CN102812027A

CN102812027A - 作为C-MET抑制剂的咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪

Info

Publication number: CN102812027A
Application number: CN2011800125270A
Authority: CN
Inventors: 卓金聪; 何春红; 姚文庆
Original assignee: Incyte Corp
Current assignee: Incyte Corp
Priority date: 2010-02-03
Filing date: 2011-02-02
Publication date: 2012-12-05
Anticipated expiration: 2031-02-02
Also published as: US20130345224A1; CA2788398A1; MX2012008898A; CN102812027B; KR101870878B1; EA025304B1; AU2011269788B2; US20160137650A1; BR112012019302B1; BR112012019302A2; EP2531509A1; AU2011269788A1; JP5714030B2; US8487096B2; JP2013518887A; KR20120125301A; US20110212967A1; US10919901B2; ES2608329T3; WO2011162835A1

Abstract

本发明涉及咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪类，它们是c-Met的抑制剂，并且在包括癌症在内的c-Met相关疾病的治疗中有用。

Description

作为C-MET抑制剂的咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪

相关申请

本申请要求于2010年2月3日提交的、名称为“IMIDAZO[1，2-b][1，2，4]TRIAZINES AS C-MET INHIBITORS”的美国临时申请第61/300,946号的优先权。本说明书全文中所引用的任何专利、专利申请及参考文献的内容均通过引用整体并入本文。

发明领域

本发明涉及咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪类，它们是c-Met的抑制剂，并且在包括癌症在内的c-Met相关疾病的治疗中是有用的。

发明背景

蛋白激酶(PK)是一组调节多种重要的生物学过程的酶，这些生物学过程尤其包括细胞的生长、存活和分化，器官的形成与形态形成，新血管生成，组织修复与再生。蛋白激酶通过催化蛋白质(或底物)的磷酸化从而调节底物在各种生物学环境中的细胞活性来发挥它们的生理学功能。除了在正常组织/器官中的功能外，许多蛋白激酶也在包括癌症在内的许多人类疾病中发挥着更特殊的作用。蛋白激酶的亚群(也称为致癌蛋白激酶)在失调时可导致肿瘤的形成和生长，并且进一步引起肿瘤的维持和进展(Blume-Jensen P等人，Nature2001，411(6835)：355-365)。到目前为止，致癌蛋白激酶是用于癌症干预及药物研发的蛋白质靶标的最大且最具吸引力的组之一。

c-Met是一种原癌基因，它是包括Met、Ron和Sea在内的异二聚体受体酪氨酸激酶的特殊亚家族的成员(Birchmeier，C.等人，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2003，4(12)：915-925；Christensen，J.G.等人，CancerLett.2005，225(1)：1-26)。c-Met的唯一的高亲和力配体是肝细胞生长因子(HGF)，也被称为散射因子(SF)。HGF与c-Met的结合会通过自磷酸化来诱导受体的激活，从而引起受体依赖性信号传导的增强。c-Met和HGF在多种器官中都广泛表达，但它们的表达通常分别局限于上皮和间质来源的细胞。c-Met(或c-Met信号传导途径)在正常组织和人类恶性肿瘤如癌症中的生物学功能已经得到很好的文献证明(Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26；Corso，S.等人，Trends in Mol.Med.2005，11(6)：284-292)。

HGF和c-Met各自都是哺乳动物的正常发育所必需的，并且在缺失HGF和c-Met的小鼠中报告的异常与器官形态形成过程中的胚胎表达及上皮-间质转变缺陷的接近相一致(Christensen，J.G等人，CanceLett.2005，225(1)：1-26)。与这些发现相符，已经证明HGF/c-Met途径的信号转导和随后的生物学效应对发育过程中上皮-间质的相互作用以及细胞迁移、入侵、细胞增殖和存活、血管生成、形态形成和三维管状结构(如肾小管细胞、腺体形成)组织化的调控至关重要。c-Met途径激活在指定细胞/组织中的具体后果与环境高度相关。

失调的c-Met途径在肿瘤的形成、生长、维持和进展中起着重要的，有时是致病的(在遗传改变的情况下)作用(Birchmeier，C.等人，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.2003，4(12)：915-925；Boccaccio，C.等人，Nat.Rev.Cancer 2006，6(8)：637-645；Christensen，J.G.等人，CancerLett.2005，225(1)：1-26)。HGF和/或c-Met在大多数人类癌症的显著部分中都是过表达的，并且往往与不良的临床结果如更多的侵袭性疾病、疾病进展、肿瘤转移和缩短的患者生存期有关。进一步地，拥有高水平HGF/c-Met蛋白的患者对化疗和放疗有更强的抵抗力。除了HGF/c-Met的异常表达外，c-Met受体在癌症患者中也可以通过基因突变(种系和体细胞)和基因扩增得到激活。尽管基因扩增和基因突变是已在患者中报告的最常见的遗传改变，但是受体也可以通过缺失、截短、基因重排以及异常受体加工和有缺陷的负调控机制得到激活。

与c-Met有关的各种癌症包括但不限于：恶性上皮肿瘤(如膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管上皮癌、结直肠癌、食管癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌)；肌肉骨骼肉瘤(例如，骨肉瘤、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤)；软组织肉瘤(例如，MFH/纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、卡波西氏肉瘤)；造血细胞恶性肿瘤(例如，多发性骨髓瘤、淋巴瘤、成人T细胞白血病、急性髓性白血病，慢性髓样白血病)；以及其他肿瘤(例如，胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、间皮瘤和胚胎性癌肉瘤)(www.vai.org/met/；Christensen，J.G等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26)。

大量的临床前研究进一步验证了以下观点：激活的c-Met途径有助于肿瘤的形成和进展并可能是用于癌症有效干预的良好靶标(Birchmeier，C.等人，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2003，4(12)：915-925；Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26；Corso，S.等人，Trends in Mol.Med.2005，11(6)：284-292)。例如，研究表明tpr-met融合基因、c-Met的过表达和激活的c-Met突变都会引起各种模型细胞系的致癌性转化并导致小鼠体内的肿瘤生成和转移。更重要的是，特异性地损害和/或阻断HGF/c-Met信号传导的药剂已经在体外和体内证明了显著的抗肿瘤(有时是肿瘤消退)和抗转移活性。这些药剂包括抗HGF和抗c-Met的抗体、HGF肽拮抗剂、诱饵c-Met受体、c-Met肽拮抗剂、显性阴性c-Met突变、c-Met特异性的反义寡核苷酸和核酶，以及选择性的小分子c-Met激酶抑制剂(Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26)。

除了在癌症中已确定的作用以外，异常的HGF/c-Met信号传导也与动脉粥样硬化、肺纤维化、肾纤维化和再生、肝脏疾病、变应性疾病、炎性和自身免疫性疾病、脑血管疾病、心血管疾病、与器官移植相关的状况有关(Ma，H.等人，Atherosclerosis.2002，164(1)：79-87；Crestani，B.等人，Lab.Invest.2002，82(8)：1015-1022；Sequra-Flores，A.A.等人，Rev.Gastroenterol.Mex.2004，69(4)243-250；Morishita，R.等人，Curr.Gene Ther.2004，4(2)199-206；Morishita，R.等人，Endocr.J.2002，49(3)273-284；Liu，Y.，Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.2002，11(1)：23-30；Matsumoto，K.等人，Kidney Int.2001，59(6)：2023-2038；Balkovetz，D.F.等人，Int.Rev.Cytol.1999，186：225-250；Miyazawa，T.等人，J.Cereb.Blood Flow Metab.1998，18(4)345-348；Koch，A.E.等人，Arthritis Rheum.1996，39(9)：1566-1575；Futamatsu，H.等人，Circ.Res.2005，96(8)823-830；Eguchi，S.等人，Clin.Transplant.1999，13(6)536-544)。

为了开发出更有效的治疗癌症以及其它疾病的药物，不断地需要现有的抑制如c-Met激酶的药剂的新的或改进的形式。本文所述的化合物和盐就是针对这些需求和其他目的的。

发明概述

本发明特别提供作为c-Met抑制剂的以下化合物：

2-氟-N-[(2R)-2-羟丙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺(式I)；

2-氯-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(式II)；

2-氯-N-[(1S)-1-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)乙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺(式III)；

N-甲基-5-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]吡啶-2-甲酰胺(式IV)；以及

N，2-二甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺(式V)。

本发明进一步提供以上所述化合物的任意一种的药学上可接受的盐。

本发明进一步提供一种抑制c-Met激酶的活性的方法，该方法包括使所述激酶与本发明的化合物或盐接触。

本发明进一步提供一种抑制细胞中的HGF/c-Met激酶信号传导途径的方法，该方法包括使所述细胞与本发明的化合物或盐接触。

本发明进一步提供一种抑制细胞的增殖活性的方法，该方法包括使所述细胞与本发明的化合物或盐接触。

本发明进一步提供一种抑制患者的肿瘤生长的方法，该方法包括对所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或盐。

本发明进一步提供一种抑制患者的肿瘤转移的方法，该方法包括对所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或盐。

本发明进一步提供一种治疗患者的疾病的方法，其中所述疾病与HGF/c-MET信号传导途径的失调相关，该方法包括对所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或盐。

本发明进一步提供一种治疗患者的癌症的方法，该方法包括对所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或盐。

本发明提供用于治疗的本发明的化合物。

本发明提供本发明的化合物在制备用于治疗的药物中的用途。在一个实施方式中，本发明提供式I、II、III、IV或V的化合物中的任一种在制备用于癌症治疗的药物中的用途。

发明详述

本发明特别提供作为c-Met抑制剂的以下化合物：

在此处以及别处，当化合物的名称与化合物的结构之间存在差异时，以化学结构为准。

本发明进一步提供以上所述化合物的任一种的药学上可接受的盐。

在此描述的化合物可以是不对称的(例如，具有一个或多个立构中心)。除非另有说明，否则涉及所有的立体异构体，如对映异构体和非对映异构体。含有不对称取代的碳原子的本发明化合物可以以旋光形式或外消旋形式得到分离。

本发明的化合物也包括互变异构形式。互变异构形式来自于单键与邻近的双键之间的交换，以及伴随的质子的迁移。互变异构形式包括质子异变互变异构体，它们是具有相同的经验式和总电荷的异构质子化态。质子异变互变异构体的实例包括酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、酰胺-亚胺酸对、烯胺-亚胺对，以及质子可以占据杂环体系中的两个或多个位点的环形，例如，1H-和3H-咪唑，1H-、2H-和4H-1，2，4-三唑，1H-和2H-异吲哚，以及1H-和2H-吡唑。互变异构形式可以处于平衡或通过适当的取代立体地锁定为一种形式。

本发明的化合物也包括存在于中间体或最终化合物中的原子的所有同位素。同位素包括那些原子数相同但质量数不同的原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。

在某些实施方式中，本发明的化合物或它们的盐是基本分离的。“基本分离的”是指该化合物或盐至少部分地或基本上从其生成或检测的环境中分离出来。部分分离可包括，例如，富含本发明化合物的组合物。基本分离可包括含有以重量计至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的本发明化合物或其盐的组合物。

本发明也包括本文所述化合物的药学上可接受的盐。如此处所用的，“药学上可接受的盐”指所公开的化合物的衍生物，其中通过使现有的酸或碱部分转化为其盐形式而修饰母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基(如胺)的无机酸盐或有机酸盐，酸性残基(如羧酸)的碱性盐或有机盐，等等。本发明的药学上可接受的盐包括例如由无毒性的无机或有机酸所生成的母体化合物的常规无毒性盐。本发明的药学上可接受的盐可以通过常规的化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，可以通过使这些化合物的游离酸形式或游离碱形式与化学计量的适合的碱或酸在水或有机溶剂或两者的混合物中反应来制备此类盐；通常，优选非水性介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。适合的盐的列表可以在Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版，MackPublishing Company，Easton，Pa.，1985，1418页和Journal ofPharmaceutical Science，66，2(1977)中找到，两者都通过引用全部结合于此。

词组“药学上可接受的”在本文中用来指那些化合物、材料、组合物和/或剂型，它们在合理的医学判断的范围内，适合用于与人和动物的组织接触，而没有过度的毒性、刺激性、变应性应答或者其他问题或并发症，符合合理的利益/风险比。

使用方法

本发明的化合物可用作c-Met的抑制剂。用本发明的化合物处理表达c-Met的细胞(在体外或体内)会抑制配体/激酶信号传导途径，并且抑制与信号传导途径有关的下游事件，比如细胞增殖和增强的细胞活动性。例如，本发明的化合物可以阻断和/或损害由c-Met途径激活引起的生化和生物学过程，包括但不限于c-Met激酶的激活(例如，c-Met磷酸化)和信号传导(细胞基质，如Gab1、Grb2、Shc和c-Cbl的激活和募集；以及包括PI-3激酶、PLC-γ、STATs、ERK1/2和FAK在内的许多信号转导物的后续激活)、细胞增殖和存活、细胞活动性、迁移和侵袭、转移、血管生成等。因此，本发明进一步提供通过使细胞与本发明的化合物接触，从而抑制细胞中的配体/激酶信号传导途径(例如HGF/c-Met激酶信号传导途径)的方法。本发明进一步提供通过使细胞与本发明的化合物接触从而抑制细胞增殖活性或抑制细胞活动性的方法。

本发明进一步提供通过对需要这种治疗的个体施用治疗有效量或剂量的本发明化合物或其药物组合物，来治疗个体(例如，患者)的与c-Met激酶信号传导途径失调(包括c-Met的异常活性和/或过表达)相关的疾病的方法。在某些实施方式中，失调的激酶在患者的病变组织中过表达。在某些实施方式中，失调的激酶在患者的病变组织中异常活跃。c-Met和HGF/c-Met信号传导途径的失调是指包括酶通过多种机制的激活，这些机制包括但不限于：依赖于HGF的自分泌和旁分泌激活、c-met基因过表达和扩增、点突变、缺失、截短、重排以及异常的c-Met受体加工和有缺陷的负调控机制。

在某些实施方式中，本发明的化合物对治疗疾病，如癌症、动脉粥样硬化、肺纤维化、肾纤维化和再生、肝脏疾病、变应性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、脑血管疾病、心血管疾病或与器官移植相关的病症，是有用的。在进一步的实施方式中，本发明的化合物可能在抑制患者的肿瘤生长或肿瘤转移的方法中有用。

可通过本文所述方法治疗的癌症的实例包括膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管上皮癌、结直肠癌、食管癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、MFH/纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、卡波西氏肉瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、成人T细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓样白血病、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、间皮瘤或胚胎性癌肉瘤等。

因此，在一个实施方式中，本文提供一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括对受试者给药2-氟-N-[(2R)-2-羟丙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐，使得癌症得到治疗。

在另一个实施方式中，本文提供一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括对受试者给药2-氯-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐，使得癌症得到治疗。

在另一个实施方式中，本文提供一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括对受试者给药2-氯-N-[(1S)-1-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)乙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐，使得癌症得到治疗。

在另一个实施方式中，本文提供一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括对受试者给药N-甲基-5-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]吡啶-2-甲酰胺，或其药学上可接受的盐，使得癌症得到治疗。

在另一个实施方式中，本文提供一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括对受试者给药N，2-二甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐，使得癌症得到治疗。

因此，在一个实施方式中，本文提供一种抑制有需要的受试者的肿瘤生长的方法，该方法包括对受试者给药2-氟-N-[(2R)-2-羟丙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方式中，本文提供一种抑制有需要的受试者的肿瘤生长的方法，该方法包括对受试者给药2-氯-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方式中，本文提供一种抑制有需要的受试者的肿瘤生长的方法，该方法包括对受试者给药2-氯-N-[(1S)-1-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)乙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方式中，本文提供一种抑制有需要的受试者的肿瘤生长的方法，包括对受试者给药N-甲基-5-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]吡啶-2-甲酰胺，或其药学上可接受的盐，使得癌症得到治疗。

在另一个实施方式中，本文提供一种抑制有需要的受试者的肿瘤生长的方法，该方法包括对受试者给药N，2-二甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。

如本文所用的，术语“细胞”是指体外的、来自体内的或体内的细胞。在某些实施方式中，来自体内的细胞可以是从生物体如哺乳动物上切除的组织样品的部分。在某些实施方式中，体外细胞可以是细胞培养物中的细胞。在某些实施方式中，体内细胞是在生物体如哺乳动物内生长的细胞。

如本文所用的，术语“接触”是指在体外系统或体内系统中使指定部分处在一起。例如，使本发明的化合物与蛋白激酶“接触”包括将本发明的化合物给药于个体或患者(如人)，以及，例如，将本发明的化合物导入到包含细胞的或纯化的蛋白激酶制剂的样品中。

如本文所用的，可交换使用的术语“个体”或“患者”是指任何动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，最优选人。

如本文所用的，术语“治疗有效量”是指引起研究人员、兽医、医师或其他临床医生要在组织、系统、动物、个体或人中寻求的生物或药物反应的活性化合物或药剂的量，所述反应包括以下一种或多种：(1)预防疾病；例如，预防可能易患疾病、状况或病症但尚未患病或尚未显示出该病的病理或症状的个体的该疾病、状况或病症；(2)抑制疾病；例如，抑制患有疾病、状况或病症或显示出其病理或症状的个体的该疾病、状况或病症；和(3)缓解疾病；例如，缓解患有疾病、状况或病症或显示出其病理或症状的个体的该疾病、状况或病症(即逆转病理和/或症状)，如降低疾病的严重程度。

术语“治疗”包括与c-Met激酶活性、HGF/c-Met激酶信号传导途径和/或细胞的增殖活性相关的至少一种症状的减少或减轻。用于疾病或状况时，术语“治疗”意指干预此类疾病或状况，从而预防或延缓疾病或状况的发展，预防或延缓疾病或状况的进展，中止疾病或状况的进展，或消除疾病或状况。

如果没有其它说明，适当地和有利地，术语“用途”包括以下本发明实施方式中的任意一个或多个，分别为：在病症的治疗中的用途；在制备用于病症治疗的药物组合物中的用途，例如，在药物制备中的用途；本发明的化合物在这些疾病的治疗中的使用方法；用于治疗这些疾病的含有本发明化合物的药物制剂；以及用于治疗这些疾病的本发明的化合物。特别是，待治疗且优选使用本发明的化合物治疗的疾病选自与c-Met激酶活性、HGF/c-Met激酶信号传导途径和/或细胞增殖活性相关的疾病，以及癌症。

联合治疗

一种或多种额外的药剂或治疗方法，例如，化疗剂、抗癌剂、细胞毒素剂或抗癌疗法(即，辐射、激素，等等)，可以与用于治疗所述疾病、病症或状况的本发明化合物和盐联合使用。这些药剂或疗法可与本发明的化合物或盐一起给药(例如，组合成单一剂型)，或者这些药剂或疗法可以通过单独的给药途径同时地或相继地给药。

合适的抗癌剂包括激酶抑制剂，其包括曲妥珠单抗(Herceptin)、伊马替尼(Gleevec)、吉非替尼(Iressa)、埃罗替尼盐酸盐(Tarceva)、西妥昔单抗(Erbitux)、贝伐珠单抗(Avastin)、索拉非尼(Nexavar)、舒尼替尼(Sutent)，以及，例如，WO 2005/004808、WO 2005/004607、WO 2005/005378、WO 2004/076412、WO 2005/121125、WO2005/039586、WO 2005/028475、WO 2005/040345、WO 2005/039586、WO 2003/097641、WO 2003/087026、WO 2005/040154、WO2005/030140、WO 2006/014325、WO 2005/070891、WO 2005/073224、WO 2005/113494以及美国专利申请公开第2005/0085473、2006/0046991和2005/0075340号中所述的RTK抑制剂。

适合的化疗剂或其它抗癌剂进一步包括，例如，烷化剂(包括但不限于，氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸酯、亚硝基脲和三氮烯)，比如尿嘧啶氮芥、甲川氯、环磷酰胺(Cytoxan^TM)、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基硫代磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链脲霉素、氮烯唑胺和替莫唑胺。

适合的化疗剂或其它抗癌剂进一步包括，例如，抗代谢物(包括但不限于，叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)，如甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁和吉西他滨。

适合的化疗剂或其它抗癌剂进一步包括，例如，某些天然产物及其衍生物(例如，长春花生物碱、抗肿瘤抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼毒素)，如长春碱、长春新碱、长春地辛、博来霉素、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、阿糖胞苷、紫杉醇(Taxol^TM)、光神霉素、脱氧助间型霉素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、干扰素(尤其是IFN-a)、依托泊苷和替尼泊苷。

其它细胞毒素剂包括诺维本(navelbene)、CPT-11、阿那曲唑(anastrazole)、来曲唑、卡培他滨、雷洛昔芬(reloxafine)、环磷酰胺、异环磷酰胺(ifosamide)以及屈洛昔芬(droloxafine)。

同样合适的细胞毒素剂，例如替尼泊苷、抗肿瘤酶、拓扑异构酶抑制剂、甲基苄肼、米托蒽醌、铂配合物(如顺铂和卡铂)、生物反应修饰剂、生长抑制剂、抗激素治疗剂、亚叶酸、喃氟啶和造血生长因子。

其它抗癌剂包括抗体治疗剂如曲妥珠单抗(Herceptin)，共刺激分子如CTLA-4、4-1BB和PD-1的抗体，或细胞因子(IL-10、TGF-β，等等)的抗体。进一步的抗体治疗剂包括酪氨酸激酶和/或其配体的抗体，如抗HGF抗体和/或抗c-Met抗体。术语“抗体”意在包括整个抗体(例如，单克隆的、多克隆的、嵌合的、人化的、人的，等等)及其抗原结合片段。

其它的抗癌剂也包括那些阻碍免疫细胞迁移的药物，如趋化因子受体拮抗剂，包括CCR2和CCR4。

其它的抗癌剂也包括那些增强免疫系统的药物，如佐剂或过继性T细胞转移剂。

其它的抗癌剂包括抗癌疫苗，如树突细胞、合成肽、DNA疫苗和重组病毒。

本领域技术人员了解大多数上述药剂的安全而有效的给药方法。另外，它们的给药在标准文献中有描述。例如，许多化学治疗剂的给药在″Physicians′Desk Reference″(PDR，例如，1996年版，Medical Economics Company，Montvale，NJ)中有描述，其公开内容通过引用全部结合于此。

药物制剂和剂型

当本发明的化合物或盐作为药物应用时，它们可以以药物组合物的形式来给药，药物组合物相当于本发明的化合物(或其盐)与药学上可接受的载体的组合。这些组合物可以以制药领域众所周知的方式来制备，并且可以通过多种途径给药，这取决于是需要进行局部治疗还是全身治疗以及取决于治疗的区域。给药可以是局部(包括眼部给药以及粘膜给药，粘膜给药包括鼻内、阴道和直肠给药)、肺部(例如，通过吸入或吹入粉剂或气雾剂，气雾剂包括通过使用喷雾器；气管内、鼻内、表皮和经皮)、眼、口腔或肠胃外给药。眼部给药方法可包括局部给药(滴眼液)，结膜下、眼周或玻璃体内注射，或通过气囊导管导入，或者通过经手术置于结膜囊中的眼科插入物导入。肠胃外给药包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注，或颅内给药，例如鞘内或心室内给药。肠胃外给药可以以快速灌注剂量的形式给药，或者可以，例如，通过连续灌注泵给药。用于局部给药的药物组合物和制剂可包括透皮贴剂、软膏剂、洗剂、乳膏、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉剂。常规的药物载体，水性、粉末或油性基质，增稠剂等，可能是必需的或期望的。

本发明也包括含有作为活性成分的一种或多种上述本发明化合物与一种或多种药学上可接受的载体结合的药物组合物。在制备本发明的组合物时，该活性成分一般与赋形剂混合，用赋形剂稀释或封装在例如胶囊、小袋、纸包或其它容器形式的载体中。当该赋形剂用作稀释剂时，它可以是充当活性组分的媒介物、载体或介质的固体、半固体或液体材料。因此，这些组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(作为固体或在液体介质中)、含有例如高达10重量％的活性化合物的软膏剂、软明胶胶囊剂和硬明胶胶囊剂、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉剂。

在制备制剂时，活性化合物在与其他成分组合之前可以先研磨以提供合适的粒度。如果活性化合物基本上是不可溶的，那么可以被研磨成小于200目的粒度。如果活性化合物基本上可溶于水，则可以通过研磨调整粒度(例如约40目)，以提供在制剂中基本均匀的分布。

一些合适的赋形剂的实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。该制剂还可包括：润滑剂，如滑石、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，如苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；和调味剂。可以配制本发明的组合物，以提供通过采用本领域已知的方法对患者给药后活性成分的快速、持续或延迟释放。

这些组合物可以以单位剂型的形式配制，每剂量含有约5mg至约500mg，更常见地约10mg至约100mg的活性成分。术语“单位剂型”是指适合作为单一剂量用于人类受试者和其它哺乳动物的物理离散单元，每个单元含有经过计算可以产生期望的治疗效果的预定量的活性成分以及合适的药用赋形剂。

活性化合物在宽剂量范围内可以是有效的，并且一般以药物有效量来给药。然而，可以理解，化合物的实际给药量通常将由医生根据包括待治疗的病症、选择的给药途径、实际给药的化合物、个体患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度等的相关情况来决定。

为了制备固体组合物，如片剂，主要活性成分与药用赋形剂混合形成包含本发明化合物的均匀混合物的固体预制剂组合物。这些预制剂组合物是均匀的是指，活性成分一般均匀分散在整个组合物中，以使该组合物可以容易地细分成等效单位剂型，如片剂、丸剂和胶囊剂。这种固体预制剂然后细分成包含例如0.1mg到约500mg本发明活性成分的上述类型的单位剂型。

可以将本发明的片剂或丸剂进行包衣或以其它方式组合，从而提供具有长效优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内剂量成分和外剂量成分，后者是在前者上的包膜的形式。两种成分可以由肠溶层隔开，肠溶层用于抵抗在胃中的崩解并且使内部成分完好地进入十二指肠或延迟释放。多种材料可用于这样的肠溶层或肠溶衣，这些材料包括多种聚合酸，以及聚合酸与虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素等材料的混合物。

可以将本发明的化合物和组合物引入的用于口服或者注射给药的液体形式包括水溶液、适当调味的糖浆、水性或油性悬浮液，以及与食用油(如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)的调味乳剂，以及酏剂和类似的药物载体。

用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和混悬剂，以及粉剂。液体或固体组合物可以包含合适的药学上可接受的上述赋形剂。在某些实施方式中，这些组合物通过口服或鼻呼吸途径给药，用于达到局部或全身的效果。组合物可以通过使用惰性气体进行雾化。雾化溶液可以直接从喷雾装置吸入，或者喷雾装置可以连接到面罩支架或间歇性正压呼吸机上。溶液、悬浮液或粉末组合物可从以恰当方式递送该制剂的装置经口或经鼻给药。

对患者给药的化合物或组合物的量将依据所给药的药物、给药目的(如预防或治疗)、患者的状态、给药方式等而改变。在治疗性应用中，可以对已经患病的患者给药足以治愈或至少部分地遏制该疾病的症状及其并发症的量的组合物。有效剂量取决于所治疗的病情，以及由主治医生根据诸如疾病的严重程度、患者的年龄、体重和一般状况等因素所做出的判断。

对患者给药的组合物可以是上述药物组合物的形式。这些组合物可以通过常规的灭菌技术进行灭菌，或者可以无菌过滤。水溶液可以经包装原样使用，或将其冻干，冻干制剂在给药之前与无菌的水性载体结合。化合物制剂的pH值一般在3-11之间，更优选5-9，最优选7-8。可以理解，某些上述赋形剂、载体或稳定剂的使用会引起药用盐的形成。

本发明的化合物的治疗剂量可根据例如进行治疗的特殊用途、化合物的给药方式、患者的健康和状况以及处方医师的判断而改变。本发明的化合物在药物组合物中的比例或浓度可以根据许多因素而改变，这些因素包括剂量、化学特性(例如，疏水性)以及给药途径。例如，本发明的化合物可以以含有约0.1-约10％w/v的化合物的水性生理缓冲溶液提供，用于肠胃外给药。某些典型的剂量范围为每天约1μg/kg至约1g/kg体重。在某些实施方式中，剂量范围为每天约0.01mg/kg至约100mg/kg体重。剂量有可能取决于诸如疾病或病症的类型和进展程度、特定患者的总体健康状况、选定的化合物的相对生物学效能、赋形剂的配方及其给药途径等变量。有效剂量可以根据来自体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线来推算。

本发明的化合物也可以与一种或多种额外的活性成分组合配制，这些额外的活性成分可包括任何药剂，如抗病毒剂、疫苗、抗体、免疫增强剂、免疫抑制剂、抗炎药等。

进一步理解，为了清楚起见而在单独的实施方式中描述的本发明的某些特征，也可以在单个实施方式中以组合的方式提供。相反，为了简洁起见而在单个实施方式中描述的本发明的各种特征，也可以单独地提供或以任何合适的亚组合的形式提供。

本发明将通过具体实施例的方式作更详细的描述。以下实施例是为了说明目的而提供的，而不是旨在以任何方式限制本发明。本领域技术人员将能够容易地认识到各种各样的可被改变或修改而获得基本上相同结果的非关键参数。根据本文提供的一种或多种分析，发现这些实施例中的化合物是c-Met的抑制剂。

实施例

以下提供了本发明化合物的实验过程。一般地，通过如实施例中所示的高效液相色谱法(HPLC)和快速色谱法(硅胶)以制备级地纯化产物。典型的制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱条件如下：

pH＝2纯化：Waters Sunfire^TM C₁₈ 5Tm，19x100mm柱，用流动相A：0.1％TFA(三氟乙酸)的水溶液和流动相B：0.1％TFA的乙腈溶液进行洗脱；流速为30ml/m；利用文献[″Preparative LCMSPurification：Improved Compound Specific Method Optimization″，K.Blom，B.Glass，R.Sparks，A.Combs，J.Comb.Chem.，6，874-883(2004)]中所述的化合物特定方法优化方案(Compound SpecificMethod Optimization protocol)针对每种化合物优化分离梯度。

pH＝10纯化：Waters XBridge C₁₈ 5Tm，19x100mm柱，用流动相A：0.15％NH₄OH的水溶液和流动相B：0.15％NH₄OH的乙腈溶液洗脱；流速为30ml/m；利用文献[″Preparative LCMS Purification：Improved Compound Specific Method Optimization″，K.Blom，B.Glass，R.Sparks，A.Combs，J.Comb.Chem.，6，874-883(2004)]中所述的化合物特定方法优化方案(Compound Specific Method Optimizationprotocol)针对每种化合物优化分离梯度。

分离出来的异构体一般在下列条件下进行分析型液相色谱质谱(LCMS)纯化：仪器：Agilent 1100系列，LC/MSD，柱：WatersSunfire^TM C₁₈ 5Tm，2.1x5.0mm，缓冲液：流动相A：0.025％TFA的水溶液，流动相B：0.025％TFA的乙腈溶液；梯度为3分钟内从2％到80％的B，流速为1.5mL/min。

实施例1

2-氟-N-[(2R)-2-羟丙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺；

步骤1：4-溴-3-氟-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺

将草酰氯(38.1mL，450mmol)缓慢加入到4-溴-3-氟苯甲酸(49.3g，225mmol)(Alfa Aesar，Cat.#B25475)在二氯甲烷(300mL)中的混合物中。然后，加入N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL)，将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩，并与甲苯共蒸发3次。然后将残留物溶于二氯甲烷(100mL)。将该溶液滴加到N，O-二甲基羟胺盐酸盐(30.7g，315mmol)和碳酸钾(120g，900mmol)在二氯甲烷(300mL)和水(300mL)中的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌2小时。分离出有机层。水层用二氯甲烷(2×50mL)进行萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩得到产物(58.5g)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝261.9/263.9。

步骤2：1-(4-溴-3-氟苯基)乙酮

在0℃，向4-溴-3-氟-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(步骤1，58.5g，223mmol)的四氢呋喃(500mL)溶液中加入3M甲基氯化镁的四氢呋喃溶液(125mL，380mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时，并且用冷的氯化铵水溶液(150mL)终止反应。分离有机层并减压浓缩。将残留物重新溶解在乙酸乙酯(100mL)中。水层用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。过滤并减压浓缩得到产物(48.4g)，该产物无需进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤3：(4-溴-3-氟苯基)(氧代)乙醛和1-(4-溴-3-氟苯基)-2，2-二羟基乙酮

向1-(4-溴-3-氟苯基)乙酮(步骤2，9.0g，41mmol)的二甲亚砜(40mL)溶液中缓慢加入48％的溴化氢水溶液(14mL)。将反应混合物在60℃下搅拌过夜，然后冷却至室温，倒入冰水中。将沉淀物过滤并用水洗涤，固体在真空中干燥过夜，得到8.1g所需产物。水层用乙酸乙酯萃取3次。合并的萃取物用水和盐水洗涤，干燥，过滤，浓缩，得到额外的2.2g所需产物(共10.3g)。

步骤4：1-(4-溴-3-氟苯基)-2，2-二乙氧基乙酮

向1-(4-溴-3-氟苯基)-2，2-二羟基乙酮和(4-溴-3-氟苯基)(氧代)乙醛(步骤3的粗产物，7.0g，28mmol)在甲苯(50mL)中的混合物中加入原甲酸乙酯(12mL，70mmol)和对甲苯磺酸(200mg，1mmol)。将反应混合物回流4小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用碳酸氢钠水溶液、水、盐水洗涤，用硫酸镁干燥。减压浓缩得到所需产物，该产物无需进一步纯化直接用于下一步。

步骤5：6-(4-溴-3-氟苯基)-1，2，4-三嗪-3-胺

将1-(4-溴-3-氟苯基)-2，2-二乙氧基乙酮(步骤4，15.2g，50mmol)、氨基胍碳酸氢盐(10.2g，75mmol)和氢氧化钾(6.6g，100mmol)在乙醇(200mL)和水(4mL)中的混合物回流过夜。减压蒸发溶剂，残留物用乙腈洗涤，然后过滤。将滤液减压浓缩。将残留物溶解在二氯甲烷(100mL)中，用水、盐水洗涤，减压浓缩。将残留物溶解在乙醇(50mL)中。向该溶液中加入0.2N的盐酸(50mL)。将得到的混合物加热至110℃保持8小时，然后用冰水浴冷却。过滤收集生成的沉淀物，用异丙醇洗涤，得到所需产物。(5.5g，41％)LCMS：(M+H)＝286.8/288.8。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：8.60(s，1H)，7.79(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.68(dd，J＝8.3，7.0Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.3，2.0Hz，1H)，5.43(s，2H)。

步骤6：3-喹啉-基丙醛

将装有三(二亚苄基丙酮)二钯(480mg，0.52mmol)(Aldrich，Cat.#328774)和三叔丁基-鏻四氟硼酸盐(300mg，1.0mmol)的烧瓶抽空并重新充满氮气(2次)。加入1，4-二氧六环(31mL)，然后依次加入6-溴喹啉(7.2g，35mmol)(TCI，Cat.#B2015)、2-丙烯-1-醇(4.7mL，69mmol)和N-环己基-N-甲基-环己胺(8.9mL，42mmol)。将反应容器抽空并重新充满氮气(2次)。将反应混合物在30℃下搅拌24小时。将二乙醚(30mL)加入反应混合物中，然后过滤，用二乙醚洗涤。将有机萃取物减压浓缩。使用含有乙酸乙酯的己烷(0-50％)，通过快速色谱法纯化残留物，从而得到所需产物(约55％)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝186.0；(M+H₂O+H)⁺：m/z＝204.0。

步骤7：1-(2-氯-1-羟基-3-喹啉-6-基丙基)吡咯烷-2，5-二酮

向在0℃下冷却的3-喹啉-6-基丙醛(步骤6，2.3g，0.012mol)的氯仿(5mL)溶液中加入L-脯氨酸(0.4g，0.004mol)。然后在0℃下向混合物中加入N-氯代琥珀酰亚胺(1.74g，0.0130mol)。使反应物升温至室温，搅拌过夜。反应物为稠浆。将固体过滤，用氯仿洗涤，得到纯产物(2g，50.5％)。¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：8.90(dd，J＝4.0，2.0Hz，1H)，8.13(d，J＝8.0Hz，1H)，8.05(d，J＝8.4Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.65(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，7.40(dd，J＝8.4，4.0Hz，1H)，5.46(d，J＝9.4Hz，1H)，4.95(ddd，J＝9.4，8.0，3.1Hz，1H)，3.73(dd，J＝14.3，3.1Hz，1H)，3.19(dd，J＝14.3，8.0Hz，1H)，2.75(s，4H)。

步骤8：6-[2-(4-溴-3-氟苯基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-7-基]甲基喹啉

将装在密封管内的6-(4-溴-3-氟苯基)-1，2，4-三嗪-3-胺(步骤5，200mg，0.743mmol)和1-(2-氯-1-羟基-3-喹啉-6-基丙基)吡咯烷-2，5-二酮(步骤7，284mg，0.892mmol)在异丙醇(7.4mL)和水(0.11mL)中的混合物在105℃下加热5天。使反应混合物冷却至室温后，过滤收集沉淀物，用异丙醇洗涤，真空干燥，得到所需产物(180mg，55％)LCMS(M+H)⁺：m/z＝433.9/436.0。

步骤9：2-氟-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苄腈

将氰化锌(131mg，1.11mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(35mg，0.038mmol)(Aldrich，Cat.#328774)、(9，9-二甲基-9H-氧杂蒽-4，5-二基)双(二苯基膦)(78.5mg，0.136mmol)(Aldrich，Cat.#526460)和N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(0.22mL，1.4mmol)相继加入到装在微波管内的6-[2-(4-溴-3-氟苯基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]-三嗪-7-基]甲基喹啉(步骤8，480mg，1.10mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(8.7mL)中的混合物中。将管密封，脱气3次，然后在微波辐射下加热至160℃保持500秒。减压除去大部分溶剂，将残留物溶解在乙酸乙酯中，用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥。过滤和浓缩后得到残留物，使用含有甲醇的二氯甲烷(0-6％)，在硅胶柱中纯化该残留物，得到所需产物。(90％)LCMS(M+H)⁺：m/z＝381.0。

步骤10：2-氟-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酸

将2-氟-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苄腈(步骤9，750mg，2mmol)在盐酸的浓溶液(5.0mL，53mmol)和水(1.0mL)中于105℃搅拌过夜。减压除去溶剂，将得到的残留物用水洗涤，过滤，得到作为盐酸盐的粗产物，该产物无需进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(M+H)⁺：m/z＝400.0。

步骤11：2-氟-N-[(2R)-2-羟丙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺

将2-氟-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酸盐酸盐(180.0mg，0.381mmol，步骤10)和苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(220mg，0.50mmol)(Aldrich，Cat.#226084)在N，N-二甲基甲酰胺(9.0mL)中的混合物于室温下搅拌3分钟。然后缓慢加入(2R)-1-氨基丙-2-醇(57mg，0.76mmol)，随后加入三乙胺(318.7μL，2.287mmol)。将混合物于室温下搅拌3小时，然后加入水。过滤收集沉淀物，用乙腈水溶液洗涤。将沉淀物溶解在1N HCl水溶液中，然后用冻干法干燥，得到作为盐酸盐的所需产物。LCMS(M+H)⁺：m/z＝457.3。¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆)：9.30(s，1H)，9.20(dd，J＝5.0，1.5Hz，1H)，9.02(d，J＝8.0Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.35(d，J＝8.0Hz，1H)，8.28(s，1H)，8.16(dd，J＝8.5，1.5Hz，1H)，8.08(s，1H)，8.04(s，1H)，8.02(s，1H)，8.00(dd，J＝8.5，5.0，Hz，1H)，7.80(t，J＝8.0Hz，1H)，4.75(s，2H)，3.79(m，1H)，3.21(m，2H)，1.09(d，J＝7.0Hz，3H)。

S对映异构体可以根据以上过程利用(2S)-1-氨基丙-2-醇制备，或者通过使产物外消旋并使用标准的手性分离技术(例如，手性柱)分离对映异构体来制备。

实施例2

2-氯-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺

步骤1：6-溴-1，2，4-三嗪-3-胺

向1，2，4-三嗪-3-胺(3.84g，40.0mmol)(Aldrich，Cat.#100625)在乙腈(40mL)中的悬浮液中加入水(60mL)，搅拌直至形成澄清溶液。在0℃下向该溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(7.48g，42.0mmol)，将生成的混合物搅拌10分钟。移去冷水浴，使混合物升温至室温。然后用乙酸乙酯(150mL)将混合物稀释并冷却至0℃(冰水浴)。加入Na₂CO₃(3.0g)，搅拌10分钟。分离两个层，水相用乙酸乙酯(150mL)进行萃取。合并的有机层用饱和NaHCO₃溶液、盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到所需产物(4g，57.15％)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝175.2/177.2。

步骤2：4-(3-氨基-1，2，4-三嗪-6-基)-2-氯苯甲酸甲酯

向6-溴-1，2，4-三嗪-3-胺(步骤1，1.0g，5.7mmol)和[3-氯-4-(甲氧羰基)苯基]硼酸(1.5g，6.8mmol)(VMR，Cat.#100013-404)在1，4-二氧六环(22mL)中的混合物中加入磷酸钾(2.4g，11mmol)的水(5.1mL)溶液。用吹扫氮气将混合物脱气10分钟。向混合物中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.20g，0.17mmol)，再次用氮气脱气。将混合物搅拌并在82℃(油浴)下加热1小时。将混合物冷却至室温，用水稀释，搅拌30分钟，形成灰色固体。将固体通过过滤分离，用水冲洗数次，然后在空气中干燥。然后将固体依次与己烷、二氯甲烷-己烷(1∶1)和己烷研磨，得到所需产物(840mg，55.54％)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝264.9/267.0。

步骤3：2-氯-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酸甲酯

将4-(3-氨基-1，2，4-三嗪-6-基)-2-氯苯甲酸甲酯(步骤2，0.840g，3.17mmol)和1-(2-氯-1-羟基-3-喹啉-6-基丙基)吡咯烷-2，5-二酮(1.11g，3.49mmol，实施例1，步骤7)在1-丁醇(11.6mL)中的混合物在110℃下搅拌22小时。减压除去溶剂。将残留物与乙酸乙酯一起研磨。过滤收集沉淀物，用乙酸乙酯和己烷洗涤沉淀物，得到所需产物(0.908g)。将母液浓缩至一半体积。过滤收集沉淀物，用乙酸乙酯和己烷洗涤沉淀物，得到额外的所需产物(0.342g)。获得的总产物为1.10g(80.6％)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝430.0/431.9。

步骤4：2-氯-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酸

向2-氯-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酸甲酯(步骤3，1.10g，2.56mmol)的四氢呋喃(7.0mL)和甲醇(5.0mL)溶液中加入氢氧化锂(0.245g，10.2mmol)的水(3.0mL)溶液。将混合物在室温下搅拌2小时，减压浓缩至体积约为3mL。残留物用水(3mL)稀释，用1N盐酸将pH调至约4-5。将沉淀物滤出，用水洗涤数次，并在空气中干燥过夜。然后将沉淀物依次与乙醚和二氯甲烷(DCM)-己烷(1∶1)研磨。得到所需产物(638mg，60％)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝415.9/417.9。

步骤5：2-氯-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺

将2-氯-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酸(步骤4，5.0mg，0.012mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(10.0mg，0.020mmol)(Aldrich，Cat.#226084)的N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)溶液在室温下搅拌3分钟。在0℃下缓慢加入2.0M甲胺的四氢呋喃(0.012mL，0.023mmol)溶液，随后加入三乙胺(6.4μL，0.046mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，并且通过RP-HPLC(pH＝2)进行纯化，得到作为三氟醋酸(TFA)盐的所需产物。LCMS(M+H)⁺：m/z＝429.3。

实施例3

2-氯-N-[(1S)-1-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)乙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺

步骤1：[(1S)-2-氨基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯

向在0℃搅拌的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酸(1g，0.005mol)的THF溶液中加入4-甲基吗啉(0.588g，0.00581mol)，之后在2分钟内逐滴加入氯甲酸异丁酯(0.794g，0.00581mol)。将反应物在0℃下搅拌30分钟，之后将30wt.％氢氧化铵溶液(12.0mL，0.0925mol)快速倒入该反应物中。将该反应物升温至室温，并搅拌5小时。将反应混合物浓缩。加水，将混合物用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到粗产物(800mg，80％)，该产物无需进一步纯化，直接用于下一步反应。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：12.40(s，1H)，7.10(d，J＝7.0Hz，1H)，3.88(m，1H)，1.35(s，9H)，1.20(d，J＝7.3Hz，3H)。

步骤2：[(1S)-1-氰乙基]氨基甲酸叔丁酯

向搅拌中的[(1S)-2-氨基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(步骤1，0.7g，0.004mol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中立即加入343mg的氰尿酰氯(0.00186mol)。将反应混合物搅拌4小时。加水，将混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩。使用含有EtOAc的己烷(30-50％)，在硅胶柱上通过快速色谱法纯化残留物，得到所需产物(400mg，63％)。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：7.74(d，J＝7.0Hz，1H)，4.48(m，1H)，1.40(s，9H)，1.35(d，J＝7.0Hz，3H)。

步骤3：[(1S，2Z)-2-氨基-2-(肟基)-1-甲基乙基]氨基甲酸叔丁酯

向[(1S)-1-氰乙基]氨基甲酸叔丁酯(步骤2，250mg，1.5mmol)在乙醇(3mL)中的混合物中加入三乙胺(0.41mL，2.9mmol)和羟胺(58mg，1.8mmol)。将混合物在50℃下搅拌过夜。将反应混合物浓缩，得到所需粗产物(300mg)，该粗产物无需进一步纯化，直接用于下一步反应。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：8.94(s，1H)，6.80(d，J＝8.5Hz，1H)，5.24(s，2H)，4.01(m，1H)，1.36(s，9H)，1.15(d，J＝7.0Hz，3H)。

步骤4：{(1S，2Z)-2-[(乙酰氧基)亚氨基]-2-氨基-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯

向在0℃冷却的[(1S，2Z)-2-氨基-2-(肟基)-1-甲基乙基]氨基甲酸叔丁酯(步骤3，100mg，0.5mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物中加入三乙胺(0.10mL，0.74mmol)。然后向混合物中逐滴加入乙酰氯(42mg，0.54mmol)，使反应物升温至室温。在室温下搅拌1小时后，将反应物浓缩。将残留物溶解在二氯甲烷(DCM)中，用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到所需的粗产物(100mg，82.8％)，该粗产物无需进一步纯化，直接用于下一步反应。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：6.90(d，J＝9.0Hz，1H)，6.22(s，2H)，4.05(m，1H)，2.01(s，3H)，1.36(s，9H)，1.20(d，J＝7.0Hz，3H)。

步骤5：(1S)-1-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)乙胺

向{(1S，2Z)-2-[(乙酰氧基)亚氨基]-2-氨基-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯(步骤4，80mg，0.3mmol)的乙醇(3mL)溶液中加入三水合醋酸钠(49mg，0.36mmol)的水(1mL)溶液。将混合物在85℃下加热3小时。将乙醇蒸发；加水，用EtOAc进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将残留物溶解在二氯甲烷(1mL)中。向该溶液中加入三氟乙酸(1mL)。搅拌30分钟后，将反应混合物浓缩得到作为TFA盐的所需产物，该产物无需进一步纯化，直接用于下一步反应。

步骤6：2-氯-N-[(1S)-1-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)乙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺

向2-氯-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酸(50mg，0.1mmol，实施例2，步骤4)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL，20mmol)溶液中加入N，N，N′，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(68mg，0.18mmol)(Aldrich，Cat.#226084)和N，N-二异丙基乙胺(42μL，0.24mmol)。搅拌溶液15分钟后，加入(1S)-1-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)乙胺TFA盐(18mg，0.14mmol，步骤5)并搅拌过夜。通过RP-HPLC(pH＝10)纯化该混合物，得到所需产物，将产物通过RP-HPLC(pH＝2)进一步纯化，得到作为TFA盐的所需纯产物。LCMS(M+H)⁺：m/z＝525.0/427.0。¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆)：9.22(s，1H)，8.98(dd，J＝5.0，1.5Hz，1H)，9.15(d，J＝8.0Hz，1H)，8.56(d，J＝8.5Hz，1H)，8.16(d，J＝2.0Hz，1H)，8.14(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.04(d，J＝9.0Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.90(dd，J＝9.0，2.0Hz，1H)，7.68(dd，J＝8.5，5.0Hz，1H)，7.60(d，J＝8.0Hz，1H)，5.24(m，1H)，4.66(s，2H)，2.60(s，3H)，1.51(d，J＝7.0Hz，3H)。

R对映异构体可根据以上过程利用(1R)-1-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)乙胺制备，或通过使产物外消旋并利用标准的手性分离技术(例如，手性柱)分离对映异构体来制备。

实施例4

N-甲基-5-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]吡啶-2-甲酰胺

步骤1：5-(3-氨基-1，2，4-三嗪-6-基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺

将N-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(200mg，0.80mmol)(VWR，Cat.#200068-640)、6-溴-1，2，4-三嗪-3-胺(130mg，0.76mmol，实施例2，步骤1)、四(三苯基膦)钯(0)(40mg，0.04mmol)和碳酸钾(0.32g，2.3mmol)在甲苯(1.3mL)、乙醇(0.66mL)和水(0.66mL)中的混合物在120℃下加热1.5小时。将混合物过滤并用甲醇洗涤。通过RP-HPLC(pH＝10)纯化滤液，得到所需产物(80mg，45.54％)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝231.4；LCMS(M+H+H₂O)⁺：m/z＝249.3。

步骤2：N-甲基-5-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]吡啶-2-甲酰胺

将5-(3-氨基-1，2，4-三嗪-6-基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(步骤1，6.5g，0.022mol)和1-(2-氯-1-羟基-3-喹啉-6-基丙基)吡咯烷-2，5-二酮(8.71g，0.0273mol，实施例1，步骤7)在1，2-乙二醇(100mL)中的混合物在120℃下搅拌过夜。将反应混合物浓缩。混合物用甲胺的THF溶液(2.0M)中和至pH＝10，然后使用5％MeOH的二氯甲烷溶液在硅胶柱上通过快速色谱法进行纯化，得到包含某些原材料的所需产物。将产物溶于10％MeOH的二氯甲烷溶液，浓缩至体积约为2mL。将得到的固体过滤，用MeOH(2mL)洗涤，得到纯产物(4.50g，50％)。将产物用2N HCl(水溶液)和乙腈处理，用冻干法进行干燥，得到作为HCl盐的所需产物。LCMS(M+H)⁺：m/z＝396.4。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.40(s，1H)，9.27(s，1H)，9.20(d，J＝5.5Hz，1H)，9.10(d，J＝8.0Hz，1H)，8.64(d，J＝8.0Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.26(d，J＝8.0Hz，1H)，8.20(d，J＝8.0，Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.17(d，J＝8.0Hz，1H)，7.03(dd，J＝8.0，5.5Hz，1H)，4.76(s，2H)，2.81(s，3H)。

实施例5

N，2-二甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺

步骤1：4-溴-N，2-二甲基苯甲酰胺

将N，N-二甲基甲酰胺(10μL)加入到4-溴-2-甲基苯甲酸(1.0g，4.6mmol)在草酰氯(2.0mL，23mmol)中的混合物中。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物浓缩，得到碳酰氯粗产物，将其溶解在二氯甲烷(2mL)中。将溶液缓慢加入到甲胺的四氢呋喃(THF)溶液(2.0M，0.465mL，9.3mmol)和三乙胺(1.3mL，9.3mmol)的DCM(10ml)溶液的混合物中。30分钟后，用饱和碳酸钠(10mL)使反应混合物终止反应，并用DCM(3x20mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物(980mg，92％)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝228.1/230.2。

步骤2：N，2-二甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺

在氮气氛下，向4-溴-N，2-二甲基苯甲酰胺(步骤1，0.50g，2.2mmol)和4，4，5，5，4′，4′，5′，5′-八甲基-[2，2′]双[[1，3，2]二氧杂硼杂环戊硼烷基](0.67g，2.6mmol)(Aldrich，Cat.#473294)的1，4-二氧六环(5.28mL)溶液中加入[1，1′-双(二苯基膦基)-二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1∶1)(0.09g，0.1mmol)(Aldrich，Cat.#379670)、乙酸钾(0.64g，0.0066mol)和1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(0.06g，0.1mmol)(Aldrich，Cat.#177261)。将反应混合物在80℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将混合物过滤，减压浓缩。利用10％甲醇的二氯甲烷溶液在硅胶柱上通过快速色谱法纯化残留物，得到所需产物。LCMS(M+H)⁺：m/z＝276.4。

步骤3：4-(3-氨基-1，2，4-三嗪-6-基)-N，2-二甲基苯甲酰胺

N，2-二甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(步骤2，0.3g，0.001mol)、6-溴-1，2，4-三嗪-3-胺(0.21g，1.2mmol，实施例2，步骤1)、四(三苯基膦)钯(0)(0.06g，0.05mmol)和碳酸钾(0.45g，3.3mmol)在甲苯(1.9mL)、乙醇(0.94mL)和水(0.94mL)中的混合物。将得到的混合物在130℃下加热2.5小时。将混合物用MeOH稀释，过滤，并用DCM/甲醇(90％)洗涤。将滤液浓缩。用10％甲醇的DCM溶液在硅胶柱上通过快速色谱法纯化残留物，得到所需产物(110mg，41％)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝244.3。

步骤4：2-氯-3-喹啉-6-基丙醛

在0℃，将L-脯氨酸(410mg，3.5mmol)加入到3-喹啉-6-基丙醛(3.27g，17.6mmol，实施例1，步骤6)的氯仿(39mL)溶液中，随后加入N-氯代琥珀酰亚胺(2.48g，18.5mmol)，使反应混合物缓慢升温至室温，搅拌1小时，通过LCMS监测。将溶剂减压浓缩，使用含乙酸乙酯的己烷(0-50％)在硅胶柱上纯化残留物，得到所需产物。(95％)LCMS：(M+H+H₂O)＝237.9/239.9。

步骤5：N，2-二甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺

将密封管内的4-(3-氨基-1，2，4-三嗪-6-基)-N，2-二甲基苯甲酰胺(步骤3，0.30g，1.2mmol)和2-氯-3-喹啉-6-基丙醛(步骤4，0.32g，1.5mmol)在乙醇(2.5mL)中的混合物在120℃搅拌过夜。冷却后，将反应混合物通过RP-HPLC(pH＝2)纯化，得到作为TFA盐的所需产物(150mg)。LCMS(M+H)⁺：m/z＝409.3。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：9.64(s，1H)，9.21(d，J＝5.0，1H)，9.18(d，J＝8.0Hz，1H)，8.44(s，1H)，8.39(s，1H)，8.32(d，J＝9.0Hz，1H)，8.27(d，J＝8.0Hz，1H)，8.12(dd，J＝9.0，5.0，Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.03(s，1H)，7.57(d，J＝8.0Hz，1H)，4.86(s，2H)，2.92(s，3H)，2.48(s，3H)。

实施例A

体外c-Met激酶酶分析

在体外对本发明的化合物抑制c-Met激酶活性的能力进行了筛查。如文献(Wang，X.等人，Mol.Cancer Ther.2003，2(11)：1085-1092；Calic，M.等人，Croatica Chemical ACTA.2005，78(3)：367-374)中所述，加以一定的修改，测定了c-Met激酶抑制的IC₅₀值。简单地说，将组氨酸标记的c-Met催化域融合蛋白(Invitrogen，#PV3143)用于该试验。IC₅₀测量是基于包被(0.01mg/孔)在96孔微孔板(R&D systems，#DY990)上的聚Glu-Tyr(Sigma-Aldrich，#P0275)的磷酸化程度。在包含50mM HEPES(pH 7.5)、10mM MnCl₂、10mM MgCl₂、0.5mMDTT、100μM Na₃VO₄、5μM ATP(Cell Signaling Technology，#9804)和测试化合物的连续稀释液的50μL溶液中进行反应。反应在30℃下持续25分钟。反应完成后，将板中的内容物丢弃。用TBS-T(250μL/孔，5x)洗涤板，然后用含有1％BSA的TBS-T封闭2小时。将板中的内容物丢弃，然后加入100μL(每孔)用含有1％BSA的TBS-T稀释(1∶60,000)的过氧化酶标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Sigma，#A5964)，温育1小时。用TBS-T(250μL/孔，5x)洗涤板，随后用100μL(1∶1混合物)H₂O₂和四甲基联苯胺(R&D Systems，#DY999)进行显色反应。用100μL 2N H₂SO₄在数分钟之内终止反应。用酶标仪在450nm(在540nm进行波长校正)立即测量光密度。用GraphPad Prism软件计算IC₅₀值。确定该激酶的线性范围(即，速率与初始速率相等的时间段)，并且在该范围内进行IC₅₀的测定。

Wang，X.，等人.Potent and selective inhibitors of the Met[hepatocyte growth factor/scatter factor(HGF/SF)receptor]tyrosinekinase block HGF/SF-induced tumor cell growth and invasion.Mol.Cancer Ther.2003，2(11)：1085-1092。

Calic，M.，等人.Flavonoids as inhibitors of Lck and Fyn kinases.Croatica Chemica ACTA.2005，78(3)：367-374。

本发明的化合物的IC₅₀结果如下所示：

化合物	IC₅₀
		式I	0.1-1.0nM
式II	0.1-1.0nM
		式III	0.1-1.0nM

式IV	0.1-1.0nM
		式V	0.1-1.0nM

实施例B

细胞增殖/存活试验

代表各种人类癌症的细胞系(SNU-1和SUN-5胃癌、A549和NCI-H441肺癌、U-87胶质母细胞瘤、HT-29结肠癌、786-O肾癌、PC-3胰腺癌)可从美国典型培养物保藏中心获得，在培养基中和ATCC推荐的条件下常规保存。对于个别的细胞系，可以预先确定在增殖/存活试验中使用的最佳细胞密度。对化合物抑制细胞增殖/存活的能力进行筛查，并确定IC₅₀值。以下是用于SNU-5和SNU-1细胞增殖/存活试验的取样方案。在含有2％FBS并补充有个别化合物的连续稀释液的合适培养基中，将SNU-5和SNU-1细胞分别以4000个细胞/孔和2000个细胞/孔接种到96孔细胞培养板中，最终体积为100μL/孔。温育72小时后，将24μL CellTiter 96Aqueous OneSolution试剂(Promega，#G3581)加入各孔(最终浓度＝333μg/mL)，将培养板置于37℃的培养箱中温育2小时以上。用酶标仪于490nm(在650nm下进行波长校正)在线性范围内测量光密度。用GraphPadPrism软件计算IC₅₀值。对于使用A549、NCI-H441、U-87、HT-29、786-0和PC-3细胞的增殖试验，首先使细胞在低血清条件(0.1-0.5％FBS，在适当的培养基中)下饥饿48小时，然后用不同浓度的化合物处理2小时。用HGF(50ng/mL)(R&D，#294-HGN)处理细胞24小时后，加入CellTiter 96

AQueous One Solution试剂，并将培养板温育2小时。用酶标仪记录结果。

实施例C

基于细胞的c-Met磷酸化分析

化合物对相关细胞系(SNU-5胃癌、A549和NCI-H441肺癌、U-87胶质母细胞瘤、HT-29结肠癌、786-O肾癌和PC-3胰腺癌细胞系以及HUVEC细胞系)中的c-Met磷酸化的抑制效果可以用免疫印迹分析和基于ELISA的c-Met磷酸化分析进行评估。细胞在适当的培养基中生长，并且用各种不同浓度的单个化合物处理。对SNU-5、HT-29、786-0细胞来说，细胞在补充有0.2％或2％FBS的适当培养基中生长，并用化合物处理3-4小时。利用从Biosource International获取的试剂和方案(#FNN0011)，加以微小的修改，来制备全细胞蛋白质提取物。简单地说，通过在4℃在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液[50mM HEPES(pH 7.5)、100mM NaCl、1.5mM MgCl₂、10％甘油、1％Triton X-100、1mM原钒酸钠、1mM氟化钠、抑酶肽(2μg/mL)、亮抑酶肽(2μg/mL)、胃酶抑制剂A(2μg/mL)和苯甲基磺酰氟(1mM)]中温育来制备蛋白质提取物。通过14,000x g离心20分钟除去蛋白质提取物中的细胞碎片。对A549、H441、U-87和PC-3细胞来说，对细胞进行血清(0.2％FBS)饥饿处理至少24小时，然后用各种浓度的化合物预处理1小时。在用HGF(50ng/mL)处理细胞10分钟之后，制得全细胞提取物。

免疫印迹分析

相关抗体可从商业渠道获得：兔多克隆抗体包括抗人c-Met(Santa Cruz Biotechnology，#sc-161)和抗磷酸化的c-Met(BiosourceInternational，pY1230/4/5和pY1003)。对于免疫印迹，将10-20μg来自个体治疗状况的蛋白质提取物通过在10％SDS-PAGE凝胶上电泳进行解析，并将其电转移到硝化纤维(或PVDF)膜上。将该膜在含3％牛奶和0.1％Tween-20的PBS中封闭1小时，然后与抗c-Met第一抗体在封闭液中温育1小时。洗涤3次后，膜与适量的辣根过氧化物酶偶联的第二抗体温育一小时。最后洗涤后，印迹与化学发光检测试剂温育5分钟，并暴光到x射线胶片上。将图像扫描、定量并用总c-Met进行校正，计算出IC₅₀值。IC₅₀为10μM或更低的化合物被认为是有活性的。

ELISA

根据制造商的说明书(R&D Systems，#DYC2480)利用人磷酸c-Met ELISA试剂盒对细胞蛋白质提取物进行分析。对于各个细胞系，预先确定蛋白质提取物的最佳量。简单地说，对于该试验，在96孔微孔板中用抗人c-Met捕获抗体捕获适量的蛋白质提取物2小时。冲洗后，加入检测抗体(HRP偶联的抗磷光体酪氨酸抗体)，温育2小时。进一步冲洗后，将100μL底物溶液(H₂O₂和四甲基联苯胺的1∶1混合物)加入到各孔中，在显色阶段的适当时间内用2N H₂SO₄终止反应。用酶标仪于450nm(在540nm进行波长校正)在线性范围内测量光密度。用GraphPad Prism软件计算IC₅₀值。

基于以上描述，除在此所述的这些以外，本发明的各种修改对本领域技术人员来说是显而易见的。这些修改也旨在于落入所附权利要求的范围内。在本申请中引用的每个参考文件，包括所有专利、专利申请和出版物，全部通过引用整体并入本文。

Claims

1.一种化合物，它是：

2-氯-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺；

2-氯-N-[(1S)-1-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)乙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺；

N-甲基-5-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]吡啶-2-甲酰胺；或

N，2-二甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺；

或以上所述化合物的任何一种的药学上可接受的盐。

2.化合物2-氯-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。

3.化合物2-氟-N-[(2R)-2-羟丙基]-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。

4.一种组合物，其包含权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体。

5.一种抑制c-Met激酶活性的方法，包括使所述激酶与权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐接触。

6.一种抑制细胞中的HGF/c-Met激酶信号传导途径的方法，包括使所述细胞与权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐接触。

7.一种抑制细胞的增殖活性的方法，包括使所述细胞与权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐接触。

8.一种抑制患者的肿瘤生长的方法，包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。

9.一种抑制患者的肿瘤转移的方法，包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。

10.一种治疗患者的疾病的方法，其中所述疾病与HGF/c-MET信号传导途径的失调有关，该方法包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。

11.权利要求10的方法，其中所述疾病是癌症、动脉粥样硬化、肺纤维化、肾纤维化和再生、肝脏疾病、变应性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、脑血管疾病、心血管疾病或与器官移植相关的病症。

12.一种治疗患者的癌症的方法，包括对所述患者施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。

13.权利要求12的方法，其中所述癌症是恶性上皮肿瘤、肌肉骨骼肉瘤、软组织肉瘤或造血细胞恶性肿瘤。

14.权利要求12的方法，其中所述癌症为膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管上皮癌、结直肠癌、食管癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、MFH/纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、卡波西氏肉瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、成人T细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓样白血病、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、间皮瘤或胚胎性癌肉瘤。