CN108368517B - 用于快速植物转化的方法和组合物 - Google Patents
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Abstract
本披露涉及用于快速和有效转化植物的方法和组合物。本披露进一步提供用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(ii)编码包含两个AP2‑DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使所述可再生植物结构发芽以形成所述转基因植物。本摘要旨在作为扫描工具用于在特定领域中进行搜索的目的,而不旨在限制本披露。
Description
技术领域
本披露总体上涉及植物分子生物学领域,包括植物的基因操作。更具体地,本披露涉及在不存在细胞分裂素并且没有愈伤组织形成的情况下用于生产转化的植物的快速、高效的方法和组合物。
相关申请的交叉引用
本申请要求于2015年10月30日提交的美国临时申请号62/248578的优先权,该申请以其全文通过引用特此结合中。
对经由EFS-Web作为文本文件提交的序列表的引用
该序列表的官方副本经由EFS-Web作为ASCII格式的序列表以电子方式提交,该序列表文件名为“20160826_6752WOPCT_SeqList.txt”,创建于2016年8月17日,且具有1000KB大小,并与本说明书同时提交。包括在该ASCII格式的文件中的序列表是本说明书的一部分并且以其全文通过引用结合在此。
背景技术
过去几年来在植物转化方面取得了的重要进展。多种农艺学上重要的植物(例如,玉米、大豆、低芥酸菜籽、小麦、籼稻、甘蔗和高粱、以及近交系)的转化依然是困难且耗时的。传统上,引起培养反应的唯一方法是通过优化培养基组分和/或外植体材料和来源。这导致了一些基因型的成功,但是许多重要的作物植物(包括优良近交系或品种)都未能产生有利的培养反应。尽管模式基因型的转化可能是有效的,但是将转基因渐渗入生产近交系的过程是费力、昂贵且耗时的。如果可以将基因引入并以更高的速度和效率进行评估,那将节省大量的时间和金钱。
尽管有局限性,单子叶植物(例如玉米、稻、和小麦)的农杆菌(Agrobacterium)介导的转化仍然是一种广泛使用的实验方法,通常使用分生组织(例如未成熟胚)作为选择的外植体(例如Ishida等人,1996;Zhao等人,2001;Frame等人,2002)。对于稻,还报道了吸胀种子的转化(Toki等人,2006)。迄今为止,用于将细胞与农杆菌接触的最常用方法包括:培养外植体组织(例如,未成熟胚)(“共培养”),其可能包括“延迟”或“静止”(非选择性)步骤,接着在选择培养基(含有一种或多种允许细胞脱分化形成愈伤组织的生长素)上进行培养。在该愈伤化阶段期间,在选择培养基上存在适当的选择剂的情况下选择转化的抗性愈伤组织。接着在再生和生根培养基中在促进愈伤组织分化和愈伤组织再生成植物的条件下使细胞生长。该过程通常需要至少10-12周来生产可以转移至土壤供进一步生长的植物。该过程还需要在整个转化过程中进行若干次组织的手动转移,并使用若干种不同类型的培养基。
因此,使用标准转化和再生方案是耗时且低效的,并且负面地影响转基因产品开发时间表,考虑到通常存在季节性限制的“优先开发窗口(priority developmentwindow)”用于根据初步研究中获得的结果决定哪些遗传构建体优先用于更大规模的田间工作。可用的转化和再生的标准方法具有多种限制可以生产和筛选转基因植物的速度和效率的缺点。例如,许多转化和再生的标准方法需要使用高生长素或细胞分裂素水平,并且需要涉及胚性愈伤组织形成或器官发生的步骤,导致在转化后在生产用于在温室环境中生长的植物之前花费许多周的程序。据报道(Zhong等人(1992)Planta[植物]187:490-497),此类方法可能花费12-23周来生产植物,其包括以下步骤:供应2,4-D以刺激玉米的体细胞胚形成(占用8周)、从初级体细胞胚产生胚性愈伤组织(占用另外的8周)、形成芽(占用另外的3周)、并最终生根(占用另外的1至3周)。可替代地,Zhong等人立即供应细胞分裂素以及生长素,以刺激直接形态发生而产生芽和直接植物形成(从8至28周)(Zhong等人(1992)Planta[植物]187:490-497)。
尽管植物分子生物学(尤其是植物转化和再生方法)中的进展,仍然需要高通量系统来快速且有效地生产转基因植物,来为进行研究和产品开发的决定提供更多的时间和灵活性。这样的用于转化的高通量系统促进生产大量的转基因植物用于基因测试和/或产品开发,同时降低材料和人工成本。
发明内容
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在一方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在一方面,位点特异性重组酶选自:FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在一方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZMPRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在一方面,化学诱导型启动子是XVE。在一方面,化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去阻抑发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在一方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在一方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在一方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在一方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在一方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在一方面,诱导型启动子包含生长素响应元件。在一方面,诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在一方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在一方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在一方面,启动子选自:NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在一方面,诱导型启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在一方面,启动子是去阻抑型启动子。在一方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在一方面,发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自单子叶植物。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自双子叶植物。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽选自:WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在一方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,ODP2是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,ODP2多肽包含SEQ IDNO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在一方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在一方面,所述单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天内或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在一方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在一方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在一方面,外植体是未成熟胚。在一方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在一方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在一方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在一方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在一方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)其组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物;其中所述WUS/WOX同源框多肽包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列;或其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个的核苷酸序列编码;并且其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在一方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在一方面,位点特异性重组酶选自:FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在一方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在一方面,化学诱导型启动子是XVE。在一方面,化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去阻抑发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在一方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在一方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在一方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在一方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在一方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在一方面,诱导型启动子包含生长素响应元件。在一方面,诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在一方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在一方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在一方面,启动子选自:NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在一方面,诱导型启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在一方面,启动子是去阻抑型启动子。在一方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在一方面,发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自单子叶植物。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自双子叶植物。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽选自:WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽包含SEQ IDNO:4的氨基酸序列。在一方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在一方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,ODP2是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在一方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在一方面,所述单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且所述转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在一方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在一方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在一方面,外植体是未成熟胚。在一方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在一方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在一方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在一方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在一方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS2多肽的核苷酸序列;或(ii)编码ODP2多肽的核苷酸序列;或(iii)其组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物;其中所述WUS2多肽包含SEQ IDNO:4的氨基酸序列;或其中所述WUS2多肽由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码;并且其中所述ODP2多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO:17或21中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在一方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在一方面,位点特异性重组酶选自:FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在一方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在一方面,化学诱导型启动子是XVE。在一方面,化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去阻抑发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在一方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在一方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在一方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在一方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在一方面,AXIG1启动子包含SEQID NO:39的核苷酸序列。在一方面,诱导型启动子包含生长素响应元件。在一方面,诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在一方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在一方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在一方面,启动子选自:NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBIl-PRO或ZM-ADF4-PRO。在一方面,诱导型启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在一方面,启动子是去阻抑型启动子。在一方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在一方面,发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自单子叶植物。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自双子叶植物。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽选自:WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽包含SEQID NO:6的氨基酸序列。在一方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽包含SEQ IDNO:14的氨基酸序列。在一方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在一方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,ODP2是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在一方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在一方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在一方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在一方面,外植体是未成熟胚。在一方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在一方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在一方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在一方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在一方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在一方面,位点特异性重组酶选自:FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在一方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(12KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在一方面,化学诱导型启动子是XVE。在一方面,化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去阻抑发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在一方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在一方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在一方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在一方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在一方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在一方面,诱导型启动子包含生长素响应元件。在一方面,诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在一方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在一方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在一方面,启动子选自:NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在一方面,诱导型启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在一方面,启动子是去阻抑型启动子。在一方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在一方面,发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自单子叶植物。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自双子叶植物。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽选自:WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽包含SEQ IDNO:4的氨基酸序列。在一方面,WUSl多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在一方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在一方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在一方面,外植体是未成熟胚。在一方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在一方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在一方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在一方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在一方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)
使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在一方面,编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列发生在起始转化后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在一方面,位点特异性重组酶选自:FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在一方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在一方面,化学诱导型启动子是XVE。在一方面,化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去阻抑发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在一方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在一方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在一方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在一方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在一方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在一方面,诱导型启动子包含生长素响应元件。在一方面,诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在一方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在一方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在一方面,启动子选自:NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在一方面,诱导型启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在一方面,启动子是去阻抑型启动子。在一方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在一方面,发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自单子叶植物。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自双子叶植物。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在一方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,ODP2是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,ODP2多肽由包含SEQ IDNO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在一方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在一方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在一方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在一方面,外植体是未成熟胚。在一方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在一方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在一方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在一方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在一方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;和(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在一方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在一方面,位点特异性重组酶选自:FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在一方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBIPRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在一方面,化学诱导型启动子是XVE。在一方面,化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去阻抑发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在一方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在一方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在一方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在一方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在一方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在一方面,诱导型启动子包含生长素响应元件。在一方面,诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在一方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在一方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在一方面,启动子选自:NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBIl-PRO或ZM-ADF4-PRO。在一方面,诱导型启动子是包含SEQID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在一方面,启动子是去阻抑型启动子。在一方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在一方面,发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自单子叶植物。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自双子叶植物。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽选自:WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一方面,WOX5多肽由包含SEQID NO:13的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在一方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,ODP2是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在一方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在一方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在一方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在一方面,外植体是未成熟胚。在一方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在一方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在一方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在一方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在一方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)在约14天至约60天内使(b)的所述可再生植物结构发芽以形成所述转基因植物。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在一方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在一方面,位点特异性重组酶选自:FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在一方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在一方面,化学诱导型启动子是XVE。在一方面,化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去阻抑发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在一方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在一方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在一方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在一方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在一方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在一方面,诱导型启动子包含生长素响应元件。在一方面,诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在一方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在一方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在一方面,启动子选自:NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在一方面,诱导型启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在一方面,启动子是去阻抑型启动子。在一方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在一方面,发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自单子叶植物。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自双子叶植物。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽选自:WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽包含SEQID NO:6的氨基酸序列。在一方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽包含SEQ IDNO:14的氨基酸序列。在一方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在一方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,ODP2是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在一方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天内或在转化细胞的约0至约14天内形成。在一方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在一方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在一方面,外植体是未成熟胚。在一方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在一方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在一方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在一方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在一方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成,并且其中所述可再生植物结构在转化细胞的约0-7天或约0-14天内形成;并且(c)在转化所述细胞的约14天至约60天内使(b)的可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在一方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在一方面,位点特异性重组酶选自:FLP、Cre、SSV1、λInt、 HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在一方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。在一方面,与编码位点特异性重组酶的核苷酸序列和/或编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在一方面,化学诱导型启动子是XVE。在一方面,化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去阻抑发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在一方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在一方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在一方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在一方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在一方面,AXIG1启动子包含SEQID NO:39的核苷酸序列。在一方面,诱导型启动子包含生长素响应元件。在一方面,诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在一方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在一方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在一方面,启动子选自:NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在一方面,诱导型启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在一方面,启动子是去阻抑型启动子。在一方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在一方面,发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自单子叶植物。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自双子叶植物。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽选自:WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在一方面,WUS2多肽包含SEQID NO:6的氨基酸序列。在一方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在一方面,WOX5多肽包含SEQ IDNO:14的氨基酸序列。在一方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在一方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,ODP2是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在一方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在一方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在一方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在一方面,单子叶植物是玉米或稻。在一方面,单子叶植物是玉米。在一方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在一方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在一方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在一方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在一方面,外植体是未成熟胚。在一方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在一方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在一方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在一方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在一方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。
本披露包含用于快速和有效转化植物(例如,单子叶植物,如玉米)的方法和组合物。在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或约0至约14天内产生。在一方面,发芽包含将可再生植物结构转移至包含外源性细胞分裂素和形成转基因植物的成熟培养基。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列,所述位点特异性重组酶选自FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,(c)发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至启动子,所述启动子选自诱导型启动子、发育调节型启动子、或组成型启动子。在一方面,与编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。与编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子;并且与编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、SDR、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,外植体源自单子叶植物或双子叶植物。在一方面,种子来自通过所述方法生产的植物。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且;(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。其中所述WUS/WOX同源框多肽包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列;或其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个的核苷酸序列编码;并且其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或约0至约14天内产生。在一方面,发芽包含将可再生植物结构转移至包含外源性细胞分裂素和形成转基因植物的成熟培养基。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列,所述位点特异性重组酶选自FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,(c)发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至启动子,所述启动子选自诱导型启动子、发育调节型启动子、或组成型启动子。在一方面,与编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。与编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子;并且与编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、SDR、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,外植体源自单子叶植物或双子叶植物。在一方面,种子来自通过所述方法生产的植物。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包含:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使(b)的可再生植物结构发芽约14至约60天以形成小植株;并且(d)允许(c)的小植株生长成植物。在一方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或约0至约14天内产生。在一方面,发芽包含将可再生植物结构转移至包含外源性细胞分裂素和形成转基因植物的成熟培养基。在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列,所述位点特异性重组酶选自FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在一方面,(c)发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至启动子,所述启动子选自诱导型启动子、发育调节型启动子、或组成型启动子。在一方面,与编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)。与编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子;并且与编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接的发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、SDR、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在一方面,外植体源自单子叶植物或双子叶植物。在一方面,种子来自通过所述方法生产的植物。
在各个方面,本披露进一步提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的一个或多个细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在一方面,本披露进一步提供了用于生产小植株的方法,所述小植株获得自使用所披露的方法制备的可再生植物结构。在一方面,本披露进一步提供了用于生产植物的方法,所述植物获得自可再生植物结构。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在一方面,本披露进一步提供了试剂盒,所述试剂盒包含:(a)表达构建体,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;以及(b)用于在不存在外源性细胞分裂素的情况下获得植物可再生结构的说明书,其中没有愈伤组织形成;以及(c)用于使可再生植物结构发芽以形成转基因植物的说明书。
本披露包含用于快速和有效转化植物(例如,单子叶植物,如玉米)的方法和组合物。在各个方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0-7天或约0-14天内产生。在各个方面,发芽包含将可再生植物结构转移至包含外源性细胞分裂素和形成转基因植物的成熟培养基。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列,所述位点特异性重组酶选自FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A或XVE。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列被可操作地连接至启动子,所述启动子选自诱导型启动子、发育调节型启动子、或组成型启动子。在各个方面,组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2,NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)诱导型启动子选自:GLB1、OLE、LTP2、AXIG1 DR5、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或XVE;并且发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在各个方面,外植体源自单子叶植物或双子叶植物。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)其组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且;(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物;其中所述WUS/WOX同源框多肽包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列;或其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个的核苷酸序列编码;并且其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0-7天或约0-14天内产生。在各个方面,发芽包含将可再生植物结构转移至包含外源性细胞分裂素和形成转基因植物的成熟培养基。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列,所述位点特异性重组酶选自FLP、Cre、SSV1、λInt、 HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A或XVE。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列被可操作地连接至启动子,所述启动子选自诱导型启动子、发育调节型启动子、或组成型启动子。在各个方面,组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZMPRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2.NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)诱导型启动子选自:GLB1、OLE、LTP2、AXIG1 DR5、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或XVE;并且发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在各个方面,外植体源自单子叶植物或双子叶植物。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)允许(b)的可再生植物结构成长为小植株,持续约14天至约60天;并且(d)允许(c)的小植株生长成植物。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0-7天或约0-14天内产生。在各个方面,发芽包含将可再生植物结构转移至包含外源性细胞分裂素和形成转基因植物的成熟培养基。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列,所述位点特异性重组酶选自FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A或XVE。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列被可操作地连接至启动子,启动子选自诱导型启动子、发育调节型启动子、和组成型启动子。在各个方面,组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2,NOS、35S的-135版本、和ZM-ADF PRO(ALT2)诱导型启动子选自:GLB1、OLE、LTP2、AXIG1 DR5、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或XVE;并且发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、或LEA-D34。在各个方面,外植体源自单子叶植物或双子叶植物。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在各个方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在各个方面,位点特异性重组酶是FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在各个方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、或HSP18A。在各个方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在各个方面,化学诱导型启动子是XVE。在各个方面,阻抑化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在各个方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在各个方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子。在各个方面,组成型启动子是UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PROFL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,发育调节型启动子是PLTP启动子。在各个方面,PLTP启动子源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,PLTP启动子源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ IDNO:1或2中的任一个。在各个方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在各个方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在各个方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在各个方面,启动子包含生长素响应元件。在各个方面,启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在各个方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在各个方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在各个方面,启动子是NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在各个方面,启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在各个方面,启动子是去阻抑型启动子。在各个方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在各个方面,WUS1多肽由包含SEQ IDNO:3的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在各个方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在各个方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在各个方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在各个方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,ODP2是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,ODP2多肽由包含SEQID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在各个方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在各个方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,外植体源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,外植体源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在各个方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,外植体是未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在各个方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在各个方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)其组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物;其中所述WUS/WOX同源框多肽包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列;或其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个的核苷酸序列编码;并且其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ IDNO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在各个方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在各个方面,位点特异性重组酶是FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在各个方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、或HSP18A。在各个方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在各个方面,化学诱导型启动子是XVE。在各个方面,阻抑化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在各个方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在各个方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子。在各个方面,组成型启动子是UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,发育调节型启动子是PLTP启动子。在各个方面,PLTP启动子源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,PLTP启动子源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在各个方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在各个方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在各个方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在各个方面,启动子包含生长素响应元件。在各个方面,启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在各个方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在各个方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在各个方面,启动子是NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在各个方面,启动子是包含SEQID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在各个方面,启动子是去阻抑型启动子。在各个方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是SEQ ID NO:4。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO:3编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是SEQID NO:6。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO:5编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是SEQ ID NO:8。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO:7编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是SEQ ID NO:14。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO:13编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是SEQ ID NO:20。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO:19编码。在各个方面,外植体源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,外植体源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在各个方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,外植体是未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在各个方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在各个方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS2多肽的核苷酸序列;或(ii)编码ODP2多肽的核苷酸序列;或(iii)其组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物;其中所述WUS2多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列;或其中所述WUS2多肽由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码;并且其中所述ODP2多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO:17或21中的任一个的核苷酸序列编码。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在各个方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在各个方面,位点特异性重组酶是FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在各个方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、或HSP18A。在各个方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在各个方面,化学诱导型启动子是XVE。在各个方面,阻抑化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在各个方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在各个方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子。在各个方面,组成型启动子是UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,发育调节型启动子是PLTP启动子。在各个方面,PLTP启动子源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,PLTP启动子源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在各个方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在各个方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在各个方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在各个方面,启动子包含生长素响应元件。在各个方面,启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在各个方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在各个方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在各个方面,启动子是NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在各个方面,启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在各个方面,启动子是去阻抑型启动子。在各个方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在各个方面,外植体源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,外植体源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在各个方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,外植体是未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在各个方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在各个方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在各个方面,位点特异性重组酶是FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在各个方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、或HSP18A。在各个方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在各个方面,化学诱导型启动子是XVE。在各个方面,阻抑化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在各个方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在各个方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子。在各个方面,组成型启动子是UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,发育调节型启动子是PLTP启动子。在各个方面,PLTP启动子源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,PLTP启动子源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在各个方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在各个方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在各个方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在各个方面,启动子包含生长素响应元件。在各个方面,启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在各个方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在各个方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在各个方面,启动子是NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在各个方面,启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在各个方面,启动子是去阻抑型启动子。在各个方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在各个方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在各个方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在各个方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽包含SEQID NO:14的氨基酸序列。在各个方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在各个方面,外植体源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,外植体源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在各个方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,外植体是未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在各个方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在各个方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在各个方面,编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在起始转化后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,位点特异性重组酶是FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在各个方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、或HSP18A。在各个方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在各个方面,化学诱导型启动子是XVE。在各个方面,阻抑化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在各个方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在各个方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在各个方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,发育调节型启动子是PLTP启动子。在各个方面,PLTP启动子源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,PLTP启动子源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在各个方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,ODP2是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,ODP2多肽包含SEQID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在各个方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在各个方面,BBM2多肽由包含SEQID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,外植体源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,外植体源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在各个方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,外植体是未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在各个方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在各个方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;和(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在各个方面,位点特异性重组酶是FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在各个方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、或HSP18A。在各个方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在各个方面,化学诱导型启动子是XVE。在各个方面,阻抑化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在各个方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在各个方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子。在各个方面,组成型启动子是UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,发育调节型启动子是PLTP启动子。在各个方面,PLTP启动子源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,PLTP启动子源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在各个方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在各个方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在各个方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在各个方面,启动子包含生长素响应元件。在各个方面,启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在各个方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在各个方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在各个方面,启动子是NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在各个方面,启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在各个方面,启动子是去阻抑型启动子。在各个方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在各个方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在各个方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在各个方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在各个方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在各个方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,ODP2是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在各个方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,BBM2多肽包含SEQID NO:20的氨基酸序列。在各个方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,外植体源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,外植体源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天或在转化细胞的约0至约14天内形成,并且转基因植物在转化细胞的约14天内至转化细胞的约60天内形成。在各个方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,外植体是未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在各个方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在各个方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)在约14天至约60天内使(b)的可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在各个方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在各个方面,位点特异性重组酶是FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在各个方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、或HSP18A。在各个方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在各个方面,化学诱导型启动子是XVE。在各个方面,阻抑化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在各个方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在各个方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子。在各个方面,组成型启动子是UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZMPRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALTl)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2,NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,发育调节型启动子是PLTP启动子。在各个方面,PLTP启动子源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,PLTP启动子源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在各个方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在各个方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在各个方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在各个方面,启动子包含生长素响应元件。在各个方面,启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在各个方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在各个方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在各个方面,启动子是NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在各个方面,启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在各个方面,启动子是去阻抑型启动子。在各个方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在各个方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在各个方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在各个方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在各个方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在各个方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,ODP2是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在各个方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在各个方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,外植体源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,外植体源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,可再生植物结构在转化细胞的约0至约7天内或在转化细胞的约0至约14天内形成。在各个方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,外植体是未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在各个方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在各个方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在另外的方面,本披露提供了用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成,并且其中所述可再生植物结构在转化细胞的约0-7天或约0-14天内形成;并且(c)在约14天至约60天内使(b)的可再生植物结构发芽以形成转基因植物。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在各个方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在各个方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于约14天。在各个方面,发芽在存在外源性细胞分裂素的情况下进行。在各个方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。在各个方面,位点特异性重组酶是FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。在各个方面,位点特异性重组酶是非稳定的融合多肽。在各个方面,非稳定的融合多肽是TETR(L17G)~CRE或ESR(L17G)~CRE。在各个方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。在各个方面,诱导型启动子是GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、或HSP18A。在各个方面,诱导型启动子是化学诱导型启动子。在各个方面,化学诱导型启动子是XVE。在各个方面,阻抑化学诱导型启动子被TETR、ESR、或CR阻抑,并且去发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。在各个方面,阻抑物是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素。在各个方面,阻抑物是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子。在各个方面,组成型启动子是UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2,NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO(ALT2)在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至诱导型启动子或发育调节型启动子。在各个方面,发育调节型启动子是PLTP启动子。在各个方面,PLTP启动子源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,PLTP启动子源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2或55-61中的任一个。在各个方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1或2中的任一个。在各个方面,诱导型启动子是生长素诱导型启动子。在各个方面,生长素诱导型启动子是AXIG1。在各个方面,AXIG1启动子包含SEQ ID NO:39的核苷酸序列。在各个方面,启动子包含生长素响应元件。在各个方面,启动子含有一个或多个DR5增强子基序。在各个方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在各个方面,启动子中的一个或多个操纵子序列已经位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。在各个方面,启动子是NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。在各个方面,启动子是包含SEQ ID NO:40的核苷酸序列的DR5启动子。在各个方面,启动子是去阻抑型启动子。在各个方面,去阻抑型启动子是TETR、ESR、或CR。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是单子叶植物核苷酸。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列是双子叶植物核苷酸。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列编码包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。在各个方面,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在各个方面,WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在各个方面,WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。在各个方面,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在各个方面,WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。在各个方面,WUS/WOX同源框多肽是WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是WOX5A多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米或稻WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽是玉米WOX5多肽。在各个方面,WOX5多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在各个方面,WOX5多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由包含SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在各个方面,ODP2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,ODP2是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列。在各个方面,ODP2多肽由包含SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。在各个方面,BBM2多肽是单子叶植物多肽。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在各个方面,单子叶植物是玉米或稻。在各个方面,单子叶植物是玉米。在各个方面,BBM2多肽是双子叶植物多肽。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,BBM2多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在各个方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。在各个方面,外植体源自单子叶植物。在各个方面,单子叶植物是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在各个方面,外植体源自双子叶植物。在各个方面,双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在各个方面,所述方法在不存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,所述方法在存在生根培养基的情况下进行。在各个方面,外植体是未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是1-5mm未成熟胚。在各个方面,未成熟胚是3.5-5mm未成熟胚。在各个方面,外源性细胞分裂素在转化细胞的约7天后或在转化细胞的约14天后在发芽期间使用。在各个方面,(a)的多肽的表达是瞬时的。在各个方面,提供了来自通过所述方法生产的植物的种子。
在一方面,本披露进一步提供了试剂盒,所述试剂盒包含:(a)表达构建体,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;或(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;以及(b)用于在不存在外源性细胞分裂素的情况下获得植物可再生结构的说明书,其中没有愈伤组织形成。在各个方面,试剂盒提供了用于在约14天至约60天内获得转化的植物的说明书。在各个方面,试剂盒提供了用于从使用试剂盒转化的外植体获得植物的说明书。
在一方面,本披露进一步提供了试剂盒,所述试剂盒包含:(a)表达构建体,所述表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;以及(b)用于在不存在外源性细胞分裂素的情况下获得植物可再生结构的说明书,其中没有愈伤组织形成。在各个方面,试剂盒提供了用于在约14天至约60天内获得转化的植物的说明书。在各个方面,试剂盒提供了用于从使用试剂盒转化的外植体获得植物的说明书。
在一方面,本披露进一步提供了试剂盒,所述试剂盒包含:(a)表达构建体,所述表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;以及(b)用于在不存在外源性细胞分裂素的情况下获得植物可再生结构的说明书,其中没有愈伤组织形成。在各个方面,试剂盒提供了用于在约14天至约60天内获得转化的植物的说明书。在各个方面,试剂盒提供了用于从使用试剂盒转化的外植体获得植物的说明书。
在另外的方面,本披露提供了来自由本文披露的方法产生的植物的种子。
附图说明
专利或申请文件包含至少一幅用彩色绘制的图画。根据要求并支付必要的费用后,本局将提供本专利或专利申请出版物的彩色图画的副本。
图1示出了使用所披露的方法(参见实例5)处理的未成熟胚的代表性图像。箭头表示处理后在表面上新形成的代表性胚。
图2示出了使用所披露的方法(参见实例5)处理的未成熟胚的代表性图像。图像示出了处理后表面上的荧光胚。
图3示出了源自使用所披露的方法(参见实例7)获得的单个原始合子未成熟胚的多个成熟体细胞胚在成熟培养基上生长13天后的代表性图像。
图4示出了使用所披露的方法(参见实例7)从45个原始转化的合子未成熟胚获得的植物的代表性图像。
图5示出了源自在农杆菌感染先锋优良春小麦品种HC0456D的未成熟胚后两周快速形成的体细胞胚的早期发芽的芽。
图6示出了来自农杆菌转染后两天的未成熟合子胚的盾片表面(箭头)上的早期垂周分裂的代表性图像。
图7示出了来自农杆菌转染后两天的转染的未成熟合子胚的盾片表面上形成的小球状体细胞胚的代表性图像。
图8示出了来自农杆菌转染后两天的转染的未成熟合子胚的盾片表面上形成的较大球状体细胞胚的代表性图像。
图9示出了来自农杆菌转染四天后的转染的未成熟合子胚的盾片表面上形成的转化期体细胞胚的代表性图像,显示出体细胞胚的光滑表面以及缺乏与下面的合子胚的血管连接。
图10示出了来自农杆菌转染四天后的转染的未成熟合子胚的盾片表面上形成的多个转化期体细胞胚的代表性图像,证明紧密接近的体细胞胚源自下面的合子胚表面并且不是通过次生体细胞胚发生。
图11示出了代表性的更高的放大倍数的图像,证明发育体细胞胚内的高有丝分裂指数,如在视野内多个细胞中观察到的中期和后期结构所指示的(如箭头所示)。
图12示出了在用含有AXIG1 PRO::WUS2和PLTP PRO::BBM的T-DNA转化后10天的玉米未成熟胚。许多体细胞胚,其中一些在发育时融合在一起,并且观察到从盾片表面生长的早期发育的叶。用油红O染色20分钟并在70%异丙醇中洗涤两次后,体细胞胚发育过程中积累的脂质染成红色(黑色箭头),而发育的叶(用白色箭头标记)和原始转化的合子盾片(用白色箭头标记)积累非常少的染色,表示这些组织中典型的较低水平的脂质沉积。
图13示出了胚在盖玻片和载玻片之间被按压并然后用油红O染色之后的体细胞胚细胞的光学显微照片。清晰地观察到在细胞内散布着红色染色的脂滴(如黑色箭头所例示)。
图14示出了在所有取样的植物组织中表达的代表性组成型表达的大豆EF1A基因的Illumina转录物定量。
图15示出了胚/种子特异性基因LTP3的Illumina转录物定量,各转录物水平表示各种植物器官和不同发育阶段中的启动子活性。
图16示出了如通过处理过的未成熟子叶在农杆菌介导的转化以引入T-DNA后产生体细胞胚的频率所测量的转化响应,该T-DNA含有如下表达盒,该表达盒中拟南芥WUS基因在以下5种启动子之一的后面:Gm-光敏色素P450启动子(P450PRO);Gm-糖基水解酶启动子(GH PRO);Gm-同源结构域/起始结构域蛋白质启动子(HSD PRO);Gm-LTP3启动子(LTP3PRO);Gm-类异胡豆苷合酶1(Strictosidine Synthase-Like1)启动子(SSL1 PRO);没有WUS表达的为阴性对照(NEG CON)。对于每个启动子,盒的上端和下端表示数据分布的上下四分位数,而盒内的线表示中位数。对于P450PRO,在该分析中只包括两个重复,因此没有计算中位数。
图17A示出了光学显微照片,并且图17B示出了对应的体细胞胚的落射荧光图像,该体细胞胚被移动到成熟培养基上以完成胚发育(在用含体验Gm-LTP3 PRO::At-WUS的T-DNA转化下面的未成熟子叶后35天在成熟培养基上所示)。箭头指向发红色荧光的体细胞子叶中的一个;比例尺代表2mm的长度。
具体实施方式
将在下文中参考附图更全面地描述本文的披露内容,其中示出了一些但不是全部可能的方面。实际上,披露内容可能以许多不同的形式体现,并且不应被解释为局限于本文所阐述的方面;而是提供这些方面使得本披露能满足适用的法律要求。
所披露的组合物和方法所涉及的领域中的技术人员将想到,本文所披露的许多修改和其他方面具有以下描述和相关附图中呈现的教导的益处。因此,应当理解,这些披露内容不限于所披露的特定方面,并且修改和其他方面旨在包括在所附权利要求书的范围内。尽管本文中采用了特定的术语,但这些术语仅在一般性和描述性意义上使用而并非用于限制目的。
还应当理解,本文使用的术语仅用于描述特定方面的目的,而不旨在加以限制。如在本说明书和权利要求书中所使用的,术语“包括”可以包括“由......组成”的方面。除非另有定义,本文所使用的全部技术和科学术语具有与所披露的组合物和方法所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在本说明书和下面的权利要求书中,将参考本文中所定义的许多术语。
I.用于生产转基因植物的方法和组合物
本披露包含用于生产转基因植物的方法和组合物,所述方法和组合物包括(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。可再生植物结构在转化的约0-7天或约0-14天内产生。在一方面,发芽包含将可再生植物结构转移至包含外源性细胞分裂素和形成转基因植物的成熟培养基。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列能够刺激可再生植物结构的形成。在一方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列能够刺激可再生植物结构的形成。
在一方面,控制在所述方法的每个转化的细胞中的(a)的多肽的表达。控制的表达脉冲持续特定的时间段。对(a)的多肽表达的控制可以通过如下文所披露的各种方法来实现。
应当理解,本披露的方法产生单个可再生植物结构,所述可再生植物结构由在已经进行转化的外植体上或内部的单个细胞直接形成,并且在可再生植物结构起始之前没有发生中间的源自单个细胞的细胞或组织增殖。相反,本领域已知的先前描述的转化和再生方法涉及中间的源自单个细胞的细胞或组织增殖,所述细胞或组织增殖包括被称为愈伤组织、未分化的愈伤组织、胚性愈伤组织和器官发生愈伤组织的生长模式类型。在各个方面,术语“愈伤组织”是指在不受控制的生长下未分化的细胞团块。愈伤组织可以通过在含有植物生长调节剂如生长素(例如2,4-D)或细胞分裂素的培养基(其中含有细胞分裂素的培养基称为去分化培养基)中培养植物组织的分化细胞来获得。可以添加到组织培养基以刺激胚发生的生长素的实例包括:天然存在的生长素,例如吲哚-3-乙酸(IAA)、氯吲哚-3-乙酸(CL-IAA)、2-苯乙酸(PAA)、吲哚-3-丙酸(IPA)和吲哚-3-丁酸(IBA),还有合成生长素,例如1-萘乙酸(NAA)、2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-D)和2,4,5-三氯苯氧基乙酸(2,4,5-T)。可以添加到组织培养基以刺激形态发生(特别是分生组织和芽发育)的细胞分裂素的实例包括:苄基氨基嘌呤(BAP)、玉米素、激动素、噻苯隆(TDZ)、间拓扑林(meta-topolin)和甲氧基拓扑林(methoxy-topolin)。添加到组织培养基中的生长素和细胞分裂素是外源性的。应当进一步理解,本领域已知的先前描述的转化和再生的方法还涉及中间的源自单个细胞的细胞或组织增殖,所述细胞或组织增殖包括:被称为分生组织增殖的生长模式类型,所述分生组织增殖涵盖从头分生组织形成(Gordon Kamm等人(2007)Development[发育]134:3539-3548)、多芽形成(Zhong等人(1992)Planta[植物]187:483-489)和绿色组织培养(Cho等人(1998)Plant Sci[植物科学]138:229-244;Cho等人(2004)Plant Cell Rep[植物细胞报告]22:483-489),全部都需要培养基中有细胞分裂素(例如US 8395020B2;US 8581035B2)。
在所披露的方法中,可以使用各种外植体,包括未成熟的胚、1-5mm合子胚、3-5mm胚、和源自以下各项的胚:成熟的穗来源的种子、叶基、来自成熟植物的叶、叶尖、未成熟的花序、雄花穗、未成熟的穗和花丝。在各个方面,用于转化的源自植物的外植体包括未成熟的胚、1-5mm合子胚、和3.5-5mm胚。在一方面,用于所披露的方法的胚可以源自成熟的穗来源的种子、叶基、来自成熟植物的叶、叶尖、未成熟的花序、雄花穗、未成熟的穗和花丝。
可再生植物结构被定义为能够形成全功能可育植物的多细胞结构,例如但不限于体细胞胚、胚性愈伤组织、体细胞分生组织和/或器官发生愈伤组织。
体细胞胚被定义为通过与合子胚发育相似的发育阶段进行的多细胞结构,包括球状和转化期胚的形成、胚轴和盾片的形成、以及脂质和淀粉的积累。源自合子胚的单个体细胞胚发芽以产生单个非嵌合植物,其可能原始地源自单个细胞。
胚性愈伤组织被定义为脆弱或不脆弱的未分化的或部分未分化的细胞的混合物,其对向(subtend)从而增殖能够再生为成熟可育植物的初生和次生体细胞胚。
体细胞分生组织被定义为与作为种子来源的胚的一部分的顶端分生组织类似的多细胞结构,其特征在于具有未分化的顶端圆顶,其侧面是叶原基并且对向为血管起始,顶端圆顶产生地上营养植物。此类体细胞分生组织可以形成单个或融合的分生组织簇。
器官发生愈伤组织被定义为分化的生长植物结构的紧密混合物,包括但不限于:顶端分生组织、根分生组织、叶和根。
发芽是可再生结构生长以形成小植株,所述小植株继续生长以产生植物。
转基因植物被定义为含有转基因的成熟的可育植物。
用于所披露的方法的外植体可以源自单子叶植物,所述单子叶植物包括但不限于:大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。可替代地,用于所披露的方法的外植体可以源自双子叶植物,所述双子叶植物包括但不限于:羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。
在另外的方面,用于所披露的方法的外植体可以源自禾本科(Poaceae)家族成员的植物。外植体可以从其来源的合适的植物的非限制性实例包括谷类作物,包括但不限于:大麦、玉米(玉米)、燕麦、稻、黑麦、高粱、小麦、粟、黑小麦;叶和茎作物,包括但不限于:竹子、滨草、草地早熟禾、芦苇、黑麦草、甘蔗;草坪植物、观赏草、以及其他草(例如柳枝稷和草坪草)。
在另外的方面,所披露的方法中使用的外植体可以源自任何植物,包括高等植物,例如被子植物门和裸子植物门的种类。双子叶植物纲和单子叶植物纲的亚纲的植物是合适的。合适的物种可以来自以下科:爵床科、葱科、六出花科、石蒜科、夹竹桃科、槟榔科、菊科、小檗科、胭脂树科、十字花科、凤梨科、大麻科、石竹科、三尖杉科、藜科、秋水仙科、葫芦科、薯蓣科、麻黄科、古柯科、大戟科、蝶形花科、唇形科、亚麻科、石松科、锦葵科、黑药花科、芭蕉科、桃金娘科、蓝果树科、罂粟科、松科、车前草科、禾本科、蔷薇科、茜草科、杨柳科、无患子科、茄科、紫杉科、山茶科和葡萄科。
在所披露的方法中使用的外植体可以从其来源的合适的物种包括以下属的成员:秋葵属、冷杉属、槭属、翦股颖属、葱属、六出花属、凤梨属、穿心莲属、须芒草属、艾属、芦竹属、颠茄属、小檗属、菾属(Beta)、红木属、芸苔属、金盏花属、山茶属、喜树属、大麻属、辣椒属、红花属、长春花属、三尖杉属、菊属、金鸡钠属、西瓜属、咖啡属、秋水仙属、紫苏属(Coleus)、黄瓜属、南瓜属、狗牙根属、曼陀罗属、石竹属、毛地黄属、薯蓣属、油棕属、麻黄属、蔗茅属、古柯属、桉属、羊茅属、草莓属、雪花莲属、大豆属、棉属、向日葵属、橡胶树属、大麦属、莨菪属、麻风树属、莴苣属、亚麻属、黑麦草属、羽扇豆属、番茄属、石松属、木薯属、苜蓿属、薄荷属、芒属、芭蕉属、烟草属、稻属、黍属、罂粟属、银胶菊属、狼尾草属、矮牵牛属、虉草属(Phalari)、梯牧草属、松属、早熟禾属、一品红属、杨属、萝芙木属、蓖麻属、蔷薇属(Rosa)、甘蔗属、柳属、血根草属、东茛菪属、黑麦属、茄属、高粱属、大米草属、菠菜属、艾菊属、红豆杉属、可可属、小黑麦属、小麦属、北美穗草属、藜芦属、长春花属、葡萄属、和玉米属。
在另外的方面,所披露的方法中使用的外植体可以源自对农业、园艺、用于生产液体燃料分子和其他化学品的生物质、和/或林业重要或有意义的植物。非限制性实例包括:例如,柳枝稷(Panicum virgatum,switchgrass)、双色高粱(Sorghum bicolor)(高粱、苏丹草)、巨芒(Miscanthus giganteus)(芒)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)(能源甘蔗)、大叶钻天杨(Populus balsamifera)(白杨)、玉蜀黍(Zea mays)(玉米)、大豆(Glycine max,soybean)、甘蓝型油菜(Brassica napus)(低芥酸菜籽)、小麦(Triticum aestivum,wheat)、陆地棉(Gossypium hirsutum)(棉花)、稻(Oryza sativa,rice)、向日葵(Helianthus annuus,sunflower)、紫花苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、甜菜(Betavulgaris,sugar beets)、御谷(Pennisetum glaucum)(珍珠稷)、黍属物种(Panicumspp.)、高粱属物种(Sorghum spp.)、芒属物种(Miscanthus spp.)、甘蔗属物种(Saccharumspp.)、斑茅属物种(Erianthus spp.)、杨属物种(Populus spp.)、须芒草(Andropogongerardii)(大须芒草)、象草(Pennisetum purpureum,elephant grass)、虉草(Phalarisarundinacea,reed canarygrass)、狗牙根(Cynodon dactylon)(百慕大草)、高羊茅(Festuca arundinacea)(牛尾草)、草原索草(Spartina pectinata,prairie cord-grass)、芦竹(Arundo donax,giant reed)、黑麦(Secale cereale,rye)、柳属物种(Salixspp.)(柳树)、桉属物种(Eucalyptus spp.)(桉树)、小黑麦属物种(Triticosecale spp.)(小麦属植物-小麦X黑麦)、竹子、红花(Carthamus tinctorius,safflower)、麻风树(Jjatropha curcas,jatropha)、蓖麻(Ricinus communis,castor)、油棕(Elaeisguineensis)(棕榈树)、亚麻(Linum usitatissimum,flax)、芥菜(Brassica juncea)、木薯(Manihot esculenta,cassava)、番茄(Lycopersicon esculentum,tomato)、莴苣(Lactucasativa,lettuce)、香蕉(Musa paradisiaca,banana)、马铃薯(Solanum tuberosum,potato)、芸苔(Brassica oleracea)(西兰花、花椰菜、抱子甘蓝)、野茶树(Camelliasinensis)(茶树)、草莓(Fragaria ananassa,strawberry)、可可树(Theobroma cacao,cocoa)、咖啡树(Coffea arabica,coffee)、葡萄(Vitis vinifera,grape)、菠萝(Ananascomosus)(凤梨)、辣椒(Capsicum annum)(辣椒和甜辣椒)、洋葱(Allium cepa,onion))、甜香瓜(Cucumis melo)(甜瓜)、黄瓜(Cucumis sativus,cucumber)、笋瓜(Cucurbitamaxima,squash)、南瓜(Cucurbita moschata,squash)、菠菜(Spinacea oleracea,spinach)、西瓜(Citrullus lanatus,watermelon)、黄秋葵(Abelmoschus esculentus,okra)、茄子(Solanum melongena,eggplant)、罂粟(Papaver somniferum,opium poppy)、东方罂粟(Papaver orientale)、欧洲紫杉(Taxus baccata)、短叶红豆杉(Taxusbrevifolia)、香青蒿(Artemisia annua)、大麻(Cannabis sativa)、喜树(Camptothecaacuminate)、长春花(Catharanthus roseus)、长春花(Vinca rosea、金鸡纳树(Cinchonaofficinalis)、秋水仙(Colchicum autumnale)、加州藜芦(Veratrum californica)、毛花洋地黄(Digitalis lanata)、毛地黄(Digitalis purpurea)、薯蓣属物种(Dioscoreaspp.)、穿心莲(Andrographis paniculata)、颠茄(Atropa belladonna)、曼陀罗(Daturastomonium)、小檗属物种(Berberis spp.)、三尖杉属物种(Cephalotaxus spp.)、草麻黄(Ephedra sinica)、麻黄属物种(Ephedra spp.)、古柯(Erythroxylum coca)、雪花莲(Galanthus wornorii)、东莨菪属物种(Scopolia spp.)、蛇足石松(Lycopodiumserratum)(=蛇足石杉(Huperzia serrata))、石松属物种(Lycopodium spp.)、蛇根木(Rauwolfia serpentina)、萝芙木属物种(Rauwolfia spp.)、血根草(Sanguinariacanadensis)、莨菪属物种(Hyoscyamus spp.)、金盏花(Calendula officinalis)、小白菊(Chrysanthemum parthenium)、毛喉鞘蕊花(Coleus forskohlii)、小艾菊(Tanacetumparthenium)、银胶菊(Parthenium argentatum,guayule)、橡胶树属物种(Hevea spp.)(橡胶树)、绿薄荷(Mentha spicata)(薄荷)、洋薄荷(Mentha piperita)(薄荷)、红木(Bixaorellana)、六出花属物种(Alstroemeria spp.)、蔷薇属物种(Rosa spp.)(玫瑰)、康乃馨(Dianthus caryophyllus,carnation)、矮牵牛属物种(Petunia spp.)(矮牵牛花)、一品红(Poinsettia pulcherrima,poinsettia)、烟草(Nicotiana tabacum,tobacco)、羽扇豆(Lupmus albus,lupin)、北美穗草(Uniola paniculata)(燕麦)、翦股颖(bentgrass)(剪股颖属物种(Agrostis spp.))、美洲山杨(Populus tremuloides)(山杨)、松属物种(Pinusspp.)(松树)、冷杉属物种(Abies spp.)(冷杉)、槭属物种(Acer spp.)(枫树)、大麦(Hordeum vulgare,barley)、草地早熟禾(Poapratensis)(早熟禾)、黑麦草属物种(Loliumspp.)(黑麦草)、梯牧草(Phleum pratense,timothy)、和针叶树。感兴趣的是为能源生产而种植的植物,即所谓的能源作物,例如基于纤维素的能源作物,如柳枝稷(Panicumvirgatum,switchgrass)、双色高粱(Sorghum bicolor)(高粱、苏丹草)、巨芒(Miscanthusgiganteus)(芒)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)(能源甘蔗)、大叶钻天杨(Populusbalsamifera)(白杨)、须芒草(Andropogon gerardii)(大须芒草)、象草(Pennisetumpurpureum,elephant grass)、虉草(Phalaris arundinacea,reed canarygrass)、狗牙根(Cynodon dactylon)(百慕大草)、高羊茅(Festuca arundinacea)(牛尾草)、草原索草(Spartina pectinata,prairie cord-grass)、紫花苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、芦竹(Arundo donax,giant reed)、黑麦(Secale cereale,rye)、柳属物种(Salix spp.)(柳树)、桉属物种(Eucalyptus spp.)(桉树)、小黑麦属物种(Triticosecale spp.)(小麦属植物-小麦X黑麦)、和竹子;以及基于淀粉的能源作物,如玉蜀黍(Zea mays)(玉米)和木薯(Manihot esculenta,cassava);以及基于蔗糖的能源作物,如甘蔗属物种(甘蔗)和甜菜(Beta vulgaris,sugar beets);以及生产生物柴油的能源作物,如大豆(Glycine max,soybean)、甘蓝型油菜(Brassica napus)(低芥酸菜籽)、向日葵(Helianthus annuus,sunflower)、红花(Carthamus tinctorius,safflower)、麻风树(Jatropha curcas,jatropha)、蓖麻(Ricinus communis,castor)、油棕(Elaeis guineensis)(棕榈树)、亚麻(Linum usitatissimum,flax)和芥菜(Brassica juncea)。
如本文所使用,“生物质可再生能源植物”意指具有或生产包括储存的太阳能的、可以被转换成电能、液体燃料和其他有用的化学品的材料(原始的或加工的)。一般来说,此类植物包括专用能源作物以及农业和木本植物。生物质可再生能源植物的实例包括:柳枝稷(Panicum virgatum,switchgrass)、双色高粱(Sorghum bicolor)(高粱、苏丹草)、巨芒(Miscanthus giganteus)(芒)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)(能源甘蔗)、大叶钻天杨(Populus balsamifera)(白杨)、须芒草(Andropogon gerardii)(大须芒草)、象草(Pennisetum purpureum,elephant grass)、虉草(Phalaris arundinacea,reedcanarygrass)、狗牙根(Cynodon dactylon)(百慕大草)、高羊茅(Festuca arundinacea)(牛尾草)、草原索草(Spartina pectinata,prairie cord-grass)、紫花苜蓿(Medicagosativa)(苜蓿)、芦竹(Arundo donax,giant reed)、黑麦(Secale cereale,rye)、柳属物种(Salix spp.)(柳树)、桉属物种(Eucalyptus spp.)(桉树)、小黑麦属物种(Triticosecalespp.)(小麦属植物-小麦X黑麦)、竹子、玉蜀黍(Zea mays)(玉米)、木薯(Manihotesculenta,cassava)、甘蔗属物种(甘蔗)、甜菜(Beta vulgaris,sugar beets)、大豆(Glycine max,soybean)、甘蓝型油菜(Brassica napus)(低芥酸菜籽)、向日葵(Helianthus annuus,sunflower)、红花(Carthamus tinctorius,safflower)、麻风树(Jatropha curcas,jatropha)、蓖麻(Ricinus communis,castor)、油棕(Elaeisguineensis)(棕榈树)、亚麻(Linum usitatissimum,flax)和芥菜(Brassica juncea)。
在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列两者。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于14天。
在一方面,表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列。在各个方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于14天。
在一方面,表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列。在各个方面,编码包含两个AP2结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在起始转化后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于14天。
在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种核苷酸序列可以被靶向用于通过位点特异性重组酶的切除。因此,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种核苷酸序列的表达可以通过在转化后所希望的时间切除来控制。应当理解,当使用位点特异性重组酶来控制编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种核苷酸序列在表达构建体中的表达时,所述表达构建体包含位于待切除的多核苷酸序列侧翼的适当的位点特异性切除位点,例如Cre lox位点(如果使用Cre重组酶)。位点特异性重组酶不必共位于包含编码WUS WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种核苷酸序列的表达构建体上。然而,在一方面,表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。
用于控制编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种多核苷酸序列的表达的位点特异性重组酶可以选自各种合适的位点特异性重组酶。例如,在各个方面,位点特异性重组酶是FLP、Cre、SSV1、λInt、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1、或U153。位点特异性重组酶可以是非稳定的融合多肽。非稳定的融合多肽可以是TETR(G17A)~CRE或ESR(G17A)~CRE。
在一方面,编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。合适的发育调节型启动子包括GLB1、OLE、和脂质转移蛋白质2(LTP2)(Kalla等人,1994.Plant J.[植物杂志]6:849-860和US 5525716)。合适的诱导型启动子包括环境诱导型热休克启动子,包括HSP17.7、HSP26、或HSP18A。可替代地,与位点特异性重组酶可操作地连接的诱导型启动子可以是化学诱导型启动子,例如XVE启动子。
在一方面,与位点特异性重组酶可操作地连接的化学诱导型启动子是XVE。化学诱导型启动子可以被四环素阻抑物(TETR)、胺苯磺隆阻抑物(ESR)、或氯磺隆阻抑物(CR)阻抑,并且去阻抑发生在添加四环素相关的配体或磺酰脲配体后。阻抑物可以是TETR,并且四环素相关的配体是多西环素或脱水四环素(Gatz,C.、Frohberg,C.和Wendenburg,艮(1992)Stringent repression and homogeneous de-repression by tetracycline of amodified CaMV 35S promoter in intact transgenic tobacco plants[完整转基因烟草植物中四环素对经修饰的CaMV 35S启动子的严格阻抑和同质去阻抑],Plant J.[植物杂志]2,397-404)。
可替代地,阻抑物可以是ESR,并且磺酰脲配体是胺苯磺隆、氯磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆甲酯、氯嘧磺隆乙酯,烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、苯磺隆、磺酰磺隆、三氟啶磺隆、甲酰胺磺隆、碘磺隆、氟磺隆、噻吩磺隆、砜嘧磺隆、甲磺胺磺隆、或氯吡嘧磺隆(US 20110287936,以其全文通过引用结合在此)。
在一方面,当表达构建体包含位点特异性重组酶切除位点时,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种核苷酸序列可以可操作地连接至生长素诱导型启动子、发育调节型启动子、或组成型启动子。在上下文中有用的示例性组成型启动子包括:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSV(AY)PRO、CYMV PROFL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO(ALT1)、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1B PRO(1.2KB)、IN2-2、NOS、35S PRO的-135版本(或35S启动子的更长版本)、和ZM-ADF PRO(ALT2)。在上下文中有用的示例性生长素诱导型启动子包括AXIG1和DR5。在上下文中有用的示例性发育调节型启动子包括PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A、和LEA-D34。
表达编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种核苷酸序列的适当的持续时间可以通过使用发育调节型启动子(例如诸如磷脂转移蛋白(PLTP)等启动子)实现。PLTP启动子包括PLTP、PLTP1、PLTP2、和PLTP3,如下面进一步描述的。在特定的方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2、和55-61中的任一个。所使用的PLTP启动子可以是玉米或双色高粱PLTP启动子,如SEQ ID NO:1或2的启动子(美国临时申请号62/271230,以其全文通过引用结合在此)。可以与本披露的方法一起使用的其他适当的发育调节型启动子包括:源自编码以下各项的基因的启动子:果糖-1,6-二磷酸酯酶蛋白质、NAD(P)-结合的罗斯曼折叠(Rossmann-Fold)蛋白质、脂肪细胞质膜相关蛋白样蛋白质、里斯克(Rieske)[2Fe-2S]铁硫结构域蛋白质、叶绿体呼吸减少6蛋白质(chlororespiratory reduction 6protein)、D-甘油酸酯3-激酶、叶绿体样蛋白质、叶绿素a-b结合蛋白7、叶绿体样蛋白质、紫外线-B-阻抑蛋白质、Soul血红素结合家族蛋白质、光系统I反应中心亚基psi-N蛋白质、和短链脱氢酶/还原酶蛋白质。启动子可以源自编码单子叶植物(例如玉米、稻、或高粱)中的前述蛋白质的基因。用于本披露的方法的合适的发育调节型启动子包括SEQ ID NO:1-2、28-40、55-61、81-83和86-88和106中示出的那些。
在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种多核苷酸序列可以可操作地连接至生长素诱导型启动子。在各个方面,生长素诱导型启动子可以是AXIG1。具体地,生长素诱导型启动子可以是SEQ ID NO:39。启动子还可以包含一个或多个生长素响应元件。在另外的方面,启动子可以包含一个或多个DR5基序。具体地,启动子可以是SEQ ID NO:40。
在一方面,启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。在另外的方面,经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子包含启动子中的一个或多个操纵子序列,所述操纵子序列位于TATA盒和/或转录起始位点附近或与其重叠。例如,这种类型的合适的启动子包括但不限于:NOS、IN2-2、35S的-135版本、CC-UBIl-PRO和ZM-ADF4-PRO启动子。
在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种核苷酸序列可以可操作地连接至发育调节型启动子。合适的发育调节型启动子包括:源自以下各项的植物基因的启动子:果糖-1,6-二磷酸酯酶、NAD(P)-结合的罗斯曼折叠蛋白质、脂肪细胞质膜相关蛋白样蛋白质、里斯克(Rieske)[2Fe-2S]铁硫结构域蛋白质、叶绿体呼吸减少6蛋白质、D-甘油酸酯3-激酶、叶绿体样蛋白质、叶绿素a-b结合蛋白7、叶绿体样蛋白质、紫外线-B-阻抑蛋白质、Soul血红素结合家族蛋白质、光系统I反应中心亚基psi-N蛋白质、和短链脱氢酶/还原酶。在各个方面,这些启动子源自单子叶植物(例如玉米、稻等)中对应的基因。可替代地,这些启动子可以源自双子叶植物中对应的基因。在特定的方面,发育调节型启动子包含SEQ ID NO:1-2、28-40、55-61、81-83和86-88和106中的任一个。
在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或这两种核苷酸序列可以可操作地连接至去阻抑型启动子。有用的去阻抑型启动子包括:35S:Top3、NOS::Top、NOS:Top2、UBI:Top3、BSV:Top3、AXIG1:Top、IN2-2:Top和DR5:Top(其中Top是TETR、ESR或CR结合以阻抑表达的18碱基操纵子序列的缩写)。
在一方面,本披露提供了允许阳性生长选择的转化方法。本领域技术人员可以理解,常规植物转化方法主要依赖阴性选择方案,其中使用抗生素或除草剂(阴性选择剂)来抑制或杀死未转化的细胞或组织,并且由于抗性基因的表达,转基因细胞或组织继续生长。相反,本披露的方法可以在不应用阴性选择剂的情况下使用。因此,尽管野生型细胞可以无阻碍地生长,但通过比较,包含所披露的WUS2和ODP2表达盒的细胞由于它们相对于周围野生型组织的生长速度加快可以被容易地鉴定。除了简单观察更快的生长之外,本披露的方法提供了含有WUS2和ODP2表达盒的转基因细胞,所述细胞相对于未转化的细胞表现出更快速的形态发生,表现为可再生的植物结构形成。因此,可以使用此类差别的生长和形态发生发育来容易地区别转基因可再生植物结构与周围的非转化组织,这一过程在本文中被称为“阳性生长选择”。
在各个方面,本披露的方法可以在不使用生根培养基的情况下进行。可替代地,在一方面,本披露的方法可以在使用生根培养基的情况下进行。如本文所使用,“生根培养基”或“选择性生根培养基”是指包含基础性盐、碳源、维生素、矿物质和植物激素的组织培养基。在一方面,植物激素可以按不同的浓度或比例提供,其中根组织从置于选择性生根培养基上的细胞发育并增殖。在一方面,选择性生根培养基含有草铵膦、灭草烟、胺苯磺隆、甘露糖或其他选择剂。在一方面,选择性生根培养基含有生长素和细胞分裂素、含有单独的细胞分裂素或不含有植物激素。
在一方面,本披露的方法在不使用细胞分裂素的情况下在可再生植物结构形成期间和/或发芽期间进行。在另外的方面,本披露的方法可以在不使用细胞分裂素的情况下在转化与起始转化后至少约7天之间进行。在另外的方面,本披露的方法可以在不使用细胞分裂素的情况下在转化与起始转化后至少约14天之间进行。
在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或每种核苷酸序列可操作地连接至PLTP启动子。PLTP启动子包括PLTP、PLTP1、PLTP2、和PLTP3。PLTP启动子可以源自单子叶植物,包括但不限于:玉米、大麦、燕麦、黑麦、甘蔗、粟、高粱、小麦、狗尾草属物种、或稻。在另外的方面,PLTP启动子是玉米、稻、或狗尾草属物种PLTP启动子。在特定的方面,PLTP启动子包含SEQ ID NO:1-2和55-61。在特定的方面,PLTP启动子是玉米或稻PLTP启动子。在另外的方面,PLTP启动子是玉米PLTP启动子。在另外的方面,PLTP启动子是稻PLTP启动子。在一方面,PLTP启动子包含SEQID NO:1或2。PLTP启动子还可以源自双子叶植物,包括但不限于:羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在上下文中有用的其他发育调节型启动子包括LGL、LEA-14A、和LEA-D34。在特定的方面,本方法中有用的其他启动子包括SEQ ID NO:28-40、81-83、86-88、和106中的任一个。
在一方面,本披露包括用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)其组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物;其中所述WUS/WOX同源框多肽包含SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、或16中的任一个的氨基酸序列;或其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、或15中的任一个的核苷酸序列编码;并且其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽包含SEQ ID NO:18、20、63、65、或67中的任一个的氨基酸序列;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。
可再生植物结构在转化的约0-7天或约0-14天内产生。在一方面,发芽包含将可再生植物结构转移至包含外源性细胞分裂素和形成转基因植物的成熟培养基。在一方面,编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列能够刺激可再生植物结构的形成。在一方面,编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列能够刺激可再生植物结构的形成。
在一方面,本披露包括用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS2多肽的核苷酸序列;(ii)编码ODP2多肽的核苷酸序列;或(iii)其组合;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物;其中所述WUS2多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列;或其中所述WUS2多肽由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码;并且其中所述ODP2多肽包含SEQ ID NO:18、63、65、或67的氨基酸序列;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO:17、21、62、64、66、或68中的任一个的核苷酸序列编码。
在一方面,本披露包括用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。
在一方面,本披露包括用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的一个或多个细胞,所述表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。
在一方面,本披露包括用于生产转化的植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化一个或多个外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;和(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;并且(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。
在一方面,本披露包括用于生产转化的植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)在约14天至约60天内使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。
术语“植物”是指整株植物、植物器官、植物组织、种子、植物细胞、种子和它们的后代。植物细胞包括但不限于:来自种子、悬浮培养物、胚、分生区域、愈伤组织、叶、根、芽、配子体、孢子体、花粉和小孢子的细胞。
植物部分包括分化和未分化的组织,包括但不限于以下:根、茎、芽、叶、花粉、种子、肿瘤组织和各种形式的细胞和培养物(例如单细胞、原生质体、胚和愈伤组织)。植物组织可以是在植物中或在植物器官、组织或细胞培养物中。
本披露还包括通过本文所披露的任何方法或组合物获得的植物。
在一方面,本披露包括用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;(b)在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且(c)在约14天至约60天内使可再生植物结构发芽以形成转基因植物。
本披露还包括来自通过本文所披露的任何方法或组合物获得的植物的种子。
在一方面,本披露包括试剂盒,所述试剂盒包含:(a)表达构建体,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;以及(b)用于在不存在外源性细胞分裂素的情况下,获得可再生植物结构的说明书,其中没有愈伤组织形成;以及(c)用于使可再生植物结构发芽以形成转基因植物的说明书。
在一方面,本披露包括试剂盒,所述试剂盒包含:(a)表达构建体,所述表达构建体包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;以及(b)用于在不存在外源性细胞分裂素的情况下,获得可再生植物结构的说明书,其中没有愈伤组织形成;以及(c)用于使可再生植物结构发芽以形成转基因植物的说明书。
在一方面,本披露包括试剂盒,所述试剂盒包含:(a)表达构建体,所述表达构建体包含编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;以及(b)用于在不存在外源性细胞分裂素的情况下,获得可再生植物结构的说明书,其中没有愈伤组织形成;以及(c)用于使可再生植物结构发芽以形成转基因植物的说明书。
所披露的试剂盒可以进一步包含用于在转化外植体后约14天至约60天内使可再生植物结构发芽以形成转基因植物的说明书。
II.AP2-DNA结合结构域蛋白质(ODP2/BBM)
本披露的方法包括胚珠发育蛋白质2(ODP2)多肽、及相关的多肽(例如,Babyboom(BBM)蛋白家族蛋白质)的多核苷酸序列和的氨基酸序列。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2、BBM2、BMN2、或BMN3多肽。本披露的ODP2多肽含有两个预测的APETALA2(AP2)结构域,并且是AP2蛋白家族的成员(PFAM登录号PF00847)。玉米ODP2多肽的AP2结构域位于SEQ ID NO:2的从约氨基酸S273至N343和从约S375至R437)。已经表明推定的转录因子的AP2家族调节广泛范围的发育过程,并且家族成员的特征在于存在AP2DNA结合结构域。预测该保守核心形成结合DNA的两亲性α螺旋。AP2结构域首先在APETALA2中被鉴定,该APETALA2是调节分生组织身份、花器官规格、种皮发育和花同源异型基因表达的拟南芥蛋白。现在已经发现AP2结构域存在于各种蛋白质中。
本披露的ODP2多肽与AP2家族内的几种多肽享有同源性,例如,参见US 8420893(以其全文通过引用结合在此)的图1提供了玉米和稻ODP2多肽与具有两个AP2结构域的八种其他蛋白质的比对。图1中还提供了出现在US 8420893的比对中的所有蛋白质的共有序列。
包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽可以源自单子叶植物。在各个方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽源自大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽源自玉米、大麦、燕麦、黑麦、甘蔗、粟、高粱、小麦、狗尾草属物种、或稻。在另外的方面,单子叶植物是玉米、高粱、稻、或狗尾草属物种。在仍另外的方面,单子叶植物是玉米或稻。在另外的方面,单子叶植物是玉米。在另外的方面,单子叶植物是稻。
包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽可以源自双子叶植物。包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽可以源自羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。
包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽可以源自禾本科家族成员的植物。两个AP2-DNA结合结构域可以从其来源的合适的植物的非限制性实例包括谷类作物,包括但不限于:大麦、玉米(玉米)、燕麦、稻、黑麦、高粱、小麦、粟、黑小麦;叶和茎作物,包括但不限于:竹子、滨草、草地早熟禾、芦苇、黑麦草、甘蔗;草坪植物、观赏草、以及其他草(例如柳枝稷和草坪草)。
在另外的方面,在所披露的方法中使用的包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽可以源自任何植物,包括高等植物,例如被子植物门和裸子植物门的种类。双子叶植物纲和单子叶植物纲的亚纲的植物是合适的。合适的物种可以来自以下科:爵床科、葱科、六出花科、石蒜科、夹竹桃科、槟榔科、菊科、小檗科、胭脂树科、十字花科、凤梨科、大麻科、石竹科、三尖杉科、藜科、秋水仙科、葫芦科、薯蓣科、麻黄科、古柯科、大戟科、蝶形花科、唇形科、亚麻科、石松科、锦葵科、黑药花科、芭蕉科、桃金娘科、蓝果树科、罂粟科、松科、车前草科、禾本科、蔷薇科、茜草科、杨柳科、无患子科、茄科、紫杉科、山茶科和葡萄科。
包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽可以从其来源的合适的物种包括以下属的成员:秋葵属、冷杉属、槭属、翦股颖属、葱属、六出花属、凤梨属、穿心莲属、须芒草属、艾属、芦竹属、颠茄属、小檗属、菾属(Beta)、红木属、芸苔属、金盏花属、山茶属、喜树属、大麻属、辣椒属、红花属、长春花属、三尖杉属、菊属、金鸡钠属、西瓜属、咖啡属、秋水仙属、紫苏属(Coleus)、黄瓜属、南瓜属、狗牙根属、曼陀罗属、石竹属、毛地黄属、薯蓣属、油棕属、麻黄属、蔗茅属、古柯属、桉属、羊茅属、草莓属、雪花莲属、大豆属、棉属、向日葵属、橡胶树属、大麦属、莨菪属、麻风树属、莴苣属、亚麻属、黑麦草属、羽扇豆属、番茄属、石松属、木薯属、苜蓿属、薄荷属、芒属、芭蕉属、烟草属、稻属、黍属、罂粟属、银胶菊属、狼尾草属、矮牵牛属、虉草属(Phalari)、梯牧草属、松属、早熟禾属、一品红属、杨属、萝芙木属、蓖麻属、蔷薇属(Rosa)、甘蔗属、柳属、血根草属、东茛菪属、黑麦属、茄属、高粱属、大米草属、菠菜属、艾菊属、红豆杉属、可可属、小黑麦属、小麦属、北美穗草属、藜芦属、长春花属、葡萄属、和玉米属。
在另外的方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽可以源自对农业、园艺、用于生产液体燃料分子和其他化学品的生物质、和/或林业重要或有意义的植物。非限制性实例包括:例如,柳枝稷(Panicum virgatum,switchgrass)、双色高粱(Sorghum bicolor)(高粱、苏丹草)、巨芒(Miscanthus giganteus)(芒)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)(能源甘蔗)、大叶钻天杨(Populus balsamifera)(白杨)、玉蜀黍(Zea mays)(玉米)、大豆(Glycinemax,soybean)、甘蓝型油菜(Brassica napus)(低芥酸菜籽)、小麦(Triticum aestivum,wheat)、陆地棉(Gossypium hirsutum)(棉花)、稻(Oryza sativa,rice)、向日葵(Helianthus annuus,sunflower)、紫花苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、甜菜(Betavulgaris,sugar beets)、御谷(Pennisetumglaucum)(珍珠稷)、黍属物种(Panicum spp.)、高粱属物种(Sorghum spp.)、芒属物种(Miscanthus spp.)、甘蔗属物种(Saccharumspp.)、斑茅属物种(Erianthus spp.)、杨属物种(Populus spp.)、须芒草(Andropogongerardii)(大须芒草)、象草(Pennisetum purpureum,elephant grass)、虉草(Phalarisarundinacea,reed canarygrass)、狗牙根(Cynodon dactylon)(百慕大草)、高羊茅(Festuca arundinacea)(牛尾草)、草原索草(Spartina pectinata,prairie cord-grass)、芦竹(Arundo donax,giant reed)、黑麦(Secale cereale,rye)、柳属物种(Salixspp.)(柳树)、桉属物种(Eucalyptus spp.)(桉树)、小黑麦属物种(Triticosecale spp.)(小麦属植物-小麦X黑麦)、竹子、红花(Carthamus tinctorius,safflower)、麻风树(Jjatropha curcas,jatropha)、蓖麻(Ricinus communis,castor)、油棕(Elaeisguineensis)(棕榈树)、亚麻(Linum usitatissimum,flax)、芥菜(Brassica juncea)、木薯(Manihot esculenta,cassava)、番茄(Lycopersicon esculentum,tomato)、莴苣(Lactucasativa,lettuce)、香蕉(Musa paradisiaca,banana)、马铃薯(Solanum tuberosum,potato)、芸苔(Brassica oleracea)(西兰花、花椰菜、抱子甘蓝)、野茶树(Camelliasinensis)(茶树)、草莓(Fragaria ananassa,strawberry)、可可树(Theobroma cacao,cocoa)、咖啡树(Coffa arabica,coffee)、葡萄(Vitis vinifera,grape)、菠萝(Ananascomosus)(凤梨)、辣椒(Capsicum annum)(辣椒和甜辣椒)、洋葱(Allium cepa,onion))、甜香瓜(Cucumis melo)(甜瓜)、黄瓜(Cucumis sativus,cucumber)、笋瓜(Cucurbitamaxima,squash)、南瓜(Cucurbita moschata,squash)、菠菜(Spinacea oleracea,spinach)、西瓜(Citrullus lanatus,watermelon)、黄秋葵(Abelmoschus esculentus,okra)、茄子(Solanum melongena,eggplant)、罂粟(Papaver somniferum,opium poppy)、东方罂粟(Papaver orientale)、欧洲紫杉(Taxus baccata)、短叶红豆杉(Taxusbrevifolia)、香青蒿(Artemisia annua)、大麻(Cannabis sativa)、喜树(Camptothecaacuminate)、长春花(Catharanthus roseus)、长春花(Vinca rosea、金鸡纳树(Cinchonaofficinalis)、秋水仙(Colchicum autumnale)、加州藜芦(Veratrum californica)、毛花洋地黄(Digitalis lanata)、毛地黄(Digitalis purpurea)、薯蓣属物种(Dioscoreaspp.)、穿心莲(Andrographis paniculata)、颠茄(Atropa belladonna)、曼陀罗(Daturastomonium)、小檗属物种(Berberis spp.)、三尖杉属物种(Cephalotaxus spp.)、草麻黄(Ephedra sinica)、麻黄属物种(Ephedra spp.)、古柯(Erythroxylum coca)、雪花莲(Galanthus wornorii)、东莨菪属物种(Scopolia spp.)、蛇足石松(Lycopodiumserratum)(=蛇足石杉(Huperzia serrata))、石松属物种(Lycopodium spp.)、蛇根木(Rauwolfia serpentina)、萝芙木属物种(Rauwolfia spp.)、血根草(Sanguinariacanadensis)、莨菪属物种(Hyoscyamus spp.)、金盏花(Calendula officinalis)、小白菊(Chrysanthemum parthenium)、毛喉鞘蕊花(Coleus forskohlii)、小艾菊(Tanacetumparthenium)、银胶菊(Parthenium argentatum,guayule)、橡胶树属物种(Hevea spp.)(橡胶树)、绿薄荷(Mentha spicata)(薄荷)、洋薄荷(Mentha piperita)(薄荷)、红木(Bixaorellana)、六出花属物种(Alstroemeria spp.)、蔷薇属物种(Rosa spp.)(玫瑰)、康乃馨(Dianthus caryophyllus,camation)、矮牵牛属物种(Petunia spp.)(矮牵牛花)、一品红(Poinsettia pulcherrima,poinsettia)、烟草(Nicotiana tabacum,tobacco)、羽扇豆(Lupinus albus,lupin)、北美穗草(Uniola paniculata)(燕麦)、翦股颖(bentgrass)(剪股颖属物种(Agrostis spp.))、美洲山杨(Populus tremuloides)(山杨)、松属物种(Pinusspp.)(松树)、冷杉属物种(Abies spp.)(冷杉)、槭属物种(Acer spp.)(枫树)、大麦(Hordeum vulgare,barley)、草地早熟禾(Poapratensis)(早熟禾)、黑麦草属物种(Loliumspp.)(黑麦草)、梯牧草(Phleum pratense,timothy)、和针叶树。感兴趣的是为能源生产而种植的植物,即所谓的能源作物,例如基于纤维素的能源作物,如柳枝稷(Panicumvirgatum,switchgrass)、双色高粱(Sorghum bicolor)(高粱、苏丹草)、巨芒(Miscanthusgiganteus)(芒)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)(能源甘蔗)、大叶钻天杨(Populusbalsamifera)(白杨)、须芒草(Andropogon gerardii)(大须芒草)、象草(Pennisetumpurpureum,elephant grass)、虉草(Phalaris arundinacea,reed canarygrass)、狗牙根(Cynodon dactylon)(百慕大草)、高羊茅(Festuca arundinacea)(牛尾草)、草原索草(Spartina pectinata,prairie cord-grass)、紫花苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、芦竹(Arundo donax,giant reed)、黑麦(Secale cereale,rye)、柳属物种(Salix spp.)(柳树)、桉属物种(Eucalyptus spp.)(桉树)、小黑麦属物种(Triticosecale spp.)(小麦属植物-小麦X黑麦)、和竹子;以及基于淀粉的能源作物,如玉蜀黍(Zea mays)(玉米)和木薯(Manihot esculenta,cassava);以及基于蔗糖的能源作物,如甘蔗属物种(甘蔗)和甜菜(Beta vulgaris,sugar beets);以及生产生物柴油的能源作物,如大豆(Glycine max,soybean)、甘蓝型油菜(Brassica napus)(低芥酸菜籽)、向日葵(Helianthus annuus,sunflower)、红花(Carthamus tinctorius,safflower)、麻风树(Jatropha curcas,jatropha)、蓖麻(Ricinus communis,castor)、油棕(Elaeis guineensis)(棕榈树)、亚麻(Linum usitatissimum,flax)和芥菜(Brassica juncea)。
包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽可以源自生物质可再生能源植物。生物质可再生能源植物的实例包括在上文所述的那些。
具体地,本披露提供了分离的核酸分子,所述核酸分子包含编码SEQ ID NO:18、20、63、65和67中示出的氨基酸序列的核苷酸序列。进一步提供了由本文所述的核酸分子(SEQ ID NO:17、19、21、62、64、66、和68)编码的氨基酸序列的多肽、及其片段和变体。
在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是ODP2多肽。在另外的方面,ODP2多肽源自单子叶植物多肽。在特定的方面,ODP2多肽源自玉米、大麦、燕麦、黑麦、甘蔗、粟、高粱、小麦、狗尾草属物种、或稻。在一方面,ODP2多肽源自玉米、稻、或狗尾草属物种。在一方面,ODP2多肽源自玉米或稻。在特定的方面,ODP2多肽源自玉米。在特定的方面,ODP2多肽源自稻。在另外的方面,ODP2多肽源自双子叶植物多肽。在特定的方面,ODP2多肽源自羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。通过所披露的方法和组合物的表达构建体表达的ODP2多肽可以是包含SEQ ID NO:18、63、65、或67的多肽。ODP2多肽可以由SEQ IDNO:17、21、62、64、66、或68的多核苷酸编码。
在一方面,包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽是BBM2多肽。BBM2多肽可以是单子叶植物多肽,包括但不限于:诸如玉米、大麦、燕麦、黑麦、甘蔗、粟、高粱、小麦、狗尾草属物种、或稻等单子叶植物。在特定的方面,单子叶植物是玉米、甘蔗、稻、或狗尾草属物种。在进一步的特定的方面,单子叶植物是玉米或稻。在仍进一步的特定的方面,单子叶植物是玉米。可替代地,BBM2多肽可以是双子叶植物多肽,包括但不限于:其中所述双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。在一个方面,BBM2多肽包含SEQ IDNO:20的氨基酸序列。在另外的方面,BBM2多肽由包含SEQ ID NO:19的序列的核苷酸序列编码。
本披露涵盖分离的或基本上纯化的核酸或蛋白质ODP2/BBM组合物。“分离的”或“纯化的”核酸分子或蛋白质、或其生物活性部分基本上或本质上不含与如在其天然存在的环境中发现的核酸分子或蛋白质正常相伴或相互作用的组分。因此,分离的或纯化的核酸分子或蛋白质当通过重组技术产生时基本上不含其他细胞物质或培养基,或者当化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品。最佳地,“分离的”核酸不含在该核酸从其来源的生物体的基因组DNA中天然位于该核酸的侧翼的序列(即,位于该核酸的5′和3′端的序列)(最佳地是蛋白质编码序列)。例如,在各个方面,分离的核酸分子可以含有少于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb、或0.1kb的核酸序列,该核酸序列在该核酸从其来源的细胞的基因组DNA中天然地位于该核酸分子的侧翼。基本上不含细胞物质的蛋白质包括具有少于约30%、20%、10%、5%、或1%(以干重计)的污染蛋白质的蛋白质制剂。当重组产生本披露的蛋白质或其生物活性部分时,最佳地,培养基表示少于约30%、20%、10%、5%或1%(以干重计)的化学前体或非目的蛋白化学品。
所披露的核苷酸序列的片段和变体以及由此编码的蛋白质也涵盖在本披露中。“片段”意在是核苷酸序列的一部分或者氨基酸序列和因此由其编码的蛋白质的一部分。核苷酸序列的片段可以编码保留天然蛋白质的生物活性的蛋白质片段,并因此具有ODP2活性。可替代地,用作杂交探针的核苷酸序列的片段通常不编码保留生物活性的片段性蛋白质。因此,核苷酸序列的片段的范围可以是从至少约20个核苷酸、约50个核苷酸、约100个核苷酸、以及多达编码本披露的蛋白质的全长核苷酸序列。
“ODP2活性”或“胚珠发育蛋白2活性”意指ODP2多肽具有以下示例性活性中的至少一种:增加植物细胞的再生能力;致使植物细胞胚发生;增加植物细胞的转化效率;改变植物细胞的含油量;结合DNA;增加非生物胁迫耐受性;在非生物胁迫下增加或维持产量;增加无性胚形成;改变淀粉含量;改变胚大小或激活转录。测定此类活性的方法是本领域已知的,并且在下面更全面地描述。
编码本披露的ODP2/BBM蛋白质的生物活性部分的ODP2/BBM核苷酸序列的片段将编码至少15个、25个、30个、50个、100个、150个、200个、250个、300个、350个、400个、450个、500个、550个、600个、650个、700个、709个连续氨基酸或多达本披露的全长ODP2/BBM蛋白质中存在的氨基酸总数。用作杂交探针或PCR引物的ODP2核苷酸序列的片段通常不需要编码ODP2/BBM蛋白质的生物活性部分。
因此,ODP2/BBM核苷酸序列的片段可以编码ODP2/BBM蛋白质的生物活性部分,或者其可以是可以使用下面披露的方法用作杂交探针或PCR引物的片段。ODP2/BBM蛋白质的生物活性部分可以通过分离本披露的ODP2/BBM核苷酸序列之一的一部分、表达ODP2/BBM蛋白的编码部分(例如,通过体外重组表达)、和评估ODP2/BBM蛋白的编码部分的活性来制备。作为ODP2/BBM核苷酸序列的片段的核酸分子包含至少16个、20个、50个、75个、100个、150个、200个、250个、300个、350个、400个、450个、500个、550个、600个、650个、700个、800个、900个、1,000个、1,100个、1,200个、1,300个、或1,400个、1,500个、1,600个、1,700个、1,800个、1,900个、2,000个、2,100个、2,200个连续核苷酸、或多达本文披露的全长ODP2/BBM核苷酸序列(例如,SEQ ID NO:17、19和21)中存在的核苷酸数目。
“变体”旨在表示基本上相似的序列。对于多核苷酸,变体包含在天然多核苷酸中的一个或多个内部位点处的一个或多个核苷酸的缺失和/或添加,和/或在天然多核苷酸中的一个或多个位点处的一个或多个核苷酸的取代。如本文所使用,“天然”多核苷酸或多肽分别包含天然存在的核苷酸序列或氨基酸序列。对于多核苷酸,保守的变体包括如下那些序列,由于遗传密码的简并性,所述序列编码本披露的ODP2/BBM多肽之一的氨基酸序列。变体ODP2/BBM2多核苷酸还包括合成来源的多核苷酸,例如通过使用定点诱变产生但仍编码本披露的ODP2蛋白质的多核苷酸。通常,如通过本文别处所描述的序列比对程序和参数确定的,本披露的特定多核苷酸的变体将与该特定的多核苷酸具有至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多的序列同一性。
“变体”蛋白质旨在表示通过在天然蛋白质的一个或多个内部位点处的一个或多个氨基酸的缺失和/或添加、和/或在天然蛋白质的一个或多个位点处的一个或多个氨基酸的取代而源自天然蛋白质的蛋白质。如本文所述,由本披露涵盖的变体蛋白质具有生物活性,即它们继续拥有天然蛋白质的所希望的生物活性,即该多肽具有ODP2/BBM活性(即,调节植物的再生能力、致使植物胚发生、增加植物的转化效率、改变植物的油含量、增加细胞增殖、增加非生物胁迫耐受性、在非生物胁迫下增加或维持产量、改变淀粉含量、增加无性胚形成、结合DNA或调节转录)。此类变体可以由例如遗传多态性或人类操作产生。本披露的天然ODP2/BBM蛋白质的生物活性变体将与天然蛋白质的氨基酸序列具有至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多的序列同一性,如本文别处描述的序列比对程序和参数所确定的。本披露的蛋白质的生物活性变体可以与该蛋白质相差少至1-15个氨基酸残基、少至1-10个、例如6-10个、少至5个、少至4个、3个、2个、或甚至1个氨基酸残基。
本披露的ODP2/BBM蛋白质可以按各种方式进行改变,包括氨基酸取代、缺失、截短、融合和插入。用于此类操作的方法在本领域中是普遍已知的。例如,可以通过DNA中的突变来制备ODP2蛋白质的氨基酸序列变体。用于诱变和核苷酸序列改变的方法是本领域熟知的。参见,例如,Kunkel(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]82:488-492;Kunkel等人(1987)Methodsin Enzymol.[酶学方法]154:367-382;美国专利号4,873,192;Walker和Gaastra,编辑(1983)Techniniques in Molecular Biology[分子生物学技术](MacMillan Publishing Company,New York[麦克米兰出版有限公司,纽约])和在其中引用的参考文献。关于不影响目的蛋白质的生物活性的适当的氨基酸取代的指导可以在Dayhoff等人,(1978),Atlas of Protein Sequence and Structure[蛋白质序列和结构图谱](Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,D.C.[国家生物医学研究基金会,华盛顿特区])的模型中找到,其通过引用结合在此。保守取代,例如将一个氨基酸与具有相似特性的另一个氨基酸交换,可能是最佳的。
III.WUS/WOX同源框多肽
本披露的方法包含多核苷酸序列和WUS/WOX同源框多肽的氨基酸序列。下文称为WUS的Wuschel蛋白质在顶端分生组织的起始和维持中发挥关键作用,所述顶端分生组织含有多能干细胞库(Endrizzi等人,(1996)Plant Journal[植物杂志]10:967-979;Laux等人,(1996)Development[发育]122:87-96;和Mayer等人,(1998)Cell[细胞]95:805-815)。WUS基因的拟南芥植物突变体含有错误指定并且似乎经历分化的干细胞。WUS编码新颖同源域蛋白,其可能起转录调节因子的作用(Mayer等人,(1998)Cell[细胞]95:805-815)。认为拟南芥芽分生组织的干细胞群体由促进器官起始的CLAVATA(CLV)基因和干细胞身份所需的WUS基因之间的调节环维持,其中CLV基因在转录水平上阻抑WUS,并且WUS表达足以诱导分生组织细胞身份和干细胞标记CLV3的表达(Brand等人,(2000)Science[科学]289:617-619;Schoof等人,(2000)Cell[细胞]100:635-644)。WUS在拟南芥中的组成型表达已显示从叶(在植物中)引起不定芽增殖(Laux,T.,Talk Presented at the XVI InternationalBotanical Congress Meeting[在第16届国际植物学大会会议上发表的讲座],1999年8月1日至7日,St.Louis,Mo.[密苏里州圣路易斯])。
在一方面,WUS/WOX同源框多肽是WUS1、WUS2、WUS3、WOX2A、WOX4、WOX5、或WOX9多肽(van der Graaff等人,2009,Genome Biology[基因组生物学]10:248)。WUS/WOX同源框多肽可以是单子叶植物WUS/WOX同源框多肽。在各个方面、WUS/WOX同源框多肽可以是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦WUS/WOX同源框多肽。可替代地,WUS/WOX同源框多肽可以是双子叶植物WUS/WOX同源框多肽。具体地,本披露提供了分离的核酸分子,所述核酸分子包含编码SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、和16示出的氨基酸序列的核苷酸序列。进一步提供了由本文所述的核酸分子(SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13、和15)编码的氨基酸序列的多肽、及其片段和变体。
WUS/WOX同源框多肽可以源自禾本科家族成员的植物。WUS/WOX同源框多肽可以从其来源的合适的植物的非限制性实例包括谷类作物,包括但不限于:大麦、玉米(玉米)、燕麦、稻、黑麦、高粱、小麦、粟、黑小麦;叶和茎作物,包括但不限于:竹子、滨草、草地早熟禾、芦苇、黑麦草、甘蔗;草坪植物、观赏草、以及其他草(例如柳枝稷和草坪草)。
在另外的方面,所披露的方法中使用的WUS/WOX同源框多肽可以源自任何植物,包括高等植物,例如被子植物门和裸子植物门的种类。双子叶植物纲和单子叶植物纲的亚纲的植物是合适的。合适的物种可以来自以下科:爵床科、葱科、六出花科、石蒜科、夹竹桃科、槟榔科、菊科、小檗科、胭脂树科、十字花科、凤梨科、大麻科、石竹科、三尖杉科、藜科、秋水仙科、葫芦科、薯蓣科、麻黄科、古柯科、大戟科、蝶形花科、唇形科、亚麻科、石松科、锦葵科、黑药花科、芭蕉科、桃金娘科、蓝果树科、罂粟科、松科、车前草科、禾本科、蔷薇科、茜草科、杨柳科、无患子科、茄科、紫杉科、山茶科和葡萄科。
WUS/WOX同源框多肽可以从其来源的合适的物种包括以下属的成员:秋葵属、冷杉属、槭属、翦股颖属、葱属、六出花属、凤梨属、穿心莲属、须芒草属、艾属、芦竹属、颠茄属、小檗属、菾属(Beta)、红木属、芸苔属、金盏花属、山茶属、喜树属、大麻属、辣椒属、红花属、长春花属、三尖杉属、菊属、金鸡钠属、西瓜属、咖啡属、秋水仙属、紫苏属(Coleus)、黄瓜属、南瓜属、狗牙根属、曼陀罗属、石竹属、毛地黄属、薯蓣属、油棕属、麻黄属、蔗茅属、古柯属、桉属、羊茅属、草莓属、雪花莲属、大豆属、棉属、向日葵属、橡胶树属、大麦属、莨菪属、麻风树属、莴苣属、亚麻属、黑麦草属、羽扇豆属、番茄属、石松属、木薯属、苜蓿属、薄荷属、芒属、芭蕉属、烟草属、稻属、黍属、罂粟属、银胶菊属、狼尾草属、矮牵牛属、虉草属(Phalari)、梯牧草属、松属、早熟禾属、一品红属、杨属、萝芙木属、蓖麻属、蔷薇属(Rosa)、甘蔗属、柳属、血根草属、东茛菪属、黑麦属、茄属、高粱属、大米草属、菠菜属、艾菊属、红豆杉属、可可属、小黑麦属、小麦属、北美穗草属、藜芦属、长春花属、葡萄属、和玉米属。
在另外的方面,WUS/WOX同源框多肽可以源自对农业、园艺、用于生产液体燃料分子和其他化学品的生物质、和/或林业重要或有意义的植物。非限制性实例包括:例如,柳枝稷(Panicum virgatum,switchgrass)、双色高粱(Sorghum bicolor)(高粱、苏丹草)、巨芒(Miscanthus giganteus)(芒)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)(能源甘蔗)、大叶钻天杨(Populus balsamifera)(白杨)、玉蜀黍(Zea mays)(玉米)、大豆(Glycine max,soybean)、甘蓝型油菜(Brassica napus)(低芥酸菜籽)、小麦(Triticum aestivum,wheat)、陆地棉(Gossypium hirsutum)(棉花)、稻(Oryza sativa,rice)、向日葵(Helianthus annuus,sunflower)、紫花苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、甜菜(Beta vulgaris,sugar beets)、御谷(Pennisetum glaucum)(珍珠稷)、黍属物种(Panicum spp.)、高粱属物种(Sorghumspp.)、芒属物种(Miscanthus spp.)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)、斑茅属物种(Erianthus spp.)、杨属物种(Populus spp.)、须芒草(Andropogon gerardii)(大须芒草)、象草(Pennisetum purpureum,elephant grass)、虉草(Phalaris arundinacea,reedcanarygrass)、狗牙根(Cynodon dactylon)(百慕大草)、高羊茅(Festuca arundinacea)(牛尾草)、草原索草(Spartina pectinata,prairie cord-grass)、芦竹(Arundo donax,giant reed)、黑麦(Secale cereale,rye)、柳属物种(Salix spp.)(柳树)、桉属物种(Eucalyptus spp.)(桉树)、小黑麦属物种(Triticosecale spp.)(小麦属植物-小麦X黑麦)、竹子、红花(Carthamus tinctorius,safflower)、麻风树(Jjatropha curcas,jatropha)、蓖麻(Ricinus communis,castor)、油棕(Elaeis guineensis)(棕榈树)、亚麻(Linum usitatissimum,flax)、芥菜(Brassica juncea)、木薯(Manihot esculenta,cassava)、番茄(Lycopersicon esculentum,tomato)、莴苣(Lactuca sativa,lettuce)、香蕉(Musa paradisiaca,banana)、马铃薯(Solanum tuberosum,potato)、芸苔(Brassicaoleracea)(西兰花、花椰菜、抱子甘蓝)、野茶树(Camellia sinensis)(茶树)、草莓(Fragaria ananassa,strawberry)、可可树(Theobromna cacao,cocoa)、咖啡树(Coffeaarabica,coffee)、葡萄(Vitis vinifera,grape)、菠萝(Ananas comosus)(凤梨)、辣椒(Capsicum annum)(辣椒和甜辣椒)、洋葱(Allium cepa,onion))、甜香瓜(Cucumis melo)(甜瓜)、黄瓜(Cucumis sativus,cucumber)、笋瓜(Cucurbita maxima,squash)、南瓜(Cucurbita moschata,squash)、菠菜(Spinacea oleracea,spinach)、西瓜(Citrulluslanatus,watermelon)、黄秋葵(Abelmoschus esculentus,okra)、茄子(Solanummelongena,eggPlant)、罂粟(Papaver somniferum,opium poppy)、东方罂粟(Papaverorientale)、欧洲紫杉(Taxus baccata)、短叶红豆杉(Taxus brevifolia)、香青蒿(ArtemisZa annua)、大麻(Cannabis sativa)、喜树(Camptotheca acuminate)、长春花(Catharanthus roseus)、长春花(Vinca rosea、金鸡纳树(Cinchona officinalis)、秋水仙(Colchicum autumnale)、加州藜芦(Veratrum californica)、毛花洋地黄(Digitalislanata)、毛地黄(Digitalis purpurea)、薯蓣属物种(Dioscorea spp.)、穿心莲(Andrographis paniculata)、颠茄(Atropa belladonna)、曼陀罗(Datura stomonium)、小檗属物种(Berberis spp.)、三尖杉属物种(Cephalotaxus spp.)、草麻黄(Ephedrasinica)、麻黄属物种(Ephedra spp.)、古柯(Erythroxylum coca)、雪花莲(Galanthuswornorii)、东莨菪属物种(Scopolia spp.)、蛇足石松(Lycopodium serratum)(=蛇足石杉(Huperzia serrata))、石松属物种(Lycopodium spp.)、蛇根木(Rauwolfiaserpentina)、萝芙木属物种(Rauwolfia spp.)、血根草(Sanguinaria canadensis)、莨菪属物种(Hyoscyamus spp.)、金盏花(Calendula officinalis)、小白菊(Chrysanthemumparthenium)、毛喉鞘蕊花(Coleus forskohlii)、小艾菊(Tanacetum parthenium)、银胶菊(Parthenium argentatum,guayule)、橡胶树属物种(Hevea spp.)(橡胶树)、绿薄荷(Mentha spicata)(薄荷)、洋薄荷(Mentha piperita)(薄荷)、红木(Bixa orellana)、六出花属物种(Alstroemeria spp.)、蔷薇属物种(Rosa spp.)(玫瑰)、康乃馨(Dianthuscaryophyllus,carnation)、矮牵牛属物种(Petunia spp.)(矮牵牛花)、一品红(Poinsettia pulcherrima,poinsettia)、烟草(Nicotiana tabacum,tobacco)、羽扇豆(Lupinus albus,lupin)、北美穗草(Uniola paniculata)(燕麦)、翦股颖(bentgrass)(剪股颖属物种(Agrostis spp.))、美洲山杨(Populus tremuloides)(山杨)、松属物种(Pinusspp.)(松树)、冷杉属物种(Abies spp.)(冷杉)、槭属物种(Acer spp.)(枫树)、大麦(Hordeum vulgare,barley)、草地早熟禾(Poa pratensis)(早熟禾)、黑麦草属物种(Lolium spp.)(黑麦草)、梯牧草(Phleum pratense,timothy)、和针叶树。感兴趣的是为能源生产而种植的植物,即所谓的能源作物,例如基于纤维素的能源作物,如柳枝稷(Panicumvirgatum,switchgrass)、双色高粱(Sorghum bicolor)(高粱、苏丹草)、巨芒(Miscanthusgiganteus)(芒)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)(能源甘蔗)、大叶钻天杨(Populusbalsamifera)(白杨)、须芒草(Andropogon gerardii)(大须芒草)、象草(Pennisetumpurpureum,elephant grass)、虉草(Phalaris arundinacea,reed canarygrass)、狗牙根(Cynodon dactylon)(百慕大草)、高羊茅(Festuca arundinacea)(牛尾草)、草原索草(Spartina pectinata,prairie cord-grass)、紫花苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、芦竹(Arundo donax,giant reed)、黑麦(Secale cereale,rye)、柳属物种(Salix spp.)(柳树)、桉属物种(Eucalyptus spp.)(桉树)、小黑麦属物种(Triticosecale spp.)(小麦属植物-小麦X黑麦)、和竹子;以及基于淀粉的能源作物,如玉蜀黍(Zea mays)(玉米)和木薯(Manihot esculenta,cassava);以及基于蔗糖的能源作物,如甘蔗属物种(甘蔗)和甜菜(Beta vulgaris,sugar beets);以及生产生物柴油的能源作物,如大豆(Glycine max,soybean)、甘蓝型油菜(Brassica napus)(低芥酸菜籽)、向日葵(Helianthus annuus,sunflower)、红花(Carthamus tinctorus,safflower)、麻风树(Jatropha curcas,jatropha)、蓖麻(Ricinus communis,castor)、油棕(Elaeis guineensis)(棕榈树)、亚麻(Linum usitatissimum,flax)和芥菜(Brassica juncea)。
WUS/WOX同源框多肽可以源自生物质可再生能源。生物质可再生能源植物的实例包括在上文所述的那些。
用于所披露的方法和组合物中的WUS/WOX同源框多肽可以是WUS1多肽。在一方面,WUS1多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS1多肽。在另外的方面,WUS1多肽是玉米或稻WUS1多肽。在另外的方面,WUS1多肽是玉米WUS1多肽。具体地,WUS1多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或WUS1多肽由包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。
用于所披露的方法和组合物中的WUS/WOX同源框多肽可以是WUS2多肽。在各个方面,WUS2多肽是大麦、玉米、粟、燕麦、稻、黑麦、狗尾草属物种、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦WUS多肽。在一方面,WUS2多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS2多肽。在另外的方面,WUS2多肽是玉米或稻WUS2多肽。在另外的方面,WUS2多肽是玉米WUS2多肽。具体地,WUS2多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或WUS2多肽由包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列编码。
用于所披露的方法和组合物中的WUS/WOX同源框多肽可以是WUS3多肽。在一方面,WUS3多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WUS3多肽。在另外的方面,WUS3多肽是玉米或稻WUS3多肽。在另外的方面,WUS3多肽是玉米WUS3多肽。具体地,WUS3多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或WUS3多肽由包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列编码。
用于所披露的方法和组合物中的WUS/WOX同源框多肽可以是WOX2A多肽。在一方面,WOX2A多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WOX2A多肽。在另外的方面,WOX2A多肽是玉米或稻WUS2A多肽。在另外的方面,WOX2A多肽是玉米WOX2A多肽。具体地,WOX2A多肽包含SEQID NO:10的氨基酸序列或WOX2A多肽由包含SEQ ID NO:9的核苷酸序列编码。
用于所披露的方法和组合物中的WUS/WOX同源框多肽可以是WOX4多肽。在一方面,WOX4多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WOX4多肽。在另外的方面,WOX4多肽是玉米或稻WUS4多肽。在另外的方面,WOX4多肽是玉米WOX4多肽。具体地,WOX4多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或WOX4多肽由包含SEQ ID NO:11的核苷酸序列编码。
用于所披露的方法和组合物中的WUS/WOX同源框多肽可以是WOX5A多肽。在一方面,WOX5A多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WOX5A多肽。在另外的方面,WOX5A多肽是玉米或稻WUS5A多肽。在另外的方面,WOX5A多肽是玉米WOX5A多肽。具体地,WOX5A多肽包含SEQID NO:14的氨基酸序列或WOX5A多肽由包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码。
用于所披露的方法和组合物中的WUS/WOX同源框多肽可以是WOX9多肽。在一方面,WOX9多肽是玉米、高粱、稻或狗尾草属物种WOX9多肽。在另外的方面,WOX9多肽是玉米或稻WUS9多肽。在另外的方面,WOX9多肽是玉米WOX9多肽。具体地,WOX9多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列或WOX9多肽由包含SEQ ID NO:15的核苷酸序列编码。
本披露涵盖分离的或基本上纯化的核酸或蛋白质WUS/WOX组合物。WUS/WOX核苷酸序列的片段和变体以及由此编码的蛋白质也涵盖在本披露中。“片段”意在是核苷酸序列的一部分或者氨基酸序列和因此由其编码的蛋白质的一部分。核苷酸序列的片段可以编码保留天然蛋白质的生物活性的蛋白质片段,并因此具有WUS/WOX活性。可替代地,用作杂交探针的核苷酸序列的片段通常不编码保留生物活性的片段性蛋白质。因此,核苷酸序列的片段的范围可以是从至少约20个核苷酸、约50个核苷酸、约100个核苷酸、以及多达编码本披露的蛋白质的全长核苷酸序列。
编码本披露的WUS/WOX蛋白质的生物活性部分的WUS/WOX核苷酸序列的片段将编码至少15个、25个、30个、50个、100个、150个、200个、250个、300个、350个、400个、450个、500个、550个、600个、650个、700个、709个连续氨基酸或多达本披露的全长WUS/WOX蛋白质中存在的氨基酸总数。用作杂交探针或PCR引物的WUS/WOX核苷酸序列的片段通常不需要编码WUS/WOX蛋白质的生物活性部分。
因此,WUS/WOX核苷酸序列的片段可以编码WUS/WOX蛋白质的生物活性部分,或者其可以是可以使用下面披露的方法用作杂交探针或PCR引物的片段。WUS/WOX蛋白质的生物活性部分可以通过分离本披露的WUS/WOX核苷酸序列之一的一部分、表达WUX/WOX蛋白的编码部分(例如,通过体外重组表达)、和评估WUS/WOX蛋白编码部分的活性来制备。作为WUS/WOX核苷酸序列的片段的核酸分子包含至少16个、20个、50个、75个、100个、150个、200个、250个、300个、350个、400个、450个、500个、550个、600个、650个、700个、800个、900个、1,000个、1,100个、1,200个、1,300个、或1,400个、1,500个、1,600个、1,700个、1,800个、1,900个、2,000个、2,100个、2,200个连续核苷酸或多达本文披露的全长WUS/WOX核苷酸序列(例如,SEQ ID NO:3、5、7、9、11、13和15)中存在的核苷酸数目。
“变体”旨在表示基本上相似的序列。对于多核苷酸,保守的变体包括如下那些序列,由于遗传密码的简并性,所述序列编码本披露的WUS/WOX多肽之一的氨基酸序列。变体多核苷酸还包括合成来源的多核苷酸,例如通过使用定点诱变产生但仍编码本披露的WUS/WOX蛋白质的多核苷酸。通常,如通过本文别处所描述的序列比对程序和参数确定的,本披露的特定多核苷酸的变体将与该特定的多核苷酸具有至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多的序列同一性。
“变体”蛋白质旨在表示通过在天然蛋白质的一个或多个内部位点处的一个或多个氨基酸的缺失和/或添加、和/或在天然蛋白质的一个或多个位点处的一个或多个氨基酸的取代而源自天然蛋白质的蛋白质。由本披露涵盖的变体蛋白质具有生物活性,即它们继续拥有天然蛋白质的所希望的生物活性,即多肽具有WUS/WOX活性。此类变体可以由例如遗传多态性或人类操作产生。本披露的天然WUS/WOX蛋白质的生物活性变体将与天然蛋白质的氨基酸序列具有至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多的序列同一性,如本文别处描述的序列比对程序和参数所确定的。本披露的蛋白质的生物活性变体可以与该蛋白质相差少至1-15个氨基酸残基、少至1-10个、例如6-10个、少至5个、少至4个、3个、2个、或甚至1个氨基酸残基。
本披露的WUS/WOX蛋白质可以按各种方式进行改变,包括氨基酸取代、缺失、截短、和插入。用于此类操作的方法在本领域中是普遍已知的。例如,可以通过DNA中的突变来制备WUS/WOX蛋白质的氨基酸序列变体。用于诱变和核苷酸序列改变的方法是本领域熟知的。参见,例如,Kunkel(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]82:488-492;Kunkel等人(1987)Methods in Enzymol.[酶学方法]154:367-382;美国专利号4,873,192;Walker和Gaastra,编辑(1983)Techniuques in Molecular Biology[分子生物学技术](MacMillan Publishing Company,New York[麦克米兰出版有限公司,纽约])和在其中引用的参考文献。关于不影响目的蛋白质的生物活性的适当的氨基酸取代的指导可以在Dayhoff等人,(1978),Atlas of Protein Sequence and Structure[蛋白质序列和结构图谱](Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,D.C.[国家生物医学研究基金会,华盛顿特区])的模型中找到,其通过引用结合在此。保守取代,例如将一个氨基酸与具有相似特性的另一个氨基酸交换,可能是最佳的。
IV.转化方法
本披露的方法和组合物可以利用各种转化方法(视情况而定)。即,转化方案以及将核苷酸序列引入植物中的方案,可以根据被靶向用于转化的植物或植物细胞的类型(即单子叶植物或双子叶植物)而变化。将核苷酸序列引入植物细胞并随后插入植物基因组中的合适的方法包括显微注射(Crossway等人(1986)Biotechniuques[生物技术]4:320-334)、电穿孔(Riggs等人(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]83:5602-5606)、农杆菌介导的转化(Townsend等人,美国专利号5,563,055;Zhao等人,美国专利号5,981,840)、直接基因转移(Paszkowski等人(1984)EMBOJ.[欧洲分子生物学学会杂志]3:2717-2722)、和弹道粒子加速法(参见,例如Sanford等人,美国专利号4,945,050;Tomes等人,美国专利号5,879,918;Tomes等人,美国专利号5,886,244;Bidney等人,美国专利号5,932,782;Tomes等人(1995),“Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells ViaMicroprojectile Bombardment[通过微粒轰击将DNA直接转移到完整的植物细胞中]”,在Plant Cell,Tissue,and Organ Culture:Fundamental Methods[植物细胞、组织和器官培养:基础方法]中,Gamborg和Phillips编辑(Springer-Verlag[施普林格出版社],柏林);和McCabe等人(1988)Biotechnology[生物技术]6:923-926)。还参见Weissinger等人(1988)Ann.Rev.Genet.[遗传学年评]22:421-477;Sanford等人(1987)Particulate Science andTechnology[微粒科学与技术]5:27-37(洋葱);Christou等人(1988)Plant Physiol.[植物生理学]87:671-674(大豆);McCabe等人(1988)Bio/Technology[生物技术]6:923-926(大豆);Finer和McMullen(1991)In Vitro Cell Dev.Biol.[体外细胞发育生物学]27P:175-182(大豆);Singh等人(1998)Theor.Appl.Genet.[理论与应用遗传学]96:319-324(大豆);Datta等人(1990)Biotechnology[生物技术]8:736-740(稻);Klein等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]85:4305-4309(玉米);Klein等人(1988)Biotechnology[生物技术]6:559-563(玉米);Tomes,美国专利号5,240,855;Buising等人,美国专利号5,322,783和5,324,646;Tomes等人(1995)“Direct DNA Transfer intoIntact Plant Cells via Microprojectile Bombardment[通过微粒轰击将DNA直接转移到完整的植物细胞中]”,在Plant Cell,Tissue,and Organ Culture:FundamentalMethods[植物细胞、组织和器官培养:基础方法]中,Gamborg编辑(Springer-Verlag[施普林格出版社],柏林)(玉米);Klein等人(1988)Plant Physiol.[植物生理学]91:440-444(玉米);Fromm等人(1990)Biotechnology[生物技术]8:833-839(玉米);Hooykaas-VanSlogteren等人(1984)Nature[自然](伦敦)311:763-764;Bowen等人,美国专利号5,736,369(谷类作物);Bytebier等人(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]84:5345-5349(百合科);De Wet等人(1985)在The Experimental Manipulation of OvuleTissues[胚珠组织的实验操作]中,Chapman等人编辑(Longman[朗文出版社],纽约),第197-209页(花粉);Kaeppler等人(1990)Plant Cell Reports[植物细胞报告]9:415-418;和Kaeppler等人(1992)Theor.Appl.Genet.[理论与应用遗传学]84:560-566(晶须介导的转化);D′Halluin等人(1992)Plant Cell[植物细胞]4:1495-1505(电穿孔);Li等人(1993)Plant Cell Reports[植物细胞报告]12:250-255,以及Christou和Ford(1995)Annals ofBotany[植物学年报]75:407-413(稻);Osjoda等人(1996)Nature Biotechnology[自然生物技术]14:745-750(经由根癌农杆菌转化的玉米);将其全部通过引用结合在此。
本披露的方法和组合物可以用于任何植物物种(包括但不限于单子叶植物和双子叶植物)的转化。感兴趣的植物物种的实例包括但不限于:玉米(玉蜀黍(Zea mays))、芸苔属物种(Brassica sp.)(例如,甘蓝型油菜(B.napus)、芜菁(B.rapa)、芥菜(B.juncea))(特别是可用作种子油来源的那些芸苔属物种)、苜蓿(紫花苜蓿(Medicago sativa))、稻(rice,Oryza sativa)、黑麦(rye,Secale cereale)、高粱(双色高粱(Sorghum bicolor)、高粱(Sorghum vulgare))、稷(例如,珍珠稷(御谷(Pennisetum glaucum))、黍(prosomillet,Panicum miliaceum)、粟(foxtail millet,Setaria italica)、穇子(龙爪稷(Eleusine coracana))、向日葵(sunflower,Helianthus annuus)、红花(safflower,Carthamus tinctorius)、小麦(wheat,Triticum aestivum)、大豆(soybean,Glycinemax)、烟草(tobacco,Nicotiana tabacum)、马铃薯(potato,Solanum tuberosum)、花生(peanut,Arachis hypogaea)、棉花(海岛棉(Gossypium barbadense)、陆地棉(Gossypiumhirsutum))、甘薯(番薯(Ipomoea batatas))、木薯(cassava,Manihot esculenta)、咖啡(咖啡属物种(Coffea spp.))、椰子(coconut,Cocos nucifera)、凤梨(菠萝(Ananascomosus))、柑橘树(柑橘属物种(Citrus spp.))、可可树(cocoa,Theobroma cacao)、茶树(山茶树(Camellia sinensis))、香蕉(芭蕉属物种(Musa spp.))、鳄梨(avocado,Perseaamericana)、无花果(fig,Ficus casica)、番石榴(guava,Psidium guajava)、芒果(mango,Mangifera indica)、橄榄(olive,Olea europaea)、木瓜(番木瓜(Caricapapaya))、腰果(cashew,Anacardium occidentale)、澳洲坚果(macadamia,Macadamia integrifolia)、扁桃树(巴旦杏(Prunus amygdalus))、甜菜(sugar beets,Beta vulgaris)、甘蔗(甘蔗属物种(Saccharum spp.))、燕麦、大麦、蔬菜、观赏植物和针叶树。
蔬菜包括番茄(tomatoes,Lycopersicon esculentum)、莴苣(例如,莴苣(Lactucasativa))、青豆(菜豆(Phaseolus vulgaris))、利马豆(lima bean,Phaseolus limensis)、豌豆(香豌豆属物种(Lathyrus spp.))和黄瓜属(Cucumis)的成员如黄瓜(cucumber,C.sativus)、香瓜(cantaloupe,C.cantalupensis)和甜瓜(musk melon,C.melo)。观赏植物包括杜鹃(杜鹃花属物种(Rhododendron spp.))、绣球花(hydrangea,Macrophyllahydrangea)、木槿(hibiscus,Hibiscus rosasanensis)、玫瑰(蔷薇属物种(Rosa spp.))、郁金香(郁金香属物种(Tulipa spp.))、水仙(水仙属物种(Narcissus spp.))、矮牵牛(petunias,Petuniahybrida)、康乃馨(carnation,Dianthus caryophyllus)、一品红(poinsettia,Euphorbia pulcherrima)和菊花。
可以用于实践本披露的针叶树包括,例如:松树,如火炬松(loblolly pine,Pinustaeda)、湿地松(slash pine,Pinus elliotii)、美国黄松(西黄松)、美国黑松(扭叶松)、和蒙特利松(辐射松(Pinus radiata));道格拉斯杉(Douglas-fir)(北美黄杉(Pseudotsugamenziesii));东部铁杉或加拿大铁杉(Canadian hemlock,Tsuga canadensis);西部铁杉(异叶铁杉(Tsuga heterophylla));大果铁杉(Mountain hemlock,Tsuga mertensiana);落叶松(Tamarack或Larch)(粗皮落叶松(Larix occidentalis));北美云杉(白云杉(Piceaglauca));红杉(北美红杉(Sequoia sempervirens));枞树(true fir),如银杉(胶冷杉(Abies amabilis))和胶枞(香脂冷杉(Abies balsamea));以及雪松,如西方红雪松(北美乔柏(Thujaplicata))和阿拉斯加黄雪松(黄扁柏(Chamaecyparis nootkatensis))。桉属物种可以用于实践本披露,包括巨桉(E.grandis)(及其杂交种,如“urograndis”)、蓝桉(E.globulus)、赤桉(E.camaldulensis)、细叶桉(E.tereticornis)、多枝桉(E.viminalis)、亮果桉(E.nitens)、悉尼蓝桉(E.saligna)和尾叶桉(E.urophylla)。最佳的,本披露的植物是作物植物(例如,玉米、苜蓿、向日葵、芸苔属、大豆、棉花、红花、花生、高粱、小麦、粟、烟草等),更佳地是玉米和大豆植物,又更佳地是玉米植物。
特别感兴趣的植物包括提供感兴趣的种子的谷物类植物、油料种子植物和豆科植物。感兴趣的种子包括谷物种子,例如玉米、小麦、大麦、稻、高粱、黑麦等。油料种子植物包括棉花、大豆、红花、向日葵、芸苔属、玉米、苜蓿、棕榈、椰子等。豆科植物包括但不限于豆类和豌豆。豆类包括但不限于:瓜尔豆、槐豆、胡芦巴、大豆、四季豆、豇豆、绿豆、利马豆、蚕豆、小扁豆和鹰嘴豆。
可选择标记包含允许人们通常在特定条件下鉴定或选择包含它的分子或细胞或对其进行选择的DNA区段。这些标记可以编码活性,例如但不限于RNA、肽或蛋白质的产生,或可以提供RNA、肽、蛋白质、无机和有机化合物或组合物等的结合位点。可选择标记的实例包括但不限于包含限制性内切酶位点的DNA区段;编码针对另外的毒性化合物提供抗性的产物的DNA区段,所述毒性化合物(例如抗生素,如壮观霉素、氨苄青霉素、卡那霉素、四环素、Basta、新霉素磷酸转移酶II(NEO)和潮霉素磷酸转移酶(HPT));编码在受体细胞中本身缺乏的产物的DNA区段(例如,tRNA基因、营养缺陷型标记);编码可以容易地鉴定的产物(例如,表型标记,例如β-半乳糖苷酶、GUS;荧光蛋白,例如绿色荧光蛋白(GFP)、青色荧光蛋白(CFP)、黄色荧光蛋白(YFP)、红色荧光蛋白(RFP)和细胞表面蛋白)的DNA区段;产生用于PCR的新引物位点(例如,以前未并列的两个DNA序列的并列),包含通过限制性内切核酸酶或其他DNA修饰酶、化学品等不起作用或起作用的DNA序列;并且包含允许其鉴定的特异性修饰(例如,甲基化)所需的DNA序列。
另外的可选择标记包括赋予除草剂化合物(例如草甘膦、磺酰脲、草胺磷、溴草腈、咪唑啉酮和2,4-二氯苯氧基乙酸酯(2,4-D))抗性的基因。通常参见,Yarranton(1992)CurrOpin Biotech[生物技术新见]3:506-511;Christopherson等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]89:6314-6318;Yao等人(1992)Cell[细胞]71:63-72;Reznikoff(1992)Mol Microbiol[分子微生物学]6:2419-2422;Barkley等人(1980)在The Operon[操纵子]中,第177-220页;Hu等人(1987)Cell[细胞]48:555-566;Brown等人(1987)Cell[细胞]49:603-612;Figge等人(1988)Cell[细胞]52:713-722;Deuschle等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]86:5400-5404;Fuerst等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]86:2549-2553;Deuschle等人(1990)Science[科学]248:480-483;Gossen,(1993)Ph.D.Thesis,University of Heidelberg[海德堡大学博士论文];Reines等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]90:1917-1921;Labow等人(1990)Mol Cell Biol[分子细胞生物学]10:3343-3356;Zambretti等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]89:3952-3956;Baim等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]88:5072-5076;Wyborski等人(1991)NucleicAcids Res[核酸研究]19:4647-4653;Hillen和Wissman(1989)Topics Mol Struc Biol[热点分子结构生物学]10:143-162;Degenkolb等人(1991)Antimicrob Agents Chemother[抗微生物剂和化疗]35:1591-1595;Kleinschnidt等人(1988)Biochemtstry[生物化学]27:1094-1104;Bonin(1993)Ph.D.Thesis,University of Heidelberg[海德堡大学博士论文];Gossen等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]89:5547-5551;Oliva等人(1992)Antimicrob Agents Chemother[抗微生物剂和化疗]36:913-919;Hlavka等人(1985)Handbook of Experimental Pharmacology[实验药理学手册],第78卷(Springer-Verlag,Berlin[柏林施普林格出版社]);Gill等人(1988)Nature[自然]334:721-724。此类披露内容通过引用结合在此。以上可选择标记的列表并不意指是限制性的。任何可选择标记都可以用于所述方法和组合物中。
因为所描述的方法的体细胞胚发生和胚成熟的时间范围被截短,因此选择方案必须迅速发生,以便有效消除非转基因胚和所产生的发芽T0植物。结果,取决于选择剂在短时间范围内的严格性,回收的“野生种(escape)”(或为野生型的可再生T0植物)的百分比增加。为了消除野生种,在谷物中转基因事件的传统体外选择已经在1.5至3个月的时间范围内发生,并且需要在选择培养基上进行多次传代培养以积聚足够的愈伤组织用于再生(Gordon-Kamm等人,1990,Plant Cell[植物细胞]2:603-618;Negrotto等人,2000,PlantCell Reports[植物细胞报告];Zhao等人,2001,Mol.Breed.[分子育种]8,323-333;Wu等人,2014,In Vitro Cell.Dev.Biol.[体外细胞发育生物学]50:9-18;参见Kan Wang,2014,Agrobacterium Protocols[农杆菌方案],第1卷,第3版,Springer-Verlag,New York[施普林格出版社,纽约]的综述)。本披露通过消除愈伤组织培养并且取而代之直接通过快速胚发生和发芽发展为独立的T0植物(各自代表单独的整合事件)(需要快速起作用的选择剂)来消除大部分这种长持续时间的选择。
在本方法中有用的某些可选择标记包括但不限于:玉米HRA基因(Lee等人,1988,EMBO J[欧洲分子生物学学会杂志]7:1241-1248)(其赋予对磺酰脲和咪唑啉酮的抗性)、GAT基因(其赋予对草甘膦的抗性)(Castle等人,2004,Science[科学]304:1151-1154),赋予对壮观霉素的抗性的基因(例如aadA基因(Svab等人,1990,Plant Mol Biol.[植物分子生物学]14:197-205)和赋予对草胺磷的抗性的bar基因(White等人,1990,Nucl.AcidsRes.[核酸研究]25:1062)、和PAT(或针对玉米的moPAT,参见Rasco-Gaunt等人,2003,PlantCell Rep.[植物细胞报告]21:569-76)、以及允许在含有甘露糖的培养基上生长的PMI基因(Negrotto等人,2000,Plant Cell Rep.[植物细胞报告]22:684-690)对于在所述方法的体细胞胚发生和胚成熟所涵盖的短暂时间内进行快速选择非常有用。然而,取决于所使用的可选择标记和被转化的作物、近交系或品种,野生型野生种的百分比可能改变。在玉米和高粱中,HRA基因有效地降低野生型野生种的频率。
V.改进植物性状和特征的方法
本披露提供了用于以增加的效率和速度生产转基因植物的新颖组合物和方法。所披露的方法和组合物可以进一步包含提供改进的性状和特征的多核苷酸。
如本文所使用,“性状”是指植物或特定植物材料或细胞的生理学、形态学、生物化学、或物理学特征。在一些情况下,这种特征是人眼可见的,例如种子或植物大小,或者可以通过生物化学技术测量,例如检测种子或叶的蛋白质、淀粉或油含量,或者通过观察代谢或生理过程(例如通过测量二氧化碳的吸收),或者通过观察一种或多种基因的表达水平(例如通过使用Northern分析、RT-PCR、微阵列基因表达测定或报告基因表达系统),或者通过农业观察(例如胁迫耐受性、产量或病原体耐受性)。用于描述本披露的方面的“增强的性状”包括改进的或增强的水利用效率或耐旱性、渗透胁迫耐受性、高盐度胁迫耐受性、热胁迫耐性、增强的耐寒性(包括发芽耐寒性)、增加的产量、增强的氮利用效率、早期植物生长和发育、后期植物生长和发育、增强的种子蛋白质和增强的种子油生产。
任何目的多核苷酸都可以用于本披露的方法中。感兴趣的是表型的各种变化,包括修改植物中的脂肪酸组成,改变植物的氨基酸含量、淀粉含量或碳水化合物含量,改变植物的病原体防御机制,影响籽粒大小、蔗糖负荷等。目的基因还可能参与调节营养物的流入,并且参与调节植酸基因的表达,尤其是降低种子中的植酸水平。这些结果可以通过提供异源产物的表达或增加植物中内源产物的表达来实现。可替代地,可以通过提供一种或多种内源产物,特别是植物中的酶或辅酶因子的表达降低来实现这些结果。这些改变导致转化的植物表型上的变化。
目的基因反映了参与作物发育的那些基因的商业市场和利益。感兴趣的作物和市场的变化,以及随着发展中国家打开国际市场,新作物和技术也将出现。此外,随着我们对农艺学性状和特征(例如产量和杂种优势)的了解增加,用于转化的基因的选择也会相应改变。目的基因的一般类别包括,例如涉及信息的那些基因(例如锌指),涉及通讯的那些基因(例如激酶),以及涉及管家的那些基因(例如热休克蛋白)。转基因的更具体类别包括,例如,编码对农学、昆虫抗性、疾病抗性、除草剂抗性、不育性、谷粒特征、和商业产品而言重要的性状的基因。目的基因通常包括参与油、淀粉、碳水化合物或营养素代谢的那些基因,以及影响籽粒大小、蔗糖负载量等的基因。
通过所披露的方法和组合物引入外植体中的多核苷酸可以可操作地连接至合适的启动子。“启动子”意指位于转录起点上游的DNA区域,并且参与识别和结合RNA聚合酶和其他蛋白质以启动转录,包括或不包括5′UTR。“植物启动子”是能够在植物细胞中启动转录的启动子,无论其起源是否是植物细胞。示例性植物启动子包括但不局限于从植物、植物病毒以及包含在植物细胞中表达的基因的细菌(如来自农杆菌或根瘤菌)获得的那些启动子。在发育控制下的启动子的实例包括优先在某些组织(例如叶、根或种子)中启动转录的启动子。此类启动子被称为“组织优选的”。仅在某些组织中启动转录的启动子被称为“组织特异性的”。“细胞类型”特异性启动子主要驱动一种或多种器官中的某些细胞类型(例如根或叶中的维管细胞)中的表达。“诱导型”或“阻抑型”启动子可以是在环境或外源控制下的启动子。可能影响诱导型启动子的转录的环境条件的实例包括厌氧条件或某些化学品或光的存在。可替代地,可以通过提供合适的化学品或其他试剂来影响诱导型或阻抑型启动子的外源控制,所述化学品或其他试剂经由与靶多肽相互作用导致对启动子的诱导或抑制。组织特异性启动子、组织优选启动子、细胞类型特异性启动子和诱导型启动子构成了“非组成型”启动子的类别。“组成型”启动子是在大多数条件下有活性的启动子。如本文所使用,“反义方向”包括提及以反义链转录的方向可操作地连接至启动子的多核苷酸序列。反义链与内源转录产物充分互补,这样使得内源性转录产物的翻译经常被抑制。“可操作地连接”是指核酸片段在单个核酸片段上的缔合,这样使得一个核酸片段的功能受到另一个的影响。例如,当启动子能够影响编码序列的表达时,它与编码序列可操作地连接(即编码序列在启动子的转录控制下)。编码序列可以在正义或反义方向上可操作地连接至调节序列上。
除了使用传统的育种方法之外,还可通过遗传方式改变农学上重要的性状(例如油、淀粉、和蛋白质含量)。修饰包括增加油酸、饱和及不饱和油的含量、增加赖氨酸和硫的水平、提供必需氨基酸、以及还有对淀粉的修饰。在美国专利号5,703,049、5,885,801、5,885,802、和5,990,389中描述了Hordothionin蛋白质修饰,将这些专利通过引用结合在此。另一个实例是由美国专利号5,850,016中描述的大豆2S白蛋白编码的富含赖氨酸和/或硫的种子蛋白质,以及Williamson等人(1987)Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]165:99-106描述的来自大麦的糜蛋白酶抑制剂,这些文献的披露通过引用结合在此。
编码序列的衍生物可以通过定点诱变制造,以增加编码的多肽中预先选择的氨基酸的水平。例如,可以使用如来自向日葵种子(Lilley等人(1989)Proceedings of theWorld Congress on Vegetable Protein Utilization in Human Foods and AnimalFeedstuffs[关于植物蛋白在人类食物和动物饲料中的应用的世界大会进展],Applewhite编辑(American Oil Chemists Society,Champaign,Ill.[美国油化学协会,平原市,伊利诺伊州]),第497-502页;通过引用结合在此);玉米(Pedersen等人(1986)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]261:6279;Kirihara等人(1988)Gene[基因]71:359;这些文献通过引用结合在此);和稻(Musumura等人(1989)Plant Mol.Biol.[植物分子生物学]12:123,通过引用结合在此)的富含甲硫氨酸的植物蛋白。其他农业重要的基因编码乳胶、Floury2、生长因子、种子储存因子、和转录因子。
昆虫抗性基因可以编码对严重影响产量的有害生物的抗性,这些有害生物例如根虫、切根虫、欧洲玉米螟等。此类基因包括,例如,苏云金芽孢杆菌毒性蛋白基因(美国专利号5,366,892;5,747,450;5,736,514;5,723,756;5,593,881;和Geiser等人(1986)Gene[基因]48:109);等。
编码疾病抗性性状的基因包括解毒基因,例如抗伏马毒素(美国专利号5,792,931);无毒力(avr)和疾病抗性(R)基因(Jones等人(1994)Science[科学]266:789;Martin等人(1993)Science[科学]262:1432;和Mindrinos等人(1994)Cell[细胞]78:1089);等。
除草剂抗性性状可以包括编码针对起到抑制乙酰乳酸合酶(ALS)之作用的除草剂的抗性的基因,特别是磺酰脲型除草剂(例如含有导致这种抗性的突变特别是S4和/或Hra突变的乙酰乳酸合酶(ALS)基因);编码对能抑制谷氨酰胺合酶的作用的除草剂的抗性的基因,诸如草胺膦或basta(例如bar基因);草甘磷(如,EPSPS基因和GAT基因;参见例如美国专利公开号20040082770和WO 03/092360)或本领域已知的其他此类基因。bar基因编码对除草剂basta的抗性,nptII基因编码对抗生素卡那霉素和遗传霉素的抗性,以及ALS-基因突变体编码对除草剂氯磺隆的抗性。
不育性基因还可以在表达盒中编码,并为物理去雄提供替代方案。以这种方式使用的基因的实例包括美国专利号5,583,210中所描述的雄性组织优选基因和具有雄性不育表型的基因(如QM)。其他基因包括激酶和编码对雄性或雌性配子体发育有毒性的化合物的那些基因。
谷物的质量反映在诸如饱和与不饱和的油的水平和类型、必需氨基酸的质量和数量以及纤维素水平等性状上。在玉米中,经修饰的hordothionin蛋白质描述于美国专利号5,703,049、5,885,801、5,885,802和5,990,389中。
还可以在可以增加例如用于乙醇生产的淀粉或提供蛋白质表达的一种基因或多种基因上编码商业性状。转化植物的另一个重要的商业用途是生产聚合物和生物塑料,例如在美国专利号5,602,321中所述。多种基因(例如β-酮硫解酶、PHBase(聚羟基丁酸酯合酶)、和乙酰乙酰辅酶A还原酶)(参见Schubert等人(1988)J.Bacteriol.[细菌学杂志]170:5837-5847)促进聚羟基链烷酸酯(PHA)的表达。
外源产物包括植物酶和植物产物,以及来自包括原核生物和其他真核生物在内的其他来源的那些产物。此类产物包括酶、辅因子、激素等。可以增加具有改进的氨基酸分布以改进植物的营养价值的蛋白质,特别是修饰的蛋白质的水平。这通过表达具有增加的氨基酸含量的此类蛋白质来实现。
在一方面,能以增加的效率和速度引入外植体中的另外的目的农艺性状是诸如增加产量等性状或提供增加的植物价值(包括例如改善的种子质量)的其他性状。特别感兴趣的是提供以下各项的性状:改善或增强的水分利用效率或耐旱性、渗透胁迫耐受性、高盐度胁迫耐受性、热胁迫耐受性、增强的耐寒性(包括萌发耐寒性)、增加的产量、提高的氮利用效率、植物生长发育较早、植物生长发育迟缓、增强的种子蛋白质以及增强的种子油生产。
许多农艺性状可以影响“产量”,这些农艺性状包括但不限于植物高度、豆荚数目、植物上的豆荚位置、节间数目、豆荚粉碎的发生率、颗粒尺寸、生节和固氮作用的效率、养分同化的效率、对生物和非生物应力的抗性、碳同化、植物结构、对倒伏的抗性、种子萌芽百分比、秧苗活力以及幼体性状。可以影响产量的其他性状包括:发芽(包括在胁迫条件下的发芽)、生长速率(包括在胁迫条件下的生长速率)、穗数目、每个穗的种子数目、种子大小、种子的组成(淀粉、油、蛋白质)以及种子填充的特征。还感兴趣的是转基因植物的产生,所述转基因植物表现出可能或可能不赋予植物总产量增加的所希望的表型特性。此类特性包括增强的植物形态、植物生理学或从转基因植物收获的成熟种子的改良组分。
本披露的转基因植物的“增加的产量”可以按许多方式进行证明和测量,包括测试重量、每株植物的种子数量、种子重量、每单位面积的种子数量(即每英亩的种子或种子重量)、蒲式耳/英亩、吨/英亩以及公斤/公顷。例如,可以将玉米产量测量为通常基于水分调整(例如15.5%的水分)来报告的每单位生产面积的去壳玉米粒的产量,例如以蒲式耳/英亩或公吨/公顷为单位。增加的产量可能是由于改善了关键生物化学化合物(例如氮、磷和碳水化合物)的利用,或者是由于改善了对环境胁迫(例如寒冷、炎热、干旱、盐、以及有害生物或病原体攻击)的耐受性所致。作为植物生长调节剂的改变的表达或者细胞周期或光合作用途径改变的结果,性状增强重组DNA还可以用于提供具有改善的生长和发育以及最终增加的产量的转基因植物。
许多农艺性状可以影响“产量”,这些农艺性状包括但不限于植物高度、豆荚数目、植物上的豆荚位置、节间数目、豆荚粉碎的发生率、颗粒尺寸、生节和固氮作用的效率、养分同化的效率、对生物和非生物应力的抗性、碳同化、植物结构、对倒伏的抗性、种子萌芽百分比、秧苗活力以及幼体性状。可以影响产量的其他性状包括:发芽(包括在胁迫条件下的发芽)、生长速率(包括在胁迫条件下的生长速率)、穗数目、每个穗的种子数目、种子大小、种子的组成(淀粉、油、蛋白质)以及种子填充的特征。还感兴趣的是转基因植物的产生,所述转基因植物表现出可能或可能不赋予植物总产量增加的所希望的表型特性。此类特性包括增强的植物形态、植物生理学或从转基因植物收获的成熟种子的改良组分。
VI.抑制基因的方法
在一方面,所披露的方法和组合物可以用于以增加的效率和速度将多核苷酸引入植物中,所述多核苷酸可用于植物中靶基因的基因抑制。对于植物基因工程的几个方面来说,降低特定基因的活性(也被称为基因沉默或基因抑制)是所希望的。用于基因沉默的许多技术对于本领域技术人员来说是熟知的,包括但不限于:反义技术(参见例如:Sheehy等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]85:8805-8809;以及美国专利号5,107,065;5,453,566;和5,759,829);共抑制(例如,Taylor(1997)Plant Cell[植物细胞]9:1245;Jorgensen(1990)Trends Biotech.[生物技术趋势]8(12):340-344;Flavell(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]91:3490-3496;Finnegan等人(1994)Bio/Technology[生物技术]12:883-888;和Neuhuber等人(1994)Mol.Gen.Genet.[分子与普通遗传学]244:230-241);RNA干扰(Napoli等人(1990)Plant Cell[植物细胞]2:279-289;美国专利号5,034,323;Sharp(1999)Genes Dev.[基因与发育]13:139-141;Zamore等人(2000)Cell[细胞]101:25-33;Javier(2003)Nature[自然]425:257-263;以及Montgomery等人(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]95:15502-15507);病毒诱导的基因沉默(Burton等人(2000)Plant Cell[植物细胞]12:691-705:和Baulcombe(1999)Curr.Op.Plant Bio.[植物生物学新见]2:109-113);靶RNA特异性核酶(Haseloff等人(1988)Nature[自然]334:585-591);发夹结构(Smith等人(2000)Nature[自然]407:319-320;WO 99/53050;WO 02/00904;和WO 98/53083);核酶(Steinecke等人(1992)EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]11:1525;美国专利号4,987,071;和Perriman等人(1993)Antisense Res.Dev.[反义研究与发展]3:253);寡核苷酸介导的靶向修饰(例如WO 03/076574和WO 99/25853);锌指靶向分子(例如WO 01/52620;WO 03/048345;和WO 00/42219);人造微小RNA(US 8106180;Schwab等人(2006)Plant Cell[植物细胞]18:1121-1133),以及其他方法或本领域技术人员已知的上述方法的组合。
VII.将基因组编辑技术引入植物中的方法
在一方面,所披露的方法和组合物可以用于以增加的效率和速度将多核苷酸引入植物中,所述多核苷酸可用于在植物的基因组中靶向用于修饰的特定位点。可以用所披露的方法和组合物引入的位点特异性修饰包括使用用于引入位点特异性修饰的任何方法产生的那些修饰,所述方法包括但不限于通过使用基因修复寡核苷酸(例如美国公开2013/0019349),或通过使用双链断裂技术,如TALEN、大范围核酸酶、锌指核酸酶、CRISPR-Cas等。例如,所披露的方法和组合物可以用于将CRISPR-Cas系统引入植物中,为了植物或植物细胞基因组中靶序列的基因组修饰的目的、用于选择植物、用于缺失碱基或序列、用于基因编辑、以及用于将目的多核苷酸插入植物的基因组中。因此,所披露的方法和组合物可以与CRISPR-Cas系统一起使用以提供用于修饰或改变植物、植物细胞或种子的基因组内的靶位点和目的核苷酸的有效系统。
在一方面,本披露包含用于生产转基因植物的方法和组合物,其中所述方法包括将目的多核苷酸引入植物细胞的基因组中的靶位点中,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的一个或多个细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且其中转化进一步包含:能够表达指导核苷酸的第一表达构建体和能够表达Cas内切核酸酶的第二重组DNA构建体,其中所述指导核苷酸和Cas内切核酸酶能够形成使得Cas内切核酸酶能够在靶位点处引入双链断裂的复合物。可替代地,包含编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和/或编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达构建体可以还可以包含能够表达指导核苷酸的核苷酸序列和能够表达Cas内切核酸酶的核苷酸序列。
在一方面,Cas内切核酸酶基因是植物优化的Cas9内切核酸酶,其中植物优化的Cas9内切核酸酶能够结合植物基因组的基因组靶序列并在植物基因组的基因组靶序列中产生双链断裂。
Cas内切核酸酶由指导核苷酸指导来识别细胞的基因组中的特定靶位点并且任选地在细胞的基因组中的特定靶位点处引入双链断裂。CRISPR-Cas系统提供用于修饰植物、植物细胞或种子的基因组内的靶位点的有效系统。进一步提供了使用指导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统来提供用于修饰细胞基因组内的靶位点和用于编辑细胞基因组中的核苷酸序列的有效系统的方法和组合物。一旦鉴定出基因组靶位点,就可以采用多种方法来进一步修饰靶位点,这样使得它们包含多种目的多核苷酸。所披露的组合物和方法可以用于引入CRISPR-Cas系统用于编辑细胞基因组中的核苷酸序列。待编辑的核苷酸序列(目的核苷酸序列)可以位于由Cas内切核酸酶识别的靶位点的内部或外部。
CRISPR基因座(规律间隔成簇短回文重复序列)(又称为SPIDR-间隔区散在同向重复序列)构成最近描述的DNA基因座的家族。CRISPR基因座由部分回文的短而高度保守的DNA重复序列(通常为24至40bp,重复从1至140次,也被称为CRISPR重复序列)组成。重复序列(通常具有物种特异性)由恒定长度的可变序列(通常为20至58,取决于CRISPR基因座(WO2007/025097,2007年3月1日公布))间隔。
CRISPR基因座首次在大肠杆菌中被识别(Ishino等人(1987)J.Bacterial.[细菌学杂志]169:5429-5433;Nakata等人(1989)J.Bacterial.[细菌学杂志]171:3553-3556)。相似的间隔短序列重复序列已经在地中海富盐菌(Haloferax mediterranei)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、鱼腥藻属(Anabaena)、和结核分枝杆菌(Mycobactermmtuberculosis)中被鉴定出(Groenen等人(1993)Mol.Microbiol.[分子微生物学]10:1057-1065;Hoe等人(1999)Emerg.Infect.Dis.[新兴传染病]5:254-263;Masepohl等人(1996)Biochim.Biophys.Acta[生物化学与生物物理学学报]1307:26-30;Mojica等人(1995)Mol.Microbiol.[分子微生物学]17:85-93)。该CRISPR基因座与其他SSR的不同之处在于重复序列的结构,该结构已被命名为短规律间隔重复序列(SRSR)(Janssen等人(2002)OMICSJ.Integ.Biol.[组学:整合生物学杂志]6:23-33;Mojica等人(2000)Mol.Microbiol.[分子微生物学]36:244-246)。重复序列是以成簇形式发生的短元件,这些短元件总是由以恒定长度的可变序列规律地间隔开(Mojica等人(2000)Mol.Microbiol.[分子微生物学]36:244-246)。
Cas基因包括通常与侧翼CRISPR基因座联接的、相关的、或接近的、或邻近的基因。术语“Cas基因”和“CRISPR相关的(Cas)基因”在本文中可互换地使用。对Cas蛋白家族的全面综述呈现于以下文献中:Haft等人(2005)Computational Biology[计算生物学],PLoSComput Biol[科学公共图书馆计算生物学]1(6):e60.doi:10.1371/journal.pcbi.0010060。
除了最初描述的四个基因家族之外,在WO/2015/026883中已经描述了另外41个CRISPR相关(Cas)基因家族,其通过引用结合在此。此参考文献表明CRISPR系统属于不同类别,具有不同的重复模式、基因的组、和物种范围。在给定的CRISPR基因座处的Cas基因数目在物种之间可以不同。Cas内切核酸酶涉及由Cas基因编码的Cas蛋白质,其中所述Cas蛋白质能够将双链断裂引入DNA靶序列中。Cas内切核酸酶由指导多核苷酸指导来识别细胞的基因组中的特定靶位点并且任选地在细胞的基因组中的特定靶位点处引入双链断裂。如本文所使用,术语“指导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统”包括能够在DNA靶序列中引入双链断裂的Cas内切核酸酶和指导多核苷酸的复合物。当由指导核苷酸识别靶序列时,Cas内切核酸酶紧邻基因组靶位点解开DNA双链体,并且切割两个DNA链,但前提是正确的前间区序列邻近基序(PAM)被大致定向在靶序列的3’端(参见2015年2月26日公开的WO/2015/026883的图2A和图2B)。
在一方面,Cas内切核酸酶基因是Cas9内切核酸酶,例如但不限于:2007年3月1日公开并且通过引用结合在此的WO 2007/025097的SEQ ID NO:462、474、489、494、499、505、和518中列出的Cas9基因。在另一方面,Cas内切核酸酶基因是植物、玉米或大豆优化的Cas9内切核酸酶,例如但不限于WO/2015/026883的图1A中示出的那些。在另一方面,Cas内切核酸酶基因可以可操作地连接至Cas密码子区域上游的SV40核靶向信号和Cas密码子区域下游的二分型VirD2核定位信号(Tinland等人,(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]89:7442-6)。
在一方面,Cas内切核酸酶基因是WO/2015/026883的SEQ ID NO:1、124、212、213、214、215、216、193或SEQ ID NO:5的核苷酸2037-6329的Cas9内切核酸酶基因、或其任何功能片段或变体。
术语“功能片段”、“功能上等效的片段”和“功能等效片段”在本文中可互换使用。这些术语是指本披露的Cas内切核酸酶序列的一部分或子序列,其中产生双链断裂的能力被保留。
术语“功能变体”、“功能上等效的变体”和“功能等效变体”在本文中可互换使用。这些术语是指本披露的Cas内切核酸酶的变体,其中产生双链断裂的能力被保留。片段和变体可以经由诸如定点诱变和合成构建等方法来获得。
在一方面,Cas内切核酸酶基因是可以对原则上可以被靶向的N(12-30)NGG形式的任何基因组序列进行识别的植物密码子优化的酿脓链球菌Cas9基因。
内切核酸酶是切割多核苷酸链内的磷酸二酯键的酶,并且包括在特定位点切割DNA而不损害碱基的限制性内切核酸酶。限制性内切核酸酶包括I型、II型、III型、和IV型内切核酸酶,这些限制性内切核酸酶进一步包括亚型。在I型和III型系统中,甲基化酶和限制性酶活性二者均包含在单复合物中。内切核酸酶还包括大范围核酸酶,也称为归巢内切核酸酶(HE酶),该酶相似于限制性内切核酸酶,在特定识别位点处结合并且切割,然而对于大范围核酸酶,这些识别位点通常更长,约18bp或更长(于2012年3月22日提交的专利申请PCT/US 12/30061)。基于保守的序列基序将大范围核酸酶分类为四个家族,这些家族是LAGLIDADG、GIY-YIG、H-N-H、和His-Cys box家族。这些基序参与金属离子的配位和磷酸二酯键的水解。大范围核酸酶的显著之处在于它们的长识别位点,并且还在于耐受其DNA底物中的一些序列多态性。对于大范围核酸酶的命名约定相似于对其他限制性内切核酸酶的约定。大范围核酸酶的特征还在于针对分别由独立的ORF、内含子、和内含肽编码的酶的前缀F-、I-、或PI-。在重组过程中的一个步骤涉及在识别位点处或附近的多核苷酸切割。这种切割活性可以用于产生双链断裂。对于位点特异性重组酶和它们的识别位点的综述,参见,Sauer(1994)Curr Op Biotechnol[生物技术新见]5:521-7;以及Sadowski(1993)FASEB[美国实验生物学学会联合会杂志]7:760-7。在一些实例中,重组酶来自Integrase或Resolvase家族。TAL效应子核酸酶是新一类的可以用于在植物或其他生物体的基因组中的特定靶序列处造成双链断裂的序列特异性核酸酶(Miller等人(2011)NatureBiotechnology[自然生物技术]29:143-148)。锌指核酸酶(ZFN)是由锌指DNA结合结构域和双链断裂诱导剂结构域组成的工程化双链断裂诱导剂。识别位点特异性由锌指结构域赋予,该锌指结构域通常包含两个、三个、或四个锌指,例如具有C2H2结构,然而其他锌指结构是已知的并且已经被工程化。锌指结构域适于设计特异性结合所选择的多核苷酸识别序列的多肽。ZFN包括连接至非特异性内切核酸酶结构域(例如来自Ms型内切核酸酶,例如Fokl的核酸酶结构域)的工程化DNA结合锌指结构域。另外的功能性可以融合到锌指结合结构域中,这些另外的功能性包括转录激活子结构域、转录抑制子结构域、和甲基化酶。在一些实例中,核酸酶结构域的二聚化是切割活性所需的。每个锌指识别在靶DNA中的三个连续的碱基对。例如,3指结构域识别9个连续核苷酸的序列,由于该核酸酶的二聚化需要,因此两组锌指三联体用于结合18个核苷酸的识别序列。
细菌和古细菌已经进化出了适应性免疫防御,称为成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR-相关的(Cas)系统,该系统使用短的RNA来引导外源核酸的降解(于2007年3月1日公开的WO 2007/025097)。来自细菌的II型CRISPR/Cas系统采用crRNA和tracrRNA将Cas内切核酸酶指导至其DNA靶。该crRNA(CRISPR RNA)包含与双链DNA靶的一条链互补,并且与tracrRNA(反式激活CRISPR RNA)碱基配对形成RNA双链体的区域,该RNA双链体引导Cas内切核酸酶切割DNA靶。
如本文所使用,术语“指导核苷酸”涉及两个RNA分子、包含可变靶向结构域的crRNA(CRISPR RNA)和tracrRNA的合成性融合。在一方面,指导核苷酸包含12至30个核苷酸序列的可变靶向结构域和可以与Cas内切核酸酶相互作用的RNA片段。
如本文所使用,术语“引导多核苷酸”涉及可以与Cas内切核酸酶形成复合物的多核苷酸序列,并且使得Cas内切核酸酶能够识别并任选地切割DNA靶位点。指导多核苷酸可以是单分子或双分子。指导多核苷酸序列可以是RNA序列、DNA序列或其组合(RNA-DNA组合序列)。任选地,指导多核苷酸可以包含至少一种核苷酸、磷酸二酯键或连接修饰,例如但不限于锁核酸(LNA)、5-甲基dC、2,6-二氨基嘌呤、2′-氟代A、2′-氟代U、2′-O-甲基RNA、硫代磷酸酯键、与胆固醇分子的连接、与聚乙二醇分子的连接、与间隔子18(六乙二醇链)分子的连接、或导致环化的5′至3′共价连接。仅包含核糖核酸的指导多核苷酸也被称为“指导核苷酸”。
指导多核苷酸可以是双分子(也被称为双链体指导多核苷酸),其包含与靶DNA中的核苷酸序列互补的第一核苷酸序列结构域(被称为可变靶向结构域或VT结构域)和与Cas内切核酸酶多肽相互作用的第二核苷酸序列结构域(被称为Cas内切核酸酶识别结构域或CER结构域)。双分子指导多核苷酸的CER结构域包含沿着互补区域杂交的两个单独的分子。两个单独的分子可以是RNA、DNA和/或RNA-DNA组合序列。在一方面,包含连接到CER结构域的VT结构域的双链体指导多核苷酸的第一个分子被称为“crDNA”(当由DNA核苷酸的连续延伸构成时)或“crRNA”(当由RNA核苷酸的连续延伸构成时)或“crDNA-RNA”(当由DNA和RNA核苷酸的组合构成时)。cr核苷酸可以包含天然存在于细菌和古细菌中的cRNA的片段。在一方面,存在于本文所披露的cr核苷酸中的细菌和古细菌中天然存在的cRNA的片段的大小的范围可以是,但并不限于2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个核苷酸。
在一方面,包含CER结构域的双链体指导多核苷酸的第二个分子被称为“tracrRNA”(当由RNA核苷酸的连续延伸构成时)或“tracrDNA”(当由DNA核苷酸的连续延伸构成时)或“tracrDNA-RNA”(当由DNA和RNA核苷酸的组合构成时)。在一方面,指导RNA/Cas9内切核酸酶复合物的RNA是包含双链体crRNA-tracrRNA的双链体化的RNA。
指导多核苷酸还可以是单分子,其包含与靶DNA中的核苷酸序列互补的第一核苷酸序列结构域(被称为可变靶向结构域或VT结构域)和与Cas内切核酸酶多肽相互作用的第二核苷酸结构域(被称为Cas内切核酸酶识别结构域或CER结构域)。“结构域”意指可以为RNA、DNA和/或RNA-DNA组合序列的核苷酸的连续延伸。单指导多核苷酸的VT结构域和/或CER结构域可以包含RNA序列、DNA序列或RNA-DNA组合序列。在一方面,单指导多核苷酸包含连接到tracr核苷酸(包含CER结构域)的cr核苷酸(包含与CER结构域连接的VT结构域),其中该连接是包含RNA序列、DNA序列或RNA-DNA组合序列的核苷酸序列。由来自cr核苷酸和tracr核苷酸的序列构成的单指导多核苷酸可以被称为“单指导核苷酸”(当由RNA核苷酸的连续延伸构成时)或“单指导DNA”(当由DNA核苷酸的连续延伸构成时)或“单指导核苷酸-DNA”(当由RNA和DNA核苷酸的组合构成时)。在本披露的一方面,单指导核苷酸包含可以与II型Cas内切核酸酶形成复合物的II型CRISPR/Cas系统的cRNA或cRNA片段和tracrRNA或tracrRNA片段,其中所述指导核苷酸Cas内切核酸酶复合物可以将Cas内切核酸酶指导至植物基因组靶位点,使得Cas内切核酸酶能够将双链断裂引入基因组靶位点。使用单指导多核苷酸对比双链体指导多核苷酸的一个方面是,为了表达单指导多核苷酸,仅需要制造一个表达盒。
术语“可变靶向结构域”或“VT结构域”在此可互换地使用,并且包括与双链DNA靶位点的一个链(核苷酸序列)互补的核苷酸序列。第一个核苷酸序列结构域(VT结构域)与靶序列之间的互补%可以为至少50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、63%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。可变靶结构域可以是至少12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个核苷酸长度。在一方面,可变靶向域包含12个至30个核苷酸的连续延伸。可变靶向域可以由DNA序列、RNA序列、修饰的DNA序列、修饰的RNA序列或其任意组合构成。
术语指导多核苷酸的“Cas内切核酸酶识别结构域”或“CER结构域”在此可互换地使用,并且包括与Cas内切核酸酶多肽相互作用的核苷酸序列(例如指导多核苷酸的第二核苷酸序列结构域)。CER结构域可以由DNA序列、RNA序列、修饰的DNA序列、修饰的RNA序列(参见例如在此所述的修饰)或其任何组合构成。
连接单指导多核苷酸的cr核苷酸和tracr核苷酸的核苷酸序列可以包含RNA序列、DNA序列或RNA-DNA组合序列。在一方面,连接单指导多核苷酸的cr核苷酸和tracr核苷酸的核苷酸序列可以是至少3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个或100个核苷酸的长度。在另一方面,连接单指导多核苷酸的cr核苷酸和tracr核苷酸的核苷酸序列可以包含四核苷酸环序列,例如但不限于GAAA四核苷酸环序列。
指导多核苷酸、VT结构域和/或CER结构域的核苷酸序列修饰可以选自但不限于由以下各项组成的组:5′帽、3’聚腺苷酸尾、核糖开关序列、稳定性控制序列、形成dsRNA双链体的序列、将指导多核苷酸靶向亚细胞位置的修饰或序列、提供跟踪的修饰或序列、提供蛋白质结合位点的修饰或序列、锁核酸(LNA)、5-甲基dC核苷酸、2,6-二氨基嘌呤核苷酸、2’-氟A核苷酸、2’-氟U核苷酸、2′-O-甲基RNA核苷酸、硫代磷酸酯键、与胆固醇分子的连接、与聚乙二醇分子的连接、与间隔物18分子的连接、5′至3′共价连接、或其任何组合。这些修饰可以产生至少一个另外的有益特征,其中该另外的有益特征选自由以下组成的组:修改的或调节的稳定性、亚细胞靶向、跟踪、荧光标记、用于蛋白质或蛋白质复合物的结合位点、对互补靶序列的修改的结合亲和力、修改的细胞降解抗性和增加的细胞通透性。
在一方面,指导核苷酸和Cas内切核酸酶能够形成使Cas内切核酸酶在DNA靶位点处引入双链断裂的复合物。
在本披露的一方面,可变靶结构域是12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、或30个核苷酸长度。
在本披露的一方面,指导核苷酸包含可以与II型Cas内切核酸酶形成复合物的II型CRISPR/Cas系统的cRNA或cRNA片段和tracrRNA或tracrRNA片段,其中所述指导核苷酸Cas内切核酸酶复合物可以将Cas内切核酸酶指导至植物基因组靶位点,使得Cas内切核酸酶能够将双链断裂引入基因组靶位点。在一方面,可以使用本领域已知的任何方法(例如但不限于粒子轰击或局部应用)将指导核苷酸直接导入植物或植物细胞中。
在一方面,还可以通过引入重组DNA分子间接地引入指导核苷酸,该重组DNA分子包含可操作地连接至植物特定启动子的相应的指导DNA序列,该启动子能够在植物细胞中转录该指导核苷酸。术语“相应的指导DNA”包括与RNA分子相同的,但具有“T”取代RNA分子的每个“U”的DNA分子。
在一方面,经由粒子轰击或使用所披露的用于重组DNA构建体的农杆菌转化的方法和组合物来引入该指导核苷酸,该重组DNA构建体包含可操作地连接至植物U6聚合酶III启动子的相应指导DNA。
在一方面,指导RNA/Cas9内切核酸酶复合物的RNA是包含双链体crRNA-tracrRNA的双链体化的RNA。使用指导核苷酸对比双链体crRNA-tracrRNA的一个优点是,为了表达融合的指导核苷酸,仅需要制造一个表达盒。
术语“靶位点”、“靶序列”、”靶DNA”、“靶基因座”、“基因组靶位点”、“基因组靶序列”、以及“基因组靶基因座”在本文中可互换地使用,并且意指植物细胞的基因组(包括叶绿体DNA和线粒体DNA)中的多核苷酸序列,在该多核苷酸序列处通过Cas内切核酸酶在植物细胞基因组中诱导双链断裂。靶位点可以是植物基因组中的内源性位点,或者可替代地,靶位点可以与植物异源,从而不是基因组中天然存在的,或者与其在自然界中存在的地方相比,靶位点可以发现于异源基因组位置中。
如本文所使用,术语“内源性靶序列”和“天然靶序列”在本文中可互换地使用,从而意指对于植物的基因组是内源性的或天然的靶序列,并且是在植物的基因组中靶序列的内源或天然位置处。在一方面,该靶位点可以相似于由双链断裂诱导剂,例如LIG3-4内切核酸酶(美国专利公开2009-0133152 A1(2009年5月21日公开))或MS26++大范围核酸酶(2012年6月19日提交的美国专利申请13/526912)特异性识别和/或结合的DNA识别位点或靶位点。
“人工靶位点”或“人工靶序列”在本文中可互换地使用,并且意指已经引入植物的基因组中的靶序列。此类人工靶序列可以在序列上与植物的基因组中的内源性或天然靶序列相同,但是位于植物的基因组中的不同位置(即,非内源性的或非天然的位置)处。
“改变的靶位点”、“改变的靶序列”、“修饰的靶位点”、和“修饰的靶序列”在本文中可互换地使用,并且意指如本文披露的靶序列,当与非改变的靶序列相比时,该靶序列包括至少一种改变。例如,此类“改变”包括:(i)至少一个核苷酸的替代、(ii)至少一个核苷酸的缺失、(iii)至少一个核苷酸的插入、或(iv)(i)-(iii)的任意组合。
VIII.引入用于位点特异性整合的核苷酸的方法
在一方面,所披露的方法和组合物可以用于以增加的效率和速度将多核苷酸引入植物中,所述多核苷酸可用于将核苷酸序列靶向整合到植物中。例如,可以使用所披露的方法和组合物来引入侧翼为不相同的重组位点包含目的核苷酸序列的转移盒,所述转移盒用于转化包含靶位点的植物。在一方面,靶位点包含至少一组不相同的重组位点,所述重组位点对应于转移盒上的那些。侧翼为重组位点的核苷酸序列的交换受重组酶影响。因此,所披露的方法和组合物可以用于引入用于靶向整合核苷酸序列的转移盒,其中所述转移盒侧翼为不相同的重组位点,所述重组位点由识别非相同重组位点和实现非相同重组位点处的重组的重组酶识别。因此,所披露的方法和组合物可以用于改进含有不相同重组位点的、源自可再生植物结构的植物的发育效率和速度。
在一方面,本披露包含用于生产转基因植物的方法和组合物,其中所述方法包括将目的多核苷酸引入植物细胞的基因组中的靶位点中,所述方法包括:(a)用表达构建体转化外植体的一个或多个细胞,所述表达构建体包含:(i)编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;(ii)编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;或(iii)(i)和(ii)的组合;并且(b)在不存在细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;其中转化进一步包括:用包含侧翼为不相同的重组位点的目的核苷酸序列的转移盒转化外植体的细胞;并且其中所述外植体来源于具有包含靶位点的基因组的植物,所述靶位点侧翼为与所述转移盒的侧翼位点相对应的不相同的重组位点。所述方法可以进一步包括提供识别非同源重组位点和实现在非同源重组位点处的重组的重组酶,所述重组酶被提供给外植体的一个或多个细胞、可再生植物结构、源自可再生植物结构的小植株、或源自来源于可再生植物结构的小植株的植物。
因此,所披露的方法和组合物可以进一步包括用于将外源核苷酸定向、靶向整合到转化植物中的组合物和方法。在一方面,所披露的方法在基因靶向系统中使用新颖重组位点,所述基因靶向系统有助于将所希望的基因和核苷酸序列定向靶向先前引入靶植物基因组中的相应的重组位点。
在一方面,侧翼为两个不相同的重组位点的核苷酸序列被引入源自靶生物体基因组的外植体的一个或多个细胞中,从而建立用于插入目的核苷酸序列的靶位点。一旦建立了稳定的植物或培养组织,将侧翼有与侧翼靶位点的那些重组位点相对应的重组位点的第二构建体或目的核苷酸序列,在重组酶蛋白存在下引入稳定转化的植物或组织中。该过程导致靶位点和转移盒的不相同的重组位点之间的核苷酸序列的交换。
应认识到,以这种方式制备的转化植物可以包含多个靶位点;即多组不相同的重组位点。以这种方式,转化植物中的靶位点的多个操作是可获得的。转化植物中的靶位点是指已经插入转化植物基因组中并包含不相同的重组位点的DNA序列。
用于所披露的方法的重组位点的实例在本领域中是已知的并且包括FRT位点(参见,例如Schlake和Bode(1994)Biochemistry[生物化学]33:12746-12751;Huang等人(1991)Nucleic Acids Research[核酸研究]19:443-448;Paul D.Sadowski(1995)InProgress in Nucleic Acid Research and Molecular Biology[核酸研究与分子生物学研究进展],第51卷,第53-91页;Michael M.Cox(1989)于Mobile DNA[移动DNA]中,Berg和Howe(编辑)American Society of Microbiology[美国微生物学会],Washington D.C.[华盛顿特区],第116-670页;Dixon等人(1995)18:449-458;Umlauf和Cox(1988)The EMBOJournal[欧洲分子生物学协会杂志]7:1845-1852;Buchholz等人(1996)Nucleic AcidsResearch[核酸研究]24:3118-3119;Kilby等人(1993)Trends Genet.[遗传学趋势]9:413-421;Rossant和Geagy(1995)Nat.Med.[自然医学]1:592-594;Albert等人(1995)The PlantJ.[植物杂志]7:649-659;Bayley等人(1992)Plant Mol.Biol.[植物分子生物学]18:353-361;Odell等人(1990)Mol.Gen.Genet.[分子与普通遗传学]223:369-378;以及Dale和Ow(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]88:10558-105620;以其全文通过引用结合在此);Lox(Albert等人(1995)Plant J.[植物杂志]7:649-659;Qui等人(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]91:1706-1710;Stuurman等人(1996)PlantMol.Biol.[植物分子生物学]32:901-913;Odell等人(1990)Mol.Gen.Gevet.[分子和普通遗传学]223:369-378;Dale等人(1990)Gene[基因]91:79-85;以及Bayley等人(1992)PlantMol.Biol.[植物分子生物学]18:353-361)。在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的大多数天然存在的菌株中发现的两微米质粒编码位点特异性重组酶,其促进两个反向重复序列之间的DNA反转。这种反转在质粒拷贝数扩增中起着核心作用。
蛋白质(指定的FLP蛋白质)催化位点特异性重组事件。最小重组位点(FRT)已被定义,并且包含围绕不对称8-bp间隔子的两个反向的13碱基对(bp)重复序列。FLP蛋白质切割重复序列和间隔子连接处的位点,并经由3′磷酸共价连接至DNA。位点特异性重组酶如FLP在特定靶序列处切割和再次连接DNA,从而导致两个相同位点之间的精确限定的重组。为了起作用,系统需要重组位点和重组酶。不需要辅助因子。因此,整个系统可以插入植物细胞中并在其中起作用。已显示酵母FLP\FRT位点特异性重组系统在植物中起作用。迄今为止,该系统已被用于切除不需要的DNA。参见Lyznik等人(1993)Nucleic Acid Res.[核酸研究]21:969-975。相比之下,本披露利用不相同的FRT用于植物基因组中核苷酸序列的交换、靶向、排列、插入和表达的控制。
在一方面,需要转化的、含有整合到其基因组中的靶位点的目的生物体,如来自植物的外植体。靶位点的特征在于侧翼为不相同的重组位点。另外需要靶向盒,其含有侧翼有与包含在转化生物体的靶位点中的那些位点相对应的不相同重组位点的核苷酸序列。需要识别不相同重组位点并催化位点特异性重组的重组酶。
应认识到,重组酶可以通过本领域已知的任何方式提供。即,通过瞬时表达或通过提供重组酶或重组酶蛋白质的信使RNA(mRNA),可以在生物体或植物细胞中通过用能够在生物体中表达重组酶的表达盒来转化生物体而提供。
“不相同的重组位点”意指侧翼重组位点在序列上不相同并且不会重组,或在位点之间的重组将是最小化的。即,一个侧翼重组位点可以是FRT位点,而第二个重组位点可以是突变的FRT位点。本披露的方法中使用的不相同重组位点阻止或大大抑制两个侧翼重组位点之间的重组和其中所含的核苷酸序列的切除。因此,应认识到,可以在本披露中使用任何合适的不相同重组位点,包括FRT和突变FRT位点、FRT和lox位点、lox和突变lox位点、以及本领域已知的其他重组位点。
通过合适的不相同重组位点暗示,在活性重组酶存在下,两个不相同重组位点之间的序列切除(如果有的话)以显著低于核苷酸序列重组介导的交换靶向排列到植物基因组中的效率存在。因此,用于本披露中的合适的不相同位点包括在位点之间的重组效率较低的情况下(例如,在效率小于约30%至约50%,优选小于约10%至约30%,更优选小于约5%至约10%的情况下)的那些位点。
如上所指出,靶向盒中的重组位点对应于转化植物的靶位点中的重组位点。即,如果转化植物的靶位点含有FRT和突变FRT的侧翼的不相同重组位点,则靶向盒将含有相同的FRT和突变FRT不相同的重组位点。
此外还应认识到,用于所披露的方法中的重组酶将取决于转化植物的靶位点中的和靶向盒中的重组位点。即,如果使用FRT位点,则需要FLP重组酶。以相同的方式,在使用lox位点的情况下,需要Cre重组酶。如果不相同的重组位点包含FRT和lox位点两者,则在植物细胞中将需要FLP和Cre重组酶两者。
FLP重组酶是催化位点特异性反应的蛋白质,所述蛋白质涉及在DNA复制期间扩增酿酒酵母的两微米质粒的拷贝数。FLP蛋白质已被克隆并表达。参见例如,Cox(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国科学院院报]80:4223-4227。用于本披露中的FLP重组酶可以是来源于酵母属(Saccharomyces)的FLP重组酶。可能优选的是使用植物优选密码子合成重组酶,用于在目的植物中最佳表达。参见例如,1997年11月18日提交的、标题为“NovelNucleic Acid Sequence Encoding FLP Recombinase[编码FLP重组酶的新颖核酸序列]”的美国申请系列号08/972,258,通过引用结合在此。
噬菌体重组酶Cre催化在两个lox位点之间的位点特异性重组。Cre重组酶是本领域已知的。参见例如,Guo等人(1997)Nature[自然]389:40-46;Abremski等人(1984)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]259:1509-1514;Chen等人(1996)Somat.Cell Mol.Genet.[体细胞与分子遗传学]22:477-488;和Shaikh等人(1977)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]272:5695-5702。将其全部通过引用结合在此。这样的Cre序列也可以使用植物优选密码子来合成。
在适当的情况下,可以对待插入植物基因组的核苷酸序列进行优化以增加转化植物中的表达。在本披露中使用哺乳动物、酵母或细菌基因的情况下,可以使用植物优选密码子合成它们以改善表达。应认识到,为了在单子叶植物中表达,也可以使用单子叶植物优选密码子合成双子叶植物基因。本领域中可获得用于合成植物优选基因的方法。参见例如,美国专利号5,380,831、5,436,391,以及Murray等人(1989)Nucleic Acids Res.[核酸研究]17:477-498,这些文献通过引用结合在此。可以从目的植物中表达的蛋白质中更频繁使用的密码子确定植物优选密码子。应认识到,可以构建单子叶植物或双子叶植物优选序列以及特定植物物种的植物优选序列。参见例如,EPA 0359472;EPA 0385962;WO 91/16432;Perlak等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报],88:3324-3328;和Murray等人(1989)Nucleic Acids Research[核酸研究],17:477-498;美国专利号5,380,831;美国专利号5,436,391;等,这些文献通过引用结合在此。进一步认识到,基因序列的全部或任何部分可以是优化的或合成的。即,也可以使用完全优化或部分优化的序列。
已知另外的序列修饰增强细胞宿主中的基因表达并可用于本披露中。这些包括:消除编码假的聚腺苷酸化信号和外显子-内含子剪接位点信号的序列、转座子样重复序列、及可能不利于基因表达的其他经充分表征的序列。可将序列的G-C含量调整至通过参照宿主细胞中表达的已知基因而计算出的给定细胞宿主的平均水平。当可能时,修饰序列以避免出现预测的发夹二级RNA结构。
本披露还涵盖新颖FLP重组靶位点(FRT)。FRT已被鉴定为包含两个由8个碱基间隔子分开的13个碱基对重复序列的最小序列,如下:5′-GAAGTTCCTATTC[TCTAGAAA]GTATAGGAACTTC3’,其中括号内的核苷酸表示间隔区。只要这两个13碱基重复序列被8个核苷酸分开,间隔区中的核苷酸就可以被核苷酸组合代替。似乎间隔子的实际核苷酸序列并不重要;然而对于本披露的实践,间隔区中核苷酸的一些取代可能比其他核苷酸更好地起作用。在链交换期间,8个碱基对间隔子参与DNA-DNA配对。该区域的不对称决定了重组事件中位点对齐的方向,这将随后导致倒位或切除。如上所示,大部分间隔子可以被突变而不丧失功能。参见例如,Schlake和Bode(1994)Biochemistry[生物化学]33:12746-12751,通过引用结合在此。
新颖FRT突变位点可以用于实践所披露的方法。这样的突变位点可以通过基于PCR的诱变来构建。尽管突变的FRT位点是已知的(参见1999年5月27日公开的WO/1999/025821的SEQ ID No:2、3、4和5),但认识到其他突变的FRT位点可以用于实践本披露。本披露不是使用特定的FRT或重组位点,而是可以利用不相同的重组位点或FRT位点用于在植物基因组中靶向插入和表达核苷酸序列。因此,基于本披露可以构建和利用其他突变的FRT位点。
如上所讨论的,在重组酶存在下,含有具有不相同的重组位点的靶位点的基因组DNA与含有具有相应不相同的重组位点的转移盒的载体一起导致重组。将位于侧翼重组位点之间的转移盒的核苷酸序列与位于侧翼重组位点之间的靶位点的核苷酸序列交换。以此方式,目的核苷酸序列可以精确地并入宿主的基因组中。
应认识到,可以实践本披露的许多变化。例如,可以构建具有多个不相同的重组位点的靶位点。因此,多个基因或核苷酸序列可以在植物基因组中的精确位置处堆叠或排序。同样,一旦已经在基因组内建立了靶位点,可以通过将此类位点并入转移盒的核苷酸序列内并将位点转移至靶序列来引入另外的重组位点。因此,一旦已经建立了靶位点,就可能通过重组随后添加位点或改变位点。
另一种变化包括提供与生物体中的靶位点可操作地连接的启动子或转录起始区域。优选地,启动子将位于第一重组位点的5′。通过用包含编码区域的转移盒转化生物体,编码区的表达将发生在转移盒整合到靶位点时。这方面提供了通过提供可选择标记序列作为编码序列来选择转化的细胞(尤其是植物细胞)的方法。
本系统的其他优点包括:通过利用如上所讨论的转移盒并且用简单整合模式选择生物体来降低转基因或转移的DNA在生物体中整合的复杂性的能力。以相同的方式,可以通过比较若干个转化事件来鉴定基因组内的优选位点。基因组内的优选位点包括不破坏必需序列表达并提供转基因序列的充分表达的基因。
所披露的方法还提供了在基因组内的一个位置组合多个盒的方法。可以在基因组内的靶位点添加或缺失重组位点。
本领域已知的用于将系统的三种组分放在一起的任何方式可以用于本披露中。例如,植物可以稳定地转化以在其基因组中具有靶位点。重组酶可以被瞬时表达或提供。可替代地,能够表达重组的核苷酸序列可以稳定地整合至植物的基因组中。在相应的靶位点和重组酶的存在下,将侧翼为相应的不相同的重组位点的转移盒被插入转化植物的基因组中。
可替代地,可以通过将转化的植物进行有性杂交来将系统的个组分放在一起。在这个方面,含有整合在其基因组中的靶位点的转化植物(亲本一)可以与已经用含有侧翼不相同的重组位点(其对应于植物一中的重组位点)的转移盒基因转化的第二植物(亲本二)进行有性杂交。植物一或植物二在其基因组内含有表达重组酶的核苷酸序列。重组酶可以在组成型或诱导型启动子的控制之下。
诱导型启动子包括上文所述的启动子,以及热诱导型启动子、雌二醇响应型启动子、化学诱导型启动子等。病原体诱导型启动子包括来自病程相关蛋白(PR蛋白)的那些启动子,其在被病原体感染后被诱导;例如,PR蛋白、SAR蛋白、β-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶等。参见,例如,Redolfi等人(1983)Neth.J.Plant Pathol.[荷兰植物病理学杂志]89:245-254;Uknes等人(1992)Plant Cell[植物细胞]4:645-656;以及Van Loon(1985)PlantMol.Virol.[植物分子病毒学]4:111-116。以此方式,可以控制重组酶的表达和重组位点处的后续活性。
用于在植物中表达基因的组成型启动子是本领域已知的。此类启动子包括但不限于花椰菜花叶病毒的35S启动子(Depicker等人(1982)Mol.Appl.Genet.[分子应用遗传学]1:561-573;Odell等人(1985)Nature[自然]313:810-812)、泛素启动子(Christensen等人(1992)Plant Mol.Biol.[植物分子生物学]18:675-689)、来自基因的启动子如核酮糖二磷酸羧化酶(De Almeida等人(1989)Mol.Gen.Genet.[分子与普通遗传学]218:78-98)、肌动蛋白(McElroy等人(1990)Plant J.[植物杂志]2:163-171)、组蛋白、DnaJ(Baszczynski等人(1997)Maydica[美迪卡杂志]42:189-201)等。
所披露的组合物和方法可用于将转移的核苷酸序列靶向整合到特定的染色体位点。核苷酸序列可以编码任何目的核苷酸序列。特定的目的基因包括为宿主细胞和/或生物体提供容易分析的功能特征的那些,如标记基因,以及改变受体细胞表型的其他基因等。因此,可以在本披露中使用影响植物生长、高度、对疾病和昆虫的易感性、营养价值等的基因。核苷酸序列还可以编码“反义”序列以关闭或修饰基因表达。
应认识到,核苷酸序列将被用于功能表达单元或盒中。功能性表达单元或盒意指具有功能性启动子的目的核苷酸序列,并且在大多数情况下是终止区。在本披露的实践中有各种方式来实现功能表达单元。在本披露的一个方面,将目的核酸作为功能表达单元转移或插入基因组中。
可替代地,可将核苷酸序列插入基因组内启动子区域3′的位点。在后一种情况下,将编码序列插入启动子区域3′使得在整合时实现功能表达单元。为了方便起见,为了在植物中表达,可将编码靶位点的核酸和转移盒(包括目的核苷酸序列)包含在表达盒内。表达盒将包含与编码目的肽的核酸可操作地连接的转录起始区域或启动子。这样的表达被提供有用于将基因或目的基因插入的多个限制性位点,以便使所述基因或目的基因位于调节性区域的转录调节之下。
转录起始区域即启动子可以对于宿主是天然的、或同源的、或外源的、或异源的,或者可以是天然序列或合成序列。外源意指转录起始区域未见于该转录起始区域引入到其中的野生型宿主中。就目的编码序列而言,可以使用天然或异源启动子。
转录盒可以在转录的5′-3′方向上包含转录和翻译起始区、目的DNA序列以及在植物中起作用的转录和翻译终止区。终止区域可以与转录起始区域一起是天然的,可以与目的DNA序列一起是天然的,或者可以源自另一种来源。方便的终止区域可从马铃薯蛋白酶抑制剂(PinII)基因或来自根瘤农杆菌(A.tumnefaciens)的Ti-质粒的序列获得,例如胭脂碱合酶、章鱼碱合酶和乳白蛋白(opaline)合酶终止区域。还参见Guerineau等人(1991)Mol.Gen.Genet.[分子与普通遗传学]262:141-144;Proudfoot(1991)Cell[细胞]64:671-674;Sanfacon等人(1991)Genes Dev.[基因与发育]5:141-149;Mogen等人(1990)PlantCell[植物细胞]2:1261-1272;Munroe等人(1990)Gene[基因]91:151-158;Ballas等人(1989)Nucleic Acids Res.[核酸研究]17:7891-7903;以及Joshi等人(1987)NucleicAcid Res.[核酸研究]15:9627-9639。
表达盒可另外在表达盒构建体中包含5′前导序列。这些前导序列可以起到增强翻译的作用。翻译前导序列是本领域已知的并且包括:细小核糖核酸病毒前导序列,例如EMCV前导序列(脑心肌炎5’非编码区)(Elroy-Stein,O.、Fuerst,T.R.和Moss,B.(1989)PNASUSA[美国科学院院报],86:6126-6130);马铃薯Y病毒前导序列,例如TEV前导序列(烟草蚀纹病毒)(Allison等人(1986);MDMV前导序列(玉米矮花叶病毒);Virology[病毒学],154:9-20);以及人免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)(Macejak,D.G.,和P.Sarnow(1991)Nature[自然],353:90-94);来自苜蓿花叶病毒的外壳蛋白MARNA的非翻译前导序列(AMV RNA 4)(Jobling,S.A.,和Gehrke,L.,(1987)Nature[自然],325:622-625);烟草花叶病毒前导序列(TMV)(Gallie等人(1989)Molecular Biology of RNA[RNA分子生物学],第237-256页;Gallie等人(1987)Nucl.Acids Res.[核酸研究]15:3257-3273);以及玉米褪绿斑驳病毒前导序列(MCMV)(Lornmel,S.A.等人(1991)Virology[病毒学],81:382-385)。还参见,Della-Cioppa,等人,(1987)Plant Physiology[植物生理学]84:965-968。和内源性玉米5′非翻译序列。还可以利用已知增强翻译的其他方法,例如内含子等。
表达盒可以含有一个或多个基因或核酸序列以在转化的植物中转移和表达。因此,每个核酸序列将可操作地连接至5′和3′调节序列上。可替代地,可以提供多个表达盒。
实验
实例1:质粒。
将包含表1中所述的T-DNA的质粒用于下文所述的实验中。表1中列出的质粒具有含有所示组分的T-DNA。
表1.质粒组分。
实例2:培养基。
实例中引用了各种培养基以用于转化和细胞培养。培养基组成如下面表2-9中所述。
表2.用于高粱转化的培养基。
aPHI-I、PHI-T、PHI-U、PHI-V、PHI-X和PHI-Z培养基,来自Zhao等人2000
bMS维生素原液:0.1g/l烟酸、0.1g/l盐酸吡哆醇、0.02g/l硫胺素HCl、0.4g/l甘氨酸。
表3.小麦液体感染培养基WI 4的组成。
表4.小麦共培养基WC#10的组成。
表5.小麦绿色组织培养基DBC4的组成。
表6.小麦绿色组织诱导培养基DBC6的组成。
表7.小麦再生培养基MSA的组成。
表8.小麦再生培养基MSB的组成。
表9.用于玉米转化、选择和再生的培养基形成。
表9,续。
实例3:粒子轰击。
在轰击前,从先锋近交系PH184C的穗中分离10-12个DAP未成熟胚,并将其置于含16%蔗糖的培养基上3小时,以使盾片细胞质壁分离。
每次粒子轰击通常使用四种质粒;1)含有用于重组酶介导的盒交换的FRT侧翼供体盒的供体质粒(100ng/μl),2)含有表达盒UBI PRO::FLPm::PinII的质粒(2.5ng/μl),3)含有表达盒UBI PRO::ODP2::PinII的质粒(10ng/μl),和4)含有表达盒UBI::WUS2::PinII的质粒(5ng/μl)。为了将DNA附着到0.6μm金颗粒上,在低结合微量离心管(索伦森生物科学公司(Sorenson Biosciences)39640T)中通过一起添加每种质粒10μl(总共40μl)将四种质粒混合。向该悬浮液中添加50μl的0.6μm金颗粒(30μg/μl)和1.0μl的转运蛋白(Transit)20/20(目录号MIR5404,米卢斯生物有限责任公司(Mirus Bio LLC)),并将悬浮液置于旋转振荡器上10分钟。以10,000RPM(约9400x g)将悬浮液离心并弃去上清液。将金颗粒重悬于120μl的100%乙醇中,以低功率短暂超声处理,并将10μl移液到每个飞片(flier)上。然后风干飞片以去除所有剩余的乙醇。使用基因枪PDF-1000在28英寸汞柱处使用200PSI破裂片进行粒子轰击。
实例4:农杆菌介导的玉米转化。
A.农杆菌主板的制备。
将具有二元供体载体的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)从-80℃冷冻等分试样划线到固体12V培养基上,并在28℃在黑暗中培养2-3天以制备主板。
B.使农杆菌在固体培养基上生长。
从主板中挑取农杆菌的单个菌落或多个菌落,并划线到含有810I培养基的第二平板上,并在28℃在黑暗中孵育1-2天。将农杆菌感染培养基(700培养基;5ml)和100mM 3′-5′-二甲氧基-4′-对羟基苯乙酮(乙酰丁香酮;5μL)添加到通风橱中的14mL锥形管中。将来自第二板的大约3个满环的农杆菌悬浮在管中,并然后将管涡旋以形成均匀的悬浮液。将悬浮液(1ml)转移到分光光度计管中,并将悬浮液的光密度(550nm)调节至约0.35-2.0的读数。农杆菌浓度为大约0.5至2.0×109cfu/mL。将最终农杆菌悬浮液等分到2mL微量离心管中,每个管含有约1mL的悬浮液。然后尽快使用悬浮液。
C.使农杆菌在液体培养基中生长。
可替代地,可以通过在液体培养基中生长来制备农杆菌用于转化。感染前一天,用30ml的557A培养基(10.5g/l磷酸氢二钾、4.5g/l无水磷酸二氢钾、1g/l硫酸铵、0.5g/l柠檬酸钠脱水物、10g/l蔗糖、1mM硫酸镁)和30μL壮观霉素(50mg/mL)和30μL乙酰丁香酮(20mg/mL)制备125ml烧瓶。将来自第二板的半环农杆菌悬浮在烧瓶中并置于设定为200rpm的定轨摇床上,并在28℃下孵育过夜。将农杆菌培养物以5000rpm离心10分钟。除去上清液并添加含有乙酰丁香酮溶液的农杆菌感染培养基。通过涡旋重悬细菌,并将农杆菌悬浮液的光密度(550nm)调节至约0.35至2.0的读数。
D.玉米转化。
将玉米(玉蜀黍(Zea mays L.))栽培品种的穗在20%(v/v)漂白剂(5.25%次氯酸钠)(加1滴Tween 20)中表面灭菌15-20分钟,接着在无菌水中洗涤3次。将未成熟胚(IE)从穗中分离并置于2ml含有乙酰丁香酮溶液的农杆菌感染培养基中。胚的最佳大小根据近交系而变化,但对于用WUS2和ODP2进行转化,可以使用大尺寸范围的未成熟胚。取出溶液并将1ml农杆菌悬浮液添加到胚中,并将管涡旋5-10秒。使微量离心管在通风橱中静置5分钟。将农杆菌和胚的悬浮液倾倒入710I共培养培养基中(参见表9)。使用无菌刮铲将留在管中的任何胚转移到板上。将农杆菌悬浮液取出并将胚轴侧向下置于培养基上。将板用Parafilm膜(抗湿软塑料,可获自贝米斯公司(Bemis Company,Inc),尼纳中心1号4楼,邮箱669,尼纳市,威斯康星州54957(1Neenah Center 4th floor,PO Box 669,Neenah,WI 54957))密封,并在21℃在黑暗中孵育1-3天进行共培养。
将胚转移至静止培养基(605T培养基)而不进行选择。3至7天后,将它们转移至补充有选择剂的成熟培养基(289Q培养基)中。
实例5:ODP2和WUS2的表达。
以下实验证明,在农杆菌感染后立即表达ODP2和WUS2导致直接体细胞胚发生。
A.PLTP启动子驱动ODP2并且NOS启动子驱动WUS2表达导致快速、直接的体细胞胚形成。
在授粉后大约11天从先锋玉米近交系PH184C收获未成熟胚(长度2-2.5mm),并用农杆菌菌株AGL1感染,该菌株AGL1含有具有以下组成的T-DNA;RB+NOS PRO::Top2::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM+GZ-W64A TERM+UBI PRO::UBI1ZM INTRON::ESR::SB-SAG12 TERM+SB-ALS PRO::HRA::SB-PEPC1 TERM+LTP2 PRO::ZS-YELLOW::PINII TERM-LB,如实例3中所述。对于PLTP PRO,参见SEQ ID NO.1。将农杆菌在液体培养基中生长至光密度为0.5(在520nm处),并将未成熟胚(来自三个独立穗的53个、52个和56个胚)在农杆菌悬浮液中孵育5分钟,然后从液体中取出放置在固体710I培养基上。
24小时后,将胚移至605T培养基以开始针对农杆菌进行选择。6天后,在124个处理过的未成熟胚中的每一个的表面上观察到许多小的体细胞胚。每个未成熟胚含有大量不同的单个体细胞胚,许多胚被清晰的胚柄支撑。由ODP2和WUS2的表达产生的代表性胚显示在图1和图2中,例如参见图1中指向新形成的胚的箭头。也可以在图2中看到新形成的荧光胚。在农杆菌感染开始后4天使用具有来自顶部的照明的立体显微镜捕获图1中的图像。合子胚的总长度为大约1.5mm。将图2中显示的胚用AXIG1::WUS2::IN2和PLTP::ODP2::OS-T28表达盒以及UBI PRO::ZS-GREEN::PINII表达盒转化。图像显示了在使用所披露的方法处理后,生长在经最初转化的合子胚的盾片表面上的荧光胚。,使用具有落射荧光附加器和标准莱卡GFP过滤器装置的立体显微镜,在农杆菌感染开始后4天捕获该图像。合子胚的总长度为大约1.5mm。
在农杆菌感染后七天,将胚转移至成熟培养基(具有0.1mg/l灭草烟的289Q培养基)中,使用咪唑啉酮除草剂来选择转基因胚。在成熟培养基上14天后,将成熟胚移至生根培养基(13158H培养基;13158培养基加25mg/l头孢噻肟)并取样叶片用于PCR分析。从来自第一穗的53个胚中,使用PCR分析对12个除草剂抗性植物进行分析,并在实验开始(在开始农杆菌转化时开始)后32-34天之间送到温室。通过从每个植物中取得两个样品(来自两个相对的叶(来自植物的相反两侧)的各一个)来对植物取样用于PCR,以确认植物不是嵌合的。来自所有植物的每对样品的PCR结果表明没有产生嵌合植物,并且T0植物是均匀转基因的。
B.比较无除草剂的选择、添加支链氨基酸的无除草剂的选择、或用灭草烟的选择。
进行该实验的两次重复,两次重复之间的差别仅仅是开始的未成熟胚的数量和移动到实验的连续阶段的胚(或植物)的数量。对于两次重复,用农杆菌菌株AGL1(THY-)感染的来自先锋近交系PH184C的未成熟胚,该菌株AGL1包含以下T-DNA(来自PHP77833);RB+NOSPRO::Top2::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM+GZ-W64A TERM+UBI PRO:UBI1ZM INTRON:ESR::SB-SAG12 TERM+SB-ALS PRO::HRA::SB-PEPC1 TERM+LTP2PRO::ZS-YELLOW::PINII TERM-LB。在液体农杆菌悬浮液中感染5分钟后,将未成熟胚转移至固体培养基(270I培养基)过夜。第二天,将胚移至以下三种培养基之一上:605T;具有0.1mg/l胺苯磺隆(也含有除草剂灭草烟(0.1mg/l)用于选择)加支链氨基酸(缩写为“AA”,含有100mM亮氨酸、异亮氨酸或缬氨酸)的605T;或具有0.1mg/l胺苯磺隆(也含有除草剂灭草烟(0.1mg/l)用于选择)、不含支链氨基酸的605T。12天后将胚移至成熟培养基,其中将来自605T培养基的胚转移至具有0.1mg/l灭草烟的289Q培养基(在成熟过程中选择)中,将来自具有0.1mg/l胺苯磺隆和AA的605T培养基的胚转移至289Q培养基(早期选择,但在成熟过程中不选择),并且将来自具有0.1mg/l胺苯磺隆的培养基605T的胚移至289Q培养基(早期选择)。16天后,将具有健康体细胞胚的胚移至再生培养基272V培养基上。
对于该实验的第一次重复,用农杆菌处理206个胚,并且一天后将106个、67个或33个胚移至605T培养基(第一周不选择)、具有0.1mg/l胺苯磺隆和AA的605T培养基(用AA进行早期选择)或具有0.1mg/l胺苯磺隆的605T培养基(不用AA进行早期选择)。对于下一次转移,将45个、16个和0个胚移至它们各自的成熟培养基上。对于最终转移至生根培养基,移动了18个、10个和0个小植株(单个事件)。在这些事件中,对16个和10个植物取样用于PCR,并且6个和2个植物被发现是整合转基因的单拷贝,并且分别观察到0个和2个野生种(在选择过程中存活的野生型植物)。对于该实验的这一重复,从农杆菌感染到温室的总的经过时间为48天。这些结果表明,没有继续选择到胚成熟的早期选择允许野生型野生种存活(伴随一些转基因事件)。然而,没有补充支链氨基酸的早期选择似乎在体细胞胚形成时的阶段是有胁迫的,因此没有产生事件。在成熟阶段开始时开始选择对事件回收是最有效的并且没有野生种。
对于第二次重复,将总共196个胚用农杆菌在液体中处理5分钟,然后在710I培养基上共培养一天。此时,将94个、66个或36个胚分别移到605T培养基、具有0.1mg/l胺苯磺隆和AA的605T培养基或具有0.1mg/l胺苯磺隆的605T培养基上。十二天后,将605T上的94个胚分到具有0.1mg/l灭草烟的289Q培养基或具有0.5mg/l灭草烟的289Q培养基上(每种47个胚)。将来自具有0.1mg/l胺苯磺隆和AA的605T培养基以及具有0.1mg/l胺苯磺隆的605T培养基两者的胚移至289Q(不进行进一步选择)。成熟后,将健康小植株(事件)转移至生根培养基13158H,分别从上述四种成熟处理中移出14个、11个、13个和0个事件。最终,将4个、5个和2个植物送到温室进行三次处理,从所述处理中回收事件,并且在成熟过程中从0.5mg/l灭草烟选择仅产生一个单拷贝事件。
C.比较两种驱动ODP2表达的启动子ZM-PLTP PRO::Top1和DR5 PRO::Top3。
对于这两种处理,将来自先锋近交系PH184C的未成熟胚收获、用含有各自质粒的农杆菌菌株AGL1(THY-)处理、与农杆菌在共培养培养基710I上一天后转移到605T培养基上、在605T培养基上培养10天、移到具有0.1mg/l胺苯磺隆的13226D中两天、并且然后转移到成熟培养基(具有0.1mg/l灭草烟的289Q)中13天。成熟后,将小植株(事件)移至生根(发芽)培养基13158上10天(生根阶段)。
i.ZM-PLTP启动子驱动ZM-ODP2表达。
用含有PHP78157(SEQ ID NO.23)的农杆菌处理80个未成熟胚。最初,所有处理过的未成熟胚通过在每个盾片表面上快速产生许多单个体细胞品胚来响应。在生根阶段结束时,产生了18个小植株。将10个植物的一个子集送到温室并取样用于PCR分析(在温室的总的经过时间为46天)。在这10个中,6个是多拷贝和/或含有质粒骨架(BB),并且有4个野生种。
ii.DR5启动子驱动ODP2表达。
使用含有PHP78156的农杆菌处理70个未成熟胚,所述农杆菌具有含有以下的T-DNA:RB+NOS PRO::Top2::WUS2::IN2-1 TERM+DR5 PRO:Top3:ODP2::OS-T28 TERM+GZ-W64ATERM+UBI PRO::ESR::SB-SAG12 TERM+SB-ALS PRO::HRA::SB-PEPC1 TERM+LTP2 PRO::ZS-YELLOW::PINII TERM-LB(SEQ ID NO:24)。
最初,所有处理过的未成熟胚通过在每个盾片表面上快速产生许多单个体细胞品胚来响应。在生根阶段结束时,产生了18个小植株。将12个植物的一个子集送到温室并取样用于PCR分析(在温室的总的经过时间为46天)。在通过PCR分析的这12个植物中,6个是多拷贝/BB+,4个是单拷贝和无骨架(BB-),并且有2个野生种。
实例6:ZM-PLTP::ZM-ODP2+ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2。
ODP2在PLTP启动子控制下的表达和WUS2在AXIG1启动子控制下的表达导致改善的植物回收、高频率的送到温室的植物和更高频率的单拷贝事件。
从两个玉米近交系(HC69和PH184C)收获未成熟胚,并用含有PHP79023(SEQ IDNO:25)或PHP79024(SEQ ID NO:26)的农杆菌(菌株LBA4404THY-)感染。对于近交系HC69,用PHP79024转化67个未成熟胚,最终产生26个对0.1mg/l灭草烟具有抗性的植物(相对于起始胚的数量频率为38.8%)。相比之下,当用PHP79023转化65个HC69胚时,将10个除草剂抗性植物送到温室(频率为15.4%)。另外,使用PHP79024产生的植物在温室中更有活力且更健康。在用农杆菌感染后33天,将来自两种起始质粒的转基因植物送到温室。
对于近交系PH184C,用PHP79024转化64个未成熟胚,最终产生30个对0.1mg/l灭草烟具有抗性的植物(相对于起始胚的数量频率为46.8%)。相比之下,当用PHP79023转化73个PH184C胚时,将27个除草剂抗性植物送到温室(频率为37%)。另外,使用PHP79024产生的植物在温室中更有活力且更健康。在用农杆菌感染后33天,将来自两种起始质粒的转基因植物送到温室。因此,对于这两个近交系,使用DR5启动子来驱动WUS2(连同PLTP PRO::ODP2)的表达迅速产生可以发芽成转基因T0植物的转基因体细胞胚,但是对于在转基因植物生产的总体频率方面和在温室中的T0活力和健康方面两者,AXIG1 PRO::WUS2+PLTPPRO::ODP2的组合甚至更有效。
实例7:从支撑盾片分离体细胞胚。
通过从原始合子未成熟胚的支撑盾片分离体细胞胚来改善独立转基因植物的回收。
使用具有质粒PHP79066(SEQ ID NO:28)(参见表1)的农杆菌菌株AGL1(THY-)转化来自先锋近交系PHH5G的未成熟胚。在培养基710I上将45个未成熟胚与农杆菌共培养一天后,将未成熟胚移至无选择的静止培养基(605T培养基)上12天。将胚移至成熟培养基上13天,并且清楚地观察到来源于单个原始合子未成熟胚的多个成熟体细胞胚(图3)。此时,将胚从固体培养基中取出并置于液体培养基(289R培养基)中。然后将含有悬浮的玉米组织的管以高功率涡旋30-60秒,每10-15秒目视检查悬浮液直至看起来组织分散。然后将液体悬浮液倾倒在固体生根培养基(具有0.1mg/l灭草烟除草剂的13158H培养基)上,并将液体从板上用移液管移出。从这种材料中,生产了超过200个植物(图4中所示的代表性植物),这导致每个转化的起始胚回收平均4.4个植物。在大约200个T0植物中,对152个植物取样用于PCR分析,全部基于PCR结果进行转化(无野生种),并且43个植物对于没有农杆菌骨架的转基因是单拷贝的(28.3%单拷贝、无BB)。基于这个频率、回收的T0植物的总数量和胚的起始数量、有质量的可用的T0事件(单拷贝、无骨架)的生产基于起始胚的数量超过100%。
实例8:CRE介导的切除。
A.UBI::CRE::PINII介导的切除。
将未成熟胚从先锋近交系HC69(293个胚)和PH184C(241个胚)收获,并用农杆菌菌株AGL1(THY-)转化,该菌株AGL1具有含有表1中所示的遗传元件的质粒PHP80334(SEQ IDNO:42)。在液体培养基710I中暴露于农杆菌5分钟后,将胚铺在琼脂固化的710I培养基上过夜共培养。在共培养一天后,将胚移至静止培养基(无选择的605T)中7天、转移至成熟培养基(具有0.1mg/l灭草烟的289Q)中14天、并且然后移至生根(发芽)培养基上至少14天,然后将植物移至温室。基于转化的胚的原始数量,19.1%和13.8%的原始胚分别在HC69和PH184C中产生转基因植物。为了确定切除频率,进行了7次PCR反应以检测CRE、WUS2、ODP2、ZS-GREEN1和ESR表达盒(即,原始是在T-DNA中两个LOXP位点之间的所有多核苷酸区段)的不存在和HRA表达盒的存在。PCR结果揭示,21%的HC69植物仅含有HRA表达盒(赋予除草剂灭草烟抗性),并且在两个原始LOXP位点之间的区段已被切除。因此,这些植物不再含有CRE、WUS2、ODP2、ZS-GREEN1和ESR表达盒。当对植物分析HRA盒存在、所有其他盒已被切除时,PH184C的切除频率甚至高于HC69,其中47%的植物显示已发生完全、完美的切除。
当含有UBI PRO::CRE的质粒与未设计用于切除的构建体比较时,在早期生长响应中观察到差异。与含有AXIG1 PRO::WUS2+PLTP PRO::ODP2的非切除构建体相比,其中体细胞胚在农杆菌感染后6天可见,在此间隔期间在UBI PRO::CRE处理中没有观察到荧光体细胞胚。泛素启动子(UBI PRO)是一种非常强大的组成型启动子,已经被广泛使用很多年(Christensen和Quail,(1996)Transgenic Research[转基因研究]5:213-218)。由于其强度和普遍存在的表达模式,预期UBI PRO::CRE在被引入细胞后将立即开始表达,因此预期WUS和ODP2表达盒可以在能够刺激体细胞胚形成之前被切除。然而令人惊讶的是,当原始合子胚被置于成熟培养基上时,观察到多个胚形成于原始是单个合子胚的胚上。除草剂灭草烟的成熟是针对野生型生长的非常严格的选择,并且与此一致,PCR结果证实了所得的植物是转基因的并且通过PCR分析的单拷贝T0植物的60%显示发生WUS、ODP2、CRE、ZS-GREEN1和ESR的完美切除。PHP80334的T-DNA含有位于loxP重组位点内的AXIG1 PRO::WUS2、PLTPPRO::ODP2、UBI PRO::CRE、UBI PRO::ZS-GREEN和ESR表达盒。当将这种T-DNA引入未成熟胚细胞中时,未观察到绿色荧光,这表明切除发生在绿色荧光蛋白可能累积至可见水平之前(通常在未切除的UBI PRO::ZS-GREEN表达盒中少于24小时)。这些数据显示,WUS和ODP2的短脉冲对于快速从头体细胞胚形成和这些体细胞胚的发芽以产生转基因T0植物是有效的。
B.GLB1::CRE介导的切除。
将未成熟胚从先锋近交系PH184C收获,并用具有含有表1中所示遗传元件的质粒PHP80338(SEQ ID NO:43)的农杆菌菌株AGL1(THY-)转化。转化、选择和植物发芽方法与上述实例8-A中针对UBI PRO::CRE实验描述的相同。对T0植物的PCR分析表明58%的单拷贝植物已经经历了发育基因(ODP2和WUS)和CRE的完全切除。已知在胚发育期间(LTP2、OLE、END-2)或受到胁迫刺激(IN2-1)时驱动表达的替代性启动子也导致在发芽前切除发育基因(ODP2、WUS2)和CRE以产生转基因T0植物。
在驱动CRE表达的不同启动子的比较中,从先锋近交系HC69或PH184C收获未成熟胚,并用含有如下质粒的农杆菌菌株LBA4404(Thy-)转化,所述质粒含有具有以下组分的T-DNA;RB-loxP-AXIG1 PRO::WUS2::In2-1 TERM+PLTP PRO::ODP2::PINII TERM+“X PRO”::CRE::OS-T28 TERM-loxP+SB-ALS PRO::ZM-HRA::PINII TERM,其中“X PRO”是用于驱动WUS、ODP2和CRE切除的玉米UBI PRO、WOX2a PRO、IN2 PRO、LTP2 PRO、OLE PRO、GLB1 PRO、HSP17.7 PRO或HSP26 PRO。在液体培养基710I中暴露于农杆菌5分钟后,将胚铺在琼脂固化的710I培养基上过夜共培养。在共培养一天后,将胚移至静止培养基(无选择的605T)中7天、转移至成熟培养基(具有0.1mg/l灭草烟的289Q)中14天、并且然后移至生根(发芽)培养基上至少14天,然后将植物移至温室。
表10.驱动CRE重组酶表达的启动子的转化和切除频率。
如表10中所示,通过来自给定数量的起始未成熟胚的回收的T0植物的数量来测量转化效率,并且显示了WUS2、ODP2和CRE的切除频率。表10还显示了被农杆菌感染的未成熟胚的数量、产生的T0植物的数量、计算的转化频率[(T0植物的数量/感染的胚的数量)*100]和最终的切除频率(基于在存在或不存在WUS、ODP2、CRE和HRA的情况下的PCR分析)。对于近交系PH184C,在T-DNA含有WOX2a::CRE::PINII或IN2::CRE::PINII(分别为PHP80558或PHP80560)的阴性对照处理中没有观察到切除。然而,对于驱动CRE的启动子在整个植物中强烈表达(UBI)、在发育的胚中强烈表达(LTP2、OLE、GLB1)或通过热处理强烈诱导(HSPl7.7、HSP26)的处理,切除频率的范围在40%与60%之间。对于UBI PRO,WUS2和ODP2的切除很快,这导致降低的转化频率(9%),并且如在T0植物中测量的切除频率高达60%。对于在胚发育中到后期期间表达的启动子(LTP2、OLE和GLB1),转化频率高于UBI(分别为33%、26%和22%),而切除频率略低于UBI(分别为50%、40%和47%)。使用HSP17.7来控制CRE表达的处理在这两个类别中产生总体最佳结果,产生最高转化频率(54%)和最高切除频率(67%)。HSP26产生的结果与胚启动子的范围相同,并且转化和切除频率分别为32%和54%。
当使用胚发育型启动子进行切除时,在这些处理中观察到许多体细胞胚(类似于没有切除组分存在的实验),这表明表达延迟到胚发育的后期阶段,但是当发育触发时,表达在整个胚中均匀、强烈,导致WUS2、ODP2和CRE的有效切除。对于热响应型启动子,推迟暴露于热(即连续三天重复42℃持续2小时)直到胚移到成熟培养基上,这导致转化后迅速形成大量体细胞胚,接着是随后的有效切除。
实例9:改善的位点特异性重组事件的回收。
从PH184C收获未成熟的穗,并在粒子轰击处理当天从籽粒中提取2.0mm的未成熟胚。在粒子轰击之前将胚置于高渗透培养基(13224B培养基)上3小时。用等摩尔比的含有以下表达盒的质粒轰击未成熟胚:FRT1:PMI::PINII TERM:FRT87+UBI PRO:UBI1ZM INTRON::MO-FLP::PINII TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-OD)P2::PINII TERM+ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::PINII TERM。在粒子轰击后,将未成熟胚保持在高渗透培养基上过夜,并然后转移到静止培养基(具有150mg/l G418的13266K培养基)中8天。在静止期后,将胚转移至成熟培养基(具有150mg/l G418的289O培养基)中21天、并且然后移至生根培养基(具有150mg/l G418的272X培养基)中14-17天(直到根足够大以移植到土壤中)。在小植株阶段,对叶组织取样用于PCR分析以确认原始靶基因座的侧翼FRT1和FRT87位点内的基因不再存在,并且供体盒内的新基因已正确重组到靶基因座中-并且鉴定了精确的RMCE(重组酶介导的盒交换)事件。这减少了从转化到在温室中具有精确的RMCE来源的植物的整个SSI周期,减少到43-50天,这取决于需要多长时间来产生足够的根。可替代地,使用具有AXIG1 PRO::WUS2+PLTPPTO::ODP2的构建体开发农杆菌介导的SSI方法。在两个单独的实验中递送两种T-DNA;第一种T-DNA在侧翼的FRT1和FRT87重组位点内含有PMI、WUS2、ODP2和DsRED表达盒(RB-UBIPRO:UBI1ZM INTRON::MO-FLP::PINII TERM+CaMV35S TERM+FRT1:PMI::PINII TERM+ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM+UBI PRO::UBI1ZM INTRON::DsRED:FRT87-LB)(RV003866),以及第二种T-DNA在FRT1和FRT87位点内仅含有PMI和DsRED(RB-+ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM UBI PRO:UBI1ZM INTRON::MO-FLP::PINII TERM+CaMV35S TERM+FRT1:PMI::PINII TERM+UBI PRO::UBI1ZM INTRON::DsRED:FRT87-LB)(RV004886)。如美国临时专利申请号62/296639(通过引用以其全文结合在此)所述,将每种T-DNA经由农杆菌介导的转化递送至具有FRT1-FRT87着陆位点的靶系中。使用如在#5907USPSP中所述的多重PCR测定来鉴定精确的RMCE事件,并且数据总结于表11中。与用于产生SSI事件的正常转化方法相比,使用AXIG1 PRO::WUS2+PLTP PTO::ODP2表达盒用于农杆菌SSI将整个SSI过程减少了几周(至少3-4周)。
表11.使用WUS2和ODP2表达回收农杆菌SSI实验中的RMCE事件。
载体 | #感染的胚 | #T0植物 | #RMCE | %RMCE |
RV003866 | 859 | 42 | 6 | 0.7 |
RV004886 | 836 | 10 | 1 | 0.1 |
实例10:改善的含有CAS9/CRISPR介导的基因组修饰的事件的回收。
使用玉米基因组的CAS9介导的切割来将单个密码子改变引入玉米ALS2基因中。为了产生ALS2编辑的等位基因,将794bp同源性片段克隆到质粒载体中,并将两种127个核苷酸单链DNA寡核苷酸作为修复模板(与天然序列相比含有若干个核苷酸改变)进行测试。794bp修复模板包括单核苷酸改变,所述单核苷酸改变将指导对应于氨基酸位置165处的脯氨酸改变成丝氨酸(P165S)的DNA序列编辑,以及在ALS-CR4靶位点和PAM序列内的三个另外的改变。修复模板内PAM序列的修饰将甲硫氨酸密码子(AUG)改变为天然存在于ALS1基因中的异亮氨酸(AUU)。用于粒子轰击、选择和再生的培养基类似于本文使用的那些培养基。用两种寡核苷酸或单个质粒修复模板(UBI PRO:UBI1ZM INTRON:CAS9::PINII、POLIII PRO::ALS~CR4 gRNA、UBI PRO:UBI1ZM INTRON:MOPAT~DSRED::PINII TERM、ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::PINII TERM和ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::PINII TERM)轰击大约1,000个未成熟胚/处理。在粒子轰击后,将未成熟胚置于含有3mg/l双丙氨膦(biolaphos)的培养基上以选择除草剂抗性体细胞胚。在8天的静止期之后,将胚转移至具有双丙氨膦的成熟培养基上21天,并然后移至生根培养基上14-17天(直到根足够大以移植到土壤中)。转化后5周,将在选择性培养基上生长的200个(每个处理)随机选择的独立幼小植株转移到PlantConTM容器(可容纳高度多达6”的植物的无菌塑料容器)中的新鲜双丙氨磷培养基中。将剩余的小植株(大约800个/处理)转移到在PlantConsTM(预先灭菌的植物组织培养容器,可获自MP生物医学有限责任公司(MP Biomedicals LLC),赫顿中心驾驶道3号套房100号,圣安纳市(SantaAnna),加利福尼亚州92707(3Hutton Center Drive,Suite 100,Santa Anna,CA 92707))中含有100ppm氯磺隆(作为编辑的ALS2基因的直接选择)的的固体培养基上。一个月后,对384个随机取样的小植株(无选择)和经过氯磺隆选择后存活的7个小植株取样用于分析。在9个小植株中检测到编辑的ALS2等位基因:两个小植株源自生长在双丙氨膦上生长的随机选择的小植株并使用794bp修复DNA模板产生,并且剩余的7个源自使用127nt单链寡核苷酸编辑的氯磺隆抗性小植株。对ALS1基因的分析仅揭示了证实ALS-CR4 gRNA的高特异性的野生型序列。
将包含编辑的ALS2等位基因的所有9个植物送到温室并取样用于另外的分子分析和后代测试。对ALS2等位基因的DNA序列分析证实存在P165S修饰以及与各自修复模板相关的其他核苷酸改变。分析两个T0植物的T1和T2后代以评估编辑的ALS2等位基因的遗传。通过测序分析了来源于使用来自野生型Hi-II植物的花粉进行杂交的后代植物,并证明了在亲本植物中观察到的编辑的等位基因的有性传播预期是1∶1分离比率(分别为57∶56和47∶49)。为了测试编辑的ALS序列是否赋予除草剂抗性,将选择的具有编辑的和野生型ALS2等位基因的四周龄的分开的T1植物用四种不同浓度的氯磺隆(50、100(1x)、200和400mg/升)进行喷雾。处理后三周,具有编辑的等位基因的植物显示正常表型,而仅具有野生型等位基因的植物显示出强烈的衰老迹象。另外,从种子分离的胚在具有100ppm氯磺隆的培养基上发芽,所述种子源自于用野生型HI-II花粉授粉的植物。发芽后14天,具有编辑的等位基因的植株显示正常的高度和发达的根系,而具有野生型等位基因的植株短且没有发育根。
在上述实验中,当包含修复模板、Cas9、ALS-CR4gRNA和MoPAT-DsRED的质粒不包含ODP2和WUS2表达盒(在两种单独的质粒上)时,在先锋近交系PHH5G(阴性对照)中在对1000个未成熟胚进行粒子轰击并且在双丙氨膦上进行选择后没有回收到事件。通过比较,当将含有PLTP PRO::ODP2::PINII和AXIG1 PRO::WUS2::PINII TERM的质粒添加到用于金颗粒制备和粒子轰击的质粒混合物中时,回收到含有对ALS基因的CAS/CRISPR介导的基因编辑的事件。在对来自先锋近交系PHH5G的大约1000个未成熟胚进行粒子轰击后,回收了超过1000多个双丙氨膦抗性小植株,并且其中9个确定含有对赋予除草剂氯磺隆抗性的基因组ALS2基因的编辑。
实例11:高粱中的高效率转化和快速T0植物生产。
用下面总结的方法,使用优化的农杆菌介导的方案(Wu等人,2014,In VitroCellular and Developmental Biology[体外细胞和发育生物学]50:8-14)进行高粱转化。
A.高粱材料和转化过程。
本研究中使用了非单宁高粱品种TX430。温室平均温度在日间为29℃,在夜间为20℃,光周期为12h日/夜,并且通过金属卤化物(1,000W)和高压钠(1,000W)灯的3∶1比例提供补充光照。表2中列出了本研究中使用的培养基组分。基线转化方案详细描述于Zhao等人(Plant Mol.Biol.[植物分子生物学](2000)44:789-798)的“treatment C[处理C]”中。简言之,将新鲜收获的高粱未成熟谷物用50%漂白剂和0.1%Tween-20在真空下灭菌30分钟,并然后用无菌水冲洗三次。胚经受以下五个连续步骤的处理:(1)农杆菌感染:将胚与PHI-I培养基在农杆菌悬浮液(在550nm处OD=1.0)中孵育5分钟;(2)共培养:将胚在25℃在黑暗中感染3天后在PHI-T培养基上进行培养;(3)静止:将胚在PHI-T培养基(加100mg/l羧苄青霉素)上于28℃在黑暗中培养7天;(4)选择:将胚在PHI-U培养基上培养2周,接着使用2-3周的传代培养间隔,在28℃在黑暗中在PHI-V培养基上进行培养以进行剩余的选择过程;(5)再生:将愈伤组织在PHI-X培养基上在黑暗中培养2-3周以刺激芽发育,接着在25℃在16h光照(40-120μE m-2s-1)和8h黑暗的条件下培养1周,并在PHI-Z培养基上在光照下(16h,40-120μE m-2s-1)进行最后的传代培养2-3周以刺激根生长。将再生的小植株移植到土壤中并在温室中生长(Zhao等人2000)。将T0植物自花授粉以产生T1后代用于进一步分析。
在另一个实验中,使胚经受以下五个连续步骤:(1)用PHP79023进行农杆菌感染:将胚用PHI-I培养基在农杆菌悬浮液(在550nm处OD=1.0)中孵育5分钟;(2)共培养:将胚在25℃在黑暗中感染7天后在PHI-T培养基上进行培养;(3)成熟期间的选择:将胚在具有0.1mg/l灭草烟的培养基289M上成熟4周,接着在具有0.1mg/l灭草烟的培养基13113A(培养基13113A含有半强度MS盐和维生素、0.05g/l肌醇、20g/l蔗糖和3g/l植物凝胶,pH 5.6)上生根。将再生的小植株移植到土壤中并在温室中生长(Zhao等人2000)。将T0植物自花授粉以产生T1后代用于进一步分析。
B.与高粱一起使用的农杆菌菌株和载体。
使用根癌农杆菌菌株LBA4404(Lazo等人(1991)Biotechnology[生物技术]9:963-967),其含有具有农杆菌vir基因的第一质粒(Komari(1990)Plant Cell[植物细胞]9:303-306;Komari等人(1996)Plant J[植物杂志]10:165-174)和含有具有以下组分T-DNA的第二质粒(PHP80334):RB+ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM+GZ-W64A TERM+UBI PRO:UBI1ZM INTRON:ESR::SB-SAG12 TERM+SB-ALS PRO::HRA::SB-PEPC1 TERM+UBI PRO:UBI1ZM INTRON:ZS-GREEN1::PINII TERM:SB-ACTIN TERM-LB。为了比较,使用了另一种农杆菌,其含有仅在T-DNA中含有UBI PRO:UBIl ZM INTRON:PMI::PINII TERM表达盒(没有ZM-WUS2或ZM-ODP2表达盒)的第二质粒,其代表本实验中的对照处理。
C.高粱转化结果。
当使用对照质粒时,总转化频率为20%,并且在送到温室并使用qPCR分析的T0植物中,40%是单拷贝的并且不含农杆菌骨架。对于对照处理,将从农杆菌感染开始直到将T0植物送到温室的持续时间在10-13周之间变化。
当使用含有Zm-PLTP PRO::ZM-ODP2+DR5 PRO::ZM-WUS2(参见表1中的PHP79023)的质粒时,总转化频率为32%,并且在送到温室并使用qPCR分析的T0植物中,42%是单拷贝的并且不含农杆菌骨架,直接从原始感染的合子未成熟胚进行体细胞胚形成,接着是体细胞胚成熟、体外发芽和根形成。使用这种启动子和发育基因的组合大大减少了从农杆菌感染到将T0植物送到温室的时间,相对于对照处理减少了大约一半。
在使用具有T-DNA(含有RB-ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTPPRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM+SB-ALS PRO::ZM-HRA::PINII TERM+组成型DsRED表达盒-LB)的PHP82240质粒的另外的实验中,证明通过使用PHP82240在具有50mg/L羧苄青霉素的710I培养基上共培养7天改善了高粱体细胞胚的直接形成。质粒与七天共培养的这种组合导致总转化频率从17.7%翻倍至38.9%的最终值,同时相对于对照处理,将从农杆菌感染到将T0植物送到温室的时间减少大约一半(将时间范围减少为5-6周的总的经过时间)。
实例12:小麦中的高效率转化和快速T0植物生产。
A.小麦转化方法。
含有目的载体的农杆菌菌株LBA4404的等分试样从-80℃储存中取出并划线到含有选择剂(卡那霉素或壮观霉素,取决于细菌菌株含有哪种质粒)的固体LB培养基上。将农杆菌在黑暗中在21℃在LB板上培养2-3天,此时从板选择单个菌落,在含有选择剂的810D培养基板上划线,并然后在28℃在黑暗中孵育过夜。使用无菌刮铲将农杆菌培养物从板上转移并悬浮于具有400μM乙酰丁香酮(AS)的约5mL小麦感染培养基(WI4)中。使用相同的培养基将悬浮液的光密度(600nm)调节至约0.1至0.7。
收集含有未成熟种子(具有1.4-2.3mm胚)的四至五个花穗,并从未成熟种子中分离未成熟胚。将小麦籽粒在20%(v/v)漂白剂(5.25%次氯酸钠)加1滴Tween 20中进行表面灭菌15分钟,然后在无菌水中洗涤2-3次。如实例4和5中所述,接着是包括小麦用农杆菌感染、共培养、静止期期间的培养、体细胞胚成熟和生根的剩余方案,包括在0.1mg/l灭草烟上进行选择和成熟的步骤来生产转基因T0小麦植物。
B.小麦转化结果。
使用根癌农杆菌菌株LBA4404(Lazo等人1991,Biotechnology[生物技术]9:963-967),其含有第一超级二元辅助质粒(pVIR9,美国临时申请号62/252229,其通过引用以其全文结合在此)和第二质粒(PHP79066),其中发育基因含有具有以下组分的T-DNA;RB+ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM+SB-ALS PRO::HRA::SB-PEPC1 TERM+LTP2 PRO::ZS-YELLOW1 N1::PINII TERM+LB。为了比较,使用含有具有以下T-DNA的第二质粒(PHP24600)的另一种农杆菌:RB+CAMV35S TERM:PAT:CAMVS PRO+UBIZM PRO:DS-RED:PINII TERM+LB,其代表本实验中的对照处理。
当使用对照质粒转化来自先锋优良春小麦品种HC0456D的小麦未成熟胚时,在农杆菌感染后的前7-10天没有观察到可再生结构,而用发育基因构建体PHP79066感染的未成熟胚在感染后7-10天产生可再生结构(使用实例4和5中描述的玉米培养基)。与对照构建体观察到的增殖愈伤组织(未示出)相比,用构建体PHP79066感染的胚在2周内产生了植物样结构(图5)。在感染后6周内用PHP79066转化后回收生根的小植株。
当含有ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::OS-T28TERM+SB-ALS PRO::HRA::SB-PEPC1 TERM+LTP2:ZS-YELLOW::PINII TERM的质粒用于转化时,总转化频率为64%(与对照的6%相比)。使用qPCR分析四个植物的一个子集,并且三个对WUS和ZS-YELLOW转基因两者为阳性。使用发育基因的这种组合,在感染后8-11周T0植物再生,将从农杆菌感染到将T0植物送到温室的时间减少了2-3周。
实例13:玉米中快速从头胚形成的观察和T0植物的生产。
A.发育体细胞胚的形态学。
用具有含有表达盒ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1I TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::PINII+UBI PRO:UBI1ZM INTRON:ZS-GREEN::PINII TERM的T-DNA的农杆菌菌株LBA4404转化来自先锋近交系PH184C的未成熟胚后,在盾片的表面上迅速形成体细胞胚(即在4-6天内)。在农杆菌感染开始后2、4、7和12天观察到直接形成的单个体细胞胚。在近交系PH184C中,当使用NOS PRO::ZM-WUS2::PINII TERM+ZM-PLTP::ODP2::PINII TERM的组合时,观察到单个体细胞胚通过好像是重现(recapitulate)胚柄的细胞的细系链(thintether)附着于原始转化的合子胚的盾片上。随着胚发育继续,观察到通常在合子胚中观察到的另外的形态特征,包括在顶端分生组织发育的开始时在顶端分生组织周围形成独特的胚芽鞘环和围绕胚轴形成盾片(其变成白色和不透明)。
为了进一步说明快速形成的体细胞胚的形态,在农杆菌感染开始后2、4、6和7天对具有突出的新生体细胞胚的合子胚取样,并将其在100mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中的2.5%EM级戊二醛中在室温以100rpm旋转4小时来进行固定。用100mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)洗涤3次(每次15分钟)后,将样品以逐步的方式脱水;在70%EtOH中1-2小时、在80%EtOH中1-2小时、在95%EtOH中1-2小时、在100%EtOH中1-2小时、和在100%EtOH中2小时。然后,按照生产商的建议用活化的Technovit 7100乙二醇甲基丙烯酸酯浸润组织2小时,并再次用更新的活化的Technovit 7100浸润组织过夜。将浸润的组织样品置于模具中,并且通过将1ml的Hardener II添加到15ml活化的Technovit 7100中来聚合Technovit 7100。将模具在真空干燥器中置于室内真空下并使其聚合过夜。将半薄2μm切片置于载玻片上的水滴上,并在45℃的加热板上干燥。根据说明书将切片用过碘酸-希夫试剂(西格玛公司(Sigma))染色,然后用在7%乙酸溶液中的0.5%萘酚蓝黑反染5分钟,并再次在去离子水中洗涤。然后将切片用玻璃盖玻片固定在Permount中并观察。
图6至图11显示了用具有T-DNA的LBA4404进行农杆菌感染后不同天数的HC69合子未成熟胚的时间进程,所述T-DNA包含以下:RB-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ODP2::PINII TERM-LB。局部生长刺激的最早指征之一是观察到在感染的盾片表面上细胞的垂周分裂(图6),这是该表面层中的第一个可见分裂,其通常经由伴随胚生长的平周分裂而扩大。持续的局部细胞分裂导致开始从合子胚表面突出的小细胞簇(图6),并且这种生长迅速产生越来越大的球状(图8)和球状/过渡期(图8)胚,其在感染后仅4天,每个体细胞胚中含有多达700-800个细胞,并且表现出通常在前胚中观察到的典型的光滑表皮层,其与下面的合子胚没有血管连接。尽管发育的体细胞胚在很接近的位置观察到(图10),但它们代表独立来源的结构。贯穿在农杆菌感染后的前6-7天的体细胞胚的生长,观察到高频率的有丝分裂结构(即明确经历前期、中期、后期或胞质分裂的细胞)(图11),其表示这些体细胞胚的极快的生长速度。
B.染色以展示在发育的体细胞胚中的脂质积累。
在农杆菌介导的转化(具有含有AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTPPRO::ODP2::PINII TERM的T-DNA)后在未成熟合子胚的盾片表面上发育的直接形成的体细胞胚在农杆菌感染后2、4和7天取样,在70%异丙醇中洗涤5分钟,并然后在70%异丙醇中的0.5%“油红O”溶液中染色20分钟,在异丙醇中洗涤2分钟,并然后在水中洗涤两次,每次各5分钟(全部在室温进行)。在农杆菌感染后两天,如在组织中形成的红色证明的,非常少的脂质染色存在于合子未成熟胚中。在开始农杆菌感染后四天,清晰可见从原始转化的合子胚的表面生长的许多球状结构(新形成的体细胞胚),并且这些新的体细胞胚被清晰地染成红色,这表明脂质积累。七天后,观察到结构的混合物;一些清晰的体细胞胚继续发育并被染成红色(图12中的黑色箭头),并且一些体细胞胚开始分化分生组织和叶,这些分生组织和叶已经开始失去与脂质积累相关的红色染色(图12)。还参见图12,在这些培养条件下,原始农杆菌感染的合子胚的盾片几乎没有脂质。
可替代地,通过在盖玻片和载玻片之间放置体细胞胚并施加压力直到单层细胞被挤出来使脂质可见。在使用上述的油红O染色方法之后,当在光学显微镜下观察时,在体细胞胚细胞内观察到大量油滴分散(图13)。
在切片的体细胞胚中使用类似的染色方案可以检测到脂质。在农杆菌感染开始后2、4、8和12天对直接形成的单个体细胞胚进行取样,并对其进行固定、脱水、用塑料浸润并如上所述进行切片。对于脂质染色,制备在60%磷酸三乙酯(水性)中的0.5%“油红O”溶液并过滤。用60%磷酸三乙酯简单冲洗载玻片上的组织切片,并然后在“油红O”中染色10-20分钟。染色后,将切片再次用磷酸三乙酯冲洗1-2秒,并然后用蒸馏的去离子水洗涤。然后将切片用在5%的水性硫酸铁铵中的0.5%天青石蓝(Celestine Blue)染色15分钟,并且再次在DI水中洗涤。然后使用水性固定培养基将切片固定和进行观察。在发育的体细胞胚中,盾片中积累的脂质呈现红色,并且在整个切片(包括盾片和胚轴)上,每个细胞中的核将染成蓝色。
实例14:使用单独的WUS2、使用单独的ODP2或使用WUS/ODP2组合的转化。
从三个先锋近交系(PH184C、HC69和PHH5G)收获未成熟胚,并将来自每个近交系的胚均匀等分用于农杆菌菌株LBA4404转化,所述菌株LBA4404包含以下之一:PHP79066(SEQID NO:27)、PHP80912(SEQ ID NO:53)和PHP80913(SEQ ID NO:54;每个在表1中详细描述)。
在农杆菌介导的转化后,三种不同的近交系对不同转基因组合的响应不同(表12)。对于近交系PH184C,每种处理感染230个未成熟胚,当表达单独的AXIG1::WUS2、表达单独的PLTP::ODP2、或表达WUS2和ODP2的组合时,84%、10%和100%的原始感染的合子胚在盾片表面上产生体细胞胚。7天后,将所有胚移至成熟培养基、然后移至发芽培养基,其中68个、8个和52个胚产生T0植物用于三种各自的处理(T0转化效率分别为30%、3%和23%)。对于近交系HC69,每种处理使用80个未成熟胚,在所有三种处理中有效产生体细胞胚和T0植物,对于AXIG1::WUS2、PLTP::ODP2或组合的WUS2+ODP2处理,分别产生85%、56%和68%的最终转基因T0植物频率(相对于起始胚的数量)。最后,对于近交系PHH5G,对于三种处理中的每一种处理感染168个未成熟胚,对于AXIG1::WUS2、PLTP::ODP2或组合的WUS2+ODP2处理,分别具有27%、0%和48%的最终转基因T0植物频率(相对于起始胚的数量)。这些数据表明,尽管近交系对单独的WUS、单独的ODP2或其组合表现出不同的响应,单个转录因子的表达可有效地产生转基因体细胞胚和T0植物。
表12.在递送单独的WUS2、单独的ODP2或WUS2与ODP2的组合后在三个近交系中的转化响应
实例15:从单个体细胞胚产生的小植株到温室的改进的转移。
用PHP79066感染三种基因型(HC69、PHH5G和PH184C)的未成熟胚(9-11DAP)。将胚转移到共培养培养基(710I)1-3天、静止培养基605G(605J培养基+2mg/l美罗培南)7天、并然后转移到成熟培养基13329(289O+0.1mg/l灭草烟)上。在成熟培养基上3-4周后,将强壮的单个芽转移到EXcel Plugs(40/80)(国际园艺技术有限公司(InternationalHorticulture Technologies,LLC),航空公司高速公路2410号,霍利斯特,加利福尼亚州95023(2410 Airline Hwy,Hollister,CA,95023))并用Moisturin(WellPlant有限公司(WellPlant,Inc.),香料群岛路940号,斯帕克斯,内华达州89431(Spice Islands Drive,Sparks,NV,89431))。将芽在27℃在Valoya(Valoya Oy公司,Lauttasaarentie 54A,00200赫尔辛基,芬兰)R系列NS2LED灯(220-305μmol/m2/秒)下培养2-3周。根据需要,每隔2-3天用6N盐和维生素加0.1mg/L灭草烟将plugs浇湿。在根建立后,将plugs转移到T0接收温室并生长另外两周。在这个时间范围结束时,收集每种基因型的存活数据,并在下表13中给出。
表13.转移到温室的T0植物的改进的存活。
基因型 | 芽* | 小植株** |
PH184C | 54 | 37(68.5%) |
PHH5G | 36 | 17(47.2%) |
HC69 | 36 | 27(75.0%) |
*转移到Excel plugs的芽的总数量。
**实验结束时存活的小植株的数量,括号内给出了存活百分比。
实例16:使用高粱PLTP启动子在玉米中直接产生体细胞胚的结果。
双色高粱PLTP启动子(SB-PLTP PRO)以SEQ ID NO:2提供。将来自先锋近交系PH184C或PHH5G的未成熟胚用具有含有T-DNA(SEQ ID NO:95)(RB+ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+SB-PLTP1 PRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM+GZ-W64A TERM+UBI PRO:UBI1ZM INTRON:ESR::SB-SAG12 TERM+SB-ALS PRO::HRA::SB-PEPC1 TERM+UBI PRO::ZS-GREEN1::PINII TERM:SB-ACTIN TERM-LB)的质粒RV012608的农杆菌菌株LBA4404转化。在培养4-6天后在近交系合子胚的表面上形成许多离散的体细胞胚。这些早期体细胞胚彼此明显不同(即,在形成的体细胞胚之间具有中间的非转基因组织)并且基于绿色荧光蛋白的表达被证实是转基因的。当这些胚被转移到具有0.1mg/l灭草烟的成熟培养基中时,胚继续发育,并且当转移到发芽培养基时,发生芽和根两者的伸长。
实例17:使用来自同源基因来源的玉米ODP2同系物、WUS2同系物和PLTP启动子在
玉米中产生体细胞胚的结果。
WUS/WOX旁系同源基因(家族成员基因和编码的蛋白质)和ODP2/BBM家族成员及其相应的SEQ ID编号列表显示在下表14中。
表14.WUS/WOX和ODP2/BBM序列
*“DNA”表示多核苷酸或核酸序列;“PRT”表示多肽或蛋白质序列。
对于下面部分A、B和C中所述的这些研究,使用单个T-DNA构型(SEQ ID NO:104),从以下阳性对照开始:RB+ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM+GZ-W64A TERM+UBI PRO:UBI1ZM INTRON:ESR::SB-SAG12 TERM+SB-ALS PRO::HRA::SB-PEPC1 TERM+UBI PRO::ZS-GREEN1::PINII TERM:SB-ACTIN TERM-LB。在此T-DNA的背景下,除了下面描述的三个变量以外,T-DNA的所有组分保持相同。在第一变量中,用ZM-WOX2A、ZM-WOX4、ZM-WOX5A或高粱(SB)WUS1替换ZM-WUS2(在对照质粒中)。在第二变量中,用来自两种玉米旁系同源基因(ZM-PLTP1和ZM-PLTP2)的启动子或三种禾本科直系同源基因(双色高粱SB-PLTP1、粟SI-PLTP1或稻OS-PLTP1)替换ZM-PLTP PRO(来自对照处理)。当将对照T-DNA(如上所示的所有玉米组分)引入先锋近交系PH1V5T、PH1V69和PHH5G的盾片中时,7天后大约一半的盾片表面面积覆盖有新发育的体细胞胚。该响应评分为“2”。在响应谱的上端,盾片完全被个体的苔覆盖,在感染后4-7天发育体细胞胚。该响应被给予相对评分“4”,并且所有其他处理从“0”(无响应)到“4”(最多产的体细胞胚产生)排列。当没有引入WUS2或ODP2表达盒时(例如在PHP24600,SEQ ID NO:69中),PH1V5T产生低水平的体细胞胚(分数为1),而PH1V69和PHH5G两者都不产生响应(分数为0)。
A.ZM-WOX家族成员或高粱WUS1替代ZM-WUS2产生不同程度的快速形成的体细胞胚。
在该实验中,在T-DNA(SEQ ID NO:104)中含有ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2+ZM-PLTPPRO::ZM-ODP2的阳性对照质粒在近交系PH1V5T和PHH5G中产生中间响应(分数2),同时在近交系PH1V69中产生较低的分数“1”。相比之下,当三个玉米WOX家族成员替代ZM-WUS2时,观察到一系列体细胞胚发生响应(表15),范围在来自ZM-WOX2A的较高体细胞胚响应、ZM-WOX4的低至无响应和WOX5的低响应(分别在SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:102中提供的T-DNA序列)。尽管WOX5和WOX4在转化的未成熟胚的表面上导致较少的体细胞胚,但是WOX5的所有三个自交系和WOX4的近交系子集仍有阳性响应。对于产生低水平响应的处理,近交系PH1V5T难以解释,因为它在不存在WUS2和ODP2表达盒的情况下表现出低水平的生长。然而,对于这些处理,另外两个近交系变得更具信息性,因为它们没有表现出背景生长并且明确是低水平响应(1)。
表15.近交系转化对不同WUS同系物的响应
还针对转化后快速生长响应的刺激对ZM-WUS1和ZM-WUS3与ZM-WUS2进行比较。在该实验中,使用玉米的标准粒子轰击方案(参见Svitachev等人,2015,Plant Physiology[植物生理学]169:931-945)以等摩尔比将含有UBI::GFP::PINII TERM的质粒与含有UBIPRO::WUS1::PINII TERM、UBI PRO::WUS2::PINII TERM或UBI PRO::WUS3::PINII TERM的质粒一起进行共轰击。在具有GFP滤波器的莱卡Mzfl III落射荧光显微镜下观察胚。7天后,被轰击的盾片的表面覆盖着快速生长的多细胞结构,GFP荧光处于中心。对于所有三种WUS3旁系同源基因,生长速度很快,在整个被轰击的盾片表面都有广泛的响应,并且不能识别三种WUS旁系同源基因之间的差异。基于这些观察结果,可以预期当放置在AXIG1启动子后面并且组合在具有ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2的T-DNA中用于转化玉米未成熟胚时,ZM-WUS1和ZM-WUS3将产生与ZM-WUS2相似程度的快速体细胞胚发生。
该实验中的最终处理是用高粱(SB)WUS1(T-DNA序列以SEQ ID NO:103提供)替代玉米WUS2。这种处理产生了对任何处理的最快速和最多产的体细胞胚响应,其中大约80%的被感染的胚整个被体细胞胚覆盖。
B.替代来自玉米旁系同源基因或三种不同的禾本科直系同源基因的PLTP启动子导致不同程度的快速体细胞胚发生。
相对于对照处理(ZM-PLTP PRO),使用各种“同源”启动子在三种不同的先锋近交系中产生一系列快速体细胞胚发生(表16),其中对照产生在1与2之间的分数。
表16.对不同PLTP启动子的近交系转化响应
在该实验中,ZM-PLTP1启动子在感染后7天产生最高的体细胞胚发生分数,其范围从3(在PH1V5T中大概75%被体细胞胚覆盖)到4(完全被覆盖,如在PH1V69和PHH5G中)。ZM-PLTP2也产生了比对照更好的结果,在所有三种近交系中具有一致的分数3。对于来自禾本科的其他成员的PLTP1启动子,高粱和稻启动子在两个近交系中产生中等水平响应(2),在一个近交系中产生低响应(1),而狗尾草属启动子在两个近交系中导致低水平响应并在一个近交系中产生中等水平响应。所有测试的PLTP启动子在7天后都导致体细胞胚发生的阳性刺激。
C.ZM PLTP PRO::ZM-LEC1与AXIG1::WUS2或PLTP::ODP2的组合导致体细胞胚的快速产生。
在之前的实验中,证明了在可转化的玉米杂交种Hi-II中UBI PRO::ZM-LEC1刺激转化频率(参见Lowe等人,2007,US 7,268,271)。
在该实验中,在对照载体中用ZM-PLTP::ZM-LEC1替代AXIG1::WUS2或PLTP::ODP2以评估在三个近交系中对快速体细胞胚发生的影响。农杆菌感染、组织培养和在7天中对胚发生的评分的条件与先前实例中描述的那些条件相同。虽然这两种新组合产生的分数都高于对照,如在表17中可以看出,AXIG1::WUS2+PLTP::LEC1在所有三个近交系中导致最强的体细胞胚响应。因此,PLTP::LEC1与WUS2或ODP2表达盒组合可有效刺激体细胞胚的快速形成。
表17.对与LEC1的不同组合的近交系转化响应
D.使用WUS和ODP2的组合或狗尾草属WUS和ODP2的组合导致在玉米未成熟胚的转化后体细胞胚形成。
从含有NOS PRO::ZM-WUS2::IN2+UBI PRO::ZM-ODP2::PINII+UBI PRO::ZS-GREEN::PINII的玉米构建体开始,合成在稻和粟中鉴定了WUS2和ODP2的直系同源基因并将其替代在上述构建体中的玉米基因。使用含有PHP80911(玉米WUS2和ODP2)、PHP79530(稻基因)或PHP79531(粟基因)的农杆菌菌株LBA4404转化来自近交系PHH5G和PH184C的未成熟胚。在培养基上14天后,在解剖显微镜和落射荧光显微镜下检查未成熟胚,并使用先前描述的体细胞胚发生量表(0-4)进行评分。对于近交系PH184C,在农杆菌感染后14天的体细胞胚评分分别为2、2和1(分别对应玉米、粟和稻的基因对)。对于近交系PHH5G,在农杆菌感染后14天的体细胞胚评分分别为3、3和2(分别对应玉米、粟和稻的基因对)。将这些未成熟胚暴露于WUS2和ODP2的表达的时间长度是上述部分5A、5B和5C中的材料的两倍,这导致比如果在7天时收集数据更高的体细胞胚发生分数。来自每个物种的同源WUS和ODP2基因的组合刺激体细胞胚形成。在不存在WUS2或ODP2的情况下,在PHH5G中未观察到体细胞胚形成。
在禾本科内,玉米和稻位于种系发生的相反端,中间是粟。基于WUS、ODP2和PLTP的上述不同序列的结果,这项工作证明,来自稻科植物成员的组合可以有效地用于在转化后快速刺激体细胞胚发生。
实例18.使用大豆LTP3启动子控制WUS的表达以改进大豆转化。
为了鉴定可能使用拟南芥WUS基因改进转化方法的新启动子,对该基因的使用进行了综述。在农杆菌介导的转化和整个愈伤组织生长后立即表达的拟南芥WUS的高水平表达(例如,使用大豆EF1A PRO)增加了事件形成的速率。然而,继续在这个水平上表达这种转录因子阻碍了事件再生。可能的解决方案是在再生小植株之前切除该基因并限制拟南芥WUS在使体细胞胚分化和成熟中异位表达。基于此,寻找在培养的细胞、胚和发育未成熟种子中表达,并且在其他植物组织中没有表达或具有低得多的表达的新启动子。大豆LTP3启动子符合这些标准,一种以前未确定的大豆磷脂转移酶基因。如在图14和图15中所示,当与EF1A PRO的组成型表达(图14)相比时,LTP3的表达(图15)是:i)在发育未成熟种子中强烈、和ii)在其他样品和植物部分中弱或不强,而在所有组织中都观察到EF1A的表达。
含有具有表达盒GM-LTP3 PRO::AT-WUS::UBI14 TERM+GM-UBQ PRO::TAGRFP::UBQ3 TERM的T-DNA的农杆菌菌株AGL1用于转化先锋大豆品种PHY21。在农杆菌感染开始后四天,用无菌培养基洗涤组织以除去过量的细菌。9天后将组织移至体细胞胚成熟培养基中,并且22天后转基因体细胞胚已准备好进行脱水。此时,良好形成的成熟体细胞胚在带有RFP滤波器装置的落射荧光立体显微镜下发红色荧光。发育的体细胞胚是有功能的并且发芽以在温室中产生健康的植物。这种产生体细胞胚和发芽以形成植物的快速方法将从农杆菌感染到将转基因T0植物转移到温室的典型时间范围从四个月(用于常规大豆转化)减少到两个月。
如图16(显示了农杆菌感染后2周未成熟子叶外植体的体细胞胚发生响应的分布)中的箱线图所示,使用LTP3启动子来驱动At-WUS的表达导致体细胞胚发生的显著改进(如与测试的其他启动子(参见图16)或不含WUS表达盒的阴性对照相比(参见图16))。
在受感染的未成熟子叶群体中的体细胞胚响应的增加还伴随着快速体细胞胚发育,其在两种光学显微镜下观察以评估形态学(图17A)并在落射荧光下观察红色荧光(图17B)。它显示准备好干燥并随后在农杆菌感染后仅5周发芽的成熟的转基因大豆体细胞胚。当没有用LTP3::At-WUS转化未成熟子叶(对照处理)时,成熟体细胞胚不仅以大大降低的频率产生(参见图16),而且从农杆菌感染到体细胞胚成熟的相当阶段的持续时间需要培养9周。
实例19.增加对WUS2、ODP2和CRE表达盒已切除且剩余的性状基因是单拷贝的T0植
物的回收的切除激活的可选择标记HRA。
为了构建具有切除激活的HRA表达的载体,HRA基因被在内含子中心含有单个loxP靶位点的ST-LS1内含子中断,并且进行了测试以证明含有loxP的内含子功能正常。将HRA表达盒的两半(在loxP位点处分开)移至T-DNA的相对端,每一半具有它自己的内部loxP位点,其比HRA两半更靠近T-DNA的中心。在两个loxP位点内的是AXIG1 PRO::WUS2::IN2 TERM、PLTP PRO::ODP2::OS-T28 TERM、ZM-GLB1 PRO::CRE::pinII和SB-UBI PRO::ZS-GREEN::OS-UBI TERM表达盒(参见表1中的PHP81814、和SEQ ID NO:80)。
该构建体产生高频率的快速体细胞胚形成,并且切除组合的WUS/ODP2/CRE/ZS-GREEN盒以激活HRA表达和回收单拷贝T0植物。在一组实验中,将总共2332个未成熟胚(来自近交系PHH5G)用于通过携带PHP81814的农杆菌菌株LBA4404THY-进行转化。在被感染的总体胚中,总共回收了604个T0植物,并且在这些604个T0植物中,总共215个不再含有WUS2、ODP2、CRE和SZ-GREEN表达盒(完全切除)。结果总共回收了9.2%的质量事件(完美事件的数量相对于起始胚的数量)。
在一组分开的用近交系HC69的三个实验中,将741个未成熟胚用含有PHP81814的农杆菌转化,并且在温室中产生315个T0植物,其中30个是HRA的单拷贝且所有其他基因被切除,其质量事件的频率为4%。
实例20.使用具有胚特异性表达模式的启动子驱动WUS2和/或ODP2表达以改进玉
米转化。
对于这些实验,使用单个T-DNA配置,从用作阳性对照的以下配置开始:RB+ZM-AXIG1 PRO::ZM-WUS2::IN2-1 TERM+ZM-PLTP PRO::ZM-ODP2::OS-T28 TERM+GZ-W64A TERM+UBI PRO:UBI1ZM INTRON:ESR::SB-SAG12 TERM+SB-ALS PRO::HRA::SB-PEPC1 TERM+UBIPRO::ZS-GREEN1::PINII TERM:SB-ACTIN TERM-LB。将阳性对照与具有驱动WUS2和ODP2表达的胚特异性启动子的质粒进行比较。使用质粒PHP24600作为阴性对照(不表达WUS2和ODP2转基因)以提供较低的比较基线。
当使用ZM-SRD PRO、ZM-LGL PRO、ZM-LEA14-A PRO或ZM-LEA-D-34启动子(分别为SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83)替换该构建体中驱动WUS2表达的ZM-AXIG1 PRO,预期增加的转化频率和快速体细胞胚发生的刺激与用阳性对照载体所观察到的类似,两者都显著高于阴性对照处理(PHP24600)。同样地,当使用ZM-SRD PRO、ZM-LGL PRO、ZM-LEA14-A PRO或ZM-LEA-D-34启动子替换该构建体中驱动ODP2表达的ZM-PLTPPRO时,再次预期增加的转化频率和快速体细胞胚发生的刺激与用阳性对照载体所观察到的类似,两者都显著高于阴性对照处理(PHP24600)。
实例21.序列鉴定
本披露中引用了各种序列。序列标识符见于下表18。
表18.
*“DNA”表示多核苷酸或核酸序列;“PRT”表示多肽或蛋白质序列。
如本文所使用,单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“该”包括复数个指示物,除非上下文中另外明确指明。因此,例如,提及“细胞”包括多个这样的细胞,并且提及“蛋白质”包括本领域技术人员已知的一种或多种蛋白质及其等效物等。本文使用的所有技术和科学术语具有与本披露所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义,除非另有明确说明。
本说明书中提到的所有专利、出版物和专利申请都表明本披露所属领域的技术人员的水平。将所有专利、出版物和专利申请通过引用以其全文结合在此,其程度就像明确且个别指出通过引用将每一篇个别专利、出版物或专利申请以其全文结合一样。
虽然出于清楚理解的目的,已经通过说明和实例的方式对前述披露内容进行了详细描述,但是在所附权利要求书的范围内可以实践某些改变和修改。
序列表
<110> 先锋良种国际有限公司(Pioneer Hi-Bred International, Inc.)
Anand, Ajith
Arling, Maren L
da Silva Conceicao, Alexandre
Gordon-Kamm , William
Hastings, Craig E
Hoerster , George J
Klein, Theodore M
La Rota , Carlos M
Lowe, Keith S
Tiwari, Shiv B
Wang, Ning
Wu, Xinli E
<120> 用于快速植物转化的方法和组合物
<130> 6752
<150> 62/248578
<151> 2015-10-30
<160> 106
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 1062
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 1
ccctagctcc ctgcggctgt tacgcggtcc cccatcaatc ttctgttctt gcggttgtag 60
cctgtgtaac agtgctagag tatgtatgat aaataggttt taagtctgct tacatgacat 120
tttttattgt ggaagagaca tataaaaatt agagagagtg gttctcatgc aacggcggac 180
ggcccggtgc taaaagagct tcaagacaaa ataatgaaac aggaagagag tagatttatc 240
taagagccaa ctttattata tgaatgtgtt tattgttggc tttagatgat atggtaagga 300
gttagagcta ataatagata ggctctatta ttattattat taattaaact cgctctaagg 360
aggaaagtgg gaggaaggga cgaggacgaa gactactgga agcatcgtgc atggatgatg 420
gatgtggtgt ctcttaatgt aggtggccgg aggatgtacg tgttaattgc gcgataagca 480
ctcagatcca accgcaaact acctccacac tgacacactg atagagagaa agagagacct 540
ccgacgactg ccgccgcaga tgagccacgt acgtatacga cgtctgccgg ccggctcagg 600
ctgccgccat caccctgctc gaaagtcgcg ttaggcggcg ccagctacat aggagtatct 660
agtctagcca gttagtatac tactactgcg ctgatgatga attaactctg catagatact 720
gtacttgcct ccctccaaca cccaaccacc tcctgctcgg ctcttaataa cttggacacg 780
gatcgatgcc atccaaggaa gaacacgacg acgacgacgg aacatccacc atgcaagctt 840
gcatccatac gccgatacgc gtgcatccat ccatccacca ttatttccat tttccaccga 900
tcacacgtac acaggcctat ttaaggagcg acatcccact gcaactctcc tcaccactca 960
tcaccagcta gctctagcaa agcacttgcc atctaccgac cgccgcattc caaacagccc 1020
gacgagctag cagagcggca ggcacctccc tcctcaagga ac 1062
<210> 2
<211> 1251
<212> DNA
<213> 双色高粱(Sorghum bicolor)
<400> 2
aaaatttgtt tgttttgaac aaaaattgag agatttgttt ttgagggtcg gacacatacg 60
agttttggga aaccgtcggt ggtacctgcc tgtgcacaca gaggtagcta gctaggttgg 120
ggacgggatg catgtatgta atacgtggcg gagcttccga tcgagacagc gacatgtggg 180
ctcccatact tgctggacaa cttaatcgct accactgctg caacttcaat ttgtgaatgt 240
gcatgtaacc tcctgcactg tactgatatc tctgtttctg gttgcggccg ggaggaatta 300
acgaagacta ctggaaggat tcatggatga tggacgatcc atatataatt gacgtcttaa 360
tgcaggaaga gtatgtgttt attgtgcgat aagcactcgg atccaactgc aaactacctc 420
acactgacac actagtgaga gagagtgaat acgcctccaa cttcatcaga tgagagccac 480
gtacgtccgt ccctgccgac tgccgccatc accctgcctg ctaagtcgtg ttaggcggct 540
gctatttaag ggcgtgttta aatgtcttta aaattctaaa tgtttataag atttctcgtc 600
gcatcgaatc tttagacgca tgtacgaaac ataaaatata tataaataaa aaaaaaataa 660
ttaactacat agtttgtata tgtaaatcgc gagataaagt acttgttgag tctagttagt 720
ctataattaa atatttattg ctaaatataa acgaaagtgt tatagtataa cataccctaa 780
taagttgcta ttgctgctgc aaatgaattc actctgcctc gatcatgccc tcatcaacta 840
accgctgtag tattatctgt atctatctgc ctcctgctcc caacacccaa ccacctcctg 900
cccagcaatt aacttcgacg gatggcgacg ataccgtccg tcgtccatgg aagatgatgt 960
tggaacatcc accatattca ttcattcata tgcatgcatc caccattcca ccgactgcct 1020
gcctgaaact gcatgcaatg caacaacacc gtgcatgcat gcacatctgt catcagcaat 1080
gacaagctac tgtagctagc tcccagatca gatcagatca gatcgatcgc aagcctgcct 1140
atttaaggag ccacactcca tctcactctc ctcaccagcg gctagcactt gctcacttgc 1200
attccaaagc tagtacaagc aagtctcaga cacccccaga acatcgacga c 1251
<210> 3
<211> 963
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 3
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ggcactgctg ctggcagcgg cggcgtgtcg acggccgtgt gccgccctag cggctcgcgg 120
tggacgccga cgccggagca gatcaggatc ctcaaggagc tctactacgg ctgcggcatc 180
cggtcgccca actcggagca gatccagcgc atcaccgcca tgctgcggca gcacggcaag 240
atcgagggca agaacgtctt ctactggttc cagaaccaca aggcccgcga gcgccagaag 300
cgccgcctca ccaacctcga cgtcaacgtg cccgtcgccg ccgacgacag cgcccaccgc 360
cttggcgtcc tctcgttgtc gccttcttca ggttgttcag gcgcggcgcc tccgtcgccc 420
accctcggct tctacgccgg cggcaatggc tccgctgtga tgctggacac gagttccgat 480
tggggcagcg ctgctgccat ggccactgag gcatgcttca tgcaggacta catgggcgtg 540
atgggcggcg cgtcaccgtg ggcatgctcc tcctcgtcgt cggaggaccc gatggcggcg 600
ctggcgctgg cgccgaaggt gacccgggcg cccgagacgc tccctctctt cccgaccggc 660
ggcggcggag acgataggca gcccccgcgg ccgcggcagt ctgtcccagc aggcgaggcc 720
atccgcggcg gcagcagcag cagcagctac cttccgttct ggggtgccgc gcccacccca 780
actggcagtg ccacttccgt tgcgatccag cagcaacacc agctgatgca gatgcaagag 840
cagtacagct tttacagcaa cgcccagctg ctgcccggca ccggcagcca ggatgcagca 900
gcaacatccc tggagctgag cctcagctcc tggtgctccc cttaccctgc agggaccatg 960
tga 963
<210> 4
<211> 320
<212> PRT
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 4
Met Ala Ala Asn Val Gly Ala Gly Arg Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ala
1 5 10 15
Gly Thr Gly Thr Gly Thr Ala Ala Gly Ser Gly Gly Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Cys Arg Pro Ser Gly Ser Arg Trp Thr Pro Thr Pro Glu Gln Ile
35 40 45
Arg Ile Leu Lys Glu Leu Tyr Tyr Gly Cys Gly Ile Arg Ser Pro Asn
50 55 60
Ser Glu Gln Ile Gln Arg Ile Thr Ala Met Leu Arg Gln His Gly Lys
65 70 75 80
Ile Glu Gly Lys Asn Val Phe Tyr Trp Phe Gln Asn His Lys Ala Arg
85 90 95
Glu Arg Gln Lys Arg Arg Leu Thr Asn Leu Asp Val Asn Val Pro Val
100 105 110
Ala Ala Asp Asp Ser Ala His Arg Leu Gly Val Leu Ser Leu Ser Pro
115 120 125
Ser Ser Gly Cys Ser Gly Ala Ala Pro Pro Ser Pro Thr Leu Gly Phe
130 135 140
Tyr Ala Gly Gly Asn Gly Ser Ala Val Met Leu Asp Thr Ser Ser Asp
145 150 155 160
Trp Gly Ser Ala Ala Ala Met Ala Thr Glu Ala Cys Phe Met Gln Asp
165 170 175
Tyr Met Gly Val Met Gly Gly Ala Ser Pro Trp Ala Cys Ser Ser Ser
180 185 190
Ser Ser Glu Asp Pro Met Ala Ala Leu Ala Leu Ala Pro Lys Val Thr
195 200 205
Arg Ala Pro Glu Thr Leu Pro Leu Phe Pro Thr Gly Gly Gly Gly Asp
210 215 220
Asp Arg Gln Pro Pro Arg Pro Arg Gln Ser Val Pro Ala Gly Glu Ala
225 230 235 240
Ile Arg Gly Gly Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Leu Pro Phe Trp Gly Ala
245 250 255
Ala Pro Thr Pro Thr Gly Ser Ala Thr Ser Val Ala Ile Gln Gln Gln
260 265 270
His Gln Leu Met Gln Met Gln Glu Gln Tyr Ser Phe Tyr Ser Asn Ala
275 280 285
Gln Leu Leu Pro Gly Thr Gly Ser Gln Asp Ala Ala Ala Thr Ser Leu
290 295 300
Glu Leu Ser Leu Ser Ser Trp Cys Ser Pro Tyr Pro Ala Gly Thr Met
305 310 315 320
<210> 5
<211> 978
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 5
atggcggcca atgcgggcgg cggtggagcg ggaggaggca gcggcagcgg cagcgtggct 60
gcgccggcgg tgtgccgccc cagcggctcg cggtggacgc cgacgccgga gcagatcagg 120
atgctgaagg agctctacta cggctgcggc atccggtcgc ccagctcgga gcagatccag 180
cgcatcaccg ccatgctgcg gcagcacggc aagatcgagg gcaagaacgt cttctactgg 240
ttccagaacc acaaggcccg cgagcgccag aagcgccgcc tcaccagcct cgacgtcaac 300
gtgcccgccg ccggcgcggc cgacgccacc accagccaac tcggcgtcct ctcgctgtcg 360
tcgccgcctt caggcgcggc gcctccctcg cccaccctcg gcttctacgc cgccggcaat 420
ggcggcggat cggctgggct gctggacacg agttccgact ggggcagcag cggcgctgcc 480
atggccaccg agacatgctt cctgcaggac tacatgggcg tgacggacac gggcagctcg 540
tcgcagtggc catgcttctc gtcgtcggac acgataatgg cggcggcggc ggccgcggcg 600
cgggtggcga cgacgcgggc gcccgagaca ctccctctct tcccgacctg cggcgacgac 660
gacgacgacg acagccagcc cccgccgcgg ccgcggcacg cagtcccagt cccggcaggc 720
gagaccatcc gcggcggcgg cggcagcagc agcagctact tgccgttctg gggtgccggt 780
gccgcgtcca caactgccgg cgccacttct tccgttgcga tccagcagca acaccagctg 840
caggagcagt acagctttta cagcaacagc acccagctgg ccggcaccgg cagccaagac 900
gtatcggctt cagcggccgc cctggagctg agcctcagct catggtgctc cccttaccct 960
gctgcaggga gcatgtga 978
<210> 6
<211> 325
<212> PRT
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 6
Met Ala Ala Asn Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Val Ala Ala Pro Ala Val Cys Arg Pro Ser Gly Ser Arg Trp
20 25 30
Thr Pro Thr Pro Glu Gln Ile Arg Met Leu Lys Glu Leu Tyr Tyr Gly
35 40 45
Cys Gly Ile Arg Ser Pro Ser Ser Glu Gln Ile Gln Arg Ile Thr Ala
50 55 60
Met Leu Arg Gln His Gly Lys Ile Glu Gly Lys Asn Val Phe Tyr Trp
65 70 75 80
Phe Gln Asn His Lys Ala Arg Glu Arg Gln Lys Arg Arg Leu Thr Ser
85 90 95
Leu Asp Val Asn Val Pro Ala Ala Gly Ala Ala Asp Ala Thr Thr Ser
100 105 110
Gln Leu Gly Val Leu Ser Leu Ser Ser Pro Pro Ser Gly Ala Ala Pro
115 120 125
Pro Ser Pro Thr Leu Gly Phe Tyr Ala Ala Gly Asn Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Ala Gly Leu Leu Asp Thr Ser Ser Asp Trp Gly Ser Ser Gly Ala Ala
145 150 155 160
Met Ala Thr Glu Thr Cys Phe Leu Gln Asp Tyr Met Gly Val Thr Asp
165 170 175
Thr Gly Ser Ser Ser Gln Trp Pro Cys Phe Ser Ser Ser Asp Thr Ile
180 185 190
Met Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Arg Val Ala Thr Thr Arg Ala Pro
195 200 205
Glu Thr Leu Pro Leu Phe Pro Thr Cys Gly Asp Asp Asp Asp Asp Asp
210 215 220
Ser Gln Pro Pro Pro Arg Pro Arg His Ala Val Pro Val Pro Ala Gly
225 230 235 240
Glu Thr Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ser Tyr Leu Pro Phe
245 250 255
Trp Gly Ala Gly Ala Ala Ser Thr Thr Ala Gly Ala Thr Ser Ser Val
260 265 270
Ala Ile Gln Gln Gln His Gln Leu Gln Glu Gln Tyr Ser Phe Tyr Ser
275 280 285
Asn Ser Thr Gln Leu Ala Gly Thr Gly Ser Gln Asp Val Ser Ala Ser
290 295 300
Ala Ala Ala Leu Glu Leu Ser Leu Ser Ser Trp Cys Ser Pro Tyr Pro
305 310 315 320
Ala Ala Gly Ser Met
325
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<211> 666
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 7
atggaggcgc tgagcgggcg ggtaggcgtc aagtgcgggc ggtggaaccc tacggcggag 60
caggtgaagg tcctgacgga gctcttccgc gcggggctgc ggacgcccag cacggagcag 120
atccagcgca tctccaccca cctcagcgcc ttcggcaagg tggagagcaa gaacgtcttc 180
tactggttcc agaaccacaa ggcccgcgag cgccaccacc acaagaagcg acgccgcggc 240
gcgtcgtcgt cctcccccga cagcggcagc ggcaggggaa gcaacaacga ggaagacggc 300
cgtggtgccg cctcgcagtc gcacgacgcc gacgccgacg ccgacctcgt gctgcaaccg 360
ccagagagca agcgggaggc cagaagctat ggccaccatc accggctcgt gacatgctac 420
gtcagggacg tggtggagca gcaggaggcg tcgccgtcgt gggagcggcc gacgagggag 480
gtggagacgc tagagctctt ccccctcaag tcgtacggcg acctcgaggc ggcggagaag 540
gtccggtcgt acgtcagagg aagcggcgcc accagcgagc agtgcaggga gttgtccttc 600
ttcgacgtcg tctccgccgg ccgggatccg ccgctcgagc tcaggctctg cagcttcggt 660
ccctag 666
<210> 8
<211> 221
<212> PRT
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 8
Met Glu Ala Leu Ser Gly Arg Val Gly Val Lys Cys Gly Arg Trp Asn
1 5 10 15
Pro Thr Ala Glu Gln Val Lys Val Leu Thr Glu Leu Phe Arg Ala Gly
20 25 30
Leu Arg Thr Pro Ser Thr Glu Gln Ile Gln Arg Ile Ser Thr His Leu
35 40 45
Ser Ala Phe Gly Lys Val Glu Ser Lys Asn Val Phe Tyr Trp Phe Gln
50 55 60
Asn His Lys Ala Arg Glu Arg His His His Lys Lys Arg Arg Arg Gly
65 70 75 80
Ala Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser Gly Ser Gly Arg Gly Ser Asn Asn
85 90 95
Glu Glu Asp Gly Arg Gly Ala Ala Ser Gln Ser His Asp Ala Asp Ala
100 105 110
Asp Ala Asp Leu Val Leu Gln Pro Pro Glu Ser Lys Arg Glu Ala Arg
115 120 125
Ser Tyr Gly His His His Arg Leu Val Thr Cys Tyr Val Arg Asp Val
130 135 140
Val Glu Gln Gln Glu Ala Ser Pro Ser Trp Glu Arg Pro Thr Arg Glu
145 150 155 160
Val Glu Thr Leu Glu Leu Phe Pro Leu Lys Ser Tyr Gly Asp Leu Glu
165 170 175
Ala Ala Glu Lys Val Arg Ser Tyr Val Arg Gly Ser Gly Ala Thr Ser
180 185 190
Glu Gln Cys Arg Glu Leu Ser Phe Phe Asp Val Val Ser Ala Gly Arg
195 200 205
Asp Pro Pro Leu Glu Leu Arg Leu Cys Ser Phe Gly Pro
210 215 220
<210> 9
<211> 975
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 9
atggagacgc cacagcagca atccgccgcc gccgccgccg ccgccgccca cgggcaggac 60
gacggcgggt cgccgccgat gtcgccggcc tccgccgcgg cggcggcgct ggcgaacgcg 120
cggtggaacc cgaccaagga gcaggtggcc gtgctggagg ggctgtacga gcacggcctg 180
cgcaccccca gcgcggagca gatacagcag atcacgggca ggctgcggga gcacggcgcc 240
atcgagggca agaacgtctt ctactggttc cagaaccaca aggcccgcca gcgccagagg 300
cagaagcagg acagcttcgc ctacttcagc aggctcctcc gccggccccc gccgctgccc 360
gtgctctcca tgccccccgc gccaccgtac catcacgccc gcgtcccggc gccgcccgcg 420
ataccgatgc cgatggcgcc gccgccgccc gctgcatgca acgacaacgg cggcgcgcgt 480
gtgatctaca ggaacccatt ctacgtggct gcgccgcagg cgccccctgc aaatgccgcc 540
tactactacc cacagccaca gcagcagcag cagcagcagg tgacagtcat gtaccagtac 600
ccgagaatgg aggtagccgg ccaggacaag atgatgacca gggccgcggc gcaccagcag 660
cagcagcaca acggcgccgg gcaacaaccg ggacgcgccg gccaccccag ccgcgagacg 720
ctccagctgt tcccgctcca gcccaccttc gtgctgcggc acgacaaggg gcgcgccgcc 780
aacggcagta ataacgactc cctgacgtcg acgtcgacgg cgactgcgac agcgacagcg 840
acagcgacag cgtccgcttc catctccgag gactcggatg gcctggagag cggcagctcc 900
ggcaagggcg tcgaggaggc gcccgcgctg ccgttctatg acttcttcgg gctccagtcc 960
tccggaggcc gctga 975
<210> 10
<211> 324
<212> PRT
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 10
Met Glu Thr Pro Gln Gln Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
1 5 10 15
His Gly Gln Asp Asp Gly Gly Ser Pro Pro Met Ser Pro Ala Ser Ala
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Leu Ala Asn Ala Arg Trp Asn Pro Thr Lys Glu Gln
35 40 45
Val Ala Val Leu Glu Gly Leu Tyr Glu His Gly Leu Arg Thr Pro Ser
50 55 60
Ala Glu Gln Ile Gln Gln Ile Thr Gly Arg Leu Arg Glu His Gly Ala
65 70 75 80
Ile Glu Gly Lys Asn Val Phe Tyr Trp Phe Gln Asn His Lys Ala Arg
85 90 95
Gln Arg Gln Arg Gln Lys Gln Asp Ser Phe Ala Tyr Phe Ser Arg Leu
100 105 110
Leu Arg Arg Pro Pro Pro Leu Pro Val Leu Ser Met Pro Pro Ala Pro
115 120 125
Pro Tyr His His Ala Arg Val Pro Ala Pro Pro Ala Ile Pro Met Pro
130 135 140
Met Ala Pro Pro Pro Pro Ala Ala Cys Asn Asp Asn Gly Gly Ala Arg
145 150 155 160
Val Ile Tyr Arg Asn Pro Phe Tyr Val Ala Ala Pro Gln Ala Pro Pro
165 170 175
Ala Asn Ala Ala Tyr Tyr Tyr Pro Gln Pro Gln Gln Gln Gln Gln Gln
180 185 190
Gln Val Thr Val Met Tyr Gln Tyr Pro Arg Met Glu Val Ala Gly Gln
195 200 205
Asp Lys Met Met Thr Arg Ala Ala Ala His Gln Gln Gln Gln His Asn
210 215 220
Gly Ala Gly Gln Gln Pro Gly Arg Ala Gly His Pro Ser Arg Glu Thr
225 230 235 240
Leu Gln Leu Phe Pro Leu Gln Pro Thr Phe Val Leu Arg His Asp Lys
245 250 255
Gly Arg Ala Ala Asn Gly Ser Asn Asn Asp Ser Leu Thr Ser Thr Ser
260 265 270
Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Ser Ala Ser Ile
275 280 285
Ser Glu Asp Ser Asp Gly Leu Glu Ser Gly Ser Ser Gly Lys Gly Val
290 295 300
Glu Glu Ala Pro Ala Leu Pro Phe Tyr Asp Phe Phe Gly Leu Gln Ser
305 310 315 320
Ser Gly Gly Arg
<210> 11
<211> 543
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 11
atgcatggtg tacgtacgta tctcttaatt ttcattgtat caaagctgca ggtgcaagtg 60
ccgccgacga cgacgacggt gggtggcacg acgcggtgga acccgtcgcc ggaccagata 120
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cagatcacgg aggagctcgg caagtacggc cggatcgagg gcaagaacgt cttctactgg 240
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agcaccacca ccactgcttc cacgctgcta ccaccagctg ctgaaaccaa ggagggagtg 360
gagacgaaaa aagaagaagc gtgtgaagat gcatcgagcc gcaagcggag gtgcagggcc 420
tgggaagatg tcgtcgtcca tggtggcggc gacgatgccg gtacggaggt agctgacgac 480
tactacaccg acgacgatgt gaccctggag ctcttcccgc tgcgtcctga tcaggggaaa 540
taa 543
<210> 12
<211> 180
<212> PRT
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 12
Met His Gly Val Arg Thr Tyr Leu Leu Ile Phe Ile Val Ser Lys Leu
1 5 10 15
Gln Val Gln Val Pro Pro Thr Thr Thr Thr Val Gly Gly Thr Thr Arg
20 25 30
Trp Asn Pro Ser Pro Asp Gln Ile Arg Val Leu Glu Met Leu Tyr Arg
35 40 45
Gly Gly Met Arg Thr Pro Asn Ser Phe Gln Ile Glu Gln Ile Thr Glu
50 55 60
Glu Leu Gly Lys Tyr Gly Arg Ile Glu Gly Lys Asn Val Phe Tyr Trp
65 70 75 80
Phe Gln Asn His Lys Ala Arg Glu Arg Gln Lys Gln Lys Arg Ala Ala
85 90 95
Leu Leu Thr Leu Ser Thr Thr Thr Thr Ala Ser Thr Leu Leu Pro Pro
100 105 110
Ala Ala Glu Thr Lys Glu Gly Val Glu Thr Lys Lys Glu Glu Ala Cys
115 120 125
Glu Asp Ala Ser Ser Arg Lys Arg Arg Cys Arg Ala Trp Glu Asp Val
130 135 140
Val Val His Gly Gly Gly Asp Asp Ala Gly Thr Glu Val Ala Asp Asp
145 150 155 160
Tyr Tyr Thr Asp Asp Asp Val Thr Leu Glu Leu Phe Pro Leu Arg Pro
165 170 175
Asp Gln Gly Lys
180
<210> 13
<211> 708
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 13
atggacacgg aggcgccgag cgggcgggtg ggcgtcaagt gcgggcggtg gaacccgacg 60
ccggagcagg tgaaggtcct gacggagctc ttccgcgcgg ggctgcggac gcccagcacg 120
gaccagatcc agcgcatctc cgcccacctc ggcgccttcg gcaaggtgga gagcaagaac 180
gtcttctact ggttccagaa ccacaaggcc cgcgagcgcc accaccacaa gaagaagaag 240
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gggagcagcg aggaagacgg ccgtgttgcc gccgccgccg acgccgacct cgtgctgcaa 360
ccatcgccgg gaagaagcaa aagcaaacgg gaggccagaa gaagctacgg cggcggccac 420
catcgccggc tcgttacatg taagcagcta gcgcacacac atcgctacgt cagggacgtt 480
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gagctcttcc ccctcaagtc gtacgtcgac ctcgaggcgg agaaggtccg gcggtacgtc 600
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<210> 14
<211> 235
<212> PRT
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 14
Met Asp Thr Glu Ala Pro Ser Gly Arg Val Gly Val Lys Cys Gly Arg
1 5 10 15
Trp Asn Pro Thr Pro Glu Gln Val Lys Val Leu Thr Glu Leu Phe Arg
20 25 30
Ala Gly Leu Arg Thr Pro Ser Thr Asp Gln Ile Gln Arg Ile Ser Ala
35 40 45
His Leu Gly Ala Phe Gly Lys Val Glu Ser Lys Asn Val Phe Tyr Trp
50 55 60
Phe Gln Asn His Lys Ala Arg Glu Arg His His His Lys Lys Lys Lys
65 70 75 80
Arg Arg Arg Arg Gly Ala Ala Met Ala Ser Ser Ser Ser Pro Asp Ser
85 90 95
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ser Glu Glu Asp Gly Arg Val Ala Ala Ala
100 105 110
Ala Asp Ala Asp Leu Val Leu Gln Pro Ser Pro Gly Arg Ser Lys Ser
115 120 125
Lys Arg Glu Ala Arg Arg Ser Tyr Gly Gly Gly His His Arg Arg Leu
130 135 140
Val Thr Cys Lys Gln Leu Ala His Thr His Arg Tyr Val Arg Asp Val
145 150 155 160
Val Glu Gln Gln Glu Glu Asp Thr Trp Glu Arg Pro Thr Arg Glu Ala
165 170 175
Val Glu Thr Leu Glu Leu Phe Pro Leu Lys Ser Tyr Val Asp Leu Glu
180 185 190
Ala Glu Lys Val Arg Arg Tyr Val Val Arg Ala Gly Ala Ser Glu Gln
195 200 205
Cys Arg Asp Phe Ser Phe Phe Asp Val Ser Gly Gly Arg Asp Pro Pro
210 215 220
Leu Leu Glu Leu Arg Leu Cys Ser Phe Gly Pro
225 230 235
<210> 15
<211> 1545
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 15
atggcctcct ccttcaacaa caaaaccagt cactggccga gcatgtttag gtccaagcac 60
gccgctgagc cgtggcaggc gcagcctgac atcagcagct cgccgccgtc gctcctctca 120
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tactcaggtg gcgaggagcg gaccccggat ccgaagcccc ggtggaaccc caggccggag 240
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ttgatccaga accaattcca ggtgctcgcc tcgcccgcgc aggcgccagc ttcctcgtcc 540
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acggcagcgg ccatgaactt tccagggccg ctcggcgcgg cgtgtgcgca gatgtactac 660
caagcccacc ccgtggcgcc ggtctcggcg ttgccagcgc acaaggtgca ggaccctgta 720
gcctccgacg agcccgtctt ccagccgtgg ccacaaggct acttcctgtc ggctgccgag 780
gtcgccagca ttctcggggg ccagtacagg cacgacgtgc ccgtgcagca gcagccaccg 840
gcgacgttgc ctgcgggagc gttcttgggg ctgtacaacg aggtgacaga gccgactgtc 900
actggtcaca ggacatgcgc ctggggcccg gcggggctcg ggcagttctg gcccgtgggc 960
ggcgctgatc accatcagca ccacaagcac aataccaccg cggcgaccaa caccgtagca 1020
agggacgcgg cgcacgagca cgccacgacg ctggggttgc tgcagtacgg cttcgaagct 1080
agcgcggcca tggagacggc ttccgcggcg gtgccccttg ctgcgtcgcc gggaaccgct 1140
gcgagcgtgg cgacggctgg gctcacatct ttgcctgcaa gtactaatgc tgttgtcgtc 1200
aactatgatc tgctgcaagg actggcagtg cccgggtccg ggtccggggc cgtcggtgtc 1260
agcaccggcg gtgcaccgcc tgtcgccgtt gccgcggcgc ccacggcagc gcaggagggc 1320
gtcgtcgtag cactgtgcat cacggacagc gtcacgggca agagcgtggc acacaacgtc 1380
gcggctgcca ggctcgacgt gagggcgcag ttcggcgagg cggccgttct gctccgcgcc 1440
gtcggcgacc gcggcgggct cgacctcgtg cccgtccccg tcgacgcgtt gggctgcaca 1500
gtggagccgc tccagcacgg tgccttttac tacgtgctgg tataa 1545
<210> 16
<211> 514
<212> PRT
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 16
Met Ala Ser Ser Phe Asn Asn Lys Thr Ser His Trp Pro Ser Met Phe
1 5 10 15
Arg Ser Lys His Ala Ala Glu Pro Trp Gln Ala Gln Pro Asp Ile Ser
20 25 30
Ser Ser Pro Pro Ser Leu Leu Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ser Thr Thr
35 40 45
Thr Ile Gly Arg Cys Leu Lys His Pro Leu Ser Gly Tyr Ser Gly Gly
50 55 60
Glu Glu Arg Thr Pro Asp Pro Lys Pro Arg Trp Asn Pro Arg Pro Glu
65 70 75 80
Gln Ile Arg Ile Leu Glu Ala Ile Phe Asn Ser Gly Met Val Asn Pro
85 90 95
Pro Arg Asp Glu Ile Pro Arg Ile Arg Met Arg Leu Gln Glu Tyr Gly
100 105 110
Gln Val Gly Asp Ala Asn Val Phe Tyr Trp Phe Gln Asn Arg Lys Ser
115 120 125
Arg Ser Lys Asn Lys Gln Arg Thr Gly Gln Leu Gly Leu Gly Leu Ala
130 135 140
Arg Ala Pro Gly Cys Gly Ala Ala Ala Pro Pro Val Thr Pro Gln Pro
145 150 155 160
Leu Ile Gln Asn Gln Phe Gln Val Leu Ala Ser Pro Ala Gln Ala Pro
165 170 175
Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Asp Arg Ser Ser Gly Ser Ser Lys
180 185 190
Pro Ala Pro Gln Pro Met Ser Ala Thr Ala Ala Ala Met Asn Phe Pro
195 200 205
Gly Pro Leu Gly Ala Ala Cys Ala Gln Met Tyr Tyr Gln Ala His Pro
210 215 220
Val Ala Pro Val Ser Ala Leu Pro Ala His Lys Val Gln Asp Pro Val
225 230 235 240
Ala Ser Asp Glu Pro Val Phe Gln Pro Trp Pro Gln Gly Tyr Phe Leu
245 250 255
Ser Ala Ala Glu Val Ala Ser Ile Leu Gly Gly Gln Tyr Arg His Asp
260 265 270
Val Pro Val Gln Gln Gln Pro Pro Ala Thr Leu Pro Ala Gly Ala Phe
275 280 285
Leu Gly Leu Tyr Asn Glu Val Thr Glu Pro Thr Val Thr Gly His Arg
290 295 300
Thr Cys Ala Trp Gly Pro Ala Gly Leu Gly Gln Phe Trp Pro Val Gly
305 310 315 320
Gly Ala Asp His His Gln His His Lys His Asn Thr Thr Ala Ala Thr
325 330 335
Asn Thr Val Ala Arg Asp Ala Ala His Glu His Ala Thr Thr Leu Gly
340 345 350
Leu Leu Gln Tyr Gly Phe Glu Ala Ser Ala Ala Met Glu Thr Ala Ser
355 360 365
Ala Ala Val Pro Leu Ala Ala Ser Pro Gly Thr Ala Ala Ser Val Ala
370 375 380
Thr Ala Gly Leu Thr Ser Leu Pro Ala Ser Thr Asn Ala Val Val Val
385 390 395 400
Asn Tyr Asp Leu Leu Gln Gly Leu Ala Val Pro Gly Ser Gly Ser Gly
405 410 415
Ala Val Gly Val Ser Thr Gly Gly Ala Pro Pro Val Ala Val Ala Ala
420 425 430
Ala Pro Thr Ala Ala Gln Glu Gly Val Val Val Ala Leu Cys Ile Thr
435 440 445
Asp Ser Val Thr Gly Lys Ser Val Ala His Asn Val Ala Ala Ala Arg
450 455 460
Leu Asp Val Arg Ala Gln Phe Gly Glu Ala Ala Val Leu Leu Arg Ala
465 470 475 480
Val Gly Asp Arg Gly Gly Leu Asp Leu Val Pro Val Pro Val Asp Ala
485 490 495
Leu Gly Cys Thr Val Glu Pro Leu Gln His Gly Ala Phe Tyr Tyr Val
500 505 510
Leu Val
<210> 17
<211> 2130
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 17
atggccactg tgaacaactg gctcgctttc tccctctccc cgcaggagct gccgccctcc 60
cagacgacgg actccacgct catctcggcc gccaccgccg accatgtctc cggcgatgtc 120
tgcttcaaca tcccccaaga ttggagcatg aggggatcag agctttcggc gctcgtcgcg 180
gagccgaagc tggaggactt cctcggcggc atctccttct ccgagcagca tcacaagtcc 240
aactgcaact tgatacccag cactagcagc acagtttgct acgcgagctc agctgctagc 300
accggctacc atcaccagct gtaccagccc accagctccg cgctccactt cgcggactcc 360
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gctaacggtg tcgctggcgc tgccagtgcc aacggcggcg gcatcgggct gtccatgatc 480
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gcgcaggggc tctctttgtc catgaacatg gcggggacga cccaaggcgc tgctggcatg 600
ccacttctcg ctggagagcg cgcacgggcg cccgagagtg tatcgacgtc agcacagggt 660
ggtgccgtcg tcgtcacggc gccgaaggag gatagcggtg gcagcggtgt tgccggtgct 720
ctagtagccg tgagcacgga cacgggtggc agcggcggcg cgtcggctga caacacggca 780
aggaagacgg tggacacgtt cgggcagcgc acgtcgattt accgtggcgt gacaaggcat 840
agatggactg ggagatatga ggcacatctt tgggataaca gttgcagaag ggaaggacaa 900
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gcttatgatc ttgctgctct gaagtactgg ggtgccacaa caacaacaaa ttttccagtg 1020
agtaactacg aaaaggagct cgaggacatg aagcacatga caaggcagga gtttgtagcg 1080
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aggcatcacc aacatggaag atggcaagca cggattggac gagttgcagg gaacaaggat 1200
ctttacttgg gcaccttcag cacccaggag gaggcagcgg aggcgtacga catcgcggcg 1260
atcaagttcc gcggcctcaa cgccgtcacc aacttcgaca tgagccgcta cgacgtgaag 1320
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gaggccgcag cgtccgcgca gcaccaccac gccggcgtgg tgagctacga cgtcggccgc 1440
atcgcctcgc agctcggcga cggcggagcc ctagcggcgg cgtacggcgc gcactaccac 1500
ggcgccgcct ggccgaccat cgcgttccag ccgggcgccg ccaccacagg cctgtaccac 1560
ccgtacgcgc agcagccaat gcgcggcggc gggtggtgca agcaggagca ggaccacgcg 1620
gtgatcgcgg ccgcgcacag cctgcaggac ctccaccact tgaacctggg cgcggccggc 1680
gcgcacgact ttttctcggc agggcagcag gccgccgccg cagctgcgat gcacggcctg 1740
gctagcatcg acagtgcgtc gctcgagcac agcaccggct ccaactccgt cgtctacaac 1800
ggcggggtcg gcgatagcaa cggcgccagc gccgttggca gcggcggtgg ctacatgatg 1860
ccgatgagcg ctgccggagc aaccactaca tcggcaatgg tgagccacga gcagatgcat 1920
gcacgggcct acgacgaagc caagcaggct gctcagatgg ggtacgagag ctacctggtg 1980
aacgcggaga acaatggtgg cggaaggatg tctgcatggg ggaccgtcgt ctctgcagcc 2040
gcggcggcag cagcaagcag caacgacaac attgccgccg acgtcggcca tggcggcgcg 2100
cagctcttca gtgtctggaa cgacacttaa 2130
<210> 18
<211> 709
<212> PRT
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 18
Met Ala Thr Val Asn Asn Trp Leu Ala Phe Ser Leu Ser Pro Gln Glu
1 5 10 15
Leu Pro Pro Ser Gln Thr Thr Asp Ser Thr Leu Ile Ser Ala Ala Thr
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Ala Asp His Val Ser Gly Asp Val Cys Phe Asn Ile Pro Gln Asp Trp
35 40 45
Ser Met Arg Gly Ser Glu Leu Ser Ala Leu Val Ala Glu Pro Lys Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Leu Gly Gly Ile Ser Phe Ser Glu Gln His His Lys Ser
65 70 75 80
Asn Cys Asn Leu Ile Pro Ser Thr Ser Ser Thr Val Cys Tyr Ala Ser
85 90 95
Ser Ala Ala Ser Thr Gly Tyr His His Gln Leu Tyr Gln Pro Thr Ser
100 105 110
Ser Ala Leu His Phe Ala Asp Ser Val Met Val Ala Ser Ser Ala Gly
115 120 125
Val His Asp Gly Gly Ser Met Leu Ser Ala Ala Ala Ala Asn Gly Val
130 135 140
Ala Gly Ala Ala Ser Ala Asn Gly Gly Gly Ile Gly Leu Ser Met Ile
145 150 155 160
Lys Asn Trp Leu Arg Ser Gln Pro Ala Pro Met Gln Pro Arg Ala Ala
165 170 175
Ala Ala Glu Gly Ala Gln Gly Leu Ser Leu Ser Met Asn Met Ala Gly
180 185 190
Thr Thr Gln Gly Ala Ala Gly Met Pro Leu Leu Ala Gly Glu Arg Ala
195 200 205
Arg Ala Pro Glu Ser Val Ser Thr Ser Ala Gln Gly Gly Ala Val Val
210 215 220
Val Thr Ala Pro Lys Glu Asp Ser Gly Gly Ser Gly Val Ala Gly Ala
225 230 235 240
Leu Val Ala Val Ser Thr Asp Thr Gly Gly Ser Gly Gly Ala Ser Ala
245 250 255
Asp Asn Thr Ala Arg Lys Thr Val Asp Thr Phe Gly Gln Arg Thr Ser
260 265 270
Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala
275 280 285
His Leu Trp Asp Asn Ser Cys Arg Arg Glu Gly Gln Thr Arg Lys Gly
290 295 300
Arg Gln Val Tyr Leu Gly Gly Tyr Asp Lys Glu Glu Lys Ala Ala Arg
305 310 315 320
Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Ala Thr Thr Thr Thr
325 330 335
Asn Phe Pro Val Ser Asn Tyr Glu Lys Glu Leu Glu Asp Met Lys His
340 345 350
Met Thr Arg Gln Glu Phe Val Ala Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly
355 360 365
Phe Ser Arg Gly Ala Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His His Gln
370 375 380
His Gly Arg Trp Gln Ala Arg Ile Gly Arg Val Ala Gly Asn Lys Asp
385 390 395 400
Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala Glu Ala Tyr
405 410 415
Asp Ile Ala Ala Ile Lys Phe Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe
420 425 430
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Pro Ile Gly Ser Ala Ala Lys Arg Leu Lys Glu Ala Glu Ala Ala Ala
450 455 460
Ser Ala Gln His His His Ala Gly Val Val Ser Tyr Asp Val Gly Arg
465 470 475 480
Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asp Gly Gly Ala Leu Ala Ala Ala Tyr Gly
485 490 495
Ala His Tyr His Gly Ala Ala Trp Pro Thr Ile Ala Phe Gln Pro Gly
500 505 510
Ala Ala Thr Thr Gly Leu Tyr His Pro Tyr Ala Gln Gln Pro Met Arg
515 520 525
Gly Gly Gly Trp Cys Lys Gln Glu Gln Asp His Ala Val Ile Ala Ala
530 535 540
Ala His Ser Leu Gln Asp Leu His His Leu Asn Leu Gly Ala Ala Gly
545 550 555 560
Ala His Asp Phe Phe Ser Ala Gly Gln Gln Ala Ala Ala Ala Ala Ala
565 570 575
Met His Gly Leu Ala Ser Ile Asp Ser Ala Ser Leu Glu His Ser Thr
580 585 590
Gly Ser Asn Ser Val Val Tyr Asn Gly Gly Val Gly Asp Ser Asn Gly
595 600 605
Ala Ser Ala Val Gly Ser Gly Gly Gly Tyr Met Met Pro Met Ser Ala
610 615 620
Ala Gly Ala Thr Thr Thr Ser Ala Met Val Ser His Glu Gln Met His
625 630 635 640
Ala Arg Ala Tyr Asp Glu Ala Lys Gln Ala Ala Gln Met Gly Tyr Glu
645 650 655
Ser Tyr Leu Val Asn Ala Glu Asn Asn Gly Gly Gly Arg Met Ser Ala
660 665 670
Trp Gly Thr Val Val Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ser Asn
675 680 685
Asp Asn Ile Ala Ala Asp Val Gly His Gly Gly Ala Gln Leu Phe Ser
690 695 700
Val Trp Asn Asp Thr
705
<210> 19
<211> 2040
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 19
atggcttcag cgaacaactg gctgggcttc tcgctctcgg gccaggataa cccgcagcct 60
aaccaggaca gctcgcctgc cgccggtatc gacatctccg gcgccagcga cttctatggc 120
ctgcccacgc agcagggctc cgacgggcat ctcggcgtgc cgggcctgcg ggacgatcac 180
gcttcttatg gtatcatgga ggcctacaac agggttcctc aagaaaccca agattggaac 240
atgaggggct tggactacaa cggcggtggc tcggagctct cgatgcttgt ggggtccagc 300
ggcggcggcg ggggcaacgg caagagggcc gtggaagaca gcgagcccaa gctcgaagat 360
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ggagtcccga tagccagcag cgccaatagc aacagcggga gcaacaccat ggagctctcc 480
atgatcaaga cctggctacg gaacaaccag gtggcccagc cccagccgcc agctccacat 540
cagccgcagc ctgaggaaat gagcaccgac gccagcggca gcagctttgg atgctcggat 600
tcgatgggaa ggaacagcat ggtggcggct ggtgggagct cgcagagcct ggcgctctcg 660
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tcggagagca catcgtcgga gaacaagcga gcgagcggtg ccatggattc gcccggcagc 780
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acaacaaatt tccctataag caactacgaa aaagagctag aagaaatgaa acatatgact 1080
agacaggagt acattgcata cctaagaaga aatagcagtg gattttctcg tggggcatca 1140
aagtatcgtg gagtaactag acatcatcag catgggagat ggcaagcaag gatagggaga 1200
gttgcaggaa acaaggatct ttacttgggc acattcagca ccgaggagga ggcggcggag 1260
gcctacgaca tcgccgcgat caagttccgc ggtctcaacg ccgtcaccaa cttcgacatg 1320
agccgctacg acgtgaagag catcctcgag agcagcacac tgcctgtcgg cggtgcggcc 1380
aggcgcctca aggacgccgt ggaccacgtg gaggccggcg ccaccatctg gcgcgccgac 1440
atggacggcg ccgtgatctc ccagctggcc gaagccggga tgggcggcta cgcctcgtac 1500
ggccaccacg gctggccgac catcgcgttc cagcagccgt cgccgctctc cgtccactac 1560
ccgtacggcc agccgtcccg cgggtggtgc aaacccgagc aggacgcggc cgccgccgcg 1620
gcgcacagcc tgcaggacct ccagcagctg cacctcggca gcgcggccca caacttcttc 1680
caggcgtcgt cgagctccac agtctacaac ggcggcgccg gcgccagtgg tgggtaccag 1740
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caggggcaca gcagcacggc caaccagggg agcacgtgca gctacgggga cgaccaccag 1860
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gcgagggcga acgggtacgc taacaactgg agctctcctt tcaacaacgg catggggtga 2040
<210> 20
<211> 679
<212> PRT
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 20
Met Ala Ser Ala Asn Asn Trp Leu Gly Phe Ser Leu Ser Gly Gln Asp
1 5 10 15
Asn Pro Gln Pro Asn Gln Asp Ser Ser Pro Ala Ala Gly Ile Asp Ile
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Ser Gly Ala Ser Asp Phe Tyr Gly Leu Pro Thr Gln Gln Gly Ser Asp
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Gly His Leu Gly Val Pro Gly Leu Arg Asp Asp His Ala Ser Tyr Gly
50 55 60
Ile Met Glu Ala Tyr Asn Arg Val Pro Gln Glu Thr Gln Asp Trp Asn
65 70 75 80
Met Arg Gly Leu Asp Tyr Asn Gly Gly Gly Ser Glu Leu Ser Met Leu
85 90 95
Val Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Asn Gly Lys Arg Ala Val Glu
100 105 110
Asp Ser Glu Pro Lys Leu Glu Asp Phe Leu Gly Gly Asn Ser Phe Val
115 120 125
Ser Asp Gln Asp Gln Ser Gly Gly Tyr Leu Phe Ser Gly Val Pro Ile
130 135 140
Ala Ser Ser Ala Asn Ser Asn Ser Gly Ser Asn Thr Met Glu Leu Ser
145 150 155 160
Met Ile Lys Thr Trp Leu Arg Asn Asn Gln Val Ala Gln Pro Gln Pro
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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Ser Glu Ser Thr Ser Ser Glu Asn Lys Arg Ala Ser Gly Ala Met Asp
245 250 255
Ser Pro Gly Ser Ala Val Glu Ala Val Pro Arg Lys Ser Ile Asp Thr
260 265 270
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275 280 285
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Gly Thr Thr Thr Thr Thr Asn Phe Pro Ile Ser Asn Tyr Glu Lys Glu
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Leu Glu Ser Ser Thr Leu Pro Val Gly Gly Ala Ala Arg Arg Leu Lys
450 455 460
Asp Ala Val Asp His Val Glu Ala Gly Ala Thr Ile Trp Arg Ala Asp
465 470 475 480
Met Asp Gly Ala Val Ile Ser Gln Leu Ala Glu Ala Gly Met Gly Gly
485 490 495
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500 505 510
Pro Ser Pro Leu Ser Val His Tyr Pro Tyr Gly Gln Pro Ser Arg Gly
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Trp Cys Lys Pro Glu Gln Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala His Ser Leu
530 535 540
Gln Asp Leu Gln Gln Leu His Leu Gly Ser Ala Ala His Asn Phe Phe
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Gly Gly Tyr Gln Gly Leu Gly Gly Gly Ser Ser Phe Leu Met Pro Ser
580 585 590
Ser Thr Val Val Ala Ala Ala Asp Gln Gly His Ser Ser Thr Ala Asn
595 600 605
Gln Gly Ser Thr Cys Ser Tyr Gly Asp Asp His Gln Glu Gly Lys Leu
610 615 620
Ile Gly Tyr Asp Ala Ala Met Val Ala Thr Ala Ala Gly Gly Asp Pro
625 630 635 640
Tyr Ala Ala Ala Arg Asn Gly Tyr Gln Phe Ser Gln Gly Ser Gly Ser
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675
<210> 21
<211> 2133
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 21
atggccactg tgaacaactg gctcgctttc tccctctccc cgcaggagct gccgccctcc 60
cagacgacgg actccacact catctcggcc gccaccgccg accatgtctc cggcgatgtc 120
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gagccgaagc tggaggactt cctcggcggc atctccttct ccgagcagca tcacaaggcc 240
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tccgtaatgg tggcctcctc ggccggtgtc cacgacggcg gtgccatgct cagcgcggcc 420
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gcaaggaaga cggtggacac gttcgggcag cgcacgtcga tttaccgtgg cgtgacaagg 840
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caaactcgta agggtcgtca agtctattta ggtggctatg ataaagagga gaaagctgct 960
agggcttatg atcttgctgc tctgaagtac tggggtgcca caacaacaac aaattttcca 1020
gtgagtaact acgaaaagga gctcgaggac atgaagcaca tgacaaggca ggagtttgta 1080
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actaggcatc accaacatgg aagatggcaa gcacggattg gacgagttgc agggaacaag 1200
gatctttact tgggcacctt cagcacccag gaggaggcag cggaggcgta cgacatcgcg 1260
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gccgaggccg cagcgtccgc gcagcaccac cacgccggcg tggtgagcta cgacgtcggc 1440
cgcatcgcct cgcagctcgg cgacggcgga gccctggcgg cggcgtacgg cgcgcactac 1500
cacggcgccg cctggccgac catcgcgttc cagccgggcg ccgccagcac aggcctgtac 1560
cacccgtacg cgcagcagcc aatgcgcggc ggcgggtggt gcaagcagga gcaggaccac 1620
gcggtgatcg cggccgcgca cagcctgcag gacctccacc acctgaacct gggcgcggcc 1680
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catgcacggg cctacgacga agccaagcag gctgctcaga tggggtacga gagctacctg 1980
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gccgcggcgg cagcagcaag cagcaacgac aacatggccg ccgacgtcgg ccatggcggc 2100
gcgcagctct tcagtgtctg gaacgacact taa 2133
<210> 22
<211> 25183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
ggatcttttt ggaatgctgc tccgtcgtca ggctttccga cgtttgggtg gttgaacaga 60
agtcattatc gcacggaatg ccaagcactc ccgaggggaa ccctgtggtt ggcatgcaca 120
tacaaatgga cgaacggata aaccttttca cgccctttta aatatccgat tattctaata 180
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ccccgccgat gacgcgggac aagccgtttt acgtttggaa ctgacagaac cgcaacgttg 360
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aagagcggtt actaccggtt cactagctag ctgctaatcg agctagttac cctatgaggt 540
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atcaactttg tatagaaaag ttgggccgaa ttcgagctcg gtacggccag aatggcccgg 720
accgaagctt cggccgcaca ctgatagttt aaactgaagg cgggaaacga caatctgatc 780
atgagcggag aattaaggga gtcacgttat gacccccgcc gatgacgcgg gacaagccgt 840
tttacgtttg gaactgacag aaccgcaacg ttgaaggagc cactcagccg cgggtttctg 900
gagtttaatg agctaagcac atacgtcaga aaccattatt gcgcgttcaa aagtcgccta 960
aggtcactat cagctagcaa atatttcttg tcaaaaatgc tccactgacg ttccataaat 1020
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gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg gcggtgtgcc 1200
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cggccgacgc caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg ccgccttcag 1500
gcgcggcgcc tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc ggcggatcgg 1560
ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg gccaccgaga 1620
catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg cagtggccac 1680
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agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc agcagcagcc gccgccctgg 1980
agctgagcct cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc agggagtatg tgagagcaac 2040
gcgagctgcc actgctcttc actggtaccg ttaacagatc attcgacaaa gcagcattag 2100
tccgttgatc ggtggaagac cactcgtcag tgttgagttg aatgtttgat caataaaata 2160
cggcaatgct gtaagggttg ttttttatgc cattgataat acactgtact gttcagttgt 2220
tgaactctat ttcttagcca tgccaagtgc ttttcttatt ttgaataaca ttacagcaaa 2280
aagttgaaag acaaaaaaaa aaacccccga acagagtgct ttgggtccca agcttcttta 2340
gactgtgttc ggcgttcccc ctaaatttct ccccctatat ctcactcact tgtcacatca 2400
gcgttctctt tccccctata tctccacgct ctacagcagt tccacctata tcaaacctct 2460
ataccccacc acaacaatat tatatacttt catcttcaac taactcatgt accttccaat 2520
ttttttctac taataattat ttacgtgcac agaaacttag caaggagaga gagagcgggg 2580
tgacccacct tgctagttgg atattacctc ttctcttcaa agtatccttg aacgctcacc 2640
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tcggtgacca agcttggcgc gatcaagctt atcgataccg tcgacctcga agcttggtca 2760
cccggtccgg gcctagaagg ccagcttcaa gtttgtacaa aaaagcaggc tccggccaga 2820
atggcccgga ccgggttacc gaattcttac cctagctccc tgcggctgtt acgcggtccc 2880
ccatcaatct tctgttcttg cggttgtagc ctgtgtaaca gtgctagagt atgtatgata 2940
aataggtttt aagtctgctt acatgacatt ttttattgtg gaagagacat ataaaaatta 3000
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taatgaaaca ggaagagagt agatttatct aagagccaac tttattatat gaatgtgttt 3120
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tattattatt aattaaactc gctctaagga ggaaagtggg aggaagggac gaggacgaag 3240
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gacacactga tagagagaaa gagagacctc cgacgactgc cgccgcagat gagccacgta 3420
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taggcggcgc cagctacata ggagtatcta gtctagccag ttagtatact actactgcgc 3540
tgatgatgaa ttaactctgc atagatactg tacttgcctc cctccaacac ccaaccacct 3600
cctgctcggc tcttaataac ttggacacgg atcgatgcca tccaaggaag aacacgacga 3660
cgacgacgga acatccacca tgcaagcttg catccatacg ccgatacgcg tgcatccatc 3720
catccaccat tatttccatt ttccaccgat cacacgtaca caggcctatt taaggagcga 3780
catcccactg caactctcct caccactcat caccagctag ctctagcaaa gcacttgcca 3840
tctaccgacc gccgcattcc aaacagcccg acgagctagc agagcggcag gcacctccct 3900
cctcaaggaa cccatggcca ctgtgaacaa ctggctcgct ttctccctct ccccgcagga 3960
gctgccgccc tcccagacga cggactccac actcatctcg gccgccaccg ccgaccatgt 4020
ctccggcgat gtctgcttca acatccccca agattggagc atgaggggat cagagctttc 4080
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gcatcacaag gccaactgca acatgatacc cagcactagc agcacagttt gctacgcgag 4200
ctcaggtgct agcaccggct accatcacca gctgtaccac cagcccacca gctcagcgct 4260
ccacttcgcg gactccgtaa tggtggcttc ctcggccggt gtccacgacg gcggtgccat 4320
gctcagcgcg gccgccgcta acggtgtcgc tggcgctgcc agtgccaacg gcggcggcat 4380
cgggctgtcc atgattaaga actggctgcg gagccaaccg gcgcccatgc agccgagggt 4440
ggcggcggct gagggcgcgc aggggctctc tttgtccatg aacatggcgg ggacgaccca 4500
aggcgctgct ggcatgccac ttctcgctgg agagcgcgca cgggcgcccg agagtgtatc 4560
gacgtcagca cagggtggag ccgtcgtcgt cacggcgccg aaggaggata gcggtggcag 4620
cggtgttgcc ggcgctctag tagccgtgag cacggacacg ggtggcagcg gcggcgcgtc 4680
ggctgacaac acggcaagga agacggtgga cacgttcggg cagcgcacgt cgatttaccg 4740
tggcgtgaca aggcatagat ggactgggag atatgaggca catctttggg ataacagttg 4800
cagaagggaa gggcaaactc gtaagggtcg tcaagtctat ttaggtggct atgataaaga 4860
ggagaaagct gctagggctt atgatcttgc tgctctgaag tactggggtg ccacaacaac 4920
aacaaatttt ccagtgagta actacgaaaa ggagctcgag gacatgaagc acatgacaag 4980
gcaggagttt gtagcgtctc tgagaaggaa gagcagtggt ttctccagag gtgcatccat 5040
ttacagggga gtgactaggc atcaccaaca tggaagatgg caagcacgga ttggacgagt 5100
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ctacgacgtc ggccgcatcg cctcgcagct cggcgacggc ggagccctgg cggcggcgta 5400
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cacaggcctg taccacccgt acgcgcagca gccaatgcgc ggcggcgggt ggtgcaagca 5520
ggagcaggac cacgcggtga tcgcggccgc gcacagcctg caggacctcc accacctgaa 5580
cctgggcgcg gccggcgcgc acgacttttt ctcggcaggg cagcaggccg ccgccgctgc 5640
gatgcacggc ctgggtagca tcgacagtgc gtcgctcgag cacagcaccg gctccaactc 5700
cgtcgtctac aacggcgggg tcggcgacag caacggcgcc agcgccgtcg gcggcagtgg 5760
cggtggctac atgatgccga tgagcgctgc cggagcaacc actacatcgg caatggtgag 5820
ccacgagcag gtgcatgcac gggcctacga cgaagccaag caggctgctc agatggggta 5880
cgagagctac ctggtgaacg cggagaacaa tggtggcgga aggatgtctg catgggggac 5940
tgtcgtgtct gcagccgcgg cggcagcagc aagcagcaac gacaacatgg ccgccgacgt 6000
cgggcatggc ggcgcgcagc tcttcagtgt ctggaacgac acttaagcgt acctagtggt 6060
acctgacatc ttatagtctg caacctctcg tgtctgaatt cctatcttta tcaagtgtta 6120
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attcatctag tctgattttt cgtgacttgt atcggtttta ttggattcat ccaacatata 6240
tcaataaaaa atgagttgtg tttcctttct tcctagttca gttaaaatta tttccctcct 6300
gcgcttgtgc tgtaattgtc tgtgtacctg ttgtttgtga ctgtgttagt tcccttggat 6360
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gcacagggtc aggaaaacaa tgagcgcgaa gatcttacct tcatcgaaaa ggcgcgcttc 19980
gcacatcgcc tgaacaggca gttttctcga gagattgtca tcgccgcgat gtcgatcgac 20040
aagagcaatt tgtccaagat gcttctgctc gttgacgccc tcccctctga actgaccgat 20100
gctattggtg ccgctcctgg tgttggacgg ccgagttggc aacaacttgc cgagctgatt 20160
gagaaagttt cttcaccggc cgacgtggct aaatatgcta tgtcggagga agttcaagcg 20220
ctgccatcgg cagaacgatt caaggcggtg atcgctagtc tgaagcccag tcgggttgcg 20280
cgtggacttc ccgaggtcat ggccacccca gacggcacca gaattgcaca ggtgacgcag 20340
agcaaggcca aactggaaat cacgattgac aggaaggcga cgcccgattt tgcgaccttc 20400
gtgctcgatc atgtgccagc gctgtatcaa gcgtaccacg ctgagaacca acggaaacgg 20460
ggagagtaaa ccgcaaaaga aaagagcccc ctcaacgtcg ccgtcgcgga agcccttctg 20520
tctctctagc gcgaacagaa tcgcatttcc tcgaatcctc gtcaagagtt tttagcgccg 20580
ttttggtgag ctgatttcct ttgcctgctg aaaggtgaaa gatgatgcag acaggaagtg 20640
taacgacgcc attcgggcgg cggccaatga cgcttgcgct tgtgcggcgc cagacggcgc 20700
tggccgatat caaacaaggc aagacagcgg acaagtggaa ggtctttaga gacgcgtccg 20760
cggctatgga actacttgga atccagtcca acagtcttgc cgtccttgat gcgctattga 20820
gctttcaccc ggaaacggag ttgcgtcagg aggcacagct gatcgtcttc ccgtcgaatg 20880
ctcagcttgc ccttcgggcg catgggatgg ctggcgcgac tttgcgtagg cacatcgcca 20940
tgctcgtgga gtcaggcttg atcgtccgga aggatagcgc caacggaaag cgttacgctc 21000
gtaaggatgg cgctggtcag atcgagcgcg cgtttggctt cgatttgtct ccgcttctcg 21060
cgcggtcgga agagctagcg atgatggcac agcaggtgat ggccgatcga gcagcattca 21120
ggatggccaa agaaagtctg acgatttgcc gacgggacgt tcggaagcta attacggcag 21180
ctatggaaga gggagcggag ggcgactggc aagctgtcga ggaagtctat gtggaacttg 21240
tgggtagaat tccacgcgcc ccgacgcttg ctgatgtaga gtcaattctc gaagagatgt 21300
ggatgctcca ggaagagata atcaaccggt tggaaattag agacaattca gaaaataata 21360
gcaccaatgc tgcccagagc gagcagcaca tacagaattc aaaacccgaa tccgttaatg 21420
aacttgaacc tcgctctgaa aaggagcagg gcgctaagcc gagtgaaata gaccgggcaa 21480
ggagcgagcc gataaaagcg ttccccctcg ggatgatcct gaaagcatgc ccgaccattg 21540
gcaactatgg gccgagcggt gcggttgcta gctggcgtga cctcatgtcg gctgcggtgg 21600
tggttcggtc tatgctgggg gtcagcccgt cggcttacca agacgcgtgt gaggcaatgg 21660
gaccggagaa tgcggcagca gcgatggcgt gcattttgga gcgagcgaac ttcatcaatt 21720
cgcccggggg ctatctccga gatctgacac ggcggagcga gcttgggaag ttttcacttg 21780
gcccgatgat aatggcgctc ttgaaggcta gcgggcaggg gacgttgcgg tttggctaga 21840
attagcgagt atggagcagg atggtctgtg gtcagctgac cacagaccta ataggttgaa 21900
aacatgagcg ttttttggat gatcgacaga ccatccgatt cccggagtac caagcgtgct 21960
ctgatgggag cgataacatt actcaacaag cacgaaggcc ccatgccgat cgttgatcgt 22020
gaaggagagc ctgctctaca tgcggcggta ttttgccggc cgaggcatgt agtcgcggag 22080
cactgcctat ttactgccct aggcacaaac gttgactctt ggatcgagct ggcagacaaa 22140
gcaataaccc acacagagga cgattaatgg ctgacgaaga gatccagaat ccgccggacg 22200
gtactgctgc tgccgaagtt gagccggctg ctcctagagg tagaagagca aagaaagcac 22260
cagccgaaac agcccgcacg ggatcgttca aatccgtgaa gccgaaaacc cgcggcctca 22320
gcaaccgaga aaaactggag aagatcggtc aaatcgaagc tcaggtcgct ggcggcgcaa 22380
ccttgaagga cgccgttaag atcgtgggta tttccgttca gacctattat caatggaaga 22440
gagctgcggt tcaacctgtc tcacagaatc cggccgtgtc tgtttcagtt gacgatgaac 22500
tcggcgagtt catccaactc gaggaggaaa atatgcatgg catgcccgtt ccatacagaa 22560
gctgggcgaa caaacgatgc tcgccttcca gaaaaccgag gatgcgaacc acttcatccg 22620
gggtcagcac caccggcaag cgccgcgacg gccgaggtct tccgatctcc tgaagccagg 22680
gcagatccgt gcacagcacc ttgccgtaga agaacagcaa ggccgccaat gcctgacgat 22740
gcgtggagac cgaaaccttg cgctcgttcg ccagccagga cagaaatgcc tcgacttcgc 22800
tgctgcccaa ggttgccggg tgacgcacac cgtggaaacg gatgaaggca cgaacccagt 22860
ggacataagc ctgttcggtt cgtaagctgt aatgcaagta gcgtatgcgc tcacgcaact 22920
ggtccagaac cttgaccgaa cgcagcggtg gtaacggcgc agtggcggtt ttcatggctt 22980
gttatgactg tttttttggg gtacagtcta tgcctcgggc atccaagcag caagcgcgtt 23040
acgccgtggg tcgatgtttg atgttatgga gcagcaacga tgttacgcag cagggcagtc 23100
gccctaaaac aaagttaaac atcatgaggg aagcggtgat cgccgaagta tcgactcaac 23160
tatcagaggt agttggcgtc atcgagcgcc atctcgaacc gacgttgctg gccgtacatt 23220
tgtacggctc cgcagtggat ggcggcctga agccacacag tgatattgat ttgctggtta 23280
cggtgacggt aaggcttgat gaaacaacgc ggcgagcttt gatcaacgac cttttggaaa 23340
cttcggcttc ccctggagag agcgagattc tccgcgctgt agaagtcacc attgttgtgc 23400
acgacgacat cattccgtgg cgttatccag ctaagcgcga actgcaattt ggagaatggc 23460
agcgcaatga cattcttgca ggtatcttcg agccagccac gatcgacatt gatctggcta 23520
tcttgctgac aaaagcaaga gaacatagcg ttgccttggt aggtccagcg gcggaggaac 23580
tctttgatcc ggttcctgaa caggatctat ttgaggcgct aaatgaaacc ttaacgctat 23640
ggaactcgcc gcccgactgg gctggcgatg agcgaaatgt agtgcttacg ttgtcccgca 23700
tttggtacag cgcagtaacc ggcaaaatcg cgccgaagga tgtcgctgcc gactgggcaa 23760
tggagcgcct gccggcccag tatcagcccg tcatacttga agctagacag gcttatcttg 23820
gacaagaaga agatcgcttg gcctcgcgcg cagatcagtt ggaagaattt gtccactacg 23880
tgaaaggcga gatcaccaag gtagtcggca aataatgtct aacaattcgt tcaagccgac 23940
gccgcttcgc ggcgcggctt aactcaagcg ttagatgcac tatacgtaac caactagtgc 24000
gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg 24060
tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa 24120
agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg 24180
cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 24240
ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 24300
tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 24360
gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 24420
gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 24480
gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 24540
ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 24600
ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 24660
ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 24720
gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc 24780
ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt 24840
tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagcg 24900
taccgacgat cttgctgcgt tcggatattt tcgtggagtt cccgccacag acccggattg 24960
aaggcgagat ccagcaactc gcgccagatc atcctgtgac ggaactttgg cgcgtgatga 25020
ctggccagga cgtcggccga aagagcgaca agcagatcac gcttttcgac agcgtcggat 25080
ttgcgatcga ggatttttcg gcgctgcgct acgtccgcga ccgcgttgag ggatcaagcc 25140
acagcagccc actcgacctt ctagccgacc cagacgagcc aag 25183
<210> 23
<211> 25183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 23
ggatcttttt ggaatgctgc tccgtcgtca ggctttccga cgtttgggtg gttgaacaga 60
agtcattatc gcacggaatg ccaagcactc ccgaggggaa ccctgtggtt ggcatgcaca 120
tacaaatgga cgaacggata aaccttttca cgccctttta aatatccgat tattctaata 180
aacgctcttt tctcttaggt ttacccgcca atatatcctg tcaaacactg atagtttaaa 240
ctgaaggcgg gaaacgacaa tctgatcatg agcggagaat taagggagtc acgttatgac 300
ccccgccgat gacgcgggac aagccgtttt acgtttggaa ctgacagaac cgcaacgttg 360
aaggagccac tcagcaagct ggtacgattg taatacgact cactataggg cgaattgagc 420
gctgtttaaa cgctcttcaa ctggaagagc ggttacgctg tttaaacgct cttcaactgg 480
aagagcggtt actaccggtt cactagctag ctgctaatcg agctagttac cctatgaggt 540
gacatgaagc gctcacggtt actatgacgg ttagcttcac gactgttggt ggcagtagcg 600
tacgacttag ctatagttcc ggacttaccc ttaagcgatt taaatcctga ggatatcgct 660
atcaactttg tatagaaaag ttgggccgaa ttcgagctcg gtacggccag aatggcccgg 720
accgaagctt cggccgcaca ctgatagttt aaactgaagg cgggaaacga caatctgatc 780
atgagcggag aattaaggga gtcacgttat gacccccgcc gatgacgcgg gacaagccgt 840
tttacgtttg gaactgacag aaccgcaacg ttgaaggagc cactcagccg cgggtttctg 900
gagtttaatg agctaagcac atacgtcaga aaccattatt gcgcgttcaa aagtcgccta 960
aggtcactat cagctagcaa atatttcttg tcaaaaatgc tccactgacg ttccataaat 1020
tcccctcggt atccaattac tctatcagtg atagagtact ggcgcgccac tctatcagtg 1080
atagagtcta gaggatcgct caggaaggcc gctgagatag aggcatggcg gccaatgcgg 1140
gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg gcggtgtgcc 1200
gccccagcgg ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat caggatgctg aaggagctct 1260
actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat ccagcgcatc accgccatgc 1320
tgcggcagca cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag aaccacaagg 1380
cccgcgagcg ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt caacgtgccc gccgccggcg 1440
cggccgacgc caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg ccgccttcag 1500
gcgcggcgcc tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc ggcggatcgg 1560
ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg gccaccgaga 1620
catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg cagtggccac 1680
gcttctcgtc gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc gcgggcggcg acgacgcggg 1740
cgcccgagac gctccctctc ttcccgacct gcggcgacga cggcggcagc ggtagcagca 1800
gctacttgcc gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg cgccacttct tccgttgcga 1860
tccagcagca acaccagctg caggagcagt acagctttta cagcaacagc aacagcaccc 1920
agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc agcagcagcc gccgccctgg 1980
agctgagcct cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc agggagtatg tgagagcaac 2040
gcgagctgcc actgctcttc actggtaccg ttaacagatc attcgacaaa gcagcattag 2100
tccgttgatc ggtggaagac cactcgtcag tgttgagttg aatgtttgat caataaaata 2160
cggcaatgct gtaagggttg ttttttatgc cattgataat acactgtact gttcagttgt 2220
tgaactctat ttcttagcca tgccaagtgc ttttcttatt ttgaataaca ttacagcaaa 2280
aagttgaaag acaaaaaaaa aaacccccga acagagtgct ttgggtccca agcttcttta 2340
gactgtgttc ggcgttcccc ctaaatttct ccccctatat ctcactcact tgtcacatca 2400
gcgttctctt tccccctata tctccacgct ctacagcagt tccacctata tcaaacctct 2460
ataccccacc acaacaatat tatatacttt catcttcaac taactcatgt accttccaat 2520
ttttttctac taataattat ttacgtgcac agaaacttag caaggagaga gagagcgggg 2580
tgacccacct tgctagttgg atattacctc ttctcttcaa agtatccttg aacgctcacc 2640
ggttatcaaa tctctacact atagctctgt agtcttgcta gatagttagt tctttagctc 2700
tcggtgacca agcttggcgc gatcaagctt atcgataccg tcgacctcga agcttggtca 2760
cccggtccgg gcctagaagg ccagcttcaa gtttgtacaa aaaagcaggc tccggccaga 2820
atggcccgga ccgggttacc gaattcttac cctagctccc tgcggctgtt acgcggtccc 2880
ccatcaatct tctgttcttg cggttgtagc ctgtgtaaca gtgctagagt atgtatgata 2940
aataggtttt aagtctgctt acatgacatt ttttattgtg gaagagacat ataaaaatta 3000
gagagagtgg ttctcatgca acggcggacg gcccggtgct aaaagagctt caagacaaaa 3060
taatgaaaca ggaagagagt agatttatct aagagccaac tttattatat gaatgtgttt 3120
attgttggct ttagatgata tggtaaggag ttagagctaa taatagatag gctctattat 3180
tattattatt aattaaactc gctctaagga ggaaagtggg aggaagggac gaggacgaag 3240
actactggaa gcatcgtgca tggatgatgg atgtggtgtc tcttaatgta ggtggccgga 3300
ggatgtacgt gttaattgcg cgataagcac tcagatccaa ccgcaaacta cctccacact 3360
gacacactga tagagagaaa gagagacctc cgacgactgc cgccgcagat gagccacgta 3420
cgtatacgac gtctgccggc cggctcaggc tgccgccatc accctgctcg aaagtcgcgt 3480
taggcggcgc cagctacata ggagtatcta gtctagccag ttagtatact actactgcgc 3540
tgatgatgaa ttaactctgc atagatactg tacttgcctc cctccaacac ccaaccacct 3600
cctgctcggc tcttaataac ttggacacgg atcgatgcca tccaaggaag aacacgacga 3660
cgacgacgga acatccacca tgcaagcttg catccatacg ccgatacgcg tgcatccatc 3720
catccaccat tatttccatt ttccaccgat cacacgtaca caggcctatt taaggagcga 3780
catcccactg caactctcct cactctatca gtgatagagt ctctagcaaa gcacttgcca 3840
tctaccgacc gccgcattcc aaacagcccg acgagctagc agagcggcag gcacctccct 3900
cctcaaggaa cccatggcca ctgtgaacaa ctggctcgct ttctccctct ccccgcagga 3960
gctgccgccc tcccagacga cggactccac actcatctcg gccgccaccg ccgaccatgt 4020
ctccggcgat gtctgcttca acatccccca agattggagc atgaggggat cagagctttc 4080
ggcgctcgtc gcggagccga agctggagga cttcctcggc ggcatctcct tctccgagca 4140
gcatcacaag gccaactgca acatgatacc cagcactagc agcacagttt gctacgcgag 4200
ctcaggtgct agcaccggct accatcacca gctgtaccac cagcccacca gctcagcgct 4260
ccacttcgcg gactccgtaa tggtggcttc ctcggccggt gtccacgacg gcggtgccat 4320
gctcagcgcg gccgccgcta acggtgtcgc tggcgctgcc agtgccaacg gcggcggcat 4380
cgggctgtcc atgattaaga actggctgcg gagccaaccg gcgcccatgc agccgagggt 4440
ggcggcggct gagggcgcgc aggggctctc tttgtccatg aacatggcgg ggacgaccca 4500
aggcgctgct ggcatgccac ttctcgctgg agagcgcgca cgggcgcccg agagtgtatc 4560
gacgtcagca cagggtggag ccgtcgtcgt cacggcgccg aaggaggata gcggtggcag 4620
cggtgttgcc ggcgctctag tagccgtgag cacggacacg ggtggcagcg gcggcgcgtc 4680
ggctgacaac acggcaagga agacggtgga cacgttcggg cagcgcacgt cgatttaccg 4740
tggcgtgaca aggcatagat ggactgggag atatgaggca catctttggg ataacagttg 4800
cagaagggaa gggcaaactc gtaagggtcg tcaagtctat ttaggtggct atgataaaga 4860
ggagaaagct gctagggctt atgatcttgc tgctctgaag tactggggtg ccacaacaac 4920
aacaaatttt ccagtgagta actacgaaaa ggagctcgag gacatgaagc acatgacaag 4980
gcaggagttt gtagcgtctc tgagaaggaa gagcagtggt ttctccagag gtgcatccat 5040
ttacagggga gtgactaggc atcaccaaca tggaagatgg caagcacgga ttggacgagt 5100
tgcagggaac aaggatcttt acttgggcac cttcagcacc caggaggagg cagcggaggc 5160
gtacgacatc gcggcgatca agttccgcgg cctcaacgcc gtcaccaact tcgacatgag 5220
ccgctacgac gtgaagagca tcctggacag cagcgccctc cccatcggca gcgccgccaa 5280
gcgcctcaag gaggccgagg ccgcagcgtc cgcgcagcac caccacgccg gcgtggtgag 5340
ctacgacgtc ggccgcatcg cctcgcagct cggcgacggc ggagccctgg cggcggcgta 5400
cggcgcgcac taccacggcg ccgcctggcc gaccatcgcg ttccagccgg gcgccgccag 5460
cacaggcctg taccacccgt acgcgcagca gccaatgcgc ggcggcgggt ggtgcaagca 5520
ggagcaggac cacgcggtga tcgcggccgc gcacagcctg caggacctcc accacctgaa 5580
cctgggcgcg gccggcgcgc acgacttttt ctcggcaggg cagcaggccg ccgccgctgc 5640
gatgcacggc ctgggtagca tcgacagtgc gtcgctcgag cacagcaccg gctccaactc 5700
cgtcgtctac aacggcgggg tcggcgacag caacggcgcc agcgccgtcg gcggcagtgg 5760
cggtggctac atgatgccga tgagcgctgc cggagcaacc actacatcgg caatggtgag 5820
ccacgagcag gtgcatgcac gggcctacga cgaagccaag caggctgctc agatggggta 5880
cgagagctac ctggtgaacg cggagaacaa tggtggcgga aggatgtctg catgggggac 5940
tgtcgtgtct gcagccgcgg cggcagcagc aagcagcaac gacaacatgg ccgccgacgt 6000
cgggcatggc ggcgcgcagc tcttcagtgt ctggaacgac acttaagcgt acctagtggt 6060
acctgacatc ttatagtctg caacctctcg tgtctgaatt cctatcttta tcaagtgtta 6120
ttgcttccac gactatagga cagctttcgt cgaaagcttt tgctcatgtg atctcgaagg 6180
attcatctag tctgattttt cgtgacttgt atcggtttta ttggattcat ccaacatata 6240
tcaataaaaa atgagttgtg tttcctttct tcctagttca gttaaaatta tttccctcct 6300
gcgcttgtgc tgtaattgtc tgtgtacctg ttgtttgtga ctgtgttagt tcccttggat 6360
atgatttcgt atttgatatg tacatggaga tagcttagct tcattattgg agtatgaagt 6420
tagtatgaca tagtcactct cctggaaaat tgacactgca aaccatattt ttattctgaa 6480
ccacaaatcc tagtcagtcc gctggcatat gccgtccgtt tgctgaatcc agaacgtggg 6540
tttggagatg tacggctgag atgcctctat gcgaagggga tttcgtggtg aaacgagatg 6600
ggagtagagc aacgcccgtg gaagatgctt caaacttcca cacttttgag caacgatcgg 6660
cagtagtaag gtagacgatt tcaagatcaa agcatatgaa gataaacaac atcaacaaca 6720
aaatttgttg gggttctata gagagaaaca gagctacata catacactgt tttgtatcta 6780
ccatctgaga tgatgaaaag atgaaaaact aaagaatgcc ccggcgccaa cgccaggaca 6840
cgccgcgcgc gcgtcacccg agccatctct tgacccagcc ggcgctgtat atttacacac 6900
gttgcagcat cgatcaccac ctgttcgatc gcgtcgccgt caccggtacc gagctcgaat 6960
tccggtccgg gcctagaagg ccgatctccc gggcacccag ctttcttgta caaagtggcc 7020
gttaacggat cggccagaat ggcccggacc gggttaccga attcgagctc ggtaccctgg 7080
gatcggccgc tctagaacta gtggatcccg gccgtgatcc ccggcggtgt ccgccactga 7140
agaaactatg tgctgtagta tagccgctgc ccgctggcta gctagctagt tgagtcattt 7200
agcggcgatg attgagtaat aatgtgtcac gcatcaccat gcatgggtgg cagtgtcagt 7260
gtgagcaatg acctgaatga acaattgaaa tgaaaagaaa aaagtattgt tccaaattaa 7320
acgttttaac cttttaatag gtttatacaa taattgatat atgttttctg tatatgtcta 7380
atttgttatc atccatttag atatagacaa aaaaaatcta agaactaaaa caaatgctaa 7440
tttgaaatga agggagtata tattgggata atgtcgatga gatccctcgt aatatcaccg 7500
acatcacacg tgtccagtta atgtatcagt gatacgtgta ttcacatttg ttgcgcgtag 7560
gcgtacccaa caattttgat cgactatcag aaagtccggt ccgctcgagg catgcctgca 7620
gtgcagcgtg acccggtcgt gcccctctct agagataatg agcattgcat gtctaagtta 7680
taaaaaatta ccacatattt tttttgtcac acttgtttga agtgcagttt atctatcttt 7740
atacatatat ttaaacttta ctctacgaat aatataatct atagtactac aataatatca 7800
gtgttttaga gaatcatata aatgaacagt tagacatggt ctaaaggaca attgagtatt 7860
ttgacaacag gactctacag ttttatcttt ttagtgtgca tgtgttctcc tttttttttg 7920
caaatagctt cacctatata atacttcatc cattttatta gtacatccat ttagggttta 7980
gggttaatgg tttttataga ctaatttttt tagtacatct attttattct attttagcct 8040
ctaaattaag aaaactaaaa ctctatttta gtttttttat ttaataattt agatataaaa 8100
tagaataaaa taaagtgact aaaaattaaa caaataccct ttaagaaatt aaaaaaacta 8160
aggaaacatt tttcttgttt cgagtagata atgccagcct gttaaacgcc gtcgacgagt 8220
ctaacggaca ccaaccagcg aaccagcagc gtcgcgtcgg gccaagcgaa gcagacggca 8280
cggcatctct gtcgctgcct ctggacccct ctcgagagtt ccgctccacc gttggacttg 8340
ctccgctgtc ggcatccaga aattgcgtgg cggagcggca gacgtgagcc ggcacggcag 8400
gcggcctcct cctcctctca cggcaccggc agctacgggg gattcctttc ccaccgctcc 8460
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caacctcgtg ttgttcggag cgcacacaca cacaaccaga tctcccccaa atccacccgt 8580
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cagccgaaac agcccgcacg ggatcgttca aatccgtgaa gccgaaaacc cgcggcctca 22320
gcaaccgaga aaaactggag aagatcggtc aaatcgaagc tcaggtcgct ggcggcgcaa 22380
ccttgaagga cgccgttaag atcgtgggta tttccgttca gacctattat caatggaaga 22440
gagctgcggt tcaacctgtc tcacagaatc cggccgtgtc tgtttcagtt gacgatgaac 22500
tcggcgagtt catccaactc gaggaggaaa atatgcatgg catgcccgtt ccatacagaa 22560
gctgggcgaa caaacgatgc tcgccttcca gaaaaccgag gatgcgaacc acttcatccg 22620
gggtcagcac caccggcaag cgccgcgacg gccgaggtct tccgatctcc tgaagccagg 22680
gcagatccgt gcacagcacc ttgccgtaga agaacagcaa ggccgccaat gcctgacgat 22740
gcgtggagac cgaaaccttg cgctcgttcg ccagccagga cagaaatgcc tcgacttcgc 22800
tgctgcccaa ggttgccggg tgacgcacac cgtggaaacg gatgaaggca cgaacccagt 22860
ggacataagc ctgttcggtt cgtaagctgt aatgcaagta gcgtatgcgc tcacgcaact 22920
ggtccagaac cttgaccgaa cgcagcggtg gtaacggcgc agtggcggtt ttcatggctt 22980
gttatgactg tttttttggg gtacagtcta tgcctcgggc atccaagcag caagcgcgtt 23040
acgccgtggg tcgatgtttg atgttatgga gcagcaacga tgttacgcag cagggcagtc 23100
gccctaaaac aaagttaaac atcatgaggg aagcggtgat cgccgaagta tcgactcaac 23160
tatcagaggt agttggcgtc atcgagcgcc atctcgaacc gacgttgctg gccgtacatt 23220
tgtacggctc cgcagtggat ggcggcctga agccacacag tgatattgat ttgctggtta 23280
cggtgacggt aaggcttgat gaaacaacgc ggcgagcttt gatcaacgac cttttggaaa 23340
cttcggcttc ccctggagag agcgagattc tccgcgctgt agaagtcacc attgttgtgc 23400
acgacgacat cattccgtgg cgttatccag ctaagcgcga actgcaattt ggagaatggc 23460
agcgcaatga cattcttgca ggtatcttcg agccagccac gatcgacatt gatctggcta 23520
tcttgctgac aaaagcaaga gaacatagcg ttgccttggt aggtccagcg gcggaggaac 23580
tctttgatcc ggttcctgaa caggatctat ttgaggcgct aaatgaaacc ttaacgctat 23640
ggaactcgcc gcccgactgg gctggcgatg agcgaaatgt agtgcttacg ttgtcccgca 23700
tttggtacag cgcagtaacc ggcaaaatcg cgccgaagga tgtcgctgcc gactgggcaa 23760
tggagcgcct gccggcccag tatcagcccg tcatacttga agctagacag gcttatcttg 23820
gacaagaaga agatcgcttg gcctcgcgcg cagatcagtt ggaagaattt gtccactacg 23880
tgaaaggcga gatcaccaag gtagtcggca aataatgtct aacaattcgt tcaagccgac 23940
gccgcttcgc ggcgcggctt aactcaagcg ttagatgcac tatacgtaac caactagtgc 24000
gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg 24060
tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa 24120
agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg 24180
cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 24240
ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 24300
tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 24360
gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 24420
gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 24480
gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 24540
ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 24600
ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 24660
ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 24720
gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc 24780
ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt 24840
tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagcg 24900
taccgacgat cttgctgcgt tcggatattt tcgtggagtt cccgccacag acccggattg 24960
aaggcgagat ccagcaactc gcgccagatc atcctgtgac ggaactttgg cgcgtgatga 25020
ctggccagga cgtcggccga aagagcgaca agcagatcac gcttttcgac agcgtcggat 25080
ttgcgatcga ggatttttcg gcgctgcgct acgtccgcga ccgcgttgag ggatcaagcc 25140
acagcagccc actcgacctt ctagccgacc cagacgagcc aag 25183
<210> 24
<211> 24405
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 24
ggatcttttt ggaatgctgc tccgtcgtca ggctttccga cgtttgggtg gttgaacaga 60
agtcattatc gcacggaatg ccaagcactc ccgaggggaa ccctgtggtt ggcatgcaca 120
tacaaatgga cgaacggata aaccttttca cgccctttta aatatccgat tattctaata 180
aacgctcttt tctcttaggt ttacccgcca atatatcctg tcaaacactg atagtttaaa 240
ctgaaggcgg gaaacgacaa tctgatcatg agcggagaat taagggagtc acgttatgac 300
ccccgccgat gacgcgggac aagccgtttt acgtttggaa ctgacagaac cgcaacgttg 360
aaggagccac tcagcaagct ggtacgattg taatacgact cactataggg cgaattgagc 420
gctgtttaaa cgctcttcaa ctggaagagc ggttacgctg tttaaacgct cttcaactgg 480
aagagcggtt actaccggtt cactagctag ctgctaatcg agctagttac cctatgaggt 540
gacatgaagc gctcacggtt actatgacgg ttagcttcac gactgttggt ggcagtagcg 600
tacgacttag ctatagttcc ggacttaccc ttaagcgatt taaatcctga ggatatcgct 660
atcaactttg tatagaaaag ttgggccgaa ttcgagctcg gtacggccag aatggcccgg 720
accgaagctt cggccgcaca ctgatagttt aaactgaagg cgggaaacga caatctgatc 780
atgagcggag aattaaggga gtcacgttat gacccccgcc gatgacgcgg gacaagccgt 840
tttacgtttg gaactgacag aaccgcaacg ttgaaggagc cactcagccg cgggtttctg 900
gagtttaatg agctaagcac atacgtcaga aaccattatt gcgcgttcaa aagtcgccta 960
aggtcactat cagctagcaa atatttcttg tcaaaaatgc tccactgacg ttccataaat 1020
tcccctcggt atccaattac tctatcagtg atagagtact ggcgcgccac tctatcagtg 1080
atagagtcta gaggatcgct caggaaggcc gctgagatag aggcatggcg gccaatgcgg 1140
gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg gcggtgtgcc 1200
gccccagcgg ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat caggatgctg aaggagctct 1260
actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat ccagcgcatc accgccatgc 1320
tgcggcagca cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag aaccacaagg 1380
cccgcgagcg ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt caacgtgccc gccgccggcg 1440
cggccgacgc caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg ccgccttcag 1500
gcgcggcgcc tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc ggcggatcgg 1560
ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg gccaccgaga 1620
catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg cagtggccac 1680
gcttctcgtc gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc gcgggcggcg acgacgcggg 1740
cgcccgagac gctccctctc ttcccgacct gcggcgacga cggcggcagc ggtagcagca 1800
gctacttgcc gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg cgccacttct tccgttgcga 1860
tccagcagca acaccagctg caggagcagt acagctttta cagcaacagc aacagcaccc 1920
agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc agcagcagcc gccgccctgg 1980
agctgagcct cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc agggagtatg tgagagcaac 2040
gcgagctgcc actgctcttc actggtaccg ttaacagatc attcgacaaa gcagcattag 2100
tccgttgatc ggtggaagac cactcgtcag tgttgagttg aatgtttgat caataaaata 2160
cggcaatgct gtaagggttg ttttttatgc cattgataat acactgtact gttcagttgt 2220
tgaactctat ttcttagcca tgccaagtgc ttttcttatt ttgaataaca ttacagcaaa 2280
aagttgaaag acaaaaaaaa aaacccccga acagagtgct ttgggtccca agcttcttta 2340
gactgtgttc ggcgttcccc ctaaatttct ccccctatat ctcactcact tgtcacatca 2400
gcgttctctt tccccctata tctccacgct ctacagcagt tccacctata tcaaacctct 2460
ataccccacc acaacaatat tatatacttt catcttcaac taactcatgt accttccaat 2520
ttttttctac taataattat ttacgtgcac agaaacttag caaggagaga gagagcgggg 2580
tgacccacct tgctagttgg atattacctc ttctcttcaa agtatccttg aacgctcacc 2640
ggttatcaaa tctctacact atagctctgt agtcttgcta gatagttagt tctttagctc 2700
tcggtgacca agcttggcgc gatcaagctt atcgataccg tcgacctcga agcttggtca 2760
cccggtccgg gcctagaagg ccagcttcaa gtttgtacaa aaaagcaggc tccgtcgacc 2820
ggaccggctc gagccttttg tctccctttt gtctcccttt tgtctccctt ttgtctcgcc 2880
ggccttttgt ctcccttttg tctccctttt gtctcccttt tgtctctgac agtggtccca 2940
aagatggacc cccacccacg aggagcatcg tggaaaaaga agacgttcca accacgtctt 3000
caaagcaagt ggattgatgt gatatctcca ctgacgtaag ggatgacgca caatcccact 3060
agactctatc agtgatagag tgtatataag actctatcag tgatagagtg aactctatca 3120
gtgatagagt tgtacatggc cactgtgaac aactggctcg ctttctccct ctccccgcag 3180
gagctgccgc cctcccagac gacggactcc acactcatct cggccgccac cgccgaccat 3240
gtctccggcg atgtctgctt caacatcccc caagattgga gcatgagggg atcagagctt 3300
tcggcgctcg tcgcggagcc gaagctggag gacttcctcg gcggcatctc cttctccgag 3360
cagcatcaca aggccaactg caacatgata cccagcacta gcagcacagt ttgctacgcg 3420
agctcaggtg ctagcaccgg ctaccatcac cagctgtacc accagcccac cagctcagcg 3480
ctccacttcg cggactccgt aatggtggct tcctcggccg gtgtccacga cggcggtgcc 3540
atgctcagcg cggccgccgc taacggtgtc gctggcgctg ccagtgccaa cggcggcggc 3600
atcgggctgt ccatgattaa gaactggctg cggagccaac cggcgcccat gcagccgagg 3660
gtggcggcgg ctgagggcgc gcaggggctc tctttgtcca tgaacatggc ggggacgacc 3720
caaggcgctg ctggcatgcc acttctcgct ggagagcgcg cacgggcgcc cgagagtgta 3780
tcgacgtcag cacagggtgg agccgtcgtc gtcacggcgc cgaaggagga tagcggtggc 3840
agcggtgttg ccggcgctct agtagccgtg agcacggaca cgggtggcag cggcggcgcg 3900
tcggctgaca acacggcaag gaagacggtg gacacgttcg ggcagcgcac gtcgatttac 3960
cgtggcgtga caaggcatag atggactggg agatatgagg cacatctttg ggataacagt 4020
tgcagaaggg aagggcaaac tcgtaagggt cgtcaagtct atttaggtgg ctatgataaa 4080
gaggagaaag ctgctagggc ttatgatctt gctgctctga agtactgggg tgccacaaca 4140
acaacaaatt ttccagtgag taactacgaa aaggagctcg aggacatgaa gcacatgaca 4200
aggcaggagt ttgtagcgtc tctgagaagg aagagcagtg gtttctccag aggtgcatcc 4260
atttacaggg gagtgactag gcatcaccaa catggaagat ggcaagcacg gattggacga 4320
gttgcaggga acaaggatct ttacttgggc accttcagca cccaggagga ggcagcggag 4380
gcgtacgaca tcgcggcgat caagttccgc ggcctcaacg ccgtcaccaa cttcgacatg 4440
agccgctacg acgtgaagag catcctggac agcagcgccc tccccatcgg cagcgccgcc 4500
aagcgcctca aggaggccga ggccgcagcg tccgcgcagc accaccacgc cggcgtggtg 4560
agctacgacg tcggccgcat cgcctcgcag ctcggcgacg gcggagccct ggcggcggcg 4620
tacggcgcgc actaccacgg cgccgcctgg ccgaccatcg cgttccagcc gggcgccgcc 4680
agcacaggcc tgtaccaccc gtacgcgcag cagccaatgc gcggcggcgg gtggtgcaag 4740
caggagcagg accacgcggt gatcgcggcc gcgcacagcc tgcaggacct ccaccacctg 4800
aacctgggcg cggccggcgc gcacgacttt ttctcggcag ggcagcaggc cgccgccgct 4860
gcgatgcacg gcctgggtag catcgacagt gcgtcgctcg agcacagcac cggctccaac 4920
tccgtcgtct acaacggcgg ggtcggcgac agcaacggcg ccagcgccgt cggcggcagt 4980
ggcggtggct acatgatgcc gatgagcgct gccggagcaa ccactacatc ggcaatggtg 5040
agccacgagc aggtgcatgc acgggcctac gacgaagcca agcaggctgc tcagatgggg 5100
tacgagagct acctggtgaa cgcggagaac aatggtggcg gaaggatgtc tgcatggggg 5160
actgtcgtgt ctgcagccgc ggcggcagca gcaagcagca acgacaacat ggccgccgac 5220
gtcgggcatg gcggcgcgca gctcttcagt gtctggaacg acacttaagc gtacctagtg 5280
gtacctgaca tcttatagtc tgcaacctct cgtgtctgaa ttcctatctt tatcaagtgt 5340
tattgcttcc acgactatag gacagctttc gtcgaaagct tttgctcatg tgatctcgaa 5400
ggattcatct agtctgattt ttcgtgactt gtatcggttt tattggattc atccaacata 5460
tatcaataaa aaatgagttg tgtttccttt cttcctagtt cagttaaaat tatttccctc 5520
ctgcgcttgt gctgtaattg tctgtgtacc tgttgtttgt gactgtgtta gttcccttgg 5580
atatgatttc gtatttgata tgtacatgga gatagcttag cttcattatt ggagtatgaa 5640
gttagtatga catagtcact ctcctggaaa attgacactg caaaccatat ttttattctg 5700
aaccacaaat cctagtcagt ccgctggcat atgccgtccg tttgctgaat ccagaacgtg 5760
ggtttggaga tgtacggctg agatgcctct atgcgaaggg gatttcgtgg tgaaacgaga 5820
tgggagtaga gcaacgcccg tggaagatgc ttcaaacttc cacacttttg agcaacgatc 5880
ggcagtagta aggtagacga tttcaagatc aaagcatatg aagataaaca acatcaacaa 5940
caaaatttgt tggggttcta tagagagaaa cagagctaca tacatacact gttttgtatc 6000
taccatctga gatgatgaaa agatgaaaaa ctaaagaatg ccccggcgcc aacgccagga 6060
cacgccgcgc gcgcgtcacc cgagccatct cttgacccag ccggcgctgt atatttacac 6120
acgttgcagc atcgatcacc acctgttcga tcgcgtcgcc gtcaccggta ccgagctcga 6180
attccggtcc gggcctagaa ggccgatctc ccgggcaccc agctttcttg tacaaagtgg 6240
ccgttaacgg atcggccaga atggcccgga ccgggttacc gaattcgagc tcggtaccct 6300
gggatcggcc gctctagaac tagtggatcc cggccgtgat ccccggcggt gtccgccact 6360
gaagaaacta tgtgctgtag tatagccgct gcccgctggc tagctagcta gttgagtcat 6420
ttagcggcga tgattgagta ataatgtgtc acgcatcacc atgcatgggt ggcagtgtca 6480
gtgtgagcaa tgacctgaat gaacaattga aatgaaaaga aaaaagtatt gttccaaatt 6540
aaacgtttta accttttaat aggtttatac aataattgat atatgttttc tgtatatgtc 6600
taatttgtta tcatccattt agatatagac aaaaaaaatc taagaactaa aacaaatgct 6660
aatttgaaat gaagggagta tatattggga taatgtcgat gagatccctc gtaatatcac 6720
cgacatcaca cgtgtccagt taatgtatca gtgatacgtg tattcacatt tgttgcgcgt 6780
aggcgtaccc aacaattttg atcgactatc agaaagtccg gtccgctcga ggcatgcctg 6840
cagtgcagcg tgacccggtc gtgcccctct ctagagataa tgagcattgc atgtctaagt 6900
tataaaaaat taccacatat tttttttgtc acacttgttt gaagtgcagt ttatctatct 6960
ttatacatat atttaaactt tactctacga ataatataat ctatagtact acaataatat 7020
cagtgtttta gagaatcata taaatgaaca gttagacatg gtctaaagga caattgagta 7080
ttttgacaac aggactctac agttttatct ttttagtgtg catgtgttct cctttttttt 7140
tgcaaatagc ttcacctata taatacttca tccattttat tagtacatcc atttagggtt 7200
tagggttaat ggtttttata gactaatttt tttagtacat ctattttatt ctattttagc 7260
ctctaaatta agaaaactaa aactctattt tagttttttt atttaataat ttagatataa 7320
aatagaataa aataaagtga ctaaaaatta aacaaatacc ctttaagaaa ttaaaaaaac 7380
taaggaaaca tttttcttgt ttcgagtaga taatgccagc ctgttaaacg ccgtcgacga 7440
gtctaacgga caccaaccag cgaaccagca gcgtcgcgtc gggccaagcg aagcagacgg 7500
cacggcatct ctgtcgctgc ctctggaccc ctctcgagag ttccgctcca ccgttggact 7560
tgctccgctg tcggcatcca gaaattgcgt ggcggagcgg cagacgtgag ccggcacggc 7620
aggcggcctc ctcctcctct cacggcaccg gcagctacgg gggattcctt tcccaccgct 7680
ccttcgcttt cccttcctcg cccgccgtaa taaatagaca ccccctccac accctctttc 7740
cccaacctcg tgttgttcgg agcgcacaca cacacaacca gatctccccc aaatccaccc 7800
gtcggcacct ccgcttcaag gtacgccgct cgtcctcccc cccccccctc tctaccttct 7860
ctagatcggc gttccggtcc atgcatggtt agggcccggt agttctactt ctgttcatgt 7920
ttgtgttaga tccgtgtttg tgttagatcc gtgctgctag cgttcgtaca cggatgcgac 7980
ctgtacgtca gacacgttct gattgctaac ttgccagtgt ttctctttgg ggaatcctgg 8040
gatggctcta gccgttccgc agacgggatc gatttcatga ttttttttgt ttcgttgcat 8100
agggtttggt ttgccctttt cctttatttc aatatatgcc gtgcacttgt ttgtcgggtc 8160
atcttttcat gctttttttt gtcttggttg tgatgatgtg gtctggttgg gcggtcgttc 8220
tagatcggag tagaattctg tttcaaacta cctggtggat ttattaattt tggatctgta 8280
tgtgtgtgcc atacatattc atagttacga attgaagatg atggatggaa atatcgatct 8340
aggataggta tacatgttga tgcgggtttt actgatgcat atacagagat gctttttgtt 8400
cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg gcggtcgttc attcgttcta gatcggagta 8460
gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg gaactgtatg tgtgtgtcat 8520
acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc gatctaggat aggtatacat 8580
gttgatgtgg gttttactga tgcatataca tgatggcata tgcagcatct attcatatgc 8640
tctaaccttg agtacctatc tattataata aacaagtatg ttttataatt attttgatct 8700
tgatatactt ggatgatggc atatgcagca gctatatgtg gattttttta gccctgcctt 8760
catacgctat ttatttgctt ggtactgttt cttttgtcga tgctcaccct gttgtttggt 8820
gttacttctg caggtcgact ctagaggatc catggccaga ctcgacaaga gcaaggtgat 8880
caacagcgca ctggagctgc tgaacgaggt cggaatcgaa ggcctcacaa cccgtaagct 8940
cgcccagaag ctcggggttg agcagcctac attgtactgg cacgtcaaga acaagcgagc 9000
tctgctagac gctatggcca tagagatgct cgatccgcac aagattcact acttaccctt 9060
ggaaggggaa agctggcaag atttcttgag gaacagggct aagtccatga gaaatgcttt 9120
gctcagtcac cgtgatggag ccaaggtctg tctaggtacg ggcttcacgg agcgacaata 9180
tgaaactgct gagaacacgc ttgccttcct gacacaacaa ggtttctccc ttgagaacgc 9240
cctctacgca ttccaagcag tggggatcta cactctgggt tgtgtcttgc tggatcaaga 9300
gctgcaagtc gctaaggagg agagggaaac acctactact gatagtatgc cgccactggt 9360
tcgacaagct tacgaactcg cggatcacca aggtgcagag ccagccttcc tgttcggcct 9420
tgaactgatc atatcaggat tggagaagca gctgaaggcc gaaagtgggt cttaatgata 9480
gctgcagaag gtacctcagc cgtcaacagc cagggtgatt agagccccag catgcaaaat 9540
gatcacctgg tcgctcatcc ttgactaaag catggctcgg cggtcgctgt ttacctatat 9600
ccctatagta ggtactcctg tacataaagc ctgaaaaaat gggttcagtt gtttatcgaa 9660
ctctgccaaa tttgcttttg catataatgt aaaattcagc tagctctgct aagctcctcg 9720
cttcagttcg acagaactgc aattgatatt gatgttatgg aaattgatat tggaacaatc 9780
agcaatatta tgcttatatt catttcttgg gcgtgctcta ctctgtgccg atgatatcat 9840
ccgatgggtt ttgtacttct tacttatgaa gtgaacgata ataggttgcc tggtcccagt 9900
tctcagcttg atgttatgat aatcatatgt gatttcagtt ctttgtctgg cattggtctg 9960
tttttgtgtc tgtgtctgtg ggctgtggct ctgtgtgttg ataactcgag cttgattgca 10020
tcagtgaact gcgacttaca acagcagaca gagtgttagc agcagggaag gagaatagag 10080
aaattaggga gtaaagagaa catagttgcc tttcagagga cagcttagca agataacaaa 10140
attatgttct ctccttttaa ggattacaga ggcatagcct cagcgacgcg cgtgctagcg 10200
gatccagtta tcatcatcgt gttgggcttc ctgggcctgg cctgcctagc aggcctgtcg 10260
acagcttcag aaggggaact cgttggcgga ttgtccacag tagcacgtac tatatgcaga 10320
aaaagtcctt atgtctctct tatcattagc ctattaatca tattaattca gtccacatag 10380
gaccgaattt ataacttaac aatcttttag tttcctgagc aatatcgtta aatcaaaaca 10440
tattcttgta ccaaattttg ctatcaacgg ttcaacgcct agttagttag cggaccgaag 10500
cttcctgaat tccaggtgga gctcgaattc ctgcagcccc tcggtaccct gggatctgcc 10560
cttactttaa cgcctctaac caacacccct ttatctttat aaggaacaat aaacagaatt 10620
tgccccactg ttctaaatca cctaataata tccccagcta aaaacaataa aggtttccta 10680
gaattaagac aagcatgact gttcctccag gagggtttgg aacattgttg cagtcttgca 10740
gatacgggcg aagggtgaga aacagagcgg agggctggag gtgacctcgg tagtcgacgc 10800
cggagttgag cttgacaacg acggggcggc ccctgatgga cttgaggaag tccgatggcg 10860
tcttcaccgt cccgccggcg cccgaggcgg gcctgtcgct gccgccgccg ccgctgctca 10920
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gccgtttact ctgggcccca cgtgtcagta ccgtctgtag atgacaacaa cccgtcgtcc 11100
acagtcatgt ccaaaatatc ctttcttctt ttttttcgat tcggatatct atcttccttt 11160
tttttttcca aaaatcttct tgacgcacca gcgcgcacgt ttgtggtaaa cgccgacacg 11220
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gactggccag gacgtcggcc gaaagagcga caagcagatc acgcttttcg acagcgtcgg 24300
atttgcgatc gaggattttt cggcgctgcg ctacgtccgc gaccgcgttg agggatcaag 24360
ccacagcagc ccactcgacc ttctagccga cccagacgag ccaag 24405
<210> 25
<211> 26982
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 25
ggatcttttt ggaatgctgc tccgtcgtca ggctttccga cgtttgggtg gttgaacaga 60
agtcattatc gcacggaatg ccaagcactc ccgaggggaa ccctgtggtt ggcatgcaca 120
tacaaatgga cgaacggata aaccttttca cgccctttta aatatccgat tattctaata 180
aacgctcttt tctcttaggt ttacccgcca atatatcctg tcaaacactg atagtttaaa 240
ctgaaggcgg gaaacgacaa tctgatcatg agcggagaat taagggagtc acgttatgac 300
ccccgccgat gacgcgggac aagccgtttt acgtttggaa ctgacagaac cgcaacgttg 360
aaggagccac tcagcaagct ggtacgattg taatacgact cactataggg cgaattgagc 420
gctgtttaaa cgctcttcaa ctggaagagc ggttacgctg tttaaacgct cttcaactgg 480
aagagcggtt actaccggtt cactagctag ctgctaaggt taccagagct ggtcaccttt 540
gtccaccaac ttattaagta tctagttgaa gacacgttct tcttcacgta agaagacact 600
cagtagtctt cggccagaat ggcctcttga ttcagcgggc ctagaaggcc ggatcactga 660
ctagctaatt taaatcctga ggatatcgct atcaactttg tatagaaaag ttgggccgaa 720
ttcgagctcg gtacggccag aatggcccgg accggctcga gccttttgtc tcccttttgt 780
ctcccttttg tctccctttt gtctcgccgg ccttttgtct cccttttgtc tcccttttgt 840
ctcccttttg tctctgacag tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg 900
gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga tatctccact 960
gacgtaaggg atgacgcaca atcccactag actctatcag tgatagagtg tatataagac 1020
tctatcagtg atagagtgaa ctctatcagt gatagagttg taccatggcg gccaatgcgg 1080
gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg gcggtgtgcc 1140
gccccagcgg ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat caggatgctg aaggagctct 1200
actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat ccagcgcatc accgccatgc 1260
tgcggcagca cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag aaccacaagg 1320
cccgcgagcg ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt caacgtgccc gccgccggcg 1380
cggccgacgc caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg ccgccttcag 1440
gcgcggcgcc tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc ggcggatcgg 1500
ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgctatg gccaccgaga 1560
catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg cagtggccac 1620
gcttctcgtc gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc gcgggcggcg acgacgcggg 1680
cgcccgagac gctccctctc ttcccgacct gcggcgacga cggcggcagc ggtagcagca 1740
gctacttgcc gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg cgccacttct tccgttgcga 1800
tccaacagca acaccagctg caggagcagt acagctttta cagcaacagc aacagcaccc 1860
agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc agcagcagcc gccgccctgg 1920
agctgagcct cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc agggagtatg tgagagcaac 1980
gcgagctgcc actgctcttc actgatgtct ctggaatgga aggaggagga agtgagcata 2040
gcgttggtgc gttgctgtca agggcgaatt gtaccacatg gttaacctag acttgtccat 2100
cttctggatt ggccaactta attaatgtat gaaataaaag gatgcacaca tagtgacatg 2160
ctaatcacta taatgtgggc atcaaagttg tgtgttatgt gtaattacta gttatctgaa 2220
taaaagagaa agagatcatc catatttctt atcctaaatg aatgtcacgt gtctttataa 2280
ttctttgatg aaccagatgc atttcattaa ccaaatccat atacatataa atattaatca 2340
tatataatta atatcaattg ggttagcaaa acaaatctag tctaggtgtg ttttgcgaat 2400
gcggccgcca ccgcggtgga gctcgaattc cggtccgggc ctagaaggcc agcttcaagt 2460
ttgtacaaaa aagcaggctc cggccagaat ggcccggacc gggttaccga attcttaccc 2520
tagctccctg cggctgttac gcggtccccc atcaatcttc tgttcttgcg gttgtagcct 2580
gtgtaacagt gctagagtat gtatgataaa taggttttaa gtctgcttac atgacatttt 2640
ttattgtgga agagacatat aaaaattaga gagagtggtt ctcatgcaac ggcggacggc 2700
ccggtgctaa aagagcttca agacaaaata atgaaacagg aagagagtag atttatctaa 2760
gagccaactt tattatatga atgtgtttat tgttggcttt agatgatatg gtaaggagtt 2820
agagctaata atagataggc tctattatta ttattattaa ttaaactcgc tctaaggagg 2880
aaagtgggag gaagggacga ggacgaagac tactggaagc atcgtgcatg gatgatggat 2940
gtggtgtctc ttaatgtagg tggccggagg atgtacgtgt taattgcgcg ataagcactc 3000
agatccaacc gcaaactacc tccacactga cacactgata gagagaaaga gagacctccg 3060
acgactgccg ccgcagatga gccacgtacg tatacgacgt ctgccggccg gctcaggctg 3120
ccgccatcac cctgctcgaa agtcgcgtta ggcggcgcca gctacatagg agtatctagt 3180
ctagccagtt agtatactac tactgcgctg atgatgaatt aactctgcat agatactgta 3240
cttgcctccc tccaacaccc aaccacctcc tgctcggctc ttaataactt ggacacggat 3300
cgatgccatc caaggaagaa cacgacgacg acgacggaac atccaccatg caagcttgca 3360
tccatacgcc gatacgcgtg catccatcca tccaccatta tttccatttt ccaccgatca 3420
cacgtacaca ggcctattta aggagcgaca tcccactgca actctcctca ctctatcagt 3480
gatagagtct ctagcaaagc acttgccatc taccgaccgc cgcattccaa acagcccgac 3540
gagctagcag agcggcaggc acctccctcc tcaaggaacc catggccact gtgaacaact 3600
ggctcgcttt ctccctctcc ccgcaggagc tgccgccctc ccagacgacg gactccacac 3660
tcatctcggc cgccaccgcc gaccatgtct ccggcgatgt ctgcttcaac atcccccaag 3720
attggagcat gaggggatca gagctttcgg cgctcgtcgc ggagccgaag ctggaggact 3780
tcctcggcgg catctccttc tccgagcagc atcacaaggc caactgcaac atgataccca 3840
gcactagcag cacagtttgc tacgcgagct caggtgctag caccggctac catcaccagc 3900
tgtaccacca gcccaccagc tcagcgctcc acttcgcgga ctccgtaatg gtggcttcct 3960
cggccggtgt ccacgacggc ggtgccatgc tcagcgcggc cgccgctaac ggtgtcgctg 4020
gcgctgccag tgccaacggc ggcggcatcg ggctgtccat gattaagaac tggctgcgga 4080
gccaaccggc gcccatgcag ccgagggtgg cggcggctga gggcgcgcag gggctctctt 4140
tgtccatgaa catggcgggg acgacccaag gcgctgctgg catgccactt ctcgctggag 4200
agcgcgcacg ggcgcccgag agtgtatcga cgtcagcaca gggtggagcc gtcgtcgtca 4260
cggcgccgaa ggaggatagc ggtggcagcg gtgttgccgg cgctctagta gccgtgagca 4320
cggacacggg tggcagcggc ggcgcgtcgg ctgacaacac ggcaaggaag acggtggaca 4380
cgttcgggca gcgcacgtcg atttaccgtg gcgtgacaag gcatagatgg actgggagat 4440
atgaggcaca tctttgggat aacagttgca gaagggaagg gcaaactcgt aagggtcgtc 4500
aagtctattt aggtggctat gataaagagg agaaagctgc tagggcttat gatcttgctg 4560
ctctgaagta ctggggtgcc acaacaacaa caaattttcc agtgagtaac tacgaaaagg 4620
agctcgagga catgaagcac atgacaaggc aggagtttgt agcgtctctg agaaggaaga 4680
gcagtggttt ctccagaggt gcatccattt acaggggagt gactaggcat caccaacatg 4740
gaagatggca agcacggatt ggacgagttg cagggaacaa ggatctttac ttgggcacct 4800
tcagcaccca ggaggaggca gcggaggcgt acgacatcgc ggcgatcaag ttccgcggcc 4860
tcaacgccgt caccaacttc gacatgagcc gctacgacgt gaagagcatc ctggacagca 4920
gcgccctccc catcggcagc gccgccaagc gcctcaagga ggccgaggcc gcagcgtccg 4980
cgcagcacca ccacgccggc gtggtgagct acgacgtcgg ccgcatcgcc tcgcagctcg 5040
gcgacggcgg agccctggcg gcggcgtacg gcgcgcacta ccacggcgcc gcctggccga 5100
ccatcgcgtt ccagccgggc gccgccagca caggcctgta ccacccgtac gcgcagcagc 5160
caatgcgcgg cggcgggtgg tgcaagcagg agcaggacca cgcggtgatc gcggccgcgc 5220
acagcctgca ggacctccac cacctgaacc tgggcgcggc cggcgcgcac gactttttct 5280
cggcagggca gcaggccgcc gccgctgcga tgcacggcct gggtagcatc gacagtgcgt 5340
cgctcgagca cagcaccggc tccaactccg tcgtctacaa cggcggggtc ggcgacagca 5400
acggcgccag cgccgtcggc ggcagtggcg gtggctacat gatgccgatg agcgctgccg 5460
gagcaaccac tacatcggca atggtgagcc acgagcaggt gcatgcacgg gcctacgacg 5520
aagccaagca ggctgctcag atggggtacg agagctacct ggtgaacgcg gagaacaatg 5580
gtggcggaag gatgtctgca tgggggactg tcgtgtctgc agccgcggcg gcagcagcaa 5640
gcagcaacga caacatggcc gccgacgtcg ggcatggcgg cgcgcagctc ttcagtgtct 5700
ggaacgacac ttaagcgtac ctagtggtac ctgacatctt atagtctgca acctctcgtg 5760
tctgaattcc tatctttatc aagtgttatt gcttccacga ctataggaca gctttcgtcg 5820
aaagcttttg ctcatgtgat ctcgaaggat tcatctagtc tgatttttcg tgacttgtat 5880
cggttttatt ggattcatcc aacatatatc aataaaaaat gagttgtgtt tcctttcttc 5940
ctagttcagt taaaattatt tccctcctgc gcttgtgctg taattgtctg tgtacctgtt 6000
gtttgtgact gtgttagttc ccttggatat gatttcgtat ttgatatgta catggagata 6060
gcttagcttc attattggag tatgaagtta gtatgacata gtcactctcc tggaaaattg 6120
acactgcaaa ccatattttt attctgaacc acaaatccta gtcagtccgc tggcatatgc 6180
cgtccgtttg ctgaatccag aacgtgggtt tggagatgta cggctgagat gcctctatgc 6240
gaaggggatt tcgtggtgaa acgagatggg agtagagcaa cgcccgtgga agatgcttca 6300
aacttccaca cttttgagca acgatcggca gtagtaaggt agacgatttc aagatcaaag 6360
catatgaaga taaacaacat caacaacaaa atttgttggg gttctataga gagaaacaga 6420
gctacataca tacactgttt tgtatctacc atctgagatg atgaaaagat gaaaaactaa 6480
agaatgcccc ggcgccaacg ccaggacacg ccgcgcgcgc gtcacccgag ccatctcttg 6540
acccagccgg cgctgtatat ttacacacgt tgcagcatcg atcaccacct gttcgatcgc 6600
gtcgccgtca ccggtaccga gctcgaattc cggtccgggc ctagaaggcc gatctcccgg 6660
gcacccagct ttcttgtaca aagtggccgt taacggatcg gccagaatgg cccggaccgg 6720
gttaccgaat tcgagctcgg taccctggga tcggccgctc tagaactagt ggatcccggc 6780
cgtgatcccc ggcggtgtcc gccactgaag aaactatgtg ctgtagtata gccgctgccc 6840
gctggctagc tagctagttg agtcatttag cggcgatgat tgagtaataa tgtgtcacgc 6900
atcaccatgc atgggtggca gtgtcagtgt gagcaatgac ctgaatgaac aattgaaatg 6960
aaaagaaaaa agtattgttc caaattaaac gttttaacct tttaataggt ttatacaata 7020
attgatatat gttttctgta tatgtctaat ttgttatcat ccatttagat atagacaaaa 7080
aaaatctaag aactaaaaca aatgctaatt tgaaatgaag ggagtatata ttgggataat 7140
gtcgatgaga tccctcgtaa tatcaccgac atcacacgtg tccagttaat gtatcagtga 7200
tacgtgtatt cacatttgtt gcgcgtaggc gtacccaaca attttgatcg actatcagaa 7260
agtccggtcc gctcgaggca tgcctgcagt gcagcgtgac ccggtcgtgc ccctctctag 7320
agataatgag cattgcatgt ctaagttata aaaaattacc acatattttt tttgtcacac 7380
ttgtttgaag tgcagtttat ctatctttat acatatattt aaactttact ctacgaataa 7440
tataatctat agtactacaa taatatcagt gttttagaga atcatataaa tgaacagtta 7500
gacatggtct aaaggacaat tgagtatttt gacaacagga ctctacagtt ttatcttttt 7560
agtgtgcatg tgttctcctt tttttttgca aatagcttca cctatataat acttcatcca 7620
ttttattagt acatccattt agggtttagg gttaatggtt tttatagact aattttttta 7680
gtacatctat tttattctat tttagcctct aaattaagaa aactaaaact ctattttagt 7740
ttttttattt aataatttag atataaaata gaataaaata aagtgactaa aaattaaaca 7800
aatacccttt aagaaattaa aaaaactaag gaaacatttt tcttgtttcg agtagataat 7860
gccagcctgt taaacgccgt cgacgagtct aacggacacc aaccagcgaa ccagcagcgt 7920
cgcgtcgggc caagcgaagc agacggcacg gcatctctgt cgctgcctct ggacccctct 7980
cgagagttcc gctccaccgt tggacttgct ccgctgtcgg catccagaaa ttgcgtggcg 8040
gagcggcaga cgtgagccgg cacggcaggc ggcctcctcc tcctctcacg gcaccggcag 8100
ctacggggga ttcctttccc accgctcctt cgctttccct tcctcgcccg ccgtaataaa 8160
tagacacccc ctccacaccc tctttcccca acctcgtgtt gttcggagcg cacacacaca 8220
caaccagatc tcccccaaat ccacccgtcg gcacctccgc ttcaaggtac gccgctcgtc 8280
ctcccccccc cccctctcta ccttctctag atcggcgttc cggtccatgc atggttaggg 8340
cccggtagtt ctacttctgt tcatgtttgt gttagatccg tgtttgtgtt agatccgtgc 8400
tgctagcgtt cgtacacgga tgcgacctgt acgtcagaca cgttctgatt gctaacttgc 8460
cagtgtttct ctttggggaa tcctgggatg gctctagccg ttccgcagac gggatcgatt 8520
tcatgatttt ttttgtttcg ttgcataggg tttggtttgc ccttttcctt tatttcaata 8580
tatgccgtgc acttgtttgt cgggtcatct tttcatgctt ttttttgtct tggttgtgat 8640
gatgtggtct ggttgggcgg tcgttctaga tcggagtaga attctgtttc aaactacctg 8700
gtggatttat taattttgga tctgtatgtg tgtgccatac atattcatag ttacgaattg 8760
aagatgatgg atggaaatat cgatctagga taggtataca tgttgatgcg ggttttactg 8820
atgcatatac agagatgctt tttgttcgct tggttgtgat gatgtggtgt ggttgggcgg 8880
tcgttcattc gttctagatc ggagtagaat actgtttcaa actacctggt gtatttatta 8940
attttggaac tgtatgtgtg tgtcatacat cttcatagtt acgagtttaa gatggatgga 9000
aatatcgatc taggataggt atacatgttg atgtgggttt tactgatgca tatacatgat 9060
ggcatatgca gcatctattc atatgctcta accttgagta cctatctatt ataataaaca 9120
agtatgtttt ataattattt tgatcttgat atacttggat gatggcatat gcagcagcta 9180
tatgtggatt tttttagccc tgccttcata cgctatttat ttgcttggta ctgtttcttt 9240
tgtcgatgct caccctgttg tttggtgtta cttctgcagg tcgactctag aggatccatg 9300
gccagactcg acaagagcaa ggtgatcaac agcgcactgg agctgctgaa cgaggtcgga 9360
atcgaaggcc tcacaacccg taagctcgcc cagaagctcg gggttgagca gcctacattg 9420
tactggcacg tcaagaacaa gcgagctctg ctagacgcta tggccataga gatgctcgat 9480
ccgcacaaga ttcactactt acccttggaa ggggaaagct ggcaagattt cttgaggaac 9540
agggctaagt ccatgagaaa tgctttgctc agtcaccgtg atggagccaa ggtctgtcta 9600
ggtacgggct tcacggagcg acaatatgaa actgctgaga acacgcttgc cttcctgaca 9660
caacaaggtt tctcccttga gaacgccctc tacgcattcc aagcagtggg gatctacact 9720
ctgggttgtg tcttgctgga tcaagagctg caagtcgcta aggaggagag ggaaacacct 9780
actactgata gtatgccgcc actggttcga caagcttacg aactcgcgga tcaccaaggt 9840
gcagagccag ccttcctgtt cggccttgaa ctgatcatat caggattgga gaagcagctg 9900
aaggccgaaa gtgggtctta atgatagctg cagaaggtac ctcagccgtc aacagccagg 9960
gtgattagag ccccagcatg caaaatgatc acctggtcgc tcatccttga ctaaagcatg 10020
gctcggcggt cgctgtttac ctatatccct atagtaggta ctcctgtaca taaagcctga 10080
aaaaatgggt tcagttgttt atcgaactct gccaaatttg cttttgcata taatgtaaaa 10140
ttcagctagc tctgctaagc tcctcgcttc agttcgacag aactgcaatt gatattgatg 10200
ttatggaaat tgatattgga acaatcagca atattatgct tatattcatt tcttgggcgt 10260
gctctactct gtgccgatga tatcatccga tgggttttgt acttcttact tatgaagtga 10320
acgataatag gttgcctggt cccagttctc agcttgatgt tatgataatc atatgtgatt 10380
tcagttcttt gtctggcatt ggtctgtttt tgtgtctgtg tctgtgggct gtggctctgt 10440
gtgttgataa ctcgagcttg attgcatcag tgaactgcga cttacaacag cagacagagt 10500
gttagcagca gggaaggaga atagagaaat tagggagtaa agagaacata gttgcctttc 10560
agaggacagc ttagcaagat aacaaaatta tgttctctcc ttttaaggat tacagaggca 10620
tagcctcagc gacgcgcgtg ctagcggatc cagttatcat catcgtgttg ggcttcctgg 10680
gcctggcctg cctagcaggc ctgtcgacag cttcagaagg ggaactcgtt ggcggattgt 10740
ccacagtagc acgtactata tgcagaaaaa gtccttatgt ctctcttatc attagcctat 10800
taatcatatt aattcagtcc acataggacc gaatttataa cttaacaatc ttttagtttc 10860
ctgagcaata tcgttaaatc aaaacatatt cttgtaccaa attttgctat caacggttca 10920
acgcctagtt agttagcgga ccgaagcttc ctgaattcca ggtggagctc gaattcctgc 10980
agcccctcgg taccctggga tctgccctta ctttaacgcc tctaaccaac acccctttat 11040
ctttataagg aacaataaac agaatttgcc ccactgttct aaatcaccta ataatatccc 11100
cagctaaaaa caataaaggt ttcctagaat taagacaagc atgactgttc ctccaggagg 11160
gtttggaaca ttgttgcagt cttgcagata cgggcgaagg gtgagaaaca gagcggaggg 11220
ctggaggtga cctcggtagt cgacgccgga gttgagcttg acaacgacgg ggcggcccct 11280
gatggacttg aggaagtccg atggcgtctt caccgtcccg ccggcgcccg aggcgggcct 11340
gtcgctgccg ccgccgccgc tgctcatctt gcgcgctgtg cccccggcgg tgtccctgtg 11400
ttgcggatcg cgggtgggcc aggtggatgc gagggcgacc cgtttggact ccggccggag 11460
ccgccggatc cctggtcggt gtcagtgccg tttactctgg gccccacgtg tcagtaccgt 11520
ctgtagatga caacaacccg tcgtccacag tcatgtccaa aatatccttt cttctttttt 11580
ttcgattcgg atatctatct tccttttttt tttccaaaaa tcttcttgac gcaccagcgc 11640
gcacgtttgt ggtaaacgcc gacacgtcgg tcccacgtcg atagacccca cccaccagtg 11700
agtagcgtgt acgtattcgg gggtgacgga cgtgtcgccg tcgtcttgct agtcccattc 11760
ccatctgagc cacacatctc tgaacaaaaa aaaggaggga ggcctccacg cacatccccc 11820
tccgtgccac ccgccccaaa ccctcgcgcc gcctccgaga cagccgccgc aaccatggcc 11880
accgccgccg ccgcgtctac cgcgctcact ggcgccacta ccgctgcgcc caaggcgagg 11940
cgccgggcgc acctcctggc cacccgccgc gccctcgccg cgcccatcag gtgctcagcg 12000
gcgtcacccg ccatgccgat ggctcccccg gccaccccgc tccggccgtg gggccccacc 12060
gagccccgca agggtgctga catcctcgtc gagtccctcg agcgctgcgg cgtccgcgac 12120
gtcttcgcct accccggcgg cgcgtccatg gagatccacc aggcactcac ccgctccccc 12180
gtcatcgcca accacctctt ccgccacgag caaggggagg cctttgccgc ctccggctac 12240
gcgcgctcct cgggccgcgt cggcgtctgc atcgccacct ccggccccgg cgccaccaac 12300
ctagtctccg cgctcgccga cgcgctgctc gattccgtcc ccatggtcgc catcacggga 12360
caggtggcgc gacgcatgat tggcaccgac gccttccagg agacgcccat cgtcgaggtc 12420
acccgctcca tcaccaagca caactacctg gtcctcgacg tcgacgacat cccccgcgtc 12480
gtgcaggagg ctttcttcct cgcctcctct ggtcgaccag ggccggtgct tgtcgacatc 12540
cccaaggaca tccagcagca gatggcggtg cctgtctggg acaagcccat gagtctgcct 12600
gggtacattg cgcgccttcc caagccccct gcgactgagt tgcttgagca ggtgctgcgt 12660
cttgttggtg aatcgcggcg ccctgttctt tatgtgggcg gtggctgcgc agcatctggt 12720
gaggagttgc gacgctttgt ggagctgact ggaatcccgg tcacaactac tcttatgggc 12780
ctcggcaact tccccagcga cgacccactg tctctgcgca tgctaggtat gcatgggacg 12840
gtgtatgcaa attatgcagt ggataaggcc gatctgttgc ttgcacttgg tgtgcggttt 12900
gatgatcgcg tgacagggaa gattgaggct tttgcaagca gggctaagat tgtgcacgtt 12960
gatattgatc cggctgagat tggcaagaac aagcagccac atgtgtccat ctgtgcagat 13020
gttaagcttg ctttgcaggg catgaatgct cttcttgaag gaagcacatc aaagaagagc 13080
tttgactttg gctcatggaa cgatgagttg gatcagcaga agagggaatt cccccttggg 13140
tataaaacat ctaatgagga gatccagcca caatatgcta ttcaggttct tgatgagctg 13200
acgaaaggcg aggccatcat cggcacaggt gttgggcagc accagatgtg ggcggcacag 13260
tactacactt acaagcggcc aaggcagtgg ttgtcttcag ctggtcttgg ggctatggga 13320
tttggtttgc cggctgctgc tggtgcttct gtggcaaacc caggtgtcac tgttgttgac 13380
atcgatggag atggtagctt tctcatgaac gttcaggagc tagctatgat ccgaattgag 13440
aacctcccag tgaaggtctt tgtgctaaac aaccagcacc tggggatggt ggtgcagttg 13500
gaggacaggt tctataaggc caacagagcg cacacatact tgggaaaccc agagaatgaa 13560
agtgagatat atccagattt cgtgacgatc gccaaagggt tcaacattcc agcggtccgt 13620
gtgacaaaga agaacgaagt ccgcgcagcg ataaagaaga tgctcgagac tccagggccg 13680
tacctcttgg atataatcgt cccacaccag gagcatgtgt tgcctatgat ccctagtggt 13740
ggggctttca aggatatgat cctggatggt gatggcagga ctgtgtactg actagctagt 13800
cagttaacag atctgccaga tcctcggtgt acaaataacc cgtcttatcc tatgagacgg 13860
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atgtagatgc caagggaagc ttattggctg ttgaagcttg atgcaaaata aattatggaa 13980
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tataaaaaat taccacatat tttttttgtc acacttgttt gaagtgcagt ttatctatct 15060
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gtgggcatca aagttgtgtg ttatgtgtaa ttactagtta tctgaataaa agagaaagag 17820
atcatccata tttcttatcc taaatgaatg tcacgtgtct ttataattct ttgatgaacc 17880
agatgcattt cattaaccaa atccatatac atataaatat taatcatata taattaatat 17940
caattgggtt agcaaaacaa atctagtcta ggtgtgtttt gcgaattgcg gcaagcttgt 18000
ttttctcaga cagttttcta aaaaaagggc gtttctgggg aagttcgaga tggttcgtaa 18060
ggtgttactg gctcctgtga accaatacat gatactgcca tgataagggt tataattagt 18120
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tgttttttgg ttggctgcaa gccattctga acttcagttt accaattgtt tttatgttgt 18360
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cggaagaacg gcaactaagc tgccgggttt gaaacacgga tgatctcgcg gagggtagca 19500
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agatccgaat tatcagcctt cttattcatt tctcgcttaa ccgtgacagg ctgtcgatct 19620
tgagaactat gccgacataa taggaaatcg ctggataaag ccgctgagga agctgagtgg 19680
cgctatttct ttagaagtga acgttgacga tcgtcgggcc caggtagaat ccgcctgagt 19740
cgcaagggtg acttcgccta tattggacga cggcgcgcag agggcgacct ctttttgggt 19800
tacgattgta ggattatcac taaaacaata catgaacata ttcaaatggc aatctctcta 19860
aggcattgga aataaataca aataacagtt gggtggagtt tttcgacctg tgggcgttaa 19920
ccttctgtta acctaaaagc tcttgcccaa acagcagaat cggcgctaat tgccagcggc 19980
ggaacttttc cagtttcgcg aaaaatatcg ccactggcaa ggaatgggtt tgagatggcg 20040
aagtctgtcc taaaagcagc gcctgtagtt gtagggttga cggccttgat ggagcgtcat 20100
gccgatgccc tctcgagcca acttcaagca catcatctta aggttttccc gccgcattcc 20160
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tcatatttac ggcagaccgc gtctgagatg ccagagttga atgttagcat gagcccgggt 20280
ggcaggcgaa tgttctcaat tgaagatatc catgcgattc ggaagtatat ggatcaggtc 20340
ggccgcggga accggcgcta cctgccacat cgtcgaggcg gcgagcagct tcaggttatc 20400
tctgtgatga atttcaaagg tgggtcgggt aagaccacca ccgccgcgca tctggcgcag 20460
tacctcgcta tgcgcggata tcgagtcttg gccattgatc tcgatcctca agcgagcctt 20520
tctgcactct ttgggagcca accggagacg gacgttggcc cgaacgaaac gctctacggc 20580
gctataaggt atgatgatga gcaggtggca atcgaacgag tcgtccgagg gacttacatt 20640
cccgacctcc acctgattcc tggtaatctt gagctgatgg agtttgaaca cgatacgcca 20700
cgcgcgctga tgaaccgcaa agagggcgac acgctctttt atggtcgcat cagccaagta 20760
attgaagata tcgcggataa ctatgacgtc gtggtcatcg actgccctcc ccagcttggg 20820
tatctcacgc tatccgcatt gactgcggcg acgtccattc ttgtcacggt ccatccgcag 20880
atgctggatg tgatgtcgat gaaccagttt ctggcaatga catcgaacct tttgcgtgaa 20940
atcgagaatg ctggcgccaa gttcaagttt aattggatgc gctatctgat aacccgtttc 21000
gaaccgagcg acggaccaca gaaccaaatg gtaggttatc tgcggtcgat ttttggcgaa 21060
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cagactctat tcgaagtgga gcgtggcctg ttcacgcgct cgacctatga tcgagccttg 21180
gaggcgatga acgccgtcaa cgacgagatc gaaacactga tcaaaaaagc atggggtagg 21240
cccacatgag ccggaagcac atccttggcg tctcaactga cgcccctgag acgtcgcccg 21300
ccgacaatag gacggcaaag aaccgctcca tgccgctcct cggcgtaaca aggaaggagc 21360
gcgatccggc aacgaagctc acagcgaaca ttggtaacgc actgcgagag caaaacgatc 21420
gtcttagccg tgccgaagag atcgagcggc gtctcgctga aggtcaggca gtgatagagt 21480
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ggctccttac ttcgatccgg gaacaaggac agcaagtccc aatccttgtg cgaccgcatc 21600
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cacagggtca ggaaaacaat gagcgcgaag atcttacctt catcgaaaag gcgcgcttcg 21780
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gagcgagccg ataaaagcgt tccccctcgg gatgatcctg aaagcatgcc cgaccattgg 23340
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ttagcgagta tggagcagga tggtctgtgg tcagctgacc acagacctaa taggttgaaa 23700
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taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg 26520
tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc 26580
tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt 26640
ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagcgt 26700
accgacgatc ttgctgcgtt cggatatttt cgtggagttc ccgccacaga cccggattga 26760
aggcgagatc cagcaactcg cgccagatca tcctgtgacg gaactttggc gcgtgatgac 26820
tggccaggac gtcggccgaa agagcgacaa gcagatcacg cttttcgaca gcgtcggatt 26880
tgcgatcgag gatttttcgg cgctgcgcta cgtccgcgac cgcgttgagg gatcaagcca 26940
cagcagccca ctcgaccttc tagccgaccc agacgagcca ag 26982
<210> 26
<211> 28113
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
ggatcttttt ggaatgctgc tccgtcgtca ggctttccga cgtttgggtg gttgaacaga 60
agtcattatc gcacggaatg ccaagcactc ccgaggggaa ccctgtggtt ggcatgcaca 120
tacaaatgga cgaacggata aaccttttca cgccctttta aatatccgat tattctaata 180
aacgctcttt tctcttaggt ttacccgcca atatatcctg tcaaacactg atagtttaaa 240
ctgaaggcgg gaaacgacaa tctgatcatg agcggagaat taagggagtc acgttatgac 300
ccccgccgat gacgcgggac aagccgtttt acgtttggaa ctgacagaac cgcaacgttg 360
aaggagccac tcagcaagct ggtacgattg taatacgact cactataggg cgaattgagc 420
gctgtttaaa cgctcttcaa ctggaagagc ggttacgctg tttaaacgct cttcaactgg 480
aagagcggtt actaccggtt cactagctag ctgctaaggt taccagagct ggtcaccttt 540
gtccaccaac ttattaagta tctagttgaa gacacgttct tcttcacgta agaagacact 600
cagtagtctt cggccagaat ggcctcttga ttcagcgggc ctagaaggcc ggatcactga 660
ctagctaatt taaatcctga ggatatcgct atcaactttg tatagaaaag ttgggccgag 720
ctcggtacgg ccagaatggc ccggaccggg ttaccgaatt caggcgaccc atcgctgctt 780
tgtctacatc atgttcttca tcatcctccc caggcgacgc gtgctgctgt tcttattcag 840
actaccgttc gagtgactgc atggcgtaca tctttctgca tcgactttgt acggctacat 900
cgaacatata cacgagatgt ctcgtgtgaa tagagtcact aatgccttaa gcatcggtta 960
ctccgtaggg tacattctgt tcttcttatt tgtgcatatt tttattgttg tttactgatt 1020
atacgagtag ttatacatac atgcacatac atatcatcac atatatcaca atatttttct 1080
aaattaaatt aaaactaaaa atgactaaat ttctaacacc aacgacattg taatgttttc 1140
tccaacaact ttacctattc tacattgttc tatttcgaat ttcactctat aaacaacata 1200
gtctacaatg gaaaacagtg ctttgtacga ctatatacgc gatgtgtggc tacaacataa 1260
gacaatatag tcgtttgaag attgaaccta tatatcggta cggttaatcc gtctatgtac 1320
gtgggcatga cgaacacccg tgataacgaa ggattaacgt gcacaatcat aaatccaaag 1380
taggagcggt gcatgatgag aatcgctctc agtactcgac ataatgaacc ttacgaggta 1440
caacaggcag gcaggcaggg accaggggcc gcctttattt caggctcgct ggccccacgg 1500
gcgtgctgcg tgcacgaagg gcactacccc aacctctcac cgaaaaccgc gctggatcgg 1560
caaatcaaac gaggtggtgc cccgtgccca ctctccacgt ccacggcacc atccctctgc 1620
agccgctcac cagccatgcc gtgtcgcgga acggcacaac cacccccaac ccactcacga 1680
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tgagtcccct ggacacccga caccctgtcg gccctttgtt tattcatccc gaaatctcat 1800
ctgcccccac ggccgactgc gctgcgccgc ccggatatat atacccatcg ttatcgatcg 1860
actggggact ctatcagtga tagagtctag aggatcgctc aggaaggccg ctgagataga 1920
ggcatggcgg ccaatgcggg cggcggtgga gcgggaggag gcagcggcag cggcagcgtg 1980
gctgcgccgg cggtgtgccg ccccagcggc tcgcggtgga cgccgacgcc ggagcagatc 2040
aggatgctga aggagctcta ctacggctgc ggcatccggt cgcccagctc ggagcagatc 2100
cagcgcatca ccgccatgct gcggcagcac ggcaagatcg agggcaagaa cgtcttctac 2160
tggttccaga accacaaggc ccgcgagcgc cagaagcgcc gcctcaccag cctcgacgtc 2220
aacgtgcccg ccgccggcgc ggccgacgcc accaccagcc aactcggcgt cctctcgctg 2280
tcgtcgccgc cgccttcagg cgcggcgcct ccctcgccca ccctcggctt ctacgccgcc 2340
ggcaatggcg gcggatcggc tgtgctgctg gacacgagtt ccgactgggg cagcagcggc 2400
gctgccatgg ccaccgagac atgcttcctg caggactaca tgggcgtgac ggacacgggc 2460
agctcgtcgc agtggccacg cttctcgtcg tcggacacga taatggcggc ggccgcggcg 2520
cgggcggcga cgacgcgggc gcccgagacg ctccctctct tcccgacctg cggcgacgac 2580
ggcggcagcg gtagcagcag ctacttgccg ttctggggtg ccgcgtccac aactgccggc 2640
gccacttctt ccgttgcgat ccagcagcaa caccagctgc aggagcagta cagcttttac 2700
agcaacagca acagcaccca gctggccggc accggcaacc aagacgtatc ggcaacagca 2760
gcagcagccg ccgccctgga gctgagcctc agctcatggt gctcccctta ccctgctgca 2820
gggagtatgt gagagcaacg cgagctgcca ctgctcttca ctggtaccgt taacagatca 2880
ttcgacaaag cagcattagt ccgttgatcg gtggaagacc actcgtcagt gttgagttga 2940
atgtttgatc aataaaatac ggcaatgctg taagggttgt tttttatgcc attgataata 3000
cactgtactg ttcagttgtt gaactctatt tcttagccat gccaagtgct tttcttattt 3060
tgaataacat tacagcaaaa agttgaaaga caaaaaaaaa aacccccgaa cagagtgctt 3120
tgggtcccaa gcttctttag actgtgttcg gcgttccccc taaatttctc cccctatatc 3180
tcactcactt gtcacatcag cgttctcttt ccccctatat ctccacgctc tacagcagtt 3240
ccacctatat caaacctcta taccccacca caacaatatt atatactttc atcttcaact 3300
aactcatgta ccttccaatt tttttctact aataattatt tacgtgcaca gaaacttagc 3360
aaggagagag agagcggggt gacccacctt gctagttgga tattacctct tctcttcaaa 3420
gtatccttga acgctcaccg gttatcaaat ctctacacta tagctctgta gtcttgctag 3480
atagttagtt ctttagctct cggtgaccaa gcttggcgcg atcaagctta tcgataccgt 3540
cgacctcgaa gcttggtcac ccggtccggg cctagaaggc cagcttcaag tttgtacaaa 3600
aaagcaggct ccggccagaa tggcccggac cgggttaccg aattcttacc ctagctccct 3660
gcggctgtta cgcggtcccc catcaatctt ctgttcttgc ggttgtagcc tgtgtaacag 3720
tgctagagta tgtatgataa ataggtttta agtctgctta catgacattt tttattgtgg 3780
aagagacata taaaaattag agagagtggt tctcatgcaa cggcggacgg cccggtgcta 3840
aaagagcttc aagacaaaat aatgaaacag gaagagagta gatttatcta agagccaact 3900
ttattatatg aatgtgttta ttgttggctt tagatgatat ggtaaggagt tagagctaat 3960
aatagatagg ctctattatt attattatta attaaactcg ctctaaggag gaaagtggga 4020
ggaagggacg aggacgaaga ctactggaag catcgtgcat ggatgatgga tgtggtgtct 4080
cttaatgtag gtggccggag gatgtacgtg ttaattgcgc gataagcact cagatccaac 4140
cgcaaactac ctccacactg acacactgat agagagaaag agagacctcc gacgactgcc 4200
gccgcagatg agccacgtac gtatacgacg tctgccggcc ggctcaggct gccgccatca 4260
ccctgctcga aagtcgcgtt aggcggcgcc agctacatag gagtatctag tctagccagt 4320
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ccaaggaaga acacgacgac gacgacggaa catccaccat gcaagcttgc atccatacgc 4500
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aggcctattt aaggagcgac atcccactgc aactctcctc actctatcag tgatagagtc 4620
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gtgccaacgg cggcggcatc gggctgtcca tgattaagaa ctggctgcgg agccaaccgg 5220
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gggcgcccga gagtgtatcg acgtcagcac agggtggagc cgtcgtcgtc acggcgccga 5400
aggaggatag cggtggcagc ggtgttgccg gcgctctagt agccgtgagc acggacacgg 5460
gtggcagcgg cggcgcgtcg gctgacaaca cggcaaggaa gacggtggac acgttcgggc 5520
agcgcacgtc gatttaccgt ggcgtgacaa ggcatagatg gactgggaga tatgaggcac 5580
atctttggga taacagttgc agaagggaag ggcaaactcg taagggtcgt caagtctatt 5640
taggtggcta tgataaagag gagaaagctg ctagggctta tgatcttgct gctctgaagt 5700
actggggtgc cacaacaaca acaaattttc cagtgagtaa ctacgaaaag gagctcgagg 5760
acatgaagca catgacaagg caggagtttg tagcgtctct gagaaggaag agcagtggtt 5820
tctccagagg tgcatccatt tacaggggag tgactaggca tcaccaacat ggaagatggc 5880
aagcacggat tggacgagtt gcagggaaca aggatcttta cttgggcacc ttcagcaccc 5940
aggaggaggc agcggaggcg tacgacatcg cggcgatcaa gttccgcggc ctcaacgccg 6000
tcaccaactt cgacatgagc cgctacgacg tgaagagcat cctggacagc agcgccctcc 6060
ccatcggcag cgccgccaag cgcctcaagg aggccgaggc cgcagcgtcc gcgcagcacc 6120
accacgccgg cgtggtgagc tacgacgtcg gccgcatcgc ctcgcagctc ggcgacggcg 6180
gagccctggc ggcggcgtac ggcgcgcact accacggcgc cgcctggccg accatcgcgt 6240
tccagccggg cgccgccagc acaggcctgt accacccgta cgcgcagcag ccaatgcgcg 6300
gcggcgggtg gtgcaagcag gagcaggacc acgcggtgat cgcggccgcg cacagcctgc 6360
aggacctcca ccacctgaac ctgggcgcgg ccggcgcgca cgactttttc tcggcagggc 6420
agcaggccgc cgccgctgcg atgcacggcc tgggtagcat cgacagtgcg tcgctcgagc 6480
acagcaccgg ctccaactcc gtcgtctaca acggcggggt cggcgacagc aacggcgcca 6540
gcgccgtcgg cggcagtggc ggtggctaca tgatgccgat gagcgctgcc ggagcaacca 6600
ctacatcggc aatggtgagc cacgagcagg tgcatgcacg ggcctacgac gaagccaagc 6660
aggctgctca gatggggtac gagagctacc tggtgaacgc ggagaacaat ggtggcggaa 6720
ggatgtctgc atgggggact gtcgtgtctg cagccgcggc ggcagcagca agcagcaacg 6780
acaacatggc cgccgacgtc gggcatggcg gcgcgcagct cttcagtgtc tggaacgaca 6840
cttaagcgta cctagtggta cctgacatct tatagtctgc aacctctcgt gtctgaattc 6900
ctatctttat caagtgttat tgcttccacg actataggac agctttcgtc gaaagctttt 6960
gctcatgtga tctcgaagga ttcatctagt ctgatttttc gtgacttgta tcggttttat 7020
tggattcatc caacatatat caataaaaaa tgagttgtgt ttcctttctt cctagttcag 7080
ttaaaattat ttccctcctg cgcttgtgct gtaattgtct gtgtacctgt tgtttgtgac 7140
tgtgttagtt cccttggata tgatttcgta tttgatatgt acatggagat agcttagctt 7200
cattattgga gtatgaagtt agtatgacat agtcactctc ctggaaaatt gacactgcaa 7260
accatatttt tattctgaac cacaaatcct agtcagtccg ctggcatatg ccgtccgttt 7320
gctgaatcca gaacgtgggt ttggagatgt acggctgaga tgcctctatg cgaaggggat 7380
ttcgtggtga aacgagatgg gagtagagca acgcccgtgg aagatgcttc aaacttccac 7440
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ataaacaaca tcaacaacaa aatttgttgg ggttctatag agagaaacag agctacatac 7560
atacactgtt ttgtatctac catctgagat gatgaaaaga tgaaaaacta aagaatgccc 7620
cggcgccaac gccaggacac gccgcgcgcg cgtcacccga gccatctctt gacccagccg 7680
gcgctgtata tttacacacg ttgcagcatc gatcaccacc tgttcgatcg cgtcgccgtc 7740
accggtaccg agctcgaatt ccggtccggg cctagaaggc cgatctcccg ggcacccagc 7800
tttcttgtac aaagtggccg ttaacggatc ggccagaatg gcccggaccg ggttaccgaa 7860
ttcgagctcg gtaccctggg atcggccgct ctagaactag tggatcccgg ccgtgatccc 7920
cggcggtgtc cgccactgaa gaaactatgt gctgtagtat agccgctgcc cgctggctag 7980
ctagctagtt gagtcattta gcggcgatga ttgagtaata atgtgtcacg catcaccatg 8040
catgggtggc agtgtcagtg tgagcaatga cctgaatgaa caattgaaat gaaaagaaaa 8100
aagtattgtt ccaaattaaa cgttttaacc ttttaatagg tttatacaat aattgatata 8160
tgttttctgt atatgtctaa tttgttatca tccatttaga tatagacaaa aaaaatctaa 8220
gaactaaaac aaatgctaat ttgaaatgaa gggagtatat attgggataa tgtcgatgag 8280
atccctcgta atatcaccga catcacacgt gtccagttaa tgtatcagtg atacgtgtat 8340
tcacatttgt tgcgcgtagg cgtacccaac aattttgatc gactatcaga aagtccggtc 8400
cgctcgaggc atgcctgcag tgcagcgtga cccggtcgtg cccctctcta gagataatga 8460
gcattgcatg tctaagttat aaaaaattac cacatatttt ttttgtcaca cttgtttgaa 8520
gtgcagttta tctatcttta tacatatatt taaactttac tctacgaata atataatcta 8580
tagtactaca ataatatcag tgttttagag aatcatataa atgaacagtt agacatggtc 8640
taaaggacaa ttgagtattt tgacaacagg actctacagt tttatctttt tagtgtgcat 8700
gtgttctcct ttttttttgc aaatagcttc acctatataa tacttcatcc attttattag 8760
tacatccatt tagggtttag ggttaatggt ttttatagac taattttttt agtacatcta 8820
ttttattcta ttttagcctc taaattaaga aaactaaaac tctattttag tttttttatt 8880
taataattta gatataaaat agaataaaat aaagtgacta aaaattaaac aaataccctt 8940
taagaaatta aaaaaactaa ggaaacattt ttcttgtttc gagtagataa tgccagcctg 9000
ttaaacgccg tcgacgagtc taacggacac caaccagcga accagcagcg tcgcgtcggg 9060
ccaagcgaag cagacggcac ggcatctctg tcgctgcctc tggacccctc tcgagagttc 9120
cgctccaccg ttggacttgc tccgctgtcg gcatccagaa attgcgtggc ggagcggcag 9180
acgtgagccg gcacggcagg cggcctcctc ctcctctcac ggcaccggca gctacggggg 9240
attcctttcc caccgctcct tcgctttccc ttcctcgccc gccgtaataa atagacaccc 9300
cctccacacc ctctttcccc aacctcgtgt tgttcggagc gcacacacac acaaccagat 9360
ctcccccaaa tccacccgtc ggcacctccg cttcaaggta cgccgctcgt cctccccccc 9420
ccccctctct accttctcta gatcggcgtt ccggtccatg catggttagg gcccggtagt 9480
tctacttctg ttcatgtttg tgttagatcc gtgtttgtgt tagatccgtg ctgctagcgt 9540
tcgtacacgg atgcgacctg tacgtcagac acgttctgat tgctaacttg ccagtgtttc 9600
tctttgggga atcctgggat ggctctagcc gttccgcaga cgggatcgat ttcatgattt 9660
tttttgtttc gttgcatagg gtttggtttg cccttttcct ttatttcaat atatgccgtg 9720
cacttgtttg tcgggtcatc ttttcatgct tttttttgtc ttggttgtga tgatgtggtc 9780
tggttgggcg gtcgttctag atcggagtag aattctgttt caaactacct ggtggattta 9840
ttaattttgg atctgtatgt gtgtgccata catattcata gttacgaatt gaagatgatg 9900
gatggaaata tcgatctagg ataggtatac atgttgatgc gggttttact gatgcatata 9960
cagagatgct ttttgttcgc ttggttgtga tgatgtggtg tggttgggcg gtcgttcatt 10020
cgttctagat cggagtagaa tactgtttca aactacctgg tgtatttatt aattttggaa 10080
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ctaggatagg tatacatgtt gatgtgggtt ttactgatgc atatacatga tggcatatgc 10200
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gcctagcagg cctgtcgaca gcttcagaag gggaactcgt tggcggattg tccacagtag 11880
cacgtactat atgcagaaaa agtccttatg tctctcttat cattagccta ttaatcatat 11940
taattcagtc cacataggac cgaatttata acttaacaat cttttagttt cctgagcaat 12000
atcgttaaat caaaacatat tcttgtacca aattttgcta tcaacggttc aacgcctagt 12060
tagttagcgg accgaagctt cctgaattcc aggtggagct cgaattcctg cagcccctcg 12120
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tacgtattcg ggggtgacgg acgtgtcgcc gtcgtcttgc tagtcccatt cccatctgag 12900
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cacctcctgg ccacccgccg cgccctcgcc gcgcccatca ggtgctcagc ggcgtcaccc 13140
gccatgccga tggctccccc ggccaccccg ctccggccgt ggggccccac cgagccccgc 13200
aagggtgctg acatcctcgt cgagtccctc gagcgctgcg gcgtccgcga cgtcttcgcc 13260
taccccggcg gcgcgtccat ggagatccac caggcactca cccgctcccc cgtcatcgcc 13320
aaccacctct tccgccacga gcaaggggag gcctttgccg cctccggcta cgcgcgctcc 13380
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atccagcagc agatggcggt gcctgtctgg gacaagccca tgagtctgcc tgggtacatt 13740
gcgcgccttc ccaagccccc tgcgactgag ttgcttgagc aggtgctgcg tcttgttggt 13800
gaatcgcggc gccctgttct ttatgtgggc ggtggctgcg cagcatctgg tgaggagttg 13860
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ccggctgaga ttggcaagaa caagcagcca catgtgtcca tctgtgcaga tgttaagctt 14160
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attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagcg taccgacgat 27840
cttgctgcgt tcggatattt tcgtggagtt cccgccacag acccggattg aaggcgagat 27900
ccagcaactc gcgccagatc atcctgtgac ggaactttgg cgcgtgatga ctggccagga 27960
cgtcggccga aagagcgaca agcagatcac gcttttcgac agcgtcggat ttgcgatcga 28020
ggatttttcg gcgctgcgct acgtccgcga ccgcgttgag ggatcaagcc acagcagccc 28080
actcgacctt ctagccgacc cagacgagcc aag 28113
<210> 27
<211> 13822
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 27
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaat cgagctagtt accctatgag gtgacatgaa gcgctcacgg 360
ttactatgac ggttagcttc acgactgttg gtggcagtag cgtacgactt agctatagtt 420
ccggacttac ccttaagcga tttaaatcct gaggatatcg ctatcaactt tgtatagaaa 480
agttgggccg agctcggtac ggccagaatg gcccggaccg ggttaccgaa ttcaggcgac 540
ccatcgctgc tttgtctaca tcatgttctt catcatcctc cccaggcgac gcgtgctgct 600
gttcttattc agactaccgt tcgagtgact gcatggcgta catctttctg catcgacttt 660
gtacggctac atcgaacata tacacgagat gtctcgtgtg aatagagtca ctaatgcctt 720
aagcatcggt tactccgtag ggtacattct gttcttctta tttgtgcata tttttattgt 780
tgtttactga ttatacgagt agttatacat acatgcacat acatatcatc acatatatca 840
caatattttt ctaaattaaa ttaaaactaa aaatgactaa atttctaaca ccaacgacat 900
tgtaatgttt tctccaacaa ctttacctat tctacattgt tctatttcga atttcactct 960
ataaacaaca tagtctacaa tggaaaacag tgctttgtac gactatatac gcgatgtgtg 1020
gctacaacat aagacaatat agtcgtttga agattgaacc tatatatcgg tacggttaat 1080
ccgtctatgt acgtgggcat gacgaacacc cgtgataacg aaggattaac gtgcacaatc 1140
ataaatccaa agtaggagcg gtgcatgatg agaatcgctc tcagtactcg acataatgaa 1200
ccttacgagg tacaacaggc aggcaggcag ggaccagggg ccgcctttat ttcaggctcg 1260
ctggccccac gggcgtgctg cgtgcacgaa gggcactacc ccaacctctc accgaaaacc 1320
gcgctggatc ggcaaatcaa acgaggtggt gccccgtgcc cactctccac gtccacggca 1380
ccatccctct gcagccgctc accagccatg ccgtgtcgcg gaacggcaca accaccccca 1440
acccactcac gaaaccccgt cccggccgtg cccgtgtcgg tccgcgctcg gcaacgaggc 1500
ggcccgcgct gctgagtccc ctggacaccc gacaccctgt cggccctttg tttattcatc 1560
ccgaaatctc atctgccccc acggccgact gcgctgcgcc gcccggatat atatacccat 1620
cgttatcgac tggggactct atcagtgata gagtctagag gatcgctcag gaaggccgct 1680
gagatagagg catggcggcc aatgcgggcg gcggtggagc gggaggaggc agcggcagcg 1740
gcagcgtggc tgcgccggcg gtgtgccgcc ccagcggctc gcggtggacg ccgacgccgg 1800
agcagatcag gatgctgaag gagctctact acggctgcgg catccggtcg cccagctcgg 1860
agcagatcca gcgcatcacc gccatgctgc ggcagcacgg caagatcgag ggcaagaacg 1920
tcttctactg gttccagaac cacaaggccc gcgagcgcca gaagcgccgc ctcaccagcc 1980
tcgacgtcaa cgtgcccgcc gccggcgcgg ccgacgccac caccagccaa ctcggcgtcc 2040
tctcgctgtc gtcgccgccg ccttcaggcg cggcgcctcc ctcgcccacc ctcggcttct 2100
acgccgccgg caatggcggc ggatcggctg tgctgctgga cacgagttcc gactggggca 2160
gcagcggcgc tgctatggcc accgagacat gcttcctgca ggactacatg ggcgtgacgg 2220
acacgggcag ctcgtcgcag tggccacgct tctcgtcgtc ggacacgata atggcggcgg 2280
ccgcggcgcg ggcggcgacg acgcgggcgc ccgagacgct ccctctcttc ccgacctgcg 2340
gcgacgacgg cggcagcggt agcagcagct acttgccgtt ctggggtgcc gcgtccacaa 2400
ctgccggcgc cacttcttcc gttgcgatcc aacagcaaca ccagctgcag gagcagtaca 2460
gcttttacag caacagcaac agcacccagc tggccggcac cggcaaccaa gacgtatcgg 2520
caacagcagc agcagccgcc gccctggagc tgagcctcag ctcatggtgc tccccttacc 2580
ctgctgcagg gagtatgtga gagcaacgcg agctgccact gctcttcact ggtaccgtta 2640
acagatcaat tcgacaaagc agcattagtc cgttgatcgg tggaagacca ctcgtcagtg 2700
ttgagttgaa tgtttgatca ataaaatacg gcaatgctgt aagggttgtt ttttatgcca 2760
ttgataatac actgtactgt tcagttgttg aactctattt cttagccatg ccaagtgctt 2820
ttcttatttt gaataacatt acagcaaaaa gttgaaagac aaaaaaaaaa acccccgaac 2880
agagtgcttt gggtcccaag cttctttaga ctgtgttcgg cgttccccct aaatttctcc 2940
ccctatatct cactcacttg tcacatcagc gttctctttc cccctatatc tccacgctct 3000
acagcagttc cacctatatc aaacctctat accccaccac aacaatatta tatactttca 3060
tcttcaacta actcatgtac cttccaattt ttttctacta ataattattt acgtgcacag 3120
aaacttagca aggagagaga gagcggggtg acccaccttg ctagttggat attacctctt 3180
ctcttcaaag tatccttgaa cgctcaccgg ttatcaaatc tctacactat agctctgtag 3240
tcttgctaga tagttagttc tttagctctc ggtgaccaag cttggcgcga tcaagcttat 3300
cgataccgtc gacctcgaag cttggtcacc cggtccgggc ctagaaggcc agcttcaagt 3360
ttgtacaaaa aagcaggctc cggccagaat ggcccggacc gggttaccga attcttaccc 3420
tagctccctg cggctgttac gcggtccccc atcaatcttc tgttcttgcg gttgtagcct 3480
gtgtaacagt gctagagtat gtatgataaa taggttttaa gtctgcttac atgacatttt 3540
ttattgtgga agagacatat aaaaattaga gagagtggtt ctcatgcaac ggcggacggc 3600
ccggtgctaa aagagcttca agacaaaata atgaaacagg aagagagtag atttatctaa 3660
gagccaactt tattatatga atgtgtttat tgttggcttt agatgatatg gtaaggagtt 3720
agagctaata atagataggc tctattatta ttattattaa ttaaactcgc tctaaggagg 3780
aaagtgggag gaagggacga ggacgaagac tactggaagc atcgtgcatg gatgatggat 3840
gtggtgtctc ttaatgtagg tggccggagg atgtacgtgt taattgcgcg ataagcactc 3900
agatccaacc gcaaactacc tccacactga cacactgata gagagaaaga gagacctccg 3960
acgactgccg ccgcagatga gccacgtacg tatacgacgt ctgccggccg gctcaggctg 4020
ccgccatcac cctgctcgaa agtcgcgtta ggcggcgcca gctacatagg agtatctagt 4080
ctagccagtt agtatactac tactgcgctg atgatgaatt aactctgcat agatactgta 4140
cttgcctccc tccaacaccc aaccacctcc tgctcggctc ttaataactt ggacacggat 4200
cgatgccatc caaggaagaa cacgacgacg acgacggaac atccaccatg caagcttgca 4260
tccatacgcc gatacgcgtg catccatcca tccaccatta tttccatttt ccaccgatca 4320
cacgtacaca ggcctattta aggagcgaca tcccactgca actctcctca ccactcatca 4380
ccagctagct ctagcaaagc acttgccatc taccgaccgc cgcattccaa acagcccgac 4440
gagctagcag agcggcaggc acctccctcc tcaaggaacc catggccact gtgaacaact 4500
ggctcgcttt ctccctctcc ccgcaggagc tgccgccctc ccagacgacg gactccacac 4560
tcatctcggc cgccaccgcc gaccatgtct ccggcgatgt ctgcttcaac atcccccaag 4620
attggagcat gaggggatca gagctttcgg cgctcgtcgc ggagccgaag ctggaggact 4680
tcctcggcgg catctccttc tccgagcagc atcacaaggc caactgcaac atgataccca 4740
gcactagcag cacagtttgc tacgcgagct caggtgctag caccggctac catcaccagc 4800
tgtaccacca gcccaccagc tcagcgctcc acttcgcgga ctccgtaatg gtggcttcct 4860
cggccggtgt ccacgacggc ggtgccatgc tcagcgcggc cgccgctaac ggtgtcgctg 4920
gcgctgccag tgccaacggc ggcggcatcg ggctgtccat gattaagaac tggctgcgga 4980
gccaaccggc gcccatgcag ccgagggtgg cggcggctga gggcgcgcag gggctctctt 5040
tgtccatgaa catggcgggg acgacccaag gcgctgctgg catgccactt ctcgctggag 5100
agcgcgcacg ggcgcccgag agtgtatcga cgtcagcaca gggtggagcc gtcgtcgtca 5160
cggcgccgaa ggaggatagc ggtggcagcg gtgttgccgg cgctctagta gccgtgagca 5220
cggacacggg tggcagcggc ggcgcgtcgg ctgacaacac ggcaaggaag acggtggaca 5280
cgttcgggca gcgcacgtcg atttaccgtg gcgtgacaag gcatagatgg actgggagat 5340
atgaggcaca tctttgggat aacagttgca gaagggaagg gcaaactcgt aagggtcgtc 5400
aagtctattt aggtggctat gataaagagg agaaagctgc tagggcttat gatcttgctg 5460
ctctgaagta ctggggtgcc acaacaacaa caaattttcc agtgagtaac tacgaaaagg 5520
agctcgagga catgaagcac atgacaaggc aggagtttgt agcgtctctg agaaggaaga 5580
gcagtggttt ctccagaggt gcatccattt acaggggagt gactaggcat caccaacatg 5640
gaagatggca agcacggatt ggacgagttg cagggaacaa ggatctttac ttgggcacct 5700
tcagcaccca ggaggaggca gcggaggcgt acgacatcgc ggcgatcaag ttccgcggcc 5760
tcaacgccgt caccaacttc gacatgagcc gctacgacgt gaagagcatc ctggacagca 5820
gcgccctccc catcggcagc gccgccaagc gcctcaagga ggccgaggcc gcagcgtccg 5880
cgcagcacca ccacgccggc gtggtgagct acgacgtcgg ccgcatcgcc tcgcagctcg 5940
gcgacggcgg agccctggcg gcggcgtacg gcgcgcacta ccacggcgcc gcctggccga 6000
ccatcgcgtt ccagccgggc gccgccagca caggcctgta ccacccgtac gcgcagcagc 6060
caatgcgcgg cggcgggtgg tgcaagcagg agcaggacca cgcggtgatc gcggccgcgc 6120
acagcctgca ggacctccac cacctgaacc tgggcgcggc cggcgcgcac gactttttct 6180
cggcagggca gcaggccgcc gccgctgcga tgcacggcct gggtagcatc gacagtgcgt 6240
cgctcgagca cagcaccggc tccaactccg tcgtctacaa cggcggggtc ggcgacagca 6300
acggcgccag cgccgtcggc ggcagtggcg gtggctacat gatgccgatg agcgctgccg 6360
gagcaaccac tacatcggca atggtgagcc acgagcaggt gcatgcacgg gcctacgacg 6420
aagccaagca ggctgctcag atggggtacg agagctacct ggtgaacgcg gagaacaatg 6480
gtggcggaag gatgtctgca tgggggactg tcgtgtctgc agccgcggcg gcagcagcaa 6540
gcagcaacga caacatggcc gccgacgtcg ggcatggcgg cgcgcagctc ttcagtgtct 6600
ggaacgacac ttaagcgtac ctagtggtac ctgacatctt atagtctgca acctctcgtg 6660
tctgaattcc tatctttatc aagtgttatt gcttccacga ctataggaca gctttcgtcg 6720
aaaggttttg ctcatgtgat ctcgaaggat tcatctagtc tgatttttcg tgacttgtat 6780
cggttttatt ggattcatcc aacatatatc aataaaaaat gagttgtgtt tcctttcttc 6840
ctagttcagt taaaattatt tccctcctgc gcttgtgctg taattgtctg tgtacctgtt 6900
gtttgtgact gtgttagttc ccttggatat gatttcgtat ttgatatgta catggagata 6960
gcttagcttc attattggag tatgaagtta gtatgacata gtcactctcc tggaaaattg 7020
acactgcaaa ccatattttt attctgaacc acaaatccta gtcagtccgc tggcatatgc 7080
cgtccgtttg ctgaatccag aacgtgggtt tggagatgta cggctgagat gcctctatgc 7140
gaaggggatt tcgtggtgaa acgagatggg agtagagcaa cgcccgtgga agatgcttca 7200
aacttccaca cttttgagca acgatcggca gtagtaaggt agacgatttc aagatcaaag 7260
catatgaaga taaacaacat caacaacaaa atttgttggg gttctataga gagaaacaga 7320
gctacataca tacactgttt tgtatctacc atctgagatg atgaaaagat gaaaaactaa 7380
agaatgcccc ggcgccaacg ccaggacacg ccgcgcgcgc gtcacccgag ccatctcttg 7440
acccagccgg cgctgtatat ttacacacgt tgcagcatcg atcaccacct gttcgatcgc 7500
gtcgccgtca ccggtaccga gctcgaattc cggtccgggc ctagaaggcc gatctcccgg 7560
gcacccagct ttcttgtaca aagtggccgt taacggatcg gccagaatgg cccggaccgg 7620
gttaccgaat tcgagctcgg taccctggga tctgccctta ctttaacgcc tctaaccaac 7680
acccctttat ctttataagg aacaataaac agaatttgcc ccactgttct aaatcaccta 7740
ataatatccc cagctaaaaa caataaaggt ttcctagaat taagacaagc atgactgttc 7800
ctccaggagg gtttggaaca ttgttgcagt cttgcagata cgggcgaagg gtgagaaaca 7860
gagcggaggg ctggaggtga cctcggtagt cgacgccgga gttgagcttg acaacgacgg 7920
ggcggcccct gatggacttg aggaagtccg atggcgtctt caccgtcccg ccggcgcccg 7980
aggcgggcct gtcgctgccg ccgccgccgc tgctcatctt gcgcgctgtg cccccggcgg 8040
tgtccctgtg ttgcggatcg cgggtgggcc aggtggatgc gagggcgacc cgtttggact 8100
ccggccggag ccgccggatc cctggtcggt gtcagtgccg tttactctgg gccccacgtg 8160
tcagtaccgt ctgtagatga caacaacccg tcgtccacag tcatgtccaa aatatccttt 8220
cttctttttt ttcgattcgg atatctatct tccttttttt tttccaaaaa tcttcttgac 8280
gcaccagcgc gcacgtttgt ggtaaacgcc gacacgtcgg tcccacgtcg atagacccca 8340
cccaccagtg agtagcgtgt acgtattcgg gggtgacgga cgtgtcgccg tcgtcttgct 8400
agtcccattc ccatctgagc cacacatctc tgaacaaaaa aaaggaggga ggcctccacg 8460
cacatccccc tccgtgccac ccgccccaaa ccctcgcgcc gcctccgaga cagccgccgc 8520
aaccatggcc accgccgccg ccgcgtctac cgcgctcact ggcgccacta ccgctgcgcc 8580
caaggcgagg cgccgggcgc acctcctggc cacccgccgc gccctcgccg cgcccatcag 8640
gtgctcagcg gcgtcacccg ccatgccgat ggctcccccg gccaccccgc tccggccgtg 8700
gggccccacc gagccccgca agggtgctga catcctcgtc gagtccctcg agcgctgcgg 8760
cgtccgcgac gtcttcgcct accccggcgg cgcgtccatg gagatccacc aggcactcac 8820
ccgctccccc gtcatcgcca accacctctt ccgccacgag caaggggagg cctttgccgc 8880
ctccggctac gcgcgctcct cgggccgcgt cggcgtctgc atcgccacct ccggccccgg 8940
cgccaccaac ctagtctccg cgctcgccga cgcgctgctc gattccgtcc ccatggtcgc 9000
catcacggga caggtggcgc gacgcatgat tggcaccgac gccttccagg agacgcccat 9060
cgtcgaggtc acccgctcca tcaccaagca caactacctg gtcctcgacg tcgacgacat 9120
cccccgcgtc gtgcaggagg ctttcttcct cgcctcctct ggtcgaccag ggccggtgct 9180
tgtcgacatc cccaaggaca tccagcagca gatggcggtg cctgtctggg acaagcccat 9240
gagtctgcct gggtacattg cgcgccttcc caagccccct gcgactgagt tgcttgagca 9300
ggtgctgcgt cttgttggtg aatcgcggcg ccctgttctt tatgtgggcg gtggctgcgc 9360
agcatctggt gaggagttgc gacgctttgt ggagctgact ggaatcccgg tcacaactac 9420
tcttatgggc ctcggcaact tccccagcga cgacccactg tctctgcgca tgctaggtat 9480
gcatgggacg gtgtatgcaa attatgcagt ggataaggcc gatctgttgc ttgcacttgg 9540
tgtgcggttt gatgatcgcg tgacagggaa gattgaggct tttgcaagca gggctaagat 9600
tgtgcacgtt gatattgatc cggctgagat tggcaagaac aagcagccac atgtgtccat 9660
ctgtgcagat gttaagcttg ctttgcaggg catgaatgct cttcttgaag gaagcacatc 9720
aaagaagagc tttgactttg gctcatggaa cgatgagttg gatcagcaga agagggaatt 9780
cccccttggg tataaaacat ctaatgagga gatccagcca caatatgcta ttcaggttct 9840
tgatgagctg acgaaaggcg aggccatcat cggcacaggt gttgggcagc accagatgtg 9900
ggcggcacag tactacactt acaagcggcc aaggcagtgg ttgtcttcag ctggtcttgg 9960
ggctatggga tttggtttgc cggctgctgc tggtgcttct gtggcaaacc caggtgtcac 10020
tgttgttgac atcgatggag atggtagctt tctcatgaac gttcaggagc tagctatgat 10080
ccgaattgag aacctcccag tgaaggtctt tgtgctaaac aaccagcacc tggggatggt 10140
ggtgcagttg gaggacaggt tctataaggc caacagagcg cacacatact tgggaaaccc 10200
agagaatgaa agtgagatat atccagattt cgtgacgatc gccaaagggt tcaacattcc 10260
agcggtccgt gtgacaaaga agaacgaagt ccgcgcagcg ataaagaaga tgctcgagac 10320
tccagggccg tacctcttgg atataatcgt cccacaccag gagcatgtgt tgcctatgat 10380
ccctagtggt ggggctttca aggatatgat cctggatggt gatggcagga ctgtgtactg 10440
actagctagt cagttaacag atctgccaga tcctcggtgt acaaataacc cgtcttatcc 10500
tatgagacgg gccggcgtca gtgtgttctg gaggaatttt tatgtcagag cctttttctt 10560
tgtgtgcttg atgtagatgc caagggaagc ttattggctg ttgaagcttg atgcaaaata 10620
aattatggaa ctctgttttt tgtttatcta ataataacta gcaaatatgc ttccattgca 10680
ttgaaactaa cagccttttg tgtttccaag ttttattttg tgacaatgtc atctatttca 10740
attagttgtg gaatcggaaa cttgcaggac taacttggaa actccaatcc ctcagcatcc 10800
tggacttttt cctggtgtaa tccatgtaga tattatttta atcatcattt tagttctgga 10860
ggtttttcca tctccggttt tgctcccctt tcttcaaaaa aaaaaaaaaa atgccgtagg 10920
cgccgcaacg cccacctgtt gttcaaactc atgggcacga gtggctcgaa gattttatac 10980
aacaattgct gtagtttcac cgttgctggt gaagaagcat ttttttaaaa aaatatagtg 11040
gtattcattt taattagttt agttgtgcag cgagcaaaat ttggacatgc tctgctcgga 11100
atctgatcga cctagacaca gattagcagc agtagctttg tcatctgttc caagagttgc 11160
gatctgatag aagaaaaaaa aaccttccct tcaatgtaaa accgaaacta acaagaaaga 11220
agcacagtgc cgtttaggca agtatggagt acgtattaag catgtagaag gccatgcatg 11280
aaccactaac aagaaagaag cgcagtgcca ttcaggcaag cataagcatg tagattggca 11340
tgcatgaaca actaacagta gatcgtctct ggtctgatta gaagtttttt gggaagccaa 11400
gaaatcatgt acaactggtt ccatctcaaa ttccgtggca aaaagaggcc taagcaacat 11460
aaagcttcgg tccgggccta gaaggccatt gggtcatcgg atcccgggca actttattat 11520
acaaagttga tagatatctg gtctaactaa ctagtcctaa ggacccggcg gaccgaagct 11580
ggccgctcta gaactagtgg atctcgatgt gtagtctacg agaagggtta accgtctctt 11640
cgtgagaata accgtggcct aaaaataagc cgatgaggat aaataaaatg tggtggtaca 11700
gtacttcaag aggtttactc atcaagagga tgcttttccg atgagctcta gtagtacatc 11760
ggacctcaca tacctccatt gtggtgaaat attttgtgct catttagtga tgggtaaatt 11820
ttgtttatgt cactctaggt tttgacattt cagttttgcc actcttaggt tttgacaaat 11880
aatttccatt ccgcggcaaa agcaaaacaa ttttatttta cttttaccac tcttagcttt 11940
cacaatgtat cacaaatgcc actctagaaa ttctgtttat gccacagaat gtgaaaaaaa 12000
acactcactt atttgaagcc aaggtgttca tggcatggaa atgtgacata aagtaacgtt 12060
cgtgtataag aaaaaattgt actcctcgta acaagagacg gaaacatcat gagacaatcg 12120
cgtttggaag gctttgcatc acctttggat gatgcgcatg aatggagtcg tctgcttgct 12180
agccttcgcc taccgcccac tgagtccggg cggcaactac catcggcgaa cgacccagct 12240
gacctctacc gaccggactt gaatgcgcta ccttcgtcag cgacgatggc cgcgtacgct 12300
ggcgacgtgc ccccgcatgc atggcggcac atggcgagct cagaccgtgc gtggctggct 12360
acaaatacgt accccgtgag tgccctagct agaaacttac acctgcaact gcgagagcga 12420
gcgtgtgagt gtagccgagt agatcccccg ggctgcaggt cgactctaga ggatccaccg 12480
gtcgccacca tggcccacag caagcacggc ctgaaggagg agatgaccat gaagtaccac 12540
atggagggct gcgtgaacgg ccacaagttc gtgatcaccg gcgagggcat cggctacccc 12600
ttcaagggca agcagaccat caacctgtgc gtgatcgagg gcggccccct gcccttcagc 12660
gaggacatcc tgagcgccgg cttcaagtac ggcgaccgga tcttcaccga gtacccccag 12720
gacatcgtgg actacttcaa gaacagctgc cccgccggct acacctgggg ccggagcttc 12780
ctgttcgagg acggcgccgt gtgcatctgt aacgtggaca tcaccgtgag cgtgaaggag 12840
aactgcatct accacaagag catcttcaac ggcgtgaact tccccgccga cggccccgtg 12900
atgaagaaga tgaccaccaa ctgggaggcc agctgcgaga agatcatgcc cgtgcctaag 12960
cagggcatcc tgaagggcga cgtgagcatg tacctgctgc tgaaggacgg cggccggtac 13020
cggtgccagt tcgacaccgt gtacaaggcc aagagcgtgc ccagcaagat gcccgagtgg 13080
cacttcatcc agcacaagct gctgcgggag gaccggagcg acgccaagaa ccagaagtgg 13140
cagctgaccg agcacgccat cgccttcccc agcgccctgg cctgaagcgg cccatggata 13200
ttcgaacgcg taggtaccac atggttaacc tagacttgtc catcttctgg attggccaac 13260
ttaattaatg tatgaaataa aaggatgcac acatagtgac atgctaatca ctataatgtg 13320
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atccatattt cttatcctaa atgaatgtca cgtgtcttta taattctttg atgaaccaga 13440
tgcatttcat taaccaaatc catatacata taaatattaa tcatatataa ttaatatcaa 13500
ttgggttagc aaaacaaatc tagtctaggt gtgttttgcg aatgcggccg ccaccgcggt 13560
ggagctcgaa ttccggtccg aagcttaagc catggcccgg gaatcttagc ggccgcctgc 13620
agagttaacg gcgcgccgac tagctagcta aggtaccgag ctcgaattca ttccgattaa 13680
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<213> 玉蜀黍(Zea mays)
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aatatgacca actcaatccc cactttcatc tattttcgag ttctgtaaaa aaatgagaaa 1200
aataagcaac aaaaaatagg aaaaataaat tattttcaag ctatgttata aggcagacct 1260
ttggtcactc agaaccttag cacgatacga catgatagtc tatcataacc cgttttaaat 1320
tagtagggtt atgtttgggc tcagacttcg gctcacggac agacaccata accccgcccg 1380
ctatttatct gtaccgtgtc tcggatcgat taaatcggca cggcccatga cgggctccgg 1440
ccgtgcttgc acggcactgt ccattagcca cgtgtagttg caaggtgtga cgagtgttaa 1500
cttcacccgt ccaatcgatt ttaacacgcg ggggcctgcg gttagagatt ggacaaggcc 1560
cgccagtaat cttctggtcc aaatgttaac acgcgcgcaa ttgtaaaaga aatatatgtc 1620
tatatagtaa aacgcgaaga gagagatact tctgcggaaa cga 1663
<210> 37
<211> 919
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 37
ttggggaggt ggagtccgac ggtgcggtgg gggaggagat ggagtccaat ggtggggtgg 60
aggagaggga ggggaggccg ccggagttga gcacagtgga ggaagctgcg cgagcccgtg 120
gctgcaaccg ccggcggtga ttaggtcaaa tgcgagaacg cggtcggcca tgggctgcac 180
gctaggatgg tgggctgcac gatgggacga tgggccttag gcccacacga aaatcattgg 240
accgcccgaa ccgctgccac aggcgcgctg gtatgctatc tattttatta gtgccacatc 300
gtccattgag agtgacggaa catggcttat aagcgcagtt gtgtattgtg tgttgctcac 360
taagagagat ggaactggat gtggctcaaa aacttgtgta tgtactgttt attttgttac 420
tcaggactgc atggtgcgta tggccggtgg ggcccacatg tagcggctgt tggaggcaga 480
acaacagttg gcagaacgcg tcggaggcag aacacgtcag aggcagacta ctattgcagt 540
cttaataagt agtagagaaa tagaagtgaa atggagttag agcatctgaa agccagaggc 600
ttccatgcag gccacctaag caataccttc ctctatattt gcatgcccaa gagtcacctg 660
cacgtgtcac acggacccat cgccatttgg ataatgggtg ccacgtgtga aaaagcccag 720
ccaatgggat ggaagcagag cctcacgccc tatccatacg acaaccacaa cccccctccc 780
gcctcagttt cctccaccgg acacctgctg ccacccacac gatcaaaaac aaaaccaagc 840
tccaagcacc catagccaca caccacacca ggtcaaagca aggagctcga tcgagagcaa 900
caagccaaca acggccatc 919
<210> 38
<211> 751
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 38
cccacagaga taaaagttct ccactatgta tgtatgttgt tttaaactgt agtcatagaa 60
gaagtcaccg tgctcactga taggagggtc taaaagtaga tgcattaatc aaaaacaaaa 120
catacatcat tgaactttaa aagcatataa ccttcaatac taaataaaaa gattagtatt 180
gtttaaatat tagatactac tgataaaaaa gataaacacc attagctata ttaccaccct 240
ctccaactgt tttctgaact aattgtaaat gggcccatag tgtagtcgtc aagcatggag 300
gcccgctcga ccgacctcct cgatcgctca aatttggaaa cagcggttgc tactgaccgg 360
ggtgagtgct gcgttgttgg cgactgccct gttttttaat ggattcagtg agagctaaaa 420
agtgcgagac tgcgagagaa atccagcagg tgtacgtacg taaagcgaga gtcgacgcgt 480
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tgcctcgcgc ctccctcacc gtgccaatgc c 751
<210> 39
<211> 1311
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 39
aggcgaccca tcgctgcttt gtctacatca tgttcttcat catcctcccc aggcgacgcg 60
tgctgctgtt cttattcaga ctaccgttcg agtgactgca tggcgtacat ctttctgcat 120
cgactttgta cggctacatc gaacatatac acgagatgtc tcgtgtgaat agagtcacta 180
atgccttaag catcggttac tccgtagggt acattctgtt cttcttattt gtgcatattt 240
ttattgttgt ttactgatta tacgagtagt tatacataca tgcacataca tatcatcaca 300
tatatcacaa tatttttcta aattaaatta aaactaaaaa tgactaaatt tctaacacca 360
acgacattgt aatgttttct ccaacaactt tacctattct acattgttct atttcgaatt 420
tcactctata aacaacatag tctacaatgg aaaacagtgc tttgtacgac tatatacgcg 480
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cacaatcata aatccaaagt aggagcggtg catgatgaga atcgctctca gtactcgaca 660
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aggctcgctg gccccacggg cgtgctgcgt gcacgaaggg cactacccca acctctcacc 780
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acccccaacc cactcacgaa accccgtccc ggccgtgccc gtgtcggtcc gcgctcggca 960
acgaggcggc ccgcgctgct gagtcccctg gacacccgac accctgtcgg ccctttgttt 1020
attcatcccg aaatctcatc tgcccccacg gccgactgcg ctgcgccgcc cggatatata 1080
tacccatcgt tatcgatcga tcgatcgcgt cactcacggg tagctcatgg tcgagcgtag 1140
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<210> 40
<211> 229
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 40
ccttttgtct cccttttgtc tcccttttgt ctcccttttg tctcgccggc cttttgtctc 60
ccttttgtct cccttttgtc tcccttttgt ctctgacagt ggtcccaaag atggaccccc 120
acccacgagg agcatcgtgg aaaaagaaga cgttccaacc acgtcttcaa agcaagtgga 180
ttgatgtgat atctccactg acgtaaggga tgacgcacaa tcccactag 229
<210> 41
<211> 22782
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 41
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
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cgttcgagtg actgcatggc gtacatcttt ctgcatcgac tttgtacggc tacatcgaac 780
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ggactctatc agtgatagag tctagaggat cgctcaggaa ggccgctgag atagaggcat 1800
ggcggccaat gcgggcggcg gtggagcggg aggaggcagc ggcagcggca gcgtggctgc 1860
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catcaccgcc atgctgcggc agcacggcaa gatcgagggc aagaacgtct tctactggtt 2040
ccagaaccac aaggcccgcg agcgccagaa gcgccgcctc accagcctcg acgtcaacgt 2100
gcccgccgcc ggcgcggccg acgccaccac cagccaactc ggcgtcctct cgctgtcgtc 2160
gccgccgcct tcaggcgcgg cgcctccctc gcccaccctc ggcttctacg ccgccggcaa 2220
tggcggcgga tcggctgtgc tgctggacac gagttccgac tggggcagca gcggcgctgc 2280
catggccacc gagacatgct tcctgcagga ctacatgggc gtgacggaca cgggcagctc 2340
gtcgcagtgg ccacgcttct cgtcgtcgga cacgataatg gcggcggccg cggcgcgggc 2400
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cagcggtagc agcagctact tgccgttctg gggtgccgcg tccacaactg ccggcgccac 2520
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cagcaacagc acccagctgg ccggcaccgg caaccaagac gtatcggcaa cagcagcagc 2640
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caaagcagca ttagtccgtt gatcggtgga agaccactcg tcagtgttga gttgaatgtt 2820
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cccaagcttc tttagactgt gttcggcgtt ccccctaaat ttctccccct atatctcact 3060
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gagtatgtat gataaatagg ttttaagtct gcttacatga cattttttat tgtggaagag 3660
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ctcgaaagtc gcgttaggcg gcgccagcta cataggagta tctagtctag ccagttagta 4200
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gtgttatgtg taattactag ttatctgaat aaaagagaaa gagatcatcc atatttctta 7800
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caaatctagt ctaggtgtgt tttgcgaatg cgaccttctt atgtgcttct agtctccaaa 7980
tgtggttgat agttattttg ctctaagatc aacagtaatg aagtataaat catcgttgtg 8040
gtgtgctact cggttaattg agcattaaca cacacaaaca tgacgaggat ggtataatct 8100
ccaaaaatgt gtactttgtt aggtgggacc ctatagcctt gattaatgtg ctatgttagg 8160
catgcctgga aacgtgtgac gcatatgttt tgtgaacctg ttgatattat atgtgctttt 8220
atattaccat attttattaa aatactaata tttattacta gtaagatata acattctatc 8280
tagcttaaaa actaaccata aatattccat aataactaga tttaccaaac taatatacta 8340
aatatacata ataaatacaa aattaacaag acaataatca atatttatga gcttaatata 8400
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<210> 42
<211> 19832
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 42
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cgttcgagtg actgcatggc gtacatcttt ctgcatcgac tttgtacggc tacatcgaac 780
atatacacga gatgtctcgt gtgaatagag tcactaatgc cttaagcatc ggttactccg 840
tagggtacat tctgttcttc ttatttgtgc atatttttat tgttgtttac tgattatacg 900
agtagttata catacatgca catacatatc atcacatata tcacaatatt tttctaaatt 960
aaattaaaac taaaaatgac taaatttcta acaccaacga cattgtaatg ttttctccaa 1020
caactttacc tattctacat tgttctattt cgaatttcac tctataaaca acatagtcta 1080
caatggaaaa cagtgctttg tacgactata tacgcgatgt gtggctacaa cataagacaa 1140
tatagtcgtt tgaagattga acctatatat cggtacggtt aatccgtcta tgtacgtggg 1200
catgacgaac acccgtgata acgaaggatt aacgtgcaca atcataaatc caaagtagga 1260
gcggtgcatg atgagaatcg ctctcagtac tcgacataat gaaccttacg aggtacaaca 1320
ggcaggcagg cagggaccag gggccgcctt tatttcaggc tcgctggccc cacgggcgtg 1380
ctgcgtgcac gaagggcact accccaacct ctcaccgaaa accgcgctgg atcggcaaat 1440
caaacgaggt ggtgccccgt gcccactctc cacgtccacg gcaccatccc tctgcagccg 1500
ctcaccagcc atgccgtgtc gcggaacggc acaaccaccc ccaacccact cacgaaaccc 1560
cgtcccggcc gtgcccgtgt cggtccgcgc tcggcaacga ggcggcccgc gctgctgagt 1620
cccctggaca cccgacaccc tgtcggccct ttgtttattc atcccgaaat ctcatctgcc 1680
cccacggccg actgcgctgc gccgcccgga tatatatacc catcgttatc gactggggac 1740
tctatcagtg atagagtcta gaggatcgct caggaaggcc gctgagatag aggcatggcg 1800
gccaatgcgg gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg 1860
gcggtgtgcc gccccagcgg ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat caggatgctg 1920
aaggagctct actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat ccagcgcatc 1980
accgccatgc tgcggcagca cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag 2040
aaccacaagg cccgcgagcg ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt caacgtgccc 2100
gccgccggcg cggccgacgc caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg 2160
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ggcggatcgg ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg 2280
gccaccgaga catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg 2340
cagtggccac gcttctcgtc gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc gcgggcggcg 2400
acgacgcggg cgcccgagac gctccctctc ttcccgacct gcggcgacga cggcggcagc 2460
ggtagcagca gctacttgcc gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg cgccacttct 2520
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aacagcaccc agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc agcagcagcc 2640
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tgagagcaac gcgagctgcc actgctcttc actggtaccg ttaacagatc aattcgacaa 2760
agcagcatta gtccgttgat cggtggaaga ccactcgtca gtgttgagtt gaatgtttga 2820
tcaataaaat acggcaatgc tgtaagggtt gttttttatg ccattgataa tacactgtac 2880
tgttcagttg ttgaactcta tttcttagcc atgccaagtg cttttcttat tttgaataac 2940
attacagcaa aaagttgaaa gacaaaaaaa aaaacccccg aacagagtgc tttgggtccc 3000
aagcttcttt agactgtgtt cggcgttccc cctaaatttc tccccctata tctcactcac 3060
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taccttccaa tttttttcta ctaataatta tttacgtgca cagaaactta gcaaggagag 3240
agagagcggg gtgacccacc ttgctagttg gatattacct cttctcttca aagtatcctt 3300
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ttctttagct ctcggtgacc aagcttggcg cgatcaagct tatcgatacc gtcgacctcg 3420
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ctccggccag aatggcccgg accgggttac cgaattctta ccctagctcc ctgcggctgt 3540
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tcaagacaaa ataatgaaac aggaagagag tagatttatc taagagccaa ctttattata 3780
tgaatgtgtt tattgttggc tttagatgat atggtaagga gttagagcta ataatagata 3840
ggctctatta ttattattat taattaaact cgctctaagg aggaaagtgg gaggaaggga 3900
cgaggacgaa gactactgga agcatcgtgc atggatgatg gatgtggtgt ctcttaatgt 3960
aggtggccgg aggatgtacg tgttaattgc gcgataagca ctcagatcca accgcaaact 4020
acctccacac tgacacactg atagagagaa agagagacct ccgacgactg ccgccgcaga 4080
tgagccacgt acgtatacga cgtctgccgg ccggctcagg ctgccgccat caccctgctc 4140
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gagagtgtat cgacgtcagc acagggtgga gccgtcgtcg tcacggcgcc gaaggaggat 5280
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gataacagtt gcagaaggga agggcaaact cgtaagggtc gtcaagtcta tttaggtggc 5520
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ggtgcatcca tttacagggg agtgactagg catcaccaac atggaagatg gcaagcacgg 5760
attggacgag ttgcagggaa caaggatctt tacttgggca ccttcagcac ccaggaggag 5820
gcagcggagg cgtacgacat cgcggcgatc aagttccgcg gcctcaacgc cgtcaccaac 5880
ttcgacatga gccgctacga cgtgaagagc atcctggaca gcagcgccct ccccatcggc 5940
agcgccgcca agcgcctcaa ggaggccgag gccgcagcgt ccgcgcagca ccaccacgcc 6000
ggcgtggtga gctacgacgt cggccgcatc gcctcgcagc tcggcgacgg cggagccctg 6060
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ggcgccgcca gcacaggcct gtaccacccg tacgcgcagc agccaatgcg cggcggcggg 6180
tggtgcaagc aggagcagga ccacgcggtg atcgcggccg cgcacagcct gcaggacctc 6240
caccacctga acctgggcgc ggccggcgcg cacgactttt tctcggcagg gcagcaggcc 6300
gccgccgctg cgatgcacgg cctgggtagc atcgacagtg cgtcgctcga gcacagcacc 6360
ggctccaact ccgtcgtcta caacggcggg gtcggcgaca gcaacggcgc cagcgccgtc 6420
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gcaatggtga gccacgagca ggtgcatgca cgggcctacg acgaagccaa gcaggctgct 6540
cagatggggt acgagagcta cctggtgaac gcggagaaca atggtggcgg aaggatgtct 6600
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gccgccgacg tcgggcatgg cggcgcgcag ctcttcagtg tctggaacga cacttaagcg 6720
tacctagtgg tacctgacat cttatagtct gcaacctctc gtgtctgaat tcctatcttt 6780
atcaagtgtt attgcttcca cgactatagg acagctttcg tcgaaaggtt ttgctcatgt 6840
gatctcgaag gattcatcta gtctgatttt tcgtgacttg tatcggtttt attggattca 6900
tccaacatat atcaataaaa aatgagttgt gtttcctttc ttcctagttc agttaaaatt 6960
atttccctcc tgcgcttgtg ctgtaattgt ctgtgtacct gttgtttgtg actgtgttag 7020
ttcccttgga tatgatttcg tatttgatat gtacatggag atagcttagc ttcattattg 7080
gagtatgaag ttagtatgac atagtcactc tcctggaaaa ttgacactgc aaaccatatt 7140
tttattctga accacaaatc ctagtcagtc cgctggcata tgccgtccgt ttgctgaatc 7200
cagaacgtgg gtttggagat gtacggctga gatgcctcta tgcgaagggg atttcgtggt 7260
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gcaacgatcg gcagtagtaa ggtagacgat ttcaagatca aagcatatga agataaacaa 7380
catcaacaac aaaatttgtt ggggttctat agagagaaac agagctacat acatacactg 7440
ttttgtatct accatctgag atgatgaaaa gatgaaaaac taaagaatgc cccggcgcca 7500
acgccaggac acgccgcgcg cgcgtcaccc gagccatctc ttgacccagc cggcgctgta 7560
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ctgagtcgaa acctagactt gtccatcttc tggattggcc aacttaatta atgtatgaaa 7680
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atccatatac atataaatat taatcatata taattaatat caattgggtt agcaaaacaa 7920
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ggttgatagt tattttgctc taagatcaac agtaatgaag tataaatcat cgttgtggtg 8040
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atatcatgat aagaaaacat actagacatt aataatctgc tagaaatggg aagaatccta 8700
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cgcagccttc ctccacgtag ccgcgcggcc gcgccacgta ccagggcccg gcgctggtat 10260
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cagacggccg agacgttgac accttcggcg cggcatctct cgagagttcc gctccggcgc 13200
tccacctcca ccgctggcgg tttcttattc cgttccgttc cgcctcctgc tctgctcctc 13260
tccacaccac acggcacgaa accgttacgg caccggcagc acccagcacg ggagagggga 13320
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cccttcaagg gcaagcaggc catcaacctg tgcgtggtgg agggcggccc cttgcccttc 14760
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成构建体
<400> 43
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gtacgatgga gaaaatgaat aaacaactga gaaaatggct cttgtttagt tgatgatgct 840
cttaagcttt ccactggttg ccatatatga tttgggcatt tcactttgat cttaatgggc 900
cttgtaaagc ccaagactca tgattatctt tagttgatgc tcttaattag gtgtgggcaa 960
ataattcaaa ctgtatgtac ccgaccaaaa ccaaagcaaa aataatcgaa ccaaaccgaa 1020
aatttaaaaa taaccgaatg aaaactaaat cctataactg aaagaactga aaccgaatca 1080
aaatatttaa tgtaaccaaa aatatccgaa atataattat attgtcaaaa atattaataa 1140
tttctagatt aaataattaa aaatacttaa aaatttatat aaaatagtaa aaatactcga 1200
aaataaccac aaatattcaa aaacaaccga aatatcccaa aatattcaaa gcaaaataac 1260
cgaatggata ccaaatttta aaaccgaaaa aactggaaca aaaccaaaat cgaaccaaaa 1320
tttcaaaaat cgaataaata ctaaacttta gaacaaaaaa aaacgataac cgaatgtata 1380
cgaaccaaag ccgaattaga taaccgaacg tccaggacta ctcttaatct ttccgccact 1440
tatgatttgg gctattactt tgtttataat gagccttttc aagctcaagt tcatgattgt 1500
ccgtgagatg agaaactgac ttgttggatt cgaaacccta gctagtattg gttaatactt 1560
aatacataaa tgacctgcat tgacatcatc atccaagaaa ataaaaattg tatgcttgag 1620
atatttagtt ttcctagcta ggttttcttt attttagtac cgaatcttta ggtgtgccac 1680
gttaatttag acccattttt tcatacttac caactgagtc tagtttaatc atgactataa 1740
tcgtataaaa tgattcagtc gacgtcattg cgaacgtata taaaatcatc caaattgacg 1800
tcattccaaa gaggtaagca tgcttatcta agagtccgag catactaaac aagacgacat 1860
tttatttgca ctccaaatca aattttgtat tgcctaaaga aaaacaatca aactcaagtt 1920
tcttaaaatt aatttcattc aaactaatca ctttcaatat ctcacatatt attcatgcca 1980
tttctatttg tctaaacatg atttaaaaaa aaaagtaaaa tacaaagatt actatgcaaa 2040
aactctataa aaaaaaattc aaatttctta tttatttgtg acatcaaatt ttcaaaataa 2100
tttttttaat tatcggttga tccggtcagt cgataaaaac ataaactttc agcgaccgtt 2160
aaaactttcc tactaccgat ttagagaaaa tcttagcttg aaacgtaatt gtaacctgcc 2220
ttcatgcaag tcgcaagata tgtcatccta agttgtatat gttttctcaa aagatgtatt 2280
tacttgagaa aatacgtttc aacgttgatg gacaaccaat taagaatcaa gcacctttcg 2340
taatcaattt aggcttatcg tctaaggtat actgatttac gacagttgac tagacttata 2400
aggaacaaaa taatagaata gtttctaaac acttcaccta atcatagaga ctaagatggt 2460
aattcgtaaa cgacaaagcc tagtgacact gtccattgta aaattccaca tcatattagt 2520
attaaacata tacatgtagt ttcctgaaca catgtagtat caaacacact tcgtggcttc 2580
ttcctcgaaa cctgcggccg cgctatagtt ccggacttac ccttaagata acttcgtata 2640
gcatacatta tacgaagtta tgggcccacg cgtgaagagc ggttaccaga gctggtcacc 2700
tttgtccacc aagatggaac tgtcttcggc cagaatggcc atctggattc agcaggccta 2760
gaaggccatt tatcgctatc aactttgtat agaaaagttg ggccgaattc gagctcggta 2820
cggccagaat ggcccggacc gggttaccga attcgagctc ggtaccctgg gatccgatat 2880
cgatgggccc tggccgaagc ttggtcaccc ggtccgggcc tagaaggcca gcttcaagtt 2940
tgtacaaaaa agcaggctcc ggccagaatg gcccggaccg ggttaccgaa ttcgagctcg 3000
gtaccctggg atccgatatc gatgggccct ggccgaagct tggtcacccg gtccgggcct 3060
agaaggccga tctcccgggc acccagcttt cttgtacaaa gtggccgtta acggatcggc 3120
cagaatggcc cggaccgggt taccgaattc gagctcggta ccctgggatc cgatatcgat 3180
gggccctggc cgaagcttgg tcacccggtc cgggcctaga aggccagctt cggccgcccc 3240
gggcaacttt attatacaaa gttgatagat aaatcagata tctggttcct aaggacccgg 3300
cggaccgatt aaactgattc ggtccgacgc gttacctaat aacttcgtat agcatacatt 3360
atacgaagtt attagctaac taactagtaa gcttaagcca tgggtcgacg gatccgttaa 3420
ctagcgtggc atttggcacc gccgcacact atgcgagcta ggagtgctag tttacagatg 3480
aaactatgaa accaagaaaa cacaattgtc cgtagctagc gcgtggcgtc gtgtcaagct 3540
tcacacagta tcttcgttct tcactataaa tcgcgcctgt tgttcgtgag acccaccacc 3600
gtggataaca gtcccctaat aataagcgat caacagcact gctgatggct gaacaccgag 3660
gcgccgccgc gcgtaaccat ccgccggagc agcccgtcgt gccggcgaac gacgccttcc 3720
ccgaccgcgc ccagcagctc tgcctcgacg ccgggcgcgc gctcgcgatg tgcggcgtgc 3780
tcgtcgccgt ccctcccgca ttttacgcgt cgacgtcgcg gacgacaccg cacttgcctt 3840
cgtcggcttc gtcctctgga tcatcggtgc gtggctgtgc ctcctggcgc tcacgccctt 3900
ggctccacgg gcggtgaggg cgggcggggc cgccgccagc accttgctga tcaggtgcct 3960
gtccctttca tgaactacta gcgcccgcgc ccgcggccgc cgggcacaag agaacacatc 4020
gatgttcgct gcgtacgtca gcaataaggc actctttgtc agtagtcgag tgcatatgtt 4080
gggtgtttgc cctgggagat ttcaagtgtt gtggccatta tcccgcagga taaaaaatcg 4140
gcggcttttg gattgatacg gaaaataacg atgtttcatg ctcgtgttgt gtgtgtgaca 4200
tcttgtcagc caagttttta accgttgcta ctccccctct gtgggctcag tgtgtggacc 4260
ggaatacgtc gtacataggc cgtagcctaa gcccaatatg ccgtttttca ggttggcctg 4320
tgtgacgaca agcgggtctc aaaagcccat cacgcaactg gcctgcaatt attggaggag 4380
agcgcgtcga gttggttcca gaggctgcgt ggtggggccg gactctgcga cgacctctcg 4440
ttcgcgtccg atttggttgc cgtgagccgt gacgtaacgc ctccttccgt tcctccctat 4500
ataagttcca cccccgggtc cggtttcccc aagccccagt gacccccgat cccgatcgcg 4560
aaatctccgc acccgccggc aagggaccga agcaagcctc tctcccgacc gtcgcatcaa 4620
ggtacgcgtc cgctcgatct gtcctcttcc ttctcgattt gacttgctgt ggtgcccgat 4680
cacgggatca gaatcgcacc agtgtagatt tcgcatgttc taagatgtgt tagtttccag 4740
gctaatccag ttctcttgac gcccgatccg atcgagctcc gtgtttattt cagcctaatc 4800
gtagtattcc cctaaaattt cctcattagg gggttcgcaa gattgttggt cgacaggttc 4860
acttatgctc gatcgcttac ttttagtcga ttcatgctgc gtactattgt tgccccccgt 4920
ggttttatct tttctcgtgt gaaatccagt agatatagta gatatcgtag cattaggttt 4980
taattcaatc gattgattat tgtatcatca aaattgagaa gttcgaatca tgcctatcat 5040
gctgcctcaa ccgaaatcct gtatattgaa gtttcaattc aattgattga tcattcatta 5100
gattcaacca aaatctagaa ggttagatga cgcatgtcat gctgcctgcg tagtttacct 5160
ttgatctgtt tatgattacc ttatcagtag gatatttgtg attttgggaa gtagcactaa 5220
ctgattcatg ctgacatgat gttccctttc agattatact gttgagtcct atctaattga 5280
tgctttgtat gctatatgaa tacgtcatgg taaattagca gttaattagc atattagcaa 5340
ttgggcgtac ctcatcagga ttgctcttgt agatgtgtgt ggtgatgttt cttgttcaat 5400
tcatgttctg ctttaaaagt atgtgttctc tgtttgttaa ttaagattca tggttataat 5460
gatttggacc taattaatca gggttgccct tttagatgcg tggttacttg ttgagttcat 5520
ttttttcctg ctatagttgt atgcgtttgt tcattcatgg ttagatttga tttgtttctt 5580
ctctattcca tgccttccat atacttcaat tgtagcttaa catgagattt ctgtatatgc 5640
aggtcgaccg ccggggatcc acacgacacc atggcccagt ccaagcacgg cctgaccaag 5700
gagatgacca tgaagtaccg catggagggc tgcgtggacg gccacaagtt cgtgatcacc 5760
ggcgagggca tcggctaccc cttcaagggc aagcaggcca tcaacctgtg cgtggtggag 5820
ggcggcccct tgcccttcgc cgaggacatc ttgtccgccg ccttcatgta cggcaaccgc 5880
gtgttcaccg agtaccccca ggacatcgtc gactacttca agaactcctg ccccgccggc 5940
tacacctggg accgctcctt cctgttcgag gacggcgccg tgtgcatctg caacgccgac 6000
atcaccgtga gcgtggagga gaactgcatg taccacgagt ccaagttcta cggcgtgaac 6060
ttccccgccg acggccccgt gatgaagaag atgaccgaca actgggagcc ctcctgcgag 6120
aagatcatcc ccgtgcccaa gcagggcatc ttgaagggcg acgtgagcat gtacctgctg 6180
ctgaaggacg gtggccgctt gcgctgccag ttcgacaccg tgtacaaggc caagtccgtg 6240
ccccgcaaga tgcccgactg gcacttcatc cagcacaagc tgacccgcga ggaccgcagc 6300
gacgccaaga accagaagtg gcacctgacc gagcacgcca tcgcctccgg ctccgccttg 6360
ccctccggac tcagatctcg atagagtcaa cctagacttg tccatcttct ggattggcca 6420
acttaattaa tgtatgaaat aaaaggatgc acacatagtg acatgctaat cactataatg 6480
tgggcatcaa agttgtgtgt tatgtgtaat tactagttat ctgaataaaa gagaaagaga 6540
tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt tataattctt tgatgaacca 6600
gatgcatttc attaaccaaa tccatataca tataaatatt aatcatatat aattaatatc 6660
aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg cgaattgcgg cgcccttact 6720
ttaacgcctc taaccaacac ccctttatct ttataaggaa caataaacag aatttgcccc 6780
actgttctaa atcacctaat aatatcccca gctaaaaaca ataaaggttt cctagaatta 6840
agacaagcat gactgttcct ccaggagggt ttggaacatt gttgcagtct tgcagatacg 6900
ggcgaagggt gagaaacaga gcggagggct ggaggtgacc tcggtagtcg acgccggagt 6960
tgagcttgac aacgacgggg cggcccctga tggacttgag gaagtccgat ggcgtcttca 7020
ccgtcccgcc ggcgcccgag gcgggcctgt cgctgccgcc gccgccgctg ctcatcttgc 7080
gcgctgtgcc cccggcggtg tccctgtgtt gcggatcgcg ggtgggccag gtggatgcga 7140
gggcgacccg tttggactcc ggccggagcc gccggatccc tggtcggtgt cagtgccgtt 7200
tactctgggc cccacgtgtc agtaccgtct gtagatgaca acaacccgtc gtccacagtc 7260
atgtccaaaa tatcctttct tctttttttt cgattcggat atctatcttc cttttttttt 7320
tccaaaaatc ttcttgacgc accagcgcgc acgtttgtgg taaacgccga cacgtcggtc 7380
ccacgtcgat agaccccacc caccagtgag tagcgtgtac gtattcgggg gtgacggacg 7440
tgtcgccgtc gtcttgctag tcccattccc atctgagcca cacatctctg aacaaaaaaa 7500
aggagggagg cctccacgca catccccctc cgtgccaccc gccccaaacc ctcgcgccgc 7560
ctccgagaca gccgccgcaa ccatggccac cgccgccgcc gcgtctaccg cgctcactgg 7620
cgccactacc gctgcgccca aggcgaggcg ccgggcgcac ctcctggcca cccgccgcgc 7680
cctcgccgcg cccatcaggt gctcagcggc gtcacccgcc atgccgatgg ctcccccggc 7740
caccccgctc cggccgtggg gccccaccga gccccgcaag ggtgctgaca tcctcgtcga 7800
gtccctcgag cgctgcggcg tccgcgacgt cttcgcctac cccggcggcg cgtccatgga 7860
gatccaccag gcactcaccc gctcccccgt catcgccaac cacctcttcc gccacgagca 7920
aggggaggcc tttgccgcct ccggctacgc gcgctcctcg ggccgcgtcg gcgtctgcat 7980
cgccacctcc ggccccggcg ccaccaacct agtctccgcg ctcgccgacg cgctgctcga 8040
ttccgtcccc atggtcgcca tcacgggaca ggtggcgcga cgcatgattg gcaccgacgc 8100
cttccaggag acgcccatcg tcgaggtcac ccgctccatc accaagcaca actacctggt 8160
cctcgacgtc gacgacatcc cccgcgtcgt gcaggaggct ttcttcctcg cctcctctgg 8220
tcgaccaggg ccggtgcttg tcgacatccc caaggacatc cagcagcaga tggcggtgcc 8280
tgtctgggac aagcccatga gtctgcctgg gtacattgcg cgccttccca agccccctgc 8340
gactgagttg cttgagcagg tgctgcgtct tgttggtgaa tcgcggcgcc ctgttcttta 8400
tgtgggcggt ggctgcgcag catctggtga ggagttgcga cgctttgtgg agctgactgg 8460
aatcccggtc acaactactc ttatgggcct cggcaacttc cccagcgacg acccactgtc 8520
tctgcgcatg ctaggtatgc atgggacggt gtatgcaaat tatgcagtgg ataaggccga 8580
tctgttgctt gcacttggtg tgcggtttga tgatcgcgtg acagggaaga ttgaggcttt 8640
tgcaagcagg gctaagattg tgcacgttga tattgatccg gctgagattg gcaagaacaa 8700
gcagccacat gtgtccatct gtgcagatgt taagcttgct ttgcagggca tgaatgctct 8760
tcttgaagga agcacatcaa agaagagctt tgactttggc tcatggaacg atgagttgga 8820
tcagcagaag agggaattcc cccttgggta taaaacatct aatgaggaga tccagccaca 8880
atatgctatt caggttcttg atgagctgac gaaaggcgag gccatcatcg gcacaggtgt 8940
tgggcagcac cagatgtggg cggcacagta ctacacttac aagcggccaa ggcagtggtt 9000
gtcttcagct ggtcttgggg ctatgggatt tggtttgccg gctgctgctg gtgcttctgt 9060
ggcaaaccca ggtgtcactg ttgttgacat cgatggagat ggtagctttc tcatgaacgt 9120
tcaggagcta gctatgatcc gaattgagaa cctcccagtg aaggtctttg tgctaaacaa 9180
ccagcacctg gggatggtgg tgcagttgga ggacaggttc tataaggcca acagagcgca 9240
cacatacttg ggaaacccag agaatgaaag tgagatatat ccagatttcg tgacgatcgc 9300
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aaagaagatg ctcgagactc cagggccgta cctcttggat ataatcgtcc cacaccagga 9420
gcatgtgttg cctatgatcc ctagtggtgg ggctttcaag gatatgatcc tggatggtga 9480
tggcaggact gtgtactgac tagctagtca gttaacagat ctgccagatc ctcggtgtac 9540
aaataacccg tcttatccta tgagacgggc cggcgtcagt gtgttctgga ggaattttta 9600
tgtcagagcc tttttctttg tgtgcttgat gtagatgcca agggaagctt attggctgtt 9660
gaagcttgat gcaaaataaa ttatggaact ctgttttttg tttatctaat aataactagc 9720
aaatatgctt ccattgcatt gaaactaaca gccttttgtg tttccaagtt ttattttgtg 9780
acaatgtcat ctatttcaat tagttgtgga atcggaaact tgcaggacta acttggaaac 9840
tccaatccct cagcatcctg gactttttcc tggtgtaatc catgtagata ttattttaat 9900
catcatttta gttctggagg tttttccatc tccggttttg ctcccctttc ttcaaaaaaa 9960
aaaaaaaaat gccgtaggcg ccgcaacgcc cacctgttgt tcaaactcat gggcacgagt 10020
ggctcgaaga ttttatacaa caattgctgt agtttcaccg ttgctggtga agaagcattt 10080
ttttaaaaaa atatagtggt attcatttta attagtttag ttgtgcagcg agcaaaattt 10140
ggacatgctc tgctcggaat ctgatcgacc tagacacaga ttagcagcag tagctttgtc 10200
atctgttcca agagttgcga tctgatagaa gaaaaaaaaa ccttcccttc aatgtaaaac 10260
cgaaactaac aagaaagaag cacagtgccg tttaggcaag tatggagtac gtattaagca 10320
tgtagaaggc catgcatgaa ccactaacaa gaaagaagcg cagtgccatt caggcaagca 10380
taagcatgta gattggcatg catgaacaac taacagtaga tcgtctctgg tctgattaga 10440
agttttttgg gaagccaaga aatcatgtac aactggttcc atctcaaatt ccgtggcaaa 10500
aagaggccta agcaacatac ctcgagtaga tcacattcaa gcttggtcac ccggtccgtc 10560
aatattctga ttccgatgac ttcgtaggtt cctagctcaa gccgctcgtg tccaagcgtc 10620
acttacgatt agctaatgat tacggcatct aggaccgact agtggcgcgc cgactagcta 10680
gctaaggtac cgagctcgaa ttcattccga ttaatcgtgg cctcttgctc ttcaggatga 10740
agagctatgt ttaaacgtgc aagcgctact agacaattca gtacattaaa aacgtccgca 10800
atgtgttatt aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgcca 10856
<210> 45
<211> 1680
<212> DNA
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 45
atggcctcca tcaccaactg gctcggcttc tcctcctcct ccttctccgg cgccggcgcc 60
gaccccgtcc tgccccaccc gccgctgcaa gagtggggga gcgcttatga gggcggcggc 120
acggtggcgg ccgccggcgg ggaggagacg gcggcgccga agctggagga cttcctcggc 180
atgcaggtgc agcaggagac ggccgccgcg gcggcggggc acggccgtgg aggcagctcg 240
tcggtcgttg ggctgtccat gatcaagaac tggctacgca gccagccgcc gcccgcggtg 300
gttgggggag aagacgctat gatggcgctc gcggtgtcga cgtcggcgtc gccgccggtg 360
gacgcgacgg tgccggcctg catttcgccg gatgggatgg ggtcgaaggc ggccgacggc 420
ggcggcgcgg ccgaggcggc ggcggcggcg gcggcgcaga ggatgaaggc ggccatggac 480
acgttcgggc agcggacgtc catctaccgg ggtgtcacca agcacaggtg gacaggaagg 540
tatgaagccc atctttggga taacagctgc agaagagaag gtcagactcg caaaggcaga 600
caagtcaatg caggaggata tgataaggaa gaaaaagctg ctagggctta tgatttggct 660
gcccttaaat actggggcac tacaacgacg acgaattttc cggtaagcaa ctacgaaaaa 720
gagttggatg aaatgaagca catgaatagg caggaatttg ttgcatccct tagaagaaaa 780
agcagtggat tttcacgtgg tgcttccata tatcgtggtg ttacaagaca ccatcagcat 840
ggaaggtggc aagcaaggat aggacgggtg gcaggaaaca aggatctgta tttgggcaca 900
tttggcaccc aagaggaagc tgcagaggca tatgatatcg ctgcaatcaa attccgtggt 960
ctcaatgctg tgacaaactt tgacatgagc cggtacgatg tcaagagcat cattgaaagc 1020
agcaatctcc caattggtac tggaaccacc cggcgattga aggactcctc tgatcacact 1080
gataatgtca tggacatcaa tgtcaatacc gaacccaata atgtggtatc atcccacttc 1140
accaatgggg ttggcaacta tggttcgcag cattatggtt acaatggatg gtcgccaatt 1200
agcatgcagc cgatcccctc gcagtacgcc aacggccagc ccagggcatg gttgaaacaa 1260
gagcaggaca gctctgtggt tacagcggcg cagaacctgc acaatctaca tcattttagt 1320
tccttgggct acacccacaa cttcttccag caatctgatg ttccagacgt cacaggtttc 1380
gttgatgcgc cttcgaggtc cagtgactca tactccttca ggtacaatgg aacaaatggc 1440
tttcatggtc tcccgggtgg aatcagctat gctatgccgg ttgcgacagc ggtggaccaa 1500
ggtcagggca tccatggcta tggagaagat ggtgtggcag gcattgacac cacacatgac 1560
ctgtatggca gccgtaatgt gtactacctt tccgagggtt cgcttcttgc cgatgtcgaa 1620
aaagaaggcg actatggcca atctgtgggg ggcaacagct gggttttgcc gacaccgtag 1680
<210> 46
<211> 559
<212> PRT
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 46
Met Ala Ser Ile Thr Asn Trp Leu Gly Phe Ser Ser Ser Ser Phe Ser
1 5 10 15
Gly Ala Gly Ala Asp Pro Val Leu Pro His Pro Pro Leu Gln Glu Trp
20 25 30
Gly Ser Ala Tyr Glu Gly Gly Gly Thr Val Ala Ala Ala Gly Gly Glu
35 40 45
Glu Thr Ala Ala Pro Lys Leu Glu Asp Phe Leu Gly Met Gln Val Gln
50 55 60
Gln Glu Thr Ala Ala Ala Ala Ala Gly His Gly Arg Gly Gly Ser Ser
65 70 75 80
Ser Val Val Gly Leu Ser Met Ile Lys Asn Trp Leu Arg Ser Gln Pro
85 90 95
Pro Pro Ala Val Val Gly Gly Glu Asp Ala Met Met Ala Leu Ala Val
100 105 110
Ser Thr Ser Ala Ser Pro Pro Val Asp Ala Thr Val Pro Ala Cys Ile
115 120 125
Ser Pro Asp Gly Met Gly Ser Lys Ala Ala Asp Gly Gly Gly Ala Ala
130 135 140
Glu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gln Arg Met Lys Ala Ala Met Asp
145 150 155 160
Thr Phe Gly Gln Arg Thr Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Lys His Arg
165 170 175
Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Asn Ser Cys Arg Arg
180 185 190
Glu Gly Gln Thr Arg Lys Gly Arg Gln Val Asn Ala Gly Gly Tyr Asp
195 200 205
Lys Glu Glu Lys Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr
210 215 220
Trp Gly Thr Thr Thr Thr Thr Asn Phe Pro Val Ser Asn Tyr Glu Lys
225 230 235 240
Glu Leu Asp Glu Met Lys His Met Asn Arg Gln Glu Phe Val Ala Ser
245 250 255
Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Ala Ser Ile Tyr Arg
260 265 270
Gly Val Thr Arg His His Gln His Gly Arg Trp Gln Ala Arg Ile Gly
275 280 285
Arg Val Ala Gly Asn Lys Asp Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Gly Thr Gln
290 295 300
Glu Glu Ala Ala Glu Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Lys Phe Arg Gly
305 310 315 320
Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Met Ser Arg Tyr Asp Val Lys Ser
325 330 335
Ile Ile Glu Ser Ser Asn Leu Pro Ile Gly Thr Gly Thr Thr Arg Arg
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Asp His Thr Asp Asn Val Met Asp Ile Asn Val
355 360 365
Asn Thr Glu Pro Asn Asn Val Val Ser Ser His Phe Thr Asn Gly Val
370 375 380
Gly Asn Tyr Gly Ser Gln His Tyr Gly Tyr Asn Gly Trp Ser Pro Ile
385 390 395 400
Ser Met Gln Pro Ile Pro Ser Gln Tyr Ala Asn Gly Gln Pro Arg Ala
405 410 415
Trp Leu Lys Gln Glu Gln Asp Ser Ser Val Val Thr Ala Ala Gln Asn
420 425 430
Leu His Asn Leu His His Phe Ser Ser Leu Gly Tyr Thr His Asn Phe
435 440 445
Phe Gln Gln Ser Asp Val Pro Asp Val Thr Gly Phe Val Asp Ala Pro
450 455 460
Ser Arg Ser Ser Asp Ser Tyr Ser Phe Arg Tyr Asn Gly Thr Asn Gly
465 470 475 480
Phe His Gly Leu Pro Gly Gly Ile Ser Tyr Ala Met Pro Val Ala Thr
485 490 495
Ala Val Asp Gln Gly Gln Gly Ile His Gly Tyr Gly Glu Asp Gly Val
500 505 510
Ala Gly Ile Asp Thr Thr His Asp Leu Tyr Gly Ser Arg Asn Val Tyr
515 520 525
Tyr Leu Ser Glu Gly Ser Leu Leu Ala Asp Val Glu Lys Glu Gly Asp
530 535 540
Tyr Gly Gln Ser Val Gly Gly Asn Ser Trp Val Leu Pro Thr Pro
545 550 555
<210> 47
<211> 2104
<212> DNA
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 47
atggcttctg caaacaactg gctgggcttc tcgctctccg gccaagagaa tccgcagcct 60
caccaggata gctcgcctcc ggcagccatc gacgtctccg gcgccggcga cttctatggc 120
ctgccgacgt cgcagccgac ggcggccgac gcgcacctcg gcgtggcggg gcatcatcac 180
aacgcctcgt atggcatcat ggaggccttc aataggggag ctcaagaggc acaagattgg 240
aacatgaggg ggctggacta caacggcggc gcctcggagc tgtcgatgct cgtcggctcc 300
agcggcggca agagggcggc ggcggtggag gagaccgagc cgaagctgga ggacttcctc 360
ggcggcaact cgttcgtctc cgagcaagat catcacgcgg cggggggctt cctcttctcc 420
ggcgtcccga tggccagcag caccaacagc aacagcggga gcaacactat ggagctctcc 480
atgatcaaga cctggctccg gaacaacggc caggtgcccg ccggccacca gccgcagcag 540
cagcagccgg cggccgcggc cgccgccgcg cagcagcagg cgcacgaggc ggcggagatg 600
agcaccgacg cgagcgcgag cagcttcggg tgctcctccg acgcgatggg gaggagtaac 660
aacggcggcg cggtctcggc ggcggccggc gggacgagct cgcagagcct ggcgctctcg 720
atgagcacgg gctcgcactc gcacctgcct atcgtcgtcg ccggcggcgg gaacgccagc 780
ggcggagcgg ccgagagcac atcgtcggag aacaagcggg ccagcggcgc catggattcg 840
ccgggcggtg gcgcgataga ggccgtgccg aggaagtcca tcgacacgtt cgggcaaagg 900
acctcgatat atcgaggtgt aacaaggcat agatggacag ggcgatatga ggctcatctc 960
tgggataata gctgtagaag agaagggcag agtcgcaagg gtaggcaagg tggctatgac 1020
aaggaggata aagcagcgag agcttatgat ttggcagctc tgaagtattg gggcacaaca 1080
acaacaacaa atttcccaat aagtaactat gaaaaagagc tagatgaaat gaaacatatg 1140
accaggcagg agtatattgc atacctaaga aggaatagca gtggattttc tcgtggtgca 1200
tcgaaatatc gtggtgtaac caggcaccat cagcatggga gatggcaagc aaggataggg 1260
agggttgcag gaaacaagga cctctactta ggcaccttca gcaccgagga ggaggcggcg 1320
gaggcgtacg acatcgcggc gatcaagttc cgggggctca acgccgtcac caactttgac 1380
atgagccgct acgacgtcaa gagcatcctg gagagcagca cgctgccggt gggcggcgcg 1440
gcgaggcggc tgaaggaggc ggcggaccac gcggaggcgg ccggcgccac catctggcgc 1500
gccgccgaca tggacggcgc cggcgtcatc tccggcctgg ccgacgtcgg gatgggcgcc 1560
tacgccgcct cgtaccacca ccaccaccac cacggctggc cgaccatcgc gttccagcag 1620
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ccggcgagca ccgtcgtggc cgaccagggg cacagcagca cggccaccaa ccatggaaac 1920
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tgat 2104
<210> 48
<211> 700
<212> PRT
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 48
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1 5 10 15
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Ser Gly Ala Gly Asp Phe Tyr Gly Leu Pro Thr Ser Gln Pro Thr Ala
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Ala Asp Ala His Leu Gly Val Ala Gly His His His Asn Ala Ser Tyr
50 55 60
Gly Ile Met Glu Ala Phe Asn Arg Gly Ala Gln Glu Ala Gln Asp Trp
65 70 75 80
Asn Met Arg Gly Leu Asp Tyr Asn Gly Gly Ala Ser Glu Leu Ser Met
85 90 95
Leu Val Gly Ser Ser Gly Gly Lys Arg Ala Ala Ala Val Glu Glu Thr
100 105 110
Glu Pro Lys Leu Glu Asp Phe Leu Gly Gly Asn Ser Phe Val Ser Glu
115 120 125
Gln Asp His His Ala Ala Gly Gly Phe Leu Phe Ser Gly Val Pro Met
130 135 140
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145 150 155 160
Met Ile Lys Thr Trp Leu Arg Asn Asn Gly Gln Val Pro Ala Gly His
165 170 175
Gln Pro Gln Gln Gln Gln Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gln Gln
180 185 190
Gln Ala His Glu Ala Ala Glu Met Ser Thr Asp Ala Ser Ala Ser Ser
195 200 205
Phe Gly Cys Ser Ser Asp Ala Met Gly Arg Ser Asn Asn Gly Gly Ala
210 215 220
Val Ser Ala Ala Ala Gly Gly Thr Ser Ser Gln Ser Leu Ala Leu Ser
225 230 235 240
Met Ser Thr Gly Ser His Ser His Leu Pro Ile Val Val Ala Gly Gly
245 250 255
Gly Asn Ala Ser Gly Gly Ala Ala Glu Ser Thr Ser Ser Glu Asn Lys
260 265 270
Arg Ala Ser Gly Ala Met Asp Ser Pro Gly Gly Gly Ala Ile Glu Ala
275 280 285
Val Pro Arg Lys Ser Ile Asp Thr Phe Gly Gln Arg Thr Ser Ile Tyr
290 295 300
Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu
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Trp Asp Asn Ser Cys Arg Arg Glu Gly Gln Ser Arg Lys Gly Arg Gln
325 330 335
Gly Gly Tyr Asp Lys Glu Asp Lys Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala
340 345 350
Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Thr Thr Thr Thr Thr Asn Phe Pro Ile Ser
355 360 365
Asn Tyr Glu Lys Glu Leu Asp Glu Met Lys His Met Thr Arg Gln Glu
370 375 380
Tyr Ile Ala Tyr Leu Arg Arg Asn Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Ala
385 390 395 400
Ser Lys Tyr Arg Gly Val Thr Arg His His Gln His Gly Arg Trp Gln
405 410 415
Ala Arg Ile Gly Arg Val Ala Gly Asn Lys Asp Leu Tyr Leu Gly Thr
420 425 430
Phe Ser Thr Glu Glu Glu Ala Ala Glu Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile
435 440 445
Lys Phe Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Met Ser Arg Tyr
450 455 460
Asp Val Lys Ser Ile Leu Glu Ser Ser Thr Leu Pro Val Gly Gly Ala
465 470 475 480
Ala Arg Arg Leu Lys Glu Ala Ala Asp His Ala Glu Ala Ala Gly Ala
485 490 495
Thr Ile Trp Arg Ala Ala Asp Met Asp Gly Ala Gly Val Ile Ser Gly
500 505 510
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515 520 525
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<210> 49
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<212> DNA
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 49
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ggcgggagga ggacggtggc cggcgacggc gtcggcgagg cgccgaagct ggagaacttc 360
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ggaagcgctg tcggcggcgc cggtggttac agtaacggcg gatgcggcgg cggaaccata 480
gagctgtcca tgatcaagac gtggctccgg agcaaccagt cgcagcagca gccatcgccg 540
ccgcagcacg ctgatcaggg catgagcacc gacgccagcg cgagcagcta cgcgtgctcc 600
gacgtgctgg tggggagctg cggcggcggc ggcgccgggg gcacggcgag ctcgcatggg 660
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aaggcggcga acgggtaccc ggacaactgg agctcgccgt tcaacggcat gggatga 1977
<210> 50
<211> 658
<212> PRT
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 50
Met Ala Ser Ala Asp Asn Trp Leu Gly Phe Ser Leu Ser Gly Gln Gly
1 5 10 15
Asn Pro Gln His His Gln Asn Gly Ser Pro Ser Ala Ala Gly Asp Ala
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Ala Ile Asp Ile Ser Gly Ser Gly Asp Phe Tyr Gly Leu Pro Thr Pro
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100 105 110
Glu Ala Pro Lys Leu Glu Asn Phe Leu Asp Gly Asn Ser Phe Ser Asp
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Gln Pro Ser Pro Pro Gln His Ala Asp Gln Gly Met Ser Thr Asp Ala
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Ser Ala Ser Ser Tyr Ala Cys Ser Asp Val Leu Val Gly Ser Cys Gly
195 200 205
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210 215 220
Leu Ser Met Ser Thr Gly Ser Val Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly Ala
225 230 235 240
Val Val Ala Ala Glu Ser Ser Ser Ser Glu Asn Lys Arg Val Asp Ser
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Phe Gly Gln Arg Thr Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp
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435 440 445
Leu Asp Ser Ser Thr Leu Pro Val Gly Gly Ala Ala Arg Arg Leu Lys
450 455 460
Glu Ala Glu Val Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly Val Ile Val Ser
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His Leu Ala Asp Gly Gly Val Gly Gly Tyr Tyr Tyr Gly Cys Gly Pro
485 490 495
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His Leu Gly Ser Gly Gly Ala Ala Ala Thr His Asn Phe Phe Gln Gln
545 550 555 560
Pro Ala Ser Ser Ser Ala Val Tyr Gly Asn Gly Gly Gly Gly Gly Gly
565 570 575
Asn Ala Phe Met Met Pro Met Gly Ala Val Val Ala Ala Ala Asp His
580 585 590
Gly Gly Gln Ser Ser Ala Tyr Gly Gly Gly Asp Glu Ser Gly Arg Leu
595 600 605
Val Val Gly Tyr Asp Gly Val Val Asp Pro Tyr Ala Ala Met Arg Ser
610 615 620
Ala Tyr Glu Leu Ser Gln Gly Ser Ser Ser Ser Ser Val Ser Val Ala
625 630 635 640
Lys Ala Ala Asn Gly Tyr Pro Asp Asn Trp Ser Ser Pro Phe Asn Gly
645 650 655
Met Gly
<210> 51
<211> 2082
<212> DNA
<213> 双色高粱(Sorghum bicolor)
<400> 51
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gccgtcacca acttcgacat gagccgctac gacgtcaaga gcatcctcga gagcagcacg 1380
ctgcctgtcg gcggcgcggc caggcgcctc aaggatgccg tggaccacgt ggaggccggc 1440
gccaccatct ggcgcgccga catggacggc ggcgtgatct cccagctcgc cgaagccggg 1500
atgggcggct acgcctcgta cgggcaccac gcctggccga ccatcgcgtt ccagcagccg 1560
tcgccgctct ccgtccacta cccgtacggg cagccgccgt cccgcgggtg gtgcaagccc 1620
gagcaggacg cggccgtcgc cgccgccgcg cacagcctgc aggacctcca gcagctgcac 1680
ctcggcagcg cggcacacaa cttcttccag gcgtcgtcga gctcggcagt ctacaacagc 1740
ggcggcggcg gcgctagcgg cgggtaccac cagggcctcg gtggcggcag cagctccttc 1800
ctcatgccgt cgagcactgt cgtggcgggg gccgaccagg ggcacagcag cagcacggcc 1860
aaccagggga gcacgtgcag ctacggggac gatcaccagg aagggaagct catcgggtac 1920
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taccagttct cgtcgcaggg ctcgggatcc acggtgagca tcgcgagggc gaacgggtac 2040
tctaacaact ggagctctcc tttcaacggc ggcatggggt ga 2082
<210> 52
<211> 693
<212> PRT
<213> 双色高粱(Sorghum bicolor)
<400> 52
Met Ala Ser Thr Asn Asn His Trp Leu Gly Phe Ser Leu Ser Gly Gln
1 5 10 15
Asp Asn Pro Gln Pro Asn His Gln Asp Ser Ser Pro Ala Ala Ala Gly
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Ile Asp Ile Ser Gly Ala Ser Asp Phe Tyr Gly Leu Pro Thr Gln Gln
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Ser Tyr Gly Ile Met Glu Ala Phe Asn Arg Val Pro Gln Glu Thr Gln
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Asp Trp Asn Met Arg Gly Leu Asp Tyr Asn Gly Gly Gly Ser Glu Leu
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Ala Val Glu Asp Ser Glu Pro Lys Leu Glu Asp Phe Leu Gly Gly Asn
115 120 125
Ser Phe Val Ser Glu His Asp Gln Ser Gly Gly Tyr Leu Phe Ser Gly
130 135 140
Val Pro Met Ala Ser Ser Thr Asn Ser Asn Ser Gly Ser Asn Thr Met
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Glu Leu Ser Met Ile Lys Thr Trp Leu Arg Asn Asn Gln Val Pro Gln
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Ser Thr Asp Ala Asn Ala Ser Ala Ser Ser Phe Gly Cys Ser Asp Ser
195 200 205
Met Gly Arg Asn Gly Thr Val Ala Ala Ala Gly Ser Ser Gln Ser Leu
210 215 220
Ala Leu Ser Met Ser Thr Gly Ser His Leu Pro Met Val Val Ala Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ala Ser Gly Ala Ala Ser Glu Ser Thr Ser Ser Glu Asn Lys
245 250 255
Arg Ala Ser Gly Ala Met Asp Ser Pro Gly Ser Ala Val Glu Ala Val
260 265 270
Pro Arg Lys Ser Ile Asp Thr Phe Gly Gln Arg Thr Ser Ile Tyr Arg
275 280 285
Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp
290 295 300
Asp Asn Ser Cys Arg Arg Glu Gly Gln Ser Arg Lys Gly Arg Gln Val
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Tyr Leu Gly Gly Tyr Asp Lys Glu Asp Lys Ala Ala Arg Ala Tyr Asp
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Ile Ser Asn Tyr Glu Lys Glu Leu Glu Glu Met Lys His Met Thr Arg
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Gly Ala Ser Lys Tyr Arg Gly Val Thr Arg His His Gln His Gly Arg
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Gly Thr Phe Ser Thr Glu Glu Glu Ala Ala Glu Ala Tyr Asp Ile Ala
420 425 430
Ala Ile Lys Phe Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Met Ser
435 440 445
Arg Tyr Asp Val Lys Ser Ile Leu Glu Ser Ser Thr Leu Pro Val Gly
450 455 460
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565 570 575
Val Tyr Asn Ser Gly Gly Gly Gly Ala Ser Gly Gly Tyr His Gln Gly
580 585 590
Leu Gly Gly Gly Ser Ser Ser Phe Leu Met Pro Ser Ser Thr Val Val
595 600 605
Ala Gly Ala Asp Gln Gly His Ser Ser Ser Thr Ala Asn Gln Gly Ser
610 615 620
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<223> 合成构建体
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aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaat cgagctagtt accctatgag gtgacatgaa gcgctcacgg 360
ttactatgac ggttagcttc acgactgttg gtggcagtag cgtacgactt agctatagtt 420
ccggacttac ccttaagcga tttaaatcct gaggatatcg ctatcaactt tgtatagaaa 480
agttgggccg aattcgagct cggtacggcc agaatggccc ggaccgggtt accgaattcg 540
agctcggtac cctgggatcc gatatcgatg ggccctggcc gaagcttggt cacccggtcc 600
gggcctagaa ggccagcttc aagtttgtac aaaaaagcag gctccggcca gaatggcccg 660
gaccgggtta ccgaattctt accctagctc cctgcggctg ttacgcggtc ccccatcaat 720
cttctgttct tgcggttgta gcctgtgtaa cagtgctaga gtatgtatga taaataggtt 780
ttaagtctgc ttacatgaca ttttttattg tggaagagac atataaaaat tagagagagt 840
ggttctcatg caacggcgga cggcccggtg ctaaaagagc ttcaagacaa aataatgaaa 900
caggaagaga gtagatttat ctaagagcca actttattat atgaatgtgt ttattgttgg 960
ctttagatga tatggtaagg agttagagct aataatagat aggctctatt attattatta 1020
ttaattaaac tcgctctaag gaggaaagtg ggaggaaggg acgaggacga agactactgg 1080
aagcatcgtg catggatgat ggatgtggtg tctcttaatg taggtggccg gaggatgtac 1140
gtgttaattg cgcgataagc actcagatcc aaccgcaaac tacctccaca ctgacacact 1200
gatagagaga aagagagacc tccgacgact gccgccgcag atgagccacg tacgtatacg 1260
acgtctgccg gccggctcag gctgccgcca tcaccctgct cgaaagtcgc gttaggcggc 1320
gccagctaca taggagtatc tagtctagcc agttagtata ctactactgc gctgatgatg 1380
aattaactct gcatagatac tgtacttgcc tccctccaac acccaaccac ctcctgctcg 1440
gctcttaata acttggacac ggatcgatgc catccaagga agaacacgac gacgacgacg 1500
gaacatccac catgcaagct tgcatccata cgccgatacg cgtgcatcca tccatccacc 1560
attatttcca ttttccaccg atcacacgta cacaggccta tttaaggagc gacatcccac 1620
tgcaactctc ctcaccactc atcaccagct agctctagca aagcacttgc catctaccga 1680
ccgccgcatt ccaaacagcc cgacgagcta gcagagcggc aggcacctcc ctcctcaagg 1740
aacccatggc cactgtgaac aactggctcg ctttctccct ctccccgcag gagctgccgc 1800
cctcccagac gacggactcc acactcatct cggccgccac cgccgaccat gtctccggcg 1860
atgtctgctt caacatcccc caagattgga gcatgagggg atcagagctt tcggcgctcg 1920
tcgcggagcc gaagctggag gacttcctcg gcggcatctc cttctccgag cagcatcaca 1980
aggccaactg caacatgata cccagcacta gcagcacagt ttgctacgcg agctcaggtg 2040
ctagcaccgg ctaccatcac cagctgtacc accagcccac cagctcagcg ctccacttcg 2100
cggactccgt aatggtggct tcctcggccg gtgtccacga cggcggtgcc atgctcagcg 2160
cggccgccgc taacggtgtc gctggcgctg ccagtgccaa cggcggcggc atcgggctgt 2220
ccatgattaa gaactggctg cggagccaac cggcgcccat gcagccgagg gtggcggcgg 2280
ctgagggcgc gcaggggctc tctttgtcca tgaacatggc ggggacgacc caaggcgctg 2340
ctggcatgcc acttctcgct ggagagcgcg cacgggcgcc cgagagtgta tcgacgtcag 2400
cacagggtgg agccgtcgtc gtcacggcgc cgaaggagga tagcggtggc agcggtgttg 2460
ccggcgctct agtagccgtg agcacggaca cgggtggcag cggcggcgcg tcggctgaca 2520
acacggcaag gaagacggtg gacacgttcg ggcagcgcac gtcgatttac cgtggcgtga 2580
caaggcatag atggactggg agatatgagg cacatctttg ggataacagt tgcagaaggg 2640
aagggcaaac tcgtaagggt cgtcaagtct atttaggtgg ctatgataaa gaggagaaag 2700
ctgctagggc ttatgatctt gctgctctga agtactgggg tgccacaaca acaacaaatt 2760
ttccagtgag taactacgaa aaggagctcg aggacatgaa gcacatgaca aggcaggagt 2820
ttgtagcgtc tctgagaagg aagagcagtg gtttctccag aggtgcatcc atttacaggg 2880
gagtgactag gcatcaccaa catggaagat ggcaagcacg gattggacga gttgcaggga 2940
acaaggatct ttacttgggc accttcagca cccaggagga ggcagcggag gcgtacgaca 3000
tcgcggcgat caagttccgc ggcctcaacg ccgtcaccaa cttcgacatg agccgctacg 3060
acgtgaagag catcctggac agcagcgccc tccccatcgg cagcgccgcc aagcgcctca 3120
aggaggccga ggccgcagcg tccgcgcagc accaccacgc cggcgtggtg agctacgacg 3180
tcggccgcat cgcctcgcag ctcggcgacg gcggagccct ggcggcggcg tacggcgcgc 3240
actaccacgg cgccgcctgg ccgaccatcg cgttccagcc gggcgccgcc agcacaggcc 3300
tgtaccaccc gtacgcgcag cagccaatgc gcggcggcgg gtggtgcaag caggagcagg 3360
accacgcggt gatcgcggcc gcgcacagcc tgcaggacct ccaccacctg aacctgggcg 3420
cggccggcgc gcacgacttt ttctcggcag ggcagcaggc cgccgccgct gcgatgcacg 3480
gcctgggtag catcgacagt gcgtcgctcg agcacagcac cggctccaac tccgtcgtct 3540
acaacggcgg ggtcggcgac agcaacggcg ccagcgccgt cggcggcagt ggcggtggct 3600
acatgatgcc gatgagcgct gccggagcaa ccactacatc ggcaatggtg agccacgagc 3660
aggtgcatgc acgggcctac gacgaagcca agcaggctgc tcagatgggg tacgagagct 3720
acctggtgaa cgcggagaac aatggtggcg gaaggatgtc tgcatggggg actgtcgtgt 3780
ctgcagccgc ggcggcagca gcaagcagca acgacaacat ggccgccgac gtcgggcatg 3840
gcggcgcgca gctcttcagt gtctggaacg acacttaagc gtacctagtg gtacctgaca 3900
tcttatagtc tgcaacctct cgtgtctgaa ttcctatctt tatcaagtgt tattgcttcc 3960
acgactatag gacagctttc gtcgaaagct tttgctcatg tgatctcgaa ggattcatct 4020
agtctgattt ttcgtgactt gtatcggttt tattggattc atccaacata tatcaataaa 4080
aaatgagttg tgtttccttt cttcctagtt cagttaaaat tatttccctc ctgcgcttgt 4140
gctgtaattg tctgtgtacc tgttgtttgt gactgtgtta gttcccttgg atatgatttc 4200
gtatttgata tgtacatgga gatagcttag cttcattatt ggagtatgaa gttagtatga 4260
catagtcact ctcctggaaa attgacactg caaaccatat ttttattctg aaccacaaat 4320
cctagtcagt ccgctggcat atgccgtccg tttgctgaat ccagaacgtg ggtttggaga 4380
tgtacggctg agatgcctct atgcgaaggg gatttcgtgg tgaaacgaga tgggagtaga 4440
gcaacgcccg tggaagatgc ttcaaacttc cacacttttg agcaacgatc ggcagtagta 4500
aggtagacga tttcaagatc aaagcatatg aagataaaca acatcaacaa caaaatttgt 4560
tggggttcta tagagagaaa cagagctaca tacatacact gttttgtatc taccatctga 4620
gatgatgaaa agatgaaaaa ctaaagaatg ccccggcgcc aacgccagga cacgccgcgc 4680
gcgcgtcacc cgagccatct cttgacccag ccggcgctgt atatttacac acgttgcagc 4740
atcgatcacc acctgttcga tcgcgtcgcc gtcaccggta ccgagctcga attccggtcc 4800
gggcctagaa ggccgatctc ccgggcaccc agctttcttg tacaaagtgg ccgttaacgg 4860
atcggccaga atggcccgga ccgggttacc gaattcgagc tcggtaccct gggatctgcc 4920
cttactttaa cgcctctaac caacacccct ttatctttat aaggaacaat aaacagaatt 4980
tgccccactg ttctaaatca cctaataata tccccagcta aaaacaataa aggtttccta 5040
gaattaagac aagcatgact gttcctccag gagggtttgg aacattgttg cagtcttgca 5100
gatacgggcg aagggtgaga aacagagcgg agggctggag gtgacctcgg tagtcgacgc 5160
cggagttgag cttgacaacg acggggcggc ccctgatgga cttgaggaag tccgatggcg 5220
tcttcaccgt cccgccggcg cccgaggcgg gcctgtcgct gccgccgccg ccgctgctca 5280
tcttgcgcgc tgtgcccccg gcggtgtccc tgtgttgcgg atcgcgggtg ggccaggtgg 5340
atgcgagggc gacccgtttg gactccggcc ggagccgccg gatccctggt cggtgtcagt 5400
gccgtttact ctgggcccca cgtgtcagta ccgtctgtag atgacaacaa cccgtcgtcc 5460
acagtcatgt ccaaaatatc ctttcttctt ttttttcgat tcggatatct atcttccttt 5520
tttttttcca aaaatcttct tgacgcacca gcgcgcacgt ttgtggtaaa cgccgacacg 5580
tcggtcccac gtcgatagac cccacccacc agtgagtagc gtgtacgtat tcgggggtga 5640
cggacgtgtc gccgtcgtct tgctagtccc attcccatct gagccacaca tctctgaaca 5700
aaaaaaagga gggaggcctc cacgcacatc cccctccgtg ccacccgccc caaaccctcg 5760
cgccgcctcc gagacagccg ccgcaaccat ggccaccgcc gccgccgcgt ctaccgcgct 5820
cactggcgcc actaccgctg cgcccaaggc gaggcgccgg gcgcacctcc tggccacccg 5880
ccgcgccctc gccgcgccca tcaggtgctc agcggcgtca cccgccatgc cgatggctcc 5940
cccggccacc ccgctccggc cgtggggccc caccgagccc cgcaagggtg ctgacatcct 6000
cgtcgagtcc ctcgagcgct gcggcgtccg cgacgtcttc gcctaccccg gcggcgcgtc 6060
catggagatc caccaggcac tcacccgctc ccccgtcatc gccaaccacc tcttccgcca 6120
cgagcaaggg gaggcctttg ccgcctccgg ctacgcgcgc tcctcgggcc gcgtcggcgt 6180
ctgcatcgcc acctccggcc ccggcgccac caacctagtc tccgcgctcg ccgacgcgct 6240
gctcgattcc gtccccatgg tcgccatcac gggacaggtg gcgcgacgca tgattggcac 6300
cgacgccttc caggagacgc ccatcgtcga ggtcacccgc tccatcacca agcacaacta 6360
cctggtcctc gacgtcgacg acatcccccg cgtcgtgcag gaggctttct tcctcgcctc 6420
ctctggtcga ccagggccgg tgcttgtcga catccccaag gacatccagc agcagatggc 6480
ggtgcctgtc tgggacaagc ccatgagtct gcctgggtac attgcgcgcc ttcccaagcc 6540
ccctgcgact gagttgcttg agcaggtgct gcgtcttgtt ggtgaatcgc ggcgccctgt 6600
tctttatgtg ggcggtggct gcgcagcatc tggtgaggag ttgcgacgct ttgtggagct 6660
gactggaatc ccggtcacaa ctactcttat gggcctcggc aacttcccca gcgacgaccc 6720
actgtctctg cgcatgctag gtatgcatgg gacggtgtat gcaaattatg cagtggataa 6780
ggccgatctg ttgcttgcac ttggtgtgcg gtttgatgat cgcgtgacag ggaagattga 6840
ggcttttgca agcagggcta agattgtgca cgttgatatt gatccggctg agattggcaa 6900
gaacaagcag ccacatgtgt ccatctgtgc agatgttaag cttgctttgc agggcatgaa 6960
tgctcttctt gaaggaagca catcaaagaa gagctttgac tttggctcat ggaacgatga 7020
gttggatcag cagaagaggg aattccccct tgggtataaa acatctaatg aggagatcca 7080
gccacaatat gctattcagg ttcttgatga gctgacgaaa ggcgaggcca tcatcggcac 7140
aggtgttggg cagcaccaga tgtgggcggc acagtactac acttacaagc ggccaaggca 7200
gtggttgtct tcagctggtc ttggggctat gggatttggt ttgccggctg ctgctggtgc 7260
ttctgtggca aacccaggtg tcactgttgt tgacatcgat ggagatggta gctttctcat 7320
gaacgttcag gagctagcta tgatccgaat tgagaacctc ccagtgaagg tctttgtgct 7380
aaacaaccag cacctgggga tggtggtgca gttggaggac aggttctata aggccaacag 7440
agcgcacaca tacttgggaa acccagagaa tgaaagtgag atatatccag atttcgtgac 7500
gatcgccaaa gggttcaaca ttccagcggt ccgtgtgaca aagaagaacg aagtccgcgc 7560
agcgataaag aagatgctcg agactccagg gccgtacctc ttggatataa tcgtcccaca 7620
ccaggagcat gtgttgccta tgatccctag tggtggggct ttcaaggata tgatcctgga 7680
tggtgatggc aggactgtgt actgactagc tagtcagtta acagatctgc cagatcctcg 7740
gtgtacaaat aacccgtctt atcctatgag acgggccggc gtcagtgtgt tctggaggaa 7800
tttttatgtc agagcctttt tctttgtgtg cttgatgtag atgccaaggg aagcttattg 7860
gctgttgaag cttgatgcaa aataaattat ggaactctgt tttttgttta tctaataata 7920
actagcaaat atgcttccat tgcattgaaa ctaacagcct tttgtgtttc caagttttat 7980
tttgtgacaa tgtcatctat ttcaattagt tgtggaatcg gaaacttgca ggactaactt 8040
ggaaactcca atccctcagc atcctggact ttttcctggt gtaatccatg tagatattat 8100
tttaatcatc attttagttc tggaggtttt tccatctccg gttttgctcc cctttcttca 8160
aaaaaaaaaa aaaaatgccg taggcgccgc aacgcccacc tgttgttcaa actcatgggc 8220
acgagtggct cgaagatttt atacaacaat tgctgtagtt tcaccgttgc tggtgaagaa 8280
gcattttttt aaaaaaatat agtggtattc attttaatta gtttagttgt gcagcgagca 8340
aaatttggac atgctctgct cggaatctga tcgacctaga cacagattag cagcagtagc 8400
tttgtcatct gttccaagag ttgcgatctg atagaagaaa aaaaaacctt cccttcaatg 8460
taaaaccgaa actaacaaga aagaagcaca gtgccgttta ggcaagtatg gagtacgtat 8520
taagcatgta gaaggccatg catgaaccac taacaagaaa gaagcgcagt gccattcagg 8580
caagcataag catgtagatt ggcatgcatg aacaactaac agtagatcgt ctctggtctg 8640
attagaagtt ttttgggaag ccaagaaatc atgtacaact ggttccatct caaattccgt 8700
ggcaaaaaga ggcctaagca acataaagct tcggtccggg cctagaaggc cattgggtca 8760
tcggatcccg ggcaacttta ttatacaaag ttgatagata tctggtctaa ctaactagtc 8820
ctaaggaccc ggcggaccga agctggccgc tctagaacta gtggatctcg atgtgtagtc 8880
tacgagaagg gttaaccgtc tcttcgtgag aataaccgtg gcctaaaaat aagccgatga 8940
ggataaataa aatgtggtgg tacagtactt caagaggttt actcatcaag aggatgcttt 9000
tccgatgagc tctagtagta catcggacct cacatacctc cattgtggtg aaatattttg 9060
tgctcattta gtgatgggta aattttgttt atgtcactct aggttttgac atttcagttt 9120
tgccactctt aggttttgac aaataatttc cattccgcgg caaaagcaaa acaattttat 9180
tttactttta ccactcttag ctttcacaat gtatcacaaa tgccactcta gaaattctgt 9240
ttatgccaca gaatgtgaaa aaaaacactc acttatttga agccaaggtg ttcatggcat 9300
ggaaatgtga cataaagtaa cgttcgtgta taagaaaaaa ttgtactcct cgtaacaaga 9360
gacggaaaca tcatgagaca atcgcgtttg gaaggctttg catcaccttt ggatgatgcg 9420
catgaatgga gtcgtctgct tgctagcctt cgcctaccgc ccactgagtc cgggcggcaa 9480
ctaccatcgg cgaacgaccc agctgacctc taccgaccgg acttgaatgc gctaccttcg 9540
tcagcgacga tggccgcgta cgctggcgac gtgcccccgc atgcatggcg gcacatggcg 9600
agctcagacc gtgcgtggct ggctacaaat acgtaccccg tgagtgccct agctagaaac 9660
ttacacctgc aactgcgaga gcgagcgtgt gagtgtagcc gagtagatcc cccgggctgc 9720
aggtcgactc tagaggatcc accggtcgcc accatggccc acagcaagca cggcctgaag 9780
gaggagatga ccatgaagta ccacatggag ggctgcgtga acggccacaa gttcgtgatc 9840
accggcgagg gcatcggcta ccccttcaag ggcaagcaga ccatcaacct gtgcgtgatc 9900
gagggcggcc ccctgccctt cagcgaggac atcctgagcg ccggcttcaa gtacggcgac 9960
cggatcttca ccgagtaccc ccaggacatc gtggactact tcaagaacag ctgccccgcc 10020
ggctacacct ggggccggag cttcctgttc gaggacggcg ccgtgtgcat ctgtaacgtg 10080
gacatcaccg tgagcgtgaa ggagaactgc atctaccaca agagcatctt caacggcgtg 10140
aacttccccg ccgacggccc cgtgatgaag aagatgacca ccaactggga ggccagctgc 10200
gagaagatca tgcccgtgcc taagcagggc atcctgaagg gcgacgtgag catgtacctg 10260
ctgctgaagg acggcggccg gtaccggtgc cagttcgaca ccgtgtacaa ggccaagagc 10320
gtgcccagca agatgcccga gtggcacttc atccagcaca agctgctgcg ggaggaccgg 10380
agcgacgcca agaaccagaa gtggcagctg accgagcacg ccatcgcctt ccccagcgcc 10440
ctggcctgaa gcggcccatg gatattcgaa cgcgtaggta ccacatggtt aacctagact 10500
tgtccatctt ctggattggc caacttaatt aatgtatgaa ataaaaggat gcacacatag 10560
tgacatgcta atcactataa tgtgggcatc aaagttgtgt gttatgtgta attactagtt 10620
atctgaataa aagagaaaga gatcatccat atttcttatc ctaaatgaat gtcacgtgtc 10680
tttataattc tttgatgaac cagatgcatt tcattaacca aatccatata catataaata 10740
ttaatcatat ataattaata tcaattgggt tagcaaaaca aatctagtct aggtgtgttt 10800
tgcgaatgcg gccgccaccg cggtggagct cgaattccgg tccgaagctt aagccatggc 10860
ccgggaatct tagcggccgc ctgcagagtt aacggcgcgc cgactagcta gctaaggtac 10920
cgagctcgaa ttcattccga ttaatcgtgg cctcttgctc ttcaggatga agagctatgt 10980
ttaaacgtgc aagcgctact agacaattca gtacattaaa aacgtccgca atgtgttatt 11040
aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgcca 11086
<210> 54
<211> 9765
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 54
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaat cgagctagtt accctatgag gtgacatgaa gcgctcacgg 360
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ccggacttac ccttaagcga tttaaatcct gaggatatcg ctatcaactt tgtatagaaa 480
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ccatcgctgc tttgtctaca tcatgttctt catcatcctc cccaggcgac gcgtgctgct 600
gttcttattc agactaccgt tcgagtgact gcatggcgta catctttctg catcgacttt 660
gtacggctac atcgaacata tacacgagat gtctcgtgtg aatagagtca ctaatgcctt 720
aagcatcggt tactccgtag ggtacattct gttcttctta tttgtgcata tttttattgt 780
tgtttactga ttatacgagt agttatacat acatgcacat acatatcatc acatatatca 840
caatattttt ctaaattaaa ttaaaactaa aaatgactaa atttctaaca ccaacgacat 900
tgtaatgttt tctccaacaa ctttacctat tctacattgt tctatttcga atttcactct 960
ataaacaaca tagtctacaa tggaaaacag tgctttgtac gactatatac gcgatgtgtg 1020
gctacaacat aagacaatat agtcgtttga agattgaacc tatatatcgg tacggttaat 1080
ccgtctatgt acgtgggcat gacgaacacc cgtgataacg aaggattaac gtgcacaatc 1140
ataaatccaa agtaggagcg gtgcatgatg agaatcgctc tcagtactcg acataatgaa 1200
ccttacgagg tacaacaggc aggcaggcag ggaccagggg ccgcctttat ttcaggctcg 1260
ctggccccac gggcgtgctg cgtgcacgaa gggcactacc ccaacctctc accgaaaacc 1320
gcgctggatc ggcaaatcaa acgaggtggt gccccgtgcc cactctccac gtccacggca 1380
ccatccctct gcagccgctc accagccatg ccgtgtcgcg gaacggcaca accaccccca 1440
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ggcccgcgct gctgagtccc ctggacaccc gacaccctgt cggccctttg tttattcatc 1560
ccgaaatctc atctgccccc acggccgact gcgctgcgcc gcccggatat atatacccat 1620
cgttatcgat cgactgggga ctctatcagt gatagagtct agaggatcgc tcaggaaggc 1680
cgctgagata gaggcatggc ggccaatgcg ggcggcggtg gagcgggagg aggcagcggc 1740
agcggcagcg tggctgcgcc ggcggtgtgc cgccccagcg gctcgcggtg gacgccgacg 1800
ccggagcaga tcaggatgct gaaggagctc tactacggct gcggcatccg gtcgcccagc 1860
tcggagcaga tccagcgcat caccgccatg ctgcggcagc acggcaagat cgagggcaag 1920
aacgtcttct actggttcca gaaccacaag gcccgcgagc gccagaagcg ccgcctcacc 1980
agcctcgacg tcaacgtgcc cgccgccggc gcggccgacg ccaccaccag ccaactcggc 2040
gtcctctcgc tgtcgtcgcc gccgccttca ggcgcggcgc ctccctcgcc caccctcggc 2100
ttctacgccg ccggcaatgg cggcggatcg gctgtgctgc tggacacgag ttccgactgg 2160
ggcagcagcg gcgctgccat ggccaccgag acatgcttcc tgcaggacta catgggcgtg 2220
acggacacgg gcagctcgtc gcagtggcca cgcttctcgt cgtcggacac gataatggcg 2280
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tgcggcgacg acggcggcag cggtagcagc agctacttgc cgttctgggg tgccgcgtcc 2400
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taccctgctg cagggagtat gtgagagcaa cgcgagctgc cactgctctt cactggtacc 2640
gttaacagat caattcgaca aagcagcatt agtccgttga tcggtggaag accactcgtc 2700
agtgttgagt tgaatgtttg atcaataaaa tacggcaatg ctgtaagggt tgttttttat 2760
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ctccccctat atctcactca cttgtcacat cagcgttctc tttcccccta tatctccacg 3000
ctctacagca gttccaccta tatcaaacct ctatacccca ccacaacaat attatatact 3060
ttcatcttca actaactcat gtaccttcca atttttttct actaataatt atttacgtgc 3120
acagaaactt agcaaggaga gagagagcgg ggtgacccac cttgctagtt ggatattacc 3180
tcttctcttc aaagtatcct tgaacgctca ccggttatca aatctctaca ctatagctct 3240
gtagtcttgc tagatagtta gttctttagc tctcggtgac caagcttggc gcgatcaagc 3300
ttatcgatac cgtcgacctc gaagcttggt cacccggtcc gggcctagaa ggccagcttc 3360
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ggcctagaag gccgatctcc cgggcaccca gctttcttgt acaaagtggc cgttaacgga 3540
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<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
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<211> 10088
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
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atcacaggac tgaaagtatc ttcatagtct atcccatacc tttgcttgaa gcctttagca 6000
acaagacgag ccttgtacct gtcaagactt ccatctgcct ttctctttat cttatacacc 6060
catttacagt caataatatt agtgcccttt tttggaggta caagatgcca ggtcttattt 6120
ttcatcaaag cagagtattc tagatccata gcatctttcc aattcttatc ttctaaagct 6180
tcatttatat tatgtggttc ccctgatgat gtaaaacacc catatctaat agtgccatca 6240
gtatatacct ttggtttgcg aattccagct tgtagacgtg tccttggcct tgaatcttca 6300
ggtgcagtag gctgtacaat ttgggacgca gctccctcgg ccataggcga tcccggtgct 6360
ggcggtggca aatcctctgt ggaatcggcg ccgatcgggt cataggaatc aggcgcatga 6420
gattctgtct gctgcccaag ctcggtcggc gacgtagctt gatttggttg atcagcgatg 6480
ctggacggga gagcggacac acgtgctggc gacgcggttt ctgcacacac ttcatcacat 6540
agattattag aatcaaacct gtgatcaccc attagttctc ccccttgatc agatggtatt 6600
ggctggagat cagatggaag gagagaaatt tcctgacgaa gtcgagctcc tgcatttgga 6660
tgaagttgtg agaaaggaaa gacattctca tcaaaggcga cgtcccgaga tatgtagacc 6720
cggcctgtgg aaggatctaa gcacttaaag cctttgtgcg agggactata gccaagaaac 6780
acacactgct tagagcgaaa ctgaaattta tgtgtgttgt agggacgtag atgtggccaa 6840
catgcacaac caaacactct aagagaagaa tagtctggtt tttgctgaaa cagacgttca 6900
aggggcgtgt cataatttat gactcgacta ggagttcgat taatcaaata agtggcagct 6960
acaaaagcat cttcccaata tttaagaggg attgaggcgt gagcaaggag agctaaaccg 7020
acctcaataa tatgcctatg ttttcgttct gcagccccgt tttgttgatg agcgtgagga 7080
catgatacaa ggtgagatat cccgacacgc tcaaaaaagg agtgaagctt ctgatattca 7140
cctccccaat cagtttgtat ggcaataatt ttttgattaa atagtctctc gacaaggttt 7200
tgaaattcat tgaatttctg aaaaacttca gatttatgct tgataagata aatccacaca 7260
tatttgctgt aatcatcgat aaagctaaca taatatttgt tctttccaac cgaattaggt 7320
ggaggacccc aaacatctga aaacacaagc tccaaaggtt tactagaaac actatgtgac 7380
ttgggatagg gaagctgatg actctttgcc ttttgacagg catcacacac cgactcttta 7440
tttgattcat ctaaacaagg aagattattt gtgctaataa ctttagaaac aatgggggca 7500
gaagcatgac ccaaacgact gtgccatctt tcgaaagatg gtttgacaac tccaaaggct 7560
tgctttatgg cgggtagagg aagagggtaa agacccttgc ggcatggccc cttaaggatg 7620
gtgttcttcg ttgcctgatc cttgatcaaa aaataatcag gatgaaattc aaggaaagca 7680
gaattatctt tggtgaggcg atgaactgaa acaagatttt tagtggcctt tggaacatga 7740
agaatattgt ttagatgtaa attgcgagtt ggggtgtgaa ctaatgaatg accaatatgt 7800
ttgatttcca tacctgcgcc gcttgctgta tgaatctggt cacttccatg atacttgtca 7860
cgaacggcga gcttctcaag atcactagtg atattgtctg tagcaccaga gtccatgtac 7920
cagttttgat ccatagaata agggctcatt gcagcagcaa catggcgttc ctctggaaca 7980
tagttttcat caaacctgtg ccaacagtca atcgccgtgt gtcccgtctt gaagcagacc 8040
tgacagattg ggcgcccatt gttgtcgtgg gttgcagttg ggcccgtggg gaagctcctg 8100
cgttgctggt tttgccgtag tggctgctgc tgcccacggc cacggccacc agagctacgg 8160
ccggagttct gccgtccacc tcggccacga tttgggccac gcatttgctg gctcccacca 8220
cggccgccgc ctcttcctgc tgaattcgct gatgacgatg acccgatgcc aagctgtaac 8280
tctaatctag tctcaaagct caaaagttgg gagtacaatt ctgaaggagt aacaggttct 8340
agtctagtta caagagcaga aactagagga ttgtactcaa gatcaagacc gttgcagata 8400
tacatcacca gttcctcatc gtcaaggggt cttcctgctg cagccatctc gtctgcaagc 8460
cccttcatct tgccatagta ttgggcaaca gtcatgttgt ccttcttcgt cgtggcgagg 8520
gcaagacgca cattagtagc acgtgcacgc gtgtgagagg cgaacatgtc ggtgatgatc 8580
ttccatgctt cagcggcggt tcttgcaatg gcgacttgtg ccaagatatc cctggacagg 8640
gaggtgagaa gaaatcctag gacttgttgg tccgtggcga accattcgtc gtaggctgga 8700
ttggaaacct tagcgatctt gccgtcgctc tgcttctcat caatttcttc agatggagcg 8760
acggctttgc cgttgacata ccgctccagt cttgcgcctc gtaagatcgc aagaacttgc 8820
gccgaccaca taccgtgatt ctggcgagtg agtttctctg tgacttgaac accaaggaga 8880
ggattcgatg acgagtttga ggacgccatt gctaggatga ttaaccctag gctctggtac 8940
catgtagaaa tcagaggcgc gatggaaata ggtggaacgt cggtctccgc tccagagatc 9000
acgacggctt cgtgtttgat atttctggtg gcacaaaaac aaggcgcgag ttacatatat 9060
atagatgagt atggccagct ttagatctat tctaggaaag gataagtttt acatggttac 9120
aattgatcta tttctattaa ctgcctatag atcttagccg gcaatatctc aaccatattt 9180
ggaatacaac acatatatgt taacaatcag tctagcagct aggttgctgt gtggattcgt 9240
gaagcggcaa attcttggat ggctgcaggt gcccgacatc tttcgagcct ccttgcaaat 9300
tgctagtttt tttcttgttt ttcctctttg acttggtccg agtgtgctat gcagttgctg 9360
tgagagtgca ccttctgctt agtcgcatga tacaaggaac tgttgattct aaaaaaaact 9420
ttattttaat gtaaaggaga gagaatttaa tatcagtttt ttttcgatat agactttcat 9480
gtgattttgc atcgcccgat acatcagtgt gtttgtttgg ctttagtcca tagcggcttc 9540
tataacgttt tgcctcgata gattacagct agctgcagca gttttaaaag ccgtctttaa 9600
tcggaagcca acatctcgac atatagagcg ttcgatagga tgcttactta ttctagtcta 9660
ttaaatttcc caccgctgct aattaatgct aatgaattaa ctctctctgc ctatccctcg 9720
acatgcacta atgtaggagt atatcccaac gcccaaccac ctcctaataa cttcgacgga 9780
tggcagctac cgtccatgga agatggtgac ggaatgtcca gcattccacc gactgccaga 9840
aactgcacgc acatctgtca tcagcaatcg ctagcctatt taatgagcaa cattccattg 9900
caatctcctc aggccactta cctgcagtca ccactcccaa gccagtaccc acagtcctac 9960
gagcagtcgc acgcaagtgt caagagacga aacggtcgac gccacttacc tgcagtcacc 10020
actcccaagc cagtacccac agtcctacga gcagtcgcac gcaagtgtca agagacgaaa 10080
cggtcgac 10088
<210> 57
<211> 1860
<212> DNA
<213> 双色高粱(Sorghum bicolor)
<400> 57
taagtgaaag gaaccatcaa atgtgtagcc aacaaagtat caacaaattc tacactagat 60
ctcatacaaa caagggcaac cacaatgtac tatgatctgt agtacaaaca ttgacctcaa 120
cttagattta acgatccatg cagagatcaa actccacgtt gcaccgaaat cctccaactc 180
ggactcgatt gggagcttaa tcttctcttc gccatacata attaagagtg gtagaaatga 240
gctacagtta agacatcatt gaatagcagc tgcaaggaat tgaatcaaac catccgaaac 300
accgcctcat acatctagag gaaagataaa tgggagcccc tctccgtcgg gaccggatca 360
gttcgagagt atatttgagt tttagcccct ttatataaaa aggtagaggt tcatttagaa 420
gtttggttga agttgctcta tacgcatcaa ccaatctttt catacaagat ctcatctcta 480
aacattacac acgaatctat ctgttacttt ctagaatata atcccaagtt ctttttagaa 540
cggatcgagg tagagcagta tttttctttg atggtcaaaa gttgtttgtt tttgaatcta 600
aaattttaaa aaatttgttt gttttgaaca aaaattgaga gatttgtttt tgagggtcgg 660
acacatacga gttttgggaa accgtcggtg gtacctgcct gtgcacacag aggtagctag 720
ctaggttggg gacgggatgc atgtatgtaa tacgtggcgg agcttccgat cgagacagcg 780
acatgtgggc tcccatactt gctggacaac ttaatcgcta ccactgctgc aacttcaatt 840
tgtgaatgtg catgtaacct cctgcactgt actgatatct ctgtttctgg ttgcggccgg 900
gaggaattaa cgaagactac tggaaggatt catggatgat ggacgatcca tatataattg 960
acgtcttaat gcaggaagag tatgtgttta ttgtgcgata agcactcgga tccaactgca 1020
aactacctca cactgacaca ctagtgagag agagtgaata cgcctccaac ttcatcagat 1080
gagagccacg tacgtccgtc cctgccgact gccgccatca ccctgcctgc taagtcgtgt 1140
taggcggctg ctatttaagg gcgtgtttaa atgtctttaa aattctaaat gtttataaga 1200
tttctcgtcg catcgaatct ttagacgcat gtacgaaaca taaaatatat ataaataaaa 1260
aaaaaataat taactacata gtttgtatat gtaaatcgcg agataaagta cttgttgagt 1320
ctagttagtc tataattaaa tatttattgc taaatataaa cgaaagtgtt atagtataac 1380
ataccctaat aagttgctat tgctgctgca aatgaattca ctctgcctcg atcatgccct 1440
catcaactaa ccgctgtagt attatctgta tctatctgcc tcctgctccc aacacccaac 1500
cacctcctgc ccagcaatta acttcgacgg atggcgacga taccgtccgt cgtccatgga 1560
agatgatgtt ggaacatcca ccatattcat tcattcatat gcatgcatcc accattccac 1620
cgactgcctg cctgaaactg catgcaatgc aacaacaccg tgcatgcatg cacatctgtc 1680
atcagcaatg acaagctact gtagctagct cccagatcag atcagatcag atcgatcgca 1740
agcctgccta tttaaggagc cacactccat ctcactctcc tcaccagcgg ctagcacttg 1800
ctcacttgca ttccaaagct agtacaagca agtctcagac acccccagaa catcgacgac 1860
<210> 58
<211> 1856
<212> DNA
<213> 双色高粱(Sorghum bicolor)
<400> 58
aacatatatc tgcgaataaa cgttgctggc tagcttgatg acgtcgttat aacatagaca 60
tgttttattg ccgttttcct ttagaaaaac aaacctaaaa atacaaagaa aatacgctag 120
tttatttagg ccatatcatc tctgttttaa ctccgttttg tccattgaaa ttgtgttagg 180
ttcgtaatca cgagcactac atgttagtaa tattgttcac tcagtttgaa accttttaat 240
ttcgtgacct taattaatta attacttttc tatataaaat cttagaaaat ccatatcttt 300
tccgttttaa ctccgatttt cgtcatcttt acgtctgtga gatcgtagcg atgcgtagaa 360
ttattttaca aatttttcat attgttttta tatgattggt gtactgttct aattatagcc 420
ttgtttgcta cgtgtatgtt gtgtccgatt gtttgtgtgt tgatgatcga tgatcgagtt 480
tagacggaga gcagtttcgg tgatcaagat caaagctttg gcaacaagtg agaccagcag 540
gaccaaaagg ataagcaaga gcaattggat tgaggcaagt atagcatttg gattttattt 600
ctgtgaccat gatcctgtga ctagattaat gttaagtaat aaatggtaaa aatgactttt 660
taacaacttg atgatttgtc tgtacgtgat cacccgggat aacagtgcaa ccatgagggc 720
tataatggct ctggctttag ctcagtatga agaccttttc tagcttgtta gaggttaccc 780
gaaagggcgg aggggctgaa ccgacacggg tatagtgcga gcccctgtcc ctatgtgtat 840
aggctgcgcg tcattgtgcc attcggaagg ggggtatcta tatctgctcg caaaggaaac 900
cttgcggccc taacatgtta gacgaacttt tgaaaggctt catagtgatc cctgccgacc 960
ttccttggaa gtgggttaag aggctgatca cctcgggcga aagggtaaat catgactcat 1020
gggtaaagat gtgcaacctc tgcagagtgt taaaactagt atactagccg agctcacggt 1080
caggaacggc cttggggaca tctacattaa gggtgatgaa tcttgtgtgt taaatatgct 1140
cattgcttat tgtttaatgc tttacattat ttatgtcaca ttgatcatga gattgtggga 1200
gctatacaat ctagttgcta tacttgtgga gtttgacatg gactcactct tgctatttcc 1260
cccaaacctc aggagaagtt taggcttgtg atcaaccagt cagttggatc ctgtagagag 1320
aagttaatac ccggagtttg gagttgtcta tccgttgttt gctatcaaag gttatctctt 1380
ttatattatg tacgttatat aatttttgca ttgtcttttg atattacccc ttatttgtag 1440
ctatatgtga gatttggctt ttaaaactca catatggtgc atatctggtt ttgtccttaa 1500
aatcgggtat tacaacaact aaacaagcat ctgccctcct ccctcaacac ccaaccacct 1560
cctccccagc agttaacttc gatgcatggc gagagatacc atcgatccat ggacatatac 1620
gcatatgcat gcatccaccg actgaaacag catgcacacc catcccatgc atgcacatca 1680
ctcatcagca atcgctagct agctcacaca tcgatcacaa agcctgccta tttaaggagc 1740
aacattccat tgcaatctcc tcaccagcta gcacttgctc actcactgca tcccaaaagc 1800
tatcagtcac ctacgagcat cagcacatat atcacaggag gtcgatcgag atcgac 1856
<210> 59
<211> 1588
<212> DNA
<213> 粟(Setaria italica)
<400> 59
tacgaagaga gaggggcgga gtttcattaa gaatggcttt atgtacaaca caatgataat 60
ggtctcataa acacatgatc atacgggtga aacgacgaca aaattagtaa atctgtggaa 120
tgatcttatg cacaacaaca gcaacatgac cttaatccaa taatagtgcc atctttatgt 180
ttgttctaga agagggccaa gaggttggtg gcacagggga atgcatgtgc caagcagcta 240
tgactctcca cggtgggacg ccgacccact tgcaaagttg caagccttgc gtgcccgctc 300
tagcaagtgt ccgcgaataa aagttaagta ggccatgaat acatagtact cctacggtgt 360
ataggagacc gctatttgat gcactcgtag gtacacgtgt cacgattagc acttggcagg 420
acattgatgc aggacacgtg tcacctatat gcgaaggtgt cctggacctt cacgactttt 480
tccttgatcc cacgaagcga aaccggacct tctctgctct gtccaaacat catttcctac 540
catcacactt aagtaaacgt cgcggatctc ctttgctctg tccaaacatt atttcctaca 600
atcacgctta agtaaacgtt gcttaccttt ggtgacggtt cagcgagggt ggcatttagt 660
atcccgattc agatccccga cgcagtccga gaccgttctt cttttttttt cttatggagc 720
atgcagatac atgcatgtag atgcatggac ttggacagat gtcaagtgtg tacgagttgc 780
accgcttccc tcactcgtac tcagcggctt gtacaagcat gtagcggtgt gtcgatccac 840
accacagtcg cgacgtccgg cccatgcagt tgtccatcgc tagcagctcg atggctgcag 900
ctggagggtc tgggtggaca aacgagtttc ggcaaccgtc ggtgcttcct gcttgtgcat 960
ctgtctgctg tcactatgct gggtaaattc atcacttaat cagtttacca acggctaacc 1020
tcctggaaga gtacgtgtct ttaatttgtt tctggttgca gccatgcatt aactattgtg 1080
ggaagattac agctggaagg atcgatccgt gtaaacgaat ggacggatgg attggtatga 1140
tgtttaaacg tacaattatc atcgataagc actcgcatcc accccccaaa ccctcgatca 1200
ctgacactga atgaattgaa tgcgtgctgc ctcaactgca caccgaccat catctgctgg 1260
cccaactccc aactacctcc tgccggtccc ttaactccca tccggtcgat cgagaccgac 1320
accaacgaca gggatccacc gacgactgca acacaccatg ggcatggcca tgcatgcacc 1380
catcagctag cagctccccg tctccgtcct cgtcagtcat cgctcacaaa ccacacagag 1440
agctaggtcg atcgagaccc tatttaaaga ccaacattcc ctcctcacca gcaaagcaaa 1500
gcacattctt cccaagcagc ttgtagagca catccgatcc atcgaccaca gcgcagctag 1560
cagctagcac aggaacacgc acatcagc 1588
<210> 60
<211> 1798
<212> DNA
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 60
ggttggcagg tagatcgata cgagaatgac atgaacataa tggatcgtcg gcttcaattt 60
ggaagccacc tgctggcgac cgacagccgt cccggccggg agggataacc tacgtcaacg 120
ataaataaat actcctacta actggagtag ctagcagctt ggtcttgtga aaaagaaaga 180
taaaattcta ctactccata gtgtacgtgg tcttatctag agcttaattg gattgcaaaa 240
tagcatacag ctgattgatt aaaaactacg ttaaacttag gaggtgttta gaaattagga 300
ctaaatttag tccctctcac aaaaatataa gtccctttag tccactttag tccctccaac 360
caaacaccac cttcaaacac caccttagta actgaaaatt cttagattta attgatcgat 420
ctgctgagag ctttgcattg tggagcacat gccaggccag ctagtacatt cttgtgataa 480
gaaacatgaa gtttcggttt aacctcttaa atacatgcat gcatggttga tacaatacac 540
gtcctgaaca tgaataaata ctattaaata cgttatccga attttatcat atagtaatat 600
atttggatta gtttcttaat atgactttta ttcttttatc ccaattatat atcaatctct 660
tgtgtactaa aatgtgatgt gctattgaga tatttcactg tgtttgtacc aactcctgaa 720
aatactcatc atatcgtcgt tgttggttgg cattcatagt ttattttgta gcagctgagc 780
aattttaatt agtcttttta gcttgtaaga ttcttatatt tcttagcaat agccgagcgc 840
attattgggc tatagtgtaa ccaggtgaag cgtacgcgtg tgcataagtt gtccttgtgg 900
ttgaaagaag aatactggaa ggatcgttgg atgttactgc tgatatgatg gacacttgga 960
tccaaacatc atgaatgcgc tcaactactt gcatgttcca aatgtacaac atgcatgcta 1020
gctgctacaa acgactagct ccgttaggcc gctgctaatc attttctcat cactaatact 1080
aacactgtgt gactagctag ctaaaccagc cctaacaacc aaccaccctg attcaattga 1140
attgaattga ataacattag acgcaccgac gactaagaac ggtgcctaaa cactagcact 1200
ccaagcttaa ttacactatg cgtacaccaa ttaaaaaatg tcacgaaaca ttctataaac 1260
aaattagata tttactccta atagtattat acatatgtgc aaagtctcat attcaaattc 1320
aatatatttt agctgtaaca aaaagtgaaa aaaacccgaa ttttagctgt aacaaaaagt 1380
gaaaaaaaac ccgacagttt taagggtaaa aatatcagga ttttgtcttt tttatggcta 1440
aaatataatg aaattgaaga taagatttca catgtaggtg taaaactatt ggaagtatgt 1500
gtccaatttt ttctaaaatt ttttatgaca tttgctaatt gatatgtata gtgtgtacat 1560
aagtaaagct tgtgtgtata ggatatgttc tctaattata ggtggactat atattccacg 1620
tagtaactac atttgacttg gtcgatgcat cggcacagat gaaatcatag ctatttaaag 1680
ccccctacat tcccgggaat tctcatcgat cgatctcacc tgcagcagca aacgagcacc 1740
acacaccagc agcagcagca aagtcgatcg atcgtcagca cacacgacca agatcgag 1798
<210> 61
<211> 1500
<212> DNA
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 61
ttaaagatga tttctccacc agtgtaaaat gtgatgtgct attgagatat ttcactgtgt 60
ttcctaaaaa tactcatcgt cgttaattgt tggttggcat tcgtagttta ttttgtagca 120
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cgagcgcatt attgggctat agtgtaacca ggtgaagcgt acgcgtgtgc ataagttgtc 240
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acttggatcc aaacatcatg aatgcgctca actacttgca tgttccaagt gtacaacatg 360
catgctagct gctacaaacg actagctctg ttaggccgct gctaatcatt ttctcatcac 420
taatactaac actgtgtgac tagctagcta aaccagccct aacaaccaac caccctgatt 480
caattgaatt gaattgaata acattagacg caccgacgac taagtgcagt cccaaccctc 540
cacctaaaat ggtgtctata tatggcatta actaaattgt catgtatgac ttttaactta 600
tgtggcacta tattaatata ttaattaaga aggagagtga agagaggaag aaactgggtc 660
tcatgcaaga cacagcttca acacgagaat ctatgcacta gacactatca agttttgcat 720
tggaagagaa tagtgtcttt ataatagttg aagaataaat atgattggta gagaagagag 780
atgatgtatt tattaatggc ccactttaag aaatcatggg ttgtggagtg tagtttttat 840
tgtgatgtct tattgacatg acaccataga cactgcttat ggacattatg ggttggaact 900
gccctaagaa cggtgcctaa acactagcac tccaagctta attacactat gtgtacgcca 960
attagaaaat gtcatgaaac attctataaa caaattagat atttactcct aatagtatta 1020
tacatatctg gaaagtctca tactcaaatt taatatattt tagctgtaac ataaagtgaa 1080
aaaacccgac agttttaagg gtaaaaatgt caggatttta tctttcttgt tatggctaaa 1140
atataatgaa actaaagata agatttcaca tataggtgta aaactattgg aagtatgtgt 1200
ctaatttttt ctagaacttt tgtggcattt gctaattgat atgtatagtg tgtacataag 1260
taaagcttct gtgtatagga tatgttctct aattataatt ataggtggac tatatattcc 1320
acgtagtaac tacatttgac ttggtcgatg catcggcaca gatgaaatca tagctactta 1380
aagcccccta cattcccggg aattctcatc gatcgatctc acctgcagca gcaaacgagc 1440
accacacacc agcagcagca gcaagtcgat cgatcgtcag cacacacgac caagatcgag 1500
<210> 62
<211> 2112
<212> DNA
<213> 双色高粱(Sorghum bicolor)
<400> 62
atggctactg tgaacaactg gctcgctttc tccctctccc cgcaggagct gccgcccacc 60
cagacggact ccaccctcat ctctgccgcc accaccgacg atgtctccgg cgatgtctgc 120
ttcaacatcc cccaagattg gagcatgagg ggatccgagc tttcggcgct cgtcgccgag 180
ccgaagctgg aggacttcct cggcggaatc tccttctccg agcagcacca caaggccaac 240
tgcaacatga tccccagcac tagcagcaca gcttgctacg cgagctcggg tgctaccgcc 300
ggctaccatc accagctgta ccaccagccc accagctccg cgctccactt cgctgactcc 360
gtcatggtgg cctcctcggc cggcggcgtc cacgacggag gtgccatgct cagcgcggcc 420
agcgctaatg gtagcgctgg cgctggcgct gccagtgcca atggcagcgg cagcatcggg 480
ctgtccatga tcaagaactg gctgcggagc caaccagctc ccatgcagcc gagggtggcg 540
gcggctgaga gcgtgcaggg gctctctttg tccatgaaca tggcgggggc gacgcaaggc 600
gccgctggca tgccacttct tgctggagag cgcggccggg cgcccgagag tgtctcgacg 660
tcggcacagg gtggagccgt cgtcacggct ccaaaggagg atagcggtgg cagcggtgtt 720
gccgccaccg gcgccctagt agccgtgagc acggacacgg gtggcagcgg cgcgtcggct 780
gacaacacgg caaggaagac ggtggacacg ttcgggcagc gcacgtcgat ttaccgtggc 840
gtgacaaggc atagatggac tgggagatat gaagcacatc tgtgggacaa cagttgcaga 900
agggaaggac aaactcgcaa gggtcgtcaa gtctatttag gtggctatga taaagaggag 960
aaagctgcta gggcttatga tctggctgct cttaagtact ggggtcccac gacaacaaca 1020
aattttccag tgaataacta cgaaaaggag ctggaggata tgaagcacat gacaaggcag 1080
gagtttgtag cgtctctgag aaggaagagc agtggtttct ccagaggtgc atccatttac 1140
aggggagtga ctaggcatca ccagcatgga agatggcaag cacggattgg acgagttgca 1200
gggaacaagg atctctactt gggcaccttc agcacgcagg aggaggcagc ggaggcatac 1260
gacattgcgg cgatcaagtt ccgcggcctc aacgccgtca caaacttcga catgagccgc 1320
tacgacgtca agagcatcct ggacagcagt gcgctcccca tcggcagcgc cgccaagcgt 1380
ctcaaggagg ccgaggccgc cgcgtccgca cagcaccatg ccggcgtggt gagctacgac 1440
gtcggccgca tagcctcaca gctcggcgac ggcggcgccc tggcggcggc gtacggcgcg 1500
cactaccatg gcgcctggcc gaccatcgcg ttccagccga gcgcggccac gggcctgtac 1560
cacccgtacg cgcagccgat gcgcgggtgg tgcaagcagg agcaggacca cgcggtgatc 1620
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aacggcagca ccgtcgtcgg cagtggtggc tacatgatgc ctatgagcgc tgccacggcg 1860
acggctacca cggcaatggt gagccacgag caggtgcatg cacgggcaca gggtgatcac 1920
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aactatggcg gcgggaggat gtctgcggcc tgggcgactg tctcagcgcc accggcggca 2040
agcagcaacg ataacatggc ggacgtcggc catggcggcg cacagctctt cagtgtctgg 2100
aacgatactt aa 2112
<210> 63
<211> 703
<212> PRT
<213> 双色高粱(Sorghum bicolor)
<400> 63
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1 5 10 15
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20 25 30
Asp Asp Val Ser Gly Asp Val Cys Phe Asn Ile Pro Gln Asp Trp Ser
35 40 45
Met Arg Gly Ser Glu Leu Ser Ala Leu Val Ala Glu Pro Lys Leu Glu
50 55 60
Asp Phe Leu Gly Gly Ile Ser Phe Ser Glu Gln His His Lys Ala Asn
65 70 75 80
Cys Asn Met Ile Pro Ser Thr Ser Ser Thr Ala Cys Tyr Ala Ser Ser
85 90 95
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100 105 110
Ser Ala Leu His Phe Ala Asp Ser Val Met Val Ala Ser Ser Ala Gly
115 120 125
Gly Val His Asp Gly Gly Ala Met Leu Ser Ala Ala Ser Ala Asn Gly
130 135 140
Ser Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ser Ala Asn Gly Ser Gly Ser Ile Gly
145 150 155 160
Leu Ser Met Ile Lys Asn Trp Leu Arg Ser Gln Pro Ala Pro Met Gln
165 170 175
Pro Arg Val Ala Ala Ala Glu Ser Val Gln Gly Leu Ser Leu Ser Met
180 185 190
Asn Met Ala Gly Ala Thr Gln Gly Ala Ala Gly Met Pro Leu Leu Ala
195 200 205
Gly Glu Arg Gly Arg Ala Pro Glu Ser Val Ser Thr Ser Ala Gln Gly
210 215 220
Gly Ala Val Val Thr Ala Pro Lys Glu Asp Ser Gly Gly Ser Gly Val
225 230 235 240
Ala Ala Thr Gly Ala Leu Val Ala Val Ser Thr Asp Thr Gly Gly Ser
245 250 255
Gly Ala Ser Ala Asp Asn Thr Ala Arg Lys Thr Val Asp Thr Phe Gly
260 265 270
Gln Arg Thr Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Lys Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro
325 330 335
Thr Thr Thr Thr Asn Phe Pro Val Asn Asn Tyr Glu Lys Glu Leu Glu
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Asp Met Lys His Met Thr Arg Gln Glu Phe Val Ala Ser Leu Arg Arg
355 360 365
Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Ala Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr
370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
Ser Ser Ala Leu Pro Ile Gly Ser Ala Ala Lys Arg Leu Lys Glu Ala
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Val Gly Arg Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asp Gly Gly Ala Leu Ala Ala
485 490 495
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500 505 510
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Ser Met Asp Asn Ala Ser Leu Glu His Ser Thr Gly Ser Asn Ser Val
580 585 590
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595 600 605
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610 615 620
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Thr Val Ser Ala Pro Pro Ala Ala Ser Ser Asn Asp Asn Met Ala Asp
675 680 685
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<210> 64
<211> 2112
<212> DNA
<213> 粟(Setaria italica)
<400> 64
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aacgatactt aa 2112
<210> 65
<211> 703
<212> PRT
<213> 粟(Setaria italica)
<400> 65
Met Ala Thr Val Asn Asn Trp Leu Ala Phe Ser Leu Ser Pro Gln Glu
1 5 10 15
Leu Pro Pro Thr Gln Thr Asp Ser Thr Leu Ile Ser Ala Ala Thr Thr
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Pro Arg Val Ala Ala Ala Glu Ser Val Gln Gly Leu Ser Leu Ser Met
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195 200 205
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275 280 285
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435 440 445
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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<210> 66
<211> 2064
<212> DNA
<213> 二穗短柄草(Brachypodium distachyum)
<400> 66
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<210> 67
<211> 687
<212> PRT
<213> 二穗短柄草(Brachypodium distachyum)
<400> 67
Met Ala Thr Val Asn Asn Trp Leu Gly Phe Ser Leu Ser Pro Gln Glu
1 5 10 15
Leu Pro Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Asp Val Ser Gly Ala Asp
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Met Val Ala Ser Ser Ala Gly Gly Val His Asn Glu His Gly Ile Met
115 120 125
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Ser Met Ile Lys Ser Trp Leu Arg Ser Gln Pro Ala Pro Ala Gln Gln
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Glu Gln Gln Arg Ala Glu Gly Leu Ser Leu Ser Met Asn Met Pro Leu
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245 250 255
Ala His Leu Trp Asp Asn Ser Cys Arg Arg Glu Gly Gln Thr Arg Lys
260 265 270
Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Gly Tyr Asp Lys Glu Glu Lys Ala Ala
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405 410 415
Ala Leu Pro Val Gly Gly Thr Lys Arg Leu Arg Asp Ala Ala Ala Ala
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435 440 445
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450 455 460
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Gln Ala Ala Pro Gln Ala Ser Ser Gly His Gly His Met Leu Tyr His
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Pro Tyr Gly Gln Pro Leu Met Arg Gly Trp Cys Lys Gln Glu Gln Glu
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Asp Phe Phe Ser Gln His Ala His Ala Met His Gln Gln Gln Gln Gln
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595 600 605
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610 615 620
Ala Tyr Glu Asn Phe Leu Leu Gly Ala Ala Thr Asp Gly Tyr Cys Gly
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Pro Gly Arg Met Ala Ala Thr Trp Thr Pro Val Ser Val Ser Ala Ala
645 650 655
Gln Pro Val Ala Ala Thr Ser Ser Gly Ser Asp Met Ala Gly Ala Val
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Cys His Gly Gly Ala Gln Leu Phe Ser Val Trp Asn Asp Asp Ser
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<210> 68
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<212> DNA
<213> 双色高粱(Sorghum bicolor)
<400> 68
atggctactg tgaacaactg gctcgctttc tccctctccc cgcaggagct gccgcccacc 60
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
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tacatcatgg cacctatgtc agcggtctct gctaccgcta cggcggtggc ctcatcccac 6480
gaccacggtg gagacggcgg caagcaggtc caaatgggct acgactccta ccttgtggga 6540
gctgacgctt acggcggagg aggagctggt cgcatgccta gctgggccat gacgcctgct 6600
tctgctcctg cggctacgag ctcgtcggat atgacaggag tgtgtcatgg cgcccaactg 6660
ttctcggtgt ggaatgatac atagggtacc cgggccgtgg gtcgtttaag ctgccgctgt 6720
acctgtgtcg tctggtgcct tctggtgtac ctgggaggtt gtcgtctatc aagtatctgt 6780
ggttggtgtc atgagtcagt gagtcccaat actgttcgtg tcctgtgtgc attataccca 6840
aaactgttat gggcaaatca tgaataagct tgatgttcga acttaaaagt ctctgctcaa 6900
tatggtatta tggttgtttt tgttcgtctc ctaatatttg cctgggatca aattttattg 6960
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atatgtttga ttgtttggtt tgttctttgt tgtacacctg gttctgtcga gcttagtttt 7080
cgacactggc ttacagctta acatgttgct attttattgg gttctgattg ctattttatt 7140
gggttctgat tgctagtttt tgctgaatcc aaaaaccatg ttatttattt aagcgatcca 7200
ggttattatt atgatggtgg ctaagttttt ttttttccaa gggtaaattt tctggattct 7260
ccagtgtttc tgtggccgaa ttcgagctcg gtaccctggg atccgatatc gatgggccct 7320
ggccgaagct tggtcacccg gtccgggcct agaaggccgc ccgggcaccc agctttcttg 7380
tacaaagtgg ccgttaacgg atcggccaga atggcccgga ccgggttacc gaattcgagc 7440
tcggtaccct gggatcggcc gctctagaac tagtggatcc cggccgtgat ccccggcggt 7500
gtccgccact gaagaaacta tgtgctgtag tatagccgct gcccgctggc tagctagcta 7560
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ggcagtgtca gtgtgagcaa tgacctgaat gaacaattga aatgaaaaga aaaaagtatt 7680
gttccaaatt aaacgtttta accttttaat aggtttatac aataattgat atatgttttc 7740
tgtatatgtc taatttgtta tcatccattt agatatagac aaaaaaaatc taagaactaa 7800
aacaaatgct aatttgaaat gaagggagta tatattggga taatgtcgat gagatccctc 7860
gtaatatcac cgacatcaca cgtgtccagt taatgtatca gtgatacgtg tattcacatt 7920
tgttgcgcgt aggcgtaccc aacaattttg atcgactatc agaaagtccg gtccgctcga 7980
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atgtctaagt tataaaaaat taccacatat tttttttgtc acacttgttt gaagtgcagt 8100
ttatctatct ttatacatat atttaaactt tactctacga ataatataat ctatagtact 8160
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caattgagta ttttgacaac aggactctac agttttatct ttttagtgtg catgtgttct 8280
cctttttttt tgcaaatagc ttcacctata taatacttca tccattttat tagtacatcc 8340
atttagggtt tagggttaat ggtttttata gactaatttt tttagtacat ctattttatt 8400
ctattttagc ctctaaatta agaaaactaa aactctattt tagttttttt atttaataat 8460
ttagatataa aatagaataa aataaagtga ctaaaaatta aacaaatacc ctttaagaaa 8520
ttaaaaaaac taaggaaaca tttttcttgt ttcgagtaga taatgccagc ctgttaaacg 8580
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gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg gaactgtatg 9660
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aaataagtac tgttttttgg ttggctgcaa gccattctga acttcagttt accaattgtt 11400
tttatgttgt ggttgaatat tttaattttt tatttaatgt ttggttcttt ttttatatat 11460
atttgcaaaa atgatacaag tggtcaagtt ttcatatagt atgggctcta tttcctagag 11520
ctctacctct aggaacgaat tttgtggagg ttttcttttg gctagttagg caaagtcccc 11580
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gccgttgttt tgcggtgact tcatctggac gtcccgcgac atagagacgc ttgtattgat 11880
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cacactagct gaatttattg aagctcataa aaagatccga gacaaagaaa tacattttca 12060
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ccggccaccc cgctccggcc gtggggcccc accgagcccc gcaagggtgc tgacatcctc 13380
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ctcgattccg tccccatggt cgccatcacg ggacaggtgg cgcgacgcat gattggcacc 13680
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caggagcatg tgttgcctat gatccctagt ggtggggctt tcaaggatat gatcctggat 15060
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cactataatg tgggcatcaa agttgtgtgt tatgtgtaat tactagttat ctgaataaaa 15240
gagaaagaga tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt tataattctt 15300
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aattaatatc aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg cgaatgcggc 15420
cgcctgcaga gttaacggcg cgccgactag ctagctaagg taccgagctc gaattcattc 15480
cgattaatcg tggcctcttg ctcttcagga tgaagagcta tgtttaaacg tgcaagcgct 15540
actagacaat tcagtacatt aaaaacgtcc gcaatgtgtt attaagttgt ctaagcgtca 15600
atttgtttac accacaatat atcctgcca 15629
<210> 71
<211> 15647
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 71
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
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ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga attcgagctc ggtacggcca gaatggcccg 660
gaccgaagct tgcggccgca cactgatagt ttaaactgaa ggcgggaaac gacaatctga 720
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tggagtttaa tgagctaagc acatacgtca gaaaccatta ttgcgcgttc aaaagtcgcc 900
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gatcccagct tcaaggtacg gcgatcgatc atcccccctc cttctctcta ccttcttttc 3660
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caggtcgact ttaacttagc ctaggatcca tggctactgt gaacaactgg ctggctttct 4740
ccctctcccc gcaggatctg ccgccttccc agacggattc caccctcatc tccgccaccg 4800
ccaccgacga ggtctccggc gacgtctgct tcaacatccc ccaagattgg agcatgaggg 4860
gatcggaact ctcagcgcta gtcgccgagc cgaagctgga ggacttcctc ggcggcatca 4920
acttctcgga gcagcaccac aaggccaacc tcaacgtgat ccccagcagt agtaacgctt 4980
gctacgcgag ctcaggcgct agcacaggct accaccagct gtaccaccac caaagctccg 5040
cgctccattt cgctgactcc gtcatggtgg cctcctccgc cggcgtccat gacggcggtg 5100
ccagcatgct cagtgcagcg gccaccgtca atggcggcgc tggcgctgcc agtgccaacg 5160
gcggcagcat cgggctgtcc atgatcaaga actggctgcg gagtcaacca gctccgccgc 5220
tgccgcaacc gagagtagtg gcggccgccg agggcgcgca ggcggcgcag gggctttctt 5280
tgtccatgaa catggcaggg gcgcaaggcg ctggcatgcc gcttctcgcc ggagagcgag 5340
gccgggcgcc cgagagcgtg tccacatcag cacagggtgg agcagtcgcc gctcggaagg 5400
aggatagcgg tagcagcggc ggtgccggcg ccctactagc cgtgagcaca gacacgggtg 5460
gcagcggcac ggttgctgag acggcggcga ggaagacggt agacacgttc ggccagcgca 5520
cgtcgattta ccgcggggtg accaggcata gatggacagg gaggtacgag gctcatctgt 5580
gggacaacag ttgcagaagg gaaggacaaa ctcgcaaggg tcgtcaagtg tacctgggtg 5640
gttatgacaa agaggagaaa gctgctaggg cttatgattt ggctgctctg aagtattggg 5700
gtcccacgac gaccacaaat tttccggtga gtaactacga aaaggagctg gaggaaatga 5760
agcacatgac aaggcaggag tttgtagcgt ctctgagaag gaagagcagt ggcttctcca 5820
gaggcacgca ggaggaggca gcagaggcgt acgacatcgc ggcgatcaag ttccgcgggc 5880
tcaacgccgt caccaacttc gacatgagcc gctacgacgt gaagagcatc ctggacagca 5940
gcgcgctccc catcggcagc gccgccaagc gcctcaagga ggccgaggcc gccgcgtccg 6000
cgcagcacgc tggcgtggtg agctacgacg taggccgcat cgcctcgcac ctcggcgacg 6060
gcggcgccct ggcagcctac ggcacgcact accacgcagc cgcagccgcc tggccgacca 6120
tcgcgttcca gccgagcgcc gccgccgccg gcctgtacca cccgtacgcg cagccgatgc 6180
gtgggtggtg caagcaggag caggatcacg cggtgatcgc cgccgcgcac agcctgcacg 6240
agctcaacca cctgaacctg ggcgccggcg gcggtgcgca cgacttcttc tcggcggggc 6300
aggccgcgat gcacggcctc ggcagcatcg acaatgcctc actcgagcat agcaccggct 6360
ccaactccgt cgtgtacaat ggggttgggg acagcaacgg tggcgccgtc ggcggcggct 6420
acatgatgcc gatgagcgct gccacggcga ccacgacggc aatggtgagt cacgagcagg 6480
tgcatgcgcg gtcacatcaa ggggagcacg acgaagccac caagcaggcg gcgcagatgg 6540
ggtacgagag ctacctggtg aacgcggagg cggcctacgg tggcgggagg atgccttcgt 6600
ggacgccggc ctcggccccg gcagcggcaa gcagcaacga caacatggcc ggcgttggcc 6660
acggcggcgc gcagctcttc agtgtctgga atgacactta agggtacccg ggccgtgggt 6720
cgtttaagct gccgctgtac ctgtgtcgtc tggtgccttc tggtgtacct gggaggttgt 6780
cgtctatcaa gtatctgtgg ttggtgtcat gagtcagtga gtcccaatac tgttcgtgtc 6840
ctgtgtgcat tatacccaaa actgttatgg gcaaatcatg aataagcttg atgttcgaac 6900
ttaaaagtct ctgctcaata tggtattatg gttgtttttg ttcgtctcct aatatttgcc 6960
tgggatcaaa ttttattggc tggtgttcat ttgacctcca tgttcttgct aggctccatt 7020
ttttactcta cagccataat atgtttgatt gtttggtttg ttctttgttg tacacctggt 7080
tctgtcgagc ttagttttcg acactggctt acagcttaac atgttgctat tttattgggt 7140
tctgattgct attttattgg gttctgattg ctagtttttg ctgaatccaa aaaccatgtt 7200
atttatttaa gcgatccagg ttattattat gatggtggct aagttttttt ttttccaagg 7260
gtaaattttc tggattctcc agtgtttctg tggccgaatt cgagctcggt accctgggat 7320
ccgatatcga tgggccctgg ccgaagcttg gtcacccggt ccgggcctag aaggccgccc 7380
gggcacccag ctttcttgta caaagtggcc gttaacggat cggccagaat ggcccggacc 7440
gggttaccga attcgagctc ggtaccctgg gatcggccgc tctagaacta gtggatcccg 7500
gccgtgatcc ccggcggtgt ccgccactga agaaactatg tgctgtagta tagccgctgc 7560
ccgctggcta gctagctagt tgagtcattt agcggcgatg attgagtaat aatgtgtcac 7620
gcatcaccat gcatgggtgg cagtgtcagt gtgagcaatg acctgaatga acaattgaaa 7680
tgaaaagaaa aaagtattgt tccaaattaa acgttttaac cttttaatag gtttatacaa 7740
taattgatat atgttttctg tatatgtcta atttgttatc atccatttag atatagacaa 7800
aaaaaatcta agaactaaaa caaatgctaa tttgaaatga agggagtata tattgggata 7860
atgtcgatga gatccctcgt aatatcaccg acatcacacg tgtccagtta atgtatcagt 7920
gatacgtgta ttcacatttg ttgcgcgtag gcgtacccaa caattttgat cgactatcag 7980
aaagtccggt ccgctcgagg catgcctgca gtgcagcgtg acccggtcgt gcccctctct 8040
agagataatg agcattgcat gtctaagtta taaaaaatta ccacatattt tttttgtcac 8100
acttgtttga agtgcagttt atctatcttt atacatatat ttaaacttta ctctacgaat 8160
aatataatct atagtactac aataatatca gtgttttaga gaatcatata aatgaacagt 8220
tagacatggt ctaaaggaca attgagtatt ttgacaacag gactctacag ttttatcttt 8280
ttagtgtgca tgtgttctcc tttttttttg caaatagctt cacctatata atacttcatc 8340
cattttatta gtacatccat ttagggttta gggttaatgg tttttataga ctaatttttt 8400
tagtacatct attttattct attttagcct ctaaattaag aaaactaaaa ctctatttta 8460
gtttttttat ttaataattt agatataaaa tagaataaaa taaagtgact aaaaattaaa 8520
caaataccct ttaagaaatt aaaaaaacta aggaaacatt tttcttgttt cgagtagata 8580
atgccagcct gttaaacgcc gtcgacgagt ctaacggaca ccaaccagcg aaccagcagc 8640
gtcgcgtcgg gccaagcgaa gcagacggca cggcatctct gtcgctgcct ctggacccct 8700
ctcgagagtt ccgctccacc gttggacttg ctccgctgtc ggcatccaga aattgcgtgg 8760
cggagcggca gacgtgagcc ggcacggcag gcggcctcct cctcctctca cggcaccggc 8820
agctacgggg gattcctttc ccaccgctcc ttcgctttcc cttcctcgcc cgccgtaata 8880
aatagacacc ccctccacac cctctttccc caacctcgtg ttgttcggag cgcacacaca 8940
cacaaccaga tctcccccaa atccacccgt cggcacctcc gcttcaaggt acgccgctcg 9000
tcctcccccc cccccctctc taccttctct agatcggcgt tccggtccat gcatggttag 9060
ggcccggtag ttctacttct gttcatgttt gtgttagatc cgtgtttgtg ttagatccgt 9120
gctgctagcg ttcgtacacg gatgcgacct gtacgtcaga cacgttctga ttgctaactt 9180
gccagtgttt ctctttgggg aatcctggga tggctctagc cgttccgcag acgggatcga 9240
tttcatgatt ttttttgttt cgttgcatag ggtttggttt gcccttttcc tttatttcaa 9300
tatatgccgt gcacttgttt gtcgggtcat cttttcatgc ttttttttgt cttggttgtg 9360
atgatgtggt ctggttgggc ggtcgttcta gatcggagta gaattctgtt tcaaactacc 9420
tggtggattt attaattttg gatctgtatg tgtgtgccat acatattcat agttacgaat 9480
tgaagatgat ggatggaaat atcgatctag gataggtata catgttgatg cgggttttac 9540
tgatgcatat acagagatgc tttttgttcg cttggttgtg atgatgtggt gtggttgggc 9600
ggtcgttcat tcgttctaga tcggagtaga atactgtttc aaactacctg gtgtatttat 9660
taattttgga actgtatgtg tgtgtcatac atcttcatag ttacgagttt aagatggatg 9720
gaaatatcga tctaggatag gtatacatgt tgatgtgggt tttactgatg catatacatg 9780
atggcatatg cagcatctat tcatatgctc taaccttgag tacctatcta ttataataaa 9840
caagtatgtt ttataattat tttgatcttg atatacttgg atgatggcat atgcagcagc 9900
tatatgtgga tttttttagc cctgccttca tacgctattt atttgcttgg tactgtttct 9960
tttgtcgatg ctcaccctgt tgtttggtgt tacttctgca ggtcgactct agaggatcca 10020
tggcccagtc caagcacggc ctgaccaagg agatgaccat gaagtaccgc atggagggct 10080
gcgtggacgg ccacaagttc gtgatcaccg gcgagggcat cggctacccc ttcaagggca 10140
agcaggccat caacctgtgc gtggtggagg gcggcccctt gcccttcgcc gaggacatct 10200
tgtccgccgc cttcatgtac ggcaaccgcg tgttcaccga gtacccccag gacatcgtcg 10260
actacttcaa gaactcctgc cccgccggct acacctggga ccgctccttc ctgttcgagg 10320
acggcgccgt gtgcatctgc aacgccgaca tcaccgtgag cgtggaggag aactgcatgt 10380
accacgagtc caagttctac ggcgtgaact tccccgccga cggccccgtg atgaagaaga 10440
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agcacaagct gacccgcgag gaccgcagcg acgccaagaa ccagaagtgg cacctgaccg 10680
agcacgccat cgcctccggc tccgccttgc cctccggact cagatctcga tagagtcaac 10740
ctagacttgt ccatcttctg gattggccaa cttaattaat gtatgaaata aaaggatgca 10800
cacatagtga catgctaatc actataatgt gggcatcaaa gttgtgtgtt atgtgtaatt 10860
actagttatc tgaataaaag agaaagagat catccatatt tcttatccta aatgaatgtc 10920
acgtgtcttt ataattcttt gatgaaccag atgcatttca ttaaccaaat ccatatacat 10980
ataaatatta atcatatata attaatatca attgggttag caaaacaaat ctagtctagg 11040
tgtgttttgc gaattgcggc aagcttgttt ttctcagaca gttttctaaa aaaagggcgt 11100
ttctggggaa gttcgagatg gttcgtaagg tgttactggc tcctgtgaac caatacatga 11160
tactgccatg ataagggtta taattagtca agcagagtaa gaagaaacaa cagtagcagt 11220
gactccgatt cctgaagatg agtcatattt gtcttgtgct cctgctgtat gaaatggatc 11280
gcatgtgtat attcgtcgcc gcgccgcact ggtgtaacct gttgcctcag agtttgcttt 11340
tagctggttc tgttttaaaa ataagtactg ttttttggtt ggctgcaagc cattctgaac 11400
ttcagtttac caattgtttt tatgttgtgg ttgaatattt taatttttta tttaatgttt 11460
ggttcttttt ttatatatat ttgcaaaaat gatacaagtg gtcaagtttt catatagtat 11520
gggctctatt tcctagagct ctacctctag gaacgaattt tgtggaggtt ttcttttggc 11580
tagttaggca aagtccccat atcttgcagg ctaaatcaag aagaagctct gtcaaacagt 11640
tttttttact gaaaagtgat taaagagtag tttctcctag atcacttcag agtttatcct 11700
agagaatcat gggaatcaaa ttcagttaga ggatcatttc ttacaaagaa tcaactttcg 11760
tagagaatct aaagcagaaa gagctttgac aaacttaccc ttagagcaat tccaacattc 11820
tcgcgtgagt ttcttcgcgc cgttgttttg cggtgacttc atctggacgt cccgcgacat 11880
agagacgctt gtattgatca tgagagcttg tgtggtcata cacaatataa ttgttaaaga 11940
tgaaagagat gtggacctta atgagcgatt cgactttgat ggtgaaaatg tgcaaccttc 12000
tcatggtatt tctactcgca cactagctga atttattgaa gctcataaaa agatccgaga 12060
caaagaaata cattttcaat tgaaagaaga cctaatcaag cacttatgga agcttggtca 12120
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gatagatcga ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatacctgg tggcgccgct 12240
aggggctgca ggaattcgat atcaagctta tcgataccgt cgacctcgag ggggggcccg 12300
gtaccctggg atctgccctt actttaacgc ctctaaccaa caccccttta tctttataag 12360
gaacaataaa cagaatttgc cccactgttc taaatcacct aataatatcc ccagctaaaa 12420
acaataaagg tttcctagaa ttaagacaag catgactgtt cctccaggag ggtttggaac 12480
attgttgcag tcttgcagat acgggcgaag ggtgagaaac agagcggagg gctggaggtg 12540
acctcggtag tcgacgccgg agttgagctt gacaacgacg gggcggcccc tgatggactt 12600
gaggaagtcc gatggcgtct tcaccgtccc gccggcgccc gaggcgggcc tgtcgctgcc 12660
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gcgggtgggc caggtggatg cgagggcgac ccgtttggac tccggccgga gccgccggat 12780
ccctggtcgg tgtcagtgcc gtttactctg ggccccacgt gtcagtaccg tctgtagatg 12840
acaacaaccc gtcgtccaca gtcatgtcca aaatatcctt tcttcttttt tttcgattcg 12900
gatatctatc ttcctttttt ttttccaaaa atcttcttga cgcaccagcg cgcacgtttg 12960
tggtaaacgc cgacacgtcg gtcccacgtc gatagacccc acccaccagt gagtagcgtg 13020
tacgtattcg ggggtgacgg acgtgtcgcc gtcgtcttgc tagtcccatt cccatctgag 13080
ccacacatct ctgaacaaaa aaaaggaggg aggcctccac gcacatcccc ctccgtgcca 13140
cccgccccaa accctcgcgc cgcctccgag acagccgccg caaccatggc caccgccgcc 13200
gccgcgtcta ccgcgctcac tggcgccact accgctgcgc ccaaggcgag gcgccgggcg 13260
cacctcctgg ccacccgccg cgccctcgcc gcgcccatca ggtgctcagc ggcgtcaccc 13320
gccatgccga tggctccccc ggccaccccg ctccggccgt ggggccccac cgagccccgc 13380
aagggtgctg acatcctcgt cgagtccctc gagcgctgcg gcgtccgcga cgtcttcgcc 13440
taccccggcg gcgcgtccat ggagatccac caggcactca cccgctcccc cgtcatcgcc 13500
aaccacctct tccgccacga gcaaggggag gcctttgccg cctccggcta cgcgcgctcc 13560
tcgggccgcg tcggcgtctg catcgccacc tccggccccg gcgccaccaa cctagtctcc 13620
gcgctcgccg acgcgctgct cgattccgtc cccatggtcg ccatcacggg acaggtggcg 13680
cgacgcatga ttggcaccga cgccttccag gagacgccca tcgtcgaggt cacccgctcc 13740
atcaccaagc acaactacct ggtcctcgac gtcgacgaca tcccccgcgt cgtgcaggag 13800
gctttcttcc tcgcctcctc tggtcgacca gggccggtgc ttgtcgacat ccccaaggac 13860
atccagcagc agatggcggt gcctgtctgg gacaagccca tgagtctgcc tgggtacatt 13920
gcgcgccttc ccaagccccc tgcgactgag ttgcttgagc aggtgctgcg tcttgttggt 13980
gaatcgcggc gccctgttct ttatgtgggc ggtggctgcg cagcatctgg tgaggagttg 14040
cgacgctttg tggagctgac tggaatcccg gtcacaacta ctcttatggg cctcggcaac 14100
ttccccagcg acgacccact gtctctgcgc atgctaggta tgcatgggac ggtgtatgca 14160
aattatgcag tggataaggc cgatctgttg cttgcacttg gtgtgcggtt tgatgatcgc 14220
gtgacaggga agattgaggc ttttgcaagc agggctaaga ttgtgcacgt tgatattgat 14280
ccggctgaga ttggcaagaa caagcagcca catgtgtcca tctgtgcaga tgttaagctt 14340
gctttgcagg gcatgaatgc tcttcttgaa ggaagcacat caaagaagag ctttgacttt 14400
ggctcatgga acgatgagtt ggatcagcag aagagggaat tcccccttgg gtataaaaca 14460
tctaatgagg agatccagcc acaatatgct attcaggttc ttgatgagct gacgaaaggc 14520
gaggccatca tcggcacagg tgttgggcag caccagatgt gggcggcaca gtactacact 14580
tacaagcggc caaggcagtg gttgtcttca gctggtcttg gggctatggg atttggtttg 14640
ccggctgctg ctggtgcttc tgtggcaaac ccaggtgtca ctgttgttga catcgatgga 14700
gatggtagct ttctcatgaa cgttcaggag ctagctatga tccgaattga gaacctccca 14760
gtgaaggtct ttgtgctaaa caaccagcac ctggggatgg tggtgcagtt ggaggacagg 14820
ttctataagg ccaacagagc gcacacatac ttgggaaacc cagagaatga aagtgagata 14880
tatccagatt tcgtgacgat cgccaaaggg ttcaacattc cagcggtccg tgtgacaaag 14940
aagaacgaag tccgcgcagc gataaagaag atgctcgaga ctccagggcc gtacctcttg 15000
gatataatcg tcccacacca ggagcatgtg ttgcctatga tccctagtgg tggggctttc 15060
aaggatatga tcctggatgg tgatggcagg actgtgtact gactagctag tcagttaacc 15120
tagacttgtc catcttctgg attggccaac ttaattaatg tatgaaataa aaggatgcac 15180
acatagtgac atgctaatca ctataatgtg ggcatcaaag ttgtgtgtta tgtgtaatta 15240
ctagttatct gaataaaaga gaaagagatc atccatattt cttatcctaa atgaatgtca 15300
cgtgtcttta taattctttg atgaaccaga tgcatttcat taaccaaatc catatacata 15360
taaatattaa tcatatataa ttaatatcaa ttgggttagc aaaacaaatc tagtctaggt 15420
gtgttttgcg aatgcggccg cctgcagagt taacggcgcg ccgactagct agctaaggta 15480
ccgagctcga attcattccg attaatcgtg gcctcttgct cttcaggatg aagagctatg 15540
tttaaacgtg caagcgctac tagacaattc agtacattaa aaacgtccgc aatgtgttat 15600
taagttgtct aagcgtcaat ttgtttacac cacaatatat cctgcca 15647
<210> 72
<211> 15901
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 72
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga attcgagctc ggtacggcca gaatggcccg 660
gaccgaagct tgcggccgca cactgatagt ttaaactgaa ggcgggaaac gacaatctga 720
tcatgagcgg agaattaagg gagtcacgtt atgacccccg ccgatgacgc gggacaagcc 780
gttttacgtt tggaactgac agaaccgcaa cgattgaagg agccactcag ccgcgggttt 840
ctggagttta atgagctaag cacatacgtc agaaaccatt attgcgcgtt caaaagtcgc 900
ctaaggtcac tatcagctag caaatatttc ttgtcaaaaa tgctccactg acgttccata 960
aattcccctc ggtatccaat tagagtctca tattcactct cccgggggat ctcgactcta 1020
gaggatcgct caggaaggcc gctgagatag aggcatggcg gccaatgcgg gcggcggtgg 1080
agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg gcggtgtgcc gccccagcgg 1140
ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat caggatgctg aaggagctct actacggctg 1200
cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat ccagcgcatc accgccatgc tgcggcagca 1260
cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag aaccacaagg cccgcgagcg 1320
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tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc ggcggatcgg ctgtgctgct 1500
ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg gccaccgaga catgcttcct 1560
gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg cagtggccac gcttctcgtc 1620
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gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg cgccacttct tccgttgcga tccagcagca 1800
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cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc agggagtatg tgagagcaac gcgagctgcc 1980
actgctcttc actgatgtct ctggaatgga aggaggagga agtgagcata gcgttggtgc 2040
gttgctgtca agggcgaatt cacatggtta acctagactt gtccatcttc tggattggcc 2100
aacttaatta atgtatgaaa taaaaggatg cacacatagt gacatgctaa tcactataat 2160
gtgggcatca aagttgtgtg ttatgtgtaa ttactagtta tctgaataaa agagaaagag 2220
atcatccata tttcttatcc taaatgaatg tcacgtgtct ttataattct ttgatgaacc 2280
agatgcattt cattaaccaa atccatatac atataaatat taatcatata taattaatat 2340
caattgggtt agcaaaacaa atctagtcta ggtgtgtttt gcgaattgcg gccgccaccg 2400
cggtggagct cgaattccgg tccgggccta gaaggccagc ttcaagtttg tacaaaaaag 2460
caggctccgg ccagaatggc ccggaccgaa gcttgcatgc ctgcagtgca gcgtgacccg 2520
gtcgtgcccc tctctagaga taatgagcat tgcatgtcta agttataaaa aattaccaca 2580
tatttttttt gtcacacttg tttgaagtgc agtttatcta tctttataca tatatttaaa 2640
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taaaactcta ttttagtttt tttatttaat aatttagata taaaatagaa taaaataaag 3000
tgactaaaaa ttaaacaaat accctttaag aaattaaaaa aactaaggaa acatttttct 3060
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tagggtacat tctgttcttc ttatttgtgc atatttttat tgttgtttac tgattatacg 900
agtagttata catacatgca catacatatc atcacatata tcacaatatt tttctaaatt 960
aaattaaaac taaaaatgac taaatttcta acaccaacga cattgtaatg ttttctccaa 1020
caactttacc tattctacat tgttctattt cgaatttcac tctataaaca acatagtcta 1080
caatggaaaa cagtgctttg tacgactata tacgcgatgt gtggctacaa cataagacaa 1140
tatagtcgtt tgaagattga acctatatat cggtacggtt aatccgtcta tgtacgtggg 1200
catgacgaac acccgtgata acgaaggatt aacgtgcaca atcataaatc caaagtagga 1260
gcggtgcatg atgagaatcg ctctcagtac tcgacataat gaaccttacg aggtacaaca 1320
ggcaggcagg cagggaccag gggccgcctt tatttcaggc tcgctggccc cacgggcgtg 1380
ctgcgtgcac gaagggcact accccaacct ctcaccgaaa accgcgctgg atcggcaaat 1440
caaacgaggt ggtgccccgt gcccactctc cacgtccacg gcaccatccc tctgcagccg 1500
ctcaccagcc atgccgtgtc gcggaacggc acaaccaccc ccaacccact cacgaaaccc 1560
cgtcccggcc gtgcccgtgt cggtccgcgc tcggcaacga ggcggcccgc gctgctgagt 1620
cccctggaca cccgacaccc tgtcggccct ttgtttattc atcccgaaat ctcatctgcc 1680
cccacggccg actgcgctgc gccgcccgga tatatatacc catcgttatc gatcgactgg 1740
ggactctatc agtgatagag tctagaggat cgctcaggaa ggccgctgag atagaggcat 1800
ggcggccaat gcgggcggcg gtggagcggg aggaggcagc ggcagcggca gcgtggctgc 1860
gccggcggtg tgccgcccca gcggctcgcg gtggacgccg acgccggagc agatcaggat 1920
gctgaaggag ctctactacg gctgcggcat ccggtcgccc agctcggagc agatccagcg 1980
catcaccgcc atgctgcggc agcacggcaa gatcgagggc aagaacgtct tctactggtt 2040
ccagaaccac aaggcccgcg agcgccagaa gcgccgcctc accagcctcg acgtcaacgt 2100
gcccgccgcc ggcgcggccg acgccaccac cagccaactc ggcgtcctct cgctgtcgtc 2160
gccgccgcct tcaggcgcgg cgcctccctc gcccaccctc ggcttctacg ccgccggcaa 2220
tggcggcgga tcggctgtgc tgctggacac gagttccgac tggggcagca gcggcgctgc 2280
catggccacc gagacatgct tcctgcagga ctacatgggc gtgacggaca cgggcagctc 2340
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cagcggtagc agcagctact tgccgttctg gggtgccgcg tccacaactg ccggcgccac 2520
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cagcaacagc acccagctgg ccggcaccgg caaccaagac gtatcggcaa cagcagcagc 2640
agccgccgcc ctggagctga gcctcagctc atggtgctcc ccttaccctg ctgcagggag 2700
tatgtgagag caacgcgagc tgccactgct cttcactggt accgttaaca gatcattcga 2760
caaagcagca ttagtccgtt gatcggtgga agaccactcg tcagtgttga gttgaatgtt 2820
tgatcaataa aatacggcaa tgctgtaagg gttgtttttt atgccattga taatacactg 2880
tactgttcag ttgttgaact ctatttctta gccatgccaa gtgcttttct tattttgaat 2940
aacattacag caaaaagttg aaagacaaaa aaaaaaaccc ccgaacagag tgctttgggt 3000
cccaagcttc tttagactgt gttcggcgtt ccccctaaat ttctccccct atatctcact 3060
cacttgtcac atcagcgttc tctttccccc tatatctcca cgctctacag cagttccacc 3120
tatatcaaac ctctataccc caccacaaca atattatata ctttcatctt caactaactc 3180
atgtaccttc caattttttt ctactaataa ttatttacgt gcacagaaac ttagcaagga 3240
gagagagagc ggggtgaccc accttgctag ttggatatta cctcttctct tcaaagtatc 3300
cttgaacgct caccggttat caaatctcta cactatagct ctgtagtctt gctagatagt 3360
tagttcttta gctctcggtg accaagcttg gcgcgatcaa gcttatcgat accgtcgacc 3420
tcgaagcttg gtcacccggt ccgggcctag aaggccagct tcaagtttgt acaaaaaagc 3480
aggctccggc cagaatggcc cggaccgggt taccgaattc ttaccctagc tccctgcggc 3540
tgttacgcgg tcccccatca atcttctgtt cttgcggttg tagcctgtgt aacagtgcta 3600
gagtatgtat gataaatagg ttttaagtct gcttacatga cattttttat tgtggaagag 3660
acatataaaa attagagaga gtggttctca tgcaacggcg gacggcccgg tgctaaaaga 3720
gcttcaagac aaaataatga aacaggaaga gagtagattt atctaagagc caactttatt 3780
atatgaatgt gtttattgtt ggctttagat gatatggtaa ggagttagag ctaataatag 3840
ataggctcta ttattattat tattaattaa actcgctcta aggaggaaag tgggaggaag 3900
ggacgaggac gaagactact ggaagcatcg tgcatggatg atggatgtgg tgtctcttaa 3960
tgtaggtggc cggaggatgt acgtgttaat tgcgcgataa gcactcagat ccaaccgcaa 4020
actacctcca cactgacaca ctgatagaga gaaagagaga cctccgacga ctgccgccgc 4080
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ctcgaaagtc gcgttaggcg gcgccagcta cataggagta tctagtctag ccagttagta 4200
tactactact gcgctgatga tgaattaact ctgcatagat actgtacttg cctccctcca 4260
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gaagaacacg acgacgacga cggaacatcc accatgcaag cttgcatcca tacgccgata 4380
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tatttaagga gcgacatccc actgcaactc tcctcactct atcagtgata gagtctctag 4500
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gcaggcacct ccctcctcaa ggaacccatg gccactgtga acaactggct cgctttctcc 4620
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tccttctccg agcagcatca caaggccaac tgcaacatga tacccagcac tagcagcaca 4860
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cccgagagtg tatcgacgtc agcacagggt ggagccgtcg tcgtcacggc gccgaaggag 5280
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ggctatgata aagaggagaa agctgctagg gcttatgatc ttgctgctct gaagtactgg 5580
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gaggcagcgg aggcgtacga catcgcggcg atcaagttcc gcggcctcaa cgccgtcacc 5880
aacttcgaca tgagccgcta cgacgtgaag agcatcctgg acagcagcgc cctccccatc 5940
ggcagcgccg ccaagcgcct caaggaggcc gaggccgcag cgtccgcgca gcaccaccac 6000
gccggcgtgg tgagctacga cgtcggccgc atcgcctcgc agctcggcga cggcggagcc 6060
ctggcggcgg cgtacggcgc gcactaccac ggcgccgcct ggccgaccat cgcgttccag 6120
ccgggcgccg ccagcacagg cctgtaccac ccgtacgcgc agcagccaat gcgcggcggc 6180
gggtggtgca agcaggagca ggaccacgcg gtgatcgcgg ccgcgcacag cctgcaggac 6240
ctccaccacc tgaacctggg cgcggccggc gcgcacgact ttttctcggc agggcagcag 6300
gccgccgccg ctgcgatgca cggcctgggt agcatcgaca gtgcgtcgct cgagcacagc 6360
accggctcca actccgtcgt ctacaacggc ggggtcggcg acagcaacgg cgccagcgcc 6420
gtcggcggca gtggcggtgg ctacatgatg ccgatgagcg ctgccggagc aaccactaca 6480
tcggcaatgg tgagccacga gcaggtgcat gcacgggcct acgacgaagc caagcaggct 6540
gctcagatgg ggtacgagag ctacctggtg aacgcggaga acaatggtgg cggaaggatg 6600
tctgcatggg ggactgtcgt gtctgcagcc gcggcggcag cagcaagcag caacgacaac 6660
atggccgccg acgtcgggca tggcggcgcg cagctcttca gtgtctggaa cgacacttaa 6720
gcgtacctag tggtacctga catcttatag tctgcaacct ctcgtgtctg aattcctatc 6780
tttatcaagt gttattgctt ccacgactat aggacagctt tcgtcgaaag cttttgctca 6840
tgtgatctcg aaggattcat ctagtctgat ttttcgtgac ttgtatcggt tttattggat 6900
tcatccaaca tatatcaata aaaaatgagt tgtgtttcct ttcttcctag ttcagttaaa 6960
attatttccc tcctgcgctt gtgctgtaat tgtctgtgta cctgttgttt gtgactgtgt 7020
tagttccctt ggatatgatt tcgtatttga tatgtacatg gagatagctt agcttcatta 7080
ttggagtatg aagttagtat gacatagtca ctctcctgga aaattgacac tgcaaaccat 7140
atttttattc tgaaccacaa atcctagtca gtccgctggc atatgccgtc cgtttgctga 7200
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ggtgaaacga gatgggagta gagcaacgcc cgtggaagat gcttcaaact tccacacttt 7320
tgagcaacga tcggcagtag taaggtagac gatttcaaga tcaaagcata tgaagataaa 7380
caacatcaac aacaaaattt gttggggttc tatagagaga aacagagcta catacataca 7440
ctgttttgta tctaccatct gagatgatga aaagatgaaa aactaaagaa tgccccggcg 7500
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gatctgagtc gaaacctaga cttgtccatc ttctggattg gccaacttaa ttaatgtatg 7680
aaataaaagg atgcacacat agtgacatgc taatcactat aatgtgggca tcaaagttgt 7740
gtgttatgtg taattactag ttatctgaat aaaagagaaa gagatcatcc atatttctta 7800
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caaatccata tacatataaa tattaatcat atataattaa tatcaattgg gttagcaaaa 7920
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tgtggttgat agttattttg ctctaagatc aacagtaatg aagtataaat catcgttgtg 8040
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tagcttaaaa actaaccata aatattccat aataactaga tttaccaaac taatatacta 8340
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tttagacatt atggttggtc gacgataatc atgctaactt ttcgtaattg cttgattgaa 8460
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accctgggaa ccacaaacac cccgaaatgc tactaaacta cacaactaac cttcatatat 8580
aaaatttcga cagcatctcc tttgaaaatt tgcatagacg tggaagcaac agagtataaa 8640
cagatatcat gataagaaaa catactagac attaataatc tgctagaaat gggaagaatc 8700
ctaacttgac gactgcgtaa ctgactagag tcacacttag ctgaccctag tcacttacaa 8760
ctgacttcgt gtcctagatc gatgggccct ggccgaagct tggtcacccg gtccgggcct 8820
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ctgcagtgca gcgtgacccg gtcgtgcccc tctctagaga taatgagcat tgcatgtcta 9000
agttataaaa aattaccaca tatttttttt gtcacacttg tttgaagtgc agtttatcta 9060
tctttataca tatatttaaa ctttactcta cgaataatat aatctatagt actacaataa 9120
tatcagtgtt ttagagaatc atataaatga acagttagac atggtctaaa ggacaattga 9180
gtattttgac aacaggactc tacagtttta tctttttagt gtgcatgtgt tctccttttt 9240
ttttgcaaat agcttcacct atataatact tcatccattt tattagtaca tccatttagg 9300
gtttagggtt aatggttttt atagactaat ttttttagta catctatttt attctatttt 9360
agcctctaaa ttaagaaaac taaaactcta ttttagtttt tttatttaat aatttagata 9420
taaaatagaa taaaataaag tgactaaaaa ttaaacaaat accctttaag aaattaaaaa 9480
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ggcaggcggc ctcctcctcc tctcacggca ccggcagcta cgggggattc ctttcccacc 9780
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cccgtcggca cctccgcttc aaggtacgcc gctcgtcctc cccccccccc cctctctacc 9960
ttctctagat cggcgttccg gtccatggtt agggcccggt agttctactt ctgttcatgt 10020
ttgtgttaga tccgtgtttg tgttagatcc gtgctgctag cgttcgtaca cggatgcgac 10080
ctgtacgtca gacacgttct gattgctaac ttgccagtgt ttctctttgg ggaatcctgg 10140
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atcttttcat gctttttttt gtcttggttg tgatgatgtg gtctggttgg gcggtcgttc 10320
tagatcggag tagaattctg tttcaaacta cctggtggat ttattaattt tggatctgta 10380
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cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg gcggtcgttc attcgttcta gatcggagta 10560
gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg gaactgtatg tgtgtgtcat 10620
acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc gatctaggat aggtatacat 10680
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taatttataa cttttctaat atatgaccaa aacatggtga tgcctaggtc tggcagtgaa 11400
gaccatccag caacaccttg gacaactgaa catgcttcac aggcgctccg gcctcccgcg 11460
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cagcctgatg gagaacagcg acaggtgcca ggacattagg aacctggcgt tcctcggaat 11640
tgcatacaac acgctcctca ggatcgcgga aattgcccgc attcgcgtga aggacattag 11700
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cgcaggcgtc gaaaaggccc tcagcctcgg agtgaccaag ctcgtcgaac gctggatctc 11820
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gtccgggcac tccgcccgcg ttggagctgc tagggacatg gcccgcgccg gtgtttccat 12060
ccccgaaatc atgcaggcgg gtggatggac gaacgtgaac attgtcatga actacattcg 12120
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ccaacctaga cttgtccatc ttctggattg gccaacttaa ttaatgtatg aaataaaagg 12240
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atgtacggca accgcgtgtt caccgagtac ccccaggaca tcgtcgacta cttcaagaac 14760
tcctgccccg ccggctacac ctgggaccgc tccttcctgt tcgaggacgg cgccgtgtgc 14820
atctgcaacg ccgacatcac cgtgagcgtg gaggagaact gcatgtacca cgagtccaag 14880
ttctacggcg tgaacttccc cgccgacggc cccgtgatga agaagatgac cgacaactgg 14940
gagccctcct gcgagaagat catccccgtg cccaagcagg gcatcttgaa gggcgacgtg 15000
agcatgtacc tgctgctgaa ggacggtggc cgcttgcgct gccagttcga caccgtgtac 15060
aaggccaagt ccgtgccccg caagatgccc gactggcact tcatccagca caagctgacc 15120
cgcgaggacc gcagcgacgc caagaaccag aagtggcacc tgaccgagca cgccatcgcc 15180
tccggctccg ccttgccctc cggactcaga tctcgataga gtcaacctag acttgtccat 15240
cttctggatt ggccaactta attaatgtat gaaataaaag gatgcacaca tagtgacatg 15300
ctaatcacta taatgtgggc atcaaagttg tgtgttatgt gtaattacta gttatctgaa 15360
taaaagagaa agagatcatc catatttctt atcctaaatg aatgtcacgt gtctttataa 15420
ttctttgatg aaccagatgc atttcattaa ccaaatccat atacatataa atattaatca 15480
tatataatta atatcaattg ggttagcaaa acaaatctag tctaggtgtg ttttgcgaat 15540
tgcggcaagc ttgtttttct cagacagttt tctaaaaaaa gggcgtttct ggggaagttc 15600
gagatggttc gtaaggtgtt actggctcct gtgaaccaat acatgatact gccatgataa 15660
gggttataat tagtcaagca gagtaagaag aaacaacagt agcagtgact ccgattcctg 15720
aagatgagtc atatttgtct tgtgctcctg ctgtatgaaa tggatcgcat gtgtatattc 15780
gtcgccgcgc cgcactggtg taacctgttg cctcagagtt tgcttttagc tggttctgtt 15840
ttaaaaataa gtactgtttt ttggttggct gcaagccatt ctgaacttca gtttaccaat 15900
tgtttttatg ttgtggttga atattttaat tttttattta atgtttggtt ctttttttat 15960
atatatttgc aaaaatgata caagtggtca agttttcata tagtatgggc tctatttcct 16020
agagctctac ctctaggaac gaattttgtg gaggttttct tttggctagt taggcaaagt 16080
ccccatatct tgcaggctaa atcaagaaga agctctgtca aacagttttt tttactgaaa 16140
agtgattaaa gagtagtttc tcctagatca cttcagagtt tatcctagag aatcatggga 16200
atcaaattca gttagaggat catttcttac aaagaatcaa ctttcgtaga gaatctaaag 16260
cagaaagagc tttgacaaac ttacccttag agcaattcca acattctcgc gtgagtttct 16320
tcgcgccgtt gttttgcggt gacttcatct ggacgtcccg cgacatagag acgcttgtat 16380
tgatcatgag agcttgtgtg gtcatacaca atataattgt taaagatgaa agagatgtgg 16440
accttaatga gcgattcgac tttgatggtg aaaatgtgca accttctcat ggtatttcta 16500
ctcgcacact agctgaattt attgaagctc ataaaaagat ccgagacaaa gaaatacatt 16560
ttcaattgaa agaagaccta atcaagcact tatggaagct tggtcacccg gtccgggcct 16620
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acttttcaac aaagggtaat atcgggaaac ctcctcggat tccattgccc agctatctgt 16740
cacttcatca aaaggacagt agaaaaggaa ggtggcacct acaaatgcca tcattgcgat 16800
aaaggaaagg ctatcgttca agatgcctct gccgacagtg gtcccaaaga tggaccccca 16860
cccacgagga gcatcgtgga aaaagaagac gttccaacca cgtcttcaaa gcaagtggat 16920
tgatgtgata tctccactga cgtaagggat gacgcacaat cccactatcc ttcgcaagac 16980
ccttcctcta tataaggaag ttcatttcat ttggagagga cgacctgcag gtcgacggat 17040
caagtgcaaa ggtccgcctt gtttctcctc tgtctcttga tctgactaat cttggtttat 17100
gattcgttga gtaattttgg ggaaagcttc gtccacagtt tttttttcga tgaacagtgc 17160
cgcagtggcg ctgatcttgt atgctatcct gcaatcgtgg tgaacttatt tcttttatat 17220
ccttcactcc catgaaaagg ctagtaatct ttctcgatgt aacatcgtcc agcactgcta 17280
ttaccgtgtg gtccatccga cagtctggct gaacacatca tacgatattg agcaaagatc 17340
gatctatctt ccctgttctt taatgaaaga cgtcattttc atcagtatga tctaagaatg 17400
ttgcaacttg caaggaggcg tttctttctt tgaatttaac taactcgttg agtggccctg 17460
tttctcggac gtaaggcctt tgctgctcca cacatgtcca ttcgaatttt accgtgttta 17520
gcaagggcga aaagtttgca tcttgatgat ttagcttgac tatgcgattg ctttcctgga 17580
cccgtgcagc catggccaga ctcgacaaga gcaaggtgat caacagcgca ctggagctgc 17640
tgaacgaggt cggaatcgaa ggcctcacaa cccgtaagct cgcccagaag ctcggggttg 17700
agcagcctac attgtactgg cacgtcaaga acaagcgagc tctgctagac gctatggcca 17760
tagagatgct cgatccgcac aagattcact acttaccctt ggaaggggaa agctggcaag 17820
atttcttgag gaacagggct aagtccatga gaaatgcttt gctcagtcac cgtgatggag 17880
ccaaggtctg tctaggtacg ggcttcacgg agcgacaata tgaaactgct gagaacacgc 17940
ttgccttcct gacacaacaa ggtttctccc ttgagaacgc cctctacgca ttccaagcag 18000
tggggatcta cactctgggt tgtgtcttgc tggatcaaga gctgcaagtc gctaaggagg 18060
agagggaaac acctactact gatagtatgc cgccactggt tcgacaagct tacgaactcg 18120
cggatcacca aggtgcagag ccagccttcc tgttcggcct tgaactgatc atatcaggat 18180
tggagaagca gctgaaggcc gaaagtgggt cttaatgata gctgcagaag gtacctcagc 18240
cgtcaacagc cagggtgatt agagccccag catgcaaaat gatcacctgg tcgctcatcc 18300
ttgactaaag catggctcgg cggtcgctgt ttacctatat ccctatagta ggtactcctg 18360
tacataaagc ctgaaaaaat gggttcagtt gtttatcgaa ctctgccaaa tttgcttttg 18420
catataatgt aaaattcagc tagctctgct aagctcctcg cttcagttcg acagaactgc 18480
aattgatatt gatgttatgg aaattgatat tggaacaatc agcaatatta tgcttatatt 18540
catttcttgg gcgtgctcta ctctgtgccg atgatatcat ccgatgggtt ttgtacttct 18600
tacttatgaa gtgaacgata ataggttgcc tggtcccagt tctcagcttg atgttatgat 18660
aatcatatgt gatttcagtt ctttgtctgg cattggtctg tttttgtgtc tgtgtctgtg 18720
ggctgtggct ctgtgtgttg ataactcgag cttgattgca tcagtgaact gcgacttaca 18780
acagcagaca gagtgttagc agcagggaag gagaatagag aaattaggga gtaaagagaa 18840
catagttgcc tttcagagga cagcttagca agataacaaa attatgttct ctccttttaa 18900
ggattacaga ggcatagcct cagcgacgcg cgtgctagcg gatccagtta tcatcatcgt 18960
gttgggcttc ctgggcctgg cctgcctagc aggcctgtcg acagcttcag aaggggaact 19020
cgttggcgga ttgtccacag tagcacgtac tatatgcaga aaaagtcctt atgtctctct 19080
tatcattagc ctattaatca tattaattca gtccacatag gaccgaattt ataacttaac 19140
aatcttttag tttcctgagc aatatcgtta aatcaaaaca tattcttgta ccaaattttg 19200
ctatcaacgg ttcaacgcct agttagttag cggaccgaag cttcctgaat tccaggtgga 19260
gctcgaattc ctgcagccct cgaggggggg cccggcaact ttattataca aagttgatag 19320
atcgaataac ttcgtatagc atacattata cgaagttata cctggtggcg ccgctagggg 19380
ctgcaggaat tcgatatcaa gcttatcgat accgtcgacc tcgagggggg gcccggtacc 19440
ctgggatctg cccttacttt aacgcctcta accaacaccc ctttatcttt ataaggaaca 19500
ataaacagaa tttgccccac tgttctaaat cacctaataa tatccccagc taaaaacaat 19560
aaaggtttcc tagaattaag acaagcatga ctgttcctcc aggagggttt ggaacattgt 19620
tgcagtcttg cagatacggg cgaagggtga gaaacagagc ggagggctgg aggtgacctc 19680
ggtagtcgac gccggagttg agcttgacaa cgacggggcg gcccctgatg gacttgagga 19740
agtccgatgg cgtcttcacc gtcccgccgg cgcccgaggc gggcctgtcg ctgccgccgc 19800
cgccgctgct catcttgcgc gctgtgcccc cggcggtgtc cctgtgttgc ggatcgcggg 19860
tgggccaggt ggatgcgagg gcgacccgtt tggactccgg ccggagccgc cggatccctg 19920
gtcggtgtca gtgccgttta ctctgggccc cacgtgtcag taccgtctgt agatgacaac 19980
aacccgtcgt ccacagtcat gtccaaaata tcctttcttc ttttttttcg attcggatat 20040
ctatcttcct tttttttttc caaaaatctt cttgacgcac cagcgcgcac gtttgtggta 20100
aacgccgaca cgtcggtccc acgtcgatag accccaccca ccagtgagta gcgtgtacgt 20160
attcgggggt gacggacgtg tcgccgtcgt cttgctagtc ccattcccat ctgagccaca 20220
catctctgaa caaaaaaaag gagggaggcc tccacgcaca tccccctccg tgccacccgc 20280
cccaaaccct cgcgccgcct ccgagacagc cgccgcaacc atggccaccg ccgccgccgc 20340
gtctaccgcg ctcactggcg ccactaccgc tgcgcccaag gcgaggcgcc gggcgcacct 20400
cctggccacc cgccgcgccc tcgccgcgcc catcaggtgc tcagcggcgt cacccgccat 20460
gccgatggct cccccggcca ccccgctccg gccgtggggc cccaccgagc cccgcaaggg 20520
tgctgacatc ctcgtcgagt ccctcgagcg ctgcggcgtc cgcgacgtct tcgcctaccc 20580
cggcggcgcg tccatggaga tccaccaggc actcacccgc tcccccgtca tcgccaacca 20640
cctcttccgc cacgagcaag gggaggcctt tgccgcctcc ggctacgcgc gctcctcggg 20700
ccgcgtcggc gtctgcatcg ccacctccgg ccccggcgcc accaacctag tctccgcgct 20760
cgccgacgcg ctgctcgatt ccgtccccat ggtcgccatc acgggacagg tggcgcgacg 20820
catgattggc accgacgcct tccaggagac gcccatcgtc gaggtcaccc gctccatcac 20880
caagcacaac tacctggtcc tcgacgtcga cgacatcccc cgcgtcgtgc aggaggcttt 20940
cttcctcgcc tcctctggtc gaccagggcc ggtgcttgtc gacatcccca aggacatcca 21000
gcagcagatg gcggtgcctg tctgggacaa gcccatgagt ctgcctgggt acattgcgcg 21060
ccttcccaag ccccctgcga ctgagttgct tgagcaggtg ctgcgtcttg ttggtgaatc 21120
gcggcgccct gttctttatg tgggcggtgg ctgcgcagca tctggtgagg agttgcgacg 21180
ctttgtggag ctgactggaa tcccggtcac aactactctt atgggcctcg gcaacttccc 21240
cagcgacgac ccactgtctc tgcgcatgct aggtatgcat gggacggtgt atgcaaatta 21300
tgcagtggat aaggccgatc tgttgcttgc acttggtgtg cggtttgatg atcgcgtgac 21360
agggaagatt gaggcttttg caagcagggc taagattgtg cacgttgata ttgatccggc 21420
tgagattggc aagaacaagc agccacatgt gtccatctgt gcagatgtta agcttgcttt 21480
gcagggcatg aatgctcttc ttgaaggaag cacatcaaag aagagctttg actttggctc 21540
atggaacgat gagttggatc agcagaagag ggaattcccc cttgggtata aaacatctaa 21600
tgaggagatc cagccacaat atgctattca ggttcttgat gagctgacga aaggcgaggc 21660
catcatcggc acaggtgttg ggcagcacca gatgtgggcg gcacagtact acacttacaa 21720
gcggccaagg cagtggttgt cttcagctgg tcttggggct atgggatttg gtttgccggc 21780
tgctgctggt gcttctgtgg caaacccagg tgtcactgtt gttgacatcg atggagatgg 21840
tagctttctc atgaacgttc aggagctagc tatgatccga attgagaacc tcccagtgaa 21900
ggtctttgtg ctaaacaacc agcacctggg gatggtggtg cagttggagg acaggttcta 21960
taaggccaac agagcgcaca catacttggg aaacccagag aatgaaagtg agatatatcc 22020
agatttcgtg acgatcgcca aagggttcaa cattccagcg gtccgtgtga caaagaagaa 22080
cgaagtccgc gcagcgataa agaagatgct cgagactcca gggccgtacc tcttggatat 22140
aatcgtccca caccaggagc atgtgttgcc tatgatccct agtggtgggg ctttcaagga 22200
tatgatcctg gatggtgatg gcaggactgt gtactgacta gctagtcagt taacctagac 22260
ttgtccatct tctggattgg ccaacttaat taatgtatga aataaaagga tgcacacata 22320
gtgacatgct aatcactata atgtgggcat caaagttgtg tgttatgtgt aattactagt 22380
tatctgaata aaagagaaag agatcatcca tatttcttat cctaaatgaa tgtcacgtgt 22440
ctttataatt ctttgatgaa ccagatgcat ttcattaacc aaatccatat acatataaat 22500
attaatcata tataattaat atcaattggg ttagcaaaac aaatctagtc taggtgtgtt 22560
ttgcgaatgc ggccgcctgc agagttaacg gcgcgccgac tagctagcta aggtaccgag 22620
ctcgaattca ttccgattaa tcgtggcctc ttgctcttca ggatgaagag ctatgtttaa 22680
acgtgcaagc gctactagac aattcagtac attaaaaacg tccgcaatgt gttattaagt 22740
tgtctaagcg tcaatttgtt tacaccacaa tatatcctgc ca 22782
<210> 74
<211> 19342
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 74
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcaggcgacc catcgctgct ttgtctacat catgttcttc atcatcctcc 720
ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
atagagtcac taatgcctta agcatcggtt actccgtagg gtacattctg ttcttcttat 900
ttgtgcatat ttttattgtt gtttactgat tatacgagta gttatacata catgcacata 960
catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
actatatacg cgatgtgtgg ctacaacata agacaatata gtcgtttgaa gattgaacct 1200
atatatcggt acggttaatc cgtctatgta cgtgggcatg acgaacaccc gtgataacga 1260
aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
cgcctttatt tcaggctcgc tggccccacg ggcgtgctgc gtgcacgaag ggcactaccc 1440
caacctctca ccgaaaaccg cgctggatcg gcaaatcaaa cgaggtggtg ccccgtgccc 1500
actctccacg tccacggcac catccctctg cagccgctca ccagccatgc cgtgtcgcgg 1560
aacggcacaa ccacccccaa cccactcacg aaaccccgtc ccggccgtgc ccgtgtcggt 1620
ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gactggggac tctatcagtg atagagtcta 1800
gaggatcgct caggaaggcc gctgagatag aggcatggcg gccaatgcgg gcggcggtgg 1860
agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg gcggtgtgcc gccccagcgg 1920
ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat caggatgctg aaggagctct actacggctg 1980
cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat ccagcgcatc accgccatgc tgcggcagca 2040
cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag aaccacaagg cccgcgagcg 2100
ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt caacgtgccc gccgccggcg cggccgacgc 2160
caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg ccgccttcag gcgcggcgcc 2220
tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc ggcggatcgg ctgtgctgct 2280
ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg gccaccgaga catgcttcct 2340
gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg cagtggccac gcttctcgtc 2400
gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc gcgggcggcg acgacgcggg cgcccgagac 2460
gctccctctc ttcccgacct gcggcgacga cggcggcagc ggtagcagca gctacttgcc 2520
gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg cgccacttct tccgttgcga tccagcagca 2580
acaccagctg caggagcagt acagctttta cagcaacagc aacagcaccc agctggccgg 2640
caccggcaac caagacgtat cggcaacagc agcagcagcc gccgccctgg agctgagcct 2700
cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc agggagtatg tgagagcaac gcgagctgcc 2760
actgctcttc actggtaccg ttaacagatc attcgacaaa gcagcattag tccgttgatc 2820
ggtggaagac cactcgtcag tgttgagttg aatgtttgat caataaaata cggcaatgct 2880
gtaagggttg ttttttatgc cattgataat acactgtact gttcagttgt tgaactctat 2940
ttcttagcca tgccaagtgc ttttcttatt ttgaataaca ttacagcaaa aagttgaaag 3000
acaaaaaaaa aaacccccga acagagtgct ttgggtccca agcttcttta gactgtgttc 3060
ggcgttcccc ctaaatttct ccccctatat ctcactcact tgtcacatca gcgttctctt 3120
tccccctata tctccacgct ctacagcagt tccacctata tcaaacctct ataccccacc 3180
acaacaatat tatatacttt catcttcaac taactcatgt accttccaat ttttttctac 3240
taataattat ttacgtgcac agaaacttag caaggagaga gagagcgggg tgacccacct 3300
tgctagttgg atattacctc ttctcttcaa agtatccttg aacgctcacc ggttatcaaa 3360
tctctacact atagctctgt agtcttgcta gatagttagt tctttagctc tcggtgacca 3420
agcttggcgc gatcaagctt atcgataccg tcgacctcga agcttggtca cccggtccgg 3480
gcctagaagg ccagcttcaa gtttgtacaa aaaagcaggc tccggccaga atggcccgga 3540
ccgggttacc gaattcttac cctagctccc tgcggctgtt acgcggtccc ccatcaatct 3600
tctgttcttg cggttgtagc ctgtgtaaca gtgctagagt atgtatgata aataggtttt 3660
aagtctgctt acatgacatt ttttattgtg gaagagacat ataaaaatta gagagagtgg 3720
ttctcatgca acggcggacg gcccggtgct aaaagagctt caagacaaaa taatgaaaca 3780
ggaagagagt agatttatct aagagccaac tttattatat gaatgtgttt attgttggct 3840
ttagatgata tggtaaggag ttagagctaa taatagatag gctctattat tattattatt 3900
aattaaactc gctctaagga ggaaagtggg aggaagggac gaggacgaag actactggaa 3960
gcatcgtgca tggatgatgg atgtggtgtc tcttaatgta ggtggccgga ggatgtacgt 4020
gttaattgcg cgataagcac tcagatccaa ccgcaaacta cctccacact gacacactga 4080
tagagagaaa gagagacctc cgacgactgc cgccgcagat gagccacgta cgtatacgac 4140
gtctgccggc cggctcaggc tgccgccatc accctgctcg aaagtcgcgt taggcggcgc 4200
cagctacata ggagtatcta gtctagccag ttagtatact actactgcgc tgatgatgaa 4260
ttaactctgc atagatactg tacttgcctc cctccaacac ccaaccacct cctgctcggc 4320
tcttaataac ttggacacgg atcgatgcca tccaaggaag aacacgacga cgacgacgga 4380
acatccacca tgcaagcttg catccatacg ccgatacgcg tgcatccatc catccaccat 4440
tatttccatt ttccaccgat cacacgtaca caggcctatt taaggagcga catcccactg 4500
caactctcct caccactcat caccagctag ctctagcaaa gcacttgcca tctaccgacc 4560
gccgcattcc aaacagcccg acgagctagc agagcggcag gcacctccct cctcaaggaa 4620
cccatggcca ctgtgaacaa ctggctcgct ttctccctct ccccgcagga gctgccgccc 4680
tcccagacga cggactccac actcatctcg gccgccaccg ccgaccatgt ctccggcgat 4740
gtctgcttca acatccccca agattggagc atgaggggat cagagctttc ggcgctcgtc 4800
gcggagccga agctggagga cttcctcggc ggcatctcct tctccgagca gcatcacaag 4860
gccaactgca acatgatacc cagcactagc agcacagttt gctacgcgag ctcaggtgct 4920
agcaccggct accatcacca gctgtaccac cagcccacca gctcagcgct ccacttcgcg 4980
gactccgtaa tggtggcttc ctcggccggt gtccacgacg gcggtgccat gctcagcgcg 5040
gccgccgcta acggtgtcgc tggcgctgcc agtgccaacg gcggcggcat cgggctgtcc 5100
atgattaaga actggctgcg gagccaaccg gcgcccatgc agccgagggt ggcggcggct 5160
gagggcgcgc aggggctctc tttgtccatg aacatggcgg ggacgaccca aggcgctgct 5220
ggcatgccac ttctcgctgg agagcgcgca cgggcgcccg agagtgtatc gacgtcagca 5280
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ggcgctctag tagccgtgag cacggacacg ggtggcagcg gcggcgcgtc ggctgacaac 5400
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aggcatagat ggactgggag atatgaggca catctttggg ataacagttg cagaagggaa 5520
gggcaaactc gtaagggtcg tcaagtctat ttaggtggct atgataaaga ggagaaagct 5580
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aaggatcttt acttgggcac cttcagcacc caggaggagg cagcggaggc gtacgacatc 5880
gcggcgatca agttccgcgg cctcaacgcc gtcaccaact tcgacatgag ccgctacgac 5940
gtgaagagca tcctggacag cagcgccctc cccatcggca gcgccgccaa gcgcctcaag 6000
gaggccgagg ccgcagcgtc cgcgcagcac caccacgccg gcgtggtgag ctacgacgtc 6060
ggccgcatcg cctcgcagct cggcgacggc ggagccctgg cggcggcgta cggcgcgcac 6120
taccacggcg ccgcctggcc gaccatcgcg ttccagccgg gcgccgccag cacaggcctg 6180
taccacccgt acgcgcagca gccaatgcgc ggcggcgggt ggtgcaagca ggagcaggac 6240
cacgcggtga tcgcggccgc gcacagcctg caggacctcc accacctgaa cctgggcgcg 6300
gccggcgcgc acgacttttt ctcggcaggg cagcaggccg ccgccgctgc gatgcacggc 6360
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aacggcgggg tcggcgacag caacggcgcc agcgccgtcg gcggcagtgg cggtggctac 6480
atgatgccga tgagcgctgc cggagcaacc actacatcgg caatggtgag ccacgagcag 6540
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tctgattttt cgtgacttgt atcggtttta ttggattcat ccaacatata tcaataaaaa 6960
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tgtaattgtc tgtgtacctg ttgtttgtga ctgtgttagt tcccttggat atgatttcgt 7080
atttgatatg tacatggaga tagcttagct tcattattgg agtatgaagt tagtatgaca 7140
tagtcactct cctggaaaat tgacactgca aaccatattt ttattctgaa ccacaaatcc 7200
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ctgaataaaa gagaaagaga tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt 7860
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aatcatatat aattaatatc aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg 7980
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ttaacacaca caaacatgac gaggatggta taatctccaa aaatgtgtac tttgttaggt 8160
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ctaatattta ttactagtaa gatataacat tctatctagc ttaaaaacta accataaata 8340
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aacaagacaa taatcaatat ttatgagctt aatatattta gacattatgg ttggtcgacg 8460
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ctagacatta ataatctgct agaaatggga agaatcctaa cttgacgact gcgtaactga 8760
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ggccctggcc gaagcttggt cacccggtcc gggcctagaa ggccagcttc aagtttgtac 8880
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aaagattatg gaacgttaca ctatacacga aaaaaaaaaa gaatctcaat gaggcctcac 9480
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tttttaagca ctccatatta atatccagag tgacaaaaaa gggaaatgcg acggaacaac 9600
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cgaggattgc aaaaaaatgc acggcgccag cagcagctac tagataggag gccaactgct 9720
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ggttccccgc tgagcccgag gacgtgaggg attaccttct gtacctgcaa gcgcgaggtt 10800
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tttataagtg tgtatatttt aatttataac ttttctaata tatgaccaaa acatggtgat 10980
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taatgtatga aataaaagga tgcacacata gtgacatgct aatcactata atgtgggcat 11880
caaagttgtg tgttatgtgt aattactagt tatctgaata aaagagaaag agatcatcca 11940
tatttcttat cctaaatgaa tgtcacgtgt ctttataatt ctttgatgaa ccagatgcat 12000
ttcattaacc aaatccatat acatataaat attaatcata tataattaat atcaattggg 12060
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ctgagttgct tgagcaggtg ctgcgtcttg ttggtgaatc gcggcgccct gttctttatg 17700
tgggcggtgg ctgcgcagca tctggtgagg agttgcgacg ctttgtggag ctgactggaa 17760
tcccggtcac aactactctt atgggcctcg gcaacttccc cagcgacgac ccactgtctc 17820
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cttcagctgg tcttggggct atgggatttg gtttgccggc tgctgctggt gcttctgtgg 18360
caaacccagg tgtcactgtt gttgacatcg atggagatgg tagctttctc atgaacgttc 18420
aggagctagc tatgatccga attgagaacc tcccagtgaa ggtctttgtg ctaaacaacc 18480
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tacaccacaa tatatcctgc ca 19342
<210> 75
<211> 18716
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 75
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ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcaggcgacc catcgctgct ttgtctacat catgttcttc atcatcctcc 720
ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
atagagtcac taatgcctta agcatcggtt actccgtagg gtacattctg ttcttcttat 900
ttgtgcatat ttttattgtt gtttactgat tatacgagta gttatacata catgcacata 960
catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
actatatacg cgatgtgtgg ctacaacata agacaatata gtcgtttgaa gattgaacct 1200
atatatcggt acggttaatc cgtctatgta cgtgggcatg acgaacaccc gtgataacga 1260
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cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
cgcctttatt tcaggctcgc tggccccacg ggcgtgctgc gtgcacgaag ggcactaccc 1440
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ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gactggggac tctatcagtg atagagtcta 1800
gaggatcgct caggaaggcc gctgagatag aggcatggcg gccaatgcgg gcggcggtgg 1860
agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg gcggtgtgcc gccccagcgg 1920
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cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat ccagcgcatc accgccatgc tgcggcagca 2040
cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag aaccacaagg cccgcgagcg 2100
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caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg ccgccttcag gcgcggcgcc 2220
tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc ggcggatcgg ctgtgctgct 2280
ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg gccaccgaga catgcttcct 2340
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acaccagctg caggagcagt acagctttta cagcaacagc aacagcaccc agctggccgg 2640
caccggcaac caagacgtat cggcaacagc agcagcagcc gccgccctgg agctgagcct 2700
cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc agggagtatg tgagagcaac gcgagctgcc 2760
actgctcttc actggtaccg ttaacagatc attcgacaaa gcagcattag tccgttgatc 2820
ggtggaagac cactcgtcag tgttgagttg aatgtttgat caataaaata cggcaatgct 2880
gtaagggttg ttttttatgc cattgataat acactgtact gttcagttgt tgaactctat 2940
ttcttagcca tgccaagtgc ttttcttatt ttgaataaca ttacagcaaa aagttgaaag 3000
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ggcgttcccc ctaaatttct ccccctatat ctcactcact tgtcacatca gcgttctctt 3120
tccccctata tctccacgct ctacagcagt tccacctata tcaaacctct ataccccacc 3180
acaacaatat tatatacttt catcttcaac taactcatgt accttccaat ttttttctac 3240
taataattat ttacgtgcac agaaacttag caaggagaga gagagcgggg tgacccacct 3300
tgctagttgg atattacctc ttctcttcaa agtatccttg aacgctcacc ggttatcaaa 3360
tctctacact atagctctgt agtcttgcta gatagttagt tctttagctc tcggtgacca 3420
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ccgggttacc gaattcttac cctagctccc tgcggctgtt acgcggtccc ccatcaatct 3600
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ggaagagagt agatttatct aagagccaac tttattatat gaatgtgttt attgttggct 3840
ttagatgata tggtaaggag ttagagctaa taatagatag gctctattat tattattatt 3900
aattaaactc gctctaagga ggaaagtggg aggaagggac gaggacgaag actactggaa 3960
gcatcgtgca tggatgatgg atgtggtgtc tcttaatgta ggtggccgga ggatgtacgt 4020
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cagctacata ggagtatcta gtctagccag ttagtatact actactgcgc tgatgatgaa 4260
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atgattaaga actggctgcg gagccaaccg gcgcccatgc agccgagggt ggcggcggct 5160
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acggcaagga agacggtgga cacgttcggg cagcgcacgt cgatttaccg tggcgtgaca 5460
aggcatagat ggactgggag atatgaggca catctttggg ataacagttg cagaagggaa 5520
gggcaaactc gtaagggtcg tcaagtctat ttaggtggct atgataaaga ggagaaagct 5580
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ccagtgagta actacgaaaa ggagctcgag gacatgaagc acatgacaag gcaggagttt 5700
gtagcgtctc tgagaaggaa gagcagtggt ttctccagag gtgcatccat ttacagggga 5760
gtgactaggc atcaccaaca tggaagatgg caagcacgga ttggacgagt tgcagggaac 5820
aaggatcttt acttgggcac cttcagcacc caggaggagg cagcggaggc gtacgacatc 5880
gcggcgatca agttccgcgg cctcaacgcc gtcaccaact tcgacatgag ccgctacgac 5940
gtgaagagca tcctggacag cagcgccctc cccatcggca gcgccgccaa gcgcctcaag 6000
gaggccgagg ccgcagcgtc cgcgcagcac caccacgccg gcgtggtgag ctacgacgtc 6060
ggccgcatcg cctcgcagct cggcgacggc ggagccctgg cggcggcgta cggcgcgcac 6120
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taccacccgt acgcgcagca gccaatgcgc ggcggcgggt ggtgcaagca ggagcaggac 6240
cacgcggtga tcgcggccgc gcacagcctg caggacctcc accacctgaa cctgggcgcg 6300
gccggcgcgc acgacttttt ctcggcaggg cagcaggccg ccgccgctgc gatgcacggc 6360
ctgggtagca tcgacagtgc gtcgctcgag cacagcaccg gctccaactc cgtcgtctac 6420
aacggcgggg tcggcgacag caacggcgcc agcgccgtcg gcggcagtgg cggtggctac 6480
atgatgccga tgagcgctgc cggagcaacc actacatcgg caatggtgag ccacgagcag 6540
gtgcatgcac gggcctacga cgaagccaag caggctgctc agatggggta cgagagctac 6600
ctggtgaacg cggagaacaa tggtggcgga aggatgtctg catgggggac tgtcgtgtct 6660
gcagccgcgg cggcagcagc aagcagcaac gacaacatgg ccgccgacgt cgggcatggc 6720
ggcgcgcagc tcttcagtgt ctggaacgac acttaagcgt acctagtggt acctgacatc 6780
ttatagtctg caacctctcg tgtctgaatt cctatcttta tcaagtgtta ttgcttccac 6840
gactatagga cagctttcgt cgaaagcttt tgctcatgtg atctcgaagg attcatctag 6900
tctgattttt cgtgacttgt atcggtttta ttggattcat ccaacatata tcaataaaaa 6960
atgagttgtg tttcctttct tcctagttca gttaaaatta tttccctcct gcgcttgtgc 7020
tgtaattgtc tgtgtacctg ttgtttgtga ctgtgttagt tcccttggat atgatttcgt 7080
atttgatatg tacatggaga tagcttagct tcattattgg agtatgaagt tagtatgaca 7140
tagtcactct cctggaaaat tgacactgca aaccatattt ttattctgaa ccacaaatcc 7200
tagtcagtcc gctggcatat gccgtccgtt tgctgaatcc agaacgtggg tttggagatg 7260
tacggctgag atgcctctat gcgaagggga tttcgtggtg aaacgagatg ggagtagagc 7320
aacgcccgtg gaagatgctt caaacttcca cacttttgag caacgatcgg cagtagtaag 7380
gtagacgatt tcaagatcaa agcatatgaa gataaacaac atcaacaaca aaatttgttg 7440
gggttctata gagagaaaca gagctacata catacactgt tttgtatcta ccatctgaga 7500
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gcgtcacccg agccatctct tgacccagcc ggcgctgtat atttacacac gttgcagcat 7620
cgatcaccac ctgttcgatc gcgtcgccgt caccgggatc tgagtcgaaa cctagacttg 7680
tccatcttct ggattggcca acttaattaa tgtatgaaat aaaaggatgc acacatagtg 7740
acatgctaat cactataatg tgggcatcaa agttgtgtgt tatgtgtaat tactagttat 7800
ctgaataaaa gagaaagaga tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt 7860
tataattctt tgatgaacca gatgcatttc attaaccaaa tccatataca tataaatatt 7920
aatcatatat aattaatatc aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg 7980
cgaatgcgac cttcttatgt gcttctagtc tccaaatgtg gttgatagtt attttgctct 8040
aagatcaaca gtaatgaagt ataaatcatc gttgtggtgt gctactcggt taattgagca 8100
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gggaccctat agccttgatt aatgtgctat gttaggcatg cctggaaacg tgtgacgcat 8220
atgttttgtg aacctgttga tattatatgt gcttttatat taccatattt tattaaaata 8280
ctaatattta ttactagtaa gatataacat tctatctagc ttaaaaacta accataaata 8340
ttccataata actagattta ccaaactaat atactaaata tacataataa atacaaaatt 8400
aacaagacaa taatcaatat ttatgagctt aatatattta gacattatgg ttggtcgacg 8460
ataatcatgc taacttttcg taattgcttg attgaaatat gcttagaata atgcctcttt 8520
gttctacatg gcaaataggg accattatgg tgtaacaccc tgggaaccac aaacaccccg 8580
aaatgctact aaactacaca actaaccttc atatataaaa tttcgacagc atctcctttg 8640
aaaatttgca tagacgtgga agcaacagag tataaacaga tatcatgata agaaaacata 8700
ctagacatta ataatctgct agaaatggga agaatcctaa cttgacgact gcgtaactga 8760
ctagagtcac acttagctga ccctagtcac ttacaactga cttcgtgtcc tagatcgatg 8820
ggccctggcc gaagcttggt cacccggtcc gggcctagaa ggccagcttc aagtttgtac 8880
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atcaagagga tgcttttccg atgagctcta gtagtacatc ggacctcaca tacctccatt 9120
gtggtgaaat attttgtgct catttagtga tgggtaaatt ttgtttatgt cactctaggt 9180
tttgacattt cagttttgcc actcttaggt tttgacaaat aatttccatt ccgcggcaaa 9240
agcaaaacaa ttttatttta cttttaccac tcttagcttt cacaatgtat cacaaatgcc 9300
actctagaaa ttctgtttat gccacagaat gtgaaaaaaa acactcactt atttgaagcc 9360
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actcctcgta acaagagacg gaaacatcat gagacaatcg cgtttggaag gctttgcatc 9480
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tgccctagct agaaacttac acctgcaact gcgagagcga gcgtgtgagt gtagccgagt 9780
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ctggtctggt ccttggtcgt gtcccgtttc attgtgtact atttacctgt aatgtgtatc 14340
cttaagtctg gtttgatggt gtctgaaacg ttttgctgtg gtagagcagc atggaagaac 14400
tataatgaat aagtgatccc taatcattgt gtccaaattt tgcttctgct ataccctttt 14460
gtgctgtttc ttatgttttg cttaaaaatt tgatctgaca aacaaatttg tctaaattat 14520
gctcttgttc tgactgtgta ctgtacacat ttgtattgct accggtttgg cacatagttt 14580
tctctttgat tgcagatcaa acccttctga ttgcagattg cttggctatg gctgatgtgc 14640
tcactgttct tctttagctt gtatattgct gatggtggct tggctacggc tgaaaaagtt 14700
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gttaagcttg ctttgcaggg catgaatgct cttcttgaag gaagcacatc aaagaagagc 17460
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gtgtaattac tagttatctg aataaaagag aaagagatca tccatatttc ttatcctaaa 18360
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atatacatat aaatattaat catatataat taatatcaat tgggttagca aaacaaatct 18480
agtctaggtg tgttttgcga atgcggccgc ctgcagagtt aacggcgcgc cgactagcta 18540
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atgtgttatt aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgcca 18716
<210> 76
<211> 18762
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 76
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
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tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
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ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
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ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt caacgtgccc gccgccggcg cggccgacgc 2160
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ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg gccaccgaga catgcttcct 2340
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tctgttcttg cggttgtagc ctgtgtaaca gtgctagagt atgtatgata aataggtttt 3660
aagtctgctt acatgacatt ttttattgtg gaagagacat ataaaaatta gagagagtgg 3720
ttctcatgca acggcggacg gcccggtgct aaaagagctt caagacaaaa taatgaaaca 3780
ggaagagagt agatttatct aagagccaac tttattatat gaatgtgttt attgttggct 3840
ttagatgata tggtaaggag ttagagctaa taatagatag gctctattat tattattatt 3900
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gcatcgtgca tggatgatgg atgtggtgtc tcttaatgta ggtggccgga ggatgtacgt 4020
gttaattgcg cgataagcac tcagatccaa ccgcaaacta cctccacact gacacactga 4080
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gtctgccggc cggctcaggc tgccgccatc accctgctcg aaagtcgcgt taggcggcgc 4200
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ttaactctgc atagatactg tacttgcctc cctccaacac ccaaccacct cctgctcggc 4320
tcttaataac ttggacacgg atcgatgcca tccaaggaag aacacgacga cgacgacgga 4380
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caactctcct caccactcat caccagctag ctctagcaaa gcacttgcca tctaccgacc 4560
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cgaatgcgac cttcttatgt gcttctagtc tccaaatgtg gttgatagtt attttgctct 8040
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gtggaccaga aaatagtgag acacggaaga caaaagaagt aaaagaggcc cggactacgg 9540
cccacatgag attcggcccc gccacctccg gcaaccagcg gccgatccaa cggcagtgcg 9600
cgcacacaca caacctcgta tatatcgccg cgcggaagcg gcgcgaccga ggaagccttg 9660
tcctcgacac cccctacaca ggtgtcgcgc tgcccccgac acgagtcccg catgcgtccc 9720
acgcggccgc gccagatccc gcctccgcgc gttgccacgc cctctataaa cacccagctc 9780
tccctcgccc tcatctacct cactcgtagt cgtagctcaa gcatcagcgg cagcggcagc 9840
ggcaggagct ctgggcagcg tgcgcacgtg gggtacctag ctcgctctgc tagcctacct 9900
taagatatcg gatccatgtc caacctgctc acggttcacc agaaccttcc ggctcttcca 9960
gtggacgcga cgtccgatga agtcaggaag aacctcatgg acatgttccg cgacaggcaa 10020
gcgttcagcg agcacacctg gaagatgctg ctctccgtct gccgctcctg ggctgcatgg 10080
tgcaagctga acaacaggaa gtggttcccc gctgagcccg aggacgtgag ggattacctt 10140
ctgtacctgc aagcgcgagg tttgtttctg cttctacctt tgatatatat ataataatta 10200
tcattaatta gtagtaatat aatatttcaa atattttttt caaaataaaa gaatgtagta 10260
tatagcaatt gcttttctgt agtttataag tgtgtatatt ttaatttata acttttctaa 10320
tatatgacca aaacatggtg atgcctaggt ctggcagtga agaccatcca gcaacacctt 10380
ggacaactga acatgcttca caggcgctcc ggcctcccgc gccccagcga ctcgaacgcc 10440
gtgagcctcg tcatgcgccg catcaggaag gaaaacgtcg atgccggcga aagggcaaag 10500
caggccctcg cgttcgagag gaccgatttc gaccaggtcc gcagcctgat ggagaacagc 10560
gacaggtgcc aggacattag gaacctggcg ttcctcggaa ttgcatacaa cacgctcctc 10620
aggatcgcgg aaattgcccg cattcgcgtg aaggacatta gccgcaccga cggcggcagg 10680
atgcttatcc acattggcag gaccaagacg ctcgtttcca ccgcaggcgt cgaaaaggcc 10740
ctcagcctcg gagtgaccaa gctcgtcgaa cgctggatct ccgtgtccgg cgtcgcggac 10800
gacccaaaca actacctctt ctgccgcgtc cgcaagaacg gggtggctgc ccctagcgcc 10860
accagccaac tcagcacgag ggccttggaa ggtattttcg aggccaccca ccgcctgatc 10920
tacggcgcga aggatgacag cggtcaacgc tacctcgcat ggtccgggca ctccgcccgc 10980
gttggagctg ctagggacat ggcccgcgcc ggtgtttcca tccccgaaat catgcaggcg 11040
ggtggatgga cgaacgtgaa cattgtcatg aactacattc gcaaccttga cagcgagacg 11100
ggcgcaatgg ttcgcctcct ggaagatggt gactgaggta cccaacctag acttgtccat 11160
cttctggatt ggccaactta attaatgtat gaaataaaag gatgcacaca tagtgacatg 11220
ctaatcacta taatgtgggc atcaaagttg tgtgttatgt gtaattacta gttatctgaa 11280
taaaagagaa agagatcatc catatttctt atcctaaatg aatgtcacgt gtctttataa 11340
ttctttgatg aaccagatgc atttcattaa ccaaatccat atacatataa atattaatca 11400
tatataatta atatcaattg ggttagcaaa acaaatctag tctaggtgtg ttttgcgatc 11460
cgatatcgat gggccctggc cgaagcttgg tcacccggtc cgggcctaga aggccgatct 11520
cccgggcacc cagctttctt gtacaaagtg gccgttaacg gatcggccag aatggcccgg 11580
accgggttac cgaattcctg cccttaaggc caattgttca agattcattc aacaattgaa 11640
acatctccca tgattaaatc agtataaggt tgctatggtc ttgcttgaca aagttttttt 11700
ttgagggaat ttcaactaaa tttttgagtg aaactatcaa atactgattt taaaaaattt 11760
ttataaaagg aagcgcagag ataaaaggcc atctatgcta caaaagtacc caaaaatgta 11820
atcctaaagt atgaattgca tttttttttt gtttggacga aaggaaagga gtattaccac 11880
aagaatgata tcatcttcat atttagatct tttttgggta aagcttgaga ttctctaaat 11940
atagagaaat cagaagaaaa aaaaaccgtg ttttggtggt tttgatttct agcctccaca 12000
ataactttga cggcgtcgac aagtctaacg gacaccaagc agcgaaccac cagcgccgag 12060
ccaagcgaag cagacggccg agacgttgac accttcggcg cggcatctct cgagagttcc 12120
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tacatcggat ggcgatccat ggttagggcc tgctagtttc ccttcctgtt ttgtcgatgg 12540
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tatagtccct ttaggagatc agtttaattt ctcggatggt tcgagatcgg tggtccatgg 12660
ttagtaccct aagatccgcg ctgttagggt tcgtagatgg aggcgacctg ttctgattgt 12720
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tttcatgatc ctctgtatct tgtttcgttg cctaggttcc gtctaatcta tccgtggtat 12840
gatgtagatg ttttgatcgt gctaactacg tcttgtaaag ttaattgtca ggtcataatt 12900
tttagcatgc cttttttttt gtttggtttt gtctaattgg gctgtcgttc tagatcagag 12960
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acatgctttt aaattatctt catatgcttg gatgatggca tacacagcgg ctatgtgtgg 13380
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gagcgtggag gagaactgca tgtaccacga gtccaagttc tacggcgtga acttccccgc 13920
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gatggtgtct gaaacgtttt gctgtggtag agcagcatgg aagaactata atgaataagt 14460
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ggcagctgtt gctcctgtaa tgcgttgtta tctcttatct cttgagatgt actatgattt 14880
tgaggctgtt tgacttgtgc cagattgcca gtgctgatgc tatattatct caggttttta 14940
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atgcgtgttg atgccctgtt gttgcttgcc agattgatgc ccctgttgct tgcagcttgc 15060
aagctgtagt gaaatcctaa aattcgaaac caaatctatt ctgaactttt gaagatctgt 15120
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aacccgtcgt ccacagtcat gtccaaaata tcctttcttc ttttttttcg attcggatat 16020
ctatcttcct tttttttttc caaaaatctt cttgacgcac cagcgcgcac gtttgtggta 16080
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gtctaccgcg ctcactggcg ccactaccgc tgcgcccaag gcgaggcgcc gggcgcacct 16380
cctggccacc cgccgcgccc tcgccgcgcc catcaggtgc tcagcggcgt cacccgccat 16440
gccgatggct cccccggcca ccccgctccg gccgtggggc cccaccgagc cccgcaaggg 16500
tgctgacatc ctcgtcgagt ccctcgagcg ctgcggcgtc cgcgacgtct tcgcctaccc 16560
cggcggcgcg tccatggaga tccaccaggc actcacccgc tcccccgtca tcgccaacca 16620
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caagcacaac tacctggtcc tcgacgtcga cgacatcccc cgcgtcgtgc aggaggcttt 16920
cttcctcgcc tcctctggtc gaccagggcc ggtgcttgtc gacatcccca aggacatcca 16980
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ttgtccatct tctggattgg ccaacttaat taatgtatga aataaaagga tgcacacata 18300
gtgacatgct aatcactata atgtgggcat caaagttgtg tgttatgtgt aattactagt 18360
tatctgaata aaagagaaag agatcatcca tatttcttat cctaaatgaa tgtcacgtgt 18420
ctttataatt ctttgatgaa ccagatgcat ttcattaacc aaatccatat acatataaat 18480
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ctcgaattca ttccgattaa tcgtggcctc ttgctcttca ggatgaagag ctatgtttaa 18660
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tgtctaagcg tcaatttgtt tacaccacaa tatatcctgc ca 18762
<210> 77
<211> 23983
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 77
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
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ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
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acccttgtac ttttggtttc acctgcatag agaaaaccca caagaatatg acagtctgat 540
ttgtcagtct cattctcaag caacatttct ctatccgtta ctttcatggt gaataacaca 600
atccatcatc aatactttgt gttactcaga aactgaaagt tattccgagt cttgcatatc 660
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ggcattgttg gagtgggaag gttcaaaaaa ttggagttat gactagttgt ctctttctat 780
gtacgatgga gaaaatgaat aaacaactga gaaaatggct cttgtttagt tgatgatgct 840
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aatttaaaaa taaccgaatg aaaactaaat cctataactg aaagaactga aaccgaatca 1080
aaatatttaa tgtaaccaaa aatatccgaa atataattat attgtcaaaa atattaataa 1140
tttctagatt aaataattaa aaatacttaa aaatttatat aaaatagtaa aaatactcga 1200
aaataaccac aaatattcaa aaacaaccga aatatcccaa aatattcaaa gcaaaataac 1260
cgaatggata ccaaatttta aaaccgaaaa aactggaaca aaaccaaaat cgaaccaaaa 1320
tttcaaaaat cgaataaata ctaaacttta gaacaaaaaa aaacgataac cgaatgtata 1380
cgaaccaaag ccgaattaga taaccgaacg tccaggacta ctcttaatct ttccgccact 1440
tatgatttgg gctattactt tgtttataat gagccttttc aagctcaagt tcatgattgt 1500
ccgtgagatg agaaactgac ttgttggatt cgaaacccta gctagtattg gttaatactt 1560
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ctaccgttcg agtgactgca tggcgtacat ctttctgcat cgactttgta cggctacatc 2880
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tacgagtagt tatacataca tgcacataca tatcatcaca tatatcacaa tatttttcta 3060
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ccaacaactt tacctattct acattgttct atttcgaatt tcactctata aacaacatag 3180
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gccgctcacc agccatgccg tgtcgcggaa cggcacaacc acccccaacc cactcacgaa 3660
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agcgcatcac cgccatgctg cggcagcacg gcaagatcga gggcaagaac gtcttctact 4140
ggttccagaa ccacaaggcc cgcgagcgcc agaagcgccg cctcaccagc ctcgacgtca 4200
acgtgcccgc cgccggcgcg gccgacgcca ccaccagcca actcggcgtc ctctcgctgt 4260
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ctgccatggc caccgagaca tgcttcctgc aggactacat gggcgtgacg gacacgggca 4440
gctcgtcgca gtggccacgc ttctcgtcgt cggacacgat aatggcggcg gccgcggcgc 4500
gggcggcgac gacgcgggcg cccgagacgc tccctctctt cccgacctgc ggcgacgacg 4560
gcggcagcgg tagcagcagc tacttgccgt tctggggtgc cgcgtccaca actgccggcg 4620
ccacttcttc cgttgcgatc cagcagcaac accagctgca ggagcagtac agcttttaca 4680
gcaacagcaa cagcacccag ctggccggca ccggcaacca agacgtatcg gcaacagcag 4740
cagcagccgc cgccctggag ctgagcctca gctcatggtg ctccccttac cctgctgcag 4800
ggagtatgtg agagcaacgc gagctgccac tgctcttcac tggtaccgtt aacagatcat 4860
tcgacaaagc agcattagtc cgttgatcgg tggaagacca ctcgtcagtg ttgagttgaa 4920
tgtttgatca ataaaatacg gcaatgctgt aagggttgtt ttttatgcca ttgataatac 4980
actgtactgt tcagttgttg aactctattt cttagccatg ccaagtgctt ttcttatttt 5040
gaataacatt acagcaaaaa gttgaaagac aaaaaaaaaa acccccgaac agagtgcttt 5100
gggtcccaag cttctttaga ctgtgttcgg cgttccccct aaatttctcc ccctatatct 5160
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cacctatatc aaacctctat accccaccac aacaatatta tatactttca tcttcaacta 5280
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aggagagaga gagcggggtg acccaccttg ctagttggat attacctctt ctcttcaaag 5400
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tattatatga atgtgtttat tgttggcttt agatgatatg gtaaggagtt agagctaata 5940
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gaagggacga ggacgaagac tactggaagc atcgtgcatg gatgatggat gtggtgtctc 6060
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ctccagaggt gcatccattt acaggggagt gactaggcat caccaacatg gaagatggca 7860
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cgctgtatat ttacacacgt tgcagcatcg atcaccacct gttcgatcgc gtcgccgtca 9720
ccagcttgcc gagtgccatc cttggacact cgataaagta tattttattt tttttatttt 9780
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cacaattaca tatttacaaa aatgttttct ataaatatta gatttagttc gtttatttga 9900
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tttagattac aaatggctaa aagtagctaa aaaatagctg ctaaagttta tctcgcgaga 10620
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taataattat cattaattag tagtaatata atatttcaaa tatttttttc aaaataaaag 11460
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ctctggatca tcggtgcgtg gctgtgcctc ctggcgctca cgcccttggc tccacgggcg 17040
gtgagggcgg gcggggccgc cgccagcacc ttgctgatca ggtgcctgtc cctttcatga 17100
actactagcg cccgcgcccg cggccgccgg gcacaagaga acacatcgat gttcgctgcg 17160
tacgtcagca ataaggcact ctttgtcagt agtcgagtgc atatgttggg tgtttgccct 17220
gggagatttc aagtgttgtg gccattatcc cgcaggataa aaaatcggcg gcttttggat 17280
tgatacggaa aataacgatg tttcatgctc gtgttgtgtg tgtgacatct tgtcagccaa 17340
gtttttaacc gttgctactc cccctctgtg ggctcagtgt gtggaccgga atacgtcgta 17400
cataggccgt agcctaagcc caatatgccg tttttcaggt tggcctgtgt gacgacaagc 17460
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cgccggcaag ggaccgaagc aagcctctct cccgaccgtc gcatcaaggt acgcgtccgc 17760
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tctagaaggt tagatgacgc atgtcatgct gcctgcgtag tttacctttg atctgtttat 18300
gattacctta tcagtaggat atttgtgatt ttgggaagta gcactaactg attcatgctg 18360
acatgatgtt ccctttcaga ttatactgtt gagtcctatc taattgatgc tttgtatgct 18420
atatgaatac gtcatggtaa attagcagtt aattagcata ttagcaattg ggcgtacctc 18480
atcaggattg ctcttgtaga tgtgtgtggt gatgtttctt gttcaattca tgttctgctt 18540
taaaagtatg tgttctctgt ttgttaatta agattcatgg ttataatgat ttggacctaa 18600
ttaatcaggg ttgccctttt agatgcgtgg ttacttgttg agttcatttt tttcctgcta 18660
tagttgtatg cgtttgttca ttcatggtta gatttgattt gtttcttctc tattccatgc 18720
cttccatata cttcaattgt agcttaacat gagatttctg tatatgcagg tcgaccgccg 18780
gggatccaca cgacaccatg gcccagtcca agcacggcct gaccaaggag atgaccatga 18840
agtaccgcat ggagggctgc gtggacggcc acaagttcgt gatcaccggc gagggcatcg 18900
gctacccctt caagggcaag caggccatca acctgtgcgt ggtggagggc ggccccttgc 18960
ccttcgccga ggacatcttg tccgccgcct tcatgtacgg caaccgcgtg ttcaccgagt 19020
acccccagga catcgtcgac tacttcaaga actcctgccc cgccggctac acctgggacc 19080
gctccttcct gttcgaggac ggcgccgtgt gcatctgcaa cgccgacatc accgtgagcg 19140
tggaggagaa ctgcatgtac cacgagtcca agttctacgg cgtgaacttc cccgccgacg 19200
gccccgtgat gaagaagatg accgacaact gggagccctc ctgcgagaag atcatccccg 19260
tgcccaagca gggcatcttg aagggcgacg tgagcatgta cctgctgctg aaggacggtg 19320
gccgcttgcg ctgccagttc gacaccgtgt acaaggccaa gtccgtgccc cgcaagatgc 19380
ccgactggca cttcatccag cacaagctga cccgcgagga ccgcagcgac gccaagaacc 19440
agaagtggca cctgaccgag cacgccatcg cctccggctc cgccttgccc tccggactca 19500
gatctcgata gagtcaacct agacttgtcc atcttctgga ttggccaact taattaatgt 19560
atgaaataaa aggatgcaca catagtgaca tgctaatcac tataatgtgg gcatcaaagt 19620
tgtgtgttat gtgtaattac tagttatctg aataaaagag aaagagatca tccatatttc 19680
ttatcctaaa tgaatgtcac gtgtctttat aattctttga tgaaccagat gcatttcatt 19740
aaccaaatcc atatacatat aaatattaat catatataat taatatcaat tgggttagca 19800
aaacaaatct agtctaggtg tgttttgcga attgcggcgc ccttacttta acgcctctaa 19860
ccaacacccc tttatcttta taaggaacaa taaacagaat ttgccccact gttctaaatc 19920
acctaataat atccccagct aaaaacaata aaggtttcct agaattaaga caagcatgac 19980
tgttcctcca ggagggtttg gaacattgtt gcagtcttgc agatacgggc gaagggtgag 20040
aaacagagcg gagggctgga ggtgacctcg gtagtcgacg ccggagttga gcttgacaac 20100
gacggggcgg cccctgatgg acttgaggaa gtccgatggc gtcttcaccg tcccgccggc 20160
gcccgaggcg ggcctgtcgc tgccgccgcc gccgctgctc atcttgcgcg ctgtgccccc 20220
ggcggtgtcc ctgtgttgcg gatcgcgggt gggccaggtg gatgcgaggg cgacccgttt 20280
ggactccggc cggagccgcc ggatccctgg tcggtgtcag tgccgtttac tctgggcccc 20340
acgtgtcagt accgtctgta gatgacaaca acccgtcgtc cacagtcatg tccaaaatat 20400
cctttcttct tttttttcga ttcggatatc tatcttcctt ttttttttcc aaaaatcttc 20460
ttgacgcacc agcgcgcacg tttgtggtaa acgccgacac gtcggtccca cgtcgataga 20520
ccccacccac cagtgagtag cgtgtacgta ttcgggggtg acggacgtgt cgccgtcgtc 20580
ttgctagtcc cattcccatc tgagccacac atctctgaac aaaaaaaagg agggaggcct 20640
ccacgcacat ccccctccgt gccacccgcc ccaaaccctc gcgccgcctc cgagacagcc 20700
gccgcaacca tggccaccgc cgccgccgcg tctaccgcgc tcactggcgc cactaccgct 20760
gcgcccaagg cgaggcgccg ggcgcacctc ctggccaccc gccgcgccct cgccgcgccc 20820
atcaggtgct cagcggcgtc acccgccatg ccgatggctc ccccggccac cccgctccgg 20880
ccgtggggcc ccaccgagcc ccgcaagggt gctgacatcc tcgtcgagtc cctcgagcgc 20940
tgcggcgtcc gcgacgtctt cgcctacccc ggcggcgcgt ccatggagat ccaccaggca 21000
ctcacccgct cccccgtcat cgccaaccac ctcttccgcc acgagcaagg ggaggccttt 21060
gccgcctccg gctacgcgcg ctcctcgggc cgcgtcggcg tctgcatcgc cacctccggc 21120
cccggcgcca ccaacctagt ctccgcgctc gccgacgcgc tgctcgattc cgtccccatg 21180
gtcgccatca cgggacaggt ggcgcgacgc atgattggca ccgacgcctt ccaggagacg 21240
cccatcgtcg aggtcacccg ctccatcacc aagcacaact acctggtcct cgacgtcgac 21300
gacatccccc gcgtcgtgca ggaggctttc ttcctcgcct cctctggtcg accagggccg 21360
gtgcttgtcg acatccccaa ggacatccag cagcagatgg cggtgcctgt ctgggacaag 21420
cccatgagtc tgcctgggta cattgcgcgc cttcccaagc cccctgcgac tgagttgctt 21480
gagcaggtgc tgcgtcttgt tggtgaatcg cggcgccctg ttctttatgt gggcggtggc 21540
tgcgcagcat ctggtgagga gttgcgacgc tttgtggagc tgactggaat cccggtcaca 21600
actactctta tgggcctcgg caacttcccc agcgacgacc cactgtctct gcgcatgcta 21660
ggtatgcatg ggacggtgta tgcaaattat gcagtggata aggccgatct gttgcttgca 21720
cttggtgtgc ggtttgatga tcgcgtgaca gggaagattg aggcttttgc aagcagggct 21780
aagattgtgc acgttgatat tgatccggct gagattggca agaacaagca gccacatgtg 21840
tccatctgtg cagatgttaa gcttgctttg cagggcatga atgctcttct tgaaggaagc 21900
acatcaaaga agagctttga ctttggctca tggaacgatg agttggatca gcagaagagg 21960
gaattccccc ttgggtataa aacatctaat gaggagatcc agccacaata tgctattcag 22020
gttcttgatg agctgacgaa aggcgaggcc atcatcggca caggtgttgg gcagcaccag 22080
atgtgggcgg cacagtacta cacttacaag cggccaaggc agtggttgtc ttcagctggt 22140
cttggggcta tgggatttgg tttgccggct gctgctggtg cttctgtggc aaacccaggt 22200
gtcactgttg ttgacatcga tggagatggt agctttctca tgaacgttca ggagctagct 22260
atgatccgaa ttgagaacct cccagtgaag gtctttgtgc taaacaacca gcacctgggg 22320
atggtggtgc agttggagga caggttctat aaggccaaca gagcgcacac atacttggga 22380
aacccagaga atgaaagtga gatatatcca gatttcgtga cgatcgccaa agggttcaac 22440
attccagcgg tccgtgtgac aaagaagaac gaagtccgcg cagcgataaa gaagatgctc 22500
gagactccag ggccgtacct cttggatata atcgtcccac accaggagca tgtgttgcct 22560
atgatcccta gtggtggggc tttcaaggat atgatcctgg atggtgatgg caggactgtg 22620
tactgactag ctagtcagtt aacagatctg ccagatcctc ggtgtacaaa taacccgtct 22680
tatcctatga gacgggccgg cgtcagtgtg ttctggagga atttttatgt cagagccttt 22740
ttctttgtgt gcttgatgta gatgccaagg gaagcttatt ggctgttgaa gcttgatgca 22800
aaataaatta tggaactctg ttttttgttt atctaataat aactagcaaa tatgcttcca 22860
ttgcattgaa actaacagcc ttttgtgttt ccaagtttta ttttgtgaca atgtcatcta 22920
tttcaattag ttgtggaatc ggaaacttgc aggactaact tggaaactcc aatccctcag 22980
catcctggac tttttcctgg tgtaatccat gtagatatta ttttaatcat cattttagtt 23040
ctggaggttt ttccatctcc ggttttgctc ccctttcttc aaaaaaaaaa aaaaaatgcc 23100
gtaggcgccg caacgcccac ctgttgttca aactcatggg cacgagtggc tcgaagattt 23160
tatacaacaa ttgctgtagt ttcaccgttg ctggtgaaga agcatttttt taaaaaaata 23220
tagtggtatt cattttaatt agtttagttg tgcagcgagc aaaatttgga catgctctgc 23280
tcggaatctg atcgacctag acacagatta gcagcagtag ctttgtcatc tgttccaaga 23340
gttgcgatct gatagaagaa aaaaaaacct tcccttcaat gtaaaaccga aactaacaag 23400
aaagaagcac agtgccgttt aggcaagtat ggagtacgta ttaagcatgt agaaggccat 23460
gcatgaacca ctaacaagaa agaagcgcag tgccattcag gcaagcataa gcatgtagat 23520
tggcatgcat gaacaactaa cagtagatcg tctctggtct gattagaagt tttttgggaa 23580
gccaagaaat catgtacaac tggttccatc tcaaattccg tggcaaaaag aggcctaagc 23640
aacatacctc gagtagatca cattcaagct tggtcacccg gtccgtcaat attctgattc 23700
cgatgacttc gtaggttcct agctcaagcc gctcgtgtcc aagcgtcact tacgattagc 23760
taatgattac ggcatctagg accgactagt ggcgcgccga ctagctagct aaggtaccga 23820
gctcgaattc attccgatta atcgtggcct cttgctcttc aggatgaaga gctatgttta 23880
aacgtgcaag cgctactaga caattcagta cattaaaaac gtccgcaatg tgttattaag 23940
ttgtctaagc gtcaatttgt ttacaccaca atatatcctg cca 23983
<210> 78
<211> 19789
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 78
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcaggcgacc catcgctgct ttgtctacat catgttcttc atcatcctcc 720
ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
atagagtcac taatgcctta agcatcggtt actccgtagg gtacattctg ttcttcttat 900
ttgtgcatat ttttattgtt gtttactgat tatacgagta gttatacata catgcacata 960
catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
actatatacg cgatgtgtgg ctacaacata agacaatata gtcgtttgaa gattgaacct 1200
atatatcggt acggttaatc cgtctatgta cgtgggcatg acgaacaccc gtgataacga 1260
aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
cgcctttatt tcaggctcgc tggccccacg ggcgtgctgc gtgcacgaag ggcactaccc 1440
caacctctca ccgaaaaccg cgctggatcg gcaaatcaaa cgaggtggtg ccccgtgccc 1500
actctccacg tccacggcac catccctctg cagccgctca ccagccatgc cgtgtcgcgg 1560
aacggcacaa ccacccccaa cccactcacg aaaccccgtc ccggccgtgc ccgtgtcggt 1620
ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gactggggac tctatcagtg atagagtcta 1800
gaggatcgct caggaaggcc gctgagatag aggcatggcg gccaatgcgg gcggcggtgg 1860
agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg gcggtgtgcc gccccagcgg 1920
ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat caggatgctg aaggagctct actacggctg 1980
cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat ccagcgcatc accgccatgc tgcggcagca 2040
cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag aaccacaagg cccgcgagcg 2100
ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt caacgtgccc gccgccggcg cggccgacgc 2160
caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg ccgccttcag gcgcggcgcc 2220
tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc ggcggatcgg ctgtgctgct 2280
ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg gccaccgaga catgcttcct 2340
gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg cagtggccac gcttctcgtc 2400
gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc gcgggcggcg acgacgcggg cgcccgagac 2460
gctccctctc ttcccgacct gcggcgacga cggcggcagc ggtagcagca gctacttgcc 2520
gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg cgccacttct tccgttgcga tccagcagca 2580
acaccagctg caggagcagt acagctttta cagcaacagc aacagcaccc agctggccgg 2640
caccggcaac caagacgtat cggcaacagc agcagcagcc gccgccctgg agctgagcct 2700
cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc agggagtatg tgagagcaac gcgagctgcc 2760
actgctcttc actggtaccg ttaacagatc attcgacaaa gcagcattag tccgttgatc 2820
ggtggaagac cactcgtcag tgttgagttg aatgtttgat caataaaata cggcaatgct 2880
gtaagggttg ttttttatgc cattgataat acactgtact gttcagttgt tgaactctat 2940
ttcttagcca tgccaagtgc ttttcttatt ttgaataaca ttacagcaaa aagttgaaag 3000
acaaaaaaaa aaacccccga acagagtgct ttgggtccca agcttcttta gactgtgttc 3060
ggcgttcccc ctaaatttct ccccctatat ctcactcact tgtcacatca gcgttctctt 3120
tccccctata tctccacgct ctacagcagt tccacctata tcaaacctct ataccccacc 3180
acaacaatat tatatacttt catcttcaac taactcatgt accttccaat ttttttctac 3240
taataattat ttacgtgcac agaaacttag caaggagaga gagagcgggg tgacccacct 3300
tgctagttgg atattacctc ttctcttcaa agtatccttg aacgctcacc ggttatcaaa 3360
tctctacact atagctctgt agtcttgcta gatagttagt tctttagctc tcggtgacca 3420
agcttggcgc gatcaagctt atcgataccg tcgacctcga agcttggtca cccggtccgg 3480
gcctagaagg ccagcttcaa gtttgtacaa aaaagcaggc tccggccaga atggcccgga 3540
ccgggttacc gaattcttac cctagctccc tgcggctgtt acgcggtccc ccatcaatct 3600
tctgttcttg cggttgtagc ctgtgtaaca gtgctagagt atgtatgata aataggtttt 3660
aagtctgctt acatgacatt ttttattgtg gaagagacat ataaaaatta gagagagtgg 3720
ttctcatgca acggcggacg gcccggtgct aaaagagctt caagacaaaa taatgaaaca 3780
ggaagagagt agatttatct aagagccaac tttattatat gaatgtgttt attgttggct 3840
ttagatgata tggtaaggag ttagagctaa taatagatag gctctattat tattattatt 3900
aattaaactc gctctaagga ggaaagtggg aggaagggac gaggacgaag actactggaa 3960
gcatcgtgca tggatgatgg atgtggtgtc tcttaatgta ggtggccgga ggatgtacgt 4020
gttaattgcg cgataagcac tcagatccaa ccgcaaacta cctccacact gacacactga 4080
tagagagaaa gagagacctc cgacgactgc cgccgcagat gagccacgta cgtatacgac 4140
gtctgccggc cggctcaggc tgccgccatc accctgctcg aaagtcgcgt taggcggcgc 4200
cagctacata ggagtatcta gtctagccag ttagtatact actactgcgc tgatgatgaa 4260
ttaactctgc atagatactg tacttgcctc cctccaacac ccaaccacct cctgctcggc 4320
tcttaataac ttggacacgg atcgatgcca tccaaggaag aacacgacga cgacgacgga 4380
acatccacca tgcaagcttg catccatacg ccgatacgcg tgcatccatc catccaccat 4440
tatttccatt ttccaccgat cacacgtaca caggcctatt taaggagcga catcccactg 4500
caactctcct caccactcat caccagctag ctctagcaaa gcacttgcca tctaccgacc 4560
gccgcattcc aaacagcccg acgagctagc agagcggcag gcacctccct cctcaaggaa 4620
cccatggcca ctgtgaacaa ctggctcgct ttctccctct ccccgcagga gctgccgccc 4680
tcccagacga cggactccac actcatctcg gccgccaccg ccgaccatgt ctccggcgat 4740
gtctgcttca acatccccca agattggagc atgaggggat cagagctttc ggcgctcgtc 4800
gcggagccga agctggagga cttcctcggc ggcatctcct tctccgagca gcatcacaag 4860
gccaactgca acatgatacc cagcactagc agcacagttt gctacgcgag ctcaggtgct 4920
agcaccggct accatcacca gctgtaccac cagcccacca gctcagcgct ccacttcgcg 4980
gactccgtaa tggtggcttc ctcggccggt gtccacgacg gcggtgccat gctcagcgcg 5040
gccgccgcta acggtgtcgc tggcgctgcc agtgccaacg gcggcggcat cgggctgtcc 5100
atgattaaga actggctgcg gagccaaccg gcgcccatgc agccgagggt ggcggcggct 5160
gagggcgcgc aggggctctc tttgtccatg aacatggcgg ggacgaccca aggcgctgct 5220
ggcatgccac ttctcgctgg agagcgcgca cgggcgcccg agagtgtatc gacgtcagca 5280
cagggtggag ccgtcgtcgt cacggcgccg aaggaggata gcggtggcag cggtgttgcc 5340
ggcgctctag tagccgtgag cacggacacg ggtggcagcg gcggcgcgtc ggctgacaac 5400
acggcaagga agacggtgga cacgttcggg cagcgcacgt cgatttaccg tggcgtgaca 5460
aggcatagat ggactgggag atatgaggca catctttggg ataacagttg cagaagggaa 5520
gggcaaactc gtaagggtcg tcaagtctat ttaggtggct atgataaaga ggagaaagct 5580
gctagggctt atgatcttgc tgctctgaag tactggggtg ccacaacaac aacaaatttt 5640
ccagtgagta actacgaaaa ggagctcgag gacatgaagc acatgacaag gcaggagttt 5700
gtagcgtctc tgagaaggaa gagcagtggt ttctccagag gtgcatccat ttacagggga 5760
gtgactaggc atcaccaaca tggaagatgg caagcacgga ttggacgagt tgcagggaac 5820
aaggatcttt acttgggcac cttcagcacc caggaggagg cagcggaggc gtacgacatc 5880
gcggcgatca agttccgcgg cctcaacgcc gtcaccaact tcgacatgag ccgctacgac 5940
gtgaagagca tcctggacag cagcgccctc cccatcggca gcgccgccaa gcgcctcaag 6000
gaggccgagg ccgcagcgtc cgcgcagcac caccacgccg gcgtggtgag ctacgacgtc 6060
ggccgcatcg cctcgcagct cggcgacggc ggagccctgg cggcggcgta cggcgcgcac 6120
taccacggcg ccgcctggcc gaccatcgcg ttccagccgg gcgccgccag cacaggcctg 6180
taccacccgt acgcgcagca gccaatgcgc ggcggcgggt ggtgcaagca ggagcaggac 6240
cacgcggtga tcgcggccgc gcacagcctg caggacctcc accacctgaa cctgggcgcg 6300
gccggcgcgc acgacttttt ctcggcaggg cagcaggccg ccgccgctgc gatgcacggc 6360
ctgggtagca tcgacagtgc gtcgctcgag cacagcaccg gctccaactc cgtcgtctac 6420
aacggcgggg tcggcgacag caacggcgcc agcgccgtcg gcggcagtgg cggtggctac 6480
atgatgccga tgagcgctgc cggagcaacc actacatcgg caatggtgag ccacgagcag 6540
gtgcatgcac gggcctacga cgaagccaag caggctgctc agatggggta cgagagctac 6600
ctggtgaacg cggagaacaa tggtggcgga aggatgtctg catgggggac tgtcgtgtct 6660
gcagccgcgg cggcagcagc aagcagcaac gacaacatgg ccgccgacgt cgggcatggc 6720
ggcgcgcagc tcttcagtgt ctggaacgac acttaagcgt acctagtggt acctgacatc 6780
ttatagtctg caacctctcg tgtctgaatt cctatcttta tcaagtgtta ttgcttccac 6840
gactatagga cagctttcgt cgaaagcttt tgctcatgtg atctcgaagg attcatctag 6900
tctgattttt cgtgacttgt atcggtttta ttggattcat ccaacatata tcaataaaaa 6960
atgagttgtg tttcctttct tcctagttca gttaaaatta tttccctcct gcgcttgtgc 7020
tgtaattgtc tgtgtacctg ttgtttgtga ctgtgttagt tcccttggat atgatttcgt 7080
atttgatatg tacatggaga tagcttagct tcattattgg agtatgaagt tagtatgaca 7140
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tagtcagtcc gctggcatat gccgtccgtt tgctgaatcc agaacgtggg tttggagatg 7260
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aacgcccgtg gaagatgctt caaacttcca cacttttgag caacgatcgg cagtagtaag 7380
gtagacgatt tcaagatcaa agcatatgaa gataaacaac atcaacaaca aaatttgttg 7440
gggttctata gagagaaaca gagctacata catacactgt tttgtatcta ccatctgaga 7500
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gcgtcacccg agccatctct tgacccagcc ggcgctgtat atttacacac gttgcagcat 7620
cgatcaccac ctgttcgatc gcgtcgccgt caccgggatc tgagtcgaaa cctagacttg 7680
tccatcttct ggattggcca acttaattaa tgtatgaaat aaaaggatgc acacatagtg 7740
acatgctaat cactataatg tgggcatcaa agttgtgtgt tatgtgtaat tactagttat 7800
ctgaataaaa gagaaagaga tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt 7860
tataattctt tgatgaacca gatgcatttc attaaccaaa tccatataca tataaatatt 7920
aatcatatat aattaatatc aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg 7980
cgaatgcgac cttcttatgt gcttctagtc tccaaatgtg gttgatagtt attttgctct 8040
aagatcaaca gtaatgaagt ataaatcatc gttgtggtgt gctactcggt taattgagca 8100
ttaacacaca caaacatgac gaggatggta taatctccaa aaatgtgtac tttgttaggt 8160
gggaccctat agccttgatt aatgtgctat gttaggcatg cctggaaacg tgtgacgcat 8220
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ctaatattta ttactagtaa gatataacat tctatctagc ttaaaaacta accataaata 8340
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aacaagacaa taatcaatat ttatgagctt aatatattta gacattatgg ttggtcgacg 8460
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<210> 79
<211> 18619
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 79
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
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caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg ccgccttcag gcgcggcgcc 2220
tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc ggcggatcgg ctgtgctgct 2280
ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgccatg gccaccgaga catgcttcct 2340
gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg cagtggccac gcttctcgtc 2400
gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc gcgggcggcg acgacgcggg cgcccgagac 2460
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cacgcggtga tcgcggccgc gcacagcctg caggacctcc accacctgaa cctgggcgcg 6300
gccggcgcgc acgacttttt ctcggcaggg cagcaggccg ccgccgctgc gatgcacggc 6360
ctgggtagca tcgacagtgc gtcgctcgag cacagcaccg gctccaactc cgtcgtctac 6420
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ctgaataaaa gagaaagaga tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt 7860
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aatcatatat aattaatatc aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg 7980
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ctaatattta ttactagtaa gatataacat tctatctagc ttaaaaacta accataaata 8340
ttccataata actagattta ccaaactaat atactaaata tacataataa atacaaaatt 8400
aacaagacaa taatcaatat ttatgagctt aatatattta gacattatgg ttggtcgacg 8460
ataatcatgc taacttttcg taattgcttg attgaaatat gcttagaata atgcctcttt 8520
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atttcaaata tttttttcaa aataaaagaa tgtagtatat agcaattgct tttctgtagt 10140
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ggaggcctcc acgcacatcc ccctccgtgc cacccgcccc aaaccctcgc gccgcctccg 16140
agacagccgc cgcaaccatg gccaccgccg ccgccgcgtc taccgcgctc actggcgcca 16200
ctaccgctgc gcccaaggcg aggcgccggg cgcacctcct ggccacccgc cgcgccctcg 16260
ccgcgcccat caggtgctca gcggcgtcac ccgccatgcc gatggctccc ccggccaccc 16320
cgctccggcc gtggggcccc accgagcccc gcaagggtgc tgacatcctc gtcgagtccc 16380
tcgagcgctg cggcgtccgc gacgtcttcg cctaccccgg cggcgcgtcc atggagatcc 16440
accaggcact cacccgctcc cccgtcatcg ccaaccacct cttccgccac gagcaagggg 16500
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cctccggccc cggcgccacc aacctagtct ccgcgctcgc cgacgcgctg ctcgattccg 16620
tccccatggt cgccatcacg ggacaggtgg cgcgacgcat gattggcacc gacgccttcc 16680
aggagacgcc catcgtcgag gtcacccgct ccatcaccaa gcacaactac ctggtcctcg 16740
acgtcgacga catcccccgc gtcgtgcagg aggctttctt cctcgcctcc tctggtcgac 16800
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gcatgctagg tatgcatggg acggtgtatg caaattatgc agtggataag gccgatctgt 17160
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cacatgtgtc catctgtgca gatgttaagc ttgctttgca gggcatgaat gctcttcttg 17340
aaggaagcac atcaaagaag agctttgact ttggctcatg gaacgatgag ttggatcagc 17400
agaagaggga attccccctt gggtataaaa catctaatga ggagatccag ccacaatatg 17460
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agctagctat gatccgaatt gagaacctcc cagtgaaggt ctttgtgcta aacaaccagc 17760
acctggggat ggtggtgcag ttggaggaca ggttctataa ggccaacaga gcgcacacat 17820
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ggttcaacat tccagcggtc cgtgtgacaa agaagaacga agtccgcgca gcgataaaga 17940
agatgctcga gactccaggg ccgtacctct tggatataat cgtcccacac caggagcatg 18000
tgttgcctat gatccctagt ggtggggctt tcaaggatat gatcctggat ggtgatggca 18060
ggactgtgta ctgactagct agtcagttaa cctagacttg tccatcttct ggattggcca 18120
acttaattaa tgtatgaaat aaaaggatgc acacatagtg acatgctaat cactataatg 18180
tgggcatcaa agttgtgtgt tatgtgtaat tactagttat ctgaataaaa gagaaagaga 18240
tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt tataattctt tgatgaacca 18300
gatgcatttc attaaccaaa tccatataca tataaatatt aatcatatat aattaatatc 18360
aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg cgaatgcggc cgcctgcaga 18420
gttaacggcg cgccgactag ctagctaagg taccgagctc gaattcattc cgattaatcg 18480
tggcctcttg ctcttcagga tgaagagcta tgtttaaacg tgcaagcgct actagacaat 18540
tcagtacatt aaaaacgtcc gcaatgtgtt attaagttgt ctaagcgtca atttgtttac 18600
accacaatat atcctgcca 18619
<210> 80
<211> 19898
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 80
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
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ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaat cgagctagtt accctatgag gtgacatgaa gcgctcacgg 360
ttactatgac ggttagcttc acgactgttg gtggcagtag cgtacgactt agctatagtt 420
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acagaatttg ccccactgtt ctaaatcacc taataatatc cccagctaaa aacaataaag 600
gtttcctaga attaagacaa gcatgactgt tcctccagga gggtttggaa cattgttgca 660
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gtcgacgccg gagttgagct tgacaacgac ggggcggccc ctgatggact tgaggaagtc 780
cgatggcgtc ttcaccgtcc cgccggcgcc cgaggcgggc ctgtcgctgc cgccgccgcc 840
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ctttgatata tatataataa ttatcattaa ttagtagtaa tataatattt caaatatttt 1680
tttcaaaata aaagaatgta gtatatagca attgcttttc tgtagtttat aacttcgtat 1740
agcatacatt atacgaagtt atacttttct aatatatgac caaaatttgt taccgaattc 1800
aggcgaccca tcgctgcttt gtctacatca tgttcttcat catcctcccc aggcgacgcg 1860
tgctgctgtt cttattcaga ctaccgttcg agtgactgca tggcgtacat ctttctgcat 1920
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tatatcacaa tatttttcta aattaaatta aaactaaaaa tgactaaatt tctaacacca 2160
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tcactctata aacaacatag tctacaatgg aaaacagtgc tttgtacgac tatatacgcg 2280
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aggctcgctg gccccacggg cgtgctgcgt gcacgaaggg cactacccca acctctcacc 2580
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tggtaccgtt aacagatcat tcgacaaagc agcattagtc cgttgatcgg tggaagacca 3960
ctcgtcagtg ttgagttgaa tgtttgatca ataaaatacg gcaatgctgt aagggttgtt 4020
ttttatgcca ttgataatac actgtactgt tcagttgttg aactctattt cttagccatg 4080
ccaagtgctt ttcttatttt gaataacatt acagcaaaaa gttgaaagac aaaaaaaaaa 4140
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aaatttctcc ccctatatct cactcacttg tcacatcagc gttctctttc cccctatatc 4260
tccacgctct acagcagttc cacctatatc aaacctctat accccaccac aacaatatta 4320
tatactttca tcttcaacta actcatgtac cttccaattt ttttctacta ataattattt 4380
acgtgcacag aaacttagca aggagagaga gagcggggtg acccaccttg ctagttggat 4440
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agctctgtag tcttgctaga tagttagttc tttagctctc ggtgaccaag cttggcgcga 4560
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<211> 2105
<212> DNA
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gagaatcaag ataatttaaa gatcaacata gtgatatatg accgtgggag ggagtatatt 1020
agagacacca tatattatat atggacaagt actagaaccc tttgcaagat ttctccaaga 1080
aagtagcatt gtatcctact ataggaaaac attgagaaat cgtcggctaa ttaaatcaag 1140
aatgaagtta cagaaagaag aaaccatact tcaatggaca tgacatgttg tatgttgagt 1200
tactctattt taccatattg tttatagatg gaggtttaaa ccgctatcca cgtactcaac 1260
aaagttccta ctaaattagt gcctaaaact caatatgagt tatagtctgg aagaaatcca 1320
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aaacaaagga aagtgaataa aagggcaaga agttgccatt ttattagcta tcacagaagt 1440
cgaaagagtt tcgattttac tgtctaaaca aacacaataa atttgtagaa acacgacata 1500
aaatattact ccacatgttc taaaataata accgttttag ctcttgtttt ttatgtctat 1560
atttagatgg atgatgataa atctagacac atatataaaa catatatatc aagtattgta 1620
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cccacgaaaa ccaaacgcct ccacgtagcc tcgccggctc ccttgcgtgt ctccgctttt 2100
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<210> 84
<211> 18287
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 84
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catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
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aacaaacatg cttttaaatt atcttcatat gcttggatga tggcatacac agcggctatg 12900
tgtggttttt taaataccca gcatcatggg catgcatgac actgctttaa tatgcttttt 12960
atttgcttga gactgtttct tttgtttata ctgacccttt agttcggtga ctcttctgca 13020
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ttctttagct tgtatattgc tgatggtggc ttggctacgg ctgaaaaagt tgctgctgcg 14280
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gccgcgtcta ccgcgctcac tggcgccact accgctgcgc ccaaggcgag gcgccgggcg 15900
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aagggtgctg acatcctcgt cgagtccctc gagcgctgcg gcgtccgcga cgtcttcgcc 16080
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gtgacaggga agattgaggc ttttgcaagc agggctaaga ttgtgcacgt tgatattgat 16920
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aaggatatga tcctggatgg tgatggcagg actgtgtact gactagctag tcagttaacc 17760
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ctagttatct gaataaaaga gaaagagatc atccatattt cttatcctaa atgaatgtca 17940
cgtgtcttta taattctttg atgaaccaga tgcatttcat taaccaaatc catatacata 18000
taaatattaa tcatatataa ttaatatcaa ttgggttagc aaaacaaatc tagtctaggt 18060
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ccgagctcga attcattccg attaatcgtg gcctcttgct cttcaggatg aagagctatg 18180
tttaaacgtg caagcgctac tagacaattc agtacattaa aaacgtccgc aatgtgttat 18240
taagttgtct aagcgtcaat ttgtttacac cacaatatat cctgcca 18287
<210> 85
<211> 18543
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 85
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
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gaggatatcg ctatcaactt tgtatagaaa agttgggccg agctcggtac ggccagaatg 540
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gtctcgtgtg aatagagtca ctaatgcctt aagcatcggt tactccgtag ggtacattct 780
gttcttctta tttgtgcata tttttattgt tgtttactga ttatacgagt agttatacat 840
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gcggccgacg ccaccaccag ccaactcggc gtcctctcgc tgtcgtcgcc gccgccttca 2100
ggcgcggcgc ctccctcgcc caccctcggc ttctacgccg ccggcaatgg cggcggatcg 2160
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atccagcagc aacaccagct gcaggagcag tacagctttt acagcaacag caacagcacc 2520
cagctggccg gcaccggcaa ccaagacgta tcggcaacag cagcagcagc cgccgccctg 2580
gagctgagcc tcagctcatg gtgctcccct taccctgctg cagggagtat gtgagagcaa 2640
cgcgagctgc cactgctctt cactggtacc gttaacagat cattcgacaa agcagcatta 2700
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cggttatcaa atctctacac tatagctctg tagtcttgct agatagttag ttctttagct 3300
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agagagagtg gttctcatgc aacggcggac ggcccggtgc taaaagagct tcaagacaaa 3660
ataatgaaac aggaagagag tagatttatc taagagccaa ctttattata tgaatgtgtt 3720
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aggatgtacg tgttaattgc gcgataagca ctcagatcca accgcaaact acctccacac 3960
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tcctcaagga acccatggcc actgtgaaca actggctcgc tttctccctc tccccgcagg 4560
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tctccggcga tgtctgcttc aacatccccc aagattggag catgagggga tcagagcttt 4680
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aatacaaaat taacaagaca ataatcaata tttatgagct taatatattt agacattatg 8340
gttggtcgac gataatcatg ctaacttttc gtaattgctt gattgaaata tgcttagaat 8400
aatgcctctt tgttctacat ggcaaatagg gaccattatg gtgtaacacc ctgggaacca 8460
caaacacccc gaaatgctac taaactacac aactaacctt catatataaa atttcgacag 8520
catctccttt gaaaatttgc atagacgtgg aagcaacaga gtataaacag atatcatgat 8580
aagaaaacat actagacatt aataatctgc tagaaatggg aagaatccta acttgacgac 8640
tgcgtaactg actagagtca cacttagctg accctagtca cttacaactg acttcgtgtc 8700
ctagatcgat gggccctggc cgaagcttgg tcacccggtc cgggcctaga aggccagctt 8760
caagtttgta caaaaaagca ggctccggcc agaatccggt aagtgactag ggtcacgtga 8820
ccctagtcac ttaaattcgg ccagaatggc ccggaccggg ttaccgaatt cctaactaac 8880
tagctggtaa ttattggctg taggattcta aacagagcct aaatagctgg aatagctcta 8940
gccctcaatc caaactaatg atatctatac ttatgcaact ctaaattttt attctaaaag 9000
taatatttca tttttgtcaa cgagattctc tactctattc cacaatcttt tgaagctata 9060
tttaccttaa atctgtactc tataccaata atcatatatt ctattattta tttttatctc 9120
tctcctaagg agcatccctc tatgtctgca tggcccccgc ctcgggtccc aatctcttgc 9180
tctgctagta gcacagaaga aaacactaga aatgacttgc ttgacttaga gtatcagata 9240
aacatcatgt ttacttaact ttaatttgta tcggtttcta ctatttttat aatatttttg 9300
tctctataga tactacgtgc aacagtataa tcaacctagt ttaatccaga gcgaaggatt 9360
ttttactaag tacgtgactc catatgcaca gcgttccttt tatggttcct cactgggcac 9420
agcataaacg aaccctgtcc aatgttttca gcgcgaacaa acagaaattc catcagcgaa 9480
caaacaacat acatgcgaga tgaaaataaa taataaaaaa agctccgtct cgataggccg 9540
gcacgaatcg agagcctcca tagccagttt tttccatcgg aacggcggtt cgcgcaccta 9600
attatatgca ccacacgcct ataaagccaa ccaacccgtc ggaggggcgc aagccagaca 9660
gaagacagcc cgtcagcccc tctcgttttt catccgcctt cgcctccaac cgcgtgcgct 9720
ccacgcctcc tccaggaaag cgagaggtac ggcgatcgat catcccccct ccttctctct 9780
accttctttt ctctagacta catcggatgg cgatccttgg ttagggcctg ctagtttccc 9840
ttcctgtttt gtcgatggct gcgaggcaca atagatctga tggcgttatg acggctaact 9900
tgtcatgttg ttgcgattta tagtcccttt aggagatcag tttaatttct cggatggttc 9960
gagatcggtg gtccttggtt agtaccctaa gatccgcgct gttagggttc gtagatggag 10020
gcgacctgtt ctgattctta acttgtcagt acctgggaaa tcctgggatg gttctagctc 10080
gtccgcagat gagatcgatt tcatgatcct ctgtatcttg tttcgttgcc taggttccgt 10140
ctaatctatc cgtggtatga tgtagatgtt ttgatcgtgc taactacgtc ttgtaaagtt 10200
aattgtcagg tcataatttt tagcatgcct ttttttttgt ttggttttgt ctaattgggc 10260
tgtcgttcta gatcagagta gaagactgtt ccaaactacc tgctggattt attgaacttg 10320
gatctgtatg tgtgtcacat atcttcataa attcatgatt aagatggatt gaaatatctt 10380
ttatcttttt ggtatggata gttctatatg ttggtgtggc tttgttagat gtatacatgc 10440
ttagatacat gaagcaacgt gctgctactg tttagtaatt gctgttcatt tgtctaataa 10500
acagataagg atatgtattt atgttgctgt tggttttgct ggtactttgt tggatacaaa 10560
tgcttcaata cagaaaacag catgctgcta cgatttacca tttatctaat cttatcatat 10620
gtctaatcta ataaacaaac atgcttttaa attatcttca tatgcttgga tgatggcata 10680
cacagcggct atgtgtggtt ttttaaatac ccagcatcat gggcatgcat gacactgctt 10740
taatatgctt tttatttgct tgagactgtt tcttttgttt atactgaccc tttagttcgg 10800
tgactcttct gcaggtccac tttaacttag ccttggagcc atgaaagcgc tcaccgcccg 10860
ccaacaggag gtcttcgacc tgatcaggga tcacatctcc cagacaggca tgccaccaac 10920
aagggcggaa atcgcacaga ggctcgggtt tcgctcgcca aacgctgccg aggagcacct 10980
taaggcgctc gcgcgcaaag gcgttatcga gattgtgagc ggagccagcc gcggaatcag 11040
gctcttacag gaggaggaag agggacttcc acttgtgggc agagtggccg ctgacgaacc 11100
actccttgcc cagcagcaca tcgaaggaca ctaccaggtc gacccatccc tgttcaagcc 11160
aaacgccgat ttcctcctcc gcgtgtccgg gatggcgatg aaagacatcg gcatcatgga 11220
cggcgacctg ctggccgtcc ataaaactca ggacgtgcgc aacggccagg tggtggtggc 11280
ccgcatcgac gatgaggtca cggtgaaacg cctcaagaag cagggcaata aagtggagct 11340
cctccccgaa aatagcgagt tcaaaccaat cgtggtcgac cttcggcaac agtctttcac 11400
gattgagggc ctggcggtgg gcgttatcag gaacggcgat tggcttggag gatccagctc 11460
ccaacagcaa caacagcagc aacagcagca gcagcagcag caacagcaac agcaacagca 11520
gcagcagcag cagcagcaac agcagcaaca agtgtgggcg cccaaggccg tgcggtgcac 11580
gggcggactc ttcttcttcc accgggacac gacgccggcg cacgcgggcg agacggcgac 11640
gccaatggcc ggaggaggat taggaggaga agcagggtcg tcggaagatt gcagctcagc 11700
ggcgtcggta tcgcctctcg tcggaagcca ggacgagccg tgcttctccg gcgacggtga 11760
ctgcgactgg atggacgacg tgagggccct ggcgtcgttt ctggagtccg acgaggactg 11820
gctccgctgt cagacggccg ggcagcttgc gtagctcgag gtttttctca gacagttttc 11880
taaaaaaagg gcgtttctgg ggaagttcga gatggttcgt aaggtgttac tggctcctgt 11940
gaaccaatac atgatactgc catgataagg gttataatta gtcaagcaga gtaagaagaa 12000
acaacagtag cagtgactcc gattcctgaa gatgagtcat atttgtcttg tgctcctgct 12060
gtatgaaatg gatcgcatgt gtatattcgt cgccgcgccg cactggtgta acctgttgcc 12120
tcagagtttg cttttagctg gttctgtttt aaaaataagt actgtttttt ggttggctgc 12180
aagccattct gaacttcagt ttaccaattg tttttatgtt gtggttgaat attttaattt 12240
tttatttaat gtttggttct ttttttatat atatttgcaa aaatgataca agtggtcaag 12300
ttttcatata gtatgggctc tatttcctag agctctacct ctaggaacga attttgtgga 12360
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ctctgtcaaa cagttttttt tactgaaaag tgattaaaga gtagtttctc ctagatcact 12480
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caattccaac attctcgcgt gagtttcttc gcgccgttgt tttgcggtga cttcatctgg 12660
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ataattgtta aagatgaaag agatgtggac cttaatgagc gattcgactt tgatggtgaa 12780
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aaaaagatcc gagacaaaga aatacatttt caattgaaag aagacctaat caagcactta 12900
tggtgtacac ccgggaagct tggcgcgccg gtcacccggt ccgggcctag aaggccagct 12960
tcggccgccc cgggcaccca gctttcttgt acaaagtggc atcggccaga atggcccgga 13020
ccgggttacc gcggccgcga attctgtaca accggtctaa ctaactagca attcgccctt 13080
gatactgtat atactcacag tatcatatga tactgtatat actcacagta tcatatgata 13140
ctgtatatac tcacagtata agggcgaatt ggcccttgat actgtatata ctcacagtat 13200
catatgatac tgtatatact cacagtatca tatgatactg tatatactca cagtataagg 13260
gcgaattgct gcagcccggg acaatcccac tatccttcgc aagacccttc ctctatataa 13320
ggaagttcat ttcatttgga gaggactatt tttacaacaa ttaccaacaa caacaaacaa 13380
caaacaacat tacaattact atttacaatt acaccatggc ctcctccgag gacgtcatca 13440
aggagttcat gcgcttcaag gtgcgcatgg agggctccgt gaacggccac gagttcgaga 13500
tcgagggcga gggcgagggc cgcccctacg agggcaccca gaccgccaag ctgaaggtga 13560
ccaagggcgg ccccctgccc ttcgcctggg acatcctgtc cccccagttc cagtacggct 13620
ccaaggtgta cgtgaagcac cccgccgaca tccccgacta caagaagctg tccttccccg 13680
agggcttcaa gtgggagcgc gtgatgaact tcgaggacgg cggcgtggtg accgtgaccc 13740
aggactcctc cctgcaggac ggctccttca tctacaaggt gaagttcatc ggcgtgaact 13800
tcccctccga cggccccgta atgcagaaga agactatggg ctgggaggcc tccaccgagc 13860
gcctgtaccc ccgcgacggc gtgctgaagg gcgagatcca caaggccctg aagctgaagg 13920
acggcggcca ctacctggtg gagttcaagt ccatctacat ggccaagaag cccgtgcagc 13980
tgcccggcta ctactacgtg gactccaagc tggacatcac ctcccacaac gaggactaca 14040
ccatcgtgga gcagtacgag cgcgccgagg gccgccacca cctgttcctg taggtcaact 14100
acccacggta ccagctgctg ctgttctagg gttcacaagt ctgcctattt gtcttcccca 14160
atggagctat ggttgtctgg tctggtcctt ggtcgtgtcc cgtttcattg tgtactattt 14220
acctgtaatg tgtatcctta agtctggttt gatggtgtct gaaacgtttt gctgtggtag 14280
agcagcatgg aagaactata atgaataagt gatccctaat cattgtgtcc aaattttgct 14340
tctgctatac ccttttgtgc tgtttcttat gttttgctta aaaatttgat ctgacaaaca 14400
aatttgtcta aattatgctc ttgttctgac tgtgtactgt acacatttgt attgctaccg 14460
gtttggcaca tagttttctc tttgattgca gatcaaaccc ttctgattgc agattgcttg 14520
gctatggctg atgtgctcac tgttcttctt tagcttgtat attgctgatg gtggcttggc 14580
tacggctgaa aaagttgctg ctgcgccgac ttggcaactg ttgctccagt aatgctttgt 14640
cctctcttcc tagccgccga cttggcactt ggcagctgtt gctcctgtaa tgcgttgtta 14700
tctcttatct cttgagatgt actatgattt tgaggctgtt tgacttgtgc cagattgcca 14760
gtgctgatgc tatattatct caggttttta tgctagtata tgttttactg tgtgctgcct 14820
gtgtcgagtt acgtaatcta ttgaaccgct atgcgtgttg atgccctgtt gttgcttgcc 14880
agattgatgc ccctgttgct tgcagcttgc aagctgtagt gaaatcctaa aattccaaac 14940
caaatctatt ctgaactttt gaagatctgt gatgtccgga agaaaagatt caaacagata 15000
aacgggactc tccagaatct ataaaataaa tgatcgacaa acgctttgct ttggtaggct 15060
tcaagcttgg tcacccggtc cgggcctaga aggccagctt cggccgcccc gggcaacttt 15120
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cctttatctt tataaggaac aataaacaga atttgcccca ctgttctaaa tcacctaata 15300
atatccccag ctaaaaacaa taaaggtttc ctagaattaa gacaagcatg actgttcctc 15360
caggagggtt tggaacattg ttgcagtctt gcagatacgg gcgaagggtg agaaacagag 15420
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gtaccgtctg tagatgacaa caacccgtcg tccacagtca tgtccaaaat atcctttctt 15780
cttttttttc gattcggata tctatcttcc tttttttttt ccaaaaatct tcttgacgca 15840
ccagcgcgca cgtttgtggt aaacgccgac acgtcggtcc cacgtcgata gaccccaccc 15900
accagtgagt agcgtgtacg tattcggggg tgacggacgt gtcgccgtcg tcttgctagt 15960
cccattccca tctgagccac acatctctga acaaaaaaaa ggagggaggc ctccacgcac 16020
atccccctcc gtgccacccg ccccaaaccc tcgcgccgcc tccgagacag ccgccgcaac 16080
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ggcgaggcgc cgggcgcacc tcctggccac ccgccgcgcc ctcgccgcgc ccatcaggtg 16200
ctcagcggcg tcacccgcca tgccgatggc tcccccggcc accccgctcc ggccgtgggg 16260
ccccaccgag ccccgcaagg gtgctgacat cctcgtcgag tccctcgagc gctgcggcgt 16320
ccgcgacgtc ttcgcctacc ccggcggcgc gtccatggag atccaccagg cactcacccg 16380
ctcccccgtc atcgccaacc acctcttccg ccacgagcaa ggggaggcct ttgccgcctc 16440
cggctacgcg cgctcctcgg gccgcgtcgg cgtctgcatc gccacctccg gccccggcgc 16500
caccaaccta gtctccgcgc tcgccgacgc gctgctcgat tccgtcccca tggtcgccat 16560
cacgggacag gtggcgcgac gcatgattgg caccgacgcc ttccaggaga cgcccatcgt 16620
cgaggtcacc cgctccatca ccaagcacaa ctacctggtc ctcgacgtcg acgacatccc 16680
ccgcgtcgtg caggaggctt tcttcctcgc ctcctctggt cgaccagggc cggtgcttgt 16740
cgacatcccc aaggacatcc agcagcagat ggcggtgcct gtctgggaca agcccatgag 16800
tctgcctggg tacattgcgc gccttcccaa gccccctgcg actgagttgc ttgagcaggt 16860
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tgggacggtg tatgcaaatt atgcagtgga taaggccgat ctgttgcttg cacttggtgt 17100
gcggtttgat gatcgcgtga cagggaagat tgaggctttt gcaagcaggg ctaagattgt 17160
gcacgttgat attgatccgg ctgagattgg caagaacaag cagccacatg tgtccatctg 17220
tgcagatgtt aagcttgctt tgcagggcat gaatgctctt cttgaaggaa gcacatcaaa 17280
gaagagcttt gactttggct catggaacga tgagttggat cagcagaaga gggaattccc 17340
ccttgggtat aaaacatcta atgaggagat ccagccacaa tatgctattc aggttcttga 17400
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ggcacagtac tacacttaca agcggccaag gcagtggttg tcttcagctg gtcttggggc 17520
tatgggattt ggtttgccgg ctgctgctgg tgcttctgtg gcaaacccag gtgtcactgt 17580
tgttgacatc gatggagatg gtagctttct catgaacgtt caggagctag ctatgatccg 17640
aattgagaac ctcccagtga aggtctttgt gctaaacaac cagcacctgg ggatggtggt 17700
gcagttggag gacaggttct ataaggccaa cagagcgcac acatacttgg gaaacccaga 17760
gaatgaaagt gagatatatc cagatttcgt gacgatcgcc aaagggttca acattccagc 17820
ggtccgtgtg acaaagaaga acgaagtccg cgcagcgata aagaagatgc tcgagactcc 17880
agggccgtac ctcttggata taatcgtccc acaccaggag catgtgttgc ctatgatccc 17940
tagtggtggg gctttcaagg atatgatcct ggatggtgat ggcaggactg tgtactgact 18000
agctagtcag ttaacctaga cttgtccatc ttctggattg gccaacttaa ttaatgtatg 18060
aaataaaagg atgcacacat agtgacatgc taatcactat aatgtgggca tcaaagttgt 18120
gtgttatgtg taattactag ttatctgaat aaaagagaaa gagatcatcc atatttctta 18180
tcctaaatga atgtcacgtg tctttataat tctttgatga accagatgca tttcattaac 18240
caaatccata tacatataaa tattaatcat atataattaa tatcaattgg gttagcaaaa 18300
caaatctagt ctaggtgtgt tttgcgaatg cggccgcctg cagagttaac ggcgcgccga 18360
ctagctagct aaggtaccga gctcgaattc attccgatta atcgtggcct cttgctcttc 18420
aggatgaaga gctatgttta aacgtgcaag cgctactaga caattcagta cattaaaaac 18480
gtccgcaatg tgttattaag ttgtctaagc gtcaatttgt ttacaccaca atatatcctg 18540
cca 18543
<210> 86
<211> 2222
<212> DNA
<213> 玉蜀黍(Zea mays)
<400> 86
cctcttcctg taccgcggcg gggtgcacgt gcgtgccgac aacgacgacg acccggcgtg 60
tgtgatccgc cgcgcgctcg gcgaggcgct ggtgccgttc tacccgctcg cggggcggct 120
gcgggaggtg gagggccgga agctggtcgt cgactgcacc ggcgaggggg tgctgttcgt 180
ggaggccgac gctgacgtgc ggctggacga actggaggcg accgggctga ggccgccgtt 240
cccgtgcatg gaccagctgc tgttcgacgt ggacggctcc agcggcgtgc tccactgccc 300
cctgctgctc atccaggtac cccaccagtt ttgccgcaaa caaaaaaaaa aaagctttca 360
gacaatcagt ggtgtgcgat atgatatgat acgatggtct cgtcgatcac caggtgaccc 420
ggctgctctg cggcggcttc gtcctcgcgc tccgcctcaa ccacaccatc tgcgacgcca 480
tcggcctcgc ccagttcatg tccgccgtgg ccgagctcgc ccgcggcctc cccgcgccga 540
ccgtggcgcc cgcatggtcc cgcgagctcc tcgaagcgcg caacccaccg aagccggcgt 600
tccctcaccg cgagttcgac gtggcgccac ctccgccacc cccaccgccg ggcgacatgg 660
tgacgcggac cttcaccttc agcccagccg acgtcgccgc gatcaagcgc gccctcccgc 720
tggctctccg cgaggcggcc acgaccttcg aggcgctgac ggcggccctc tggcgcgcgc 780
gcacggcggc gctggcgccc cctcacgacg cggaggcgcg gctggtgtcc attgtcagct 840
ttcgtggcct tcccgagctg gcgctccccg cgggttacta cggcaacgcg tgcgtgcccg 900
tggccgcgct caccaccgcg ggggcactgc tggcggggtc gctgggcgac gcggtggcgc 960
tggtgcgggg gaccaaggcg gcggtcaccg ccgagtacgt gcggtccacg ctggacctgc 1020
tggtgctgcg ggggcggccg tgcgtggcgc tcgcgaacct gttcctcgtg tccgacaacc 1080
ggcgcgcgga gttccaccgg ctggacttgg ggtggggcgt gccggcgtac gggggtcctg 1140
ccgtggcgct cttcgggttg agcttcttcg tccaggcagg gaacggtgac gacgtcgccg 1200
tgttgatggc gctgccgcgg ccggctatgg accacttcgc gtcggaagtg gagacgttgt 1260
tgaaggctta gttgggtgtt cttgaatctt gacgagcgag cgagagagcg gcagagcgcc 1320
gcctgttctt gctaatgcta actgtcttcg ctcaaatttg tcgtctattc gtcgccaacg 1380
actctctccg atcgttcagt cagattcgct tggccatgtc aggtctggtc tagatggacc 1440
atgccggctt gggcccaatc ttgacaacgc cgtgtttggt ttggaccgaa ataacaggcc 1500
tctgagccat cgccattcac tgggaactta aaatggtgca gggttgttgt tattgtccac 1560
gctaatccaa gtgtgttgtg cttccgaata cagctatcaa gagagtaaaa ttttaagatg 1620
aaaacccaca gagataaaag ttctccacta tgtatgtatg ttgttttaaa ctgtagtcat 1680
agaagaagtc accgtgctca ctgataggag ggtctaaaag tagatgcatt aatcaaaaac 1740
aaaacataca tcattgaact ttaaaagcat ataaccttca atactaaata aaaagattag 1800
tattgtttaa atattagata ctactgataa aaaagataaa caccattagc tatattacca 1860
ccctctccaa ctgttttctg aactaattgt aaatgggccc atagtgtagt cgtcaagcat 1920
ggaggcccgc tcgaccgacc tcctcgatcg ctcaaatttg gaaacagcgg ttgctactga 1980
ccggggtgag tgctgcgttg ttggcgactg ccctgttttt taatggattc agtgagagct 2040
aaaaagtgcg agactgcgag agaaatccag caggtgtacg tacgtaaagc gagagtcgac 2100
gcgtgggcgc ggcagacgcg agcctcccgc cacgttggcc tcgttcccgc gccacgcggc 2160
cacgcctgcc tgcctcctca ccttgtttat atgcctcgcg cctccctcac cgtgccaatg 2220
cc 2222
<210> 87
<211> 2101
<212> DNA
<213> 稻(Oryza sativa)
<400> 87
ttttttaagg acagggggag tatgaagtag tcacatgaat gcccaaggaa ttaggaattt 60
ttcccgtgct acagatttta agtgagaaac acatgaattt ttccattcac tctgaactta 120
tttttctatt catttgcgta ggatccagac aaacatgcag ctaatccaaa caccttcata 180
tgtttttcaa ttatctgttt tgcatttata ttcttatcat atttctatgt ttttttatgt 240
ttctgtattt tttttttcaa tgatgcgttc cgaataagcc ctctgcaagc agcaggtaac 300
aatgggttgc aacagtcact gtcatagctg aagcctcggc gagcgacatg ttcggaacgg 360
agcagaatga atagtgtgct acctaatgat tacattattc gagtagcacc ttaagatctt 420
aaatttaacc gatttggcta tatctcactc gaaagatttt tttcttatct cactcgattt 480
tctcactcaa atttacaggg tattttcttg taaattacag tgtaacttat gaaacttaca 540
ttgtaatttt tgtaagttgc agtgtaattt tttaatcttt gcatgtaagt tttaaaattt 600
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ctagcaagga gaggatggca cggaggaagg cccgcccgcc gccgtcgtcg ccgcctccgc 1020
tcgggcctcc ctggcgccca tcgctatcgc ctctgctcga tcctcctctg gcaccaccgc 1080
cgctcgagtc gggtggccgc cgccgtttgg gatgccccgt cgcccggcgt cgtcgcctct 1140
gctcgagccg agcggcctcc gcccatgagg cgcgcggcga ggctaggtgt gcgcggcgtg 1200
ttggcctcgg agggtggcgc ggacggcctg ggccgcgcga gagcgccaga ggccggctcg 1260
atctggacgc cgatctggat gtcgccgcgg aggaggttgg cgtcgaggtc gaggctgttg 1320
cgtggcgcct ggaggcctcc gtcgtttgtg ccgccccgtc gcccgacgcc gtcacctccg 1380
ctcgacctgc ctctagcgcc gccgccgctc tagccgggtg gccgccgccg tttggcctcc 1440
ccgttgcccg gcgccatcgc ccatcaccgc ctgtgggaga cgtaggggaa gaagggggga 1500
gagagagaag ggagaaaggg aggaggaaga aggaaggagg atgacatgtg gggtccacat 1560
gtcagtggga cccacaattt tttttatgtg tgtgaatgac aaacgggtcc cacaattgta 1620
atgccatgta agtgccacgt caacgccacg tggatcgaag actcggtcaa tattgccacg 1680
taggcgccac gtaagcaaaa ccgcctccca aaaccgcgca gggagtcaaa ttgcaccggt 1740
tttagaagtt tgggggtcga gatatctggt tttgtggttt agggtcatgg attagatttc 1800
gaccacagtt gagggtcatg aagtgaactt attcccgcgc gatcaaacgt gttaaggatc 1860
cacgttgcgg cccataaagg cccagatgtc tctactattt cttcttctag tgagctccat 1920
cgaagctttt aggcgaggcc taccgctgtg gctaagcggc ggcgtgtgcc agcccaaccc 1980
ccgacgacga cgacgcgtgg cgacggccgc cgcgacaccc gccgccacgt cgccccgcca 2040
cgcgccgccc cccggcgagc tcctcctcct cttttataat cccagcctcg tctcccccgc 2100
g 2101
<210> 88
<211> 2137
<212> DNA
<213> 双色高粱(Sorghum bicolor)
<400> 88
cggaattcat accttgttta gttcgcaaaa atttccaaga ttcaccgtca catcaaatct 60
ttagtcgcat gtatagagta ttaaaaatag acgaaaacaa aaactaactg tatagtttac 120
ttgtaatttg tgagatgaat cttttaagtc tagttactct gtgattggat aatatttgtc 180
aaataaaaac gaaatgctag agtatctaaa aacaaaaaaa atttacgaac caaattgcaa 240
gatctcgcag tcgcccgggt ctccgccgcc gccatcatag tcgctgcctg ctctttgata 300
gcgacgtccc ggctgcccgc aacccgcagg cgctcgtcca cgaagcagga gccatgacgc 360
caccccacca ctggtctgct tcctgcaccc gcacgccagg cgctgagggt atccgccgcc 420
gcacgctacg cgctcgatcc ttcgccggtt ccatcggatc ttcgtcgggt acccggccag 480
caggtatgtc caccccttct cttcccttta cttctgaaat atgtatttag catataagga 540
tgattttgtg tagaccccat tcagatgaaa tatgtattta gcacagtcaa aaatttagca 600
gatgcctctt gtttagcttt tgagtgtgat ctaacagttg catttggagc ataatgcttt 660
ttaacaaatt ttaactgaat agctaacgtc aaaatggagc aatgcagcca catagggtca 720
ttattcttac aaggaaggac ctggattcag cattcaaact tcaaagtagg catatttaac 780
acaaaaaatg atttctgatt tctgaatcgt cttcatggat gcagacttga gtacttgata 840
tttgttggca tataaatgat aaaactagat ttacagaaaa taacatatag ttcatcaaat 900
tatttcagtt gacgggcctt tcatagtata ttcattagta tactaccact gattgctgac 960
agggtgcaag ccttctttgt gctttgatct gctttgctct taatgttcat aggccttgtg 1020
tgctcctcat ccaccccacc gtggcggcat ttggataggc agatcgaaag ggatcaggat 1080
atgtgcccag taagaattat cgtggagtgc acagagctat atgtatggtt gtttacaagt 1140
ggccaaatag gcttgctcaa cttgggatta acttatttat ctttctaaaa tgaaggtagc 1200
attccagttt atggccacca gggattgact tatttatcct cttgaaatat attccctcca 1260
tctcaaattg taagttattt caaaaatctt ggagagttaa acttttctaa gtttgaccca 1320
atttatatga taaaataatt attattatga tacaaactaa gtatcattaa attctttttt 1380
aattatattt ttatagtata ctcactttac gttacaattc ttagtatttc tctctataat 1440
tttggtcaaa tgtaaaaata ctttaactct ccaagattct tggaatgact tacaatttag 1500
gatggaggga gtaggtagca ttccagtttg tggctatcat gcaagtacac atgcaatggt 1560
ttccagttca gccatctaat tgctttaaaa cttagtgctg atcatagatg cagcaaaatg 1620
gttcctattt agagctcata tactatattt gtttcatgaa cttaattatg attgcaggac 1680
tactacaaag ttctagaggt tgactatgac gcatcttaca ataccatcaa atcaagttat 1740
cgaaaattac ctttggtaag atgttgtaca acctccactc gtcaaactag aagataatta 1800
tgtgcacacc tgacgatgtt ctatcttttc tgaattgtat ggcattaagc ggttgacaca 1860
gttgtaagta tctaattatc cccaagtgca ctacccatct ctattaaaac tgtcaattca 1920
gaatttcaga cagtgatgct actagcgagg tcgagtgggt gtaataagcg gcggccggcg 1980
tgcgttggtt ggttctccga gcggccggac tggacgcgtg ggcgaggcag atgccagcct 2040
cccgccacgt ccgccgccac gcgcccacgc ctgcctgcct ctccctcttg tttatatgcc 2100
ctcctcccct ccaccccctc gtctccctca ccgtgcc 2137
<210> 89
<211> 17326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 89
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcctagt tagttagggg cagctaacgt cccctagcta actagttgct 120
attaaccttt agcctagttt agtgcggtcg cgctagtgaa ctagtctaat gggtgcctag 180
cttagattag atccccgttc ggcttagact aggttagtcg gatagggcta gtctagtggc 240
ttagcttgga actgttaagc taggctgtta gtgcgggact tctaggctaa cctattgacc 300
cctaacgcct agaacctaag aaacgctaag gacacctagc taactttggc gacgtccaga 360
ggtccgattc cggctaacta actagcttaa gcttgatatc atgataagaa aacatactag 420
acattaataa tctgctagaa atgggaagaa tcacgcgtaa gcttgcatgc ctgcagtgca 480
gcgtgacccg gtcgtgcccc tctctagaga taatgagcat tgcatgtcta agttataaaa 540
aattaccaca tatttttttt gtcacacttg tttgaagtgc agtttatcta tctttataca 600
tatatttaaa ctttactcta cgaataatat aatctatagt actacaataa tatcagtgtt 660
ttagagaatc atataaatga acagttagac atggtctaaa ggacaattga gtattttgac 720
aacaggactc tacagtttta tctttttagt gtgcatgtgt tctccttttt ttttgcaaat 780
agcttcacct atataatact tcatccattt tattagtaca tccatttagg gtttagggtt 840
aatggttttt atagactaat ttttttagta catctatttt attctatttt agcctctaaa 900
ttaagaaaac taaaactcta ttttagtttt tttatttaat aatttagata taaaatagaa 960
taaaataaag tgactaaaaa ttaaacaaat accctttaag aaattaaaaa aactaaggaa 1020
acatttttct tgtttcgagt agataatgcc agcctgttaa acgccgtcga cgagtctaac 1080
ggacaccaac cagcgaacca gcagcgtcgc gtcgggccaa gcgaagcaga cggcacggca 1140
tctctgtcgc tgcctctgga cccctctcga gagttccgct ccaccgttgg acttgctccg 1200
ctgtcggcat ccagaaattg cgtggcggag cggcagacgt gagccggcac ggcaggcggc 1260
ctcctcctcc tctcacggca ccggcagcta cgggggattc ctttcccacc gctccttcgc 1320
tttcccttcc tcgcccgccg taataaatag acaccccctc cacaccctct ttccccaacc 1380
tcgtgttgtt cggagcgcac acacacacaa ccagatctcc cccaaatcca cccgtcggca 1440
cctccgcttc aaggtacgcc gctcgtcctc cccccccccc ctctctacct tctctagatc 1500
ggcgttccgg tccatgcatg gttagggccc ggtagttcta cttctgttca tgtttgtgtt 1560
agatccgtgt ttgtgttaga tccgtgctgc tagcgttcgt acacggatgc gacctgtacg 1620
tcagacacgt tctgattgct aacttgccag tgtttctctt tggggaatcc tgggatggct 1680
ctagccgttc cgcagacggg atcgatttca tgattttttt tgtttcgttg catagggttt 1740
ggtttgccct tttcctttat ttcaatatat gccgtgcact tgtttgtcgg gtcatctttt 1800
catgcttttt tttgtcttgg ttgtgatgat gtggtctggt tgggcggtcg ttctagatcg 1860
gagtagaatt ctgtttcaaa ctacctggtg gatttattaa ttttggatct gtatgtgtgt 1920
gccatacata ttcatagtta cgaattgaag atgatggatg gaaatatcga tctaggatag 1980
gtatacatgt tgatgcgggt tttactgatg catatacaga gatgcttttt gttcgcttgg 2040
ttgtgatgat gtggtgtggt tgggcggtcg ttcattcgtt ctagatcgga gtagaatact 2100
gtttcaaact acctggtgta tttattaatt ttggaactgt atgtgtgtgt catacatctt 2160
catagttacg agtttaagat ggatggaaat atcgatctag gataggtata catgttgatg 2220
tgggttttac tgatgcatat acatgatggc atatgcagca tctattcata tgctctaacc 2280
ttgagtacct atctattata ataaacaagt atgttttata attattttga tcttgatata 2340
cttggatgat ggcatatgca gcagctatat gtggattttt ttagccctgc cttcatacgc 2400
tatttatttg cttggtactg tttcttttgt cgatgctcac cctgttgttt ggtgttactt 2460
ctgcaggtcg actttaactt agcctaggat ccaacaatgc cccagttcga catcctctgc 2520
aagacccccc ccaaggtgct cgtgaggcag ttcgtggaga ggttcgagag gccctccggc 2580
gagaagatcg ccctctgcgc cgccgagctc acctacctct gctggatgat cacccacaac 2640
ggcaccgcca ttaagagggc caccttcatg tcatacaaca ccatcatctc caactccctc 2700
tccttcgaca tcgtgaacaa gtccctccag ttcaaataca agacccagaa ggccaccatc 2760
ctcgaggcct ccctcaagaa gctcatcccc gcctgggagt tcaccatcat cccctactac 2820
ggccagaagc accagtccga catcaccgac atcgtgtcat ccctccagct tcagttcgag 2880
tcctccgagg aggctgacaa gggcaactcc cactccaaga agatgctgaa ggccctcctc 2940
tccgagggcg agtccatctg ggagatcacc gagaagatcc tcaactcctt cgagtacacc 3000
tccaggttca ctaagaccaa gaccctctac cagttcctct tcctcgccac cttcatcaac 3060
tgcggcaggt tctcagacat caagaacgtg gaccccaagt ccttcaagct cgtgcagaac 3120
aagtacctag gtttgtttct gcttctacct ttgatatata tataataatt atcattaatt 3180
agtagtaata taatatttca aatatttttt tcaaaataaa agaatgtagt atatagcaat 3240
tgcttttctg tagtttataa gtgtgtatat tttaatttat aacttttcta atatatgacc 3300
aaaacatggt gatgcctagg tgtcatcatc cagtgcctcg tgaccgagac caagacctcc 3360
gtgtccaggc acatctactt cttctccgct cgcggcagga tcgaccccct cgtgtacctc 3420
gacgagttcc tcaggaactc agagcccgtg ctcaagaggg tgaacaggac cggcaactcc 3480
tcctccaaca agcaggagta ccagctcctc aaggacaacc tcgtgaggtc ctacaacaag 3540
gccctcaaga agaacgcccc ctactccatc ttcgccatca agaacggccc caagtcccac 3600
atcggtaggc acctcatgac ctccttcctc tcaatgaagg gcctcaccga gctcaccaac 3660
gtggtgggca actggtccga caagagggcc tccgccgtgg ccaggaccac ctacacccac 3720
cagatcaccg ccatccccga ccactacttc gccctcgtgt caaggtacta cgcctacgac 3780
cccatctcca aggagatgat cgccctcaag gacgagacta accccatcga ggagtggcag 3840
cacatcgagc agctcaaggg ctccgccgag ggctccatca ggtaccccgc ctggaacggc 3900
atcatctccc aggaggtgct cgactacctc tcctcctaca tcaacaggag gatctgagtt 3960
aacctagact tgtccatctt ctggattggc caacttaatt aatgtatgaa ataaaaggat 4020
gcacacatag tgacatgcta atcactataa tgtgggcatc aaagttgtgt gttatgtgta 4080
attactagtt atctgaataa aagagaaaga gatcatccat atttcttatc ctaaatgaat 4140
gtcacgtgtc tttataattc tttgatgaac cagatgcatt tcattaacca aatccatata 4200
catataaata ttaatcatat ataattaata tcaattgggt tagcaaaaca aatctagtct 4260
aggtgtgttt tgcggtcaca ccggttaaaa ccaaaatcca gtggcgagct ctcgagtcga 4320
tcgctatcaa ctttgtatag aaaagttggg ccgaattcga gctcggtacg gccagaatgg 4380
cccggaccgg gttaccgaat tcgagctcgg taccctggga tccgatatcg atgggccctg 4440
gccgaagctt ggtcacccgg tccgggccta gaaggccagc ttcaagtttg tacaaaaaag 4500
caggctccgg ccagaatggc ccggaccggg ttaccgaatt cgcctagaag gccatttaaa 4560
tcctgaggat ctggtcttcc taaggacccg ggatatcgga ccgattaaac tttaattcgg 4620
tccgaagctt cgctgaaatc accagtctct ctctacaaat ctatctctct ctataataat 4680
gtgtgagtag ttcccagata agggaattag ggttcttata gggtttcgct catgtgttga 4740
gcatataaga aacccttagt atgtatttgt atttgtaaaa tacttctatc aataaaattt 4800
ctaattccta aaaccaaaat ccagtggcga gctgctagcg aagttcctat tccgaagttc 4860
ctattctcta gaaagtatag gaacttcaga tcctagagga tcgatccccg atcatgcaaa 4920
aactcattaa ctcagtgcaa aactatgcct ggggcagcaa aacggcgttg actgaacttt 4980
atggtatgga aaatccgtcc agccagccga tggccgagct gtggatgggc gcacatccga 5040
aaagcagttc acgagtgcag aatgccgccg gagatatcgt ttcactgcgt gatgtgattg 5100
agagtgataa atcgactctg ctcggagagg ccgttgccaa acgctttggc gaactgcctt 5160
tcctgttcaa agtattatgc gcagcacagc cactctccat tcaggttcat ccaaacaaac 5220
acaattctga aatcggtttt gccaaagaaa atgccgcagg tatcccgatg gatgccgccg 5280
agcgtaacta taaagatcct aaccacaagc cggagctggt ttttgcgctg acgcctttcc 5340
ttgcgatgaa cgcgtttcgt gaattttccg agattgtctc cctactccag ccggtcgcag 5400
gtgcacatcc ggcgattgct cactttttac aacagcctga tgccgaacgt ttaagcgaac 5460
tgttcgccag cctgttgaat atgcagggtg aagaaaaatc ccgcgcgctg gcgattttaa 5520
aatcggccct cgatagccag cagggtgaac cgtggcaaac gattcgttta atttctgaat 5580
tttacccgga agacagcggt ctgttctccc cgctattgct gaatgtggtg aaattgaacc 5640
ctggcgaagc gatgttcctg ttcgctgaaa caccgcacgc ttacctgcaa ggcgtggcgc 5700
tggaagtgat ggcaaactcc gataacgtgc tgcgtgcggg tctgacgcct aaatacattg 5760
atattccgga actggttgcc aatgtgaaat tcgaagccaa accggctaac cagttgttga 5820
cccagccggt gaaacaaggt gcagaactgg acttcccgat tccagtggat gattttgcct 5880
tctcgctgca tgaccttagt gataaagaaa ccaccattag ccagcagagt gccgccattt 5940
tgttctgcgt cgaaggcgat gcaacgttgt ggaaaggttc tcagcagtta cagcttaaac 6000
cgggtgaatc agcgtttatt gccgccaacg aatcaccggt gactgtcaaa ggccacggcc 6060
gtttagcgcg tgtttacaac aagctgtaag agcttactga aaaaattaac atctcttgct 6120
aaatccatca tggatattcg aacgcgtagg taccacatgg ttaacctaga cttgtccatc 6180
ttctggattg gccaacttaa ttaatgtatg aaataaaagg atgcacacat agtgacatgc 6240
taatcactat aatgtgggca tcaaagttgt gtgttatgtg taattactag ttatctgaat 6300
aaaagagaaa gagatcatcc atatttctta tcctaaatga atgtcacgtg tctttataat 6360
tctttgatga accagatgca tttcattaac caaatccata tacatataaa tattaatcat 6420
atataattaa tatcaattgg gttagcaaaa caaatctagt ctaggtgtgt tttgcgaatg 6480
cggccagctt ggtcacaatt caggcgaccc atcgctgctt tgtctacatc atgttcttca 6540
tcatcctccc caggcgacgc gtgctgctgt tcttattcag actaccgttc gagtgactgc 6600
atggcgtaca tctttctgca tcgactttgt acggctacat cgaacatata cacgagatgt 6660
ctcgtgtgaa tagagtcact aatgccttaa gcatcggtta ctccgtaggg tacattctgt 6720
tcttcttatt tgtgcatatt tttattgttg tttactgatt atacgagtag ttatacatac 6780
atgcacatac atatcatcac atatatcaca atatttttct aaattaaatt aaaactaaaa 6840
atgactaaat ttctaacacc aacgacattg taatgttttc tccaacaact ttacctattc 6900
tacattgttc tatttcgaat ttcactctat aaacaacata gtctacaatg gaaaacagtg 6960
ctttgtacga ctatatacgc gatgtgtggc tacaacataa gacaatatag tcgtttgaag 7020
attgaaccta tatatcggta cggttaatcc gtctatgtac gtgggcatga cgaacacccg 7080
tgataacgaa ggattaacgt gcacaatcat aaatccaaag taggagcggt gcatgatgag 7140
aatcgctctc agtactcgac ataatgaacc ttacgaggta caacaggcag gcaggcaggg 7200
accaggggcc gcctttattt caggctcgct ggccccacgg gcgtgctgcg tgcacgaagg 7260
gcactacccc aacctctcac cgaaaaccgc gctggatcgg caaatcaaac gaggtggtgc 7320
cccgtgccca ctctccacgt ccacggcacc atccctctgc agccgctcac cagccatgcc 7380
gtgtcgcgga acggcacaac cacccccaac ccactcacga aaccccgtcc cggccgtgcc 7440
cgtgtcggtc cgcgctcggc aacgaggcgg cccgcgctgc tgagtcccct ggacacccga 7500
caccctgtcg gccctttgtt tattcatccc gaaatctcat ctgcccccac ggccgactgc 7560
gctgcgccgc ccggatatat atacccatcg ttatcgatcg actggggact ctatcagtga 7620
tagagtctag aggatcgctc aggaaggccg ctgagataga ggcatggcgg ccaatgcggg 7680
cggcggtgga gcgggaggag gcagcggcag cggcagcgtg gctgcgccgg cggtgtgccg 7740
ccccagcggc tcgcggtgga cgccgacgcc ggagcagatc aggatgctga aggagctcta 7800
ctacggctgc ggcatccggt cgcccagctc ggagcagatc cagcgcatca ccgccatgct 7860
gcggcagcac ggcaagatcg agggcaagaa cgtcttctac tggttccaga accacaaggc 7920
ccgcgagcgc cagaagcgcc gcctcaccag cctcgacgtc aacgtgcccg ccgccggcgc 7980
ggccgacgcc accaccagcc aactcggcgt cctctcgctg tcgtcgccgc cgccttcagg 8040
cgcggcgcct ccctcgccca ccctcggctt ctacgccgcc ggcaatggcg gcggatcggc 8100
tgtgctgctg gacacgagtt ccgactgggg cagcagcggc gctgccatgg ccaccgagac 8160
atgcttcctg caggactaca tgggcgtgac ggacacgggc agctcgtcgc agtggccacg 8220
cttctcgtcg tcggacacga taatggcggc ggccgcggcg cgggcggcga cgacgcgggc 8280
gcccgagacg ctccctctct tcccgacctg cggcgacgac ggcggcagcg gtagcagcag 8340
ctacttgccg ttctggggtg ccgcgtccac aactgccggc gccacttctt ccgttgcgat 8400
ccagcagcaa caccagctgc aggagcagta cagcttttac agcaacagca acagcaccca 8460
gctggccggc accggcaacc aagacgtatc ggcaacagca gcagcagccg ccgccctgga 8520
gctgagcctc agctcatggt gctcccctta ccctgctgca gggagtatgt gagagcaacg 8580
cgagctgcca ctgctcttca ctggtaccgt taacagatca ttcgacaaag cagcattagt 8640
ccgttgatcg gtggaagacc actcgtcagt gttgagttga atgtttgatc aataaaatac 8700
ggcaatgctg taagggttgt tttttatgcc attgataata cactgtactg ttcagttgtt 8760
gaactctatt tcttagccat gccaagtgct tttcttattt tgaataacat tacagcaaaa 8820
agttgaaaga caaaaaaaaa aacccccgaa cagagtgctt tgggtcccaa gcttctttag 8880
actgtgttcg gcgttccccc taaatttctc cccctatatc tcactcactt gtcacatcag 8940
cgttctcttt ccccctatat ctccacgctc tacagcagtt ccacctatat caaacctcta 9000
taccccacca caacaatatt atatactttc atcttcaact aactcatgta ccttccaatt 9060
tttttctact aataattatt tacgtgcaca gaaacttagc aaggagagag agagcggggt 9120
gacccacctt gctagttgga tattacctct tctcttcaaa gtatccttga acgctcaccg 9180
gttatcaaat ctctacacta tagctctgta gtcttgctag atagttagtt ctttagctct 9240
cggtgaccaa gcttggcgcg atcaagctta tcgataccgt cgacctcgaa gcttggtcac 9300
ccggtccggg cctagaaggc cagcttcaag tttgtacaaa aaagcaggct ccggccagaa 9360
tggcccggac cgggttaccg aattcttacc ctagctccct gcggctgtta cgcggtcccc 9420
catcaatctt ctgttcttgc ggttgtagcc tgtgtaacag tgctagagta tgtatgataa 9480
ataggtttta agtctgctta catgacattt tttattgtgg aagagacata taaaaattag 9540
agagagtggt tctcatgcaa cggcggacgg cccggtgcta aaagagcttc aagacaaaat 9600
aatgaaacag gaagagagta gatttatcta agagccaact ttattatatg aatgtgttta 9660
ttgttggctt tagatgatat ggtaaggagt tagagctaat aatagatagg ctctattatt 9720
attattatta attaaactcg ctctaaggag gaaagtggga ggaagggacg aggacgaaga 9780
ctactggaag catcgtgcat ggatgatgga tgtggtgtct cttaatgtag gtggccggag 9840
gatgtacgtg ttaattgcgc gataagcact cagatccaac cgcaaactac ctccacactg 9900
acacactgat agagagaaag agagacctcc gacgactgcc gccgcagatg agccacgtac 9960
gtatacgacg tctgccggcc ggctcaggct gccgccatca ccctgctcga aagtcgcgtt 10020
aggcggcgcc agctacatag gagtatctag tctagccagt tagtatacta ctactgcgct 10080
gatgatgaat taactctgca tagatactgt acttgcctcc ctccaacacc caaccacctc 10140
ctgctcggct cttaataact tggacacgga tcgatgccat ccaaggaaga acacgacgac 10200
gacgacggaa catccaccat gcaagcttgc atccatacgc cgatacgcgt gcatccatcc 10260
atccaccatt atttccattt tccaccgatc acacgtacac aggcctattt aaggagcgac 10320
atcccactgc aactctcctc accactcatc accagctagc tctagcaaag cacttgccat 10380
ctaccgaccg ccgcattcca aacagcccga cgagctagca gagcggcagg cacctccctc 10440
ctcaaggaac ccatggccac tgtgaacaac tggctcgctt tctccctctc cccgcaggag 10500
ctgccgccct cccagacgac ggactccaca ctcatctcgg ccgccaccgc cgaccatgtc 10560
tccggcgatg tctgcttcaa catcccccaa gattggagca tgaggggatc agagctttcg 10620
gcgctcgtcg cggagccgaa gctggaggac ttcctcggcg gcatctcctt ctccgagcag 10680
catcacaagg ccaactgcaa catgataccc agcactagca gcacagtttg ctacgcgagc 10740
tcaggtgcta gcaccggcta ccatcaccag ctgtaccacc agcccaccag ctcagcgctc 10800
cacttcgcgg actccgtaat ggtggcttcc tcggccggtg tccacgacgg cggtgccatg 10860
ctcagcgcgg ccgccgctaa cggtgtcgct ggcgctgcca gtgccaacgg cggcggcatc 10920
gggctgtcca tgattaagaa ctggctgcgg agccaaccgg cgcccatgca gccgagggtg 10980
gcggcggctg agggcgcgca ggggctctct ttgtccatga acatggcggg gacgacccaa 11040
ggcgctgctg gcatgccact tctcgctgga gagcgcgcac gggcgcccga gagtgtatcg 11100
acgtcagcac agggtggagc cgtcgtcgtc acggcgccga aggaggatag cggtggcagc 11160
ggtgttgccg gcgctctagt agccgtgagc acggacacgg gtggcagcgg cggcgcgtcg 11220
gctgacaaca cggcaaggaa gacggtggac acgttcgggc agcgcacgtc gatttaccgt 11280
ggcgtgacaa ggcatagatg gactgggaga tatgaggcac atctttggga taacagttgc 11340
agaagggaag ggcaaactcg taagggtcgt caagtctatt taggtggcta tgataaagag 11400
gagaaagctg ctagggctta tgatcttgct gctctgaagt actggggtgc cacaacaaca 11460
acaaattttc cagtgagtaa ctacgaaaag gagctcgagg acatgaagca catgacaagg 11520
caggagtttg tagcgtctct gagaaggaag agcagtggtt tctccagagg tgcatccatt 11580
tacaggggag tgactaggca tcaccaacat ggaagatggc aagcacggat tggacgagtt 11640
gcagggaaca aggatcttta cttgggcacc ttcagcaccc aggaggaggc agcggaggcg 11700
tacgacatcg cggcgatcaa gttccgcggc ctcaacgccg tcaccaactt cgacatgagc 11760
cgctacgacg tgaagagcat cctggacagc agcgccctcc ccatcggcag cgccgccaag 11820
cgcctcaagg aggccgaggc cgcagcgtcc gcgcagcacc accacgccgg cgtggtgagc 11880
tacgacgtcg gccgcatcgc ctcgcagctc ggcgacggcg gagccctggc ggcggcgtac 11940
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acaggcctgt accacccgta cgcgcagcag ccaatgcgcg gcggcgggtg gtgcaagcag 12060
gagcaggacc acgcggtgat cgcggccgcg cacagcctgc aggacctcca ccacctgaac 12120
ctgggcgcgg ccggcgcgca cgactttttc tcggcagggc agcaggccgc cgccgctgcg 12180
atgcacggcc tgggtagcat cgacagtgcg tcgctcgagc acagcaccgg ctccaactcc 12240
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ggtggctaca tgatgccgat gagcgctgcc ggagcaacca ctacatcggc aatggtgagc 12360
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gagagctacc tggtgaacgc ggagaacaat ggtggcggaa ggatgtctgc atgggggact 12480
gtcgtgtctg cagccgcggc ggcagcagca agcagcaacg acaacatggc cgccgacgtc 12540
gggcatggcg gcgcgcagct cttcagtgtc tggaacgaca cttaagcgta cctagtggta 12600
cctgacatct tatagtctgc aacctctcgt gtctgaattc ctatctttat caagtgttat 12660
tgcttccacg actataggac agctttcgtc gaaagctttt gctcatgtga tctcgaagga 12720
ttcatctagt ctgatttttc gtgacttgta tcggttttat tggattcatc caacatatat 12780
caataaaaaa tgagttgtgt ttcctttctt cctagttcag ttaaaattat ttccctcctg 12840
cgcttgtgct gtaattgtct gtgtacctgt tgtttgtgac tgtgttagtt cccttggata 12900
tgatttcgta tttgatatgt acatggagat agcttagctt cattattgga gtatgaagtt 12960
agtatgacat agtcactctc ctggaaaatt gacactgcaa accatatttt tattctgaac 13020
cacaaatcct agtcagtccg ctggcatatg ccgtccgttt gctgaatcca gaacgtgggt 13080
ttggagatgt acggctgaga tgcctctatg cgaaggggat ttcgtggtga aacgagatgg 13140
gagtagagca acgcccgtgg aagatgcttc aaacttccac acttttgagc aacgatcggc 13200
agtagtaagg tagacgattt caagatcaaa gcatatgaag ataaacaaca tcaacaacaa 13260
aatttgttgg ggttctatag agagaaacag agctacatac atacactgtt ttgtatctac 13320
catctgagat gatgaaaaga tgaaaaacta aagaatgccc cggcgccaac gccaggacac 13380
gccgcgcgcg cgtcacccga gccatctctt gacccagccg gcgctgtata tttacacacg 13440
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ataaaaaatt accacatatt ttttttgtca cacttgtttg aagtgcagtt tatctatctt 13740
tatacatata tttaaacttt actctacgaa taatataatc tatagtacta caataatatc 13800
agtgttttag agaatcatat aaatgaacag ttagacatgg tctaaaggac aattgagtat 13860
tttgacaaca ggactctaca gttttatctt tttagtgtgc atgtgttctc cttttttttt 13920
gcaaatagct tcacctatat aatacttcat ccattttatt agtacatcca tttagggttt 13980
agggttaatg gtttttatag actaattttt ttagtacatc tattttattc tattttagcc 14040
tctaaattaa gaaaactaaa actctatttt agttttttta tttaataatt tagatataaa 14100
atagaataaa ataaagtgac taaaaattaa acaaataccc tttaagaaat taaaaaaact 14160
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atggctctag ccgttccgca gacgggatcg atttcatgat tttttttgtt tcgttgcata 14880
gggtttggtt tgcccttttc ctttatttca atatatgccg tgcacttgtt tgtcgggtca 14940
tcttttcatg cttttttttg tcttggttgt gatgatgtgg tctggttggg cggtcgttct 15000
agatcggagt agaattctgt ttcaaactac ctggtggatt tattaatttt ggatctgtat 15060
gtgtgtgcca tacatattca tagttacgaa ttgaagatga tggatggaaa tatcgatcta 15120
ggataggtat acatgttgat gcgggtttta ctgatgcata tacagagatg ctttttgttc 15180
gcttggttgt gatgatgtgg tgtggttggg cggtcgttca ttcgttctag atcggagtag 15240
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catcttcata gttacgagtt taagatggat ggaaatatcg atctaggata ggtatacatg 15360
ttgatgtggg ttttactgat gcatatacat gatggcatat gcagcatcta ttcatatgct 15420
ctaaccttga gtacctatct attataataa acaagtatgt tttataatta ttttgatctt 15480
gatatacttg gatgatggca tatgcagcag ctatatgtgg atttttttag ccctgccttc 15540
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ggccacgagt tcgagatcga gggcgagggc gagggccgcc cctacgaggg ccacaacacc 15780
gtgaagctga aggtgacgaa gggcggcccc ctgcccttcg cctgggacat cctgtccccc 15840
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ttcatcggcg tgaacttccc ctccgacggc cccgtgatgc agaagaagac catgggctgg 16080
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ctgaataaaa gagaaagaga tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt 16560
tataattctt tgatgaacca gatgcatttc attaaccaaa tccatataca tataaatatt 16620
aatcatatat aattaatatc aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg 16680
cgaatgcggc cgccaccgcg gtggagctcg aattccggtc cgaagctggg caactttatt 16740
atacaaagtt gatagatcga gcgactaatt aactagctgt cccacggcct aactagcact 16800
taatccccta gcctaaccta agagcgctaa tctaggctag tggtcactta gggctttaag 16860
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tgtacacctg agcctaacta actaggacgt cccgaggtcc gattccgggc taattaacac 16980
ctagctcgcc actcgactaa ttagggacta agcctagcgc ttagccgtta aaacctagca 17040
caccctaagc acccttagtt aggttcccct cttaattaag ccctagtgag cccctaagtt 17100
aaggggacgc taagagcccc ctaacctagt attcggctag aggcgaacta ggctaaacac 17160
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aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgcca 17326
<210> 90
<211> 18003
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 90
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcctagt tagttagggg cagctaacgt cccctagcta actagttgct 120
attaaccttt agcctagttt agtgcggtcg cgctagtgaa ctagtctaat gggtgcctag 180
cttagattag atccccgttc ggcttagact aggttagtcg gatagggcta gtctagtggc 240
ttagcttgga actgttaagc taggctgtta gtgcgggact tctaggctaa cctattgacc 300
cctaacgcct agaacctaag aaacgctaag gacacctagc taactttggc gacgtcccga 360
ggtccgattc cggctaacta actagcttaa gcttgatatc aggcgaccca tcgctgcttt 420
gtctacatca tgttcttcat catcctcccc aggcgacgcg tgctgctgtt cttattcaga 480
ctaccgttcg agtgactgca tggcgtacat ctttctgcat cgactttgta cggctacatc 540
gaacatatac acgagatgtc tcgtgtgaat agagtcacta atgccttaag catcggttac 600
tccgtagggt acattctgtt cttcttattt gtgcatattt ttattgttgt ttactgatta 660
tacgagtagt tatacataca tgcacataca tatcatcaca tatatcacaa tatttttcta 720
aattaaatta aaactaaaaa tgactaaatt tctaacacca acgacattgt aatgttttct 780
ccaacaactt tacctattct acattgttct atttcgaatt tcactctata aacaacatag 840
tctacaatgg aaaacagtgc tttgtacgac tatatacgcg atgtgtggct acaacataag 900
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aggagcggtg catgatgaga atcgctctca gtactcgaca taatgaacct tacgaggtac 1080
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accccgtccc ggccgtgccc gtgtcggtcc gcgctcggca acgaggcggc ccgcgctgct 1380
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catcaccgcc atgctgcggc agcacggcaa gatcgagggc aagaacgtct tctactggtt 1800
ccagaaccac aaggcccgcg agcgccagaa gcgccgcctc accagcctcg acgtcaacgt 1860
gcccgccgcc ggcgcggccg acgccaccac cagccaactc ggcgtcctct cgctgtcgtc 1920
gccgccgcct tcaggcgcgg cgcctccctc gcccaccctc ggcttctacg ccgccggcaa 1980
tggcggcgga tcggctgtgc tgctggacac gagttccgac tggggcagca gcggcgctgc 2040
tatggccacc gagacatgct tcctgcagga ctacatgggc gtgacggaca cgggcagctc 2100
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ttgatcaata aaatacggca atgctgtaag ggttgttttt tatgccattg ataatacact 2640
gtactgttca gttgttgaac tctatttctt agccatgcca agtgcttttc ttattttgaa 2700
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ctatatcaaa cctctatacc ccaccacaac aatattatat actttcatct tcaactaact 2940
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agagagagag cggggtgacc caccttgcta gttggatatt acctcttctc ttcaaagtat 3060
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agcttcaaga caaaataatg aaacaggaag agagtagatt tatctaagag ccaactttat 3540
tatatgaatg tgtttattgt tggctttaga tgatatggta aggagttaga gctaataata 3600
gataggctct attattatta ttattaatta aactcgctct aaggaggaaa gtgggaggaa 3660
gggacgagga cgaagactac tggaagcatc gtgcatggat gatggatgtg gtgtctctta 3720
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ggcaggcacc tccctcctca aggaacccat ggccactgtg aacaactggc tcgctttctc 4380
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ctccttctcc gagcagcatc acaaggccaa ctgcaacatg atacccagca ctagcagcac 4620
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cgacggcggt gccatgctca gcgcggccgc cgctaacggt gtcgctggcg ctgccagtgc 4800
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catgcagccg agggtggcgg cggctgaggg cgcgcagggg ctctctttgt ccatgaacat 4920
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cgccggcgtg gtgagctacg acgtcggccg catcgcctcg cagctcggcg acggcggagc 5820
cctggcggcg gcgtacggcg cgcactacca cggcgccgcc tggccgacca tcgcgttcca 5880
gccgggcgcc gccagcacag gcctgtacca cccgtacgcg cagcagccaa tgcgcggcgg 5940
cgggtggtgc aagcaggagc aggaccacgc ggtgatcgcg gccgcgcaca gcctgcagga 6000
cctccaccac ctgaacctgg gcgcggccgg cgcgcacgac tttttctcgg cagggcagca 6060
ggccgccgcc gctgcgatgc acggcctggg tagcatcgac agtgcgtcgc tcgagcacag 6120
caccggctcc aactccgtcg tctacaacgg cggggtcggc gacagcaacg gcgccagcgc 6180
cgtcggcggc agtggcggtg gctacatgat gccgatgagc gctgccggag caaccactac 6240
atcggcaatg gtgagccacg agcaggtgca tgcacgggcc tacgacgaag ccaagcaggc 6300
tgctcagatg gggtacgaga gctacctggt gaacgcggag aacaatggtg gcggaaggat 6360
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atgtgatctc gaaggattca tctagtctga tttttcgtga cttgtatcgg ttttattgga 6660
ttcatccaac atatatcaat aaaaaatgag ttgtgtttcc tttcttccta gttcagttaa 6720
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aacagtaatg aagtataaat catcgttgtg gtgtgctact cggttaattg agcattaaca 7500
cacacaaaca tgacgaggat ggtataatct ccaaaaatgt gtactttgtt aggtgggacc 7560
ctatagcctt gattaatgtg ctatgttagg catgcctgga aacgtgtgac gcatatgttt 7620
tgtgaacctg ttgatattat atgtgctttt atattaccat attttattaa aatactaata 7680
tttattacta gtaagatata acattctatc tagcttaaaa actaaccata aatattccat 7740
aataactaga tttaccaaac taatatacta aatatacata ataaatacaa aattaacaag 7800
acaataatca atatttatga gcttaatata tttagacatt atggttggtc gacgataatc 7860
atgctaactt ttcgtaattg cttgattgaa atatgcttag aataatgcct ctttgttcta 7920
catggcaaat agggaccatt atggtgtaac accctgggaa ccacaaacac cccgaaatgc 7980
tactaaacta cacaactaac cttcatatat aaaatttcga cagcatctcc tttgaaaatt 8040
tgcatagacg tggaagcaac agagtataaa cagatatcat gataagaaaa catactagac 8100
attaataatc tgctagaaat gggaagaatc acgcgtaagc ttgcatgcct gcagtgcagc 8160
gtgacccggt cgtgcccctc tctagagata atgagcattg catgtctaag ttataaaaaa 8220
ttaccacata ttttttttgt cacacttgtt tgaagtgcag tttatctatc tttatacata 8280
tatttaaact ttactctacg aataatataa tctatagtac tacaataata tcagtgtttt 8340
agagaatcat ataaatgaac agttagacat ggtctaaagg acaattgagt attttgacaa 8400
caggactcta cagttttatc tttttagtgt gcatgtgttc tccttttttt ttgcaaatag 8460
cttcacctat ataatacttc atccatttta ttagtacatc catttagggt ttagggttaa 8520
tggtttttat agactaattt ttttagtaca tctattttat tctattttag cctctaaatt 8580
aagaaaacta aaactctatt ttagtttttt tatttaataa tttagatata aaatagaata 8640
aaataaagtg actaaaaatt aaacaaatac cctttaagaa attaaaaaaa ctaaggaaac 8700
atttttcttg tttcgagtag ataatgccag cctgttaaac gccgtcgacg agtctaacgg 8760
acaccaacca gcgaaccagc agcgtcgcgt cgggccaagc gaagcagacg gcacggcatc 8820
tctgtcgctg cctctggacc cctctcgaga gttccgctcc accgttggac ttgctccgct 8880
gtcggcatcc agaaattgcg tggcggagcg gcagacgtga gccggcacgg caggcggcct 8940
cctcctcctc tcacggcacc ggcagctacg ggggattcct ttcccaccgc tccttcgctt 9000
tcccttcctc gcccgccgta ataaatagac accccctcca caccctcttt ccccaacctc 9060
gtgttgttcg gagcgcacac acacacaacc agatctcccc caaatccacc cgtcggcacc 9120
tccgcttcaa ggtacgccgc tcgtcctccc ccccccccct ctctaccttc tctagatcgg 9180
cgttccggtc catgcatggt tagggcccgg tagttctact tctgttcatg tttgtgttag 9240
atccgtgttt gtgttagatc cgtgctgcta gcgttcgtac acggatgcga cctgtacgtc 9300
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agccgttccg cagacgggat cgatttcatg attttttttg tttcgttgca tagggtttgg 9420
tttgcccttt tcctttattt caatatatgc cgtgcacttg tttgtcgggt catcttttca 9480
tgcttttttt tgtcttggtt gtgatgatgt ggtctggttg ggcggtcgtt ctagatcgga 9540
gtagaattct gtttcaaact acctggtgga tttattaatt ttggatctgt atgtgtgtgc 9600
catacatatt catagttacg aattgaagat gatggatgga aatatcgatc taggataggt 9660
atacatgttg atgcgggttt tactgatgca tatacagaga tgctttttgt tcgcttggtt 9720
gtgatgatgt ggtgtggttg ggcggtcgtt cattcgttct agatcggagt agaatactgt 9780
ttcaaactac ctggtgtatt tattaatttt ggaactgtat gtgtgtgtca tacatcttca 9840
tagttacgag tttaagatgg atggaaatat cgatctagga taggtataca tgttgatgtg 9900
ggttttactg atgcatatac atgatggcat atgcagcatc tattcatatg ctctaacctt 9960
gagtacctat ctattataat aaacaagtat gttttataat tattttgatc ttgatatact 10020
tggatgatgg catatgcagc agctatatgt ggattttttt agccctgcct tcatacgcta 10080
tttatttgct tggtactgtt tcttttgtcg atgctcaccc tgttgtttgg tgttacttct 10140
gcaggtcgac tttaacttag cctaggatcc aacaatgccc cagttcgaca tcctctgcaa 10200
gacccccccc aaggtgctcg tgaggcagtt cgtggagagg ttcgagaggc cctccggcga 10260
gaagatcgcc ctctgcgccg ccgagctcac ctacctctgc tggatgatca cccacaacgg 10320
caccgccatt aagagggcca ccttcatgtc atacaacacc atcatctcca actccctctc 10380
cttcgacatc gtgaacaagt ccctccagtt caaatacaag acccagaagg ccaccatcct 10440
cgaggcctcc ctcaagaagc tcatccccgc ctgggagttc accatcatcc cctactacgg 10500
ccagaagcac cagtccgaca tcaccgacat cgtgtcatcc ctccagcttc agttcgagtc 10560
ctccgaggag gctgacaagg gcaactccca ctccaagaag atgctgaagg ccctcctctc 10620
cgagggcgag tccatctggg agatcaccga gaagatcctc aactccttcg agtacacctc 10680
caggttcact aagaccaaga ccctctacca gttcctcttc ctcgccacct tcatcaactg 10740
cggcaggttc tcagacatca agaacgtgga ccccaagtcc ttcaagctcg tgcagaacaa 10800
gtacctaggt ttgtttctgc ttctaccttt gatatatata taataattat cattaattag 10860
tagtaatata atatttcaaa tatttttttc aaaataaaag aatgtagtat atagcaattg 10920
cttttctgta gtttataagt gtgtatattt taatttataa cttttctaat atatgaccaa 10980
aacatggtga tgcctaggtg tcatcatcca gtgcctcgtg accgagacca agacctccgt 11040
gtccaggcac atctacttct tctccgctcg cggcaggatc gaccccctcg tgtacctcga 11100
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catctccaag gagatgatcg ccctcaagga cgagactaac cccatcgagg agtggcagca 11520
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catctcccag gaggtgctcg actacctctc ctcctacatc aacaggagga tctgagttaa 11640
cctagacttg tccatcttct ggattggcca acttaattaa tgtatgaaat aaaaggatgc 11700
acacatagtg acatgctaat cactataatg tgggcatcaa agttgtgtgt tatgtgtaat 11760
tactagttat ctgaataaaa gagaaagaga tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt 11820
cacgtgtctt tataattctt tgatgaacca gatgcatttc attaaccaaa tccatataca 11880
tataaatatt aatcatatat aattaatatc aattgggtta gcaaaacaaa tctagtctag 11940
gtgtgttttg cggtcacacc ggttaaaacc aaaatccagt ggcgagctct cgagtcgatc 12000
gctatcaact ttgtatagaa aagttgggcc gaattcgagc tcggtacggc cagaatggcc 12060
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atataagaaa cccttagtat gtatttgtat ttgtaaaata cttctatcaa taaaatttct 12480
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attctctaga aagtatagga acttcagatc ctagaggatc gatccccgat catgcaaaaa 12600
ctcattaact cagtgcaaaa ctatgcctgg ggcagcaaaa cggcgttgac tgaactttat 12660
ggtatggaaa atccgtccag ccagccgatg gccgagctgt ggatgggcgc acatccgaaa 12720
agcagttcac gagtgcagaa tgccgccgga gatatcgttt cactgcgtga tgtgattgag 12780
agtgataaat cgactctgct cggagaggcc gttgccaaac gctttggcga actgcctttc 12840
ctgttcaaag tattatgcgc agcacagcca ctctccattc aggttcatcc aaacaaacac 12900
aattctgaaa tcggttttgc caaagaaaat gccgcaggta tcccgatgga tgccgccgag 12960
cgtaactata aagatcctaa ccacaagccg gagctggttt ttgcgctgac gcctttcctt 13020
gcgatgaacg cgtttcgtga attttccgag attgtctccc tactccagcc ggtcgcaggt 13080
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ttcgccagcc tgttgaatat gcagggtgaa gaaaaatccc gcgcgctggc gattttaaaa 13200
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tacccggaag acagcggtct gttctccccg ctattgctga atgtggtgaa attgaaccct 13320
ggcgaagcga tgttcctgtt cgctgaaaca ccgcacgctt acctgcaagg cgtggcgctg 13380
gaagtgatgg caaactccga taacgtgctg cgtgcgggtc tgacgcctaa atacattgat 13440
attccggaac tggttgccaa tgtgaaattc gaagccaaac cggctaacca gttgttgacc 13500
cagccggtga aacaaggtgc agaactggac ttcccgattc cagtggatga ttttgccttc 13560
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ttctgcgtcg aaggcgatgc aacgttgtgg aaaggttctc agcagttaca gcttaaaccg 13680
ggtgaatcag cgtttattgc cgccaacgaa tcaccggtga ctgtcaaagg ccacggccgt 13740
ttagcgcgtg tttacaacaa gctgtaagag cttactgaaa aaattaacat ctcttgctaa 13800
gatccatgca tggatattcg aacgcgtagg taccacatgg ttaacctaga cttgtccatc 13860
ttctggattg gccaacttaa ttaatgtatg aaataaaagg atgcacacat agtgacatgc 13920
taatcactat aatgtgggca tcaaagttgt gtgttatgtg taattactag ttatctgaat 13980
aaaagagaaa gagatcatcc atatttctta tcctaaatga atgtcacgtg tctttataat 14040
tctttgatga accagatgca tttcattaac caaatccata tacatataaa tattaatcat 14100
atataattaa tatcaattgg gttagcaaaa caaatctagt ctaggtgtgt tttgcgaatt 14160
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gaagcttgca tgcctgcagt gcagcgtgac ccggtcgtgc ccctctctag agataatgag 14340
cattgcatgt ctaagttata aaaaattacc acatattttt tttgtcacac ttgtttgaag 14400
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agtactacaa taatatcagt gttttagaga atcatataaa tgaacagtta gacatggtct 14520
aaaggacaat tgagtatttt gacaacagga ctctacagtt ttatcttttt agtgtgcatg 14580
tgttctcctt tttttttgca aatagcttca cctatataat acttcatcca ttttattagt 14640
acatccattt agggtttagg gttaatggtt tttatagact aattttttta gtacatctat 14700
tttattctat tttagcctct aaattaagaa aactaaaact ctattttagt ttttttattt 14760
aataatttag atataaaata gaataaaata aagtgactaa aaattaaaca aatacccttt 14820
aagaaattaa aaaaactaag gaaacatttt tcttgtttcg agtagataat gccagcctgt 14880
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ctccacaccc tctttcccca acctcgtgtt gttcggagcg cacacacaca caaccagatc 15240
tcccccaaat ccacccgtcg gcacctccgc ttcaaggtac gccgctcgtc ctcccccccc 15300
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ctacttctgt tcatgtttgt gttagatccg tgtttgtgtt agatccgtgc tgctagcgtt 15420
cgtacacgga tgcgacctgt acgtcagaca cgttctgatt gctaacttgc cagtgtttct 15480
ctttggggaa tcctgggatg gctctagccg ttccgcagac gggatcgatt tcatgatttt 15540
ttttgtttcg ttgcataggg tttggtttgc ccttttcctt tatttcaata tatgccgtgc 15600
acttgtttgt cgggtcatct tttcatgctt ttttttgtct tggttgtgat gatgtggtct 15660
ggttgggcgg tcgttctaga tcggagtaga attctgtttc aaactacctg gtggatttat 15720
taattttgga tctgtatgtg tgtgccatac atattcatag ttacgaattg aagatgatgg 15780
atggaaatat cgatctagga taggtataca tgttgatgcg ggttttactg atgcatatac 15840
agagatgctt tttgttcgct tggttgtgat gatgtggtgt ggttgggcgg tcgttcattc 15900
gttctagatc ggagtagaat actgtttcaa actacctggt gtatttatta attttggaac 15960
tgtatgtgtg tgtcatacat cttcatagtt acgagtttaa gatggatgga aatatcgatc 16020
taggataggt atacatgttg atgtgggttt tactgatgca tatacatgat ggcatatgca 16080
gcatctattc atatgctcta accttgagta cctatctatt ataataaaca agtatgtttt 16140
ataattattt tgatcttgat atacttggat gatggcatat gcagcagcta tatgtggatt 16200
tttttagccc tgccttcata cgctatttat ttgcttggta ctgtttcttt tgtcgatgct 16260
caccctgttg tttggtgtta cttctgcagg tcgactttaa cttagcctag gatccaccgg 16320
tcgccaccat ggcctcctcc gagaacgtca tcaccgagtt catgcgcttc aaggtgcgca 16380
tggagggcac cgtgaacggc cacgagttcg agatcgaggg cgagggcgag ggccgcccct 16440
acgagggcca caacaccgtg aagctgaagg tgacgaaggg cggccccctg cccttcgcct 16500
gggacatcct gtccccccag ttccagtacg gctccaaggt gtacgtgaag caccccgccg 16560
acatccccga ctacaagaag ctgtccttcc ccgagggctt caagtgggag cgcgtgatga 16620
acttcgagga cggcggcgtg gcgaccgtga cccaggactc ctccctgcag gacggctgct 16680
tcatctacaa ggtgaagttc atcggcgtga acttcccctc cgacggcccc gtgatgcaga 16740
agaagaccat gggctgggag gcctccaccg agcgcctgta cccccgcgac ggcgtgctga 16800
agggcgagac ccacaaggcc ctgaagctga aggacggcgg ccactacctg gtggagttca 16860
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agctggacat cacctcccac aacgaggact acaccatcgt ggagcagtac gagcgcaccg 16980
agggccgcca ccacctgttc ctgtagcggc ccatggatat tcgaacgcgt aggtaccaca 17040
tggttaacct agacttgtcc atcttctgga ttggccaact taattaatgt atgaaataaa 17100
aggatgcaca catagtgaca tgctaatcac tataatgtgg gcatcaaagt tgtgtgttat 17160
gtgtaattac tagttatctg aataaaagag aaagagatca tccatatttc ttatcctaaa 17220
tgaatgtcac gtgtctttat aattctttga tgaaccagat gcatttcatt aaccaaatcc 17280
atatacatat aaatattaat catatataat taatatcaat tgggttagca aaacaaatct 17340
agtctaggtg tgttttgcga atgcggccgc caccgcggtg gagctcgaat tccggtccga 17400
agctgggcaa ctttattata caaagttgat agatcgagcg actaattaac tagctgtccc 17460
acggcctaac tagcacttaa tcccctagcc taacctaaga gcgctaatct aggctagtgg 17520
tcacttaggg ctttaaggct agcgtatacg aagttcctat tccgaagttc ctattctcca 17580
gaaagtatag gaacttctgt acacctgagc ctaactaact aggacgtccc gaggtccgat 17640
tccgggctaa ttaacaccta gctcgccact cgactaatta gggactaagc ctagcgctta 17700
gccgttaaaa cctagcacac cctaagcacc cttagttagg ttcccctctt aattaagccc 17760
tagtgagccc ctaagttaag gggacgctaa gagcccccta acctagtatt cggctagagg 17820
cgaactaggc taaacaccta agcgcacctc tttaagctag atcgctaggg ggctaggcta 17880
gagcttcgct agattagtct aagggcagct aactaactag gtttaaacta cattaaaaac 17940
gtccgcaatg tgttattaag ttgtctaagc gtcaatttgt ttacaccaca atatatcctg 18000
cca 18003
<210> 91
<211> 14566
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 91
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
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ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
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gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcttacccta gctccctgcg gctgttacgc ggtcccccat caatcttctg 720
ttcttgcggt tgtagcctgt gtaacagtgc tagagtatgt atgataaata ggttttaagt 780
ctgcttacat gacatttttt attgtggaag agacatataa aaattagaga gagtggttct 840
catgcaacgg cggacggccc ggtgctaaaa gagcttcaag acaaaataat gaaacaggaa 900
gagagtagat ttatctaaga gccaacttta ttatatgaat gtgtttattg ttggctttag 960
atgatatggt aaggagttag agctaataat agataggctc tattattatt attattaatt 1020
aaactcgctc taaggaggaa agtgggagga agggacgagg acgaagacta ctggaagcat 1080
cgtgcatgga tgatggatgt ggtgtctctt aatgtaggtg gccggaggat gtacgtgtta 1140
attgcgcgat aagcactcag atccaaccgc aaactacctc cacactgaca cactgataga 1200
gagaaagaga gacctccgac gactgccgcc gcagatgagc cacgtacgta tacgacgtct 1260
gccggccggc tcaggctgcc gccatcaccc tgctcgaaag tcgcgttagg cggcgccagc 1320
tacataggag tatctagtct agccagttag tatactacta ctgcgctgat gatgaattaa 1380
ctctgcatag atactgtact tgcctccctc caacacccaa ccacctcctg ctcggctctt 1440
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ccaccatgca agcttgcatc catacgccga tacgcgtgca tccatccatc caccattatt 1560
tccattttcc accgatcaca cgtacacagg cctatttaag gagcgacatc ccactgcaac 1620
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cattccaaac agcccgacga gctagcagag cggcaggcac ctccctcctc aaggaaccca 1740
tggactccag cagcttcctc cctgccgccg gcgcggagaa tggctcggcg gcgggcggcg 1800
ccaacaatgg cggcgctgct cagcagcatg cggcgccggc gatccgcgag caggaccggc 1860
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ttagcgacga cgccaaggag acgatccagg agtgcgtgtc ggagtacatc agcttcatca 1980
cgggggaggc caacgagcgg tgccagcggg agcagcgcaa gaccatcacc gccgaggacg 2040
tgctgtgggc catgagccgc ctcggcttcg acgactacgt cgagccgctc ggcgcctacc 2100
tccaccgcta ccgcgagttc gagggcgacg cgcgcggcgt cgggctcgtc cctggggccg 2160
ccccatcgcg cggcggcgac caccacccgc actccatgtc gccagcggcg atgctcaagt 2220
cccgcgggcc agtctccgga gccgccatgc taccgcacca ccaccaccac cacgacatgc 2280
agatgcacgc cgccatgtac gggggaacgg ccgtgccccc gccggccggg cctcctcacc 2340
acggcgggtt cctcatgcca cacccacagg gtagtagcca ctacctgcct tacgcgtacg 2400
agcccacgta cggcggtgag cacgcgatgg ctgcatacta tggaggcgcc gcgtacgcgc 2460
ccggcaacgg cgggagcggc gacggcagtg gcagtggcgg cggtggcggg agcgcgtcgc 2520
acacaccgca gggcagcggc ggcttggagc acccgcaccc gttcgcgtac aagtagttat 2580
gtacaggtac cgttaaccga caaagcagca ttagtccgtt gatcggtgga agaccactcg 2640
tcagtgttga gttgaatgtt tgatcaataa aatacggcaa tgctgtaagg gttgtttttt 2700
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gtgcttttct tattttgaat aacattacag caaaaagttg aaagacaaaa aaaaaaaccc 2820
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ttcttaccct agctccctgc ggctgttacg cggtccccca tcaatcttct gttcttgcgg 3240
ttgtagcctg tgtaacagtg ctagagtatg tatgataaat aggttttaag tctgcttaca 3300
tgacattttt tattgtggaa gagacatata aaaattagag agagtggttc tcatgcaacg 3360
gcggacggcc cggtgctaaa agagcttcaa gacaaaataa tgaaacagga agagagtaga 3420
tttatctaag agccaacttt attatatgaa tgtgtttatt gttggcttta gatgatatgg 3480
taaggagtta gagctaataa tagataggct ctattattat tattattaat taaactcgct 3540
ctaaggagga aagtgggagg aagggacgag gacgaagact actggaagca tcgtgcatgg 3600
atgatggatg tggtgtctct taatgtaggt ggccggagga tgtacgtgtt aattgcgcga 3660
taagcactca gatccaaccg caaactacct ccacactgac acactgatag agagaaagag 3720
agacctccga cgactgccgc cgcagatgag ccacgtacgt atacgacgtc tgccggccgg 3780
ctcaggctgc cgccatcacc ctgctcgaaa gtcgcgttag gcggcgccag ctacatagga 3840
gtatctagtc tagccagtta gtatactact actgcgctga tgatgaatta actctgcata 3900
gatactgtac ttgcctccct ccaacaccca accacctcct gctcggctct taataacttg 3960
gacacggatc gatgccatcc aaggaagaac acgacgacga cgacggaaca tccaccatgc 4020
aagcttgcat ccatacgccg atacgcgtgc atccatccat ccaccattat ttccattttc 4080
caccgatcac acgtacacag gcctatttaa ggagcgacat cccactgcaa ctctcctcac 4140
cactcatcac cagctagctc tagcaaagca cttgccatct accgaccgcc gcattccaaa 4200
cagcccgacg agctagcaga gcggcaggca cctccctcct caaggaaccc atggccactg 4260
tgaacaactg gctcgctttc tccctctccc cgcaggagct gccgccctcc cagacgacgg 4320
actccacact catctcggcc gccaccgccg accatgtctc cggcgatgtc tgcttcaaca 4380
tcccccaaga ttggagcatg aggggatcag agctttcggc gctcgtcgcg gagccgaagc 4440
tggaggactt cctcggcggc atctccttct ccgagcagca tcacaaggcc aactgcaaca 4500
tgatacccag cactagcagc acagtttgct acgcgagctc aggtgctagc accggctacc 4560
atcaccagct gtaccaccag cccaccagct cagcgctcca cttcgcggac tccgtaatgg 4620
tggcttcctc ggccggtgtc cacgacggcg gtgccatgct cagcgcggcc gccgctaacg 4680
gtgtcgctgg cgctgccagt gccaacggcg gcggcatcgg gctgtccatg attaagaact 4740
ggctgcggag ccaaccggcg cccatgcagc cgagggtggc ggcggctgag ggcgcgcagg 4800
ggctctcttt gtccatgaac atggcgggga cgacccaagg cgctgctggc atgccacttc 4860
tcgctggaga gcgcgcacgg gcgcccgaga gtgtatcgac gtcagcacag ggtggagccg 4920
tcgtcgtcac ggcgccgaag gaggatagcg gtggcagcgg tgttgccggc gctctagtag 4980
ccgtgagcac ggacacgggt ggcagcggcg gcgcgtcggc tgacaacacg gcaaggaaga 5040
cggtggacac gttcgggcag cgcacgtcga tttaccgtgg cgtgacaagg catagatgga 5100
ctgggagata tgaggcacat ctttgggata acagttgcag aagggaaggg caaactcgta 5160
agggtcgtca agtctattta ggtggctatg ataaagagga gaaagctgct agggcttatg 5220
atcttgctgc tctgaagtac tggggtgcca caacaacaac aaattttcca gtgagtaact 5280
acgaaaagga gctcgaggac atgaagcaca tgacaaggca ggagtttgta gcgtctctga 5340
gaaggaagag cagtggtttc tccagaggtg catccattta caggggagtg actaggcatc 5400
accaacatgg aagatggcaa gcacggattg gacgagttgc agggaacaag gatctttact 5460
tgggcacctt cagcacccag gaggaggcag cggaggcgta cgacatcgcg gcgatcaagt 5520
tccgcggcct caacgccgtc accaacttcg acatgagccg ctacgacgtg aagagcatcc 5580
tggacagcag cgccctcccc atcggcagcg ccgccaagcg cctcaaggag gccgaggccg 5640
cagcgtccgc gcagcaccac cacgccggcg tggtgagcta cgacgtcggc cgcatcgcct 5700
cgcagctcgg cgacggcgga gccctggcgg cggcgtacgg cgcgcactac cacggcgccg 5760
cctggccgac catcgcgttc cagccgggcg ccgccagcac aggcctgtac cacccgtacg 5820
cgcagcagcc aatgcgcggc ggcgggtggt gcaagcagga gcaggaccac gcggtgatcg 5880
cggccgcgca cagcctgcag gacctccacc acctgaacct gggcgcggcc ggcgcgcacg 5940
actttttctc ggcagggcag caggccgccg ccgctgcgat gcacggcctg ggtagcatcg 6000
acagtgcgtc gctcgagcac agcaccggct ccaactccgt cgtctacaac ggcggggtcg 6060
gcgacagcaa cggcgccagc gccgtcggcg gcagtggcgg tggctacatg atgccgatga 6120
gcgctgccgg agcaaccact acatcggcaa tggtgagcca cgagcaggtg catgcacggg 6180
cctacgacga agccaagcag gctgctcaga tggggtacga gagctacctg gtgaacgcgg 6240
agaacaatgg tggcggaagg atgtctgcat gggggactgt cgtgtctgca gccgcggcgg 6300
cagcagcaag cagcaacgac aacatggccg ccgacgtcgg gcatggcggc gcgcagctct 6360
tcagtgtctg gaacgacact taagcgtacc tagtggtacc tgacatctta tagtctgcaa 6420
cctctcgtgt ctgaattcct atctttatca agtgttattg cttccacgac tataggacag 6480
ctttcgtcga aagcttttgc tcatgtgatc tcgaaggatt catctagtct gatttttcgt 6540
gacttgtatc ggttttattg gattcatcca acatatatca ataaaaaatg agttgtgttt 6600
cctttcttcc tagttcagtt aaaattattt ccctcctgcg cttgtgctgt aattgtctgt 6660
gtacctgttg tttgtgactg tgttagttcc cttggatatg atttcgtatt tgatatgtac 6720
atggagatag cttagcttca ttattggagt atgaagttag tatgacatag tcactctcct 6780
ggaaaattga cactgcaaac catattttta ttctgaacca caaatcctag tcagtccgct 6840
ggcatatgcc gtccgtttgc tgaatccaga acgtgggttt ggagatgtac ggctgagatg 6900
cctctatgcg aaggggattt cgtggtgaaa cgagatggga gtagagcaac gcccgtggaa 6960
gatgcttcaa acttccacac ttttgagcaa cgatcggcag tagtaaggta gacgatttca 7020
agatcaaagc atatgaagat aaacaacatc aacaacaaaa tttgttgggg ttctatagag 7080
agaaacagag ctacatacat acactgtttt gtatctacca tctgagatga tgaaaagatg 7140
aaaaactaaa gaatgccccg gcgccaacgc caggacacgc cgcgcgcgcg tcacccgagc 7200
catctcttga cccagccggc gctgtatatt tacacacgtt gcagcatcga tcaccacctg 7260
ttcgatcgcg tcgccgtcac cggtaccgag ctcgaattcc ggtccgggcc tagaaggccg 7320
atctcccggg cacccagctt tcttgtacaa agtggccgtt aacggatcgg ccagaatggc 7380
ccggaccggg ttaccgaatt cctgccctta aggccaattg ttcaagattc attcaacaat 7440
tgaaacatct cccatgatta aatcagtata aggttgctat ggtcttgctt gacaaagttt 7500
ttttttgagg gaatttcaac taaatttttg agtgaaacta tcaaatactg attttaaaaa 7560
atttttataa aaggaagcgc agagataaaa ggccatctat gctacaaaag tacccaaaaa 7620
tgtaatccta aagtatgaat tgcatttttt ttttgtttgg acgaaaggaa aggagtatta 7680
ccacaagaat gatatcatct tcatatttag atcttttttg ggtaaagctt gagattctct 7740
aaatatagag aaatcagaag aaaaaaaaac cgtgttttgg tggttttgat ttctagcctc 7800
cacaataact ttgacggcgt cgacaagtct aacggacacc aagcagcgaa ccaccagcgc 7860
cgagccaagc gaagcagacg gccgagacgt tgacaccttc ggcgcggcat ctctcgagag 7920
ttccgctccg gcgctccacc tccaccgctg gcggtttctt attccgttcc gttccgcctc 7980
ctgctctgct cctctccaca ccacacggca cgaaaccgtt acggcaccgg cagcacccag 8040
cacgggagag gggattcctt tcccaccgtt ccttcccttt ccgccccgcc gctataaata 8100
gccagcccca tccccagctt ttttccccaa tctcatctcc tctctcctgt tgttcggagc 8160
acacgcacaa tccgatcgat ccccaaatcc ccttcgtctc tcctcgcgag cctcgtggat 8220
cccagcttca aggtacggcg atcgatcatc ccccctcctt ctctctacct tcttttctct 8280
agactacatc ggatggcgat ccatggttag ggcctgctag tttcccttcc tgttttgtcg 8340
atggctgcga ggcacaatag atctgatggc gttatgacgg ctaacttgtc atgttgttgc 8400
gatttatagt ccctttagga gatcagttta atttctcgga tggttcgaga tcggtggtcc 8460
atggttagta ccctaagatc cgcgctgtta gggttcgtag atggaggcga cctgttctga 8520
ttgttaactt gtcagtacct gggaaatcct gggatggttc tagctcgtcc gcagatgaga 8580
tcgatttcat gatcctctgt atcttgtttc gttgcctagg ttccgtctaa tctatccgtg 8640
gtatgatgta gatgttttga tcgtgctaac tacgtcttgt aaagttaatt gtcaggtcat 8700
aatttttagc atgccttttt ttttgtttgg ttttgtctaa ttgggctgtc gttctagatc 8760
agagtagaag actgttccaa actacctgct ggatttattg aacttggatc tgtatgtgtg 8820
tcacatatct tcataaattc atgattaaga tggattgaaa tatcttttat ctttttggta 8880
tggatagttc tatatgttgg tgtggctttg ttagatgtat acatgcttag atacatgaag 8940
caacgtgctg ctactgttta gtaattgctg ttcatttgtc taataaacag ataaggatat 9000
gtatttatgt tgctgttggt tttgctggta ctttgttgga tacaaatgct tcaatacaga 9060
aaacagcatg ctgctacgat ttaccattta tctaatctta tcatatgtct aatctaataa 9120
acaaacatgc ttttaaatta tcttcatatg cttggatgat ggcatacaca gcggctatgt 9180
gtggtttttt aaatacccag catcatgggc atgcatgaca ctgctttaat atgcttttta 9240
tttgcttgag actgtttctt ttgtttatac tgacccttta gttcggtgac tcttctgcag 9300
gtcgacttta acttagccta ggatccatgg cccagtccaa gcacggcctg accaaggaga 9360
tgaccatgaa gtaccgcatg gagggctgcg tggacggcca caagttcgtg atcaccggcg 9420
agggcatcgg ctaccccttc aagggcaagc aggccatcaa cctgtgcgtg gtggagggcg 9480
gccccttgcc cttcgccgag gacatcttgt ccgccgcctt catgtacggc aaccgcgtgt 9540
tcaccgagta cccccaggac atcgtcgact acttcaagaa ctcctgcccc gccggctaca 9600
cctgggaccg ctccttcctg ttcgaggacg gcgccgtgtg catctgcaac gccgacatca 9660
ccgtgagcgt ggaggagaac tgcatgtacc acgagtccaa gttctacggc gtgaacttcc 9720
ccgccgacgg ccccgtgatg aagaagatga ccgacaactg ggagccctcc tgcgagaaga 9780
tcatccccgt gcccaagcag ggcatcttga agggcgacgt gagcatgtac ctgctgctga 9840
aggacggtgg ccgcttgcgc tgccagttcg acaccgtgta caaggccaag tccgtgcccc 9900
gcaagatgcc cgactggcac ttcatccagc acaagctgac ccgcgaggac cgcagcgacg 9960
ccaagaacca gaagtggcac ctgaccgagc acgccatcgc ctccggctcc gccttgccct 10020
ccggactcag atctcgatag ggtaccaatg gccagttaac agatccagct gctgctgttc 10080
tagggttcac aagtctgcct atttgtcttc cccaatggag ctatggttgt ctggtctggt 10140
ccttggtcgt gtcccgtttc attgtgtact atttacctgt aatgtgtatc cttaagtctg 10200
gtttgatggt gtctgaaacg ttttgctgtg gtagagcagc atggaagaac tataatgaat 10260
aagtgatccc taatcattgt gtccaaattt tgcttctgct ataccctttt gtgctgtttc 10320
ttatgttttg cttaaaaatt tgatctgaca aacaaatttg tctaaattat gctcttgttc 10380
tgactgtgta ctgtacacat ttgtattgct accggtttgg cacatagttt tctctttgat 10440
tgcagatcaa acccttctga ttgcagattg cttggctatg gctgatgtgc tcactgttct 10500
tctttagctt gtatattgct gatggtggct tggctacggc tgaaaaagtt gctgctgcgc 10560
cgacttggca actgttgctc cagtaatgct ttgtcctctc ttcctagccg ccgacttggc 10620
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attttgaggc tgtttgactt gtgccagatt gccagtgctg atgctatatt atctcaggtt 10740
tttatgctag tatatgtttt actgtgtgct gcctgtgtcg agttacgtaa tctattgaac 10800
cgctatgcgt gttgatgccc tgttgttgct tgccagattg atgcccctgt tgcttgcagc 10860
ttgcaagctg tagtgaaatc ctaaaattcg aaaccaaatc tattctgaac ttttgaagat 10920
ctgtgatgtc cggaagaaaa gattcaaaca gataaacggg actctccaga atctataaaa 10980
taaatgatcg acaaacgctt tgctttggta ggcttcctag ttagttagcg gaccgaagct 11040
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aacaataaac agaatttgcc ccactgttct aaatcaccta ataatatccc cagctaaaaa 11340
caataaaggt ttcctagaat taagacaagc atgactgttc ctccaggagg gtttggaaca 11400
ttgttgcagt cttgcagata cgggcgaagg gtgagaaaca gagcggaggg ctggaggtga 11460
cctcggtagt cgacgccgga gttgagcttg acaacgacgg ggcggcccct gatggacttg 11520
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cctggtcggt gtcagtgccg tttactctgg gccccacgtg tcagtaccgt ctgtagatga 11760
caacaacccg tcgtccacag tcatgtccaa aatatccttt cttctttttt ttcgattcgg 11820
atatctatct tccttttttt tttccaaaaa tcttcttgac gcaccagcgc gcacgtttgt 11880
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cacacatctc tgaacaaaaa aaaggaggga ggcctccacg cacatccccc tccgtgccac 12060
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ccgcgtctac cgcgctcact ggcgccacta ccgctgcgcc caaggcgagg cgccgggcgc 12180
acctcctggc cacccgccgc gccctcgccg cgcccatcag gtgctcagcg gcgtcacccg 12240
ccatgccgat ggctcccccg gccaccccgc tccggccgtg gggccccacc gagccccgca 12300
agggtgctga catcctcgtc gagtccctcg agcgctgcgg cgtccgcgac gtcttcgcct 12360
accccggcgg cgcgtccatg gagatccacc aggcactcac ccgctccccc gtcatcgcca 12420
accacctctt ccgccacgag caaggggagg cctttgccgc ctccggctac gcgcgctcct 12480
cgggccgcgt cggcgtctgc atcgccacct ccggccccgg cgccaccaac ctagtctccg 12540
cgctcgccga cgcgctgctc gattccgtcc ccatggtcgc catcacggga caggtggcgc 12600
gacgcatgat tggcaccgac gccttccagg agacgcccat cgtcgaggtc acccgctcca 12660
tcaccaagca caactacctg gtcctcgacg tcgacgacat cccccgcgtc gtgcaggagg 12720
ctttcttcct cgcctcctct ggtcgaccag ggccggtgct tgtcgacatc cccaaggaca 12780
tccagcagca gatggcggtg cctgtctggg acaagcccat gagtctgcct gggtacattg 12840
cgcgccttcc caagccccct gcgactgagt tgcttgagca ggtgctgcgt cttgttggtg 12900
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gacgctttgt ggagctgact ggaatcccgg tcacaactac tcttatgggc ctcggcaact 13020
tccccagcga cgacccactg tctctgcgca tgctaggtat gcatgggacg gtgtatgcaa 13080
attatgcagt ggataaggcc gatctgttgc ttgcacttgg tgtgcggttt gatgatcgcg 13140
tgacagggaa gattgaggct tttgcaagca gggctaagat tgtgcacgtt gatattgatc 13200
cggctgagat tggcaagaac aagcagccac atgtgtccat ctgtgcagat gttaagcttg 13260
ctttgcaggg catgaatgct cttcttgaag gaagcacatc aaagaagagc tttgactttg 13320
gctcatggaa cgatgagttg gatcagcaga agagggaatt cccccttggg tataaaacat 13380
ctaatgagga gatccagcca caatatgcta ttcaggttct tgatgagctg acgaaaggcg 13440
aggccatcat cggcacaggt gttgggcagc accagatgtg ggcggcacag tactacactt 13500
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cggctgctgc tggtgcttct gtggcaaacc caggtgtcac tgttgttgac atcgatggag 13620
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agaacgaagt ccgcgcagcg ataaagaaga tgctcgagac tccagggccg tacctcttgg 13920
atataatcgt cccacaccag gagcatgtgt tgcctatgat ccctagtggt ggggctttca 13980
aggatatgat cctggatggt gatggcagga ctgtgtactg actagctagt cagttaacct 14040
agacttgtcc atcttctgga ttggccaact taattaatgt atgaaataaa aggatgcaca 14100
catagtgaca tgctaatcac tataatgtgg gcatcaaagt tgtgtgttat gtgtaattac 14160
tagttatctg aataaaagag aaagagatca tccatatttc ttatcctaaa tgaatgtcac 14220
gtgtctttat aattctttga tgaaccagat gcatttcatt aaccaaatcc atatacatat 14280
aaatattaat catatataat taatatcaat tgggttagca aaacaaatct agtctaggtg 14340
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ttaaacgtgc aagcgctact agacaattca gtacattaaa aacgtccgca atgtgttatt 14520
aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgcca 14566
<210> 92
<211> 13820
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 92
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
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atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcaggcgacc catcgctgct ttgtctacat catgttcttc atcatcctcc 720
ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
atagagtcac taatgcctta agcatcggtt actccgtagg gtacattctg ttcttcttat 900
ttgtgcatat ttttattgtt gtttactgat tatacgagta gttatacata catgcacata 960
catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
actatatacg cgatgtgtgg ctacaacata agacaatata gtcgtttgaa gattgaacct 1200
atatatcggt acggttaatc cgtctatgta cgtgggcatg acgaacaccc gtgataacga 1260
aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
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actctccacg tccacggcac catccctctg cagccgctca ccagccatgc cgtgtcgcgg 1560
aacggcacaa ccacccccaa cccactcacg aaaccccgtc ccggccgtgc ccgtgtcggt 1620
ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
ggtcgagcgt agcatgcagg aacttatttg ccgtgcgctc ccaggtctcc gctcgcgtgc 1860
cttccagtct gtctcacact agctgctgtg ggacgatcga agtgggtgtg tcagctagct 1920
agctgcgccg tgaccacgca catgaccgca gtgcgcgcgg ggctgatcaa gggaaagtga 1980
tcccatggcg gccaatgcgg gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt 2040
ggctgcgccg gcggtgtgcc gccccagcgg ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat 2100
caggatgctg aaggagctct actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat 2160
ccagcgcatc accgccatgc tgcggcagca cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta 2220
ctggttccag aaccacaagg cccgcgagcg ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt 2280
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cggcggcagc ggtagcagca gctacttgcc gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg 2700
cgccacttct tccgttgcga tccaacagca acaccagctg caggagcagt acagctttta 2760
cagcaacagc aacagcaccc agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc 2820
agcagcagcc gccgccctgg agctgagcct cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc 2880
agggagtatg tgagagcaac gcgagctgcc actgctcttc actgatgtct ctggaatgga 2940
aggaggagga agtgagaaca gatcattcga caaagcagca ttagtccgtt gatcggtgga 3000
agaccactcg tcagtgttga gttgaatgtt tgatcaataa aatacggcaa tgctgtaagg 3060
gttgtttttt atgccattga taatacactg tactgttcag ttgttgaact ctatttctta 3120
gccatgccaa gtgcttttct tattttgaat aacattacag caaaaagttg aaagacaaaa 3180
aaaaaaaccc ccgaacagag tgctttgggt cccaagcttc tttagactgt gttcggcgtt 3240
ccccctaaat ttctccccct atatctcact cacttgtcac atcagcgttc tctttccccc 3300
tatatctcca cgctctacag cagttccacc tatatcaaac ctctataccc caccacaaca 3360
atattatata ctttcatctt caactaactc atgtaccttc caattttttt ctactaataa 3420
ttatttacgt gcacagaaac ttagcaagga gagagagagc ggggtgaccc accttgctag 3480
ttggatatta cctcttctct tcaaagtatc cttgaacgct caccggttat caaatctcta 3540
cactatagct ctgtagtctt gctagatagt tagttcttta gctctcggtg accaagcttg 3600
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tacgttaccg aattcttacc ctagctccct gcggctgtta cgcggtcccc catcaatctt 3780
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agtctgctta catgacattt tttattgtgg aagagacata taaaaattag agagagtggt 3900
tctcatgcaa cggcggacgg cccggtgcta aaagagcttc aagacaaaat aatgaaacag 3960
gaagagagta gatttatcta agagccaact ttattatatg aatgtgttta ttgttggctt 4020
tagatgatat ggtaaggagt tagagctaat aatagatagg ctctattatt attattatta 4080
attaaactcg ctctaaggag gaaagtggga ggaagggacg aggacgaaga ctactggaag 4140
catcgtgcat ggatgatgga tgtggtgtct cttaatgtag gtggccggag gatgtacgtg 4200
ttaattgcgc gataagcact cagatccaac cgcaaactac ctccacactg acacactgat 4260
agagagaaag agagacctcc gacgactgcc gccgcagatg agccacgtac gtatacgacg 4320
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cttaataact tggacacgga tcgatgccat ccaaggaaga acacgacgac gacgacggaa 4560
catccaccat gcaagcttgc atccatacgc cgatacgcgt gcatccatcc atccaccatt 4620
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aactctcctc accactcatc accagctagc tctagcaaag cacttgccat ctaccgaccg 4740
ccgcattcca aacagcccga cgagctagca gagcggcagg cacctccctc ctcaaggaac 4800
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agattagcga cgacgccaag gagacgatcc aggagtgcgt gtcggagtac atcagcttca 5040
tcacggggga ggccaacgag cggtgccagc gggagcagcg caagaccatc accgccgagg 5100
acgtgctgtg ggccatgagc cgcctcggct tcgacgacta cgtcgagccg ctcggcgcct 5160
acctccaccg ctaccgcgag ttcgagggcg acgcgcgcgg cgtcgggctc gtccctgggg 5220
ccgccccatc gcgcggcggc gaccaccacc cgcactccat gtcgccagcg gcgatgctca 5280
agtcccgcgg gccagtctcc ggagccgcca tgctaccgca ccaccaccac caccacgaca 5340
tgcagatgca cgccgccatg tacgggggaa cggccgtgcc cccgccggcc gggcctcctc 5400
accacggcgg gttcctcatg ccacacccac agggtagtag ccactacctg ccttacgcgt 5460
acgagcccac gtacggcggt gagcacgcga tggctgcata ctatggaggc gccgcgtacg 5520
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cgcacacacc gcagggcagc ggcggcttgg agcacccgca cccgttcgcg tacaagtagt 5640
tatgtacagg tacctgacat cttatagtct gcaacctctc gtgtctgaat tcctatcttt 5700
atcaagtgtt attgcttcca cgactatagg acagctttcg tcgaaagctt ttgctcatgt 5760
gatctcgaag gattcatcta gtctgatttt tcgtgacttg tatcggtttt attggattca 5820
tccaacatat atcaataaaa aatgagttgt gtttcctttc ttcctagttc agttaaaatt 5880
atttccctcc tgcgcttgtg ctgtaattgt ctgtgtacct gttgtttgtg actgtgttag 5940
ttcccttgga tatgatttcg tatttgatat gtacatggag atagcttagc ttcattattg 6000
gagtatgaag ttagtatgac atagtcactc tcctggaaaa ttgacactgc aaaccatatt 6060
tttattctga accacaaatc ctagtcagtc cgctggcata tgccgtccgt ttgctgaatc 6120
cagaacgtgg gtttggagat gtacggctga gatgcctcta tgcgaagggg atttcgtggt 6180
gaaacgagat gggagtagag caacgcccgt ggaagatgct tcaaacttcc acacttttga 6240
gcaacgatcg gcagtagtaa ggtagacgat ttcaagatca aagcatatga agataaacaa 6300
catcaacaac aaaatttgtt ggggttctat agagagaaac agagctacat acatacactg 6360
ttttgtatct accatctgag atgatgaaaa gatgaaaaac taaagaatgc cccggcgcca 6420
acgccaggac acgccgcgcg cgcgtcaccc gagccatctc ttgacccagc cggcgctgta 6480
tatttacaca cgttgcagca tcgatcacca cctgttcgat cgcgtcgccg tcaccggtac 6540
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acaaagtggc cgttaacgga tcggccagaa tggcccggac cgggttaccg aattcctgcc 6660
cttaaggcca attgttcaag attcattcaa caattgaaac atctcccatg attaaatcag 6720
tataaggttg ctatggtctt gcttgacaaa gttttttttt gagggaattt caactaaatt 6780
tttgagtgaa actatcaaat actgatttta aaaaattttt ataaaaggaa gcgcagagat 6840
aaaaggccat ctatgctaca aaagtaccca aaaatgtaat cctaaagtat gaattgcatt 6900
ttttttttgt ttggacgaaa ggaaaggagt attaccacaa gaatgatatc atcttcatat 6960
ttagatcttt tttgggtaaa gcttgagatt ctctaaatat agagaaatca gaagaaaaaa 7020
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gtctaacgga caccaagcag cgaaccacca gcgccgagcc aagcgaagca gacggccgag 7140
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cgttccttcc ctttccgccc cgccgctata aatagccagc cccatcccca gcttttttcc 7380
ccaatctcat ctcctctctc ctgttgttcg gagcacacgc acaatccgat cgatccccaa 7440
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ttagggcctg ctagtttccc ttcctgtttt gtcgatggct gcgaggcaca atagatctga 7620
tggcgttatg acggctaact tgtcatgttg ttgcgattta tagtcccttt aggagatcag 7680
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tcctgggatg gttctagctc gtccgcagat gagatcgatt tcatgatcct ctgtatcttg 7860
tttcgttgcc taggttccgt ctaatctatc cgtggtatga tgtagatgtt ttgatcgtgc 7920
taactacgtc ttgtaaagtt aattgtcagg tcataatttt tagcatgcct ttttttttgt 7980
ttggttttgt ctaattgggc tgtcgttcta gatcagagta gaagactgtt ccaaactacc 8040
tgctggattt attgaacttg gatctgtatg tgtgtcacat atcttcataa attcatgatt 8100
aagatggatt gaaatatctt ttatcttttt ggtatggata gttctatatg ttggtgtggc 8160
tttgttagat gtatacatgc ttagatacat gaagcaacgt gctgctactg tttagtaatt 8220
gctgttcatt tgtctaataa acagataagg atatgtattt atgttgctgt tggttttgct 8280
ggtactttgt tggatacaaa tgcttcaata cagaaaacag catgctgcta cgatttacca 8340
tttatctaat cttatcatat gtctaatcta ataaacaaac atgcttttaa attatcttca 8400
tatgcttgga tgatggcata cacagcggct atgtgtggtt ttttaaatac ccagcatcat 8460
gggcatgcat gacactgctt taatatgctt tttatttgct tgagactgtt tcttttgttt 8520
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atggcccagt ccaagcacgg cctgaccaag gagatgacca tgaagtaccg catggagggc 8640
tgcgtggacg gccacaagtt cgtgatcacc ggcgagggca tcggctaccc cttcaagggc 8700
aagcaggcca tcaacctgtg cgtggtggag ggcggcccct tgcccttcgc cgaggacatc 8760
ttgtccgccg ccttcatgta cggcaaccgc gtgttcaccg agtaccccca ggacatcgtc 8820
gactacttca agaactcctg ccccgccggc tacacctggg accgctcctt cctgttcgag 8880
gacggcgccg tgtgcatctg caacgccgac atcaccgtga gcgtggagga gaactgcatg 8940
taccacgagt ccaagttcta cggcgtgaac ttccccgccg acggccccgt gatgaagaag 9000
atgaccgaca actgggagcc ctcctgcgag aagatcatcc ccgtgcccaa gcagggcatc 9060
ttgaagggcg acgtgagcat gtacctgctg ctgaaggacg gtggccgctt gcgctgccag 9120
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gagcacgcca tcgcctccgg ctccgccttg ccctccggac tcagatctcg atagggtacc 9300
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tactatttac ctgtaatgtg tatccttaag tctggtttga tggtgtctga aacgttttgc 9480
tgtggtagag cagcatggaa gaactataat gaataagtga tccctaatca ttgtgtccaa 9540
attttgcttc tgctataccc ttttgtgctg tttcttatgt tttgcttaaa aatttgatct 9600
gacaaacaaa tttgtctaaa ttatgctctt gttctgactg tgtactgtac acatttgtat 9660
tgctaccggt ttggcacata gttttctctt tgattgcaga tcaaaccctt ctgattgcag 9720
attgcttggc tatggctgat gtgctcactg ttcttcttta gcttgtatat tgctgatggt 9780
ggcttggcta cggctgaaaa agttgctgct gcgccgactt ggcaactgtt gctccagtaa 9840
tgctttgtcc tctcttccta gccgccgact tggcacttgg cagctgttgc tcctgtaatg 9900
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ccaaaatatc ctttcttctt ttttttcgat tcggatatct atcttccttt tttttttcca 11100
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gtcgatagac cccacccacc agtgagtagc gtgtacgtat tcgggggtga cggacgtgtc 11220
gccgtcgtct tgctagtccc attcccatct gagccacaca tctctgaaca aaaaaaagga 11280
gggaggcctc cacgcacatc cccctccgtg ccacccgccc caaaccctcg cgccgcctcc 11340
gagacagccg ccgcaaccat ggccaccgcc gccgccgcgt ctaccgcgct cactggcgcc 11400
actaccgctg cgcccaaggc gaggcgccgg gcgcacctcc tggccacccg ccgcgccctc 11460
gccgcgccca tcaggtgctc agcggcgtca cccgccatgc cgatggctcc cccggccacc 11520
ccgctccggc cgtggggccc caccgagccc cgcaagggtg ctgacatcct cgtcgagtcc 11580
ctcgagcgct gcggcgtccg cgacgtcttc gcctaccccg gcggcgcgtc catggagatc 11640
caccaggcac tcacccgctc ccccgtcatc gccaaccacc tcttccgcca cgagcaaggg 11700
gaggcctttg ccgcctccgg ctacgcgcgc tcctcgggcc gcgtcggcgt ctgcatcgcc 11760
acctccggcc ccggcgccac caacctagtc tccgcgctcg ccgacgcgct gctcgattcc 11820
gtccccatgg tcgccatcac gggacaggtg gcgcgacgca tgattggcac cgacgccttc 11880
caggagacgc ccatcgtcga ggtcacccgc tccatcacca agcacaacta cctggtcctc 11940
gacgtcgacg acatcccccg cgtcgtgcag gaggctttct tcctcgcctc ctctggtcga 12000
ccagggccgg tgcttgtcga catccccaag gacatccagc agcagatggc ggtgcctgtc 12060
tgggacaagc ccatgagtct gcctgggtac attgcgcgcc ttcccaagcc ccctgcgact 12120
gagttgcttg agcaggtgct gcgtcttgtt ggtgaatcgc ggcgccctgt tctttatgtg 12180
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ccggtcacaa ctactcttat gggcctcggc aacttcccca gcgacgaccc actgtctctg 12300
cgcatgctag gtatgcatgg gacggtgtat gcaaattatg cagtggataa ggccgatctg 12360
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agcagggcta agattgtgca cgttgatatt gatccggctg agattggcaa gaacaagcag 12480
ccacatgtgt ccatctgtgc agatgttaag cttgctttgc agggcatgaa tgctcttctt 12540
gaaggaagca catcaaagaa gagctttgac tttggctcat ggaacgatga gttggatcag 12600
cagaagaggg aattccccct tgggtataaa acatctaatg aggagatcca gccacaatat 12660
gctattcagg ttcttgatga gctgacgaaa ggcgaggcca tcatcggcac aggtgttggg 12720
cagcaccaga tgtgggcggc acagtactac acttacaagc ggccaaggca gtggttgtct 12780
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aacttaatta atgtatgaaa taaaaggatg cacacatagt gacatgctaa tcactataat 13380
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atcatccata tttcttatcc taaatgaatg tcacgtgtct ttataattct ttgatgaacc 13500
agatgcattt cattaaccaa atccatatac atataaatat taatcatata taattaatat 13560
caattgggtt agcaaaacaa atctagtcta ggtgtgtttt gcgaatgcgg ccgcctgcag 13620
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ttcagtacat taaaaacgtc cgcaatgtgt tattaagttg tctaagcgtc aatttgttta 13800
caccacaata tatcctgcca 13820
<210> 93
<211> 15002
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 93
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
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ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tgctaactaa ctagaattcc tcgaggcggc cgcgtgctag gttttcattt 720
ttttgaattt cttttctttt ctagaaaaca tataaataac tatatttaac tatttcaaaa 780
atataataaa ttcactaaaa atatttacaa ataaaattac tagatatata tttttagacc 840
aaagtctatt atataaatta attggatttc gcaataaaga aatactacaa ataaaatcct 900
caacaatcat tagcaaacaa aatcatgctt tcaaaaaaat gaatagatca aacacttaat 960
taaaaaataa tttattcaaa agattatata tatacatata tatatatgac attattttct 1020
ttattttaaa attgttttct ctctactagt tttagcaact aatgtttaat ttcttttaag 1080
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tcaactctat tttatctctc ttgccattaa catcgtgtca ctggatctaa tacgtgatac 1380
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cacgggcagc tcgtcgcagt ggccacgctt ctcgtcgtcg gacacgataa tggcggcggc 2700
cgcggcgcgg gcggcgacga cgcgggcgcc cgagacgctc cctctcttcc cgacctgcgg 2760
cgacgacggc ggcagcggta gcagcagcta cttgccgttc tggggtgccg cgtccacaac 2820
tgccggcgcc acttcttccg ttgcgatcca acagcaacac cagctgcagg agcagtacag 2880
cttttacagc aacagcaaca gcacccagct ggccggcacc ggcaaccaag acgtatcggc 2940
aacagcagca gcagccgccg ccctggagct gagcctcagc tcatggtgct ccccttaccc 3000
tgctgcaggg agtatgtgat aggtaccgtt aaccgacaaa gcagcattag tccgttgatc 3060
ggtggaagac cactcgtcag tgttgagttg aatgtttgat caataaaata cggcaatgct 3120
gtaagggttg ttttttatgc cattgataat acactgtact gttcagttgt tgaactctat 3180
ttcttagcca tgccaagtgc ttttcttatt ttgaataaca ttacagcaaa aagttgaaag 3240
acaaaaaaaa aaacccccga acagagtgct ttgggtccca agcttcttta gactgtgttc 3300
ggcgttcccc ctaaatttct ccccctatat ctcactcact tgtcacatca gcgttctctt 3360
tccccctata tctccacgct ctacagcagt tccacctata tcaaacctct ataccccacc 3420
acaacaatat tatatacttt catcttcaac taactcatgt accttccaat ttttttctac 3480
taataattat ttacgtgcac agaaacttag caaggagaga gagagcgggg tcacccggtc 3540
cgggcctaga aggccagctt caagtttgta caaaaaagca ggctccggcc agaatggccc 3600
ggaccgggtt accgaattct taccctagct ccctgcggct gttacgcggt cccccatcaa 3660
tcttctgttc ttgcggttgt agcctgtgta acagtgctag agtatgtatg ataaataggt 3720
tttaagtctg cttacatgac attttttatt gtggaagaga catataaaaa ttagagagag 3780
tggttctcat gcaacggcgg acggcccggt gctaaaagag cttcaagaca aaataatgaa 3840
acaggaagag agtagattta tctaagagcc aactttatta tatgaatgtg tttattgttg 3900
gctttagatg atatggtaag gagttagagc taataataga taggctctat tattattatt 3960
attaattaaa ctcgctctaa ggaggaaagt gggaggaagg gacgaggacg aagactactg 4020
gaagcatcgt gcatggatga tggatgtggt gtctcttaat gtaggtggcc ggaggatgta 4080
cgtgttaatt gcgcgataag cactcagatc caaccgcaaa ctacctccac actgacacac 4140
tgatagagag aaagagagac ctccgacgac tgccgccgca gatgagccac gtacgtatac 4200
gacgtctgcc ggccggctca ggctgccgcc atcaccctgc tcgaaagtcg cgttaggcgg 4260
cgccagctac ataggagtat ctagtctagc cagttagtat actactactg cgctgatgat 4320
gaattaactc tgcatagata ctgtacttgc ctccctccaa cacccaacca cctcctgctc 4380
ggctcttaat aacttggaca cggatcgatg ccatccaagg aagaacacga cgacgacgac 4440
ggaacatcca ccatgcaagc ttgcatccat acgccgatac gcgtgcatcc atccatccac 4500
cattatttcc attttccacc gatcacacgt acacaggcct atttaaggag cgacatccca 4560
ctgcaactct cctcaccact catcaccagc tagctctagc aaagcacttg ccatctaccg 4620
accgccgcat tccaaacagc ccgacgagct agcagagcgg caggcacctc cctcctcaag 4680
gaacccatgg ccactgtgaa caactggctc gctttctccc tctccccgca ggagctgccg 4740
ccctcccaga cgacggactc cacactcatc tcggccgcca ccgccgacca tgtctccggc 4800
gatgtctgct tcaacatccc ccaagattgg agcatgaggg gatcagagct ttcggcgctc 4860
gtcgcggagc cgaagctgga ggacttcctc ggcggcatct ccttctccga gcagcatcac 4920
aaggccaact gcaacatgat acccagcact agcagcacag tttgctacgc gagctcaggt 4980
gctagcaccg gctaccatca ccagctgtac caccagccca ccagctcagc gctccacttc 5040
gcggactccg taatggtggc ttcctcggcc ggtgtccacg acggcggtgc catgctcagc 5100
gcggccgccg ctaacggtgt cgctggcgct gccagtgcca acggcggcgg catcgggctg 5160
tccatgatta agaactggct gcggagccaa ccggcgccca tgcagccgag ggtggcggcg 5220
gctgagggcg cgcaggggct ctctttgtcc atgaacatgg cggggacgac ccaaggcgct 5280
gctggcatgc cacttctcgc tggagagcgc gcacgggcgc ccgagagtgt atcgacgtca 5340
gcacagggtg gagccgtcgt cgtcacggcg ccgaaggagg atagcggtgg cagcggtgtt 5400
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acaaggcata gatggactgg gagatatgag gcacatcttt gggataacag ttgcagaagg 5580
gaagggcaaa ctcgtaaggg tcgtcaagtc tatttaggtg gctatgataa agaggagaaa 5640
gctgctaggg cttatgatct tgctgctctg aagtactggg gtgccacaac aacaacaaat 5700
tttccagtga gtaactacga aaaggagctc gaggacatga agcacatgac aaggcaggag 5760
tttgtagcgt ctctgagaag gaagagcagt ggtttctcca gaggtgcatc catttacagg 5820
ggagtgacta ggcatcacca acatggaaga tggcaagcac ggattggacg agttgcaggg 5880
aacaaggatc tttacttggg caccttcagc acccaggagg aggcagcgga ggcgtacgac 5940
atcgcggcga tcaagttccg cggcctcaac gccgtcacca acttcgacat gagccgctac 6000
gacgtgaaga gcatcctgga cagcagcgcc ctccccatcg gcagcgccgc caagcgcctc 6060
aaggaggccg aggccgcagc gtccgcgcag caccaccacg ccggcgtggt gagctacgac 6120
gtcggccgca tcgcctcgca gctcggcgac ggcggagccc tggcggcggc gtacggcgcg 6180
cactaccacg gcgccgcctg gccgaccatc gcgttccagc cgggcgccgc cagcacaggc 6240
ctgtaccacc cgtacgcgca gcagccaatg cgcggcggcg ggtggtgcaa gcaggagcag 6300
gaccacgcgg tgatcgcggc cgcgcacagc ctgcaggacc tccaccacct gaacctgggc 6360
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ggcctgggta gcatcgacag tgcgtcgctc gagcacagca ccggctccaa ctccgtcgtc 6480
tacaacggcg gggtcggcga cagcaacggc gccagcgccg tcggcggcag tggcggtggc 6540
tacatgatgc cgatgagcgc tgccggagca accactacat cggcaatggt gagccacgag 6600
caggtgcatg cacgggccta cgacgaagcc aagcaggctg ctcagatggg gtacgagagc 6660
tacctggtga acgcggagaa caatggtggc ggaaggatgt ctgcatgggg gactgtcgtg 6720
tctgcagccg cggcggcagc agcaagcagc aacgacaaca tggccgccga cgtcgggcat 6780
ggcggcgcgc agctcttcag tgtctggaac gacacttaag cgtacctagt ggtacctgac 6840
atcttatagt ctgcaacctc tcgtgtctga attcctatct ttatcaagtg ttattgcttc 6900
cacgactata ggacagcttt cgtcgaaagc ttttgctcat gtgatctcga aggattcatc 6960
tagtctgatt tttcgtgact tgtatcggtt ttattggatt catccaacat atatcaataa 7020
aaaatgagtt gtgtttcctt tcttcctagt tcagttaaaa ttatttccct cctgcgcttg 7080
tgctgtaatt gtctgtgtac ctgttgtttg tgactgtgtt agttcccttg gatatgattt 7140
cgtatttgat atgtacatgg agatagctta gcttcattat tggagtatga agttagtatg 7200
acatagtcac tctcctggaa aattgacact gcaaaccata tttttattct gaaccacaaa 7260
tcctagtcag tccgctggca tatgccgtcc gtttgctgaa tccagaacgt gggtttggag 7320
atgtacggct gagatgcctc tatgcgaagg ggatttcgtg gtgaaacgag atgggagtag 7380
agcaacgccc gtggaagatg cttcaaactt ccacactttt gagcaacgat cggcagtagt 7440
aaggtagacg atttcaagat caaagcatat gaagataaac aacatcaaca acaaaatttg 7500
ttggggttct atagagagaa acagagctac atacatacac tgttttgtat ctaccatctg 7560
agatgatgaa aagatgaaaa actaaagaat gccccggcgc caacgccagg acacgccgcg 7620
cgcgcgtcac ccgagccatc tcttgaccca gccggcgctg tatatttaca cacgttgcag 7680
catcgatcac cacctgttcg atcgcgtcgc cgtcaccggt accgagctcg aattccggtc 7740
cgggcctaga aggccgatct cccgggcacc cagctttctt gtacaaagtg gccgttaacg 7800
gatcggccag aatggcccgg accgggttac cgaattcctg cccttaaggc caattgttca 7860
agattcattc aacaattgaa acatctccca tgattaaatc agtataaggt tgctatggtc 7920
ttgcttgaca aagttttttt ttgagggaat ttcaactaaa tttttgagtg aaactatcaa 7980
atactgattt taaaaaattt ttataaaagg aagcgcagag ataaaaggcc atctatgcta 8040
caaaagtacc caaaaatgta atcctaaagt atgaattgca tttttttttt gtttggacga 8100
aaggaaagga gtattaccac aagaatgata tcatcttcat atttagatct tttttgggta 8160
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cggcatctct cgagagttcc gctccggcgc tccacctcca ccgctggcgg tttcttattc 8400
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caccggcagc acccagcacg ggagagggga ttcctttccc accgttcctt ccctttccgc 8520
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ctaccttctt ttctctagac tacatcggat ggcgatccat ggttagggcc tgctagtttc 8760
ccttcctgtt ttgtcgatgg ctgcgaggca caatagatct gatggcgtta tgacggctaa 8820
cttgtcatgt tgttgcgatt tatagtccct ttaggagatc agtttaattt ctcggatggt 8880
tcgagatcgg tggtccatgg ttagtaccct aagatccgcg ctgttagggt tcgtagatgg 8940
aggcgacctg ttctgattgt taacttgtca gtacctggga aatcctggga tggttctagc 9000
tcgtccgcag atgagatcga tttcatgatc ctctgtatct tgtttcgttg cctaggttcc 9060
gtctaatcta tccgtggtat gatgtagatg ttttgatcgt gctaactacg tcttgtaaag 9120
ttaattgtca ggtcataatt tttagcatgc cttttttttt gtttggtttt gtctaattgg 9180
gctgtcgttc tagatcagag tagaagactg ttccaaacta cctgctggat ttattgaact 9240
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ttttatcttt ttggtatgga tagttctata tgttggtgtg gctttgttag atgtatacat 9360
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atgtctaatc taataaacaa acatgctttt aaattatctt catatgcttg gatgatggca 9600
tacacagcgg ctatgtgtgg ttttttaaat acccagcatc atgggcatgc atgacactgc 9660
tttaatatgc tttttatttg cttgagactg tttcttttgt ttatactgac cctttagttc 9720
ggtgactctt ctgcaggtcg actttaactt agcctaggat ccatggccca gtccaagcac 9780
ggcctgacca aggagatgac catgaagtac cgcatggagg gctgcgtgga cggccacaag 9840
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tgcaacgccg acatcaccgt gagcgtggag gagaactgca tgtaccacga gtccaagttc 10140
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ccagctgctg ctgttctagg gttcacaagt ctgcctattt gtcttcccca atggagctat 10560
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atgtgctcac tgttcttctt tagcttgtat attgctgatg gtggcttggc tacggctgaa 10980
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tagccgccga cttggcactt ggcagctgtt gctcctgtaa tgcgttgtta tctcttatct 11100
cttgagatgt actatgattt tgaggctgtt tgacttgtgc cagattgcca gtgctgatgc 11160
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tccagaatct ataaaataaa tgatcgacaa acgctttgct ttggtaggct tcctagttag 11460
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ttttttttcg attcggatat ctatcttcct tttttttttc caaaaatctt cttgacgcac 12300
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tcagcggcgt cacccgccat gccgatggct cccccggcca ccccgctccg gccgtggggc 12720
cccaccgagc cccgcaaggg tgctgacatc ctcgtcgagt ccctcgagcg ctgcggcgtc 12780
cgcgacgtct tcgcctaccc cggcggcgcg tccatggaga tccaccaggc actcacccgc 12840
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gaggtcaccc gctccatcac caagcacaac tacctggtcc tcgacgtcga cgacatcccc 13140
cgcgtcgtgc aggaggcttt cttcctcgcc tcctctggtc gaccagggcc ggtgcttgtc 13200
gacatcccca aggacatcca gcagcagatg gcggtgcctg tctgggacaa gcccatgagt 13260
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tccgcaatgt gttattaagt tgtctaagcg tcaatttgtt tacaccacaa tatatcctgc 15000
ca 15002
<210> 94
<211> 14446
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 94
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
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ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
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cactaatcta tgacttctat tttttgctta aataaaatct atgcaaatat tcaagcatcc 840
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cctgtgcctt aagtcttact ctctccgttt ctttttattt gtcgctggat agcgcaattt 1140
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ctaacatttg ggtggctttg cgttctgctt gttgggcccg gctctgaaat gagcagtcta 1260
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ggctacttgg cgcgagggcg gccatccacg tcagacgagc gcgctgacct ggcgcccctc 1440
cagctcatcc tatctacata tcagtgtccc tctccctggc ccagccgctc ctaccatcag 1500
aatcagacca ccacacgccc gaggcccgac tgcaagatct tgagcccaag acccatggcg 1560
gccaatgcgg gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt ggctgcgccg 1620
gcggtgtgcc gccccagcgg ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat caggatgctg 1680
aaggagctct actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat ccagcgcatc 1740
accgccatgc tgcggcagca cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag 1800
aaccacaagg cccgcgagcg ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt caacgtgccc 1860
gccgccggcg cggccgacgc caccaccagc caactcggcg tcctctcgct gtcgtcgccg 1920
ccgccttcag gcgcggcgcc tccctcgccc accctcggct tctacgccgc cggcaatggc 1980
ggcggatcgg ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg cgctgctatg 2040
gccaccgaga catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg cagctcgtcg 2100
cagtggccac gcttctcgtc gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc gcgggcggcg 2160
acgacgcggg cgcccgagac gctccctctc ttcccgacct gcggcgacga cggcggcagc 2220
ggtagcagca gctacttgcc gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg cgccacttct 2280
tccgttgcga tccaacagca acaccagctg caggagcagt acagctttta cagcaacagc 2340
aacagcaccc agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc agcagcagcc 2400
gccgccctgg agctgagcct cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc agggagtatg 2460
tgataggtac cgttaaccga caaagcagca ttagtccgtt gatcggtgga agaccactcg 2520
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atgccattga taatacactg tactgttcag ttgttgaact ctatttctta gccatgccaa 2640
gtgcttttct tattttgaat aacattacag caaaaagttg aaagacaaaa aaaaaaaccc 2700
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ttctccccct atatctcact cacttgtcac atcagcgttc tctttccccc tatatctcca 2820
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ctttcatctt caactaactc atgtaccttc caattttttt ctactaataa ttatttacgt 2940
gcacagaaac ttagcaagga gagagagagc ggggtcaccc ggtccgggcc tagaaggcca 3000
gcttcaagtt tgtacaaaaa agcaggctcc ggccagaatg gcccggaccg ggttaccgaa 3060
ttcttaccct agctccctgc ggctgttacg cggtccccca tcaatcttct gttcttgcgg 3120
ttgtagcctg tgtaacagtg ctagagtatg tatgataaat aggttttaag tctgcttaca 3180
tgacattttt tattgtggaa gagacatata aaaattagag agagtggttc tcatgcaacg 3240
gcggacggcc cggtgctaaa agagcttcaa gacaaaataa tgaaacagga agagagtaga 3300
tttatctaag agccaacttt attatatgaa tgtgtttatt gttggcttta gatgatatgg 3360
taaggagtta gagctaataa tagataggct ctattattat tattattaat taaactcgct 3420
ctaaggagga aagtgggagg aagggacgag gacgaagact actggaagca tcgtgcatgg 3480
atgatggatg tggtgtctct taatgtaggt ggccggagga tgtacgtgtt aattgcgcga 3540
taagcactca gatccaaccg caaactacct ccacactgac acactgatag agagaaagag 3600
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gtatctagtc tagccagtta gtatactact actgcgctga tgatgaatta actctgcata 3780
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gacacggatc gatgccatcc aaggaagaac acgacgacga cgacggaaca tccaccatgc 3900
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tgatacccag cactagcagc acagtttgct acgcgagctc aggtgctagc accggctacc 4440
atcaccagct gtaccaccag cccaccagct cagcgctcca cttcgcggac tccgtaatgg 4500
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ggctctcttt gtccatgaac atggcgggga cgacccaagg cgctgctggc atgccacttc 4740
tcgctggaga gcgcgcacgg gcgcccgaga gtgtatcgac gtcagcacag ggtggagccg 4800
tcgtcgtcac ggcgccgaag gaggatagcg gtggcagcgg tgttgccggc gctctagtag 4860
ccgtgagcac ggacacgggt ggcagcggcg gcgcgtcggc tgacaacacg gcaaggaaga 4920
cggtggacac gttcgggcag cgcacgtcga tttaccgtgg cgtgacaagg catagatgga 4980
ctgggagata tgaggcacat ctttgggata acagttgcag aagggaaggg caaactcgta 5040
agggtcgtca agtctattta ggtggctatg ataaagagga gaaagctgct agggcttatg 5100
atcttgctgc tctgaagtac tggggtgcca caacaacaac aaattttcca gtgagtaact 5160
acgaaaagga gctcgaggac atgaagcaca tgacaaggca ggagtttgta gcgtctctga 5220
gaaggaagag cagtggtttc tccagaggtg catccattta caggggagtg actaggcatc 5280
accaacatgg aagatggcaa gcacggattg gacgagttgc agggaacaag gatctttact 5340
tgggcacctt cagcacccag gaggaggcag cggaggcgta cgacatcgcg gcgatcaagt 5400
tccgcggcct caacgccgtc accaacttcg acatgagccg ctacgacgtg aagagcatcc 5460
tggacagcag cgccctcccc atcggcagcg ccgccaagcg cctcaaggag gccgaggccg 5520
cagcgtccgc gcagcaccac cacgccggcg tggtgagcta cgacgtcggc cgcatcgcct 5580
cgcagctcgg cgacggcgga gccctggcgg cggcgtacgg cgcgcactac cacggcgccg 5640
cctggccgac catcgcgttc cagccgggcg ccgccagcac aggcctgtac cacccgtacg 5700
cgcagcagcc aatgcgcggc ggcgggtggt gcaagcagga gcaggaccac gcggtgatcg 5760
cggccgcgca cagcctgcag gacctccacc acctgaacct gggcgcggcc ggcgcgcacg 5820
actttttctc ggcagggcag caggccgccg ccgctgcgat gcacggcctg ggtagcatcg 5880
acagtgcgtc gctcgagcac agcaccggct ccaactccgt cgtctacaac ggcggggtcg 5940
gcgacagcaa cggcgccagc gccgtcggcg gcagtggcgg tggctacatg atgccgatga 6000
gcgctgccgg agcaaccact acatcggcaa tggtgagcca cgagcaggtg catgcacggg 6060
cctacgacga agccaagcag gctgctcaga tggggtacga gagctacctg gtgaacgcgg 6120
agaacaatgg tggcggaagg atgtctgcat gggggactgt cgtgtctgca gccgcggcgg 6180
cagcagcaag cagcaacgac aacatggccg ccgacgtcgg gcatggcggc gcgcagctct 6240
tcagtgtctg gaacgacact taagcgtacc tagtggtacc tgacatctta tagtctgcaa 6300
cctctcgtgt ctgaattcct atctttatca agtgttattg cttccacgac tataggacag 6360
ctttcgtcga aagcttttgc tcatgtgatc tcgaaggatt catctagtct gatttttcgt 6420
gacttgtatc ggttttattg gattcatcca acatatatca ataaaaaatg agttgtgttt 6480
cctttcttcc tagttcagtt aaaattattt ccctcctgcg cttgtgctgt aattgtctgt 6540
gtacctgttg tttgtgactg tgttagttcc cttggatatg atttcgtatt tgatatgtac 6600
atggagatag cttagcttca ttattggagt atgaagttag tatgacatag tcactctcct 6660
ggaaaattga cactgcaaac catattttta ttctgaacca caaatcctag tcagtccgct 6720
ggcatatgcc gtccgtttgc tgaatccaga acgtgggttt ggagatgtac ggctgagatg 6780
cctctatgcg aaggggattt cgtggtgaaa cgagatggga gtagagcaac gcccgtggaa 6840
gatgcttcaa acttccacac ttttgagcaa cgatcggcag tagtaaggta gacgatttca 6900
agatcaaagc atatgaagat aaacaacatc aacaacaaaa tttgttgggg ttctatagag 6960
agaaacagag ctacatacat acactgtttt gtatctacca tctgagatga tgaaaagatg 7020
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catctcttga cccagccggc gctgtatatt tacacacgtt gcagcatcga tcaccacctg 7140
ttcgatcgcg tcgccgtcac cggtaccgag ctcgaattcc ggtccgggcc tagaaggccg 7200
atctcccggg cacccagctt tcttgtacaa agtggccgtt aacggatcgg ccagaatggc 7260
ccggaccggg ttaccgaatt cctgccctta aggccaattg ttcaagattc attcaacaat 7320
tgaaacatct cccatgatta aatcagtata aggttgctat ggtcttgctt gacaaagttt 7380
ttttttgagg gaatttcaac taaatttttg agtgaaacta tcaaatactg attttaaaaa 7440
atttttataa aaggaagcgc agagataaaa ggccatctat gctacaaaag tacccaaaaa 7500
tgtaatccta aagtatgaat tgcatttttt ttttgtttgg acgaaaggaa aggagtatta 7560
ccacaagaat gatatcatct tcatatttag atcttttttg ggtaaagctt gagattctct 7620
aaatatagag aaatcagaag aaaaaaaaac cgtgttttgg tggttttgat ttctagcctc 7680
cacaataact ttgacggcgt cgacaagtct aacggacacc aagcagcgaa ccaccagcgc 7740
cgagccaagc gaagcagacg gccgagacgt tgacaccttc ggcgcggcat ctctcgagag 7800
ttccgctccg gcgctccacc tccaccgctg gcggtttctt attccgttcc gttccgcctc 7860
ctgctctgct cctctccaca ccacacggca cgaaaccgtt acggcaccgg cagcacccag 7920
cacgggagag gggattcctt tcccaccgtt ccttcccttt ccgccccgcc gctataaata 7980
gccagcccca tccccagctt ttttccccaa tctcatctcc tctctcctgt tgttcggagc 8040
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cccagcttca aggtacggcg atcgatcatc ccccctcctt ctctctacct tcttttctct 8160
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atggctgcga ggcacaatag atctgatggc gttatgacgg ctaacttgtc atgttgttgc 8280
gatttatagt ccctttagga gatcagttta atttctcgga tggttcgaga tcggtggtcc 8340
atggttagta ccctaagatc cgcgctgtta gggttcgtag atggaggcga cctgttctga 8400
ttgttaactt gtcagtacct gggaaatcct gggatggttc tagctcgtcc gcagatgaga 8460
tcgatttcat gatcctctgt atcttgtttc gttgcctagg ttccgtctaa tctatccgtg 8520
gtatgatgta gatgttttga tcgtgctaac tacgtcttgt aaagttaatt gtcaggtcat 8580
aatttttagc atgccttttt ttttgtttgg ttttgtctaa ttgggctgtc gttctagatc 8640
agagtagaag actgttccaa actacctgct ggatttattg aacttggatc tgtatgtgtg 8700
tcacatatct tcataaattc atgattaaga tggattgaaa tatcttttat ctttttggta 8760
tggatagttc tatatgttgg tgtggctttg ttagatgtat acatgcttag atacatgaag 8820
caacgtgctg ctactgttta gtaattgctg ttcatttgtc taataaacag ataaggatat 8880
gtatttatgt tgctgttggt tttgctggta ctttgttgga tacaaatgct tcaatacaga 8940
aaacagcatg ctgctacgat ttaccattta tctaatctta tcatatgtct aatctaataa 9000
acaaacatgc ttttaaatta tcttcatatg cttggatgat ggcatacaca gcggctatgt 9060
gtggtttttt aaatacccag catcatgggc atgcatgaca ctgctttaat atgcttttta 9120
tttgcttgag actgtttctt ttgtttatac tgacccttta gttcggtgac tcttctgcag 9180
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cctgggaccg ctccttcctg ttcgaggacg gcgccgtgtg catctgcaac gccgacatca 9540
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ccttggtcgt gtcccgtttc attgtgtact atttacctgt aatgtgtatc cttaagtctg 10080
gtttgatggt gtctgaaacg ttttgctgtg gtagagcagc atggaagaac tataatgaat 10140
aagtgatccc taatcattgt gtccaaattt tgcttctgct ataccctttt gtgctgtttc 10200
ttatgttttg cttaaaaatt tgatctgaca aacaaatttg tctaaattat gctcttgttc 10260
tgactgtgta ctgtacacat ttgtattgct accggtttgg cacatagttt tctctttgat 10320
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tctttagctt gtatattgct gatggtggct tggctacggc tgaaaaagtt gctgctgcgc 10440
cgacttggca actgttgctc cagtaatgct ttgtcctctc ttcctagccg ccgacttggc 10500
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tgttttgcga atgcggccgc ctgcagagtt aacggcgcgc cgactagcta gctaaggtac 14280
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<210> 95
<211> 15326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 95
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ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
atagagtcac taatgcctta agcatcggtt actccgtagg gtacattctg ttcttcttat 900
ttgtgcatat ttttattgtt gtttactgat tatacgagta gttatacata catgcacata 960
catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
actatatacg cgatgtgtgg ctacaacata agacaatata gtcgtttgaa gattgaacct 1200
atatatcggt acggttaatc cgtctatgta cgtgggcatg acgaacaccc gtgataacga 1260
aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
cgcctttatt tcaggctcgc tggccccacg ggcgtgctgc gtgcacgaag ggcactaccc 1440
caacctctca ccgaaaaccg cgctggatcg gcaaatcaaa cgaggtggtg ccccgtgccc 1500
actctccacg tccacggcac catccctctg cagccgctca ccagccatgc cgtgtcgcgg 1560
aacggcacaa ccacccccaa cccactcacg aaaccccgtc ccggccgtgc ccgtgtcggt 1620
ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
ggtcgagcgt agcatgcagg aacttatttg ccgtgcgctc ccaggtctcc gctcgcgtgc 1860
cttccagtct gtctcacact agctgctgtg ggacgatcga agtgggtgtg tcagctagct 1920
agctgcgccg tgaccacgca catgaccgca gtgcgcgcgg ggctgatcaa gggaaagtga 1980
tcccatggcg gccaatgcgg gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt 2040
ggctgcgccg gcggtgtgcc gccccagcgg ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat 2100
caggatgctg aaggagctct actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat 2160
ccagcgcatc accgccatgc tgcggcagca cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta 2220
ctggttccag aaccacaagg cccgcgagcg ccagaagcgc cgcctcacca gcctcgacgt 2280
caacgtgccc gccgccggcg cggccgacgc caccaccagc caactcggcg tcctctcgct 2340
gtcgtcgccg ccgccttcag gcgcggcgcc tccctcgccc accctcggct tctacgccgc 2400
cggcaatggc ggcggatcgg ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg 2460
cgctgctatg gccaccgaga catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg 2520
cagctcgtcg cagtggccac gcttctcgtc gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc 2580
gcgggcggcg acgacgcggg cgcccgagac gctccctctc ttcccgacct gcggcgacga 2640
cggcggcagc ggtagcagca gctacttgcc gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg 2700
cgccacttct tccgttgcga tccaacagca acaccagctg caggagcagt acagctttta 2760
cagcaacagc aacagcaccc agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc 2820
agcagcagcc gccgccctgg agctgagcct cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc 2880
agggagtatg tgagagcaac gcgagctgcc actgctcttc actgatgtct ctggaatgga 2940
aggaggagga agtgagaaca gatcattcga caaagcagca ttagtccgtt gatcggtgga 3000
agaccactcg tcagtgttga gttgaatgtt tgatcaataa aatacggcaa tgctgtaagg 3060
gttgtttttt atgccattga taatacactg tactgttcag ttgttgaact ctatttctta 3120
gccatgccaa gtgcttttct tattttgaat aacattacag caaaaagttg aaagacaaaa 3180
aaaaaaaccc ccgaacagag tgctttgggt cccaagcttc tttagactgt gttcggcgtt 3240
ccccctaaat ttctccccct atatctcact cacttgtcac atcagcgttc tctttccccc 3300
tatatctcca cgctctacag cagttccacc tatatcaaac ctctataccc caccacaaca 3360
atattatata ctttcatctt caactaactc atgtaccttc caattttttt ctactaataa 3420
ttatttacgt gcacagaaac ttagcaagga gagagagagc ggggtgaccc accttgctag 3480
ttggatatta cctcttctct tcaaagtatc cttgaacgct caccggttat caaatctcta 3540
cactatagct ctgtagtctt gctagatagt tagttcttta gctctcggtg accaagcttg 3600
gcgcgatcaa gcttatcgat accgtcgacc tcgaagcttg gtcacccggt ccgggcctag 3660
aaggccagct tcaagtttgt acaaaaaagc aggctccggc cagaatggcc cggaccgggt 3720
taccgaattg ctaactaact agaattcctc gaggcggccg ctatttgttt gttttgaaca 3780
aaaattgaga gatttgtttt tgagggtcgg acacatacga gttttgggaa accgtcggtg 3840
gttcctgcct gtgcacacag aggtagctag ctaggttggg gacgggatgc atgtatgtaa 3900
tacgtggcgg agcttccgat cgagacagcg acatgtgggc tcccatactt gctggacaac 3960
ttaatcgcta ccactgctgc aacttcaatt tgtgaatgtg catgtaacct cctgcactgt 4020
actgatatct ctgtttctgg ttgcggccgg gaggaattaa cgaagactac tggaaggatt 4080
catggatgat ggacgatcca tatataattg acgtcttaat gcaggaagag tatgtgttta 4140
ttgtgcgata agcactcggt tccaactgca aactacctca cactgacaca ctagtgagag 4200
agagtgaata cgcctccaac ttcatcagat gagagccacg tacgtccgtc cctgccgact 4260
gccgccatca ccctgcctgc taagtcgtgt taggcggctg ctatttaagg gcgtgtttaa 4320
atgtctttaa aattctaaat gtttataaga tttctcgtcg catcgaatct ttagacgcat 4380
gtacgaaaca taaaatatat ataaataaaa aaaaaataat taactacata gtttgtatat 4440
gtaaatcgcg agataaagta cttgttgagt ctagttagtc tataattaaa tatttattgc 4500
taaatataaa cgaaagtgtt atagtataac ataccctaat aagttgctat tgctgctgca 4560
aatcaattca ctctgcctcg atcatgccct catcaactaa ccgctgtagt attatctgta 4620
tctatctgcc tcctgctccc aacacccaac cacctcctgc ccagcaatta acttcgacgg 4680
atggcgacga taccgtccgt cgtccttgga agatgatgtt ggaacatcca ccatattcat 4740
tcattcatat gcatgcatcc accattccac cgactgcctg cctgaaactg catgcaatgc 4800
aacaacaccg tgcatgcatg cacatctgtc atcagcaatg acaagctact gtagctagct 4860
cccagatcag atcagatcag atcgatcgca agcctgccta tttaaggagc cacactccat 4920
ctcactctcc tcaccagcgg ctagcacttg ctcacttgca ttccaaagct agtacaagca 4980
agtctcagac acccccagat cttcgacgcc atggccactg tgaacaactg gctcgctttc 5040
tccctctccc cgcaggagct gccgccctcc cagacgacgg actccacact catctcggcc 5100
gccaccgccg accatgtctc cggcgatgtc tgcttcaaca tcccccaaga ttggagcatg 5160
aggggatcag agctttcggc gctcgtcgcg gagccgaagc tggaggactt cctcggcggc 5220
atctccttct ccgagcagca tcacaaggcc aactgcaaca tgatacccag cactagcagc 5280
acagtttgct acgcgagctc aggtgctagc accggctacc atcaccagct gtaccaccag 5340
cccaccagct cagcgctcca cttcgcggac tccgtaatgg tggcttcctc ggccggtgtc 5400
cacgacggcg gtgccatgct cagcgcggcc gccgctaacg gtgtcgctgg cgctgccagt 5460
gccaacggcg gcggcatcgg gctgtccatg attaagaact ggctgcggag ccaaccggcg 5520
cccatgcagc cgagggtggc ggcggctgag ggcgcgcagg ggctctcttt gtccatgaac 5580
atggcgggga cgacccaagg cgctgctggc atgccacttc tcgctggaga gcgcgcacgg 5640
gcgcccgaga gtgtatcgac gtcagcacag ggtggagccg tcgtcgtcac ggcgccgaag 5700
gaggatagcg gtggcagcgg tgttgccggc gctctagtag ccgtgagcac ggacacgggt 5760
ggcagcggcg gcgcgtcggc tgacaacacg gcaaggaaga cggtggacac gttcgggcag 5820
cgcacgtcga tttaccgtgg cgtgacaagg catagatgga ctgggagata tgaggcacat 5880
ctttgggata acagttgcag aagggaaggg caaactcgta agggtcgtca agtctattta 5940
ggtggctatg ataaagagga gaaagctgct agggcttatg atcttgctgc tctgaagtac 6000
tggggtgcca caacaacaac aaattttcca gtgagtaact acgaaaagga gctcgaggac 6060
atgaagcaca tgacaaggca ggagtttgta gcgtctctga gaaggaagag cagtggtttc 6120
tccagaggtg catccattta caggggagtg actaggcatc accaacatgg aagatggcaa 6180
gcacggattg gacgagttgc agggaacaag gatctttact tgggcacctt cagcacccag 6240
gaggaggcag cggaggcgta cgacatcgcg gcgatcaagt tccgcggcct caacgccgtc 6300
accaacttcg acatgagccg ctacgacgtg aagagcatcc tggacagcag cgccctcccc 6360
atcggcagcg ccgccaagcg cctcaaggag gccgaggccg cagcgtccgc gcagcaccac 6420
cacgccggcg tggtgagcta cgacgtcggc cgcatcgcct cgcagctcgg cgacggcgga 6480
gccctggcgg cggcgtacgg cgcgcactac cacggcgccg cctggccgac catcgcgttc 6540
cagccgggcg ccgccagcac aggcctgtac cacccgtacg cgcagcagcc aatgcgcggc 6600
ggcgggtggt gcaagcagga gcaggaccac gcggtgatcg cggccgcgca cagcctgcag 6660
gacctccacc acctgaacct gggcgcggcc ggcgcgcacg actttttctc ggcagggcag 6720
caggccgccg ccgctgcgat gcacggcctg ggtagcatcg acagtgcgtc gctcgagcac 6780
agcaccggct ccaactccgt cgtctacaac ggcggggtcg gcgacagcaa cggcgccagc 6840
gccgtcggcg gcagtggcgg tggctacatg atgccgatga gcgctgccgg agcaaccact 6900
acatcggcaa tggtgagcca cgagcaggtg catgcacggg cctacgacga agccaagcag 6960
gctgctcaga tggggtacga gagctacctg gtgaacgcgg agaacaatgg tggcggaagg 7020
atgtctgcat gggggactgt cgtgtctgca gccgcggcgg cagcagcaag cagcaacgac 7080
aacatggccg ccgacgtcgg gcatggcggc gcgcagctct tcagtgtctg gaacgacact 7140
taagcgtacc tagtggtacc tgacatctta tagtctgcaa cctctcgtgt ctgaattcct 7200
atctttatca agtgttattg cttccacgac tataggacag ctttcgtcga aagcttttgc 7260
tcatgtgatc tcgaaggatt catctagtct gatttttcgt gacttgtatc ggttttattg 7320
gattcatcca acatatatca ataaaaaatg agttgtgttt cctttcttcc tagttcagtt 7380
aaaattattt ccctcctgcg cttgtgctgt aattgtctgt gtacctgttg tttgtgactg 7440
tgttagttcc cttggatatg atttcgtatt tgatatgtac atggagatag cttagcttca 7500
ttattggagt atgaagttag tatgacatag tcactctcct ggaaaattga cactgcaaac 7560
catattttta ttctgaacca caaatcctag tcagtccgct ggcatatgcc gtccgtttgc 7620
tgaatccaga acgtgggttt ggagatgtac ggctgagatg cctctatgcg aaggggattt 7680
cgtggtgaaa cgagatggga gtagagcaac gcccgtggaa gatgcttcaa acttccacac 7740
ttttgagcaa cgatcggcag tagtaaggta gacgatttca agatcaaagc atatgaagat 7800
aaacaacatc aacaacaaaa tttgttgggg ttctatagag agaaacagag ctacatacat 7860
acactgtttt gtatctacca tctgagatga tgaaaagatg aaaaactaaa gaatgccccg 7920
gcgccaacgc caggacacgc cgcgcgcgcg tcacccgagc catctcttga cccagccggc 7980
gctgtatatt tacacacgtt gcagcatcga tcaccacctg ttcgatcgcg tcgccgtcac 8040
cggtaccgag ctcgaattcc ggtccgggcc tagaaggccg atctcccggg cacccagctt 8100
tcttgtacaa agtggccgtt aacggatcgg ccagaatggc ccggaccggg ttaccgaatt 8160
cctgccctta aggccaattg ttcaagattc attcaacaat tgaaacatct cccatgatta 8220
aatcagtata aggttgctat ggtcttgctt gacaaagttt ttttttgagg gaatttcaac 8280
taaatttttg agtgaaacta tcaaatactg attttaaaaa atttttataa aaggaagcgc 8340
agagataaaa ggccatctat gctacaaaag tacccaaaaa tgtaatccta aagtatgaat 8400
tgcatttttt ttttgtttgg acgaaaggaa aggagtatta ccacaagaat gatatcatct 8460
tcatatttag atcttttttg ggtaaagctt gagattctct aaatatagag aaatcagaag 8520
aaaaaaaaac cgtgttttgg tggttttgat ttctagcctc cacaataact ttgacggcgt 8580
cgacaagtct aacggacacc aagcagcgaa ccaccagcgc cgagccaagc gaagcagacg 8640
gccgagacgt tgacaccttc ggcgcggcat ctctcgagag ttccgctccg gcgctccacc 8700
tccaccgctg gcggtttctt attccgttcc gttccgcctc ctgctctgct cctctccaca 8760
ccacacggca cgaaaccgtt acggcaccgg cagcacccag cacgggagag gggattcctt 8820
tcccaccgtt ccttcccttt ccgccccgcc gctataaata gccagcccca tccccagctt 8880
ttttccccaa tctcatctcc tctctcctgt tgttcggagc acacgcacaa tccgatcgat 8940
ccccaaatcc ccttcgtctc tcctcgcgag cctcgtggat cccagcttca aggtacggcg 9000
atcgatcatc ccccctcctt ctctctacct tcttttctct agactacatc ggatggcgat 9060
ccatggttag ggcctgctag tttcccttcc tgttttgtcg atggctgcga ggcacaatag 9120
atctgatggc gttatgacgg ctaacttgtc atgttgttgc gatttatagt ccctttagga 9180
gatcagttta atttctcgga tggttcgaga tcggtggtcc atggttagta ccctaagatc 9240
cgcgctgtta gggttcgtag atggaggcga cctgttctga ttgttaactt gtcagtacct 9300
gggaaatcct gggatggttc tagctcgtcc gcagatgaga tcgatttcat gatcctctgt 9360
atcttgtttc gttgcctagg ttccgtctaa tctatccgtg gtatgatgta gatgttttga 9420
tcgtgctaac tacgtcttgt aaagttaatt gtcaggtcat aatttttagc atgccttttt 9480
ttttgtttgg ttttgtctaa ttgggctgtc gttctagatc agagtagaag actgttccaa 9540
actacctgct ggatttattg aacttggatc tgtatgtgtg tcacatatct tcataaattc 9600
atgattaaga tggattgaaa tatcttttat ctttttggta tggatagttc tatatgttgg 9660
tgtggctttg ttagatgtat acatgcttag atacatgaag caacgtgctg ctactgttta 9720
gtaattgctg ttcatttgtc taataaacag ataaggatat gtatttatgt tgctgttggt 9780
tttgctggta ctttgttgga tacaaatgct tcaatacaga aaacagcatg ctgctacgat 9840
ttaccattta tctaatctta tcatatgtct aatctaataa acaaacatgc ttttaaatta 9900
tcttcatatg cttggatgat ggcatacaca gcggctatgt gtggtttttt aaatacccag 9960
catcatgggc atgcatgaca ctgctttaat atgcttttta tttgcttgag actgtttctt 10020
ttgtttatac tgacccttta gttcggtgac tcttctgcag gtcgacttta acttagccta 10080
ggatccatgg cccagtccaa gcacggcctg accaaggaga tgaccatgaa gtaccgcatg 10140
gagggctgcg tggacggcca caagttcgtg atcaccggcg agggcatcgg ctaccccttc 10200
aagggcaagc aggccatcaa cctgtgcgtg gtggagggcg gccccttgcc cttcgccgag 10260
gacatcttgt ccgccgcctt catgtacggc aaccgcgtgt tcaccgagta cccccaggac 10320
atcgtcgact acttcaagaa ctcctgcccc gccggctaca cctgggaccg ctccttcctg 10380
ttcgaggacg gcgccgtgtg catctgcaac gccgacatca ccgtgagcgt ggaggagaac 10440
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aagaagatga ccgacaactg ggagccctcc tgcgagaaga tcatccccgt gcccaagcag 10560
ggcatcttga agggcgacgt gagcatgtac ctgctgctga aggacggtgg ccgcttgcgc 10620
tgccagttcg acaccgtgta caaggccaag tccgtgcccc gcaagatgcc cgactggcac 10680
ttcatccagc acaagctgac ccgcgaggac cgcagcgacg ccaagaacca gaagtggcac 10740
ctgaccgagc acgccatcgc ctccggctcc gccttgccct ccggactcag atctcgatag 10800
ggtaccaatg gccagttaac agatccagct gctgctgttc tagggttcac aagtctgcct 10860
atttgtcttc cccaatggag ctatggttgt ctggtctggt ccttggtcgt gtcccgtttc 10920
attgtgtact atttacctgt aatgtgtatc cttaagtctg gtttgatggt gtctgaaacg 10980
ttttgctgtg gtagagcagc atggaagaac tataatgaat aagtgatccc taatcattgt 11040
gtccaaattt tgcttctgct ataccctttt gtgctgtttc ttatgttttg cttaaaaatt 11100
tgatctgaca aacaaatttg tctaaattat gctcttgttc tgactgtgta ctgtacacat 11160
ttgtattgct accggtttgg cacatagttt tctctttgat tgcagatcaa acccttctga 11220
ttgcagattg cttggctatg gctgatgtgc tcactgttct tctttagctt gtatattgct 11280
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actgtgtgct gcctgtgtcg agttacgtaa tctattgaac cgctatgcgt gttgatgccc 11580
tgttgttgct tgccagattg atgcccctgt tgcttgcagc ttgcaagctg tagtgaaatc 11640
ctaaaattcg aaaccaaatc tattctgaac ttttgaagat ctgtgatgtc cggaagaaaa 11700
gattcaaaca gataaacggg actctccaga atctataaaa taaatgatcg acaaacgctt 11760
tgctttggta ggcttcctag ttagttagcg gaccgaagct tcggtccggg cctagaaggc 11820
cagcttcggc cgccccgggc aactttatta tacaaagttg atagatcgaa taacttcgta 11880
tagcatacat tatacgaagt tatacctggt ggcgccgcta ggggctgcag gaattcgata 11940
tcaagcttat cgataccgtc gacctcgagg gggggcccgg taccctggga tctgccctta 12000
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cgggcgaagg gtgagaaaca gagcggaggg ctggaggtga cctcggtagt cgacgccgga 12240
gttgagcttg acaacgacgg ggcggcccct gatggacttg aggaagtccg atggcgtctt 12300
caccgtcccg ccggcgcccg aggcgggcct gtcgctgccg ccgccgccgc tgctcatctt 12360
gcgcgctgtg cccccggcgg tgtccctgtg ttgcggatcg cgggtgggcc aggtggatgc 12420
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tcatgtccaa aatatccttt cttctttttt ttcgattcgg atatctatct tccttttttt 12600
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tcccacgtcg atagacccca cccaccagtg agtagcgtgt acgtattcgg gggtgacgga 12720
cgtgtcgccg tcgtcttgct agtcccattc ccatctgagc cacacatctc tgaacaaaaa 12780
aaaggaggga ggcctccacg cacatccccc tccgtgccac ccgccccaaa ccctcgcgcc 12840
gcctccgaga cagccgccgc aaccatggcc accgccgccg ccgcgtctac cgcgctcact 12900
ggcgccacta ccgctgcgcc caaggcgagg cgccgggcgc acctcctggc cacccgccgc 12960
gccctcgccg cgcccatcag gtgctcagcg gcgtcacccg ccatgccgat ggctcccccg 13020
gccaccccgc tccggccgtg gggccccacc gagccccgca agggtgctga catcctcgtc 13080
gagtccctcg agcgctgcgg cgtccgcgac gtcttcgcct accccggcgg cgcgtccatg 13140
gagatccacc aggcactcac ccgctccccc gtcatcgcca accacctctt ccgccacgag 13200
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gattccgtcc ccatggtcgc catcacggga caggtggcgc gacgcatgat tggcaccgac 13380
gccttccagg agacgcccat cgtcgaggtc acccgctcca tcaccaagca caactacctg 13440
gtcctcgacg tcgacgacat cccccgcgtc gtgcaggagg ctttcttcct cgcctcctct 13500
ggtcgaccag ggccggtgct tgtcgacatc cccaaggaca tccagcagca gatggcggtg 13560
cctgtctggg acaagcccat gagtctgcct gggtacattg cgcgccttcc caagccccct 13620
gcgactgagt tgcttgagca ggtgctgcgt cttgttggtg aatcgcggcg ccctgttctt 13680
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cttcttgaag gaagcacatc aaagaagagc tttgactttg gctcatggaa cgatgagttg 14100
gatcagcaga agagggaatt cccccttggg tataaaacat ctaatgagga gatccagcca 14160
caatatgcta ttcaggttct tgatgagctg acgaaaggcg aggccatcat cggcacaggt 14220
gttgggcagc accagatgtg ggcggcacag tactacactt acaagcggcc aaggcagtgg 14280
ttgtcttcag ctggtcttgg ggctatggga tttggtttgc cggctgctgc tggtgcttct 14340
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gttcaggagc tagctatgat ccgaattgag aacctcccag tgaaggtctt tgtgctaaac 14460
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cacacatact tgggaaaccc agagaatgaa agtgagatat atccagattt cgtgacgatc 14580
gccaaagggt tcaacattcc agcggtccgt gtgacaaaga agaacgaagt ccgcgcagcg 14640
ataaagaaga tgctcgagac tccagggccg tacctcttgg atataatcgt cccacaccag 14700
gagcatgtgt tgcctatgat ccctagtggt ggggctttca aggatatgat cctggatggt 14760
gatggcagga ctgtgtactg actagctagt cagttaacct agacttgtcc atcttctgga 14820
ttggccaact taattaatgt atgaaataaa aggatgcaca catagtgaca tgctaatcac 14880
tataatgtgg gcatcaaagt tgtgtgttat gtgtaattac tagttatctg aataaaagag 14940
aaagagatca tccatatttc ttatcctaaa tgaatgtcac gtgtctttat aattctttga 15000
tgaaccagat gcatttcatt aaccaaatcc atatacatat aaatattaat catatataat 15060
taatatcaat tgggttagca aaacaaatct agtctaggtg tgttttgcga atgcggccgc 15120
ctgcagagtt aacggcgcgc cgactagcta gctaaggtac cgagctcgaa ttcattccga 15180
ttaatcgtgg cctcttgctc ttcaggatga agagctatgt ttaaacgtgc aagcgctact 15240
agacaattca gtacattaaa aacgtccgca atgtgttatt aagttgtcta agcgtcaatt 15300
tgtttacacc acaatatatc ctgcca 15326
<210> 96
<211> 15665
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 96
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aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
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ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
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ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
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tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
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aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
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ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
ggtcgagcgt agcatgcagg aacttatttg ccgtgcgctc ccaggtctcc gctcgcgtgc 1860
cttccagtct gtctcacact agctgctgtg ggacgatcga agtgggtgtg tcagctagct 1920
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caggatgctg aaggagctct actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat 2160
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cgctgctatg gccaccgaga catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg 2520
cagctcgtcg cagtggccac gcttctcgtc gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc 2580
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ttggatatta cctcttctct tcaaagtatc cttgaacgct caccggttat caaatctcta 3540
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gccgacccac ttgcaaagtt gcaagccttg cgtgcccgct ctagcaagtg tccgcgaata 4080
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acatccccct ccgtgccacc cgccccaaac cctcgcgccg cctccgagac agccgccgca 13200
accatggcca ccgccgccgc cgcgtctacc gcgctcactg gcgccactac cgctgcgccc 13260
aaggcgaggc gccgggcgca cctcctggcc acccgccgcg ccctcgccgc gcccatcagg 13320
tgctcagcgg cgtcacccgc catgccgatg gctcccccgg ccaccccgct ccggccgtgg 13380
ggccccaccg agccccgcaa gggtgctgac atcctcgtcg agtccctcga gcgctgcggc 13440
gtccgcgacg tcttcgccta ccccggcggc gcgtccatgg agatccacca ggcactcacc 13500
cgctcccccg tcatcgccaa ccacctcttc cgccacgagc aaggggaggc ctttgccgcc 13560
tccggctacg cgcgctcctc gggccgcgtc ggcgtctgca tcgccacctc cggccccggc 13620
gccaccaacc tagtctccgc gctcgccgac gcgctgctcg attccgtccc catggtcgcc 13680
atcacgggac aggtggcgcg acgcatgatt ggcaccgacg ccttccagga gacgcccatc 13740
gtcgaggtca cccgctccat caccaagcac aactacctgg tcctcgacgt cgacgacatc 13800
ccccgcgtcg tgcaggaggc tttcttcctc gcctcctctg gtcgaccagg gccggtgctt 13860
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cttatgggcc tcggcaactt ccccagcgac gacccactgt ctctgcgcat gctaggtatg 14160
catgggacgg tgtatgcaaa ttatgcagtg gataaggccg atctgttgct tgcacttggt 14220
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gtgcacgttg atattgatcc ggctgagatt ggcaagaaca agcagccaca tgtgtccatc 14340
tgtgcagatg ttaagcttgc tttgcagggc atgaatgctc ttcttgaagg aagcacatca 14400
aagaagagct ttgactttgg ctcatggaac gatgagttgg atcagcagaa gagggaattc 14460
ccccttgggt ataaaacatc taatgaggag atccagccac aatatgctat tcaggttctt 14520
gatgagctga cgaaaggcga ggccatcatc ggcacaggtg ttgggcagca ccagatgtgg 14580
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gctatgggat ttggtttgcc ggctgctgct ggtgcttctg tggcaaaccc aggtgtcact 14700
gttgttgaca tcgatggaga tggtagcttt ctcatgaacg ttcaggagct agctatgatc 14760
cgaattgaga acctcccagt gaaggtcttt gtgctaaaca accagcacct ggggatggtg 14820
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gagaatgaaa gtgagatata tccagatttc gtgacgatcg ccaaagggtt caacattcca 14940
gcggtccgtg tgacaaagaa gaacgaagtc cgcgcagcga taaagaagat gctcgagact 15000
ccagggccgt acctcttgga tataatcgtc ccacaccagg agcatgtgtt gcctatgatc 15060
cctagtggtg gggctttcaa ggatatgatc ctggatggtg atggcaggac tgtgtactga 15120
ctagctagtc agttaaccta gacttgtcca tcttctggat tggccaactt aattaatgta 15180
tgaaataaaa ggatgcacac atagtgacat gctaatcact ataatgtggg catcaaagtt 15240
gtgtgttatg tgtaattact agttatctga ataaaagaga aagagatcat ccatatttct 15300
tatcctaaat gaatgtcacg tgtctttata attctttgat gaaccagatg catttcatta 15360
accaaatcca tatacatata aatattaatc atatataatt aatatcaatt gggttagcaa 15420
aacaaatcta gtctaggtgt gttttgcgaa tgcggccgcc tgcagagtta acggcgcgcc 15480
gactagctag ctaaggtacc gagctcgaat tcattccgat taatcgtggc ctcttgctct 15540
tcaggatgaa gagctatgtt taaacgtgca agcgctacta gacaattcag tacattaaaa 15600
acgtccgcaa tgtgttatta agttgtctaa gcgtcaattt gtttacacca caatatatcc 15660
tgcca 15665
<210> 97
<211> 15142
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 97
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcaggcgacc catcgctgct ttgtctacat catgttcttc atcatcctcc 720
ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
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atatatcggt acggttaatc cgtctatgta cgtgggcatg acgaacaccc gtgataacga 1260
aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
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caacctctca ccgaaaaccg cgctggatcg gcaaatcaaa cgaggtggtg ccccgtgccc 1500
actctccacg tccacggcac catccctctg cagccgctca ccagccatgc cgtgtcgcgg 1560
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ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
ggtcgagcgt agcatgcagg aacttatttg ccgtgcgctc ccaggtctcc gctcgcgtgc 1860
cttccagtct gtctcacact agctgctgtg ggacgatcga agtgggtgtg tcagctagct 1920
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caggatgctg aaggagctct actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat 2160
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cggcaatggc ggcggatcgg ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg 2460
cgctgctatg gccaccgaga catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg 2520
cagctcgtcg cagtggccac gcttctcgtc gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc 2580
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cgccacttct tccgttgcga tccaacagca acaccagctg caggagcagt acagctttta 2760
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agaccactcg tcagtgttga gttgaatgtt tgatcaataa aatacggcaa tgctgtaagg 3060
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ccccctaaat ttctccccct atatctcact cacttgtcac atcagcgttc tctttccccc 3300
tatatctcca cgctctacag cagttccacc tatatcaaac ctctataccc caccacaaca 3360
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ttatttacgt gcacagaaac ttagcaagga gagagagagc ggggtgaccc accttgctag 3480
ttggatatta cctcttctct tcaaagtatc cttgaacgct caccggttat caaatctcta 3540
cactatagct ctgtagtctt gctagatagt tagttcttta gctctcggtg accaagcttg 3600
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agcttcaaga caaaataatg aaacaggaag agagtagatt tatctaagag ccaactttat 4020
tatatgaatg tgtttattgt tggctttaga tgatatggta aggagttaga gctaataata 4080
tataggctct attattatta ttattaatta aactcgctct aaggaggaaa gtgggaggaa 4140
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atgtaggtgg ccggaggatg tacgtgttaa ttgcgcgata agcactcaga tccaaccgca 4260
aactacctcc acactgacac actgatagag agaaagagag acctccgacg actgccgccg 4320
cagatgagcc acgtacgtat acgacgtctg ccggccggct caggctgccg ccatcaccct 4380
gctcgaaagt cgcgttaggc ggcgccagct acataggagt atctagtcta gccagttagt 4440
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gctatgataa agaggagaaa gctgctaggg cttatgatct tgctgctctg aagtactggg 5820
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catccaacat atatcaataa aaaatgagtt gtgtttcctt tcttcctagt tcagttaaaa 7200
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cccttaaggc caattgttca agattcattc aacaattgaa acatctccca tgattaaatc 8040
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ccaatggcca gttaacagat ccagctgctg ctgttctagg gttcacaagt ctgcctattt 10680
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cagattgcca gtgctgatgc tatattatct caggttttta tgctagtata tgttttactg 11340
tgtgctgcct gtgtcgagtt acgtaatcta ttgaaccgct atgcgtgttg atgccctgtt 11400
gttgcttgcc agattgatgc ccctgttgct tgcagcttgc aagctgtagt gaaatcctaa 11460
aattcgaaac caaatctatt ctgaactttt gaagatctgt gatgtccgga agaaaagatt 11520
caaacagata aacgggactc tccagaatct ataaaataaa tgatcgacaa acgctttgct 11580
ttggtaggct tcctagttag ttagcggacc gaagcttcgg tccgggccta gaaggccagc 11640
ttcggccgcc ccgggcaact ttattataca aagttgatag atcgaataac ttcgtatagc 11700
atacattata cgaagttata cctggtggcg ccgctagggg ctgcaggaat tcgatatcaa 11760
gcttatcgat accgtcgacc tcgagggggg gcccggtacc ctgggatctg cccttacttt 11820
aacgcctcta accaacaccc ctttatcttt ataaggaaca ataaacagaa tttgccccac 11880
tgttctaaat cacctaataa tatccccagc taaaaacaat aaaggtttcc tagaattaag 11940
acaagcatga ctgttcctcc aggagggttt ggaacattgt tgcagtcttg cagatacggg 12000
cgaagggtga gaaacagagc ggagggctgg aggtgacctc ggtagtcgac gccggagttg 12060
agcttgacaa cgacggggcg gcccctgatg gacttgagga agtccgatgg cgtcttcacc 12120
gtcccgccgg cgcccgaggc gggcctgtcg ctgccgccgc cgccgctgct catcttgcgc 12180
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gcgacccgtt tggactccgg ccggagccgc cggatccctg gtcggtgtca gtgccgttta 12300
ctctgggccc cacgtgtcag taccgtctgt agatgacaac aacccgtcgt ccacagtcat 12360
gtccaaaata tcctttcttc ttttttttcg attcggatat ctatcttcct tttttttttc 12420
caaaaatctt cttgacgcac cagcgcgcac gtttgtggta aacgccgaca cgtcggtccc 12480
acgtcgatag accccaccca ccagtgagta gcgtgtacgt attcgggggt gacggacgtg 12540
tcgccgtcgt cttgctagtc ccattcccat ctgagccaca catctctgaa caaaaaaaag 12600
gagggaggcc tccacgcaca tccccctccg tgccacccgc cccaaaccct cgcgccgcct 12660
ccgagacagc cgccgcaacc atggccaccg ccgccgccgc gtctaccgcg ctcactggcg 12720
ccactaccgc tgcgcccaag gcgaggcgcc gggcgcacct cctggccacc cgccgcgccc 12780
tcgccgcgcc catcaggtgc tcagcggcgt cacccgccat gccgatggct cccccggcca 12840
ccccgctccg gccgtggggc cccaccgagc cccgcaaggg tgctgacatc ctcgtcgagt 12900
ccctcgagcg ctgcggcgtc cgcgacgtct tcgcctaccc cggcggcgcg tccatggaga 12960
tccaccaggc actcacccgc tcccccgtca tcgccaacca cctcttccgc cacgagcaag 13020
gggaggcctt tgccgcctcc ggctacgcgc gctcctcggg ccgcgtcggc gtctgcatcg 13080
ccacctccgg ccccggcgcc accaacctag tctccgcgct cgccgacgcg ctgctcgatt 13140
ccgtccccat ggtcgccatc acgggacagg tggcgcgacg catgattggc accgacgcct 13200
tccaggagac gcccatcgtc gaggtcaccc gctccatcac caagcacaac tacctggtcc 13260
tcgacgtcga cgacatcccc cgcgtcgtgc aggaggcttt cttcctcgcc tcctctggtc 13320
gaccagggcc ggtgcttgtc gacatcccca aggacatcca gcagcagatg gcggtgcctg 13380
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ctgagttgct tgagcaggtg ctgcgtcttg ttggtgaatc gcggcgccct gttctttatg 13500
tgggcggtgg ctgcgcagca tctggtgagg agttgcgacg ctttgtggag ctgactggaa 13560
tcccggtcac aactactctt atgggcctcg gcaacttccc cagcgacgac ccactgtctc 13620
tgcgcatgct aggtatgcat gggacggtgt atgcaaatta tgcagtggat aaggccgatc 13680
tgttgcttgc acttggtgtg cggtttgatg atcgcgtgac agggaagatt gaggcttttg 13740
caagcagggc taagattgtg cacgttgata ttgatccggc tgagattggc aagaacaagc 13800
agccacatgt gtccatctgt gcagatgtta agcttgcttt gcagggcatg aatgctcttc 13860
ttgaaggaag cacatcaaag aagagctttg actttggctc atggaacgat gagttggatc 13920
agcagaagag ggaattcccc cttgggtata aaacatctaa tgaggagatc cagccacaat 13980
atgctattca ggttcttgat gagctgacga aaggcgaggc catcatcggc acaggtgttg 14040
ggcagcacca gatgtgggcg gcacagtact acacttacaa gcggccaagg cagtggttgt 14100
cttcagctgg tcttggggct atgggatttg gtttgccggc tgctgctggt gcttctgtgg 14160
caaacccagg tgtcactgtt gttgacatcg atggagatgg tagctttctc atgaacgttc 14220
aggagctagc tatgatccga attgagaacc tcccagtgaa ggtctttgtg ctaaacaacc 14280
agcacctggg gatggtggtg cagttggagg acaggttcta taaggccaac agagcgcaca 14340
catacttggg aaacccagag aatgaaagtg agatatatcc agatttcgtg acgatcgcca 14400
aagggttcaa cattccagcg gtccgtgtga caaagaagaa cgaagtccgc gcagcgataa 14460
agaagatgct cgagactcca gggccgtacc tcttggatat aatcgtccca caccaggagc 14520
atgtgttgcc tatgatccct agtggtgggg ctttcaagga tatgatcctg gatggtgatg 14580
gcaggactgt gtactgacta gctagtcagt taacctagac ttgtccatct tctggattgg 14640
ccaacttaat taatgtatga aataaaagga tgcacacata gtgacatgct aatcactata 14700
atgtgggcat caaagttgtg tgttatgtgt aattactagt tatctgaata aaagagaaag 14760
agatcatcca tatttcttat cctaaatgaa tgtcacgtgt ctttataatt ctttgatgaa 14820
ccagatgcat ttcattaacc aaatccatat acatataaat attaatcata tataattaat 14880
atcaattggg ttagcaaaac aaatctagtc taggtgtgtt ttgcgaatgc ggccgcctgc 14940
agagttaacg gcgcgccgac tagctagcta aggtaccgag ctcgaattca ttccgattaa 15000
tcgtggcctc ttgctcttca ggatgaagag ctatgtttaa acgtgcaagc gctactagac 15060
aattcagtac attaaaaacg tccgcaatgt gttattaagt tgtctaagcg tcaatttgtt 15120
tacaccacaa tatatcctgc ca 15142
<210> 98
<211> 15211
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 98
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcaggcgacc catcgctgct ttgtctacat catgttcttc atcatcctcc 720
ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
atagagtcac taatgcctta agcatcggtt actccgtagg gtacattctg ttcttcttat 900
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catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
actatatacg cgatgtgtgg ctacaacata agacaatata gtcgtttgaa gattgaacct 1200
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aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
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actctccacg tccacggcac catccctctg cagccgctca ccagccatgc cgtgtcgcgg 1560
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ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
ggtcgagcgt agcatgcagg aacttatttg ccgtgcgctc ccaggtctcc gctcgcgtgc 1860
cttccagtct gtctcacact agctgctgtg ggacgatcga agtgggtgtg tcagctagct 1920
agctgcgccg tgaccacgca catgaccgca gtgcgcgcgg ggctgatcaa gggaaagtga 1980
tcccatggcg gccaatgcgg gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt 2040
ggctgcgccg gcggtgtgcc gccccagcgg ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat 2100
caggatgctg aaggagctct actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat 2160
ccagcgcatc accgccatgc tgcggcagca cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta 2220
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caacgtgccc gccgccggcg cggccgacgc caccaccagc caactcggcg tcctctcgct 2340
gtcgtcgccg ccgccttcag gcgcggcgcc tccctcgccc accctcggct tctacgccgc 2400
cggcaatggc ggcggatcgg ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg 2460
cgctgctatg gccaccgaga catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg 2520
cagctcgtcg cagtggccac gcttctcgtc gtcggacacg ataatggcgg cggccgcggc 2580
gcgggcggcg acgacgcggg cgcccgagac gctccctctc ttcccgacct gcggcgacga 2640
cggcggcagc ggtagcagca gctacttgcc gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg 2700
cgccacttct tccgttgcga tccaacagca acaccagctg caggagcagt acagctttta 2760
cagcaacagc aacagcaccc agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc 2820
agcagcagcc gccgccctgg agctgagcct cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc 2880
agggagtatg tgagagcaac gcgagctgcc actgctcttc actgatgtct ctggaatgga 2940
aggaggagga agtgagaaca gatcattcga caaagcagca ttagtccgtt gatcggtgga 3000
agaccactcg tcagtgttga gttgaatgtt tgatcaataa aatacggcaa tgctgtaagg 3060
gttgtttttt atgccattga taatacactg tactgttcag ttgttgaact ctatttctta 3120
gccatgccaa gtgcttttct tattttgaat aacattacag caaaaagttg aaagacaaaa 3180
aaaaaaaccc ccgaacagag tgctttgggt cccaagcttc tttagactgt gttcggcgtt 3240
ccccctaaat ttctccccct atatctcact cacttgtcac atcagcgttc tctttccccc 3300
tatatctcca cgctctacag cagttccacc tatatcaaac ctctataccc caccacaaca 3360
atattatata ctttcatctt caactaactc atgtaccttc caattttttt ctactaataa 3420
ttatttacgt gcacagaaac ttagcaagga gagagagagc ggggtgaccc accttgctag 3480
ttggatatta cctcttctct tcaaagtatc cttgaacgct caccggttat caaatctcta 3540
cactatagct ctgtagtctt gctagatagt tagttcttta gctctcggtg accaagcttg 3600
gcgcgatcaa gcttatcgat accgtcgacc tcgaagcttg gtcacccggt ccgggcctag 3660
aaggccagct tcaagtttgt acaaaaaagc aggctccggc cagaatggcc cggaccgggt 3720
taccgaattg ctaactaact agaattcctc gaggcggccg cgaacaccaa ggagaggatt 3780
cgatgacgag tttgaggacg ccattgctag gatgattaac cctaggctct ggttccatgt 3840
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ggcttcgtgt ttgatatttc tggtggcaca aaaacaaggc gcgagttaca tatatataga 3960
tgagtatcgc cagctttagt tctattctag gaaaggataa gttttacatg gttacaattg 4020
atctatttct attaactgcc tatagaactt agccggcaat atctcaacca tatttggaat 4080
acaacacata tatgttaaca atcagtctag cagctaggtt gctgtgtgga ttcgtgaagc 4140
ggcaaattct tggatggctg caggtgcccg acatctttcg agcctccttg caaattgcta 4200
gtttttttct tgtttttcct ctttgacttg gtccgagtgt gctatgcagt tgctgtgaga 4260
gtgcaccttc tgcttagtcg catgatacaa ggaactgttg attctaaaaa aaactttatt 4320
ttaatgtaaa ggagagagaa tttaatatca gttttttttc gatatagact ttcatgtgat 4380
tttgcatcgc ccgatacatc agtgtgtttg tttggcttta gtccatagcg gcttctataa 4440
cgttttgcct cgatagatta cagctagctg cagcagtttt aaaagccgtc tttaatcgga 4500
agccaacatc tcgacatata gagcgttcga taggatgctt acttattcta gtctattaaa 4560
tttcccaccg ctgctaatta atgctaatga attaactctc tctgcctatc cctcgacatg 4620
cactaatgta ggagtatatc ccaacgccca accacctcct aataacttcg acggatggca 4680
gctaccgtcc ttggaagatg gtgacggaat gtccagcatt ccaccgactg ccagaaactg 4740
cacgcacatc tgtcatcagc aatcgctagc ctatttaatg agcaacattc cattgcaatc 4800
tcctcaggcc acttacctgc agtcaccact cccaagccag tacccacagt cctacgagca 4860
gtcgcacgca agtgtcaaga gatctaacgg tcgccatggc cactgtgaac aactggctcg 4920
ctttctccct ctccccgcag gagctgccgc cctcccagac gacggactcc acactcatct 4980
cggccgccac cgccgaccat gtctccggcg atgtctgctt caacatcccc caagattgga 5040
gcatgagggg atcagagctt tcggcgctcg tcgcggagcc gaagctggag gacttcctcg 5100
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accagcccac cagctcagcg ctccacttcg cggactccgt aatggtggct tcctcggccg 5280
gtgtccacga cggcggtgcc atgctcagcg cggccgccgc taacggtgtc gctggcgctg 5340
ccagtgccaa cggcggcggc atcgggctgt ccatgattaa gaactggctg cggagccaac 5400
cggcgcccat gcagccgagg gtggcggcgg ctgagggcgc gcaggggctc tctttgtcca 5460
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cgggtggcag cggcggcgcg tcggctgaca acacggcaag gaagacggtg gacacgttcg 5700
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cacatctttg ggataacagt tgcagaaggg aagggcaaac tcgtaagggt cgtcaagtct 5820
atttaggtgg ctatgataaa gaggagaaag ctgctagggc ttatgatctt gctgctctga 5880
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gtttctccag aggtgcatcc atttacaggg gagtgactag gcatcaccaa catggaagat 6060
ggcaagcacg gattggacga gttgcaggga acaaggatct ttacttgggc accttcagca 6120
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ccgtcaccaa cttcgacatg agccgctacg acgtgaagag catcctggac agcagcgccc 6240
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gcggcggcgg gtggtgcaag caggagcagg accacgcggt gatcgcggcc gcgcacagcc 6540
tgcaggacct ccaccacctg aacctgggcg cggccggcgc gcacgacttt ttctcggcag 6600
ggcagcaggc cgccgccgct gcgatgcacg gcctgggtag catcgacagt gcgtcgctcg 6660
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ccagcgccgt cggcggcagt ggcggtggct acatgatgcc gatgagcgct gccggagcaa 6780
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tttgctcatg tgatctcgaa ggattcatct agtctgattt ttcgtgactt gtatcggttt 7200
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agctttcttg tacaaagtgg ccgttaacgg atcggccaga atggcccgga ccgggttacc 8040
gaattcctgc ccttaaggcc aattgttcaa gattcattca acaattgaaa catctcccat 8100
gattaaatca gtataaggtt gctatggtct tgcttgacaa agtttttttt tgagggaatt 8160
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tgaattgcat tttttttttg tttggacgaa aggaaaggag tattaccaca agaatgatat 8340
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gcgatccatg gttagggcct gctagtttcc cttcctgttt tgtcgatggc tgcgaggcac 9000
aatagatctg atggcgttat gacggctaac ttgtcatgtt gttgcgattt atagtccctt 9060
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tttgatcgtg ctaactacgt cttgtaaagt taattgtcag gtcataattt ttagcatgcc 9360
tttttttttg tttggttttg tctaattggg ctgtcgttct agatcagagt agaagactgt 9420
tccaaactac ctgctggatt tattgaactt ggatctgtat gtgtgtcaca tatcttcata 9480
aattcatgat taagatggat tgaaatatct tttatctttt tggtatggat agttctatat 9540
gttggtgtgg ctttgttaga tgtatacatg cttagataca tgaagcaacg tgctgctact 9600
gtttagtaat tgctgttcat ttgtctaata aacagataag gatatgtatt tatgttgctg 9660
ttggttttgc tggtactttg ttggatacaa atgcttcaat acagaaaaca gcatgctgct 9720
acgatttacc atttatctaa tcttatcata tgtctaatct aataaacaaa catgctttta 9780
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ccttcaaggg caagcaggcc atcaacctgt gcgtggtgga gggcggcccc ttgcccttcg 10140
ccgaggacat cttgtccgcc gccttcatgt acggcaaccg cgtgttcacc gagtaccccc 10200
aggacatcgt cgactacttc aagaactcct gccccgccgg ctacacctgg gaccgctcct 10260
tcctgttcga ggacggcgcc gtgtgcatct gcaacgccga catcaccgtg agcgtggagg 10320
agaactgcat gtaccacgag tccaagttct acggcgtgaa cttccccgcc gacggccccg 10380
tgatgaagaa gatgaccgac aactgggagc cctcctgcga gaagatcatc cccgtgccca 10440
agcagggcat cttgaagggc gacgtgagca tgtacctgct gctgaaggac ggtggccgct 10500
tgcgctgcca gttcgacacc gtgtacaagg ccaagtccgt gccccgcaag atgcccgact 10560
ggcacttcat ccagcacaag ctgacccgcg aggaccgcag cgacgccaag aaccagaagt 10620
ggcacctgac cgagcacgcc atcgcctccg gctccgcctt gccctccgga ctcagatctc 10680
gatagggtac caatggccag ttaacagatc cagctgctgc tgttctaggg ttcacaagtc 10740
tgcctatttg tcttccccaa tggagctatg gttgtctggt ctggtccttg gtcgtgtccc 10800
gtttcattgt gtactattta cctgtaatgt gtatccttaa gtctggtttg atggtgtctg 10860
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aaatttgatc tgacaaacaa atttgtctaa attatgctct tgttctgact gtgtactgta 11040
cacatttgta ttgctaccgg tttggcacat agttttctct ttgattgcag atcaaaccct 11100
tctgattgca gattgcttgg ctatggctga tgtgctcact gttcttcttt agcttgtata 11160
ttgctgatgg tggcttggct acggctgaaa aagttgctgc tgcgccgact tggcaactgt 11220
tgctccagta atgctttgtc ctctcttcct agccgccgac ttggcacttg gcagctgttg 11280
ctcctgtaat gcgttgttat ctcttatctc ttgagatgta ctatgatttt gaggctgttt 11340
gacttgtgcc agattgccag tgctgatgct atattatctc aggtttttat gctagtatat 11400
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gaaaagattc aaacagataa acgggactct ccagaatcta taaaataaat gatcgacaaa 11640
cgctttgctt tggtaggctt cctagttagt tagcggaccg aagcttcggt ccgggcctag 11700
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tcgtatagca tacattatac gaagttatac ctggtggcgc cgctaggggc tgcaggaatt 11820
cgatatcaag cttatcgata ccgtcgacct cgaggggggg cccggtaccc tgggatctgc 11880
ccttacttta acgcctctaa ccaacacccc tttatcttta taaggaacaa taaacagaat 11940
ttgccccact gttctaaatc acctaataat atccccagct aaaaacaata aaggtttcct 12000
agaattaaga caagcatgac tgttcctcca ggagggtttg gaacattgtt gcagtcttgc 12060
agatacgggc gaagggtgag aaacagagcg gagggctgga ggtgacctcg gtagtcgacg 12120
ccggagttga gcttgacaac gacggggcgg cccctgatgg acttgaggaa gtccgatggc 12180
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gatgcgaggg cgacccgttt ggactccggc cggagccgcc ggatccctgg tcggtgtcag 12360
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cacagtcatg tccaaaatat cctttcttct tttttttcga ttcggatatc tatcttcctt 12480
ttttttttcc aaaaatcttc ttgacgcacc agcgcgcacg tttgtggtaa acgccgacac 12540
gtcggtccca cgtcgataga ccccacccac cagtgagtag cgtgtacgta ttcgggggtg 12600
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tcgtcgagtc cctcgagcgc tgcggcgtcc gcgacgtctt cgcctacccc ggcggcgcgt 13020
ccatggagat ccaccaggca ctcacccgct cccccgtcat cgccaaccac ctcttccgcc 13080
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tgctcgattc cgtccccatg gtcgccatca cgggacaggt ggcgcgacgc atgattggca 13260
ccgacgcctt ccaggagacg cccatcgtcg aggtcacccg ctccatcacc aagcacaact 13320
acctggtcct cgacgtcgac gacatccccc gcgtcgtgca ggaggctttc ttcctcgcct 13380
cctctggtcg accagggccg gtgcttgtcg acatccccaa ggacatccag cagcagatgg 13440
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cactgtctct gcgcatgcta ggtatgcatg ggacggtgta tgcaaattat gcagtggata 13740
aggccgatct gttgcttgca cttggtgtgc ggtttgatga tcgcgtgaca gggaagattg 13800
aggcttttgc aagcagggct aagattgtgc acgttgatat tgatccggct gagattggca 13860
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cagcgataaa gaagatgctc gagactccag ggccgtacct cttggatata atcgtcccac 14580
accaggagca tgtgttgcct atgatcccta gtggtggggc tttcaaggat atgatcctgg 14640
atggtgatgg caggactgtg tactgactag ctagtcagtt aacctagact tgtccatctt 14700
ctggattggc caacttaatt aatgtatgaa ataaaaggat gcacacatag tgacatgcta 14760
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aagagaaaga gatcatccat atttcttatc ctaaatgaat gtcacgtgtc tttataattc 14880
tttgatgaac cagatgcatt tcattaacca aatccatata catataaata ttaatcatat 14940
ataattaata tcaattgggt tagcaaaaca aatctagtct aggtgtgttt tgcgaatgcg 15000
gccgcctgca gagttaacgg cgcgccgact agctagctaa ggtaccgagc tcgaattcat 15060
tccgattaat cgtggcctct tgctcttcag gatgaagagc tatgtttaaa cgtgcaagcg 15120
ctactagaca attcagtaca ttaaaaacgt ccgcaatgtg ttattaagtt gtctaagcgt 15180
caatttgttt acaccacaat atatcctgcc a 15211
<210> 99
<211> 15875
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 99
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
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ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
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ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
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ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
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cttccagtct gtctcacact agctgctgtg ggacgatcga agtgggtgtg tcagctagct 1920
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tcccatggcg gccaatgcgg gcggcggtgg agcgggagga ggcagcggca gcggcagcgt 2040
ggctgcgccg gcggtgtgcc gccccagcgg ctcgcggtgg acgccgacgc cggagcagat 2100
caggatgctg aaggagctct actacggctg cggcatccgg tcgcccagct cggagcagat 2160
ccagcgcatc accgccatgc tgcggcagca cggcaagatc gagggcaaga acgtcttcta 2220
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caacgtgccc gccgccggcg cggccgacgc caccaccagc caactcggcg tcctctcgct 2340
gtcgtcgccg ccgccttcag gcgcggcgcc tccctcgccc accctcggct tctacgccgc 2400
cggcaatggc ggcggatcgg ctgtgctgct ggacacgagt tccgactggg gcagcagcgg 2460
cgctgctatg gccaccgaga catgcttcct gcaggactac atgggcgtga cggacacggg 2520
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cggcggcagc ggtagcagca gctacttgcc gttctggggt gccgcgtcca caactgccgg 2700
cgccacttct tccgttgcga tccaacagca acaccagctg caggagcagt acagctttta 2760
cagcaacagc aacagcaccc agctggccgg caccggcaac caagacgtat cggcaacagc 2820
agcagcagcc gccgccctgg agctgagcct cagctcatgg tgctcccctt accctgctgc 2880
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aggaggagga agtgagaaca gatcattcga caaagcagca ttagtccgtt gatcggtgga 3000
agaccactcg tcagtgttga gttgaatgtt tgatcaataa aatacggcaa tgctgtaagg 3060
gttgtttttt atgccattga taatacactg tactgttcag ttgttgaact ctatttctta 3120
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aaaaaaaccc ccgaacagag tgctttgggt cccaagcttc tttagactgt gttcggcgtt 3240
ccccctaaat ttctccccct atatctcact cacttgtcac atcagcgttc tctttccccc 3300
tatatctcca cgctctacag cagttccacc tatatcaaac ctctataccc caccacaaca 3360
atattatata ctttcatctt caactaactc atgtaccttc caattttttt ctactaataa 3420
ttatttacgt gcacagaaac ttagcaagga gagagagagc ggggtgaccc accttgctag 3480
ttggatatta cctcttctct tcaaagtatc cttgaacgct caccggttat caaatctcta 3540
cactatagct ctgtagtctt gctagatagt tagttcttta gctctcggtg accaagcttg 3600
gcgcgatcaa gcttatcgat accgtcgacc tcgaagcttg gtcacccggt ccgggcctag 3660
aaggccagct tcaagtttgt acaaaaaagc aggctccggc cagaatggcc cggaccgggt 3720
taccgaattg ctaactaact agaattcctc gaggcggccg cggttggcag gtagatcgat 3780
acgagaatga catgaacata atggatcgtc ggcttcaatt tggaagccac ctgctggcga 3840
ccgacagccg tcccggccgg gagggataac ctacgtcaac gataaataaa tactcctact 3900
aactggagta gctagcagct tggtcttgtg aaaaagaaag ataaaattct actactccat 3960
agtgtacgtg gtcttatcta gagcttaatt ggattgcaaa atagcataca gctgattgat 4020
taaaaactac gttaaactta ggaggtgttt agaaattagg actaaattta gtccctctca 4080
caaaaatata agtcccttta gtccacttta gtccctccaa ccaaacacca ccttcaaaca 4140
ccaccttagt aactgaaaat tcttagattt aattgatcga tctgctgaga gctttgcatt 4200
gtggagcaca tgccaggcca gctagtacat tcttgtgata agaaacatga agtttcggtt 4260
taacctctta aatacatgca tgcatggttg atacaataca cgtcctgaac atgaataaat 4320
actattaaat acgttatccg aattttatca tatagtaata tatttggatt agtttcttaa 4380
tatgactttt attcttttat cccaattata tatcaatctc ttgtgtacta aaatgtgatg 4440
tgctattgag atatttcact gtgtttgtac caactcctga aaatactcat catatcgtcg 4500
ttgttggttg gcattcatag tttattttgt agcagctgag caattttaat tagtcttttt 4560
agcttgtaag attcttatat ttcttagcaa tagccgagcg cattattggg ctatagtgta 4620
accaggtgaa gcgtacgcgt gtgcataagt tgtccttgtg gttgaaagaa gaatactgga 4680
aggatcgttg gatgttactg ctgatatgat ggacacttgg ttccaaacat catgaatgcg 4740
ctcaactact tgcatgttcc aaatgtacaa catgcatgct agctgctaca aacgactagc 4800
tccgttaggc cgctgctaat cattttctca tcactaatac taacactgtg tgactagcta 4860
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gacgcaccga cgactaagaa cggtgcctaa acactagcac tccaaggtta attacactat 4980
gcgtacacca attaaaaaat gtcacgaaac attctataaa caaattagat atttactcct 5040
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atctcggccg ccaccgccga ccatgtctcc ggcgatgtct gcttcaacat cccccaagat 5700
tggagcatga ggggatcaga gctttcggcg ctcgtcgcgg agccgaagct ggaggacttc 5760
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ctgaagtact ggggtgccac aacaacaaca aattttccag tgagtaacta cgaaaaggag 6600
ctcgaggaca tgaagcacat gacaaggcag gagtttgtag cgtctctgag aaggaagagc 6660
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tatgaagata aacaacatca acaacaaaat ttgttggggt tctatagaga gaaacagagc 8400
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ccagccggcg ctgtatattt acacacgttg cagcatcgat caccacctgt tcgatcgcgt 8580
cgccgtcacc ggtaccgagc tcgaattccg gtccgggcct agaaggccga tctcccgggc 8640
acccagcttt cttgtacaaa gtggccgtta acggatcggc cagaatggcc cggaccgggt 8700
taccgaattc ctgcccttaa ggccaattgt tcaagattca ttcaacaatt gaaacatctc 8760
ccatgattaa atcagtataa ggttgctatg gtcttgcttg acaaagtttt tttttgaggg 8820
aatttcaact aaatttttga gtgaaactat caaatactga ttttaaaaaa tttttataaa 8880
aggaagcgca gagataaaag gccatctatg ctacaaaagt acccaaaaat gtaatcctaa 8940
agtatgaatt gcattttttt tttgtttgga cgaaaggaaa ggagtattac cacaagaatg 9000
atatcatctt catatttaga tcttttttgg gtaaagcttg agattctcta aatatagaga 9060
aatcagaaga aaaaaaaacc gtgttttggt ggttttgatt tctagcctcc acaataactt 9120
tgacggcgtc gacaagtcta acggacacca agcagcgaac caccagcgcc gagccaagcg 9180
aagcagacgg ccgagacgtt gacaccttcg gcgcggcatc tctcgagagt tccgctccgg 9240
cgctccacct ccaccgctgg cggtttctta ttccgttccg ttccgcctcc tgctctgctc 9300
ctctccacac cacacggcac gaaaccgtta cggcaccggc agcacccagc acgggagagg 9360
ggattccttt cccaccgttc cttccctttc cgccccgccg ctataaatag ccagccccat 9420
ccccagcttt tttccccaat ctcatctcct ctctcctgtt gttcggagca cacgcacaat 9480
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gatggcgatc catggttagg gcctgctagt ttcccttcct gttttgtcga tggctgcgag 9660
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cctttaggag atcagtttaa tttctcggat ggttcgagat cggtggtcca tggttagtac 9780
cctaagatcc gcgctgttag ggttcgtaga tggaggcgac ctgttctgat tgttaacttg 9840
tcagtacctg ggaaatcctg ggatggttct agctcgtccg cagatgagat cgatttcatg 9900
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tgcctttttt tttgtttggt tttgtctaat tgggctgtcg ttctagatca gagtagaaga 10080
ctgttccaaa ctacctgctg gatttattga acttggatct gtatgtgtgt cacatatctt 10140
cataaattca tgattaagat ggattgaaat atcttttatc tttttggtat ggatagttct 10200
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tactgtttag taattgctgt tcatttgtct aataaacaga taaggatatg tatttatgtt 10320
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gaggagaact gcatgtacca cgagtccaag ttctacggcg tgaacttccc cgccgacggc 11040
cccgtgatga agaagatgac cgacaactgg gagccctcct gcgagaagat catccccgtg 11100
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tcccgtttca ttgtgtacta tttacctgta atgtgtatcc ttaagtctgg tttgatggtg 11520
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ttaaaaattt gatctgacaa acaaatttgt ctaaattatg ctcttgttct gactgtgtac 11700
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tatattgctg atggtggctt ggctacggct gaaaaagttg ctgctgcgcc gacttggcaa 11880
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gttgctcctg taatgcgttg ttatctctta tctcttgaga tgtactatga ttttgaggct 12000
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aggcagtggt tgtcttcagc tggtcttggg gctatgggat ttggtttgcc ggctgctgct 14880
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ataaaagaga aagagatcat ccatatttct tatcctaaat gaatgtcacg tgtctttata 15540
attctttgat gaaccagatg catttcatta accaaatcca tatacatata aatattaatc 15600
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agcgctacta gacaattcag tacattaaaa acgtccgcaa tgtgttatta agttgtctaa 15840
gcgtcaattt gtttacacca caatatatcc tgcca 15875
<210> 100
<211> 14940
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 100
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
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ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
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ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
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catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
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ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
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cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
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cccctatatc tccacgctct acagcagttc cacctatatc aaacctctat accccaccac 3360
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ataattattt acgtgcacag aaacttagca aggagagaga gagcggggtc acccggtccg 3480
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ttctgttctt gcggttgtag cctgtgtaac agtgctagag tatgtatgat aaataggttt 3660
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cgccgcattc caaacagccc gacgagctag cagagcggca ggcacctccc tcctcaagga 4620
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cgcggcgatc aagttccgcg gcctcaacgc cgtcaccaac ttcgacatga gccgctacga 5940
cgtgaagagc atcctggaca gcagcgccct ccccatcggc agcgccgcca agcgcctcaa 6000
ggaggccgag gccgcagcgt ccgcgcagca ccaccacgcc ggcgtggtga gctacgacgt 6060
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gtaccacccg tacgcgcagc agccaatgcg cggcggcggg tggtgcaagc aggagcagga 6240
ccacgcggtg atcgcggccg cgcacagcct gcaggacctc caccacctga acctgggcgc 6300
ggccggcgcg cacgactttt tctcggcagg gcagcaggcc gccgccgctg cgatgcacgg 6360
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catgatgccg atgagcgctg ccggagcaac cactacatcg gcaatggtga gccacgagca 6540
ggtgcatgca cgggcctacg acgaagccaa gcaggctgct cagatggggt acgagagcta 6600
cctggtgaac gcggagaaca atggtggcgg aaggatgtct gcatggggga ctgtcgtgtc 6660
tgcagccgcg gcggcagcag caagcagcaa cgacaacatg gccgccgacg tcgggcatgg 6720
cggcgcgcag ctcttcagtg tctggaacga cacttaagcg tacctagtgg tacctgacat 6780
cttatagtct gcaacctctc gtgtctgaat tcctatcttt atcaagtgtt attgcttcca 6840
cgactatagg acagctttcg tcgaaagctt ttgctcatgt gatctcgaag gattcatcta 6900
gtctgatttt tcgtgacttg tatcggtttt attggattca tccaacatat atcaataaaa 6960
aatgagttgt gtttcctttc ttcctagttc agttaaaatt atttccctcc tgcgcttgtg 7020
ctgtaattgt ctgtgtacct gttgtttgtg actgtgttag ttcccttgga tatgatttcg 7080
tatttgatat gtacatggag atagcttagc ttcattattg gagtatgaag ttagtatgac 7140
atagtcactc tcctggaaaa ttgacactgc aaaccatatt tttattctga accacaaatc 7200
ctagtcagtc cgctggcata tgccgtccgt ttgctgaatc cagaacgtgg gtttggagat 7260
gtacggctga gatgcctcta tgcgaagggg atttcgtggt gaaacgagat gggagtagag 7320
caacgcccgt ggaagatgct tcaaacttcc acacttttga gcaacgatcg gcagtagtaa 7380
ggtagacgat ttcaagatca aagcatatga agataaacaa catcaacaac aaaatttgtt 7440
ggggttctat agagagaaac agagctacat acatacactg ttttgtatct accatctgag 7500
atgatgaaaa gatgaaaaac taaagaatgc cccggcgcca acgccaggac acgccgcgcg 7560
cgcgtcaccc gagccatctc ttgacccagc cggcgctgta tatttacaca cgttgcagca 7620
tcgatcacca cctgttcgat cgcgtcgccg tcaccggtac cgagctcgaa ttccggtccg 7680
ggcctagaag gccgatctcc cgggcaccca gctttcttgt acaaagtggc cgttaacgga 7740
tcggccagaa tggcccggac cgggttaccg aattcctgcc cttaaggcca attgttcaag 7800
attcattcaa caattgaaac atctcccatg attaaatcag tataaggttg ctatggtctt 7860
gcttgacaaa gttttttttt gagggaattt caactaaatt tttgagtgaa actatcaaat 7920
actgatttta aaaaattttt ataaaaggaa gcgcagagat aaaaggccat ctatgctaca 7980
aaagtaccca aaaatgtaat cctaaagtat gaattgcatt ttttttttgt ttggacgaaa 8040
ggaaaggagt attaccacaa gaatgatatc atcttcatat ttagatcttt tttgggtaaa 8100
gcttgagatt ctctaaatat agagaaatca gaagaaaaaa aaaccgtgtt ttggtggttt 8160
tgatttctag cctccacaat aactttgacg gcgtcgacaa gtctaacgga caccaagcag 8220
cgaaccacca gcgccgagcc aagcgaagca gacggccgag acgttgacac cttcggcgcg 8280
gcatctctcg agagttccgc tccggcgctc cacctccacc gctggcggtt tcttattccg 8340
ttccgttccg cctcctgctc tgctcctctc cacaccacac ggcacgaaac cgttacggca 8400
ccggcagcac ccagcacggg agaggggatt cctttcccac cgttccttcc ctttccgccc 8460
cgccgctata aatagccagc cccatcccca gcttttttcc ccaatctcat ctcctctctc 8520
ctgttgttcg gagcacacgc acaatccgat cgatccccaa atccccttcg tctctcctcg 8580
cgagcctcgt ggatcccagc ttcaaggtac ggcgatcgat catcccccct ccttctctct 8640
accttctttt ctctagacta catcggatgg cgatccatgg ttagggcctg ctagtttccc 8700
ttcctgtttt gtcgatggct gcgaggcaca atagatctga tggcgttatg acggctaact 8760
tgtcatgttg ttgcgattta tagtcccttt aggagatcag tttaatttct cggatggttc 8820
gagatcggtg gtccatggtt agtaccctaa gatccgcgct gttagggttc gtagatggag 8880
gcgacctgtt ctgattgtta acttgtcagt acctgggaaa tcctgggatg gttctagctc 8940
gtccgcagat gagatcgatt tcatgatcct ctgtatcttg tttcgttgcc taggttccgt 9000
ctaatctatc cgtggtatga tgtagatgtt ttgatcgtgc taactacgtc ttgtaaagtt 9060
aattgtcagg tcataatttt tagcatgcct ttttttttgt ttggttttgt ctaattgggc 9120
tgtcgttcta gatcagagta gaagactgtt ccaaactacc tgctggattt attgaacttg 9180
gatctgtatg tgtgtcacat atcttcataa attcatgatt aagatggatt gaaatatctt 9240
ttatcttttt ggtatggata gttctatatg ttggtgtggc tttgttagat gtatacatgc 9300
ttagatacat gaagcaacgt gctgctactg tttagtaatt gctgttcatt tgtctaataa 9360
acagataagg atatgtattt atgttgctgt tggttttgct ggtactttgt tggatacaaa 9420
tgcttcaata cagaaaacag catgctgcta cgatttacca tttatctaat cttatcatat 9480
gtctaatcta ataaacaaac atgcttttaa attatcttca tatgcttgga tgatggcata 9540
cacagcggct atgtgtggtt ttttaaatac ccagcatcat gggcatgcat gacactgctt 9600
taatatgctt tttatttgct tgagactgtt tcttttgttt atactgaccc tttagttcgg 9660
tgactcttct gcaggtcgac tttaacttag cctaggatcc atggcccagt ccaagcacgg 9720
cctgaccaag gagatgacca tgaagtaccg catggagggc tgcgtggacg gccacaagtt 9780
cgtgatcacc ggcgagggca tcggctaccc cttcaagggc aagcaggcca tcaacctgtg 9840
cgtggtggag ggcggcccct tgcccttcgc cgaggacatc ttgtccgccg ccttcatgta 9900
cggcaaccgc gtgttcaccg agtaccccca ggacatcgtc gactacttca agaactcctg 9960
ccccgccggc tacacctggg accgctcctt cctgttcgag gacggcgccg tgtgcatctg 10020
caacgccgac atcaccgtga gcgtggagga gaactgcatg taccacgagt ccaagttcta 10080
cggcgtgaac ttccccgccg acggccccgt gatgaagaag atgaccgaca actgggagcc 10140
ctcctgcgag aagatcatcc ccgtgcccaa gcagggcatc ttgaagggcg acgtgagcat 10200
gtacctgctg ctgaaggacg gtggccgctt gcgctgccag ttcgacaccg tgtacaaggc 10260
caagtccgtg ccccgcaaga tgcccgactg gcacttcatc cagcacaagc tgacccgcga 10320
ggaccgcagc gacgccaaga accagaagtg gcacctgacc gagcacgcca tcgcctccgg 10380
ctccgccttg ccctccggac tcagatctcg atagggtacc aatggccagt taacagatcc 10440
agctgctgct gttctagggt tcacaagtct gcctatttgt cttccccaat ggagctatgg 10500
ttgtctggtc tggtccttgg tcgtgtcccg tttcattgtg tactatttac ctgtaatgtg 10560
tatccttaag tctggtttga tggtgtctga aacgttttgc tgtggtagag cagcatggaa 10620
gaactataat gaataagtga tccctaatca ttgtgtccaa attttgcttc tgctataccc 10680
ttttgtgctg tttcttatgt tttgcttaaa aatttgatct gacaaacaaa tttgtctaaa 10740
ttatgctctt gttctgactg tgtactgtac acatttgtat tgctaccggt ttggcacata 10800
gttttctctt tgattgcaga tcaaaccctt ctgattgcag attgcttggc tatggctgat 10860
gtgctcactg ttcttcttta gcttgtatat tgctgatggt ggcttggcta cggctgaaaa 10920
agttgctgct gcgccgactt ggcaactgtt gctccagtaa tgctttgtcc tctcttccta 10980
gccgccgact tggcacttgg cagctgttgc tcctgtaatg cgttgttatc tcttatctct 11040
tgagatgtac tatgattttg aggctgtttg acttgtgcca gattgccagt gctgatgcta 11100
tattatctca ggtttttatg ctagtatatg ttttactgtg tgctgcctgt gtcgagttac 11160
gtaatctatt gaaccgctat gcgtgttgat gccctgttgt tgcttgccag attgatgccc 11220
ctgttgcttg cagcttgcaa gctgtagtga aatcctaaaa ttcgaaacca aatctattct 11280
gaacttttga agatctgtga tgtccggaag aaaagattca aacagataaa cgggactctc 11340
cagaatctat aaaataaatg atcgacaaac gctttgcttt ggtaggcttc ctagttagtt 11400
agcggaccga agcttcggtc cgggcctaga aggccagctt cggccgcccc gggcaacttt 11460
attatacaaa gttgatagat cgaataactt cgtatagcat acattatacg aagttatacc 11520
tggtggcgcc gctaggggct gcaggaattc gatatcaagc ttatcgatac cgtcgacctc 11580
gagggggggc ccggtaccct gggatctgcc cttactttaa cgcctctaac caacacccct 11640
ttatctttat aaggaacaat aaacagaatt tgccccactg ttctaaatca cctaataata 11700
tccccagcta aaaacaataa aggtttccta gaattaagac aagcatgact gttcctccag 11760
gagggtttgg aacattgttg cagtcttgca gatacgggcg aagggtgaga aacagagcgg 11820
agggctggag gtgacctcgg tagtcgacgc cggagttgag cttgacaacg acggggcggc 11880
ccctgatgga cttgaggaag tccgatggcg tcttcaccgt cccgccggcg cccgaggcgg 11940
gcctgtcgct gccgccgccg ccgctgctca tcttgcgcgc tgtgcccccg gcggtgtccc 12000
tgtgttgcgg atcgcgggtg ggccaggtgg atgcgagggc gacccgtttg gactccggcc 12060
ggagccgccg gatccctggt cggtgtcagt gccgtttact ctgggcccca cgtgtcagta 12120
ccgtctgtag atgacaacaa cccgtcgtcc acagtcatgt ccaaaatatc ctttcttctt 12180
ttttttcgat tcggatatct atcttccttt tttttttcca aaaatcttct tgacgcacca 12240
gcgcgcacgt ttgtggtaaa cgccgacacg tcggtcccac gtcgatagac cccacccacc 12300
agtgagtagc gtgtacgtat tcgggggtga cggacgtgtc gccgtcgtct tgctagtccc 12360
attcccatct gagccacaca tctctgaaca aaaaaaagga gggaggcctc cacgcacatc 12420
cccctccgtg ccacccgccc caaaccctcg cgccgcctcc gagacagccg ccgcaaccat 12480
ggccaccgcc gccgccgcgt ctaccgcgct cactggcgcc actaccgctg cgcccaaggc 12540
gaggcgccgg gcgcacctcc tggccacccg ccgcgccctc gccgcgccca tcaggtgctc 12600
agcggcgtca cccgccatgc cgatggctcc cccggccacc ccgctccggc cgtggggccc 12660
caccgagccc cgcaagggtg ctgacatcct cgtcgagtcc ctcgagcgct gcggcgtccg 12720
cgacgtcttc gcctaccccg gcggcgcgtc catggagatc caccaggcac tcacccgctc 12780
ccccgtcatc gccaaccacc tcttccgcca cgagcaaggg gaggcctttg ccgcctccgg 12840
ctacgcgcgc tcctcgggcc gcgtcggcgt ctgcatcgcc acctccggcc ccggcgccac 12900
caacctagtc tccgcgctcg ccgacgcgct gctcgattcc gtccccatgg tcgccatcac 12960
gggacaggtg gcgcgacgca tgattggcac cgacgccttc caggagacgc ccatcgtcga 13020
ggtcacccgc tccatcacca agcacaacta cctggtcctc gacgtcgacg acatcccccg 13080
cgtcgtgcag gaggctttct tcctcgcctc ctctggtcga ccagggccgg tgcttgtcga 13140
catccccaag gacatccagc agcagatggc ggtgcctgtc tgggacaagc ccatgagtct 13200
gcctgggtac attgcgcgcc ttcccaagcc ccctgcgact gagttgcttg agcaggtgct 13260
gcgtcttgtt ggtgaatcgc ggcgccctgt tctttatgtg ggcggtggct gcgcagcatc 13320
tggtgaggag ttgcgacgct ttgtggagct gactggaatc ccggtcacaa ctactcttat 13380
gggcctcggc aacttcccca gcgacgaccc actgtctctg cgcatgctag gtatgcatgg 13440
gacggtgtat gcaaattatg cagtggataa ggccgatctg ttgcttgcac ttggtgtgcg 13500
gtttgatgat cgcgtgacag ggaagattga ggcttttgca agcagggcta agattgtgca 13560
cgttgatatt gatccggctg agattggcaa gaacaagcag ccacatgtgt ccatctgtgc 13620
agatgttaag cttgctttgc agggcatgaa tgctcttctt gaaggaagca catcaaagaa 13680
gagctttgac tttggctcat ggaacgatga gttggatcag cagaagaggg aattccccct 13740
tgggtataaa acatctaatg aggagatcca gccacaatat gctattcagg ttcttgatga 13800
gctgacgaaa ggcgaggcca tcatcggcac aggtgttggg cagcaccaga tgtgggcggc 13860
acagtactac acttacaagc ggccaaggca gtggttgtct tcagctggtc ttggggctat 13920
gggatttggt ttgccggctg ctgctggtgc ttctgtggca aacccaggtg tcactgttgt 13980
tgacatcgat ggagatggta gctttctcat gaacgttcag gagctagcta tgatccgaat 14040
tgagaacctc ccagtgaagg tctttgtgct aaacaaccag cacctgggga tggtggtgca 14100
gttggaggac aggttctata aggccaacag agcgcacaca tacttgggaa acccagagaa 14160
tgaaagtgag atatatccag atttcgtgac gatcgccaaa gggttcaaca ttccagcggt 14220
ccgtgtgaca aagaagaacg aagtccgcgc agcgataaag aagatgctcg agactccagg 14280
gccgtacctc ttggatataa tcgtcccaca ccaggagcat gtgttgccta tgatccctag 14340
tggtggggct ttcaaggata tgatcctgga tggtgatggc aggactgtgt actgactagc 14400
tagtcagtta acctagactt gtccatcttc tggattggcc aacttaatta atgtatgaaa 14460
taaaaggatg cacacatagt gacatgctaa tcactataat gtgggcatca aagttgtgtg 14520
ttatgtgtaa ttactagtta tctgaataaa agagaaagag atcatccata tttcttatcc 14580
taaatgaatg tcacgtgtct ttataattct ttgatgaacc agatgcattt cattaaccaa 14640
atccatatac atataaatat taatcatata taattaatat caattgggtt agcaaaacaa 14700
atctagtcta ggtgtgtttt gcgaatgcgg ccgcctgcag agttaacggc gcgccgacta 14760
gctagctaag gtaccgagct cgaattcatt ccgattaatc gtggcctctt gctcttcagg 14820
atgaagagct atgtttaaac gtgcaagcgc tactagacaa ttcagtacat taaaaacgtc 14880
cgcaatgtgt tattaagttg tctaagcgtc aatttgttta caccacaata tatcctgcca 14940
<210> 101
<211> 14718
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 101
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcaggcgacc catcgctgct ttgtctacat catgttcttc atcatcctcc 720
ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
atagagtcac taatgcctta agcatcggtt actccgtagg gtacattctg ttcttcttat 900
ttgtgcatat ttttattgtt gtttactgat tatacgagta gttatacata catgcacata 960
catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
actatatacg cgatgtgtgg ctacaacata agacaatata gtcgtttgaa gattgaacct 1200
atatatcggt acggttaatc cgtctatgta cgtgggcatg acgaacaccc gtgataacga 1260
aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
cgcctttatt tcaggctcgc tggccccacg ggcgtgctgc gtgcacgaag ggcactaccc 1440
caacctctca ccgaaaaccg cgctggatcg gcaaatcaaa cgaggtggtg ccccgtgccc 1500
actctccacg tccacggcac catccctctg cagccgctca ccagccatgc cgtgtcgcgg 1560
aacggcacaa ccacccccaa cccactcacg aaaccccgtc ccggccgtgc ccgtgtcggt 1620
ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
ggtcgagcgt agcatgcagg aacttatttg ccgtgcgctc ccaggtctcc gctcgcgtgc 1860
cttccagtct gtctcacact agctgctgtg ggacgatcga agtgggtgtg tcagctagct 1920
agctgcgccg tgaccacgca catgaccgca gtgcgcgcgg ggctgatcaa gggaaagtga 1980
tcccatgagg cttcaccatt tccatgtggc ttacttggat aaagcggcag gctcgccgcc 2040
gccgtcgtcg tcaccaccat ccatctcacc agcatctcac agtcacagct cgtcgtctgc 2100
tgccaccatc gtccctctgg ccctccagca atactgtcta cgcccgcttg cgcccaagat 2160
ctccttccct gaggcgagga agatggtcgt ccttcctgag ttcgctcgcg tcaggaatgc 2220
ttcttcgagg ctgctaaact gcacggtgca agtgccgccg acgacgacga cggtgggtgg 2280
cacgacgcgg tggaacccgt cgccggacca gataagggtg ctggagatgc tgtaccgcgg 2340
ggggatgcgc acgcccaact cgttccagat cgagcagatc acggaggagc tcggcaagta 2400
cggccggatc gagggcaaga acgtcttcta ctggttccag aaccacaagg cccgcgagcg 2460
ccagaagcag aagcgagctg ccctcctcac cctcagcacc accaccactg cttccacgct 2520
gctaccacca gctgctgaaa ccaaggaggg agtggagacg aaaaaagaag aagcgtgtga 2580
agatgcatcg agccgcaagc ggaggtgcag ggcctgggaa gatgtcgtcg tccacggtgg 2640
cggcgacgat gccggtacgg aggtagctga cgactactac accgacgacg atgtgaccct 2700
ggagctcttc ccgctgcgtc ctgatcaggg gaaataacgt accgttaacc gacaaagcag 2760
cattagtccg ttgatcggtg gaagaccact cgtcagtgtt gagttgaatg tttgatcaat 2820
aaaatacggc aatgctgtaa gggttgtttt ttatgccatt gataatacac tgtactgttc 2880
agttgttgaa ctctatttct tagccatgcc aagtgctttt cttattttga ataacattac 2940
agcaaaaagt tgaaagacaa aaaaaaaaac ccccgaacag agtgctttgg gtcccaagct 3000
tctttagact gtgttcggcg ttccccctaa atttctcccc ctatatctca ctcacttgtc 3060
acatcagcgt tctctttccc cctatatctc cacgctctac agcagttcca cctatatcaa 3120
acctctatac cccaccacaa caatattata tactttcatc ttcaactaac tcatgtacct 3180
tccaattttt ttctactaat aattatttac gtgcacagaa acttagcaag gagagagaga 3240
gcggggtcac ccggtccggg cctagaaggc cagcttcaag tttgtacaaa aaagcaggct 3300
ccggccagaa tggcccggac cgggttaccg aattcttacc ctagctccct gcggctgtta 3360
cgcggtcccc catcaatctt ctgttcttgc ggttgtagcc tgtgtaacag tgctagagta 3420
tgtatgataa ataggtttta agtctgctta catgacattt tttattgtgg aagagacata 3480
taaaaattag agagagtggt tctcatgcaa cggcggacgg cccggtgcta aaagagcttc 3540
aagacaaaat aatgaaacag gaagagagta gatttatcta agagccaact ttattatatg 3600
aatgtgttta ttgttggctt tagatgatat ggtaaggagt tagagctaat aatagatagg 3660
ctctattatt attattatta attaaactcg ctctaaggag gaaagtggga ggaagggacg 3720
aggacgaaga ctactggaag catcgtgcat ggatgatgga tgtggtgtct cttaatgtag 3780
gtggccggag gatgtacgtg ttaattgcgc gataagcact cagatccaac cgcaaactac 3840
ctccacactg acacactgat agagagaaag agagacctcc gacgactgcc gccgcagatg 3900
agccacgtac gtatacgacg tctgccggcc ggctcaggct gccgccatca ccctgctcga 3960
aagtcgcgtt aggcggcgcc agctacatag gagtatctag tctagccagt tagtatacta 4020
ctactgcgct gatgatgaat taactctgca tagatactgt acttgcctcc ctccaacacc 4080
caaccacctc ctgctcggct cttaataact tggacacgga tcgatgccat ccaaggaaga 4140
acacgacgac gacgacggaa catccaccat gcaagcttgc atccatacgc cgatacgcgt 4200
gcatccatcc atccaccatt atttccattt tccaccgatc acacgtacac aggcctattt 4260
aaggagcgac atcccactgc aactctcctc accactcatc accagctagc tctagcaaag 4320
cacttgccat ctaccgaccg ccgcattcca aacagcccga cgagctagca gagcggcagg 4380
cacctccctc ctcaaggaac ccatggccac tgtgaacaac tggctcgctt tctccctctc 4440
cccgcaggag ctgccgccct cccagacgac ggactccaca ctcatctcgg ccgccaccgc 4500
cgaccatgtc tccggcgatg tctgcttcaa catcccccaa gattggagca tgaggggatc 4560
agagctttcg gcgctcgtcg cggagccgaa gctggaggac ttcctcggcg gcatctcctt 4620
ctccgagcag catcacaagg ccaactgcaa catgataccc agcactagca gcacagtttg 4680
ctacgcgagc tcaggtgcta gcaccggcta ccatcaccag ctgtaccacc agcccaccag 4740
ctcagcgctc cacttcgcgg actccgtaat ggtggcttcc tcggccggtg tccacgacgg 4800
cggtgccatg ctcagcgcgg ccgccgctaa cggtgtcgct ggcgctgcca gtgccaacgg 4860
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gccgagggtg gcggcggctg agggcgcgca ggggctctct ttgtccatga acatggcggg 4980
gacgacccaa ggcgctgctg gcatgccact tctcgctgga gagcgcgcac gggcgcccga 5040
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cggtggcagc ggtgttgccg gcgctctagt agccgtgagc acggacacgg gtggcagcgg 5160
cggcgcgtcg gctgacaaca cggcaaggaa gacggtggac acgttcgggc agcgcacgtc 5220
gatttaccgt ggcgtgacaa ggcatagatg gactgggaga tatgaggcac atctttggga 5280
taacagttgc agaagggaag ggcaaactcg taagggtcgt caagtctatt taggtggcta 5340
tgataaagag gagaaagctg ctagggctta tgatcttgct gctctgaagt actggggtgc 5400
cacaacaaca acaaattttc cagtgagtaa ctacgaaaag gagctcgagg acatgaagca 5460
catgacaagg caggagtttg tagcgtctct gagaaggaag agcagtggtt tctccagagg 5520
tgcatccatt tacaggggag tgactaggca tcaccaacat ggaagatggc aagcacggat 5580
tggacgagtt gcagggaaca aggatcttta cttgggcacc ttcagcaccc aggaggaggc 5640
agcggaggcg tacgacatcg cggcgatcaa gttccgcggc ctcaacgccg tcaccaactt 5700
cgacatgagc cgctacgacg tgaagagcat cctggacagc agcgccctcc ccatcggcag 5760
cgccgccaag cgcctcaagg aggccgaggc cgcagcgtcc gcgcagcacc accacgccgg 5820
cgtggtgagc tacgacgtcg gccgcatcgc ctcgcagctc ggcgacggcg gagccctggc 5880
ggcggcgtac ggcgcgcact accacggcgc cgcctggccg accatcgcgt tccagccggg 5940
cgccgccagc acaggcctgt accacccgta cgcgcagcag ccaatgcgcg gcggcgggtg 6000
gtgcaagcag gagcaggacc acgcggtgat cgcggccgcg cacagcctgc aggacctcca 6060
ccacctgaac ctgggcgcgg ccggcgcgca cgactttttc tcggcagggc agcaggccgc 6120
cgccgctgcg atgcacggcc tgggtagcat cgacagtgcg tcgctcgagc acagcaccgg 6180
ctccaactcc gtcgtctaca acggcggggt cggcgacagc aacggcgcca gcgccgtcgg 6240
cggcagtggc ggtggctaca tgatgccgat gagcgctgcc ggagcaacca ctacatcggc 6300
aatggtgagc cacgagcagg tgcatgcacg ggcctacgac gaagccaagc aggctgctca 6360
gatggggtac gagagctacc tggtgaacgc ggagaacaat ggtggcggaa ggatgtctgc 6420
atgggggact gtcgtgtctg cagccgcggc ggcagcagca agcagcaacg acaacatggc 6480
cgccgacgtc gggcatggcg gcgcgcagct cttcagtgtc tggaacgaca cttaagcgta 6540
cctagtggta cctgacatct tatagtctgc aacctctcgt gtctgaattc ctatctttat 6600
caagtgttat tgcttccacg actataggac agctttcgtc gaaagctttt gctcatgtga 6660
tctcgaagga ttcatctagt ctgatttttc gtgacttgta tcggttttat tggattcatc 6720
caacatatat caataaaaaa tgagttgtgt ttcctttctt cctagttcag ttaaaattat 6780
ttccctcctg cgcttgtgct gtaattgtct gtgtacctgt tgtttgtgac tgtgttagtt 6840
cccttggata tgatttcgta tttgatatgt acatggagat agcttagctt cattattgga 6900
gtatgaagtt agtatgacat agtcactctc ctggaaaatt gacactgcaa accatatttt 6960
tattctgaac cacaaatcct agtcagtccg ctggcatatg ccgtccgttt gctgaatcca 7020
gaacgtgggt ttggagatgt acggctgaga tgcctctatg cgaaggggat ttcgtggtga 7080
aacgagatgg gagtagagca acgcccgtgg aagatgcttc aaacttccac acttttgagc 7140
aacgatcggc agtagtaagg tagacgattt caagatcaaa gcatatgaag ataaacaaca 7200
tcaacaacaa aatttgttgg ggttctatag agagaaacag agctacatac atacactgtt 7260
ttgtatctac catctgagat gatgaaaaga tgaaaaacta aagaatgccc cggcgccaac 7320
gccaggacac gccgcgcgcg cgtcacccga gccatctctt gacccagccg gcgctgtata 7380
tttacacacg ttgcagcatc gatcaccacc tgttcgatcg cgtcgccgtc accggtaccg 7440
agctcgaatt ccggtccggg cctagaaggc cgatctcccg ggcacccagc tttcttgtac 7500
aaagtggccg ttaacggatc ggccagaatg gcccggaccg ggttaccgaa ttcctgccct 7560
taaggccaat tgttcaagat tcattcaaca attgaaacat ctcccatgat taaatcagta 7620
taaggttgct atggtcttgc ttgacaaagt ttttttttga gggaatttca actaaatttt 7680
tgagtgaaac tatcaaatac tgattttaaa aaatttttat aaaaggaagc gcagagataa 7740
aaggccatct atgctacaaa agtacccaaa aatgtaatcc taaagtatga attgcatttt 7800
ttttttgttt ggacgaaagg aaaggagtat taccacaaga atgatatcat cttcatattt 7860
agatcttttt tgggtaaagc ttgagattct ctaaatatag agaaatcaga agaaaaaaaa 7920
accgtgtttt ggtggttttg atttctagcc tccacaataa ctttgacggc gtcgacaagt 7980
ctaacggaca ccaagcagcg aaccaccagc gccgagccaa gcgaagcaga cggccgagac 8040
gttgacacct tcggcgcggc atctctcgag agttccgctc cggcgctcca cctccaccgc 8100
tggcggtttc ttattccgtt ccgttccgcc tcctgctctg ctcctctcca caccacacgg 8160
cacgaaaccg ttacggcacc ggcagcaccc agcacgggag aggggattcc tttcccaccg 8220
ttccttccct ttccgccccg ccgctataaa tagccagccc catccccagc ttttttcccc 8280
aatctcatct cctctctcct gttgttcgga gcacacgcac aatccgatcg atccccaaat 8340
ccccttcgtc tctcctcgcg agcctcgtgg atcccagctt caaggtacgg cgatcgatca 8400
tcccccctcc ttctctctac cttcttttct ctagactaca tcggatggcg atccatggtt 8460
agggcctgct agtttccctt cctgttttgt cgatggctgc gaggcacaat agatctgatg 8520
gcgttatgac ggctaacttg tcatgttgtt gcgatttata gtccctttag gagatcagtt 8580
taatttctcg gatggttcga gatcggtggt ccatggttag taccctaaga tccgcgctgt 8640
tagggttcgt agatggaggc gacctgttct gattgttaac ttgtcagtac ctgggaaatc 8700
ctgggatggt tctagctcgt ccgcagatga gatcgatttc atgatcctct gtatcttgtt 8760
tcgttgccta ggttccgtct aatctatccg tggtatgatg tagatgtttt gatcgtgcta 8820
actacgtctt gtaaagttaa ttgtcaggtc ataattttta gcatgccttt ttttttgttt 8880
ggttttgtct aattgggctg tcgttctaga tcagagtaga agactgttcc aaactacctg 8940
ctggatttat tgaacttgga tctgtatgtg tgtcacatat cttcataaat tcatgattaa 9000
gatggattga aatatctttt atctttttgg tatggatagt tctatatgtt ggtgtggctt 9060
tgttagatgt atacatgctt agatacatga agcaacgtgc tgctactgtt tagtaattgc 9120
tgttcatttg tctaataaac agataaggat atgtatttat gttgctgttg gttttgctgg 9180
tactttgttg gatacaaatg cttcaataca gaaaacagca tgctgctacg atttaccatt 9240
tatctaatct tatcatatgt ctaatctaat aaacaaacat gcttttaaat tatcttcata 9300
tgcttggatg atggcataca cagcggctat gtgtggtttt ttaaataccc agcatcatgg 9360
gcatgcatga cactgcttta atatgctttt tatttgcttg agactgtttc ttttgtttat 9420
actgaccctt tagttcggtg actcttctgc aggtcgactt taacttagcc taggatccat 9480
ggcccagtcc aagcacggcc tgaccaagga gatgaccatg aagtaccgca tggagggctg 9540
cgtggacggc cacaagttcg tgatcaccgg cgagggcatc ggctacccct tcaagggcaa 9600
gcaggccatc aacctgtgcg tggtggaggg cggccccttg cccttcgccg aggacatctt 9660
gtccgccgcc ttcatgtacg gcaaccgcgt gttcaccgag tacccccagg acatcgtcga 9720
ctacttcaag aactcctgcc ccgccggcta cacctgggac cgctccttcc tgttcgagga 9780
cggcgccgtg tgcatctgca acgccgacat caccgtgagc gtggaggaga actgcatgta 9840
ccacgagtcc aagttctacg gcgtgaactt ccccgccgac ggccccgtga tgaagaagat 9900
gaccgacaac tgggagccct cctgcgagaa gatcatcccc gtgcccaagc agggcatctt 9960
gaagggcgac gtgagcatgt acctgctgct gaaggacggt ggccgcttgc gctgccagtt 10020
cgacaccgtg tacaaggcca agtccgtgcc ccgcaagatg cccgactggc acttcatcca 10080
gcacaagctg acccgcgagg accgcagcga cgccaagaac cagaagtggc acctgaccga 10140
gcacgccatc gcctccggct ccgccttgcc ctccggactc agatctcgat agggtaccaa 10200
tggccagtta acagatccag ctgctgctgt tctagggttc acaagtctgc ctatttgtct 10260
tccccaatgg agctatggtt gtctggtctg gtccttggtc gtgtcccgtt tcattgtgta 10320
ctatttacct gtaatgtgta tccttaagtc tggtttgatg gtgtctgaaa cgttttgctg 10380
tggtagagca gcatggaaga actataatga ataagtgatc cctaatcatt gtgtccaaat 10440
tttgcttctg ctataccctt ttgtgctgtt tcttatgttt tgcttaaaaa tttgatctga 10500
caaacaaatt tgtctaaatt atgctcttgt tctgactgtg tactgtacac atttgtattg 10560
ctaccggttt ggcacatagt tttctctttg attgcagatc aaacccttct gattgcagat 10620
tgcttggcta tggctgatgt gctcactgtt cttctttagc ttgtatattg ctgatggtgg 10680
cttggctacg gctgaaaaag ttgctgctgc gccgacttgg caactgttgc tccagtaatg 10740
ctttgtcctc tcttcctagc cgccgacttg gcacttggca gctgttgctc ctgtaatgcg 10800
ttgttatctc ttatctcttg agatgtacta tgattttgag gctgtttgac ttgtgccaga 10860
ttgccagtgc tgatgctata ttatctcagg tttttatgct agtatatgtt ttactgtgtg 10920
ctgcctgtgt cgagttacgt aatctattga accgctatgc gtgttgatgc cctgttgttg 10980
cttgccagat tgatgcccct gttgcttgca gcttgcaagc tgtagtgaaa tcctaaaatt 11040
cgaaaccaaa tctattctga acttttgaag atctgtgatg tccggaagaa aagattcaaa 11100
cagataaacg ggactctcca gaatctataa aataaatgat cgacaaacgc tttgctttgg 11160
taggcttcct agttagttag cggaccgaag cttcggtccg ggcctagaag gccagcttcg 11220
gccgccccgg gcaactttat tatacaaagt tgatagatcg aataacttcg tatagcatac 11280
attatacgaa gttatacctg gtggcgccgc taggggctgc aggaattcga tatcaagctt 11340
atcgataccg tcgacctcga gggggggccc ggtaccctgg gatctgccct tactttaacg 11400
cctctaacca acaccccttt atctttataa ggaacaataa acagaatttg ccccactgtt 11460
ctaaatcacc taataatatc cccagctaaa aacaataaag gtttcctaga attaagacaa 11520
gcatgactgt tcctccagga gggtttggaa cattgttgca gtcttgcaga tacgggcgaa 11580
gggtgagaaa cagagcggag ggctggaggt gacctcggta gtcgacgccg gagttgagct 11640
tgacaacgac ggggcggccc ctgatggact tgaggaagtc cgatggcgtc ttcaccgtcc 11700
cgccggcgcc cgaggcgggc ctgtcgctgc cgccgccgcc gctgctcatc ttgcgcgctg 11760
tgcccccggc ggtgtccctg tgttgcggat cgcgggtggg ccaggtggat gcgagggcga 11820
cccgtttgga ctccggccgg agccgccgga tccctggtcg gtgtcagtgc cgtttactct 11880
gggccccacg tgtcagtacc gtctgtagat gacaacaacc cgtcgtccac agtcatgtcc 11940
aaaatatcct ttcttctttt ttttcgattc ggatatctat cttccttttt tttttccaaa 12000
aatcttcttg acgcaccagc gcgcacgttt gtggtaaacg ccgacacgtc ggtcccacgt 12060
cgatagaccc cacccaccag tgagtagcgt gtacgtattc gggggtgacg gacgtgtcgc 12120
cgtcgtcttg ctagtcccat tcccatctga gccacacatc tctgaacaaa aaaaaggagg 12180
gaggcctcca cgcacatccc cctccgtgcc acccgcccca aaccctcgcg ccgcctccga 12240
gacagccgcc gcaaccatgg ccaccgccgc cgccgcgtct accgcgctca ctggcgccac 12300
taccgctgcg cccaaggcga ggcgccgggc gcacctcctg gccacccgcc gcgccctcgc 12360
cgcgcccatc aggtgctcag cggcgtcacc cgccatgccg atggctcccc cggccacccc 12420
gctccggccg tggggcccca ccgagccccg caagggtgct gacatcctcg tcgagtccct 12480
cgagcgctgc ggcgtccgcg acgtcttcgc ctaccccggc ggcgcgtcca tggagatcca 12540
ccaggcactc acccgctccc ccgtcatcgc caaccacctc ttccgccacg agcaagggga 12600
ggcctttgcc gcctccggct acgcgcgctc ctcgggccgc gtcggcgtct gcatcgccac 12660
ctccggcccc ggcgccacca acctagtctc cgcgctcgcc gacgcgctgc tcgattccgt 12720
ccccatggtc gccatcacgg gacaggtggc gcgacgcatg attggcaccg acgccttcca 12780
ggagacgccc atcgtcgagg tcacccgctc catcaccaag cacaactacc tggtcctcga 12840
cgtcgacgac atcccccgcg tcgtgcagga ggctttcttc ctcgcctcct ctggtcgacc 12900
agggccggtg cttgtcgaca tccccaagga catccagcag cagatggcgg tgcctgtctg 12960
ggacaagccc atgagtctgc ctgggtacat tgcgcgcctt cccaagcccc ctgcgactga 13020
gttgcttgag caggtgctgc gtcttgttgg tgaatcgcgg cgccctgttc tttatgtggg 13080
cggtggctgc gcagcatctg gtgaggagtt gcgacgcttt gtggagctga ctggaatccc 13140
ggtcacaact actcttatgg gcctcggcaa cttccccagc gacgacccac tgtctctgcg 13200
catgctaggt atgcatggga cggtgtatgc aaattatgca gtggataagg ccgatctgtt 13260
gcttgcactt ggtgtgcggt ttgatgatcg cgtgacaggg aagattgagg cttttgcaag 13320
cagggctaag attgtgcacg ttgatattga tccggctgag attggcaaga acaagcagcc 13380
acatgtgtcc atctgtgcag atgttaagct tgctttgcag ggcatgaatg ctcttcttga 13440
aggaagcaca tcaaagaaga gctttgactt tggctcatgg aacgatgagt tggatcagca 13500
gaagagggaa ttcccccttg ggtataaaac atctaatgag gagatccagc cacaatatgc 13560
tattcaggtt cttgatgagc tgacgaaagg cgaggccatc atcggcacag gtgttgggca 13620
gcaccagatg tgggcggcac agtactacac ttacaagcgg ccaaggcagt ggttgtcttc 13680
agctggtctt ggggctatgg gatttggttt gccggctgct gctggtgctt ctgtggcaaa 13740
cccaggtgtc actgttgttg acatcgatgg agatggtagc tttctcatga acgttcagga 13800
gctagctatg atccgaattg agaacctccc agtgaaggtc tttgtgctaa acaaccagca 13860
cctggggatg gtggtgcagt tggaggacag gttctataag gccaacagag cgcacacata 13920
cttgggaaac ccagagaatg aaagtgagat atatccagat ttcgtgacga tcgccaaagg 13980
gttcaacatt ccagcggtcc gtgtgacaaa gaagaacgaa gtccgcgcag cgataaagaa 14040
gatgctcgag actccagggc cgtacctctt ggatataatc gtcccacacc aggagcatgt 14100
gttgcctatg atccctagtg gtggggcttt caaggatatg atcctggatg gtgatggcag 14160
gactgtgtac tgactagcta gtcagttaac ctagacttgt ccatcttctg gattggccaa 14220
cttaattaat gtatgaaata aaaggatgca cacatagtga catgctaatc actataatgt 14280
gggcatcaaa gttgtgtgtt atgtgtaatt actagttatc tgaataaaag agaaagagat 14340
catccatatt tcttatccta aatgaatgtc acgtgtcttt ataattcttt gatgaaccag 14400
atgcatttca ttaaccaaat ccatatacat ataaatatta atcatatata attaatatca 14460
attgggttag caaaacaaat ctagtctagg tgtgttttgc gaatgcggcc gcctgcagag 14520
ttaacggcgc gccgactagc tagctaaggt accgagctcg aattcattcc gattaatcgt 14580
ggcctcttgc tcttcaggat gaagagctat gtttaaacgt gcaagcgcta ctagacaatt 14640
cagtacatta aaaacgtccg caatgtgtta ttaagttgtc taagcgtcaa tttgtttaca 14700
ccacaatata tcctgcca 14718
<210> 102
<211> 14673
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 102
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcaggcgacc catcgctgct ttgtctacat catgttcttc atcatcctcc 720
ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
atagagtcac taatgcctta agcatcggtt actccgtagg gtacattctg ttcttcttat 900
ttgtgcatat ttttattgtt gtttactgat tatacgagta gttatacata catgcacata 960
catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
actatatacg cgatgtgtgg ctacaacata agacaatata gtcgtttgaa gattgaacct 1200
atatatcggt acggttaatc cgtctatgta cgtgggcatg acgaacaccc gtgataacga 1260
aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
cgcctttatt tcaggctcgc tggccccacg ggcgtgctgc gtgcacgaag ggcactaccc 1440
caacctctca ccgaaaaccg cgctggatcg gcaaatcaaa cgaggtggtg ccccgtgccc 1500
actctccacg tccacggcac catccctctg cagccgctca ccagccatgc cgtgtcgcgg 1560
aacggcacaa ccacccccaa cccactcacg aaaccccgtc ccggccgtgc ccgtgtcggt 1620
ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
ggtcgagcgt agcatgcagg aacttatttg ccgtgcgctc ccaggtctcc gctcgcgtgc 1860
cttccagtct gtctcacact agctgctgtg ggacgatcga agtgggtgtg tcagctagct 1920
agctgcgccg tgaccacgca catgaccgca gtgcgcgcgg ggctgatcaa gggaaagtga 1980
tcccatggac acggaggcgc cgagcgggcg ggtgggcgtc aagtgcgggc ggtggaaccc 2040
gacgccggag caggtgaagg tcctgacgga gctcttccgc gcggggctgc ggacgcccag 2100
cacggaccag atccagcgca tctccgccca cctcggcgcc ttcggcaagg tggagagcaa 2160
gaacgtcttc tactggttcc agaaccacaa ggcccgcgag cgccaccacc acaagaagaa 2220
gaagcgccgc cgacgcggcg cggcaatggc atcgtcgtcc tcccccgaca gcggcagcgg 2280
cagcgggagc agcgaggaag acggccgtgt tgccgccgcc gccgacgccg acctcgtgct 2340
gcaaccatcg ccgggaagaa gcaaaagcaa acgggaggcc agaagaagct acggcggcgg 2400
ccaccatcgc cggctcgtta catgtaagca gctagcgcac acacatcgct acgtcaggga 2460
cgttgtggag cagcaggagg aggacacgtg ggagcggccg acgagggagg cggtggagac 2520
tctggagctc ttccccctca agtcctacgt cgacctcgag gcggagaagg tccggcggta 2580
cgtcgtcagg gccggcgcca gcgagcagtg cagggacttc tccttcttcg acgtgtccgg 2640
cggtcgcgat ccgccgcttc ttgagcttag gctctgcagc ttcggtccct agcgtaccgt 2700
taaccgacaa agcagcatta gtccgttgat cggtggaaga ccactcgtca gtgttgagtt 2760
gaatgtttga tcaataaaat acggcaatgc tgtaagggtt gttttttatg ccattgataa 2820
tacactgtac tgttcagttg ttgaactcta tttcttagcc atgccaagtg cttttcttat 2880
tttgaataac attacagcaa aaagttgaaa gacaaaaaaa aaaacccccg aacagagtgc 2940
tttgggtccc aagcttcttt agactgtgtt cggcgttccc cctaaatttc tccccctata 3000
tctcactcac ttgtcacatc agcgttctct ttccccctat atctccacgc tctacagcag 3060
ttccacctat atcaaacctc tataccccac cacaacaata ttatatactt tcatcttcaa 3120
ctaactcatg taccttccaa tttttttcta ctaataatta tttacgtgca cagaaactta 3180
gcaaggagag agagagcggg gtcacccggt ccgggcctag aaggccagct tcaagtttgt 3240
acaaaaaagc aggctccggc cagaatggcc cggaccgggt taccgaattc ttaccctagc 3300
tccctgcggc tgttacgcgg tcccccatca atcttctgtt cttgcggttg tagcctgtgt 3360
aacagtgcta gagtatgtat gataaatagg ttttaagtct gcttacatga cattttttat 3420
tgtggaagag acatataaaa attagagaga gtggttctca tgcaacggcg gacggcccgg 3480
tgctaaaaga gcttcaagac aaaataatga aacaggaaga gagtagattt atctaagagc 3540
caactttatt atatgaatgt gtttattgtt ggctttagat gatatggtaa ggagttagag 3600
ctaataatag ataggctcta ttattattat tattaattaa actcgctcta aggaggaaag 3660
tgggaggaag ggacgaggac gaagactact ggaagcatcg tgcatggatg atggatgtgg 3720
tgtctcttaa tgtaggtggc cggaggatgt acgtgttaat tgcgcgataa gcactcagat 3780
ccaaccgcaa actacctcca cactgacaca ctgatagaga gaaagagaga cctccgacga 3840
ctgccgccgc agatgagcca cgtacgtata cgacgtctgc cggccggctc aggctgccgc 3900
catcaccctg ctcgaaagtc gcgttaggcg gcgccagcta cataggagta tctagtctag 3960
ccagttagta tactactact gcgctgatga tgaattaact ctgcatagat actgtacttg 4020
cctccctcca acacccaacc acctcctgct cggctcttaa taacttggac acggatcgat 4080
gccatccaag gaagaacacg acgacgacga cggaacatcc accatgcaag cttgcatcca 4140
tacgccgata cgcgtgcatc catccatcca ccattatttc cattttccac cgatcacacg 4200
tacacaggcc tatttaagga gcgacatccc actgcaactc tcctcaccac tcatcaccag 4260
ctagctctag caaagcactt gccatctacc gaccgccgca ttccaaacag cccgacgagc 4320
tagcagagcg gcaggcacct ccctcctcaa ggaacccatg gccactgtga acaactggct 4380
cgctttctcc ctctccccgc aggagctgcc gccctcccag acgacggact ccacactcat 4440
ctcggccgcc accgccgacc atgtctccgg cgatgtctgc ttcaacatcc cccaagattg 4500
gagcatgagg ggatcagagc tttcggcgct cgtcgcggag ccgaagctgg aggacttcct 4560
cggcggcatc tccttctccg agcagcatca caaggccaac tgcaacatga tacccagcac 4620
tagcagcaca gtttgctacg cgagctcagg tgctagcacc ggctaccatc accagctgta 4680
ccaccagccc accagctcag cgctccactt cgcggactcc gtaatggtgg cttcctcggc 4740
cggtgtccac gacggcggtg ccatgctcag cgcggccgcc gctaacggtg tcgctggcgc 4800
tgccagtgcc aacggcggcg gcatcgggct gtccatgatt aagaactggc tgcggagcca 4860
accggcgccc atgcagccga gggtggcggc ggctgagggc gcgcaggggc tctctttgtc 4920
catgaacatg gcggggacga cccaaggcgc tgctggcatg ccacttctcg ctggagagcg 4980
cgcacgggcg cccgagagtg tatcgacgtc agcacagggt ggagccgtcg tcgtcacggc 5040
gccgaaggag gatagcggtg gcagcggtgt tgccggcgct ctagtagccg tgagcacgga 5100
cacgggtggc agcggcggcg cgtcggctga caacacggca aggaagacgg tggacacgtt 5160
cgggcagcgc acgtcgattt accgtggcgt gacaaggcat agatggactg ggagatatga 5220
ggcacatctt tgggataaca gttgcagaag ggaagggcaa actcgtaagg gtcgtcaagt 5280
ctatttaggt ggctatgata aagaggagaa agctgctagg gcttatgatc ttgctgctct 5340
gaagtactgg ggtgccacaa caacaacaaa ttttccagtg agtaactacg aaaaggagct 5400
cgaggacatg aagcacatga caaggcagga gtttgtagcg tctctgagaa ggaagagcag 5460
tggtttctcc agaggtgcat ccatttacag gggagtgact aggcatcacc aacatggaag 5520
atggcaagca cggattggac gagttgcagg gaacaaggat ctttacttgg gcaccttcag 5580
cacccaggag gaggcagcgg aggcgtacga catcgcggcg atcaagttcc gcggcctcaa 5640
cgccgtcacc aacttcgaca tgagccgcta cgacgtgaag agcatcctgg acagcagcgc 5700
cctccccatc ggcagcgccg ccaagcgcct caaggaggcc gaggccgcag cgtccgcgca 5760
gcaccaccac gccggcgtgg tgagctacga cgtcggccgc atcgcctcgc agctcggcga 5820
cggcggagcc ctggcggcgg cgtacggcgc gcactaccac ggcgccgcct ggccgaccat 5880
cgcgttccag ccgggcgccg ccagcacagg cctgtaccac ccgtacgcgc agcagccaat 5940
gcgcggcggc gggtggtgca agcaggagca ggaccacgcg gtgatcgcgg ccgcgcacag 6000
cctgcaggac ctccaccacc tgaacctggg cgcggccggc gcgcacgact ttttctcggc 6060
agggcagcag gccgccgccg ctgcgatgca cggcctgggt agcatcgaca gtgcgtcgct 6120
cgagcacagc accggctcca actccgtcgt ctacaacggc ggggtcggcg acagcaacgg 6180
cgccagcgcc gtcggcggca gtggcggtgg ctacatgatg ccgatgagcg ctgccggagc 6240
aaccactaca tcggcaatgg tgagccacga gcaggtgcat gcacgggcct acgacgaagc 6300
caagcaggct gctcagatgg ggtacgagag ctacctggtg aacgcggaga acaatggtgg 6360
cggaaggatg tctgcatggg ggactgtcgt gtctgcagcc gcggcggcag cagcaagcag 6420
caacgacaac atggccgccg acgtcgggca tggcggcgcg cagctcttca gtgtctggaa 6480
cgacacttaa gcgtacctag tggtacctga catcttatag tctgcaacct ctcgtgtctg 6540
aattcctatc tttatcaagt gttattgctt ccacgactat aggacagctt tcgtcgaaag 6600
cttttgctca tgtgatctcg aaggattcat ctagtctgat ttttcgtgac ttgtatcggt 6660
tttattggat tcatccaaca tatatcaata aaaaatgagt tgtgtttcct ttcttcctag 6720
ttcagttaaa attatttccc tcctgcgctt gtgctgtaat tgtctgtgta cctgttgttt 6780
gtgactgtgt tagttccctt ggatatgatt tcgtatttga tatgtacatg gagatagctt 6840
agcttcatta ttggagtatg aagttagtat gacatagtca ctctcctgga aaattgacac 6900
tgcaaaccat atttttattc tgaaccacaa atcctagtca gtccgctggc atatgccgtc 6960
cgtttgctga atccagaacg tgggtttgga gatgtacggc tgagatgcct ctatgcgaag 7020
gggatttcgt ggtgaaacga gatgggagta gagcaacgcc cgtggaagat gcttcaaact 7080
tccacacttt tgagcaacga tcggcagtag taaggtagac gatttcaaga tcaaagcata 7140
tgaagataaa caacatcaac aacaaaattt gttggggttc tatagagaga aacagagcta 7200
catacataca ctgttttgta tctaccatct gagatgatga aaagatgaaa aactaaagaa 7260
tgccccggcg ccaacgccag gacacgccgc gcgcgcgtca cccgagccat ctcttgaccc 7320
agccggcgct gtatatttac acacgttgca gcatcgatca ccacctgttc gatcgcgtcg 7380
ccgtcaccgg taccgagctc gaattccggt ccgggcctag aaggccgatc tcccgggcac 7440
ccagctttct tgtacaaagt ggccgttaac ggatcggcca gaatggcccg gaccgggtta 7500
ccgaattcct gcccttaagg ccaattgttc aagattcatt caacaattga aacatctccc 7560
atgattaaat cagtataagg ttgctatggt cttgcttgac aaagtttttt tttgagggaa 7620
tttcaactaa atttttgagt gaaactatca aatactgatt ttaaaaaatt tttataaaag 7680
gaagcgcaga gataaaaggc catctatgct acaaaagtac ccaaaaatgt aatcctaaag 7740
tatgaattgc attttttttt tgtttggacg aaaggaaagg agtattacca caagaatgat 7800
atcatcttca tatttagatc ttttttgggt aaagcttgag attctctaaa tatagagaaa 7860
tcagaagaaa aaaaaaccgt gttttggtgg ttttgatttc tagcctccac aataactttg 7920
acggcgtcga caagtctaac ggacaccaag cagcgaacca ccagcgccga gccaagcgaa 7980
gcagacggcc gagacgttga caccttcggc gcggcatctc tcgagagttc cgctccggcg 8040
ctccacctcc accgctggcg gtttcttatt ccgttccgtt ccgcctcctg ctctgctcct 8100
ctccacacca cacggcacga aaccgttacg gcaccggcag cacccagcac gggagagggg 8160
attcctttcc caccgttcct tccctttccg ccccgccgct ataaatagcc agccccatcc 8220
ccagcttttt tccccaatct catctcctct ctcctgttgt tcggagcaca cgcacaatcc 8280
gatcgatccc caaatcccct tcgtctctcc tcgcgagcct cgtggatccc agcttcaagg 8340
tacggcgatc gatcatcccc cctccttctc tctaccttct tttctctaga ctacatcgga 8400
tggcgatcca tggttagggc ctgctagttt cccttcctgt tttgtcgatg gctgcgaggc 8460
acaatagatc tgatggcgtt atgacggcta acttgtcatg ttgttgcgat ttatagtccc 8520
tttaggagat cagtttaatt tctcggatgg ttcgagatcg gtggtccatg gttagtaccc 8580
taagatccgc gctgttaggg ttcgtagatg gaggcgacct gttctgattg ttaacttgtc 8640
agtacctggg aaatcctggg atggttctag ctcgtccgca gatgagatcg atttcatgat 8700
cctctgtatc ttgtttcgtt gcctaggttc cgtctaatct atccgtggta tgatgtagat 8760
gttttgatcg tgctaactac gtcttgtaaa gttaattgtc aggtcataat ttttagcatg 8820
cctttttttt tgtttggttt tgtctaattg ggctgtcgtt ctagatcaga gtagaagact 8880
gttccaaact acctgctgga tttattgaac ttggatctgt atgtgtgtca catatcttca 8940
taaattcatg attaagatgg attgaaatat cttttatctt tttggtatgg atagttctat 9000
atgttggtgt ggctttgtta gatgtataca tgcttagata catgaagcaa cgtgctgcta 9060
ctgtttagta attgctgttc atttgtctaa taaacagata aggatatgta tttatgttgc 9120
tgttggtttt gctggtactt tgttggatac aaatgcttca atacagaaaa cagcatgctg 9180
ctacgattta ccatttatct aatcttatca tatgtctaat ctaataaaca aacatgcttt 9240
taaattatct tcatatgctt ggatgatggc atacacagcg gctatgtgtg gttttttaaa 9300
tacccagcat catgggcatg catgacactg ctttaatatg ctttttattt gcttgagact 9360
gtttcttttg tttatactga ccctttagtt cggtgactct tctgcaggtc gactttaact 9420
tagcctagga tccatggccc agtccaagca cggcctgacc aaggagatga ccatgaagta 9480
ccgcatggag ggctgcgtgg acggccacaa gttcgtgatc accggcgagg gcatcggcta 9540
ccccttcaag ggcaagcagg ccatcaacct gtgcgtggtg gagggcggcc ccttgccctt 9600
cgccgaggac atcttgtccg ccgccttcat gtacggcaac cgcgtgttca ccgagtaccc 9660
ccaggacatc gtcgactact tcaagaactc ctgccccgcc ggctacacct gggaccgctc 9720
cttcctgttc gaggacggcg ccgtgtgcat ctgcaacgcc gacatcaccg tgagcgtgga 9780
ggagaactgc atgtaccacg agtccaagtt ctacggcgtg aacttccccg ccgacggccc 9840
cgtgatgaag aagatgaccg acaactggga gccctcctgc gagaagatca tccccgtgcc 9900
caagcagggc atcttgaagg gcgacgtgag catgtacctg ctgctgaagg acggtggccg 9960
cttgcgctgc cagttcgaca ccgtgtacaa ggccaagtcc gtgccccgca agatgcccga 10020
ctggcacttc atccagcaca agctgacccg cgaggaccgc agcgacgcca agaaccagaa 10080
gtggcacctg accgagcacg ccatcgcctc cggctccgcc ttgccctccg gactcagatc 10140
tcgatagggt accaatggcc agttaacaga tccagctgct gctgttctag ggttcacaag 10200
tctgcctatt tgtcttcccc aatggagcta tggttgtctg gtctggtcct tggtcgtgtc 10260
ccgtttcatt gtgtactatt tacctgtaat gtgtatcctt aagtctggtt tgatggtgtc 10320
tgaaacgttt tgctgtggta gagcagcatg gaagaactat aatgaataag tgatccctaa 10380
tcattgtgtc caaattttgc ttctgctata cccttttgtg ctgtttctta tgttttgctt 10440
aaaaatttga tctgacaaac aaatttgtct aaattatgct cttgttctga ctgtgtactg 10500
tacacatttg tattgctacc ggtttggcac atagttttct ctttgattgc agatcaaacc 10560
cttctgattg cagattgctt ggctatggct gatgtgctca ctgttcttct ttagcttgta 10620
tattgctgat ggtggcttgg ctacggctga aaaagttgct gctgcgccga cttggcaact 10680
gttgctccag taatgctttg tcctctcttc ctagccgccg acttggcact tggcagctgt 10740
tgctcctgta atgcgttgtt atctcttatc tcttgagatg tactatgatt ttgaggctgt 10800
ttgacttgtg ccagattgcc agtgctgatg ctatattatc tcaggttttt atgctagtat 10860
atgttttact gtgtgctgcc tgtgtcgagt tacgtaatct attgaaccgc tatgcgtgtt 10920
gatgccctgt tgttgcttgc cagattgatg cccctgttgc ttgcagcttg caagctgtag 10980
tgaaatccta aaattcgaaa ccaaatctat tctgaacttt tgaagatctg tgatgtccgg 11040
aagaaaagat tcaaacagat aaacgggact ctccagaatc tataaaataa atgatcgaca 11100
aacgctttgc tttggtaggc ttcctagtta gttagcggac cgaagcttcg gtccgggcct 11160
agaaggccag cttcggccgc cccgggcaac tttattatac aaagttgata gatcgaataa 11220
cttcgtatag catacattat acgaagttat acctggtggc gccgctaggg gctgcaggaa 11280
ttcgatatca agcttatcga taccgtcgac ctcgaggggg ggcccggtac cctgggatct 11340
gcccttactt taacgcctct aaccaacacc cctttatctt tataaggaac aataaacaga 11400
atttgcccca ctgttctaaa tcacctaata atatccccag ctaaaaacaa taaaggtttc 11460
ctagaattaa gacaagcatg actgttcctc caggagggtt tggaacattg ttgcagtctt 11520
gcagatacgg gcgaagggtg agaaacagag cggagggctg gaggtgacct cggtagtcga 11580
cgccggagtt gagcttgaca acgacggggc ggcccctgat ggacttgagg aagtccgatg 11640
gcgtcttcac cgtcccgccg gcgcccgagg cgggcctgtc gctgccgccg ccgccgctgc 11700
tcatcttgcg cgctgtgccc ccggcggtgt ccctgtgttg cggatcgcgg gtgggccagg 11760
tggatgcgag ggcgacccgt ttggactccg gccggagccg ccggatccct ggtcggtgtc 11820
agtgccgttt actctgggcc ccacgtgtca gtaccgtctg tagatgacaa caacccgtcg 11880
tccacagtca tgtccaaaat atcctttctt cttttttttc gattcggata tctatcttcc 11940
tttttttttt ccaaaaatct tcttgacgca ccagcgcgca cgtttgtggt aaacgccgac 12000
acgtcggtcc cacgtcgata gaccccaccc accagtgagt agcgtgtacg tattcggggg 12060
tgacggacgt gtcgccgtcg tcttgctagt cccattccca tctgagccac acatctctga 12120
acaaaaaaaa ggagggaggc ctccacgcac atccccctcc gtgccacccg ccccaaaccc 12180
tcgcgccgcc tccgagacag ccgccgcaac catggccacc gccgccgccg cgtctaccgc 12240
gctcactggc gccactaccg ctgcgcccaa ggcgaggcgc cgggcgcacc tcctggccac 12300
ccgccgcgcc ctcgccgcgc ccatcaggtg ctcagcggcg tcacccgcca tgccgatggc 12360
tcccccggcc accccgctcc ggccgtgggg ccccaccgag ccccgcaagg gtgctgacat 12420
cctcgtcgag tccctcgagc gctgcggcgt ccgcgacgtc ttcgcctacc ccggcggcgc 12480
gtccatggag atccaccagg cactcacccg ctcccccgtc atcgccaacc acctcttccg 12540
ccacgagcaa ggggaggcct ttgccgcctc cggctacgcg cgctcctcgg gccgcgtcgg 12600
cgtctgcatc gccacctccg gccccggcgc caccaaccta gtctccgcgc tcgccgacgc 12660
gctgctcgat tccgtcccca tggtcgccat cacgggacag gtggcgcgac gcatgattgg 12720
caccgacgcc ttccaggaga cgcccatcgt cgaggtcacc cgctccatca ccaagcacaa 12780
ctacctggtc ctcgacgtcg acgacatccc ccgcgtcgtg caggaggctt tcttcctcgc 12840
ctcctctggt cgaccagggc cggtgcttgt cgacatcccc aaggacatcc agcagcagat 12900
ggcggtgcct gtctgggaca agcccatgag tctgcctggg tacattgcgc gccttcccaa 12960
gccccctgcg actgagttgc ttgagcaggt gctgcgtctt gttggtgaat cgcggcgccc 13020
tgttctttat gtgggcggtg gctgcgcagc atctggtgag gagttgcgac gctttgtgga 13080
gctgactgga atcccggtca caactactct tatgggcctc ggcaacttcc ccagcgacga 13140
cccactgtct ctgcgcatgc taggtatgca tgggacggtg tatgcaaatt atgcagtgga 13200
taaggccgat ctgttgcttg cacttggtgt gcggtttgat gatcgcgtga cagggaagat 13260
tgaggctttt gcaagcaggg ctaagattgt gcacgttgat attgatccgg ctgagattgg 13320
caagaacaag cagccacatg tgtccatctg tgcagatgtt aagcttgctt tgcagggcat 13380
gaatgctctt cttgaaggaa gcacatcaaa gaagagcttt gactttggct catggaacga 13440
tgagttggat cagcagaaga gggaattccc ccttgggtat aaaacatcta atgaggagat 13500
ccagccacaa tatgctattc aggttcttga tgagctgacg aaaggcgagg ccatcatcgg 13560
cacaggtgtt gggcagcacc agatgtgggc ggcacagtac tacacttaca agcggccaag 13620
gcagtggttg tcttcagctg gtcttggggc tatgggattt ggtttgccgg ctgctgctgg 13680
tgcttctgtg gcaaacccag gtgtcactgt tgttgacatc gatggagatg gtagctttct 13740
catgaacgtt caggagctag ctatgatccg aattgagaac ctcccagtga aggtctttgt 13800
gctaaacaac cagcacctgg ggatggtggt gcagttggag gacaggttct ataaggccaa 13860
cagagcgcac acatacttgg gaaacccaga gaatgaaagt gagatatatc cagatttcgt 13920
gacgatcgcc aaagggttca acattccagc ggtccgtgtg acaaagaaga acgaagtccg 13980
cgcagcgata aagaagatgc tcgagactcc agggccgtac ctcttggata taatcgtccc 14040
acaccaggag catgtgttgc ctatgatccc tagtggtggg gctttcaagg atatgatcct 14100
ggatggtgat ggcaggactg tgtactgact agctagtcag ttaacctaga cttgtccatc 14160
ttctggattg gccaacttaa ttaatgtatg aaataaaagg atgcacacat agtgacatgc 14220
taatcactat aatgtgggca tcaaagttgt gtgttatgtg taattactag ttatctgaat 14280
aaaagagaaa gagatcatcc atatttctta tcctaaatga atgtcacgtg tctttataat 14340
tctttgatga accagatgca tttcattaac caaatccata tacatataaa tattaatcat 14400
atataattaa tatcaattgg gttagcaaaa caaatctagt ctaggtgtgt tttgcgaatg 14460
cggccgcctg cagagttaac ggcgcgccga ctagctagct aaggtaccga gctcgaattc 14520
attccgatta atcgtggcct cttgctcttc aggatgaaga gctatgttta aacgtgcaag 14580
cgctactaga caattcagta cattaaaaac gtccgcaatg tgttattaag ttgtctaagc 14640
gtcaatttgt ttacaccaca atatatcctg cca 14673
<210> 103
<211> 14949
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 103
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga gctcggtacg gccagaatgg cccggaccgg 660
gttaccgaat tcaggcgacc catcgctgct ttgtctacat catgttcttc atcatcctcc 720
ccaggcgacg cgtgctgctg ttcttattca gactaccgtt cgagtgactg catggcgtac 780
atctttctgc atcgactttg tacggctaca tcgaacatat acacgagatg tctcgtgtga 840
atagagtcac taatgcctta agcatcggtt actccgtagg gtacattctg ttcttcttat 900
ttgtgcatat ttttattgtt gtttactgat tatacgagta gttatacata catgcacata 960
catatcatca catatatcac aatatttttc taaattaaat taaaactaaa aatgactaaa 1020
tttctaacac caacgacatt gtaatgtttt ctccaacaac tttacctatt ctacattgtt 1080
ctatttcgaa tttcactcta taaacaacat agtctacaat ggaaaacagt gctttgtacg 1140
actatatacg cgatgtgtgg ctacaacata agacaatata gtcgtttgaa gattgaacct 1200
atatatcggt acggttaatc cgtctatgta cgtgggcatg acgaacaccc gtgataacga 1260
aggattaacg tgcacaatca taaatccaaa gtaggagcgg tgcatgatga gaatcgctct 1320
cagtactcga cataatgaac cttacgaggt acaacaggca ggcaggcagg gaccaggggc 1380
cgcctttatt tcaggctcgc tggccccacg ggcgtgctgc gtgcacgaag ggcactaccc 1440
caacctctca ccgaaaaccg cgctggatcg gcaaatcaaa cgaggtggtg ccccgtgccc 1500
actctccacg tccacggcac catccctctg cagccgctca ccagccatgc cgtgtcgcgg 1560
aacggcacaa ccacccccaa cccactcacg aaaccccgtc ccggccgtgc ccgtgtcggt 1620
ccgcgctcgg caacgaggcg gcccgcgctg ctgagtcccc tggacacccg acaccctgtc 1680
ggccctttgt ttattcatcc cgaaatctca tctgccccca cggccgactg cgctgcgccg 1740
cccggatata tatacccatc gttatcgatc gatcgatcgc gtcactcacg ggtagctcat 1800
ggtcgagcgt agcatgcagg aacttatttg ccgtgcgctc ccaggtctcc gctcgcgtgc 1860
cttccagtct gtctcacact agctgctgtg ggacgatcga agtgggtgtg tcagctagct 1920
agctgcgccg tgaccacgca catgaccgca gtgcgcgcgg ggctgatcaa gggaaagtga 1980
tcccatggcg gccaatgtgg gcgcgggcag gagtgccgtc ggcggcggcg gtggtggtgg 2040
agcgggtggc actggcactg ctgctgccag cggcagcgtg gcgacgacag cggtgtgccg 2100
ccccatcggc tcgcggtgga cgccgacgcc cgagcagatc aggatactca aggagttcta 2160
ctacggctgc ggcatccggt cgcccaactc ggagcagatc cagcgcatca ccgccatgct 2220
gcgccagcac ggcaagatcg agggcaagaa cgtcttctac tggttccaga accacaaggc 2280
ccgcgaacgc cagaagcgcc gcctcaccaa cctcgacgtc aacgtgccca ccgccgcagc 2340
cgccggcgcg gccgacgcca gcacccacct aggcgtcctc tcgctgtcgt cgccttcagg 2400
cgcggcgcct ccctcgccca ccctcggctt ctacgccggc aatggcggcg ccggctcgac 2460
cgtgctgctg gacacgagtt ccgactgcgc tgcgatggcc actgagacat gcttcctgca 2520
ggactacatg ggcgtgatgg gcacgggcag cgcggccgcc gcgtcgccgt gggcatgctt 2580
ctcgtcgtcg aacactatgg cggcggccgc ggcacgggca ccgacggtga cgcgggcgcc 2640
cgagacgctc cctctcttcc cgacgggcgg cgacgacagc cagccccggc ggccgcggca 2700
cggagtccca gttccagttg cagcaggcga ggccatccgc ggcggcagca gcagcagcag 2760
gtacctgccg ttctggggtg ccgcgcccac aactgccagt gccacttcca ttggcatcca 2820
gcagcaacac cagctgctgc agctgcaaga gcagtacagc ttttacagca acgccatgcc 2880
cggcaccggc agccaagatg catcagcagc atccctggag ctcagcctca gctcctggtg 2940
ctccccttac cctgcaggga ccatgtgacg taccgttaac cgacaaagca gcattagtcc 3000
gttgatcggt ggaagaccac tcgtcagtgt tgagttgaat gtttgatcaa taaaatacgg 3060
caatgctgta agggttgttt tttatgccat tgataataca ctgtactgtt cagttgttga 3120
actctatttc ttagccatgc caagtgcttt tcttattttg aataacatta cagcaaaaag 3180
ttgaaagaca aaaaaaaaaa cccccgaaca gagtgctttg ggtcccaagc ttctttagac 3240
tgtgttcggc gttcccccta aatttctccc cctatatctc actcacttgt cacatcagcg 3300
ttctctttcc ccctatatct ccacgctcta cagcagttcc acctatatca aacctctata 3360
ccccaccaca acaatattat atactttcat cttcaactaa ctcatgtacc ttccaatttt 3420
tttctactaa taattattta cgtgcacaga aacttagcaa ggagagagag agcggggtca 3480
cccggtccgg gcctagaagg ccagcttcaa gtttgtacaa aaaagcaggc tccggccaga 3540
atggcccgga ccgggttacc gaattcttac cctagctccc tgcggctgtt acgcggtccc 3600
ccatcaatct tctgttcttg cggttgtagc ctgtgtaaca gtgctagagt atgtatgata 3660
aataggtttt aagtctgctt acatgacatt ttttattgtg gaagagacat ataaaaatta 3720
gagagagtgg ttctcatgca acggcggacg gcccggtgct aaaagagctt caagacaaaa 3780
taatgaaaca ggaagagagt agatttatct aagagccaac tttattatat gaatgtgttt 3840
attgttggct ttagatgata tggtaaggag ttagagctaa taatagatag gctctattat 3900
tattattatt aattaaactc gctctaagga ggaaagtggg aggaagggac gaggacgaag 3960
actactggaa gcatcgtgca tggatgatgg atgtggtgtc tcttaatgta ggtggccgga 4020
ggatgtacgt gttaattgcg cgataagcac tcagatccaa ccgcaaacta cctccacact 4080
gacacactga tagagagaaa gagagacctc cgacgactgc cgccgcagat gagccacgta 4140
cgtatacgac gtctgccggc cggctcaggc tgccgccatc accctgctcg aaagtcgcgt 4200
taggcggcgc cagctacata ggagtatcta gtctagccag ttagtatact actactgcgc 4260
tgatgatgaa ttaactctgc atagatactg tacttgcctc cctccaacac ccaaccacct 4320
cctgctcggc tcttaataac ttggacacgg atcgatgcca tccaaggaag aacacgacga 4380
cgacgacgga acatccacca tgcaagcttg catccatacg ccgatacgcg tgcatccatc 4440
catccaccat tatttccatt ttccaccgat cacacgtaca caggcctatt taaggagcga 4500
catcccactg caactctcct caccactcat caccagctag ctctagcaaa gcacttgcca 4560
tctaccgacc gccgcattcc aaacagcccg acgagctagc agagcggcag gcacctccct 4620
cctcaaggaa cccatggcca ctgtgaacaa ctggctcgct ttctccctct ccccgcagga 4680
gctgccgccc tcccagacga cggactccac actcatctcg gccgccaccg ccgaccatgt 4740
ctccggcgat gtctgcttca acatccccca agattggagc atgaggggat cagagctttc 4800
ggcgctcgtc gcggagccga agctggagga cttcctcggc ggcatctcct tctccgagca 4860
gcatcacaag gccaactgca acatgatacc cagcactagc agcacagttt gctacgcgag 4920
ctcaggtgct agcaccggct accatcacca gctgtaccac cagcccacca gctcagcgct 4980
ccacttcgcg gactccgtaa tggtggcttc ctcggccggt gtccacgacg gcggtgccat 5040
gctcagcgcg gccgccgcta acggtgtcgc tggcgctgcc agtgccaacg gcggcggcat 5100
cgggctgtcc atgattaaga actggctgcg gagccaaccg gcgcccatgc agccgagggt 5160
ggcggcggct gagggcgcgc aggggctctc tttgtccatg aacatggcgg ggacgaccca 5220
aggcgctgct ggcatgccac ttctcgctgg agagcgcgca cgggcgcccg agagtgtatc 5280
gacgtcagca cagggtggag ccgtcgtcgt cacggcgccg aaggaggata gcggtggcag 5340
cggtgttgcc ggcgctctag tagccgtgag cacggacacg ggtggcagcg gcggcgcgtc 5400
ggctgacaac acggcaagga agacggtgga cacgttcggg cagcgcacgt cgatttaccg 5460
tggcgtgaca aggcatagat ggactgggag atatgaggca catctttggg ataacagttg 5520
cagaagggaa gggcaaactc gtaagggtcg tcaagtctat ttaggtggct atgataaaga 5580
ggagaaagct gctagggctt atgatcttgc tgctctgaag tactggggtg ccacaacaac 5640
aacaaatttt ccagtgagta actacgaaaa ggagctcgag gacatgaagc acatgacaag 5700
gcaggagttt gtagcgtctc tgagaaggaa gagcagtggt ttctccagag gtgcatccat 5760
ttacagggga gtgactaggc atcaccaaca tggaagatgg caagcacgga ttggacgagt 5820
tgcagggaac aaggatcttt acttgggcac cttcagcacc caggaggagg cagcggaggc 5880
gtacgacatc gcggcgatca agttccgcgg cctcaacgcc gtcaccaact tcgacatgag 5940
ccgctacgac gtgaagagca tcctggacag cagcgccctc cccatcggca gcgccgccaa 6000
gcgcctcaag gaggccgagg ccgcagcgtc cgcgcagcac caccacgccg gcgtggtgag 6060
ctacgacgtc ggccgcatcg cctcgcagct cggcgacggc ggagccctgg cggcggcgta 6120
cggcgcgcac taccacggcg ccgcctggcc gaccatcgcg ttccagccgg gcgccgccag 6180
cacaggcctg taccacccgt acgcgcagca gccaatgcgc ggcggcgggt ggtgcaagca 6240
ggagcaggac cacgcggtga tcgcggccgc gcacagcctg caggacctcc accacctgaa 6300
cctgggcgcg gccggcgcgc acgacttttt ctcggcaggg cagcaggccg ccgccgctgc 6360
gatgcacggc ctgggtagca tcgacagtgc gtcgctcgag cacagcaccg gctccaactc 6420
cgtcgtctac aacggcgggg tcggcgacag caacggcgcc agcgccgtcg gcggcagtgg 6480
cggtggctac atgatgccga tgagcgctgc cggagcaacc actacatcgg caatggtgag 6540
ccacgagcag gtgcatgcac gggcctacga cgaagccaag caggctgctc agatggggta 6600
cgagagctac ctggtgaacg cggagaacaa tggtggcgga aggatgtctg catgggggac 6660
tgtcgtgtct gcagccgcgg cggcagcagc aagcagcaac gacaacatgg ccgccgacgt 6720
cgggcatggc ggcgcgcagc tcttcagtgt ctggaacgac acttaagcgt acctagtggt 6780
acctgacatc ttatagtctg caacctctcg tgtctgaatt cctatcttta tcaagtgtta 6840
ttgcttccac gactatagga cagctttcgt cgaaagcttt tgctcatgtg atctcgaagg 6900
attcatctag tctgattttt cgtgacttgt atcggtttta ttggattcat ccaacatata 6960
tcaataaaaa atgagttgtg tttcctttct tcctagttca gttaaaatta tttccctcct 7020
gcgcttgtgc tgtaattgtc tgtgtacctg ttgtttgtga ctgtgttagt tcccttggat 7080
atgatttcgt atttgatatg tacatggaga tagcttagct tcattattgg agtatgaagt 7140
tagtatgaca tagtcactct cctggaaaat tgacactgca aaccatattt ttattctgaa 7200
ccacaaatcc tagtcagtcc gctggcatat gccgtccgtt tgctgaatcc agaacgtggg 7260
tttggagatg tacggctgag atgcctctat gcgaagggga tttcgtggtg aaacgagatg 7320
ggagtagagc aacgcccgtg gaagatgctt caaacttcca cacttttgag caacgatcgg 7380
cagtagtaag gtagacgatt tcaagatcaa agcatatgaa gataaacaac atcaacaaca 7440
aaatttgttg gggttctata gagagaaaca gagctacata catacactgt tttgtatcta 7500
ccatctgaga tgatgaaaag atgaaaaact aaagaatgcc ccggcgccaa cgccaggaca 7560
cgccgcgcgc gcgtcacccg agccatctct tgacccagcc ggcgctgtat atttacacac 7620
gttgcagcat cgatcaccac ctgttcgatc gcgtcgccgt caccggtacc gagctcgaat 7680
tccggtccgg gcctagaagg ccgatctccc gggcacccag ctttcttgta caaagtggcc 7740
gttaacggat cggccagaat ggcccggacc gggttaccga attcctgccc ttaaggccaa 7800
ttgttcaaga ttcattcaac aattgaaaca tctcccatga ttaaatcagt ataaggttgc 7860
tatggtcttg cttgacaaag tttttttttg agggaatttc aactaaattt ttgagtgaaa 7920
ctatcaaata ctgattttaa aaaattttta taaaaggaag cgcagagata aaaggccatc 7980
tatgctacaa aagtacccaa aaatgtaatc ctaaagtatg aattgcattt tttttttgtt 8040
tggacgaaag gaaaggagta ttaccacaag aatgatatca tcttcatatt tagatctttt 8100
ttgggtaaag cttgagattc tctaaatata gagaaatcag aagaaaaaaa aaccgtgttt 8160
tggtggtttt gatttctagc ctccacaata actttgacgg cgtcgacaag tctaacggac 8220
accaagcagc gaaccaccag cgccgagcca agcgaagcag acggccgaga cgttgacacc 8280
ttcggcgcgg catctctcga gagttccgct ccggcgctcc acctccaccg ctggcggttt 8340
cttattccgt tccgttccgc ctcctgctct gctcctctcc acaccacacg gcacgaaacc 8400
gttacggcac cggcagcacc cagcacggga gaggggattc ctttcccacc gttccttccc 8460
tttccgcccc gccgctataa atagccagcc ccatccccag cttttttccc caatctcatc 8520
tcctctctcc tgttgttcgg agcacacgca caatccgatc gatccccaaa tccccttcgt 8580
ctctcctcgc gagcctcgtg gatcccagct tcaaggtacg gcgatcgatc atcccccctc 8640
cttctctcta ccttcttttc tctagactac atcggatggc gatccatggt tagggcctgc 8700
tagtttccct tcctgttttg tcgatggctg cgaggcacaa tagatctgat ggcgttatga 8760
cggctaactt gtcatgttgt tgcgatttat agtcccttta ggagatcagt ttaatttctc 8820
ggatggttcg agatcggtgg tccatggtta gtaccctaag atccgcgctg ttagggttcg 8880
tagatggagg cgacctgttc tgattgttaa cttgtcagta cctgggaaat cctgggatgg 8940
ttctagctcg tccgcagatg agatcgattt catgatcctc tgtatcttgt ttcgttgcct 9000
aggttccgtc taatctatcc gtggtatgat gtagatgttt tgatcgtgct aactacgtct 9060
tgtaaagtta attgtcaggt cataattttt agcatgcctt tttttttgtt tggttttgtc 9120
taattgggct gtcgttctag atcagagtag aagactgttc caaactacct gctggattta 9180
ttgaacttgg atctgtatgt gtgtcacata tcttcataaa ttcatgatta agatggattg 9240
aaatatcttt tatctttttg gtatggatag ttctatatgt tggtgtggct ttgttagatg 9300
tatacatgct tagatacatg aagcaacgtg ctgctactgt ttagtaattg ctgttcattt 9360
gtctaataaa cagataagga tatgtattta tgttgctgtt ggttttgctg gtactttgtt 9420
ggatacaaat gcttcaatac agaaaacagc atgctgctac gatttaccat ttatctaatc 9480
ttatcatatg tctaatctaa taaacaaaca tgcttttaaa ttatcttcat atgcttggat 9540
gatggcatac acagcggcta tgtgtggttt tttaaatacc cagcatcatg ggcatgcatg 9600
acactgcttt aatatgcttt ttatttgctt gagactgttt cttttgttta tactgaccct 9660
ttagttcggt gactcttctg caggtcgact ttaacttagc ctaggatcca tggcccagtc 9720
caagcacggc ctgaccaagg agatgaccat gaagtaccgc atggagggct gcgtggacgg 9780
ccacaagttc gtgatcaccg gcgagggcat cggctacccc ttcaagggca agcaggccat 9840
caacctgtgc gtggtggagg gcggcccctt gcccttcgcc gaggacatct tgtccgccgc 9900
cttcatgtac ggcaaccgcg tgttcaccga gtacccccag gacatcgtcg actacttcaa 9960
gaactcctgc cccgccggct acacctggga ccgctccttc ctgttcgagg acggcgccgt 10020
gtgcatctgc aacgccgaca tcaccgtgag cgtggaggag aactgcatgt accacgagtc 10080
caagttctac ggcgtgaact tccccgccga cggccccgtg atgaagaaga tgaccgacaa 10140
ctgggagccc tcctgcgaga agatcatccc cgtgcccaag cagggcatct tgaagggcga 10200
cgtgagcatg tacctgctgc tgaaggacgg tggccgcttg cgctgccagt tcgacaccgt 10260
gtacaaggcc aagtccgtgc cccgcaagat gcccgactgg cacttcatcc agcacaagct 10320
gacccgcgag gaccgcagcg acgccaagaa ccagaagtgg cacctgaccg agcacgccat 10380
cgcctccggc tccgccttgc cctccggact cagatctcga tagggtacca atggccagtt 10440
aacagatcca gctgctgctg ttctagggtt cacaagtctg cctatttgtc ttccccaatg 10500
gagctatggt tgtctggtct ggtccttggt cgtgtcccgt ttcattgtgt actatttacc 10560
tgtaatgtgt atccttaagt ctggtttgat ggtgtctgaa acgttttgct gtggtagagc 10620
agcatggaag aactataatg aataagtgat ccctaatcat tgtgtccaaa ttttgcttct 10680
gctataccct tttgtgctgt ttcttatgtt ttgcttaaaa atttgatctg acaaacaaat 10740
ttgtctaaat tatgctcttg ttctgactgt gtactgtaca catttgtatt gctaccggtt 10800
tggcacatag ttttctcttt gattgcagat caaacccttc tgattgcaga ttgcttggct 10860
atggctgatg tgctcactgt tcttctttag cttgtatatt gctgatggtg gcttggctac 10920
ggctgaaaaa gttgctgctg cgccgacttg gcaactgttg ctccagtaat gctttgtcct 10980
ctcttcctag ccgccgactt ggcacttggc agctgttgct cctgtaatgc gttgttatct 11040
cttatctctt gagatgtact atgattttga ggctgtttga cttgtgccag attgccagtg 11100
ctgatgctat attatctcag gtttttatgc tagtatatgt tttactgtgt gctgcctgtg 11160
tcgagttacg taatctattg aaccgctatg cgtgttgatg ccctgttgtt gcttgccaga 11220
ttgatgcccc tgttgcttgc agcttgcaag ctgtagtgaa atcctaaaat tcgaaaccaa 11280
atctattctg aacttttgaa gatctgtgat gtccggaaga aaagattcaa acagataaac 11340
gggactctcc agaatctata aaataaatga tcgacaaacg ctttgctttg gtaggcttcc 11400
tagttagtta gcggaccgaa gcttcggtcc gggcctagaa ggccagcttc ggccgccccg 11460
ggcaacttta ttatacaaag ttgatagatc gaataacttc gtatagcata cattatacga 11520
agttatacct ggtggcgccg ctaggggctg caggaattcg atatcaagct tatcgatacc 11580
gtcgacctcg agggggggcc cggtaccctg ggatctgccc ttactttaac gcctctaacc 11640
aacacccctt tatctttata aggaacaata aacagaattt gccccactgt tctaaatcac 11700
ctaataatat ccccagctaa aaacaataaa ggtttcctag aattaagaca agcatgactg 11760
ttcctccagg agggtttgga acattgttgc agtcttgcag atacgggcga agggtgagaa 11820
acagagcgga gggctggagg tgacctcggt agtcgacgcc ggagttgagc ttgacaacga 11880
cggggcggcc cctgatggac ttgaggaagt ccgatggcgt cttcaccgtc ccgccggcgc 11940
ccgaggcggg cctgtcgctg ccgccgccgc cgctgctcat cttgcgcgct gtgcccccgg 12000
cggtgtccct gtgttgcgga tcgcgggtgg gccaggtgga tgcgagggcg acccgtttgg 12060
actccggccg gagccgccgg atccctggtc ggtgtcagtg ccgtttactc tgggccccac 12120
gtgtcagtac cgtctgtaga tgacaacaac ccgtcgtcca cagtcatgtc caaaatatcc 12180
tttcttcttt tttttcgatt cggatatcta tcttcctttt ttttttccaa aaatcttctt 12240
gacgcaccag cgcgcacgtt tgtggtaaac gccgacacgt cggtcccacg tcgatagacc 12300
ccacccacca gtgagtagcg tgtacgtatt cgggggtgac ggacgtgtcg ccgtcgtctt 12360
gctagtccca ttcccatctg agccacacat ctctgaacaa aaaaaaggag ggaggcctcc 12420
acgcacatcc ccctccgtgc cacccgcccc aaaccctcgc gccgcctccg agacagccgc 12480
cgcaaccatg gccaccgccg ccgccgcgtc taccgcgctc actggcgcca ctaccgctgc 12540
gcccaaggcg aggcgccggg cgcacctcct ggccacccgc cgcgccctcg ccgcgcccat 12600
caggtgctca gcggcgtcac ccgccatgcc gatggctccc ccggccaccc cgctccggcc 12660
gtggggcccc accgagcccc gcaagggtgc tgacatcctc gtcgagtccc tcgagcgctg 12720
cggcgtccgc gacgtcttcg cctaccccgg cggcgcgtcc atggagatcc accaggcact 12780
cacccgctcc cccgtcatcg ccaaccacct cttccgccac gagcaagggg aggcctttgc 12840
cgcctccggc tacgcgcgct cctcgggccg cgtcggcgtc tgcatcgcca cctccggccc 12900
cggcgccacc aacctagtct ccgcgctcgc cgacgcgctg ctcgattccg tccccatggt 12960
cgccatcacg ggacaggtgg cgcgacgcat gattggcacc gacgccttcc aggagacgcc 13020
catcgtcgag gtcacccgct ccatcaccaa gcacaactac ctggtcctcg acgtcgacga 13080
catcccccgc gtcgtgcagg aggctttctt cctcgcctcc tctggtcgac cagggccggt 13140
gcttgtcgac atccccaagg acatccagca gcagatggcg gtgcctgtct gggacaagcc 13200
catgagtctg cctgggtaca ttgcgcgcct tcccaagccc cctgcgactg agttgcttga 13260
gcaggtgctg cgtcttgttg gtgaatcgcg gcgccctgtt ctttatgtgg gcggtggctg 13320
cgcagcatct ggtgaggagt tgcgacgctt tgtggagctg actggaatcc cggtcacaac 13380
tactcttatg ggcctcggca acttccccag cgacgaccca ctgtctctgc gcatgctagg 13440
tatgcatggg acggtgtatg caaattatgc agtggataag gccgatctgt tgcttgcact 13500
tggtgtgcgg tttgatgatc gcgtgacagg gaagattgag gcttttgcaa gcagggctaa 13560
gattgtgcac gttgatattg atccggctga gattggcaag aacaagcagc cacatgtgtc 13620
catctgtgca gatgttaagc ttgctttgca gggcatgaat gctcttcttg aaggaagcac 13680
atcaaagaag agctttgact ttggctcatg gaacgatgag ttggatcagc agaagaggga 13740
attccccctt gggtataaaa catctaatga ggagatccag ccacaatatg ctattcaggt 13800
tcttgatgag ctgacgaaag gcgaggccat catcggcaca ggtgttgggc agcaccagat 13860
gtgggcggca cagtactaca cttacaagcg gccaaggcag tggttgtctt cagctggtct 13920
tggggctatg ggatttggtt tgccggctgc tgctggtgct tctgtggcaa acccaggtgt 13980
cactgttgtt gacatcgatg gagatggtag ctttctcatg aacgttcagg agctagctat 14040
gatccgaatt gagaacctcc cagtgaaggt ctttgtgcta aacaaccagc acctggggat 14100
ggtggtgcag ttggaggaca ggttctataa ggccaacaga gcgcacacat acttgggaaa 14160
cccagagaat gaaagtgaga tatatccaga tttcgtgacg atcgccaaag ggttcaacat 14220
tccagcggtc cgtgtgacaa agaagaacga agtccgcgca gcgataaaga agatgctcga 14280
gactccaggg ccgtacctct tggatataat cgtcccacac caggagcatg tgttgcctat 14340
gatccctagt ggtggggctt tcaaggatat gatcctggat ggtgatggca ggactgtgta 14400
ctgactagct agtcagttaa cctagacttg tccatcttct ggattggcca acttaattaa 14460
tgtatgaaat aaaaggatgc acacatagtg acatgctaat cactataatg tgggcatcaa 14520
agttgtgtgt tatgtgtaat tactagttat ctgaataaaa gagaaagaga tcatccatat 14580
ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt tataattctt tgatgaacca gatgcatttc 14640
attaaccaaa tccatataca tataaatatt aatcatatat aattaatatc aattgggtta 14700
gcaaaacaaa tctagtctag gtgtgttttg cgaatgcggc cgcctgcaga gttaacggcg 14760
cgccgactag ctagctaagg taccgagctc gaattcattc cgattaatcg tggcctcttg 14820
ctcttcagga tgaagagcta tgtttaaacg tgcaagcgct actagacaat tcagtacatt 14880
aaaaacgtcc gcaatgtgtt attaagttgt ctaagcgtca atttgtttac accacaatat 14940
atcctgcca 14949
<210> 104
<211> 14894
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 104
gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac 60
aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg 120
acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc actcagcaag 180
ctggtacgat tgtaatacga ctcactatag ggcgaattga gcgctgttta aacgctcttc 240
aactggaaga gcggttacgc tgtttaaacg ctcttcaact ggaagagcgg ttactaccgg 300
ttcactagct agctgctaag gttaccagag ctggtcacct ttgtccacca acttattaag 360
tatctagttg aagacacgtt cttcttcacg taagaagaca ctcagtagtc ttcggccaga 420
atggcctctt gattcagcgg gcctagaagg ccggatcact gactagctaa tttaaatcct 480
gaggatctgg tcttcctaag gacccgggat atcggaccga ttaaacttta attcggtccg 540
ataacttcgt atagcataca ttatacgaag ttatatgcat acgcgtctta agtcgatcgc 600
tatcaacttt gtatagaaaa gttgggccga attcgagctc ggtacggcca gaatggcccg 660
gaccgggtta ccgcggccgc gaattcaggc gacccatcgc tgctttgtct acatcatgtt 720
cttcatcatc ctccccaggc gacgcgtgct gctgttctta ttcagactac cgttcgagtg 780
actgcatggc gtacatcttt ctgcatcgac tttgtacggc tacatcgaac atatacacga 840
gatgtctcgt gtgaatagag tcactaatgc cttaagcatc ggttactccg tagggtacat 900
tctgttcttc ttatttgtgc atatttttat tgttgtttac tgattatacg agtagttata 960
catacatgca catacatatc atcacatata tcacaatatt tttctaaatt aaattaaaac 1020
taaaaatgac taaatttcta acaccaacga cattgtaatg ttttctccaa caactttacc 1080
tattctacat tgttctattt cgaatttcac tctataaaca acatagtcta caatggaaaa 1140
cagtgctttg tacgactata tacgcgatgt gtggctacaa cataagacaa tatagtcgtt 1200
tgaagattga acctatatat cggtacggtt aatccgtcta tgtacgtggg catgacgaac 1260
acccgtgata acgaaggatt aacgtgcaca atcataaatc caaagtagga gcggtgcatg 1320
atgagaatcg ctctcagtac tcgacataat gaaccttacg aggtacaaca ggcaggcagg 1380
cagggaccag gggccgcctt tatttcaggc tcgctggccc cacgggcgtg ctgcgtgcac 1440
gaagggcact accccaacct ctcaccgaaa aaccgcgctg gatcggcaaa tcaaacgagg 1500
tggtgccccg tgcccactct ccacgtccac ggcaccatcc ctctgcagcc gctcaccagc 1560
catgccgtgt cgcggaacgg cacaaccacc cccaacccac tcacgaaacc ccgtcccggc 1620
cgtgcccgtg tcgctccgcg ctcggcaacg aggcggcccg cgctgctgag tcccctggac 1680
acccgacacc ctgtcggccc tttgtttatt catcccgaaa tctcatctgc ccccacggcc 1740
gactgcgctg cgccgcccgg atatatatac ccatcgttat cgatcgatcg atcgcgtcac 1800
tcacgggtag ctcatggtcg agcgtagcat gcaggaactt atttgccgtg cgctcccagg 1860
tctccgctcg cgtgccttcc agtctgtctc acactagctg ctgtgggacg atcgaagtgg 1920
gtgtgtcagc tagctagctg cgccgtgacc acgcacatga ccgcagtgcg cgcggggctg 1980
atcaagggaa agtggatccg ccatggcggc caatgcgggc ggcggtggag cgggaggagg 2040
cagcggcagc ggcagcgtgg ctgcgccggc ggtgtgccgc cccagcggct cgcggtggac 2100
gccgacgccg gagcagatca ggatgctgaa ggagctctac tacggctgcg gcatccggtc 2160
gcccagctcg gagcagatcc agcgcatcac cgccatgctg cggcagcacg gcaagatcga 2220
gggcaagaac gtcttctact ggttccagaa ccacaaggcc cgcgagcgcc agaagcgccg 2280
cctcaccagc ctcgacgtca acgtgcccgc cgccggcgcg gccgacgcca ccaccagcca 2340
actcggcgtc ctctcgctgt cgtcgccgcc gccttcaggc gcggcgcctc cctcgcccac 2400
cctcggcttc tacgccgccg gcaatggcgg cggatcggct gtgctgctgg acacgagttc 2460
cgactggggc agcagcggcg ctgctatggc caccgagaca tgcttcctgc aggactacat 2520
gggcgtgacg gacacgggca gctcgtcgca gtggccacgc ttctcgtcgt cggacacgat 2580
aatggcggcg gccgcggcgc gggcggcgac gacgcgggcg cccgagacgc tccctctctt 2640
cccgacctgc ggcgacgacg gcggcagcgg tagcagcagc tacttgccgt tctggggtgc 2700
cgcgtccaca actgccggcg ccacttcttc cgttgcgatc caacagcaac accagctgca 2760
ggagcagtac agcttttaca gcaacagcaa cagcacccag ctggccggca ccggcaacca 2820
agacgtatcg gcaacagcag cagcagccgc cgccctggag ctgagcctca gctcatggtg 2880
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agtccgttga tcggtggaag accactcgtc agtgttgagt tgaatgtttg atcaataaaa 3000
tacggcaatg ctgtaagggt tgttttttat gccattgata atacactgta ctgttcagtt 3060
gttgaactct atttcttagc catgccaagt gcttttctta ttttgaataa cattacagca 3120
aaaagttgaa agacaaaaaa aaaaaccccc gaacagagtg ctttgggtcc caagcttctt 3180
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ctatacccca ccacaacaat attatatact ttcatcttca actaactcat gtaccttcca 3360
atttttttct actaataatt atttacgtgc acagaaactt agcaaggaga gagagagcgg 3420
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gtcccccatc aatcttctgt tcttgcggtt gtagcctgtg taacagtgct agagtatgta 3600
tgataaatag gttttaagtc tgcttacatg acatttttta ttgtggaaga gacatataaa 3660
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gggactgtcg tgtctgcagc cgcggcggca gcagcaagca gcaacgacaa catggccgcc 6660
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gtggtacctg acatcttata gtctgcaacc tctcgtgtct gaattcctat ctttatcaag 6780
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ctcctgcgct tgtgctgtaa ttgtctgtgt acctgttgtt tgtgactgtg ttagttccct 7020
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gttgctatgg tcttgcttga caaagttttt ttttgaggga atttcaacta aatttttgag 7860
tgaaactatc aaatactgat tttaaaaaat ttttataaaa ggaagcgcag agataaaagg 7920
ccatctatgc tacaaaagta cccaaaaatg taatcctaaa gtatgaattg catttttttt 7980
ttgtttggac gaaaggaaag gagtattacc acaagaatga tatcatcttc atatttagat 8040
cttttttggg taaagcttga gattctctaa atatagagaa atcagaagaa aaaaaaaccg 8100
tgttttggtg gttttgattt ctagcctcca caataacttt gacggcgtcg acaagtctaa 8160
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ttccctttcc gccccgccgc tataaatagc cagccccatc cccagctttt ttccccaatc 8460
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taatcttatc atatgtctaa tctaataaac aaacatgctt ttaaattatc ttcatatgct 9480
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aatatatcct gcca 14894
<210> 105
<211> 14504
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 105
caaacaaaca tacacagcga tttattcaca cgaacccgaa ttacaacggt atatatcctg 60
tcagccaaca ccaaaacatc aaaaaaatcg ggatcaggat caggatctgc ggccgcatcc 120
tgcaggttta aacggccggc cttcactagc tagctgctaa gctcaaacga gcaggaagca 180
acgagagggt ggcgcgcgac cgacgtgcgt acgtagcatg agcctgagtg gagacgttgg 240
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aagtgtggct ctgtagtatg tacgtgcggg tacgatgctg taagctactg aggcaagtcc 360
ataaataaat aatgacacgt gcgtgttcta taatctcttc gcttcttcat ttgtcccctt 420
gcggagtttg gcatccattg atgccgttac gctgagaaca gacacagcag acgaaccaaa 480
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tagcccatcc ttagcaatta gctattggcc ctgcccatcc caagcaatga tctcgaagta 660
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tgaacgtaag gagcttctgg atgacggctg ggacttcttt gacaaagaga cagagctcta 1440
agtgtcttct tttcagtaga ttatcggtgc tagaataaaa gagatatgaa gggattctgg 1500
gttctgctct atgtagagta aagcttggat ctttgatcta atctaccgtt agtataaaac 1560
atctattgag ctctctttta tttttcttct cagtgtatag tttgcttatt gtttttttgg 1620
tgtttttttc cacctctttg tggtactgac ataaacaaag actatcgttt tgtcatagaa 1680
ttttgagatt ttgaagaaaa gttggataat ttagtatact ttttaactga ctttataaaa 1740
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tttaagctag aaaaaaatat gctctaagcc tggacatgtt gttagtcatg gccagcgtat 1860
gtgtacatta ggtaaatgaa aacaaaaaca aaaactttga aggtttctgt taagaaagga 1920
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tgataatttc aataaaaagt taatttattc cttaaaatat catctatatt gattatataa 3540
gaaaaaaaaa taagattatt aaaaataaaa ctcaattaaa cgaatgatgt tttgaaaata 3600
catcattaag taggtgataa agtaggtgat agttaattaa aatttgttta tattttaatc 3660
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tagactcttt ctttttacac attttttttc atctctccaa ataattttac aaatatgtaa 3900
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ttctttaatg cattaatttt caaaaattaa tttaatacat ttaagtaact tatttccgta 4080
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ctatttttca aatttttgtt tttttatttt atttcagaaa ccagaacaca tgctgaatta 4200
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ccataaatac tatttaatat ataaatatta cgattataac aaatttaata ctctctattg 4320
tcttaaatgt aagaaaaaag atcagccaga gataagtgga atattccaat tattttgtga 4380
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tttggcttaa aaatgggttt aactcctata aaatgagcga aaattgattt tgtaaacttt 5040
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<210> 106
<211> 2000
<212> DNA
<213> 大豆(Glycine max)
<400> 106
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aaaaatagaa actagaataa aaaaaatcaa taaaaaggac ctcacttatt attttgactg 1080
ttactaatta cggaaataag ttacttaaat gtattaaatt aatttttgaa aattaatgca 1140
ttaaagaaac ttatttaatg tattaaataa gtatttaatg catttcagga aaaagcattt 1200
aatgtattaa atacagttta gaaattaatt tttgtttcat tttttattta taaaattatg 1260
ttttcttttt acatatttgt aaaattattt ggagagatga aaaaaaatgt gtaaaaagaa 1320
agagtctacc aacaagtagt tagtccaaat agtattgaat tcaaattttt taaataaagt 1380
tttgttaaaa ttaattatga ataaaattga tagataattc taacataatt acacaaaaaa 1440
atctttaatc ataatactcc ctttagacct caaatgtaaa aaaaataaaa aaaaaatcaa 1500
ttgtgttaga ttaaaatata aacaaatttt aattaactat cacctacttt atcacctact 1560
taatgatgta ttttcaaaac atcattcgtt taattgagtt ttatttttaa taatcttatt 1620
tttttttctt atataatcaa tatagatgat attttaagga ataaattaac tttttattga 1680
aattatcaaa attaaataat attaactaat tttttgtcta atggttgagt ccagagagag 1740
taatatttgt gggtggagtt ttactggtgg atgtggacag gtgtgagcca catgttacca 1800
tgcagtgagt cagaaaaaag aagtggcagg atatccggcg ggttcacggc ttggaagttg 1860
caataaatat taaatgagga tgcagatatt cttcttctgt cggtggtatg atatatatat 1920
atatataagg ccgggcagaa aggaaaggaa atactattac atagcagaag caaagaaaat 1980
actattacta gctaatgagt 2000
Claims (55)
1.一种用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:
(a) 用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:
(i) 编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;和
(ii) 编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;
(b) 在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且
(c) 使所述可再生植物结构发芽以形成所述转基因植物;
其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO: 4、6、8、10、12或14中的任一个的氨基酸序列组成;或其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO: 3、5、7、9、11或13中的任一个的核苷酸序列编码;并且
其中所述包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO: 18的氨基酸序列组成;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO: 17或21中的任一个的核苷酸序列编码。
2.一种用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:
(a) 用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含
(i) 编码WUS2多肽的核苷酸序列;和
(ii) 编码ODP2多肽的核苷酸序列;
(b) 在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且
(c) 使所述可再生植物结构发芽以形成所述转基因植物;
其中所述WUS2多肽由SEQ ID NO: 6的氨基酸序列组成;或其中所述WUS2多肽由SEQ IDNO: 5的核苷酸序列编码;并且
其中所述ODP2多肽由SEQ ID NO: 18的氨基酸序列组成;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO: 17或21中的任一个的核苷酸序列编码。
3.一种用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:
(a) 用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含:
(i) 编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;和
(ii) 编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;
(b) 在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成;并且
(c) 在14天至60天内使(b)的所述可再生植物结构发芽以形成所述转基因植物;
其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO: 4、6、8、10、12或14中的任一个的氨基酸序列组成;或其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO: 3、5、7、9、11或13中的任一个的核苷酸序列编码;并且
其中所述包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO: 18的氨基酸序列组成;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO: 17或21中的任一个的核苷酸序列编码。
4.一种用于生产转基因植物的方法,所述方法包括:
(a) 用表达构建体转化外植体的细胞,所述表达构建体包含
(i) 编码WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列;和
(ii) 编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列;
(b) 在不存在外源性细胞分裂素的情况下,允许(a)的多肽在每个转化的细胞中表达以形成可再生植物结构,其中没有愈伤组织形成,并且其中所述可再生植物结构在转化所述细胞的0-7天或0-14天内形成;并且
(c) 在转化所述细胞的14天至60天内使(b)的所述可再生植物结构发芽以形成所述转基因植物;
其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO: 4、6、8、10、12或14中的任一个的氨基酸序列组成;或其中所述WUS/WOX同源框多肽由SEQ ID NO: 3、5、7、9、11或13中的任一个的核苷酸序列编码;并且
其中所述包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO: 18的氨基酸序列组成;或其中包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽由SEQ ID NO: 17或21中的任一个的核苷酸序列编码。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法,其中编码所述WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码所述包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列的表达发生在转化起始后少于1天、少于2天、少于5天、少于7天、或少于14天。
6.如权利要求1-4中任一项所述的方法,其中所述表达构建体进一步包含编码位点特异性重组酶的核苷酸序列。
7.如权利要求6所述的方法,其中所述位点特异性重组酶选自:FLP、Cre、SSV1、λInt、φC31 Int、HK022、R、Gin、Tn1721、CinH、ParA、Tn5053、Bxb1、TP907-1或U153。
8.如权利要求7所述的方法,其中编码位点特异性重组酶的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。
9.如权利要求1-4中任一项所述的方法,其中编码所述WUS/WOX同源框多肽的核苷酸序列和编码包含两个AP2-DNA结合结构域的多肽的核苷酸序列可操作地连接至组成型启动子、诱导型启动子、或发育调节型启动子。
10.如权利要求8所述的方法,其中所述组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSVPRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1BPRO、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO。
11.如权利要求9所述的方法,其中所述组成型启动子选自:UBI、LLDAV、EVCV、DMMV、BSVPRO、CYMV PRO FL、UBIZM PRO、SI-UB3 PRO、SB-UBI PRO、USB1ZM PRO、ZM-GOS2 PRO、ZM-H1BPRO、IN2-2、NOS、35S的-135版本、或ZM-ADF PRO。
12.如权利要求8所述的方法,其中所述诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。
13.如权利要求9所述的方法,其中所述诱导型启动子选自:AXIG1、DR5、XVE、GLB1、OLE、LTP2、HSP17.7、HSP26、HSP18A、或由四环素、胺苯磺隆或氯磺隆激活的启动子。
14.如权利要求8所述的方法,其中所述发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A或LEA-D34。
15.如权利要求9所述的方法,其中所述发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2、PLTP3、LGL、LEA-14A或LEA-D34。
16.如权利要求8所述的方法,其中所述诱导型启动子是化学诱导型启动子。
17.如权利要求9所述的方法,其中所述诱导型启动子是化学诱导型启动子。
18.如权利要求8所述的方法,其中所述诱导型启动子是生长素诱导型启动子。
19.如权利要求9所述的方法,其中所述诱导型启动子是生长素诱导型启动子。
20.如权利要求18或19所述的方法,其中所述生长素诱导型启动子是AXIG1。
21.如权利要求20所述的方法,其中所述AXIG1启动子由SEQ ID NO: 39的核苷酸序列组成。
22.如权利要求8所述的方法,其中所述诱导型启动子包含生长素响应元件。
23.如权利要求9所述的方法,其中所述诱导型启动子包含生长素响应元件。
24.如权利要求12所述的方法,其中所述诱导型启动子包含生长素响应元件。
25.如权利要求8所述的方法,其中所述诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。
26.如权利要求9所述的方法,其中所述诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。
27.如权利要求12所述的方法,其中所述诱导型启动子含有一个或多个DR5增强子基序。
28.如权利要求8所述的方法,其中所述启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。
29.如权利要求9所述的方法,其中所述启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。
30.如权利要求10所述的方法,其中所述启动子是经修饰用于阻抑和去阻抑的弱组成型启动子。
31.如权利要求28-30中任一项所述的方法,其中所述启动子选自:NOS、AXIG1、ZM-GOS2、CC-UBI1-PRO或ZM-ADF4-PRO。
32.如权利要求8所述的方法,其中所述诱导型启动子是由SEQ ID NO: 40的核苷酸序列组成的DR5启动子。
33.如权利要求9所述的方法,其中所述诱导型启动子是由SEQ ID NO: 40的核苷酸序列组成的DR5启动子。
34.如权利要求12所述的方法,其中所述诱导型启动子是由SEQ ID NO: 40的核苷酸序列组成的DR5启动子。
35.如权利要求8所述的方法,其中所述启动子是去阻抑型启动子。
36.如权利要求9所述的方法,其中所述启动子是去阻抑型启动子。
37.如权利要求10所述的方法,其中所述启动子是去阻抑型启动子。
38.如权利要求8所述的方法,其中所述发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。
39.如权利要求9所述的方法,其中所述发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。
40.如权利要求14所述的方法,其中所述发育调节型启动子选自:PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3。
41.如权利要求14-15和38-40中任一项所述的方法,其中所述PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自单子叶植物。
42.如权利要求41所述的方法,其中所述单子叶植物是大麦、玉米、稷、燕麦、稻、黑麦、粟、高粱、甘蔗、柳枝稷、黑小麦、草坪草、或小麦。
43.如权利要求42所述的方法,其中所述单子叶植物是玉米、高粱、稻、或粟。
44.如权利要求43所述的方法,其中所述单子叶植物是玉米、高粱或稻。
45.如权利要求44所述的方法,其中所述单子叶植物是玉米。
46.如权利要求14-15和38-40中任一项所述的方法,其中所述PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子源自双子叶植物。
47.如权利要求46所述的方法,其中所述双子叶植物是羽衣甘蓝、花椰菜、西兰花、芥菜植物、卷心菜、豌豆、三叶草、苜蓿、蚕豆、番茄、木薯、大豆、低芥酸菜籽、苜蓿、向日葵、红花、烟草、拟南芥、或棉花。
48.如权利要求14-15和38-40中任一项所述的方法,其中所述PLTP、PLTP1、PLTP2或PLTP3启动子由SEQ ID NO: 1-2或55-61中的任一个组成。
49.如权利要求14-15和38-40中任一项所述的方法,其中所述PLTP启动子由SEQ IDNO: 1或2中的任一个组成。
50.如权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述可再生植物结构在转化所述细胞的0至7天内、或在转化所述细胞的0至14天内形成,并且所述转基因植物在转化所述细胞的14天至转化所述细胞的60天内形成。
51.如权利要求1-4中任一项所述的方法,其中所述外植体是未成熟胚。
52.如权利要求51所述的方法,其中所述未成熟胚是1-5 mm的未成熟胚。
53.如权利要求51所述的方法,其中所述未成熟胚是3.5-5 mm的未成熟胚。
54.如权利要求1-4中任一项所述的方法,其中外源性细胞分裂素在转化所述细胞的7天后或在转化所述细胞的14天后在发芽期间使用。
55.如权利要求1-4中任一项所述的方法,其中(a)的多肽的表达是瞬时的。
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