UA79440C2 - Аналоги гормону, що вивільнюють гормон росту людини, спосіб їх одержання, фармацевтична композиція та спосіб лікування - Google Patents

Abstract

Винахід належить до аналогів гормону, що вивільнюють гормон росту, що мають амінокислотну послідовність формули: Dat-Ala-Asp-Ala-lle-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr10-R11-R12-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-R20-R21-Leu-Leu-Gln-Asp-lle-Nle-Asp-R29-NH2 (І), в якій R11 є hArg, Gab або Gap; R12 є hАrg, Orn, Gab або Gap; R20 є hАrg, Gab або Gap; R21 є hАrg, Gab або Gap; R29 є D-Arg, hArg, Gab або Gap; і їх фармацевтично прийнятних солей; способу одержання пептидів - аналогів гормону; фармацевтичної композиції, що містить активну речовину, та способу лікування розладів, викликаних дефіцитом гормону росту у людини.

Description

Опис винаходу

Представлений винахід стосується нових пептидів - аналогів гормону, що вивільнює гормон росту людини, 2 способу одержання нових пептидів і їх терапевтичного застосування.

Вивільнення і синтез гормону росту людини (СН, соматотропін) знаходиться під постійним контролем з боку двох взаємно антагоністичних гіпоталамічних гормонів - гормону, що інгібує вивільнення гормону росту (СІН, соматостатин) і гормону, що вивільнює гормон росту. Терапія, що грунтується на призначенні гормону, що вивільнює гормон росту людини (ПОН-КН), може застосовуватись для більшості пацієнтів з недостатнім рівнем 70 сн. Було встановлено, що його М-термінальний аналог пОН-КН(1-29)-МНо, який є вкороченим фрагментом,

Зберігає повну біологічну активність ендогенного ПОН-КН, який містить 44 амінокислотні залишки. пОеН-КН(1-29)-МН» можна одержати за допомогою синтезу; синтетичний ЗН-КН(1-29)-МНо під назвою ацетат сермореліну стверджений для використання при лікуванні дітей маленького зросту і також досліджується можливість його використання при лікуванні розладів нейросекреції, як ад'ювант для гонадотропінвикликаної 12 овуляції у безплідних жінок і для лікування СНІД-залежних катаболітичних розладів.

Однак, описується, що пОеН-КН(1-29)-МН 2 є відносно нестійкими до ферментної деградації. Основними метаболітами, що спостерігаються, є характеристичними для розщеплення зв'язку між Ага Пдув'я! і

І ув2-уа!"З, що викликається трипсинподібними ферментами (І.А. Егоптап, Т.В. Оом/пв, ЕР. Неїтег, А.М. Ееїїх 20 У. Сііп. Іпмеві. 1989, 83, 1533-1540). Нещодавно було встановлено, що при деградації трипсином аналогу пОеНн-КН(1-29)-МН»о відбувається гідроліз пептидних зв'язків при карбоксильній групі всіх основних амінокислотних залишків, включаючи С-термінальний амідний зв'язок, в той час як у аналогу, який відрізняється тільки наявністю Огп залишків замість І уз, гідролізують тільки зв'язки сусідні з Ага залишками (Е. УУйКкомузКа,

А. ОпПомузКа, В. Задап, М. Зтоїиси, 4. ІгаереКкі У. Реріїде Зсі. 2000, 6 (Биррі.), 189; Е. УуйКомузКа, А. сч ре Опомувка, В. адап, М. ЗтоїЇисп, .). ІгаереКкі У. Рерііїде Зсі, 2001, 7, 166-172). Це відкриття узгоджується з надзвичайно високою іп мімо активністю аналогів, що містять Огп в положеннях 12 і 21 |У. Ігдер»кі, 9. Ріпекі, о

У.Е. Ногмаїйй, б. НаІтозв, К. сгоої, А.М. ЗегіаПу, Ргос. Маї!. Асад. Зсі. ОБА, 1995, 92, 4872-4876).

Були здійснені спроби подолати проблему нестабільності НОН-КН(1-29)-МН», іпіег айа шляхом заміни Ага в положенні 29 амінокислотної послідовності на Адт (4-гуанідилбутиламін) (Ва)ив52 еї аї.,, іп Реріїдез 1982, о 30 Віана.апа Меїоп, Едв».; МУ. Ое Сгиуїег, Вегпііп-Мем/ Могк, рр.643-647)Ї, або шляхом заміни Туг в положенні 1 на

Оаї (дезамінотірозин) і Гуз в положенні 12 на 0-І уз, Ага або Огп |Міжнародні заявки Мо УУО 94/11396 і МО « 94/11397|. «

Однак, результати цих спроб є незадовільними і все ще існує потреба в аналогах, що поєднують підвищену здатність вивільнювати гормон росту із висоткою стійкістю до ферментної деградації, які б дозволили зменшити 35 дози лікарського засобу і/або зменшити кількість введень. їм

Винахідниками було встановлено, що введення певних амінокислот у аналог гормону, що вивільнює гормон росту людини, не тільки призводить до аналогів з вищою біологічною активністю - кращою здатністю вивільнювати гормон росту, але також мають корисний вплив на стійкість пептидів до ферментів. Певними амінокислотами є О-Агуд в положенні 29, і амінокислоти, що містять гуанідинові групи в їх бічному ланцюзі, в « 40 положеннях зайнятих в природному пептиді І уз і Ага. -о

Нові пептиди - аналоги гормону, що вивільнює гормон росту, згідно з винаходом мають амінокислотну с послідовність формули (1): з раї-Аіа-Авр-Аіа-Пе-Рпе-Тпг-Авп-Зег-Туг 19-В11-812.Уані еи-Ага-Сіп-І еи-Зег-Аіа-В. 20-К21-| ец-І еи-Сіп-Авр-Пе-Міе-Авр-В 29-МНо (І) в якій: і 11 .

КК" ерАго, Ссаб або Сар; се) 272 є пАго, От, Са або Сар; ї» 229 є пАго, Саб або Сар; їз 50 В2! є пАго, От, баб або Сар; 829 є р-Аго, пАго, Са або Сар. с Нові пептиди є сильними і селективними стимуляторами вивільнення гормону росту і вони мають високу резистентність до дії ферментів.

Нові пептиди або їх фармацевтично прийнятна сіль можуть бути введенні пацієнтові індивідуально або як активний інгредієнт фармацевтичних композицій. о Таким чином, представлений винахід також стосується фармацевтичної композиції, що містить, принаймні, ю один з нових аналогів гормону, що вивільнює гормон росту, який має амінокислотну послідовність формули (1): раї-Аіа-Азр-Аіа-Пе-Рпе- Тпг-Авп-Зег-Туг 10-8 11-82 12.Уа/-І еи-Аіа-Сіп-і еи-Зег-Аіа-В. 20-821-| ец-І еи-Сіп-Авр-Пе-Мміе-Азр-В. 29-МНа (І) 60 в якій:

В" є пАго, Саб або Сар;

В: є пАго, От, баб абс Сар; 229 є пАго, Саб або Сар; бо 22! є пАго, От, Са або Сар;

229 є О-Аго, пАго, Сай або Сар. або його фармацевтично прийнятну сіль і, принаймні, один носій і/або екціпієнт.

Нові пептиди є корисними для попередження і лікування розладів обумовлених дефіцитом ПеН-КН.

Представлений винахід також забезпечує спосіб лікування розладу обумовленого дефіцитом гормону росту людини, що включає введення пацієнтові, що потребує лікування, терапевтично ефективної дози пептиду - аналогу НОН-ВН формули (І), де В", В72, 220, В?! ї В29 с такими як описано вище.

Нові пептиди - аналоги гормону, що вивільнює гормон росту, мають амінокислотну послідовність формули (1): раї-Аїіа-Азр-Аіа-Пе-Рпе-Тпг-Авп-Вег-Туг 19-К11-к12.УаІ-І еи-Аіа-Сіп-І еи-Зег-Аіа-В. 20-821-| вц-І еи-Сіп-Авр-Пе-Міе-Азр-В. 29-МНо (І) в якій:

В" є пАго, баб абс Сар;

В: є пАго, От, баб або Сар; 220 є пАго, Са або Сар; 22! є пАго, От, Са або Сар: 829 є р-Аго, пАго, Са або Сар.

Переважними пептидами цього винаходу є: (у раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зег- Туг 19-нАго-пАга-ма!-І еи-Аїа-СІп-І еи-Зег-Аіа-пАго 29-пАга-І ец-І ец-сІп-Авр-Пе-

Міе-Авр-пАга29-МН»; (2) раї-АїІа-Азр-АІа-Пе-РНе-Тпг-Авп-Зег- Туг 19-нАга-Огп-Ма!-І еи-АІа-СІп-І еи-Зег-Аіа-пАго 29-Огп-І ецш-І еи-СІп-Авр-Іе-МІ с е-Авр-пАга29-МНа; о (3) сСа!/-АІа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зег- Туг 19-(Ззар-Сар-Мма!-І еи-АІа-СІп-І еи-Зег-АІа-Сар-сар-! ец-І еи-сіп-Авр-Пе-Мів-

Авр-Сар-МН»; () що 3о раї-АїІа-Азр-АІа-Пе-РНе-Тиг-Авп-Зег- Туг 19-нАгд-Зар-ма!-І еи-АІа-СІп-І еи-Зег-АІа-СЗар-Сар-і ецш-І еи-(Іп-Авр-Пе-Міе- Й

Авр-Сар-МН»: « (5)

Оаї-Аіа-Азр-Аїа-Пе-Рпе-Тпг-Авп-Зег-Туг 19-(Зар-пАго-Ма!-І еи-АІа-СІп-І еи-Зег-АІа-пАго-пАго-І ец-І еи-СІп-Авр-Іе-Мі (є) е-Авр-О-Ага-МН о; їч- (6) раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпа- Тиг-Азп-Зег- Туг 19-нАго-Зар-маї!-І еи-АІа-СіІп-І еи-Зег-АІа-пАга-пАго-і ец-І еи-СІп-Азр-Іе-МІ е-Авр-О-Ага-МН»; « (7 раї-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зег- Туг 1У-(Зар-Сар-Ма!-І еи-АІа-сіп-І еи-Зег-АІа-Сар-Сарі ец-І еи-СІп-Азр-Іе-Міе-А - с зр-Сар-МН»; ч» (8) и раї-АїІа-Азр-Аїіа-Пе-РНе-Тпг-Авп-Зег-Туг 19-Зар-Сар-Ма!-І еи-Аіа-СІп-І еи-Зег-Аіа-пАго-Сар-і еиш-І еи-СіІп-Авр-ІПе-Мів-

Авр-Сар-МН».

Пептидами особливо переважними з огляду на біологічну активність і стійкість до дії ферментів травлення є: - раї-АїІа-Авр-Аіа-Пе-РНе- Тиг-Авп-Зег- ТугО-пАгуд-пАго-Ма!-І еш-АІа-СІп-І еи-Зег-АІа-пАгу 29 со -НАго-І ец-І еи-СІп-Авр-ІПе-Міе-Авр-пАгу 29-МН», і раї-Аіа-Азр-АІа-Пе-РНе-Тиг-Авп-Зег- Туг 19-нАгд-Огп-Ма!-І еш-АІа-СІп-І еи-Зег-АІа-пАгуо 29 ь -Огп-І еш-І еш-(Іп-Азр-Пе-Міе-Авзр-пАго 29-МН». т» 20 Нові пептиди корисні для попередження і терапії розладів обумовлених дією гормону, що вивільнює гормон о росту людини, і тому вони можуть бути використані для лікування маленького зросту у дітей вікозалежних розладів, для збільшення лінійної ваги тіла і вмісту мінеральних речовин в кістках, при загоєнні ран, для лікування опіків шкіри і переломів кісток, як не стероїдний анаболік при слабкості обумовленій хронічним захворюванням, а також в діагностиці.

Згідно з способом представленого винаходу, при лікуванні розладів обумовлених дією гормону, що вивільнює

ГФ) гормон росту людини, пацієнтові, що потребує такого лікування вводять терапевтично ефективну кількість 7 пептиду - аналогу НЗН-КН, що має амінокислотну послідовність (1).

Рівні дозування і режим залежите від виду захворювання, віку пацієнта, ваги і стану, і можуть бути визначте спеціалістом, виходячи з відомих терапевтичних і профілактичних способів лікування дефіциту 60 гормону, що вивільнює гормон росту людини. При лікуванні захворювань цього виду, придатна одиниця дозування аналогу НЗН-КН зазвичай становить від 0,01 до 2мкг на кілограм ваги тіла на дозу. Придатна добова дога може бути введена пацієнтові у вигляді однієї або декількох одиничних доз на день, за винятком форм з контрольованим вивільненням, таких як депо або імплантати. Форми з контрольованим вивільненням вводяться через кожні 15 днів або 30 днів, або один раз на три місяці. бо Петити представленого винаходу корисно вводити пацієнтові у будь-якій придатній фармацевтичній формі,

будь-яким придатним шляхом, таким як внутрішньовенний, підшкірний, внутрішньом'язовий, пероральний, інтраназальний або пульмонарна інгаляція.

Нові пептиди можуть бути введені окремо або, необов'язково, в комбінації з іншими терапевтичними агентами, що використовуються при лікуванні розладів обумовлених дефіцитом гормону, що вивільнює гормон росту людини, при умові, що вони не спричиняють негативного впливу на дію один одного. Такі сполуки можуть бути введенні одночасно як одна рецептура, або у вигляді окремих рецептур або одна після одної, у відповідності із інтервалами, що визначає спеціаліст. Лікарю відомо, які лікарські засоби і комбінації вибрати.

Фармацевтичні агенти представленого винаходу містять, принаймні, одну активну речовину, яка є пептидом - /о аналогом НОН-КН, що має амінокислотну послідовність формули І, або її фармацевтично прийнятну сіль і, принаймні, один носій і/або екціпіент.

Фармацевтичні рецептури представленого винаходу можуть бути одержані у вигляді різних фармацевтичних форм, добре відомих спеціалісту в цій галузі, таких як, наприклад з |Кеттіподіоп'в Рнагтасеціїса! Зсіепсев, 181

Еа., Маск Рибіїзпіпд Сотрапу, 1990).

Фармацевтичними рецептурами придатними для ін'єктування і вливання є стерильні водні, водо-органічні і неводні розчини, суспензії, сухі речовини і таблетки для одержання розчину і імплантати. Носії, що використовуються для одержання суспензій, гарантують рівномірне розподілення активного інгредієнту в рідкій фазі і ними є полісорбати, лецитин, ПЄГ-співполімери поліпропіленгліколю, пептизатори, такі як фосфорани, поліфосфорани і цитрати водорозчинних полімерів, таких як карбоксиметилцелюлоза, метилцелюлоза, полівінілпіролідон, камеді або желатин. Рецептури для ін'єктування можуть містити фармацевтично прийнятні носії або екціпієнти, такі як регулятори рН, буфери тоніки і консерванти. Сухі речовини використовуються для одержання розчинів або непідготовлених суспензій шляхом розведення придатним розчинником.

Для зручності пацієнта і для того щоб досягти прийнятних характеристик вивільнення речовини, похідне пептиду зазвичай вводять у вигляді рецептур для ін'єкції з контрольованим вивільненням і пролонгованою дією, сч ор таких як кристалічні полімерні мікрокапсули, що містять активну речовину. Іншим прикладом часозалежної рецептури є імплантат на основі полімеру одержаний шляхом розчинення біодефадуємого полімеру і пептидів і) цього винаходу у водозмішуваному розчиннику з утворенням рідкої композиції. Коли ін'єктується, полімер утворює депо, з якої активна речовина повільно вивільнюється.

Фармацевтичними формами придатними для введення пероральним шляхом є таблетки, пігулки, порошки, о зо гранули, драже або капсули, що містять фармацевтично прийнятні тверді носії, такі як кукурудзяний крохмаль, лактоза, цукроза, сорбіт, водний силікат мамію, стеаринова кислота, стеарат магнію, гідрофосфат кальцію або « камеді. Таблетки або гранули можуть мати покриття або бути оброблені іншим чином для одержання одиниці «г дозування, що гарантує переважний час вивільнення. Для формування таких захисних шарів або покриттів може бути використаний ряд різних речовин, включаючи полімерні кислоти і суміші полімерних кислот з іншими Ме

Зз5 речовинами, такими як шелак, цетиловий спирт або ацетатцелюлози. ї-

Фармацевтична рецептура, що містить пептид як активну речовину, також може зустрічатись у придатних для введення як аерозолі або порошки для інгаляції. Типова аерозольна рецептура, окрім водного розчину активної речовини, може містити буфери, ізотонічні речовини, консерванти і, необов'язково, інші екціпієнти, що роблять можливим введення активної речовини за допомогою дозованого розпилювача або крапельниці. «

Нові пептиди представленого винаходу можуть бути одержані середнім спеціалістом в цій галузі що знає ств) с методики хімічного синтезу, такі як класичний синтез у розчині або твердофазний синтез. . В способі синтезу у розчині, придатно захищені термінальні Мо-амінопохідні амінокислот з захищеними «» бічними ланцюгами (якщо присутні реакційні бічні ланцюги) або фрагменти пептиду конденсують з прийнятно захищеними карбоксильними похідними амінокислот або фрагменти пептидів, о-амінофункцію зазвичай захищають у формі карбамату, такого як кислотонестійка трет-бутоксикарбонільна група (Вос), -І бензилоксикарбонльна група (7, СВ;7) або їх заміщені аналоги, або у формі 9-флуоренілметоксикарбонільної со (ЕГтос) захисної групи, які є не стійкими в основному середовищі. Карбоксильні групи можуть бути захищені як естер, наприклад, метиловий естер, який є нестабільним в присутності нуклеофільних основ, трет-бутиловий «г» естер, який є нестабільним в кислому середовищі або бензиловий естер, який є нестабільним за гідрогенолітичних умов. Карбоксильні групи в захищеній структурі активуються за допомогою азиду, змішаного е ангідриду, активованого естеру, з використанням фосфонієвої або уронієвої кислоти або шляхом використання с карбодіїмідного способу, використовуючи сполуки, які каталізують реакцію, що викликає рацемізацію, таку як

М-гідроксисукцинімід, 1-гідроксибензогриазол, 1-гідрокси-7-азабензотриазол або

З-гідрокси-4-оксо-3,4-дигідро-1,2,3-бензотриазин. Способи конденсування і захисні групи, що зазвичай використовуються в хімії пептидів, описані в (Реріідез: Апаїузіз, Зупійпевіз, Віоіоду, Мо! З, Е. Оговв, 3.

Меїеппоїег, Едз (Асадетіс Ргевзв, Мем МогкК, 1981) і Ргоїесіме Сгоцрз іп Огдапіс Зупіпезів, Зесопа Еайіоп о (ММіеу, Мем Хогк, 1991). ко В твердофазному синтезі пептидів (ГОСП) запропонованому |Мегтійеіа (9). Ат. Спет. ос. 85 (1963), 2149) використовують нерозчинний в реакційному середовищі полімерний носій, що містить функціональну групу, до бо якої може бути приєднана перша амінокислота. Полімерна матриця використовується як перманентна

С-термінальна захисна група. Синтез розпочинають з приєднання першої М о-захищеної амінокислоти до лінкерної групи. Після зняття захисту з аміногрупи додають іншу активовану захищену амінокислоту. Ланцюгове подовження здійснюють шляхом послідовних стадій зняття захисту і конденсування. В кінці кінців,

М-термінальний вільний пептид відщеплюють від смоли з супровідним зняттям захисту функціональних груп 65 бічних ланцюгів. Нерозчинний носій легко відфільтровується з розчину пептиду. Полімерами придатними як носій є, наприклад, целюлоза, полі вініловий спирт, поліметакрилати, співполімер хлорметильованийдивинілбензол-полістерол, 4-метилбенгідриламінова смола (МБГА смола), бензгідриламінова смола (БГА) і їм подібні. Синтез пептидів на полімерному носії проводять в розчинниках, які розчиняють амінокислотні похідні, що використовуються, і є нейтральними за умов проведення реакції. Переважними є

ВоЗчИННИКИ, які додатково добре набухають, такі як диметилформамід, дихлорметан, М-метил-2-піролідон, ацетонітрил, диметилсульфоксид і їх суміші. Після відщеплення амінокислоти від полімерного носія, очищають, наприклад використовуючи високоефективну рідинну хроматографію.

Нові пептиди - аналоги ЗН-КН представленого винаходу, що містять гуанідинову групу в бічних ланцюгах амінокислот переважно одержують використовуючи твердофазний синтез, шляхом введення придатних похідних 70 лізину, 2,4-діаміномасляної кислоти або 2,3-діамінопропіонової кислоти в прийняті положення ланцюга пептиду приєднаного до полімерного носія, зняття захисту з аміногруп бічного ланцюга і взаємодії вільних амногруп з гуанідинувальним агентом, видалення всіх т-бутилоксикарбонільних захисних груп, що залишились, і відчеплення синтезованого пептиду від носія, з наступним очищенням і, необоз'язково, перетворенням пептиду у фармацевтично прийнятну сіль

Реакцію гуанідинування проводять, використвуючи надлишок гуанідинувального агенту, такого як

М,М'-біс(трет-бутилоксикарбоніл)-З-метилізотіосечовина, в присутності промотору реакції, такого як 4-(диметиламіно)піридин.

Синтезовані пептиди очищають, переважно за допомогою високоефективної рідинної хроматографії, для досягнення високого ступеня чистоти придатного для фармацевтичного використання.

Нові пептиди можуть бути виділені з реакційної суміші у формі фармацевтично прийнятних солей з різними неорганічними і органічними кислотами і основами. Нові пептиди можуть утворювати фармацевтичні прийнятні солі з неорганічними кислотами, такі як: хлорводнева кислота, бромводнева кислота, сірчана кислота, азотна кислота, фосфорна кислота або органічні кислоти, такі як оцтова, пропіонова, малеїнова, фумарова, малонова, бурштинова, винна, лимона, аскорбінова, яблучна, щавлева, корична, манделова, бензойна, метансульфонова, с етансульфонова, п-толуолсульфонова кислота і інші кислоти.

Солі також можна одержати з допомогою реакції карбоксильної групи пептиду з лужними металами, і) гідроксидами і алкоксидами лужних металів, також як і з органічними основами, такими як триметиламін, діетиламін, етаноламіє, піперидин, холін і їм подібні.

Солі можна одержати за допомогою відомих методів, шляхом взаємодії речовини з вільною осовою або о

Зр КИислотою з од ним або більшою кількістю еквівалентів придатної основи або кислоти, відповідно, в розіиннику або в середовищі, в якому сіль не розчиняється. -

Солі оцтової кислоти нових пептидів - аналогів НЗН-КН є переважними втіленнями представленого винаходу. «Е

Визначення біологічної активності

Для того щоб визначити біологічну активність нових пептидів представленого винаходу, досліджували їх Ме)

Зв Вплив на рівень в плазмі у щурів гормону росту і інших гіпофізарних гормонів і порівнювали з впливом М пОН-КН(1-29)МН 5», як речовини порівняння.

Досліджуваними матеріалами були: ПОН-КН(1-29)МНо одержували від бБідта СПетіса! Со., і пептиди - аналоги ПОН-КН синтезовані за способом представленого винаходу.

Самиць щурів Вістар (240-260г) розміщали в контрольованому світловому режимі з 14г світла, 10г темноти і « забезпечували вільний доступ до їжі і води. Тварин випадково розбивали на експериментальні групи, яким з с вводили салін (0,995 Масі; О,Змл), пОН-КН(1-29УМНо в дозі 50 або 15Омкг/кг ваги тіла, і пептиди представленого винаходу в дозі 1 або Змкг/кг ваги тіла. Щури одержували підшкірну (пш.) ін'єкцію пептиду ;» порівняння або кожного з нових тестованих аналогів, розчинених в 0,Змл саліну.

В день експерименту, щурів анестезіювали за допомогою внутрішньочеревної ін'єкції кетаміну (12Омг/кг) і шийну вену канюлювали для відбору крові. Через тридцять хвилин, пш вводили сполуки, що досліджуються. -І Щурам контрольної групи ін'єктували тільки салін. Кров (приблизно 0О,бмл) відбирали з шийної вени на 1 хвилині (зразок "0") до, і 15- і ЗО-хвилинах після пш введення тестуємих сполук. Еквівалентний об'єм гепаринізованого і, саліну (10Ш/мл) вводили до кожного видаленому зразку. В кінці експерименту, тварин умертвляли шляхом їх анестезіювання надмірною дозою кетаміну. Зразки крові центрифугували і відокремлювали зразки, плазми (приблизно 0,Змл) і зберігали при -202С, до дослідження за допомогою КІА методів. ть Визначали концентрації в плазмі гормону росту, пролактину, лютеінізуючий гормон, фолікулостимулюючий о гормон і тіротропін (СН, РК, ІН, Е5Н ї Т5Н) для 0,О05мл аліквот зразків плазми, використовуючи набори, що поставляються Віоїгак (Атегепат І Ме Зсіепсе, Епдіапа). Чутливість для щурів СН, РКІ, ІН, Е5Н і Т5Н була 0,16, 0,08, 0,08,0,09 і О,О5нг/пробірку, відповідно.

Статистичний аналіз результатів проводили використовуючи Зіаївой Зіаїйвіса Рі для М/іпдомув. Спочатку, всі групи даних досліджували на нормальність за допомогою теста Колмогоров-Смірнов і теста Шапір-Вілка. іФ) Визначали статистичні відмінності між групами за допомогою одностороннього АМОМА. Багатократні ко дослідження інтервалу Дункана використовувались для проведення наступних порівнянь. Однак, коли знаходили розбіжності із значною гетерогенністю, проводили порівняння між групами за допомогою непараметричного бо аналізу розходжень Крускал-Валліса на Ранкс.

Індивідуальні відміни у рівнях гормонів усували шляхом коригування рівня гормону, розраховуючи сітьову концентрацію гормону для кожного щура. Цю сітьову концентрацію для кожного гормону розраховували як різницю між концентрацією на 15 хвилині після введення сполуки і концентрацією гормону до введення сполуки (А15-0), і різницю між концентрацією гормону на 15 хвилині і ЗО хвилині після введення сполуки (лА15-30). 65 Вплив сполук на вивільнення СН визначали шляхом порівняння значення сітьової концентрації СН ( А15-0) після ін'єктгування. пОН-КН-(1-29УМН 2 в дозах 50,О0мкг і 150,О0мкг на кг ваги тіла, і 1,0мкг і З,Омкг для аналогів, на кг ваги тіла. Результати для вибраної сполуки (1) представлені в Таблицях 1 і 2. Значні відміни між оброблюваними групами визначали за допомогою модифікованого Лілліетором тесту Крускал-Валліса. й нини ПО ПО ПО я ПО ПОН

Сполука " яри 00веливи 00 авт 118001 ввяа | аойви | ввдвехо я (нг/млі жов зв о бе гою 1 фр. яю 77717 важ 3 пили ни и с осн НК т - й сполуки ("Охв"). А(15-30) розраховували як різницю між концентрацією СН на 15хв після введення тестованої сполуки і концентрацією СН на

ЗОхв після введення сполуки. ча

Одержані результати вказують, що тестовані аналоги АИЗН-КН проявляють стимулюючу дію на вивільнення

СН у щурів, порівняно з контрольним саліном. Саму сильну стимулюючу дію проявляє сполука позначена як (1). « 20 Максимальний стимулюючий ефект спостерігається через 15 хвилин після її введення. Цей ефект -о спостерігається протягом ЗО хвилин після введення. Вплив сполуки 1 на сітьову концентрацію СН був с співставимий з сітьовою концентрацією цього гормону на 15 хвилині після ін'єктування ПОН-КН-(1-29)-МН ».: в :з» дозі в 50 разів вищій. Відносна ефективність сполуки 1 грунтується на дозах 1,0 і З,Омкг і дозах 50 і 150мкг пОеНн-КН-(1-29)-МН» на кг ваги тіла. Відносна ефективність цього нового аналогу була в 70 і 38 разів вищою, 415 відповідно, порівняно з НН-КН-(1-29)-МН» на 15 хвилині після ін'єктування. -1 Під час цього дослідження також було встановлено, що нові сполуки представленого винаходу діють селективно і вони не впливають на рівні концентрації в крові інших гіпофізарних гормонів - пролактин, іс), лутропін, фоллітропін і тіреотропін, в периферичні крові щурів. їз Одержані сполуки також досліджували на стійкість до дії ферментів в тесті з трипсином.

Зразок пептиду (1,2мг) розчиняли в рН 8,5 буфері (2,9мл; 0,05М розчину ацетату амонію) і інкубували при - 372С протягом 20 хвилин. Потім, додавали розчин трипсину (1О0Омкл; О,02мг/мл; Зегма, З36О/мг). Одержаний о розчин інкубували при 372 протягом 60 хвилин. Відбирали аліквоту (50Омкл) і розводили 0,5М оцтової кислоти (Імл), потім ліофілізували. Одержаний матеріал аналізували за допомогою ВЕРХ, використовуючи систему

Кнауера з колонкою Еигозрпег 100 С18 (4,6х25Омм, 5 мікрон). Використовували наступну систему розчинників:

А, 0,190 ТФО у воді; В, 8095 розчин ацетонітрилу в А; з лінійним градієнтом 25-7095 В; швидкість потоку 1мл/хвилину; детектування проводили при 220 нанометрах. Результати дигерування пептиду зведені в Таблиці

О (з. іме) во нини ши з 6БЕ 60 299 з 00111111 т і ши нн п ли

Е нини нин 5 5 Ш Н ВВЕ Ж К(?ГВЯ 8 8)-- нн нн п

В нини ши

ЗБ 6 ЖЖх - - ; Є - - ;- Є Ж -- -- - - -- - - я во

Результати приведені в Таблиці З вказують, що всі досліджені нові аналоги НЗН-КН мають набагато більшу стійкість до дигерування трипсином порівняно з стандартом, НН-КН(1-29)-МН ». Таким чином, через 30 хвилин, зе умов що забезпечують повне дигерування пептиду, інші пептиди залишаються або незмінними (пептид (1), (2) і (8)), або зазнають тільки незначного гідролізу.

Нові пептиди представленого винаходу характеризуються високою активністю по вивільненню гормону росту, вони діють селективно і не впливають на рівні інших гіпофізарних гормонів - пролактин, лутропін, фоллітропін с ові тіреотропін. Особливо переважний пептид має амінокислоту послідовність раг-Аїа-Авр-АїІа-Пе-Рпе- Тиг-Авзп-Зег- Гуг-пАга-пАТо-Маї1-І еи-АІа-СіІп-Ї ен-Зег-АІа-пАга-пАго-І ец-І ец-СІп-Авр-ІПе-МІ і) е-Авзр-пПАго-МН», і він має набагато сильну дію по вивільненню гормону росту порівняно з еталонним пептидом пОеНн-КН(1-29)-МН», і таким чином зберігає максимальну стимулюючу дію через 15 хвилин. Одночасно, нові сполуки цього винаходу проявляють набагато вищу стійкість до дії дигеруючих ферментів порівняно з відомими о

Зо синтетичними аналогами ПОН-КН, що робить нові сполуки особливо корисними для використання при виготовленні фармацевтичних агентів, що використовуються в лікуванні і попередженні розладів обумовлених - нестачею гормону росту. «Е

Визначення і умовні позначення

Визначення і пояснення нижче є термінами як використовують у всьому цьому документі включаючи опис і Ме.

Зв формулу винаходу. М

Визначення

Номенклатура амінокислот і абревіатури використовують тут у відповідності з загально прийнятними правилами ІШРАС-ІЮВ, наприклад, (К.М. Зсп!йй, М.М. Гіертап Ргоїеіпв: Сотрозйіоп апа Зігисійге, Спаріег 2, іп: Техіроок ої Віоспетівігу, з Едйіоп, Т.М. Оеміїп, Еа.; УМіпеу- ів5, Мем МогК, 1992; і Еийгореап -. Віоспет. « 738(1984), 9-37). Трилітерні абревіатури, що тут використовуються, мають наступні значення: - с Аа - аланін є Ага - аргінін "» НАгу - гомоаргінін (б-гуанідин-2-капронова кислота)

Авп - аспарагін

Авр - аспарагінова кислота -І Баї - дезамінотірозин, 3-(4-гідроксифеніл)пропіонова кислота

СіІп - глутамін іш баь - 4-гуанідин-2-аміномасляна кислота ьч Сар - З-гуанідин-2-амінопропіонова кислота

Пу - ізолейцин е Ї еи -лейцин с ув - лізин

Ме - норлейцин

Опт - орнітин

Рпе - фенілаланін

Зег - серии о Тиг - треонін ко Туг - тірозин

Уа! - валін 60 Всі послідовності пептидів приведені в даному описі, в прикладах і в пунктах формули написані за стандартними правилами згідно з якими послідовність починається з М-термінальної амінокислоти і закінчується

С-термінальною амінокислотою. Амінокислоти знаходяться в І. конфігурації, якщо не вказано інше.

Представлений винахід зараз описується з посиланням на наступні специфічні необмежуючі приклади.

Приклади 65 Загальна методика синтезу пептиду

А. Утворення пептичного ланцюга

Для захисту д-аміно функціональних груп використовували т-бутилоксикарбонільну (Вос) групу; бічні ланцюги захищали наступними групами: Азр - цикпогексилом; Огп - бензилоксикарбонілом; Зег і Тиг - бензилом; Туг - 2-бромбензилоксикарбонілом.

Для того щоб одержати аналоги, що містять залишок пАго, залишки лізину у формі Вос-І ув(ЕГтос) похідного вводили в прийнятні положення в пептидному ланцюзі.

Для того щоб одержати аналоги, що містять залишки са і/або Сар, 2,4-залишки діаміномасляної кислоти і залишки 2,3-діамінопропіонової кислоти вводили а прийнятні положення, у формі Вос-Оав(Етос) і

Вос-бар(ЕГтос) похідних, відповідно. 70 Для того щоб одержати аналоги, що містять залишки Огп, Вос-Огп(7) похідне вводили під час синтезу прийнятних положень пептидного ланцюга.

МБГА смолу (4-метилбензгідриламінова смола, Васпет Саїйогпіа або Момаріоспет, пр. О,5мек./г), після розбухання в дихлорметані (ДХМ) протягом 30 хвилин, обробляли 595 діїізопропілетиламіновим (ДІЕА) розчином

ДХМ (Іххв., 1х20хв.) і промивали ДХМ (бх1хХв.).

Захищені пептидильні смоли синтезували використовуючи стандартні методики на кожній стадії синтезу, згідно з наступним протоколом: (а) Видалення Вос групи 5595 розчином трифтороцтової кислоти (ТФО) в ДХМ (1ххв., 1х2Охв.); (6) Промивання ДХМ (Зх 1хв.); (в) Промивання 3095 розчином 1,4-діоксан/ДдХхМ (2х1хв.); (г) Промивання ДХМ (Зх Іхв.); (д) Нейтралізація 5 95 ДІЕА/ДХМ (1 х1хв., Іхохв.); (е) Промивання ДХМ (бх 1хв.); (ж) Конденсування Вос-амінокислоти (1,2ммоль) за допомогою карбодіїмідного способу, використовуючи М,М'- діізопропілкарбодіїмід (ДІК), 1,2ммоль, в ДХМ, час реакції 2 години. У випадку Вос-СІп і Вос-Авп, с 29 М-гідроксибензотриазол (НОВІ), 1,2ммоль, додавали до реакційної суміші; Ге) (3) Промивання ДХМ (бх1хв.).

Б. Введення гуанідинових груп

Для того щоб видалити Етос групу з І уз залишку, захищену пептидильну смолу обробляли розчином 5090 піперидин/ДМФА (1хХ10Охв., 1х2г), потім смолу промивали диметилформамідом (ДМФА) (Зх1хв.), розчином 5090 о 3о ДМФА/ДХМ (Зх2хв.), розчином 5095 метанол/ДдХМ і ДХМ (Зх2хв.). Пептидильну смолу піддавали взаємодії з «КЕ

М,М'-біс(трет-бутилоксикарбоніл)-З-метилізотіосечовиною (п'ятикратним молярним надлишком) в присутності « 4-(диметиламіно)піридину (/Омг) в ДМФА, протягом 4 днів. Одержану пептидильну смолу промивали ДМФА (Зх1хв.), і ДХМ (Зхїхв.), Вос групи видаляли розчином 5595 ТФО/ДХМ (1 х1хв., їх20Охв., їх4Охв.), з наступним -Ф

З6 промиванням ДХМ (Зх 1хв.), 50 96 ДМФА/ДХМ (2х1хв.) і ДХМ (2ххв.). М

В. Відщеплення пептиду від смоли

Пептидильну смолу обробляли рідким фторидом водню (НЕ), в присутності анізолу. Реакцію проводили протягом 1 при 02. Надалі, НЕ видаляли при пониженому тиску, залишок промивали холодним діетиловим етером і екстрагували 5095 розчином оцтової кислоти, потім ліофілізували. «

Г. Очищення пептиду - с Неочищені пептиди очищали за допомогою високоефективної рідинної хроматографії, використовуючи є систему Кнауера з колонкою Вертекс, Мисіеовії-300 С18 (8х200мм, 5 мікрон). Використовували наступні системи "» розчинників: А, 0,195 розчин ТФО у воді; Б, 8090 розчин МесМм в А. Елюювання проводили з градієнтом 20-55 95 Б протягом ЗО хвилин, потім ізократично 5590 Б протягом ЗО хвилин, із швидкістю потоку 2мл/хвилину. Фракції аналізували з колонки Вертекс, Мисіеовії 100 С18 (4хХ25О0мм, 5 мікрон), проганяли з градієнтом 25-7095 протягом -і ЗОхв.; швидкість потоку: 1 мл/хв. Детектування проводили при 220Онм. Гомогенні фракції (один пік на с хроматограмі) об'єднували, розводили водою і ліофілізували одержуючи хроматографічно чистий продукт.

Структури пептидів визначали з ЕСІ-МС масспектру на спектрометрі Ріппідап МАТ 955 (Вгетеп, Сегтапу). ї Приклад 1 ї» 50 Одержання раг-Аїа-Авр-АїІа-Пе-Рпе- Тиг-Авзп-Зег- Гуг-пАга-пАго-Ма!-І еи-АІа-С|п-І еи-Зег-АІа-пАго-пАго-І еи-І еш-с1|Іп-Авр-ГПе-МіІ 62 е-Авр-пАга-МН» |Сполука (1))

Зг МБГА смоли (4-метилбензгідриламінової смоли, Момабріоспет, 0,4Умек./г), після приєднання придатнозахищених похідних амінокислот згідно з приведеною вище загальною методикою синтезу пептиду (розділ А), одержували повністю захищену пелтидильну смолу: о раг-АїІа-Азр(ОсНех)-Аїа-ІПІе-Рпе-Ти(ОВ21)-Азп-5е((О821)- Туг(2-Вг-2)-Ї ув(Етос)-І ув(Етос)-Ма!-ІЇ ец-АІа-С1Іп-І еш-Зег -АІа-І ув(Етос)-І ув(Етос)-І ец-Ї ен-СІп-Азр(ОсНех)-Пе-Міе-Азр(ОсНех)-І ув(Етос)-смола. іме) Наступна методика, згідно із згаданою вище загальною методикою синтезу пептиду (розділ Б), після видалення всіх Гтос захисних груп і вичерпного гуанідинування, з наступним видаленням всіх Вос груп, бо одержували 9,53гГ пептидильної смоли раг-Аїа-Авр-АїІа-Пе-Рпе- Тиг-Авзп-Зег- Гуг-пАга-пАго-Маї1-І еи-АІа-СІ|п-І еи-Зег-АІа-пАгд-пАго-І ец-І еиш-СІп-Авр-Пе-МІ е-Авр-пПАга-МН»-смола.

Цю смолу піддавали дії рідкого фториду водню (20О0мл НЕ), в присутності анізолу (15мл), згідно з приведеною вище загальною методикою синтезу пептиду (розділ В), що давало 4,5г неочищеного пептиду 5090 65 чистоти, виходячи з ВЕРХ аналізу.

Неочищений пептид (20мг зразка) очищали за допомогою високоефективної рідинної хроматографії, згідно з приведеною вище загальною методикою синтезу (розділ Г, вище). Це давало 4,Змг вказаного в заголовку пептиду 92,39о чистоти (виходячи з ВЕРХ); масспектр: для С457Но58Ми7О4з, М-3492,0; реєстрували ті/л:

ІМж2НІ": розраховано 1747,0, знайдено 17476;

ІМ-ЗНІЗ": розраховано 1165,0, знайдено 11654;

ІМаНІИ: розраховано 874,0, знайдено 874,0;

ІМБНІ"": розраховано 699,4, знайдено 699,4.

Приклад 2

Одержання Сполук (2)-(8)

Використовуючи придатно захищені амінокислоти в методиці повністю аналогічній приведеній вище, одержували наступні пептиди: (2) раї-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зет- Туг 19-нАга-Огп-Ма!-І еи-Аїа-сіп-І еи-Зег-АІа-пАго 20-Огп-І ецш-І еи-С1Іп-Авр-ІІе-МІ е-Авр-пАгуа29-МНа; МС: для С45зНовіМазО43, М-3380,9; реєстрували т/з:

ІМ-ЗНІУ": розраховано 1128,0, знайдено 11279;

ІМаНІИ: розраховано 846,2, знайдено 846,2;

ІМ'АБНІР": розраховано 677,2, знайдено 676,9. (3) раі-Аіа-Авр-Аїа-ІПІе-Рпе-Тиг-Азп-Зег-Туг 19-(зар-Зар-Мма!-І еи-АІа-СІп-І еи-Зег-АІа-Зар-Сар-! ец-І еи-СІп-Авр-Пе-Міе-А зр-Сар-МН»; МС: для С4547НозвМа7О43, М-3351,8; реєстрували ті/л:

ІМ-ЗНІУ": розраховано 1118,3, знайдено 1118,6;

ІМаНІИ: розраховано 839,0, знайдено 839,2;

ІМБНІ"": розраховано 671,4, знайдено 671,6. с (4) і) раї-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зег- Туг 19-нАго-Зар-маї!-Ї еи-АІа-СіІп-І еи-Зег-АІа-Сар-сар-і ецш-І еи-СІп-Авр-ІПе-Міе-

Авр-Сар-МН»; МС: для С159Н242М47О43, М-3379,8; реєстрували ті/л:

ІМаНІИ: розраховано 846,0, знайдено 846,3; о

ІМ'АБНІР": розраховано 677,0, знайдено 677,2. (5) З раї-АїІа-Азр-АІа-Пе-РНе-Тиг-Авп-Зег- Туг 19-«Зар-пАго-Маї!-І еи-АІа-Сіп-І еи-Зег-АІа-пАго-пАго-І ец-І еи-сІп-Авр-Пе-мі Й е-Авзр-О-Ага-МН»; МО.- для Сі54НовзМа7О43, М-3451,0; реєстрували пт/л: б»

ІМ'ЗНІЯ": розраховано 1151,3, знайдено 1152,0;

ІМаНІИ: розраховано 863,8, знайдено 863,8; -

ІМ'АБНІР": розраховано 691,2, знайдено 691,6. (6) раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зег- Туг 19-нАго-Зар-маї!-І еи-АІа-СіІп-І еи-Зег-АІа-пАга-пАго-і ец-І еи-СІп-Азр-Іе-МІ « 20 е-Авзр-О-Ага-МН»; МС: для Сі5аНовзМа7О43, М-3451,0; реєстрували п/з: -в с ІМ-ЗНІУ": розраховано 1151,3, знайдено 11514; й ІМаНІИ: розраховано 863,8, знайдено 863,6; "» ІМ'АБНІР": розраховано 691,2, знайдено 691,3. (7

Оаї-Аіа-Азр-Аіа-Пе-РНне-Тиг-Азп-Зег-Туг 19-Зар-Сар-маї!-І еи-АІа-СІп-І еи-Зег-АІа-Сар-Сар-і ец-І еи-СіІп-Авр-ІПе-Міе-А - зр-Сар-МН»; МС: для С4542Ног29Ма7О43, М-3282,7; реєстрували ті/л:

Ге! ІМ-ЗНІУ": розраховано 1095,2, знайдено 1095,3;

ІМаНІИ: розраховано 821,7, знайдено 821,7; е ІМ'АБНІР": розраховано 657,5, знайдено 657,8. їз 50 (в) о раї-Аїіа-Азр-Аїа-Пе-Рпе-Тниг-Азп-Зег-Туг 12-(Зар-Зар-Ма/!-І еи-Аіа-СІп-І еи-Зег-Аіа-пАго-Сар-і еш-І еи-СІп-Азр-Пе-Міе-

Авр-Сар-МН»; МС: для Сі45Но2з5Ма7О43, М-3324,8; реєстрували ті/л:

ІМ-ЗНІУ": розраховано 1109,3, знайдено 1109,6;

ІМаНІИ: розраховано 832,2, знайдено 832,2; о ІМ'АБНІР": розраховано 666,0, знайдено 666,0. іме)

Claims (1)

1. Формула винаходу

   1. Аналоги гормону, що вивільнюють гормон росту, що мають амінокислотну послідовність формули (1): раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зет- Туг 19-8 11-12-УаІ-Ї еи-АІа-Сіп-І еи-Зег-АІа-В 20-22! -І еш-І еи-СіІп-Авр-Пе-Міе-Авр-В 29-МН», (І) в якій: 65 В" є пАго, Са або Сар;

   В"? є пАго, От, Са або Сар; 229 є пАго, Саб або Сар; В! є пАго, От, Са або бар; 829 є р-Аго, пАго, Са або Сар; і їх фармацевтично прийнятні солі.

   2. Пептид за пунктом 1, який вибирають з групи, що містить: (у раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зег- Туг 19-нАго-пАга-ма!-І еи-Аїа-СІп-І еи-Зег-Аіа-пАго 29-пАга-І ец-І ец-сІп-Авр-Пе- то Міе-Авр-пАга29-МН»; (2) раї-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зет- Туг 19-нАга-Огп-Ма!-І еи-Аїа-сіп-І еи-Зег-АІа-пАго 20-Огп-І ецш-І еи-С1Іп-Авр-ІІе-МІ е-Авр-пАга29-МН»; (3) раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зег- Туг 12-(Зар-Сар-ма!-І еи-АІа-сіп-І еи-Зег-АІа-Сар-Сар-ї! ец-І еи-СІп-Азр-Іе-Міе-А зр-Сар-МН»; (4) раї-АїІа-Азр-Аїіа-Пе-РНе-Тпг-Авп-Зег-Туг 19-нАгд-Сар-маї!-І еи-АІа-сіп-І еи-Зег-АІа-Сар-Сар-і еш-І еи-С1Іп-Авр-Пе-Міе- Авр-бар-МН»; (5) раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зег- Туг 12-(зар-нАго-ма!-Ї еи-АІа-СіІп-І еи-Зег-АІа-пАга-пАго-і ец-І еи-СІп-Азр-Іе-МІ е-Авр-О-Ага-МН о; (в) см 29 раї-АїІа-Азр-Аіа-Пе-РНе-Тпг-Авп-Зег-Туг 19-нАгд-Сар-ма!-І еи-АІа-СІп-І еи-Зег-Аіа-пАга-пАго-І ец-І еи-СІп-Авр-Пе-Мі о е-Авр-О-Ага-МН о; (7 раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зег- Туг 1У-(Зар-Сар-Ма!-І еи-АІа-Сіп-І еи-Зег-АІа-Сар-Сар-і ецш-І еи-СІп-Азр-Іе-Міе-А о зр-Сар-МН»; (В) ч Оаї-АїІа-Азр-Аїа-Пе-Рпе-Тпг-Азп-Зег-Туг 19-(Зар-Зар-Мма!-І еи-АІа-СіІп-І еи-Зег-АІа-пАго-Сар-І! еш-І еи-СіІп-Азр-ІТе-Міе- «Е Авр-Сар-МН».

   З. Пептид за пунктом 2, яким є Ме) раї-АїІа-Азр-Аїіа-Пе-РНе-Тпг-Авп-Зег-Туг 19-пнАга-пАго-Ма!-І еи-Аіа-Сіп-І еи-Зег-Аіа-пАга 20 ча -НАго-І еш-І еш-сіІп-Авр-Пе-Міе-Азр-пАго 29-МН».

   4. Пептид за пунктом 2, яким є раї-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зет- Туг Л9-нНАга-Огп-Ма!-І еи-Аїа-сіп-І еи-Зег-АІа-пАго 29 « -Огп-І еш-І еи-СбіІп-Азр-Іе-Міе-Азр-пАго 29-МН».

   5. Спосіб одержання пептидів - аналогів гормону, що вивільнюють гормон росту, що мають амінокислотну З с послідовність формули (1): » раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зет- Туг 19-8 11-12-УаІ-Ї еи-АІа-Сіп-І еи-Зег-АІа-В 20-22! -І еш-І еи-СіІп-Авр-Пе-Міе-Авр-Б 29-МН», (І) в якій:

   11 . - КК" є Аг, баб або Сар; 272 є пАго, От, Са або Сар; о 220 є пАго, Са або Сар; ї» В2! є пАго, От, баб або Сар; їз 70 829 є р-Аго, пАго, Са або Сар; і їх фармацевтично прийнятних солей, що передбачає використання твердофазного синтезу, що включає с2 введення придатних похідних лізину, 2,4-діаміномасляної кислоти або 2,3-діамінопропіонової кислоти в прийнятні положення ланцюга пептиду, приєднаного до полімерного носія, зняття захисту з аміногруп бічного ланцюга і взаємодію вільних аміногруп з гуанідинувальним агентом, видалення всіх т-бутилоксикарбонільних захисних груп, що залишились, і відщеплення синтезованого пептиду від носія, з наступним очищенням і, о необов'язково, перетворенням пептиду у фармацевтично прийнятну сіль.

   6. Спосіб за пунктом 5, де як полімерний носій використовують МБГА-смолу. де 7. Спосіб за пунктом 5 або 6, де М,М'-біс(трет-бутилоксикарбоніл)-З-метилізосечовину використовують як гуанідинувальний агент в присутності 4-(диметиламіно)піридину. 60 8. Спосіб за пунктом 5 або 6, де синтезований пептид віддеплюють від носія, використовуючи фторид водню.

   9. Спосіб за пунктом 5, де синтезований пептид очищають за допомогою високоефективної рідинної хроматографії.

   10. Фармацевтична композиція, що містить активну речовину, один або більшу кількість носіїв і/або один або більшу кількість ексципієнтів, де активною речовиною є принаймні один з аналогів гормону, що вивільнюють 65 гормон росту, який має амінокислотну послідовність формули (1): раїг-Аіа-Азр-АІа-Пе-Рпе- Тиг-Азп-Зет- Туг 19-8 11-12-УаІ-Ї еи-АІа-Сіп-І еи-Зег-АІа-В 20-22!

   -І ец-І ец-СіІп-Авр-ІПе-Міе-Авр-В 29-МН», (І) в якій: В" є пАго, Саб або Сар; В: є пАго, От, баб або Сар; 229 є пАго, Саб або Сар; 22! є пАго, От, Са або Сар; 229 є О-Аго, пАго, Саб або Сар; або його фармацевтично прийнятна сіль. то 11. Спосіб лікування розладів, викликаних дефіцитом гормону росту у людини, що включає введення пацієнту, що потребує такого лікування, терапевтично ефективної дози пептиду - аналога ПОН-КН, що має амінокислотну послідовність формули (1): раї-АїІа-Азр-Аіа-Пе-РНе-Тпг-Авп-Зет-Туг 19-811-к12.УаІ-І еи-АІа-СІп-І еи-Зег-Аіа-В 20-82!

   75. т еш-Геш-Сіп-Авр-Пе-Міе-Авр-К 79-МН», (І) в якій: В" є пАго, Саб або Сар; В: є пАго, От, баб або Сар; 220 є пАго, Са або Сар; 22! є пАго, От, Са або Сар; 829 є р-Аго, пАго, Са або Сар; або його фармацевтично прийнятної солі. с о «в) « « (22) і - ші с з -І се) щ» їз 50 (42) Ф) іме) 60 б5