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La présente invention est relative à un procédé de prépara- tion d'un agent bactériostatique à bactéricide qui est basé sur l'em- ploi d'acide ascorbique et qui, utilisé déjà à faibles doses, peut ac- cuser de sérieuses propriétés bactéricides sans provoquer dans le corps des phénomènes secondaires désagréables, contrairement aux agents ana- logues connus.
On sait que l'acide ascorbique exerce, en tant que vitami- ne C, des effets favorables sur le corps humain ou animal et que, en cas d'application de plus grandes quantités, il convient également dans une certaine mesure pour diminuer la tendance à l'inflammation. De tou- te manière, la vitamine C est extraordinairement sensible et, de tou- tes les vitamines les plus connues, c'est elle qui se détruit le plus facilement. Ceci est valable tant pour les influences qu'exerce l'or- ganisme sur l'acide ascorbique que pour les influences extérieures, comme par exemple attaques chimiques par l'oxygène ou température éle- vée.
La présente invention découle du fait qu'il est possible non seulement de stabiliser l'acide ascorbique vis-à-vis des influen- ces extérieures chimiques ou physiques, mais aussi de le stabiliser afin d'empêcher sa décomposition prématurée dans l'organisme, et ce en le faisant réagir avec des acides amino. Il a été en effet surprenant de constater que les produits de réaction de l'acide ascorbique avec les acides amino ne sont pas soumis dans le corps à une décomposition aussi rapide et aussi forte que l'acide ascorbique seul, et que, au contraire, étant l'accroissement de leur résistance, ils peuvent exer- cer leur action en des endroits où ils sont utilisés par le corps pour prévenir certains troubles ou pour combattre certaines maladies.
Il était non moins prévisible que, ainsi que cela fut démontré par des expériences effectuées sur des animaux, même l'application de faibles quantités, par exemple de 0,03 à 1 mg par souris, de ces produits de réaction de l'acide ascorbique avec des acides amino, suffirait pour développer des effets thérapeutiques qui sont semblables ou même de loin supérieurs à ceux des remèdes connus à effet bactéricide,comme par exemple les sulfamides ou les anti-biotiques. Il s'agit donc ici d'un effet potentiel exceptionnel, que l'on peut aussi peu atteindre avec des doses simultanées ou successives des constituants qu'avec l'application de simples mélanges.
Comme avantage particulier, il faut toutefois insister sur ce que l'utilisation des produits de réaction préparés conformément à l'invention n'entraîne pratiquement aucun effet secondaire désagréable, comme par exemple détériorations du sang, dé- térioration de la flore intestinale, phénomènes allergiques ou derma- tites.
Suivant le procédé de l'invention,les produits décrits sont préparés de la manière suivante : l'acide ascorbique ou ses dérivés ou sels sont mis en réaction dans un agent liquide avec des acides amino, leurs sels ou dérivés, en dispersion et/ou en solution, et le produit de réaction est séparé du mélange de réaction. Dans l'intérêt d'une transformation rapide et complète en produits très efficaces, on travaille de préférence à des températures élevées, par exemple compi- ses entre 30 et 130 , en particulier de 35 à 80 . On peut, comme men tionné, rassembler dans un agent aqueux les constituants de la réac- ' tion qui sont généralement solubles dans l'eau.
Il est toutefois pos- sible aussi d'avoir recours à des liquides organiques et d'utiliser l'un ou l'autre constituant en fine dispersion. Si on part par exe@ple d'ascorbinate de sodium, il conviendra de travailler dans une suspen- sion alcoolique.
Les conditions de réaction peuvent être choisies telles que la réaction se déroule dans le sens de la formation d'un sel, par ex-
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emple d'un sel complexe. Etant donné toutefois que les produits avec liaison des constituants à la façon de l'ester se sont révélés supérieurs au point de vue efficacité, on travaillera de préférence dans le sens d'une éthérification en effectuant la réaction suivant une formule avantageuse de mise en oeuvre du procédé, en présence de matières favorisant l'éthérification. Sont particulièrement appropriées dans ce cas des additions, comme le chlorure de thionyle ou le trifluorure de bore.
La séparation du produit de réaction du mélange de réaction peut avoir lieu par évaporation partielle ou complète du solvant ou de l'agent de dispersion. le cas échéant avec cristallisation subséquente, auquel cas on peut favoriser ou compléter la séparation du produit solide de réaction particulièrement par précipitation avec des liquides organiques ; comme par exemple l'éther, l'éther de pétrole.
Etant donné que l'acide ascorbique n'accuse une grande stabilité vis-à-vis des influences extérieures et organiques qu'après réaction avec l'acide amino il est avantageux d'effectuer la transformation en l'absence d'oxygène, la réaction ayant lieu par exemple dans une atmosphère d'azote, ou bien de l'azote étant conduit au travers du mélange liquide de réaction.
Comme deuxième constituant de la réaction, on utilisera avant tout des acides amino, qui sont appropriés au corps humain en tant que formateurs d'albumine et qui peuvent de ce fait être considérés comme particulièrement intéressants pour le corps humait. De cette manière, on peut bien entendu aussi unir à l'application bactériostatique ou bactéricide de l'agent actif, des réactions secondaires souhaitables, relativement à l'emploi des acides amino.
Pour ce qui est de ces effets, se sont révélés particulièrement appropriés des acides amino avec un ou plusieurs groupes porteurs de soufre dans la molécule. Peut-être, le fait de convenir aussi bien, qui est surtout remarquable chez les acides amino contenant des groupes sulfhydryles, peut être attribué à ce que, par la teneur en soufre, la décomposition provoquée par le ferment, l'ascorbinase, est empêchée ou toutefois tout au moins retardée.
Parmi les acides amino à prendre en considération pour le procédé de l'invention, nous mentionnerons à titre d'exemple la glycocolle, l'alanine, l'acide glutamique, et de préférence la méthionine, la méthionine acétylée, l'éthionine, la cystine, en particulier la cystéine, ainsi que la glutathione,ou l'homo-cystéine. On peut évidemment partir aussi de mélanges de ces corps ou d'autres acides amino. Comme -il- en a déjà été fait mention, les acides peuvent être utilisés tels quels pour la réaction ou aussi sous forme de leurs dérivés ou de leurs sels.
Il s'est toutefois révélé que, pour beaucoup d'acides amino, la réaction s'effectue au mieux lorsqu'on les transforme d'abord en chlorures d'acide et que, ensuite, on les fait réagir avec de l'acide ascorbique ou de l'ascorbinate de sodium, le cas échéant en présence d'agents séparant l'halogène, par exemple de carbonate de sodium ou de pyridine.
Au lieu d'acide ascorbique, on peut également, comme mentionné, utiliserrses sels ou dérivés, dans lesquels se trouve au moins le groupe endiole.
La proportion des constituants d'acides amino et de ceux d'acide ascorbique peut fluctuer dans certaines limites. On peut fixer ces constituants à peu près de manière équimoléculaire, mais il convient toutefois de les tenir dans des proportions moléculaires comprises entre 2:1 et 1:2.
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Exemple I :
3,52 parties d'acide ascorbique anhydre et 3,15 parties d'hy- drochlorure de cystéine anhydre sont dissoutes à la chaleur, dans une atmosphère d'azote, dans 40 parties d'alcool absolu. Après refroidisse- ment à la température ambiante, on ajoute 0,2 partie de chlorure de thio- nyle fraîchement distillée On laisse reposer le dépôt pendant 24 heures.
Sous une pression diminuée, on concentre jusqu'à un volume d'environ 25 parties et, ensuite, on précipite avec 250 parties d'éther anhydre. Le précipité se présente d'abord sous une forme huileuse, se solidifiant toutefois après quelque temps en une masse blanche cristalline. Le pré- cipité est filtré par aspiration et séché. - Rendements quasi quantita- tifs.
Exemple 2 :
3,52 parties d'acide ascorbique anhydre et 3,15 parties d'hydrochlorure de cystéine anhydre sont dissoutes à la chaleur dans 40 par- ties d'alcool absolu. Après le refroidissement, on introduit 0,3 partie environ de trifluorure de bore. Le traitement subséquent a lieu comme indiqué à l'exemple I.
Exemple 3 :
Dans une atmosphère d'azote, on procède à transfusion de 25 parties d'acétone dans 1 partie d'hydrochlorure de cystéine anhydre et 8 parties d'acide ascorbique anhydre, et on ajoute 0,1 partie de chlorure de thionyle. On laisse alors reposer le dépôt pendant 48:heures à la température ambiante, dans l'obscurité. Ensuite, on filtre par aspiration; le dépôt est lavé avec un peu d'acétone et le produit du filtrage est précipité avec 150 parties d'éther absolu. Après 24 heures, le précipité est devenu cristallin. Le solvant est filtré par aspiration et le précipité est lavé avec un peu d'éther.
Exemple 4 :
On ajoute 500 parties d'alcool absolu à 3,15 parties d'hydrochlorure de cystéine anhydre et 4 parties d'ascorbinate de sodium, dans une atmosphère d'azote, et on chauffe pendant 20 minutes à 37 . De la partie non dissoute on filtre ; le produit du filtrage est laissé pendant une nuit dans l'armoire frigorifique et, le lendemain il est concentré sous vide à 75 parties. D'un dépôt restant on sépare, et on ajoute 200 parties d'éther au produit du filtrage. Après un court repos, le précipité formé est filtré par aspiration et séché.
Exemple 5 :
Sur un laps de temps de 10 minutes, on ajoute goutte à goutte. à une température de 20 , de 6 à 8 parties de chlorure de thionyle très pur, fraîchement distillé, à 3,1 parties d'hydrochlorure de cystéine anhydre, finement pulvérisé. On chauffe ensuite à 37 au bain-marie.
Le dégagement gazeux cesse après 25 à 30 minutes. Pour que la réaction soit parfaite, on agite pendant 3 à 4 heures, et le produit obtenu est lavé avec de l'éther de pétrole anhydre. Les restes d'éther de pétrole
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sont éliminés sous vide,1;.q partie du ;prodúit"ot)t'elttf.Jde" ,cé't'ti 1itan:i:ré'.3e-àir ad- ditionnée à 2 parties d'ascorbinate de sodium qui, auparavant, a été mis en fine suspension dans 250 parties d'alcool absolu. On remue le mélange de réaction pendant une heure à une température de 40 à 45 dans une atmosphère d'azote. Le lendemain, on décante à partir du dépôt et l'al- cool est distillé sous vide à une température de 25 à 30 .
Lorsque la solution commence à se troubler, on précipite avec de l'éther anhydre et Ie précipité séparé est recristallisé à partir d'alcool absolu.
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Exemple 6 :
3,15 parties d'hydrochlorure de cystéine sont dissoutes dans 3,2 parties d'eau et on additionne à une solution provenant de 3,96 parties d'ascorbinate de sodium qui a été dissous dans 4,8 parties d'eau.
On ajoute alors 200 parties d'alcool absolu et on concentre à 20 parties sous vide obtenu.à la trompe à eau à une température de bain d'environ 40 . On additionne 100 parties d'éther anhydre au résidu. Le dépôt est ensuite placé dans l'armoire frigorifique et ,le lendemain, on filtre par aspiration le précipité formé. Le précipité est lavé avec un peu d'éther, pulvérisé et séché.
Exemple 7 :
On additionne 3,96 parties d'ascorbinate de sodium pulvérisé et séché à 3,15 parties d'hydrochlorure de cystéine pulvérisé et séché et 150 parties de chloroforme anhydre, et on chauffe pendant 5 heures au réfrigérant à reflux. Le chloroforme est ensuite distillé, en dernier lieu sous pression diminuée.. Le résidu est pulvérisé et séché.
Exemple 8 :
On dissout en remuant 3,22 gr d'hydrochlorure de cystéine soigneusement séché, dans 400 ml d'alcool éthylique absolu, A une température de 40 , on ajoute une suspension de 3,96 gr d'ascorbinate de sodium dans 100 ml d'alcool éthylique absolu; on remue pendant 2 1/2 heures à 40 C dans une atmosphère d'azote, et on laisse reposer à la température ambiante pendant la nuit. On filtre ensuite par aspiration 1,7 gr de pré'cipité constitué principalement par du chlorure de sodium. On concentre le produit du filtrage sous un vide faible et une température ne dépassant pas 40 , sous passage d'azote, jusqu'à un volume d'environ 130 ml, la solution commençant alors à se troubler ; onajoute 260 ml d'éther an- hydre et on laisse reposer pendant 10 heures à la température de l'armoire frigorifique.
Le précipité, blanc, amorphe, obtenu comporte environ 1,6 gr, est facilement soluble dans l'eau et peu soluble dans la plupart des solvants organiques. De l'examen analytique, il résulte une faible teneur, difficile à discerner, de chlorure de sodium, et comme produit principal une combinaison de deux constituants de départ : acide ascorbique et cystéine. Le spectre aux U.V. de la substance produite conformément à l'invention accuse un maximum à 245 m6n.
Exemple 9 :
On additionne 1,49 gr de méthionine finement pulvérisée à 200 ml d'acool éthylique absolu et on l'amène à solution sous agitation et léger chauffage par addition d'une quantité supplémentaire de 20 ml d'alcool éthylique contenant en tout 0,36 gr d'acide chlorhydrique.
On additionne la solution ayant encore une température d'environ 40 à une suspendion de 1,98 gr d'ascorbinate de sodium dans 20 ml d'alcool éthylique absolu, et, après avoir balayé l'oxygène contenu dans le réci- pient par de l'azote sec et pur, on agite pendant 30 minutes à une tem- pérature de 40 C. Après refroidissement, on filtre à partir du non-dissous, on concentre le produit du filtrage sous faible vide jusqu'à 75 ml, on ajoute 250 ml d'éther anhydre, et on laisse reposer pendant 48 heures à la température de l'armoire frigorifique. On a séparé ainsi de fins cristaux incolores de 0,7 gr, en forme d'écailles, qui brunissent légèrement à partir de 200 C, mais qui nefondent pas encore à 260 .
La-teneur en azote du composé trouvé est de 4,5 %, celle en soufre de 10,3 %.
Exemple 10 :
D'après le procédé décrit par S.Levine dans le I.Am.Chem.Soc., 76, 1382 (1954), l'hydrochlorure - chlorure d'acide - méthionine, est représenté à partir de méthionine et de penthachlorure de phosphore dans
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du tétrachlorure de carbone.
On met 1,98 de ce composé fort hygroscopique en suspension, en l'absence de toute humidité, dans 100 ml d'éther anhydre, on ajoute une ouspension de 1,98 d'ascorbinate de sodium dans 100 ml d'éther, et on procède ensuite comme décrit aux exemples 1 et 2. Après épuration on obtient des prismes incolores, solubles dans l'eau, dont la teneur en soufre avec 9,1 % et celle en azote avec 4,2 % correspondraiemt à une formule C10H15o7NS.HCl.
Avec les produits représentés aux exemples ci-avant, on a procédé à une assez grande série d'essais comparatifs sur des anima*.
Pour ces essais, on a utilisé des cultures de forte virulence, prove- nant de l'être humain, des bactéries suivantes, après les avoir enco- re soumises à 5 passages sur des animaux afin d'en accroître la virulen- ce :
Pneumocoque, streptocoque hémolytique staphylocoque.pyogène, (hémolytique) et colibacille hémolytique. Il s'agissait partiellement de staphylocoque, Oxford ainsi que de streptocoque hémolytique Aron- son. Avec ces bactéries, on infecta des souris (animaux de contrôle et d'essai) par 3 piqûres intra-péritonéales. Les animaux d'essai reçurent des intervalles différents (jusqu'à 4 1/2 heures après contamination) une seule dose de l'agent de traitement, en quantités croissant suivant le temps écoulé de 0,5 à 5mg, dans une solution de chlorure de sodium physiologique de 0,3ml.
Les animaux de contrôle non traités moururent, tandis que ceux servant à l'essai, traités avec les produits conformes à l'invention, survécurent sans accuser de troubles visibles.
REVENDICATIONS.
1) Procédé de préparation d'un agent bactériostatique à bactéricide contenant de l'acide ascorbique, caractérisé par le fait que l'acide ascorbique, ses dérivés ou ses sels sont mis en réaction, de préférence en solution, avec des acides amino, en particulier convenant au corps humain, leurs dérivés ou leurs sels, et que le produit de réaction, le cas échéant sous addition de précipitants organiques, comme éther, est isolé du mélange de réaction sous forme @@ solide.
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The present invention relates to a process for the preparation of a bacteriostatic to bactericidal agent which is based on the use of ascorbic acid and which, already used in low doses, can acquire serious bactericidal properties without induce unpleasant secondary phenomena in the body, unlike known similar agents.
It is known that ascorbic acid, as vitamin C, exerts favorable effects on the human or animal body and that, in case of application of larger amounts, it is also suitable to a certain extent to reduce the tendency to inflammation. In any case, vitamin C is extraordinarily sensitive and, of all the most famous vitamins, it is it that is destroyed the most easily. This applies both to the influences exerted by the body on ascorbic acid and to external influences, such as chemical attacks by oxygen or high temperature.
The present invention arises from the fact that it is possible not only to stabilize ascorbic acid against chemical or physical external influences, but also to stabilize it in order to prevent its premature decomposition in the organism, and this by reacting it with amino acids. It has indeed been surprising to find that the reaction products of ascorbic acid with amino acids are not subjected in the body to a decomposition as rapidly and as strongly as ascorbic acid alone, and that, on the contrary, being the increase of their resistance, they can exert their action in places where they are used by the body to prevent certain disorders or to fight certain diseases.
It was no less predictable that, as was demonstrated by animal experiments, even the application of small amounts, for example 0.03 to 1 mg per mouse, of these ascorbic acid reaction products with amino acids, would be sufficient to develop therapeutic effects which are similar or even far superior to those of known remedies with a bactericidal effect, such as, for example, sulfonamides or anti-biotics. This is therefore an exceptional potential effect, which can be achieved as little with simultaneous or successive doses of the constituents as with the application of simple mixtures.
As a particular advantage, however, it must be emphasized that the use of the reaction products prepared in accordance with the invention results in practically no unpleasant side effects, such as, for example, deterioration of the blood, deterioration of the intestinal flora, allergic phenomena. or dermatitis.
According to the process of the invention, the products described are prepared as follows: ascorbic acid or its derivatives or salts are reacted in a liquid agent with amino acids, their salts or derivatives, in dispersion and / or in solution, and the reaction product is separated from the reaction mixture. In the interest of rapid and complete conversion into highly effective products, it is preferable to work at elevated temperatures, for example between 30 and 130, in particular 35 to 80. As mentioned, the constituents of the reaction which are generally soluble in water can be combined in an aqueous agent.
However, it is also possible to have recourse to organic liquids and to use one or the other constituent in fine dispersion. If, for example, one starts with sodium ascorbinate, it will be advisable to work in an alcoholic suspension.
The reaction conditions can be chosen such that the reaction proceeds in the direction of the formation of a salt, e.g.
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Example of a complex salt. Since, however, the products with binding of the constituents in the manner of the ester have proved to be superior from the point of view of efficiency, one will preferably work in the direction of an etherification by carrying out the reaction according to an advantageous formula of implementation. of the process, in the presence of materials promoting etherification. Particularly suitable in this case are additions, such as thionyl chloride or boron trifluoride.
Separation of the reaction product from the reaction mixture can take place by partial or complete evaporation of the solvent or dispersant. optionally with subsequent crystallization, in which case the separation of the solid reaction product can be promoted or completed, particularly by precipitation with organic liquids; such as, for example, ether, petroleum ether.
Since ascorbic acid exhibits great stability to external and organic influences only after reaction with amino acid, it is advantageous to carry out the conversion in the absence of oxygen. taking place, for example, in a nitrogen atmosphere, or else nitrogen being carried through the liquid reaction mixture.
As the second component of the reaction, first of all amino acids will be used, which are suitable for the human body as albumin formers and which can therefore be regarded as particularly valuable for the inhaling body. In this way, it is of course also possible to combine the bacteriostatic or bactericidal application of the active agent with desirable side reactions in relation to the use of amino acids.
For these effects, amino acids with one or more sulfur bearing groups in the molecule have been found to be particularly suitable. Perhaps, the suitability so well, which is especially noticeable in amino acids containing sulfhydryl groups, can be attributed to the fact that, by the sulfur content, the decomposition caused by the ferment, ascorbinase, is prevented. or at least delayed.
Among the amino acids to be taken into consideration for the process of the invention, we will mention, by way of example, glycocoll, alanine, glutamic acid, and preferably methionine, acetylated methionine, ethionine, cystine, in particular cysteine, as well as glutathione, or homocysteine. It is of course also possible to start from mixtures of these substances or of other amino acids. As has already been mentioned, the acids can be used as such for the reaction or also in the form of their derivatives or their salts.
It has been found, however, that for many amino acids the reaction proceeds best when first converted to acid chlorides and then reacted with ascorbic acid. or sodium ascorbinate, where appropriate in the presence of halogen separating agents, for example sodium carbonate or pyridine.
Instead of ascorbic acid, it is also possible, as mentioned, to use its salts or derivatives, in which at least the endiole group is found.
The proportion of the constituents of amino acids and those of ascorbic acid can fluctuate within certain limits. These constituents can be fixed in approximately equimolecular fashion, but they should however be kept in molecular proportions between 2: 1 and 1: 2.
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Example I:
3.52 parts of anhydrous ascorbic acid and 3.15 parts of anhydrous cysteine hydrochloride are dissolved with heat, in a nitrogen atmosphere, in 40 parts of absolute alcohol. After cooling to room temperature, 0.2 part of freshly distilled thionyl chloride is added. The deposit is allowed to stand for 24 hours.
Under reduced pressure, concentrate to a volume of about 25 parts, and then precipitate with 250 parts of anhydrous ether. The precipitate initially appears in an oily form, but after some time solidifies into a white crystalline mass. The precipitate is filtered off with suction and dried. - Quasi-quantitative returns.
Example 2:
3.52 parts of anhydrous ascorbic acid and 3.15 parts of anhydrous cysteine hydrochloride are dissolved with heat in 40 parts of absolute alcohol. After cooling, approximately 0.3 part of boron trifluoride is introduced. The subsequent processing takes place as indicated in Example I.
Example 3:
In a nitrogen atmosphere, 25 parts of acetone are transfused in 1 part of anhydrous cysteine hydrochloride and 8 parts of anhydrous ascorbic acid, and 0.1 part of thionyl chloride is added. The deposit is then left to stand for 48 hours at room temperature, in the dark. Then, suction filtered; the deposit is washed with a little acetone and the filtering product is precipitated with 150 parts of absolute ether. After 24 hours, the precipitate became crystalline. The solvent is filtered off with suction and the precipitate is washed with a little ether.
Example 4:
500 parts of absolute alcohol are added to 3.15 parts of anhydrous cysteine hydrochloride and 4 parts of sodium ascorbinate, in a nitrogen atmosphere, and the mixture is heated for 20 minutes at 37. From the undissolved part is filtered; the filtering product is left overnight in the refrigerated cabinet and the next day it is concentrated under vacuum to 75 parts. From a remaining deposit is separated, and 200 parts of ether are added to the filter product. After standing for a short time, the precipitate formed is filtered off by suction and dried.
Example 5:
Add dropwise over a 10 minute period. at a temperature of 20, from 6 to 8 parts of very pure thionyl chloride, freshly distilled, to 3.1 parts of anhydrous cysteine hydrochloride, finely powdered. Then heated to 37 in a water bath.
Gas evolution ceases after 25 to 30 minutes. In order for the reaction to be perfect, the mixture is stirred for 3 to 4 hours, and the product obtained is washed with anhydrous petroleum ether. The remains of petroleum ether
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are removed under vacuum, 1; .q part of; product "ot) t'elttf.Jde", cé'ti 1itan: i: ré'.3e-air added to 2 parts of sodium ascorbinate which , previously, was suspended in 250 parts of absolute alcohol. The reaction mixture is stirred for one hour at a temperature of 40 to 45 in a nitrogen atmosphere. The next day, decant from the deposit and the alcohol is vacuum distilled at a temperature of 25 to 30.
When the solution begins to cloud, precipitate with anhydrous ether and the separated precipitate is recrystallized from absolute alcohol.
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Example 6:
3.15 parts of cysteine hydrochloride are dissolved in 3.2 parts of water and added to a solution from 3.96 parts of sodium ascorbinate which has been dissolved in 4.8 parts of water.
200 parts of absolute alcohol are then added and the mixture is concentrated to 20 parts under vacuum obtained with a water pump at a bath temperature of about 40. 100 parts of anhydrous ether are added to the residue. The deposit is then placed in the refrigeration cabinet and, the next day, the precipitate formed is filtered off by suction. The precipitate is washed with a little ether, pulverized and dried.
Example 7:
3.96 parts of powdered and dried sodium ascorbinate are added to 3.15 parts of powdered and dried cysteine hydrochloride and 150 parts of anhydrous chloroform, and the mixture is heated for 5 hours in reflux condenser. The chloroform is then distilled off, lastly under reduced pressure. The residue is pulverized and dried.
Example 8:
3.22 g of carefully dried cysteine hydrochloride are dissolved with stirring in 400 ml of absolute ethyl alcohol.At a temperature of 40, a suspension of 3.96 g of sodium ascorbinate in 100 ml of sodium ascorbinate is added. absolute ethyl alcohol; stir for 2 1/2 hours at 40 ° C in a nitrogen atmosphere, and let stand at room temperature overnight. 1.7 g of precipitate consisting mainly of sodium chloride are then filtered off by suction. The product of filtering is concentrated under a low vacuum and a temperature not exceeding 40, under passage of nitrogen, to a volume of about 130 ml, the solution then beginning to cloud; 260 ml of anhydrous ether are added and the mixture is left to stand for 10 hours at the temperature of the refrigerated cabinet.
The precipitate, white, amorphous, obtained comprises about 1.6 g, is easily soluble in water and sparingly soluble in most organic solvents. Analytical examination shows a low content, difficult to discern, of sodium chloride, and as the main product a combination of two starting constituents: ascorbic acid and cysteine. The U.V. spectrum of the substance produced in accordance with the invention shows a maximum at 245 m6n.
Example 9:
1.49 g of finely powdered methionine are added to 200 ml of absolute ethyl alcohol and brought to solution with stirring and slight heating by adding an additional 20 ml of ethyl alcohol containing in all 0.36 gr of hydrochloric acid.
The solution, still having a temperature of about 40, is added to a suspension of 1.98 g of sodium ascorbinate in 20 ml of absolute ethyl alcohol, and, after having swept away the oxygen contained in the vessel with dry and pure nitrogen, stirred for 30 minutes at a temperature of 40 C. After cooling, the mixture is filtered from the undissolved, the product of the filtering is concentrated under low vacuum to 75 ml, added. 250 ml of anhydrous ether, and left to stand for 48 hours at the temperature of the refrigerated cabinet. In this way, fine colorless crystals weighing 0.7 gr, in the form of scales, which turn slightly brown from 200 ° C., but which do not yet melt at 260, were separated.
The nitrogen content of the compound found is 4.5%, that of sulfur 10.3%.
Example 10:
According to the process described by S. Levine in I. Am. Chem. Soc., 76, 1382 (1954), hydrochloride - acid chloride - methionine, is represented from methionine and phosphorus penthachloride in
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carbon tetrachloride.
1.98 of this strong hygroscopic compound is suspended, in the absence of any moisture, in 100 ml of anhydrous ether, a suspension of 1.98 of sodium ascorbinate in 100 ml of ether is added, and the procedure is then as described in Examples 1 and 2. After purification, colorless prisms soluble in water are obtained, the sulfur content of which with 9.1% and that of nitrogen with 4.2% correspond to a formula C10H15o7NS. HCl.
With the products shown in the examples above, a fairly large series of comparative tests on animals was carried out.
For these tests, cultures of high virulence from humans were used of the following bacteria, after having again subjected them to 5 passages in animals in order to increase their virulence:
Pneumococcus, streptococcus haemolytic staphylococcus, pyogenic, (haemolytic) and colibacillus haemolytic. These were partially staphylococcus, Oxford as well as Aronson hemolytic streptococcus. With these bacteria, mice (control and test animals) were infected by 3 intraperitoneal punctures. The test animals received at different intervals (up to 4 1/2 hours after contamination) a single dose of the treatment agent, in increasing amounts with elapsed time from 0.5 to 5 mg, in chloride solution. of physiological sodium of 0.3ml.
The untreated control animals died, while those used in the test, treated with the products according to the invention, survived without showing visible disturbances.
CLAIMS.
1) Process for preparing a bacteriostatic to bactericidal agent containing ascorbic acid, characterized in that ascorbic acid, its derivatives or its salts are reacted, preferably in solution, with amino acids, in particularly suitable for the human body, their derivatives or their salts, and that the reaction product, optionally with the addition of organic precipitants, such as ether, is isolated from the reaction mixture in solid form.