EA025304B1 - ИМИДАЗО[1,2-b][1,2,4]ТРИАЗИНЫ В КАЧЕСТВЕ c-Met ИНГИБИТОРОВ - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к имидазо[1,2-b][1,2,4]триазинам, которые представляют собой 2-фтор-N-[(2R)-2-гидроксипропил]-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-b][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид или 2-хлор-N-[(1S)-1-(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3-ил)этил]-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-b][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид; или фармацевтически приемлемым солям любого из приведенных выше соединений, которые являются ингибиторами c-Met и являются пригодными для лечения заболеваний, связанных с c-Met, включая рак.

Description

Настоящее изобретение относится к имидазо [1,2-Ъ][1,2,4]триазинам, которые являются ингибиторами с-Ме! и являются пригодными для лечения заболеваний, связанных с с-Ме!, включая рак.

Уровень техники

Протеинкиназы (РК) представляют собой группу белков, которые регулируют, среди прочих, различные важные биологические процессы, включая рост клеток, выживаемость и дифференциацию, образование органов и морфогенез, неоваскуляризацию, восстановление и регенерацию тканей. Протеинкиназы проявляют свои физиологические функции посредством катализирования фосфорилирования белков (или субстратов) и благодаря этому регулируют клеточную активность субстратов в различном биологическом окружении. В добавление к функциям в нормальных тканях/органах, многие протеинкиназы также играют более специализированную роль в большом количестве человеческих заболеваний, включая рак. Подгруппа протеинкиназ (также называемых онкогенными протеинкиназами), при нарушении регулирования, может вызывать образование и рост опухоли, и дополнительно способствовать сохранению и развитию опухоли (ВкнпеЧепзеп Р е! а1., №1иге 2001, 411 (6835): 355-365). На сегодняшний день, онкогенные протеинкиназы представляют собой одну из самых больших и самую притягательную группу белковых мишеней для воздействия на рак и разработки лекарственных средств.

с-Ме!, протоонкоген, представляет собой член отдельного подсемейства гетеродимерных рецепторных тирозинкиназ, которое включает Ме!, Коп и 8еа (В1тсЬте1ег, С. е! а1., ΝαΙ. Кеу. Мо1. Се11 Βίο1. 2003, 4(12): 915-925; СЬт1з!епзеп, 1. С. е! а1., Сапсег Ье!!. 2005, 225(1): 1-26). Лигандом с высоким сродством к сМе! является только фактор роста гепатоцитов (НСР), также известный как рассеивающий фактор (8Р). Связывание НСР с с-Ме! вызывает активацию рецептора за счет аутофосфорилирования, приводящего в результате к усилению зависящего от рецептора сигнала. Как с-Ме!, так и НСР широко экспрессируются в ряде органов, но их экспрессия обычно ограничивается клетками эпителиального и мезенхимального происхождения, соответственно. Биологические функции с-Ме! (или с-Ме! сигнальный путь) в нормальных тканях и человеческих злокачественных опухолях, таких как рак, являются хорошо задокументированными (СЬт1з!епзеп, ТС. е! а1., Сапсег Ье!!. 2005, 225(1): 1-26; Согзо, 8. е! а1., Тгепбз ίη Мо1. Меб. 2005, 11 (6): 284-292).

Каждый из НСР и с-Ме! требуется для нормального развития млекопитающего, и нарушения, сообщенные для мышей с отсутствием как НСР-, так и с-Ме!, согласуются с вероятностью дефектов эмбриональной экспрессии и эпителиально-мезенхимального перехода в процессе морфогенеза органа (СЬт1з!епзеп, ТС. е! а1., Сапсег Ьей. 2005, 225(1): 1-26). В соответствии с данными результатами, показано, что передача сигнала и последующие биологические эффекты НСР/с-Ме! пути являются важными для эпителиально-мезенхимального взаимодействия и регуляции клеточной миграции, инвазии, клеточной пролиферации и выживаемости, ангиогенеза, морфогенеза и организации трехмерных трубчатых структур (например, почечных тубулярных клеток, образования желез) в процессе развития. Специфическая последовательность активации с-Ме! пути в указанной клетке/ткани сильно обусловлена окружением.

Нарушение регуляции с-Ме! пути играет важную и иногда причинную (в случае генетических изменений) роль при образовании, росте, сохранении и развитии опухоли (В1тсЬте1ег, С. е! а1., ΝηΙ. Кеу. Мо1. Се11. Вю1. 2003, 4 (12): 915-925; Воссассю, С. е! а1., ΝηΙ. Кеу. Сапсег 2006, 6(8): 637-645; СЬпз!епзеп, ТС. е! а1., Сапсег Ье!!. 2005, 225(1): 1-26). НСР и/или с-Ме! избыточно экспрессируются в значительных количествах при большинстве видов рака человека, и часто связаны с неблагоприятными клиническими исходами, такими как более резкие заболевания, развитие заболевания, метастазы опухоли и пониженная выживаемость пациентов. Дополнительно, пациенты с высокими концентрациями НСР/с-Ме! белков более устойчивы к химиотерапии и радиотерапии. В добавление к нарушенной НСР/с-Ме! экспрессии, с-Ме! рецептор может также активироваться у раковых пациентов посредством генных мутаций (и зародышевых и соматических) и генной амплификации. Хотя генная амплификация и мутации являются самыми распространенными генными изменениями, которые сообщаются у пациентов, рецептор может также активироваться делециями, отсечениями, перегруппировкой генов, а также нарушенным процессингом рецептора и дефектными отрицательными регуляторными механизмами.

Различные виды рака, в которые вовлечен с-Ме!, включают, но не ограничиваются ими: карциномы (например, мочевого пузыря, молочной железы, шейки матки, холангиокарциному, толстой кишки, пищевода, желудка, головы и шеи, почек, печени, легких, носоглотки, яичников, поджелудочной железы, предстательной железы, щитовидной железы), саркомы опорно-двигательного аппарата (например, остеосаркома, синовиальная саркома, рабдомиосаркома); саркомы мягких тканей (например, МРН/фибросаркома, лейомиосаркома, саркома Капоши), гематопоэтические злокачественные опухоли (например, множественная миелома, лимфомы, Т-клеточная лейкемия у взрослых, острый миелобласт- 1 025304 ный лейкоз, хронический миелолейкоз) и другие новообразования (например, глиобластомы, астроцитомы, меланомы, мезотелиомы и опухоль Вильма (\у\у\у.уатогд/те1/; СНпМсшсп. ТС. е! а1., Сапсег Ьей. 2005, 225(1): 1-26).

Точка зрения, что активированный с-Ме! путь способствует образованию и развитию опухоли и может представлять собой хорошую мишень для эффективной борьбы с раком дополнительно подкреплялась большим количеством доклинических исследований (В1тсЬте1ет, С. е! а1., №й. Кеу. Мо1. Се11 Βίο1. 2003, 4(12): 915-925; СЬг1к!епкеп, ТО. е! а1., Сапсег Ьей. 2005, 225(1): 1-26; Согко, 8. е! а1., Тгепйк ίη Мо1. Мей. 2005, 11(6): 284-292). Например, исследования показали, что все из !рг-те! гибридного гена, чрезмерной экспрессии с-те! и активированных с-те! мутаций вызывали онкогенные превращения различных модельных клеточных линий и приводили в результате к образованию опухоли и метастазам у мышей. Более важно, значительные противоопухолевые (иногда регрессия опухоли) и анти-метастазные активности демонстрировались ίη уйто и ίη У1уо с агентами, которые специфически повреждают и/или блокируют НОР/с-Ме! путь. Данные агенты включают анти-НОР и анти-с-Ме! антитела, НОР пептидные антагонисты, йесоу с-Ме! рецептор, с-Ме! пептидные антагонисты, доминантные негативные с-Ме! мутации, с-Ме! специфические антисенс-олигонуклеотиды и рибозимы и селективные низкомолекулярные с-Ме! киназные ингибиторы (СЬг1к!епкеп, ТО. е! а1., Сапсег Ьей. 2005, 225 (1): 1-26).

В добавление к установленной роли при раке, нарушенная НОР/с-Ме! передача сигнала также вовлечена в атеросклероз, фиброз легких, фиброз и регенерацию почек, заболевания печени, аллергические заболевания, воспалительные и аутоиммунные заболевания, цереброваскулярные заболевания, сердечнососудистые заболевания, заболевания, связанные с трансплантации органов (Ма, Н. е! а1., А1йетокс1егок1к. 2002, 164 (1): 79-87; Стек!аш, В. е! а1., ЬаЬ. 1пуек!. 2002, 82(8): 1015-1022; 8едига-Р1отек, А.А. е! а1., Кеу. Оак!гоеп!его1. Мех. 2004, 69(4)243-250; МопкЬйа, К. е! а1., Сигг. Оепе Тйет. 2004, 4(2)199-206; МопкЬйа, К. е! а1., Епйосг. 1. 2002, 49(3)273-284; Ьш, Υ., Сигг. Орш. №рЬто1. Нурейепк. 2002, 11 (1): 23-30; Ма!кито!о, К. е! а1., Елйпеу 1п!. 2001, 59 (6): 2023-2038; Ва1коуей, Ό.Ρ. е! а1., 1п!. Кеу. Су!о1. 1999, 186: 225-250; М1уа/а\у;г Т. е! а1., 1. СегеЬ. В1оой Р1о\у Ме!аЬ. 1998, 18(4)345-348; КосЬ, А.Е. е! а1., АйЬпйк Кйеит. 1996, 39(9): 1566-1575; Ри1ата!ки, Н. е! а1., Сис. Кек. 2005, 96(8)823-830; ЕдисЫ, 8. е! а1., СЬп. Тгапкр1ап!. 1999, 13(6)536-544).

Новые или улучшенные формы существующих агентов, которые; ингибируют киназы, такие как с-Ме!, являются постоянно необходимыми для разработки более эффективных фармацевтических средств для лечения рака и других заболеваний. Соединения и соли, описанные в настоящем изобретении, направлены на удовлетворение данных потребностей и других целей.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится, в частности, к следующим соединениям, которые являются с-Ме! ингибиторами:

2-фтор^-[(2К)-2-гидроксипропил]-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо [1,2-Ь][1,2,4]триазин-2ил]бензамкду (формула I); и

2-хлор-^[(18)-1 -(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3 -ил)этил]-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо [1,2Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензамиду (формула III).

Настоящее изобретение дополнительно относится к фармацевтически приемлемой соли любого одного из приведенных выше соединений.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу ингибирования активности с-Ме! киназы, включающему приведение в контакт киназы с соединением или солью настоящего изобретения.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу ингибирования НОР/с-Ме! киназного сигнального пути в клетке, включающему приведение в контакт клетки с соединением или солью настоящего изобретения.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу ингибирования пролиферативной активности клетки, включающему приведение в контакт клетки с соединением, или солью настоящего изобретения.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу ингибирования роста опухоли у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения или соли настоящего изобретения.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу ингибирования метастазов опухоли у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения или соли настоящего изобретения.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу лечения заболевания у пациента, в котором заболевание связано с нарушенной регуляцией НОР/с-МЕТ сигнального пути, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения или соли настоящего изобретения.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу лечения рака у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения или соли настоящего изобретения.

Настоящее изобретение относится к. соединению настоящего изобретения для применения в терапии.

- 2 025304

Настоящее изобретение относится к применению соединения настоящего изобретения для получения лекарственного препарата для применения в терапии. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению любого из соединений формулы I или III для получения лекарственного препарата для применения в лечении рака.

Подробное описание

Настоящее изобретение, в частности, относится к следующим соединениям, которые являются с-Ме! ингибиторами:

2-фтор-Ы-[(2К)-2-гидроксипропил]-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2ил] бензамиду (формула I); и

2-хлор-Ы-[(1§)-1 -(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3 -ил)этил]-4-[7-(хинолин-б-илметил)имидазо [1,2Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензамиду (формула III).

Здесь и далее, когда существуют противоречия между названием соединения и структурой соединения, химическая: структура будет определяющей.

Настоящее изобретение дополнительно относится к фармацевтически приемлемым солям любого из указанных выше; соединений.

Соединения, описанные в настоящем описании, могут быть асимметрическими (например, содержащими один или более стереоцентров). Предполагаются все стереоизомеры, такие как энантиомеры и диастереомеры, если не указано иное. Соединения настоящего изобретения, которые содержат асимметрично замещенные атомы углерода, можно выделить в оптически активной или рацемической формах.

Соединения настоящего изобретения также включают таутомерные формы. Таутомерные формы являются результатом обмена простой связи с соседней двойной связью вместе с сопутствующей миграцией протона. Таутомерные формы включают прототропные таутомеры, которые являются изомерными протонированными состояниями, имеющими одинаковую эмпирическую формулу и суммарный заряд. Примеры прототропных таутомероз включают кетон-енольные пары, пары амид-имидокислота, пары лактам-лактим, пары амид-имидокислота, пары енамин-имин и кольцевые формы, когда протон может занимать два или более положений гетероциклической системы, например 1Н- и 3Н-имидазол, 1Н-, 2Ни 4Н-1,2,4-триазол, 1Н- и 2Н-изоиндол и 1Н-и 2Н-пиразол.

Таутомерные формы могут быть в равновесии или стерически замкнутыми в одной форме подходящим замещением.

Соединения настоящего изобретения также включают все изотопы атомов, встречающиеся в промежуточных соединениях или конечных соединениях. Изотопы включают такие атомы, которые имеют одинаковое атомное число, но различные массы. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий.

В некоторых вариантах осуществления соединения настоящего изобретения или их соли являются практически полностью выделенными. Под практически полностью выделенными подразумевается, что соединение или соль является, по меньшей мере, частично или по существу полностью отделенным от окружения, в котором оно образовалось или было обнаружено. Частичное отделение может включать, например, композицию, обогащенную соединением настоящего изобретения. Практически полностью отделенное может относиться к композициям, содержащим по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей

- 3 025304 мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% по массе соединения настоящего изобретения или его соли.

Настоящее изобретение также включает фармацевтически приемлемые соли соединений, описанных в настоящем изобретении. Как использовано в настоящем описании, термин фармацевтически приемлемые соли относится к производным описанных соединений, в которых исходное соединение модифицировано преобразованием имеющейся кислотной или основной группы в ее солевую форму. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются ими, соли неорганических и органических кислот основных остатков, таких как амины; соли щелочных металлов или органические соли кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты; и подобные. Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения включают общепринятые нетоксичные соли исходного соединения, образованные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения можно получить из исходного соединения, которое содержит основную или кислотную группу общепринятыми химическими способами. Как правило, данные соли можно получить взаимодействием формы свободной кислоты или основания данных соединений со стехиометрическим количеством подходящего основания или кислоты в воде или органическом растворителе, или в смеси обоих; обычно, неводная среда, подобно эфиру, этилацетату, этанолу, изопропанолу или ацетонитрилу, является предпочтительной. Перечень подходящих солей можно найти в РстшдЮп'к Рйагтасеийса1 Зсюпсск. 171Н ей., Маск РиЪйкЫпд Сотрапу, ЕаЧоп. Ра., 1985, р. 1418 и 1оигпа1 οί Рйаттасеийса1 Зшепсе, 66, 2 (1977), каждый из которых включен в настоящее описание во всей своей полноте посредством ссылки.

Фразу фармацевтически приемлемые применяют в настоящем описании для ссылки на такие соединения, материалы, композиции и/или лекарственные формы, которые по результатам, тщательной медицинской оценки являются подходящими для применения в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, соразмерно приемлемому соотношению риск/полезный эффект.

Способы применения.

Соединения настоящего изобретения могут действовать в качестве ингибиторов с-Ме1. Обработка клетки (ίη νίίτο или ίη νίνο), которая экспрессирует с-Ме1 соединением настоящего изобретения может приводить в результате к ингибированию лиганд/киназа сигнального пути и ингибированию последующих процессов, связанных с сигнальным путем, таких как клеточная пролиферация и повышенная клеточная подвижность. Например, соединения настоящего изобретения могут блокировать и/или нарушать биохимические и биологические процессы, являющиеся результатом активации с-Меί пути, включая, но, не ограничиваясь ими, с-Меί киназную активацию (например, с-Меί фосфорилирование) и передачу сигнала (активацию и пополнение клеточных субстратов, таких как ОаЪ1, ОтЪ2, Зйе и с-СЪ1, и последующую активацию ряда преобразователей сигнала, включая Р1-3 киназу, РЬС- γ, 8ТЛТ, Ε К1/2 и РАК), клеточную пролиферацию и выживаемость, клеточную подвижность, миграцию и инвазию, метастазы, ангиогенез и подобные. Таким образом, настоящее изобретение дополнительно относится к способам ингибирования лиганд/киназа сигнального пути, такого как ΗΟР/с-Меί киназный сигнальный путь, в клетке путем приведения в контакт клетки с соединением настоящего изобретения. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам ингибирования пролиферативной активности клетки или ингибированию подвижности клеток путем приведения в контакт клетки с соединением настоящего изобретения.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способам лечения заболеваний, связанных с нарушенной регуляцией с-Меί киназного сигнального пути, включая нарушенную активность и/или чрезмерную экспрессию с-Мер у индивида (например, пациента) введением нуждающемуся в данном лечении индивиду терапевтически эффективного количества или дозы соединения настоящего изобретения или его фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления разрегулированная киназа чрезмерно экспрессируется в поврежденной ткани пациента. В некоторых вариантах осуществления разрегулированная киназа является чрезмерно активной в поврежденной ткани пациента.

Предполагается, что нарушение регуляции с-Меί и ΗΟР/с-Меί сигнального пути включает активацию фермента посредством различных механизмов, включая, но, не ограничиваясь ими, НОР-зависимую аутокринную и паракринную активацию, чрезмерную с-теί генную экспрессию и амплификацию, точечные мутации, делеции, укорачивания, перегруппировку, а также нарушенный с-Ме~ рецепторный процессинг и нарушенные отрицательные регуляторные механизмы.

В некоторых вариантах осуществления соединения настоящего изобретения являются пригодными для лечения заболеваний, таких как рак, атеросклероз, фиброз легких, фиброз и регенерация почек, заболевание печени, аллергическое расстройство, воспалительное заболевание, аутоиммунное расстройство, цереброваскулярное заболевание, сердечно-сосудистое заболевание или состояние, связанное с трансплантацией органа. В дополнительных вариантах осуществления соединения настоящего изобретения могут быть пригодны в способах ингибирования роста и метастазов опухоли у пациента.

Примеры видов рака, которые можно лечить способами настоящего изобретения, включают рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак шейки матки, холангиокарциному, колоректальный рак, рак пищевода, рак желудка, рак головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легких, рак носоглотки, рак яични- 4 025304 ков, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеосаркому, синовиальную саркому, рабдомиосаркому, МРН/фибросаркому, лейомиосаркому, саркому Капоши, множественную миелому, лимфому, лейкемию Т-клеток у взрослых, острый миелобласткый лейкоз, хронический миелолейкоз, глиобластому, астроцитому, меланому, мезотелиому, опухоль. Вильма и подобные.

Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения рака у субъекта, включающему введение субъекту 2-фтор-Ы-[(2К)-2-гидроксипропил]-4-[7-(хинолин6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензамида или его фармацевтически приемлемой соли, так что рак подвергается лечению.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения рака у субъекта, включающему введение субъекту 2-хлор-Ы-[(1§)-1-(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3-ил)этил]-4-[7(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензамида или его фармацевтически приемлемой соли, так что рак подвергается лечению.

Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста опухоли у нуждающегося в лечении субъекта, включающему введение субъекту 2-фтор-Ы-[(2К.)-2-гидроксипропил]-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2ил]бензамида или его фармацевтически приемлемой соли.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста опухоли у нуждающегося в лечении субъекта, включающему введение субъекту 2-хлор-Ы-[(18)-1-(5метил-1,2,4-оксадиазол-3 -ил)этил]-4-[7-(хинолин-б-илметил)имидазо [1,2-Ь][1,2,4]триазин-2ил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли.

Как использовано в настоящем описании, предполагается, что термин клетка относится к клетке, которая является ίη νίίτο, ех νίνο или ίη νίνο. В некоторых вариантах осуществления ех νίνο клетка может быть частью образца ткани, отделенного из организма, такого как млекопитающее. В некоторых вариантах осуществления ίη νίίτο клетка может быть клеткой в клеточной культуре. В некоторых вариантах осуществления ίη νίνο клетка является клеткой, живущей в организме, таком как млекопитающее.

Как использовано в настоящем описании, термин приведение: в контакт относится к сближению указанных агентов ίη νίίτο системе или ίη νίνο системе. Например, приведение в контакт'' соединения настоящего изобретения с протеинкиназой включает введение соединения настоящего изобретения индивиду или пациенту, такому как человек, а также, например, введение соединения настоящего изобретения в образец, содержащий клеточный или очищенный препарат протеинкиназы.

Как использовано в настоящем описании, термин индивид или пациент, применяемые взаимозаменяемо, относится к любому животному, включая млекопитающих, предпочтительно мышей, крыс и других грызунов, кроликов, собак, кошек, свиней, крупный рогатый скот, овец, лошадей или приматов, и наиболее предпочтительно людей.

Как использовано в настоящем описании, фраза терапевтически эффективное количество относится к количеству активного соединения или фармацевтического агента, которое вызывает биологический или медицинский ответ, который получает исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист в ткани, системе, животном, индивиде или человеке, включающий одно или более из следующих: (1) предотвращение заболевания; например предотвращение заболевания, состояния или расстройства у индивида, который может быть предрасположен к данному заболеванию, состоянию или расстройству, но пока не страдает от или не проявляет патологию или симптоматику заболевания (2) ингибирование заболевания, например ингибирование заболевания, состояния или расстройства у индивида, который страдает или проявляет патологию или симптоматику заболевания, состояния или расстройства, и (3) улучшение заболевания, например улучшение заболевания, состояния или расстройства у индивида, который страдает или проявляет патологию или симптоматику заболевания, состояния или заболевания (т.е. обращение патологии и/или симптоматики), такое как снижение тяжести заболевания.

Термин подвергаемый лечению, лечение или обработка включает уменьшение или смягчение по меньшей мере одного симптома, связанного с активностью с-Меί киназы, НΟΡ/с-Меί киназного сигнального пути и/или пролиферативной активности клетки. Термин подвергаемый лечению, лечение или обработка, как используется со ссылкой на заболевание или состояние, должен означать вмешательство в данное заболевание или состояние таким образом, чтобы предотвратить или замедлить развитие, предотвратить или замедлить прогрессирование, остановить прогрессирование или устранить заболевание или состояние.

Термин применение включает любой один или более из следующих вариантов осуществления настоящего изобретения, соответственно: применение для лечения расстройства; применение для получения фармацевтических композиций для применения в лечении расстройства, например для получения лекарственного препарата; способы применения соединений настоящего изобретения для лечения данных заболеваний; фармацевтические препараты, содержащие соединение настоящего изобретения для лечения данных заболеваний; и соединения настоящего изобретения для применения в лечении данных заболеваний; при необходимости, и подручные средства, если не указано иное. В частности, заболевания, которые подвергают лечению и, таким образом, являются предпочтительными для применения соедине- 5 025304 ния настоящего изобретения, выбраны из заболеваний, связанных с активностью с-Ме! киназы, НОР/сМс1 киназного сигнального пути и/или пролиферативной активностью клетки, и раком.

Комбинационная терапия.

Один или более дополнительных фармацевтических агентов или способов лечения, таких как, например, химиотерапевтические препараты, противораковые агенты, цитотоксические агенты или противораковые терапии (например, облучение, гормон и т.д.), можно применять в комбинации с соединениями и солями настоящего изобретения для лечения заболеваний, расстройств или состояний, описанных в настоящем изобретении. Агенты или терапии можно вводить/осуществлять вместе с соединениями или солями настоящего изобретения (например, смешанные в единичной лекарственной форме), или агенты или терапии можно вводить/осуществлять одновременно или последовательно различными путями введения.

Подходящие противораковые агенты, включают агенты, ингибирующие киназу, включая трастузумаб (Нетсербп), иматиниб (О1ееуес), гефитиниб (1те88а), эрлотинибгидрохлорид (Тагссуа). цетуксимаб (ЕтЬйих), бевацизумаб (Ауакбп), сорафениб (Ыехауат), сунитиниб (§и1еп1) и ТК ингибиторы, описанные, например, в АО 2005/004808, АО 2005/004607, АО 2005/005378, АО 2004/076412, АО 2005/121125, АО 2005/039586, АО 2005/028475, АО 2005/040345, АО 2005/039586, АО 2003/097641, АО 2003/087026, АО 2005/040154, АО 2005/030140, АО 2006/014325, АО 2005/070891, АО 2005/073224, АО 2005/1134 94 и опубликованных патентных заявках США № 2005/0085473, 2006/0046991 и 2005/0075340.

Подходящие химиотерапевтические или другие противораковые агенты дополнительно включают, например, алкилирующие агенты (включая, но без ограничения, азотистые иприты, этилиминовые производные, алкилсульфонаты, нитрозомочевины и триазены), такие как урамустин, хлорметин, циклофосфамид (Су!охап™), ифосфамид, мелфалан, хлорамбуцил, пипоброман, триэтиленмеламии, триэтилентиофосфамин, бусульфан, кармустин, ломустии, стрептозоцин, дакарбазин и темозоломид.

Подходящие химиотерапезтические или другие противораковые агенты дополнительно включают, например, антиметаболиты (включая, но без ограничения, антагонисты фолиевой кислоты, пиримидиновые аналоги, пуриновые аналоги и ингибиторы аденозиндеаминазы), такие как метотрексат, 5-фторурацил, флоксуридин, цитарабин, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, флударабинфосфат, пентостатин и гемцитабин.

Подходящие химиотерапевтические или другие противораковые агенты дополнительно включают, например, определенные природные продукты и их производные (например, алкалоиды барвинка, противоопухолевые антибиотики, ферменты, лимфокины и эпидофиллотоксины), такие как винбластин, винкристин, виндезин, блеомицин, дактиномицин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, ара-С, паклитаксел (Тахо1™), митрамицин, деоксикоформицин, митомицин-С, 1-аспарагиназа, интерфероны (в частности, ΙΡΝ-α), этспозид и тенипозид.

Другие цитотоксические агенты включают навелбен, СРТ-11, анастразол, летразол, капацитабин, релоксафин, циклофосфамид, ифозамид и дролоксафин.

Также подходящими являются цитотоксические агенты, такие как эпидофиллотоксин; противоопухолевый фермент, ингибитор топоизомеразы; прокарбазин; митоксантрон, координационные комплексы платины, такие как цис-платина и карбоплатина, модификаторы биологической реакции, ингибиторы роста; антигормональные терапевтические агенты, лейковорин, тегафур, гематопоэтические факторы роста.

Другой противораковый агент(ы) включает(ют) терапевтические агенты на основе антител, такие как трастузумаб (Нетсербп), антитела к костимуляторным молекулам, такие как СТЬА-4, 4-ΙΒΒ и ΡΌ-1, или антитела к цитскинам (16--10, ТОР-β и т.д.). Дополнительные терапевтические агенты на основе антител включают антитела к тирозинкиназам и/или их лигандам, такие как анти-НОР антитела и/или антис-Ме! антитела. Предполагается, что термин антитело включает все антитела (например, моноклональные, поликлональные, химерные, гуманизированные, человеческие и т. д.), а также их антигенсвязывающие фрагменты.

Другие противораковые агенты включают агенты, которые блокируют миграцию иммунных клеток, такие как антагонисты хемокиновых рецепторов, включая ССВ2 и СС4.

Другие противораковые агенты также включают агенты, которые усиливают иммунную систему, такие как адьюванты или адаптивный Т-клеточный транспорт.

Другие противораковые агенты включают противораковые вакцины, такие как дендритные клетки, синтетические пептиды, ДНК вакцины и рекомбинантные вирусы.

Способы безопасного и эффективного введения большинства из указанных выше агентов известны специалистам в данной области техники. Кроме того, их введение описано в стандартной литературе. Например, введение многих из химиотерапевтических агентов описано в РйукЮапк¹ Эе^к ВеГегепсе (ΡΌΚ, например, 1996 издание, МеШса1 Есопошкк Сотрапу, Мойуа1е, N1), описание которого включено в настоящее описание во всей своей полноте посредством ссылки.

- 6 025304

Фармацевтические составы и лекарственные формы.

При применении в качестве фармацевтических средств, соединения или соли настоящего изобретения можно вводить в виде фармацевтических композиций, соответствующих комбинаций соединения настоящего изобретения (или его соли) и фармацевтически приемлемого носителя. Данные композиции можно получить способом, хорошо известным в фармацевтической области, и их можно вводить рядом путей, в зависимости от того, требуется ли местное или системное лечение и от области, которая подвергается лечению. Введение может представлять собой местное (включая офтальмологическое введение и на слизистую оболочку, включая интраназальную, вагинальную и ректальную доставку), легочное (например, при ингаляции или инсуффляции порошков или аэрозолей, включая через распылитель, трахею, интраназально, эпидермально и трансдермально), глазное, пероральное или парентеральное введение. Методы глазной доставки могут включать местное введение (глазные капли), субконъюнктивальную, периокулярную или интравитреальную инъекцию или введение баллонным катетером или глазными вставками, хирургически помещенными в конъюнктивальный мешок. Парентеральное введение включает внутривенную, внутриартериальную, подкожную, внутрибрюшинную или внутримышечную инъекции или вливание, или внутричерепное, например интратекальное или внутрижелудочковое введение.

Парентеральное введение может быть в виде единичной болюсной дозы, или может осуществляться, например, непрерывным перфузионным насосом. Фармацевтические композиции и составы для местного введения могут включать трансдермальные пластыри, мази, лосьоны, кремы, гели, капли, суппозитории, аэрозоли, жидкости и порошки. Могут быть необходимы или желательны обычные фармацевтические носители, водные, порошковые или жирные основы, загустители и т. п.

Настоящее изобретение также включает фармацевтические; композиции, которые содержат в качестве активного ингредиента одно или более из указанных выше соединений настоящего изобретения в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями. При получении композиций настоящего изобретения, активный ингредиент обычно смешивают с эксципиентом, разбавляют эксципиентом или помещают в такой носитель в виде, например, капсулы, саше, бумаги или другой емкости. Когда эксципиент используется в качестве разбавителя, он может быть твердым, полутвердым или жидким веществом, которое выступает в качестве разбавителя, носителя или среды для активного ингредиента. Таким образом, композиции могут быть в виде таблеток, пилюль, порошков, таблеток, саше, крахмальных капсул, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (в твердом виде или в жидкой среде), мазей, содержащих, например, до 10% по массе активного соединения, мягких и твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных растворов для инъекций, стерильных и упакованных порошков.

При получении состава активное соединение может быть измельчено, для обеспечения соответствующих размеров частиц до смешивания с другими ингредиентами. Если активное вещество является практически нерастворимым, оно может быть измельчено до частиц размером менее 200 меш. Если активное вещество в значительной степени растворяется в воде, размер частиц можно регулировать измельчением для того, чтобы обеспечить по существу равномерное распределение в составе, например приблизительно 40 меш.

Некоторые примеры подходящих эксципиентов включают лактозу, глюкозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, камедь, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, лоливинилпирролидон, целлюлозу, воду, патоку и метилцеллюлозу. Составы могут дополнительно содержать: лубриканты, такие как тальк, стеарат магния и минеральные масла, увлажняющие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты, подсластители и ароматизаторы.

Композиции настоящего изобретения можно формулировать так, чтобы обеспечить быстрое, длительное или замедленное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту с использованием способов, известных в данной области.

Композиции можно формулировать в виде единичной дозированной формы, причем каждая доза будет содержать приблизительно от 5 до приблизительно 500 мг, обычно приблизительно от 10 до приблизительно 100 мг активного ингредиента. Термин единичные дозированные формы относится к физически дискретным единицам в виде единичных доз для людей и других млекопитающих, причем каждая единица содержит предварительно определенное количество активного вещества, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с подходящим фармацевтическим эксципиентом.

Активное соединение может быть эффективным в широком диапазоне доз, и его обычно вводят в фармацевтически эффективном количестве. Однако следует понимать, что реально вводимое количество соединения, как правило, определяется врачом в зависимости от соответствующих обстоятельств, включающих состояние, подлежащее лечению, выбранный путь введения, вводимое соединение, возраст, массу и реакцию пациента, тяжесть симптомов у пациента и подобные.

Для получения твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим эксципиентом для получения твердого предварительного состава, содержащего гомогенную смесь соединения настоящего изобретения. При упоминании данных предварительных ком- 7 025304 позиций как однородных, активный ингредиент обычно распределен равномерно по всему составу, так что композиция может быть легко разделена на равноэффективные единичные дозированные формы, такие как таблетки, пилюли и капсулы. Затем твердые предварительные составы разделяют на единичные дозированные формы описанного выше типа, содержащие, например, от 0,1 до приблизительно 500 мг активного ингредиента настоящего изобретения.

Таблетки или пилюли настоящего изобретения можно покрывать или иначе смешивать для получения дозированной формы, обеспечивающей пролонгированное действие. Например, таблетка или пилюля может содержать компонент внутренней дозы и компонент внешней дозы, причем последний в виде покрытия первого. Оба компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который служит для того, чтобы препятствовать распаду в желудке, и позволяет внутреннему компоненту проникать незатронутым в двенадцатиперстную кишку или замедляет его высвобождение. Различные материалы можно применять для данных энтеросолюбильных слоев или покрытий, причем данные вещества включают ряд полимерных кислот и смеси полимерных кислот с такими веществами, как шеллак, цетиловый спирт и цетат целлюлозы.

Жидкие формы, в которые можно вводить соединения и композиции настоящего изобретения, для перорального введения или в виде инъекций, включают водные растворы, подходящим образом ароматизированные сиропы, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии с пищевыми маслами, такими как хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло, а также эликсиры и аналогичные фармацевтические среды.

Композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых, водных или органических растворителях или их смесях, и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты, как описано выше. В некоторых вариантах осуществления композиции вводят перорально или через носовые дыхательные пути для местного или системного эффекта. Композиции можно распылять при использовании инертных газов.

Распыляемые растворы могут вдыхаться непосредственно из распыляющего устройства, или распыляющее устройство можно прикрепить к маске для лица или машине для дыхания с перемежающимся положительным давлением. Композиции в виде растворов, суспензий или порошков можно вводить перорально или назально из устройств, которые доставляют состав надлежащим образом.

Количество соединения или композиции, вводимое пациенту, будет варьироваться в зависимости от того, что будет вводиться, цели введение, такой как профилактика или лечение, состояния больного, способа введение и подобных. В терапевтических целях композиции могут вводиться пациенту, уже страдающему от болезни, в количестве достаточном для того, чтобы вылечить или, по меньшей мере, частично остановить симптомы заболевания и его осложнения. Эффективные дозы будут зависеть от заболевания, подлежащего лечению, а также от решения лечащего врача в зависимости от таких факторов, как тяжесть заболевания, возраст, масса и общее состояние пациента и подобных.

Композиции, вводимые пациенту, могут быть в виде фармацевтических композиций, описанных выше. Данные композиции могут быть стерилизованы обычными способами стерилизации или они могут быть стерилизованы фильтрованием. Водные растворы могут быть упакованы для применения как таковые или могут быть лиофилизированы, причем лиофилизированный препарат будет смешан со стерильным водным носителем перед введением. рН препаратов, содержащих соединение, обычно составляет от 3 до 11, более предпочтительно от 5 до 9 и наиболее предпочтительно от 7 до 8, Следует понимать, что использование некоторых из вышеуказанных эксципиентов, носителей или стабилизаторов будет приводить к образованию фармацевтической соли.

Терапевтическая доза соединения настоящего изобретения может варьироваться в зависимости, например, от конкретного применения, для которого осуществляется лечение, способа введение соединения, здоровья и состояния больного, и решения лечащего врача. Доля или концентрация соединения настоящего изобретения в фармацевтической композиции может варьироваться в зависимости от ряда факторов, включая дозу, химические свойства (например, гидрофобность) и способ введения. Например, соединения настоящего изобретения могут быть предоставлены в водном физиологическом буферном растворе, содержащем приблизительно от 0,1 до приблизительно 10% мас./об. соединения для парентерального введения. Некоторые конкретные диапазоны дозы составляют приблизительно от 1 мкг/кг до приблизительно 1 г/кг массы тела в день. В некоторых вариантах осуществления диапазон доз составляет приблизительно от 0,01 до приблизительно 100 мг/кг массы тела в день. Дозировка, вероятно, зависит от таких переменных, как тип и степень прогрессирования заболевания или расстройства, общее состояние здоровья конкретного пациента, относительная биологическая эффективность выбранного соединения, состава эксципиента и пути его введения. Эффективные дозы могут быть экстраполированы из кривых доза-ответ, полученных ίη νίΐτο или на животных моделях тестовых систем.

Соединения настоящего изобретения можно формулировать в комбинации с одним или более дополнительными активными ингредиентами, которые могут включать любые фармацевтические агенты, такие как противовирусные препараты, вакцины, антитела, усилители иммунитета, агенты, подавляющие иммунитет, противовоспалительные средства и подобные.

- 8 025304

Кроме того, ясно, что определенные признаки настоящего изобретения, которые, для ясности, описаны в контексте отдельных вариантов осуществления, могут быть предоставлены в комбинации в одном варианте осуществления. С другой стороны, различные признаки настоящего изобретения, которые, для краткости, описаны в контексте одного варианта осуществления, также могут быть предоставлены отдельно или в любом удобной субкомбинации.

Настоящее изобретение будет описано более подробно посредством конкретных примеров. Следующие примеры представлены для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения настоящего изобретения в любом виде. Специалисту в данной области техники известен ряд некритических параметров, которые могут быть изменены или модифицированы для получения по существу таких же результатов. Было обнаружено, что соединения примеров являются ингибиторами с-Мет в соответствии с одним или более анализов, приведенных в настоящем изобретении.

Примеры

Экспериментальные методики для соединений настоящего изобретения приведены ниже. Как правило, продукт очищали в препаративном масштабе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) или флэш-хроматографии (силикагель), как указано в примерах. Конкретные условия для колонки препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ) были следующими:

рН 2 очистки: \Уа1сг5 8иийге™ С₁₈ 5 Тт, 19 х 100 мм колонка, элюирование подвижной фазой А: 0,1% ТРА (трифторуксусная кислота) в воде, и подвижной фазой В: 0,1% ТРА в ацетонитриле; скорость потока составляет 30 мл/мин; разделяющий градиент оптимизировали для каждого соединения, применяя протокол специфичной к конкретному соединению оптимизации метода (Сотроипб 8ресШс МеЛоб ΘρΙίιηίζαΙίοη рго!осо1), как описано в литературе [Ргерагабуе ЬСМ8 РшгГюабои: 1тргоуеб Сотроипб 8ресШс Мебюб Οрί^т^ζаΐ^ои, К. В1от, В. С1а88, К. 8рагк§, А. СотЬк, 1 СотЬ. Сйет., 6, 874-883 (2004)];

рН=10 очистки: ^а1ег8 ХВпбде С₁₈ 5 Тт, 19x100 мм колонка, элюирование подвижной фазой А: 0,15% ΝΗ₄ΟΗ в воде и подвижной фазой В: 0,15% ΝΗ₄ΟΗ в ацетонитриле; скорость потока составляет 30 мл/мин; разделяющий градиент оптимизировали для каждого соединения, применяя протокол специфичной к конкретному соединению оптимизации метода, как описано в литературе [Ргерагабуе ЖХМС Рипйсабои: 1тргоуеб Сотроипб 8ресШс Мебюб Οрί^т^ζаί^ои, К. В1от, В. С1а88, К. 8рагк§, А. СотЬк, 1. СотЬ. Сйет., 6, 874-883 (2004)].

Разделенные изомеры обычно подвергали аналитической жидкостной хроматографии/массспектрометрии (ЖХМС) для определения чистоты в следующих условиях: оборудование; ЛдбеШ 1100 8ег1е8, ’ЖХ/МСЭ. колонка: ^а1ег8 8иийге™ С₁₈ 5 Тт, 2,1х5,0 мм, буферы: подвижная фаза А: 0,025% ТРА в воде и подвижная фаза В: 0,025% ТРА в ацетонитриле; градиент 2-80% В в течение 3 мин со скоростью потока 1,5 мл/мин.

Ссылочные примеры 2, 4 и 5 не включены в объем настоящего изобретения.

Пример 1.

2-фтор^-[(2К)-2-гидроксипропил]-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо [1,2-Ь][1,2,4]триазин-2ил]бензамид

Стадия 1. 4-бром-3-фтор-^метокси^-метилбензамид

Оксалилхлорид (38,1 мл, 450 ммоль) медленно добавляли к смеси 4-бром-3-фторбензойной кислоты (49,3 г, 225 ммоль) (А1Га Аекаг, Са!.# В25475) в дихлорметане (300 мл). Затем добавляли Ν,Ν-диметилформамид (1,0 мл), и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и повторно упаривали с толуолом 3 раза. Затем остаток растворяли в дихлорметане (100 мл). Раствор добавляли по каплям к смеси гидрохлорида ^О-диметилгидроксиламина (30,7 г, 315 ммоль) и карбоната калия (120 г, 900 ммоль) в дихлорметане (300 мл) и воде (300 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Органический слой отделяли. Водный слой экстрагироЕзали дихлорметаном (2х50 мл).

- 9 025304

Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором соли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, с получением продукта (58,5 г). ЖХМС (М+Н)+: щ^=261,9/263,9.

Стадия 2. 1-(4-бром-3-фторфенил)этанон

К раствору 4-бром-3-фтор-М-метокси-Ы-метилбензамида (стадия 1, 58,5 г, 223 ммоль) в тетрагидрофуране (500 мл) добавляли 3 М метилмагнийхлорид в ТГФ (12 5 мл, 38 0 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°С и гасили охлажденным водным раствором хлорида аммония (150 мл). Органический слой отделяли и концентрировали при пониженном давлении. Остаток повторно растворяли в этилацетате (100 мл). Водный слой разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Органические экстракты объединяли, промывали насыщенным раствором соли и сушили над сульфатом магния. Фильтрование и концентрирование при пониженном давление давали продукт (48,4 г), который использовали на следующей реакционной стадии без дополнительной очистки.

Стадия З. дигидроксиэтанон (4-бром-З -фторфенил)(оксо)ацетальдегид и 1 -(4-бром-З -фторфенил)-2,2-

К раствору 1-(4-бром-З-фторфенил)этанона (стадия 2, 9,0 г, 41 ммоль) в диметилсульфоксиде (40 мл) медленно добавляли 48% водный раствор бромистоводородной кислоты. (14 мл). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение ночи, затем охлаждали до температуры окружающей среды и выливали в ледяную воду. Осадок отфильтровывали и промывали водой, и твердое вещество сушили в вакууме в течение ночи, с получением 8,1 г требуемого продукта. Водный слой экстрагировали этилацетатом З раза. Объединенные экстракты промывали водой, насыщенным раствором соли, сушили, фильтровали и концентрировали, с получением дополнительно 2,2 г требуемого продукта (10,З г в сумме).

Стадия 4. 1-(4-бром-З-фторфенил)-2,2-диэтоксиэтанон

К смеси 1-(4-бром-З-фторфенил)-2,2-дигидроксиэтанона и 4-бром-Зфторфенил)(оксо)ацетальдегида (неочищенный продукт стадии З, 7,0 г, 28 ммоль) в толуоле (50 мл) добавляли этилортоформиат (12 мл, 70 ммоль) и п-толуолсульфокислоту (200 мг, 1 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли этилацетатом, промывали водным бикарбонатом натрия, водой, насыщенным раствором соли и сушили над сульфатом магния. Концентрирование при пониженном давлении давало требуемый продукт, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 5. 6-(4-бром-З-фторфенил)-1,2,4-триазин-З-амин

Смесь 1-(4-бром-З-фторфенил)-2,2-диэтоксиэтанона (стадия 4, 15,2 г, 50 ммоль), аминогуанидинбикарбоната (10,2 г, 75 ммоль) и гидроксида калия (6,6 г, 100 ммоль) в этаноле (200 мл) и воде (4 мл) кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Растворитель упаривали при пониженном давлении, и остаток промывали ацетонитрилом и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в дихлорметане (100 мл), промывали водой, насыщенным раствором соли и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этаноле (50 мл). К раствору добавляли 0,2н. хлористоводородную кислоту (50 мл). Полученную в результате смесь нагревали при 110°С в течение 8 ч и охлаждали на бане вода со льдом. Осадок, который образовался, отделяли фильтрованием и промывали изопропанолом, с получением требуемого продукта (5,5 г, 41%). ЖХМС: (М+Н)=286,8/288,8. Ή-ЯМР (400 МГц, СССР): 8,60 (с, 1Н), 7,79 (дд, 1=8,6, 2,0 Гц, 1Н), 7,68 (дд, >8,З, 7,0 Гц, 1Н), 7,61 (дд, >8,З, 2,0 Гц, 1Н), 5,4З (с, 2Н).

- 10 025304

Стадия 6. 3-хинолин-6-илпропаналь

Трис-(дибензилиденацетон)дипалладий (480 мг, 0,52 ммоль) (Αΐύπαίι. Са1. # 328774) и тетрафторборат три-трет-бутилфосфония (300 мг. 1.0 ммоль) в колбе вакуумировали и повторно заполняли азотом (2 раза). Добавляли 1,4-диоксан (31 мл). с последующим добавлением 6-бромхинолина (7.2 г. 35 ммоль) (ТС1, Са1. #В2015). 2-пропен-1-ола (4.7 мл. 69 ммоль) и Ы-циклогексил-М-метилциклогексанамина (8.9 мл. 42 ммоль). Реакционную колбу вакуумировали и повторно заполняли азотом (2 раза). Реакционную смесь перемешивали при 30°С в течение 24 ч. Добавляли к реакционной смеси диэтиловый эфир (30 мл). затем фильтровали и промывали диэтиловым эфиром. Органический экстракт концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией. элюируя этилацетатом в гексане (050%). с получением требуемого продукта (-55%). ЖХМС (М+Н)+: т//=186.0; (М+Н₂О+Н)+: ш//=204.0.

Стадия 7. 1-(2-хлор-1-гидрокси-3-хинолин-6-илпропил)пирролидон-2.5-дион

ΙΉ

К раствору 3-хинолин-6-илпропаналя (стадия 6. 2.3 г. 0.012 моль) в хлороформе (5 мл). охлажденном до 0°С. добавляли Ь-пролин (0.4 г. 0.004 моль). Затем к смеси добавляли Ν-хлорсукцинимид (1.74 г. 0.0130 моль) при 0°С. Реакцию нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционная смесь представляла собой густую суспензию. Твердые вещества отфильтровывали и промывали хлороформом. с получением чистого продукта (2 г. 50.5%). Ή-ЯМР (400 МГц. СЭС1₃,): 8.90 (дд. 1=4.0. 2.0 Гц. 1Н). 8.13 (д. 1=8.0 Гц. 1Н). 8.05 (д. 1=8.4 Гц. 1Н). 7.73 (с. 1Н). 7.65 (дд. 1=8.0. 2.0 Гц. 1Н). 7.40 (дд. 1=8.4. 4.0 Гц. 1Н). 5.46 (д. 1=9.4 Гц. 1Н). 4.95 (ддд. 1=9.4. 8.0. 3.1 Гц. 1Н). 3.73 (дд. 1=14.3. 3.1 Гц. 1Н). 3.19 (дд. 1=14.3. 8.0 Гц. 1Н). 2.75 (с. 4Н).

Стадия 8. 6-[2-(4-бром-3-фторфенил)имидазо[1. 2-Ь][1.2.4'триазин-7-ил]метилхинолин

Смесь 6-(4-бром-3-фторфенил)-1.2.4-триазин-3-амина (стадия 5. 200 мг. 0.74 3 ммоль) и 1-(2-хлор-1гидрокси-3-хинолин-6-илпропил)пирролидон-2. 5-диона (стадия 7. 284 мг. 0.892 ммоль); в изопропиловом спирте (7.4 мл) и воде (0.11 мл) в герметичной пробирке нагревали при 105°С в течение 5 дней. После охлаждения реакционной смеси до температуры окружающей среды. осадок отделяли фильтрованием. промывали изопропиловым спиртом и сушили в вакууме. с получением требуемого продукта (183 мг. 55%). ЖХМС (М+Н)+: т//=433.9/436.0.

Стадия 9. 2-фтор-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1.2-Ь][1.2.4]триазин-2-ил]бензонитрил

Цианид цинка (131 мг. 1.11 ммоль). трис-(дибензилиденацетон)дипалладий (0) (35 мг. 0.03 8 ммоль) (Αΐύπαίι. Са1. # 328774). (9.9-диметил-9Н-ксантен-4.5-диил)бис-(дифенилфосфин) (78.5 мг. 0.136 ммоль) (Αΐύπαίι. Са1. # 526460) и Ν.Ν.Ν'.Ν'-тетраметилэтилендиамин (0.22 мл. 1.4 ммоль) последовательно добавляли к смеси 6-[2-(4-бром-3-фторфенил)имидазо[1.2-Ь][1.2.4]триазин-7-ил]метилхинолина (стадия 8. 4 80 мг. 1.10 ммоль) в Ν. Ν-диметилформамиде (8.7 мл) в пробирке для СВЧ-печи. Пробирку плотно закрывали. дегазировали три раза и нагревали при 160°С при микроволновом облучении в течение 500 с. Большую часть растворителя удаляли при пониженном давлении. и остаток растворяли в этилацетате. промывали водным бикарбонатом натрия. водой и насыщенным раствором соли и сушили над сульфатом магния. Фильтрование и концентрирование давали остаток. который очищали на колонке с силикагелем метанолом в дихлорметане (0-6%). с получением требуемого продукта (90%). ЖХМС (М+Н)+: т//=381.0.

- 11 025304

Стадия 10. 2-фтор-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1, 2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензойная кислота

2-фтор-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензонитрил (стадия 9, 750 мг, 2 ммоль) в концентрированном растворе хлористоводородной кислоты (5,0 мл, 53 ммоль) и воде (1,0 мл) перемешивали при 105°С в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и полученный в результате остаток промывали водой и фильтровали, с получением неочищенного продукта в вице НС1 соли, которую непосредственно использовали на следующей реакционной стадии без дополнительной очистки. ЖХМС (М+Н)': ш//=400.0.

Стадия 11. 2-фтор-Х-[(2К)-2-гидроксипропил] -4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид

Г)

Смесь НС1 соли 2-фтор-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензойной кислоты (180,0 мг, 0,381 ммоль, стадия 10) и гексафторфосфата бензотриазол-1-илокси-трис(диметиламино)фосфония (220 мг, 0,50 ммоль) (АИпск Са1. #226084) в Ν,Ν-диметилформамиде (9,0 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 мин. Затем медленно добавляли (2К)-1аминопропан-2-ол (57 мг, 0,76 ммоль), с последующим добавлением триэтиламина (318,7 мкл, 2,2 87 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, и затем добавляли воду. Осадок отделяли фильтрованием и промывали водным ацетонитрилом. Осадок растворяли в 1н. водном растворе НС1 и затем сушили лиофилизацией, с получением, требуемого продукта в виде НС1 соли. ЖХМС (М+Н)+: щ//=457,3. Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆): 9,30 (с, 1Н), 9,20 (дд, 1 = 5,0, 1,5 Гц, 1Н), 9,02 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,37 (с, 1Н), 8,35 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,28 (с, 1Н), 8,16 (дд, 1=8,5, 1,5 Гц, 1Н), 8,08 (с, 1Н), 8,04 (с, 1Н), 8,02 (с, 1Н), 8,00 (дд, 1=8,5, 5,0, Гц, 1Н), 7,80 (т, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 3,79 (м, 1Н), 3,21 (м, 2Н), 1,09 (д, 1=7,0 Гц, 3Н).

δ энантиомер может быть получен согласно указанной выше методике, используя (2δ)-аминопропан-2-сл, или рацемизацией продукта и разделением энантиомеров, применяя стандартные способы хирального разделения (например, хиральную колонку).

Ссылочный пример 2.

2-хлор-Ы-метил-4-(7-(хинолин-6-илметил)имидазо [1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил)бензамид

Стадия 1. 6-бром-1,2,4-триазин-3-амин

К суспензии 1,2,4-триазин-3-амина (3,84 г, 40,0 ммоль) (АИпск Са1. # 100 625) в ацетонитриле (40 мл) добавляли воду (60 мл) и перемешивали до образования прозрачного раствора. К полученному раствору добавляли Ν-бромсукцинимид (7,48 г, 42,0 ммоль) при 0°С, и полученную в результате смесь перемешивали в течение 10 мин. Удаляли охлаждающую баню, и смесь нагревали до комнатной температуры. Затем смесь разбавляли этилацетатом (150 мл) и охлаждали до 0°С (баня вода со льдом). Добавляли №₂СОз (3,0 г) и перемешивали в течение 10 мин. Два слоя разделяли, и водную фазу экстрагировали этилацетатом (150 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным Να40Ο₃, насыщенным раствором если, сушили над Μ§δΟ₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, с получением требуемого продукта (4 г, 57,15%). ЖХМС (М+Н)+: щ//=175,2/177,2.

- 12 025304

Стадия 2. Метил 4-(3-амино-1,2,4-триазин-6-ил)-2-хлорбензоат

К смеси 6-бром-1,2,4-триазин-3-амина (стадия 1, 1,0 г, 5,7 ммоль) и [3-хлор-4(метоксикарбонил)фенил]бороновой кислоты (1,5 г, 6,8 ммоль) (УМК, Са!. # 100С13-404) в 1,4-диоксане (22 мл) добавляли раствор фосфата реалия (2,4 г, 11 ммоль) в воде (5,1 мл). Смесь дегазировали продуванием азота в течение 10 мин. К смеси добавляли тетракис-(трифенилфосфин)палладий (0) (0,20 г, 0,17 ммоль) и снова дегазировали азотом. Смесь перемешивали и нагревали при 82°С (масляная баня) в течение 1 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой, перемешивали в течение 30 мин и получали серый твердый остаток. Твердый остаток отделяли фильтрованием, промывали несколько раз водой и сушили на воздухе. Затем твердый остаток растирали последовательно с гексанем, со смесью дихлорметан-гексан (1:1) и гексаном, с получением требуемого продукта (840 мг, 55,54%). ЖХМС (М+Н)+: шЦ=264,9/267,0.

Стадия 3. Метил 2-хлор-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензоат

Смесь метил 4-(3-аминс-1,2,4-триазин-6-ил)-2-хлорбензоата (стадия 2, 0,840 г, 3,17 ммоль) и 1-(2хлор-1-гидрокси-3-хинолин-6-илпропил)пирролидон-2,5-диона. (1,11 г, 3,49 ммоль, пример 1, стадия 7) в 1-бутаноле (11,6 мл) перемешивали при 110°С в течение 22 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растирали с этилацетатом. Осадок отделяла фильтрованием и промывали этилацетатом и гексаном, с получением требуемого продукта (0,908 г). Маточник концентрировали до половины объема. Осадок отделяли фильтрованием и промывали этилацетатом и гексаном, с получением дополнительного количества требуемого продукта (0,342 г). Суммарное количество полученного продукта составляло 1,10 г (80,6%). ЖХМС (М+Н)+: шЦ=430,0/431,9.

Стадия 4. 2-хлор-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензойная кислота

К раствору метил 2-хлор-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензоата (стадия 3, 1,10 г, 2,5 6 ммоль) в тетрагидрофуране (7,0 мл) и метаноле (5,0 мл) добавляли раствор гидроксида лития (0,245 г, 10,2 ммоль) в воде (3,0 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и концентрировали при пониженном давлении до объема приблизительно 3 мл. Остаток разбавляли водой (3 мл) и рН доводили 1н. НС1 приблизительно до 4-5. Осадок отфильтровали, промывали несколько раз водой и сушили на воздухе в течение ночи. Затем осадок растирали последовательно с эфиром и смесью дихлорметан (ОСМ)-гексан (1:1). Получали требуемый продукт (638 мг, 60%). ЖХМС (М+Н)+: ш^=415,9/417,9.

Стадия 5. 2-хлор-Ы-метил-4-(7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил)бензамид

2-хлор-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо [1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензойную кислоту (стадия 4, 5,0 мг, 0,012 ммоль) и гексафторфосфат (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония (10,0 мг, 0,020 ммоль) (Λΐάπαίι. Са!. #226084) в Ν,Ν-диметилформамиде (0,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 мин. Затем медленно добавляли 2,0 М метиламин в тетрагидрофуране (0,012 мл,

- 13 025304

0,023 ммоль) при 0°С, с последующим добавлением триэтиламина (6,4 мкл, 0,04 6 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и очищали ОФ-ВЭЖХ (рН 2), с получением требуемого продукта в виде трифторацетатной (ТРА) соли. ЖХМС (М+Н)': т//=429.3.

Пример 3.

2-хлор-Ы-[(1§)-1 -(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3 -ил)этил]-4-[7-(хинолин-б-илметил)имидазо [1,2Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид

Стадия 1. Трет-бутил [(18)-2-амино-1-метил-2-оксоэтил]карбамат

К перемешиваемому раствору (2§)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]пропионовой кислоты (1 г, 0,005 моль) в ТГФ при 0°С добавляли 4-метилморфолин (0,588 г, 0,00581 моль), с последующим добавлением по каплям изобутилхлорформиата (0,7 94 г, 0,00581 моль) в течение 2 мин. Реакцию перемешивали при 0°С в течение 30 мин, затем раствор 30% масс, гидроксида аммония (12,0 мл, 0,0925 моль) быстро выливали в реакционную смесь. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 5 ч. Реакционную смесь концентрировали. Добавляли воду, и смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали, с получением неочищенного продукта, который использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки (800 мг, 80%). Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-Д₆): 12,4 0 (с, 1Н), 7,10 (д, 1=7,0 Гц, 1Н), 3,88 (м, 1Н), 1,35 (с, 9Н), 1,20 (д, 1=7,3 Гц, 3Н).

Стадия 2. Трет-бутил[(18)-1-цианоэтил]карбамат

К перемешиваемому раствору трет-бутил[(18)-2-амино-1-метил-2-оксоэтил]карбамата (стадия 1, 0,7 г, 0,004 моль) в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл) добавляли 343 мг цианурхлорида (0,00186 моль) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч. Добавляли воду, и смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэшхроматографией на колонке с силикагелем ЕЮАс в гексане (30-50%), с получением требуемого продукта (400 мг, 63%). Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-а₆): 7,74 (д, 1=7,0 Гц, 1Н), 4,48 (м, 1Н), 1,40 (с, 9Н), 1,35 (д, 1=7,0 Гц, 3Н).

Стадия 3. Трет-бутил[( 18,22)-2-амино-2-(гидроксиимино)-1 -метилэтил] карбамат

К смеси трет-бутил[(18)-1-цианоэтил]карбамата (стадия 2, 250 мг, 1,5 ммоль) в этаноле (3 мл) добавляли триэтиламин (0,41 мл, 2,9 ммоль) и гидроксиламин (58 мг, 1,8 ммоль). Смесь перемешивали при 50°С в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали, с получением требуемого неочищенного продукта (300 мг), который использовали непосредственно на следующей реакционной стадии без дополнительной очистки. Ή-ЯМР (300 МГц, ДМСО-а₆): 8,94 (с, 1Н), 6,80 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 5,24 (с, 2Н), 4,01 (м, 1Н), 1,36 (с, 9Н), 1,15 (д, 1=7,0 Гц, 3Н).

- 14 025304

Стадия 4. Трет-бутил{(13,22)-2-[(ацетилокси)имино]-2-амино-1-метилэтил}карбамат

К смеси трет-бутил [(13,22)-2-амино-2-(гидроксиимино)-1-метилэтил]карбамата (стадия 3, 100 мг, 0,5 ммоль) в метиленхлориде (2 мл), охлажденном до 0°С, добавляли триэтиламин (0,10 мл, 0,74 ммоль). Затем к смеси добавляли по каплям ацетилхлорид (42 мг, 0,54 ммоль), и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч, реакционную смесь концентрировали. Остаток растворяли в дихлорметане (ЭСМ), промывали водой и насыщенным раствором соли, сушили над МдЗО₄, фильтровали и концентрировали, с получением требуемого неочищенного продукта (100 мг, 82,8%), который использовали непосредственно на следующей реакционной стадии без дополнительной очистки. ¹Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-й₆): 6,90 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 6,22 (с, 2Н), 4,05 (м, 1Н), 2,01 (с, 3Н), 1,36 (с, 9Н), 1,20 (д, 1=7,0 Гц, 3Н).

Стадия 5. (¹3)-1-(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3-ил)этанамин

К раствору трет-бутил{(18,22)-2-[(ацетилокси)имино]-2-амино-1-метилэтил}карбамата (стадия 4, 80 мг, 0,3 ммоль) в этаноле (3 мл) добавляли раствор тригидрата ацетата натрия (49 мг, 0,36 ммоль) в воде (1 мл). Смесь нагревали при 85°С в течение 3 ч. Этанол упаривали; добавляли воду и экстрагировали ЕЮАс. Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором соли, сушили над М§ЗО₄, фильтровали и концентрировали. Остаток растворяли в метиленхлориде (1 мл). К раствору добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл). После перемешивания в течение 30 мин, реакционную смесь концентрировали, с получением требуемого продукта в виде ТРА соли, которую использовали непосредственно на следующей реакционной стадии без дополнительной очистки.

Стадия 6. 2-хлор-Ы-[(18)-1-(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3-ил)этил]-4-[7-(хинолин-6илметил)имидазо [1,2-Ъ][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид

О

N ^Л'г н ,1.

С1

N /

С У- ^/ >Г Н

К раствору 2-хлор-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ъ][1,2,4]триазин-2-ил]бензойной кислоты (50 мг, 0,1 ммоль, пример 2, стадия 4) в Ν,Ν-диметилформамиде (2 мл, 20 ммоль) добавляли гексафторфосфат У^№,№-тетраметил-0-(7-азабензотриазол-1-ил)урония (68 мг, 0,18 ммоль) (А1йг1сН, Са1. #226084) и Ν,Ν-диизопропилэтиламин (42 мкл, 0,24 ммоль). После перемешивания раствора в течение 15 мин, добавляли ТРА соль (13)-1-(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3-ил)этанамина (18 мг, 0,14 ммоль, стадия 5) и перемешивали в течение ночи. Смесь очищали ОФ-ВЭЖХ (рН 10), с получением требуемого продукта, который дополнительно очищали ОФ-ВЭЖХ (рН 2), с получением требуемого чистого продукта в виде ТРА соли. ЖХМС (М+Н)+: т/ζ = 525,0/427,0. Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆): 9,22 (с, 1Н), 8,98 (дд, 1=5,0, 1,5 Гц, 1Н), 9,15 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,56 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 8,16 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 8,14 (дд, 1=3,0, 1,5 Гц, 1Н), 8,06 (с, 1Н), 8,04 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 8,02 (с, 1Н), 7,90 (дд, 1=9,0, 2,0 Гц, 1Н), 7,68 (дд, 1=8,5, 5,0 Гц, 1Н), 7,60 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 5,24 (м, 1Н), 4,66 (с, 2Н), 2,60 (с, 3Н), 1,51 (д, 1=7,0 Гц, 3Н).

К энантиомер может быть получен согласно приведенной выше методике, используя (1К)-1-(5метил-1,2,4-оксадиазол-3-ил)этанамин, или рацемизацией продукта и разделением энантиомеров, применяя стандартные способы хирального разделения (например, хиральную колонку).

- 15 025304

Ссылочный пример 4.

Ы-метил-5-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо [1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]пиридин-2-карбоксамид

Стадия 1. 5-(3-амино-1,2-триазин-6-ил)-Ы-метилпиридин-2-карбоксамид

Смесь Ы-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-карбоксамида (200 мг, 0,80 ммоль)(УАК, Са!. # 200068-640), 6-бром-1,2,4-триазин-3-амина (130 мг, 0,76 ммоль, пример 2, стадия 1), тетракис-(трифенилфосфин)палладия (0) (40 мг, 0,04 ммоль) и карбоната калия (0,32 г, 2,3 ммоль) в толуоле (1,3 мл), этаноле (0,66 мл) и воде (0,66 мл) нагревали при 120°С в течение 1,5 ч. Смесь фильтровали и промывали метанолом. Фильтрат очищали ОФ-ВЭЖХ (рН 10), с получением требуемого продукта (80 мг, 45,54%). ЖХМС (М+Н)+: μ/ζ=231,4; ЖХМС (М+Н+Н₂О)+: т//24 9,3.

Стадия 2. Ы-метил-5-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]пиридин-2карбоксамид

Смесь 5-(3-амино-1,2,4-триазин-6-ил)-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида (стадия 1, 6,5 г, 0,022 моль) и 1-(2-хлор-1-гидрокси-3-хинолин-6-илпропил)пирролидон-2,5-диона (8,71 г, 0,02 7 3 моль, пример 1, стадия 7) в 1,2-этандиоле (100 мл) перемешивали при 120°С в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали. Смесь нейтрализовали до рН 10 раствором метиламина в ТГФ (2,0 М), и затем очищали флэш-хроматографией на колонке с силикагелем 5% МеОН в дихлорметане, с получением требуемого продукта, который был загрязнен небольшим количеством исходного соединения. Продукт растворяли в 10% МеОН в дихлорметане и концентрировали до объема приблизительно 2 мл. Полученный в результате твердый продукт отфильтровывали, промывали МеОН (2 мл), с получением чистого продукта (4,50 г, 50%>). Продукт обрабатывали 2н. НС1 (водная) и ацетонитрилом, и сушили лиофилизацией, с получением требуемого продукта в виде НС1 соли. ЖХМС (М+Н)+: т//=396,4. 'Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): 9,40 (с, 1Н), 9,27 (с, 1Н), 9,20 (д, 1=5,5 Гц, 1Н), 9,10 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,64 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,30 (с, 1Н), 8,26 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,20 (д, 1=8,0, Гц, 1Н), 8,19 (с, 1Н), 8,17 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,03 (дд, 1=8,0, 5,5 Гц, 1Н), 4,76 (с, 2Н), 2,81 (с, 3Н).

Ссылочный пример 5.

Ы,2-диметил-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид

- 16 025304

Стадия 1. 4-бром-Ы,2-диметилбензамид

Ν,Ν-диметилформамид (10 мкл) добавляли к смеси 4-бром-2-метилбензойной кислоты (1,0 г, 4,6 ммоль) в оксалилхлориде (2,0 мл, 23 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали, с получением неочищенного карбонилхлорида, который растворяли в метиленхлориде (2 мл). Раствор добавляли медленно к смеси метиламина в тетрагидрофуране (ТГФ) (2,0М, 0,465 мл, 9,3 ммоль) и триэтиламина (1,3 мл, 9,3 ммоль) в ЭСМ (10 мл). Через 30 мин реакционную смесь гасили насыщенным карбонатом натрия (10 мл) и экстрагировали ЭСМ (3x20 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором соли, сушили над №ь8О₄. фильтровали, концентрировали при пониженном давлении, с получением неочищенного продукта (980 мг, 92%). ЖХМС (М+Н)+: μ/ζ=228,1/230,2.

Стадия 2. ^2-диметил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамид

К раствору 4-бром-Ы,2-диметилбензамида (стадия 1, 0,50 г, 2,2 ммоль) и 4,4,5,5,4',4',5',5'октаметил[2,2']би[[1,3,2]диоксабороланила] (0,67 г, 2,6 ммоль) (АЮг1сН, Са!. # 473294) в 1,4-диоксане (5,28 мл) добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(11) с дихлорметаном (1:1)(0,09 г, 0,1 ммоль) (АИпск Са!. # 379670), ацетат калия (0,64 г, 0,00 66 моль) и 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен (0,06 г, 0,1 ммоль) (АИпск Са!. # 177261) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температурь смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэшхроматографией на колонке с силикагелем 10% метанолом в дихлорметане, с получением, требуемого продукта. ЖХМС (М+Н)+: 111^=276,4.

Стадия 3. 4-(3-Амино-1,2,4-триазин-6-ил)-Н,2-диметилбензамид

Смесь ^2-диметил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамида (стадия 2, 0,3 г, 0,001 моль), 6-бром-1,2,4-триазин-3-амина (0,21 г, 1,2 ммоль, пример 2, стадия 1), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,06 г, 0,05 ммоль) и карбоната калия (0,45 г, 3,3 ммоль) в толуоле (1,9 мл), этаноле (0,94 мл) и воде (0,94 мл). Полученную в результате смесь нагревали при 130°С в течение 2,5 ч. Смесь разбавляли МеОН, фильтровали и промывали смесью ЭСМ/метанол (90%). Фильтрат концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией на колонке с силикагелем 10% МеОН в ЭСМ, с получением требуемого продукта (110 мг, 41%). ЖХМС (М+Н)+: 111^=244,3.

Стадия 4. 2-Хлор-3-хинолин-6-илпропакаль

Ь-пролин (410 мг, 3,5 ммоль) добавляли к раствору 3-хинолин-6-илпропаналя (3,27 г, 17,6 ммоль, пример 1, стадия 6) в хлороформе (39 мл) при 0°С, с последующим добавлением Ν-хлорсукцинимида (2,48 г, 18,5 ммоль), реакционную смесь медленно нагревали до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 1 ч, отслеживая ЖХМС. Растворитель концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали на колонке с силикагелем этилацетатом в гексане (0-50%), с получением требуемого продукта (95%). ЖХМС: (М+Н+Н₂О) = 237, 9/239, 9.

- 17 025304

Стадия 5. N,2-Диметил-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо [1,2-Ь][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид

Смесь 4-(3-амино-1,2,4-триазин-6-ил)-^2-диметилбензамида (стадия 3, 0,30 г, 1,2 ммоль) и 2-хлор3-хинолин-6-илпропаналя (стадия 4, 0,32 г, 1,5 ммоль) в этаноле (2,5 мл) в герметичной пробирке перемешивали при 120°С в течение ночи. После охлаждения реакционную смесь очищали ОФ-ВЭЖХ (рН 2), с получением требуемого продукта (150 мг) в виде ТРА соли. ЖХМС (М+Н)': т/ζ = 409,3. ¹Н-ЯМР (400 МГц, С1ТО1)): 9,64 (с, 1Н), 9,21 (д, 1=5,0, 1Н), 9,18 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,44 (с, 1Н), 8,39 (с, 1Н), 8,32 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 8,27 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,12 (дд, 1=9,0, 5,0, Гц, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 8,03 (с, 1Н), 7,57 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,86 (с, 2Н), 2,92 (с, 3Н), 2,48 (с, 3Н).

Пример А.

Ιη νίίτο ферментативные анализы с-Меί киназы.

Соединения настоящего изобретения скринировали ίη νίίτο на их способность ингибировать с-Меί киназную активность. Величины 1С₅₀ ингибирования с-Меί киназы определяли, как описано в литературе с некоторыми модификациями (^аи§, X. еί а1., Μοί. Саисет ТРег. 2003, 2(1.1): 1085-1092; СаРс, М. еί а1., СгоаРса СРепРса1 АСТА. 2005, 78 (3): 367-374). Кратко, меченный гистидином гибридный белок с с-Μеί каталитическим доменом (Ιηνίίτο^η, # Ρν3143) использовали для анализа. Измерения 1С₅₀ основывались на степени фосфорилирования поли О1и-Тут (Зщта-АИпск # Р0275), который наносили (0,01 мг/лунка) на 96-луночные микропланшеты (Ρ&Ό 8у8ίет8, # ΌΥ990). Реакцию проводили в 50 мкл раствора, содержащего 50 мМ НЕРЕ8 (рН 7,5), 10 мМ МпС1₂, 10 мМ МдС1₂, 0,5 мМ ЭТТ, 100 мкМ ХаАТС 5 мкМ АТФ (Се11 8^дηа1^ηд ТесРшкду, # 9804) и серийно разведенные растворы испытуемого соединения. Реакция протекала в течение 25 мин при 30°С. После завершения реакции, содержимое планшетов удаляли. Затем планшеты промывали ТВ8-Т (250 мкл/лунка, 5х) и затем блокировали ТВ8-Т, содержащей 1% В8А, в течение 2 ч. Содержимое планшетов удаляли, и затем добавляли 100 мкл (на лунку) меченного пероксидазой анти-фосфотирозинового антитела (81дта, # А5964), разведенного (1:60,000) в ТВ8-Т, содержащей 1% В8А, и выдерживали в течение 1 ч. Планшеты промывали ТВ8-Т (250 мкл/лунка, 5х), и затем проводили цветную реакцию, используя 100 мкл (1:1 смесь) Н₂О₂ и тетраметилбензидина (Ρ&Ό 8у8ίет8, # ΌΥ999). Реакцию прекращали в течение 1 мин 100 мкл 2н. Н₂8О₄. Сразу измеряли оптическую плотность, используя микропланшет-ридер при 4 50 нм с коррекцией длины волны при 540 нм. Величины 1С₅₀ рассчитывали с помощью ОтарРРаб Рп8т программного обеспечения. Линейный диапазон (т.е. период времени, в течение которого скорость оставалась эквивалентной первоначальной скорости) определяли для киназы, и определение 1С₅₀ проводили в данном диапазоне.

Х/аид, X., еί а1. Ροίеηί анб 8е1есРуе ίηΡΦίίοτ8 οί )Ре Μеί |ПераЮсу1е дго\у)Р ГасЮг/8са11ег ГасЮг (НОР/8Р) гесерЮг| ίу^ο8^ηе ките Ькск НОР/8Р-шбисеб ίитο^ се11 дго\у)Р ааб ^ηνа8^οη. Μο1. Сапсег ТРег. 2003, 2(11): 1085-1092. СаРс, М., еί а1. ΡΡινοηοίά8 а8 ίηΡΦίίοτ8 οί Ьск ааб Руи кша8е8. СгоаРса СРетка АСТА. 2005, 78 (3): 367-374.

Полученные в результате величины 1С₅₀ для соединений настоящего изобретения показаны ниже:

Соединвние	1С50
Формула I	0,1-1, 0 нМ
Формула III	0,1-1,0 нМ

Пример В.

Анализ клеточной пролиферации/выживаемости.

Клеточные линии, представляющие различные виды рака человека (8Νυ-1 и 8υΝ-5 желудка, А54Э и N0-4441 легкого, υ-87 глиобластома, НТ-29 толстой кишки, 786-0 почки, РС-3 поджелудочной железы), можно получить у Атепсаг! Туре СиРиге ί'.'ο1^1ίοη и стандартно хранить в клеточной среде и условиях, рекомендованных АТСС. Оптимальную клеточную плотность, применяемую в анализе пролиферации/выживаемости, можно предварительно определить для отдельных клеточных линий. Соединения скринировали на их способность ингибировать клеточную пролиферацию/выживаемость, и определяли величины 1С₅₀. Ниже приведены протоколы анализа клеточной пролиферации/выживаемости с 8Νυ-5 и 8Νυ-1. 8Νυ-5 и 8Νυ-1 клетки высевали в 96-луночные планшеты для культуры клеток при 4000 клеток/лунка и 2000 клеток/лунка, соответственно, в подходящей среде, содержащей 2% РВ8 и снабженной серийно разведенными растворами отдельных соединений в конечном объеме 100 мкл/лунка. После 72 ч выдерживания, 24 мкл Се11ТРег 96® АСг^т Оме 8ο1υίίοη реагента (Рготеда, # 03581) добавляли к каж- 18 025304 дой лунке (конечная концентрация=333 мкг/мл), и планшеты выдерживали в течение дополнительных 2 ч при 37°С в инкубаторе. Оптическую плотность измеряли в линейном, диапазоне, используя микропланшет-ридер при 490 нм с коррекцией длины волны при 650 нм. 1С₅₀ величины рассчитывали с помощью СтарЬРаб Рп8ш программного обеспечения. Для анализов на пролиферацию, используя А549, ЫС1Н441, И-87, НТ-29, 786-0 и РС-3 клетки, клетки сначала обедняли на 48 ч в условиях с низким содержанием сыворотки (0,1-0,5% ΡΒδ в подходящей культуральной среде), затем обрабатывали различными концентрациями соединений в течение 2 ч. После обработки клеток НСР (50 нг/мл) (Ρ&Ό, # 294-НСЫ) в течение 24 ч, СеИТйег 96® АОиеоих Опе δοϊυΐίοη реагент добавляли, и планшеты выдерживали в течение 2 ч. Результаты записывали с помощью планшет-ридера.

Пример С.

Анализ с-Ме! фосфорилирования на основе клеток.

Ингибирующий эффект соединений на с-Ме! фосфорилирование в подходящих клеточных линиях (линии раковых клеток δΝυ-5 желудка, А549 и ЫС1-Н441 легкого, И-87 глиобластома, НТ-29 толстой кишки, 786-0 почки и РС-3 поджелудочной железы, и НИУЕС клеточная линия) можно оценить, применяя иммуноблоттинг анализ и анализы с-Ме! фосфорилирования на основе ЕЬ-ΙδΛ. Клетки выращивали в подходящей культуральной среде и обрабатывали различными концентрациями отдельных соединений. Для δΝυ-5, НТ-29, 786-0 клеток, клетки выращивали в подходящей среде, снабженной 0,2% или 2% ΡΒδ, и обрабатывали соединениями в течение 3-4 ч. Полные клеточные белковые экстракты получали, используя реагенты и протокол (# ΡΝΝ001 1), полученные у Вюкоитсе 1п!егпабопа1, с небольшими модификациями. Кратко, белковые экстракты получали выдерживанием в лизирующем буфере с ингибиторами протеаз и фосфатаз [50 мМ ΒΕΡΕδ (рН 7,5), 100 мМ №С1, 1,5 мМ М§С1₂, 10% глицерин, 1% ТтЪоп Х-100, 1 мМ ортованадат натрия, 1 мМ фторид натрия, апротинин (2 мкг/мл), леупептин (2 мкг/мл), пепстатин А (2 мкг/мл) и фенилметилсульфонилфторид (1 мМ)] при 4°С, Белковые экстракты очищали от продуктов распада клеток центрифугированием при 14000/д в течение 20 мин. Для А549, Н441, И-87 и РС-3 клеток, клетки обедняли сывороткой (0,2% ΡΒδ) по меньшей мере на 24 ч, затем предварительно обрабатывали различными концентрациями соединений в течение 1 ч. Полные клеточные экстракты получали после обработки клеток НСР (50 нг/мл) в течение 10 мин.

Иммуноблоттинг анализ.

Соответствующие антитела получали из коммерческих источников: поликлональные антитела кролика включали античеловеческие с-Ме! (5ап!а Сти/ Вю1есЬпо1оду. # 8с-161) и анти-фосфорилированныес-Ме! (Вюкоитсе 1п!егпа!юпак ρΥ1230/4/5 и ρΥ1003). Для иммуноблоттинга, 10-20 мкг белкового экстракта для отдельных условий обработки разделяли электрофорезом на 10% δΌδ-РАСЕ геле и электропереносили на нитроцеллюлозную (или РУЭР) мембрану. Мембрану блокировали ΡΒδ, содержащим 3% молоко и 0,1% Тетееп-20, в течение 1 ч и затем выдерживали с первичными анти-с-Ме! антителами в блокирующем растворе в течение 1 ч. После трех промывок, мембрану выдерживали с подходящими конъюгированными с пероксидазой вторичными антителами в течение 1 ч. После конечной промывки, блот выдерживали с реагентом для хемилюминисцентной детекции в течение 5 мин и экспонировали на рентгеновский снимок. Изображения сканировали, оценивали количественно и корректировали относительно суммарной с-Ме!, и рассчитывали 1С₅₀ величины.

Соединения, имеющие 1С₅₀ 10 мкМ или меньше, считали активными.

ЕЫ8А.

Клеточные белковые экстракты анализировали, используя человеческий фосфо-с-Ме! ЕБ-ΙδΑ набор согласно инструкции производителя (Ρ&Ό δу8!ет8, #ΩΥΕ2480). Оптимальные количества белковых экстрактов предварительно определяли для отдельных клеточных линий. Кратко, для данного анализа, подходящие количества белковых экстрактов захватывали анти-человеческим с-Ме! антителом в течение 2 ч в 96-луночном микропланшете. После промывок, добавляли антитела для детекции (НРРконъюгированное анти-фосфо-тирозиновое антитело) и выдерживали в течение 2 ч. После дополнительных промывок, 103 мкл раствора субстрата (1:1 смесь Н2О2 и тетраметилбензидина) добавляли в каждую лунку, и реакцию прекращали 2н. Н^О₄ в течение подходящего промежутка времени в ходе возникновения цвета. Оптическую плотность измеряли в линейном диапазоне, используя микропланшет-ридер при 45С нм с корректировкой длины волны при 540 нм. 1С₅₀ величины рассчитывали с помощью СгарЬРаб Рт18т программного обеспечения.

Различные модификации настоящего изобретения, в дополнение к тем, что описаны в настоящем изобретении, будут очевидны специалисту в данной области из предшествующего описания. Предполагается, что такие изменения также включены в объем прилагаемой формулы изобретения. Каждая ссылка, включая все патенты, патентные заявки и публикации, приведенные в настоящем описании, включены в настоящее описание во все своей полноте посредством ссылки.

Claims (14)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение, которое представляет собой
2. 2-фтор-Ы-[(2К)-2-гидроксипропил]-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо [1,2-Ъ][1,2,4]триазин-2ил]бензамид или

   2-хлор-Ы-[(1§)-1 -(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3 -ил)этил]-4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо [1,2Ъ][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид;

   или фармацевтически приемлемая соль любого из приведенных выше соединений.

   2. Соединение, которое представляет собой 2-фтор-Ы-[(2К)-2-гидроксипропил]-4-[7-(хинолин-6илметил)имидазо[1,2-Ъ][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид, или его фармацевтически приемлемая соль.
3. 3. Соединение, которое представляет собой 2-хлор-М-[(1§)-1-(5-метил-1,2,4-оксадиазол-3-ил)этил]4-[7-(хинолин-6-илметил)имидазо[1,2-Ъ][1,2,4]триазин-2-ил]бензамид, или его фармацевтически приемлемая соль.
4. 4. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.
5. 5. Способ ингибирования активности с-Ме! киназы, включающий приведение в контакт указанной киназы с соединением по п.1 или его фармацевтически приемлемой солью.
6. 6. Способ ингибирования НСР/с-Ме! киназного сигнального пути в клетке, включающий приведение в контакт указанной клетки с соединением по п.1 или его фармацевтически приемлемой солью.
7. 7. Способ ингибирования пролиферативной активности клетки, включающий приведение в контакт указанной клетки с соединением по п.1 или его фармацевтически приемлемой солью.
8. 8. Способ ингибирования роста опухоли у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли.
9. 9. Способ ингибирования метастазов опухоли у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли.
10. 10. Способ лечения заболевания у пациента, в котором указанное заболевание связано с нарушением регуляции НСР/с-Ме! сигнального пути, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли.
11. 11. Способ по п.10, в котором указанное заболевание представляет собой рак, атеросклероз, фиброз легких, фиброз и регенерацию почек, заболевание печени, аллергическое расстройство, воспалительное заболевание, аутоиммунное расстройство, цереброваскулярное заболевание, сердечно-сосудистое заболевание или состояние, связанное с трансплантацией органа.
12. 12. Способ лечения рака у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли.
13. 13. Способ по п.12, в котором указанный рак представляет собой карциному, саркому опорнодвигательного аппарата, саркому мягких тканей или гемопоэтическую злокачественную опухоль.
14. 14. Способ по п.12, в котором указанный рак представляет собой рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак шейки матки, холангиокарциному, колоректальный рак, рак пищевода, рак желудка, рак головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легких, рак носоглотки, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеосаркому, синовиальную саркому, рабдомиосаркому, МРН/фибросаркому, лейомиосаркому, саркому Капоши, множественную миелому, лимфому, Т-клеточную лейкемию у взрослых, острый миелобластный лейкоз, хронический миелолейкоз, глиобластому, астроцитому, меланому, мезотелиому и опухоль Вильма.