BRPI0818000A2

BRPI0818000A2 - forma humanizada de um anticorpo, anticorpo, composiÇço farmacÊutica, e, Ácido nucleico isolado

Info

Publication number: BRPI0818000A2
Application number: BRPI0818000-8A
Authority: BR
Inventors: Ronald Black; Lars Ekman; Ivan Lieberburg; Michael Grundman; James Callaway; Keith M Gregg; Jack Steven Jacobsen; Davinder Gill; Lioudmila Tchistiakova; Angela Widom
Original assignee: Janssen Alzheimer Immunotherap; Wyeth Llc
Priority date: 2007-10-17
Filing date: 2008-10-17
Publication date: 2012-12-25
Also published as: WO2009052439A3; KR20100068301A; HK1217709A1; EP2207565A4; SG186649A1; MX2010004250A; TW200932264A; PT2207565E; CA2940337A1; HUE025684T2; PA8800801A1; ZA201002544B; JP6022636B2; KR101197839B1; SG10201607589XA; CA2702617A1; CO6331295A2; EA201590833A1; US20090155256A1; JP5745853B2

Abstract

FORMA HUMANIZADA DE UM ANTICORPO, ANTICORPO, COMPOSIÇçO FARMACÊUTICA, E, ÁCIDO NUCLEICO ISOLADO. A invenção fornece métodos de imunoterapia contra doenças de Alzheimer e similares em que o regime administrado a um paciente depende do genotipo de ApoE do paciente.

Description

"FORMA HUMANIZADA DE UM ANTICORPO, ANTICORPO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, ÁCIDO NUCLEICO ISOLADO" REFERÊNCIA CRUZADA COM PEDIDOS RELACIONADOS

O Pedido US Condicional N0 60/999.423 e 61/083.827, depositado em 17 de outubro de 2007 e 25 de julho de 2008, respectivamente, são incorporados por referência em sua totalidade para todos os propósitos. FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO I. Geral

O mal de Alzheimer (AD) é uma doença progressiva que resulta em demência senil. Ver, em geral, Selkoe, TINS 16:403 (1993); Hardy et al., WO 92/13069; Selkoe, J. Neuropathol Exp. Neurol. 53:438 (1994); Duff et al., Nature 373:476 (1995); Games et al., Nature 373:523 (1995). Falando amplamente, a doença está em duas categorias: início tardio, que ocorre em idade avançada (65 + anos) e início precoce, que se desenvolve bem antes do período senil, isto é, entre 35 e 60 anos. Em ambos os tipos de doença, a patologia é a mesma, mas as anormalidades tendem a ser mais graves e difundidas em casos que começam em um estágio precoce. A doença é caracterizada por pelo menos dois tipos de lesões no cérebro, emaranhados neurofibrilares e placas senis. Os emaranhados neurofibrilares são depósitos intracelulares de proteína tau associada com microtúbulo que consiste de dois filamentos enrolados em torno um dos outros em pares. As placas senis (isto é, placas amilóides) são áreas de neurópilo desorganizado até 150 μιη através dos depósitos amilóides extracelulares no centro que são visíveis pela análise microscópica de seções de tecido celular. O acúmulo de placas amilóides dentro do cérebro também está associado com a síndrome de Down e outros distúrbios cognitivos.

O constituinte principal das placas é um peptídeo denominado peptídeo amilóide Αβ ou β. O peptídeo Αβ é um fragmento interno de 4-kDa de 39 a 43 aminoácidos de uma glicoproteína transmembrana maior denominada proteína precursora de amilóide (APP). Como um resultado de processamento proteolítico de APP por enzimas de secretase diferentes, Αβ é primariamente encontrada tanto em uma forma curta, 40 aminoácidos de comprimento, quanto em uma forma longa, que varia de 42 a 43 aminoácidos de comprimento. Parte do domínio transmembrana hidrofóbico de APP é encontrado na extremidade carbóxi de Αβ e pode levar em conta a capacidade de Αβ para a agregação em placas, particularmente no caso da forma longa. O acúmulo de placas amilóides no cérebro eventualmente leva à morte celular neuronal. Os sintomas físicos associados com este tipo de deterioração neural caracterizam o mal de Alzheimer.

Diversas mutações dentro da proteína APP foram correlacionadas com a presença do mal de Alzheimer. Ver, por exemplo, Goate et al, Nature 349:704 (1991) (valina717 a isoleucina); Chartier Harlan et al, Nature 353:844 (1991)) (valina717 a glicina); Murrell et al, Science 254:97 (1991) (valina717 a fenilalanina); Mullan et al, Nature Genet. 1:345 (1992) (uma mutação dupla que muda lisina595-metionina596 a asparagina595- leucina596). Tais mutações são pensadas causar o mal de Alzheimer pelo processamento aumentado ou alterado de APP à Αβ, particularmente processamento de APP a quantidades aumentadas da forma longa de Αβ (isto é, Αβ1-42 e Αβ1-43). As mutações em outros genes, tais como os genes de presenilina, PSl e PS2, são pensadas indiretamente para afetar o processamento de APP para gerar quantidades aumentadas de forma longa Αβ (ver Hardy, TINS 20: 154 (1997)).

A Apolipoproteína E (ApoE) codifica uma proteína de processamento de colesterol. O gene, que mapeia quanto a 19ql3.2, tem três variantes alélicas: ApoE4, ApoE3 e ApoE2. A freqüência da versão apoE4 do gene na população geral varia, mas é sempre menor do que 30 % e freqüentemente 8 % a 15 %. ApoE3 é a forma mais comum e ApoE2 é a menos comum. As pessoas com um alelo E4 usualmente têm cerca de duas a três vezes o risco aumentado de desenvolver mal de Alzheimer. As pessoas com dois alelos E4 (usualmente em torno de 1 % da população) tem cerca de nove vezes o aumento de risco. Entretanto, mesmo pessoas com dois alelos E4 nem sempre desenvolvem o mal de Alzheimer. Pelo menos um alelo E4 é observado em cerca de 40 % de pacientes com mal de Alzheimer de início tardio. A avaliação genética para E4 não foi rotineiramente realizada, porque não foi conhecido como usar esta informação para um regime terapêutico. SUMÁRIO DA INVENÇÃO REIVINDICADA

A invenção fornece um método para tratar mal de Alzheimer, que compreende administrar a um paciente tendo zero alelos ApoE4 ("paciente não carreador de ApoE4") e mal de Alzheimer, um regime eficaz de um anticorpo que liga-se especificamente a um epítopo de terminal N de Αβ. Opcionalmente, o anticorpo liga-se especificamente a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 7 de Αβ ou um epítopo dentro dos resíduos 1 a 5 de Αβ ou um epítopo dentro dos resíduos 3 a 7 de Αβ. Opcionalmente, a dosagem do anticorpo dentro de uma faixa de cerca de 0,15 mg/kg a cerca de 2 mg/kg é administrado pela infusão intravenosa. Opcionalmente, a dosagem é administrada a cada 4 a 16 semanas. Opcionalmente, a dosagem é administrada a cada 10 a 14 semanas. Opcionalmente, a dosagem é administrada a cada 13 semanas. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 1 mg/kg. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 0,5 mg/kg a 2 mg/kg. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 2 mg/kg. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. Opcionalmente, o método também envolve monitorar quanto ao edema vasogênico e, opcionalmente administrar um corticosteróide ao paciente para tratar o edema vasogênico detectado pelo monitoramento.

A invenção também fornece um método para reduzir o declínio cognitivo em um paciente tendo zero alelos ApoE4 ("paciente não carreador de ApoE4"), que compreende administrar ao paciente um anticorpo que liga-se especificamente a um epítopo de terminal N de Αβ em um regime eficaz para reduzir o declínio cognitivo do paciente com relação a um paciente de controle aos quais o anticorpo não é administrado; em que: o paciente não carreador de ApoE4 e paciente de controle foram diagnosticados com mal de Alzheimer brando a moderado e o declínio cognitivo é medido por ADAS-COG, NTB, MMSE ou CDR-SB. Opcionalmente, o anticorpo é administrado pela infusão intravenosa em uma dosagem dentro de uma faixa de cerca de 0,15 mg/kg a cerca de 2 mg/kg. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 0,5 mg/kg e o declínio cognitivo é medido por ADAS-COG. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 2 mg/kg e o declínio cognitivo é medido por ADAS-COG. Opcionalmente, o declínio cognitivo é medido por NTB. Opcionalmente, a dosagem é 0,5 mg/kg. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 0,5 mg/kg e o declínio cognitivo é medido por CDR. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 0,5 mg/kg e o declínio cognitivo é medido por MMSE. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 2 mg/kg e o declínio cognitivo é medido por MMSE.

A invenção também fornece um método para reduzir o declínio do volume cerebral em um paciente tendo zero alelos ApoE4 ("paciente não carreador de ApoE4"), que compreende administrar ao paciente não carreador de ApoE4 um anticorpo que liga-se especificamente a um epítopo de terminal N de Αβ em um regime eficaz para reduzir o declínio do volume cerebral do paciente não carreador de ApoE4 com relação a um paciente de controle aos quais o anticorpo não é administrado; em que o paciente não carreador de ApoE4 e paciente de controle foram diagnosticados com mal de Alzheimer brando a moderado. Opcionalmente, o anticorpo é administrado pela infusão intravenosa em uma dosagem dentro de uma faixa de cerca de 0,15 mg/kg a cerca de 2 mg/kg. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 0,5 mg/kg. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 2 mg/kg. Opcionalmente, o declínio do volume cerebral é medido por MRL

A invenção também fornece um método para tratar mal de Alzheimer, que compreende administrar a um paciente não carreador de ApoE4 um anticorpo que reconhece especificamente a região de terminal N de Αβ em um regime eficaz para manter uma concentração de soro média do anticorpo na faixa de cerca de 0,1 μg/ml a cerca de 60 pg/ml. Opcionalmente, a faixa e de cerca de 0,4 μg/ml a cerca de 20 μg/ml. Opcionalmente, a faixa e de cerca de 1 μg/ml a cerca de 5 μg/ml. Opcionalmente, a concentração de soro máxima do anticorpo no paciente menor do que cerca de 28 μg de anticorpo/ml de soro. Opcionalmente, a concentração de soro máxima está dentro de uma faixa de cerca de 4 a 18 pg de anticorpo/ml de soro. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab.

A invenção também fornece um método para tratar mal de Alzheimer, que compreende administrar a um paciente não carreador de ApoE4 um anticorpo que reconhece especificamente a região de terminal N de AR em um regime eficaz para atingir uma concentração de plasma Αβ média de pelo menos 450 pg/ml. Opcionalmente, a concentração de plasma Αβ média está na faixa de cerca de 600 pg/ml a cerca de 3000 pg/ml. Opcionalmente, a concentração de plasma Αβ média está na faixa de cerca de 700 pg/ml a cerca de 2000 pg/ml. Opcionalmente, a concentração de plasma Αβ média está na faixa de cerca de 700 pg/ml a cerca de 2000 pg/ml. Opcionalmente, a concentração de plasma Αβ média está na faixa de cerca de 800 pg/ml a cerca de 1000 pg/ml.

A invenção também fornece um método para tratar mal de Alzheimer, que compreende subcutaneamente administrar a um paciente tendo a doença e uma ou duas cópias de um alelo de ApoE4 um regime eficaz de um anticorpo que liga-se a um epítopo de terminal N de Αβ. Opcionalmente, o método ainda compreende monitorar quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,01 a 0,6 mg/kg e uma freqüência entre semanal e mensal. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,05 a 0,5 mg/kg. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,05 a 0,25 mg/kg. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,015 a 0,2 mg/kg semanalmente ou bissemanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,05 a 0,15 mg/kg semanalmente ou bissemanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,05 a 0,07 mg/kg semanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,06 mg/kg semanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,1 a 0,15 mg/kg bissemanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,1 a 0,3 mg/kg mensalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 0,2 mg/kg mensalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 1 a 40 mg e uma freqüência entre semanal e mensal. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 5 a 25 mg. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 2,5 a 15 mg. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 1 a 12 mg semanalmente ou bissemanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 2,5 a 10 mg semanalmente ou bissemanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 2,5 a 5 mg semanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 4 a 5 mg semanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dose de 7 a 10 mg bissemanalmente. Opcionalmente, o método ainda compreende monitorar quanto ao edema vasogênico.

A invenção ainda compreende um método para tratar mal de Alzheimer, que compreende administrar a um paciente tendo a doença e um ou dois alelos ApoE4 um regime eficaz de um anticorpo que liga-se a um epítopo de terminal N de Αβ; administrar um corticosteróide ao paciente para tratar o edema vasogênico que origina-se da administração do anticorpo. Opcionalmente, o método ainda compreende monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, a dose ou freqüência de administração do anticorpo é reduzida ou eliminada durante o edema vasogênico com relação à dose ou freqüência antes do edema vasogênico. Opcionalmente, a dose ou freqüência de administração do anticorpo é aumentado após a resolução do edema vasogênico com relação à dose ou freqüência antes ou durante o edema vasogênico.

A invenção ainda compreende um método para tratar ou realizar profilaxia em uma população de pacientes de uma doença amiloidogênica caracterizada por depósitos de amilóide de Αβ no cérebro, que compreende: administrar regimes diferentes a pacientes diferentes na população dependendo daquelas formas alélicas de ApoE estão presentes em pacientes; em que pelo menos um dos regimes compreende a administração de um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente. Opcionalmente, cada um dos os regimes diferentes compreendem a administração de um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente e a dose do agente e/ou a freqüência de administração do agente e/ou a capacidade do agente induzir uma resposta clara aos depósitos de amilóide e/ou a concentração de soro média do agente ou anticorpos induzidos pelo agente e/ou a concentração de soro máxima do agente ou anticorpos induzidos pelo agente é reduzido e/ou o tempo de iniciação de tratamento com relação à progressão da doença é precoce em (a) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4 e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4.

Opcionalmente, um primeiro regime compreende a administração de um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente e um regime precisa de um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ e o primeiro regime é administrado a pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4 e o segundo regime é administrado a pacientes tendo uma ou duas cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, um primeiro regime compreende administrar um primeiro anticorpo a Αβ e o segundo regime compreende administrar um segundo anticorpo a Αβ e o segundo anticorpo reduziu a ligação a um Fcy ou Clq com relação ao primeiro anticorpo e o primeiro anticorpo é administrado a pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4 e o segundo anticorpo é administrado a pacientes tendo uma ou duas cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, o segundo anticorpo tem uma ou mais mutações na região constante que reduz a ligação ao receptor Fcy e/ou Clq, as mutações não estando presentes no primeiro anticorpo. Opcionalmente, a uma ou mais mutações estão presentes em posições em uma região constante de cadeia pesada selecionada do grupo que consiste de posições 234, 235, 236 e 237 (numeração EU). Opcionalmente, a uma ou mais mutações são mutações nas posições 234, 235 e 237. Opcionalmente, a uma ou mais mutações são L234A, L235A e G237A. Opcionalmente, o isotipo da região constante é IgGl humano. Opcionalmente, o isotipo da região constante é IgG2 ou IgG4 humano. Opcionalmente, o primeiro anticorpo é bapineuzumab e o segundo anticorpo é uma variante L234A, L235A, G237A de bapineuzumab. Opcionalmente, um primeiro regime compreende administrar um primeiro anticorpo a Αβ e um segundo regime compreende administrar um segundo anticorpo a Αβ, o primeiro anticorpo sendo de isotipo IgGl humano e o segundo anticorpo de isotipo IgG4 humano, e o primeiro anticorpo é administrado a pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4 e o segundo anticorpo é administrado a pacientes tendo uma ou duas cópias de um alelo de ApoE4.

Em alguns métodos, a doença é mal de Alzheimer. Alguns métodos ainda compreendem determinar quais alelos de ApoE estão presentes no paciente.

Opcionalmente, os regimes diferentes diferem em dose do agente administrado. Opcionalmente, os regimes diferentes diferem em freqüência do agente administrado. Opcionalmente, os regimes diferentes diferem do tipo de agente administrado.

Opcionalmente, a dose do agente e/ou a freqüência de administração do agente e/ou a capacidade do agente induzir uma resposta clara aos depósitos de amilóide é reduzido em (a) pacientes tendo dois alelos ApoE4 com relação aos pacientes tendo um alelo ApoE4 e/ou (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4 e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, a dose do agente e/ou a freqüência de administração do agente e/ou a capacidade do agente induzir uma resposta clara aos depósitos de amilóide é reduzido em pacientes tendo um ou dois alelos ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero alelos ApoE4 de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, aos pacientes na população tendo um ou dois alelos ApoE4 é administrado uma dose de 0,15 a 1 mg/kg e pacientes na população tendo zero alelos ApoE4 é administrado uma dose de 0,5 a 2 mg/kg de um anticorpo que liga-se especificamente dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ. Opcionalmente, os pacientes na população tendo um ou dois alelos ApoE4 são administrados com uma dosagem inferior de agente do que pacientes tendo zero alelos ApoE4 até o edema vasogênico ter aparecido e ser resolvido e a mesma dosagem de agente a seguir.

Opcionalmente, os pacientes na população tendo um ou dois alelos ApoE4 são administrados com uma freqüência menor do agente do que os pacientes tendo zero alelos ApoE4 até o edema vasogênico ter aparecido e ser resolvido e a mesma dosagem de agente a seguir. Opcionalmente, os pacientes na população tendo um ou dois alelos ApoE4 são administrados com um anticorpo com capacidade reduzida para induzir uma resposta clara aos depósitos de amilóide com relação a bapineuzumab.

Opcionalmente, o método ainda compreende monitorar pelo menos alguns pacientes na população para o edema vasogênico. Opcionalmente, o monitoramento é realizado por MRL Opcionalmente, pacientes na população com zero alelos ApoE4 não são monitorados por MRL Opcionalmente, o agente é um anticorpo que liga a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ. Opcionalmente, o anticorpo tem isotipo IgGl humano. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. Opcionalmente, o agente é um anticorpo tendo capacidade reduzida para induzir uma resposta clara aos depósitos de amilóide com relação a bapineuzumab. Opcionalmente, o anticorpo é uma variante de L234A, L235A, G237A de bapineuzumab.

Opcionalmente, em que os pacientes com um ou dois alelos ApoE4 são administrados com 1 a 3 doses de anticorpo 266 humanizado seguido pelas doses subsequentes de bapineuzumab e pacientes com zero alelos ApoE4 são administrados com o mesmo número total de doses mas todas com bapineuzumab. Em alguns métodos, o anticorpo é um anticorpo 266 humanizado. Opcionalmente, pacientes com um ou dois alelos ApoE4 são administrados com 266 humanizado e pacientes com zero alelos ApoE4 são administrados com bapineuzumab.

A invenção ainda fornece um método para monitorar uma população de pacientes que passam pelo tratamento ou profilaxia quanto a uma doença distinguida por depósitos de amilóide de Αβ no cérebro com um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ, o método compreendendo: realizar regimes de monitoramento diferentes em paciente diferentes na população para o edema vasogênico, em que a freqüência de monitoramento é maior para (a) pacientes tendo duas cópias de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de ApoE4 e/ou (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, a doença é mal de Alzheimer. Opcionalmente, o método ainda compreende determinar que as formas alélicas de ApoE estão presentes em cada paciente na população. Opcionalmente, o monitoramento ocorre pela formação de imagem cerebral. Opcionalmente, monitoramento ocorre por MRL Opcionalmente, pacientes tendo um alelo ApoE4 são monitorados mais freqüentemente do que pacientes tendo zero alelos ApoE4. Opcionalmente, pacientes tendo dois alelos ApoE4 são monitorados mais freqüentemente do que pacientes tendo um alelo ApoE4. Opcionalmente, pacientes tendo um alelo ApoE4 são monitorados mais freqüentemente do que pacientes tendo zero alelos ApoE4. Opcionalmente, pacientes tendo zero alelos ApoE4 não são monitorados por MRI quanto ao edema vasogênico.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia de um paciente quanto a uma doença distinguida por depósitos de amilóide de Αβ no cérebro, que compreende administrar a um paciente com pelo menos um alelo ApoE4 um agente que é um anticorpo a um epítopo dentro do resíduo 1 a 11 de Αβ ou um agente que inclui um tal anticorpo para Αβ e monitoramento o paciente quanto ao edema vasogênico por MRL Opcionalmente, o agente é bapineuzumab. Opcionalmente, o agente é uma variante L234A, L235A, G237Ade bapineuzumab.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia de uma doença distinguida por depósitos de amilóide de Αβ no cérebro em um paciente tendo pelo menos um alelo ApoE4, que compreende administrar um primeiro regime ao paciente antes do edema vasogênico aparecer, e um segundo regime após o edema vasogênico ser resolvido; em que o primeiro e o segundo regimes cada um compreende administrar um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente e a dose do agente e/ou a freqüência de administração do agente e/ou a capacidade do agente remover depósitos de amilóide é no primeiro regime com relação ao segundo regime. Opcionalmente, a doença é mal de Alzheimer. Opcionalmente, o paciente tem um ou dois alelos ApoE4. Opcionalmente, o primeiro e o segundo regimes cada um compreende adminsitrar um anticorpo que liga-se especificamente a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ ao paciente e o anticorpo é administrado em uma dose de 0,15 a 1 mg/kg antes do edema vasogênico aparecer e 0,5 a 2 mg/kg após o edema vasogênico ser resolvido. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. Opcionalmente, o anticorpo é uma variante L234A, L235A, G237A de bapineuzumab.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia do mal de Alzheimer em um paciente, que compreende administrar ao paciente um anticorpo que liga-se especificamente a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ a um paciente tendo um ou dois alelos ApoE4, em que o anticorpo é administrado em um regime em que 0,15 a 1 mg/kg de anticorpo é administrado trimestralmente pela administração intravenosa ou em uma freqüência de dose e via de administração que gera uma concentração de soro média ou área sob a curva equivalentes. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. Opcionalmente a dose é 0,5 mg/kg.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia do mal de Alzheimer em um paciente, que compreende administrar ao paciente um anticorpo que liga-se especificamente a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ a um paciente tendo zero alelos ApoE4, em que a dose do anticorpo é 0,5 a 2 mg/kg administrado trimestralmente pela administração intravenosa ou uma freqüência de dose e via de administração que gera uma concentração de soro ou área sob a curva equivalentes. Opcionalmente, o anticorpo é uma variante de L234A, L235A, G237Ade bapineuzumab.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia do mal de Alzheimer em uma população de pacientes, que compreende administrar um anticorpo que liga-se especificamente a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ aos pacientes, em que o anticorpo é administrado em uma dose de 0,15 a 1 mg/kg em pacientes da população tendo um ou dois alelos ApoE4 e uma dose de 0,5 a 2,5 mg/kg em pacientes da população tendo zero alelos ApoE4 e a dose média é mais alta nos pacientes tendo zero alelos ApoE4. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. Opcionalmente, o anticorpo é uma variante de L234A, L235A, G237A de bapineuzumab. Opcionalmente, a dose é 0,5 mg/kg em pacientes da população tendo um ou dois alelos ApoE4 e 2 mg/kg em pacientes da população tendo zero alelos ApoE4.

A invenção ainda fornece o uso de uma medição de número de cópia de ApoE4 que é a seleção de regimes diferentes para o tratamento ou profilaxia de uma doença distinguida por depósitos de amilóide no cérebro no paciente em que cada um dos os regimes diferentes compreendem a administração de um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente e a dose do agente e/ou a freqüência de administração do agente e/ou a capacidade do agente induzir uma resposta clara aos depósitos de amilóide e/ou a concentração de soro média do agente ou anticorpos induzidos pelo agente e/ou a concentração de soro máxima do agente ou anticorpos induzidos pelo agente é reduzido e/ou o tempo de iniciação de tratamento com relação à progressão da doença é precoce em um regime administrado a (a) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um ApoE4.

A invenção ainda fornece um método de selecionar a regime para o tratamento ou profilaxia de uma doença distinguida por depósitos de amilóide no cérebro de um paciente, o método compreendendo determinar o número de alelos de alelos ApoE4 presentes em um paciente; seleção de regimes diferentes com base no número de alelos ApoE4 presentes, em que cada um dos os regimes diferentes compreendem a administração de um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente e a dose do agente e/ou a freqüência de administração do agente e/ou a capacidade do agente induzir uma resposta clara aos depósitos de amilóide e/ou a concentração de soro média do agente ou anticorpos induzidos pelo agente e/ou a concentração de soro máxima do agente ou anticorpos induzidos pelo agente é reduzido e/ou o tempo de iniciação de tratamento com relação à progressão da doença é precoce em (a) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um ApoE4.

A invenção ainda fornece o uso de uma medição de número de cópia de ApoE4 na fabricação de um medicamento para tratar mal de Alzheimer, em que o medicamento compreende um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ. A invenção ainda fornece o uso de pelo menos um agente que

é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente na fabricação de um medicamento para o tratamento ou profilaxia de uma doença distinguida por depósitos de amilóide no cérebro de um paciente por regimes diferentes dependendo do número de alelos ApoE4 no paciente, em que os regimes diferentes compreendem administrar um agente a um paciente e uma dose do agente e/ou a freqüência de administração do agente e/ou a capacidade do agente para induzir uma resposta clara aos depósitos de amilóide e/ou a concentração de soro média do agente ou anticorpos induzidos pelo agente e/ou a concentração de soro máxima do agente ou anticorpos induzidos pelo agente é reduzido e/ou o tempo de iniciação de tratamento com relação à progressão da doença é precoce em (a) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um ApoE4.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia em uma população de pacientes de uma doença amiloidogênica caracterizada por depósitos de amilóide de Αβ no cérebro, que compreende: administrar regimes diferentes a pacientes diferentes na população dependendo daquelas formas alélicas de ApoE estão presentes em pacientes; em que cada um dos os regimes diferentes compreendem a administração de um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente e a concentração de soro média do agente ou anticorpos induzidos pelo agente e/ou a concentração máxima do agente ou anticorpos induzidos pelo agente é reduzido em pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um ApoE4.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia em uma população de pacientes de uma doença amiloidogênica caracterizada por depósitos de amilóide de Αβ no cérebro, que compreende: determinar o estado de ApoE4 do paciente; administrar regimes diferentes a pacientes diferentes na população dependendo daquelas formas alélicas de ApoE estão presentes em pacientes; em que cada um dos os regimes diferentes compreendem a administração de um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente e a dose do agente e/ou a freqüência de administração do agente e/ou a capacidade do agente induzir uma resposta clara aos depósitos de amilóide e/ou a concentração de soro média do agente ou anticorpos induzidos pelo agente e/ou a concentração de soro máxima do agente ou anticorpos induzidos pelo agente é reduzido e/ou o tempo de iniciação de tratamento com relação à progressão da doença é precoce em (a) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4 e/ou (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4, e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um ApoE4.

A invenção ainda fornece uma forma humanizada de um anticorpo 10D5 que compreende uma região constante de cadeia pesada humana com mutações L234A, L235A e G237A, em que as posições são numeradas pelo sistema EU de numeração. Opcionalmente, o isotipo é IgGl, IgG2 ou IgG4 humanos, preferivelmente IgGl. O hibridoma 10D5 foi depositado com o ATCC em 8 de abril de 2003 e número de acessão designado PTA-5129. O ATCC está localizado em 10801 University Blvd., Manassas5VA 20110,

A invenção ainda fornece uma forma humanizada de um anticorpo 12A11 que compreende uma região variável de cadeia leve humanizada de SEQ DD N°: 10 e uma região variável de cadeia pesada humanizada de SEQ ID N°: 11 e uma região constante de cadeia pesada humana com mutações L234A, L235A e G237A, em que as posições são numeradas pelo sistema EU de numeração. Opcionalmente, o isotipo é IgGl, IgG2 ou IgG4 humanos, preferivelmente IgGl.

A invenção ainda fornece uma forma humanizada de um

anticorpo 3D6 que compreende uma região constante de cadeia pesada humana com mutações L234A, L235A e G237A, em que as posições são numeradas pelo sistema EU de numeração. O hibridoma 3D6 foi depositado com o ATCC em 8 de abril de 2003 e número de acessão designado PTA- 5130, O ATCC está localizado em 10801 University Blvd., Manassas, VA 20110, Opcionalmente, o isotipo é IgGl, IgG2 ou IgG4 humanos, preferivelmente IgGl. O hibridoma 3D6 foi depositado com o ATCC em 8 de abril de 2003.

A invenção ainda fornece um anticorpo humanizado isolado que compreende uma seqüência de região variável de cadeia leve madura SEQ ID N°: 2 e uma seqüência de região variável de cadeia pesada madura da SEQ ID N°: 3, e uma região constante de cadeia pesada humana de isotipo IgG com mutações L234A, L235A, e G237A, em que as posições são numeradas pelo sistema EU de numeração. Opcionalmente, o isotipo é isotipo IgGl humano.

A invenção ainda fornece uma forma humanizada isolada de um anticorpo 12B4, em que o anticorpo 12B4 é caracterizado por uma seqüência de região variável de cadeia leve madura SEQ ED N°: 31 e uma seqüência de região variável de cadeia pesada madura da SEO ID N°: 32, e uma região constante de cadeia pesada humana de isotipo IgG com mutações L234A, L235A, e G237A, em que as posições são numeradas pelo sistema EU de numeração. Opcionalmente, o isotipo é Isotipo IgGl humano.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia de uma doença distinguida por depósitos de Αβ no cérebro do paciente que compreende administrar um regime eficaz de um anticorpo humanizado ao paciente; em que o anticorpo humanizado compreende uma seqüência de região variável de cadeia leve madura SEQ ID N°: 2 e uma seqüência de região variável de cadeia pesada madura da SEQ ID N°: 3 e uma constante de cadeia pesada humana de isotipo IgGl com mutações L234A, L235A, e G237A, em que as posições são numeradas pelo sistema EU de numeração. Opcionalmente, o paciente tem pelo menos um alelo ApoE4. Opcionalmente a dose é 0,15 a 1 mg/kg. Opcionalmente, a dose é 0,15 a 2 mg/kg. Opcionalmente, o método ainda compreende monitorar o paciente por MRI quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, o método é para tratar a população de pacientes e o regime administrado a pacientes diferentes na população não depende do número de alelos ApoE4 presentes em um paciente.

A invenção ainda fornece um método para realizar profilaxia de uma doença distinguida por depósitos de Αβ no cérebro de um paciente que compreende administrar um regime eficaz de um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ na administração a um paciente, em que o paciente tem pelo menos um alelo ApoE4. Opcionalmente, o paciente tem dois alelos ApoE4. Opcionalmente, o paciente é assintomático. Opcionalmente, o paciente tem um registro de teste mini-mental de 27 ou mais alto. Opcionalmente, o paciente tem um registro de teste mini-mental de 20 a 26. Opcionalmente, o paciente tem pelo menos sessenta anos de idade. Opcionalmente, o método ainda compreende determinar o número de alelos ApoE4 no paciente. A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar

profilaxia de uma doença distinguida por depósitos de amilóide de Αβ no cérebro em um paciente que compreende administrar um primeiro regime compreende administrar um agente que é um anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ ao paciente; monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico; mantendo o regime se o edema vasogênico não aparecer e administrar um segundo regime ao paciente se o edema vasogênico aparecer, em que o segundo regime é uma dose reduzida do agente e/ou uma freqüência reduzida do gente, e/ou um agente diferente com capacidade reduzida de ligar um receptor Fcy e/ou Clq ou é uma perda de anticorpo para Αβ ou um agente que induz um anticorpo para Αβ; em que o segundo regime é mantido pelo menos pela duração do edema vasogênico. Opcionalmente, o agente no primeiro regime é um anticorpo que liga-se especificamente a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ. Opcionalmente, o primeiro regime compreende administrar um primeiro anticorpo a Αβ e o segundo regime compreende administrar um segundo anticorpo a Αβ com capacidade reduzida de ligar a um receptor Fcy e ou Clq com relação ao primeiro anticorpo. Opcionalmente, o primeiro anticorpo é bapineuzumab e o segundo anticorpo é uma variante L234A, L235A, G237Ade bapineuzumab.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia do mal de Alzheimer em uma população de paciente, que compreende administrar um anticorpo que liga-se especificamente a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ e tem mutações na região constante que reduz a ligação a um receptor Fcy e ou Clq ao paciente, em que o anticorpo é administrado na mesma dose e/ou freqüência a cada paciente com respeito ao número de alelos ApoE4 no paciente. Opcionalmente, o anticorpo é uma variante L234A, L235A e G237A de bapineuzumab. Opcionalmente, o método ainda compreende uma etapa de monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico.

A invenção ainda fornece um método para tratar ou realizar profilaxia do mal de Alzheimer em uma população de paciente, que compreende administrar um agente que é um anticorpo para Αβ ou que induz um anticorpo a Αβ na administração a alguns pacientes na população, em que os pacientes na população tendo zero alelos ApoE4 recebe o agente e pacientes na população tendo dois alelos ApoE4 não recebe o agente. Opcionalmente, pacientes na população tendo um alelo ApoE4 não recebe o agente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado pela infusão intravenosa em uma dosagem dentro de uma faixa de cerca de 0,15 mg/kg a cerca de 2 mg/kg. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 0,5 mg/kg. Opcionalmente, a dosagem é de cerca de 2 mg/kg. Opcionalmente, o declínio do volume cerebral é medido por MRL

A invenção ainda fornece um método para determinar um regime para a administração de bapineuzumab, que compreende fornecer instruções a um profissional de cuidado com a saúde que ajuda o profissional de cuidado com a saúde determinar um regime de bapineuzumab para a administração a um paciente tendo zero cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, o regime é caracterizado pela administração de bapineuzumab em uma dose de 0,5 a 2 mg/kg. Opcionalmente, o regime é caracterizado pela administração de 0,5 a 2 mg/kg de bapineuzumab trimestralmente pela administração intravenosa ou em uma freqüência de dose e via de administração que gera uma concentração de soro média ou área sob a curva equivalentes. Opcionalmente, o regime ainda compreende monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, o monitoramento do regime é diferente daquele monitoramento de regime para um paciente tendo uma ou duas cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, o método ainda compreende a etapa de determinar o número de alelos ApoE4 presentes em um paciente. Opcionalmente, o método ainda compreende fornecer bapineuzumab a um profissional de cuidado com a saúde. Opcionalmente, as instruções e bapineuzumab são fornecidas em combinação. Opcionalmente, o regime ainda compreende monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, o monitoramento é realizado por MRL Opcionalmente, o monitoramento ocorre pela formação de imagem cerebral.

A invenção ainda fornece um método para determinar um regime para a administração de bapineuzumab que compreende fornecer instruções a um profissional de cuidado com a saúde que ajuda o profissional de cuidado com a saúde determinar um regime de bapineuzumab para a administração a um paciente tendo uma ou duas cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, o regime é caracterizado pela administração de bapineuzumab em uma dose de 0,15 a 1 mg/kg. Opcionalmente, o regime é caracterizado pela administração de bapineuzumab em uma dose de 0,15 a 1 mg/kg trimestralmente pela administração intravenosa ou em uma freqüência de dose e via de administração que gera uma concentração de soro média ou área sob a curva equivalentes. Opcionalmente, o regime determinado compreende um primeiro e um segundo regime, em que o primeiro regime é administrado ao paciente antes do edema vasogênico aparecer, e o segundo regime após o edema vasogênico ser resolvido e em que o primeiro e o segundo regimes cada um compreende administrar bapineuzumab; em que o primeiro regime difere com relação ao segundo regime em pelo menos um de (i) - (ii) abaixo: (i) a dose do bapineuzumab é reduzida; (ii) a freqüência de administração do bapineuzumab é reduzida. Opcionalmente, o regime ainda compreende monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, o monitoramento do regime é diferente daquele monitoramento de regime para um paciente tendo uma ou duas cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, o método ainda compreende a etapa de determinar o número de alelos de alelos ApoE4 presentes em um paciente. Opcionalmente, o método ainda compreende fornecer bapineuzumab a um profissional de cuidado com a saúde. Opcionalmente, as instruções e bapineuzumab são fornecidas em combinação. Opcionalmente, o regime ainda compreende monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, o monitoramento é realizado por MRL Opcionalmente, o monitoramento ocorre pela formação de imagem cerebral. Opcionalmente, o monitoramento do regime é diferente daquele monitoramento de regime para um paciente que tem zero cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, a freqüência de monitoramento é maior para: (a) pacientes tendo duas cópias do alelo ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4; (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4; e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4.

A invenção ainda fornece um kit para determinar um regime para a administração de bapineuzumab que compreende instruções a um profissional de cuidado com a saúde que auxilia o profissional de cuidado com a saúde determinar que o regime de bapineuzumab para a administração a um paciente tendo zero cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, as instruções especificam um regime caracterizado pela administração de bapineuzumab em uma dose de 0,5 a 2 mg/kg. Opcionalmente, as instruções especificam a administração de 0,5 a 2 mg/kg de bapineuzumab trimestralmente pela administração intravenosa ou em uma freqüência de dose e via de administração que gera uma concentração de soro média ou área sob a curva equivalentes. Opcionalmente, as instruções especificam monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, as instruções especificam que o monitoramento do regime é diferente que o monitoramento do regime para um paciente tendo uma ou duas cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, as instruções especificam que o regime determinado compreende um primeiro e um segundo regime, em que o primeiro regime é administrado ao paciente antes do edema vasogênico aparecer, e o segundo regime após o edema vasogênico ser resolvido e em que o primeiro e o segundo regimes cada um compreende administrar bapineuzumab; em que o primeiro regime difere com relação ao segundo regime em pelo menos um de (i) a (ii) abaixo: (i) a dose do bapineuzumab é reduzida; (ii) a freqüência de administração do bapineuzumab é reduzida. Opcionalmente, as instruções especificam determinar o número de alelos de alelos ApoE4 presentes em um paciente. Opcionalmente, o kit ainda compreende bapineuzumab. Opcionalmente, as instruções especificam monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, as instruções especificam que o monitoramento é realizado por MRL Opcionalmente, as instruções especificam que o monitoramento ocorre pela formação de imagem cerebral.

A invenção ainda fornece um kit para determinar um regime para a administração de bapineuzumab que compreende instruções a um profissional de cuidado com a saúde que auxilia o profissional de cuidado com a saúde determinar que o regime de bapineuzumab para a administração a um paciente tendo uma ou duas cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, as instruções especificam a administração de bapineuzumab ern uma dose de 0,15 a 1 mg/kg. Opcionalmente, as instruções especificam a administração de bapineuzumab em uma dose de 0,15 a 1 mg/kg trimestralmente pela administração intravenosa ou em uma freqüência de dose e via de administração que gera uma concentração de soro média ou área sob a curva equivalentes. Opcionalmente, as instruções especificam que o regime determinado compreende um primeiro e um segundo regime, em que o primeiro regime é administrado ao paciente antes do edema vasogênico aparecer, e o segundo regime após o edema vasogênico ser resolvido e em que o primeiro e o segundo regimes cada um compreende administrar bapineuzumab; em que o primeiro regime difere com relação ao segundo regime em pelo menos um de (i) a (ii) abaixo: (i) a dose do bapineuzumab é reduzida; (ii) a freqüência de administração do bapineuzumab é reduzida. Opcionalmente, as instruções especificam determinar o número de alelos de alelos ApoE4 presentes em um paciente. Opcionalmente, o kit ainda compreende bapineuzumab. Opcionalmente, as instruções especificam monitorar o paciente quanto ao edema vasogênico. Opcionalmente, as instruções especificam que o monitoramento é realizado por MRI Opcionalmente, as instruções especificam que o monitoramento ocorre pela formação de imagem cerebral. Opcionalmente, as instruções especificam que o monitoramento do regime é diferente daquele monitoramento de regime para um paciente que tem zero cópias de um alelo de ApoE4. Opcionalmente, as instruções especificam que a freqüência de monitoramento é maior para: (a) pacientes tendo duas cópias do alelo ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4; (b) pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero cópias de um alelo de ApoE4; e/ou (c) pacientes tendo duas cópias de um alelo de ApoE4 com relação aos pacientes tendo uma cópia de um alelo de ApoE4.

A invenção ainda fornece um método de melhorar a segurança de bapineuzumab em pacientes tendo um ou dois alelos ApoE4, que compreende recomendar ao médico a administração de uma dose inferior de bapineuzumab a um paciente tendo um ou mais alelos ApoE com relação àqueles de um paciente tendo zero alelos ApoE.

A invenção ainda fornece um método de melhorar a segurança de bapineuzumab em pacientes tendo um ou dois alelos ApoE4, que compreende recomendar ao médico monitorar o paciente por MRI mais freqüentemente do que um paciente tendo um ou mais alelos ApoE com relação àqueles de um paciente tendo zero alelos ApoE.

A invenção ainda fornece um anticorpo isolado que compreende uma região constante de cadeia pesada humana de isotipo IgGl5 em que os aminoácidos nas posições 234, 235, e 237 (numeração EU) são, cada um, alanina. Opcionalmente, nenhum outro aminoácido de posições 230 a 240 ou 315 a 325 na região constante de cadeia pesada humana é ocupado por um aminoácido não naturalmente encontrado naquela posição em uma região constante de IgGl. Opcionalmente, nenhum outro aminoácido na região constante de cadeia pesada humana que não nas posições 234, 235 e 237 é ocupado por um aminoácido não naturalmente encontrado naquela posição em uma região constante de IgGl. Opcionalmente, a região constante de cadeia pesada humana compreende regiões de CHI, junta, CH2 e CH3. Opcionalmente, a região constante de cadeia pesada humana tem uma seqüência de aminoácido que compreende SEQ ED N°: 66 ou SEQ ID N°: 67 ou um alotipo destas seqüências. Opcionalmente, a região constante de cadeia pesada humana tem uma seqüência de aminoácido que compreende SEQ ED N°: 66 ou SEQ ID N°: 67. Opcionalmente, o anticorpo é um anticorpo totalmente humano. Opcionalmente, o anticorpo é um anticorpo humanizado. Opcionalmente, o anticorpo é anticorpo quimérico. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

A Fig. 1 mostra mudanças em ADAS-Cog, DAD, NTB e CDR-SB em pacientes tratados com relação a pacientes placebo usando-se modelos estatísticos de medições repetidas sem assumir a linearidade, barras acima de zero indicam melhora com relação ao placebo. MITT = plano modificado para o tratamento.

A Fig. 2 mostra mudanças em ADAS-Cog, DAD, NTB e CDR-SB em pacientes tratados que completaram os testes ("completadores") com relação a pacientes placebo usando-se modelos estatísticos de medições repetidas sem assumir a linearidade, barras acima de zero indicam melhora com relação ao placebo.

A Fig. 3 mostra mudanças em ADAS-Cog, DAD, NTB e CDR-SB em pacientes tratados com carreador ApoE4 com relação a pacientes placebo usando-se modelos estatísticos de medições repetidas sem assumir a linearidade, barras acima de zero indicam melhora com relação ao placebo.

A Fig. 4 mostra mudanças em ADAS-Cog, DAD, NTB e CDR-SB em pacientes tratados com carreador ApoE4 que completaram o teste com relação a pacientes placebo usando-se modelos estatísticos de medições repetidas sem assumir a linearidade. Barras acima de zero indicam melhora com relação ao placebo. A Fig. 5 mostra mudanças em ADAS-Cog, DAD5 NTB e CDR-SB em pacientes não tratados com carreador ApoE4 com relação a pacientes placebo usando-se modelos estatísticos de medições repetidas sem assumir a linearidade. Barras acima de zero indicam melhora com relação ao placebo.

A Fig. 6 fornece informação similar à Fig. 5 exceto que a Fig. 6 mostra mudanças com base na escala MMSE com relação ao placebo.

A Fig. 7 mostra mudanças em ADAS-Cog, DAD, NTB e CDR-SB em pacientes não tratados com carreador ApoE4 que completaram o teste com relação a pacientes placebo usando-se modelos estatísticos de medições repetidas sem assumir a linearidade. Barras acima de zero indicam melhora com relação ao placebo.

A Fig. 8 mostra informação similar à Fíg. 7 exceto que a Fig. 8 mostra mudanças com base na escala MMSE com relação ao placebo.

A Fig. 9 mostra mudanças em ADAS-cog, DAS, NTB e CDR- SB durante o tempo em pacientes tratados em comparação com os placebos em uma população que não carrega ApoE4.

As Figs. 10, 11 e 12 mostram mudanças em BBSI na população total (carreadores e não carreadores de ApoE4), carreadores de ApoE4 e não carreadores de ApoE4 respectivamente comparados com populações de placebo.

A Fig. 13 mostra a concentração de CSF de fosfo-tau em pacientes tratados em comparação com pacientes placebo (sem distinguir entre genotipos ApoE4).

A Fig. 14 mostra mudanças na concentração de soro de bapineuzuab no soro durante o tempo (deixado) e concentração de Αβ em plasma durante o tempo.

A Fig. 15 mostra um alinhamento dos domínios de CH2 de IgGl humano (SEQ ID N°: 95), IgG2 (SEQ ID N°: 96) e IgG4 (SEQ ID N°: 97) com IgGl de camundongo (SEQ ID N°: 98) e IgG2a (SEQ ID N°: 99).

A Fig. 16 mostra a desobstrução de placa Αβ pelas micróglias de camundongo de derivados de 3D6 IgGl murino. MsIgGl e MsIgG2a are anticorpos murinos contra antígenos irrelevantes. Os anticorpos 3D6 têm a região variável descrita neste. 3D6/FcyRl indica o mutante E233P sinmples na região de ligação Fc da região constante de IgGl. 3D6/Clq indica o mutante triplo na região de ligação Clq. Ver, por exemplo, Exemplo 6 e tabela 10,

A Fig. 17 mostra a desobstrução de placa Αβ pelas micróglias de camundongo de derivados de 3D6 IgG2a murino. IgG2a é um anticorpo murino contra um antígeno irrelevante. Os anticorpos remanescentes e condições são descritas, por exemplo, em Exemplo 6 e tabela 10.

A Fig. 18 mostra a desobstrução de placa Αβ pelas micróglias de camundongo de derivados 3D6 humanizados (AAB). Os anticorpos e condições são descritas, por exemplo, no Exemplo 6 e tabela 10.

A Fig. 19 mostra os resultados de um ensaio in vitro que mede o engolfamento gotas revestidas por IgG murino pelas micróglias de células de camundongo. As condições são descritas no Exemplo 6.

A Fig. 20 mostra um ensaio similar usando-se os anticorpos humanizados indicados. As condições são descritas no Exemplo 6.

A Fig. 21 mostra os resultados de um ensaio ELISA que mede a ligação de Clq pelos anticorpos humanizados indicados. Ver Exemplo 7.

A Fig. 22 mostra os resultados de um ensaio de citotoxicidade de complemento dependente de anticorpo usando-se os anticorpos humanizados indicados. Os resultados são expressados como descrito no Exemplo 7.

A Fig. 23 mostra os resultados de um ensaio ELISA que mede a ligação de Clq pelos anticorpos murinos indicados. Ver Exemplo 8.

As Figs. 24 e 25 mostra os resultados de um ensaio de medo contextual em camundongos tratados com os anticorpos humanizados indicados. Os resultados são comparados entre camundongos do tipo selvagem e Tg2576, como descrito no Exemplo 9.

A Fig. 26 mostra os resultados das atividades ADCC de anticorpos Y Ab02 anti-Lewis. Ver Exemplo 15.

A Fig. 27 mostra os resultados de atividades de CDC (citotoxicidade dependente de complemento) de anticorpos anti-Lewis Y Ab02. VerExemplo 15. DEFINIÇÕES

O termo "imunoglobulina" ou "anticorpo" (usado de maneira intercambeável neste) refere-se a uma proteína de ligação de antígeno tendo uma estrutura de cadeia de quatro polipeptídeos básica que consiste de duas cadeias pesadas e duas cadeias leves, as ditas cadeias sendo estabilizadas, por Exemplo, pelas ligações de bissulfeto intercadeia, que tem a capacidade de ligar especificamente o antígeno. Tanto as cadeias leves quanto as pesadas são dobradas em domínios. O termo "domínio" refere-se a uma região globular de um polipeptídeo de cadeia pesada ou leve que compreende arcos de peptídeo (por exemplo, que compreende de 3 a 4 arcos de peptídeo) estabilizados, por exemplo, pela ligação de bissulfeto de lâmina dobrada e/ou intracadeia. Os domínios ainda são referidos aqui como "constante" ou "variável", com base na perda relativa de variação de seqüência dentro dos domínios de vários membros de classe no caso de um domínio "constante" ou a variação significante dentro dos domínios de vários membros de classe na classe de um domínio "variável". Os domínios "constantes" na cadeia leve são referidos intercambeavelmente como "regiões constantes de cadeia leve", "domínios constantes de cadeia leve", regiões "CL" ou domínios "CL"). Os domínios "constantes" na cadeia pesada são referidos de maneira intercambeável como "regiões constantes de cadeia pesada", "domínios constantes de cadeia pesada", regiões "CH" ou domínios "CH"). Uma região constante de cadeia pesada também é comumente entendida referir-se coletivamente aos domínios presentes em uma região constante de comprimento total, que são domínios CHI, junta, CH2 e CH3 no caso de anticorpos de isotipo IgG. Os domínios "variáveis" na cadeia leve são referidos de maneira intercambeável como "regiões variáveis de cadeia leve", "domínios variáveis de cadeia leve", regiões "VL" ou domínios "VL"). Os domínios "variáveis" na cadeia pesada são referidos de maneira intercambeável como "regiões constantes de cadeia pesada", "domínios constantes de cadeia pesada," regiões "CH" ou domínios "CH").

O termo "região" refere-se a uma parte ou porção de uma cadeia de anticorpo e inclui domínios constantes ou variáveis como definido neste, bem como partes mais distintas ou porções dos ditos domínios. Por exemplo, os domínios ou regiões variáveis de cadeia leve incluem "regiões determinadoras de complementaridade" ou "CDRs" intercalados entre "regiões de estrutura" ou "FRs", como definido neste.

Referências a um anticorpo ou imunoglobulina incluem anticorpos intactos e fragmentos de ligação destes. Tipicamente, os fragmentos competem com o anticorpo intacto a partir do qual estes foram derivados para a ligação específica a um antígeno. Os fragmentos incluem separar cadeias pesadas e leves, Fab, Fab1 F(ab')2, Fabc e Fv. As cadeias separadas incluem NANOBODIES™ (isto é o fragmento VH isolado da cadeia pesada de anticorpos de camelos ou lhamas, opcionalmente humanizados). Os fragmentos VH isolados também podem ser obtidos de outras fontes, tais como anticorpos humanos. Os fragmentos são produzidos pelas técnicas de DNA recombinante ou pela separação enzimática ou química de imunoglobulinas intactas. O termo "anticorpo" também inclui uma ou mais cadeias de imunoglobulina que são quimicamente conjugadas a ou expressadas como proteínas de fusão com outras proteínas. O termo "anticorpo" também inclui anticorpo biespecífico. Um anticorpo biespecífico ou bifuncional é um anticorpo híbrido artificial tendo dois pares de cadeia pesada/leve e dois locais de ligação diferentes. Os anticorpos biespecíficos podem ser produzidos por uma variedade de métodos incluindo a fusão de hibridomas ou ligação de fragmentos Fab'. (Ver, por exemplo, Songsivilai & Lachmami, Clin. Exp. Immunol 79:315-321 (1990); Kostelny et al, J. Immunol 148, 1547-1553 (1992)).

"Ligação específica" de um anticorpo significa que o anticorpo apresenta afinidade apreciável para o antígeno ou um epítopo preferido e, preferivelmente, não apresenta reatividade cruzada constante. A ligação apreciável ou preferida inclui ligação com uma afinidade de pelo menos IO6, IO7, IO8, IO9 M"1 ou IO10 M"1. Afinidades maiores do que IO7 M"1 , preferivelmente maior do que IO8 M"1 são mais preferidas. Os valores intermediários daqueles apresentados aqui são pretendidos estarem dentro do escopo da presente invenção e uma afinidade de ligação preferida pode ser indicada como uma faixa de afinidades, por exemplo, IO6 a IO10 M"1' preferivelmente IO7 a IO10 M"1' mais preferivelmente IO8 a IO10 M-1. Um anticorpo que "não apresenta reatividade cruzada significante" é um que não ligará de maneira apreciável a uma entidade desejável (por exemplo, uma entidade proteinácea indesejável). Por exemplo, um anticorpo que liga-se especificamente a Αβ ligará de maneira apreciável ao Αβ mas não reagirá de maneira significante com proteínas ou peptídeos que não de Αβ (por exemplo, com proteínas ou peptídeos que não de Αβ incluídos em placas). Um anticorpo específico para um epítopo preferido, por exemplo, não reagirá de maneira significante com os epítopos remotos na mesma proteína ou peptídeo. A ligação específica pode ser determinada com quaisquer meios reconhecidos na técnica para determinar tal ligação. Preferivelmente, a ligação específica é determinada de acordo com a análise de Scatchard e/ou ensaios de ligação competitivos.

O termo "imunoglobulina humanizada" ou "anticorpo humanizado" refere-se a uma imunoglobulina ou anticorpo que inclui pelo menos uma imunoglobulina humanizada ou cadeia de anticorpo (isto é, pelo menos uma cadeia leve ou pesada humanizada). O termo "cadeia de imunoglobulina humanizada" ou cadeia de "anticorpo humanizado" (isto é, uma "cadeia leve de imunoglobulina humanizada" ou "cadeia pesada de imunoglobulina humanizada") refere-se a uma cadeia de imunoglobulina ou anticorpo (isto é, uma cadeia leve ou pesada, respectivamente) tendo uma região variável que inclui uma região de estrutura variável (também conhecido como estrutura de região variável) substancialmente a partir de imunoglobulina ou anticorpo humanos e regiões determinadoras de complementaridade (CDRs) (por exemplo, pelo menos um CDR, preferivelmente dois CDRs, mais preferivelmente três CDRs) substancialmente a partir de uma imunoglobulina não humana ou anticorpo (por exemplo, roedor e opcionalmente, camundongo) e ainda inclui regiões constantes (por exemplo, pelo menos uma região constante ou uma porção desta, no caso de uma cadeia leve e, preferivelmente três regiões constantes no case de uma cadeia pesada). O termo "região variável humanizada" (por exemplo, "região variável de cadeia leve pesada" ou "uma região variável de cadeia pesada humanizada") refere-se a uma região variável que inclui uma região de estrutura variável (também conhecida como uma estrutura de região variável) substancialmente a partir de uma imunoglobulina ou anticorpo humanos e regiões determinadoras de complementaridade (CDRs) substancialmente a partir de uma imunoglobulina não humana ou anticorpo.

A frase "substancialmente a partir de uma imunoglobulina ou anticorpo humanos" ou "substancialmente humano" significa que, quando alinhado a uma seqüência de amino de imunoglobulina ou anticorpo humanos para propósitos de comparação, a região divide pelo menos 80 a 90 % (por exemplo, pelo menos 90 %), preferivelmente 90 a 95 %, mais preferivelmente 95 a 99 % de identidade (isto é, identidade de seqüência local) com a estrutura humana ou seqüência de região constante, permitindo, por exemplo, substituições conservativas, substituições de seqüência de consenso, substituições de linha germinativa, retro-mutações e outros. A introdução de substituições conservativas, substituições de seqüência de consenso, substituições de linha germinativa, retro-mutações e outros, é Jfrequentemente referido como "otimização" de um anticorpo ou cadeia humanizados. A frase "substancialmente a partir de uma não-imunoglobulina ou anticorpos humanos" ou "substancialmente não humano" significa ter uma imunoglobulina ou seqüência de anticorpo pelo menos 80 a 95 %, preferivelmente 90 a 95 %, mais preferivelmente, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % idêntico àquele de um organismo não humano, por exemplo, um mamífero não humano.

Consequentemente, todas as regiões ou resíduos de uma imunoglobulina humanizada ou anticorpo ou de uma cadeia de imunoglobulina humanizada ou anticorpo, exceto a possibilidade dos CDRs, são substancialmente idênticos às regiões ou resíduos correspondentes de uma ou mais seqüências de imunoglobulina humanas naturais. O termo "região correspondente" ou "resíduo correspondente" refere-se a uma região ou resíduo em um segundo aminoácido ou seqüência de nucleotídeo que ocupa a mesma posição (isto é, equivalente) como uma região ou resíduo em uma primeira seqüência de aminoácido ou nucleotídeo, quando a primeira e a segunda seqüências são otimamente alinhada para os propósitos de comparação.

Os termos "imunoglobulina humanizada" ou "anticorpo humanizado" não são pretendidos abranger as imunoglobulinas ou anticorpos quiméricos, como definido infra. Embora a imunoglobulina ou anticorpos humanizados são quiméricos em sua construção (isto é, compreende regiões de mais do que uma espécie de proteína), estes incluem características adicionais (isto é, regiões variáveis que compreendem resíduos de CDR doador e resíduos de estrutura receptora) não encontrados em imunoglobulinas ou anticorpos quiméricos, como definido neste.

O termo "imunoglobulina quimérica" ou anticorpo refere-se a uma imunoglobulina ou anticorpo cujas regiões variáveis derivam de uma primeira espécie e cujas regiões constantes derivam de uma segunda espécie. As imunoglobulinas ou anticorpos quiméricos podem ser construídas, por exemplo, pela engenharia genética, de segmentos de gene de imunoglobulina que pertencem à espécies diferentes.

Um "antígeno" é uma entidade (por exemplo, uma entidade proteinácea ou peptídeo) à qual um anticorpo liga-se especificamente.

O termo "epítopo" ou "determinante antigênico" refere-se a um local em um antígeno ao qual uma imunoglobulina ou anticorpo (ou fragmento de ligação de antígeno deste) liga-se especificamente. Os epítopos podem ser ambos formados de aminoácidos contíguos ou aminoácidos não contíguos justapostos pela dobra terciária de uma proteína. Os epítopos formados de aminoácidos contíguos são tipicamente retidos em exposição aos solventes desnaturadores visto que os epítopos formados pela dobra terciária são tipicamente perdidos em tratamento com solventes desnaturadores. Um epítopo tipicamente inclui pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou aminoácidos em uma conformação espacial única. Os métodos de determinar conformação espacial de epítopos inclui, por exemplo, cristalografia em raio χ e ressonância magnética nuclear de 2 dimensões. Ver, por exemplo, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996).

Os anticorpos que reconhecem o mesmo epítopo podem ser identificados em uma imunoensaio simples que mostra a capacidade de um anticorpo bloquear a ligação de um outro anticorpo a um antígeno alvo, isto é, um ensaio de ligação competitivo. É determinado em um ensaio em que a imunoglobulina sob teste inibe a ligação específica de um anticorpo de referência a um antígeno comum, tal como Αβ. Tipos numerosos de ensaios de ligação competitivos são conhecidos, por exemplo, radioimunoensaio direto ou indireto de fase sólida (RIA), imunoensaio de enzima direto ou indireto de fase sólida (EIA), ensaio de competição sanduíche (ver Stahli et at., Methods in Enzymology 9:242 (1983)); EIA de biotina-avidina de fase sólida direta (ver Kirkland et al, J. Immunol. 137:3614 (1986)); ensaio rotulado direto de fase sólida, ensaio de sanduíche rotulado direto de fase sólida (ver Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)); RIA de rotulo direto de fase sólida usando-se rótulo I- 125 (ver Morei et al, Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)); ELA de biotina-avidina de fase sólida direta (Cheung et al, Virology 176:546 (1990)) e RlA rotulado direto (Moldenhauer et al, Scand. J. Immunol. 32:77 (1990). Tipicamente, um tal ensaio envolve o uso de antígeno purificado ligado a uma superfície sólidas ou células que carregam cada um destes, uma imunoglobulina de teste não rotulado em uma imunoglobulina de referência rotulada. A inibição competitiva é medida pela determinação da quantidade de rótulo ligado à superfície sólida ou células na presença da imunoglobulina de teste. Usualmente, a imunoglobulina de teste está presente em excesso. Usualmente, quando uma competição de anticorpo está presente em excesso, este inibirá a ligação específica de um anticorpo de referência a um antígeno comum por pelo menos 50 a 55 %, 55 a 60 %, 60 a 65 %, 65 a 70 % 70 a 75 % ou mais.

Um epítopo também é reconhecido por células imunológicas, por exemplo, células B e/ou células Τ. O reconhecimento celular de um epítopo pode ser determinado por ensaios in vitro que mede a proliferação dependente de antígeno, como determinado pela incorporação de 3H-timidina, pela secreção de citocina, pela secreção de anticorpo ou pela morte dependente de antígeno (ensaio de linfócito T citotóxico).

Os epítopos exemplares ou determinantes antigênicos podem ser encontrados dentro da proteína precursora de amilóide humana (APP), mas são preferivelmente observados dentro do peptídeo Αβ de APP. As isoformas múltiplas de APP existem, por exemplo, APP695, APP751 e APP770. Os aminoácidos dentro de APP são números designados de acordo com a seqüência da isoforma APP770 (ver por exemplo, GenBank N0 de Acessão P05067). As seqüências de peptídeos AR e sua relação com o precursor de APP APP são ilustrados pela Fig. 1 de Hardy et ai., TINS 20, 155-158 (1997). Por exemplo, o Al342 tem a seqüência:

H2N-Asp-Ala-Ghi-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val- His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly- Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-OH (SEQ ID N0: 1).

A não ser que evidente de outra maneira a partir do contexto, referência a Αβ também inclui variações alélicas naturais da seqüência acima, particularmente aquelas associadas com doença hereditária, tal como a mutação Arctic5 E693G, numeração APP 770. Αβ41, Αβ40 e Αβ39 diferem de Αβ42 pela omissão de Ala, Ala-Ile e Ala-Ile-Val respectivamente da extremidade de terminal C. Αβ43 difere de Αβ42 pela presença de um resíduo de treonina no terminal C. Os epítopos preferidos ou determinantes antigênicos, como descrito neste, estão localizados dentro do terminal N do peptídeo Αβ e inclui resíduos dentro dos aminoácidos 1 a 11 de Αβ, preferivelmente de resíduos 1-10, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7 ou 3-7 de Αβ42. Os epítopos preferidos adicionais ou determinantes antigênicos incluem resíduos 2-4, 5, 6, 7 ou 8 de Αβ, resíduos 3-5, 6, 7, 8 ou 9 de A ou resíduos 4-7, 8, 9 ou de Αβ42. Outros epítopos preferidos ocorrem dentro de regiões centrais ou terminal C como descrito abaixo. Um epítopo de terminal N de Αβ significa um epítopo com

resíduos 1-11. Um epítopo dentro de uma região de terminal C significa um epítopo dentro dos resíduos 29-43 e um epítopo dentro de regiões centrais significa um epítopo com resíduos 12-28.

Αβ "solúvel" ou "dissociado" refere-se ao polipeptídeo Αβ não agregador ou desagregador.

O Αβ "insolúvel" refere-se ao polipeptídeo Αβ agregador, por exemplo, Αβ mantido junto por ligações não covalentes. Acredita-se que o Αβ (por exemplo, Αβ42) agregue-se, pelo menos em parte, devido à presença de resíduos hidrofóbicos no terminal C do peptídeo (parte do domínio transmembrana de APP). Um método para a preparação de Αβ solúvel é dissolver o peptídeo liofilizado em DMSO puro com sonificação. A solução resultante é centrifugada para a remoção de quaisquer particulados insolúveis.

O termo "região Fc" refere-se a uma região de terminal Cde um anticorpo de IgG, em particular, a região de terminal C das cadeias pesadas de anticorpo de IgG. Embora as fronteiras da região Fc de uma cadeia pesada de IgG poderem variar levemente, uma região Fc está tipicamente definida como abrangendo a partir do resíduo Cys226 de aminoácído ao terminal carboxila de uma cadeia pesada de IgG.

O termo "função atuadora" refere-se a uma atividade que reside na região de Fc de um anticorpo (por exemplo, um anticorpo IgG) e inclui, por exemplo, a capacidade do anticorpo ligar moléculas atuadoras, tais como complemento e/ou receptores de Fc, que podem controlar diversas funções imune do anticorpo, tais como atividade de célula atuadora, lise, atividade mediada por complemento, purificação de e vida média de anticorpo. A função atuadora também pode ser influenciada pelas mutações na região de junta.

O termo "molécula atuadora" refere-se a uma molécula que é capaz de ligação à região de Fc de um anticorpo (por exemplo, um anticorpo de IgG) incluindo uma proteína de complemento ou um receptor de Fc.

O termo "célula atuadora" refere-se a uma célula capaz e ligar à porção Fc de um anticorpo (por exemplo, um anticorpo IgG) tipicamente por intermédio de um receptor de Fc expressado na célula atuadora, incluindo, mas não limitado a, linfócitos, por exemplo, células que apresentam antígenos e células Τ.

O termo "numeração de Kabat" a não ser que de outra maneira estabelecido, é definido como a numeração dos resíduos como em Kabat et al. (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5o Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)), incorporado neste por referência.

O termo "receptor de Fc" ou "FcR" refere-se a um receptor que liga-se à região Fc de um anticorpo. Os receptores Fc típicos que ligam-se a uma região de Fc de um anticorpo (por exemplo, um anticorpo IgG) inclui, mas não limita-se a, receptores das subclasses FcyRI, FcyRII e FcyRIII, incluindo variantes alélicas e, alternativamente, formas unidades destes receptores. Os receptores de Fc são revistos em Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capei et al., Immunomethods 4:25-34 (Í994) e de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995).

O termo "adjuvante" refere-se a um composto que quando administrado em conjunção com um antígeno aumenta e/ou redireciona a resposta imune ao antígeno, mas quando administrado sozinho não gera uma resposta imune ao antígeno. Os adjuvantes podem aumentar uma resposta imune por diversos mecanismos, incluindo o recrutamento de linfócito, estímulo de células B e/ou T e estímulo de macrófagos.

A área sob a curva (AUC) é a área sob a curva em uma plotagem de concentração de medicamento em plasma contra o tempo. Em um paciente individual, a área sob a curva representa a área sob a curva com base naquele paciente. Em uma população de pacientes, a área sob a curva representa a área média sob a curva para um intervalo de tempo comparável de pacientes diferentes na população.

A concentração de soro média em um paciente individual representa a concentração média de um anticorpo (ou anticorpos induzidos para um agente ativo) durante um período de tempo. A concentração de soro média em uma população de pacientes representa a média das concentrações de soro médias dos pacientes individuais em períodos comparáveis de tempo.

A concentração de soro máxima em um paciente individual representa a concentração máxima de um anticorpo (ou anticorpos induzidos para um agente ativo) durante um curso de tratamento. A concentração de soro máxima em uma população de indivíduos representa a média de concentrações máximas do anticorpo ou induz anticorpos entre indivíduos na população.

Para brevidade, o termo "carreador ApoE4" é algumas vezes usado para referir-se a pacientes tendo um ou dois alelos ApoE4 e "ApoE4 não carreador", ApoE4 não carreador" ou "carreador que não ApoE4" refere- se a pacientes tendo zero alelos ApoE4. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO I. Geral

A invenção fornece métodos de imunoterapia contra doenças de Alzheimer e similares em que o regime administrado a um paciente depende do genotipo de ApoE do paciente. Os métodos são fundamentados em parte (1) na observação que certos regimes de imunoterapia levam à instâncias mais altas no aparecimento do edema vasogênico (VE) em pacientes tendo um alelo ApoE4 (E4) do que em pacientes que precisam de um alelo E4 e mais freqüentemente ainda em pacientes tendo dois alelos E4 e/ou (2) a observação inicial de eficácia diferencial em pacientes carreadores de ApoE4 comparados a pacientes não carreadores de ApoE4 ou pacientes que receberam pelo menos seis doses comparadas com pacientes que receberam menos do que seis doses. Os resultados também mostram que a freqüência de casos de edema vasogênico aumenta com a freqüência e quantidade de dose.

Embora a prática da invenção não seja dependente de um entendimento de mecanismo, é hipotetizado que a associação do edema vasogênico com um genotipo ApoE4 pode originar-se de uma deposição maior de depósitos de Αβ e, em conseqüência indução de uma resposta de ajusta mais alta quando os anticorpos ligam-se aos depósitos. O ajuste de depósitos de amilóide podem levar ao edema vasogênico por qualquer um ou todos de diversos mecanismos. A remoção de amilóide das paredes dos vasos sangüíneos (amilóide vascular) pode causar vazamento de vasos sangüíneos; mais amilóide no espaço perivascular pode causar a drenagem mais lenta do fluido intersticial e/ou fluxo aumentado na rede de amilóide de compartimento intravascular à parênquima do cérebro pode levar a gradientes osmóticos. Embora o efeito do edema vasogênico seja usualmente assintomático e reversível e não impeça tratamento adicional, é desejável, entretanto, ajusta o regime terapêutico para reduzir o risco de que o edema vasogênico ocorra.

A invenção, desta maneira, fornece métodos em que o regime de imunoterapia é variado, por exemplo, para ajustar a resposta fagocítica, dependendo do estado de ApoE do paciente. Embora a resposta fagocítica seja útil no ajuste de depósitos de amilóide, a resposta pode, opcionalmente, ser controlada para evitar o edema vasogênico. Em geral, pacientes tendo dois alelos E4, que são mais suscetíveis ao edema vasogênico são administrados com uma dose menor ou uma freqüência menor do mesmo agente aos pacientes com zero alelos E4 ou são administrados com um agente diferente que é menos propenso a induzir uma resposta fagocítica ou recebe o agente através de um modo alternativo de administração, tal como, por exemplo, administração subcutânea. Pacientes com um alelo E4 pode ser tratado com o mesmo como os pacientes com zero ou dois alelos E4 ou um tratamento pode ser adaptado para este em que a dose e/ou freqüência de administração é intermediária entre aquela administrada a pacientes com zero ou dois alelos ApoE4. II. APOE O ApoE humano tem o número de acessão de entrada UniProtKB/Swiss-Prot P02649. As variantes E2, E3 e E4 são descritas em Genomics 3:373-379(1988), J. Biol Chem. 259:5495-5499 (1984); e Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 82:3445-3449(1985). A associação da forma E4 com o mal de Alzheimer de início tardio foi relatado por, por exemplo, Corder, Science 261, 921-3 (1993); Farrer, JAMA, 278, 1349-56 (1997) e Saunders, Neurology 43, 1467-72 (1993). As formas alélicas presentes em qualquer indivíduo podem ser determinadas por muitas técnicas convencionais, tais como sequenciamento direto, uso de arranjos GeneChip® ou semelhante, sondas específicas de alelo, métodos de extensão de base simples, extensão específica alélica. As formas alélicas também podem ser determinadas no nível de proteína por ELISA usando-se anticorpos específicos para produtos de expressão alélica diferente. Os kits para análise genética e imunológica estão comervialmente disponíveis (por exemplo, Innogenetics, Inc.; Graceful Earth, Inc.). A determinação de formas alélicas são, usualmente, feitas in vitro, isto é, em amostras removidas e nunca retornadas a um paciente. III. Estratégias Diferentes Para Tratamento ou Monitoramento Dependendo de ApoE

A. Regimes de Tratamento Diferentes

Alguns regimes de imunoterapia para imunoterapia contra mal de Alzheimer e outras doenças foram associados com o edema vasogênico (VE) no cérebro de alguns pacientes. Em geral, a incidência de VE é maior em carreadores de ApoE4 do que em não carreadores de ApoeE4 e em pacientes que receberam doses mais altas de certos agentes em certos regimes de imunoterapia. O VE foi observado na formação de imagem por ressonância magnética (MRI) como intensidades de sinal altas na seqüência de recuperação de inversão atenuada de fluido (FLAIR) envolvendo anormalidades cerebrais e expansão girante. O VE, em geral, é observado após a primeira ou a segunda administração do agente imunoterapêutico, embora isto seja observado na terceira ou quarta administração. A maioria dos pacientes com VE descobertos em MRI são assintomáticos. O VE é heterogêneo na apresentação e as descobertas de MRI em um paciente particular pode variar durante o tempo. A expansão girante e até certo ponto, a ressonância magnética maior (MR) muda visto em FLAIR que diferencia VE das mudanças de matéria branca comumente observada vista em FLAIR tanto em pacientes idosos normais quanto em pacientes com mal de Alzheimer (Hentschel et al, 2005; de Leeuw et al 2001).

O edema vasogênico (VE) é caracterizado por um aumento no volume de fluido extracelular devido à permeabilidade aumentada de células endoteliais capilares cerebrais às proteínas de soro macromolecular (por exemplo, albumina). VE pode ser o resultado da permeabilidade capilar cerebal aumentada. Os sintomas clínicos observados em pacientes com VE, quando existentes, são variados e até hoje foram grandemente brandos em estado natural. Dos casos de VE observados em MRI regularmente agendado, a maioria dos pacientes são assintomáticos. As observações clínicas associadas com os casos assintomáticos de VE incluíram estados mentais alterados (por exemplo, confusão aumentada, letargia, desorientação e alucinações), vômitos, dor de cabeça, dificuldades para andar, distúrbios visuais, fadiga, irritabilidade, ataxia, apetite diminuído e diarréia.

Como resumido acima, a invenção fornece regimes de tratamento diferentes dependendo se um paciente tem zero, um ou dois alelos E4. Desta maneira, na população de indivíduos tratados, aqueles tendo zero alelos E4 podem ser tratados diferentemente daqueles tendo dois alelos. Aqueles tendo um alelo E4 podem ser tratados de maneira diferente (de uma maneira intermediária) àqueles com zero ou dois alelos E4 ou podem ser agrupados com indivíduos tendo zero ou dois alelos E4 em qualquer um dos regimes que segue. Segue que os indivíduos tendo um alelo E4 podem ser tratados de maneira diferentes do que os indivíduos com zero alelos e/ou que o indivíduo com dois alelos ApoE4 podem ser tratados diferentemente do que os indivíduos com um alelo ApoE4. A experiência contínua com alguns agentes imunoterapêuticos cujo VE é mais provável de ocorrer em doses maiores do que 5 mg/kg (ver PCT/US07/09499).

Em alguns métodos, o estado ApoE4 é o único marcador genético que determina os regimes de tratamento diferente em pacientes diferentes. Em outros métodos, os regimes de tratamento diferenciais podem ser fundamentado em ApoE4 em combinação com outros marcadores genéticos associados com a suscetibilidade ou resistência à mal de Alzheimer.

Uma população de indivíduos tratados opcionalmente em número total suficiente de pacientes e números suficientes de subpopulações com números diferentes de alelos ApoE4 do que uma associação entre regimes de tratamento diferentes e alelos ApoE4 diferentes pode ser visto com relação a uma designação aleatória dos regimes diferentes com uma confianca estatística de pelo menos 95 %. Por exemplo, a população tratada pode consistir de pelo menos 100, 500 ou 1000 indivíduos que tem pelo menos 10 a 70 % e mais tipicamente 30 a 50 % de um alelo ApoE4. Uma população tratada também pode (isto é, opcionalmente) ser reconhecida como a população total tratada com um medicamento particular produzido por um fabricante particular.

Em alguns métodos, como debatido em mais detalhes abaixo, os indivíduos tendo zero alelos ApoE4 são administrados com um agente em um regime designado para atingir a eficácia como estimado a partir de um ou mais pontos finais clínicos, tais como, por exemplo, medidas cognitivas (por exemplo, ADAS-cog, NTB, DAD, MMSE, CDR-SB, NPI), biomarcadores (por exemplo, CSF tau) e volume cerebral (por exemplo, BBSI, VBSI), bem como outros parâmetros, tal como, por exemplo segurança desejável, farmacocinéticas e farmacodinâmicas. Em alguns métodos, um ou dois alelos E4 são administrados com uma dose reduzida e/ou freqüência do mesmo agente como indivíduos com zero alelos E4. Um objetivo de tal método é liberar uma concentração de soro média reduzida do agente em um período de tempo (área reduzida sob a curva) e/ou para reduzir a concentração de pico máxima. Isto pode ser realizado, por exemplo, pela redução da dose e administração na mesma freqüência ou redução da freqüência e administração na mesma dose ou administração em dose e freqüência reduzida. Se uma dose for reduzida, mas a freqüência mantida constante, uma dose é usualmente reduzida entre 10 e 90 %, freqüentemente cerca de 30 a 75 ou 40 a 60 %. Se a freqüência for reduzida, mas a dose mantida constante, então a freqüência é tipicamente reduzida entre duas e cinco vezes. Algumas vezes, a freqüência é reduzida omitindo-se simplesmente uma dose ocasional ou duas doses consecutivas do regime administrado a pacientes com zero alelos ApoE4. Tais doses podem ser, por exemplo, omitidas durante o período que um paciente está passando por edema vasogênico. Em outros métodos, o indivíduo tendo um ou dois alelos E4

são administrados com uma dose reduzida do agente em uma freqüência aumentada com relação a indivíduos tendo zero alelos E4. Por exemplo, a dose pode ser dividida e a freqüência dobrada. Em tais métodos, o medicamento total liberado às duas subpopulaçãos durante o tempo (isto é, área sob a curva) pode ser o mesmo dentro do erro experimental, mas a concentração de plasma máxima é menor em indivíduos tendo dois alelos E4. Por exemplo, em pacientes tendo um ou dois alelos E4 a concentração de soro máxima de anticorpo está preferivelmente abaixo 14 μg/ml e para pacientes tendo zero alelos, a concentração de soro máxima de anticorpo está preferivelmente abaixo 28 μg/ml.

Em outros métodos, o tratamento é administrado em estágios diferentes com relação à progressão da doença dependendo do estado de ApoE4. Em tais métodos, o tratamento é administrado precocemente em pacientes tendo dois alelos ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero alelos ApoE4 ou em pacientes tendo um alelo ApoE4 com relação aos pacientes tendo zero alelos ApoE4 e/ou em pacientes tendo dois alelos ApoE4 com relação aos pacientes tendo um alelo ApoE4. A progressão da doença pode ser medida, por exemplo, pela escala MMSE em que um registro de 27 a é considerado Alzheimer normal e 20 a 26 considerado brando. Desta maneira, por exemplo, o registro de núcleo de MMSE médio de não carreadores de ApoE4 no começo do tratamento pode ser maior do que aquele de carreadores de ApoE4 (pacientes com um ou dois alelos ApoE4). Opcionalmente, o tratamento de carreadores de ApoE4 pode começar profilativamente antes dos sintomas clínicos estarem evidentes. Tais pacientes podem ser identificados pela avaliação de populações quanto ao estado ApoE4. O tratamento pode ser começado na detecção de tal estado ou subseqüentemente quando o paciente atinge uma certa idade (por exemplo, 55, 60 ou 65 anos) quando existe um risco alto de desenvolver Alzheimer. Embora o entendimento de mecanismo não é requerido para a prática de tais métodos, acredita-se que o tratamento precoce de carreadores de ApoE4 pode ser benéfico porque o alelo ApoE4 reduz a capacidade de reparar o dano neuronal e/ou porque a deposição de Αβ é maior em tais pacientes.

Em alguns métodos, o tratamento é administrado por uma via diferente em pacientes tendo zero alelos ApoE4 e pacientes tendo um alelo ApoE4 e/ou pacientes tendo dois alelos ApoE4. Por exemplo, o tratamento pode ser administrado intravenosamente em pacientes tendo zero alelos ApoE4 e subcutaneamente em pacientes tendo um ou dois alelos. A dosagem é tipicamente maior e/ou freqüência de administração menor em tais pacientes não carreadores de ApoE4 com relação a pacientes carreadores de ApoE4.

Em alguns métodos, uma resposta positiva ao tratamento (isto é, inibição de declínio ou inibição cognitiva de declínio no volume cerebral) não se desenvolve mais em carreadores de ApoE4 do que os não carreadores. O tempo maior pode refletir a capacidade reduzida para o reparo neuronal e/ou acúmulo amilóide maior em tais pacientes; e/ou uso de um regime de tratamento menos potente. Em tais métodos, o tratamento pode ser administrado por pelo menos um ano e opcionalmente pelo menos 2, 3 ou 4 anos antes de cessar o tratamento quanto à necessidade do efeito. Em alguns métodos, o tratamento é administrado por pelo menos seis administrações trimestrais.

Como observado, os agentes são algumas vezes fornecidos com um rótulo que contraindica o uso nos carreadores de ApoE4. Tais agentes podem ser usados em métodos de tratamento em que apenas não carreadores de ApoE4 recebem um agente da invenção (isto é, de um anticorpo que liga-se a Αβ ou um agente que induz um tal anticorpo). Em tais métodos carreadores de ApoE4 não recebem um anticorpo que liga-se to Αβ ou um agente que induz um tal anticorpo mas pode receber outros tratamentos, tais como memantina.

Os métodos em que a dose e/ou freqüência de administração são reduzidos dependendo do ApoE4 são mais úteis para agentes que iniciam uma resposta de purificação contra depósitos de amilóide. Em geral, tais agentes são anticorpos que ligam a um epítopo dentro de Αβ1-11 e eu tem uma região Fc ou fragmentos de Αβ que induz tais anticorpos (isto é, contém um epítopo dentro de Αβ1-11). Os anticorpos que ligam-se a epítopos dentro de regiões centrais ou de terminal C de Αβ usualmente liga-se predominantemente a formas solúveis de Αβ em vez de depósitos amilóides e, desta maneira, inicia pouco, se houver resposta de purificação contra depósitos amilóides, particularmente depósitos densos ou vasculares.

Os exemplos de faixas de dosagem e freqüência adequadas para a administração são fornecidos abaixo. As dosagens e/ou freqüências diferentes de administração para pacientes com o estado E4 diferente pode ser selecionado a partir de tais faixas de dose e freqüência. Por exemplo, pacientes com um ou dois alelos E4 podem ser administrados com uma dose de 0,1 a 1 mg/kg de anticorpo pela infusão intravenosa a cada treze semanas e pacientes com zero alelos E4 podem ser administrados com uma dose de 1 a 2 mg/kg a cada treze semanas. Opcionalmente, pacientes com dois alelos E4 são administrado com uma dose de 0,15 a 0,5 mg/kg, pacientes com um alelo E4 é administrado uma dose de 0,15 a 1 mg/kg (por exemplo, 0,5 a 1 mg/kg) e pacientes com zero alelos E4 é administrado uma dose de 0,15 a 2 mg/kg (por exemplo, 1 a 2 mg/kg) a cada treze semanas. Em um regime preferido, pacientes com um ou dois alelos E4 é administrado com uma dose de 0,5 mg/kg de um anticorpo que liga a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ (por exemplo, bapineuzumab) e pacientes com zero alelos E4 a dose de 2 mg/kg. As doses são administradas intravenosamente em intervalos trimestrais até o edema vasogênico aparecer (se isso ocorrer). Após o edema vasogênico aparecer, a dose seguinte é omitida e a seguir, os pacientes retornam à agenda de dosagem trimestral em uma dose inferior de 0,15 mg/kg. Se o edema vasogênico aparecer novamente, o tratamento pode ser terminado. Os pacientes com zero alelos E4 são administrados com uma dose de 0,5 a 2 mg/kg, individualmente com pacientes com zero alelos E4 opcionalmente recebendo doses de 0,5 mg/kg, 1,0 mg/kg, 1,5 mg/kg e 2,0 mg/kg.

Como um outro exemplo, aos pacientes com dois alelos E4 é

dada uma primeira dose de 0,5 mg/kg e doses subsequentes de 1 mg/kg. Alternativamente, a pacientes com dois alelos E4 é dada uma primeira dose de 0,5 mg/kg, segunda e terceira doses de 1 mg/kg e doses subsequentes de 2,0 mg/kg.

Como um outro exemplo, pacientes com zero alelos E4 podem

ser administrados com uma dose de 0,015 a 0,2 mg/kg de anticorpo subcutaneamente uma vez por semana e pacientes com dois alelos E4 podem ser administrados com uma mesma dose a cada duas semanas. Os regimes equivalentes de qualquer um acima podem ser planejados pela variação da quantidade ou seqüência ou via de administração para liberar a mesma área sob a curva (isto é, a dose média integrada com o tempo) de anticorpo ao soro.

Em alguns métodos, pacientes com um ou dois alelos E4 são administrados com o agente para atingir uma concentração de soro média inferior de anticorpo durante o tempo do que pacientes com zero alelos E4. A concentração de soro média inferior é mantida por um período de pelo menos um ou três meses e usualmente três meses a um ano ou indefinidamente. A concentração de soro média de todos os tais pacientes está preferivelmente dentro da faixa de 2 a 7 μg de anticorpo/ml de soro com aquele para pacientes com um ou dois alelos E4 sendo menores do aquela para pacientes com zero alelos E4. Por exemplo, pacientes com zero alelos E4 podem ser administrados para atingir uma concentração de soro média de anticorpo dentro de uma faixa de 4,5 a 7 μg de anticorpo/ml e pacientes com um ou dois alelos E4 pode ser o agente administrado para atingir uma concentração de soro média na faixa de 2 a 4,5 μg de anticorpo/ml.

Em tais métodos, os indivíduos dentro de qualquer subpopulação definida pela presença de dois, um ou zero alelos E4 são usualmente administrados usualmente no mesmo regime. Entretanto, o regime também pode ser customizado para indivíduos dentro de uma subpopulação. Neste caso, a dose média e/ou freqüência e/ou concentração de soro média e/ou concentração máxima de agente ou anticorpos induzidos pelo agente na subpopulação de indivíduos com dois alelos E4 é menor do que aquele de indivíduos tendo zero alelos E4.

Em alguns métodos, um agente diferente é administrado a indivíduos com dois alelos E4 do que os indivíduos com zero alelos E4. Os agentes diferentes usualmente diferem em sua capacidade para induzir uma resposta de purificação contra depósitos amilóides (isto é, depósitos pre- existentes). Uma tal capacidade pode ser testada, por exemplo, em um ensaio de purificação ex vivo como descrito por US 6.750.324. Em resumo, um anticorpo e células microgliais são incubadas com um depósito amilóide a partir de um paciente com Alzheimer doente ou modelo de camundongo transgênico e a reação de purificação é monitorada usando-se um anticorpo rotulado a Αβ. A capacidade de purificação dos agentes ativos pode ser similarmente testado usando-se soros induzidos pelo agente ativo como uma fonte de anticorpo para o ensaio. A capacidade de purificação tanto de agentes passivos quanto ativos também pode ser avaliada em um modelo de camundongo transgênico como também descrito US 6.750.324 ou em um paciente humano pelo monitoramento MRL Opcionalmente, a resposta de purificação é medida em um ensaio é medido em um ensaio que distingue entre depósitos amilóides compactos e difusos. As diferenças na capacidade de purificação de alguns anticorpos são mais evidentes ou apenas evidentes quando a comparação é feita com respeito à capacidade de purificação de depósitos amilóides compactos. Opcionalmente, a resposta de purificação é avaliada a partir de uma redução na purificação de amilóide vascular de um anticorpo mutado com relação a um anticorpo idêntico de outra maneira comparado com o isotipo. A purificação de amilóide vascular pode ser avaliada por uma estatística significante entre populações de modelos animais ou pacientes humanos tratados com um anticorpo mutado e um anticorpo comparado com isotipo de outra maneira idêntico sem as mutações.

Adicional ou alternativamente para ensaios que medem uma resposta de purificação, alguns anticorpos adequados para o uso nos métodos da invenção podem ser reconhecidos pela ligação reduzida a Clq e/ou aos receptores Fcy(s). A capacidade para ligar Clq e/ou um receptor Fcy pode ser reduzida por mutações próximas da região de dobra de uma cadeia pesada como debatido em maiores detalhes abaixo. A capacidade reduzida pode ser determinada, por exemplo, pela comparação com um anticorpo mutado com um anticorpo idêntico de outra maneira comparado com o isotipo que precisa das mutações presentes no anticorpo mutado (isto é, tendo resíduos de uma região constante humana do tipo selvagem (por exemplo, bapineuzumab vs. AAB-003) ou pela comparação de anticorpos idênticos de outra maneira tendo isotipos diferentes (por exemplo, IgGl humano versus IgG4 humano).

Alguns anticorpos tendo a capacidade para ligar receptor Clq e/ou Fcy reduzem a micro-hemorragia com relação a controles comparados com isotipos mas retêm pelo menos alguma atividade na inibição do declínio cognitivo e/ou purificação dos depósitos amilóides. Em alguns anticorpos, a capacidade de purificação de amilóide reduzido é principalmente associado com a capacidade de purificação reduzida de amilóide vascular e/ou depósitos amilóide compactos e não com depósitos amilóides difusos. Tais anticorpos oferecem uma eficácia potencialmente melhorada:perfil de efeitos secundários, particularmente para o uso em carreadores de ApoE4.

Os anticorpo tendo ligação reduzida a Clq e/ou um receptor Fcy pode ser usado em métodos diferenciais de tratamento como descrito acima. Por exemplo, um anticorpo com ligação reduzida a Clq e/ou receptor Fcy pode ser administrado a pacientes tendo um ou dois alelos ApoE4 e um anticorpo de outra maneira idêntico sem as mutações a pacientes com zero alelos ApoE4. Alternativamente, um anticorpo com ligação reduzida a Clq e/ou um receptor Fcy pode ser administrado a pacientes irrespectivos do número de alelos ApoE4.

Os anticorpos com regiões constantes mutados para reduzir o receptor Clq e/ou Fcy são algumas vezes administrados em dosagens mais altas do que anticorpos de outra maneira idênticos sem a mutação. Para alguns tais anticorpos, a dosagem pode ser ajustada para cima para atingir um efeito terapêutico equivalente com efeitos colaterais reduzidos.

A capacidade de purificação é afetada tanto pela especificidade de epítopo de um anticorpo (ou anticorpo induzidos por um fragmento para a administração ativa) quanto na presença de, e tipo de função atuadora do anticorpo, em particular pela capacidade da região de Fc se presente para ligar receptores Fcy. Embora a purificação de depósitos amilóides seja um mecanismo útil de ação, agentes que perdem a capacidade para a purificação de depósitos podem ser úteis pelos outros mecanismos, tais como ligação a Αβ solúvel e/ou formas oligoméricas solúveis de Αβ. Tal ligação pode reduzir a toxicidade de tais espécies e/ou inibe sua agregação para formar depósitos entre outros mecanismos possíveis.

Os agentes com propensão para induzir uma tal resposta de purificação incluem anticorpos que ligam-se a um epítopo dentro dos resíduos 1-11 e particularmente 1-7 de Αβ, particularmente tais anticorpos tendo um isotipo IgGl humano, que interage mais fortemente com receptores Fcy. Os fragmentos de Αβ que contém epítopos dentro dos resíduos 1-11 e particularmente 1-7 são similarmente eficaz na indução de uma resposta de purificação. Opcionalmente, os agentes que iniciam uma resposta de purificação, pode ser fornecido com um rótulo que contraindica o uso em pacientes com um ou dois alelos ApoE4. Os agentes com menos ou menos propensão para induzir uma resposta de purificação incluem anticorpos Αβ que têm outros isotipos que não IgGl humano, anticorpos que precisam de uma região Fc (por exemplo, fragmentos Fab, fragmentos Fv ou Nanocorpos), ou anticorpos com regiões Fc mutadas pela engenharia genética para reduzir interações com receptores Fcy. Tais agentes também incluem anticorpos que ligam-se especificamente a um epítopo dentro de uma outra região de Αβ que não resíduos 1-11, (isto é, a um epítopo médio ou epítopo de terminal C, como descrito acima) e anticorpos que ligam-se especificamente a formas solúveis ou oligoméricas de Αβ sem ligação a depósitos amilóides. Tais agentes também incluem fragmentos de Αβ que precisam de epítopos dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ. em tais métodos, os indivíduos tendo dois alelos E4 são administrados com um agente com uma tendência inferior para induzir uma resposta de purificação fagocítica do que indivíduos tendo zero alelos. Por exemplo, os indivíduos tendo zero alelos E4 podem ser administrados a um anticorpo que ligam a um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ e tendo isotipo IgGl humano e indivíduos tendo dois alelos E4 pode ser administrado ao mesmo anticorpo exceto que o anticorpo é um fragmento de Fab ou tem um outro isotipo que não IgGl humano ou tem uma região de Fc projetada para reduzir a ligação aos receptores Fcy. O agente administrado a indivíduos tendo dois alelos E4 também pode ser um anticorpo a um epítopo médio ou terminal C de Αβ ou um fragmento de Αβ de uma região média ou terminal C (isto é, que precisa de um epítopo dentro de Αβ1-11). Em alguns métodos, pacientes com dois alelos E4 são

administrados com um anticorpo tendo um epítopo dentro de regiões médias ou de terminal C para uma ou mais doses iniciais e um anticorpo tendo um epítopo dentro de uma região de terminal N para doses subsequentes. Um tal anticorpo pode ser um anticorpo 266 humanizado, um anticorpo 2H6 humanizado, um anticorpo 2H6 humanizado desglicosilado ou RNl219. Um tal anticorpo também pode ser um anticorpo humanizado que liga-se especificamente a um epítopo dentro de Αβ28-40 ou Αβ33-40. As doses iniciais preferivelmente consistem de 1, 2 ou 3 doses. Pacientes tendo zero alelos podem ser administrados a um anticorpo tendo um epítopo dentro de uma região de terminal N.

Os regimes diferentes administrados a pacientes diferentes dependendo de seu estado de E4 pode ser mantido indefinidamente. Entretanto, tal não é usualmente necessário. Foi observado que o efeito colateral do edema vasogênico associado com o alelo E4 usualmente ocorre na terceira dose, se não em todas. Desta maneira, uma vez que os pacientes tenham recebido cerca de 2 a 3 doses de tratamento, pacientes tendo um ou dois alelos ApoE4 que não desenvolveram edema vasogênico provavelmente não o desenvolverá e pode, a seguir, se desejado, ser tratado pelo mesmo regime como pacientes tendo zero alelos E4. Da mesma maneira, pacientes com um ou dois alelos ApoE4 que desenvolveram edema vasogênico entretanto, o presente regime de tratamento diferencial usualmente resolve esta condição e pode, a seguir, se desejado, ser tratado de maneira similar a pacientes tendo zero alelos E4. Opcionalmente, a dose é titulada após a recuperação do edema vasogênico daquela usada para não carreadores.

O edema vasogênico tipicamente desintegra-se por si só. Entretanto, a desintegração pode ser facilitada, se desejado, pela administração de um corticosteróide.

Os agentes podem ser embalados com rótulos que indicam os procedimentos de tratamento diferencial dependente do estado de ApoE4 consistente com qualquer um dos regimes acima ou combinações destes. B. Monitoração de Regimes Diferentes

Alternativa ou adicionalmente, a invenção fornece monitoração de regimes diferentes para pacientes dependendo de seu estado E4. O edema vasogênico é um aumento no volume cerebral a partir do vazamento de plasma no espaço intersticial. Uma vez extravasado, o fluido é retido fora da vasculatura, a maioria na matéria branca do cérebro. O edema vasogênico pode ser monitorado pela formação de imagem cerebral por MRI, Tomografia de Emissão de Pósitron (Formação de imagem PET) ou formação de imagem de seqüência de Recuperação de Inversão Atenuada de Fluido (FLAIR) (ver Pediatric Neurology, 20(3):241-243; ÂJNR, 26:825-830; NEJM, 334(8):494-500; Pediatr Nephrol, 18:1161-1166; Internai Medicine Journal, 35:83-90; JNNP, 68:790-79 1; AJNR1 23:1038-1048; Pak JMed Sei, 21(2): 149-154 and, AJNR, 21:1199-1209). O edema vasogênico presente com uma intensidade de sinal alta em matéria branca. O edema vasogênico observado é freqüentemente assintomático mas também pode ser acompanhado por dor de cabeça, náusea, vômitos, confusão, ataques, anormalidades visuais, funionamento mental alterado, ataxia, sintomas frontais, sintomas parietais, letargia e sinais neurológicos focais. De acordo com os presentes métodos, pacientes com dois alelos E4 podem ser submetidos à formação de imagem cerebral mais freqüentemente do que pacientes tendo zero alelos E4. Por exemplo, pacientes com duas cópias de E4 podem ser submetidos à formação de imagem antes de começar o tratamento e trimestralmente a seguir, visto que os pacientes com zero alelos E4 podem ser submetidos à formação de imagem antes de começar o tratamento e anualmente ou duas vezes ao ano a seguir. Alternativamente, a formação de imagem cerebral pode ser omitida completamente em pacientes tendo zero alelos E4. Pacientes tendo um alelo E4 pode ser submetido à formação de imagem com freqüência intermediária entre pacientes tendo zero e dois alelos E4 ou pode ser agrupado com pacientes tendo zero ou dois alelos E4. Segue que pacientes com um alelo E4 pode ser monitorado de maneira diferente (por exemplo, mais freqüentemente) do que pacientes com zero alelos E4 e pacientes com dois alelos E4 pode ser monitorado diferentemente (por exemplo, mais freqüentemente) do que pacientes com um alelo E4.

Em pacientes que desenvolvem edema vasogênico, o monitoramento pode ser continuado durante o edema vasogênico e por cerca de um anos após os sintomas desaparecerem. A seguir, sem assumir descobertas neurológicas, o monitoramento pode ser opcionalmente realizado a cada seis meses ou anualmente.

Os agentes podem ser embalados com rótulos indicando procedimentos de monitoramento diferenciais dependentes do estado de ApoE4 consistente com qualquer um dos regimes acima ou combinações destes.

C. Tratamento Universal ou Monitoramento de Regimes

Embora carreadores e não carreadores de ApoE4 possam ter respostas diferentes para o tratamento como debatido acima e alguns regimes de tratamento são seguros e eficazes em carreadores de ApoE4 também são seguros e eficazes, embora não necessariamente ótimos, em não-carreadores de ApoE4 e pode ser usado em ambos os tipos de pacientes sem relação com

0 estado de ApoE dos pacientes. Em alguns tais regimes, o agente é de um anticorpo que liga-se a um epítopo de terminal N de Αβ tendo mutações em sua região constante que reduz a ligação a um receptor Fcy e/ou Clq. AAB- 003 é um Exemplo de um tal anticorpo. Em outros regimes, a dose e/ou freqüência e/ou a concentração de soro máxima e/ou concentração de soro média de um anticorpo administrado ou induzido são contidos dentro de limites como descrito em PCT/US2007/009499 e ainda resumidos abaixo para reduzir o risco de edema vasogênico.

IV. Agentes A. Anticorpos

Uma variedade de anticorpos ao Αβ foram descritos na Patente e literatura científica para o uso na imunoterapia contra mal de Alzheimer, alguns de que estão nos testes clínicos (ver, por exemplo, U.S. 6.750,324). Tais anticorpos pode especificamente ligar-se a um epítopo de terminal N, um epítopo médio (isto é central) ou um epítopo de terminal C como definido acima. Alguns anticorpos são específicos de terminal N (isto é, tais anticorpos especificamente ligam-se ao terminal N de Αβ sem a ligação por APP). Como notado acima a ligação de anticorpos aos epítopos dentro dos resíduos 1 a 10,

1 a 3, 1 a 4, 1 a 5, 1 a 6, 1 a 7 ou 3 a 7 de Αβ42 ou dentro dos resíduos 2 a 4, 5, 6, 7 ou 8 de Αβ, ou dentro dos resíduos 3 a 5, 6, 7, 8 ou 9 de Αβ, ou dentro dos resíduos 4 a 7, 8, 9 ou 10 de Αβ42 pode ser usado. Alguns anticorpos são específicos do terminal C (isto é, especificamente liga-se a um terminal C de Αβ sem a ligação por APP). O anticorpo pode ser policlonal ou rnonocional. O soro policlonal tipicamente contém as populações misturadas de anticorpos especificamente a ligação aos diversos epítopos ao longo do comprimento de APP. Entretanto, o soro policlonal pode ser específico a um segmento particular de Αβ tal como Αβχ.π) sem especificamente a ligação a outros segmentos de Αβ. Os anticorpos preferidos são quiméricos, humanizados (incluindo os anticorpos embutidos) (ver Queen et ai, Proc. NatL Acad.. Sei. USA 86:10029-10033 (1989) e WO 90/07861, U.S. 5.693.762, U.S. 5.693.761, U.S. 5.585.089, U.S. 5.530,101 e Winter, U.S. 5.225.539), ou humano (Lonberg et al., WO 93/12227 (1993); U.S. 5.877.397, U.S.

5.874.299, U.S. 5.814.318, U.S. 5.789.650, U.S. 5.770,429, U.S. 5.661.016, U.S. 5.633.425, U.S. 5.625.126, U.S. 5.569.825, U.S. 5.545.806, Nature 148, 1547-1553 (1994), Nature Bioteehnology 14, 826 (1996), Kucherlapati, WO 91/10741 (1991)) EP1481008, Bleck, Bioprocessing Journal 1 (Sept/Oct. 2005), US 2004132066, US 2005008625, WO 04/072266, WO 05/065348, WO 05/069970, e WO 06/055778.

Os anticorpos 3D6, 10D5 e variantes destes são exemplos de anticorpos que podem ser usados. Ambos são descritos em U.S. 20030165496, U.S. 20040087777, WO 02/46237 e WO 04/080419, WO 02/088306 e WO 02/088307. Os anticorpos 10D5 também são descritos em U.S. 20050142131. Os anticorpos 3D6 adicionais são descritos em U.S. 20060198851 e PCT/US05/45614. 3D6 é um anticorpo monoclonal (mAb) que especificamente liga-se a um epítopo de localizado no terminal N no humano peptídeo β-amilóide, especificamente, resíduos 1 a 5. Em comparação, 10D5 é um mAb que especificamente liga-se a um epítopo de localizado no terminal N no peptídeo β-amilóide humano, especificamente, resíduos 3 a 6. Uma linha celular que produz o anticorpo monoclonal 3D6 (RB96 3D6.32.2.4) foi depositado com American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA 20108, USA on April 8, 2003 sob os termos de Budapest Treaty e número de acessão designado PTA-5130. Uma linha celular que produz o anticorpo monoclonal 10D5 (RB44 10D5.19.21) foi depositado com o ATCC on April 8, 2003 sob os termos de Budapest Treaty e número de acessão designado PTA-5129.

Bapineuzumab (International Non-Proprietary Name indicado by the World Health Organization) significa um anticorpo 3D6 humanizado que compreende uma cadeia leve tendo uma região variável madura tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 2 e uma cadeia pesada tendo uma região variável madura tendo a seqüência de aminoácido indicada na SEQ ID N°: 3. (As regiões constantes de cadeia leve e pesada do anticorpo indicado a bapineuzumab por WHO são IgGl humanos e capa humana respectivamente). Uma cadeia leve humanizada incluindo regiões constantes e variáveis é indicado na SEQ ID N°: 48 abaixo e uma cadeia pesada humanizada incluindo as regiões constantes e variáveis é indicado na SEQ ID N°: 66 ou 67 (SEQ ID N°: 66 tendo uma lisina de terminal C adicional relativo a SEQ ID N°: 67).

Região variável de cadeia leve 3D6 humanizada

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (SEQ ID N°: 2) Região variável de cadeia pesada 3D6 humanizada

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Arg Ser Gly Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Tyr Asp His Tyr Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 3)

Uma segunda versão de anticorpo 3D6 humanizado que compreende uma cadeia leve tendo uma região variável madura tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 4 e uma cadeia pesada tendo uma região variável madura tendo a seqüência de aminoácido indicado

na SEQ ED N°: 5 é mostrado abaixo.

Região variável de cadeia leve 3D6 humanizada

Tyr Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (SEQ ID N°: 4) Região variável de cadeia pesada 3D6 humanizada

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Arg Ser Gly Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Val Arg Tyr Asp His Tyr Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 5) Uma terceira versão de anticorpo 3D6 humanizado que

compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 6 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 7 é descrito em US 2005/0090648 Al publicado em April 28, 2005 depositado como U.S. 7.318.923, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Cadeia leve 3D6 humanizado

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys (SEQID N°: 6) Cadeia pesada 3D6 humanizada

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met Ser Trp

λ7^1 au nu, t ,,·„ /"11,, t /11,, rt1- \7~1 a c--a--cct- ou.

ναι rug vjiix /-νια iio v_ii_y u^o vjíj i^ou vjiu np vai rua oci aie .rvig 061 vji^

Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Tyr Asp His Tyr Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Ttir Pro Glu VaI Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Tip Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu TTir Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys (SEQIDN0: 7).

Uma versão de anticorpo 10D5 humanizado que compreende uma cadeia leve tendo uma região variável madura tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 8 e uma cadeia pesada tendo uma região variável madura tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 9 é mostrado abaixo.

Região variável de cadeia leve 10D5 humanizada

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Ile His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Tip Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Lys Lys Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Glu (SEQ ID N°: 8) Região variável de cadeia pesada 10D5 humanizada

Gln Ala Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Tip Ile Arg Gin Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tyr Tip Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Lys Gln Val Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Arg Arg Pro Ile Thr Pro Val Leu Val Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 9)

12A11 ou uma forma quimérica ou humanizada ou nanocorpo deste é um anticorpo preferido. O anticorpo 12A11 ou uma variante deste, é descrito em U.S. 20050118651, U.S. 20060198851, WO 04/108895 e WO 06/066089, todos de que são incorporados por referência em sua totalidade neste para todos os propósitos.

12A11 é um mAb que especificamente liga-se a um epítopo de

localizado no terminal N no peptídeo β-amilóide humano, especificamente, resíduos 3 a 7. Uma linha celular que produz o anticorpo monoclonal 12A11 foi depositado no ATCC (American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209) em December 12, 2005 e designado o número de acessão ATCC PTA-7271.

Uma versão preferida do anticorpo 12All humanizada é a versão 1 que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SE-Q ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 11. Versão 1 de 12A11 humanizado é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos. Cadeia leve humanizada 12Al 1

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys (SEQID N°: 10)

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 1) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 11)

Uma segunda versão do anticorpo humanizado 12All que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 12 (versão 2) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 2)

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu

Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val

VJij JLip H^ mg VJiii J-Lia ι ιυ vji_y x^y ο vji_y x^cu vjiu ι ι ρ ν αϊ .τνια irn -iic ιιρ

Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 12)

Uma terceira versão do anticorpo humanizado 12All que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 13 (versão 2.1) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 2.1) GIn VaI Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly GIy Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 13)

Uma quarta versão do anticorpo 12All humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 14 (versão 3) é descrito em WO 02/088306 publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 3) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala His Ile Trp

a--a „„ a „„ t tv™ t.™ a „„ c__t t a tm__tru- tl „ c__

xip -rvap /-v-ap i-vap x^ya x_yi χ}ί nau χ ιυ oci jocu L^yS ο6γ ATg χ iic i Jir Iic ocf

Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 14)

Uma quinta versão do anticorpo 12A11 humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 15 (versão 4.1) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 4.1) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 15)

Uma sexta versão do anticorpo 12A11 humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ED N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 16 (versão 4.2) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 4.2) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Giu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 16)

Uma sétima versão do anticorpo 12All humanizado que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 17 (versão 4.3) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 4.3) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 17) Uma oitava versão do anticorpo 12A11 humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ED N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 18 (versão 4.4) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 4.4) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 18)

Uma nona versão do anticorpo 12A11 humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 19 (versão 5.1) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 5.1) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr A^sn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 19) Uma décima versão do anticorpo 12A11 humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 20 (versão 5.2) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 5.2) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 20)

Uma décima primeira versão do anticorpo 12All humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 21 (versão 5.3) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 5.3) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tip Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Val (SEQ ID N°: 21)

Uma décima segunda versão do anticorpo 12A11 humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 22 (versão 5.4) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 5.4)

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Tip Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala His Ile Tip Tip Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Val (SEQ ID N°: 22)

Uma décima terceira versão do anticorpo 12A11 humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 23 (versão 5.5) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 5.5) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 23)

Uma décima quarta versão do anticorpo 12A11 humanizado que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 24 (versão 5.6) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 5.6) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 24) Uma décima quinta versão do anticorpo 12A11 humanizada

que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 25 (versão 6.1) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 6.1) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 25)

Uma décima sexta versão do anticorpo 12A11 humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 26 (versão 6.2) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 6.2) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 26)

Uma décima sétima versão do anticorpo 12All humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 27 (versão 6.3) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de

todos os propósitos. Região variável de cadeia pesada humanizada 12Al 1 (versão 6.3)

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 27)

Uma décima oitava versão do anticorpo 12All humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 28 (versão 6.4) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada humanizada 12A11 (versão 6.4) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 28)

Uma décima nova versão do anticorpo 12A11 humanizada que compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 29 (versão 7) é descrito em U.S. 20050118651 AI publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos.

Região variável de cadeia pesada 12Al 1 humanizada (versão 7) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 29) Uma vigésima versão do anticorpo 12A11 humanizada que

compreende uma cadeia leve tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 10 e uma cadeia pesada tendo a seqüência de aminoácido indicado na SEQ ID N°: 30 (versão 8) é descrito em U.S. 20050118651 Al publicado em 2 de Junho de 2005, que é incorporado neste por referência de todos os propósitos. Região variável de cadeia pesada humanizada 12Al 1 (versão 8) Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 30)

Outros anticorpos exemplares incluem anticorpo 12B4 ou variante deste, como descrito em U.S. 20040082762A1 e WO 03/077858. 12B4 é um mAb que especificamente liga-se a um epítopo de localizado no terminal N no peptídeo β-amilóide humano, especificamente, resíduos 3 a 7. A cadeia leve (SEQ ID N°: 31) e pesada (SEQ ID N°: 32) de 12B4 tem as seguintes regiões variáveis seguintes (não incluindo as seqüências de sinal). Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys (SEQ ID N°: 31)

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Asn Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tyr Tip Asp Glu Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Thr Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Ile Ile Tyr Asp Val Glu Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 32) Outros anticorpos exemplares são os anticorpos 6C6, ou uma variante deste, como descrito em U.S. 20060165682 e WO 06/06604. 6C6 é um mAb que especificamente liga-se a um epítopo de localizado no terminal N no peptídeo β-amilóide humano, especificamente, resíduos 3 a 7. Uma linha celular que produz o anticorpo 6C6 foi depositado em 1 de Novembro de 2005, com o ATCC sob os termos de Budapest Treaty e número de acessão designado PTA-7200.

Outros anticorpos exemplares são anticorpo 2H3 e variantes destes como descrito em U.S. 20060257396. 2H3 é um mAb que especificamente liga-se a um epítopo de localizado no terminal N no peptídeo β-amilóide humano, especificamente, resíduos 2 a 7. Uma linha celular que produz o anticorpo 2H3 foi depositado em 13 de Dezembro de 2005, com o ATCC sob os termos de Budapest Treaty e número de acessão designado PTA-7267.

Outros anticorpos exemplares incluem 3A3 e variantes destes como descrito em U.S. 20060257396. 3A3 é um mAb que especificamente liga-se a um epítopo de localizado no terminal N no peptídeo β-amilóide humano, especificamente, resíduos 3 a 7. Uma linha celular que produz o anticorpo 3A3 foi depositado em 13 de Dezembro de 2005, com o ATCC sob os termos de Budapest Treaty e número de acessão designado PTA-7269.

Outros anticorpos exemplares são 2B1, 1C2 ou 9G8. As linhas celulares que produz o anticorpos 2B1, 1C2 e 9G8 foram depositados em 1 de Novembro de 2005, com o ATCC sob os termos de Budapest Treaty e foram designados os números de acessão PTA-7202, PTA-7199 e PTA-7201, respectivamente.

Um outro anticorpo exemplar é um anticorpo 266 humanizado ou variante deste. O anticorpo 266 liga-se a um epítopo entre resíduos 13-28 de A. Uma linha celular que produz o anticorpo 266 foi depositado em 20 de Julho de 2004 com o ATCC sob os termos de Budapest Treaty e designado número de acessão PTA-6123. As formas humanizados do anticorpo 266 são descritos em U.S. 20040265308, U.S. 20040241164, WO 03/016467 e U.S. 7.195.761. A cadeia leve (SEQ ID N°: 33) e pesada (SEQ ID N°: 34) do anticorpo 266 tem as seguintes seqüências de região variável (não incluindo as seqüências de sinal).

Asp Xaa Val Met Thr Gln Xaa Pro Leu Ser Leu Pro Val Xaa Xaa Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Xaa Tyr Ser Asp Gly Asn Ala Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Xaa Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Xaa Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Xaa

Xaa Glu Ile Lys Arg (SEQ ID N°: 33)

em que: Xaa na posição 2 é Val ou lie; Xaa na posição 7 é Ser ou Thr; Xaa na posição 14 é Thr ou Ser; Xaa na posição 15 é Leu ou rro; Xaa na posição 30 é Ile ou Vai; Xaa na posição 50 é Arg, Gln, ou Lys; Xaa na posição 88 é Val ou Leu; Xaa na posição 105 é Gln ou Gly; Xaa na posição 108 é Lys ou Arg; e Xaa na posição 109 é Val ou Leu; e Xaa Val Gln Leu Val Glu Xaa Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Xaa Leu Val Ala Gln Ile Asn Ser Val Gly Asn Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Xaa Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Xaa Xaa Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Xaa Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Xaa

Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 34)

em que: Xaa na posição 1 é Glu ou Gln; Xaa na posição 7 é Ser ou Leu; Xaa na posição 46 é Glu, Vai, Asp, ou Ser; Xaa na posição 63 é Thr ou Ser; Xaa na posição 75 é Ala, Ser, Val ou Thr; Xaa na posição 76 é Lys ou Arg; Xaa na posição 89 é Glu ou Asp; e Xaa na posição 107 é Leu ou

Thr.

Um anticorpo 266 humanizado exemplar compreende a seguinte cadeia leve (SEQ ID N°: 35) e seqüências de cadeia pesada (SEQ ID N°: 36) (não incluindo as seqüências de sinal).

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ile Tyr Ser Asp Gly Asn Ala Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Giu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys (SEQ ID N°: 35)

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Ser Met Ser Trp Val Ary Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val Ala Gin Ile Asn Ser Val Gly Asn Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Va Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Ary Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys (SEQ ID N°: 36)

O anticorpo também pode ser 15C11 ou uma forma humanizada neste (ver U.S. 200601Ó5Ó82), que especificamente liga-se a um epítopo dentro de AO15-24.

O anticorpo também pode ser uma forma humanizada de 20C2 ou uma variante deste. Tais anticorpos são descritas, por exemplo, em U.S. 2007081998. O epítopo linear do núcleo por 20C2 corresponde aos resíduos de aminoácido 3 a 8 de Αβί a 42, com um epítopo conformacional que é dependente nos elementos dentro dos resíduos 17 a 42 de Αβ. A cadeia leve (SEQ ID N°: 37) e cadeia pesada (SEQ ID N°: 38) do anticorpo 20C2 humanizado (versão 1) tem as seguintes seqüências de região variável (não incluindo as seqüências de sinal).

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Tro Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys (SEQ ID N°: 37) Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gin Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gln Leu Gly Leu Arg Ser Ile Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 38)

Um anticorpo 20C2 humanizado adicional (versão 2) compreende a seqüência de região variável de cadeia leve da SEQ ED N°: 37 e a seqüência de região variável de cadeia pesada da SEQ ID N°: 39 (não incluindo a seqüência sinal).

Gln VaI Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln Tnr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gln Leu Gly Leu Arg Ser Ile Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser (SEQ ID N°: 39) Um outro anticorpo que pode ser usado de acordo com a

invenção é C705 ou uma variante deste, que liga-se a um epítopo que compreende 7 a 12 aminoácidos o peptídeo Αβ, como descrito em WO 05/028511. O anticorpo C705 compreende a seqüência de região variável de cadeia leve de SEQ ID N°: 40 e região variável de cadeia pesada da SEQ ID N°: 41, seqüência sinal sublinhada.

Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Gly Ser Ser Ser Asp Val Met Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Met Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Met Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Phe Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Arg Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg (SEQ ID N°: 40)

Met Asp Arg Leu Thr Ser Ser Phe Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr Val Leu Ser_Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Thr Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Val Ile Ala Tbr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala (SEQ ID N°:

Λ 1 N ti;

Um outro anticorpo que pode ser usado de acordo com a invenção é C706 ou uma variante deste, que liga-se a um epítopo que compreende 6 a Il aminoácidos do peptídeo Αβ, como descrito em WO 05/028511. O anticorpo C706 compreende a seqüência de região variável de cadeia leve de SEQ ID N°: 42 e a seqüência da região variável da cadeia pesada da SEQ ED N°: 43. As seqüências sinais são sublinhadas. Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser Val Ile Ile SerArg Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Ser Ser Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Pro Thr Ile Ser Asn Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Asn Trp Arg Ser Ser Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg (SEQ ID N°: 42)

Met Glu Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly Val His SerGln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Thr Ser Trp Ile Glu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Val Leu Pro Gly Ser Gly Lys Ser Asn His Asn Ala Asn Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ala Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Ser Asn Asn Asn Ala Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala (SEQ ID N°: 43)

Outros anticorpos que podem ser usados de acordo com a invenção incluem anticorpos 2286 humanizados e variantes destes. Estes anticorpos reconhecem um epítopo que compreende 28 a 40 aminoácidos do peptídeo Αβ, como descrito em U.S. 20070160616. Um anticorpo 2286 humanizado (versão 1) compreende uma região variável da cadeia leve de SEQ ID N°: 44 e a região variável da cadeia pesada da SEQ ID N°: 45 (não incluindo as seqüências de sinal).

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKAPKLLI YYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYRKLPYT FGGGTKVEEKR (SEQ ID N°: 44)

EVQL VESGGGL VQPGGSLRLSCAASGFDFSRYWMNWVRQAPGKGLE WVSEINPDSSTINYTPSLKDRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCARQMGYW GQGTTLTVSS (SEQ ID N°: 45)

Uma outra versão de 2286 humanizado compreende uma região variável da cadeia leve de SEQ ID N°: 44 e a região variável da cadeia pesada de SEQID N°: 46 (não incluindo as seqüências de sinal).

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFDFSRYWMNWIRQPPGKGLEW IGEINPDSSTINYTPSLKDRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARQMGYWGQ GTLVTVSS (SEQ ID N°: 46)

Os anticorpo adicionais que podem ser usados de acordo com a invenção são uma quarta versão de 3D6 humanizado e uma segunda versão de 10D5 humanizado, como divulgado em U.S. 7.318.923 e 7.320.790, respectivamente. Estes anticorpos ligam-se ao terminal N do peptídeo Αβ, como explicado acima. O 3D6 humanizado (versão 4) compreende a seqüência de região variável de cadeia leve de SEQ ID N°: 71 e a seqüência de região variável de cadeia pesada da SEQ ID N°: 72. Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu GlyGln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg (SEQID N°: 71)

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro GIy Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Ser IIe Arg Ser Gly Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Tyr Asp His Tyr Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 72)

O anticorpo 10D5 humanizado (versão 2) compreende a seqüência de região variável de cadeia leve de SEQ ID N°: 73 e a seqüência de região variável de cadeia pesada da SEQ ID N°: 74. Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Ile His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg (SEQ ID N°: 73)

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Arg Arg Pro Ile Thr Pro Val Leu Val Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser (SEQ ID N°: 74)

Um outro anticorpo exemplar é 2E7 humanizado, como divulgado em WO 07/113172. O anticorpo 2E7 liga-se aos resíduos 1-12 do peptídeo Αβ, mas não 2 a 13, ou variantes mais longas do peptídeo. O anticorpo 2E7 humanizado (versão 1) compreende a seqüência de região variável de cadeia leve da SEQ LD N°: 75 e seqüência de região variável de cadeia pesada da SEQID N°: 76.

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRVSQSLLHSNGYTYLHWYLQKPGQS PQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQT RHVPYTFGGGT KVEIK (SEQ ID N°: 75)

EVQL VESGGGL VQPGGSLRLSCAASGFTFSDNGMAWVRQAPGKGLE WVSFISNLAYSIDYADTVTGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAV YYCVSGTWFA YWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 76)

Uma segunda versão do anticorpo 2E7 humanizado compreende uma região variável da cadeia leve de SEQ ID N°: 75 e a seqüência de região variável de cadeia pesada da SEQ ID N°: 77 (ver, por exemplo, WO 07/113172).

EVQL VESGGGL VQPGGSLRLSCAVSGFTFSDNGMAWVRQAPGKGLE WVSFISNLAYSIDYADTVTGRFTISRDNAKNSLYLOMNSLRAEDTAV YYCV SGTWFA YWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 77)

O anticorpo 2E7 humanizado (versão 3) compreende a seqüência de região variável de cadeia leve de SEQ ID N°: 75 e a seqüência de região variável de cadeia pesada da SEQ ID N°: 78 (ver, por exemplo, WO 07/113172). EVQL VESGGGL VQPGGSLRLSCAASGFTFSDNGMAWVRQAPGKGLE WISFISNL A YSID YADT VTGRFTISRDNAKNSL YLQMNS LRAEDT A VY YCVSGTWFA YWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 78)

Um anticorpo adicional que pode ser usado de acordo com a invenção inclui o anticorpo 9TL humanizado (número de acessão ATCCs PTA-6124 e PTA-6125), como descrito em WO 06/036291. As regiões variáveis de cadeia leve e pesada, sem seqüências de sinal, são mostradas como SEQ ID N°: 79 e SEQ ID N°: 80, respectivamente.

QVQL VQSGAE VKXPGASVKVSCKASGYYTEAYYIHWVRQ APGQGLE WMGRIDPATGNTKYAPRLQDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTA VYYCASLYSLP VYWGQGTTVTVSS (SEQ ID N°: 79) DWMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSDAKTYLNWFQQRPGQS PRRLIYQISRLDPGWDRFSGSGSGTDFTLKTSR W.AEDVGVYYC1QGT HYPVLFGQG TRLEIKRT (SEQ ID N°: 80)

As versões humanizadas de anticorpo 6G também pode ser usado de acordo com a invenção. As regiões variáveis de cadeia leve e pesada, sem seqüências de sinal, são mostradas como SEQ ID N°s:81 e 82, respectivamente.

QVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYTTTTYAIHWVRQAPGQGLE WMGFTSP YS GVSNYNQKFKGRVTMTRDTSTSTVYMEL S SLRSEDTA VYYCARFDNY DRGYVRDYWGQGTLV (SEQ ID N°: 81) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNDRISFLNWYQQKPGQPP KLLIYAATKQGTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSK EFPWSFGGG TKVEDCRTV (SEQ ID N°: 82) 0 Os anticorpo adicionais que podem ser usados de acordo corri

a invenção são como as versões humanizadas de anticorpo 2.1, como descrito em WO 06/081171. Estes anticorpos confiam no CDRs do anticorpo 2.1 de murino e resíduos substitutos a partir da região de estrutura variável de cadeia leve VKII A19/JK4 humana. A região de estrutura variável de cadeia pesada usada para a substituição é desigual com base em VH 2 a 70. Um anticorpo 2.1 humanizado exemplar compreende as regiões variáveis de cadeia leve e pesada, sem seqüências de sinal, mostrado como a SEQ ID N°s: 83 e 84, respectivamente.

QVII.KESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLRTSGMGVGWIRQPPGKALE WLAmWWDDDKSYNPSLKSQLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTAT YYCARRNYY YDDYFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 83) DVLMTQSPLSLPVTTGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQRPGQS PKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQG SHVPLTFGAGT KLEIK (SEQ ID N°: 84)

Outros anticorpos que podem ser usados de acordo com a invenção incluem os anticorpos CWl 181 e CW 1185. Estes anticorpos especificamente ligam-se a duas regiões do peptídeo Αβ, como descrito em WO 03/070760 e U.S. 20050196399. A primeira região compreende AEFRHDSGY (SEQ ID N°: 85) ou um fragmento destes (por exemplo, AEFRHD (SEQ ID N°: 86), ou EFRHDSG (SEQ ID N°: 87), EFRHD (SEQ ID N°: 88)) e segunda região compreende a seqüência de aminoácido YEVHHQKLVFFAEDVG (SEQ ID N°: 89) ou um fragmento destes (por exemplo, VFFA (SEQ ID N°: 90), ou QKLFFAEDV (SEQ ID N°: 91)).

Um anticorpo adicional que pode ser usado de acordo com a invenção é o anticorpo NAB61 monoclonal. NAB61 liga-se Αβ1-11, mas não liga-se ao APP ou C99 de comprimento total, como divulgado em WO 07/062088. Similarmente, o anticorpo 82E1 monoclonal pode ser usado de acordo com a invenção. O 82E1 liga-se ao terminal N do peptídeo AP, mas não APP de comprimento total, como divulgado em U.S. 20080025988.

Outros anticorpos da invenção são anticorpos anti-ADDL. Tais anticorpos foram gerados e selecionados para a capacidade de ligar-se aos ADDLs especificamente, sem a ligação por monômero Αβ ou fibrilas amilóides. Ver por exemplo, WO 04/031400. Outros anticorpos que podem ser usados incluem (i) o anticorpo catalítico ABP 102 (Abzyme, from Abiogen Pharma); (ii) ACI-Ol Ab7 C2 (AC Immune Genentech); (iii) AZD-3102 (AstraZenecalDyax); (iv) IVIg (Gammagard S/D Immune Globulin Intravenous (humano), from Baxter Bioscience); (v) BAN 2401 (BioArctic Neuroscience AB/ Eisai Co. Ltd.; (vi) Rl450 (Hoffman-La Roche/MorphoSys); (vii) LY2062430 (Eli Lilly); (viii) h3D6 (Eli Lilly); (ix) ACU-5A5 (a ADDL mAb from Merck/Acumen); anticorpo α-amiloidsferóide (ASPD) (Mitsubishi Pharma Corp).; (xi) o anticorpo derivado de PBMCs de um paciente ANl 792 (Neurimmune Therapeutics AG); (xii) BC05 (Takeda); (xiii) os anticorpos CEN701-CEN706 (Centocor/Johnson & Johnson); e (xiv) PF-04360365 (também denominado RN-1219 (h2286), de Pfizer/Rinat Neurosciences). Cada um destes anticorpos nodem ser usados de acordo com qualquer um dos métodos da invenção.

O anticorpo ABP 102 cliva o Αβ agregado como descrito, por exemplo, em U.S. 6.387.674 e WO 99/06536. O anticorpo ACI-Ol Ab7 C2 liga-se ao peptídeo Αβ entre os resíduos 10 a 20 e é descrito em U.S. 20070166311. O anticorpo de globulina imune IYIg Gammagard SD é descrito, por exemplo, no Baxter Bioscience website at Baxter.com. O anticorpo BAN 2401 é um anticorpo humanizado que liga-se as protofibrilas Αβ e é descrito, por exemplo, em WO 05/123775. O anticorpo R-1450 HuCAL humano tem um epítopo 266/3D6 duplo. O anticorpo LY2062430 humanizado (IgG) liga-se ao peptídeo Αβ entre os resíduos 16-23 e é descrito, por exemplo, na Patente U.S.N°. 7.195.761. O anticorpo h3D6 humanizado liga-se ao peptídeo Α.β nos resíduos 1 a 5 e é descrito, por exemplo, na Patente U.S.N°. 7.318.923. O anticorpo BC05 liga-se a um epítopo Αβ do terminal C, como descrito por Asami-Odaka et ai. (2005) Neurodegenerative Diseases 2:36-43. Os anticorpos CEN701- CEN706 são descritos, por exemplo, em WO 05/028511. O anticorpo PF-04360365 humanizado liga-se ao peptídeo Αβ entre os resíduos 28-40 e é descrito, por exemplo, em WO 04/032868.

Qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de anticorpo descritos neste podem ser projetados ou preparados usando os métodos padrão, como divulgado, por exemplo, em U.S. 20040038304, U.S. 20070020685, U.S. 200601660184, U.S. 20060134098, U.S. 20050255552, U.S. 20050130266, U.S. 2004025363, U.S. 20040038317, U.S. 20030157579 e U.S. 7.335.478.

Qualquer um dos anticorpos descritos acima podem ser produzidos com os isotipos diferentes ou isotipos mutantes para controlar a extensão da ligação pelos receptores Fcy diferentes. Os anticorpos que necessitam de uma região Fc (por exemplo, fragmentos Fab) perde a ligação aos receptores Fcy. A seleção de isotipo também afeta a ligação aos receptores Fcy. As respectivas afinidades de vários isotipos IgG humanos para os três receptores Fcy, FcyRI, FcyRII e FcyRIII, foram determinados. (Ver Ravetch & Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9, 457 (1991)). FcyRI é um receptor de alta afinidade que liga-se ao IgGs na forma monomérica e os últimos dois são receptores de afinidade baixa que ligam-se aos IgGs apenas na forma multimérica. Em geral, tanto o IgGl quanto o IgG3 tem a atividade de ligação significante a todos os três receptores, IgG4 ao FcyRI e IgG2 por apenas um tipo de FcyRII denominado IIaLR (ver Parren et al., J. Immunol. 148, 695 (1992). Portanto, o IgGl de isotipo humano é usualmente selecionado para a ligação mais forte aos receptores Fcy é desejado e IgG2 é usualmente selecionado para a ligação mais fraca. As mutações em, adjacente, ou próximos aos locais na região

de ligação de junta (por exemplo, substituições de resíduos 234, 235, 236 e/ou 237 com outro resíduo) em todos da afinidade reduzida por isotipos pelos receptores Fcy, particularmente o receptor FcyRI (ver, por exemplo, U.S. 6.624.821). Opcionalmente, as posições 234, 236 e/ou 237 são substituídas com alanina e posição 235 com glutamina. (Ver, por exemplo, U.S. 5.624.821). A posição 236 está faltando no isotipo IgG2 humano. Os segmentos exemplares dos aminoácidos para as posições 234, 235 e 237 para o IgG2 humano são Ala Ala Gly, Val Ala Ala, Ala Ala Ala, Val Glu Ala e Ala Glu Ala. Uma combinação preferida de mutantes é L234A, L235A e G237A pelo IgGl de isotipo humano. Um anticorpo preferido particular é bapineuzumab tendo IgG de isotipo humano e estas três mutações da região Fc. Outras substituições que diminuem a ligação aos receptores Fcy são uma mutação E233P (particularmente em IgGl de camundongo) e D265A (particularmente em IgG2a de camundongo). Outros exemplos de mutações e combinações de mutações que reduzem a ligação Fc e/ou Clq são descritos nos exemplos (E318A/K320A/R322A (particularmente em IgGl de camundongo), L235A/E318A/K320A/K322A (particularmente cm IgG2a de camundongo). Similarmente, o resíduo 241 (Ser) em IgG4 humano pode ser substituído, por exemplo, com prolina para romper a ligação Fc.

As mutações adicionais podem ser feitas à região constante para modular a atividade efetiva. Por exemplo, as mutações podem ser feitas a região constante IgG2a em A330S, P331 S, ou ambos. Para as mutações IgG4, podem ser feitas em E233P, F234V e L235A, com G236 anulado, ou qualquer combinação deste. O IgG4 também pode ter uma ou ambas das seguintes mutações S228P e L235E. O uso das seqüências da região constante rompida para modular a região efetiva ainda é descrita, por exemplo, em WO 06/118,959 e WO 06/036291.

As mutações adicionais podem ser feitas à região constante do IgG humano para modular a atividade efetiva (ver, por exemplo, WO 06/03291). Estes incluem as seguintes substituições: (i) A327G, A330S, P331S; (ii) E233P, L234V, L235A, G236 anulado; (iii) E233P, L234V, L235A; (iv) E233P, L234V, L235A, G236 anulado, A327G, A330S, P331S; e (ν) E233P, L234V, L235A, A327G, A330S, P331S ao IgGl humano. A afinidade de um anticorpo para o FcR pode ser alterada pela mutação de certos resíduos de região constante de cadeia pesada. Por exemplo, rompimento do local de glicosilação do IgGl humano pode reduzir a ligação FcR e deste modo a função efetiva, do anticorpo (ver, por exemplo, WO 06/036291). As seqüências de tripeptídeo NXS, NXT e NXC, onde X é qualquer aminoácido outro do que prolina, são os locais de reconhecimento enzimático pela glicosilação do resíduo Ν. O rompimento de qualquer um dos aminoácidos de tripeptídeos, particularmente na região CH2 de IgG, prevenirá a glicosilação no local. Por exemplo, a mutação de N297 do IgGl humano evita a glicosilação e reduz a ligação FcR ao anticorpo.

As seqüências de diversos anticorpos 3D6 humanizados exemplares e sua parte dos componentes são mostrados abaixo. As regiões constantes humanas mostram a variação alotípica e variação isoalalotípica entre os indivíduos diferentes, isto é, as regiões constantes podem diferenciar nos indivíduos diferentes em uma ou mais posições polimórficas. Os isoalotipos diferem-se a partir dos alotipos em que o reconhecimento do soro em um isoalotipo liga-se a uma região não polimórfica de um ou mais outros isotipos. O alotipo da região constante IgGl mostrada abaixo é 3D6 (AAB- 001) é Glmz que tem Glu na posição 356 e Met na posição 358. O alotipo da região constante capa mostrada abaixo é Km3, que tem um Ala na posição 153 e um Val na posição 191. Um alotipo diferente Km(I) tem Val e Leu nas posições 153 e 191 respectivamente. As variantes alotípicas são revisadas por J Immunogen 3: 357-362 (1976) e Loghem,. Monogr Allergy 19: 40-51 (1986). Outras variantes isoalotípicas e alotípicas das regiões constantes ilustradas são incluídas. Também incluído são as regiões constantes tendo uma qualquer permutação de resíduos que ocupam as posições polimórficas em alotipos naturais. Exemplos de outros alotipos de cadeia pesada IgG 1 incluem: Glm(f), Glm(a) e G 1 m(x). Glm(f) difere-se de Glm(z) em que este tem um Arg em vez de um Lys na posição 214. Glm(a) tem os aminoácidos Arg, Asp, Glu5 Leu nas posições 355 a 358.

A cadeia leve de comprimento total 3D6 humanizado (seqüência sinal sublinhada) (bapineuzumab e AAB-003) MDMRW AOLLGLLMLWYSGSSGDVVMTOSPLSLPVTPGEPASISCKS SQSLLDSDGKTYLNWLLQKPGQSPQRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSG TDFTLKJSRVE AED VGVYYCWQGTHFPRTFGQGTKVEIKRTV AAPSV FIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPRE AKVQ WKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSLSSTLIT.SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC (SEQIDN0: 47)

A cadeia leve de comprimento total 3D6 humanizado, não incluindo a seqüência sinal (bapineuzumab e AAB-003)

DWMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQKPGQS PQRLIYLVSKLDSGWDRFSGSGSGTDFTLKJSPA^AEDVG\^YYCVvrQG THFPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE KHKVYACEVTHQGLS SP VTKSFNRGEC (SEQ ID N°: 48)

DNA que codifica a seqüência codificadora de cadeia leve 3D6 humanizada (seqüência sinal sublinhada) (bapineuzumab e AAB-003) ATGGACATGCGCGTGCCCGCCCAGCTGCTGGGCCTGCTGATGCTGT GGGTGTCCGGCTCCTCCGGCGACGTGGTGATGACCCAGTCCCCCCT GTCCCTGCCCGTGACCCCCGGCGAGCCCGCCTCCATCTCCTGCAAG TCCTCCCAGTCCCTGCTGGACTCCGACGGCAAGACCTACCTGAACT GGCTGCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCCAGCGCCTGATCTACCT GGTGTCCAAGCTGGACTCCGGCGTGCCCGACCGCTTCTCCGGCTCC GGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGCGTGGAGGCC GAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTGGCAGGGCACCCACTTCCCC CGCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACTGTG GCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGA AATCTGG AACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCC CAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC

GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACA

GCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACT

ACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCC

TGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

(SEQIDN0: 49)

Região constante de cadeia pesada humana, isotipo IgGl, L234A/G237A ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYPPEPVTVSWNSGALTS GVHITPAVLQSSGLYSLSSWTWSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK KVEPKSCDKTHTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQD WLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWSNGQPEN^TYKTTPr vTDSDGS FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID N°: 50)

O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como indicado

abaixo.

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFP AVLQSSGL YSLSSVVTWSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK KVEPKSCDKTHTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQD WLNGKE YKCKVSNKALPAPEEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPG (SEQ IDN°: 51).

Cadeia pesada de comprimento total 3D6 humanizada (Isotipo IgGl, L234A/G237A) incluindo seqüência de sinal (sublinhada)

MEFGLSWLFLVAILKGVQCEVOLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFT FSNYGMSWVRQAPGKGLEWVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDN SKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCVRYDHYSGSSDYWGQGTL VTVSSA STXGPSWPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG WTFPAVLQSSGLYSLSSWTWSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK VEPKSCDKTHTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCW VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVL HQD WLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MITGSÍQVSLTCL\^GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKXI^KSRWQQGNWSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID N°: 52)

O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como indicado

abaixo.

MEFGLSWLFLVAILKGVOCEVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFT

FSNYGMSWRQAPGKGTEWASIRSGGGPvT\^/SDN^vKGRFTISRDN

SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRYDHYSGSSDYWGQGTLVTVSSA

STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSWTA^SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK

VEPKSCDKTHTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCW

TOVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVL

HQD WLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE

MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF

FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ

IDN°: 53).

Cadeia pesada de comprimento total 3D6 humanizada, não incluindo a seqüência sinal (isotipo IgGl, L234A/G237A)

EVOLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLE WVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV YYCVRYDHYSGSSDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSV VTWSSSLGTQTOCNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE ALGAPSWLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVD GVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKE YKCKVSN KALPAPffiKTISKAKGQPREPQWTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENbTTCTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NYFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQID N°: 54)

O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como indicado

abaixo.

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLE WVAS1RSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV YYCVRYDHYSGSSDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAAEGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP AVLQSSGL YSLSSV VTVP S S SLGTQTYICNVNHKP SNTKVDKKVEPKS CDKTHTCPPCP APE ALGAPSWLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEv^ GVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKE YKCKVSN KALP APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCL VKGFY PSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID N°: 55). Região constante de cadeia pesada humana, isotipo IgG4, S241P (numeração Kabat); S228P (numeração EU)

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFP AVLQS SGL YSLS S WTVPS S SLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDK RVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWD VSQEDPEVQFNWYVDGVEVIINAKTKPREEQFNSTYRVSVLTVLHQD WLNGKE YKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTK NOVSLTCLWXtFYPSDIA^\\ESNGQPENWkTTPP\^DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHN HYTQKSLSLSLGK (SEQ ID N°: 56)

O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como indicado

abaixo. ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFP AVLQS SGL YSLS S WTVPS S SLGTKTYTCISIYDHKPSNTKVDK RVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVD VSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQ DWLNGKE YKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID N°: 57)

Cadeia pesada de comprimento total 3D6 humanizada (isotipo IgG4, S241P), incluindo a seqüência de sinal (sublinhada)

MEFGLSWLFLVAILKGVOCEVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFT FSNYGMSWVRQAPGKGLEWVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDN SKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYC\^YDHYSGSSDYVvGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFP AVLQSSGLYSLSSVVTWSSSLGTKTTTCNVDHKPSNTKVDKR VESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWA/DV SQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQD WLNGKE YKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS RLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID N°: 58)

O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como indicado

abaixo.

MEFGLSWLFLVAILKGVQCEVOLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFT F SN YGMS W VRQAPGKGLFAW ASIRSGGGRT YYS DN VKGRFTI S RDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC VRYDHYSGS SDY WGQGTL VTVS S A STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPA VLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKR VESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDV SQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVTLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS RLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID N°: 59).

Cadeia pesada 3D6 humanizada, não incluindo a seqüência sinal (isotipo IgG4, S241P)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLE

WVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV

YYCVRYDHYSGSSDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSEST

AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV

TVP S S SLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCP APEFLGG

PSWLFPPKPKXíTLMTSRTPEVTCAAA^DVSQEDPEVQFNYvY^vDGVEV

HNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDLNGKEYKCKVSNKGLPSSI

EKTISKAKGQPREPQWTT.PPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE

WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSV

MHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID N°: 60)

O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como indicado

abaixo.

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLE

WVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV

YYCVRYDHYSGSSDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSEST

AALGCL VKD YFPEPVWSWNSGALTSGVHTFP AVLQSSGLYSLSSVV

TVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGG

PSWLFPPKPKDTLN1ISRTPEVTC V^V7D VSQEDPEVQFNWYVDGVEV

HNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS

SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV

EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCS

VMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID N°: 61). Região constante de cadeia pesada humana, isotipo IgGl (AAB-003), L234A/L235A/G237A

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTXVDK KVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV WDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQD WLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQIDN0: 62)

O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como indicado

abaixo.

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALC<:LVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPA^/LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK KVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPG (SEQ IDN°: 63).

Cadeia pesada de comprimento total 3D6 humanizada incluindo a seqüência de sinal (isotipo IgGl, L234A/L235A/G237A): AAB-003 MEFGLSWLFLVAILKGVOCEVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFT FSNYGMSWVRQAPGKGLEWVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDN SKNTLYLQNlNSLRAEDTAV^rfCVTlTOHYSGSSDYWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFP A VLQ S S GL YSLS SWTVP S S SLGTQT YICN VNHKP SNTK VDKK VEPKSCDKIHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPffiKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MIXNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLWDKSRWQQGNWSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ IDN°: 64)

O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como indicado

abaixo.

MEFGLSWLFLVAILKGVOCEVOLLESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFT

FSNYGMS WVRQAPGKGLEWVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDN

SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRYDHYSGSSDYWGQGTLVTVSSA

STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTTPAVLQSSGLYSLSSWT^SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK^

VEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCW

TOVSHEDPEVKFN\\^vT>GVE VHNAKT^

HQD WLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNYFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ IDN°: 65).

Cadeia pesada 3D6 humanizada, não incluindo a seqüência sinal (isotipo IgGl, L234A/L235A/G237A): AAB-003

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLE WVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV YYCVRYDHYSGSSD YWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSV VTWSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AAGAPS vTLFPPKPKDTI.MISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVD GVE VHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKE YKCKVSN KALP APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCL VKGFY PSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID N°: 66) O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como

indicado abaixo.

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLE WASIRSGGGRTYYSDNWGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV YYCVRYDHYSGSSDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYPPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVP S S SLGTQTYICNVNHKP SNTKVOKK VEPKS CDKTHTCPPCP APE AAGAPSVFLFPPKPKDTLMÍSRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKENWYVD GVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVEHQD WLNGKE YKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID N°: 67).

DNA que codifica a região codincadora da cadeia pesada 3D6 humanizada incluindo a seqüência de sinal (sublinhada) (Isotipo IgGl, L234A/L235A/G237A): AAB-003

ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCTATTTTAAAAG

GTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGCTGGAGTCCGGCGGCGGCCTGG

TGCAGCCCGGCGGCTCCCTGCGCCTGTCCTGCGCCGCCTCCGGCTT

CACCTTCTCCAACTACGGCATGTCCTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGC

AAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCTCCATCCGCTCCGGCGGCGGCCGC

ACCTACTACTCCGACAACGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCCGCG

ACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGCG

CCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGTGCGCTACGACCACTACTC

CGGCTCCTCCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCC

TCCGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCT

CCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA

AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCG

CCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTC

AGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGC TTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGC

AACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAA

ACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCA

CCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGA

TCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCC

ACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGG

AGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAAC

AGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACT

GGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCC

TCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGC

CCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGA

TGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCT

ATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGG

AGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCT

CCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCA

GCAGGGG AACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCAC

AACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAATGA

(SEQ ID N°: 68)

Cadeia pesada de comprimento total de bapineuzumab, não incluindo a

seqüência sinal, isotipo IgGl, nenhuma mutação Fc

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLE

WVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV

YYCVRYDHYSGSSDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG

TAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV

VTVPSSSLGTQTTICNVNHKPSNTKVDK^^

LLGGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD GVEYHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPffiKTISKAKGQPREPQWTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQID N°: 69)

O resíduo K de terminal C pode estar ausente, como indicado

abaixo.

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLE

WVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV

YYCVRYDHYSGSSDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG

TAALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP AVLQSSGLYSLSSV

VTWSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE

LLGGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD

GVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKE YKCKVSN

KALPAPIEKTISKAKGQPREPQWTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY

PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG

NWSCS\^4HEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID N°: 70)

Em alguns anticorpos, as posições 234, 235 e 237 de uma região constante de cadeia pesada IgG humana pode ser AAA respectivamente, LLA respectivamente, LAG respectivamente, ALG respectivamente, AAG respectivamente, ALA respectivamente, ou LAA respectivamente, como mostrado acima, AAB-003 é uma variante L234A, L235A e G237A de bapineuzumab (isto é, tendo seqüências de aminoácido idênticas ao bapineuzumab exceto pelas mutações L234A, L235A e G237A, alanina (A) sendo o aminoácido da variante). Equivalente ao bapineuzumab, AAB-003 tem uma região constante de cadeia leve de capa humana de comprimento total e uma região constante de cadeia pesada IgGl humana de comprimento total (em um outro bapineuzumab ou AAB-003, um resíduo de lisina do terminai C é algumas vezes clivado intracelularmente e é algumas vezes necessitado do produto final).

Embora as três mutações em AAB-003 estão próximas da região de junta antes do que a região de ligação de complemento, AAB-003 tem a ligação reduzida aos ambos receptores Fcy e por Clq, relativo ao bapineuzumab. Deste modo, o anticorpo AAB-003 tem a capacidade reduzida para induzir tanto a fagocitose quanto a cascata de complemento. Além disso, as apresentações AAB-003 menos a ligação ao FcyRII humano do que um anticorpo idêntico de outra maneira com menos do que as três mutações presentes em AAB-003 (por exemplo, um com as substituições nos resíduos 234 e 237), indicando que todas as três mutações na região AAB-003 Fc contribui para reduzir a função efetiva. A mutação da região constante de cadeia pesada para reduzir a interação com os receptores Fcy e ou Clq pode reduzir a microemorragia em um modelo de camundongo sem eliminar as atividade úteis. A microemorragia nos camundongos é um fator que pode contribuir para o edema vasogênico que ocorre em humanos. Os anticorpos que carregam tais mutações retém a capacidade de inibir o declínio cognitivo bem como a capacidade de limpar os depósitos de amilóide.

Similarmente os mutantes da região constante de cadeia pesada também podem ser combinados com as seqüências de região variável descritas acima, por exemplo, pelos anticorpos 12A11 humanizado e 12B4. A seguinte tabela mostra as combinações exemplares das regiões variáveis de cadeia pesada e a região constante de cadeia pesada com as mutações para os anticorpos descritos acima. A cadeia pesada mostra a tabela para o anticorpo particular por exemplo, 12A11, pode ser formado pares com qualquer uma das regiões variáveis de cadeia leve descritos acima para que o anticorpo ligado à região constante de cadeia leve (por exemplo, uma região constante de cadeia leve capa humana como seguem:

RTVAAPSYFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTTSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRG EC (SEQ ID N°: 85)

ou um alotipo ou isoalotipo destes. Tabela 1

Correlação da cadeia pesada de comprimento total da SEQ ID N0 com região constante e variável respectiva da SEQ ID N°.

Anticorpo Região variável de cadeia pesada Região constante de cadeia pesada 10D5 (versão 1) 9 50 9 51 9 56 9 57 9 62 9 63 12B4 32 50 32 51 32 56 32 57 32 62 32 63 12A11 (versão 1) 11 50 11 51 11 56 11 57 11 62 11 63 12A11 (versão 2) 12 50 12 51 12 56 12 57 12 62 12 63 12A11 (versão 2.1) 13 50 13 51 13 56 13 57 13 62 13 63 12A11 (versão 3) 14 50 14 51 14 56 14 57 14 62 14 63 12A11 (versão 4.1) 15 50 15 51 15 56 15 57 15 62 15 63 12A11 (versão 4.2) 16 50 16 51 16 56 16 57 16 62 16 63 12A11 (versão 4.3) 17 50 17 51 17 56 17 57 17 62 17 63 12A11 (versão 4.4) 18 50 18 51 18 56 Anticorpo Região variável de cadeia pesada Região constante de cadeia pesada 18 57 18 62 18 63 12A11 (versão 5.1) 19 50 19 51 19 56 19 57 19 62 19 63 12A1 1 (versão 5.2) 20 50 20 51 20 56 20 57 20 62 20 63 12A1 1 (versão 5.3) 21 50 21 51 21 56 21 57 21 62 21 63 12A1 1 (versão 5.4) 22 50 22 51 22 56 OO 57 22 62 22 63 12A11 (versão 5.5) 23 50 23 51 23 56 23 57 23 62 23 63 12A11 (versão 5.6) 24 50 24 51 24 56 24 57 24 62 24 63 12A11 (versão 6.1) 25 50 25 51 25 56 25 57 25 62 25 63 12A1 1 (versão 6.2) 26 50 26 51 26 56 26 CT J I 26 62 26 63 12A11 (versão 6.3) 27 50 27 51 27 56 27 57 27 62 27 63 12A11 (versão 6.4) 28 50 28 51 I

Anticorpo Região variável de cadeia pesada Região constante de cadeia pesada 28 56 28 57 28 62 28 63 12A1 1 (versão 7) 29 50 29 51 29 56 29 57 29 62 29 63 12A11 (versão 8) 30 50 30 51 30 56 30 57 30 62 30 63 12B4 32 50 32 51 32 56 32 57 32 62 32 63 266 34 50 34 51 34 56 34 57 34 62 34 63 20C2 (versão 1) 38 50 38 51 38 56 38 57 38 62 38 63 20C2 (versão 2) 39 50 39 51 39 56 39 57 39 62 39 63 C705 41 50 41 51 41 56 41 57 41 62 41 63 C706 43 50 43 51 43 56 43 57 43 62 43 63 2286 (versão 1) 45 50 45 51 45 56 45 57 45 62 45 63 2286 (versão 2) 46 50 Anticorpo Região variável de cadeia pesada Região constante de cadeia pesada 46 51 46 56 46 57 46 62 46 63 3D6 (versão 4) 72 50 72 51 72 56 72 57 72 62 72 63 10D6 (versão 2) 74 50 74 51 74 56 74 57 74 62 74 63 2E7 (versão 1) 76 50 76 51 76 56 76 57 76 62 76 63 2E7 (versão 2) 77 50 77 51 77 56 77 57 77 62 77 63 2E7 (versão 3) 78 50 78 51 78 56 78 57 78 62 78 63 9TL 79 50 79 51 79 56 79 57 79 62 79 63 6G 81 50 81 51 81 56 81 57 81 62 81 63 2.1 82 50 82 51 82 56 82 57 82 62 82 63

Os aminoácidos na região constante são numerados pelo

alinhamento com o anticorpo EU humano (ver Cunningham et al., J. Biol. Chem., 9, 3161 (1970)). Isto é, as cadeias pesadas e leves de um anticorpo são alinhadas com as cadeias leves e pesadas de EU para maximizar a identidade da seqüência de aminoácido e cada aminoácido no anticorpo é determinado o mesmo número como o aminoácido correspondente em EU. O sistema de numeração EU é convencional (ver geralmente, Kabat et al., Sequences of Protein of Immunological Interest, Publicação NIH N°. 91 a 3242, US Department of Health and Human Services (1991)).

A afinidade de um anticorpo para o componente Clq de complemento pode ser alterada pela mutação em pelo menos um dos resíduos de aminoácido 318, 320 e 322 da cadeia pesada a um resíduo tendo uma cadeia secundária diferente. Outras alterações adequadas para modificar, por exemplo, a redução ou anulação, Clq específico por ligação de um anticorpo incluem a mudança de qualquer um dos resíduos 318 (Glu), 320 (Lys) e 322 (Lys), ao Ala. A atividade de ligação Clq pode ser anulada pela substituição de qualquer um dos três resíduos específicos com um resíduo tendo uma funcionalidade inapropriada em sua cadeia secundária. Não é necessário substituir os resíduos iônicos com Ala para anular a ligação Clq. Também é possível usar outros resíduos não iônicos substituídos por alquila, tal como Gly, lie, Leu, ou Vai, ou tais resíduos polares não aromáticos como Phe, Tyr, Trp e Pro no local de qualquer um dos três resíduos a fim de anular a ligação Clq. Além disso, também é possível usar tais resíduos polares não iônicos como Ser, Thr, Cys e Met no lugar de dos resíduos 320 e 322, mas não 318, para anular a atividade de ligação Clq. A substituição do resíduo 318 (Glu) por um resíduo polar pode modificar mas não anular a atividade de ligação Clq. A substituição do resíduo 297 (Asn) com os resultados Ala na remoção da atividade lítica enquanto apenas reduz levemente a afinidade (cerca de três vezes mais fraca) por Clq. Esta alteração destrói o local de glicosilação e a presença do carboidrato a que é requerido pela ativação complementar. Qualquer outra substituição neste local também destrói o local de glicosilação. As mutações adicionais que podem afetar a ligação Clq à região constante do IgGl humano incluem aqueles descritos, por exemplo, no WO 06/036291. Neste caso, em pelo menos uma das seguintes substituições podem ser feitas para reduzir a ligação Clq: D270A, K322A, P329A e P311S. Cada uma destas mutações, incluindo aqueles nos resíduos 297, 318 e 320 podem ser feitos individualmente ou em combinação.

Os anticorpos com as mutações da região constante de cadeia pesada que reduzem a ligação aos receptores Fcy e/ou Clq podem ser usados em quaisquer um dos métodos da invenção. Preferivelmente, tais anticorpos tem reduzido a ligação relativa a um anticorpo idêntico de outra maneira que necessita da mutação de pelo menos 50 % a pelo menos um receptor Fcy e/ou ao Clq.

B. Fragmentos Αβ

Os fragmentos numerosos de Αβ foram agora descritos na literatura da Patente e científica como os agentes para a imunoterapia ativa (ver, por exemplo, U.S. 6.750,324, U.S. 20040213800; U.S. 20070134762). Em geral, os fragmentos incluindo um epítopo dentro dos resíduos 1 a 11 de Αβ induzem os anticorpos que ligam-se aos receptores Fcy e induz um ajuste da resposta contra os depósitos amilóides, considerando os fragmentos que necessitam de um epítopo dentro de resíduos 1 a 11 de Αβ que induzem os anticorpos que ligam-se preferivelmente ou exclusivamente por formas solúveis de Αβ antes do que as placas e induz um pouco se qualquer ajuste da resposta contra os depósitos amilóides.

O fragmento preferido para a indução dos anticorpos que ligam-se aos depósitos amilóides e induzem um ajuste a resposta são os fragmentos de terminal N começando nos resíduos 1 a 3 de Αβ e terminando nos resíduos 7 a 11 de A. Os fragmentos de terminal N exemplares incluem Αβί a 5, 1 a 6, 1 a 7, 1 a 10, 3 a 7, 1 a 3 e 1 a 4 com 1 a 7 sendo particularmente preferidos. Uma classe de fragmentos exemplares incluem os fragmentos começando em um resíduo entre 1 a 3 (inclusive) e terminando no resíduo entre 7 a 11 (inclusive).

Os fragmentos preferidos para a indução dos anticorpos para solucionar Αβ, que induz os pequenos, se qualquer, ajuste da resposta contra os depósitos amilóides incluem Αβ15-21, Αβ16-22, Αβ17-23, Αβ18-24, Αβ 19-25, Αβ15-22, Αβ16-23, Αβ17-24, Αβ18-25, Αβ15-23, Αβ16-24, Αβ17- 25, Αβ 18-26, Αβ15-24, Αβ16-25 e Αβ15-25, Αβ16-23 é particularmente preferido significando um fragmento incluindo os resíduos 16 a 23 de Αβ e necessitando de outros resíduos de Αβ. Também preferido são os fragmentos de terminal C de Αβ42 ou 43 de 5 a 10 e preferivelmente 7 a 10 aminoácidos contínuos. Os Fragmentos análogos de terminal C de Αβ40, ou 39 também podem ser usados. Estes fragmentos podem gerar uma resposta de anticorpo que incluem os anticorpos específicos finais. Os fragmentos preferivelmente perdem os epítopos de célula T que induziriam as células T contra Αβ. Geralmente, os epítopos de célula T são maiores do que 10 aminoácidos contínuos. Portanto, os fragmentos preferidos de Αβ são do tamanho de 5 a 10 ou preferivelmente 7 a 10 aminoácidos contínuos; isto é, comprimento suficiente para gerar uma resposta do anticorpo sem gerar uma resposta de célula Τ. A ausência dos epítopos de célula T é preferido por causa destes epítopos e não são necessários para a atividade imunogênica de fragmentos e pode causar uma resposta inflamatória indesejada em uma subsérie dos pacientes.

Os agentes para induzir os anticorpos ao Αβ que pode ser usado nos métodos da invenção também incluem (i) ACI-24 (AC Immune); (ii) Afitopos AD02 e AD02 (Affiris GmbH); (iii) Arctic Immunotherapeutic KLVFFAGDV (SEQ ED N°: 92) (BioArctic Neuroscience/ Eisai); (iv) A[31- 15-K-K-A131-15 (Brigham & Women's Hospital); (v) I3-Vax™ and Recall- Vax™ (Intellect Neurosciences); (vi) K6-A131 a 30 (Intellect Neurosciences/ NYU); (vii) V-950 (Merck); (viii) CAD106 (Novartis/ Cytos); (ix) A(3 DCtagm nanoparticle adjuvant (Prana Biotechnology/ PRIMABioMed); (x) PXl06 (também 2A131-11-PADRE, de Pharmexa/ Lundbeck); (xi) A134-10 conjugado a um epítopo de célula T (U. Toronto); e (xii) p3102 e p3075 (United Biomedical).

ACI-24 é uma construção de lipossomo Αβ1-15 com ácido

palmítico A131-15-K-K-16C inserido em uma bicamada lipossômica. Estes compostos são descritos em U.S. 2004/0242845, WO 05/081872, U.S. 2007/0281006 e U.S. 2006/0073158. Afitopos ADOl e AD02 são mimotopos a partir do terminal N de Αβ, como descrito em WO 06/005707. O Arctic Immunotherapeutic é derivado de Αβ22 de E692G, como descrito em U.S. 20020162129 e U.S. 20070248606. Αβ1-15-Κ-Κ-Αβ1-15 representa dois fragmentos Αβ ligado ao terminal N, como descrito em WO 05/012330 e WO 02/0123553. β-Vax™, Recall-Vax™ e Κ6-Αβ1-30 são os fragmentos Αβ ligados a um epítopo da célula T, como descrito em WO 01/42306. V-950 é um peptídeo 8-mer AP ligado a um peptídeo linear multivalente com pelo menos um espaçador e um peptídeo de antígeno múltiplo ramificado multivalente, como descrito em WO 06/121656. O CAD106 é um carreador ζ)β (um RNA VLP) ligado a um peptídeo Αβ de terminal N, como descrito em WO 04/016282. O adjuvante de nanopartícula Αβ DCtag™ é descrito, por exemplo, em WO 02/00245. O PX106 é um peptídeo Αβ1-11 ligado a um epítopo de célula T denominado um "peptídeo de epítopo pan DR (PADRE)," como descrito em U.S. 7.135.181. p3102 e p3075 são os peptídeos Αβ1-14 ligados por um espaçador a um epítopo de célula T (por exemplo, epítopo de sarampo), como descrito em U.S. 20030068325 U.S. 20040247612, U.S. 6.906.169 e WO 02/096350.

Os fragmentos são usualmente peptídeos Αβ naturais mas podem incluir os aminoácidos não naturais ou modificações de aminoácidos de terminal N ou C em um, dois, cinco, dez, ou onze em todas as posições. Por exemplo, o resíduo de ácido aspártico natural na posição 1 e/ou 7 de Αβ pode ser substituído com ácido iso-aspártico. Exemplos de aminoácidos não naturais são D, alfa, aminoácidos alfa-disubstituídos, aminoácidos de N alquila, ácido láctico, 4-hidroxiprolina, γ-carboxiglutamato, epsilon-Ν,Ν,Ν- trimetillisina, epsilon-N-acetillisina, O-fosfoserina, N-acetilserina, N- formilmetionina, 3-metilistidina, 5-hidroxilisina, omega-N-metilarginina, β- alanina, ornitina, norleucina, norvalina, hidroxprolina, tiroxina, ácido γ-amino butírico, homoserina, citrulina e ácido isoaspártico. Alguns agentes terapêuticos da invenção são todos os peptídeos D, por exemplo, todos os fragmentos D Αβ ou todos D Αβ e todos os análogos de peptídeo D. Os fragmentos podem ser avaliados pela eficácia terapêutica Ou profilática nos modelos de animais transgênicos em comparação com controles de placebo ou não tratados.

Os fragmentos são tipicamente conjugados para realizar as moléculas, que fornecem um epítopo da célula T e deste modo promove uma resposta imune contra o fragmento conjugado ao carreador. Um agente simples pode ser ligado a um carreador, cópias múltiplas de um agente pode ser ligado as cópias múltiplas de um carreador, que voltam a ligar-se com um outro, cópias múltiplas de um agente pode ser ligado a um cópia simples de um carreador, ou uma cópia simples de um agente e pode ser ligado as cópias múltiplas de um carreador, ou carreadores diferentes. Os carreadores adequados incluem albuminas de soro, hemocianina do lapa buraco de fechadura, moléculas de imunoglobulina, tiroglobulina, ovalbumina, toxóide de tétano, ou um toxóide de uma outra bactéria patogênica, tal como dfteria (por exemplo, CRM197), E. coli, cólera, ou H. pylori, ou um derivado de toxina atenuada. Os epítopos celulares também são moléculas carreadoras adequadas. Alguns conjugados podem ser formados pelo agente de ligação da invenção a uma molécula polímero imunoestimuladora (por exemplo, tripalmitoil-S-glicerina cisteína (Pam3Cys), manan (um polímero de manose), ou glucano (um polímero β1~>2)), citocinas (por exemplo, IL-1, IL-I alfa e peptídeos β, IL-2, γ-INF, IL-10, GM-CSF) e quimiocinas (por exemplo, MIPl -(X e β e RANTES). Agentes imunogênicos também podem ser ligados aos peptídeos que intensificam os tecidos através do transporte, como descrito em O1Mahony, WO 97/17613 e WO 97/17614. Os imunogênios podem ser ligados aos carreadores com ou sem os espaçadores de aminoácidos (por exemplo, gly-gly).

Os carreadores adicionais incluem partículas semelhantes ao vírus. As partículas semelhantes ao vírus (VLPs), também denominado pseudovírus ou partículas derivadas de vírus, representa estruturas de subunidades compostas de cópias múltiplas de uma proteína envelope e/ou capsídeo viral capaz de reunir por si só em VLPs da simetria esférica definida in vivo. (Powilleit, et al, (2007) PLoS ONE 2(5):e415). Estas partículas foram observadas serem úteis como os sistemas de liberação de antígeno. Os VLPs podem ser produzido e prontamente purificado em amplas quantidades e devido ao seu particulado natural e altos pesos moleculares. Os VLPs induzem uma resposta imunes sem aplicação adicional de um adjuvante. (Ulrich et al, (1996) Intervirology 39:126-132). As partículas quiméricas exemplares úteis como os sistemas VLP de liberação de antígeno incluem aqueles com base em vírus de hepatite B, vírus de imunodeficiência humana (HTV), Ty de retrotranspossomo de levedura, L-A de totivírus de levedura, parvovírus, vírus de influenza, vírus de Norwalk, rotavírus, adevírus associado, vírus da língua azul, vírus de hepatite A, papilomavírus humano, vírus do sarampo, vírus de polioma e vírus de fago RNA, bem como aqueles com base em vários retrovírus e lentivírus. Para a revisão, ver Lechner5 et al (2002) Internrology 45:212-217.

A proteína do núcleo do vírus de hepatite B (HBcAg) é um VLP comum usado para a realização de antígenos estranhos (Ver Koletzki et al, (1997) J Gen Vir 78:2049-2053). Brevemente, o HBcAg pode ser usado como um núcleo para construir VLPs que presente estende-se aos segmentos de proteína estranhos. O método utiliza uma construção tendo uma seqüência ligadora entre um HBcAg terminalmente truncado por C e uma seqüência de proteína estranha que contém uma códon interrompido. A quimera da proteína estranha/HbcAg truncado é expressada que utiliza um mecanismo direto de leitura com base na mutação TGA-Trp opal para a expressão em uma cepa supressora E. coli. O método descrito por Koletzki et al. permite a incorporação das seqüências de proteína estranha longa em VLPs, permitindo por uma maior variedade de antígenos a ser realizado pelo VLP.

A proteína Gag do vírus do HIV pode ser usada como um sistema carreador de antígeno (ver Griffiths et al, (1993) J Virol. 67(6):3191 a 3198). O Griffiths utiliza o arco V3 de HIV, que é a princípio para neutralizar o determinante do HIV envelope. As proteínas de fusão Gag:V3 reunidas in vivo nas partículas Gag híbridas, indicando as partículas derivadas de vírus (VDPs). Os VDPs induzem tanto as respostas humorais quanto as celulares. Como o arco V3 contém um epítopo CTL, imunização com Gag:V3 induz uma resposta CTL à porção de proteína V3 do VLP.

Um HIV:Ty VLP híbrido também pode ser usado (ver Adams et al, (1987) Nature 329(3):68-70). O HIVrTy VLP utiliza a proteína pl do Ty transpossomo de levedura. O primeiro dos 381 aminoácidos de pl são suficientes para a formação VLP. As proteínas de fusão HIV:Ty são capazes de reunir nos VLPs in vivo, bem como a indução de uma resposta imune ao antígeno HIV realizado pelo VLP. Os VLPs usando a proteína Ty pl também pode conter o pl fundido ao total de um alfa2-interferon, o produto dos genes do vírus de papiloma bovina El e E2 e uma porção de uma hemaglutinina de influenza. Cada um destas fusões Ty formadas por VLPs e foram capazes de induzir a produção de antisoro do não componente Ty VLP.

Os VLPs também podem ser projetados a partir das variantes de L-A totivírus de levedura (ver Powilleit et al. (2007) PLOS One 2(5):e415). O gene Pol do vírus L-A pode ser substituído com um antígeno apropriado para induzir uma resposta imune específica, que demonstra que os VLPs de levedura são carreadores efetivos.

As parvopartículas não replicativas, recombinantes semelhantes ao vírus também podem ser usadas como carreadores de antígeno. (Sedlik, et al. (1997) PNAS 94:7503 a 7508). Estas partículas permitem os antígenos carreadores no citosol de modo que estes entrem no caminho imunológico restrito de classe I, detse modo estimulando as respostas mediadas por linfócitos T de estimulação da citotoxicidade (CTL). Sedlik especificamente usado por PPVrVLP, que contém a proteína de capsídeo VP2 do parvovírus e resíduos 118 a 132 a partir do vírus de coriomeningite linfócito (LCMV) foi inserido na proteína de capsídeo VP2. O PPV:VLP contendo LCMV foi capaz de induzir uma resposta imune por LCMV e proteção imunoiógica extraída contra as dosagens virais letais nos camundongos pré-imunizados.

Os VLPs também podem compreender a influenza de replicação incompetente que perde o gene NS2 de influenza, o gene essencial para a replicação viral. (Watanabe, et al. (1996) J Virol 76(2):767-773). Estes VLPs infectam as células de mamíferos e permite a expressão das proteínas de expressão.

O vírus Norwalk (NV) com base em VLPs também pode ser usado como veículos para a liberação imunogênica. (Bali, et al (1999) Gastroenterology 117:40-48). O genoma NV tem três estruturas de leitura aberta (ORFs 1 a 3). A expressão de bacilovírus recombinante de ORFs 2 e 3 permite a reunião espontânea de altos rendimentos do vírus Norwalk recombinante VLPs (rNV).

Alguns conjugados podem ser formados pela ligação dos agentes da invenção em pelo menos um epítopo de célula T. Alguns epítopos celulares são heterogêneos considerando outros epítopos celulares são universais. Os epítopos heterólogos celulares são capazes de itensificar a indução da imunidade da célula T em uma ampla variedade de pacientes que apresentam vários tipos de HLA. Em constraste aos epítopos heterólogos celulares, os epítopos universais celulares são capazes de intensificar a indução da imunidade da célula T em uma ampla porcentagem, por exemplo, pelo menos 75 % dos pacientes que apresentam várias moléculas HLA codificadas pelos alelos HLA-DR diferentes.

Um amplo número de epítopos de célula T de ocorrência natural existente, tal como, toxóide de tétano (por exemplo, os epítopos P2 e P30), antígeno de superfície de hepatite B, coqueluche, toxóide, proteína do viras F de sarampo, Chlamydia trachomatis maior proteína de membrana externa, toxóide de dfteria, Plasmodium falciparum circumsporozoite T, antígeno Plasmodium falciparum CS, isomerase de fosfato de triose Schistosoma mansoni, Escherichia eoli TraT e hemaglutinina do viras dc influenza (HA). Os peptídeos imunogênicos da invenção também podem ser conjugados aos epítopos da célula T descritos em Sinigaglia F. et al., Naturei 336:778-780 (1988); Chicz R.M. et al., J. Exp. Med., 178:27-47 (1993); Hammer J. et al, Cell 74:197-203 (1993); Falk K. et. al., Immunogenetics, 39:230-242 (1994); WO 98/23635; e, Southwood 5. et al J. Immunology, 160:3363-3373 (1998). Os carreadores também incluem partículas semelhantes ao

vírus (ver U.S. 20040141984).

Os fragmentos são freqüentemente administrados com adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. O adjuvante aumenta o titulador dos anticorpos induzidos e/ou a afinidade de ligação dos anticorpos induzidos relativos à situação se o peptídeo foi usado sozinho. Uma variedade de adjuvantes pode ser usado em combinação com um fragmento imunogênico de Αβ, para extrair uma resposta imune. Os adjuvantes preferidos aumentam a resposta intrínseca a um imunogênio sem causar as mudanças conformacionais no imunogênio que afetam a forma quantitativa da resposta. Os adjuvantes preferidos incluem hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio, lipídeo de monofosforila 3 De-O-acilado A (MPL™) (ver GB 2220211 (RJBI ImmunoChem Research Inc., Hamilton, Montana, now part of Corixa). Stimulon™ QS-21 é uma saponina glicosidora de triterpeno isolada a partir do casca da árvores Quillaja Saponaria Molina observada na South America (ver Kensil et al, in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman, Plenum Press, NY, 1995); US 5,057,540), (Aquila BioPharmaceuticals, Framingham, MA; now Antigenics, Inc., New York, ΝΎ). Outros adjuvantes são emulsões água em óleo (tal como esqualeno ou óleo de amendoim), opcionalmente em combinação com estimulantes imunes, tal como lipídeo de monofosforila A (ver Stoute et al., N. Engl. J. Med. 336, 86-91 (1997)), polímeros plurônicos e micobactéria matadora. Um outro adjuvante é CpG (WO 98/40100). Os adjuvantes podem ser administrados como um componente de uma composição terapêutica com um agente ativo ou pode ser administrado separadamente, antes, concorrentemente com, ou após a administração do agente terapêutico.

Uma classe preferida dos adjuvantes é sais de alumínio (alum), tal como hidróxido de alume, fosfato de alume, sulfato de alume. Tais adjuvantes podem ser usados com ou sem outros agentes de imunoestimulação específica tal como MPL ou 3-DMP, QS-21, aminoácidos monoméricos ou poliméricos tal como ácido poliglutâmico ou polilisina. Uma outra classe de adjuvantes é formulações de emulsão água em óleo. Tais adjuvantes podem ser usados com ou sem outros agentes de imunoestimulação específicos tal como peptídeos de muramila (por exemplo, N-acetilmuramil-L-treonila-D-isoglutamina (tr-MDP), N-acetil-normuramil- L-alanil-D-isoglutamina (não MDP), N-acetilmuramil-L-alanil-D- isoglutaminil-L-alanina-2-(r-2'dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosfo etilamina (MTP-PE), N-acetilglucsaminil-N-acetilmuramil-LAl-D-isoglu-L- Ala-dipalmitoxi propilamida (DTP-DPP) teramidaTM), ou outros componentes da parede da célula bacteriana. As emulsões água em óleo incluem (a) MF59 (WO 90/14837), contendo 5 % de esqualeno, 0,5 % de Tween 80 e 0,5 % de Span 85 (opcionalmente contendo várias quantidades de MTP-PE) formuladas nas partículas de sub-mícron usando um microfluidizador tal como microfluidizador modelo IlOY (Microfluidics, Newton MA), (b) SAF, contendo 10 % de esqualeno, 0,4 % de Tween 80, 5 % de polímero bloqueado por plurônico L121 e tr-MDP, microfluidizado em uma emulsão sub-mícron ou turbilhão para gerar uma emulsão de amplo tamanho da partícula e (c) sistema adjuvante Ribi™ (RAS), (Ribi ImmunoChem, Hamilton, MT) contendo 2 % esqualeno, 0,2 % da Tween 80 e um ou mais componentes da parede da célula bacteriana a partir do grupo que consiste de monofosforilipídeo A (MPL), dimicolato de trealose (TDM) e esqueleto da parede celular (CWS), preferívelmente MPL + CWS (Detox™)

Uma classe de adjuvantes preferidos é adjuvantes de saponina, tal como Stimulon™ (QS-21, Aquila, Framingham, MA) ou partículas geradas destes tal como ISCOMs (complexos imunoestimulantes) e ISCOMATRJX. Outros adjuvantes incluem RC-529, GMCSF e adjuvante de Freund completo (CFA) e adjuvante de Freund incompleto (IFA). Outros adjuvantes incluem citocinas, tal como interleucinas (por exemplo, peptídeos IL-I α e β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL13 e IL-15), fator de estimulação da colônia de macrófago (M-CSF), fator de estimulação da colônia de macrófago-granulócito (GM-CSF), fator de necrose de tumor (TNF), quimiocinas, tal como MIPla e β e RANTES. Uma outra classe de adjuvantes é análogos de glicolipídeos incluindo N-glicosilamidas, N- glicosiluréia e N-glicosilcarbamatos, cada um de que é substituído no resíduo de açúcar por um aminoácido, como imuno-moduladores ou adjuvantes (ver U.S. 4.855.283). As proteínas de choque por calor, por exemplo, HSP70 e HSP90, também podem ser usados como adjuvantes.

Um adjuvante pode ser administrado com um imunogênio como uma simples composição, ou pode ser administrado antes, concorrente com ou após a administração do imunogênio. O imunogênio e adjuvante pode ser embalado e fornecido nos mesmo frasco ou pode ser embalado em frascos separados e misturados antes do uso. O imunogênio e adjuvante são tipicamente embalados com um rótulo que indica a aplicação terapêutica pretendida. Se o imunogênio e adjuvante são embalados separadamente, a embalagem tipicamente inclui as instruções para a mistura antes do uso. A escolha do adjuvante e/ou carreador depende da estabilidade da formulação imunogênica contendo o adjuvante, a via de administração, a listagem de dosagem, a eficácia do adjuvante para as espécies sendo vacinadas e, em humanos, um adjuvante farmaceuticamente aceitável é um que foi aprovado para a administração humana pelos corpos reguladores pertinentes. Por exemplo, o adjuvante de Freund completo não é adequado para a administração humana. Alume, MPL e QS-21 são preferidos. Opcionalmente, dois ou mais adjuvantes diferentes podem ser usados simultaneamente. As combinações preferidas incluem alume com MPL, QS-21, MPL com QS-21, MPL ou RC-529 com GM-CSF e alume, QS-21 e MPL juntos. Também, o adjuvante de Freund incompleto pode ser usado (Chang et al., Advanced Drug Delivery Reviews 32, 173-186 (1998)), opcionalmente em combinação com qualquer um de alume, QS-21 e MPL em todas as combinações destes. V. Pacientes responsáveis pelo tratamento

O presente regime é útil para o tratamento de qualquer doença caracterizada pelos depósitos amilóides de Αβ no cérebro. Bem como mal de Alzheimer, tais doenças incluem síndrome de Down, doença de Parkinson, dano cognitivo brando e doenças amilóides vasculares. Pacientes responsáveis pelo tratamento incluem indivíduos em risco da doença mas que não mostra os sintomas, bem como pacientes que apresentam e mostram os sintomas. No caso de mal de Alzheimer, em virtude de alguém que está em risco de sofrer do mal de Alzheimer se ele ou ela viverem o bastante. Portanto, os presentes métodos podem ser administrados profilaticamente à população geral sem a necessidade para qualquer avaliação dos riscos do paciente. Os presentes métodos também podem ser úteis para os indivíduos que tem um risco genético conhecido do mal de Alzheimer. Tais indivíduos incluem aqueles tendo comparativos de quem tem experimentado esta doença e aquele cujo o risco é determinado pela análise dos marcadores bioquímicos ou genéticos. Os marcadores genéticos do risco em direção o mal de Alzheimer incluem as mutações no gene APP, particularmente as mutações na posição 717 e posições 670 e 671 referido como as mutações Hardy e Swedish respectivamente (ver Hardy, supra). Outros marcadores do risco são as mutações nos genes de presenilina, PSl e PS2 e ApoE4, histórico familiar de AD, hipercolesterolemia ou aterosclerose. Os indivíduos que apresentam os que sofrem do mal de Alzheimer podem ser reconhecidos a partir das características de demência, bem como a presença do risco dos fatores descritos acima. Além disso, um número de testes diagnósticos são disponíveis para a identificação individual de quem tem AD. Estes incluem a medição de CSF tau e níveis 4342. O nível de tau elevado e diminuído Αβ42 significa a presença de AD. Indivíduos que sofrem do mal de Alzheimer também podem ser diagnosticados pelo critério ADRDA como divulgado na seção dos Exemplos.

Nos pacientes assintomáticos, o tratamento pode começar em qualquer idade (por exemplo, 10, 20, 30). Usualmente, entretanto, não é necessário começar o tratamento até um paciente atingir 40, 50, 60 ou 70 anos de idade. O tratamento tipicamente vincula as dosagens múltiplas em um período de tempo. O tratamento pode ser monitorado pela ensaio dos níveis de anticorpo durante o período. Se as respostas falharem, uma dosagem intensificadora será indicada. No caso de pacientes potências de síndrome de Down, o tratamento pode começar no pré-natal pela administração do agente terapêutico à mãe ou brevemente após o nascimento. Os pacientes responsáveis pelo tratamento incluem os pacientes 50 a 87 anos de idade, pacientes que sofreram de mal de Alzheimer branda ou moderada, os pacientes tendo uma contagem MMSE de 14 a 26, pacientes tendo uma diagnose da provável mal de Alzheimer com base nos distúrbios comunicativos e neurológicos e critérios dos distúrbios relacionados à mal de Alzheimer e acidente vascular cerebral (NINCDS- ADRDA) e/ou pacientes tendo uma contagem isquêmica Hachinski modificada por Rosen menos do que ou igual ao 4. Os pacientes com uma avaliação MRI consistente com a diagnose do mal de Alzheimer, isto é, que não existe outras anormalidades presentes no MRI que deve ser atribuído a outras doenças, por exemplo acidente vascular cerebral, dano cerebral traumático, cistos aracnóides, tumores, etc também são responsáveis pelo tratamento.

VI. Regimes de tratamento

Nas aplicações profiláticas, agentes ou composições ou medicamentos farmacêuticos contendo o mesmo são administrado a um paciente susceptível a, ou de outra maneira no risco da, mal de Alzheimer em uma quantidade suficiente para eliminar ou reduzir o risco, diminuir a gravidade, ou atrasar o início da doença, incluindo sintomas bioquímicos, histológicos e/ou de comportamentos da doença, suas complicações e fenotipos patológicos intermediários que apresentam durante o desenvolvimento da doença. Nas aplicações terapêuticas, composições ou medicamentos são administrados a um paciente que suspeita de, ou que já sofrem de uma tal doença em uma quantidade suficiente para curar, ou pelo menos parcialmente impedir, os sintomas da doença (bioquímica, histoiógica e/ou de comportamento), incluindo suas complicações e fenotipos patológicos intermediários no desenvolvimento da doença.

Dosagens efetivas das composições da presente invenção, para o tratamento das condições descritas acima variam dependendo de muitos fatores diferentes, incluindo meios de administração, local alvo, estado fisiológico do paciente, se o paciente é humano ou um animal, outras medicações administradas e se o tratamento é profilático ou terapêutico.

Opcionalmente, os anticorpos são administrados para atingir um meio de concentração de soro do anticorpo administrado de 0,1 a 60, 0,4 a 20, ou 1 a 15 μg/ml em um paciente. Estas faixas suportam as concentrações efetivas demonstradas nos camundongos e humanos permitindo alguma margem para erro na medição e variação do paciente individual. A concentração de soro pode ser determinada pela medição atual ou predito a partir de farmacocinéticos padrão (por exemplo, WinNonline Versão 4.0,1 (Pharsight Corporation, Cary, USA)) com base na quantidade de anticorpo administrado, freqüência de administração, via de administração e vida média de anticorpo.

O meio de concentração de anticorpo no soro é opcionalmente dentro de uma faixa de 1 a 10, 1 a 5 ou 2 a 4 μg/ml. Também é opcional a uma concentração de soro máxima do anticorpo no paciente menos do que cerca de 28 μg de soro de anticorpo/ml para a maximização do benefício terapêutico relativo a ocorrência de possíveis efeitos colaterais, particularmente edema vascular. Uma concentração de soro máxima preferida está dentro de uma faixa de cerca de 4 a 28 μg de soro de anticorpo/ml. A combinação de soro máximo menos do que cerca de 28 μg de soro de anticorpo/ml e um meio de concentração de soro do anticorpo no paciente está abaixo de cerca de 7 μg de soro de anticorpo/ml sendo particularmente benéfico. Opcionalmente, o meio de concentração está dentro de uma faixa de cerca de 2 a 7 μg de soro de anticorpo/ml.

A concentração de Αβ no plasma seguindo a administração de anticorpo muda aproximadamente em paralelo com as mudanças de concentração de soro de anticorpo. Em outras palavras, a concentração de plasma de Αβ está altamente após uma dosagem de anticorpo e então declina como uma concentração de anticorpo declina entre as dosagens. A dosagem e regime da administração de anticorpo pode ser variada para obter um nível desejado de Αβ em plasma. Em tais métodos, o meio de concentração de plasma do anticorpo pode ser pelo menos 450 pg/ml ou por exemplo, dentro de uma faixa de 600 a 30000 pg/ml ou 700 a 2000 pg/ml ou 800 a 1000 pg/ml.

As faixas de dosagens preferidas pelos anticorpos são de cerca de 0,01 a 5 mg/kg e mais usualmente 0,1 a 3 mg/kg ou 0,15 a 2 mg/kg ou 0,15 a 1,5 mg/kg, do peso corporal do hospedeiro. Os pacientes podem ser administrados em tais dosagens diárias, em dias alternativos, semanalmente, quinzenalmente, mensalmente, trimestral, ou de acordo com qualquer outra lista determinada pela análise empírica. Um tratamento exemplar requer a administração das dosagens múltiplas em um período prolongado, por exemplo, de pelo menos seis meses. Os regimes de tratamento exemplares adicionais requer a administração uma vez a cada duas semanas ou uma vez ao mês ou uma vez a cada 3 a 6 meses.

Para a administração intravenosa, as dosagens de 0,1 mg/kg a 2 mg/kg e preferivelmente 0,5 mg/kg ou 1,5 mg/kg administrada intravenosamente trimestral são adequadas. As dosagens preferidas de anticorpo para a administração intravenosa ocorre na faixa de 0,1 a 1,0 mg/kg de anticorpo ou preferivelmente 0,5 a 1,0 mg/kg de anticorpo.

Para a dosagem mais freqüente, por exemplo, a partir da dosagem mensalmente a mensalmente, administração subcutânea é preferida. A dosagem subcutânea é mais fácil para administrar e pode reduzir as concentrações máximas de soro relativa a dosagem intravenosa. As dosagens usadas para a dosagem subcutânea são usualmente na faixa de 0,01 a 0,6 mg/kg ou 0,01 a 0,35 mg/kg, preferivelmente, 0,05 a 0,25 mg/kg. Para a dosagem semanalmente ou quinzenalmente, a dosagem é preferivelmente na faixa de 0,015 a 0,2 mg/kg, ou 0,05 a 0,15 mg/kg. Para a dosagem semanalmente, a dosagem é preferivelmente 0,05 a 0,07 mg/kg, por exemplo, cerca de 0,06 mg/kg. Para a dosagem semestralmente, a dosagem é preferivelmente 0,1 a 0,15 mg/kg. Para a dosagem mensalmente, a dosagem é preferivelmente 0,1 a 0,3 mg/kg ou cerca de 0,2 mg/kg. A dosagem mensalmente inclui a dosagem pelo calendário mensal ou mensal lunar (isto é, a cada quatro meses). Aqui como em outra parte na aplicação, as dosagens expressadas em mg/kg podem ser convertidos para completar as dosagens de massa para a multiplicação pela massa de um paciente típico (por exemplo, 70 ou 75 kg) tipicamente em torno de um número total. Outros regimes são descritos por exemplo, PCT/US2007/009499. A dosagem e freqüência pode ser variada dentro destas diretrizes com base no estado ApoE do paciente como debatido acima.

A quantidade de um agente para a administração ativa varia de 1 a 500 μg por paciente e mais usualmente de 5 a 100 μg por injeção para a administração humana. As dosagens exemplares por injeção são 3, 10, 30, ou 90 μg para cada injeção humana. A massa de imunogênio também depende da razão massa de epítopo imunogênico dentro do imunogênio a uma massa de imunogênio como um total. Tipicamente, IO"3 a IO"5 micromoles do epítopo imunogênico são usados para cada imunização de imunogênio. A cronometragem das injeções pode variar significantemente de uma vez ao dia, uma vez ao ano, uma vez na década. Em qualquer dado dia que a dosagem de imunogênio é dada, a dosagem é maior do que 1 μg/paciente e usualmente maior do que 10 μ§/ paciente se o adjuvante é também administrado e maior do que 10 μg/paciente e usualmente maior do que 100 μg/paciente na ausência do adjuvante. Um regime típico consiste de uma imunização seguido pelas injeções impulsionadora nos intervalos de tempo, tal como 6 semanas de intervalo. Um outro regime consiste de uma imunização seguido pelas injeções impulsionadora 1, 2 e 12 meses mais tarde. Um outro regime requer uma injeção a cada dois meses pela vida. Alternativamente, as injeções impulsionadas podem ser em uma base irregular como indicado pelo monitoramento da resposta imune. A dosagem e freqüência pode ser variada tal que os anticorpos induzidos por um agente ativo tem meios de concentração de soro dentro de uma faixa de 0,1 a 60, 0,4 a 20, ou 1 a 15 ou 2 a 7 μg/ml como na administração passiva. A dosagem e freqüência pode ser variada dentro destas diretrizes com base no estado ApoE do paciente como debatido acima.

VII. Regimes exemplares dependendo do estado do carreador

A invenção fornece os métodos de tratamento dos pacientes não carreadores tendo mal de Alzheimer (por exemplo, branda ou moderada) em que um regime efetivo de um anticorpo que especificamente liga-se a um epítopo de terminal N de Αβ é administrado a um tal paciente. O anticorpo por exemplo pode ligar-se a um epítopo dentro de resíduos Iall5Ia 7, Ia 5, ou 3 a 7 de Αβ. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. A dosagem do anticorpo pode estar dentro de uma faixa de cerca de 0,15 mg/kg a 2 mg/kg administrado pela infusão intravenosa. Opcionalmente, uma dosagem é cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 1 mg/kg A dosagem pode ser administrada por exemplo a cada 8 a 16 semanas, a cada 1 a 14 semanas ou a cada 13 semanas.

A invenção também fornece os métodos de redução do declínio cognitivo em um paciente não carreador que foi diagnosticado com mal de Alzheimer branda ou moderada. O método requer a administração de um regime efetivo de um anticorpo que especificamente liga-se a um epítopo de terminal N de Αβ a um tal paciente. O anticorpo pode ligar-se por exemplo a um epítopo dentro de resíduos 1 ali, 1 a 7, 1 a 5, ou 3 a 7 de Αβ. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. Uma dosagem do anticorpo pode estar dentro de uma faixa de cerca de 0,15 mg/kg a 2 mg/kg administrada pela infusão intravenosa. Opcionalmente, a dosagem é cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 1 mg/kg. A dosagem pode ser administrada por exemplo a semanas, a cada 1 a 14 semanas ou a cada 13 semanas. O declínio cognitivo pode ser medido pela comparação ao paciente sendo tratado com o declínio cognitivo em uma população de pacientes de controle também do estado não carreador e tendo mal de Alzheimer branda ou moderada (por exemplo, uma população de controle em um processo clínico). A capacidade cognitiva pode ser medida pela escala tal como ADAS-COG, NTB, MMSE ou CDR-SB. A taxa de mudança em uma tal escala (pontos do período de tempo) em um paciente pode ser comparado com o meio de declínio da população de pacientes de controle como descrito acima.

A invenção também fornece os métodos de redução do declínio do volume cerebral em um paciente não carreador que foi diagnosticado com mal de Alzheimer branda ou moderada. O método requer a administração de um regime efetivo de um anticorpo que especificamente liga-se a um epítopo de terminal N de Αβ a um tal paciente. O anticorpo por exemplo pode ligar-se a um epítopo dentro de resíduos 1 a 11, 1 a 7, 1 a 5, ou 3 a 7 de Αβ. Opcionalmente, o anticorpo é bapineuzumab. A dosagem do anticorpo pode estar dentro de uma faixa de cerca de 0,15 mg/kg a 2 mg/kg administrado pela infusão intravenosa. Opcionalmente, a dosagem é cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 1 mg/kg. A dosagem pode ser administrada por exemplo a cada 8 a 16 semanas, a cada 1 a 14 semanas ou a cada 13 semanas. O volume cerebral pode ser medido por MRL A mudança no volume cerebral em um paciente pode ser comparada com o meio de declínio no volume cerebral em uma população de paciente de controle também de estado não carreador e tendo o mal de Alzheimer branda ou moderado (por exemplo, uma população de controle em um processo clínico).

A invenção também fornece os métodos de tratamento do paciente não carreador tendo o mal de Alzheimer (por exemplo, branda ou moderada) em que um regime de um anticorpo que especificamente liga-se a um epítopo de terminal N de Αβ é administrado a um tal paciente. O regime é efetivo para manter um meio de concentração de soro do anticorpo na faixa de cerca de 0,1 μ§/ηι1 a cerca de 60 μ g/ml, opcionalmente 0,4 a 20 ou 1 a 5 μg/ml. Adicionalmente ou alternativamente, o regime é administrado para manter um meio de concentração de plasma de Αβ de 600 a 3000 pg/ml, 700 a 2000 pg/ml ou 800 a 100 pg/ml. Opcionalmente, o anticorpo em tais métodos é bapineuzumab.

A invenção também fornece os métodos de tratamento a um paciente que é um carreador ApoE4 e tem o mal de Alzheimer em que o anticorpo administrado tem uma mutação de região constante que reduz a ligação ao Cl q e/ou e receptores Fcy. Opcionalmente, o anticorpo é um anticorpo que liga-se a um epítopo dentro de uma região de terminal N de Αβ. Opcionalmente, o anticorpo é AAB-003. Opcionalmente, os pacientes são monitorados, por exemplo, trimestralmente, por MRI para o edema vasogênico. O edema vasogênico desenvolve a freqüência ou dosagem que pode ser reduzido ou eliminado. O edema vasogênico pode opcionalmente ser tratados com um corticosteróide. Após a resolução de edema vasogênico, a administração do tratamento pode ser resumido. Opcionalmente, a dosagem é aumentado durante o período.

A invenção também fornece os métodos de tratamento a um paciente diagnosticado com a provável mal de Alzheimer, sem considerar o estado ApoE4. Em tais métodos, um regime efetivo de um anticorpo que especificamente liga-se a uma região de terminal N de Αβ é administrado. O anticorpo tem uma mutação de região constante que reduz a ligação ao Cl q e/ou e receptor Fcy relativo a um anticorpo idêntico de uma outra maneira sem a mutação. Opcionalmente, o anticorpo é um anticorpo que liga-se a um epítopo dentro de uma região de terminal N de Αβ. Opcionalmente, o anticorpo é AAB-003. Opcionalmente, os pacientes são monitorados, por exemplo, trimestralmente, por MRI para o edema vasogênico. O edema vasogênico desenvolve a freqüência ou dosagem pode ser reduzida ou eliminada. Edema vasogênico opcionalmente pode ser tratado com um corticosteróide. Após a resolução do edema vasogênico, a administração do tratamento pode ser resumido. Opcionalmente, a dosagem é aumentada no período de tempo após a resolução do edema vasogênico.

A invenção fornece métodos de tratamento de um paciente carreador ApoE com mal de Alzheimer que compreende subcutaneamente a administração de um paciente tendo a doença de um anticorpo que especificamente liga-se a um epítopo de terminal N de Αβ. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,01 a 0,6 mg/kg e uma freqüência de entre semanalmente e mensalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,05 a 0,5 mg/kg. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,05 a 0,25 mg/kg. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,015 a 0,2 mg/kg semanalmente a semestralmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,05 a 0,15 mg/kg semanalmente a semestralmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,05 a 0,07 mg/kg semanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,06 mg/kg semanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,1 a 0,15 mg/kg semestralmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,1 a 0,3 mg/kg mensalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 0,2 mg/kg mensalmente.

A invenção também fornece os métodos de tratamento um paciente carreador ApoE4 tendo o mal de Alzheimer que compreende subcutaneamente a administração de um paciente tendo uma doença em um anticorpo que especificamente liga-se a um fragmento de terminal N de Αβ, em que o anticorpo é administrado em uma dosagem de 1 a 40 mg e uma freqüência de entre semanalmente e mensalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 5 a 25 mg. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 2,5 a 15 mg. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 1 a 12 mg semanalmente a semestralmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 2,5 a 10 mg semanalmente a semestralmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 2,5 a 5 mg semanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 4 a 5 mg semanalmente. Opcionalmente, o anticorpo é administrado em uma dosagem de 7 a 10 mg semestralmente.

VIII. Composições farmacêuticas

Agentes da invenção são freqüentemente administrados como as composições farmacêuticas que compreendem um agente terapêutico ativo, isto é uma variedade de outros componentes farmaceuticamente aceitáveis. Ver Remington1S Pharmaceutical Science (15° ed., Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania (1980)). A forma preferida depende do modo pretendido de administração e aplicação terapêutica. As composições também podem incluir, dependendo da formulação desejada, carreadores ou diluentes não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, que são definidos como veículos comumente usados para formular as composições farmacêuticas para a administração humana ou animal. O diluente é selecionado de modo como para não afetar a atividade biológica da combinação. Exemplos de tais diluentes são a água destilada, solução salina tamponada por fosfato fisiológico, soluções de Ringer, solução de dextrose e solução de Hank. Além disso, a composição farmacêutica ou formulação também pode incluir outros carreadores, adjuvantes, ou estabilizadores não imunogênicos, não terapêuticos, não tóxicos e outros.

As composições farmacêuticas também podem incluir amplas macromoléculas levemente metabolizadas tal como proteínas, polissacarídeos tal como quitosano, ácido poliláctico, ácidos poliglicólicos e copolímeros (tal como sefarose funcionalizada por látex (TM), agarose, celulose e outros), aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácido e agregados de lipídeos (tal como dropletos oleosos ou lipossomos). Adicionalmente, estes carreadores podem funcionar como agentes imunoestimulantes (isto é, adjuvantes).

Os agentes são tipicamente administrados parenteralmente. Os anticorpos são usualmente administrados intravenosamente ou subcutaneamente. Os agentes para a indução de uma resposta imune ativa são usualmente administrados subcutaneamente ou intramuscularmente. Para a administração parenteral, os agentes da invenção podem ser administrados como as dosagem injetáveis de uma solução ou suspensão da substância em um diluente fisiologicamente aceitável com um carreador farmacêutico que pode ser um líquido estéril tal como óleo aquosos, solução salina, glicerol, ou etanol. Adicionalmente, as substâncias auxiliares, tal como agentes de emulsificação ou umectantes, tensoativos, substâncias de tamponação de pH e outros podem estar presentes nas composições. Outros componentes das composições farmacêuticas são aqueles de petróleo, animal, vegetal ou de origem sintética, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de soja ou óleo mineral. Em geral, os glicóis tal como propileno glicol ou polietileno glicol são carreadores líquidos preferidos, particularmente para as soluções injetáveis. Os anticorpos podem ser administrados na forma de uma injeção de depósito ou preparação de implante, que pode ser formulado em uma tal maneira como para permitir uma liberação sustentada do ingrediente ativo.

Algumas formulações preferidas são descritas em U.S. 20060193850. Uma formulação preferida tem um pH de cerca de 5,5 a cerca de 6,5, compreende; i. em pelo menos um anticorpo Αβ em uma concentração de cerca de 1 mg/ml a cerca de 30 mg/ml; ii. manitol em uma concentração de cerca de 4 % p/v ou NaCl em uma concentração de cerca de 150 mM; iii. cerca de 5 mM a cerca de 10 mM histidina ou succinato; e iv. 10 mM de metionina. Opcionalmente, a formulação também inclui polisorbato 80 em uma concentração de cerca de 0,001 % p/v a cerca de 0,01 % p/v. Opcionalmente, a formulação tem um pH de cerca de 6,0 a cerca de 6,5 e compreende cerca de 10 mg/ml do anticorpo Αβ, cerca de 10 mM de histidina e cerca de 4 % p/v de manitol e cerca de 0,005 % p/v de polisorbato 80 Opcionalmente, a formulação tem um pH de cerca de 6,0 a cerca de 6,2 e compreende cerca de 20 mg/ml do anticorpo Αβ, cerca de 10 mM de histidina, cerca de 4 % p/v de manitol e cerca de 0,005 % p/v de polisorbato 80. Opcionalmente, a formulação tem um pH de cerca de 6,0 a cerca de 6,2 e compreende cerca de 30 mg/ml do anticorpo Αβ, cerca de 10 mM de histidina, cerca de 4 % p/v de manitol e cerca de 0,005 % p/v de polisorbato 80.

Tipicamente, as composições são preparadas como injetáveis, como soluções ou suspensões líquidas; formas sólidas adequadas para a solução em, ou suspensão em, veículos líquidos antes da injeção também pode ser preparado. A preparação também pode ser emulsificada ou encapsulada em lipossomos ou micropartículas tal como polilactídeo, poliglicolídeo, ou copolímero para a efeito adjuvante intensificado, como debatido acima (ver Langer, Science 249: 1527 (1990) e Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28:97 (1997)). Os agentes desta invenção podem ser administrados na forma de uma injeção de depósito ou preparação de implante, que pode ser formulado em uma tal maneira como para permitir a liberação sustentada ou pulsátil do ingrediente ativo.

As formulações adicionais adequadas para outros modos de administração incluem aplicações orais, intranasais e formulações pulmonares, supositórios e transdérmicos. Para os supositórios, os ligadores e carreadores incluem, por exemplo, polialquileno glicóis ou triglicerídeos; tais supositórios podem ser formados a partir de misturas contendo o ingrediente ativo na faixa de 0,5 % a 10 %, preferivelmente 1 % a 2 %. As formulações orais incluem excipientes, tal como grau farmacêutico de manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina de sódio, celulose e carbonato de magnésio. Estas composições tomam a forma de soluções, suspensões, tabletes, pílulas, cápsulas, formulações de liberação sustentada ou pós e contém 10 % a 95 % do ingrediente ativo, preferivelmente 25 % a 70 %. IX. Kits e rótulos

A invenção fornece kits contendo uma ligação de anticorpo a

um epítopo de terminal N de Αβ. O anticorpo é tipicamente fornecido na forma de solução ou liofilizado em um frasco, opcionalmente em uma dosagem simples. O anticorpo no frasco é tipicamente estéril e fabricado sob as condições GMP. Os kits também podem incluir diluentes, seringas, agulhas, gotejamento intravenoso ou subcutâneo e outros. Os kits tipicamente contém instruções (por exemplo, uma embalagem inserida ou rótulo) para o uso. Em alguns kits, as instruções específicas se o anticorpo será fornecido aos carreadores ApoE4 ou não carreadores ou podem ser fornecidos por ambos. As instruções também pode especificar que o anticorpo não será fornecido aos carreadores ApoE4. Em alguns kits, as instruções podem fornecer a informação ou fontes para o teste ApoE.

Em alguns kits, as instruções especificamente resultam e que podem ser atingidos pela administração do anticorpo. Os resultados podem incluir uma inibição de um declínio cognitivo. As instruções também podem incluir a medição de Declínio cognitivo em um paciente controle (tipicamente um valor médio a partir da população de tais pacientes) para os propósitos da comparação. Declínio cognitivo pode ser medido, por exemplo, ADAS-COG, NTB, MMSE ou CDR-SB Do mesmo modo, as instruções pode referir a inibição da diminuição de um volume cerebral ou inibição do volume ventricular. As instruções também podem incluir a medição da diminuição do volume cerebral ou inibição do volume ventricular em um paciente controle (tipicamente um valor médio a partir da população de tais pacientes para os propósitos da comparação).

Em alguns kits, as instruções especificam os efeitos colaterais potenciais incluindo edema vasogênico. As instruções também podem especificar um regime de monitoramento, tal como a realização de MRI nos intervalos trimestrais, seis meses ou anuais. As instruções podem especificar os regimes de monitoramento diferentes pelos carreadores e não carreadores ApoE4 como debatido acima. As instruções também podem especificar a lista de dosagem alterada na ocorrência e/ou resolução do edema vasogênico e tratamento medido para o edema vasogênico, tal como corticosteróides.

Os kits também podem incluir as instruções para os pacientes para quem o tratamento é contraindicado tal como antes do dano cerebral, CVA, tumor cerebral, lacunas múltiplas, doença venotrombótica, anticoagulação (heparina/coumadina) ou fibrilação atrial. Os kits também podem fornecer as instruções para a via (por exemplo, subcutânea), quantidade de dosagem ou freqüência de dosagem. X. Anticorpos com a região constante IgGl mutada

A invenção fornece uma região constante IgGl humana, em que os aminoácidos nas posições 234, 235 e 237 (numeração EU) são cada alanina e anticorpos isolados ou proteínas de fusão contendo uma tal região constante. Tais anticorpos incluem anticorpos humanos, anticorpos humanizados e anticorpos quiméricos como descrito acima. Exemplos de tais anticorpos incluem anticorpos a anticorpos Αβ, anticorpos ao antígeno de Lewis Yeo antígeno de tumor 5T4, tal como descritos nos Exemplos. As proteínas de fusão incluem os domínios extracelulares dos receptores (por exemplo, TNF-alfa receptor) ligado a uma região constante. O métodos para a fiisão ou conjugação dos polipeptídeos como as regiões constantes de anticorpos são descritos por, por exemplo, Patente U.S. N°. 5.336.603, 5.622.929, 5.359.046, 5.349.053, 5.447.851, 5.723.125, 5.783.181, 5.908.626, 5.844.095, 5.112.946; EP 0 307 434; EP 0 367 166; EP 0 394 827).

Os anticorpos ou proteínas de fusão que incorporam estas mutações podem oferecer as vantagens do Isotipo IgGl incluindo farmacocinéticos e bem estar do fabricante, mas também tem reduzido ou eliminado a função efetiva relativa a um anticorpo idêntico de outra maneira que perde estas mutações. A função efetiva é tipicamente prejudicada na ligação de um ou mais receptores de gama Fc5 ligação ao Clq, citotoxicidade celular dependente do anticorpo e/ou atividade de complemento dependente do anticorpo. Em alguns anticorpos, todos destas atividades são reduzidas ou eliminadas. Uma atividade é considerada eliminada se não existe diferença detectável além do erro experimental em que a atividade entre um anticorpo tendo as três mutações acima e um anticorpo de controle idêntico de outra maneira sem as mutações.

Tipicamente, uma região constante mutada inclui domínios CHI, de junta, CH2 e CH3. Entretanto, o domínio CHl é algumas vezes substituído particularmente nas proteínas de fusão com um ligador sintético. Algumas regiões constantes contém uma região constante IgG 1 de comprimento total com a exceção possível de um resíduo de lisina do terminal C. As seqüências exemplares de uma região constante mutada são fornecidas pela SEQ ID N°: 62 e 63. Estas seqüências diferem-se de 62 e contém uma lisina de terminal C não presente em 63.

As seqüências 62 e 63 representam o alotipo Glmz do IgGl humano. Outros exemplos de alotipos foram fornecidos acima. Os alotipos são variações polimórficas naturais na região constante IgGl humana que difere-se entre os indivíduos diferentes na posição polimórfica. O alotipo Glmz tem Glu na posição 356 e Met na posição 358.

Outras variantes alotípicas da SEQ DD N°S. 62 e 63 são incluídas. Também incluídas são as regiões constantes IgGl humanas tendo um resíduo de alanina nas posições 234, 235 e 237 e qualquer permutação dos resíduos que ocupam as posições polimórficas em alotipos naturais.

As regiões constantes IgGl mutadas tendo uma alanina nas posições 234, 235 e 237 podem ter as mutações adicionais presentes relativas a uma região constante IgGl humana natural. Como um exemplo em que as mutações adicionais podem estar presentes, as mutações de alanina nas posições 234, 235 e 237 podem ser combinadas com as mutações nas posições 428 e/ou 250 como descrito em U.S. 7.365.168. As mutações nas posições 428 e 250 pode resultar na vida média aumentada. As mutações adicionais que podem ser combinadas com as mutações nas posições 234, 235 e 237 foram descritos na seção IV A em conexão com os anticorpos que ligam-se ao Αβ. Algumas de tais regiões constantes não tem as mutações adicionais presentes. Algumas de tais regiões constantes não tem as mutações adicionais presentes em torno das regiões da região constante IgGl que afeta o receptor gama Fc e/ou ligação de complemento (por exemplo, resíduos 230- 240 e 325-325 pela numeração EU). A omissão de um resíduo de lisina do terminal C pelo processamento intracelular não é considerado a ser uma mutação. Do mesmo modo, os aminoácidos de ocorrência natural que ocupam os locais polimórficos que diferem-se entre os alotipos sã considerados naturais antes do que aminoácidos mutantes. XI. Modelos experimentais, ensaios e diagnósticos A. Modelos animais

Tais modelos incluem, por exemplo, camundongos que carregam uma mutação 717 (numeração APP770) de APP descrito por Games et al, supra e os camundongos que carregam um 670/671 (numeração APP770) mutação de Swedish APP tal como descrito por McConlogue et al, U.S. 5.612.486 e Hsiao et al, Science, 274, 99 (1996); Staufenbiel et al, Proc. Natl. Acad. Scl USA, 94:13287-13292 (1997); Sturchler-Pierrat et al, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 94:13287-13292 (1997); Borchelt et al, Neuron, 19:939-945 (1997)); Richards et al, J. Neurosci. 23:8989-9003, 2003; Cheng, Nat Med. 10(11): 1190-2, 2004 Hwang et al, Exp Neurol. 2004 Mar..

As mutações de APP adequadas pela inclusão nos animais transgênicos incluem a conversão do códon Val 717 de tipo selvagem (numeração APP770) a um códon por lie, Phe, Gly5 Tyr, Leu, Ala, Pro, Trp, Met, Ser, Thr, Asn, ou Gln. Uma substituição preferida por Val 717 é Phe. Uma outra mutação adequada é a mutação arctica E693G (numeração APP 770). O camundongo PSAPP, que tem tanto proteína precursora amilóide quanto transgenes de preselina, é descrito por Takeuchi et ai, American Journal of Pathology. 2000; 157:331 a 339. Um camundongo transgênico triplo tendo uma proteína precursora de amilóide, transgenes tau e preselina é descrito por LaFerla, (2003), Neuron 39, 409-421. Um outro camundongo transgênico útil tem tanto transgenes APP quanto TGF-β. As seqüências que codifica a proteína nos transgenes estão na ligação operável com um ou mais elementos reguladores adequados pela expressão neural. Tais elementos incluem o PDGF, antes da proteína e promotores Thy-1. Um outro camundongo transgênico útil tem um transgene APP com tanto uma mutação Swedish quanto 717. Um outro camundongo trangênico útil tem um transgene APP com uma mutação arctica (E693G). B. Ensaios para detectar as patologias relacionadas amilóide

Ensaios de condicionamento do medo contextual. O condicionamento do medo contextual (CFC) é uma forma comum de aprender que é excepecionalmente confiável e rapidamente adquirido em muitos animais, por exemplo, mamíferos. Os animais de teste aprendem a temer previamente os estímulos neutros e/ou ambiente por causa de sua associação com uma experiência aversiva. (ver, por exemplo, Fanselow, Anim. Learn. Behav. 18:264-270 (1990); Wehner et al, Nature Genet. 17:331 a 334. (1997); Caldarone et al., Nature Genet. 17:335-337 (1997)).

O condicionamento de medo contextual é especialmente útil para a determinação da função cognitiva ou disfunção, por exemplo, como um resultado da doença ou distúrbio, tal como um distúrbio ou doença neurodegenerativa, uma doença ou distúrbio relacionado ao Αβ, uma doença ou distúrbio amilodogênico, a presença de uma alteração genética não favorável que efetua a função cognitiva (por exemplo, mutação genética, rompimento do gene, ou genotipo não desejado) e/ou a eficácia de um agente, por exemplo, um agente conjugado Αβ, na capacidade cognitiva. Consequentemente, o ensaio CFC fornece um método para testar independentemente e/ou validar o efeito terapêutico de agentes para a prevenção ou tratamento de uma doença ou distúrbio cognitivo e em particular, uma doença ou distúrbio que afeta uma ou mais regiões do cérebro, por exemplo, o hipocampos, subiculum, córtex cingulado, córtex pré-frontal, córtex peririnal, córtex sensorial e lobo temporal mediano (ver U.S. 2008145373).

C. Ensaios de fagocitose para determinar a função efetiva de anticorpo

Os anticorpos podem ser avaliados para ajustar um depósito amilóide em um ensaio ex vivo. Uma amostra do tecido do cérebro de um paciente com o mal de Alzheimer ou um modelo animal tendo as características da patologia de Alzheimer é contactado com as células fagocíticas que carregam um receptor Fcy, tal como células microgliais e o anticorpo sob o teste em um meio in vitro. As células fagocíticas podem ser uma cultura primária ou uma linha celular, tal como BV-2, C8-B4, ou THP-1. Uma série de medições é feito da quantidade do depósito amilóide ma mistura de reação, partida a partir do valor da linha de base antes da reação tem procedido e um ou mais valores testados durante a reação. O antígeno pode ser detectado pelo tingimento, por exemplo, com um anticorpo fluorescente rotulado ao Αβ ou outro componente ou de placas amilóides. Uma redução relativa à linha de base durante a reação dos depósitos amilóides que indicam o anticorpo sob o teste tem a atividade de ajuste.

Geralmente, os controles de isotipo são adicionados para garantir que a interação do receptor Fc-Fcy está sendo observado. Os controles adicionais incluem o uso de anticorpos não específicos e/ anticorpos com uma afinidade conhecida para os receptores Fyc nas células fagocíticas. Tais ensaios podem ser realizados com tecidos humanos ou não humanos e células fagocíticas e humanas, não humanas, ou anticorpos humanizados.

Uma variação no ensaio de fagocitose ex vivo elimina a necessidade para o tecido contendo AR, embora ainda permitindo a detecção da interação entre um anticorpo particular e os receptores Fcy. Neste caso, o ensaio alivia em uma matriz sólida que é revestida com o anticorpo. A matriz sólida é geralmente em uma forma que pode ser engolfado por uma célula fagocítica, por exemplo, uma pérola ou partícula a fim dos nanômetros por diversos mícrons no tamanho. A matriz sólida pode ser conjugada a uma porção detectável, por exemplo, um fluoróforo, de modo que a partícula pode ser traçada. Os kits e materiais para os ensaios de fagocitose destas classes são comercialmente disponíveis, por exemplo, de Beckman Coulter (Fullerton, CA) e Molecular Probes (Eugene, ou). Um exemplo de um tal ensaio é fornecido na seção do exemplo. Ensaios de ligação complementar

A função efetiva de anticorpo também pode ser determinada pela detecção da capacidade de um anticorpo para interagir com o complemento, em particular, o polipeptídeo Clq (ver, por exemplo, Mansouri et al. (1999) Infect. Immun. 67:1461). No caso de anticorpo específico por Αβ, uma matriz sólida (por exemplo, uma placa de reservatório múltiplo) pode ser revestida com Αβ e exposto ao anticorpo e, em volta, exposto ao Clq rotulado. Alternativamente, Clq pode ser ligado à matriz e anticorpo rotulado adicionado. Alternativamente, o anticorpo podem ser ligado à matriz e exposto ao Clq, seguido pela detecção de Cia. Tais ensaios de ligação in vitro são comuns na técnica e são responsáveis pela modificação e otimização como necessário. E. Métodos diagnósticos

Ferramentas de avaliação da função cognitiva. Diversas ferramentas existem para quantificar a cognição e função mental dos pacientes de demência. Estes incluem o critério NTB, DAD, ADAS, MMSE, CDR-SOB, NINCDS-ADRDA e a contagem RMHI (Rosen Modified Hachinski Ischemic). Estas ferramentas são geralmente conhecida na técnica.

O NTB (Neuropsychological Test Battery) é composto de nove testes bem aceitáveis de memória e função executiva. A bateria teste é aceitável na orientação mais recente EMEA. Os pacientes são geralmente avaliados no seguinte teste de periodicamente de memória: Weschsler Memòry Scale Visual Paired Associates; Weschsler Memory Scale Verbal Paired Associates; e Rey Auditory Verbal Learning Test. The Executive fiinction tests incluem: Wechsler Memory Scale Digit Span; Controlled Word Association Test; e Category Naming Test Este teste é sensível para mudar nos pacientes AD brandos e efeitos clínicos dos agentes inferiores amilóides.

O teste DAD (Disability Assessment for Dementia) foi desenvolvido e validado para medir a incapacidade funcional de pacientes com o mal de Alzheimer (Gelinas et al. (1999) AmJOccup Ther 53:471-81). Os cuidadores fazem perguntas sobre a capacidade do paciente para realizar tanto as atividades básicas quanto as instrumentais na vida diária que foram tentadas no procedimento de duas semanas. A proporção das atividades DAD foi completada de maneira bem sucedida fora aquelas tentadas é então determinada e relatada como uma porcentagem.

O ADAS-Cog refere-se a porção cognitiva da escala de avaliação do mal de Alzheimer (ver Rosen, et al. (1984) Am JPsyehiatry 141:1356-64). O teste que consiste de onze tarefas que mede a perturbações na memória, linguagem, atividade prática, aplicação e outras capacidade cognitivas.

O NINCDS-ADRDA (distúrbios neurológicos e comunicativos e avaliação dos distúrbios relacionados ao acidente vascular cerebral - mal de Alzheimer) que mede oito critérios afetados em Alzheimer: memória, linguagem, habilidade perceptiva, atenção, capacidades construtivas, orientação, resolução de problemas e capacidade funcionais (McKhann et al. (1984) Neurology 34: 939-44)

O MMSE (Mini Mental State Exam), CDR-SOB (Clinicai Dementia Rating- Sum de contagem Boxes e RMHI (Rosen Modified Hachinki Ischemic) também são conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Folstein et ai. (1975) JPsych Res 12: 189-198; Morris (1993) Neurology 43: 2412-2414; e Rosen et al. (19S0) Ann Neurol 17:486-488).

Biomarcadores. Os biomarcadores para a simptomologia de AlzheimertS em humanos podem ser medidos usando os MRI volumétricos, sangue e níveis de proteína CSF e PET (topografia de emissão positron). Por exemplo, os biomarcadores para suportar o compromisso de anticorpo-Αβ e incluem Αβ40 e Αβ42 no CSF e plasma e imagem da placa de amilóide, por exemplo, por PET. Os biomarcadores que aponta a modificação da doença que inclui a morfologia cerebral (MRI), CSF tau e níveis fosfotau e novamente imagem de placa amilóide. XII. EXEMPLOS

Exemplo 1: Ensaio de Fase 1

111 pacientes com uma diagnose da provável mal de Alzheimer (branda ou moderada) foram administradas ao anticorpo humanizado bapineuzumab em dosagens que variam de 0,15 a 2,0 mg/kg em um estudo de dosagem ascendente múltiplo (MAD). O anticorpo foi administrado pela infusão intravenosa a cada treze semanas até o regime de dosagem ser completo. Os pacientes também foram classificados para o estado ApoE4. Tabela 2 mostra que onze pacientes no estudo do edema vasogênico experimentado detectado pelo MRI. Tabela 2 também mostra os sintomas experimentados em alguns destes pacientes; em outros pacientes no edema vasogênico foi assintomático. Tabela 3 mostra o risco do edema vasogênico estratificado pelo genotipo irrespectivo de dosagem. O risco é apenas 2 % nos pacientes que perdem um alelo E4 mas é 35 % nos pacientes com dois alelos E4. Tabela 4 mostra o risco do edema vasogênico em apenas o 5

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mais alto grupo de dosagem (2 mg/kg). O risco de edema vasogênico para os pacientes com dois alelos E4 é 60 % e que para os pacientes com um alelo é 35 %.

Tabela 5 mostra o risco do edema vasogênico nas dosagens diferentes. O risco de edema vasogênico é muito baixo para todos os genotipos para as dosagens entre 0,15 a 0,5 mg/ml mas começa a tornar-se significante para os pacientes com dois alelos E4 em uma dosagem de 1 mg/kg e para pacientes com um alelo E4 a 2 mg/kg. Estes dados indicam que o risco de edema vasogênico é dependente tanto do genotipo de ApoE quanto da dosagem e pacientes.

TABELA 2

Estudo Dosagem (mg/kg) Dosagem # Estado E4 Sintomas SAD 2 1 ND - SAD 5 1 ND - SAD 5 1 ND vertigem, confusão MAD 0,15 4/4 Andar anormal, confusão MAD 1 1 4/4 Visual MAD 1 1 4/4 - MAD 1 3/4 - MAD 2 1 4/4 - MAD 2 1 3/4 - MAD 2 1 4/4 Confusão MAD 2 1 3/4 - MAD 2 1 3/4 HA, letargia, confusão MAD 2 2 3/4 - PET 2 1 3/4 - MAD 2 3 4/4 -

TABELA 3

Genotipo ApoE4 (alelos) Genotipo de caso VE / Casos VE totais % de casos VE Casos VE/pacientes expostos % de pacientes expostos 2 6/11 55% 6/17 35% 1 4/11 36% 4/52 8 % 0 1/11 9% 1/42 2%

TABELA 4

Genotipo ApoE4 (alelos) Genotipo de casos VE / Casos VE totais % de casos VE CasosVE /pacientes expostos % de pacientes expostos 2 3/7 43 % 3/5 60 % 1 3/7 43 % 3/9 33 % 0 1/7 14% 1/14 7%

TABELA 5

Número de pacientes (Número de desenvolvimento do edema vasogênico

Cópia ApoE4 # 0,15 mg/kg 0,5 mg/kg 1,0 mg/kg 2,0 mg/kg 0 13(0) 11(0) 9(0) 14(1) 1 15(0) 14(0) 14(1) 9(3) 2 3(1) 4(0) 5(2) 5(3) Exemplo 2: Ensaio de Fase 2

Um estudo de dose ascendente múltipla controlada por placebo cego duplo aleatório foi conduzido em uma população de 234 pacientes aleatorizados a partir da população inicial de 317 pacientes avaliados. Os pacientes foram avaliados para o estado do carreador ApoE4, mas os carreadores (homozigotos e heterozigotos) e não carreadores receberam o mesmo tratamento. O critério de inclusão foi: diagnose AD provável; 50 a 85 anos de idade; contagem MMSE 16-26; contagem isquêmica Hachinski modificada por Rosen <_4; vivendo em casa ou em uma comunidade com um cuidador capaz; MRI consistente com diagnose de AD; avaliação MRI de qualidade suficiente para a análise volumétrica; dosagens estáveis de medicação para o tratamento de condições não excluídas; dosagens estáveis de AchEls e/ou memantina por 120 dias antes da avaliação. O principal critério de exclusão foi: manifestação corrente de um maior distúrbio psiquiátrico (por exemplo, maior distúrbio depressivo); doença sistêmica corrente provavelmente para resultar na deterioração da condição do paciente; histórico ou evidência de uma doença ou distúrbio auto imune clinicamente importante do sistema imune; histórico de qualquer um dos seguintes: acidente vascular cerebral clinicamente evidente, carótida clinicamente importante ou placa/estenose basilar vertebral, apreensão, câncer dentro dos últimos 5 anos, dependência de álcool/medicamento dentro dos últimos 2 anos, infarto do miocárdio dentro do últimos 2 anos, uma doença neurológica significante (outro do que AD) que pode afetar a cognição. Os kits da invenção e seus rótulos e embalagens de acompanhamento inseridos podem fornecer as exclusões para o encontro dos pacientes com qualquer um dos critérios de exclusão acima e qualquer subcombinações destes.

Quatro níveis de dosagem foram utilizados (0,15, 0,5, 1,0 e 2,0 mg/kg) juntos com um placebo. 124 pacientes receberam o bapineuzumab e 110 receberam um placebo. Aqueles pacientes, 122 e 107, respectivamente, foram analisados por sua eficácia. O Bapineuzumab foi fornecido como uma solução aquosa estéril em frascos de 5 ml contendo: 100 mg de bapineuzumab (20 mg/mL), 10 mM de histidina, 10 mM de metionina, 4 % manitol, 0,005 % de polisorbato-80 (derivado de vegetal), pH de 6.0. O placebo foi fornecido em frascos de comparação contendo os mesmos constituintes exceto por bapineuzumab. O estudo da medicação foi diluído na solução salina normal e administrado como uma infusão intravenosa de 100 ml (IV) em 4 horas.

O período de tratamento foi 18 meses com 6 infusões intravenosas no intervalo de 13 semanas. A segurança seguiu as visitas, incluindo as avaliações MRI ocorridas em 6 semanas que seguem cada dosagem. O seguinte paciente do período de tratamento foram monitorados com uma segurança de 1 ano seguido pelo tratamento continuado na extensão de rótulo aberto. O objetivo principal dos ensaios foi para avaliar a segurança e tolerabilidade de bapineuzumab nos pacientes com mal de Alzheimer branda ou moderada. Os pontos finais primários para o estudo foram (subescala cognitiva de escala de avaliação do mal de Alzheimer (ADAS-Cog), escala de avaliação de incapacidade por demência (DAD) junto com a segurança e tolerabilidade). O ADAS-Cog 12 contém um teste adicional que envolve a recordação atrasada de dez itens da lista de palavras relativo ao ADAS-Cog 11. O objetivo secundário do estudo foi para avaliar a eficácia de bapineuzumab nos pacientes com doença de Alzhiemer. Outros pontos finais foram bateria de testes neuropsicológicos (NTB), inventário neuropsiquiátrico (NPI), Soma da classificação de demência clínica de caixas (CDR-SB), medições volumétricas do cérebro MRI e CSF.

Um resumo da população total, as populações analisadas pelo grupo de dosagem e populações analisadas pelo estado carreador é fornecido são as seguintes tabelas.

Tabela 6

Características demográficas e de pacientes Todos os Placebo N=I 07 Todos os Bapineuzumab N= 122 Idade 67,9 70,1 Gênero ( % F) 59,8 50,0 Classificação ( % de caucasiano) 95,3 96,7 Anos desde o início 3,7 3,5 ApoE4 ( % do carreador) 69,8 60,5 Avaliação MMSE 20,7 20,9 % Colinesterase ou Uso de Memantina 96,3 95,1 TABELA 7

Bapineuzumab MMSE média Idade média Duração de doença Gravidade da doença % Do carreador APOE Con Alz Meds # de pacientes Bravo Moderado Linha de base Wk 78 0,15 mg/kg 20 70 4 29% 71 % 64% 100% 31 24 Placebo 20 64 4 33 % 65% 46% 96% 26 17 0,5 mg/kg 21 71 4 48% 51 % 58% 91 % 33 17 Placebo 21 69 4 43% 57% 86% 93% 28 21 1,0 mg/kg 21 69 3 43 % 55% 69% 97% 29 25 Placebo 21 69 4 36% 69% 75 % 93 % 26 21 2,0 mg/kg 2 70 3 63% 34% 53 % 90% 29 17 Placebo 21 69 3 56% 44% 70% 100% 27 22 Todos os Bapineuzumab 21 70 4 46% 53% 61 % 95% 122 83 Todos os Placebo 21 68 4 42% 59% 69% 96% 107 81

TABELA 8

Carreador Não carreador Placebo N=74 Bapineuzumab N=72 Placebo N=32 Bapineuzumab N=47 Idade 68,6 71,2 66,1 69,1 Gênero ( % F) 59,5 48,6 62,5 51,1 Classificação ( % Caucasiano) 97,3 97,2 90,6 95,7 Anos desde o início 3,8 3,7 3,5 3,0 Avaliação MMSE 21,0 20,6 19,8 21,4 % Colinesterase ou Uso de Memantina 95,9 98,6 96,9 89,4

Comparação de vários coorte de dosagem com placebo usando

um modelo linear de declínio cognitivo em escalas ADAS-COG e DAD não atinge a significância estatística por qualquer um do coorte de dosagem ou população de coorte de dosagem combinada.

Os dados foram reanalisados usando um modelo estatístico não assumindo o declínio linear (a) com base em todos dos pacientes em que a eficácia foi determinado e (b) com base apenas em pacientes que tem recebido todas as seis dosagens ("completadores") e não inclui os pacientes que tem gotejado por várias razões. O modelo não linear é acreditado ser mais exato por causa das capacidades cognitivas não necessariamente o declínio linear com o tempo.

Os resultados usando o modelo de declínio não linear para todos dos pacientes em que a eficácia foi determinado (carreadores ApoE4 e não carreadores combinados) são mostrados na Figura 1. A análise MITT (plano modificado para tratamento) foi feito usando o modelo de medição repetido sem suposição da linearidade. Barras acima do eixo X representa um resultado favorável (isto é, declínio inibido) relativo ao placebo. Embora a significância estatística não foi obtida, uma direção foi observada pelo coorte de dosagem combinado usando as escalas ADAS-cog e NTB (0,1 > p>0,05) .

Os resultados para as populações completas (carreadores ApoE4 e não carreadores combinados) são mostrados na Fig. 2. Os completadores foram definidos como pacientes que receberam todas as 6 infusões e uma avaliação da eficácia na semana 78. Barras acima do eixo indica o melhoramento relativo ao placebo. A importância estatística foi obtida pelo coorte de dosagem combinado pelas medições ADAS-cog e DAD e uma direção positiva (0,1 > p>0,05) foi observado pela medição NTB.

As análise separadas foram realizadas pelos carreadores ApoE4 e não carreadores usando o modelo não linear e (a) todos os pacientes tratados em que a eficácia foi determinada e (b) completadores.

A Fig. 3 mostra os resultados por todos os pacientes do carreador ApoE4 em que a eficácia foi medida. A importância estatística não foi observada por qualquer uma das escalas cognitivas. Novamente, a análise MITT usada pelo modelo de medição repetida sem a suposição da linearidade. A Fig. 4 mostra a análise para os completadores carreador ApoE4, como definido acima. Novamente, a importância estatística não foi observada por qualquer uma das escalas (ADAS-cog, DAD, NTB e CDR-SB). Entretanto, as mudanças direcionais favoráveis (barras acima do eixo) foram observados particularmente pelas medições ADAS-cog e DAD.

As Figs. 5 e 6 mostram os resultados por todos os pacientes ApoE4 não carreadores em que a eficácia foi medida. A importância estatística foi obtida pelas medições ADAS-cog, NTB, CDR-SB e MMSE para o coorte de dosagem combinado. Barras acima do eixo indica o melhoramento relativo ao placebo. A Fig. 9 mostra a análise do período de tempo destes parâmetros (ADAS-cog, esquerda superior, DAD, direita superior, NTB, esquerda inferior, CDR-SB, direita inferior). O declínio no desempenho cognitivo para os paciente tratados foi menos do que do placebo em todos os período de tempo nas escalas ADAS-cog, NTB e CDR-SB. As Figs. 7 e 8 mostram a análise pelos completadores não carreador ApoE4, como definido acima. A importância estatística ainda foi obtida pelas medições ADAS-cog, NTB, CDR-SB e MMSE. Novamente, barras acima do eixo indica o melhoramento relativo ao placebo.

O MRI foi realizado até sete vezes por paciente durante o estudo de seis semanas após cada infusão. As mudanças no cérebro foram avaliadas pelo volume cerebral, volume ventricular, mudança integral do limite do cérebro e mudança integral de limite ventricular. A mudança integral de limite (BSI) como uma medição de mudanças do volume cerebral de avaliações de ressonância magnética tri-dimensional repetida registrada. O BSI determina o volume total direto dos limites de uma dada estrutura cerebral que tem movido e, consequentemente, a mudança no volume, diretamente a partir de intensidades voxel. A mudança integral ventricular é uma medição similar das mudanças do espaço ventricular. Ambos estes parâmetros aumentam os progressos do mal de Alzheimer. Deste modo a inibição do aumento destes parâmetros relativos ao placebo mostram um efeito positivo (isto é, desejado) de tratamento.

Na população tratada total (carreadores e não carreadores) nenhuma diferença significante foi observada pelas mudanças no volume cerebral medido pela mudança integral do limite cerebral ou volume ventricular medido pela mudança integral do limite ventricular em 78 semanas comparadas com a população de placebo.

No declínio do volume da população de carreador não tratado ApoE4 foi significantemente inferior do que a população não placebo ApoE4 (significa -10.7 cc; 95 % Cl: -18.0 a -3.4; p=0.004). O aumento no volume ventricular comparado ao placebo também foi reduzido mas a mudança não atinge a significância estatística. Não existiu mudança significante no volume cerebral comparado com a população de placebo ApoE4. Entretanto, o volume ventricular aumentado significantemente comparado ao placebo (significa 2,5 cc; 95 % Cl: 0,1 a 5,1; p=0,037).

As mudanças de BBSI na população total, população do carreadora ApoE4 e população não carreadora ApoE4 são mostrados nas Figs. a 12. Fig. 12 (ApoE4 não carreador) mostra uma separação estatisticamente significante entre as linhas para os pacientes tratados e placebo. A mudança no volume cerebral foi reduzida na população tratada relativa ao placebo em todos os pontos do período medido. A Fig. 10 (carreadores ApoE4 combinados e não carreadores) mostra a separação das linhas para os pacientes placebo e tratados mas os resultados não atingem uma significância estatística. A Fig. 11 (carreadores ApoE4) mostram as linhas para os pacientes placebo e tratados são virtualmente superimpostos. A análise usada repetida mede o modelo com o período como ajuste categórico para o estado do carreador ApoE4. A linha de base foi o volume cerebral total e camada MMSE.

Uma direção foi observada para a redução em CSF fosfo-tau na população de paciente tratado por bapineuzumab relativo à população tratada por placebo em 52 semanas nos ensaios (Fig. 13). O Fosfo-tau é um biomarcador associado com o mal de Alzheimer. Nenhuma diferença significante foi observada entre os níveis CSF de tau e Al 342 entre todos os pacientes tratados e controles. A figura é com base na análise ANCOVA, ajustado pelo valor da linha de base. Um animal fora do cercado foi excluído na coorte de dose de placebo de 0,15 mg/kg.

O tratamento foi, em gerai, seguro e bem tolerado. O edema vasogênico (VE) ocorrido apenas nos pacientes tratados por bapineuzumab. O VE ocorrido com maior freqüência em carreadores ApoE4 (10) do que em não carreadores (2) e em maior freqüência com a dosagem aumentada, sendo 8, 3, 0 e 1 episódios nas dosagens de 2,0, 1,0, 0,5 e 0,15 mg/kg respectivamente. Todos os episódios VE ocorreram após a primeira e a segunda dosagem. Mais episódios de VE foram detectados apenas por MRI e não tem sintomas clínicos detectados. Os episódios VE resolvidos em semanas a meses. Em um paciente, o VE foi tratado com esteróides. Excluindo VE e a exclusão de coorte 0,15 mg/kg (que os pacientes contidos com mais doenças avançadas do que outros coortes), sérios eventos adversos foram similares entre os grupos tratados e placebo. Os eventos adversos foram geralmente brandos ou moderados, transientes, considerados não relacionados no estudo do medicamento, ocorrido relativamente em pequenas proporções de pacientes e não parecem ser relacionados a dosagem.

A concentração de soro do bapineuzumab e concentração de plasma de Αβ foram medidas nos pacientes tratados no período para o coorte diferente de dosagem como mostrado na Fig. 14. O Cmax pelo bapineuzumab do soro variou de cerca de 3,5 a 50 μg/ml no coorte diferente de dosagem de 0,15 mg/kg a 2,0 mg/kg. O perfil da concentração média de plasma de Αβ refletiu aquele do bapineuzumab do médio com a concentração de plasma Αβ que levanta a dosagem com bapineuzumab e diminui como uma concentração de bapineuzumab diminuída.

A concentração de plasma Αβ variou de cerca de 500 a 3000 pg/ml. A variação da concentração de plasma de Αβ entre coorte diferente de dosagem mostrou menor variação do que a variação entre as doses. Por exemplo, aumento da dosagem de 0,15 mg/kg a 2 mg/kg aumento de plasma Αβ por cerca de um fator de 2.

Os parâmetros PK após a primeira infusão de bapineuzumab são resumidos na Tabela 9 abaixo.

TABELA 9

Dosagem( Cmax Cmédia Cmin Tmax AUCinf CL/F Vz/F T% mg/kg) (pg/mL) (pg/mL) (pg/mL) (dias) (pg»h/mL) (mL/hr/kg) (mL/kg) (dias) 0,15 4,6 0,7 0,1 í 0,1 1794 0,09 76,2 26,7 0,5* 17,7 3,0 1,1 í 0,4 7165 0,07 63,7 26,4 1,0 28,0 5,5 1,8 í 0,1 13499 0,08 75,4 28,4 2,0 56,3 9,5* 1,7 í 0,1 21802* 0,09* 65,8* 20,5*

N=6 a não ser de outra maneira especificado; *n=5 Φ - valores de depressão da 2° infusão; todos os limites dos valores abaixo da quantificação para a depressão da 1 ° infusão

Abreviações: Cavg- Concentração média em 13 semanas; Cmin - Concentração mínima ("depressão"); Tmax - Período de concentração máxima; AUC inf - Concentração sob área versos curva do período extrapolado pela infinidade; CLss/F - razão da liberação extravascular no estado fixo (CLss) e extensão da biodisponibilidade (F); Vz/F - razão do volume aparente da distribuição no estado fixo (Vz) e F; t 1/2 - aliminação da vida média em dias (ou terminal).

Conclusões

1. O ensaio fornece a evidência que carreadores ApoE4 não carreadores reagem diferentemente a imunoterapia.

2. O ensaio fornece a evidência que edema vasogênico ocorre mais freqüentemente em carreadores ApoE4 e em dosagens mais altas.

3. O ensaio fornece estatisticamente a evidência significante da eficácia em ApoE4 não carreadores e pacientes quer recebem pelo menos 6 dosagens de bapineuzumab (carreadores ApoE4 não carreadores).

4. O ensaio fornece a evidência de direções ou mudanças direcionais favoráveis em uma população total (carreadores ApoE4 não carreadores) e população carreadora ApoE4 por algumas medições. A importância estatística deve ser mostrada com maior populações. Os regimes de tratamento alternativos nestes pacientes tal como debatidos acima são provavelmente para melhorar a eficácia como debatido acima.

5. O ensaio fornece a evidência que o tratamento é geralmente seguro e bem tolerado.

Exemplo 3: Estudo clínico de administração subcutânea de Bapineuzumab em pacientes de Alzheimer

As injeções subcutâneas são geralmente mais fáceis para administrar, que podem ser uma consideração para os pacientes com função mental prejudicada e coordenação, ou os cuidadores administram a um paciente não cooperativo. Também é mais fácil fazer em casa, que é menos inquietante ao paciente, bem como menos custoso. Finalmente, a administração subcutânea usualmente resulta em uma concentração de pico inferior da composição (Cmax) no sistema do paciente do que intravenoso. O pico reduzido pode diminuir o provável edema vasogênico.

Por estas razões, um estudo clínico foi projetado para a administração subcutânea de bapineuzumab. Os pontos finais primários para o estudo inicial são seguros e tem biodisponibilidade. Uma vez que estes são estabelecidos para a administração subcutânea, os testes cognitivos descritos acima serão administrados para determinar a eficácia.

Sob o regime inicial, bapineuzumab é administrado subcutaneamente aos pacientes a cada 13 semanas por 24 meses, para um total de 9 dosagens. Todos os pacientes receberam uma dosagem de 0,5 mg/kg. Os pacientes estão avaliados e periodicamente monitorado como descrito nos exemplos acima, por exemplo, para os níveis sangüíneos do anticorpo, função cardíaca e edema vasogênico. Exemplo 4: Projeto de camundongo específico e anticorpos humanos

As variantes de anticorpos 3D6 de camundongo e humanizados que diferem-se no isotipo e ou mutações de região constante foram construídas para testar os efeitos da redução da função efetiva no ajuste de depósito amilóide, função cognitiva e microemorragia. Os camundongos tratados com anticorpos por proteínas Αβ freqüentemente exibem os sinais de microemorragia nos vasos cerebrais, que é um fator que pode ser relacionado ao edema vasogênico observado em pacientes humanos que sofrem o tratamento similar.

Uma alinhamento dos domínios CH2 do IgGl humano, IgG2 e IgG4 com IgGl e IgG2a de camundongo são mostrados na Fig. 15. O alinhamento iluminam os resíduos responsáveis pela ligação FcR e Clq. O motivo de ligação Clq é conservado através das espécies e isotipos. O motivo de ligação FcR é conservado em IgGl, IgG4 humano e IgG2a de murino.

A seguinte tabela divulga as modificações particulares feitas a uma região CH2 da cadeia pesada. A numeração de aminoácido é pelo sistema EU. O formato é o resíduo de tipo selvagem, posição, resíduo mutante. Tabela 10 Anticorpos derivados de 3D6

Anticorpos derivados de 3D6 Isotipo (espécies) Resíduos mutados Controle Bapineuzumab AAB-001 IgG 1 (humano) — 3D6 2m humanizado (FcyR) IgGl (humano) L234A/G237A (numeração EU) 3D6 3m humanizado (FcyR) AAB-003 IgGl (humano) L234A/L235A/G237A (numeração EU) 3D6 Im humanizado (região articulada) IgG4 (humano) S241 P (numeração Kabat) Controle 3D6 IgGl (camundongo) 3D6 Im (FcyR) IgGl (camundongo) E233P 3D6 3m (Clq) IgGl (camundongo) E318A/K320A/R322A 3D6 4m (Clq) IgGl (camundongo) E318A/K320A/R322A/E233P 3D6 Controle IgG2a (camundongo) 3D6 Im (FcyR) IgG2a (camundongo) D265A 3D6 4m (FcyR, Clq) IgG2a (camundongo) L235A/E318A/K320A/K322A

As regiões de ligação de epítopo dos anticorpos derivados de 3D6 são os mesmos e os cinéticos da ligação Αβ são comparáveis. Tabela 11 divulga os cinéticos da ligação de receptor Fc aos anticorpos derivados de 3D6 listados na Tabela 10. Estes valores foram gerados como seguem.

Para os anticorpos derivados humanizados 3D6, as seguintes condições do ensaio foram usadas. Um Biacore 3000 e CM5 chip revestido com anticorpo penta-His (SEQ DD N°: 93) (Qiagen, Cat # 34660) foi usado em combinação com domínios His-tagged de FcyRI, FcyRII e FcyRIII humano (sistemas R&D, Cat # 1257-Fc, 1330-CD, 1597-Fc). Cada receptor foi separadamente capturado em uma célula de fluxo do sensor chip pelo anticorpo penta-His (SEQ ID N0: 93). Uma solução do anticorpo a ser testada foi injetada para capacitar as medições da taxa de associação e dissociação ao receptor capturado. Após as medições serem consideradas, os receptores e anticorpos experimentais foram removidos pela injeção do tampão em pH2.5. A célula de fluxo foi então pronta para o próximo ciclo. Cada ciclo foi realizado na duplicata e as mesmas condições (por exemplo, concentrações, taxas de fluxo e cronometragem) foram usadas para cada amostra. Como indicado pelos valores na Tabela 11, a ligação

bapineuzumab (região Fc não modificada) a todos dos receptores FcyR humanos com afinidade relativamente alta. KD por FcyRI foi na faixa nm, enquanto KD por FcyRII e III foram na faixa μηι. Pelos últimos dois, os sensogramas mostraram cinéticas fast-on, fast-off típicas. O isotipo IgG4 tem a ligação similar ao FcyRI, mas não liga FcyRIII, como esperado. Os dois derivados IgGl, Hu 3D6 2m e 3m, não mostra a ligação detectável ao FcyRI ou FcyRIII.

Para os anticorpos derivados de 3D6 de camundongo, os métodos similares foram usados para determinar a ligação ao FcyRI, II e III de camundongo. O FcyRI e III são receptores de ativação, enquanto FcyRII é geralmente considerado a ser inibidor. Os anticorpos testados foram 3D6 IgG2a, 3D6 IgGl e os mutantes IgGl, 3D6 lm, 3m e 4m. os resultados são expressados como uma porcentagem relativa de ligação 3D6 IgG2a. Como mostrado na Tabela 11, 3D6 IgG2a foi apenas o anticorpo com capacidade de ligação FcyRI detectável. 3D6 IgGl e o 3D6 3m IgGl tem FcyRII similar e perfis de ligação III.

TABELA 11

Capacidade de ligação do receptor Fc de anticorpos 3D6

Derivado 3D6 Capacidade de ligação relativa* ( %) FcyRI humano** FcyRII humano** FcyRIII humano** Controle Bapineuzumab 100 100 100 3D6 lmhumanizado 85-95 40-50 0 3D6 2m humanizado 0 40-50 0 3D6 3m humanizado AAB-003 0 8-12 0 FcyRI de camundongo** FcyRII de camundongo** FcyRIII de camundongo ** Controle 3D6 IgG2a 100*** 100 100 Controle 3D6 IgGl 0 180 70 3D6 ImIgGl 0 15 10 3D6 3m IgGl 0 180 70 3D6 4m IgGl 0 25 15

* Definido como a quantidade de ligação no (RU) relativo aquele do controle IgG2a no estado fixo **0 mFcyRl e mFcyRIII são receptores de ativação, mFcyRII é uni receptor inibidor. Um outro receptor ativação potente, mFcyRTV, não é comercialmente disponível. ***Uma ligação do estado fixo não foi reagida. O ajuste cinético leva a um estímulo de Kd na faixa nanomolar.

Os resultados acima que o anticorpo Hu 3D6 3m (AAB-003) tem a ligação do receptor gama Fc mais reduzida dos três testados. Aqueles testados, o anticorpo mutante de camundongo 3D6 Im IgGl foi o mais similar ao AAB-003, em que sua ligação FcyR foi reduzida próxima a 10 % do normal.

Exemplo 5: Estudos de camundongo dos projeto de estudo dos anticorpos derivados de 3D6

Os camundongos de um ano de idade PDAPP foram expostos

ao paradigma do tratamento de 6 meses com o controle ou os anticorpos derivados de 3D6 descritos em Tabela 10. O controle negativo foi um anticorpo IgG2a de camundongo a um epítopo não amilóide, irrelevante. Os camundongos foram injetados EP com 3 mg/kg do anticorpo indicado a cada semana.

As concentrações de anticorpo de soro foram testadas no curso do estudo por ELISA. Os níveis foram comparáveis em todos os grupos. Após seis meses, os camundongos foram sacrificados e submetidos à perfusão. As seções e tecidos cerebrais foram preparados de acordo com os métodos conhecidos (Johnson-Wood et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci., USA 94:1550-55).

A carga amilóide foi medida no córtex e hipocampos dos camundongos transgênicos. Os resultados na Tabela 12A e 12B são indicadas como a redução de porcentagem da área com amilóide (valores ρ indicam a diferença significante comparado ao anticorpo de controle IgG2a).

TABELA 12A

Carga amilóide cortical ( % de redução)

IgG2a de controle Controle 3D6 IgG2a Controle 3D6 IgGl 3D6 Im IgGl (FcyR) 3D6 3m IgGl rn 1 Vv--iM/ % de área média 6,25076 0,757259 1,24205 2,06056 1,50084 Faixa 0,069-17,073 0-9,646 0-17,799 0-24,531 0-17,069 % controle de mudança IgG2a 88 p<0,0001 80 p<0,0001 67 p<0,003 76 p<0,0001 % de mudança 3D6 IgGl — — — 165,9 120,8 Número 32 34 36 36 34 TABELA 12B

Carga amilóide hipocampal ( % de redução)

IgG2a de controle Controle 3D6 IgG2a Controle 3D6 IgGl 3D6 Im IgGl (FcyR) 3D6 3m IgGl (Clq) % de área mediana 20,36 8,462 12,29 12,18 8,435 Faixa 4,707-35,79 1,467-17,59 0,2449-18,61 0-26,99 0,8445-18,61 % de controle de mudança IgG2a 58 p<0,0001 40 p<0,0001 40 p<0,0001 59 p<0,0001 % de mudança 3D6 IgGi — — — 0,895 31,4 Número 34 34 37 37 34

Os resultados acima indicam que todos dos anticorpos 3D6

(IgG2a, IgGl e mutantes) significantemente a carga amilóide reduzida relativa aos controles negativos. As diferenças entre os anticorpos testados não foram estatisticamente significantes.

O efeito dos anticorpos derivados 3D6 foi então testado na avaliação amilóide vascular. A Tabela 13 mostra o número de camundongos com a avaliação amilóide vascular indicada e a porcentagem de animais com a avaliação de 4 ou mais (valores ρ que indicam a diferença significante comparado ao anticorpo 3D6 IgG2a).

TABELA 13

% dos camundongos tendo amilóide vascular

Nenhum-pequeno (0-3) Moderado (4+) Porcentagem com avaliação moderada IgG2a de controle 11 24 69 p<0,0001 Controle 3D6 IgG2a 27 7 21------------ Controle 3D6 IgGl 12 25 68 p<0,0001 3D6 Im (FcyR) IgGl 15 21 58 p<0,0016 3D6 3m (C1 q) IgGl 20 17 46 <0,0434

Os dados acima mostram que o 3D6 IgG2a controle positivo

significantemente do amilóide vascular reduzido relativo ao anticorpo IgG2a irrelevante. A redução com 3D6 IgG2a também foi estatisticamente significante relativo aquele com 3D6 IgGl, 3D61 m IgGl e 3D6 3 m IgGl. As diferenças entre 3D6 IgGl, 3D6 1 m IgGl e 3D6 3 m IgGl e controle IgG2a não foram estatisticamente significantes. Para determinar se o derivado de anticorpo 3D6 causa a microemorragia em camundongos, níveis de hemosiderina, um marcador para microemorragia, foram examinados nas seções cerebrais dos camundongos tratados com 3 mg/kg de anticorpo. O tingimento foi realizado com 2 % de ferrocianida de potássio em 2 % de ácido clorídrico, seguido por um contratingimento em uma solução vermelha neutra a 1 %. Tabela 14 indica a porcentagem e número absoluto de camundongos com o nível indicado do tingimento de hemosiderina. Os resultados demonstram que 3D6 Im IgGl (FcyR) e 3D6 3m IgGl (Clq), que são mostrados acima ser efetivos no ajuste λ das placas amilóides, reduz os níveis microemorrágicos relativos ao 3D6

IgG2a. As diferenças entre 3D6 IgGl, 3D6 Im IgGl e 3D6 3m IgGl não atingem uma significância estatística, embora as diferenças entre 3D6 Im IgGl e mostraram 3D6 IgGl uma direção, (valores ρ indicam a diferença comparado ao anticorpo 3D6 IgG2a).

TABELA 14

Nível Microemorrágico: 0 1 2 3 IgG2a de controle p<0,0001 68% (23) 32% (H) 0% (0) 0% (0) Controle 3D6 IgG2a 9% (3) 42% (14) 27% (9) 21 % (7) Controle 3D6 IgGl p<0,0023 38% (14) 46% (17) 3 % O) 13 % (5) 3D6 Im IgGl (FcyR) p<0,0001 51 % (19) 49% (18) 0% (0) 0% (0) 3D6 3m IgGl (Clq) p<0,0001 53 % (19) 42% (15) 0% (0) 5% (2)

Exemplo 6: Materiais e métodos dos ensaios de fagocitose

Ensaios de fagocitose de placa ex vivo: seções cerebrais congeladas de camundongos PDAPP foram pré-incubados com 3D6 IgGl e as mutantes de função efetiva descritas na Tabela 10 (3D6 Im (FcyRl) e 3D6 3m (Clq), ambos o Isotipo IgGl de camundongo). 3D6 IgG2a foi usado como um controle positivo e IgGl irrelevante e anticorpos IgG2a foram usados como controles de isotipo. As seções foram tratadas com 0,3 ou 3 μg/ml de anticorpo por 30 minutos antes da adição de um camundongo microglia, a 5 % de C02 a 37° C. As co-culturas foram extraídas no próximo dia. O Αβ remanescente foi medido por ELISA (266 anticorpos para capturador e 3D6-B para repórter) para avaliar a liberação de Αβ.

A fagocitose de derivados de IgG2a de murino foi testado. Estes experimentos incluídos: 3D6 IgG2a (controle positivo); IgG2a não específico (controle negativo); 3D6 Im (FcyRl, isotipo IgG2a); e anticorpos 3D6 4m (FcyRl/Clq). As condições foram similares aquelas descritas acima.

A fagocitose de não placa foi adicionalmente determinada por 3D6 (Hu 3D6 IgGl) humanizados e os mutantes efetivos descritos na Tabela (Hu 3D6 2m IgGl, Hu 3D6 3m IgGl5 e Hu 3D6 Im IgG4). O controle negativo foi um anticorpo IgGl humano irrelevante. O ensaio e condições de detecção foram de outra maneira o mesmo.

Ensaios in vitro: Para os ensaios de anticorpo de camundongo de fagocitose de pérola fluorescentemente conjugada, 10 μΜ de partículas de FluoroSphere (5x106) foram opsonizadas com 1 mg/ml de F(ab'2) de camundongo, 3D6 IgG2a, 3D6 IgGl, ou o mutante 3D6 FcyR por 2 horas em temperatura ambiente com a rotação. Seguindo as 2 horas, as pérolas foram lavadas com 1 ml de PBS 3 vezes para remover o IgG não ligado. As partículas opsonizadas foram adicionadas (1:10) ao camundongo microglia pelos experimentos 3D6 Ig2a de murino (3D62a). As perólas foram incubadas com as células por 90 minutos a 37° C. As partículas não ligadas foram então lavadas for a com PB S. As células foram tingidas com DiffQuick por 30 segundos para cada tingimento e fagocitose e foi visualizado pelo microscopia leve. Os controles para este ensaio foram pérolas não opsonizadas (não rotuladas) (para detectar o engolfar não específico) e o pré-tratamento com fragmentos Fc humanos (3D62a + FC)(para bloquear FcyRl).

Para os ensaios de anticorpos humanizados, condições e detecções foram as mesmas. Entretanto, os anticorpos foram: nenhum anticorpo (não rotulado; controle negativo), IgGl humano irrelevante (IgGl humano; controle positivo), Hu 3D6 IgGl, Hu 3D6 2m IgGl, Hu 3D6 3m IgGl e Hu 3D6 Im IgG4. As células fagocíticas foram as células THP-I humanas (diferenciadas com PMA). Resultados

Ensaios de fagocitose de placa ex vivo: O anticorpo 3D6 IgGl de murino e seus mutantes efetivos (3D6 Im (FcyRl) e 3D6 3m (Clq)) foram submetidos ao ensaio para avaliar sua capacidade de liberação amilóide (ver Fig. 16). O anticorpo 3D6 IgG2a estimulado a liberação mais robusta do que 3D6 IgGl, 3D6 Im (FcyRl) e 3D6 3m (Clq). A estimulação de fagocitose por 3D6 IgGl, 3D6 Im (FcyRl) e 3D6 3m (Clq) foi maior do que o controle negativo. As mutações ao domínio Fc de 3D6 IgGl não parecem significantemente umedecer sua capacidade de estimular a liberação no ensaio de liberação ex vivo.

Para os derivados de IgG2a 3D6, os mutantes da liberação estimulante equivalente ao 3D6 IgG2a de tipo selvagem a um maior grau relativo a um controle de ponto de isotipo IgG2 irrelevante (ver Fig. 17). Deste modo, nenhum dos mutantes completamente inibiram a fagocitose de Αβ.

Nos ensaios de anticorpos humanizados, as mutações da região efetiva de Hu 3D6 IgGl retém a atividade de ajuste significante relativo ao controle negativo. A liberação estimulada Hu 3D6 IgGl no ensaio de liberação de placa ex vivo Αβ e os mutantes da região efetiva tem moderadamente a função prejudicada. A fagocitose induzida Hu 3D6 IgG4 à mesma extensão como Hu 3D6 IgGl e a mutação pela região de junta IgG4 de 3D6 não aparece para mudar sua função efetiva (ver Fig. 18).

Ensaios de fagocitose de pérola in vitro: para determinar se os resultados ex vivo foram específicos pela liberação Αβ e se a mutação Fc no 3D6 IgGl alterado e sua função efetiva, ensaios da fagocitose de pérola mediado por Fc não específico foram realizados. No anticorpo de camundongo o ensaio de fagocitose de pérola, o anticorpo de isotipo 3D6 IgG2a mediado por mais fagocitoses efetivas do que 3D6 IgGl (ver Fig. 19). A mutação Fc em 3D6 IgGl não significantemente diminuem a capacidade para estimular a fagocitose, como comparado ao controle positivo 3D6 IgG2a, indicando que a mutação Fc em 3D6 IgGl foi moderadamente efetiva na redução da fagocitose.

No ensaio de anticorpo humanizado, o efeito da mutação Fc vista no ensaio de fagocitose de placa ex vivo foi verificada em fagocitose de pérola mediada por Fc. Novamente, as mutações na porção Fc de 3D6 humanizado diminuído na capacidade para mediar a fagocitose de périlas fluorescentes e não existe diferença significante entre os mutantes 2m e 3m. Novamente, o isotipo IgG4 teoricamente não efetivo mediado pela remoção da mesma extensão como o isotipo IgGl (ver Fig. 20). A mutação da região de junta IgG4 de 3D6 não parece mudar sua função efetiva. Exemplo 7: Capacidade de ligação Clq de derivados humanizados de 3D6

Os derivados humanizados de 3D6 foram testados pela capacidade de ligar-se ao Clq e induzir uma resposta do complemento. Uma série de diluição Clq padrão foi seguida, como descrito abaixo. Os protocolos similares são descritos, por exemplo, em Idusogie et ai. (2000) J. Immunol. 164:4178-4184.

O Αβ purificado foi revestido pelas placas de ELISA e expostos a um dos seguintes anticorpos humanizados de 3D6 nas concentrações indicadas na Fig. 21: Hu 3D6 2m (IgG 1), Hu 3D6 3m (IgG 1), Hu 3D6 Im (IgG4) e Hu 3D6 (IgGl) não modificado. As placas de ELISA foram lavadas e então bloqueadas com 0,02 % de solução de caseína em PBS por 3 a 24 horas com leve agitação. A solução de bloqueio foi removida com

uma outra etapa de lavagem. >

A seguir, o Clq humano purificado (191391, MP Biomedicals) foi adicionado as placas de ELISA, com 2 ug do tampão de partida do ensaio Clq /ml das séries de diluição 2X. O Clq foi deixado ligar-se por 2 horas com agitação. Seguindo uma outra etapa de lavagem, 100 μ/reservatório do anticorpo anti-Clq (Rb Clq anti-humano conjugado por FITC cat# FOlO DBS (dbiosys.com)) usado em 1:200 foi adicionado por 1 hora com agitação. Os resultados foram comparados a um branco com nenhum anticorpo anti-Cl q.

Como mostrado na Fig. 21, os anticorpos derivados humanizados de 3D6 não significantemente interagem com Clq. Este é em contraste ao bapineuzumab, que não tem as mutações na região Fc.

Os anticorpos derivados foram testados pela capacidade de induzir a Iise mediada pelo complemento das células HEK 293 que expressam Αβ na superfície. Um ensaio de liberação padrão 51Cr foi usado, como descrito em Phillips et ai. (2000) CancerRes. 60:6977-84; Aprile et al. (1981) Clin. Exp. Immunol. 46:565-76.

As células alvos foram as células HEK293 (ATCC, CRL- 1573) que expressadas com uma proteína de fusão com o epítopo Αβ detectado por 3D6 (DAEFR (SEQ ID N°: 94)) na superfície. A seqüência contendo Αβ foi inserida no vetor pDisplay (Invitrogen). O vetor pDisplay foi alterado para remover a sinalização HA e no lugar da partida com o peptídeo contendo Αβ após a seqüência líder. Um grupo estável de HEK 293 foi movido em direção ao ensaio ADCC.

Para a rotulação, as células IO7 foram recolocadas em suspensão em 2ml de RPMI 10 % de FCS e adicionados 25 OuCi de 51Cr (NEN catálogo #NEZ-030; cromato de sódio51 na solução salina). As células foram incubadas por 1 hora a 37° C com a agitação ocasional. No final da incubação, 10 ml de RPMI com 10 % de FCS foi adicionado. As células foram rotacionadas de modo que o sobrenadante poderia ser removido e recolocado em suspensão em 10 ml de RPMI contendo 10 % de FCS. As células foram incubadas novamente, em temperatura ambiente por 1,5 horas com agitação ocasional, para permitir o excesso 51Cr para sangra a partir das células. As células alvos foram lavadas 3 vezes com 10 ml de RPMI e um período final em 10 ml de RPMI contendo 10 % de FCS. As células foram recolocadas em suspensão em RPMI com 10 % de FCS a uma concentração de IO6 células/ml.

As células efetivas foram coletadas a partir de sangue humano.

Brevemente, o sangue foi diluído com 1:1 de PBS e formado camadas em Ficoll (Sigma Histopaque 1077). A coluna foi rotacionado por 20 minutos, 1200 χ g, com nenhuma trava a 20° C. As células na interface foram coletadas; lavadas uma vez com 2 a 3 volumes de PBS e duas vezes com RPMI contendo 10 % de FCS. O enriquecimento NK é detectado com os anticorpos CD3 e CD56.

As células efetivas e células alvos foram adicionadas as placas de 96 reservatórios em uma razão de 25:1 (efetor:alvo) em um volume total de 200 μΐ. As seguintes amostras de controle foram incluídas: Iise espontânea (contendo células alvos com nenhum efetivo) e Iise total (partida vazia nos reservatórios) foi incluída. As células foram incubadas por 5 horas a 37° C. Junto antes da coleta, 100 μΐ, 0,1 % de Triton X-100 foi adicionado à amostra de Iise total para liberar 51Cr. As reações foram coletadas nas unidade do filtro com um coletor Skatron (Molecular Devices) e o 51Cr total foi detectado.

Para calcular % de lise, a média de cpm e desvio padrão foi determinado para cada amostra. A % máxima de liberação 51Cr é determinada com a seguinte fórmula:

(Experimental - Espontâneo) χ 100

(Total — Espontâneo)

Consistente com os resultados do ensaio de ligação Clq, os anticorpos derivados mutantes da função efetiva humanizado de 3D6 não foram efetivas na indução do complemento da lise de Αβ que expressa as células HEK 293 (ver Fig. 22).

Exemplo 8: Capacidade de ligação Clq da medição do ensaio ELISA dos métodos e materiais derivados de 3D6 murino Uma placa fluorescente de 96 reservatórios foi revestida com 1, 3, ou 6 μ^πιΐ de vários anticorpos em tampão de revestimento do reservatório de 100 μΐ durante a noite a 4o C. Após o revestimento, as placas foram lavadas e bloqueadas com 200 μΐ de bloqueio de Elisa caseína por 1 hora em temperatura ambiente. As placas foram lavadas e 100 μΐ de 2 μ§/πι1 Clq humano em tampão de diluente foi adicionado por 2 horas 2 horas em temperatura ambiente. Após 2 horas, as placas foram lavadas e anti-Clq de Coelho rotulado por FITC (1:1000) foi adicionado por 1 hora. As placas foram lavadas duas vezes e lidas a 494/517 no leitor de placa fluorescente em PBS. As seguintes amostras de anticorpo de camundongo foram testadas: IgG2a, IgG2b, 3D6 IgG2a, IgGl, 3D6 IgGl e o mutante 3D6 IgGl Clq. Resultados

O nível mais alto da ligação Clq foi observado por IgG2a e 3D6 IgG2a (ver Fig. 23). A ligação Clq ao IgGl e 3D6 IgGl foi significantemente inferior do que IgG2a. A mutação no domínio de ligação 3D6 IgGl Clq suprimindo sua ligação adicional. Exemplo 9: Ensaio de condicionamento de medo contextual (CFC)

Os camundongos transgênicos Tg2576 e controles littermate do tipo selvagem foram individualizados alojados por pelo menos 2 semanas antes de qualquer teste e permitindo o acesso ad libitum para alimento e água. CFC ocorrido nas câmaras operantes (Med Associates, Inc) construídas a partir de paredes secundárias de alumina e teto PLEXIGLAS, porta e parede funda. Cada câmara foi equipada com um piso através do qual um choque na pata pode ser administrado. Além disso, cada câmara tem 2 estímulos leves, uma luz doméstica e um solenóide. A iluminação, o choque na pata (US) e o solenóide (CS) foram todos controlados por um PC que realize o software MED-PC. As câmaras foram localizadas em um ruído isolado do ambiente na presença da luz vermelha.

Camundongos (n = 8-12/genotipo/tratamento) foram treinados e testados em dois dias consecutivos. A fase de treinamento consiste de colocar os camundongos nas câmaras operantes, iluminando tanto o estímulo quando a luz doméstica e permitindo a estes explorar por 2 minutos. No final dos dois minutos, um choque na pata (US; 1.5 mAmp) foi administrado por dois segundos. Este procedimento foi repetido e 30 segundos após o segundo choque na pata os camundongos foram removidos a partir das câmaras e retornados a suas gaiolas domésticas.

Vinte horas após o treinamento, os animais foram retornados as câmaras em que este tem sido previamente treinados. O comportamento de congelamento, no mesmo ambiente em que estes tem recebido o choque ("Contexto"), foi então registrado usando o período de amostragem em 10 segundos e caixas por 5 minutos (30 pontos de amostra). O congelamento foi definido como a perda de movimento exceto que o requerido para a respiração. No final dos 5 minutos os camundongos do teste de contexto foram retornados a sua gaiola doméstica.

Aproximadamente os camundongos de tipo selvagem de 20 semanas de idade e camundongos transgênicos Tg2576 foram administrados em uma dosagem simples de tratamento do anticorpo pela injeção intraperitoneal em 24 horas antes da fase de treinamento de CFC. Os anticorpos de tratamento foram: (i) anticorpo IgGl não específico; (ii) Hu 3D6 3m (FcyR) (também denominado AAB-003); e (iii) bapineuzumab (também denominado AAB-OO1).

Fig. 24 demonstra os resultados. O camundongo de tipo selvagem tratado por controle mostrou cerca de 40 % de congelamento, enquanto em comparação, os camundongos transgênicos tratados por controle exibiu diversos déficits na memória contextual. Quando administrado a 30 mg/kg, o anticorpo Hu 3D6 3m restaura a função cognitiva aos níveis de tipo selvagem. Além disso, o mutante da função efetiva tem o mesmo efeito da memória contextual como o anticorpo precursor, bapineuzumab. O efeito do anticorpo Hu 3D6 3m na memória contextual foi observada durante o período. A Fig. 25 ilustra que o tratamento com 30 mg/kg de anticorpo Hu 3D6 3m fornecido nos níveis de tipo selvagem de cognição pelo menos 5 dias pós-administração.

Em resumo, os exemplos acima mostram que Hu 3D6 3m

resultam em melhoramentos de cognição similares como bapineuzumab. Este é apenas do fato que o anticorpo derivado não significantemente liga-se aos receptores Fc ou Clq5 ou induzem a fagocitose ou atividade ADCC. Exemplo 10: Estudo de camundongo com 3D6 4m (FcyR/ Clq) IgG2a e Hu 3D6 3m IgGl (AAB-003) Projeto de estudo

Os camundongos de um ano de idade PDAPP são expostos a um paradigma de tratamento de 6 meses com controle; 3D6 4m (FcyR/ Clq) IgG2a; ou Hu 3D6 3m IgGl (ver Tabela 10). Os controles negativos incluem um anticorpo IgG2a de camundongo e um anticorpo IgGl humano a um epítopo não amilóide, irrelevante. O controles positivos incluem 3D6 IgG2a e Hu 3D6 IgGl. Os camundongos são unidos em coorte de dosagem e injetados IP nos intervalos semestrais com 3, 30, ou 300 mg/kg do anticorpo indicado. As condições experimentais são como descrito no Exemplo 5. Após 6 meses, os camundongos são sacrificados e o tecido

cerebral coletado como descrito acima. Os tecidos são examinados pelo Ab cortical e hipocampal e carga de amilóide, amilóide vascular e microemorragia.

Exemplo 11: Estudos de macacos cinomólogos com projeto de estudo Hu 3D6 3m IgGl (AAB-003)

Os macacos cinomólogos são tratados com Hu 3D6 3m IgGl (AAB-003). O controle negativo inclui um anticorpo IgGl humano um epítopo não amilóide, irrelevante. O controle positivo inclui Hu 3D6 IgGl (Bapineuzumab). Os macacos são unidos no coorte de dosagem recebendo 15, 50, ou 150 mg/kg do anticorpo indicado. Cada coorte é ainda unido nos grupos de administração IV e SC.

Os macacos são semanalmente injetados por 13 semanas, com um período de observação de 2 meses. No final do estudo, os macacos são sacrificados e o tecido cerebral coletado. Os tecidos são examinados pelo Αβ cortical e hipocampal e carga amilóide, amilóide vascular e microemorragia. Exemplo 12: Estudo de dosagem de ascensão simples (SAD) em humanos de anticorpo Hu 3D6 3m (AAB-003)

Os pacientes de Alzheimer brando ou moderado, incluindo carreadores ApoE4 não carreadores, são divididos em coortes para a injeção intravenosa (IV) ou subcutânea (SC) com o anticorpo AAB-003. Os coortes são dados por uma dosagem simples com os 12 meses seguidos e monitorados em toda parte por um comitê de monitoramento de segurança independente.

O objetivo do estudo é para aumentar a exposição equivalente de pelo menos 5 mg/kg de Bapineuzumab intravenoso (a não ser sinais de edema vasogênico serem observados). Nesta dosagem de Bapineuzumab, VE foi observado em 3 de 10 pacientes.

Os coortes SC incluem pelo menos dois níveis de dosagem subcutânea. Estes pacientes serão observados pela biodisponibilidade do anticorpo e linearidade destes.

Todos os pacientes são avaliados (por exemplo, pelo estado ApoE) e monitorado como descrito no Exemplo 1. Para todos os coortes, o monitoramento de segurança inclui o monitoramento MRL Os resultados MRI são comparados por aqueles do estudo Bapineuzumab descrito nos exemplos acima. A eficácia é medida pela métrica cognitiva (por exemplo, NTB, DAD, ADAS-Cog,); níveis de plasma AR; níveis de CSF amilóide, tau e fosfotau; e imagem de amilóide.

Certos biomarcadores são procurados em cada paciente durante o estudo. Biomarcadores para suportar a ligação Αβ pelo anticorpo incluem Αβ40 e Αβ42 no CSF e plasma e imagem de placa amilóide, por exemplo, por PET. A pontuação dos biomarcadores para modificação da doença incluem MRI, CSF tau e níveis fosfotau e novamente, imagem de placa amilóide.

Exemplo 13: Perfis farmacocinéticos de Hu 3D6 3m (AAB-003) em Tg2576 e camundongos de tipo selvagem

Os camundongos transgênicos Tg2576 e os controles de tipo selvagem foram dosados com AAB-003 subcutaneamente (SC) ou intraperitonealmente (IP) para determinar a biodisponibilidade do anticorpo. O perfil foi típico para o anticorpo terapêutico.

AAB-003 foi eliminado levemente, com um T1/2 de 66 a 160 horas. Teve baixa distribuição de volume (71-96) e boa exposição (como medido por AUC).

Alguns diferenças entre os camundongos de tipo selvagem e transgênicos foram aparentes. Por exemplo, camundongos de tipo selvagem tem maiores AUC e T1/2. Os camundongos transgênicos tem níveis levemente mais altos de anticorpos anti-AAB-003.

Exemplo 14: Perfis farmacocinéticos de Hu 3D6 3m (AAB-003) em macacos cinomólogos

mg/kg Hu 3D6 3m ou bapineuzumab foram administrados intravenosamente (IV) aos macacos cinomólogos (3 animais/ tratamento de anticorpo) para comparar os perfis farmacocinéticos e determinar se a mutação da função efetiva tem qualquer efeito. Os resultados foram comparáveis entre os dois anticorpos e típicos para os anticorpos terapêuticos em geral. Teve baixa liberação (0,16 + 0,06 ml/hr/kg), pequenos volumes da distribuição (-62 ml/kg) e longa eliminação da vida média (309 ± 226 horas). Um de três animais testados positivos para os anticorpos contra AAB-003.

A mesma dosagem de anticorpo foi administrada subcutaneamente (SC). Biodisponibilidade foi boa, aproximadamente 69 % e a vida média variou de 21 a 445 horas. Dois dos três animais testados positivos para anticorpos contra AAB-003.

Exemplo 15: Efeito das mutações Fc na função efetiva de um anticorpo anti- Lewis Y

Para determinar o efeito das mutações na baixa região de junta do IgGl humano na função efetiva de anticorpos com especificidade de antígeno diferentes, projetamos os anticorpos ao antígeno Lewis Y (LeY). LeY é um tipo 2 de grupo sangüíneo relacionado ao oligossacarídeo difucosilado que é principalmente expressado nos cânceres epiteliais, incluindo mama, pâncreas, cólon, ovário, gástrico e pulmão. LeY não parece ser expressado nos tumores de origem neuroectodérmica ou mesodérmica.

O anticorpo anti-LeY Ab02 foi gerado com uma de três regiões constantes de cadeia pesada: (i) IgGl humano do tipo selvagem; (ii) IgG4 humano do tipo selvagem; e (iii) IgGl humano com duas mutações de região atuadora, L234A e G237A (ver SEQ ID N°: 50 e 51). O IgG4 foi mostrado ter função atuadora reduzida em outros sistemas.

Para o ensaio ADCC (citotoxicidade completar dependente de anticorpo), as células de adenocarcinoma gástrico humano N87 que superexpressa LeY foram usados como células alvo e PBMC humano recentemente isolado foram usados como células atuadoras. As células alvo e atuadoras foram colocadas em uma razão de 50:1 em placas de 96 reservatórios. O anticorpo foi aplicado em várias concentrações (0,1, 1 e 10 μg/ml) em triplicata com o meio, atuador e controles de célula alvo e controles de anticorpo. As atividades de ADCC de versões anti-Lewis Y Ab02 são apresentadas na Fig. 26.

Para o ensaio CDC (citotoxicidade dependente de complemento), as células tumorais positivas (A431 LeY) foram colocadas em placas de 96 reservatórios com quantidade variante de anticorpo (0,1, 1 e 10 μ g/ml), o complemento humano diluído (1:100), foi adicionando a cada reservatório. Os testes foram realizados em triplicata em um volume final de 100 μΐ/ml com o meio, as células sozinhas e o anticorpo e controles de complemento. Após 4 horas de incubação a 37° C, as placas foram removidas e equilibradas a 22° C.

Um volume igual de CytoTox-One™ foi adicionado a cada reservatório e incubado por 10 minutos a 22° C. como um controle positivo, 2 μΐ de tampão de Iise por reservatório (em triplicata) foi adicionado para gerar uma liberação de LDH máxima (lactato desidrogenase) nos reservatórios de controle. A reação enzimática foi interrompida pela adição de 50 μΐ de solução de interrupção. A fluorescência resultante foi registrada com um comprimento de onda de excitação de 560 nm e um comprimento de onda de emissão de 590 nm. A % de Iise celular relacionada com o comprimento foi calculada como % de liberação de LDH total (Fig. 27).

A despeito das mutações L234A e G237A em IgGl, o anticorpo mutante reteve totalmente sua capacidade de mediar tanto ADCC quanto CDC contra as células tumorais que expressam Lewis Y, em comparação com o IgGl do tipo selvagem.

Exemplo 16: Efeito de mutações Fc na função atuadora de anticorpo anti-5T4 para ainda investigar o efeito de mutações de Fc em IgGl humano na função atuadora de anticorpos com especificidade e antígeno diferente, projetamos anticorpos para a proteína oncofetal 5T4. 5T4 é uma proteína associada com o tumor apresentada na membrana celular de vários carcinomas e é um alvo promissor para o desenvolvimento da vacina anti- tumor a para terapias direcionadas a anticorpo.

O anticorpo anti-5T4 foi gerado com combinações diferentes de mutações na região constante de cadeia pesada. As cadeias pesadas usadas foram: (i) IgGl humano do tipo selvagem; (ii) IgG4 humano do tipo selvagem; (iii) IgGl, L234A e L235A humanos; (iv) IgGl, L234A e G237A humanos; (v) IgGl humano, L235A e G237A; e (vi) IgGl humano com três mutações de região atuadora, L234A, L235A e G237A (ver SEQ ID N°: 62 e 63).

MDAMB435 celular de linha de carcinoma de mama humano, estavelmente transfectado com o antígeno 5T4, foi usado para os ensaios ADCC e CDC. O ensaio ADCC de anticorpos anti-5T4 foi como descrito no Exemplo 15, usando-se PBMC humano recentemente isolado como células atuadoras em uma razão célula atuadora:alvo de 50:1. As células transfectadas MDAMB435-Neo foram usadas como um controle negativo. Os resultados da atividade de ADCC (citotoxicidade específica máxima na concentração de anticorpo 10 ug/ml) são resumidos na Tabela 15.

TABELA 15

Atividade ADCC nos anticorpos anti-5T4 contra linha celular de carcinoma

de mama humano positivo e negativo 5T4 MDAMB435

Anticorpo MDAMB345-5T4 % da citotoxicidade específica MDAMB-Neo % da citotoxicidade específica 5T4-IgGlwt 81 3 5T4-IgGl 78 2 TABELA 15 Atividade ADCC dos anticorpos anti-5T4 contra a linha celular do carcinoma de mama humano positivo e negativo 5T4 MDAMB435 Anticorpo MDAMB345-5T4 % de citotoxicidade específica MDAMB-Neo % de citotoxicidade específica L234A/G237A 5T4-IgGl L234A/L235A 15 2 5T4-IgGl L235A/G237A 27 2 5T4-IgGl L234A/L235A/G237A 2 2 5T4-IgGl N297A 5 3 5T4-IgG4 2 2

Para avaliar um efeito de mutações Fc na citotoxicidade

induzida por complemento, as células MDAMB435-5T4 de carcinoma de mama humano foram incubadas com o complemento humano diluído como descrito no Exemplo 15. Os resultados de ensaios CDC são apresentados na Tabela 16. Tabela 16

Atividade CDC dos anticorpos anti-5T4 contra a linha celular do carcinoma

de mama humano positivo e negativo 5T4 MDAMB435

Anticorpo MDAMB345-5T4 % de citotoxicidade específica MDAMB-Neo % de citotoxicidade específica 5T4-IgG 1 wt 90 2 5T4-IgGl L234A/G237A 72 2 5T4-IgGl L3234A/L235A 5 2 5T4-IgGl L235A/G237A 19 2 5T4-IgGl L234A/L235A/G23 7A 1 1 Tabela 16 Atividade CDC de anticorpos anti-5T4 contra a linha celular de carcinoma de mama humano positivo e negativo 5T4 MDAMB435 Anticorpo Citotoxicidade específica por MDAMB345-5T4 MDAMB-Neo % de citotoxicidade específica 5T4-IgGl N297A 1 1 5T4-IgG4 1 1

A introdução de duas mutações na região de dobra baixa do

IgGl humano em qualquer uma das combinações tentadas (L234A/L235 ; L234A/G237A; L235A/G237A) apenas reduziu parcialmente a atividade de ADCC e CDC com L235A/G237A mostrando as capacidades de função atuadora residual mais alta. Entretanto, o anticorpo anti-5T4 com três mutações na região de dobra baixa IgGl (L234A1 L235A/G237A) demonstrou atividades de ADCC e CDC completamente abolidas. Conclusões

Os exemplos fornecem diversas comparações de anticorpos mutantes de região Fc com especificidades de antígeno diferentes. O Exemplo 6 descreve um ensaio ADCC usando-se anticorpos específicos de Αβ- com mutações de IgGl Fc em L234A e G237A (mutante duplo) ou L234, L235A e G237A (mutante triplo). Tanto os mutantes duplos quanto triplos reduziram significantemente a função (ver Fig. 22). O Exemplo 15 descreve os ensaios ADCC e CDC usando-se os anticorpos específicos de LeY com mutações IgGl em L234A e G237A. neste caso, o anticorpo mutante reteve a função atuadora (ver Figs. 26 e 27). Finalmente, o Exemplo 16 compara mutantes de IgGl Fc de anticorpos específicos de 5T4. Cada um dos mutantes duplos (L234A/L235; L234A/G237A; L235A/G237A) reteram mais atividade atuadora do que o mutante triplo (L234A/ L235A/G237A) (ver Tabelas 15 e 16). A atividade atuadora do mutante duplo L234A/L235, entretanto, foi reduzida a quase o mesmo nível como aquele do mutante triplo.

Os resultados acima demonstram que o efeito das mutações de região de dobra podem depender de diversos fatores, incluindo densidade de antígeno alvo na superfície celular. Entretanto, os dados indicam que as interrupções em todas as três posições são necessárias para eliminar a atividade atuadora.

Os exemplos acima são ilustrativos apenas e não definem a invenção; outras variantes estarão facilmente disponíveis àqueles de habilidade comum na técnica. O escopo da invenção é abrangido pelas reivindicações de quaisquer patentes concedida a partir daqui. O escopo da invenção, portanto, deve ser determinado não com referência à descrição acima, mas em vez disso deve ser determinado com referência às reivindicações concedidas junto com o seu escopo total de equivalentes. Todas as publicações, referências, números de acessão e documentos de patente citados neste pedido são incorporados por referência em sua totalidade para todos os propósitos ao mesmo ponto como se cada publicação ou documento de patente individuais forem, desta maneira, individualmente indicada.

Claims

1. Forma humanizada de um anticorpo 3D6 (número de acessão ATCC PTA-5130), caracterizada pelo fato de que compreende uma região constante de cadeia pesada humana com mutações L234A, L235A e G237A, em que as posições são numeradas pelo sistema EU de numeração.

2. Anticorpo humanizado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o isotipo é IgGl5 IgG2 ou IgG4 humanos, preferivelmente IgGl.

3. Anticorpo humanizado de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia leve humanizada tendo uma seqüência de aminoácido que compreende SEQ ID N°:48 e uma cadeia pesada humanizada tendo uma seqüência de aminoácido que compreende SEQ ID N°: 66 ou 67.

4. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo humanizado como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

5. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que codifica o anticorpo humanizado como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, tendo uma seqüência que compreende SEQ ID N°: 68, contanto que os nucleotídeos 1 a 57 que codificam uma seqüência sinalizadora pode ou não pode estar presente.

6. Anticorpo humanizado isolado, caracterizado pelo fato de que compreende uma seqüência de região variável de cadeia leve madura SEQ ID N0:2 e uma seqüência de região variável de cadeia pesada madura da SEQ ID N0:3, e uma região constante de cadeia pesada humana de isotipo IgG com mutações L234A, L235A, e G237A, em que as posições são numeradas pelo sistema EU de numeração.

7. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que tem isotipo IgGl humano.