CN101868545B

CN101868545B - 具有改变的根构造的植物、涉及编码富含亮氨酸重复序列激酶(llrk)多肽及其同源物的基因的相关构建体和方法

Info

Publication number: CN101868545B
Application number: CN2008801169274A
Authority: CN
Inventors: G·塔拉米诺; S·V·廷盖; H·萨凯; S·M·艾伦; D·托姆斯; S·卢克; 牛小牧
Original assignee: Pioneer Hi Bred International Inc; EI Du Pont de Nemours and Co
Current assignee: Pioneer Hi Bred International Inc; EIDP Inc
Priority date: 2007-11-20
Filing date: 2008-11-20
Publication date: 2013-08-21
Anticipated expiration: 2028-11-20
Also published as: US20120110700A1; CA2703903A1; MX2010005578A; BRPI0818971A2; US20150299723A1; US20090130685A1; EP2617831A2; US9090901B2; EP2617831A3; WO2009067569A2; CN101868545A; ZA201002765B; WO2009067569A3; EP2225379A2

Abstract

本发明描述了尤其可用于改变植物的根结构的分离的多核苷酸和多肽及重组DNA构建体、包含这些重组DNA构建体的组分(例如植物或种子)、以及利用这些重组DNA构建体的方法。所述重组DNA构建体包含可操作地连接在植物中有功能的启动子的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码可用于改变植物根构造的多肽。

Description

具有改变的根构造的植物、涉及编码富含亮氨酸重复序列激酶(LLRK)多肽及其同源物的基因的相关构建体和方法

本专利申请要求提交于2007年11月20日的美国临时申请60/989,161和提交于2008年4月1日的美国临时申请60/041,281的优先权，其全文以引用方式并入本文。

发明领域

本发明领域涉及植物育种和基因学，并且具体地讲涉及用于改变植物根构造的重组DNA构建体。

发明背景

在除了非常少的几个之外的所有其他自然生态系统中，水和营养物质的可用性限制了植物生长。它们在大多数农业生态系统中限制产量。植物根部起到重要作用，如水和营养物质摄取、在土壤中固定植物以及在根围建立生物相互作用。因此阐明植物根发育和功能的基因调控是农学和生态学中相当受关注的课题。

根系发源于在胚胎形成期间发育的初生根。初生根产生次生根，次生根继而产生三生根。所有次生、三生、四生以及更进一步分生的根均被称为侧根。包括玉米在内的许多植物也可从连续的地下节位(冠根)或地上节位(支柱根)处产生不定根。有三个主要过程影响根系的总体构造。第一个是在初生根分裂组织中的细胞分裂过程，该过程通过加入新生细胞到根中使得根不定生长。第二个是侧根形成过程，该过程增加根系的探索能力。第三个是根毛形成过程，该过程增加初生根和侧根的总表面(Lopez-Bucio等人，Current Opinion in Plant Biology(2003)6：280-287)。在已经分离出的玉米突变体中仅仅缺少根型的一个亚型。已经鉴定了拟南芥属的根形态基因突变体如SHORTROOT和SCARECROW，它显示初生根和侧根的发育缺陷(J.E.Malamy，Plant，Cell and Environment(2005)28：67-77)。

已经鉴定了许多特异性影响根发育的玉米突变体(Hochholdinger等人，2004，Annals of Botany 93：359-368)。隐性突变体rtcs和rt1不形成或形成较少的冠根和支柱根，然而初生根和侧根不受影响。在隐性突变体des21中，缺失侧生种子根和根毛。隐性突变体rthl-3缺失根毛。突变体lrt1和rum1在侧根开始产生之前受影响，而突变体slr1和slr2的侧根伸长能力受到削弱。决定根系构造的内源响应途径包括激素、细胞循环调节子和调节基因。水分胁迫和营养物质可用性属于决定根系构造的环境响应途径。

提交于2005年2月14日的美国专利申请2005-57473(美国专利公开公布2005/223429A1，公布于2005年10月6日)涉及使用拟南芥属细胞分裂素氧化酶基因来改变植物中的细胞分裂素含量并刺激根生长。

美国专利公开6,344,601(公布于2002年2月5日)涉及在植物细胞中低表达或超表达肌动蛋白抑制蛋白(profilin)以改变植物生长习性，例如减少根系或根毛系统会使花期推迟。

WO2004/US16432(提交于2004年5月21日(WO2004/106531，公布于2004年12月9日)涉及使用超表达顺式-异戊烯基转移酶的方法来操纵生长速率和/或产量和/或构造。

提交于2004年9月30日的美国专利申请2004/489500(美国专利公开公布2005/059154A1，公布于2005年3月13日)涉及使用在植物中超表达转录因子E2F的方法来改变细胞数量、构造和产量。

可利用激活标记来鉴定能影响性状的基因。已经在模型植物拟南芥属中使用该方法(Weigel等人，2000，Plant Physiol.122：1003-1013)。

插入转录增强子元件能够显著激活和/或提高附近内源基因的表达。

发明内容

本发明包括：

在一个实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码LLRK或LLRK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、或19比较时具有至少80％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：17进行比较时具有至少85％的序列同一性。

在第二实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码LLRK或LLRK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、或19比较时具有至少85％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：17进行比较时具有至少90％的序列同一性。

在第三实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码LLRK或LLRK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15或19比较时具有至少90％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：17进行比较时具有至少95％的序列同一性。

在第四实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码LLRK或LLRK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15或19比较时具有至少95％的序列同一性。

在第五实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码LLRK或LLRK样多肽的核酸序列，其中所述多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO：15、17、19、或22。

在第六实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码LLRK或LLRK样多肽的核酸序列，其中所述核酸序列包含SEQ IDNO：14、16、18、或20。

在另一个实施方案中，包含任何前述多核苷酸的载体和重组构建体，以及包含所述重组构建体的细胞。

在另一个实施方案中，用任一前述多核苷酸来转化细胞的方法，以及用于生产和再生包含任一前述多核苷酸的转化植物的方法。

在另一个实施方案中，在基因组中包含重组DNA构建体的植物，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性，并且其中所述植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物进行比较时表现出改变的根构造。

在另一个实施方案中，在基因组中包含重组DNA构建体的植物，该重组DNA构建体包含：

(a)可操作地连接至少一种调控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性，或

(b)抑制DNA构建体，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于ClustalV比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样多肽，并且其中在与未包含所述重组构建体的对照植物比较时，所述植物表现出至少一种农学特性的改变。

在另一个实施方案中，改变植物根构造的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性；以及(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造；并且任选地，(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。

在另一个实施方案中，评价植物根构造的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性，(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(c)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该转基因植物的根构造；以及任选地，(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及任选地，(e)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

在另一个实施方案中，评价植物根构造的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性，(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(d)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

在另一个实施方案中，测定植物农学特性改变的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性，(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(c)测定该转基因植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变；以及任选地，(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及任选地，(e)测定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

在另一个实施方案中，测定植物农学特性改变的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性，(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(d)测定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

在另一个实施方案中，测定植物农学特征改变的方法，该方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样多肽；

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(c)测定该转基因植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变；

以及(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及任选地，(e)测定该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体，并且当与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(d)测定所述子代植物在与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

在另一个实施方案中，改变植物根构造的方法，该方法包括：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性；或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样多肽；以及

(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体，并且其中该转基因植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造；以及

任选地，(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体，并且其中该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的农学特性。

在另一个实施方案中，评价植物根构造的方法，该方法包括：

(c)评价与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时该转基因植物的根构造；

以及(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及任选地，(e)评价与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；

(d)评价当与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时所述子代植物的根构造。

本发明中还包括上述植物的任何子代、上述植物的任何种子以及来自任一上述植物和子代植物的细胞。

生产可作为产品销售的种子的方法，该种子提供改变的根构造，该方法包括任一前述优选的方法，并且还包括从所述子代植物获得种子，其中所述种子在其基因组中包含所述重组DNA构建体。

在另一个实施方案中，本发明也涉及对基因变异进行作图的方法，所述基因变异与控制种子发育期间的胚芽/胚乳大小和/或改变植物中的含油表型有关，所述方法包括：

(a)使两种植物品种杂交；以及

(b)在得自步骤(a)的杂交的子代植物中针对以下序列来评价基因变异：

(i)选自SEQ ID NO：14、16、18、21、或35的核酸序列；或

(ii)编码选自SEQ ID NO：15、17、19、22、或36的多肽的核酸序列，

其中所述评价是使用选自下组方法进行的：RFLP分析、SNP分析、和基于PCR的分析。

在另一个实施方案中，本发明涉及改变种子发育期间的胚芽/胚乳尺寸和/或改变植物中含油表型的分子育种方法，所述方法包括：

(a)使两种植物品种杂交；以及

(i)选自SEQ ID NO：14、16、18、21、或35的核酸序列；或

(ii)编码选自SEQ ID NO：15、17、19、22、或36的多肽的核酸序列；

附图以及序列表的说明

根据以下的详细描述和附图以及序列表，可更全面地理解本发明，以下的详细描述和附图以及序列表形成本申请的一部分。

图1示出pHSbarENDs激活标记构建体(SEQ ID NO：1)的图谱，该构建体用于制备拟南芥属种群。

图2示出载体pDONR^TM/Zeo(SEQ ID NO：2)的图谱。attP1位点位于核苷酸570-801；attP2位点位于核苷酸2754-2985(互补链)。

图3示出载体pDONR^TM221(SEQ ID NO：3)的图谱。attP1位点位于核苷酸570-801；attP2位点位于核苷酸2754-2985(互补链)。

图4示出载体pBC-yelloW(SEQ ID NO：4)的图谱，该载体是用于构建拟南芥属表达载体的目的载体。attR1位点位于核苷酸11276-11399(互补链)；attR2位点位于核苷酸9695-9819(互补链)。

图5示出PHP27840(SEQ ID NO：5)的图谱，该载体是用于构建大豆表达载体的目的载体。attR1位点位于核苷酸7310-7434；attR2位点位于核苷酸8890-9014。

图6示出PHP23236(SEQ ID NO：6)的图谱，该载体是用于构建Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系的表达载体的目的载体。attR1位点位于核苷酸2006-2130；attR2位点位于核苷酸2899-3023。

图7示出PHP10523(SEQ ID NO：7)的图谱，它是存在于农杆菌菌株LBA4404中的质粒DNA。

图8示出PHP23235(SEQ ID NO：8)的图谱，它是用于构建目的载体PHP23236的载体。

图9示出了入门克隆PHP20234(SEQ ID NO：9)的图谱，它是转运PINII终止子的载体。attR2位点位于核苷酸591-747；attL3位点位于核苷酸1100-1195。

图10示出PHP28529(SEQ ID NO：10)的图谱，该载体是用于构建玉米品系表达载体的目的载体。attR3位点位于核苷酸3613-3737；attR4位点位于核苷酸2035-2159。

图11示出了入门克隆PHP28408(SEQ ID NO：11)的图谱，它是转运组成型玉米GOS2启动子的载体。attL4位点位于核苷酸160-255；attR1位点位于核苷酸2301-2447。

图12示出了入门克隆PHP22020(SEQ ID NO：12)的图谱，它是转运玉米根NAS2启动子的载体。attR1位点位于核苷酸31-187；attL4位点位于核苷酸2578-2673。

图13示出PHP29635(SEQ ID NO：13)的图谱，该载体是用于构建Gaspe Flint衍生的玉米品系的表达载体的目的载体。attR1位点位于核苷酸40786-40910；attR2位点位于核苷酸41679-41803。

图14示出PIIOXS2a-FRT87(ni)m(SEQ ID NO：29)的图谱，该载体用于构建目的载体PHP29635。

图15A至15D示出以下全长氨基酸序列的多重比对：SEQ ID NO：15、17、19、22和36，以及SEQ ID NO：23和24。完全匹配共有序列的残基显示为暗色。将共有序列显示于每个比对上部。共有残基通过直接取多数来测定。

图16示出图15A至15D中示出的NDK同源物的每对氨基酸序列的序列同一性百分比和趋异值图表。

图17是实施例17中用于半水耕玉米生长的培养基。

图18是列出实施例17中与不同硝酸盐浓度对Gaspe Bay Flint衍生的玉米系生长和发育的影响相关的数据的图表。

序列描述以及所附序列表遵循如37 C.F.R.§1.821-1.825所列出的关于专利申请中核苷酸和/或氨基酸序列公开的规定。

序列表包含用于核苷酸序列字符的单字母码和用于氨基酸的三字母码，如遵照IUPAC-IUBMB标准所定义的，该标准在Nucleic Acids Res.13：3021-3030(1985)以及在Biochemical J.219(2)：345-373(1984)中有所描述，这两篇文献以引用的方式并入本文。用于核苷酸和氨基酸序列数据的符号和格式遵循在37 C.F.R.§1.822中所列出的规定。

SEQ ID NO：1，pHSbarENDs

SEQ ID NO：2，pDONR^TM/Zeo

SEQ ID NO：3，pDONR^TM221

SEQ ID NO：4，pBC-yellow

SEQ ID NO：5，PHP27840

SEQ ID NO：6，PHP23236

SEQ ID NO：7，PHP10523

SEQ ID NO：8，PHP23235

SEQ ID NO：9，PHP20234

SEQ ID NO：10，PHP28529

SEQ ID NO：11，PHP28408

SEQ ID NO：12，PHP22020

SEQ ID NO：13，PHP29635

表1和SEQ ID NO：36列出了本文所述的多肽、包含编码多肽全部或其主要部分的核酸片段的cDNA克隆的命名、以及在所附序列表中使用的对应标识符(SEQ ID NO：)。

表1

富含亮氨酸重复序列激酶(LLRK)

蛋白质	克隆命名	SEQ ID NO：(核苷酸)	SEQ ID NO：(氨基酸)
				LLRK	p0128.cpiae89r:fis	14	15
LLRK	cfp1n.pk018.k5b:fis	16	17
				LLRK	重叠群：my.cco1n.pk077.a19cfp2n.pk056.k23a.fcfp2n.pk056.k23b	18	19

SEQ ID NO：20对应于拟南芥富含亮氨酸重复序列激酶(LLRK)(AT1G69270)位点。

SEQ ID NO：21对应于由SEQ ID NO：20的核苷酸204-1826(终止)编码的拟南芥LLRK的编码序列。

SEQ ID NO：22对应于由SEQ ID NO：21编码的氨基酸序列，并且是NCBI GI NO：6730642的较短版本。

SEQ ID NO：23对应于NCBI GI NO：115455429(稻)

SEQ ID NO：24对应于NCBI GI No：125600990(稻)

SEQ ID NO：25是attB1序列。

SEQ ID NO：26是attB2序列。

SEQ ID NO：27是实施例9中的正向引物VC062。

SEQ ID NO：28是实施例9中的反向引物VC063。

SEQ ID NO：29PIIOXS2a-FRT87(ni)m。

SEQ ID NO：30是玉米NAS2启动子。

SEQ ID NO：31是GOS2启动子。

SEQ ID NO：32是泛素启动子。

SEQ ID NO：33是S2A启动子。

SEQ ID NO：34是PINII终止子。

SEQ ID NO：35是玉米克隆cfp5n.pk002.f22:fis的DNA序列，它是拟南芥属LLRK的同源物。

SEQ ID NO：36是由SEQ ID NO：35的核苷酸371至1909(终止)编码的氨基酸序列。

SEQ ID NO：37对应于NCBI GI No：115438737(稻)。

优选实施方案的详细描述

本文中所列出的每篇参考文献的公开内容的全文以引用的方式并入本文。

如本文所用的并在所附的权利要求书中的单数形式“一个”和“所述”包括复数涵义，除非上下文中清楚地另有指明。因此，例如，“一株植物”的涵义包括多株该类植物。“一个细胞”的涵义包括一个或多个细胞及其本领域的技术人员已知的等同物，等等。

术语“根构造”指构成根的不同部分的布置方式。术语“根构造”、“根结构”、“根系”或“根系构造”在这里可互换使用。

一般来讲，植物由胚发育成的第一种根称为初生根。在大多数双子叶植物中，初生根被称为主根。这种主根向下生长并产生分枝根(侧根)。在单子叶植物中，植物的初生根发生分枝，生成须根系。

术语“改变的根构造”指与参照植株或对照植株比较，在其不同发育阶段构成根系的不同部分的改变状况。应当理解，改变的根构造涵盖了一种或多种可测量参数(包括但不限于一个或多个根系部分的直径、长度、数目、角度或表面)的改变，所述根系部分包括但不限于初生根、侧根或分枝根、不定根和根毛，所有这些均在本发明的范围内。这些改变可导致根所占的面积或空间的整体改变。参照植株或对照植株在其基因组中不含重组DNA构建体或异源构建体。

“表达序列标签”(“EST”)是得自cDNA文库的DNA序列，并且因此是已经被转录的序列。EST通常通过cDNA插入序列单程测序获取。将完整的cDNA插入序列称为“全长插入序列”(“FIS”)。“重叠群”序列是由选自，但不限于EST、FIS和PCR序列的两个或更多个序列装配成的序列。将编码完整或功能性蛋白的序列称为“完全基因序列”(“CGS”)，该序列能得自FIS或重叠群。

术语“V”阶段是指玉米植物的叶片生长阶段；例如V4＝四片、V5＝五片具有可见叶颈的叶片。叶颈是浅色领状“带”，位于暴露的叶片底部，靠近叶片接触植物茎部的区域。进行叶片计数，开始时计数最底下的、短的、圆顶真叶，最后计数具有可见叶颈的最上面的叶片。

“农学特性”是可测量的参数，包括但不限于绿度、产量、生长速率、生物量、成熟时的鲜重、成熟时的干重、果实产量、种子产量、总植物含氮量、果实含氮量、种子含氮量、营养组织含氮量、总植物游离氨基酸含量、果实游离氨基酸含量、种子游离氨基酸含量、营养组织游离氨基酸含量、总植物蛋白质含量、果实蛋白质含量、种子蛋白质含量、营养组织蛋白质含量、耐旱性、氮摄取、根倒伏、茎倒伏、植株高度、穗长和收获指数。

“llrk”(富含亮氨酸重复序列激酶)、rpk1、“at-llrk”、“at-rpk1”(拟南芥-受体蛋白激酶1)本文可互换使用，指拟南芥位点AT1G69270(SEQ ID NO：20)。

“LLRK”、“RPK1”(受体蛋白激酶1)或“AT-RPK1”指由AT1G69270(SEQ ID NO：20)编码的蛋白(SEQ ID NO：22)。

“llrk样”指拟南芥“LLRK”位点AT1G69270(SEQ ID NO：20)的来自不同物种的核苷酸同源物，如玉米，并且不受限制地包括任何以下核苷酸序列：SEQ ID NO：14、16、18和35。

“LLRK样”指拟南芥“LLRK”(SEQ ID NO：22)的来自不同物种的蛋白同源物，如玉米，并且不受限制地包括任何以下氨基酸序列：SEQ ID NO：15、17、19和36。

“环境条件”指植物生长的条件，例如水的可用性、营养物质(例如氮)的可用性或者病害的存在。

“转基因”指其基因组因异源核酸(如重组DNA构建体)的存在而发生改变的任何细胞、细胞系、愈伤组织、组织、植物部分或植物，包括那些最初的转基因事件以及从最初的转基因事件通过有性杂交或无性生殖而产生的那些。如本文所用的术语“转基因”不涵盖通过常规植物育种方法或通过诸如随机异花受精、非重组病毒感染、非重组细菌转化、非重组转座或自发突变之类的自然发生事件导致的基因组(染色体基因组或染色体外基因组)改变。

“基因组”在用于植物细胞时不仅涵盖存在于细胞核中的染色体DNA，而且还包括存在于细胞的亚细胞组分(如线粒体、质粒)中的细胞器DNA。

“植物”包括整个植株、植物器官、植物组织、种子和植物细胞以及同一植株的子代。植物细胞包括但不限于得自下列物质的细胞：种子、悬浮培养物、胚、分生区域、愈伤组织、叶、根、芽、配子体、孢子体、花粉和小孢子。

“子代”包括植物的任何后续世代。

“转基因植物”包括在其基因组内包含异源多核苷酸的植物。优选的是，异源多核苷酸被稳定地整合进基因组中，使得该多核苷酸传递至连续的世代。异源多核苷酸可单独地或作为重组DNA构建体的部分整合进基因组中。

针对序列而言的“异源”意指来自外来物种的序列，或者如果来自相同物种，则指通过蓄意的人为干预而从其天然形式发生了组成和/或基因座的显著改变的序列。

“多核苷酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“核酸片段”可互换使用并且是任选含有合成的、非天然的或改变的核苷酸碱基的单链或双链RNA或DNA聚合物。核苷酸(通常以它们的5′-单磷酸形式存在)通过如下它们的单个字母名称来指代：“A”为腺苷酸或脱氧腺苷酸(分别对应RNA或DNA)，“C”表示胞苷酸或脱氧胞苷酸，“G”表示鸟苷酸或脱氧鸟苷酸，“U”表示尿苷酸，“T”表示脱氧胸苷酸，“R”表示嘌呤(A或G)，“Y”表示嘧啶(C或T)，“K”表示G或T，“H”表示A或C或T，“I”表示肌苷，并且“N”表示任何核苷酸。

“多肽”、“肽”、“氨基酸序列”和“蛋白质”在本文中可互换使用，指氨基酸残基的聚合物。该术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学类似物的氨基酸聚合物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物。术语“多肽”、“肽”、“氨基酸序列”和“蛋白质”还可包括修饰，包括但不限于糖基化、脂质连接、硫酸盐化、谷氨酸残基的γ羧化、羟化和ADP-核糖基化。

“信使RNA(mRNA)”指无内含子并且可通过细胞翻译成蛋白质的RNA。

“cDNA”指与mRNA模板互补并且利用逆转录酶从mRNA模板合成的DNA。cDNA可以是单链的或者可用DNA聚合成酶I的Klenow片段转化成双链形式。

“成熟”蛋白质指经翻译后加工的多肽；即已经去除了存在于初级翻译产物中的任何前肽或原肽的多肽。

“前体”蛋白质指mRNA的翻译初级产物；即具有仍然存在的前肽和原肽。前肽和原肽可以是并且不限于细胞内定位信号。

“分离的”指物质，例如核酸和/或蛋白质，该物质基本上不含在天然存在的环境中通常伴随该物质或与其反应的组分，或者说是该物质被从所述组分移出。分离的多核苷酸可从它们天然存在于其中的宿主细胞纯化。技术人员已知的常规核酸纯化方法可用于获得分离的多核苷酸。该术语也涵盖重组多核苷酸和化学合成的多核苷酸。

“重组体”指(例如)通过化学合成或者通过用基因工程技术操纵分离的核酸片段来实现的两个原本分离的序列片段的人工组合。“重组体”也包括指已经通过引入异源核酸而进行了修饰的细胞或载体，或源于经这样修饰的细胞的细胞，但不涵盖由天然发生的事件(如自发突变、自然转化/转导/转座)对细胞或载体的改变，例如没有蓄意人为干扰而发生的那些。

“重组DNA构建体”指在自然界中通常不会一起存在的核酸片段的组合。因此，重组DNA构建体可包含源于不同来源的调控序列和编码序列，或源于相同来源但以不同于通常天然存在的方式排列的调控序列和编码序列。

术语“入门克隆”和“入门载体”本文可互换使用。

“调控序列”指位于编码序列的上游(5′非编码序列)、中间或下游(3′非编码序列)，并且影响相关编码序列的转录、RNA加工或稳定性或者翻译的核苷酸序列。调控序列可包括但不限于启动子、翻译前导序列、内含子和多腺苷酸化识别序列。

“启动子”指能够控制另一核酸片段转录的核酸片段。

“在植物中有功能的启动子”指能够控制植物细胞中的转录的启动子，无论其是否来源于植物细胞。

“组织特异性启动子”和“组织优选启动子”可互换使用，并且指主要但非必须专一地在一种组织或器官中表达，而是也可在一种特定细胞中表达的启动子。

“发育调控启动子”指其活性由发育事件决定的启动子。

术语“可操作地连接”指核酸片段联合成单一片段，使得其中一个核酸片段的功能受到另一个核酸片段的调控。例如，在启动子能够调节核酸片段的转录时，该启动子与该核酸片段进行了可操作地连接。

“表达”指功能产物的产生。因此，核酸片段的表达可指核酸片段的转录(如生成mRNA或功能RNA的转录)和/或RNA翻译成前体或成熟蛋白质。

“表型”意指细胞或生物体的可检测的特征。

有关将核酸片段(例如重组DNA构建体)插入细胞内的“导入”意指“转染”或“转化”或“转导”，并且包括指将核酸片段整合进真核或原核细胞中，在该细胞中核酸片段可整合进细胞的基因组(如染色体、质粒、质体或线粒体DNA)内，转变成自主的复制子或瞬时表达(如转染的mRNA)。

“转化细胞”是将核酸片段(如重组DNA构建体)引入其中的任何细胞。

在此所用的“转化”指稳定转化和瞬时转化两者。

“稳定转化”指将核酸片段引入宿主生物体的基因组中，导致基因稳定遗传。一旦稳定转化，核酸片段稳定地整合进宿主生物体和任何连续世代的基因组中。

“瞬时转化”指将核酸片段引入宿主生物体的核中或包含DNA的细胞器中，引起基因表达而没有基因稳定遗传。

“等位基因”是占据染色体上给定位点的基因的几种供选择形式的其中一种。当二倍体植物中一对同源染色体上给定基因座上存在的等位基因相同时，该植物在该基因座处是纯合的。如果二倍体植物中一对同源染色体上给定基因座上存在的等位基因不同，则该植物在该基因座处是杂合的。如果转基因存在于二倍体植物中一对同源染色体中的其中之一上，则该植物在该基因座处是半合子的。

序列比对和同一性百分比可用设计用于检测同源序列的多种比较方法来测定，这些方法包括但不限于生物信息计算包(

Inc.，Madison，WI)的

程序。除非另外说明，本文提供的序列的多重比对用Clustal V比对方法(Higgins和Sharp，1989，CABIOS.5：151-153)采用默认参数(空位罚分＝10，空位长度罚分＝10)执行。用Clustal V方法进行成对比对和蛋白质序列的同一性百分比计算的默认参数为KTUPLE＝1、缺口罚分＝3、窗口(WINDOW)＝5和DIAGONALS SAVED＝5。而对于核酸，这些参数为KTUPLE＝2，空位罚分＝5，窗口＝4和DIAGONALS SAVED＝4。用Clustal V程序比对序列后，可通过查看同一程序中的“序列距离”表来获得“同一性百分比”和“趋异度”值。除非另外说明，本文提供的和申明的同一性百分比和趋异度是以该方式计算。

本文使用的标准重组DNA和分子克隆技术是本领域所熟知的并且在如下文献中有更全面的描述：Sambrook，J.，Fritsch，E.F.和Maniatis，T.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual；Cold Spring HarborLaboratory Press：Cold Spring Harbor，1989(下文称为“Sambrook”)。

基因关联作图

基因作图的目的是为了鉴定产生受关注的表型的基因。作图的第一阶段通常是定位染色体的普通区域，该区域与受关注的表型的传送有关。接下来鉴定该基因和最后的特定等位基因是否具有诱发作用。

一种用于基因作图(关联分析)的方法使用具有已知谱系结构的玉米品系。在遍布基因组的随机标记上进行个体基因分型。然后如果谱系内的疾病基因靠近其中一个标记，标记的遗传模式将与受关注的表型的遗传模式相似。关联分析已经是在寻找与受关注的表型相关的简单基因方面高度成功的方法，即，寻找那些其中单个主基因在给定谱系中导致表型、并且环境因素不是非常重要的那些基因。

基因作图(关联或不平衡作图)的第二种方法在种群水平上使用关联。该方法是受关注的表型由特定单体型引起，这样一来遗传受关注表型的个体将也遗传在标记位点附近的相同等位基因。重组和突变使得该方法复杂化。在某种意义上，关联作图与关联分析并无根本的不同，但是它不使用家族谱系，而是使用未知的种群谱系。因为种群谱系比家族谱系要深的多，不平衡作图能进行比关联分析更精细的作图。关联作图方法和分析的综述参见“Association Mapping in Plants，”Oraguzie，N.C.；Rikkerink，E.H.A.；Gardiner，S.E.；Silva，H.N.D.Springer，2007年1月。

现在来看优选的实施方案：

优选的实施方案包括分离的多核苷酸和多肽、重组DNA构建体、包含这些重组DNA构建体的组分(例如植株或种子)以及利用这些重组DNA构建体的方法。

优选的分离的多核苷酸和多肽

本发明包括如下优选的分离的多核苷酸和多肽：

分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含：(i)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性；或(ii)所述(i)的核酸序列的全长互补序列；任一上述分离的多核苷酸可用于本发明的任何重组DNA构建体(包括抑制DNA构建体)。所述多肽优选地是LLRK或LLRK样蛋白。

分离的多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性。所述多肽优选地是LLRK或LLRK样蛋白。

分离的多核苷酸，该多核苷酸包含(i)核酸序列，所述核酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：14、16、18或20进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性，或(ii)所述(i)的核酸序列的全长互补序列；任一上述分离的多核苷酸可用于本发明的任何重组DNA构建体(包括抑制DNA构建体)。该分离的多核苷酸编码LLRK或LLRK样蛋白。

优选的重组DNA构建体和抑制DNA构建体

在一个方面，本发明包括重组DNA构建体(包括抑制DNA构建体)。

在一个优选的实施方案中，重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列(如，在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中该多核苷酸包含(i)编码氨基酸序列的核酸序列，所述氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性，或(ii)所述(i)的核酸序列的全长互补序列。

在另一个优选的实施方案中，重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列(如，在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含(i)核酸序列，所述核酸序列在与SEQ ID NO：14、16、18、或20进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性，或(ii)所述(i)的核酸序列的全长互补序列。

图15A至15D示出以下全长氨基酸序列的多重比对：SEQ ID NO：15、17、19、22和36，以及SEQ ID NO：23和24。用生物信息计算包(

Inc.，Madison，WI)的

程序进行序列多重比对。具体地讲，使用Clustal V比对方法(Higgins和Sharp(1989)CABIOS.5：151-153)，多重比对预设参数为空位罚分＝10，空位长度罚分＝10，成对比对预设参数为KTUPLE＝1，空位罚分＝3，窗口＝5以及DIAGONALS SAVED＝5。

图16示出图15A至15D中示出的NDK同源物的每对氨基酸序列的序列同一性百分比和趋异值。

在另一个优选的实施方案中，重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列(如，在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码LLRK或LLRK样蛋白。

在另一方面，本发明包括抑制DNA构建体。

抑制DNA构建体优选包含至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)，该调控序列可操作地连接至：(a)以下序列的全部或部分：(i)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性，或(ii)所述(a)(i)的核酸序列的全长互补序列；或者(b)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样蛋白；或(c)以下序列的全部或部分：(i)核酸序列，所述核酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：14、16、18、或20进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性，或(ii)所述(c)(i)的核酸序列的全长互补序列。该抑制DNA构建体优选包含共抑制构建体、反义构建体、病毒抑制构建体、发夹抑制构建体、茎环抑制构建体、产生双链RNA的构建体、RNAi构建体或小RNA构建体(如，siRNA构建体或miRNA构建体)。

应当理解(正如本领域技术人员将会理解的)，本发明不仅仅涵盖这些具体的示例性序列。导致给定位点处产生化学上等价的氨基酸但不影响所编码多肽的功能特性的核酸片段中的改变是本领域众所周知的。因此，氨基酸丙氨酸(一种疏水性氨基酸)的密码子可被编码另一个疏水性较弱的残基(例如甘氨酸)或疏水性较强的残基(例如缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸)的密码子取代。类似地，导致一个带负电荷的残基替换为另一个带负电荷的残基(例如，天冬氨酸替代谷氨酸)或者一个带正电荷的残基替换为另一个带正电荷的残基(例如，赖氨酸替换精氨酸)的改变也可预期产生功能上等价的产物。导致多肽分子的N-末端和C-末端部分改变的核苷酸变化也将预计不会改变多肽的活性。所提出的修饰中的每一种均完全在本领域常规技术内，如测定所编码的产物的生物活性的保留。

“抑制DNA构建体”是在转化或稳定整合进植物基因组时，导致该植物中的靶基因“沉默”的重组DNA构建体。对该植物来说，该靶基因可以是内源性的或是转基因的。如本文针对靶基因所使用的，“沉默”通常指在由靶基因表达的mRNA或蛋白质/酶的水平上的抑制，和/或在酶活性或蛋白质功能性的水平上的抑制。术语“抑制”包括降低、减少、下调、减弱、抑制、消除或阻止。“沉默”或“基因沉默”不测定机理并且包括(并且不限于)反义、共抑制、病毒抑制、发夹抑制、茎环抑制、基于RNAi的方法以及基于小RNAi的方法。

抑制DNA构建体可包含源自所关注的靶基因的区域并且可包含所关注的靶基因的有义链(或反义链)的核酸序列的全部或部分。取决于所要利用的方法，该区域可与所关注基因的有义链(或反义链)的全部或部分100％相同或者具有少于100％同一性的同一性(如，具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的同一性)。

抑制DNA构建体是本领域所熟知的，一旦选定所关注的靶基因就很容易构建，并且包括但不限于共抑制构建体、反义构建体、病毒抑制构建体、发夹抑制构建体、茎环抑制构建体、产生双链RNA的构建体，以及更通常的是，RNAi(RNA干扰)构建体和小RNA构建体，例如siRNA(短干扰RNA)构建体和miRNA(微RNA)构建体。

“反义抑制”指产生能够抑制靶蛋白表达的反义RNA转录物。

“反义RNA”指与靶初级转录物或mRNA的全部或部分互补，并阻断分离的靶核酸片段表达的RNA转录物(美国专利号：5,107,065)。反义RNA可与特定基因转录物的任何部分，即5′非编码序列、3′非编码序列、内含子或编码序列互补。

“共抑制”指产生能够抑制靶蛋白表达的有义RNA转录物。“有义”RNA指包括mRNA和在细胞内或体外能被翻译成蛋白质的RNA在内的RNA转录物。此前，已通过着眼于以有义方向过表达与内源mRNA具有同源性的核酸序列(其导致与过表达的序列具有同源性的所有RNA减少)设计出了植物中的共抑制构建体(参见Vaucheret等人，1998，Plant J.，16：651-659；以及Gura，2000 Nature 404：804-808)。

另一种变型描述了将植物病毒序列用于引导对近端mRNA编码序列的抑制(于1998年8月20日公开的PCT专利公开WO 98/36083)。

此前描述的是“发夹”结构的利用，该结构以互补方向整合mRNA编码序列的全部或部分，导致已表达的RNA形成潜在的“茎环”结构(于1999年10月21日公开的PCT专利公开WO99/53050)。在这种情况下，茎由对应相对于启动子以有义或反义方向插入的相关基因的多核苷酸形成，并且环由一些相关基因的多核苷酸形成，在构建体中该多核苷酸不具有互补序列。这增加了获得的转基因植物中的共抑制或沉默频率。关于发夹抑制的综述，参见Wesley，S.V.等人，2003，Methods inMolecular Biology，Plant Functional Genomics：Methods and Protocols236：273-286。

其中茎由至少30个来自待抑制基因的核苷酸形成而环由任何的核苷酸序列形成的构建体也已经有效地用于抑制(于1999年12月2日公开的PCT专利公开WO 99/61632)。

使用聚-T和聚-A序列产生茎环结构中的茎已经有所描述(于2002年1月3日公开的PCT专利公开WO 02/00894)。

然而另一种变型涉及使用合成的重复序列来促进茎环结构中的茎的形成。用这种重组DNA片段产生的转基因生物体已经显示由形成茎环结构的核苷酸片段编码的蛋白质的水平降低，如于2002年1月3日公开的PCT专利公开WO 02/00904中所述。

RNA干扰是指由短干扰性RNA(siRNA)介导的动物中序列特异性转录后基因沉默的过程(Fire等人，Nature 391：806 1998)。在植物中的对应过程通常称为转录后基因沉默(PTGS)或RNA沉默，并且在真菌中也称为阻抑作用(quelling)。据信转录后基因沉默过程是用于防止外来基因表达的进化保守性细胞防御机制，并且通常由不同植物区系和门所共有(Fire等人，Trends Genet.15：358 1999)。这种防止外来基因表达的保护作用可能是通过特异性破坏病毒基因组RNA的同源单链RNA的细胞反应，响应源自病毒感染或源自转座因子随机整合到宿主基因组内的双链RNA(dsRNA)的生成而进化而来。dsRNA在细胞中的存在通过还没有完全表征的机制引发了RNAi反应。

细胞中长dsRNA的存在刺激了称为dicer的核糖核酸酶III的活性。Dicer涉及使dsRNA加工成称为短干扰RNA(siRNA)的短dsRNA片段(Berstein等人，Nature 409：363 2001)。源自dicer活性的短干扰RNA的长度通常是约21至约23个核苷酸，并且包含约19个碱基对的双链体(Elbashir等人，Genes Dev.15：188，2001)。Dicer还涉及从保守结构的前体RNA上切下21个和22个核苷酸的小时序RNA(stRNA)，该小时序RNA参与翻译控制(Hutvagner等人，2001，Science 293：834)。RNAi响应还涉及内切核酸酶复合物，通常称为RNA诱导沉默复合物(RISC)，其介导具有与siRNA双链体的反义链互补的序列的单链RNA的裂解。靶RNA的裂解在与siRNA双链体的反义链互补的区域中间发生(Elbashir等人，Genes Dev.15：188，2001)。此外，RNA干扰还涉及小RNA(如miRNA)介导的基因沉默，可推定是通过调节染色质结构并由此防止靶基因序列转录的细胞机制(参见(例如)Allshire，Science297：1818-18192002；Volpe等人，Science 297：1833-1837 2002；Jenuwein，Science 297：2215-2218 2002；和Hall等人，Science 297：2232-2237 2002)。这样，本发明的miRNA分子可用于通过与RNA转录物相互作用或者作为另一种选择通过与特定基因序列相互作用来介导基因沉默，其中这样的相互作用导致在转录或转录后水平上的基因沉默。

已经在多种系统中研究了RNAi。Fire等人(Nature 391：806，1998)首次在秀丽隐杆线虫(C.elegans)中观察到RNAi。Wianny和Goetz(Nature Cell Biol.2：70，1999)描述了在小鼠胚胎中由dsRNA介导的RNAi。Hammond等人(Nature 404：293，2000)描述了在用dsRNA转染的果蝇(Drosophila)细胞中的RNAi。Elbashir等人(Nature 411：4942001)描述了通过将合成的21-核苷酸RNA的双链体引入包括人胚肾和HeLa细胞在内的培养的哺乳动物细胞中而诱导的RNAi。

小RNA在控制基因表达中起重要作用。很多发育过程(包括开花)的调节是由小RNA控制的。现在有可能通过使用在植物中产生小RNA的转基因构建体来以工程手段改变植物基因的基因表达。

小RNA似乎是通过与互补RNA或DNA靶序列碱基配对来行使功能的。当与RNA结合时，小RNA或者引发靶序列的RNA裂解或者引发翻译抑制。当与DNA靶序列结合时，据信小RNA可介导靶序列的DNA甲基化。无论具体机制是什么，这些事件的后果是基因表达受到抑制。

据认为，小RNA和它们的RNA靶标之间的序列互补性有助于测定采用了哪种机制(RNA裂解或翻译抑制)。据信，优选与它们的靶标互补的siRNA通过RNA裂解起作用。一些miRNA与它们的靶基因具有完全或几乎完全的互补性，并且对于至少一些这样的miRNA，已经证实了RNA裂解。其他miRNA与它们的靶标具有若干错配，并且在翻译水平上明显抑制了它们的靶标。同样，无需坚持特定的作用机理，出现了这样一种一般规律：完全或几乎完全的互补性引起RNA裂解，而当miRNA/靶标双链体含有许多错配时倾向于翻译抑制。对于此规律的一个明显例外是植物中微RNA 172(miR172)。miR172的其中一个靶标是APETALA2(AP2)，尽管miR172与AP2具有几乎完全的互补性，但其表现出引起AP2的翻译抑制而不是引起RNA裂解。

微RNA(miRNA)是长度为约19至约24个核苷酸(nt)的已经在动物和植物中鉴定出的非编码RNA(Lagos-Quintana等人，Science294：853-858 2001，Lagos-Quintana等人，Curr.Biol.12：735-739 2002；Lau等人，Science 294：858-862，2001；Lee和Ambros，Science 294：862-864，2001；Llave等人，Plant Cell 14：1605-1619，2002；Mourelatos等人，Genes.Dev.16：720-728，2002；Park等人，Curr.Biol.12：1484-1495，2002；Reinhart等人，Genes.Dev.16：1616-1626，2002)。它们是由大小为大约70至200nt的较长的前体转录物加工生成的，并且这些前体转录物能够形成稳定的发夹结构。在动物中，涉及加工miRNA前体的酶称为Dicer，这是一种核糖核酸酶III样蛋白(Grishok等人，Cell 106：23-34 2001；Hutvagner等人，Science 293：834-838 2001；Ketting等人，Genes.Dev.15：2654-2659，2001)。植物也具有Dicer样酶，即DCL1(以前称为CARPEL FACTORY/SHORT INTEGUMENTS1/SUSPENSOR1)，并且最近有证据表明，其像Dicer一样，也涉及发夹前体的加工以产生成熟miRNA(Park等人，Curr.Biol.12：1484-1495，2002；Reinhart等人，Genes.Dev.16：1616-1626，2002)。此外，最近的研究已经清楚地表明，至少某些miRNA发夹前体最初是作为较长的聚腺苷酸化转录物存在，并且在单个转录物中可存在几种不同的miRNA以及相关发夹(Lagos-Quintana等人，Science 294：853-858 2001；Lee等人，EMBO J 21：4663-4670 2002)。最近的研究还测定了从dsRNA产物的miRNA链选择，所述dsRNA产物是通过DICER加工发夹而产生的(Schwartz等人，2003，Cell 115：199-208)。看起来，经加工的dsRNA的两端的稳定性(即G∶C与A∶U的含量比，和/或错配)影响链选择，具有低稳定性的末端更容易因解旋酶活性而解旋。低稳定性末端的5′末端链被整合至RISC复合物内，而另一条链被降解。

微RNA看起来通过与位于由这些基因产生的转录物中的互补序列结合来调节靶基因。就lin-4和let-7而言，靶位点位于靶mRNA的3′非翻译区中(Lee等人，Cell 75：843-854，1993；Wightman等人，Cell 75：855-862，1993；Reinhart等人，Nature 403：901-906，2000；Slack等人，Mol.Cell 5：659-669 2000)，并且在lin-4和let-7miRNA与其靶位点之间有几个错配。lin-4或let-7miRNA的结合看起来引起了由靶mRNA编码的蛋白质的稳态水平下调，而不影响转录物自身(Olsen和Ambros，Dev.Biol.216：671-680，1999)。另一方面，最近有证据表明，在某些情况下，miRNA可引起靶转录物在靶位点内特异性RNA裂解，并且该裂解步骤看起来需要miRNA与靶转录物之间具有100％的互补性(Hutvagner和Zamore，Science 297：2056-2060 2002；Llave等人，PlantCell 14：1605-1619 2002)。看起来有可能miRNA可进入至少两条靶基因调控途径：当靶互补性＜100％时，蛋白下调，当靶互补性是100％时，RNA裂解。进入RNA裂解途径的微RNA与在动物中RNA干扰(RNAi)期间以及在植物中转录后基因沉默(PTGS)期间产生的21-25nt短干扰RNA(siRNA)类似(Hamilton和Baulcombe 1999；Hammond等人，2000；Zamore等人，2000；Elbashir等人，2001)，并且可能整合进与在RNAi情况中观察到的复合物类似或相同的RNA-诱导的沉默复合物(RISC)内。

用生物信息学鉴定miRNA的靶标在动物中没有成功，这可能是因为动物miRNA与它们的靶标具有低水平的互补性。另一方面，生物信息学方法已经成功地用于预测植物miRNA的靶标(Llave等人，Plant Cell14：1605-1619 2002；Park等人，Curr.Biol.12：1484-1495 2002；Rhoades等人，Cell 110：513-520 2002)，因此，看起来植物miRNA与它们的推定靶标的整体互补性高于动物miRNA。植物miRNA的这些预测靶标中的大部分编码涉及植物发育模式或细胞分化的转录因子家族的成员。

本发明的重组DNA构建体(包括抑制DNA构建体)优选包含至少一种调控序列。

优选的调控序列是启动子。

多种启动子可用于本发明的重组DNA构建体(及抑制DNA构建体)中。可根据所需结果来选择启动子，并且可包括用于在宿主生物体中表达的组成型启动子、组织特异性启动子、细胞特异性启动子、诱导型启动子或其他启动子。

虽然候选基因当通过组成型启动子驱动表达时可预测其效应，但候选基因在35S或UBI启动子控制下的高水平、组成型表达可具有多重效应。

使用组织特异表达和/或胁迫特异表达可消除不需要的效应但保留改变根构造的能力。在拟南芥属中已经观察到了该效应(Kasuga等人(1999)Nature Biotechnol.17：287-291)。

适用于植物宿主细胞的组成型启动子包括(例如)Rsyn7启动子的核心启动子和在WO 99/43838和美国专利6,072,050中公开的其他组成型启动子；CaMV 35S核心启动子(Odell等人，Nature 313：810-812(1985))；稻肌动蛋白(McElroy等人，Plant Cell 2：163-171(1990))；泛素(UBI)(Christensen等人，Plant Mol.Biol.12：619-632(1989)和Christensen等人，Plant Mol.Biol.18：675-689(1992))；pEMU(Last等人，Theor.Appl.Genet.81：581-588(1991))；MAS(Velten等人，EMBO J.3：2723-2730(1984))；ALS启动子(美国专利公开5,659,026)、玉米GOS2启动子(WO0020571A2，公布于2000年4月1日)等。其他组成型启动子包括例如在美国专利5,608,149、5,608,144、5,604,121、5,569,597、5,466,785、5,399,680、5,268,463、5,608,142和6,177,611中公开的那些启动子。

在选择启动子用于本发明方法时，可能有利的是使用组织特异性启动子或发育调控启动子。

优选的组织特异性启动子或发育调控启动子是这样的DNA序列，该序列调节DNA序列选择性地在对雄穗发育、结籽或两者重要的植物细胞/组织中的表达，并限制这种DNA序列只在植物的雄穗发育或种子成熟期间表达。任何引起所需时空表达的可鉴定启动子均可用于本发明的方法中。

种子或胚特异性的并且可用于本发明的启动子包括大豆Kunitz胰蛋白酶抑制剂(Kti3，Jofuku和Goldberg，Plant Cell 1：1079-1093(1989))、马铃薯块茎特异蛋白(patatin)(马铃薯块茎)(Rocha-Sosa，M.等人，1989，EMBO J.8：23-29)、convicilin、豌豆球蛋白和豆球蛋白(豌豆子叶)(Rerie，W.G.等人，1991，Mol.Gen.Genet.259：149-157；Newbigin，E.J.等人，1990，Planta 180：461-470；Higgins，T.J.V.等人，1988，Plant.Mol.Biol.11：683-695)、玉米蛋白(玉米胚乳)(Schemthaner，J.P.等人，1988，EMBO J.7：1249-1255)、菜豆蛋白(菜豆子叶)(Segupta-Gopalan，C.等人，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82：3320-3324)、植物血球凝集素(菜豆子叶)(Voelker，T.等人，1987，EMBO J.6：3571-3577)、B-伴球蛋白和大豆球蛋白(大豆子叶)(Chen，Z-L等人，1988，EMBO J.7：297-302)、谷蛋白(稻胚乳)、大麦醇溶蛋白(大麦胚乳)(Marris，C.等人，1988，Plant Mol.Biol.10：359-366)、麦谷蛋白和麦醇溶蛋白(小麦胚乳)(Colot，V.等人，1987，EMBO J.6：3559-3564)和甘薯贮藏蛋白(sporamin)(甘薯块根)(Hattori，T.等人，1990，Plant Mol.Biol.14：595-604)。可操作地连接至嵌合基因构建体异源编码区的种子特异性基因的启动子在转基因植物中保持它们的时空表达模式。这样的实例包括在拟南芥属和甘蓝型油菜种子中表达脑啡肽的拟南芥属2S种子储藏蛋白基因启动子(Vanderkerckhove等人，Bio/Technology 7：L929-932(1989))、表达荧光素酶的菜豆凝集素和β-菜豆蛋白启动子(Riggs等人，Plant Sci.63：47-57(1989))，以及表达氯霉素乙酰转移酶的小麦谷蛋白启动子(Colot等人，EMBO J 6：3559-3564(1987))。

可诱导启动子响应内源性或外源性刺激的存在，例如，通过化合物(化学诱导剂)，或响应环境、激素、化学信号和/或发育信号而选择性表达可操作地连接的DNA序列。可诱导的或受调控的启动子包括(例如)受光、热、胁迫、水涝或干旱、植物激素、创伤或诸如乙醇、茉莉酮酸酯、水杨酸或安全剂之类的化学品调控的启动子。

优选的启动子包括如下启动子：1)胁迫诱导型RD29A启动子(Kasuga等人，1999，Nature Biotechnol.17：287-91)；2)大麦启动子B22E；B22E的表达是发育中的玉米籽粒中的柄所特异性的(“PrimaryStructure of a Novel Barley Gene Differentially Expressed in ImmatureAleurone Layers(在未成熟糊粉层中差异表达的新大麦基因的一级结构)”。Klemsdal，S.S.等人，Mol.Gen.Genet.228(1/2)：9-16(1991))；以及3)玉米启动子Zag2(“Identification and molecular characterizationof ZAG1，the maize homolog of the Arabidopsis floral homeotic geneAGAMOUS(ZAG1-拟南芥属花同源异形基因AGAMOUS的玉米同系物的鉴定和分子表征)”，Schmidt，R.J.等人，Plant Cell 5(7)：729-737(1993))。“Structural characterization，chromosomallocalization andphylogenetic evaluation of two pairs of AGAMOUS-like MADS-box genesfrom maize(两对来自玉米的AGAMOUS样MADS-box基因的结构表征、染色体定位及系统发育评价)”，Theissen等人，Gene 156(2)：155-166(1995)；NCBI GenBank Accession X80206))。Zag2转录物可在授粉前5天至授粉后(DAP)7至8天被检测到，并且引导Ciml在发育中的雌花序心皮中表达，Ciml对发育中的玉米籽粒的籽仁而言是特异性的。Ciml转录物在授粉前4至5天至授粉后6至8天被检测到。其他可用的启动子包括可源自其表达与发育中的雌小花母系相关的基因的任何启动子。

用于在植物中调节本发明的核苷酸序列表达的其他优选启动子是维管元件特异性启动子或茎优选启动子。这种茎优选启动子包括苜蓿S2A启动子(GenBank登录号：EF030816；Abrahams等人，Plant Mol.Biol.27：513-528(1995))和S2B启动子(GenBank登录号：EF030817)等等，将这些文献以引用的方式并入本文。

启动子可整个源于天然基因，或者由源于天然存在的不同启动子的不同元件构成，或者甚至包含合成的DNA片段。本领域内的技术人员应当理解，不同的启动子可在不同的组织或细胞类型中，或者在不同的发育阶段，或者响应不同的环境条件而引导基因的表达。还应认识到，由于在大多数情况下还不能完全测定调控序列的确切范围，一些变型的DNA片段可能具有相同的启动子活性。在多数情况下引起基因在大多数细胞型中表达的启动子通常称为“组成型启动子”。目前不断在发现可用于植物细胞中的不同类型的新启动子；在Okamuro，J.K.和Goldberg，R.B.，Biochemistry of Plants 15：1-82(1989)的汇编中可找到许多实例。(将其与其他组成型启动子描述放在一起。)

优选的启动子可包括：RIP2、mLIP15、ZmCOR1、Rab17、CaMV 35S、RD29A、B22E、Zag2、SAM合成酶启动子、泛素启动子(SEQ ID NO：32)、CaMV 19S、nos、Adh、蔗糖合成酶启动子、R-等位基因启动子、根细胞启动子、维管组织特异性启动子S2A(Genbank登录号EF030816；SEQ ID NO：33)和S2B(Genbank登录号EF030817)及来自玉米的组成型启动子GOS2(SEQ ID NO：31)。其他优选的启动子包括根优选的启动子，例如玉米NAS2启动子(SEQ ID NO：30)、玉米Cyclo启动子(US 2006/0156439，公开于2006年7月13日)、玉米ROOTMET2启动子(WO05063998，公开于2005年7月14日)、CR1BIO启动子(WO06055487，公开于2006年5月26日)、CRWAQ81(WO05035770，公开于2005年4月21日)和玉米ZRP2.47启动子(NCBI保藏号：U38790，gi：1063664)。

核苷酸序列的“主要部分”包含的核苷酸序列足以提供其包含的启动子的推定鉴定。核苷酸序列可由本领域技术人员来人工评估，或使用基于计算机的序列比较和鉴定工具进行评估，所述工具使用算法如BLAST(Basic Local Alignment Search Tool；Altschul等人(1993)J.Mol.Biol.215：403-410)。一般来讲，为了推定鉴定启动子核酸序列是否与已知启动子同源，包含三十或更多个邻接核苷酸的序列是必需的。具有如本文报道序列的有益效果，技术人员现在可使用全部公布序列或它们的主要部分用于本领域技术人员已知的目的。因此，本发明包括在附随序列表中报道的完全序列，以及那些上述序列的主要部分。

本发明的重组DNA构建体(及抑制DNA构建体)也可包括其他调控序列，包括但不限于翻译前导序列、内含子和多腺苷酸化识别序列。在本发明的另一个优选的实施方案中，本发明的重组DNA构建体还包括增强子或沉默子。

内含子序列可加入到部分编码序列的5’非翻译区或编码序列以增加积聚在胞浆中的成熟信息的量。已经显示，在植物和动物两者的表达构建体的转录单位中包含可剪接内含子可使基因表达在mRNA和蛋白质水平上均增强高达1000倍。参见Buchman和Berg，Mol.Cell Biol.8：4395-4405(1988)；Callis等人，Genes Dev.1：1183-1200(1987)。这种内含子对基因表达的增强通常在将其设置接近转录单位的5’端时为最大。玉米内含子Adh1-S内含子1、2和6、Bronze-1内含子的使用是本领域已知的。通常参见The Maize Handbook，第116章，Freeling和Walbot(编辑)，Springer，纽约(1994)。

如果期望进行多肽表达，则通常希望在多核苷酸编码区的3′-端处包含有多腺苷酸化区。该多腺苷酸化区可源自天然基因，源自多种其他植物基因或源自T-DNA。要加入的3′端序列可源自(例如)胭脂碱合成酶或章鱼碱合成酶基因，或作为选择源自另外的植物基因，或较不优选的是源自任何其他真核基因。

“翻译前导序列”指位于基因启动子序列和编码序列之间的DNA序列。翻译前导序列存在于翻译起始序列的经完全加工后的mRNA上游。翻译前导序列可影响mRNA的初级转录过程、mRNA稳定性或翻译效率。翻译前导序列的实例已经有所描述(Turner，R.和Foster，G.Molecular Biotechnology 3：225(1995))。

在本发明的另一个优选的实施方案中，本发明的重组DNA构建体还包括增强子或沉默子。

任何植物均可选择用来鉴定将用于产生本发明重组DNA构建体和抑制DNA构建体的调控序列和基因。适用于分离基因和调控序列的靶植物的实例应该包括但不限于苜蓿、苹果、杏、拟南芥属植物、洋蓟、芝麻菜、芦笋、鳄梨、香蕉、大麦、豆类、甜菜、黑莓、蓝莓、西兰花、抱子甘蓝、卷心菜、卡诺拉、香瓜、胡萝卜、木薯、蓖麻、菜花、芹菜、樱桃、菊苣、芫荽、柑桔类、克莱门氏小柑橘类、三叶草、椰子、咖啡、玉米、棉、蔓越莓、黄瓜、花旗松、茄子、菊苣、茅菜、桉树、茴香、无花果、大蒜、葫芦、葡萄、柚子树、白兰瓜、豆薯、猕猴桃、生菜、韭葱、柠檬、酸橙、火炬松、亚麻子、芒果、甜瓜、蘑菇、油桃、坚果、燕麦、油棕、油菜、秋葵、橄榄树、洋葱、橙、观赏植物、棕榈、木瓜树、欧芹、欧洲防风草、豌豆、桃树、花生、梨树、胡椒、柿树、松树、菠萝、大蕉、李树、石榴树、白杨、马铃薯、南瓜、温柏、辐射松、红菊苣、萝卜、油菜、树莓、稻、黑麦、高粱、南方松、大豆、菠菜、南瓜、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、甘薯、枫香树、柑橘、茶、烟草、蕃茄、黑小麦、草皮草、芜菁、葡萄树、西瓜、小麦、薯蓣和西葫芦。用于鉴定调控序列的特别优选的植物是拟南芥属植物、玉米、小麦、大豆和棉。

优选的组合物

本发明的优选组合物是其基因组中包含本发明的任何重组DNA构建体(包括任何抑制DNA构建体)(例如上面所讨论的那些优选构建体)的植物。优选的组合物也包括任何植物的子代，以及获取自植物或其子代的任何种子，其中所述子代或种子在其基因组中包含重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)。子代包括通过植物的自花授粉或异型杂交而获得的连续世代。子代也包括杂交种和近交系。

优选地，在杂交种子繁殖的农作物中，成熟的转基因植物可自花授粉而产生纯合的近交系植物。该近交系植物产生含有新引入的重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的种子。这些种子可生长而产生将会表现出改变的根(或植物)构造，或者可用于育种程序以产生杂交种子，这些杂交种子可生长而产生将会表现出改变的根(或植物)构造的植物。优选地，种子是玉米。

优选地，植物是单子叶植物或双子叶植物，更优选地，是玉米或大豆植物，甚至更优选的是玉米植物，例如玉米杂交种植物或玉米近交系植物。植物还可以是向日葵、高梁、蓖麻、葡萄、卡诺拉、小麦、苜蓿、棉、稻、大麦或小米。

优选地，重组DNA构建体稳定地整合进植物的基因组中。

尤其优选的实施方案包括但不限于如下优选的实施方案：

1.在基因组中包含重组DNA构建体的植物(优选玉米或大豆植物)，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于ClustalV比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性，并且其中所述植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物进行比较时表现出改变的根构造。优选地，在与该对照植物比较时，该植物还表现出至少一种农学特性的改变。

2.植物(优选地玉米或大豆植物)，所述植物在其基因组中包含：

重组DNA构建体，所述重组DNA构建体包含：

(a)可操作地连接至少一种调控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％的序列同一性；或

(b)抑制DNA构建体，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样多肽，并且其中在与未包含所述重组构建体的对照植物比较时，所述植物表现出至少一种农学特性的改变。

3.在基因组中包含重组DNA构建体的植物(优选玉米或大豆植物)，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码LLRK或LLRK样蛋白，并且其中在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时，所述植物表现出改变的根构造。优选地，该植物还表现出至少一种农学特性的改变。

优选地，该LLRK或LLRK样蛋白来自拟南芥属(Arabidopsisthaliana)、玉米(Zea mays)、大豆(Glycine max)、烟豆(Glycine tabacina)、野大豆(Glycine soia)和短绒野大豆(Glycine tomentella)。

4.在基因组中包含抑制DNA构建体的植物(优选玉米或大豆植物)，该抑制DNA构建体包含至少一个可操作地连接至源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域的调控元件，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样蛋白，并且其中在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时，所述植物表现出至少一种农学特性的改变。

5.在基因组中包含抑制DNA构建体的植物(优选玉米或大豆植物)，该抑制DNA构建体包含至少一个可操作地连接至以下序列的全部或部分的调控元件：(a)编码多肽的核酸序列，在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(b)所述(a)的核酸序列的完全互补序列，并且其中在与未包含所述重组·DNA构建体的对照植物比较时，所述植物表现出至少一种农学特性的改变。

6.上述优选实施方案1-5中的植物的任何子代、上述优选实施方案1-5中的植物的任何种子、上述优选实施方案1-5中的植物的子代的任何种子以及来自上述优选实施方案1-5中的植物以及它们的子代的细胞。

在上述优选的实施方案1-6或本发明的任何其他实施方案中的任一项中，重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)优选包含至少一种在植物中有功能的启动子作为优选的调控序列。

在上述优选的实施方案1-6或本发明的任意其他实施方案中的任一项中，至少一种农学特性的改变是增加或减少，优选增加。

在任一前述的优选实施方案1-6或本发明的任何其他实施方案中，至少一种农学特性优选选自：绿度、产量、生长速率、生物量、成熟时的鲜重、成熟时的干重、果实产量、种子产量、总植物含氮量、果实含氮量、种子含氮量、营养组织中的含氮量、总植物游离氨基酸含量、果实游离氨基酸含量、种子游离氨基酸含量、营养组织游离氨基酸含量、总植物蛋白质含量、果实蛋白质含量、种子蛋白质含量、营养组织蛋白质含量、抗涝性、氮摄取、根倒伏、茎倒伏、植株高度、穗长以及收获指数；产量、绿度、生物量和根倒伏是尤其优选进行改变的农学特性(优选增加)。

在任一前述的优选实施方案1-6或本发明的任何其他实施方案中，在与对照植物比较时，植物优选表现出至少一种与环境条件例如水和营养物质的可用性无关的农学特性的改变。

本领域的普通技术人员熟悉测定植物根构造改变的规程。例如，可检测分析转基因玉米植物的根构造在幼苗期、花期或成熟期的改变。根构造的改变可通过统计温室培育的植物顶部第3或第4节的节根数目或根带的宽度来测定。“根带”指成熟期植物在花盆底部的根丛宽度。植物根构造变化的其他量度包括但不限于侧根的数量、节根的平均根直径、侧根的平均根直径、根毛的数量和长度。侧根分枝的程度(如侧根数量、侧根长度)可通过这样测定：从完整的根系进行二次取样，将样本用平面扫描器或数码相机成像并用WinRHIZO^TM软件(RegentInstruments Inc.)分析。

对提取的有关根表型的数据进行统计分析(通常为t检验)，以将转基因根与非转基因姊妹株植株的根进行比较。在多个事件和/或构建体涉及该分析的情况下，还可使用单因素方差分析。

下面的实施例描述了一些用于检测根构造改变的代表性规程和技术。

也可通过在田间测试中，在相同条件下比较植物与对照或参照植物提高产量的能力，来评价植物根构造的改变。

也可通过在田间测试中比较植物在胁迫条件下(例如营养物质过剩或受限、水过剩或受限、存在病害)保持基本产量(优选地至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％产量)的能力，与非胁迫条件下的对照或参照植物的产量，来评价根构造改变。

根构造的改变可通过测定转基因植物较于参照植物或对照植物的抗根倒伏性来测量。

在评估或测量其中利用了对照或参照植物的本发明任何实施方案(如，如本文描述的组合物或方法)中的转基因植物的农学特性或表型时，本领域的普通技术人员将很容易认识到要利用的合适对照或参照植物。例如，通过如下非限制性示例来说明：

1.转化过的植物的子代，该转化过的植物对于重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)来说是半合子的，使得该子代分离成包含或不包含该DNA构建体(或抑制DNA构建体)的植株：包含该重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的子代将通常相对于未包含该重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的子代来进行测量(即，未包含该重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的子代是对照或参照植株)。

2.重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)基因渗入至近交系中，例如在玉米中，或基因渗入进变种中，例如在大豆中：基因渗入品系将通常相对于亲本近交系或变种品系进行测量(即，亲本近交系或品种品系是对照或参照植物)。

3.双杂交系，其中第一杂交系由两个亲本近交系产生，而第二杂交系由相同的两个亲本近交系产生，不同的是其中一个亲本近交系含有重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)：第二杂交系通常将相对于第一杂交系进行测量(即亲本近交系或变种品系为对照植物或参照植物)。

4.包含重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的植株：该植株可相对于这样的对照植株进行评估或测量，该对照植株不包含重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)，但具有与该植株相当的遗传背景(例如，与包含重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的植株相比较，核遗传物质具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性)。存在许多可用于分析、比较和表征植物遗传背景的基于实验室的技术；其中这些技术是同工酶电泳、限制性片段长度多态性(RFLP)、随机扩增多态性DNA(RAPD)、任何引物聚合成酶链反应(AP-PCR)、DNA扩增指纹(DAF)、序列特异扩增区域(SCAR)、扩增片段长度多态性

和也称为微卫星的简单序列重复(SSR)。

此外，本领域的普通技术人员将容易认识到，评估或测量转基因植物的农学特性或表型时合适的对照或参照植物将不包括先前已经针对所需的农学特性或表型，通过诱变或转化而选择的植物。

优选的方法

优选的方法包括但不限于用于改变植物根构造的方法、用于评价植物根构造改变的方法、用于改变植物农学特性的方法、用于测定植物农学特性改变的方法以及用于产生种子的方法。优选地，植物是单子叶植物或双子叶植物，更优选地，是玉米或大豆植物，甚至更优选地，是玉米植物。植物还可以是向日葵、高梁、蓖麻、卡诺拉、小麦、苜蓿、棉、稻、大麦或小米。种子优选的是玉米或大豆种子，更优选的是玉米种子，并且甚至更优选的是玉米杂交种种子或玉米近交系种子。

特别优选的方法包括但不限于如下方法：

改变植物根构造的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性；以及(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。所述方法可进一步包括(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。

改变植物根构造的方法，该方法包括：(a)将包含至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的抑制DNA构建体导入可再生的植物细胞中，该调控序列可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，在与SEQID NO：15、17、19、22、或36比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样多肽；以及

(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。所述方法可进一步包括(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造；

评价植物根构造改变的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性，或(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(c)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该转基因植物的根构造；该方法还可包括：(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(e)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

评价植物根构造改变的方法，所述方法包括：(a)将包含至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的抑制DNA构建体导入可再生的植物细胞中，该调控序列可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，在与SEQID NO：15、17、19、22、或36比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或者(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样多肽；以及

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及(c)评价该转基因植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时改变的根构造。该方法可另外包括：(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(e)评价该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时改变的根构造。

评价植物根构造改变的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(d)评价该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时改变的根构造。

评价植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，在与SEQ IDNO：15、17、19、22、或36比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或者(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样多肽；(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及(d)评价与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

测定植物农学特性改变的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及(c)测定该转基因植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。该方法还可包括：(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(e)测定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，该方法包括：(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该抑制DNA构建体包含至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)，所述调控序列可操作地连接以下序列的全部或部分：(i)核酸序列，该核酸序列编码多肽，该多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(ii)所述(i)的核酸序列的全长互补序列；(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(c)测定该转基因植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。该方法可另外包括：(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(e)测定该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(d)测定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。测定植物中农学特性改变的方法可进一步包括：测定所述转基因植物在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，该方法包括：(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该抑制DNA构建体包含至少一种调控序列(优选在植物中有功能的启动子)，所述调控序列可操作地连接以下序列的全部或部分：(i)核酸序列，该核酸序列编码多肽，该多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、22、或36进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(ii)所述(i)的核酸序列的全长互补序列；

(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(d)测定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞，该抑制DNA构建体包括至少一种调控元件，该调控元件可操作地连接至源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样多肽；(b)在步骤(a)之后从该可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(c)测定所述转基因植物在与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。所述方法可进一步包括：(d)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及(e)测定该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该抑制DNA构建体包括至少一种调控元件，该调控元件可操作地连接至源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码LLRK或LLRK样蛋白；(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及(d)测定该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

产生种子(优选可作为提供改变的根构造的产品销售的种子)的方法，该方法包括任一上述的优选方法，并且还包括从所述子代植物获得种子，其中所述种子在其基因组中包含所述重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)。

在任一前述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，测定转基因植物中农学特性改变的步骤(如果适用的话)可优选地包括测定在改变的环境条件下与不包含重组DNA构建体的对照植物进行比较时该转基因植物是否表现出至少一种农学特性的改变。

在任一前述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，测定子代植物中农学特性改变的步骤(如果适用的话)可优选地包括测定在改变的环境条件下与不包含重组DNA构建体的对照植物进行比较时该子代植物是否表现出至少一种农学特性的改变。

在任何前述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，在所述导入步骤中所述可再生的植物细胞优选地包括愈伤组织细胞(优选胚胎)、配子细胞、分生细胞或未成熟胚芽细胞。可再生的植物细胞优选来自近交系玉米植物。

在任一上述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，所述再生步骤优选包括：(i)在包含促进胚发生的激素的培养基中培育所述转化的植物细胞直至观察到愈伤组织；(ii)将所述步骤(i)的转化的植物细胞转移至包含促进组织机体形成的激素的第一培养基；以及(iii)在第二培养基上传代培养步骤(ii)后的所述转化的植物细胞，以允许嫩芽伸长、根发育或这两者同时发生。

在任一前述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，存在供选择的替代方案用于将包含可操作地连接至少一种调控序列上的多核苷酸的重组DNA构建体导入可再生的植物细胞。例如，可将调控序列(例如一种或多种增强子、优选地作为转位因子的部件)导入可再生的植物细胞，然后筛选其中将所述调控序列可操作地连接至编码本发明多肽的内源基因的事件。

将本发明的重组DNA构建体引入植物可通过任何合适的技术来进行，这些技术包括但不限于引导DNA摄取、化学处理、电穿孔、显微注射、细胞融合、感染、载体介导的DNA转移、轰击或农杆菌介导转化。

在任一上述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，至少一种农学特性优选选自：绿度、产量、生长速率、生物量、成熟时的鲜重、成熟时的干重、果实产量、种子产量、总植物含氮量、果实含氮量、种子含氮量、营养组织含氮量、总植物游离氨基酸含量、果实游离氨基酸含量、种子游离氨基酸含量、营养组织游离氨基酸含量、总植物蛋白质含量、果实蛋白质含量、种子蛋白质含量、营养组织蛋白质含量、抗涝性、氮摄取、根倒伏、茎倒伏、植株高度、穗长、茎倒伏以及收获指数。产量、绿度、生物量和根倒伏是尤其优选进行改变的农学特性(优选增加)。

在任一上述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，在与对照植物比较时，植物优选表现出至少一种与环境条件无关的农学特性的改变。

优选的技术如下文实施例所示，用于转化玉米植物细胞和大豆植物细胞。

用于转化双子叶植物(主要通过利用根癌农杆菌以及获得转基因植物的其他优选方法包括公开的用于棉的那些(美国专利5,004,863、美国专利5,159,135、美国专利5,518,908)；用于大豆的那些(美国专利5,569,834、美国专利5,416,011、McCabe等人，Bio/Technology 6：923(1988)，Christou等人，Plant Physiol.87：671674(1988))；用于芸苔属植物(Brassica)的那些(美国专利5,463,174)；用于花生的那些(Cheng等人，Plant Cell Rep.15：653 657(1996)，McKently等人，Plant Cell Rep.14：699 703(1995))；用于番木瓜的那些；以及用于豌豆的那些(Grant等人，Plant Cell Rep.15：254 258，(1995))。

用电穿孔、粒子轰击和农杆菌转化单子叶植物也已有报道并且作为优选的方法包括(例如)如在天门冬属(asparagus)中实现的转化和植物再生(Bytebier等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84：5354，(1987))；在大麦中实现的转化和植物再生(Wan和Lemaux，Plant Physiol.104：37(1994))；在玉米中实现的转化和植物再生(Rhodes等人，Science 240：204(1988)；Gordon-Kamm等人，Plant Cell 2：603 618(1990)；Fromm等人，Bio/Technology 8：833(1990)；Koziel等人，Bio/Technology11：194，(1993)；Armstrong等人，Crop Science 35：550-557(1995))；在燕麦中实现的转化和植物再生(Somers等人，Bio/Technology 10：1589(1992))；在鸭茅中实现的转化和植物再生(Horn等人，Plant Cell Rep.7：469(1988))；在稻中实现的转化和植物再生(Toriyama等人，Theor.Appl.Genet.205：34，(1986)；Part等人，Plant Mol.Biol.32：1135 1148，(1996)；Abedinia等人，Aust.J.Plant Physiol.24：133 141(1997)；Zhang和Wu，Theor.Appl.Genet.76：835(1988)；Zhang等人，PlantCell Rep.7：379，(1988)；Battraw和Hall，Plant Sci.86：191 202(1992)；Christou等人，Bio/Technology 9：957(1991))；裸麦(De la Pena等人，Nature 325：274(1987))；在甘蔗中实现的转化和植物再生(Bower和Birch，Plant J.2：409(1992))；在高羊茅(tall fescue)中实现的转化和植物再生(Wang等人，Bio/Technology 10：691(1992))和在小麦中实现的转化和植物再生(Vasil等人，Bio/Technology 10：667(1992)；美国专利5,631,152)。

存在多种用于从植物组织再生植物的方法。再生的具体方法将取决于起始植物组织以及待再生的具体植物物种。

从单植物原生质体转化体或从多种经转化的外植体再生、发育和培育植物是本领域所熟知的(Weissbach和Weissbach(编辑)，载于：Methods for Plant Molecular Biology，Academic Press，Inc.San Diego，CA，(1988))。该再生和生长方法通常包括如下步骤：选择转化的细胞、培养这些单独化的细胞通过胚发育的通常阶段以及通过生根小植株阶段。转基因胚以及种子以类似的方式再生。随后将所得的转基因的生根小苗种植在诸如土壤之类的合适植物生长培养基中。

含有编码所关注蛋白质的外来的外源性分离核酸片段的植物的发育或再生是本领域所熟知的。优选地，将再生的植物进行自花授粉以产生纯合的转基因植物。或者，将得自再生植物的花粉与农学上重要的品系的产生种子的植株进行杂交。相反，将来自这些重要品系的植物用于给再生植物授粉。利用本领域技术人员所熟知的方法培育含有所需多肽的本发明的转基因植物。

在另一方面，本发明也涉及与改变根构造和/或改变植物至少一种农学特性有关的对基因变异进行作图的方法，所述方法包括：

(a)使两种植物品种杂交；以及

(i)选自SEQ ID NO：14、16、18、20、22、24、26、28、30或33的核酸序列；或

(ii)编码选自SEQ ID NO：15；17、19、21、23、25、27、29、31或34的多肽的核酸序列，

所述评价是使用选自下组的方法进行的：RFLP分析、SNP分析、和基于PCR的分析。

在另一个实施方案中，本发明涉及改变根构造和/或改变植物至少一种农学特性的分子育种方法，所述方法包括：

(a)使两种植物品种杂交；以及

(ii)编码选自SEQ ID NO：15；17、19、21、23、25、27、29、31或34的多肽的核酸序列；

术语“对基因变异进行作图”或“对基因变异性进行作图”可互换使用，并且定义了鉴定DNA序列中在不同植物品系、栽培变种、品种、家族、或物种之间存在差异的基因区域内天然发生或诱导发生的变化的方法。甚至由于极少的碱基变化导致的在特定位点(基因)的基因变异性能够改变可能生成的限制酶消化片段的形式。病原体变成基因型可能是由于被分析基因内的删除或插入导致，或者甚至只是由于能够产生或删除限制酶识别位点的单个核苷酸取代导致。RFLP分析利用这一方法并且利用具有对应于受关注的分离核酸片段的探针的Southern印迹法。

因此，如果多态性(即，基因或DNA片段中普遍存在的变型；也指在相同物种内存在若干形式的基因(等位基因))产生或破坏一个限制性核酸内切酶裂解位点，或者如果它导致DNA丢失或插入(例如可变的核苷酸串联重复(variable nucleotide tandem repeat，VNTR)多态性)，将改变能用限制性核酸内切酶消化生成的DNA片段的大小或特征。同样地，通过限制性片段分析能将具有变异序列的个体与那些具有初始序列的个体区分开来。将能用该方法鉴定的多态性称为“限制性片段长度多态性(“RFLP”)。RFLP已经被广泛应用于人类和植物基因分析(Glassberg，UK专利申请2135774；Skolnick等人，Cytogen.Cell Genet.32：58-67(1982)；Botstein等人，Ann.J.Hum.Genet.32：314-331(1980)；Fischer等人(PCT专利申请WO 90/13668；Uhlen，PCT专利申请WO90/11369)。

“单核苷酸多态性”或“SNP”的中心属性是多态性位点位于单个核苷酸上。据报道，SNP具有对RFLP或VNTR的某些优点。首先，SNP比其它类型的多态性更稳定。它们的自发突变率为大约10^-9(Kornberg，DNA Replication，W.H.Freeman & Co.，San Francisco，1980)，比VNTR(美国专利公开5,679,524)的频率低了大约1,000倍。其次，SNP的发生频率更高，并且比RFLP和VNTR更一致。因为SNP由序列变异产生，可通过随机基因组测序或cDNA分子测序来鉴定新的多态性。SNP也可由删除、点突变和插入产生。任何单个碱基改变，无论其起因，都可能是SNP。SNP的更高频率意味着它们可能比其它类别的多态性更易于鉴定。

SNP可使用多种方法中的任何一种进行鉴定。此类方法包括直接的或间接的位点测序、使用限制性酶(其中位点相应的等位基因产生或破坏限制性位点)、使用等位基因特异性杂交探针、使用由多态性的不同等位基因或者其它生化物质编码的蛋白的特异抗体。SNP可通过许多方法进行测序。可使用两种基本方法进行DNA测序，Sanger等人的链终止法，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)74：5463-5467(1977)，以及Maxam和Gilbert的化学降解法，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)74：560-564(1977)。

此外，可通过改进的PCR技术来检测单点突变，例如连接酶链反应(“LCR”)和PCR-单链构象多态性(“PCR-SSCP”)分析。也可使用PCR技术来鉴定极少量样本中的基因表达水平，例如来自主体的组织或细胞。该技术称为反转录-PCR(“RT-PCR”)。

术语“分子育种”定义了在育种过程期间跟踪分子标记的方法。将分子标记与所期望的表型特征相连是普遍的。通过跟踪分离的分子标记或基因特征，而不是对表型进行评分，育种过程能通过种植更少的植物并免于对表型变型进行检测分析或目测而加快。该过程中有用的分子标记包括但不限于鉴定前文提到的可作图的基因变异时可用的任何标记，以及显示跨植物物种的同线性的任何紧接的基因。术语“同线性”指不同生物之间的基因组上的保守基因位置/顺序。这意味着发现两个或更多个基因位点(可以是紧接的，或者可以是不紧接的)位于不同物种间的相同基因组上。同线性的另一个术语是“基因组共线性”。

实施例

本发明将在下面的实施例中进一步说明，其中份数和百分比是以重量计并且度数是摄氏度，除非另外说明。应当理解，尽管这些实施例说明了本发明的优选实施方案，但仅是以例证的方式给出的。根据上面的论述和这些实施例，本领域的技术人员可以测定本发明的基本特征，并在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可对本发明做出多种改变和修饰，以使其适用于多种用法和条件。因此，除了那些本文所示和描述的那些之外，根据前文所述，本发明的各种修改形式对本领域的技术人员来说将是显而易见的。这些修改形式也旨在属于所附权利要求书的范围内。

实施例1

制备具有激活标记基因的拟南芥种群

构建18.4kb的T-DNA基二元构建体，pHSbarENDs(图1；SEQ IDNO：1；)包含四个来源于花椰菜花叶病毒35S启动子的四个多聚增强子元件，对应于序列-341至-64，如Odell等人(1985)Nature 313：810-812所述。该构建体也包含允许质粒救援的载体序列(pUC9)、再动员T-DNA的转座子序列(Ds)、以及允许草胺磷选择转基因植物的bar基因。仅将从右边界(RB)至左边界(LB)包含的10.8kb片段转移到寄主植物基因组中。因为增强子元件位于靠近RB处，它们可诱导T-DNA整合后的基因组位点顺式激活。

将pHSbarENDs构建体转化到根癌农杆菌菌株C58中，在25℃下在LB中培养至OD600～1.0。然后离心沉淀细胞，并重悬在相等体积的5％蔗糖/0.05％Silwet L-77(OSI Specialties，Inc)中。在早期抽薹时，培育拟南芥属生态型Col-0的土壤使用农杆菌悬浮液进行顶部灌溉。一周后，相同植株再次用在蔗糖/Silwet中的相同农杆菌菌株进行顶部灌溉。然后将该植物的种子设为标准。所得T₁种子在土壤中播种，通过喷洒草胺磷(

AgrEvo；Bayer Environmental Science)选择转基因幼苗。从大约35,000个单个草胺磷抗性T1植株中收集T₂种子。培养T₂植株并收集来自96个分离T₂品系的相同体积的T3种子。这组成了360个亚群。

农杆菌菌株和整个植株的转化如上所述进行。

选择了总计100,000个草胺磷抗性T₁幼苗。分开保存来自每个品系的T₂种子。

实施例2A

筛选以鉴定具有改变根构造的品系(非限制性氮条件)

在与早期发育期间来自如实施例1所述的种群的对照幼苗进行比较时，可分析在不限制氮条件下培养的具有激活标记的拟南芥属幼苗的根系构造。

来自每个96,000个分离T1激活标记品系的十个T2种子可用氯气进行灭菌并种植在培养皿上，培养皿包含以下培养基：0.5x N-FreeHoagland’s，60mM KNO₃，0.1％蔗糖，1mM MES和1％Phytagel^TM。通常将10个平板置于架子中。平板在4℃下保存三天以使种子分层，然后在22℃光照和20℃黑暗垂直保持11天。光周期为16h；8h黑暗，平均光照强度为～180μmol/m²/s。架子(通常每个装有10个平板)在每个搁板中每日旋转。在第14天，评估平板的幼苗状态，拍摄整个平板的数字图像并分析根面积。将平板随机分成10个水平区域。在板上10个水平区域的每个区域中的根面积以总面积百分比表示。仅仅使用区域3至9的面积进行品系根总面积计算。可使用ICORIA开发的Rootbot图像分析工具(专有)来评估根面积。根总面积以mm²表示。

期望具有增加的根生长特性的品系位于根分布区域的上端。假定架子有最多两个异常值，可使用滑动窗方法评估给定架子的根区域的变化。包括生长培养基、温度、和湿度在内的多个因素的环境变量可引起根生长的显著改变，尤其是在播种期间更是如此。因此根据播种日期和搁板来将所述品系分组以用于数据分析。然后通过平均根面积来拣选特定播种日期/搁板组中的架子。通过将架子r_i的数据与来自下一个最低架子(r_i-1，以及下一个最高平均根面积，r_i+1)的数据进行合并来执行滑动窗根面积分布然后使用Grubbs型方法(Barnett等人，Outliers in StatisticalData，John Wiley & Sons，第3版(1994)来分析组合分布的变量以鉴定ri中的异常值。

将通过上文所述方法测定的具有显著增加的根生长的品系命名为Phase 1 hits。在相同分析条件下进行Phase 1 hits的重复试样再筛选。当任一个或两个Phase 2重复试样显示与平均值的显著差异时，认为该品系是经过验证的根构造品系。

在Phase 2的至少一个平板中再次发现是异常值的那些品系经过室内进行的Phase 3筛选以验证Phase 1和Phase 2中获得的结果。使用下文所述的Rootboot图像分析(如上所述)和验证Phase 3的结果。在第一轮筛选中进行相同方式的确认。T2种子用50％家用漂白剂，0.01％triton X-100溶液灭菌，并以10颗种子/平板的密度置于与第一轮筛选所述的相同平板培养基上。在4℃下保存平板三天以使种子分层，并在与首次实验相同的温度和光周期下培养种子，光照强度为～160μmol/m²/s。将平板垂直放入10平板架的八个中心位置，第一个和最后一个位置放空白平板。每隔一天旋转架子和架子中的平板。每隔平板拍摄两组照片。第一组在14-16天拍摄，此时大多数品系的初生根已经到达平板底部，第二组照片在发育出更多侧根两天后拍摄。通常用后面的一组照片进行数据分析。用软件(Regent Instruments Inc)分析在垂直平板上生长的这些幼苗的根生长，该软件是特别设计的一种进行根测量的图像分析系统。

利用像素对照来从较暗的背景辨别出根构造。为了在不拍摄背景情况下鉴定的根的最大量，所述像素级别是150-170，并且使用滤光器去除长度/宽度比率小于10.0的物体。进行分析的平板上的面积为从植物叶片边缘至距离平板底部约1cm处。使用完全相同的

设置和分析面积分析一批的所有平板。

给出的一个平板的总根长度得分除以已经萌发并沿平板生长一半的植物数目。每个品系培养三个平板，取它们的得分均值。然后将该平均值与同时培养的包含野生型种子的三个平板的平均值比较。

然后使用通过与野生型相比具有更高根生长数值进行再确认的拟南芥激活标记品系，用于分子鉴定侧接T-DNA插入序列的DNA。

实施例2B

在突变种群中鉴定具有改变的根表型的突变品系(氮限制条件)

可使用两步筛选程序，该程序包括：

(1)用垂直平板检测分析法鉴定改变的根生长表型；

(2)在拯救的突变体品系中确认抗除草剂性和根表型；

初次筛选基于垂直平板，该平板包含无氮的Hoagland盐，0.3％蔗糖和1mM KNO₃。该培养基也包含0.8％至1.0％PhytaGel作胶凝剂。具有1.0％Phytagel的培养基有时难以灌注，因为它凝固迅速，然而低于0.8％时当垂直放置时培养基将滑出平板。来自激活标记种群的突变体，其中100个单个品系的集合可用于总计36000个品系的筛选。在每个平板上，种植12个突变体和2个野生型Columbia种子。平板置于具有26℃恒温的培养室中，培养室为16小时-日循环，平板顶部的平均光照强度为110μE/m²s。这些平板在2.5周期限内拍照3-4次。当观察到清楚的根表型时拯救单个幼苗。拯救的幼苗在生长室(24℃，每日16小时，250至300μE/m²s)中生长至成熟以采集种子。

就次级筛选而言，将来自在初次筛选中鉴定的推定hits的种子播种于包含与上文相同的培养基(加上6mg/L双丙氨磷)的平板上。野生型Columbia种子在相同时间、但无双丙氨磷的相同培养基上播种。每个平板具有10个种子。每个突变体品系有3个平板，而野生型Columbia有2个平板作为重复试样。这些平板置于培养室中，生长条件与上文所述相同。剔除那些认为是假阳性的不具有抗除草剂性或无明显的根表型的品系。保存次级筛选验证的品系用于进一步研究。

实施例3

鉴定激活标记基因

使用下述两个标准程序中的一个或两个来鉴定侧接导致根构造改变的T-DNA插入序列的基因：(1)热不对称交错PCR(TAIL)PCR(Liu等人，(1995)，Plant J.8：457-63)；以及(2)SAIFF PCR(Siebert等人，(1995)Nucleic Acids Res.23：1087-1088)。至于复杂的多聚T-DNA插入序列，TAIL PCR和SAIFF PCR可能均不足以鉴定候选基因。在这些情况下，可使用包括反式PCR、质粒拯救和/或基因组文库构建在内的其他程序。

成功的结果是其中单个TAIL或SAIFF PCR片段包含T-DNA边界序列和拟南芥属基因组序列。

一旦获取侧接T-DNA插入序列的基因组序列标记，通过与公开可用的拟南芥属基因组的序列比对来鉴定候选基因。

具体地讲，最靠近35S增强子元件/T-DNA RB的注释基因是激活的基因的候选基因。

为了验证鉴定的基因真的靠近T-DNA并排除TAIL/SAIFF片段是嵌合伪克隆的可能性，用一个T-DNA中的寡核苷酸和一个候选基因特异性的寡核苷酸进行对基因组DNA的诊断PCR。将提供PCR产品的基因组DNA样本理解为表示T-DNA插入序列。该分析也验证了其中一种以上的插入事件发生在相同品系中的情况，例如，在TAIL和/或SAIFF PCR分析中鉴定是否有多个不同基因组片段。

实施例4

鉴定激活标记llrk基因

通过如实施例2B所述的筛选程序，以及随后经过如实施例2A所述的阶段3(室内)筛选来获取llrk基因。如实施例3所述进行激活标记基因的鉴定。

进一步分析显示具有改变的根构造的一个品系(5至7)。提取来自品系的DNA，使用T-DNA左边界内的引物通过连接介导PCR(Siebert等人，(1995)Nucleic Acids Res.23：1087-1088)建立T-DNA插入序列。一旦获取侧接T-DNA插入序列的基因组序列标记，通过与完全拟南芥属基因组的序列比对来鉴定候选基因。将其中一个鉴定的插入位点鉴定为嵌合插入；左边界的T-DNA序列经测定位于T-DNA插入序列的两端。这仍然是可能的：位于靠近T-DNA右边界的增强子元件足够靠近以对附近的候选基因产生效应。在这种情况下，假定右边界位置位于插入位点，并将侧接插入位点的两个基因选作候选基因。最靠近嵌合基因35S增强子的其中一个基因是AT1G69270(SEQ ID NO：20)；拟南芥富含亮氨酸重复序列激酶)，编码LLRK蛋白(SEQ ID NO：22)，本文称为富含亮氨酸重复序列激酶，或LLRK。

实施例5A

验证候选拟南芥属基因(AT1G69270)经由转化到拟南芥属中增强植物

根构造的能力

可将候选基因转化到拟南芥属中并在35S启动子作用下过表达。如果在转基因品系中观察到与亲本激活标记品系相同或相似的表型，则将该候选基因认为是拟南芥属中验证过的“前导基因”。

可直接测试拟南芥属AT1G69270基因促进拟南芥属中的根构造的能力。

拟南芥AT1G69270cDNA用寡核苷酸进行PCR扩增，寡核苷酸导入attB1(SEQ ID NO：25)序列，其上游为ATG起始密码子的共有起始序列(CAACA)和AT1G69270 cDNA(SEQ ID NO：50的核苷酸51-764(终止))蛋白编码区的前23个核苷酸，以及attB2(SEQ ID NO：26)序列和包括所述cDNA终止密码子的蛋白编码区的最后21个核苷酸。使用Invitrogen^TM

技术，用pDONR^TM/Zeo(Invitrogen^TM，图2；SEQ ID NO：2)进行MultiSite

BP重组反应。这种方法将细菌致死ccdB基因以及氯霉素抗性基因(CAM)从pDONR^TM/Zeo移除并定向地克隆了该在旁侧具有attB1(SEQ ID NO：25)和attB2(SEQ ID NO：26)位点的PCR产物而得到入门克隆PHP28738。

用紧接Invitrogen^TM C1转化插入序列上游的1.3-kb35S启动子构建称为pBC-yellow(图4，SEQ ID NO：4)的16.8-kb T-DNA基的二元载体，所述插入序列包含侧接attR1和attR2序列的ccdB基因和氯霉素抗性基因(CAM)。该载体也包含在Rd29a启动子控制下的YFP标记用于选择转化过的种子。

使用Invitrogen^TM

技术，对包含定向克隆PCR产物和pBC-yellow的入门克隆进行MultiSiteLR重组反应。这使得能够迅速地和定向地克隆pBC-yellow中在35S启动子后的AT1G69270基因。

使用如实施例1所述的相同农杆菌介导的转化程序将35S-AT1G69270基因构建体导入野生型拟南芥属生态型Col-0中。

通过存在的荧光YFP标记选择转基因T1种子。按照如实施例2A所述的程序对荧光种子进行根构造检测分析。每个构建体使用6个平板对转基因T1种子进行再筛选。包含从荧光种子中分选出的未转化的Columbia种子的两个平板(每个架子)作为对照。

每个构建体有六个平板进行统计学分析，并检测平板上生长的植物数量和它们的平均

得分之间的趋势。

得分进行趋势归一化处理，对应于构建体的根得分除以野生型根得分。

实施例5B

在氮限制条件下筛选候选基因

也可筛选如上文实施例5A所述通过存在的荧光标记YFP选择的转基因T1种子在氮限制条件下生长的抗性。为此目的，32个转基因个体可在一个有0.4mM KNO₃或60mM KNO₃的平板上紧邻着32个野生型个体生长。如果一个品系显示与对照的统计意义上的显著差异，可认为该品系是经验证的氮缺乏抗性品系。在掩蔽该平板图像以去除背景颜色后，每个个体收集两个不同的测量数据：总罗赛塔面积和进入绿色区的颜色百分比。使用色调、饱和度和强度数据(HIS)，绿色区由色调50至66组成。总罗赛塔面积用作植物生物量的量度，而绿色区通过剂量-响应研究已经显示指示氮同化作用。

实施例5C

验证候选拟南芥属基因(AT1G69270)经由转化进入拟南芥属后改善植物氮利用率的能力

如实施例5B所述来筛选能够在氮限制条件下生长的转基因种子。

在第10、11、12和13天评估植物。与野生型植物相比，表达拟南芥候选基因(AT1G69270)的转基因个体在低氮(0.4mM KNO₃)和不限制氮条件(60mM KNO₃)下进行验证；例如，转基因植物在两种条件下的生物量都增加。

实施例5D

筛选以鉴定具有改善的硝酸盐摄取的品系

就每个过表达品系而言，将十二个T2植株播种在96孔微滴定板上，所述微滴定板包含2mM MgSO₄，0.5mM KH₂PO₄，1mM CaCl₂，2.5mMKCl，0.15mM Sprint 330，0.06mM FeSO₄，1μM MnCl₂·4H₂O，1μMZnSO₄·7H₂O，3μM H₃BO₃，0.1μM NaMoO₄，0.1μM CuSO₄·5H₂O，

0.8mM硝酸钾，0.1％蔗糖，1mM MES，200μM溴酚红和0.40％Phytagel^TM(pH测定培养基)。培养基pH使得溴酚呈红色，pH指示染料是黄色的。

将四个品系种植于每个平板中，每个平板上包含12个野生型个体和来自某一已经显示具有改善的硝酸盐摄取(阳性对照)的品系的12个个体，在每个96孔微滴定板上总计有72个个体。可使用基于网络的随机序列发生器测定每个平板上的品系顺序。不将种子种植在96孔微滴定板上的Row A或Row H中。每个实验使用四个平板，使得每个品系分析最多48株植物。在暗处、4℃条件下保持平板三天以使种子分层，然后在22℃，光照和黑暗交替条件下水平放置六天。光周期为16小时光照；8小时黑暗，平均光照强度为～200mmol/m²/s。旋转并振动每个架子中的平板。在第八或第九天(生长五天或六天)，通过记录培养基颜色为粉红色、桃色、黄色或无发芽来评估幼苗状态。然后移除每孔上的植物和/或种子。将每个培养基块状物转移到1.2mL微滴定管中，并置于96孔深微滴定板中的相应孔中。将包含2μM荧光素的等体积水加入到每个1.2mL微滴定管中。用土壤覆盖平板并用液体循环高压灭菌。将每个管充分混合，从每个管中取出等分试样并分析培养基中保留的硝酸盐的量。如果t检验显示某个品系与野生型对照具有显著差异(p＜0.05)，则可认为所述品系是验证过的具有改善的硝酸盐摄取品系。

实施例5E

验证包含候选拟南芥属基因(AT1G69270)的转基因品系氮摄取增加

如实施例5D所述筛选氮摄取增加的转基因种子。

与不过表达拟南芥属候选基因的野生型植物相比，过表达拟南芥属候选基因(AT1G69270)的转基因个体经验证不是具有改善的硝酸盐摄取品系。

实施例6

cDNA文库的组成；

cDNA克隆的分离和测序

cDNA文库可通过许多可用的方法中的任一种制备。例如，通过首先根据生产商的说明书(Stratagene Cloning Systems，La Jolla，CA)制备Uni-ZAP^TMXR载体中的cDNA文库，可将cDNA引入质粒载体中。根据Stratagene提供的说明书，将Uni-ZAP^TM XR文库转换成质粒文库。转换后，cDNA插入序列将会包含在质粒载体pBluescript中。此外，可用T4 DNA连接酶(New England Biolabs)将cDNA直接引入预切的Bluescript II SK(+)载体(Stratagene)中，然后根据生产商的说明书(GIBCO BRL Products)将其转染进DH10B细胞中。一旦cDNA插入序列处于质粒载体中，从随机选取的含重组pBluescript质粒的细菌菌落制备质粒DNA，或者用对插入的cDNA序列旁侧的载体序列特异性的引物，通过聚合酶链式反应来扩增插入的cDNA序列。将扩增的DNA插入序列或质粒DNA在引物标记法测序反应(dye-primer sequencingreaction)中进行测序，以产生部分cDNA序列(表达序列标记或“EST”；参见Adams等人，1991，Science 252：1651-1656)。用Perkin Elmer Model377荧光测序仪分析所得的EST。

用改进的转座规程来产生全长插入序列(FIS)数据。从归档的甘油原种作为单一菌落来回收鉴定了FIS的克隆，并通过碱性裂解来分离质粒DNA。将分离的DNA模板在基于PCR的测序反应中与载体引物M13正向和反向寡核苷酸反应并上样至自动化的测序仪上。通过与对其进行FIS查询的初始EST序列进行序列比对来确认克隆鉴定。

将确认的模板通过基于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Ty1转座因子(Devine和Boeke，1994，Nucleic Acids Res.22：3765-3772)的Primer Island转座试剂盒(PE Applied Biosystems，Foster City，CA)进行转座。该体外转座系统在整个一组大DNA分子中随机地放入独特的结合位点。随后将转座的DNA用于通过电穿孔转化DH10B电-感受态细胞(Gibco BRL/Life Technologies，Rockville，MD)。转座因子含有另外的可选标记(称为DHFR；Fling和Richards，1983，Nucleic AcidsRes.11：5147-5158)，使得能在琼脂平板上仅双重筛选含有整合的转座子的那些亚克隆。从每次转座反应随机地选择多个亚克隆，通过碱性裂解制备质粒DNA，并用对转座子内的结合位点特异性的独特引物从转座事件位点向外进行测序(ABI Prism dye-terminator ReadyReaction mix)。

收集序列数据(ABI Prism Collections)并用Phred和Phrap(Ewing，等人，1998，Genome Res.8：175-185；Ewing和Green，1998，Genome Res.8：186-194)进行装配。Phred是一种公用软件程序，该程序再次读取ABI序列数据，再次调出(recall)碱基，赋质量值，并将碱基序列(base call)和质量值写入可编辑的输出文件中。Phrap序列组装程序使用这些质量值来增加组装的序列重叠群的准确度。通过Consed序列编辑器(Gordon等人，1998，Genome Res.8：195-202)检查装配序列。

在一些克隆中，cDNA片段对应基因的3’-端的一部分并且不会涵盖整个开放阅读框。为了获得上游信息，使用两种不同规程中的一者。这两种方法中的第一种方法导致产生含有所需基因序列的部分的DNA片段，而第二种方法导致产生含有整个开放阅读框的片段。这两种方法均使用两轮PCR扩增以从一个或多个文库获得片段。有时基于以前的知识(特定的基因应该存在于某些组织中)选择文库，有时则进行随机地选择。获得相同基因的反应可平行地在若干文库中进行，或者在文库池中进行。文库池通常用3至5个不同的文库制备并且使其归一化而成为一致的稀释度。在第一轮扩增中，两种方法均使用载体特异性的(正向)引物，同时还使用基因特异性的(反向)引物，该正向引物对应位于克隆5’-端处的载体的一部分。第一种方法使用与已知基因序列的一部分互补的序列，而第二种方法使用与3’-非翻译区(也称为UTR)的一部分互补的基因特异性引物。在第二轮扩增中，两种方法均使用套式引物组。按照生产商的说明书，用市售试剂盒将所得DNA片段连接进pBluescript载体中。该试剂盒选自可得自包括Invitrogen^TM(Carlsbad，CA)、Promega Biotech(Madison，WI)和Gibco-BRL(Gaithersburg，MD)在内的一些供应商的许多试剂盒。如上所述，将质粒DNA通过碱性裂解方法分离并进行测序和用Phred/Phrap进行装配。

实施例7

cDNA克隆的鉴定

编码NDK样多肽的cDNA克隆通过这样鉴定：进行BLAST(基本的局部比对搜索工具)；Altschul等人，1993，J.Mol.Biol.215：403-410；还可参见国立卫生研究院国家医学图书馆的国家生物技术信息中心的万维网址上对BLAST算法的解释)，寻找与BLAST“nr”数据库中所包含序列(包括所有非冗余GenBank CDS翻译序列、源自3-维结构Brookhaven蛋白质数据银行(Protein Data Bank)、SWISS-PROT蛋白质序列数据库的最新的主要版本、EMBL和DDBJ数据库的序列)的相似性。采用国家生物技术信息中心(NCBI)提供的BLASTN算法，分析如实施例6中获得的cDNA序列与包含在“nr”数据库中的所有可公开获得的DNA序列的相似性。在所有的阅读框中翻译DNA并用NCBI提供的BLASTX算法(Gish和States，1993，Nat.Genet.3：266-272)比较与“nr”数据库中包含的所有可公开获得的蛋白质序列的相似性。为方便起见，通过BLAST计算仅仅偶然观察到cDNA序列与所搜索的数据库中所包含序列的匹配的P值-(概率)在本文报导为“pLog”值，它代表所报导的P值的负对数。因此，pLog值越大，cDNA序列和BLAST的“匹配”代表同源蛋白的可能性就越大。

将受分析的EST与上述Genbank数据库进行比较。通过使用BLASTn算法(Altschul等人，1997，Nucleic Acids Res.25：3389-3402.)对杜邦专利数据库比较具有序列同源共有区域或重叠区域的核苷酸序列，可找到含更5′端或3′端序列的EST。在两个或更多个核酸片段之间存在共有或重叠序列时，该序列可装配成单一的连续核苷酸序列，从而使最初的片段在5′或3′初始方向上延伸。一旦测定了最5′的EST后，可如实施例6中所述，通过全长插入序列来测定其完整的序列。可用tBLASTn算法，通过将已知基因(来自专有来源或公开数据库的已知基因)的氨基酸序列对EST数据库进行比较，可找到属于不同物种的同源基因。tBLASTn算法对所有6个阅读框都翻译了的核苷酸数据库进行氨基酸查询的搜索。该搜索允许不同物种之间的核苷酸密码子使用的差异，并且允许密码子简并。

实施例8

制备cDNA文库并且鉴定编码LLRK样多肽的cDNA克隆

如实施例6所述制备提供来自玉米不同组织的mRNA的cDNA文库。表2描述了该文库的特性。

表2

来自玉米的cDNA文库

文库	组织	克隆
			p0128	收集的初生和次生幼穗	p0128.cpiae89r:fis
cfp1n	收集的玉米雄穗V7至V12，全长富集的，标准化的。	cfp1n.pk018.k5b:fis
			cfp2n	授粉的和未授粉的玉米穗，集中的，全长富集的，标准化的。	cfp2n.pk056.k23a.fcfp2n.pk056.k23b
my	Myriad项目提交。	my.cco1n.pk077.a19
			cfp5n	玉米粒，收集阶段，全长富集的，标准化的	cfp5n.pk002.f22:fis

使用来自表1中列出的克隆的EST序列和SEQ ID NO：36进行的BLASTX搜索揭示所述cDNA编码的多肽与来自稻的LLRK样多肽的相似性(GI No.115455429、12500990和115438737分别对应于SEQ IDNO：23、24、和37)。表3示出了表2列出的克隆的全长cDNA插入序列(“全长插入序列”或“FIS”)的BLAST结果。每个cDNA插入序列编码完整蛋白或功能性蛋白(“完全基因序列”或“CGS”)。表3和表4也示出了使用Clustal V比对方法、使用默认参数计算的每对氨基酸序列的序列同一性百分比值：

表3

编码NDK样多肽同源物的多肽序列的BLAST结果和同一性百分比

序列	状况	NCBI GI	BLAST pLog打分	％同一性
					p0128.cpiae89r:fisSEQ ID NO：14	CGS	115455429(稻)SEQ ID NO：23	＞180	75.7
cfp1n.pk018.k5b:fisSEQ ID NO：16	CGS	125600990(稻)SEQ ID NO：24	＞180	83.4
					重叠群：my.cco1n.pk077.a19cfp2n.pk056.k23a.fcfp2n.pk056.k23b(SEQ ID NO：18)	CGS	115455429(稻)SEQ ID NO：23	164	60.6
cfp5n.pk002.f22:fis(SEQ ID NO：35)	CGS	115438737(稻)SEQ ID NO：37	＞180	90.2

图15A至15D示出以下全长氨基酸序列的多重比对：SEQ ID NO：15、17、19、22、和36，以及SEQ ID NO：23和24。图16给出图15A-15D中给出的每对序列的序列同一性百分比和趋异值。

用LASERGENE生物信息计算包(DNASTAR Inc.，Madison，WI)的Megalign程序进行序列比对和同一性百分比计算。用带默认参数(空位罚分＝10，空位长度罚分＝10)的Clustal比对方法(Higgins和Sharp，1989，CABIOS.5：151-153)进行序列的多重比对。使用Clustal方法的成对比对的默认参数为KTUPLE 1，空位罚分＝3，窗口＝5，DIAGONALSSAVED＝5。

序列比对和BLAST打分以及概率显示包含本发明cDNA克隆的核酸片段编码LLRK样多肽。

表4

编码与NDK和NDK样多肽同源的多肽的序列的BLAST结果

序列	状况	参照序列	Blast pLog打分	％同一性
					p0128.cpiae89r:fisSEQ ID NO：14	CGS	SEQ ID NO：4815，在WO2003008540-A2中	＞180	74.6
cfp1n.pk018.k5b:fisSEQ ID NO：16	CGS	SEQ ID NO：52915，在JP2005185101中	＞180	83.4
					重叠群：my.cco1n.pk077.a19cfp2n.pk056.k23a.fcfp2n.pk056.k23b(SEQ ID NO：18	CGS	SEQ ID NO：47357，在US2004034888-A1中	＞180	60.6
cfp5n.pk002.f22:fis(SEQ ID NO：35)	CGS	SEQ ID NO：64281，在US2007011783中	＞180	99.8

实施例9

制备含有拟南芥属前导基因(AT1G69270)的同源物的植物表达载体

可使用诸如BLAST(基本的局部比对搜索工具(Basic LocalAlignment Search Tool)；Altschul等人，J.Mol.Biol.215：403-410，1993；也参见美国国家卫生研究院(NationalInstitutes of Health)国立医学图书馆(National Library of Medicine)的国家生物技术信息中心(NationalCenter for Biotechnology Information)的万维网网址上对BLAST算法的解释)之类的序列比较算法，鉴定与前导llrk基因同源的序列。同源llrk样序列，如实施例8所述的序列，可通过任何一种以下方法进行PCR扩增。

方法1(基于RNA的方法)：如果llrk同源物的蛋白编码区域的5’和3’序列信息是可用的，可如实施例5A所述设计基因特异性引物。可以将RT-PCR用于植物RNA来获得含有RUM1蛋白编码区的核酸片段，该llrk蛋白编码区旁侧为attB1(SEQ ID NO：25)和attB2(SEQ ID NO：26)序列。引物可含有起始密码子上游的共有Kozak序列(CAACA)。

方法2(基于DNA的方法)：作为另外一种选择，如果编码LLRK多肽同源物的基因的cDNA克隆是可用的，可以PCR扩增完整cDNA插入序列(含有5′和3′非编码区)。可设计正向引物和反向引物，使它们分别或者含有attB1序列和在该cDNA插入序列前面的载体特异性序列或者含有attB2序列和在该cDNA插入序列后面的载体特异性序列。对于克隆进载体pBluescript SK+中的cDNA插入序列，可以使用正向引物VC062(SEQ ID NO：27)和反向引物VC063(SEQ ID NO：28)。

方法1和方法2可根据本领域技术人员已知的步骤进行修改。例如，方法1的引物可含有限制性酶切位点而不是attB1和attB2位点，用于后来将PCR产物克隆进含有attB1和attB2位点的载体内。另外，方法2可涉及从cDNA克隆、λ克隆、BAC克隆或基因组DNA扩增。

可利用BP重组反应将通过任一种上述方法获得的PCR产物与

供体载体(例如pDONR^TM/Zeo(Invitrogen^TM，图2；SEQ ID NO：2)或pDONR^TM221(Invitrogen^TM，图3；SEQ ID NO：3)组合。这种方法将细菌致死ccdB基因以及氯霉素抗性基因(CAM)从pDONR^TM221移除并定向地克隆了该在旁侧具有attB1和attB2位点的PCR产物而得到入门克隆(entry clone)。使用Invitrogen^TM

Clonase^TM技术，然后可将来自入门克隆的同源llrk样基因转移到合适的目的载体中以获得植物表达载体，所述载体用于拟南芥属、玉米和大豆，如pBC-Yellow(图4；SEQ ID NO：4)、PHP27840(图5；SEQ ID NO：5)或PHP23236(图6；SEQ ID NO：6)，以获取植物表达载体，分别用于拟南芥属、大豆和玉米。

作为另外一种选择，可进行多个入门克隆和合适的目的载体之间的MultiSite

LR重组反应以产生表达载体。该程序的一个实例在实施例14A中有所描述，该实施例描述了用于转化玉米品系的玉米表达载体的构建。

实施例10

用验证过的拟南芥属前导基因及其同源物制备大豆表达载体并转化大豆

为了检查所得表型，可将大豆植株转化以过表达验证过的拟南芥属基因(AT1G69270)和来自不同物种的对应同源物。

可将实施例5A和9中所述的入门克隆用于将每个基因定向克隆进PHP27840载体(图5，SEQ ID NO：5)中，使得该基因的表达处于SCP1启动子的控制下。

然后可用包含编码本多肽的序列的表达载体转化大豆胚。

为了诱导体细胞胚，可将子叶(长度为3-5mm，从大豆品种A2872的表面灭菌的未成熟种子解剖出来)于26℃在光下或黑暗下培养6-10周。然后切取体细胞胚(其产生次生胚)并将其置于合适的液体培养基内。在重复选择增殖为早期球形阶段胚的体细胞胚的簇后，按下面的描述保持该悬浮液。

可将大豆胚发生悬浮培养物在26℃下在摇床(150rpm)上的35mL液体培养基中保持，荧光光照采用16：8小时(白天/黑夜)的时间表。通过将大约35mg组织移植进35ml液体培养基中，每两周将培养物进行传代培养。

然后可通过基因枪轰击方法(Klein等人，Nature(London)327：70-73，1987；美国专利4,945,050)转化大豆胚发生悬浮培养物。杜邦公司的Biolistic^TM PDS1000/HE仪器(氦气改进型)可用于这些转化。

可用于帮助大豆转化的可选标记基因是由来自花椰菜花叶病毒的35S启动子(Odell等人，Nature 313：810-812，1985)、来自质粒pJR225(来自大肠杆菌；Gritz等人，Gene 25：179-188，1983)的潮霉素磷酸转移酶基因以及胭脂碱合成酶基因的3′区构成的嵌合基因，该胭脂碱合成酶基因来自根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)Ti质粒的T-DNA。可用于帮助大豆转化的另一种可选标记基因是来自大豆或拟南芥属的除草剂抗性乙酰乳酸合成酶(ALS)基因。ALS是支链氨基酸缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成中的第一共用酶。已经鉴定出ALS中的突变导致对三类ALS抑制剂中的某些或全部具有抗性(美国专利5,013,659；其全部内容以引用的方式并入本文)。除草剂抗性ALS基因的表达可处于SAM合成酶启动子(美国专利申请US-2003-0226166-A1；其全部内容以引用方式并入本文)的控制下。

将如下物质(依次)加入50μL 60mg/mL的1μm金颗粒悬浮液：5μLDNA(1μg/μL)、20μL亚精胺(0.1M)和50μL CaCl₂(2.5M)。然后搅拌该颗粒制备物三分钟，在微量离心机(microfuge)中离心10秒并除去上清液。然后将DNA包覆的颗粒在400μL 70％乙醇中洗涤一次并再悬浮于40μL无水乙醇中。可将DNA/颗粒悬浮液用超声波处理三次，每次一秒钟。然后将5μL该DNA-包覆的金颗粒装载至每个宏载体盘上。

将大约300-400mg两周大的悬浮培养物置于60×15mm的空培养皿中并用吸管将残留的液体从组织除去。对于每次转化实验，大约5-10板的组织受到正常轰击。膜破裂压力设定为1100psi并将腔室抽成28英寸汞柱的真空。将组织置于离阻挡网大约3.5英寸的地方并轰击三次。轰击后，可将组织分成两份并放回液体培养基中，如上所述进行培养。

轰击后五至七天，用新鲜培养基更换该液体培养基，并在轰击后七至十二天，用含有50mg/mL潮霉素的新鲜培养基更换。可每周更换这种选择培养基。轰击后七至八周，可观察到绿色的转化组织从未转化的坏死的胚芽发生簇长出来。移出分离的绿色组织并将其移植进单独的烧瓶中以产生新的、无性繁殖的、转化的胚发生悬浮培养物。可将每一新品系当成是独立的转化事件。然后可将这些悬浮培养物作为未成熟胚进行传代培养和维持，或者通过使单独体细胞胚成熟并萌发而再生成整株植株。

可通过在土壤中培养植物并在用

分析总根质量前洗涤根部来测量大豆增大的根构造。

然后可分析用验证过的基因转化大豆植株以研究相对于对照或参照植株的农学特性。例如，在多种环境条件(如氮限制条件、干旱等)下的氮利用效率、产量增强和/或稳定性。

实施例11

使用颗粒轰击用验证过的拟南芥属前导基因转化玉米

为了检查所得表型，可将大豆植株转化以过表达验证过的拟南芥属前导基因或来自不同物种的对应同源物。

可将实施例5A中所述的

入门克隆用于将每种基因定向克隆进玉米转化载体中。玉米基因的表达可处于组成型启动子的控制下，例如玉米泛素启动子(Christensen等人，Plant Mol.Biol.12：619-632，1989，以及Christensen等人，Plant Mol.Biol.18：675-689，1992)。

然后可通过下面的方法将上述重组DNA构建体引入玉米细胞中。可从源于近交玉米系H99和LH132杂交的发育中的颖果切取未成熟的玉米胚。在授粉后10至11天分离胚，这时它们长为1.0至1.5mm。然后将胚以轴线侧朝下放置并与琼脂糖硬化的N6培养基(Chu等人，Sci.Sin.Peking 18：659-668，1975)接触。将胚在27℃下保持在黑暗中。从这些未成熟胚的胚鳞增生出易脆的胚发生愈伤组织，该愈伤组织由未分化的细胞块构成，在胚柄结构上长有体细胞原胚状体和胚状体。可将从该原外植体分离的胚发生愈伤组织在N6培养基上培养，并每两至三周在这种培养基上进行传代培养。

可将质粒p35S/Ac(得自Peter Eckes博士，Hoechst Ag，Frankfurt，Germany)用于转化实验以便提供可选标记。该质粒含有pat基因(见欧洲专利公布0 242 236)，该基因编码草胺膦乙酰转移酶(PAT)。酶PAT赋予对除草性谷氨酰胺合成酶抑制剂例如草胺膦的抗性。p35S/Ac的pat基因处于来自花椰菜花叶病毒的35S启动子(Odell等人，Nature313：810-812(1985))和胭脂碱合成酶基因的3′区的控制下，该胭脂碱合成酶基因来自根癌农杆菌Ti质粒的T-DNA。

可将粒子轰击法(Klein等人，Nature 327：70-73(1987))用于将基因转移至愈伤组织培养细胞。根据该方法，利用下面的技术用DNA包覆金颗粒(直径1μm)。将10μg质粒DNA加入到50μL金颗粒悬浮液(每mL 60mg)中。将氯化钙(50μL的2.5M溶液)和亚精胺游离碱(20μL的1.0M溶液)加入到该颗粒中。在加入这些溶液过程中涡旋该悬浮液。10分钟后，将试管粗略地离心(以15,000rpm进行5秒钟)并除去上清液。将该颗粒再悬浮于200μL的无水乙醇中，再次离心并除去上清液。再次进行乙醇冲洗并将颗粒再悬浮于终体积为30μL的乙醇中。可将DNA包覆的金颗粒等分试样(5μL)置于Kapton^TM飞行圆盘(Bio-RadLabs)的中心。然后使用

PDS-1000/He(Bio-Rad Instruments，Hercules CA)，采用1000psi的氦气压、0.5cm的间隙距离以及1.0cm的飞行距离，将颗粒加速射入玉米组织中。

对于轰击，将胚发生组织置于琼脂糖硬化的N6培养基上的滤纸上。组织布置成薄薄一层，并覆盖直径为约5cm的圆形区域。然后可将包含组织的培养皿置于离阻挡网大约8cm的PDS-1000/He的腔室内。然后将该腔室中的空气抽出至28英寸汞柱的真空。利用在击波管中氦气压力达到1000psi时破裂的可破裂膜，宏载体被氦气冲击波加速。

轰击后七天，可将组织转移至N6培养基中，该培养基含有双丙氨磷(每升5mg)并缺少酪蛋白或脯氨酸。组织继续在这种培养基上缓慢生长。另外两周后，可将组织转移至含有bialaphos的新鲜N6培养基上。六周后，在某些装有补充了双丙氨磷的培养基的盘上，可辨别直径约1cm的区域上有活性生长的愈伤组织。当在选择培养基上传代培养时，这些愈伤组织可继续生长。

通过首先将组织簇转移到补充有0.2mg每升的2，4-D的N6培养基中，可从该转基因愈伤组织再生出植物。两周后，可将组织转移至再生培养基中(Fromm等人，Bio/Technology 8：833-839(1990))。

可再生出转基因的T0植株并按照下面的HTP步骤测定它们的表型。可收集T1种子。

可栽培T1植株并分析表型变化。利用图像分析可定量下面的参数：可收集并定量植株面积、体积、生长速率以及颜色分析。与合适的对照植物比较，导致根构造改变或上文列出的任何一种农学特性改变的表达构建体可被认为是拟南芥属前导基因在玉米中发挥功能以改变根构造或植物构造的证据。

此外，可通过直接转化或者从单独转化的品系基因渗入而将含有证实的拟南芥基因的重组DNA构建体导入玉米品系内。

可对转基因植株(或者是近交的或者是杂交的)进行更有力的基于田间的实验来研究在多种环境条件下(如营养物质的改变和水的可利用性)的根构造或植物构造、产量提高和/或抗根倒伏性。

也可进行后续的产量分析，以测定含有验证过的拟南芥属前导基因的植物与不包含验证过的拟南芥属前导基因的对照(或参照)植物相比较时是否具有改善的产量表现。包含验证过的拟南芥属前导基因的植物相对于对照植物将具有改善的产量，优选地在不利环境条件下产量损失减少50％，或在不同环境条件下相对于对照植物将具有提高的产量。

实施例12

电穿孔根癌农杆菌LBA4404

将电穿孔感受态细胞(40μl)，例如根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404(含有PHP10523)在冰上解冻(20-30分钟)。PHP10523含有用于T-DNA转移的VIR基因、农杆菌属的低拷贝数质粒复制起始区、四环素抗性基因以及用于体内DNA生物分子重组的cos位点。同时，将电穿孔管(electroporation cuvette)在冰上冷却。将该电穿孔仪的设置调节至2.1kV。

将DNA等分试样(0.5μL JT(US 7,087,812)亲代DNA，在低盐缓冲液或双蒸H₂O中的浓度为0.2μg-1.0μg)与解冻的农杆菌细胞混合，同时仍然保持在冰上。将该混合物转移至电穿孔管的底部并静止保持在冰上1-2分钟。通过按下“pulse(脉冲)”键两次(理想的是获得4.0毫秒的脉冲)对细胞进行电穿孔(Eppendorf电穿孔仪2510)。随后，将0.5ml 2xYT培养基(或SOCmedium)加入到电穿孔管并转移至15mlFalcon管中。将细胞在28-30℃、200-250rpm下培养3小时。

将250μl的等分试样散布在#30B(YM+50μg/mL奇放线菌素)板上并在28-30℃下培养3天。为了增加转化体的数目，可进行如下两个可选步骤中的其中一个：

选择1：用30μl 15mg/ml的利福平覆盖平板。LBA4404具有针对利福平的染色体抗性基因。这种附加的选择消除了在使用较差的LBA4404感受态细胞制备物时观察到的一些污染克隆。

选择2：进行两次重复的电穿孔以补偿较差的电感受态细胞。

转化体的鉴定：

选取四个独立的克隆并划痕接种在AB基本培养基+50mg/mL奇放线菌素的平板(#12S培养基)上用于分离单个克隆。将平板在28℃下孵育2至3天。

对于每个推定的共整合体，选取单个克隆并将其接种在4ml具有50mg/l的奇放线菌素的#60A中。将该混合物在28℃下摇动培养24小时。采用Qiagen Miniprep+可选的PB洗涤，从4ml培养物分离出质粒DNA。将DNA在30μl中洗提。如上所述，将2μl的等分试样用于电穿孔20μlDH10b+20μl ddH₂O。

可任选地，可将15μl等分试样用于转化75-100μl的Invitrogen^TMLibrary Efficiency DH5α。将细胞散布在LB培养基+50mg/mL奇放线菌素的平板(#34T培养基)上并将其在37℃下培养过夜。

对于每个推定的共整合体，选取3至4个独立的克隆并将其接种在4ml具有50μg/ml奇放线菌素的2xYT(#60A)上。将细胞在37℃下摇晃培养过夜。

使用

Miniprep，用任选PB洗涤液(稀释成50μl)从4mL培养物中分离质粒DNA，并且8μl质粒DNA用SalI(使用JT亲本和PHP10523作对照物)进行消化。

对于4个质粒，利用限制性内切酶BamHI、EcoRI和HindIII再进行三次消化(使用亲代DNA和PHP10523作为对照)，这4个质粒代表2种具有正确SalI消化模式的推定共整合体。推荐电凝胶(Electronic gel)用于比较。

作为另一种选择，对于高通量应用，例如针对Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系(实施例15-17)所描述的，代替通过限制性酶切分析来评价所得的共整合载体，可将三个克隆同时用于如实施例13所述的感染步骤。

实施例13

农杆菌介导的玉米的转化

农杆菌介导的玉米转化基本上按照Zhao等人，Meth.Mol.Biol.318：315-323(2006)中描述的方法进行(还可参见Zhao等人，Mol.Breed.8：323-333(2001)和1999年11月9日公布的美国专利5,981,840，以引用的方式将该文献并入本文)。该转化过程涉及细菌接种、共培养、静止期、选择以及植株再生。

1.未成熟胚芽制备

从颖果切取未成熟胚并置于装有2mL PHI-A培养基的2mL微型管中。

2.中农杆菌对胚胎的感染和共培养

2.1感染步骤

用1mL微量吸移管移出PHI-A培养基并加入1mL农杆菌悬浮液。轻轻倒置该管进行混合。将该混合物在室温下培养5分钟。

2.2共培养步骤

用1mL微量吸移管将农杆菌悬浮液从感染步骤中移出。使用无菌刮刀将胚从管中刮出并转移到100×15mm培养皿中的PHI-B培养基的平板中。测定胚的朝向，使得胚轴在培养基表面上朝下。将具有胚的平板在20℃下于黑暗中培养3天。L-半胱氨酸可用于共培养阶段。采用标准二元载体，补充有100-400mg/L L-半胱氨酸的共培养培养基对于回收稳定的转基因事件是至关重要的。

3.推定的转基因事件的选择

向在100×15mm培养皿中的PHI-D培养基的平板中转移10个胚芽，保持朝向，并且用parafilm将培养皿密封。将平板在黑暗中于28℃下培养。预计在6-8周将看见活性生长的推定事件(作为浅黄色胚组织)。不产生事件的胚可能是棕色和坏死的，并且几乎看不见脆性组织生长。取决于生长速率，以2-3周的间隔将推定的转基因胚组织转移到新鲜的PHI-D平板上进行传代培养。记录事件。

4.T0植株的再生

将在PHI-D培养基上增殖的胚组织转移至100×25mm培养皿中的PHI-E培养基(体细胞胚成熟培养基)进行传代培养并在28℃下，在黑暗中培养约10至18天，直至体细胞胚成熟。将具有良好限定的盾片和胚芽鞘的个体成熟体细胞胚芽转移到PHI-F胚芽发芽培养基中，并且在28℃下于光中(约80μE，来自冷光灯或同等荧光灯)培养。在7-10天，将约10cm高的再生植株盆载于园艺混合物中，并使用标准园艺方法使其受冷而变得耐寒。

用于植物转化的培养基

1.PHI-A：4g/L的CHU基础盐、1.0mL/L的1000×Eriksson维生素混合物、0.5mg/L的盐酸硫胺素、1.5mg/L的2，4-D、0.69g/L的L-脯氨酸、68.5g/L的蔗糖、36g/L的葡萄糖，pH为5.2。在使用前加入100μM的乙酰丁香酮，过滤灭菌。

2.PHI-B：无葡萄糖的PHI-A，2，4-D增加至2mg/L，蔗糖减少至30g/L并且补充有0.85mg/L的硝酸银(过滤灭菌)，3.0g/L的固化剂(gelrite)，100μM的乙酰丁香酮(过滤灭菌)，pH为5.8。

3.PHI-C：无固化剂和乙酰丁香酮的PHI-B，2，4-D减少至1.5mg/L并且补充有8.0g/L的琼脂，0.5g/L的Ms-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液，100mg/L的羧苄青霉素(过滤灭菌)。

4.PHI-D：PHI-C补充3mg/L bialaphos(过滤灭菌的)。

5.PHI-E：4.3g/L的Murashige and Skoog(MS)盐(Gibco，BRL11117-074)、0.5mg/L的烟酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.1g/L的肌醇、0.5mg/L的玉米素(Sigma，商品目录号：Z-0164)、1mg/L的吲哚乙酸(IAA)、26.4μg/L的脱落酸(ABA)、60g/L的蔗糖、3mg/L的双丙氨磷(过滤灭菌)、100mg/L的羧苄青霉素(过滤灭菌)、8g/L的琼脂，pH为5.6。

6.PHI-F：不含玉米素、IAA、ABA的PHI-E；蔗糖减少至40g/L；用1.5g/L的固化剂代替琼脂；pH为5.6。

通过首先将组织簇转移到补充有0.2mg每升的2，4-D的N6培养基中，可从该转基因愈伤组织再生出植物。两周后，可将组织转移至再生培养基(Fromm等人，(1990)Bio/Technology 8：833-839)中。

可进行对转基因T0植株和T1植株的表型分析。

可分析T1植株表型的变化。利用图像分析，可在植株生长过程中在多个时间点，分析T1植株在植株面积、体积、生长速率方面的表型变化并且可进行颜色分析。可如实施例20中所述分析根构造的改变。

可对农学特性的改变进行后续分析，以测定含有验证过的拟南芥属前导基因的植株在与不含有验证过的拟南芥属前导基因的对照(或参照)植株比较时是否具有至少一种农学特性的改善。还可在多种环境条件下研究改变。

导致根构造显著改变的表达构建体将被认为是拟南芥属基因在玉米中发挥功能以改变根构造的证据。

实施例14A

利用农杆菌介导的转化构建具有拟南芥属前导基因(AT1G69270)的玉米表达载体

用拟南芥属llrk基因(AT1G69270)在NAS2(SEQ ID NO：30)和GOS2(SEQ ID NO：31)启动子控制下制备玉米表达载体。PINII是终止子(SEQ ID NO：34)使用Invitrogen^TM

技术，如实施例5A所述制备的、包含拟南芥属llrk基因(AT1G69270)的入门克隆PHP28738被用于独立的

LR反应：

1)组成型玉米GOS2启动子入门克隆(PHP28408，图11，SEQ IDNO：11)和PinII终止子入门克隆(PHP20234，图9，SEQ ID NO：9)形成目的载体PHP28529(图10，SEQ ID NO：10)。将所得载体命名为PHP29302。

2)根玉米NAS2启动子入门克隆(PHP22020，图12，SEQ ID NO：12)和PinII终止子入门克隆(PHP20234，图9，SEQ ID NO：9)形成目的载体PHP28529(图10，SEQ ID NO：10)。将所得载体命名为PHP29303。

目的载体PHP28529被加到每个最终载体(PHP28911和PHP28912)中，也是：

1)RD29A启动子::黄色荧光蛋白::PinII终止子盒，用于拟南芥属种子分选。

2)泛素启动子::moPAT/红色荧光蛋白融合基因::PinII终止子盒，用于转化选择和玉米种子分选。

实施例14B

制备包含拟南芥属llrk基因及其同源物的玉米表达构建体

可使用实施例5A和14A所述的程序将拟南芥属基因及其来自玉米和其他物种的对应同源物(表1和SEQ ID NO：35)转化到玉米品系中。能如实施例5A和14A所述制备具有拟南芥属llrk基因及其来自玉米和其他物种的对应同源物(表1和SEQ ID NO：35)的玉米表达载体。除了GOS2或NAS2启动子以外，其他启动子，例如(但不限于)泛素启动子、S2A和S2B启动子、玉米ROOTMET2启动子、玉米Cyclo、CR1BIO、CRWAQ81以及玉米ZRP2.4447，也可用于引导llrk和llrk样基因在玉米中的表达。此外，多种终止子，例如但不限于PINII终止子，可用于完成所关注基因在玉米中的表达。

实施例14C

使用农杆菌介导转化，用拟南芥属前导基因(AT1G69270)和来自其他物种的对应同源物来转化玉米品系

然后可将最终载体(玉米中表达的载体，实施例14A和B)分别电穿孔进入包含PHP10523的LBA4404农杆菌(图7；SEQ ID NO：7，Komari等人Plant J 10：165-174(1996)，NCBI GI：59797027)中，以产生用于玉米转化的共整合载体。该共整合载体是通过最终载体(玉米表达载体)与PHP10523的重组(通过每个载体上含有的COS重组位点)而形成。除了实施例14A-B中所述的表达盒以外，该共整合载体还含有农杆菌菌株以及农杆菌介导转化所需的基因(TET、TET、TRFA、ORI终止子、CTL、ORI V、VIR C1、VIR C2、VIR G、VIR B)。转化玉米品系可如实施例13所述进行。

实施例15

用于转化Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系的目的载体PHP23236和 PHP29635的制备

目的载体PHP23236(图6，SEQ ID NO：6)是通过用质粒PHP23235(图8，SEQ ID NO：8)转化包含质粒PHP10523(图7，SEQ ID NO：7)的农杆菌菌株LBA4404并分离所得的共整合产物而获得。目的载体PHP23236可被用于如实施例16所述的与入门克隆的重组反应，以产生用于转化Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系的玉米表达载体。所关注的基因的表达是处于泛素启动子(SEQ ID NO：32)的控制之下。

PHP29635(图13，SEQ ID NO：13)是通过用质粒PIIOXS2a-FRT87(ni)m(图14，SEQ ID NO：29)转化包含质粒PHP10523的农杆菌菌株LBA4404并分离所得的共整合产物而获得。目的载体PHP29635可被用于如实施例16所述的与入门克隆的重组反应，以产生用于转化Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系的玉米表达载体。所关注的基因的表达是处于S2A启动子(SEQ ID NO：33)的控制之下。

实施例16

用于转化Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系的质粒的制备

使用Invitrogen^TM

重组技术，可如实施例5A和9所述制备包含拟南芥属llrk基因(AT1G69270)或玉米llrk样同源物的入门克隆，该克隆用于定向克隆每个基因进入目的载体PHP23236(实施例15)用于在泛素启动子下表达，或进入目的载体PHP29635(实施例15)用于在S2A启动子下表达。每一种表达载体都是用于农杆菌介导玉米转化的T-DNA二元载体。

Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系可如实施例17中所述用表达构建体转化。

实施例17

用验证过的拟南芥属前导基因和来自其他物种的对应同源物转化Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系

为了检查所得表型，玉米植株可如实施例16所述进行转化以过表达拟南芥属AT1G69270基因和来自其他物种的同源物，如表1和SEQ IDNO：35中列出的基因。除了如实施例16所述的启动子之外，其他启动子，例如S2A和S2B启动子、玉米ROOTMET2启动子、玉米Cyclo、CRlBIO、CRWAQ81以及玉米ZRP2.4447，也可用于引导llrk和llrk样基因在玉米中的表达。此外，多种终止子，例如但不限于PINII终止子，可用于完成所关注基因在Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系中的表达。

受体植株

受体植株细胞可来自具有短的生活周期(“快速循环”)、大小减少以及转化潜能高的单一玉米品系。对玉米典型的这些植株细胞是来自可公开获得的Gaspe Bay Flint(GBF)品系品种的植株细胞。一种可能的候选植株品系品种是GBF×QTM(Quick Turnaround Maize(快速周转玉米)，选择用于在温室条件下生长的Gaspe Bay Flint的可公开获得形式)的F1杂交种，其在Tomes等人的美国专利申请公开2003/0221212中有所公开。从该品系获得的转基因植株具有如此小的大小使得它们可在4英寸的盆中生长(是正常大小的玉米植株所需空间的1/4)并且它们在少于2.5个月时间内成熟。(传统上，一旦转基因植株适应温室后需要3.5个月来获得转基因T0种子。)另一合适的品系是GS3(高度可转化的品系)×Gaspe Flint的双单倍体品系。还有另一种合适的品系是携带引起较早开花、高度减小或这两者的转基因的可转化的优良近交系。

转化规程

任何合适的方法可用于将转基因引入玉米细胞中，包括但不限于利用基于农杆菌载体的接种类型的步骤，如实施例9所述。转化可在受体(靶标)植株的未成熟胚上进行。

精确的生长和植株跟踪

将由转化的玉米胚产生的转基因(T0)植株的事件群体在受控的温室环境中栽培，该温室使用改良的随机分块(block)设计以降低或消除环境误差。随机分块设计是这样一种植株布局，在该布局中，实验植株被分成组(如，每组30株植株)，称为块，而每株植株随块被随机分配一个位置。

对于一组30株植株，24株转化的实验植株和6株对照植株(具有设定好的表型的植株)(总起来说称为“重复组”)被置于盆中，这些盆在位于温室内的桌子上布置成阵列(也叫做重复组或块)。每株植株(对照植株或实验植株)随块被随机分配一个位置，所述的块映射一个唯一的、温室物理位置以及映射该重复组。在单次实验中多个30株植株的重复组中的每一个可栽培在相同的温室中。应该测定重复组的布局(布置方式)以使对空间的要求最小以及温室内的环境影响最小。这样一种布局可称为压缩的温室布局。

对于加入特定的对照组的一种替代方法是鉴定不表达所关注基因的那些转基因植株。可将诸如RT-PCR之类的多种技术应用于定量评估引入基因的表达水平。可将不表达转基因的T0植株与表达转基因的那些植株进行比较。

在整个评价过程中鉴定和跟踪事件群体中的每株植株，并且从那些植株收集的数据自动与那些植株相关联，使得所搜集的数据可与由该植株携带的转基因关联。例如，每个植株容器具有机器可读的标签(例如通用货单代码(UPC)条形码)，该标签包含了关于植物身份的信息，身份信息继而又与温室位置相关，使得从植物获得的数据可自动与该植物相关联。

作为另外一种选择，可使用任何有效的、机器可读的植物识别系统，例如二维矩阵代码或甚至是射频识别标签(RFID)，其中数据被接收并由射频接收器/处理器进行翻译。参见美国公布的专利申请2004/0122592，其以引用方式并入本文。

利用三维成像进行表型分析

对T0事件群体中的每株温室植株(包括任何对照植株)分析所关注的农学特性，并且以这样一种方式记录或存储每株植株的农学数据，该方式使得数据与该植株的辨识数据(见上面)相关联。可利用与上述类似的实验设计，可在T1代中完成对表型(基因效应)的确认。

在植物的整个温室生活周期中，利用定量的非破坏性成像技术在表型水平上来分析T0植株以评估所关注的性状。优选的是，将数字成像分析仪用于整株植物的自动多维分析。成像可在温室内进行。将两个摄像系统(位于顶部和侧面)和用于旋转植物的装置用于从所有侧面观察植物和成像。从每株植物的顶部、前面和侧面采集图像。所有的三个图像一起提供了足够的信息用于评价每株植物的生物量、大小和形态。

由于植物在第一片叶片从土壤显现出来时到植物处于它们发育的末期时大小的改变，最好是从顶部以较高的放大倍率记录植物发育的早期。这可通过利用完全由成像软件控制的自动变焦镜头系统来完成。

在单次成像分析操纵中，进行如下事件：(1)将植株传送至分析仪区域内，旋转360度以便其机器可读标签可被读取，并且让其保持静止直至其叶片停止移动；(2)获取侧面图像并将其输入数据库；(3)将植株旋转90度并再次让其保持静止直至其叶片停止移动，以及(4)将该植株传送出分析仪。

每24小时的周期让植物至少6个小时处于黑暗以便具有正常的白天/黑夜周期。

成像仪器

可使用任何合适的成像仪器，包括但不限于可从LemnaTec GmbH(Wurselen，Germany)商购获得的光谱数字成像仪。获取图像并用具有1/2″IT Progressive Scan IEE CCD成像设备的LemnaTec ScanalyzerHTS LT-0001-2进行分析。该成像照相机可配备有自动变焦、自动调节光圈和自动聚焦。可利用LemnaTec软件设定所有的照相机设置。优选的是，对于主要组成成像分析仪的仪器差异小于约5％，对于次要组成成像分析仪的仪器差异小于约10％。

软件

成像分析系统包括用于颜色和构造分析的LemnaTec HTS Bonit软件程序和用于存储约500,000次分析的数据(包括分析数据)的服务器数据库。原始图像和分析过的图像储存在一起以允许用户根据需要进行再次分析。可将数据库连接至成像硬件用于自动的数据收集和存储。多种可商购获得的软件系统(例如Matlab和其它软件)可用于定量解释图像数据，并且可将这些软件体系中的任何一种应用于所述图像数据集。

传送系统

具有植物旋转装置的传送系统可用于将植物传送至成像区域并在成像过程中选择植物。例如，将最多4株植物(每株最高高度为1.5m)装上汽车，该汽车在循环的传送系统上行进并通过成像测量区域。在这种情况下，该单位(成像分析仪和传送环线)的总占有面积为约5m×5m。

可扩大传送系统以同时容纳更多植物。将植物沿传送环线传送至成像区域并对每株植物分析最多50秒。获取植物的三个视图。传送系统以及成像设备应该能够用于温室环境条件。

照明

任何合适的照明模式可用于图像采集。例如，可在暗背景上使用顶部照明。作为另外一种选择，可采用使用白色背景的顶部照明和背部照明的组合。应该将被照亮的区域围起来以确保恒定的照明条件。遮蔽物应该长于测量区域使得能保持恒定的光条件而不需要打开和关闭门。作为另一种选择，可以变化照明以引起转基因(如，绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP))的激发或者引起内源性(如叶绿素)荧光基团的激发。

基于三维成像的生物量评价

为了更好地评价生物量，应该从至少三个轴(优选顶部视图和两个侧面(侧面1和侧面2)视图)来获取植物图像。然后分析这些图像以将植物从背景(盆和花粉控制袋(如果适用的话))分离。可通过如下计算评价植物的体积：

在上面的等式中，体积和面积的单位是“任意单位”。在该系统中，任意单位完全足以检测基因对植物大小和生长影响，因为所需的是检测与实验平均值或对照平均值的差值(正较大和负较小两者)。大小(如面积)的任意单位可通过将物理参照加入到成像过程而轻易地转化成物理量度。例如，可在顶部成像过程和侧面成像过程两者中均包括已知面积的物理参照。基于这些物理参照的面积，可测定转换因子以允许从像素转换为面积单位，例如平方厘米(cm²)。物理参照可以是或可以不是独立的样本。例如，具有已知直径和高度的盆足可用作物理参照。

颜色分类

成像技术还可用于测定植物颜色以及用于将植物颜色归为各种衍生类型。将图像颜色归属于颜色类型是LemnaTec软件的固有特色。使用其他图像分析软件系统，可通过多种计算方法测定颜色分类。

对于植物大小和生长参数的测定，一种有用的分类方案是定义一种单一颜色方案，包括绿色的两种或三种色调，此外，还有关于缺绿病、坏死和漂白(在这些条件出现时)的颜色类型。还使用了背景颜色类型，其包括图像中的非植物颜色(例如盆和土壤颜色)，并将这些像素特别地从测定大小中排除。在受控的恒定照明下分析植物，使得可以定量一株植物内随时间推移的任何改变，或者植物之间或植物不同分枝之间的任何改变(如季节差异)。

除了其在测定植物的大小、生长中的有效性以外，颜色分类还可用于评估其他产量构成性状。对于这些其他产量构成性状，可使用另外的颜色分离方案。例如，称为“保绿度(staygreen)”的性状(已经将其与产量的提高相关联)可通过颜色分类来评估，该颜色分类将绿色色调与黄色和棕色色调(其指示老化的组织)相分离。通过将这种颜色分类应用于在T0或T1植物生活周期末获取的图像，可鉴定绿色的量相对于黄色和棕色(例如，可表示为绿色/黄色比率)增加的植物。这种绿色/黄色比率具有显著差异的植物可被鉴定为携带影响这种重要农学特性的转基因。

熟练的植物学家将认识到可指示植物健康或应激反应的其他植物颜色(花青素)的出现，以及认识到其他颜色分类方案可提供对基因在与这些响应相关的性状方面的作用的进一步度量。

植物结构分析

改变植物构造参数的转基因也可用本发明鉴定，包括诸如最大高度和宽度、节间距离、叶与茎之间的角度、在节处开始的叶片数以及叶片长度。LemnaTec系统软件可如下用于测定植物构造。在第一成像步骤中将植物简化至其主要的几何构造，并且随后基于该图像可进行不同构造参数的参数化鉴定。或者是单独地或者是组合地修改任何这些构造参数的转基因可通过应用此前所述的统计方法来鉴定。

花粉脱落日期

花粉脱落日期是转基因植物中要分析的一个重要参数，并且可通过活性雄花第一次出现在植物上来测定。为了找到雄花目标，通过颜色对茎的上端进行分类以检测黄色或紫色花药。然后将这种颜色分类分析用于定义活性花，活性花继而可用于计算花粉脱落日期。

作为另外一种选择，花粉脱落日期和其他易于在视觉上检测到的植物属性(如授粉日期、第一穗丝日期)可由负责进行植物看护的工作任人员来记录。为了使数据完整性和过程效率最大化，通过利用相同的由LemnaTec光谱数字分析设备利用的条形码来跟踪该数据。可将具有条形码阅读器的电脑、掌上设备或笔记本电脑用于使记录观察时间、植物标识符的数据捕捉变得容易，以及使捕捉数据的操作者感觉舒适。

植物的取向

以接近商业栽培的密度种植的成熟玉米植物通常具有平面的构造。也就是说，植物具有一可清晰分辨的宽的侧面和窄的侧面。对来自植物宽侧的图像进行测定。对于每株植物，给其赋予一个明确界定的基本取向以获得宽侧图像与窄侧(edgewise)图像之间的最大差别。将顶部图像用于测定植物的主轴，而将额外的旋转装置用于在开始主图像采集前将植物转至合适的取向。

实施例18

在氮限制条件下筛选Gaspe Bav Flint衍生的玉米品系

一些转基因植物将含有两个或三个剂量的Gaspe Flint-3与一个剂量的GS3(GS3/(Gaspe-3)2X或GS3/(Gaspe-3)3X)，并且对于显性转基因将会以1∶1分离。其他转基因植物将是常规近交系，并将被用于顶交以生成测试杂交体。将植物在Turface中栽培，每天用1mM KNO₃生长培养基和2mM KNO₃或更高的生长培养基浇洒四次(见图17)。在1mM KNO₃培养基中培养的对照植物的绿度较小，产生较少的生物量并且在开花期具有较小的穗。Gaspe衍生的品系将生长至开花期，然而常规杂交种和近交系将生长至V4和V5阶段。

用统计学测定处理株之间所观察到的差异是否是显著差异。图18示出了一种方法，该方法将字母放在数值后面。同一列中其后具有相同字母(不是字母组)的那些值不具有显著的差异。使用该方法，如果在一列中的值的后面没有字母，则该列中的这些值的任何之间不存在显著的差异，换句话讲，该列中的所有这些值是均等的。与无效转基因相比较，转基因的表达将导致植物在1mM KNO₃中具有改善的植物生长。因此生物量和绿度数据(如实施例17所述)将在取样(Gaspe在开花期，而其他的品系在V4-V5阶段)时间采集，并与无效转基因植物比较。此外，将在基本组织中分析植物中的总氮。在开花期的生长、绿度、氮积聚和穗大小的改善将指示氮利用效率提高。

实施例19

具有经验证的拟南芥属前导基因(AT1G69270)的玉米品系的产量分析

可通过直接转化或者从单独转化的品系基因渗入而将含有证实的拟南芥属基因的重组DNA构建体导入玉米品系内。

可以将转基因植物(自交系或杂种)进行更强的基于田间的试验，以研究在不同环境条件(例如改变水和营养物质可利用性)下的产量增加和/或稳定性。

可对产量进行后续分析以测定含有验证过的拟南芥属前导基因的植株在与不含有验证过的拟南芥属前导基因的对照植株比较时，在不同环境条件下是否具有产量的改善。可以测得这两种植物的产量都有所减少。包含验证过的拟南芥属前导基因的植物具有相对于对照植物更少的产量损失，优选50％更少的产量损失。

实施例20

测定玉米根构造改变的测定法

测定转基因玉米植物在幼苗期、花期或成熟期的根构造改变。测量玉米植物的根构造改变的测定法包括但不限于下面概述的方法。为了便于手动或自动地测定根构造改变，可让玉米植物在透明的盆中生长。

1)根质量(干重)。让植物在Turface中生长。将烘干的根和根组织称重并计算根冠比。

2)侧根分枝的程度。侧根分枝的程度(如侧根数量、侧根长度)通过这样测定：从完整的根系进行二次取样，将样本用平面扫描器或数码相机成像并用WinRHIZO^TM软件(Regent Instruments Inc.)分析。

3)根带宽度测量。根带是植物成熟时在温室栽培盆的底部形成的根带或根量。测量成熟时根带的厚度(以mm为单位)，作为对根量的粗略评价。

4)节生根的计数。从支持培养基(support medium)(如盆栽混合物(potting mix))中分离出根后，可测定上部节位处出现的冠根数。另外，可测量冠根和/或支柱根的角度。对节生根和节生根的分枝量的数值分析形成对上述手动方法的另一种延伸。

对提取的有关根表型的所有数据进行统计分析(通常为t检验)，以将转基因根与非转基因姊妹株植株的根进行比较。在多个事件和/或构建体涉及该分析的情况下，还可使用单因素方差分析。

实施例21

氮利用效率幼苗检测分析法

使用颜色标记物将转基因事件的种子分成转基因种子(杂合子)和无效转基因种子。进行两组不同的随机分配处理，使用所有处理的9个平行测定，使每个随机分块(block)有排列成6排9列的54个盆。

将每个处理的两个种子种在4英寸的方盆中，盆中包含在8英寸交错中心上的Turface，每天用包含以下营养物质的溶液浇灌四次：

1mM CaCl₂ 2mM MgSO₄ 0.5mM KH₂PO₄ 83ppm Sprint330

3mM KCl 1mM KNO₃ 1μM ZnSO₄ 1μM MnCl₂

3μM H₃BO₄ 1μM MnCl₂ 0.1μM CuSO₄ 0.1μM NaMoO₄

植物出苗后，将其减少到每盆一个种子。在收获时从盆中移除植株，并且将Turface从根部洗脱。使根与苗分开，把根置于纸袋中并且在70℃干燥70小时。将干燥后的植株部分(根和苗)称重并置于50mL的圆锥管中，管中有大约20 5/32英寸的钢球，在涂料振荡器中进行振荡研磨。将大约30mg研磨组织(记录重量用于后续的调节)在2mL 20％H₂O₂和6MH₂SO₄中水解30分钟，水解温度为170℃。冷却后加水至20mL，充分混合，取出50μL等分试样并将其加入950μL 1M Na₂CO₃中。通过将100μL该溶液置于96孔板的每个孔中，然后加入50μL OPA溶液，使用该溶液中的氨评估减少的总植株氮。测定荧光强度，激发(excitation)＝360nM/发射(emission)＝530nM，并且与溶解在相似溶液并用OPA溶液处理过的NH₄Cl标准品进行比较。

OPA溶液-5μL巯基乙醇+1mL OPA储备液

OPA储备液-50mg邻苯二醛(OPA-Sigma#P0657)溶解于1.5mL甲醇+4.4mL 1MBorate缓冲液pH9.5(3.09g H₃BO₄+1g NaOH，溶于50mL水中)+0.55mL 20％SDS

使用这些数据，测量以下参数，并且使用Student t检验比较参数平均值与无效参数平均值：

植株生物重量

根生物量

苗生物量

根/苗比率

植株氮浓度

植株总氮

在每个随机分块中使用最近邻计算以及使用完全随机设计(CRD)模型的方差分析(Analysis of Variance，ANOVA)计算差异。使用F统计，通过将总随机分块处理平均面积除以总随机分块误差平均面积计算每个随机分块的总处理效应。计算更大的Student t检验的概率用于比较每个转基因平均值与合适的无效转基因(或者批构建体或单个事件的无效转基因平均值)平均值。使用最小值(P＜t)0.1作为临界值。

实施例22

包含拟南芥属llrk基因的玉米幼苗的根与来自不包含llrk基因的幼苗的根的比较分析

如实施例14A所述制备玉米表达载体，该载体包含玉米NAS2启动子(SEQ ID NO：30)或玉米GOS2启动子(SEQ ID NO：31)以及拟南芥属llrk基因(AT1G69270)。

如实施例14C所述经由农杆菌介导的转化，通过制备共合体载体(分别是PHP29405和PHP29414)完成玉米转化，并使用如实施例20所述的幼苗检测分析法对根进行检测。

在温室实验中检测分析所有10个来自构建体PHP29405((ZM-NAS2::AT-RPK1)的事件，其中每个事件使9个植株在Turface培养基中生长至V4阶段。种子来自顶交杂交种子。实验中的对照物是9株生长至相同阶段的批无效植株(非转基因的分离植株)。使用完全随机分组设计种植种子。在种植后3周收获植株，此时它们达到V4阶段。洗涤根部并从苗中分开收集。在用天平称量干重之前，所有样本进行烘干。

发现在与批无效对照植株进行比较时，总计三(3)个事件具有显著的根干重变化、3个事件具有显著的苗干重变化、3个事件具有显著的总植株干重变化，P值小于0.1。

表5示出在每个转基因事件和对照之间的t检验分析的显著性。示出每个特性的P值，如根干重、苗干重、和根苗比率。粗体字指示转基因事件具有比对照更高的值，也用星号(*)指示。那些在与对照进行比较时P值大于0.1的事件用“NS”表示(不显著)。

表5

事件	根干重	苗干重	植株干重
				1	0.038	NS	NS
2	NS	NS	NS
				3	NS	NS	NS
4	0.076^*	0.076^*	0.070^*
				5	0.063^*	NS	NS
6	NS	NS	NS
				7	＜0.001^*	＜0.001^*	＜0.001^*
8	NS	NS	NS
				9	NS	NS	NS
10	NS	0.047^*	0.094^*

实施例23

在田间标准氮和低氮条件下的转基因杂交体产量测试

在2008季，在Johnston，Iowa的农场中进行田间实验。测试十个(10)递送控制拟南芥属rpk1基因(AT1G69270)的玉米NAS2启动子和对照的转基因事件。对照是批杂交所有10个事件的非无效转基因与无效转基因。所有事件是由常见自交系受试者生成的IntroEF09B ETX品系的顶交杂交体。

施加两次处理，一次是在标准氮条件下进行处理，另一次是在氮耗尽(stress)环境下进行处理。在标准处理中，以260lb每英亩的比率施加氮肥。氮耗尽处理通过在其中土壤含氮量已经在以前多年的无肥料条件下被作物耗尽的土地上进行。氮耗尽处理以60至80lb每英亩的比率施加氮肥，在与标准氮处理进行比较时这导致6％的产量减少。用2排小块土地进行实验，其密度为每英亩32000株植物。重复4次标准氮处理和6次氮耗尽处理。该实验在2008年5月15日种植，并且在2008年10月18日一起收获。

下表6以相对于无效转基因对照植物的产量增加百分比综述了实验的以每英亩蒲式耳计算的谷物产量数据。总体上，在氮耗尽条件下的4个事件和在标准氮条件下的5个事件显示与批无效转基因对照相比，产量显著增加(α＝0.2，2尾分析)。所有测试的事件都显示了相对于无效转基因植物的产量增加趋势。

表6

事件	产量相对于无效转基因的增加	显著性	处理
				1	8.18％	*	低氮
2	3.65％		低氮
				3	3.67％		低氮
4	2.82％		低氮
				5	5.64％		低氮
6	5.36％		低氮
				7	7.79％	*	低氮
8	4.91％		低氮
				9	11.28％	*	低氮
10	9.88％	*	低氮
				1	11.09％	*	标准氮
2	1.59％		标准氮
				3	15.22％	*	标准氮
4	14.06％	*	标准氮
				5	10.64％	*	标准氮
6	3.43％		标准氮
				7	13.24％	*	标准氮
8	0.52％		标准氮
				9	4.01％		标准氮
10	7.85％		标准氮

实施例24

关联作图分析

可使用关联作图方法来鉴定与玉米根构造改变有关的标记。

将获得对根构造改变或至少一种农学特性改变的表型评分。具有极端表型的品系将相对于全基因组关联测试(使用2×2相依表的Fisher精确检验)中的基因型进行测试。将使用基于结构的关联分析，其中使用标记数据控制群体结构。将使用基于模型的集分析软件，Structure，该软件由Pritchard等人开发，(Genetics 155：945-959(2000))，同时使用几百个标记的数百个玉米优良自交系的单倍型数据评估混合系数并且将自交系分配成许多亚群。这降低了假阳性的发生概率，假阳性可能由对关联作图统计的群体结构效应引发。使用Kuiper统计测试两个分配是否相同，并且测试给定标记与在给定亚群中的单倍型和表型之间的关联(Press等人，Numerical Recipes in C，第二版，Cambridge UniversityPress，NY(2002))。

在至少一个亚群中的至少一个强峰值指示显著标记-性状关联(例如p＜0.001)。cM中给出了标记位点，零点是染色体起始处的第一个(距着丝点最远端)已知标记。这些图谱位点不是绝对的，而是提供基于内源遗传图谱的图谱位点预测。

序列表

<110>E.I.du Pont de Nemours and Company and

Pioneer Hi-Bred International

<120>具有改变的根构造的植物、涉及编码富含亮氨酸重复序列激酶(LLRK)多肽及其同源

物的基因的相关构建体和方法

<130>BB1632

<150>US 60/989,161

<151>2007-11-20

<150>US 60/041,281

<151>2008-04-01

<160>37

<170>PatentIn 3.5版本

<210>1

<211>18444

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>载体

<400>1

catgaatcaa acaaacatac acagcgactt attcacacga gctcaaatta caacggtata 60

tatcctgccg tcgacaacca tggtctagac aggatccccg ggtaccgagc tcgaatttgc 120

aggtcgactg cgtcatccct tacgtcagtg gagatatcac atcaatccac ttgctttgaa 180

gacgtggttg gaacgtcttc tttttccacg atgctcctcg tgggtggggg tccatctttg 240

ggaccactgt cggcagaggc atcttgaacg atagcctttc ctttatcgca atgatggcat 300

ttgtaggtgc caccttcctt ttctactgtc cttttgatga agtgacagat agctgggcaa 360

tggaatccga ggaggtttcc cgatattacc ctttgttgaa aagtctcaat tgccctttgg 420

tcttctgaga ctgttgcgtc atcccttacg tcagtggaga tatcacatca atccacttgc 480

tttgaagacg tggttggaac gtcttctttt tccacgatgc tcctcgtggg tgggggtcca 540

tctttgggac cactgtcggc agaggcatct tgaacgatag cctttccttt atcgcaatga 600

tggcatttgt aggtgccacc ttccttttct actgtccttt tgatgaagtg acagatagct 660

gggcaatgga atccgaggag gtttcccgat attacccttt gttgaaaagt ctcagttaac 720

ccgcgatcct gcgtcatccc ttacgtcagt ggagatatca catcaatcca cttgctttga 780

agacgtggtt ggaacgtctt ctttttccac gatgctcctc gtgggtgggg gtccatcttt 840

gggaccactg tcggcagagg catcttgaac gatagccttt cctttatcgc aatgatggca 900

tttgtaggtg ccaccttcct tttctactgt ccttttgatg aagtgacaga tagctgggca 960

atggaatccg aggaggtttc ccgatattac cctttgttga aaagtctcaa ttgccctttg 1020

gtcttctgag actgttgcgt catcccttac gtcagtggag atatcacatc aatccacttg 1080

ctttgaagac gtggttggaa cgtcttcttt ttccacgatg ctcctcgtgg gtgggggtcc 1140

atctttggga ccactgtcgg cagaggcatc ttgaacgata gcctttcctt tatcgcaatg 1200

atggcatttg taggtgccac cttccttttc tactgtcctt ttgatgaagt gacagatagc 1260

tgggcaatgg aatccgagga ggtttcccga tattaccctt tgttgaaaag tctcagttaa 1320

cccgcaattc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct ggcgttaccc 1380

aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc gaagaggccc 1440

gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatggatc gatccgtcga 1500

tcgaccaaag cggccatcgt gcctccccac tcctgcagtt cgggggcatg gatgcgcgga 1560

tagccgctgc tggtttcctg gatgccgacg gatttgcact gccggtagaa ctccgcgagg 1620

tcgtccagcc tcaggcagca gctgaaccaa ctcgcgaggg gatcgagccc ctgctgagcc 1680

tcgacatgtt gtcgcaaaat tcgccctgga cccgcccaac gatttgtcgt cactgtcaag 1740

gtttgacctg cacttcattt ggggcccaca tacaccaaaa aaatgctgca taattctcgg 1800

ggcagcaagt cggttacccg gccgccgtgc tggaccgggt tgaatggtgc ccgtaacttt 1860

cggtagagcg gacggccaat actcaacttc aaggaatctc acccatgcgc gccggcgggg 1920

aaccggagtt cccttcagtg aacgttatta gttcgccgct cggtgtgtcg tagatactag 1980

cccctggggc cttttgaaat ttgaataaga tttatgtaat cagtctttta ggtttgaccg 2040

gttctgccgc tttttttaaa attggatttg taataataaa acgcaattgt ttgttattgt 2100

ggcgctctat catagatgtc gctataaacc tattcagcac aatatattgt tttcatttta 2160

atattgtaca tataagtagt agggtacaat cagtaaattg aacggagaat attattcata 2220

aaaatacgat agtaacgggt gatatattca ttagaatgaa ccgaaaccgg cggtaaggat 2280

ctgagctaca catgctcagg ttttttacaa cgtgcacaac agaattgaaa gcaaatatca 2340

tgcgatcata ggcgtctcgc atatctcatt aaagcagggg gtgggcgaag aactccagca 2400

tgagatcccc gcgctggagg atcatccagc cggcgtcccg gaaaacgatt ccgaagccca 2460

acctttcata gaaggcggcg gtggaatcga aatctcgtga tggcaggttg ggcgtcgctt 2520

ggtcggtcat ttcgaacccc agagtcccgc tcagaagaac tcgtcaagaa ggcgatagaa 2580

ggcgatgcgc tgcgaatcgg gagcggcgat accgtaaagc acgaggaagc ggtcagccca 2640

ttcgccgcca agctcttcag caatatcacg ggtagccaac gctatgtcct gatagcggtc 2700

cgccacaccc agccggccac agtcgatgaa tccagaaaag cggccatttt ccaccatgat 2760

attcggcaag caggcatcgc catgggtcac gacgagatcc tcgccgtcgg gcatgccccc 2820

caattcactg gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact 2880

taatcgcctt gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac 2940

cgatcgccct tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tggcgcctga tgcggtattt 3000

tctccttacg catctgtgcg gtatttcaca ccgcatatgg tgcactctca gtacaatctg 3060

ctctgatgcc gcatagttaa gccagccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg 3120

acgggcttgt ctgctcccgg catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg 3180

catgtgtcag aggttttcac cgtcatcacc gaaacgcgcg agacgaaagg gcctcgtgat 3240

acgcctattt ttataggtta atgtcatgat aataatggtt tcttagacgt caggtggcac 3300

ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac attcaaatat 3360

gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa aaaggaagag 3420

tatgagtatt caacatttcc gtgtcgccct tattcccttt tttgcggcat tttgccttcc 3480

tgtttttgct cacccagaaa cgctggtgaa agtaaaagat gctgaagatc agttgggtgc 3540

acgagtgggt tacatcgaac tggatctcaa cagcggtaag atccttgaga gttttcgccc 3600

cgaagaacgt tttccaatga tgagcacttt taaagttctg ctatgtggcg cggtattatc 3660

ccgtattgac gccgggcaag agcaactcgg tcgccgcata cactattctc agaatgactt 3720

ggttgagtac tcaccagtca cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag taagagaatt 3780

atgcagtgct gccataacca tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc tgacaacgat 3840

cggaggaccg aaggagctaa ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg taactcgcct 3900

tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg acaccacgat 3960

gcctgtagca atggcaacaa cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac ttactctagc 4020

ttcccggcaa caattaatag actggatgga ggcggataaa gttgcaggac cacttctgcg 4080

ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg agcgtgggtc 4140

tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg tagttatcta 4200

cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga acgaaataga cagatcgctg agataggtgc 4260

ctcactgatt aagcattggt aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac tttagattga 4320

tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg ataatctcat 4380

gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat 4440

caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa 4500

accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa 4560

ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt 4620

aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt 4680

accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata 4740

gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt 4800

ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagcattgag aaagcgccac 4860

gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga 4920

gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg 4980

ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa 5040

aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat 5100

gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc 5160

tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga 5220

agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt aatgcagctg 5280

gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta 5340

gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg 5400

aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt acgccaagct 5460

ttctaggggg ggggtaccga tctgagatcg gtaacgaaaa cgaacgggta gggatgaaaa 5520

cggtcggtaa cggtcggtaa aatacctcta ccgttttcat tttcatattt aacttgcggg 5580

acggaaacga aaacgggata taccggtaac gaaaacgaac gggataaata cggtaatcga 5640

aaaccgatac gatccggtcg ggttaaagtc gaaatcggac gggaaccggt atttttgttc 5700

ggtaaaatca cacatgaaaa catatattca aaacttaaaa acaaatataa aaaattgtaa 5760

acacaagtct taattaaaca tagataaaat ccatataaat ctggagcaca catagtttaa 5820

tgtagcacat aagtgataag tcttgggctc ttggctaaca taagaagcca tataagtcta 5880

ctagcacaca tgacacaata taaagtttaa aacacatatt cataatcact tgctcacatc 5940

tggatcactt agcatgctac agctagtgca atattagaca ctttccaata tttctcaaac 6000

ttttcactca ttgcaacggc cattctccta atgacaaatt tttcatgaac acaccattgg 6060

tcaatcaaat cctttatctc acagaaacct ttgtaaaata aatttgcagt ggaatattga 6120

gtaccagata ggagttcagt gagatcaaaa aacttcttca aacacttaaa aagagttaat 6180

gccatcttcc actcctcggc tttaggacaa attgcatcgt acctacaata attgacattt 6240

gattaattga gaatttataa tgatgacatg tacaacaatt gagacaaaca tacctgcgag 6300

gatcacttgt tttaagccgt gttagtgcag gcttataata taaggcatcc ctcaacatca 6360

aataggttga attccatcta gttgagacat catatgagat ccctttagat ttatccaagt 6420

cacattcact agcacacttc attagttctt cccactgcaa aggagaagat tttacagcaa 6480

gaacaatcgc tttgattttc tcaattgttc ctgcaattac agccaagcca tcctttgcaa 6540

ccaagttcag tatgtgacaa gcacacctca catgaaagaa agcaccatca caaactagat 6600

ttgaatcagt gtcctgcaaa tcctcaatta tatcgtgcac agctacttca tttgcactag 6660

cattatccaa agacaaggca aacaattttt tctcaatgtt ccacttaacc atgattgcag 6720

tgaaggtttg tgataacctt tggccagtgt ggcgcccttc aacatgaaaa aagccaacaa 6780

ttcttttttg gagacaccaa tcatcatcaa tccaatggat ggtgacacac atgtatgact 6840

tattttgaca agatgtccac atatccatag ttgtactgaa gcgagactga acatctttta 6900

gttttccata caacttttct ttttcttcca aatacaaatc catgatatat tttctagcag 6960

tgacacggga ctttattgga aagtgagggc gcagagactt aacaaactca acaaagtact 7020

catgttctac aatattgaaa ggatattcat gcatgattat tgccaaatga agcttcttta 7080

ggctaaccac ttcatcgtac ttataaggct caatgagatt tatgtctttg ccatgatcct 7140

tttcactttt tagacacaac tgacctttaa ctaaactatg tgatgttctc aagtgatttc 7200

gaaatccgct tgttccatga tgaccctcag ccctatactt agccttgcaa ttaggaaagt 7260

tgcaatgtcc ccatacctga acgtatttct ttccatcgac ctccacttca atttccttct 7320

tggtgaaatg ctgccataca tccgatgtgc acttctttgc cctcttctgt ggtgcttctt 7380

cttcgggttc aggttgtggc tgtggttgtg gttctggttg tggttgtggt tgtggttgtg 7440

gttcatgaac aatagccata tcatcttgac tcggatctgt agctgtacca tttgcattac 7500

tactgcttac actctgaata aaatgcctct cggcctcagc tgttgatgat gatggtgatg 7560

tgcggccaca tccatgccca cgcgcacgtg cacgtacatt ctgaatccga ctagaagagg 7620

cttcagcttt tcttttcaac cctgttataa acagattttt cgtattattc tacagtcaat 7680

atgatgcttc ccaatctaca accaattagt aatgctaatg ctattgctac tgtttttcta 7740

atatatacct tgagcatatg cagagaatac ggaatttgtt ttgcgagtag aaggcgctct 7800

tgtggtagac atcaacttgg ccaatcttat ggctgagcct gagggaggat tatttccaac 7860

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tggacagcag gtgttcagca atcagcttgg tgctgtactg ctgtgacttg tgagcacctg 7980

gacggctgga cagcaatcag caggtgttgc agagcccctg gacagcacac aaatgacaca 8040

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ccgtggagac agggagaccg cggatggccg gatgggcgag cgccgagcag tggaggtctg 8160

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ggagtggagg tctgggcgga tgggcggacc gcggcgcgga tgggcgagtc gcgagcagtg 8280

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agctctaccg tttccgtttc cgtttaccgt tttgtatatc ccgtttccgt tccgttttcg 8760

ttttttacct cgggttcgaa atcgatcggg ataaaactaa caaaatcggt tatacgataa 8820

cggtcggtac gggattttcc catcctactt tcatccctga gattattgtc gtttctttcg 8880

cagatcggta ccccccccct agagtcgaca tcgatctagt aacatagatg acaccgcgcg 8940

cgataattta tcctagtttg cgcgctatat tttgttttct atcgcgtatt aaatgtataa 9000

ttgcgggact ctaatcataa aaacccatct cataaataac gtcatgcatt acatgttaat 9060

tattacatgc ttaacgtaat tcaacagaaa ttatatgata atcatcgcaa gaccggcaac 9120

aggattcaat cttaagaaac tttattgcca aatgtttgaa cgatctgctt cgacgcactc 9180

cttctttagg tacggactag atctcggtga cgggcaggac cggacggggc ggtaccggca 9240

ggctgaagtc cagctgccag aaacccacgt catgccagtt cccgtgcttg aagccggccg 9300

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cttagctcat taaactccag aaacccgcgg ctgagtggct ccttcaatcg ttgcggttct 9960

gtcagttcca aacgtaaaac ggcttgtccc gcgtcatcgg cgggggtcat aacgtgactc 10020

ccttaattct ccgctcatga tccccgggta ccgagctcga attgcggctg agtggctcct 10080

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caactcgccg gggccgatgt tctgttagtc gattccgatc cccagggcag tgcccgcgat 12720

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ccaagccctt acgacatatg ggccaccgcc gacctggtgg agctggttaa gcagcgcatt 12960

gaggtcacgg atggaaggct acaagcggcc tttgtcgtgt cgcgggcgat caaaggcacg 13020

cgcatcggcg gtgaggttgc cgaggcgctg gccgggtacg agctgcccat tcttgagtcc 13080

cgtatcacgc agcgcgtgag ctacccaggc actgccgccg ccggcacaac cgttcttgaa 13140

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ccggccgtcc gagcgcacgc agcagcaagg ctgcaacgtt ggccagcctg gcagacacgc 13320

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gcatcatgga cgtggccgtt ttccgtctgt cgaagcgtga ccgacgagct ggcgaggtga 13980

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gcctggtgac ggtatccgag ggtgaagcct tgattagccg ctacaagatc gtaaagagcg 14340

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ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa 16320

ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat 16380

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tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac 16500

gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg 16560

ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg 16620

caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt 16680

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cggctttttc aaaaatatgg tattgataat cctgatatga ataaattgca gtttcatttg 18000

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ctcagcgccc ccccccccct gcaggtcaat tcggtcgata tggctattac gaagaaggct 18360

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ggccatttcg ttaaaatgcg cagc 18444

<210>2

<211>4291

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>载体

<400>2

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taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga 120

gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca 180

cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaata cgcgtaccgc 240

tagccaggaa gagtttgtag aaacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc cttctgctta 300

gtttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc 360

acaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca ggagagcgtt caccgacaaa 420

caacagataa aacgaaaggc ccagtcttcc gactgagcct ttcgttttat ttgatgcctg 480

gcagttccct actctcgcgt taacgctagc atggatgttt tcccagtcac gacgttgtaa 540

aacgacggcc agtcttaagc tcgggcccca aataatgatt ttattttgac tgatagtgac 600

ctgttcgttg caacacattg atgagcaatg cttttttata atgccaactt tgtacaaaaa 660

agctgaacga gaaacgtaaa atgatataaa tatcaatata ttaaattaga ttttgcataa 720

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tgtacatcca caaacagacg ataacggctc tctcttttat aggtgtaaac cttaaactgc 1500

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caataattta tcctgaaaat atgaaaaaat agaagaaaat gtttacctcc tctctcctct 8220

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aggattggga cacaccattg tccttcttaa tttaatttta tttctttgct gataaaaaaa 8700

aaaaatttca tatagtgtta aataataatt tgttaaataa ccaaaaagtc aaatatgttt 8760

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caatatttac ttttttatag ataaatgtta tattataata aatttatata catatattat 8880

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acctttatac agagtaagag agttcaaata gtaccctttc atatacatat caactaaaat 9060

attagaaata tcatggatca aaccttataa agacattaaa taagtggata agtataatat 9120

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<210>5

<211>9142

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>载体

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cgtgtcttta taattctttg atgaaccaga tgcatttcat taaccaaatc catatacata 120

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ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggcgcagcca 9660

tgacccagtc acgtagcgat agcggagtgt atactggctt aactatgcgg catcagagca 9720

gattgtactg agagtgcacc atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa 9780

ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg 9840

gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg 9900

ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa 9960

ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg 10020

acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc 10080

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ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc 10200

ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg 10260

ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc 10320

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atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 10620

acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa 10680

ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta 10740

ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt 10800

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tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt 11040

tgttgccatt gctgcagggg gggggggggg gggggacttc cattgttcat tccacggaca 11100

aaaacagaga aaggaaacga cagaggccaa aaagcctcgc tttcagcacc tgtcgtttcc 11160

tttcttttca gagggtattt taaataaaaa cattaagtta tgacgaagaa gaacggaaac 11220

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aacgtgcgtg gaggccatca aaccacgtca aataatcaat tatgacgcag gtatcgtatt 11400

aattgatctg catcaactta acgtaaaaac aacttcagac aatacaaatc agcgacactg 11460

aatacggggc aacctcatgt cccccccccc cccccccctg caggcatcgt ggtgtcacgc 11520

tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga 11580

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atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa 11760

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catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca 11880

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tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt 12120

tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc 12180

taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt 12240

cgtcttcaag aattcggagc ttttgccatt ctcaccggat tcagtcgtca ctcatggtga 12300

tttctcactt gataacctta tttttgacga ggggaaatta ataggttgta ttgatgttgg 12360

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gttttctcct tcattacaga aacggctttt tcaaaaatat ggtattgata atcctgatat 12480

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gttgtaacac tggcagagca ttacgctgac ttgacgggac ggcggctttg ttgaataaat 12600

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ctgacgcggt ggaaaggggg aggggatgtt gtctacatgg ctctgctgta gtgagtgggt 12960

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caacgagcct ccttttcgcc aatccatcga caatcaccgc gagtccctgc tcgaacgctg 13080

cgtccggacc ggcttcgtcg aaggcgtcta tcgcggcccg caacagcggc gagagcggag 13140

cctgttcaac ggtgccgccg cgctcgccgg catcgctgtc gccggcctgc tcctcaagca 13200

cggccccaac agtgaagtag ctgattgtca tcagcgcatt gacggcgtcc ccggccgaaa 13260

aacccgcctc gcagaggaag cgaagctgcg cgtcggccgt ttccatctgc ggtgcgcccg 13320

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tgcgggcatt cccgatcaga aatgagcgcc agtcgtcgtc ggctctcggc accgaatgcg 13440

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gaccgtctac gccgacctcg ttcaacaggt ccagggcggc acggatcact gtattcggct 13620

gcaactttgt catgcttgac actttatcac tgataaacat aatatgtcca ccaacttatc 13680

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cggcctgatt atgccggtgc tgccgggcct cctgcgcgat ctggttcact cgaacgacgt 13860

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cgatatcact gatggcgatg agcgcgcgcg gcacttcggc ttcatgagcg cctgtttcgg 14160

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catgcaactt gtcggacagg tgccggccgc gctttgggtc attttcggcg aggatcgctt 14460

tcactgggac gcgaccacga tcggcatttc gcttgccgca tttggcattc tgcattcact 14520

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ggcgctcacc agcctgacct cgatcgtcgg acccctcctc ttcacggcga tctatgcggc 14820

ttctataaca acgtggaacg ggtgggcatg gattgcaggc gctgccctct acttgctctg 14880

cctgccggcg ctgcgtcgcg ggctttggag cggcgcaggg caacgagccg atcgctgatc 14940

gtggaaacga taggcctatg ccatgcgggt caaggcgact tccggcaagc tatacgcgcc 15000

ctaggagtgc ggttggaacg ttggcccagc cagatactcc cgatcacgag caggacgccg 15060

atgatttgaa gcgcactcag cgtctgatcc aagaacaacc atcctagcaa cacggcggtc 15120

cccgggctga gaaagcccag taaggaaaca actgtaggtt cgagtcgcga gatcccccgg 15180

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ttggttcctg taggcatcgg gattggcgga tcaaacacta aagctactgg aacgagcaga 15300

agtcctccgg ccgccagttg ccaggcggta aaggtgagca gaggcacggg aggttgccac 15360

ttgcgggtca gcacggttcc gaacgccatg gaaaccgccc ccgccaggcc cgctgcgacg 15420

ccgacaggat ctagcgctgc gtttggtgtc aacaccaaca gcgccacgcc cgcagttccg 15480

caaatagccc ccaggaccgc catcaatcgt atcgggctac ctagcagagc ggcagagatg 15540

aacacgacca tcagcggctg cacagcgcct accgtcgccg cgaccccgcc cggcaggcgg 15600

tagaccgaaa taaacaacaa gctccagaat agcgaaatat taagtgcgcc gaggatgaag 15660

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gccggcaacg cccgcagcag cataccggcg acccctcggc ctcgctgttc gggctccacg 15780

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gacagcccaa tgatctcgcc gtcgatgtag gcgccgaatg ccacggcatc tcgcaaccgt 15900

tcagcgaacg cctccatggg ctttttctcc tcgtgctcgt aaacggaccc gaacatctct 15960

ggagctttct tcagggccga caatcggatc tcgcggaaat cctgcacgtc ggccgctcca 16020

agccgtcgaa tctgagcctt aatcacaatt gtcaatttta atcctctgtt tatcggcagt 16080

tcgtagagcg cgccgtgcgt cccgagcgat actgagcgaa gcaagtgcgt cgagcagtgc 16140

ccgcttgttc ctgaaatgcc agtaaagcgc tggctgctga acccccagcc ggaactgacc 16200

ccacaaggcc ctagcgtttg caatgcacca ggtcatcatt gacccaggcg tgttccacca 16260

ggccgctgcc tcgcaactct tcgcaggctt cgccgacctg ctcgcgccac ttcttcacgc 16320

gggtggaatc cgatccgcac atgaggcgga aggtttccag cttgagcggg tacggctccc 16380

ggtgcgagct gaaatagtcg aacatccgtc gggccgtcgg cgacagcttg cggtacttct 16440

cccatatgaa tttcgtgtag tggtcgccag caaacagcac gacgatttcc tcgtcgatca 16500

ggacctggca acgggacgtt ttcttgccac ggtccaggac gcggaagcgg tgcagcagcg 16560

acaccgattc caggtgccca acgcggtcgg acgtgaagcc catcgccgtc gcctgtaggc 16620

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ttttcttgtt gcgcgtggtg aacagggcag agcgggccgt gtcgtttggc atcgctcgca 16920

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tgcgccactc ttcattaacc gctatatcga aaattgcttg cggcttgtta gaattgccat 17700

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ccatatcgcc aggaccccta gcggccgtcg agtgcaagaa attctcgaag ttcttggtta 19440

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gtccatcatc ggcatcgtcg tcgccggcgg cgtgctgatc ttcggcggcg aactcaacgc 19740

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atgggtggtg atcgtgaact ggtgatgttc tcgggcctga tggcgtttgc gctgattttc 20040

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aagccggccc ccgctgcggc cccgaccggc ttcaccttca acccaacacc ggacaaaaag 21900

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cggcatcgcc gtcggccgcg acgacccggt gctgatcctg cataccatca acgcccggct 22740

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ggccgaagcg atccgcaggg aaatcgacga cggccttggc cgccagctcg cggccaaggt 22980

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ggccgccctg gtggtgtggg cctcgttatg aatcgcagag gcgcagatga aaaagcccgg 23100

cgttgccggg ctttgttttt gcgttagctg ggcttgtttg acaggcccaa gctctgactg 23160

cgcccgcgct cgcgctcctg ggcctgtttc ttctcctgct cctgcttgcg catcagggcc 23220

tggtgccgtc gggctgcttc acgcatcgaa tcccagtcgc cggccagctc gggatgctcc 23280

gcgcgcatct tgcgcgtcgc cagttcctcg atcttgggcg cgtgaatgcc catgccttcc 23340

ttgatttcgc gcaccatgtc cagccgcgtg tgcagggtct gcaagcgggc ttgctgttgg 23400

gcctgctgct gctgccaggc ggcctttgta cgcggcaggg acagcaagcc gggggcattg 23460

gactgtagct gctgcaaacg cgcctgctga cggtctacga gctgttctag gcggtcctcg 23520

atgcgctcca cctggtcatg ctttgcctgc acgtagagcg caagggtctg ctggtaggtc 23580

tgctcgatgg gcgcggattc taagagggcc tgctgttccg tctcggcctc ctgggccgcc 23640

tgtagcaaat cctcgccgct gttgccgctg gactgcttta ctgccgggga ctgctgttgc 23700

cctgctcgcg ccgtcgtcgc agttcggctt gcccccactc gattgactgc ttcatttcga 23760

gccgcagcga tgcgatctcg gattgcgtca acggacgggg cagcgcggag gtgtccggct 23820

tctccttggg tgagtcggtc gatgccatag ccaaaggttt ccttccaaaa tgcgtccatt 23880

gctggaccgt gtttctcatt gatgcccgca agcatcttcg gcttgaccgc caggtcaagc 23940

gcgccttcat gggcggtcat gacggacgcc gccatgacct tgccgccgtt gttctcgatg 24000

tagccgcgta atgaggcaat ggtgccgccc atcgtcagcg tgtcatcgac aacgatgtac 24060

ttctggccgg ggatcacctc cccctcgaaa gtcgggttga acgccaggcg atgatctgaa 24120

ccggctccgg ttcgggcgac cttctcccgc tgcacaatgt ccgtttcgac ctcaaggcca 24180

aggcggtcgg ccagaacgac cgccatcatg gccggaatct tgttgttccc cgccgcctcg 24240

acggcgagga ctggaacgat gcggggcttg tcgtcgccga tcagcgtctt gagctgggca 24300

acagtgtcgt ccgaaatcag gcgctcgacc aaattaagcg ccgcttccgc gtcgccctgc 24360

ttcgcagcct ggtattcagg ctcgttggtc aaagaaccaa ggtcgccgtt gcgaaccacc 24420

ttcgggaagt ctccccacgg tgcgcgctcg gctctgctgt agctgctcaa gacgcctccc 24480

tttttagccg ctaaaactct aacgagtgcg cccgcgactc aacttgacgc tttcggcact 24540

tacctgtgcc ttgccacttg cgtcataggt gatgcttttc gcactcccga tttcaggtac 24600

tttatcgaaa tctgaccggg cgtgcattac aaagttcttc cccacctgtt ggtaaatgct 24660

gccgctatct gcgtggacga tgctgccgtc gtggcgctgc gacttatcgg ccttttgggc 24720

catatagatg ttgtaaatgc caggtttcag ggccccggct ttatctacct tctggttcgt 24780

ccatgcgcct tggttctcgg tctggacaat tctttgccca ttcatgacca ggaggcggtg 24840

tttcattggg tgactcctga cggttgcctc tggtgttaaa cgtgtcctgg tcgcttgccg 24900

gctaaaaaaa agccgacctc ggcagttcga ggccggcttt ccctagagcc gggcgcgtca 24960

aggttgttcc atctatttta gtgaactgcg ttcgatttat cagttacttt cctcccgctt 25020

tgtgtttcct cccactcgtt tccgcgtcta gccgacccct caacatagcg gcctcttctt 25080

gggctgcctt tgcctcttgc cgcgcttcgt cacgctcggc ttgcaccgtc gtaaagcgct 25140

cggcctgcct ggccgcctct tgcgccgcca acttcctttg ctcctggtgg gcctcggcgt 25200

cggcctgcgc cttcgctttc accgctgcca actccgtgcg caaactctcc gcttcgcgcc 25260

tggtggcgtc gcgctcgccg cgaagcgcct gcatttcctg gttggccgcg tccagggtct 25320

tgcggctctc ttctttgaat gcgcgggcgt cctggtgagc gtagtccagc tcggcgcgca 25380

gctcctgcgc tcgacgctcc acctcgtcgg cccgctgcgt cgccagcgcg gcccgctgct 25440

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cggccgcctc ggcggcctgc tgctctagca atgtaacgcg cgcctgggct tcttccagct 25560

cgcgggcctg cgcctcgaag gcgtcggcca gctccccgcg cacggcttcc aactcgttgc 25620

gctcacgatc ccagccggct tgcgctgcct gcaacgattc attggcaagg gcctgggcgg 25680

cttgccagag ggcggccacg gcctggttgc cggcctgctg caccgcgtcc ggcacctgga 25740

ctgccagcgg ggcggcctgc gccgtgcgct ggcgtcgcca ttcgcgcatg ccggcgctgg 25800

cgtcgttcat gttgacgcgg gcggccttac gcactgcatc cacggtcggg aagttctccc 25860

ggtcgccttg ctcgaacagc tcgtccgcag ccgcaaaaat gcggtcgcgc gtctctttgt 25920

tcagttccat gttggctccg gtaattggta agaataataa tactcttacc taccttatca 25980

gcgcaagagt ttagctgaac agttctcgac ttaacggcag gttttttagc ggctgaaggg 26040

caggcaaaaa aagccccgca cggtcggcgg gggcaaaggg tcagcgggaa ggggattagc 26100

gggcgtcggg cttcttcatg cgtcggggcc gcgcttcttg ggatggagca cgacgaagcg 26160

cgcacgcgca tcgtcctcgg ccctatcggc ccgcgtcgcg gtcaggaact tgtcgcgcgc 26220

taggtcctcc ctggtgggca ccaggggcat gaactcggcc tgctcgatgt aggtccactc 26280

catgaccgca tcgcagtcga ggccgcgttc cttcaccgtc tcttgcaggt cgcggtacgc 26340

ccgctcgttg agcggctggt aacgggccaa ttggtcgtaa atggctgtcg gccatgagcg 26400

gcctttcctg ttgagccagc agccgacgac gaagccggca atgcaggccc ctggcacaac 26460

caggccgacg ccgggggcag gggatggcag cagctcgcca accaggaacc ccgccgcgat 26520

gatgccgatg ccggtcaacc agcccttgaa actatccggc cccgaaacac ccctgcgcat 26580

tgcctggatg ctgcgccgga tagcttgcaa catcaggagc cgtttctttt gttcgtcagt 26640

catggtccgc cctcaccagt tgttcgtatc ggtgtcggac gaactgaaat cgcaagagct 26700

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gacgaaatcg ccgtcattcc ctctggattg ttcgctgctc ggcggggcag tgcgccgcgc 26940

cggcggcgtc gtggatggct cgggttggct ggcctgcgac ggccggcgaa aggtgcgcag 27000

cagctcgtta tcgaccggct gcggcgtcgg ggccgccgcc ttgcgctgcg gtcggtgttc 27060

cttcttcggc tcgcgcagct tgaacagcat gatcgcggaa accagcagca acgccgcgcc 27120

tacgcctccc gcgatgtaga acagcatcgg attcattctt cggtcctcct tgtagcggaa 27180

ccgttgtctg tgcggcgcgg gtggcccgcg ccgctgtctt tggggatcag ccctcgatga 27240

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cgtcgtgctc gacctggacg atggcctttt tcagcttgtc cgggtccggc tccttcgcgc 27420

ccttttcctt ggcgtcctta ccgtcctggt cgccgtcctc gccgtcctgg ccgtcgccgg 27480

cctccgcgtc acgctcggca tcagtctggc cgttgaaggc atcgacggtg ttgggatcgc 27540

ggcccttctc gtccaggaac tcgcgcagca gcttgaccgt gccgcgcgtg atttcctggg 27600

tgtcgtcgtc aagccacgcc tcgacttcct ccgggcgctt cttgaaggcc gtcaccagct 27660

cgttcaccac ggtcacgtcg cgcacgcggc cggtgttgaa cgcatcggcg atcttctccg 27720

gcaggtccag cagcgtgacg tgctgggtga tgaacgccgg cgacttgccg atttccttgg 27780

cgatatcgcc tttcttcttg cccttcgcca gctcgcggcc aatgaagtcg gcaatttcgc 27840

gcggggtcag ctcgttgcgt tgcaggttct cgataacctg gtcggcttcg ttgtagtcgt 27900

tgtcgatgaa cgccgggatg gacttcttgc cggcccactt cgagccacgg tagcggcggg 27960

cgccgtgatt gatgatatag cggcccggct gctcctggtt ctcgcgcacc gaaatgggtg 28020

acttcacccc gcgctctttg atcgtggcac cgatttccgc gatgctctcc ggggaaaagc 28080

cggggttgtc ggccgtccgc ggctgatgcg gatcttcgtc gatcaggtcc aggtccagct 28140

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cgatgctatc caaccccagg ccggacggct gcgccgcgcc tgcggcttcc tgagcggccg 28260

cagcggtgtt tttcttggtg gtcttggctt gagccgcagt cattgggaaa tctccatctt 28320

cgtgaacacg taatcagcca gggcgcgaac ctctttcgat gccttgcgcg cggccgtttt 28380

cttgatcttc cagaccggca caccggatgc gagggcatcg gcgatgctgc tgcgcaggcc 28440

aacggtggcc ggaatcatca tcttggggta cgcggccagc agctcggctt ggtggcgcgc 28500

gtggcgcgga ttccgcgcat cgaccttgct gggcaccatg ccaaggaatt gcagcttggc 28560

gttcttctgg cgcacgttcg caatggtcgt gaccatcttc ttgatgccct ggatgctgta 28620

cgcctcaagc tcgatggggg acagcacata gtcggccgcg aagagggcgg ccgccaggcc 28680

gacgccaagg gtcggggccg tgtcgatcag gcacacgtcg aagccttggt tcgccagggc 28740

cttgatgttc gccccgaaca gctcgcgggc gtcgtccagc gacagccgtt cggcgttcgc 28800

cagtaccggg ttggactcga tgagggcgag gcgcgcggcc tggccgtcgc cggctgcggg 28860

tgcggtttcg gtccagccgc cggcagggac agcgccgaac agcttgcttg catgcaggcc 28920

ggtagcaaag tccttgagcg tgtaggacgc attgccctgg gggtccaggt cgatcacggc 28980

aacccgcaag ccgcgctcga aaaagtcgaa ggcaagatgc acaagggtcg aagtcttgcc 29040

gacgccgcct ttctggttgg ccgtgaccaa agttttcatc gtttggtttc ctgttttttc 29100

ttggcgtccg cttcccactt ccggacgatg tacgcctgat gttccggcag aaccgccgtt 29160

acccgcgcgt acccctcggg caagttcttg tcctcgaacg cggcccacac gcgatgcacc 29220

gcttgcgaca ctgcgcccct ggtcagtccc agcgacgttg cgaacgtcgc ctgtggcttc 29280

ccatcgacta agacgccccg cgctatctcg atggtctgct gccccacttc cagcccctgg 29340

atcgcctcct ggaactggct ttcggtaagc cgtttcttca tggataacac ccataatttg 29400

ctccgcgcct tggttgaaca tagcggtgac agccgccagc acatgagaga agtttagcta 29460

aacatttctc gcacgtcaac acctttagcc gctaaaactc gtccttggcg taacaaaaca 29520

aaagcccgga aaccgggctt tcgtctcttg ccgcttatgg ctctgcaccc ggctccatca 29580

ccaacaggtc gcgcacgcgc ttcactcggt tgcggatcga cactgccagc ccaacaaagc 29640

cggttgccgc cgccgccagg atcgcgccga tgatgccggc cacaccggcc atcgcccacc 29700

aggtcgccgc cttccggttc cattcctgct ggtactgctt cgcaatgctg gacctcggct 29760

caccataggc tgaccgctcg atggcgtatg ccgcttctcc ccttggcgta aaacccagcg 29820

ccgcaggcgg cattgccatg ctgcccgccg ctttcccgac cacgacgcgc gcaccaggct 29880

tgcggtccag accttcggcc acggcgagct gcgcaaggac ataatcagcc gccgacttgg 29940

ctccacgcgc ctcgatcagc tcttgcactc gcgcgaaatc cttggcctcc acggccgcca 30000

tgaatcgcgc acgcggcgaa ggctccgcag ggccggcgtc gtgatcgccg ccgagaatgc 30060

ccttcaccaa gttcgacgac acgaaaatca tgctgacggc tatcaccatc atgcagacgg 30120

atcgcacgaa cccgctgaat tgaacacgag cacggcaccc gcgaccacta tgccaagaat 30180

gcccaaggta aaaattgccg gccccgccat gaagtccgtg aatgccccga cggccgaagt 30240

gaagggcagg ccgccaccca ggccgccgcc ctcactgccc ggcacctggt cgctgaatgt 30300

cgatgccagc acctgcggca cgtcaatgct tccgggcgtc gcgctcgggc tgatcgccca 30360

tcccgttact gccccgatcc cggcaatggc aaggactgcc agcgctgcca tttttggggt 30420

gaggccgttc gcggccgagg ggcgcagccc ctggggggat gggaggcccg cgttagcggg 30480

ccgggagggt tcgagaaggg ggggcacccc ccttcggcgt gcgcggtcac gcgcacaggg 30540

cgcagccctg gttaaaaaca aggtttataa atattggttt aaaagcaggt taaaagacag 30600

gttagcggtg gccgaaaaac gggcggaaac ccttgcaaat gctggatttt ctgcctgtgg 30660

acagcccctc aaatgtcaat aggtgcgccc ctcatctgtc agcactctgc ccctcaagtg 30720

tcaaggatcg cgcccctcat ctgtcagtag tcgcgcccct caagtgtcaa taccgcaggg 30780

cacttatccc caggcttgtc cacatcatct gtgggaaact cgcgtaaaat caggcgtttt 30840

cgccgatttg cgaggctggc cagctccacg tcgccggccg aaatcgagcc tgcccctcat 30900

ctgtcaacgc cgcgccgggt gagtcggccc ctcaagtgtc aacgtccgcc cctcatctgt 30960

cagtgagggc caagttttcc gcgaggtatc cacaacgccg gcggccgcgg tgtctcgcac 31020

acggcttcga cggcgtttct ggcgcgtttg cagggccata gacggccgcc agcccagcgg 31080

cgagggcaac cagcccggtg agcgtcggaa aggcgctgga agccccgtag cgacgcggag 31140

aggggcgaga caagccaagg gcgcaggctc gatgcgcagc acgacatagc cggttctcgc 31200

aaggacgaga atttccctgc ggtgcccctc aagtgtcaat gaaagtttcc aacgcgagcc 31260

attcgcgaga gccttgagtc cacgctagat gagagctttg ttgtaggtgg accagttggt 31320

gattttgaac ttttgctttg ccacggaacg gtctgcgttg tcgggaagat gcgtgatctg 31380

atccttcaac tcagcaaaag ttcgatttat tcaacaaagc cacgttgtgt ctcaaaatct 31440

ctgatgttac attgcacaag ataaaaatat atcatcatga acaataaaac tgtctgctta 31500

cataaacagt aatacaaggg gtgttatgag ccatattcaa cgggaaacgt cttgctcgac 31560

tctagagctc gttcctcgag gaacggtacc tgcggggaag cttacaataa tgtgtgttgt 31620

taagtcttgt tgcctgtcat cgtctgactg actttcgtca taaatcccgg cctccgtaac 31680

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ctgaagggtc ttggttccac ctcctggcac aatgcgaatg attacttgag cgcgatcggg 31860

catccaattt tctcccgtca ggtgcgtggt caagtgctac aaggcacctt tcagtaacga 31920

gcgaccgtcg atccgtcgcc gggatacgga caaaatggag cgcagtagtc catcgagggc 31980

ggcgaaagcc tcgccaaaag caatacgttc atctcgcaca gcctccagat ccgatcgagg 32040

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aagtatggct tccatctttt ctcgtgtgtc tgcatctatt tcgagaaagc ccccgatgcg 32160

gcgcaccgca acgcgaattg ccatactatc cgaaagtccc agcaggcgcg cttgatagga 32220

aaaggtttca tactcggccg atcgcagacg ggcactcacg accttgaacc cttcaacttt 32280

cagggatcga tgctggttga tggtagtctc actcgacgtg gctctggtgt gttttgacat 32340

agcttcctcc aaagaaagcg gaaggtctgg atactccagc acgaaatgtg cccgggtaga 32400

cggatggaag tctagccctg ctcaatatga aatcaacagt acatttacag tcaatactga 32460

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catcttacat tactaaacac gggaactgat ccgacgatgc gcctcataga gaggaatctt 33240

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cgttggacga tttcgaaagc atgctggcag atggatcatt tcgcgtggcc ccgaaaagtt 33720

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ttgcgttgct cgaggtcgct cgaagtcatt ttgatccgtt ggggttggag accgctcgag 33840

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gacttcactc agataagccc atgctgcatc gtcgcgcatc tcgccaagca atatccggtc 35280

cggccgcata cgcagacttg cttggagcaa gtgctcggcg ctcacagcac ccagcccagc 35340

accgttcttg gagtagagta gtctaacatg attatcgtgt ggaatgacga gttcgagcgt 35400

atcttctatg gtgattagcc tttcctgggg ggggatggcg ctgatcaagg tcttgctcat 35460

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ctgattttgg cgtttccttc gtgtctgcca ctggttccac ctcgaagcat cataacggga 35640

ggagacttct ttaagaccag aaacacgcga gcttggccgt cgaatggtca agctgacggt 35700

gcccgaggga acggtcggcg gcagacagat ttgtagtcgt tcaccaccag gaagttcagt 35760

ggcgcagagg gggttacgtg gtccgacatc ctgctttctc agcgcgcccg ctaaaatagc 35820

gatatcttca agatcatcat aagagacggg caaaggcatc ttggtaaaaa tgccggcttg 35880

gcgcacaaat gcctctccag gtcgattgat cgcaatttct tcagtcttcg ggtcatcgag 35940

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atcctatctc taagcggaaa tttgaattca ttaagagcgg cggttcctcc cccgcgtggc 36060

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cgagctgccg gcgtaggtgc tagctgcctg gaaggcgcct tgaacaacac tcaagagcat 36300

agctccgcta aaacgctgcc agaagtggct gtcgaccgag cccggcaatc ctgagcgacc 36360

gagttcgtcc gcgcttggcg atgttaacga gatcatcgca tggtcaggtg tctcggcgcg 36420

atcccacaac acaaaaacgc gcccatctcc ctgttgcaag ccacgctgta tttcgccaac 36480

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ctcaccgtgc ccgtttgcgg cctttggcca acgggatcgt aagcggtgtt ccagatacat 37260

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gcgctgtttg cggaaccggt gatctgcgat cgcaacaggt ccgcttcagc atcactaccc 40260

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ctcgcttgcc gcaaatgact ctgtcggtat aaatcgaagc gccgagtgag ccgctgacga 42360

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aggcgattta gatgtaaacg gtatctctca aagcatcgca tcaatgcgca cctccttagt 43680

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catcccacgt ctcttcggat tttagcgcct cgtgatcgtc ttttggaggc tcgattaacg 43860

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gggcacactt gcgagcaaca tggtcaaact cagcagatga gagtggcgtg gcaaggctcg 44340

acgaacagaa ggagaccatc aaggcaagag aaagcgaccc cgatctctta agcatacctt 44400

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cagcaagctg gtacgattgt aatacgactc actatagggc gaattgagcg ctgtttaaac 49860

gctcttcaac tggaagagcg gttacccgga ccgaagcttg catgcctgca g 49911

<210>7

<211>36909

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>载体

<400>7

tctagagctc gttcctcgag gcctcgaggc ctcgaggaac ggtacctgcg gggaagctta 60

caataatgtg tgttgttaag tcttgttgcc tgtcatcgtc tgactgactt tcgtcataaa 120

tcccggcctc cgtaacccag ctttgggcaa gctcacggat ttgatccggc ggaacgggaa 180

tatcgagatg ccgggctgaa cgctgcagtt ccagctttcc ctttcgggac aggtactcca 240

gctgattgat tatctgctga agggtcttgg ttccacctcc tggcacaatg cgaatgatta 300

cttgagcgcg atcgggcatc caattttctc ccgtcaggtg cgtggtcaag tgctacaagg 360

cacctttcag taacgagcga ccgtcgatcc gtcgccggga tacggacaaa atggagcgca 420

gtagtccatc gagggcggcg aaagcctcgc caaaagcaat acgttcatct cgcacagcct 480

ccagatccga tcgagggtct tcggcgtagg cagatagaag catggataca ttgcttgaga 540

gtattccgat ggactgaagt atggcttcca tcttttctcg tgtgtctgca tctatttcga 600

gaaagccccc gatgcggcgc accgcaacgc gaattgccat actatccgaa agtcccagca 660

ggcgcgcttg ataggaaaag gtttcatact cggccgatcg cagacgggca ctcacgacct 720

tgaacccttc aactttcagg gatcgatgct ggttgatggt agtctcactc gacgtggctc 780

tggtgtgttt tgacatagct tcctccaaag aaagcggaag gtctggatac tccagcacga 840

aatgtgcccg ggtagacgga tggaagtcta gccctgctca atatgaaatc aacagtacat 900

ttacagtcaa tactgaatat acttgctaca tttgcaattg tcttataacg aatgtgaaat 960

aaaaatagtg taacaacgct tttactcatc gataatcaca aaaacattta tacgaacaaa 1020

aatacaaatg cactccggtt tcacaggata ggcgggatca gaatatgcaa cttttgacgt 1080

tttgttcttt caaagggggt gctggcaaaa ccaccgcact catgggcctt tgcgctgctt 1140

tggcaaatga cggtaaacga gtggccctct ttgatgccga cgaaaaccgg cctctgacgc 1200

gatggagaga aaacgcctta caaagcagta ctgggatcct cgctgtgaag tctattccgc 1260

cgacgaaatg ccccttcttg aagcagccta tgaaaatgcc gagctcgaag gatttgatta 1320

tgcgttggcc gatacgcgtg gcggctcgag cgagctcaac aacacaatca tcgctagctc 1380

aaacctgctt ctgatcccca ccatgctaac gccgctcgac atcgatgagg cactatctac 1440

ctaccgctac gtcatcgagc tgctgttgag tgaaaatttg gcaattccta cagctgtttt 1500

gcgccaacgc gtcccggtcg gccgattgac aacatcgcaa cgcaggatgt cagagacgct 1560

agagagcctt ccagttgtac cgtctcccat gcatgaaaga gatgcatttg ccgcgatgaa 1620

agaacgcggc atgttgcatc ttacattact aaacacggga actgatccga cgatgcgcct 1680

catagagagg aatcttcgga ttgcgatgga ggaagtcgtg gtcatttcga aactgatcag 1740

caaaatcttg gaggcttgaa gatggcaatt cgcaagcccg cattgtcggt cggcgaagca 1800

cggcggcttg ctggtgctcg acccgagatc caccatccca acccgacact tgttccccag 1860

aagctggacc tccagcactt gcctgaaaaa gccgacgaga aagaccagca acgtgagcct 1920

ctcgtcgccg atcacattta cagtcccgat cgacaactta agctaactgt ggatgccctt 1980

agtccacctc cgtccccgaa aaagctccag gtttttcttt cagcgcgacc gcccgcgcct 2040

caagtgtcga aaacatatga caacctcgtt cggcaataca gtccctcgaa gtcgctacaa 2100

atgattttaa ggcgcgcgtt ggacgatttc gaaagcatgc tggcagatgg atcatttcgc 2160

gtggccccga aaagttatcc gatcccttca actacagaaa aatccgttct cgttcagacc 2220

tcacgcatgt tcccggttgc gttgctcgag gtcgctcgaa gtcattttga tccgttgggg 2280

ttggagaccg ctcgagcttt cggccacaag ctggctaccg ccgcgctcgc gtcattcttt 2340

gctggagaga agccatcgag caattggtga agagggacct atcggaaccc ctcaccaaat 2400

attgagtgta ggtttgaggc cgctggccgc gtcctcagtc accttttgag ccagataatt 2460

aagagccaaa tgcaattggc tcaggctgcc atcgtccccc cgtgcgaaac ctgcacgtcc 2520

gcgtcaaaga aataaccggc acctcttgct gtttttatca gttgagggct tgacggatcc 2580

gcctcaagtt tgcggcgcag ccgcaaaatg agaacatcta tactcctgtc gtaaacctcc 2640

tcgtcgcgta ctcgactggc aatgagaagt tgctcgcgcg atagaacgtc gcggggtttc 2700

tctaaaaacg cgaggagaag attgaactca cctgccgtaa gtttcacctc accgccagct 2760

tcggacatca agcgacgttg cctgagatta agtgtccagt cagtaaaaca aaaagaccgt 2820

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aactctctcg tactaaacgg cttagcgata aaatcacttg ctcctagctc gagtgcaaca 2940

actttatccg tctcctcaag gcggtcgcca ctgataatta tgattggaat atcagacttt 3000

gccgccagat ttcgaacgat ctcaagccca tcttcacgac ctaaatttag atcaacaacc 3060

acgacatcga ccgtcgcgga agagagtact ctagtgaact gggtgctgtc ggctaccgcg 3120

gtcactttga aggcgtggat cgtaaggtat tcgataataa gatgccgcat agcgacatcg 3180

tcatcgataa gaagaacgtg tttcaacggc tcacctttca atctaaaatc tgaacccttg 3240

ttcacagcgc ttgagaaatt ttcacgtgaa ggatgtacaa tcatctccag ctaaatgggc 3300

agttcgtcag aattgcggct gaccgcggat gacgaaaatg cgaaccaagt atttcaattt 3360

tatgacaaaa gttctcaatc gttgttacaa gtgaaacgct tcgaggttac agctactatt 3420

gattaaggag atcgcctatg gtctcgcccc ggcgtcgtgc gtccgccgcg agccagatct 3480

cgcctacttc ataaacgtcc tcataggcac ggaatggaat gatgacatcg atcgccgtag 3540

agagcatgtc aatcagtgtg cgatcttcca agctagcacc ttgggcgcta cttttgacaa 3600

gggaaaacag tttcttgaat ccttggattg gattcgcgcc gtgtattgtt gaaatcgatc 3660

ccggatgtcc cgagacgact tcactcagat aagcccatgc tgcatcgtcg cgcatctcgc 3720

caagcaatat ccggtccggc cgcatacgca gacttgcttg gagcaagtgc tcggcgctca 3780

cagcacccag cccagcaccg ttcttggagt agagtagtct aacatgatta tcgtgtggaa 3840

tgacgagttc gagcgtatct tctatggtga ttagcctttc ctgggggggg atggcgctga 3900

tcaaggtctt gctcattgtt gtcttgccgc ttccggtagg gccacatagc aacatcgtca 3960

gtcggctgac gacgcatgcg tgcagaaacg cttccaaatc cccgttgtca aaatgctgaa 4020

ggatagcttc atcatcctga ttttggcgtt tccttcgtgt ctgccactgg ttccacctcg 4080

aagcatcata acgggaggag acttctttaa gaccagaaac acgcgagctt ggccgtcgaa 4140

tggtcaagct gacggtgccc gagggaacgg tcggcggcag acagatttgt agtcgttcac 4200

caccaggaag ttcagtggcg cagagggggt tacgtggtcc gacatcctgc tttctcagcg 4260

cgcccgctaa aatagcgata tcttcaagat catcataaga gacgggcaaa ggcatcttgg 4320

taaaaatgcc ggcttggcgc acaaatgcct ctccaggtcg attgatcgca atttcttcag 4380

tcttcgggtc atcgagccat tccaaaatcg gcttcagaag aaagcgtagt tgcggatcca 4440

cttccattta caatgtatcc tatctctaag cggaaatttg aattcattaa gagcggcggt 4500

tcctcccccg cgtggcgccg ccagtcaggc ggagctggta aacaccaaag aaatcgaggt 4560

cccgtgctac gaaaatggaa acggtgtcac cctgattctt cttcagggtt ggcggtatgt 4620

tgatggttgc cttaagggct gtctcagttg tctgctcacc gttattttga aagctgttga 4680

agctcatccc gccacccgag ctgccggcgt aggtgctagc tgcctggaag gcgccttgaa 4740

caacactcaa gagcatagct ccgctaaaac gctgccagaa gtggctgtcg accgagcccg 4800

gcaatcctga gcgaccgagt tcgtccgcgc ttggcgatgt taacgagatc atcgcatggt 4860

caggtgtctc ggcgcgatcc cacaacacaa aaacgcgccc atctccctgt tgcaagccac 4920

gctgtatttc gccaacaacg gtggtgccac gatcaagaag cacgatattg ttcgttgttc 4980

cacgaatatc ctgaggcaag acacacttta catagcctgc caaatttgtg tcgattgcgg 5040

tttgcaagat gcacggaatt attgtccctt gcgttaccat aaaatcgggg tgcggcaaga 5100

gcgtggcgct gctgggctgc agctcggtgg gtttcatacg tatcgacaaa tcgttctcgc 5160

cggacacttc gccattcggc aaggagttgt cgtcacgctt gccttcttgt cttcggcccg 5220

tgtcgccctg aatggcgcgt ttgctgaccc cttgatcgcc gctgctatat gcaaaaatcg 5280

gtgtttcttc cggccgtggc tcatgccgct ccggttcgcc cctcggcggt agaggagcag 5340

caggctgaac agcctcttga accgctggag gatccggcgg cacctcaatc ggagctggat 5400

gaaatggctt ggtgtttgtt gcgatcaaag ttgacggcga tgcgttctca ttcaccttct 5460

tttggcgccc acctagccaa atgaggctta atgataacgc gagaacgaca cctccgacga 5520

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gcgtttcaca tcgggcctca ccgtgcccgt ttgcggcctt tggccaacgg gatcgtaagc 5700

ggtgttccag atacatagta ctgtgtggcc atccctcaga cgccaacctc gggaaaccga 5760

agaaatctcg acatcgctcc ctttaactga atagttggca acagcttcct tgccatcagg 5820

attgatggtg tagatggagg gtatgcgtac attgcccgga aagtggaata ccgtcgtaaa 5880

tccattgtcg aagacttcga gtggcaacag cgaacgatcg ccttgggcga cgtagtgcca 5940

attactgtcc gccgcaccaa gggctgtgac aggctgatcc aataaattct cagctttccg 6000

ttgatattgt gcttccgcgt gtagtctgtc cacaacagcc ttctgttgtg cctcccttcg 6060

ccgagccgcc gcatcgtcgg cggggtaggc gaattggacg ctgtaataga gatcgggctg 6120

ctctttatcg aggtgggaca gagtcttgga acttatactg aaaacataac ggcgcatccc 6180

ggagtcgctt gcggttagca cgattactgg ctgaggcgtg aggacctggc ttgccttgaa 6240

aaatagataa tttccccgcg gtagggctgc tagatctttg ctatttgaaa cggcaaccgc 6300

tgtcaccgtt tcgttcgtgg cgaatgttac gaccaaagta gctccaaccg ccgtcgagag 6360

gcgcaccact tgatcgggat tgtaagccaa ataacgcatg cgcggatcta gcttgcccgc 6420

cattggagtg tcttcagcct ccgcaccagt cgcagcggca aataaacatg ctaaaatgaa 6480

aagtgctttt ctgatcatgg ttcgctgtgg cctacgtttg aaacggtatc ttccgatgtc 6540

tgataggagg tgacaaccag acctgccggg ttggttagtc tcaatctgcc gggcaagctg 6600

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acgacgaggg tccttttata gcgaatttgc tgcgtgcttg gagttacatc atttgaagcg 6720

atgtgctcga cctccaccct gccgcgtttg ccaagaatga cttgaggcga actgggattg 6780

ggatagttga agaattgctg gtaatcctgg cgcactgttg gggcactgaa gttcgatacc 6840

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tcgctgtcaa cggtgccgtc cggccgtatc catagatata cgggcacaag cctgctcaac 7020

ggcaccattg tggctatagc gaacgcttga gcaacatttc ccaaaatcgc gatagctgcg 7080

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tctacttcct tatagtgctc ggcaaggctt tcgcgcgcca ctagcatggc atattcaggc 7200

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ccccacattc agcgggaaga tcgggccttt gcagctcgct aatgtgtcgt ttgtctggca 7320

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agattgggtt gcgccgctcc agtaactgcc tccaatgttg ccggcgatcg ccggcaaagc 7500

gacaatgagc gcatcccctg tcagaaaaaa catatcgagt tcgtaaagac caatgatctt 7560

ggccgcggtc gtaccggcga aggtgattac accaagcata agggtgagcg cagtcgcttc 7620

ggttaggatg acgatcgttg ccacgaggtt taagaggaga agcaagagac cgtaggtgat 7680

aagttgcccg atccacttag ctgcgatgtc ccgcgtgcga tcaaaaatat atccgacgag 7740

gatcagaggc ccgatcgcga gaagcacttt cgtgagaatt ccaacggcgt cgtaaactcc 7800

gaaggcagac cagagcgtgc cgtaaaggac ccactgtgcc ccttggaaag caaggatgtc 7860

ctggtcgttc atcggaccga tttcggatgc gattttctga aaaacggcct gggtcacggc 7920

gaacattgta tccaactgtg ccggaacagt ctgcagaggc aagccggtta cactaaactg 7980

ctgaacaaag tttgggaccg tcttttcgaa gatggaaacc acatagtctt ggtagttagc 8040

ctgcccaaca attagagcaa caacgatggt gaccgtgatc acccgagtga taccgctacg 8100

ggtatcgact tcgccgcgta tgactaaaat accctgaaca ataatccaaa gagtgacaca 8160

ggcgatcaat ggcgcactca ccgcctcctg gatagtctca agcatcgagt ccaagcctgt 8220

cgtgaaggct acatcgaaga tcgtatgaat ggccgtaaac ggcgccggaa tcgtgaaatt 8280

catcgattgg acctgaactt gactggtttg tcgcataatg ttggataaaa tgagctcgca 8340

ttcggcgagg atgcgggcgg atgaacaaat cgcccagcct taggggaggg caccaaagat 8400

gacagcggtc ttttgatgct ccttgcgttg agcggccgcc tcttccgcct cgtgaaggcc 8460

ggcctgcgcg gtagtcatcg ttaataggct tgtcgcctgt acattttgaa tcattgcgtc 8520

atggatctgc ttgagaagca aaccattggt cacggttgcc tgcatgatat tgcgagatcg 8580

ggaaagctga gcagacgtat cagcattcgc cgtcaagcgt ttgtccatcg tttccagatt 8640

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ttcagcatca ctacccacga ctgcacgatc tgtatcgctg gtgatcgcac gtgccgtggt 8760

cgacattggc attcgcggcg aaaacatttc attgtctagg tccttcgtcg aaggatactg 8820

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aaccatcgct atagtctgag tgagattctc cgcagtcgcg agcgcagtcg cgagcgtctc 8940

agcctccgtt gccgggtcgc taacaacaaa ctgcgcccgc gcgggctgaa tatatagaaa 9000

gctgcaggtc aaaactgttg caataagttg cgtcgtcttc atcgtttcct accttatcaa 9060

tcttctgcct cgtggtgacg ggccatgaat tcgctgagcc agccagatga gttgccttct 9120

tgtgcctcgc gtagtcgagt tgcaaagcgc accgtgttgg cacgccccga aagcacggcg 9180

acatattcac gcatatcccg cagatcaaat tcgcagatga cgcttccact ttctcgttta 9240

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gtacatttca gtccatcgac ataagccgat cgatctgcgg ttggtgatgg atagaaaatc 9360

ttcgtcatac attgcgcaac caagctggct cctagcggcg attccagaac atgctctggt 9420

tgctgcgttg ccagtattag catcccgttg ttttttcgaa cggtcaggag gaatttgtcg 9480

acgacagtcg aaaatttagg gtttaacaaa taggcgcgaa actcatcgca gctcatcaca 9540

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catacttcct cgtattcgag aagatgcgtc atgtcgaagc cggtaatcga cggatctaac 9660

tttacttcgt caacttcgcc gtcaaatgcc cagccaagcg catggccccg gcaccagcgt 9720

tggagccgcg ctcctgcgcc ttcggcgggc ccatgcaaca aaaattcacg taaccccgcg 9780

attgaacgca tttgtggatc aaacgagagc tgacgatgga taccacggac cagacggcgg 9840

ttctcttccg gagaaatccc accccgacca tcactctcga tgagagccac gatccattcg 9900

cgcagaaaat cgtgtgaggc tgctgtgttt tctaggccac gcaacggcgc caacccgctg 9960

ggtgtgcctc tgtgaagtgc caaatatgtt cctcctgtgg cgcgaaccag caattcgcca 10020

ccccggtcct tgtcaaagaa cacgaccgta cctgcacggt cgaccatgct ctgttcgagc 10080

atggctagaa caaacatcat gagcgtcgtc ttacccctcc cgataggccc gaatattgcc 10140

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aatcgggcaa tcgcgttgcc ccagtggcct gagctggcgc cctctggaaa gttttcgaaa 10260

gagacaaacc ctgcgaaatt gcgtgaagtg attgcgccag ggcgtgtgcg ccacttaaaa 10320

ttccccggca attgggacca ataggccgct tccataccaa taccttcttg gacaaccacg 10380

gcacctgcat ccgccattcg tgtccgagcc cgcgcgcccc tgtccccaag actattgaga 10440

tcgtctgcat agacgcaaag gctcaaatga tgtgagccca taacgaattc gttgctcgca 10500

agtgcgtcct cagcctcgga taatttgccg atttgagtca cggctttatc gccggaactc 10560

agcatctggc tcgatttgag gctaagtttc gcgtgcgctt gcgggcgagt caggaacgaa 10620

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cattgtggcg gggtcagtgc cgccacccgc agattgcgct gcggcgggtc cggatgagga 12000

aatgctccat gcaattgcac cgcacaagct tggggcgcag ctcgatatca cgcgcatcat 12060

cgcattcgag agcgagaggc gatttagatg taaacggtat ctctcaaagc atcgcatcaa 12120

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tcctggtgtg gcggtggcgg agcgattaaa ccgccagcgc catcctcctg cgagcggcgc 12240

tgatatgacc cccaaacatc ccacgtctct tcggatttta gcgcctcgtg atcgtctttt 12300

ggaggctcga ttaacgcggg caccagcgat tgagcagctg tttcaacttt tcgcacgtag 12360

ccgtttgcaa aaccgccgat gaaattaccg gtgttgtaag cggagatcgc ccgacgaagc 12420

gcaaattgct tctcgtcaat cgtttcgccg cctgcataac gacttttcag catgtttgca 12480

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aaatttcgag agtttatttg catgaggcca acatccagcg aatgccgtgc atcgagacgg 12600

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ttgtcatgaa tcgctaaagg atcaaagcga ctctccacct tagctatcgc cgcaagcgta 12720

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atcacactca gaatatgatc ccagacgtct gcctcacgcc atcgtacaaa gcgattgtag 13560

caggttgtac aggaaccgta tcgatcagga acgtctgccc agggcgggcc cgtccggaag 13620

cgccacaaga tgacattgat cacccgcgtc aacgcgcggc acgcgacgcg gcttatttgg 13680

gaacaaagga ctgaacaaca gtccattcga aatcggtgac atcaaagcgg ggacgggtta 13740

tcagtggcct ccaagtcaag cctcaatgaa tcaaaatcag accgatttgc aaacctgatt 13800

tatgagtgtg cggcctaaat gatgaaatcg tccttctaga tcgcctccgt ggtgtagcaa 13860

cacctcgcag tatcgccgtg ctgaccttgg ccagggaatt gactggcaag ggtgctttca 13920

catgaccgct cttttggccg cgatagatga tttcgttgct gctttgggca cgtagaagga 13980

gagaagtcat atcggagaaa ttcctcctgg cgcgagagcc tgctctatcg cgacggcatc 14040

ccactgtcgg gaacagaccg gatcattcac gaggcgaaag tcgtcaacac atgcgttata 14100

ggcatcttcc cttgaaggat gatcttgttg ctgccaatct ggaggtgcgg cagccgcagg 14160

cagatgcgat ctcagcgcaa cttgcggcaa aacatctcac tcacctgaaa accactagcg 14220

agtctcgcga tcagacgaag gccttttact taacgacaca atatccgatg tctgcatcac 14280

aggcgtcgct atcccagtca atactaaagc ggtgcaggaa ctaaagatta ctgatgactt 14340

aggcgtgcca cgaggcctga gacgacgcgc gtagacagtt ttttgaaatc attatcaaag 14400

tgatggcctc cgctgaagcc tatcacctct gcgccggtct gtcggagaga tgggcaagca 14460

ttattacggt cttcgcgccc gtacatgcat tggacgattg cagggtcaat ggatctgaga 14520

tcatccagag gattgccgcc cttaccttcc gtttcgagtt ggagccagcc cctaaatgag 14580

acgacatagt cgacttgatg tgacaatgcc aagagagaga tttgcttaac ccgatttttt 14640

tgctcaagcg taagcctatt gaagcttgcc ggcatgacgt ccgcgccgaa agaatatcct 14700

acaagtaaaa cattctgcac accgaaatgc ttggtgtaga catcgattat gtgaccaaga 14760

tccttagcag tttcgcttgg ggaccgctcc gaccagaaat accgaagtga actgacgcca 14820

atgacaggaa tcccttccgt ctgcagatag gtaccatcga tagatctgct gcctcgcgcg 14880

tttcggtgat gacggtgaaa acctctgaca catgcagctc ccggagacgg tcacagcttg 14940

tctgtaagcg gatgccggga gcagacaagc ccgtcagggc gcgtcagcgg gtgttggcgg 15000

gtgtcggggc gcagccatga cccagtcacg tagcgatagc ggagtgtata ctggcttaac 15060

tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga gtgcaccata tgcggtgtga aataccgcac 15120

agatgcgtaa ggagaaaata ccgcatcagg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg 15180

ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg 15240

ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag 15300

gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac 15360

gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga 15420

taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt 15480

accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc 15540

tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc 15600

cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta 15660

agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat 15720

gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca 15780

gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct 15840

tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt 15900

acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct 15960

cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc 16020

acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa 16080

acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta 16140

tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc 16200

ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat 16260

ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta 16320

tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt 16380

aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct gcaggggggg gggggggggg gttccattgt 16440

tcattccacg gacaaaaaca gagaaaggaa acgacagagg ccaaaaagct cgctttcagc 16500

acctgtcgtt tcctttcttt tcagagggta ttttaaataa aaacattaag ttatgacgaa 16560

gaagaacgga aacgccttaa accggaaaat tttcataaat agcgaaaacc cgcgaggtcg 16620

ccgccccgta acctgtcgga tcaccggaaa ggacccgtaa agtgataatg attatcatct 16680

acatatcaca acgtgcgtgg aggccatcaa accacgtcaa ataatcaatt atgacgcagg 16740

tatcgtatta attgatctgc atcaacttaa cgtaaaaaca acttcagaca atacaaatca 16800

gcgacactga atacggggca acctcatgtc cccccccccc ccccccctgc aggcatcgtg 16860

gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga 16920

gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt 16980

gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct 17040

cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca 17100

ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaac acgggataat 17160

accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga 17220

aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc 17280

aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg 17340

caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc 17400

ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt 17460

gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca 17520

cctgacgtct aagaaaccat tattatcatg acattaacct ataaaaatag gcgtatcacg 17580

aggccctttc gtcttcaaga attcggagct tttgccattc tcaccggatt cagtcgtcac 17640

tcatggtgat ttctcacttg ataaccttat ttttgacgag gggaaattaa taggttgtat 17700

tgatgttgga cgagtcggaa tcgcagaccg ataccaggat cttgccatcc tatggaactg 17760

cctcggtgag ttttctcctt cattacagaa acggcttttt caaaaatatg gtattgataa 17820

tcctgatatg aataaattgc agtttcattt gatgctcgat gagtttttct aatcagaatt 17880

ggttaattgg ttgtaacact ggcagagcat tacgctgact tgacgggacg gcggctttgt 17940

tgaataaatc gaacttttgc tgagttgaag gatcagatca cgcatcttcc cgacaacgca 18000

gaccgttccg tggcaaagca aaagttcaaa atcaccaact ggtccaccta caacaaagct 18060

ctcatcaacc gtggctccct cactttctgg ctggatgatg gggcgattca ggcctggtat 18120

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gagcgcggcc gtgaggcttg gacgctaggg cagggcatga aaaagcccgt agcgggctgc 18240

tacgggcgtc tgacgcggtg gaaaggggga ggggatgttg tctacatggc tctgctgtag 18300

tgagtgggtt gcgctccggc agcggtcctg atcaatcgtc accctttctc ggtccttcaa 18360

cgttcctgac aacgagcctc cttttcgcca atccatcgac aatcaccgcg agtccctgct 18420

cgaacgctgc gtccggaccg gcttcgtcga aggcgtctat cgcggcccgc aacagcggcg 18480

agagcggagc ctgttcaacg gtgccgccgc gctcgccggc atcgctgtcg ccggcctgct 18540

cctcaagcac ggccccaaca gtgaagtagc tgattgtcat cagcgcattg acggcgtccc 18600

cggccgaaaa acccgcctcg cagaggaagc gaagctgcgc gtcggccgtt tccatctgcg 18660

gtgcgcccgg tcgcgtgccg gcatggatgc gcgcgccatc gcggtaggcg agcagcgcct 18720

gcctgaagct gcgggcattc ccgatcagaa atgagcgcca gtcgtcgtcg gctctcggca 18780

ccgaatgcgt atgattctcc gccagcatgg cttcggccag tgcgtcgagc agcgcccgct 18840

tgttcctgaa gtgccagtaa agcgccggct gctgaacccc caaccgttcc gccagtttgc 18900

gtgtcgtcag accgtctacg ccgacctcgt tcaacaggtc cagggcggca cggatcactg 18960

tattcggctg caactttgtc atgcttgaca ctttatcact gataaacata atatgtccac 19020

caacttatca gtgataaaga atccgcgcgt tcaatcggac cagcggaggc tggtccggag 19080

gccagacgtg aaacccaaca tacccctgat cgtaattctg agcactgtcg cgctcgacgc 19140

tgtcggcatc ggcctgatta tgccggtgct gccgggcctc ctgcgcgatc tggttcactc 19200

gaacgacgtc accgcccact atggcattct gctggcgctg tatgcgttgg tgcaatttgc 19260

ctgcgcacct gtgctgggcg cgctgtcgga tcgtttcggg cggcggccaa tcttgctcgt 19320

ctcgctggcc ggcgccactg tcgactacgc catcatggcg acagcgcctt tcctttgggt 19380

tctctatatc gggcggatcg tggccggcat caccggggcg actggggcgg tagccggcgc 19440

ttatattgcc gatatcactg atggcgatga gcgcgcgcgg cacttcggct tcatgagcgc 19500

ctgtttcggg ttcgggatgg tcgcgggacc tgtgctcggt gggctgatgg gcggtttctc 19560

cccccacgct ccgttcttcg ccgcggcagc cttgaacggc ctcaatttcc tgacgggctg 19620

tttccttttg ccggagtcgc acaaaggcga acgccggccg ttacgccggg aggctctcaa 19680

cccgctcgct tcgttccggt gggcccgggg catgaccgtc gtcgccgccc tgatggcggt 19740

cttcttcatc atgcaacttg tcggacaggt gccggccgcg ctttgggtca ttttcggcga 19800

ggatcgcttt cactgggacg cgaccacgat cggcatttcg cttgccgcat ttggcattct 19860

gcattcactc gcccaggcaa tgatcaccgg ccctgtagcc gcccggctcg gcgaaaggcg 19920

ggcactcatg ctcggaatga ttgccgacgg cacaggctac atcctgcttg ccttcgcgac 19980

acggggatgg atggcgttcc cgatcatggt cctgcttgct tcgggtggca tcggaatgcc 20040

ggcgctgcaa gcaatgttgt ccaggcaggt ggatgaggaa cgtcaggggc agctgcaagg 20100

ctcactggcg gcgctcacca gcctgacctc gatcgtcgga cccctcctct tcacggcgat 20160

ctatgcggct tctataacaa cgtggaacgg gtgggcatgg attgcaggcg ctgccctcta 20220

cttgctctgc ctgccggcgc tgcgtcgcgg gctttggagc ggcgcagggc aacgagccga 20280

tcgctgatcg tggaaacgat aggcctatgc catgcgggtc aaggcgactt ccggcaagct 20340

atacgcgccc taggagtgcg gttggaacgt tggcccagcc agatactccc gatcacgagc 20400

aggacgccga tgatttgaag cgcactcagc gtctgatcca agaacaacca tcctagcaac 20460

acggcggtcc ccgggctgag aaagcccagt aaggaaacaa ctgtaggttc gagtcgcgag 20520

atcccccgga accaaaggaa gtaggttaaa cccgctccga tcaggccgag ccacgccagg 20580

ccgagaacat tggttcctgt aggcatcggg attggcggat caaacactaa agctactgga 20640

acgagcagaa gtcctccggc cgccagttgc caggcggtaa aggtgagcag aggcacggga 20700

ggttgccact tgcgggtcag cacggttccg aacgccatgg aaaccgcccc cgccaggccc 20760

gctgcgacgc cgacaggatc tagcgctgcg tttggtgtca acaccaacag cgccacgccc 20820

gcagttccgc aaatagcccc caggaccgcc atcaatcgta tcgggctacc tagcagagcg 20880

gcagagatga acacgaccat cagcggctgc acagcgccta ccgtcgccgc gaccccgccc 20940

ggcaggcggt agaccgaaat aaacaacaag ctccagaata gcgaaatatt aagtgcgccg 21000

aggatgaaga tgcgcatcca ccagattccc gttggaatct gtcggacgat catcacgagc 21060

aataaacccg ccggcaacgc ccgcagcagc ataccggcga cccctcggcc tcgctgttcg 21120

ggctccacga aaacgccgga cagatgcgcc ttgtgagcgt ccttggggcc gtcctcctgt 21180

ttgaagaccg acagcccaat gatctcgccg tcgatgtagg cgccgaatgc cacggcatct 21240

cgcaaccgtt cagcgaacgc ctccatgggc tttttctcct cgtgctcgta aacggacccg 21300

aacatctctg gagctttctt cagggccgac aatcggatct cgcggaaatc ctgcacgtcg 21360

gccgctccaa gccgtcgaat ctgagcctta atcacaattg tcaattttaa tcctctgttt 21420

atcggcagtt cgtagagcgc gccgtgcgtc ccgagcgata ctgagcgaag caagtgcgtc 21480

gagcagtgcc cgcttgttcc tgaaatgcca gtaaagcgct ggctgctgaa cccccagccg 21540

gaactgaccc cacaaggccc tagcgtttgc aatgcaccag gtcatcattg acccaggcgt 21600

gttccaccag gccgctgcct cgcaactctt cgcaggcttc gccgacctgc tcgcgccact 21660

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acggctcccg gtgcgagctg aaatagtcga acatccgtcg ggccgtcggc gacagcttgc 21780

ggtacttctc ccatatgaat ttcgtgtagt ggtcgccagc aaacagcacg acgatttcct 21840

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gcagcagcga caccgattcc aggtgcccaa cgcggtcgga cgtgaagccc atcgccgtcg 21960

cctgtaggcg cgacaggcat tcctcggcct tcgtgtaata ccggccattg atcgaccagc 22020

ccaggtcctg gcaaagctcg tagaacgtga aggtgatcgg ctcgccgata ggggtgcgct 22080

tcgcgtactc caacacctgc tgccacacca gttcgtcatc gtcggcccgc agctcgacgc 22140

cggtgtaggt gatcttcacg tccttgttga cgtggaaaat gaccttgttt tgcagcgcct 22200

cgcgcgggat tttcttgttg cgcgtggtga acagggcaga gcgggccgtg tcgtttggca 22260

tcgctcgcat cgtgtccggc cacggcgcaa tatcgaacaa ggaaagctgc atttccttga 22320

tctgctgctt cgtgtgtttc agcaacgcgg cctgcttggc ctcgctgacc tgttttgcca 22380

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tcgacttcgc caaacctgcc gcctcctgtt cgagacgacg cgaacgctcc acggcggccg 22500

atggcgcggg cagggcaggg ggagccagtt gcacgctgtc gcgctcgatc ttggccgtag 22560

cttgctggac catcgagccg acggactgga aggtttcgcg gggcgcacgc atgacggtgc 22620

ggcttgcgat ggtttcggca tcctcggcgg aaaaccccgc gtcgatcagt tcttgcctgt 22680

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ccggggcaat gtgcccttat tcctgatttg acccgcctgg tgccttggtg tccagataat 22800

ccaccttatc ggcaatgaag tcggtcccgt agaccgtctg gccgtccttc tcgtacttgg 22860

tattccgaat cttgccctgc acgaatacca gcgacccctt gcccaaatac ttgccgtggg 22920

cctcggcctg agagccaaaa cacttgatgc ggaagaagtc ggtgcgctcc tgcttgtcgc 22980

cggcatcgtt gcgccactct tcattaaccg ctatatcgaa aattgcttgc ggcttgttag 23040

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ttccgctgtg tacaaccaga tatttttcac caacatcctt cgtctgctcg atgagcgggg 23280

catgacgaaa catgagctgt cggagagggc aggggtttca atttcgtttt tatcagactt 23340

aaccaacggt aaggccaacc cctcgttgaa ggtgatggag gccattgccg acgccctgga 23400

aactccccta cctcttctcc tggagtccac cgaccttgac cgcgaggcac tcgcggagat 23460

tgcgggtcat cctttcaaga gcagcgtgcc gcccggatac gaacgcatca gtgtggtttt 23520

gccgtcacat aaggcgttta tcgtaaagaa atggggcgac gacacccgaa aaaagctgcg 23580

tggaaggctc tgacgccaag ggttagggct tgcacttcct tctttagccg ctaaaacggc 23640

cccttctctg cgggccgtcg gctcgcgcat catatcgaca tcctcaacgg aagccgtgcc 23700

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gtacgtcgag gcgggcatca tgacccgcga gcaatacgag gtcattaaaa gcgccgtcgc 24300

ggcgcatcga aacatcctcg tcattggcgg tactggctcg ggcaagacca cgctcgtcaa 24360

cgcgatcatc aatgaaatgg tcgccttcaa cccgtctgag cgcgtcgtca tcatcgagga 24420

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ctcgatgacg ctgctgctca agacaacgct gcgtatgcgc cccgaccgca tcctggtcgg 24540

tgaggtacgt ggccccgaag cccttgatct gttgatggcc tggaacaccg ggcatgaagg 24600

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tatcagcatg cacccggatt caccgaaacc cattgagccg ctgattggcg aggcggttca 24720

tgtggtcgtc catatcgcca ggacccctag cggccgtcga gtgcaagaaa ttctcgaagt 24780

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cttcgttctc gctctcgcgt tatccgcgca tccggcgatg gcctcggaag gcaccggcgg 24960

cagcttgcca tatgagagct ggctgacgaa cctgcgcaac tccgtaaccg gcccggtggc 25020

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cgtcaccgcc ggtacaagcc gtattacccg gcccgctcga ccccgttccg cgagaacacc 25560

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tcgatgacgg cgtaatcgtg ggcaagaacg gcagctttat ggctgcctgg ctgtacaagg 25800

gcgatgacaa cgcaagcagc accgaccagc agcgcgaagt agtgtccgcc cgcatcaacc 25860

aggccctcgc gggcctggga agtgggtgga tgatccatgt ggacgccgtg cggcgtcctg 25920

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aagaagagcg ctcggtcttg ccttgctcgt cggtgatgta cttcaccagc tccgcgaagt 26040

cgctcttctt gatggagcgc atggggacgt gcttggcaat cacgcgcacc ccccggccgt 26100

tttagcggct aaaaaagtca tggctctgcc ctcgggcgga ccacgcccat catgaccttg 26160

ccaagctcgt cctgcttctc ttcgatcttc gccagcaggg cgaggatcgt ggcatcaccg 26220

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ttttcctcaa tcgctcttcg ttcgtctgga aggcagtaca ccttgatagg tgggctgccc 26460

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cgttggatac accaaggaaa gtctacacga accctttggc aaaatcctgt atatcgtgcg 26700

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gaaaagcgct gcttccctgc tgttttgtgg aatatctacc gactggaaac aggcaaatgc 26820

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gcgttcctgg cggtgagggc ggatgtcgag gcggcgttag cgtccggcta tgcgctcgtc 27000

accatttggg agcacatgcg ggaaacgggg aaggtcaagt tctcctacga gacgttccgc 27060

tcgcacgcca ggcggcacat caaggccaag cccgccgatg tgcccgcacc gcaggccaag 27120

gctgcggaac ccgcgccggc acccaagacg ccggagccac ggcggccgaa gcaggggggc 27180

aaggctgaaa agccggcccc cgctgcggcc ccgaccggct tcaccttcaa cccaacaccg 27240

gacaaaaagg atctactgta atggcgaaaa ttcacatggt tttgcagggc aagggcgggg 27300

tcggcaagtc ggccatcgcc gcgatcattg cgcagtacaa gatggacaag gggcagacac 27360

ccttgtgcat cgacaccgac ccggtgaacg cgacgttcga gggctacaag gccctgaacg 27420

tccgccggct gaacatcatg gccggcgacg aaattaactc gcgcaacttc gacaccctgg 27480

tcgagctgat tgcgccgacc aaggatgacg tggtgatcga caacggtgcc agctcgttcg 27540

tgcctctgtc gcattacctc atcagcaacc aggtgccggc tctgctgcaa gaaatggggc 27600

atgagctggt catccatacc gtcgtcaccg gcggccaggc tctcctggac acggtgagcg 27660

gcttcgccca gctcgccagc cagttcccgg ccgaagcgct tttcgtggtc tggctgaacc 27720

cgtattgggg gcctatcgag catgagggca agagctttga gcagatgaag gcgtacacgg 27780

ccaacaaggc ccgcgtgtcg tccatcatcc agattccggc cctcaaggaa gaaacctacg 27840

gccgcgattt cagcgacatg ctgcaagagc ggctgacgtt cgaccaggcg ctggccgatg 27900

aatcgctcac gatcatgacg cggcaacgcc tcaagatcgt gcggcgcggc ctgtttgaac 27960

agctcgacgc ggcggccgtg ctatgagcga ccagattgaa gagctgatcc gggagattgc 28020

ggccaagcac ggcatcgccg tcggccgcga cgacccggtg ctgatcctgc ataccatcaa 28080

cgcccggctc atggccgaca gtgcggccaa gcaagaggaa atccttgccg cgttcaagga 28140

agagctggaa gggatcgccc atcgttgggg cgaggacgcc aaggccaaag cggagcggat 28200

gctgaacgcg gccctggcgg ccagcaagga cgcaatggcg aaggtaatga aggacagcgc 28260

cgcgcaggcg gccgaagcga tccgcaggga aatcgacgac ggccttggcc gccagctcgc 28320

ggccaaggtc gcggacgcgc ggcgcgtggc gatgatgaac atgatcgccg gcggcatggt 28380

gttgttcgcg gccgccctgg tggtgtgggc ctcgttatga atcgcagagg cgcagatgaa 28440

aaagcccggc gttgccgggc tttgtttttg cgttagctgg gcttgtttga caggcccaag 28500

ctctgactgc gcccgcgctc gcgctcctgg gcctgtttct tctcctgctc ctgcttgcgc 28560

atcagggcct ggtgccgtcg ggctgcttca cgcatcgaat cccagtcgcc ggccagctcg 28620

ggatgctccg cgcgcatctt gcgcgtcgcc agttcctcga tcttgggcgc gtgaatgccc 28680

atgccttcct tgatttcgcg caccatgtcc agccgcgtgt gcagggtctg caagcgggct 28740

tgctgttggg cctgctgctg ctgccaggcg gcctttgtac gcggcaggga cagcaagccg 28800

ggggcattgg actgtagctg ctgcaaacgc gcctgctgac ggtctacgag ctgttctagg 28860

cggtcctcga tgcgctccac ctggtcatgc tttgcctgca cgtagagcgc aagggtctgc 28920

tggtaggtct gctcgatggg cgcggattct aagagggcct gctgttccgt ctcggcctcc 28980

tgggccgcct gtagcaaatc ctcgccgctg ttgccgctgg actgctttac tgccggggac 29040

tgctgttgcc ctgctcgcgc cgtcgtcgca gttcggcttg cccccactcg attgactgct 29100

tcatttcgag ccgcagcgat gcgatctcgg attgcgtcaa cggacggggc agcgcggagg 29160

tgtccggctt ctccttgggt gagtcggtcg atgccatagc caaaggtttc cttccaaaat 29220

gcgtccattg ctggaccgtg tttctcattg atgcccgcaa gcatcttcgg cttgaccgcc 29280

aggtcaagcg cgccttcatg ggcggtcatg acggacgccg ccatgacctt gccgccgttg 29340

ttctcgatgt agccgcgtaa tgaggcaatg gtgccgccca tcgtcagcgt gtcatcgaca 29400

acgatgtact tctggccggg gatcacctcc ccctcgaaag tcgggttgaa cgccaggcga 29460

tgatctgaac cggctccggt tcgggcgacc ttctcccgct gcacaatgtc cgtttcgacc 29520

tcaaggccaa ggcggtcggc cagaacgacc gccatcatgg ccggaatctt gttgttcccc 29580

gccgcctcga cggcgaggac tggaacgatg cggggcttgt cgtcgccgat cagcgtcttg 29640

agctgggcaa cagtgtcgtc cgaaatcagg cgctcgacca aattaagcgc cgcttccgcg 29700

tcgccctgct tcgcagcctg gtattcaggc tcgttggtca aagaaccaag gtcgccgttg 29760

cgaaccacct tcgggaagtc tccccacggt gcgcgctcgg ctctgctgta gctgctcaag 29820

acgcctccct ttttagccgc taaaactcta acgagtgcgc ccgcgactca acttgacgct 29880

ttcggcactt acctgtgcct tgccacttgc gtcataggtg atgcttttcg cactcccgat 29940

ttcaggtact ttatcgaaat ctgaccgggc gtgcattaca aagttcttcc ccacctgttg 30000

gtaaatgctg ccgctatctg cgtggacgat gctgccgtcg tggcgctgcg acttatcggc 30060

cttttgggcc atatagatgt tgtaaatgcc aggtttcagg gccccggctt tatctacctt 30120

ctggttcgtc catgcgcctt ggttctcggt ctggacaatt ctttgcccat tcatgaccag 30180

gaggcggtgt ttcattgggt gactcctgac ggttgcctct ggtgttaaac gtgtcctggt 30240

cgcttgccgg ctaaaaaaaa gccgacctcg gcagttcgag gccggctttc cctagagccg 30300

ggcgcgtcaa ggttgttcca tctattttag tgaactgcgt tcgatttatc agttactttc 30360

ctcccgcttt gtgtttcctc ccactcgttt ccgcgtctag ccgacccctc aacatagcgg 30420

cctcttcttg ggctgccttt gcctcttgcc gcgcttcgtc acgctcggct tgcaccgtcg 30480

taaagcgctc ggcctgcctg gccgcctctt gcgccgccaa cttcctttgc tcctggtggg 30540

cctcggcgtc ggcctgcgcc ttcgctttca ccgctgccaa ctccgtgcgc aaactctccg 30600

cttcgcgcct ggtggcgtcg cgctcgccgc gaagcgcctg catttcctgg ttggccgcgt 30660

ccagggtctt gcggctctct tctttgaatg cgcgggcgtc ctggtgagcg tagtccagct 30720

cggcgcgcag ctcctgcgct cgacgctcca cctcgtcggc ccgctgcgtc gccagcgcgg 30780

cccgctgctc ggctcctgcc agggcggtgc gtgcttcggc cagggcttgc cgctggcgtg 30840

cggccagctc ggccgcctcg gcggcctgct gctctagcaa tgtaacgcgc gcctgggctt 30900

cttccagctc gcgggcctgc gcctcgaagg cgtcggccag ctccccgcgc acggcttcca 30960

actcgttgcg ctcacgatcc cagccggctt gcgctgcctg caacgattca ttggcaaggg 31020

cctgggcggc ttgccagagg gcggccacgg cctggttgcc ggcctgctgc accgcgtccg 31080

gcacctggac tgccagcggg gcggcctgcg ccgtgcgctg gcgtcgccat tcgcgcatgc 31140

cggcgctggc gtcgttcatg ttgacgcggg cggccttacg cactgcatcc acggtcggga 31200

agttctcccg gtcgccttgc tcgaacagct cgtccgcagc cgcaaaaatg cggtcgcgcg 31260

tctctttgtt cagttccatg ttggctccgg taattggtaa gaataataat actcttacct 31320

accttatcag cgcaagagtt tagctgaaca gttctcgact taacggcagg ttttttagcg 31380

gctgaagggc aggcaaaaaa agccccgcac ggtcggcggg ggcaaagggt cagcgggaag 31440

gggattagcg ggcgtcgggc ttcttcatgc gtcggggccg cgcttcttgg gatggagcac 31500

gacgaagcgc gcacgcgcat cgtcctcggc cctatcggcc cgcgtcgcgg tcaggaactt 31560

gtcgcgcgct aggtcctccc tggtgggcac caggggcatg aactcggcct gctcgatgta 31620

ggtccactcc atgaccgcat cgcagtcgag gccgcgttcc ttcaccgtct cttgcaggtc 31680

gcggtacgcc cgctcgttga gcggctggta acgggccaat tggtcgtaaa tggctgtcgg 31740

ccatgagcgg cctttcctgt tgagccagca gccgacgacg aagccggcaa tgcaggcccc 31800

tggcacaacc aggccgacgc cgggggcagg ggatggcagc agctcgccaa ccaggaaccc 31860

cgccgcgatg atgccgatgc cggtcaacca gcccttgaaa ctatccggcc ccgaaacacc 31920

cctgcgcatt gcctggatgc tgcgccggat agcttgcaac atcaggagcc gtttcttttg 31980

ttcgtcagtc atggtccgcc ctcaccagtt gttcgtatcg gtgtcggacg aactgaaatc 32040

gcaagagctg ccggtatcgg tccagccgct gtccgtgtcg ctgctgccga agcacggcga 32100

ggggtccgcg aacgccgcag acggcgtatc cggccgcagc gcatcgccca gcatggcccc 32160

ggtcagcgag ccgccggcca ggtagcccag catggtgctg ttggtcgccc cggccaccag 32220

ggccgacgtg acgaaatcgc cgtcattccc tctggattgt tcgctgctcg gcggggcagt 32280

gcgccgcgcc ggcggcgtcg tggatggctc gggttggctg gcctgcgacg gccggcgaaa 32340

ggtgcgcagc agctcgttat cgaccggctg cggcgtcggg gccgccgcct tgcgctgcgg 32400

tcggtgttcc ttcttcggct cgcgcagctt gaacagcatg atcgcggaaa ccagcagcaa 32460

cgccgcgcct acgcctcccg cgatgtagaa cagcatcgga ttcattcttc ggtcctcctt 32520

gtagcggaac cgttgtctgt gcggcgcggg tggcccgcgc cgctgtcttt ggggatcagc 32580

cctcgatgag cgcgaccagt ttcacgtcgg caaggttcgc ctcgaactcc tggccgtcgt 32640

cctcgtactt caaccaggca tagccttccg ccggcggccg acggttgagg ataaggcggg 32700

cagggcgctc gtcgtgctcg acctggacga tggccttttt cagcttgtcc gggtccggct 32760

ccttcgcgcc cttttccttg gcgtccttac cgtcctggtc gccgtcctcg ccgtcctggc 32820

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tgggatcgcg gcccttctcg tccaggaact cgcgcagcag cttgaccgtg ccgcgcgtga 32940

tttcctgggt gtcgtcgtca agccacgcct cgacttcctc cgggcgcttc ttgaaggccg 33000

tcaccagctc gttcaccacg gtcacgtcgc gcacgcggcc ggtgttgaac gcatcggcga 33060

tcttctccgg caggtccagc agcgtgacgt gctgggtgat gaacgccggc gacttgccga 33120

tttccttggc gatatcgcct ttcttcttgc ccttcgccag ctcgcggcca atgaagtcgg 33180

caatttcgcg cggggtcagc tcgttgcgtt gcaggttctc gataacctgg tcggcttcgt 33240

tgtagtcgtt gtcgatgaac gccgggatgg acttcttgcc ggcccacttc gagccacggt 33300

agcggcgggc gccgtgattg atgatatagc ggcccggctg ctcctggttc tcgcgcaccg 33360

aaatgggtga cttcaccccg cgctctttga tcgtggcacc gatttccgcg atgctctccg 33420

gggaaaagcc ggggttgtcg gccgtccgcg gctgatgcgg atcttcgtcg atcaggtcca 33480

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acaggtcgcc gatgctatcc aaccccaggc cggacggctg cgccgcgcct gcggcttcct 33600

gagcggccgc agcggtgttt ttcttggtgg tcttggcttg agccgcagtc attgggaaat 33660

ctccatcttc gtgaacacgt aatcagccag ggcgcgaacc tctttcgatg ccttgcgcgc 33720

ggccgttttc ttgatcttcc agaccggcac accggatgcg agggcatcgg cgatgctgct 33780

gcgcaggcca acggtggccg gaatcatcat cttggggtac gcggccagca gctcggcttg 33840

gtggcgcgcg tggcgcggat tccgcgcatc gaccttgctg ggcaccatgc caaggaattg 33900

cagcttggcg ttcttctggc gcacgttcgc aatggtcgtg accatcttct tgatgccctg 33960

gatgctgtac gcctcaagct cgatggggga cagcacatag tcggccgcga agagggcggc 34020

cgccaggccg acgccaaggg tcggggccgt gtcgatcagg cacacgtcga agccttggtt 34080

cgccagggcc ttgatgttcg ccccgaacag ctcgcgggcg tcgtccagcg acagccgttc 34140

ggcgttcgcc agtaccgggt tggactcgat gagggcgagg cgcgcggcct ggccgtcgcc 34200

ggctgcgggt gcggtttcgg tccagccgcc ggcagggaca gcgccgaaca gcttgcttgc 34260

atgcaggccg gtagcaaagt ccttgagcgt gtaggacgca ttgccctggg ggtccaggtc 34320

gatcacggca acccgcaagc cgcgctcgaa aaagtcgaag gcaagatgca caagggtcga 34380

agtcttgccg acgccgcctt tctggttggc cgtgaccaaa gttttcatcg tttggtttcc 34440

tgttttttct tggcgtccgc ttcccacttc cggacgatgt acgcctgatg ttccggcaga 34500

accgccgtta cccgcgcgta cccctcgggc aagttcttgt cctcgaacgc ggcccacacg 34560

cgatgcaccg cttgcgacac tgcgcccctg gtcagtccca gcgacgttgc gaacgtcgcc 34620

tgtggcttcc catcgactaa gacgccccgc gctatctcga tggtctgctg ccccacttcc 34680

agcccctgga tcgcctcctg gaactggctt tcggtaagcc gtttcttcat ggataacacc 34740

cataatttgc tccgcgcctt ggttgaacat agcggtgaca gccgccagca catgagagaa 34800

gtttagctaa acatttctcg cacgtcaaca cctttagccg ctaaaactcg tccttggcgt 34860

aacaaaacaa aagcccggaa accgggcttt cgtctcttgc cgcttatggc tctgcacccg 34920

gctccatcac caacaggtcg cgcacgcgct tcactcggtt gcggatcgac actgccagcc 34980

caacaaagcc ggttgccgcc gccgccagga tcgcgccgat gatgccggcc acaccggcca 35040

tcgcccacca ggtcgccgcc ttccggttcc attcctgctg gtactgcttc gcaatgctgg 35100

acctcggctc accataggct gaccgctcga tggcgtatgc cgcttctccc cttggcgtaa 35160

aacccagcgc cgcaggcggc attgccatgc tgcccgccgc tttcccgacc acgacgcgcg 35220

caccaggctt gcggtccaga ccttcggcca cggcgagctg cgcaaggaca taatcagccg 35280

ccgacttggc tccacgcgcc tcgatcagct cttgcactcg cgcgaaatcc ttggcctcca 35340

cggccgccat gaatcgcgca cgcggcgaag gctccgcagg gccggcgtcg tgatcgccgc 35400

cgagaatgcc cttcaccaag ttcgacgaca cgaaaatcat gctgacggct atcaccatca 35460

tgcagacgga tcgcacgaac ccgctgaatt gaacacgagc acggcacccg cgaccactat 35520

gccaagaatg cccaaggtaa aaattgccgg ccccgccatg aagtccgtga atgccccgac 35580

ggccgaagtg aagggcaggc cgccacccag gccgccgccc tcactgcccg gcacctggtc 35640

gctgaatgtc gatgccagca cctgcggcac gtcaatgctt ccgggcgtcg cgctcgggct 35700

gatcgcccat cccgttactg ccccgatccc ggcaatggca aggactgcca gcgctgccat 35760

ttttggggtg aggccgttcg cggccgaggg gcgcagcccc tggggggatg ggaggcccgc 35820

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cgcacagggc gcagccctgg ttaaaaacaa ggtttataaa tattggttta aaagcaggtt 35940

aaaagacagg ttagcggtgg ccgaaaaacg ggcggaaacc cttgcaaatg ctggattttc 36000

tgcctgtgga cagcccctca aatgtcaata ggtgcgcccc tcatctgtca gcactctgcc 36060

cctcaagtgt caaggatcgc gcccctcatc tgtcagtagt cgcgcccctc aagtgtcaat 36120

accgcagggc acttatcccc aggcttgtcc acatcatctg tgggaaactc gcgtaaaatc 36180

aggcgttttc gccgatttgc gaggctggcc agctccacgt cgccggccga aatcgagcct 36240

gcccctcatc tgtcaacgcc gcgccgggtg agtcggcccc tcaagtgtca acgtccgccc 36300

ctcatctgtc agtgagggcc aagttttccg cgaggtatcc acaacgccgg cggccgcggt 36360

gtctcgcaca cggcttcgac ggcgtttctg gcgcgtttgc agggccatag acggccgcca 36420

gcccagcggc gagggcaacc agcccggtga gcgtcggaaa ggcgctggaa gccccgtagc 36480

gacgcggaga ggggcgagac aagccaaggg cgcaggctcg atgcgcagca cgacatagcc 36540

ggttctcgca aggacgagaa tttccctgcg gtgcccctca agtgtcaatg aaagtttcca 36600

acgcgagcca ttcgcgagag ccttgagtcc acgctagatg agagctttgt tgtaggtgga 36660

ccagttggtg attttgaact tttgctttgc cacggaacgg tctgcgttgt cgggaagatg 36720

cgtgatctga tccttcaact cagcaaaagt tcgatttatt caacaaagcc acgttgtgtc 36780

tcaaaatctc tgatgttaca ttgcacaaga taaaaatata tcatcatgaa caataaaact 36840

gtctgcttac ataaacagta atacaagggg tgttatgagc catattcaac gggaaacgtc 36900

ttgctcgac 36909

<210>8

<211>13019

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>载体

<400>8

gttacccgga ccgaagctta gcccgggcat gcctgcagtg cagcgtgacc cggtcgtgcc 60

cctctctaga gataatgagc attgcatgtc taagttataa aaaattacca catatttttt 120

ttgtcacact tgtttgaagt gcagtttatc tatctttata catatattta aactttactc 180

tacgaataat ataatctata gtactacaat aatatcagtg ttttagagaa tcatataaat 240

gaacagttag acatggtcta aaggacaatt gagtattttg acaacaggac tctacagttt 300

tatcttttta gtgtgcatgt gttctccttt ttttttgcaa atagcttcac ctatataata 360

cttcatccat tttattagta catccattta gggtttaggg ttaatggttt ttatagacta 420

atttttttag tacatctatt ttattctatt ttagcctcta aattaagaaa actaaaactc 480

tattttagtt tttttattta ataatttaga tataaaatag aataaaataa agtgactaaa 540

aattaaacaa atacccttta agaaattaaa aaaactaagg aaacattttt cttgtttcga 600

gtagataatg ccagcctgtt aaacgccgtc gacgagtcta acggacacca accagcgaac 660

cagcagcgtc gcgtcgggcc aagcgaagca gacggcacgg catctctgtc gctgcctctg 720

gacccctctc gagagttccg ctccaccgtt ggacttgctc cgctgtcggc atccagaaat 780

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cacggcagct acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc ctcgcccgcc 900

gtaataaata gacaccccct ccacaccctc tttccccaac ctcgtgttgt tcggagcgca 960

cacacacaca accagatctc ccccaaatcc acccgtcggc acctccgctt caaggtacgc 1020

cgctcgtcct cccccccccc ccctctctac cttctctaga tcggcgttcc ggtccatggt 1080

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cgtgctgcta gcgttcgtac acggatgcga cctgtacgtc agacacgttc tgattgctaa 1200

cttgccagtg tttctctttg gggaatcctg ggatggctct agccgttccg cagacgggat 1260

cgatttcatg attttttttg tttcgttgca tagggtttgg tttgcccttt tcctttattt 1320

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aattgaagat gatggatgga aatatcgatc taggataggt atacatgttg atgcgggttt 1560

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agctatatgt ggattttttt agccctgcct tcatacgcta tttatttgct tggtactgtt 1980

tcttttgtcg atgctcaccc tgttgtttgg tgttacttct gcaggtcgac tctagaggat 2040

ccacaagttt gtacaaaaaa gctgaacgag aaacgtaaaa tgatataaat atcaatatat 2100

taaattagat tttgcataaa aaacagacta cataatactg taaaacacaa catatccagt 2160

cactatggcg gccgcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtataa 2220

tgtgtggatt ttgagttagg atttaaatac gcgttgatcc ggcttactaa aagccagata 2280

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tgactggata tgttgtgttt tacagtatta tgtagtctgt tttttatgca aaatctaatt 3000

taatatattg atatttatat cattttacgt ttctcgttca gctttcttgt acaaagtggt 3060

gttaacctag acttgtccat cttctggatt ggccaactta attaatgtat gaaataaaag 3120

gatgcacaca tagtgacatg ctaatcacta taatgtgggc atcaaagttg tgtgttatgt 3180

gtaattacta gttatctgaa taaaagagaa agagatcatc catatttctt atcctaaatg 3240

aatgtcacgt gtctttataa ttctttgatg aaccagatgc atttcattaa ccaaatccat 3300

atacatataa atattaatca tatataatta atatcaattg ggttagcaaa acaaatctag 3360

tctaggtgtg ttttgcgaat tgcggccgcc accgcggtgg agctcgaatt ccggtccggg 3420

tcacctttgt ccaccaagat ggaactgcgg ccgctcatta attaagtcag gcgcgcctct 3480

agttgaagac acgttcatgt cttcatcgta agaagacact cagtagtctt cggccagaat 3540

ggccatctgg attcagcagg cctagaaggc catttaaatc ctgaggatct ggtcttccta 3600

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cggtgccagt tcgacaccgt gtacaaggcc aagagcgtgc ccagcaagat gcccgagtgg 1500

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cagctgaccg agcacgccat cgccttcccc agcgccctgg cctgaagcgg cccatggata 1620

ttcgaacgcg taggtaccac atggttaacc tagacttgtc catcttctgg attggccaac 1680

ttaattaatg tatgaaataa aaggatgcac acatagtgac atgctaatca ctataatgtg 1740

ggcatcaaag ttgtgtgtta tgtgtaatta ctagttatct gaataaaaga gaaagagatc 1800

atccatattt cttatcctaa atgaatgtca cgtgtcttta taattctttg atgaaccaga 1860

tgcatttcat taaccaaatc catatacata taaatattaa tcatatataa ttaatatcaa 1920

ttgggttagc aaaacaaatc tagtctaggt gtgttttgcg aatgcggcca ttggcctaga 1980

aggccattta aatcctgagg atctggtctt cctaaggacc cgggatatcg ctatcaactt 2040

tgtatagaaa agttgaacga gaaacgtaaa atgatataaa tatcaatata ttaaattaga 2100

ttttgcataa aaaacagact acataatact gtaaaacaca acatatccag tcactatggt 2160

cgacctgcag actggctgtg tataagggag cctgacattt atattcccca gaacatcagg 2220

ttaatggcgt ttttgatgtc attttcgcgg tggctgagat cagccacttc ttccccgata 2280

acggagaccg gcacactggc catatcggtg gtcatcatgc gccagctttc atccccgata 2340

tgcaccaccg ggtaaagttc acgggggact ttatctgaca gcagacgtgc actggccagg 2400

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ctcgtcggca aaagagccgt tcatttcaat aaaccgggcg acctcagcca tcccttcctg 2580

attttccgct ttccagcgtt cggcacgcag acgacgggct tcattctgca tggttgtgct 2640

taccgaaccg gagatattga catcatatat gccttgagca actgatagct gtcgctgtca 2700

actgtcactg taatacgctg cttcatagca tacctctttt tgacatactt cgggtataca 2760

tatcagtata tattcttata ccgcaaaaat cagcgcgcaa atacgcatac tgttatctgg 2820

cttttagtaa gccggatcct ctagattacg ccccgcctgc cactcatcgc agtactgttg 2880

taattcatta agcattctgc cgacatggaa gccatcacaa acggcatgat gaacctgaat 2940

cgccagcggc atcagcacct tgtcgccttg cgtataatat ttgcccatgg tgaaaacggg 3000

ggcgaagaag ttgtccatat tggccacgtt taaatcaaaa ctggtgaaac tcacccaggg 3060

attggctgag acgaaaaaca tattctcaat aaacccttta gggaaatagg ccaggttttc 3120

accgtaacac gccacatctt gcgaatatat gtgtagaaac tgccggaaat cgtcgtggta 3180

ttcactccag agcgatgaaa acgtttcagt ttgctcatgg aaaacggtgt aacaagggtg 3240

aacactatcc catatcacca gctcaccgtc tttcattgcc atacggaatt ccggatgagc 3300

attcatcagg cgggcaagaa tgtgaataaa ggccggataa aacttgtgct tatttttctt 3360

tacggtcttt aaaaaggccg taatatccag ctgaacggtc tggttatagg tacattgagc 3420

aactgactga aatgcctcaa aatgttcttt acgatgccat tgggatatat caacggtggt 3480

atatccagtg atttttttct ccattttagc ttccttagct cctgaaaatc tcgacggatc 3540

ctaactcaaa atccacacat tatacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc ctggggtgcc 3600

ctaatgcggc cgccatagtg actggatatg ttgtgtttta cagtattatg tagtctgttt 3660

tttatgcaaa atctaattta atatattgat atttatatca ttttacgttt ctcgttcaac 3720

tttattatac aaagttgata gatatcggac cgattaaact ttaattcggt ccgaagcttg 3780

catgcctgca gtgcagcgtg acccggtcgt gcccctctct agagataatg agcattgcat 3840

gtctaagtta taaaaaatta ccacatattt tttttgtcac acttgtttga agtgcagttt 3900

atctatcttt atacatatat ttaaacttta ctctacgaat aatataatct atagtactac 3960

aataatatca gtgttttaga gaatcatata aatgaacagt tagacatggt ctaaaggaca 4020

attgagtatt ttgacaacag gactctacag ttttatcttt ttagtgtgca tgtgttctcc 4080

tttttttttg caaatagctt cacctatata atacttcatc cattttatta gtacatccat 4140

ttagggttta gggttaatgg tttttataga ctaatttttt tagtacatct attttattct 4200

attttagcct ctaaattaag aaaactaaaa ctctatttta gtttttttat ttaataattt 4260

agatataaaa tagaataaaa taaagtgact aaaaattaaa caaataccct ttaagaaatt 4320

aaaaaaacta aggaaacatt tttcttgttt cgagtagata atgccagcct gttaaacgcc 4380

gtcgacgagt ctaacggaca ccaaccagcg aaccagcagc gtcgcgtcgg gccaagcgaa 4440

gcagacggca cggcatctct gtcgctgcct ctggacccct ctcgagagtt ccgctccacc 4500

gttggacttg ctccgctgtc ggcatccaga aattgcgtgg cggagcggca gacgtgagcc 4560

ggcacggcag gcggcctcct cctcctctca cggcaccggc agctacgggg gattcctttc 4620

ccaccgctcc ttcgctttcc cttcctcgcc cgccgtaata aatagacacc ccctccacac 4680

cctctttccc caacctcgtg ttgttcggag cgcacacaca cacaaccaga tctcccccaa 4740

atccacccgt cggcacctcc gcttcaaggt acgccgctcg tcctcccccc cccccctctc 4800

taccttctct agatcggcgt tccggtccat gcatggttag ggcccggtag ttctacttct 4860

gttcatgttt gtgttagatc cgtgtttgtg ttagatccgt gctgctagcg ttcgtacacg 4920

gatgcgacct gtacgtcaga cacgttctga ttgctaactt gccagtgttt ctctttgggg 4980

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cgttgcatag ggtttggttt gcccttttcc tttatttcaa tatatgccgt gcacttgttt 5100

gtcgggtcat cttttcatgc ttttttttgt cttggttgtg atgatgtggt ctggttgggc 5160

ggtcgttcta gatcggagta gaattctgtt tcaaactacc tggtggattt attaattttg 5220

gatctgtatg tgtgtgccat acatattcat agttacgaat tgaagatgat ggatggaaat 5280

atcgatctag gataggtata catgttgatg cgggttttac tgatgcatat acagagatgc 5340

tttttgttcg cttggttgtg atgatgtggt gtggttgggc ggtcgttcat tcgttctaga 5400

tcggagtaga atactgtttc aaactacctg gtgtatttat taattttgga actgtatgtg 5460

tgtgtcatac atcttcatag ttacgagttt aagatggatg gaaatatcga tctaggatag 5520

gtatacatgt tgatgtgggt tttactgatg catatacatg atggcatatg cagcatctat 5580

tcatatgctc taaccttgag tacctatcta ttataataaa caagtatgtt ttataattat 5640

tttgatcttg atatacttgg atgatggcat atgcagcagc tatatgtgga tttttttagc 5700

cctgccttca tacgctattt atttgcttgg tactgtttct tttgtcgatg ctcaccctgt 5760

tgtttggtgt tacttctgca ggtcgacttt aacttagcct aggatccaca cgacaccatg 5820

tcccccgagc gccgccccgt cgagatccgc ccggccaccg ccgccgacat ggccgccgtg 5880

tgcgacatcg tgaaccacta catcgagacc tccaccgtga acttccgcac cgagccgcag 5940

accccgcagg agtggatcga cgacctggag cgcctccagg accgctaccc gtggctcgtg 6000

gccgaggtgg agggcgtggt ggccggcatc gcctacgccg gcccgtggaa ggcccgcaac 6060

gcctacgact ggaccgtgga gtccaccgtg tacgtgtccc accgccacca gcgcctcggc 6120

ctcggctcca ccctctacac ccacctcctc aagagcatgg aggcccaggg cttcaagtcc 6180

gtggtggccg tgatcggcct cccgaacgac ccgtccgtgc gcctccacga ggccctcggc 6240

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ggcttctggc agcgcgactt cgagctgccg gccccgccgc gcccggtgcg cccggtgacg 6360

cagatctccg gtggaggcgg cagcggtggc ggaggctccg gaggcggtgg ctccatggcc 6420

tcctccgagg acgtcatcaa ggagttcatg cgcttcaagg tgcgcatgga gggctccgtg 6480

aacggccacg agttcgagat cgagggcgag ggcgagggcc gcccctacga gggcacccag 6540

accgccaagc tgaaggtgac caagggcggc cccctgccct tcgcctggga catcctgtcc 6600

ccccagttcc agtacggctc caaggtgtac gtgaagcacc ccgccgacat ccccgactac 6660

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ggcgtggtga ccgtgaccca ggactcctcc ctgcaggacg gctccttcat ctacaaggtg 6780

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aaggccctga agctgaagga cggcggccac tacctggtgg agttcaagtc catctacatg 6960

gccaagaagc ccgtgcagct gcccggctac tactacgtgg actccaagct ggacatcacc 7020

tcccacaacg aggactacac catcgtggag cagtacgagc gcgccgaggg ccgccaccac 7080

ctgttcctgt agtcaggatc tgagtcgaaa cctagacttg tccatcttct ggattggcca 7140

acttaattaa tgtatgaaat aaaaggatgc acacatagtg acatgctaat cactataatg 7200

tgggcatcaa agttgtgtgt tatgtgtaat tactagttat ctgaataaaa gagaaagaga 7260

tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt tataattctt tgatgaacca 7320

gatgcatttc attaaccaaa tccatataca tataaatatt aatcatatat aattaatatc 7380

aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg cgaatgcggc cgccaccgcg 7440

gtggagctcg aattcattcc gattaatcgt ggcctcttgc tcttcaggat gaagagctat 7500

gtttaaacgt gcaagcgcta ctagacaatt cagtacatta aaaacgtccg caatgtgtta 7560

ttaagttgtc taagcgtcaa tttgtttaca ccacaatata tcctgccacc agccagccaa 7620

cagctccccg accggcagct cggcacaaaa tcaccactcg atacaggcag cccatcagtc 7680

cgggacggcg tcagcgggag agccgttgta aggcggcaga ctttgctcat gttaccgatg 7740

ctattcggaa gaacggcaac taagctgccg ggtttgaaac acggatgatc tcgcggaggg 7800

tagcatgttg attgtaacga tgacagagcg ttgctgcctg tgatcaaata tcatctccct 7860

cgcagagatc cgaattatca gccttcttat tcatttctcg cttaaccgtg acaggctgtc 7920

gatcttgaga actatgccga cataatagga aatcgctgga taaagccgct gaggaagctg 7980

agtggcgcta tttctttaga agtgaacgtt gacgatcgtc gaccgtaccc cgatgaatta 8040

attcggacgt acgttctgaa cacagctgga tacttacttg ggcgattgtc atacatgaca 8100

tcaacaatgt acccgtttgt gtaaccgtct cttggaggtt cgtatgacac tagtggttcc 8160

cctcagcttg cgactagatg ttgaggccta acattttatt agagagcagg ctagttgctt 8220

agatacatga tcttcaggcc gttatctgtc agggcaagcg aaaattggcc atttatgacg 8280

accaatgccc cgcagaagct cccatctttg ccgccataga cgccgcgccc cccttttggg 8340

gtgtagaaca tccttttgcc agatgtggaa aagaagttcg ttgtcccatt gttggcaatg 8400

acgtagtagc cggcgaaagt gcgagaccca tttgcgctat atataagcct acgatttccg 8460

ttgcgactat tgtcgtaatt ggatgaacta ttatcgtagt tgctctcaga gttgtcgtaa 8520

tttgatggac tattgtcgta attgcttatg gagttgtcgt agttgcttgg agaaatgtcg 8580

tagttggatg gggagtagtc atagggaaga cgagcttcat ccactaaaac aattggcagg 8640

tcagcaagtg cctgccccga tgccatcgca agtacgaggc ttagaaccac cttcaacaga 8700

tcgcgcatag tcttccccag ctctctaacg cttgagttaa gccgcgccgc gaagcggcgt 8760

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tagtgaacaa attcttccaa ctgatctgcg cgcgaggcca agcgatcttc ttgtccaaga 8880

taagcctgcc tagcttcaag tatgacgggc tgatactggg ccggcaggcg ctccattgcc 8940

cagtcggcag cgacatcctt cggcgcgatt ttgccggtta ctgcgctgta ccaaatgcgg 9000

gacaacgtaa gcactacatt tcgctcatcg ccagcccagt cgggcggcga gttccatagc 9060

gttaaggttt catttagcgc ctcaaataga tcctgttcag gaaccggatc aaagagttcc 9120

tccgccgctg gacctaccaa ggcaacgcta tgttctcttg cttttgtcag caagatagcc 9180

agatcaatgt cgatcgtggc tggctcgaag atacctgcaa gaatgtcatt gcgctgccat 9240

tctccaaatt gcagttcgcg cttagctgga taacgccacg gaatgatgtc gtcgtgcaca 9300

acaatggtga cttctacagc gcggagaatc tcgctctctc caggggaagc cgaagtttcc 9360

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acggccagca acgtcggttc gagatggcgc tcgatgacgc caactacctc tgatagttga 9540

gtcgatactt cggcgatcac cgcttccctc atgatgttta actcctgaat taagccgcgc 9600

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tgtgtctcta atcgtatgcc aaggagctgt ctgcttagtg cccacttttt cgcaaattcg 9840

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gaggctagat cgttccatgt tgagttgagt tcaatcttcc cgacaagctc ttggtcgatg 9960

aatgcgccat agcaagcaga gtcttcatca gagtcatcat ccgagatgta atccttccgg 10020

taggggctca cacttctggt agatagttca aagccttggt cggataggtg cacatcgaac 10080

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accgaaatct tcatatgacg cctaacgcct ggcacagcgg atcgcaaacc tggcgcggct 10200

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attgctgggg atttcaggaa agtaaacatc accttccggc tcgatgtcta ttgtagatat 10380

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ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc 11100

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tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac 11400

caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg 11460

atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 11520

acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa 11580

ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta 11640

ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt 11700

tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag 11760

tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca 11820

gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc 11880

tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt 11940

tgttgccatt gctgcagggg gggggggggg gggggacttc cattgttcat tccacggaca 12000

aaaacagaga aaggaaacga cagaggccaa aaagcctcgc tttcagcacc tgtcgtttcc 12060

tttcttttca gagggtattt taaataaaaa cattaagtta tgacgaagaa gaacggaaac 12120

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tgtcggatca ccggaaagga cccgtaaagt gataatgatt atcatctaca tatcacaacg 12240

tgcgtggagg ccatcaaacc acgtcaaata atcaattatg acgcaggtat cgtattaatt 12300

gatctgcatc aacttaacgt aaaaacaact tcagacaata caaatcagcg acactgaata 12360

cggggcaacc tcatgtcccc cccccccccc cccctgcagg catcgtggtg tcacgctcgt 12420

cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc aaggcgagtt acatgatccc 12480

ccatgttgtg caaaaaagcg gttagctcct tcggtcctcc gatcgttgtc agaagtaagt 12540

tggccgcagt gttatcactc atggttatgg cagcactgca taattctctt actgtcatgc 12600

catccgtaag atgcttttct gtgactggtg agtactcaac caagtcattc tgagaatagt 12660

gtatgcggcg accgagttgc tcttgcccgg cgtcaacacg ggataatacc gcgccacata 12720

gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc ggggcgaaaa ctctcaagga 12780

tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg tgcacccaac tgatcttcag 12840

catcttttac tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac aggaaggcaa aatgccgcaa 12900

aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat actcttcctt tttcaatatt 12960

attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga 13020

aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgtctaag 13080

aaaccattat tatcatgaca ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc 13140

ttcaagaatt ggtcgacgat cttgctgcgt tcggatattt tcgtggagtt cccgccacag 13200

acccggattg aaggcgagat ccagcaactc gcgccagatc atcctgtgac ggaactttgg 13260

cgcgtgatga ctggccagga cgtcggccga aagagcgaca agcagatcac gcttttcgac 13320

agcgtcggat ttgcgatcga ggatttttcg gcgctgcgct acgtccgcga ccgcgttgag 13380

ggatcaagcc acagcagccc actcgacctt ctagccgacc cagacgagcc aagggatctt 13440

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atcgtacgga atgccaagca ctcccgaggg gaaccctgtg gttggcatgc acatacaaat 13560

ggacgaacgg ataaaccttt tcacgccctt ttaaatatcc gttattctaa taaacgctct 13620

tttctcttag gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc 13680

gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg 13740

atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc 13800

actcagc 13807

<210>11

<211>4678

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>载体

<400>11

gaaaggccca gtcttccgac tgagcctttc gttttatttg atgcctggca gttccctact 60

ctcgcgttaa cgctagcatg gatgttttcc cagtcacgac gttgtaaaac gacggccagt 120

cttaagctcg ggcccgcgtt aacgctacca tggagctcca aataatgatt ttattttgac 180

tgatagtgac ctgttcgttg caacaaattg ataagcaatg cttttttata atgccaactt 240

tgtatagaaa agttgggccg aattcgagct cggtacggcc agaatggccc ggaccgggtt 300

accgaattcg agctcggtac cctgggatcc ctggtaatta ttggctgtag gattctaaac 360

agagcctaaa tagctggaat agctctagcc ctcaatccaa actaatgata tctatactta 420

tgcaactcta aatttttatt ctaaaagtaa tatttcattt ttgtcaacga gattctctac 480

tctattccac aatcttttga agcaatattt accttaaatc tgtactctat accaataatc 540

atatattcta ttatttattt ttatctctct cctaaggagc atccccctat gtctgcatgg 600

cccccgcctc gggtcccaat ctcttgctct gctagtagca cagaagaaaa cactagaaat 660

gacttgcttg acttagagta tcagataaac atcatgttta cttaacttta atttgtatcg 720

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ttactgaaaa gtgagcggga aagaagagtt tcagaccatc aaggagcggg ccaagcgcaa 7500

gctggaacgc gacatgggtg cggacctgtt ggccgcgctc aacgacccga aaaccgttga 7560

agtcatgctc aacgcggacg gcaaggtgtg gcacgaacgc cttggcgagc cgatgcggta 7620

catctgcgac atgcggccca gccagtcgca ggcgattata gaaacggtgg ccggattcca 7680

cggcaaagag gtcacgcggc attcgcccat cctggaaggc gagttcccct tggatggcag 7740

ccgctttgcc ggccaattgc cgccggtcgt ggccgcgcca acctttgcga tccgcaagcg 7800

cgcggtcgcc atcttcacgc tggaacagta cgtcgaggcg ggcatcatga cccgcgagca 7860

atacgaggtc attaaaagcg ccgtcgcggc gcatcgaaac atcctcgtca ttggcggtac 7920

tggctcgggc aagaccacgc tcgtcaacgc gatcatcaat gaaatggtcg ccttcaaccc 7980

gtctgagcgc gtcgtcatca tcgaggacac cggcgaaatc cagtgcgccg cagagaacgc 8040

cgtccaatac cacaccagca tcgacgtctc gatgacgctg ctgctcaaga caacgctgcg 8100

tatgcgcccc gaccgcatcc tggtcggtga ggtacgtggc cccgaagccc ttgatctgtt 8160

gatggcctgg aacaccgggc atgaaggagg tgccgccacc ctgcacgcaa acaaccccaa 8220

agcgggcctg agccggctcg ccatgcttat cagcatgcac ccggattcac cgaaacccat 8280

tgagccgctg attggcgagg cggttcatgt ggtcgtccat atcgccagga cccctagcgg 8340

ccgtcgagtg caagaaattc tcgaagttct tggttacgag aacggccagt acatcaccaa 8400

aaccctgtaa ggagtatttc caatgacaac ggctgttccg ttccgtctga ccatgaatcg 8460

cggcattttg ttctaccttg ccgtgttctt cgttctcgct ctcgcgttat ccgcgcatcc 8520

ggcgatggcc tcggaaggca ccggcggcag cttgccatat gagagctggc tgacgaacct 8580

gcgcaactcc gtaaccggcc cggtggcctt cgcgctgtcc atcatcggca tcgtcgtcgc 8640

cggcggcgtg ctgatcttcg gcggcgaact caacgccttc ttccgaaccc tgatcttcct 8700

ggttctggtg atggcgctgc tggtcggcgc gcagaacgtg atgagcacct tcttcggtcg 8760

tggtgccgaa atcgcggccc tcggcaacgg ggcgctgcac caggtgcaag tcgcggcggc 8820

ggatgccgtg cgtgcggtag cggctggacg gctcgcctaa tcatggctct gcgcacgatc 8880

cccatccgtc gcgcaggcaa ccgagaaaac ctgttcatgg gtggtgatcg tgaactggtg 8940

atgttctcgg gcctgatggc gtttgcgctg attttcagcg cccaagagct gcgggccacc 9000

gtggtcggtc tgatcctgtg gttcggggcg ctctatgcgt tccgaatcat ggcgaaggcc 9060

gatccgaaga tgcggttcgt gtacctgcgt caccgccggt acaagccgta ttacccggcc 9120

cgctcgaccc cgttccgcga gaacaccaat agccaaggga agcaataccg atgatccaag 9180

caattgcgat tgcaatcgcg ggcctcggcg cgcttctgtt gttcatcctc tttgcccgca 9240

tccgcgcggt cgatgccgaa ctgaaactga aaaagcatcg ttccaaggac gccggcctgg 9300

ccgatctgct caactacgcc gctgtcgtcg atgacggcgt aatcgtgggc aagaacggca 9360

gctttatggc tgcctggctg tacaagggcg atgacaacgc aagcagcacc gaccagcagc 9420

gcgaagtagt gtccgcccgc atcaaccagg ccctcgcggg cctgggaagt gggtggatga 9480

tccatgtgga cgccgtgcgg cgtcctgctc cgaactacgc ggagcggggc ctgtcggcgt 9540

tccctgaccg tctgacggca gcgattgaag aagagcgctc ggtcttgcct tgctcgtcgg 9600

tgatgtactt caccagctcc gcgaagtcgc tcttcttgat ggagcgcatg gggacgtgct 9660

tggcaatcac gcgcaccccc cggccgtttt agcggctaaa aaagtcatgg ctctgccctc 9720

gggcggacca cgcccatcat gaccttgcca agctcgtcct gcttctcttc gatcttcgcc 9780

agcagggcga ggatcgtggc atcaccgaac cgcgccgtgc gcgggtcgtc ggtgagccag 9840

agtttcagca ggccgcccag gcggcccagg tcgccattga tgcgggccag ctcgcggacg 9900

tgctcatagt ccacgacgcc cgtgattttg tagccctggc cgacggccag caggtaggcc 9960

gacaggctca tgccggccgc cgccgccttt tcctcaatcg ctcttcgttc gtctggaagg 10020

cagtacacct tgataggtgg gctgcccttc ctggttggct tggtttcatc agccatccgc 10080

ttgccctcat ctgttacgcc ggcggtagcc ggccagcctc gcagagcagg attcccgttg 10140

agcaccgcca ggtgcgaata agggacagtg aagaaggaac acccgctcgc gggtgggcct 10200

acttcaccta tcctgcccgg ctgacgccgt tggatacacc aaggaaagtc tacacgaacc 10260

ctttggcaaa atcctgtata tcgtgcgaaa aaggatggat ataccgaaaa aatcgctata 10320

atgaccccga agcagggtta tgcagcggaa aagcgctgct tccctgctgt tttgtggaat 10380

atctaccgac tggaaacagg caaatgcagg aaattactga actgagggga caggcgagag 10440

acgatgccaa agagctacac cgacgagctg gccgagtggg ttgaatcccg cgcggccaag 10500

aagcgccggc gtgatgaggc tgcggttgcg ttcctggcgg tgagggcgga tgtcgaggcg 10560

gcgttagcgt ccggctatgc gctcgtcacc atttgggagc acatgcggga aacggggaag 10620

gtcaagttct cctacgagac gttccgctcg cacgccaggc ggcacatcaa ggccaagccc 10680

gccgatgtgc ccgcaccgca ggccaaggct gcggaacccg cgccggcacc caagacgccg 10740

gagccacggc ggccgaagca ggggggcaag gctgaaaagc cggcccccgc tgcggccccg 10800

accggcttca ccttcaaccc aacaccggac aaaaaggatc tactgtaatg gcgaaaattc 10860

acatggtttt gcagggcaag ggcggggtcg gcaagtcggc catcgccgcg atcattgcgc 10920

agtacaagat ggacaagggg cagacaccct tgtgcatcga caccgacccg gtgaacgcga 10980

cgttcgaggg ctacaaggcc ctgaacgtcc gccggctgaa catcatggcc ggcgacgaaa 11040

ttaactcgcg caacttcgac accctggtcg agctgattgc gccgaccaag gatgacgtgg 11100

tgatcgacaa cggtgccagc tcgttcgtgc ctctgtcgca ttacctcatc agcaaccagg 11160

tgccggctct gctgcaagaa atggggcatg agctggtcat ccataccgtc gtcaccggcg 11220

gccaggctct cctggacacg gtgagcggct tcgcccagct cgccagccag ttcccggccg 11280

aagcgctttt cgtggtctgg ctgaacccgt attgggggcc tatcgagcat gagggcaaga 11340

gctttgagca gatgaaggcg tacacggcca acaaggcccg cgtgtcgtcc atcatccaga 11400

ttccggccct caaggaagaa acctacggcc gcgatttcag cgacatgctg caagagcggc 11460

tgacgttcga ccaggcgctg gccgatgaat cgctcacgat catgacgcgg caacgcctca 11520

agatcgtgcg gcgcggcctg tttgaacagc tcgacgcggc ggccgtgcta tgagcgacca 11580

gattgaagag ctgatccggg agattgcggc caagcacggc atcgccgtcg gccgcgacga 11640

cccggtgctg atcctgcata ccatcaacgc ccggctcatg gccgacagtg cggccaagca 11700

agaggaaatc cttgccgcgt tcaaggaaga gctggaaggg atcgcccatc gttggggcga 11760

ggacgccaag gccaaagcgg agcggatgct gaacgcggcc ctggcggcca gcaaggacgc 11820

aatggcgaag gtaatgaagg acagcgccgc gcaggcggcc gaagcgatcc gcagggaaat 11880

cgacgacggc cttggccgcc agctcgcggc caaggtcgcg gacgcgcggc gcgtggcgat 11940

gatgaacatg atcgccggcg gcatggtgtt gttcgcggcc gccctggtgg tgtgggcctc 12000

gttatgaatc gcagaggcgc agatgaaaaa gcccggcgtt gccgggcttt gtttttgcgt 12060

tagctgggct tgtttgacag gcccaagctc tgactgcgcc cgcgctcgcg ctcctgggcc 12120

tgtttcttct cctgctcctg cttgcgcatc agggcctggt gccgtcgggc tgcttcacgc 12180

atcgaatccc agtcgccggc cagctcggga tgctccgcgc gcatcttgcg cgtcgccagt 12240

tcctcgatct tgggcgcgtg aatgcccatg ccttccttga tttcgcgcac catgtccagc 12300

cgcgtgtgca gggtctgcaa gcgggcttgc tgttgggcct gctgctgctg ccaggcggcc 12360

tttgtacgcg gcagggacag caagccgggg gcattggact gtagctgctg caaacgcgcc 12420

tgctgacggt ctacgagctg ttctaggcgg tcctcgatgc gctccacctg gtcatgcttt 12480

gcctgcacgt agagcgcaag ggtctgctgg taggtctgct cgatgggcgc ggattctaag 12540

agggcctgct gttccgtctc ggcctcctgg gccgcctgta gcaaatcctc gccgctgttg 12600

ccgctggact gctttactgc cggggactgc tgttgccctg ctcgcgccgt cgtcgcagtt 12660

cggcttgccc ccactcgatt gactgcttca tttcgagccg cagcgatgcg atctcggatt 12720

gcgtcaacgg acggggcagc gcggaggtgt ccggcttctc cttgggtgag tcggtcgatg 12780

ccatagccaa aggtttcctt ccaaaatgcg tccattgctg gaccgtgttt ctcattgatg 12840

cccgcaagca tcttcggctt gaccgccagg tcaagcgcgc cttcatgggc ggtcatgacg 12900

gacgccgcca tgaccttgcc gccgttgttc tcgatgtagc cgcgtaatga ggcaatggtg 12960

ccgcccatcg tcagcgtgtc atcgacaacg atgtacttct ggccggggat cacctccccc 13020

tcgaaagtcg ggttgaacgc caggcgatga tctgaaccgg ctccggttcg ggcgaccttc 13080

tcccgctgca caatgtccgt ttcgacctca aggccaaggc ggtcggccag aacgaccgcc 13140

atcatggccg gaatcttgtt gttccccgcc gcctcgacgg cgaggactgg aacgatgcgg 13200

ggcttgtcgt cgccgatcag cgtcttgagc tgggcaacag tgtcgtccga aatcaggcgc 13260

tcgaccaaat taagcgccgc ttccgcgtcg ccctgcttcg cagcctggta ttcaggctcg 13320

ttggtcaaag aaccaaggtc gccgttgcga accaccttcg ggaagtctcc ccacggtgcg 13380

cgctcggctc tgctgtagct gctcaagacg cctccctttt tagccgctaa aactctaacg 13440

agtgcgcccg cgactcaact tgacgctttc ggcacttacc tgtgccttgc cacttgcgtc 13500

ataggtgatg cttttcgcac tcccgatttc aggtacttta tcgaaatctg accgggcgtg 13560

cattacaaag ttcttcccca cctgttggta aatgctgccg ctatctgcgt ggacgatgct 13620

gccgtcgtgg cgctgcgact tatcggcctt ttgggccata tagatgttgt aaatgccagg 13680

tttcagggcc ccggctttat ctaccttctg gttcgtccat gcgccttggt tctcggtctg 13740

gacaattctt tgcccattca tgaccaggag gcggtgtttc attgggtgac tcctgacggt 13800

tgcctctggt gttaaacgtg tcctggtcgc ttgccggcta aaaaaaagcc gacctcggca 13860

gttcgaggcc ggctttccct agagccgggc gcgtcaaggt tgttccatct attttagtga 13920

actgcgttcg atttatcagt tactttcctc ccgctttgtg tttcctccca ctcgtttccg 13980

cgtctagccg acccctcaac atagcggcct cttcttgggc tgcctttgcc tcttgccgcg 14040

cttcgtcacg ctcggcttgc accgtcgtaa agcgctcggc ctgcctggcc gcctcttgcg 14100

ccgccaactt cctttgctcc tggtgggcct cggcgtcggc ctgcgccttc gctttcaccg 14160

ctgccaactc cgtgcgcaaa ctctccgctt cgcgcctggt ggcgtcgcgc tcgccgcgaa 14220

gcgcctgcat ttcctggttg gccgcgtcca gggtcttgcg gctctcttct ttgaatgcgc 14280

gggcgtcctg gtgagcgtag tccagctcgg cgcgcagctc ctgcgctcga cgctccacct 14340

cgtcggcccg ctgcgtcgcc agcgcggccc gctgctcggc tcctgccagg gcggtgcgtg 14400

cttcggccag ggcttgccgc tggcgtgcgg ccagctcggc cgcctcggcg gcctgctgct 14460

ctagcaatgt aacgcgcgcc tgggcttctt ccagctcgcg ggcctgcgcc tcgaaggcgt 14520

cggccagctc cccgcgcacg gcttccaact cgttgcgctc acgatcccag ccggcttgcg 14580

ctgcctgcaa cgattcattg gcaagggcct gggcggcttg ccagagggcg gccacggcct 14640

ggttgccggc ctgctgcacc gcgtccggca cctggactgc cagcggggcg gcctgcgccg 14700

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ccttacgcac tgcatccacg gtcgggaagt tctcccggtc gccttgctcg aacagctcgt 14820

ccgcagccgc aaaaatgcgg tcgcgcgtct ctttgttcag ttccatgttg gctccggtaa 14880

ttggtaagaa taataatact cttacctacc ttatcagcgc aagagtttag ctgaacagtt 14940

ctcgacttaa cggcaggttt tttagcggct gaagggcagg caaaaaaagc cccgcacggt 15000

cggcgggggc aaagggtcag cgggaagggg attagcgggc gtcgggcttc ttcatgcgtc 15060

ggggccgcgc ttcttgggat ggagcacgac gaagcgcgca cgcgcatcgt cctcggccct 15120

atcggcccgc gtcgcggtca ggaacttgtc gcgcgctagg tcctccctgg tgggcaccag 15180

gggcatgaac tcggcctgct cgatgtaggt ccactccatg accgcatcgc agtcgaggcc 15240

gcgttccttc accgtctctt gcaggtcgcg gtacgcccgc tcgttgagcg gctggtaacg 15300

ggccaattgg tcgtaaatgg ctgtcggcca tgagcggcct ttcctgttga gccagcagcc 15360

gacgacgaag ccggcaatgc aggcccctgg cacaaccagg ccgacgccgg gggcagggga 15420

tggcagcagc tcgccaacca ggaaccccgc cgcgatgatg ccgatgccgg tcaaccagcc 15480

cttgaaacta tccggccccg aaacacccct gcgcattgcc tggatgctgc gccggatagc 15540

ttgcaacatc aggagccgtt tcttttgttc gtcagtcatg gtccgccctc accagttgtt 15600

cgtatcggtg tcggacgaac tgaaatcgca agagctgccg gtatcggtcc agccgctgtc 15660

cgtgtcgctg ctgccgaagc acggcgaggg gtccgcgaac gccgcagacg gcgtatccgg 15720

ccgcagcgca tcgcccagca tggccccggt cagcgagccg ccggccaggt agcccagcat 15780

ggtgctgttg gtcgccccgg ccaccagggc cgacgtgacg aaatcgccgt cattccctct 15840

ggattgttcg ctgctcggcg gggcagtgcg ccgcgccggc ggcgtcgtgg atggctcggg 15900

ttggctggcc tgcgacggcc ggcgaaaggt gcgcagcagc tcgttatcga ccggctgcgg 15960

cgtcggggcc gccgccttgc gctgcggtcg gtgttccttc ttcggctcgc gcagcttgaa 16020

cagcatgatc gcggaaacca gcagcaacgc cgcgcctacg cctcccgcga tgtagaacag 16080

catcggattc attcttcggt cctccttgta gcggaaccgt tgtctgtgcg gcgcgggtgg 16140

cccgcgccgc tgtctttggg gatcagccct cgatgagcgc gaccagtttc acgtcggcaa 16200

ggttcgcctc gaactcctgg ccgtcgtcct cgtacttcaa ccaggcatag ccttccgccg 16260

gcggccgacg gttgaggata aggcgggcag ggcgctcgtc gtgctcgacc tggacgatgg 16320

cctttttcag cttgtccggg tccggctcct tcgcgccctt ttccttggcg tccttaccgt 16380

cctggtcgcc gtcctcgccg tcctggccgt cgccggcctc cgcgtcacgc tcggcatcag 16440

tctggccgtt gaaggcatcg acggtgttgg gatcgcggcc cttctcgtcc aggaactcgc 16500

gcagcagctt gaccgtgccg cgcgtgattt cctgggtgtc gtcgtcaagc cacgcctcga 16560

cttcctccgg gcgcttcttg aaggccgtca ccagctcgtt caccacggtc acgtcgcgca 16620

cgcggccggt gttgaacgca tcggcgatct tctccggcag gtccagcagc gtgacgtgct 16680

gggtgatgaa cgccggcgac ttgccgattt ccttggcgat atcgcctttc ttcttgccct 16740

tcgccagctc gcggccaatg aagtcggcaa tttcgcgcgg ggtcagctcg ttgcgttgca 16800

ggttctcgat aacctggtcg gcttcgttgt agtcgttgtc gatgaacgcc gggatggact 16860

tcttgccggc ccacttcgag ccacggtagc ggcgggcgcc gtgattgatg atatagcggc 16920

ccggctgctc ctggttctcg cgcaccgaaa tgggtgactt caccccgcgc tctttgatcg 16980

tggcaccgat ttccgcgatg ctctccgggg aaaagccggg gttgtcggcc gtccgcggct 17040

gatgcggatc ttcgtcgatc aggtccaggt ccagctcgat agggccggaa ccgccctgag 17100

acgccgcagg agcgtccagg aggctcgaca ggtcgccgat gctatccaac cccaggccgg 17160

acggctgcgc cgcgcctgcg gcttcctgag cggccgcagc ggtgtttttc ttggtggtct 17220

tggcttgagc cgcagtcatt gggaaatctc catcttcgtg aacacgtaat cagccagggc 17280

gcgaacctct ttcgatgcct tgcgcgcggc cgttttcttg atcttccaga ccggcacacc 17340

ggatgcgagg gcatcggcga tgctgctgcg caggccaacg gtggccggaa tcatcatctt 17400

ggggtacgcg gccagcagct cggcttggtg gcgcgcgtgg cgcggattcc gcgcatcgac 17460

cttgctgggc accatgccaa ggaattgcag cttggcgttc ttctggcgca cgttcgcaat 17520

ggtcgtgacc atcttcttga tgccctggat gctgtacgcc tcaagctcga tgggggacag 17580

cacatagtcg gccgcgaaga gggcggccgc caggccgacg ccaagggtcg gggccgtgtc 17640

gatcaggcac acgtcgaagc cttggttcgc cagggccttg atgttcgccc cgaacagctc 17700

gcgggcgtcg tccagcgaca gccgttcggc gttcgccagt accgggttgg actcgatgag 17760

ggcgaggcgc gcggcctggc cgtcgccggc tgcgggtgcg gtttcggtcc agccgccggc 17820

agggacagcg ccgaacagct tgcttgcatg caggccggta gcaaagtcct tgagcgtgta 17880

ggacgcattg ccctgggggt ccaggtcgat cacggcaacc cgcaagccgc gctcgaaaaa 17940

gtcgaaggca agatgcacaa gggtcgaagt cttgccgacg ccgcctttct ggttggccgt 18000

gaccaaagtt ttcatcgttt ggtttcctgt tttttcttgg cgtccgcttc ccacttccgg 18060

acgatgtacg cctgatgttc cggcagaacc gccgttaccc gcgcgtaccc ctcgggcaag 18120

ttcttgtcct cgaacgcggc ccacacgcga tgcaccgctt gcgacactgc gcccctggtc 18180

agtcccagcg acgttgcgaa cgtcgcctgt ggcttcccat cgactaagac gccccgcgct 18240

atctcgatgg tctgctgccc cacttccagc ccctggatcg cctcctggaa ctggctttcg 18300

gtaagccgtt tcttcatgga taacacccat aatttgctcc gcgccttggt tgaacatagc 18360

ggtgacagcc gccagcacat gagagaagtt tagctaaaca tttctcgcac gtcaacacct 18420

ttagccgcta aaactcgtcc ttggcgtaac aaaacaaaag cccggaaacc gggctttcgt 18480

ctcttgccgc ttatggctct gcacccggct ccatcaccaa caggtcgcgc acgcgcttca 18540

ctcggttgcg gatcgacact gccagcccaa caaagccggt tgccgccgcc gccaggatcg 18600

cgccgatgat gccggccaca ccggccatcg cccaccaggt cgccgccttc cggttccatt 18660

cctgctggta ctgcttcgca atgctggacc tcggctcacc ataggctgac cgctcgatgg 18720

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ccgccgcttt cccgaccacg acgcgcgcac caggcttgcg gtccagacct tcggccacgg 18840

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gcactcgcgc gaaatccttg gcctccacgg ccgccatgaa tcgcgcacgc ggcgaaggct 18960

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aatgcttccg ggcgtcgcgc tcgggctgat cgcccatccc gttactgccc cgatcccggc 19320

aatggcaagg actgccagcg ctgccatttt tggggtgagg ccgttcgcgg ccgaggggcg 19380

cagcccctgg ggggatggga ggcccgcgtt agcgggccgg gagggttcga gaaggggggg 19440

cacccccctt cggcgtgcgc ggtcacgcgc acagggcgca gccctggtta aaaacaaggt 19500

ttataaatat tggtttaaaa gcaggttaaa agacaggtta gcggtggccg aaaaacgggc 19560

ggaaaccctt gcaaatgctg gattttctgc ctgtggacag cccctcaaat gtcaataggt 19620

gcgcccctca tctgtcagca ctctgcccct caagtgtcaa ggatcgcgcc cctcatctgt 19680

cagtagtcgc gcccctcaag tgtcaatacc gcagggcact tatccccagg cttgtccaca 19740

tcatctgtgg gaaactcgcg taaaatcagg cgttttcgcc gatttgcgag gctggccagc 19800

tccacgtcgc cggccgaaat cgagcctgcc cctcatctgt caacgccgcg ccgggtgagt 19860

cggcccctca agtgtcaacg tccgcccctc atctgtcagt gagggccaag ttttccgcga 19920

ggtatccaca acgccggcgg ccgcggtgtc tcgcacacgg cttcgacggc gtttctggcg 19980

cgtttgcagg gccatagacg gccgccagcc cagcggcgag ggcaaccagc ccggtgagcg 20040

tcggaaaggc gctggaagcc ccgtagcgac gcggagaggg gcgagacaag ccaagggcgc 20100

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cccctcaagt gtcaatgaaa gtttccaacg cgagccattc gcgagagcct tgagtccacg 20220

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ggaacggtct gcgttgtcgg gaagatgcgt gatctgatcc ttcaactcag caaaagttcg 20340

atttattcaa caaagccacg ttgtgtctca aaatctctga tgttacattg cacaagataa 20400

aaatatatca tcatgaacaa taaaactgtc tgcttacata aacagtaata caaggggtgt 20460

tatgagccat attcaacggg aaacgtcttg ctcgactcta gagctcgttc ctcgaggcct 20520

cgaggcctcg aggaacggta cctgcgggga agcttacaat aatgtgtgtt gttaagtctt 20580

gttgcctgtc atcgtctgac tgactttcgt cataaatccc ggcctccgta acccagcttt 20640

gggcaagctc acggatttga tccggcggaa cgggaatatc gagatgccgg gctgaacgct 20700

gcagttccag ctttcccttt cgggacaggt actccagctg attgattatc tgctgaaggg 20760

tcttggttcc acctcctggc acaatgcgaa tgattacttg agcgcgatcg ggcatccaat 20820

tttctcccgt caggtgcgtg gtcaagtgct acaaggcacc tttcagtaac gagcgaccgt 20880

cgatccgtcg ccgggatacg gacaaaatgg agcgcagtag tccatcgagg gcggcgaaag 20940

cctcgccaaa agcaatacgt tcatctcgca cagcctccag atccgatcga gggtcttcgg 21000

cgtaggcaga tagaagcatg gatacattgc ttgagagtat tccgatggac tgaagtatgg 21060

cttccatctt ttctcgtgtg tctgcatcta tttcgagaaa gcccccgatg cggcgcaccg 21120

caacgcgaat tgccatacta tccgaaagtc ccagcaggcg cgcttgatag gaaaaggttt 21180

catactcggc cgatcgcaga cgggcactca cgaccttgaa cccttcaact ttcagggatc 21240

gatgctggtt gatggtagtc tcactcgacg tggctctggt gtgttttgac atagcttcct 21300

ccaaagaaag cggaaggtct ggatactcca gcacgaaatg tgcccgggta gacggatgga 21360

agtctagccc tgctcaatat gaaatcaaca gtacatttac agtcaatact gaatatactt 21420

gctacatttg caattgtctt ataacgaatg tgaaataaaa atagtgtaac aacgctttta 21480

ctcatcgata atcacaaaaa catttatacg aacaaaaata caaatgcact ccggtttcac 21540

aggataggcg ggatcagaat atgcaacttt tgacgttttg ttctttcaaa gggggtgctg 21600

gcaaaaccac cgcactcatg ggcctttgcg ctgctttggc aaatgacggt aaacgagtgg 21660

ccctctttga tgccgacgaa aaccggcctc tgacgcgatg gagagaaaac gccttacaaa 21720

gcagtactgg gatcctcgct gtgaagtcta ttccgccgac gaaatgcccc ttcttgaagc 21780

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tcccatgcat gaaagagatg catttgccgc gatgaaagaa cgcggcatgt tgcatcttac 22140

attactaaac acgggaactg atccgacgat gcgcctcata gagaggaatc ttcggattgc 22200

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ctccaggttt ttctttcagc gcgaccgccc gcgcctcaag tgtcgaaaac atatgacaac 22560

ctcgttcggc aatacagtcc ctcgaagtcg ctacaaatga ttttaaggcg cgcgttggac 22620

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ccttcaacta cagaaaaatc cgttctcgtt cagacctcac gcatgttccc ggttgcgttg 22740

ctcgaggtcg ctcgaagtca ttttgatccg ttggggttgg agaccgctcg agctttcggc 22800

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cttgctgttt ttatcagttg agggcttgac ggatccgcct caagtttgcg gcgcagccgc 23100

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agattaagtg tccagtcagt aaaacaaaaa gaccgtcggt ctttggagcg gacaacgttg 23340

gggcgcacgc gcaaggcaac ccgaatgcgt gcaagaaact ctctcgtact aaacggctta 23400

gcgataaaat cacttgctcc tagctcgagt gcaacaactt tatccgtctc ctcaaggcgg 23460

tcgccactga taattatgat tggaatatca gactttgccg ccagatttcg aacgatctca 23520

agcccatctt cacgacctaa atttagatca acaaccacga catcgaccgt cgcggaagag 23580

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gcggatgacg aaaatgcgaa ccaagtattt caattttatg acaaaagttc tcaatcgttg 23880

ttacaagtga aacgcttcga ggttacagct actattgatt aaggagatcg cctatggtct 23940

cgccccggcg tcgtgcgtcc gccgcgagcc agatctcgcc tacttcataa acgtcctcat 24000

aggcacggaa tggaatgatg acatcgatcg ccgtagagag catgtcaatc agtgtgcgat 24060

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tggtgattag cctttcctgg ggggggatgg cgctgatcaa ggtcttgctc attgttgtct 24420

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caagatcatc ataagagacg ggcaaaggca tcttggtaaa aatgccggct tggcgcacaa 24840

atgcctctcc aggtcgattg atcgcaattt cttcagtctt cgggtcatcg agccattcca 24900

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tctaagcgga aatttgaatt cattaagagc ggcggttcct cccccgcgtg gcgccgccag 25020

tcaggcggag ctggtaaaca ccaaagaaat cgaggtcccg tgctacgaaa atggaaacgg 25080

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cggcgtaggt gctagctgcc tggaaggcgc cttgaacaac actcaagagc atagctccgc 25260

taaaacgctg ccagaagtgg ctgtcgaccg agcccggcaa tcctgagcga ccgagttcgt 25320

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tgccacgatc aagaagcacg atattgttcg ttgttccacg aatatcctga ggcaagacac 25500

actttacata gcctgccaaa tttgtgtcga ttgcggtttg caagatgcac ggaattattg 25560

tcccttgcgt taccataaaa tcggggtgcg gcaagagcgt ggcgctgctg ggctgcagct 25620

cggtgggttt catacgtatc gacaaatcgt tctcgccgga cacttcgcca ttcggcaagg 25680

agttgtcgtc acgcttgcct tcttgtcttc ggcccgtgtc gccctgaatg gcgcgtttgc 25740

tgaccccttg atcgccgctg ctatatgcaa aaatcggtgt ttcttccggc cgtggctcat 25800

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ctggaggatc cggcggcacc tcaatcggag ctggatgaaa tggcttggtg tttgttgcga 25920

tcaaagttga cggcgatgcg ttctcattca ccttcttttg gcgcccacct agccaaatga 25980

ggcttaatga taacgcgaga acgacacctc cgacgatcaa tttctgagac cccgaaagac 26040

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aactgaatag ttggcaacag cttccttgcc atcaggattg atggtgtaga tggagggtat 26340

gcgtacattg cccggaaagt ggaataccgt cgtaaatcca ttgtcgaaga cttcgagtgg 26400

caacagcgaa cgatcgcctt gggcgacgta gtgccaatta ctgtccgccg caccaagggc 26460

tgtgacaggc tgatccaata aattctcagc tttccgttga tattgtgctt ccgcgtgtag 26520

tctgtccaca acagccttct gttgtgcctc ccttcgccga gccgccgcat cgtcggcggg 26580

gtaggcgaat tggacgctgt aatagagatc gggctgctct ttatcgaggt gggacagagt 26640

cttggaactt atactgaaaa cataacggcg catcccggag tcgcttgcgg ttagcacgat 26700

tactggctga ggcgtgagga cctggcttgc cttgaaaaat agataatttc cccgcggtag 26760

ggctgctaga tctttgctat ttgaaacggc aaccgctgtc accgtttcgt tcgtggcgaa 26820

tgttacgacc aaagtagctc caaccgccgt cgagaggcgc accacttgat cgggattgta 26880

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accagtcgca gcggcaaata aacatgctaa aatgaaaagt gcttttctga tcatggttcg 27000

ctgtggccta cgtttgaaac ggtatcttcc gatgtctgat aggaggtgac aaccagacct 27060

gccgggttgg ttagtctcaa tctgccgggc aagctggtca ccttttcgta gcgaactgtc 27120

gcggtccacg tactcaccac aggcattttg ccgtcaacga cgagggtcct tttatagcga 27180

atttgctgcg tgcttggagt tacatcattt gaagcgatgt gctcgacctc caccctgccg 27240

cgtttgccaa gaatgacttg aggcgaactg ggattgggat agttgaagaa ttgctggtaa 27300

tcctggcgca ctgttggggc actgaagttc gataccaggt cgtaggcgta ctgagcggtg 27360

tcggcatcat aactctcgcg caggcgaacg tactcccaca atgaggcgtt aacgacggcc 27420

tcctcttgag ttgcaggcaa tcgcgagaca gacacctcgc tgtcaacggt gccgtccggc 27480

cgtatccata gatatacggg cacaagcctg ctcaacggca ccattgtggc tatagcgaac 27540

gcttgagcaa catttcccaa aatcgcgata gctgcgacag ctgcaatgag tttggagaga 27600

cgtcgcgccg atttcgctcg cgcggtttga aaggcttcta cttccttata gtgctcggca 27660

aggctttcgc gcgccactag catggcatat tcaggccccg tcatagcgtc cacccgaatt 27720

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gcctttgcag ctcgctaatg tgtcgtttgt ctggcagccg ctcaaagcga caactaggca 27840

cagcaggcaa tacttcatag aattctccat tgaggcgaat ttttgcgcga cctagcctcg 27900

ctcaacctga gcgaagcgac ggtacaagct gctggcagat tgggttgcgc cgctccagta 27960

actgcctcca atgttgccgg cgatcgccgg caaagcgaca atgagcgcat cccctgtcag 28020

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gattacacca agcataaggg tgagcgcagt cgcttcggtt aggatgacga tcgttgccac 28140

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gatgtcccgc gtgcgatcaa aaatatatcc gacgaggatc agaggcccga tcgcgagaag 28260

cactttcgtg agaattccaa cggcgtcgta aactccgaag gcagaccaga gcgtgccgta 28320

aaggacccac tgtgcccctt ggaaagcaag gatgtcctgg tcgttcatcg gaccgatttc 28380

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ttcgaagatg gaaaccacat agtcttggta gttagcctgc ccaacaatta gagcaacaac 28560

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taaaataccc tgaacaataa tccaaagagt gacacaggcg atcaatggcg cactcaccgc 28680

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ggtttgtcgc ataatgttgg ataaaatgag ctcgcattcg gcgaggatgc gggcggatga 28860

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gcgttgagcg gccgcctctt ccgcctcgtg aaggccggcc tgcgcggtag tcatcgttaa 28980

taggcttgtc gcctgtacat tttgaatcat tgcgtcatgg atctgcttga gaagcaaacc 29040

attggtcacg gttgcctgca tgatattgcg agatcgggaa agctgagcag acgtatcagc 29100

attcgccgtc aagcgtttgt ccatcgtttc cagattgtca gccgcaatgc cagcgctgtt 29160

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acgatctgta tcgctggtga tcgcacgtgc cgtggtcgac attggcattc gcggcgaaaa 29280

catttcattg tctaggtcct tcgtcgaagg atactgattt ttctggttga gcgaagtcag 29340

tagtccagta acgccgtagg ccgacgtcaa catcgtaacc atcgctatag tctgagtgag 29400

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aagttgcgtc gtcttcatcg tttcctacct tatcaatctt ctgcctcgtg gtgacgggcc 29580

atgaattcgc tgagccagcc agatgagttg ccttcttgtg cctcgcgtag tcgagttgca 29640

aagcgcaccg tgttggcacg ccccgaaagc acggcgacat attcacgcat atcccgcaga 29700

tcaaattcgc agatgacgct tccactttct cgtttaagaa gaaacttacg gctgccgacc 29760

gtcatgtctt cacggatcgc ctgaaattcc ttttcggtac atttcagtcc atcgacataa 29820

gccgatcgat ctgcggttgg tgatggatag aaaatcttcg tcatacattg cgcaaccaag 29880

ctggctccta gcggcgattc cagaacatgc tctggttgct gcgttgccag tattagcatc 29940

ccgttgtttt ttcgaacggt caggaggaat ttgtcgacga cagtcgaaaa tttagggttt 30000

aacaaatagg cgcgaaactc atcgcagctc atcacaaaac ggcggccgtc gatcatggct 30060

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tgcgtcatgt cgaagccggt aatcgacgga tctaacttta cttcgtcaac ttcgccgtca 30180

aatgcccagc caagcgcatg gccccggcac cagcgttgga gccgcgctcc tgcgccttcg 30240

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gggatatagt cgaaaggcgt tccgccattg gtacgaaatc gggcaatcgc gttgccccag 30720

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ttgccgattt gagtcacggc tttatcgccg gaactcagca tctggctcga tttgaggcta 31080

agtttcgcgt gcgcttgcgg gcgagtcagg aacgaaaaac tctgcgtgag aacaagtgga 31140

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ccgcaaatga ctctgtcggt ataaatcgaa gcgccgagtg agccgctgac gaccggaacc 31320

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ccctgcttct cgcggatgcc aagacgatgc aggccatacg ctttaagaga gccagcgaca 31440

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tcaattctcg caatggtcat gatcgatccg tcttcaagaa ggacgatatg gtcgctgagg 31860

tggccaatat aagggagata gatctcaccg gatctttcgg tcgttccact cgcgccgagc 31920

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ccccccaaac tgcactatca atgcttcttc ccgcggtccg caaaaatagc aggacgacgc 32040

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aataagactt gattgtcgtc tgcggatttg ccgttgtcct ggtgtggcgg tggcggagcg 32700

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gtctcttcgg attttagcgc ctcgtgatcg tcttttggag gctcgattaa cgcgggcacc 32820

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tggagcgcac cgtcaggtgt cagaccgagc atagaaaaat ttcgagagtt tatttgcatg 33060

aggccaacat ccagcgaatg ccgtgcatcg agacggtgcc tgacgacttg ggttgcttgg 33120

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aagcgactct ccaccttagc tatcgccgca agcgtagatg tcgcaactga tggggcacac 33240

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agctcgcaac taacaccgcc tctcccgttg gaagaagtgc gttgttttat gttgaagatt 33420

atcgggaggg tcggttactc gaaaattttc aattgcttct ttatgatttc aattgaagcg 33480

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tcggcgaggt tacgctgtct gtaaacccat tcgatgaacg ggaagcttcc ttccgattgc 33660

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cggtcatgcg gcggtcatgg gcttgacccg ctgtcagcgc aagacggatc ggtcaaccgt 33840

cggcatcgac aacagcgtga atcttggtgg tcaaaccgcc acgggaacgt cccatacagc 33900

catcgtcttg atcccgctgt ttcccgtcgc cgcatgttgg tggacgcgga cacaggaact 33960

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taccgccccg tccggtcctg cccgtcaccg agatctgatc cgtcgaccaa cctagacttg 39540

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acatcgaaca cttcacgaac aatgaaatgg ttctcagcat ccaatgtttc cgccacctgc 47940

tcagggatca ccgaaatctt catatgacgc ctaacgcctg gcacagcgga tcgcaaacct 48000

ggcgcggctt ttggcacaaa aggcgtgaca ggtttgcgaa tccgttgctg ccacttgtta 48060

acccttttgc cagatttggt aactataatt tatgttagag gcgaagtctt gggtaaaaac 48120

tggcctaaaa ttgctgggga tttcaggaaa gtaaacatca ccttccggct cgatgtctat 48180

tgtagatata tgtagtgtat ctacttgatc gggggatctg ctgcctcgcg cgtttcggtg 48240

atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag 48300

cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg 48360

gcgcagccat gacccagtca cgtagcgata gcggagtgta tactggctta actatgcggc 48420

atcagagcag attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt 48480

aaggagaaaa taccgcatca ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc 48540

ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac 48600

agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa 48660

ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca 48720

caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc 48780

gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata 48840

cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta 48900

tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca 48960

gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga 49020

cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg 49080

tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg 49140

tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg 49200

caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag 49260

aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa 49320

cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat 49380

ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc 49440

tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc 49500

atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc 49560

tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc 49620

aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc 49680

catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt 49740

gcgcaacgtt gttgccattg ctgca 49765

<210>14

<211>4222

<212>DNA

<213>玉米

<400>14

ggcaccaacc aagagaaaag tagcaactca cacacagtag gagaggagag gaaagaaccc 60

agcgatagat cagagtcgga gagaaaattt tgcctcctcc catcggaatc tagctaatta 120

ttttccagtc cttctccccc atgtaagtct ccctctccca tccccgtcgc ctgcacctac 180

cggaagcgaa gccttctaca gttcaggtcc atatccgggt cgccgccgtc ggctagctct 240

aggcggacat ggtggccgct tgccggagca cggcctccac ctacgcgttt ctgctgctct 300

tgctgtttgc cgctgcggtc gccgtctctt cttcctccgg gttgcgccgt gtccaggacc 360

aggacagatc ggcgctgctc cagatcaaga acgccttccc tgccgtagac ctgctccagc 420

agtggtcccc ggactctagc ggccgtaacc actgctcctg gctgggggta acatgcgact 480

caagctcccg ggtcgtcgct ctggaggtgc tctccccttc acggcgtttc ggacccggcc 540

aggagcttgc cggcgagctt cctgcggcgg ttgggctcct caccgagttg aaagtggtct 600

cttttccgct ccacggcctc cggggcgaga tccccggtga gatctggcgg ttggaagatc 660

tcgaggtggt caacctcgct gggaactctc tccggggcgc ccttcctgcc gccttcccgc 720

cgcggctgag ggtgctctcg ctcgcttcca acctgcttca cggtgagatc ccgtcttccc 780

tttccacctg caaagacttg gagaggttgg atctttcagg caaccggttc actggatcgg 840

tgccgagagc acttggcagc ctgcctaatc tgaagtggct tgacttgtct gcaaaccttc 900

ttgtcggtgg catcccctct ggtctgggga attgcaggca gctccgctcg ctgcggttgt 960

tctccaattc attacacggt tcaattccag cagggattgg aaagctgagg aaactacagg 1020

tgttggacgt atcaagaaac agattaagtg gcctggtgcc accggagctc ggaaattgct 1080

cagatttgtc agtgctcgta ttgtctagcc agtccaattc agtaaagtca catgagttca 1140

atctgtttaa aggaggaatt ccagagagtg tgacagcttt gccaagactc cgggtgctat 1200

gggtgccaag ggcgggcctg gaaggaactc tcccgagcaa ctggggaagg tgttctaatt 1260

tagaaatggt taatctgggg ggaaatttac tttctggagc aatcccaagg gatctaggac 1320

agtgcagtaa cctcaagttt ctcaacctca gctcaaatag attatctggt ttactggata 1380

aggatctatg tccgcattgt atgactgtat tcgatgtcag cggaaatgaa atttcaggat 1440

caattccagc atgtgtgaat aaagtctgta cttctcatct agtgctggat aaaatgtcat 1500

ccagttattc ttcattcctc atgtccaaaa ctctacaaga actgccatca gttttttgca 1560

actccgggga gtgttctgtt gtgtatcata attttgcaaa gaacaacctt gaaggtcacc 1620

ttacatcctt gccatttagt gctgacaggt ttggaaacaa gacgtcatat gtgtttgtcg 1680

ttgatcacaa taatttcagt ggatcgttgg attcaattct gttggaacag tgtagcaact 1740

tgaaggggtt ggttgtaagc ttccgagaca acaagatatc tggtcagatc acagcagagt 1800

ttagcagaaa atgcagtgct atcagagctt tggatttagc tggcaatcaa atatcaggaa 1860

tgatgcctga taatgttggt ttgttaggag cccttgtcaa gatggacatg agcagaaatt 1920

ttttggaggg tcaaatacct gccagtttca aagatttcaa gagcttgaag tttctctcat 1980

tagctgggaa caacattagt ggcagaatac catcctgttt gggtcagttg agatcactga 2040

gggttttaga tctctcatct aattctcttg ctggtgagat cccaaataac cttgtgacac 2100

taggagacat aactgtgctt ctactcaaca ataataggct ctctggaaac attccaaatt 2160

ttgcctcttc accatcgctg tccatattca atgtttcatt caatgatttg tctgggccac 2220

tgccttcaaa aattcactca ctgacatgca acagtattcg tggaaatcca tcccttcaac 2280

cttgtggact gtcaacgctc tccagtcctt tagtgaatgc tcgagcacta agtgaggcag 2340

acaataatcc accagctgat aatacagccc ctgatgacaa tggtaacggt ggcggattca 2400

gcaaaataga gattgcctcc ataacttcag catcagcaat tgttgcagtt ctcttggctc 2460

tggtcatcct ttatatttac acacgaaaat gtgcatcaag accatcaagg cgttctctaa 2520

gaagggaagt aactgttttt gttgatattg gtgctccctt gacatatgag gctgttttac 2580

gtgccagtgg aagcttcaat gcaagtaatt gcatcggaag tggtggcttc ggagcaacgt 2640

acaaagctga ggtagcacca ggaaaattgg tggcaataaa gagacttgct attggaaggt 2700

tccaaggcat tcagcaattc caagcagagg tcaaaacact tgggaggtgt cgccattcca 2760

atcttgtaac actcatagga taccatctca gcgattcaga gatgtttcta atatataatt 2820

ttctgcctgg tggcaattta gaaagattca tacaagaaag gactaagaga ccaattgatt 2880

ggagaatgct tcataaaatt gctctagatg ttgcgcgtgc acttgcatat cttcatgaca 2940

attgtgtccc ccgcatctta cacagggatg tcaaaccaag taacatcttg cttgataatg 3000

attacactgc ctacctttct gattttggat tagcaaggct gcttggaaat tcagaaacac 3060

atgcaaccac tggtgtggca ggtacttttg gatatgtagc tccagagtat gcgatgacat 3120

gccgcgtttc tgataaggcg gatgtgtata gctatggagt tgtacttctt gaactcattt 3180

cagacaaaaa ggcactggat ccttctttct ctccttacgg gaatggattc aacatagttg 3240

cctgggcttg catgcttcta caaaagggtc gagctcgtga attctttata gaagggctgt 3300

gggatgtggc cccacatgac gaccttgttg agattctaca cctgggcatc aagtgtacgg 3360

ttgattctct ttcttctagg cccacaatga agcaagttgt tcggcgactt aaggaactca 3420

gaccaccgtc ttactaggaa tagcaagcag agactggctt gcttctgcat aatgagacca 3480

agactgctgg ctgtttgggt gactgcaaca gccagtaatg ttccaaataa actggtggca 3540

actggcaagc aattcaaatg tcatttctca agggatcctc aagcaggaca ttcatggtat 3600

ttaatcattt ggtcgtcatg gtcactgtat ggaacgccga tatcgcttca atgccactgc 3660

aagcaagcat caaggatgcc tgaggaagtt cttctatgcc tgccaaatct gatgactgga 3720

ttaggctctg ttcgtttagt ccagattgga ggccggaacc attccaactc atcaagctaa 3780

tacaaatttg cgaactattc caatccggaa ccaatccagt aaagcattca ggaagaaccg 3840

aacgggcact taggcattac cgacccagtt aacaggatgc attatatacc ttgctaagca 3900

attattacgg cgtaacggag atcgaccacc ttgactcatt ggaacgtagc catatatctg 3960

gcagttctag catatatctg atcaaagcaa agccatatat ctggcagttc tggggtgatc 4020

cgtccgtgga aaaggcttgg ccactgacct gcgcgaggac aaagcagtag aaacatatca 4080

gccaatcaaa gcaaagccat atgaattcat gttaaacatg tccatacata tagcagtgaa 4140

aagtatcaaa tcactgattt cctttcttgg cctttgtaac tgtatatact gctttcgtgg 4200

cctttgtaaa aaaaaaaaaa aa 4222

<210>15

<211>1062

<212>PRT

<213>玉米

<400>15

Met Val Ala Ala Cys Arg Ser Thr Ala Ser Thr Tyr Ala Phe Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Phe Ala Ala Ala Val Ala Val Ser Ser Ser Ser Gly Leu

20 25 30

Arg Arg Val Gln Asp Gln Asp Arg Ser Ala Leu Leu Gln Ile Lys Asn

35 40 45

Ala Phe Pro Ala Val Asp Leu Leu Gln Gln Trp Ser Pro Asp Ser Ser

50 55 60

Gly Arg Asn His Cys Ser Trp Leu Gly Val Thr Cys Asp Ser Ser Ser

65 70 75 80

Arg Val Val Ala Leu Glu Val Leu Ser Pro Ser Arg Arg Phe Gly Pro

85 90 95

Gly Gln Glu Leu Ala Gly Glu Leu Pro Ala Ala Val Gly Leu Leu Thr

100 105 110

Glu Leu Lys Val Val Ser Phe Pro Leu His Gly Leu Arg Gly Glu Ile

115 120 125

Pro Gly Glu Ile Trp Arg Leu Glu Asp Leu Glu Val Val Asn Leu Ala

130 135 140

Gly Asn Ser Leu Arg Gly Ala Leu Pro Ala Ala Phe Pro Pro Arg Leu

145 150 155 160

Arg Val Leu Ser Leu Ala Ser Asn Leu Leu His Gly Glu Ile Pro Ser

165 170 175

Ser Leu Ser Thr Cys Lys Asp Leu Glu Arg Leu Asp Leu Ser Gly Asn

180 185 190

Arg Phe Thr Gly Ser Val Pro Arg Ala Leu Gly Ser Leu Pro Asn Leu

195 200 205

Lys Trp Leu Asp Leu Ser Ala Asn Leu Leu Val Gly Gly Ile Pro Ser

210 215 220

Gly Leu Gly Asn Cys Arg Gln Leu Arg Ser Leu Arg Leu Phe Ser Asn

225 230 235 240

Ser Leu His Gly Ser Ile Pro Ala Gly Ile Gly Lys Leu Arg Lys Leu

245 250 255

Gln Val Leu Asp Val Ser Arg Asn Arg Leu Ser Gly Leu Val Pro Pro

260 265 270

Glu Leu Gly Asn Cys Ser Asp Leu Ser Val Leu Val Leu Ser Ser Gln

275 280 285

Ser Asn Ser Val Lys Ser His Glu Phe Asn Leu Phe Lys Gly Gly Ile

290 295 300

Pro Glu Ser Val Thr Ala Leu Pro Arg Leu Arg Val Leu Trp Val Pro

305 310 315 320

Arg Ala Gly Leu Glu Gly Thr Leu Pro Ser Asn Trp Gly Arg Cys Ser

325 330 335

Asn Leu Glu Met Val Asn Leu Gly Gly Asn Leu Leu Ser Gly Ala Ile

340 345 350

Pro Arg Asp Leu Gly Gln Cys Ser Asn Leu Lys Phe Leu Asn Leu Ser

355 360 365

Ser Asn Arg Leu Ser Gly Leu Leu Asp Lys Asp Leu Cys Pro His Cys

370 375 380

Met Thr Val Phe Asp Val Ser Gly Asn Glu Ile Ser Gly Ser Ile Pro

385 390 395 400

Ala Cys Val Asn Lys Val Cys Thr Ser His Leu Val Leu Asp Lys Met

405 410 415

Ser Ser Ser Tyr Ser Ser Phe Leu Met Ser Lys Thr Leu Gln Glu Leu

420 425 430

Pro Ser Val Phe Cys Asn Ser Gly Glu Cys Ser Val Val Tyr His Asn

435 440 445

Phe Ala Lys Asn Asn Leu Glu Gly His Leu Thr Ser Leu Pro Phe Ser

450 455 460

Ala Asp Arg Phe Gly Asn Lys Thr Ser Tyr Val Phe Val Val Asp His

465 470 475 480

Asn Asn Phe Ser Gly Ser Leu Asp Ser Ile Leu Leu Glu Gln Cys Ser

485 490 495

Asn Leu Lys Gly Leu Val Val Ser Phe Arg Asp Asn Lys Ile Ser Gly

500 505 510

Gln Ile Thr Ala Glu Phe Ser Arg Lys Cys Ser Ala Ile Arg Ala Leu

515 520 525

Asp Leu Ala Gly Asn Gln Ile Ser Gly Met Met Pro Asp Asn Val Gly

530 535 540

Leu Leu Gly Ala Leu Val Lys Met Asp Met Ser Arg Asn Phe Leu Glu

545 550 555 560

Gly Gln Ile Pro Ala Ser Phe Lys Asp Phe Lys Ser Leu Lys Phe Leu

565 570 575

Ser Leu Ala Gly Asn Asn Ile Ser Gly Arg Ile Pro Ser Cys Leu Gly

580 585 590

Gln Leu Arg Ser Leu Arg Val Leu Asp Leu Ser Ser Asn Ser Leu Ala

595 600 605

Gly Glu Ile Pro Asn Asn Leu Val Thr Leu Gly Asp Ile Thr Val Leu

610 615 620

Leu Leu Asn Asn Asn Arg Leu Ser Gly Asn Ile Pro Asn Phe Ala Ser

625 630 635 640

Ser Pro Ser Leu Ser Ile Phe Asn Val Ser Phe Asn Asp Leu Ser Gly

645 650 655

Pro Leu Pro Ser Lys Ile His Ser Leu Thr Cys Asn Ser Ile Arg Gly

660 665 670

Asn Pro Ser Leu Gln Pro Cys Gly Leu Ser Thr Leu Ser Ser Pro Leu

675 680 685

Val Asn Ala Arg Ala Leu Ser Glu Ala Asp Asn Asn Pro Pro Ala Asp

690 695 700

Asn Thr Ala Pro Asp Asp Asn Gly Asn Gly Gly Gly Phe Ser Lys Ile

705 710 715 720

Glu Ile Ala Ser Ile Thr Ser Ala Ser Ala Ile Val Ala Val Leu Leu

725 730 735

Ala Leu Val Ile Leu Tyr Ile Tyr Thr Arg Lys Cys Ala Ser Arg Pro

740 745 750

Ser Arg Arg Ser Leu Arg Arg Glu Val Thr Val Phe Val Asp Ile Gly

755 760 765

Ala Pro Leu Thr Tyr Glu Ala Val Leu Arg Ala Ser Gly Ser Phe Asn

770 775 780

Ala Ser Asn Cys Ile Gly Ser Gly Gly Phe Gly Ala Thr Tyr Lys Ala

785 790 795 800

Glu Val Ala Pro Gly Lys Leu Val Ala Ile Lys Arg Leu Ala Ile Gly

805 810 815

Arg Phe Gln Gly Ile Gln Gln Phe Gln Ala Glu Val Lys Thr Leu Gly

820 825 830

Arg Cys Arg His Ser Asn Leu Val Thr Leu Ile Gly Tyr His Leu Ser

835 840 845

Asp Ser Glu Met Phe Leu Ile Tyr Asn Phe Leu Pro Gly Gly Asn Leu

850 855 860

Glu Arg Phe Ile Gln Glu Arg Thr Lys Arg Pro Ile Asp Trp Arg Met

865 870 875 880

Leu His Lys Ile Ala Leu Asp Val Ala Arg Ala Leu Ala Tyr Leu His

885 890 895

Asp Asn Cys Val Pro Arg Ile Leu His Arg Asp Val Lys Pro Ser Asn

900 905 910

Ile Leu Leu Asp Asn Asp Tyr Thr Ala Tyr Leu Ser Asp Phe Gly Leu

915 920 925

Ala Arg Leu Leu Gly Asn Ser Glu Thr His Ala Thr Thr Gly Val Ala

930 935 940

Gly Thr Phe Gly Tyr Val Ala Pro Glu Tyr Ala Met Thr Cys Arg Val

945 950 955 960

Ser Asp Lys Ala Asp Val Tyr Ser Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Leu

965 970 975

Ile Ser Asp Lys Lys Ala Leu Asp Pro Ser Phe Ser Pro Tyr Gly Asn

980 985 990

Gly Phe Asn Ile Val Ala Trp Ala Cys Met Leu Leu Gln Lys Gly Arg

995 1000 1005

Ala Arg Glu Phe Phc Ile Glu Gly Leu Trp Asp Val Ala Pro His

1010 1015 1020

Asp Asp Leu Val Glu Ile Leu His Leu Gly Ile Lys Cys Thr Val

1025 1030 1035

Asp Ser Leu Ser Ser Arg Pro Thr Met Lys Gln Val Val Arg Arg

1040 1045 1050

Leu Lys Glu Leu Arg Pro Pro Ser Tyr

1055 1060

<210>16

<211>3534

<212>DNA

<213>玉米

<400>16

ccctttcctc tctacaccga cgagacccta acaaggcccc cgccgccgcc gccgcctccg 60

cacatggccg ctcgaacctt gctgctcgtg ctgctcttgc ttctgctcgg tgacgccacc 120

tcggcttccg tcagcggcca gcgcgaagcg ttgatgaagt tcaaagcggc cgtgacggcc 180

gacccgggcg gcctgctgcg cggctggtcc ccggcgtccg gggaccactg ccgctggccg 240

ggcgtgtcgt gcggcgcttc cggggaggtg gtcgcgctca acgtcacctc ctcgcccggg 300

cgcgcgctcg cgggcgcgct gtctccggcc gtcgcggcgc tgcgggagct ccgcgtgctc 360

gctctcccgt cccacgcgct ctcgggcccg ctcccgcccg cgatctggac gctgcgccgc 420

ctccgcgtcc tcgacctctc cggcaatcgc ctccagggcg ggatccccgc agtgctcgtt 480

tgcgtctccc tccagacgct ggaccttgcc tacaaccagc tcaacggctc cgtgcccgcg 540

gccctcggtg cgctccctgt gctacggcgg ctgtcacttg cctgcaaccg cttcggtggc 600

gccatccctg acgagctcgg tggcgccggt tgccgcaacc tgcagttcct cgatgtctct 660

gggaacatgc tcgtcggtgg cataccccgg agcctgggga attgtactga gctgcaggcg 720

ctgttattgt cctcgaacaa tctggatgac atcatcccgc cggagattgg tcggctcaag 780

aacctgcgtg cattagatgt gtccaggaac agtttgagtg ggcctgtgcc agcggagctt 840

ggtggttgca ttcagctgtc agtgcttgtt ctgtccaatc cttatgcacc cactgctggt 900

tctgattctt ctgattatgg tgagctcgat gacttcaact acttccaagg agggattccg 960

gatactatcg ctacactgcc aaagctgagg atgttgtggg cgccaagagc cacattggag 1020

ggagagttgc cgggtaattg gagttcttgc cagagcttgg agatgataaa tttgggggag 1080

aatctgttct ctggtgggat tcctaagggg ctggtggaat gtgagaattt gaagttcctg 1140

aatttgagca tgaacaagtt tacaggttca gttgattctt cgctgccagt accttgcatg 1200

gacgtgtttg atgtcagtgg aaatcagctg tctggctcgt tgccagtatt tatgtcaaaa 1260

aagaattgtc tttcatccca ggccccacgg gatgacttgg tgtcggagta ttcttccttc 1320

ttcacatatc aagcgcttgc tggctttatg tcatccccat cacccttgga tgcacatttg 1380

acaagctatc atagtttttc caggaacaat tttactggtc cagttacatc cttacctctt 1440

gctactgaaa agttggggat gcaggggtcc tatgcattct tggctgatgg gaatcatctt 1500

ggtggtcagc ttcaacctag tctatttgac aagtgcaaca gctcaagggg cctcgtcgtg 1560

gaaatcagta acaacttgat aagtggagct attcccacag acattggctc gctttgcagt 1620

tctcttcttg ttcttggtgt tgctggtaat cagctttcag gtatgatacc atcaagtatc 1680

ggggagttaa gttaccttat cagcttggat ttgagtagga atcgccttgg tggtgtaatt 1740

cctacttctg tgaagaactt gctgcattta cagcgcctct ctttggctca gaaccttctg 1800

aatggcacaa ttccacctga tattaatcag ttgcatgctc tcaaggtttt ggacctgtca 1860

tcaaacctcc tcatggggat gatccctgat gcccttgctg acttgagaaa tctcactgct 1920

ctcctccttg ataacaataa acttactggg aagattcctt caggatttgc taactcggca 1980

tcccttacca cgtttaatgt gtcattcaac aatttgtctg gtccagtgcc aacgaatggt 2040

aatacggtta gatgtgacag tgttattggg aatcctttgc tgcaatcttg tcatgtgtac 2100

actctggctg tgccatcagc tgctcagcag ggtcgaggtt tgaattcgaa tgacagcaat 2160

gatacaacac cttcaaactc acaaaacgaa ggagcgaaca attcatttaa tgcaattgaa 2220

attgcttcaa taacttctgc aacagccatc gtttccatcc tccttgcact gattgcactc 2280

ttcatataca caaggaagtg cgcgccccgg atgtcagctc ggtcttctgg aaggagagaa 2340

gttacactct tccaagatat tggtgtccca atcacttatg agactgttgt tcgagccact 2400

ggaagtttca atgcaagcaa ttgcatcgga agtggaggct ttggagccac ttacaaggct 2460

gaaattgcac ctggagtgtt ggtagctatt aagagactct ctgtcgggag atttcaggga 2520

gcccaacagt ttgacgctga gataaaaact ctagggagat taagacatcc aaatcttgtt 2580

accttggtag gttaccatct aggcgagtct gaaatgtttc tcatatataa ctacttgtct 2640

ggaggaaacc ttgagaggtt tatacaggag agatcgaaga gaccggtaga ctggaaaatg 2700

ctgcacaaga ttgcattgga cgttgccaaa gcacttgctt atctgcatga tacctgtgtt 2760

cctcgcatcc ttcaccggga cgtgaagccg agcaatattt tgttggacac caactatact 2820

gcttacctct cggactttgg actggcgaga ctcttgggaa attcagaaac acatgcaacc 2880

actggtgtag ctggaacatt tggatatgtt gctccagaat atgctatgac ttgtcgtgtt 2940

tcagataaag ctgatgtgta tagctatggt gttgtcctga tggagctaat ctcagacaag 3000

aaggctttgg acccgtcctt ttccccatat ggtaatgggt tcaacatagt tgcttgggct 3060

tgcatgctgc ttcgtcaagg ccgtgctcgg gaattcttta ttgatggtct gtgggatgtt 3120

ggcccgcatg atgacttggt agaaacattg catttagcag tgatatgcac tgctgattca 3180

ctctctatac ggccaactat gaagcaggtc gttcagagat taaagcagct acagcctcca 3240

attcgtgaac atcgatagag atgaataggt ttacaatttc cacatgtaga aggtaaagat 3300

agctgtgacc tgtgctcttg atgatttttt tttcctaatc atctgtttga ctaggtttta 3360

tcttgtagat ggcagctttg tgtaatatag ttttctcctg aatctctcac tagtcactaa 3420

tgtatctgct gataagaagt gcaggtgtaa attaacagtt taatgccaaa gatttcagtt 3480

aagat taaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaag 3534

<210>17

<211>1064

<212>PRT

<213>玉米

<400>17

Met Ala Ala Arg Thr Leu Leu Leu Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly

1 5 10 15

Asp Ala Thr Ser Ala Ser Val Ser Gly Gln Arg Glu Ala Leu Met Lys

20 25 30

Phe Lys Ala Ala Val Thr Ala Asp Pro Gly Gly Leu Leu Arg Gly Trp

35 40 45

Ser Pro Ala Ser Gly Asp His Cys Arg Trp Pro Gly Val Ser Cys Gly

50 55 60

Ala Ser Gly Glu Val Val Ala Leu Asn Val Thr Ser Ser Pro Gly Arg

65 70 75 80

Ala Leu Ala Gly Ala Leu Ser Pro Ala Val Ala Ala Leu Arg Glu Leu

85 90 95

Arg Val Leu Ala Leu Pro Ser His Ala Leu Ser Gly Pro Leu Pro Pro

100 105 110

Ala Ile Trp Thr Leu Arg Arg Leu Arg Val Leu Asp Leu Ser Gly Asn

115 120 125

Arg Leu Gln Gly Gly Ile Pro Ala Val Leu Val Cys Val Ser Leu Gln

130 135 140

Thr Leu Asp Leu Ala Tyr Asn Gln Leu Asn Gly Ser Val Pro Ala Ala

145 150 155 160

Leu Gly Ala Leu Pro Val Leu Arg Arg Leu Ser Leu Ala Cys Asn Arg

165 170 175

Phe Gly Gly Ala Ile Pro Asp Glu Leu Gly Gly Ala Gly Cys Arg Asn

180 185 190

Leu Gln Phe Leu Asp Val Ser Gly Asn Met Leu Val Gly Gly Ile Pro

195 200 205

Arg Ser Leu Gly Asn Cys Thr Glu Leu Gln Ala Leu Leu Leu Ser Ser

210 215 220

Asn Asn Leu Asp Asp Ile Ile Pro Pro Glu Ile Gly Arg Leu Lys Asn

225 230 235 240

Leu Arg Ala Leu Asp Val Ser Arg Asn Ser Leu Ser Gly Pro Val Pro

245 250 255

Ala Glu Leu Gly Gly Cys Ile Gln Leu Ser Val Leu Val Leu Ser Asn

260 265 270

Pro Tyr Ala Pro Thr Ala Gly Ser Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Leu

275 280 285

Asp Asp Phe Asn Tyr Phe Gln Gly Gly Ile Pro Asp Thr Ile Ala Thr

290 295 300

Leu Pro Lys Leu Arg Met Leu Trp Ala Pro Arg Ala Thr Leu Glu Gly

305 310 315 320

Glu Leu Pro Gly Asn Trp Ser Ser Cys Gln Ser Leu Glu Met Ile Asn

325 330 335

Leu Gly Glu Asn Leu Phe Ser Gly Gly Ile Pro Lys Gly Leu Val Glu

340 345 350

Cys Glu Asn Leu Lys Phe Leu Asn Leu Ser Met Asn Lys Phe Thr Gly

355 360 365

Ser Val Asp Ser Ser Leu Pro Val Pro Cys Met Asp Val Phe Asp Val

370 375 380

Ser Gly Asn Gln Leu Ser Gly Ser Leu Pro Val Phe Met Ser Lys Lys

385 390 395 400

Asn Cys Leu Ser Ser Gln Ala Pro Arg Asp Asp Leu Val Ser Glu Tyr

405 410 415

Ser Ser Phe Phe Thr Tyr Gln Ala Leu Ala Gly Phe Met Ser Ser Pro

420 425 430

Ser Pro Leu Asp Ala His Leu Thr Ser Tyr His Ser Phe Ser Arg Asn

435 440 445

Asn Phe Thr Gly Pro Val Thr Ser Leu Pro Leu Ala Thr Glu Lys Leu

450 455 460

Gly Met Gln Gly Ser Tyr Ala Phe Leu Ala Asp Gly Asn His Leu Gly

465 470 475 480

Gly Gln Leu Gln Pro Ser Leu Phe Asp Lys Cys Asn Ser Ser Arg Gly

485 490 495

Leu Val Val Glu Ile Ser Asn Asn Leu Ile Ser Gly Ala Ile Pro Thr

500 505 510

Asp Ile Gly Ser Leu Cys Ser Ser Leu Leu Val Leu Gly Val Ala Gly

515 520 525

Asn Gln Leu Ser Gly Met Ile Pro Ser Ser Ile Gly Glu Leu Ser Tyr

530 535 540

Leu Ile Ser Leu Asp Leu Ser Arg Asn Arg Leu Gly Gly Val Ile Pro

545 550 555 560

Thr Ser Val Lys Asn Leu Leu His Leu Gln Arg Leu Ser Leu Ala Gln

565 570 575

Asn Leu Leu Asn Gly Thr Ile Pro Pro Asp Ile Asn Gln Leu His Ala

580 585 590

Leu Lys Val Leu Asp Leu Ser Ser Asn Leu Leu Met Gly Met Ile Pro

595 600 605

Asp Ala Leu Ala Asp Leu Arg Asn Leu Thr Ala Leu Leu Leu Asp Asn

610 615 620

Asn Lys Leu Thr Gly Lys Ile Pro Ser Gly Phe Ala Asn Ser Ala Ser

625 630 635 640

Leu Thr Thr Phe Asn Val Ser Phe Asn Asn Leu Ser Gly Pro Val Pro

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Thr Asn Gly Asn Thr Val Arg Cys Asp Ser Val Ile Gly Asn Pro Leu

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Leu Gln Ser Cys His Val Tyr Thr Leu Ala Val Pro Ser Ala Ala Gln

675 680 685

Gln Gly Arg Gly Leu Asn Ser Asn Asp Ser Asn Asp Thr Thr Pro Ser

690 695 700

Asn Ser Gln Asn Glu Gly Ala Asn Asn Ser Phe Asn Ala Ile Glu Ile

705 710 715 720

Ala Ser Ile Thr Ser Ala Thr Ala Ile Val Ser Ile Leu Leu Ala Leu

725 730 735

Ile Ala Leu Phe Ile Tyr Thr Arg Lys Cys Ala Pro Arg Met Ser Ala

740 745 750

Arg Ser Ser Gly Arg Arg Glu Val Thr Leu Phe Gln Asp Ile Gly Val

755 760 765

Pro Ile Thr Tyr Glu Thr Val Val Arg Ala Thr Gly Ser Phe Asn Ala

770 775 780

Ser Asn Cys Ile Gly Ser Gly Gly Phe Gly Ala Thr Tyr Lys Ala Glu

785 790 795 800

Ile Ala Pro Gly Val Leu Val Ala Ile Lys Arg Leu Ser Val Gly Arg

805 810 815

Phe Gln Gly Ala Gln Gln Phe Asp Ala Glu Ile Lys Thr Leu Gly Arg

820 825 830

Leu Arg His Pro Asn Leu Val Thr Leu Val Gly Tyr His Leu Gly Glu

835 840 845

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Arg Phe Ile Gln Glu Arg Ser Lys Arg Pro Val Asp Trp Lys Met Leu

865 870 875 880

His Lys Ile Ala Leu Asp Val Ala Lys Ala Leu Ala Tyr Leu His Asp

885 890 895

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900 905 910

Leu Leu Asp Thr Asn Tyr Thr Ala Tyr Leu Ser Asp Phe Gly Leu Ala

915 920 925

Arg Leu Leu Gly Asn Ser Glu Thr His Ala Thr Thr Gly Val Ala Gly

930 935 940

Thr Phe Gly Tyr Val Ala Pro Glu Tyr Ala Met Thr Cys Arg Val Ser

945 950 955 960

Asp Lys Ala Asp Val Tyr Ser Tyr Gly Val Val Leu Met Glu Leu Ile

965 970 975

Ser Asp Lys Lys Ala Leu Asp Pro Ser Phe Ser Pro Tyr Gly Asn Gly

980 985 990

Phe Asn Ile Val Ala Trp Ala Cys Met Leu Leu Arg Gln Gly Arg Ala

995 1000 1005

Arg Glu Phe Phe Ile Asp Gly Leu Trp Asp Val Gly Pro His Asp

1010 1015 1020

Asp Leu Val Glu Thr Leu His Leu Ala Val Ile Cys Thr Ala Asp

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Ser Leu Ser Ile Arg Pro Thr Met Lys Gln Val Val Gln Arg Leu

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Lys Gln Leu Gln Pro Pro Ile Arg Glu His Arg

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<210>18

<211>1797

<212>DNA

<213>玉米

<400>18

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<210>19

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<212>PRT

<213>玉米

<400>19

Met Gly Phe Leu Arg Arg Ser Ala Thr Thr Ala Val Leu Phe Ala Leu

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His Leu Leu Leu Leu Ala Thr Ala Ser Val Ala Ser Ser Pro Ser Ser

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Ser Leu Pro Glu Gln Gln Asp Asp Asp Val Gln Ala Leu Leu His Leu

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Lys Arg Gly Leu Ala Ser Gly Ala Asp Ala Pro Leu Arg Gln Trp Ser

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Ala Arg Ser Gly Arg Val Val Ala Leu Ala Leu Ala Leu Gly Gly Arg

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Leu Gly Gly Glu Leu Ser Pro Ala Val Ala Arg Leu Thr Glu Leu Arg

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Ala Leu Ser Phe Pro Ser Ala Gly Leu Gly Gly Glu Ile Pro Pro Gln

115 120 125

Leu Trp Arg Leu Gly Arg Leu Gln Ala Leu Asn Leu Ala Gly Asn Ser

130 135 140

Leu Arg Gly Arg Leu Pro Ala Thr Phe Pro Glu Gly Leu Lys Ser Leu

145 150 155 160

Asp Leu Ser Gly Asn Arg Leu Ser Gly Gly Ile Pro Pro Gly Leu Gly

165 170 175

Ser Cys Ala Thr Leu Arg Arg Leu Arg Leu Ser Ser Asn Trp Leu Ala

180 185 190

Gly Thr Ile Pro Pro Arg Ile Gly Glu Leu Ala Arg Leu Arg Val Leu

195 200 205

Asp Leu Ser Gly Asn Arg Leu Thr Gly Gly Val Pro Pro Glu Leu Leu

210 215 220

His Cys Arg Gly Leu Val Arg Met Asp Leu Ser Arg Asn Leu Leu His

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Gly Arg Leu Pro Ser Gly Leu Ala Gln Leu Lys Asn Leu Arg Phe Leu

245 250 255

Ser Leu Ser Gly Asn Asn Phe Ser Gly Glu Ile Pro Ser Val Ala Leu

260 265 270

Thr Leu Cys Ile Cys Thr Arg Lys Trp Arg Leu Lys Pro Ser Glu Arg

275 280 285

Ser Phe Ala Ser Lys Glu Val Lys Val Phe Ala Asp Val Asp Ile Gly

290 295 300

Ala Pro Leu Thr Tyr Glu Thr Val Val Arg Ala Thr Gly Asn Phe Asn

305 310 315 320

Ala Ser Asn Cys Ile Gly Asn Gly Gly Phe Gly Ala Thr Tyr Arg Ala

325 330 335

Glu Val Ala Pro Gly Val Leu Val Ala Ile Lys Arg Leu Ala Ile Gly

340 345 350

Lys Gln His Gly Asp Lys Glu Phe Gln Ala Glu Val Arg Ile Leu Gly

355 360 365

Gln Cys Arg His Pro His Leu Val Thr Leu Leu Gly Tyr His Ile Asn

370 375 380

Glu Ser Glu Met Phe Leu Ile Tyr Asn Tyr Leu Pro Gly Gly Asn Leu

385 390 395 400

Glu Arg Phe Ile Gln Glu Arg Gly Arg Arg Pro Ile Ser Trp Arg Arg

405 410 415

Leu His Lys Ile Ala Leu Asp Val Ala Arg Ala Leu Ala Tyr Met His

420 425 430

Asp Glu Cys Val Pro Arg Val Leu His Arg Asp Val Lys Pro Asn Asn

435 440 445

Ile Leu Leu Asp Asn Glu Cys Asn Ala Tyr Leu Ser Asp Phe Gly Leu

450 455 460

Ala Arg Leu Leu Arg Asn Ser Glu Thr His Ala Thr Thr Asp Val Ala

465 470 475 480

Gly Thr Phe Gly Tyr Val Ala Pro Glu Tyr Ala Met Thr Cys Arg Val

485 490 495

Ser Asp Lys Ala Asp Val Tyr Ser Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Leu

500 505 510

Ile Ser Asp Lys Lys Ala Leu Asp Pro Ser Phe Ser Pro Tyr Gly Asn

515 520 525

Gly Phe Asn Ile Val Ser Trp Ala Val Arg Leu Ile Gln Arg Gly Arg

530 535 540

Val Arg Glu Phe Phe Val Glu Gly Leu Trp Glu Lys Ala Pro His Asp

545 550 555 560

Asp Leu Val Glu Phe Leu Asn Leu Ala Val Arg Cys Thr Gln Glu Ser

565 570 575

Leu Ala Ser Arg Pro Thr Met Lys His Val Leu Arg Cys Leu Arg Glu

580 585 590

Leu Arg Pro Pro Ser Tyr

595

<210>20

<211>2380

<212>DNA

<213>拟南芥属

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aatgtcattt tctttttgag taaagaaact ttcttctttt gcaacttgaa aattttcgat 60

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tgtttatgtt ttcgttttct cggaaacttt taaccgagag tggtggtggt ctccacgacg 300

aagctgctct gttgaagttg aagagtagtt tcttggatcc aaatggagtt ctgtctagct 360

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gattgtatcc gattgagata gcttctattg tgtcagcttc agtgattgtc tttgtgcttc 840

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tcattgttag agctactggt tactttagta actctaactg tatcggtcac ggcggtttcg 1020

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caatgacatg ccgagtctcg gagaaagcag atgtttacag ctatgggata gtcctcttgg 1560

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caggactatg ggagactggt cctccagacg atttggtcga ggttctgcat ttggcactca 1740

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<210>21

<211>1623

<212>DNA

<213>拟南芥属

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atgaaacttc tgggtttggt cttcttgctg tttaatctgt ttatgttttc gttttctcgg 60

aaacttttaa ccgagagtgg tggtggtctc cacgacgaag ctgctctgtt gaagttgaag 120

agtagtttct tggatccaaa tggagttctg tctagctggg tttccgacag ctcatcaaac 180

cattgttctt ggtacggtgt ctcttgcaac tctgattcga gagtcgtttc tttaattctc 240

agaggctgtg atgagcttga aggtagtggt gttcttcatc tcccagattt gtcttcttgt 300

tcttcaagta aaagaagact tggtggtgta atctctcctg ttgttggaga tttgtctgaa 360

attagggttt tatctctgtc ttttaatgat cttagaggtg agattccaaa ggagatttgg 420

gggttggaga aattagagat tcttgatctt aaaggtaaca actttatcgg tggaattagg 480

gttgttgata atgttgttct taggaaactt atgagttttg aggatgaaga tgaaattggt 540

ccaagctcag ctgatgatga ttctcctggt aaatctggat tgtatccgat tgagatagct 600

tctattgtgt cagcttcagt gattgtcttt gtgcttcttg ttcttgtgat cttgttcatc 660

tacacgagga aatggaaacg aaactctcag gttcaggtag atgagatcaa ggagattaaa 720

gtgtttgttg acattggtat tcctctgacg tatgagatca ttgttagagc tactggttac 780

tttagtaact ctaactgtat cggtcacggc ggtttcggtt cgacttataa agcagaggtg 840

tctccaacga atgtgtttgc tgttaaaaga ctctctgttg ggaggtttca aggtgatcaa 900

cagtttcatg ctgagatctc tgctcttgag atggttaggc atccgaatct tgttatgtta 960

atcggttacc atgcgagcga aaccgagatg tttcttattt acaactactt atctggagga 1020

aaccttcaag atttcattaa agagagatcg aaagctgcta ttgagtggaa ggtacttcac 1080

aagattgctc ttgatgtagc gcgtgctctc tcctatcttc acgaacagtg ttctcctaaa 1140

gtcttgcata gagatatcaa accgagtaac atactcttgg acaacaacta caacgcttat 1200

ctatctgatt tcggactctc gaaactcttg ggaacttcgc agtctcatgt cacaactggt 1260

gtggctggaa cattcggata tgtagctcca gagtacgcaa tgacatgccg agtctcggag 1320

aaagcagatg tttacagcta tgggatagtc ctcttggagc tgatatcgga caaacgagct 1380

ctggatcctt ctttctcatc gcatgagaac gggttcaaca ttgtctcgtg ggctcatatg 1440

atgttgagtc aaggcaaagc gaaagaagtc ttcaccacag gactatggga gactggtcct 1500

ccagacgatt tggtcgaggt tctgcatttg gcactcaaat gcaccgtcga tagcctctcg 1560

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tga 1623

<210>22

<211>540

<212>PRT

<213>拟南芥属

<400>22

Met Lys Leu Leu Gly Leu Val Phe Leu Leu Phe Asn Leu Phe Met Phe

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Ser Phe Ser Arg Lys Leu Leu Thr Glu Ser Gly Gly Gly Leu His Asp

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Glu Ala Ala Leu Leu Lys Leu Lys Ser Ser Phe Leu Asp Pro Asn Gly

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Val Leu Ser Ser Trp Val Ser Asp Ser Ser Ser Asn His Cys Ser Trp

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Tyr Gly Val Ser Cys Asn Ser Asp Ser Arg Val Val Ser Leu Ile Leu

65 70 75 80

Arg Gly Cys Asp Glu Leu Glu Gly Ser Gly Val Leu His Leu Pro Asp

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Leu Ser Ser Cys Ser Ser Ser Lys Arg Arg Leu Gly Gly Val Ile Ser

100 105 110

Pro Val Val Gly Asp Leu Ser Glu Ile Arg Val Leu Ser Leu Ser Phe

115 120 125

Asn Asp Leu Arg Gly Glu Ile Pro Lys Glu Ile Trp Gly Leu Glu Lys

130 135 140

Leu Glu Ile Leu Asp Leu Lys Gly Asn Asn Phe Ile Gly Gly Ile Arg

145 150 155 160

Val Val Asp Asn Val Val Leu Arg Lys Leu Met Ser Phe Glu Asp Glu

165 170 175

Asp Glu Ile Gly Pro Ser Ser Ala Asp Asp Asp Ser Pro Gly Lys Ser

180 185 190

Gly Leu Tyr Pro Ile Glu Ile Ala Ser Ile Val Ser Ala Ser Val Ile

195 200 205

Val Phe Val Leu Leu Val Leu Val Ile Leu Phe Ile Tyr Thr Arg Lys

210 215 220

Trp Lys Arg Asn Ser Gln Val Gln Val Asp Glu Ile Lys Glu Ile Lys

225 230 235 240

Val Phe Val Asp Ile Gly Ile Pro Leu Thr Tyr Glu Ile Ile Val Arg

245 250 255

Ala Thr Gly Tyr Phe Ser Asn Ser Asn Cys Ile Gly His Gly Gly Phe

260 265 270

Gly Ser Thr Tyr Lys Ala Glu Val Ser Pro Thr Asn Val Phe Ala Val

275 280 285

Lys Arg Leu Ser Val Gly Arg Phe Gln Gly Asp Gln Gln Phe His Ala

290 295 300

Glu Ile Ser Ala Leu Glu Met Val Arg His Pro Asn Leu Val Met Leu

305 310 315 320

Ile Gly Tyr His Ala Ser Glu Thr Glu Met Phe Leu Ile Tyr Asn Tyr

325 330 335

Leu Ser Gly Gly Asn Leu Gln Asp Phe Ile Lys Glu Arg Ser Lys Ala

340 345 350

Ala Ile Glu Trp Lys Val Leu His Lys Ile Ala Leu Asp Val Ala Arg

355 360 365

Ala Leu Ser Tyr Leu His Glu Gln Cys Ser Pro Lys Val Leu His Arg

370 375 380

Asp Ile Lys Pro Ser Asn Ile Leu Leu Asp Asn Asn Tyr Asn Ala Tyr

385 390 395 400

Leu Ser Asp Phe Gly Leu Ser Lys Leu Leu Gly Thr Ser Gln Ser His

405 410 415

Val Thr Thr Gly Val Ala Gly Thr Phe Gly Tyr Val Ala Pro Glu Tyr

420 425 430

Ala Met Thr Cys Arg Val Ser Glu Lys Ala Asp Val Tyr Ser Tyr Gly

435 440 445

Ile Val Leu Leu Glu Leu Ile Ser Asp Lys Arg Ala Leu Asp Pro Ser

450 455 460

Phe Ser Ser His Glu Asn Gly Phe Asn Ile Val Ser Trp Ala His Met

465 470 475 480

Met Leu Ser Gln Gly Lys Ala Lys Glu Val Phe Thr Thr Gly Leu Trp

485 490 495

Glu Thr Gly Pro Pro Asp Asp Leu Val Glu Val Leu His Leu Ala Leu

500 505 510

Lys Cys Thr Val Asp Ser Leu Ser Ile Arg Pro Thr Met Lys Gln Ala

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Val Arg Leu Leu Lys Arg Ile Gln Pro Ser Arg Leu

530 535 540

<210>23

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<212>PRT

<213>水稻

<400>23

Met Val Ala Ala Arg Arg Ser Ala Ala Ser Ser Ser Phe Phe Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Val Leu Ala Val Arg Val Arg Ala Ser Ser Asp Arg Val Gln

20 25 30

Glu Arg Asp Arg Ser Ala Leu Leu Glu Leu Arg Gly Ala Ala Gly Leu

35 40 45

Leu Gly Arg Trp Pro Thr Gly Ser Ala Val Ala Asp His Cys Ser Trp

50 55 60

Pro Gly Val Thr Cys Asp Ala Ser Arg Arg Val Val Ala Val Ala Val

65 70 75 80

Ala Ala Pro Pro Ala Ser Gly Ser Ser Glu Leu Ala Gly Glu Leu Ser

85 90 95

Pro Ala Val Gly Leu Leu Thr Glu Leu Arg Glu Leu Ser Leu Pro Ser

100 105 110

Arg Gly Leu Arg Gly Glu Ile Pro Ala Glu Ile Trp Arg Leu Glu Lys

115 120 125

Leu Glu Val Val Asn Leu Ala Gly Asn Ser Leu His Gly Ala Leu Pro

130 135 140

Leu Ala Phe Pro Pro Arg Met Arg Val Leu Asp Leu Ala Ser Asn Arg

145 150 155 160

Leu His Gly Glu Ile Gln Gly Thr Leu Ser Asp Cys Lys Ser Leu Met

165 170 175

Arg Leu Asn Leu Ser Gly Asn Arg Leu Thr Gly Ser Val Pro Gly Val

180 185 190

Leu Gly Ser Leu Pro Lys Leu Lys Leu Leu Asp Leu Ser Arg Asn Leu

195 200 205

Leu Thr Gly Arg Ile Pro Ser Glu Leu Gly Asp Cys Arg Glu Leu Arg

210 215 220

Ser Leu Gln Leu Phe Ser Asn Leu Leu Glu Gly Ser Ile Pro Pro Glu

225 230 235 240

Ile Gly Arg Leu Arg Arg Leu Gln Val Leu Asp Ile Ser Ser Asn Arg

245 250 255

Leu Asn Gly Pro Val Pro Met Glu Leu Gly Asn Cys Met Asp Leu Ser

260 265 270

Val Leu Val Leu Thr Ser Gln Phe Asp Ala Val Asn Leu Ser Glu Phe

275 280 285

Asn Met Phe Ile Gly Gly Ile Pro Glu Ser Val Thr Ala Leu Pro Lys

290 295 300

Leu Arg Met Leu Trp Ala Pro Arg Ala Gly Phe Glu Gly Asn Ile Pro

305 310 315 320

Ser Asn Trp Gly Arg Cys His Ser Leu Glu Met Val Asn Leu Ala Glu

325 330 335

Asn Leu Leu Ser Gly Val Ile Pro Arg Glu Leu Gly Gln Cys Ser Asn

340 345 350

Leu Lys Phe Leu Asn Leu Ser Ser Asn Lys Leu Ser Gly Ser Ile Asp

355 360 365

Asn Gly Leu Cys Pro His Cys Ile Ala Val Phe Asp Val Ser Arg Asn

370 375 380

Glu Leu Ser Gly Thr Ile Pro Ala Cys Ala Asn Lys Gly Cys Thr Pro

385 390 395 400

Gln Leu Leu Asp Asp Met Pro Ser Arg Tyr Pro Ser Phe Phe Met Ser

405 410 415

Lys Ala Leu Ala Gln Pro Ser Ser Gly Tyr Cys Lys Ser Gly Asn Cys

420 425 430

Ser Val Val Tyr His Asn Phe Ala Asn Asn Asn Leu Gly Gly His Leu

435 440 445

Thr Ser Leu Pro Phe Ser Ala Asp Arg Phe Gly Asn Lys Ile Leu Tyr

450 455 460

Ala Phe His Val Asp Tyr Asn Asn Phe Thr Gly Ser Leu His Glu Ile

465 470 475 480

Leu Leu Ala Gln Cys Asn Asn Val Glu Gly Leu Ile Val Ser Phe Arg

485 490 495

Asp Asn Lys Ile Ser Gly Gly Leu Thr Glu Glu Met Ser Thr Lys Cys

500 505 510

Ser Ala Ile Arg Ala Leu Asp Leu Ala Gly Asn Arg Ile Thr Gly Val

515 520 525

Met Pro Gly Asn Ile Gly Leu Leu Ser Ala Leu Val Lys Met Asp Ile

530 535 540

Ser Arg Asn Leu Leu Glu Gly Gln Ile Pro Ser Ser Phe Lys Glu Leu

545 550 555 560

Lys Ser Leu Lys Phe Leu Ser Leu Ala Glu Asn Asn Leu Ser Gly Thr

565 570 575

Ile Pro Ser Cys Leu Gly Lys Leu Arg Ser Leu Glu Val Leu Asp Leu

580 585 590

Ser Ser Asn Ser Leu Ser Gly Lys Ile Pro Arg Asn Leu Val Thr Leu

595 600 605

Thr Tyr Leu Thr Ser Leu Leu Leu Asn Asn Asn Lys Leu Ser Gly Asn

610 615 620

Ile Pro Asp Ile Ala Pro Ser Ala Ser Leu Ser Ile Phe Asn Ile Ser

625 630 635 640

Phe Asn Asn Leu Ser Gly Pro Leu Pro Leu Asn Met His Ser Leu Ala

645 650 655

Cys Asn Ser Ile Gln Gly Asn Pro Ser Leu Gln Pro Cys Gly Leu Ser

660 665 670

Thr Leu Ala Asn Thr Val Met Lys Ala Arg Ser Leu Ala Glu Gly Asp

675 680 685

Val Pro Pro Ser Asp Ser Ala Thr Val Asp Ser Gly Gly Gly Phe Ser

690 695 700

Lys Ile Glu Ile Ala Ser Ile Thr Ser Ala Ser Ala Ile Val Ala Val

705 710 715 720

Leu Leu Ala Leu Ile Ile Leu Tyr Ile Tyr Thr Arg Lys Cys Ala Ser

725 730 735

Arg Gln Ser Arg Arg Ser Ile Arg Arg Arg Glu Val Thr Val Phe Val

740 745 750

Asp Ile Gly Ala Pro Leu Thr Tyr Glu Thr Val Val Arg Ala Thr Gly

755 760 765

Ser Phe Asn Ala Ser Asn Cys Ile Gly Ser Gly Gly Phe Gly Ala Thr

770 775 780

Tyr Lys Ala Glu Ile Ala Pro Gly Val Leu Val Ala Ile Lys Arg Leu

785 790 795 800

Ala Ile Gly Arg Phe Gln Gly Ile Gln Gln Phe Gln Ala Glu Val Lys

805 810 815

Thr Leu Gly Arg Cys Arg His Pro Asn Leu Val Thr Leu Ile Gly Tyr

820 825 830

His Leu Ser Asp Ser Glu Met Phe Leu Ile Tyr Asn Phe Leu Pro Gly

835 840 845

Gly Asn Leu Glu Arg Phe Ile Gln Glu Arg Ala Lys Arg Pro Ile Asp

850 855 860

Trp Arg Met Leu His Lys Ile Ala Leu Asp Ile Ala Arg Ala Leu Gly

865 870 875 880

Phe Leu His Asp Ser Cys Val Pro Arg Ile Leu His Arg Asp Val Lys

885 890 895

Pro Ser Asn Ile Leu Leu Asp Asn Glu Tyr Asn Ala Tyr Leu Ser Asp

900 905 910

Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Gly Asn Ser Glu Thr His Ala Thr Thr

915 920 925

Gly Val Ala Gly Thr Phe Gly Tyr Val Ala Pro Glu Tyr Ala Met Thr

930 935 940

Cys Arg Val Ser Asp Lys Ala Asp Val Tyr Ser Tyr Gly Val Val Leu

945 950 955 960

Leu Glu Leu Ile Ser Asp Lys Lys Ala Leu Asp Pro Ser Phe Ser Pro

965 970 975

Tyr Gly Asn Gly Phe Asn Ile Val Ala Trp Ala Cys Met Leu Leu Gln

980 985 990

Lys Gly Arg Ala Arg Glu Phe Phe Ile Glu Gly Leu Trp Asp Val Ala

995 1000 1005

Pro His Asp Asp Leu Val Glu Ile Leu His Leu Gly Ile Lys Cys

1010 1015 1020

Thr Val Asp Ser Leu Ser Ser Arg Pro Thr Met Lys Gln Val Val

1025 1030 1035

Arg Arg Leu Lys Glu Leu Arg Pro Pro Ser Tyr

1040 1045

<210>24

<211>1070

<212>PRT

<213>水稻

<400>24

Met Ala Thr Leu Asn Thr Gln Thr Leu Leu Thr Leu Phe Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Asp Ala Gly Gly Gly Gly Glu

20 25 30

Arg Glu Ala Leu Leu Arg Phe Lys Ala Gly Val Ala Ser Asp Pro Gly

35 40 45

Gly Leu Leu Arg Gly Trp Thr Thr Ala Ala Ser Pro Asp His Cys Ala

50 55 60

Trp Pro Gly Val Ser Cys Gly Gly Asn Gly Glu Val Val Ala Leu Asn

65 70 75 80

Val Ser Ser Ser Pro Gly Arg Arg Leu Ala Gly Ala Leu Ser Pro Ala

85 90 95

Val Ala Ala Leu Arg Gly Leu Arg Val Leu Ala Leu Pro Ser His Ala

100 105 110

Leu Ser Gly Gln Leu Pro Ala Ala Ile Trp Ser Leu Arg Arg Leu Leu

115 120 125

Val Leu Asp Leu Ser Gly Asn Arg Leu Gln Gly Glu Ile Pro Pro Ala

130 135 140

Leu Ala Cys Ala Gly Leu Gln Thr Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Gln Leu

145 150 155 160

Asn Gly Ser Val Pro Ala Ser Leu Gly Ala Leu Pro Gly Leu Arg Arg

165 170 175

Leu Ser Leu Ala Ser Asn Arg Leu Gly Gly Ala Ile Pro Asp Glu Leu

180 185 190

Gly Gly Ala Gly Cys Arg Ser Leu Gln Tyr Leu Asp Leu Ser Gly Asn

195 200 205

Leu Leu Val Gly Gly Ile Pro Arg Ser Leu Gly Asn Cys Ser Lys Leu

210 215 220

Glu Ala Leu Leu Leu Ser Ser Asn Leu Leu Asp Asp Val Ile Pro Pro

225 230 235 240

Glu Ile Gly Arg Leu Arg Asn Leu Arg Ala Leu Asp Val Ser Arg Asn

245 250 255

Ser Leu Ser Gly Ser Val Pro Ala Glu Leu Gly Gly Cys Val Glu Leu

260 265 270

Ser Val Leu Val Leu Ser Asn Pro Tyr Thr Pro Ile Gly Gly Ser Asn

275 280 285

Ser Ser Asp Tyr Gly Asp Val Asp Asp Phe Asn Tyr Phe Gln Gly Gly

290 295 300

Ile Pro Asp Ala Val Val Ala Leu Pro Lys Leu Arg Val Leu Trp Ala

305 310 315 320

Pro Arg Ala Thr Leu Glu Gly Glu Leu Pro Arg Asn Trp Ser Ala Cys

325 330 335

Gln Ser Leu Glu Met Ile Asn Leu Gly Glu Asn Leu Phe Ser Gly Gly

340 345 350

Ile Pro Asn Gly Leu Val Glu Cys Ser His Leu Lys Phe Leu Asn Leu

355 360 365

Ser Ser Asn Lys Leu Thr Gly Ala Ile Asp Pro Ser Leu Thr Val Pro

370 375 380

Cys Met Asp Val Phe Asp Val Ser Gly Asn Arg Phe Ser Gly Ala Met

385 390 395 400

Pro Val Phe Glu Gln Lys Gly Cys Pro Ser Ser Gln Leu Pro Phe Asp

405 410 415

Asp Leu Val Ser Glu Tyr Ser Ser Phe Phe Ser Tyr Gln Ala Leu Ala

420 425 430

Gly Phe Arg Ser Ser Ser Phe Val Leu Gly Thr Asp Leu Thr Ser Tyr

435 440 445

His Ser Phe Ala Gln Asn Asn Phe Thr Gly Pro Val Lys Ser Leu Pro

450 455 460

Leu Ala Ala Asp Lys Leu Gly Met Gln Gly Ser Tyr Ala Phe Leu Ala

465 470 475 480

Asp Gly Asn Asn Ile Ala Gly Gln Leu Gln Pro Asp Leu Phe Ser Lys

485 490 495

Cys Asn Ser Ser Arg Gly Phe Ile Val Asp Val Ser Asn Asn Leu Ile

500 505 510

Thr Gly Gly Ile Pro Val Glu Ile Gly Ser Leu Cys Ser Ser Leu Val

515 520 525

Val Leu Gly Val Ala Gly Asn Gln Leu Ser Gly Leu Ile Pro Thr Ser

530 535 540

Ile Gly Gln Leu Asn Tyr Leu Ile Ser Leu Asp Leu Ser Arg Asn His

545 550 555 560

Leu Gly Gly Glu Ile Pro Thr Ser Val Lys Asn Leu Pro Asn Leu Glu

565 570 575

Arg Leu Ser Leu Gly His Asn Phe Leu Asn Gly Thr Ile Pro Thr Glu

580 585 590

Ile Asn Gln Leu Tyr Ser Leu Lys Val Leu Asp Leu Ser Ser Asn Leu

595 600 605

Leu Thr Gly Glu Ile Pro Gly Ala Leu Ala Asp Leu Arg Asn Leu Thr

610 615 620

Ala Leu Leu Leu Asp Asn Asn Lys Leu Thr Gly Lys Ile Pro Ser Ala

625 630 635 640

Phe Ala Lys Ser Met Ser Leu Thr Met Phe Asn Leu Ser Phe Asn Asn

645 650 655

Leu Ser Gly Pro Val Pro Ala Asn Ser Asn Thr Val Arg Cys Asp Ser

660 665 670

Val Ile Gly Asn Pro Leu Leu Gln Ser Cys His Met Tyr Thr Leu Ala

675 680 685

Val Pro Ser Ala Ala Gln Gln Gly Arg Gly Leu Asn Ser Asn Asp Tyr

690 695 700

Asn Asp Thr Ser Ser Ala Asp Ser Gln Asn Gln Gly Gly Ser Asn Ser

705 710 715 720

Phe Asn Ala Ile Glu Ile Ala Ser Ile Thr Ser Ala Thr Ala Ile Val

725 730 735

Ser Val Leu Leu Ala Leu Ile Val Leu Phe Ile Tyr Thr Arg Lys Cys

740 745 750

Ala Pro Arg Met Ser Ser Arg Ser Ser Arg Arg Arg Glu Val Ile Thr

755 760 765

Phe Gln Asp Ile Gly Val Pro Ile Thr Tyr Glu Thr Val Val Arg Ala

770 775 780

Thr Gly Ser Phe Asn Ala Ser Asn Cys Ile Gly Ser Gly Gly Phe Gly

785 790 795 800

Ala Thr Tyr Lys Ala Glu Ile Ser Pro Gly Val Leu Val Ala Ile Lys

805 810 815

Arg Leu Ser Val Gly Arg Phe Gln Gly Val Gln Gln Phe His Ala Glu

820 825 830

Ile Lys Thr Leu Gly Arg Leu Arg His Pro Asn Leu Val Thr Leu Val

835 840 845

Gly Tyr His Leu Gly Glu Ser Glu Met Phe Leu Ile Tyr Asn Tyr Leu

850 855 860

Pro Gly Gly Asn Leu Glu Arg Phe Ile Gln Glu Arg Ser Lys Arg Pro

865 870 875 880

Val Asp Trp Lys Met Leu His Lys Ile Ala Leu Asp Ile Ala Lys Ala

885 890 895

Leu Ala Tyr Leu His Asp Thr Cys Val Pro Arg Ile Leu His Arg Asp

900 905 910

Val Lys Pro Ser Asn Ile Leu Leu Asp Thr Glu Tyr Asn Ala Tyr Leu

915 920 925

Ser Asp Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Gly Asn Ser Glu Thr His Ala

930 935 940

Thr Thr Gly Val Ala Gly Thr Phe Gly Tyr Val Ala Pro Glu Tyr Ala

945 950 955 960

Met Thr Cys Arg Val Ser Asp Lys Ala Asp Val Tyr Ser Tyr Gly Val

965 970 975

Val Leu Met Glu Leu Ile Ser Asp Lys Lys Ala Leu Asp Pro Ser Phe

980 985 990

Ser Pro Tyr Gly Asn Gly Phe Asn Ile Val Ala Trp Ala Cys Met Leu

995 1000 1005

Leu Arg Gln Gly Arg Ala Arg Glu Phe Phe Ile Asp Gly Leu Trp

1010 1015 1020

Asp Val Gly Pro His Asp Asp Leu Val Glu Thr Leu His Leu Ala

1025 1030 1035

Val Met Cys Thr Val Asp Ser Leu Ser Val Arg Pro Thr Met Lys

1040 1045 1050

Gln Val Val Gln Arg Leu Lys Gln Leu Gln Pro Pro Ile Arg Glu

1055 1060 1065

His Arg

1070

<210>25

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列s

<220>

<223>引物

<400>25

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggct 29

<210>26

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>26

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggt 29

<210>27

<211>54

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>27

ttaaacaagt ttgtacaaaa aagcaggctg caattaaccc tcactaaagg gaac 54

<210>28

<211>53

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>28

ttaaaccact ttgtacaaga aagctgggtg cgtaatacga ctcactatag ggc 53

<210>29

<211>12856

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>载体

<400>29

cgccttggcg cgccgatcat ccacaagttt gtacaaaaaa gctgaacgag aaacgtaaaa 60

tgatataaat atcaatatat taaattagat tttgcataaa aaacagacta cataatactg 120

taaaacacaa catatccagt cactatggcg gccgcattag gcaccccagg ctttacactt 180

tatgcttccg gctcgtataa tgtgtggatt ttgagttagg atttaaatac gcgttgatcc 240

ggcttactaa aagccagata acagtatgcg tatttgcgcg ctgatttttg cggtataaga 300

atatatactg atatgtatac ccgaagtatg tcaaaaagag gtatgctatg aagcagcgta 360

ttacagtgac agttgacagc gacagctatc agttgctcaa ggcatatatg atgtcaatat 420

ctccggtctg gtaagcacaa ccatgcagaa tgaagcccgt cgtctgcgtg ccgaacgctg 480

gaaagcggaa aatcaggaag ggatggctga ggtcgcccgg tttattgaaa tgaacggctc 540

ttttgctgac gagaacaggg gctggtgaaa tgcagtttaa ggtttacacc tataaaagag 600

agagccgtta tcgtctgttt gtggatgtac agagtgatat cattgacacg cccggtcgac 660

ggatggtgat ccccctggcc agtgcacgtc tgctgtcaga taaagtctcc cgtgaacttt 720

acccggtggt gcatatcggg gatgaaagct ggcgcatgat gaccaccgat atggccagtg 780

tgccggtctc cgttatcggg gaagaagtgg ctgatctcag ccaccgcgaa aatgacatca 840

aaaacgccat taacctgatg ttctggggaa tataaatgtc aggctccctt atacacagcc 900

agtctgcagg tcgaccatag tgactggata tgttgtgttt tacagtatta tgtagtctgt 960

tttttatgca aaatctaatt taatatattg atatttatat cattttacgt ttctcgttca 1020

gctttcttgt acaaagtggt gttaacctag acttgtccat cttctggatt ggccaactta 1080

attaatgtat gaaataaaag gatgcacaca tagtgacatg ctaatcacta taatgtgggc 1140

atcaaagttg tgtgttatgt gtaattacta gttatctgaa taaaagagaa agagatcatc 1200

catatttctt atcctaaatg aatgtcacgt gtctttataa ttctttgatg aaccagatgc 1260

atttcattaa ccaaatccat atacatataa atattaatca tatataatta atatcaattg 1320

ggttagcaaa acaaatctag tctaggtgtg ttttgcgaat tgcggccgcc accgcggtgg 1380

agctcgaatt ccggtccggg tcacctttgt ccaccaagat ggaactgcgg ccgctcatta 1440

attaagtcag gcgcgcctct agttgaagac acgttcatgt cttcatcgta agaagacact 1500

cagtagtctt cggccagaat ggccatctgg attcagcagg cctagaaggc catttaaatc 1560

ctgaggatct ggtcttccta aggacccggg atatcggacc gattaaactt taattcggtc 1620

cgaagcttga agttcctatt ccgaagttcc tattctccag aaagtatagg aacttcgcat 1680

gcctgcagtg cagcgtgacc cggtcgtgcc cctctctaga gataatgagc attgcatgtc 1740

taagttataa aaaattacca catatttttt ttgtcacact tgtttgaagt gcagtttatc 1800

tatctttata catatattta aactttactc tacgaataat ataatctata gtactacaat 1860

aatatcagtg ttttagagaa tcatataaat gaacagttag acatggtcta aaggacaatt 1920

gagtattttg acaacaggac tctacagttt tatcttttta gtgtgcatgt gttctccttt 1980

ttttttgcaa atagcttcac ctatataata cttcatccat tttattagta catccattta 2040

gggtttaggg ttaatggttt ttatagacta atttttttag tacatctatt ttattctatt 2100

ttagcctcta aattaagaaa actaaaactc tattttagtt tttttattta ataatttaga 2160

tataaaatag aataaaataa agtgactaaa aattaaacaa atacccttta agaaattaaa 2220

aaaactaagg aaacattttt cttgtttcga gtagataatg ccagcctgtt aaacgccgtc 2280

gacgagtcta acggacacca accagcgaac cagcagcgtc gcgtcgggcc aagcgaagca 2340

gacggcacgg catctctgtc gctgcctctg gacccctctc gagagttccg ctccaccgtt 2400

ggacttgctc cgctgtcggc atccagaaat tgcgtggcgg agcggcagac gtgagccggc 2460

acggcaggcg gcctcctcct cctctcacgg caccggcagc tacgggggat tcctttccca 2520

ccgctccttc gctttccctt cctcgcccgc cgtaataaat agacaccccc tccacaccct 2580

ctttccccaa cctcgtgttg ttcggagcgc acacacacac aaccagatct cccccaaatc 2640

cacccgtcgg cacctccgct tcaaggtacg ccgctcgtcc tccccccccc ccctctctac 2700

cttctctaga tcggcgttcc ggtccatgca tggttagggc ccggtagttc tacttctgtt 2760

catgtttgtg ttagatccgt gtttgtgtta gatccgtgct gctagcgttc gtacacggat 2820

gcgacctgta cgtcagacac gttctgattg ctaacttgcc agtgtttctc tttggggaat 2880

cctgggatgg ctctagccgt tccgcagacg ggatcgattt catgattttt tttgtttcgt 2940

tgcatagggt ttggtttgcc cttttccttt atttcaatat atgccgtgca cttgtttgtc 3000

gggtcatctt ttcatgcttt tttttgtctt ggttgtgatg atgtggtctg gttgggcggt 3060

cgttctagat cggagtagaa ttctgtttca aactacctgg tggatttatt aattttggat 3120

ctgtatgtgt gtgccataca tattcatagt tacgaattga agatgatgga tggaaatatc 3180

gatctaggat aggtatacat gttgatgcgg gttttactga tgcatataca gagatgcttt 3240

ttgttcgctt ggttgtgatg atgtggtgtg gttgggcggt cgttcattcg ttctagatcg 3300

gagtagaata ctgtttcaaa ctacctggtg tatttattaa ttttggaact gtatgtgtgt 3360

gtcatacatc ttcatagtta cgagtttaag atggatggaa atatcgatct aggataggta 3420

tacatgttga tgtgggtttt actgatgcat atacatgatg gcatatgcag catctattca 3480

tatgctctaa ccttgagtac ctatctatta taataaacaa gtatgtttta taattatttt 3540

gatcttgata tacttggatg atggcatatg cagcagctat atgtggattt ttttagccct 3600

gccttcatac gctatttatt tgcttggtac tgtttctttt gtcgatgctc accctgttgt 3660

ttggtgttac ttctgcaggt cgactttaac ttagcctagg atccacacga caccatgata 3720

gaggtgaaac cgattaacgc agaggatacc tatgaactaa ggcatagaat actcagacca 3780

aaccagccga tagaagcgtg tatgtttgaa agcgatttac ttcgtggtgc atttcactta 3840

ggcggctatt acgggggcaa actgatttcc atagcttcat tccaccaggc cgagcactca 3900

gaactccaag gccagaaaca gtaccagctc cgaggtatgg ctaccttgga aggttatcgt 3960

gagcagaagg cgggatcgag tctaattaaa cacgctgaag aaattcttcg taagaggggg 4020

gcggacttgc tttggtgtaa tgcgcggaca tccgcctcag gctactacaa aaagttaggc 4080

ttcagcgagc agggagaggt attcgacacg ccgccagtag gacctcacat cctgatgtat 4140

aaaaggatca cataactagc tagtcagtta acctagactt gtccatcttc tggattggcc 4200

aacttaatta atgtatgaaa taaaaggatg cacacatagt gacatgctaa tcactataat 4260

gtgggcatca aagttgtgtg ttatgtgtaa ttactagtta tctgaataaa agagaaagag 4320

atcatccata tttcttatcc taaatgaatg tcacgtgtct ttataattct ttgatgaacc 4380

agatgcattt cattaaccaa atccatatac atataaatat taatcatata taattaatat 4440

caattgggtt agcaaaacaa atctagtcta ggtgtgtttt gcgaattcag agctcgaatt 4500

cattccgatt aatcgtggcc tcttgctctt caggatgaag agctatgttt aaacgtgcaa 4560

gcgctactag acaattcagt acattaaaaa cgtccgcaat gtgttattaa gttgtctaag 4620

cgtcaatttg tttacaccac aatatatcct gccaccagcc agccaacagc tccccgaccg 4680

gcagctcggc acaaaatcac cactcgatac aggcagccca tcagtccggg acggcgtcag 4740

cgggagagcc gttgtaaggc ggcagacttt gctcatgtta ccgatgctat tcggaagaac 4800

ggcaactaag ctgccgggtt tgaaacacgg atgatctcgc ggagggtagc atgttgattg 4860

taacgatgac agagcgttgc tgcctgtgat caaatatcat ctccctcgca gagatccgaa 4920

ttatcagcct tcttattcat ttctcgctta accgtgacag gctgtcgatc ttgagaacta 4980

tgccgacata ataggaaatc gctggataaa gccgctgagg aagctgagtg gcgctatttc 5040

tttagaagtg aacgttgacg atcgtcgacc gtaccccgat gaattaattc ggacgtacgt 5100

tctgaacaca gctggatact tacttgggcg attgtcatac atgacatcaa caatgtaccc 5160

gtttgtgtaa ccgtctcttg gaggttcgta tgacactagt ggttcccctc agcttgcgac 5220

tagatgttga ggcctaacat tttattagag agcaggctag ttgcttagat acatgatctt 5280

caggccgtta tctgtcaggg caagcgaaaa ttggccattt atgacgacca atgccccgca 5340

gaagctccca tctttgccgc catagacgcc gcgcccccct tttggggtgt agaacatcct 5400

tttgccagat gtggaaaaga agttcgttgt cccattgttg gcaatgacgt agtagccggc 5460

gaaagtgcga gacccatttg cgctatatat aagcctacga tttccgttgc gactattgtc 5520

gtaattggat gaactattat cgtagttgct ctcagagttg tcgtaatttg atggactatt 5580

gtcgtaattg cttatggagt tgtcgtagtt gcttggagaa atgtcgtagt tggatgggga 5640

gtagtcatag ggaagacgag cttcatccac taaaacaatt ggcaggtcag caagtgcctg 5700

ccccgatgcc atcgcaagta cgaggcttag aaccaccttc aacagatcgc gcatagtctt 5760

ccccagctct ctaacgcttg agttaagccg cgccgcgaag cggcgtcggc ttgaacgaat 5820

tgttagacat tatttgccga ctaccttggt gatctcgcct ttcacgtagt gaacaaattc 5880

ttccaactga tctgcgcgcg aggccaagcg atcttcttgt ccaagataag cctgcctagc 5940

ttcaagtatg acgggctgat actgggccgg caggcgctcc attgcccagt cggcagcgac 6000

atccttcggc gcgattttgc cggttactgc gctgtaccaa atgcgggaca acgtaagcac 6060

tacatttcgc tcatcgccag cccagtcggg cggcgagttc catagcgtta aggtttcatt 6120

tagcgcctca aatagatcct gttcaggaac cggatcaaag agttcctccg ccgctggacc 6180

taccaaggca acgctatgtt ctcttgcttt tgtcagcaag atagccagat caatgtcgat 6240

cgtggctggc tcgaagatac ctgcaagaat gtcattgcgc tgccattctc caaattgcag 6300

ttcgcgctta gctggataac gccacggaat gatgtcgtcg tgcacaacaa tggtgacttc 6360

tacagcgcgg agaatctcgc tctctccagg ggaagccgaa gtttccaaaa ggtcgttgat 6420

caaagctcgc cgcgttgttt catcaagcct tacagtcacc gtaaccagca aatcaatatc 6480

actgtgtggc ttcaggccgc catccactgc ggagccgtac aaatgtacgg ccagcaacgt 6540

cggttcgaga tggcgctcga tgacgccaac tacctctgat agttgagtcg atacttcggc 6600

gatcaccgct tccctcatga tgtttaactc ctgaattaag ccgcgccgcg aagcggtgtc 6660

ggcttgaatg aattgttagg cgtcatcctg tgctcccgag aaccagtacc agtacatcgc 6720

tgtttcgttc gagacttgag gtctagtttt atacgtgaac aggtcaatgc cgccgagagt 6780

aaagccacat tttgcgtaca aattgcaggc aggtacattg ttcgtttgtg tctctaatcg 6840

tatgccaagg agctgtctgc ttagtgccca ctttttcgca aattcgatga gactgtgcgc 6900

gactcctttg cctcggtgcg tgtgcgacac aacaatgtgt tcgatagagg ctagatcgtt 6960

ccatgttgag ttgagttcaa tcttcccgac aagctcttgg tcgatgaatg cgccatagca 7020

agcagagtct tcatcagagt catcatccga gatgtaatcc ttccggtagg ggctcacact 7080

tctggtagat agttcaaagc cttggtcgga taggtgcaca tcgaacactt cacgaacaat 7140

gaaatggttc tcagcatcca atgtttccgc cacctgctca gggatcaccg aaatcttcat 7200

atgacgccta acgcctggca cagcggatcg caaacctggc gcggcttttg gcacaaaagg 7260

cgtgacaggt ttgcgaatcc gttgctgcca cttgttaacc cttttgccag atttggtaac 7320

tataatttat gttagaggcg aagtcttggg taaaaactgg cctaaaattg ctggggattt 7380

caggaaagta aacatcacct tccggctcga tgtctattgt agatatatgt agtgtatcta 7440

cttgatcggg ggatctgctg cctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac 7500

atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc 7560

cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggcg cagccatgac ccagtcacgt 7620

agcgatagcg gagtgtatac tggcttaact atgcggcatc agagcagatt gtactgagag 7680

tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc 7740

gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg 7800

tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa 7860

agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg 7920

cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 7980

ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 8040

tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 8100

gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 8160

gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 8220

gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 8280

ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 8340

ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 8400

ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 8460

gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc 8520

ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt 8580

tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt 8640

ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca 8700

gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg 8760

tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac 8820

cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg 8880

ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc 8940

gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg 9000

cagggggggg gggggggggg gacttccatt gttcattcca cggacaaaaa cagagaaagg 9060

aaacgacaga ggccaaaaag cctcgctttc agcacctgtc gtttcctttc ttttcagagg 9120

gtattttaaa taaaaacatt aagttatgac gaagaagaac ggaaacgcct taaaccggaa 9180

aattttcata aatagcgaaa acccgcgagg tcgccgcccc gtaacctgtc ggatcaccgg 9240

aaaggacccg taaagtgata atgattatca tctacatatc acaacgtgcg tggaggccat 9300

caaaccacgt caaataatca attatgacgc aggtatcgta ttaattgatc tgcatcaact 9360

taacgtaaaa acaacttcag acaatacaaa tcagcgacac tgaatacggg gcaacctcat 9420

gtcccccccc cccccccccc tgcaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct 9480

tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa 9540

aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta 9600

tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc 9660

ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg 9720

agttgctctt gcccggcgtc aacacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa 9780

gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg 9840

agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc 9900

accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg 9960

gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat 10020

cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata 10080

ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc 10140

atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtcttca agaattggtc 10200

gacgatcttg ctgcgttcgg atattttcgt ggagttcccg ccacagaccc ggattgaagg 10260

cgagatccag caactcgcgc cagatcatcc tgtgacggaa ctttggcgcg tgatgactgg 10320

ccaggacgtc ggccgaaaga gcgacaagca gatcacgctt ttcgacagcg tcggatttgc 10380

gatcgaggat ttttcggcgc tgcgctacgt ccgcgaccgc gttgagggat caagccacag 10440

cagcccactc gaccttctag ccgacccaga cgagccaagg gatctttttg gaatgctgct 10500

ccgtcgtcag gctttccgac gtttgggtgg ttgaacagaa gtcattatcg tacggaatgc 10560

caagcactcc cgaggggaac cctgtggttg gcatgcacat acaaatggac gaacggataa 10620

accttttcac gcccttttaa atatccgtta ttctaataaa cgctcttttc tcttaggttt 10680

acccgccaat atatcctgtc aaacactgat agtttaaact gaaggcggga aacgacaatc 10740

tgatcatgag cggagaatta agggagtcac gttatgaccc ccgccgatga cgcgggacaa 10800

gccgttttac gtttggaact gacagaaccg caacgttgaa ggagccactc agcaagctgg 10860

tacgattgta atacgactca ctatagggcg aattgagcgc tgtttaaacg ctcttcaact 10920

ggaagagcgg ttacccggac cgaagcttga agttcctatt ccgaagttcc tattctctag 10980

aaagtatagg aacttcagat ctcgatgctc accctgttgt ttggtgttac ttctgcaggt 11040

cgactctaga ggatccacca tgagcccaga acgacgcccg gccgacatcc gccgtgccac 11100

cgaggcggac atgccggcgg tctgcaccat cgtcaaccac tacatcgaga caagcacggt 11160

caacttccgt accgagccgc aggaaccgca ggactggacg gacgacctcg tccgtctgcg 11220

ggagcgctat ccctggctcg tcgccgaggt ggacggcgag gtcgccggca tcgcctacgc 11280

gggcccctgg aaggcacgca acgcctacga ctggacggcc gagtcgaccg tgtacgtctc 11340

cccccgccac cagcggacgg gactgggctc cacgctctac acccacctgc tgaagtccct 11400

ggaggcacag ggcttcaaga gcgtggtcgc tgtcatcggg ctgcccaacg acccgagcgt 11460

gcgcatgcac gaggcgctcg gatatgcccc ccgcggcatg ctgcgggcgg ccggcttcaa 11520

gcacgggaac tggcatgacg tgggtttctg gcagctggac ttcagcctgc cggtaccgcc 11580

ccgtccggtc ctgcccgtca ccgagatctg atccgtcgac caacctagac ttgtccatct 11640

tctggattgg ccaacttaat taatgtatga aataaaagga tgcacacata gtgacatgct 11700

aatcactata atgtgggcat caaagttgtg tgttatgtgt aattactagt tatctgaata 11760

aaagagaaag agatcatcca tatttcttat cctaaatgaa tgtcacgtgt ctttataatt 11820

ctttgatgaa ccagatgcat ttcattaacc aaatccatat acatataaat attaatcata 11880

tataattaat atcaattggg ttagcaaaac aaatctagtc taggtgtgtt ttgcgaattg 11940

cggccgcgat ctggggaatt cccatggaca ccggtaattc ccatgatctt ctctccttca 12000

tcaatggatg ccatgtttca taacaataac accaaatgtt tgatgagcta ccaacaattg 12060

cgcaaagact atggctaagc tcgagctcgc tcgctacaag ttgttgactt tcaaatacaa 12120

gtttgttttt ggaacaccaa atattctaca tgatctttca ctaagttgcg caccactatc 12180

aaaagattat ctaggccatt attcaagtaa agagtgaaca cgtctaagac ccacaaccac 12240

accaaataga atacgcatac atgcaacata ttgtgcaaga agtatccaac tggactccca 12300

tgtattctaa aactattttc gtagagttaa agttatgaca aacttatcaa ataaaaattt 12360

gaacgctgga ccaaaacttt catctttcaa atccaccatc gtctatcctc ataaattgtt 12420

ttgattataa cacatctacg taaatcattt gttttgaaca atactaattt aattttatta 12480

agtcaaataa cctgcttaga aaataatccc tccacctcat ttaacaattt cttgtcaaac 12540

acacaccaag aaaaaaatta atgaaagaga aaagaaatga aaaggacatg gagttgaata 12600

ctagcaaaat tgattgaagg aagattcaca attgaaattg aaaccattta atttattttc 12660

gggtccataa taataaattg gtaagaataa aaacccgatc aagtccggta cagtacaatt 12720

ccactccacc aactccttac ttaaacccct atttataccc actctcatcc tcactcttcc 12780

ttcacctctc acactctctt ctctctctca aaaccctcac acaaacgctg cgtttagtgt 12840

aagaaattca atccgg 12856

<210>30

<211>825

<212>DNA

<213>玉米

<400>30

aaatccttac agaattgctg tagtttcata gtgctagatg tggacagcaa agcgccgctg 60

tatgcttctg cttttctttt ttggtgtgtg tagccacatc ctttgttcct gcccggcgcc 120

atcccacttg gttgtttttt tttatgattg aaagccttca tgcttcctcg gtcaatcacc 180

ggtgcgcact gggagcatcg ccggaaaaaa aattcttcgg ctaagagtaa cttctttctc 240

cttttcttct ctgatctcgc gagcagtgct gataacgtgt tgtaatctac ttagcggtaa 300

cgagattgag agagacaaaa tgacagaact attgtcttta ttgcagagtg tcatgtattt 360

atacagggga tacaaagtct cccaaggggt gtgtcccttg ggagtaactg ccagttgatc 420

acaggacaat attttgtaac aaaacgtaca catcgtcaaa atagcgaggc atgaaactgg 480

ccttggccat ggacgcgtga agcgcgccat gcgttggata tgtggtcaat aagtatatac 540

aatacaatgt ttaacagagc tgatagtact gctttggcac atttttgtcc acgcttcatg 600

agagataaaa cacctgcacg taaattcaca tgctgcactg aaggcccgat cactgaggag 660

cgaactgccg taactccctt ctatatatac ccccagtccc tgtttcagtt ttcgtcaagc 720

tagcagcacc aagttgtcga tcacttgcct gctcttgagc tcgattaagc tatcatcagc 780

tacagcatcc gatcccaaac tgcaactgta gcagcgacaa ctgcc 825

<210>31

<211>860

<212>DNA

<213>玉米

<400>31

ctggtaatta ttggctgtag gattctaaac agagcctaaa tagctggaat agctctagcc 60

ctcaatccaa actaatgata tctatactta tgcaactcta aatttttatt ctaaaagtaa 120

tatttcattt ttgtcaacga gattctctac tctattccac aatcttttga agcaatattt 180

accttaaatc tgtactctat accaataatc atatattcta ttatttattt ttatctctct 240

cctaaggagc atccccctat gtctgcatgg cccccgcctc gggtcccaat ctcttgctct 300

gctagtagca cagaagaaaa cactagaaat gacttgcttg acttagagta tcagataaac 360

atcatgttta cttaacttta atttgtatcg gtttctacta tttttataat atttttgtct 420

ctatagatac tacgtgcaac agtataatca acctagttta atccagagcg aaggattttt 480

tactaagtac gtgactccat atgcacagcg ttccttttat ggttcctcac tgggcacagc 540

ataaacgaac cctgtccaat gttttcagcg cgaacaaaca gaaattccat cagcgaacaa 600

acaacataca tgcgagatga aaataaataa taaaaaaagc tccgtctcga taggccggca 660

cgaatcgaga gcctccatag ccagtttttt ccatcggaac ggcggttcgc gcacctaatt 720

atatgcacca cacgcctata aagccaacca acccgtcgga ggggcgcaag ccagacagaa 780

gacagcccgt cagcccctct cgtttttcat ccgccttcgc ctccaaccgc gtgcgctcca 840

cgcctcctcc aggaaagcga 860

<210>32

<211>899

<212>DNA

<213>玉米

<400>32

gtgcagcgtg acccggtcgt gcccctctct agagataatg agcattgcat gtctaagtta 60

taaaaaatta ccacatattt tttttgtcac acttgtttga agtgcagttt atctatcttt 120

atacatatat ttaaacttta ctctacgaat aatataatct atagtactac aataatatca 180

gtgttttaga gaatcatata aatgaacagt tagacatggt ctaaaggaca attgagtatt 240

ttgacaacag gactctacag ttttatcttt ttagtgtgca tgtgttctcc tttttttttg 300

caaatagctt cacctatata atacttcatc cattttatta gtacatccat ttagggttta 360

gggttaatgg tttttataga ctaatttttt tagtacatct attttattct attttagcct 420

ctaaattaag aaaactaaaa ctctatttta gtttttttat ttaataattt agatataaaa 480

tagaataaaa taaagtgact aaaaattaaa caaataccct ttaagaaatt aaaaaaacta 540

aggaaacatt tttcttgttt cgagtagata atgccagcct gttaaacgcc gtcgacgagt 600

ctaacggaca ccaaccagcg aaccagcagc gtcgcgtcgg gccaagcgaa gcagacggca 660

cggcatctct gtcgctgcct ctggacccct ctcgagagtt ccgctccacc gttggacttg 720

ctccgctgtc ggcatccaga aattgcgtgg cggagcggca gacgtgagcc ggcacggcag 780

gcggcctcct cctcctctca cggcacggca gctacggggg attcctttcc caccgctcct 840

tcgctttccc ttcctcgccc gccgtaataa atagacaccc cctccacacc ctctttccc 899

<210>33

<211>879

<212>DNA

<213>紫花苜蓿

<400>33

aattcccatg atcttctctc cttcatcaat ggatgccatg tttcataaca ataacaccaa 60

atgtttgatg agctaccaac aattgcgcaa agactatggc taagctcgag ctcgctcgct 120

acaagttgtt gactttcaaa tacaagtttg tttttggaac accaaatatt ctacatgatc 180

tttcactaag ttgcgcacca ctatcaaaag attatctagg ccattattca agtaaagagt 240

gaacacgtct aagacccaca accacaccaa atagaatacg catacatgca acatattgtg 300

caagaagtat ccaactggac tcccatgtat tctaaaacta ttttcgtaga gttaaagtta 360

tgacaaactt atcaaataaa aatttgaacg ctggaccaaa actttcatct ttcaaatcca 420

ccatcgtcta tcctcataaa ttgttttgat tataacacat ctacgtaaat catttgtttt 480

gaacaatact aatttaattt tattaagtca aataacctgc ttagaaaata atccctccac 540

ctcatttaac aatttcttgt caaacacaca ccaagaaaaa aattaatgaa agagaaaaga 600

aatgaaaagg acatggagtt gaatactagc aaaattgatt gaaggaagat tcacaattga 660

aattgaaacc atttaattta ttttcgggtc cataataata aattggtaag aataaaaacc 720

cgatcaagtc cggtacagta caattccact ccaccaactc cttacttaaa cccctattta 780

tacccactct catcctcact cttccttcac ctctcacact ctcttctctc tctcaaaacc 840

ctcacacaaa cgctgcgttt agtgtaagaa attcaatcc 879

<210>34

<211>318

<212>DNA

<213>马铃薯

<400>34

agacttgtcc atcttctgga ttggccaact taattaatgt atgaaataaa aggatgcaca 60

catagtgaca tgctaatcac tataatgtgg gcatcaaagt tgtgtgttat gtgtaattac 120

tagttatctg aataaaagag aaagagatca tccatatttc ttatcctaaa tgaatgtcac 180

gtgtctttat aattctttga tgaaccagat gcatttcatt aaccaaatcc atatacatat 240

aaatattaat catatataat taatatcaat tgggttagca aaacaaatct agtctaggtg 300

tgttttgcga attgcggc 318

<210>35

<211>2228

<212>DNA

<213>玉米

<400>35

gtttctcttt tgtttcgcac ccctccatcc ttcactcctc gctggtccag ccattaatgc 60

caccacctgc tatacatcac taccttcctc ttccctcccg cagtctccga cctctctctc 120

tcctctctct ttctttttct ctctctccct cgctttttct gctgtctatc cccgcgccgc 180

gcgaggttgc tgccttggcc ttgctggttc tttgcttgtg ggatgagtgg aaggaaggcc 240

ggtcctcgct gcagaaagag ggagaagact tcatctgcac gtgctgctga tgtgcattag 300

aggatccgtg ctgataatat acagctgaca cccacaagat cgactggata agttcgagcc 360

tgacggcatc atgggttccg gcgatttgag ctcggagatg gagaggacgg ttcttggcct 420

gacgctgtgg gtctggattg ccatcggcgt ggtcgcgctt ctcgtggcaa tcctgctgat 480

gatctgcatt tgggtggcgt cccgcctgag gaccaagaga accatggaca gcctgaggca 540

gacgcagatc cccatctact ccaaggagat ccccatcgac cgggtcggcg ggcgcagcct 600

ggcacagaca atgcatgagc gcgagcagcc gagcttgccg ccgccggaca agtacgcgaa 660

ccgggagccg gccggggcgg ctgtggggca cctggcactc agcaagtcct cggatcatga 720

caacatgagc caggggagct cggtttgcaa tgctgaccgt gctggcactg gcagcatgca 780

ctccggtgag gatgggagct caggacctcg gaggaaaccc aactctcctg cggcgttcgt 840

gtcagcttcg cccttggttg gccttccgga gttctcgcat cttggttggg gtcactggtt 900

tactcagcgt gaccttgaac ttgctaccaa ccgcttctct aaggagaatg tgctcgggga 960

gggtggttat ggagttgtgt accgtggacg tctggtgaat ggaactgaag tcgcaataaa 1020

aaagatcttt aacaacatgg ggcaggcaga aaaagaattc agagtggaag ttgaggctat 1080

tggccatgtc cgacataaga atttggttcg gctgttggga tattgtgttg agggcgtaaa 1140

caggatgcta gtatatgagt tcgtgaacaa tggtaattta gagcagtggc ttcatggagc 1200

tatgcatcag cgtggtgttt ttagctggga aaatcgcatg aaggttgtaa caggcactgc 1260

aaaagcgctt gcttaccttc atgaagctat tgagccaaaa gttgtacatc gagatataaa 1320

atcaagcaac atattgattg atgatgaatt taatggcaaa gtatctgact ttggattggc 1380

taaacttttg ggatcagaca aaagccacat tactactaga gtgatgggaa catttggata 1440

tgttgcacct gaatatgcta atactggaat gttaaatgaa aagagtgacg tttacagttt 1500

tggcgttctc ttgttagaaa ctgtgacagg aaggaatcct gttgactaca gccgatcttc 1560

caatgaggtc aatcttgttg aatggcttaa aacaatggtg gccaatcgga gggcagagga 1620

agtggctgat ccaagcttag aggctagacc cagtatccgg gctctcaagc gggctctttt 1680

ggtggcactg aggtgtgttg atcctgactc tgaaaagaga cctaagatgg gccaggttgt 1740

taggatgctt gagtcagaag aagtaccata ccgggaggat cggagaaatc gtagaagtcg 1800

cactggaagc atggatattg agtccattgc agagggttcc aactctgcgg agtttggaaa 1860

gaaggtagaa aggactggaa gctctatatc tgacagatct caaccatgag gcctggaaat 1920

ctaagctata tcaggaactg tctcagaaac gatgttaatc accaaggtga ttgctgtcct 1980

gataggggat gctggtaggt gacagaggca aggcaggccc aggtattact gcctaagtat 2040

taggctttag ttttcaggtg cagtagaagc attcttggat gaggaacctc ctggtctcct 2100

cttatttgta taggtatatg ttggtgcctg aggaattcct cttggtttgg gtgtttaaca 2160

tttgttcggt tcttttattt cttgcattgt tgccttctta aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2220

aaaaaaag 2228

<210>36

<211>512

<212>PRT

<213>玉米

<400>36

Met Gly Ser Gly Asp Leu Ser Ser Glu Met Glu Arg Thr Val Leu Gly

1 5 10 15

Leu Thr Leu Trp Val Trp Ile Ala Ile Gly Val Val Ala Leu Leu Val

20 25 30

Ala Ile Leu Leu Met Ile Cys Ile Trp Val Ala Ser Arg Leu Arg Thr

35 40 45

Lys Arg Thr Met Asp Ser Leu Arg Gln Thr Gln Ile Pro Ile Tyr Ser

50 55 60

Lys Glu Ile Pro Ile Asp Arg Val Gly Gly Arg Ser Leu Ala Gln Thr

65 70 75 80

Met His Glu Arg Glu Gln Pro Ser Leu Pro Pro Pro Asp Lys Tyr Ala

85 90 95

Asn Arg Glu Pro Ala Gly Ala Ala Val Gly His Leu Ala Leu Ser Lys

100 105 110

Ser Ser Asp His Asp Asn Met Ser Gln Gly Ser Ser Val Cys Asn Ala

115 120 125

Asp Arg Ala Gly Thr Gly Ser Met His Ser Gly Glu Asp Gly Ser Ser

130 135 140

Gly Pro Arg Arg Lys Pro Asn Ser Pro Ala Ala Phe Val Ser Ala Ser

145 150 155 160

Pro Leu Val Gly Leu Pro Glu Phe Ser His Leu Gly Trp Gly His Trp

165 170 175

Phe Thr Gln Arg Asp Leu Glu Leu Ala Thr Asn Arg Phe Ser Lys Glu

180 185 190

Asn Val Leu Gly Glu Gly Gly Tyr Gly Val Val Tyr Arg Gly Arg Leu

195 200 205

Val Asn Gly Thr Glu Val Ala Ile Lys Lys Ile Phe Asn Asn Met Gly

210 215 220

Gln Ala Glu Lys Glu Phe Arg Val Glu Val Glu Ala Ile Gly His Val

225 230 235 240

Arg His Lys Asn Leu Val Arg Leu Leu Gly Tyr Cys Val Glu Gly Val

245 250 255

Asn Arg Met Leu Val Tyr Glu Phe Val Asn Asn Gly Asn Leu Glu Gln

260 265 270

Trp Leu His Gly Ala Met His Gln Arg Gly Val Phe Ser Trp Glu Asn

275 280 285

Arg Met Lys Val Val Thr Gly Thr Ala Lys Ala Leu Ala Tyr Leu His

290 295 300

Glu Ala Ile Glu Pro Lys Val Val His Arg Asp Ile Lys Ser Ser Asn

305 310 315 320

Ile Leu Ile Asp Asp Glu Phe Asn Gly Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu

325 330 335

Ala Lys Leu Leu Gly Ser Asp Lys Ser His Ile Thr Thr Arg Val Met

340 345 350

Gly Thr Phe Gly Tyr Val Ala Pro Glu Tyr Ala Asn Thr Gly Met Leu

355 360 365

Asn Glu Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Val Leu Leu Leu Glu Thr

370 375 380

Val Thr Gly Arg Asn Pro Val Asp Tyr Ser Arg Ser Ser Asn Glu Val

385 390 395 400

Asn Leu Val Glu Trp Leu Lys Thr Met Val Ala Asn Arg Arg Ala Glu

405 410 415

Glu Val Ala Asp Pro Ser Leu Glu Ala Arg Pro Ser Ile Arg Ala Leu

420 425 430

Lys Arg Ala Leu Leu Val Ala Leu Arg Cys Val Asp Pro Asp Ser Glu

435 440 445

Lys Arg Pro Lys Met Gly Gln Val Val Arg Met Leu Glu Ser Glu Glu

450 455 460

Val Pro Tyr Arg Glu Asp Arg Arg Asn Arg Arg Ser Arg Thr Gly Ser

465 470 475 480

Met Asp Ile Glu Ser Ile Ala Glu Gly Ser Asn Ser Ala Glu Phe Gly

485 490 495

Lys Lys Val Glu Arg Thr Gly Ser Ser Ile Ser Asp Arg Ser Gln Pro

500 505 510

<210>37

<211>509

<212>PRT

<213>水稻

<400>37

Met Gly Ser Ser Asp Leu Ser Ser Glu Met Arg Arg Thr Val Leu Gly

1 5 10 15

Leu Thr Leu Trp Val Trp Ile Ala Ile Gly Val Val Ala Leu Leu Val

20 25 30

Ala Ile Leu Leu Met Ile Cys Ile Trp Met Ala Ser Arg Arg Lys Thr

35 40 45

Lys Arg Thr Met Asp Asn Leu Arg Gln Thr Gln Ile Pro Ile Phe Ser

50 55 60

Lys Glu Ile Pro Val Asp Arg Val Gly Gly Arg Ser Leu Ala Gln Thr

65 70 75 80

Met His Glu Arg Glu Gln Pro Ser Phe Pro Pro Gln Asp Lys His Thr

85 90 95

Asn Arg Glu Pro Gly Lys Thr Leu Gly His Met Ala Leu Ser Lys Ser

100 105 110

Ser Glu Pro Asp Asn Met Ser Gln Gly Ser Ser Val Cys Asn Val Asp

115 120 125

Arg Ala Gly Ser Val His Ser Gly Glu Asp Gly Ser Thr Gly His Gly

130 135 140

Arg Lys Pro Tyr Ser Pro Ala Ala Phe Val Ser Ala Ser Pro Leu Val

145 150 155 160

Gly Leu Pro Glu Phe Ser His Leu Gly Trp Gly His Trp Phe Thr Leu

165 170 175

Arg Asp Leu Glu Leu Ala Thr Asn Arg Phe Ser Arg Glu Asn Val Leu

180 185 190

Gly Glu Gly Gly Tyr Gly Val Val Tyr Arg Gly Arg Leu Val Asn Gly

195 200 205

Thr Glu Val Ala Ile Lys Lys Ile Phe Asn Asn Met Gly Gln Ala Glu

210 215 220

Lys Glu Phe Arg Val Glu Val Glu Ala Ile Gly His Val Arg His Lys

225 230 235 240

Asn Leu Val Arg Leu Leu Gly Tyr Cys Val Glu Gly Val Asn Arg Met

245 250 255

Leu Val Tyr Glu Phe Val Asn Asn Gly Asn Leu Glu Gln Trp Leu His

260 265 270

Gly Ala Met Arg Gln His Gly Val Phe Ser Trp Glu Asn Arg Met Lys

275 280 285

Val Val Ile Gly Thr Ala Lys Ala Leu Ala Tyr Leu His Glu Ala Ile

290 295 300

Glu Pro Lys Val Val His Arg Asp Ile Lys Ser Ser Asn Ile Leu Ile

305 310 315 320

Asp Glu Glu Phe Asn Gly Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu

325 330 335

Leu Gly Ser Asp Lys Ser His Ile Thr Thr Arg Val Met Gly Thr Phe

340 345 350

Gly Tyr Val Ala Pro Glu Tyr Ala Asn Thr Gly Met Leu Asn Glu Lys

355 360 365

Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Val Leu Leu Leu Glu Thr Val Thr Gly

370 375 380

Arg Glu Pro Val Asp Tyr Ser Arg Ser Gly Asn Glu Val Asn Leu Val

385 390 395 400

Glu Trp Leu Lys Ile Met Val Ala Asn Arg Arg Ala Glu Glu Val Val

405 410 415

Asp Pro Ile Leu Glu Val Arg Pro Thr Val Arg Ala Ile Lys Arg Ala

420 425 430

Leu Leu Val Ala Leu Arg Cys Val Asp Pro Asp Ser Glu Lys Arg Pro

435 440 445

Lys Met Gly Gln Val Val Arg Met Leu Glu Ser Glu Glu Val Pro Tyr

450 455 460

Arg Glu Asp Arg Arg Asn Arg Arg Ser Arg Thr Gly Ser Met Asp Ile

465 470 475 480

Glu Ser Ile Ala Glu Gly Ser Asn Ser Thr Glu Phe Ala Asn Lys Val

485 490 495

Glu Arg Thr Gly Ser Ser Thr Ser Asp Arg Ser Gln Ser

500 505

Claims

1.改变植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽如SEQ ID NO：15的氨基酸序列所示；以及

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体，并且在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。

2.权利要求1的方法，所述方法还包括：

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体，并且在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。

3.评价植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽如SEQ ID NO：15的氨基酸序列所示；

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及

(c)评价与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时所述转基因植物的根构造。

4.权利要求3的方法，所述方法还包括：

(d)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及

(e)评价与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时所述子代植物的根构造。

5.评价植物根构造的方法，所述方法包括：

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及

(d)评价与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时所述子代植物的根构造。

6.测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：

(c)测定所述转基因植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

7.权利要求6的方法，所述方法还包括：

(e)测定所述子代植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

8.权利要求7的方法，其中所述测定步骤包括：测定所述转基因植物在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

9.权利要求8的方法，其中所述测定步骤(e)包括：测定所述子代植物在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

10.测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：

(d)测定所述子代植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

11.权利要求10的方法，其中所述测定步骤包括：测定所述转基因植物在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

12.分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码LLRK或LLRK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽如SEQ IDNO：15的氨基酸序列所示。

13.权利要求12的多核苷酸，其中所述核酸序列是SEQ ID NO：14。

14.包含权利要求12的多核苷酸的载体。

15.重组DNA构建体，所述重组DNA构建体包含与至少一种调控序列可操作地连接的权利要求12的多核苷酸。

16.用于转化细胞的方法，所述方法包括用权利要求12的多核苷酸来转化细胞。

17.细胞，所述细胞包含权利要求16的重组DNA构建体，其中所述细胞不是种子细胞。

18.用于生产植物的方法，所述方法包括使用权利要求12的多核苷酸来转化植物细胞以及从转化过的植物细胞再生植物。

19.对基因变异进行作图的方法，所述基因变异表现出植物根构造的改变和/或植物至少一种农学特性的改变，所述方法包括：

(a)使两种植物品种杂交；以及

(i)SEQ ID NO：14的核酸序列；或

(ii)编码SEQ ID NO：15的多肽的核酸序列；

20.用于改变植物根构造和/或改变植物至少一种农学特性的分子育种方法，所述方法包括：

(a)使两种植物品种杂交；以及

(i)SEQ ID NO：14的核酸序列；或

(ii)编码SEQ ID NO：15的多肽的核酸序列；