА TTTGGCGGCG GCACAAAAGT AGAAATTAAA CGTACGGTGG 401 CTGCACCATC TGTCTTCATC TTCCCGCCAT CTGATGAGCA GTTGAAATCT 451 GGAACTGCCT CTGTTGTGTG CCTGCTGAAT ААСТТСТАТС CCAGAGAGGC 501 CAAAGTACAG TGGAAGGTGG ATAACGCCCT CCAATCGGGT AACTCCCAGG 551 AGAGTGTCAC AGAGCAGGAC AGCAAGGACA GCACCTACAG CCTCAGCAGC 601 ACCCTGACGC TGAGCAAAGC AGACTACGAG AAACACAAAG TCTACGCCTG 651 CGAAGTCACC CATCAGGGCC TGAGCTCGCC CGTCACAAAG AGCTTCAACA 701 GGGGAGAGTG Т (SEQ ID NO:224)
Тяжелая цепь Ab-15.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab15.
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASDFNIK DFYLHWVRQA PGQGLEWIGR
51IDPENGDTLY DPKFQDKVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAREA
101 DYFHDGTSYW YFDVWGRGTL NYNSSASTKG PSVFPLAPCS RSTSESTAAL
151 GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSN
201 FGTQTYTCNVDHKPSNTKVD KTVERKCCVE CPPCPAPPVA GPSVFLFPPK
251PKDTLMISRT PEVTCVWDV SHEDPEVQFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQF
301NSTFRWSVL TWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREP
351 QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CL VKGFYPSD IA VEWESNGQ PENNYKTTPP
401MLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
457 К (SEQ ID NO:225)
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-15 без лизина на карбоксильном конце:
- 54 037044
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASDFNIK DFYtHWVRQA PGQGLEWIGR 51IDPENGDTLY DPKFQDKVTM TTDTSTSTAYMELRSLRSDD TAVYYCAREA 101 DYFHDGTSYW YFDVWGRGTL NYNSSASTKG PSVFPLAPCS RSTSESTAAL 151 GCLVKDYFPEPVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSN 201 FGTQTYTCNVDHKPSNTKVD KTVERKCCVE CPPCPAPPVA GPSVFLFPPK 251PKDTLMISRT PEVTCWVDV SHEDPEVQFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQF 301NSTFRWSVL TWHQDWLNG KEYKCKVSNK GLPAPIEKTISKTKGQPREP 351 QVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IA VEWESNGQ PENNYKTTPP 401MLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG 451 (SEQ ID NO:394)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-15:
GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC 51 AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGACTT СААСАТТААА GACTTCTATC 101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATTGGAAGG 151 ATTGATCCTG AGAATGGTGA ТАСТТТАТАТ GACCCGAAGT TCCAGGACAA 201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCACCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GGAGCCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAGGCG 301 GATTATTTCC ACGATGGTAC CTCCTACTGG TACTTCGATG TCTGGGGCCG 351 TGGCACCCTG GTCACCGTCT CTAGTGCCTC CACCAAGGGC CCATCGGTCT 401 TCCCCCTGGC GCCCTGCTCC AGGAGCACCT CCGAGAGCAC AGCGGCCCTG 451 GGCTGCCTGG TCAAGGACTA CTTCCCCGAA CCGGTGACGG TGTCGTGGAA 501 CTCAGGCGCT CTGACCAGCG GCGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTACAGT 551 CCTCAGGACT СТАСТСССТС AGCAGCGTGG TGACCGTGCC CTCCAGCAAC 601 TTCGGCACCC AGACCTACAC CTGCAACGTA GATCACAAGC CCAGCAACAC 651 CAAGGTGGAC AAGACAGTTG AGCGCAAATG TTGTGTCGAG TGCCCACCGT 701 GCCCAGCACC ACCTGTGGCA GGACCGTCAG ТСТТССТСТТ ССССССАААА 751 CCCAAGGACA CCCTCATGAT CTCCCGGACC CCTGAGGTCA CGTGCGTGGT 801 GGTGGACGTG AGCCACGAAG ACCCCGAGGT CCAGTTCAAC TGGTACGTGG 851 ACGGCGTGGA GGTGCATAAT GCCAAGACAA AGCCACGGGA GGAGCAGTTC 901 AACAGCACGT TCCGTGTGGT CAGCGTCCTC ACCGTTGTGC ACCAGGACTG 951 GCTGAACGGC AAGGAGTACA AGTGCAAGGT СТССААСААА GGCCTCCCAG 1001 CCCCCATCGA GAAAACCATC TCCAAAACCA AAGGGCAGCC CCGAGAACCA 1051 CAGGTGTACA CCCTGCCCCC ATCCCGGGAG GAGATGACCA AGAACCAGGT 1101 CAGCCTGACC TGCCTGGTCA AAGGCTTCTA CCCCAGCGAC ATCGCCGTGG 1151 AGTGGGAGAG CAATGGGCAG CCGGAGAACA ACTACAAGAC САСАССТССС 1201 ATGCTGGACT CCGACGGCTC СТТСТТССТС TACAGCAAGC TCACCGTGGA 1251 CAAGAGCAGG TGGCAGCAGG GGAACGTCTT CTCATGCTCC GTGATGCATG 1301 AGGCTCTGCA СААССАСТАС ACGCAGAAGA GCCTCTCCCT GTCTCCGGGT 1351 AAA(SEQIDNO:226)
Аминокислотная последовательность HC Ab-15, включая сигнальный пептид:
MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASDFNIKD 51 FYLHWVRQAP GQGLEWIGRIDPENGDTLYD PKFQDKVTMT TDTSTSTAYM 101 ELRSLRSDDT AVYYCAREAD YFHDGTSYWY FDVWGRGTLV TVSSASTKGP 151 SVFPLAPCSR STSESTAALG CLVKDYFPEP VTVSWNSGAL TSGVHTFPAV 201 LQSSGLYSLS SVVTVPSSNF GTQTYTCNVD HKPSNTKVDK TVERKCCVEC 251 PPCPAPPVAG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVQFNW 301 YVDGVEVHNA KTKPREEQFN STFRVVSVLT VVHQDWLNGK EYKCKVSNKG 351 LPAPIEKTIS KTKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI 401 AVEWESNGQP ENNYKTTPPM LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV 451 MHEALHNHYT QKSLSLSPGK (SEQ ID NO:227)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-15, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 55 037044
ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC
CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG
101 GGGCCTCAGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGACTTCAA CATTAAAGAC
151 TTCTATCTAC ACTGGGTGCG ACAGGCCCCT GGACAAGGGC TTGAGTGGAT
201 TGGAAGGATT GATCCTGAGA ATGGTGATAC TTTATATGAC CCGAAGTTCC
251 AGGACAAGGT CACCATGACC ACAGACACGT CCACCAGCAC AGCCTACATG
301 GAGCTGAGGA GCCTGAGATC TGACGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGAG
351 AGAGGCGGAT TATTTCCACG ATGGTACCTC CTACTGGTAC TTCGATGTCT
401 GGGGCCGTGG CACCCTGGTC ACCGTCTCTA GTGCCTCCAC CAAGGGCCCA
451 TCGGTCTTCC CCCTGGCGCC CTGCTCCAGG AGCACCTCCG AGAGCACAGC
501 GGCCCTGGGC TGCCTGGTCA AGGACTACTT CCCCGAACCG GTGACGGTGT
551 CGTGGAACTC AGGCGCTCTG ACCAGCGGCG TGCACACCTT CCCAGCTGTC
601 CTACAGTCCT CAGGACTCTA CTCCCTCAGC AGCGTGGTGA CCGTGCCCTC
651 CAGCAACTTC GGCACCCAGA CCTACACCTG CAACGTAGAT CACAAGCCCA
701 GCAACACCAA GGTGGACAAG ACAGTTGAGC GCAAATGTTG TGTCGAGTGC
751 CCACCGTGCC CAGCACCACC TGTGGCAGGA CCGTCAGTCT TCCTCTTCCC
801 CCCAAAACCC AAGGACACCC TCATGATCTC CCGGACCCCT GAGGTCACGT
851 GCGTGGTGGT GGACGTGAGC CACGAAGACC CCGAGGTCCA GTTCAACTGG
901 TACGTGGACG GCGTGGAGGT GCATAATGCC AAGACAAAGC CACGGGAGGA
951 GCAGTTCAAC AGCACGTTCC GTGTGGTCAG CGTCCTCACC GTTGTGCACC
1001 AGGACTGGCT GAACGGCAAG GAGTACAAGT GCAAGGTCTC CAACAAAGGC
1051 CTCCCAGCCC CCATCGAGAA AACCATCTCC AAAACCAAAG GGCAGCCCCG
1101 AGAACCACAG GTGTACACCC TGCCCCCATC CCGGGAGGAG ATGACCAAGA
1151 ACCAGGTCAG CCTGACCTGC CTGGTCAAAG GCTTCTACCC CAGCGACATC
1201 GCCGTGGAGT GGGAGAGCAA TGGGCAGCCG GAGAACAACT ACAAGACCAC
1251 ACCTCCCATG CTGGACTCCG ACGGCTCCTT CTTCCTCTAC AGCAAGCTCA
1301 CCGTGGACAA GAGCAGGTGG CAGCAGGGGA ACGTCTTCTC ATGCTCCGTG
1351 ATGCATGAGG CTCTGCACAA CCACTACACG CAGAAGAGCC TCTCCCTGTC
1401 TCCGGGTAAA (SEQ ID NO:228)
Последовательности CDR в вариабельной области тяжелой цепи Ab-15:
CDR-Hl: DFYLH (SEQ ID NO:290)
CDR-H2: RIDPENGDTLYDPKFQD (SEQ ID NO:291)
CDR-H3: EADYFHDGTSYWYFDV (SEQ ID NO :292)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-15:
CDR-Ll: SVSSTISSNHLH (SEQ ID NO:278)
CDR-L2: GTSNLAS (SEQ ID NO:279)
CDR-L3: QQWSSYPLT (SEQ ID NO:280).
Вариабельные домены Ab-15.
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи Ab-15 (без сигнальной последовательности) :
DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCSVSSTIS SNHEHWFQQK PGKAPKSLIY
GTSNLASGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QWSSYPLTFG
101 GGTKVEIK (SEQ ID NO:384)
Последовательность ДНК вариабельного домена легкой цепи Ab-15 (без сигнальной последовательности):
GACATCCAGA TGACCCAGTC ТССАТССТСС CTCTCAGCAT CCGTAGGCGA
TAGAGTTACA ATAACATGCA GCGTATCATC ААСТАТАТСА ТСАААТСАТС
101 TTCATTGGTT CCAACAGAAA CCCGGCAAAG САССТАААТС АСТТАТАТАС
151 GGCACATCAA ATCTCGCATC AGGCGTTCCT TCAAGATTTT CAGGCTCTGG
201 CTCAGGCACC GACTTTACTC ТТАСААТАТС СТСССТССАА CCCGAAGACT
251 TCGCAACCTA TTACTGTCAA CAATGGTCCT САТАТССАСТ CACATTTGGC
301 GGCGGCACAA AAGTAGAAAT TAAA (SEQ ID NO:385)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи Ab-15 (без сигнальной последовательности):
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASDFNIK DFYLHWVRQA PGQGLEWIGR
51IDPENGDTLY DPKFQDKVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAREA
101 DYFHDGTSYW YFDVWGRGTL VTVSS (SEQ ГО NO:386)
Последовательность ДНК вариабельного домена тяжелой цепи Ab-15 (без сигнальной последовательности):
GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC
AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGACTT СААСАТТААА GACTTCTATC
101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATTGGAAGG
151 ATTGATCCTG AGAATGGTGA ТАСТТТАТАТ GACCCGAAGT TCCAGGACAA
201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCACCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA
251 GGAGCCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAGGCG
301 GATTATTTCC ACGATGGTAC CTCCTACTGG TACTTCGATG TCTGGGGCCG
351 TGGCACCCTG GTCACCGTCT CTAGT (SEQ ID NO:387)
Ab-11 гуманизировали, чтобы создать Ab-16.
- 56 037044
Ab-16.
Последовательности LC и HC антитела 16 (также называемого в данном описании Ab-16) показаны ниже.
Легкая цепь Ab-16.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab16:
DIQLTQSPSF LSASVGDRVTITCRASSS1S Y1HWYQQKPG KAPKLLIYAT
SKLASGVPSR FSGSGSGTEF TLTISSLQPE DFATYYCQQW SSDPLTFGGG
101 TKYEIKRTRA APSVFIFPPS DEQLKSGTAS VVCLLNNFYPREAKVQWKVD
151NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL
201 SSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:229)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-16:
GACATCCAGT TGACCCAGTC ТССАТССТТС CTGTCTGCAT CTGTAGGAGA
CAGAGTCACC ATCACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTATAAGT ТАСАТАСАСТ
101 GGTATCAGCA AAAACCAGGG AAAGCCCCTA AGCTCCTGAT CTATGCCACA
151 TCCAACCTGG CTTCTGGGGT CCCATCAAGG TTCAGCGGCA GTGGATCTGG
201 GACAGAATTC АСТСТСАСАА TCAGCAGCCT GCAGCCTGAA GATTTTGCAA
251 CTTATTACTG TCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGCGGAGGG
301 ACCAAGGTGG AGATCAAACG TACGGTGGCT GCACCATCTG ТСТТСАТСТТ
351 CCCGCCATCT GATGAGCAGT TGAAATCTGG AACTGCCTCT GTTGTGTGCC
401 TGCTGAATAA СТТСТАТССС AGAGAGGCCA AAGTACAGTG GAAGGTGGAT
451 AACGCCCTCC AATCGGGTAA CTCCCAGGAG AGTGTCACAG AGCAGGACAG
501 CAAGGACAGC ACCTACAGCC TCAGCAGCAC CCTGACGCTG AGCAAAGCAG
551 ACTACGAGAA ACACAAAGTC TACGCCTGCG AAGTCACCCA TCAGGGCCTG
601 AGCTCGCCCG TCACAAAGAG CTTCAACAGG GGAGAGTGT (SEQ ID NO:230)
Аминокислотная последовательность LC Ab-16, включая сигнальный пептид:
MDMRVPAQLL GLLLLWLPGA RCDIQLTQSP SFLSASVGDR VTITCRASSS 51ISYIHWYQQK PGKAPKLLIY ATSNLASGVP SRFSGSGSGT EFTLTISSLQ 101 PEDFATYYCQ QWSSDPLTFG GGTKVEIKRT VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT
151 ASVVCLLNNF YPREAKVQWK VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL
201 TLSKADYEKH KVYACEVTHQ GLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO:231)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-16, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TGCTCTGGCT
CCCAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGTTGAC CCAGTCTCCA TCCTTCCTGT
101 CTGCATCTGT AGGAGACAGA GTCACCATCA CTTGCAGGGC CAGCTCAAGT
151 ATAAGTTACA TACACTGGTA TCAGCAAAAA CCAGGGAAAG CCCCTAAGCT
201 CCTGATCTAT GCCACATCCA ACCTGGCTTC TGGGGTCCCA TCAAGGTTCA
251 GCGGCAGTGG ATCTGGGACA GAATTCACTC TCACAATCAG CAGCCTGCAG
301 CCTGAAGATT TTGCAACTTA TTACTGTCAG CAGTGGAGTA GTGACCCACT
351 CACGTTCGGC GGAGGGACCA AGGTGGAGAT CAAACGTACG GTGGCTGCAC
401 CATCTGTCTT CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT
451 GCCTCTGTTG TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT
501 ACAGTGGAAG GTGGATAACG СССТССААТС GGGTAACTCC CAGGAGAGTG
551 TCACAGAGCA GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG
601 ACGCTGAGCA AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT
651 CACCCATCAG GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG
701 AGTGT (SEQ ID NO:232)
Тяжелая цепь Ab-16.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab16:
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFDIKDYYIHWVRQA PGQGLEWIGR
VDPDNGETEF APKFPGKVTM TTDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARED
101 YDGTYTWFPY WGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLV
151KDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSWTVPSSNFGTQ
201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT
251LMISRTPEVTCVWDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTF
301RVVSVLTWH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT
351LPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS
401DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID
NO:233)
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-16 без лизина на карбоксильном конце:
- 57 037044
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFDIKDYYIHWVRQA PGQGLEWIGR
VDPDNGETEF APKFPGKVTM TTDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARED
101 Ydgtytwfpy wgqgtlvtvs sastkgpsvf plapcsrsts estaalgclv
151KDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPA VLQSSGLYSLSSW TVPSSNFGTQ
201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT
251LMISRTPEVT CVWDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTF
301RVVSVLTWH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTKGQPREPQVYT
351LPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIA VE WESNGQPENN YKTTPPMLDS
401DGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID
NO:395)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-16:
GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC
AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGATT CGACATTAAG GACTACTATA
101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATCGGAAGG
151 GTTGATCCTG ACAATGGTGA GACTGAATTT GCCCCGAAGT TCCCGGGCAA
201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCATCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA
251 GCAGGCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAAGAC
301 TACGATGGTA CCTACACCTG GTTTCCTTAT TGGGGCCAAG GGACTCTGGT
351 CACCGTCTCT AGTGCCTCCA CCAAGGGCCC ATCGGTCTTC CCCCTGGCGC
401 CCTGCTCCAG GAGCACCTCC GAGAGCACAG CGGCCCTGGG CTGCCTGGTC
451 AAGGACTACT TCCCCGAACC GGTGACGGTG TCGTGGAACT CAGGCGCTCT
501 GACCAGCGGC GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTACAGTCC TCAGGACTCT
551 ACTCCCTCAG CAGCGTGGTG ACCGTGCCCT CCAGCAACTT CGGCACCCAG
601 ACCTACACCT GCAACGTAGA TCACAAGCCC AGCAACACCA AGGTGGACAA
651 GACAGTTGAG CGCAAATGTT GTGTCGAGTG CCCACCGTGC CCAGCACCAC
701 CTGTGGCAGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC
751 CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACG TGCGTGGTGG TGGACGTGAG
801 CCACGAAGAC CCCGAGGTCC AGTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG
851 TGCATAATGC CAAGACAAAG CCACGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACGTTC
901 CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTTGTGCAC CAGGACTGGC TGAACGGCAA
951 GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGG CCTCCCAGCC CCCATCGAGA
1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGGCAGCCCC GAGAACCACA GGTGTACACC
1051 CTGCCCCCAT CCCGGGAGGA GATGACCAAG AACCAGGTCA GCCTGACCTG
1101 CCTGGTCAAA GGCTTCTACC CCAGCGACAT CGCCGTGGAG TGGGAGAGCA
1151 ATGGGCAGCC GGAGAACAAC TACAAGACCA CACCTCCCAT GCTGGACTCC
1201 GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CAGCAAGCTC ACCGTGGACA AGAGCAGGTG
1251 GCAGCAGGGG AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG GCTCTGCACA
1301 ACCACTACAC GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGGTAA A (SEQ ID NO:234)
Аминокислотная последовательность HC Ab-16, включая сигнальный пептид:
MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGFDIKD
YYIHWVRQAP GQGLEWIGRV DPDNGETEFA PKFPGKVTMT TDTSISTAYM
101 ELSRLRSDDT AVYYCAREDY DGTYTWFPYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP
151 LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS
201 GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP
251 APPVAGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP evqfnwyvdg
301 VEVHNAKTKP REEQFNSTFR VVSVLTVVHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP
351IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW
401 ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA
451 LHNHYTQKSL SLSPGK (SEQ ID NO:235)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-16, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 58 037044
ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC
CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG
101 GGGCCTCAGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGGATTCGA CATTAAGGAC
151 TACTATATAC ACTGGGTGCG ACAGGCCCCT GGACAAGGGC TTGAGTGGAT
201 CGGAAGGGTT GATCCTGACA ATGGTGAGAC TGAATTTGCC CCGAAGTTCC
251 CGGGCAAGGT CACCATGACC ACAGACACGT CCATCAGCAC AGCCTACATG
301 GAGCTGAGCA GGCTGAGATC TGACGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGAG
351 AGAAGACTAC GATGGTACCT ACACCTGGTT TCCTTATTGG GGCCAAGGGA
401 CTCTGGTCAC CGTCTCTAGT GCCTCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC
451 CTGGCGCCCT GCTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCGG CCCTGGGCTG
501 CCTGGTCAAG GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG
551 GCGCTCTGAC CAGCGGCGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT ACAGTCCTCA
601 GGACTCTACT CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAACTTCGG
651 CACCCAGACC TACACCTGCA ACGTAGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG
701 TGGACAAGAC AGTTGAGCGC AAATGTTGTG TCGAGTGCCC ACCGTGCCCA
751 GCACCACCTG TGGCAGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA
801 GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACGTGC GTGGTGGTGG
851 ACGTGAGCCA CGAAGACCCC GAGGTCCAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC
901 GTGGAGGTGC ATAATGCCAA GACAAAGCCA CGGGAGGAGC AGTTCAACAG
951 CACGTTCCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT TGTGCACCAG GACTGGCTGA
1001 ACGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGGCCT CCCAGCCCCC
1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT
1101 GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC
1151 TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTACCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG
1201 GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACAC CTCCCATGCT
1251 GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA
1301 GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT
1351 CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAA (SEQ IDNO:236)
Последовательности CDR в вариабельной области тяжелой цепи Ab-16:
CDR-Hl: DYYIH (SEQ ID NO:293)
CDR-H2: RVDPDNGETEFAPKFPG (SEQ ID NO:294)
CDR-H3: EDYDGTYTWFPY (SEQ ID NO:295)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-16:
CDR-Ll: RASSSISYIH (SEQ ID NO:281)
CDR-L2: ATSNLAS (SEQ ID NO:282)
CDR-L3: QQWSSDPLT (SEQ ID NO:283)
Вариабельные домены Ab-16.
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи Ab-16 (без сигнальной последовательности) :
DIQLTQSPSF LSASVGDRVTITCRASSSIS YIHWYQQKPG KAPKLLIYAT
SNLASGVPSR FSGSGSGTEF TLTISSLQPE DFATYYCQQW SSDP1 TFGGG
101 TKVEIK (SEQ ID NO:388)
Последовательность ДНК вариабельного домена легкой цепи Ab-16 (без сигнальной последовательности):
GACATCCAGT TGACCCAGTC ТССАТССТТС CTGTCTGCAT CTGTAGGAGA
CAGAGTCACC ATCACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTATAAGT ТАСАТАСАСТ
101 GGTATCAGCA AAAACCAGGG AAAGCCCCTA AGCTCCTGAT CTATGCCACA
151 TCCAACCTGG CTTCTGGGGT CCCATCAAGG TTCAGCGGCA GTGGATCTGG
201 GACAGAATTC АСТСТСАСАА TCAGCAGCCT GCAGCCTGAA GATTTTGCAA
251 CTTATTACTG TCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGCGGAGGG
301 ACCAAGGTGG AGATCAAA (SEQ ID NO:389)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи Ab-16 (без сигнальной последовательности):
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFDIKDYYIHWVRQA PGQGLEWIGR
VDPDNGETEF APKFPGKVTM TTDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARED
101 YDGTYTWFPY WGQGTLVTVS S (SEQIDNO:390)
Последовательность ДНК вариабельного домена тяжелой цепи Ab-16 (без сигнальной последовательности):
GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC
AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGATT CGACATTAAG GACTACTATA
101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATCGGAAGG
151 GTTGATCCTG ACAATGGTGA GACTGAATTT GCCCCGAAGT TCCCGGGCAA
201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCATCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA
251 GCAGGCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAAGAC
301 TACGATGGTA CCTACACCTG GTTTCCTTAT TGGGGCCAAG GGACTCTGGT
351 CACCGTCTCT AGT (SEQ ID NO:391)
Дополнительные антитела названы в данном описании антителами 17-22 (также называемые в дан- 59 037044 ном описании Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21 и Ab-22). Константная область каппа для всех областей
VK Ab-17, Ab-19 и Ab-21 показана ниже:
TDAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQD SKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO:323)
Константная область тяжелой цепи для всех VH-областей антител 17, 19 и 21 показана ниже: AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQS DLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIF PPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRS VSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEA GNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK (SEQ ID NO:324)
В следующих аминокислотных последовательностях антител заключенные в прямоугольники аминокислоты означают определяющие комплементарность области (CDR), а подчеркнутые аминокислоты относятся к сигнальному пептиду.
Ab-17.
Аминокислотная последовательность LC Ab-17, включая сигнальный пептид:
MDFOVOIFSFMLISVTVILSSGEIVLTOSPALMAASPGEKVTITCSVSSblSSSNLHWSQOK SGTSPKLWIYGTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWTTTYTFG SGTKLELKR (SEQ ID NO:299)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-17, включая сигнальный пептид: ATGGATTTTCAGGTGCAGATTTTCAGCTTCATGCTAATCAGTGTCACAGTCATATTG TCCAGTGGAGAAATTGTGCTCACCCAGTCTCCAGCACTCATGGCTGCATCTCCAGGG GAGAAGGTCACCATCACCTGCAGTGTCAGCTCGAGTATAAGTTCCAGCAACTTACA CTGGTCCCAGCAGAAGTCAGGAACCTCCCCCAAACTCTGGATTTATGGCACATCCA ACCTTGCTTCTGGAGTCCCTGTTCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACCTCTTATTC TCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGTCAACAGT GGACTACTACGTATACGTTCGGATCGGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGT (SEQ ID NO:300)
Аминокислотная последовательность HC Ab-17, включая сигнальный пептид:
MGWNWIIFFLMAVVTGVNSEVQLRQSGADLVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVK QRPEQGLEWIGRIDPDNGESTYVPKFQGKATITADTSSNTAYLQLRSLTSEDTAIYYCGR FGEDYGDYYAVDYWGQGTSVTVSS (SEQ IDNO:301)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-17, включая сигнальный пептид: ATGGGATGGAACTGGATCATCTTCTTCCTGATGGCAGTGGTTACAGGGGTCAATTCA GAGGTGCAGTTGCGGCAGTCTGGGGCAGACCTTGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTCAA GTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTACTATATACACTGGGTGAA GCAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGATAATGGTG AAAGTACATATGTCCCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCA TCCAACACAGCCTACCTACAACTCAGAAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCATCTA
TTATTGTGGGAGAGAGGGGCTCGACTATGGTGACTACTATGCTGTGGACTACTGGG GTCAAGGAACCTCGGTCACAGTCTCGAGC (SEQ ID NO:302)
Ab-17 гуманизировали, чтобы создать Ab-18.
Ab-18.
Аминокислотная последовательность LC Ab-18, включая сигнальный пептид:
MDMRVPAOLLGLLLLWLPGARCDIOLTOSPSFLSASVGDRVTITCSVSSSISSSNLHWYO QKPGKAPKLLIYGTSNL·ASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQWTΊTYTF GQGTKLEIKR (SEQ ID NO:303) Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-18, включая сигнальный пептид: ATGGATATGCGCGTGCCGGCGCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGCCGGG CGCGCGCTGCGATATTCAGCTGACCCAGAGCCCGAGCTTTCTGAGCGCGAGCGTGG GCGATCGCGTGACCATTACCTGCAGCGTGAGCAGCAGCATTAGCAGCAGCAACCTG CATTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATGGCACCAG CAACCTGGCGAGCGGCGTGCCGAGCCGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGAAT TTACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGC AGTGGACCACCACCTATACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAAATTAAACGT (SEQ ID NO:304)
Аминокислотная последовательность НС Ab-18, включая сигнальный пептид:
MDWTWSILFLVAAPTGAI-ISEVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKbYYIHWVR QAPGQGLEWMGRIDPDNGESTYVPKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYY CAREGLDYGDYYAVDYWGQGTLVTVSS (SEQ IDNO:305)
Последовательность нуклеиновой кислоты НС Ab-18, включая сигнальный пептид: ATGGATTGGACCTGGAGCATTCTGTTTCTGGTGGCGGCGCCGACCGGCGCGCATAG CGAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTG AAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATTCATTGGGT GCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCCGCATTGATCCGGATAACG GCGAAAGCACCTATGTGCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACC AGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGT GTATTATTGCGCGCGCGAAGGCCTGGATTATGGCGATTATTATGCGGTGGATTATTG GGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ IDNO.-306)
- 60 037044
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи Ab-18 (без сигнальной последовательности):
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCSVSSSISSSNLHWYQQKPGKAPKLLIYGTSNLASGVPS
RFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQWTTTYTFGQGTKLEIKR (SEQ ID NO:368)
Последовательность ДНК вариабельного домена легкой цепи Ab-18 (без сигнальной последовательности):
GATATTCAGCTGACCCAGAGCCCGAGCTTTCTGAGCGCGAGCGTGGGCGATCGCGT GACCATTACCTGCAGCGTGAGCAGCAGCATTAGCAGCAGCAACCTGCATTGGTATC AGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATGGCACCAGCAACCTGGCG AGCGGCGTGCCGAGCCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGAATTTACCCTGAC CATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGTGGACCA CCACCTATACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAAATTAAACGT (SEQ ID NO:369)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи Ab-18 (без сигнальной последовательности):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDYY1HWVRQAPGQGLEWMGRIDPDNGE STYVPKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAREGLDYGDYYAVDYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO:370)
Последовательность ДНК вариабельного домена тяжелой цепи Ab-18 (без сигнальной последовательности):
GAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGA AAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATTCATTGGGTG CGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCCGCATTGATCCGGATAACGG CGAAAGCACCTATGTGCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACCA GCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGTG TATTATTGCGCGCGCGAAGGCCTGGATTATGGCGATTATTATGCGGTGGATTATTGG GGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO:371)
Ab-19.
Аминокислотная последовательность LC Ab-19, включая сигнальный пептид:
MMSSAOFLGLLLLCFOGTRCDIQMTOTTSSLSASLGDRVNISCRASODISSYLNWYOOK PDGTVKLLIY STSRLN SGVPSRFSGSGSGTD YSLTISNLAQEDIATYFCQQDIKHPTFGGG TKLELKR (SEQ ID NO:307)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-19, включая сигнальный пептид:
ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGAT GTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAG TCAACATCAGCTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAGTTATTTAAACTGGTATCAG CAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACTCCACATCAAGATTAAACTC AGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGATTATTCTCTCACTAT TAGCAACCTGGCACAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGATATTAAGC ATCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGTTGGAGCTGAAACGT (SEQ ID NO:308)
Аминокислотная последовательность HC Ab-19, включая сигнальный пептид:
MEWIWIFLFLLSGTAGVHSEVOLOQSGPELVKPGASVKMSCKASGFTFTDYIMHWVKO
KPGQGLEWIGYINPYNDDTEYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMDLSSLTSEGSAVYYCA RSIYYYDAPFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:309)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-19, включая сигнальный пептид:
ATGGAATGGATCTGGATATTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCT GAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAA GATGTCCTGCAAGGCTTCTGGGTTCACATTCACTGACTACATTATGCACTGGGTGAA GCAGAAGCCTGGGCAGGGCCTTGAGTGGATTGGATATATTAATCCTTACAATGATG ATACTGAATACAATGAGAAGTTCAAAGGCAAGGCCACACTGACTTCAGACAAATCC TCCAGCACAGCCTACATGGATCTCAGCAGTCTGACCTCTGAGGGCTCTGCGGTCTAT TACTGTGCAAGATCGATTTATTACTACGATGCCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGG ACTCTGGTCACAGTCTCGAGC (SEQ ID NO:310)
Ab-19 гуманизировали, чтобы создать антитело 20 (также называемое в данном описании Ab-20) и антитело 23 (также называемое в данном описании Ab-23).
Ab-20.
IqG4-вариант.
Аминокислотная последовательность LC Ab-20, включая сигнальный пептид:
MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSYLNWYOQK PGKAPKLLIYSTSRLNSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQDIKHPTFGQG TKVEIKR(SEQIDNO:311)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-20, включая сигнальный пептид:
ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGAT GTGATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGTGACCGTG TCACCATCACTTGCCGCGCAAGTCAGGATATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGC AGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATTCTACTTCCCGTTTGAATAGTG GGGTCCCATCACGCTTCAGTGGCAGTGGCTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCA GCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGGATATTAAACACC CTACGTTCGGTCAAGGCACCAAGGTGGAGATCAAACGT (SEQ ID NO:312)
- 61 037044
Аминокислотная последовательность HC Ab-20, включая сигнальный пептид:
MEWIWIFLFLLSGTAGVHSEVOLVOSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFTDYIMHWVRO APGQGLEWMGYINPYNDDTEYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCA RSIYYYDAPFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:313) '
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-20, включая сигнальный пептид:
ATGGAATGGATCTGGATATTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCT GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA GGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTTTACCTTCACCGACTATATTATGCACTGGGTGCG TCAGGCCCCTGGTCAAGGGCTTGAGTGGATGGGCTATATCAACCCTTATAATGATG ACACCGAATACAACGAGAAGTTCAAGGGCCGTGTCACGATTACCGCGGACAAATCC ACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGCGCTCTGAGGACACGGCCGTGTA TTACTGTGCGCGTTCGATTTATTACTACGATGCCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGG GACTCTGGTCACAGTCTCGAGC (SEQ ID NO:349)
Ab-23.
IqG2-вариант. Легкая цепь.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab23:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCRASQDIS SYLNWYQQKP GKAPKLLIYS
TSRLNSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ DIKHPTFGQG
101 TKVEIKRTK4 APSVFIFPPS DEQLKSGTAS VVCLLNNFYPREAKVQWKVD
151NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL
201SSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:341)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-23:
GACATCCAGA TGACCCAGTC ТССАТССТСС CTGTCTGCAT CTGTAGGTGA
CCGTGTCACC ATCACTTGCC GCGCAAGTCA GGATATTAGC AGCTATTTAA
101 ATTGGTATCA GCAGAAACCA GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATTCT
151 ACTTCCCGTT TGAATAGTGG GGTCCCATCA CGCTTCAGTG GCAGTGGCTC
201 TGGGACAGAT ТТСАСТСТСА CCATCAGCAG TCTGCAACCT GAAGATTTTG
251 СААСТТАСТА CTGTCAACAG GATATTAAAC ACCCTACGTT CGGTCAAGGC
301 ACCAAGGTGG AGATCAAACG TACGGTGGCT GCACCATCTG ТСТТСАТСТТ
351 CCCGCCATCT GATGAGCAGT TGAAATCTGG AACTGCCTCT GTTGTGTGCC
401 TGCTGAATAA СТТСТАТССС AGAGAGGCCA AAGTACAGTG GAAGGTGGAT
451 AACGCCCTCC AATCGGGTAA CTCCCAGGAG AGTGTCACAG AGCAGGACAG
501 CAAGGACAGC ACCTACAGCC TCAGCAGCAC CCTGACGCTG AGCAAAGCAG
551 ACTACGAGAA ACACAAAGTC TACGCCTGCG AAGTCACCCA TCAGGGCCTG
601 AGCTCGCCCG TCACAAAGAG CTTCAACAGG GGAGAGTGT (SEQ ID NO:342)
Аминокислотная последовательность LC Ab-23, включая сигнальный пептид:
MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RCDIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRASQD
ISSYLNWYQQ KPGKAPKLLIYSTSRLNSGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL
101 QPEDFATYYC QQDIKHPTFG QGTKVEIKRT VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT
151 ASVVCLLNNF YPREAKVQWK VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL
201 TLSKADYEKH KVYACEVTHQ GLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO:343)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-23, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
ATGGACATGA GGGTGCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TGCTGTGGCT
GAGAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT
101 CTGCATCTGT AGGTGACCGT GTCACCATCA CTTGCCGCGC AAGTCAGGAT
151 ATTAGCAGCT ATTTAAATTG GTATCAGCAG AAACCAGGGA AAGCCCCTAA
201 GCTCCTGATC ТАТТСТАСТТ CCCGTTTGAA TAGTGGGGTC CCATCACGCT
251 TCAGTGGCAG TGGCTCTGGG ACAGATTTCA СТСТСАССАТ CAGCAGTCTG
301 CAACCTGAAG ATTTTGCAAC TTACTACTGT CAACAGGATA ТТАААСАССС
351 TACGTTCGGT CAAGGCACCA AGGTGGAGAT CAAACGTACG GTGGCTGCAC
401 CATCTGTCTT CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT
451 GCCTCTGTTG TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT
501 ACAGTGGAAG GTGGATAACG СССТССААТС GGGTAACTCC CAGGAGAGTG
551 TCACAGAGCA GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG
601 ACGCTGAGCA AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT
651 CACCCATCAG GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG
701 AGTGT (SEQ ID NO:344)
Тяжелая цепь.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab23:
- 62 037044
EVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGFTFT DY1MHWVRQA PGQGLEWMGY 51INPYNDDTEY NEKFKGRVTITADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSI 101 YYYDAPFAYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK 151DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPA VLQSS GLYSLSSWT VPSSNFGTQT 201 YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP APPVAGPSVFLFPPKPKDTL 251 MISRTPEVTC WVDVSHEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTFR
301 WSVLTVVHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKG QPREPQVYTL 351PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD 401 GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK(SYQ ID NO:345)
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-23 без лизина на карбоксильном конце:
EVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGFTFT DYIMHWVRQA PGQGLEWMGY 51 INPYNDDTEY NEKFKGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSI 101 YYYDAPFAYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK 151 DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPA VLQSS GLYSLSSWT VPSSNFGTQT 201 YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP APPVAGPSVF LFPPKPKDTL 251 MISRTPEVTC WVDVSHEDPEVQFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQFNSTFR
301 WSVLTVVHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP IEKTISKTKG QPREPQVYTL
351 PPSREEMTKN Q VSLTCL VKG FYPSDIA VEW ESNGQPENNY KTTPPMLDSD 401 GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPG (SEQ ID NO:396)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-23:
GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGTCCTC 51 GGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGTTT TACCTTCACC GACTATATTA 101 TGCACTGGGT GCGTCAGGCC CCTGGTCAAG GGCTTGAGTG GATGGGCTAT 151 ATCAACCCTT ATAATGATGA CACCGAATAC AACGAGAAGT TCAAGGGCCG 201 TGTCACGATT ACCGCGGACA AATCCACGAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GCAGCCTGCG CTCTGAGGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GCGTTCGATT 301 TATTACTACG ATGCCCCGTT TGCTTACTGG GGCCAAGGGA CTCTGGTCAC 351 CGTCTCTAGT GCCTCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC CTGGCGCCCT 401 GCTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCGG CCCTGGGCTG CCTGGTCAAG 451 GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG GCGCTCTGAC 501 CAGCGGCGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT ACAGTCCTCA GGACTCTACT 551 CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAACTTCGG CACCCAGACC 601 TACACCTGCA ACGTAGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG TGGACAAGAC 651 AGTTGAGCGC AAATGTTGTG TCGAGTGCCC ACCGTGCCCA GCACCACCTG 701 TGGCAGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA GGACACCCTC 751 ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACGTGC GTGGTGGTGG ACGTGAGCCA 801 CGAAGACCCC GAGGTCCAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC GTGGAGGTGC 851 ATAATGCCAA GACAAAGCCA CGGGAGGAGC AGTTCAACAG CACGTTCCGT 901 GTGGTCAGCG TCCTCACCGT TGTGCACCAG GACTGGCTGA ACGGCAAGGA 951 GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGGCCT CCCAGCCCCC ATCGAGAAAA 1001 CCATCTCCAA AACCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT GTACACCCTG 1051 CCCCCATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC TGACCTGCCT 1101 GGTCAAAGGC TTCTACCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG GAGAGCAATG 1151 GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACAC CTCCCATGCT GGACTCCGAC 1201 GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA GCAGGTGGCA 1251 GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT CTGCACAACC 1301 ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAA (SEQ ID NO:346)
Аминокислотная последовательность HC Ab-23, включая сигнальный пептид:
MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGSSVKVS CKASGFTFTD 51 YIMHWVRQAP GQGLEWMGYINPYNDDTEYN EKFKGRVTIT ADKSTSTAYM 101 ELSSLRSEDT AVYYCARSIY YYDAPFAYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL 151 APCSRSTSES TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG 201 LYSLSSVVTV PSSNFGTQTY TCNVDHKPSN TKVDKTVERK CCVECPPCPA 251 PPVAGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VQFNWYVDGV 301 EVHNAKTKPR EEQFNSTFRV VSVLTVVHQD WLNGKEYKCK VSNKGLPAPI 351 EKTISKTKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE 401 SNGQPENNYK TTPPMLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL 451 HNHYTQKSLS LSPGK (SEQ ID NO:347)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-23, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 63 037044
ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GGTCCTCGGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGGTTTTAC CTTCACCGAC 151 TATATTATGC ACTGGGTGCG TCAGGCCCCT GGTCAAGGGC TTGAGTGGAT 201 GGGCTATATC AACCCTTATA ATGATGACAC CGAATACAAC GAGAAGTTCA 251 AGGGCCGTGT CACGATTACC GCGGACAAAT CCACGAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTGAGCA GCCTGCGCTC TGAGGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGCG 351 TTCGATTTAT TACTACGATG CCCCGTTTGC TTACTGGGGC CAAGGGACTC 401 TGGTCACCGT CTCTAGTGCC TCCACCAAGG GCCCATCGGT CTTCCCCCTG 451 GCGCCCTGCT CCAGGAGCAC CTCCGAGAGC ACAGCGGCCC TGGGCTGCCT 501 GGTCAAGGAC TACTTCCCCG AACCGGTGAC GGTGTCGTGG AACTCAGGCG 551 CTCTGACCAG CGGCGTGCAC ACCTTCCCAG CTGTCCTACA GTCCTCAGGA
601 CTCTACTCCC TCAGCAGCGT GGTGACCGTG CCCTCCAGCA ACTTCGGCAC 651 CCAGACCTAC ACCTGCAACG TAGATCACAA GCCCAGCAAC ACCAAGGTGG 701 ACAAGACAGT TGAGCGCAAA TGTTGTGTCG AGTGCCCACC GTGCCCAGCA 751 CCACCTGTGG CAGGACCGTC AGTCTTCCTC TTCCCCCCAA AACCCAAGGA 801 CACCCTCATG ATCTCCCGGA CCCCTGAGGT CACGTGCGTG GTGGTGGACG
851 TGAGCCACGA AGACCCCGAG GTCCAGTTCA ACTGGTACGT GGACGGCGTG 901 GAGGTGCATA ATGCCAAGAC AAAGCCACGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC 951 GTTCCGTGTG GTCAGCGTCC TCACCGTTGT GCACCAGGAC TGGCTGAACG 1001 GCAAGGAGTA CAAGTGCAAG GTCTCCAACA AAGGCCTCCC AGCCCCCATC 1051 GAGAAAACCA TCTCCAAAAC CAAAGGGCAG CCCCGAGAAC CACAGGTGTA 1101 CACCCTGCCC CCATCCCGGG AGGAGATGAC CAAGAACCAG GTCAGCCTGA 1151 CCTGCCTGGT CAAAGGCTTC TACCCCAGCG ACATCGCCGT GGAGTGGGAG 1201 AGCAATGGGC AGCCGGAGAA CAACTACAAG ACCACACCTC CCATGCTGGA 1251 CTCCGACGGC TCCTTCTTCC TCTACAGCAA GCTCACCGTG GACAAGAGCA 1301 GGTGGCAGCA GGGGAACGTC TTCTCATGCT CCGTGATGCA TGAGGCTCTG
1351 CACAACCACT ACACGCAGAA GAGCCTCTCC CTGTCTCCGG GTAAA (SEQ ID
NO:348)
Последовательности CDR (определяющей комплементарность области) в вариабельной области тяжелой цепи Ab-23 показаны ниже.
CDR-Hl: DYIMH (SEQ ID NO:269)
CDR-H2: YINPYNDDTEYNEKFKG (SEQ ID NO:270)
CDR-H3: SIYYYDAPFAY (SEQ ID NO:271)
Последовательности CDR вариабельной области легкой цепи Ab-23: CDR-L1: RASQDISSYLN (SEQ ID NO:239)
CDR-L2: STSRLNS (SEQ ID NO:240)
CDR-L3: QQDIKHPT (SEQ ID NO:241)
Вариабельные домены Ab-23.
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи Ab-23 (без сигнальной последовательности) :
DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCRASQDIS SYLNWYQQKP GKAPKLLIYS TSRLNSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ DIKHPTFGQG TKVEIK (SEQ ID NO:364)
Последовательность ДНК вариабельного домена легкой цепи Ab-23 (без сигнальной последовательности):
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGTGACCGTGTC АСС ATCACTTGCC GCGCAAGTCA GGATATTAGC AGCTATTTAAATTGGTATCA GCAGAAACCA GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATTCTACTTCCCGTT TGAATAGTGG GGTCCCATCA CGCTTCAGTG GCAGTGGCTCTGGGACAGAT ТТСАСТСТСА CCATCAGCAG TCTGCAACCT GAAGATTTTGCAACTTACTA CTGTCAACAG GATATTAAAC ACCCTACGTT CGGTCAAGGCACCAAGGTGG AGATCAAA (SEQ ID NO:365)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи Ab-23 (без сигнальной последовательности):
EVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGFTFT DYIMHWVRQA
PGQGLEWMGYINPYNDDTEY NEKFKGRVTITADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSIYYYDAPFAYW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO:366)
Последовательность ДНК вариабельного домена тяжелой цепи Ab-23 (без сигнальной последовательности):
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA GGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGTTT TACCTTCACC GACTATATTATGCACTGGGT GCGTCAGGCC CCTGGTCAAG GGCTTGAGTG GATGGGCTATATCAACCCTT ATAATGATGA CACCGAATAC AACGAGAAGT TCAAGGGCCGTGTCACGATT ACCGCGGACA AATCCACGAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGAGCAGCCTGCG CTCTGAGGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GCGTTCGATTTATTACTACG
ATGCCCCGTT TGCTTACTGG GGCCAAGGGACTCTGGTCACCGTCTCTAGT (SEQ ID NO:367)
Ab-21.
Аминокислотная последовательность LC Ab-21, включая сигнальный пептид:
- 64 037044
MKSOTOVFVYMLLWLSGVEGDIVMTOSHKFMSTSVGDRVTITCKASODVFTAVAWYO QKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYPLT FGAGTKLELKR (SEQ ID NO:315)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-21, включая сигнальный пептид:
ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTTGTATACATGTTGCTGTGGTTGTCTGGTGTTGAA GGAGACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACGTCAGTAGGAGACAG GGTCACCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTCTTTACTGCTGTAGCCTGGTATCA ACAGAAACCAGGACAATCTCCTAAACTACTGATTTACTGGGCATCCACCCGGCACA CTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCA TTAGCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGATTATTTCTGTCAACAATATAGCAGCT ATCCTCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGTTGGAGCTGAAACGT (SEQ ID NO:316)
Аминокислотная последовательность HC Ab-21, включая сигнальный пептид:
MGWNWIIFFLMAVVTGVNSEVOLOOSGAELVRPGALVKLSCKASGFNIKDYYMHWV
KQRPEQGLEWIGR1DPENGDIIYDPKFQGKASITTDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCA YDAGDPAWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:317)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-21, включая сигнальный пептид:
ATGGGATGGAACTGGATCATCTTCTTCCTGATGGCAGTGGTTACAGGGGTCAATTCA GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTTAGTCAA GTTGTCCTGCAAAGCTTCTGGCTTCAATATTAAAGACTACTATATGCACTGGGTGAA GCAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGAATGGTG ATATTATATATGACCCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCAGTATAACAACAGACACATCC TCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACGTCTGAGGACACTGCCGTCTAT TACTGTGCTTACGATGCTGGTGACCCCGCCTGGTTTACTTACTGGGGCCAAGGGACT CTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO:318)
Ab-21 гуманизировали, получая Ab-22.
Ab-22.
Аминокислотная последовательность LC Ab-22, включая сигнальный пептид:
MDMRVPAOLLGLLLLWLRGARCDIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVFTAVAW
YQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYP LTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO:319)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-22, включая сигнальный пептид:
ATGGATATGCGCGTGCCGGCGCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGCGCGG CGCGCGCTGCGATATCCAGATGACCCAGAGCCCGAGCAGCCTGAGCGCGAGCGTGG GCGATCGCGTGACCATTACCTGCAAAGCGAGCCAGGATGTGTTTACCGCGGTGGCG TGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATTGGGCGAGCAC CCGCCATACCGGCGTGCCGAGTCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTA CCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGT ATAGCAGCTATCCGCTGACCTTTGGCGGCGGCACCAAAGTGGAAATTAAACGT (SEQ ID NO:320)
Аминокислотная последовательность HC Ab-22, включая сигнальный пептид:
MDWTWSILFLVAAPTGAHSEVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDYYMIIWV RQAPGQGLEWIGR1DPENGDIIYDPKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYC AYDAGDPAWFTYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:321)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-22, включая сигнальный пептид:
ATGGATTGGACCTGGAGCATTCTGTTTCTGGTGGCGGCGCCGACCGGCGCGCATAG CGAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTG AAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATGCATTGGGT GCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCCGCATTGATCCGGAAAAC GGCGATATTATTTATGATCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACC AGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGT GTATTATTGCGCGTATGATGCGGGCGATCCGGCGTGGTTTACCTATTGGGGCCAGGG CACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO:322)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи Ab-22 (без сигнальной последовательности):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCKASQDVF TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSSYPLTFGG GTKVEIKR (SEQ ID NO:336)
Последовательность ДНК вариабельного домена легкой цепи Ab-22 (без сигнальной последовательности):
GATATCCAGATGACCCAGAGCCCGAGCAGCCTGAGCGCGAGCGTGGGCGATCGCGT GACCATTACCTGCAAAGCGAGCCAGGATGTGTTTACCGCGGTGGCGTGGTATCAGC AGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATTGGGCGAGCACCCGCCATACC GGCGTGCCGAGTCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCAT TAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGTATAGCAGCT ATCCGCTGACCTTTGGCGGCGGCACCAAAGTGGAAATTAAACGT (SEQ ID NO:337)
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи Ab-22 (без сигнальной последовательности):
- 65 037044
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFNIK DYYMHWVRQA PGQGLEWIGRIDPENGDIIY DPKFQGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAYDAGDPAWFTYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO:338)
Последовательность ДНК вариабельного домена тяжелой цепи Ab-22 (без сигнальной последовательности):
GAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGA AAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATGCATTGGGTG CGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCCGCATTGATCCGGAAAACG GCGATATTATTTATGATCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACCA GCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGTG TATTATTGCGCGTATGATGCGGGCGATCCGGCGTGGTTTACCTATTGGGGCCAGGGC ACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ IDNO.-339).
Для Ab-18, Ab-20 и Ab-22 константная область легкой цепи каппа человека показана ниже:
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC* (SEQ IDNO:325) и константная область тяжелой цепи гамма-4 человека показана ниже:
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSR WQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK* (SEQ ID NO:326)
Шарнирная область содержит мутацию Ser-241-Pro, чтобы повысить стабильность шарнира (Angal S. et al., (1993), Mol. Immunol, 30(1), 105-108).
Ab-24.
Последовательности LC и HC антитела 24 (также называемого в данном описании Ab-24) показаны ниже.
Легкая цепь.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab24:
DIVLTQSPAS LAVSLGQRATIACKASQSVD YDGTSYMNWY QQKPGQPPKL
LIYAASNLES EIPARFSGTG SGTDFTLNIH PVEEEDITTY YCQQSNEDPF
101 TFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLT SGGASVVCFL NNFYPKDINV
151 KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS STLTLTKDEY ERHNSYTCEA
201 THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQ ID NO:350)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) LC Ab-24:
GACATTGTGT TGACCCAGTC TCCAGCTTCT TTGGCTGTGT CTCTAGGGCA
GAGGGCCACC ATCGCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT TATGATGGTA
101 CTAGTTATAT GAATTGGTAC CAACAGAAAC CAGGACAGCC АСССАААСТС
151 CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GAGATCCCAG CCAGGTTTAG
201 TGGCACTGGG TCTGGGACAG АСТТСАСССТ СААСАТССАТ CCTGTGGAGG
251 AGGAGGATAT САСААССТАТ TACTGTCAGC AAAGTAATGA GGATCCGTTC
301 ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GTTGGAAATA AAACGGGCTG ATGCTGCACC
351 AACTGTATCC АТСТТСССАС CATCCAGTGA GCAGTTAACA TCTGGAGGTG
401 CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG ААСААСТТСТ ACCCCAAAGA CATCAATGTC
451 AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC TGAACAGTTG 501 GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC AGCACCCTCA 551 CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC CTGTGAGGCC 601 ACTCACAAGA САТСААСТТС ACCCATTGTC AAGAGCTTCA ACAGGAATGA 651 GTGTTAG (SEQ ID NO.G54)
Аминокислотная последовательность LC Ab-24, включая сигнальный пептид:
METDTILLWV LLLWVPGSTG DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT IACKASQSVD
YDGTSYMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNLES EIPARFSGTG SGTDFTLNIH
101 PVEEEDITTY YCQQSNEDPF TFGGGTKLEI KRADAAPTVS IFPPSSEQLT
151 SGGAS VVCFL NNFYPKDINV KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS
201 STLTLTKDEY ERHNSYTCEA THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQ ID NOG55)
Последовательность нуклеиновой кислоты LC Ab-24, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 66 037044
ATGGAGACAG ACACAATCCT GCTATGGGTG CTGCTGCTCT GGGTTCCAGG
CTCCACTGGT GACATTGTGT TGACCCAGTC TCCAGCTTCT TTGGCTGTGT
101 CTCTAGGGCA GAGGGCCACC ATCGCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT
151 TATGATGGTA CTAGTTATAT GAATTGGTAC CAACAGAAAC CAGGACAGCC
201 ACCCAAACTC CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GAGATCCCAG
251 CCAGGTTTAG TGGCACTGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT
301 CCTGTGGAGG AGGAGGATAT CACAACCTAT TACTGTCAGC AAAGTAATGA
351 GGATCCGTTC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GTTGGAAATA AAACGGGCTG
401 ATGCTGCACC AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA
451 TCTGGAGGTG CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA
501 CATCAATGTC AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC
551 TGAACAGTTG GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC
601 AGCACCCTCA CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC
651 CTGTGAGGCC ACTCACAAGA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA
701 ACAGGAATGA GTGTTAG (SEQ ID NO:356)
Тяжелая цепь Ab-24.
Аминокислотная последовательность зрелой формы (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab24:
QVQLQQPGTE LVRPGTSVKL SCKASGYIFT TYWMNWVKQR PGQGLEWIGM
IHPSASEIRL DQKFKDKATL TLDKSSSTAY MHLSGPTSVD SAVYYCARSG
101 EWGSMDYiWGQ GTSVTVSSAK TTPPSVYPLA PGSAAQTNSM VTLGCLVKGY
151 FPEPVTVTWN SGSLSSGVHT FPA VLQSDLY TLSSSVTVPS STWPSETVTC
201 NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP EVSSVFIFPPKPKDVLTITL
251 TPKVTCVWDISKDDPEVQF SWFVDDVEVH TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE
301 LPIMHQDWLN GKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKA PQVYTIPPPK
351 EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ PIMDTDGSYF
401 IYSKLNVQKS NWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSP GK (SEQ ID NO:357)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая зрелую форму (с удаленным сигнальным пептидом) HC Ab-24:
CAGGTCCAAC TACAGCAGCC TGGGACTGAG CTGGTGAGGC CTGGAACTTC
AGTGAAGTTG TCCTGTAAGG CTTCTGGCTA САТСТТСАСС ACCTACTGGA
101 TGAACTGGGT GAAACAGAGG CCTGGACAAG GCCTTGAGTG GATTGGCATG
151 АТТСАТССТТ CCGCAAGTGA AATTAGGTTG GATCAGAAAT TCAAGGACAA
201 GGCCACATTG ACTCTTGACA AATCCTCCAG CACAGCCTAT ATGCACCTCA
251 GCGGCCCGAC ATCTGTGGAT TCTGCGGTCT ATTACTGTGC AAGATCAGGG
301 GAATGGGGGT CTATGGACTA CTGGGGTCAA GGAACCTCAG TCACCGTCTC
351 CTCAGCCAAA ACGACACCCC CATCTGTCTA TCCACTGGCC CCTGGATCTG
401 CTGCCCAAAC TAACTCCATG GTGACCCTGG GATGCCTGGT CAAGGGCTAT
451 TTCCCTGAGC CAGTGACAGT GACCTGGAAC TCTGGATCCC TGTCCAGCGG
501 TGTGCACACC TTCCCAGCTG TCCTGCAGTC TGACCTCTAC ACTCTGAGCA
551 GCTCAGTGAC TGTCCCCTCC AGCACCTGGC CCAGCGAGAC CGTCACCTGC
601 AACGTTGCCC ACCCGGCCAG CAGCACCAAG GTGGACAAGA AAATTGTGCC
651 CAGGGATTGT GGTTGTAAGC CTTGCATATG TACAGTCCCA GAAGTATCAT
701 CTGTCTTCAT СТТССССССА AAGCCCAAGG ATGTGCTCAC CATTACTCTG
751 ACTCCTAAGG TCACGTGTGT TGTGGTAGAC ATCAGCAAGG ATGATCCCGA
801 GGTCCAGTTC AGCTGGTTTG TAGATGATGT GGAGGTGCAC ACAGCTCAGA
851 CGCAACCCCG GGAGGAGCAG TTCAACAGCA CTTTCCGCTC AGTCAGTGAA
901 СТТСССАТСА TGCACCAGGA CTGGCTCAAT GGCAAGGAGT TCAAATGCAG
951 GGTCAACAGT GCAGCTTTCC CTGCCCCCAT CGAGAAAACC АТСТССАААА
1001 CCAAAGGCAG ACCGAAGGCT CCACAGGTGT АСАССАТТСС ACCTCCCAAG
1051 GAGCAGATGG CCAAGGATAA AGTCAGTCTG ACCTGCATGA TAACAGACTT
1101 CTTCCCTGAA GACATTACTG TGGAGTGGCA GTGGAATGGG CAGCCAGCGG
1151 AGAACTACA A GAAC ACTCAG ССС ATCATGG AC AC AGATGG СТСТТАСТТС
1201 ATCTACAGCA AGCTCAATGT GCAGAAGAGC AACTGGGAGG CAGGAAATAC
1251 TTTCACCTGC TCTGTGTTAC ATGAGGGCCT GCACAACCAC CATACTGAGA
1301 AGAGCCTCTC ССАСТСТССТ GGTAAATGA (SEQ ID NO:361)
Аминокислотная последовательность HC Ab-24, включая сигнальный пептид:
MGWSSIILFL VATATGVHSQ VQLQQPGTEL VRPGTSVKLS CKASGYIFTT
YWMNWVKQRP GQGLEWIGMIHPSASEIRLD QKFKDKATLT LDKSSSTAYM
101 HLSGPTSVDS AVYYCARSGE WGSMDYWGQG TSVTVSSAKT TPPSVYPLAP
151 GSAAQTNSMV TLGCLVKGYF PEPVTVTWNS GSLSSGVHTF PAVLQSDLYT
201 LSSSVTVPSS TWPSETVTCN VAHPASSTKV DKKIVPRDCG CKPCICTVPE
251 VSSVFIFPPK PKDVLTITLT PKVTCVVVDI SKDDPEVQFS WFVDDVEVHT
301 AQTQPREEQF NSTFRSVSEL PIMHQDWLNG KEFKCRVNSA AFPAPIEKTI
351 SKTKGRPKAP QVYTIPPPKE QMAKDKVSLT CMITDFFPEDITVEWQWNGQ
401 PAENYKNTQPIMDTDGSYFIYSKLNVQKSN WEAGNTFTCS VLHEGLHNHH
451 TEKSLSHSPG К (SEQ ID NO:362)
Последовательность нуклеиновой кислоты HC Ab-24, включая последовательность, кодирующую сигнальный пептид:
- 67 037044
ATGGGATGGA GCTCTATCAT CCTCTTCTTG GTAGCAACAG CTACAGGTGT
CCACTCCCAG GTCCAACTAC AGCAGCCTGG GACTGAGCTG GTGAGGCCTG
101 GAACTTCAGT GAAGTTGTCC TGTAAGGCTT CTGGCTACAT CTTCACCACC
151 TACTGGATGA ACTGGGTGAA ACAGAGGCCT GGACAAGGCC TTGAGTGGAT
201 TGGCATGATT CATCCTTCCG CAAGTGAAAT TAGGTTGGAT CAGAAATTCA
251 AGGACAAGGC CACATTGACT CTTGACAAAT CCTCCAGCAC AGCCTATATG 301 CACCTCAGCG GCCCGACATC TGTGGATTCT GCGGTCTATT ACTGTGCAAG 3 51 АТС AGGGGAA TGGGGGTCTA TGGACTACTG GGGTCAAGGA ACCTCAGTCA 401 CCGTCTCCTC AGCCAAAACG ACACCCCCAT CTGTCTATCC ACTGGCCCCT 451 GGATCTGCTG CCCAAACTAA CTCCATGGTG ACCCTGGGAT GCCTGGTCAA 501 GGGCTATTTC CCTGAGCCAG TGACAGTGAC CTGGAACTCT GGATCCCTGT 551 CCAGCGGTGT GCACACCTTC CCAGCTGTCC TGCAGTCTGA CCTCTACACT 601 CTGAGCAGCT CAGTGACTGT CCCCTCCAGC ACCTGGCCCA GCGAGACCGT 651 CACCTGCAAC GTTGCCCACC CGGCCAGCAG CACCAAGGTG GACAAGAAAA 701 TTGTGCCCAG GGATTGTGGT TGTAAGCCTT GCATATGTAC AGTCCCAGAA 751 GTATCATCTG TCTTCATCTT CCCCCCAAAG CCCAAGGATG TGCTCACCAT 801 TACTCTGACT CCTAAGGTCA CGTGTGTTGT GGTAGACATC AGCAAGGATG 851 ATCCCGAGGT CCAGTTCAGC TGGTTTGTAG ATGATGTGGA GGTGCACACA 901 GCTCAGACGC AACCCCGGGA GGAGCAGTTC AACAGCACTT TCCGCTCAGT 951 CAGTGAACTT CCCATCATGC ACCAGGACTG GCTCAATGGC AAGGAGTTCA 1001 AATGCAGGGT CAACAGTGCA GCTTTCCCTG CCCCCATCGA GAAAACCATC 1051 TCCAAAACCA AAGGCAGACC GAAGGCTCCA CAGGTGTACA CCATTCCACC 1101 TCCCAAGGAG CAGATGGCCA AGGATAAAGT CAGTCTGACC TGCATGATAA 1151 CAGACTTCTT CCCTGAAGAC ATTACTGTGG AGTGGCAGTG GAATGGGCAG 1201 CCAGCGGAGA ACTACAAGAA CACTCAGCCC ATCATGGACA CAGATGGCTC 1251 TTACTTCATC TACAGCAAGC TCAATGTGCA GAAGAGCAAC TGGGAGGCAG 1301 GAAATACTTT CACCTGCTCT GTGTTACATG AGGGCCTGCA CAACCACCAT 1351 ACTGAGAAGA GCCTCTCCCA CTCTCCTGGT AAATGA (SEQ ID NO:363)
Последовательности CDR в вариабельной области легкой цепи Ab-24 показаны ниже.
CDR-Ll: KASQSVDYDGTSYMN (SEQ ID NO:351)
CDR-L2: AASNLES (SEQ ID NO:352)
CDR-L3: QQSNEDPFT (SEQ ID NO:353)
Последовательности CDR в вариабельной области тяжелой цепи Ab-24 показаны ниже.
CDR-Hl: TYWMN (SEQ ID NO:358)
CDR-H2: MIHPSASEIRLDQKFKD (SEQ ID NO:359)
CDR-H3: SGEWGSMDY (SEQ ID NO:360)
В таблице 1, приведенной ниже, показаны идентификационные номера SEQ ID NO и аминокислотные последовательности CDR антител Ab-А, Ab-В, Ab-С, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24. L1, L2 и L3 относятся к CDR 1, 2 и 3 легкой цепи, а H1, H2 и H3 относятся к CDR 1, 2 и 3 тяжелой цепи согласно системе нумерации Кабата (Rabat et al., 1987 in Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, NIH, USA).
Таблица 1
SEQ ID NO ОПИСАНИЕ АМИНОКИСЛОТНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
54 Ab-A и Ab-1 CDR-Ll QSSQSVYDNNWLA
55 Ab-A и Ab-1 CDR-L2 DASDLAS
56 Ab-A и Ab-1 CDR-L3 QGAYNDVIYA
51 Ab-A и Ab-1 CDR-Hl SYWMN
52 Ab-A и Ab-1 CDR-H2 TIDSGGRTDYASWAKG
53 Ab-A и Ab-1 CDR-H3 NWNL
60 Ab-B CDR-Ll SASSSVSFVD
61 Ab-B CDR-L2 RTSNLGF
62 Ab-B CDR-L3 QQRSTYPPT
57 Ab-B CDR-Hl TSGMGVG
58 Ab-B CDR-H2 HIWWDDVKRYNPVLKS
59 Ab-B CDR-H3 EDFDYDEEYYAMDY
48 Ab-C CDR-Ll KASQSVDYDGDSYMN
49 Ab-C CDR-L2 AASNLES
50 Ab-C CDR-L3 QQSNEDPWT
45 Ab-C CDR-Hl DCYMN
46 Ab-C CDR-H2 DINPFNGGTTYNQKFKG
47 Ab-C CDR-H3 SHYYFDGRVPWDAMDY
42 Ab-D CDR-Ll QASQGTSINLN
43 Ab-D CDR-L2 GSSNLED
44 Ab-D CDR-L3 LQHSYLPYT
- 68 037044
39 Ab-D CDR-Hl DHYMS
40 Ab-D CDR-H2 DINPYSGETTYNQKFKG
41 Ab-D CDR-H3 DDYDASPFAY
275 Ab-2 CDR-Ll RASSSVYYYMH
276 Ab-2 CDR-L2 ATSNLAS
277 Ab-2 CDR-L3 QQWSSDPLT
287 Ab-2 CDR-Hl DYFIH
288 Ab-2 CDR-H2 RLDPEDGESDYAPKFQD
289 Ab-2 CDR-H3 EDYDGTYTFFPY
278 Ab-3 и Ab-15 CDR-Ll SVSSTISSNHLH
279 Ab-3 и Ab-15 CDR-L2 GTSNLAS
280 Ab-3 и Ab-15 CDR-L3 QQWSSYPLT
290 Ab-3 и Ab-15 CDR-Hl DFYLH
291 Ab-3 и Ab-15 CDR-H2 RIDPENGDTLYDPKFQD
292 Ab-3 и Ab-15 CDR-H3 EADYFHDGTSYWYFDV
78 Ab-4 и Ab-5 CDR-Ll RASQDISNYLN
79 Ab-4 и Ab-5 CDR-L2 YTSRLLS
80 Ab-4 и Ab-5 CDR-L3 QQGDTLPYT
245 Ab-4 и Ab-5 CDR-Hl DYNMH
246 Ab-4 и Ab-5 CDR-H2 EINPNSGGAGYNQKFKG
247 Ab-4 и Ab-5 CDR-H3 LGYDDIYDDWYFDV
81 Ab-6 CDR-Ll RASQDISNYLN
99 Ab-6 CDR-L2 YTSRLHS
100 Ab-6 CDR-L3 QQGDTLPYT
248 Ab-6 CDR-Hl DYNMH
249 Ab-6 CDR-H2 EINPNSGGSGYNQKFKG
250 Ab-6 CDR-H3 LVYDGSYEDWYFDV
101 Ab-7 CDR-Ll RASQVITNYLY
102 Ab-7 CDR-L2 YTSRLHS
103 Ab-7 CDR-L3 QQGDTLPYT
251 Ab-7 CDR-Hl DYNMH
252 Ab-7 CDR-H2 EINPNSGGAGYNQQFKG
253 Ab-7 CDR-H3 LGYVGNYEDWYFDV
104 Ab-8 CDR-Ll RASQDISNYLN
105 Ab-8 CDR-L2 YTSRLLS
106 Ab-8 CDR-L3 QQGDTLPYT
254 Ab-8 CDR-Hl DYNMH
255 Ab-8 CDR-H2 EINPNSGGAGYNQKFKG
256 Ab-8 CDR-H3 LGYDDIYDDWYFDV
107 Ab-9 CDR-Ll RASQDISNYLN
108 Ab-9 CDR-L2 YTSRLFS
109 Ab-9 CDR-L3 QQGDTLPYT
257 Ab-9 CDR-Hl DYNMH
258 Ab-9 CDR-H2 EINPNSGGAGYNQKFKG
259 Ab-9 CDR-H3 LGYDDIYDDWYFDV
110 Ab-10 CDR-Ll RASQDISNYLN
111 Ab-10 CDR-L2 YTSRLLS
112 Ab-10 CDR-L3 QQGDTLPYT
260 Ab-10 CDR-Hl DYNMH
261 Ab-10 CDR-H2 EINPNSGGAGYNQKFKG
262 Ab-10 CDR-H3 LGYDDIYDDWYFDV
281 Ab-11 и Ab-16 CDR-Ll RASSSISYIH
282 Ab-11 и Ab-16 CDR-L2 ATSNLAS
283 Ab-11 и Ab-16 CDR-L3 QQWSSDPLT
- 69 037044
293 АЬ-11 и Ab-16 CDR-H1 DYYIH
294 Ab-11 и Ab-16 CDR-H2 RVDPDNGETEFAPKFPG
295 Ab-П и Ab-16 CDR-H3 EDYDGTYTWFPY
113 Ab-12 CDR-L1 RASQDISNYLN
114 Ab-12 CDR-L2 YTSTLQS
115 Ab-12 CDR-L3 QQGDTLPYT
263 Ab-12 CDR-H1 DYNMH
264 Ab-12 CDR-H2 EINPNSGGSGYNQKFKG
265 Ab-12 CDR-H3 LGYYGNYEDWYFDV
284 АЬ-13 и Ab-14 CDR-L1 RASSSVTSSYLN
285 Ab-13 и Ab-14CDR-L2 stsnlAs
286 Ab-13 и Ab-14 CDR-L3 QQYDFFPST
296 Ab-13 и Ab-14 CDR-H1 DYYMN
297 Ab-13 и Ab-14 CDR-H2 DINPYNDDTTYNHKFKG
298 Ab-13 и Ab-14 CDR-H3 ETAVITTNAMD
116 Ab-17 и Ab-18 CDR-L1 SVSSSISSSNLH
237 Ab-17 и Ab-18 CDR-L2 GTSNLAS
238 Ab-17 и Ab-18 CDR-L3 QQWTTTYT
266 Ab-17 и Ab-18 CDR-H1 DYYIH
267 Ab-17 и Ab-18 CDR-H2 RIDPDNGESTYVPKFQG
268 Ab-17 и Ab-18 CDR-H3 EGLDYGDYYAVDY
239 Ab-19, Ab-20 и Ab-23 CDR-L1 RASQDISSYLN
240 Ab-19, Ab-20 и Ab-23 CDR-L2 STSRLNS
241 Ab-19, Ab-20 и Ab-23 CDR-L3 QQDIKHPT
269 Ab-19, Ab-20 и Ab-23 CDR-H1 DYIMH
270 Ab-19, Ab-20 и Ab-23 CDR-H2 YINPYNDDTEYNEKFKG
271 Ab-19, Ab-20 и Ab-23 CDR-H3 SIYYYDAPFAY
242 Ab-21 и Ab-22 CDR-L1 KASQDVFTAVA
243 Ab-21 и Ab-22 CDR-L2 WASTRHT
244 Ab-21 и Ab-22 CDR-L3 QQYSSYPLT
272 Ab-21 и Ab-22 CDR-H1 DYYMH
273 Ab-21 и Ab-22 CDR-H2 RIDPENGDIIYDPKFQG
274 Ab-21 и Ab-22 CDR-H3 DAGDPAWFTY
351 Ab-24 CDR-L1 KASQSVDYDGTSYMN
352 Ab-24 CDR-L2 AASNLES
353 Ab-24 CDR-L3 QQSNEDPFT
358 Ab-24 CDR-H1 TYWMN
359 Ab-24 CDR-H2 MIHPSASEIRLDQKFKD
360 Ab-24 CDR-H3 SGEWGSMDY
Олигонуклеотид или полипептид входит в объем изобретения, если он имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична по меньшей мере одной из CDR, указанной в табл. 1 выше; и/или CDR связывающего склеростин агента, который перекрестно блокирует связывание по меньшей мере одного из антител Ab-А, Ab-В, Ab-С, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24 со склеростином, и/или связывание которого со склеростином перекрестно блокируется по меньшей мере одним из антител Ab-А, Ab-В, Ab-С, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-б, Ab-7, Ab-8, Ab9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24; и/или CDR связывающего склеростин агента в том случае, когда связывающий агент может блокировать ингибирующее действие склеростина в анализе минерализации, основанном на клетках (т.е. нейтрализующего склеростин связывающего агента); и/или CDR связывающего склеростин агента, который связывается с эпитопом петли 2; и/или CDR связывающего склеростин агента, который связывается с эпитопом T20.6; и/или CDR связывающего склеростин агента, который связывается с эпитопом, производным T20.6 (цистиновый узел + 4 плеча).
Связывающие склеростин агенты в виде полипептидов и антител входят в объем изобретения, если они имеют аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны вариабельной области по меньшей мере одного из антител Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24 и перекрестно блокируют связывание по меньшей мере одного из антител Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24 со склеростином, и/или их связывание со склеростином перекрестно блокируется по меньшей мере одним из антител Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24; и/или они могут блокировать ингибирующее действие склеростина в анализе минерализации, основанном на клетках (т.е. нейтрализующий склеростин связывающий агент); и/или связываются с эпитопом петли 2; и/или связываются с эпитопом T20.6; и/или связываются с эпитопом, производным T20.6 (цистиновый узел + 4 плеча).
Полинуклеотиды, кодирующие связывающие склеростин агенты, входят в объем изобретения, если
- 70 037044 они имеют полинуклеотидные последовательности, которые по меньшей мере на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны полинуклеотиду, кодирующему вариабельную область по меньшей мере одного из антител Ab-А, Ab-В, Ab-С, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab23 и Ab-24, и при этом кодируемые связывающие склеростин агенты перекрестно блокируют связывание по меньшей мере одного из антител Ab-А, Ab-В, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24 со склеростином, и/или их связывание со склеростином перекрестно блокируется по меньшей мере одним из антител Ab-А, Ab-В, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 и Ab-24; и/или они могут блокировать ингибирующее действие склеростина в анализе минерализации, основанном на клетках (т.е. нейтрализующий склеростин связывающий агент); и/или связываются с эпитопом петли 2; и/или связываются с эпитопом T20.6; и/или связываются с эпитопом, производным T20.6 (цистиновый узел + 4 плеча).
Антитела согласно изобретению могут иметь аффинность связывания со склеростином человека, меньше или равную 1х10-7 М, меньше или равную 1х10-8 М, меньше или равную 1х10-9 М, меньше или равную 1 х 10-10 М, меньше или равную 1х 10-11 M или меньше или равную 1х 10-12 М.
Аффинность связывающего агента, такого как антитело или партнер в связывании, а также степень, в которой связывающий агент (такой как антитело) ингибирует связывание, могут быть определены специалистом в данной области с использованием обычных способов, например, способов, описанных Scatchard et al. (Ann. KY. Acad. Sci. 51:660-672 (1949)), или на основе резонанса поверхностного плазмона (SPR; BIAcore, Biosensor, Piscataway, NJ). В случае резонанса поверхностного плазмона молекулымишени иммобилизуют на твердой фазе и подвергают воздействию лигандов в подвижной фазе, проходящей через проточную ячейку. Если происходит связывание лиганда с иммобилизованной мишенью, то локальный показатель преломления изменяется, приводя к изменению угла SPR, который можно контролировать в реальном времени, регистрируя изменения интенсивности отраженного света. Можно анализировать скорости изменения сигнала SPR, получая кажущиеся константы скорости для фаз ассоциации и диссоциации реакции связывания. Отношение указанных значений дает кажущуюся константу равновесия (аффинность) (см., например, Wolff et al., Cancer Res. 53:2560-65 (1993)).
Антитело согласно настоящему изобретению может относиться к любому классу иммуноглобулинов, например, IgG, IgE, IgM, IgD или IgA. Оно может быть получено или извлечено из организма животного, например, птиц (например, цыпленка) и млекопитающих, которые включают без ограничения мышь, крысу, хомячка, кролика или другого грызуна, корову, лошадь, овцу, козу, верблюда, человека или другого примата. Антитело может представлять собой интернализующееся антитело. Получение антител в общем описано в публикации патента США № 2004/0146888 А1.
Анализы для характеристики.
В описанных выше способах получения антител согласно изобретению, включая операции по введению CDR специфичных Ab-А, Ab-В, Ab-С, Ab-D и антител 1-24 (Ab-1 - Ab-24) в новые каркасы и/или константные области, существуют подходящие анализы для отбора требуемых антител или связывающих агентов (т.е. анализы для определения аффинность связывания со склеростином; анализы перекрестного блокирования; основанный на Biacore анализ конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека; анализ, основанный на клетках MC3T3-E1; анализы in vivo).
Анализы связывания эпитопов.
Природная форма склеростина человека представляет собой 190-аминокислотный гликопротеид со структурой цистинового узла (фиг. 8 и 9). Кроме структуры цистинового узла белок характеризуется наличием трех петель, названных петлей 1, петлей 2 и петлей 3. Склеростин человека подвергали протеолитическому расщеплению, чтобы получить фрагменты. Коротко, используя различные протеазы, включая трипсин, aspN и lysC, получали фрагменты с разными сайтами расщепления и разного размера. Определяли последовательности и массу различных пептидов склеростина человека. Оценивали защиту антителами, чтобы определить влияние на доступность протеолизу, включая маскирование разрезаемых сайтов и изменение пептидов. Наконец осуществляли основанный на BIAcore анализ конкурентного связывания эпитопов пептидов склеростина человека.
Воздействие на склеростин трипсином приводило к получению картины пептидных фрагментов, которая суммирована на фиг. 13. Фрагменты названы T19.2, T20, T20.6 и T21-22. Как схематично показано на фиг. 19В, эпитоп T20.6 представляет собой комплекс из четырех отдельных пептидных последовательностей, которые связаны тремя дисульфидными связями области цистинового узла. Два пептида связаны двумя дисульфидными связями. Другие два пептида связаны одной дисульфидной связью, которая на схеме пересекает первые два полипептида.
Эпитоп T20.6, который был образован при расщеплении трипсином, сохраняет структуру цистинового узла природного полипептида и узнается антителами Ab-С и Ab-D. Производное эпитопа T20.6 состоит из области цистинового узла и аминокислот 58-64, 73-81, 112-117 и 138-141, положения которых в
- 71 037044 последовательности указаны согласно SEQ ID NO: 1. Данный производный эпитоп показан на фиг. 21.
Эпитоп, содержащий область цистинового узла, может иметь одну или несколько аминокислот, которые присутствуют в эпитопе T20.6 (фиг. 19В), но отсутствуют в эпитопе, производном от T20.6 (фиг. 21).
Другую содержащую эпитоп область идентифицировали в области петли 2 склеростина человека (фиг. 19А), и она узнается антителами Ab-А и Ab-В. Эпитоп петли 2 содержит аминокислоты 86-111 последовательности SEQ ID NO: 1 (C4GPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC5, SEQ ID NO: 6).
Стерически по отношению к полноразмерному склеростину с последовательностью SEQ ID NO: 1 структура, содержащая петлю 2, определяется на одном конце дисульфидной связью между цистеином в положении 86 (С4) и цистеином в положении 144 (С8), а на другом конце - дисульфидной связью между цистеином в положении 111 (C5) и цистеином в положении 57 (С1).
Пептиды, образованные при расщеплении aspN склеростина человека, показаны на фиг. 12. На фигуре указанные пептиды обозначены AspN14.6, AspN18.6 и AspN22.7-23.5 и также упоминаются в данном описании как N14.6, N18.6 и N22.7-23.5 соответственно.
Одна группа антител имеет специфичную картину связывания с некоторыми эпитопами, которая наблюдается в основанном на Biacore анализе конкурентного связывания эпитопов пептидов склеростина человека. Коротко, антитело предварительно инкубируют с тестируемым эпитопом в концентрациях, которые будут насыщать сайты связывания эпитопа на антителе. Затем антитело экспонируют со склеростином, связанным с поверхностью чипа. После проведения соответствующих процедур инкубации и промывки устанавливают картину конкурентного связывания. Как показано на фиг. 18, взятое в качестве примера антитело Ab-D связывается с молекулами склеростина, связанными с поверхностью чипа. Предварительная инкубация антитела Ab-D со склеростином уменьшала связывание антитела со склеростином на чипе почти до нуля. Предварительная инкубация с пептидом, состоящим из эпитопа T19.2, показала, что T19.2 не конкурирует со склеростином за связывание с антителом. Однако предварительная инкубация с любым из эпитопов, обозначенных T20, T20.6, T21-22 или N22.7-23.5, отменяла большую часть связывания антитела со склеростином на чипе. Напротив, предварительная инкубация антитела с любым из эпитопов, обозначенных T19.2, N14.6 или N18.6, не отменяла способность антитела связываться со склеростином. Вторым, взятым в качестве примера антителом с таким профилем связывания (фиг. 17) является Ab-C.
Таким образом, антитело Ab-D является иллюстративным и типичным антителом из группы антител, которые связываются с эпитопами T20, T20.6, T21-22 и N22.7-23.5 и имеют минимальное регистрируемое связывание с эпитопами T19.2, N14.6 и N18.6, которое измеряли по способности блокировать связывание антитела со склеростином. Антитела, имеющие такую характерную картину связывания, могут иметь или не иметь общую аминокислотную последовательность в одной или нескольких областях молекулы антитела. Сходство антител определяют функционально, например, по способности связываться со склеростином после предварительной инкубации с каждым из описанных выше эпитопов. Антитела, которые имеют картину связывания, сходную или идентичную с картиной связывания антитела Ab-D, включены в объем изобретения. Под термином сходную подразумевают, например, что антитело будет проявлять связывание с каждым из полипептидов T20, T20.6, Т21-22 и N22.7-23.5, при этом указанное связывание будет специфично конкурентно исключать по меньшей мере на 50% связывание антитела со склеростином, которое могло при других обстоятельствах происходить в отсутствии предварительной инкубации со склеростином или пептидом склеростина. Антитело также будет проявлять слабое или не будет проявлять регистрируемого связывания с полипептидами T19.2, N14.6 и N18.6, приводя к уменьшению на 30% или меньше связывание, которое могло бы происходить в отсутствии предварительной инкубации со склеростином или пептидом склеростина.
Например, не имея намерения связывать наблюдения с конкретным механизмом, полагают, что картина связывания антитела, показанная на фиг. 18, свидетельствует, что область эпитопа, с которой связывается антитело Ab-D и другие антитела, имеющие картину связывания эпитопа Ab-D, состоит из полипептида, содержащего область цистинового узла склеростина.
Таким образом, как указано в данном описании и показано на фиг. 19В, иллюстративный эпитоп T20.6 содержит четыре пептидных цепи, связанных тремя отдельными дисульфидными связями. Пептидная цепь sakpvtelvc3sgqc4gpar (seq id no:з) связана с пептидной цепью LVASC7KC8KRLTR (seq id no : 5) дисульфидными связями между C3 и С7 и между С4 и С8. Пептидная цепь DVSEYSC1RELHFTR (seq id no : 2) связана с пептидной цепью wwrpsgpdfrc5ipdryr (seq id no:4) дисульфидной связью между С1 и С5. Полипептиды с последовательностями SEQ ID NO: 3 и 5 остаются связанными с полипептидами SEQ ID NO: 2 и 4 в стерической конструкции, при этом связь С1-С5 пересекает плоскость связей С4-С8 и С3-С7 и расположена между ними, как показано на фиг. 19В.
Как указано в данном описании и показано на фиг. 21, приведенный в качестве примера эпитоп, являющийся производным эпитопа T20.6, содержит четыре пептидных цепи, связанных тремя отдельными дисульфидными связями. Пептидная цепь sakpvtelvc3sgqc4 (seq id no:70) связана с пептидной цепью LVASC7KC8 (seq id NO:71) дисульфидными связями между C3 и С7 и между С4 и С8. Пептидная
- 72 037044 цепь C1RELHFTR (SEQ ID NO: 72) связана С пептидной цепью C5IPDRYR (SEQ ID NO: 73) дисульфидной связью между С1 и С5. Полипептиды SEQ ID NO: 70 и 71 остаются связанными с полипептидами SEQ ID NO: 72 и 73 в пространственной конструкции, при этом С1-С5-связь пересекает плоскость связей С4-С8 и С3-С7 и расположена между ними, как показано на фиг. 21.
Антитело Ab-A является иллюстративным и типичным представителем второй группы антител, которые имеют характерную картину связывания с пептидами склеростина человека, которая отличается от картины связывания, полученной для антител Ab-C и Ab-D. Ab-A и группа антител, которую оно представляет, связываются с эпитопом N22.7-23.5 и имеют минимальное регистрируемое связывание с эпитопами T19.2, T20, T20.6, T21-22, N14.6 или N18.6, которое измеряли по способности блокировать связывание антитела со склеростином (фиг. 15). Вторым типичным антителом с таким профилем связывания (фиг. 16) является Ab-B. Антитела, имеющие указанную характерную картину связывания, могут иметь или могут не иметь общей аминокислотной последовательности в одной или нескольких областях молекулы антитела. Сходство антител определяют функционально, например, по способности связываться со склеростином после предварительной инкубации с каждым из описанных выше эпитопов. Антитела, которые имеют картину связывания, сходную или идентичную с картиной связывания антитела Ab-А, включены в объем изобретения. Под термином сходную подразумевают, например, что антитело будет проявлять связывание с полипептидом N22.7-23.5, при этом указанное связывание будет специфично конкурентно исключать по меньшей мере на 50% связывание антитела со склеростином, которое могло бы при других обстоятельствах происходить в отсутствии предварительной инкубации со склеростином или пептидом склеростина. Антитело также будет проявлять слабое или не будет проявлять регистрируемого связывания с полипептидами T19.2, T20, T20.6, T21-22, N14.6 и N18.6, приводя к уменьшению на 30% или меньше связывание, которое могло бы происходить в отсутствии предварительной инкубации со склеростином или пептидом склеростина.
Например, не имея намерения связывать наблюдения с конкретным механизмом, полагают, что картинна связывания антитела, показанная на фиг. 15, свидетельствует о том, что область эпитопа, с которой связывается антитело Ab-А и другие антитела, имеющие картину связывания с эпитопом антитела Ab-A, состоят из полипептида, содержащего область петли 2 склеростина. Таким образом, как указано в данном описании и изображено на фиг. 19А, область петли 2 может быть описана как линейный пептид, но он приобретает третичную структуру в том случае, когда присутствует в нативном склеростине или в содержащей цистиновый узел части склеростина, в которой сохраняется нативная структура с дисульфидными связями. Линейная или третичная структура эпитопа петли 2 может влиять на связывание с ним антитела, как обсуждается в примерах. Область петли 2 может содержать следующую аминокислотную последовательность: C4GPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC5 (SEQ ID NO:6) С4 относится к остатку цистеина, расположенному в положении 86 относительно последовательности SEQ ID NO: 1. С5 относится к остатку цистеина, расположенному в положении 111 относительно последовательности SEQ ID NO: 1. В нативном белке склеростина С4 связан с цистеином в положении 144 (С8) дисульфидной связью, а С5 связан с цистеином в положении 57 (С1) дисульфидной связью. Эпитопы, полученные из области петли 2, включают
CGPARLLPNAIGRGKWWRPS (SEQ ID NO:63); GPARLLPNAIGRGKWWRPSG (SEQ
ID NO:64); PARLLPNAIGRGKWWRPSGP (SEQ ID NO:65);
ARLLPNAIGRGKWWRPSGPD (SEQ ID NO:66); RLLPNAIGRGKWWRPSGPDF (SEQ ID NO:67); LLPNAIGRGKWWRPSGPDFR (SEQ ID NO:68) и LPNAIGRGKWWRPSGPDFRC (SEQ ID NO:69).
Анализы перекрестного блокирования.
Термины перекрестно блокировать, перекрестно блокированный и перекрестное блокирование используют в данном описании взаимозаменяемо, что в отношении способности антитела или другого связывающего агента может препятствовать связыванию других антител или связывающих агентов со склеростином.
Степень, в которой антитело или другой связывающий агент способен препятствовать связыванию другого антитела или агента со склеростином, и, следовательно, можно говорить о том, что он перекрестно блокирует согласно изобретению, можно определить, используя анализы конкурентного связывания. В одном особенно подходящем количественном анализе применяют устройство Biacore, которое может измерять степень взаимодействий, используя методику, основанную на резонансе поверхностного плазмона. В другом подходящем количественном анализе перекрестного блокирования используют способ, основанный на ELISA, чтобы измерить конкуренцию между антителами или другими связывающими агентами в отношении их связывания со склеростином.
Анализ перекрестного блокирования BIACORE.
Далее, в общем, описан подходящий анализ Biacore для определения того, имеет ли место перекрестное блокирование антителом или другим связывающим агентом, или способны ли они к перекрестному блокированию согласно изобретению. Для удобства описание относится к двум антителам, но будет понятно, что анализ можно использовать с любыми связывающими склеростин агентами, описанными в
- 73 037044 данной публикации. Устройство Biacore (например, Biacore 3000) применяют согласно рекомендациям производителя.
Таким образом, в одном анализе перекрестного блокирования склеростин связывают с чипом Biacore CM5, используя стандартную химическую реакцию связывания амина, чтобы получить покрытую склеростином поверхность. Обычно 200-800 резонансных единиц склеростина связывают с чипом (количество, которое дает легко измеряемые уровни связывания, но которое легко насыщается при используемых концентрациях тестируемого реагента).
Два антитела (называемых A* и B*), оцениваемых в отношении из способности перекрестно блокировать друг друга, смешивают в молярном соотношении сайтов связывания один к одному в подходящем буфере, получая смесь для тестирования. При расчете концентраций на основе сайтов связывания предполагают, что молекулярная масса антитела представляет собой общую молекулярную массу антитела, разделенного на ряд связывающих склеростин сайтов на данном антителе.
Концентрация каждого антитела в смеси для тестирования должна быть достаточно высокой, чтобы легко насытить сайты связывания для данного антитела на молекулах склеростина, иммобилизованных на чипе Biacore. Антитела в смеси содержатся в одной и той же молярной концентрации (на основе сайтов связывания), и такая концентрация, как правило, может составлять от 1,00 до 1,5 микромоль (на основе сайтов связывания).
Также готовят отдельные растворы, содержащие только антитело A* и только антитело B*. Антитело A* и антитело B* в указанных растворах должны быть в одном и том же буфере и в одинаковых концентрациях в виде смеси для тестирования.
Смесь для тестирования пропускают над покрытым склеростином чипом Biacore и регистрируют общее количество связывания. Затем чип обрабатывают так, чтобы удалить связанные антитела, не повреждая связанный с чипом склеростин. Обычно это осуществляют посредством обработки чипа 30 мМ HCl в течение 60 с.
Затем раствор, содержащий только антитело A*, пропускают над покрытой склеростином поверхностью и количественно регистрируют связывание. Чип снова обрабатывают, чтобы удалить все связанные антитела, не повреждая связанный с чипом склеростин.
Затем раствор, содержащий только антитело B*, пропускают над покрытой склеростином поверхностью и количественно регистрируют связывание.
Затем рассчитывают максимальное теоретическое связывание смеси антитела A* и антитела B* и суммарное связывание антител при пропускании над покрытой склеростином поверхностью по отдельности. Если фактически зарегистрированное связывание смеси меньше, чем указанный теоретический максимум, то два антитела перекрестно блокируют друг друга.
Таким образом, в общем, перекрестно блокирующим антителом или другим связывающим агентом согласно изобретению является антитело или другой связывающий агент, который будет связываться со склеростином в указанном выше анализе перекрестного блокирования Biacore так, что во время анализа и в присутствии второго антитела или другого связывающего агента согласно изобретению регистрируемое связывание составляет от 80 до 0,1% (например, от 80 до 4%) от максимального теоретического связывания, в частности от 75 до 0,1% (например, от 75 до 4%) от максимального теоретического связывания и более предпочтительно от 70 до 0,1% (например, от 70 до 4%) от максимального теоретического связывания (которое определено выше) двух антител или связывающих агентов в комбинации.
Описанный выше анализ Biacore является первичным анализом, используемым для определения того, блокируют ли перекрестно антитела или другие связывающие агенты друг друга согласно изобретению. В редких случаях конкретные антитела или другие связывающие агенты могут не связываться со склеростином, связанным посредством химической реакции аминов с чипом Biacore CM5 (такие случаи возникают, когда соответствующий сайт связывания на склеростине замаскирован или нарушен в результате связывания с чипом). В таких случаях перекрестное блокирование можно определить с использованием варианта склеростина, содержащего метку, например, His-меченный на N-конце склеростин (R & D Systems, Minneapolis, MN, USA; 2005, № в каталоге 1406-ST-025). В указанной конкретной форме анти-His-антитело может быть связано с чипом Biacore, и затем His-меченный склеростин может быть пропущен по поверхности чипа и может улавливаться анти-His-антителом. Анализ перекрестного блокирования можно осуществлять по существу как описано выше, за исключением того, что после каждого цикла регенерации чипа новый His-меченный склеростин нужно снова наносить на покрытую анти-Hisантителом поверхность. Кроме примера, приведенного для использования His-меченного на N-конце склеростина, альтернативно можно использовать His-меченный на С-конце склеростин. Кроме того, для таких анализов перекрестного блокирования можно использовать другие комбинации меток и связывающих метки белков, которые известны в данной области (например, метка НА с анти-НА-антителами; метка FLAG с анти-FLAG-антиmелами; биотиновая метка со стрептавидином).
Анализ перекрестного блокирования, основанный на ELISA.
Ниже, в общем, описан анализ ELISA для определения того, осуществляет ли антитело против склеростина или другой связывающий склеростин агент перекрестное блокирование или способен ли он к перекрестному блокированию согласно изобретению. Для удобства описаны два антитела (Ab-Х и Ab- 74 037044
Y), но будет понятно, что анализ можно использовать с любыми связывающими склеростин агентами, описанными в данной публикации.
Общий принцип анализа заключается в покрывании антителом против склеростина лунок в планшете для ELISA. Избыточное количество второго, потенциально перекрестно блокирующего антитела против склеростина добавляют в растворе (т.е. несвязанным с планшетом для ELISA). Затем в лунки добавляют ограниченное количество склеростина. Антитело, которым покрыты лунки, и антитело в растворе конкурируют за связывание ограниченного количества молекул склеростина. Планшет промывают, чтобы удалить склеростин, который не был связан антителом, которым покрывали лунки, а также удалить второе антитело, находящееся в растворе, а также любые комплексы, образованные между вторым, находящимся в растворе антителом и склеростином. Затем измеряют количество связанного склеростина, используя подходящий реагент для выявления склеростина. Антитело в растворе, которое способно перекрестно блокировать нанесенное в качестве покрытия антитело, будет способно вызывать уменьшение количества молекул склеростина, которое нанесенное в качестве покрытия антитело может связывать по сравнению с количеством молекул склеростина, которое нанесенное в качестве покрытия антитело может связывать в отсутствии второго, находящего в растворе антитела.
Данный анализ более подробно описан ниже для Ab-Х и Ab-Y. В том случае, когда в качестве Ab-Х выбрано иммобилизованное антитело, им покрывают лунки планшета для ELISA, затем планшеты блокируют подходящим раствором для блокирования, чтобы минимизировать неспецифичное связывание реагентов, которые добавляют позже. Затем в планшет для ELISA добавляют избыточное количество AbY, так, чтобы количество молей связывающих склеростин сайтов Ab-Y на лунку было по меньшей мере в 10 раз больше, чем количество молей связывающих склеростин сайтов антитела Ab-Х, используемого на лунку во время покрывания планшета для ELISA. Затем добавляют склеростин так, чтобы количество молей склеростина, добавляемого в лунку, было по меньшей мере в 25 раз меньше, чем количество молей связывающих склеростин сайтов антитела Ab-Х, которое использовали для покрывания каждой лунки. После инкубации в течение подходящего периода времени планшет для ELISA промывают и добавляют реагент для регистрации склеростина, чтобы измерить количество склеростина, специфично связываемого нанесенным в виде покрытия антителом против склеростина (в данном случае Ab-Х). Фоновый сигнал для анализа определяют в виде сигнала, получаемого в лунках, покрытых антителом (в данном случае Ab-Х), содержащих второе антитело в растворе (в данном случае Ab-Y), буфер для склеростина отдельно (т.е. без склеростина) и реагенты для выявления склеростина. Сигнал позитивного контроля в анализе определяют как сигнал, получаемый в лунках, покрытых антителом (в данном случае Ab-Х), содержащих только буфер для второго антитела в растворе (т.е. без второго антитела в растворе), склеростин и реагенты для выявления склеростина. Анализ ELISA необходимо осуществлять таким образом, чтобы сигнал позитивного контроля был по меньшей мере в 6 раз выше фонового сигнала.
Чтобы избежать артефактов (например, в значительной степени отличающихся аффинностей антител Ab-Х и Ab-Y по отношению к склеростину) в результате выбора антител, которые используют в качестве покрывающего антитела или используют в качестве второго антитела (конкурента), необходимо провести анализ перекрестного блокирования в двух формах:
1) форма 1: когда Ab-Х является антителом, которым порывают планшет для ELISA, и Ab-Y является конкурирующим антителом, которое находится в растворе; и
2) форма 2: когда Ab-Y является антителом, которым покрывают планшет для ELISA, a Ab-Х является конкурирующим антителом, которое находится в растворе.
Ab-Х и Ab-Y определяют как перекрестно блокирующие, если при анализе либо в форме 1, либо в форме 2 антитело против склеростина, находящееся в растворе, способно вызывать уменьшение от 60 до 100%, в частности от 70 до 100% и более предпочтительно от 80 до 100% сигнала определения склеростина (т.е. количества склеростина, связанного антителом, используемым для покрывания) по сравнению с сигналом определения склеростина, получаемым в отсутствии антитела против склеростина в растворе (т.е. в лунках с позитивным контролем).
Пример такого основанного на ELISA анализа перекрестного блокирования можно найти в примере 7 (анализ перекрестного блокирования, основанный на ELISA).
Основанный на клетках анализ нейтрализации.
Минерализацию клетками остеобластной линии в культуре, либо первичных клеток, либо клеточных линий, используют в качестве модели остеогенеза in vitro. Для того чтобы произошла минерализация требуется примерно от одной до шести недель, начиная с индукции дифференцировки клеток остеобластной линии одним или несколькими агентами дифференцировки. Общая последовательность событий включает пролиферацию клеток, дифференцировку, образование внеклеточного матрикса, созревание матрикса и, наконец, отложение минерального вещества, которое относится к кристаллизации и/или отложению фосфата кальция. Указанную последовательность событий, начиная с пролиферации и дифференцировки клеток и заканчивая отложением минерального вещества, в данном описании называют минерализацией. Результатом анализа является измерение кальция (минерала).
Клетки MC3T3-B1 (Sudo H., Kodama H.-A., Amagai Y., Yamamoto S., Kasai S., 1983. In vitro differentiation and calcification in a new clonal osteogenic cell line derived from newborn mouse calvaria. J. Cell Biol.
- 75 037044
96:191-198) и субклоны исходной клеточной линии могут образовывать минерал в культуре при выращивании в присутствии дифференцирующих агентов. Такие субклоны включают MC3T3-E1-BF (Smith E., Redman R., Logg С., Coetzee G., Kasahara N., Frenkel B. 2000. Glucocorticoids inhibit developmental stage-specific osteoblast cell cycle. J. Biol. Chem. 275:19992-20001). Как в случае субклона MC3T3-E1-BF, так и в случае исходных клеток МСЗТЗ-Е1 склеростин может ингибировать одно или несколько событий из последовательности событий, приводящих к отложению минерала и включающих отложение минерала (т.е. склеростин ингибирует минерализацию). Антитела против склеростина, которые способны нейтрализовать ингибирующую активность склеростина, обеспечивают возможность минерализации культуры в присутствии склеростина, так что наблюдается статистически значимое увеличение отложения фосфата кальция (измеряемого по кальцию) по сравнению с количеством кальция, измеряемого в группе, обрабатываемой только склеростином (т.е. без антитела). Антитела, используемые в экспериментах с использованием основанного на клетках анализа минерализации, показанных на фиг. 22, 23 и 24, имеют молекулярные массы около 145 кД и имеют по 2 сайта связывания склеростина в молекуле антитела.
При осуществлении анализа с целью определения того, может ли конкретное антитело против склеростина или связывающий агент против склеростина нейтрализовать склеростин (т.е. является нейтрализующим склеростин антителом или его производным или является нейтрализующим склеростин связывающим агентом), необходимо, чтобы количество склеростина, используемого в анализе было равно минимальному количеству склеростина, которое вызывает по меньшей мере 70% статистическое значимое уменьшение отложения фосфата кальция (измеряемое по кальцию) в группе, обработанной только склеростином, по сравнению с количеством кальция, измеряемого в группе без склеростина. Нейтрализующее антитело против склеростина или нейтрализующий связывающий агент против склеростина определяют как антитело или связывающий агент, который вызывает статистически значимое увеличение отложения фосфата кальция (измеряемого по кальцию) по сравнению с количеством кальция, измеряемого в группе, обработанной только склеростином (т.е. без антитела, без связывающего агента). Чтобы определить, является ли антитело против склеростина или связывающий агент против склеростина нейтрализующим или не является, необходимо, чтобы количество антитела против склеростина или связывающего агента против склеростина, используемое в анализе, было таким, чтобы имел место избыток по количеству молей связывающих сайтов на лунку по сравнению с количеством молей склеростина на лунку. В зависимости от эффективности антитела кратный избыток, который может требоваться, может составлять 24, 18, 12, 6, 3 или 1,5, и специалисту известны обычные практические способы тестирования более чем одной концентрации связывающего агента. Например, очень эффективное нейтрализующее антитело против склеростина или нейтрализующий связывающий агент против склеростина будут способны нейтрализовать склеростин даже при наличии менее чем 6-кратного избытка количества молей сайтов связывания склеростина в лунке по сравнению с количеством молей склеростина в лунке. Менее эффективное нейтрализующее антитело против склеростина или нейтрализующий связывающий агент против склеростина будет способен нейтрализовать склеростин только при 12-, 18- или 24-кратном избытке. Связывающие склеростин агенты во всем диапазоне эффективности являются подходящими в качестве нейтрализующих связывающих склеростин агентов. Примеры основанных на клетках анализов минерализации подробно описаны в примере 8.
Антитела против склеростина и их производные, которые могут нейтрализовать склеростин человека, и связывающие склеростин агенты, которые могут нейтрализовать склеростин человека, можно использовать для лечения состояний/расстройств человека, которые вызваны, связаны или приводят по меньшей мере к одному из симптомов: низкому остеогенезу, низкой минеральной плотности костей, низкому содержанию минеральных веществ в костях, низкой костной массе, низкому качеству костей и низкой прочности костей.
Анализ нейтрализации in vivo.
Увеличение различных параметров, связанных или являющихся результатом стимуляции нового остеогенеза, можно измерить в результате тестирования in vivo связывающих склеростин агентов, чтобы идентифицировать такие связывающие агенты, которые способны нейтрализовать склеростин и таким образом способны вызывать стимуляцию нового остеогенеза. Такие параметры включают различные анаболические маркеры сыворотки [например, остеокальцин, P1NP (N-концевой пропептид проколлагена типа 1)], гистоморфометрические маркеры остеогенеза (например, поверхность остеобластов/поверхность кости; скорость остеогенеза/поверхности кости; толщина трабекулярной кости), минеральную плотность костей, содержание минеральных веществ в костях, костную массу, качество костей и прочность костей. Нейтрализующий связывающий склеростин агент определяют как агент, способный вызывать статистически значимое увеличение по сравнению с обработанными наполнителем животными любого параметра, связанного или являющегося результатом стимуляции нового остеогенеза. Такое тестирование in vivo можно осуществить на любом подходящем животном (например, мышь, крыса, обезьяна). Пример такого тестирования in vivo можно найти в примере 5 (Тестирование in vivo моноклональных антител против склеростина).
Хотя аминокислотная последовательность склеростина не на 100% идентична среди разных видов млекопитающих (например, склеростин мыши не на 100% идентичен склеростину человека), специали
- 76 037044 сту в данной области будет понятно, что связывающий склеростин агент, который может нейтрализовать склеростин некоторых видов (например, мыши) in vivo и который также может связывать склеростин человека in vitro, с высокой долей вероятности способен нейтрализовать склеростин человека in vivo. Таким образом, такой связывающий склеростин человека агент (например, антитело против склеростина человека) может быть применим для лечения состояний/расстройств человека, которые вызваны, связаны или приводят по меньшей мере к одному из симптомов: низкому остеогенезу, низкой минеральной плотности костей, низкому содержанию минеральных веществ в костях, низкой костной массе, низкому качеству костей и низкой прочности костей. Мыши, у которых использовали гомологичную рекомбинацию, чтобы делетировать ген склеростина мыши и вместо него встроить ген склеростина человека (т.е. мыши, нокаутированные геном склеростина человека или мыши, нокаутированные SOST человека), могли бы быть примером дополнительной системы in vivo.
Предлагаются фармацевтические композиции, содержащие один из описанных выше связывающих агентов, таких как по меньшей мере одно из антител Ab-А, Ab-В, Ab-С, Ab-D и Ab-1-Ab-24 к склеростину человека, вместе с фармацевтически или физиологически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем. Фармацевтические композиции и способы лечения описаны в заявке, одновременно находящейся на рассмотрении, с регистрационным № 10/868497, поданной 16 июня 2004, которая притязает на приоритет на основании заявки с регистрационным № 60/478977, обе заявки включены в данное описание в виде ссылки.
Разработка подходящих доз и схем лечения для применения конкретных композиций, описанных в данной публикации при различных режимах лечения, включая, например, подкожное, пероральное, парентеральное, внутривенное, интраназальное и внутримышечное введение, и препаратов хорошо известна в данной области, и некоторые из них кратко обсуждаются ниже в целях иллюстрации.
В случае некоторых применений фармацевтические композиции, описанные в данной публикации, могут быть доставлены в результате перорального введения животному. В таком случае указанные композиции могут быть приготовлены с использованием инертного разбавителя или усваиваемого съедобного носителя, или они могут быть заключены в желатиновую капсулу с твердой или мягкой оболочкой, или их можно прессовать в таблетки, или они могут быть введены непосредственно с пищевыми продуктами.
В некоторых случаях будет желательна доставка фармацевтических композиций, раскрытых в данном описании, подкожно, парентерально, внутривенно, внутримышечно или даже внутрибрюшинно. Такие способы хорошо известны специалисту в данной области, и некоторые из них дополнительно описаны, например, в патентах США № 5543158; 5641515 и 5399363. В некоторых вариантах растворы активных соединений в виде свободного основания или фармакологически приемлемых солей могут быть приготовлены в воде, соответствующим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Также могут быть приготовлены дисперсии в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях и в маслах. При обычных условиях хранения и применения указанные препараты, как правило, будут содержать консервант, чтобы предотвратить рост микроорганизмов.
Иллюстративные фармацевтические формы, подходящие для инъекционного применения, включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовления непосредственно перед приемом стерильных инъекционных растворов или дисперсий (например, см. патент США № 5466468). Во всех случаях форма должны быть стерильной и должна быть текучей в такой степени, чтобы легко проходить через шприц. Она должна быть стабильной в условиях производства и хранения и должна быть защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носителем может быть растворитель или дисперсионная среда, содержащая, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и тому подобные), их подходящие смеси и/или растительные масла. Соответствующая текучесть может поддерживаться, например, посредством применения покрытия, такого как лецитин, за счет поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и/или за счет применения поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов можно обеспечить с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и тому подобного. Во многих случаях предпочтительным будет включение средств для достижения изотоничности, например сахаров или хлорида натрия. Длительное всасывание инъекционных композиций можно достичь в результате применения в композиции средств, замедляющих всасывание, например, моностеарата алюминия и желатина.
В одном варианте для парентерального введения в водном растворе раствор при необходимости должен быть соответствующим образом забуферен, и жидкий растворитель сначала делают изотоничным, используя достаточное количество соли или глюкозы. Такие конкретные водные растворы особенно подходят для внутривенного, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения. В этой связи стерильная водная среда, которую можно применять, будет известна специалистам в данной области в свете настоящего описания. Например, одна доза может быть растворена в 1 мл изотоничного раствора NaCl и либо добавлена к 1000 мл жидкости для подкожного введения, либо инъецирована в предполагаемое место инфузии (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th ed., p. 1035-1038 и
- 77 037044
1570-1580). Некоторые изменения дозы обязательно будут иметь место в зависимости от состояния субъекта, подвергаемого лечению. Кроме того, для введения человеку препараты, конечно, предпочтительно должны удовлетворять требованиям стерильности, пирогенности и стандартам общей безопасности и чистоты, которые требуются ведомством FDA по биологическим стандартам.
В другом варианте осуществления изобретения композиции, раскрытые в данном описании, могут быть приготовлены в нейтральной форме или в форме соли. Иллюстративные фармацевтически приемлемые соли включают кислотно-аддитивные соли (образованные свободными аминогруппами белка), которые образованы неорганическими кислотами, такими как, например, хлористоводородная или фосфорная кислоты, или такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и тому подобные. Также могут быть получены соли, образованные свободными карбоксильными группами, с неорганическими основаниями, такими как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и с такими органическими основаниями, как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и тому подобные. После приготовления растворы будут введены таким образом, который совместим с дозированным препаратом, и в таком количестве, которое является терапевтически эффективным.
Носители, кроме того, могут включать любой из растворителей, дисперсионных сред, наполнителей, покрытий, разбавителей, антибактериальных и противогрибковых средств, средств для изотоничности и средств, замедляющих всасывание, буферов, растворов носителей, суспензий, коллоидов и тому подобного. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области. За исключением случаев, когда какая-либо обычная среда или агент несовместимы с активным ингредиентом, их применение в терапевтических композициях предусмотрено. Дополнительные активные ингредиенты также могут быть включены в композиции. Фраза фармацевтически приемлемый относится к молекулярным единицам и композициям, которые не вызывают аллергической или сходной неблагоприятной реакции при введении человеку.
В некоторых вариантах используют липосомы, нанокапсулы, микрочастицы, липидные частицы, везикулы и тому подобное для введения композиций согласно настоящему изобретению в подходящие клетки-хозяева/организмы. В частности, композиции согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены для доставки инкапсулированными в липидную частицу, липосому, везикулу, наносферу или наночастицу или тому подобное. Альтернативно, композиции согласно настоящему изобретению могут быть связаны, либо ковалентно, либо нековалентно, с поверхностью таких носителей.
Образование и применение липосомных и подобных липосомам препаратов в качестве потенциальных носителей лекарственных средств, в общем, известно специалистам в данной области (см., например, Lasic, Trends Biotechnol. 16 (7):307-21, 1998; Takakura, Nippon Rinsho 56 (3):691-95, 1998; Chandran et al., Indian J. Exp. Biol. 35 (8):801-09, 1997; Margalit, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 12 (2-3):233-61, 1995; патенты США № 5567434; 5552157; 5565213; 5738868 и 5795587, каждый из которых специально включен в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Применение липосом, по-видимому, не связано с аутоиммунными ответами или неприемлемой токсичностью после системной доставки. В некоторых вариантах липосомы образованы из фосфолипидов, которые диспергируют в водной среде и которые спонтанно образуют мультиламеллярные концентрические двухслойные везикулы (также называемые мультиламеллярными везикулами (MLV)).
Альтернативно, в других вариантах изобретение относится к фармацевтически приемлемым нанокапсулярным препаратам композиций согласно настоящему изобретению. Нанокапсулы, в общем, могут стабильным и воспроизводимым образом улавливать соединения (см., например, Quintanar-Guerrero et al., Drug Dev. Ind. Pharm. 24 (12):1113-28, 1998). Чтобы избежать побочных эффектов вследствие внутриклеточной перегрузки полимерами такие мельчайшие частицы (размером около 0,1 мкм) могут быть сконструированы с использованием полимеров, способных разрушаться in vivo. Такие частицы могут быть получены, как описано, например, в Couvreur et al., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 5(1):1-20, 1988; zur Muhlen et al., Eur. J. Pharm. Biopharm. 45(2):149-55, 1998; Zambaux et al., J. Controlled Release 50(13):31-40, 1998; и в патенте США № 5145684.
Кроме того, фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть помещены в емкости вместе с упаковочным материалом, который содержит инструкции относительно применения таких фармацевтических композиций. Как правило, такие инструкции будут содержать ясные формулировки, описывающие концентрацию реагентов, а также в некоторых вариантах относительные количества эксципиентов или разбавителей (например, воды, физиологического раствора или PBS), которые могут быть необходимы для перерастворения фармацевтической композиции.
Вводимая доза может быть в диапазоне от 0,01 до 100 мг/кг массы тела. Как будет понятно специалисту в данной области, количество и частота введения, конечно, будут зависеть от таких факторов, как природа и тяжесть заболевания, подвергаемого лечению, требуемый ответ, состояние пациента и т.д. Обычно композиции можно вводить различными способами, которые указаны выше.
Увеличение содержания минеральных веществ в костях и/или минеральной плотности костей можно определить непосредственно, используя рентгеновское излучение (например, двухэнергетическую рентгеновскую абсорбциометрию или DEXA) или делая вывод на основании измерения: 1) маркеров
- 78 037044 остеогенеза и/или активности остеобластов, таких как без ограничения специфичная для остеобластов щелочная фосфатаза, остеокальцин, пропептид С проколлагена типа 1 (PICP), общая щелочная фосфатаза (см. Cornier, Curr. Opin. in Rheu. 7:243(1995)) и N-концевой пропептид проколлагена 1 сыворотки (P1NP), и/или 2) маркеров резорбции костей и/или активности остеокластов, включая без ограничения пиридинолин, дезоксипиридинолин, N-телопептид, гидроксипролин в моче, резистентные к тартрату кислые фосфатазы плазмы и галактозилгидроксилизин; (см. Cornier, там же), TRAP 5b сыворотки (изоформа 5b резистентной к тартрату кислой фосфатазы) и поперечно связанный С-телопептид сыворотки (sCTXI). Количество костной массы также можно рассчитать на основе массы тела, или используя другие способы (см. Guinness-Hey, Metab. Bone Dis. Relat. Res. 5:177-181, 1984). Животных и, в частности, модели на животных используют в данной области для тестирования влияния композиций и способов согласно изобретению, например, на параметры потери костной массы, резорбции кости, остеогенеза, прочности костей или минерализации костей, которые имитируют состояния при таких заболеваниях человека, как остеопороз и остеопения. Примеры таких моделей включают модель на крысах с удаленными яичниками (Kalu, D.N., The ovariectomized rat model of postmenopausal bone loss. Bone and Mineral 15:175-192 (1991); Frost, H.M. and Jee, W.S.S. On the rat model of human osteopenias and osteoporosis. Bone and Mineral 18:227236 (1992); и Jee, W.S.S. and Yao, W., Overview: animal models of osteopenia and osteoporosis. J. Musculoskel. Neuron. Interact. 1:193-207 (2001)).
Конкретные состояния, которые можно лечить композициями согласно настоящему изобретению, включают дисплазии, при которых наблюдается аномальный рост и развитие кости, и широкое множество причин остеопении, остеопороза и потери костной массы. Типичные примеры таких состояний включают ахондроплазию, ключично-черепной дизостоз, эхондроматоз, фиброзную дисплазию, болезнь Гоше, гипофосфатемический рахит, синдром Марфана, множественные наследственные экзостозы, нейрофиброматоз, несовершенный остеогенез, остеопетроз, остеопойкилоз, склеротические повреждения, псевдоартроз и пиогенный остеомиелит, заболевание периодонта, индуцированную противоэпилептическими средствами потерю костной массы, первичный и вторичный гиперпаратиреоидизм, синдромы семейного гиперпаратиреоидизма, индуцированную невесомостью потерю костной массы, остеопороз у мужчин, постклимактерическую потерю костной массы, остеоартрит, нефрогенную остеодистрофию, инфильтративные заболевания костей, потерю массы костей ротовой полости, остеонекроз челюсти, ювенильную форму болезни Педжета, мелореостоз, метаболические заболевания костей, мастоцитоз, серповидноклеточную анемию/заболевание, связанную с трансплантацией органа потерю костной массы, связанную с трансплантацией почки потерю костной массы, системную красную волчанку, анкилозирующий спондилит, эпилепсию, поражения кожи у детей ревматического происхождения, талассемию, мукополисахаридозы, болезнь Фабри, псевдотернеровский синдром, синдром Дауна, синдром Кляйнфелтера, проказу, болезнь Пертеса, подростковый идиопатический сколиоз, многосистемное воспалительное заболевание у детей, синдром Винчестера, болезнь Менкеса, болезнь Вильсона, ишемическое заболевание костей (такое как болезнь Легга-Кальве-Пертеса, регионарный мигрирующий остеопороз), анемические состояния, состояния, вызванные стероидами, индуцированную глюкокортикоидами потерю массы костей, индуцированную гепарином потерю массы костей, заболевания костного мозга, цингу, недостаточное питание, дефицит кальция, идиопатическую остеопению или остеопороз, врожденную остеопению или остеопороз, алкоголизм, хроническое заболевание печени, постклимактерическое состояние, хронические воспалительные состояния, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, воспалительный колит, болезнь Крона, олигоменорею, аменорею, беременность, сахарный диабет, гипертиреоидизм, расстройства щитовидной железы, расстройства паратиреоидной железы, болезнь Кушинга, акромегалию, гипогонадизм, лишение подвижности или бездействие, синдром симпатической рефлекторной дистрофии, регионарный остеопороз, остеомаляцию, потерю костной массы, связанную с заменой сустава, связанную с ВИЧ потерю костной массы, потерю костной массы, связанную со снижением уровня гормона роста, потерю костной массы, связанную с кистозным фиброзом, фиброзную дисплазию, связанную с химиотерапией потерю костной массы, индуцированную опухолью потерю костной массы, связанную со злокачественной опухолью потерю костной массы, потерю костной массы при гормональном разрушении, множественную миелому, индуцированную лекарственными средствами потерю костной массы, нервную анорексию, связанную с заболеванием потерю массы костей лицевого черепа, связанную с заболеванием потерю массы костей черепа, связанную с заболеванием потерю костной массы челюсти, связанную с заболеванием потерю костной массы черепа и потерю костной массы, связанную с космическим полетом. Кроме того, состояния относятся к потере массы костей, связанной со старением, включая потерю массы лицевых костей, связанную со старением, потерю массы костей черепа, связанную со старением, потерю костной массы челюсти, связанную со старением, и потерю массы костей черепа, связанную со старением.
Композиции согласно настоящему изобретению также могут быть применимы для улучшения исходов ортопедических процедур, процедур, проводимых на зубах, имплантационной хирургии, замены сустава, костной пластики, косметической хирургии на костях и восстановления костей, например, срастания переломов, заживления несросшихся переломов, заживления при медленном срастании и реконструкции лица. Одну или несколько композиций можно вводить предварительно, во время и/или после
- 79 037044 процедуры, замены, трансплантации, хирургии или восстановления.
Изобретение также относится к диагностическому набору, содержащему по меньшей мере один связывающий агент против склеростина согласно настоящему изобретению. Связывающим агентом может быть антитело. Кроме того, такой набор необязательно может содержать один или несколько из следующих компонентов:
(1) инструкции по применению одного или нескольких связывающих агентов для скрининга, диагностики, прогнозирования, терапевтического контроля или любой комбинации указанных применений;
(2) меченый партнер для связывания связывающего агента против склеростина;
(3) твердая фаза (например, полоска с реагентом), на которой иммобилизован связывающий агент(ы) против склеростина; и (4) этикетка или вкладыш, на котором указано разрешение контролирующего органа для скринингового, диагностического, прогностического или терапевтического применения или любой их комбинации.
Если не предлагается меченый партнер для связывания со связывающим агентом(ами), то сам связывающий агент(ты) может быть меченым одним или несколькими регистрируемыми маркерами, например, хемилюминесцентным, ферментным, флуоресцентным или радиоактивным остатком.
Следующие примеры предлагаются с целью иллюстрации, а не для ограничения.
Примеры
Пример 1.
Рекомбинантная экспрессия склеростина.
Рекомбинантный склеростин человека/SOST коммерчески доступен из R&D Systems (Minneapolis, MN, USA; 2006 № в каталоге 1406-ST-025). Кроме того, рекомбинантный склеростин мыши/SOST коммерчески доступен из R&D Systems (Minneapolis, MN, USA; 2006 № в каталоге 1589-ST-025).
Альтернативно, различные виды склеростина могут быть временно экспрессированы в клетках 293Т или 293EBNA, адаптированных к культивированию в суспензии без сыворотки. Трансфекции могут быть осуществлены в культурах объемом 500 мл или 1 л. Следующие реагенты и материалы доступны из Gibco BRL (в настоящее время Invitrogen, Carlsbad, CA). Номера в каталоге перечислены в скобках: бессывороточная среда DMEM (21068-028); DMEM/F12 (3:1) (21068/11765); 1X добавка инсулинтрансферрин-селен (51500-056); 1X пенициллин-стрептомицин-глутамин (10378-016); 2 мМ L-глутамин (25030-081); 20 мМ HEPES (15630-080); 0,01% плюроник F68 (24040-032). Коротко, клеточный инокулят (5,0-10,0x105 клеток/млх объем культивирования) центрифугируют при 2500 об/мин в течение 10 мин при 4°С, чтобы удалить кондиционированную среду.
Клетки ресуспендируют в бессывороточной среде DMEM и снова центрифугируют при 2500 об/мин в течение 10 мин при 4°С. После отсасывания раствора для промывки клетки ресуспендируют в среде роста [DMEM/F12 (3:1) + 1X добавка инсулин-трансферрин-селен + 1X пенициллин-стрептомицинглутамин + 2 мМ L-глутамин + 20 мМ HEPES + 0,01% плюроник F68] во вращающемся флаконе для культивирования объемом 1 или 3 л. Культуру во флаконе ставят на магнитную мешалку при 125 об/мин, которую помещают во влажный инкубатор, в котором поддерживают 37°С и 5% СО2. Экспрессирующуюся плазмидную ДНК млекопитающих (например, рсДНК3.1, рСЕР4, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA), содержащую полную кодирующую область (и стоп-кодон) склеростина с консенсусной последовательностью Козака (например, ССАСС) непосредственно с 5'-стороны от стартового кодона ATG подвергают реакции образования комплекса с реагентом для трансфекции в конической пробирке объемом 50 мл.
Комплекс ДНК-реагент для трансфекции может быть получен в 5-10% конечного объема культуры в бессывороточной среде DMEM или OPTI-MEM. Реагенты для трансфекции, которые могут быть использованы в таких целях, включают X-tremeGene RO-1539 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN), FuGene6 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN), липофектамин 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) и 293fectin (Invitrogen, Carlsbad, CA). Сначала в бессывороточную среду DMEM добавляют 1-5 мкг плазмидной ДНК/мл культуры, затем 1-5 мкл реагентов для трансфекции/мл культуры. Комплексы можно инкубировать при комнатной температуре в течение примерно 10-30 мин и затем добавить к клеткам во вращающемся флаконе. Трансфекция/экспрессия может быть осуществлена в течение 4-7 дней, после этого кондиционированную среду (СМ) собирают центрифугированием при 4000 об/мин в течение 60 мин при 4°С.
Пример 2.
Очистка рекомбинантного склеростина.
Рекомбинантный склеростин очищали из клеток-хозяев млекопитающих следующим образом. Все процедуры очистки осуществляли при комнатной температуре. Одну схему очистки использовали для того, чтобы очистить различные виды склеростина, включая склеростин мыши и человека. В схеме очистки использовали аффинную хроматографию, а затем катионообменную хроматографию.
Хроматография на гепарине.
Кондиционированную среду (СМ) от клеток-хозяев млекопитающих центрифугировали в центрифуге Beckman J6-M1 при 4000 об/мин в течение 1 ч при 4°С, чтобы удалить остатки клеток. Затем надо- 80 037044 садок СМ фильтровали через стерильный фильтр 0,2 мкм. (В этот момент стерильно профильтрованную СМ необязательно можно оставить на хранение в замороженном виде вплоть до очистки). Если СМ была заморожена, то ее размораживали при указанных ниже температурах или комбинациях температур: 4°С, комнатная температура или теплая вода. После размораживания СМ фильтровали через стерильный фильтр с диаметром пор 0,2 мкм и необязательно концентрировали тангенциальной проточной ультрафильтрацией (TFF), используя мембрану с пределом отсечения 10 кД. Концентрат СМ фильтровали через стерильный фильтр с диаметром пор 0,2 мкм и затем наносили на высокоэффективную колонку с гепарином (гепарин-НР) (GE Healthcare, ранее Amersham Biosciences), уравновешенную в PBS. Альтернативно, профильтрованный надосадок СМ можно непосредственно наносить на колонку HP с гепарином, уравновешенную в PBS.
После нанесения колонку HP с гепарином промывали PBS вплоть до момента, когда оптическая плотность при 280 нм проходящего потока возвращалась к исходному уровню (т.е. к оптической плотности, измеренной перед нанесением надосадка СМ). Затем склеростин элюировали с колонки, используя линейный градиент от 150 мМ до 2 М хлорида натрия в PBS. Контролировали оптическую плотность элюата при 280 нм и собирали фракции, содержащие белок. Затем фракции анализировали в SDS-ПААГ, окрашенном Кумасси, чтобы идентифицировать фракции, содержащие полипептид, который мигрирует в области, соответствующей размеру гликозилированного склеростина. Соответствующие фракции с колонки объединяли, получая гепарин-HP-пул.
Катионообменная хроматография.
Склеростин, элюированный с колонки HP с гепарином, дополнительно очищали катионообменной хроматографией, используя носители для высокоэффективной хроматографии нормального давления (SPHP) (GE Healthcare, ранее Amersham Biosciences). Буфер, содержащий пул, полученный с колонки HP с гепарином, заменяли на PBS диализом, используя мембраны с пределом отсечения по молекулярной массе 10000 (Pierce Slide-A-Lyzer). Затем диализованный пул с колонки HP с гепарином наносили на колонку для SPHP, уравновешенную в PBS. После нанесения колонку промывали PBS вплоть до момента, когда оптическая плотность при 280 нм проходящего потока возвращалась к исходному уровню.
Затем склеростин элюировали с SPHP-колонки, используя линейный градиент от 150 мМ до 1 М хлорида натрия в PBS. Контролировали оптическую плотность элюата при 280 нм и собирали элюированный склеростин по фракциям. Затем фракции анализировали в окрашенном Кумасси SDS-ПААГ, чтобы идентифицировать фракции, содержащие полипептид, который мигрирует в области, соответствующей размеру гликозилированного склеростина. Подходящие фракции с колонки объединяли, получая SPHP-пул.
Приготовление препарата.
После очистки SPHP-пул готовили в PBS посредством диализа, используя мембраны с пределом отсечения по молекулярной массе 10000 (Pierce Slide-A-Lyzer). Если было необходимо концентрирование склеростина, то использовали центрифугирующее устройство (Amicon Centricon или Centriprep) с мембраной, имеющей предел отсечения по молекулярной массе 10000. После приготовления склеростин фильтровали через стерильный 0,2 мкм-фильтр и хранили при 4°С или замораживали.
Пример 3.
ELISA-анализ связывания пептидов.
Синтезировали серии перекрывающихся пептидов (каждый пептид длиной примерно 20-25 аминокислот) на основе известной аминокислотной последовательности склеростина крысы (SEQ ID NO: 98). Пептиды конструировали так, чтобы все они содержали восстановленный остаток цистеина; дополнительный цистеин вводили на С-конце каждого из пептидов, которые не содержали цистеина в своей последовательности. Это давало возможность связывать пептиды с планшетами для анализа ковалентной связью, используя коммерчески доступные связывающие сульфгидрил планшеты (Costar), в концентрации 1 мкг/мл в фосфатно-солевом буфере (PBS: рН 6,5), содержащем 1 мМ EDTA. После инкубации в течение 1 часа при комнатной температуре планшеты три раза промывали PBS, содержащим 0,5% твин20. Планшеты блокировали инкубацией с раствором PBS, содержащим 0,5% желатина из кожи рыб (Sigma), в течение 30 мин при комнатной температуре и затем три раза промывали в PBS, содержащем 0,5% твин-20.
Тестируемые антитела разбавляли до 1 мкг/мл в PBS, содержащем 0,5% желатина кожи рыб и инкубировали в покрытых пептидом планшетах в течение 1 ч при комнатной температуре. Избыточное антитело удаляли тремя промывками в PBS, 0,5% твин-20. Затем планшеты инкубировали с соответствующим вторым антителом, конъюгированным с пероксидазой хрена (соответствующим образом разбавленным в PBS, содержащем 0,5% твин-20) и способным связываться с представляющим интерес антителом. Затем планшеты три раза промывали: один раз PBS, содержащим 0,5% твин-20, и два раза PBS. Наконец, планшеты инкубировали хромогенным субстратом пероксидазы хрена (ТМВ-Stable Stop, RDI) в течение 5 мин при комнатной температуре, развитие окраски останавливали кислотой и измеряли оптическую плотность в планшетах при 450 нм.
Материалы.
Связывающие сульфгидрил планшеты Costar (VWR № 29442-278).
- 81 037044
Буфер для покрывания: 1X PBS РН 6,5 + 1 мМ EDTA.
Блокирующий буфер: 1X PBS + 0,5% желатин кожи рыб (PBS из CS; желатин кожи рыб из Sigma № G 7765).
Буфер для промывки: 1X PBS + 0,5% твин-20.
Пептиды склеростина крысы.
Образцы антител: временное Ат, очищенное рекомбинантное Ат, сыворотка кролика и т.д.
Подходящее второе Ат: антитело козы против Ig кролика/мыши-HRP (Jackson Immuno Research, 115-036-072).
TMB-Stable Stop (RDI № RDI-TMBSX-1L).
0,5 M HCl.
Использовали следующие способы.
1. Планшеты покрывали 100 мкл/лунку пептида склеростина крысы, разбавленного в 1X PBS РН 6,5 + 1 мМ EDTA, в концентрации 1 мкг/мл. Планшеты инкубировали 1 ч при комнатной температуре. (Планшеты следует использовать в течение 30 мин после открывания).
2. Планшеты промывали 3 раза буфером для промывки.
3. Планшеты блокировали 200 мкл/лунку блокирующего буфера. Планшеты инкубировали 30 мин при комнатной температуре.
4. Повторяли промывку, как описано в п.2.
5. Инкубировали планшеты с 50 мкл/лунку образцов, разбавленных в блокирующем буфере - титры сыворотки, начиная с 1:100; временное рекомбинантное Ат использовали неразбавленным; очищенное рекомбинантное Ат использовали в концентрации 1 мкг/мл (все образцы использовали в двух повторах). Планшеты инкубировали 1 ч при комнатной температуре.
6. Планшеты промывали, как описано в п.2.
7. Планшеты инкубировали с 50 мкл/лунку подходящего второго антитела (меченого HRP), разбавленного 1:1600 в блокирующем буфере. Планшеты инкубировали 1 ч при комнатной температуре.
8. Планшеты промывали 1 раз буфером для промывки, 2 раза - PBS.
9. Планшеты инкубировали с 50 мкл/лунку ТМВ 5 мин при комнатной температуре.
10. Реакцию останавливали 50 мкл/лунку 0,5 М HCl.
11. Планшеты регистрировали при длине волны 450 нм. Скрининг следующих пептидов проводили как описано выше:
QGWQAFKNDATEIIPGLREYPEPP(SEQ ID NO:82)
TEIIPGLREYPEPPQELENN (SEQ ID NO:83)
PEPPQELENNQTMNRAENGG (SEQ ID NO:84)
ENGGRPPHHPYDTKDVSEYS (SEQ ID NO:85)
CRELHYTRFVTDGP (SEQ ID NO:86)
CRELHYTRFVTDGPSRSAKPVTELV (SEQ ID NO:87)
CRSAKPVTELVSSGQSGPRARLL (SEQ ID NO:88)
CGPARLLPNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO:89)
RAQRVQLLCPGGAAPRSRKV (SEQ ID NO: 90)
PGGAAPRSRKVRLVAS (SEQ ID NO:91)
KRLTRFHNQSELKDFGPETARPQ (SEQ ID NO:92)
IPDRYAQRVQLLSPGG (SEQ ID NO:93)
SELKDFGPETARPQKGRKPRPRAR (SEQ ID NO:94)
KGRKPRPRARGAKANQAELENAY (SEQ ID NO:95)
PNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO:96)
KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV (SEQ ID NO:97).
Высокоаффинное нейтрализующее антитело (Ab-19) связывалось с двумя перекрывающимися пептидными последовательностями:
PNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO:96) и KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV (SEQ
ID NO:97) .
Указанный способ позволяет распознавать эпитопы для антител, которые взаимодействуют с кажущимися линейными эпитопами. Пептиды, которые содержат весь или часть сайта связывания с антителом, будут связываться с антителом и, следовательно, будут выявлены.
Пример 4.
Идентификация эпитопов склеростина человека.
Структура склеростина.
Зрелая форма (с удаленным сигнальным пептидом) склеростина человека представляет собой белок, состоящий из 190 аминокислот (фиг. 8). На фиг. 9 показана схема общей структуры склеростина с N-концевым плечом (от N-концевого Q до цистеина 1) и С-концевым плечом (от цистеина 8 до концевого Y). В виде слоя между двумя плечами расположена структура цистинового узла и три петли, которые обозначены - петля 1, петля 2 и петля 3. Четыре дисульфидные связи в склеростине образованы Cys1 в
- 82 037044 положении последовательности 57, связанным с Cys5 в положении последовательности 111 (называемой С1-С5), Cys2 в положении последовательности 71, связанным с Cys6 в положении последовательности 125 (называемой С2-С6), Cys3 в положении последовательности 82, связанным с Cys7 в положении последовательности 142 (называемой СЗ-С7), Cys4 в положении последовательности 86, связанным с Cys8 в положении последовательности 144 (называемой С4-С8). Восьмичленная кольцевая структура образуется посредством дисульфидных связей С3-С7 и С4-С8. Указанная кольцевая структура вместе с дисульфидной связью С1-С5, пронизывающей кольцо, образует типичный цистиновый узел. С2-С6, которая не является частью цистинового узла, притягивает две большие структуры петель, петли 1 (остатки 57-82) и петли 3 (остатки 111-142) близко друг к другу. Петля 2 отходит от С4 (остаток 86) к С5 (остаток 111).
Эксперимент.
Общий способ характеристики эпитопов, связываемых моноклональными антителами против склеростина, заключается во фрагментации склеростина человека на пептиды разными протеазами, в определении последовательности различных пептидов склеростина человека, выделении указанных пептидов и тестировании каждого из них в отношении способности связываться с конкретным моноклональным антителом с использованием основанного на Biacore анализа конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека. Полученные в результате данные позволили определить локализацию связывающегося эпитопа.
Пептидные продукты расщепления подвергали картированию пептидов с помощью ВЭЖХ; собирали отдельные пики и пептиды идентифицировали и картировали с помощью анализов, основанных на масс-спектрометрии с лазерной десорбцией из матрицы (MALDI-MS) и ЖХ-МС с ионизацией в электроспрее (ESI-LC-MS) и/или N-концевым секвенированием. Все ВЭЖХ-анализы для указанных исследований осуществляли с использованием колонки С8 с обращенной фазой (с внутренним диаметром 2,1 мм и длиной 15 см). Картирование пептидов ВЭЖХ осуществляли с использованием линейного градиента от 0,05% трифторуксусной кислоты (подвижная фаза А) до 90% ацетонитрила в 0,05% трифторуксусной кислоте. Колонки элюировали в течение 50 мин при скорости потока 0,2 мл/мин.
Расщепление эндопротеазами трипсином и AspN.
Зрелую форму склеростина человека расщепляли трипсином, который расщепляет после аргинина и лизина, или AspN. Примерно 200 мкг склеростина в концентрации 0,5-1,0 мг/мл инкубировали в PBS (рН 7,2) в течение 20 ч при 37°С с 8 мкг либо трипсина, либо AspN.
Расщепление трипсином.
ВЭЖХ-хроматография продуктов расщепления трипсином давала несколько основных пиков (фиг. 10А). Анализ последовательностей проводили для пиков пептидов, полученных в результате ВЭЖХ после расщепления трипсином. Также одновременно осуществляли анализ ESI-ЖХ-МС пептидного продукта расщепления, чтобы определить точную массу пептидов, которые разделяли ВЭЖХ. Таким образом, идентифицировали пептиды, присутствующие в пиках пептидов (фиг. 11). На фиг. 13 показано выравнивание различных пептидных последовательностей (T19.2, T20, T20.6, T21-22) с последовательностью склеростина. Число после каждого Т (например, T19.2) отражает время удержания. T19.2 содержит два пептида (один из петли 1 и один из петли 3), связанных дисульфидной связью С2-С6. T20 содержит два пептида, удерживаемых вместе структурой цистинового узла, при этом интактные петли 1 и 3 удерживаются вместе дисульфидом С2-С6 и большая часть петли 2 отсутствует. T20.6 содержит четыре последовательности, удерживаемых вместе структурой цистинового узла, но при этом отсутствует часть петли 1 и 3 (часть T19.2) и отсутствует большая часть петли 2. T21-22 почти идентичен T20, но имеет 3 дополнительных аминокислоты в области петли 2.
Расщепление AspN.
ВЭЖХ-хроматография продуктов расщепления AspN давала несколько основных пиков (фиг. 10В). Анализ последовательностей проводили для пиков пептидов, полученных в результате ВЭЖХ. Также одновременно осуществляли анализ ESI-ЖХ-МС пептидного продукта расщепления, чтобы определить точную массу пептидов, которые разделяли ВЭЖХ. Таким образом, идентифицировали пептиды, присутствующие в пиках пептидов после расщепления AspN (фиг. 12). На фиг. 14 показано выравнивание различных пептидных последовательностей (AspN14.6, AspN18.6, AspN22.7-23.5) с последовательностью склеростина. Число после каждого AspN (например, AspN18.6) отражает время удержания. AspN14.6 содержит три коротких пептида из обоих N- и С-концевых плеч склеростина, тогда как AspN18.6 является более крупным пептидом из N-концевого плеча склеростина. AspN22.7-23.5 содержит один пептидный фрагмент из 104 аминокислот, в который входят все восемь цистеинов (четыре дисульфидных связи), цистиновый узел и все петли 1, 2 и 3.
Стратегия характеристики эпитопов заключалась в использовании указанных различных созданных с помощью трипсина и AspN пептидов склеростина человека и определении того, какие пептиды все еще могут связываться различными антителами (Ab-А, Ab-В, Ab-С и Ab-D). В частности, тестирование проводили в основанном на Biacore анализе конкурентного связывания пептидных эпитопов склеростина человека, в котором связывание конкретного моноклонального антитела со склеростином человека, иммобилизованным на чипе Biacore, определяли в присутствии или отсутствии каждого из различных выделенных при ВЭЖХ фракций пептидов, полученных с помощью трипсина и AspN. В отсутствии конку
- 83 037044 рирующих пептидов конкретное моноклональное антитело способно связываться со склеростином человека на чипе и давать ответ, измеряемый в единицах резонанса, RU. Предварительная инкубация конкретного моноклонального антитела с интактным склеростином человека в растворе с последующим тестированием связывания на чипе показала, что связывание мАт со склеростином человека в растворе предотвращало связывание мАт со склеростином человека на чипе, таким образом подтверждая общий принцип данного конкурентного анализа.
Указанный общий способ повторяли отдельно для каждого пептида. Оценивали устойчивый ответ в RU, чтобы показать, что конкретный тестируемый пептид может не связываться с мАт в растворе (следовательно, мАт свободно для того, чтобы связать склеростин человека, который был иммобилизован на чипе). Напротив, отсутствие устойчивого ответа в RU показывало, что мАт способно связывать пептид склеростина в растворе. Указанные картины связывания наряду с известной идентификацией различных пептидов склеростина использовали для определения эпитопов склеростина, которые связывались антителами против склеростина Ab-А, Ab-В, Ab-С и Ab-D.
Основанный на BIACORE анализ конкурентного связывания пептидного эпитопа склеростина человека.
Приготовление поверхности, покрытой склеростином человека.
Иммобилизацию зрелой формы склеростина человека на поверхности сенсорного чипа BIAcore (CM5) осуществляли согласно инструкциям производителя. Коротко, карбоксильные группы на поверхностях сенсорных чипов активировали инъекцией 60 мкл смеси, содержащей 0,2 М N-этил-N'(диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и 0,05 М N-гидроксисукцинимида (NHS). Склеростин человека разбавляли в 10 мМ ацетате натрия, рН 4,0, в концентрации 20 мкг/мл с последующей инъекцией на активированную поверхность СМ5. Избыточные химически активные группы на поверхностях дезактивировали инъекцией 60 мкл 1 М этаноламина. Конечные иммобилизованные уровни составляли ~5000 резонансных единиц (RU) для поверхности со склеростином человека. Также получали контрольную эталонную поверхность сенсорного чипа с имитацией связывания.
Анализ специфичности связывания.
1X фосфатно-солевой буфер без хлорида кальция или хлорида магния приобретали из Gibco/Invitrogen, Carlsbad, CA. Бычий сывороточный альбумин, фракцию V, не содержащую IgG, приобретали из Sigma-Aldrich, St. Louis, МО. Каждое мАт (2 нМ) отдельно инкубировали с 20 нМ склеростином человека или конкретным пептидом склеростина человека (примечание: имеется 3 несвязанных пептида в AspN14.6) в буфере для образцов (1X PBS + 0,005% Р-20 + 0,1 мг/мл БСА) перед инъекцией на поверхность с иммобилизованным склеростином человека. Скорость потока при инъекции образца составляла 5 мкл/мин, затем поверхность регенерировали, используя 1 М NaCl в 8 мМ глицине, рН 2,0, со скоростью 30 мкл/мин в течение 30 с. Данные анализировали, используя программу BIAevaluation 3.2, и результаты представлены на фиг. 15 (Ab-А), фиг. 16 (Ab-В), фиг. 17 (Ab-С) и фиг. 18 (Ab-D).
Эпитопы петли 2 и T20.6.
Картины связывания пептидов склеростина для двух типичных антител (Ab-А и Ab-В) фактически были идентичными (фиг. 15 и фиг. 16) и показали, что оба антитела могли связывать только пептид AspN22.7-23.5. Единственным отличием AspN22.7-23.5 от всех других пептидов склеростина является то, что AspN22.7-23.5 содержит интактную петлю 2. Это свидетельствует о том, что Ab-А и Ab-В связывают область петли 2 склеростина, таким образом определяя эпитоп петли 2 (фиг. 19А). Картины связывания пептидов склеростина для Ab-С и Ab-D фактически были идентичны друг другу (фиг. 17 и фиг. 18), но совершенно отличными от картин связывания пептидов, которые наблюдались для Ab-А и Ab-B. Из тестированных в данном примере пептидов самым маленьким пептидом, с которым могли связываться Ab-С и Ab-D, был пептид T20.6. Полученный результат определяет эпитоп T20.6 (фиг. 19В).
Анализ защиты от протеаз.
Общий принцип данного анализа заключается в том, что связывание мАт со склеростином может приводить к защите некоторых специфичных сайтов расщепления протеазами, и такую информацию можно использовать для определения области склеростина, с которой связывается мАт.
Эпитоп, производный 1 от T20.6 (цистиновый узел + 4 плеча).
На фиг. 20 показаны пептидные карты, полученные при ВЭЖХ, для комплекса склеростин человека-Ab-D (фиг. 20А: склеростин человека предварительно инкубировали в молярном соотношении 1:1 с Ab-D перед расщеплением трипсином, как описано выше) и для склеростина человека отдельно (фиг. 20В: склеростин человека расщепляли трипсином как описано выше). Пики пептидов T19.2 и T20.6 на фиг. 20А показали явное снижение высоты соответствующих пиков по сравнению с фиг. 20В. Такое уменьшение высоты пиков сопровождалось увеличением высоты пиков пептидов T20 и T21-22. Полученные данные свидетельствуют, что основные аминокислотные остатки в петле 1 и петле 3, которые в отсутствии Ab-D расщеплялись трипсином с образованием пептидов T19.2 и T20.6, были резистентны к расщеплению трипсином, когда Ab-D предварительно связывали со склеростином. Присутствие T20, T20.6 и T21-22 свидетельствует, что петля 2 еще эффективно расщеплялась, когда Ab-D предварительно было связано со склеростином. Полученные данные свидетельствуют, что Ab-D связывалось со стороны петли 1 и петли 3 эпитопа T20.6, таким образом определяя меньший эпитоп, производный 1 от T20.6
- 84 037044 (цистиновый узел + 4 плеча), показанный на фиг. 21.
Пример 5.
Тестирование моноклональных антител против склеростина in vivo у мышей.
Самцов мышей BDF1 четырехнедельного возраста получали из Charles River Laboratories (Raleigh, NC) и содержали в чистых клетках по пять животных на клетку. Температуру в комнате поддерживали от 68 до 72°F, и относительную влажность поддерживали от 34 до 73%. При лабораторном содержании в клетках выдерживали цикл 12 ч освещенность/темнота, и содержание удовлетворяло всем требованиям AAALAC. Клинические наблюдения за всеми мышами в исследовании осуществляли ежедневно один раз.
Очищенные моноклональные антитела против склеростина (Ab-А, фиг. 1; Ab-В, фиг. 2; Ab-С, фиг. 3; Ab-D, фиг. 4) разбавляли в стерильном фосфатно-солевом растворе Дульбекко. Мышам инъецировали антитела против склеростина или наполнитель PBS подкожно по 21 мкл на грамм массы тела два раза в неделю (понедельник и четверг), 25 мг/кг. РТН(1-34) человека разбавляли в буфера для РТН (0,001Н HCl, 0,15 М NaCl, 2% БСА), и дозы вводили подкожно по 21 мкл на грамм массы тела пять раз в неделю (понедельник, вторник, среда, четверг, пятница) по 100 мкг/кг в качестве позитивного контроля (фиг. 5 и 6). Количество мышей на группу составляло N=5 на фиг. 5 и 6, и N=6 на фиг. 7.
Денситометрия костей PIXImus in vivo
Минеральную плотность костей (BMD) определяли еженедельно в проксимальном метафизе большеберцовой кости и поясничных позвонках и периферической двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрией (pDEXA), используя систему PIXImus2 из GE/Lunar Medical Systems, Madison, WI. Представляющую интерес область (ROI) площадью 25 мм2 размещали так, чтобы она включала проксимальную поверхность сустава, эпифиз и проксимальный конец на метафизе большеберцовой кости. Представляющую интерес область (ROI) размещали так, чтобы она включала поясничные позвонки (L1L5). Анализировали проксимальные области большеберцовой кости и поясничных позвонков, чтобы определить общую минеральную плотность костей. Получали средние значения для группы ± стандартное отклонение и сравнивали с группой, обработанной наполнителем, для статистического анализа.
Статистический анализ.
Статистический анализ осуществляли с использованием критериев Даннета и Тьюки-Крамера (используя MS Excel и JMP v. 5.0. для данных BMD). Средние значения в группах для каждого набора данных считали значимо отличающимися, когда значение P было меньше 0,05 (P<0,05).
Нейтрализующая склеростин активность антител.
Статистически значимые увеличения BMD по сравнению с обработкой наполнителем, наблюдаемые в случае каждого из антител Ab-А (фиг. 5), Ab-В (фиг. 5), Ab-С (фиг. 6) и Ab-D (фиг. 7), свидетельствуют, что указанные четыре антитела являются антителами, нейтрализующими склеростин. Кроме того, полученные данные показывают, что в случае антител против склеростина, которые связывают склеростин мыши, обработку и анализ мышей, как описано выше, можно использовать для идентификации нейтрализующих склеростин антител.
Пример 6.
Скрининговый анализ антител, которые блокируют связывание антитела со склеростином человека.
Склеростин человека связывали с чипом Biacore CM5, используя стандартную химию связывания аминов, чтобы получить покрытую склеростином поверхность. 300 резонансных единиц склеростина связывали с поверхностью.
Тестируемые антитела разбавляли до концентрации 200 мкг/мл в буфере HBS-EP (10 мМ HEPES рН 7,4, 150 мМ NaCl, 3 мМ EDTA, 0,005% (об./об.) поверхностно-активного вещества Р20) и затем смешивали в молярном соотношении один к одному (на основе сайтов связывания), чтобы получить тестируемую смесь. Таким образом, полученная смесь содержала каждое антитело в концентрации 100 мкг/мл (1,3 мкМ на основе сайтов связывания). Также получали отдельные растворы, содержащие каждое из антител из смеси для тестирования по отдельности. Полученные растворы содержали отдельные антитела в буфере HBS-EP в концентрации 100 мкг/мл (1,3 мкМ на основе сайтов связывания).
мкл тестируемой смеси пропускали над покрытым склеростином чипом при скорости потока 10 мкл/мин и количественно регистрировали связывание. Затем чип обрабатывали двумя импульсами по 60 с 30 мМ HCl, чтобы удалить все связанные антитела. Затем над чипом пропускали раствор, содержащий только одно из антител из смеси для тестирования (1,3 мкМ в таком же буфере, что и тестируемая смесь, на основе сайтов связывания), таким же образом, как и смесь для тестирования, и количественно регистрировали связывание. Чип снова обрабатывали, чтобы удалить все связанные антитела, и, наконец, раствор, содержащий другое отдельное антитело из тестируемой смеси (1,3 мкМ в таком же буфере, что и тестируемая смесь, на основе сайтов связывания), пропускали над чипом и количественно оценивали связывание.
В таблице, приведенной ниже, показаны результаты анализов перекрестного блокирования среди разных антител. Значения в каждой клетке таблицы означают количество связывания (в RU), наблюдаемого в том случае, когда антитела (1,3 мкМ на основе сайтов связывания) или буфер, указанные в верхней строке таблицы, смешивали с антителами (1,3 мкМ на основе сайтов связывания) или буфером, ука- 85 037044 занными в первой колонке таблицы.
Буфер АЬ-4 АЬ-13 АЬ-А АЬ-3 АЬ-19
Буфер -0.5 693 428.5 707.3 316.1 649.9
АЬ-4 687.7 795.1 101'8.2 860.5 869.3 822.5
АЬ-13 425.6 1011.3 442.7 1108.4 431.9 1042.4
АЬ-А 692.4 833.1 1080.4 738.5 946.2 868.1
АЬ-3 305.5 845.1 428.2 952.2 344.4 ' 895.7
АЬ-19 618.1 788.6 1022.5 863.3 891.5 658.7
Используя среднее значение связывания (в RU) для каждой комбинации антител, указанной в таблице выше (так как каждая комбинация встречается дважды), можно рассчитать процент от теоретического связывания для каждой комбинации антител. Теоретическое связывание рассчитывают в виде суммы средних значений для компонентов каждой тестируемой смеси, полученных при их анализе по отдельности (т.е. антитело и буфер).__________________________________________________
Буфер АЬ-4 АЬ-13 АЬ-А АЬ-3 АЬ-19
Буфер
АЬ-4 90.75 60.45 ' 85.4 60.75
АЬ-13 96.9 58.0 97.0
АЬ-А 93.5 65.0
АЬ-3 94.4
АЬ-19
Из указанных выше данных видно, что Ab-4, Ab-А и Ab-19 перекрестно блокируют друг друга. Подобным образом Ab-13 и Ab-3 перекрестно блокируют друг друга.
Пример 7.
Основанный на ELISA анализ перекрестного блокирования.
Объемы жидкостей, используемых в данном примере, могут соответствовать объемам, обычно используемым в 96-луночном планшете для ELISA (например, 50-200 мкл/лунку). В данном примере предполагается, что Ab-Х и Ab-Y имеют молекулярные массы около 145 кД и имеют 2 сайта связывания склеростина на молекулу антитела. Антителом против склеростина (Ab-Х) покрывают (например, 50 мкл, 1 мкг/мл) 96-луночный планшет для ELISA [например, 96-луночный микропланшет с плоским дном для EIA/RIA Corning (продукт № 3590), Corning Inc., Acton, MA] в течение по меньшей мере одного часа. После указанной стадии покрывания раствор антитела удаляют, планшет промывают один или два раза раствором для промывки (например, PBS и 0,05% твином-20) и затем блокируют, используя подходящий блокирующий раствор (например, PBS, 1% БСА, 1% сыворотка козы и 0,5% твин-20) и способы, известные в данной области. Затем блокирующий раствор удаляют из планшета для ELISA, и в соответствующие лунки планшета для ELISA добавляют второе антитело против склеростина (Ab-Y), которое тестируют в отношении способности перекрестно блокировать нанесенное в виде покрытия антитело, в избытке (например, 50 мкл раствора 10 мкг/мл) в блокирующем растворе. Затем в соответствующие лунки добавляют ограниченное количество (например, 50 мкл раствора 10 нг/мл) склеростина в блокирующем растворе, и планшет инкубируют в течение по меньшей мере 1 ч при комнатной температуре при встряхивании. Затем планшет промывают 2-4 раза раствором для промывки. Соответствующее количество реагента для выявления склеростина [например, биотинилированного поликлонального антитела против склеростина, которое предварительно подвергали комплексообразованию с соответствующим количеством конъюгата стрептавидин-пероксидаза хрена (HRP)] в блокирующем растворе добавляют в планшет для ELISA и инкубируют в течение по меньшей мере 1 ч при комнатной температуре. Затем планшет промывают по меньшей мере 4 раза раствором для промывки и проявляют с использованием соответствующего реагента [например, субстратов HRP, таких как TMB (колориметрический способ) или различные люминесцентные субстраты HRP]. Фоновый сигнал для анализа определяют в виде сигнала, получаемого в лунках, покрытых антителом (в данном случае Ab-Х), содержащих второе антитело в растворе (в данном случае Ab-Y), только буфер для склеростина (т.е. без склеростина) и реагенты для выявления склеростина. Сигнал позитивного контроля в анализе определяют в виде сигнала, определяемого в лунках, покрытых антителом (в данном случае Ab-X), содержащих только буфер для второго антитела в растворе (т.е. без второго антитела в растворе), склеростин и реагенты для выявления склеростина. Анализ ELISA необходимо осуществлять таким образом, чтобы сигнал позитивного контроля был по меньшей мере в 6 раз выше фонового сигнала.
Чтобы избежать артефактов (например, в значительной степени отличающихся аффинностей антител Ab-Х и Ab-Y по отношению к склеростину), в результате выбора антител, которые используют в качестве покрывающего антитела или используют в качестве второго антитела (конкурента), необходимо провести анализ перекрестного блокирования в двух формах:
1) форма 1: когда Ab-Х является антителом, которым покрывают планшет для ELISA, и Ab-Y является конкурирующим антителом, которое находится в растворе; и
2) форма 2: когда Ab-Y является антителом, которым покрывают планшет для ELISA, a Ab-Х является конкурирующим антителом, которое находится в растворе.
Ab-Х и Ab-Y определяют как перекрестно блокирующие, если при анализе либо в форме 1, либо в форме 2 антитело против склеростина, находящееся в растворе, способно вызывать уменьшение от 60 до
- 86 037044
100%, в частности от 70 до 100% и более предпочтительно от 80 до 100% сигнала определения склеростина (т.е. количества склеростина, связанного антителом, используемым для покрывания) по сравнению с сигналом определения склеростина, получаемым в отсутствии антитела против склеростина в растворе (т.е. в лунках с позитивным контролем).
В том случае, когда в ELISA используют меченый вариант склеростина, такой как His-меченный на N-конце склеростин (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA; 2005, № в каталоге 1406-ST-025), соответствующий тип реагента для определения склеростина может включать HRP-меченное анти-His-антитело. Кроме использования His-меченного на N-конце склеростина, также можно использовать His-меченный на С-конце склеростин. Кроме того, различные другие комбинации меток и связывающих метки белков, которые известны в данной области, можно использовать в данном основанном на ELISA анализе перекрестного связывания (например, метка НА с анти-НА-антителами; метка FLAG с анти-FLAGантителами; биотиновая метка со стрептавидином).
Пример 8.
Основанный на клетках анализ минерализации для идентификации агентов, способных антагонизировать активность склеростина.
Введение.
Минерализацию клетками остеобластной линии в культуре, либо первичных клеток, либо клеточных линий, используют в качестве модели образования костей in vitro. Для того чтобы произошла минерализация, требуется примерно от одной до шести недель, начиная с индукции дифференцировки клеток остеобластной линии одним или несколькими агентами дифференцировки. Общая последовательность событий включает пролиферацию клеток, дифференцировку, образование внеклеточного матрикса, созревание матрикса и, наконец, отложение минерального вещества, которое относится к кристаллизации и/или отложению фосфата кальция. Указанную последовательность событий, начиная с пролиферации и дифференцировки клеток и заканчивая отложением минерального вещества, в данном описании называют минерализацией. Результатом анализа является измерение кальция (минерала).
Отложение минерала имеет усиленные биофизические характеристики, так как после того, как начинают образовываться кристаллы-затравки, общее количество минерала, которое будет откладываться во всей культуре, может иногда откладываться довольно быстро, например, в течение нескольких дней после этого. На продолжительность и объем отложения минерала в культуре отчасти влияют конкретные используемые клетки/линия клеток остеобластной линии, условия роста, выбор агентов для дифференцировки и конкретная партия сыворотки, используемая в среде культивирования клеток. Для культивирования с целью минерализации клеток/линии клеток остеобластной линии необходимо тестировать по меньшей мере восемь-пятнадцать партий сыворотки от нескольких поставщиков, чтобы идентифицировать конкретную партию сыворотки, которая обеспечивает возможность минерализации.
Клетки MC3T3-B1 (Sudo H et al., In vitro differentiation and calcification in a new clonal osteogenic cell line derived from newborn mouse calvaria. J. Cell Biol. 96:191-198) и субклоны исходной линии клеток могут образовывать минерал в культуре при выращивании в присутствии различных агентов дифференцировки. Такие субклоны включают MC3T3-E1-BF (Smith E., Redman R., Logg С, Coetzee G., Kasahara N., Frenkel B. 2000. Glucocorticoids inhibit developmental stage-specific osteoblast cell cycle. J. Biol. Chem. 275:19992-20001).
Идентификация антител, нейтрализующих склеростин.
Клетки MC3T3-E1-BF использовали для анализа минерализации. Аскорбиновую кислоту и Вглицерофосфат использовали для того, чтобы индуцировать дифференцировку клеток MC3T3-E1-BF, приводящую к отложению минерального вещества. Конкретный протокол скрининга в 96-луночном планшете включал посев клеток в среду с последующими семью заменами сред (как дополнительно описано ниже) в течение 12-дневного периода, при этом наибольшее отложение минерального вещества происходило в последние примерно 18 ч (например, в ночь с воскресенья на понедельник). Для любой указанной обработки использовали 3 лунки (N=3). Конкретная продолжительность и объем отложения минерального вещества могут варьировать отчасти в зависимости от конкретной используемой партии сыворотки. Контрольные эксперименты позволят учесть такие вариации, как, в общем, известно в области культивирования клеток.
В данной системе анализа склеростин ингибировал одно или несколько событий из последовательности событий, приводящих к отложению минералов и включающих отложение минералов (т.е. склеростин ингибировал минерализацию). Антитела против склеростина, которые способны нейтрализовать ингибирующую активность склеростина, обеспечивали возможность минерализации культуры в присутствии склеростина, так что наблюдали статистически значимое увеличение отложения фосфата кальция (измеряемого по кальцию) по сравнению с количеством кальция, измеряемого в группе, обрабатываемой только склеростином (т.е. без антитела). Для статистического анализа (с использованием MS Excel и JMP) применяли 1-факторный ANOVA с последующим сравнением по Даннету, чтобы определить различия между группами. Средние значения в группах для каждого набора данных считали значимо отличающимися, когда значение P было меньше 0,05 (P<0,05). Типичный результат осуществления данного анализа показан на фиг. 22. В отсутствии рекомбинантного склеростина мыши последовательность со- 87 037044 бытий, приводящих к отложению минералов и включающих отложение минералов, протекает нормально. Уровни кальция в каждой группе обработки показаны в виде средних значений ± стандартная ошибка среднего (SEM). В данном типичном эксперименте уровни кальция на основе анализа кальция составляли ~31 мкг/мл. Однако добавление рекомбинантного склеростина мыши вызывало ингибирование минерализации, и уровень кальция снижался на ~85%. Добавление моноклонального антитела против склеростина Ab-19 или Ab-4 вместе с рекомбинантным склеростином приводило к статистически значимому увеличению отложения минерала по сравнению с группой, обработанной только склеростином, так как ингибирующая активность склеростина была нейтрализована каждым из антител. Результаты данного эксперимента показывают, что Ab-19 и Ab-4 являются нейтрализующими склеростин моноклональными антителами (мАт).
На фиг. 23 показан очень похожий результат, полученный с использованием рекомбинантного склеростина человека и двух гуманизированных мАт против склеростина. На фиг. 24 также показан очень похожий результат, полученный с использованием рекомбинантного склеростина человека и мышиного и гуманизированного мАт против склеростина, которые указаны.
Антитела, используемые для экспериментов, показанных на фиг. 22, 23 и 24, имеют молекулярные массы около 145 кД и имеют 2 сайта связывания склеростина на молекулу антитела.
Подробный протокол культивирования клеток MC3T3-E1-BF описан ниже. Результаты и среды.
Реагенты Компания № в каталоге
Альфа-МЕМ Cibco- Invitrogen 12571-048
Аскорбиновая кислота Sigma A4544
Бета-глицерофосфат Sigma G6376
100Х пенициллин- стрептомицин-глутамин Cibco- Invitrogen 10378-016
Диметилсульфоксид (ДМСО) Sigma D5879 или D2650
Фетальная бычья сыворотка (FBS) Cansera CS-C08-500 (лот № SF50310)
или фетальная бычья сыворотка (FBS) TerraCell Int. CS-C08-1000A (лот SF-20308)
Альфа-MEM обычно производят со сроком годности 1 год. Для культивирования клеток использовали альфа-MEM, со сроком не более 6 месяцев после даты изготовления.
Среду для размножения (альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллин-стрептомицин-глутамин) готовили следующим образом.
Флакон с FBS объемом 500 мл размораживали и стерилизовали фильтрованием через фильтр с диаметром пор 0,22 микрона. 100 мл указанной FBS добавляли к 1 литру альфа-MEM с последующим добавлением 10 мл 100 х пенициллина-стрептомицина-глутамина. Неиспользованную FBS делили на алик воты и повторно замораживали для последующего использования.
Среду для дифференцировки (альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллин-стрептомицин-глутамин + 50 мкг/мл аскорбиновой кислоты + 10 мМ бета-глицерофосфат) готовили следующим образом.
100 мл среды для дифференцировки готовили добавлением в 100 мл среды для размножения аскор биновой кислоты и бета-глицерофосфата следующим образом:
Концентрация Объем
Конечная маточного концентрация раствора Аскорбиновая 10 мг/мл 0,5 мл 100 мкг/мл (50 кислота мкг/мл + 50 мкг/мл) β-глицерофосфат Iм 1,0 мл 10 мМ
Среду для дифференцировки готовили введением добавок в среду для размножения только в день, когда среду для дифференцировки собирались использовать для культивирования клеток. Конечная концентрация аскорбиновой кислоты в среде для дифференцировки составляла 100 мкг/мл, так как среда альфа-МЕМ уже содержала 50 мкг/мл аскорбиновой кислоты. Готовили маточный раствор аскорбиновой кислоты (10 мг/мл) и делили на аликвоты для замораживания при -80°С. Каждую аликвоту использовали только один раз (т.е. не замораживали повторно). Готовили маточный раствор бета-глицерофосфата (1 М) и делили на аликвоты для замораживания при -20°С. Каждую аликвоту замораживали и размораживали максимум 5 раз, прежде чем выбросить.
Культивирование клеток для размножения клеток MC3T3-E1-BF.
Культивирование клеток осуществляли при 37°С и 5% СО2. Создавали банк клеток в целях скрининга в отношении антител, нейтрализующих склеростин. Банк клеток создавали следующим образом.
- 88 037044
Один флакон с замороженными клетками MC3T3-E1-BF размораживали встряхиванием на водяной бане при 37°С. Размороженные клетки помещали в 10 мл среды для размножения (альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллин-стрептомицин-глутамин) в пробирке объемом 50 мл и осторожно осаждали центрифугированием в течение 5 мин. Затем клетки ресуспендировали в 4 мл альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллинстрептомицин-глутамин. После определения количества клеток с использованием красителя трипанового синего и гемацитометра 1х106 клеток помещали в 50 мл среды альфа-МЕМ/ 10% FBS/пенициллинстрептомицин-глутамин в один флакон T175.
Когда посеянные клетки сливались в монослой (примерно на 7 сутки), клетки трипсинизировали, используя смесь трипсин/EDTA (0,05% трипсин; 0,53 мМ EDTA), осторожно осаждали центрифугированием в течение 5 мин и затем ресуспендировали в 5 мл альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллин-стрептомицинглутамин. После определения количества клеток с использованием красителя трипанового синего и гемацитометра клетки высевали по 1х106 клеток в 50 мл среды альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллинстрептомицин-глутамин на один флакон T175. Количество флаконов T175, используемых для посева в данной точке, зависело от общего количества имеющихся клеток и требуемого количества флаконов, которое было необходимо для следующего посева. Лишние клетки замораживали по 1-2х106 живых клеток/мл в 90% FBS/10% ДМСО.
Когда клетки данного посева клетки сливались в монослой (примерно на 3-4 сутки), клетки трипсинизировали, используя смесь трипсин/EDTA (0,05% трипсин; 0,53 мМ EDTA), осторожно осаждали центрифугированием в течение 5 мин и затем ресуспендировали в 5 мл альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллинстрептомицин-глутамин. После определения количества клеток с использованием красителя трипанового синего и гемацитометра клетки высевали по 1х106 клеток в 50 мл среды альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллин-стрептомицин-глутамин на один флакон T175. Количество флаконов T175, используемых для посева в данной точке, зависело от общего количества имеющихся клеток и требуемого количества флаконов, которое было необходимо для следующего посева. Лишние клетки замораживали по 12х 106 живых клеток/мл в 90% FBS/10% ДМСО.
Когда клетки данного посева сливались в монослой (примерно на 3-4 сутки), клетки трипсинизировали, используя смесь трипсин/EDTA (0,05% трипсин; 0,53 мМ EDTA), осторожно осаждали центрифугированием в течение 5 мин и затем ресуспендировали в 5 мл альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллинстрептомицин-глутамин. После определения количества клеток с использованием красителя трипанового синего и гемацитометра клетки высевали по 1х106 клеток в 50 мл среды альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллин-стрептомицин-глутамин на один флакон T175. Количество флаконов T175, используемых для посева в данной точке зависело от общего количества имеющихся клеток и требуемого количества флаконов, которое было необходимо для следующего посева. Лишние клетки замораживали по 12х 106 живых клеток/мл в 90% FBS/10% ДМСО.
Когда клетки данного посева сливались в монослой (примерно на 3-4 сутки), клетки трипсинизировали, используя смесь трипсин/EDTA (0,05% трипсин; 0,53 мМ EDTA), осторожно осаждали центрифугированием в течение 5 мин и затем ресуспендировали в 5 мл альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллинстрептомицин-глутамин. После определения количества клеток с использованием красителя трипанового синего и гемацитометра клетки замораживали по 1-2х106 живых клеток/мл в 90% FBS/10% ДМСО. Полученные замороженные клетки последнего посева использовали для скринингового анализа.
Культивирование клеток для минерализации клеток MC3T3-F1-BF.
Культивирование клеток осуществляли при 37°С и 5% СО2. Желательно минимизировать колебания температуры и % СО2 во время культивирования клеток в целях минерализации. Этого можно достичь посредством минимизации периода времени, в течение которого чашки находятся вне инкубатора при обновлении среды, а также посредством минимизации количества открывания и закрывания двери инкубатора во время культивирования клеток в целях минерализации. В этой связи может быть полезным иметь инкубатор для культуры тканей, который предназначен исключительно для культивирования клеток в целях минерализации (и следовательно его не открывают и не закрывают больше, чем это необходимо).
Необходимое количество флаконов с клетками последнего посева, приготовленных как описано выше, размораживали встряхиванием при 37°С на водяной бане. Размороженные клетки помещали в 10 мл среды для размножения (альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллин-стрептомицин-глутамин) в пробирке объемом 50 мл и осторожно осаждали центрифугированием в течение 5 мин. Затем клетки ресуспендировали в 4 мл альфа-МЕМ/10% FBS/пенициллин-стрептомицин-глутамин. После определения количества клеток с использованием красителя трипанового синего и гемацитометра 2500 клеток высевали в 200 мкл среды для размножения на лунку покрытых коллагеном I 96-луночных планшетов (Becton Dickinson Labware, № в каталоге 354407).
Чтобы избежать влияния края планшета на минерализацию, клетки не высевали в наиболее удаленных рядах/колонках по краям планшета. Вместо этого в такие лунки добавляли 200 мкл PBS.
- 89 037044
Примерный способ культивирования клеток.
В описанном ниже способе в качестве начального дня посева клеток указана среда. Если в качестве начального дня для посева клеток используют другой день недели, то при этом используют расписанную по дням схему удаления и добавления среды в ходе всего процесса, которая указана ниже. Например, если клетки высевают во вторник, то культуральную среду не следует удалять и добавлять в первую пятницу и субботу, а только во вторую пятницу и субботу. Если начинать со вторника, то планшеты можно готовить для анализа кальция в последнее воскресенье.
Клетки высевали в среду по 2500 клеток в 200 мкл среды для размножения.
В четверг всю среду для размножения удаляли и добавляли 200 мкл среды для дифференцировки.
В пятницу удаляли 100 мкл среды и добавляли 100 мкл свежей среды для дифференцировки.
В понедельник 100 мкл среды удаляли и добавляли 100 мкл свежей среды для дифференцировки.
Во вторник 100 мкл среды удаляли и добавляли 100 мкл свежей среды для дифференцировки.
В среду 100 мкл среды удаляли и добавляли 100 мкл свежей среды для дифференцировки.
В четверг 100 мкл среды удаляли и добавляли 100 мкл свежей среды для дифференцировки.
В пятницу 100 мкл среды удаляли и добавляли 100 мкл свежей среды для дифференцировки.
В следующий понедельник планшеты готовили для анализа кальция следующим образом.
Планшеты промывали один раз 10 мМ трис-HCl, рН 7-8. Работая под вытяжкой добавляли по 200 мкл 0,5Н HCl на лунку. Затем планшеты замораживали при -80°С.
Непосредственно перед измерением кальция планшеты дважды подвергали замораживаниюоттаиванию, и затем растирание многоканальной пипеткой использовали для того, чтобы диспергировать содержимое планшета. Затем содержимому планшета давали возможность осесть при 4°С в течение 30 мин, и в этот момент извлекали соответствующее количество надосадка для измерения уровня кальция с использованием коммерчески доступного набора для определения кальция. Неограничивающим примером набора является набор для определения кальция (СРС) Liquicolor, № в каталоге 0150-250, Stanbio Laboratory, Boerne, ТХ.
В данном анализе, основанном на клетках, склеростин ингибирует одну или несколько последовательностей событий, приводящих к отложению минерала и включающих отложение минерала (т.е. склеростин ингибирует минерализацию). Таким образом, в экспериментах, в которых склеростин был включен в конкретный эксперимент по культивированию клеток, рекомбинантный склеростин добавляли в культуральные среды, начиная с первого четверга и далее каждый день смены среды. В тех случаях, когда тестировали моноклональное антитело (мАт) против склеростина в отношении способности нейтрализовать склеростин, т.е. обеспечивать минерализацию посредством нейтрализации способности склеростина ингибировать минерализацию, мАт добавляли в культуральные среды, начиная с первого четверга и далее каждый день при смене среды. Согласно протоколу это осуществляли следующим образом: мАт предварительно инкубировали с рекомбинантным склеростином в среде для дифференцировки в течение 45-60 мин при 37°С и затем такую среду использовали для питания клеток.
Выше описан 12-дневный протокол минерализации для клеток MC3T3-E1-BF. При использовании таких же реагентов и протокола смены среды для минерализации исходных клеток MC3T3-B1 (Sudo Н., Kodama H.-A., Amagai Y., Yamamoto S., Kasai S. 1983. In vitro differentiation and calcification in a new clonal osteogenic cell line derived from newborn mouse calvaria. J. Cell Biol. 96:191-198), которые авторы получили из банка клеток RIKEN (RCB 1126, RIKEN BioResource Center 3-1-1 Koyadai, Tsukuba-shi, Ibaraki 305-0074 Japan), требовался более длительный период (всего 20 дней для минерализации), чем для клеток MC3T3-E1-BF. Минерализацию исходных клеток MC3T3-B1 ингибировали рекомбинантным склеростином, и такое ингибирование блокировали, используя нейтрализующее склеростин антитело.
Пример 9.
Антитело против склеростина защищает от индуцированной воспалением потери костной массы в модели колита у мышей SCID, основанной на пересадке CD4CD45RBhigh
Сущность модели.
Инъекция подгруппы CD45RBhigh Т-клеток CD4+ мышам С.В-17 scid приводит к хроническому воспалению кишечника с характерными симптомами, сходными с симптомами воспалительного заболевания кишечника у человека (IBD). Диарея и истощение наблюдаются через 3-5 недель после пересадки клеток с тяжелой инфильтрацией лейкоцитов в ободочную кишку, сопровождаемой гиперплазией эпителиальных клеток и образованием гранулемы. У мышей С.В-17 scid, которые получают аналогичную подгруппу клеток CD4+, таких, которые экспрессируют CD45RBlow, не наблюдается колит, и они имеют прирост массы, неотличимый от мышей scid, которым не проводили инъекцию. Симптомы колита в модели колита на основе переноса Т-клеток CD4+ CD45RBhigh сопровождаются снижением минеральной плотности костей (BMD), по-видимому, в основном вследствие воспалительных механизмов, а не вследствие нарушения всасывания пищи (Byrne, F.R. et al., Gut 54:78-86, 2005).
Индукция колита и индуцированной воспалением потери костной массы.
Селезенки собирали от самок мышей balb/c и протирали через сито для получения клеток, имеющее ячейки 70 мкм. Затем популяцию CD4+ обогащали негативной селекцией с помощью шариков Dynabeads, используя антитела против В220, МАС-1, CD8 и I-Ad
- 90 037044
Затем обогащенную популяцию красили антителом против CD4, конъюгированным с ФИТЦ, и антителом против CD45RB, конъюгированным с РЕ, и фракционировали на популяции CD4+ CD45RBhigh и CD4+ CD45RBlow сортировкой на основе двух окрасок в устройстве Moflo (Dakocytomation). Популяции CD45RBhigh и CD45RBlow определяли как наиболее ярко окрашенные 40% и наиболее тускло окрашенные 20% клетки CD4+ соответственно. Затем 5х105 клеток инъецировали внутрибрюшинно мышам С.В-17 scid в 0 день, и развитие колита контролировали по появлению жидкого стула или диареи и потере массы. Измерения минеральной плотности костей проводили в конце исследования (88 день).
Влияние обработки антителами против склеростина на симптомы колита и BMP.
Ab-A IgG вводили в дозе 10 мг/кг подкожно, начиная с дня перед пересадкой клеток CD4+ CD45RBhigh, и проводили сравнение с мышами, которые получали антитело для негативного контроля 101.4, также вводимое в дозе 10 мг/кг подкожно. Далее дозы антител вводили еженедельно. Группу мышей, которые получали непатогенные клетки CD4+ CD45RBlow и которым вводили дозу 10 мг/кг 101.4, исследовали в качестве контроля. В конце исследования (88 день) измеряли минеральную плотность костей и брали срезы ободочной кишки для анализа инфильтрации клеток и оценки гистологического повреждения.
a) Отсутствие влияния на симптомы колита.
Обработка Ab-А не влияла на типичные симптомы колита, такие как потеря массы и инфильтрация воспалительных клеток в ободочную кишку. Подобным образом не было ослабления гистологического повреждения в ободочной кишке после обработки Ab-А.
b) Ингибирование индуцированной воспалением потери минеральной плотность костей.
На 88 день после пересадки клеток мышам С.В-17 scid измеряли минеральную плотность костей (общая BMD, BMD позвонков и BMD бедренной кости). По сравнению с контрольными мышами, которые получали непатогенные клетки CD4+ CD45RBlow, мыши, которые получали Т-клетки CD4+ CD45RBhigh и негативное контрольное антитело 101.4, имели пониженную минеральную плотность костей, как показано на фиг. 25. Напротив, снижения BMD не отмечали после обработки Ab-А. Измерения общей BMD, BMD позвонков и бедренной кости были значимо выше у мышей, получавших Т-клетки CD4+ CD45RBhigh и обработанных Ab-А, чем у мышей, получавших Т-клетки CD4+ CD45RBhigh и обработанных 101.4 (P<0,001 на основании критерия для множественного сравнения Бонферрони).
Пример 10.
Основанное на KINEXA определение аффинности (KD) антитела против склеростина по отношению к склеростину человека.
Аффинность нескольких антител против склеростина по отношению к склеростину человека оценивали в анализе равновесного связывания растворенных веществ с использованием KinExA® 3000 (Sapidyne Instruments Inc., Boise, ID). Для таких измерений шарики Reacti-Gel 6x (Pierce, Rockford, IL) предварительно покрывали 40 мкг/мл склеростина человека в 50 мМ Na2CO3, pH 9,6, при 4°С в течение ночи. Затем шарики блокировали 1 мг/мл БСА в 1 М трис-HCl, рН 7,5 при 4°С в течение 2 ч. 10, 30 или 100 пМ антитела смешивали с различными концентрациями склеростина человека в диапазоне концентраций от 0,1 пМ до 1 нМ и уравновешивали при комнатной температуре в течение 8 ч в PBS с 0,1 мг/мл БСА и 0,005% Р20. Затем смесь пропускали через покрытые склеростином человека шарики. Количество связанного с шариками антитела против склеростина количественно оценивали, используя флуоресцентно Cy5-меченное антитело козы против IgG мыши или флуоресцентно Cy5-меченное антитело козы против IgG человека (Jackson Immuno Research, West Grove) для образцов антител мыши или человека соответственно. Количественная мера флуоресцентного сигнала была пропорциональна концентрации свободного антитела против склеростина в каждой реакционной смеси в равновесии. Равновесную константу диссоциации (KD) получали на основе нелинейной регрессии кривых конкуренции, используя модель гомогенного связывания в одном сайте для n-кривых, предлагаемую в компьютерной программе KinExA Pro. Результаты анализа KinExA для выбранных антител суммированы в приведенной ниже таблице.
Антитела Антиген KD(nM) 95% доверительный интервал
АЬ-13 Склеростин человека 0, 6 0,4- 0, 8 пМ
АЬ-4 Склеростин человека 3 1,8 -4 пМ
АЬ-19 Склеростин человека 3 1,7 -4 пМ
АЬ-14 Склеростин человека 1 0,5 -2 пМ
АЬ-5 Склеростин человека 6 4,3 -8 пМ
АЬ-23 Склеростин человека 4 2,1 -8 пМ
- 91 037044
Пример 11.
Способ biacore для определения аффинности гуманизированного антитела против склеростина по отношению к склеростину человека.
Способом BIAcore наблюдают связывание между биомолекулами в реальном времени и без необходимости в мечении. Одну из взаимодействующих молекул, называемую лигандом, либо непосредственно иммобилизуют, либо улавливают на иммобилизованной поверхности, тогда как другая взаимодействующая молекула, называемая аналитом, проходит с потоком раствора над поверхностью с иммобилизованной молекулой. Датчик регистрирует изменение массы сенсорной поверхности по мере того, как аналит связывается с лигандом с образованием комплекса на поверхности. Получаемые данные соответствуют процессу ассоциации. Процесс диссоциации наблюдают, когда аналит заменяют буфером. В анализе аффинности BIAcore лигандом является антитело против склеростина, а аналитом является склеростин.
Прибор.
Biacore® 3000, Biacore AB, Uppsala, Sweden.
Сенсорный чип.
СМ5 (чистый для анализа), номер в каталоге: BR-1001-14, Biacore AB, Uppsala, Sweden. Чипы хранили при 4°С.
BIA-нормализующий раствор.
70% мас./мас. глицерин. Часть набора BIAmaintenance, номер в каталоге: BR-1002-51, Biacore AB, Uppsala, Sweden. Набор BIAmaintenance хранили при 4°С.
Набор для связывания аминов.
Номер в каталоге: BR-1000-50, Biacore AB, Uppsala, Sweden.
Гидрохлорид этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC). Готовили в концентрации 75 мг/мл в дистиллированной воде и хранили в виде аликвот по 200 мкл при -70°С.
N-гидроксисукцинимид (NHS). Готовили в концентрации 11,5 мг/мл в дистиллированной воде и хранили в виде аликвот по 200 мкл при -70°С.
М гидрохлорид этаноламина - NaOH, pH 8,5. Хранили в виде аликвот по 200 мкл при -70°С.
Буферы.
Рабочий буфер для иммобилизации улавливающего антитела: HBS-EP (0,01 М HEPES, рН 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ EDTA, 0,005% поверхностно-активного вещества Р20). Номер в каталоге: BR-1001-88, Biacore AB, Uppsala, Sweden. Буфер хранили при 4°С.
Буфер для иммобилизации: Ацетат 5,0 (10 мМ ацетат натрия, рН 5,0). Номер в каталоге: BR-100351, Biacore AB, Uppsala, Sweden. Буфер хранили при 4°С.
Рабочий буфер для анализа связывания: HbS-EP (0,01 М HEPES, рН 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ EDTA, 0,005% поверхностно-активное вещество Р20, номер в каталоге: BR-1001-88, Biacore AB, Uppsala, Sweden) с добавлением СМ-декстрана в концентрации 1 мг/мл (номер в каталоге 27560, Fluka BioChemika, Buchs, Switzerland). Буфер хранили при 4°С.
Ловушка для лиганда.
Аффинно очищенный F(ab')2-фрагмент антитела козы против IgG человека, специфичный к Fcфрагменту. Jackson ImmunoResearch Inc. (Pennsylvania, USA). Номер в каталоге: 109-006-098. Реагент хранили при 4°С.
Лиганд.
Гуманизированные антитела против склеростина человека Ab5, Ab14 и Ab20.
Аналит.
Рекомбинантный склеростин человека. Аликвоты хранили при -70°С и размораживали один раз для каждого анализа.
Раствор для регенерации.
мМ HCl, приготовленный разведением в дистиллированной воде из 11,6 М маточного раствора (BDH, Poole, England. Номер в каталоге: 101254Н).
мМ NaOH, приготовленный разбавлением в дистиллированной воде из 50 мМ маточного раствора. Номер в каталоге: BR-1003-58, Biacore AB, Uppsala, Sweden.
Способ анализа.
Форма анализа заключалась в улавливании антитела против склеростина иммобилизованным антителом против IgG-Fc человека и затем титровании склеростином поверхности с иммобилизованными антителами.
Пример способа приведен ниже.
BIA (анализ взаимодействия биомолекул) осуществляли, используя BIAcore 3000 (BIAcore AB). Аффинно очищенный F(ab')2-фрагмент антитела козы против IgG человека, специфичный для Fcфрагмента (Jackson ImmunoResearch) иммобилизовали на сенсорном чипе СМ5 посредством химической реакции связывания аминов до уровня иммобилизации, дающего сигнал ~4000 единиц (RU). Буфер HBSEP (10 мМ HEPES, рН 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ ЕРТА, 0,005% поверхностно-активного вещества Р20, BIAcore AB), содержащий 1 мг/мл СМ-декстрана, использовали в качестве рабочего буфера при скоро- 92 037044 сти потока 10 мкл/мин. Инъекцию 10 мкл антител против склеростина в концентрации ~5 мкг/мл использовали для улавливания иммобилизованным антителом против IgG-Fc человека. Уровни улавливания антител обычно составляли 100-200 RU. Проводили титрование склеростином иммобилизованных антител против склеростина в разных концентрациях со скоростью потока 30 мкл/мин. Поверхность регенерировали двумя инъекциями по 10 мкл 40 мМ HCl, затем инъекцией 5 мкл 5 мМ NaOH со скоростью потока 10 мкл/мин.
Кривые связывания, полученные после вычитания фона, анализировали, используя компьютерную программу BIAevaluation (версия 3.2), следуя стандартным процедурам. Кинетические параметры определяли на основе алгоритма подгонки.
Кинетические данные и рассчитанные константы диссоциации приведены в табл. 2.
Таблица 2
Аффинность антител против склеростина по отношению к склеростину
Антитело ka (1/Мс) kd (1/с) kd (пМ)
АЬ-5 1,78Е+06 1,74Е-04 97,8
АЬ-14 3,30Е+06 4,87Е-06 1,48
АЬ-20 2,62Е+06 4,16Е-05 15, 8
Пример 12.
Тестирование in vivo моноклональных антител против склеростина у макак-крабоедов.
В данном 2-месячном исследовании использовали тридцать три самки макак-крабоедов примерно 3-5-летнего возраста (Масаса fascicularis). В исследовании были включены 11 групп.
Группа 1: наполнитель (N=4).
Группа 2: Ab-23 (N=2, доза 3 мг/кг).
Группа 3: Ab-23 (N=3, доза 10 мг/кг).
Группа 4: Ab-23 (N=3, доза 30 мг/кг).
Группа 5: Ab-5 (N=3, доза 3 мг/кг).
Группа 6: Ab-5 (N=3, доза 10 мг/кг).
Группа 7: Ab-5 (N=3, доза 30 мг/кг).
Группа 8: Ab-14 (N=3, доза 3 мг/кг).
Группа 9: Ab-14 (N=3, доза 10 мг/кг).
Группа 10: Ab-14 (N=3, доза 30 мг/кг).
Группа 11: паратиреоидный гормон (1-34) [РТН(1-34)] (N=3, доза 10 мкг/кг).
Все дозы вводили подкожно. Дозы РТН(1-34) вводили каждый день, дозы моноклональных антител (мАт) вводили дважды (первую дозу в начале исследования, а вторую дозу во временной точке -один месяц). Для оценки параметров костей (например, минеральной плотности костей) осуществляли pQCT (периферическую количественную компьютерную томографию) и сканирование DXA (двухэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия) перед началом исследования (чтобы получить значения исходного уровня) и через месяц (перед введением второй дозы мАт), и, наконец, в конце исследования (временная точка 2 месяца), и в этой временной точке обезьян подвергали вскрытию для дополнительного анализа (например, гистоморфометрического анализа). Животных метили флуорохромом (14, 24, 47 и 57 дни) для динамической гистоморфометрии. Сыворотку собирали в разных временных точках во время исследования [1 день перед введением дозы (день введения первой дозы мАт), 1 день через 12 ч после введения дозы, 2 день, 3 день, 5 день, 7 день, 14 день, 21 день, 28 день, 29 день через 12 ч после введения дозы (29 день - день введения второй и последней дозы мАт), 30 день, 31 день, 33 день, 35 день, 42 день, 49 день и 56 день].
Измеряли три связанных с костями биомаркера сыворотки, используя коммерчески доступные наборы.
Остеокальцин (ОС) (набор для радиоиммуноанализа остеокальцина DSL; Diagnostic Systems Laboratories, Inc., Webster, TX, USA).
N-концевой пропептид проколлагена типа I (P1NP) (набор для радиоиммуноанализа P1NP; Orion Diagnostica, Espoo, Finland).
С-телопептидные фрагменты а1-цепей коллагена типа I (sCTXI) (ELISA сыворотки CrossLaps®; Nordic Bioscience Diagnostics A/S, Herlev, Denmark).
При сканировании с помощью pQCT и DXA получили данные о различных параметрах костей (включая минеральную плотность костей (BMD) и содержание минеральных веществ в костях) в различных местах скелета (включая метафиз и диафиз большеберцовой кости, метафиз и диафиз лучевой кости, шейку бедра, поясничные позвонки). Анализ полученных данных о костях (изменение в процентах от исходного уровня для каждого животного) и данных, имеющих отношение к анаболическим биомаркерам сыворотки (ОС, P1NP) (изменение в процентах от исходного уровня для каждого животного), выявил статистически значимые увеличения по сравнению с группой, обработанной наполнителем, нескольких параметров в некоторых временных точках и при нескольких дозах каждого мАт. Полученные данные о параметрах костей, данные о биомаркерах в сыворотке, а также гистоморфометрические дан
- 93 037044 ные показали, что каждое из 3 мАт (Ab-23, Ab-5 и Ab-14) способно нейтрализовать склеростин у макаккрабоедов. Наиболее высокой такая активность наблюдалась в случае антител Ab-23 и Ab-5, особенно при наиболее высокой дозе (30 мг/кг), с явным увеличением остеогенеза (анаболическое действие), а также чистым приростом в костях (например, BMD). Статистически значимые увеличения параметров костей и анаболических гистоморфометрических параметров также обнаружены для группы позитивного контроля (РТН(1-34)).
Маркеры остеогенеза в сыворотке (P1NP, остеокальцин) возрастали (p<0,05 по сравнению с наполнителем (VEH)) в разных временных точках и при разных дозах, но особенно в группе, обработанной антителами Ab-23 и Ab-5 в дозе 30 мг/кг. Гистоморфометрический анализ выявил значительное увеличение (p<0,05 по сравнению с VEH) скорости остеогенеза в спонгиозной кости поясничного позвонка и проксимальной части большеберцовой кости (до 5-кратного увеличения), а также эндокортикальной поверхности средней трети бедренной кости (до 10-кратного увеличения) при более высоких дозах Ab-23 и Ab-5. Толщина трабекулярной кости увеличивалась при высокой дозе Ab-23 и Ab-5 в поясничных позвонках (>60%, p<0,05 по сравнению в VEH). К концу исследования (2 месяца) поверхностная BMD, в виде изменения в процентах от исходного уровня, увеличивалась (p<0,05 по сравнению с VEH) в шейке бедра, ультрадистальном отделе лучевой кости (Ab-23, 30 мг/кг) и поясничных позвонках (Ab-5, 30 мг/кг). Увеличение поверхностной BMD в поясничных позвонках сопровождалось увеличением прочности позвонков (97% увеличение при максимальной нагрузке на позвонки в случае Ab-23, 30 мг/кг; p<0,05 по сравнению с VEH); значения исходных уровней поверхностной BMD поясничного отдела перед введением дозы мАт были статистически сходны во всех группах. В заключение, кратковременное введение нейтрализующих склеростин мАт макакам-крабоедам частично приводило к увеличению остеогенеза, BMD и прочности костей позвоночника.
Исходя из вышесказанного, будет понятно, что, хотя в данной публикации в целях иллюстрации описаны конкретные варианты осуществления изобретения, могут быть осуществлены различные модификации, не отходя от сути и не выходя за рамки объема изобретения. Соответственно, изобретение не ограничено ничем, кроме прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, опубликованные заявки на выдачу патента и патентные документы, упоминаемые в данном описании, включены в данное описание в виде ссылки.
- 94 037044
Список последовательностей <110> UCB S.A.
Amgen, Inc.
<120> Агенты, связывающие склеростин <130> 60117-225 <150>
<151> 2006-04-25 <150>
<151> 2006-04-17 <150> 60/782,244 <151> 2006-03-13 <150> 60/776,847 <151> 2006-02-24 <150> 60/667,583 <151> 2005-05-03 <160> 396 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 190 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 1
Gln Gly Trp Gln Ala Phe Lys Asn Asp Ala Thr Glu lie lie Pro Glu 15 1015
Leu Gly Glu Tyr Pro Glu Pro Pro Pro Glu Leu Glu Asn Asn Lys Thr 20 2530
Met Asn Arg Ala Glu Asn Gly Gly Arg Pro Pro His His Pro Phe Glu 35 4045
Thr Lys Asp Val Ser Glu Tyr Ser Cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg 50 5560
Tyr Val Thr Asp Gly Pro Cys Arg Ser Ala Lys Pro Val Thr GluLeu
70 7580
Val Cys Ser Gly Gln Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Alalie
9095
Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser Gly Pro Asp Phe Arg Cys lie 100 105110
Pro Asp Arg Tyr Arg Ala Gln Arg Val Gln Leu Leu Cys Pro Gly Gly 115 120125
Glu Ala Pro Arg Ala Arg Lys Val Arg Leu Val Ala Ser Cys Lys Cys 130 135140
Lys Arg Leu Thr Arg Phe His Asn Gln Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly 145 150 155160
- 95 037044
Thr Glu Ala Ala Arg Pro Gln Lys Gly Arg Lys Pro Arg Pro Arg Ala 165 170 175
Arg Ser Ala Lys Ala Asn Gln Ala Glu Leu Glu Asn Ala Tyr 180 185 190 <210> 2 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 2
Asp Val Ser Glu Tyr Ser Cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg 15 10 <210> 3 <211> 18 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 3
Ser Ala Lys Pro Val Thr Glu Leu Val Cys Ser Gly Gln Cys Gly Pro 15 10 15
Ala Arg <210> 4 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 4
Trp Trp Arg Pro Ser Gly Pro Asp Phe Arg Cys lie Pro Asp Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 5 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 5
Leu Val Ala Ser Cys Lys Cys Lys Arg Leu Thr Arg 15 10 <210> 6 <211> 26 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens
- 96 037044 <400> 6
Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro 1 5
Trp Arg Pro Ser Gly Pro Asp Phe 20 <210> 7 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 7
Asp Val Gln Met lie Gln Ser Pro 15
Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gln 20
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro 3540
Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp 5055
Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr 6570
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 100
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro
115120
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu 130135
Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly 145150
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser
165
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp 180
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr 195 200
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 <210> 8 <211> 645 <212> ДНК
Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp
1015
Arg Cys
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1015
Ala Ser Gln Gly Thr Ser lie Asn 2530
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 45
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Asp 7580
Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Tyr 9095
Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala 105110
Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
125
Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie 140
Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu 155160
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 170175
Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 185190
Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser
205
- 97 037044 <213> Mus musculus <400> 8 gatgtccaga tgattcagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctttgggaga catagtcacc60 atgacttgcc aggcaagtca gggcactagc attaatttaa actggtttca gcaaaaacca120 gggaaggctc ctaagctcct gatctatggt tcaagcaact tggaagatgg ggtcccatca180 aggttcagtg gcagtagata tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctggaggat240 gaagatctgg caacttattt ctgtctacaa catagttatc tcccgtacac gttcggaggg300 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag645 <210> 9 <211> 236 <212> БЕЛОК <213 > Mus musculus <400> 9
Met Asn Thr Arg Ala Pro Ala Glu Phe Leu Gly Phe Leu Leu Leu Trp
5 1015
Phe Leu Gly Ala Arg Cys Asp Val Gln Met lie Gln Ser Pro Ser Ser 20 2530
Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp lie Val Thr Met Thr Cys Gln Ala Ser 35 4045
Gln Gly Thr Ser He Asn Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 5560
Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp GlyVal
70 7580
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr LeuThr
9095
He Ser Ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln 100 105110
His Ser Tyr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu He 115 120125
Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser He Phe Pro Pro Ser Ser 130 135140
Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu AsnAsn
145 150 155160
Phe Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys He Asp Gly SerGlu
165 170175
Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp 180 185190
- 98 037044
Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr
195
200
205
Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr
210
215
220
Ser Pro lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cy:
225
230
235 <210> 10 <211> 711 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 10 atgaacacga gggcccctgc tgagttcctt gggttcctgt tgctctggtt tttaggtgcc60 agatgtgatg tccagatgat tcagtctcca tcctccctgt ctgcatcttt gggagacata120 gtcaccatga cttgccaggc aagtcagggc actagcatta atttaaactg gtttcagcaa180 aaaccaggga aggotcctaa gctcctgatc tatggttcaa gcaacttgga agatggggtc240 ccatcaaggt tcagtggcag tagatatggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg300 gaggatgaag atctggcaac ttatttctgt ctacaacata gttatctccc gtacacgttc360 ggagggggga ccaagctgga aataaaacgg gctgatgctg caccaactgt atccatcttc420 ccaccatcca gtgagcagtt aacatctgga ggtgcctcag tcgtgtgctt cttgaacaac480 ttctacccca aagacatcaa tgtcaagtgg aagattgatg gcagtgaacg acaaaatggc540 gtcctgaaca gttggactga tcaggacagc aaagacagca cctacagcat gagcagcacc600 ctcacgttga ccaaggacga gtatgaacga cataacagct atacctgtga ggccactcac660 aagacatcaa cttcacccat tgtcaagagc ttcaacagga atgagtgtta g711 <210> 11 <211> 443 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 11
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
Tyr Met Ser Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser lie Ala Tyr
Met Glu lie Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
- 99 037044
Thr Leu
Pro Leu
130
Gly Cys 145
Asn Ser
Gln Ser
Thr Trp
Ser Thr
210
Pro Cys 225
Pro Lys
Cys Val
Trp Phe
Glu Glu
290
Met His 305
Ser Pro
Gly Arg
Gln Met
Phe Pro
370
Glu Asn 385
Phe lie
Asn Thr
Thr Glu
100
Val Thr 115
Ala Pro
Leu Val
Gly Ser
Asp Leu 180
Pro Ser 195
Lys Val lie Cys Pro Lys Val Val
260
Val Asp 275
Gln Phe Gln Asp Ala Phe Pro Lys 340
Ala Lys 355
Glu Asp
Tyr Lys
Tyr Ser
Phe Thr 420
Lys Ser 435
Val Ser
Gly Ser
Lys Gly 150
Leu Ser 165
Tyr Thr
Glu Thr
Asp Lys
Thr Val
230
Asp Val 245
Asp lie
Asp Val
Asn Ser
Trp Leu
310
Pro Ala 325
Ala Pro
Asp Lys lie Thr
Asn Thr
390
Lys Leu 405
Cys Ser
Leu Ser
Ala Ala
120
Ala Ala 135
Tyr Phe
Ser Gly
Leu Ser
Val Thr
200
Lys lie 215 Pro Glu
Leu Thr
Ser Lys
Glu Val
280
Thr Phe 295
Asn Gly
Pro lie
Gln Val
Val Ser
360
Val Glu 375
Gln Pro
Asn Val
Val Leu
His Ser
440
105
Lys Thr
Gln Thr
Pro Glu
Val His
170
Ser Ser 185
Cys Asn
Val Pro
Val Ser
Ile Thr
250
Asp Asp 265
His Thr
Arg Ser
Lys Glu
Glu Lys 330
Tyr Thr 345 Leu Thr
Trp Gln lie Met
Gln Lys
410
His Glu
425
Pro Gly
Thr Pro
Asn Ser
140
Pro Val 155
Thr Phe
Val Thr
Val Ala
Arg Asp 220
Ser Val 235
Leu Thr
Pro Glu
Ala Gln
Val Ser
300
Phe Lys 315
Thr lie lie Pro
Cys Met
Trp Asn 380
Asp Thr 395
Ser Asn
Gly Leu
Lys
110
Pro Ser 125 Met Val
Thr Val
Pro Ala
Val Pro
190
His Pro 205
Cys Gly
Phe lie
Pro Lys
Val Gln
270
Thr Gln 285
Glu Leu
Cys Arg
Ser Lys
Pro Pro
350 lie Thr 365
Gly Gln
Asp Gly
Trp Glu
His Asn
430
Val Tyr
Thr Leu
Thr Trp 160
Val Leu 175
Ser Ser
Ala Ser
Cys Lys
Phe Pro
240
Val Thr 255
Phe Ser
Pro Arg
Pro lie
Val Asn
320
Thr Lys 335
Lys Glu
Asp Phe
Pro Ala
Ser Tyr
400
Ala Gly 415 His His
- 100 037044 <210> 12 <211> 1332 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 12 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa ctggtgacgc ctggggcttc agtgaagata60 tcttgtaagg cttctggata cacattcact gaccactaca tgagctgggt gaagcagagt120 catggaaaaa gccttgagtg gattggagat attaatccct attctggtga aactacctac180 aaccagaagt tcaagggcac ggccacattg actgtagaca agtcttccag tatagcctac240 atggagatcc gcggcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagatgat300 tacgacgcct ctccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgcagcc360 aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc420 atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg480 aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc540 tacactctga gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc600 tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat660 tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc720 ccaaagccca aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta780 gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg840 cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt900 gaacttccca tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac960 agtccagctt tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag1020 gctccacagg tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt1080 ctgacctgca tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat1140 gggcagccag cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac1200 ttcatctaca gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc1260 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct1320 cctggtaaat ga1332 <210> 13 <211> 462 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 13
Met Arg Cys Arg Trp lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 15 1015
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr
2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 4045
Thr Asp His Tyr Met Ser Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu 50 5560
- 101 037044
Glu Trp 65
Gln Lys
He Ala
Tyr Tyr
Gly Gln 130
Ser Val 145
Val Thr
Val Thr
Ala Val
Pro Ser
210
Pro Ala 225
Gly Cys
He Phe
Lys Val
Gln Phe
290
Gln Pro 305
Leu Pro
Arg Val
Lys Thr
Pro Lys
370
Thr Asp 385
Gln Pro lie Gly
Phe Lys
Tyr Met
100
Cys Ala 115
Gly Thr
Tyr Pro
Leu Gly
Trp Asn
180
Leu Gln 195
Ser Thr
Ser Ser
Lys Pro
Pro Pro
260
Thr Cys 275
Ser Trp
Arg Glu
He Met
Asn Ser
340
Lys Gly 355
Glu Gln
Phe Phe
Ala Glu
Asp He 70
Gly Thr 85
Glu He
Arg Asp
Leu Val
Leu Ala
150
Cys Leu 165
Ser Gly
Ser Asp
Trp Pro
Thr Lys
230
Cys He 245
Lys Pro
Val Val
Phe Val
Glu Gln
310
His Gln 325
Pro Ala
Arg Pro
Met Ala
Pro Glu
390
Asn Tyr
Asn Pro
Ala Thr
Arg Gly
Asp Tyr 120
Thr Val 135
Pro Gly
Val Lys
Ser Leu
Leu Tyr
200
Ser Glu 215
Val Asp
Cys Thr
Lys Asp
Val Asp 280
Asp Asp 295 Phe Asn
Asp Trp
Phe Pro
Lys Ala 360
Lys Asp 375
Asp He
Lys Asn
Tyr Ser
Leu Thr 90
Leu Thr 105 Asp Ala
Ser Ala
Ser Ala
Gly Tyr 170
Ser Ser 185
Thr Leu
Thr Val
Lys Lys
Val Pro
250
Val Leu
265 lie Ser
Val Glu
Ser Thr
Leu Asn
330
Ala Pro 345 Pro Gln
Lys Val
Thr Val
Thr Gln
Gly Glu 75
Val Asp
Ser Glu
Ser Pro
Ala Lys 140
Ala Gln 155
Phe Pro
Gly Val
Ser Ser
Thr Cys 220 lie Val 235 Glu Val
Thr He
Lys Asp
Val His
300 Phe Arg 315
Gly Lys
He Glu
Val Tyr
Ser Leu
380 Glu Trp 395
Pro He
Thr Thr
Lys Ser
Asp Ser 110
Phe Ala 125
Thr Thr
Thr Asn
Glu Pro
His Thr
190
Ser Val 205
Asn Val
Pro Arg
Ser Ser
Thr Leu
270
Asp Pro 285
Thr Ala
Ser Val
Glu Phe
Lys Thr
350
Thr lie 365
Thr Cys
Gln Trp
Met Asp
Tyr Asn 80
Ser Ser 95 Ala Val
Tyr Trp
Pro Pro
Ser Met
160
Val Thr 175
Phe Pro
Thr Val
Ala His
Asp Cys
240
Val Phe
255
Thr Pro
Glu Val
Gln Thr
Ser Glu
320
Lys Cys 335
He Ser
Pro Pro
Met lie
Asn Gly
400
Thr Asp
- 102 037044
405 410415
Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp 420 425430
Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His 435 440445
Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 450 455460 <210> 14 <211> 1389 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 14 atgagatgca ggtggatctt tctctttctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag60 gtccagctgc aacagtctgg acctgaactg gtgacgcctg gggcttcagt gaagatatct120 tgtaaggctt ctggatacac attcactgac cactacatga gctgggtgaa gcagagtcat180 ggaaaaagcc ttgagtggat tggagatatt aatccctatt ctggtgaaac tacctacaac240 cagaagttca agggcacggc cacattgact gtagacaagt cttccagtat agcctacatg300 gagatccgcg gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag agatgattac360 gacgcctctc cgtttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgcagccaaa420 acgacacccc catctgtcta tccactggcc cctggatctg ctgcccaaac taactccatg480 gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac540 tctggatccc tgtccagcgg tgtgcacacc ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac600 actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc660 aacgttgccc acccggccag cagcaccaag gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt720 ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca780 aagcccaagg atgtgctcac cattactctg actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac840 atcagcaagg atgatcccga ggtccagttc agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac900 acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa960 cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt1020 ccagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct1080 ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg1140 acctgcatga taacagactt cttccctgaa gacattactg tggagtggca gtggaatggg1200 cagccagcgg agaactacaa gaacactcag cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc1260 atctacagca agctcaatgt gcagaagagc aactgggagg caggaaatac tttcacctgc1320 tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac catactgaga agagcctctc ccactctcct1380 ggtaaatga1389 <210> 15 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 15
- 103 037044
Asp lie Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly
5 1015
Leu Arg Ala Thr lie Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
2530
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
4045
Lys Leu Leu lie Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly lie Pro Ala
5560
Arg Phe Ser Gly Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn lieHis
70 7580
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Val Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln SerAsn
9095
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg
100 105110
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
115 120125
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135140
Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu ArgGln
145 150 155160
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp SerThr
165 170175
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
180 185190
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
195 200205 lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210215 <210> 16 <211> 657 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 16 gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttgactgtgt ctctaggcct gagggccacc60 atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggtg atagttatat gaactggtac120 cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct180 gggatcccag ccaggtttag tggcaatggg tctgggacag acttcaccct caacatccat240 cctgtggagg aggaggatgc tgtaacctat tactgtcaac aaagtaatga ggatccgtgg300 acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc360 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg420 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa480 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc540
- 104 037044 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 600 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag 657 <210> 17 <211> 238 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus
<400> 17
Met 1 Glu Thr Asp Thr 5 He Leu Leu Trp Val 10 Leu Leu Leu Trp Val 15 Pro
Gly Ser Thr Gly 20 Asp He Val Leu Thr 25 Gln Ser Pro Ala Ser 30 Leu Thr
Val Ser Leu 35 Gly Leu Arg Ala Thr 40 He Ser Cys Lys Ala 45 Ser Gln Ser
Val Asp 50 Tyr Asp Gly Asp Ser 55 Tyr Met Asn Trp Tyr 60 Gln Gln Lys Pro
Gly 65 Gln Pro Pro Lys Leu 70 Leu lie Tyr Ala Ala 75 Ser Asn Leu Glu Ser 80
Gly He Pro Ala Arg 85 Phe Ser Gly Asn Gly 90 Ser Gly Thr Asp Phe 95 Thr
Leu Asn He His 100 Pro Val Glu Glu Glu 105 Asp Ala Val Thr Tyr 110 Tyr Cys
Gln Gln Ser 115 Asn Glu Asp Pro Trp 120 Thr Phe Gly Gly Gly 125 Thr Lys Leu
Glu lie 130 Lys Arg Ala Asp Ala 135 Ala Pro Thr Val Ser 140 lie Phe Pro Pro
Ser 145 Ser Glu Gln Leu Thr 150 Ser Gly Gly Ala Ser 155 Val Val Cys Phe Leu 160
Asn Asn Phe Tyr Pro 165 Lys Asp He Asn Val 170 Lys Trp Lys lie Asp 175 Gly
Ser Glu Arg Gln 180 Asn Gly Val Leu Asn 185 Ser Trp Thr Asp Gln 190 Asp Ser
Lys Asp Ser 195 Thr Tyr Ser Met Ser 200 Ser Thr Leu Thr Leu 205 Thr Lys Asp
Glu Ser 225 Tyr 210 Thr Glu Ser Arg Pro His He Asn Val 230 Ser 215 Lys Tyr Ser Thr Phe Cys Asn Glu Arg 235 Ala 220 Asn Thr Glu His Cys Lys Thr
<210> 18 <211> 717 <212> ДНК <213> Mus musculus
- 105 037044 <400> 18 atggagacag acacaatcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ctccactggt60 gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttgactgtgt ctctaggcct gagggccacc120 atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggtg atagttatat gaactggtac180 cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct240 gggatcccag ccaggtttag tggcaatggg tctgggacag acttcaccct caacatccat300 cctgtggagg aggaggatgc tgtaacctat tactgtcaac aaagtaatga ggatccgtgg360 acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc420 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg480 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa540 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc600 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc660 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag717 <210> 19 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 19
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
5 1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Cys
2530
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 4045
Gly Asp lie Asn Pro Phe Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Ser His Tyr Tyr Phe Asp Gly Arg Val Pro Trp Asp Ala Met 100 105110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr 115 120125
Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr 130 135140
Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe ProGlu
145 150 155160
Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly ValHis
165 170175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser 180 185190
- 106 037044
Val Thr
Val Ala
210
Arg Asp 225
Ser Val
Leu Thr
Pro Glu
Ala Gln
290
Val Ser 305
Phe Lys
Thr lie lie Pro
Cys Met 370
Trp Asn 385
Asp Thr
Ser Asn
Gly Leu
Lys
Val Pro 195
His Pro
Cys Gly
Phe lie
Pro Lys 260
Val Gln 275
Thr Gln
Glu Leu
Cys Arg
Ser Lys 340
Pro Pro 355 lie Thr
Gly Gln
Asp Gly
Trp Glu 420
His Asn 435
Ser Ser
Ala Ser
Cys Lys 230
Phe Pro 245
Val Thr
Phe Ser
Pro Arg
Pro lie 310
Val Asn 325 Thr Lys
Lys Glu
Asp Phe
Pro Ala
390
Ser Tyr 405
Ala Gly
His His
Thr Trp
200
Ser Thr 215
Pro Cys
Pro Lys
Cys Val
Trp Phe
280
Glu Glu 295
Met His
Ser Ala
Gly Arg
Gln Met
360
Phe Pro 375
Glu Asn
Phe lie
Asn Thr
Thr Glu
440
Pro Ser
Lys Val lie Cys Pro Lys 250
Val Val 265
Val Asp
Gln Phe
Gln Asp
Ala Phe 330
Pro Lys 345
Ala Lys
Glu Asp
Tyr Lys
Tyr Ser
410
Phe Thr 425
Lys Ser
Glu Thr
Asp Lys 220
Thr Val 235 Asp Val
Asp lie
Asp Val
Asn Ser
300
Trp Leu 315
Pro Ala
Ala Pro
Asp Lys lie Thr
380
Asn Thr 395
Lys Leu
Cys Ser
Leu Ser
Val Thr 205
Lys lie
Pro Glu
Leu Thr
Ser Lys 270
Glu Val 285
Thr Phe
Asn Gly
Pro lie
Gln Val
350
Val Ser 365
Val Glu
Gln Pro
Asn Val
Val Leu
430
His Ser 445
Cys Asn
Val Pro
Val Ser
240 lie Thr 255 Asp Asp
His Thr
Arg Ser
Lys Glu
320
Glu Lys 335
Tyr Thr
Leu Thr
Trp Gln lie Met
400
Gln Lys 415
His Glu
Pro Gly <210> 20 <211> 1350 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 20 gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag tcctgtaagg cttctggata cacattcact catgggaaga gccttgaatg gattggagat ctggtgaagc ctgggacttc agtgaagatg 60 gactgctaca tgaactgggt gaagcagagc 120 attaatcctt tcaacggtgg tactacctac 180
- 107 037044 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcagctca acagcctgac atctgacgac tctgcagtct attactgtgc aagatcccat300 tattacttcg atggtagagt cccttgggat gctatggact actggggtca aggaacctca360 gtcaccgtct cctcagccaa aacgacaccc ccatctgtct atccactggc ccctggatct420 gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag480 ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagcg gtgtgcacac cttcccagct540 gtcctgcagt ctgacctcta cactctgagc agctcagtga ctgtcccctc cagcacctgg600 cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag660 aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag ccttgcatat gtacagtccc agaagtatca720 tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag gatgtgctca ccattactct gactcctaag780 gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt840 gragatgatg tggaggtgca cacagctcag acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc900 actttccgct cagtcagtga acttcccatc atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag960 ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa1020 accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg1080 gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg ataacagact tcttccctga agacattact1140 gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg gagaactaca agaacactca gcccatcatg1200 gacacagatg gctcttactt catctacagc aagctcaatg tgcagaagag caactgggag1260 gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta catgagggcc tgcacaacca ccatactgag1320 aagagcctct cccactctcc tggtaaatga1350 <210> 21 <211> 468 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 21
Met Gly Trp Asn Trp lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 15 1015
Val Tyr Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys ' 20 2530
Pro Gly Thr Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 4045
Thr Asp Cys Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu ' 50 5560
Glu Trp lie Gly Asp lie Asn Pro Phe Asn Gly Gly Thr Thr TyrAsn
70 7580
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser SerSer
9095
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser His Tyr Tyr Phe Asp Gly Arg Val Pro Trp 115 120125
Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
- 108 037044
130 135140
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly SerAla
145 150 155160
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys GlyTyr
165 170175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 180 185190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 195 200205
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val 210 215220
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp LysLys
225 230 235240 lie Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys lie Cys Thr ValPro
245 250255
Glu Val Ser Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu 260 265270
Thr lie Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser 275 280285
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu 290 295300
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn SerThr
305 310 315320
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro lie Met His Gln Asp Trp LeuAsn
325 330335
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro 340 345350 lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln 355 360365
Val Tyr Thr lie Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val 370 375380
Ser Leu Thr Cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie ThrVal
385 390 395400
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn ThrGln
405 410415
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn 420 425430
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val 435 440445
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His 450 455460
Ser Pro Gly Lys
465
- 109 037044 <210> 22 <211> 1407 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 22 atgggatgga actggatctt tctcttcctc ttgtcaggaa ctgcaggtgt ctactctgag60 gtccagctgc aacaatctgg acctgagctg gtgaagcctg ggacttcagt gaagatgtcc120 tgtaaggctt ctggatacac attcactgac tgctacatga actgggtgaa gcagagccat180 gggaagagcc ttgaatggat tggagatatt aatcctttca acggtggtac tacctacaac240 cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg300 cagctcaaca gcctgacatc tgacgactct gcagtctatt actgtgcaag atcccattat360 tacttcgatg gtagagtccc ttgggatgct atggactact ggggtcaagg aacctcagtc420 accgtctcct cagccaaaac gacaccccca tctgtctatc cactggcccc tggatctgct480 gcccaaacta actccatggt gaccctggga tgcctggtca agggctattt ccctgagcca540 gtgacagtga cctggaactc tggatccctg tccagcggtg tgcacacctt cccagctgtc600 ctgcagtctg acctctacac tctgagcagc tcagtgactg tcccctccag cacctggccc660 agcgagaccg tcacctgcaa cgttgcccac ccggccagca gcaccaaggt ggacaagaaa720 attgtgccca gggattgtgg ttgtaagcct tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct780 gtcttcatct tccccccaaa gcccaaggat gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc840 acgtgtgttg tggtagacat cagcaaggat gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta900 gatgatgtgg aggtgcacac agctcagacg caaccccggg aggagcagtt caacagcact960 ttccgctcag tcagtgaact tcccatcatg caccaggact ggctcaatgg caaggagttc1020 aaatgcaggg tcaacagtgc agctttccct gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc1080 aaaggcagac cgaaggctcc acaggtgtac accattccac ctcccaagga gcagatggcc1140 aaggataaag tcagtctgac ctgcatgata acagacttct tccctgaaga cattactgtg1200 gagtggcagt ggaatgggca gccagcggag aactacaaga acactcagcc catcatggac1260 acagatggct cttacttcat ctacagcaag ctcaatgtgc agaagagcaa ctgggaggca1320 ggaaatactt tcacctgctc tgtgttacat gagggcctgc acaaccacca tactgagaag1380 agcctctccc actctcctgg taaatga1407 <210> 23 <211> 217 <212> БЕЛОК <213> Химера кролик-мышь <400> 23
Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly 15 1015
Gly Thr Val Thr He Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn
2530
Asn Trp Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 35 4045
Leu lie Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
- 110 037044
5560
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr He Ser GlyVal
70 7580
Gln Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ala Tyr AsnAsp
9095
Val lie Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg Thr 100 105110
Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser He Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu 115 120125
Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135140
Lys Asp He Asn Val Lys Trp Lys He Asp Gly Ser Glu Arg GlnAsn
145 150 155160
Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser ThrTyr
165 170175
Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His 180 185190
Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro He
195 200205
Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210215 <210> 24 <211> 654 <212> ДНК <213> Химера кролик-мышь <400> 24 gcgcaagtgc tgacccagac tccagcctcc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc60 atcaattgcc agtccagtca gagtgtttat gataacaact ggttagcctg gtttcagcag120 aaaccagggc agcctcccaa gctcctgatt tatgatgcat ccgatctggc atctggggtc180 ccatcgcggt tcagtggcag tggatctggg acacagttca ctctcaccat cagcggcgtg240 cagtgtgccg atgctgccac ttactactgt caaggcgctt ataatgatgt tatttatgct300 ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa cgtacggatg ctgcaccaac tgtatccatc360 ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac420 aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag tggaagattg atggcagtga acgacaaaat480 ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac agcaaagaca gcacctacag catgagcagc540 accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cgacataaca gctatacctg tgaggccact600 cacaagacat caacttcacc cattgtcaag agcttcaaca ggaatgagtg ttag654 <210> 25 <211> 239 <212> БЕЛОК <213> Химера кролик-мышь
- 111 037044 <400> 25
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
5 1015
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser
2530
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr lie Asn Cys Gln Ser Ser
4045
Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Trp Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro
5560
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Asp Ala Ser Asp Leu AlaSer
70 7580
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln PheThr
9095
Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105110
Gln Gly Ala Tyr Asn Asp Val lie Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu
115 120125
Val Val Val Lys Arg Thr Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro
130 135140
Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val CysPhe
145 150 155160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lieAsp
165 170175
Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp
180 185190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys
195 200205
Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys
210 215220
Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225 230235 <210> 26 <211> 720 <212> ДНК <213> Химера кролик-мышь <400> 26 atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc60 acatttgcgc aagtgctgac ccagactcca gcctccgtgt ctgcagctgt gggaggcaca120 gtcaccatca attgccagtc cagtcagagt gtttatgata acaactggtt agcctggttt180 cagcagaaac cagggcagcc tcccaagctc ctgatttatg atgcatccga tctggcatct240 ggggtcccat cgcggttcag tggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc300 ggcgtgcagt gtgccgatgc tgccacttac tactgtcaag gcgcttataa tgatgttatt360
- 112 037044
tatgctttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggatgctgc accaactgta 420
tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 480
ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 540
caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat caggacagca aagacagcac ctacagcatg 600
agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag 660
gccactcaca agacatcaac ttcacccatt gtcaagagct tcaacaggaa tgagtgttag 720
<210> 27 <211> 433 <212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Гуманизированное антитело < 400> 27
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 15 1015
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Trp 20 2530
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp lie Gly 35 4045
Thr Xie Asp Sex- Gly Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 5560
Arg Phe Thr lie Ser Arg Thr Ser Thr Thr Met Asp Leu Lys MetThr
70 7580
Ser Leu Thr Thr Gly Asp Thr Ala Arg Tyr Phe Cys Ala Arg AsnTrp
9095
Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 100 105110
Lys Gly Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr 115 120125
Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu 130 135140
Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly ValHis
145 150 155160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Sex'Ser
165 170175
Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn 180 185190
Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Val Pro 195 200205
Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser 210 215220
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie Thr
- 113 037044
225
Leu Thr
Pro Glu
Ala Gln
Val Ser
290
Phe Lys 305
Thr lie lie Pro
Cys Met
Trp Asn 370
Asn Thr 385
Ser Asn
Gly Leu
Lys
Pro Lys
Val Gln
260 Thr Gln 275 Glu Leu
Cys Arg
Ser Lys
Pro Pro 340 lie Thr 355
Gly Gln
Asn Gly
Trp Glu
His Asn 420
230
Val Thr 245
Phe Ser
Pro Arg
Pro lie
Val Asn
310
Thr Lys 325
Lys Glu
Asp Phe
Pro Ala
Ser Tyr 390
Ala Gly 405 His His
Cys Val
Trp Phe
Glu Glu
280
Met His 295
Ser Ala
Gly Arg
Gln Met
Phe Pro
360
Glu Asn 375 Phe Val
Asn Thr
Thr Glu
Val Val
250
Val Asp 265
Gln Phe
Gln Asp
Ala Phe
Pro Lys 330
Ala Lys 345
Glu Asp
Tyr Lys
Tyr Ser
Phe Thr
410
Lys Ser 425
235
Asp lie
Asp Val
Asn Ser
Trp Leu 300
Pro Ala 315
Ala Pro
Asp Lys lie Thr
Asn Thr
380
Lys Leu 395
Cys Ser
Leu Ser
Ser Lys
Glu Val
270
Thr Phe 285
Asn Gly
Pro lie
Gln Val
Val Ser
350
Val Glu 365
Gln Pro
Asn Val
Val Leu
His Ser
430
240
Asp Asp 255
His Thr
Arg Ser
Lys Glu
Glu Lys 320
Tyr Thr 335
Leu Thr
Trp Gln lie Met
Gln Lys
400
His Glu
415
Pro Gly <210> 28 <211> 1302 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Гуманизированное антитело <400> 28 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc60 tgcacagcct ctggattctc cctcagtagt tattggatga actgggtccg ccaggctcca120 ggggaggggc tggaatggat cggaaccatt gattctggtg gtaggacgga ctacgcgagc180 tgggcaaaag gccgattcac catctccaga acctcgacta cgatggatct gaaaatgacc240 agtctgacga ccggggacac ggcccgttat ttctgtgcca gaaattggaa cttgtggggc300 caaggcaccc tcgtcaccgt ctcgagcgct tctacaaagg gcccatctgt ctatccactg360 gcccctggat ctgctgccca aactaactcc atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc420 tatttccctg agccagtgac agtgacctgg aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac480
- 114 037044 accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc tacactctga gcagctcagt gactgtcccc540 tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc600 aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc660 ccagaagtat catctgtctt catcttcccc ccaaagccca aggatgtgct caccattact720 ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag780 ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag840 cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt gaacttccca tcatgcacca ggactggctc900 aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa960 accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag gctccacagg tgtacaccat tccacctccc1020 aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt ctgacctgca tgataacaga cttcttccct1080 gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat gggcagccag cggagaacta caagaacact1140 cagcccatca tggacacaga tggctcttac ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag1200 agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac1260 caccatactg agaagagcct ctcccactct cctggtaaat ga1302 <210> 29 <211> 452 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Гуманизированное антитело <400> 29
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 15 1015
Val His Cys Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 2530
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser 35 4045
Ser Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu 50 5560
Trp lie Gly Thr lie Asp Ser Gly Gly Arg Thr Asp Tyr Ala SerTrp
70 7580
Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Thr Ser Thr Thr Met AspLeu
9095
Lys Met Thr Ser Leu Thr Thr Gly Asp Thr Ala Arg Tyr Phe Cys Ala 100 105110
Arg Asn Trp Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala 130 135140
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys GlyTyr
145 150 155160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
- 115 037044
Gly Val
Ser Ser
Thr Cys
210
He Val 225
Glu Val
Thr He
Lys Asp
Val His
290
Phe Arg 305
Gly Lys lie Glu
Val Tyr
Ser Leu
370
Glu Trp 335
Pro lie
Val Gln
Leu His
Ser Pro
450
His Thr
180
Ser Val 195
Asn Val
Pro Arg
Ser Ser
Thr Leu
260
Asp Pro 275
Thr Ala
Ser Val
Glu Phe
Lys Thr 340
Thr He 355
Thr Cys
Gln Trp
Met Asn
Lys Ser
420
Glu Gly 435
Gly Lys
165
Phe Pro
Thr Val
Ala His
Asp Cys 230
Val Phe 245
Thr Pro
Glu Val
Gln Thr
Ser Glu
310
Lys Cys 325 lie Ser
Pro Pro
Met lie
Asn Gly 390
Thr Asn 405
Asn Trp
Leu His
Ala Val
Pro Ser 200
Pro Ala 215
Gly Cys lie Phe Lys Val Gln Phe 280
Gln Pro 295
Leu Pro
Arg Val
Lys Thr
Pro Lys 360
Thr Asp 375
Gln Pro
Gly Ser
Glu Ala
Asn His 440
170
Leu Gln 185
Ser Thr
Ser Ser
Lys Pro
Pro Pro
250
Thr Cys 265
Ser Trp
Arg Glu lie Met
Asn Ser
330
Lys Gly 345
Glu Gln
Phe Phe
Ala Glu
Tyr Phe 410
Gly Asn 425
His Thr
Ser Asp
Trp Pro
Thr Lys 220
Cys He 235
Lys Pro
Val Val
Phe Val
Glu Gln
300
His Gln 315
Ala Ala
Arg Pro
Met Ala
Pro Glu
380
Asn Tyr 395
Val Tyr
Thr Phe
Glu Lys
Leu Tyr
190
Ser Glu 205
Val Asp
Cys Thr
Lys Asp
Val Asp
270
Asp Asp 285
Phe Asn
Asp Trp
Phe Pro
Lys Ala 350
Lys Asp 365
Asp lie
Lys Asn
Ser Lys
Thr Cys 430
Ser Leu 445
175
Thr Leu
Thr Val
Lys Lys
Val Pro
240
Val Leu 255
He Ser
Val Glu
Ser Thr
Leu Asn
320
Ala Pro 335
Pro Gln
Lys Val
Thr Val
Thr Gln
400
Leu Asn 415 Ser Val
Ser His <210> 30 <211> 1359 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
- 116 037044 <223> Гуманизированное антитело <400> 30 atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccactgtcag60 tcgctggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc120 acagcctctg gattctccct cagtagttat tggatgaact gggtccgcca ggctccaggg180 gaggggctgg aatggatcgg aaccattgat tctggtggta ggacggacta cgcgagctgg240 gcaaaaggcc gattcaccat ctccagaacc tcgactacga tggatctgaa aatgaccagt300 ctgacgaccg gggacacggc ccgttatttc tgtgccagaa attggaactt gtggggccaa360 ggcaccctcg tcaccgtctc gagcgcttct acaaagggcc catctgtcta tccactggcc420 cctggatctg ctgcccaaac taactccatg gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat480 ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac tctggatccc tgtccagcgg tgtgcacacc540 ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc600 agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc aacgttgccc acccggccag cagcaccaag660 gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca720 gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca aagcccaagg atgtgctcac cattactctg780 actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac atcagcaagg atgatcccga ggtccagttc840 agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag900 ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat960 ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt gcagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc1020 atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag1080 gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg acctgcatga taacagactt cttccctgaa1140 gacattactg tggagtggca gtggaatggg cagccagcgg agaactacaa gaacactcag1200 cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc gtctacagca agctcaatgt gcagaagagc1260 aactgggagg caggaaatac tttcacctgc tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac1320 catactgaga agagcctctc ccactctcct ggtaaatga1359 <210> 31 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 31
Gln lie Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr lie Val Ser Ala Ser Pro Gly 15 1015
Glu Lys Val Thr Leu lie Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Phe Val
2530
Asp Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp He Tyr 35 4045
Arg Thr Ser Asn Leu Gly Phe Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Gly 50 5560
Gly Ser Gly Thr Ser His Ser Leu Thr lie Ser Arg Met Glu AlaGlu
70 7580
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Thr Tyr Pro ProThr
9095
- 117 037044
Phe Gly Ala Gly 100 Thr Lys Leu Glu Leu 105 Lys Arg Ala Asp Ala 110 Ala Pro
Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp He Asn
130 135 140
Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn
145 150 155 160
Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser
165 17 0 175
Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr
180 185 190
Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro He Val Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Asn Glu Cys
210 <210> 32 <211> 642 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 32 caaattgttc tcacccagtc tccaacaatc gtgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc60 ctaatctgca gtgccagttc aagtgtaagt ttcgtggact ggttccagca gaagccaggc120 acttctccca aacgctggat ttacagaaca tccaacctgg gttttggagt ccctgctcgc180 ttcagtggcg gtggatctgg gacctctcac tctctcacaa tcagccgaat ggaggctgaa240 gatgctgcca cttattactg ccagcaaagg agtacttacc cacccacgtt cggtgctggg300 accaagctgg aactgaaacg ggctgatgct gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc360 agtgagcagt taacatctgg aggtgcctca gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc420 aaagacatca atgtcaagtg gaagattgat ggcagtgaac gacaaaatgg cgtcctgaac480 agttggactg atcaggacag caaagacagc acctacagca tgagcagcac cctcacgttg540 accaaggacg agtatgaacg acataacagc tatacctgtg aggccactca caagacatca600 acttcaccca ttgtcaagag cttcaacagg aatgagtgtt ag642 <210> 33 <211> 235 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 33
Met His Phe Gln Val Gln He Phe Ser Phe Leu Leu lie Ser Ala Ser
5 10 15
Val lie Val Ser Arg Gly Gln lie Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr lie 20 25 30
- 118 037044
Val Ser
Ser Ser
Pro Lys 65
Ala Arg
Ser Arg
Ser Thr
Arg Ala
130
Gln Leu 145
Tyr Pro
Gln Asn
Thr Tyr
Arg His
210
Pro lie 225
Ala Ser 35
Val Ser
Arg Trp
Phe Ser
Met Glu
100
Tyr Pro 115
Asp Ala
Thr Ser
Lys Asp
Gly Val
180
Ser Met 195
Asn Ser
Val Lys
Pro Gly
Phe Val lie Tyr 70
Gly Gly 85
Ala Glu
Pro Thr
Ala Pro
Gly Gly
150 lie Asn 165 Leu Asn
Ser Ser
Tyr Thr
Ser Phe
230
Glu Lys 40
Asp Trp 55
Arg Thr
Gly Ser
Asp Ala
Phe Gly
120
Thr Val 135
Ala Ser
Val Lys
Ser Trp
Thr Leu
200
Cys Glu 215
Asn Arg
Val Thr
Phe Gln
Ser Asn
Gly Thr 90
Ala Thr 105
Ala Gly
Ser lie
Val Val
Trp Lys
170
Thr Asp 185
Thr Leu
Ala Thr
Asn Glu
Leu lie
Gln Lys 60
Leu Gly 75
Ser His
Tyr Tyr
Thr Lys
Phe Pro 140
Cys Phe 155 lie Asp
Gln Asp
Thr Lys
His Lys 220
Cys 235
Cys Ser 45
Pro Gly
Phe Gly
Ser Leu
Cys Gln 110
Leu Glu 125
Pro Ser
Leu Asn
Gly Ser
Ser Lys
190
Asp Glu 205
Thr Ser
Ala Ser
Thr Ser
Val Pro
Thr lie 95
Gln Arg
Leu Lys
Ser Glu
Asn Phe
160
Glu Arg 175
Asp Ser
Tyr Glu
Thr Ser <210> 34 <211> 708 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 34 atgcattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcctcagt catagtgtcc60 agagggcaaa ttgttctcac ccagtctcca acaatcgtgt ctgcatctcc aggggagaag120 gtcaccctaa tctgcagtgc cagttcaagt gtaagtttcg tggactggtt ccagcagaag180 ccaggcactt ctcccaaacg ctggatttac agaacatcca acctgggttt tggagtccct240 gctcgcttca gtggcggtgg atctgggacc tctcactctc tcacaatcag ccgaatggag300 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag caaaggagta cttacccacc cacgttcggt360 gctgggacca agctggaact gaaacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca420 ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc480 taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc540 ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc600 acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag660
- 119 037044 acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg agtgttag
708 <210> 35 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 35
Gln Val Thr Leu
Thr Leu Ser Leu
Gly Met Gly Val
Trp Leu Ala His
Leu Lys Ser Arg 65
Phe Leu Lys lie
Cys Ala Arg lie
100
Asp Tyr Trp Gly
115
Thr Pro Pro Ser
130
Asn Ser Met Val
145
Pro Val Thr Val
Thr Phe Pro Ala
180
Val Thr Val Pro
195
Val Ala His Pro
210
Arg Asp Cys Gly 225
Ser Val Phe lie
Leu Thr Pro Lys
260
Pro Glu Val Gln
275
Lys Glu Ser Gly 5
Thr Cys Ser Phe
Gly Trp lie Arg 40 lie Trp Trp Asp 55
Leu Thr lie Ser
Ala Asn Val Asp 85
Glu Asp Phe Asp
Gln Gly Thr Ser
120
Val Tyr Pro Leu 135
Thr Leu Gly Cys 150
Thr Trp Asn Ser 165
Val Leu Gln Ser
Ser Ser Thr Trp
200
Ala Ser Ser Thr
215
Cys Lys Pro Cys 230
Phe Pro Pro Lys 245
Val Thr Cys Val
Phe Ser Trp Phe
280
Pro Gly lie Leu 10
Ser Gly Phe Ser 25
His Pro Ser Gly
Asp Val Lys Arg 60
Lys Asp Thr Ser
Thr Ala Asp Thr 90
Tyr Asp Glu Glu 105
Val lie Val Ser
Ala Pro Gly Ser
140
Leu Val Lys Gly
155
Gly Ser Leu Ser 170
Asp Leu Tyr Thr 185
Pro Ser Glu Thr
Lys Val Asp Lys
220 lie Cys Thr Val 235
Pro Lys Asp Val 250
Val Val Asp lie 265
Val Asp Asp Val
Gln Pro Ser Gln
Leu Ser Thr Ser
Lys Asn Leu Glu 45
Tyr Asn Pro Val
Asn Ser Gln Val
Ala Thr Tyr Tyr 95
Tyr Tyr Ala Met 110
Ser Ala Lys Thr 125
Ala Ala Gln Thr
Tyr Phe Pro Glu
160
Ser Gly Val His 175
Leu Ser Ser Ser
190
Val Thr Cys Asn 205
Lys lie Val Pro
Pro Glu Val Ser
240
Leu Thr lie Thr
255
Ser Lys Asp Asp
270
Glu Val His Thr
285
- 120 037044
Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser 290 295300
Val Ser Glu Leu Pro He Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly LysGlu
305 310 315320
Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro He GluLys
325 330335
Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr
340 345350 lie Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr
355 360365
Cys Met He Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp He Thr Val Glu Trp Gln 370 375380
Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro lieMet
385 390 395400
Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val GlnLys
405 410415
Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu 420 425430
Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly 435 440445
Lys <210> 36 <211> 1350 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 36 caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg60 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtagg ctggattcgt120 cacccatcag ggaagaatct ggagtggctg gcacacattt ggtgggatga tgtcaagcgc180 tataacccag tcctgaagag ccgactgact atctccaagg atacctccaa cagccaggta240 ttcctcaaga tcgccaatgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcgaata300 gaggactttg attacgacga ggagtattat gctatggact actggggtca aggaacctca360 gtcatcgtct cctcagccaa aacgacaccc ccatctgtct atccactggc ccctggatct420 gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag480 ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagcg gtgtgcacac cttcccagct540 gtcctgcagt ctgacctcta cactctgagc agctcagtga ctgtcccctc cagcacctgg600 cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag660 aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag ccttgcatat gtacagtccc agaagtatca720 tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag gatgtgctca ccattactct gactcctaag780 gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt840 gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc900
- 121 037044 actttccgct cagtcagtga acttcccatc atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag960 ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa1020 accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg1080 gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg ataacagact tcttccctga agacattact1140 gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg gagaactaca agaacactca gcccatcatg1200 gacacagatg gctcttactt cgtctacagc aagctcaatg tgcagaagag caactgggag1260 gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta catgagggcc tgcacaacca ccatactgag1320 aagagcctct cccactctcc tggtaaatga1350 <210> 37 <211> 468 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 37
Met Gly Arg Leu Thr Ser Ser Phe Leu Leu Leu lie Val Pro Ala Tyr
1015
Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly lie Leu Gln
2530
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu 35 4045
Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly Trp lie Arg His Pro Ser Gly Lys 50 5560
Asn Leu Glu Trp Leu Ala His lie Trp Trp Asp Asp Val Lys ArgTyr
70 7580
Asn Pro Val Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr SerAsn
9095
Ser Gln Val Phe Leu Lys lie Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala 100 105110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg lie Glu Asp Phe Asp Tyr Asp Glu Glu Tyr 115 120125
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val lie Val Ser Ser 130 135140
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly SerAla
145 150 155160
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys GlyTyr
165 170175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 180 185190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 195 200205
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val
210 215220
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
- 122 037044
225 lie Val
Glu Val
Thr lie
Lys Asp 290
Val His 305
Phe Arg
Gly Lys
Ile Glu
Val Tyr 370
Ser Leu 385
Glu Trp
Pro Ile
Val Gln
Leu His
450
Ser Pro 465
Pro Arg
Ser Ser
260
Thr Leu 275
Asp Pro
Thr Ala
Ser Val
Glu Phe
340
Lys Thr 355
Thr Ile
Thr Cys
Gln Trp
Met Asp
420
Lys Ser 435
Glu Gly
Gly Lys
230
Asp Cys 245
Val Phe
Thr Pro
Glu Val
Gln Thr
310
Ser Glu 325
Lys Cys lie Ser
Pro Pro
Met lie
390
Asn Gly 405
Thr Asp
Asn Trp
Leu His
Gly Cys lie Phe
Lys Val
280
Gln Phe 295
Gln Pro
Leu Pro
Arg Val
Lys Thr
360
Pro Lys 375
Thr Asp
Gln Pro
Gly Ser
Glu Ala
440
Asn His 455
Lys Pro 250
Pro Pro 265 Thr Cys
Ser Trp
Arg Glu lie Met
330
Asn Ser 345
Lys Gly
Glu Gln
Phe Phe
Ala Glu
410
Tyr Phe 425
Gly Asn
His Thr
235
Cys lie
Lys Pro
Val Val
Phe Val
300
Glu Gln 315
His Gln
Ala Ala
Arg Pro
Met Ala
380
Pro Glu 395
Asn Tyr
Val Tyr
Thr Phe
Glu Lys
460
Cys Thr
Lys Asp 270
Val Asp 285
Asp Asp
Phe Asn
Asp Trp
Phe Pro
350
Lys Ala 365
Lys Asp
Asp Ile
Lys Asn
Ser Lys
430
Thr Cys 445
Ser Leu
240
Val Pro 255
Val Leu lie Ser
Val Glu
Ser Thr
320
Leu Asn 335
Ala Pro
Pro Gln
Lys Val
Thr Val
400
Thr Gln 415
Leu Asn
Ser Val
Ser His <210> 38 <211> 1407 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 38 atgggcaggc ttacttcttc attcctgcta ctgattgtcc ctgcatatgt cctgtcccag60 gttactctga aagagtctgg ccctgggata ttgcagccct cccagaccct cagtctgact120 tgttctttct ctgggttttc actgagcact tctggtatgg gtgtaggctg gattcgtcac180 ccatcaggga agaatctgga gtggctggca cacatttggt gggatgatgt caagcgctat240 aacccagtcc tgaagagccg actgactatc tccaaggata cctccaacag ccaggtattc300 ctcaagatcg ccaatgtgga cactgcagat actgccacat actactgtgc tcgaatagag360
- 123 037044 gactttgatt acgacgagga gtattatgct atggactact ggggtcaagg aacctcagtc420 atcgtctcct cagccaaaac gacaccccca tctgtctatc cactggcccc tggatctgct480 gcccaaacta actccatggt gaccctggga tgcctggtca agggctattt ccctgagcca540 gtgacagtga cctggaactc tggatccctg tccagcggtg tgcacacctt cccagctgtc600 ctgcagtctg acctctacac tctgagcagc tcagtgactg tcccctccag cacctggccc660 agcgagaccg tcacctgcaa cgttgcccac ccggccagca gcaccaaggt ggacaagaaa720 attgtgccca gggattgtgg ttgtaagcct tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct780 gtcttcatct tccccccaaa gcccaaggat gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc840 acgtgtgttg tggtagacat cagcaaggat gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta900 gatgatgtgg aggtgcacac agctcagacg caaccccggg aggagcagtt caacagcact960 ttccgctcag tcagtgaact tcccatcatg caccaggact ggctcaatgg caaggagttc1020 aaatgcaggg tcaacagtgc agctttccct gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc1080 aaaggcagac cgaaggctcc acaggtgtac accattccac ctcccaagga gcagatggcc1140 aaggataaag tcagtctgac ctgcatgata acagacttct tccctgaaga cattactgtg1200 gagtggcagt ggaatgggca gccagcggag aactacaaga acactcagcc catcatggac1260 acagatggct cttacttcgt ctacagcaag ctcaatgtgc agaagagcaa ctgggaggca1320 ggaaatactt tcacctgctc tgtgttacat gagggcctgc acaaccacca tactgagaag1380 agcctctccc actctcctgg taaatga1407 <210> 39 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 39
Asp His Tyr Met Ser
5 <210> 40 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 40
Asp He Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 15 10 15
Gly <210> 41 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 41
Asp Asp Tyr Asp Ala Ser Pro Phe Ala Tyr
- 124 037044
5 <210> 42 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 42
Gln Ala Ser Gln Gly Thr Ser He
5 <210> 43 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 43
Gly Ser Ser Asn Leu Glu Asp
5 <210> 44 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 44
Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Tyr
5 <210> 45 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 45
Asp Cys Tyr Met Asn
5 <210> 46 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 46
Asp He Asn Pro Phe Asn Gly Gly
5
Gly
Asn Leu Asn
Thr
Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
15
- 125 037044 <210> 47 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 47
Ser His Tyr Tyr Phe Asp Gly Arg
5 <210> 48 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 48
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr
5 <210> 49 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 49
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
5 <210> 50 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 50
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Trp
5 <210> 51 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Химера кролик-мышь <400> 51
Ser Tyr Trp Met Asn
5 <210> 52 <211> 16
Val Pro Trp Asp Ala Met Asp Tyr
15
Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn
15
Thr
- 126 037044 <212> БЕЛОК <213> Химера кролик-мышь <400> 52
Thr lie Asp Ser Gly Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
10 15 <210> 53 <211> 4 <212> БЕЛОК <213> Химера кролик-мышь <400> 53
Asn Trp Asn Leu <210> 54 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Химера кролик-мышь <400> 54
Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Trp Leu Ala
5 10 <210> 55 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Химера кролик-мышь <400> 55
Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser
5 <210> 56 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Химера кролик-мышь <400> 56
Gln Gly Ala Tyr Asn Asp Val lie Tyr Ala
10 <210> 57 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 57
- 127 037044
Thr Ser Gly Met Gly 1 5 Val Gly
<210> 58 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 58 His lie Trp Trp Asp 1 5 Asp Val Lys Arg Tyr 10 Asn Pro Val Leu Lys Ser 15
<210> 59 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 59 Glu Asp Phe Asp Tyr 1 5 Asp Glu Glu Tyr Tyr 10 Ala Met Asp Tyr
<210> 60 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 60 Ser Ala Ser Ser Ser 1 5 Val Ser Phe Val Asp 10
<210> 61 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 61 Arg Thr Ser Asn Leu 1 5 Gly Phe
<210> 62 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 62 Gln Gln Arg Ser Thr 1 5 Tyr Pro Pro Thr
- 128 037044 <210> 63 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 63
Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro
5
Trp Arg Pro Ser <210> 64 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 64
Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn
5
Arg Pro Ser Gly <210> 65 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 65
Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala
5
Pro Ser Gly Pro <210> 66 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 66
Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala He
5
Ser Gly Pro Asp <210> 67 <211> 20 <212> БЕЛОК
Asn Ala He Gly Arg Gly Lys Trp
15
Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp
15 lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg
15
Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro
15
- 129 037044 <213> Homo sapiens
<400 > 67
Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser
1 5 10 15
Gly Pro Asp Phe
20
<210> 68 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 68
Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser Gly 15 10 15
Pro Asp Phe Arg 20 <210> 69 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens
<400 > 69
Leu Pro Asn Ala Xie Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser Gly Pro
1 5 10 15
Asp Phe Arg Cys
20
<210> 70 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 70
Ser Ala Lys Pro Val Thr Glu Leu Val Cys Ser Gly Gln Cys
10 <210> 71 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 71
Leu Val Ala Ser Cys Lys Cys
5
- 130 037044 <210> 72 <211> 8 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 72
Cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg
5 < 210> 73 < 211> 7 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens < 400> 73
Cys He Pro Asp Arg Tyr Arg
5 <210> 74 <211> 399 < 212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Последовательность гуманизированного антитела < 400> 74 atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc60 acatttgctc aagttctgac ccagagtcca agcagtctct ccgccagcgt aggcgatcgt120 gtgactatta cctgtcaatc tagteagage gtgtatgata acaattggct ggcgtggtac180 cagcaaaaac cgggcaaagc cccgaagctg ctcatctatg acgcgtccga tetggetage240 ggtgtgccaa gccgtttcag tggcagtggc ageggtaetg actttaccct cacaatttcg300 tctctccagc eggaagattt cgccacttac tattgteaag gtgcttacaa egatgtgatt360 tatgeetteg gtcagggcac taaagtagaa atcaaacgt399 <210> 75 <211> 133 <212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Последовательность гуманизированного антитела < 400> 75
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Tie Thr Cys Gln Ser Ser
- 131 037044
4045
Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 50 5560
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Asp Ala Ser Asp Leu AlaSer
70 7580
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp PheThr
9095
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105110
Gln Gly Ala Tyr Asn Asp Val lie Tyr Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys 115 120125
Val Glu lie Lys Arg 130 <210> 76 <211> 393 <212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Последовательность гуманизированного антитела < 400> 76 atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccactgtgag60 gtgcagctgt tggagtctgg aggcgggctt gtccagcctg gagggagcct gcgtctctct120 tgtgcagcaa gcggcttcag cttatcctct tactggatga attgggtgcg gcaggcacct180 gggaagggcc tggagtgggt gggcaccatt gattccggag gccgtacaga ctacgcgtct240 tgggcaaagg gccgtttcac catttcccgc gacaactcca aaaataccat gtacctccag300 atgaactctc tccgcgcaga ggacacagca cgttattact gtgcacgcaa ctggaatctg360 tggggtcaag gtactcttgt aacagtctcg age393 <210> 77 <211> 131 <212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Последовательность гуманизированного антитела < 400> 77
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val His Cys Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
35 40 45
Ser Ser Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
- 132 037044
55
Glu Trp Val Gly Thr lie Asp Ser
70
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie
Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
100
Tyr Cys Ala Arg Asn Trp Asn Leu
115 120
Val Ser Ser
130 <210> 78 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 78
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn
5 <210> 79 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 79
Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser
5 <210> 80 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 80
Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr
5 <210> 81 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 81
Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn
5
Gly Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Ser
7580
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
9095
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Arg Tyr
105110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
125
Tyr Leu Asn
Thr
Tyr Leu Asn
- 133 037044 <210> 82 <211> 24 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 82
Gln Gly Trp Gln Ala Phe Lys Asn Asp Ala Thr Glu He lie Pro Gly
10 15
Leu Arg Glu Tyr Pro Glu Pro Pro 20 <210> 83 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus
<400 > 83
Thr Glu lie He Pro Gly Leu Arg Glu Tyr Pro Glu Pro Pro Gln Glu
1 Leu Glu Asn Asn 20 5 10 15
<210> 84 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 84
Pro Glu Pro Pro Gln Glu Leu Glu Asn Asn Gln Thr Met Asn Arg Ala 15 10 15
Glu Asn Gly Gly 20 <210> 85 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 85
Glu Asn Gly Gly Arg Pro Pro His His Pro Tyr Asp Thr Lys Asp Val 15 10 15
Ser Glu Tyr Ser 20 <210> 86 <211> 14
- 134 037044 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 86
Cys Arg Glu Leu His Tyr Thr Arg
5 <210> 87 <211> 25 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 87
Cys Arg Glu Leu His Tyr Thr Arg 1 5
Ser Ala Lys Pro Val Thr Glu Leu 20 <210> 88 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 88
Cys Arg Ser Ala Lys Pro Val Thr
5
Gly Pro Arg Ala Arg Leu Leu 20 <210> 89 <211> 25 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 89
Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro 1 5
Trp Arg Pro Asn Gly Pro Asp Phe 20 <210> 90 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 90
Arg Ala Gln Arg Val Gln Leu Leu 1 5
Phe Val Thr Asp Gly Pro
Phe Val Thr Asp Gly Pro Ser Arg
15
Val
Glu Leu Val Ser Ser Gly Gln Ser
15
Asn Ala lie Gly Arg Val Lys Trp
15
Arg
Cys Pro Gly Gly Ala Ala Pro Arg
15
- 135 037044
Ser Arg Lys Val <210> 91 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 91
Pro Gly Gly Ala Ala Pro Arg Ser Arg Lys Val Arg Leu Val Ala Ser
1 5 10 15
<210> 92 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 92 Lys Arg Leu Thr Arg Phe 1 5 Pro Glu Thr Ala Arg Pro 20 His Gln Asn Gln Ser 10 Glu Leu Lys Asp Phe 15 Gly
<210> 93 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 93 He Pro Asp Arg Tyr Ala 1 5 Gln Arg Val Gln 10 Leu Leu Ser Pro Gly 15 Gly
<210> 94 <211> 24 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 94 Ser Glu Leu Lys Asp Phe 1 5 Arg Lys Pro Arg Pro Arg 20 Gly Ala Pro Arg Glu Thr 10 Ala Arg Pro Gln Lys 15 Gly
<210> <211> <212> <213> 95 23 БЕЛОК Rattus norvegicus
- 136 037044 <400> 95
Lys Gly Arg Lys Pro Arg Pro Arg 1 5
Ala Glu Leu Glu Asn Ala Tyr 20 <210> 96 <211> 18 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 96
Pro Asn Ala lie Gly Arg Val Lys
5
Phe Arg <210> 97 <211> 22 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 97
Lys Trp Trp Arg Pro Asn Gly Pro
5
Tyr Arg Ala Gln Arg Val 20 <210> 98 ' <211> 213 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <400> 98
Met Gln Leu Ser Leu Ala Pro Cys 15
Ala Phe Val Ala Val Glu Ser Gln
Ala Thr Glu Ile lie Pro Gly Leu 3540
Glu Leu Glu Asn Asn Gln Thr Met 5055
Pro Pro His His Pro Tyr Asp Thr 6570
Arg Glu Leu His Tyr Thr Arg Phe 85
Ala Arg Gly Ala Lys Ala Asn Gln
15
Trp Trp Arg Pro Asn Gly Pro Asp
15
Asp Phe Arg Cys lie Pro Asp Arg
15
Leu Ala Cys Leu Leu Val His Ala 10 15
Gly Trp Gln Ala Phe Lys Asn Asp 25 30
Arg Glu Tyr Pro Glu Pro Pro Gln 45
Asn Arg Ala Glu Asn Gly Gly Arg 60
Lys Asp Val Ser Glu Tyr Ser Cys 75 80
Val Thr Asp Gly Pro Cys Arg Ser
95
- 137 037044
Ala Lys Pro Val Thr Glu Leu Val Cys Ser Gly Gln Cys Gly Pro Ala 100 105110
Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Val Lys Trp Trp Arg Pro Asn 115 120125
Gly Pro Asp Phe Arg Cys lie Pro Asp Arg Tyr Arg Ala Gln Arg Val 130 135140
Gln Leu Leu Cys Pro Gly Gly Ala Ala Pro Arg Ser Arg Lys ValArg
145 150 155160
Leu Val Ala Ser Cys Lys Cys Lys Arg Leu Thr Arg Phe His AsnGln
165 170175
Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly Pro Glu Thr Ala Arg Pro Gln Lys Gly 180 185190
Arg Lys Pro Arg Pro Arg Ala Arg Gly Ala Lys Ala Asn Gln Ala Glu 195 200205
Leu Glu Asn Ala Tyr 210 <210> 99 c211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 99 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 100 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 100
Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr
5 <210> 101 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 101
Arg Ala Ser Gln Val lie Thr Asn Tyr Leu Tyr 15 10 <210> 102 <211> 7
- 138 037044 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 102
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
5 <210> 103 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 103
Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr
5 <210> 104 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 104
Arg Ala Ser Gln Asp He Ser Asn Tyr Leu Asn
5 10 <210> 105 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 105
Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser
5 <210> 106 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 106
Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr
5 <210> 107 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 107
- 139 037044
Arg Ala Ser Gln Asp He Ser Asn Tyr Leu Asn
10 <210> 108 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 108
Tyr Thr Ser Arg Leu Phe Ser
5 <210> 109 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 109
Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr
5 <210> 110 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 110
Arg Ala Ser Gln Asp He Ser Asn Tyr Leu Asn
10 <210> 111 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 111
Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser
5 <210> 112 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 112
Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr
5
- 140 037044 <210> 113 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 113
Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn
10 <210> 114 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 114
Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Ser
5 <210> 115 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 115
Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr
5 <210> 116 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 116
Ser Val Ser Ser Ser lie Ser Ser Ser Asn Leu His
10 <210> 117 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 117
Gln lie Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala lie Leu Ser Thr Ser Pro Gly
1015
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Tyr Tyr Met
2530
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp lie Tyr
4045
- 141 037044
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser 50 5560
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr lie Thr Arg Val Glu AlaGlu
70 7580
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asp Pro LeuThr
9095
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro 100 105110
Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly 115 120125
Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie Asn 130 135140
Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val LeuAsn
145 150 155160
Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met SerSer
165 170175
Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr 180 185190
Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser Phe 195 200205
Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 118 <211> 642 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 118 caaattgttc tctcccagtc tccagcaatc ctgtctacat ctccagggga gaaggtcaca 60 atgacttgca gggccagctc aagtgtatat tacatgcact ggtaccagca gaagccagga120 tcctccccca aaccctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgttcgc180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcaccagagt ggaggctgaa240 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtgacc cactcacgtt cggtgctggg300 accaagctgg agctgaaacg ggctgatgct gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc360 agtgagcagt taacatctgg aggtgcctca gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc420 aaagacatca atgtcaagtg gaagattgat ggcagtgaac gacaaaatgg cgtcctgaac480 agttggactg atcaggacag caaagacagc acctacagca tgagcagcac cctcacgttg540 accaaggacg agtatgaacg acataacagc tatacctgtg aggccactca caagacatca600 acttcaccca ttgtcaagag cttcaacagg aatgagtgtt ag642 <210> 119 <211> 235 <212> БЕЛОК
- 142 037044 <213> Mus musculus <400> 119
Met Asp Phe Gln Val Gln He Phe Ser Phe Leu Leu lie Ser Ala Ser
5 1015
Val He Met Ser Arg Gly Gln lie Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala lie
2530
Leu Ser Thr Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser
4045
Ser Ser Val Tyr Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser
5560
Pro Lys Pro Trp He Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly ValPro
70 7580
Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thrlie
9095
Thr Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp
100 105110
Ser Ser Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
115 120125
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser He Phe Pro Pro Ser Ser Glu
130 135140
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn AsnPhe
145 150 155160
Tyr Pro Lys Asp He Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser GluArg
165 170175
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
180 185190
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
195 200205
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
210 215220
Pro He Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225 230235 <210> 120 <211> 708 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 120 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cattatgtcc60 aggggacaaa ttgttctctc ccagtctcca gcaatcctgt ctacatctcc aggggagaag120 gtcacaatga cttgcagggc cagctcaagt gtatattaca tgcactggta ccagcagaag180 ccaggatcct cccccaaacc ctggatttat gccacatcca acctggcttc tggagtccct240 gttcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcac cagagtggag300
- 143 037044 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtgacccact cacgttcggt360 gctgggacca agctggagct gaaacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca420 ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc480 taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc540 ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc600 acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag660 acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg agtgttag708 <210> 121 <211> 445 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 121
Glu Val Gln Val
Ser Val Lys Leu
Phe He His Trp
Gly Arg Leu Asp 50
Gln Asp Lys Ala 65
Leu Gln Leu Arg
Glu Arg Glu Asp
100
Gln Gly Thr Leu 115
Val Tyr Pro Leu 130
Thr Leu Gly Cys 145
Thr Trp Asn Ser
Val Leu Gln Ser
180
Ser Ser Thr Trp
195
Ala Ser Ser Thr
210
Cys Lys Pro Cys 225
Gln Gln Ser Gly 5
Ser Cys Thr Ala
Val Lys Gln Arg 40
Pro Glu Asp Gly 55 lie Met Thr Ala
Ser Leu Thr Ser 85
Tyr Asp Gly Thr
Val Thr Val Ser
120
Ala Pro Gly Ser 135
Leu Val Lys Gly
150
Gly Ser Leu Ser 165
Asp Leu Tyr Thr
Pro Ser Glu Thr
200
Lys Val Asp Lys 215 lie Cys Thr Val
230
Pro Glu Leu Val
Ser Gly Phe Asn 25
Pro Glu Gln Gly
Glu Ser Asp Tyr 60
Asp Thr Ser Ser 75
Glu Asp Thr Ala 90
Tyr Thr Phe Phe 105
Ala Ala Lys Thr
Ala Ala Gln Thr
140
Tyr Phe Pro Glu
155
Ser Gly Val His 170
Leu Ser Ser Ser 185
Val Thr Cys Asn
Lys lie Val Pro
220
Pro Glu Val Ser
235
Lys Pro Gly Ala lie Lys Asp Tyr
Leu Glu Trp lie 45
Ala Pro Lys Phe
Asn Thr Ala Tyr 80
He Tyr Tyr Cys 95
Pro Tyr Trp Gly 110
Thr Pro Pro Ser 125
Asn Ser Met Val
Pro Val Thr Val
160
Thr Phe Pro Ala
175
Val Thr Val Pro
190
Val Ala His Pro 205
Arg Asp Cys Gly
Ser Val Phe lie
240
- 144 037044
Phe Pro
Val Thr
Phe Ser
Pro Arg 290
Pro lie 305
Val Asn
Thr Lys
Lys Glu
Asp Phe 370
Pro Ala 385
Ser Tyr
Ala Gly
His His
Pro Lys
Cys Val
260
Trp Phe 275
Glu Glu
Met His
Ser Ala
Gly Arg 340
Gln Met 355
Phe Pro
Glu Asn
Phe Ile
Asn Thr
420
Thr Glu 435
Pro Lys 245
Val Val
Val Asp
Gln Phe
Gln Asp 310
Ala Phe 325 Pro Lys
Ala Lys
Glu Asp
Tyr Lys 390
Tyr Ser 405
Phe Thr
Lys Ser
Asp Val
Asp lie
Asp Val
280
Asn Ser 295
Trp Leu
Pro Ala
Ala Pro
Asp Lys
360 lie Thr 375
Asn Thr
Lys Leu
Cys Ser
Leu Ser
440
Leu Thr
250
Ser Lys 265
Glu Val
Thr Phe
Asn Gly
Pro lie
330
Gln Val 345
Val Ser
Val Glu
Gln Pro
Asn Val
410
Val Leu 425
His Ser lie Thr
Asp Asp
His Thr
Arg Ser 300
Lys Glu 315
Glu Lys
Tyr Thr
Leu Thr
Trp Gln
380
Ile Met 395
Gln Lys
His Glu
Pro Gly
Leu Thr
Pro Glu
270
Ala Gln 285
Val Ser
Phe Lys
Thr Ile lie Pro
350
Cys Met 365
Trp Asn
Asp Thr
Ser Asn
Gly Leu
430
Lys
445
Pro Lys 255
Val Gln
Thr Gln
Glu Leu
Cys Arg 320
Ser Lys 335
Pro Pro lie Thr
Gly Gln
Asp Gly
400
Trp Glu 415
His Asn <210> 122 <211> 1338 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 122 gaggttcagg tgcagcagtc tgggccagaa cttgtgaagc caggggcctc agtcaagttg60 tcctgcacag cttctggctt caacattaaa gactacttta tacactgggt gaagcagagg120 cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg cttgatcctg aggatggtga aagtgattat180 gccccgaagt tccaggacaa ggccattatg acagcagaca catcatccaa cacagcctat240 cttcagctca gaagcctgac atctgaggac actgccatct attattgtga gagagaggac300 tacgatggta cctacacctt ttttccttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct360 gcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact420 aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg480 acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct540 gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc600 gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc660
- 145 037044 agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc720 ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt780 gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg840 gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca900 gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg960 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga1020 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa1080 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag1140 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc1200 tcttacttca tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact1260 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc1320 cactctcctg gtaaatga1338 <210> 123 <211> 464 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 123
Met Lys Cys Ser Trp Val He Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly
5 1015
Val Asn Ser Glu Val Gln Val Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn lie 35 4045
Lys Asp Tyr Phe He His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu 50 5560
Glu Trp He Gly Arg Leu Asp Pro Glu Asp Gly Glu Ser Asp TyrAla
70 7580
Pro Lys Phe Gln Asp Lys Ala He Met Thr Ala Asp Thr Ser SerAsn
9095
Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala He 100 105110
Tyr Tyr Cys Glu Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Thr Tyr Thr Phe Phe Pro 115 120125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr 130 135140
Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln ThrAsn
145 150 155160
Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro GluPro
165 170175
Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr 180 185190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val
- 146 037044
Thr Val
210
Ala His 225
Asp Cys
Val Phe
Thr Pro
Glu Val
290
Gln Thr 305
Ser Glu
Lys Cys lie Ser
Pro Pro
370
Met lie 385
Asn Gly
Thr Asp
Asn Trp
Leu His
450
195
Pro Ser
Pro Ala
Gly Cys lie Phe
260
Lys Val 275
Gln Phe
Gln Pro
Leu Pro
Arg Val
340
Lys Thr 355
Pro Lys
Thr Asp
Gln Pro
Gly Ser
420
Glu Ala 435
Asn His
Ser Thr
Ser Ser
230
Lys Pro 245
Pro Pro
Thr Cys
Ser Trp
Arg Glu 310 lie Met 325
Asn Ser
Lys Gly
Glu Gln
Phe Phe
390
Ala Glu 405
Tyr Phe
Gly Asn
His Thr
200
Trp Pro 215
Thr Lys
Cys lie
Lys Pro
Val Val
280
Phe Val
295
Glu Gln
His Gln
Ala Ala
Arg Pro 360
Met Ala 375
Pro Glu
Asn Tyr lie Tyr
Thr Phe 440
Glu Lys 455
Ser Glu
Val Asp
Cys Thr
250
Lys Asp 265
Val Asp
Asp Asp
Phe Asn
Asp Trp
330
Phe Pro
345
Lys Ala
Lys Asp
Asp lie
Lys Asn
410
Ser Lys 425
Thr Cys
Ser Leu
Thr Val
220
Lys Lys 235
Val Pro
Val Leu
Ile Ser
Val Glu
300
Ser Thr 315
Leu Asn
Ala Pro
Pro Gln
Lys Val 380
Thr Val 395
Thr Gln
Leu Asn
Ser Val
Ser His
460
205
Thr Cys lie Val Glu Val Thr lie
270
Lys Asp 285
Val His
Phe Arg
Gly Lys lie Glu 350
Val Tyr 365
Ser Leu
Glu Trp
Pro lie
Val Gln
430
Leu His 445
Ser Pro
Asn Val
Pro Arg
240
Ser Ser 255
Thr Leu
Asp Pro
Thr Ala
Ser Val
320
Glu Phe 335
Lys Thr
Thr lie
Thr Cys
Gln Trp 400
Met Asp 415
Lys Ser
Glu Gly
Gly Lys <210> 124 <211> 1395 <212> ДНК <213> Mus musculuS <400> 124 atgaaatgca gctgggtcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag60 gttcaggtgc agcagtctgg gccagaactt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc120 tgcacagctt ctggcttcaa cattaaagac tactttatac actgggtgaa gcagaggcct180 gaacagggcc tggagtggat tggaaggctt gatcctgagg atggtgaaag tgattatgcc240
- 147 037044 ccgaagttcc aggacaaggc cattatgaca gcagacacat catccaacac agcctatctt300 cagctcagaa gcctgacatc tgaggacact gccatctatt attgtgagag agaggactac360 gatggtacct acaccttttt tccttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca420 gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac480 tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc540 tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac600 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc660 acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg720 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc780 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg840 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag900 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc960 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc1020 aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg1080 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc1140 agtctgacct gcatgataac agacttctta cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg1200 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct1260 tacttcatct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc1320 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac1380 tctcctggta aatga1395 <210> 125 <211> 215 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 125
Glu lie Val Leu Thr Gln Ser Pro
Glu Lys Val Thr lie Thr Cys Ser 20
His Leu His Trp Phe Gln Gln Lys 3540 lie Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala 5055
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr 6570
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr 85
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys 100
Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro
115120
Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe
Ala Leu Met Ala Ala Ser Pro Gly 1015
Val Ser Ser Thr lie Ser Ser Asn
2530
Ser Asp Thr Ser Pro Lys Pro Trp 45
Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser 60
Ser Leu Thr lie Ser Ser Met Glu 7580
Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro 9095
Leu Glu Leu Arg Arg Ala Asp Ala
105110
Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser
125
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp
- 148 037044
130 135140
He Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn GlyVal
145 150 155160
Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr SerMet
165 170175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser 180 185190
Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro He Val Lys 195 200205
Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210215 <210> 126 <211> 648 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 126 gaaattgtgc tcacccagtc tccagcactc atggctgcat ctccggggga gaaggtcacc60 atcacctgca gtgtcagttc aactataagt tccaaccact tgcactggtt ccagcagaag120 tcagacacct cccccaaacc ctggatttat ggcacatcca acctggcttc tggagtccct180 gttcgcttca gtggcagtgg atctgggacc tcttattctc tcacaatcag cagcatggag240 gctgaggatg ctgccactta ttactgtcaa cagtggagta gttacccact cacgttcggc300 gctgggacca agctggagct gagacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca360 ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc420 taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc480 ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc540 acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag600 acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg agtgttag648 <210> 127 <211> 237 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 127
Met Asp Phe His Val Gln lie Phe Ser Phe Met Leu lie Ser Val Thr 15 1015
Val lie Leu Ser Ser Gly Glu lie Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu
2530
Met Ala Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr lie Thr Cys Ser Val Ser 35 4045
Ser Thr lie Ser Ser Asn His Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Ser Asp 50 5560
Thr Ser Pro Lys Pro Trp He Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
- 149 037044
70 7580
Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu
9095
Thr lie Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 100 105110
Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu 115 120125
Leu Arg Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser 130 135140
Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe LeuAsn
145 150 155160
Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp GlySer
165 170175
Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys 180 185190
Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu 195 200205
Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser 210 215220
Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225 230235 <210> 128 <211> 714 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 128 atggattttc atgtgcagat tttcagcttc atgctaatca gtgtcacagt cattttgtcc60 agtggagaaa ttgtgctcac ccagtctcca gcactcatgg ctgcatctcc gggggagaag120 gtcaccatca cctgcagtgt cagttcaact ataagttcca accacttgca ctggttccag180 cagaagtcag acacctcccc caaaccctgg atttatggca catccaacct ggcttctgga240 gtccctgttc gcttcagtgg cagtggatct gggacctctt attctctcac aatcagcagc300 atggaggctg aggatgctgc cacttattac tgtcaacagt ggagtagtta cccactcacg360 ttcggcgctg ggaccaagct ggagctgaga cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc420 ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac480 aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag tggaagattg atggcagtga acgacaaaat540 ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac agcaaagaca gcacctacag catgagcagc600 accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cgacataaca gctatacctg tgaggccact660 cacaagacat caacttcacc cattgtcaag agcttcaaca ggaatgagtg ttag714 <210> 129 <211> 449 <212> БЕЛОК
- 150 037044 <213> Mus musculus <400> 129
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly 15
Leu Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala 20
Tyr Leu His Trp Met Arg Gln Arg 3540
Gly Arg He Asp Pro Glu Asn Gly 5055
Gln Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr 6570
Leu Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser 85
Ser Arg Glu Ala Asp Tyr Phe His 100
Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr 115120
Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu 130135
Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys
145150
Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser 165
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
180
Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp 195200
Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr 210215
Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys 225230
Ser Val Phe He Phe Pro Pro Lys 245
Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val 260
Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe 275280
Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu 290295
Val Ser Glu Leu Pro lie Met His
305310
Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala
Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1015
Ser Asp Phe Asn lie Lys Asp Phe
2530
Pro Glu Gln Gly Leu Asp Trp lie 45
Asp Thr Leu Tyr Asp Pro Lys Phe 60
Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 7580
Glu Thr Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Asp Gly Thr Ser Tyr Trp Tyr Phe
105110
He Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr
125
Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr 140
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu 155160
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His 170175
Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser
185190
Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn
205
Lys Val Asp Lys Lys lie Val Pro 220 lie Cys Thr Val Pro Glu Val Ser 235240
Pro Lys Asp Val Leu Thr He Thr 250255
Val Val Asp He Ser Lys Asp Asp 265270
Val Asp Asp Val Glu Val His Thr
285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
315 320
Ala Phe Pro Ala Pro He Glu Lys
- 151 037044
Thr lie lie Pro
Cys Met
370
Trp Asn 385
Asp Thr
Ser Asn
Gly Leu
Lys
Ser Lys 340
Pro Pro 355 lie Thr
Gly Gln
Asp Gly
Trp Glu 420
His Asn 435
325
Thr Lys
Lys Glu
Asp Phe
Pro Ala
390
Ser Tyr 405
Ala Gly
His His
Gly Arg
Gln Met
360
Phe Pro 375
Glu Asn
Phe lie
Asn Thr
Thr Glu
440
330
Pro Lys 345 Ala Lys
Glu Asp
Tyr Lys
Tyr Ser 410
Phe Thr 425
Lys Ser
Ala Pro
Asp Lys lie Thr
380
Asn Thr 395
Lys Leu
Cys Ser
Leu Ser
Gln Val
350
Val Ser 365
Val Glu
Gln Pro
Asn Val
Val Leu
430
His Ser 445
335
Tyr Thr
Leu Thr
Trp Gln lie Met
400
Gln Lys 415
His Glu
Pro Gly <210> 130 <211> 1350 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 130 gaggttcagc tgcagcagtc tggggctgaa cttgtgaggc caggggcctt agtcaagttg60 tcctgcacag cttctgactt caacattaaa gacttctatc tacactggat gaggcagcgg120 cctgaacagg gcctggactg gattggaagg attgatcctg agaatggtga tactttatat180 gacccgaagt tccaggacaa ggccactctt acaacagaca catcctccaa cacagcctac240 ctgcagctca gcggcctgac atctgagacc actgccgtct attactgttc tagagaggcg300 gattatttcc acgatggtac ctcctactgg tacttcgatg tctggggcgc agggaccaca360 atcaccgtct cctcagccaa aacgacaccc ccatctgtct atccactggc ccctggatct420 gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag480 ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagcg gtgtgcacac cttcccagct540 gtcctgcagt ctgacctcta cactctgagc agctcagtga ctgtcccctc cagcacctgg600 cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag660 aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag ccttgcatat gtacagtccc agaagtatca720 tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag gatgtgctca ccattactct gactcctaag780 gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt840 gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc900 actttccgct cagtcagtga acttcccatc atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag960 ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa1020 accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg1080 gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg ataacagact tcttccctga agacattact1140 gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg gagaactaca agaacactca gcccatcatg1200
- 152 037044 gacacagatg gctcttactt catctacagc aagctcaatg tgcagaagag caactgggag 1260 gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta catgagggcc tgcacaacca ccatactgag 1320 aagagcctct cccactctcc tggtaaatga 1350 <210> 131 <211> 468 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 131
Met Lys Cys Ser Trp Val lie Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly
5 1015
Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg
2530
Pro Gly Ala Leu Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Asp Phe Asn Ile 35 4045
Lys Asp Phe Tyr Leu His Trp Met Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu 50 ' 5560
Asp Trp lie Gly Arg lie Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Leu TyrAsp
70 7580
Pro Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser SerAsn
9095
Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Thr Thr Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ser Arg Glu Ala Asp Tyr Phe His Asp Gly Thr Ser Tyr 115 120125
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr lie Thr Val Ser Ser 130 135140
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly SerAla
145 150 155160
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys GlyTyr
165 170175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 180 185190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 195 200205
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val
210 215220
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp LysLys
225 230 235240 lie Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys lie Cys Thr ValPro
245 250255
Glu Val Ser Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
260 265270
- 153 037044
Thr Не
Lys Asp
290
Val His 305
Phe Arg
Gly Lys
He Glu
Val Tyr
370
Ser Leu 385
Glu Trp
Pro He
Val Gln
Leu His
450
Ser Pro 465
Thr Leu 275
Asp Pro
Thr Ala
Ser Val
Glu Phe
340
Lys Thr 355
Thr He
Thr Cys
Gln Trp
Met Asp
420
Lys Ser 435
Glu Gly
Gly Lys
Thr Pro
Glu Val
Gln Thr
310
Ser Glu 325
Lys Cys lie Ser
Pro Pro
Met He
390
Asn Gly 405
Thr Asp
Asn Trp
Leu His
Lys Val 280
Gln Phe 295
Gln Pro
Leu Pro
Arg Val
Lys Thr
360
Pro Lys 375
Thr Asp
Gln Pro
Gly Ser
Glu Ala
440
Asn His 455
Thr Cys
Ser Trp
Arg Glu lie Met
330
Asn Ser 345
Lys Gly
Glu Gln
Phe Phe
Ala Glu
410
Tyr Phe 425
Gly Asn
His Thr
Val Val
Phe Val
300
Glu Gln 315
His Gln
Ala Ala
Arg Pro
Met Ala
380
Pro Glu 395
Asn Tyr
He Tyr
Thr Phe
Glu Lys
460
Val Asp 285
Asp Asp
Phe Asn
Asp Trp
Phe Pro
350
Lys Ala 365
Lys Asp
Asp He
Lys Asn
Ser Lys
430
Thr Cys 445
Ser Leu lie Ser
Val Glu
Ser Thr
320
Leu Asn 335
Ala Pro
Pro Gln
Lys Val
Thr Val
400
Thr Gln 415
Leu Asn
Ser Val
Ser His <210> 132 <211> 1407 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 132 atgaaatgca gctgggtcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag60 gttcagctgc agcagtctgg ggctgaactt gtgaggccag gggccttagt caagttgtcc120 tgcacagctt ctgacttcaa cattaaagac ttctatctac actggatgag gcagcggcct180 gaacagggcc tggactggat tggaaggatt gatcctgaga atggtgatac tttatatgac240 ccgaagttcc aggacaaggc cactcttaca acagacacat cctccaacac agcctacctg300 cagctcagcg gcctgacatc tgagaccact gccgtctatt actgttctag agaggcggat360 tatttccacg atggtacctc ctactggtac ttcgatgtct ggggcgcagg gaccacaatc420 accgtctcct cagccaaaac gacaccccca tctgtctatc cactggcccc tggatctgct480 gcccaaacta actccatggt gaccctggga tgcctggtca agggctattt ccctgagcca540 gtgacagtga cctggaactc tggatccctg tccagcggtg tgcacacctt cccagctgtc600 ctgcagtctg acctctacac tctgagcagc tcagtgactg tcccctccag cacctggccc660
- 154 037044 agcgagaccg tcacctgcaa cgttgcccac ccggccagca gcaccaaggt ggacaagaaa720 attgtgccca gggattgtgg ttgtaagcct tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct780 gtcttcatct tccccccaaa gcccaaggat gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc840 acgtgtgttg tggtagacat cagcaaggat gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta900 gatgatgtgg aggtgcacac agctcagacg caaccccggg aggagcagtt caacagcact960 ttccgctcag tcagtgaact tcccatcatg caccaggact ggctcaatgg caaggagttc1020 aaatgcaggg tcaacagtgc agctttccct gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc1080 aaaggcagac cgaaggctcc acaggtgtac accattccac ctcccaagga gcagatggcc1140 aaggataaag tcagtctgac ctgcatgata acagacttct tccctgaaga cattactgtg1200 gagtggcagt ggaatgggca gccagcggag aactacaaga acactcagcc catcatggac1260 acagatggct cttacttcat ctacagcaag ctcaatgtgc agaagagcaa ctgggaggca1320 ggaaatactt tcacctgctc tgtgttacat gagggcctgc acaaccacca tactgagaag1380 agcctctccc actctcctgg taaatga1407 <210> 133 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 133
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ile Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 1015
Asp Arg Val Ser lie Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr
2530
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Phe Lys Leu Leu lie 35 4045
Phe Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Tyr Asn Leu GluGln
70 7580
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu ProTyr
9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105110
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 115 120125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie 130 135140
Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly ValLeu
145 150 155160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser MetSer
165 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185190
- 155 037044
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro He Val Lys Ser
195
200
205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 134 <211> 645 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 134 gatatccaga tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc60 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca120 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa240 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg300 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag645 <210> 135 <211> 234 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 135
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
Gly Thr Arg Cys Asp lie Gln Met Thr Gln He Thr Ser Ser Leu Ser
Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Ser He Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Phe
Lys Leu Leu He Phe Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr He Tyr
Asn Leu Glu Gln Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp
100
105
110
Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg
115
120
125
- 156 037044
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 130 135140
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn PheTyr
145 150 155160
Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu ArgGln
165 170175
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185190
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 195 200205
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 210 215220 lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225230 <210> 136 <211> 705 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 136 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt60 gatatccaga tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc120 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca180 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa300 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg360 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag705 <210> 137 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 137
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Asn Gln Gly Lys Thr Leu Glu Trp lie
- 157 037044
Gly Glu 50
Lys Gly 65
Met Glu
Ala Arg
Trp Gly
Pro Ser
130
Met Val 145
Thr Val
Pro Ala
Val Pro
His Pro
210
Cys Gly 225
Phe He
Pro Lys
Val Gln
Thr Gln
290
Glu Leu 305
Cys Arg
Ser Lys
Pro Pro lie Thr
370
He Asn
Lys Ala
Leu Arg
Leu Gly
100
Ala Gly 115
Val Tyr
Thr Leu
Thr Trp
Val Leu
180
Ser Ser
195
Ala Ser
Cys Lys
Phe Pro
Val Thr
260
Phe Ser 275
Pro Arg
Pro He
Val Asn
Thr Lys 340
Lys Glu 355
Asp Phe
Pro Asn
Thr Leu 70
Ser Leu 85
Tyr Asp
Thr Thr
Pro Leu
Gly Cys
150
Asn Ser 165
Gln Ser
Thr Trp
Ser Thr
Pro Cys 230
Pro Lys 245
Cys Val
Trp Phe
Glu Glu
Met His
310
Ser Ala
325
Gly Arg
Gln Met
Phe Pro
Ser Gly 55
Thr Val
Thr Ser
Asp lie
Val Thr 120
Ala Pro 135
Leu Val
Gly Ser
Asp Leu
Pro Ser 200
Lys Val 215 lie Cys
Pro Lys
Val Val
Val Asp 280
Gln Phe 295
Gln Asp
Ala Phe
Pro Lys
Ala Lys 360
Glu Asp 375
Gly Ala
Asp Lys
Glu Asp 90
Tyr Asp 105
Val Ser
Gly Ser
Lys Gly
Leu Ser
170
Tyr Thr 185
Glu Thr
Asp Lys
Thr Val
Asp Val 250
Asp He 265
Asp Val
Asn Ser
Trp Leu
Pro Ala
330
Ala Pro 345
Asp Lys lie Thr
Gly Tyr 60
Ser Ser 75
Ser Ala
Asp Trp
Ser Ala
Ala Ala
140
Tyr Phe 155
Ser Gly
Leu Ser
Val Thr
Lys lie 220
Pro Glu
235
Leu Thr
Ser Lys
Glu Val
Thr Phe
300
Asn Gly 315 Pro lie
Gln Val
Val Ser
Val Glu
380
Asn Gln
Thr Thr
Val Tyr
Tyr Phe
110
Lys Thr 125
Gln Thr
Pro Glu
Val His
Ser Ser
190
Cys Asn 205
Val Pro
Val Ser lie Thr
Asp Asp 270
His Thr 285
Arg Ser
Lys Glu
Glu Lys
Tyr Thr 350
Leu Thr 365
Trp Gln
Lys Phe
Ala Tyr 80
Tyr Cys 95
Asp Val
Thr Pro
Asn Ser
Pro Val
160
Thr Phe 175
Val Thr
Val Ala
Arg Asp
Ser Val
240
Leu Thr
255
Pro Glu
Ala Gln
Val Ser
Phe Lys 320
Thr He
335 lie Pro
Cys Met
Trp Asn
- 158 037044
Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro He Met Asp Thr
385 390 395400
Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys SerAsn
405 410415
Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu 420 425430
His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440445 <210> 138 <211> 1344 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 138 gaggtccaac tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggata tacattcact gactacaaca tgcactgggt gaagcagaac120 caaggaaaga ccctagagtg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccac cacagcctac240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc300 tacgatgata tctacgacga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc360 gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc420 caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg480 acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg540 cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc600 gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt660 gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc720 ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg780 tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat840 gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc900 cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa960 tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa1020 ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag1080 gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag1140 tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca1200 gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga1260 aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc1320 ctctcccact ctcctggtaa atga1344 <210> 139 <211> 466 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 139
- 159 037044
Met Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu 15
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln
Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser 3540
Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val 5055
Glu Trp He Gly Glu lie Asn Pro 6570
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr 85
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser 100
Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr 115120
Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 130135
Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro 145150
Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly
165
Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn 180
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
195200
Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr 210215
Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser 225230
Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro 245
Ser Ser Val Phe He Phe Pro Pro
260
Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys 275280
Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp 290295
Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu 305310
Ser Val Ser Glu Leu Pro He Met 325
Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser
Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 1015
Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys 2530
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 45
Lys Gln Asn Gln Gly Lys Thr Leu 60
Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn 7580
Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr 9095
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
105110
Asp Asp He Tyr Asp Asp Trp Tyr 125
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys 140
Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln 155160
Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro 170175
Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val
185190
Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser 205
Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys 220
Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Val 235240
Cys He Cys Thr Val Pro Glu Val 250255
Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr He 265270
Val Val Val Asp lie Ser Lys Asp
285
Phe Val Asp Asp Val Glu Val His 300
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 330 335
Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu
- 160 037044
340 345350
Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr 355 360365
Thr lie Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu 370 375380
Thr Cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val GluTrp
385 390 395400
Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Prolie
405 410415
Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln 420 425430
Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His
435 440445
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro 450 455460
Gly Lys
465 <210> 140 <211> 1401 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 140 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag60 gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc120 tgcaaggctt ctggatatac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa gcagaaccaa180 ggaaagaccc tagagtggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac240 cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccaccac agcctacatg300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attgggctac360 gatgatatct acgacgactg gtacttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc420 tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa480 actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca540 gtgacctgga actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag600 tctgacctct acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag660 accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg720 cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc780 atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt840 gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat900 gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc cgggaggagc agttcaacag cactttccgc960 tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag gactggctca atggcaagga gttcaaatgc1020 agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc1080 agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt ccacctccca aggagcagat ggccaaggat1140 aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg1200
- 161 037044
cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260
ggctcttact tcatctacag caagctcaat gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320
actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380
tcccactctc ctggtaaatg a 1401
<210> 141 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 141
Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 1015
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr 20 2530
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 4045
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu GlnPro
70 7580
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu ProTyr
9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn SerGln
145 150 155160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser LeuSer
165 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 142 <211> 642
- 162 037044 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 142 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctccgcat ccgtaggcga ccgcgtaacc60 ataacatgta gagcatctca agatatttcc aactatttga attggtacca acaaaaaccc120 ggcaaagcac ctaaactcct catttactat acatcaagac tcctctccgg cgttccatca180 cgattctcag gctccggctc cggcacagat ttcacactca ctatttcctc cctccaacca240 gaagattttg caacctatta ctgtcaacaa ggcgatacac tcccatacac attcggcggc300 ggcacaaaag ttgaaattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt642 <210> 143 <211> 236 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 143'
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1015
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
2530
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser 35 4045
Gln Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 5560
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser GlyVal
70 7580
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr LeuThr
9095 lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105110
Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie 115 120125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp
130 135140
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
- 163 037044
145 150 155160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
165 170175
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala AspTyr ' 195 200205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly LeuSer
210 215220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230235 <210> 144 <211> 708 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 144 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctct ccgcatccgt aggcgaccgc120 gtaaccataa catgtagagc atctcaagat atttccaact atttgaattg gtaccaacaa180 aaacccggca aagcacctaa actcctcatt tactatacat caagactcct ctccggcgtt240 ccatcacgat tctcaggctc cggctccggc acagatttca cactcactat ttcctccctc300 caaccagaag attttgcaac ctattactgt caacaaggcg atacactccc atacacattc360 ggcggcggca caaaagttga aattaaacgt acggtggctg caccatctgt cttcatcttc420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat660 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt708 <210> 145 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 145
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30
- 164 037044
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 4045
Gly Glu He Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 5560
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu ProVal
145 150 155160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His ThrPhe
165 170175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185190
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys 210 215220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala GlyPro
225 230 235240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lieSer
245 250255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 290 295300
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly LysGlu
305 310 315320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He GluLys
325 330335
Thr He Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu
- 165 037044
370 375380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro MetLeu
385 390 395400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val AspLys
405 410415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440445
Lys <210> 146 <211> 1347 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 146 gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtaaaaaaac caggagcaag cgttaaagtt60 tcttgtaaag caagcggata tacatttaca gattacaaca tgcattgggt aagacaagcg120 ccaggacaag gattggaatg gatgggcgaa attaacccta atagtggagg agcaggctac180 aatcaaaaat tcaaagggag agttacaatg acaacagaca caagcacttc aacagcatat240 atggaactgc gatcacttag aagcgacgat acagctgtat actattgcgc acgacttggg300 tatgatgata tatatgatga ctggtatttc gatgtttggg gccagggaac aacagttacc360 gtctctagtg cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc420 acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg480 acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta540 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc600 acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca660 gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg720 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag780 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc900 acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag960 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa1020 accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag1260 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag1320 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa1347
- 166 037044 <210> 147 <211> 468 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 147
Met Asp Trp Thr Trp Arg He Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 1015
Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 4045
Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 5560
Glu Trp Met Gly Glu He Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly TyrAsn
70 7580
Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser ThrSer
9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp He Tyr Asp Asp Trp Tyr 115 120125
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135140
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg SerThr
145 150 155160
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr PhePro
165 170175
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185190
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200205
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 210 215220
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys ThrVal
225 230 235240
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro ProVal
245 250255
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265270
Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280285
- 167 037044
His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295300
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn SerThr
305 310 315320
Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp LeuAsn
325 330335
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 340 345350 lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360365
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375380
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie AlaVal
385 390 395400
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr ThrPro
405 410415
Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425430
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440445
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455460
Ser Pro Gly Lys 465 <210> 148 <211> 1404 <212> ДНК <213> Mus musculus ' <400> 148 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag60 gtgcagctgg tgcagagcgg cgccgaggta aaaaaaccag gagcaagcgt taaagtttct120 tgtaaagcaa gcggatatac atttacagat tacaacatgc attgggtaag acaagcgcca180 ggacaaggat tggaatggat gggcgaaatt aaccctaata gtggaggagc aggctacaat240 caaaaattca aagggagagt tacaatgaca acagacacaa gcacttcaac agcatatatg300 gaactgcgat cacttagaag cgacgataca gctgtatact attgcgcacg acttgggtat360 gatgatatat atgatgactg gtatttcgat gtttggggcc agggaacaac agttaccgtc420 tctagtgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc480 tccgagagca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg540 gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag600 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc660 cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt720 gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca780
- 168 037044 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc840 acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg900 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccacggg aggagcagtt caacagcacg960 ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac1020 aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc1080 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc1140 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg1200 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacacctcc catgctggac1260 tccgacggct ccttcttCct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag1320 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag1380 agcctctccc tgtctccggg taaa1404 <210> 149 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 149
Asp lie Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 1015
Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr
2530
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu lie 35 4045
Phe Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser Asn Leu GluGln
70 7580
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu ProTyr
9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Arg Arg Ala Asp Ala Ala 100 105110
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 115 120125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie 130 135140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly ValLeu
145 150 155160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser MetSer
165 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser 195 200205
- 169 037044
Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 150 <211> 645 <212> ДНК <213 > Mus musculus <400> 150 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc60 atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtttca gcagaaacca120 gatggaactc ttaaactcct gatcttctac acatcaagat tacactcagg agttccatca180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa240 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gttcgggggg300 gggaccaagc tggaaataag acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag645 <210> 151 <211> 234 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 151
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1015
Gly Thr Arg Cys Asp He Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser
2530
Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr He Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp 35 4045 lie Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Leu 50 5560
Lys Leu Leu He Phe Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val ProSer
70 7580
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr HeSer
9095
Asn Leu Glu Gln Glu Asp lie Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp 100 105110
Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Arg Arg
115 120125
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
130 135140
- 170 037044
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
145
150
155
160
Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln
165
170
175
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180
185
190
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
195
200
205
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
210
215
220 lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225
230 <210> 152 <211> 705 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 152 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt60 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc120 atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtttca gcagaaacca180 gatggaactc ttaaactcct gatcttctac acatcaagat tacactcagg agttccatca240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa300 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gttcgggggg360 gggaccaagc tggaaataag acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag705 <210> 153 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 153
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
Asn Met His Trp Val Lys Gln Asn Gln Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie
Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
- 171 037044
Lys Gly 65
Met Glu
Ala Arg
Trp Gly
Pro Ser
130
Met Val
145
Thr Val
Pro Ala
Val Pro
His Pro
210
Cys Gly 225
Phe He
Pro Lys
Val Gln
Thr Gln
290
Glu Leu
305
Cys Arg
Ser Lys
Pro Pro lie Thr
370
Gly Gln 385
Lys Ala
Leu Arg
Leu Val
100
Ala Gly 115
Val Tyr
Thr Leu
Thr Trp
Val Leu
180
Ser Ser 195
Ala Ser
Cys Lys
Phe Pro
Val Thr
260
Phe Ser 275
Pro Arg
Pro He
Val Asn
Thr Lys 340
Lys Glu 355
Asp Phe
Pro Ala
Thr Leu
Ser Leu 85
Tyr Asp
Thr Thr
Pro Leu
Gly Cys
150
Asn Ser 165 Gln Ser
Thr Trp
Ser Thr
Pro Cys
230
Pro Lys 245
Cys Val
Trp Phe
Glu Glu
Met His
310
Ser Ala
325
Gly Arg
Gln Met
Phe Pro
Glu Asn
390
Thr Val
Thr Ser
Gly Ser
Val Thr 120
Ala Pro 135
Leu Val
Gly Ser
Asp Leu
Pro Ser 200
Lys Val 215 lie Cys
Pro Lys
Val Val
Val Asp 280
Gln Phe 295
Gln Asp
Ala Phe
Pro Lys
Ala Lys 360
Glu Asp 375
Tyr Lys
Asp Lys
Glu Asp 90
Tyr Glu 105
Val Ser
Gly Ser
Lys Gly
Leu Ser
170
Tyr Thr 185 Glu Thr
Asp Lys
Thr Val
Asp Val 250
Asp He 265
Asp Val
Asn Ser
Trp Leu
Pro Ala
330
Ala Pro 345
Asp Lys
He Thr
Asn Thr
Ser Ser 75
Ser Ala
Asp Trp
Ser Ala
Ala Ala
140
Tyr Phe 155
Ser Gly
Leu Ser
Val Thr
Lys He
220
Pro Glu
235
Leu Thr
Ser Lys
Glu Val
Thr Phe
300
Asn Gly 315
Pro He
Gln Val
Val Ser
Val Glu
380
Gln Pro 395
Ser Thr
Val Tyr
Tyr Phe 110
Lys Thr 125
Gln Thr
Pro Glu
Val His
Ser Ser
190
Cys Asn 205
Val Pro
Val Ser
He Thr
Asp Asp
270
His Thr 285
Arg Ser
Lys Glu
Glu Lys
Tyr Thr 350
Leu Thr 365
Trp Gln
He Met
Ala Tyr 80
Tyr Cys 95 Asp Val
Thr Pro
Asn Ser
Pro Val
160
Thr Phe
175
Val Thr
Val Ala
Arg Asp
Ser Val
240
Leu Thr
255
Pro Glu
Ala Gln
Val Ser
Phe Lys
320
Thr He
335
He Pro
Cys Met
Trp Asn
Asp Thr
400
- 172 037044
Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn 405 410415
Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu 420 425430
His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440445 <210> 154 <211> 1344 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 154 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tgcactgggt gaaacagaac120 caaggaaaga gcctagagtg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tagtggctac180 aaccaaaagt tcaaaggcaa ggccacattg actgtagaca agtcttccag cacagcctac240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattggtc300 tacgatggca gctacgagga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc360 gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc420 caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg480 acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg540 cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc600 gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt660 gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc720 ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg780 tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat840 gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc900 cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa960 tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa1020 ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag1080 gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag1140 tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca1200 gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga1260 aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc1320 ctctcccact ctcctggtaa atga1344 <210> 155 <211> 466 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 155
Met Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 15 1015
- 173 037044
Val Leu
Pro Gly
Thr Asp 50
Glu Trp 65
Gln Lys
Thr Ala
Tyr Tyr
Phe Asp
130
Thr Thr 145
Thr Asn
Glu Pro
His Thr
Ser Val
210
Asn Val 225 Pro Arg
Ser Ser
Thr Leu
Asp Pro
290
Thr Ala 305 Ser Val
Glu Phe
Lys Thr
Ser Glu
Ala Ser 35
Tyr Asn
He Gly
Phe Lys
Tyr Met 100
Cys Ala 115
Val Trp
Pro Pro
Ser Met
Val Thr
180
Phe Pro
195
Thr Val
Ala His
Asp Cys
Val Phe
260
Thr Pro 275 Glu Val
Gln Thr
Ser Glu
Lys Cys
340
He Ser
Val Gln
Val Lys
Met His
Glu lie 70
Gly Lys 85
Glu Leu
Arg Leu
Gly Ala
Ser Val
150
Val Thr
165
Val Thr
Ala Val
Pro Ser
Pro Ala
230
Gly Cys 245
He Phe
Lys Val
Gln Phe
Gln Pro
310
Leu Pro 325
Arg Val
Lys Thr
Leu Gln
Met Ser 40
Trp Val 55
Asn Pro
Ala Thr
Arg Ser
Val Tyr 120
Gly Thr 135
Tyr Pro
Leu Gly
Trp Asn
Leu Gln
200
Ser Thr
215
Ser Ser
Lys Pro
Pro Pro
Thr Cys
280
Ser Trp 295
Arg Glu lie Met
Asn Ser
Lys Gly
Gln Ser 25
Cys Lys
Lys Gln
Asn Ser
Leu Thr
Leu Thr
105
Asp Gly
Thr Val
Leu Ala
Cys Leu
170
Ser Gly 185
Ser Asp
Trp Pro
Thr Lys
Cys He
250
Lys Pro 265
Val Val
Phe Val
Glu Gln
His Gln
330
Ala Ala
345
Arg Pro
Gly Pro
Ala Ser
Asn Gln
Gly Qly 75
Val Asp
Ser Glu
Ser Tyr
Thr Val
140
Pro Gly 155
Val Lys
Ser Leu
Leu Tyr
Ser Glu
220
Val Asp 235 Cys Thr
Lys Asp
Val Asp
Asp Asp
300
Phe Asn
315
Asp Trp
Phe Pro
Lys Ala
Glu Leu
Gly Tyr 45
Gly Lys
Ser Gly
Lys Ser
Asp Ser
110
Glu Asp 125
Ser Ser
Ser Ala
Gly Tyr
Ser Ser
190
Thr Leu
205
Thr Val
Lys Lys
Val Pro
Val Leu
270
He Ser
285
Val Glu
Ser Thr
Leu Asn
Ala Pro
350
Pro Gln
Met Lys
Thr Phe
Ser Leu
Tyr Asn 80
Ser Ser 95
Ala Val
Trp Tyr
Ala Lys
Ala Gln
160
Phe Pro 175
Gly Val
Ser Ser
Thr Cys
He Val
240
Glu Val 255
Thr lie
Lys Asp
Val His
Phe Arg
320
Gly Lys 335 He Glu
Val Tyr
- 174 037044
355
Thr lie Pro Pro Pro
370
Thr Cys Met lie Thr 385
Gln Trp Asn Gly Gln
405
Met Asp Thr Asp Gly 420
Lys Ser Asn Trp Glu
435
Glu Gly Leu His Asn
450
Gly Lys
465
360
Lys Glu Gln Met Ala
375
Asp Phe Phe Pro Glu
390
Pro Ala Glu Asn Tyr
410
Ser Tyr Phe lie Tyr
425
Ala Gly Asn Thr Phe
440
His His Thr Glu Lys
455
365
Lys Asp Lys Val Ser Leu
380
Asp Ile Thr Val Glu Trp
395 400
Lys Asn Thr Gln Pro lie
415
Ser Lys Leu Asn Val Gln
430
Thr Cys Ser Val Leu His
445
Ser Leu Ser His Ser Pro
460 <210> 156 <211> 1401 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 156 atgggatgga gtccagctgc tgcaaggctt ggaaagagcc caaaagttca gagctccgca gatggcagct tcctcagcca actaactcca gtgacctgga tctgacctct accgtcacct cccagggatt atcttccccc gttgtggtag gtggaggtgc tcagtcagtg agggtcaaca agaccgaagg aaagtcagtc cagtggaatg ggctcttact gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 ctggatacac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa acagaaccaa 180 tagagtggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtag tggctacaac 240 aaggcaaggc cacattgact gtagacaagt cttccagcac agcctacatg 300 gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attggtctac 360 acgaggactg gtacttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480 tggtgaccct gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540 actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600 acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660 gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720 gtggttgtaa caaagcccaa acatcagcaa acacagctca aacttcccat gtgcagcttt ctccacaggt tgacctgcat ggcagccagc tcatctacag gccttgcata ggatgtgctc ggatgatccc gacgcaaccc catgcaccag ccctgccccc gtacaccatt gataacagac ggagaactac caagctcaat tgtacagtcc accattactc gaggtccagt cgggaggagc gactggctca atcgagaaaa ccacctccca ttcttccctg aagaacactc gtgcagaaga cagaagtatc tgactcctaa tcagctggtt agttcaacag atggcaagga ccatctccaa aggagcagat aagacattac agcccatcat gcaactggga atctgtcttc ggtcacgtgt tgtagatgat cactttccgc gttcaaatgc aaccaaaggc ggccaaggat tgtggagtgg ggacacagat ggcaggaaat
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
- 175 037044 actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380 tcccactctc ctggtaaatg a 1401 <210> 157 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 157
Asp lie Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1015
Asp Arg Val Thr lie Cys Cys Arg Ala Ser Gln Val lie Thr Asn Tyr
2530
Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Phe Lys Leu Leu lie
4045
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser Asn Leu GluGln
70 7580
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu ProTyr
9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105110
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie
130 135140
Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly ValLeu
145 150 155160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser MetSer
165 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser
195 200205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 158 <211> 642 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 158 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60
- 176 037044 atctgttgca gggcaagtca ggtcattacc aattatttat actggtatca gcagaaacca120 gatggaactt ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggaacag240 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg300 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt642 <210> 159 <211> 234 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 159
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln 15 1015
Gly Thr Arg Cys Asp He Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser 20 2530
Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr lie Cys Cys Arg Ala Ser Gln Val 35 4045
He Thr Asn Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Phe 50 5560
Lys Leu Leu He Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val ProSer
70 7580
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lieSer
9095
Asn Leu Glu Gln Glu Asp He Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp 100 105110
Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 115 120125
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 130 135140
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn PheTyr
145 150 155160
Pro Lys Asp He Asn Val Lys Trp Lys He Asp Gly Ser Glu ArgGln
165 170175
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185190
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 195 200205
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
- 177 037044
210
215
220 lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225
230 <210> 160 <211> 702 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 160 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt60 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc120 atctgttgca gggcaagtca ggtcattacc aattatttat actggtatca gcagaaacca180 gatggaactt ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggaacag300 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg360 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt702 <210> 161 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 161
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
Asn Met His Trp Met Lys Gln Asn Gln Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie
Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Gln Phe
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Arg Thr Ala Tyr
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
Ala Arg Leu Gly Tyr Val Gly Asn Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Val
100
105
110
Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro
115
120
125
- 178 037044
Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro 130 135
Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val
145 150
Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser 165
Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu 180
Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser 195200
His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val 210215
Cys Gly Cys Lys Pro Cys He Cys
225230
Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245
Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val 260
Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp 275280
Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe 290295
Glu Leu Pro lie Met His Gln Asp 305310
Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe 325
Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys 340
Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys 355360
He Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp 370375
Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys 385390
Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser
405
Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr 420
His Asn His His Thr Glu Lys Ser 435 440 <210> 162 <211> 1341
Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser
140
Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val
155160
Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe
170175
Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr
185190
Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala
205
Asp Lys Lys He Val Pro Arg Asp
220
Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val
235240
Asp Val Leu Thr He Thr Leu Thr
250255
Asp He Ser Lys Asp Asp Pro Glu
265270
Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln
285
Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser
300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys
315320
Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie
330335
Ala Pro Gln Val Tyr Thr He Pro
345350
Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met
365 lie Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn
380
Asn Thr Gln Pro He Met Asp Thr
395400
Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn
410415
Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu
425430
Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
445
- 179 037044 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 162 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tgcactggat gaagcagaac120 caaggaaaga gcctagaatg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac180 aaccagcagt tcaaaggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag gacagcctac240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc300 tacgttggta attacgagga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc360 gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc420 caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg480 acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg540 cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc600 gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt660 gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc720 ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg780 tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat840 gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc900 cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa960 tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa1020 ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag1080 gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag1140 tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca1200 gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga1260 aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc1320 ctctcccact ctcctggtaa a1341 <210> 163 <211> 466 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 163
Met Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 15 1015
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys 20 2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 4045
Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Met Lys Gln Asn Gln Gly Lys Ser Leu 50 5560
Glu Trp He Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly TyrAsn
70 7580
Gln Gln Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Arg
- 180 037044
Thr Ala
Tyr Tyr
Phe Asp 130
Thr Thr 145
Thr Asn
Glu Pro
His Thr
Ser Val
210
Asn Val 225
Pro Arg
Ser Ser
Thr Leu
Asp Pro
290
Thr Ala 305
Ser Val
Glu Phe
Lys Thr
Thr lie
370
Thr Cys 385
Gln Trp
Met Asp
Tyr Met
100
Cys Ala 115
Val Trp
Pro Pro
Ser Met
Val Thr
180
Phe Pro 195
Thr Val
Ala His
Asp Cys
Val Phe
260
Thr Pro 275
Glu Val
Gln Thr
Ser Glu
Lys Cys 340 lie Ser
355
Pro Pro
Met lie
Asn Gly
Thr Asp 420
Glu Leu
Arg Leu
Gly Ala
Ser Val
150
Val Thr 165
Val Thr
Ala Val
Pro Ser
Pro Ala 230
Gly Cys 245 lie Phe
Lys Val
Gln Phe
Gln Pro
310
Leu Pro 325
Arg Val
Lys Thr
Pro Lys
Thr Asp 390
Gln Pro 405 Gly Ser
Arg Ser
Gly Tyr 12 0
Gly Thr 135
Tyr Pro
Leu Gly
Trp Asn
Leu Gln
200
Ser Thr 215
Ser Ser
Lys Pro
Pro Pro
Thr Cys 280
Ser Trp 295
Arg Glu
Ile Met
Asn Ser
Lys Gly
360
Glu Gln
375
Phe Phe
Ala Glu
Tyr Phe
Leu Thr 105 Val Gly
Thr Val
Leu Ala
Cys Leu
0 Ser Gly 185 Ser Asp
Trp Pro
Thr Lys
Cys lie 250
Lys Pro 265
Val Val
Phe Val
Glu Gln
His Gln
330 Ala Ala 345
Arg Pro
Met Ala
Pro Glu
Asn Tyr 410 lie Tyr 425
Ser Glu
Asn Tyr
Thr Val
140
Pro Gly 155
Val Lys
Ser Leu
Leu Tyr
Ser Glu
220
Val Asp 235
Cys Thr
Lys Asp
Val Asp
Asp Asp 300
Phe Asn 315
Asp Trp
Phe Pro
Lys Ala
Lys Asp 380
Asp lie 395
Lys Asn
Ser Lys
Asp Ser 110
Glu Asp 125
Ser Ser
Ser Ala
Gly Tyr
Ser Ser
190
Thr Leu 205
Thr Val
Lys Lys
Val Pro
Val Leu
270 lie Ser 285
Val Glu
Ser Thr
Leu Asn
Ala Pro
350
Pro Gln 365
Lys Val
Thr Val
Thr Gln
Leu Asn
430
Ala Val
Trp Tyr
Ala Lys
Ala Gln
160
Phe Pro 175
Gly Val
Ser Ser
Thr Cys lie Val
240
Glu Val 255
Thr lie
Lys Asp
Val His
Phe Arg 320
Gly Lys 335 lie Glu
Val Tyr
Ser Leu
Glu Trp 400
Pro lie
415
Val Gln
- 181 037044
Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His 435 440 445
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro 450 455 460
Gly Lys 465 <210> 164 <211> 1398 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 164 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccagctgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc120 tgcaaggctt ctggatacac attcactgac tacaacatgc actggatgaa gcagaaccaa180 ggaaagagcc tagaatggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac240 cagcagttca aaggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccaggac agcctacatg300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attgggctac360 gttggtaatt acgaggactg gtacttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc420 tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa480 actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca540 gtgacctgga actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag600 tctgacctct acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag660 accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg720 cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc780 atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt840 gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat900 gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc cgggaggagc agttcaacag cactttccgc960 tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag gactggctca atggcaagga gttcaaatgc1020 agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc1080 agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt ccacctccca aggagcagat ggccaaggat1140 aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg1200 cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac aagaacactc agcccatcat ggacacagat1260 ggctcttact tcatctacag caagctcaat gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat1320 actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc1380 tcccactctc ctggtaaa1398 <210> 165 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 165
Asp He Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
- 182 037044
1015
Asp Arg Val Ser lie Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr
2530
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Phe Lys Leu Leu lie
4045
Phe Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Tyr Asn Leu GluGln
70 7580
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu ProTyr
9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105110
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie
130 135140
Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly ValLeu
145 150 155160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser MetSer
165 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser
195 200205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 <210> 166 <211> 645 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 166 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc60 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca120 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa240 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg300 gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca600
- 183 037044 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag645 <210> 167 <211> 234 <212> БЕЛОК' <213> Mus musculus <400> 167
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
5 ' 1015
Gly Thr Arg Cys Asp He Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser
2530
Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Ser He Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp
4045
He Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Phe
5560
Lys Leu Leu lie Phe Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val ProSer
70 7580
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lieTyr
9095
Asn Leu Glu Gln Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp
100 105110
Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg
115 120125
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
130 135140
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn PheTyr
145 150 155160
Pro Lys Asp He Asn Val Lys Trp Lys He Asp Gly Ser Glu ArgGln
165 170175
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185190
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
195 200205
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
210 215220
He Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225230 <210> 168 <211> 705 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 168
- 184 037044 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt60 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc120 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca180 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa300 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg360 gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag705 <210> 169 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 169
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
5 1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530
Asn Met His Trp Val Lys Gln Asn Gln Gly Lys Thr Leu Asp Trp lie 35 4045
Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105110
Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro
115 120 .125
Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser 130 135140
Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu ProVal
145 150 155160
Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His ThrPhe
165 170175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr 180 185190
Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala
- 185 037044
195 200205
His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Val Pro Arg Asp
210 215220
Cys Gly Cys Lys Pro Cys lie Cys Thr Val Pro Glu Val Ser SerVal
225 230 235240
Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie Thr LeuThr
245 250255
Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser Lys Asp Asp Pro Glu
260 265270
Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln
275 280285
Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser
290 295300
Glu Leu Pro lie Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu PheLys
305 310 315320
Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thrlie
325 330335
Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr lie Pro
340 345350
Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met
355 360365 lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn
370 375380
Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met AspThr
385 390 395400
Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys SerAsn
405 410415
Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu
420 425430
His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440445 <210> 170 <211> 1344 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 170 gaggtccaac tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggata tacattcact gactacaaca tgcactgggt gaagcagaac120 caaggaaaga ccctagactg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccac cacagcctac240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc300 tacgatgata tctacgacga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc360
- 186 037044 gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc420 caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg480 acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg540 cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc600 gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt660 gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc720 ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg780 tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat840 gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc900 cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa960 tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa1020 ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag1080 gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag1140 tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca1200 gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga1260 aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc1320 ctctcccact ctcctggtaa atga1344 <210> 171 <211> 466 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 171
Met Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 15 1015
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys 20 2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 4045
Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Asn Gln Gly Lys Thr Leu 50 5560
Asp Trp He Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly TyrAsn
70 7580
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser SerThr
9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105HO
Tyr Tyr Cys 115 Ala Arg Leu Gly Tyr 120 Asp Asp lie Tyr Asp 125 Asp Trp Tyr
Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys
130 135 140
Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln
145 150 155 160
- 187 037044
Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly 165
Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn 180
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
195200
Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr 210215
Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser
225230
Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro 245
Ser Ser Val Phe He Phe Pro Pro
260
Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys 275280
Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp 290295
Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu
305310
Ser Val Ser Glu Leu Pro He Met
325
Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser 340
Lys Thr He Ser Lys Thr Lys Gly 355360
Thr He Pro Pro Pro Lys Glu Gln 370375
Thr Cys Met He Thr Asp Phe Phe
385390
Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu 405
Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe '420
Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn
435440
Glu Gly Leu His Asn His His Thr 450455
Gly Lys
465 <210> 172 <211> 1401
Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro 170 175
Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val
185 190
Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser 205
Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys 220
Thr Lys Val Asp Lys Lys He Val 235240
Cys lie Cys Thr Val Pro Glu Val 250255
Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie
265270
Val Val Val Asp He Ser Lys Asp 285
Phe Val Asp Asp Val Glu Val His 300
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 315320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 330335
Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu
345350
Arg Pro Lys A.la Pro Gln Val Tyr 365
Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu 380
Pro Glu Asp He Thr Val Glu Trp 395400
Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro lie 410415 lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln
425430
Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His 445
Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro 460
- 188 037044 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 172 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag60 gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc120 tgcaaggctt ctggatatac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa gcagaaccaa180 ggaaagaccc tagactggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac240 cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccaccac agcctacatg300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attgggctac360 gatgatatct acgacgactg gtacttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc420 tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa480 actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca540 gtgacctgga actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag600 tctgacctct acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag660 accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg720 cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc780 atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt840 gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat900 gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc cgggaggagc agttcaacag cactttccgc960 tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag gactggctca atggcaagga gttcaaatgc1020 agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc1080 agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt ccacctccca aggagcagat ggccaaggat1140 aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg1200 cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac aagaacactc agcccatcat ggacacagat1260 ggctcttact tcatctacag caagctcaat gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat1320 actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc1380 tcccactctc ctggtaaatg a1401 <210> 173 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 173
Asp lie Gln Met Thr Gln Ile Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 1015
Asp Arg Val Ser lie Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr
2530
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Phe Lys Leu Leu lie 35 4045
Phe Tyr Thr Ser Arg Leu Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Tyr Asn Leu Glu Gln 65 70 7580
- 189 037044
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105110
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 115 120125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie 130 135140
Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly ValLeu
145 150 155160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser MetSer
165 1.70175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser 195 200205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 174 <211> 642 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 174 gatatccaga tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc60 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa attggtatca gcagaaacca120 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tattttcagg agtcccatca180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa240 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg300 gggaccaagg tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt642 <210> 175 <211> 234 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 175
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
10 15
- 190 037044
Gly Thr
Ala Ser lie Ser 50
Lys Leu 65
Arg Phe
Asn Leu
Thr Leu
Ala Asp
130 Leu Thr 145 Pro Lys
Asn Gly
Tyr Ser
His Asn
210 lie Val 225
Arg Cys
Leu Gly 35
Asn Tyr
Leu Ile
Ser Gly
Glu Gln
100
Pro Tyr 115
Ala Ala
Ser Gly
Asp lie
Val Leu
180
Met Ser
195
Ser Tyr
Lys Ser
Asp lie
Asp Arg
Leu Asn
Phe Tyr 70
Ser Gly 85
Glu Asp
Thr Phe
Pro Thr
Gly Ala
150
Asn Val
165
Asn Ser
Ser Thr
Thr Cys
Phe Asn
230
Gln Met
Val Ser 40
Trp Tyr 55
Thr Ser
Ser Gly
Phe Ala
Gly Gly
120
Val Ser 135
Ser Val
Lys Trp
Trp Thr
Leu Thr
200
Glu Ala 215
Arg Asn
Thr Gln 25 lie Ser
Gln Gln
Arg Leu
Thr Asp 90
Thr Tyr 105
Gly Thr
Ile Phe
Val Cys
Lys lie
170
Asp Gln 185
Leu Thr
Thr His
Glu Cys lie Thr
Cys Arg
Lys Pro 60
Phe Ser 75
Tyr Ser
Phe Cys
Lys Val
Pro Pro
140
Phe Leu
155
Asp Gly
Asp Ser
Lys Asp
Lys Thr
220
Ser Ser
Ala Ser 45
Asp Gly
Gly Val
Leu Thr
Gln Gln
110
Glu Ile 125
Ser Ser
Asn Asn
Ser Glu
Lys Asp
190
Glu Tyr 205 Ser Thr
Leu Ser
Gln Asp
Thr Phe
Pro Ser 80 lie Tyr 95 Gly Asp
Lys Arg
Glu Gln
Phe Tyr
160 Arg Gln 175 Ser Thr
Glu Arg
Ser Pro <210> 176 <211> 702 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 176 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt60 gatatccaga tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc120 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa attggtatca gcagaaacca180 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tattttcagg agtcccatca240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa300 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg360 gggaccaagg tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg540
- 191 037044
aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600
ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660
tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt 702
<210> 177 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 177
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Thr 1 5 1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Gln Gly Lys Thr Leu Glu Trp He 35 4045
Gly Glu He Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Lys Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105110
Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala 115 120125
Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser 130 135140
Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu ProVal
145 150 155160
Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Asp Val His ThrPhe
165 170175
Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr 180 185190
Val Thr Thr Trp Pro Ser Gln Thr He Thr Cys Asn Val Ala His Pro 195 200205
Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys He Glu Pro Arg Gly Ser Pro 210 215220
Thr His Lys Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu GlyGly
225 230 235240
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys He Lys Asp Val Leu Metlie
245 250255
Ser Leu Ser Pro Met Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp 260 265270
- 192 037044
Asp Pro Asp Val His Val Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His 275 280285
Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr lie Arg 290 295300
Val Val Ser Ala Leu Pro lie Gln His Gln Asp Trp Met Ser GlyLys
305 310 315320
Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lieGlu
325 330335
Arg Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly Pro Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr 340 345350
Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu 355 360365
Thr Cys Met lie Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp lie Tyr Val Glu Trp 370 375380
Thr Asn Asn Gly Gln Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu ProVal
385 390 395400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg ValGlu
405 410415
Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His 420 425430
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro 435 440445
Gly Lys 450 <210> 178 <211> 1350 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 178 gaggtccaac tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctgggacttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata tacattcact gactacaaca tgcactgggt gaagcagacc120 caaggaaaga ccctagagtg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccac cacagcctac240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aaaattgggc300 tacgatgata tctacgacga ctggtatttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc360 gtctcctcag ccaaaacaac agccccatcg gtctatccac tggcccctgt gtgtggagat420 acaactggct cctcggtgac tctaggatgc ctggtcaagg gttatttccc tgagccagtg480 accttgacct ggaactctgg atccctgtcc agtgatgtgc acaccttccc agctctcctg540 cagtctggcc tctacaccct cagcagctca gtgactgtaa ccacctggcc cagccagacc600 atcacctgca atgtggccca cccggcaagc agcaccaaag tggacaagaa aattgagccc660 agagggtccc caacacataa accctgtcct ccatgcccag ctcctaacct cttgggtgga720 ccatccgtct tcatcttccc tccaaagatc aaggatgtac tcatgatctc cctgagcccc780
- 193 037044 atggtcacgt gtgtggtggt ggatgtgagc gaggatgacc cagatgtcca tgtcagctgg840 ttcgtgaaca acgtggaagt acacacagct cagacacaaa cccatagaga ggattacaac900 agtactatcc gggtggtcag tgccctcccc atccagcacc aggactggat gagtggcaag960 gagttcaaat gcaaggtcaa caacaaagcc ctcccagcgc ccatcgagag aaccatctca1020 aaacccaaag ggccagtaag agctccacag gtatatgtct tgcctccacc agaagaagag1080 atgactaaga aacaggtcac tctgacctgc atgatcacag acttcatgcc tgaagacatt1140 tacgtggagt ggaccaacaa cgggcaaaca gagctaaact acaagaacac tgaaccagtc1200 ctggactctg atggttctta cttcatgtac agcaagctga gagtggaaaa gaagaactgg1260 gtggaaagaa atagctactc ctgttcagtg gtccacgagg gtctgcacaa tcaccacacg1320 actaagagct tctcccggac tccgggtaaa1350 <210> 179 <211> 469 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 179
Met Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 15 1015
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys 20 2530
Pro Gly Thr Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 4045
Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Gln Gly Lys Thr Leu 50 5560
Glu Trp He Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly TyrAsn
70 7580
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser SerThr
9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Gly Tyr Asp Asp He Tyr Asp Asp Trp Tyr 115 120125
Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys 130 135140
Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly AspThr
145 150 155160
Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr PhePro
165 170175
Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Asp Val 180 185190
His Thr Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Ser 195 200205
Ser Val Thr Val Thr Thr Trp Pro Ser Gln Thr He Thr Cys Asn Val
- 194 037044
210 215220
Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys He Glu ProArg
225 230 235240
Gly Ser Pro Thr His Lys Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro AsnLeu
245 250255
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys lie Lys Asp Val 260 265270
Leu Met lie Ser Leu Ser Pro Met Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280285
Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val His Val Ser Trp Phe Val Asn Asn Val 290 295300
Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr AsnSer
305 310 315320
Thr He Arg Val Val Ser Ala Leu Pro lie Gln His Gln Asp TrpMet
325 330335
Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345350
Pro lie Glu Arg Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly Pro Val Arg Ala Pro 355 360365
Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln 370 375380
Val Thr Leu Thr Cys Met He Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp HeTyr
385 390 395400
Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Gln Thr Glu Leu Asn Tyr Lys AsnThr
405 410415
Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu 420 425430
Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser 435 440445
Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser 450 455460
Arg Thr Pro Gly Lys 465 <210> 180 <2H> 1407 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 180 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg ggacttcagt gaagatgtcc120 tgcaaggctt ctggatatac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa gcagacccaa180 ggaaagaccc tagagtggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac240
- 195 037044 cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccaccac agcctacatg300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaaa attgggctac360 gatgatatct acgacgactg gtatttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc420 tcctcagcca aaacaacagc cccatcggtc tatccactgg cccctgtgtg tggagataca480 actggctcct cggtgactct aggatgcctg gtcaagggtt atttccctga gccagtgacc540 ttgacctgga actctggatc cctgtccagt gatgtgcaca ccttcccagc tctcctgcag600 tctggcctct acaccctcag cagctcagtg actgtaacca cctggcccag ccagaccatc660 acctgcaatg tggcccaccc ggcaagcagc accaaagtgg acaagaaaat tgagcccaga720 gggtccccaa cacataaacc ctgtcctcca tgcccagctc ctaacctctt gggtggacca780 tccgtcttca tcttccctcc aaagatcaag gatgtactca tgatctccct gagccccatg840 gtcacgtgtg tggtggtgga tgtgagcgag gatgacccag atgtccatgt cagctggttc900 gtgaacaacg tggaagtaca cacagctcag acacaaaccc atagagagga ttacaacagt960 actatccggg tggtcagtgc cctccccatc cagcaccagg actggatgag tggcaaggag1020 ttcaaatgca aggtcaacaa caaagccctc ccagcgccca tcgagagaac catctcaaaa1080 cccaaagggc cagtaagagc tccacaggta tatgtcttgc ctccaccaga agaagagatg1140 actaagaaac aggtcactct gacctgcatg atcacagact tcatgcctga agacatttac1200 gtggagtgga ccaacaacgg gcaaacagag ctaaactaca agaacactga accagtcctg1260 gactctgatg gttcttactt catgtacagc aagctgagag tggaaaagaa gaactgggtg1320 gaaagaaata gctactcctg ttcagtggtc cacgagggtc tgcacaatca ccacacgact1380 aagagcttct cccggactcc gggtaaa <210> 181 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 181
Asp lie Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser 15
Asp Arg Val Ser lie Ser Cys Arg Ala 2025
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp 3540
Phe Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly 5055
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu 6570
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100105
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Leu Ser 115120
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn
1407
Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 15
Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr
Gly Thr Phe Lys Leu Leu lie 45
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Thr lie Tyr Asn Leu Glu Gln 75 80
Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 90 95 lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala
110
Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 125
Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie
- 196 037044
130 135140
Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly ValLeu
145 150 155160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser MetSer
165 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr- Ser Pro lie Val Lys Ser 195 200205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 182 <211> 645 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 182 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 60 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca120 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa240 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg300 gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacta360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag645 <210> 183 <211> 234 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 183
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln 15 1015
Gly Thr Arg Cys Asp lie Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser 20 2530
Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp 35 4045 lie Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Phe 50 5560
Lys Leu Leu lie Phe Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser
- 197 037044
70 7580
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr He Tyr 85 9095
Asn Leu Glu Gln Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp 100 105110
Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg 115 120125
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Leu Ser Ser Glu Gln 130 135140
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn PheTyr
145 150 155160
Pro Lys Asp He Asn Val Lys Trp Lys He Asp Gly Ser Glu ArgGln
165 170175
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185190
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 195 200205
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
210 215220 lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225230 <210> 184 <211> 705 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 184 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt60 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc120 atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca180 gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa300 gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg360 gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacta420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag705 <210> 185 <211> 447 <212> БЕЛОК
- 198 037044 <213> Mus musculus <400> 185
Glu Val Gln Leu Gln
5
Ser Val Lys Met Ser
Asn Met His Trp Val 35
Gly Glu lie Asn Pro
Lys Ala Thr
Leu Arg Ser 85
Leu Gly Tyr 100
Ala Gly Thr 115
Val Tyr Pro
Thr Leu Gly
Thr Trp Asn 165
Val Leu Gln
180
Ser Ser Thr
195
Ala Ser Ser
Lys Gly 65 Met Glu
Ala Arg
Trp Gly
Pro Ser
130
Met Val
145
Thr Val
Pro Ala
Val Pro
His Pro
210
Cys Gly 225
Phe lie
Pro Lys
Val Gln
Thr Gln
290
Glu Leu
305
Cys Arg
Cys Lys Pro
Phe Pro
Val Thr
260
Phe Ser
275
Pro Arg
Pro lie Met
Val Asn Ser
Gln
Cys
Lys
Asn
Leu 70
Leu
Asp
Thr
Leu
Cys 150
Ser
Ser
Trp
Thr
Cys 230
Pro Lys 245
Cys Val
Trp Phe
Glu Glu
His 310
Ala
Ser Gly
Lys Ala
Gln Asn 40
Ser Gly 55
Thr Val
Thr Ser
Asp lie
Val Thr 120
Ala Pro 135
Leu Val
Gly Ser
Asp Leu
Pro Ser 200
Lys Val 215 lie Cys
Pro Lys
Val Val
Val Asp 280
Gln Phe 295
Gln Asp
Ala Phe
Pro Glu
Ser Gly 25
Gln Gly
Gly Ala
Asp Lys
Glu Asp
Tyr Asp 105
Val Ser
Gly Ser
Lys Gly
Leu Ser
170
Tyr Thr 185
Glu Thr
Asp Lys
Thr Val
Asp Val
250
Asp lie 265
Asp Val
Asn Ser
Trp Leu
Pro Ala
Leu Met
Tyr Thr
Lys Thr
Gly Tyr 60
Ser Ser 75
Ser Ala
Asp Trp
Ser Ala
Ala Ala
140
Tyr Phe 155
Ser Gly
Leu Ser
Val Thr
Lys lie 220
Pro Glu
235
Leu Thr
Ser Lys
Glu Val
Thr Phe
300
Asn Gly 315 Pro lie
Lys Pro
Phe Thr
Leu Glu 45
Asn Gln
Thr Thr
Val Tyr
Tyr Phe
110
Lys Thr 125
Gln Thr
Pro Glu
Val His
Ser Ser
190
Cys Asn 205
Val Pro
Val Ser lie Thr
Asp Asp
270
His Thr
285
Arg Ser
Lys Glu
Glu Lys
Gly Ala
Asp Tyr
Trp lie
Lys Phe
Ala Tyr 80
Tyr Cys 95
Asp Val
Thr Pro
Asn Ser
Pro Val
160
Thr Phe
175
Val Thr
Val Ala
Arg Asp
Ser Val
240
Leu Thr
255
Pro Glu
Ala Gln
Val Ser
Phe Lys
320
Thr lie
- 199 037044
325 330335
Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr He Pro 340 345350
Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met 355 360365 lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn 370 375380
Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro He Met AspThr
385 390 395400
Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys SerAsn
405 410415
Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu 420 425430
His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440445 <210> 186 <211> 1344 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 186 gaggtccaac tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggata tacattcact gactacaaca tgcactgggt gaagcagaac120 caaggaaaga ccctagaatg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccac cacagcctac240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc300 tacgatgata tctacgacga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc360 gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc420 caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg480 acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg540 cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc600 gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt660 gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc720 ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg780 tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat840 gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc900 cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa960 tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa1020 ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag1080 gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag1140 tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca1200 gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga1260 aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc1320
- 200 037044 ctctcccact ctcctggtaa atga 1344 <210> 187 <211> 466 <212> БЕЛОК <213 > Mus musculus <400> 187
Met Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly
1015
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys
2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
4045
Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Asn Gln Gly Lys Thr Leu
5560
Glu Trp lie Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly TyrAsn
70 7580
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser SerThr
9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr
115 120125
Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys
130 135140
Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala AlaGln
145 150 155160
Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr PhePro
165 170175
Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val
180 185190
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser
195 200205
Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys
210 215220
Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lieVal
225 230 235240
Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys lie Cys Thr Val Pro GluVal
245 250255
Ser Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie
260 265270
Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser Lys Asp
275 280285
- 201 037044
Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His 290 295300
Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr PheArg
305 310 315320
Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn GlyLys
325 330335
Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu 340 345350
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr 355 360365
Thr lie Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu 370 375380
Thr Cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val GluTrp
385 390 395400
Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Prolie
405 410415
Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln 420 425430
Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His 435 440445
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro 450 455460
Gly Lys 465 <210> 188 <211> 1401 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 188 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc120 tgcaaggctt ctggatatac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa gcagaaccaa180 ggaaagaccc tagaatggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac240 cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccaccac agcctacatg300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attgggctac360 gatgatatct acgacgactg gtacttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc420 tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa480 actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca540 gtgacctgga actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag600 tctgacctct acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag660 accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg720 cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc780
- 202 037044 atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt840 gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat900 gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc cgggaggagc agttcaacag cactttccgc960 tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag gactggctca atggcaagga gttcaaatgc1020 agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc1080 agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt ccacctccca aggagcagat ggccaaggat1140 aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg1200 cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac aagaacactc agcccatcat ggacacagat1260 ggctcttact tcatctacag caagctcaat gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat1320 actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc1380 tcccactctc ctggtaaatg a <210> 189 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 189
Gln He Val Leu Ser Gln
5
Asp Lys Val Thr Met Thr 20
His Trp Phe Gln Gln Lys 35
Ala Thr Ser Asn Leu Ala 50
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr 65 70
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr 85
Phe Gly Ala Gly Thr Lys 100
Thr Val Ser He Phe Pro
115
Ala Ser Val Val Cys Phe 130
Val Lys Trp Lys He Asp 145 150
Ser Trp Thr Asp Gln Asp 165
Thr Leu Thr Leu Thr Lys 180
Cys Glu Ala Thr His Lys
195
Ser Pro Ala Phe Leu Ser 10
Cys Arg Ala Ser Ser Ser 25
Pro Gly Ser Ser Pro Arg 40
Ser Gly Val Pro Gly Arg
60
Ser Leu Thr lie Ser Arg 75
Cys Gln Gln Trp Ser Ser 90
Leu Glu Leu Lys Arg Ala 105
Pro Ser Ser Glu Gln Leu
120
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 135 140
Gly Ser Glu Arg Gln Asn
155
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
170
Asp Glu Tyr Glu Arg His 185
Thr Ser Thr Ser Pro He
200
Val Ser Pro Gly lie Ser Tyr lie 30
Ser Trp He Tyr 45
Phe Ser Gly Ser
Val Glu Ala Glu
Asp Pro Leu Thr 95
Asp Ala Ala Pro 110
Thr Ser Gly Gly 125
Lys Asp He Asn
Gly Val Leu Asn
160
Ser Met Ser Ser
175
Asn Ser Tyr Thr 190
Val Lys Ser Phe 205
1401
- 203 037044
Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 190 <211> 642 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 190 caaattgttc tctcccagtc tccagcattc ctgtctgtat ctccagggga taaggtcaca60 atgacttgca gggccagctc aagtataagt tacatacact ggtttcagca gaagccagga120 tcctccccca gatcctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctggtcgc180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagagt ggaggctgag240 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtgacc cactcacgtt cggtgctggg300 accaagctgg agctgaaacg ggctgatgct gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc360 agtgagcagt taacatctgg aggtgcctca gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc420 aaagacatca atgtcaagtg gaagattgat ggcagtgaac gacaaaatgg cgtcctgaac480 agttggactg atcaggacag caaagacagc acctacagca tgagcagcac cctcacgttg540 accaaggacg agtatgaacg acataacagc tatacctgtg aggccactca caagacatca600 acttcaccca ttgtcaagag cttcaacagg aatgagtgtt ag642 <210> 191 <211> 235 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 191
Met Asp Phe Gln Val Gln lie Phe Ser Phe Leu Leu lie Ser Ala Ser 15 1015
Val Ile Met Ser Arg Gly Gln lie Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Phe
2530
Leu Ser Val Ser Pro Gly Asp Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser 35 4045
Ser Ser lie Ser Tyr lie His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser 50 5560
Pro Arg Ser Trp lie Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
70 ' 7580
Gly Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile 85 9095
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp 100 105110
Ser Ser Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 115 120125
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu
130 135140
- 204 037044
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
145 150 155160
Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser GluArg
165 170175
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser 180 185190
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 195 200205
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 210 215220
Pro lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230235 <210> 192 <211> 708 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 192 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcc60 agaggacaaa ttgttctctc ccagtctcca gcattcctgt ctgtatctcc aggggataag120 gtcacaatga cttgcagggc cagctcaagt ataagttaca tacactggtt tcagcagaag180 ccaggatcct cccccagatc ctggatttat gccacatcca acctggcttc tggagtccct240 ggtcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagagtggag300 gctgaggatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtgacccact cacgttcggt360 gctgggacca agctggagct gaaacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca420 ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc480 taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc540 ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc600 acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag660 acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg agtgttag708 <210> 193 <211> 445 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 193
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Asp Leu Val Gln Pro Gly Ala 15 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp lie Lys Asp Tyr
2530
Tyr lie His Trp Met Lys Gln Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 4045
Gly Arg Val Asp Pro Asp Asn Gly Glu Thr Glu Phe Ala Pro Lys Phe
- 205 037044
Pro Gly 65
Leu Gln
Gly Arg
Gln Gly
Val Tyr
130
Thr Leu 145
Thr Trp
Val Leu
Ser Ser
Ala Ser
210
Cys Lys 225
Phe Pro
Val Thr
Phe Ser
Pro Arg
290
Pro He 305
Val Asn
Thr Lys
Lys Glu
Asp Phe
370
Pro Ala 385
Lys Ala
Leu Arg
Glu Asp
100
Thr Leu 115
Pro Leu
Gly Cys
Asn Ser
Gln Ser
180
Thr Trp 195
Ser Thr
Pro Cys
Pro Lys
Cys Val
260
Trp Phe 275
Glu Glu
Met His
Ser Ala
Gly Arg
340
Gln Met 355
Phe Pro
Glu Asn
Thr Phe
Gly Leu 85
Tyr Asp
Val Thr
Ala Pro
Leu Val
150
Gly Ser 165 Asp Leu
Pro Ser
Lys Val
He Cys
230
Pro Lys 245
Val Val
Val Asp
Gln Phe
Gln Asp
310
Ala Phe 325 Pro Lys
Ala Lys
Glu Asp
Tyr Lys
390
Thr Thr
Thr Ser
Gly Thr
Val Ser
120
Gly Ser 135
Lys Gly
Leu Ser
Tyr Thr
Glu Thr
200
Asp Lys 215
Thr Val
Asp Val
Asp lie
Asp Val
280
Asn Ser 295
Trp Leu
Pro Ala
Ala Pro
Asp Lys 360 lie Thr
375
Asn Thr
Asp Thr
Glu Asp 90
Tyr Thr 105 Ala Ala
Ala Ala
Tyr Phe
Ser Gly
0
Leu Ser 185
Val Thr
Lys lie
Pro Glu
Leu Thr
250
Ser Lys 265
Glu Val
Thr Phe
Asn Gly
Pro He
330
Gln Val 345
Val Ser
Val Glu
Gln Pro
Ser Ser 75
Thr Ala
Trp Phe
Lys Thr
Gln Thr
140
Pro Glu 155
Val His
Ser Ser
Cys Asn
Val Pro
220
Val Ser 235 lie Thr
Asp Asp
His Thr
Arg Ser
300
Lys Glu 315
Glu Lys
Tyr Thr
Leu Thr
Trp Gln
380
He Met 395
Asn Thr lie Tyr
Pro Tyr
110
Thr Pro 125
Asn Ser
Pro Val
Thr Phe
Val Thr
190
Val Ala 205
Arg Asp
Ser Val
Leu Thr
Pro Glu
270
Ala Gln 285
Val Ser
Phe Lys
Thr He lie Pro
350
Cys Met 365
Trp Asn
Asp Thr
Ala Tyr 80
Tyr Cys 95
Trp Gly
Pro Ser
Met Val
Thr Val
160
Pro Ala 175
Val Pro
His Pro
Cys Gly
Phe lie
240
Pro Lys 255
Val Gln
Thr Gln
Glu Leu
Cys Arg
320
Ser Lys 335
Pro Pro lie Thr
Gly Gln
Asp Gly
400
- 206 037044
Ser Tyr Phe He Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu 405 410415
Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn 420 425430
His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440445 <210> 194 <211> 1338 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 194 gaagttcagc tgcaacagtc tggggcagac cttgtgcagc caggggcctc agtcaaggtg60 tcctgcacag cttctggctt cgacattaag gactactata tacactggat gaaacagagg120 cctgaccagg gcctggagtg gattggaagg gttgatcctg acaatggtga gactgaattt180 gccccgaagt tcccgggcaa ggccactttt acaacagaca catcctccaa cacagcctac240 ctacaactca gaggcctgac atctgaggac actgccatct attactgtgg gagagaagac300 tacgatggta cctacacctg gtttccttat tggggccaag ggactctggt cactgtctct360 gcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact420 aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg480 acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct540 gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc600 gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc660 agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc720 ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt780 gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg840 gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca900 gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg960 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga1020 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa1080 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag1140 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc1200 tcttacttca tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact1260 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc1320 cactctcctg gtaaatga1338 <210> 195 <211> 464 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 195
Met Lys Cys Ser Trp Val He Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly 15 10 15
- 207 037044
Val Asn Ser Glu
Pro Gly Ala Ser 35
Lys Asp Tyr Tyr 50
Glu Trp He Gly 65
Pro Lys Phe Pro
Thr Ala Tyr Leu
100
Tyr Tyr Cys Gly 115
Tyr Trp Gly Gln
130
Pro Pro Ser Val 145
Ser Met Val Thr
Val Thr Val Thr
180
Phe Pro Ala Val
195
Thr Val Pro Ser
210
Ala His Pro Ala 225
Asp Cys Gly Cys
Val Phe He Phe
260
Thr Pro Lys Val 275
Glu Val Gln Phe
290
Gln Thr Gln Pro
305
Ser Glu Leu Pro
Lys Cys Arg Val
340 lie Ser Lys Thr
Val Gln Leu Gln
Val Lys Val Ser 40 lie His Trp Met
Arg Val Asp Pro 70
Gly Lys Ala Thr 85
Gln Leu Arg Gly
Arg Glu Asp Tyr
120
Gly Thr Leu Val
135
Tyr Pro Leu Ala
150
Leu Gly Cys Leu 165
Trp Asn Ser Gly
Leu Gln Ser Asp
200
Ser Thr Trp Pro
215
Ser Ser Thr Lys
230
Lys Pro Cys He 245
Pro Pro Lys Pro
Thr Cys Val Val
280
Ser Trp Phe Val 295
Arg Glu Glu Gln
310 lie Met His Gln
325
Asn Ser Ala Ala
Lys Gly Arg Pro
Gln Ser Gly Ala 25
Cys Thr Ala Ser
Lys Gln Arg Pro 60
Asp Asn Gly Glu 75
Phe Thr Thr Asp 90
Leu Thr Ser Glu 105
Asp Gly Thr Tyr
Thr Val Ser Ala
140
Pro Gly Ser Ala 155
Val Lys Gly Tyr 170
Ser Leu Ser Ser
185
Leu Tyr Thr Leu
Ser Glu Thr Val
220
Val Asp Lys Lys 235
Cys Thr Val Pro 250
Lys Asp Val Leu 265
Val Asp He Ser
Asp Asp Val Glu
300
Phe Asn Ser Thr
315
Asp Trp Leu Asn 330
Phe Pro Ala Pro
345
Lys Ala Pro Gln
Asp Leu Val Gln 30
Gly Phe Asp lie 45
Asp Gln Gly Leu
Thr Glu Phe Ala
Thr Ser Ser Asn
Asp Thr Ala lie 110
Thr Trp Phe Pro 125
Ala Lys Thr Thr
Ala Gln Thr Asn
160
Phe Pro Glu Pro
175
Gly Val His Thr 190
Ser Ser Ser Val
205
Thr Cys Asn Val
He Val Pro Arg
240
Glu Val Ser Ser
255
Thr He Thr Leu
270
Lys Asp Asp Pro 285
Val His Thr Ala
Phe Arg Ser Val
320
Gly Lys Glu Phe 335
He Glu Lys Thr
350
Val Tyr Thr lie
- 208 037044
355 360365
Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys 370 375380
Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp GlnTrp
385 390 395400
Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro lie MetAsp
405 410415
Thr Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser 420 425430
Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly 435 440 .445
Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 450 455460 <210> 196 <211> 1395 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 196 atgaaatgca gctgggtcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagaa60 gttcagctgc aacagtctgg ggcagacctt gtgcagccag gggcctcagt caaggtgtcc120 tgcacagctt ctggcttcga cattaaggac tactatatac actggatgaa acagaggcct180 gaccagggcc tggagtggat tggaagggtt gatcctgaca atggtgagac tgaatttgcc240 ccgaagttcc cgggcaaggc cacttttaca acagacacat cctccaacac agcctaccta300 caactcagag gcctgacatc tgaggacact gccatctatt actgtgggag agaagactac360 gatggtacct acacctggtt tccttattgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca420 gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac480 tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc540 tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac600 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc660 acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg720 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc780 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg840 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag900 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc960 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc1020 aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg1080 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc1140 agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg1200 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct1260 tacttcatct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc1320 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac1380 tctcctggta aatga1395
- 209 037044 <210> 197 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 197
Asp Leu Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
5 1015
Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr 20 2530
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu lie 35 4045
Phe Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Ser Leu Thr lie Thr Asn Leu GluGln
70 7580
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu ProTyr
9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105110
Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 115 120125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 130 135140
Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly ValLeu
145 150 155160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser MetSer
165 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys Ser 195 200205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 198 <211> 645 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 198 gatctccaga tgacacagac tacttcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaagctcct gatcttctac acatcaacat tacagtcagg agtcccatcg 180
- 210 037044 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacaaat tattctctca ccattaccaa cctggagcaa 240 gatgatgctg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 645 <210> 199 <211> 234 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 199
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu
Gly Ser Arg Cys Asp Leu Gln Met 20
Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr 3540 lie Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr 5055
Lys Leu Leu lie Phe Tyr Thr Ser 6570
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 85
Asn Leu Glu Gln Asp Asp Ala Ala 100
Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly
115120
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser 130135
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val 145150
Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp
165
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr 180
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr
195200
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala 210215 lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn
Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1015
Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser
2530 lie Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp
Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val
Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
7580
Thr Asn Tyr Ser Leu Thr lie Thr
9095
Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp
105110
Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg
125 lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
140
Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
155160
Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln
170175
Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
185190
Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
205
Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
220
Glu Cys
- 211 037044
225 230 <210> 200 <211> 705 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 200 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg ttccagatgt60 gatctccaga tgacacagac tacttcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc120 atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca180 gatggaactg ttaagctcct gatcttctac acatcaacat tacagtcagg agtcccatcg240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacaaat tattctctca ccattaccaa cctggagcaa300 gatgatgctg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg360 gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac480 cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg540 aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg600 ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca660 tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag705 <210> 201 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 201
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 15 1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530
Asn Met His Trp Met Lys Gln Asn Gln Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 4045
Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Leu Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105110
Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro 115 120125
Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser 130 135140
- 212 037044
Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu ProVal
145 150 155160
Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His ThrPhe
165 170175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr 180 185190
Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala 195 200205
His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys He Val Pro Arg Asp 210 215220
Cys Gly Cys Lys Pro Cys He Cys Thr Val Pro Glu Val Ser SerVal
225 230 235240
Phe He Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr He Thr LeuThr
245 250255
Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser Lys Asp Asp Pro Glu 260 265270
Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln 275 280285
Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser 290 295300
Glu Leu Pro He Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu PheLys
305 310 315320
Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro He Glu Lys ThrHe
325 330335
Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr He Pro 340 345350
Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met 355 360365 lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn 370 375380
Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro He Met AspThr
385 390 395400
Asp Gly Ser Tyr Phe He Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys SerAsn
405 410415
Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu 420 425430
His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 <210> 202 <211> 1344 <212> ДНК <213 > Mus musculus
- 213 037044 <400> 202 gaggtccagt tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tgcactggat gaagcagaac120 caaggaaaga gcctagagtg gataggagag attaatccta acagtggtgg ttctggttac180 aaccagaagt tcaaaggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc300 tactatggta actacgagga ctggtatttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc360 gtctcctctg ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc420 caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg480 acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg540 cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc600 gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt660 gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc720 ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg780 tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat840 gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc900 cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa960 tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa1020 ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag1080 gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag1140 tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca1200 gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga1260 aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc1320 ctctcccact ctcctggtaa atga1344 <210> 203 <211> 466 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 203
Met Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ser Gly 15 10 15
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys
Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Met Lys Gln Asn Gln Gly Lys Ser Leu
Glu Trp He Gly Glu He Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
- 214 037044
100
105
110
Туг Туг
Phe Asp
130
Thr Thr 145
Thr Asn
Glu Pro
His Thr
Ser Val
210
Asn Val 225
Pro Arg
Ser Ser
Thr Leu
Asp Pro
290
Thr Ala 305
Ser Val
Glu Phe
Lys Thr
Thr lie
370
Thr Cys 385
Gln Trp
Met Asp
Lys Ser
Cys Ala 115
Val Trp
Pro Pro
Ser Met
Val Thr
180
Phe Pro 195
Thr Val
Ala His
Asp Cys
Val Phe
260
Thr Pro 275
Glu Val
Gln Thr
Ser Glu
Lys Cys 340 lie Ser 355
Pro Pro
Met lie
Asn Gly
Thr Asp 420
Asn Trp 435
Arg Leu
Gly Ala
Ser Val
150
Val Thr 165
Val Thr
Ala Val
Pro Ser
Pro Ala
230
Gly Cys 245 lie Phe
Lys Val
Gln Phe
Gln Pro
310
Leu Pro 325
Arg Val
Lys Thr
Pro Lys
Thr Asp 390
Gln Pro 405
Gly Ser
Glu Ala
Gly Tyr 120 Gly Thr 135 Tyr Pro
Leu Gly
Trp Asn
Leu Gln 200
Ser Thr 215
Ser Ser
Lys Pro
Pro Pro
Thr Cys 280
Ser Trp 295
Arg Glu lie Met
Asn Ser
Lys Gly 360
Glu Gln 375
Phe Phe
Ala Glu
Tyr Phe
Gly Asn 440
Tyr Gly
Thr Val
Leu Ala
Cys Leu
0 Ser Gly 185 Ser Asp
Trp Pro
Thr Lys
Cys Ile
250 Lys Pro 265 Val Val
Phe Val
Glu Gln
His Gln
330 Ala Ala 345 Arg Pro
Met Ala
Pro Glu
Asn Tyr
410 lie Tyr 425 Thr Phe
Asn Tyr
Thr Val
140
Pro Gly 155
Val Lys
Ser Leu
Leu Tyr
Ser Glu
220
Val Asp 235
Cys Thr
Lys Asp
Val Asp
Asp Asp
300
Phe Asn 315 Asp Trp
Phe Pro
Lys Ala
Lys Asp 380
Asp lie 395
Lys Asn
Ser Lys
Thr Cys
Glu Asp 125
Ser Ser
Ser Ala
Gly Tyr
Ser Ser
190
Thr Leu 205
Thr Val
Lys Lys
Val Pro
Val Leu
270 lie Ser 285
Val Glu
Ser Thr
Leu Asn
Ala Pro
350
Pro Gln 365
Lys Val
Thr Val
Thr Gln
Leu Asn
430
Ser Val 445
Trp Tyr
Ala Lys
Ala Gln
160
Phe Pro 175
Gly Val
Ser Ser
Thr Cys lie Val
240
Glu Val 255
Thr lie
Lys Asp
Val His
Phe Arg
320
Gly Lys 335 lie Glu
Val Tyr
Ser Leu
Glu Trp 400
Pro lie 415
Val Gln
Leu His
- 215 037044
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro
450
455
460
Gly Lys
465 <210> 204 <211> 1401 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 204 atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa cttcgggtgt cctctctgag60 gtccagttgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc120 tgcaaggctt ctggatacac attcactgac tacaacatgc actggatgaa gcagaaccaa180 ggaaagagcc tagagtggat aggagagatt aatcctaaca gtggtggttc tggttacaac240 cagaagttca aaggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccagcac agcctacatg300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attgggctac360 tatggtaact acgaggactg gtatttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc420 tcctctgcca aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa480 actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca540 gtgacctgga actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag600 tctgacctct acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag660 accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg720 cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc780 atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt840 gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat900 gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc cgggaggagc agttcaacag cactttccgc960 tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag gactggctca atggcaagga gttcaaatgc1020 agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc1080 agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt ccacctccca aggagcagat ggccaaggat1140 aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg1200 cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac aagaacactc agcccatcat ggacacagat1260 ggctcttact tcatctacag caagctcaat gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat1320 actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc1380 tcccactctc ctggtaaatg a1401 <210> 205 <211> 215 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 205
Gln He Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala lie Met Ser Ala Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Ser
- 216 037044
2530
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp 35 4045 lie Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 5560
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr lie Ser Ser ValGlu
70 7580
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Phe PhePro
9095
Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala 100 105110
Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser
115 120125
Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp 130 135140 lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn GlyVal
145 150 155160
Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr SerMet
165 170175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser 180 185190
Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Val Lys 195 200205
Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210215 <210> 206 <211> 645 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 206 cagattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc60 atgacctgca gggccagctc aagtgtaact tccagttact tgaactggta ccagcagaag120 ccaggatctt cccccaaact ctggatttat agcacatcca acctggcttc aggagtccca180 gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagtgtggag240 gctgaggatg ctgccactta ttactgccag cagtatgatt ttttcccatc gacgttcggt300 ggaggcacca agctggaaat caagcgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca360 ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc420 taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc480 ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc540 acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag600 acatcaactt cacccatcgt caagagcttc aacaggaatg agtgt645
- 217 037044 <210> 207 <211> 237 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 207
Met Asp Ser Gln Val Gln He Phe Ser Phe Leu Leu He Ser Ala Leu
1015
Val Lys Met Ser Arg Gly Gln He Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala He
2530
Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser
4045
Ser Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
5560
Ser Ser Pro Lys Leu Trp He Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala SerGly
70 7580
Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr SerLeu
9095
Thr lie Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
100 105110
Gln Tyr Asp Phe Phe Pro Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
115 120125
He Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser
130 135140
Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe LeuAsn
145 150 155160
Asn Phe Tyr Pro Lys Asp He Asn Val Lys Trp Lys He Asp GlySer
165 170175
Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys
180 185190
Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu
195 200205
Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser
210 215220
Thr Ser Pro He Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225 230235 <210> 208 <211> 711 <212> ДНК <213> Mus musculus' <400> 208 atggattctc aagtgcagat tttcagcttc cttctaatca gtgccttagt caaaatgtcc 60 agaggacaga ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag 120
- 218 037044 gtcaccatga cctgcagggc cagctcaagt gtaacttcca gttacttgaa ctggtaccag180 cagaagccag gatcttcccc caaactctgg atttatagca catccaacct ggcttcagga240 gtcccagctc gcttcagtgg cagtgggtct gggacctctt actctctcac aatcagcagt300 gtggaggctg aggatgctgc cacttattac tgccagcagt atgatttttt cccatcgacg360 ttcggtggag gcaccaagct ggaaatcaag cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc420 ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac480 aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag tggaagattg atggcagtga acgacaaaat540 ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac agcaaagaca gcacctacag catgagcagc600 accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cgacataaca gctatacctg tgaggccact660 cacaagacat caacttcacc catcgtcaag agcttcaaca ggaatgagtg t711 <210> 209 <211> 445 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 209
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
2530
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Glu Ser Leu Glu Trp He 35 4045
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Thr Tyr Asn His Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr AlaTyr
70 7580
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Glu Thr Ala Val He Thr Thr Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser 115 120125
Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val 130 135140
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrVal
145 150 155160
Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe ProAla
165 170175
Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro 180 185190
Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro
195 200205
Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys He Val Pro Arg Asp Cys Gly
- 219 037044
210 215220
Cys Lys Pro Cys lie Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phelie
225 230 235240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie Thr Leu Thr ProLys
245 250255
Val Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln
260 265270
Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln
275 280285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu
290 295300
Pro lie Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys CysArg
305 310 315320
Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie SerLys
325 330335
Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln λ/al Tyr Thr lie Pro Pro Pro
340 345350
Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met lie Thr
355 360365
Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln
370 375380
Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro lie Met Asp Thr AspGly
385 390 395400
Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn TrpGlu
405 410415
Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn
420 425430
His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440445 <210> 210 <211> 1335 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 210 gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg60 tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactactaca tgaactgggt gaagcagagc120 catggagaga gccttgagtg gattggagat attaatcctt acaacgatga tactacctac180 aaccacaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcctccaa cacagcctac240 atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagagacg300 gccgttatta ctacgaatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc360 tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact420 aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg480
- 220 037044 acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct540 gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc600 gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc660 agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc720 ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt780 gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg840 gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca900 gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg960 gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga1020 ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa1080 gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag1140 tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc1200 tcttacttca tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact1260 ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc1320 cactctcctg gtaaa1335 <210> 211 <211> 464 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 211
Met Gly Trp Asn Trp lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly
5 1015
Val Tyr Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 4045
Thr Asp Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Glu Ser Leu 50 5560
Glu Trp lie Gly Asp lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Thr TyrAsn
70 7580
His Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser SerAsn
9095
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Thr Ala Val lie Thr Thr Asn Ala Met Asp 115 120125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr 130 135140
Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln ThrAsn
145 150 155160
Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro GluPro
165 170175
- 221 037044
Val Thr
Phe Pro
Thr Val
210
Ala His 225
Asp Cys
Val Phe
Thr Pro
Glu Val
290
Gln Thr 305 Ser Glu
Lys Cys lie Ser
Pro Pro
370
Met lie 385
Asn Gly
Thr Asp
Asn Trp
Leu His
450
Val Thr
180
Ala Val 195
Pro Ser
Pro Ala
Gly Cys lie Phe
260
Lys Val 275
Gln Phe
Gln Pro
Leu Pro
Arg Val
340
Lys Thr 355 Pro Lys
Thr Asp
Gln Pro
Gly Ser 420
Glu Ala 435
Asn His
Trp Asn
Leu Gln
Ser Thr
Ser Ser 230
Lys Pro 245
Pro Pro
Thr Cys
Ser Trp
Arg Glu 310 lie Met 325 Asn Ser
Lys Gly
Glu Gln
Phe Phe
390
Ala Glu 405
Tyr Phe
Gly Asn
His Thr
Ser Gly
Ser Asp 200
Trp Pro 215
Thr Lys
Cys lie
Lys Pro
Val Val
280
Phe Val 295
Glu Gln
His Gln
Ala Ala
Arg Pro 360
Met Ala 375
Pro Glu
Asn Tyr lie Tyr
Thr Phe 440
Glu Lys 455
Ser Leu 185
Leu Tyr
Ser Glu
Val Asp
Cys Thr 250
Lys Asp 265
Val Asp
Asp Asp
Phe Asn
Asp Trp 330
Phe Pro 345
Lys Ala
Lys Asp
Asp lie
Lys Asn 410
Ser Lys 425
Thr Cys
Ser Leu
Ser Ser
Thr Leu
Thr Val
220
Lys Lys 235
Val Pro
Val Leu lie Ser
Val Glu
300
Ser Thr 315
Leu Asn
Ala Pro
Pro Gln
Lys Val 380
Thr Val 395
Thr Gln
Leu Asn
Ser Val
Ser His
460
Gly Val
190
Ser Ser 205 Thr Cys lie Val
Glu Val
Thr lie
270
Lys Asp 285
Val His
Phe Arg
Gly Lys lie Glu
350
Val Tyr 365
Ser Leu
Glu Trp
Pro lie
Val Gln
430
Leu His
445
Ser Pro
His Thr
Ser Val
Asn Val
Pro Arg 240
Ser Ser 255
Thr Leu
Asp Pro
Thr Ala
Ser Val
320
Glu Phe
335
Lys Thr
Thr lie
Thr Cys
Gln Trp 400
Met Asp 415
Lys Ser
Glu Gly
Gly Lys <210> 212 <211> 1392 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 212 atgggatgga actggatctt tctcttcctc ttgtcaggaa ctgcaggtgt ctactctgag 60
- 222 037044 gtccagctgc aacaatctgg acctgagctg gtgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc120 tgtaaggctt ctggatacac att.cactgac tactacatga actgggtgaa gcagagccat180 ggagagagcc ttgagtggat tggagatatt aatccttaca acgatgatac tacctacaac240 cacaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaaat cctccaacac agcctacatg300 cagctcaaca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag agagacggcc360 gttattacta cgaatgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca420 gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac480 tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc540 tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac600 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc660 acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg720 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc780 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg840 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag900 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc960 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc1020 aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg1080 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc1140 agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg1200 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct1260 tacttcatct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc1320 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac1380 tctcctggta aa1392 <210> 213 <211> 215 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 213
Asp He Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
5 10 '15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Ser 20 2530
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 4045
He Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 5560
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Phe Phe Pro
90 95
- 223 037044
Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala
100 105110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155160
Gln Glu Ser Val Thr 165 Glu Gln Asp Ser Lys Asp 1.7 0 Ser Thr Tyr Ser 175 Leu
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210215 <210> 214 <211> 645 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 214 gacatccagc tgacccagag ccccagcttc ctttccgcat ccgttggtga ccgagtaaca60 atcacatgcc gcgcctcatc ttcagttaca tcttcttatc ttaattggta tcaacaaaaa120 ccaggaaaag cacctaaact tcttatatac tctacatcta atctcgcatc aggagttccc180 tctcgatttt caggatctgg atcaggcaca gaatttacac ttactatatc atcactccaa240 ccagaagact tcgccactta ttactgccaa caatacgatt tttttccaag cacattcgga300 ggaggtacaa aagtagaaat caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg360 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc420 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc480 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg540 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag600 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt645 <210> 215 <211> 237 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 215
- 224 037044
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
5 1015
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Asp lie Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe
2530
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser
4045
Ser Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
5560
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala SerGly
70 7580
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe ThrLeu
9095
Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
100 105110
Gln Tyr Asp Phe Phe Pro Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
115 120125 lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser
130 135140
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu LeuAsn
145 150 155160
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp AsnAla
165 170175
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
180 185190
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
195 200205
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
210 215220
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230235 <210> 216 <211> 711 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 216 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct cccaggtgcc60 agatgtgaca tccagctgac ccagagcccc agcttccttt ccgcatccgt tggtgaccga120 gtaacaatca catgccgcgc ctcatcttca gttacatctt cttatcttaa ttggtatcaa180 caaaaaccag gaaaagcacc taaacttctt atatactcta catctaatct cgcatcagga240 gttccctctc gattttcagg atctggatca ggcacagaat ttacacttac tatatcatca300
- 225 037044
ctccaaccag aagacttcgc cacttattac tgccaacaat acgatttttt tccaagcaca 360
ttcggaggag gtacaaaagt agaaatcaag cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 480
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 711
<210> 217 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 217
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 4045
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Thr Tyr Asn His Lys Phe 50 5560
Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Glu Thr Ala Val Ile Thr Thr Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrVal
145 150 155160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProAla
165 170175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 210 215220
- 226 037044
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro SerVal
225 230 235240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser ArgThr
245 250255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu TyrLys
305 310 315320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thrlie
325 330335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu AspSer
385 390 395400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys SerArg
405 410415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440445 <210> 218 <2H> 1341 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 218 gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtcaagaaac ctggagcaag cgtaaaggtt60 agttgcaaag catctggata cacatttacc gactactaca tgaattgggt acgacaagcc120 cctggacaaa gacttgaatg gatgggagac attaaccctt ataacgacga cactacatac180 aatcataaat ttaaaggaag agttacaatt acaagagata catccgcatc aaccgcctat240 atggaacttt cctcattgag atctgaagac actgctgttt attactgtgc aagagaaact300 gccgttatta ctactaacgc tatggattac tggggtcaag gaaccactgt taccgtctct360 agtgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc420
- 227 037044 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag660 cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc1320 ctctccctgt ctccgggtaa a1341 <210> 219 <211> 466 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 219
Met Asp Trp Thr Trp Arg He Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 15 1015
Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 4045
Thr Asp Tyr Tyr Met Ash Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu 50 5560
Glu Trp Met Gly Asp lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Thr TyrAsn
70 7580
His Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr He Thr Arg Asp Thr Ser AlaSer
9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Thr Ala Val lie Thr Thr Asn Ala Met Asp 115 120125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
- 228 037044
145 150
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 165
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 180
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 195200
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe 210215
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
225230
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro 245
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 275280
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 290295
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 305310
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val
325
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 340
Lys Thr He Ser Lys Thr Lys Gly 355360
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 370375
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 385390
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 420
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 435440
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 450455
Gly Lys
465 <210> 220
155160
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
170175
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
185190
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
205
Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
220
Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
235240
Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
250255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He
265270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu
285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
300
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
315320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
330335
Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu
345350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
380
Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp
395400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
410415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
425430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
460
- 229 037044 <211> 1398 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 220 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag60 gtgcagctgg tgcagagcgg cgccgaggtc aagaaacctg gagcaagcgt aaaggttagt120 tgcaaagcat ctggatacac atttaccgac tactacatga attgggtacg acaagcccct180 ggacaaagac ttgaatggat gggagacatt aacccttata acgacgacac tacatacaat240 cataaattta aaggaagagt tacaattaca agagatacat ccgcatcaac cgcctatatg300 gaactttcct cattgagatc tgaagacact gctgtttatt actgtgcaag agaaactgcc360 gttattacta ctaacgctat ggattactgg ggtcaaggaa ccactgttac cgtctctagt420 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag480 agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg540 tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca600 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc660 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc720 aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc780 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc840 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc900 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt960 gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc1020 aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg1080 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac1140 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg1200 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac1260 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac1320 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc1380 tccctgtctc cgggtaaa1398 <210> 221 <211> 215 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 221
Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Ser Val Ser Ser Thr He Ser Ser Asn
20 25 30
His Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu
- 230 037044
4045 lie Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 5560
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser LeuGln
70 7580
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser TyrPro
9095
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105110
Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly AsnSer
145 150 155160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr SerLeu
165 170175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210215 <210> 222 <211> 645 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 222 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctcagcat ccgtaggcga tagagttaca60 ataacatgca gcgtatcatc aactatatca tcaaatcatc ttcattggtt ccaacagaaa120 cccggcaaag cacctaaatc acttatatac ggcacatcaa atctcgcatc aggcgttcct180 tcaagatttt caggctctgg ctcaggcacc gactttactc ttacaatatc ctccctccaa240 cccgaagact tcgcaaccta ttactgtcaa caatggtcct catatccact cacatttggc300 ggcggcacaa aagtagaaat taaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg360 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc420 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc480 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg540 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag600 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt645
- 231 037044 <210> 223 <211> 237 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 223
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1015
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 2530
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Val Ser 35 4045
Ser Thr lie Ser Ser Asn His Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly 50 5560
Lys Ala Pro Lys Ser Leu lie Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala SerGly
70 7580
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe ThrLeu
9095
Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 100 105110
Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu 115 120125 lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser 130 135140
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu LeuAsn
145 150 155160
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp AsnAla
165 170175
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys 180 185190
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 195 200205
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
210 215220
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230235 <210> 224 <211> 711 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
- 232 037044 <223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 224 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctct cagcatccgt aggcgataga120 gttacaataa catgcagcgt atcatcaact atatcatcaa atcatcttca ttggttccaa180 cagaaacccg gcaaagcacc taaatcactt atatacggca catcaaatct cgcatcaggc240 gttccttcaa gattttcagg ctctggctca ggcaccgact ttactcttac aatatcctcc300 ctccaacccg aagacttcgc aacctattac tgtcaacaat ggtcctcata tccactcaca360 tttggcggcg gcacaaaagt agaaattaaa cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc420 ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat480 aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt540 aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc600 accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc660 catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t711 <210> 225 <211> 451 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 225
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly 1' 5
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala 3540
Gly Arg lie Asp Pro Glu Asn Gly
5055
Gln Asp Lys Val Thr Met Thr Thr
6570
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser
Ala Arg Glu Ala Asp Tyr Phe His
100
Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Leu
115120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 130135
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
145150
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala ' 1015
Ser Asp Phe Asn lie Lys Asp Phe
2530
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 45
Asp Thr Leu Tyr Asp Pro Lys Phe 60
Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 7580
Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Asp Gly Thr Ser Tyr Trp Tyr Phe 105110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
- 233 037044
Thr Phe
Val Val
Asn Val
210
Arg Lys 225
Gly Pro lie Ser Glu Asp His Asn 290
Arg Val 305
Lys Glu
Glu Lys
Tyr Thr
Leu Thr
370
Trp Glu 385
Met Leu
Asp Lys
His Glu
Pro Gly
450
Pro Ala
180
Thr Val 195
Asp His
Cys Cys
Ser Val
Arg Thr
260
Pro Glu 275
Ala Lys
Val Ser
Tyr Lys
Thr lie
340
Leu Pro 355
Cys Leu
Ser Asn
Asp Ser
Ser Arg 420
Ala Leu
435
Lys
165
Val Leu
Pro Ser
Lys Pro
Val Glu
230
Phe Leu 245
Pro Glu
Val Gln
Thr Lys
Val Leu
310
Cys Lys 325
Ser Lys
Pro Ser
Val Lys
Gly Gln 390
Asp Gly 405
Trp Gln
His Asn
Gln Ser
Ser Asn
200
Ser Asn 215
Cys Pro
Phe Pro
Val Thr
Phe Asn
280
Pro Arg 295
Thr Val
Val Ser
Thr Lys
Arg Glu 360
Gly Phe 375 Pro Glu
Ser Phe
Gln Gly
His Tyr
440
1.7 0
Ser Gly 185
Phe Gly
Thr Lys
Pro Cys
Pro Lys
250
Cys Val 265
Trp Tyr
Glu Glu
Val His
Asn Lys 330
Gly Gln 345
Glu Met
Tyr Pro
Asn Asn
Phe Leu
410
Asn Val
425
Thr Gln
Leu Tyr
Thr Gln
Val Asp 220
Pro Ala 235
Pro Lys
Val Val
Val Asp
Gln Phe
300
Gln Asp 315
Gly Leu
Pro Arg
Thr Lys
Ser Asp
380
Tyr Lys 395
Tyr Ser
Phe Ser
Lys Ser
Ser Leu
190
Thr Tyr 205
Lys Thr
Pro Pro
Asp Thr
Asp Val 270
Gly Val 285
Asn Ser
Trp Leu
Pro Ala
Glu Pro
350
Asn Gln 365 lie Ala
Thr Thr
Lys Leu
Cys Ser
430
Leu Ser 445
175
Ser Ser
Thr Cys
Val Glu
Val Ala
240
Leu Met 255
Ser His
Glu Val
Thr Phe
Asn Gly 320
Pro lie 335
Gln Val
Val Ser
Val Glu
Pro Pro
400
Thr Val 415
Val Met
Leu Ser <210> 226 <211> 1353 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
- 234 037044 <223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 226 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc60 tcctgcaagg cttctgactt caacattaaa gacttctatc tacactgggt gcgacaggcc120 cctggacaag ggcttgagtg gattggaagg attgatcctg agaatggtga tactttatat180 gacccgaagt tccaggacaa ggtcaccatg accacagaca cgtccaccag cacagcctac240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaggcg300 gattatttcc acgatggtac ctcctactgg tacttcgatg tctggggccg tggcaccctg360 gtcaccgtct ctagtgcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc420 aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa480 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac600 ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac660 aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca720 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc780 cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc900 aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc960 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc1020 tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag1080 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac1140 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc1200 atgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg1260 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac1320 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa1353 <210> 227 <211> 470 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 227
Met Asp Trp Thr Trp Arg lie Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 15 1015
Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Asp Phe Asn lie 35 4045
Lys Asp Phe Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 5560
Glu Trp lie Gly Arg lie Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Leu Tyr Asp 65 70 7580
- 235 037044
Pro Lys Phe Gln Asp Lys Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ala Asp Tyr Phe His Asp Gly Thr Ser Tyr 115 120125
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130 135140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys SerArg
145 150 155160
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys AspTyr
165 170175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 180 185190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 195 200205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 210 215220
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val AspLys
225 230 235240
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro AlaPro
245 250255
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 260 265270
Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 275 280285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 290 295300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln PheAsn
305 310 315320
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln AspTrp
325 330335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 340 345350
Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 355 360365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 370 375380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asplie
385 390 395400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr LysThr
405 410415
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
- 236 037044
420 425430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 435 440445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 450 455460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465470 <210> 228 <211> 1410 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 228 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag60 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc120 tgcaaggctt ctgacttcaa cattaaagac ttctatctac actgggtgcg acaggcccct180 ggacaagggc ttgagtggat tggaaggatt gatcctgaga atggtgatac tttatatgac240 ccgaagttcc aggacaaggt caccatgacc acagacacgt ccaccagcac agcctacatg300 gagctgagga gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag agaggcggat360 tatttccacg atggtacctc ctactggtac ttcgatgtct ggggccgtgg caccctggtc420 accgtctcta gtgcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg480 agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg540 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc600 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc660 ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag720 acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga780 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct840 gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg900 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac960 agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag1020 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc1080 aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag1140 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc1200 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg1260 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg1320 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg1380 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa1410 <210> 229 <211> 213 <212> БЕЛОК
- 237 037044 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 229
Asp Не Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1015
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser He Ser Tyr He
2530
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr
4045
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
5560
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gln ProGlu
70 7580
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asp Pro LeuThr
9095
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105HO
Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser GlnGlu
145 150 155160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu SerSer
165 .170175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200205
Asn Arg Gly Glu Cys
210 <210> 230 <211> 639' <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 230 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60 atcacttgca gggccagctc aagtataagt tacatacact ggtatcagca aaaaccaggg120 aaagccccta agctcctgat ctatgccaca tccaacctgg cttctggggt cccatcaagg180
- 238 037044 ttcagcggca gtggatctgg gacagaattc actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa240 gattttgcaa cttattactg tcagcagtgg agtagtgacc cactcacgtt cggcggaggg300 accaaggtgg agatcaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct360 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc420 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag480 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg540 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg600 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt639 <210> 231 <211> 235.
<212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 231
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1015
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Asp He Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe
2530
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser 35 4045
Ser Ser lie Ser Tyr lie His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 50 5560
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly ValPro
70 7580
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thrlie
9095
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp 100 105110
Ser Ser Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys 115 120125
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 130 135140
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn AsnPhe
145 150 155160
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala LeuGln
165 170175
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 180 185190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
195 200205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
- 239 037044
210 215 220
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235 <210> 232 <211> 705 <212> ДНК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 232 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc60 agatgtgaca tccagttgac ccagtctcca tccttcctgt ctgcatctgt aggagacaga120 gtcaccatca cttgcagggc cagctcaagt ataagttaca tacactggta tcagcaaaaa180 ccagggaaag cccctaagct cctgatctat gccacatcca acctggcttc tggggtccca240 tcaaggttca gcggcagtgg atctgggaca gaattcactc tcacaatcag cagcctgcag300 cctgaagatt ttgcaactta ttactgtcag cagtggagta gtgacccact cacgttcggc360 ggagggacca aggtggagat caaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg420 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc480 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc540 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg600 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag660 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt705 <210> 233 <211> 447 <212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 233
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp lie Lys Asp Tyr
2530
Tyr lie His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 35 4045
Gly Arg Val Asp Pro Asp Asn Gly Glu Thr Glu Phe Ala Pro Lys Phe 50 5560
Pro Gly Lys Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser lie Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
- 240 037044
Ala Arg
Gln Gly
Val Phe
130
Ala Leu 145
Ser Trp
Val Leu
Pro Ser
Lys Pro
210
Val Glu 225
Phe Leu
Pro Glu
Val Gln
Thr Lys 290
Val Leu 305
Cys Lys
Ser Lys
Pro Ser
Val Lys
370
Gly Gln 385
Asp Gly
Trp Gln
His Asn
Glu Asp
100
Thr Leu 115
Pro Leu
Gly Cys
Asn Ser
Gln Ser
180
Ser Asn 195
Ser Asn
Cys Pro
Phe Pro
Val Thr
260
Phe Asn 275
Pro Arg
Thr Val
Val Ser
Thr Lys
340
Arg Glu 355
Gly Phe
Pro Glu
Ser Phe
Gln Gly
420
His Tyr
Tyr Asp
Val Thr
Ala Pro
Leu Val
150
Gly Ala 165
Ser Gly
Phe Gly
Thr Lys
Pro Cys 230
Pro Lys 245
Cys Val
Trp Tyr
Glu Glu
Val His
310
Asn Lys 325
Gly Gln
Glu Met
Tyr Pro
Asn Asn
390
Phe Leu 405
Asn Val
Thr Gln
Gly Thr
Val Ser
120
Cys Ser 135
Lys Asp
Leu Thr
Leu Tyr
Thr Gln
200
Val Asp 215
Pro Ala
Pro Lys
Val Val
Val Asp 280
Gln Phe 295
Gln Asp
Gly Leu
Pro Arg
Thr Lys 360
Ser Asp 375
Tyr Lys
Tyr Ser
Phe Ser
Lys Ser
Tyr Thr 105
Ser Ala
Arg Ser
Tyr Phe
Ser Gly 17 0
Ser Leu 185
Thr Tyr
Lys Thr
Pro Pro
Asp Thr 250
Asp Val 265
Gly Val
Asn Ser
Trp Leu
Pro Ala
330
Glu Pro 345
Asn Gln lie Ala
Thr Thr
Lys Leu 410
Cys Ser 425
Leu Ser
Trp Phe
Ser Thr
Thr Ser
140
Pro Glu 155
Val His
Ser Ser
Thr Cys
Val Glu
220
Val Ala 235
Leu Met
Ser His
Glu Val
Thr Phe
300
Asn Gly 315
Pro lie
Gln Val
Val Ser
Val Glu
380
Pro Pro 395
Thr Val
Val Met
Leu Ser
Pro Tyr 110
Lys Gly 125
Glu Ser
Pro Val
Thr Phe
Val Val
190
Asn Val 205
Arg Lys
Gly Pro lie Ser
Glu Asp
270
His Asn 285
Arg Val
Lys Glu
Glu Lys
Tyr Thr
350
Leu Thr 365
Trp Glu
Met Leu
Asp Lys
His Glu
430
Pro Gly
Trp Gly
Pro Ser
Thr Ala
Thr Val
160
Pro Ala 175
Thr Val
Asp His
Cys Cys
Ser Val
240
Arg Thr 255
Pro Glu
Ala Lys
Val Ser
Tyr Lys
320
Thr lie 335
Leu Pro
Cys Leu
Ser Asn
Asp Ser
400
Ser Arg 415
Ala Leu
Lys
- 241 037044
435 440 445 <210> 234 <211> 1341 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 234 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc60 tcctgcaagg cttctggatt cgacattaag gactactata tacactgggt gcgacaggcc120 cctggacaag ggcttgagtg gatcggaagg gttgatcctg acaatggtga gactgaattt180 gccccgaagt tcccgggcaa ggtcaccatg accacagaca cgtccatcag cacagcctac240 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaagac300 tacgatggta cctacacctg gtttccttat tggggccaag ggactctggt caccgtctct360 agtgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag660 cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc1320 ctctccctgt ctccgggtaa a1341 <210> 235 <211> 466 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 235
Met Asp Trp Thr Trp Arg He Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 15 10 15
Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
- 242 037044
Pro Gly
Lys Asp 50
Glu Trp 65
Pro Lys
Thr Ala
Tyr Tyr
Tyr Trp 130
Gly Pro 145
Ser Thr
Val Thr
Phe Pro
Val Thr
210
Val Asp 225
Lys Cys
Pro Ser
Ser Arg
Asp Pro
290
Asn Ala 305
Val Val
Glu Tyr
Lys Thr
Ala Ser 35 Tyr Tyr
He Gly
Phe Pro
Tyr Met 100
Cys Ala 115
Gly Gln
Ser Val
Ala Ala
Val Ser
180 Ala Val 195
Val Pro
His Lys
Cys Val
Val Phe
260 Thr Pro 275 Glu Val
Lys Thr
Ser Val
Lys Cys
340 lie Ser 355
Val Lys lie His
Arg Val 70
Gly Lys 85
Glu Leu
Arg Glu
Gly Thr
Phe Pro 150
Leu Gly 165
Trp Asn
Leu Gln
Ser Ser
Pro Ser 230
Glu Cys 245
Leu Phe
Glu Val
Gln Phe
Lys Pro 310
Leu Thr 325
Lys Val
Lys Thr
Val Ser 40
Trp Val 55
Asp Pro
Val Thr
Ser Arg
Asp Tyr
120
Leu Val 135
Leu Ala
Cys Leu
Ser Gly
Ser Ser
200
Asn Phe 215
Asn Thr
Pro Pro
Pro Pro
Thr Cys
280
Asn Trp 295
Arg Glu
Val Val
Ser Asn
Lys Gly
360
Cys Lys
Arg Gln
Asp Asn
Met Thr 90
Leu Arg 105
Asp Gly
Thr Val
Pro Cys
Val Lys 170
Ala Leu 185
Gly Leu
Gly Thr
Lys Val
Cys Pro 250
Lys Pro 265
Val Val
Tyr Val
Glu Gln
His Gln
330
Lys Gly 345
Gln Pro
Ala Ser
Ala Pro
Gly Glu 75
Thr Asp
Ser Asp
Thr Tyr
Ser Ser
140
Ser Arg 155
Asp Tyr
Thr Ser
Tyr Ser
Gln Thr
220
Asp Lys 235
Ala Pro
Lys Asp
Val Asp
Asp Gly
300
Phe Asn 315
Asp Trp
Leu Pro
Arg Glu
Gly Phe 45
Gly Gln
Thr Glu
Thr Ser
Asp Thr 110
Thr Trp 125
Ala Ser
Ser Thr
Phe Pro
Gly Val
190
Leu Ser 205
Tyr Thr
Thr Val
Pro Val
Thr Leu
270
Val Ser 285
Val Glu
Ser Thr
Leu Asn
Ala Pro
350
Pro Gln 365
Asp He
Gly Leu
Phe Ala 80 lie Ser 95
Ala Val
Phe Pro
Thr Lys
Ser Glu 160
Glu Pro 175
His Thr
Ser Val
Cys Asn
Glu Arg 240
Ala Gly 255
Met lie
His Glu
Val His
Phe Arg 320
Gly Lys 335 lie Glu
Val Tyr
- 243 037044
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 370 375380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val GluTrp
385 390 395400
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro ProMet
405 410415
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr ValAsp
420 ' 425430
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val MetHis
435 440445
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 450 455460
Gly Lys 465 <210> 236 <211> 1398 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220> <223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 236 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc120 tgcaaggctt ctggattcga cattaaggac tactatatac actgggtgcg acaggcccct180 ggacaagggc ttgagtggat cggaagggtt gatcctgaca atggtgagac tgaatttgcc240 ccgaagttcc cgggcaaggt caccatgacc acagacacgt ccatcagcac agcctacatg300 gagctgagca ggctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag agaagactac360 gatggtacct acacctggtt tccttattgg ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt420 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag480 agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg540 tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca600 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc660 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc720 aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc780 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc840 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc900 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt960 gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc1020 aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg1080 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac1140 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg1200 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac1260
- 244 037044 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1320 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380 tccctgtctc cgggtaaa 1398 <210> 237 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 237
Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 238 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 238 Gln Gln Trp Thr Thr Thr 1 5 <210> 239 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 239 Arg Ala Ser Gln Asp Xie Tyr Thr Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 <210> 240 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 240 Ser Thr Ser Arg Leu Asn 1 5 <210> 241 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 241 Gln Gln Asp lie Lys His 1 5 10 Ser Pro Thr
- 245 037044 <210> 242 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 242
Lys Ala Ser Gln Asp Val Phe Thr Ala Val Ala
5 10 <210> 243 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 243
Trp Ala Ser Thr Arg His Thr
5 <210> 244 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 244
Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
5 <210> 245 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 245
Asp Tyr Asn Met His
5 <210> 246 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 246
Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
10 15
Gly
- 246 037044 <210> 247 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 247
Leu Gly Tyr Asp Asp He Tyr Asp Asp Trp 10 Tyr Phe Asp Val
1 5
<210> 248 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400=> 248 Asp Tyr Asn Met His 1 5 <210> 249 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 249 Glu He Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 Gly <210> 250 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 250 Leu Val Tyr Asp Gly Ser Tyr Glu Asp 10 Trp Tyr 15 Phe Asp Val
10 <210> 251 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 251
Asp Tyr Asim Met His
5 <210> 252
- 247 037044 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 252
Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Gln Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 253 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 253 Leu Gly Tyr Val Gly 1 5 Asn Tyr Glu Asp Trp 10 Tyr Phe Asp Val
<210> 254 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 254 Asp Tyr Asn Met His 1 5
<210> 255 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 255 Glu lie Asn Pro Asn 1 5 Gly Ser Gly Gly Ala Gly 10 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 15
<210> 256 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 256 Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val
10
- 248 037044 <210> 257 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 257
Asp Tyr Asn Met His
5 <210> 258 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 258
Glu He Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 259 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 259 Leu Gly Tyr Asp Asp 1 5 He Tyr Asp Asp Trp 10 Tyr Phe Asp Val
<210> 260 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 260 Asp Tyr Asn Met His 1 5
<210> 261 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 261 Glu He Asn Pro Asn 1 5 Ser Gly Gly Ala Gly 10 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 15
Gly
- 249 037044
<210> 262 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 262 Leu Gly Tyr Asp Asp 1 5 lie Tyr Asp Asp Trp 10 Tyr Phe Asp Val
<210> 263 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 263 Asp Tyr Asn Met His 1 5
<210> 264 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 264 Glu lie Asn Pro Asn 1 5 Gly Ser Gly Gly Ser Gly 10 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 15
<210> 265 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 265 Leu Gly Tyr Tyr Gly 1 5 Asn Tyr Glu Asp Trp 10 Tyr Phe Asp Val
<210> 266 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 266
Asp Tyr Tyr lie His
5
- 250 037044 <210> 267 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 267
Arg lie Asp Pro Asp Asn Gly Glu Ser Thr Tyr Val Pro Lys Phe Gln
10 15
Gly <210> 268 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 268
Glu Gly Leu Asp Tyr Gly Asp Tyr Tyr Ala Val Asp Tyr
10 <210> 269 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 269
Asp Tyr lie Met His
5 <210> 270 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 270
Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
10 15
Gly
<210> 271
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Mus musculus
<400> 271
Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr
1 5 10
- 251 037044 <210> 272 <211> 5 <212> БЕЛОК
<213> Mus musculus <400> 272 Asp Tyr Tyr Met His 1 5
<210> 273 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 273 Arg lie Asp Pro Glu 1 5 Gly Asn Gly Asp lie lie Tyr Asp Pro Lys 10 Phe Gln 15
<210> 274 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 274 Asp Ala Gly Asp Pro 1 5 Ala Trp Phe Thr Tyr 10
<210> 275 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 275 Arg Ala Ser Ser Ser 1 5 Val Tyr Tyr Met His 10
<210> 276 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 276 Ala Thr Ser Asn Leu 1 5 Ala Ser
- 252 037044 <210> 277 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 277
Gln Gln Trp Ser Ser Asp Pro Leu Thr
5 <210> 278 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 278
Ser Val Ser Ser Thr lie Ser Ser Asn His Leu His
10 <210> 279 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 279
Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser
5 <210> 280 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 280
Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
5 <210> 281 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 281
Arg Ala Ser Ser Ser lie Ser Tyr lie His
10 <210> 282 <211> 7 <212> БЕЛОК
- 253 037044 <213> Mus musculus <400> 282
Ala Thr Ser Asn Leu Ala
5 <210> 283 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 283
Gln Gln Trp Ser Ser Asp
5 <210> 284 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 284
Arg Ala Ser Ser Ser Val
5 <210> 285 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 285
Ser Thr Ser Asn Leu Ala
5 <210> 286 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 286
Gln Gln Tyr Asp Phe Phe
5 <210> 287 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 287
Asp Tyr Phe lie His
Ser
Pro Leu Thr
Thr Ser Ser Tyr Leu Asn
Ser
Pro Ser Thr
- 254 037044
5 <210> 288 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 288
Arg Leu Asp Pro Glu Asp Gly Glu Ser Asp 10 Tyr Ala Pro Lys Phe 15 Gln
1 Asp 5
<210> 289 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 289 Glu Asp Tyr Asp Gly Thr 1 5 <210> 290 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 290 Asp Phe Tyr Leu His 1 5 <210> 291 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 291 Tyr Thr Phe Phe 10 Pro Tyr
Arg He Asp Pro Glu Asn 1 5 Gly Asp Thr Leu 10 Tyr Asp Pro Lys Phe 15 Gln
Asp <210> 292 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 292
- 255 037044
Glu Ala Asp Tyr Phe His Asp Gly
5 <210> 293 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 293
Asp Tyr Tyr He His
5 <210> 294 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 294
Arg Val Asp Pro Asp Asn Gly Glu
5
Gly <210> 295 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 295
Glu Asp Tyr Asp Gly Thr Tyr Thr
5 <210> 296 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 296
Asp Tyr Tyr Met Asn
5 <210> 297 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 297
Asp lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp
Thr Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val
15
Thr Glu Phe Ala Pro Lys Phe Pro
15
Trp Phe Pro Tyr
Thr Thr Tyr Asn His Lys Phe Lys
- 256 037044
10 15
Gly <210> 298 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 298 Glu Thr Ala Val He Thr Thr Asn Ala Met Asp 1 5 10 <210> 299 <211> 130 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 299 Met Asp Phe Gln Val Gln He Phe Ser Phe Met Leu lie Ser Val Thr 15 10 15
Val lie Leu Ser Ser Gly Glu lie Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu
2530
Met Ala Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr He Thr Cys Ser Val Ser
4045
Ser Ser lie Ser Ser Ser Asn Leu His Trp Ser Gln Gln Lys Ser Gly
5560
Thr Ser Pro Lys Leu Trp He Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala SerGly
70 7580
Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr SerLeu
9095
Thr He Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
100 105110
Gln Trp Thr Thr Thr Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu
115 120125
Lys Arg
130 <210> 300 <2H> 390 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 300 atggattttc aggtgcagat tttcagcttc atgctaatca gtgtcacagt catattgtcc 60 agtggagaaa ttgtgctcac ccagtctcca gcactcatgg ctgcatctcc aggggagaag 120
- 257 037044 gtcaccatca cctgcagtgt cagctcgagt cagaagtcag gaacctcccc caaactctgg gtccctgttc gcttcagtgg cagtggatct atggaggctg aagatgctgc cacttattac ataagttcca gcaacttaca ctggtcccag 180 atttatggca catccaacct tgcttctgga 240 gggacctctt attctctcac aatcagcagc 300 tgtcaacagt ggactactac gtatacgttc 360 ggatcgggga ccaagctgga gctgaaacgt
390 <210> 301 <211> 141 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 301
Met Gly Trp Asn Trp lie lie Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly
1 5 10 15
Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Arg Gln Ser Gly Ala Asp Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn lie
40 45
Lys Asp Tyr Tyr lie His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu 50 5560
Glu Trp lie Gly Arg lie Asp Pro Asp Asn Gly Glu Ser Thr TyrVal
70 7580
Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser SerAsn
9095
Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala lie 100 105110
Tyr Tyr Cys Gly Arg Glu Gly Leu Asp Tyr Gly Asp Tyr Tyr Ala Val 115 120125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135140 <210> 302 <211> 423 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 302 atgggatgga actggatcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag60 gtgcagttgc ggcagtctgg ggcagacctt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc120 tgcacagctt ctggcttcaa cattaaagac tactatatac actgggtgaa gcagaggcct180 gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgata atggtgaaag tacatatgtc240 ccgaagttcc agggcaaggc cactataaca gcagacacat catccaacac agcctaccta300 caactcagaa gcctgacatc tgaggacact gccatctatt attgtgggag agaggggctc360 gactatggtg actactatgc tgtggactac tggggtcaag gaacctcggt cacagtctcg420 age423
- 258 037044 <210> 303 <211> 130 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 303
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
5 1015
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Asp He Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe
2530
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Ser Val Ser
4045
Ser Ser He Ser Ser Ser Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 50 5560
Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala SerGly
70 7580
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe ThrLeu
9095
Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 100 105110
Gln Trp Thr Thr Thr Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie 115 120125
Lys Arg
130 <210> 304 <211> 390 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность’ <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела ' <400> 304 atggatatgc gcgtgccggc gcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gccgggcgcg60 cgctgcgata ttcagctgac ccagagcccg agctttctga gcgcgagcgt gggcgatcgc120 gtgaccatta cctgcagcgt gagcagcagc attagcagca gcaacctgca ttggtatcag180 cagaaaccgg gcaaagcgcc gaaactgctg atttatggca ccagcaacct ggcgagcggc240 gtgccgagcc gctttagcgg cagcggcagc ggcaccgaat ttaccctgac cattagcagc300 ctgcagccgg aagattttgc gacctattat tgccagcagt ggaccaccac ctataccttt360 ggccagggca ccaaactgga aattaaacgt390 <210> 305
- 259 037044 <211> 141 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 305
Met Asp Trp Thr Trp Ser He Leu Phe Leu Val Ala Ala Pro Thr Gly
5 1015
Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn He 35 4045
Lys Asp Tyr Tyr lie His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 5560
Glu Trp Met Gly Arg He Asp Pro Asp Asn Gly Glu Ser Thr TyrVal
70 7580
Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser ThrSer
9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Leu Asp Tyr Gly Asp Tyr Tyr Ala Val 115 120125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130 135140 <210> 306 <211> 423 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 306 atggattgga cctggagcat tctgtttctg gtggcggcgc cgaccggcgc gcatagcgaa60 gtgcagctgg tgcagagcgg cgcggaagtg aaaaaaccgg gcgcgagcgt gaaagtgagc120 tgcaaagcga gcggctttaa cattaaagat tattatattc attgggtgcg ccaggcgccg180 ggccagggcc tggaatggat gggccgcatt gatccggata acggcgaaag cacctatgtg240 ccgaaatttc agggccgcgt gaccatgacc accgatacca gcaccagcac cgcgtatatg300 gaactgcgca gcctgcgcag cgatgatacc gcggtgtatt attgcgcgcg cgaaggcctg360 gattatggcg attattatgc ggtggattat tggggccagg gcaccctggt gaccgtctcg420 age423 <210> 307 <211> 127
- 260 037044
<212 > БЕЛОК
<213 <400 > Mus musculus > 307
Met 1 Met Ser Ser Ala 5 Gln Phe Leu Gly Leu 10 Leu Leu Leu Cys Phe 15 Gln
Gly Thr Arg Cys 20 Asp lie Gln Met Thr 25 Gln Thr Thr Ser Ser 30 Leu Ser
Ala Ser Leu 35 Gly Asp Arg Val Asn 40 lie Ser Cys Arg Ala 45 Ser Gln Asp
lie Ser 50 Ser Tyr Leu Asn Trp 55 Tyr Gln Gln Lys Pro 60 Asp Gly Thr Val
Lys 65 Leu Leu lie Tyr Ser 70 Thr Ser Arg Leu Asn 75 Ser Gly Val Pro Ser 80
Arg Phe Ser Gly Ser 85 Gly Ser Gly Thr Asp 90 Tyr Ser Leu Thr lie 95 Ser
Asn Leu Ala Gln 100 Glu Asp Ile Ala Thr 105 Tyr Phe Cys Gln Gln 110 Asp lie
Lys His Pro 115 Thr Phe Gly Gly Gly 120 Thr Lys Leu Glu Leu 125 Lys Arg
<210> 308 <211> 381 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 308 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt60 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcaac120 atcagctgca gggcaagtca ggacattagc agttatttaa actggtatca gcagaaacca180 gatggaactg ttaaactcct gatctactcc acatcaagat taaactcagg agtcccatca240 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat tattctctca ctattagcaa cctggcacaa300 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag gatattaagc atccgacgtt cggtggaggc360 accaagttgg agctgaaacg t381 <210> 309 <211> 139 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 309
Met Glu Trp lie Trp lie Phe Leu
5
Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln
Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser
Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly
15
Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys
30
Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe
- 261 037044
4045
Thr Asp Tyr lie Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu 50 5560
Glu Trp lie Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu TyrAsn
70 7580
Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser SerSer
9095
Thr Ala Tyr Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Gly Ser Ala Val
100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr
115 120125
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130135 <210> 310 <211> 417 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 310 atggaatgga tctggatatt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccactctgag60 gtccagctgc agcagtctgg acctgagctg gtaaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc120 tgcaaggctt ctgggttcac attcactgac tacattatgc actgggtgaa gcagaagcct180 gggcagggcc ttgagtggat tggatatatt aatccttaca atgatgatac tgaatacaat240 gagaagttca aaggcaaggc cacactgact tcagacaaat cctccagcac agcctacatg300 gatctcagca gtctgacctc tgagggctct gcggtctatt actgtgcaag atcgatttat360 tactacgatg ccccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcacagt ctcgagc417 <210> 311 <211> 127 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 311
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1015
Gly Thr Arg Cys Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
2530
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
4045 lie Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
5560
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser Gly Val Pro Ser
- 262 037044
70 7580
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser
9095
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp lie
100 105110
Lys His Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 115 120125 <210> 312 <211> 381 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 312 atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt60 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc120 atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca180 gggaaagccc ctaagctcct gatctattct acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca240 cgcttcagtg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct300 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gatattaaac accctacgtt cggtcaaggc360 accaaggtgg agatcaaacg t381 <210> 313 <211> 139 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 313
Met Glu Trp lie Trp lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly
1015
Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
2530
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe
4045
Thr Asp Tyr lie Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
5560
Glu Trp Met Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu TyrAsn
70 7580
Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser ThrSer
9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
- 263 037044
100
105
110
Туг Туг Cys Ala Arg Ser lie
115
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr
120 125
Thr Val Ser Ser
130
135 <210> 314 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 314
Asp lie Gln Met Thr Gln Thr Thr 15
Asp Arg Val Asn lie Ser Cys Arg
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 3540
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser 5055
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser 6570
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Phe Cys 85
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
100
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 15
Ala Ser Gln Asp lie Ser Ser Tyr 25 30
Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu lie 45
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Leu Thr lie Ser Asn Leu Ala Gln 75 80
Gln Gln Asp lie Lys His Pro Thr 90 95
Leu Lys Arg
105 <210> 315 <211> 128 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 315
Met Lys Ser Gln Thr Gln Val Phe Val Tyr Met Leu Leu Trp Leu Ser 15 1015
Gly Val Glu Gly Asp lie Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser 20 2530
Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp 35 4045
Val Phe Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 50 5560
Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val ProAsp
70 7580
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser
- 264 037044
Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser
100 105 110
Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
115 120 125 <210> 316 <211> 381 <212> ДНК <213> Mus musculus
<400> 316
atgaagtcac agacccaggt ctttgtatac atgttgctgt ggttgtctgg tgttgaagga 60
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacgt cagtaggaga cagggtcacc 120
atcacctgca aggccagtca ggatgtcttt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 180
ggacaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat 240
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtgcagtct 300
gaagacttgg cagattattt ctgtcaacaa tatagcagct atcctctcac gttcggtgct 360
gggaccaagt tggagctgaa a 381
<210> 317 <211> 138 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 317
Met Gly Trp Asn Trp lie lie Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly 15 1015
Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg 20 2530
Pro Gly Ala Leu Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn lie 35 4045
Lys Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu 50 5560
Glu Trp lie Gly Arg lie Asp Pro Glu Asn Gly Asp lie lie TyrAsp
70 7580
Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Ser lie Thr Thr Asp Thr Ser SerAsn
9095
Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Tyr Asp Ala Gly Asp Pro Ala Trp Phe Thr Tyr Trp 115 120125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130135 <210> 318
- 265 037044 <211> 411 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 318 atgggatgga actggatcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag60 gttcagctgc agcagtctgg ggctgagctt gtgaggccag gggccttagt caagttgtcc120 tgcaaagctt ctggcttcaa tattaaagac tactatatgc actgggtgaa gcagaggcct180 gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgaga atggtgatat tatatatgac240 ccgaagttcc agggcaaggc cagtataaca acagacacat cctccaacac agcctacctg300 cagctcagca gcctgacgtc tgaggacact gccgtctatt actgtgctta cgatgctggt360 gaccccgcct ggtttactta ctggggccaa gggactctgg tcaccgtctc g411 <210> 319 <211> 130 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220> <223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 319
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 1015
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 2530
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser 35 4045
Gln Asp Val Phe Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 5560
Ala Pro Lys Leu Leu He Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr GlyVal
70 7580
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr LeuThr
9095 lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105HO
Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He 115 120125
Lys Arg 130 <210> 320 <211> 390 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
- 266 037044 <223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 320
atggatatgc gcgtgccggc gcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gcgcggcgcg 60
cgctgcgata tccagatgac ccagagcccg agcagcctga gcgcgagcgt gggcgatcgc 120
gtgaccatta cctgcaaagc gagccaggat gtgtttaccg cggtggcgtg gtatcagcag 180
aaaccgggca aagcgccgaa actgctgatt tattgggcga gcacccgcca taccggcgtg 240
ccgagtcgct ttagcggcag cggcagcggc accgatttta ccctgaccat tagcagcctg 300
cagccggaag attttgcgac ctattattgc cagcagtata gcagctatcc gctgaccttt 360
ggcggcggca ccaaagtgga aattaaacgt 390
<210> 321 <211> 138 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 321
Met Asp Trp Thr Trp Ser He Leu Phe Leu Val Ala Ala Pro Thr Gly 15 1015
Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 2530
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn lie 35 4045
Lys Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 5560
Glu Trp He Gly Arg He Asp Pro Glu Asn Gly Asp lie lie TyrAsp
70 7580
Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser ThrSer
9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Tyr Asp Ala Gly Asp Pro Ala Trp Phe Thr Tyr Trp 115 120125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130135 <210> 322 <211> 414 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220> <223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 322
- 267 037044 atggattgga cctggagcat gtgcagctgg tgcagagcgg tgcaaagcga gcggctttaa ggccagggcc tggaatggat ccgaaatttc agggccgcgt gaactgcgca gcctgcgcag gatccggcgt ggtttaccta
tctgtttctg gtggcggcgc cgaccggcgc gcatagcgaa 60
cgcggaagtg aaaaaaccgg gcgcgagcgt gaaagtgagc 120
cattaaagat tattatatgc attgggtgcg ccaggcgccg 180
cggccgcatt gatccggaaa acggcgatat tatttatgat 240
gaccatgacc accgatacca gcaccagcac cgcgtatatg 300
cgatgatacc gcggtgtatt attgcgcgta tgatgcgggc 360
ttggggccag ggcaccctgg tgaccgtctc gage 414
<210> 323 <211> 106 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 323
Thr Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser He Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 15 1015
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr 20 2530
Pro Lys Asp He Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gln 35 4045
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 5560
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr GluArg
70 7580
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr SerPro
9095
He Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100105 <210> 324 <2H> 324 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 324
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr
3540
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
5055
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser
6570
Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala 1015
Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 2530
Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 45
Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 60
Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val
80
- 268 037044
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala 85
He Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys 100
Glu Val Ser Ser Val Phe He Phe
115120
Thr He Thr Leu Thr Pro Lys Val 130135
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe 145150
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro
165
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro 180
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val 195200
He Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr 210215
Val Tyr Thr He Pro Pro Pro Lys
225230
Ser Leu Thr Cys Met lie Thr Asp
245
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro 260
Pro He Met Asp Thr Asp Gly Ser 275280
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala 290295
Leu His Glu Gly Leu His Asn His
305310
Ser Pro Gly Lys <210> 325 <2H> 106 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 325
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
5
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 20
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
95
Lys Pro Cys lie Cys Thr Val Pro
105 HO
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
125
Thr Cys Val Val Val Asp He Ser
140
Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
155160
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
170175
He Met His Gln Asp Trp Leu Asn
185190
Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
205
Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
220
Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
235240
Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val
250255
Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
265270
Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
285
Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
300
His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
315320
He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1015
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
2530
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
- 269 037044
3540
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
5055
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
6570
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
100 <210> 326 <211> 327 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 326
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
3540
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
5055
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
6570
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
100
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
115120
Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr
130135
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
145150
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195200
Pro Ser Ser He Glu Lys Thr He
210215
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 60
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 7580
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 9095
Glu Cys
105
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1015
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
2530
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
7580
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
9095
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
105110
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
125
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
140
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
155160
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
170175
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
185190
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
205
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
220
- 270 037044
Glu 225 Pro Gln Val Tyr Thr 230 Leu Pro Pro Ser Gln 235 Glu Glu Met Thr Lys 240
Asn Gln Val Ser Leu 245 Thr Cys Leu Val Lys 250 Gly Phe Tyr Pro Ser 255 Asp
Ile Ala Val Glu 260 Trp Glu Ser Asn Gly 265 Gln Pro Glu Asn Asn 270 Tyr Lys
Thr Thr Pro 275 Pro Val Leu Asp Ser 280 Asp Gly Ser Phe Phe 285 Leu Tyr Ser
Arg Leu 290 Thr Val Asp Lys Ser 295 Arg Trp Gln Glu Gly 300 Asn Val Phe Ser
Cys Ser Val Met His 305 Leu Ser Leu Ser Leu 325 <210> 327 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 327 Glu 310 Gly Ala Lys Leu His Asn His 315 Tyr Thr Gln Lys Ser 320
Glu 1 Val Gln Leu Gln 5 Gln Ser Gly Pro Glu 10 Leu Val Lys Pro Gly 15 Ala
Ser Val Lys Met 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Phe Thr Phe Thr 30 Asp Tyr
lie Met His 35 Trp Val Lys Gln Lys 40 Pro Gly Gln Gly Leu 45 Glu Trp lie
Gly Tyr 50 lie Asn Pro Tyr Asn 55 Asp Asp Thr Glu Tyr 60 Asn Glu Lys Phe
Lys 65 Gly Lys Ala Thr Leu 70 Thr Ser Asp Lys Ser 75 Ser Ser Thr Ala Tyr 80
Met Asp Leu Ser Ser 85 Leu Thr Ser Glu Gly 90 Ser Ala Val Tyr Tyr 95 Cys
Ala Arg Ser lie Tyr 100 Gly Thr Leu Val Thr 115 <210> 328 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 328 Tyr Val Tyr Ser Asp Ser 120 Ala 105 Pro Phe Ala Tyr Trp 110 Gly Gln
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
- 271 037044
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala 20 lie Met His Trp Val Lys Gln Lys 3540
Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp 5055
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser 6570
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser 85
Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 329 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 329
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala 20
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala 3540
Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp 5055
Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala 6570
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser 85
Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 330 <211> 226 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus
15
Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 25 30
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 45
Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 60
Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 7580
Glu Gly Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 105110
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1015
Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 2530
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 45
Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 60
Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 7580
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 105110
- 272 037044 <400> 330
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 15 1015
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530 lie Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 35 4045
Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Gly Ser Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 115 120125 lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 130 135140
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val GlnTrp
145 150 155160
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser ValThr
165 170175
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 180 185190
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val 195 200205
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly 210 215220
Glu Cys 225 <210> 331 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 331
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530 lie Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 4045
- 273 037044
Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 5560
Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr ValSer
145 150 155160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro AlaVal
165 170175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro SerVal
225 230 235240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser ArgThr
245 250255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu TyrLys
305 310 315320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thrlie
325 330335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
- 274 037044
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe 405 Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys 410 Ser Arg 415
Trp Gln Glu Gly Asn 420 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 425 430 Ala Leu
His Asn His Tyr Thr 435 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 440 445 Lys
<210> 332 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus
<400 i> 332
Asp 1 lie Gln Met Thr 5 Gln Ile Thr Ser Ser 10 Leu Ser Ala Ser Leu 15 Gly
Asp Arg Val Ser 20 lie Ser Cys Arg Ala 25 Ser Gln Asp lie Ser 30 Asn Tyr
Leu Asn Trp 35 Tyr Gln Gln Lys Pro 40 Asp Gly Thr Phe Lys 45 Leu Leu lie
Phe Tyr 50 Thr Ser Arg Leu Leu 55 Ser Gly Val Pro Ser 60 Arg Phe Ser Gly
Ser 65 Gly Ser Gly Thr Asp 70 Tyr Ser Leu Thr lie 75 Tyr Asn Leu Glu Gln 80
Glu Asp Phe Ala Thr 85 Thr Phe Gly Gly Gly 100 <210> 333 <211> 324 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 333 Tyr Thr Phe Lys Cys Leu Gln Glu 105 Gln 90 lie Gly Lys Asp Thr Leu Pro 95 Tyr
Ala 1 Lys Thr Thr Pro 5 Pro Ser Val Tyr Pro 10 Leu Ala Pro Gly Ser 15 Ala
Ala Gln Thr Asn 20 Ser Met Val Thr Leu 25 Gly Cys Leu Val Lys 30 Gly Tyr
Phe Pro Glu 35 Pro Val Thr Val Thr 40 Trp Asn Ser Gly Ser 45 Leu Ser Ser
Gly Val 50 His Thr Phe Pro Ala 55 Val Leu Gln Ser Asp 60 Leu Tyr Thr Leu
Ser 65 Ser Ser Val Thr Val 70 Pro Ser Ser Thr Trp 75 Pro Ser Glu Thr Val 80
- 275 037044
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala
He Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys
100
Glu Val Ser Ser Val Phe He Phe
115120
Thr He Thr Leu Thr Pro Lys Val
130135
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe
145150
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro
165
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro
180
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val
195200
He Glu Lys Thr He Ser Lys Thr
210215
Val Tyr Thr lie Pro Pro Pro Lys
225230
Ser Leu Thr Cys Met lie Thr Asp
245
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro
260
Pro lie Met Asp Thr Asp Gly Ser
275280
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala
290295
Leu His Glu Gly Leu His Asn His
305310
Ser Pro Gly Lys <210> 334 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 334
Asp lie Gln Met Thr Gln Thr Thr
5
Asp Arg Val Asn lie Ser Cys Arg
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
95
Lys Pro Cys lie Cys Thr Val Pro
105 110
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
125
Thr Cys Val Val Val Asp He Ser
140
Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
155160
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
170175
He Met His Gln Asp Trp Leu Asn
185190
Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
205
Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
220
Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
235240
Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val
250255
Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
265270
Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn
285
Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
300
His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
315320
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1015
Ala Ser Gln Asp lie Ser Ser Tyr
2530
Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu He
- 276 037044
3540
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser 5055
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser
6570
Glu Asp lie Ala Thr Tyr Phe Cys 85
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100
Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser 115120
Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn 130135
Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser
145150
Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys 165
Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu 180
Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser 195 200
Asn Arg Asn Glu Cys
210 <210> 335 <211> 444 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 335
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala 20
Ile Met His Trp Val Lys Gln Lys 3540
Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp 5055
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser 6570
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser 85
Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp 100
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Leu Thr lie Ser Asn Leu Ala Gln 7580
Gln Gln Asp lie Lys His Pro Thr 9095
Leu Lys Arg Thr Asp Ala Ala Pro
105110
Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly
125
Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie Asn 140
Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn 155160
Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser 170175
Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr
185190
Thr Ser Pro lie Val Lys Ser Phe
205
Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1015
Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
2530
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 45
Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 60
Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 7580
Glu Gly Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 105110
- 277 037044
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115120
Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
130135
Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
145150
Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
165
Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
180
Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val
195200
Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
210215
Lys Pro Cys He Cys Thr Val Pro
225230
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
245
Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser
260
Sei' Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
275280
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290295 lie Met His Gln Asp Trp Leu Asn
305310
Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
325
Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
340
Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
355360
Phe Phe Pro Glu Asp He Thr Val
370375
Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
385390
Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
405
Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
420
His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
435 440
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val
125
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr
140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr
155160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
170175
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser
185190
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala
205
He Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys
220
Glu Val Ser Ser Val Phe He Phe
235240
Thr He Thr Leu Thr Pro Lys Val
250255
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe
265270
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro
285
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro
300
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val
315320 lie Glu Lys Thr He Ser Lys Thr
330335
Val Tyr Thr lie Pro Pro Pro Lys
345350
Ser Leu Thr Cys Met He Thr Asp
365
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro
380
Pro lie Met Asp Thr Asp Gly Ser
395400
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala
410415
Leu His Glu Gly Leu His Asn His
425430
Ser Pro Gly Lys
- 278 037044 <210> 336 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 336
Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 1015
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Phe Thr Ala 20 2530
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 4045
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu GlnPro
70 7580
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr ProLeu
9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100105 <210> 337 <211> 324 <212> ДНК <213> Mus musculus
<400> 337 cccgagcagc ggatgtgttt gatttattgg cggcaccgat ttgccagcag acgt ctgagcgcga accgcggtgg gcgagcaccc tttaccctga tatagcagct gcgtgggcga cgtggtatca gccataccgg ccattagcag atccgctgac tcgcgtgacc gcagaaaccg cgtgccgagt cctgcagccg ctttggcggc 60 120 180 240 300 324
gatatccaga attacctgca ggcaaagcgc cgctttagcg gaagattttg ggcaccaaag tgacccagag aagcgagcca cgaaactgct gcagcggcag cgacctatta tggaaattaa
<210> 338
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213 > Mus musculus
<400 > 338
Glu 1 Val Gln Leu Val 5 Gln Ser Gly Ala Glu 10 Val Lys Lys Pro Gly 15 Ala
Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Phe Asn lie Lys 30 Asp Tyr
Tyr Met His 35 Trp Val Arg Gln Ala 40 Pro Gly Gln Gly Leu 45 Glu Trp He
- 279 037044
Gly Arg lie Asp Pro Glu Asn 55 Gly Asp lie lie Tyr Asp 60 Pro Lys Phe
50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Tyr Asp Ala Gly Asp Pro Ala Trp Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 <210> 339 <211> 357 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 339 gaagtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg60 agctgcaaag cgagcggctt taacattaaa gattattata tgcattgggt gcgccaggcg120 ccgggccagg gcctggaatg gatcggccgc attgatccgg aaaacggcga tattatttat180 gatccgaaat ttcagggccg cgtgaccatg accaccgata ccagcaccag caccgcgtat240 atggaactgc gcagcctgcg cagcgatgat accgcggtgt attattgcgc gtatgatgcg300 ggcgatccgg cgtggtttac ctattggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagc357 <210> 340 <211> 1395 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 340 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag60 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc120 tgcaaggctt ctggttttac cttcaccgac tatattatgc actgggtgcg tcaggcccct180 ggtcaagggc ttgagtggat gggctatatc aacccttata atgatgacac cgaatacaac240 gagaagttca agggccgtgt cacgattacc gcggacaaat ccacgagcac agcctacatg300 gagctgagca gcctgcgctc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgcg ttcgatttat360 tactacgatg ccccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcaccgt ctctagtgcc420 tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg540 aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccag ctgtcctaca gtcctcagga600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac660 acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa720 tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc780 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg840 gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg900
- 280 037044 gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg960 gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag1020 gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag1080 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag1140 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag1200 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc1260 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc1320 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc1380 ctgtctccgg gtaaa1395 <210> 341 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus' <400> 341
Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1015
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp He Ser Ser Tyr
2530
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 4045
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu GlnPro
70 7580
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp He Lys His ProThr
9095
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105110
Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser GlnGlu
145 150 155160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu SerSer
165 170175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
- 281 037044 <210> 342 <211> 639 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 342 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc60 atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca120 gggaaagccc ctaagctcct gatctattct acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca180 cgcttcagtg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gatattaaac accctacgtt cggtcaaggc300 accaaggtgg agatcaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct360 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc420 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag480 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg540 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg600 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt639 <210> 343 <211> 235 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 343
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie 20
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg 3540
Gln Asp lie Ser Ser Tyr Leu Asn 5055
Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ser 6570
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 85 lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp 100
Asp lie Lys His Pro Thr Phe Gly 115120
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val 130135
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 145150
Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1015
Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
2530
Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
Thr Ser Arg Leu Asn Ser Gly Val
7580
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
9095
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
105110
Gln Gly Thr Lys Val Glu lie Lys
125
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
140
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
155 160
- 282 037044
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn. Ala Leu Gln 165 170175
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
180 185190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 195 200205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
210 215220
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230235 <210> 344 <211> 705 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 344 atggacatga gggtgcCcgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcc60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggtgaccgt120 gtcaccatca cttgccgcgc aagtcaggat attagcagct atttaaattg gtatcagcag180 aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tattctactt cccgtttgaa tagtggggtc240 ccatcacgct tcagtggcag tggctctggg acagatttca ctctcaccat cagcagtctg300 caacctgaag attttgcaac ttactactgt caacaggata ttaaacaccc tacgttcggt360 caaggcacca aggtggagat caaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg420 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc480 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc540 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg600 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag660 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt705 <210> 345 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 345
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
2530 lie Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 4045
Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe
5560
Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
- 283 037044
Met Glu
Ala Arg
Gly Thr
Phe Pro
130
Leu Gly 145
Trp Asn
Leu Gln
Ser Ser
Pro Ser
210
Glu Cys 225
Leu Phe
Glu Val
Gln Phe
Lys Pro
290
Leu Thr 305
Lys Val
Lys Thr
Ser Arg
Lys Gly
370
Gln Pro 385
Gly Ser
Leu Ser
Ser lie
100
Leu Val 115 '
Leu Ala
Cys Leu
Ser Gly
Ser Ser
180
Asn Phe 195
Asn Thr
Pro Pro
Pro Pro
Thr Cys 260
Asn Trp 275
Arg Glu
Val Val
Ser Asn
Lys Gly
340
Glu Glu 355
Phe Tyr
Glu Asn
Phe Phe
Ser Leu 85
Tyr Tyr
Thr Val
Pro Cys
Val Lys
150
Ala Leu 165
Gly Leu
Gly Thr
Lys Val
Cys Pro
230
Lys Pro 245
Val Val
Tyr Val
Glu Gln
His Gln
310
Lys Gly 325
Gln Pro
Met Thr
Pro Ser
Asn Tyr
390
Leu Tyr 405
Arg Ser
Tyr Asp
Ser Ser
120
Ser Arg 135
Asp Tyr
Thr Ser
Tyr Ser
Gln Thr
200
Asp Lys 215
Ala Pro
Lys Asp
Val Asp
Asp Gly 280
Phe Asn 295
Asp Trp
Leu Pro
Arg Glu
Lys Asn
360
Asp lie 375
Lys Thr
Ser Lys
Glu Asp 90
Ala Pro 105
Ala Ser
Ser Thr
Phe Pro
Gly Val
170
Leu Ser 185
Tyr Thr
Thr Val
Pro Val
Thr Leu
250
Val Ser 265
Val Glu
Ser Thr
Leu Asn
Ala Pro
330
Pro Gln 345 Gln Val
Ala Val
Thr Pro
Leu Thr
410
Thr Ala
Phe Ala
Thr Lys
Ser Glu
140
Glu Pro 155
His Thr
Ser Val
Cys Asn
Glu Arg
220
Ala Gly 235
Met lie
His Glu
Val His
Phe Arg 300
Gly Lys 315 lie Glu
Val Tyr
Ser Leu
Glu Trp
380
Pro Met 395
Val Asp
Val Tyr
Tyr Trp
110
Gly Pro 125
Ser Thr
Val Thr
Phe Pro
Val Thr
190
Val Asp 205
Lys Cys
Pro Ser
Ser Arg
Asp Pro
270
Asn Ala 285
Val Val
Glu Tyr
Lys Thr
Thr Leu
350
Thr Cys 365
Glu Ser
Leu Asp
Lys Ser
Tyr Cys 95
Gly Gln
Ser Val
Ala Ala
Val Ser
160
Ala Val 175
Val Pro
His Lys
Cys Val
Val Phe
240
Thr Pro
255
Glu Val
Lys Thr
Ser Val
Lys Cys 320 lie Ser
335
Pro Pro
Leu Val
Asn Gly
Ser Asp
400
Arg Trp 415
- 284 037044
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 346 <211> 1338 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 346 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc60 tcctgcaagg cttctggttt taccttcacc gactatatta tgcactgggt gcgtcaggcc120 cctggtcaag ggcttgagtg gatgggctat atcaaccctt ataatgatga caccgaatac180 aacgagaagt tcaagggccg tgtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac240 atggagctga gcagcctgcg ctctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgttcgatt300 tattactacg atgccccgtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt360 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag420 agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg480 tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc600 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc660 aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt900 gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc960 aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg1020 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc1320 tccctgtctc cgggtaaa1338 <210> 347 <211> 465 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 347
Met Asp Trp Thr Trp Arg He Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 15 10 15
Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
25 30
- 285 037044
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 4045
Thr Asp Tyr lie Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 5560
Glu Trp Met Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu TyrAsn
70 7580
Glu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser ThrSer
9095
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr 115 120125
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135140
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser GluSer
145 150 155160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu ProVal
165 170175
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185190
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200205
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val 210 215220
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu ArgLys
225 230 235240
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala GlyPro
245 250255
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 260 265270
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 275 280285
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 290 295300
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe ArgVal
305 310 315320
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly LysGlu
325 330335
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 340 345350
Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 355 360365
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
- 286 037044
370 375380
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu TrpGlu
385 390 395400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro MetLeu
405 410415
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 420 425430
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 435 440445
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 450 455460
Lys 465 <210> 348 <211> 1395 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 348 atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag60 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc120 tgcaaggctt ctggttttac cttcaccgac tatattatgc actgggtgcg tcaggcccct180 ggtcaagggc ttgagtggat gggctatatc aacccttata atgatgacac cgaatacaac240 gagaagttca agggccgtgt cacgattacc gcggacaaat ccacgagcac agcctacatg300 gagctgagca gcctgcgctc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgcg ttcgatttat360 tactacgatg ccccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcaccgt ctctagtgcc420 tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg540 aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccag ctgtcctaca gtcctcagga600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac660 acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa720 tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc780 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg840 gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg900 gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg960 gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag1020 gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag1080 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag1140 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag1200 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc1260 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc1320 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc1380 ctgtctccgg gtaaa1395
- 287 037044 <210> 349 <211> 417 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 349 atggaatgga tctggatatt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccactctgag60 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc120 tgcaaggctt ctggttttac cttcaccgac tatattatgc actgggtgcg tcaggcccct180 ggtcaagggc ttgagtggat gggctatatc aacccttata atgatgacac cgaatacaac240 gagaagttca agggccgtgt cacgattacc gcggacaaat ccacgagcac agcctacatg300 gagctgagca gcctgcgctc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgcg ttcgatttat360 tactacgatg ccccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcacagt ctcgagc417 <210> 350 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 350
Asp lie Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 1015
Gln Arg Ala Thr lie Ala Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
2530
Gly Thr Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
4045
Lys Leu Leu lie Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Glu lie Pro Ala 50 5560
Arg Phe Ser Gly Thr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn lieHis
70 7580
Pro Val Glu Glu Glu Asp lie Thr Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln SerAsn
9095
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105110
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 115 120125
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135140
Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu ArgGln
145 150 155160
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp SerThr
165 170175
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
180 185190
- 288 037044
His Asn Ser 195 Tyr Thr Cys Glu Ala 200 Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 205
He Val Lys 210 Ser Phe Asn Arg Asn 215 Glu Cys
<210> 351 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 351
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Thr Ser Tyr Met Asn
5 10 15
<210> 352
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Mus musculus
<400> 352
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
5 <210> 353 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 353
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr
5
<210> 354
<211> 657
<212> ДНК
<213> Mus musculus
<400> 354
gacattgtgt tgacccagtc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atcgcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggta ctagttatat gaattggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct 180
gagatcccag ccaggtttag tggcactggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatat cacaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgttc 300
acgttcggag gggggaccaa gttggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 360
atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 420
aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 480
aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 540
- 289 037044 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 600 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag 657 <210> 355 <211> 238 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 355
Met 1 Glu Thr Asp Thr 5 He Leu Leu Trp Val 10 Leu Leu Leu Trp Val 15 Pro
Gly Ser Thr Gly 20 Asp He Val Leu Thr 25 Gln Ser Pro Ala Ser 30 Leu Ala
Val Ser Leu 35 Gly Gln Arg Ala Thr 40 He Ala Cys Lys Ala 45 Ser Gln Ser
Val Asp 50 Tyr Asp Gly Thr Ser 55 Tyr Met Asn Trp Tyr 60 Gln Gln Lys Pro
Gly 65 Gln Pro Pro Lys Leu 70 Leu lie Tyr Ala Ala 75 Ser Asn Leu Glu Ser 80
Glu He Pro Ala Arg 85 Phe Ser Gly Thr Gly 90 Ser Gly Thr Asp Phe 95 Thr
Leu Asn He His 100 Pro Val Glu Glu Glu 105 Asp He Thr Thr Tyr 110 Tyr Cys
Gln Gln Ser 115 Asn Glu Asp Pro Phe 120 Thr Phe Gly Gly Gly 125 Thr Lys Leu
Glu lie 130 Lys Arg Ala Asp Ala 135 Ala Pro Thr Val Ser 140 He Phe Pro Pro
Ser 145 Ser Glu Gln Leu Thr 150 Ser Gly Gly Ala Ser 155 Val Val Cys Phe Leu 160
Asn Asn Phe Tyr Pro 165 Lys Asp He Asn Val 17 0 Lys Trp Lys He Asp 175 Gly
Ser Glu Arg Gln 180 Asn Gly Val Leu Asn 185 Ser Trp Thr Asp Gln 190 Asp Ser
Lys Asp Ser 195 Thr Tyr Ser Met Ser 200 Ser Thr Leu Thr Leu 205 Thr Lys Asp
Glu Ser 225 Tyr 210 Thr Glu Ser Arg Pro His He Asn Val 230 Ser 215 Lys Tyr Ser Thr Phe Cys Asn Glu Arg 235 Ala 220 Asn Thr Glu His Cys Lys Thr
<210> 356 <211> 717 <212> ДНК <213> Mus musculus
- 290 037044 <400> 356 atggagacag acacaatcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ctccactggt60 gacattgtgt tgacccagtc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc120 atcgcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggta ctagttatat gaattggtac180 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct240 gagatcccag ccaggtttag tggcactggg tctgggacag acttcaccct caacatccat300 cctgtggagg aggaggatat cacaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgttc360 acgttcggag gggggaccaa gttggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc420 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg480 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa540 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc600 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc660 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag717 <210> 357 <211> 442 <212> БЕЛОК <213> MuS musculus <400> 357
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg
3540
Gly Met He His Pro Ser Ala Ser
5055
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Leu
6570
Met His Leu Ser Gly Pro Thr Ser
Ala Arg Ser Gly Glu Trp Gly Ser
100
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys
115120
Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln
130135
Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro
145150
Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val
165
Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser
180
Thr Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 10 15
Ser Gly Tyr lie Phe Thr Thr Tyr
30
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp He 45
Glu He Arg Leu Asp Gln Lys Phe 60
Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 7580
Val Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
105110
Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro
125
Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly
140
Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn 155160
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 170175
Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr
185190
- 291 037044
Trp Pro
Thr Lys 210
Cys lie 225
Lys Pro
Val Val
Phe Val
Glu Gln 290
His Gln 305
Ala Ala
Arg Pro
Met Ala
Pro Glu 370
Asn Tyr 385 lie Tyr
Thr Phe
Glu Lys
Ser Glu 195
Val Asp
Cys Thr
Lys Asp
Val Asp 260
Asp Asp 275
Phe Asn
Asp Trp
Phe Pro
Lys Ala 340
Lys Asp 355
Asp lie
Lys Asn
Ser Lys
Thr Cys
420
Ser Leu 435
Thr Val
Lys Lys
Val Pro
230
Val Leu 245 lie Ser
Val Glu
Ser Thr
Leu Asn
310
Ala Pro 325
Pro Gln
Lys Val
Thr Val
Thr Gln
390
Leu Asn 405 Ser Val
Ser His
Thr Cys
200 lie Val 215 Glu Val
Thr lie
Lys Asp
Val His
280
Phe Arg 295
Gly Lys lie Glu
Val Tyr
Ser Leu
360
Glu Trp 375
Pro lie
Val Gln
Leu His
Ser Pro
440
Asn Val
Pro Arg
Ser Ser
Thr Leu
250
Asp Pro 265
Thr Ala
Ser Val
Glu Phe
Lys Thr 330
Thr lie 345
Thr Cys
Gln Trp
Met Asp
Lys Ser 410
Glu Gly 425
Gly Lys
Ala His
Asp Cys 220
Val Phe 235
Thr Pro
Glu Val
Gln Thr
Ser Glu 300
Lys Cys 315 lie Ser
Pro Pro
Met Tie
Asn Gly 380
Thr Asp 395
Asn Trp
Leu His
Pro Ala 205
Gly Cys lie Phe Lys Val Gln Phe 270
Gln Pro 285
Leu Pro
Arg Val
Lys Thr
Pro Lys 350
Thr Asp 365
Gln Pro Gly Ser Glu Ala Asn His 430
Ser Ser
Lys Pro
Pro Pro
240
Thr Cys 255
Ser Trp
Arg Glu lie Met Asn Ser 320
Lys Gly 335
Glu Gln
Phe Phe
Ala Glu
Tyr Phe 400
Gly Asn 415
His Thr <210> 358 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 358
Thr Tyr Trp Met Asn
5 <210> 359 <211> 17
- 292 037044 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 359
Met lie His Pro Ser Ala Ser Glu lie Arg Leu Asp Gln Lys Phe Lys
10 15
Asp <210> 360 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 360
Ser Gly Glu Trp Gly Ser Met Asp Tyr
5 <210> 361 <211> 1329 <212> ДНК <213> Mus musculus ' <400> 361 caggtccaac tacagcagcc tgggactgag ctggtgaggc ctggaacttc agtgaagttg60 tcctgtaagg cttctggcta catcttcacc acctactgga tgaactgggt gaaacagagg120 cctggacaag gccttgagtg gattggcatg attcatcctt ccgcaagtga aattaggttg180 gatcagaaat tcaaggacaa ggccacattg actcttgaca aatcctccag cacagcctat240 atgcacctca gcggcccgac atctgtggat tctgcggtct attactgtgc aagatcaggg300 gaatgggggt ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctcagccaaa360 acgacacccc catctgtcta tccactggcc cctggatctg ctgcccaaac taactccatg420 gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac480 tctggatccc tgtccagcgg tgtgcacacc ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac540 actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc600 aacgttgccc acccggccag cagcaccaag gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt660 ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca720 aagcccaagg atgtgctcac cattactctg actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac780 atcagcaagg atgatcccga ggtccagttc agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac840 acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa900 cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt960 gcagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct1020 ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg1080 acctgcatga taacagactt cttccctgaa gacattactg tggagtggca gtggaatggg1140 cagccagcgg agaactacaa gaacactcag cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc1200 atctacagca agctcaatgt gcagaagagc aactgggagg caggaaatac tttcacctgc1260 tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac catactgaga agagcctctc ccactctcct1320
- 293 037044 ggtaaatga <210> 362 <211> 461 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 362
Met Gly Trp Ser Ser lie 1 5
Val His Ser Gln Val Gln 20
Pro Gly Thr Ser Val Lys 35
Thr Thr Tyr Trp Met Asn 50
Glu Trp lie Gly Met lie 65 70
Gln Lys Phe Lys Asp Lys 85
Thr Ala Tyr Met His Leu 100
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser 115
Gln Gly Thr Ser Val Thr 130
Val Tyr Pro Leu Ala Pro 145 150
Thr Leu Gly Cys Leu Val 165
Thr Trp Asn Ser Gly Ser 180
Val Leu Gln Ser Asp Leu 195
Ser Ser Thr Trp Pro Ser 210
Ala Ser Ser Thr Lys Val 225 230
Cys Lys Pro Cys lie Cys 245
Phe Pro Pro Lys Pro Lys 260
Val Thr Cys Val Val Val 275
1329 lie Leu Phe Leu Val Ala 10
Leu Gln Gln Pro Gly Thr 25
Leu Ser Cys Lys Ala Ser 40
Trp Val Lys Gln Arg Pro 55 60
His Pro Ser Ala Ser Glu
Ala Thr Leu Thr Leu Asp 90
Ser Gly Pro Thr Ser Val 105
Gly Glu Trp Gly Ser Met 120
Val Ser Ser Ala Lys Thr
135 140
Gly Ser Ala Ala Gln Thr 155
Lys Gly Tyr Phe Pro Glu 170
Leu Ser Ser Gly Val His 185
Tyr Thr Leu Ser Ser Ser 200
Glu Thr Val Thr Cys Asn 215 220
Asp Lys Lys lie Val Pro 235
Thr Val Pro Glu Val Ser
250
Asp Val Leu Thr lie Thr 265
Asp lie Ser Lys Asp Asp
280
Thr Ala Thr Gly 15
Glu Leu Val Arg 30
Gly Tyr lie Phe 45
Gly Gln Gly Leu lie Arg Leu Asp 80
Lys Ser Ser Ser 95
Asp Ser Ala Val
110
Asp Tyr Trp Gly 125
Thr Pro Pro Ser
Asn Ser Met Val
160
Pro Val Thr Val
175
Thr Phe Pro Ala
190
Val Thr Val Pro 205
Val Ala His Pro
Arg Asp Cys Gly
240
Ser Val Phe lie
255
Leu Thr Pro Lys
270
Pro Glu Val Gln
285
- 294 037044
Phe Ser 290 Trp Phe Val Asp Asp 295 Val Glu Val His Thr 300 Ala Gln Thr Gln
Pro 305 Arg Glu Glu Gln Phe 310 Asn Ser Thr Phe Arg 315 Ser Val Ser Glu Leu 320
Pro lie Met His Gln 325 Asp Trp Leu Asn Gly 330 Lys Glu Phe Lys Cys 335 Arg
Val Asn Ser Ala 340 Ala Phe Pro Ala Pro 345 lie Glu Lys Thr lie 350 Ser Lys
Thr Lys Gly 355 Arg Pro Lys Ala Pro 360 Gln Val Tyr Thr lie 365 Pro Pro Pro
Lys Glu 370 Gln Met Ala Lys Asp 375 Lys Val Ser Leu Thr 380 Cys Met lie Thr
Asp 385 Phe Phe Pro Glu Asp 390 lie Thr Val Glu Trp 395 Gln Trp Asn Gly Gln 400
Pro Ala Glu Asn Tyr 405 Lys Asn Thr Gln Pro 410 lie Met Asp Thr Asp 415 Gly
Ser Tyr Phe lie 420 Tyr Ser Lys Leu Asn 425 Val Gln Lys Ser Asn 430 Trp Glu
Ala His Gly His 450 Asn 435 Thr Thr Glu Phe Lys Thr Ser Cys Leu 455 Ser 440 Ser Val His Leu Ser His Pro Glu Gly 460 Gly 445 Lys Leu His Asn
<210> 363 <211> 13S6 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 363 atgggatgga gctctatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag60 gtccaactac agcagcctgg gactgagctg gtgaggcctg gaacttcagt gaagttgtcc120 tgtaaggctt ctggctacat cttcaccacc tactggatga actgggtgaa acagaggcct180 ggacaaggcc ttgagtggat tggcatgatt catccttccg caagtgaaat taggttggat240 cagaaattca aggacaaggc cacattgact cttgacaaat cctccagcac agcctatatg300 cacctcagcg gcccgacatc tgtggattct gcggtctatt actgtgcaag atcaggggaa360 tgggggtcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc agccaaaacg420 acacccccat ctgtctatcc actggcccct ggatctgctg cccaaactaa ctccatggtg480 accctgggat gcctggtcaa gggctatttc cctgagccag tgacagtgac ctggaactct540 ggatccctgt ccagcggtgt gcacaccttc ccagctgtcc tgcagtctga cctctacact600 ctgagcagct cagtgactgt cccctccagc acctggccca gcgagaccgt cacctgcaac660 gttgcccacc cggccagcag caccaaggtg gacaagaaaa ttgtgcccag ggattgtggt720 tgtaagcctt gcatatgtac agtcccagaa gtatcatctg tcttcatctt ccccccaaag780 cccaaggatg tgctcaccat tactctgact cctaaggtca cgtgtgttgt ggtagacatc840 agcaaggatg atcccgaggt ccagttcagc tggtttgtag atgatgtgga ggtgcacaca900
- 295 037044 gctcagacgc aaccccggga ggagcagttc aacagcactt tccgctcagt cagtgaactt960 cccatcatgc accaggactg gctcaatggc aaggagttca aatgcagggt caacagtgca1020 gctttccctg cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aaggcagacc gaaggctcca1080 caggtgtaca ccattccacc tcccaaggag cagatggcca aggataaagt cagtct.gacc1140 tgcatgataa cagacttctt ccctgaagac attactgtgg agtggcagtg gaatgggcag1200 ccagcggaga actacaagaa cactcagccc atcatggaca cagatggctc ttacttcatc1260 tacagcaagc tcaatgtgca gaagagcaac tgggaggcag gaaatacttt cacctgctct1320 gtgttacatg agggcctgca caaccaccat actgagaaga gcctctccca ctctcctggt1380 aaatga1386 <210> 364 <211> 106 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 364
Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 1015
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Ser Tyr
2530
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 4045
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu GlnPro
70 7580
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp lie Lys His ProThr
9095
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100105 <210> 365 <211> 318 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 365 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc60 atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca120 gggaaagccc ctaagctcct gatctattct acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca180 cgcttcagtg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gatattaaac accctacgtt cggtcaaggc300 accaaggtgg agatcaaa318 <210> 366
- 296 037044 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 366
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
5 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
2530 lie Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
4045
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe
5560
Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala’Tyr
70 7580
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115120 <210> 367 <211> 360 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 367 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc60 tcctgcaagg cttctggttt taccttcacc gactatatta tgcactgggt gcgtcaggcc120 cctggtcaag ggcttgagtg gatgggctat atcaaccctt ataatgatga caccgaatac180 aacgagaagt tcaagggccg tgtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac240 atggagctga gcagcctgcg ctctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgttcgatt300 tattactacg atgccccgtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt360 <210> 368 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 368
Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Phe Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
- 297 037044
4045
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu GlnPro
70 7580
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr ProLeu
9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100105 <210> 369 <211> 324 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 369 gatatccaga tgacccagag cccgagcagc ctgagcgcga gcgtgggcga tcgcgtgacc60 attacctgca aagcgagcca ggatgtgttt accgcggtgg cgtggtatca gcagaaaccg120 ggcaaagcgc cgaaactgct gatttattgg gcgagcaccc gccataccgg cgtgccgagt180 cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctgcagccg240 gaagattttg cgacctatta ttgccagcag tatagcagct atccgctgac ctttggcggc300 ggcaccaaag tggaaattaa acgt324 <210> 370 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 370
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn lie Lys Asp Tyr
2530
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 35 4045
Gly Arg lie Asp Pro Glu Asn Gly Asp lie lie Tyr Asp Pro Lys Phe 50 5560
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Tyr Asp Ala Gly Asp Pro Ala Trp Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
- 298 037044 <210> 371 <211> 357 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 371 gaagtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg60 agctgcaaag cgagcggctt taacattaaa gattattata tgcattgggt gcgccaggcg120 ccgggccagg gcctggaatg gatcggccgc attgatccgg aaaacggcga tattatttat180 gatccgaaat ttcagggccg cgtgaccatg accaccgata ccagcaccag caccgcgtat240 atggaactgc gcagcctgcg cagcgatgat accgcggtgt attattgcgc gtatgatgcg300 ggcgatccgg cgtggtttac ctattggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagc357 <210> 372 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 372
Asp He Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
5 1015
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser lie Ser Ser Ser 20 2530
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 4045 lie Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 ·60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser LeuGln
70 7580
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Thr ThrTyr
9095
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg 100105 <210> 373 <211> 324 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 373 gatattcagc tgacccagag cccgagcttt ctgagcgcga gcgtgggcga tcgcgtgacc60 attacctgca gcgtgagcag cagcattagc agcagcaacc tgcattggta tcagcagaaa120 ccgggcaaag cgccgaaact gctgatttat ggcaccagca acctggcgag cggcgtgccg180 agccgcttta gcggcagcgg cagcggcacc gaatttaccc tgaccattag cagcctgcag240 ccggaagatt ttgcgaccta ttattgccag cagtggacca ccacctatac ctttggccag300
- 299 037044
ggcaccaaac I tggaaattaa acgt 324
<210> 374 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 374 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 Ser Val Lys 5 Val Ser Cys Lys Ala 10 15 Ser Gly Phe Asn lie Lys Asp Tyr
Tyr He His 20 Trp Val Arg Gln Ala 25 30 Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 Gly Arg lie 40 Asp Pro Asp Asn Gly 45 Glu Ser Thr Tyr Val Pro Lys Phe
50 Gln Gly Arg 55 Val Thr Met Thr Thr 60 Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 Met Glu Leu 70 Arg Ser Leu Arg Ser 75 80 Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
Ala Arg Glu 85 Gly Leu Asp Tyr Gly 90 95 Asp Tyr Tyr Ala Val Asp Tyr Trp
Gly Gln Gly 115 100 Thr Leu Val Thr Val 120 105 110 Ser Ser
<210> 375 <211> 366 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 375 gaagtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg60 agctgcaaag cgagcggctt taacattaaa gattattata ttcattgggt gcgccaggcg120 ccgggccagg gcctggaatg gatgggccgc attgatccgg ataacggcga aagcacctat180 gtgccgaaat ttcagggccg cgtgaccatg accaccgata ccagcaccag caccgcgtat240 atggaactgc gcagcctgcg cagcgatgat accgcggtgt attattgcgc gcgcgaaggc300 ctggattatg gcgattatta tgcggtggat tattggggcc agggcaccct ggtgaccgtc360 tcgagc366 <210> 376 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 376
Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
- 300 037044
1015
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp lie Ser Asn Tyr
2530
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 4045
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu GlnPro
70 7580
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu ProTyr
9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100105 <210> 377 <211> 321 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 377 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctccgcat ccgtaggcga ccgcgtaacc60 ataacatgta gagcatctca agatatttcc aactatttga attggtacca acaaaaaccc120 ggcaaagcac ctaaactcct catttactat acatcaagac tcctctccgg cgttccatca180 cgattctcag gctccggctc cggcacagat ttcacactca ctatttcctc cctccaacca240 gaagattttg caacctatta ctgtcaacaa ggcgatacac tcccatacac attcggcggc300 ggcacaaaag ttgaaattaa a321 <210> 378 <211> 123 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 378
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
2530
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 4045
Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 5560
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
- 301 037044
Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 379 <211> 369 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 379 gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtaaaaaaac caggagcaag cgttaaagtt60 tcttgtaaag caagcggata tacatttaca gattacaaca tgcattgggt aagacaagcg120 ccaggacaag gattggaatg gatgggcgaa attaacccta atagtggagg agcaggctac180 aatcaaaaat tcaaagggag agttacaatg acaacagaca caagcacttc aacagcatat240 atggaactgc gatcacttag aagcgacgat acagctgtat actattgcgc acgacttggg300 tatgatgata tatatgatga ctggtatttc gatgtttggg gccagggaac aacagttacc360 gtctctagt369 <210> 380 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 380
Asp lie Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 1015
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Ser 20 2530
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 4045 lie Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 5560
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser LeuGln
70 7580
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Phe PhePro
9095
Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100105 <210> 381 <211> 324 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 381
- 302 037044 gacatccagc tgacccagag ccccagcttc ctttccgcat ccgttggtga ccgagtaaca60 atcacatgcc gcgcctcatc ttcagttaca tcttcttatc ttaattggta tcaacaaaaa120 ccaggaaaag cacctaaact tcttatatac tctacatcta atctcgcatc aggagttccc180 tctcgatttt caggatctgg atcaggcaca gaatttacac ttactatatc atcactccaa240 ccagaagact tcgccactta ttactgccaa caatacgatt tttttccaag cacattcgga300 ggaggtacaa aagtagaaat caag324 <210> 382 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 382
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
5 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 4045
Gly Asp He Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Thr Tyr Asn His Lys Phe 50 5560
Lys Gly Arg Val Thr He Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Glu Thr Ala Val He Thr Thr Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115120 <210> 383 <211> 363 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 383 gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtcaagaaac ctggagcaag cgtaaaggtt60 agttgcaaag catctggata cacatttacc gactactaca tgaattgggt acgacaagcc120 cctggacaaa gacttgaatg gatgggagac attaaccctt ataacgacga cactacatac180 aatcataaat ttaaaggaag agttacaatt acaagagata catccgcatc aaccgcctat240 atggaacttt cctcattgag atctgaagac actgctgttt attactgtgc aagagaaact300 gccgttatta ctactaacgc tatggattac tggggtcaag gaaccactgt taccgtctct360 agt363 <210> 384
- 303 037044 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 384
Asp He Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1015
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ser Val Ser Ser Thr lie Ser Ser Asn
2530
His Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu
4045 lie Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 5560
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser LeuGln
70 7580
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser TyrPro
9095
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys
100105 <210> 385 <211> 324 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 385 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctcagcat ccgtaggcga tagagttaca60 ataacatgca gcgtatcatc aactatatca tcaaatcatc ttcattggtt ccaacagaaa120 cccggcaaag cacctaaatc acttatatac ggcacatcaa atctcgcatc aggcgttcct180 tcaagatttt caggctctgg ctcaggcacc gactttactc ttacaatatc ctccctccaa240 cccgaagact tcgcaaccta ttactgtcaa caatggtcct catatccact cacatttggc300 ggcggcacaa aagtagaaat taaa324 <210> 386 <211> 125 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 386
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Asp Phe Asn He Lys Asp Phe
2530
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie
4045
Gly Arg He Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Leu Tyr Asp Pro Lys Phe
- 304 037044
5560
Gln Asp Lys Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Glu Ala Asp Tyr Phe His Asp Gly Thr Ser Tyr Trp Tyr Phe
100 105110
Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120125 <210> 387 <211> 375 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 387 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc60 tcctgcaagg cttctgactt caacattaaa gacttctatc tacactgggt gcgacaggcc120 cctggacaag ggcttgagtg gattggaagg attgatcctg agaatggtga tactttatat180 gacccgaagt tccaggacaa ggtcaccatg accacagaca cgtccaccag cacagcctac240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaggcg300 gattatttcc acgatggtac ctcctactgg tacttcgatg tctggggccg tggcaccctg360 gtcaccgtct ctagt375 <210> 388 <211> 106 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 388
Asp lie Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1015
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr lie
2530
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 4045
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 5560
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln ProGlu
70 7580
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asp Pro LeuThr
9095
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys
100105
- 305 037044 <210> 389 <211> 318 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 389 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60 atcacttgca gggccagctc aagtataagt tacatacact ggtatcagca aaaaccaggg120 aaagccccta agctcctgat ctatgccaca tccaacctgg cttctggggt cccatcaagg180 ttcagcggca gtggatctgg gacagaattc actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa240 gattttgcaa cttattactg tcagcagtgg agtagtgacc cactcacgtt cggcggaggg300 accaaggtgg agatcaaa318 <210> 390 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <400> 390
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp lie Lys Asp Tyr
Tyr lie His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Arg Val Asp Pro Asp Asn Gly Glu Thr Glu Phe Ala Pro Lys Phe
Pro Gly Lys Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Thr Tyr Thr Trp Phe Pro Tyr Trp Gly
100
105
110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
120 <210> 391 <211> 363 <212> ДНК <213> Mus musculus <400> 391 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc60 tcctgcaagg cttctggatt cgacattaag gactactata tacactgggt gcgacaggcc120 cctggacaag ggcttgagtg gatcggaagg gttgatcctg acaatggtga gactgaattt180 gccccgaagt tcccgggcaa ggtcaccatg accacagaca cgtccatcag cacagcctac240
- 306 037044 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaagac 300 tacgatggta cctacacctg gtttccttat tggggccaag ggactctggt caccgtctct 360 agt 363 <210> 392 <211> 448 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 392
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
5 1015
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
2530
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
4045
Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 5560
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys
9095
Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val
100 105110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser
130 135140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu ProVal
145 150 155160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His ThrPhe
165 170175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185190
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val
195 200205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys
210 215220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
225 230 235240
- 307 037044
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser 245 250255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 290 295300
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly LysGlu
305 310 315320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He GluLys
325 330335
Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu 370 375380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro MetLeu
385 390 395400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val AspLys
405 410415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440445 <210> 393 <211> 446 < 212> БЕЛОК' < 213> Искусственная последовательность <220>
< 223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 393
Glu 1 Val Gln Leu Val 5 Gln Ser Gly Ala Glu 10 Val Lys Lys Pro Gly 15 Ala
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Thr Tyr Asn His Lys Phe
- 308 037044
Lys Gly 65
Met Glu
Ala Arg
Gln Gly
Val Phe
130
Ala Leu 145
Ser Trp
Val Leu
Pro Ser
Lys Pro
210
Val Glu 225
Phe Leu
Pro Glu
Val Gln
Thr Lys
290
Val Leu 305
Cys Lys
Ser Lys
Pro Ser
Val Lys
370
Gly Gln 385
Arg Val
Leu Ser
Glu Thr
100
Thr Thr 115
Pro Leu
Gly Cys
Asn Ser
Gln Ser
180
Ser Asn 195
Ser Asn
Cys Pro
Phe Pro
Val Thr
260
Phe Asn
275
Pro Arg
Thr Val
Val Ser
Thr Lys
340
Arg Glu 355
Gly Phe
Pro Glu
Thr He
Ser Leu
Ala Val
Val Thr
Ala Pro
Leu Val
150
Gly Ala 165 Ser Gly
Phe Gly
Thr Lys
Pro Cys 230
Pro Lys 245
Cys Val
Trp Tyr
Glu Glu
Val His
310
Asn Lys 325
Gly Gln
Glu Met
Tyr Pro
Asn Asn
390
Thr Arg
Arg Ser lie Thr
Val Ser
120
Cys Ser 135
Lys Asp
Leu Thr
Leu Tyr
Thr Gln
200
Val Asp 215
Pro Ala
Pro Lys
Val Val
Val Asp 280
Gln Phe 295
Gln Asp
Gly Leu
Pro Arg
Thr Lys 360
Ser Asp 375
Tyr Lys
Asp Thr
Glu Asp 90
Thr Asn 105
Ser Ala
Arg Ser
Tyr Phe
Ser Gly
0
Ser Leu 185
Thr Tyr
Lys Thr
Pro Pro
Asp Thr
250
Asp Val 265
Gly Val
Asn Ser
Trp Leu
Pro Ala
330
Glu Pro 345
Asn Gln
He Ala
Thr Thr
Ser Ala 75
Thr Ala
Ala Met
Ser Thr
Thr Ser
0
Pro Glu 155
Val His
Ser Ser
Thr Cys
Val Glu
220
Val Ala 235
Leu Met
Ser His
Glu Val
Thr Phe
300
Asn Gly 315
Pro He
Gln Val
Val Ser
Val Glu
380
Pro Pro 395
Ser Thr
Val Tyr
Asp Tyr 110
Lys Gly 125
Glu Ser
Pro Val
Thr Phe
Val Val
190
Asn Val 205
Arg Lys
Gly Pro lie Ser Glu Asp 270
His Asn 285
Arg Val
Lys Glu
Glu Lys
Tyr Thr 350
Leu Thr 365
Trp Glu
Met Leu
Ala Tyr 80
Tyr Cys 95
Trp Gly
Pro Ser
Thr Ala
Thr Val
160
Pro Ala 175
Thr Val
Asp His
Cys Cys
Ser Val
240
Arg Thr 255
Pro Glu
Ala Lys
Val Ser
Tyr Lys
320
Thr He 335
Leu Pro
Cys Leu
Ser Asn
Asp Ser
400
- 309 037044
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440445 <210> 394 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 394
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala
3540
Gly Arg lie Asp Pro Glu Asn Gly
5055
Gln Asp Lys Val Thr Met Thr Thr
6570
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser
Ala Arg Glu Ala Asp Tyr Phe His
100
Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Leu
115120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
130135
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
145150
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
165
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
180
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn
195200
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1015
Ser Asp Phe Asn lie Lys Asp Phe 2530
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 45
Asp Thr Leu Tyr Asp Pro Lys Phe 60
Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 7580
Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Asp Gly Thr Ser Tyr Trp Tyr Phe 105110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 155160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 170175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
185190
Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys
205
Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu
- 310 037044
210 215220
Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro ValAla
225 230 235240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuMet
245 250255
He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe
290 295300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu AsnGly
305 310 315320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Prolie
325 330335
Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu
370 375380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProPro
385 390 395400
Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrVal
405 410415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440445
Pro Gly
450 <210> 395 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 395
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
10 15
- 311 037044
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp lie Lys Asp Tyr 20 2530
Tyr lie His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 35 4045
Gly Arg Val Asp Pro Asp Asn Gly Glu Thr Glu Phe Ala Pro Lys Phe 50 5560
Pro Gly Lys Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser lie Ser Thr AlaTyr
70 7580
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr TyrCys .9095
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Thr Tyr Thr Trp Phe Pro Tyr Trp Gly 100 105110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrVal
145 150 155160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProAla
165 170175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 210 215220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro SerVal
225 230 235240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser ArgThr
245 250255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu TyrLys
305 310 315320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thrlie
325 330335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
- 312 037044
355 360365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu AspSer
385 390 395400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys SerArg
405 410415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440445 <210> 396 <211> 445 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220> <223> Последовательность гуманизированного антитела <400> 396
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala 20 lie Met His Trp Val Arg Gln Ala 3540
Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp 5055
Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala
6570
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser 85
Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115120
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 130135
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 145150
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 165
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1015
Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 2530
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 45
Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 60
Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 7580
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 9095
Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 105110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 170 175
- 313 037044
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val
210 215220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser ValPhe
225 230 235240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg ThrPro
245 250255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 290 295300
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr LysCys
305 310 315320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lieSer
325 330335
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp SerAsp
385 390 395400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser ArgTrp
405 410415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440445

Claims (31)

1. Антитело, которое связывается с фрагментом склеростина с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, где SEQ ID NO: 2 и 4 соединены дисульфидной связью в аминокислотных положениях 57 и 111 относительно SEQ ID NO: 1, и где SEQ ID NO: 3 и 5 соединены по меньшей мере одной из:
(a) дисульфидной связью в аминокислотных положениях 82 и 142 относительно SEQ ID NO: 1, и (b) дисульфидной связью в аминокислотных положениях 86 и 144 относительно SEQ ID NO: 1, где указанное антитело получают с помощью указанного фрагмента склеростина.
2. Антитело по п.1, которое также связывается с эпитопом SEQ ID NO: 6.
3. Антитело по п.1, где фрагмент получен путем расщепления трипсином склеростина человека SEQ ID NO: 1 и сохраняет третичную структуру соответствующей области полипептида склеростина человека.
4. Антитело по любому из пп.1-3, которое перекрестно блокирует связывание Ab-C, Ab-D, Ab-3, Ab-13, Ab-14 со склеростином с SEQ ID NO: 1, и/или связывание которого со склеростином SEQ ID NO: 1 перекрестно блокировано антителом Ab-С, Ab-D, Ab-3, Ab-13, Ab-14.
5. Антитело по п.4, где способность указанного антитела перекрестно блокировать или быть перекрестно блокированным определяется анализом Biacore или анализом ELISA.
6. Антитело по п.1, содержащее CDR последовательности SEQ ID NO: 48, 49 и 50 и CDR последовательности SEQ ID NO: 45, 46 и 47.
7. Антитело по п.1, содержащее CDR последовательности SEQ ID NO: 42, 43 и 44 и CDR последовательности SEQ ID NO: 39, 40 и 41.
8. Антитело по п.1, содержащее CDR последовательности SEQ ID NO: 284, 285 и 286 и CDR после-
- 314 037044 довательности SEQ ID NO: 296, 297 и 298.
9. Антитело по п.6, содержащее тяжелую цепь, содержащую полипептид с последовательностью
SEQ ID NO: 19, и легкую цепь, содержащую полипептид с последовательностью SEQ ID NO: 15.
10. Антитело по п.7, содержащее тяжелую цепь, содержащую полипептид, имеющий последовательность, представленную SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую полипептид, имеющий последовательность, представленную SEQ ID NO: 7.
11. Антитело по любому из пп.1-10, где указанное антитело может увеличивать по меньшей мере один из параметров: остеогенез, минеральную плотность костей, содержание минеральных веществ в костях, костную массу, качество костей и прочность костей у млекопитающего и/или может блокировать ингибирующее действие склеростина в анализе минерализации, основанном на клетках.
12. Антитело по п.11, где антитело связывается со склеростином при анализе, основанным на резонансе поверхностного плазмона, таким образом, что в ходе анализа в присутствии второго антитела связывание фиксируют в пределах от 80 и 4% от максимально теоретического.
13. Антитело по п.11, где:
(a) антитело в растворе при анализе ELISA вызывает снижение на 60-100% количества склеростина, связанного иммобилизованным вторым антителом, и/или (b) второе антитело в растворе при анализе ELISA вызывает снижение на 60-100% количества склеростина, связанного иммобилизованным антителом, по сравнению с количеством склеростина, связанного в отсутствие указанного антитела или второго антитела в растворе.
14. Антитело по п.1, которое является иммуноглобулином, содержащим тяжелые цепи и легкие цепи.
15. Антитело по п.14, которое является IgG антителом.
16. Антитело по п.14 или 15, которое является моноклональным антителом.
17. Антитело по любому из пп.14-16, которое является химерным антителом, гуманизированным антителом, антителом человека.
18. Антигенсвязывающий фрагмент антитела по любому из пп.1-17, который связывается с фрагментом склеростина с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, где SEQ ID NO: 2 и 4 соединены дисульфидной связью в аминокислотных положениях 57 и 111 относительно SEQ ID NO: 1, и где SEQ ID NO: 3 и 5 соединены по меньшей мере одной из:
(a) дисульфидной связью в аминокислотных положениях 82 и 142 относительно SEQ ID NO: 1, и (b) дисульфидной связью в аминокислотных положениях 86 и 144 относительно SEQ ID NO: 1.
19. Антитело по п.18, которое содержит вариабельную область легкой цепи, вариабельную область тяжелой цепи, F(ab')2, Fab, Fab', Fv, Fc или Fd-фрагмент.
20. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп.1-17 в комбинации с одним или несколько фармацевтически приемлемыми эксципиентами, разбавителями или носителями.
21. Применение антитела по любому из пп.1-17 для лечения или профилактики патологического нарушения, которое опосредовано склеростином или которое связано с повышенным уровнем склеростина.
22. Применение фармацевтической композиции по п.20 для лечения или профилактики патологического нарушения, которое опосредовано склеростином или которое связано с повышенным уровнем склеростина.
23. Применение антитела по любому из пп.1-17 для увеличения остеогенеза, содержания минеральных веществ в костях, костной массы, минеральной плотности костей, качества костей или прочности костей у млекопитающего или лечения связанного с костями нарушения у млекопитающего.
24. Применение фармацевтической композиции по п.21 для увеличения остеогенеза, содержания минеральных веществ в костях, костной массы, минеральной плотности костей, качества костей или прочности костей у млекопитающего или лечения связанного с костями нарушения у млекопитающего.
25. Применение по п.23 или 24, в котором связанным с костями нарушением является по меньшей мере одно из следующего: ахондроплазия, ключично-черепной дизостоз, эхондроматоз, фиброзная дисплазия, болезнь Гоше, гипофосфатемический рахит, синдром Марфана, множественные наследственные экзостозы, нейрофиброматоз, несовершенный остеогенез, остеопетроз, остеопойкилоз, склеротические повреждения, псевдоартроз, пиогенный остеомиелит, заболевание периодонта, индуцированная противоэпилептическими средствами потеря костной массы, первичный и вторичный гиперпаратиреоидизм, синдромы семейного гиперпаратиреоидизма, индуцированная невесомостью потеря костной массы, остеопороз у мужчин, постклимактерическая потеря костной массы, остеоартрит, нефрогенная остеодистрофия, инфильтративные заболевания костей, потеря массы костей ротовой полости, остеонекроз челюсти, ювенильная форма болезни Педжета, мелореостоз, метаболические заболевания костей, мастоцитоз, серповидноклеточная анемия/заболевание, связанная с трансплантацией органа потеря костной массы, связанная с трансплантацией почки потеря костной массы, системная красная волчанка, анкилозирующий спондилит, эпилепсия, поражения кожи у детей ревматического происхождения, талассемия, мукополисахаридозы, болезнь Фабри, синдром Тернера, синдром Дауна, синдром Кляйнфелтера, проказа,
- 315 037044 болезнь Пертеса, подростковый идиопатический сколиоз, многосистемное воспалительное заболевание у детей, синдром Винчестера, болезнь Менкеса, болезнь Вильсона, ишемическое заболевание костей (такое как болезнь Легга-Кальве-Пертеса, регионарный мигрирующий остеопороз), анемические состояния, состояния, вызванные стероидами, индуцированная глюкокортикоидами потеря массы костей, индуцированная гепарином потеря массы костей, заболевания костного мозга, цинга, недостаточное питание, дефицит кальция, остеопороз, остеопения, алкоголизм, хроническое заболевание печени, постклимактерическое состояние, хронические воспалительные состояния, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, воспалительный колит, болезнь Крона, олигоменорея, аменорея, беременность, сахарный диабет, гипертиреоидизм, расстройства щитовидной железы, расстройства паратиреоидной железы, болезнь Кушинга, акромегалия, гипогонадизм, лишение подвижности или бездействие, синдром симпатической рефлекторной дистрофии, регионарный остеопороз, остеомаляция, потеря костной массы, связанная с заменой сустава, связанная с ВИЧ потеря костной массы, потеря костной массы, связанная со снижением уровня гормона роста, потеря костной массы, связанная с кистозным фиброзом, связанная с химиотерапией потеря костной массы, индуцированная опухолью потеря костной массы, связанная со злокачественной опухолью потеря костной массы, потеря костной массы при гормональном разрушении, множественная миелома, индуцированная лекарственными средствами потеря костной массы, нервная анорексия, связанная с заболеванием потеря массы костей лицевой части черепа, связанная с заболеванием потеря массы костей краниальной части черепа, связанная с заболеванием потеря костной массы челюсти, связанная с заболеванием потеря костной массы черепа, потеря костной массы, связанная со старением, потеря массы костей лицевой части черепа, связанная со старением, потеря массы костей краниальной части черепа, связанная со старением, потеря костной массы челюсти, связанная со старением, потеря массы костей черепа, связанная со старением, и потеря костной массы, связанная с полетом в космос.
26. Применение антитела по любому из пп.1-17 для лечения остеопении или остеопороза.
27. Применение фармацевтической композиции по п.20 для лечения остеопении или остеопороза.
28. Применение антитела по любому из пп.1-17 для улучшения исхода лечения млекопитающего, подвергаемого ортопедический процедуре, процедуре, проводимой на зубах, имплантационной хирургии, замене сустава, костной пластики, косметической хирургии на костях и восстановлению костей.
29. Применение фармацевтической композиции по п.20 для улучшения исхода лечения млекопитающего, подвергаемого ортопедический процедуре, процедуре, проводимой на зубах, имплантационной хирургии, замене сустава, костной пластики, косметической хирургии на костях и восстановлению костей.
30. Применение по п.28 или 29, где восстановление костей представляет собой срастание переломов, заживление несросшихся переломов, заживление при медленном срастании или реконструкция лица.
31. Применение фрагмента антитела по п.18 или 19 для увеличения остеогенеза, содержания минеральных веществ в костях, костной массы, минеральной плотности костей, качества костей или прочности костей у млекопитающего или лечения связанного с костями нарушения у млекопитающего.
EA201400933A 2005-05-03 2006-04-28 Антитело, связывающее склеростин, и его применение EA037044B1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US67758305P 2005-05-03 2005-05-03
US77684706P 2006-02-24 2006-02-24
US78224406P 2006-03-13 2006-03-13
US79264506P 2006-04-17 2006-04-17
US11/411,003 US7592429B2 (en) 2005-05-03 2006-04-25 Sclerostin-binding antibody

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201400933A1 EA201400933A1 (ru) 2015-04-30
EA037044B1 true EA037044B1 (ru) 2021-01-29

Family

ID=36992590

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200702402A EA021539B1 (ru) 2005-05-03 2006-04-28 Антитело к склеростину и его применение
EA201400933A EA037044B1 (ru) 2005-05-03 2006-04-28 Антитело, связывающее склеростин, и его применение

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200702402A EA021539B1 (ru) 2005-05-03 2006-04-28 Антитело к склеростину и его применение

Country Status (42)

Country Link
US (8) US7592429B2 (ru)
EP (7) EP2325199B1 (ru)
JP (4) JP5462484B2 (ru)
KR (4) KR101624809B1 (ru)
CN (4) CN103435698B (ru)
AR (1) AR053266A1 (ru)
AU (2) AU2006242476B2 (ru)
BR (2) BRPI0610197B8 (ru)
CA (2) CA2607197C (ru)
CR (1) CR9524A (ru)
CY (4) CY1114350T1 (ru)
DK (3) DK2325199T3 (ru)
EA (2) EA021539B1 (ru)
ES (4) ES2902548T3 (ru)
GE (2) GEP20125594B (ru)
GT (1) GT200600186A (ru)
HK (3) HK1108705A1 (ru)
HR (3) HRP20211904T1 (ru)
HU (3) HUE057097T2 (ru)
IL (3) IL187106A (ru)
LT (2) LT3670528T (ru)
LU (1) LUC00151I2 (ru)
MA (1) MA29528B1 (ru)
ME (2) ME02085B (ru)
MX (3) MX2007013759A (ru)
MY (1) MY163480A (ru)
NL (1) NL301034I2 (ru)
NO (4) NO346914B1 (ru)
NZ (2) NZ591636A (ru)
PE (1) PE20070317A1 (ru)
PH (1) PH12015501848A1 (ru)
PL (3) PL2325199T3 (ru)
PT (3) PT3670528T (ru)
RS (3) RS62685B1 (ru)
SG (1) SG10201403400UA (ru)
SI (3) SI1891101T1 (ru)
TN (1) TNSN07406A1 (ru)
TW (5) TW201323438A (ru)
UA (1) UA123695C2 (ru)
UY (2) UY29514A1 (ru)
WO (1) WO2006119107A2 (ru)
ZA (1) ZA200709480B (ru)

Families Citing this family (213)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040009535A1 (en) 1998-11-27 2004-01-15 Celltech R&D, Inc. Compositions and methods for increasing bone mineralization
EP2261335B1 (en) * 1998-11-27 2017-06-14 UCB Pharma S.A. Compositions and methods for increasing bone mineralisation
US7799523B2 (en) 2002-04-03 2010-09-21 Celltech R & D, Inc. Association of polymorphisms in the SOST gene region with bone mineral density
US7585501B2 (en) 2002-06-14 2009-09-08 Stowers Institute For Medical Research Compositions and methods for treating kidney disease
WO2003106657A2 (en) 2002-06-14 2003-12-24 Stowers Institute For Medical Research Wise/sost nucleic acid sequences and amino acid sequences
US7893218B2 (en) * 2003-06-16 2011-02-22 Stowers Institute For Medical Research Antibodies that specifically bind SOST peptides
AU2004262640B2 (en) 2003-06-16 2010-12-23 Ucb Manufacturing, Inc. Antibodies specific for sclerostin and methods for increasing bone mineralization
US8461155B2 (en) * 2003-09-22 2013-06-11 University Of Connecticut Sclerostin and the inhibition of WNT signaling and bone formation
ITMI20050739A1 (it) * 2005-04-22 2006-10-23 Effebi Spa Piastrina di connsessione valvola-attuatore
US7592429B2 (en) 2005-05-03 2009-09-22 Ucb Sa Sclerostin-binding antibody
US8003108B2 (en) * 2005-05-03 2011-08-23 Amgen Inc. Sclerostin epitopes
ITTO20050905A1 (it) * 2005-12-23 2007-06-24 Univ Degli Studi Torino Leganti sintetici capaci di legare l'ocratossina e relativi usi
EP2094731A2 (en) * 2006-11-10 2009-09-02 UCB Pharma S.A. Anti human sclerostin antibodies
EP2097450A2 (en) * 2006-11-10 2009-09-09 Amgen Inc. Antibody-based diagnostics and therapeutics
FI3345607T3 (fi) 2006-12-29 2022-11-30 Menetelmiä luun kasvun muuttamiseksi antamalla SOST- tai WISE-antagonistia tai antagonistia
MY149129A (en) 2007-03-20 2013-07-15 Lilly Co Eli Anti-sclerostin antibodies
US7977313B2 (en) * 2007-04-27 2011-07-12 Affinergy, Inc. Methods and compositions for promoting localization of pharmaceutically active agents to bone
EP2150562A1 (en) * 2007-04-27 2010-02-10 Genetech, Inc. Potent, stable and non-immunosuppressive anti-cd4 antibodies
WO2009029795A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Amgen Inc. Solid-state protein formulation
US7981415B2 (en) * 2007-09-07 2011-07-19 Cisthera, Inc. Humanized PAI-1 antibodies
CL2008002775A1 (es) * 2007-09-17 2008-11-07 Amgen Inc Uso de un agente de unión a esclerostina para inhibir la resorción ósea.
EP2205280B1 (en) 2007-09-27 2019-09-04 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations
TWI489993B (zh) 2007-10-12 2015-07-01 Novartis Ag 骨硬化素（ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ）抗體組合物及使用方法
US8796206B2 (en) 2007-11-15 2014-08-05 Amgen Inc. Aqueous formulation of erythropoiesis stimulating protein stabilised by antioxidants for parenteral administration
EA201070740A1 (ru) 2007-12-14 2010-12-30 Эмджен Инк. Способ лечения перелома кости антителами против склеростина
PL3514180T3 (pl) 2008-04-11 2024-08-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cząsteczka wiążąca antygen zdolna do wiązania dwóch lub więcej cząsteczek antygenu w sposób powtarzalny
BRPI0910482A2 (pt) * 2008-04-29 2019-09-24 Abbott Lab imunoglobinas de domínio variável duplo e usos das mesmas
SG191639A1 (en) * 2008-06-03 2013-07-31 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
TW201006485A (en) * 2008-06-03 2010-02-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
AU2009268585C1 (en) * 2008-07-08 2014-10-02 Abbvie Inc. Prostaglandin E2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2010096418A2 (en) * 2009-02-17 2010-08-26 Ucb Pharma S.A. Antibody molecules having specificity for human ox40
WO2010115932A1 (en) 2009-04-08 2010-10-14 Novartis Ag Combination for the treatment of bone loss
CA2760332A1 (en) * 2009-05-01 2010-11-04 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9775819B2 (en) * 2009-09-16 2017-10-03 R.P. Scherer Technologies, Llc Oral solid dosage form containing nanoparticles and process of formulating the same using fish gelatin
PE20121531A1 (es) * 2009-10-15 2012-12-22 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual
MX344382B (es) 2009-10-23 2016-12-14 Amgen Inc * Adaptador de vial y sistema.
UY32979A (es) * 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
PH12012501991A1 (en) 2010-04-07 2017-07-26 Abbvie Inc Tnf-alpha binding proteins
AU2011239935A1 (en) 2010-04-16 2012-11-08 Novartis Ag Methods and compositions for improving implant osseointegration
SMT202000095T1 (it) 2010-05-14 2020-03-13 Amgen Inc Formulazioni di anticorpi anti-sclerostina ad alta concentrazione
US9403882B2 (en) * 2010-06-07 2016-08-02 Joshua Rabbani Sulfation of Wnt pathway proteins
US11167011B2 (en) 2010-06-07 2021-11-09 Enzo Biochem, Inc. Methods for treating bone loss using sclerostin peptides
US9493541B2 (en) * 2010-06-07 2016-11-15 Joshua Rabbani Antibodies specific for sulfated sclerostin
US9617323B2 (en) 2010-06-07 2017-04-11 Joshua Rabbani Sulfonated sclerostin, antibodies, epitopes and methods for identification and use therefor
MX2012014180A (es) 2010-06-07 2013-05-06 Amgen Inc Dispositivo de administracion de farmacos.
JP2013537415A (ja) 2010-08-03 2013-10-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
PH12013500337A1 (en) 2010-08-26 2017-08-23 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
TWI636993B (zh) 2010-10-27 2018-10-01 安美基公司 Ｄｋｋ１抗體及使用方法
RU2013125479A (ru) * 2010-11-02 2014-12-10 Эбботт Лэборетриз Иммуноглобулины с двумя вариабельными доменами и их применение
MX362591B (es) 2010-11-05 2019-01-25 Novartis Ag Uso de antagonistas de il-17.
TWI812066B (zh) 2010-11-30 2023-08-11 日商中外製藥股份有限公司 具有鈣依存性的抗原結合能力之抗體
AU2011349049B2 (en) * 2010-12-22 2016-08-11 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Modified antibody with improved half-life
AU2012223358A1 (en) 2011-03-01 2013-09-05 Amgen Inc. Sclerostin and DKK-1 bispecific binding agents
US9145457B2 (en) 2011-03-25 2015-09-29 Amgen Inc. Sclerostin antibody crystals and formulations thereof
MX341790B (es) 2011-03-31 2016-09-02 Amgen Inc Adaptador de viales y sistema.
PL3404041T3 (pl) 2011-04-19 2020-12-14 Amgen Inc. Sposób leczenia osteoporozy
DK2699293T3 (en) 2011-04-20 2019-04-29 Amgen Inc AUTO INJECTION DEVICE
RU2668170C2 (ru) 2011-04-25 2018-09-26 Дайити Санкио Компани, Лимитед Анти-в7-н3-антитело
US20140056912A1 (en) 2011-04-29 2014-02-27 Novartis Ag Methods of treating squamous cell carcinoma
AU2012290083B2 (en) * 2011-08-04 2017-07-20 Amgen Inc. Method for treating bone gap defects
ES2923766T3 (es) 2011-10-14 2022-09-30 Amgen Inc Inyector y método de montaje
SG11201401791WA (en) 2011-10-24 2014-08-28 Abbvie Inc Immunobinders directed against sclerostin
PE20142245A1 (es) 2011-10-24 2015-01-22 Abbvie Inc Inmunoligantes biespecificos dirigidos contra tnf e il-17
PH12014500866A1 (en) 2011-10-24 2014-05-26 Abbvie Inc Immunobinders directed against tnf
UA112203C2 (uk) 2011-11-11 2016-08-10 Юсб Фарма С.А. Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини
AU2012362898B2 (en) * 2011-12-28 2017-11-09 Amgen, Inc. Method of treating alveolar bone loss through the use of anti-sclerostin antibodies
AR089529A1 (es) 2011-12-30 2014-08-27 Abbvie Inc Proteinas de union especificas duales dirigidas contra il-13 y/o il-17
CN114133454A (zh) 2012-03-14 2022-03-04 瑞泽恩制药公司 多特异性抗原结合分子及其用途
EP2869844B2 (en) 2012-07-05 2023-06-21 UCB Pharma S.A. Treatment for bone diseases
MX2015005593A (es) 2012-11-01 2016-02-05 Abbvie Inc Inmunoglobulinas de dominio variable dual anti-vegf/dll4 y usos de las mismas.
EP4234694A3 (en) 2012-11-21 2023-09-06 Amgen Inc. Drug delivery device
UY35148A (es) * 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
WO2014118705A1 (en) 2013-01-31 2014-08-07 Novartis Ag Methods of treating chronic kidney disease-mineral and bone disorder using sclerostin antagonists
CN105324396A (zh) 2013-03-15 2016-02-10 艾伯维公司 针对IL-1β和/或IL-17的双重特异性结合蛋白
WO2014144817A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Amgen Inc. Inhibitory polypeptides specific to wnt inhibitors
TWI580452B (zh) 2013-03-15 2017-05-01 安美基公司 用於注射器之匣盒、注射器及使用包括自動注射器及匣盒之設備之方法
CA2907436A1 (en) * 2013-03-18 2014-09-25 Biocerox Products B.V. Humanized anti-cd134 (ox40) antibodies and uses thereof
UY35493A (es) * 2013-03-20 2014-11-28 Genzyme Corp Métodos para el tratamiento de la osteogénesis imperfecta
AU2014238267B2 (en) 2013-03-22 2019-08-15 Amgen Inc. Injector and method of assembly
WO2014155278A2 (en) 2013-03-26 2014-10-02 Novartis Ag Methods of treating autoimmune diseases using il-17 antagonists
EP3712166A1 (en) 2013-09-05 2020-09-23 Amgen Inc. Fc-containing molecules exhibiting predictable, consistent, and reproducible glycoform profiles
WO2015061389A1 (en) 2013-10-24 2015-04-30 Amgen Inc. Drug delivery system with temperature-sensitive control
CN105873626A (zh) 2013-10-24 2016-08-17 美国安进公司 注射器和组装方法
WO2015087187A1 (en) 2013-12-10 2015-06-18 Rinat Neuroscience Corp. Anti-sclerostin antibodies
WO2015119906A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
CN104892753B (zh) * 2014-03-07 2019-11-29 神州细胞工程有限公司 一种中和人感染h7n9甲型流感病毒的抗体及其用途
US10267806B2 (en) 2014-04-04 2019-04-23 Mayo Foundation For Medical Education And Research Isotyping immunoglobulins using accurate molecular mass
EP3139977B1 (en) 2014-05-07 2021-02-17 Amgen Inc. Autoinjector with shock reducing elements
WO2015175861A1 (en) 2014-05-16 2015-11-19 Amgen Inc. Assay for detecting th1 and th2 cell populations
EP3151883A1 (en) 2014-06-03 2017-04-12 Amgen Inc. Devices and methods for assisting a user of a drug delivery device
AU2015332557B2 (en) 2014-10-14 2020-05-14 Amgen Inc. Drug injection device with visual and audio indicators
WO2016065181A1 (en) 2014-10-23 2016-04-28 Amgen Inc. Reducing viscosity of pharmaceutical formulations
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
MA41142A (fr) 2014-12-12 2017-10-17 Amgen Inc Anticorps anti-sclérostine et utilisation de ceux-ci pour traiter des affections osseuses en tant qu'élements du protocole de traitement
US10799630B2 (en) 2014-12-19 2020-10-13 Amgen Inc. Drug delivery device with proximity sensor
JP2017538512A (ja) 2014-12-19 2017-12-28 アムジエン・インコーポレーテツド ライブボタンまたはユーザインタフェースフィールドを含む薬物送達装置
AR103173A1 (es) 2014-12-22 2017-04-19 Novarits Ag Productos farmacéuticos y composiciones líquidas estables de anticuerpos il-17
EP3556411B1 (en) 2015-02-17 2021-06-30 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
EP3981450A1 (en) 2015-02-27 2022-04-13 Amgen, Inc Drug delivery device having a needle guard mechanism with a tunable threshold of resistance to needle guard movement
SI3269735T1 (sl) * 2015-03-13 2020-12-31 Jiangsu Hengrui Medicine Co. Ltd. Protitelo proti sklerostinu, antigen-vezavni fragment in medicinska uporaba le-tega
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
WO2017007796A1 (en) 2015-07-06 2017-01-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
US11351308B2 (en) 2015-12-09 2022-06-07 Amgen Inc. Auto-injector with signaling cap
US11154661B2 (en) 2016-01-06 2021-10-26 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
NZ745564A (en) 2016-03-01 2024-12-20 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Antibodies specific to human poliovirus receptor (pvr)
GB201604124D0 (en) 2016-03-10 2016-04-27 Ucb Biopharma Sprl Pharmaceutical formulation
US11200298B2 (en) 2016-03-15 2021-12-14 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
LT3219727T (lt) * 2016-03-17 2021-02-10 Tillotts Pharma Ag Anti-tnf alfa antikūnai ir jų funkciniai fragmentai
WO2017190079A1 (en) 2016-04-28 2017-11-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making multispecific antigen-binding molecules
US11541168B2 (en) 2016-04-29 2023-01-03 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
US11389588B2 (en) 2016-05-02 2022-07-19 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
ES2959783T3 (es) 2016-05-13 2024-02-28 Amgen Inc Conjunto de cubierta protectora de vial
US11238150B2 (en) 2016-05-16 2022-02-01 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
WO2017209899A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
US11285266B2 (en) 2016-07-01 2022-03-29 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
KR20190037261A (ko) 2016-08-08 2019-04-05 암젠 인크 항-스클레로스틴 항체를 사용한 결합 조직 부착 개선 방법
WO2018034784A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
CN109642899B (zh) * 2016-08-31 2024-03-08 荣研化学株式会社 使用由不同的方式固定化抗原的抗原负载不溶性载体粒子的抗体测定法、抗体测定用试剂
US20200261643A1 (en) 2016-10-25 2020-08-20 Amgen Inc. On-body injector
EP3538553A4 (en) 2016-11-08 2020-11-25 University of Miami ANTI-SECRETOGRANIN III (SCG3) ANTIBODIES AND THEIR USES
WO2018115879A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 Mereo Biopharma 3 Limited Use of anti-sclerostin antibodies in the treatment of osteogenesis imperfecta
KR20190096409A (ko) 2016-12-21 2019-08-19 메레오 바이오파마 3 리미티드 불완전 골형성증 치료에서의 항-스클레로스틴 항체의 용도
AU2018210301A1 (en) 2017-01-17 2019-08-01 Amgen Inc. Injection devices and related methods of use and assembly
JP7191833B2 (ja) * 2017-01-30 2022-12-19 中外製薬株式会社 抗スクレロスチン抗体およびその使用
US11369736B2 (en) 2017-02-17 2022-06-28 Amgen Inc. Cannula insertion and retraction mechanisms
JP7064501B2 (ja) 2017-02-17 2022-05-10 アムジエン・インコーポレーテツド 無菌流体流路を備える薬物送達デバイスおよび関連する組立方法
AU2018231107B2 (en) 2017-03-06 2023-04-20 Amgen Inc. Drug delivery device with activation prevention feature
CA3052482A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 Amgen Inc. Needle insertion by overpressure
KR20240005194A (ko) 2017-03-09 2024-01-11 암겐 인코포레이티드 약물 전달 장치용 삽입 메커니즘
AU2018235928B2 (en) 2017-03-14 2023-09-21 Amgen Inc. Control of total afucosylated glycoforms of antibodies produced in cell culture
LT3600491T (lt) 2017-03-28 2023-10-10 Amgen Inc. Stūmoklio koto ir švirkšto konstrukcinė sistema ir būdas
CA3059468A1 (en) * 2017-04-27 2018-11-01 Tesaro, Inc. Antibody agents directed against lymphocyte activation gene-3 (lag-3) and uses thereof
MA48464A (fr) 2017-04-28 2020-03-04 Amgen Inc Dipeptides n-acétylés et non acétylés contenant de l'arginine destinés à réduire la viscosité de compositions visqueuses de polypeptides thérapeutiques
AU2018280054B2 (en) 2017-06-08 2023-07-13 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
WO2018226565A1 (en) 2017-06-08 2018-12-13 Amgen Inc. Torque driven drug delivery device
US11541183B2 (en) 2017-06-22 2023-01-03 Amgen Inc. Device activation impact/shock reduction
CA3063921A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 Amgen Inc. Electronic drug delivery device comprising a cap activated by a switch assembly
MA49562A (fr) 2017-07-14 2020-05-20 Amgen Inc Système d'insertion-rétractation d'aiguille présentant un système à ressort en double torsion
US11672733B2 (en) 2017-07-21 2023-06-13 Amgen Inc. Gas permeable sealing member for drug container and methods of assembly
EP3658206A1 (en) 2017-07-25 2020-06-03 Amgen Inc. Drug delivery device with container access system and related method of assembly
EP3658203B1 (en) 2017-07-25 2022-08-31 Amgen Inc. Drug delivery device with gear module and related method of assembly
TW201909913A (zh) * 2017-07-27 2019-03-16 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 一種ｓｏｓｔ抗體醫藥組成物及其用途
KR102577670B1 (ko) 2017-08-01 2023-09-12 암젠 인크 샘플의 실시간 글리칸 분석을 수행하기 위한 시스템 및 방법
JP7237022B2 (ja) 2017-08-01 2023-03-10 アムジエン・インコーポレーテツド 質量分析法による分析用ポリペプチド試料のリアルタイム調製のためのシステム及び方法
US20200164155A1 (en) 2017-08-09 2020-05-28 Amgen Inc. Hydraulic-pneumatic pressurized chamber drug delivery system
EP3668567A1 (en) 2017-08-18 2020-06-24 Amgen Inc. Wearable injector with sterile adhesive patch
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
WO2019051047A1 (en) 2017-09-07 2019-03-14 University Of Florida Research Foundation, Inc. CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR T-LYMPHOCYTES EXPRESSING THE INTERLEUKIN-8 RECEPTOR
WO2019055634A1 (en) 2017-09-13 2019-03-21 Mayo Foundation For Medical Education And Research IDENTIFICATION AND MONITORING OF A MACROPHAGE APOPTOSIS INHIBITOR
WO2019055632A1 (en) 2017-09-13 2019-03-21 Mayo Foundation For Medical Education And Research IDENTIFICATION AND MONITORING OF IMMUNOGLOBULIN CHAINS J
WO2019070472A1 (en) 2017-10-04 2019-04-11 Amgen Inc. FLOW ADAPTER FOR MEDICATION DELIVERY DEVICE
US11813426B2 (en) 2017-10-06 2023-11-14 Amgen Inc. Drug delivery device including seal member for needle of syringe
EP3694578A1 (en) 2017-10-09 2020-08-19 Amgen Inc. Drug delivery device with drive assembly and related method of assembly
MA50528A (fr) 2017-11-03 2020-09-09 Amgen Inc Systèmes et approches pour stériliser un dispositif d'administration de médicament
AU2018358749B2 (en) 2017-11-06 2024-02-29 Amgen Inc. Drug delivery device with placement and flow sensing
MA50569A (fr) 2017-11-06 2020-09-16 Amgen Inc Ensembles de remplissage-finition et procédés associés
US11191904B2 (en) 2017-11-10 2021-12-07 Amgen Inc. Plungers for drug delivery devices
JP7370969B2 (ja) 2017-11-16 2023-10-30 アムジエン・インコーポレーテツド 薬物送達デバイスの扉ラッチ機構
AU2018368338B2 (en) 2017-11-16 2024-07-25 Amgen Inc. Autoinjector with stall and end point detection
MA52015A (fr) 2018-03-13 2021-01-20 Amgen Inc Digestion séquentielle de polypeptides pour une analyse par spectrométrie de masse
US20210041453A1 (en) 2018-03-13 2021-02-11 Amgen Inc. Methods for the preparation of trypsin-resistant polypeptides for mass spectrometric analysis
IL313983A (en) 2018-03-26 2024-08-01 Amgen Inc Total afucosylated glycoforms of antibodies produced in cell culture
WO2019191534A1 (en) 2018-03-30 2019-10-03 Amgen Inc. C-terminal antibody variants
EP3788075A1 (en) 2018-04-30 2021-03-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibodies, and bispecific antigen-binding molecules that bind her2 and/or aplp2, conjugates, and uses thereof
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
GB201810746D0 (en) 2018-06-29 2018-08-15 Mereo Biopharma 3 Ltd Use of sclerostin antagonist
AU2019299357A1 (en) 2018-07-02 2021-01-14 Amgen Inc. Anti-steap1 antigen-binding protein
WO2020023451A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
US20210260279A1 (en) 2018-07-24 2021-08-26 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with optional grip portion and related method of preparation
WO2020023444A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
WO2020023336A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
IL279323B1 (en) 2018-07-31 2025-01-01 Amgen Inc Assembling a fluid pathway for a drug delivery device
US20210308265A1 (en) 2018-08-10 2021-10-07 Amgen Inc. Method of preparing an antibody pharmaceutical formulation
KR20210061350A (ko) * 2018-08-20 2021-05-27 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 길항성 항-종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 폴리펩티드
WO2020068623A1 (en) 2018-09-24 2020-04-02 Amgen Inc. Interventional dosing systems and methods
EP3856283A1 (en) 2018-09-28 2021-08-04 Amgen Inc. Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device
MA53815A (fr) 2018-10-02 2022-01-05 Amgen Inc Systèmes d'injection pour administration de médicament avec transmission de force interne
MX2021003491A (es) 2018-10-05 2021-06-18 Amgen Inc Dispositivo de administracion de farmacos con indicador de dosis.
US12053617B2 (en) 2018-10-15 2024-08-06 Amgen Inc. Drug delivery device having damping mechanism
TWI846741B (zh) 2018-10-15 2024-07-01 美商安進公司 用於藥物遞送裝置之平台組裝方法
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
US11213620B2 (en) 2018-11-01 2022-01-04 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
IL281908B1 (en) 2018-11-01 2025-02-01 Amgen Inc Drug delivery devices with partial drug delivery unit withdrawal
CA3126018A1 (en) 2018-12-14 2020-06-18 Amgen Inc. System suitability method for use with protein concentration determination by slope
WO2020168156A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Amgen Inc. Systems and methods for preparing a sample and performing a real-time assay of the sample
CA3127817A1 (en) 2019-02-20 2020-08-27 Amgen Inc. Methods of determining protein stability
EP3935396A1 (en) 2019-03-04 2022-01-12 Amgen Inc. In vivo reversibility of high molecular weight species
CN109897105B (zh) * 2019-03-22 2022-05-20 天承南运(天津)科技有限公司 Ev71病毒的单克隆抗体、其制备方法及其检测试纸条
CA3133459A1 (en) 2019-03-27 2020-10-01 Amgen Inc. Methods of fingerprinting therapeutic proteins via a two-dimensional (2d) nuclear magnetic resonance technique at natural abundance for formulated biopharmaceutical products
EP3958934A1 (en) 2019-04-24 2022-03-02 Amgen Inc. Syringe sterilization verification assemblies and methods
CA3138941A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Amgen Inc. Methods of identifying attributes of therapeutic proteins
AU2020331282A1 (en) 2019-08-12 2022-03-31 Amgen Inc. Anti-sclerostin antibody formulations
WO2021041067A2 (en) 2019-08-23 2021-03-04 Amgen Inc. Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods
CN110499287B (zh) * 2019-08-30 2021-07-23 博雅干细胞科技有限公司 简易制备胎盘间充质干细胞外泌体的方法
KR20220069982A (ko) 2019-09-26 2022-05-27 암젠 인크 항체 조성물의 생산 방법
CN115942954A (zh) * 2020-04-30 2023-04-07 得克萨斯大学体系董事会 抗-CD79b抗体和嵌合抗原受体及其使用方法
CN111537737B (zh) * 2020-05-18 2023-05-12 巴迪泰（广西）生物科技有限公司 降钙素原与c-反应蛋白联合检测试剂盒
US20230273126A1 (en) 2020-06-04 2023-08-31 Amgen Inc. Assessment of cleaning procedures of a biotherapeutic manufacturing process
JP2023543167A (ja) 2020-09-18 2023-10-13 アムジエン・インコーポレーテツド ペプチドマッピング分析のための試料を処理する方法
CA3197930A1 (en) 2020-10-15 2022-04-21 Amgen Inc. Relative unpaired glycans in antibody production methods
AU2021376246A1 (en) 2020-11-05 2023-06-08 Amgen Inc. Materials and methods for protein processing
KR102255372B1 (ko) 2020-11-24 2021-05-25 (주)발맥스기술 간편 제작 설치 가능 bog 열교환장치
MX2023013640A (es) 2021-05-21 2023-11-30 Amgen Inc Metodo de optimizacion de una receta de llenado para un contenedor de medicamento.
CA3222409A1 (en) 2021-06-07 2022-12-15 Amgen Inc. Using fucosidase to control afucosylation level of glycosylated proteins
WO2023059607A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Amgen Inc. Fc-gamma receptor ii binding and glycan content
CA3237662A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 Amgen Inc. Production of therapeutic proteins
CN118139882A (zh) * 2022-03-24 2024-06-04 安济盛生物医药有限公司 骨骼肌肉系统疾病的治疗
WO2023215725A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Fred Hutchinson Cancer Center Compositions and methods for cellular immunotherapy
WO2024220916A1 (en) 2023-04-20 2024-10-24 Amgen Inc. Methods of determining relative unpaired glycan content
WO2024259275A1 (en) 2023-06-14 2024-12-19 Bristol-Myers Squibb Company Near real time sialic acid quantitation of glycoproteins
WO2025019728A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Amgen Inc. Methods of buffer preparation for a therapeutic protein formulation

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040009535A1 (en) * 1998-11-27 2004-01-15 Celltech R&D, Inc. Compositions and methods for increasing bone mineralization

Family Cites Families (119)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US32011A (en) 1861-04-09 Coffee-pot
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4331647A (en) * 1980-03-03 1982-05-25 Goldenberg Milton David Tumor localization and therapy with labeled antibody fragments specific to tumor-associated markers
US4376110A (en) * 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4411993A (en) * 1981-04-29 1983-10-25 Steven Gillis Hybridoma antibody which inhibits interleukin 2 activity
US4427115A (en) * 1981-10-19 1984-01-24 Laipply Thomas C One piece alcohol preparation device
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
USRE32011E (en) * 1981-12-14 1985-10-22 Scripps Clinic And Research Foundation Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies
JPS58117537A (ja) 1982-01-06 1983-07-13 Toray Ind Inc 感光性樹脂組成物
JPS5955608A (ja) * 1982-09-24 1984-03-30 Hitachi Ltd 増幅器
US4543439A (en) * 1982-12-13 1985-09-24 Massachusetts Institute Of Technology Production and use of monoclonal antibodies to phosphotyrosine-containing proteins
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US6054561A (en) * 1984-02-08 2000-04-25 Chiron Corporation Antigen-binding sites of antibody molecules specific for cancer antigens
DE3417525C1 (de) * 1984-05-11 1986-01-09 Matter + Siegmann Ag, Wohlen Vorrichtung zur quantitativen und qualitativen Erfassung von kohlenwasserstoffhaltigen Schwebeteilchen in Gasen
US4902614A (en) * 1984-12-03 1990-02-20 Teijin Limited Monoclonal antibody to human protein C
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US5223409A (en) * 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5571714A (en) 1988-12-22 1996-11-05 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Monoclonal antibodies which bind both transforming growth factors β1 and β2 and methods of use
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5549910A (en) * 1989-03-31 1996-08-27 The Regents Of The University Of California Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5177197A (en) 1990-02-27 1993-01-05 Ludwig Institute For Cancer Research Isolated nucleotide sequence expressing human transforming growth factor-β1-binding protein
US5466468A (en) * 1990-04-03 1995-11-14 Ciba-Geigy Corporation Parenterally administrable liposome formulation comprising synthetic lipids
GB9015198D0 (en) * 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
JP3218637B2 (ja) * 1990-07-26 2001-10-15 大正製薬株式会社 安定なリポソーム水懸濁液
WO1992002551A1 (en) * 1990-08-02 1992-02-20 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
JP2958076B2 (ja) * 1990-08-27 1999-10-06 株式会社ビタミン研究所 遺伝子導入用多重膜リポソーム及び遺伝子捕捉多重膜リポソーム製剤並びにその製法
US5877397A (en) * 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5698426A (en) * 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
JPH04141095A (ja) 1990-10-02 1992-05-14 Chemo Sero Therapeut Res Inst 組換え抗ｈｉｖ改変抗体および改変抗体の調製方法
US5070108A (en) * 1990-10-12 1991-12-03 Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of treating osteoporosis, increasing bone mineral content and preventing the occurrence of compression fractures in a mammal
WO1992006693A1 (en) 1990-10-22 1992-04-30 Fox Chase Cancer Center Dna construct for providing rna therapy
US5399363A (en) * 1991-01-25 1995-03-21 Eastman Kodak Company Surface modified anticancer nanoparticles
US5145684A (en) * 1991-01-25 1992-09-08 Sterling Drug Inc. Surface modified drug nanoparticles
DK0628639T3 (da) * 1991-04-25 2000-01-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Rekonstitueret humant antistof mod human interleukin-6-receptor
CA2164505A1 (en) * 1993-06-07 1994-12-22 Phillip W. Berman Hiv envelope polypeptides
US5543158A (en) * 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
US5453492A (en) * 1993-07-28 1995-09-26 La Jolla Cancer Research Foundation 60 kDa transforming growth factor-β-binding protein and its use to detect or purify TGF-β
US5837458A (en) * 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US5605793A (en) * 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US5863738A (en) 1994-04-29 1999-01-26 Creative Biomolecules, Inc. Methods of antagonizing OP-1 binding to a cell surface receptor utilizing ALK polypeptides
DE4427221A1 (de) 1994-08-01 1996-02-08 Gsf Forschungszentrum Umwelt Retrovirus-induzierte Osteoklasten-Modulation für die Osteoporose-Therapie
US5846770A (en) 1994-11-22 1998-12-08 Genetics Institute, Inc. DNA molecules encoding human chordin
US6057421A (en) * 1994-11-30 2000-05-02 Immpheron, Inc. Variable heavy and light chain regions of murine monoclonal antibody 1F7
US5795587A (en) * 1995-01-23 1998-08-18 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
IE80468B1 (en) * 1995-04-04 1998-07-29 Elan Corp Plc Controlled release biodegradable nanoparticles containing insulin
CA2220912A1 (en) * 1995-06-05 1996-12-12 Gregg A. Hastings Human ccn-like growth factor
US5738868A (en) * 1995-07-18 1998-04-14 Lipogenics Ltd. Liposome compositions and kits therefor
DK0912738T3 (da) * 1996-05-22 2008-11-17 Viventia Biotech Inc Antigen-bindende-fragmenter der specifikt detekterer cancerceller, nukleotider der koder fragmenterne og anvendelse deraf til profylakse og detektion af cancere
US6133426A (en) * 1997-02-21 2000-10-17 Genentech, Inc. Humanized anti-IL-8 monoclonal antibodies
US5989909A (en) 1997-09-26 1999-11-23 Millennium Biotherapeutics, Inc. Huchordin and uses thereof
US6117911A (en) * 1997-04-11 2000-09-12 Neorx Corporation Compounds and therapies for the prevention of vascular and non-vascular pathologies
ATE386802T1 (de) * 1997-06-12 2008-03-15 Novartis Int Pharm Ltd Künstliche antikörperpolypeptide
US6075007A (en) 1997-07-17 2000-06-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Modified noggin polypeptide and compositions
EP1000152A2 (en) 1997-08-01 2000-05-17 Genset 5' ESTs FOR SECRETED PROTEINS EXPRESSED IN MUSCLE AND OTHER MESODERMAL TISSUES
US6815201B2 (en) * 1997-09-08 2004-11-09 The Public Health Research Institute Of The City Of New York, Inc. HIV-1 gp120 V1/V2 domain epitopes capable of generating neutralizing antibodies
GB9818881D0 (en) 1998-08-28 1998-10-21 Glaxo Group Ltd Compounds
US6544485B1 (en) * 2001-01-29 2003-04-08 Sharper Image Corporation Electro-kinetic device with enhanced anti-microorganism capability
EP2261335B1 (en) 1998-11-27 2017-06-14 UCB Pharma S.A. Compositions and methods for increasing bone mineralisation
CN1345334A (zh) 1999-01-29 2002-04-17 伊姆克罗尼系统公司 对kdr特异的抗体及其应用
US20090087878A9 (en) * 1999-05-06 2009-04-02 La Rosa Thomas J Nucleic acid molecules associated with plants
ATE440109T1 (de) 1999-06-09 2009-09-15 Genentech Inc Methoden zur diagnose von tumoren
JP4141095B2 (ja) 1999-10-29 2008-08-27 三洋電機株式会社 半導体装置とその製造方法
AU4196801A (en) 2000-03-02 2001-09-12 Amgen Inc Chordin-like-2 molecules and uses thereof
JP2003534813A (ja) * 2000-06-01 2003-11-25 アムジェン インコーポレーテッド シスチンノットポリペプチド：ｃｌｏａｋｅｄ−２分子およびその使用
WO2001098491A2 (en) 2000-06-19 2001-12-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Osteolevin gene polymorphisms
CA2421056A1 (en) 2000-09-01 2002-03-28 Genentech, Inc. A polypeptide for use as a diagnostic marker for the presence of colon tumours
IL155002A0 (en) 2000-10-12 2003-10-31 Genentech Inc Reduced-viscosity concentrated protein formulations
US20030133939A1 (en) * 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
CA2374027A1 (en) * 2001-03-13 2002-09-13 The Minister Of National Defence Cloning, expression, sequencing, and functional enhancement of monoclonal scfv antibody against venezuelan equine encephalitis virus(vee)
DE10145772A1 (de) 2001-09-17 2003-04-10 Bayer Cropscience Ag DELTA·1·-Pyrroline
JP2005512962A (ja) * 2001-09-20 2005-05-12 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 抗ｐｄｇｆ抗体および設計抗体の産生方法
AUPR837201A0 (en) 2001-10-19 2001-11-15 BUKILIC, Aleksandar Method and apparatus for cleaning and disinfecting a toothbrush
CA2469025A1 (en) 2001-12-06 2003-06-19 Biocontrol Systems, Inc. Sample collection and testing system
US20030186915A1 (en) * 2002-02-11 2003-10-02 Yang Pan Regulatory polynucleotides and uses thereof
WO2003073991A2 (en) * 2002-03-01 2003-09-12 Celltech R & D, Inc. Methods to increase or decrease bone density
US7799523B2 (en) 2002-04-03 2010-09-21 Celltech R & D, Inc. Association of polymorphisms in the SOST gene region with bone mineral density
FR2838379B1 (fr) 2002-04-12 2005-06-24 Valeo Climatisation Dispositif de purification de l'air de l'habitacle d'un vehicule automobile
WO2003106657A2 (en) 2002-06-14 2003-12-24 Stowers Institute For Medical Research Wise/sost nucleic acid sequences and amino acid sequences
US7893218B2 (en) 2003-06-16 2011-02-22 Stowers Institute For Medical Research Antibodies that specifically bind SOST peptides
CA2504493C (en) 2002-11-01 2015-12-29 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Method of preventing infections from bioterrorism agents with immunostimulatory cpg oligonucleotides
DE10255152A1 (de) 2002-11-26 2004-06-03 Von Langen Ursula Lang Schadstoffsauger
US7642238B2 (en) * 2002-12-05 2010-01-05 Shaughnessy John D Molecular determinants of myeloma bone disease and uses thereof
US20040141875A1 (en) * 2003-01-15 2004-07-22 Rajiv Doshi System and method for treating microorganisms within motor vehicle heating, ventilation, and air conditioning units
EP1608399B1 (en) 2003-03-14 2012-01-11 Ucb Manufacturing, Inc. Complex of sclerostin and noggin or chordin, and agents that modulate the formation of said complex
US20050158303A1 (en) 2003-04-04 2005-07-21 Genentech, Inc. Methods of treating IgE-mediated disorders comprising the administration of high concentration anti-IgE antibody formulations
CU23403A1 (es) * 2003-04-23 2009-08-04 Centro Inmunologia Molecular Anticuerpos recombinantes y fragmentos que reconocen el gangliósido n-glicolil gm3 y su uso para diagnóstico y tratamiento de tumores
AU2004262640B2 (en) 2003-06-16 2010-12-23 Ucb Manufacturing, Inc. Antibodies specific for sclerostin and methods for increasing bone mineralization
WO2005018912A1 (de) * 2003-07-21 2005-03-03 Alpla-Werke Alwin Lehner Gmbh & Co. Kg Verfahren zur herstellung eines preformlings für kunststoffflaschen
US8461155B2 (en) 2003-09-22 2013-06-11 University Of Connecticut Sclerostin and the inhibition of WNT signaling and bone formation
US20050267233A1 (en) 2004-05-25 2005-12-01 Joshi Ashok V Anti-microbial handle system
AU2005267722B2 (en) 2004-08-04 2009-10-08 Amgen Inc. Antibodies to Dkk-1
US8003108B2 (en) 2005-05-03 2011-08-23 Amgen Inc. Sclerostin epitopes
US7592429B2 (en) 2005-05-03 2009-09-22 Ucb Sa Sclerostin-binding antibody
EP1981910B1 (en) 2006-01-13 2013-06-26 A Chan Holding B.V. Method for identifying inhibitor of the glypican-sclerostin interaction
EP2094731A2 (en) 2006-11-10 2009-09-02 UCB Pharma S.A. Anti human sclerostin antibodies
EP2097450A2 (en) 2006-11-10 2009-09-09 Amgen Inc. Antibody-based diagnostics and therapeutics
FI3345607T3 (fi) 2006-12-29 2022-11-30 Menetelmiä luun kasvun muuttamiseksi antamalla SOST- tai WISE-antagonistia tai antagonistia
WO2008092894A1 (en) 2007-02-02 2008-08-07 Novartis Ag Modulators of sclerostin binding partners for treating bone-related disorders
MY149129A (en) 2007-03-20 2013-07-15 Lilly Co Eli Anti-sclerostin antibodies
CL2008002775A1 (es) 2007-09-17 2008-11-07 Amgen Inc Uso de un agente de unión a esclerostina para inhibir la resorción ósea.
TWI489993B (zh) 2007-10-12 2015-07-01 Novartis Ag 骨硬化素（ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ）抗體組合物及使用方法
MX2010004761A (es) 2007-11-02 2010-05-19 Novartis Ag Moleculas y metodos para modular la proteina relacionada con el receptor de lipoproteina de baja densidad 6 (lrp6).
EA201070740A1 (ru) 2007-12-14 2010-12-30 Эмджен Инк. Способ лечения перелома кости антителами против склеростина
SG191639A1 (en) 2008-06-03 2013-07-31 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2010100179A2 (en) 2009-03-05 2010-09-10 Novartis Ag Self-forming gel system for sustained drug delivery
AR075715A1 (es) 2009-03-05 2011-04-20 Novartis Ag Formulacion de anticuerpo liofilizado
WO2010115932A1 (en) 2009-04-08 2010-10-14 Novartis Ag Combination for the treatment of bone loss
WO2010130830A2 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against sclerostin and polypeptides comprising the same for the treatment of bone diseases and disorders
SMT202000095T1 (it) * 2010-05-14 2020-03-13 Amgen Inc Formulazioni di anticorpi anti-sclerostina ad alta concentrazione
WO2012028683A1 (en) 2010-09-02 2012-03-08 Novartis Ag Antibody gel system for sustained drug delivery
TWI636993B (zh) * 2010-10-27 2018-10-01 安美基公司 Ｄｋｋ１抗體及使用方法
AU2012223358A1 (en) * 2011-03-01 2013-09-05 Amgen Inc. Sclerostin and DKK-1 bispecific binding agents
US9145457B2 (en) * 2011-03-25 2015-09-29 Amgen Inc. Sclerostin antibody crystals and formulations thereof
AU2012290083B2 (en) * 2011-08-04 2017-07-20 Amgen Inc. Method for treating bone gap defects
AU2012362898B2 (en) * 2011-12-28 2017-11-09 Amgen, Inc. Method of treating alveolar bone loss through the use of anti-sclerostin antibodies
UY35148A (es) * 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
WO2019191534A1 (en) * 2018-03-30 2019-10-03 Amgen Inc. C-terminal antibody variants

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040009535A1 (en) * 1998-11-27 2004-01-15 Celltech R&D, Inc. Compositions and methods for increasing bone mineralization

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAVEY D.A. "Osteoporosis in clinical practice-bone densitometry and facture risk" S Afr Med J., 1998 Nov; 88(11): p.1419-1423, (реферат), [он-лайн]. Найдено из PubMed, PMID:9861948 *

Also Published As

Publication number Publication date
GEP20125594B (en) 2012-08-10
PL3670528T3 (pl) 2022-01-31
TW201323438A (zh) 2013-06-16
PL2325199T3 (pl) 2015-08-31
EP2264063A1 (en) 2010-12-22
MX2007013759A (es) 2008-04-29
EP2336163A1 (en) 2011-06-22
NO346914B1 (no) 2023-02-27
CN103435698A (zh) 2013-12-11
TWI712613B (zh) 2020-12-11
GT200600186A (es) 2007-02-09
MY163480A (en) 2017-09-15
BRPI0610197A2 (pt) 2010-06-01
CN103435698B (zh) 2018-08-31
PH12015501848A1 (en) 2020-07-06
CN107446043A (zh) 2017-12-08
ME02247B (me) 2015-10-30
NO345294B1 (no) 2020-11-30
EP1891101B8 (en) 2013-06-26
WO2006119107A2 (en) 2006-11-09
KR20140037293A (ko) 2014-03-26
BRPI0610197B1 (pt) 2021-05-11
TW202108605A (zh) 2021-03-01
NO348331B1 (no) 2024-11-25
EP2264063B1 (en) 2018-06-27
DK1891101T3 (da) 2013-08-26
US20130203965A1 (en) 2013-08-08
NO20230084A1 (no) 2008-01-30
NL301034I2 (nl) 2020-05-13
LT3670528T (lt) 2021-12-27
HUE025530T2 (en) 2016-04-28
SG10201403400UA (en) 2014-10-30
SI1891101T1 (sl) 2013-10-30
HUE057097T2 (hu) 2022-04-28
WO2006119107A3 (en) 2006-12-28
CA2607197A1 (en) 2006-11-09
CA2947080A1 (en) 2006-11-09
HRP20211904T1 (hr) 2022-03-04
EA200702402A1 (ru) 2008-04-28
JP5391360B2 (ja) 2014-01-15
JP5409952B2 (ja) 2014-02-05
MX2018005512A (es) 2021-11-16
KR20080011420A (ko) 2008-02-04
US20070110747A1 (en) 2007-05-17
IL224967B (en) 2019-03-31
CN103819558A (zh) 2014-05-28
CY2020009I1 (el) 2020-11-25
ES2902548T3 (es) 2022-03-28
JP5789652B2 (ja) 2015-10-07
PE20070317A1 (es) 2007-04-27
EP2325199A1 (en) 2011-05-25
BR122020023315B1 (pt) 2021-06-08
AU2006242431B2 (en) 2012-11-08
HRP20150597T1 (hr) 2015-09-11
US10562964B2 (en) 2020-02-18
US8383801B2 (en) 2013-02-26
IL224968B (en) 2018-03-29
PL1891101T3 (pl) 2013-11-29
JP2013249303A (ja) 2013-12-12
RS54049B1 (en) 2015-10-30
GEP20166454B (en) 2016-04-11
KR101653122B1 (ko) 2016-08-31
IL187106A0 (en) 2008-02-09
LTPA2020506I1 (lt) 2020-04-27
AU2006242476B2 (en) 2012-05-31
CY1116525T1 (el) 2017-03-15
LUC00151I1 (ru) 2020-03-16
US7592429B2 (en) 2009-09-22
UA123695C2 (uk) 2021-05-19
ES2537278T3 (es) 2015-06-05
TNSN07406A1 (en) 2009-03-17
BRPI0610197B8 (pt) 2021-05-25
TWI778444B (zh) 2022-09-21
SI3670528T1 (sl) 2022-01-31
NO2021014I1 (no) 2021-03-24
AU2006242476A1 (en) 2006-11-09
NZ591636A (en) 2012-10-26
ES2689143T3 (es) 2018-11-08
JP2014061000A (ja) 2014-04-10
UY38207A (es) 2020-11-30
ES2412857T3 (es) 2013-07-12
CN103819558B (zh) 2016-08-24
SI2325199T1 (sl) 2015-07-31
TW201741332A (zh) 2017-12-01
AR053266A1 (es) 2007-04-25
NO20201120A1 (no) 2008-01-30
US11939372B2 (en) 2024-03-26
EP2325199B1 (en) 2015-03-04
CY2020009I2 (el) 2020-11-25
HRP20130803T1 (hr) 2013-11-08
NZ563539A (en) 2011-04-29
RS52919B (en) 2014-02-28
KR101624809B1 (ko) 2016-05-26
EP3670528B1 (en) 2021-09-08
EP3670528A1 (en) 2020-06-24
CN101287756A (zh) 2008-10-15
US20160168241A1 (en) 2016-06-16
CA2607197C (en) 2016-12-13
US9296812B2 (en) 2016-03-29
EP3985015A1 (en) 2022-04-20
US8637643B2 (en) 2014-01-28
HK1108705A1 (en) 2008-05-16
ZA200709480B (en) 2010-07-28
AU2006242431A1 (en) 2006-11-09
KR101450888B1 (ko) 2014-10-16
RS62685B1 (sr) 2021-12-31
TWI494320B (zh) 2015-08-01
UY29514A1 (es) 2006-11-30
US7872106B2 (en) 2011-01-18
CN101287756B (zh) 2014-06-25
ME02085B (me) 2014-02-28
DK2325199T3 (da) 2015-05-26
TW202323271A (zh) 2023-06-16
JP5462484B2 (ja) 2014-04-02
US20110097342A1 (en) 2011-04-28
JP2008539726A (ja) 2008-11-20
PT3670528T (pt) 2021-12-09
MX358705B (es) 2018-08-31
CY1124802T1 (el) 2022-11-25
LUC00151I2 (ru) 2021-02-15
NO20076046L (no) 2008-01-30
DK3670528T3 (da) 2021-12-06
LTC1891101I2 (lt) 2020-09-25
JP2014012001A (ja) 2014-01-23
PT2325199E (pt) 2015-07-10
EP1891101A2 (en) 2008-02-27
EA021539B1 (ru) 2015-07-30
HK1151803A1 (en) 2012-02-10
US20090304713A1 (en) 2009-12-10
KR20150117302A (ko) 2015-10-19
EP1891101B1 (en) 2013-05-22
US20130121997A1 (en) 2013-05-16
US20240270835A1 (en) 2024-08-15
EA201400933A1 (ru) 2015-04-30
CY1114350T1 (el) 2016-08-31
TW200716667A (en) 2007-05-01
IL187106A (en) 2015-10-29
HUS2000007I1 (hu) 2020-03-30
PT1891101E (pt) 2013-08-23
CR9524A (es) 2008-05-21
EP2325200A1 (en) 2011-05-25
KR20130126752A (ko) 2013-11-20
MA29528B1 (fr) 2008-06-02
WO2006119107A9 (en) 2007-09-20
HK1198444A1 (en) 2015-04-24
US20200048338A1 (en) 2020-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240270835A1 (en) Binding agents
DK2251351T3 (en) Sclerostin epitober
AU2012238247B2 (en) Sclerostin binding agents
AU2013205486A1 (en) Sclerostin binding agents
MX2007013756A (en) Sclerostin epitopes
AU2012216589A1 (en) Sclerostin epitopes