CN102482695B

CN102482695B - A-87774化合物或其盐、它们的制法及含有它们作为有效成分的农药

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Publication number: CN102482695B
Application number: CN201080036742.XA
Authority: CN
Inventors: 重松由夫; 杉江佳子; 木塚正明
Original assignee: Sankyo Agro Co Ltd
Current assignee: Mitsui Chemical Plant Protection Co ltd
Priority date: 2009-08-18
Filing date: 2010-08-13
Publication date: 2014-09-10
Anticipated expiration: 2030-08-13
Also published as: EP2468879A1; JP5694708B2; EP2468879B1; BR112012003724A2; CN102482695A; ES2537416T3; CA2771400A1; JP2011078407A; US20120149575A1; WO2011021580A1; CA2771400C; BR112012003724B1; US8563266B2; BR122018006081B1; EP2468879A4; BR112012003724A8; AU2010285723B2; RU2012110247A; AU2010285723A1; US20140051152A1

Abstract

本发明提供具有除草活性或植物生长调节活性的新型的A-87774化合物或其盐、生产它们的微生物、它们的制法、含有它们作为有效成分的农药(特别是除草剂或植物生长调节剂)、使用它们的方法、以及微生物的培养物。

Description

A-87774化合物或其盐、它们的制法及含有它们作为有效成分的农药

技术领域

本发明涉及A-87774化合物或其盐、生产它们的微生物、它们的制法、含有它们作为有效成分的农药(特别是除草剂或植物生长调节剂)、使用它们的方法、以及微生物的培养物。

背景技术

微生物生产各种生理活性物质，其中一部分已有效地应用于农药领域中来提高生产率。例如，米尔倍霉素类、阿维菌素类和多杀菌素类作为杀虫剂、杀稻瘟菌素和春雷霉素作为杀菌剂已被实用化。

另一方面，除草剂领域中，双丙氨磷已商品化。

当微生物代谢产物用作农药时，具有在环境中易于被分解的优点，当考虑环境负荷时，可以说这种优点是今后的农药应具备的所期望的性质。但是，作为具有除草活性的化合物，除了上述化合物之外还未达到实用化的程度，期待制造新型的活性物质。

发明内容

发明的目的在于提供具有除草活性或植物生长调节活性的新型的A-87774化合物或其盐、生产它们的微生物、它们的制法、含有它们作为有效成分的农药(特别是除草剂或植物生长调节剂)、使用它们的方法、以及微生物的培养物。

本发明人等鉴于上述问题，对微生物代谢产物进行了深入探索，结果发现，在属于链霉菌属(Streptomyces)的微生物的培养液中存在多种具有极强的除草活性的化合物，从而完成本发明。

即，本发明提供A-87774-1、A-87774-2或A-87774-3表示的A-87774化合物或其盐、生产该化合物的微生物、该化合物的制法、含有该化合物作为有效成分的农药(特别是除草剂和植物生长调节剂)、使用该化合物的除草方法和调节植物生长的方法、通过培养该微生物可以得到的培养物、含有该培养物的农药。

本发明的新型A-87774化合物具有优异的除草作用或植物生长调节作用，作为农药(特别是除草剂或植物生长调节剂)有用。

附图说明

[图1]图1表示化合物A-87774-1的¹H-核磁共振谱。

[图2]图2表示同一化合物的¹³C-核磁共振谱。

[图3]图3表示同一化合物的红外吸收光谱。

[图4]图4表示化合物A-87774-2的¹H-核磁共振谱。

[图5]图5表示同一化合物的¹³C-核磁共振谱。

[图6]图6表示同一化合物的红外吸收光谱。

[图7]图7表示化合物A-87774-3的¹H-核磁共振谱。

[图8]图8表示同一化合物的¹³C-核磁共振谱。

[图9]图9表示同一化合物的红外吸收光谱。

具体实施方式

本发明的新型的化合物A-87774-1具有以下性状：

1)分子量：668；

2)分子式：C₁₈H₂₉N₄O₁₇PS₂；

3)在重水中测定时的¹H-核磁共振谱(δ_ppm)：5.86(1H，d，J＝5.9Hz)、5.59(1H，d，J＝11.0Hz)、4.56(1H，q，J＝6.9Hz)、4.42(1H，dd，J＝11.2，2.9Hz)、4.38(1H，dd，J＝11.2，3.7Hz)、4.30～4.27(2H，m)、4.24～4.23(2H，m)、4.07(1H，d，J＝10.1Hz)、3.97(1H，dd，J＝12.7，2.1Hz)、3.61(1H，dd，J＝11.3，10.3Hz)、3.55(1H，m)、3.52(1H，m)、3.33(1H，dd，J＝11.4，1.8Hz)、2.72(1H，dd，J＝7.0，6.6Hz)、1.42(3H，d，J＝6.9Hz)；

4)在重水中测定时的¹³C-核磁共振谱(δ_ppm)：178.6(s)、174.0(s)、154.8(s)、91.4(s)、89.2(d)、87.6(d)、80.8(d)、74.8(d)、73.5(d)、70.2(d)、70.2(d)、70.0(t)、63.7(d)、60.6(d)、53.8(t)、36.5(t)、30.3(t)、18.3(q)；

5)用KBr压片测定时的红外吸收光谱(v_maxcm^-1)：3423，1703，1639，1487，1450，1406，1383，1339，1258，1217，1184，1088，1067，937，899，827，536；和

6)旋光率：[α]_D ²⁴+40.0°(c，0.22，H₂O中)。

本发明的新型化合物A-87774-2具有以下性状：

1)分子量：666；

2)分子式：C₁₈H₂₇N₄O₁₇PS₂；

3)在重水中测定时的¹H-核磁共振谱(δ_ppm)：7.73(1H，d，J＝8.1Hz)、5.91(1H，d，J＝2.4Hz)、5.90(1H，d，J＝8.1Hz)、5.60(1H，d，J＝10.8Hz)、4.57(1H，q，J＝6.9Hz)、4.55(1H，d，J＝11.4Hz)、4.46(1H，dd，J＝11.2，2.2Hz)、4.34～4.32(3H，m)、4.22(1H，d，J＝12.6Hz)、4.07(1H，d，J＝10.1Hz)、3.96(1H，dd，J＝12.6，1.7Hz)、3.61(1H，dd，J＝11.4，10.1Hz)、3.32(1H，d，J＝11.4Hz)、1.42(3H，d，J＝6.9Hz)；

4)在重水中测定时的¹³C-核磁共振谱(δ_ppm)：178.6(s)、166.3(s)、151.8(s)、141.7(d)、102.8(d)、91.3(s)、89.3(d)、89.2(d)、81.5(d)、74.8(d)、73.5(d)、73.4(d)、69.5(d)、69.4(t)、63.7(d)、60.6(d)、53.8(t)、18.3(q)；

5)用KBr压片测定时的红外吸收光谱(v_maxcm^-1)：3399，1706，1455，1405，1346，1266，1185，1087，1067，934，900，826，534；和

6)旋光率：[α]_D ²⁴+47.2°(c，1.0，H₂O中)。

本发明的新型的化合物A-87774-3具有以下性状：

1)分子量：828；

2)分子式：C₂₄H₃₇N₄O₂₂PS₂；

3)在重水中测定时的¹H-核磁共振谱(δ_ppm)：7.74(1H，d，J＝8.1Hz)、5.94(1H，d，J＝5.3Hz)、5.91(1H，d，J＝8.1Hz)、5.60(1H，d，J＝11.0Hz)、5.01(1H，br.s)、4.57(1H，q，J＝6.9Hz)、4.57(1H，m)、4.50～4.48(3H，m)、4.41(1H，m)、4.22(1H，d，J＝12.5Hz)、4.07(1H，d，J＝10.1Hz)、4.04(1H，dd，J＝3.3，1.8Hz)、3.96(1H，dd，J＝12.5，1.3Hz)、3.87(1H，d，J＝12.3Hz)、3.85(1H，m)、3.71(1H，dd，J＝12.3，4.4Hz)、3.63～3.61(3H，m)、3.32(1H，d，J＝11.4Hz)、1.42(3H，d，J＝6.9Hz)；

4)在重水中测定时的¹³C-核磁共振谱(δ_ppm)：178.6(s)、166.3(s)、151.8(s)、141.6(d)、102.9(d)、100.3(d)、91.3(s)、89.2(d)、89.1(d)、80.2(d)、74.8(d)、74.1(d)、73.8(d)、73.5(d)、72.2(d)、70.3(d)、69.9(d)、69.3(t)、66.8(d)、63.7(d)、61.0(t)、60.6(d)、53.7(t)、18.3(q)；

5)用KBr压片测定时的红外吸收光谱(v_maxcm^-1)：3396，1705，1402，1340，1265，1184，1090，1063，937，899，825，538；和

6)旋光率：[α]_D ²⁴+78.7°(c，1.0，H₂O中)。

A-87774化合物的盐，只要无损于A-87774化合物的除草作用或植物生长调节作用即可，可以是任意的盐。A-87774化合物的盐例如可以是钠盐、钾盐、镁盐、钙盐等与碱金属或碱土金属形成的盐；铵盐；或与异丙胺和三乙胺等有机胺形成的盐，优选为钠盐。

对于本发明的A-87774化合物来说，可培养微生物，从其培养物中分离。

作为本发明的化合物A-87774的制造法中使用的属于链霉菌属(Streptomyces)属的菌株，例如可以举出链霉菌(Streptomyces sp.)SANK 61805株。SANK 61805株的菌学特征如下所述。需要说明的是，SANK 61805株的形态学性质、各种培养基上的各性质、生理学性质、化学分类学性质和16SrRNA基因等分类学的分析，按照“放线菌的分类和鉴定”(日本放线菌学会编，日本学会事务中心出版，2001年)中记载的方法。

1.形态学特征

对于SANK 61805株，在ISP[国际链霉菌计划(InternationalStreptomyces Project)]规定的琼脂培养基上、在28℃下培养14天后，用显微镜观察。基生菌丝良好地伸长、分枝，显示淡黄褐色、黄褐色或灰黄褐色。未观察到诺卡菌(Nocardia)属菌株样的菌丝断裂或锯齿状伸长。气生菌丝单纯分枝，显示白色、褐灰色或灰黄褐色。在气生菌丝的前端形成10至50个或更多的孢子链，孢子链的形态为直链状、偶见螺旋状。利用扫描电子显微镜观察，表面结构呈平滑(smooth)状。孢子为椭圆形，大小为0.4～0.8×0.8～1.2μm。此外，未观察到气生菌丝的车轴状分枝、菌核或孢子囊等特殊器官。

2.各种培养基上的各性质

在各种培养基上、在28℃下培养14天后的性状示于表1。色调的表示以按照Munsell方式的日本色彩研究所版“标准色票”的色卡号(color chip number)表示。

[表1]

1)“G”、“AM”、“R”和“SP”分别表示“生长”、“气生菌丝”、“里面”和“可溶性色素”。

2)性状栏的括号内的内容表示基于Munsell方式的色调表示。

3.生理学性质

在28℃下培养后，2～21天观察到的SANK 61805株的生理学性质示于表2。

[表2]

1)“培养基1”表示“胰蛋白胨·酵母提取物·肉汤(ISP1)”。

2)“培养基2”表示“蛋白胨·酵母提取物·铁琼脂(ISP6)”。

3)“培养基3”表示“酪氨酸琼脂(ISP7)”。

4)“培养基4”表示“酵母提取物·麦芽提取物琼脂(ISP2)”。

此外，使用Pridham·Gottlieb琼脂培养基(ISP9)，在28℃下培养14天后观察到的SANK 61805株的碳源的同化性示于表3。

[表3]

“+”表示“利用”，“±”表示“弱利用”，“-”表示“未利用”。

4.关于菌体成分

SANK 61805株的化学分类学性状按照“放线菌的分类和鉴定”(Identification Manual of Actinomycetes)[日本放线菌学会编，日本学会事务中心，49-82页(2001)]进行研究。其结果，从细胞壁检测出LL-二氨基庚二酸，未确认到作为全细胞中的糖成分的特征性图谱。作为主要的甲基萘醌分子种类，检测出MK-9(H₆)、MK-9(H₈)。

5.16S rRNA基因分析

解读SANK 61805株的16S rRNA基因的碱基序列(1325bp)，进行数据库检索，结果，SANK 61805株包含于链霉菌属的簇(cluster)中。

利用下述文献进行鉴定，判断本菌株属于放线菌中的链霉菌(Streptomyces)属，所述文献包括：ISP[国际链霉菌计划(International Streptomyces Project)]标准；S.A.Waksman著，TheActinomycetes，第2卷；R.E.Buchanan and N.E.Gibbons编，Bergey′sManual of Determinative Bacteriology，第8版(1974年)；Bergey′sManual of Systematic Bacteriology，第4卷(1989年)；和与链霉菌(Streptomyces)属放线菌有关的最近的文献。因此，将本菌株命名为链霉菌(Streptomyces sp.)SANK 61805株。

由以上结果，将本菌株鉴定为链霉菌(Streptomyces sp.)SANK61805株(以下，在本说明书中称为“SANK 61805株”。)。需要说明的是，本菌株于平成19年(2007年)6月19日在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(地址：日本国茨城县筑波市东1-1-1中央第6)进行了国际保藏，保藏编号为FERMBP-10840。

众所周知，放线菌在自然界中或由于人工操作(例如紫外线照射、放射线照射、化学药品处理等)而易于发生变异，本发明的SANK61805株也同样易于发生变异。本发明中所谓的SANK 61805株包含其所有的变异株。此外，这些变异株中，也包括利用遗传学的方法例如重组、转导、转化等得到的变异株。即，生产化合物A-87774-1、A-87774-2或A-87774-3的、SANK 61805株及其变异株以及不能与它们进行明确区分的菌株均包含于SANK 61805株中。

在培养生产本发明的A-87774化合物的菌株(生产菌)时，使用的培养基可以是适当含有选自碳源、氮源、无机离子和有机营养源的物质的培养基，也包括合成或天然培养基中的任一种。

该营养源可以是现有用于培养真菌类和放线菌类的菌株的公知的营养源，包括微生物可同化的碳源、氮源和无机盐。

具体而言，碳源例如可以为葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、甘露糖、甘油、糊精、燕麦、黑麦、玉米淀粉、马铃薯、玉米粉、大豆粉、棉籽油、糖稀、糖蜜、大豆油、柠檬酸或酒石酸，它们可单独使用或同时使用。该碳源通常在培养基量的1～10重量％范围内使用，但并不限于该范围。

此外，氮源通常可以为含有蛋白质或其水解物的物质。优选的氮源例如可以为大豆粉、麸、花生粉、棉籽粉、脱脂乳、酪蛋白水解物、Pharmamine、鱼粉、玉米浆、蛋白胨、肉膏、生酵母、干燥酵母、酵母提取物、麦芽提取物、马铃薯、硫酸铵、硝酸铵或硝酸钠，它们可单独使用或同时使用。该氮源优选在培养基量的0.2～6重量％的范围内使用。

此外，营养无机盐可以是可得到钠、铵、钙、磷酸盐、硫酸盐、盐酸盐或碳酸盐的离子的通常的盐类。此外，该营养无机盐也可以是钾、钙、钴、锰、铁、锌、镍或镁等微量的金属。

需要说明的是，在液体培养时，可使用硅油、植物油或表面活性剂等消泡剂。

用于培养生产A-87774化合物的菌株(生产菌，特别是SANK61805株)、生产化合物A-87774-1、A-87774-2或A-87774-3的培养基的pH优选为5.0～8.0。

用于生产A-87774化合物的培养温度可在生产菌(特别是SANK61805株)生产目标物质的范围内适当改变，优选为22～36℃。

A-87774化合物可通过对生产菌(特别是SANK 61805株)进行需氧型培养、从培养物采集而得到。上述培养法可以是通常使用的需氧培养法、例如固体培养法、振荡培养法或通气搅拌培养法。

A-87774化合物可如下提取：将生产菌(特别是SANK 61805株)的培养液分离为液体与菌体、或不进行分离而利用其物理化学性质，从滤液或培养液中提取，优选在分离为液体与菌体后进行提取。分离例如可利用离心分离法或将硅藻土作为助滤剂的过滤法进行。

当从菌体提取A-87774化合物时，向菌体中添加水溶液或水溶性有机溶剂并进行搅拌，然后对混合物实施例如离心分离法或将硅藻土作为助滤剂的过滤法，由此分离液相。从得到的液相中蒸馏除去水溶性有机溶剂(优选在减压下蒸馏除去)，然后，进行与下述培养液的滤液相同的操作，可得到化合物A-87774-1、A-87774-2或A-87774-3。用于提取的水溶性有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙酮、乙腈或四氢呋喃或它们的混合溶剂，水溶性有机溶剂的添加比例为0至95容积％。

A-87774化合物为水溶性物质，可通过利用其物理化学性状，将它们从滤液中提取·纯化。作为吸附剂，可使用例如活性炭、或合成吸附剂。上述合成吸附剂例如可以是DIAION HP-20等HP系列(三菱化学制)或Amberlite XAD-2等XAD系列(Organo公司制)。使含有A-87774化合物的液体通过如上所述的吸附剂层，吸附所含的杂质将其除去，或者一旦吸附了A-87774化合物后，也可使用有机溶剂洗脱。洗脱有机溶剂例如可以是甲醇、乙醇、丙酮、乙腈或四氢呋喃等水溶性有机溶剂，此外，也可使用水和这些水溶性有机溶剂的混合溶剂、以及加入乙酸、甲酸或氨水调节pH的溶剂。此外，也可不使用吸附剂而单独或组合使用水不混溶性的有机溶剂例如乙酸乙酯、甲苯、氯仿、二氯甲烷或丁醇等，将在含有A-87774化合物的水溶液中所含的杂质提取除去。

通过对如上所述得到的A-87774化合物的提取成分，实施通常有机化合物的纯化中使用的方法，可进一步将其纯化。所述纯化方法例如可以是吸附、分配、阳离子交换、阴离子交换、凝胶过滤等柱色谱法、薄层色谱法或高效液相色谱法。这些色谱法中使用的载体例如可以是硅胶、氧化铝、硅酸镁载体(florisil)、纤维素、活性炭、Dowex 50W、Amberlite CG-400、Sephadex LH-20、Sephadex G-25或硅胶C18，它们可以单独使用或以任意顺序组合使用，由此可有效地分离·纯化A-87774化合物。

由通过如上所述培养生产菌(特别是SANK 61805株)可以得到的培养物得到的本发明的A-87774化合物，具有优异的除草活性，因此，通过作为农药、尤其是除草剂对杂草或土壤进行处理，可用于除去农业园艺领域中的有害杂草、尤其是旱田杂草或水田杂草。

上述有害的旱田杂草例如可以是龙葵和曼陀罗等茄科杂草、苘麻和金午时花(Sida spinosa)等锦葵科杂草、圆叶牵牛和田旋花等旋花科杂草、凹头苋和反枝苋等苋科杂草、苍耳、豚草、欧洲千里光和一年蓬等菊科杂草、芥菜和荠菜等十字花科杂草、藜和小藜等藜科杂草、耕地三色堇等堇菜科杂草、繁缕等石竹科杂草、白三叶草、合萌和决明等豆科杂草、马齿苋等马齿苋科杂草、阿拉伯婆婆纳等玄参科杂草、宝盖草等唇形科杂草、紫叶地锦等大戟科杂草、稗、石茅、马唐、牛筋草、早熟禾、看麦娘、野燕麦、硬直黑麦草、黑麦草、狗尾草和狗牙根等禾本科杂草、碎米莎草和油莎草等莎草科杂草、鸭跖草和饭包草等鸭跖草科杂草、问荆草等木贼科杂草。此外，有害的水田杂草可以是稻稗等禾本科杂草、细秆萤蔺、水莎草、牛毛毡、木贼状荸荠和三江藨草等莎草科杂草、野慈姑和矮慈姑等泽泻科杂草、陌上菜、鸭舌草、节节菜和三蕊沟繁缕等阔叶杂草。

A-87774化合物对于上述杂草的除草活性可如下评价：在对象杂草发芽后用药液处理茎叶部、或在对象杂草发芽前用药液处理对象杂草的种子或块茎所在的土壤，将之后杂草的生长与对照的未处理组进行比较，由此评价。

A-87774化合物不仅可在旱田和水田中使用，也可在果树园、桑园、非农耕地和山林中使用。

此外，由于本发明的A-87774化合物不会使植物枯死，还具有调节或抑制植物生长的作用，所以可用作植物生长调节剂。由于可通过用A-87774化合物以适当的时期、浓度对植物体进行处理来调节植物生长，所以可期待多种有用性，例如由水稻矮杆化带来的抗倒伏、由抑制草坪生长带来的修剪次数的减少等。

A-87774化合物可制成作为农药制剂常用的制剂进行施用。上述制剂例如可以是乳剂、可湿性粉剂、水分散颗粒剂、水溶性粉剂、液剂、粉剂、粒剂、悬浊剂、流动剂、干流动剂、或由聚合物物质形成的胶囊剂。

这些制剂也可含有适当的添加剂和载体，固体制剂中含有的上述添加剂和载体例如可以是大豆粉、小麦粉、淀粉和结晶纤维素等植物性粉末；硅藻土、磷钙土、石膏、滑石、膨润土、沸石和粘土等矿物性粉末；苯甲酸钠、尿素、碳酸钙和芒硝等有机或无机化合物。此外，液体制剂中含有的添加剂和载体例如可以是大豆油、菜籽油和棉籽油等植物油；矿物油；煤油、二甲苯和甲苯等芳香族烃类；甲酰胺和二甲基甲酰胺等酰胺类；乙酸乙二醇酯和琥珀酸二乙酯等酯类；甲基异丁基酮和丙酮等酮类；乙二醇乙醚等醚类；乙二醇和异丙醇等醇类；二甲基亚砜；三氯乙烯；或水。为了使液体制剂均匀且稳定，也可添加表面活性剂。

作为适当的非离子型表面活性剂，例如可以是脂肪酸的蔗糖酯、月桂醇、硬脂醇和油醇等高级脂肪族醇的氧化乙烯聚合加成物；异辛基苯酚和壬基苯酚等烷基苯酚的氧化乙烯聚合加成物；丁基萘酚和辛基萘酚等烷基萘酚的氧化乙烯聚合加成物；棕榈酸、硬脂酸和油酸等高级脂肪酸的氧化乙烯聚合加成物；磷酸硬脂基酯和磷酸二月桂基酯等单或二烷基磷酸酯的氧化乙烯聚合加成物；十二烷基胺和硬脂酰胺等高级脂肪族胺的氧化乙烯聚合加成物；脱水山梨糖醇等多元醇的高级脂肪酸酯；及其氧化乙烯聚合加成物以及氧化乙烯和氧化丙烯的共聚物。

作为适当的阴离子型表面活性剂，例如可以是十二烷基硫酸钠和油醇硫酸酯胺盐等烷基硫酸酯盐；磺基琥珀酸二辛酯钠、油酸钠和硬脂酸钠等脂肪酸盐类；异丙基萘磺酸钠、亚甲基双萘磺酸钠、木质素磺酸钠和十二烷基苯磺酸钠等烷基芳基磺酸盐。此外，作为适当的阳离子型表面活性剂，例如可以是高级脂肪族胺、季铵盐类、烷基吡啶鎓盐类。

农药制剂中的A-87774化合物的含量取决于剂型等，例如，上限为100重量％、下限为0.01重量％，优选为0.1至50重量％。A-87774化合物作为农药的施用量也取决于对象杂草、生长调节的对象植物体、剂型、制剂中的含量，可以是每10公亩(are)为1000g至0.1g，优选在100g至1g的范围内。

接着，举出实施例和试验例详细说明本发明，但本发明并不限于此。

实施例

实施例1

化合物A-87774-1和A-87774-2的分离

(1)SANK 61805株的培养

将下述培养基组成所示的培养基80mL装入500mL容量的锥形瓶中，在121℃下加热灭菌30分钟。以倾斜方式在各个培养基中接种1铂环Streptomyces sp.SANK 61805株，在28℃下以210rpm旋转振荡培养3天，得到种培养液。将相同组成的培养基80mL装入500mL容量的锥形瓶中，共准备100个，在121℃下加热灭菌30分钟，将其冷却至室温。在其中接种0.5mL上述种培养液，在28℃下以210rpm旋转振荡培养8天。

培养基组成

(2)化合物A-87774-1和A-87774-2的分离

使用下述方法进行活性成分的分离。分离时，对于在装入4cm见方的罐(pot)中的水田土中栽培7天的芥菜，散布各分离级分的0.5mL溶液，以其除草效果来追踪活性成分。

利用离心分离机(7500×g)将8L上述(1)中得到的培养液分离为菌体和液体部分。将菌体部分与甲醇一起搅拌，然后，在硅藻土上过滤。减压下浓缩滤液后，与培养液液体部分合并并浓缩至5L，通过DIAION HP-20柱(内径6cm，长度31cm)，将通过后的液体与清洗过柱的水2.8L合并。使其通过Dowex 50W×8柱(H⁺型：内径6cm，长度33cm)，将通过后的液体与清洗过柱的水2L合并。接着，使其通过活性炭柱(内径6cm，长度20cm)，吸附活性成分。用1L水、2L甲醇/水(3/1)清洗柱，然后用2.5L的甲醇/2.8％氨水(4/1)洗脱活性成分。在减压下从洗脱液中蒸馏除去溶剂，得到固体物质，将得到的固体物质溶于80mL水中，通过Amberite CG-400type I柱(Cl^-型：内径4cm，长度22cm)。用1L 0.02N-HCl、1L含有0.01M-NaCl的0.02N-HCl依次清洗柱，然后，用1.3L含有0.6M-NaCl的0.02N-HCl洗脱活性成分。为了除去NaCl，使其再次通过活性炭柱(内径3cm，长度20cm)，用1L的水清洗柱，然后用1.5L的甲醇/2.8％氨水(4/1)洗脱活性成分，在减压下蒸馏除去溶剂，得到383mg的固体物质。

用Sephadex G-25柱色谱法纯化该固体物质。即，将固体物质溶解于1mL的水，然后将其装载于用乙腈、水和乙酸的混合溶剂(容量混合比：73/27/0.1)平衡化过的Sephadex G-25柱(内径2.5cm，长度41cm)，用相同的混合溶剂洗脱，将洗脱液分级成每份12mL。由于具有除草活性的活性成分洗脱至第49～89号中，所以在减压下蒸馏除去该级分的溶剂，得到固体物质130mg。

利用高效液相色谱法(HPLC)纯化该固体物质。使用资生堂CAPCELL-PAK C18 UG120(内径2cm，长度25cm)作为HPLC柱，使用乙腈、水和乙酸的混合溶剂(容量混合比：4/96/0.1)作为洗脱液，在柱箱温度40℃、流速15mL/分钟的条件下进行洗脱，由此得到在保留时间5.6～9.6分钟洗脱的化合物A-87774-2的白色粉末11.3mg、和含有在5.6分钟以前洗脱的化合物A-87774-1的级分81.3mg。用使用资生堂CAPCELL-PAK C18 UG120(内径1cm，长度25cm)与乙腈、水和乙酸的混合溶剂(容量混合比：3/97/0.1)的HPLC(柱箱温度40℃、流速5mL/分钟)再次纯化后者，得到在13.4～16.6分钟洗脱的化合物A-87774-1的白色粉末2.4mg。

该化合物A-87774-1和A-87774-2具有上述分子量、分子式、在重水中测定时的¹H-核磁共振谱、在重水中测定时的¹³C-核磁共振谱、用KBr压片测定时的红外吸收光谱和旋光率。化合物A-87774-1的¹H-核磁共振谱、¹³C-核磁共振谱和红外吸收光谱分别示于图1、图2和图3，化合物A-87774-2的¹H-核磁共振谱、¹³C-核磁共振谱和红外吸收光谱分别示于图4、图5和图6。需要说明的是，A-87774-1和A-87774-2的¹H-核磁共振谱和¹³C-核磁共振谱中添加甲醇作为内标物质。

测定装置如下所述。

核磁共振谱：JEOL ECA500

红外吸收光谱：SHIMADZU FTIR-8400

旋光率：JASCO DIP-360

此外，NMR的测定条件如下所述。

频率¹H：500.16MHz，¹³C：125.77MHz

测定温度，累计次数：

A-87774-1 ¹H：23.9℃，8次，

¹³C：24.6℃，21600次，

A-87774-2 ¹H：23.1℃，8次，

¹³C：24.6℃，46000次

实施例2

化合物A-87774-3的分离

(1)SANK 61805株的培养

将与上述实施例1(1)相同组成的培养基80mL装500mL容量的锥形瓶中，共准备4个，在121℃下加热灭菌30分钟。以倾斜方式在各个培养基中接种1铂环Streptomyces sp.SANK 61805株，在28℃下以210rpm旋转振荡培养。在第7天和第14天添加甘油，使其相当于2％，进行培养22天。

(2)化合物A-87774-3的分离

利用离心分离机(7500×g)将上述(1)中得到的培养液320mL分离为菌体和液体部分。将菌体部分与甲醇一起搅拌，然后在硅藻土上过滤。在减压下浓缩滤液后，与培养液液体部分合并并浓缩。使其通过活性炭柱(内径1.6cm，长度16cm)，吸附活性成分。用120mL的水、甲醇/水(1/1)、甲醇依次洗涤柱，然后用120mL的甲醇/2.8％氨水(4/1)洗脱活性成分。将其浓缩后溶解于3mL的水中，使其通过Dowex 50W×8柱(H⁺型：内径1.2cm，长度9.5cm)，合并通过的液体和清洗柱的水50mL。接着，使其通过AmberiteCG-400 typeI柱(Cl^-型：内径1.8cm，长度12cm)。使60mL的0.02N-HCl、80mL含有0.01M-NaCl的0.02N-HCl、200mL含有0.6M-NaCl的0.02N-HCl依次流过柱，每份分取20mL，结果活性成分洗脱至第5～14号的级分中。为了除去NaCl，而使该级分再次通过活性炭柱(内径1.2cm，长度10cm)，用50mL的水清洗柱，然后，用50mL的甲醇/2.8％氨水(4/1)洗脱活性成分，在减压下蒸馏除去溶剂，得到237mg的固体物质。

利用高效液相色谱法(HPLC)纯化该固体物质。使用资生堂CAPCELL-PAK C18 UG120(内径2cm，长度25cm)作为HPLC柱，使用乙腈、水和乙酸的混合溶剂(容量混合比：3/97/0.4)作为洗脱液，在柱箱温度40℃、流速10mL/分钟的条件下进行洗脱，由此得到在保留时间12.5～16.8分钟洗脱的化合物A-87774-3的白色粉末7.3mg。

该化合物A-87774-3具有上述分子量、分子式、在重水中测定时的¹H-核磁共振谱、在重水中测定时的¹³C-核磁共振谱、用KBr压片测定时的红外吸收光谱和旋光率。将化合物A-87774-3的¹H-核磁共振谱、¹³C-核磁共振谱和红外吸收光谱分别示于图7、图8和图9。需要说明的是，A-87774-3的¹H-核磁共振谱中添加丙酮作为内标物质，A-87774-3的¹³C-核磁共振谱中添加乙酸作为内标物质。

测定装置如下所述。

核磁共振谱：JEOL ECA500

红外吸收光谱：SHIMADZU FTIR-8400

旋光率：JASCO DIP-360

此外，NMR的测定条件如下所述。

频率¹H：500.16MHz，¹³C：125.77MHz

测定温度，累计次数：

A-87774-3 ¹H：23.1℃，64次，

¹³C：23.9℃，48000次

试验例1

茎叶散布试验

将化合物A-87774-1、A-87774-2和A-87774-3溶于含有0.1％(W/V)的Newcol 1200的水溶液中，配制100及50mg/L的溶液。向4cm见方的罐中装入粒状的水田土，播种芥菜、苘麻、反枝苋和稗的种子，向在温室内栽培了7天的植物体散布上述试验液0.5mL，14天后调查除草效力。用5(枯死)～0(无活性)的6级评价除草效力。其结果示于表4。

[表4]

由上述结果可知，A-87774化合物均显示优异的除草效果。

试验例2

茎叶散布试验

向装入有水田土壤的塑料罐[10cm×15cm×3cm(高度)]中播种表2所示的供试植物，在播种后第14天向植物散布A-87774-2。将药液溶于含有0.01％(v/v)的GraminS的水溶液中，配制100mg/L的溶液，以换算为2000L/ha的液量进行散布。(投药量200g/ha)。14天后调查除草效力，用5(枯死)～0(无活性)的6级评价除草效力。其结果示于表5。

[表5]

由上述结果可知，化合物A-87774-2对于广泛的杂草显示优异的除草效果。

试验例3

茎叶散布试验

向装入有水田土壤的塑料罐[10cm×15cm×3cm(高度)]中播种9种供试植物，在播种后第14天，将溶于含有0.1％(w/v)的Newcol1200的水溶液中的A-87774-2的62.5mg/L、或A-87774-3的250mg、62.5mg/L的溶液以换算为2000L/ha的液量散布于植物上。投药量分别为125g/ha、500g/ha、125g/ha。在15日后调查除草效力，用5(枯死)～0(无活性)的6级进行评价。其结果示于表6。

[表6]

由上述结果可知，化合物A-87774-3对于广泛的杂草也显示优异的除草效果。

试验例4

土壤处理试验

向装入有水田土壤的塑料罐[10cm×15cm×3cm(高度)]中播种7种供试植物，1天后滴加A-87774-2或A-87774-3的50mg/L或12.5mg/L的药液进行处理。14天后调查生长抑制程度。药液的投药量分别为500g/ha、125g/ha。用5(未发芽)～0(无活性)的6级评价除草效力。其结果示于表7。

[表7]

由上述结果可知，化合物A-87774化合物在土壤处理中也显示优异的除草效果。

试验例5

水田处理试验

在装入有水田土壤的直径6cm的容器中渍水(paddy shallowwater)并进行耙平(soil puddling)，然后种植6种水田杂草的种子或块茎。2天后滴加A-87774-2或A-87774-3的50mg/L的药液进行处理，26天后调查生长抑制程度。药液的投药量为500g/ha。用5(未发芽)～0(无活性)的6级评价除草效力。其结果示于表8。

[表8]

由上述结果可知，化合物A-87774对于水田杂草也显示优异的除草效果。

产业上的可利用性

本发明的新型化合物A-87774-1、A-87774-2和A-87774-3具有优异的除草作用和植物生长调节活性，作为农药(特别是农业、园艺用除草剂和植物生长调节剂)有用。

[保藏号]

FERM BP-10840

Claims

1.化合物A-87774，选自下述由(I)、(II)及(III)组成的组，

(I)化合物A-87774-1或其盐，具有下述性状：

1)分子量：668；

2)分子式：C₁₈H₂₉N₄O₁₇PS₂；

3)在重水中测定时的¹H-核磁共振谱(δ_ppm)：5.86(1H，d，J=5.9Hz)、5.59(1H，d，J=11.0Hz)、4.56(1H，q，J=6.9Hz)、4.42(1H，dd，J=11.2，2.9Hz)、4.38(1H，dd，J=11.2，3.7Hz)、4.30～4.27(2H，m)、4.24～4.23(2H，m)、4.07(1H，d，J=10.1Hz)、3.97(1H，dd，J=12.7，2.1Hz)、3.61(1H，dd，J=11.3，10.3Hz)、3.55(1H，m)、3.52(1H，m)、3.33(1H，dd，J=11.4，1.8Hz)、2.72(1H，dd，J=7.0，6.6Hz)、1.42(3H，d，J=6.9Hz)；

5)用KBr压片测定时的红外吸收光谱(ν_maxcm^-1)：3423，1703，1639，1487，1450，1406，1383，1339，1258，1217，1184，1088，1067，937，899，827，536；和

6)旋光率：[α]_D ²⁴+40.0°(c，0.22，H₂O中)；

(II)化合物A-87774-2或其盐，具有下述性状：

1)分子量：666；

2)分子式：C₁₈H₂₇N₄O₁₇PS₂；

3)在重水中测定时的¹H-核磁共振谱(δ_ppm)：7.73(1H，d，J=8.1Hz)、5.91(1H，d，J=2.4Hz)、5.90(1H，d，J=8.1Hz)、5.60(1H，d，J=10.8Hz)、4.57(1H，q，J=6.9Hz)、4.55(1H，d，J=11.4Hz)、4.46(1H，dd，J=11.2，2.2Hz)、4.34～4.32(3H，m)、4.22(1H，d，J=12.6Hz)、4.07(1H，d，J=10.1Hz)、3.96(1H，dd，J=12.6，1.7Hz)、3.61(1H，dd，J=11.4，10.1Hz)、3.32(1H，d，J=11.4Hz)、1.42(3H，d，J=6.9Hz)；

5)用KBr压片测定时的红外吸收光谱(ν_maxcm^-1)：3399，1706，1455，1405，1346，1266，1185，1087，1067，934，900，826，534；和

6)旋光率：[α]_D ²⁴+47.2°(c，1.0，H₂O中)；

(III)化合物A-87774-3或其盐，具有下述性状：

1)分子量：828；

2)分子式：C₂₄H₃₇N₄O₂₂PS₂；

3)在重水中测定时的¹H-核磁共振谱(δ_ppm)：7.74(1H，d，J=8.1Hz)、5.94(1H，d，J=5.3Hz)、5.91(1H，d，J=8.1Hz)、5.60(1H，d，J=11.0Hz)、5.01(1H，br.s)、4.57(1H，q，J=6.9Hz)、4.57(1H，m)、4.50～4.48(3H，m)、4.41(1H，m)、4.22(1H，d，J=12.5Hz)、4.07(1H，d，J=10.1Hz)、4.04(1H，dd，J=3.3，1.8Hz)、3.96(1H，dd，J=12.5，1.3Hz)、3.87(1H，d，J=12.3Hz)、3.85(1H，m)、3.71(1H，dd，J=12.3，4.4Hz)、3.63～3.61(3H，m)、3.32(1H，d，J=11.4Hz)、1.42(3H，d，J＝6.9Hz)；

5)用KBr压片测定时的红外吸收光谱(ν_maxcm^-1)：3396，1705，1402，1340，1265，1184，1090，1063，937，899，825，538；和

6)旋光率：[α]_D ²⁴+78.7°(c，1.0，H₂O中)。

2.链霉菌SANK61805，保藏编号为FERM BP-10840。

3.权利要求1所述的化合物的制法，其特征在于，培养权利要求2所述的链霉菌，从培养物采集权利要求1所述的化合物。

4.一种农药，含有权利要求1所述的化合物作为有效成分。

5.一种除草剂，含有权利要求1所述的化合物作为有效成分。

6.一种植物生长调节剂，含有权利要求1所述的化合物作为有效成分。

7.一种杂草的除草方法，所述方法使用权利要求1所述的化合物处理杂草或土壤。

8.如权利要求7所述的方法，其中，杂草为旱田杂草和／或水田杂草。

9.一种调节植物生长的方法，所述方法使用权利要求1所述的化合物处理植物体。

10.一种培养物，通过培养权利要求2所述的链霉菌得到。

11.一种农药，含有权利要求10所述的培养物。