DE69434588T2

DE69434588T2 - Zubereitungen enthaltend Mikropartikel von wasserunlöslichen Stoffen und Verfahren zu deren Herstellung

Info

Publication number: DE69434588T2
Application number: DE69434588T
Authority: DE
Inventors: Dennis Edward Danley; Robert Alan Gelfand; Kieran Francis Geoghegan; Kim Yesook; William Joseph Lambert; Qi Hong
Original assignee: Scios LLC
Current assignee: Scios LLC
Priority date: 1993-04-07
Filing date: 1994-02-10
Publication date: 2006-09-07
Anticipated expiration: 2014-02-11
Also published as: CN1106698A; AU682328B2; JP5081213B2; HUT68525A; IL108611A0; CZ296341B6; CN1080123C; JP4610503B2; EP0619322A3; PL180697B1; ATE314393T1; KR100186885B1; EP0619322A2; NO940436D0; BR9401185A; CN1544084A; RU2126264C1; ZA94878B; ES2255051T3; CA2116478C

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Zusammensetzungen die für die Behandlung von Diabetes Mellitus geeignet sind. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung Zusammensetzungen zum Verzögern der Verabreichung von Glucagon-ähnlichem Peptid 1 (GLP-1) und Derivaten davon. Diese Zusammensetzungen sind t für die Behandlung von Nichtinsulinabhängigem Diabetes Mellitus (NIDDM) geeignet.
Die Aminosäuresequenz von GLP-1 ist wie folgt bekannt:
His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (SEQUENZ ID NR.: 1).
GLP-1 wurde durch Lopez, L.C., et al., P.N.A.S., USA 80:5485–5489 (1983); Bell, G.I., et al., Nature 302:716–718 (1983); Heinrich, G., et al., Endocrinol. 115:2176–2181 (1984) und Ghiglione, M, et al., Diabetologia 27:599–600 (1984) offenbart.
Während der Verarbeitung in der Bauchspeicheldrüse und im Darm wird GLP-1 in ein 31 Aminosäurepeptid mit den Aminosäuren 7–37 von GLP-1 umgewandelt; im Folgenden wird dieses Peptid als GLP-1 (7–37) bezeichnet.
Dieses Peptid zeigt nachweislich insulinotrope Aktivität, d.h. es ist in der Lage, die Synthese oder Expression des Hormons Insulin zu stimulieren oder dessen Stimulation zu veranlassen. Aufgrund dieser insulinotropen Aktivität wird GLP-1 (7–37) alternativ auch als Insulinotropin bezeichnet.
GLP-1 (7–37) besitzt folgende Aminosäuresequenz:
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (SEQUENZ ID NR.: 2). GLP-1 (7–37), bestimmte Derivate davon und die Verwendung davon zum Behandeln von Diabetes Mellitus bei einem Säugetier sind in US-Patent Nr. 5,118,666 (Patent '666) und 5,120,712 (Patent '712) offenbart.
Zu den in Patent '666 und '712 offenbarten Derivaten von GLP-1 (7–37) zählen Polypeptide, welche eine oder mehrere Aminosäuren enthalten, oder denen eine oder mehrere Aminosäuren fehlen, welche in der natürlich vorkommenden Sequenz möglicherweise nicht vorhanden sind. Zu weiteren Derivaten von GLP-1 (7–37) offenbart in Patent '666 und '712 zählen bestimmte C-terminale-Salze, Ester und Amide, wobei die Salze und Ester als OM definiert sind, wobei M ein pharmazeutisch akzeptables Kation oder eine niedere-(C₁-C₆) verzweigte oder unverzweigte Alkylgruppe ist, und die Amide sind definiert als -NR²R³, wobei R² und R³ gleich oder unterschiedlich sind, und sie sind ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff und einer niederen-(C₁-C₆), verzweigten oder unverzweigten Alkylgruppe.
Bestimmte andere Polypeptide, welche alternativ als verkürztes GLP-1 oder verkürztes Insulinotropin bezeichnet werden, welche insulinotrope Aktivität zeigen, sowie die Derivate davon sind in PCT/US 89/01121 (WO 90/11296) offenbart. Diese Polypeptide, darin als GLP-1 (7–36), GLP-1 (7–35) und GLP-1 (7–34) bezeichnet, besitzen die folgenden Aminosäuresequenzen:
Zu Derivaten der in WO 90/11296 offenbarten Polypeptide zählen Polypeptide mit inkonsequenten Aminosäuresubstitutionen oder zusätzlichen Aminosäuren zur Verbesserung der Kopplung an Trägerprotein oder zur Verbesserung der insulinotropen Aktivität davon. Zu weiteren Derivaten von Insulinotropin offenbart in WO 90/11296 zählen bestimmte C-Termin-Salze, Ester und Amide, wobei die Salze und Ester als OM definiert sind, wobei M ein pharmazeutisch akzeptables Kation oder eine niedere verzweigte oder unverzweigte Alkylgruppe ist, und die Amide sind definiert als -NR²R³, wobei R² und R³ gleich oder unterschiedlich sind, und sie sind ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff und einer niederen verzweigten oder unverzweigten Alkylgruppe.
WO 91/11457 und WO 93/18785 offenbaren die nachhaltige Freisetzung von Zusammensetzungen antidiabetischer GLP-1-Peptide.
Im Folgenden wird Bezug genommen auf die beigefügten Zeichnungen, wobei:
1 die Wirkung einer verlängerten Infusion (7 Stunden) von 4 ng/kg/min. Insulinotropin auf den Plasmaglukosespiegel in Patienten mit NIDDM zeigt.
2 zeigt die Wirkung einer kurzen Infusion (60 Minuten) von 10 ng/kg/min. Insulinotropin auf den Plasmaglukosespiegel in Patienten mit NIDDM.
3 zeigt die Wirkung einer verlängerten Infusion (7 Stunden) von 2 ng/kg/min. und 4 ng/kg/min. Insulinotropin auf den Plasmaglukosespiegel in Patienten mit NIDDM.
4 zeigt die mittlere (n=3) Plasmakonzentration von Insulinotropin in Ratten nach subkutaner Verabreichung von einzelnen 0,5 mg/0,5 ml Dosen in unterschiedlichen wässrigen Suspensionen (AS).
5 zeigt die mittlere (n=3) Plasmakonzentration von Insulinotropin in Ratten nach subkutaner Verabreichung von einzelnen 0,5 mg/0,5 ml Dosen in unterschiedlichen wässrigen Suspensionen (AS).
6 zeigt die mittlere (n=3) Plasmakonzentration von Insulinotropin in Ratten nach subkutaner Verabreichung von einzelnen 0,5 mg/0,5 ml Dosen in unterschiedlichen wässrigen Suspensionen (AS).
7 zeigt die mittlere (n=3) Plasmakonzentration von Insulinotropin in Ratten nach subkutaner Verabreichung von einzelnen 0,5 mg/0,5 ml Dosen in unterschiedlichen wässrigen Suspensionen (AS).
8 zeigt die mittlere (n=3) Plasmakonzentration von Insulinotropin in Ratten nach subkutaner Verabreichung von einzelnen 0,5 mg/0,13 ml Dosen in unterschiedlichen wässrigen Suspensionen (AS).
9 zeigt die mittlere (n=3) Plasmakonzentration von Insulinotropin in Ratten nach subkutaner Verabreichung von einzelnen 0,5 mg/0,13 ml Dosen in unterschiedlichen wässrigen Suspensionen (AS).
10 zeigt pharmakokinetische Studien eines Insulinotropin-Zink-Präzipitates.
Die vorliegende Erfindung bietet in einem ersten Aspekt eine Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist:

(i) eine Verbindung ausgewählt aus: (a) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2; (b) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (1) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (2) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (3) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (4) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (5) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und
(ii) ein Polymer ausgewählt aus Polyethylenglykol, Polyoxyethylen-Polyoxypropylen-Copolymeren, Polyanhydriden und Polysacchariden, wobei die Polysaccharide aus Chitosan, Gummiarabikum, Karayagummi, Guar Gum, Xanthan, Tragant, Alginsäure, Carrageenan, Agarose und Furcellaranen, Dextran, Stärke, Stärkederivaten und Hyaluronsäure ausgewählt sind; wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Formulierung vorliegt, in der Lage ist, eine anhaltende glykämische Kontrolle zu erreichen und so behandelt worden ist, dass sie die Verbindung aus Teil (i) in kristalliner oder amorpher Form aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.

Die vorliegende Erfindung bietet in einem zweiten Aspekt eine Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist:

(i) eine Verbindung ausgewählt aus: (a) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2; (b) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (1) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (2) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (3) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (4) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (5) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und
(ii) eine pharmazeutisch akzeptable, nicht mit Wasser mischbare Ölsuspension, wobei das Öl aus Erdnussöl, Sesamöl, Mandelöl, Rizinusöl, Kamelienöl, Baumwollsamenöl, Olivenöl, Maisöl, Sojaöl, Safloröl, Estern von Fettsäuren und Estern von Fettalkoholen ausgewählt ist, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Formulierung vorliegt, in der Lage ist, eine anhaltende glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Partikelform aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.

Die Zusammensetzung des zweiten Aspektes kann weiters (i) ein Benetzungsmittel, welches ein nicht-ionisches oberflächenaktiver Stoff ist, und (ii) ein Suspendiermittel aufweisen.
Die vorliegende Erfindung bietet in einem dritten Aspekt eine Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist:

(i) eine Verbindung ausgewählt aus: (a) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2; (b) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (1) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (2) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (3) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (4) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (5) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und
(ii) Zink (II), welches mit dem Peptid gemischt ist, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Formulierung vorliegt, in der Lage ist, eine anhaltende glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in kristalliner oder amorpher Form aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.

Das Zink kann amorph oder kristallin sein.
Die vorliegende Erfindung bietet in einem vierten Aspekt eine Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist:

(i) eine Verbindung ausgewählt aus: (a) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2; (b) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (1) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (2) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (3) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (4) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (5) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und
(ii) ein Metall ausgewählt aus Ni(II), Co(II), Mn(II), Fe(II) und Cu(II), wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Formulierung vorliegt und die Verbindung aus Teil (i) in kristalliner oder amorpher Form aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.

Die vorliegende Erfindung bietet in einem fünften Aspekt eine Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist:

(i) eine Verbindung ausgewählt aus: (a) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2; (b) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (1) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (2) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (3) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (4) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (5) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und
(ii) Phenol, Cresol, Resorcinol oder Methylparaben, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Formulierung vorliegt, in der Lage ist, eine anhaltende glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Präzipitat- oder Aggregatform aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.

Die vorliegende Erfindung bietet in einem sechsten Aspekt eine Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist:

(i) eine Verbindung ausgewählt aus: (a) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2; (b) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (1) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (2) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (3) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (4) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (5) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und
(ii) ein basisches Polypeptid und eine Phenolverbindung, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Formulierung vorliegt, in der Lage ist, eine anhaltende glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Präzipitat- oder Aggregatform aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.

Die vorliegende Erfindung bietet in einem siebenten Aspekt eine Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist:

(i) eine Verbindung ausgewählt aus: (a) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2; (b) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (1) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (2) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (3) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (4) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (5) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und
(ii) ein basisches Polypeptid, eine Phenolverbindung und ein Metall-Ion, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt, in der Lage ist, eine anhaltende glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Präzipitat- oder Aggregatform umfasst, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist. Das basische Polypeptid kann Protamin sein, und das Metall-Ion kann Zink sein.

Die vorliegende Erfindung bietet in einem achten Aspekt eine Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist:

(i) eine Verbindung ausgewählt aus: (a) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2; (b) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (1) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (2) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (3) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (4) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (5) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, wobei die Peptide und Derivate davon Bedingungen unterzogen wurden, welche in amorphen oder kristallinen Präzipitaten oder Aggregaten resultieren, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweisen, wobei die Bedingungen folgende sind: hohe Scherung, Salzeinwirkung oder Kombinationen davon, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Formulierung vorliegt und in der Lage ist, eine anhaltende glykämische Kontrolle zu erreichen.

In der Zusammensetzung des achten Aspektes kann das Salz: Ammoniumsulfat, Natriumsulfat, Lithiumsulfat, Lithiumchlorid, Natriumcitrat, Ammoniumcitrat, Natriumphosphat, Kaliumphosphat, Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Ammoniumchlorid, Natriumacetat, Ammoniumacetat, Magnesiumsulfat, Calciumchlorid, Ammoniumnitrat, Natriumformat oder eine Kombination daraus, sein.
Die vorliegende Erfindung bietet in einem neunten Aspekt eine Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist:

(i) eine Verbindung ausgewählt aus: (a) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2; (b) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COH wobei W die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz der SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (1) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (2) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (3) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (4) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (5) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und
(ii) ein basisches Polypeptid, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt, in der Lage ist, eine anhaltende glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Präzipitat- oder Aggregatform aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.

Das basische Polypeptid kann Protamin sein.
In einem weiteren Aspekt bietet die Erfindung eine Zusammensetzung des ersten bis neunten Aspektes zur Verwendung in der Medizin. In noch einem weiteren Aspekt bietet die Erfindung die Verwendung einer Zusammensetzung des ersten bis neunten Aspektes bei der Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung von Nichtinsulinabhängigem Diabetes Mellitus.
Das Medikament kann für die subkutane, intramuskuläre oder transdermale Verabreichung oder zur Verabreichung durch eine Infusionspumpe, durch orale Inhalation oder durch nasale Inhalation oder gastrointestinale Verabreichung gedacht sein.
Die verzögerte Verabreichung der Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung kann zur Behandlung von Nichtinsulinabhängigem Diabetes Mellitus in einem Säugetier verwendet werden.
Falls nicht anders angegeben, schließt der Begriff „Derivat" wie im gesamten Dokument und den beigefügten Ansprüchen verwendet, jedoch nicht darauf beschränkt, Polypeptide, welche die gezeigte Primärstruktur aufweisen, wobei eine oder mehrere L-Aminosäuren am C-Terminus davon eingeschlossen sind; wobei die C-terminale-Carboxylgruppe einen Ester mit einer (C₁-C₆)- gerader oder verzweigten Alkylgruppe bildet, wobei die C-terminale-Carboxylgruppe ein Carboxamid oder substituiertes Carboxamid bildet; wobei die sauren Aminosäurereste (Asp und/oder Glu) einen Ester oder Carboxamid bilden; und Kombinationen davon, ein.
Eingeschlossen in den Umfang dieser Erfindung sind Polypeptide, welche Homologie mit den zuvor beschriebenen Peptiden aufweisen, wobei die Homologie ausreichend ist, um die insulinotrope Aktivität solcher Polypeptide zu gewähren. Ebenso eingeschlossen in den Umfang dieser Erfindung sind Varianten der zuvor beschriebenen Polypeptide, wobei die Varianten inkonsequente Aminosäuresubstitutionen aufweisen und insulinotrope Aktivität zeigen.
Glucagon-ähnliches Peptid-1 (7–37), seine Isolierung, Charakterisierung und Verwendung zur Behandlung von Diabetes Mellitus sind in US-Patentschrift Nr. 5,118,666 und 5,120,712 offenbart.
Es wurde nun in der vorliegenden Erfindung wurde nun entdeckt, dass anhaltende Erhöhungen der Plasmawerte von GLP-1 und verwandten Polypeptiden während der Mahlzeit und darüber hinaus notwendig sind, um eine anhaltende glykämische Kontrolle in Patienten mit Nichtinsulinabhängigem Diabetes Mellitus zu erreichen. Überraschenderweise stellte sich heraus, dass die Erhöhung von GLP-1 und verwandten Polypeptiden nur um die Zeit der Mahlzeit herum, selbst für Zeiträume von bis zu einer Stunde, die Glukosespiegel nicht angemessen kontrolliert. Somit erfordert die Verabreichung von GLP-1 und verwandten Peptide ein System zur verlängerten Abgabe. Dieses System zur anhaltenden Abgabe führt zu einer Verbesserung der Insulinwirkung.
Die Phrase „Verbesserung der Insulinwirkung", wie im gesamten Dokument und in den beigefügten Ansprüchen verwendet, schließt, ohne jedoch darauf beschränkt zu sein, eines oder mehrere von Erhöhung der Insulinsynthese, Erhöhung der Insulinsekretion, Erhöhung der Glukoseaufnahme durch Muskel und Fett und Verringerung der Glukoseproduktion durch die Leber ein:
Die Polypeptide dieser Erfindung werden durch verschiedene, dem Fachmann gut bekannte Verfahren hergestellt. Zum Beispiel können die Polypeptide mit Hilfe automatischer Peptidsynthesizer wie einem 430A Festphasen-Peptidsynthesizer von Applied Biosystems (ABI) synthetisiert werden. Alternativ dazu können die Polypeptide dieser Erfindung mit Hilfe rekombinanter DNA-Technologie hergestellt werden, wobei eine DNA-Sequenz, welche das Polypeptid kodiert, funktionsfähig mit einem Expressionsvektor verbunden ist und verwendet wird, um eine geeignete Wirtszelle zu transformieren. Die transformierte Wirtszelle wird dann unter Bedingungen kultiviert, unter denen das Polypeptid exprimiert wird. Das Polypeptid wird dann aus der Kultur gewonnen. Weiters kann eine Kombination aus Synthese und rekombinanter DNA-Techniken eingesetzt werden, um die Amid- und Ester-Derivate dieser Erfindung und/oder Fragmente des gewünschten Polypeptides herzustellen, welches dann durch Verfahren verbunden werden, welche dem Fachmann gut bekannt sind.
Derivate der Polypeptide gemäß dieser Erfindung werden durch Verfahren hergestellt, welche dem Fachmann gut bekannt sind. Zum Beispiel werden C-terminale-Alkylester-Derivate der Polypeptide dieser Erfindung hergestellt, indem das gewünschte (C₁-C₆)-Alkanol in Gegenwart einer katalytischen Säure wie HCl mit dem gewünschten Polypeptid reagiert wird. Zu geeigneten Reaktionsbedingungen für eine solche Alkylesterbildung zählen eine Reaktionstemperatur von etwa 50°C und Reaktionszeiten von etwa 1 Stunde bis etwa 3 Stunden. Ähnlich können so Derivate von Polypeptiden dieser Erfindung, welche (C₁-C₆)-Alkylester der Asp- und/oder Glu-Reste innerhalb des Polypeptides aufweisen, gebildet werden.
Carboxamid-Derivate der Polypeptide dieser Erfindung werden auch durch Festphasen-Peptidsynthese-Verfahren hergestellt, welche dem Fachmann gut bekannt sind. Zum Beispiel siehe Solid Phase Peptide Synthesis, Stewart, J.M., et al., Pierce Chem. Co. Press, 1984.
Alternativ zu oder in Kombination mit dem zuvor genannten, können Derivate der Polypeptide dieser Erfindung durch Modifikation der DNA-Kodiersequenz für solche Polypeptide hergestellt werden, so dass ein basischer Aminosäurerest durch einen unterschiedlichen basischen Aminosäurerest oder durch einen sauren oder neutralen Aminosäurerest ersetzt wird, oder ein saurer Aminosäurerest wird durch einen unterschiedlichen sauren Aminosäurerest oder durch einen basischen oder neutralen Aminosäurerest ersetzt, oder ein neutraler Aminosäurerest wird durch einen unterschiedlichen neutralen Aminosäurerest oder durch einen sauren oder basischen Aminosäurerest ersetzt. Solche Veränderungen in der Polypeptidprimärsequenz können auch durch direkte Synthese des Derivates erreicht werden. Solche Verfahren sind dem Fachmann gut bekannt. Natürlich müssen solche Derivate, um für den praktischen Einsatz dieser Erfindung geeignet zu sein, eine insulinotrope Wirkung erzielen.
Die insulinotrope Aktivität eines Polypeptidderivates gemäß dieser Erfindung wird wie Folgt bestimmt.
Langerhans-Inseln werden aus dem Bauchspeicheldrüsengewebe normaler Ratten isoliert, durch eine Modifikation des Verfahrens von Lacy, P.E., et al., Diabetes 16:35–39 (1967), bei welchem der Kollagenase-Verdau des Bauchspeicheldrüsengewebes auf einem Ficoll-Gradienten (27 %, 23 %, 20,5 % und 11 % in Hanks ausgewogener Salzlösung, pH 7,4) getrennt wird. Die Inseln werden aus der 20,5 %/11 % Schnittstelle entnommen, gewaschen und unter einem Stereomikroskop per Hand von exokrinem und anderem Gewebe befreit. Die Inseln werden über Nacht in RPMI 1640 Medium das mit 10 % fötalem Rinderserum ergänzt ist und 11 mM Glukose enthält, bei 37°C und unter 95 % Luft/5 % CO₂ inkubiert. Die Inseln werden dann in RPMI 1640 Medium das mit 10 % fötalem Rinderserum ergänzt ist und 5,6 mM Glukose enthält, übertragen. Die Inseln werden dann für 60 Minuten bei 37°C unter 95 % Luft/5 % CO₂ inkubiert. Das zu untersuchende Polypeptidderivat wird in Konzentrationen von 1 nM und 10 nM in RPMI Medium, das 10 % fötalem Rinderserum und 16,7 mM Glukose enthält, hergestellt. Etwa 8 bis 10 isolierte Inseln werden dann mittels einer Pipette in ein Gesamtvolumen von 250 μl des Polypeptidderivat-enthaltenden Mediums in 96-Kammer-Mikrotiterschalen übertragen. Die Inseln werden in Gegenwart des Polypeptidderivates für 90 Minuten bei 37°C unter 95 % Luft/5 % CO₂ inkubiert. Dann werden Aliquote von inselfreiem Medium entnommen, und 100 μl davon werden durch Radioimmunoassay mittels eines Equate Insulin RIA Satzes (Binax, Inc., Portland, ME) auf die Menge an vorhandenem Insulin untersucht.
Wirksame Dosierungen bei der Behandlung von Erwachsenendiabetes reichen von etwa 1 pg/kg bis 1.000 μg/kg pro Tag, wenn ein Polypeptidderivat dieser Erfindung verabreicht wird, zum Beispiel intravenös, intramuskulär oder subkutan. Ein bevorzugter Dosierungsbereich für die intravenöse Infusion während der und zwischen den Mahlzeiten reicht von etwa 4 bis 10 ng/kg/min oder von etwa 0,6 bis 1,4 μg/Tag basierend auf einem 100 kg schweren Patienten. Es dürfte jedoch erkennbar sein, dass Dosierungen außerhalb dieses Bereiches möglich sind und diese auch innerhalb des Umfangs dieser Erfindung liegen. Die geeignete Dosierung kann und wird durch den verschreibenden Arzt festgelegt und erfolgt anhand der Schwere des zu behandelnden Zustandes sowie der mit dem verabreichten Derivat erreichten Reaktion, sowie des Alters, Gewichts, Geschlechts und der medizinischen Vorgeschichte des Patienten.
Die verzögerte Verabreichung kann durch subkutane, intramuskuläre oder transdermale Mittel, orale Inhalation, nasale Inhalation, gastrointestinal oder mittels einer Infusionspumpe erreicht werden.
Die verzögerte Verabreichung von GLP-1 und verwandten Peptide kann auch durch Formulierung als eine Lösung in verschiedenen wasserlöslichen Polymeren erreicht werden. Diese Polymere sind im Allgemeinen Polymere mit niedrigem Molekulargewicht (<15 kDa). Zu nichteinschränkenden Beispielen solcher Polymere mit niedrigem Molekulargewicht zählen Polyethylenglykol, Polyvinylpyrrolidon, Polyvinylalkohol und Polyoxyethylen-Polyoxypropylen-Copolymere. Polymere mit höherem Molekulargewicht können verwendet werden. Zu nichteinschränkenden Beispielen von Polymeren mit höherem Molekulargewicht zählen Polysaccharide wie Zellulose und ihre Derivate, Chitosan, Akaziengummi, Karayagummi, Guar Gum, Xanthan, Tragant, Alginsäure, Carrageenan, Agarose und Furcelleran. In letzterem Fall werden Polymere, welche in vivo entweder enzymatisch oder durch Hydrolyse zersetzt werden, bevorzugt, zum Beispiel Dextran; Stärke und ihre Derivate, Hyaluronsäure, Polyester, Polyamide, Polyanhydride und Polyorthoester. Die Gewebeakkumulation in Verbindung mit nicht biologisch abbaubaren Polymeren mit höherem Molekulargewicht wird verhindert, indem Polymere mit niedrigem Molekulargewicht oder biologisch abbaubare Polymere verwendet werden. Die Formulierungen enthalten üblicherweise GLP-1 oder verwandte Peptide, bei etwa 1 mg/ml, mit einer Konzentration in Abhängigkeit vom Polymer, jedoch üblicherweise bei Konzentrationen bis zu der, welche eine Viskosität von 50 cps erzielt, und möglicherweise einen geeigneten/s Puffer, Tonizitätsagens und Konservierungsmittel. In vivo Daten bei Ratten und Menschen zeigen, dass die Formulierungen in der Lage sind, messbarer Blutinsulinotropinspiegel zu erreichen, zum Beispiel Spiegel für bis zu 24 Stunden. Im Gegensatz dazu resultiert Insulinotropin, zum Beispiel formuliert in phosphatgepufferter Salzlösung, in schnellen (- 15 Minuten) Spitzenplasmaspiegel, mit einem Plasmaspiegelabfall unter die Nachweisgrenze in knapp über 4 Stunden. Die Plasmakonzentration vs. Zeit-Diagramme lassen darauf schließen, dass die Insulinotropin Absorptionsrate, zum Beispiel, von der Injektionsstelle in Gegenwart der Polymere signifikant verringert wurde.
GLP-1 und verwandte Peptide können auch als Partikel suspendiert in einem pharmazeutisch akzeptablen Öl formuliert werden. Die bevorzugten Öle sind Triglyceride. Zu nichteinschränkenden Beispielen solcher Öle zählen Erdnussöl, Sesamöl, Mandelöl, Rizinusöl, Kamelienöl, Baumwollsamenöl, Olivenöl, Maisöl, Sojaöl, Safloröl und Kokosnussöl. Öle anderer Klassen sind akzeptabel, zum Beispiel Ester von Fettsäuren und Ester von Fettalkoholen, solange das Öl nicht mit Wasser mischbar und ein schlechtes Lösemittel für das Peptid ist. Die Formulierung kann auch geeignete Konservierungsmittel, Benetzungsmittel und Suspendiermittel enthalten. Das Gewichtsprozent von Insulinotropin kann in der Formulierung zum Beispiel zwischen 0,01 bis 10 % variieren. In vivo Daten bei Ratten zeigen, dass diese Formulierungen in der Lage sind, messbarer Insulinotropin-Blutspiegel zu erreichen, zum Beispiel für bis zu 24 Stunden. Im Gegensatz dazu resultiert Insulinotropin, zum Beispiel formuliert in phosphatgepufferter Salzlösung, in schnellen (~ 15 Minuten) Spitzenplasmaspiegel, mit einem Plasmaspiegelabfall unter die Nachweisgrenze in knapp über 4 Stunden. Die Plasmakonzentration vs. Zeit-Diagramme lassen darauf schließen, dass die Insulinotropin-Absorptionsrate von der Injektionsstelle in den Ölsuspensionen signifikant verringert wurde.
GLP-1 und verwandte Peptide können auch als eine gering lösliche Form für die Verabreichung durch Kombination mit einem Metall-Ion, bevorzugt in Form eines Salzes, formuliert werden. Ein bevorzugtes Ion ist Zink (II). Die Kombination kann in einer Zusammensetzung resultieren, welche amorph oder kristallin ist. Es können auch andere Metall-Ionen verwendet werden, einschließlich Ni(II), Co(II), Mg(II), Ca(II), K(I), Mn(II), Fe(II) und Cu(II).
Eine weitere Art der Formulierung zur verzögerten Freigabe ist eine wässrige Suspension von Insulinotropin-Präzipitaten oder -Aggregaten gebildet unter Verwendung von Fällungsmitteln, zum Beispiel Phenolverbindungen oder basische Polypeptide oder Metall-Ionen oder Salze und/oder unter Einwirkung hoher Scherung. Mehr als ein Fällungsmittel kann gleichzeitig eingesetzt werden. Die Präzipitate können entweder kristallin oder amorph sein.
Insulinotropinkristalle können aus einer Lösung des Arzneimittels in Wasser durch Verwendung eines pH-Gradienten (entweder hoch zu niedrig oder niedrig zu hoch) und/oder Temperaturgradienten und/oder Salzen zur Verringerung der Löslichkeit erhalten werden. Zu den Salzen zählen Ammoniumcitrat, Natrium- oder Kaliumphosphat, Natrium- oder Kalium- oder Ammoniumchlorid, Natrium- oder Ammoniumacetat, Magnesiumsulfat, Calciumchlorid, Ammoniumnitrat, Natriumformat und jedes andere Salz, welches die Löslichkeit des Arzneimittels verringern kann. Wenn das für die Kristallisation verwendete Salz nicht pharmazeutisch akzeptabel ist, dann kann die Mutterlauge nach Abschluss der Kristallisation durch ein pharmazeutisch akzeptables Medium ersetzt werden. Sollte eine weitere Verringerung der Arzneimittellöslichkeit notwendig sein, um ein gewünschtes pharmakokinetisches Profil zu erreichen, dann können die Kristalle mit Metall-Ionen wie Zink oder Calcium und/oder Phenolverbindungen behandelt werden. Die Behandlung kann einfach durch Zugabe dieser Zusatzstoffe zu der Kristallsuspension erfolgen.
Die Löslichkeit der Insulinotropin-Präzipitate oder -Aggregate kann unter physiologischen Bedingungen von weniger als 1 μg/ml bis 500 μg/ml reichen. In vivo Daten bei Ratten zeigen, dass die Formulierungen in der Lage sind, messbarer Insulinotropin-Blutspiegel, zum Beispiel, für mindestens 30 Stunden zu erreichen.
Das für die zuvor genannten Formulierungen verwendete wässrige Medium kann jede Art von Puffersystem sein, welches für die Injektion verwendet werden kann, oder selbst reines Wasser. Der pH der endgültigen Formulierung kann jeden Wert haben, solange die Formulierung injizierbar ist. Protamin kann als jegliche Art von Salzform (z.B. Sulfat, Chlorid, etc.) oder Protaminbase zugegeben werden. Exemplarische Konzentrationsbereiche der Komponenten, welche für die Formulierungsherstellung verwendet werden können, sind Folgende: Phenol (0,5 bis 5,0 mg/ml), m-Cresol (0,5 bis 5,5 mg/ml), Protamin (0,02 bis 1,0 mg/ml), Zink (0,10 bis 6 Zink/Insulinotropin-Molarverhältnis), Natriumchlorid (bis zu 100 mg/ml) und Phosphatpuffer (5–500 mM).
Es können auch andere phenolische oder nicht-phenolische-Verbindungen verwendet werden. Zu nichteinschränkenden Beispielen solcher Verbindungen zählen Resorcinol, Methylparaben, Propylparaben, Benzylalkohol, Chlorcresol, Cresol, Benzaldehyd, Catecol, Pyrogallol, Hydrochinon, n-Propylgallat, butyliertes Hydroxyanisol, butyliertes Hydroxytoluen. Nichteinschränkende Beispiele basischer Polypeptide sind Polylysin, Polyarginin usw.
Nach der allgemeinen Beschreibung der Erfindung wird nun auf spezifische Beispiele Bezug genommen. Es dürfte einleuchtend sein, dass diese Beispiele nicht dem Zweck der Einschränkung der vorliegenden Erfindung dienen, deren Umfang durch die beigefügten Ansprüche festgelegt ist.
BEISPIEL 1
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A1
10 mg Insulinotropin wurden in einen 5 ml Messkolben eingewogen. Etwa 4 ml phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Es wurde ausreichend PBS (q.s. Menge: quantum sufficit) zugegeben, um den Kolben zu füllen. 20 mg Insulinotropin wurden in einen 10 ml Messkolben abgewogen. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Eine ausreichende Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Die Volumina beider Kolben wurden kombiniert, indem sie mittels einer Glasspritze durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert wurden. Lösung A1 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B1
8 mg Protaminsulfat und 44 mg Phenol wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Die q.s. Menge PBS wurde hinzugegeben, um das Protaminsulfat und das Phenol aufzulösen. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B1 enthielt Protaminbase 0,6 mg/ml und Phenol 4,4 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 1
1,5 ml Lösung A1 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B1 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden sachte gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 1 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml, Protaminbase 0,3 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 2
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A2
10 mg Insulinotropin wurden in einen 5 ml Messkolben eingewogen. Etwa 4 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Es wurde eine ausreichende Menge PBS in den Kolben gegeben. 20 mg Insulinotropin wurden in einen 10 ml Messkolben abgewogen. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Die Volumina beider Kolben wurden kombiniert, indem sie mittels einer Glasspritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert wurden. Lösung A2 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B2
2 mg Protaminsulfat und 44 mg Phenol wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat und das Phenol aufzulösen. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B2 enthielt Protaminbase 0,15 mg/ml und Phenol 4,4 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 2
1,5 ml Lösung A2 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B2 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 2 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml, Protaminbase 0,075 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 3
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A3
20 mg Insulinotropin wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Lösung A3 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A3 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B3
8 mg Protaminsulfat, 44 mg Phenol und 323 mg Glycerin wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat, das Phenol und das Glycerin aufzulösen. Diese Lösung wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B3 enthielt Protaminbase 0,6 mg/ml, Phenol 4,4 mg/ml und Glycerin 32 ml/mg in PBS.
Wässrige Suspension 3
1,5 ml Lösung A3 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B3 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 3 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml, Protaminbase 0,3 mg/ml, Phenol 2,2 mg/ml und Glycerin 16 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 4
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A4
20 mg Insulinotropin wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A4 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter (Millipore Millex-GV) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A4 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B4
8 mg Protaminsulfat und 52 mg m-Cresol wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat und das m-Cresol aufzulösen. Diese Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B4 enthielt Protaminbase 0,6 mg/ml und m-Cresol 5 ml/mg in PBS.
Wässrige Suspension 4
1,5 ml Lösung A4 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B4 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Kristallbildung zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 4 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml, Protaminbase 0,3 mg/ml und m-Cresol 2,5 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 5
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A5
50 mg Insulinotropin wurden in einen 25 ml Messkolben eingewogen. Etwa 23 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A5 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 50 ml Glasphiole filtriert. Lösung A5 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Phenolstammlösung
0,44 g Phenol wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 95 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die entstehende Lösung (4,4 mg/ml Phenol) wurde zur Herstellung von Lösung B5 verwendet.
Herstellung der Lösung B5
Lösung B5 wurde durch Filtrieren von 25 ml der Phenolstammlösung durch einen 0,2 μ-Filter in eine 50 ml Glasphiole hergestellt. Lösung B5 enthielt Phenol 4,4 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 5
1,25 ml Lösung A5 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,25 ml Lösung B5 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 5 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 6
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A6
50 mg Insulinotropin wurden in einen 25 ml Messkolben eingewogen. Etwa 23 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A6 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 50 ml Glasphiole filtriert. Lösung A6 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Phenolstammlösung
0,44 g Phenol wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 95 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die entstehende Lösung (4,4 mg/ml Phenol) wurde zur Herstellung von Lösung B6 verwendet.
Herstellung der Lösung B6
Lösung B6 wurde hergestellt, indem 1,25 mg Protaminsulfat in einen 25 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 20 ml Phenolstammlösung wurden in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat aufzulösen. Die q.s. Menge Phenolstammlösung wurde in den Kolben gegeben. Lösung B6 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 50 ml Glasphiole filtriert. Lösung B6 enthielt Phenol 4,4 mg/ml und Protaminbase 0,038 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 6
1,25 ml Lösung A6 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,25 ml Lösung B6 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 6 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml, Phenol 2,2 mg/ml und Protaminbase 0,019 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 7
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A7
50 mg Insulinotropin wurden in einen 25 ml Messkolben eingewogen. Etwa 23 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A7 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 50 ml Glasphiole filtriert. Lösung A7 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Phenolstammlösung
0,44 g Phenol wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 95 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die entstehende Lösung (4,4 mg/ml Phenol) wurde zur Herstellung von Lösung B7 verwendet.
Herstellung der Losung B7
Lösung B7 wurde hergestellt, indem 2,5 mg Protaminsulfat in einen 25 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 20 ml Phenolstammlösung wurden in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat aufzulösen. Die q.s. Menge Phenolstammlösung wurde in den Kolben gegeben. Lösung B7 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 50 ml Glasphiole filtriert. Lösung B7 enthielt Phenol 4,4 mg/ml und Protaminbase 0,075 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 7
1,25 ml Lösung A7 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,25 ml Lösung B7 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 7 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml, Phenol 2,2 mg/ml und Protaminbase 0,038 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 8
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A12
20 mg Insulinotropin wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A12 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A12 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Lösung B12
Lösung B12 wurde hergestellt, indem 20 mg Phenol in einen 10 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Lösung B12 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B12 enthielt Phenol 2 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 12
4 ml Lösung A12 wurden in eine 10 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde gerührt, während 4 ml Lösung B12 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 12 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml und Phenol 1 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 9
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A15
20 mg Insulinotropin wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml Phosphatpuffer (PB) wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PB in den Kolben gegeben. Lösung A15 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A15 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PB.
Herstellung der Lösung B15
Lösung B15 wurde hergestellt, indem 8 mg Protaminsulfat in einen 10 ml Messkolben abgewogen wurden. Etwa 8 ml PB wurden in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat aufzulösen. Eine ausreichende q.s. Menge PB wurde in den Kolben gegeben. Lösung B15 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B15 enthielt Protaminbase 0,6 mg/ml in PB.
Wässrige Suspension 15
3 ml Lösung A15 wurden in eine 10 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde gerührt, während 3 ml Lösung B15 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 15 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml und Protaminbase 0,3 mg/ml in PB. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 10
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A16
20 mg Insulinotropin wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml PB wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PB in den Kolben gegeben. Lösung A16 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A16 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PB.
Herstellung der Lösung B16
Lösung B16 wurde hergestellt, indem 44 mg Phenol in einen 10 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 8 ml PB wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s. Menge PB wurde in den Kolben gegeben. Lösung B16 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B16 enthielt Phenol 4,4 mg/ml in PB.
Wässrige Suspension 16
3 ml Lösung A16 wurden in eine 10 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 3 ml Lösung B16 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 16 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in PB. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 11
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Wässrige Suspension 17
10 mg Insulinotropin wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Der Inhalt des Kolbens wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole vom Typ I filtriert. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 17 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 12
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Wässrige Suspension 18
10 mg Insulinotropin wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Der Inhalt des Kolbens wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole vom Typ I filtriert. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden sachte gerührt (darauf achtend, dass es nicht zu Schaum- oder Blasenbildung kommt), um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 18 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 13
Insulinotropin (0,2 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A22
Lösung A22 wurde hergestellt, indem 2 mg Insulinotropin in einen 5 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 3 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A22 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A22 enthielt Insulinotropin 0,4 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B22
Lösung B22 wurde hergestellt, indem 44 mg Phenol in einen 10 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Lösung B22 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B22 enthielt Phenol 4,4 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 22
1,5 ml Lösung A22 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B22 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 22 enthielt Insulinotropin 0,2 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 14
Insulinotropin (0,2 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A23
Lösung A23 wurde hergestellt, indem 2 mg Insulinotropin in einen 5 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 3 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A23 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A23 enthielt Insulinotropin 0,4 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B23
Lösung B23 wurde hergestellt, indem 8,8 mg Phenol in einen 10 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Lösung B23 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B23 enthielt Phenol 0,88 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 23
1,5 ml Lösung A23 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B23 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 23 enthielt Insulinotropin 0,2 mg/ml und Phenol 0,44 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 15
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A24
Lösung A24 wurde hergestellt, indem 10 mg Insulinotropin in einen 5 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 3 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A24 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A24 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B24
Lösung B24 wurde hergestellt, indem 8 mg Protaminsulfat in einen 10 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Lösung B24 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B24 enthielt Protaminbase 0,6 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 24
1,5 ml Lösung A24 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B24 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 24 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml und Protaminbase 0,3 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 16
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A25
Lösung A25 wurde hergestellt, indem 10 mg Insulinotropin in einen 5 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 3 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A25 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A25 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B25
Lösung B25 wurde hergestellt, indem 53 mg m-Cresol in einen 10 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das m-Cresol aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Lösung B25 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B25 enthielt m-Cresol 5,3 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 25
1,5 ml Lösung A25 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B25 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 25 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml und m-Cresol 2,5 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 17
Insulinotropin (0,5 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A29
Lösung A29 wurde hergestellt, indem 25 mg Insulinotropin in einen 25 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 20 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A29 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 50 ml Glasphiole filtriert. Lösung A29 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B29
Lösung B29 wurde hergestellt, indem 50 mg Phenol in einen 50 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 40 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Lösung B29 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 50 ml Glasphiole filtriert. Lösung B29 enthielt Phenol 1,0 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 29
1,5 ml Lösung A29 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B29 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 29 enthielt Insulinotropin 0,5 mg/ml und Phenol 0,5 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 18
Insulinotropin (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A31
10 mg Insulinotropin wurden in einen 5 ml Messkolben eingewogen. Etwa 4 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel zu dispergieren und aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A31 wurde mittels einer Spritze durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A31 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B31
Lösung B31 wurde hergestellt, indem 50 mg Phenol in einen 50 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 40 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s. Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Lösung B31 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 50 ml Glasphiole filtriert. Lösung B31 enthielt Phenol 1 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 31
1,5 ml Lösung A31 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B31 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 16 Stunden gerührt, um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 31 enthielt Insulinotropin 1 mg/ml und Phenol 0,5 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 19
Insulinotropin (4 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A51
22,2 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 5 ml PBS wurden in die Phiole pipettiert, um das Arzneimittel aufzulösen. Diese Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A51 enthielt Insulinotropin 4,44 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B51
110 mg Phenol und 30 mg Protaminsulfat wurden in einen 5 ml Messkolben eingewogen. Etwa 4 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol und das Protaminsulfat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit PBS gefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B51 enthielt Phenol 22 mg/ml und Protaminbase 4,5 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 51
3 ml Lösung A51 und 0,33 ml Lösung B51 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde sachte geschüttelt, um eine homogene Mischung sicherzustellen. Die Phiole wurde bei Umgebungstemperatur für 16 Stunden stehen lassen. Die wässrige Suspension 51 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Protaminbase 0,44 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 20
Insulinotropin (4 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A52
22,2 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 5 ml PBS wurden in die Phiole pipettiert, um das Arzneimittel aufzulösen. Diese Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A52 enthielt Insulinotropin 4,44 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B52
110 mg Phenol und 15,6 mg Zinkacetat-Dihydrat wurden in einen 5 ml Messkolben eingewogen. Etwa 4 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol und das Zinkacetat-Dihydrat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B52 enthielt Phenol 22 mg/ml und Zinkacetat-Dihydrat 7,8 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 52
3 ml Lösung A52 und 0,33 ml Lösung B52 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde sachte geschüttelt, um eine homogene Mischung sicherzustellen. Die Phiole wurde bei Umgebungstemperatur für 16 Stunden stehen lassen. Die wässrige Suspension 52 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Zinkacetat-Dihydrat 0,78 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 21
Insulinotropin (4 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Phenollösung
244 mg Phenol wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 90 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Der pH dieser Lösung wurde mit 5 % NaOH-Lösung auf pH 9,0 eingestellt. Die Phenollösung enthielt Phenol 2,44 mg/ml in Wasser zur Injektion mit pH 9,0.
Herstellung der Lösung A71
22,2 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 5 ml der Phenollösung wurden in die Phiole pipettiert, um das Arzneimittel aufzulösen. Diese Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A71 enthielt Insulinotropin 4,44 mg/ml und Phenol 2,44 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung B71
116 mg Protaminsulfat wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B71 enthielt Protaminbase 8,7 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung C71
156 mg Zinkacetat-Dihydrat und 1,632 g NaCl wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat und das NaCl aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung C71 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 15,6 mg/ml und NaCl 163,2 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 71
3 ml Lösung A71, 0,165 ml Lösung B71 und 0,165 ml Lösung C71 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde sachte geschüttelt, um eine homogene Mischung sicherzustellen. Die Phiole wurde bei Umgebungstemperatur für 16 Stunden stehen lassen. Die wässrige Suspension 71 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Protaminbase 0,435 mg/ml, Zinkacetat-Dihydrat 0,78 mg/ml, NaCl 8,16 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in Wasser zur Injektion. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 22
Insulinotropin (4 mg/ml) -Suspension
Herstellung der m-Cresol-Lösung
244 mg m-Cresol wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 90 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das m-Cresol aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Der pH dieser Lösung wurde mit 5 % NaOH-Lösung auf pH 9,0 eingestellt. Die m-Cresol-Lösung enthielt m-Cresol 2,44 mg/ml in Wasser zur Injektion mit pH 9,0.
Herstellung der Lösung A100
22,2 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 5 ml der m-Cresol-Lösung wurden in die Phiole pipettiert, um das Arzneimittel aufzulösen. Diese Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A100 enthielt Insulinotropin 4,44 mg/ml und m-Cresol 2,44 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung B100
116 mg Protaminsulfat wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion gefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B100 enthielt Protaminbase 8,7 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung C 100
156 mg Zinkacetat-Dihydrat und 1,632 g NaCl wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat- Dihydrat und das NaCl aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung C 100 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 15,6 mg/ml und NaCl 163,2 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 100
3 ml Lösung A100, 0,165 ml Lösung B100 und 0,165 ml Lösung C 100 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde sachte geschüttelt, um eine homogene Mischung sicherzustellen. Die Phiole wurde bei Umgebungstemperatur für 16 Stunden stehen lassen. Die wässrige Suspension 100 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Protaminbase 0,435 mg/ml, Zinkacetat-Dihydrat 0,78 mg/ml, NaCl 8,16 mg/ml und m-Cresol 2,2 mg/ml in Wasser zur Injektion. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 23
Insulinotropin (4 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A68
22,2 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 5 ml PBS wurden in die Phiole pipettiert, um das Arzneimittel aufzulösen. Diese Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A68 enthielt Insulinotropin 4,44 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B68
116 mg Protaminsulfat wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion gefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B68 enthielt Protaminbase 8,7 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung C68
156 mg Zinkacetat-Dihydrat und 440 mg Phenol wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat und das Phenol aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung C68 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 15,6 mg/ml und Phenol 44 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 68
3 ml Lösung A68, 0,165 ml Lösung B68 und 0,165 ml Lösung C68 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde sachte geschüttelt, um eine homogene Mischung sicherzustellen. Die Phiole wurde bei Umgebungstemperatur für 16 Stunden stehen lassen. Die wässrige Suspension 68 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Protaminbase 0,435 mg/ml, Zinkacetat-Dihydrat 0,78 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 24
Insulinotropin (4 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A67
22,2 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 5 ml PBS wurden in die Phiole pipettiert, um das Arzneimittel aufzulösen. Diese Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A67 enthielt Insulinotropin 4,44 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B67
116 mg Protaminsulfat wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Protaminsulfat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B67 enthielt Protaminbase 8,7 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung C67
156 mg Zinkacetat-Dihydrat und 440 mg m-Cresol wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 8 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat und das m-Cresol aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung C67 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 15,6 mg/ml und m-Cresol 44 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 67
3 ml Lösung A67, 0,165 ml Lösung B67 und 0,165 ml Lösung C67 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde sachte geschüttelt, um eine homogene Mischung sicherzustellen. Die Phiole wurde bei Umgebungstemperatur für 16 Stunden stehen lassen. Die wässrige Suspension 67 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Protaminbase 0,435 mg/ml, Zinkacetat-Dihydrat 0,78 mg/ml und m-Cresol 2,2 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 25
Herstellung der Lösung A39
67,6 mg Insulinotropin wurden in eine Glasphiole eingewogen. Etwa 22 ml Wasser zur Injektion wurden in die Phiole gegeben, um das Insulinotropin aufzulösen. Der pH des Phioleninhaltes wurde mittels NaOH auf 9,6 eingestellt, um eine klare Lösung zu ergeben. Der Phiole wurde Wasser zur Injektion zugegeben, um eine abschließende Arzneimittelkonzentration von 2,5 mg/ml zu erreichen.
Herstellung der Lösung B39
386,8 mg Zinkacetat-Dihydrat wurden in einen 10 ml Messkolben eingewogen. Etwa 80 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung B39 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 3,9 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung C39
1,095 g Phenol wurden in einen 50 ml Messkolben eingewogen. Etwa 40 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung C39 enthielt Phenol 21,9 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung D39
2,25 g NaCl wurden in einen 25 ml Messkolben eingewogen. Etwa 20 ml Lösung C39 wurden in den Kolben gegeben, um das NaCl aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Lösung C39 aufgefüllt. Lösung D39 enthielt NaCl 9 % (w/v) und Phenol 21,9 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 39
Alle Lösungen wurden durch 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) filtriert. 9 ml Lösung A39 wurden in eine 10 ml Probenphiole überführt. 1 ml Lösung B39 wurde unter sachtem Rühren in die Phiole gegeben. Es bildeten sich sofort Präzipitate. Der pH wurde mit 7,0 gemessen. Die Phiole wurde bei Umgebungstemperatur für etwa 18 Stunden stehen lassen. 4 ml der Probe wurden in eine separate 10 ml Phiole übertragen, und 0,44 ml Lösung D39 wurden in die Phiole gegeben. Die Probe wurde für 5 Minuten sachte gerührt und dann über Nacht bei Umgebungstemperatur stehen lassen.
Die wässrige Suspension 39 enthielt Insulinotropin 2 mg/ml, Phenol 2,2 mg/ml, NaCl 0,9 % und Zinkacetat 0,39 mg/ml. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 26
sHerstellung der Lösung A53
32,5 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 6 ml Wasser zur Injektion wurden in die Phiole gegeben. Der pH des Phioleninhaltes wurde mittels 1 % (w/v) NaOH auf 9,6 eingestellt, um eine klare Lösung zu ergeben. Eine geeignete Menge an Wasser zur Injektion wurde zugegeben, um eine Arzneimittelkonzentration von 5,0 mg/ml zu erreichen.
Herstellung der Lösung B53
390 mg Zinkacetat-Dihydrat wurden in einen 50 ml Messkolben eingewogen. Etwa 40 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung B53 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 7,8 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 53
Alle Lösungen wurden durch 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) filtriert. 2,4 ml Lösung A53 wurden in eine 3,5 ml Phiole überführt. 300 μl Lösung B53 wurden unter sachtem Rühren in die Phiole gegeben. Sofort nach der Zugabe bildeten sich doppelbrechende Präzipitate. Der pH wurde mit 6,8 gemessen. Nachdem die Phiole bei Umgebungstemperatur für 20 Stunden stehen gelassen wurde, wurden 7,5 μl m-Cresol direkt zum Überstand der gesetzten Suspension zugegeben. Die Suspension wurde dann sachte gerührt, um das m-Cresol aufzulösen. 300 μl 9 % NaCl-Lösung wurden unter Rühren zur Suspension hinzugegeben. Die wässrige Suspension 53 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, 0,9 % NaCl, 0,78 mg/ml Zinkacetat und 2,5 mg/ml m-Cresol in Wasser zur Injektion. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 27
Herstellung der Lösung A54
32,5 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 6 ml Wasser zur Injektion wurden in die Phiole gegeben. Der pH des Phioleninhaltes wurde mittels 1 % (w/v) NaOH auf 9,6 eingestellt, um eine klare Lösung zu ergeben. Eine geeignete Menge Wasser zur Injektion wurde zugegeben, um eine Arzneimittelkonzentration von 5,0 mg/ml zu erreichen.
Herstellung der Lösung B54
390 mg Zinkacetat-Dihydrat wurden in einen 50 ml Messkolben eingewogen. Etwa 40 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion gefüllt. Lösung B54 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 7,8 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung C54
1,1 g Phenol und 4,5 g NaCl wurden in einen 50 ml Messkolben eingewogen. Etwa 40 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung C54 enthielt Phenol 22 mg/ml und NaCl 90 mg/ml.
Wässrige Suspension 54
Alle Lösungen wurden durch 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) filtriert. 2,4 ml Lösung A54 wurden in eine 3,5 ml Phiole übertragen. 300 μl Lösung B54 wurde unter Rühren in die Phiole gegeben. Sofort nach der Zugabe bildeten sich doppelbrechende Präzipitate. Der pH wurde mit 6,8 gemessen. Die Probe wurde bei Umgebungstemperatur für 20 Stunden stehen lassen. 300 μl Lösung C54 wurden unter sachtem Rühren zugegeben. Die wässrige Suspension 54 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Zinkacetat-Dihydrat 0,78 mg/ml, Phenol 2,2 mg/ml und NaCl 9 mg/ml in Wasser zur Injektion. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 28
Herstellung der Lösung A57
15 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 3 ml Wasser zur Injektion wurden in die Phiole gegeben. Der pH des Phioleninhaltes wurde mittels 5 % NaOH auf 9,9 eingestellt, um das Arzneimittel komplett aufzulösen. Lösung A57 enthielt Insulinotropin 5,0 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung B57
780 mg Zinkacetat-Dihydrat wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 80 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung B57 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 7,8 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung C57
2,2 g Phenol und 9 g NaCl wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 80 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol und das NaCl aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung C57 enthielt Phenol 22 mg/ml und NaCl 90 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 57
2,4 ml Lösung A57 wurden in eine 3,5 ml Phiole überfμhrt. Während der Zugabe von 300 μl Lösung B57 wurde die Lösung sachte gerührt. Sofort nach der Zugabe der Lösung B57 bildeten sich Präzipitate. Der pH wurde mit 7,1 gemessen. Die Probe wurde bei Umgebungsbedingungen für 24 Stunden stehen lassen. 300 μl Lösung C57 wurden unter sachtem Rühren zugegeben. Die wässrige Suspension 57 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Zinkacetat-Dihydrat 0,78 mg/ml, Phenol 2,2 mg/ml und NaCl 9 mg/ml in Wasser zur Injektion. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 29
Herstellung der Lösung A64
53,3 mg Insulinotropin wurden in eine 30 ml Glasphiole eingewogen. Nach Zugabe von 11 ml Wasser zur Injektion wurde der pH des Phioleninhaltes mittels 5 % NaOH (w/v) auf 8,3 eingestellt, um das Insulinotropin aufzulösen. Der pH wurde mittels verdünntem HCl auf 6,0 nach unten korrigiert, wobei sichergestellt wurde, dass sie Lösung klar blieb. Eine geeignete Menge Wasser zur Injektion wurde zugegeben, um eine Arzneimittelkonzentration von 4,4 mg/ml zu erreichen. Lösung A64 wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) in eine 3,5 ml Probenphiole filtriert. 1,8 ml der filtrierten Lösung wurden in eine separate sterile 3,5 ml Phiole überführt, und die Phiole wurde bei Umgebungstemperatur für 3 Tage zum Kristallisieren stehen lassen.
Herstellung der Lösung B64
780 mg Zinkacetat-Dihydrat wurden in einen 50 ml Messkolben eingewogen. Etwa 40 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung B64 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 15,6 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung C64
18 g NaCl wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 80 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das NaCl aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung C64 enthielt NaCl 180 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 64
Nach Abschluss der Kristallisation in Lösung A64, wurden unter langsamem Rühren 100 μl Lösung B64 zu 1,8 ml der Kristallsuspension zugegeben. Die Probe wurde dann bei Umgebungstemperatur für 3 Tage stehen lassen. 100 μl Lösung C64 wurden unter sachtem Rühren zu der Kristallsuspension zugegeben. Der pH der Suspension wurde mittels verdünntem NaOH auf pH 7,3 eingestellt. 5,0 μ m-Cresol wurden direkt in die pH-eingestellte Kristallsuspension gegeben. Die wässrige Suspension 64 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Zinkacetat-Dihydrat 0,78 mg/ml, NaCl 9 mg/ml und m-Cresol 2,5 mg/ml in Wasser zur Injektion. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 30
Herstellung der Lösung A69
1 g NaCl wurde in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 80 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben zugegeben, um das NaCl aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung A69 enthielt NaCl 1 % (w/v) in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung B69
390 mg Zinkacetat-Dihydrat wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 80 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung B69 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 3,9 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Emulsion C69
2,5 ml steril filtriertes (0,22 μ, niedrige Proteinbindung) m-Cresol wurden in einen 100 ml Messkolben überführt. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion gefüllt und beschallt, um eine homogene Suspension zu erzeugen. Emulsion C69 enthielt m-Cresol 25 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 69
35,74 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 7 ml Lösung A69 wurden zugegeben. Der pH des Phioleninhaltes wurde auf 9,2 eingestellt, um das Arzneimittel aufzulösen. Der pH der Lösung wurde mittels verdünntem HCl wieder auf 6,5 eingestellt. Eine geeignete Menge Wasser zur Injektion wurde zugegeben, um eine Arzneimittelkonzentration von 4,4 mg/ml zu erreichen. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) filtriert. Die Lösung wurde bei Umgebungstemperatur für 6 Tage stehen lassen; während dieser Zeit wurde Insulinotropin kristallisiert. 1,5 ml Kristallsuspension wurden in eine separate Phiole überführt. 167 μl Lösung B69 wurden unter sachtem Rühren zugegeben. Die Probe wurde bei Umgebungstemperatur für 1 Tag stehen lassen. 167 μl Emulsion C69 wurde zum Überstand der gesetzten Suspension zugegeben. Die Probe wurde gerührt, um das m-Cresol aufzulösen. Die wässrige Suspension 69 enthielt Insulinotropin 3,6 mg/ml, Zinkacetat 0,36 mg/ml, NaCl 8,17 mg/ml und m-Cresol 2,28 mg/ml in Wasser zur Injektion. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 31
Herstellung der Lösung A 101
10 g Natriumacetat wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 80 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben zugegeben, um das Natriumacetat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung A200 enthielt 100 mg/ml Natriumacetat in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 101
44,4 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole eingewogen. 8 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben zugegeben. Der pH des Phioleninhaltes wurde auf 9,3 eingestellt, um eine klare Lösung zu erhalten. 1 ml der Lösung A200 wurde zu der Insulinotropin-Lösung zugegeben. Der pH wurde dann auf 6,5 nach unten korrigiert. Die Lösung wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) filtriert. Die filtrierte Lösung wurde bei Umgebungstemperatur für 3 Tage stehen lassen, so dass eine Kristallisation stattfinden konnte. Die wässrige Suspension 101 enthielt Insulinotropin 4,9 mg/ml und Natriumacetat 11,1 mg/ml in Wasser zur Injektion. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 32
Herstellung der Lösung A82
9 g NaCl wurde in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 80 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben zugegeben, um das NaCl aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung A82 enthielt NaCl 9 % (w/v) in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Lösung B82
789 mg Zinkacetat-Dihydrat wurden in einen 100 ml Messkolben eingewogen. Etwa 80 ml Wasser zur Injektion wurden in den Kolben gegeben, um das Zinkacetat-Dihydrat aufzulösen. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt. Lösung B82 enthielt Zinkacetat-Dihydrat 7,89 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Herstellung der Emulsion C82
2,5 ml steril filtriertes (0,22 μ, niedrige Proteinbindung) m-Cresol wurden in einen 100 ml Messkolben überführt. Der Kolben wurde bis zur Eichmarke mit Wasser zur Injektion aufgefüllt und beschallt, um eine homogene Suspension zu erzeugen. Emulsion C82 enthielt m-Cresol 25 mg/ml in Wasser zur Injektion.
Wässrige Suspension 82
Alle Lösungen wurden durch 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) filtriert. 45,34 mg Insulinotropin wurden in eine 10 ml Glasphiole gegeben, zu der 8 ml Wasser zugegeben wurden. Der pH wurde mittels 5 % NaOH auf 9,3 eingestellt. Nachdem 1 ml Lösung A82 in die Phiole zugegeben wurde, wurde der pH der Lösung mittels verdünnter HCl auf 6,55 nach unten eingestellt. Die Lösung (5 mg/ml Insulinotropin) wurde durch einen 0,22 μ-Filter (niedrige Proteinbindung) filtriert. 81 μl der wässrigen Suspension 101 (siehe Beispiel 31) wurden zu der steril-filtierten Insulinotropin-Lösung zugegeben und durch Schütteln der Probe dispergiert. Die Probe wurde dann bei Umgebungstemperatur für 72 Stunden stehen lassen, um eine Kristallsuspension zu bilden. 2,4 ml der Suspension wurden in eine 3,5 ml Phiole überführt. 300 μl Lösung B82 wurden unter sachtem Rühren in die Phiole zugegeben. Der pH des Phioleninhaltes wurde mittels verdünnter NaOH auf 7,3 eingestellt. 300 μl Emulsion C82 wurden zum Überstand der gesetzten Suspension zugegeben. Die wässrige Suspension 82 enthielt Insulinotropin 4 mg/ml, Zinkacetat-Dihydrat 0,79 mg/ml, m-Cresol 2,5 mg/ml und 0,9 % NaCl in Wasser zur Injektion. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 33
GLP-1 (7–36) Amid (1 mg/ml) -Suspension
Herstellung der Lösung A26
Lösung A26 wurde hergestellt, indem 10 mg GLP-1 (7–36) Amid in einen 5 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 3 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Arzneimittel aufzulösen. Es wurde die q.s. Menge PBS in den Kolben gegeben. Lösung A26 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung A26 enthielt GLP-1 (7–36) 2 mg/ml in PBS.
Herstellung der Lösung B26
Lösung B26 wurde hergestellt, indem 44 mg Phenol in einen 10 ml Messkolben eingewogen wurden. Etwa 8 ml PBS wurden in den Kolben gegeben, um das Phenol aufzulösen. Die q.s: Menge PBS wurde in den Kolben gegeben. Lösung B26 wurde durch einen 0,22 μ-Filter in eine 10 ml Glasphiole filtriert. Lösung B26 enthielt Phenol 4,4 mg/ml in PBS.
Wässrige Suspension 26
1,5 ml Lösung A26 wurden in eine 3,5 ml Glasphiole vom Typ I pipettiert. Der Inhalt der Phiole wurde magnetisch gerührt, während 1,5 ml Lösung B26 in die Phiole pipettiert wurden. Die Phiole wurde verstöpselt und mit einer Aluminiumhülle versiegelt. Der Phioleninhalt wurde für 18 Stunden sachte gerührt (darauf achtend, dass es nicht zur Schaum- oder Blasenbildung kommt), um die Bildung einer Suspension zu ermöglichen. Die wässrige Suspension 26 enthielt GLP-1 (7–36) Amid 1 mg/ml und Phenol 2,2 mg/ml in PBS. Diese Suspension wurde für pharmakokinetische in vivo Studien bei Ratten verwendet.
BEISPIEL 34
In einer Form der Erfindung wird eine Form von GLP-1 (7–37) mit geringer Löslichkeit durch die Kombination von GLP-1 (7–37) bei 2–15 mg/ml in Puffer bei pH 7–8,5 mit einer Lösung eines Metallionen-Salzes hergestellt, um Lösungen mit 1–8 mg/ml GLP-1 (7–37) bei molaren Verhältnissen von etwa 1:1 bis 270:1 Zink zu GLP-1 (7–37) zu erhalten. Es bildet sich ein schweres Präzipitat und es wird über Nacht bei Raumtemperatur stehen lassen. Die Löslichkeit von GLP-1 (7–37) in der Metallionen-Lösung variiert mit dem eingesetzten Metall. Die anschließende Messung der Löslichkeit des GLP-1 (7–37) Pellets in einem nichtmetallhaltigen Lösungsmittel wie PBS oder Wasser zeigt, dass Zink-, Kobalt- und Nickelionen Formen von GLP-1 (7–37) mit geringer Löslichkeit erzeugen.
Tabelle 1 Die Fähigkeit verschiedener Metallionen-Salze, GLP-1 (7–37) mit geringer Löslichkeit zu erzeugen
Hinweis: In jedem Fall wurden 100 μl Metallionen-Lösung mit 5 mM zu 100 μl GLP-1 (7–37) mit 5 mg/ml zugegeben, gemischt und über Nacht stehen lassen. Das unlösliche Pellet wurde durch Zentrifugation entfernt. Die Konzentration des GLP-1 (7–37), welches in der Metallionen-Lösung verblieb, wurde gemessen. Das Pellet wurde in phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) resuspendiert, beschallt und über Nacht stehen lassen. Noch einmal wurde unlösliches Material pelletisiert, und die GLP-1 (7–37) Konzentration gemessen.
BEISPIEL 35
Mikrokristalline Formen von GLP-1 (7–37) können durch Mischen von Lösungen aus GLP-1 (7–37) in Puffer mit pH 7–8,5 mit bestimmten Kombinationen von Salzen und Polyethylenglykolen (PEG) mit niedrigem Molekulargewicht erhalten werden. Tabelle 2 beschreibt sechs spezifische Sätze von Bedingungen, um mikrokristalline Formen von GLP-1 (7–37) zu bilden.
Tabelle 2 Ausgewählte Reagenzien für die Erzeugung von Mikrokristallen
Hinweis: GLP-1 (7–37) Stammlösung bei 5 mg/ml in 50 mM Tris pH 8,1 wurde 1:1 mit Reagens zugegeben. Tropfen wurden betrachtet und auf die Abwesenheit oder Gegenwart von unlöslichem GLP-1 (7–37) in kristalliner oder amorpher Form untersucht. Im Allgemeinen scheinen PEG mit niedrigem Molekulargewicht kristalline Formen zu bevorzugen. Tris ist Tris(hydroxymethyl)aminomethan und HEPES ist N-2-(Hydroxyethyl)piperazin-N-2-ethansulfonsäure.
VERGLEICHSBEISPIEL 36
Spezifische Kombinationen von GLP-1 (7–37)- und PEG-Konzentrationen sind erforderlich, um mikrokristalline Formen und hohe Ausbeuten zu erzielen. Tabelle 3 zeigt spezifische Kombinationen von PEG 600- und GLP-1 (7–37)-Konzentrationen, welche mikrokristalline im Gegensatz zu amorphen Formen des Arzneimittels erzeugen. Die Ausbeute an GLP-1 (7–37) in der unlöslichen Form wird auch gezeigt.
Tabelle 3 Bildung/Ausbeute von/an kristallinem GLP-1 (7–37)
Hinweis: Mikrokristalle von GLP-1 (7–37) wurden durch Kombination von Lösungen von GLP-1 (7–37) bei 20 mg/ml in Tris-Puffer bei pH 8, 60 % Polyethylenglykol 600 (PEG 600) in H₂O und Tris-Puffer pH 8, um eine abschließende Konzentration von 15–30 % PEG und 3–10 mg/ml GLP-1 (7–37) zu erhalten, hergestellt. Die Lösung wird über Nacht stehen lassen, und es bilden sich Mikrokristalle von GLP-1 (7–37) in der Lösung mit Ausbeuten von 50–85 %.
BEISPIEL 37
Dieses Experiment veranschaulicht eine weitere Form der Erfindung, welche das Behandeln vorgeformter Mikrokristalle von GLP-1 (7–37) mit verschiedenen Metallionen zum Erzeugen von mikrokristallinen Formen mit niedriger Löslichkeit beinhaltet. Mikrokristalle von GLP-1 (7–37) hergestellt mit 8 mg/ml GLP-1 (7–37) und 22,5 % PEG wie in Beispiel 36 beschrieben ist, besitzen eine Löslichkeit gleich der von reinem lyophilisiertem GLP-1 (7–37). Um die gewünschte Eigenschaft niedriger Löslichkeit für die langanhaltende Arzneimittelabgabe zu gewähren, können diese vorgeformten Mikrokristalle mit Lösungen von Metallsalzen bei Verhältnissen von Metall:GLP-1 (7–37) von 1:1 bis 260:1 über Nacht bei Raumtemperatur behandelt werden. Das überschüssige Metallsalz wurde durch einen Zentrifugations/Waschungsprozess entfernt. Tabelle 4 zeigt die Ergebnisse mit mehreren bivalenten Kationen-Metall-Salzen als Behandlung.
Tabelle 4 Löslichkeit von GLP-1 (7–37)-Kristallen mit verschiedenen Behandlungen
Hinweis: GLP-1 (7–37)-Kristalle werden aus einer Lösung von 8 mg/ml IST in 50 mM Tris pH 8 mit 22,5 % PEG 600 zugegeben in H₂O gezüchtet. Alle Zusatzstoffbehandlungslösungen sind 100 mM bivalentes Ionen-Salz in 10 mM Na-Citrat pH 5,2 oder Na-MES pH 6,5.
BEISPIEL 38
Unter Verwendung der hierin beschriebenen Verfahren wurden sowohl amorphe als auch mikrokristalline Formulierungen mit niedriger Löslichkeit unter Verwendung von Zinkacetat hergestellt. Subkutane Injektionen erfolgten bei Ratten (drei Tiere pro Formulierung), und die Plasmaspiegel von GLP-1 (7–37) wurden mittels Radioimmunoassay über 24 Stunden gemessen. 10 zeigt die ausgedehnte Dauer des Arzneimittels im Plasma im Vergleich zu einer subkutanen Kontrollinjektion von löslichem GLP-1 (7–37).
BEISPIEL 39

45 % w/v Polyethylenglykol 3350 (PEG)
1 mg/ml Insulinotropin
20 mM Phosphatpuffer
q.s. Menge steriles Wasser zur Injektion (SWFI)

Eine 50 % w/w PEG-Lösung wurde mit Hilfe von SWFI hergestellt. Ein 200 mM Phosphatpuffer wurde separat mit wasserfreiem zweibasischem Natriumphosphat (26,85 mg/ml) und einbasischem Natriumphosphat- Monohydrat (1,41 mg/ml) hergestellt. Falls notwendig, wurde der pH der Pufferlösung entweder mit Natriumhydroxid oder Salzsäure auf pH 8 gebracht. Die entsprechende Menge an Insulinotropin wurde in ausreichend Pufferlösung aufgelöst, um eine 10 mg/ml Lösung von Insulinotropin herzustellen. Das entsprechende Gewicht der PEG-Lösung wurde zu der Insulinotropin-Lösung zugegeben, und eine ausreichende Menge (q.s.) an SWFI wurde verwendet, um die Lösung auf das gewünschte Volumen zu bringen. Die endgültige Lösung wurde dann mit einem 0,2 μ-Filter sterilfiltriert und aseptisch in Phiolen gefüllt. Die Lösung (0,5 ml) wurde Ratten subkutan injiziert und die Plasma-Insulinotropin-Spiegel wurden mittels RIA-Assay verfolgt.
BEISPIEL 40

1,32 % w/v Hydroxyethylcellulose (HEC)
1 mg/ml Insulinotropin
20 mM Phosphatpuffer
100 mM Natriumchlorid
q.s. Menge steriles Wasser zur Injektion (SWFI)

Eine 2 % w/w Hydroxyethylcellulose-Lösung wurde mit Hilfe von SWFI hergestellt. Ein 200 mM Phosphatpuffer wurde separat mit wasserfreiem zweibasischem Natriumphosphat (26,85 mg/ml) und einbasischem Natriumphosphat -Monohydrat (1,41 mg/ml) hergestellt. Falls notwendig, wurde der pH der Pufferlösung entweder mit Natriumhydroxid oder Salzsäure auf pH 8 gebracht. Die entsprechende Menge an Insulinotropin und Natriumchlorid wurde in ausreichend Pufferlösung aufgelöst, um eine 10 mg/ml Lösung von Insulinotropin herzustellen. Das entsprechende Gewicht der HEC-Lösung wurde zu der Insulinotropin-Lösung zugegeben, und eine ausreichende Menge (q.s.) an SWFI wurde verwendet, um die Lösung auf das gewünschte Volumen zu bringen. Die endgültige Lösung wurde dann mit einem 0,2 μ-Filter sterilfiltriert und aseptisch in Phiolen gefüllt. Die Lösung (0,5 ml) wurde Ratten subkutan injiziert und die Plasma-Insulinotropin-Spiegel wurden mittels RIA-Assay verfolgt.
BEISPIEL 41

18 % w/v Pluronic F 127
1 mg/ml Insulinotropin
20 mM Phosphatpuffer
Ausreichende Menge (q.s.) steriles Wasser zur Injektion (SWFI)

Eine 20 % W/W Pluronic F127-Lösung wurde mit Hilfe von SWFI hergestellt. Ein Polytron (Probenhomogenisator) mit einem Eisbad wurde verwendet, um das Polymer aufzulösen. Ein 200 mM Phosphatpuffer wurde separat mit wasserfreiem zweibasischem Natriumphosphat (26,85 mg/ml) und einbasischem Natriumphosphat-Monohydrat (1,41 mg/ml) hergestellt. Falls notwendig, wurde der pH der Pufferlösung entweder mit Natriumhydroxid oder Salzsäure auf pH 8 gebracht. Die entsprechende Menge an Insulinotropin wurde in ausreichend Pufferlösung aufgelöst, um eine 10 mg/ml Lösung von Insulinotropin herzustellen. Das entsprechende Gewicht der Pluronic-Lösung wurde zu der Insulinotropin-Lösung zugegeben, und eine ausreichende Menge (q.s.) an SWFI wurde verwendet, um die Lösung auf das gewünschte Volumen zu bringen. Die endgültige Lösung wurde dann mit einem 0,2 μ-Filter sterilfiltriert und aseptisch in Phiolen gefüllt. Die Lösung (0,5 ml) wurde Ratten subkutan injiziert und die Plasma-Insulinotropin-Spiegel wurden mittels RIA-Assay verfolgt.
BEISPIEL 42

Erdnussölsuspension (gemahlen in einer Kugelmühle)
1 mg/ml Insulinotropin
1 % Tween 80

Tween 80 wurde auf einer Konzentration von 1 % zu Erdnussöl hinzugegeben. Die Lösung wurde steril mit einem 0,2 μ-Filter sterilfiltriert. Festes Insulinotropin wurde dann in dem Öl suspendiert. Durch Zermahlen in einer Kugelmühle (Szesvari Attritor) bei 40 U/Min. für 18 Stunden (Kühlwassermantel) wurde die Partikelgröße verringert. Diese Suspension wurde dann in Phiolen gefüllt. Die Suspension (0,5 ml) wurde Ratten subkutan injiziert und die Plasma-Insulinotropin-Spiegel wurden mittels RIA-Assay verfolgt.
BEISPIEL 43

22,6 % w/v Dextran
1 mg/ml Insulinotropin
20 mM Phosphatpuffer
Ausreichende Menge (q.s.) steriles Wasser zur Injektion

Eine 50 % w/w Dextran-Lösung wurde mit Hilfe von SWFI hergestellt. Ein 200 mM Phosphatpuffer wurde separat mit wasserfreiem zweibasischem Natriumphosphat (26,85 mg/ml) und einbasischem Natriumphosphat-Monohydrat (1,41 mg/ml) hergestellt. Falls notwendig, wurde der pH der Pufferlösung entweder mit Natriumhydroxid oder Salzsäure auf pH 8 gebracht. Die entsprechende Menge an Insulinotropin wurde in ausreichend Pufferlösung aufgelöst, um eine 5,0 mg/ml Lösung von Insulinotropin herzustellen. Das entsprechende Gewicht der Dextran-Lösung wurde zu der Insulinotropin-Lösung zugegeben, und eine ausreichende Menge (q.s.) an SWFI wurde verwendet, um die Lösung auf das gewünschte Volumen zu bringen. Die endgültige Lösung wurde dann mit einem 0,2 μ-Filter sterilfiltriert und aseptisch in Phiolen gefüllt. Die Lösung (0,5 ml) wurde Ratten subkutan injiziert und die Plasma-Insulinotropin-Spiegel wurden mittels RIA-Assay verfolgt.
BEISPIEL 44
Insulinotropin wurde aus der Mischung aus phosphatgepufferter Salzlösung (PBS), Ethanol und m-Cresol kristallisiert. Eine homogene Insulinotropin-Aufschlämmung (10 mg/ml) wurde mit PBS in einer Glasphiole hergestellt, und ein großes Volumen an Ethanol (9 Mal soviel wie die Aufschlämmung) wurde in die Phiole zugegeben, während der Phioleninhalt magnetisch gerührt wurde. Es bildeten sich sehr feine amorphe Insulinotropin-Partikel. m-Cresol wurde in die Phiole zugegeben, so dass die resultierende m-Cresol-Konzentration bei 1 % (v/v) lag. Die Phiole wurde zugedeckt, um ein Verdampfen des Lösemittels zu verhindern. Die Kristallisationsmischung wurde für ein paar Tage bei Raumtemperatur gelagert. Nadelförmige Kristallplatten wuchsen aus den amorphen Partikeln. Die Länge der Kristalle lag zwischen 50 und 200 μm, und die Breite zwischen 2 und 4 μm.
BEISPIEL 45
Insulinotropin (1 bis 4 mg/ml) wurde in 1 % Natriumsulfat (oder Natriumacetat oder Natriumchlorid oder Ammoniumsulfat) -Lösung mit einem höherem pH-Wert als 8 aufgelöst, und der pH-Wert der Lösung mit verdünnter HCl auf 6,0 bis 7,5 verringert. Die klare Lösung wurde bei Ungebungstemperatur stehen lassen. Nach ein paar Tagen erhielt man, je nach den Kristallisationsbedingungen, nadel- oder plättchenförmige Kristalle.
BEISPIEL 46
GLP-1 (7–37) wurde in 50 mM Glycinpuffer, der 0,1 bis 0,2 M NaCl enthält, bei pH 8,5–9,5 von 1 bis 5 mg/ml aufgelöst. Eine Lösung aus Zinksalz (Acetat oder Chlorid) wurde zugegeben, um ein Molverhältnis von 0,5:1 bis 1,5:1 Zink:GLP-1 (7–37) zu erhalten. Kristalle von GLP-1 (7–37) wuchsen über Nacht bei Raumtemperatur mit Ausbeuten von 70 bis 97 %.
BEISPIEL 47
GLP-1 (7–37)-Kristalle können durch Dampfdiffusion unter Verwendung des Peptids aufgelöst in 100 mM Tris bei pH 8–9,6 bei 10–20 mg/ml gezüchtet werden. Die Peptidlösung wird 1:1 mit dem gleichen Puffer, der 0,5 bis 2,5 M NaCl enthält, gemischt und dann in einem versiegelten System gegen den hochkonzentrierten Puffer (d.h. Tris mit 0,5–2,5 M NaCl) äquilibriert.
SEQUENZAUFLISTUNG

Claims

Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist: (i) eine Verbindung ausgewählt aus: (c) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2; (d) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (6) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (7) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (8) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (9) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (10) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und (ii) ein Polymer ausgewählt aus Polyethylenglykol, Polyoxyethylen-Polyoxypropylen-Copolymeren, Polyanhydriden und Polysacchariden, wobei die Polysaccharide aus Chitosan, Gummiarabikum, Karayagummi, Guar Gum, Xanthan, Tragant, Alginsäure, Carrageenan, Agarose, und Furcellaranen, Dextran, Stärke, Stärkederivaten und Hyaluronsäure ausgewählt sind, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt, in der Lage ist, verzögerte glykämische Kontrolle zu erreichen und in einer Weise behandelt worden ist, dass sie die Verbindung aus Teil (i) in kristalliner oder amorpher Form aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.
Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist: (i) eine Verbindung ausgewählt aus: (c) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2; (d) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (6) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (7) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (8) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (9) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (10) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und (ii) eine pharmazeutisch akzeptable, nicht mit Wasser mischbare Ölsuspension, wobei das Öl aus Erdnussöl, Sesamöl, Mandelöl, Rizinusöl, Kamelienöl, Baumwollsamenöl, Olivenöl, Maisöl, Sojaöl, Safloröl, Estern von Fettsäuren und Estern von Fettalkoholen ausgewählt ist, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt, in der Lage ist, verzögerte glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Partikelform aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.
Zusammensetzung nach Anspruch 2, welche ferner (i) ein Benetzungsmittel, bei welchem es sich um einen nicht-ionischen oberflächenaktiven Stoff handelt, und (ii) ein Suspendiermittel aufweist.
Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist: (i) eine Verbindung ausgewählt aus: (c) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2; (d) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (6) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (7) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (8) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (9) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (10) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und (ii) Zink (II), welches mit dem Peptid gemischt ist, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt, in der Lage ist, verzögerte glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in kristalliner oder amorpher Form aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.
Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist: (i) eine Verbindung ausgewählt aus: (c) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2; (d) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (6) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (7) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (8) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (9) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (10) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und (ii) ein Metall ausgewählt aus Ni(II), Co(II), Mn(II), Fe(II) und Cu(II), wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt und die Verbindung aus Teil (i) in kristalliner oder amorpher Form aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.
Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist: (i) eine Verbindung ausgewählt aus: (c) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2; (d) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (6) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (7) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (8) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (9) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (10) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und (ii) Phenol, Cresol, Resorcinol oder Methylparaben, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt, in der Lage ist, verzögerte glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Präzipitat- oder Aggregatform aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.
Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist: (i) eine Verbindung ausgewählt aus: (c) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2; (d) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (6) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (7) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (8) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (9) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (10) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und (ii) ein basisches Polypeptid und eine Phenolverbindung, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt, in der Lage ist, verzögerte glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Präzipitat- oder Aggregatform aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.
Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist: (i) eine Verbindung ausgewählt aus: (c) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2; (d) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (6) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (7) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (8) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (9) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkylester der Peptide; und (10) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und (ii) ein basisches Polypeptid, eine Phenolverbindung und ein Metall-Ion, wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt, in der Lage ist, verzögerte glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Präzipitat- oder Aggregatform aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.
Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist: (i) eine Verbindung ausgewählt aus: (c) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2; (d) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (6) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (7) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (8) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (9) einem pharmazeutisch akzeptablen Niederalkylester der Peptide; und (10) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, wobei die Peptide und Derivate davon Bedingungen unterzogen wurden, welche in amorphen oder kristallinen Präzipitaten oder Aggregaten resultieren, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweisen, wobei die Bedingungen folgende sind: hohe Scherung, Salzeinwirkung oder Kombinationen davon; wobei die Stoffzusammensetzung in einer injizierbaren Form vorliegt und in der Lage ist, verzögerte glykämische Kontrolle zu erreichen.
Zusammensetzung nach Anspruch 9, wobei das Salz Ammoniumsulfat, Natriumsulfat, Lithiumsulfat, Lithiumchlorid, Natriumcitrat, Ammoniumcitrat, Natriumphosphat, Kaliumphosphat, Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Ammoniumchlorid, Natriumacetat, Ammoniumacetat, Magnesiumsulfat, Calciumchlorid, Ammoniumnitrat, Natriumformat oder eine Kombination daraus ist.
Stoffzusammensetzung, welche Folgendes aufweist: (i) eine Verbindung ausgewählt aus: (c) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2; (d) einem Peptid mit der Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 7; wobei X Folgendes ist: (A) Lys, (B) Lys-Gly, oder (C) Lys-Gly-Arg; (c) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-W-COOH wobei W die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 1 oder SEQUENZ ID NR.: 6 ist; (d) einem Peptid, welches folgende Primärstruktur aufweist: H₂N-R-COOH wobei R die Aminosäuresequenz von SEQUENZ ID NR.: 2, SEQUENZ ID NR.: 3, SEQUENZ ID NR.: 4 oder SEQUENZ ID NR.: 5 ist; und (e) einem Derivat der Peptide (a) bis (d) ausgewählt aus: (6) einem pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalz der Peptide; (7) einem pharmazeutisch akzeptablen Carboxylatsalz der Peptide; (8) einem pharmazeutisch akzeptablen Alkaliadditionssalz der Peptide; (9) einem pharmazeutisch akzeptablen C₁-C₆-Alkylester der Peptide; und (10) einem pharmazeutisch akzeptablen Amid, C₁-C₆-Alkylamid oder C₁-C₆-Dialkylamid der Peptide, und (ii) ein basisches Polypeptid, wobei die Stoffzusammensetzung in injizierbarer Form vorliegt, in der Lage ist, verzögerte glykämische Kontrolle zu erreichen und die Verbindung aus Teil (i) in Präzipitat- oder Aggregatform aufweist, welche unter physiologischen Bedingungen eine Löslichkeit gleich oder unter 500 μg/ml aufweist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 11 zur Verwendung in der Medizin.
Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 11 bei der Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung von Nichtinsulinabhängigem Diabetes Mellitus. Deutsche Übersetzung der Figurenbeschriftungen: