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TW202515608A - Ｉｌ—１８ｂｐ拮抗抗體及其於癌症治療之單一療法及組合療法的用途 - Google Patents

Ｉｌ—１８ｂｐ拮抗抗體及其於癌症治療之單一療法及組合療法的用途 Download PDF

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TW202515608A
TW202515608A TW113123320A TW113123320A TW202515608A TW 202515608 A TW202515608 A TW 202515608A TW 113123320 A TW113123320 A TW 113123320A TW 113123320 A TW113123320 A TW 113123320A TW 202515608 A TW202515608 A TW 202515608A
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內爾斯 Ｐ 尼爾森
艾莉莎 Ｍ 切森
凱倫 科恩
利奧爾 費根布魯姆
珊卓 佛斯
丹 布拉特
卓雅 奧特伯爾
羅伊 格雷尼特
瑪莎 弗侖克爾
阿沙夫 梅納凱姆
埃藍 奧菲爾
奧爾加 萊德曼
凱菲爾 塔爾 佛萊曼
莫蘭 加佩林
哈達斯 加倫 蒂爾曼
納達夫 柯恩
蓋德 科喬卡魯
埃米爾 土波里克
艾密特 諾維克
利托爾 賽佛
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以色列商坎布根有限公司
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Abstract

本發明係關於抗IL18-BP抗體及其用途。本發明係關於單一療法及與例如如本文所述之免疫檢查點抑制劑抗體的組合治療。

Description

IL-18BP拮抗抗體及其於癌症治療之單一療法及組合療法的用途
介白素18 (IL-18)係促發炎細胞介素，可刺激T細胞、NK細胞、及骨髓細胞。鑑於IL-18之刺激抗腫瘤免疫細胞的能力，其已被提議作為治療癌症之免疫治療劑。然而，IL-18之臨床功效有限，因此需要提供有效IL-18信號傳導活性之組成物及方法，以治療及預防癌症及其他疾病及病症。
介白素18結合蛋白(IL18-BP)與IL18結合，防止IL18與其受體之結合，且因此起到促發炎細胞介素IL18之抑制劑的作用。IL18-BP抑制IL18誘導之T細胞及NK細胞活化及增殖、及促發炎細胞介素產生，導致T細胞及NK細胞活性及第1型輔助T免疫反應減少。
本發明之目的係提供抗IL18-BP抗體或在疾病治療中之用途。本發明藉由提供抗IL18-BP抗體（包括抗原結合片段）、特別是阻斷IL18-BP之抗IL18-BP抗體來滿足此需求，可用於治療疾病（諸如癌症）。
本發明提供與抗IL18-BP（介白素18結合蛋白）抗體相關之方法。
在一些實施例中，本發明提供一種調節患者之腫瘤微環境的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中相較於未經治療患者或經對照治療患者之腫瘤微環境，該腫瘤微環境經調節。
在一些實施例中，調節包含CD45+細胞對腫瘤微環境之浸潤。
在一些實施例中，調節包含增加淋巴隔室中之CD3+細胞、CD4+細胞、及CD8+細胞。
在一些實施例中，調節包含增加腫瘤微環境中效應CD8+細胞之百分比。
在一些實施例中，調節包含誘導分泌多功能顆粒酶B+IFNγ+之CD8+細胞。
在一些實施例中，調節包含誘導分泌TNFα-及TNFα+ IFNγ+之NK細胞。
在一些實施例中，調節包含誘導DC2細胞。
在一些實施例中，調節包含增加IFNγ、TNFα、及IL-12p70細胞介素之水平。
在一些實施例中，調節包含增加CXCL9及IFNγ調控之細胞介素的分泌。
在一些實施例中，調節包含增加MIP-1α分泌。
在一些實施例中，調節包含減少IL1b分泌。
在一些實施例中，調節包含增加腫瘤中T細胞之比例。
在一些實施例中，調節包含增加表現穿孔素、多種顆粒酶、及IFNγ之效應多功能CD8+ T細胞。
在一些實施例中，調節包含增加增殖CD8+ T細胞之數目。
在一些實施例中，調節包含在T細胞隔室中自初始T細胞向細胞毒性CD8效應T細胞之轉變。
在一些實施例中，調節進一步包含T細胞殖株擴增(clonal expansion)。
在一些實施例中，T細胞殖株擴增包含每個殖株擴增超過3個細胞。
在一些實施例中，T細胞殖株擴增包含高GZMB及增殖CD8+ T細胞之擴增。
在一些實施例中，調節包含增加腫瘤微環境中之CD8+ T細胞浸潤，但不增加血清或脾臟中之CD8+ T細胞浸潤。
在一些實施例中，調節包含增加腫瘤微環境中之IFNγ分泌，但不增加血清或脾臟中之IFNγ分泌。
在一些實施例中，調節包含增加IL2及TNFα自CD4+ T細胞的分泌。
在一些實施例中，調節包含增加IFNγ+、IL2+、及顆粒酶B+自CD8+ T細胞的分泌。
在一些實施例中，調節不包含耗竭T細胞之擴增。
在一些實施例中，調節包含增加單核球及巨噬細胞隔室中之發炎性MHCII 高C1qa+及Nos2 +巨噬細胞。
在一些實施例中，調節包含增加單核球及巨噬細胞隔室中之活化樹突細胞。
在一些實施例中，調節包含減少單核球及巨噬細胞隔室中之MHCII 低C1qa+巨噬細胞、抑制性Mrc1 +巨噬細胞、Ifit +MonoMacs、及低活化DC。
在一些實施例中，調節包含增加發炎性骨髓細胞。
在一些實施例中，調節包含增加腫瘤微環境細胞群中未結合至IL-18BP之IL18，其足以增強投予後的免疫反應性，其中免疫反應性係以T細胞及NK細胞之活化測量。
在一些實施例中，調節包含增加發育成促發炎巨噬細胞之骨髓譜系之細胞群的比例。
本文亦提供一種治療患者之癌症的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該癌症經治療。
本文進一步提供一種治療患者之癌症的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，其中該抗IL18-BP抗體活化T細胞、NK細胞、NKT細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)，且/或調節骨髓細胞，且其中該癌症經治療。
本文亦提供一種活化患者之T細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等T細胞經活化。
本文進一步提供一種活化患者之NK細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等NK細胞經活化。
本文亦提供一種活化患者之NKT細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等NKT細胞經活化。
本文亦提供一種調節患者之骨髓細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等骨髓細胞經調節。
本文進一步提供一種活化患者之樹突細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等樹突細胞經活化。
本文亦提供一種活化患者之樹突細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等MAIT T細胞經活化。
本文亦提供一種活化患者之樹突細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等γδ T細胞經活化。
本文進一步提供一種活化患者之ILC細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等ILC細胞經活化。
本文亦提供一種增加腫瘤微環境(TME)及/或淋巴結中IL-18介導之免疫刺激活性的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該抗IL18-BP抗體增加TME及/或淋巴結中IL-18介導之免疫刺激活性。
本文亦提供一種恢復IL-18對T細胞、NK細胞、NKT細胞、骨髓細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)之活性的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，其中該抗IL18-BP抗體恢復對T細胞、NK細胞、NKT細胞、骨髓細胞、樹突細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)之活性。
本文亦提供一種調節患者之腫瘤微環境的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中相較於未經治療患者或經對照治療患者之腫瘤微環境，該腫瘤微環境經調節。
在一些實施例中，包含抗IL18-BP抗體之該組成物係作為穩定的液體醫藥配方投予。
在一些實施例中，該等T細胞係細胞毒性T細胞(CTL)。
在一些實施例中，該等T細胞係選自由CD4 +T細胞及CD8 +T細胞所組成之群組。
在一些實施例中，相較於對照或未經治療患者，該患者展現出腫瘤生長抑制增加至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%、300%、325%、350%、375%、400%、425%、450%、475%、500%、525%、550%、575%、600%、625%、650%、675%、700%、725%、750%、775%、800%、825%、850%、875%、900%、925%、950%、975%、或1000%。
在一些實施例中，相較於對照或未經治療患者，該患者展現出腫瘤生長減少至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%、300%、325%、350%、375%、400%、425%、450%、475%、500%、525%、550%、575%、600%、625%、650%、675%、700%、725%、750%、775%、800%、825%、850%、875%、900%、925%、950%、975%、或1000%。
在一些實施例中，該等NK細胞係CD16+淋巴球。
在一些實施例中，該等NK細胞係CD56+ NK細胞。
在一些實施例中，該活化係以一或多種活化標記之表現的增加測量。
在一些實施例中，該等活化標記係選自由下列所組成之群組：CD107a、CD137、CD69、顆粒酶、及穿孔素。
在一些實施例中，該活化係以該等NK細胞之增殖的增加測量。
在一些實施例中，該活化係以一或多種細胞介素之分泌的增加測量。
在一些實施例中，該一或多種細胞介素係選自由下列所組成之群組：IFNγ、TNF、GMCSF、MIG (CXCL9)、IP-10 (CXCL10)、及MCP1 (CCL2)。
在一些實施例中，該活化係以目標細胞之直接殺滅的增加測量。
在一些實施例中，該方法進一步包含投予第二抗體。
在一些實施例中，該第二抗體係結合至且/或抑制人類檢查點受體蛋白之抗體。
在一些實施例中，該第二抗體係選自由下列所組成之群組：抗PVRIG抗體、抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIGIT抗體、抗CTLA-4抗體、抗PD-L2抗體、抗B7-H3抗體、抗B7-H4抗體、抗CEACAM-1抗體、抗PVR抗體、抗LAG3抗體、抗CD112抗體、抗CD96抗體、抗TIM3抗體、抗BTLA抗體、抗ICOS抗體、抗OX40抗體、或抗41BB抗體、抗CD27抗體、或抗GITR抗體。
在一些實施例中，PVRIG抗體係選自由CHA.7.518.1.H4(S241P)及CHA.7.538.1.2.H4(S241P)所組成之群組。
在一些實施例中，該抗PVRIG抗體包含：i)包含來自CHA.7.518.1.H4(S241P)之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域(SEQ ID NO:260)；及ii)包含來自CHA.7.518.1.H4(S241P)之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域(SEQ ID NO:265)。
在一些實施例中，該抗PVRIG抗體包含：i)包含來自CHA.7.538.1.2.H4(S241P)之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域(SEQ ID NO:270)；及ii)包含來自CHA.7.538.1.2.H4(S241P)之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域(SEQ ID NO:275)。
在一些實施例中，該抗PVRIG抗體包含：i)包含來自CHA.7.518.4之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域（SEQ ID NO:1453；圖36AG）；及ii)包含來自CHA.7.518.4之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域（SEQ ID NO:1457；圖36AG）。
在一些實施例中，該抗PVRIG抗體係選自由下列所組成之群組：GSK4381562/SRF816 (GSK/Surface)、NTX2R13(Nectin Therapeutics)、如WO 2017/041004中所述之抗PVRIG抗體、如WO2001008879中所述之抗PVRIG抗體、如WO2018017864中所述之抗PVRIG抗體、及如WO2118000205中所述之抗PVRIG抗體。
在一些實施例中，抗TIGIT抗體係選自由CPA.9.083.H4(S241P)及CPA.9.086.H4(S241P)所組成之群組。
在一些實施例中，該抗TIGIT抗體包含：i)包含來自CPA.9.083.H4(S241P)之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域(SEQ ID NO:350)；及ii)包含來自CPA.9.083.H4(S241P)之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域(SEQ ID NO:355)。
在一些實施例中，該抗TIGIT抗體包含：i)包含來自CPA.9.086.H4(S241P)之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域(SEQ ID NO:360)；及ii)包含來自CPA.9.086.H4(S241P)之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域(SEQ ID NO:365)。
在一些實施例中，該抗TIGIT抗體包含：i)包含來自CHA.9.547.18之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域（SEQ ID NO:1177；圖34QQQQ）；及ii)包含來自CHA.9.547.18之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域（SEQ ID NO:1181；圖34QQQQ）。
在一些實施例中，該抗TIGIT抗體係選自由下列所組成之群組：EOS-448 (GlaxoSmithKline, iTeos Therapeutics)、BMS-986207、多伐那利單抗(domvanalimab) (AB154, Arcus Biosciences, Inc.)、AB308 (Arcus Bioscience)、奧西伯利單抗(Ociperlimab) (aBGB-A1217, BeiGene)、替瑞利尤單抗(Tiragolumab) (MTIG7192A, RocheGenentech)、BAT6021 (Bio-Thera Solutions)、BAT6005 (Bio-Thera Solutions)、IBI939 (Innovent Biologics, US2021/00040201)、JS006 (Junshi Bioscience/COHERUS)、ASP8374 (Astellas Pharma Inc)、維博利單抗(Vibostolimab) (MK-7684, Merck Sharp & Dohme)、M6332 (Merck KGAA)、厄提吉利單抗(Etigiliimab) (OMP-313M32, Mereo BioPharma)、SEA-TGT (Seagen)y、HB0030 (Huabo Biopharma)、AK127 (AKESO)、IBI939 (Innovent Biologics)，且抗TIGIT抗體包括Genentech抗體(MTIG7192A)。
在一些實施例中，該抗PD-1抗體係選自由下列所組成之群組：納武單抗(nivolumab) (Opdivo®; BMS; CheckMate078)、派姆單抗(pembrolizumab) (KEYTRUDA®; Merck)、TSR-042 (Tesaro)、西米普利單抗(cemiplimab)（REGN2810；Regeneron Pharmaceuticals，參見US20170174779）、BMS-936559、斯巴達珠單抗(Spartalizumab) (PDR001, Novartis)、皮地利珠單抗(pidilizumab) (CT-011; Pfizer Inc)、替雷利珠單抗(Tislelizumab) (BGB-A317, BeiGene)、卡瑞利珠單抗(Camrelizumab)（SHR-1210，Incyte及Jiangsu HengRui）、SHR-1210（CTR20170299及CTR20170322）、SHR-1210（CTR20160175及CTR20170090）、信迪利單抗(Sintilimab)（Tyvyt®；Eli lily及Innovent Biologics）、特瑞普利單抗(Toripalimab) (JS001, Shanghai Junshi Bioscience)、JS-001 (CTR20160274)、IBI308 (CTR20160735)、BGB-A317 (CTR20160872)、派安普利單抗(Penpulimab) (AK105, Akeso Biopharma)、賽帕利單抗(Zimberelimab) (Arcus)、BAT1306 (Bio-Thera Solutions Ltd)、薩善利單抗(Sasanlimab) (PF-06801591, pfizer)、多斯利單抗-gxly (Dostarlimab-gxly) (GlaxoSmithKline LLC)、帕洛利單抗(Prolgolimab) (Biocad)、卡度尼利單抗(Cadonilimab) (Akeso Inc)、傑洛利單抗(Geptanolimab) (Genor BioPharma Co Ltd)、斯魯利單抗(Serplulimab) (Shanghai Henlius Biotech Inc)、巴斯利單抗(Balstilimab) (Agenus Inc)、瑞弗利單抗(Retifanlimab) (Incyte Corp)、西利單抗(Cetrelimab) (Johnson & Johnson)、CS-1003 (EQRx Inc)、IBI-318 (Innovent Biologics Inc)、伊努西單抗(Ivonescimab) (Akeso Inc)、普特利單抗(Pucotenlimab) (Lepu Biopharma Co Ltd)、QL-1604 (Qilu Pharmaceutical Co Ltd)、SCTI-10A (SinoCelltech Group Ltd)、特泊利單抗(Tebotelimab) (MacroGenics Inc)、AZD-7789 (AstraZeneca Plc)、布格利單抗(Budigalimab) (AbbVie Inc)、EMB-02 (EpimAb Biotherapeutics Inc)、埃本利單抗(Ezabenlimab) (Boehringer Ingelheim International GmbH)、F-520 (Shandong New Time Pharmaceutical Co Ltd)、HX-009 (Waterstone Hanxbio Pty Ltd)、哲瓦利單抗(Zeluvalimab) (Amgen)、培雷索利單抗(Peresolimab) (Eli Lilly and Co)、羅司利單抗(Rosnilimab) (AnaptysBio Inc)、武達利單抗(Vudalimab) (Xencor)、艾珠利單抗(Izuralimab) (Xencor)、洛瑞格利單抗(Lorigerlimab) (MacroGenics Inc)、YBL-006 (Y-Biologics Inc)、及ONO-4685 (Ono Pharmaceutical Co Ltd)、LY-3434172 (Eli Lilly and Co)。
在一些實施例中，該抗PD-L1抗體係選自由下列所組成之群組：阿特珠單抗(atezolizumab) (TECENTRIQ®; MPDL3280A；IMpower110；Roche/Genentech)、阿維魯單抗(avelumab) (BAVENCIO®; MSB001071 8C; EMD Serono & Pfizer)、及德瓦魯單抗(Durvalumab) (MEDI4736; IMFINZI®; AstraZeneca)。及正在開發中的其他抗體，例如洛達利單抗(Lodapolimab) (LY3300054, Eli Lily)、皮米單抗(Pimivalimab) (Jounce Therapeutics Inc)、SHR-1316 (Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd)、恩弗利單抗(Envafolimab) (Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co Ltd)、舒格利單抗(sugemalimab) (CStone Pharmaceuticals Co Ltd)、柯希利單抗(cosibelimab) (Checkpoint Therapeutics Inc)、帕克米利單抗(pacmilimab) (CytomX Therapeutics Inc)、IBI-318、IBI-322、IBI-323 (Innovent Biologics Inc)、INBRX-105 (Inhibrx Inc)、KN-046 (Alphamab Oncology)、6MW-3211 (Mabwell Shanghai Bioscience Co Ltd)、BNT-311 (BioNTech SE)、FS-118 (F-star Therapeutics Inc)、GNC-038 (Systimmune Inc)、GR-1405 (Genrix (Shanghai) Biopharmaceutical Co Ltd)、HS-636 (Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd)、LP-002 (Lepu Biopharma Co Ltd)、PM-1003 (Biotheus Inc)、PM-8001 (Biotheus Inc)、STIA-1015 (ImmuneOncia Therapeutics LLC)、ATG-101 (Antengene Corp Ltd)、BJ-005 (BJ Bioscience Inc)、CDX-527 (Celldex Therapeutics Inc)、GNC-035 (Systimmune Inc)、GNC-039 (Systimmune Inc)、HLX-20 (Shanghai Henlius Biotech Inc)、JS-003 (Shanghai Junshi Bioscience Co Ltd)、LY-3434172 (Eli Lilly and Co)、MCLA-145 (Merus NV)、MSB-2311 (Transcenta Holding Ltd)、PF-07257876 (Pfizer Inc)、Q-1802 (QureBio Ltd)、QL-301 (QLSF Biotherapeutics Inc)、QLF-31907 (Qilu Pharmaceutical Co Ltd)、RC-98 (RemeGen Co Ltd)、TST-005 (Transcenta Holding Ltd)、阿特珠單抗(Atezolizumab) (IMpower133)、BMS-936559/MDX-1105、及/或RG-7446/MPDL3280A、及YW243.55.S70。
在一些實施例中，該抗IL18-BP抗體及第二抗體係以任何順序且在一或多種配方中依序或同時投予。
在一些實施例中，該抗IL18-BP抗體係用於與免疫刺激抗體、細胞介素療法、免疫調節藥物、細胞毒性劑、化學治療劑、生長抑制劑、抗荷爾蒙劑、激酶抑制劑、抗血管新生劑、心臟保護劑、免疫抑制劑、促進血液細胞增殖之藥劑、血管新生抑制劑、蛋白質酪胺酸激酶(PTK)抑制劑、或其他治療劑組合使用。
在一些實施例中，該方法進一步包含投予一或多種發炎體活化劑。
在一些實施例中，該發炎體活化劑係化學治療劑。
在一些實施例中，該化學治療劑係選自由下列所組成之群組：鉑（包括鉑類化學治療劑）、太平洋紫杉醇(Paclitaxel) (taxol)、索拉非尼(Sorafenib)、阿黴素(Doxorubicin)、索拉非尼、5-FU、吉西他濱(Gemcitabine)、及伊立替康(Irinotecan) (CPT-11)。
在一些實施例中，該鉑類化學治療劑係奧沙利鉑(Oxaliplatin)或順鉑(Cisplatin)。
在一些實施例中，該發炎體活化劑係CD39抑制劑。
在一些實施例中，該CD39抑制劑係抗CD39抗體。
在一些實施例中，該抗IL18-BP抗體及免疫刺激抗體、細胞介素療法、免疫調節藥物、細胞毒性劑、化學治療劑、生長抑制劑、抗荷爾蒙劑、激酶抑制劑、抗血管新生劑、心臟保護劑、免疫抑制劑、促進血液細胞增殖之藥劑、血管新生抑制劑、蛋白質酪胺酸激酶(PTK)抑制劑、或其他治療劑係以任何順序且在一或多種配方中依序或同時投予。
在一些實施例中，該癌症係選自由下列所組成之群組：血管化腫瘤(vascularized tumor)、黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌（鱗狀細胞癌及基底細胞癌）、間皮瘤、鱗狀細胞癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神經內分泌肺癌（包括胸膜間皮瘤、神經內分泌肺癌）、NSCL（大細胞）、NSCLC大細胞腺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、NSCLC鱗狀細胞、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、肺之腺癌、肺之鱗狀細胞癌、PDL1 ＞=50% TPS之NSCLC、神經內分泌肺癌、非典型類癌肺癌、腹膜之癌症、食道癌、肝細胞癌、肝癌(liver cancer)（包括HCC）、胃癌(gastric cancer)、胃癌(stomach cancer)（包括胃腸道癌）、胰臟癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、泌尿上皮癌、膀胱癌、肝細胞瘤(hepatoma)、神經膠質瘤、腦癌（以及水腫，諸如與腦腫瘤相關聯之水腫）、乳癌（包括例如三陰性乳癌）、睪丸癌、睪丸生殖細胞腫瘤、結腸癌、結腸直腸癌(CRC)、結腸直腸癌MSS (MSS-CRC)；難治性MSS結腸直腸癌；MSS（微衛星穩定狀態）、原發性腹膜癌、原發性腹膜卵巢癌、微衛星穩定原發性腹膜癌、鉑類抗藥性微衛星穩定原發性腹膜癌、CRC（MSS未知）、直腸癌、子宮內膜癌(endometrial cancer)（包括子宮內膜癌(endometrial carcinoma)）、子宮癌、唾液腺癌、腎癌、腎細胞癌(renal cell cancer, RCC)、腎細胞癌(renal cell carcinoma, RCC)、胃食道接合部癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、類癌、頭頸癌、B細胞淋巴瘤（包括非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)以及低惡性度/濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴球性(SL) NHL、中惡性度/濾泡性NHL、中惡性度瀰漫性NHL、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、高惡性度免疫母細胞NHL、高惡性度淋巴母細胞NHL、高惡性度小非裂解細胞NHL、巨大疾病NHL (bulky disease NHL)、被套細胞淋巴瘤、AIDS相關淋巴瘤、及華氏巨球蛋白血症(Waldenström’s Macroglobulinemia)、霍奇金氏淋巴瘤(HD)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、毛細胞白血病、慢性骨髓母細胞性白血病、多發性骨髓瘤、移植後淋巴增生病症(PTLD)、與斑痣性錯構瘤(phakomatoses)相關聯之異常血管增生、Meigs氏症候群、Merkel氏細胞癌、高MSI癌症、KRAS突變腫瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、腺樣囊狀癌(adenoid cystic cancer)（包括腺樣囊狀癌(adenoid cystic carcinoma)）、黑色素瘤、惡性黑色素瘤、轉移性黑色素瘤、胰臟癌、胰臟腺癌、卵巢癌(ovarian cancer)（包括卵巢癌(ovarian carcinoma)）、胸膜間皮瘤、子宮頸鱗狀細胞癌（子宮頸SCC）、肛門鱗狀細胞癌（肛門SCC）、原發部位不明癌、膽囊癌、胸膜間皮瘤、脊索瘤、子宮內膜肉瘤、軟骨肉瘤、子宮肉瘤、葡萄膜黑色素瘤、類澱粉沉積症、AL-類澱粉沉積症、星狀細胞瘤、及骨髓增生不良症候群(MDS)。
在一些實施例中，該癌症係選自由下列所組成之群組：腎透明細胞癌(RCC)、肺癌、NSCLC、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、胃腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、乳癌、三陰性乳癌(TNBC)、頭頸部腫瘤、結腸直腸腺癌、黑色素瘤、及轉移性黑色素瘤。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含：包含抗IL18-BP抗體之組成物，該抗體用於活化T細胞、NK細胞、NKT細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)，且/或調節骨髓細胞，以用於治療癌症，其中抗體拮抗IL18-BP之至少一種免疫抑制效應，可選地其中抗IL18-BP抗體阻斷IL18 : IL18-BP結合交互作用，可選地其中抗IL18-BP抗體展現出低於1 pM之結合親和力或K D。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體與結合至SEQ ID NO:254之人類IL18-BP及/或SEQ ID NO:255之人類IL18-BP之分泌鏈的抗體競爭結合、及/或與競爭結合IL18的抗體競爭結合。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體與如下列中所述之抗體競爭結合：US8436148、WO2019213686、WO200107480。WO2019051015、WO2014126277A1、WO2012177595、US20140364341、及/或WO2018060447。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含：vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3序列，其等係選自由下列所組成之群組： i.    圖1A (66650)之vhCD2R1 (SEQ ID NO: 1)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 32)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 3)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 4)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 5)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 6)序列； ii.   圖1B (66670)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 7)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 8)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 9)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 10)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 11)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 12)序列； iii.  圖1C (66692)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 13)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 14)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 15)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 16)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 17)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 18)序列； iv.  圖1D (66716)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 19)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 20)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 21)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 22)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 23)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 24)序列； v.   圖1E (66650)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 25)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 26)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 27)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 28)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 29)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 30)序列； vi.  圖1F (66670)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 31)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 32)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 33)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 34)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 35)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 36)序列； vii. 圖1G (66692)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 37)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 38)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 39)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 40)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 41)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 42)序列； viii. 圖1H (66716)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 43)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 44)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 45)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 46)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 47)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 48)序列； ix.  圖1I (66650)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 844)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 845)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 846)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 847)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 848)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 849)序列； x.   圖1J (66670)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 850)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 851)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 852)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 853)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 854)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 855)序列； xi.  圖1K (66692)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 856)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 857)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 858)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 859)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 860)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 861)序列； xii. 圖1L (66716)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 862)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 863)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 864)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 865)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 866)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 867)序列； xiii. 圖2A (71709)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 55)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 56)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 57)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 60)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 61)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 62)序列； xiv. 圖2B (71719)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 65)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 66)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 67)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 70)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 71)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 72)序列； xv. 圖2C (71720)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 75)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 76)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 77)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 80)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 81)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 82)序列； xvi. 圖2D (71722)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 85)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 86)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 87)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 90)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 91)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 92)序列； xvii. 圖2E (71701)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 95)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 96)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 97)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 100)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 101)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 102)序列； xviii. 圖2F (71663)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 105)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 106)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 107)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 110)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 111)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 112)序列； xix. 圖2G (71662)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 115)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 116)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 117)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 120)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 121)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 122)序列； xx. 圖2H (66692)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 125)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 126)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 127)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 130)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 131)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 132)序列； xxi. 圖2I (71710)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 135)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 136)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 137)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 140)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 141)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 142)序列； xxii. 圖2J (71717)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 145)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 146)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 147)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 150)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 151)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 152)序列； xxiii. 圖2K (71739)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 155)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 156)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 157)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 160)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 161)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 162)序列； xxiv. 圖2L (71736)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 165)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 166)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 167)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 170)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 171)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 172)序列； xxv.  圖2M (71707)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 175)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 176)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 177)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 180)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 181)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 182)序列； xxvi. 圖2N (66716)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 185)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 186)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 187)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 190)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 191)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 192)序列； xxvii. 圖2O (71728)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 195)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 196)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 197)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 200)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 201)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 202)序列； xxviii. 圖2P (71741)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 205)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 206)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 207)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 210)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 211)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 212)序列； xxix. 圖2Q (71742)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 215)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 216)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 217)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 220)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 221)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 222)序列； xxx.  圖2R (71744)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 225)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 226)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 227)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 230)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 231)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 232)序列； xxxi. 圖2S (71753)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 235)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 236)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 237)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 240)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 241)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 242)序列；及 xxxii. 圖2T (71755)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 245)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 246)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 247)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 250)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 251)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 252)序列。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含選自由下列所組成之群組的抗體之重鏈可變域及輕鏈可變域 i.    圖2A (71709)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 54)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 59)； ii.   圖2B (71719)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 64)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 69)； iii.  圖2C (71720)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 74)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 79)； iv.  圖2D (71722)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 84)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 89)； v.   圖2E (71701)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 94)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 99)； vi.  圖2F (71663)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 104)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 109)； vii. 圖2G (71662)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 114)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 119)； viii. 圖2H (66692)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 124)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 129)； ix.  圖2I (71710)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 134)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 139)； x.   圖2J (71717)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 144)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 149)； xi.  圖2K (71739)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 154)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 159)； xii. 圖2L (71736)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 164)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 169)； xiii. 圖2M (71707)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 174)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 179)； xiv. 圖2N (66716)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 184)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 189)； xv. 圖2O (71728)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 194)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 199)； xvi. 圖2P (71741)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 204)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 209)； xvii. 圖2Q (71742)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 214)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 219)； xviii. 圖2R (71744)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 224)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 229)； xix. 圖2S (71753)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 234)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 239)；及 xx. 圖2T (71755)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 244)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 249)。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4之CH1-鉸鏈-CH2-CH3區，其中該鉸鏈區可選地包含突變。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG4之CH1-鉸鏈-CH2-CH3區。
在一些實施例中，該鉸鏈區包含突變。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含人類κ2輕鏈之CL區。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含人類λ2輕鏈之CL區。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H之CDR-H1，其中X係N、R、D、G、或K；X2係S、H、I、或Q；X3係M或V； b)   具有序列W-I-H-A-G-T-G-X-T-X2-Y-S-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係N、A、或V；X2係K或LW-I-H；及 c)   具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P之CDR-H3，其中X係S或E；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列E-A-S-S-L-E-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T之CDR-L3，其中X係S、V、Y、L、或Q；X2係F、S、或G。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S之CDR-H1，其中X係S或N；X2係E或S；X3係V或P b)   具有序列G-I-I-P-X-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係G或Y；X2係A或S；X3係N、I、或V；及 c)   具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T之CDR-H3，其中X係S、G、或F；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1 b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2 c)   具有序列Q-Q-V-Y-X-X2-P-W-T之CDR-L3，其中X係S或R；X2係L、I、或F-。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.重鏈可變域，其包含： a)   具有序列F-T-F-X-N-X2-A-M-S之CDR-H1，其中X係G或D或S；X2係T或V或Y； b)   具有序列A-I-S-X-X1-X2-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G之CDR-H2，其中X係G或A；X2係N或S；X3係A或G；及 c)   具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y之CDR-H3；及 ii.輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A之CDR-L1，其中X係S或D； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-H-A-X-X1-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係Y或L；X1係S或F。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-S-I-S-S-X-X2-Y-X3-W-G之CDR-H1，其中X係S或P；X2係E或D；X3係G、Y、或P； b)   具有序列S-I-X-X2-X3-G-X4-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S之CDR-H2，其中X係Y或V；X2係Y或N；X3係Q或S；X4係S或A；及 c)   具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y之CDR-H3，其中X係Y或H，X2係V或L；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1 b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2 c)   具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係S或F；X2係S或V。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.重鏈可變域，其包含： a)   具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H之CDR-H1，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； b)   具有序列W-I-H-A-G-T-G-X-T-X2-Y-S-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；及 c)   具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P之CDR-H3，其中X係任何胺基酸；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列E-A-S-S-L-E-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T之CDR-L3，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S之CDR-H1，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； b)   具有序列G-I-I-P-G-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸；及 c)   具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T之CDR-H3，其中X係任何胺基酸；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-V-Y-X-X2-P-W-T之CDR-L3，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列F-T-F-X-N-X2-A-M-S之CDR-H1，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸； b)   具有序列A-I-S-X-X1-X2-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G之CDR-H2，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸；及 c)   具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y之CDR-H3； ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A之CDR-L1，其中X係任何胺基酸； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-H-A-X-X1-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-S-I-S-S-X-X2-Y-X3-W-G之CDR-H1，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； b)   具有序列S-I-X-X2-X3-G-X4-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S之CDR-H2，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸；X4係任何胺基酸；及 c)   具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y之CDR-H3，其中X係任何胺基酸，X2係任何胺基酸；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H之CDR-H1，其中X係N、R、D、G、T、Q、S、A、或K；X2係S、H、I、N、L、Y、或Q；X3係M或V； b)   具有序列X-I-X2-A-G-X3-X4-X5-T-X6-Y-S-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係W或Y；X2係H或N；X3係S、T、或A；X4係G或A；X5係N、A、T、或V；X6係E、K、或L；及 c)   具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P之CDR-H3，其中X係S、L、A、K、或E；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列E-A-S-S- -E-S之CDR-L2，其中X係L或S；及 c)   具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T之CDR-L3，其中X係S、V、Y、L、T、或Q；X2係F、S、Y、或G。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S之CDR-H1，其中X係S或N；X2係E或S；X3係V或P b)   具有序列G-I-I-P-X-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係G、S、I、或Y；X2係A、V、或S；X3係N、I、或V；及 c)   具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T之CDR-H3，其中X係S、G、或F；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-X-Y-X2-X3-P-W-T之CDR-L3，其中X係V或L；X2係S或R；X3係L、I、或F。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列F-T-F-X-X2-X3-X4-M-S之CDR-H1，其中X係G、S、P、或D、或S；X2係N、S、或P；X3係T、V、或Y；X4係A、H、或I； b)   具有序列A-I-S-X-X2-X3-X4-X5-T-X6-Y-A-D-S-V-K-G之CDR-H2，其中X係G或A；X2係N、T、E、或S；X3係A或G；X4係A或G；X5係S或G；X6係Y或F；及 c)   具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y之CDR-H3；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A之CDR-L1，其中X係S或D； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-H-X-X2-X3-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係A或G；X2係Y、R、或L；X3係S、R、L、或F。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-S-I-X-S-X2-X3-Y-X4-W-X5之CDR-H1，其中X係S或F；X2係S或P；X3係E或D；X4係G、P、或Y；X5係G或S； b)   具有序列X-I-X2-X3-X4-G-X5-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S之CDR-H2，其中X係S或V；X2係Y、V、F、或A；X3係Y、F、或N；X4係Q、A、或S；X5係S、A、或N；及 c)   具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y之CDR-H3，其中X係Y、H、或F；X2係V或L；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係S、N、W、或F；X2係S或V。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i)來自VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、或VH1-39.66716之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3；及 ii)來自VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、或VH1-39.66716之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3。來自VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、或VH1-39.66716之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i)來自VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、VH1-39.66716、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3；及 ii)來自VL-κ-1-5、VL-κ-1-12、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3； 可選地其中該等CDR包含0至4個取代，且其中沒有個別CDR包含多於1個取代，且其中該vhCDR3及vlCDR3不包含取代。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i)重鏈可變域，其包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之重鏈可變域展現出至少90%、至少95%、或至少98%同一性的序列，其中各個別vhCDR包含不多於1個取代，且其中該vhCDR3不包含取代；及 ii)輕鏈可變域，其包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之輕鏈可變域展現出至少90% %、至少95%、或至少98%同一性的序列，其中各個別vlCDR包含不多於1個取代，且其中該vlCDR3不包含取代。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i)重鏈可變域，其包含來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3，且其中該重鏈可變域包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之重鏈可變域展現出至少90%同一性的序列，其中各個別vhCDR包含不多於1個取代，且其中該vhCDR3不包含取代；及 ii)輕鏈可變域，其包含來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3，且其中該輕鏈可變域包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之輕鏈可變域展現出至少90%同一性的序列，其中各個別vlCDR包含不多於1個取代，且其中該vlCDR3不包含取代。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i)重鏈可變域，其包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之重鏈可變域展現出至少90%、至少95%、或至少98%同一性的序列，其中各個別vhCDR包含不多於1個取代，且其中該vhCDR3不包含取代；及 ii)輕鏈可變域，其包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之輕鏈可變域展現出至少90% %、至少95%、或至少98%同一性的序列，其中各個別vlCDR包含不多於1個取代，且其中該vlCDR3不包含取代。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： i)重鏈可變域，其包含來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3，且其中該重鏈可變域包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之重鏈可變域展現出至少90%同一性的序列，其中各個別vhCDR包含不多於1個取代，且其中該vhCDR3不包含取代；及 ii)輕鏈可變域，其包含來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3，且其中該輕鏈可變域包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之輕鏈可變域展現出至少90%同一性的序列，其中各個別vlCDR包含不多於1個取代，且其中該vlCDR3不包含取代。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含：來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之重鏈可變域；及來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之輕鏈可變域。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG4之CH1-鉸鏈-CH2-CH3區。
在一些實施例中，該鉸鏈區包含突變。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含人類κ2輕鏈之CL區。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含人類λ2輕鏈之CL區。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： a)重鏈可變域，其包含來自選自由下列所組成之群組的抗體之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3：VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、VH1-39.66716、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755；及 b)輕鏈可變域，其包含來自選自由下列所組成之群組的抗體之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3：VL-κ-1-5、VL-κ-1-12、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含： a)重鏈可變域，其包含來自選自由下列所組成之群組的抗體之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3：VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、VH1-39.66716、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755；及 b)輕鏈可變域，其包含來自選自由下列所組成之群組的抗體之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3：VL-κ-1-5、VL-κ-1-12、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755；及
可選地，1)其中各CDR個別包含0至4個取代，且其中沒有個別CDR包含多於1個取代，且其中該vhCDR3及vlCDR3不包含取代，2)其中各CDR個別包含1個取代，或3)其中各個別vhCDR包含不多於1個取代，且其中該vhCDR3不包含取代。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4之CH1-鉸鏈-CH2-CH3區，其中該鉸鏈區可選地包含突變。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG4之CH1-鉸鏈-CH2-CH3區。
在一些實施例中，該鉸鏈區包含突變。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含人類κ2輕鏈之CL區。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含人類λ2輕鏈之CL區。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體與如前述實施例中任一者陳述之抗體競爭結合。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含用於藉由活化患者之T細胞、NK細胞、NKT細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)，且/或調節骨髓細胞來治療癌症之抗體。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體增加腫瘤微環境(TME)及/或淋巴結中IL-18介導之免疫刺激活性。
本文亦提供一種抗IL18-BP抗體用於治療接受者患者之癌症的用途。
在一些實施例中，抗IL18BP抗體係如前述實施例中任一者使用。
在一些實施例中，抗IL18BP抗體係與第二抗體組合使用。
在一些實施例中，第二抗體係選自由下列所組成之群組：抗PVRIG抗體、抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、及抗TIGIT抗體。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體展現出小於0.005 pM、0.01 pM、0.02 pM、0.03 pM、0.04 pM、0.05 pM、0.06 pM、0.07 pM、0.08 pM、0.09 pM、0.10 pM、0.15 pM、0.20 pM、0.25 pM、0.30 pM、0.35 pM、0.40 pM、0.45 pM、0.50 pM、0.55 pM、0.60 pM、0.65 pM、0.70 pM、0.75 pM、0.80 pM、0.85 pM、0.90 pM、0.95 pM、或1 pM之結合親和力或K D。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合構象表位，該構象表位包含：包含SEQ ID NO: 1917之一或多個胺基酸殘基的第一胺基酸序列、及/或包含SEQ ID NO: 1919之一或多個胺基酸殘基的第二胺基酸序列。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之殘基S1、R2、F3、P4、N5、F6、S7、I8、及L9中之一或多者。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之殘基S7、I8、及L9中之一或多者。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之殘基S7、I8、及L9。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1919之殘基V1、D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、及R9中之一或多者。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1919之殘基D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、及R9中之一或多者。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1919之殘基D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、及R9。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a或IL18-BP異構體c。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體c。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體不結合IL18-BP異構體b或IL18-BP異構體d。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體不結合IL18-BP異構體b。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體不結合IL18-BP異構體d。
相關申請案
本申請案主張2023年12月8日申請之美國臨時專利申請案第63/608,147號、2023年10月20日申請之美國臨時專利申請案第63/592,140號、2023年7月27日申請之美國臨時專利申請案第63/516,116號、及2023年6月26日申請之美國臨時專利申請案第63/510,343號之優先權及權益，其等之全部內容以引用方式併入本文中。 序列表
隨此提交之XML檔案（命名為「210196-215007_TW_SL」，且建立於2024年5月28日，檔案大小為2,913,343位元組）之全文特此以引用方式併入本文中。 I. 介紹 A. 介白素18 結合蛋白
本發明提供與介白素18結合蛋白(IL18-BP)特異性結合之抗體。在上下文中，「蛋白質(protein)」與「多肽(polypeptide)」可互換使用，亦包括肽。本發明提供特異性結合至IL18-BP之抗體。
IL18-BP基因定位於人類11號染色體，在包含IL18-BP基因之8.3 kb基因體序列中未發現編碼跨膜域之外顯子。迄今為止，已在人類中鑑定出藉由替代性mRNA剪接產生的四種IL18-BP異構體。其等被命名為IL18-BP a、b、c、及d，皆具有相同的N端，但C端不同(Novick, D. et al., Immunity, 10:127-136, (1999))。此等異構體結合IL18之能力各不相同(Kim, S.-H. et al., PNAS, 97(3): 1190-1195 (2000))。在四種人類IL18-BP (hIL18-BP)異構體中，已知異構體a及c具有中和IL18之能力。最豐富的IL18-BP異構體（異構體a）對IL18展現出高親和力，具有快速結合速率及緩慢解離速率，解離常數(K d)係約0.4 nM (Kim, S.-H. et al., PNAS, 97(3): 1190-1195 (2000))。其他則報導IL18-BP與IL-18之親和力係約1 pM或約25 pM (Zhou T. et al., Nature, 583(7817): 609–614, (2020), Girard C. et al., Rheumatology2016; 55:2237-2247 (2016))，IL18-BPb及IL18-BPd異構體缺乏完整的Ig域，缺乏結合或中和IL18之能力。在各種cDNA庫中發現由mRNA剪接產生之兩種小鼠IL18-BP異構體，已被表現、純化並評估其與IL18生物活性之結合及中和作用(Kim, S.-H. et al., PNAS, 97(3): 1190-1195 (2000))。人類及小鼠IL18-BP之胺基酸相似性係60.8%。鼠類IL18-BPc及IL18-BPd異構體具有同一Ig域，在莫耳過量為二時亦能中和＞95%的鼠類IL18。然而，鼠類IL18-BPd與人類IL18-BPa具有共同的C端模體，亦能中和人類IL18。分子模型在IL18-BP之Ig域中識別出大的靜電及疏水混合結合位點，可能是其與配體高親和力結合之原因(Kim, S.-H. et al., PNAS, 97(3): 1190-1195 (2000))。
IL18-BP係長度為194個胺基酸之分泌蛋白，具有信號肽（跨越胺基酸1至30）、分泌鏈（跨越胺基酸41至171）、及4個潛在的N-醣基化位點，但沒有跨膜域。全長人類IL18-BP異構體a蛋白係顯示於圖28A (SEQ ID NO:254)。全長人類IL18-BP異構體b蛋白係顯示於圖99A (SEQ ID NO:1921)。全長人類IL18-BP異構體c蛋白係顯示於圖99B (SEQ ID NO:1922)。全長人類IL18-BP異構體d蛋白係顯示於99C (SEQ ID NO:1923)。本發明提供配方，其包含特異性結合至IL18-BP蛋白之抗體。在上下文中，「蛋白質(protein)」與「多肽(polypeptide)」可互換使用，亦包括肽。本發明提供特異性結合至IL18-BP蛋白之抗體。IL18-BP係長度為194個胺基酸之分泌蛋白，具有信號肽（跨越胺基酸1至30）及分泌鏈（跨越胺基酸41至171）。在圖99A至圖99C中之底線者、及圖28A中加上陰影者係N端信號傳導肽。
因此，如本文中所使用，用語「IL18 BP」、「IL-18BP」、「IL18BP」、「IL18-BP」、「IL18結合蛋白(IL18 binding protein)」、或「介白素18結合蛋白(Interleukin 18 binding protein)」可以可選地包括任何此類蛋白或其變體、接合物、或片段，包括但不限於本文所述之已知或野生型IL18-BP、以及任何天然存在的剪接變體、胺基酸變體、或異構體。用語「IL18-BP」可與「IL18結合蛋白」、「介白素18結合蛋白」、「IL18 Bpa」、「介白素-18-結合蛋白異構體a (interleukin-18-binding protein isoform a)」、「介白素-18結合蛋白異構體a前驅物(interleukin-18 binding protein isoform a precursor)」互換使用。用語IL18-BP之「可溶(soluble)」形式亦可與用語「IL18 BP可溶(IL18 BP soluble)」或「IL18-BP多肽片段(fragments of IL18-BP polypeptides)」互換使用，其可廣泛地指以下可選的多肽中之一或多者。關於IL18-BP形式之用語「可溶」亦可與用語「分泌之(secreted)」以及「IL18-BP多肽片段」互換使用，其可以廣泛地指本文揭示之IL18-BP多肽中之一或多者。
IL18-BP在脾臟中持續表現(constitutively expressed)，屬於免疫球蛋白超家族。已透過電腦建模(Kim, S.-H. et al., PNAS, 97(3): 1190-1195 (2000))並基於相似蛋白IL-1β與I型IL-1R之間的交互作用(Vigers, G. P. A. et al., Nature, 386:190-194 (1997))來描述參與IL18與IL18-BP交互作用之殘基。IL18-BP作為促發炎細胞介素IL18之抑制劑發揮作用。IL-18調節免疫系統功能，包括誘導IFNγ產生、Th1分化、NK細胞活化、及細胞毒性T淋巴球(CTL)反應(Tominaga, K., et al., International Immunology, 12(2): 151–160 (2000)及Senju, H., et al., Int J Biol Sci.,14(3):331-340 (2018))。IL18-BP與IL18結合，防止IL18與其受體之結合，且因此抑制IL18誘導之T細胞及NK細胞活化及增殖、及促發炎細胞介素產生，導致T細胞及NK細胞活性及第1型輔助T免疫反應減少。IL18-BP在體外消除IL18對IFN-γ之誘導及IL18對NF-κB之活化。此外，IL18-BP抑制經注射LPS端之小鼠中IFN-γ之誘導(Novick, D. et al., Immunity, 10:127-136, (1999))。
IL18持續存在於許多細胞中(Puren et al., PNAS, 96:2256-2261 (1999))並在健康人類中循環(Urushihara et al. 2000)，代表細胞介素生物學中的獨特現象。由於IL18與IL18-BP之高親和力（Kd約1 pM）以及在循環中發現高濃度IL18-BP（比IL18莫耳過量20倍），因此假設循環中大多數（不是全部）IL18分子與IL18-BP結合。因此，與細胞表面受體競爭IL18之循環IL18-BP可能充當天然消炎及免疫抑制分子。
根據本發明之至少一些實施例，抗IL18-BP抗體（包括抗原結合片段）與IL18-BP結合並阻斷IL18與IL18-BP之交互作用，從而釋放增加之游離IL18水平，用於增強T細胞、NK細胞、NKT細胞、骨髓細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)之活化、增殖、細胞介素及/或趨化因子之分泌，可用於治療疾病諸如癌症及病原體感染。此等抗IL18-BP抗體可用於治療疾病諸如癌症。
因此，本發明提供如圖1、圖2、及/或圖3所提供之抗IL18-BP抗體（例如包括與圖1、圖2、及/或圖3所示之彼等具有同一CDR之抗IL18-BP抗體）。IL18-BP，亦稱為介白素-18結合蛋白、UniProtKB/Swiss-Prot (O95998)、或HGNC (5987) NCBI Entrez Gene (10068)，係關於RefSeq登錄識別符中所示之胺基酸及核酸序列：NG_029021.1、NM_001039659.1、NP_001034748.1、NC_000011.10 11號染色體參考GRCh38.p13主組裝登錄識別符：NM_001039660.2及NP_001034749.1及NC_000011.9 11號染色體參考GRCh38.p13主組裝登錄識別符：NP_001034748.1、NM_001039659.2、NP_005690.2NM_005699.3 NP_001034748.1NM_001039659.2、NP_005690.2、NM_005699.3、NP_001138529.1 NM_001145057.1、NP_001138527.1、NM_001145055.1。在一些實施例中，本發明之抗體對IL18-BP具有特異性。 II. 抗IL18-BP 抗體
因此，本發明提供如圖1、圖2、及圖3所提供之抗IL18-BP抗體（例如包括與圖1、圖2、及/或圖3所示之彼等具有同一CDR之抗IL18-BP抗體）以及與圖1、圖2、及/或圖3中列舉之抗體競爭結合的抗體。
如下文所討論，通常使用用語「抗體(antibody)」。本發明使用之抗體可採用本文所述之多種形式，包括傳統抗體以及下文所述之抗體衍生物、片段、及擬似物。通常，用語「抗體」包括任何包括至少一個抗原結合域之多肽，如下文更全面地描述。如本文所述，抗體可以是多株、單株、異種、同種異體、同基因、或其修飾形式，其中單株抗體在許多實施例中特別有用。在一些實施例中，本發明之抗體特異性結合或實質上特異性結合IL18-BP分子。如本文中所使用，用語「單株抗體(monoclonal antibodies)」及「單株抗體組成物(monoclonal antibody composition)」係指僅含有一種能夠與抗原之特定表位發生免疫反應的抗原結合位點之抗體分子群，而用語「多株抗體」及「多株抗體組成物」係指含有能夠與特定抗原交互作用的多種抗原結合位點之抗體分子群。單株抗體組成物一般對與其發生免疫反應之特定抗原表現出單一結合親和力。
傳統的全長抗體結構單元一般包含四聚體。各四聚體一般由兩對同一多肽鏈組成，各對具有一個「輕」鏈（一般具有約25 kDa的分子量）及一個「重」鏈（一般具有約50至70 kDa的分子量）。人類輕鏈係分類為κ及λ輕鏈。本發明係關於IgG類，其具有若干種亞類，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4。因此，如本文中所使用，「同型(isotype)」係指由其恆定區之化學及抗原特徵定義之免疫球蛋白的任何亞類。如圖4所示，儘管在本文中經指定為「CPA」之例示性抗體係基於IgGl重鏈恆定區，但本發明之抗IL18-BP抗體包括使用IgG2、IgG3、及IgG4序列、或其組合者。例如，如所屬技術領域已知的，不同的IgG同型具有不同的效應功能，其可能是或可能不是所欲的。因此，本發明之CPA抗體亦可將IgGl恆定域替換成IgG2、IgG3、或IgG4恆定域（如圖1E所繪示），其中IgG2及IgG4在數種情況下特別有用，例如為了易於製造或所欲減少效應功能時，後者在一些情況下係所欲的。
各鏈之胺基末端部分包括約100至110或更多個胺基酸的可變區，主要負責抗原識別，在所屬技術領域及本文中通常稱為「Fv域(Fv domain)」或「Fv區(Fv region)」。在可變區中，重鏈及輕鏈之各V域聚集三個環以形成抗原結合位點。環中之各者稱為互補決定區（下文中稱為「CDR」），其中胺基酸序列之變化最為顯著。「可變(Variable)」係指抗體之間可變區之某些區段在序列上有很大差異。可變區內之可變性不是均勻分布的。相反地，V區由相對不變的片段組成，稱為架構區(FR)（15至30個胺基酸），其被稱為「高度變異區(hypervariable region)」的極端變異的較短區域分隔開。
各VH及VL由三個高度變異區（「互補決定區」，「CDR」）及四個FR構成，以下列順序由胺基端排列至羧基端：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
高度變異區通常涵蓋輕鏈可變區中之約胺基酸殘基24-34（LCDR1；「L」表示輕鏈）、50-56 (LCDR2)、及89-97 (LCDR3)及重鏈可變區中之約胺基酸殘基31-35B（HCDR1；「H」表示重鏈）、50-65 (HCDR2)、及95-102 (HCDR3)，所屬技術領域中具有通常知識者將瞭解，有時編號略有改變；Kabat et al., SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5 th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)及/或形成高度變異環之殘基（例如輕鏈可變區中之殘基26-32 (LCDR1)、50-52 (LCDR2)、及91-96 (LCDR3)及重鏈可變區中之殘基26-32 (HCDR1)、53-55 (HCDR2)、及96-101 (HCDR3)）；Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917。本發明之具體CDR如下所述並顯示於圖6A至圖6D。
各鏈之羧基端部分定義主要負責效應功能之恆定區。Kabat等人收集大量重鏈可變區及輕鏈可變區之一級序列。基於序列之保守程度，他們將個別一級序列分類成CDR及架構，並列出其列表（參見SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5 th edition, NIH publication, No. 91-3242, E. A. Kabat et al.，全文以引用方式併入本文中）。
在免疫球蛋白之IgG亞類中，重鏈中有數個免疫球蛋白域。本文中之「免疫球蛋白(Ig)域(immunoglobulin (Ig) domain)」係指具有獨特三級結構之免疫球蛋白區域。本發明所關注的是重鏈域，包括恆定重(CH)域及鉸鏈域。在IgG抗體之上下文中，各IgG同型具有三個CH區。因此，IgG上下文中之「CH」域如下：「CH1」係指根據Kabat中之EU索引的位置118-220。「CH2」係指根據Kabat中之EU索引的位置237-340，及「CH3」係指根據Kabat中之EU索引的位置341-447。
因此，本發明提供可變重域、可變輕域、重恆定域、輕恆定域、及Fc域，如本文所述所使用。如本文中所使用，「可變區」係指免疫球蛋白之區域，其包含實質上由各別構成κ、λ、及重鏈免疫球蛋白基因座之Vκ或Vλ及/或VH基因中之任一種編碼之一或多個Ig域。因此，可變重域包含vhFR1-vhCDR1-vhFR2-vhCDR2-vhFR3-vhCDR3-vhFR4，且可變輕域包含vlFR1-vlCDR1-vlFR2-vlCDR2-vlFR3-vlCDR3-vlFR4。本文中之「重恆定區」係指抗體之CH1-鉸鏈-CH2-CH3部分。如本文所使用，「Fc」或「Fc區」或「Fc域」意指包含抗體之恆定區（排除第一恆定區免疫球蛋白域）及在一些情形下包含部分鉸鏈的多肽。因此，Fc係指IgA、IgD、及IgG之最後兩個恆定區免疫球蛋白域、IgE及IgM之最後三個恆定區免疫球蛋白域、及此等域之可撓性鉸鏈N端。對於IgA及IgM，Fc可包括J鏈。對於IgG，Fc域包含免疫球蛋白域Cγ2及Cγ3（Cγ2及Cγ3）及Cγ1 (Cγ1)與Cγ2 (Cγ2)之間的下鉸鏈區。儘管Fc區之邊界可以變化，但人類IgG重鏈Fc區通常被定義為在其羧基端包括殘基C226或P230，其中編號係根據Kabat中之EU索引。在一些實施例中，如下文更全面描述的，對Fc區進行胺基酸修飾，以改變例如與一或多種FcγR受體或與FcRn受體之結合。
因此，如本文中所使用，「Fc變體」或「變體Fc」意指在Fc域中包含胺基酸修飾之蛋白質。本發明之Fc變體係根據組成它們的胺基酸修飾來定義。因此，例如，N434S或434S係相對於親本Fc多肽在位置434具有絲胺酸取代之Fc變體，其中編號係根據EU索引。同樣地，M428L/N434S定義相對於親本Fc多肽具有M428L及N434S取代之Fc變體。WT胺基酸之特性可能未指定，在此情況下上述變體稱為428L/434S。應注意，本文所提供之取代順序係任意的，亦即，例如428L/434S與M428L/N434S係相同的Fc變體等。對於本發明中所論述之與抗體有關的所有位置，除非另有說明，否則胺基酸位置編號係根據EU索引。
如本文中所使用，「Fab」或「Fab區」意指包含VH、CH1、VL、及CL免疫球蛋白域之多肽。Fab可單獨指此區域，或指全長抗體、抗體片段、或Fab融合蛋白之上下文中的此區域。如本文中所使用，「Fv」或「Fv片段」或「Fv區」意指包含單一抗體之VL及VH域的多肽。如所屬技術領域中具有通常知識者將理解的，此等通常由兩條鏈組成。
在通篇說明書中，當提及可變域中之殘基（大約是輕鏈可變區之殘基1-107及重鏈可變區之殘基1-113）時，通常會使用IMTG編號系統或Kabat編號系統（例如Kabat et al., supra (1991)）。Kabat中之EU編號通常用於恆定域及/或Fc域。
CDR有助於形成抗原結合位點，或更具體地，形成抗體之表位結合位點。「表位(Epitope)」係指與抗體分子可變區中之特定抗原結合位點（稱為互補位）交互作用的決定簇。表位係分子群組諸如胺基酸或糖側鏈，且通常具有特定的結構特徵以及特定的電荷特徵。單一抗原可具有多於一個表位。
表位可包含直接參與結合之胺基酸殘基（亦稱為表位之免疫顯性組分）及不直接參與結合之其他胺基酸殘基，諸如由特異性抗原結合肽有效阻斷的胺基酸殘基；換言之，胺基酸殘基在特異性抗原結合肽之覆蓋範圍內。
表位可以是構象的或線性的。構象表位係由線性多肽鏈之不同區段在空間上並置的胺基酸產生。線性表位係由多肽鏈中相鄰胺基酸殘基所產生者。構象表位與非構象表位之區別在於，在變性溶劑之存在下，會失去與前者之結合，而不失去與後者之結合。
表位一般包括至少3個、更常見地至少5個、或8至10個呈現獨特空間構象之胺基酸。識別相同表位之抗體可透過簡單的免疫檢定進行驗證，顯示一種抗體阻斷另一種抗體與目標抗原結合之能力，例如「分倉(binning)」。具體分倉如下所述。
「抗體(antibody)」之定義中包括抗體之「抗原結合部分(antigen-binding portion)」（亦可與「抗原結合片段(antigen-binding fragment)」、「抗體片段(antibody fragment)」、及「抗體衍生物(antibody derivative)」互換使用）。亦即，為了本發明之目的，本發明之抗體之最低功能要求係結合至IL18-BP抗原。如所屬技術領域具有通常知識者將理解的，存在大量保留結合抗原之能力且還具有替代結構之抗原片段及衍生物，包括但不限於(i)由VL、VH、CL、及CH1域組成之Fab片段；(ii)由VH及CH1域組成之Fd片段；(iii) F(ab')2片段，包含兩個連接之Fab片段的二價片段；(vii)單鏈Fv分子(scFv)，其中VH域及VL域係藉由肽連接子連接，該肽連接子使兩個域締合以形成抗原結合位點（Bird et al., 1988, Science 242:423-426, Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:5879-5883，全文以引用方式併入本文中）；(iv)「雙價抗體」或「三價抗體」，藉由基因融合構築之多價或多特異性片段（Tomlinson et. al., 2000, Methods Enzymol. 326:461-479；WO94/13804；Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-6448，全文以引用方式併入本文中）；(v)「域抗體」或「dAb」（有時稱為「免疫球蛋白單可變域」），包括其他物種諸如囓齒動物（例如如WO 00/29004中所揭示）、護士鯊、及駱駝科V-HH dAb之單抗體可變域；(vi) SMIP（小分子免疫藥物）、駱駝科抗體、奈米抗體、及IgNAR。
更進一步，抗體或其抗原結合部分（抗原結合片段、抗體片段、抗體部分）可係較大免疫黏附分子（有時亦稱為「融合蛋白」）之一部分，其藉由抗體或抗體部分與一或多種其他蛋白質或肽共價或非共價締合形成。免疫黏附分子之實例包括使用鏈親和素核心區以製備四聚體scFv分子，及使用半胱胺酸殘基、標記肽、及C端多組胺酸標籤以製備二價及生物素化之scFv分子。抗體部分諸如Fab及F(ab') 2片段可使用習知技術由完整抗體製備，諸如分別用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化完整抗體。此外，如本文所述，抗體、抗體部分、及免疫黏附分子可使用標準重組DNA技術獲得。
大致上，本發明之抗IL18-BP抗體係重組的。如本文中所使用，「重組(Recombinant)」泛指例如細胞或核酸、蛋白質、或載體之產物，指示細胞、核酸、蛋白質、或載體已藉由引入異源核酸或蛋白質或改變天然核酸或蛋白質而經修飾，或者細胞衍生自經如此修飾之細胞。因此，例如重組細胞會表現細胞之天然（非重組）形式中未發現的基因，或表現異常表現、表現不足、或完全不表現的天然基因。
如本文中所使用，用語「重組抗體(recombinant antibody)」包括藉由重組方式製備、表現、產生、或單離之所有抗體，諸如(a)自人類免疫球蛋白基因之轉殖基因或轉殖染色體動物（例如小鼠）或由其製備之融合瘤中單離之抗體（下文將進一步描述）；(b)自轉化成表現人類抗體之宿主細胞（例如轉染瘤）中單離之抗體；(c)自重組、組合人類抗體庫中單離之抗體；及(d)藉由涉及人類免疫球蛋白基因序列與其他DNA序列之剪接的任何其他方式製備、表現、產生、或單離之抗體。此類重組人類抗體具有可變區，其中架構區及CDR區衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列。然而，在某些實施例中，此類重組人類抗體可經歷體外誘變（或當使用人類Ig序列轉殖基因動物時，可經歷體內體細胞誘變），因此儘管重組抗體之V H及V L區之胺基酸序列衍生自人類生殖系V H及V L序列且與之相關，但可能不天然存在於體內人類抗體生殖系庫中。 A. 抗IL18-BP 結合抗體
本發明提供抗IL18-BP抗體。（為方便起見，「抗IL18-BP抗體」及「IL18-BP抗體」可互換使用）。如圖28所示，本發明之抗IL18-BP抗體特異性結合至人類IL18-BP，且較佳地結合人類IL18-BP之分泌鏈，包括例如與圖1、圖2、及/或圖3所示之其等具有同一CDR之抗IL18-BP抗體。
如本文所述及下文更全面地描述，抗IL18-BP抗體（包括抗原結合片段）不僅與IL18-BP結合並能阻斷IL18-BP與IL18之交互作用，從而釋放增加之游離IL18水平，用於增強T細胞、NK細胞、NKT細胞、骨髓細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)之活化、增殖、細胞介素及/或趨化因子之分泌，可用於治療疾病諸如癌症及病原體感染。
對IL18-BP或IL18-BP表位之特異性結合可例如藉由抗體具有K D為至少約10 -5M、至少約10 -6M、至少約10 -7M、至少約10 -8M、至少約10 -9M、替代地至少約10 -10M、至少約10 -11M、至少約10 -12M、至少約10 -13M、至少約10 -14M或更大來展現，其中K D係指特定抗體-抗原交互作用之解離速率。一般而言，相對於IL18-BP抗原或表位，特異性結合抗原之抗體之K D係對照分子的20、50、100、500、1000、5,000、10,000、100,000、或更多倍。
然而，如實例所支持的，為了與IL18-BP最佳結合，抗體較佳地具有小於0.01 nM、小於10 nM、最佳地小於0.1 pM、小於1 pM、小於0.1 pM、及小於0.01 pM的K D（亦稱為結合親和力），可用於本發明之方法。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體展現出小於900 pM、小於850 pM、小於800 pM、小於750 pM、小於700 pM、小、於650 pM、小於600 pM、小於550 pM、小於500 pM、小於450 pM、小於400 pM、小於350 pM、小於300 pM、小於250 pM、小於200 pM、小於150 pM、小於100 pM、小於50 pM、或小於10 pM的KD。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體展現出小於750 pM的K D。在一些實施例中，本發明之抗IL18-BP抗體以50 nM或更小、10 nM或更小、或1 nM或更小（亦即，較高結合親和力）、100 pM或更小、10 pM或更小、1 pM或更小、0.1 pM或更小、或0.01 pM或更小的K D結合至人類IL18-BP，其中K D係藉由已知方法判定，例如表面電漿子共振（SPR，例如Biacore儀器）、ELISA、KinExA，且最典型的是25℃或37℃下的SPR。在一些實施例中，本發明之抗IL18-BP抗體以小於900 pM、小於850 pM、小於800 pM、小於750 pM、小於700 pM、小於650 pM、小於600 pM、小於550 pM、小於500 pM、小於450 pM、小於400 pM、小於350 pM、小於300 pM、小於250 pM、小於200 pM、小於150 pM、小於100 pM、小於50 pM、或小於10 pM的K D結合至人類IL18-BP，其中K D係藉由已知方法判定，例如表面電漿子共振（SPR，例如Biacore儀器）、ELISA、KinExA，且最典型的是25℃或37℃下的SPR。在一些實施例中，抗體較佳地具有小於0.005 pM、0.01 pM、0.02 pM、0.03 pM、0.04 pM、0.05 pM、0.06 pM、0.07 pM、0.08 pM、0.09 pM、0.10 pM、0.15 pM、0.20 pM、0.25 pM、0.30 pM、0.35 pM、0.40 pM、0.45 pM、0.50 pM、0.55 pM、0.60 pM、0.65 pM、0.70 pM、0.75 pM、0.80 pM、0.85 pM、0.90 pM、0.95 pM、或1 pM的K D或結合親和力。
此外，相對於對照，對於特定抗原或表位之特異性結合可例如藉由對於IL18-BP抗原或表位之KA或Ka是表位的至少20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍、100,000倍、或更多倍來展現，其中KA或Ka係指特定抗體-抗原交互作用之締合速率。
本發明提供抗原結合域，包括全長抗體，其含有數種特異性、列舉之6個CDR組，如圖1、圖2、及/或圖3所提供。本發明提供抗原結合域，包括全長抗體，其含有數種特異性、列舉之6個CDR組，如圖3所提供。
本發明進一步提供可變重域及可變輕域以及全長重鏈及全長輕鏈。
如本文所論述的，本發明進一步提供上述組分之變體，包括如上所述之CDR中之變體。此外，可變重鏈可與本文中之「VH」序列至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、或至少99%同一，及/或當使用Fc變體時含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個胺基酸變化。所提供之可變輕鏈可與本文中之「VL」序列至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、或至少99%同一，及/或當使用Fc變體時含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個胺基酸變化。類似地，所提供之重鏈及輕鏈與本文中之「HC」及「LC」序列至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、或至少99%同一，及/或當使用Fc變體時含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個胺基酸變化。
因此，本發明提供抗體，通常是全長或scFv域，包含以下CHA CDR組，其序列顯示於圖1至圖3。
使用ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、及ADI-71717抗體產生66650譜系（VH1-03；VL-κ-1-5）CDR共有序列（圖1A）。各別序列比對顯示於圖3B。
66650譜系（VH1-03；VL-κ-1-5）共有序列包含： ●CDR-H1，具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H，其中X係N、R、D、G、或K；X2係S、H、I、或Q；X3係M或V； ●CDR-H2，具有序列W-I-H-A-G-T-G-X-T-X2-Y-S-Q-K-F-Q-G，其中X係N、A、或V；X2係K或L； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P，其中X係S或E； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列E-A-S-S-L-E-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T，其中X係S、V、Y、L、或Q；X2係F、S、或G。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含以下CDR： ●CDR-H1，具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H，其中X係N、R、D、G、或K；X2係S、H、I、或Q；X3係M或V； ●CDR-H2，具有序列W-I-H-A-G-T-G-X-T-X2-Y-S-Q-K-F-Q-G，其中X係N、A、或V；X2係K或L； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P，其中X係S或E； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列E-A-S-S-L-E-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T，其中X係S、V、Y、L、或Q；X2係F、S、或G。
使用ADI-71719、ADI-71720、ADI-71722、及ADI-71728抗體產生66670譜系（VH1-69；VL-κ-1-12）CDR共有序列（圖1B）。各別序列比對顯示於圖3C。
66670譜系（VH1-69；VL-κ-1-12）共有序列包含： ●CDR-H1，具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S，其中X係S或N；X2係E或S；X3係V或P； ●CDR-H2，具有序列G-I-I-P-G-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G，其中X係G或Y，X2係A或S；X3係N、I、或V； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T，其中X係S、G、或F； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S； ●CDR-L3，具有序列Q-Q-V-Y-X-X2-P-W-T，其中X係S或R；X2係L、I、或F。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含以下CDR： ●CDR-H1，具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S，其中X係S或N；X2係E或S；X3係V或P； ●CDR-H2，具有序列G-I-I-P-G-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G，其中X係G或Y，X2係A或S；X3係N、I、或V； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T，其中X係S、G、或F； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-Q-V-Y-X-X2-P-W-T，其中X係S或R；X2係L、I、或F。
使用ADI-71662、ADI-71663、及ADI-66692抗體產生66692譜系（VH3-23；VL-κ-1-12）CDR共有序列（圖1C）。各別序列比對顯示於圖3A。
66692譜系（VH3-23；VL-κ-1-12）共有序列包含： ●CDR-H1，具有序列F-T-F-X-N-X2-A-M-S，其中X係G或D或S；X2係T或V或Y； ●CDR-H2，具有序列A-I-S-X-X1-X2-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G，其中X係G或A；X2係N或S；X3係A或G； ●CDR-H3，具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A，其中X係S或D； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-H-A-X-X1-F-P-Y-T，其中X係Y或L；X2係S或F。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含以下CDR： ●CDR-H1，具有序列F-T-F-X-N-X2-A-M-S，其中X係G或D或S；X2係T或V或Y； ●CDR-H2，具有序列A-I-S-X-X1-X2-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G，其中X係G或A；X2係N或S；X3係A或G； ●CDR-H3，具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A，其中X係S或D； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-H-A-X-X1-F-P-Y-T，其中X係Y或L；X2係S或F。
使用ADI-71736、ADI-71739、及ADI-66716抗體產生66716譜系（VH1-39；VL-κ-1-12）CDR共有序列（圖1D）。各別序列比對顯示於圖3D。
66716譜系（VH1-39；VL-κ-1-12）共有序列包含： ●CDR-H1，具有序列G-S-I-S-S-X-X2-Y-X3-W-G，其中X係S或P；X2係E或D；X3係G、P、或Y； ●CDR-H2，具有序列S-I-X-X2-X3-G-X4-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S，其中X係Y或V；X2係Y或N；X3係Q或S；X4係S或A； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y，其中X係Y或H，X2係V或L； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T，其中X係S或F；X2係S或V。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含以下CDR： ●CDR-H1，具有序列G-S-I-S-S-X-X2-Y-X3-W-G，其中X係S或P；X2係E或D；X3係G、P、或Y； ●CDR-H2，具有序列S-I-X-X2-X3-G-X4-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S，其中X係Y或V；X2係Y或N；X3係Q或S；X4係S或A； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y，其中X係Y或H，X2係V或L； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T，其中X係S或F；X2係S或V。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含以下CDR： ●CDR-H1，具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； ●CDR-H2，具有序列W-I-H-A-G-T-G-X-T-X2-Y-S-Q-K-F-Q-G，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P，其中X係任何胺基酸； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列E-A-S-S-L-E-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含以下CDR： ●CDR-H1，具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； ●CDR-H2，具有序列G-I-I-P-G-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G，其中X係任何胺基酸，X2係任何胺基酸； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T，其中X係任何胺基酸； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S； ●CDR-L3，具有序列Q-Q-V-Y-X-X2-P-W-T，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含以下CDR： ●CDR-H1，具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； ●CDR-H2，具有序列G-I-I-P-G-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T，其中X係任何胺基酸； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S； ●CDR-L3，具有序列Q-Q-V-Y-X-X2-P-W-T，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含以下CDR： ●CDR-H1，具有序列F-T-F-X-N-X2-A-M-S，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸； ●CDR-H2，具有序列A-I-S-X-X1-X2-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； ●CDR-H3，具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A，其中X係任何胺基酸； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-H-A-X-X1-F-P-Y-T，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體包含以下CDR： ●CDR-H1，具有序列G-S-I-S-S-X-X2-Y-X3-W-G，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； ●CDR-H2，具有序列S-I-X-X2-X3-G-X4-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸；X4係任何胺基酸； ●CDR-H3，具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸； ●CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ●CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ●CDR-L3，具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
在一些實施例中，抗體包含： i.      重鏈可變域，其包含： a)     具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H之CDR-H1，其中X係N、R、D、G、T、Q、S、A、或K；X2係S、H、I、N、L、Y、或Q；X3係M或V； b)     具有序列X-I-X2-A-G-X3-X4-X5-T-X6-Y-S-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係W或Y；X2係H或N；X3係S、T、或A；X4係G或A；X5係N、A、T、或V；X6係E、K、或L；及 c)     具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P之CDR-H3，其中X係S、L、A、K、或E；及 ii.     輕鏈可變域，其包含： a)     具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)     具有序列E-A-S-S- -E-S之CDR-L2，其中X係L或S；及 c)     具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T之CDR-L3，其中X係S、V、Y、L、T、或Q；X2係F、S、Y、或G。
在一些實施例中，抗體包含： i.      重鏈可變域，其包含： a)     具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S之CDR-H1，其中X係S或N；X2係E或S；X3係V或P b)     具有序列G-I-I-P-X-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係G、S、I、或Y；X2係A、V、或S；X3係N、I、或V；及 c)     具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T之CDR-H3，其中X係S、G、或F；及 ii.     輕鏈可變域，其包含： a)     具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)     具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)     具有序列Q-Q-X-Y-X2-X3-P-W-T之CDR-L3，其中X係V或L；X2係S或R；X3係L、I、或F。
在一些實施例中，抗體包含： i.      重鏈可變域，其包含： a)     具有序列F-T-F-X-X2-X3-X4-M-S之CDR-H1，其中X係G、S、P、或D、或S；X2係N、S、或P；X3係T、V、或Y；X4係A、H、或I； b)     具有序列A-I-S-X-X2-X3-X4-X5-T-X6-Y-A-D-S-V-K-G之CDR-H2，其中X係G或A；X2係N、T、E、或S；X3係A或G；X4係A或G；X5係S或G；X6係Y或F；及 c)     具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y之CDR-H3；及 ii.     輕鏈可變域，其包含： a)     具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A之CDR-L1，其中X係S或D； b)     具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)     具有序列Q-H-X-X2-X3-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係A或G；X2係Y、R、或L；X3係S、R、L、或F。
在一些實施例中，抗體包含： i.      重鏈可變域，其包含： a)     具有序列G-S-I-X-S-X2-X3-Y-X4-W-X5之CDR-H1，其中X係S或F；X2係S或P；X3係E或D；X4係G、P、或Y；X5係G或S； b)     具有序列X-I-X2-X3-X4-G-X5-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S之CDR-H2，其中X係S或V；X2係Y、V、F、或A；X3係Y、F、或N；X4係Q、A、或S；X5係S、A、或N；及 c)     具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y之CDR-H3，其中X係Y、H、或F；X2係V或L；及 ii.     輕鏈可變域，其包含： a)     具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)     具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)     具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係S、N、W、或F；X2係S或V。
抗IL18-BP抗體亦包含架構區。可變重鏈及可變輕鏈之架構區可如所屬技術領域已知的經人源化（根據需要在CDR中偶爾產生變體），因此可產生圖1、圖2、及/或圖3之VH鏈及VL鏈之人源化變體。此外，人源化可變重域及輕域可接著與人類恆定區（諸如IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4之恆定區）融合。
此外，亦包括可能具有同一CDR但可變域（或整個重鏈或輕鏈）發生變化之序列。例如，IL18-BP抗體包括與圖1至3所示者具有同一CDR者，但其沿可變區之同一性可能較低，例如同一百分比85%、88%、90%、92%、95、或98%。例如，IL18-BP抗體包括與圖3中所示者具有同一CDR者，但其沿可變區之同一性可能較低，例如同一百分比95%或98%，且在一些實施例中至少95%或至少98%。
介於兩個胺基酸序列之間的同一性百分比可使用E. Meyers及W. Miller演算法( Comput. Appl. Biosci.,4:11-17 (1988))來判定，其已經併入ALIGN程式（版本2.0），使用PAM120權重殘基表，間隔長度處罰為12，間隔處罰為4。此外，介於兩個胺基酸序列之間的同一性百分比可使用Needleman及Wunsch ( J. Mol. Biol.48：444-453(1970))演算法來判定，其已經併入GCG軟體包中之GAP程式（可商購），使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣，間隔權重(gap weight)為16、14、12、10、8、6、或4，長度權重(length weight)為1、2、3、4、5、或6。
額外地或替代地，本發明之蛋白質序列可進一步用作「查詢序列」以對公共資料庫進行檢索，以例如識別相關序列。此類檢索可使用Altschul, et al., J. Mol. Biol.215:403-10 (1990)之XBLAST程式（版本2.0）來執行。BLAST蛋白質檢索可用XBLAST程式進行，得分＝50，字長＝3，以獲得與根據本發明之至少一些實施例的抗體分子同源的胺基酸序列。為了獲得用於比較目的之空位比對，可使用帶空位的BLAST(Gapped BLAST)，如Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25(17):3389-3402 (1997)中所述。當使用BLAST及Gapped BLAST程式時，可使用各別程式（XBLAST及NBLAST）之預設參數。
大致上，IL18-BP抗體之間用於比較之同一性百分比係至少75%、至少80%、至少90%，較佳同一性百分比係至少約95%、96%、97%、98%、或99%。同一性百分比可沿著整個胺基酸序列，例如整個重鏈或輕鏈或沿著鏈之一部分。例如，本發明之抗IL18-BP抗體之定義中包括沿著整個可變區具有同一性之抗體（例如其中沿著可變區之同一性係95%或98%同一，且在一些實施例中係至少95%或至少98%），或沿著整個恆定區，或僅沿著Fc域。 B. 特異性抗IL18-BP 抗體
本發明提供抗原結合域，包括全長抗體，其含有數種特異性、列舉之6個CDR組以及共有CDR（參見例如圖1A至圖1D中所列出者）。
本文所述之抗體標示如下。抗體具有參考編號，例如「66650譜系（VH1-03；VL-κ-1-5）」或「VH1-03」或「ADI-71663 hIgG4 S228P κ」。此代表CDR及/或可變重鏈及可變輕鏈之組合，如圖1、圖2、及/或圖3所示。「ADI-71663.VH」係指ADI-71663 hIgG4 S228P κ之可變重鏈部分，而「ADI-71663.VL」係可變輕鏈。「ADI-71663.vhCDR1」、「ADI-71663.vhCDR2」、「ADI-71663.vhCDR3」、「ADI-71663.vlCDR1」、「ADI-71663.vlCDR2」、及「ADI-71663.vlCDR3」係指所指示之CDR。「ADI-71663.HC」係指此分子之整個重鏈（例如可變域及恆定域），且「ADI-71663.LC」係指同一分子之整個輕鏈（例如可變域及恆定域）。
本發明進一步提供可變重域及可變輕域以及全長重鏈及全長輕鏈。
在許多實施例中，本發明之抗體係人類抗體（源自噬菌體）並阻斷IL18-BP。如圖1A至圖1D及圖2A至圖2P所示，抗IL18-BP抗體及其組分亦概述如下：
來自66650譜系之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、及CDR-L3（VH1-03；VL-κ-1-5）；
來自66670譜系之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、及CDR-L3（VH1-69；VL-κ-1-12）；
來自66692譜系之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、及CDR-L3（VH3-23；VL-κ-1-12）；
來自66716譜系之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、及CDR-L3（VH1-39；VL-κ-1-12）；
ADI-71663、ADI-71663.VH、ADI-71663.VL、ADI-71663.HC、ADI-71663.LC、及ADI-71663.H1、ADI-71663.H2、ADI-71663.H3、ADI-71663.H4；ADI-71663.vhCDR1、ADI-71663.vhCDR2、ADI-71663.vhCDR3、ADI-71663.vlCDR1、ADI-71663.vlCDR2、及ADI-71663.vlCDR3；
ADI-71662、ADI-71662.VH、ADI-71662.VL、ADI-71662.HC、ADI-71662.LC、及ADI-71662.H1、ADI-71662.H2、ADI-71662.H3、ADI-71662.H4；ADI-71662.vhCDR1、ADI-71664.71662、ADI-71662.vhCDR3、ADI-71662.vlCDR1、ADI-71662.vlCDR2、及ADI-71662.vlCDR3；
ADI-71701、ADI-71701.VH、ADI- 71701.VL、ADI- 71701.HC、ADI- 71701.LC、及ADI-71701.H1、ADI-71701.H2、ADI-71701.H3、ADI-71701.H4；ADI- 71701.vhCDR1、ADI-71701.vhCDR2、ADI- 71701.vhCDR3、ADI- 71701.vlCDR1、ADI- 71701.vlCDR2、及ADI- 71701.vlCDR3；
ADI-71709、ADI- 71709.VH、ADI- 71709.VL、ADI- 71709.HC、ADI- 71709.LC、及ADI-71709.H1、ADI-71709.H2、ADI-71709.H3、ADI-71709.H4；ADI- 71709.vhCDR1、ADI-71709.vhCDR2、ADI-71709.vhCDR3、ADI-71709.vlCDR1、ADI- 71709.vlCDR2、及ADI-71709.vlCDR3；
ADI-71710、ADI-71710.VH、ADI-71710.VL、ADI-71710.HC、ADI- 71710.LC、及ADI- 71710.H1、ADI-71710.H2、ADI- 71710.H3、ADI-71710.H4；ADI- 71710.vhCDR1、ADI-71710.vhCDR2、ADI-71710.vhCDR3、ADI-71710.vlCDR1、ADI- 71710.vlCDR2、及ADI- 71710.vlCDR3；
ADI-71719、ADI-71719.VH、ADI-71719.VL、ADI-71719.HC、ADI-71719.LC、及ADI-71719.H1、ADI-71719.H2、ADI-71719.H3、ADI-71719.H4；ADI-71719.vhCDR1、ADI-71719.vhCDR2、ADI- 71719.vhCDR3、ADI-71719.vlCDR1、ADI-71719.vlCDR2、及ADI-71719.vlCDR3；
ADI-71720、ADI-71720.VH、ADI-71720.VL、ADI- 71720.HC、ADI-71720.LC、及ADI-71720.H1、ADI-71720.H2、ADI-71720.H3、ADI- 71720.H4；ADI-71720.vhCDR1、ADI-71720.vhCDR2、ADI-71720.vhCDR3、ADI-71720.vlCDR1、ADI- 71720.vlCDR2、及ADI-71720.vlCDR3；
ADI-71722、ADI-71722.VH、ADI-71722.VL、ADI-71722.HC、ADI-71722.LC、及ADI-71722.H1、ADI71722.H2、ADI-71722.H3、ADI-71722.H4；ADI-71722.vhCDR1、ADI-71722.vhCDR2、ADI-71722.vhCDR3、ADI-71722.vlCDR1、ADI-71722.vlCDR2、及ADI-71722.vlCDR3；
ADI-71717、ADI-71717.VH、ADI-71717.VL、ADI-71717.HC、ADI-71717.LC、及ADI-71717.H1、ADI71717.H2、ADI-71717.H3、ADI-71717.H4；ADI-71717.vhCDR1、ADI-71717.vhCDR2、ADI-71717.vhCDR3、ADI-71717.vlCDR1、ADI-71717.vlCDR2、及ADI-71717.vlCDR3；
ADI-71739、ADI-71739.VH、ADI-71739.VL、ADI-71739.HC、ADI-71739.LC、及ADI-71739.H1、ADI71739.H2、ADI-71739.H3、ADI-71739.H4；ADI-71739.vhCDR1、ADI-71739.vhCDR2、ADI-71739.vhCDR3、ADI-71739.vlCDR1、ADI-71739.vlCDR2、及ADI-71739.vlCDR3；
ADI-71736、ADI-71736.VH、ADI-71736.VL、ADI-71736.HC、ADI-71736.LC、及ADI-71736.H1、ADI71736.H2、ADI-71736.H3、ADI-71736.H4；ADI-71736.vhCDR1、ADI-71736.vhCDR2、ADI-71736.vhCDR3、ADI-71736.vlCDR1、ADI-71736.vlCDR2、及ADI-71736.vlCDR3；
ADI-71707、ADI-71707.VH、ADI-71707.VL、ADI-71707.HC、ADI-71707.LC、及ADI-71707.H1、ADI-71707.H2、ADI-71707.H3、ADI-71707.H4；ADI-71707.vhCDR1、ADI-71707.vhCDR2、ADI-71707.vhCDR3、ADI-71707.vlCDR1、ADI-71707.vlCDR2、及ADI-71707.vlCDR3；
AB-837、AB-837.VH、AB-837.VL、AB-837.HC、AB-837.LC、及AB-837.H1、AB-837.H2、AB-837.H3、AB-837.H4；AB-837.vhCDR1、AB-837.vhCDR2、AB-837.vhCDR3、AB-837.vlCDR1、AB-837.vlCDR2、及AB-837.vlCDR3；
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ADI-66716、ADI-66716.VH、ADI-66716.VL、ADI-66716.HC、ADI-66716.LC、及ADI-66716.H1、ADI-66716.H2、ADI-66716.H3、ADI-66716.H4；ADI-66716.vhCDR1、ADI-66716.vhCDR2、ADI-66716.vhCDR3、ADI-66716.vlCDR1、ADI-66716.vlCDR2、及ADI-66716.vlCDR3；
ADI-71728、ADI-71728.VH、ADI-71728.VL、ADI-71728.HC、ADI-71728.LC、及ADI-71728.H1、ADI-71728.H2、ADI-71728.H3、ADI-71728.H4；ADI-71728.vhCDR1、ADI-71728.vhCDR2、ADI-71728.vhCDR3、ADI-71728.vlCDR1、ADI-71728.vlCDR2、及ADI-71728.vlCDR3；或
ADI-71741、ADI-71741.VH、ADI-71741.VL、ADI-71741.HC、ADI-71741.LC、及ADI- 71741.H1、ADI71741.H2、ADI-71741.H3、ADI-71741.H4；ADI-71741.vhCDR1、ADI-71741.vhCDR2、ADI-71741.vhCDR3、ADI-71741.vlCDR1、ADI-71741.vlCDR2、及ADI-71741.vlCDR3；
ADI-71742、ADI-71742.VH、ADI-71742.VL、ADI-71742.HC、ADI-71742.LC、及ADI-71742.H1、ADI71742.H2、ADI-71742.H3、ADI-71742.H4；ADI-71742.vhCDR1、ADI-71742.vhCDR2、ADI-71742.vhCDR3、ADI-71742.vlCDR1、ADI-71742.vlCDR2、及ADI-71742.vlCDR3；
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ADI-71753、ADI-71753.VH、ADI-71753.VL、ADI-71753.HC、ADI-71753.LC、及ADI-71753.H1、ADI71753.H2、ADI-71753.H3、ADI-71753.H4；ADI-71753.vhCDR1、ADI-71753.vhCDR2、ADI-71753.vhCDR3、ADI-71753.vlCDR1、ADI-71753.vlCDR2、及ADI-71753.vlCDR3；或
ADI71755、ADI-71755.VH、ADI-71755.VL、ADI-71755.HC、ADI-71755.LC、及ADI-71755.H1、ADI71755.H2、ADI-71755.H3、ADI-71755.H4；ADI-71755.vhCDR1、ADI-71755.vhCDR2、ADI-71755.vhCDR3、ADI-71755.vlCDR1、ADI-71755.vlCDR2、及ADI-71755.vlCDR3。 C.    IL18-BP 抗體與列舉之抗體競爭結合
本發明不僅提供所列舉之抗體，還提供與所列舉之抗體（如本文列舉之與IL18-BP特異性結合的VH及ADI編號）競爭以與IL18-BP分子特異性結合的額外抗體。本發明之IL18-BP抗體包括與一或多種所列舉之抗體競爭結合的抗體，包括VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、VH1-39.66716、VL-κ-1-5-66650、VL-κ-1-12、66670、VL-κ-1-12、66692、VL-κ-1-12、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755。 D. 額外抗體之產生
針對人類IL18-BP的額外抗體可使用如所屬技術領域熟知的方法（諸如實例中概述之方法）來製備。因此，可藉由傳統方法產生額外的抗IL18-BP抗體，諸如免疫小鼠（有時使用DNA免疫，例如Aldevron使用之方法），隨後針對IL18-BP（包括人類IL18-BP）篩選蛋白質並產生融合瘤，進行抗體純化及回收。 E. 可選的抗體工程改造
本發明之抗IL18-BP抗體（例如包括與圖1、圖2、及/或圖3所示之彼等具有同一CDR之抗IL18-BP抗體）可經修飾或工程改造，以藉由胺基酸取代改變胺基酸序列。
在本文中，「胺基酸取代(amino acid substitution)」或「取代(substitution)」意指用不同的胺基酸置換親本多肽序列中特定位置的胺基酸。具體地，在一些實施例中，取代係針對非天然存在於特定位置、或非天然存在於生物體內或任何生物體中的胺基酸。例如，取代E272Y係指變體多肽，在此情況下係Fc變體，其中位置272處的麩胺酸經酪胺酸置換。為清楚起見，經工程改造以改變核酸編碼序列但不改變起始胺基酸（例如將CGG（編碼精胺酸）交換成CGA（仍編碼精胺酸）以增加宿主生物體表現水平）之蛋白質不是「胺基酸取代」；也就是說，儘管產生編碼相同蛋白質之新基因，但如果該蛋白質在其起始特定位置具有相同的胺基酸，則不屬於胺基酸取代。
如本文所論述的，可進行胺基酸取代以改變CDR對IL18-BP蛋白之親和力（包括增加及減少結合，如下文更全面地概述），以及改變抗體之額外功能特性。例如，抗體可經工程改造以包括Fc區內之修飾，一般是為了改變抗體之一或多種功能特性，諸如血清半衰期、補體結合、Fc受體結合、及/或抗原依賴性細胞毒性。此外，根據本發明之至少一些實施例的抗體可經化學修飾（例如可將一或多個化學部份附接至抗體上）或經修飾以改變其醣基化，從而再次改變抗體之一或多種功能特性。以下進一步描述此類實施例。Fc區中殘基之編號係Kabat之EU索引編號。
在一些實施例中，C H1之鉸鏈區經修飾，以使得鉸鏈區中之半胱胺酸殘基數目改變，例如增加或減少。此方法進一步描述於Bodmer等人之美國專利第5,677,425號。CH1鉸鏈區中半胱胺酸殘基之數目經改變以例如促進輕鏈及重鏈之組裝或增加或降低抗體之穩定性。
在另一實施例中，抗體之Fc鉸鏈區經突變以縮短抗體之生物半衰期。更具體地，將一或多個胺基酸突變引入Fc鉸鏈片段之CH2-CH3域界面區，以使得抗體所具有之葡萄球菌屬蛋白A (SpA)結合相對於天然Fc鉸鏈域SpA結合削弱。此方法係進一步詳細描述於Ward等人之美國專利第6,165,745號中。
在一些實施例中，可在Fc區中進行胺基酸取代，通常用於改變與FcγR受體之結合。如本文中所使用，「Fcγ受體」、「FcγR」、或「FcγR」意指結合IgG抗體Fc區且由FcγR基因編碼之蛋白質家族之任何成員。在人類中，此家族包括但不限於FcγRI (CD64)，包括異構體FcγRIa、FcγRIb、及FcγRIc；FcγRII (CD32)，包括異構體FcγRIIa（包括同種異型H131及R131）、FcγRIIb（包括FcγRIIb-1及FcγRIIb-2）、及FcγRIIc；及FcγRIII (CD16)，包括異構體FcγRIIIa（包括同種異型V158及F158）及FcγRIIIb（包括同種異型FcγRIIIb-NA1及FcγRIIIb-NA2）（Jefferis et al., 2002, Immunol Lett 82:57-65，全文以引用方式併入本文中），以及任何未發現之人類FcγR或FcγR異構體或同種異型。FcγR可來自任何生物體，包括但不限於人類、小鼠、大鼠、兔、及猴。小鼠FcγR包括但不限於FcγRI (CD64)、FcγRII (CD32)、FcγRIII-1 (CD16)、及FcγRIII-2 (CD16-2)，以及任何未發現之小鼠FcγR或FcγR異構體或同種異型。
具有數種有用的Fc取代可改變與一或多種FcγR受體之結合。導致結合增加以及結合減少之取代可能是有用的。例如，已知與FcγRIIIa之結合增加通常會導致ADCC（抗體依賴性細胞介導之細胞毒性；細胞介導之反應，其中表現FcγR之非特異性細胞毒性細胞識別目標細胞上之經結合抗體，並隨後導致目標細胞裂解）增加。同樣地，在一些情形下，減少與FcγRIIb（抑制性受體）之結合也可能是有益的。可用於本發明之胺基酸取代包括美國專利第11/124,620號（特別是圖41）及美國專利第6,737,056號中所列者，兩者之全文皆明確地以引用方式併入本文中，且特別針對其中揭示之變體。可用的特定變體包括但不限於236A、239D、239E、332E、332D、239D/332E、267D、267E、328F、267E/328F、236A/332E、239D/332E/330Y、239D、332E/330L、299T、及297N。
此外，本發明之抗體經修飾以增加其生物半衰期。各種方法係可能的。例如，可引入以下突變中之一多者：T252L、T254S、T256F，如描述於美國專利第6,277,375號。替代地，為了增加生物半衰期，抗體可在C H1及C L區內發生改變，以含有自IgG之Fc區中CH2域之兩個環獲取之補救受體結合表位，如描述於Presta等人之美國專利第5,869,046號及第6,121,022號。增加血清半衰期之額外突變揭示於美國專利第8,883,973號、第6,737,056號、及第7,371,826號中，並包括428L、434A、434S、及428L/434S。
在又另一實施例中，藉由以不同胺基酸殘基置換至少一個胺基酸殘基來改變Fc區以改變抗體之效應功能。例如，可將選自胺基酸殘基234、235、236、237、297、318、320、及322之一或多種胺基酸用不同胺基酸殘基置換，以使抗體具有改變之效應配體親和力，但保留親本抗體之抗原結合能力。親和力發生改變之效應配體可以是例如Fc受體或補體之C1組分。此方法進一步詳細描述於Winter等人之美國專利第5,624,821號及第5,648,260號。
在另一實例中，可將選自胺基酸殘基329、331、及322之一或多種胺基酸用不同胺基酸殘基置換，以使抗體具有改變之C1q結合及/或降低或消除之補體依賴性細胞毒性(CDC)。此方法進一步詳細描述於Idusogie等人之美國專利第6,194,551號中。
在另一實例中，改變胺基酸位置231至239內之一或多個胺基酸殘基以藉此改變抗體固定補體之能力。此方式進一步描述於Bodmer等人之PCT公開案WO 94/29351中。
在又一實例中，藉由對以下位置處之一或多種胺基酸進行修飾來修飾Fc區以增加抗體介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)之能力及/或增加抗體對Fcγ受體之親和力：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438、或439。此方式進一步描述於Presta之PCT公開案WO 00/42072中。此外，已定位人類IgG1對FcγR1、FcγRII、FcγRIII、及FcRn之結合位點且已描述具有改良結合之變體（參見Shields, R. L. et al., J. Biol. Chem., 276:6591-6604 (2001)）。位置256、290、298、333、334、及339處之特異性突變顯示改良與FcγRIII之結合。此外，以下組合突變體顯示可改良FcγRIII結合：T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A、及S298A/E333A/K334A。此外，突變諸如M252Y/S254T/T256E或M428L/N434S可改良與FcRn之結合並延長抗體循環半衰期（參見Chan CA and Carter PJ (2010) Nature Rev Immunol 10:301-316）。
在又另一實施例中，抗體可經修飾以廢除體內Fab臂交換。具體而言，此過程涉及在其他IgG4抗體之間交換IgG4半分子（一條重鏈加上一條輕鏈），從而有效地產生功能上單價之雙特異性抗體。重鏈之鉸鏈區及恆定域之突變可廢除此交換（參見Aalberse, RC, Schuurman J., Immunology, 105:9-19 (2002)）。
在又另一實施例中，抗體之醣基化經修飾。例如，可製備去醣基化抗體（亦即抗體缺乏醣基化）。可改變醣基化以例如增加抗體對抗原之親和力或降低效應功能諸如ADCC。此類碳水化合物修飾可藉由例如改變抗體序列內之一或多個醣基化位點（例如N297）來達成。例如，可進行一或多種胺基酸取代，導致消除一或多個可變區架構醣基化位點，藉以消除該位點處之醣基化。
額外地或替代地，可製備具有改變類型之醣基化之抗體，諸如具有減少量岩藻醣殘基之低岩藻醣基化抗體或具有增加之二等分GlcNac結構之抗體。此類改變之醣基化模式已證明可提高抗體之ADCC能力。此類碳水化合物修飾可藉由例如在具有改變之醣基化機制之宿主細胞中表現抗體來達成。具有改變之醣基化機制之細胞已描述於所屬技術領域中，且可用作表現根據本發明之至少一些實施例之重組抗體藉以產生具有改變之醣基化之抗體的宿主細胞。例如，細胞系Ms704、Ms705、及Ms709缺乏岩藻醣基轉移酶基因FUT8（α (1,6)岩藻醣基轉移酶），因此表現於Ms704、Ms705、及Ms709細胞系中之抗體在其碳水化合物上缺乏岩藻醣。Ms704、Ms705、及Ms709 FUT8細胞系是藉由使用兩種置換載體靶向破壞CHO/DG44細胞中之FUT8基因而產生的（參見Yamane等人之美國專利公開案第20040110704號及Yamane-Ohnuki et al., Biotechnol Bioeng87:614-22 (2004)）。作為另一實例，Hanai等人之EP 1,176,195描述具有編碼岩藻醣基轉移酶之功能性破壞之FUT8基因之細胞系，使得表現於此種細胞系中之抗體藉由減少或消除α 1,6鍵相關酶而展現低岩藻醣基化。Hanai等人亦描述具有向結合至抗體之Fc區之N-乙醯葡萄糖胺添加岩藻醣之低酶活性或不具有酶活性之細胞系，例如大鼠骨髓瘤細胞系YB2/0 (ATCC CRL 1662)。Presta之PCT公開案WO 03/035835描述CHO細胞系變體Lec13細胞，其中使岩藻醣附接至Asn(297)-連接碳水化合物之能力有所降低，亦導致表現於該宿主細胞中之抗體發生低岩藻醣基化（另參見Shields, R. L. et al., J. Biol. Chem., 277:26733-26740 (2002)）。Umana等人之PCT公開案WO 99/54342描述經工程改造以表現醣蛋白修飾醣苷基轉移酶（例如β(1,4)-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶III (GnTIII)）之細胞系，使得表現於經工程改造細胞系中之抗體展現增加之二等分GlcNac結構，其導致抗體之ADCC活性增加（另參見Umana et al., Nat. Biotech., 17:176-180 (1999)）。替代地，可使用岩藻醣苷酶裂解抗體之岩藻醣殘基。例如，岩藻醣苷酶α-L-岩藻醣苷酶自抗體去除岩藻醣基殘基(Tarentino, A. L. et al., Biochem., 14:5516-23 (1975))。
本發明所設想之對本文抗體的另一種修飾係聚乙二醇化或添加其他水溶性部份，一般是聚合物，例如以延長半衰期。抗體可經聚乙二醇化，以例如增加抗體之生物（例如血清）半衰期。為了將抗體聚乙二醇化，一般使抗體或其片段在使一或多個PEG基團變成附接至抗體或其片段之條件下與聚乙二醇(PEG)（諸如PEG之反應性酯或醛衍生物）反應。較佳地，聚乙二醇化係經由與反應性PEG分子（或類似的反應性水溶性聚合物）之醯化反應或烷基化反應來進行。如本文中所使用，用語「聚乙二醇(polyethylene glycol)」意欲涵蓋已用以衍生其他蛋白質之任何形式的PEG，諸如單(C1-C10)烷氧基、或芳氧基-聚乙二醇、或聚乙二醇-順丁烯二醯亞胺。在某些實施例中，待進行聚乙二醇化之抗體係去醣基化抗體。使蛋白質聚乙二醇化之方法係所屬技術領域已知的且可應用於根據本發明之至少一些實施例之抗體。參見例如Nishimura等人之EP 0 154 316及Ishikawa等人之EP 0 401 384。
為了改變與FcγR及/或FcRn之結合親和力及/或增加體內血清半衰期，除了進行取代之外，還可進行額外的抗體修飾，如下文進一步詳細描述。
在一些情形下，親和力已經成熟。CDR中之胺基酸修飾有時稱為「親和力成熟(affinity maturation)」。「親和力成熟之(affinity matured)」抗體係在一或多個CDR上具有一或多個改變，導致抗體對抗原之親和力相較於不具有此等改變之親本抗體有所提高之抗體。在一些情形下，儘管很少見，但可能所欲的是降低抗體與其抗原之親和力，但此通常不是較佳的。
在一些實施例中，在本發明之IL18-BP抗體之一或多個CDR中進行一或多個胺基酸修飾。通常，在任何單一CDR中僅1或2或3個胺基酸經取代，且通常在一組CDR內進行不多於1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個變化。然而，應理解的是，任何CDR中之無取代、1、2、或3個取代之任何組合可獨立地且可選地與任何其他取代組合。
可進行親和力成熟，以使抗體對IL18-BP抗原之結合親和力相較於「親本」抗體增加至少約100%或更多、或至少約10 4或更多、10 5或更多、10 6或更多、10 7或更多。較佳的親和力成熟抗體對IL18-BP抗原具有奈莫耳甚至皮莫耳之親和力。親和力成熟抗體係藉由已知的程序產生。參見例如Marks et al., 1992, Biotechnology 10:779-783，其中描述藉由可變重鏈(VH)及可變輕鏈(VL)域改組(shuffling)之親和力成熟。CDR及/或架構殘基之隨機突變例如描述於：Barbas, et al., PNAS, USA 91:3809-3813 (1994)；Shier et al., Gene,169:147-155 (1995)；Yelton et al., J. Immunol., 155:1994-2004 (1995)；Jackson et al., J. Immunol., 154(7):3310-9 (1995)；及Hawkins et al., J. Mol. Biol., 226:889-896 (1992)。
替代地，可在本發明抗體之一或多個CDR中進行「沉默(silent)」胺基酸修飾，例如不顯著改變抗體對抗原之親和力。其進行的原因有很多，包括最佳化表現（如可對編碼本發明之抗體之核酸進行）。
因此，本發明之CDR及抗體之定義內包括變體CDR及抗體；亦即，本發明之抗體可在本發明所列舉之抗體之CDR中之一或多者包括胺基酸修飾。此外，如下文所述，胺基酸修飾亦可獨立地且可選地在CDR以外的任何區域中進行，包括架構區及恆定區。 F.     IL-18BP 表位作圖
本文所述之抗IL-18BP抗體與IL-18BP上的至少一種表位結合。此類表位可係構象的或線性的。如上所述，構象表位係由線性多肽鏈之不同區段在空間上並置的胺基酸產生。線性表位係由多肽鏈中相鄰胺基酸殘基所產生者。
在一些實施例中，本文所述之抗IL-18BP抗體結合至少一種構象表位，該構象表位包括區1 (SEQ ID NO: 1917)之一或多個胺基酸殘基。區1包括SRPFNFSIL之胺基酸序列(SEQ ID NO: 1917)。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之一或多個胺基酸殘基。例如，抗IL-18BP抗體可結合SEQ ID NO: 1917之胺基酸殘基中的一、二、三、四、五、六、七、八、或全部九個。具體地，抗IL-18BP抗體可結合SEQ ID NO: 1917之胺基酸殘基S1、R2、F3、P4、N5、F6、S7、I8、或L9、或其任何組合。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之胺基酸殘基S7、I8、或L9、或其任何組合。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之胺基酸殘基S7、I8、及L9。
在一些實施例中，本文所述之抗IL-18BP抗體結合至少一種構象表位，該構象表位包括區6 (SEQ ID NO: 1919)之一或多個胺基酸殘基。區6包含VDPEQVVQRH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 1919)。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體結合SEQ ID NO: 1919之一或多個胺基酸殘基。例如，抗IL-18BP抗體可結合SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基中的一、二、三、四、五、六、七、八、或九個。具體地，抗IL-18BP抗體可結合SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基V1、D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、或R9、或其任何組合。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體結合SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、或R9、或其任何組合。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體結合SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、及R9。
在一些實施例中，本文所述之抗IL-18BP抗體結合至少一種構象表位，該構象表位包括：第一胺基酸，其包括區1之胺基酸殘基中之一或多者；及第二胺基酸，其包括區6之胺基酸殘基中之一或多者。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之一或多個胺基酸殘基、及SEQ ID NO: 1919之一或多個胺基酸殘基。例如，抗IL-18BP抗體可結合SEQ ID NO: 1917之胺基酸殘基中的一、二、三、四、五、六、七、八、或全部九個；及SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基中的一、二、三、四、五、六、七、八、或九個。具體地，抗IL-18BP抗體可結合SEQ ID NO: 1917之胺基酸殘基S1、R2、F3、P4、N5、F6、S7、I8、或L9、或其任何組合；及SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基V1、D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、或R9、或其任何組合。在一些具體實施例中，抗IL-18BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之胺基酸殘基S7、I8、或L9、或其任何組合；及SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、或R9、或其任何組合。在一些實施例中，抗IL-18BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之胺基酸殘基S7、I8、及L9；及SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、及R9。
本文所述之IL-18BP抗體之構象或線性表位或結合位點可使用所屬技術領域中已知的方法來識別。此類用於識別構象表位之方法之非限制性實例包括氫氘交換質譜法(HDX-MS)、電子顯微鏡（冷凍/陰性染色）、及深度突變掃描(Francino-Urdaniz et al., RSC Chem Biol., 2(6):1580–1589 (2021)；Renaud et al., Nat Rev Drug Discov, 17(7):471-492 (2018)；Malito et al., Int. J. Mol. Sci., 16(6):13106–13140 (2015)；Sun et al., Anal. Bioanal. Chem., 413(9):2345–2359 (2021))。HDX-MS用於獲取蛋白質及其結合伴體之結構數據，以識別交互作用界面並觀察蛋白質隨時間的動態變化。隨著蛋白質消化技術之進步、不同裂解方法及數據分析軟體之實施，高通量HDX-MS能夠常規地獲得單一胺基酸分辨率數據。HDX-MS及其在分子交互作用研究中之用途之彙總可在Vinciauskaite et al., Essays Biochem., 67(2): 301–314; (2023)中找到。
眾所周知的用於識別線性表位之作圖方法包括肽陣列及噬菌體及細菌展示(Katz et al., Chem. Soc. Rev., 40(5):2131–2145 (2011); Pande et al., Biotechnol Adv., 28(6):849-58 (2010))。
所屬技術領域已知有四種IL18-BP異構體，以IL18-BP異構體a、b、c、及d表示。IL18-BP異構體a及c兩者皆含有本文所述之某些構象表位。例如，IL18-BP異構體a及c兩者皆含有構象表位，該構象表位包括：第一胺基酸序列，其具有SEQ ID NO: 1917之一或多個胺基酸殘基；及/或第二胺基酸序列，其具有SEQ ID NO: 1919之一或多個胺基酸殘基。在一些實施例中，含有N端信號傳導肽之全長IL18-BP異構體a及c、及不含N端信號傳導肽之分泌型IL18-BP異構體a及c兩者皆含有本文所述之構象表位，例如由SEQ ID NO: 1917之某些胺基酸殘基及/或SEQ ID NO: 1919之某些胺基酸殘基定義之前述構象表位。
IL18-BP異構體b及d不含SEQ ID NO: 1917及SEQ ID NO: 1919兩者之胺基酸殘基。具體地，IL18-BP異構體d含有SEQ ID NO: 1917之胺基酸殘基，但不含SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基。IL18-BP異構體d不含SEQ ID NO: 1917或SEQ ID NO: 1919之胺基酸殘基。因此，IL18-BP異構體b及IL18-BP異構體d皆不含有構象表位，該構象表位包括：第一胺基酸序列，其具有SEQ ID NO: 1917之一或多個胺基酸殘基；及第二胺基酸序列，其具有SEQ ID NO: 1919之一或多個胺基酸殘基。在一些實施例中，含有N端信號傳導肽之全長IL18-BP異構體b及d、及不含N端信號傳導肽之分泌型IL18-BP異構體b及d兩者皆含有本文所述之構象表位，例如由SEQ ID NO: 1917之某些胺基酸殘基及/或SEQ ID NO: 1919之某些胺基酸殘基定義之前述構象表位。
在一些實施例中，本文所述之抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a，IL18-BP異構體a包括全長或分泌型異構體a。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體c，IL18-BP異構體c包括全長或分泌型異構體c。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a及異構體c兩者。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體不結合IL18-BP異構體b，IL18-BP異構體b包括全長或分泌型異構體b。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體不結合IL18-BP異構體d，IL18-BP異構體d包括全長或分泌型異構體d。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體不結合IL18-BP異構體b或異構體d。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a及/或異構體c，但不結合IL18-BP異構體b及/或異構體d。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a，但不結合異構體b。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體c，但不結合異構體b。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a及異構體c兩者，但不結合異構體b。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a，但不結合異構體d。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體c，但不結合異構體d。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a及異構體c兩者，但不結合異構體d。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a，但不結合異構體b或異構體d。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體c，但不結合異構體b或異構體d。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a及異構體c兩者，但不結合異構體b或異構體d。 III. 核酸組成物
亦提供編碼本發明之抗IL18-BP抗體之核酸組成物，以及含有核酸之表現載體、及用核酸及/或表現載體組成物轉化之宿主細胞。如所屬技術領域具有通常知識者將理解的，由於基因密碼之簡併性，本文所描述之蛋白質序列可由任何數目之可能的核酸序列編碼。
編碼IL18-BP抗體之核酸組成物將取決於抗體之形式。傳統的含有兩條重鏈及兩條輕鏈之四聚體抗體係由兩種不同核酸編碼，一種編碼重鏈，而一種編碼輕鏈。如所屬技術領域已知的，可將其等放入單一表現載體或兩種表現載體中，轉化至宿主細胞中，並在宿主細胞中表現以形成本發明之抗體。在一些實施例中，例如使用scFv構築體時，通常使用編碼可變重鏈-連接子-可變輕鏈之單一核酸，可將其插入表現載體以轉化至宿主細胞中。可將核酸放入含有適當轉錄及轉譯控制序列之表現載體中，包括但不限於信號及分泌序列、調控序列、啟動子、複製起點、選擇基因等。
根據本發明之至少一些實施例用於表現重組抗體之較佳哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢（CHO細胞）、PER.C6、HEK293、及所屬技術領域已知的其他細胞。
核酸可存在於整個細胞、細胞裂解物、或以部分純化或實質上純的形式存在。當藉由標準技術（包括鹼/SDS處理、CsCl密度分離法(CsCl banding)、管柱層析、瓊脂糖凝膠電泳、及所屬技術領域熟知的其他方法）將核酸自其他細胞組分或其他污染物（例如其他細胞核酸或蛋白質）中純化時，核酸係「經單離」或「使其實質上純的」。
為了產生scFv基因，將編碼VH及VL之DNA片段可操作地連接至編碼可撓性連接子（例如編碼胺基酸序列(Gly4-Ser)3 (SEQ ID NO:150)）之另一片段，使得VH及VL序列可表現為連續的單鏈蛋白質，其中VL及VH區藉由可撓性連接子連接（參見例如Bird et al., Science242:423-426 (1988)；Huston et al. PNAS,85:5879-5883 (1988)；McCafferty et al., Nature348:552-554 (1990)）。 IV. 抗IL18-BP 抗體配方之投予
包含本發明之抗IL18-BP抗體（例如包括與圖1、圖2、及/或圖3所示之彼等具有同一CDR之抗IL18-BP抗體）之醫藥組成物的投予，較佳地以無菌水溶液之形式，可以以多種方式進行。如所屬技術領域已知的，蛋白質治療劑通常藉由IV輸注來遞送。本發明之抗體亦可使用此類方法來遞送。例如，投予可以是靜脈投予或藉由0.9%氯化鈉作為輸注媒劑進行靜脈輸注。此類技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed., 1980。
在一些實施例中，選擇投予之劑量及頻率以在治療或疾病預防上有效。如所屬技術領域已知的，對蛋白質降解、全身性遞送相對於局部遞送、新蛋白酶合成速率、以及年齡、體重、總體健康狀況、性別、飲食、投予時間、藥物交互作用、及病況嚴重性之調整可能是必要的，並可由所屬技術領域中具有通常知識者用常規實驗判定。為了治療患者，可投予治療有效劑量的本發明之Fc變體。本文中之「治療有效劑量(therapeutically effective dose)」意指產生其投予所要達成之效應的劑量。 V. 抗IL18-BP 抗體配方之投予
包含本發明之抗IL18-BP抗體（例如包括圖1、圖2、及/或圖3所述之彼等之抗IL18-BP抗體）之醫藥組成物的投予，較佳地以無菌水溶液之形式，可以以多種方式進行。如所屬技術領域已知的，蛋白質治療劑通常藉由IV輸注來遞送。本發明之抗體亦可使用此類方法來遞送。例如，投予可以是靜脈投予或藉由0.9%氯化鈉作為輸注媒劑進行靜脈輸注。此類技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed., 1980。
在一些實施例中，選擇投予之劑量及頻率以在治療或疾病預防上有效。如所屬技術領域已知的，對蛋白質降解、全身性遞送相對於局部遞送、新蛋白酶合成速率、以及年齡、體重、總體健康狀況、性別、飲食、投予時間、藥物交互作用、及病況嚴重性之調整可能是必要的，並可由所屬技術領域中具有通常知識者用常規實驗判定。為了治療患者，可投予治療有效劑量的本發明之Fc變體。本文中之「治療有效劑量(therapeutically effective dose)」意指產生其投予所要達成之效應的劑量。 VI. 抗IL18-BP 抗體之使用方法 A. 治療用途
抗IL18-BP抗體（例如包括圖1、圖2、及/或圖3所述之彼等之抗IL18-BP抗體）可用於治療通常患有與IL18-BP或游離IL18水平相關病況之患者，諸如人類對象。如本文中所使用，用語「治療(treatment)」係指治療性治療及疾病預防性或預防性措施兩者，在此實例中係關於癌症之治療。需要治療者包括已經患有癌症者以及需要預防癌症者。因此，本文中待治療之哺乳動物可能已診斷出罹患癌症或可能有罹患癌症傾向或易患癌症。如本文中所使用，用語「治療(treating)」係指預防、延遲發作、治癒、反轉、減弱、減輕、最小化、抑制、終止有害效應、或穩定上述癌性疾病、病症、或病況之可辨別症狀。亦包括如上所述之癌症控制。「控制(manage)」意指降低疾病之嚴重性、降低疾病發作頻率、縮短此類發作之持續時間、降低此類發作之嚴重性、減緩/減少癌細胞生長或增殖、減緩至少一種症狀之進展、改善至少一種可測量身體參數等。例如，免疫刺激性抗IL18-BP免疫分子應促進T細胞、NK細胞、NKT細胞、骨髓細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)、或細胞介素對目標細胞（例如癌細胞、感染細胞、或病原體細胞）之免疫，從而藉由除盡參與疾病病況之細胞來治療癌症或感染性疾病。
本發明之IL18-BP抗體以治療有效劑量提供。根據本發明之至少一些實施例，抗IL18-BP免疫分子之「治療有效劑量(therapeutically effective dosage)」較佳地導致疾病症狀之嚴重性降低、無疾病症狀期之頻率及持續時間增加、延長壽命、緩解疾病、或預防或減少因疾病折磨而造成之損傷或殘疾。例如，對於IL18-BP陽性腫瘤之治療，相對於未治療對象，「治療有效劑量」較佳地抑制細胞生長或腫瘤生長至少約20%、更佳地至少約40%、甚至更佳地至少約60%、又更佳地至少約80%。化合物抑制腫瘤生長之能力可在預測人類腫瘤功效之動物模型系統中進行評估。替代地，可藉由檢查化合物抑制之能力，諸如技術人員已知的體外抑制檢定來評估組成物之此種性質。治療有效量的治療化合物可減少對象之腫瘤大小，或以其他方式改善症狀。
所屬技術領域中具有通常知識者將能夠基於諸如對象之體型、對象症狀之嚴重性、及所選之具體組成物或投予途徑等因素來判定治療有效量。 1. 癌症治療
本發明之IL18-BP抗體單獨或與其他治療劑組合係特別可用於治療癌症。大致上，本發明之抗體係免疫調節性的，因為本發明之抗IL18-BP抗體通常會藉由抑制IL18-BP之作用來刺激免疫系統，而不是直接攻擊癌細胞。因此，與旨在抑制對腫瘤生長及發展至關重要的分子途徑及/或除盡腫瘤細胞之腫瘤靶向療法不同，癌症免疫療法旨在刺激患者自身的免疫系統消除癌細胞，從而提供長效的腫瘤破壞。癌症免疫療法可採用各種方法，其中有誘導腫瘤特異性T細胞反應之治療性癌症疫苗、及消除免疫抑制路徑之免疫刺激抗體（亦即抑制性受體拮抗劑=免疫檢查點）。
隨著癌細胞產生耐藥性及腫瘤再發，靶向療法或習知抗癌療法之臨床反應往往是短暫的。然而，過去幾年的癌症免疫療法之臨床應用顯示，此種療法可產生持久的臨床反應，對長期存活顯示出巨大的影響。然而，儘管反應係長期的，但僅少數患者有反應（而習知療法或靶向療法則有大量患者有反應，但反應係短暫的）。
當臨床上偵測到腫瘤時，其已藉由各種機制及各種免疫細胞獲得免疫抗性及免疫抑制特性，並創造免疫抑制性腫瘤微環境，從而逃避免疫防禦系統。
因此，本發明知抗IL18-BP抗體可用於治療癌症。由於免疫腫瘤學作用機制之性質，IL18-BP不一定需要在特定癌症類型上過度表現或與之相關；亦即，目的是使抗IL18-BP抗體解除對T細胞、NK細胞、NKT細胞、骨髓細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)活化之抑制，使免疫系統能夠追擊癌症。
如本文中所使用，「癌症(Cancer)」泛指任何腫瘤疾病（無論是侵襲性或轉移性），其特徵在於異常且不受控制之細胞分裂導致惡性生長或腫瘤（例如不受調控之細胞生長）。如本文中所使用，用語「癌症(cancer)」或「癌性(cancerous)」應理解為涵蓋任何腫瘤疾病（無論是侵襲性、非侵襲性、或轉移性），其特徵在於異常且不受控制之細胞分裂導致惡性生長或腫瘤，在本文中描述其非限制性實例。此包括哺乳動物中一般以不受調控之細胞生長為特徵的任何生理病況。
本文中之「癌症療法(Cancer therapy)」係指預防或治療癌症或改善癌症之一或多種症狀之任何方法。一般而言，此類療法將包含單獨投予免疫刺激抗IL18-BP抗體（包括抗原結合片段）或與化學療法或放射療法或其他生物製劑組合投予，用於增強其活性（亦即個體中），其中IL18-BP之表現會抑制抗腫瘤反應及化學療法或放射療法或生物製劑之功效。
本發明之抗IL18-BP抗體，作為單一療法或作為本文所述之組合療法之一部分，可用於治療實體腫瘤（包括例如肺癌、肝癌、乳癌、腦癌、胃腸道癌）及血癌（包括例如白血病及白血病前期病症、淋巴瘤、漿細胞病症）、惡性瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤、及白血病、或淋巴樣惡性病。在一些實施例中，癌症係早期的。在一些實施例中，癌症係晚期的（包括轉移性）。在一些實施例中，適合本發明治療之癌症包括表現IL18-BP之癌症，且進一步包括非轉移性或非侵襲性癌症以及侵襲性或轉移性癌症，包括其中IL18-BP藉由免疫、基質、或病變細胞抑制抗腫瘤反應及抗侵襲性免疫反應之癌症。在一些實施例中，抗IL18-BP抗體可用於治療血管化腫瘤。在一些實施例中，使用本發明之抗IL18-BP抗體治療之癌症包括惡性瘤、淋巴瘤、肉瘤、及/或白血病。在一些實施例中，使用本發明之抗IL18-BP抗體治療之癌症包括血管化腫瘤、黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌（鱗狀細胞癌及基底細胞癌）、間皮瘤、鱗狀細胞癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神經內分泌肺癌（包括胸膜間皮瘤、神經內分泌肺癌）、NSCL（大細胞）、NSCLC大細胞腺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、NSCLC鱗狀細胞、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、肺之腺癌、肺之鱗狀細胞癌、PDL1 ＞=50% TPS之NSCLC、神經內分泌肺癌、非典型類癌肺癌、腹膜之癌症、食道癌、肝細胞癌、肝癌(liver cancer)（包括HCC）、胃癌(gastric cancer)、胃癌(stomach cancer)（包括胃腸道癌）、胰臟癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、泌尿上皮癌、膀胱癌、肝細胞瘤、神經膠質瘤、腦癌（以及水腫，諸如與腦腫瘤相關聯之水腫）、乳癌（包括例如三陰性乳癌）、睪丸癌、睪丸生殖細胞腫瘤、結腸癌、結腸直腸癌(CRC)、結腸直腸癌MSS (MSS-CRC)；難治性MSS結腸直腸癌；MSS（微衛星穩定狀態）、原發性腹膜癌、原發性腹膜卵巢癌、微衛星穩定原發性腹膜癌、鉑類抗藥性微衛星穩定原發性腹膜癌、CRC（MSS未知）、直腸癌、子宮內膜癌(endometrial cancer)（包括子宮內膜癌(endometrial carcinoma)）、子宮癌、唾液腺癌、腎癌、腎細胞癌(renal cell cancer, RCC)、腎細胞癌(renal cell carcinoma, RCC)、胃食道接合部癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、類癌、頭頸癌、B細胞淋巴瘤（包括非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)以及低惡性度/濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴球性(SL) NHL、中惡性度/濾泡性NHL、中惡性度瀰漫性NHL、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、高惡性度免疫母細胞NHL、高惡性度淋巴母細胞NHL、高惡性度小非裂解細胞NHL、巨大疾病NHL (bulky disease NHL)、被套細胞淋巴瘤、AIDS相關淋巴瘤、及華氏巨球蛋白血症(Waldenström’s Macroglobulinemia)、霍奇金氏淋巴瘤(HD)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、毛細胞白血病、慢性骨髓母細胞性白血病、多發性骨髓瘤、移植後淋巴增生病症(PTLD)、與斑痣性錯構瘤(phakomatoses)相關聯之異常血管增生、Meigs氏症候群、Merkel氏細胞癌、高MSI癌症、KRAS突變腫瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、腺樣囊狀癌(adenoid cystic cancer)（包括腺樣囊狀癌(adenoid cystic carcinoma)）、黑色素瘤、惡性黑色素瘤、轉移性黑色素瘤、胰臟癌、胰臟腺癌、卵巢癌(ovarian cancer)（包括卵巢癌(ovarian carcinoma)）、胸膜間皮瘤、子宮頸鱗狀細胞癌（子宮頸SCC）、肛門鱗狀細胞癌（肛門SCC）、原發部位不明癌、膽囊癌、胸膜間皮瘤、脊索瘤、子宮內膜肉瘤、軟骨肉瘤、子宮肉瘤、葡萄膜黑色素瘤、類澱粉沉積症、AL-類澱粉沉積症、星狀細胞瘤、及/或骨髓增生不良症候群(MDS)。
在一些實施例中，使用本發明之抗IL18-BP抗體治療之癌症包括選自由下列所組成之群組的癌症：腎透明細胞癌(RCC)、肺癌、NSCLC、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、胃腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、乳癌、三陰性乳癌(TNBC)、頭頸部腫瘤、結腸直腸腺癌、黑色素瘤、及轉移性黑色素瘤。 2. 抗IL-18BP 抗體單一療法
本發明之IL-18BP抗體特別適用於作為單一療法治療癌症。由於免疫腫瘤學作用機制之性質，IL18-BP不一定需要在特定癌症類型上過度表現或與之相關；亦即，目的是使抗IL18-BP抗體解除對T細胞及NK細胞活化之抑制，使免疫系統能夠追擊癌症。
圖1至圖3之任何抗IL-18抗體皆可用作單一療法。 3. 抗IL18BP 抗體組合療法
如所屬技術領域已知的，包含靶向免疫療法目標之治療性抗體及對疾病病況具有特異性之額外治療劑之組合療法顯示出巨大的前景。例如，在免疫療法領域，具有數種有前景的組合療法，使用化學治療劑（小分子藥物或抗腫瘤抗體）或免疫腫瘤學抗體。
用語「組合(in combination with)」及「共投予(co-administration)」不限於完全在相同時間投予該等疾病預防劑或治療劑。相反，這意味著抗體及其他一或多種藥劑在一定時間間隔內依序投予，從而使其等一起作用，以提供比僅使用本發明之抗體或其他一或多種藥劑治療而增加的益處。較佳的是，抗體及其他一或多種藥劑相加地起作用，且特別較佳的是，其等協同地起作用。
因此，本發明之抗體可與一或多種其他治療方案或藥劑同時投予。在一些實施例中，本發明之抗體與一或多種其他治療方案或藥劑在相同配方中投予。在一些實施例中，本發明之抗體與一或多種其他治療方案或藥劑在分開的及/或不同的配方中投予。額外的治療方案或藥劑可用於改善抗體之功效或安全性。另外，額外的治療方案或藥劑可用於治療相同疾病或共病，而不是改變抗體之作用。例如，本發明之抗體可連同化學療法、放射療法、或化學療法及放射療法兩者一起投予於患者。
在一些實施例中，本發明之抗IL18BP抗體可與數種檢查點受體抗體中之一者組合。在一些實施例中，可評估患者腫瘤之受體表現，接著根據評估結果來告知臨床醫師投予哪種抗體。圖1至圖3之任何抗IL-18抗體可用作組合療法之一部分。 a.     免疫檢查點抑制劑組合療法
在一些實施例中，組合或組成物進一步包含額外活性劑，例如第二抗原結合蛋白。可選地，第二抗原結合蛋白結合至免疫系統之負調控因子、免疫抑制劑、或免疫檢查點蛋白，包括但不限於PD-1、PD-L1、CTLA-4、PD-L2、B7-H3、B7-H4、CEACAM-1、TIGIT、PVR、LAG3、CD112、PVRIG、CD96、TIM3、及/或BTLA；或共刺激受體：ICOS、OX40、41BB、CD27、及/或GITR。出於所有目的，以下章節中列出之所有專利文獻之全文皆以引用方式併入本文中。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與免疫檢查點抑制劑蛋白之抗體組合使用。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑蛋白係選自由下列所組成之群組：抗PVRIG抗體、抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIGIT抗體、抗CTLA-4抗體、抗PD-L2抗體、抗B7-H3抗體、抗B7-H4抗體、抗CEACAM-1抗體、抗PVR抗體、抗LAG3抗體、抗CD112抗體、抗CD96抗體、抗TIM3抗體、抗BTLA抗體、抗ICOS抗體、抗OX40抗體、或抗41BB抗體、抗CD27抗體、或抗GITR抗體。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗PD-1（例如抗PD-1靶向抗體）組合使用，包括例如但不限於納武單抗(Opdivo®; BMS; CheckMate078)、派姆單抗(pembrolizumab) (KEYTRUDA®; Merck)、TSR-042 (Tesaro)、西米普利單抗(cemiplimab)（REGN2810；Regeneron Pharmaceuticals，參見US20170174779）、BMS-936559、斯巴達珠單抗(Spartalizumab) (PDR001, Novartis)、皮地利珠單抗(pidilizumab) (CT-011; Pfizer Inc)、替雷利珠單抗(Tislelizumab) (BGB-A317, BeiGene)、卡瑞利珠單抗(Camrelizumab)（SHR-1210，Incyte及Jiangsu HengRui）、SHR-1210（CTR20170299及CTR20170322）、SHR-1210（CTR20160175及CTR20170090）、信迪利單抗(Sintilimab)（Tyvyt®；Eli lily及Innovent Biologics）、特瑞普利單抗(Toripalimab) (JS001, Shanghai Junshi Bioscience)、JS-001 (CTR20160274)、IBI308 (CTR20160735)、BGB-A317 (CTR20160872)、派安普利單抗(Penpulimab) (AK105, Akeso Biopharma)、賽帕利單抗(Zimberelimab) (Arcus)、BAT1306 (Bio-Thera Solutions Ltd)、薩善利單抗(Sasanlimab) (PF-06801591, pfizer)、多斯利單抗-gxly (Dostarlimab-gxly) (GlaxoSmithKline LLC)、帕洛利單抗(Prolgolimab) (Biocad)、卡度尼利單抗(Cadonilimab) (Akeso Inc)、傑洛利單抗(Geptanolimab) (Genor BioPharma Co Ltd)、斯魯利單抗(Serplulimab) (Shanghai Henlius Biotech Inc)、巴斯利單抗(Balstilimab) (Agenus Inc)、瑞弗利單抗(Retifanlimab) (Incyte Corp)、西利單抗(Cetrelimab) (Johnson & Johnson)、CS-1003 (EQRx Inc)、IBI-318 (Innovent Biologics Inc)、伊努西單抗(Ivonescimab) (Akeso Inc)、普特利單抗(Pucotenlimab) (Lepu Biopharma Co Ltd)、QL-1604 (Qilu Pharmaceutical Co Ltd)、SCTI-10A (SinoCelltech Group Ltd)、特泊利單抗(Tebotelimab) (MacroGenics Inc)、AZD-7789 (AstraZeneca Plc)、布格利單抗(Budigalimab) (AbbVie Inc)、EMB-02 (EpimAb Biotherapeutics Inc)、埃本利單抗(Ezabenlimab) (Boehringer Ingelheim International GmbH)、F-520 (Shandong New Time Pharmaceutical Co Ltd)、HX-009 (Waterstone Hanxbio Pty Ltd)、哲瓦利單抗(Zeluvalimab) (Amgen)、培雷索利單抗(Peresolimab) (Eli Lilly and Co)、羅司利單抗(Rosnilimab) (AnaptysBio Inc)、武達利單抗(Vudalimab) (Xencor)、艾珠利單抗(Izuralimab) (Xencor)、洛瑞格利單抗(Lorigerlimab) (MacroGenics Inc)、YBL-006 (Y-Biologics Inc)、ONO-4685 (Ono Pharmaceutical Co Ltd)、LY-3434172 (Eli Lilly and Co)、及/或如US 2017/0081409中所陳述之PD-1抗體、以及可與本發明之抗IL18BP抗體組合使用之正在開發中的其他者。額外的例示性抗PD-1抗體序列係如圖39所示。
在一些實施例中，派姆單抗係以約2 mg/kg至10 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約2 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約2 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約3 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約4 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約5 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約6 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約7 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約8 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約9 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約10 mg/kg之劑量投予。
在一些實施例中，派姆單抗係以約不多於2 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約1 mg/kg至2 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約0.1 mg/kg至1 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約0.01 mg/kg至0.1 mg/kg之劑量投予。
在一些實施例中，派姆單抗係以約至少10 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約10 mg/kg至20 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約20 mg/kg至30 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約30 mg/kg至40 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以約40 mg/kg至50 mg/kg之劑量投予。
在一些實施例中，派姆單抗係約每1週至每6週投予一次。在一些實施例中，派姆單抗係約每週投予一次。在一些實施例中，派姆單抗係約每2週投予一次。在一些實施例中，派姆單抗係約每3週投予一次。在一些實施例中，派姆單抗係約每4週投予一次。在一些實施例中，派姆單抗係約每5週投予一次。在一些實施例中，派姆單抗係約每6週投予一次。
在一些實施例中，派姆單抗係以每3週約2 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以每3週約10 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以每3週約200 mg之劑量投予。在一些實施例中，派姆單抗係以每6週約400 mg之劑量投予。
在一些實施例中，派姆單抗係在約10分鐘、約15分鐘、約20分鐘、約25分鐘、約30分鐘、約35分鐘、或約40分鐘內投予。在一些實施例中，派姆單抗係在約30分鐘+/- 10分鐘內投予。
派姆單抗之進一步揭露提供於https://www.accessdata.fda.gov/spl/data/157262d6-15e0-4b0a-968f-b99bab4aef50/157262d6-15e0-4b0a-968f-b99bab4aef50.xml，其全文以引用方式併入本文中。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗PD-L1抗體（例如抗PD-L1靶向抗體）組合使用。有三種已核准之抗PD-L1抗體：阿特珠單抗(TECENTRIQ®; MPDL3280A；IMpower110；Roche/Genentech)、阿維魯單抗(avelumab) (BAVENCIO®; MSB001071 8C; EMD Serono & Pfizer)、及德瓦魯單抗(Durvalumab) (MEDI4736; IMFINZI®; AstraZeneca)。及正在開發中的其他抗體，例如洛達利單抗(Lodapolimab) (LY3300054, Eli Lily)、皮米單抗(Pimivalimab) (Jounce Therapeutics Inc)、SHR-1316 (Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd)、恩弗利單抗(Envafolimab) (Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co Ltd)、舒格利單抗(sugemalimab) (CStone Pharmaceuticals Co Ltd)、柯希利單抗(cosibelimab) (Checkpoint Therapeutics Inc)、帕克米利單抗(pacmilimab) (CytomX Therapeutics Inc)、IBI-318、IBI-322、IBI-323 (Innovent Biologics Inc)、INBRX-105 (Inhibrx Inc)、KN-046 (Alphamab Oncology)、6MW-3211 (Mabwell Shanghai Bioscience Co Ltd)、BNT-311 (BioNTech SE)、FS-118 (F-star Therapeutics Inc)、GNC-038 (Systimmune Inc)、GR-1405 (Genrix (Shanghai) Biopharmaceutical Co Ltd)、HS-636 (Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd)、LP-002 (Lepu Biopharma Co Ltd)、PM-1003 (Biotheus Inc)、PM-8001 (Biotheus Inc)、STIA-1015 (ImmuneOncia Therapeutics LLC)、ATG-101 (Antengene Corp Ltd)、BJ-005 (BJ Bioscience Inc)、CDX-527 (Celldex Therapeutics Inc)、GNC-035 (Systimmune Inc)、GNC-039 (Systimmune Inc)、HLX-20 (Shanghai Henlius Biotech Inc)、JS-003 (Shanghai Junshi Bioscience Co Ltd)、LY-3434172 (Eli Lilly and Co)、MCLA-145 (Merus NV)、MSB-2311 (Transcenta Holding Ltd)、PF-07257876 (Pfizer Inc)、Q-1802 (QureBio Ltd)、QL-301 (QLSF Biotherapeutics Inc)、QLF-31907 (Qilu Pharmaceutical Co Ltd)、RC-98 (RemeGen Co Ltd)、TST-005 (Transcenta Holding Ltd)、阿特珠單抗(Atezolizumab) (IMpower133)、BMS-936559/MDX-1105、及/或RG-7446/MPDL3280A、及/或YW243.55.S70。在一些實施例中，PD-L1抗體係描述於美國專利公開案第2017/0281764號以及WO 2013/079174（阿維魯單抗）及WO 2010/077634（或US 2016/0222117或US 8,217,149；阿特珠單抗）中之一者。在一些實施例中，PD-L1抗體包含SEQ ID NO: 34之重鏈序列及SEQ ID NO: 36之輕鏈序列（根據US 2017/281764）以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18BP抗體組合使用。額外的例示性抗PD-L1抗體序列係顯示於圖40中。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗PD-L2抗體（例如抗PD-L2靶向抗體）組合使用。例如，抗PD-L2抗體之實例包括但不限於如WO 2010/036959中所述之抗PD-L2抗體、如WO 20140/22758中所述之抗PD-L2抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗CTLA-4抗體（例如抗CTLA-4靶向抗體）組合使用。例如，抗CTLA-4抗體之實例包括但不限於FDA核准之抗體伊匹單抗(ipilimumab)及曲美木單抗(tremelimumab)。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體包括例如但不限於Yervoy®（伊匹單抗或抗體10D1，描述於PCT公開案WO 01/14424）、曲美木單抗（以往稱為替西利姆單抗(ticilimumab)，CP-675,206）、單株抗體、或描述於以下任何公開案中之抗CTLA-4抗體：WO 98/42752；WO 00/37504；美國專利第6,207,156號；Hurwitz et al., Pro. Natl. Acad. Sci. USA,95(17): 10067-10071 (1998)；Camacho et al.,(2004) J. Clin. Oncology, 22(145): antibodiestract No. 2505 (antibody CP-675206)；及Mokyr et al., Cancer Res.,58:5301-5304 (1998)。亦可使用揭示於WO2013/173223中之任何抗CTLA-4抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗B7H3抗體（例如抗B7H3靶向抗體）組合使用。抗B7H3抗體之實例包括正在臨床研究中之抗體，例如依諾妥珠單抗(Enoblituzumab) (MGA271;MacroGenics)、如WO 2016/033225中描述之抗B7H3抗體、如US 9,441,049中概述之抗B7H3抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗B7H4抗體（例如抗B7H4靶向抗體）組合使用。例如，抗B7H4抗體之實例包括但不限於來自FivePrime之抗B7H4單株抗體FPA150，其目前處於臨床I期；如WO 2022/002012中所述之抗體；以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗癌胚抗原相關細胞黏附分子1抗體（亦稱為抗CEACAM1抗體或抗CD66a抗體）組合使用。例如，抗CEACAM-1抗體之實例包括但不限於正在臨床研究中之抗體，例如貝索單抗(Besilesomab) (TheraPharm)、AMG211 (Amgen)、及CM-24 (MK-6018, KitovPharma)。抗CEACAM-1抗體之實例亦包括如US20200277398A1中概述之抗體（Famewave Ltd開發之CM-24）、如US9072797B2中概述之抗體（CD66結合組分及放射性核素釔-90 (90Y)）、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗PVR抗體（例如抗PVR靶向抗體）組合使用。例如，抗PVR抗體之實例包括但不限於如WO 2017/149538中所述之抗體，抗PVR抗體之實例包括如WO 2021/070181中所述之抗體。在一些實施例中，第二藥劑選自拮抗劑PVRL1、PVRL2、PVRL3、PVRL4、及CD155中之一或多者，例如ASG-22CE (Astellas Pharm/a Inc)、因福土單抗(Enfortumab) (Astellas Pharma)、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗LAG3抗體（例如抗LAG3靶向抗體）組合使用。例如，抗LAG3抗體之實例包括但不限於正在臨床研究中之抗體，例如LAG525(Novartis)、TSR-033(Tesaro)、飛利單抗(Fianlimab) (REGN3767, Regeneron)、BI-754111(Boehringer Ingelheim)、Sym-022 (Symphogen)、RO7247669 (Roch)、BMS-986016（參見WO 2010/019570）、GSK2831781（參見US 2016/0017037）、及Merck殖株22D2、11C9、4A10、及/或19E8（參見WO 2016/028672）；及包含抗體25F7、26H10、25E3、8B7、11F2、或17E5之CDR或可變區之抗體，其等描述於US 2011/0150892、WO 2010/19570、及WO 2014/008218中。其他可使用之所屬技術領域認可的抗LAG-3抗體包括IMP731及IMP-321，描述於US 2011/007023、WO 2008/132601、及WO 2009/44273中。與此等抗體中之任一者競爭及/或結合至相同表位之抗LAG-3抗體亦可用於組合治療。以及正在開發中的其他者，可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體與一或多種抗CD112（亦稱為PVRL2；並包括例如抗CD112靶向抗體）組合使用。例如，抗CD112抗體之實例包括但不限於如US 2020/0040081中概述之抗CD112抗體、如US 2019/0040154中概述之抗CD112抗體、或如WO 2017/021526中概述之抗CD112抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗CD96抗體（例如抗CD96靶向抗體）組合使用。例如，抗CD96抗體之實例包括但不限於如WO 2019/091449中概述之抗CD96抗體、如WO 2021042019中概述之抗CD96抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗TIM3抗體（例如抗TIM3靶向抗體）組合使用。抗TIM3抗體之實例包括正在臨床研究中之抗體，例如薩巴托利單抗(Sabatolimab) (Novartis)、TSR-022 (Tesaro)、INCAGN02385 (Incyte Corporation)、INCAGN02390 (Incyte Corporation)、BGB-A425 (BeiGene)、LY3321367 (Eli Lilly)、BMS986258、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗BTLA抗體（例如抗BTLA靶向抗體）組合使用。例如，抗BTLA抗體之實例包括但不限於JS004 (Shanghai Junshi Bioscience)、如WO 2011/014438中揭示之抗BTLA抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗ICOS抗體（例如抗ICOS靶向抗體）組合使用。例如，抗ICOS抗體之實例包括但不限於正在臨床研究中之抗ICOS抗體，例如MEDI-570 (MedImmune)、沃普瑞單抗(Vopratelimab) (Jounce Therapeutics)、KY1044 (Kymab Limited)、菲阿迪利單抗(Feladilimab) (GlaxoSmithKline)。抗ICOS抗體之實例亦包括如US 9,957,323中概述之抗ICOS抗體、如WO 2016/120789中概述之抗ICOS抗體、如WO 2016/154177中概述之抗ICOS抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗OX40抗體（例如抗OX-40靶向抗體）組合使用。例如，抗OX40抗體之實例包括但不限於正在臨床研究中之抗OX40抗體，例如PF-04518600 (Pfizer)、BAT6026 (Bio-Thera Solutions)、MEDI6469、MEDI-0562、MEDI6962 (MedImmune)、BMS 986178、GSK3174998、ABBV-368 (AbbVie)、ATOR-1015 (Alligator Bioscience)。抗OX40抗體之實例亦包括如US 10,730,951中概述之抗OX40抗體、如US 10,851,173中概述之抗OX40抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗41BB抗體（例如抗41BB靶向抗體）組合使用。例如，抗41BB抗體之實例包括但不限於烏圖木單抗(utomilumab) (Pfizer, PF-05082566)、LVGN6051(Lyvgen Biopharma)、ATOR-1017 (Alligator Bioscience)、BMS-663513、如US 10,501,551中概述之抗41BB抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗CD27抗體（例如抗CD27靶向抗體）組合使用。例如，抗CD27抗體之實例包括但不限於瓦里木單抗(Varlilumab) (CDX-1127, Leap Therapeutics)、如US 2020/0277393中概述之抗CD27抗體、如WO 2019/195452中概述之抗CD27抗體、以及正在開發中的其他者，其等可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗GITR抗體（例如抗GITR靶向抗體）組合使用。例如，抗GITR抗體之臨床研究實例包括但不限於MK-4166、MK-1248 (Merck Sharp & Dohme)、BMS-986156、INCAGN01876 (Incyte Corporation)、OMP-336B11 (OncoMed Pharmaceuticals)、MEDI1873 (MedImmune)。抗GITR抗體之實例亦包括但不限於如WO 2016/196792中所述之抗GITR抗體、如WO 2015/187835中所述之抗GITR抗體，其內容以引用方式併入本文中，例如具有抗體28F3、19D3、18E10、3C3-1、3C3-2、2G6、9G7-1、9G7-2、14E3、19H8-1、19H8-2、及/或6G10、及其變體之重鏈及輕鏈可變區CDR、重鏈及輕鏈可變區、或重鏈及輕鏈之抗體。描述於WO 2015/187835中之抗體之序列係提供於表2中（參見SEQ ID NO: 5-14及27-228）。患者亦可用任何其他抗GITR抗體治療，例如TRX518 (Leap Therapeutics)、MK- 4166 (Merck)、LKZ-145 (Novartis)、GWN-323 (Novartis Pharmaceuticals Corp.)、Medi 1873 (Medlmmune)、INBRX-110 (Inhibrx)、GITR-Fc protein (OncoMed)、及描述於WO 2006/105021、WO 2009/009116、WO 2011/028683、US 2014/0072565、US 2014/0072566、US 2014/0065152、WO 2015/031667、WO 2015/184099、WO 2015/184099、或WO 2016/054638中之抗體。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗TIGIT抗體組合使用。例如，抗TIGIT抗體之實例包括但不限於如WO 2018/220446中所揭示之CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)、CHA.9.547.13.H4(S241P)、CPA.9.018、CPA.9.027、CPA.9.049、CPA.9.057、CPA.9.059、CPA.9.083、CPA.9.086、CPA.9.089、CPA.9.093、CPA.9.101、CPA.9.103、CHA.9.536.3.1、CHA.9.536.3、CHA.9.536.4、CHA.9.536.5、CHA.9.536.7、CHA.9.536.8、CHA.9.560.1、CHA.9.560.3、CHA.9.560.4、CHA.9.560.5、CHA.9.560.6、CHA.9.560.7、CHA.9.560.8、CHA.9.546.1、CHA.9.547.1、CHA.9.547.2、CHA.9.547.3、CHA.9.547.4、CHA.9.547.6、CHA.9.547.7、CHA.9.547.8、CHA.9.547.9、CHA.9.547.13、CHA.9.541.1、CHA.9.541.3、CHA.9.541.4、CHA.9.541.5、CHA.9.541.6、CHA.9.541.7及CHA.9.541.8、CHA.9.547.18、及其他正在臨床研究中之抗體，例如EOS-448 (GlaxoSmithKline, iTeos Therapeutics)、BMS-986207、多伐那利單抗(AB154, Arcus Biosciences, Inc.)、AB308 (Arcus Bioscience)、奧西伯利單抗(aBGB-A1217, BeiGene)、替瑞利尤單抗(MTIG7192A, Roche)、BAT6021 (Bio-Thera Solutions)、BAT6005 (Bio-Thera Solutions)、IBI939 (Innovent Biologics, US2021/00040201)、JS006 (Junshi Bioscience/COHERUS)、ASP8374 (Astellas Pharma Inc)、維博利單抗(MK-7684, Merck Sharp & Dohme)、M6332 (Merck KGAA)、厄提吉利單抗(OMP-313M32, Mereo BioPharma)、SEA-TGT (Seagen)y、HB0030 (Huabo Biopharma)、AK127 (AKESO)，或抗TIGIT抗體包括Genentech抗體(MTIG7192A)。在一些實施例中，抗TIGIT抗體係如US 9,713,364中所述（包括MAB1、MAB2、MAB3、MAB4、MAB5、MAB6、MAB7、MAB8、MAB9、MAB10、MAB11、MAB12、MAB13、MAB14、MAB15、MAB16、MAB17、MAB18、40 MAB19、MAB20、及/或MAB21）；抗TIGIT抗體係如美國專利第9,499,596號中所述；抗TIGIT抗體係如WO 2016/191643中所述；抗TIGIT抗體係如WO 2017/053748中所述；抗TIGIT抗體係如WO2016/191643中所述；抗TIGIT抗體係如WO 2016/028656中所述；抗TIGIT抗體係如WO 2017/030823中所述；抗TIGIT抗體係如US 2016/0176963中所述；抗TIGIT抗體係如WO 2017/037707中所述；抗TIGIT抗體係如WO 2017/059095中所述；抗TIGIT抗體係如U.S. 2017281764中所述；抗TIGIT抗體係如WO 2015/009856中所述；抗TIGIT抗體係US 2017/0037133之任一者所述之抗體；抗TIGIT抗體係如WO 2017/048824（包括10A7、1F4、14A6、28H5、31C6、15A6、22G2、11G11、及/或10D7）中所揭示者；抗TIGIT抗體係描述於國際專利公開案WO 2016/028656中之一者。在一些實施例中，抗TIGIT抗體通常是全長或scFv域，包含以下CDR之CHA組，其序列顯示於圖30A：CPA.9.083.H4(S241P)vhCDR1、CPA.9.083.H4(S241P)vhCDR2、CPA.9.083.H4(S241P)vhCDR3、CPA.9.083.H4(S241P)vlCDR1、CPA.9.083.H4(S241P)vlCDR2、及CPA.9.083.H4(S241P)vlCDR3。在一些實施例中，抗TIGIT抗體通常是全長或scFv域，包含以下CDR之CHA組，其序列顯示於圖30B：CPA.9.086.H4(S241P)vhCDR1、CPA.9.086.H4(S241P)vhCDR2、CPA.9.086.H4(S241P)vhCDR3、CPA.9.086.H4(S241P)vlCDR1、CPA.9.086.H4(S241P)vlCDR2、及CPA.9.086.H4(S241P)vlCDR3。此類抗TIGIT抗體可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。額外的例示性抗TIGIT抗體序列係顯示於圖34。
在一些實施例中，抗IL18-BP抗體係與一或多種抗PVRIG抗體組合使用。例如，抗PVRIG抗體之實例包括但不限於如WO 2018/220446A9中所揭示之CHA.7.518.1.H4(S241P)、CHA.7.538.1.2.H4(S241P)、及CHA.7.502、CHA.7.503、CHA.7.506、CHA.7.508、CHA.7.510、CHA.7.512、CHA.7.514、CHA.7.516、CHA.7.518.1.H4(S241P)、CHA.7.518、CHA.7.518.4、CHA.7.520.1、CHA.7.520.2、CHA.7.522、CHA.7.524、CHA.7.526、CHA.7.527、CHA.7.528、CHA.7.530、CHA.7.534、CHA.7.535、CHA.7.537、CHA.7.538.1.2.H4(S241P)、CHA.7.538.1、CHA.7.538.2、CHA.7.543、CHA.7.544、CHA.7.545、CHA.7.546、CHA.7.547、CHA.7.548、CHA.7.549、CHA.7.550、CPA.7.001、CPA.7.003、CPA.7.004、CPA.7.006、CPA.7.008、CPA.7.009、CPA.7.010、CPA.7.011、CPA.7.012、CPA.7.013、CPA.7.014、CPA.7.015、CPA.7.017、CPA.7.018、CPA.7.019、CPA.7.021、CPA.7.022、CPA.7.023、CPA.7.024、CPA.7.033、CPA.7.034、CPA.7.036、CPA.7.040、CPA.7.046、CPA.7.047、CPA.7.049、及CPA.7.050、及其他正在臨床研究中之抗體，例如GSK4381562/SRF816 (GSK/Surface)、NTX2R13(Nectin Therapeutics)。在一些實施例中，抗體序列來自WO 201/6134333。在一些實施例中，抗PVRIG抗體通常是全長或scFv域，包含以下CDR之CHA組，其序列顯示於圖29A：CHA.7.518.1.H4(S241P)vhCDR1、CHA.7.518.1.H4(S241P)vhCDR2、CHA.7.518.1.H4(S241P)vhCDR3、CHA.7.518.1.H4(S241P)vlCDR1、CHA.7.518.1.H4(S241P)vlCDR2、及CHA.7.518.1.H4(S241P)vlCDR3。在一些實施例中，抗PVRIG抗體通常是全長或scFv域，包含以下CDR之CHA組，其序列顯示於圖30B：CHA.7.538.1.2.H4(S241P)vhCDR1、CHA.7.538.1.2.H4(S241P)vhCDR2、CHA.7.538.1.2.H4(S241P)vhCDR3、CHA.7.538.1.2.H4(S241P)vlCDR1、CHA.7.538.1.2.H4(S241P)vlCDR2、及CHA.7.538.1.2.H4(S241P)vlCDR3。此類抗PVRIG抗體可與本發明之抗IL18-BP抗體組合使用。額外的例示性抗PVRIG抗體序列係顯示於圖36、圖37、及圖38。 b.     其他癌症組合療法
本發明之抗IL-18BP抗體可與一或多種其他疾病預防劑或治療劑組合投予，包括但不限於細胞毒性劑、化學治療劑、細胞介素、生長抑制劑、抗荷爾蒙劑、激酶抑制劑、抗血管新生劑、心臟保護劑、免疫刺激劑、免疫抑制劑、促進血液細胞增殖之藥劑、血管新生抑制劑、蛋白質酪胺酸激酶(PTK)抑制劑、或其他治療劑。
在此上下文中，「化學治療劑(chemotherapeutic agent)」係可用於治療癌症之化學化合物。化學治療劑之實例包括烷基化劑，諸如噻替哌及環磷醯胺；烷基磺酸鹽，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥多巴(meturedopa)、及優瑞多巴(uredopa)；乙烯亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙烯三聚氰胺、三乙烯磷醯胺、三乙烯硫磷醯胺、及三羥甲基三聚氰胺；內酯(acetogenins)（特別是布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone)；δ-9-四氫大麻酚（屈大麻酚(dronabinol)，MARINOL'）；β-拉帕醌(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙鹼；白樺脂酸；喜樹鹼（包括合成類似物拓撲替康(HYCAMTN®)、CPT-11（伊立替康、CAMPTOSAR®）、乙醯喜樹鹼、東莨菪素(scopolectin)、及9-胺基喜樹鹼）；苔蘚蟲素(bryostatin)；海綿多聚乙醯(callystatin)；CC-1065（包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)、及比折來新(bizelesin)合成類似物）；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷；念珠藻素(cryptophycin)（特別是念珠藻素1及念珠藻素8）；海兔毒素(dolastatin)；多卡米星(duocarmycin)（包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1）；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；沙考地汀(sarcodictyin)；海綿抑素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，諸如氯芥苯丁酸、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、氯乙環磷醯胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基尿素，諸如卡莫司汀、吡葡亞硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀、尼氮芥(nimustine)、及雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素（例如卡奇黴素(calicheamicin)、特別是卡奇黴素γ1I及卡奇黴素ω1I（參見例如Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)）；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新抑癌素(neocarzinostatin)發色團及相關色素蛋白烯二炔抗生素發色團）、阿克拉黴素(aclacinomycin)、放線菌素、安曲黴素(authramycin)、氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素、放線菌素C、卡拉星(carabicin)、卡尼米辛(carrninomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D、道諾黴素、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、阿黴素（包括N- 啉基-阿黴素、氰基N- 啉基-阿黴素、2-吡咯啉-阿黴素、及去氧阿黴素(deoxydoxorubicin)）、泛艾黴素、依索比星(esorubicin)、艾達黴素、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素，諸如絲裂黴素C、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲黴素、殺結核菌素(tubercidin)、鳥苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、及佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如胺甲喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、胺甲喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-硫唑脲嘧啶(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷；雄性激素，諸如卡魯睪酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺劑，諸如胺麩精(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如夫羅林酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；倍曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥氨酸(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃博黴素；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；類美坦素(maytansinoid)，諸如美坦素及安絲菌素；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫呱達醇(mopidanmol)；尼群克林(nitraerine)；噴司他汀(pentostatin)；凡那明(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基醯肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK.RTM.多醣複合物(JHS Natural Products, Eugene, Oreg.)；雷佐生(razoxane)；利索新(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2''-三氯三乙胺；新月毒素(trichothecene)（特別是T-2毒素、韋拉庫林A (verracurin A)、桿孢菌素A (roridin A)及安奎定(anguidine)）；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine) (ELDISINE®, FILDESIN®)；達卡巴仁；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；伽托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(「Ara-C」)；噻替派；類紫杉醇，例如太平洋紫杉醇(TAXOL®; Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.）、ABRAXANE®（游離十六醇聚氧乙烯醚(cremophor-free)）、太平洋紫杉醇之經白蛋白工程改造之奈米粒子配方(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.)、及多西紫杉醇（TAXOTERE®；Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；苯丁酸氮芥；吉西他濱(GEMZAR®)；6-硫鳥嘌呤；巰嘌呤；胺甲喋呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春鹼(VELBAN®)；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(ONCOVIN®)；奧沙利鉑；亞葉酸；長春瑞濱(NAVELBINE®)；諾安托(novantrone)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；胺喋呤；伊班膦酸鹽(ibandronate)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視黃素，諸如視黃酸；卡培他濱(XELODA®)；以上任一者之醫藥上可接受之鹽、酸、或衍生物；以及上述二或更多種之組合，諸如CHOP（環磷醯胺、阿黴素、長春新鹼、及潑尼松龍之組合療法的縮寫）；CVP（環磷醯胺、長春新鹼、及潑尼松龍之組合療法的縮寫）；FOLFOX（奧沙利鉑(ELOXATIN®)組合5-FU及亞葉酸之治療方案的縮寫）。
在一些實施例中，化學治療劑係選自由下列所組成之群組：鉑、奧沙利鉑、順鉑、太平洋紫杉醇(taxol)、索拉非尼、阿黴素、索拉非尼、5-FU、及吉西他濱、伊立替康(CPT-11)。
在一些實施例中，其他治療係用於治療癌症之放射療法的藥劑。因此，在一些實施例中，本文所述之活性劑與鉑配位化合物、拓樸異構酶抑制劑、抗生素、抗有絲分裂生物鹼、及二氟核苷中之一或多者組合投予。
在一些實施例中，抗IL18BP抗體與一或多種發炎體活化劑組合。在一些實施例中，發炎體活化劑係CD39抑制劑。在一些實施例中，CD39抑制劑係抗CD39抗體。
根據至少一些實施例，抗IL18BP抗體可與任何所屬技術領域已知的護理標準癌症治療（可在例如全球資訊網cancer.gov/cancertopics找到）組合使用。 實例 實例1 ：IL18 及IL18BP 在腫瘤微環境中之表現
IL18-BP係IL18之螯合劑，可抑制IL18活性(Dinarello, et al., Front. Immunol., 1:1-10 (2013)。因此，目標抗體IL18-BP以及IL18兩者皆需要存在於TME（腫瘤微環境）中，才能有效阻斷IL18-BP。圖4顯示IL18（圖4A）及IL18-BP（圖4B）兩者之表現，並證明此兩種蛋白質在所有TCGA腫瘤中表現，在此等腫瘤類型之子集中，僅嗜鉻細胞瘤及副神經節瘤（TCGA腫瘤類型縮寫參見表1）對IL18之表現展現出一定的局限性（1RPKM之參考線表示低於其的背景表現水平）。游離IL18之最終目標細胞係白血球/淋巴球（Tominaga, K., et al., International Immunology, 12(2): 151–160 (2000)及Senju, H., et al., Int J Biol Sci.,14(3):331-340 (2018)），此等研究將靶向展現出較高免疫存在之腫瘤，如IFNγ發炎特徵所證明（參見例如US 2016/0312295 A1）。如自圖5可看出，IL18（圖5A）及IL18-BP（圖5B）兩者普遍存在於所有具有發炎腫瘤（高IFNγ特徵值）之腫瘤亞群中。即使在具有最低IFNγ之亞群中，亦偵測到此兩種蛋白質之顯著表現。由於IL18依賴發炎體而分泌，因此產生核心發炎體基因之特徵。此等基因係多種類型之發炎體活化信號所共有的(Chauhan, D., et al., Immunological Reviews, 297:123–138 (2020))。特徵值計算為表2中列出之基因之log10 RPKM表現值的平均值。如圖6A所示，核心發炎體特徵在所有TME中皆高度表現，且通常在發炎（高IFNγ特徵）亞群中具有較高表現。此模式與IL18之模式非常相似（圖5A），指示IL18之機制存在於所有發炎（高IFNγ特徵）腫瘤及大多數低IFNγ特徵腫瘤中，除了LGG及PCPG以外。為了驗證IL18及發炎體核心特徵基因確實在TME之相同細胞中表現，使用單細胞數據，並計算IL18、IL18-BP、及核心發炎體基因之間的餘弦相似度、以及額外的上游基因與IL18受體之間的餘弦相似度。在圖6B中，顯示NSCLC中巨噬細胞之餘弦相似度矩陣，指示IL18及核心發炎體特徵確實存在於相同細胞中。在額外腫瘤類型中亦獲得類似結果（數據未顯示）。具體而言，據報導，在乳癌中，三陰性乳癌在約30%的病例中具有更多發炎特徵，而荷爾蒙受體陽性乳癌係約5至10% (Thomas, F., et al., Frontiers in Oncology, 10:1-17 (2021))。因此，吾人藉由單細胞特地檢查乳癌中IL18及IL18-BP之表現（原始數據採用自Bassez, A., et al., Nature Medicine, 27:820–832 (2021)）。在圖7A中，以表現細胞百分比及平均表現水平兩者而言，IL18及IL18-BP兩者在TNBC中更豐富，其次是HER2+亞群，且在荷爾蒙受體陽性亞群中表現最低，特別是在治療前樣本中。在此特異性數據集中，在治療前對患者進行採樣，接著在切除腫瘤（活體組織切片治療）後接受aPD1或aPD1加上化學療法之新輔助治療。發明人測量治療後的T細胞殖株擴增，T細胞殖株擴增可被視為aPD1治療反應之替代測量(Bassez et al., Nature Medicine, 27:820–832 (2021))。圖7B展示未擴增患者之IL18基線水平較低，而此等患者之IL18-BP水平較高。此可能是IL18-BP減弱IL18活性並阻礙免疫檢查點阻斷(ICB)治療活性之潛在作用的指標。在aPD1治療後此兩種基因皆上調。大致上，此等觀察結果強化對發炎更嚴重之適應症之選擇，特別是TNBC。 材料及方法預處理、過濾、及標準化
使用Cellranger 3.0.2 (10x Genomics)與參考轉錄組GRCh38對UMI進行定量。若沒有其他說明，後續分析皆使用「Seurat」(https://satijalab.org/seurat/)進行。 聚類及細胞類型註釋
前15個主成分用於建立SNN圖及UMAP嵌入。Thomas等人2021年之細胞註釋係基於發明人提交之後設資料。
將細胞藉由嵌套PCA進行聚類。將此等聚類藉由其等之基因特徵表現進行註釋。
藉由計算各對基因及其表現向量式(i)之值來計算所欲基因集之餘弦相似度矩陣： 式(i)。
IFNγ發炎特徵（如US 2016/0312295 A1中所述，其全文以引用方式併入本文中）分三個步驟計算： 1.   IFNγ_up特徵係根據以下基因之log10 RPKM表現值的平均值而計算： CCR5、HLA-DRA、CXCL13、CCL5、STAT1、KLRK1、NKG7、CXCL9、LAIR1、LAG3、CXCR6、KLRD1、GZMA、PRF1、SIGLEC14、PTPN22、CD86、SLA、SIRPG、CD72、HAVCR2、PSTPIP2、SLAMF6、CD84、CD300LF、CD3D、IFNG、CXCL11、CD2、CTSZ、GZMB、IL2RG、CXCL10、LILRB4、PDCD1、CCL8、CIITA、CCL4、IGSF6、PTPRC、CLEC9A、CST7、MYLIP、ITGAL、CDH1、PSTPIP1、GZMK、HLA-E、CD3E、TAGAP、TNFRSF9 2.   IFNγ_down特徵係根據以下基因之log10 RPKM表現值的平均值而計算： CLEC3B、NR4A2、EEF1G、PIK3CA、TYRO3、CX3CL1、ING1、BST1、ACKR3、UBB、PPARG、PTEN、THY1、CLCA1、EFEMP1、GAS6、ITM2A、CD55、NFATC1、BCL6、RETNLB、PDCD4、TIMP3、CDO1、POLR1B、DDR1、F2R、CTSG、LILRA5、CX3CR1、TBP、CLEC1B、RGS16、PTPN13、IRF1、MON1B、CPD、PHACTR2、OAZ1、CASP3、IFI16、ITGA1、RPL19、CCR6、LTK、C10orf54、SLAMF1、及TNFAIP8L2 3.   最後，IFNγ發炎特徵係根據兩個特徵之間的差值而計算： IFNγ = IFNγ _up - IFNγ _down。 聚類及細胞類型註釋
前15個主成分用於建立SNN圖及UMAP嵌入。 表1. TCGA 腫瘤縮寫。
研究縮寫 研究名稱
LAML 急性骨髓性白血病
ACC 腎上腺皮質癌
BLCA 膀胱泌尿上皮癌
LGG 腦低惡性度神經膠質瘤
BRCA 侵襲性乳癌
CESC 子宮頸鱗狀細胞癌及子宮頸內腺癌
CHOL 膽管癌
LCML 慢性骨髓性白血病
COAD 結腸腺癌
CNTL 對照
ESCA 食道癌
FPPP FFPE先導試驗II期
GBM 多形性神經膠質母細胞瘤
HNSC 頭頸鱗狀細胞癌
KICH 嫌色腎細胞癌
KIRC 腎臟腎透明細胞癌
KIRP 腎臟腎乳突狀細胞癌
LIHC 肝細胞癌
LUAD 肺腺癌
LUSC 肺鱗狀細胞癌
DLBC 淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤
MESO 間皮瘤
MISC 混雜型
OV 卵巢漿液性囊腺癌
PAAD 胰臟腺癌
PCPG 嗜鉻細胞瘤及副神經節瘤
PRAD 前列腺腺癌
READ 直腸腺癌
SARC 肉瘤
SKCM 皮膚黑色素瘤
STAD 胃腺癌
TGCT 睪丸生殖細胞腫瘤
THYM 胸腺瘤
THCA 甲狀腺癌
UCS 子宮癌肉瘤
UCEC 子宮體子宮內膜癌
UVM 葡萄膜黑色素瘤
表2. 發炎體特徵。
基因名稱 同義詞 酶學委員會編號(EC)
CASP1 IL1BC, IL1BCE 3.4.22.36
CASP4 ICH2 3.4.22.57
CASP5 ICH3 3.4.22.58
PYCARD ASC, CARD5, TMS1
GSDMD DFNA5L, GSDMDC1, FKSG10
實例2 ：IL-18BP 係可溶免疫檢查點- RNA 表現數據IL-18BP在TME中之上調- TCGA對GTEX
圖47：來自TCGA及GTEX資料庫之IL18BP轉錄本在正常組織（綠色）或癌症組織（紅色）中之表現。GBM，多形性神經膠質母細胞瘤；HSNC，頭頸鱗狀細胞癌；KIRC，腎臟腎透明細胞癌；PAAD，胰臟腺癌；SKCM，皮膚黑色素瘤；STAD，胃腺癌(*P ＜ 0.01)。 IL-18BP在抑制性骨髓細胞群中表現，並與TME中之PD-L1相關，表明抗性機制
如圖 59A所示：在結腸癌及乳癌中，IL-18BP在RNA水平下與PD-L1相關(TCGA)，表明腫瘤微環境(TME)中對免疫活化之抗性機制。
如 圖 59B及 圖 48所示：對結腸癌患者之腫瘤浸潤骨髓細胞（包括腫瘤相關巨噬細胞(TAM)及樹突細胞(DC)）之單細胞RNA分析顯示，相較於周邊(PBMC)，IL-18BP在TME中之骨髓細胞群中上調，表明TME中對免疫活化之抗性機制。
如 圖 59C所示：對跨適應症之腫瘤浸潤骨髓細胞（包括腫瘤相關巨噬細胞(TAM)及樹突細胞(DC)）之單細胞RNA分析顯示，相較於周邊(PBMC)，IL-18BP在TME中之骨髓細胞群中上調，表明TME中對免疫活化之抗性機制 IL-18BP回應於ICB治療而上調– scRNA/bulk RNA數據
圖60A 至圖60C ：IL-18BP在免疫檢查點阻斷(ICB)治療後上調（RNA水平），在用抗PD-1（乳癌及基底細胞癌）或抗PD-1加上抗CTLA-4（黑色素瘤）治療後，IL-18BP水平在腫瘤微環境中上調(RNA)，表明潛在的抗性機制。
圖60D ：IL-18BP在aPD-(L)1治療後在NSCLC患者血清中升高，藉由ELISA定量健康供體( n= 22)及NSCLC患者( n= 52)在治療之前在基線、及在接受抗PD-(L)1治療之後進行CT掃描後( n= 52)的血漿IL-18BP蛋白水平。 IL-18BP水平與aPD-(L)1阻斷具有不良反應之關聯：1) RCC（派姆單抗+樂伐替尼之組合）及2)黑色素瘤反應者/NR中之IL18BP (Olink)
在接受派姆單抗加上樂伐替尼(Lenvatinib)之腎細胞癌患者中，IL-18BP作為可溶性ICP之作用及對PD1阻斷之潛在抗性機制的支持性數據。如自 圖 61A可看出：用派姆單抗加上樂伐替尼預治療之患者血清中的高IL-18BP係與較短的無進展存活期(PFS)相關聯。如自 圖 61B可看出：患者血清中的高IL-18BP係用派姆單抗加上樂伐替尼預治療，其與疾病穩定或疾病進展(SD/PD)相關聯。
在接受抗PD-1治療之黑色素瘤癌症患者中，IL-18BP作為可溶性ICP之作用及對PD1阻斷之潛在抗性機制的支持性數據。如自圖62可看出，用抗PD-1預治療之黑色素瘤癌症患者血清中的高IL-18BP係與不良反應相關聯。在針對目標產物進行強度標準化之後，對IL18BP蛋白之原始Olink數據（NPX格式）執行學生T檢定。 實例3 ：發炎體誘導之細胞介素（諸如IL-18 及IL-1B ）在TME 中係豐富的。
不同於其他細胞介素，發炎體誘導之細胞介素（諸如IL-18及IL-1b）在TME中係豐富的。 方法：
依照製造商之規程，使用人類腫瘤分離套組(Miltenyi Biotec)將腫瘤用手術刀切成小塊並轉移至含有酶混合物之GentleMACs™ C管(Miltenyi Biotec)中。在解離之後，將樣本以300g離心5分鐘，且收集上清液並以3130g重新離心10分鐘。在離心後，將上清液重新收集並分成等分試樣，儲存在-80℃下。檢定當天，將樣本在室溫下解凍，隨後以14,000 RPM離心10 min，且收集上清液，立即用於以下ELISA或CBA套組： ●      人類IL18 ELISA套組(MBL,7620) ●      人類Th1/Th2/Th17細胞介素流式微珠陣列(cytometric bead array, CBA) (BD 560484)
人類發炎細胞介素流式微珠陣列(CBA) (BD 551811)。 結果：
圖71A ：IL-18及IL-1b係發炎體衍生之細胞介素，在TME中具有相反的效應。IL-18促進T細胞及NK細胞活化並導致抗致瘤活性，而IL-1b具有雙重作用且效應之總和導致促致瘤活性。
圖71B ：點圖顯示在跨各種適應症測量之腫瘤衍生上清液中細胞介素之水平。各點代表一個樣本。平均值係藉由短黑線描繪。IL-1b及IL-18除外，所有其他細胞介素皆低於偵測下限。 實例4 ：相較於健康供體及跨適應症，患者血清中之IL18 及IL18BP 蛋白水平 方法：
將健康供體及癌症患者之血清樣本解凍，並依照製造商之規程藉由以下ELISA套組測量IL18分析物（IL18總量、IL18BP）之水平： ● 人類IL18 ELISA套組(MBL,7620) ● 人類IL18BP ELISA套組(R&D DBP180) 結果：
圖56A.各種適應症中患者血清中之IL18分析物水平。圖56B.代表個別患者或健康供體血清樣本中IL18分析物之點圖。使用t檢定（雙尾）進行統計分析，P ＜ 0.001***。相較於健康供體，癌症患者血清中IL-18之表現顯著增加，證實惡性腫瘤期間周邊IL-18水平增強。 實例5 ：腫瘤部位在舌頭之頭頸癌患者之血清中IL-18 蛋白水平較高 方法：
將頭頸癌患者之血清樣本解凍，並依照製造商之規程藉由以下ELISA套組測量IL18分析物之水平：人類IL18 ELISA套組(MBL,7620)及人類IL18BP ELISA套組(R&D DBP180)。 結果：
圖63A 至圖63B：主成分分析(PCA)顯示在IL-18高水平與低水平的樣本之間的腫瘤部位主要係分開的。相較於其他部位，位於舌頭之腫瘤與高水平的IL-18及較低水平的IL18BP相關。
圖63C.個別患者血清中之IL-18及IL18BP水平顯示於不同腫瘤部位之點圖中。 實例6 ：用抗PD1/ 抗PD1 加上化學療法之NSCLC 患者血漿中IL18BP 及IL18 蛋白質之水平 方法：
將NSCLC患者之血漿樣本解凍，並依照製造商之規程藉由以下ELISA套組測量IL18及IL18BP之水平：人類IL18 ELISA套組(MBL,7620)及人類IL18BP ELISA套組(R&D DBP180)。 結果：
圖65 ：在基線、及在單次劑量的抗PD-1 (Keytruda) (n=8)或單次劑量的化學療法+抗PD-1 (n=14)後收集NSCLC患者之血漿。在數個治療週期之後執行PET-CT掃描，對患者之反應（有反應/無反應，R/NR）進行臨床評估。
相較於無反應患者，對療法（抗PD-1單一療法或抗PD-1與化學療法之組合）有反應之患者在基線測得之IL18BP及IL18之平均血漿水平較高（圖65A）。
如圖65B及圖65D所示，相較於基線水平，對抗PD-1單一療法無臨床反應之患者顯示出較高的IL18及IL18BP血漿水平，而在對抗PD-1單一療法有反應之患者中，IL18及IL18BP水平自基線沒有顯著變化。相反地，相較於基線，僅對抗PD-1 +化學療法之組合有臨床反應之患者顯示出較高的IL18及IL18BP水平（圖65C、圖65D）。 討論：
用抗PD1 (Keytruda)治療之NSCLC患者最有可能表現PDL1-CPS ＞ 50%，此可能表明TME中免疫浸潤增加及隨後IFNg表現增加。鑑於IL18BP係IFNg誘導之基因，此可能表明用抗PD-1治療之患者存在潛在的免疫抗性機制，並支持組合使用抗IL18BP及抗PD1阻斷之合理性，以進一步提高患者之潛在抗腫瘤反應。接受化學療法+抗PD-1組合治療之患者中，PDL1-CPS ＜50%，且傾向於具有較大腫瘤團塊。對抗PD-1 +化學療法組合有臨床反應之患者，可能會增加分泌IL18之免疫細胞浸潤，隨後誘導IFNg水平，此可能會導致IL18BP分泌增加。抗IL18BP抗體可增強此等患者之臨床抗腫瘤反應。 實例7 ：腫瘤衍生上清液(TDS) 中之IL18 及IL18BP 蛋白水平 方法：
依照製造商之規程，使用人類腫瘤分離套組(Miltenyi Biotec)將腫瘤用手術刀切成小塊並轉移至含有酶混合物之GentleMACs™ C管(Miltenyi Biotec)中。在解離之後，將樣本以300g離心5分鐘，且收集上清液並以3130g重新離心10分鐘。在離心後，將上清液重新收集並分成等分試樣，儲存在-80℃下。檢定當天，將樣本在室溫下解凍，隨後以14,000 RPM離心10 min，且收集上清液，立即用於以下ELISA或CBA套組： ● 人類IL18 ELISA套組(MBL,7620) ● 人類IL18BP ELISA套組(R&D DBP180) 結果：
在跨各種適應症之TDS中偵測到IL-18及IL-18BP。
圖57.代表來自個別患者之TDS樣本中之IL18及IL18BP的點圖。 圖 58.各種適應症之患者之TDS中之IL18及IL18BP水平。 實例8 ：IL18RA 在TME 中之TIL 上表現，且相較於周邊，其表現在CD4 TIL 上經誘導 方法：
將腫瘤樣本用手術刀切成小塊並轉移至含有酶混合物之GentleMACs™ C管(Miltenyi Biotec)中。在解離之後，將細胞通過70 μm過濾器過濾。將單細胞懸浮液接種到96孔V底盤中，並使用CD16 (BioLegend)、CD32 (Thermo Fisher)、及CD64 (BioLegend)抗體(Ab)混合物來阻斷Fc受體。將免疫群體用抗人類IL18Ra或使用其同型對照(BioLegend)染色。在洗滌之後（1% BSA、0.1%疊氮化鈉，於PBS中），在FACS Fortessa細胞儀(BD Bioscience)上獲取細胞。使用FlowJo進行分析。 結果：
相較於匹配之PBMC，在腫瘤浸潤T細胞上誘導IL-18Ra表現，在CD4+ T細胞上具有統計顯著性，而在CD8+ T細胞上具有上升趨勢。
圖55A.顯示IL18Ra在來自各種癌症類型的分離人類腫瘤之CD8+及CD4+及NK TIL上之表現。各點代表來自個別患者之不同腫瘤。將目標之MFI除以相關同型對照之MFI來計算表現倍數值。(FOI)。藉由刻度線顯示平均值及SEM。 圖 55B ：IL18Ra在來自供體匹配的PBMC及TME之CD4+及CD8+ T細胞及NK細胞上之表現。使用成對t檢定（雙尾）執行統計分析，P ＜ 0.05；**p=0.0064。 實例9 ：TME 內TIGIT 及IL18RA 之共表現
使用Milteny之人類腫瘤解離套組（依照製造商之說明）對腫瘤樣本進行機械解離及酶促消化。將單細胞懸浮液用Zombie-Nir染色以排除死細胞，並用針對CD45、CD3、CD4、CD8、CD56、TIGIT、或IL18Ra之抗體染色。在FACS Fortessa細胞儀(BD Bioscience)上獲取細胞，並使用FlowJo軟體(V10)進行分析。細胞表面標記係用於偵測以下免疫群體：CD8 (CD3+CD8+)、CD4 (CD3+CD4+)、NK (CD3-CD56+)、及NKT (CD3+CD56+)。
結果係顯示於圖33中，所呈現之流式細胞術點圖顯示IL18Ra及TIGIT在子宮內膜及結腸TME中在CD8 T細胞、CD4 T細胞、NK細胞、及NKT細胞上之共表現。TIGIT及IL18Ra在相同細胞上之共表現指示，藉由組合投予抑制性抗IL18BP及抗TIGIT抗體來靶向此兩種途徑可能會產生有益效應。 實例10 ：ADIMAB LTD 針對人類IL18-BP 蛋白質之客製化ABS 之產生及表徵針對人類IL18-BP蛋白質之抗IL18-BP hIgG1-N297A Ab之產生 抗原製備
使用EZ-Link Sulfo-NHS-Biotinylation Kit（Thermo Scientific，目錄號21425）對抗原進行生物素化。
在添加1:7.5莫耳比之生物素化試劑之前，將抗原濃縮至約1 mg/mL，並將緩衝液換液至PBS。將混合物在4C下保持隔夜，之後進行另一次緩衝液換液以去除溶液中之游離生物素。生物素化係透過鏈親和素感測器與ForteBio上經標示蛋白之結合來確認。 初始庫選擇
如前所述繁殖八個初始人類合成酵母庫，各庫具有約10 9個多樣性（參見例如Y. Xu et al, PEDS26(10), 663-70 (2013)；WO2009036379；WO2010105256；及WO2012009568。）
對於前兩輪選擇，如前所述，使用Miltenyi MACS系統執行磁珠分選技術（參見例如Siegel et al, J Immunol Methods286(1-2), 141-153 (2004)。）簡言之，將酵母細胞（約10 10個細胞/庫）與10 nM生物素化人類IL18-BP-Fc融合蛋白於洗滌緩衝液（磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)/0.1%牛血清白蛋白(BSA)）中於30°C下培養30 min。在用40 mL冰冷的洗滌緩衝液洗滌一次之後，將沉澱細胞(cell pellet)再懸浮於20 mL洗滌緩衝液中，並將鏈親和素微珠(500 μl)添加至酵母中，並在4°C下培養15 min。接下來，使酵母沉澱，再懸浮於5 mL洗滌緩衝液中，並裝載至Miltenyi LS管柱上。在裝載5 mL之後，將管柱用3 mL洗滌緩衝液洗滌3次。接著將管柱自磁場中移出，將酵母用5 mL的生長培養基洗提，接著生長隔夜。
使用流式細胞術(FACS)執行以下輪次之選擇。使酵母沉澱，用洗滌緩衝液洗滌三次，並在30°C下與10 nM生物素化人類IL18-BP-Fc融合蛋白、10 nM生物素化食蟹獼猴IL18-BP-Fc融合蛋白、100 nM人類IL18-BP-Fc單體、100 nM生物素化食蟹獼猴IL18-BP單體一起培養，或與多特異性試劑(PSR)一起培養以自選擇中移除非特異性抗體。一些選擇亦藉由與預複合至人類IL18之生物素化人類IL18-BP-Fc融合蛋白一起培養來進行，以富集IL18競爭性抗體。對於PSR除盡，如前所述，將庫與1:10稀釋之生物素化PSR試劑一起培養（參見例如Y. Xu et al, PEDS26(10), 663-70 (2013)。）接著將酵母用洗滌緩衝液洗滌兩次，並用1:100稀釋之山羊F(ab’)2抗人類κ-FITC (LC-FITC)（Southern Biotech，目錄號2062-02）及1:500稀釋之鏈親和素-AF633 (SA-633)（Life Technologies，目錄號S21375）或1:50稀釋之Extravidin-藻紅蛋白(EA-PE)（Sigma-Aldrich，目錄號E4011）二級試劑在4°C下染色15 min。在用冰冷的洗滌緩衝液洗滌兩次之後，將沉澱細胞再懸浮於0.3 mL洗滌緩衝液中，並轉移至帶有濾器蓋之分選管中。使用FACS ARIA分選機(BD Biosciences)進行分選，並判定分選門以選擇具有所欲特徵之抗體。重複選擇輪次，直到獲得具有所有所欲特徵之群體。在最後一輪分選之後，將酵母接種並挑選個別菌落進行表徵。 抗體最佳化
抗體之最佳化係經由輕鏈批次改組進行，接著如下文所述將多樣性引入重鏈及輕鏈可變區。各抗體皆使用其中一些方法之組合。
輕鏈批次改組：將來自初始輸出之重鏈用於製備輕鏈多樣化庫。如上所述對此等庫進行選擇，亦即用一輪MACS及四輪FACS。在不同FACS選擇輪次中，藉由抗原滴定評估庫之例如PSR結合及親和力壓力。進行分選以獲得具有所欲特徵之群體。自每一輪之最終FACS選擇中挑選個別菌落進行定序及表徵。
CDRH1及CDRH2選擇：將單一抗體之CDRH3重組到預製庫中，其中具有約10 8個多樣性的CDRH1及CDRH2變體，如初始選擇中所述，使用一輪MACS及四輪FACS進行選擇。對於每一輪FACS，皆會檢查庫之PSR結合及親和力壓力，並進行分選以獲得具有所欲特徵之群體。
CDRH3及CDRL3選擇：寡核苷酸係購自IDT，其包含CDRH3及CDRL3以及CDR3兩側之側翼區域。各寡核苷酸經由NNK多樣性使CDR3中之一或兩個胺基酸多樣化。CDRH3寡核苷酸與含有來自CDRH1及CDRH2選擇之選定變體的重鏈FR1-FR3可變區重組，而CDRL3寡核苷酸與來自親本抗體之輕鏈FR1-FR3可變區重組，以獲得約10 8的組合庫多樣性。如初始選擇中所述，使用一輪MACS及四輪FACS進行選擇。對於每一輪FACS，皆會檢查庫之PSR結合及親和力壓力，並進行分選以獲得具有所欲特徵之群體。對於此等選擇，藉由將抗原與親本IgG預培養30分鐘，接著將此預複合混合物應用於酵母庫一段時間來施加親和力壓力，使選擇達到平衡。接著能夠對親和力較高之抗體進行分選。 抗體生產及純化
酵母殖株生長至飽和，接著在      振盪下於30°C誘導48 h。在誘導之後，將酵母細胞沉澱，採集上清液以進行純化。將IgG使用Protein A管柱純化，並用pH 3.5的乙酸洗提。 粒徑篩析層析法
使用TSKgel SuperSW mAb HTP管柱(22855)對哺乳動物產生之mAb進行快速SEC分析，在0.4 mL/min下，循環時間係6 min/運行。使用200 mM磷酸鈉及250 mM氯化鈉作為流動相。 動態掃描螢光測定法
將10 µL的20x Sypro Orange添加至20 µL的0.2-1 mg/mL mAb或Fab溶液中。使用RT-PCR儀器(BioRad CFX96 RT PCR)將樣本盤溫度以0.5℃的增量自40℃升至95℃，各溫度平衡2 min。原始數據之一階導數之負值用於提取Tm。 表3. 用於最佳化抗體之SEC-HPLC (%) 及DSF (℃) Fab Tm 之概述
殖株 Fab Tm (DSF,℃) SEC-HPLC ，單體%
ADI-71663 68.0 93.9
ADI-71701 71.5 98.6
ADI-71707 71.0 98.8
ADI-71709 71.5 97.6
ADI-71710 71.5 97.9
ADI-71719 72.5 94.5
ADI-71720 72.5 98.6
ADI-71722 73.0 95.9
ADI-71728 73.0 95.0
ADI-71736 73.5 79.2
ADI-71739 73.0 94.9
ADI-71741 73.5 99.4
ADI-71742 74.0 91.3
ADI-71744 74.5 88.1
ADI-71753 74.5 96.9
ADI-71755 74.5 92.9
抗L18-BP hIgG1抗體分析包括以下步驟： 藉由ForteBio Octet測量抗人類抗體與人類IL18-BP-Fc蛋白及食蟹獼猴IL18-BP-Fc蛋白之親和力–原始輸出
如前所述，Octet親和力測量通常在Octet HTX上執行（參見例如Estep et al, Mabs 5(2), 270-278 (2013)）。簡言之，ForteBio親和力測量係藉由將IgG線上裝載於AHC感測器上來執行。使感測器離線在檢定緩衝液中平衡30分鐘，接著線上監測60秒以用於基線建立。將裝載有IgG之感測器暴露於100 nM抗原達3分鐘，之後轉移至檢定緩衝液中達3分鐘以進行解離速率測量。所有動力學皆使用1:1結合模型進行分析。 SPR測量 表面電漿子共振K D測量
使用Biacore 8K光學生物感測器(Global Life Sciences Solutions USA, Marlborough, MA)在25°C下於HBS-EP+運行緩衝液系統（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.05%界面活性劑P20）中進行動力學分析。在各實驗期間，樣本室皆維持在10°C。
對於抗體捕獲實驗，經由標準胺偶合(1:1 EDC:NHS)將山羊抗人類Fc抗體(Jackson ImmunoResearch)共價偶合至CM5感測器晶片表面之流通池1及2，接著用乙醇胺(1.0 M, pH 8.5)阻斷。將抗體（10.0 nM於運行緩衝液中）注入（40秒，10 µL/min）流通池2。將一系列濃度在27.0至0.111 nM之範圍內的IL18-BP-Fc單體（於運行緩衝液中稀釋3倍）注入（300秒，30 µL/min）流通池1及2。對IL18-BP-Fc單體之解離監測600秒或5130秒。將數個空白緩衝液樣本注入（300秒，30 µL/min）流通池1及2，並用於減去參考表面。所有表面（流通池1及2）皆經由兩次注射（20秒，30 µL/min）pH 1.5的10 mM甘胺酸而再生。
對於溶液實驗中之生物素化抗原捕獲Fab或完全抗體，各實驗週期皆以將於運行緩衝液中之生物素CAPture試劑(Global Life Sciences Solutions USA)之1:20溶液注入（150秒，2 µL/min）流通池1及2中開始。隨後將生物素化IL18-BP-Fc融合蛋白(10.0 nM)注入（120秒，1.0 µL/min）流通池2。將生物素化IL18-BP-Fc融合蛋白捕獲到感測器表面後，將完全抗體濃度（12.5 nM – 0.8 nM，2倍稀釋）之一系列Fab濃度（24.3 – 0.1 nM，3倍稀釋）注入（300秒，30 µL/min）流通池1及2。對Fab或Ab之解離監測600秒或5130秒。將數個空白緩衝液樣本注入（300秒，30 µL/min）流通池1及2，並用於減去參考表面。最後，將再生溶液（於0.25 M NaOH中之6 M鹽酸胍）注入（120秒，10 µL/min）流通池1及2，為感測器表面準備另一個週期。
對於數據處理及擬合，將感測圖裁切以僅包括締合及解離步驟。隨後將裁切後之數據進行比對、減去雙參考，接著使用Biacore Insight評估軟體版本3.0.11.15423對1:1結合模型進行非線性最小平方擬合。
結果顯示於圖41及圖42。
圖41A：抗IL18BP Fab -人類IL18BP交互作用之Biacore影像；10 min解離。
圖41B：抗IL18BP Fab -人類IL18BP交互作用之Biacore影像；85 min解離。
圖41C：抗IL18BP Fab-食蟹獼猴IL18BP交互作用之Biacore影像；10 min解離。
圖41D：抗IL18BP Fab-食蟹獼猴IL18BP交互作用之Biacore影像；85 min解離。
圖42呈現表格，其顯示藉由Biacore測量之人類/食蟹獼猴抗IL18BP Fab-IL18BP交互作用之KD值。 MSD-SET K D測量
如前所述執行平衡親和力測量(Estep et al., 2013)。在PBS + 0.1%無IgG BSA (PBSF)中執行溶液平衡滴定(SET)，抗原（生物素化IL18-BP-Fc融合蛋白）在50 pM下保持恆定，並與Fab之1.5至3倍連續稀釋液一起培養，起始於10 nM至500 pM（實驗條件取決於樣本）。將抗體（20 nM於PBS中）塗佈到標準結合MSD-ECL盤上，在4°C下隔夜或在室溫下30 min。接著將盤用BSA阻斷30 min，並在700 rpm下振盪，隨後用洗滌緩衝液(PBSF + 0.05% Tween 20)洗滌。將SET樣本應用於盤上並在700 rpm下振盪培養150秒，接著洗滌一次。在盤上培養3 min，將盤上捕獲之抗原用於PBSF中之1000 ng/mL經磺酸基標籤標示之鏈親和素偵測。將盤用洗滌緩衝液洗滌一次，接著在MSD Meso Sector S 600儀器上使用含界面活性劑的1x Read Buffer T進行讀數。在Prism中將游離抗原百分比繪製為滴定抗體之函數，並擬合至二次方程式以提取K D。
結果顯示於圖43至圖45。
圖43A：Fab-IL18BP MSD影像（黑色）與人類IL-18 – IL18BP MSD影像（綠色）之疊加。
圖43B：Fab-IL18BP MSD影像（黑色）與食蟹獼猴IL-18 – IL18BP MSD影像（綠色）之疊加。
圖44呈現表格，其顯示藉由MSD測量之人類/食蟹獼猴抗IL18BP Fab -IL18BP交互作用之K D值。
圖45呈現表格，其顯示藉由MSD測量之人類/食蟹獼猴IL18-IL18BP交互作用之K D值。 ForteBio Octet表位分倉
使用標準三明治格式交叉阻斷檢定執行表位分倉。將對照抗靶向IgG裝載於AHQ感測器上，並用不相關的人類IgG1抗體阻斷感測器上未經佔據之Fc結合位點。接著將感測器暴露於100 nM人類IL18-BP-Fc抗原，隨後暴露於抗IL18-BP第二抗體。在抗原締合之後第二抗體之額外結合指示表位未經佔據（非競爭者），而沒有結合則指示表位經阻斷（競爭者）。 AlphaLISA競爭檢定
將抗HIS標籤受體珠(Perkin Elmer AL178C)與2.5 nM人類或食蟹獼猴IL18-BP His、連同2.5 nM生物素化人類或食蟹獼猴IL18、及150 nM IgG一起培養60分鐘。在此培養後，添加Steptavidin供體珠(Perkin Elmer 6760002S)並在室溫下額外培養30分鐘。接著將樣本使用Perkin Elmer EnSpire Alpha多模式盤讀取儀(Perkin Elmer 2390)讀取。將樣本在680 nm下激發之後在615 nm處讀取。競爭係使用光子（僅PBSF）/光子（抗體）比率來計算。對於頂部結合物，使用抗體劑量滴定（150 nM，3倍稀釋）重複檢定。 藉由BiaCORE測量抗人類IL18-BP抗體與人類IL18-BP單體蛋白及食蟹獼猴IL18-BP-HIS標籤蛋白之親和力–最佳化輸出
對於溶液實驗中之生物素化抗原捕獲Fab，各實驗週期皆以將於運行緩衝液中之生物素CAPture試劑(Global Life Sciences Solutions USA)之1:20溶液注入（150秒，2 µL/min）流通池1及2中開始。隨後將生物素化IL18-BP-Fc融合蛋白(10.0 nM)注入（120秒，1.0 µL/min）流通池2。將生物素化IL18-BP-Fc融合蛋白捕獲到感測器表面後，將一系列Fab濃度（24.3 – 0.1 nM，3倍稀釋）注入（300秒，30 µL/min）流通池1及2。對Fab之解離監測600秒或5130秒。將數個空白緩衝液樣本注入（300秒，30 µL/min）流通池1及2，並用於減去參考表面。最後，將再生溶液（於0.25 M NaOH中之6 M鹽酸胍）注入（120秒，10 µL/min）流通池1及2，為感測器表面準備另一個週期。
對於數據處理及擬合，將感測圖裁切以僅包括締合及解離步驟。隨後將裁切後之數據進行比對、減去雙參考，接著使用Biacore Insight評估軟體版本3.0.11.15423對1:1結合模型進行非線性最小平方擬合。 人類IL18之阻斷：藉由ELISA偵測IL18-BP交互作用
藉由ELISA測試來自Adimab之抗人類IL18-BP Ab對人類IL18-BP-Fc融合蛋白與IL-18 (R&D)結合之抑制作用。將人類抗IL18-BP多株抗體（R&D，目錄號AF119）塗佈於高結合盤之孔上在4°C下隔夜（2.5 µg/ml，50 µl/孔體積）。將經塗佈之盤用PBS潤洗一次，並與250 µL封閉緩衝液（於PBS中之2.5%脫脂牛奶）在室溫(RT)下培養2 hr。將抗人類IL18-BP Ab之連續稀釋液（1:2，4-0.06 µg/ml，50 µL/孔）與1 nM人類IL18-BP-Fc及4 nM生物素化人類IL18在RT下混合，並在RT下預培養1h。將阻斷緩衝液移除並將盤洗滌，且與100 µl/孔蛋白質混合物在RT下培養2h。將盤洗滌並與鏈親和素-HRP溶液（Jackson；50 µL/孔體積）在RT下培養1h。將盤用PBS-T洗滌3次，用PBS洗滌一次，並與TMB底物溶液（50 µL/孔）在RT下培養以產生信號。藉由添加1N HCl溶液（50 µL/孔）終止HRP反應，並在螢光讀取儀(EnSpire, Perkin Elmar)上讀取450 nm處的吸光度信號。將數據匯出至Excel (Microsoft)並在GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.)中作圖。阻斷係根據生物素化人類IL-18與IL18-BP-Fc蛋白在Ab存在下之結合信號相較於同型對照存在下之結合信號的減少而計算。 藉由ELISA自預複合人類血清及重組人類IL18中援救游離人類IL18
藉由ELISA在人類血清中測試來自Adimab之抗人類IL18-BP Ab對預結合人類IL18-BP之人類重組IL18的援救能力。將人類抗IL18 Mab（MOR09464_N30K抗體Novartis專利US 2014/O112915 A1）塗佈於高結合盤之孔上在4°C下隔夜（2.5 µg/ml，50 µl/孔體積）。將經塗佈之盤用PBS潤洗一次，並與250 µL封閉緩衝液（於PBS中之2.5%脫脂牛奶）在室溫(RT)下培養2 hr。將抗人類IL18-BP Ab之連續稀釋液（1:2，5至0.078 µg/ml，50 µL/孔）與摻有4 ng/ml的重組人類IL18 (R&D)之人類健康供體血清(ISERS50 Almog)混合，並在37℃下培養2小時，在RT下培養1小時。對於標準曲線，在阻斷緩衝液中製備重組IL18之連續稀釋液（1:2，3至0.05 ng/ml）。將阻斷緩衝液移除並將盤洗滌，且與100 µl/孔蛋白質混合物在RT下培養2小時。將盤洗滌並與D045-6-生物素（1:1000，溶於1% BSA PBS，100 µl/孔，R&D）在RT下培養1小時。將盤洗滌並與鏈親和素-HRP溶液（Jackson；50 µL/孔體積）在RT下培養1小時。將盤用PBS-T洗滌3次，用PBS洗滌一次，並與TMB底物溶液（50 µL/孔）在RT下培養以產生信號。藉由添加1N HCl溶液（50 µL/孔）終止HRP反應，並在螢光讀取儀(EnSpire, Perkin Elmar)上讀取450 nm處的吸光度信號。將數據匯出至Excel (Microsoft)並在GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.)中作圖。IL18援救%係根據所偵測之游離IL18與IL18總量之總和：相較於同型對照存在下之結合信號，Ab存在下之IL18-BP複合物量。 藉由ELISA自預複合之食蟹獼猴重組IL18-BP與重組食蟹獼猴IL18中援救游離食蟹獼猴重組IL18
藉由ELISA測試來自Adimab之抗人類IL18-BP Ab對預結合食蟹獼猴重組IL18-BP之食蟹獼猴重組IL18的援救能力。將人類抗IL18 Mab（MOR09464_N30K抗體Novartis專利US 2014/O112915 A1）塗佈於高結合盤之孔上在4°C下隔夜（2.5 µg/ml，50 µl/孔體積）。將經塗佈之盤用PBS潤洗一次，並與250 µL封閉緩衝液（於PBS中之2.5%脫脂牛奶）在室溫(RT)下培養2小時。將阻斷緩衝液移除並將盤洗滌，且與100 µl/孔的抗人類IL18-BP Ab之連續稀釋液（1:3，10至0.004 µg/ml，50 µL/孔）在37℃下培養1小時，與預形成之食蟹獼猴IL18:IL18-BP複合物（1 ng/ml恆河猴IL18，R&D及25 ng/ml IL18BP-His，R&D；在37℃下培養1小時）。將盤洗滌並與D045-6-生物素（1:2000，溶於1% BSA PBS，100 µl/孔，R&D）在RT下培養1h。將盤洗滌並與鏈親和素-HRP溶液（Jackson；50 µL/孔體積）在RT下培養1h。將盤用PBS-T洗滌3次，用PBS洗滌一次，並與TMB底物溶液（50 µL/孔）在RT下培養以產生信號。藉由添加1N HCl溶液（50 µL/孔）終止HRP反應，並在螢光讀取儀(EnSpire, Perkin Elmar)上讀取450 nm處的吸光度信號。將數據匯出至Excel (Microsoft)並在GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.)中作圖。IL18拯救%係根據以下而計算：相較於同型對照存在下之結合信號，在Ab存在下所偵測之游離IL18與IL18:IL18-BP複合物總量之總和。 IL18 HEK293報導子細胞自預複合之人類IL18-IL18-BP中援救游離人類IL18
在3 µg/ml的Adimab Ab或同型對照存在下，將0.1 ng/ml人類IL18 (R&D)與表現高水平IL18-BP（來自經SUIT2 INF-γ處理之細胞（24小時，1000 U/ml））之細胞培養基預培養。將50K/孔的HEK293報導子細胞(Invivogen)接種於96孔盤中之測試培養基（DMEM高葡萄糖、10%FBS、1%pen-strep、1%glutamax）中，並向各孔添加20 µl的樣本。將細胞在37°C下於CO 2培養箱中培養20小時。第二天，將20 µl誘導細胞上清液添加至96孔盤中之180 µl經預熱之Quanti-Blue溶液(Invivogen)。將細胞在37°C下培養1小時，並藉由OD650讀數測量SEAP水平。所有樣本皆以二重複測量。阻斷係根據Ab存在下游離IL18偵測之增加相較於同型對照存在下之游離IL18水平而計算。 結果：抗人類IL18-BP hIgG1產生
使用與hIgG1 Fc蛋白融合之人類IL18-BP或食蟹獼猴IL18-BP-Fc蛋白(Adimab)對Adimab之酵母初始庫進行5輪選擇，並針對多特異性試劑進行一輪反選擇，以除盡非特異性抗體。在人類IL18-BP抗原上添加人類IL18並重複數輪，以富集阻斷抗體。
在第一次篩選中，使用生物膜干涉(bio-layer interferometry, BLI)技術在無標示、浸入式生物感測器平台(ForteBio Octet® RED384) Octet儀器上對740個殖株進行單離、定序、及篩選，以Kd排序與人類IL18-BP之結合。在740個殖株中，有341個係獨特的且經識別為人類IL18-BP之陽性結合物，而有266個抗體對人類單體IL18BP之親和力低於100 nM。前341個Octet-陽性抗體之二次篩選包括對以下進行親和力測量：與hIgG1 Fc融合之食蟹獼猴IL18-BP或食蟹獼猴IL18-BP-HIS、及人類IL18-BP單體蛋白。195個抗體具有人類/食蟹獼猴交叉反應性。使用三明治法在Octet儀器中執行初始抗體分倉；然而，檢定無法區分可能的IL18競爭者及非競爭者。為了克服此問題，在FACS中使用配體競爭對抗體執行分倉。個別殖株係在10 nM Hu IL18BP Fc存在下、具有或不具有100 nM IL18之情況下測試。所挑選之所有殖株皆顯示與IL18之競爭以與IL18BP結合（抗體僅代表倉1，且所有抗體皆係配體競爭性）。
接下來，將來自初始選擇之341個獨特殖株的可變重區次選殖(subclone)到預製之輕鏈改組庫中。LCBS庫之選擇係如上所述執行，使用人類或食蟹獼猴IL18-BP抗原進行3輪選擇，並使用PSR進行一輪反選擇。
在第一次篩選中，使用生物膜干涉(BLI)技術在無標示、浸入式生物感測器平台(ForteBio Octet® RED384) Octet儀器上對1152個殖株進行單離、定序、及篩選，以KD排序與人類IL18-BP之結合。在1152個殖株中，有658個係獨特的且經識別為人類IL18-BP之陽性結合物。基於與人類IL18-BP-Fc蛋白之結合親和力對抗體進行排序，並挑選前87個殖株進一步表徵，並使用親和管柱自酵母表現細胞之培養基中純化。前87個Octet-陽性抗體之二次篩選包括對以下進行親和力測量：與hIgG1 Fc融合之食蟹獼猴IL18-BP或食蟹獼猴IL18-BP-HIS、及人類IL18-BP單體蛋白。根據IL18-BP-Fc與人類IL18之結合及競爭對抗體進行分倉。在AlfaLISA檢定中執行與150 nM的經純化hIgG1競爭結合IL18-BP-Fc。基於以上所有內容，對抗體進行排序，並使用抗體劑量滴定（150 nM，3倍稀釋）在AlfaLISA中篩選出前16個抗體。選擇出前6個阻斷人類/食蟹獼猴IL18-BP結合物進行最佳化。
將前6個親本殖株之相關CDR改組到預製的CDRH1及CDRH2庫中，並在Adimab使用人類IL18-BP單體蛋白或食蟹獼猴IL18-BP-HIS蛋白執行3輪選擇。在Octet中識別並篩選出79個獨特殖株，用於與單體人類及食蟹獼猴IL18-BP蛋白結合。
將來自79個獨特殖株的相關CDR用於建立CDRH3及CDRL3多樣化庫。使用10 nM的IL18-BP單體與100 nM的親本IgG之預複合物對CDRH3/L3庫進行淘選，以產生Koff富集殖株。使用親和管柱自酵母表現細胞之培養基中識別並純化47個獨特殖株。前47個抗體之分析包括對食蟹獼猴及人類IL18-BP單體蛋白之親和力測量（Octet及Biacore）。藉由Octet所有47個殖株皆達到85分鐘解離之Koff偵測極限。47個殖株與人類及食蟹獼猴IL18-BP之親和力係藉由Biacore來測量，如藉由Biacore對人類IL18-BP所測得，47個殖株中有24個達到85分鐘解離之Koff偵測極限；及如藉由Biacore對食蟹獼猴IL18-BP所測得，有5個達到85分鐘解離之Koff偵測極限（圖8）。在AlfaLISA檢定中使用15 nM的經純化hIgG1執行與人類IL18競爭IL18-BP-Fc之結合（圖9）。 藉由ELISA人類及食蟹獼猴IL18-IL18-BP交互作用之阻斷
藉由ELISA分析親本mAb對人類IL18-BP之阻斷活性。如圖10所示，相較於同型對照，抗人類IL18-BP Ab (1:2, 4-0.06 µg/ml)顯示出劑量依賴性阻斷效應。相較於同型對照，抗人IL18-BP Ab (1:3, 10-0.01 µg/ml)對食蟹獼猴IL18:IL18-BP交互作用顯示出劑量依賴性阻斷效應（圖11）。抗人類IL18-BP Ab之IC50值顯示於圖12。 藉由抗IL-18BP Ab自預複合之人類或食蟹獼猴IL18-IL18BP中援救游離人類/食蟹獼猴IL18
使用ELISA檢定證明抗人類IL-18BP親和成熟mAb釋放與人類IL18BP結合之人類IL18及與食蟹獼猴IL18BP蛋白結合之食蟹獼猴IL18的能力。
如圖31所示，相較於同型對照，抗人類IL18BP mAb能夠自預形成之人類IL-18:IL-18BP複合物中釋放人類IL18。
如圖32所示，相較於同型對照，抗人類IL18BP mAb之劑量滴定（10 µg/mlµg/ml，1:3連續稀釋）自預形成之食蟹獼猴IL-18:IL-18BP複合物中釋放食蟹獼猴IL18。 IL18 HEK293報導子細胞自預複合之人類IL18-IL18-BP中援救游離人類IL18
使用IL18 HEK293報導子細胞展示針對人類IL18-BP之mAb援救與IL18-BP蛋白結合之人類IL18的能力。添加30 ng/ml抗人類IL18-BP抗體能夠恢復所有經測試抗體之游離IL18（圖13）。
使用SnapGene MUSCLE比對，使用來自各親本庫之最佳化序列產生共有序列。將來自各親本譜系之高親和力IL18BP結合物與各別生殖系序列進行比對。在＞90%的閾值下達成共有。
使用ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、及ADI-71717抗體產生66650譜系（VH1-03；VL-κ-1-5）CDR共有序列（圖1A）。各別序列比對顯示於圖3B。
66650譜系（VH1-03；VL-κ-1-5）共有序列包含： ● CDR-H1，具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H，其中X係N、R、D、G、或K；X2係S、H、I、或Q；X3係M或V； ● CDR-H2，具有序列W-I-H-A-G-T-G-X-T-X2-Y-S-Q-K-F-Q-G，其中X係N、A、或V；X2係K或L； ● CDR-H3，具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P，其中X係S或E； ● CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ● CDR-L2，具有序列E-A-S-S-L-E-S；及 ● CDR-L3，具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T，其中X係S、V、Y、L、或Q；X2係F、S、或G。
使用ADI-71719、ADI-71720、ADI-71722、及ADI-71728抗體產生66670譜系（VH1-69；VL-κ-1-12）CDR共有序列（圖1B）。各別序列比對顯示於圖3C。
66670譜系（VH1-69；VL-κ-1-12）共有序列包含 ● CDR-H1，具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S，其中X係S或N；X2係E或S；X3係V或P； ● CDR-H2，具有序列G-I-I-P-G-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G，其中X係G或Y，X2係A或S；X3係N、I、或V ● CDR-H3，具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T，其中X係S、G、或F； ● CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ● CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ● CDR-L3，具有序列Q-Q-V-Y-X-X2-P-W-T，其中X係S或R；X2係L、I、或F。
使用ADI-71662、ADI-71663、及ADI-66692抗體產生66692譜系（VH3-23；VL-κ-1-12）CDR共有序列（圖1C）。各別序列比對顯示於圖3A。
66692譜系（VH3-23；VL-κ-1-12）共有序列包含： ● CDR-H1，具有序列F-T-F-X-N-X2-A-M-S，其中X係G或D或S；X2係T或V或Y； ● CDR-H2，具有序列A-I-S-X-X1-X2-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G，其中X係G或A；X2係N或S；X3係A或G； ● CDR-H3，具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y； ● CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A，其中X係S或D； ● CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ● CDR-L3，具有序列Q-H-A-X-X1-F-P-Y-T，其中X係Y或L；X2係S或F。
使用ADI-71736、ADI-71739、及ADI-66716抗體產生66716譜系（VH1-39；VL-κ-1-12）CDR共有序列（圖1D）。各別序列比對顯示於圖3D。
66716譜系（VH1-39；VL-κ-1-12）共有序列包含： ● CDR-H1，具有序列G-S-I-S-S-X-X2-Y-X3-W-G，其中X係S或P；X2係E或D；X3係G、P、或Y； ● CDR-H2，具有序列S-I-X-X2-X3-G-X4-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S，其中X係Y或V；X2係Y或N；X3係Q或S；X4係S或A； ● CDR-H3，具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y，其中X係Y或H，X2係V或L； ● CDR-L1，具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A； ● CDR-L2，具有序列A-A-S-S-L-Q-S；及 ● CDR-L3，具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T，其中X係S或F；X2係S或V。 實例11 ：藉由KINEXA 及BIACORE 比較抗IL-18BP AB 對IL18BP 與IL-18BP:IL-18 之親和力
人類、食蟹獼猴、殖株W19089C (Biolegend): IL-18BP (KinExA)、及小鼠(Biacore)中ADI-71739:IL-18BP對IL-18:IL-18BP之親和力及表徵資訊。
動力學排除檢定(KinExA®)測量溶液中未經修飾分子之間的平衡結合親和力及動力學。對於親和力分析，平衡解離常數Kd係由實驗判定，反映結合交互作用之強度。締合速率Kon亦由實驗判定，而解離速率koff通常基於以下方程式計算：koff = Kd x kon。
Kd分析需要將一種交互作用搭配物固定至固相上，接著將其用作探針來捕獲另一種交互作用搭配物，即恆定結合搭配物(CBP)。對於各實驗，在CBP背景下滴定其中一個結合搭配物並使其達到平衡。接著將溶液短暫暴露於固相並捕獲一部分游離CBP。接著將捕獲之CBP用螢光二級分子標示。與固相的短暫接觸時間小於溶液中預形成之複合物解離所需的時間，因此，在溶液與固相滴定結合搭配物之間的競爭經「動力學排除(kinetically excluded)」。由於固相僅用作各樣本中游離CBP之探針，因此在KinExA測量期間溶液平衡不會改變。由捕獲之CBP產生的信號與經平衡樣本中游離CBP之濃度成正比，用於判定Kd值。KinExA Pro軟體對所測量之數據執行最小平方分析，將Kd及CBP活性之最佳解決方案擬合至代表1:1可逆雙分子交互作用之曲線。對於曲線上之各數據點，x軸反映滴定之結合搭配物之莫耳濃度，y軸反映平衡時特定滴定劑濃度下游離CBP之百分比。 抗IL18BP與小鼠IL18BP結合之SPR親和力測量
Fab製備：使用Fab消化試劑套組（Pierce，目錄號44985）自1 mg抗IL18BP hIgG1 N97A酵母產生之抗體中製備Fab片段。在還原及非還原條件下對經純化之Fab片段執行SDS PAGE凝膠分析
所有實驗皆在Biacore T100光學生物感測器(Global Life Sciences Solutions USA, Marlborough, MA)中執行 捕獲晶片製備
將人類Fc捕獲試劑(Cytyva, Br1008-39)經由標準胺偶合以10 µg/mL於pH 5乙酸鹽緩衝液中共價偶合至CM5感測器晶片表面之流通池3及4，接著用乙醇胺(1.0 M, pH 8.5)進行六分鐘的阻斷步驟。 小鼠IL18BP與抗IL18BP Fab之結合動力學
對於溶液實驗中之抗原捕獲，各實驗週期分別以將小鼠IL18BP-Fc或hIgG1同型對照之10 µg/ml溶液注入（60秒，5 µL/min）流通池3及4中開始。將小鼠IL18-BP-Fc融合蛋白或同型對照捕獲到感測器表面後，將一系列Fab濃度（300 – 2.21 nM，2倍稀釋）注入（60秒，30 µL/min）流通池3及4。對Fab之解離監測900秒。將數個空白緩衝液樣本注入（60秒，30 µl/min）流通池3及4，並用於減去參考表面。最後，將再生溶液（10 mM甘胺酸pH=1.5）注入（60秒，10 µL/min）流通池3及4，為感測器表面準備另一個週期。
如圖52所示，ADI-71739與人類及食蟹獼猴IL-18BP之結合親和力（分別是Kd約291fM、Kd約208fM）高於人類及食蟹獼猴IL-18（分別是Kd約441fM、Kd約345fM）。ADI-71739與小鼠IL-18BP（Kd約4nM）之結合親和力低於IL-18（Kd約3.7pM）。 實例12 ：IL-18BP – 商業ABS 與ADIMAB 抗IL-18BP AB 之間的生物化學比較 方法：藉由ELISA使用a-hIL18BP Ab阻斷hIL18BP-hIL-18交互作用- IL18BP結合盤
此檢定用於識別抗人類IL18BP Ab，其抑制人類IL18BP與其搭配物人類IL-18之間的結合交互作用。藉由ELISA測試商業Ab抗人類IL18BP（殖株W19089C，目錄號947703，Biolegend）、ADI-71739、及ADI-71722對人類IL18BP蛋白與IL-18結合之抑制作用。將人類IL18BP-Fc蛋白塗佈於高結合盤之孔上在4°C下隔夜（1 µg/ml，100 µl/孔體積）。將盤用PBS-T緩衝液（1X PBS pH 7.4，0.05% Tween20）洗滌三次，並與250 µL阻斷緩衝液（於PBS中之2.5%脫脂牛奶）在室溫(RT)下培養2 hr。將阻斷緩衝液移除並將盤用PBS-T緩衝液洗滌三次。將結合盤配體與連續稀釋兩次（2.5-0.019 µg/ml，100 µL/孔體積）之抗人類IL18BP Ab（溶於含1% BSA之PBS緩衝液中）在RT下培養1h。將盤用PBS洗滌一次。將結合盤配體與溶於含1% BSA之PBS緩衝液（1 ng/ml，100 µL/孔體積）中之人類IL-18（目錄號9124-IL，R&D）在RT下培養1h。將盤用PBS-T（於PBS中之0.05% Tween20）洗滌三次。添加1:1000溶於含1% BSA之PBS緩衝液中之生物素化抗IL18偵測抗體，目錄號D045-6，R&D（100 µL/孔）。將此在RT下培養1hr，並將盤再次洗滌。添加1:1000溶於含2.5%脫脂牛奶之PBS中之過氧化物酶鏈親和素，Jackson，目錄號016-030-084（100 µL/孔），在室溫下達1小時。將盤用PBS-T緩衝液（1X PBS pH 7.4，0.05% Tween20）洗滌三次。ELISA信號係藉由添加50 µL的TMB受質並培養1.45min以在所有孔中產生信號。藉由添加50 µL 1N HCl終止HRP反應，並在發光讀數器EnSpire (Perkin Elmar)上讀取450 nm處的吸光度信號。將數據匯出至Excel (Microsoft)並在GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.)中作圖。 使用可溶性IL18-IL18BP及抗IL18BP Ab之複合物的競爭ELISA
此檢定用於識別抗人類IL18BP Ab，其抑制人類IL18BP與其搭配物人類IL-18之間的結合交互作用。藉由ELISA測試商業Ab抗人類IL18BP（殖株136007，目錄號MAB1191，R&D Systems）及ADI-66716對人類IL18BP蛋白與IL-18結合之抑制作用。將人類IL18BP抗體（目錄號AF119，R&D）塗佈於高結合盤之孔上在4°C下隔夜（1ug/ml，100 µl/孔體積）。將盤用PBS-T緩衝液（1X PBS pH 7.4，0.05% Tween20）洗滌三次，並與250 µL阻斷緩衝液（於PBS中之2.5%脫脂牛奶）在室溫(RT)下培養2 hr。將阻斷緩衝液移除並將盤用PBS-T緩衝液洗滌三次。使用0.25 nM人類IL-18-BP（R&D，目錄號119BP）及3 nM人類IL-18生物素(9124-IL, R&D)溶於含1% BSA之PBS緩衝液中，在37℃下預形成複合物達1小時。將複合物與抗人類IL18BP Ab（溶於含1% BSA之PBS緩衝液中連續稀釋兩次，4至0.06 µg/ml，100 µL/孔體積）一起在RT下培養2小時。添加1:1000溶於含2.5%脫脂牛奶之PBS中之過氧化物酶鏈親和素，Jackson，目錄號016-030-084（100 µL/孔），在室溫下達1小時。將盤用PBS-T緩衝液（1X PBS pH 7.4，0.05% Tween20）洗滌三次。ELISA信號係藉由添加50 µL的TMB受質並培養以在所有孔中產生信號。藉由添加50 µL 1N HCl終止HRP反應，並在發光讀數器EnSpire (Perkin Elmar)上讀取450 nm處的吸光度信號。將數據匯出至Excel (Microsoft)並在GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.)中作圖。 結果：
將AB-71739及AB-71722之阻斷活性與商業抗體抗IL18BP Ab（殖株W19089C，Biolegand）進行比較。如圖53所示，AB-71739及AB-71722之阻斷效應優於Biolegend Ab。
藉由KinExA測量Biolegend抗體（目錄號947703，殖株W19089C）對人類IL18BP之親和力，其值係63.8 pM（參見實例11中之方法）。
在可溶性阻斷ELISA檢定中，將ADI-66716之阻斷活性與商業抗體抗IL18BP Ab（殖株136007，目錄號MAB1191，R&D系統）進行比較。圖54顯示ADI-66716（右圖條）之阻斷效應優於R&D抗體。
藉由Biacore測量R&D抗體（目錄號MAB1191）對人類IL18BP之親和力，其值係2.73*10^-10 M（圖76）。 實例13 ：ADIMAB 之抗IL18-BP ABS 之功能評估 方法：基於NK之抗IL18-BP抗體功能評估檢定
將人類NK細胞於含有20% FBS之RPMI 1640中解凍，並用完全RPMI（RPMI 1640、10% FBS、1% Glutamax、1%青黴素-鏈黴素溶液）再次洗滌。接著，將細胞以50k個細胞/孔接種到96孔盤中，並與rhIL-12 (10 ng/ml, R&D systems, 10018-1L/CF)、rhIL-18（3 ng或10 ng/ml，R&D systems，9124-IL/CF）、及rhIL-18BP-Fc嵌合蛋白(1 µg/ml, R&D systems 119-BP)之組合在37°C、5% CO2培養箱中培養30分鐘，以形成IL-18+IL-18BP複合物。在30分鐘之後，將濃度遞減之抗人類IL-18BP mAb或相關同型對照添加至培養物中，以檢測其恢復IL-18活性之能力。將細胞及所有經添加之溶液製備於完全RPMI培養基中，最終體積係150 µl/孔。將盤在37°C、5% CO2培養箱中培養24小時，之後收集上清液用於IFNγ分泌評估。在一些情形下，採集細胞沉澱並染色以用於膜CD69水平，作為NK細胞活化之測量。所有測試皆以三重複進行，各測試皆由四名供體重複進行。 基於PBMC之阻斷內源性分泌IL-18BP之檢定
將人類PBMC於含有20% FBS之RPMI 1640中解凍，用完全RPMI（RPMI 1640、10%FBS、1%麩胺酸、1%青黴素-鏈黴素溶液）再次洗滌，並放入T-75燒瓶中於37℃、5% CO2培養箱中培養24小時，使其回復。接著，將細胞以200k個細胞/孔接種到96孔盤中，並與rhIL-12 (10 ng/ml, R&D systems, 10018-1L/CF)、rhIL-18（33.3 ng/ml或2 ng/ml，R&D systems，9124-IL/CF）、及濃度遞減之抗人類IL-18BP mAb、或同型對照之組合一起培養。將細胞及所有經添加之溶液製備於完全RPMI培養基中，最終體積係150 µl/孔。將盤在37°C、5% CO2培養箱中培養24小時，之後收集上清液用於IFNγ分泌評估。IL-18BP分泌係經IL-18/IL-18BP複合物ELISA（R&D Systems，DY8936-05，未顯示）證實。所有測試皆以三重複進行，各測試對ADI66716及ADI66692的兩名供體及親和成熟抗體的五名供體重複進行。 CD69表現
在培養24小時之後，收集NK細胞沉澱，用PBS洗滌殘餘培養基，並用以1:1000稀釋於PBS中之活力染料(Zombie NIR)進行標示，在RT下避光15 min。接著將細胞與Fc受體阻斷溶液（Trustain Fcx，Biolegend，2.5 µl/反應）在室溫下培養10 min。為了偵測細胞表面CD69之表現，將細胞與PE-抗人類CD69 Ab（BioLegend，1 µg/ml）在冰上避光培養30 min。接著將細胞洗滌一次並使用MACSquant分析儀進行分析。 細胞介素分泌
為了測量細胞之IFNγ分泌，在刺激後24小時收集上清液，並藉由CBA人類IFNγ套組(BD Biosciences, 558269)測試NK細胞或藉由CBA人類Th1、Th2、Th17細胞介素套組(BD Biosciences, 560484)測試PBMC。 數據分析與統計
所有FACS檔案皆藉由FlowJo軟體進行分析。在適用的情形下，使用GraphPad Prism軟體計算EC50。 結果：基於NK之體外檢定中mAb阻斷mIL18-BP-mIL-18交互作用的性能分析
藉由基於NK之檢定評估mAb對重組人類IL18-BP之功能性阻斷活性。如圖14所示，相較於同型對照，抗人類IL18-BP抗體能夠以劑量依賴性方式阻斷重組IL-18BP並完全恢復IL-18活性，此藉由IFNγ分泌及CD69表現來描述。EC50值係在一位數及兩位數nM範圍內。 基於PBMC之體外檢定中mAb阻斷mIL18-BP-mIL-18交互作用的性能分析
藉由基於PBMC之檢定評估mAb對內源性人類IL18-BP之功能性阻斷活性。如圖15所示，相較於同型對照，抗人類IL18-BP抗體能夠以劑量依賴性方式阻斷內源性IL-18BP並恢復IFNγ分泌。 實例14 ：基於T 細胞之檢定並與ICB 組合進行抗IL-18BP ABS 之功能評估
可溶性免疫檢查點在TME中上調，回應於IFNγ. αIL-18BP而恢復T及NK活性。此為IFNγ高的患者產生抗PD-1耐藥性提供建議的機制。
活性：體外– αIL-18BP恢復T及NK細胞活性。αIL-18BP Ab之體內活性證明，無論是作為單一療法或與ICB組合，腫瘤生長皆受到抑制。 用於抗IL18-BP抗體功能評估之MEL624:TIL檢定 方法：
將人類MEL624細胞解凍並在含有10% FBS、1%麩胺酸、1%青黴素-鏈黴素溶液、及1% HEPES緩衝液之DMEM中生長。接著將細胞以75k個細胞/孔接種在96孔盤的檢定培養基（含有10%人類血清、1%麩胺酸、1% MEM eagle、1%丙酮酸鈉、及1%青黴素-鏈黴素溶液之IMDM）中，在與先前使用已知黑色素瘤抗原(TIL)擴增之人類腫瘤浸潤淋巴球共培養之前先在37°C、5% CO2培養箱中培養1小時。將人類TIL在完全TIL培養基中解凍，並將75k個細胞/孔與MEL624細胞共培養以建立效應物：目標比例係1：1。接著將共培養之細胞用rhIL-18 (30 ng/ml)及rhIL-18BP (1 µg/ml)處理，在37°C、5% CO2培養箱中達30 min，以形成IL-18:IL-18BP複合物。在30分鐘之後，將抗人類IL-18BP mAb（ADI-71722，劑量滴定，30 µg/ml至0.01 µg/ml，稀釋因子1:3）或相關同型對照(hIgG1 30 µg/ml)添加至共培養物，以檢測其恢復IL-18活性之能力。將細胞及所有經添加之溶液製備於完全檢定培養基中，最終體積係200 µl/孔。將盤在37°C、5% CO2培養箱中培養24小時，之後收集上清液用於細胞介素分泌評估。所有測試皆以三重複進行，各測試皆由四名TIL供體重複進行。 細胞介素分泌
為了測量細胞之細胞介素分泌，在刺激後24小時收集上清液，並藉由CBA人類Th1、Th2、Th17細胞介素套組(BD Biosciences, 560484)進行測試。
在適用的情形下，使用GraphPad Prism軟體計算EC50值。 結果：
藉由MEL624:TIL檢定評估mAb對重組人類IL18-BP之功能性阻斷活性。如圖49A至圖49B及圖50所示，相較於同型對照，抗人類IL18-BP Ab (ADI-71722)能夠以劑量依賴性方式阻斷重組IL-18BP並完全恢復IL-18活性，此藉由IFNγ分泌來描述。 CMV回憶檢定用於抗IL18-BP抗體單獨使用及與抗PVRIG/抗TIGIT/派姆單抗組合之功能評估 方法：
將過度表現PD-L1之人類MEL-624細胞解凍並裝載CMV pp65肽(0.03 µg/ml)。將細胞以100K/孔接種到96孔盤中，並與rhIL-18 (30 ng/ml, R&D systems, 9124-IL/CF)及rhIL-18BP-Fc嵌合蛋白(2 µg/ml, R&D systems 119-BP)之組合在37°C、5% CO2培養箱中培養30分鐘，以形成IL-18+IL-18BP複合物。在30分鐘之後，將抗人類IL-18BP (ADI-71722)、抗人類PVRIG、抗人類TIGIT（抗TIGIT）、抗人類PD1（派姆單抗）、或相關同型對照(hIgG4)添加至培養物中，以檢測其恢復IL-18活性之能力。將所有抗體添加至最終濃度10 µg/ml。在與抗體培養後30分鐘，將經解凍之CMV反應性T細胞添加至培養物中。將細胞及所有經添加之溶液製備於完全IMDM（含有10%人類血清、1%麩胺酸、1% MEM eagle、1%丙酮酸鈉、及1%青黴素-鏈黴素溶液之IMDM培養基）中，最終體積係200 µl/孔。將盤在37°C、5% CO2培養箱中培養24小時，之後收集上清液用於IFNγ分泌評估。所有測試皆以三重複進行，各測試皆由三名供體重複進行。 結果：
藉由CMV回憶檢定評估mAb對重組人類IL18-BP之功能性阻斷活性。如圖49C至圖49D及圖51所示，抗人類IL18-BP Ab能夠阻斷重組IL-18BP並完全恢復IL-18活性，如IFNγ分泌所示。抗IL-18BP Ab與抗PVRIG/抗TIGIT/派姆單抗之組合產生更多的IFNγ分泌，指示對T細胞活化有益。 實例15 ：基於T 細胞之檢定並與ICB 組合進行抗IL-18BP ABS 之功能評估全血檢定
如圖66所示，抗IL-18BP抗體Ab-71709無論是單獨使用或與納武單抗組合，在ID. Flow（模擬人類血液循環之離體系統）中皆未顯示全身性免疫活化之徵象。自六名健康志願者採集新鮮全血，且立即將其轉移至全血循環系統。投予測試項目，且將血液設定在37°C下循環以防止凝血。對在24 hr時間點收集之血液樣本針對血液學及流式細胞術參數進行分析，接著處理成血漿以用於細胞介素分析。包括抗CD52抗體阿侖單抗(Alemtuzumab)作為臨床上可控細胞介素釋放之參考抗體。與阿侖單抗相反，根據所採用之各種讀數，抗IL-18BP抗體無論是單獨使用或與抗PD1抗體納武單抗組合，皆不會誘導任何全身性免疫活化之徵象。 體外研究測試ADI-71739對人類TIL殺滅黑色素瘤細胞之效應
如圖67所示，抗IL18-BP抗體ADI-71739增加腫瘤浸潤淋巴球對黑色素瘤細胞之殺滅。檢定設置之示意圖示係顯示於圖67A中。將MEL624細胞與先前富集MART1或gp100肽特異性殖株之人類TIL共培養。在用10 µg/ml ADI-71739或同型對照處理前，將rhIL-18 (R&D systems, 50 ng/ml)及rhIL-18BP (R&D systems, 1 µg/ml)添加至共培養物中達30分鐘，以允許IL-18:IL-18BP複合物形成。使用IncuCyte活細胞成像儀器監測共培養物72小時。如圖67B所示，添加IL-18（灰色）增強腫瘤細胞殺滅，如藉由MEL624細胞隨時間滿度降低（左）及細胞凋亡增加（右）所指示。在同型對照抗體（黑色）存在下，IL-18BP廢除IL-18之效應，而抗IL-18BP抗體（綠松石色）能夠完全恢復此等效應。 體外研究測試ADI-71739 Ab與其他檢查點阻斷抗體組合之效應
如圖68所示，ADI-71739單獨使用及與aPVRIG/aTIGIT/派姆單抗組合增加CMV特異性T細胞之IFNg分泌。檢定設置之示意圖示係顯示於圖68A中。過度表現PD-L1之MEL624細胞載有CMV肽pp65。將細胞與rhIL-18 (R&D systems, 30 ng/ml)及rhIL-18BP (R&D systems, 2 µg/ml)一起培養30分鐘，以允許IL-18:IL-18BP複合物形成，接著將細胞用10 µg/ml ADI-71739、或aPVRIG（抗PVRIG）、或aTIGIT（抗TIGIT）、或派姆單抗（抗PD-L1）、或同型對照（單獨或各種組合）處理。接著，將CMV特異性T細胞添加至培養物中，且在隔夜培養之後測量IFNg分泌。如圖68B所示，單獨ADI-71739能夠增加T細胞之IFNγ分泌，且在與派姆單抗/aPVRIG/aTIGIT組合後，此效應增強。 體外研究測試在內源性IL-18BP水平存在下ADI-71739對人類TIL功能之效應
如圖69所示，抗IL18-BP抗體ADI-71739增加腫瘤浸潤淋巴球之IFNg釋放。 A.檢定設置之示意圖示。將MEL624細胞與先前富集MART1或gp100肽特異性殖株之人類TIL共培養。將IL-18 (3.7 ng/ml)連同5 µg/ml ADI-71739或同型對照添加至共培養物中。共培養設定為18小時，之後測量上清液中之IFNg水平。 B.相較於經同型治療之樣本（黑色），用ADI-71739（綠松石色）治療之共培養物中IFNg水平增加。顯示來自兩個TIL供體之代表性實例。 經結合IL-18水平在TME中高於體外T細胞活化所需的量 方法：
將人類MEL624細胞解凍並在含有10% FBS、1%麩胺酸、1%青黴素-鏈黴素溶液、及1% HEPES緩衝液之DMEM中生長。接著將細胞以75k個細胞/孔接種在96孔盤的檢定培養基（含有10%人類血清、1%麩胺酸、1% MEM eagle、1%丙酮酸鈉、及1%青黴素-鏈黴素溶液之IMDM）中，在與先前使用已知黑色素瘤抗原(TIL)擴增之人類腫瘤浸潤淋巴球共培養之前先在37°C、5% CO2培養箱中培養1小時。將人類TIL在完全TIL培養基中解凍，並將75k個細胞/孔與MEL624細胞共培養以建立效應物：目標比例係1：1。接著將共培養之細胞用rhIL-18 (1.23-300 ng/ml)處理。將細胞及所有經添加之溶液製備於完全檢定培養基中，最終體積係200 µl/孔。將盤在37°C、5% CO2培養箱中培養24小時，之後收集上清液用於細胞介素分泌評估。所有測試皆以三重複進行。
依照製造商之規程，使用人類腫瘤分離套組(Miltenyi Biotec)將腫瘤用手術刀切成小塊並轉移至含有酶混合物之GentleMACs™ C管(Miltenyi Biotec)中。在解離之後，將樣本以300g離心5分鐘，且收集上清液並以3130g重新離心10分鐘。在離心後，將上清液重新收集並分成等分試樣，儲存在-80℃下。檢定當天，將樣本在室溫下解凍，隨後以14,000 RPM離心10 min，且收集上清液，立即用於以下ELISA或CBA套組： ●      人類IL18 ELISA套組(MBL,7620) ●      人類游離IL18偵測套組（內部規程） 人類游離IL18 ELISA規程：
將抗人類IL18 hIgG1殖株12GL（專利US 2014/0004128A1）於PBS中稀釋至1 µg/ml，並塗佈於ELISA盤上在4°C下隔夜（100 µl/孔）。將經塗佈之盤用PBST洗滌三次，並在室溫(RT)下與300 µl阻斷緩衝液（於含1% BSA之PBS中）一起培養2小時。將阻斷緩衝液移除並將盤用PBST洗滌三次。將人類健康供體血清以1:2稀釋於含1% BSA之PBS中。藉由將人類IL18之2倍連續稀釋液培養於含1% BSA之PBS中（自1 ng/ml開始）來產生標準曲線。將盤用PBST緩衝液（1X PBS pH 7.4，0.05% Tween20）洗滌三次，並添加100 µl/孔生物素化抗IL18偵測抗體（目錄號D0456 R&D；1:1000稀釋於含1% BSA之PBS中）。將其培養1 hr，並在抗體結合之後如上所述再次將盤洗滌。添加100 µl/孔辣根過氧化物酶HRP接合之鏈親和素（Jackson，1:1000）並將盤在RT下培養1 hr。在抗體結合之後如上所述再次將盤洗滌。ELISA信號係藉由添加50 µL的TMB受質(Scytek)並培養5至20分鐘以在所有孔中產生信號。藉由添加50 µL 1N HCL終止HRP反應，並讀取450 nm處的吸光度信號(EnSpire, Perkin Elmar)。檢定係以二重複進行。使用GraphPad Prism軟體分析數據。 結果：
檢定設置之示意圖示係顯示於圖70A中，將經解凍之腫瘤浸潤淋巴球(TIL)與MEL624細胞以1:1之比例共培養，並用rhIL-18（R&D systems，1.23至300 ng/ml）處理24hr。如自圖70B可看出，rhIL-18以劑量依賴性方式增加IFNγ分泌。rhIL-18在高於~1 ng/ml之濃度活化TIL，並在~100 ng/ml下達到飽和。
圖70C：跨適應症之TDS中經結合IL-18之水平大多高於體外T細胞活化所需的水平。經結合IL18水平係藉由自兩個單獨的ELISA套組測得之各樣本之總IL-18扣除游離IL18來計算。紅色虛線代表功能性活性所需的水平(1.5 ng/gr)。黑線代表各腫瘤類型之經結合IL-18中位數水平。 實例16 ：針對小鼠IL18-BP 蛋白之客製化ABS 的產生與表徵 方法： 針對小鼠IL18-BP 蛋白之Fab 的產生
AbD Serotec (Bio Rad, Germany)使用人類組合抗體庫(HuCAL®)生產服務來產生Fab。HuCAL®庫基於人類IgG1 Fab格式，由抗體重鏈之前兩個域及完整的輕鏈組成。 研究設計
針對小鼠IL18-BP之Fab產生由AbD Serotec (Bio Rad, Germany)執行。使用HuCAL®噬菌體庫，針對非相關的人類IgG1融合蛋白進行3輪富集及反選擇，以除盡非特異性抗體，從而產生針對小鼠IL18-BP蛋白之抗體。接下來，將噬菌體展示載體之富集抗體池次選殖到表現載體中，以判定最終的Fab格式。所選之Fab格式係Fab-FH（含有Flag及6 His標籤之單價Fab mini Ab）。使用小鼠IL18-BP Fc融合蛋白（小鼠IL18-BP與人類IgG1融合）產生抗體。 抗小鼠IL18-BP Fab 產生
AbD Serotec之Fab產生包括以下步驟： 1.     抗原固定－將抗原固定在固體支撐物上。標準方法係共價偶合至磁珠。 2.     噬菌體展示選擇–淘選-將呈現於噬菌體粒子上的HuCAL ®鉑庫與固定化抗原一起培養。藉由大量洗滌移除非特異性抗體，並藉由添加還原劑洗提特異性抗體噬菌體。大腸桿菌培養物係用經洗提之噬菌體及輔助噬菌體感染，產生富集之抗體噬菌體庫，用於下一輪淘選。一般而言，淘選進行三輪。 3.     次選殖到抗體表現載體中-在淘選之後，將富集之抗體DNA單離成池，並次選殖到Fab表現載體中。將大腸桿菌用連接混合物轉化並鋪在瓊脂盤上。各生長群落代表此階段之單株抗體。 4.     初步篩選-挑選群落並生長於384孔微量滴定盤中。誘導抗體表現，裂解培養物以釋放抗體分子。藉由ELISA篩選培養物之特異性抗原結合。 5.     二次篩選-使用生物膜干涉(BLI)技術在無標示、浸入式生物感測器平台(ForteBio Octet® RED384)上對前95個ELISA陽性殖株進行K off排序定序-對初級及二級篩選實驗之命中進行定序以識別獨特的抗體。 6.     表現及純化-使用一步親和層析法表現及純化獨特的Fab。 7.     抗體QC -使用重組蛋白藉由ELISA測試經純化之Fab。 mAb 性能之分析 藉由 ELISA 測量抗小鼠 IL18-BP 抗體與小鼠 IL18-BP 蛋白之結合
將小鼠IL18-BP His融合蛋白(Sino Biological)塗佈於高結合盤之孔上在4°C下隔夜（2.5 µg/ml，50 µl/孔體積）。使用小鼠抗組胺酸標籤HRP確保小鼠IL18-BP His塗層（以1:500稀釋於阻斷緩衝液中）。將經塗佈之盤用PBS潤洗一次，並與250 µL阻斷緩衝液（於PBS中之2.5%脫脂牛奶-每個實驗所指示）在室溫(RT)下培養2 hr。將阻斷緩衝液移除，將盤用PBS再次潤洗，並與來自Biorad之抗小鼠IL18-BP Ab（1:3，5-0.002 µg/ml，50 µL/孔）在RT下培養2 hr。將盤用PBS-T（0.05% Tween20於PBS中）洗滌3次，隨後用PBS洗滌一次，並與HRP接合之二級抗體（50 µL/孔）在RT下培養1hr。將盤用PBS-T洗滌3次，用PBS洗滌一次，並與TMB底物溶液（50 µL/孔）在RT下培養以產生信號。藉由添加1N HCl溶液（50 µL/孔）終止HRP反應，並在螢光讀取儀(EnSpire, Perkin Elmar)上讀取450 nm處的吸光度信號。將數據匯出至Excel (Microsoft)並在GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.)中作圖。 藉由BiaCore 測量對小鼠IL18-BP 蛋白之親和力1.     抗人類Fc之固定化：所有SPR測量皆使用BiaCore T-100儀器於PBS 0.05% Tween 25運行緩衝液中執行。將S系列CM5晶片（目錄號BR100530 Cytiva）在運行緩衝液中預置(primed) 7 min。晶片正規化係用注射70%甘油8 min來執行。將小鼠抗體捕獲套組（目錄號BR100838 Cytiva）用於捕獲。將0.4 M 1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)-碳二亞胺水溶液與0.1 M N-羥基琥珀醯亞胺水溶液以1:1比例混合，並以10 µl/min活化晶片表面達420秒。接下來，將稀釋於固定緩衝液（10 mM乙酸鈉pH 5.0，目錄號BR100838 Cytiva）中之30 µg/ml小鼠Fc捕獲試劑以5 µl/min注入所有4個通道，直到ΔRU達到12000RU。用1 M乙醇胺-HCl pH 8.5以10 µl/min將晶片阻斷7 min。 2.     抗小鼠IL18-BP抗體之捕獲：為了捕獲，將AB-837 mIgG1 D265A (AbD35328)於運行緩衝液中稀釋至10 µg/ml，並以5 µl/min的速率注入特定通道。CH1用於捕獲同型對照(synagis mIgG1 D265A)。當捕獲水平達到約250 RU時停止注射。 3.     抗小鼠IL18-BP Ab之動力學測量：將12個小鼠IL18-BP-Fc（目錄號122-BP，R&D）之兩倍連續稀釋液（自256 nM開始，稀釋於運行緩衝液中）以30 µl/min注入所有通道達180秒。監測結合蛋白與捕獲抗體之解離達1000秒。在各循環之後，以10 µl/min注入甘胺酸-HCl pH 1.7達60秒，使晶片表面再生。使用Biacore T100評估軟體對所得感測圖進行處理及雙重參照。在適當的情形下，感測圖係與簡單的1:1動力學結合模型擬合。 藉由ELISA 阻斷mIL18-BP-mIL-18 交互作用
藉由ELISA測試來自Biorad之抗小鼠IL18-BP Ab對小鼠IL18-BP His融合蛋白與IL-18 (Sino Biological)結合之抑制作用。將IL18-BP His融合蛋白塗佈於高結合盤之孔上在4°C下隔夜（2.5 µg/ml，50 µl/孔體積）。將經塗佈之盤用PBS潤洗一次，並與250 µL阻斷緩衝液（於PBS中之2.5%脫脂牛奶）在室溫(RT)下培養2 hr。將緩衝液移除，將盤洗滌並與來自Biorad之抗小鼠IL18-BP Ab之連續稀釋液（1:2，5-0.04 µg/ml，50 µL/孔）在RT下培養30 min。將盤洗滌並與阻斷緩衝液中之生物素化小鼠IL-18（1 µg/ml，50 µL/孔體積）在RT下培養1hr。將盤洗滌，並添加HRP接合之二級抗體（50 µL/孔），在RT下培養1 hr。ELISA信號係如上所述產生。阻斷係根據生物素化小鼠IL-18與IL18-BP-His蛋白在Ab存在下之結合信號相較於同型對照存在下之結合信號的減少而計算。 體外mIL18-BP-mIL-18 交互作用之阻斷
依照製造商之說明，使用EasySep™小鼠T細胞單離套組將小鼠CD3 +T細胞自新鮮採集的C57BL/6小鼠脾臟中單離，並以0.8*10^6個細胞/ml鋪於塗佈有抗CD3 (10 µg/ml)之T-75 cm 2燒瓶上。補充抗CD28 (1 µg/ml)，並將細胞在37°C、5% CO 2下培養3天。隨後採集細胞、洗滌並在rmIL-12 (2 ng/ml)存在下額外培養24小時。第二天，使IL-18及IL-18 BP在37°C、5% CO2下於96孔盤中（25 µl/孔）複合30分鐘，並添加抗IL-18 BP mAb（連續稀釋，25 µl/孔）達額外30分鐘。採集細胞、洗滌且補充有rmIL-12（最終濃度0.1 ng/ml），並添加至含有IL-18/IL-18 BP/抗IL-18 BP之孔中（40K/25 µl/孔）在37°C、5% CO2下達24小時。培養24 h後，收集上清液，藉由小鼠Th1/Th2/Th17細胞珠陣列(CBA, BD Biosciences)進行IFNg分泌分析。 結果： 抗小鼠IL18-BP Fab 產生
淘選係在BioRad執行，使用與hIgG1蛋白Fc融合之小鼠IL18-BP進行3輪選擇，並針對非相關的經Fc標記之對照蛋白質（重組小鼠IL-15R α Fc嵌合蛋白，R&D，目錄號551-MR-100）進行反選擇，用於除盡非特異性抗體。
在第一次篩選中，藉由ELISA檢定檢測約360個殖株與小鼠IL18-BP對非相關蛋白質之結合。在約360個殖株中之150個經識別為小鼠IL18-BP之陽性結合物。對前95個ELISA陽性殖株之二次篩選包括使用生物膜干涉(BLI)技術在無標示、浸入式生物感測器平台(ForteBio Octet® RED384)上進行koff排序，其中基於最慢的Ab速率進行排序。ELISA之確認性篩選產生41個獨特的Fab陽性結合物。將Fab純化，並藉由ELISA證實其與小鼠IL18-BP之結合。藉由對小鼠IL18-BP蛋白之親和力測量、阻斷活性、及分倉（ELISA，數據未顯示），對41個Fab進一步分析。識別出屬於同一倉的十一個Fab，顯示出高阻斷及結合活性。
BioRad將Fab轉化為全長免疫球蛋白。將前6個Fab（AbD35357、AbD35327、AbD35346、AbD35328、AbD35350、AbD35344）轉化為小鼠IgG1 D256A。 mAb 性能之分析 藉由ELISA 測量對小鼠IL18-BP 蛋白之親和力
藉由ELISA分析BioRad之6種經純化mAb對小鼠IL18-BP之親和力。如圖16所示，抗小鼠IL18-BP，AbD35328（亦稱為「AB-837」、「837」、「Ab837」）結合小鼠IL18-BP His融合蛋白(2.5 µg/ml)，Kd值係0.4 nM。 抗小鼠IL18-BP (AbD35328) 之SPR 動力學測量
抗小鼠IL18-BP mAb (AbD35328)與小鼠IL18-BP-Fc蛋白之結合係展示於圖17中。對於此種交互作用，k off常數低於儀器之偵測極限(＜10^-9 1/S)，且ka=4.93*10^4 1/M*s。KD值無法唯一判定，估計值低於1*10^-12M。 mAb 在功能性阻斷mIL18-BP-mIL-18 交互作用中之性能分析
藉由ELISA分析BioRad之6種經純化mAb對小鼠IL18-BP之阻斷活性。如圖18所示，相較於同型對照，抗小鼠IL18-BP Ab（1:2, 5-0.04 µg/ml-0.04 µg/ml，於PBS中之2.5%脫脂牛奶）顯示出劑量依賴性阻斷效應。抗小鼠IL18-BP (AbD35328)之IC50值係3.3 nM（圖19）。 體外T 細胞活化檢定中mAb 阻斷mIL18-BP-mIL-18 交互作用之性能分析
在T細胞活化檢定中評估BioRad之經純化mAb針對小鼠IL18-BP的功能性阻斷活性。如圖20所示，相較於同型對照，抗小鼠IL18-BP Ab (AbD35328)藉由增強IFN g分泌顯示出劑量依賴性阻斷效應。抗小鼠IL18-BP之EC50值係7.9 nM（圖21）。 實例17 ：抗IL-18BP 作為單一療法及與免疫檢查點阻斷劑組合之功效
本實例描述抗小鼠IL18-BP mAb治療作為單一療法或與免疫檢查點阻斷劑組合，在CT26小鼠類結腸癌模型、B16/Db-hmgp100黑色素瘤模型、MC38OVA dimCRC模型、及E0771三陰性乳癌(TNBC)模型中之功效。 材料及方法腫瘤激發(Tumor Challenge)實驗：
CT26結腸癌係購自ATCC (CRL-2638)。將細胞培養於含有10% FBS (Biological Industries, 04-127-1A)及100 µg/mL青黴素/鏈黴素(Biological Industries, 03-031-1B)之RPMI 1640 (Biological Industries, 01-100-1A)中。對於腫瘤植入，採集細胞並洗滌、計數、懸浮於冷的RPMI 1640中並置於冰上。將BALB/c小鼠（(雌性，8週) Envigo）經腹膜內注射10%氯胺酮(Clorketam; SAGARPA Q-7090-053)及10%塞拉嗪(Xylazine) (Sedaxylan ;BE-V254834)混合物而麻醉。接下來，將小鼠背部剃毛並用70%乙醇溶液消毒。將腫瘤細胞以50 µl的2.5×10 5個CT26細胞皮下注射到小鼠右側腹。
B16/Db-hmgp100細胞係由Hanada博士等人（HHS機構）友情提供並獲得NIH授權。B16/Db-hmgp100細胞係藉由B16F10與H-2Db及編碼嵌合小鼠gp100（由人類gp100 25-33及小鼠gp100之其餘部分組成）之反轉錄病毒的雙轉導而產生。將細胞培養於含有10% FBS (Biological Industries, 04-127-1A)、100 μg/mL青黴素/鏈黴素(Biological Industries, 03-031-1B)、1%麩胺酸(Life Technologies, 35050-038)、1%丙酮酸鈉(Biological Industries, 03-042-1B)、0.01% 2-巰基乙醇(Life Technologies, 31350-010)、及10 µg/ml殺稻瘟菌素(InvivoGen, ant-bl-05)之RPMI 1640 (Biological Industries, 01-100-1A)中。將1×10 5個B16/Db-hmgp100細胞皮下注射到小鼠右側腹。
在CT26及B16/Db-hmgp100兩者模型中，mAb投予在腫瘤接種後第4天（單一治療）或第7天（組合治療）開始，此時腫瘤體積係30至50 mm 3；並以最終體積/注射200 µl腹膜內(i.p.)投予，持續3週，共投予6次。每2-3天用電子卡尺測量腫瘤生長，並報告為0.5 X W 2X L mm 3。在研究終止或任何以下臨床終點時將小鼠用CO 2犧牲：腫瘤體積≥1800 mm 3、腫瘤潰爛、體重減輕≥20%、或出現垂死狀態。
MC38OVA dim細胞（殖株UC10 4H10）係來自Peter MacCallum癌症中心。細胞係生長於含有10% FBS、1%麩胺酸、1%丙酮酸鈉、0.01% 2-巰基乙醇、1%青黴素-鏈黴素、1% HEPES、1% NEAA之DMEM或RPMI培養基中。將MC38OVA dim細胞（10 6個或1.2x10 6個）以50 µl/小鼠皮下注射到小鼠右側腹。在腫瘤體積係130至260 mm3時，將小鼠隨機指派至治療組中。將小鼠用15 mg/kg Synagis同型對照或用每週注射兩次之AB-837 mAb治療，總共6次治療。每2-3天用電子卡尺測量腫瘤生長，並報告為0.5 X W 2X L mm 3。實驗終點定義為1800 mm 3的腫瘤體積。將排除測量期間體重減輕超過10%或較初始體重減輕20%的小鼠。
E0771鼠類TNBC模型係購自CH3 BioSystems（產品：#94A001）。將細胞培養於含有10% FBS (Biological Industries, 04-127-1A)及100 μg/mL青黴素/鏈黴素(Biological Industries, 03-031-1B)之RPMI 1640 (Biological Industries, 01-100-1A)中。對於腫瘤植入，採集細胞並洗滌、計數、懸浮於10 7個細胞/ml冷的RPMI 1640中並置於冰上。將C57BL/6小鼠（(雌性，8週) Envigo）經腹膜內注射10%氯胺酮(Clorketam; SAGARPA Q-7090-053)及10%塞拉嗪(Xylazine) (Sedaxylan ;BE-V254834)混合物而麻醉。接下來，將含有50 µl 5×10 5個E0771細胞及50 µl Matrigel Matrix (Corning; 354234)之混合物注射到腫瘤細胞中，原位注射到C57BL/6小鼠的右側第三乳腺脂肪墊中。在腫瘤體積係330 mm 3時，將小鼠隨機指派至n=10的治療組中。將小鼠用15 mg/kg Synagis D265A同型對照、AB-837 mIgG1-D265A、及與抗PD-L1組合治療。mAb係每週注射兩次，共6次治療。每2-3天用電子卡尺測量腫瘤生長，並報告為0.5 X W2 X L mm3。實驗終點定義為1800 mm 3的腫瘤體積。將排除測量期間體重減輕超過10%或較初始體重減輕20%的小鼠。 抗體：
本研究使用之噬菌體展示抗小鼠IL18-BP mAb (AbD35328)經工程改造為小鼠IgG1 D265A同型單株抗體(mAb)，在ELISA檢定中顯示可與IL18-BP結合，並阻斷mIL-18與IL18-BP之結合。此研究中使用之mIgG1骨架上之抗小鼠PD-L1抑制劑係mAb YW243.55.S70，其描述於WO 2010/077634中（重鏈及輕鏈可變區序列分別顯示於WO 2010/077634之SEQ ID NO: 20及21），具有其中所揭示之序列。
所有mAb皆配製於無菌PBS中，且內毒素含量低(＜0.05 EU/mg)。 表4. 經測試之mAb 。
1 小鼠IgG1
2 小鼠IgG1 D265A
3 基準抗PD-L1(mIgG1) YW243.55.S70
4 抗IL18-BP mAb小鼠IgG1 D265A AbD35328
5. 抗PVRIG mAb 407 mAb小鼠IgG1 BOJ-5G4-F4
6. 抗TIGIT mAb小鼠IgG1 CPA.9.086 M1
CT26 及B16/Db-hmgp100 模型之研究設計單一治療
六至八週齡的雌性BALB/c（對於CT26）或C57BL/6（對於B16/Db-hmgp100及E0771）小鼠係購自Envigo，並在實驗開始前在SPF動物設施中適應1週。將小鼠麻醉、剃毛並皮下接種50 µl的2.5x105個CT26或1x105個B16/Db-hmgp100或5x105個E0771細胞腫瘤細胞。
在腫瘤接種後第4天，將小鼠用在接種後第4、7、11、14、18、及21天注射之mAb（如下所詳述）治療。每2-3天用卡尺測量腫瘤生長。 表5. 治療組。
組編號 治療/mAb 劑量(mg/Kg) 劑量數目 體積/ 劑量( ul)
1 mIgG1同型對照 5 6 200
2 mIgG1- D265A同型對照 15 6 200
3 抗PD-L1 mIgG1 5 6 200
4 抗IL18-BP mAb mIgG1 D265A 15 6 200
5 抗TIGIT mAb mIgG1 10 6 200
6 抗PVRIG 407 mAb mIgG1 10 6 200
組合治療
對於抗IL18-BP與抗mPD-L1 mAb組合治療，在腫瘤接種後第 7天，將小鼠隨機指派至n=10的治療組中，如下所述。將小鼠用在腫瘤接種後第7、11、14、18、21、及25天注射之mAb（如下所詳述）治療。對於抗IL18-BP與抗TIGIT或抗PVRIG之組合，在接種後第4天起始投予抗IL18-BP、抗PVRIG、抗TIGIT、及對照Synagis mIgG1-D265A（抗IL18-BP）及mIgG1（抗PVRIG、抗TIGIT）。將小鼠用在接種後第4、7、11、14、18、及21天注射之mAb（如下所詳述）治療。 表6. 治療劑量。
組編號 治療/mAb 1 劑量(mg/Kg) 治療/mAb 2 劑量(mg/Kg) 劑量數目 體積/ 劑量(µl)
1 mIgG1同型對照 5 mIgG1 D265A同型對照 15 6 200
2 抗PD-L1 mIgG1 5 mIgG1 D265A同型對照 15 6 200
3 抗PD-L1 mIgG1 5 抗IL18-BP mAb mIgG1 D265A 15 6 200
4 抗TIGIT mAb mIgG1 10 抗IL18-BP mAb mIgG1 D265A 15 6 200
5 抗PVRIG 407 mAb mIgG1 10 抗IL18-BP mAb mIgG1 D265A 15 6 200
E0771 模型之研究設計
在腫瘤體積係330 mm3時，將小鼠隨機指派至n=10的治療組中。將小鼠用15 mg/kg Synagis D265A、837 mIgG1-D265A、及與抗PD-L1組合治療，mAb每週注射兩次，總共6次治療。 表7. 治療組。
組編號 治療/mAb 劑量(mg/Kg) 劑量數目 體積/ 劑量( ul)
1 mIgG1同型對照 5 6 200
2 mIgG1- D265A同型對照 15 6 200
3 抗PD-L1 mIgG1 5 6 200
4 抗IL18-BP mAb mIgG1 D265A 15 6 200
表8. 治療劑量。
組編號 治療/mAb 1 劑量(mg/Kg) 治療/mAb 2 劑量(mg/Kg) 劑量數目 體積/ 劑量(µl)
1 mIgG1同型對照 5 mIgG1 D265A同型對照 15 6 200
2 抗PD-L1 mIgG1 5 mIgG1 D265A同型對照 15 6 200
3 抗PD-L1 mIgG1 5 抗IL18-BP mAb mIgG1 D265A 15 6 200
統計分析：
使用JMP (Statistical Discoveries TM)軟體對選定之組對進行重複測量的雙向變異數分析(Two-way ANOVA)。腫瘤生長測量之分析係藉由比較所有研究動物存活的最後一天所測得之腫瘤體積來執行。無腫瘤小鼠百分比之統計差異係藉由Log Rank Mantel–Cox測試來判定。P ＜ 0.05的值視為顯著的。* p＜0.05；** p＜0.01；*** p＜0.001。對於各實驗，執行的重複次數及每組動物之數目描述於對應的（多個）圖例中。 結果抗IL18-BP及抗mPD-L1單一療法在同基因CT26小鼠腫瘤模型中之活性
評估抗IL18-BP單一療法在小鼠同基因CT26腫瘤模型中之效應，並與抗mPDL1單一療法進行比較。將小鼠用同型對照抗體（mIgG1或mIgG1 D265A）或抗PD-L1 mIgG1抗體(YW243.55.S70)或mIgG1 D265A抗IL18-BP (mAb AbD35328)治療。
在CT26結腸癌之半治療治療模型中，抗PD-L1單一療法導致的腫瘤生長率類似於mIgG1同型對照治療，但對小鼠存活率具有統計顯著的益處。使用抗IL18-BP mAb作為單一療法治療之組中的小鼠顯示出與用mIgG1 D265A同型對照治療之小鼠類似的腫瘤生長率，但沒有存活益處（圖22）。 抗IL18-BP與抗PD-L1之組合在同基因CT26小鼠腫瘤模型中之活性
接下來，評估抗IL18-BP與抗PD-L1組合療法在小鼠同基因腫瘤模型中之功效。
在CT26結腸癌之治療模型中，在接種後第7天起始投予抗PD-L1與對照mIgG1 D265A同型治療，其不會影響腫瘤生長，而將抗IL18-BP mAb與抗PD-L1組合使用則會引發顯著的TGI（52%，P=0.03，圖22）、較高的反應率（10個個體中之4個展示出低於200 mm 3之腫瘤體積），其轉換成具有統計顯著益處的小鼠存活率（P＜0.05，圖22），並促進抗腫瘤活性之增加及持久。 IL18-BP單一療法在MC38OVA dim小鼠腫瘤模型中之活性
為了驗證抗小鼠IL18BP (AB-837)作為單一藥劑之抗腫瘤活性，對接種MC38OVA dim腫瘤細胞之小鼠投予15 mg/kg的AB-837或同型對照。AB-837單一療法導致58% TGI（p＜0.005，圖78A）。 抗IL18-BP及抗mPD-L1單一療法在同基因B16/Db-hmgp100小鼠腫瘤模型中之活性
吾人進一步探討在免疫浸潤較少的小鼠黑色素瘤腫瘤模型B16/Db-hmgp100中，AB-837作為單一療法或與抗PD-L1 Ab組合之抗腫瘤活性。
將小鼠用同型對照抗體（mIgG1或mIgG1 D265A）或抗PD-L1 mIgG1抗體(YW243.55.S70)或mIgG1 D265A抗IL18-BP (mAb AbD35328)治療。
在B16/Db-hmgp100黑色素瘤腫瘤模型中，抗PD-L1單一療法導致的腫瘤生長率類似於mIgG1同型對照治療，但對小鼠存活不具有益處。相較於mIgG1 D265A同型對照，使用抗IL18-BP mAb作為單一療法治療之組中的小鼠顯示出31.4%的腫瘤生長抑制，其具有統計顯著性（p=0.09，圖23）。在額外實驗中，使用抗IL18-BP mAb治療導致54% TGI（p＜0.005，圖78B）。 抗IL18-BP與抗PD-L1之組合在同基因B16/Db-hmgp100小鼠腫瘤模型中之活性
接下來，評估抗IL18-BP與抗PD-L1組合療法在B16/Db-hmgp100小鼠同基因腫瘤模型中之活性。
在B16/Db-hmgp100黑色素瘤腫瘤模型中，在接種後第7天起始投予抗PD-L1與對照mIgG1 D265A同型對照治療，相較於用同型對照治療之小鼠，腫瘤生長抑制率係30.8%（P=0.07，圖23）。而抗IL18-BP mAb與抗PD-L1之組合相較於抗PD-L1單一療法可引發31.1%的TGI，相較於用同型對照治療之小鼠，具有顯著的TGI (52%, P=0.0023)（圖23）。相較於對照組，僅抗IL18-BP mAb與抗PD-L1組合治療之小鼠的存活率達到統計顯著的改善（P＜0.05，圖23）。 抗IL18-BP與抗TIGIT之組合在B16/Db-hmgp100同基因小鼠腫瘤模型中之活性
接下來，吾人評估抗IL18-BP與抗TIGIT組合療法在B16/Db-hmgp100小鼠同基因腫瘤模型中之活性。
相較於用同型對照治療之小鼠，使用抗IL18-BP mAb或抗TIGIT mAb作為單一療法治療之小鼠分別顯示出34% TGI (p=0.0594)及43% TGI (p=0.0105)（圖24）。然而，當小鼠用抗IL18-BP及抗TIGIT mAb之組合治療時，相較於抗IL18-BP及抗TIGIT單一療法，TGI分別是35%及24%。此外，相較於用同型對照mAb治療之組，此等小鼠展現出57%的TGI（p=0.02，圖24）。此效應亦轉換成顯著改善的小鼠存活率（p=0.013，圖24）。 抗IL18-BP與抗PVRIG之組合在B16/Db-hmgp100同基因小鼠腫瘤模型中之活性
亦評估抗IL18-BP與抗PVRIG組合療法在B16/Db-hmgp100小鼠同基因腫瘤模型中之活性。
儘管用抗IL18-BP mAb單一療法治療之小鼠展現出34%的TGI (p=0.0594)，但用抗PVRIG治療之小鼠具有與用同型對照mAb治療之小鼠相當的腫瘤生長（圖25）。沒有一種單一療法能顯著改善小鼠之存活率。然而，當小鼠用抗IL18-BP及抗PVRIG mAb之組合治療時，相較於用同型對照治療之小鼠，顯示出統計顯著的TGI (44%, p=0.0034)，其進一步顯著改善小鼠存活率(p=0.0034)（圖25）。 抗IL18-BP作為單一療法及與抗mPD-L1組合在原位E0771小鼠腫瘤模型中之活性
相較於Synagis D265A同型對照，在E0771荷瘤小鼠中接受抗小鼠IL18 bp mAb (837 mIgG1-D265A)單一療法導致83%的TGI (P＜0.0001)（圖72）。837 mIgG1-D265A與aPD-L1之組合治療導致增強的反應，相較於作為單一療法之AB-837投予，TGI係61% (p=0.029)，而相較於同型對照，TGI係91%（圖72，p＜0.0001）。此等抗腫瘤反應轉換成顯著的存活益處：相較於837 mIgG1-D265A單一療法(P=0.01)，837 mIgG1-D265A與抗PD-L1之組合顯著(P=0.004)增加小鼠之存活率。 結論
本實例中描述之研究評估在3種同基因小鼠腫瘤模型CT26、B16/Db-hmgp100、及E0771中，針對IL18-BP之mAb作為單一療法或與抗PD-L1、抗TIGIT、或抗PVRIG mAb組合之體內抗癌功效。
在CT26及B16/Db-hmgp100腫瘤模型中，在最小疾病設置（即第4天起始治療）中使用15 mg/kg（300 µg/小鼠）抗IL18-BP作為單一療法進行治療，導致TGI增加（0至35%），但不具有統計顯著的存活優勢。然而，當抗IL18-BP mAb與抗PD-L1、抗TIGIT、或抗PVRIG治療組合投予時，藉由統計顯著的腫瘤生長抑制及小鼠存活率之增加展現出協同作用。
在E0771腫瘤模型中，相較於對照組，使用15 mg/kg（300 µg/小鼠）抗IL18BP Ab作為單一療法進行治療導致顯著的抗腫瘤活性(83% TGI)。當與抗PD-L1治療組合投予時，抗IL-18BP Ab之活性進一步增加。
在MC38OVA dim腫瘤模型中，相較於對照組，使用15 mg/kg（300 µg/小鼠）抗IL18BP Ab作為單一療法進行治療導致顯著的抗腫瘤活性(58% TGI)。
抗IL18-BP與抗mPD-L1組合治療之體內效應亦在MC38ova中得到證明（數據未顯示）。 實例18 ：抗IL18BP MAB 單一療法在E0771 腫瘤模型中誘導免疫記憶
本實例描述抗IL18-BP Ab誘導免疫記憶之能力。 材料及方法腫瘤激發實驗：
E0771鼠類TNBC模型係購自CH3 BioSystems（產品：#94A001）。將細胞培養於含有10% FBS (Biological Industries, 04-127-1A)及100 μg/mL青黴素/鏈黴素(Biological Industries, 03-031-1B)之RPMI 1640 (Biological Industries, 01-100-1A)中。對於腫瘤植入，採集細胞並洗滌、計數、懸浮於10 7個細胞/ml冷的RPMI 1640中並置於冰中。將C57BL/6小鼠（(雌性，8週) Envigo）經腹膜內注射10%氯胺酮(Clorketam; SAGARPA Q-7090-053)及10%塞拉嗪(Xylazine) (Sedaxylan ;BE-V254834)混合物而麻醉。接下來，將含有50 µl 5×10 5個E0771細胞及50 µl Matrigel Matrix (Corning; 354234)之混合物中的腫瘤細胞原位注射到C57BL/6小鼠的右側第三乳腺脂肪墊中。mAb投予在腫瘤接種後第11天開始，此時腫瘤體積係270 mm 3；並以最終體積/注射200 µl腹膜內(i.p.)投予，持續3週，共6次投予。每2-3天用電子卡尺測量腫瘤生長，並報告為0.5 X W2 X L mm3。在研究終止或任何以下臨床終點時將小鼠用CO2犧牲：腫瘤體積≥1800 mm 3、腫瘤潰爛、體重減輕≥20%、或出現垂死狀態。 腫瘤再激發實驗：
對於腫瘤再激發實驗，在初次接種E0771後九十天，將用抗小鼠IL18-BP mAb治療並排斥原發性腫瘤之小鼠、及年齡匹配的初始雌性C57BL/6小鼠，在其左側第三乳腺脂肪墊中用5×10 5個E0771細胞進行再激發（圖27A）。如上所述監測腫瘤生長。 結果： 抗IL18-BP及抗mPD-L1單一療法在同基因E0771原位小鼠腫瘤模型中之活性
在E0771腫瘤模型中，將小鼠用抗PD-L1 mIgG1抗體(YW243.55.S70)或用抗IL18-BP mIgG1 D265A抗體(mAb AbD35328)治療。
在原位E0771 TNBC模型中，相較於mIgG1同型對照治療，抗PD-L1單一療法之腫瘤生長抑制率係38.2% (p=0.72)，並有利於小鼠存活(p=0.0362)。相較於mIgG1 D265A同型對照，使用抗IL18-BP mAb作為單一療法治療之組中的小鼠顯示出94.2% (p=0.0113)的腫瘤生長抑制（圖26）。此抗腫瘤反應轉換成統計顯著的存活益處（p=0.0011，圖26）。當比較抗IL18-BP與抗PD-L1之治療效應時，偵測到腫瘤生長抑制率係81.6%。 E0771原位腫瘤再激發模型評估免疫記憶之生成
由於抗IL18-BP mAb單一療法會誘導小鼠對E0771腫瘤之完全排斥，因此吾人藉由對無明顯殘留腫瘤之小鼠（完全反應者）進行再激發來檢測此治療是否會誘導免疫記憶之生成。將小鼠用15 mg/kg抗IL18-BP Ab或同型對照治療。在原發性腫瘤接種兩個月之後，將無明顯殘留腫瘤之小鼠及未經腫瘤處理(tumor-naïve)之年齡匹配小鼠重新接種5x10 5個E0771腫瘤細胞。十隻未經腫瘤處理之小鼠中有五隻出現腫瘤進展，而完全排斥原發性腫瘤之小鼠(5/5)中沒有一隻出現腫瘤（圖27A、圖27B、及圖27C）。在額外實驗中，經再激發之小鼠的8/9會排斥腫瘤，而未經腫瘤處理之小鼠只有1/9會排斥腫瘤。相較於未經腫瘤處理之小鼠，經再投藥之小鼠的脾臟重量顯著增加（P=0.004，圖27D）。此外，相較於未經腫瘤處理之小鼠，吾人發現經再投藥之小鼠中CD44+CD62L-CD8+效應T細胞（22%，p=0.02，圖5E）及CD19+細胞（20%，p=0.04，圖27F）之百分比顯著增加。未偵測到其他統計顯著的差異。總體而言，此等結果顯示，在小鼠E0771模型中，抗IL18 bp單一療法會誘導系統性記憶。 實例19 ：抗IL18BP 之投予預期比經工程改造之IL-18 具有更好的治療潛力 材料及方法：小鼠抗體及重組蛋白
所有mAb及重組蛋白皆配製於無菌PBS中，且內毒素含量低(＜0.05 EU/mg)。 細胞培養：
在接種前九天，將小瓶中之MC38ova dim細胞解凍，並置於含有10% FBS、1%麩胺酸、1%丙酮酸鈉、1% HEPES、1% NEAA、0.01% 2-巰基乙醇、1%青黴素-鏈黴素之RPMI培養基中。在以300xg離心8min後，將細胞沉澱物再懸浮，計數，並接種於T175燒瓶中。在第-7天、第-5天、及第-2天，將細胞剝離並以6至8*10 6個細胞/T175燒瓶重新接種。在接種當天，將細胞剝離，以300xg離心10min，通過40 µM細胞濾器過濾，並再懸浮於RPMI中。 小鼠之接種：
實驗係在C57Bl/6（雌性，6-8週，Envigo）中執行。將小鼠經腹膜內注射10%氯胺酮及10%塞拉嗪混合物而麻醉。接下來，將MC38ova細胞（1.2x10 6個）以50 µl/小鼠皮下接種到小鼠右側腹。每2-3天用電子卡尺測量腫瘤生長，並報告為0.5 X W 2X L mm 3。 對荷瘤小鼠投予抗mIL18BP及經工程改造之mIL-18：
在腫瘤體積係~120 mm 3時（第9天），將小鼠隨機指派至治療組中。將小鼠用Synagis小鼠IgG1、k同型對照15 mg/kg (IP)、抗mIL18 bp 837 mIgG1 15 mg/kg (IP)、PBS (SC)、或經工程改造之IL-18 (SC) 0.32 mg/kg治療。每週注射兩次，共6次治療。每2-3天用卡尺測量腫瘤生長。每週將小鼠稱重。將小鼠在第4次治療之前、在第4次治療之後4小時、及在第4次治療之後24小時抽血。藉由流式微珠陣列(CBA)小鼠發炎套組（BD，目錄號552364）分析血清中IFNg、TNFα、MCP1、IL6之存在。在第4次治療之後24小時自小鼠採集脾臟並稱重。對於IL15實驗，將小鼠用單次劑量的0.5 µg、1.5 µg IL15、或用0.5 µg IL15及2.33 µg IL15R之混合物治療。 脾臟處理及FACS分析：
將脾臟壓碎至40 um過濾器中並使紅血球裂解。將單細胞懸浮液接種到96孔V底盤中。使用Fixable Viability Stain 450（BD Bioscience目錄號562247）對細胞活力進行標示並排除死細胞。為了阻斷Fcγ受體，將細胞與10 μg/mL的經純化大鼠抗小鼠CD16/CD32（Mouse BD Fc Block™，BD Bioscience目錄號553142）於冷的1xPBS緩衝液中培養10分鐘。將各種免疫群體用抗小鼠抗體染色（表17）。在洗滌之後（1% BSA、0.1%疊氮化鈉，於PBS中），在FACS Fortessa細胞儀(BD Bioscience)上獲取細胞。使用FlowJo進行分析。圈選標記(Gating marker)顯示於表18中。 表17. FACS 小組。
標記 螢光團 供應商 目錄號 殖株
淋巴樣 活力 450 BD Bioscience 562247
CD45 BV605 Biolegend 103140 30-F11
CD3ε BUV395 Biolegend 563565 145-2C11
CD4 BV785 Biolegend 100453 GK1.5
CD8a PE/Cy7 Biolegend 100722 53-6.7
CD19 PerCP/Cy5.5 Biolegend 115534 6D5
NK1.1 FITC Biolegend 108706 PK136
CD107a APC/Cy7 Biolegend 121616 1D4B
CD69 BV510 Biolegend 104532 H1.2F3
IL18Ra AF647 Biolegend 157908 A17071D
表18. 圈選標記。
細胞亞群名稱 圈選標記
免疫細胞 CD45 +
T細胞 CD45 +CD3 +
CD4 +T細胞 CD45 +CD3 +CD4 +
CD8 +T細胞 CD45 +CD3 +CD8 +
NK CD45 +NK1.1 +
NKT CD45 +NK1.1 +CD3+
B細胞 CD45 +CD19 +
美國專利公開案第20190070262A1號中的經工程改造之IL-18（亦稱為DR-18）及mCS2（在US 2019/0070262 A1中列為SEQ ID NO: 61）顯示不與IL18-BP結合。DR-18之序列係顯示於下： HFGRLHCTTAVIRNINDQVLFVDKRQPVFEDMTDIDQSASEPQTRLIIYAYGDSRARGKAVTLSVKDSKMSTLSCKNKIISFEEMDPPENIDDIQSDLIFFQKRVPGHNKMEFESSLYEGHFLACQKEDDAFKLILKKKDENGDKSVMFTLTNLHQSHHHHHH (SEQ ID NO: 1920) 結果：用抗mIL18 bp及經工程改造之mIL-18治療之MC38ovadom荷瘤小鼠之分析：
當使用抗mIL18 bp治療小鼠時，類似於對照組，未觀察到體重減輕（圖73A）。當分析用抗mIL18 bp治療之小鼠血清時，未觀察到發炎細胞介素IFNg、TNFa、MCP1、及IL6之增加。相反地，用經工程改造之mIL-18治療之小鼠在第4次治療之後4小時，血清中IFNg、TNFa、MCP1、及IL6水平升高，而在第4次治療之後24小時，血清中IFNg水平升高（圖73B）。用經工程改造之mIL-18治療之小鼠在第4次治療之後4小時，血清中IL18水平非常高（IL18偵測方法亦識別出經工程改造之IL18），其在第4次治療之後24小時恢復至基線（圖73C）。在抗mIL18 bp第4次治療之後24小時採集的小鼠脾臟類似於自對照組採集的小鼠脾臟，而自用經工程改造之mIL-18治療之小鼠採集的脾臟相較於對照組平均大4.9倍（圖73D）。同樣地，自用不同濃度IL-15治療之小鼠採集的脾臟比對照組大（圖73E）。 經治療小鼠脾臟之免疫組成
當分析自經治療小鼠採集的脾臟細胞時，吾人觀察到，相較於對照小鼠，投予經工程改造之mIL-18的小鼠具有更多數目的CD45+免疫細胞以及CD3+ T細胞及CD19+ B細胞。相反地，用抗mIL18 bp Ab治療之小鼠脾臟中的此等細胞群略有減少（圖73F）。吾人亦偵測到脾臟CD8+、CD4+ T細胞、NK及NKT細胞上IL18Ra之表現增加（圖73G）。當檢測淋巴細胞之活化狀態時，相較於對照小鼠，用經工程改造之mIL-18治療之小鼠脾臟具有顯著更多的CD69+ CD4+ T細胞、CD69+ CD8 T細胞、CD69+ B細胞、CD107+ NK細胞、及CD69+CD107+ NKT細胞。此外，相較於對照，經工程改造之mIL-18會顯著增加活化標記之表現。與經工程改造之IL18相比，接受抗IL18 bp Ab治療相較於同型對照並沒有增加脾臟淋巴球之活化狀態。（圖73H至圖73I）。 實例20 ：在鼠類腫瘤模型中抗IL-18BP 抗體調節腫瘤微環境而不影響周邊
為了進一步了解小鼠抗IL-18BP Ab對腫瘤微環境及免疫周邊之影響，吾人研究自用AB-837單一療法治療之小鼠中單離出的腫瘤的免疫組成，並與用同型對照治療之MC38OVA dim腫瘤對照組進行比較。 材料及方法：小鼠抗體及重組蛋白
所有mAb及重組蛋白皆配製於無菌PBS中，且內毒素含量低(＜0.05 EU/mg)。 細胞培養
在接種前九天，將小瓶中之MC38OVA dim細胞解凍，並置於含有10% FBS、1%麩胺酸、1%丙酮酸鈉、1% HEPES、1% NEAA、0.01% 2-巰基乙醇、1%青黴素-鏈黴素之RPMI培養基中。在以300xg離心8min後，將細胞沉澱物再懸浮，計數，並接種於T175燒瓶中。在第-7天、第-5天、及第-2天，將細胞剝離並以6至8*10 6個細胞/T175燒瓶重新接種。在接種當天，將細胞剝離，以300xg離心10min，通過40 µM細胞濾器過濾，並再懸浮於RPMI中。 小鼠之接種
將C57BL/6小鼠（雌性，6至8wk，Envigo）經腹膜內注射10%氯胺酮及10%塞拉嗪混合物而麻醉。接下來，將MC38OVA dim細胞（1.2x10 6個）以50 µl/小鼠皮下接種到小鼠右側腹。每2-3天用電子卡尺測量腫瘤生長，並報告為0.5 X W 2X L mm 3。 對荷瘤小鼠投予抗mIL18BP
在腫瘤體積係~120 mm 3時（第9天），將小鼠隨機指派至治療組中。將小鼠用Synagis小鼠IgG1、k同型對照15 mg/kg (IP)、抗mIL18 bp 837 mIgG1 15 mg/kg (IP)治療。治療係每週接種兩次，共4次治療。每2-3天用卡尺測量腫瘤生長。每週將小鼠稱重。在第4次治療之前、第4次治療之後4小時、第4次治療之後24及48小時對小鼠進行採血。藉由ELISA（MBL，目錄號7625）分析血清之IL-18水平及IL18 bp水平（內部ELISA）。在第4次治療之後24小時自小鼠採集腫瘤。 MC38OVA dim腫瘤微環境之腫瘤免疫表型分型
將小鼠接種MC38OVA dim，並每週兩次用抗小鼠IL-18BP Ab或同型對照治療。收集腫瘤、脾臟、及血清。依照製造商之規程，使用人類腫瘤分離套組(Miltenyi Biotec)將腫瘤樣本用手術刀切成小塊並轉移至含有酶混合物之GentleMACs™ C管(Miltenyi Biotec)中。在解離之後，將樣本以300g離心8分鐘，且收集上清液。將細胞通過70μm過濾器過濾。將單細胞懸浮液接種到96孔V底盤中。使用Zombie Aqua viability dye (BioLegend)對細胞活力進行標示並排除死細胞。為了阻斷Fcγ受體，將細胞與10 μg/mL的抗CD16及抗CD32抗體(BD Bioscience)於冷的1xPBS緩衝液中培養10分鐘。將各種免疫群體用抗小鼠抗體染色（參見表9）。對於細胞介素染色，將細胞用50 ng/ml PMA、1 µg/ml離子黴素、及BFA刺激。接著，對細胞進行細胞外染色以用於膜標記，並在細胞內染色以用於細胞介素表現。在FACS Fortessa細胞儀(BD Bioscience)上獲取細胞。使用FlowJo進行分析。將收集之上清液以3130g離心10分鐘。離心後，回收上清液。藉由流式微珠陣列(CBA)小鼠發炎套組（BD，目錄號552364）分析腫瘤上清液及血清中IFNg之存在。 表9. FACS 染色小組在MC38ova dim 腫瘤模型中可識別不同的免疫細胞類型以用於免疫表型分型。
標記 螢光團 供應商
淋巴樣 活/死 BV510
CD45 BV605 Biolegend
CD3 BV421 Biolegend
CD4 BV785 Biolegend
CD8 PE-Cy7 Biolegend
CD19 PercpCy5.5 Biolegend
NK1.1 FITC Biolegend
CD44 PE Biolegend
CD62L APC Biolegend
骨髓 活/死 BV510
CD45（大鼠IgG2b，k） BV605 Biolegend
CD11b（大鼠IgG2b，k） PB Biolegend
Ly6C APC-Cy7 Biolegend
Ly6G BV785 Biolegend
F4/80 AF488 Bio-Rad
CD11c Percp-cy5.5 Biolegend
I-A/I-E APC Biolegend
CD24 AF700 Biolegend
CD103 PE-cy7 Biolegend
細胞介素 活/死 BV510
CD45 BV605 Biolegend
CD3 BV421 Biolegend
CD4 BUV395 BD
CD8 BV785 Biolegend
CD49b PerCP/Cy5.5 Biolegend
IFNg AF488 Biolegend
TNFa PE/cy7 Biolegend
IL2 PE Biolegend
結果：
當使用抗小鼠IL18BP治療小鼠時，在4次治療之後觀察到腫瘤生長抑制率係41.1%（圖74）。為了評估免疫組成，如材料及方法中所述採集腫瘤及脾臟，產生單細胞懸浮液，且將細胞用如表9所述之抗體小組染色。收集腫瘤上清液及血清並分析細胞介素濃度。抗IL-18BP Ab單一療法導致TME中CD3 +(+100%, p=0.007)及CD8 +(+85%, p=0.0087)T細胞數目增加（圖75A至圖75C）。此療法亦誘導腫瘤上清液中之IFNg+ (+76%, p=0.0519)濃度增加（圖75D）。檢查活化標記時，CD8+CD69+CD107+ (+168%, p=0.0005) T細胞（圖75E）以及CD107+ (+54%, p=0.0094) NK細胞（圖75F）顯著增加。在骨髓室中，DC細胞(+136%, p=0.0017)數目顯著增加，以及其上的MHC-II (+40%, p=0.0138)表現顯著增加（圖75G），指示啟動T細胞之能力可能會增加。當檢查經AB-837治療動物之脾臟或血清中的類似參數時，未觀察到免疫活化。僅偵測到輕微效應－NK細胞、巨噬細胞、及嗜中性球輕微減少，NK細胞上CD69表現增加，及NK細胞上mIL18Ra表現減少（圖75H）。在用抗IL-18BP Ab或同型對照治療之小鼠血清中未偵測到IFNg、TNFa、IL-6、IL-10、及MCP-1（圖75I）。總之，AB-837單一療法誘導穩健TME限制性免疫調節，而不具有周邊免疫活化。 實例21 ：抗IL-18BP AB 與化學療法之組合之功效 方法 抗體及奧沙利鉑投予
將1.2x10 6個MC38OVA dim小鼠腫瘤細胞以50 µl/小鼠皮下接種到C57Bl/6小鼠（雌性，6-8週，Envigo）的右側腹。每2-3天用電子卡尺測量腫瘤生長，並報告為0.5 X W 2X L mm 3。實驗終點定義為1800 mm 3的腫瘤體積。將排除測量期間體重減輕超過10%或較初始體重減輕20%的小鼠。
當腫瘤體積係110 mm 3時，將小鼠隨機指派至兩個治療組中：一組投予5 mg/kg奧沙利鉑（Sigma-Aldrich，目錄號09512）或對照組投予DDW。當腫瘤體積達到140 mm 3時，將各組小鼠指派至兩個不同的組中：用15 mg/kg抗小鼠IL18 bp抗體治療之組或同型對照治療之組。抗體係每週注射兩次，共6次治療（詳見表10）。 表10. 實驗治療組
組 Ab Ab 劑量(mg/kg) 奧沙利鉑劑量(mg/kg) N
1 DDW+Synagis mIgG1 15 0 10
2 DDW+抗IL18bp mIgG1 15 0 10
3 奧沙利鉑+Synagis mIgG1 15 5 10
4 奧沙利鉑+抗IL18bp mIgG1 15 5 10
結果 奧沙利鉑與抗IL18BP 抗體之組合在MC38ova 腫瘤模型中產生協同效應
為了研究抗IL18 bp mAb與奧沙利鉑組合使用在MC38ova dim小鼠腫瘤模型中之效應，將小鼠指派至表10所述之組中。如圖77所示，相較於使用單一藥劑之單一療法，投予組合療法導致協同抗腫瘤反應。相較於奧沙利鉑單一療法，奧沙利鉑與抗IL-18BP mAb組合療法產生72% TGI (p＜0.0001)，而相較於抗IL-18 bp mAb單一療法則產生42% TGI (p=0.24)。 實例22 ：E0771 腫瘤之免疫浸潤組成因使用抗IL-18BP 抗體之單一療法而改變
為了測試抗IL-18BP Ab單一療法在另一種模型中對TME之效應，吾人藉由流式、scRNA定序、及細胞介素剖析研究EO771腫瘤之免疫組成。 材料及方法：小鼠抗體及重組蛋白
所有mAb及重組蛋白皆配製於無菌PBS中，且內毒素含量低(＜0.05 EU/mg)。 細胞培養
E0771鼠類TNBC模型係購自CH3 BioSystems（產品：#94A001）。將細胞培養於含有10% FBS (Biological Industries, 04-127-1A)及100 μg/mL青黴素/鏈黴素(Biological Industries, 03-031-1B)之RPMI 1640 (Biological Industries, 01-100-1A)中。對於腫瘤植入，採集細胞並洗滌、計數、懸浮於10^7個細胞/ml冷的RPMI 1640中並置於冰中。 小鼠之接種
實驗係在C57Bl/6（雌性，6-8週，Envigo）中執行。將小鼠經腹膜內注射10%氯胺酮及10%塞拉嗪混合物而麻醉。接下來，將E0771細胞(5*10^5)與Matrigel (Corning, CLS354234)之1:1混合物以100 µl的體積原位接種到小鼠的左側乳房脂肪墊。每2-3天用電子卡尺測量腫瘤生長，並報告為0.5 X W 2X L mm 3。 對荷瘤小鼠投予抗mIL18BP
在腫瘤體積係~330 mm 3時，將小鼠隨機指派至治療組中。將小鼠用Synagis同型對照10 mg/kg (IP)或抗IL18BP 10 mg/kg (IP)治療。每週注射兩次，共3次治療。每2-3天用卡尺測量腫瘤生長。每週將小鼠稱重一次。在第3次治療之後24小時自小鼠採集腫瘤。 E0771腫瘤微環境之腫瘤免疫表型分型
將小鼠接種E0771並用抗IL-18BP Ab或同型對照治療，每週兩次，共三次。依照製造商之規程，使用人類腫瘤分離套組(Miltenyi Biotec)將腫瘤樣本用手術刀切成小塊並轉移至含有酶混合物之GentleMACs™ C管(Miltenyi Biotec)中。在解離之後，將樣本以300g離心8分鐘，且收集上清液。將細胞通過70 μm過濾器過濾。將單細胞懸浮液接種到96孔V底盤中。使用Zombie Aqua viability dye (BioLegend)對細胞活力進行標示並排除死細胞。為了阻斷Fcγ受體，將細胞與10μg/mL的抗CD16及抗CD32抗體(BD Bioscience)於冷的1xPBS緩衝液中培養10分鐘。將各種免疫群體用抗小鼠抗體染色（參見表11）。對於細胞介素染色，將細胞用50 ng/ml PMA、1 µg/ml離子黴素、及BFA刺激。接著，對細胞進行細胞外染色以用於膜標記，並在細胞內染色以用於細胞介素表現。對於FoxP3偵測，將細胞於FoxP3緩衝液(Thermo Fisher)中在4℃下固定並透化隔夜、洗滌並在冰上用細胞內抗FoxP3染色30分鐘。在洗滌之後（1% BSA、0.1%疊氮化鈉，於PBS中），在FACS Fortessa細胞儀(BD Bioscience)上獲取細胞。使用FlowJo進行分析。將收集之上清液以3130g離心10分鐘。離心後，回收上清液。藉由流式微珠陣列(CBA)小鼠發炎套組（BD，目錄號552364）分析腫瘤上清液及血清中IFNg之存在。 表11. FACS 染色小組：不同免疫細胞類型在E0771小鼠腫瘤模型中用於免疫表型分型。
標記 螢光團 供應商
淋巴樣 活/死 BV510
CD45 BV605 Biolegend
CD3 BV421 Biolegend
CD4 BV785 Biolegend
CD8 PE-Cy7 Biolegend
CD19 PercpCy5.5 Biolegend
NK1.1 FITC Biolegend
CD44 PE Biolegend
CD62L APC Biolegend
骨髓 活/死 BV510
CD45 BV605 Biolegend
CD11b PB Biolegend
Ly6C APC-Cy7 Biolegend
Ly6G BV785 Biolegend
F4/80 AF488 Bio-Rad
CD11c Percp-cy5.5 Biolegend
I-A/I-E APC Biolegend
CD24 AF700 Biolegend
CD103 PE-cy7 Biolegend
T reg 活/死 BV510
CD45 BV605 Biolegend
CD3 BV421 Biolegend
CD4 BV785 Biolegend
CD25 APC-Cy7 Biolegend
細胞介素 活/死 BV510
CD45 BV605 Biolegend
CD3 BV421 Biolegend
CD4 BUV395 BD
CD8 BV785 Biolegend
CD49b PerCP/Cy5.5 Biolegend
IFNg AF488 Biolegend
TNFa PE/cy7 Biolegend
IL2 PE Biolegend
顆粒酶B AF647 Biolegend
單細胞RNA-seq
將小鼠腫瘤經酶促分離以產生單細胞懸浮液，並使用Total-seq-c抗體(Biolegend)對各小鼠之個別樣本進行散列(hash)。對於各治療，將6隻小鼠集中，並將40,000個細胞裝載到Chromium單細胞5'晶片之各通道中，以使用Chromium X機器建立單細胞GEM。cDNA及隨後的庫係根據製造商之建議而製備。將來自兩個10x通道之庫匯集並使用Illumina NovaSeq S1一起定序。 單細胞基因表現分析預處理及QC
利用10X genomics之CellRanger單細胞軟體套件(V7.0) pipeline來識別細胞散列及VDJ特徵，並將讀數映射到參考轉錄組。採用經修飾基因參考（基於GENCODE）來比對讀數，從而產生唯一分子識別符(UMI)計數矩陣。使用scanpy包(V1.9.3)對數據進行下游分析，包括品質控制、聚類、細胞註釋、及識別差異表現基因(DEG)。
使用scanpy hashsolo蘊含對獲自43615個細胞之特徵條碼矩陣進行多工解訊(de-multiplex)。總共33,376個細胞經辨識為單細胞。
利用每個細胞之UMI總計數、每個細胞偵測到之基因數目、及粒線體基因計數之比例進一步評估細胞品質。將低品質細胞濾除，亦即基因小於200個或表現基因大於10%係粒線體基因之細胞。將在小於3個細胞中表現之基因移除。進一步分析排除共表現細胞類型特異性標記（雙聯體）之細胞，諸如Cd3e及Cd68，之後吾人保留28,366個細胞。在預處理期間注意到一些源自高度豐富的骨髓轉錄本的環境RNA，並在下游分析期間將其考慮在內。使用細胞條碼，可將scRNA-seq數據與scTCR-seq數據連結。由於注意到TCR陰性T細胞之高百分比，額外的品質控制發現一些低品質T細胞（TCR陰性、核醣體基因表現低、粒線體表現高），在下游分析之前將其濾除。為了進一步下游分析，對剩餘的25,713個細胞進行分析。 scRNA-seq聚類與註釋
將特徵計數標準化至觀察（每個細胞）總計數之中位數，並應用自然對數轉換。採用flavor「seurat」中之scanpy函數sc.find_variable_genes()，以識別在後續降維步驟中使用之高度可變基因(HVG)。將經log標準化數據進行縮放，接著基於HVG之表現矩陣進行主成分分析(PCA)，選擇前50個主成分(PC)進行基於圖形之聚類。計算n=15的最近鄰偵測，接著UMAP投影。數據經過leiden聚類，並基於習知標記表現對以下主要細胞類型進行註釋：單核球及巨噬細胞(Cd68)、DC (Zbtb46)、T細胞(Cd3e)、自然殺手(NK)細胞(Ncr1)、嗜中性球(S100a8)、基質(Col1a1)、及B細胞(Cd79a)。為了詳細的細胞類型分析，將主要細胞類型之亞群單離且重置為其原始計數。隨後，採用與初始數據相同的預處理pipeline使群體重新聚類。 結果流式細胞術及細胞介素分析
抗IL-18BP Ab單一療法導致CD45 +免疫細胞浸潤增加(47.8%, 0.03)。在淋巴室中，CD3 +(108.5%, p=0.015)、CD4 +(93.7%, p=0.014)、及CD8 +T細胞(108.3%, p=0.04)皆增加（圖79A）。此外，偵測到效應CD8 +T細胞之增加(97.5%, ns)（圖79B）。此係藉由增強IFNγ +、IL2 +、及顆粒酶B +自CD8 +T細胞的分泌、以及藉由誘導多功能顆粒酶B +IFNγ +CD8 +T細胞進一步支持(p＞0.05)（圖79C）。類似地，吾人偵測到IL2及TNFα自CD4 +T細胞的分泌增加（p＞0.05，圖79D）及分泌TNFα-及TNFα +IFNγ +之NK細胞的誘導（圖79E）。類似於MC38OVA dim，抗IL-18BP Ab誘導DC（特別是DC2）增加之趨勢，但程度較小（圖79F）。根據細胞群分析，吾人偵測到腫瘤上清液中之IFNg, TNFa及IL-12p70水平增強（圖79G）。有趣的是，抗IL-18BP Ab增加CXCL9（經IFNg調控之細胞介素）之分泌，其支持TME中更多的T細胞數目及IFNg誘導之反應（圖79H）。此外，抗IL-18BP Ab亦誘導MIP-1a分泌，其可能指示TME中之發炎反應（圖79H）。相較於同型對照，在經抗IL-18BP Ab治療之動物中Treg有增加之趨勢，但CD8/Treg比率亦增加（數據未顯示）。總之，抗IL-18BP Ab單一療法誘導顯著的TME調節。 scRNA分析
為了以高解析度進一步剖析IL-18BP對TME之阻斷效應，在接受抗IL-18BP Ab治療後對E0771腫瘤執行單細胞(sc)RNA定序(seq)。主要細胞類型係基於習知譜系標記進行註釋（圖80A）。抗IL-18BP治療增加T細胞之分率，對其他細胞類型不具有重大效應（圖80B），此與流式細胞術結果一致。
使所有T及NK細胞形成亞群且重新聚類，產生十個不同的T/NK聚類。對T細胞亞群之進一步檢測揭示治療後對TME T細胞群進行重塑（圖80C至圖80D）。治療後，效應多功能CD8 +T細胞群（表現穿孔素、多種顆粒酶、及IFNγ）以及增殖CD8+ T細胞會顯著增加，而初始CD8 +及CD4 +T細胞群之頻率則減少（圖80C）。重要的是，治療並未增加耗竭T細胞（圖80C）。
所有此等結果與流式細胞術結果一致，指示在T細胞室中初始T細胞轉變為細胞毒性CD8效應T細胞。
此外，TCR-seq分析顯示，IL-18BP阻斷後效應T細胞之增加亦與T細胞殖株擴增之增加相關聯（每個殖株擴增超過3個細胞），表明定向抗原特異性、潛在腫瘤特異性、免疫反應（圖80E）。重要的是，儘管如預期，耗竭T細胞在TME中經殖株擴增[1,2]，但藉由治療擴增之高GZMB及增殖CD8 +T細胞在各種T細胞亞型中展現出最明顯的殖株擴增（數據未顯示），表明藉由治療會擴增多功能腫瘤特異性殖株。
接下來，檢測單核球及巨噬細胞室，並識別出九個骨髓細胞亞群及六個DC細胞亞群（圖80F至圖80I）。IL-18BP阻斷誘導發炎性MHCII 高C1qa+及Nos2 +巨噬細胞顯著增加，以及活化DC顯著增加。因此，在經治療小鼠中，MHCII 低C1qa+巨噬細胞、抑制性Mrc1 +巨噬細胞、Ifit +MonoMacs、及低活化DC之顯著減少係明顯的（圖80F至圖80G）
此與IL-18BP阻斷後偵測到的發炎性骨髓細胞增加、發炎細胞介素（包括IFNγ、TNFα、IL-12p70、CXCL9、MIP1a）水平顯著增加、及腫瘤上清液中IL-1β減少係一致的（圖79G至圖79H）。抗IL18BP治療後，對上調差異表現基因(DEG)進行之基因集富集分析(GSEA)顯示，GO生物程序基因集中的基因顯著富集，諸如「對干擾素γ之反應」及「對細胞介素刺激之細胞反應」。相反地，抗IL18BP治療後，下調DEG與「膽固醇生物合成程序」或「固醇生物合成程序」等基因集顯著相關聯（圖80J）。抗IL18BP處理樣本之DC中的DEG在基因集「II型干擾素信號傳導」中最顯著富集（圖80K）。抗IL18BP治療後DEG下調，顯示出基因集諸如「膽固醇生物合成途徑」及「膽固醇生物合成途徑甲羥戊酸臂」中之富集。近來據報導，巨噬細胞、單核球、及DC中之膽固醇生物合成及甲羥戊酸途徑與此等細胞類型之免疫抑制及耐受狀態相關聯[3]。總之，抗IL-18BP Ab單一療法誘導明顯的TME局部調節及跨越多個適應性及先天免疫細胞之抗癌免疫。 抗小鼠IL18BP 單一療法抗腫瘤活性之免疫細胞依賴性
為了判定特定免疫細胞群在抗小鼠IL-18BP Ab對MC38OVA dim腫瘤效應之貢獻，吾人執行抗體介導之除盡研究。
方法
將小鼠指派至4組中，並在腫瘤接種前（第-1天）及在第6天、第13天、及第20天注射抗CD4 (GK1.5)、抗CD8 (Lyt 3.2)、抗NK1.1 (PK136)、或同型對照，總共4次治療。在腫瘤體積係120 mm 3時，將小鼠隨機指派至治療組中，每週兩次用抗IL-18BP或同型對照i.p.治療，共6次治療（額外細節參見表12）。 表12. 除盡抗體及抗小鼠IL-18BP IgG1-D265A 或Synagis mIgG1-D265A mAb 單一療法：向小鼠注射除盡抗體，並向每組10 隻小鼠注射15 mg/kg Synagis mIgG1-D265A 或抗IL-18BP mIgG1-D265A 抗體(IP) 。
組 抗體1 （除盡） 劑量(µg) 抗體2 （治療） 劑量(mg/kg) n
1 PBS Synangis D265A 9
2 同型ab 大鼠IgG1 100 10 9
3 抗CD4 (GK1.5) B.B-大鼠IgG2b 300 10 10
4 抗CD8 (Lyt 3.2) B.B-大鼠IgG1 100 10 8
5 抗NK1.1 (PK136) B.B-mIgG2a 50 10 10
6 PBS aIL-18BP 9
7 同型ab 大鼠IgG1 100 10 9
8 抗CD4 (GK1.5) 300 10 10
9 抗CD8 (Lyt 3.2) 100 10 8
10 抗NK1.1 (PK136) 50 10 10
結果
儘管IL-18BP阻斷之功效會因CD8 +T細胞之除盡而廢除，但對腫瘤體積的影響較小(15.8% TGI, p=ns)，且對小鼠存活沒有影響（圖81A），而CD4 +T細胞之除盡僅部分廢除抗IL-18BP Ab之抗腫瘤效應(35.6% TGI, p=0.0005)，並具有改善存活的趨勢（p=0.3，圖3B）。此外，抗IL-18BP Ab之抗腫瘤效應在NK細胞除盡之背景下完全消除（圖81C）。結論是，在MC38OVA dim腫瘤模型中，IL18BP阻斷活性取決於CD8 T細胞及NK細胞。 功能性抗IL18BP Ab 治療使人類腫瘤衍生細胞(tumor-derived cell, TDC) 樣本產生免疫反應性
為了測試抗IL-18BP Ab療法在內源性IL18及IL18BP水平存在下之效應，吾人研究Ab-71739治療對人類TDC之效應。 材料及方法：人類抗體
所有mAb皆配製於無菌PBS中，且內毒素含量低(＜0.05 EU/mg)。 TDC
將經切除之腫瘤樣品用手術刀切成1 mm的小塊並轉移至酶促消化混合物中（腫瘤分離套組，Miltenyi，130-095-929）。使用gentle MACS Dissociator (Miltenyi Biotec)根據製造商之說明進行分離。在機械旋轉及加熱下分離時間持續1h。將樣本以300g離心3 min，將沉澱物再懸浮於RPMI中，通過MACS SmartStrainer (70 μm)，並以300g離心7 min。將細胞以RBC再懸浮3 min，用RPMI 1640洗滌，轉移通過40 µm過濾器，並以300 g離心7 min。最後，將細胞再懸浮於PBS中，用台酚藍染色並計數。接著將樣本染色以進行流式細胞術分析，或將其再懸浮於含有10%二甲基亞碸之胎牛血清中，用於液態氮儲存。 離體腫瘤表型分型
為了進行免疫表型分型，將單細胞懸浮液接種到96孔V底盤中。使用Zombie Aqua viability dye (BioLegend)對細胞活力進行標示。為了阻斷Fcγ受體，將細胞與10μg/mL的抗CD16、抗CD32、及抗CD64抗體(BD Bioscience)於冷的1xPBS緩衝液中培養10分鐘。將免疫群體用抗人類抗體染色（參見表12）。在洗滌之後（1% BSA、0.1%疊氮化鈉，於PBS中），在FACS Fortessa細胞儀(BD Bioscience)上獲取細胞。使用FlowJo進行分析。 離體腫瘤培養
將人類TDC樣本以每孔0.1×10 6個CD45 +細胞接種在96孔盤中，其中預先塗佈有抗CD3及抗CD28抗體（兩者皆係10 mg/ml）。使用完全培養基[RPMI 1640（BI，目錄號01-110-1A），補充有10%人類AB血清（Sigma，目錄號H3667）、1%青黴素/鏈黴素（BI，目錄號03-031-1B）、1% L-麩醯胺酸（Life Technologies，目錄號35050-038）、及1%丙酮酸鈉（BI，目錄號03-042-1B）]。將樣本用以下處理：10 mg/ml同型對照、抗人類IL-18BP Ab-71739、抗PD1 Ab派姆單抗、或Ab-71739+派姆單抗之組合。在培養60 h之後，收集上清液，根據製造商之規程使用BD流式微珠陣列(CBA)人類Th1/Th2/Th17細胞介素套組（目錄號560484）測試細胞介素分泌，並使用人類顆粒酶B套組（R&D，目錄號DY2906-05）測試顆粒酶B分泌。 表13. FACS 染色小組。
標記 螢光團
活/死 BV510
CD45 BUV395
CD3 APC-Cy7
CD4 BUV496
CD8 BV785
CD56 BV421
CD11b AF488
CD14 APC
結果
對TDC樣本進行FACS染色以用於CD45 +白血球組成之免疫表型分型（圖82A），其中包括T、NK、及骨髓細胞群。
相較於培養基，用抗CD3/抗CD28 mAb處理刺激後，Ab-71739處理會增強TNFa、IFNg、IL2、及顆粒酶B分泌（圖82B，藍條對灰條）。此外，相較於單獨派姆單抗治療，Ab-71739與抗PD1 Ab派姆單抗之組合進一步增加TNFa、IFNg、及顆粒酶B分泌（綠條對紅條；分別是各圖的第四行及第三行）。
此等結果指示，TME細胞群產生之IL18水平足以增強抗IL18BP Ab處理後的免疫反應性，可能是藉由阻斷IL18:IL18BP交互作用並增加游離IL18水平，導致T細胞及NK細胞之活化。 參考文獻1. Aoki H, Shichino S, Matsushima K, Ueha S. Revealing Clonal Responses of Tumor-Reactive T-Cells Through T Cell Receptor Repertoire Analysis.Frontiers in Immunology [Internet].2022 [cited 2023 Jul 10]; 13.可得自：https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2022.807696 2. Li H, Leun AM van der, Yofe I, Lubling Y, Gelbard-Solodkin D, Akkooi ACJ van, Braber M van den, Rozeman EA, Haanen JBAG, Blank CU, Horlings HM, David E, Baran Y, Bercovich A, Lifshitz A, Schumacher TN, Tanay A, Amit I. Dysfunctional CD8 T Cells Form a Proliferative, Dynamically Regulated Compartment within Human Melanoma.Cell.2019 Feb 7; 176(4):775-789.e18。 3. Plebanek MP, Xue Y, Nguyen YV, DeVito NC, Wang X, Holtzhausen A, Beasley GM, Yarla N, Thievanthiran B, Hanks BA.A SREBF2-dependent gene program drives an immunotolerant dendritic cell population during cancer progression. bioRxiv.2023 Apr 28; 2023.04.26.538456。 實例23 ：透過IL-18BP 阻斷而利用天然IL-18 活性重塑腫瘤微環境，從而產生強效的抗腫瘤免疫反應 先前技術
IL-18係發炎體誘導之促發炎細胞介素，可活化T細胞及NK細胞並刺激IFNγ產生(C. A. Dinarello, D. Novick, S. Kim, G. Kaplanski, Interleukin-18 and IL-18 binding protein. Front Immunol4, 289 (2013)；S. L. Swain, Interleukin 18: Tipping the Balance towards a T Helper Cell 1 Response. Journal of Experimental Medicine194, F11–F14 (2001))。IL-18之活性自然會由高親和力內源性結合蛋白所阻斷(IL-18BP) (C. A. Dinarello, D. Novick, S. Kim, G. Kaplanski, Interleukin-18 and IL-18 binding protein. Front Immunol4, 289 (2013))，此係回應於IFNγ上調而誘導之負回饋機制(J. Paulukat, M. Bosmann, M. Nold, S. Garkisch, H. Kämpfer, S. Frank, J. Raedle, S. Zeuzem, J. Pfeilschifter, H. Mühl, Expression and release of IL-18 binding protein in response to IFN-gamma. J Immunol167, 7038–7043 (2001))。 方法
為了判定腫瘤中經結合IL-18水平是否高於體外人類T細胞活化所需之水平，對不同腫瘤類型之總及游離IL-18進行評估。藉由評估總及游離IL-18，檢測腫瘤中經結合IL-18水平是否高於體外人類T細胞活化所需之水平。為了釋放內源性經結合IL-18活性，產生抗IL18BP Ab（抗IL-18BP阻斷劑Ab）並在基於T細胞之檢定中檢測。在多種小鼠腫瘤模型中評估體內IL-18BP阻斷。藉由流式細胞術、scRNA定序、及細胞介素剖析評估腫瘤微環境(TME)調節。 結果
IL-18在75個體腫瘤中皆高度表現且相較於血清明顯升高（圖83A至圖83B）。結果顯示，大部分腫瘤IL-18與IL-18BP結合，其水平高於體外T細胞活化所需之量，意味著局部釋放腫瘤IL-18可導致T細胞活化（圖83C至圖83D）。抗IL18BP Ab可將IL-18由IL-18:IL-18BP複合物中置換出來，因此在離體經刺激人類CD8+腫瘤浸潤淋巴球-腫瘤細胞共培養檢定及人類分離腫瘤細胞檢定中可增強T細胞活化（圖84）。此外，在多種腫瘤模型中，抗小鼠IL-18BP Ab單獨或與抗PD-L1組合皆觀察到腫瘤生長抑制（圖85）。此外，在E0771模型中，IL-18BP阻斷誘導功能性免疫細胞之顯著增加及淋巴球聚類之顯著變化，包括初始T細胞減少、效應T細胞增加、及T細胞殖株擴增增加（圖86）。IL-18BP阻斷亦增加促發炎細胞介素分泌，並使骨髓譜系細胞群偏向有利於促發炎巨噬細胞（圖87）。在同時評估TME及周邊血液之MC38OVA dim模型中，抗小鼠IL-18BP Ab亦誘導強效的TME免疫調節，包括增加CD8+ T細胞浸潤及IFNγ分泌，而血清及脾臟中之IFNγ分泌、淋巴球數目、或活化狀態沒有明顯增加（圖88）。 結論
IL-18在人類腫瘤中上調，且主要與IL-18BP結合。抗IL18BP Ab係高親和力抗 IL-18BP Ab，可在體外及離體誘導人類 T細胞反應。抗小鼠IL-18BP Ab誘導強效的抗腫瘤反應及明顯的TME限制性免疫調節，此與全身性投予之治療性細胞介素相反，後者可產生全身性發炎反應（圖89）（Harnessing cytokines and chemokines for cancer therapy | Nature Reviews Clinical Oncology（可在全球資訊網取得：nature.com/articles/s41571-021-00588-9））。綜上所述，阻斷IL-18BP係一種利用細胞介素效力治療癌症的有前景的新方法。 實例24 ：透過IL-18BP 阻斷而利用天然IL-18 活性重塑腫瘤微環境，從而產生強效的抗腫瘤免疫反應 先前技術
為了判定特定免疫細胞群對抗小鼠IL-18BP Ab效應之貢獻，吾人在MC38OVA dim腫瘤模型中執行抗體(Ab)介導之除盡研究。此外，在4T1及LLC腫瘤模型中檢測到抗IL-18BP Ab之抗腫瘤活性，此等免疫系統模型被視為浸潤不良，因此腫瘤浸潤T細胞及NK細胞數目相對較少。最後，檢測數種小鼠模型之腫瘤免疫組成，並與IL-18BP阻斷誘導之抗腫瘤活性程度進行比較。 方法細胞培養
B16/Db-hmgp100細胞係由Hanada博士等人（HHS機構）友情提供並獲得NIH授權。B16/Db-hmgp100細胞係藉由B16F10與H-2Db及編碼嵌合小鼠gp100（由人類gp10025-33及小鼠gp100之其餘部分組成）之反轉錄病毒的雙轉導而產生。鼠類結腸癌MC38OVA dim細胞（殖株UC10 4H10）係收自Peter MacCallum癌症中心。E0771細胞系購自CH3 BioSystems（產品號94A001）。CT26 (CRL-2638)、LLC (CRL-1642)、及4T1 (CRL-2539)細胞系購自ATCC。 小鼠之接種
將MC38OVA dim（106或1.2x10 6個）、CT26（2.5x10 5個）、或B16/Db-hmgp100（1x10 5個）細胞皮下注射到小鼠之右側腹(50 µl)。將4T1細胞（2x10 5個）及E0771細胞（5x10 5個）與Matrigel (Corning)之1:1混合物以100 µl的體積原位接種到小鼠的左側乳房脂肪墊。每2-3天用電子卡尺測量腫瘤生長，並報告為0.5 X W2 X L mm 3。 對荷瘤小鼠投予抗mIL-18BP
在MC38OVA dim之腫瘤體積達到130-260 mm 3、E0771之腫瘤體積達到260 mm 3、或B16/Db-hmgp100、LLC、及4T1腫瘤接種後第4天（可觸及腫瘤）時，將小鼠隨機指派至治療組中。每週兩次腹膜內注射抗IL-18BP Ab或同型對照(15 mg/kg)，共6次治療。 MC38OVA dim腫瘤模型之除盡研究
將小鼠指派至4組中，並在腫瘤接種前（第-1天）及在第6天、第13天、及第20天注射抗CD4 (GK1.5)、抗CD8 (Lyt 3.2)、抗NK1.1 (PK136)、或同型對照，總共4次治療。在腫瘤體積係120 mm 3時，將小鼠隨機指派至治療組中，每週兩次用抗IL-18BP或同型對照i.p.治療，共6次治療（額外細節參見表14）。 表14. 除盡抗體及抗小鼠IL-18BP mIgG1-D265A 或Synagis mIgG1-D265A mAb 單一療法：向小鼠注射除盡抗體，並向每組10隻小鼠注射15 mg/kg Synagis mIgG1-D265A或抗IL-18BP mIgG1-D265A抗體(i.p.)。
組 抗體1 （除盡） 劑量(µg) 抗體2 （治療） 劑量(mg/kg) n
1 PBS Synangis D265A 9
2 同型ab 大鼠IgG1 100 10 9
3 抗CD4 (GK1.5) B.B-大鼠IgG2b 300 10 10
4 抗CD8 (Lyt 3.2) B.B-大鼠IgG1 100 10 8
5 抗NK1.1 (PK136) B.B-mIgG2a 50 10 10
6 PBS aIL-18BP 9
7 同型ab 大鼠IgG1 100 10 9
8 抗CD4 (GK1.5) 300 10 10
9 抗CD8 (Lyt 3.2) 100 10 8
10 抗NK1.1 (PK136) 50 10 10
腫瘤免疫表型分型
使用小鼠分離套組(Miltenyi Biotec)將小鼠腫瘤樣本藉由gentleMACS (Miltenyi Biotec)分離。將經分離腫瘤細胞通過70μm過濾器過濾，用Aqua Live Dead (Life Technologies)染色以區分活細胞及死細胞，接著用抗CD16、抗CD32、抗CD64抗體之混合物染色，以阻斷與Fcγ受體之非特異性結合。將各種免疫群體用抗小鼠抗體染色（參見表15）。所有染色皆在4°C下進行30分鐘。在Fortessa X-20流式細胞儀(BD Bioscience)上獲取樣本。使用FlowJo (TreeStar LLC)完成分析，並針對特異性群體進行圈選。 表15. FACS 染色小組用於識別不同的免疫細胞類型以進行免疫表型分型。
標記 螢光團 供應商
淋巴樣 活/死 BV510
CD45 BV605 Biolegend
CD3 BV421 Biolegend
CD4 BV785 Biolegend
CD8 PE-Cy7 Biolegend
CD19 PercpCy5.5 Biolegend
NK1.1 FITC Biolegend
CD44 PE Biolegend
CD62L APC Biolegend
結果MC38OVA dim腫瘤模型之除盡研究
儘管IL-18BP阻斷之抗腫瘤活性會因CD8+ T細胞之除盡而廢除，但對腫瘤體積的影響較小(15.8% TGI, p=ns)，且對存活沒有影響（圖90A），而CD4+ T細胞之除盡僅部分廢除抗IL-18BP Ab之抗腫瘤效應(35.6% TGI, p=0.0005)，並具有改善存活的趨勢（p=0.3，圖90B）。此外，抗IL-18BP Ab之抗腫瘤效應在NK細胞除盡之背景下完全消除（圖90C）。結論是，在MC38OVA dim腫瘤模型中，IL-18BP阻斷活性主要取決於CD8+ T細胞及NK細胞。 抗IL-18BP Ab在免疫浸潤不良的同基因4T1及LLC小鼠腫瘤模型中之活性
在4T1及LLC腫瘤模型中，IL-18BP阻斷既不影響腫瘤生長（圖91A至圖91B）也不影響小鼠存活（數據未顯示）。兩種模型之腫瘤浸潤T細胞及NK細胞數目相對較低（圖91C），其支持抗IL-18BP Ab之有效治療對腫瘤浸潤T細胞或NK細胞之需求。
腫瘤微環境(TME)免疫細胞組成與抗IL-18BP Ab抗腫瘤活性程度之間的相關性
吾人對數種小鼠模型（E0771、MC38OVA dim、B16/Db-hmgp100、CT26、4T1、及LLC）之腫瘤免疫組成進行比較，並與IL-18BP阻斷誘導之抗腫瘤活性程度具有相關性。此分析揭示，對抗IL-18BP治療之反應與CD8+ T細胞之浸潤呈正相關（圖91D）。在B16/Db-hmgp100腫瘤模型中觀察到的抗腫瘤活性可歸因於相對較高百分比的NK細胞（圖91C）。 結論
總的來說，體內IL-18BP阻斷之抗腫瘤活性取決於腫瘤浸潤CD8+ T及NK細胞，部分取決於CD4+ T細胞，其等係表現IL-18Rα的主要免疫群體（數據未顯示）。 實例25 ：腫瘤中之IL-18 及經結合IL-18 表現水平比相鄰於腫瘤之正常組織高 先前技術
為了判定腫瘤中之總IL-18及IL-18BP結合IL-18（即無活性）是否比相鄰於腫瘤之正常組織(NAT)高，在腫瘤活體組織切片及匹配的NAT樣本中測量IL-18及經結合IL-18（表16）。經結合IL-18水平係藉由自兩個單獨的ELISA套組測得之各樣本之總IL-18扣除游離IL-18來計算。 方法組織加工
依照製造商之規程，使用人類腫瘤分離套組(Miltenyi Biotec)將腫瘤及匹配的NAT樣本（表16）用手術刀切成小塊並轉移至含有酶混合物之GentleMACs™ C管(Miltenyi Biotec)中。在解離之後，將樣本以300g離心5分鐘，且收集上清液並以3130g重新離心10分鐘。在離心後，將上清液重新收集並分成等分試樣，儲存在-80℃下。檢定當天，將樣本在室溫下解凍，隨後以14,000 RPM離心10 min，且收集上清液，立即用於以下ELISA或CBA套組： ●      人類IL-18 ELISA套組(MBL,7620) ●      人類游離IL-18偵測套組（內部規程） 人類游離IL-18 ELISA規程
將抗人類IL-18 hIgG1殖株12GL（專利US 2014/0004128A1）於PBS中稀釋至1 µg/ml，並塗佈於ELISA盤上在4°C下隔夜（100 µl/孔）。將經塗佈之盤用PBST洗滌三次，並在室溫(RT)下與300 µl阻斷緩衝液（於含1% BSA之PBS中）一起培養2小時。將阻斷緩衝液移除並將盤用PBST洗滌三次。將人類健康供體血清以1:2稀釋於含1% BSA之PBS中。藉由將人類IL-18之2倍連續稀釋液培養於含1% BSA之PBS中（自1 ng/ml開始）來產生標準曲線。將盤用PBST緩衝液（1X PBS pH 7.4，0.05% Tween20）洗滌三次，並添加100 µl/孔生物素化抗IL-18偵測抗體（目錄號D0456 R&D；1:1000稀釋於含1% BSA之PBS中）。將其培養1 hr，並在抗體結合之後如上所述再次將盤洗滌。添加100 µl/孔辣根過氧化物酶HRP接合之鏈親和素（Jackson，1:1000）並將盤在RT下培養1 hr。在抗體結合之後如上所述再次將盤洗滌。ELISA信號係藉由添加50 µL的TMB受質(Scytek)並培養5至20分鐘以在所有孔中產生信號。藉由添加50 µL 1N HCL終止HRP反應，並讀取450 nm處的吸光度信號(EnSpire, Perkin Elmar)。檢定係以二重複進行。使用GraphPad Prism軟體分析數據。 表16. 用於總IL-18 及經結合IL-18 之ELISA 測量而獲得之人類腫瘤組織及匹配的NAT （正常相鄰組織）清單。
I.D. 編號 腫瘤部位 總IL-18 IL-18 結合
T33及N33 結腸 X X
T34及N34 結腸 X X
T43及N43 結腸 X X
T64及N64 結腸 X X
T69及N69 結腸 X X
T6及N6 結腸 X
T7及N7 結腸 X
T41及N41 子宮內膜 X
T60及N60 子宮內膜 X X
T31及N31 卵巢 X
T63及N63 腎 X
T24及N24 胃 X X
T17及N17 胃 X
T87及N87 乳房 X
T76及N76 膀胱 X
T22及N22 肺 X
T72及N72 肺 X
結果及結論
在匹配的NAT及腫瘤衍生上清液樣本中測量IL-18及經結合IL-18水平。如圖92所示，相較於匹配的NAT樣本，腫瘤中之IL-18（圖92A）及經結合IL-18（圖92B）水平顯著較高。相較於周邊，IL-18及經結合IL-18在腫瘤中之上調可能會誘導TME中對IL-18的增強反應。 實例26 ：IL-18BP 表位作圖 材料及方法材料
實驗中所使用之材料如下： ●      人類IL-18BP蛋白，His標籤（經MALS驗證）目錄號ILP-H5222，Acro biosystems；及 ●      ADI-71739。 方法 氫 -氘交換 –質譜法 (HDX-MS)。
氫-氘交換質譜法(HDX-MS)係用於研究不同條件下蛋白質結構變化的方法。HDX-MS之工作原理係將蛋白質暴露於氘（一種較重、穩定的氫之同位素，可藉由MS與氫區分開）溶液中。氘原子與蛋白質骨架中之特定氫以不同的速率進行交換，其取決於其等與周圍溶液之暴露程度。接著使用質譜法測量此等交換。疏水區域及其他未暴露於溶液之區域緩慢地交換氘，而可撓性或暴露於溶劑之區域更快地交換氘。此有助於了解胺基酸暴露量之變化。在此情形下，ADI-71739「保護」其在人類IL-18BP上之表位免受氘交換，並將其與未受保護之IL-18BP上的交換率進行比較，已揭示表位區之作圖。 檢定細節
使用Leap HDX自動進樣器及Waters cyclic IMS MS進行HDX-MS檢定。最初測試九種不同的蛋白酶，其中Nep2 (N=1)或胃蛋白酶(N=2)蛋白酶在7.5 °C消化溫度下使用時顯示出最佳覆蓋結果。 結果質譜覆蓋率
基於MS偵測到之人類IL-18BP的胺基酸覆蓋率選擇Nep2及胃蛋白酶。人類IL-18BP之N端區係無序的，因此MS無法正確覆蓋。覆蓋範圍的進一步間隙(gap)可藉由醣基化位點或其他可能的轉譯後修飾來解釋（圖93A及圖93B）。如圖93A所示，當經Nep2蛋白酶消化時，偵測到33種肽，覆蓋hIL-18BP的55.3%。另外，如圖93B所示，當經胃蛋白酶蛋白酶消化時，偵測到20種肽，覆蓋hIL-18BP的49.4%。 氘交換之變化
將藉由MS偵測到之氘吸收變化定位到hIL-18BP之胺基酸序列上。將未經結合之hIL-18BP與經抗體結合之hIL-18BP之間的氘交換變化引起之胺基酸段(stretch)概括到界定之區域中。氫-氘交換減少之區域陰影較深，指示此等區域在抗體結合後較少暴露於溶液（圖94A及圖94B）。具體地，在圖94A中，覆蓋範圍之間隙係由醣基化引起的，且難以覆蓋N端。在圖94B中，類似地，覆蓋範圍之間隙係由醣基化引起的，且難以覆蓋N端。此外，相鄰於區2有額外的覆蓋範圍，覆蓋範圍至C端，區6上由於肽定向而有新的截止位點，區3及區4由於長的肽而在此組中難以區分。
區6在兩組數據中具有最大的差異。當將氘吸收之變化定位到hIL-18BP之3D結構時，其顯示基於區1 (SRFPNFSIL; SEQ ID NO: 1917)中之胺基酸SIL及區6 (VDPEQVVQRH; SEQ ID NO: 1919)中之DPEQVVQR (SEQ ID NO: 1918)，區1及區6形成三級結構表位。圖95顯示HDX在hIL-18BP之α折疊預測結構上之作圖。深色區域指示ADI-71739表位，其出現在區1及區6上。
ADI-71739表位區連同結合位點在與IL-18 (7AL7)結合之IL-18BP的已解析晶體結構上之作圖(Detry et al., Journal of Biological Chemistry, 298(5):101908 (2022))顯示該兩個區域彼此接近，但僅在區1之1個胺基酸及區6之2個胺基酸中重疊（圖96A）。
表位作圖顯示區1與區6之間的距離係4.4 Å (0.44 nm)，而區1與區4之間的距離係16 Å，即1.6 nm（圖96B）。區1及區6最有可能構成抗體結合位點。
IL-18BP存在四種異構體，以a、b、c、及d表示（圖97）。異構體a與c、a與d、及a與b之間的胺基酸序列比對分別顯示於圖98A至圖98C中。僅異構體a及c具有活性並結合IL-18，且兩者皆含有建議之表位，指示ADI-71739能夠結合活性異構體a及c兩者（圖97及圖98A至圖98C）。 討論及結論
與IL-18BP結合之ADI-71739抗體之HDX-MS分析展示由下列組成之構象表位：來自區1 (SEQ ID NO: 1917)之短胺基酸段SIL；及來自區6 (SEQ ID NO: 1919)之環DPEQVVQR (SEQ ID NO: 1918)。值得注意的是，IL-18BP之兩種活性異構體（a及c）皆含有此表位，指示ADI-71739可結合兩者。
此表位與IL-18BP及IL-18之結合位點（來自區1之一個胺基酸及來自區6之兩個胺基酸）具有少量重疊。此種重疊與IL-18在ADI-71739結合下自IL-18BP中置換一致。
發現IL-18BP上之其他區域在ADI-71739結合後氘之吸收有所減少。此等結果可能是由於抗體結合後IL-18BP之構象變化所致，且此等區域與區1及區6距離太遠而無法形成單一連續表位。值得注意的是，區2、區3、及區4係連續的，其與所有3個位點如何一起經歷構象變化係一致的。 ***
提出上述實例係為了向所屬技術領域中具有通常知識者提供完整的揭露以及如何進行並使用本發明之組成物、系統、及方法的實施例，並且不意欲限制本發明人視為其揭露的範疇。對於所屬技術領域中具有通常知識者來說顯而易見的是，用於執行本發明的上述模式的修改旨在落入所附申請專利範圍之範疇內。說明書中提及的所有專利及公開案皆表明本發明所屬技術領域中具有通常知識者之技術水平。
所有標題及章節名稱僅用於使目的清晰並參考，不應被視為以任何方式進行限制。例如，所屬技術領域中具有通常知識者將理解的是，根據本文所述之本發明的精神及範疇，將來自不同標題及章節的各種態樣適當地組合係有用的。
本文所引用之所有參考文獻特此以引用方式併入本文中並用於所有目的，其程度如同將各單獨的公開案或專利或專利申請案指示為具體且單獨地以引用方式併入本文中並用於所有目的。
對於所屬技術領域中具有通常知識者來說是顯而易見的是，在不脫離本申請案之精神及範疇的情形下，可對本申請案進行許多修改及變化。本文所述之具體實施例及實例僅以舉例的方式提供，且本申請案僅受限於所附申請專利範圍之用語連同申請專利範圍所賦予的等同物之完整範疇。
〔圖1A〕至〔圖1L〕描述抗體66650（圖1A及圖1E及圖1I）、66670（圖1B及圖1F及圖1J）、66692（圖1C及圖1G及圖1K）、66716（圖1D及圖1H及圖1L）之vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2、vlCDR3序列。圖1M提供IgG序列，包括IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4。 〔圖2A〕至〔圖2U〕描述抗體ADI-71709（圖2A）、ADI-71719（圖2B）、ADI-71720（圖2C）、ADI-71722（圖2D）、ADI-71701（圖2E）、ADI-71663（圖2F）、ADI-71662（圖2G）、ADI-66692（圖2H）、ADI-71710（圖2I）、ADI-71717（圖2J）、ADI-71739（圖2K）、ADI-71736（圖2L）、ADI-71707（圖2M）、ADI-66716（圖2N）、ADI-71728（圖2O）、ADI-71741（圖2P）、ADI-71742（圖2Q）、ADI-71744（圖2R）、ADI-71753（圖2S）、ADI-71755（圖2T）、及AB-837（亦稱為「AbD35328」、「837」、或「Ab837」）（圖2U）之可變重鏈及可變輕鏈、vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2、vlCDR3序列、以及全長。 〔圖3A〕至〔圖3E〕：圖3A描繪VH3-23與VL-κ-1-12生殖系序列71663、及71662、及66692之間CDRH及CDRL序列之比對。圖3B描繪VH1-03與VL-κ-1-5生殖系序列71701、71707、71709、71710、及71717之間CDRH及CDRL序列之比對。圖3C描繪VH1-69與VL-κ-1-2生殖系序列71719、71720、71722、及71728之間CDRH及CDRL序列之比對。圖3D描繪VH4-39與VL-κ-1-12生殖系序列71736、71739、及66716之間CDRH及CDRL序列之比對。圖3E描繪VH4-39與VL-κ-1-12生殖系序列71736、71739、66716、71742、71744、71741、71753、及71755之間CDRH及CDRL序列之比對。 〔圖4A〕至〔圖4B〕：圖4A描繪所有TCGA腫瘤中IL18之表現，且圖4B描繪所有TCGA腫瘤中IL18-BP之表現。各TCGA腫瘤之log10 RPKM盒狀圖，參考線在1 RPKM。 〔圖5A〕至〔圖5B〕：圖5A描繪依TCGA中每種腫瘤類型之IFNγ表現進行分層的IL18；圖5B描繪依TCGA中每種腫瘤類型之IFNγ表現進行分層的IL18-BP。各TCGA腫瘤之log10 RPKM盒狀圖，參考線在1 RPKM。腫瘤縮寫參見表1。IFNγ高代表最高四分位數，且IFNγ低代表最低四分位數。FC –倍數變化，P – IFNγ高至IFNγ低之間學生T檢定之p值。分率代表IFNγ高/ IFNγ低之樣本數目。 〔圖6A〕至〔圖6B〕：圖6A描繪核心發炎體特徵，其依TCGA中每種腫瘤類型之IFNγ表現進行分層。各TCGA腫瘤之log10 RPKM盒狀圖，參考線在1 RPKM。腫瘤縮寫參見表1。IFNγ高代表最高四分位數，且IFNγ低代表最低四分位數。FC –倍數變化，P – IFNγ高至IFNγ低之間學生T檢定之p值。分率代表IFNγ高/ IFNγ低之樣本數目。圖6B描繪核心發炎體基因、IL18、IL18-BP、IL18R's、及額外上游發炎體基因之間的餘弦相似度熱圖及樹狀圖(dandogram)。 〔圖7A〕至〔圖7B〕：圖7A描繪IL18及IL18-BP在乳癌亞型中在治療前及治療中、此兩個基因在TNBC中在治療前及治療中之表現的點圖。圖7B描繪IL18及IL18-BP、此兩個基因在TNBC中在治療前及治療中之表現的點圖，亦藉由擴增TCR殖株(_E)及非擴增TCR殖株(_NE)劃分。 〔圖8〕描繪藉由Biacore之針對人類IL18-BP之mAb對人類及食蟹獼猴(“cyno”) IL18-BP的親和矩陣 〔圖9〕：在AlfaLISA檢定中使用15nM具有hIgG1骨架之經純化Ab，執行與人類IL18競爭結合IL18-BP-Fc。 〔圖10〕：藉由ELISA分析親本mAb對人類IL18-BP之阻斷活性 〔圖11〕：藉由ELISA分析親本mAb對食蟹獼猴IL18-BP之阻斷活性 〔圖12〕：藉由ELISA測量抗人類IL18-BP Ab之IC50值 〔圖13〕：使用IL18 HEK293報導子細胞展示針對人類IL18-BP之mAb援救(rescue)與IL18-BP-Fc蛋白結合之人類IL18的能力。 〔圖14A〕至〔圖14H〕：抗IL-18BP抗體完全恢復NK細胞上之IL-18活性。圖14A及圖14H顯示檢定設置之示意圖示；將來自四名供體之經解凍NK細胞與rhIL-18（3或10 ng/ml）及rhIL-18BP (1 µg/ml)一起在rhIL-12 (10 ng/ml)存在下培養30分鐘，以允許IL-18-IL-18BP複合物形成。在培養後30分鐘，將細胞用下列之劑量滴定處理：抗IL-18BP抗體（20 µg/ml至0.25 µg/ml；稀釋因子係1:3（圖14A至圖14G）；或10 µg/ml至0.325 µg/ml；稀釋因子係1:2（圖14H至圖14N））或同型對照（20 µg/ml（圖14A至圖14G）或10 µg/ml（圖14A至圖14G））。圖14I至圖14N顯示抗IL-18BP抗體能夠以劑量依賴性方式完全恢復IFNγ分泌（圖14B至圖14D及圖14I至圖14N）及CD69表現（圖14E至圖14G）。同型對照無法恢復IL-18活性。圖14N顯示抗IL-18BP抗體及計算之EC50之援救%的劑量反應曲線。代表性數據來自一個供體。抗IL-18BP Ab之援救係計算如下：[(IL-12+ IL-18+IL-18BP+抗IL-18BP Ab)- (IL-12+ IL-18+ IL-18BP+同型)]/ [(IL-12+ IL-18)- (IL-12+ IL-18+ IL-18BP+同型)]。 〔圖15A〕至〔圖15J〕：抗IL-18BP抗體阻斷PBMC分泌之IL-18BP。圖15A、圖15D顯示檢定設置之示意圖示；將來自兩個供體之經解凍PBMC與下列一起培養24小時：rhIL-12 (10 ng/ml)、rhIL-18 (33.3 ng/ml)、及抗IL-18BP抗體之劑量滴定（圖15B：20 µg/ml至0.625 µg/ml；稀釋因子係1:2。圖15E至圖15J：6ug/ml至0.002 µg/ml；稀釋因子係1:3）或同型對照(20 µg/ml)。圖15B至圖15C及圖15E至圖15J顯示抗IL-18BP抗體能夠誘導高於IL-12+IL-18對照水平之劑量依賴性IFNγ分泌，表明此等抗體可阻斷內源性IL-18BP活性。代表性數據來自一個供體。 〔圖16〕描繪藉由ELISA之抗小鼠mIL18BP Ab對小鼠IL18-BP蛋白之親和力測量。 〔圖17〕描繪抗小鼠IL18-BP（AbD35328（亦稱為「837」、「Ab837」、或「AB-837」））之SPR動力學測量。 〔圖18〕描繪藉由ELISA之mAb在功能性阻斷mIL18-BP- mIL-18交互作用中之性能的分析。 〔圖19〕描繪抗小鼠IL18-BP (AbD35328)之IC50分析。 〔圖20〕描繪針對小鼠IL18-BP之經純化mAb藉由IFNg分泌的功能性阻斷活性。 〔圖21〕描繪抗小鼠IL18-BP之EC50分析。 〔圖22A〕至〔圖22L〕描繪在小鼠同基因CT26腫瘤模型中對抗IL18-BP單一療法或與抗PD-L1 Ab之組合療法的評估。圖22A：單一療法各組之腫瘤生長測量，圖22B：單一療法各組之存活百分比分析，圖22C至圖22F：各組單一療法中個別小鼠之腫瘤生長測量概述；圖22G：組合療法各組之腫瘤生長測量，圖22H：組合療法之存活百分比分析，圖22I至圖22K：各組組合療法中個別小鼠之腫瘤生長測量概述，及圖22L：組合療法效應之統計分析。 〔圖23A〕至〔圖23L〕描繪在小鼠同基因B16/Db-hmgp100小鼠腫瘤模型中對抗IL18-BP單一療法或與抗PD-L1 Ab之組合療法的評估。圖23A：單一療法各組之腫瘤生長測量，圖23B：單一療法各組之存活百分比分析，圖23C至圖23F：各組單一療法中個別小鼠之腫瘤生長測量概述，圖23G：組合療法各組之腫瘤生長測量，圖23H：組合療法各組之存活百分比分析，圖23I至圖23K：各組組合療法中個別小鼠之腫瘤生長測量概述，及圖23L：組合療法效應之統計分析。 〔圖24A〕至〔圖24G〕描繪在B16/Db-hmgp100同基因小鼠腫瘤模型中抗IL18-BP及抗TIGIT組合之活性。圖24A：組合療法各組之腫瘤生長測量，圖24B：組合療法各組之存活百分比分析，圖24C至圖24F：各組組合療法中個別小鼠之腫瘤生長測量概述，及圖24G：組合療法效應之統計分析。 〔圖25A〕至〔圖25G〕描繪在B16/Db-hmgp100同基因小鼠腫瘤模型中抗IL18-BP及抗PVRIG組合之活性。圖25A：組合療法各組之腫瘤生長測量，圖25B：組合療法各組之存活百分比分析；圖25C至圖25F：各組組合療法中個別小鼠之腫瘤生長測量概述，及圖25G：組合療法效應之統計分析。 〔圖26A〕至〔圖26G〕描繪在同基因E0771原位小鼠腫瘤模型中抗IL18-BP及抗mPD-L1之單一療法活性。圖26A：單一療法各組之腫瘤生長測量，圖26B至圖26E：各組單一療法中個別小鼠之腫瘤生長測量概述，圖26F：單一療法各組之存活百分比分析，及圖26G：單一療法效應之統計分析。 〔圖27A〕至〔圖27F〕描繪E0771 TNBC模型之腫瘤再投藥(rechallenge)實驗。將每組5至10隻年齡匹配的C57BL/6腫瘤初始(tumor-naïve)小鼠原位接種E0771（0.5x10 6個細胞）。當腫瘤達到250 mm 3之體積時，將小鼠用指定mAb治療：AB-837 mIgG1-D265A或同型對照，接著為5個額外劑量。在兩個月之後，將無腫瘤且年齡匹配的初始小鼠原位重新接種E0771。圖27A：腫瘤體積係以平均體積± SEM表示。圖27B描繪各小鼠之個別腫瘤測量，CR-完全反應者，PR-部分反應者(TV＜=500 mm 3)。圖27C顯示各組之Kaplan-Meier存活曲線。圖27D脾臟重量/體重比。圖27E CD44 +CD62L -CD8 +效應T細胞之百分比。圖27F每mg脾臟中CD19+細胞之數目。 〔圖28A〕至〔圖28F〕描述人類（圖28A）及小鼠（圖28C）IL18-BP蛋白之胺基酸序列。突出顯示信號肽序列。圖28B及圖28D分別描述分泌之人類及小鼠IL18-BP蛋白鏈。圖28E及圖28F分別描述人類及小鼠IL18蛋白之胺基酸序列。 〔圖29A〕至〔圖29B〕描述CHA.7.518.1.H4(S241P)及CHA.7.538.1.2.H4(S241P)之可變重鏈及可變輕鏈以及vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3序列。 〔圖30A〕至〔圖30B〕描述CPA.9.083.H4(S241P)及CPA.9.086.H4(S241P)之可變重鏈及可變輕鏈以及vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3序列。 〔圖31〕顯示藉由ELISA展示之針對人類IL18-BP之mAb援救人類血清中與IL18-BP結合之人類IL18的能力 〔圖32〕顯示使用ELISA展示之針對人類IL18-BP之mAb援救與食蟹獼猴IL18-BP結合之食蟹獼猴IL18的能力。 〔圖33〕顯示TIGIT及IL18Ra在TME內共表現。 〔圖34A〕至〔圖34QQQQ〕描述阻斷TIGIT及PVR交互作用之四種抗TIGIT抗體CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)、及CHA.9.547.13.H4(S241P)、以及基準抗體BM26及BM29、及數種其他抗TIGIT抗體之序列。在圖34EEE中，MAB1-IgG4、MAB2-IgG4、MAB3-IgG4、MAB4-IgG4、及MAB5-IgG4具有相同的CDRH3 (SEQ ID NO: 1926)、CDRL1 (SEQ ID NO: 1928)、CDRL2 (SEQ ID NO: 1929)、CDRL3 (SEQ ID NO: 1930)、及VL (SEQ ID NO: 1931)。MAB1-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1924及1925之序列的CDRH1及CDRH2、及具有SEQ ID NO: 1927之序列的VH；MAB2-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1932及1933之序列的CDRH1及CDRH2、及具有SEQ ID NO: 1934之序列的VH；MAB3-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1935及1933之序列的CDRH1及CDRH2、及具有SEQ ID NO: 1936之序列的VH；MAB4-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1935及1933之序列的CDRH1及CDRH2、及具有SEQ ID NO: 1937之序列的VH；MAB5-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1935及1938之序列的CDRH1及CDRH2、及具有SEQ ID NO: 1939之序列的VH。在圖34FFF中，MAB6-IgG4、MAB7-IgG4、MAB8-IgG4、MAB9-IgG4、及MAB10-IgG4具有相同的CDRL1 (SEQ ID NO: 1943)、CDRL2 (SEQ ID NO: 1944)、CDRL3 (SEQ ID NO: 1945)、及VL (SEQ ID NO: 1947)。MAB6-IgG4、MAB7-IgG4、MAB8-IgG4、及MAB9-IgG4具有相同的CDRH3 (SEQ ID NO: 1942)。MAB6-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1943及1044之序列的CDRH1及CDRH2、及具有SEQ ID NO: 1946之序列的VH；MAB7-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1948及1949之序列的CDRH1及CDRH2、及具有SEQ ID NO: 1950之序列的VH；MAB8-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1941及1952之序列的CDRH1及CDRH2、及具有SEQ ID NO: 1953之序列的VH；MAB9-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1954及1949之序列的CDRH1及CDRH2、及具有SEQ ID NO: 1955之序列的VH；MAB10-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1954、1949、及1956之序列的CDRH1至CDRH3、及具有SEQ ID NO: 1957之序列的VH。在圖34GGG中，MAB11-IgG4及MAB12-IgG4兩者皆具有分別具有SEQ ID NOS: 1954、1949、及1956之序列的CDRH1至CDRH3、分別具有SEQ ID NOS: 1943至1945之序列的CDRL1至CDRL3、及具有SEQ ID NO: 1947之序列的VL；MAB11-IgG4具有：具有SEQ ID NO: 1958之序列的VH；MAB12-IgG4具有：具有SEQ ID NO: 1959之序列的VH；MAB13-IgG4、MAB14-IgG4、及MAB15-IgG4分別共享：具有SEQ ID NOS: 1960至1962之序列的CDRL1至CDRL3、及具有SEQ ID NO: 1964之序列的CDRH3；MAB13-IgG4具有：分別具有SEQ ID NO: 1965及1963之序列的CDRH1及CDRH2、及分別具有SEQ ID NOS: 1966及1967之序列的VH及VL；MAB14-IgG4具有：具有SEQ ID NOS: 1968及1963之序列的CDRH1及CDRH2、及分別具有SEQ ID NOS: 1969及1970之序列的VH及VL；MAB15-IgG4具有：分別具有SEQ ID NO: 1971及1974之序列的CDRH1及CDRH2、及分別具有SEQ ID NOS: 1972及1970之序列的VH及VL。在圖34HHH中，MAB16-IgG4至MAB17-IgG4、MAB18-IgG4、MAB19-IgG4、MAB20-IgG4、及MAB21-IgG4共享：分別具有SEQ ID NOS: 1960及1961之序列的CDRL1及CDRL2；MAB16-IgG4、MAB17-IgG4、及MAB18-IgG4共享：具有SEQ ID NO: 1962之序列的CDRL3、及具有SEQ ID NO: 1970之序列的VL；MAB19-IgG4、MAB20-IgG4、及MAB21-IgG4共享：具有SEQ ID NO: 1973之序列的CDRL3、及具有SEQ ID NO: 1977之序列的VL；MAB16-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1971、1974、及1975之序列的CDRH1至CDRH3、及具有SEQ ID NO: 1976之序列的VH；MAB17-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1978、1979、及1975之序列的CDRH1至CDRH3、及具有SEQ ID NO: 1980之序列的VH；MAB18-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1968、1979、及1964之序列的CDRH1至CDRH3、及具有SEQ ID NO: 1981之序列的VH；MAB19-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1982至1984之序列的CDRH1至CDRH3、及具有SEQ ID NO: 1985之序列的VH；MAB20-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1982、1986、及1984之序列的CDRH1至CDRH3、及具有SEQ ID NO: 1987之序列的VH；MAB21-IgG4具有：分別具有SEQ ID NOS: 1982、1988、及1984之序列的CDRH1至CDRH3、及具有SEQ ID NO: 1989之序列的VH。 〔圖35A〕至〔圖35B〕描述人類IgG1（具有一些有用的胺基酸取代）、IgG2、IgG3、IgG4、具有本發明中特別有用的鉸鏈變體之IgG4之恆定域、及κ輕鏈及λ輕鏈之恆定域之胺基酸序列。 〔圖36A〕至〔圖36AG〕描述本發明之抗PVRIG抗體之可變重鏈及可變輕鏈以及vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3序列。 〔圖37A〕至〔圖37D〕描述本發明之其他PVRIG抗體之序列。 〔圖38A〕至〔圖38X〕提供用於本發明中之額外抗PVRIG抗體。 〔圖39A〕至〔圖39B〕描述例示性抗PD-1抗體之序列。 〔圖40A〕至〔圖40I〕描述例示性抗PD-L1抗體之序列。 〔圖41A〕至〔圖41D〕描繪用塗佈於CM5晶片上之生物素化人類/食蟹獼猴IL18BP-Fc蛋白執行的Biacore KD測量。圖41A及圖41B：抗IL18BP Fab -人類IL18BP交互作用之Biacore影像；10 min解離（圖41A）、85 min解離（圖41B）。圖41C及圖41D：抗IL18BP Fab –食蟹獼猴IL18BP交互作用之Biacore影像，10 min解離（圖41C）、85 min解離（圖41D）。 〔圖42〕描繪表格，其顯示藉由Biacore測量之人類/食蟹獼猴抗IL18BP Fab -IL18BP交互作用之K D值。 〔圖43A〕至〔圖43B〕呈現使用MSD取得之最佳化IL18BP抗體之親和力。圖43A顯示Fab-IL18BP MSD影像（黑色）與人類IL-18 – IL18BP MSD影像（綠色）之疊加。圖43B顯示Fab-IL18BP MSD影像（黑色）與食蟹獼猴IL-18 – IL18BP MSD影像（綠色）之疊加。 〔圖44〕呈現表格，其顯示藉由MSD測量之人類/食蟹獼猴抗IL18BP Fab -IL18BP交互作用之KD值。 〔圖45〕呈現表格，其顯示藉由MSD測量之人類/食蟹獼猴IL18-IL18BP交互作用之KD值。 〔圖46〕提供所關注之αIL-18BP抗體(αIL-18BP Ab)之例示性抗體特徵。 〔圖47〕顯示IL-18BP水平在人類癌症中升高。來自TCGA資料庫之 IL18BP轉錄本在正常組織（綠色）或癌症組織（紅色）中之表現。GBM，多形性神經膠質母細胞瘤；HSNC，頭頸鱗狀細胞癌；KIRC，腎臟腎透明細胞癌；PAAD，胰臟腺癌；SKCM，皮膚黑色素瘤；STAD，胃腺癌(*P ＜ 0.01)。 〔圖48〕顯示IL-18BP在TME中之抑制性骨髓細胞群中表現，表明抗性機制。對人類結腸直腸癌(CRC)中之腫瘤浸潤骨髓細胞（包括腫瘤相關巨噬細胞(TAM)及樹突細胞(DC)）的單細胞RNA分析顯示，IL-18BP在腫瘤中之抑制性骨髓細胞群中表現。此表明腫瘤微環境(TME)中存在對免疫活化之抗性機制。左圖：周邊(PBMC)、正常腫瘤(NAT)、及腫瘤中之骨髓細胞群。右圖：IL18BP主要在cDC2-CD1C及TAM-C1QC中表現，抑制性骨髓細胞群表明IL18BP可能係腫瘤中免疫細胞活化的抗性機制。 〔圖49A〕至〔圖49D〕顯示αIL-18BP Ab (ADI-71739)增強人類T細胞之刺激活性。圖49A顯示檢定設置之示意圖示；將經解凍之腫瘤浸潤淋巴球(TIL)與MEL624細胞以1:1比例共培養，用rhIL-18 (R&D systems, 30 ng/ml)及rhIL-18BP (R&D systems, 1 µg/ml)處理30分鐘，以允許IL-18-IL-18BP複合物形成。在培養後30分鐘，將細胞用ADI-71739或同型對照(10 µg/ml)處理。圖49B顯示相較於同型對照，抗IL-18BP抗體能夠增加TIL之IFNγ分泌。圖49C顯示檢定設置之示意圖示；過度表現PD-L1之MEL-624細胞載有CMV pp65肽並經接種。將細胞與rhIL-18 (30 ng/ml)及rhIL-18BP (2 µg/ml)一起培養30分鐘，以允許IL-18-IL-18BP複合物形成。接著，將細胞用ADI-71739、派姆單抗、或同型對照處理（所有抗體皆以相同的最終濃度10 µg/ml投予）。在與抗體培養後30分鐘，將CMV反應性T細胞添加至培養物中。圖49D：ADI-71739單獨使用能夠增加CMV反應性T細胞之IFNγ分泌，且當與派姆單抗組合時以更強效的方式增加。 〔圖50A〕至〔圖50B〕顯示在MEL624:TIL檢定中抗IL-18BP抗體完全恢復IL-18活性。圖50A顯示檢定設置之示意圖示；將經解凍之腫瘤浸潤淋巴球(TIL)與MEL624細胞以1:1比例共培養，用rhIL-18 (30 ng/ml)及rhIL-18BP (1 µg/ml)處理30分鐘，以允許IL-18-IL-18BP複合物形成。在培養後30分鐘，將細胞用抗IL-18BP抗體(ADI-71722)之劑量滴定（30 µg/ml至0.01 µg/ml；稀釋因子係1:3）或同型對照(30 µg/ml)處理。圖50B顯示抗IL-18BP抗體能夠以劑量依賴性方式完全恢復IFNγ分泌。同型對照無法恢復IL-18活性。圖50C顯示抗IL-18BP抗體及計算之EC50之援救%的劑量反應曲線。代表性數據來自一個供體。抗IL-18BP Ab之援救係計算如下：[(IL-18+IL-18BP+抗IL-18BP Ab)- (IL-18+ IL-18BP+同型)]/ [(IL-18)- (IL-18+ IL-18BP+同型)]。 〔圖51A〕至〔圖51B〕顯示在體外CMV回憶檢定(recall assay)中抗hIL-18BP抗體增強PD-1及DNAM-1軸阻斷之活性。抗IL-18BP抗體單獨使用及與aPVRIG/aTIGIT/派姆單抗組合增加CMV反應性T細胞之IFNg分泌。圖51A顯示檢定設置之示意圖示；過度表現PD-L1之MEL-624細胞載有CMV pp65肽並經接種。將細胞與rhIL-18 (30 ng/ml)及rhIL-18BP (2 µg/ml)一起培養30分鐘，以允許IL-18-IL-18BP複合物形成。接著，將細胞用抗IL-18BP抗體(ADI-71722)、抗PVRIG、抗TIGIT、派姆單抗、或同型對照處理（所有抗體皆以相同的最終濃度10 µg/ml投予）。在與抗體培養後30分鐘，將CMV反應性T細胞添加至培養物中。圖51B：ADI-71722單獨使用及與抗PVRIG/抗TIGIT/派姆單抗組合增加CMV反應性T細胞之IFNγ分泌。左圖：抗IL-18BP抗體單獨使用能夠完全恢復IFNγ分泌，且當與派姆單抗/抗PVRIG組合時以更強效的方式恢復。右圖：ADI-71722單獨使用能夠完全恢復IFNγ分泌，且當與派姆單抗/抗TIGIT組合時以更強效的方式恢復。 〔圖52〕提供之數據顯示ADI-71739以高親和力結合人類及食蟹彌猴IL-18BP且以低親和力結合小鼠Il-18 bp。ADI-71739以高親和力結合人類及食蟹彌猴IL-18BP且以低親和力結合小鼠Il-18 bp：上圖（由左至右）：在KinExA中之人類IL18-IL18BP交互作用、食蟹彌猴IL18-IL18BP交互作用、及小鼠IL18-IL18BP交互作用測量，最終KD分別係441 fM、345 fM、及3.7 pM。下圖（由左至右）：在KinExA中之ADI-71739-人類IL18BP交互作用、ADI-71739 –食蟹彌猴IL18BP交互作用測量、及藉由Biacore之ADI-71739 –小鼠IL18BP交互作用測量。最終KD分別係291 fM、209 fM、及4nM。對於KinExA中之各運行，運行兩條或三條具有不同管柱結合蛋白(column binding protein, CBP)濃度之曲線，並使用n曲線分析進行分析以判定Kd。 〔圖53〕顯示抗IL18BP Ab對人類IL18BP與人類IL-18之結合的阻斷效應。使用1 ng/ml人類IL-18蛋白，藉由ELISA測試抗IL18BP Ab之阻斷效應。 〔圖54〕顯示使用可溶性IL18-IL18BP及抗IL18BP Ab之複合物的競爭ELISA。藉由ELISA測試IL18-IL18BP複合物形成之阻斷，相較於66716 Ab，MAB1191顯示阻斷活性減少。 〔圖55A〕至〔圖55B〕顯示IL18Ra在TME中之TIL亞群上表現，且相較於周邊，其表現在TIL上經誘導。IL18Ra在TME中之TIL上表現，且相較於周邊，其表現在CD4 TIL上經誘導。圖55A顯示IL18Ra在來自各種癌症類型的分離人類腫瘤之CD8+及CD4+及NK TIL上之表現。各點代表來自個別患者之不同腫瘤。將目標之MFI除以相關同型對照之MFI來計算表現倍數值。(FOI)。藉由刻度線顯示平均值及SEM。圖55B顯示IL18Ra在來自供體匹配的PBMC及TME之CD4+及CD8+ T細胞及NK細胞上之表現。使用成對t檢定（雙尾）執行統計分析，P ＜ 0.05；**p=0.0064 〔圖56A〕至〔圖56B〕顯示癌症患者血清中之IL18水平相較於HD血清中之水平增加。圖56A顯示跨適應症之患者血清中IL18分析物（IL18及IL18BP）之水平。圖56B係代表來自個別患者或HD之血清樣本中之IL18分析物的點圖。使用t檢定（雙尾）執行統計分析， P≤ 0.0005*** 〔圖57〕顯示跨適應症之腫瘤衍生上清液(tumor derived supernatant, TDS)中之IL18分析物（IL18及IL18BP）水平。代表TDS樣本中之IL18分析物的點圖。各點代表個別患者之樣本。 〔圖58A〕至〔圖58B〕顯示跨適應症之患者之腫瘤衍生上清液(TDS)中IL18（圖58A）及IL18BP（圖58B）之水平。黑線代表平均水平。 〔圖59A〕至〔圖59C〕顯示IL-18BP在TME中之抑制性骨髓細胞群中表現，表明抗性機制。IL-18BP在抑制性骨髓細胞群中表現，並與TME中之PD-L1相關，表明抗性機制。圖59A：在結腸癌及乳癌中，IL-18BP在RNA水平下與PD-L1相關(TCGA)，表明腫瘤微環境(TME)中對免疫活化之抗性機制。圖59B：對結腸癌患者之腫瘤浸潤骨髓細胞（包括腫瘤相關巨噬細胞(TAM)及樹突細胞(DC)）之單細胞RNA分析顯示，相較於周邊(PBMC)，IL-18BP在TME中之骨髓細胞群中上調，表明TME中對免疫活化之抗性機制。圖59C：對跨適應症之腫瘤浸潤骨髓細胞（包括腫瘤相關巨噬細胞(TAM)及樹突細胞(DC)）之單細胞RNA分析顯示，相較於周邊(PBMC)，IL-18BP在TME中之骨髓細胞群中上調，表明TME中對免疫活化之抗性機制 〔圖60A〕至〔圖60D〕顯示IL-18BP在免疫檢查點阻斷(ICB)治療後上調。圖60A至圖60C：IL-18BP在ICB治療後上調（RNA水平），在用抗PD-1（乳癌及基底細胞癌）或抗PD-1加上抗CTLA-4（黑色素瘤）治療後，IL-18BP水平在腫瘤微環境中上調(RNA)，表明潛在的抗性機制。圖60D：IL-18BP在aPD-(L)1治療後在NSCLC患者血清中升高，藉由ELISA定量健康供體(n = 22)及NSCLC患者(n = 52)在治療之前在基線、及在接受抗PD-(L)1治療之後(n = 52)的血漿IL-18BP蛋白水平。 〔圖61A〕至〔圖61B〕顯示IL-18BP基線血清水平可能與對抗PD-1之不良反應相關聯。在接受派姆單抗加上樂伐替尼(Lenvatinib)之腎細胞癌患者中，IL-18BP作為可溶性ICP之作用及對PD1阻斷之潛在抗性機制的支持性數據。圖61A：用派姆單抗加上樂伐替尼預治療之患者血清中的高IL-18BP係與較短的無進展存活期(PFS)相關聯。圖61B：患者血清中的高IL-18BP係用派姆單抗加上樂伐替尼預治療，其與疾病穩定或疾病進展(SD/PD)相關聯。 〔圖62〕顯示IL-18BP基線血清水平可能與對抗PD-1之不良反應相關聯。在接受抗PD-1治療之黑色素瘤癌症患者中，IL-18BP作為可溶性ICP之作用及對PD1阻斷之潛在抗性機制的支持性數據。用抗PD-1預治療之黑色素瘤癌症患者血清中的高IL-18BP係與不良反應相關聯。在針對目標產物進行強度標準化之後，對IL18BP蛋白之原始Olink數據（NPX格式）執行學生T檢定。 〔圖63A〕至〔圖63B〕顯示頭頸癌血清中之IL-18及IL-18BP水平的主成分分析(PCA)。PCA顯示在IL-18高水平與低水平的樣本之間的腫瘤部位主要係分開的。A至B.相較於其他部位，位於舌頭之腫瘤與高水平的IL-18及較低水平的IL18BP相關。 〔圖64〕顯示不同腫瘤部位之頭頸癌患者血清中之IL-18及IL-18BP水平（點圖）。顯示頭頸癌患者血清中之IL-18水平在舌頭中較高。 〔圖65A〕至〔圖65C〕顯示在抗PD-1單一療法或抗PD-1+化學療法組合後，NSCLC患者之IL18及IL18BP血漿水平增加。IL18及IL18BP之平均血漿水平在有反應之患者中在基線時較高，且在用抗PD1治療之NR患者中增加。圖65A：R/NR NSCLC患者在基線的血漿中之IL18及IL18BP水平。圖65B：個別NSCLC患者(R/NR)在基線及在單一抗PD-1治療後的血漿中之IL18及IL18BP水平。圖65C：個別NSCLC患者(R/NR)在基線、及在單一抗PD1治療後或在化學療法+抗PD-1之組合治療後的血漿中之IL18及IL18BP水平。圖65D：在單一抗PD-1治療或化學療法與抗PD-1之組合後，R/NR NSCLC患者之IL18及IL18BP自基線之變化百分比。A至C圖中之P值係依據成對T檢定獲得。 〔圖66〕顯示全血檢定數據。抗IL-18BP抗體Ab-71709無論是單獨使用或與納武單抗組合，在ID.Flow（模擬人類血液循環之離體系統）中皆未顯示全身性免疫活化之徵象。自六名健康志願者採集新鮮全血，且立即將其轉移至全血循環系統。投予測試項目，且將血液設定在37°C下循環以防止凝血。對在24 hr時間點收集之血液樣本針對血液學及流式細胞術參數進行分析，接著處理成血漿以用於細胞介素分析。包括抗CD52抗體阿侖單抗(Alemtuzumab)作為臨床上可控細胞介素釋放之參考抗體。與阿侖單抗相反，根據所採用之各種讀數，抗IL-18BP抗體無論是單獨使用或與抗PD1抗體納武單抗組合，皆不會誘導任何全身性免疫活化之徵象。 〔圖67A〕至〔圖67B〕顯示體外研究測試ADI-71739對人類TIL殺滅黑色素瘤細胞之效應。抗IL18-BP抗體ADI-71739增加腫瘤浸潤淋巴球對黑色素瘤細胞之殺滅。圖67A：檢定設置之示意圖示。將MEL624細胞與先前富集MART1或gp100肽特異性殖株之人類TIL共培養。在用10 µg/ml ADI-71739或同型對照處理前，將rhIL-18 (R&D systems, 50 ng/ml)及rhIL-18BP (R&D systems, 1 µg/ml)添加至共培養物中達30分鐘，以允許IL-18:IL-18BP複合物形成。使用IncuCyte活細胞成像儀器監測共培養物72小時。圖67B：添加IL-18（灰色）增強腫瘤細胞殺滅，如藉由MEL624細胞隨時間滿度(confluence)降低（左）及細胞凋亡增加（右）所指示。在同型對照抗體（黑色）存在下，IL-18BP廢除IL-18之效應，而抗IL-18BP抗體（綠松石色）能夠完全恢復此等效應。 〔圖68A〕至〔圖68B〕顯示體外研究測試ADI-71739與其他檢查點阻斷抗體組合之效應。抗IL-18BP抗體ADI-71739單獨使用及與aPVRIG/aTIGIT/派姆單抗組合增加CMV特異性T細胞之IFNg分泌。圖68A：檢定設置之示意圖示。過度表現PD-L1之MEL624細胞載有CMV肽pp65。將細胞與rhIL-18 (R&D systems, 30 ng/ml)及rhIL-18BP (R&D systems, 2 µg/ml)一起培養30分鐘，以允許IL-18:IL-18BP複合物形成，接著將細胞用10 µg/ml ADI-71739、或aPVRIG（抗PVRIG）、或aTIGIT（抗TIGIT）、或派姆單抗（抗PD-L1）、或同型對照（單獨或各種組合）處理。接著，將CMV特異性T細胞添加至培養物中，且在隔夜培養之後測量IFNg分泌。圖68B：單獨抗IL-18BP抗體能夠增加T細胞之IFNγ分泌，且在與派姆單抗/aPVRIG/aTIGIT組合後，此效應增強。 〔圖69A〕至〔圖69B〕顯示體外研究測試在內源性IL-18BP水平存在下ADI-71739對人類TIL功能之效應。抗IL18BP抗體ADI-71739增加腫瘤浸潤淋巴球之IFNg釋放。圖69A：檢定設置之示意圖示。將MEL624細胞與先前富集MART1或gp100肽特異性殖株之人類TIL共培養。將IL-18 (3.7 ng/ml)連同5 µg/ml ADI-71739或同型對照添加至共培養物中。共培養設定為18小時，之後測量上清液中之IFNg水平。圖69B：相較於經同型治療之樣本（黑色），用ADI-71739（綠松石色）治療之共培養物中IFNγ水平增加。顯示來自兩個TIL供體之代表性實例。 〔圖70A〕至〔圖70C〕顯示經結合IL-18水平在TME中高於體外T細胞活化所需的量。圖70A：檢定設置之示意圖示；將經解凍之腫瘤浸潤淋巴球(TIL)與MEL624細胞以1:1比例共培養，用rhIL-18（R&D systems，1.23至300 ng/ml）處理24 hr。圖70B：rhIL-18以劑量依賴性方式增加IFNγ分泌。rhIL-18在高於~1 ng/ml之濃度活化TIL，並在~100 ng/ml下達到飽和。圖70C：跨適應症之TDS中經結合IL-18之水平大多高於體外T細胞活化所需的水平。經結合IL18水平係藉由自兩個單獨的ELISA套組測得之各樣本之總IL-18扣除游離IL18來計算。紅色虛線代表功能性活性所需的水平(1.5 ng/gr)。黑線代表各腫瘤類型之經結合IL-18中位數水平。 〔圖71A〕至〔圖71B〕顯示，不同於其他細胞介素，發炎體誘導之細胞介素（諸如IL-18及IL-1b）在TME中係豐富的。圖71A：IL-18及IL-1b係發炎體衍生之細胞介素，在TME中具有相反的效應。IL-18促進T細胞及NK細胞活化並導致抗致瘤活性，而IL-1b具有雙重作用且效應之總和導致促致瘤活性。圖71B：點圖顯示在跨各種適應症測量之腫瘤衍生上清液中細胞介素之水平。各點代表一個樣本。平均值係藉由短黑線描繪。紅色虛線代表各細胞介素之偵測極限。 〔圖72〕顯示小鼠腫瘤模型中之抗IL-18BP抗體及抗PD-L1抗體組合研究。抗IL-18BP Ab與抗PD-L1 Ab之組合在小鼠腫瘤模型中增加腫瘤生長抑制及存活率。向每組十隻6週齡雌性C57BL/6小鼠皮下注射E0771，並投予mIgG1 Synagis同型對照、抗小鼠IL-18BP Ab、抗PDL1 ab、或抗小鼠IL-18BP Ab與抗PD-L1 ab之組(IP)合，接著投予6個額外劑量。腫瘤體積係以平均體積+ SEM表示。腫瘤體積係每週測量兩次。 〔圖73A〕至〔圖73I〕顯示預期投予抗IL18BP Ab具有較經工程改造之IL-18更好的治療窗及更少的周邊效應。向C57BL/6小鼠皮下注射MC38ova細胞，且每週兩次用指定之mAb Synagis mIgG1 (IP)、抗IL18 bp mIgG1 (IP)、PBS (SC)、或經工程改造之IL-18 (SC)治療。圖73A：每週將小鼠稱重一次。圖73B：將小鼠在第4次治療之前、在第4次治療之後4小時、及在第4次治療之後24小時抽血。分析血清中指示分子– IFNg、TNF、MCP1、IL6之存在。圖73C：分析血清之IL-18水平。圖73D：在第4次治療之後24小時自小鼠採集脾臟並稱重。E)將自用重組IL15或重組IL15+ILRa治療之小鼠採集的脾臟稱重。圖73F至圖73I：在使用抗IL18 bp抗體、同型對照、PBS、或經工程改造之IL18之第4次治療之後24小時自小鼠採集的脾臟中之免疫組成及淋巴球活化。 〔圖74A〕至〔圖74B〕描繪在小鼠同基因MC38ova腫瘤模型中對抗IL18-BP單一療法的評估。向C57BL/6小鼠皮下注射1.2M MC38ova細胞，且每週兩次用指定之mAb Synagis mIgG1 (IP)、抗IL18 bp mIgG1 (IP)治療。圖74A：各組之腫瘤生長測量，圖74B：各組中個別小鼠之腫瘤生長測量概述。 〔圖75A〕至〔圖75H〕顯示在MC38ova腫瘤模型中抗IL18 bp抗體調節腫瘤微環境而不影響周邊。向C57BL/6小鼠皮下注射MC38ova dim並用抗小鼠IL-18BP Ab (IP)治療。採集腫瘤、脾臟、及血清，且判定免疫組成及細胞介素濃度。圖75A至圖75G代表腫瘤微環境，圖75H代表脾臟，且圖75I代表血清。 〔圖76〕顯示MAB1191 Ab與人類IL18BP之結合，使用Biacore進行親和力測量。 〔圖77A〕至〔圖77B〕顯示在MC38ova dim腫瘤模型中抗IL18BP抗體與奧沙利鉑組合之效應。將每組10隻C57BL/6小鼠接種MC38OVA dim。在腫瘤體積(TV)係110 mm 3時，將小鼠用5 mg/kg的奧沙利鉑或對照DDW治療。在TV係140 mm 3時，將小鼠用15 mg/kg的抗IL18BP mIgG1 Ab或同型對照治療，接著用5個額外劑量治療。圖77A：TV係以平均體積± SEM表示。圖77B：描繪各小鼠之個別腫瘤測量（每組n=10）。CR-完全反應者，PR-部分反應者(TV＜=500 mm 3)，CR-完全反應者，PR-部分反應者。 〔圖78A〕至〔圖78B〕顯示在MC38OVA dim及B16F10-hmgp100小鼠腫瘤模型中抗小鼠IL18BP作為單一藥劑之抗腫瘤活性。將每組10隻C57BL/6小鼠接種MC38ova dim或B16F10-hmgp100細胞。將小鼠用指定之mAb治療：抗IL-18BP Ab或同型對照。（A至B）在MC38ova（圖78A）或B16F10-hmgp100（圖78B）小鼠腫瘤模型中抗IL-18BP Ab抑制腫瘤生長。腫瘤體積係以平均體積± SEM表示。 〔圖79A〕至〔圖79H〕顯示E0771腫瘤之免疫浸潤組成因使用抗IL-18BP Ab之單一療法而改變：將C57BL/6小鼠原位接種E0771，並用抗IL-18BP Ab或同型對照(IP)治療。採集腫瘤，且判定免疫組成及細胞介素濃度。 〔圖80A〕至〔圖80K〕顯示IL-18BP阻斷改變E0771腫瘤之免疫浸潤組成。圖80A：顯示主要細胞亞群之標記的熱圖。圖80B：相較於對照組，抗IL-18BP Ab治療中主要免疫群體頻率之富集。繪示平均頻率之log2倍數變化。點之大小指示治療之間細胞群之平均分率，而點之顏色代表P值。圖80C：如圖80B，針對T細胞群。圖80D：顯示不同T/NK亞群之標記的熱圖。圖80E：相較於對照組，抗IL-18BP Ab治療中殖株擴增頻率之富集。對TCR+ T細胞執行TCR定序及殖株型擴增之定量。圖80F至圖80G：如圖80A，針對腫瘤相關單核球及巨噬細胞（圖80F）及DC亞型（圖80G）。圖80H係顯示不同單核球及巨噬細胞亞群之標記的熱圖。圖80I係顯示不同DC亞群之標記的熱圖。圖80J顯示查詢GO Biological Process 2021基因集，對來自對照組相對於治療組之腫瘤相關單核球及巨噬細胞之DEG進行GSEA。圖80K顯示查詢WikiPathway 2021人類基因集，對來自對照組相對於治療組之腫瘤相關DC之DEG進行GSEA。 〔圖81A〕至〔圖81C〕顯示在MC38OVA dim腫瘤模型中CD4、CD8+、或NK細胞除盡對抗IL-18BP Ab之單一藥劑活性之效應：將每組10隻C57BL/6小鼠接種MC38ova dim腫瘤細胞。將小鼠用除盡mAb及用抗IL-18BP Ab或同型對照治療，接著用5個額外劑量治療。對於CD8 +細胞除盡小鼠（圖81A）、CD4 +細胞除盡小鼠（圖81B）、及NK細胞除盡小鼠（圖81C），TV以平均體積± SEM表示及Kaplan-Meier存活曲線。 〔圖82A〕至〔圖82B〕顯示抗IL18BP抗體Ab-71739增加人類腫瘤分離細胞(TDC)之TNFα、IFNγ、IL2、及GZMB釋放。A.將解離成單細胞懸浮液之經切除癌症樣品染色，以用於免疫表型分型(immuno-phenotyping)。B.將樣本與抗CD3/抗CD28 mAb一起培養以刺激T細胞，並用Ab-71739、抗PD1 Ab派姆單抗、或用Ab-71739+派姆單抗之組合治療（所有Ab皆以10 mg/ml濃度使用）。在3天之後，測量上清液中之細胞介素及顆粒酶分泌。顯示人類卵巢TDC樣本之代表性實例。 〔圖83A〕至〔圖83D〕顯示IL-18在TME中上調，且IL-18BP結合IL-18高於體外T細胞活化所需的量。圖83A顯示相較於血清，腫瘤中之IL-18水平顯著較高。自癌症患者收集血清樣本及腫瘤活體組織切片。將腫瘤活體組織切片分離，且收集上清液。使用ELISA檢定分析血清及腫瘤衍生上清液(TDS)中之IL-18表現。圖83B顯示來自跨不同適應症之個別患者之TDS樣本中之IL-18表現。圖83C顯示在TIL-腫瘤細胞共培養檢定中，重組(r) IL-18以劑量依賴性方式增加經刺激CD8+腫瘤浸潤淋巴球(TIL)之IFNg釋放。接種MEL624細胞及TIL，並用rIL-18（0至100 ng/ml）治療。將盤培養24小時，之後收集上清液以用於細胞介素分泌評估。圖83D顯示跨適應症之TDS中經結合IL-18之水平高於體外T細胞活化所需的水平。將腫瘤活體組織切片分離，收集上清液並使用游離及總IL-18 ELISA檢定進行分析。IL-18BP結合IL-18水平係藉由自兩個單獨的ELISA套組測得之各樣本之總IL-18扣除游離IL-18來計算。紅色虛線代表功能性活性所需的水平(1.5 ng/gr)。 〔圖84A〕至〔圖84B〕顯示抗IL18BP Ab（針對IL-18BP之高親和力Ab）釋放IL-18以增強體外T細胞活性。圖84A顯示在rIL-18BP及rIL-18 B存在下，在TIL-腫瘤細胞共培養檢定中，抗IL18BP Ab (10 µg/ml)自預形成之IL-18:IL-18BP複合物中置換IL-18，以增加經刺激人類CD8+TIL（N=3至4）之IFNγ及TNFα釋放。圖84B顯示抗IL18BP Ab增加人類腫瘤分離細胞之IFNγ、TNFα、GZMB、及IL-2釋放。將切除之癌症樣品分離成單細胞懸浮液，與抗CD3/抗CD28 mAb一起培養以刺激T細胞，並用抗IL18BP Ab、抗PD1 Ab（派姆單抗）、或抗IL18BP Ab +派姆單抗之組合(10 µg/ml)治療。在3天之後，測量上清液中之細胞介素及顆粒酶分泌。顯示人類卵巢TDC樣本之代表性實例。 〔圖85A〕至〔圖85D〕顯示抗小鼠IL-18BP Ab作為單一藥劑及與抗PD-L1組合抑制跨鼠類同基因腫瘤模型之腫瘤生長。A至C.相較於同型對照，抗小鼠IL-18BP Ab (15 mg/kg)作為單一藥劑在MC38OVA dim（治療起始於130至260 mm 3或330 mm 3腫瘤體積）（圖85A）、E0771（治療起始於250至270 mm 3或330 mm 3腫瘤體積）（圖85B）、及B16F10-hmgp100（治療起始於腫瘤接種後第4天）（圖85C）小鼠腫瘤模型中抑制腫瘤生長並增加存活率。將腫瘤接種至C57Bl/6小鼠；小鼠(N=10)每週接受兩次治療，總共6次治療。圖85D顯示在E0771腫瘤模型中抗小鼠IL-18BP (15 mg/kg)與抗PD-L1 Ab (5 mg/kg)協同抑制腫瘤生長。於已建立之腫瘤(330 mm 3, N=10)起始治療，且每週治療兩次，總共6次治療。腫瘤體積係以平均體積+ SEM表示。 〔圖86A〕至〔圖86F〕顯示在E0771小鼠腫瘤模型中IL-18BP阻斷增加T細胞效應狀態及殖株擴增。將C57BL/6小鼠原位接種E0771細胞，並在腫瘤體積係330 mm 3時用抗IL-18BP Ab或同型對照(15 mg/kg)每週治療兩次。在第三次治療後24hr收集腫瘤並分離。藉由流式及scRNA定序評估免疫調節。圖86A：抗IL-18BP Ab增加CD3+、CD8+、及CD4+ T細胞浸潤至腫瘤中。圖86B：抗IL-18BP Ab增加T細胞多功能性，如藉由IFNg+、IL-2+、GrB+、及GrB+IFNg+ CD8+ T細胞之增加所證明。圖86C：UMAP投影顯示用抗IL-18BP或同型對照治療之E0771腫瘤中存在的T及NK細胞。圖86D：使用對T/NK UMAP之嵌入密度估計，可視化抗IL-18BP（下）組及同型對照（上）組內之平均細胞密度。較深的顏色對應於較密集的區。圖86E：比較抗IL-18BP Ab治療與對照組的T細胞亞群之Log2倍數變化。僅描繪具有顯著變化之群。圖86F：相較於對照組，抗IL-18BP Ab治療中殖株擴增頻率之定量。 〔圖87A〕至〔圖87D〕顯示在E0771小鼠腫瘤模型中，IL-18BP阻斷增加促發炎細胞介素分泌，並使骨髓細胞偏向有利於促發炎狀態。將C57BL/6小鼠原位接種E0771細胞，並在腫瘤體積係330 mm 3時用抗IL-18BP Ab或同型對照(15 mg/kg)每週治療兩次。在第三次治療後24hr收集腫瘤並分離。藉由細胞介素剖析及scRNA定序評估免疫調節。圖87A：抗IL-18BP Ab增加IFNγ、TNFα、IL-12p70、CXCL9、及MIP-1a分泌並減少IL-1b分泌。圖87B：UMAP投影顯示用抗IL-18BP或同型對照治療之E0771腫瘤中存在的腫瘤相關單核球及巨噬細胞亞群。圖87C：使用對腫瘤相關單核球及巨噬細胞UMAP之嵌入密度估計，可視化抗IL-18BP（下）組及同型對照（上）組內之平均細胞密度。較深的顏色對應於較密集的區。圖87D：比較抗IL-18BP Ab治療與對照組的單核球及巨噬細胞亞群之Log 2倍數變化。僅描繪具有明顯變化之群。 〔圖88A〕至〔圖88C〕顯示抗小鼠IL-18BP Ab改變MC38OVA dim腫瘤之免疫浸潤組成而不影響周邊。將MC38OVA dim腫瘤接種至C57Bl/6小鼠。在腫瘤體積係120 mm 3時將小鼠隨機分組，並用抗IL-18BP Ab或用同型對照(15 mg/kg)每週治療兩次，總共4次治療。在第4次治療之後24小時採集腫瘤及脾臟，且檢查免疫組成。在相同時間點收集腫瘤上清液及血清並分析其細胞介素濃度。A至C.抗小鼠IL-18BP Ab影響TME（圖88A）中之免疫組成及細胞介素濃度，但不影響脾臟（圖88B）及血清（圖88C）中之免疫組成及細胞介素濃度。 〔圖89〕顯示抗IL-18BP Ab係潛在的首見(first-in-class)抗IL-18BP阻斷劑抗體，其在TME中釋放內源性IL-18。IL-18係效應細胞介素，其在TME中上調並在發炎體活化後分泌。IL-18BP係經由IL-18負回饋機制分泌，結合IL-18，並阻斷其免疫刺激活性。抗IL18BP Ab係高親和力IL-18BP阻斷劑Ab，具有誘導強效抗腫瘤反應及明顯TME限制性免疫調節的潛力。 〔圖90A〕至〔圖90C〕顯示在MC38OVA dim腫瘤模型中CD4、CD8+、或NK細胞除盡對抗IL-18BP Ab之單一藥劑活性之效應：將每組10隻C57BL/6小鼠接種MC38OVA dim腫瘤細胞。向小鼠投予除盡mAb及抗IL-18BP Ab或同型對照，接著投予5個額外劑量。對於CD8+ T細胞除盡小鼠（圖90A）、CD4+ T細胞除盡小鼠（圖90B）、及NK細胞除盡小鼠（圖90C），腫瘤體積以平均體積± SEM表示及Kaplan-Meier存活曲線。 〔圖91A〕至〔圖91D〕顯示IL-18BP之功效取決於TME中之免疫組成（圖91A至圖91B）。將4T1（圖91A）及LLC（圖91B）小鼠腫瘤細胞分別接種至BALB/c或C57Bl/6小鼠中。在接種後第4天，將小鼠隨機分組（每組n=10）並用抗IL-18BP Ab或用同型對照(15 mg/kg)每週治療兩次，總共6次治療。腫瘤體積係以平均體積± SEM表示。Kaplan-Meier。圖91C：使用小鼠分離套組藉由gentleMACS分離出E0771、MC38OVA dim、B16/Db-hmgp100、CT26、4T1、及LLC腫瘤。將經分離腫瘤細胞用抗CD16、抗CD32、及抗CD64 Ab之混合物阻斷，以阻斷與Fcγ受體之非特異性結合，並用目標Ab或同型對照混合物染色，以測量各樣本中CD8+ T及NK細胞之百分比。在Fortessa X-20流式細胞儀上獲取樣本。圖91D：將E0771、MC38OVA dim、B16/Db-hmgp100、CT26、4T1、及LLC之免疫組成與由IL-18BP阻斷誘導之抗腫瘤活性之程度進行比較。 〔圖92A〕及〔圖92B〕顯示相較於正常相鄰組織，IL-18表現在腫瘤中上調。對來自癌症患者之腫瘤活體組織切片及相鄰於腫瘤之正常組織(NAT)進行分析。將腫瘤活體組織切片及NAT同時分離，且收集上清液。使用ELISA套組對經結合IL-18及IL-18蛋白水平進行分析。（圖92A）17個匹配的NAT及腫瘤衍生上清液樣本中之IL-18表現，（圖92B）7個匹配的NAT及腫瘤衍生上清液樣本中之IL-18BP結合IL-18水平。IL-18BP結合IL-18水平係藉由自兩個單獨的ELISA套組測得之各樣本之總IL-18扣除游離IL-18來計算。 〔圖93A〕至〔圖93B〕描繪當藉由質譜法偵測時分別用Nep2蛋白酶（圖93A）或胃蛋白酶蛋白酶（圖93B）消化所得之hIL-18BP多肽片段，其針對全長hIL-18BP定位。hIL-18BP係分泌型hIL-18BP (SEQ ID NO: 255)，其C端與His標籤融合。 〔圖94A〕至〔圖94B〕描繪在質譜法前分別基於Nep2蛋白水解（圖94A）及胃蛋白酶蛋白水解（圖94B）定位至hIL-18BP之胺基酸序列的氫-氘交換水平。氫-氘交換減少之區域陰影較深。hIL-18BP係分泌型hIL-18BP (SEQ ID NO: 255)，其C端與His標籤融合。 〔圖95〕描繪HDX-MS結果在hIL-18BP (AF-O95998-F1)之α折疊預測結構上之作圖(mapping)。深色區域表示ADI-71739表位。 〔圖96A〕描繪ADI-71739表位區連同結合位點在與IL-18 (PDB ID: 7AL7)結合之IL-18BP的已解析晶體結構上之作圖(Detry et al., Journal of Biological Chemistry, 298(5):101908 (2022))。左結構：IL-18 BP；右結構：IL-18。箭頭分別指示抗體結合位點（ADI-71739之表位）、IL-18/IL-18 BP交互作用位點、及共享位點。 〔圖96B〕描繪圖96A中之作圖（左）的另一角度，及由區1及區6形成之三級表位之放大圖。 〔圖97〕描繪IL-18BP異構體a（查詢）及異構體b、c、及d之比對。底條表示包含ADI-71739表位之區1及區6。 〔圖98A〕至〔圖98C〕描述IL-18BP異構體a (SEQ ID NO: 254)與異構體c (SEQ ID NO: 1922)（圖98A）、異構體a與異構體d (SEQ ID NO: 1923)（圖98B）、及異構體a與異構體b (SEQ ID NO: 1921)（圖98C）之間的胺基酸序列之比對。圖98A及圖98B中之加框序列係ADI-71739之表位序列。 〔圖99A〕至〔圖99C〕顯示全長IL-18BP異構體b（圖99A）、全長IL-18BP異構體c（圖99A）、及全長IL-18BP異構體d（圖99C）之胺基酸序列。底線者係N端信號傳導肽。
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Claims (140)

  1. 一種調節患者之腫瘤微環境的方法，其包含投予包含抗IL18-BP（介白素18結合蛋白）抗體之組成物，且其中相較於未經治療患者或經對照治療患者之腫瘤微環境，該腫瘤微環境經調節。
  2. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含CD45+細胞對腫瘤微環境之浸潤。
  3. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加淋巴隔室中之CD3+細胞、CD4+細胞、及CD8+細胞。
  4. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加腫瘤微環境中效應CD8+細胞之百分比。
  5. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含誘導分泌多功能顆粒酶B+IFNγ+之CD8+細胞。
  6. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含誘導分泌TNFα-及TNFα+ IFNγ+之NK細胞。
  7. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含誘導DC2細胞。
  8. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加IFNγ、TNFα、及IL-12p70細胞介素之水平。
  9. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加CXCL9及IFNγ調控之細胞介素的分泌。
  10. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加MIP-1α分泌。
  11. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含減少IL1b分泌。
  12. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加腫瘤中T細胞之比例。
  13. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加表現穿孔素、多種顆粒酶、及IFNγ之效應多功能CD8+ T細胞。
  14. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加增殖CD8+ T細胞之數目。
  15. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含在T細胞隔室中自初始T細胞向細胞毒性CD8效應T細胞之轉變。
  16. 如請求項1或2之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節進一步包含T細胞殖株擴增(clonal expansion)。
  17. 如請求項16之調節腫瘤微環境的方法，其中T細胞殖株擴增包含每個殖株擴增超過3個細胞。
  18. 如請求項16之調節腫瘤微環境的方法，其中T細胞殖株擴增包含高GZMB及增殖CD8+ T細胞之擴增。
  19. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加腫瘤微環境中之CD8+ T細胞浸潤，但不增加血清或脾臟中之CD8+ T細胞浸潤。
  20. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加腫瘤微環境中之IFNγ分泌，但不增加血清或脾臟中之IFNγ分泌。
  21. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加IL2及TNFα自CD4+ T細胞的分泌。
  22. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加IFNγ+、IL2+、及顆粒酶B+自CD8+ T細胞的分泌。
  23. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節不包含耗竭T細胞之擴增。
  24. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加單核球及巨噬細胞隔室中之發炎性MHCII 高C1qa+及Nos2 +巨噬細胞。
  25. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加單核球及巨噬細胞隔室中之活化樹突細胞。
  26. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含減少單核球及巨噬細胞隔室中之MHCII 低C1qa+巨噬細胞、抑制性Mrc1 +巨噬細胞、Ifit +MonoMacs、及低活化DC。
  27. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加發炎性骨髓細胞。
  28. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加腫瘤微環境細胞群中未結合至IL-18BP之IL18，其足以增強投予後的免疫反應性，其中免疫反應性係以T細胞及NK細胞之活化測量。
  29. 如請求項1之調節腫瘤微環境的方法，其中該調節包含增加發育成促發炎巨噬細胞之骨髓譜系之細胞群的比例。
  30. 一種治療患者之癌症的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該癌症經治療。
  31. 一種治療患者之癌症的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，其中該抗IL18-BP抗體活化T細胞、NK細胞、NKT細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)，且/或調節骨髓細胞，且其中該癌症經治療。
  32. 一種活化患者之T細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等T細胞經活化。
  33. 一種活化患者之NK細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等NK細胞經活化。
  34. 一種活化患者之NKT細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等NKT細胞經活化。
  35. 一種調節患者之骨髓細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等骨髓細胞經調節。
  36. 一種活化患者之樹突細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等樹突細胞經活化。
  37. 一種活化患者之樹突細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等MAIT T細胞經活化。
  38. 一種活化患者之樹突細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等γδ T細胞經活化。
  39. 一種活化患者之ILC細胞的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該等ILC細胞經活化。
  40. 一種增加腫瘤微環境(TME)及/或淋巴結中IL-18介導之免疫刺激活性的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中該抗IL18-BP抗體增加TME及/或淋巴結中IL-18介導之免疫刺激活性。
  41. 一種恢復IL-18對T細胞、NK細胞、NKT細胞、骨髓細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)之活性的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，其中該抗IL18-BP抗體恢復對T細胞、NK細胞、NKT細胞、骨髓細胞、樹突細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)之活性。
  42. 一種調節患者之腫瘤微環境的方法，其包含投予包含抗IL18-BP抗體之組成物，且其中相較於未經治療患者或經對照治療患者之腫瘤微環境，該腫瘤微環境經調節。
  43. 如請求項1至42中任一項之方法，其中包含抗IL18-BP抗體之該組成物係作為穩定的液體醫藥配方投予。
  44. 如請求項12至19、21至23、28、31、32、37、38、41、或42中任一項之方法，其中該等T細胞係細胞毒性T細胞(CTL)。
  45. 如請求項44之方法，其中該等T細胞係選自由CD4 +T細胞及CD8 +T細胞所組成之群組。
  46. 如請求項30至39中任一項之方法，其中相較於對照或未經治療患者，該患者展現出腫瘤生長抑制增加至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%、300%、325%、350%、375%、400%、425%、450%、475%、500%、525%、550%、575%、600%、625%、650%、675%、700%、725%、750%、775%、800%、825%、850%、875%、900%、925%、950%、975%、或1000%。
  47. 如請求項30至39中任一項之方法，其中相較於對照或未經治療患者，該患者展現出腫瘤生長減少至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%、300%、325%、350%、375%、400%、425%、450%、475%、500%、525%、550%、575%、600%、625%、650%、675%、700%、725%、750%、775%、800%、825%、850%、875%、900%、925%、950%、975%、或1000%。
  48. 如請求項28或33之方法，其中該等NK細胞係CD16+淋巴球。
  49. 如請求項28或33之方法，其中該等NK細胞係CD56+ NK細胞。
  50. 如請求項28或33之方法，其中該活化係以一或多種活化標記之表現的增加測量。
  51. 如請求項50之方法，其中該等活化標記係選自由下列所組成之群組：CD107a、CD137、CD69、顆粒酶、及穿孔素。
  52. 如請求項32至34或36至39中任一項之方法，其中該活化係以該等NK細胞之增殖的增加測量。
  53. 如請求項32至34或36至39中任一項之方法，其中該活化係以一或多種細胞介素之分泌的增加測量。
  54. 如請求項53之方法，其中該一或多種細胞介素係選自由下列所組成之群組：IFNγ、TNF、GMCSF、MIG (CXCL9)、IP-10 (CXCL10)、及MCP1 (CCL2)。
  55. 如請求項32至34或36至39中任一項之方法，其中該活化係以目標細胞之直接殺滅的增加測量。
  56. 如請求項30至55中任一項之方法，其進一步包含投予第二抗體。
  57. 如請求項56之方法，其中該第二抗體係結合至且/或抑制人類檢查點受體蛋白之抗體。
  58. 如請求項56或57之方法，其中該第二抗體係選自由下列所組成之群組：抗PVRIG抗體、抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIGIT抗體、抗CTLA-4抗體、抗PD-L2抗體、抗B7-H3抗體、抗B7-H4抗體、抗CEACAM-1抗體、抗PVR抗體、抗LAG3抗體、抗CD112抗體、抗CD96抗體、抗TIM3抗體、抗BTLA抗體、抗ICOS抗體、抗OX40抗體、或抗41BB抗體、抗CD27抗體、或抗GITR抗體。
  59. 如請求項58之方法，其中該PVRIG抗體係選自由CHA.7.518.1.H4(S241P)及CHA.7.538.1.2.H4(S241P)所組成之群組。
  60. 如請求項58之方法，其中該抗PVRIG抗體包含：i)包含來自CHA.7.518.1.H4(S241P)之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域(SEQ ID NO:260)；及ii)包含來自CHA.7.518.1.H4(S241P)之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域(SEQ ID NO:265)。
  61. 如請求項58之方法，其中該抗PVRIG抗體包含：i)包含來自CHA.7.538.1.2.H4(S241P)之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域(SEQ ID NO:270)；及ii)包含來自CHA.7.538.1.2.H4(S241P)之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域(SEQ ID NO:275)。
  62. 如請求項58之方法，其中該抗PVRIG抗體包含：i)包含來自CHA.7.518.4之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域（SEQ ID NO:1453；圖36AG）；及ii)包含來自CHA.7.518.4之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域（SEQ ID NO:1457；圖36AG）。
  63. 如請求項58之方法，其中該抗PVRIG抗體係選自由下列所組成之群組：GSK4381562/SRF816 (GSK/Surface)、NTX2R13(Nectin Therapeutics)、如WO 2017/041004中所述之抗PVRIG抗體、如WO2001008879中所述之抗PVRIG抗體、如WO2018017864中所述之抗PVRIG抗體、及如WO2118000205中所述之抗PVRIG抗體。
  64. 如請求項58之方法，其中該抗TIGIT抗體係選自由CPA.9.083.H4(S241P)及CPA.9.086.H4(S241P)所組成之群組。
  65. 如請求項58之方法，其中該抗TIGIT抗體包含：i)包含來自CPA.9.083.H4(S241P)之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域(SEQ ID NO:350)；及ii)包含來自CPA.9.083.H4(S241P)之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域(SEQ ID NO:355)。
  66. 如請求項58之方法，其中該抗TIGIT抗體包含：i)包含來自CPA.9.086.H4(S241P)之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域(SEQ ID NO:360)；及ii)包含來自CPA.9.086.H4(S241P)之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域(SEQ ID NO:365)。
  67. 如請求項58之方法，其中該抗TIGIT抗體包含：i)包含來自CHA.9.547.18之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3的重鏈可變域（SEQ ID NO:1177；圖34QQQQ）；及ii)包含來自CHA.9.547.18之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3的輕鏈可變域（SEQ ID NO:1181；圖34QQQQ）。
  68. 如請求項58之方法，其中該抗TIGIT抗體係選自由下列所組成之群組：EOS-448 (GlaxoSmithKline, iTeos Therapeutics)、BMS-986207、多伐那利單抗(domvanalimab) (AB154, Arcus Biosciences, Inc.)、AB308 (Arcus Bioscience)、奧西伯利單抗(Ociperlimab) (aBGB-A1217, BeiGene)、替瑞利尤單抗(Tiragolumab) (MTIG7192A, RocheGenentech)、BAT6021 (Bio-Thera Solutions)、BAT6005 (Bio-Thera Solutions)、IBI939 (Innovent Biologics, US2021/00040201)、JS006 (Junshi Bioscience/COHERUS)、ASP8374 (Astellas Pharma Inc)、維博利單抗(Vibostolimab) (MK-7684, Merck Sharp & Dohme)、M6332 (Merck KGAA)、厄提吉利單抗(Etigiliimab) (OMP-313M32, Mereo BioPharma)、SEA-TGT (Seagen)y、HB0030 (Huabo Biopharma)、AK127 (AKESO)、IBI939 (Innovent Biologics)，且抗TIGIT抗體包括Genentech抗體(MTIG7192A)。
  69. 如請求項58之方法，其中該抗PD-1抗體係選自由下列所組成之群組：納武單抗(nivolumab) (Opdivo®; BMS; CheckMate078)、派姆單抗(pembrolizumab) (KEYTRUDA®; Merck)、TSR-042 (Tesaro)、西米普利單抗(cemiplimab)（REGN2810；Regeneron Pharmaceuticals，參見US20170174779）、BMS-936559、斯巴達珠單抗(Spartalizumab) (PDR001, Novartis)、皮地利珠單抗(pidilizumab) (CT-011; Pfizer Inc)、替雷利珠單抗(Tislelizumab) (BGB-A317, BeiGene)、卡瑞利珠單抗(Camrelizumab)（SHR-1210，Incyte及Jiangsu HengRui）、SHR-1210（CTR20170299及CTR20170322）、SHR-1210（CTR20160175及CTR20170090）、信迪利單抗(Sintilimab)（Tyvyt®；Eli lily及Innovent Biologics）、特瑞普利單抗(Toripalimab) (JS001, Shanghai Junshi Bioscience)、JS-001 (CTR20160274)、IBI308 (CTR20160735)、BGB-A317 (CTR20160872)、派安普利單抗(Penpulimab) (AK105, Akeso Biopharma)、賽帕利單抗(Zimberelimab) (Arcus)、BAT1306 (Bio-Thera Solutions Ltd)、薩善利單抗(Sasanlimab) (PF-06801591, pfizer)、多斯利單抗-gxly (Dostarlimab-gxly) (GlaxoSmithKline LLC)、帕洛利單抗(Prolgolimab) (Biocad)、卡度尼利單抗(Cadonilimab) (Akeso Inc)、傑洛利單抗(Geptanolimab) (Genor BioPharma Co Ltd)、斯魯利單抗(Serplulimab) (Shanghai Henlius Biotech Inc)、巴斯利單抗(Balstilimab) (Agenus Inc)、瑞弗利單抗(Retifanlimab) (Incyte Corp)、西利單抗(Cetrelimab) (Johnson & Johnson)、CS-1003 (EQRx Inc)、IBI-318 (Innovent Biologics Inc)、伊努西單抗(Ivonescimab) (Akeso Inc)、普特利單抗(Pucotenlimab) (Lepu Biopharma Co Ltd)、QL-1604 (Qilu Pharmaceutical Co Ltd)、SCTI-10A (SinoCelltech Group Ltd)、特泊利單抗(Tebotelimab) (MacroGenics Inc)、AZD-7789 (AstraZeneca Plc)、布格利單抗(Budigalimab) (AbbVie Inc)、EMB-02 (EpimAb Biotherapeutics Inc)、埃本利單抗(Ezabenlimab) (Boehringer Ingelheim International GmbH)、F-520 (Shandong New Time Pharmaceutical Co Ltd)、HX-009 (Waterstone Hanxbio Pty Ltd)、哲瓦利單抗(Zeluvalimab) (Amgen)、培雷索利單抗(Peresolimab) (Eli Lilly and Co)、羅司利單抗(Rosnilimab) (AnaptysBio Inc)、武達利單抗(Vudalimab) (Xencor)、艾珠利單抗(Izuralimab) (Xencor)、洛瑞格利單抗(Lorigerlimab) (MacroGenics Inc)、YBL-006 (Y-Biologics Inc)、及ONO-4685 (Ono Pharmaceutical Co Ltd)、LY-3434172 (Eli Lilly and Co)。
  70. 如請求項58之方法，其中該抗PD-L1抗體係選自由下列所組成之群組：阿特珠單抗(atezolizumab) (TECENTRIQ®; MPDL3280A；IMpower110；Roche/Genentech)、阿維魯單抗(avelumab) (BAVENCIO®; MSB001071 8C; EMD Serono & Pfizer)、及德瓦魯單抗(Durvalumab) (MEDI4736; IMFINZI®; AstraZeneca)。及正在開發中的其他抗體，例如洛達利單抗(Lodapolimab) (LY3300054, Eli Lily)、皮米單抗(Pimivalimab) (Jounce Therapeutics Inc)、SHR-1316 (Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd)、恩弗利單抗(Envafolimab) (Jiangsu Simcere Pharmaceutical Co Ltd)、舒格利單抗(sugemalimab) (CStone Pharmaceuticals Co Ltd)、柯希利單抗(cosibelimab) (Checkpoint Therapeutics Inc)、帕克米利單抗(pacmilimab) (CytomX Therapeutics Inc)、IBI-318、IBI-322、IBI-323 (Innovent Biologics Inc)、INBRX-105 (Inhibrx Inc)、KN-046 (Alphamab Oncology)、6MW-3211 (Mabwell Shanghai Bioscience Co Ltd)、BNT-311 (BioNTech SE)、FS-118 (F-star Therapeutics Inc)、GNC-038 (Systimmune Inc)、GR-1405 (Genrix (Shanghai) Biopharmaceutical Co Ltd)、HS-636 (Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd)、LP-002 (Lepu Biopharma Co Ltd)、PM-1003 (Biotheus Inc)、PM-8001 (Biotheus Inc)、STIA-1015 (ImmuneOncia Therapeutics LLC)、ATG-101 (Antengene Corp Ltd)、BJ-005 (BJ Bioscience Inc)、CDX-527 (Celldex Therapeutics Inc)、GNC-035 (Systimmune Inc)、GNC-039 (Systimmune Inc)、HLX-20 (Shanghai Henlius Biotech Inc)、JS-003 (Shanghai Junshi Bioscience Co Ltd)、LY-3434172 (Eli Lilly and Co)、MCLA-145 (Merus NV)、MSB-2311 (Transcenta Holding Ltd)、PF-07257876 (Pfizer Inc)、Q-1802 (QureBio Ltd)、QL-301 (QLSF Biotherapeutics Inc)、QLF-31907 (Qilu Pharmaceutical Co Ltd)、RC-98 (RemeGen Co Ltd)、TST-005 (Transcenta Holding Ltd)、阿特珠單抗(Atezolizumab) (IMpower133)、BMS-936559/MDX-1105、及/或RG-7446/MPDL3280A、及YW243.55.S70。
  71. 如請求項56至70中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體及該第二抗體係以任何順序且在一或多種配方中依序或同時投予。
  72. 如請求項56至72中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體係用於與免疫刺激抗體、細胞介素療法、免疫調節藥物、細胞毒性劑、化學治療劑、生長抑制劑、抗荷爾蒙劑、激酶抑制劑、抗血管新生劑、心臟保護劑、免疫抑制劑、促進血液細胞增殖之藥劑、血管新生抑制劑、蛋白質酪胺酸激酶(PTK)抑制劑、或其他治療劑組合使用。
  73. 如請求項56至72中任一項之方法，其進一步包含投予一或多種發炎體活化劑。
  74. 如請求項73之方法，其中該發炎體活化劑係化學治療劑。
  75. 如請求項74之方法，其中該化學治療劑係選自由下列所組成之群組：鉑（包括鉑類化學治療劑）、太平洋紫杉醇(Paclitaxel) (taxol)、索拉非尼(Sorafenib)、阿黴素(Doxorubicin)、索拉非尼、5-FU、吉西他濱(Gemcitabine)、及伊立替康(Irinotecan) (CPT-11)。
  76. 如請求項75之方法，其中該鉑類化學治療劑係奧沙利鉑(Oxaliplatin)或順鉑(Cisplatin)。
  77. 如請求項73至76中任一項之方法，其中該發炎體活化劑係CD39抑制劑。
  78. 如請求項77之方法，其中該CD39抑制劑係抗CD39抗體。
  79. 如請求項1至78中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體及該免疫刺激抗體、細胞介素療法、免疫調節藥物、細胞毒性劑、化學治療劑、生長抑制劑、抗荷爾蒙劑、激酶抑制劑、抗血管新生劑、心臟保護劑、免疫抑制劑、促進血液細胞增殖之藥劑、血管新生抑制劑、蛋白質酪胺酸激酶(PTK)抑制劑、或其他治療劑係以任何順序且在一或多種配方中依序或同時投予。
  80. 如請求項30或31之治療方法，其中該癌症係選自由下列所組成之群組：血管化腫瘤(vascularized tumor)、黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌（鱗狀細胞癌及基底細胞癌）、間皮瘤、鱗狀細胞癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神經內分泌肺癌（包括胸膜間皮瘤、神經內分泌肺癌）、NSCL（大細胞）、NSCLC大細胞腺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、NSCLC鱗狀細胞、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、肺之腺癌、肺之鱗狀細胞癌、PDL1 ＞=50% TPS之NSCLC、神經內分泌肺癌、非典型類癌肺癌、腹膜之癌症、食道癌、肝細胞癌、肝癌(liver cancer)（包括HCC）、胃癌(gastric cancer)、胃癌(stomach cancer)（包括胃腸道癌）、胰臟癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、泌尿上皮癌、膀胱癌、肝細胞瘤(hepatoma)、神經膠質瘤、腦癌（以及水腫，諸如與腦腫瘤相關聯之水腫）、乳癌（包括例如三陰性乳癌）、睪丸癌、睪丸生殖細胞腫瘤、結腸癌、結腸直腸癌(CRC)、結腸直腸癌MSS (MSS-CRC)；難治性MSS結腸直腸癌；MSS（微衛星穩定狀態）、原發性腹膜癌、原發性腹膜卵巢癌、微衛星穩定原發性腹膜癌、鉑類抗藥性微衛星穩定原發性腹膜癌、CRC（MSS未知）、直腸癌、子宮內膜癌(endometrial cancer)（包括子宮內膜癌(endometrial carcinoma)）、子宮癌、唾液腺癌、腎癌、腎細胞癌(renal cell cancer, RCC)、腎細胞癌(renal cell carcinoma, RCC)、胃食道接合部癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、類癌、頭頸癌、B細胞淋巴瘤（包括非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)以及低惡性度/濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴球性(SL) NHL、中惡性度/濾泡性NHL、中惡性度瀰漫性NHL、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、高惡性度免疫母細胞NHL、高惡性度淋巴母細胞NHL、高惡性度小非裂解細胞NHL、巨大疾病NHL (bulky disease NHL)、被套細胞淋巴瘤、AIDS相關淋巴瘤、及華氏巨球蛋白血症(Waldenström’s Macroglobulinemia)、霍奇金氏淋巴瘤(HD)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、毛細胞白血病、慢性骨髓母細胞性白血病、多發性骨髓瘤、移植後淋巴增生病症(PTLD)、與斑痣性錯構瘤(phakomatoses)相關聯之異常血管增生、Meigs氏症候群、Merkel氏細胞癌、高MSI癌症、KRAS突變腫瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、腺樣囊狀癌(adenoid cystic cancer)（包括腺樣囊狀癌(adenoid cystic carcinoma)）、黑色素瘤、惡性黑色素瘤、轉移性黑色素瘤、胰臟癌、胰臟腺癌、卵巢癌(ovarian cancer)（包括卵巢癌(ovarian carcinoma)）、胸膜間皮瘤、子宮頸鱗狀細胞癌（子宮頸SCC）、肛門鱗狀細胞癌（肛門SCC）、原發部位不明癌、膽囊癌、胸膜間皮瘤、脊索瘤、子宮內膜肉瘤、軟骨肉瘤、子宮肉瘤、葡萄膜黑色素瘤、類澱粉沉積症、AL-類澱粉沉積症、星狀細胞瘤、及骨髓增生不良症候群(MDS)。
  81. 如請求項30或31之治療方法，其中該癌症係選自由下列所組成之群組：腎透明細胞癌(RCC)、肺癌、NSCLC、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、胃腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、乳癌、三陰性乳癌(TNBC)、頭頸部腫瘤、結腸直腸腺癌、黑色素瘤、及轉移性黑色素瘤。
  82. 如請求項1至81中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含：包含抗IL18-BP抗體之組成物，該抗體用於活化T細胞、NK細胞、NKT細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)，且/或調節骨髓細胞，以用於治療癌症，其中該抗體拮抗IL18-BP之至少一種免疫抑制效應，可選地其中該抗IL18-BP抗體阻斷IL18 : IL18-BP結合交互作用，可選地其中該抗IL18-BP抗體展現出低於1pM之結合親和力或KD。
  83. 如請求項1至82中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體與結合至SEQ ID NO:254之人類IL18-BP及/或SEQ ID NO:255之人類IL18-BP之分泌鏈的抗體競爭結合、及/或與競爭結合IL18的抗體競爭結合。
  84. 如請求項1至83中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體與如下列中所述之抗體競爭結合：US8436148、WO2019213686、WO200107480。WO2019051015、WO2014126277A1、WO2012177595、US20140364341、及/或WO2018060447。
  85. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含：vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3序列，其等係選自由下列所組成之群組： i.    圖1A (66650)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 1)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 32)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 3)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 4)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 5)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 6)序列； ii.      圖1B (66670)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 7)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 8)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 9)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 10)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 11)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 12)序列； iii.     圖1C (66692)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 13)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 14)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 15)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 16)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 17)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 18)序列； iv.     圖1D (66716)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 19)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 20)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 21)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 22)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 23)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 24)序列； v.      圖1E (66650)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 25)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 26)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 27)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 28)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 29)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 30)序列； vi.     圖1F (66670)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 31)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 32)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 33)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 34)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 35)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 36)序列； vii.    圖1G (66692)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 37)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 38)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 39)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 40)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 41)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 42)序列； viii.   圖1H (66716)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 43)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 44)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 45)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 46)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 47)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 48)序列； ix.     圖1I (66650)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 844)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 845)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 846)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 847)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 848)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 849)序列； x.      圖1J (66670)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 850)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 851)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 852)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 853)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 854)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 855)序列； xi.     圖1K (66692)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 856)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 857)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 858)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 859)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 860)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 861)序列； xii.    圖1L (66716)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 862)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 863)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 864)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 865)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 866)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 867)序列； xiii.   圖2A (71709)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 55)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 56)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 57)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 60)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 61)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 62)序列； xiv.   圖2B (71719)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 65)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 66)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 67)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 70)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 71)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 72)序列； xv.    圖2C (71720)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 75)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 76)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 77)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 80)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 81)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 82)序列； xvi.   圖2D (71722)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 85)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 86)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 87)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 90)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 91)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 92)序列； xvii.  圖2E (71701)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 95)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 96)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 97)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 100)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 101)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 102)序列； xviii. 圖2F (71663)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 105)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 106)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 107)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 110)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 111)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 112)序列； xix.   圖2G (71662)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 115)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 116)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 117)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 120)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 121)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 122)序列； xx.    圖2H (66692)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 125)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 126)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 127)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 130)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 131)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 132)序列； xxi.   圖2I (71710)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 135)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 136)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 137)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 140)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 141)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 142)序列； xxii.  圖2J (71717)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 145)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 146)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 147)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 150)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 151)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 152)序列； xxiii. 圖2K (71739)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 155)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 156)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 157)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 160)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 161)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 162)序列； xxiv.  圖2L (71736)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 165)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 166)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 167)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 170)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 171)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 172)序列； xxv.   圖2M (71707)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 175)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 176)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 177)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 180)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 181)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 182)序列； xxvi.  圖2N (66716)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 185)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 186)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 187)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 190)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 191)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 192)序列； xxvii. 圖2O (71728)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 195)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 196)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 197)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 200)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 201)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 202)序列； xxviii. 圖2P (71741)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 205)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 206)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 207)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 210)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 211)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 212)序列； xxix.  圖2Q (71742)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 215)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 216)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 217)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 220)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 221)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 222)序列； xxx.   圖2R (71744)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 225)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 226)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 227)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 230)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 231)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 232)序列； xxxi.  圖2S (71753)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 235)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 236)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 237)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 240)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 241)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 242)序列；及 xxxii. 圖2T (71755)之vhCDR1 (SEQ ID NO: 245)、vhCDR2 (SEQ ID NO: 246)、vhCDR3 (SEQ ID NO: 247)、vlCDR1 (SEQ ID NO: 250)、vlCDR2 (SEQ ID NO: 251)、及vlCDR3 (SEQ ID NO: 252)序列。
  86. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含選自由下列所組成之群組的抗體之重鏈可變域及輕鏈可變域 i.       圖2A (71709)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 54)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 59)； ii.      圖2B (71719)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 64)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 69)； iii.     圖2C (71720)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 74)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 79)； iv.     圖2D (71722)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 84)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 89)； v.      圖2E (71701)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 94)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 99)； vi.     圖2F (71663)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 104)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 109)； vii.    圖2G (71662)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 114)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 119)； viii.   圖2H (66692)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 124)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 129)； ix.     圖2I (71710)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 134)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 139)； x.      圖2J (71717)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 144)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 149)； xi.     圖2K (71739)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 154)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 159)； xii.    圖2L (71736)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 164)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 169)； xiii.   圖2M (71707)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 174)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 179)； xiv.   圖2N (66716)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 184)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 189)； xv.    圖2O (71728)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 194)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 199)； xvi.   圖2P (71741)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 204)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 209)； xvii.  圖2Q (71742)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 214)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 219)； xviii. 圖2R (71744)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 224)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 229)； xix.   圖2S (71753)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 234)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 239)；及 xx.    圖2T (71755)之重鏈可變域(SEQ ID NO: 244)及輕鏈可變域(SEQ ID NO: 249)。
  87. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4之CH1-鉸鏈-CH2-CH3區，其中該鉸鏈區可選地包含突變。
  88. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG4之該CH1-鉸鏈-CH2-CH3區。
  89. 如請求項88之方法，其中該鉸鏈區包含突變。
  90. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含人類κ2輕鏈之CL區。
  91. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含人類λ2輕鏈之CL區。
  92. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H之CDR-H1，其中X係N、R、D、G、或K；X2係S、H、I、或Q；X3係M或V； b)   具有序列W-I-H-A-G-T-G-X-T-X2-Y-S-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係N、A、或V；X2係K或LW-I-H；及 c)   具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P之CDR-H3，其中X係S或E；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列E-A-S-S-L-E-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T之CDR-L3，其中X係S、V、Y、L、或Q；X2係F、S、或G。
  93. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S之CDR-H1，其中X係S或N；X2係E或S；X3係V或P b)   具有序列G-I-I-P-X-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係G或Y；X2係A或S；X3係N、I、或V；及 c)   具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T之CDR-H3，其中X係S、G、或F；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1 b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2 c)   具有序列Q-Q-V-Y-X-X2-P-W-T之CDR-L3，其中X係S或R；X2係L、I、或F-。
  94. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列F-T-F-X-N-X2-A-M-S之CDR-H1，其中X係G或D或S；X2係T或V或Y； b)   具有序列A-I-S-X-X1-X2-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G之CDR-H2，其中X係G或A；X2係N或S；X3係A或G；及 c)   具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y之CDR-H3；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A之CDR-L1，其中X係S或D； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-H-A-X-X1-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係Y或L；X1係S或F。
  95. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-S-I-S-S-X-X2-Y-X3-W-G之CDR-H1，其中X係S或P；X2係E或D；X3係G、Y、或P； b)   具有序列S-I-X-X2-X3-G-X4-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S之CDR-H2，其中X係Y或V；X2係Y或N；X3係Q或S；X4係S或A；及 c)   具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y之CDR-H3，其中X係Y或H，X2係V或L；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1 b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2 c)   具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係S或F；X2係S或V。
  96. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H之CDR-H1，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； b)   具有序列W-I-H-A-G-T-G-X-T-X2-Y-S-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；及 c)   具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P之CDR-H3，其中X係任何胺基酸；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列E-A-S-S-L-E-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T之CDR-L3，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
  97. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S之CDR-H1，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； b)   具有序列G-I-I-P-G-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸；及 c)   具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T之CDR-H3，其中X係任何胺基酸；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-V-Y-X-X2-P-W-T之CDR-L3，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
  98. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列F-T-F-X-N-X2-A-M-S之CDR-H1，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸； b)   具有序列A-I-S-X-X1-X2-G-S-T-Y-Y-A-D-S-V-K-G之CDR-H2，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸；及 c)   具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y之CDR-H3； ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A之CDR-L1，其中X係任何胺基酸； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-H-A-X-X1-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
  99. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-S-I-S-S-X-X2-Y-X3-W-G之CDR-H1，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸； b)   具有序列S-I-X-X2-X3-G-X4-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S之CDR-H2，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸；X3係任何胺基酸；X4係任何胺基酸；及 c)   具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y之CDR-H3，其中X係任何胺基酸，X2係任何胺基酸；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係任何胺基酸；X2係任何胺基酸。
  100. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列Y-T-F-X-X2-Y-A-X3-H之CDR-H1，其中X係N、R、D、G、T、Q、S、A、或K；X2係S、H、I、N、L、Y、或Q；X3係M或V； b)   具有序列X-I-X2-A-G-X3-X4-X5-T-X6-Y-S-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係W或Y；X2係H或N；X3係S、T、或A；X4係G或A；X5係N、A、T、或V；X6係E、K、或L；及 c)   具有序列A-R-G-L-G-X-V-G-P-T-G-T-S-W-F-D-P之CDR-H3，其中X係S、L、A、K、或E；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列E-A-S-S- -E-S之CDR-L2，其中X係L或S；及 c)   具有序列Q-Q-Y-R-X-X2-P-F-T之CDR-L3，其中X係S、V、Y、L、T、或Q；X2係F、S、Y、或G。
  101. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-T-F-X-X2-Y-X3-I-S之CDR-H1，其中X係S或N；X2係E或S；X3係V或P b)   具有序列G-I-I-P-X-X2-G-T-A-X3-Y-A-Q-K-F-Q-G之CDR-H2，其中X係G、S、I、或Y；X2係A、V、或S；X3係N、I、或V；及 c)   具有序列A-R-G-R-H-X-H-E-T之CDR-H3，其中X係S、G、或F；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-X-Y-X2-X3-P-W-T之CDR-L3，其中X係V或L；X2係S或R；X3係L、I、或F。
  102. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列F-T-F-X-X2-X3-X4-M-S之CDR-H1，其中X係G、S、P、或D、或S；X2係N、S、或P；X3係T、V、或Y；X4係A、H、或I； b)   具有序列A-I-S-X-X2-X3-X4-X5-T-X6-Y-A-D-S-V-K-G之CDR-H2，其中X係G或A；X2係N、T、E、或S；X3係A或G；X4係A或G；X5係S或G；X6係Y或F；及 c)   具有序列A-K-G-P-D-R-Q-V-F-D-Y之CDR-H3；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-X-S-W-L-A之CDR-L1，其中X係S或D； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-H-X-X2-X3-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係A或G；X2係Y、R、或L；X3係S、R、L、或F。
  103. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i.    重鏈可變域，其包含： a)   具有序列G-S-I-X-S-X2-X3-Y-X4-W-X5之CDR-H1，其中X係S或F；X2係S或P；X3係E或D；X4係G、P、或Y；X5係G或S； b)   具有序列X-I-X2-X3-X4-G-X5-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S之CDR-H2，其中X係S或V；X2係Y、V、F、或A；X3係Y、F、或N；X4係Q、A、或S；X5係S、A、或N；及 c)   具有序列A-R-G-P-X-R-Q-X2-F-D-Y之CDR-H3，其中X係Y、H、或F；X2係V或L；及 ii.   輕鏈可變域，其包含： a)   具有序列R-A-S-Q-G-I-S-S-W-L-A之CDR-L1； b)   具有序列A-A-S-S-L-Q-S之CDR-L2；及 c)   具有序列Q-Q-G-X-X2-F-P-Y-T之CDR-L3，其中X係S、N、W、或F；X2係S或V。
  104. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i)來自VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、或VH1-39.66716之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3；及 ii)來自VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、或VH1-39.66716之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3。來自VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、或VH1-39.66716之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3。
  105. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i)來自VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、VH1-39.66716、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3；及 ii)來自VL-κ-1-5、VL-κ-1-12、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3； 可選地其中該等CDR包含0至4個取代，且其中沒有個別CDR包含多於1個取代，且其中該vhCDR3及vlCDR3不包含取代。
  106. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i)重鏈可變域，其包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之重鏈可變域展現出至少90%、至少95%、或至少98%同一性的序列，其中各個別vhCDR包含不多於1個取代，且其中該vhCDR3不包含取代；及 ii)輕鏈可變域，其包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之輕鏈可變域展現出至少90% %、至少95%、或至少98%同一性的序列，其中各個別vlCDR包含不多於1個取代，且其中該vlCDR3不包含取代。
  107. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： i)重鏈可變域，其包含來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3，且其中該重鏈可變域包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之重鏈可變域展現出至少90%同一性的序列，其中各個別vhCDR包含不多於1個取代，且其中該vhCDR3不包含取代；及 ii)輕鏈可變域，其包含來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3，且其中該輕鏈可變域包含與來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之輕鏈可變域展現出至少90%同一性的序列，其中各個別vlCDR包含不多於1個取代，且其中該vlCDR3不包含取代。
  108. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含：來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之重鏈可變域；及來自ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755之輕鏈可變域。
  109. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG4之該CH1-鉸鏈-CH2-CH3區。
  110. 如請求項109之方法，其中該鉸鏈區包含突變。
  111. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含人類κ2輕鏈之CL區。
  112. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含人類λ2輕鏈之CL區。
  113. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： a)重鏈可變域，其包含來自選自由下列所組成之群組的抗體之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3：VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、VH1-39.66716、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755；及 b)輕鏈可變域，其包含來自選自由下列所組成之群組的抗體之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3：VL-κ-1-5、VL-κ-1-12、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755。
  114. 如請求項1至84中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含： a)重鏈可變域，其包含來自選自由下列所組成之群組的抗體之vhCDR1、vhCDR2、及vhCDR3：VH1-03.66650、VH1-69.66670、VH3-23.66692、VH1-39.66716、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755；及 b)輕鏈可變域，其包含來自選自由下列所組成之群組的抗體之vlCDR1、vlCDR2、及vlCDR3：VL-κ-1-5、VL-κ-1-12、ADI-71663、ADI-71662、ADI-66692、ADI-71701、ADI-71709、ADI-71710、ADI-71707、ADI-71717、ADI-71719、ADI-71220、ADI-71722、ADI-71736、ADI-71739、ADI-71728、ADI-66716、ADI-71741、ADI-71742、ADI-71744、ADI-71753、或ADI-71755；及 可選地，1)其中各CDR個別包含0至4個取代，且其中沒有個別CDR包含多於1個取代，且其中該vhCDR3及vlCDR3不包含取代，2)其中各CDR個別包含1個取代，或3)其中各個別vhCDR包含不多於1個取代，且其中該vhCDR3不包含取代。
  115. 如請求項1至114中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4之CH1-鉸鏈-CH2-CH3區，其中該鉸鏈區可選地包含突變。
  116. 如請求項115之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含來自人類IgG4之該CH1-鉸鏈-CH2-CH3區。
  117. 如請求項116之方法，其中該鉸鏈區包含突變。
  118. 如請求項1至117中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含人類κ2輕鏈之CL區。
  119. 如請求項1至118中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含人類λ2輕鏈之CL區。
  120. 如請求項1至119中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體與如前述請求項中任一項陳述之抗體競爭結合。
  121. 如請求項1至120中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體包含用於藉由活化患者之T細胞、NK細胞、NKT細胞、樹突細胞、MAIT T細胞、γδ T細胞、及/或先天性淋巴細胞(ILC)，且/或調節骨髓細胞來治療癌症之抗體。
  122. 如請求項1至121中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體增加腫瘤微環境(TME)及/或淋巴結中IL-18介導之免疫刺激活性。
  123. 一種抗IL18-BP抗體用於治療接受者患者之癌症的用途。
  124. 如請求項1至123中任一項之方法，其中該抗IL18BP抗體係如前述請求項中任一項使用。
  125. 如請求項1至124中任一項之方法，其中該抗IL18BP抗體係與第二抗體組合使用。
  126. 如請求項125之方法，其中該第二抗體係選自由下列所組成之群組：抗PVRIG抗體、抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、及抗TIGIT抗體。
  127. 如請求項1至126中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體展現出小於0.005 pM、0.01 pM、0.02 pM、0.03 pM、0.04 pM、0.05 pM、0.06 pM、0.07 pM、0.08 pM、0.09 pM、0.10 pM、0.15 pM、0.20 pM、0.25 pM、0.30 pM、0.35 pM、0.40 pM、0.45 pM、0.50 pM、0.55 pM、0.60 pM、0.65 pM、0.70 pM、0.75 pM、0.80 pM、0.85 pM、0.90 pM、0.95 pM、或1 pM之結合親和力或KD。
  128. 如請求項1至127中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合構象表位，該構象表位包含：包含SEQ ID NO: 1917之一或多個胺基酸殘基的第一胺基酸序列、及/或包含SEQ ID NO: 1919之一或多個胺基酸殘基的第二胺基酸序列。
  129. 如請求項128之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之殘基S1、R2、F3、P4、N5、F6、S7、I8、及L9中之一或多者。
  130. 如請求項129之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之殘基S7、I8、及L9中之一或多者。
  131. 如請求項130之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1917之殘基S7、I8、及L9。
  132. 如請求項128至131中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1919之殘基V1、D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、及R9中之一或多者。
  133. 如請求項132之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1919之殘基D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、及R9中之一或多者。
  134. 如請求項133之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合SEQ ID NO: 1919之殘基D2、P3、E4、Q5、V6、V7、Q8、及R9。
  135. 如請求項1至134中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a或IL18-BP異構體c。
  136. 如請求項135之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體a。
  137. 如請求項135之方法，其中該抗IL18-BP抗體結合IL18-BP異構體c。
  138. 如請求項1至137中任一項之方法，其中該抗IL18-BP抗體不結合IL18-BP異構體b或IL18-BP異構體d。
  139. 如請求項138之方法，其中該抗IL18-BP抗體不結合IL18-BP異構體b。
  140. 如請求項138之方法，其中該抗IL18-BP抗體不結合IL18-BP異構體d。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021021837A2 (en) * 2019-07-29 2021-02-04 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
JP2026503273A (ja) 2023-01-06 2026-01-28 ラッセン・セラピューティクス・インコーポレイテッド 抗ｉｌ－１８ｂｐ抗体

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3572982D1 (en) 1984-03-06 1989-10-19 Takeda Chemical Industries Ltd Chemically modified lymphokine and production thereof
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
CA2006596C (en) 1988-12-22 2000-09-05 Rika Ishikawa Chemically-modified g-csf
AU4116793A (en) 1992-04-24 1993-11-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
DK0672142T3 (da) 1992-12-04 2001-06-18 Medical Res Council Multivalente og multispecifikke bindingsproteiner samt fremstilling og anvendelse af disse
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
WO1998042752A1 (en) 1997-03-21 1998-10-01 Brigham And Women's Hospital Inc. Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides
IL121860A0 (en) 1997-08-14 1998-02-22 Yeda Res & Dev Interleukin-18 binding proteins their preparation and use
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
PT1071700E (pt) 1998-04-20 2010-04-23 Glycart Biotechnology Ag Modificação por glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
IL127127A0 (en) 1998-11-18 1999-09-22 Peptor Ltd Small functional units of antibody heavy chain variable regions
CA2356215C (en) 1998-12-23 2015-11-24 Pfizer Inc. Human monoclonal antibodies to ctla-4
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1141024B1 (en) 1999-01-15 2018-08-08 Genentech, Inc. POLYPEPTIDE COMPRISING A VARIANT HUMAN IgG1 Fc REGION
ES2601882T5 (es) 1999-04-09 2021-06-07 Kyowa Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
IL131047A0 (en) 1999-07-22 2001-01-28 Yeda Res & Dev Use of il-18 inhibitors
US7351673B1 (en) 1999-07-30 2008-04-01 Johns Manville Laminates including two or more layers of organic synthetic filament non-wovens and glass fiber webs and scrims
ATE354655T1 (de) 1999-08-24 2007-03-15 Medarex Inc Humane antikörper gegen ctla-4 und deren verwendungen
HUP0600342A3 (en) 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
CN102911987B (zh) 2002-04-09 2015-09-30 协和发酵麒麟株式会社 基因组被修饰的细胞
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
CA2602777C (en) 2005-03-25 2018-12-11 Tolerrx, Inc. Gitr binding molecules and uses therefor
WO2007062855A2 (en) 2005-11-30 2007-06-07 Therapharm Gmbh Radioimmunoconjugate for human cd66 for the treatment of multiple myeloma
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
ES2591281T3 (es) 2007-07-12 2016-11-25 Gitr, Inc. Terapias de combinación que emplean moléculas de enlazamiento a GITR
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
CN101855242B (zh) 2007-09-14 2014-07-30 阿迪马布有限责任公司 合理设计的合成抗体文库及其用途
EP2044949A1 (en) 2007-10-05 2009-04-08 Immutep Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response
HUE036780T2 (hu) 2008-04-09 2018-07-30 Genentech Inc Új kompozíciók és eljárások immunológiai vonatkozású betegségek kezelésére
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
CA2998281C (en) 2008-09-26 2022-08-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human anti-pd-1 antobodies and uses therefor
EP4331604B9 (en) 2008-12-09 2025-07-23 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
US20110007023A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 Sony Ericsson Mobile Communications Ab Display device, touch screen device comprising the display device, mobile device and method for sensing a force on a display device
CA2769473A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 N.V. Organon Fully human antibodies to btla
CA2772613C (en) 2009-09-03 2020-03-10 Schering Corporation Anti-gitr antibodies
PH12012501751A1 (en) 2010-03-04 2012-11-12 Macrogenics Inc Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
DK2593594T3 (en) 2010-07-16 2017-12-11 Adimab Llc ANTIBODY LIBRARIES
US20120171694A1 (en) 2010-07-30 2012-07-05 Vermillion, Inc. Predictive markers and biomarker panels for ovarian cancer
NZ716369A (en) 2010-08-23 2017-05-26 Univ Texas Anti-ox40 antibodies and methods of using the same
RU2013133846A (ru) 2010-12-20 2015-01-27 Медиммьюн Лимитед Антитела против il-18 и их применение
MX2013013627A (es) 2011-06-21 2014-04-25 Oncofactor Corp Composiciones y metodos para la terapia y diagnostico de cancer.
ES2808152T3 (es) 2011-11-28 2021-02-25 Merck Patent Gmbh Anticuerpos anti-PD-L1 y usos de los mismos
HK1206251A1 (zh) 2012-03-15 2016-01-08 Janssen Biotech, Inc. 人抗cd27抗体、方法和用途
SG10201700698WA (en) 2012-05-15 2017-02-27 Bristol Myers Squibb Co Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
KR101549637B1 (ko) 2012-06-08 2015-09-03 국립암센터 신규한 Ｔｈ1 세포 전환용 에피토프 및 이의 용도
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
WO2014022758A1 (en) 2012-08-03 2014-02-06 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Single agent anti-pd-l1 and pd-l2 dual binding antibodies and methods of use
JOP20200308A1 (ar) 2012-09-07 2017-06-16 Novartis Ag جزيئات إرتباط il-18
KR101780575B1 (ko) 2013-02-14 2017-09-21 건국대학교 산학협력단 신규한 인터루킨-33 수용체와 결합 단백질 조성물 및 그 용도
ES2808654T3 (es) 2013-03-15 2021-03-01 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Proteínas de unión anti-LAG-3
KR20160030936A (ko) 2013-07-16 2016-03-21 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 tigit 억제제를 사용한 암을 치료하는 방법
TW201605896A (zh) 2013-08-30 2016-02-16 安美基股份有限公司 Gitr抗原結合蛋白
US20160312295A1 (en) 2013-12-17 2016-10-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Gene signature biomarkers of tumor response to pd-1 antagonists
US9713364B2 (en) 2014-02-14 2017-07-25 Alyssa Ashley Simmons Foot habiliment with easily interchangeable outer
EP3119913B1 (en) 2014-03-21 2021-01-06 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Methods and compositions for treatment of immune-related diseases or disorders and/or therapy monitoring
KR20160146747A (ko) 2014-03-31 2016-12-21 제넨테크, 인크. 항혈관신생제 및 ox40 결합 효능제를 포함하는 조합 요법
CN106573977B (zh) 2014-04-27 2020-08-07 菲姆威有限公司 针对ceacam1的人源化抗体
SMT202100116T1 (it) 2014-05-28 2021-05-07 Agenus Inc Anticorpi anti-gitr e metodi di utilizzo degli stessi
PT3151921T (pt) 2014-06-06 2019-11-21 Bristol Myers Squibb Co Anticorpos contra recetor do fator de necrose tumoral induzido por glicocorticoide e utilizações dos mesmos
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
SG11201701161QA (en) 2014-08-19 2017-03-30 Merck Sharp & Dohme Anti-tigit antibodies
US10316093B2 (en) 2014-08-27 2019-06-11 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies, compositions, and uses
MX2017004311A (es) 2014-10-03 2017-12-07 Dana Farber Cancer Inst Inc Anticuerpos del receptor del factor de necrosis tumoral inducido por glucocorticoide (gitr) y metodos de uso de los mismos.
MA40662B1 (fr) 2014-12-23 2020-12-31 Bristol Myers Squibb Co Anticorps contre tigit
MA41414A (fr) 2015-01-28 2017-12-05 Centre Nat Rech Scient Protéines de liaison agonistes d' icos
IL254039B2 (en) 2015-02-19 2023-12-01 Compugen Ltd Anti-pvrig antibodies and methods of use
EP3735986A1 (en) 2015-03-23 2020-11-11 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to icos
TWI715587B (zh) 2015-05-28 2021-01-11 美商安可美德藥物股份有限公司 Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途
BR112017025297A2 (pt) 2015-06-03 2018-08-14 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos anti-gitr para diagnóstico do câncer
JO3620B1 (ar) 2015-08-05 2020-08-27 Amgen Res Munich Gmbh مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم
CN115925931A (zh) 2015-08-14 2023-04-07 默沙东公司 抗tigit抗体
WO2017040790A1 (en) 2015-09-01 2017-03-09 Agenus Inc. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
US10407484B2 (en) 2015-09-02 2019-09-10 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Compositions and methods for modulating T-cell mediated immune response
CN108137691B (zh) 2015-09-02 2021-10-19 耶路撒冷希伯来大学伊萨姆研究发展有限公司 特异性针对人类t-细胞免疫球蛋白和itim结构域(tigit)的抗体
US20180251548A1 (en) 2015-09-14 2018-09-06 Compass Therapeutics Llc Compositions and methods for treating cancer via antagonism of the cd155/tigit pathway and tgf-beta
NZ739750A (en) 2015-09-25 2019-11-29 Genentech Inc Anti-tigit antibodies and methods of use
PT3356413T (pt) 2015-10-01 2022-04-04 Potenza Therapeutics Inc Proteínas de ligação a antigénio anti-tigit e métodos de utilização das mesmas
ES2954153T3 (es) 2015-12-22 2023-11-20 Regeneron Pharma Combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anticuerpos biespecíficos anti-CD20/anti-CD3 para tratar el cáncer
JP7022993B2 (ja) 2016-01-11 2022-02-21 インヒブルクス インコーポレイテッド 多価かつ多重特異性の４１ｂｂ結合融合タンパク質
AU2017228055B2 (en) 2016-03-01 2024-04-04 University Of Rijeka Faculty Of Medicine Antibodies specific to human poliovirus receptor (PVR)
BR112018067458A2 (pt) 2016-03-04 2019-01-02 Abmuno Therapeutics Llc anticorpos para tigit
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
CN106462647A (zh) 2016-06-28 2017-02-22 深圳狗尾草智能科技有限公司 一种基于多意图的多技能包问答方法、系统和机器人
WO2018017864A2 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Pvrig-binding agents and uses thereof
JP2019530873A (ja) 2016-09-30 2019-10-24 バイオプロミック アクティエボラーグ 阻害成分の除去方法
CN110799213A (zh) 2017-06-01 2020-02-14 康姆普根有限公司 三联组合抗体疗法
MX2020002542A (es) 2017-09-06 2020-07-20 Univ Yale Variantes de interleucina-18 y metodos de uso.
CN110914304B (zh) 2017-11-10 2022-07-26 江苏恒瑞医药股份有限公司 Cd96抗体、其抗原结合片段及医药用途
JP7680208B2 (ja) 2018-04-04 2025-05-20 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗ｃｄ２７抗体およびその使用
WO2019213686A1 (en) 2018-05-10 2019-11-14 The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research Therapeutic compositions and uses therefor
US11214619B2 (en) 2018-07-20 2022-01-04 Surface Oncology, Inc. Anti-CD112R compositions and methods
SG11202100746WA (en) 2018-07-25 2021-03-30 Innovent Biologics Suzhou Co Ltd Anti-tigit antibody and use thereof
MX2022002315A (es) 2019-08-30 2022-03-25 Agenus Inc Anticuerpos anti-cd96 y sus metodos de uso.
CN120424218A (zh) 2019-10-08 2025-08-05 奈克汀治疗有限公司 针对脊髓灰质炎病毒受体(pvr)的抗体及其用途
JP7726534B2 (ja) 2020-06-30 2025-08-20 諾納生物（蘇州）有限公司 抗ｂ７ｈ４抗体及びその二重特異性抗体および用途
WO2022222125A1 (zh) 2021-04-23 2022-10-27 京东方科技集团股份有限公司 一种解锁控制方法、装置、电子设备和计算机可读存储介质
MX2024011278A (es) * 2022-03-15 2024-09-25 Compugen Ltd Anticuerpos antagonistas de il-18bp y su uso en monoterapia y terapia de combinacion en el tratamiento del cancer.

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