EA004943B1 - Суспензия биоразлагаемых микросфер и способ лечения глиобластомы - Google Patents

Abstract

Предметом настоящего изобретения является способ лечения глиобластомы, заключающийся в одновременном, раздельном или разделенном временем использовании в сочетании с радиотерапией суспензии микросфер, высвобождающих радиосенсибилизирующий противораковый агент, в стерильном растворе, причем микросферы имплантируют в стенки операционной полости после иссечения глиальной опухоли на глубину по меньшей мере 2 см, предпочтительно 2-3 см на каждом смпри объеме одной инъекции 100 мкл, причем содержащие противораковый агент микросферы имеют полимерное покрытие, которое замедляет высвобождение противоракового агента и поддерживает в течение времени его терапевтически эффективную концентрацию в паренхиматозном пространстве в течение по меньшей мере трех недель, предпочтительно по меньшей мере четырех недель. Настоящее изобретение относится также к суспензии, содержащей биоразрушаемые микросферы, которую используют в этом способе.

Description

Настоящее изобретение относится к применению биоразлагаемых микросфер, высвобождающих антиканцероген, для лечения глиобластомы.

Глиобластома принадлежит к группе редких заболеваний, занесенных в список Ναΐίοηαΐ ϋΓβαηίζαΙίοη Тот Кате Эйогйсге.

Злокачественные глиальные опухоли являются неразвитыми опухолями центральной нервной системы, составляющими, в зависимости от групп, от 13 до 22% от общего количества внутричерепных опухолей. С точки зрения гистологии, в действительности различают два типа злокачественных глиальных опухолей: анаплазированные астроцитомы и глиобластомы, из которых последние представляют наиболее недифференцированную форму этих опухолей.

В настоящее время эффективное лечение злокачественных глиальных опухолей отсутствует. Продолжительность выживания больных с глиобластомой не превышает одного года даже в том случае, когда хирургия сопровождается химиотерапией и радиотерапией.

Лечение злокачественных глиальных опухолей ограничено главным образом тремя факторами.

Первый из этих факторов - существование гематоэнцефалического барьера, который изолирует центральную нервную систему от остальной части организма. Этот барьер пропускает только небольшие жирорастворимые молекулы. Другие же молекулы, чтобы достичь центральной нервной системы, должны применяться в очень значительных дозах и при этом ценой значительных системных побочных эффектов.

Вторым фактором, ограничивающим эффективность лечения глиальных опухолей, является инфильтрирующий характер этих опухолей. Поскольку мозг - в высшей степени функциональный орган, на нем невозможно осуществить обширную в онкологическом смысле этого слова операцию. Наиболее полное из возможных иссечений - это всего лишь макроскопически полное иссечение, при котором в стенках операционной полости остается большое количество инфильтрованных опухолевых клеток. В то же время многими авторами было показано, что 90% прооперированных и подвергнутых радиотерапии злокачественных глиальных опухолей рецидивировали в двух сантиметрах от начального центра опухоли.

Последним фактором, ограничивающим эффективность лечения глиальных опухолей, является низкий терапевтический индекс. Опухолевые клетки в определенной степени упрятаны позади чрезвычайно хрупкой ткани, которая очень чувствительна к агрессивному воздействию радиотерапии или к некоторым антиканцерогенам. Таким образом, трудно разрушить раковые клетки, не разрушив при этом нормальные нервные клетки.

Успехи, достигнутые в лечении глиальных опухолей, недостаточны (КотиЫйй РЬ, \Уа1кег М, С11ето111егару Тог тайдиаи! дйотаз, 1. №игозигд, 68: 1-17, 1988; 8йар1то \¥Р. Отееи 8В, Вигдег РС, 8е1кет КО, Уаибййет .ГС, КоЬейзои 1Т, Ма1а1еу 8М, А пиЛоиНей сотрапзои оТ шГтаайет1а1 уетзиз шГгауеиоиз ВСNυ \νί11ι ог \\'Ц1юи1 шГгауеиоиз 5-Т1иогоигасй, Тог ие^1у Надиозей райеиГз \νί(1ι тайдиаиГ дйота, 1. №иго8игд. 76: 772-781, 1992).

В настоящее время традиционное лечение глиобластом после хирургической резекции основано на наружной радиотерапии. Такое лечение не дает возможности достичь продолжительности выживания более одного года. Сочетание радиотерапии с химиотерапией с использованием 1-(2-хлорэтил)-3-циклогексил-1-нитрозомочевины (ВСNυ) эффективно только по отношению к анаплазированным астроцитомам. Оно дает лишь небольшой выигрыш, поскольку повышает процент выживших только к восемнадцати месяцам и при этом не меняет продолжительности выживания.

При этом иммунотерапия ни разу о себе не заявила, а генная терапия еще должна себя проявить.

Были испытаны несколько способов повышения локальной концентрации антиканцерогенов, в частности, осмотический разрыв гематоэнцефалического барьера, инъекция в спинномозговую жидкость, внутриспинномозговая перфузия и внутриопухолевое введение с помощью подкожных резервуаров (Татагдо и Вгет Н, Эгид йейуегу 1о Не сеиГта1 иегуоиз 5У51ет, №иго8игдегу Оиа1ег1у, 2: 259-279, 1992). Ни один из этих способов не смог увеличить продолжительность выживаемости больных, а некоторые из них оказались чрезвычайно токсичными.

За последние годы исследования в области галеновой фармации позволили разработать имплантируемые полимерные системы, защищающие активные вещества от разложения и делающие возможным их регулируемое локальные высвобождение в течение определенного периода времени, снижая тем самым системные побочные эффекты. Преимущества этих имплантируемых полимерных систем побудили недавно несколько исследовательских групп изучить их применение при патологиях центральной нервной системы (Ьаидет К, Ро1утег 1тр1аи1з Тог бгид йейуегу ш Не Ьташ, Т Сои1го11ей Ке1еа8е, 16: 53-60, 1991). В частности, такие системы, будучи имплантированными в стенку опухолевой резекции злокачественных глиом, замедляют рецидив опухоли и продляют выживаемость больных. Вокруг операционной полости сохраняются отдельные, ответственные за 90% рецидивов злокачественные клетки, которые возникают в двух сантиметрах от операционного поля. В этой зоне нервная ткань функциональна, а гематоэнцефалический барьер еще не нарушен, что ограничивает воздействие обычной радиотерапии и химиотерапии.

Были разработаны и испытаны на животных различные имплантируемые полимерные системы, высвобождающие активные молекулы.

Система биоразлагаемых дисков, состоящих из РСРР-8А (сополимер 1,3-бис(карбоксифенокси)пропана с себационовой кислотой) и высвобождающих ΒΟΝυ (СЬГАЭЕЬ®), была разработана несмотря на скромные результаты клинических исследований (Вгет Н, Ро1утегз ίο ГгеаГ Ьгаш Гитогз, ВютаГепа1з 11: 699-701, 1990; Вгет Н, Майа1еу М8, У1ск ΝΑ, В1аск КЬ, 8сйо1б 8С, Е11ег ТЭД, Со/хепз 1ЭД, Кепеа1у ΓΝ, 1пГегзййа1 сйетоЛегару \νίί1ι бгид ро1утег 1тр1апГз Гог 1Не ГгеаГтепГ оГ гесшгепГ д1ютаз, 1. №игозигд 74: 441-446, 1991; Вгет Н, ЭДа1Гег КА, Ьаидег В, Ро1утегз аз соп1го11еб бгид беНгегу беуюез Гог Не ГгеаГтепГ оГ тайдпапГ Ьгаш Гитогз, Еиг. 1. Рйагт. Вюрйагт, 39(1): 2-7, 1993; Вгет Н, Р1апГабоы 8, Вигдег РС, ЭДа1кег М, еГ а1., Р1асеЬосопГго11еб Гпа1 оГ заГеГу апб еГПсасу оГ йгаорегабге сопГго11еб беНгегу Ьу ЬюбедгабаЫе ро1утегз оГ сйетоЛегару Гог гесиггепГ д1юта. ЬапсеГ, 345: 1008-1012, 1995).

Были разработаны микросферы, высвобождающие В СИИ, но результаты исследований на животных оказались мало обнадеживающими (Тоггез ΑΙ, ВоЬбгоп-С’е11е М, Вепой ГР, РогтикШоп оГ ΒСNυ-1οабеб пйсгозрйегез: шДиепсе оГ бгид зГаЬШГу апб зо1иЬ11йу оп Гйе без1дп оГ Гйе ш^с^οепсарзи1аГ^οп ргосебиге, Ь М1сгоепсарзи1аГюп, 13: 41-51, 1996; РашЬеш Т, Уешег-.Ги11еппе МС, Вепой ГР, 1пГегпа1 тогрйо1оду оГ ро1у(Э,Ь1асйбе-со-д1усо11бе) ΒСNυ-1οабеб пйсгозрйегез. 1пГ1иепсе оп бгид зГаЬДйу, Еиг. Ь Рйагт. Вюрйагт, 1998, 45, 31-39).

Предметом настоящего изобретения является способ лечения глиобластомы с применением имплантируемых биоразрушаемых микросфер, высвобождающих антиканцероген. Использование микросфер по изобретению сочетают с радиотерапией и хирургией. После иссечения опухоли биоразрушаемые микросферы, которые высвобождают противораковый агент, имплантируют в операционную полость способом внутритканевой инъекции. После этого, не позже чем через семь дней, проводят радиотерапию.

Благодаря использованию микросфер заявителю удалось абсолютно благоприятным образом удвоить продолжительность выживания страдающих глиобластомой больных. Действительно, использование микросфер по изобретению позволяет достичь продолжительности выживания не менее 90 недель.

Таким образом, настоящее изобретение относится к способу лечения глиобластомы, заключающемуся в одновременном, раздельном или разделенном временем использовании в сочетании с радиотерапией суспензии микросфер, высвобождающих радиосенсибилизи рующий противораковый агент, в стерильном растворе, причем микросферы имплантируют в стенки операционной полости после иссечения глиальной опухоли на глубину по меньшей мере 2 см, предпочтительно 2-3 см на каждом см² при объеме одной инъекции 100 мкл, причем содержащие противораковый агент микросферы имеют полимерное покрытие, которое замедляет высвобождение противоракового агента и поддерживает в течение времени его терапевтически эффективную концентрацию в паренхиматозном пространстве в течение по меньшей мере трех недель, предпочтительно по меньшей мере четырех недель.

Используемые в рамках настоящего изобретения микросферы содержат антиканцероген, который преимущественно гидрофилен и/или не преодолевает гематоэнцефалический барьер. Противораковый агент обладает тем преимуществом, что не проявляет токсичности по отношению к центральной нервной системе. Этот антиканцероген действует главным образом на клетки в стадии их деления.

Противораковый агент состоит из радиосенсибилизирующего противоракового соединения или смеси противораковых соединений, содержащей по меньшей мере одно радиосенсибилизирующее противораковое соединение, причем это противораковое соединение или соединения выбирают, например, из 5фторурацила (5-РИ), платин, таких как карбоплатина и цисплатина, таксанов, таких как доцетаксел и паклитаксел, гемцитабина, УР 16, митомицина, идоксуредина, ингибиторов топоизомеразы 1, таких как иринотекан, топотекан и камптотецины, нитрозомочевин, таких как ΒСNυ, ΑСNυ и МСNυ, метотрексата, блеомицина, адриамицина, цитоксана и винкристина, иммуномодулирующих цитокинов, таких как 1Ь2, 1Ь6, 1Ь12 и 1Ь13 и интерферонов.

Противораковым агентом преимущественно является 5-РИ.

5-РИ является старым и хорошо известным антибитотиком. Это гидрофильная молекула, которая очень слабо преодолевает гематоэнцефалический барьер, в связи с чем его активность возрастает при локальном введении (Вошке В8, ЭДезГ СВ, С1111еба С еГ а1., Кшейсз оГ епГгу апб бщйгЬиГюп оГ 5-Г1иогоигасй ш С8Р апб Ьгаш Го11о\\'шд шГгауепоиз щ)есГюп ш рптаГе. Сапсег Вез., 33: 1735-1746, 1973; Сегоза МА, Поидйейу ЭУ, ЭД1зоп СВ, ВозепЬ1ит МЬ, Гтргоуеб ГгеаГтепГ оГ а Ьгаш Гитог тобе1, Рай 2:

8ес|иепба1 Гйегару \νίί1ι ΒСNυ апб 5Диогоигасй, Ь №игозигд. 58: 368, 1983; КоГзШтЬаз ЭС. КагрГ В, Мегебйй 8, 8сйешЬегд ЬС, Еуа1иаГюп оГ рагепГега1 5-РИ оп ехрептепГа1 Ьгаш Гитогз, №шо1оду, 16: 916-918, 1966; Ьеуш УА, Еб\\'агбз М8, ЭДага ЭДМ, А11еп 1, Ойеда 1, УезГпуз Р, 5-Диогоигас11 апб 1-(2-сй1огоеГйу1)-3сус1ойеху1-1-шГгозоигеа (СС^Ь) ГоПохгеб Ьу 11убгохуигеа, 1шзошба/о1е апб игаб1аГюп Гог Ьгаш к!ет д1ютак: а ρϊΐοΐ к!ибу оГ !йе Ьгаш (итог гекеагсй сеп!ег апб Ле сйббтеп сапсег дгоир, Ыеигокигдегу, 14: 679-681, 1984; Оба Υ, Токипк! Υ, Ткиба Е, Напба Н, К1е1ег 1, Тпа1 оГ апДсапсет ре11е! ш тайдпап! Ьгаш (итогк, 5-ЕЙ апб игок1паке етЬеббеб ш кбакДс. Ргосеебшд оГ Ле 6'¹' Еигореап Сопдгекк оГ Ыеигокигдегу, Ас!а пеигосЫгигдка, 8ирр1. 28: 489-490, 1979; Репп ВО, Кгош 18, Натк 1Е, СЫи КМ, Вгаип ЭР, СНгошс ш!га!итога1 сйето!йегару оГ а га! !итог \νί!1ι с1кр1а!ш апб Диогоигасб, Арр1. №игорйукю, 46: 240-244, 1983; 8йар1го XV В, 8!иб1ек оп Ле сйетоЛегару оГ ехрептеп!а1 Ьгаш !итогк: Еуа1иа!юп оГ 1(2-Сй1огоеЛу1)-3-Сус1ойеху1-1-№!гокоигеа, УткспкДпе апб 5-Е1иогоигасб, 1. №11. Сапсег 1пкЛи!е, 46(2), 359-368, 1971; 8йар1го ХУД, Сгееп 8В, Вигдег РС, 8е1кег ВО, УапСПбег 1С, ВоЬег!коп 1Т, Майа1еу 8М, А гапбоий/еб сотрапкоп оГ ш!га-аг!епа1 уегкик ш!тауепоик ВСЫИ \νί!1ι ог \\ййои! ш!тауепоик 5-Диогоигасб, Гог пе\\1у б1адпокеб ра!1еп!к \νί!1ι таИдпап! дйота, 1. Ыеигокигд, 76: 772-781; 8о1о^ау АН, Магк УН, Пика! ЕС е! а1., СйетоЛегару оГ Ьгаш !итогк. I - Тгапкр1ап!еб типпе ерепбутоЬ1ак!отак, Сапсег Сйето!йег Вер., 36: 1-4, 1964).

Активность 5-ЕИ повышают также путем продолжительного введения. 5-ЕИ является агентом, действие которого основано на включении в синтез нуклеиновых кислот. Исследования показали, что только от 30 до 50% клеток злокачественной глиомы у мыши (Ь9) и от 14 до 44% клеток злокачественной глиомы у человека находятся в стадии деления в любое время. Кроме того, продолжительности клеточного цикла глиобластомы являются большими (20 ч для глиомы Ь9, от 3 до 7 дней для глиобластомы человека). В то же время клиренс 5-ЕИ в плазме осуществляется быстро (полупериод 30 мин) (№ιι\\ό1! ЕА, Вате!! РА, Егепке1 ЕР, СНетоЛегареиДс адеп! реттеаЬШ!у !о погта1 Ьгаш апб беДуегу !о ау1ап кагсота У1гик-тбисеб Ьгаш !итогк ш Ле гобеп!: оЬкегуаДоп оп ргоЬ1етк оГ бгид беДуегу, Ыеигокигдегу, 14: 154-160, 1984).

5-ЕИ не может, таким образом, разрушить значительное количество злокачественных клеток при системном введении или при локальной инъекции.

5-ЕИ существенно активен на тканях с быстрым обновлением и исключительно нейротоксичен. Он включается в синтез нуклеиновых кислот, в котором быстрорастущие ткани испытывают особенно большую необходимость, поскольку он обеспечивает их пролиферацию и их регенерацию. Естественно, это не относится к ткани мозга, где митозы в нормальном состоянии редки и возникают только у глиальной популяции. Токсические эффекты 5-ЕИ, которые ограничивают его введение обычными способами, являются в основном гематологическими и желудочно-кишечными. Несмотря на публикацию данных о редких побочных нейрологических эффектах 5-ЕИ, их малоизученный этиопа тогенез является, по-видимому, многофакторным (блокирование цикла Кребса одним из катаболитов 5-ЕИ или предшествующее усиление дефицита тиамина) (Аок1 Ν, Веуегк1Ь1е 1еикоепсерйа1ора!йу саикеб Ьу 5-Диогоигас11 бепсаЛ'ек. ртекепДпд ак акшеДс тиДкт, 8игд №ито1, 25; 279-282, 1986; Мооге ИН, ЕоМет УС, Огитр1ег Ь8, 5-Диогоигасй пеиго!ох1сйу, саке герог!, Супесо1 Опсо1оду, 36: 152-154, 1990).

Наконец, 5-ЕИ является радиосенсибилизатором (Кои!сйег 1А, А1Деп АА, Тйа1ег Н е! а1., Ваб1а!юп епйапсетеп! Ьу Ь^οсйеш^са1 тоби1а!юп апб 5-ЕИ, 1п!. 1. Вабй. Вю1. Рйук., 39: 1145-1152, 1997). Преимущество сочетания 5-ЕИ и радиотерапии в каждом из этих отдельных способов лечения было показано, начиная с 60-х годов, на животных моделях и на раковых клетках ш уйго (Вадкйа^ М, А рокк1Ь1е го1е оГ ро!еп!1а!юп ш габ1а!юп Легару, Атег. 1. Воеп!депо1, 85: 822-833, 1961; У1еЛ Т, Еддетбшд Е, Уа1етю!е Е, СотЬшеб еГГес! оГ Х-таб1аДоп апб 5-Диогоигас11 оп кигу1уа1 оГ !гапкр1ап!еб 1еике1шс се11к, 1. Νι!1. 1пк!., 47: 865-870, 1971). Эта синергия обусловлена, повидимому, синхронизацией опухолевой клеточной популяции и ослаблением механизмов клеточной репарации с помощью 5-ЕИ. Уже делались попытки применить сочетание радиотерапии и антипиримидина (5-ЕИ или ВгибВ) на человеке (СоГГтап ТЕ, Эасйоюкк1 Ы, ВоЬо Н е! а1., Ьопд !егт Го11о\\-ир оп па!юпа1 сапсег 1пк!1!и!е рйаке Ι/ΙΙ к!ибу оГ дДоЬ1ак!ота тиЛГогт !геа!еб \\йй юбобеохушгбше апб йуретГтасДопа!еб итаб1а!юп, 1. СДшса1 Опсо1оду, 10: 264-268, 1992). Отсутствие отчетливого эффекта может быть еще объяснено системным способом введения лекарств.

Когда противораковым агентом является 5ЕЙ, концентрация этого противоракового агента в спинно-мозговой жидкости, которая отражает концентрацию в паренхиматозном пространстве, составляет от 3 до 20 нг/мл.

С целью ограничения нейротоксичности используемого в рамках изобретения содержащегося в микросферах противоракового агента целесообразно добавление к этому противораковому агенту какого-либо нейропротекторного соединения. Это нейропротекторное соединение может быть, например, выбрано из пептидных факторов роста, таких как N6Е или ΕΟΝΓ.

Используемые в рамках настоящего изобретения биоразлагаемые микросферы покрыты полимером, который замедляет высвобождение противоракового агента и поддерживает в паренхиматозном пространстве терапевтически эффективную концентрацию в течение периода времени не менее трех недель, преимущественно не менее четырех недель.

Полимер выбирают из этилцеллюлозы, полистирола, поли(е-капролактона), поли(б,1-молочной кислоты) и сополимера б,1-молочной кислоты с гликолевой кислотой.

Ί

Полимером преимущественно является сополимер й, 1 -молочной кислоты с гликолевой кислотой, или РЬАСА, представляющий собой биоразлагаемый полимер, разрешенный для применения в составе галеновых препаратов пролонгированного действия (в отличие от РСРР-8Л, который не разрешен для клинического использования в широком масштабе).

Сополимер й,1-молочная кислота/гликолевая кислота представляет собой преимущественно РЬАСА 50:50 (т.е. он содержит равные количества молочной кислоты и гликолевой кислоты), например Еекотег® ЕС 506, поставляемый фирмой ΒI СЫтге, Франция, с молекулярной массой, равной 72000, индексом полидисперсности, равным 1,8 и характеристической вязкостью 0,80 дл/г (0,1%-ный раствор полимера в хлороформе при 25°С).

РЬЛСЛ является гидрофобным сополимером, разложение которого, обусловленное реакцией гидролиза, приводит к образованию двух нормальных биологических веществ - молочной кислоты и гликолевой кислоты, метаболизируемых в итоге аэробного гликолиза в СО₂ и Н₂О. Ранее проведенные исследования показали, что основным путем выведения этих двух веществ является дыхательный тракт. Скорость биоразложения РЬЛСЛ зависит от относительного соотношения молочной и гликолевой кислот. РЬЛСЛ обладает прекрасной биосовместимостью и вызывает умеренную реакцию на посторонние тела (Уйксйег СЕ, ЕЬ ЕоЬшкоп, НУ Маийшд, Еопд ПУ, Реагкоп 1Е, Агдепйегг С1, Вюйедгайайоп о£ апй йккие геаейои 1о 50:50 ро1у(ПЬ-1асййе-со-д1усо11йе) тгсгосаркикк, 1. Вютей. Ма!. Еек. 19: 349-365, 1985). РЬАСА входит в состав хирургических нитей (Ггахха Е1, 8с1ишй1 ЕЕ, А пе\у аЬкогЬаЫе 8и1иге, 1. Вюшей. Ма1ег. Еек., 5: 43-58, 1971) и имплантируемых под кожу галеновых форм (1аШ Е, №хоп 1Е, ВюйедгайаЫе ро1у(1асйс аай) апй ро1у(1асййесо-д1усоййе) шкгосаркикк: ргоЫешк а88ос1а1ей \\Й11 ргерагайуе 1ес1шй.|ие5 апй ге1еаке ргорегйек (Ееу1ете), 1. М1сгоепсар8и1айоп, 7: 297-325, 1990). Было показано, что микросферы РЬАСА 50:50 могут быть стерилизованы γ-облучением и что, будучи имплантированными стереотаксическим способом в мозг грызуна, они полностью биологически разлагаются в течение двух месяцев, вызывая лишь умеренную неспецифическую реакцию астроцитарного или гистиоцитарного типа (Меие1 Р, Ьаше1 У, МоШегоМеие1 С, ВгоиШагй М, Роир1агй-ВаДйе1а1х А, Вепой 1Р, Вюйедгайайоп апй Ьгаш Щкие геасйоп 1о ро1у(ПЬ-1асййе-со-д1усо11йе) тгсгокрйегек, Вюша1епа18 14: 470-478, 1993; Мепе1 Р, Сгоие А, Ьаше1 У, Роир1агй-Ваг1йе1а1х А, Вепой 1Р: Еа1е апй ЬюсотрайЬййу о£ 11гее !урек о£ тгсгокрйегек 1шр1ап1ей ш!о Не Ьгаш, 1. Вюшей. Ма1. Еек., 28, 1079-1085, 1994). С тех пор последний результат был подтвержден Кои 1Н, Ешшей С, 8Неп Р е! а1., Вюегоаоп апй ЫосошрайЬййу о£ ро1у(й,11асйс-со-д1усо11с аай) 1тр1ап18 ш Ьгаш, 1. Соп1го1

Ее1еаке, 43, 123-130, 1997.

Биоразлагаемые микросферы по изобретению имеют средний диаметр 48 ± 20 мкм, преимущественно, 46 ± 7 мкм. Они содержат от 15 до 35 мас.% противоракового агента, преимущественно от 19 до 27% 5-ЕИ (предпочтительно 20%) и от 65 до 85 мас.% полимера.

Особенно предпочтительны в рамках настоящего изобретения микросферы РЬАСА 50:50, содержащие 5-ЕИ.

В опытах ш уйго содержащие 5-ЕИ микросферы РЬАСА 50:50 могут высвобождать 5-ЕИ в течение 21 дня. В опытах ш у1уо эти микросферы, имплантированные под кожу кролика, позволяют получать постоянную плазматическую концентрацию 5-ЕИ в течение 23 дней. В опытах же ш у1уо в мозге грызунов кристаллы 5-ЕИ различимы в микросферах по крайней мере до 19-го дня. После внутримозговой имплантации микросфер РЬАСА-5-ЕИ (7 мг/кг 5-ЕИ) у кролика в сыворотке не обнаружено никаких следов 5-ЕИ, что дает основание предполагать почти полное отсутствие вхождения лекарства в системную циркуляцию.

После внутримозговой имплантации микросфер РЬАСА-5-ЕИ у грызуна при общей дозе 17 мг/кг 5-ЕИ не наблюдалось никаких признаков системной токсичности и клинической или гистологической нейротоксичности. При дозе, поделенной до 24 Гр, прекрасно переносится сочетание микросфер 5-ЕИ с церебральной радиотерапией (Мепе1 Р, Векторизация в 8ЫС методом стереотаксической имплантации микросфер. Диссертация Университета фармацевтических наук, Анжерский университет, 1995). Наконец, эти микросферы, будучи стереотаксически имплантированными в область развившейся злокачественной глиомы у крысы (глиома С6), значительно снижают смертность (Мепе1 Р/ Воййгоп-С’еПе М, Сгоие А, Сиу С, Вепой 1Р, ЕПес! о£ 81егео1асйс 1тр1ап1а11оп о£ ЬюйедгайаЬ1е 5-Диогоигасй-1оайей тгсгокрйегек ш погта1 С6-д1юта Ьеаппд га18, Ыеигокигдегу, 39: 117-124, 1996).

Целесообразно суспендирование микросфер в стерильном растворе с последующим инъецированием суспензии в стенку операционной полости после расширенной операции на опухоли.

Стерильный раствор преимущественно содержит

- от 1 до 1,5%, предпочтительно 1,25% (об./мас.) загущающего агента, например натриевой карбоксиметилцеллюлозы, от 0,5 до 1,5%, предпочтительно 1% ПАВ, например полисорбата 80® и от 3,5 до 4,5%, предпочтительно 4% изотонизирующего агента, например маннита.

Микросферы преимущественно переводят в суспензию непосредственно перед инъекцией.

Суспензия преимущественно содержит 3 мл описанного выше стерильного раствора и 700800 мг биоразрушаемых микросфер.

После подтверждения диагноза глиобластомы и проведения макроскопического иссечения на глиальной опухоли суспензию микросфер имплантируют в стенку операционной полости на глубину по меньшей мере два сантиметра, предпочтительно от 2 до 3 см, по меньшей мере, на каждом квадратном сантиметре.

Когда противораковым соединением является 5-РИ, общая доза инъецируемой суспензии соответствует количеству 5-РИ, составляющему от 50 до 200 мг.

Радиотерапию сосредоточивают на опухолевом объеме и облученный объем охватывает предоперационную опухоль вместе с опушкой не менее двух сантиметров во всех направлениях, в то время как применяемая общая доза составляет от 50 до 60 Гр.

Радиотерапию начинают проводить преимущественно между вторым и седьмым днями после операции. Общую дозу, составляющую от 50 до 60 Гр, растягивают на период времени, составляющий от 4 до 8 недель, например при 5 долях облучения в неделю.

Радиотерапию проводят преимущественно при общей дозе 60 Гр в течение приблизительно шести недель, преимущественно при пяти долях облучения в неделю в течение 6,5 недель.

После инъекции микросфер непосредственно вслед за иссечением на опухоли в случае рецидива опухоли могут быть стереотаксически произведены одна или несколько дополнительных инъекций микросфер.

Используемые в рамках изобретения микросферы могут быть приготовлены с использованием эмульсионно-экстракционного метода в соответствии с его вариантом, описанным Воййтоп-Се11е М, Мепе1 Р, Вепой !Р: Ртератайоп о£ ЬюйедтайаЫе 5-Пиогоигас11-1оайей тютокрйегек, 1. Рйатт. Рйаттасо1., 47, 108-114, 1995.

Используемые в рамках изобретения, содержащие противораковый агент микросферы с полимерным покрытием получают предпочтительно способом, основные стадии которого состоят в приготовлении органической фазы, в которой противораковый агент и полимер диспергируют в органическом растворителе. Органическую фазу и водную фазу переводят в эмульсию, после чего органический растворитель экстрагируют добавлением воды. Наконец, полученную суспензию микросфер фильтруют.

Способ по изобретению отличается прежде всего тем, что, прежде чем добавить полимер, противораковый агент диспергируют в органическом растворителе при интенсивном перемешивании.

Согласно вносимым в известный способ уточнениям, активное начало измельчают в планетарной шаровой мельнице. Размер получаемых при этом кристаллов составляет от 15 до 50 мкм. Размер инкапсулируемых кристаллов и их диспергирование являются существенными критериями для регулирования степени инкапсулирования и кинетики высвобождения ш уйго.

Далее активное начало диспергируют в органическом растворителе, преимущественно дихлорметане, в круглодонной пробирке при перемешивании с помощью гомогенизирующего вала, после чего добавляют полимер.

Гомогенизация позволяет получать гомогенную суспензию, сглаживать различия в степени размола от одной партии к другой и уменьшать размер кристаллов активного начала.

Органическую фазу приготовляют в растворителе без сорастворителя. Отсутствие сорастворителя позволяет замедлить выпадение в осадок полимера в процессе стадии эмульгирования и при этом получают менее пористые частицы.

Дисперсию активного начала переливают в первый реактор.

Добавляют полимер в количестве от 8 до 13 мас.%, предпочтительно 11%. Полученную органическую фазу выдерживают при постоянном перемешивании и комнатной температуре в течение 2-4 ч и затем в течение приблизительно 15 мин при температуре от 1 до 5°С, предпочтительно при 2°С. Продленный период перемешивания органической фазы при комнатной температуре обеспечивает полное растворение полимера в растворителе.

Во втором реакторе приготовляют водную фазу, выдерживая ее приблизительно при той же температуре, что и органическую фазу, предпочтительно при 2°С. Понижение температуры водной фазы и органической фазы приводит к повышению их вязкости и увеличению степени инкапсулирования. Водной фазой может, например, быть 10%-ный водный раствор поливинилацетата.

Оба используемых реактора имеют двойные стенки и в обоих реакторах последовательно циркулирует охлаждающая жидкость. При смешении фаз температура органической и водной фаз предпочтительно одна и та же и преимущественно равна 2°С. Строгое выдерживание температуры обусловливает одновременно нужные размер частиц, скорость растворения активного начала и скорость экстракции растворителя.

Из первого реактора органическую фазу переливают во второй реактор. При этом отношение водной фазы к органической фазе составляет от 80/3 до 120/3, предпочтительно 100/3.

Полученную эмульсию перемешивают в течение по меньшей мере 3 мин, предпочтительно 3-6 мин и, еще более предпочтительно, в течение 5 мин. Выбор продолжительности перемешивания непосредственно коррелирует с кинетикой высвобождения, в частности со взрывным эффектом, в течение 24-48 ч.

Отсутствие сорастворителя в сочетании с достаточной продолжительностью эмульгирования делает возможным растворение активного начала с поверхности или слабо защищенного покрытием активного начала, благодаря чему кинетика высвобождения в начальной фазе становится более управляемой.

К эмульсии добавляют воду при объемном соотношении эмульсия/вода от 1/4 до 1/2, предпочтительно 1/3, с целью экстракции органического растворителя. Температура экстракционной воды составляет от 1 до 5°С, предпочтительно 4°С.

Стадии эмульгирования и экстракции осуществляются в одном и том же реакторе, что позволяет сгладить отличия одной партии от другой и сэкономить время. Температура экстракционной воды является низкой с целью ограничения слишком быстрого растворения активного начала.

Полученную суспензию микросфер перемешивают в течение нескольких минут и затем фильтруют в инертной атмосфере. Работа в инертной атмосфере позволяет снизить риск загрязнения продукта.

Полученные в соответствии с описанным выше способом микросферы предпочтительно подвергают лиофилизации.

К 2-5 г порошка (фильтрационной лепешки) микросфер добавляют 10 мл стерильной воды. Смесь замораживают при -40°С и затем вводят в лиофилизатор. Лиофилизация длится 18 ч. В конце процедуры температура вторичного обезвоживания должна поддерживаться ниже 10°С.

Микросферы необходимо выдержать перед сушкой при +4°С.

Настоящее изобретение относится также к суспензии, состоящей из стерильного раствора, содержащего 1-1,5% мас./об. загущающего агента, 0,5-1,5% ПАВ и 3,5-4,5% изотонизирующего агента и описанные выше выделяющие противораковый агент биоразрушаемые микросферы с полимерным покрытием, которые могут быть получены описанным выше способом, причем количество микросфер составляет от 200 до 300 мг на 1 мл стерильного раствора, предпочтительно от 230 до 270 мг/мл.

Эти микросферы преимущественно состоят из противоракового агента (15-35 мас.%) и полимера (65-85 мас.%).

Полимером предпочтительно является сополимер 6.1 -молочной кислоты с гликолевой кислотой, содержащий по преимуществу равные количества молочной кислоты и гликолевой кислоты.

Стерильный раствор преимущественно содержит 1,25% мас./об. натриевой карбоксиметилцеллюлозы, 1% полисорбата 80 и 4% маннита.

Настоящее изобретение иллюстрируют следующие не ограничивающие изобретения примеры.

Пример 1.

Микросферы, приготовленные методом эмульгирования-экстракции растворителя в соответствии с вариантом метода, описанным Войбгоп-СеПе М, Мепе1 Р и Веиой 1Р (РгерагаНоп оГ ЫобедтабаЫе 5-Г1иогоигасб-1оабеб шютокрйетек, 1. Рйатш. Рйатшасой, 47, 108-114, 1995).

Измельчение 5-РИ.

5-Ρϋ измельчают в планетарной шаровой мельнице типа РикегЦейе 7 (Ртйксй). 8,6 г 5-РИ вводят в каждый отсек, содержащий 7 шариков. Измельчение проводится в течение 10 мин на скорости 7. Порошок собирают под вытяжным зонтом с ламинарным потоком. Полученные кристаллы имеют размеры от 15 до 50 мкм и распределяются по двум фракциям: мелкодисперсная фракция (с гранулометрией менее 1 мкм) и грубая фракция (более 30 мкм).

Диспергирование 5-РИ в органическом растворителе.

Измельченную 5-РИ диспергируют в 45 мл дихлорметана при перемешивании с помощью гомогенизатора типа ийга-1штах в течение 3 мин при скорости 13500 об/мин в круглодонной пробирке.

Приготовление органической фазы.

Дисперсию 5-РИ переливают в охлаждаемый 150-мл реактор с двойной стенкой. Туда же добавляют РЬАОА таким образом, чтобы отношение РЬАОА/дихлорметан было равным 11%. Органическую фазу 4 ч перемешивают лопастной мешалкой со скоростью 450 об/мин при 20°С и затем 15 мин при 2°С. Температуру в реакторе поддерживают постоянной с точностью 0,1°С с помощью криостата.

Приготовление эмульсии.

Приготовляют 1500 мл автоклавированного 10%-ного водного раствора поливинилацетата, выдерживаемого при 2°С в охлаждаемом 6-л реакторе с двойной стенкой. Органическую фазу после этого переливают в этот реактор через вентильное отверстие первого реактора. Органическую фазу вливают в течение 5-10 с на водную фазу, перемешиваемую с помощью лопастной мешалки со скоростью 375 об/мин. Объемное соотношение водная фаза/органическая фаза равно 100/3.

Эмульсию перемешивают в течение 4 мин 45 с.

Экстракция.

В готовую эмульсию вливают 4,5 л экстракционной воды при 4°С при объемном отношении эмульсия/вода равном 1/3. Экстракция длится 2 мин.

Фильтрация.

Все содержимое второго реактора сливают через дно в бак из нержавеющей стали, в котором создают давление азотом. Суспензию фильтруют на фильтре с диаметром пор 3 мкм.

После прохода всего количества суспензии через фильтр фильтрационную лепешку дважды промывают 3 л стерильной воды.

Степень инкапсулирования противоракового агента в полученных микросферах составляет 20%. После просеивания производят десорбирование дихлорметана в сушильном шкафу в течение 48 ч. Микросферы после этого затаривают и стерилизуют γ-облучением в дозе 19 кГр. После стерилизации вновь проверяют степень инкапсулирования. Затем производят определение следов остаточного растворителя. Детектируемое остаточное содержание дихлорметана преимущественно составляет 0,5%. Контролируют стерильность и кинетику высвобождения ίη νίίτο полученных микросфер.

Содержание активного начала в полученных микросферах равно 23 ± 3,5%.

Приготовляют несколько партий по описанной выше прописи и рассчитывают средний размер частиц 48 ± 20 мкм по совокупности всех партий с размером частиц 46 ± 7 мкм (среднее из средних приготовленных партий).

Содержание активного начала в полученных микросферах составляет 23 ± 3,5%, а средний размер 48 ± 20 мкм.

Пример 2.

Микросферы приготовляют методом эмульгирования-экстракции растворителя как в примере 1.

Измельчение 5-ЕИ.

Повторяют процедуру примера 1, измельчая 4 г 5-ЕИ. Полученные кристаллы имеют размеры в пределах от 15 до 50 мкм и распределяются по двум фракциям: мелкодисперсная фракция (с гранулометрией менее 1 мкм) и грубая фракция (более 30 мкм).

Диспергирование 5-ЕИ в органическом растворителе.

Измельченную 5-ЕИ диспергируют в 40 мл дихлорметана в круглодонной пробирке при перемешивании с помощью гомогенизатора типа и11га-Шггах в течение 3,5 мин при скорости 13500 об/мин.

Приготовление органической фазы и приготовление эмульсии проводят как в примере 1.

Экстракцию и фильтрацию проводят как в примере 1.

Характеристики полученных микросфер:

Содержание 5-ЕИ - 22%

Размер - 46 ± 7 мкм

Взрывной эффект через 24 ч после радиостерилизации в дозе 19 кГр: 40 ± 4%.

Пример 3.

Было проведено открытое пилотное клиническое исследование фазы 1/11 на микросферах РЬЛСЛ 50:50/5-Еи примера 1.

Полученные микросферы суспендируют непосредственно перед применением в растворе, содержащем

- 1,25 мас.%/об. натриевой карбоксиметилцеллюлзы (Соорег),

- 1% полисорбата 80,

- 4% маннита и

- вода в количестве, достаточном для получения препарата для инъекции, с общим объемом 3 мл.

Раствор предварительно стерилизуют в автоклаве при 121°С в течение 20 мин и затем с помощью радиостерилизации γ-облучением в дозе от 5 до 25 кГр, преимущественно 19 кГр.

Получение этой суспензии является деликатной операцией, поскольку необходимо избегать образования пузырьков. Приготовленную суспензию незамедлительно инъецируют, так как микросферы имеют тенденцию к седиментации в шприце, приводящей к его закупориванию.

Суспензию микросфер имплантируют в стенку операционной полости после макроскопического иссечения глиальной опухоли на глубину 2-3 см на каждом квадратном сантиметре при объеме одной инъекции 100 мкл.

Инъекцию производят 1-мл шприцом и катетером (1п5у1е® У1а1оп™) 18 да (1,3 х 45 мм), из которого удаляют металлический мандрен с тем, чтобы на нескошенном конце из пенопласта оставался только пластиковый катетер для инъекции суспензии в церебральную ткань. 1-мл шприцы используют в таком количестве, которое необходимо. Инъекция суспензии со скошенной иглой таит опасность гематомы и обратного тока микросфер. Диаметр катетера должен быть достаточно мал, чтобы не травмировать церебральную ткань, и достаточно велик, чтобы катетер не оказался закупоренным суспензией микросфер.

Инъекция должна производиться очень мягко и для того, чтобы избежать обратного тока микросфер, катетер перед его извлечением должен оставаться на месте в течение нескольких минут. На место инъекции накладывают фрагмент рассасывающегося кровоостанавливающего компресса (8игд1еа1® или 8ропде1®) размером 1 см².

Включенные в исследования больные имеют возраст от 18 до 68 лет, не имеют опухолевого анамнеза, имеют показатель Карнофского выше 60, имеют клиническую историю болезни и визуальные данные, характеризующие субтенториальную глиобластому, перенесли макроскопически полное иссечение, и внутриоперационное гистологическое исследование (проведенное на основании критериев ВОЗ: некроз, сосудистая пролиферация, ядерный плеоморфизм и митотическая активность) подтверждает диагноз глиобластомы.

Критерии исключения больных следующие: метаболическая недостаточность, беременность, другая предшествующая раковая патология.

Для изучения эффектов возрастающих доз

5-фторурацила вначале были отобраны три группы: в хронологическом порядке 70, 132 и

264 мг, причем лечение следующей группы начинается после констатации толерантности к лечению у группы, на которой проводятся испытания.

По причине появления неврологической токсичности второй степени у больного, получившего 132 мг 5-ЕИ, и в соответствии с установленными правилами, усиление терапии было остановлено и следующие больные получили ту же дозу 132 мг.

Традиционную наружную радиотерапию (сосредоточенную на опухолевом объеме, оцененном по предоперационным данным ЯМР с энергией 10 Мв) начинают проводить между вторым и седьмым днями после операции. Применена общая доза 60 Гр в 33 долях по 1,8 Гр в расчете по 5 долей в неделю в течение 6,5 недель. Облученный объем охватывает предоперационную опухоль с опушкой по меньшей мере два сантиметра во всех направлениях.

За больными проводится клиническое и радиологическое наблюдение: проведены компьютерная томография (через 72 ч для подтверждения макроскопически полного иссечения и клиническая оценка на 10, 20 и 30 дни. ЯМРисследование проведено на 10 и 30 дни. Наконец, определение 5-ЕИ в крови и спинномозговой жидкости проводили через 72 ч, на 10, 20 и 30 дни. Токсичность (неврологическая, гематологическая, мукозная и кардиологическая) оценивается в градациях на основании критериев, выведенных из критериев ВОЗ. Спустя месяц больные наблюдались клинически каждые два месяца и подвергались ЯМР-исследованию каждые три месяца.

У всех больных наблюдались легкая послеоперационная анемия, гиперлейкоцитоз и легкая лимфопения.

Фармакологическое исследование позволило подтвердить пролонгированное высвобождение 5-ЕИ в спинно-мозговой жидкости в течение более 30 дней и неустановившийся, более слабый переход молекулы в системную циркуляцию. Значительные концентрации 5-ЕИ еще присутствуют в спинно-мозговой жидкости через один месяц после имплантации.

Профили высвобождения 5-ЕИ в спинномозговой жидкости обнаруживают пик на десятый и на двадцатый дни соответственно для доз 70 и 132 мг. Плазматический показатель 5-ЕИ не детектировался, начиная с десятого дня у половины больных.

Системная толерантность прекрасна у всех проходящих лечение больных. Не было обнаружено никакого изменения в химии или клеточности спинно-мозговой жидкости. Появление церебрального отека во время радиотерапии у одного больного с дозой 132 мг не позволило повысить дозу.

Таким образом, в исследования были включены восемь больных, среди которых было четверо мужчин и четыре женщины, со средним возрастом 48,5 лет и показателем Карнофского выше 90. Первая группа из трех человек получила дозу 70 мг, а вторая группа из пяти человек получила 132 мг.

Предварительные результаты по выживаемости не могли быть интерпретированы статистически из-за малого числа больных. По последней оценке, в первой подвергнутой лечению группе (70 мг) трое больных умерли через 61, 114 и 125 недель. Следует отметить, что причиной смерти больного, умершего через 114 недель, были легочные метастазы глиобластомы. Во второй подвергнутой лечению группе (132 мг) трое больных умерли через 31, 59 и 82 недели, а двое все еще находились в состоянии ремиссии на 159 и 172 неделях - дате написания этих предварительных результатов.

Средняя выживаемость больных составляет 98 недель (в сравнении с 50,6 неделями в литературе для больных, отвечающих тем же критериям (Иеуаих ВС, О'Еа11еп ЗК, Ке11у Р1, Кекесйои, Ыорку, апб 8игу1уа1 ίη шайдпап! цПа1 пеор1а8Ш8, 1. Иеипкигд., 78: 767-775, 1993). Пять больных из восьми, т.е. 62%, оставались живыми спустя 18 месяцев, в то время как в литературе для больных, отвечающих критериям включения настоящего исследования, выживаемость 18 месяцев составляет 20% (Пеуаих ВС, О'Еа11еп 1К. Ке11у Р1, Кекеебоп, Ьюрку, апб кигУ1уа1 ш шаПдпап! дйа1 пеор1а8Ш8, 1. Иеигокигд., 78: 767-775, 1993).

Claims (35)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Суспензия, состоящая из стерильного раствора, содержащего 1-1,5% мас./об. загущающего агента, 0,5-1,5% ПАВ и 3,5-4,5% изотонизирующего агента, и высвобождающие противораковый агент биоразрушаемые микросферы с полимерным покрытием, в которой микросферы содержатся в количестве от 200 до 300 мг на 1 мл стерильного раствора.
2. 2. Суспензия по п.1, отличающаяся тем, что микросферы состоят из 15-35 мас.% противоракового агента и 65-85 мас.% полимера.
3. 3. Суспензия по п.1 или 2, отличающаяся тем, что полимером является сополимер б,1молочной кислоты с гликолевой кислотой, содержащий преимущественно равные количества молочной кислоты и гликолевой кислоты.
4. 4. Суспензия по пп.1-3, отличающаяся тем, что стерильный раствор содержит 1,25% мас./об. натриевой карбоксиметилцеллюлозы, 1% полисорбата 80 и 4% маннита.
5. 5. Способ лечения глиобластомы, заключающийся в одновременном, раздельном или разделенном временем использовании в сочетании с радиотерапией суспензии микросфер в стерильном растворе по одному из пп.1-4, при этом микросферы имплантируют в стенки операционной полости после иссечения глиальной опухоли на глубину по меньшей мере 2 см, предпочтительно 2-3 см на каждом см² при объеме одной инъекции 100 мкл, причем содержащие противораковый агент микросферы имеют полимерное покрытие, которое замедляет высвобождение противоракового агента и поддерживает его терапевтически эффективную концентрацию в паренхиматозном пространстве в течение по меньшей мере трех недель, предпочтительно по меньшей мере четырех недель.
6. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что противораковый агент является гидрофильным и/или не преодолевает гематоэнцефалический барьер.
7. 7. Способ по п.5 или 6, отличающийся тем, что противораковый агент не проявляет токсичности по отношению к центральной нервной системе.
8. 8. Способ по одному из пп.5-7, отличающийся тем, что противораковый агент состоит из радиосенсибилизирующего противоракового соединения или смеси противораковых соединений, содержащей по меньшей мере одно радиосенсибилизирующее противораковое соединение, причем это противораковое соединение или соединения выбирают из 5-фторурацила (5ЕЙ), платин, таких как карбоплатина и цисплатина, таксанов, таких как доцетаксел и паклитаксел, гемцитабина, УР 16, митомицина, идоксуридина, ингибиторов топоизомеразы 1, таких как иринотекан, топотекан и камптотецины, нитрозомочевин, таких как ВСЫи, ЛСМИ или МСЫИ, метотрексата, блеомицина, адриамицина, цитоксана и винкристина, иммуномодулирующих цитокинов, таких как 1Ь2, 1Ь6, 1Ь12 и 1Ь13, и интерферонов.
9. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что противораковым агентом является 5фторурацил.
10. 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что концентрация 5-ЕИ в спинно-мозговой жидкости, которая отражает концентрацию в паренхиматозном пространстве, составляет от 3 до 20 нг/мл.
11. 11. Способ по одному из пп.5-10, отличающийся тем, что к противораковому соединению добавляют нейропротекторное соединение, выбранное из пептидных факторов роста, таких как ΝΟΕ или ΒΩΝΕ.
12. 12. Способ по одному из пп.5-11, отличающийся тем, что полимер выбирают из этилцеллюлозы, полистирола, поли(е-капролактона), поли(6,1-молочной кислоты) и сополимера 6.1молочной кислоты с гликолевой кислотой.
13. 13. Способ по одному из пп.5-12, отличающийся тем, что покрывающим микросферы полимером является сополимер 6,1-молочной кислоты с гликолевой кислотой.
14. 14. Способ по п.13, отличающийся тем, что покрывающий микросферы полимер является сополимером 6,1-молочной кислоты с глико левой кислотой, содержащим равные количества молочной кислоты и гликолевой кислоты.
15. 15. Способ по одному из пп.5-14, отличающийся тем, что средний диаметр микросфер равен 48 ± 20 мкм, преимущественно 46 ±7 мкм.
16. 16. Способ по одному из пп.5-15, отличающийся тем, что микросферы содержат от 15 до 35 мас.% противоракового агента и от 65 до 85 мас.% полимера.
17. 17. Способ по пп.9 и 16, отличающийся тем, что микросферы содержат от 19 до 27% 5ЕЙ, предпочтительно 20% 5-ЕИ.
18. 18. Способ по одному из пп.5-17, отличающийся тем, что микросферы переводят в суспензию в стерильном растворе, а полученная суспензия предназначена для инъекции в стенку операционной полости после иссечения глиальной опухоли, и тем, что названный стерильный раствор содержит от 1 до 1,5% мас./об. загущающего агента, от 0,5 до 1,5% ПАВ и от 3,5 до 4,5% изотонизирующего агента.
19. 19. Способ по п.18, отличающийся тем, что раствор содержит 1,25% мас./об. натриевой карбоксиметилцеллюлозы, 1% полисорбата 80 и 4% маннита.
20. 20. Способ по п.9, отличающийся тем, что общая доза инъецируемого 5-ЕИ составляет от 50 до 200 мг, предпочтительно 130 мг.
21. 21. Способ по одному из пп.5-20, отличающийся тем, что радиотерапию сосредоточивают на опухолевом объеме, что облученный объем охватывает предоперационную опухоль с опушкой не менее двух сантиметров во всех направлениях и что примененная общая доза составляет от 50 до 60 Гр.
22. 22. Способ по одному из пп.5-21, отличающийся тем, что радиотерапию начинают проводить преимущественно между вторым и седьмым днями после операции.
23. 23. Способ по одному из пп.5-22, отличающийся тем, что радиотерапию проводят с общей дозой 60 Гр в течение приблизительно шести недель.
24. 24. Способ по одному из пп.18 и 19 или 2123, отличающийся тем, что в случае рецидива опухоли суспензию микросфер стереотаксически инъецируют в несколько приемов.
25. 25. Суспензия по одному из пп.1-4, отличающаяся тем, что микросферы получены эмульсионно-экстракционным методом, который состоит в диспергировании полимера и противоракового агента в органическом растворителе, смешивании полученной органической фазы с водной фазой для получения эмульсии, экстракции органического растворителя добавлением воды с последующей фильтрацией полученной суспензии микросфер, причем перед добавлением полимера противораковый агент диспергируют в органическом растворителе при интенсивном перемешивании.
26. 26. Суспензия по п.25, отличающаяся тем, что органическим растворителем является дихлорметан.
27. 27. Суспензия по п.25 или 26, отличающаяся тем, что температура водной фазы и органической фазы при их смешении одинакова и преимущественно равна приблизительно 2°С.
28. 28. Суспензия по одному из пп.25-27, отличающаяся тем, что органическая фаза содержит 11% полимера.
29. 29. Суспензия по одному из пп.25-28, отличающаяся тем, что соотношение водная фаза/органическая фаза равно 100/3.
30. 30. Суспензия по одному из пп.25-29, отличающаяся тем, что эмульсию, состоящую из водной фазы и органической фазы, перемешивают в течение по меньшей мере 3 мин.
31. 31. Суспензия по одному из пп.25-30, отличающаяся тем, что воду, необходимую для экстракции органического растворителя, добавляют в таком количестве, чтобы объемное соотношение эмульсия/вода составляло 1/3.
32. 32. Суспензия по одному из пп.25-31, отличающаяся тем, что вода, необходимая для экстракции органического растворителя, имеет температуру 4°С.
33. 33. Суспензия по одному из пп.25-32, отличающаяся тем, что противораковый агент перед диспергированием в органическом растворителе измельчают, получая кристаллы противоракового агента размером от 15 до 50 мкм.
34. 34. Суспензия по одному из пп.25-33, отличающаяся тем, что полученную после добавления экстракционной воды суспензию фильтруют в инертной атмосфере.
35. 35. Суспензия по одному из пп.25-34, отличающаяся тем, что микросферы подвергают лиофилизации.