TW201618794A - 用於治療腎臟疾病之組成物及方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供用於治療諸如慢性腎病或NASH之腎臟疾病之方法，其使用半乳糖凝集素-3抑制劑，諸如經修飾之果膠(例如GCS-100)。亦描述用於評估及/或監測半乳糖凝集素-3抑制劑之作用的方法，例如以調整該抑制劑在療法期間之給藥方案。

Description

用於治療腎臟疾病之組成物及方法 相關申請案

本申請案主張2014年3月10日申請之美國臨時申請案第61/950,806號之權益，該申請案之內容以引用的方式併入本文中。

在已開發國家中，經診斷患有高血壓、高脂質血症及糖尿病之個體的持續上升已導致諸如慢性腎病(CKD)、NASH及末期腎病(ESRD)之腎臟疾病的發生率整體增加。(Tumlin等人，(2013)「Cardiorenal Syndrome Type 4：insights on clinical presentation and pathophysiology from the Eleventh Consensus Conference of the acute dialysis quality initiative」,Contrib Nephrol.2013；182：158-73)。慢性腎病(CKD)及末期腎病(ESRD)之發生率上升為全球醫學及流行病學問題(Redon等人，(2006)「ERIC-HTA 2003 study investigators：kidney function and cardiovascular disease in the hypertensive population：the ERIC-HTA study」,J.Hypertens 24：663-669)。在美國，據估計高達13%之人群(3000萬人)患有CKD。愈來愈多的證據顯示腎功能下降為心血管疾病之獨立風險因素。CKD患者處於更高的心肌梗塞後死亡風險下，且即使經歷短暫腎功能不全之患者亦具有增加之CVD長期風險(同上；Mathew等人，(2002)「Coronary intervention incidence and prognostic importance of acute renal failure after percutaneous coronary intervention」,Circulation 105：2259-2264)。

雖然引起患者之CKD之機制尚未完全瞭解，但愈來愈意識到在腎反應中起作用以補償腎小球濾過率(GFR)削弱及腎損傷之多個信號傳導路徑的作用。廣泛的科學研究集中於此等路徑之獨特病理生理機制上，意欲設計出用於治療腎臟疾病之新策略(Ronco等人，「Cardio-renal syndromes：report from the consensus conference of Acute Dialysis Quality Initiative」,Eur Heart J 31：703-771.)。

此等生理反應可引起多個補償性路徑活化，包括腎素-血管收縮素-醛固酮軸(RAAS)及交感神經系統上調以及鈣-副甲狀腺軸活化。(Tumlin等人，(2013)「Cardiorenal Syndrome Type 4：insights on clinical presentation and pathophysiology from the Eleventh Consensus Conference of the acute dialysis quality initiative」,Contrib Nephrol.2013；182：158-73)。

若干近期研究已顯示，半乳糖凝集素-3之循環含量增加與末期腎病(ESRD)患者中更壞結果相關聯(de Boer等人，2011)。另外，使用腎臟疾病之多個動物模型(單側輸尿管阻塞[UUO]、缺血再灌注[I/R]及腎移植)的大量臨床前研究已證實在引起腎衰竭之組織纖維化之形成中半乳糖凝集素-3由巨噬細胞之表現及分泌的直接因果作用。特定言之，經基因工程改造從而缺乏半乳糖凝集素-3之動物在腎損傷或移植之後並未展現疤痕形成(纖維化)，且實際上顯示促炎性細胞因子表現減少及與表現半乳糖凝集素-3之對照小鼠相比，腎功能改善(Henderson等人，2008,Dang等人，2012,Fernandes Bertocchi等人，2008)。

總體而言，此等發現一致強調間接或直接靶向半乳糖凝集素-3在治療腎臟疾病中之潛能。因為下調半乳糖凝集素-3之能力可減輕腎損傷且增加腎功能，所以在此項技術中非常需要鑑別靶向半乳糖凝集素 -3或半乳糖凝集素-3介導之信號傳導路徑的化合物以適當確定有效及有成本效益之治療性療程。

本文所描述之本發明提供一種安全且有效之腎臟疾病治療，其使用半乳糖凝集素-3抑制劑，尤其為經修飾之果膠，諸如GCS-100。本發明進一步提供用於治療腎臟疾病之組合療法，其中半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠聯合一或多種適用於治療癌症、心血管疾病、感染、發炎、纖維化及腎損傷之其他治療劑。亦涵蓋與治療腎臟疾病之方法相關的組成物及包括套組之製品作為本發明之一部分。

在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑以相對於其他半乳糖凝集素、尤其例如半乳糖凝集素-9，優先影響半乳糖凝集素-3含量及/或活性之劑量投與，因為該藥劑對半乳糖凝集素-3含量及/或活性之抑制程度大於其對半乳糖凝集素-9含量及/或活性之抑制程度。舉例而言，該藥劑針對半乳糖凝集素-9之IC₅₀可為其針對半乳糖凝集素-3之IC₅₀的至少2、3、5、10、20、50、100或甚至超過100倍。不希望受理論束縛，抑制半乳糖凝集素-9含量及/或活性可誘發不希望之副作用，且因此可能需要在治療有效程度上抑制半乳糖凝集素-3含量及/或活性而不實質上抑制半乳糖凝集素-9含量及/或活性。因此，在一些實施例中，本文所描述之方法包括量測用半乳糖凝集素-3抑制劑治療之患者中的半乳糖凝集素-9含量，以確定半乳糖凝集素-9含量及/或活性是否已在臨床顯著程度上受影響。若量測顯示半乳糖凝集素-9含量及/或活性已顯著受影響，則半乳糖凝集素-3抑制劑之後續劑量可相對於量測之前投與之劑量降低。

本發明之一態樣提供一種用於治療患者之腎臟疾病的方法，其包含向該患者投與至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑。

在一些實施例中，腎臟疾病係選自NASH(非酒精性脂肪肝炎)、 腎衰竭、CKD(慢性腎病)、肝腎症候群、酸中毒、ARF(急性腎衰竭)、發育不全、奧爾波特症候群(Alport syndrome)、澱粉樣變性、鎮痛劑腎病、抗-GBM病(古巴士德氏病(Goodpasture disease))、抗磷脂症候群、粥樣硬化栓子(膽固醇栓塞)、巴特症候群(Bartter syndrome)、良性家族性血尿、伯格氏病(Berger's disease)、布雷西亞-西米諾瘻管(Brescia-Cimino fistula)、鈣過敏、慢性腎盂腎炎(逆流性腎病)、CRF(慢性腎衰竭)、慢性腎機能不全、保守治療、新月體性腎炎(RPGN(迅速進展性絲球體腎炎))、膀胱炎、腎囊腫、緻密物沈積病或MCGN(腎小球膜毛細血管性絲球體腎炎)、尿崩症、糖尿病性腎病、排尿困難、水腫、ESRD或ESRF(末期腎病或末期腎衰竭)、法布立病(Fabry disease)、范康尼氏症候群(Fanconi syndrome)、原纖維性腎炎、FSGS(局部性節段性腎小球硬化症)、吉特曼症候群(Gitelman syndrome)、絲球體腎炎、血尿、HUS(溶血性尿毒症候群)、腎盂積水、亨諾-絲奇恩賴紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、肝腎症候群、腎上腺樣瘤、發育不全、IgA腎病(伯格氏病)、間質性腎炎、腰痛血尿症候群、惡性高血壓、髓質海綿腎、膜性腎病、膜增生性絲球體腎炎、MCGN(腎小球膜毛細血管性絲球體腎炎)、MPA(顯微性多血管炎)、腎病、腎病症候群、胡桃夾症候群、乏尿症、骨營養不良、佩奇腎(Page kidney)、多動脈炎、多囊性腎臟疾病(PKD)、感染後絲球體腎炎、梅乾腹症候群、腎盂腎炎、逆流性腎病、腎小管性酸中毒、腹膜後纖維化、類肉瘤病、絲奇恩賴-亨諾紫癜、硬皮病腎危象、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、全身性硬化症、全身性脈管炎、薄GBM病、血栓性血小板減少性紫癜、TTP(血栓性血小板減少性紫癜)、結節性硬化症、尿道炎、脈管炎及韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)。

在一些實施例中，患者患有CKD。

在一些實施例中，患者患有NASH。

在一些實施例中，患者具有約15-44mL/min/1.73m²之基線eGFR(腎小球濾過率)。

在一些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑為經修飾之果膠。

在一些實施例中，經修飾之果膠之主鏈包含同聚半乳糖醛酸及/或鼠李半乳糖醛酸I。

在一些實施例中，經修飾之果膠去酯化且部分解聚合，從而具有經破壞之鼠李半乳糖醛酸主鏈。

在一些實施例中，經修飾之果膠的平均分子量在50與200kDa之間，較佳在80與150kDa之間。

在一些實施例中，經修飾之果膠實質上不含分子量低於25kDa之經修飾之果膠。

在一些實施例中，經修飾之果膠為GCS-100。

在一些實施例中，經修飾之果膠藉由使經修飾或未經修飾之果膠通過切向流過濾器來製備。

在一些實施例中，該方法包含投與約0.1至2mg/m²劑量之經修飾之果膠。

在一些實施例中，劑量為約1.5mg/m²。

在一些實施例中，劑量為約1-10mg。

在一些實施例中，劑量為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg，較佳為1、3或9mg。

在一些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑每週或每兩週投與一次。

在一些實施例中，對於誘發階段，半乳糖凝集素-3抑制劑每週投與一次，且接著對於維持階段，每兩週投與一次。

在一些實施例中，誘發階段為1-3個月，較佳為2個月。

在一些實施例中，維持階段為至少1個月，較佳至少3個月或甚至六個月或更多個月。

在一些實施例中，至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少患者血清中尿酸含量之量投與。

在一些實施例中，至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少患者血清中BUN含量之量投與。

在一些實施例中，至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以引起患者中GFR改變之量投與。

在一些實施例中，至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少患者血清中半乳糖凝集素-3含量之量投與。

在一些實施例中，至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少患者中半乳糖凝集素-3表現量之量投與。

在一些實施例中，至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少患者中半乳糖凝集素-3活性之量投與。

在一些實施例中，半乳糖凝集素-3之濃度、表現量或活性相對於對照減少0.5、1、2、3、4或5倍。

在一些實施例中，該方法進一步包含1)在投與半乳糖凝集素-3抑制劑之前量測半乳糖凝集素-3之濃度、含量或活性；及2)在投與半乳糖凝集素-3抑制劑之後量測半乳糖凝集素-3之濃度、含量或活性。

在一些實施例中，在投與半乳糖凝集素-3抑制劑之後半乳糖凝集素-3之濃度、含量或活性降低指示半乳糖凝集素-3抑制劑之劑量為半乳糖凝集素-3抑制劑有效治療患者之腎臟疾病之劑量。

在一些實施例中，在投與半乳糖凝集素-3抑制劑之後半乳糖凝集素-3之濃度、含量或活性增加指示半乳糖凝集素-3抑制劑之劑量為半乳糖凝集素-3抑制劑治療患者之腎臟疾病無效之劑量。

在一些實施例中，該方法進一步包含向該患者投與量比先前投 與低的第二劑量之半乳糖凝集素-3抑制劑。

在一些實施例中，該方法進一步包含投與其他治療劑。

在一些實施例中，該其他治療劑適用於治療心血管疾病、腎衰竭、癌症、發炎、纖維化或感染。

在一些實施例中，其他治療劑係選自抗氧化劑、消炎藥、化學治療劑、抗感染劑、抗生素或抗纖維化藥物。

在一些實施例中，該方法包含半乳糖凝集素-3抑制劑與該治療劑同時投與。

在一些實施例中，該方法包含半乳糖凝集素-3抑制劑在投與該治療劑之後投與。

在一些實施例中，該方法包含該治療劑在投與半乳糖凝集素-3抑制劑之後投與。

在一些實施例中，該方法包含在至少8週之時間段內投與多個劑量之半乳糖凝集素-3抑制劑。

在一些實施例中，該方法包含每週投與半乳糖凝集素-3抑制劑一次。

在一些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑藉由注射或靜脈內輸注來投與。

在一些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑藉由靜脈內輸注來投與。

預期本文所描述之所有實施例，包括在本發明之不同態樣下描述之實施例，在未特別禁止下均可彼此組合。

圖1描繪已知之哺乳動物半乳糖凝集素家族。

圖2示意性地描繪未結合及結合於半乳糖凝集素-3之GCS-100的結構。

圖3展示在癌症患者中單一1.5mg/m²劑量後相對於基線半乳糖凝集素-3之GCS-100濃度。

圖4展示在癌症患者中單一30mg/m²劑量後相對於基線半乳糖凝集素-3之GCS-100濃度。

圖5展示eGFR隨時間之改變。

本文提供用於治療諸如慢性腎病或NASH之腎臟疾病之方法，其使用半乳糖凝集素-3抑制劑，尤其為經修飾之果膠，諸如GCS-100。本發明進一步提供用於治療腎臟疾病之組合療法，其中半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠聯合一或多種適用於治療癌症、心血管疾病、感染、發炎、纖維化及腎損傷之其他治療劑。亦描述用於評估及/或監測半乳糖凝集素-3抑制劑之作用的方法，例如以調整該抑制劑在療法期間之給藥方案。亦涵蓋與治療腎臟疾病之方法相關的組成物及包括套組之製品作為本發明之一部分。

在下文中更詳細地描述本發明之各種態樣。

I.定義

除非本文中另外定義，否則本申請案中所用之科學及技術術語應具有一般技術者通常所理解之含義。一般而言，本文所描述之與化學、分子生物學、細胞及癌症生物學、免疫學、微生物學、藥理學以及蛋白質及核酸化學相關之命名法及技術為此項技術中所熟知且常用之命名法及技術。

在本說明書通篇中，詞語「包含(comprise)」或如「包含(comprises)」或「包含(comprising)」之變化形式應理解為暗示包括所陳述之整數(或組分)或整數(或組分)之群，但不排除任何其他整數(或組分)或整數(或組分)之群。除非上下文另外明確規定，否則單數形式「一(a或an)」及「該」包括複數。術語「包括」用於意謂「包括(但 不限於)」。「包括」及「包括(但不限於)」可互換使用。

「約」及「大約」一般應意謂鑒於量測值之性質或精確度，所量測之量之可接受誤差程度。通常，示例性誤差程度在給定值或值範圍之20%內，較佳在10%內，且更佳在5%內。或者且尤其在生物系統中，術語「約」及「大約」可意謂在給定值之數量級內，較佳在5倍內且更佳在2倍內的值。除非另外說明，否則本文中給定之數值量為近似值，意謂當未明確陳述時可推斷術語「約」或「大約」。

「基線」為在第一次研究藥物投與之前獲取的最後評估。

「自基線之改變」為基線後值與基線值之間的算術差異：自基線之改變=(基線後值-基線值)

自基線之改變百分比=[(基線後值-基線值)/基線值]×100。

「體表面積」或BSA由下式定義：

如本文中所使用之「臨床反應」係指藥劑治療效用之指示物。舉例而言，臨床反應可藉由在患有慢性腎病(CKD)且基線之估計之腎小球濾過率(eGFR)為約15-44mL/min/1.73m²的患者中，在投與經修飾之果膠(諸如GCS-100)8週之後，相對於對照，eGFR自基線之改變來確定。臨床反應可為CKD患者中相對於對照投與8週之經修飾之果膠的安全性及耐受性。在某些實施例中，臨床反應為相對於對照，經修飾之果膠對以下各者之作用的量測：1)循環半乳糖凝集素-3含量；2)血清標記物；及/或3)發炎、纖維化及腎損傷之標記物。

如短語「第一藥劑與第二藥劑組合」中之術語「組合」包括第一藥劑與第二藥劑共同投與，其例如可溶解或互混於相同的醫藥學上可接受之載劑中，或者投與第一藥劑，接著投與第二藥劑，或投與第二藥劑，接著投與第一藥劑。因此，本發明包括組合治療性治療方法 及組合醫藥組成物。

如短語「伴隨治療性治療」中之術語「伴隨」包括在第二藥劑存在下投與一種藥劑。伴隨治療性治療方法包括其中第一、第二、第三或者其他藥劑共同投與之方法。伴隨治療性治療方法亦包括其中第一或其他藥劑在第二或其他藥劑存在下投與的方法，其中第二或其他藥劑例如可已預先投與。伴隨治療性治療方法可藉由不同執行人逐步執行。舉例而言，一個執行人可向個體投與第一藥劑，且第二執行人可向該個體投與第二藥劑，且投與步驟可同時執行，或幾乎同時執行，或相隔較久執行，只要第一藥劑(及其他藥劑)在第二藥劑(及其他藥劑)存在下投與即可。執行人及個體可為相同實體(例如人類)。

如本文所用之術語「聯合療法」及「組合療法」係指投與兩種或兩種以上治療物質，例如半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠及用於治療發炎、纖維化、腎損傷或癌症之另一藥物。其他藥物可伴隨半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠的投與、在其之前或之後來投與。

如本文所用之術語「劑量」係指諸如半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)之治療劑投與個體的量。

如本文所用之術語「給藥」係指投與治療劑，諸如半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)，以實現治療目標(例如治療腎臟疾病)。給藥量可基於半乳糖凝集素-3之基線含量。一種確定適當劑量之方式將為量測基線半乳糖凝集素以確定標靶劑量，接著在投與之後進行其他量測以確定該劑量對半乳糖凝集素-3之作用。

「給藥方案」描述用於投與治療劑，諸如半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)之時程，例如長時段或整個治療過程之治療時程，例如在第0週投與第一劑量之半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)，接著以每週或每兩週一次之給藥方案 投與第二劑量之半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)。

「腎小球濾過率」或GFR為用於檢查腎功能運作情況之測試。特定言之，其估計每分鐘多少血液通過腎小球。腎小球為腎中過濾來自血液之廢棄物的微小過濾器。GFR可每2週、4週、6週、8週、10週、12週、16週、20週、24週、26週、28週、32週、34週、36週、42週、44週、48週、50週、52週、56週、57週等量測一次。較佳地，GFR在第0週、第50週及第57週量測。

術語「固定劑量」或「全身劑量」係指作為每次投與時，向所治療之個體遞送之治療劑之恆定量的劑量。在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)以在0.1mg/m²至30mg/m²範圍內之固定劑量投與個體。在某些實施例中，經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑以0.1mg/m²、0.5mg/m²、1mg/m²、3mg/m²、6mg/m²、9mg/m²、12mg/m²、15mg/m²、18mg/m²、21mg/m²、24mg/m²、27mg/m²、30mg/m²、35mg/m²、40mg/m²、50mg/m²、60mg/m²、70mg/m²、80mg/m²、90mg/m²、100mg/m²、110mg/m²、120mg/m²、130mg/m²、140mg/m²、150mg/m²、160mg/m²、170mg/m²、180mg/m²、190mg/m²、200mg/m²等固定劑量投與個體。任一以上提及之敍述值之間的值範圍亦意欲包括於本發明之範疇中，例如0.2mg/m²、0.6mg/m²、1.9mg/m²、4mg/m²、8mg/m²、10mg/m²、13mg/m²、17mg/m²、20mg/m²、23mg/m²、25mg/m²、26mg/m²、28mg/m²、32mg/m²、45mg/m²、55mg/m²、65mg/m²、75mg/m²、85mg/m²、95mg/m²、105mg/m²、115mg/m²、125mg/m²、135mg/m²、145mg/m²、155mg/m²、165mg/m²、175mg/m²、185mg/m²、195mg/m²、205mg/m²，如基於以上提及之劑量之範圍，例如0.1-5mg/m²、5-10mg/m²、10-15mg/m²、15-20 mg/m²、20-25mg/m²、25-30mg/m²、30-80mg/m²、80-120mg/m²、120-150mg/m²、150-175mg/m²、175-200mg/m²。全身劑量不應超過每週1g/m²或每天200mg/m² 5次。

術語「誘發劑量」或「起始劑量」在本文中可互換使用，係指最初用於治療腎臟疾病之經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑(例如GCS-100)的第一劑量。起始劑量可例如在誘發階段期間投與。起始劑量可大於後續維持或治療劑量。誘發劑量可為單一劑量或一組劑量。舉例而言，1.5mg/m²劑量可作為單一1.5mg/m²劑量、作為兩個各0.75mg/m²劑量或四個各0.375mg/m²劑量投與。在某些實施例中，隨後在誘發劑量之後，投與較小劑量之經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑(例如GCS-100)，例如治療或維持劑量。誘發劑量在療法誘發或起始階段期間投與。誘發階段之後可為維持階段。

「需要治療」者包括已患有腎臟疾病之哺乳動物，諸如人類，包括其中有待防止該疾病或病症者，例如經鑑別處於出現該疾病或病症之風險下者。

如本文所用之術語「腎臟疾病」係指腎臟之任何腎病、疾病、病狀、病痛、感染、發炎、惡化、纖維化、損傷或結疤。腎臟疾病可包括(但不限於)以下：NASH(非酒精性脂肪肝炎)、腎衰竭、CKD(慢性腎病)、肝腎症候群、酸中毒、ARF(急性腎衰竭)、發育不全、奧爾波特症候群、澱粉樣變性、鎮痛劑腎病、抗-GBM病(古巴士德氏病)、抗磷脂症候群、粥樣硬化栓子(膽固醇栓塞)、巴特症候群、良性家族性血尿、伯格氏病、布雷西亞-西米諾瘻管、鈣過敏、慢性腎盂腎炎(逆流性腎病)、CRF(慢性腎衰竭)、慢性腎機能不全、新月體性腎炎RPGN(迅速進展性絲球體腎炎)、膀胱炎、腎囊腫、緻密物沈積病或MCGN(腎小球膜毛細血管性絲球體腎炎)、尿崩症、糖尿病性腎病、排尿困難、水腫、ESRD或ESRF(末期腎病或末期腎衰竭)、法布 立病、范康尼氏症候群、原纖維性腎炎、FSGS(局部性節段性腎小球硬化症)、吉特曼症候群、絲球體腎炎、血尿、HUS(溶血性尿毒症候群)、腎盂積水、亨諾-絲奇恩賴紫癜、肝腎症候群、腎上腺樣瘤、發育不全、IgA腎病(伯格氏病)、間質性腎炎、腰痛血尿症候群、惡性高血壓、髓質海綿腎、膜性腎病、膜增生性絲球體腎炎、MCGN(腎小球膜毛細血管性絲球體腎炎)、MPA(顯微性多血管炎)、腎病、腎病症候群、胡桃夾症候群、乏尿症、骨營養不良、佩奇腎、多動脈炎、多囊性腎臟疾病(PKD)、感染後絲球體腎炎、梅乾腹症候群、腎盂腎炎、逆流性腎病、腎小管性酸中毒、腹膜後纖維化、類肉瘤病、絲奇恩賴-亨諾紫癜、硬皮病腎危象、休格連氏症候群、全身性硬化症、全身性脈管炎、薄GBM病、TTP(血栓性血小板減少性紫癜)、結節性硬化症、尿道炎、脈管炎及韋格納氏肉芽腫病。

術語「凝集素」係指在體內發現的與位於細胞表面上及細胞之間的碳水化合物糖特異性相互作用的蛋白質。此相互作用引起細胞改變行為，包括細胞移動、增殖及其他細胞功能。凝集素與其標靶碳水化合物糖之間的相互作用經由凝集素內之碳水化合物識別結構域(CRD)發生。半乳糖凝集素為凝集素子族。

術語「半乳糖凝集素」為具有與β-半乳糖苷糖分子特異性結合之CRD的凝集素子族。半乳糖凝集素具有大量功能，包括介導細胞存活及黏附，促進細胞-細胞相互作用、血管生長及調節免疫系統及發炎反應(Leffler等人，2004)。當前，存在15種已知之哺乳動物半乳糖凝集素，其可劃分成三個亞類：具有一個CRD之半乳糖凝集素(半乳糖凝集素1、2、5、7、10、13、14及15)、具有兩個CRD之半乳糖凝集素(半乳糖凝集素4、6、8、9及12)及具有一個CRD及包含胺基酸尾之第二結構域之半乳糖凝集素(半乳糖凝集素3)，如圖1中所描繪。在低濃度下，半乳糖凝集素以單體形式存在。然而，在較高濃度下，其以 二聚體及寡聚物形式存在(圖1)，且因此在細胞內及在細胞與其環境之間與含β-半乳糖苷之受體形成晶格樣網狀物(圖1)。因而，在低濃度下，半乳糖凝集素可具有在上調及過度表現時改變之不同生物功能(Rabinovich等人，2007)。

術語「維持療法」或「維持給藥方案」係指經診斷患有腎臟疾病之個體或患者的治療時程，以使其能夠將健康維持在既定狀態下，例如減少腎損傷或實現臨床反應。舉例而言，本發明之維持療法可使患者能夠維持其健康在完全或實質上無症狀之狀態下。或者，本發明之維持療法可使患者能夠維持其健康在相對於接受療法之前患者的狀況，與該疾病相關之症狀顯著減少的狀態下。

如本文所用之術語「維持階段」或「治療階段」係指包含向個體投與經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑(例如GCS-100)以維持所希望之治療作用，例如改善與腎臟疾病相關之症狀的治療時段。維持階段之前可為誘發階段，誘發階段通常劑量大於維持劑量，例如其目的在於將諸如經修飾之果膠的治療劑在患者血漿中之含量自基線含量(例如0)快速提高至治療有效窗，隨後藉由在維持階段投與而維持。

術語「維持劑量」或「治療劑量」為維持或繼續所希望之治療作用，由個體獲取的經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑(例如GCS-100)之量。維持劑量可為單一劑量或一組劑量。維持劑量在療法之治療或維持階段期間投與。通常，維持劑量小於誘發劑量，且當依次投與時維持劑量可彼此相等。

短語「多變劑量」包括投與個體以進行治療性治療的經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑(例如GCS-100)的不同劑量。「多變給藥方案」或「多變劑量療法」描述基於在整個治療過程中的各個時間點，投與不同量之經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑(例如GCS- 100)的治療時程。

術語「醫藥學上有效量」或「治療有效量」係指組成物或治療劑(諸如半乳糖凝集素-3抑制劑)有效治療患者之腎臟疾病，例如改善腎功能及/或實現罹患腎病之患者之整體健康狀態的有益及/或所需改變之量。「醫藥學上有效量」或「治療有效量」亦指改善患者臨床症狀之量。

如本文中所使用之短語「醫藥學上可接受之賦形劑」意謂熟習此項技術者將認為適合於形成適於投與個體之醫藥調配物的醫藥學上可接受之物質、組成物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、潤滑劑、黏合劑、載劑、保濕劑、崩解劑、溶劑或囊封材料。各賦形劑必須在與調配物之其他成分相容的意義上「可接受」，以及如上所定義「醫藥學上可接受」。可充當醫藥學上可接受之賦形劑的物質之實例包括(但不限於)：糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及醋酸纖維素；粉末狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；二氧化矽、蠟；油類，諸如玉米油及芝麻油；二醇類，諸如丙二醇及丙三醇；多元醇類，諸如山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；酯類，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑；海藻酸；無熱原質水；等張生理食鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution)；以及醫藥調配物中常用之其他對人體無毒的相容物質。

術語「預防」為此項技術中所公認，且當關於諸如腎臟疾病之醫學病狀使用時，為此項技術中所充分理解，且包括投與一種組成物，使得相對於未接受組成物之個體，減少個體中醫學病狀之症狀的頻率或延遲其發作。腎毒性之預防包括例如自腎移除有毒物質以避免彼等物質對腎及其功能之不利影響。

術語「防治性」或「治療性」治療為此項技術中所公認，且係 指投與藥物至宿主。若其在不欲病狀(例如疾病或宿主動物之其他不欲狀態)之臨床表現之前投與，則治療為防治性的，亦即其保護宿主避免出現不欲病狀，而若在不欲病狀呈現之後投與，則治療為治療性的(亦即意圖減輕、改善或維持現有不欲病狀或其副作用)。防治性及治療性治療可結合已知之緩解腎功能不全之方法，諸如(但不限於)血管成形術、血液透析、血液過濾、震波碎石、透析及姑息性護理來使用。

如本文所用之術語「個體」及「患者」可互換使用。在某些實施例中，個體係指可用經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑(例如GCS-100)治療性治療的個體。

「實質上不含」具有低於某一數目之某一分子量的經修飾之果膠意謂組成物具有低於1%，較佳低於0.5%或甚至低於0.1%的分子量低於該數目之經修飾之果膠。

諸如本發明之經修飾之果膠的化合物關於本發明治療方法之「治療有效量」係指製劑中當化合物作為所需給藥方案的一部分投與個體時實現治療目標(例如治療腎臟疾病)之量。治療有效量可藉由量測基線半乳糖凝集素-3含量以確定標靶劑量，接著在投與之後進行其他量測以確定該劑量對半乳糖凝集素-3之作用來確定。在此類實施例中，若患者的半乳糖凝集素-3含量或活性降低、抑制或減少，則該劑量為治療有效量。

如在本發明之上下文中使用之術語「治療」意謂包括治療性治療以及防治性或抑制性措施。

III.半乳糖凝集素-3抑制劑

在本發明之某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑為結合於半乳糖凝集素-3且例如藉由降低其抗細胞凋亡活性來抑制半乳糖凝集素-3的藥劑。此類藥劑可例如藉由阻止半乳糖凝集素-3之細胞內信號轉導 路徑及/或易位來起作用。僅僅為了說明，該藥劑可為抑制半乳糖凝集素-3之多聚合及/或半乳糖凝集素-3與諸如Bcl-2或bcl-xL之抗細胞凋亡Bcl-2蛋白質之相互作用的藥劑。其亦可為諸如藉由抑制半乳糖凝集素-3在Ser-6之磷酸化來抑制半乳糖凝集素-3磷酸化的藥劑。在總機制層面下，抑制劑可為抑制半乳糖凝集素-3在細胞核與細胞質之間的易位或抑制半乳糖凝集素-3易位至核周膜且抑制細胞色素C自粒線體釋放的藥劑。抑制劑亦可為例如藉由結合於半乳糖凝集素-3且抑制其來誘發纖維母細胞增殖的藥劑。

本發明所涵蓋之一類半乳糖凝集素-3抑制劑為結合於半乳糖凝集素-3且抑制其抗細胞凋亡活性之聚合物，尤其為含碳水化合物之聚合物。適用於本發明之物質一般可包含天然或合成聚合物及寡聚物。較佳地，此類聚合物毒性極低。

用於實踐本發明之一較佳類別聚合物為衍生自碳水化合物之聚合物，其含有活性半乳糖凝集素結合糖位點，但分子量比單糖高，使得其能夠持續阻斷、活化、抑制或與半乳糖凝集素蛋白質進行其他相互作用。一較佳類別之治療物質包含富含半乳糖或阿拉伯糖之天然或合成來源之寡聚或聚合物質，諸如果膠。此類物質之分子量可較佳在高達500,000道爾頓(dalton)範圍內，且更佳在高達100,000道爾頓範圍內。一種特定物質包含實質上去甲氧基化聚半乳糖醛酸主鏈，該主鏈可間雜有側接有半乳糖封端之側鏈的鼠李糖。另一特定物質包含側接有或未側接側鏈之同聚半乳糖醛酸主鏈。

果膠為複雜碳水化合物，其具有高度分支結構，由附接有許多分支側鏈之聚半乳糖醛酸主鏈構成。分支產生特徵為「平滑」及「毛狀」之區域。已發現果膠可藉由各種化學物質、酶或物理處理來修飾以將分子分裂成具有更線性化、實質上去甲氧基化之聚半乳糖醛酸主鏈及具有減少分支之鼠李糖殘基側接側鏈的較小部分。所得部分解聚 果膠在此項技術中稱為經修飾之果膠。

在某些實施例中，本發明提供一種經修飾之果膠，其包含具有中性糖側鏈之鼠李半乳糖醛酸及/或同聚半乳糖醛酸主鏈且具有低程度之附接主鏈之中性糖分支。在某些實施例中，經修飾之果膠去酯化且部分解聚合，從而具有經破壞之鼠李半乳糖醛酸主鏈。

在某些實施例中，經修飾之果膠包括半乳糖醛酸與鼠李半乳糖醛酸I之共聚物，其中至少一些含半乳糖及阿拉伯糖之側鏈仍然附接。在較佳實施例中，經修飾之果膠具有50-200kD、較佳70-200kD、更佳70-150kD之平均分子量，如凝膠滲透層析法(GPC)與多角度雷射光散射(MALLS)偵測所量測。

在某些實施例中，經修飾之果膠包含其中具有少量鼠李半乳糖醛酸之同聚半乳糖醛酸主鏈，其中主鏈具有含低程度之附接主鏈之分支的中性糖側鏈。在特定實施例中，同聚半乳糖醛酸主鏈之半乳糖醛酸次單元已部分去酯化。

在某些實施例中，本發明可藉由以下式I及II中之任一者或兩者描述，且應瞭解，此等通式之變體可根據美國專利第8,128,966號中所描述之原理製備及利用。

同聚半乳糖醛酸-[α-GalpA-(1→4)-α-GalpA]_n- (I)

鼠李半乳糖醛酸

在上式中，m0，n、o及p1，X為α-Rhap；且Y_m表示糖之直鏈或分支鏈(鏈Y_m中之各Y可獨立地表示鏈內不同糖)。糖Y可為但不限於以下任一者：α-Galp、β-Galp、β-Apif、β-Rhap、α-Rhap、α-Fucp、 β-GlcpA、α-GalpA、β-GalpA、β-DhapA、Kdop、β-Acef、α-Araf、β-Araf及α-Xylp。

此類型之一種示例性聚合物為經修飾之果膠，較佳為水溶性pH修飾之柑橘果膠。此類型之適合聚合物揭示於例如美國專利5,834,442、5,895,784、6,274,566、6,500,807、7,491,708及8,128,966、美國專利公開案2002/0107222及PCT公開案WO 96/01640及WO 03/000118中。

可瞭解到，天然果膠不具有絕對規則之重複結構，且果膠之部分水解很可能引入其他隨機變化，使得由以上式II表示之p重複單元的一個重複與下一個重複的Y_m身分及「n」及「o」值可不同。

本文中使用之縮寫糖單體名稱如下定義：GalA：半乳糖醛酸；Rha：鼠李糖；Gal：半乳糖；Api：赤-芹菜糖；Fuc：海藻糖；GlcA：葡糖醛酸；DhaA：3-去氧-D-來蘇糖-庚酮糖酸；Kdo：3-去氧-D-甘露糖-2-辛酮糖酸；Ace：槭樹酸(3-C-羧基-5-去氧-L-來蘇糖)；Ara：阿拉伯糖。斜體p指示哌喃醣形式，且斜體f指示呋喃醣環。

揭示內容以引用的方式併入本文中的美國專利第5,895,784號、第8,128,966號、第8,658,224號、第8,409,635號、第8,420,133號及第8,187,642號描述經修飾之果膠物質、其製備技術及該物質作為各種癌症之治療的用途，且此等物質亦可用於本文所描述之組成物及方法中。如'784專利中所描述，藉由其中將果膠投入溶液中且暴露於pH值之一系列漸進改變的基於pH值之修飾程序製備的經修飾之果膠導致分子分解，得到治療有效之經修飾之果膠。較佳起始物質為柑橘果膠，不過應瞭解經修飾之果膠可由獲自諸如蘋果果膠之其他來源的果膠製備。此外，修飾可藉由果膠之酶處理或藉由諸如加熱之物理製程進行。經修飾之果膠及其製備技術及用途的其他揭示內容亦見於揭示內容以引用的方式併入本文中的美國專利5,834,442及7,491,708中。 此類型經修飾之果膠一般具有在低於100千道爾頓範圍內的分子量。一組此類物質具有低於3千道爾頓之平均分子量。另一組具有在1-15千道爾頓範圍內之平均分子量，其中一組特定物質具有約10千道爾頓之分子量。在某些實施例中，經修飾之果膠具有果膠酸聚合物之結構，其中仍然存在一些果膠酸側鏈。在較佳實施例中，經修飾之果膠為同聚半乳糖醛酸與鼠李半乳糖醛酸I之共聚物，其中一些含半乳糖及阿拉伯糖之側鏈仍然附接。該經修飾之果膠可具有1至500千道爾頓(kD)、較佳10至250kD、更佳50-200kD或80-150kD且最佳80至100kD之平均分子量，如藉由凝膠滲透層析法(GPC)與多角度雷射光散射(MALLS)偵測所量測。在某些實施例中，經修飾之果膠為平均分子量在20-70kD範圍內的經修飾之蘋果果膠。在某些實施例中，經修飾之果膠可具有在1-15kD範圍內的平均分子量，而在其他實施例中，經修飾之果膠具有在15-60kD範圍內的平均分子量。參見以全文引用的方式併入本文中的Gunning等人，The FASEB Journal,(2009)第23卷，第416頁，結合半乳糖凝集素-3之半乳聚糖的論述部分。此類半乳聚糖亦可用於本文所描述之組成物及方法中。

在某些實施例中，經修飾之果膠實質上不含分子量低於25kDa之經修飾之果膠。經修飾之果膠可藉由使經修飾或未經修飾之果膠通過切向流過濾器來製備。

酯化程度為經修飾之果膠的另一特徵。在某些實施例中，酯化程度可在0與80%之間、在10%與60%之間、在0與50%之間或在20%與60%之間，諸如20%-45%或30%-40%酯化。

醣含量為經修飾之果膠的另一特徵。在某些實施例中，經修飾之果膠完全由單一類型之醣次單元構成。在其他實施例中，經修飾之果膠包含至少兩種、較佳至少三種且最佳至少四種類型之醣次單元。舉例而言，經修飾之果膠可完全由半乳糖醛酸次單元構成。或者，經 修飾之果膠可包含半乳糖醛酸與鼠李糖次單元之組合。在又一實例中，經修飾之果膠可包含半乳糖醛酸、鼠李糖及半乳糖次單元之組合。在又一實例中，經修飾之果膠可包含半乳糖醛酸、鼠李糖及阿拉伯糖次單元之組合。在再一個實例中，經修飾之果膠可包含半乳糖醛酸、鼠李糖、半乳糖及阿拉伯糖次單元之組合。在一些實施例中，經修飾之果膠的半乳糖醛酸含量超過50%，較佳超過60%且最佳超過80%。在一些實施例中，鼠李糖含量低於25%，較佳低於15%且最佳低於10%；半乳糖含量低於50%，較佳低於40%且最佳低於30%；且阿拉伯糖含量低於15%，較佳低於10%且最佳低於5%。在某些實施例中，除上述醣單元之外，經修飾之果膠亦可含有其他糖醛酸、木糖、核糖、來蘇糖、葡萄糖、阿洛糖、阿卓糖、艾杜糖、塔羅糖、葡萄糖、甘露糖、果糖、阿洛酮糖、山梨糖或塔拉糖。

適用於本發明方法之經修飾之果膠亦可具有多種鍵之任一者或其組合。鍵意謂果膠中之個別糖彼此附接之位點。在一些實施例中，經修飾之果膠僅僅包含單一類型之鍵。在某些較佳實施例中，經修飾之果膠包含至少兩種類型鍵，且最佳至少3種類型鍵。舉例而言，經修飾之果膠可僅僅包含α-1,4鍵聯之半乳糖醛酸次單元。或者，經修飾之果膠可包含α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元。在另一實例中，經修飾之果膠可由經由4位鍵聯至阿拉伯糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元構成。在另一實例中，經修飾之果膠可包含經由4位鍵聯至阿拉伯糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元以及其他3-鍵聯之阿拉伯糖次單元。在另一實例中，經修飾之果膠可包含經由4位鍵聯至阿拉伯糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元以及其他5-鍵聯之阿拉伯糖單元。在另一實例中，經修飾之果膠可包含經由4位鍵聯至阿拉伯糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單 元及α-1,2-鼠李糖次單元以及其他3-鍵聯及5-鍵聯之阿拉伯糖次單元。在另一實例中，經修飾之果膠可包含經由4位鍵聯至阿拉伯糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元以及具有3,5-鍵聯之阿拉伯糖分支點的其他3-鍵聯及5-鍵聯之阿拉伯糖次單元。在另一實例中，經修飾之果膠可包含經由4位鍵聯至半乳糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元。在另一實例中，經修飾之果膠可包含經由4位鍵聯至半乳糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元以及其他3-鍵聯之半乳糖次單元。在另一實例中，經修飾之果膠可包含經由4位鍵聯至半乳糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元以及其他4-鍵聯之半乳糖次單元。在另一實例中，經修飾之果膠可包含經由4位鍵聯至半乳糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元以及具有3,6-鍵聯之分支點的其他3-鍵聯之半乳糖次單元。在另一實例中，經修飾之果膠可包含經由4位鍵聯至半乳糖次單元之α-1,4-鍵聯之半乳糖醛酸次單元及α-1,2-鼠李糖次單元以及具有4,6-鍵聯之分支點之其他4-鍵聯之半乳糖次單元。在某些實施例中，除上述醣單元之外，經修飾之果膠之側鏈亦可包含糖醛酸、半乳糖醛酸、葡糖醛酸、鼠李糖、木糖、核糖、來蘇糖、葡萄糖、阿洛糖、阿卓糖、艾杜糖、塔羅糖、葡萄糖、甘露糖、果糖、阿洛酮糖、山梨糖或塔拉糖。

適合於本文所描述之組成物及方法的經修飾之果膠可具有上述特徵中之一或多者。

包括能夠結合及抑制半乳糖凝集素-3之半乳糖殘基的其他碳水化合物物質亦可用於本文所揭示之組成物及方法中。舉例而言，甘露聚糖、葡聚糖、聚半乳糖醛酸鹽、聚葡糖胺及其他水溶性多醣(參見例如以引用的方式併入本文中的Platt等人之美國專利公開案 2005/0043272的其中揭示之組成物部分)可用作半乳糖凝集素-3抑制劑。諸如半乳糖、鼠李糖、甘露糖或阿拉伯糖之標靶特異性碳水化合物的包括可變化，以靶向腫瘤細胞上特定凝集素類型受體，例如調節半乳糖凝集素-3對比半乳糖凝集素-9之相對抑制。熟習此項技術者將認識到在聚合物上可存在一群異質碳水化合物殘基，如一些天然存在之聚合物一樣，諸如經修飾之果膠及一些半乳聚糖。特定多醣包括聚半乳甘露糖(例如來自瓜兒豆(Cyamopsis tetragonolobus))、阿拉伯半乳聚糖(例如來自落葉松(Larix occidentalis))、鼠李半乳糖醛酸(例如來自馬鈴薯)、角叉菜膠(例如來自麒麟菜屬海藻(Eucheuma seaweed)及刺槐豆膠(例如來自長角豆(Ceratonia siliqua))。

經烷基修飾之多醣可來源於天然來源及/或以合成方式由天然存在之碳水化合物聚合物製備。烷基化多醣之微生物來源為熟習此項技術者所熟知，參見例如美國專利第5,997,881號，其教示以全文引用的方式併入本文中。一些微生物來源已用於溢油修復操作中(參見Gutnick及Bach「Engineering bacterial biopolymers for the biosorption of heavy metals」；Applied Microbiology and Biotechnology,54(4)第451-460頁，(2000)；亦參見美國專利第4,395,354號，Gutnick等人1983，整個教示以引用的方式併入本文中)。此等溢油修復活性有關之微生物稱為「Emulsan」，其中一些其多醣經O-醯基化。類似烷基化碳水化合物亦自酵母醱酵分離且稱為槐糖脂。

適合多醣之另一實例為基本上由2-胺基-2,6-二去氧基醛己醣、葡糖胺及一或多種非胺化糖組成之多醣鏈，其中胺化糖之胺基實質上均為乙醯化形式。多醣鏈以酯鍵鍵聯至由約10至約18個碳原子之50%-95%包含十二酸及3-羥基-十二酸的飽和及/或不飽和鏈組成之烷基部分。在一個特定態樣中，十二酸以超過3-羥基-十二酸之量存在。

視情況，烷基化多醣可包含陰離子基團，諸如磷酸根、硫酸 根、硝酸根、羧基及/或硫酸根，同時維持疏水性部分。

舉例而言，合成多醣可用約8至約40個碳原子之直鏈或分支鏈烷基酯化。此等烷基可為脂族基或不飽和，且視情況可含有一或多個芳族基團。在某些實施例中，烷基化多醣之表面可使用碳水化合物配位體，例如半乳糖、鼠李糖、甘露糖或阿拉伯糖來進一步衍生，以進一步增強凝集素之識別位點。本發明之多醣可使用烷基、芳基或其他化學部分衍生。

在特定實施例中，多醣可為半乳甘露聚糖，如均以引用的方式併入本文中的美國專利公開案2003/0064957、2005/0053664、2011/0077217及2013/0302471的其中揭示之組成物部分中所述。舉例而言，半乳甘露聚糖之分子量可具有在20-600kD範圍內之平均分子量，例如半乳甘露聚糖具有在90至415kD或40-200kD範圍內之分子量，諸如83kD或215kD之平均分子量。適合聚半乳甘露糖可自美國皂莢(Gleditsia triacanthos)、角豆樹(Ceratonia siliqua)、野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)、葫蘆巴(Trigonella foenum-graecum)、黃花苜蓿(Medicago falcate)或瓜爾豆(Cyamopsis tetragonoloba)分離，或可由自其分離之聚半乳甘露糖製備。

在某些此類實施例中，半乳甘露聚糖可為β-1→4-D-半乳甘露聚糖且包括其中甘露糖在1.0-3.0範圍內且半乳糖在0.5-1.5範圍內的半乳糖與甘露糖比率。或者，半乳甘露聚糖可具有2.6個甘露糖與1.5個半乳糖之比率。

在某些實施例中，半乳甘露聚糖具有2.2個甘露糖與0.9個半乳糖之比率。或者，半乳甘露聚糖可具有1.13個甘露糖與1個半乳糖之比率。或者，半乳甘露聚糖可具有2.2個甘露糖與1個半乳糖之比率。

在某些實施例中，多醣可為β-1,4-D-半乳甘露聚糖且包括約1.7之甘露糖與半乳糖之比率。在某些實施例中，半乳甘露聚糖多醣之分子 量在約4至約200kD範圍內。在某些特定實施例中，半乳甘露聚糖具有約40至60kD之平均重量。在另一個態樣中，半乳甘露聚糖之結構為聚-β-1,4甘露聚糖主鏈，其中側取代基經由α-1-6-糖苷鍵附接。在某些實施例中，半乳甘露聚糖多醣可為β-1,4-D-半乳甘露聚糖。在某些特定實施例中，多醣為(((1,4)-鍵聯之β-D-吡喃甘露糖)17-((1,6)-鍵聯之β-D-吡喃半乳糖)10)12)。

適合多醣可具有標靶特異性碳水化合物之側支鏈，諸如半乳糖、鼠李糖、甘露糖或阿拉伯糖，以賦予靶向細胞表面上特定凝集素類型受體的識別能力，例如調節半乳糖凝集素-3對比半乳糖凝集素-9之相對抑制。支鏈可為寡醣之單一單元或兩個或兩個以上單元。

又一種適合多醣揭示於以引用的方式併入本文中的美國專利公開案2005/0282773的其中揭示之組成物部分中。此類多醣可具有糖醛酸主鏈或糖醛酸酯醣主鏈，該等主鏈具有連接至主鏈之中性單醣，約每二十個主鏈單元一個至每二十五個主鏈單元一個。所得多醣可具有至少一個包含大部分中性醣及醣衍生物之側鏈，該側鏈經由約七個至二十五個中性單醣中一個連接至主鏈。一些較佳多醣可具有至少一個醣側鏈，該側鏈進一步實質上不具有二級醣支鏈，其中封端醣包含半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖或其衍生物。其他較佳多醣可具有至少一個以經阿魏醯基修飾之醣封端的醣側鏈。

適合多醣可具有在約40,000-400,000道爾頓之間的平均分子量範圍，具有多個醣支鏈，例如由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等構成之支鏈，且此等支鏈可經由諸如鼠李糖之中性單醣連接至主鏈。此等分子可進一步包括可自少至約10%至多達約90%糖醛酸殘基酯化的糖醛酸醣主鏈。多個支鏈本身可具有多個醣支鏈，該多個支鏈視情況包括中性醣及中性醣衍生物。

此類多醣可藉由化學修飾程序來製備，該化學修飾程序包含依 序使用控制之pH值、溫度及時間，例如在37℃下pH 10.0 30分鐘，接著在25℃下約3.5之pH值12小時(參見實例1)，pH值依賴性解聚合成較小的去分支化多醣分子。視情況選用之替代性修飾程序為在鹼性溶液中在諸如硼氫化鉀之還原劑存在下使多醣水解，形成尺寸對應於重複次單元之片段(參見例如美國專利第5,554,386號)。化學修飾之多醣的分子量範圍係在5至60kD範圍內，更特定言之，在約15-40kD範圍內，且更特定言之，例如約20kD。

其他適合多醣揭示於以引用的方式併入本文中的美國專利公開案2008/0107622的其中揭示之組成物部分中。一種類型此類多醣包括半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯(GR)，GR為交替1,2-鍵聯之鼠李糖與1,4-鍵聯之半乳糖殘基的分支鏈雜聚物，其攜有主要1,4-β-D-半乳糖及/或1,5-α-L-阿拉伯糖殘基之附接至RGI主鏈之鼠李糖殘基的中性側鏈。GR側鏈可經阿拉伯糖基殘基(阿拉伯半乳聚糖I)或包括海藻糖、木糖及甘露糖之其他糖裝飾。此等在商業使用中亦稱為果膠物質。

此等多醣之製備可包括修飾天然存在之聚合物以將分子量減少在所需範圍，調節烷基化基團(去甲氧基化或去乙醯化)，且調整側鏈寡醣以達成最佳功效。舉例而言，天然多醣可具有在約40,000-1,000,000之間的分子量範圍，具有多個醣支鏈，例如由1至20個葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等單醣構成之支鏈，且此等支鏈可經由諸如鼠李糖之中性單醣連接至主鏈。此等分子可進一步包括少至約2%至多達約30%可酯化之糖醛酸醣主鏈。多個支鏈本身可具有多個醣支鏈，該多個支鏈視情況包括中性醣及中性醣衍生物，產生主要疏水性實體。

在某些實施例中，鼠李糖半乳糖醛酸酯具有2.0至200kD之分子量範圍。在特定實例中，鼠李糖半乳糖醛酸酯可具有約34kD或約135kD之平均尺寸分子量且經由化學、酶及/或物理處理獲得。起始物質 可經由自柑橘皮、蘋果渣、大豆殼或糖用甜菜之果膠物質或如熟習此項技術者所顯而易見之其他適合物質分離及/或純化來獲得。

在某些實施例中，可溶性化學上改變之半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯藉由修飾天然存在之聚合物以減少分子量在所需範圍，減少烷基化基團(去甲氧基化或去乙醯化)來製備。在化學修飾之前，天然多醣可具有在約40,000-1,000,000之間的分子量範圍，具有多個醣支鏈，例如由1至20個葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等單醣構成之支鏈，且此等支鏈可經由諸如鼠李糖之中性單醣連接至主鏈。此等分子可進一步包括少至約2%至多達約30%可酯化之單一糖醛酸醣主鏈或一條鏈之糖醛酸醣主鏈。多個支鏈本身可具有多個醣支鏈，該多個支鏈視情況包括中性醣及中性醣衍生物，產生主要疏水性實體。

亦可使用較小醣。適合化合物包括N-乙醯基乳糖胺及其衍生物(參見例如Sorme等人，Chembiochem.2002年3月1日；3(2-3)：183-9，以全文引用的方式併入本文中，其揭示一系列3'-胺基-N-乙醯基乳糖胺衍生物)以及其寡聚及聚合衍生物，諸如聚-N-乙醯基乳糖胺。

結合於半乳糖凝集素-3之其他類別半乳糖凝集素-3抑制劑包括對半乳糖凝集素-3具有特異性之抗體、結合於半乳糖凝集素-3且干擾其活性之肽及多肽以及結合於半乳糖凝集素-3且抑制其之小(較佳低於2500amu)有機分子。

為進一步說明，在本發明之某些實施例中，本發明之方法可使用與半乳糖凝集素-3進行免疫反應且抑制其抗細胞凋亡活性之抗體或其片段進行。

一種示例性蛋白質治療劑描述於PCT公開案WO 02/100343中。該參考文獻揭示某些N端截短之半乳糖凝集素-3蛋白質，其抑制完整半乳糖凝集素-3與碳水化合物配位體之結合，從而亦抑制可為半乳糖凝集素-3抗細胞凋亡活性所需要的其多聚合及交聯活性。

半乳糖凝集素-3之示例性小分子抑制劑包括硫代二半乳糖苷(諸如Leffler等人，1986,J.Biol.Chem.261：10119中所描述)及以引用的方式併入本文中的PCT公開案WO 02/057284的其中揭示之抑制劑部分中所描述之藥劑。

在結合於半乳糖凝集素-3之半乳糖凝集素-3抑制劑的某些較佳實施例中，選擇結合半乳糖凝集素-3之解離常數(Kd)為10^-6M或10^-6M以下且甚至更佳低於10^-7M、10^-8M或甚至10^-9M之抑制劑。

適用於本發明之某些半乳糖凝集素-3抑制劑藉由結合於半乳糖凝集素-3且破壞半乳糖凝集素-3與一或多種抗細胞凋亡Bcl-2蛋白質相互作用來起作用。半乳糖凝集素-3抑制劑可直接結合於Bcl-2結合位點，由此競爭性地抑制Bcl-2結合。然而，亦涵蓋結合於Bcl-2蛋白質之半乳糖凝集素-3抑制劑，且包括結合於Bcl-2蛋白質且競爭性地或異位抑制與半乳糖凝集素-3之相互作用的半乳糖凝集素-3抑制劑。

如上文所提及，某些本發明之半乳糖凝集素-3抑制劑藉由抑制半乳糖凝集素-3之磷酸化來發揮其作用。半乳糖凝集素-3抑制劑之結合可阻斷引起半乳糖凝集素-3磷酸化之激酶進入，或可引起半乳糖凝集素之構形改變，隱藏或暴露磷酸化位點。然而，本發明亦涵蓋直接對引起半乳糖凝集素-3磷酸化之激酶起作用的激酶抑制劑之使用。

在其他實施例中，半乳糖凝集素-3活性之抑制亦藉由抑制半乳糖凝集素-3蛋白質之表現來實現。此類抑制使用具有對應於自半乳糖凝集素-3基因轉錄之mRNA序列一部分之序列的反義或RNAi構築體實現。

在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑可為核酸。在某些實施例中，本發明係關於反義核酸之使用，其與半乳糖凝集素-3 mRNA雜交且減少半乳糖凝集素-3之表現。此類反義核酸可例如呈表現質體遞送，其在細胞中轉錄時，產生與編碼半乳糖凝集素-3之細胞mRNA之 至少獨特部分互補的RNA。或者，構築體為離體產生且在引入至細胞中時藉由與編碼半乳糖凝集素-3之mRNA及/或基因組序列雜交而抑制表現的寡核苷酸。此類寡核苷酸為視情況經修飾之寡核苷酸，其對例如外切核酸酶及/或內切核酸酶之內源性核酸酶具抗性，因此在體內為穩定的。用作反義寡核苷酸之示例性核酸分子為DNA之胺基磷酸酯、硫代磷酸酯及甲基磷酸酯類似物(亦參見美國專利第5,176,996號、第5,264,564號及第5,256,775號)。另外，已例如藉由van der Krol等人，(1988)Biotechniques 6：958-976；及Stein等人，1988,Cancer Res.48：2659-2668評述構築適用於核酸療法之寡聚物的一般方法。

在其他實施例中，本發明係關於使用RNA干擾(RNAi)實現半乳糖凝集素-3基因表現之阻斷。RNAi構築體包含可特異性地阻斷標靶基因表現之雙股RNA。「RNA干擾」或「RNAi」為最初應用於在植物及蠕蟲中觀測到之其中雙股RNA(dsRNA)以特定及轉錄後方式阻斷基因表現之現象的術語。RNAi提供一種在活體外或在活體內抑制基因表現之適用方法。如本文所使用，術語「RNAi構築體」為包括小干擾RNA(siRNA)、髮夾RNA及可在活體內裂解以形成siRNA之其他RNA物質的通用術語。本文中之RNAi構築體亦包括能夠產生在細胞中形成dsRNA或髮夾RNA之轉錄物及/或可以在活體內產生siRNA之轉錄物的表現載體(亦稱為RNAi表現載體)。

RNAi構築體可包含與標靶核酸序列一致或實質上一致的dsRNA長延伸或僅僅與標靶核酸序列之一個區域一致或實質上一致的dsRNA短延伸。

視情況，RNAi構築體含有在細胞生理條件下與有待抑制之基因(亦即「標靶」基因)的mRNA轉錄物之至少一部分的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。雙股RNA僅僅需要足夠類似於天然RNA，使得其具有介導RNAi之能力。因此，本發明具有能夠耐受因遺傳突變、株系多 形現象或進化差異而預期之序列變化的優點。標靶序列與RNAi構築體序列之間的耐受核苷酸錯配數目不超過5個鹼基對中之1個，或10個鹼基對中之1個，或20個鹼基對中之1個，或50個鹼基對中之1個。siRNA雙螺旋中心中之錯配最為關鍵且可基本上消除標靶RNA之裂解。相比之下，與標靶RNA互補之siRNA股3'末端之核苷酸並未顯著造成標靶識別之特異性。序列一致性可藉由此項技術中已知之序列比較及比對演算法(參見Gribskov及Devereux,Sequence Analysis Primer,Stockton Press,1991及其中所引用之參考文獻)，且藉由例如如BESTFIT軟體程式中使用預設參數(例如University of Wisconsin Genetic Computing Group)所實現之史密斯-沃特曼演算法(Smith-Waterman algorithm)計算核苷酸序列之間的差異百分比來最佳化。抑制RNA與標靶基因部分之間超過90%序列一致性或甚至100%序列一致性為較佳。或者，RNA雙螺旋區可在功能上定義為能夠與標靶基因轉錄物一部分雜交(例如400mM NaCl、40mM PIPES pH 6.4、1mM EDTA、50℃或70℃雜交12-16小時；接著洗滌)的核苷酸序列。

雙股結構可藉由單一自我互補RNA股或兩個互補RNA股形成。RNA雙螺旋形成可在細胞內部或外部開始。RNA可以允許每一細胞遞送至少一個複本之量引入。更高劑量(例如每一細胞至少5、10、100、500或1000個複本)雙股物質可產生更有效抑制，而更低劑量亦可適用於特定應用。抑制為序列特異性的，因為靶向對應於RNA雙螺旋區之核苷酸序列，從而遺傳性抑制。

本發明之RNAi構築體可為「小干擾RNA」或「siRNA」。此等核酸約19-30個核苷酸長，且甚至更佳為21-23個核苷酸長。應瞭解siRNA募集核酸酶複合物且藉由與特定序列配對將複合物引導至標靶mRNA。因此，標靶mRNA藉由蛋白質複合物中之核酸酶降解。在一些實施例中，21-23個核苷酸siRNA分子包含3'羥基。在某些實施例 中，siRNA構築體可藉由例如在酶dicer存在下加工更長雙股RNA來產生。舉例而言，可使用果蠅活體外系統。在此系統中，dsRNA與來源於果蠅胚胎之可溶性提取物組合，由此產生組合。組合維持在其中dsRNA加工成約21至約23個核苷酸之RNA分子的條件下。siRNA分子可使用熟習此項技術者已知之大量技術純化。舉例而言，凝膠電泳可用於純化siRNA。或者，諸如非變性管柱層析法之非變性方法可用於純化siRNA。此外，層析法(例如尺寸排阻層析法)、丙三醇梯度離心、使用抗體之親和力純化可用於純化siRNA。

可藉由化學合成方法或藉由重組核酸技術產生RNAi構築體。經處理細胞之內源性RNA聚合酶可介導活體內轉錄，或選殖RNA聚合酶可用於活體外轉錄。RNAi構築體可包括對磷酸酯-糖主鏈或核苷之修飾，例如減少對細胞核酸酶之敏感性、提高生物可用性、改良調配物特徵及/或改變其他藥物動力學特性。舉例而言，天然RNA磷酸二酯鍵可經修飾以包括氮或硫雜原子中之至少一者。RNA結構之修飾可調整以允許特異性遺傳性抑制，同時避免對dsRNA之一般反應。同樣，鹼基可經修飾以阻斷腺苷脫胺酶之活性。RNAi構築體可以酶促方式或藉由部分/總有機合成產生，任何經修飾之核糖核苷酸可藉由活體外酶或有機合成引入。化學上修飾RNA分子之方法可適用於修飾RNAi構築體(參見例如Heidenreich等人，1997,Nucleic Acids Res.,25：776-780；Wilson等人，1994,J.Mol.Recog.7：89-98；Chen等人，1995,Nucleic Acids Res.23：2661-2668；Hirschbein等人，1997,Antisense Nucleic Acid Drug Dev.7：55-61)。僅僅為了說明，RNAi構築體之主鏈可經硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、二硫代磷酸酯、嵌合甲基磷酸酯-磷酸二酯、肽核酸、含有5-丙炔基-嘧啶之寡聚物或糖修飾(例如2'-經取代核糖核苷、a-組態)修飾。

在一些情況下，siRNA分子之至少一股具有約1至約6個核苷酸長 之3'突出物，不過可為2至4個核苷酸長。更佳地，3'突出物為1-3個核苷酸長。在某些實施例中，一股具有3'突出物且另一股為鈍端或亦具有突出物。各股的突出物長度可相同或不同。為進一步增強siRNA之穩定性，3'突出物可穩定化以免降解。在一些實施例中，RNA藉由包括諸如腺苷或鳥苷核苷酸之嘌呤核苷酸來穩定化。或者，嘧啶核苷酸藉由經修飾之類似物取代，例如容許尿苷核苷酸3'突出物藉由2'-去氧胸苷取代，且不影響RNAi效率。2'羥基之缺乏顯著增強突出物在組織培養基中之核酸酶抗性且在活體內可為有益的。

RNAi構築體亦可呈長雙股RNA形式。在某些實施例中，RNAi構築體為至少25、50、100、200、300或400個鹼基。在某些實施例中，RNAi構築體為400-800個鹼基長。雙股RNA在細胞內消化，例如在細胞中產生siRNA序列。然而，在體內長雙股RNA之使用並非一直切實可行的，可能因為由序列非依賴性dsRNA反應所引起的有害作用。在此類實施例中，使用減少干擾素或PKR作用之局部遞送系統及/或藥劑為較佳。

或者，RNAi構築體呈髮夾結構形式(命名為髮夾RNA)。髮夾RNA可外源合成，或可藉由在活體內自RNA聚合酶III啟動子轉錄而形成。在哺乳動物細胞中製造及使用此類髮夾RNA以達成基因沉默之實例描述於例如Paddison等人，Genes Dev.,2002,16：948-58；McCaffrey等人，Nature,2002,418：38-9；McManus等人，RNA,2002,8：842-50；Yu等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA,2002,99：6047-52中。較佳地，此類髮夾RNA在細胞中或在動物中工程改造以確保所需基因之連續及穩定抑制。此項技術中已知siRNA可藉由在細胞中加工髮夾RNA來產生。

在其他實施例中，本發明係關於核糖核酸酶分子之用途，其經設計以催化裂解半乳糖凝集素-3 mRNA轉錄物，從而防止mRNA轉譯 (參見例如1990年10月4日公開之PCT國際公開案WO90/11364；Sarver等人，1990,Science 247：1222-1225；以及美國專利第5,093,246號)。雖然在位點特異性識別序列使mRNA裂解之核糖核酸酶可用於破壞特定mRNA，但使用錘頭狀核糖核酸酶為較佳。錘頭狀核糖核酸酶使mRNA在由與標靶mRNA形成互補鹼基對之側接區域指定的位置裂解。唯一需要為標靶mRNA具有兩個鹼基之以下序列：5'-UG-3'。錘頭狀核糖核酸酶之構築及產生為此項技術中熟知且更完全地描述於Haseloff及Gerlach,1988,Nature,334：585-591中。本發明之核糖核酸酶亦包括RNA核糖核酸內切酶(「切赫型核糖核酸酶(Cech-type ribozyme)」，諸如天然存在於四膜蟲(Tetrahymena thermophila)中且已廣泛描述之RNA核糖核酸內切酶(稱為IVS或L-19 IVS RNA)(參見例如Zaug等人，1984,Science,224：574-578；Zaug及Cech,1986,Science,231：470-475；Zaug等人，1986,Nature,324：429-433；University Patents Inc.公開之國際專利申請案第WO88/04300號；Been及Cech,1986,Cell,47：207-216)。

在其他實施例中，本發明係關於DNA酶之用途，其用以抑制半乳糖凝集素-3基因之表現。DNA酶併入反義與核糖核酸酶技術之一些機制特徵。DNA酶經設計，使得其識別特定標靶核酸序列，非常像反義寡核苷酸，然而，非常像核糖核酸酶，其催化且特異性裂解標靶核酸。簡言之，為設計一種特異性識別且裂解標靶核酸之理想DNA酶，熟習此項技術者必須首先鑑別獨特標靶序列。較佳地，該獨特或實質上序列富含G/C，具有大約18至22個核苷酸。高G/C含量幫助確保DNA酶與標靶序列之間的更強相互作用。當合成DNA酶時，可靶向酶至訊息之特定反義識別序列分裂，使得其包含DNA酶之兩個臂，且DNA酶環置放於兩個特定臂之間。製備及投與DNA酶之方法可見於例如美國專利第6,110,462號。

其他抑制劑可包括結合於半乳糖凝集素-3之單株、多株、人類化及/或嵌合抗體。如本文所用之術語「抗體」意欲指包含四個多肽鏈，亦即由二硫鍵互連之兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈之免疫球蛋白分子。各重鏈包含重鏈可變區(本文中縮寫為HCVR或VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含三個結構域CH1、CH2及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區(本文中縮寫為LCVR或VL)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個結構域CL。VH及VL區可進一步再分成高變區，稱為互補決定區(CDR)，穿插稱為構架區(FR)之更保守區。各VH及VL由自胺基端至羧基端按以下順序配置之三個CDR及四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。代表性抗體進一步詳細描述於美國專利第6,090,382號、第6,258,562號及第6,509,015號中。

如本文所用之術語抗體之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」(或簡稱為「抗體部分」)係指保留特異性結合於抗原(例如半乳糖凝集素-3)之能力的抗體之一或多個片段。已展示抗體之抗原結合功能可由全長抗體之片段來執行。結合片段包括Fab、Fab'、F(ab')₂、Fabc、Fv、單鏈及單鏈抗體。涵蓋於術語抗體之「抗原結合部分」內之結合片段的實例包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL及CHI結構域組成之單價片段；(ii)F(ab')₂片段，包含在鉸鏈區由二硫橋鍵鍵聯之兩個Fab片段之二價片段；(iii)Fd片段，由VH及CHI結構域組成；(iv)Fv片段，由抗體單一臂之VL及VH結構域組成；(v)dAb片段(Ward等人(1989)Nature 341：544-546)，其由VH結構域組成；以及(vi)分離之互補決定區(CDR)。

此外，儘管Fv片段之兩個結構域(VL及VH)經分開基因編碼，但其可使用重組方法藉由合成連接子接合，該連接子能夠將其製造成VL與VH區配對以形成單價分子之單個蛋白鏈(稱為單鏈Fv(scFv)；參見例如Bird等人(1988)Science 242：423-426；及Huston等人(1988) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。此類單鏈抗體亦意欲涵蓋於術語抗體之「抗原結合部分」內。亦涵蓋單鏈抗體之其他形式，諸如雙功能抗體。雙功能抗體為二價雙特異性抗體，其中VH及VL結構域在單一多肽鏈上表現，但使用過短而無法使同一鏈上之兩個結構域之間配對，由此迫使結構域與另一鏈之互補結構域配對且產生兩個抗原結合位點的連接子(參見例如Holliger等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448；Poljak等人(1994)Structure 2：1121-1123)。本發明之抗體部分進一步詳細描述於美國專利第6,090,382號、第6,258,562號、第6,509,015號中，每一者以全文引用的方式併入本文中。

再此外，抗體或其抗原結合部分可為較大免疫黏附分子之一部分，所述免疫黏附分子藉由抗體或抗體部分與一或多種其他蛋白質或肽之共價或非共價締合而形成。此類免疫黏附分子之實例包括使用抗生蛋白鏈菌素核心區製備四聚scFv分子(Kipriyanov,S.M.等人，(1995)Human Antibodies and Hybridomas 6：93-101)及使用半胱胺酸殘基、標記物肽及C端聚組胺酸標籤製備二價及生物素標記scFv分子(Kipriyanov,S.M.等人，(1994)Mol.Immunol.31：1047-1058)。諸如Fab和F(ab')₂片段之抗體部分可由全抗體，使用習知技術，諸如對全抗體分別進行木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化來製備。此外，抗體、抗體部分及免疫黏附分子可使用如本文中所述之標準重組DNA技術獲得。

「嵌合抗體」係指其中重鏈及輕鏈之各胺基酸序列之一部分與來源於特定物種或屬於特定類別之抗體中的對應序列同源，而鏈之剩餘區段與來自另一物種之對應序列同源的抗體。在某些實施例中，本發明係關於一種嵌合抗體或抗原結合片段，其中輕鏈與重鏈之可變區模擬來源於哺乳動物一種物種之抗體的可變區，而恆定部分與來源於另一物種之抗體中的序列同源。在某些實施例中，嵌合抗體藉由將來 自小鼠抗體之CDR移植至人類抗體之構架區上來製備。

「人類化抗體」係指包含至少一個包含實質上來自人類抗體鏈(稱為接受體免疫球蛋白或抗體)之可變區構架殘基之鏈及至少一個實質上來自非人類抗體(例如小鼠)之互補決定區(CDR)的抗體。除移植CDR之外，人類化抗體通常進行進一步改變以改善親和力及/或免疫原性。

術語「多價抗體」係指包含一個以上抗原識別位點之抗體。舉例而言，「二價」抗體具有兩個抗原識別位點，而「四價」抗體具有四個抗原識別位點。術語「單特異性」、「雙特異性」、「三特異性」、「四特異性」等係指多價抗體中所存在之不同抗原識別位點特異性(與抗原識別位點之數目相對)的數目。舉例而言，「單特異性」抗體之抗原識別位點均結合相同抗原決定基。「雙特異性」或「雙重特異性」抗體具有至少一個結合第一抗原決定基之抗原識別位點及至少一個結合不同於第一抗原決定基之第二抗原決定基之抗原識別位點。「多價單特異性」抗體具有多個均結合相同抗原決定基之抗原識別位點。「多價雙特異性」抗體具有多個抗原識別位點，其中一些數目結合第一抗原決定基且其中一些數目結合不同於第一抗原決定基之第二抗原決定基。

如本文中所用，術語「人類抗體」意欲包括具有來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變及恆定區之抗體。本發明之人類抗體可在例如CDR中及特定CDR3中包括並非由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(例如藉由活體外隨機或定點突變誘發或藉由活體內體細胞突變引入之突變)。然而，如本文所用之術語「人類抗體」不意欲包括其中來源於另一哺乳動物物種(諸如小鼠)生殖系之CDR序列移植至人類構架序列上的抗體。

如本文所用之術語「重組人類抗體」意欲包括藉由重組方式製 備、表現、產生或分離之所有人類抗體，諸如使用轉染於宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體(以下進一步描述)、自重組之組合人類抗體文庫分離之抗體(以下進一步描述)、自針對人類免疫球蛋白基因進行轉殖基因之動物(例如小鼠)分離之單株抗體(參見例如Taylor等人(1992)Nucl.Acids Res.20：6287)或藉由包含人類免疫球蛋白基因序列與其他DNA序列剪接之任何其他方式製備、表現、產生或分離之抗體。此類重組人類抗體具有來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變及恆定區。然而，在某些實施例中，此類重組人類抗體可經受活體外突變誘發(或當使用人類Ig序列之動物轉殖基因時，為活體內體細胞突變誘發)，且因此重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列為雖然來源於人類生殖系VH及VL序列且與其相關，但可不天然存在於活體內人類抗體生殖系譜系內之序列。

IV.血清標記物及生物標記物

血清標記物可與半乳糖凝集素-3一起量測以量測用諸如經修飾之果膠(例如GCS-100)之半乳糖凝集素-3抑制劑治療的作用。可抽取全血樣品以測定循環半乳糖凝集素-3、肌酐、BUN、血漿分裂素及/或其他血清標記物之含量。針對半乳糖凝集素-3濃度及血清標記物之分析可根據本文所描述及此項技術中已知之方法進行。

在某些實施例中，本發明之方法在低劑量半乳糖凝集素-3抑制劑下使患者中之GFR含量例如相對於在未治療患者或用安慰劑治療之患者中量測之GFR增加0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、4、6、8或甚至10倍。

在某些實施例中，本發明之方法在低劑量半乳糖凝集素-3抑制劑(例如1.5mg/m²經修飾之果膠，諸如GCS-100)下使患者中之BUN含量例如相對於在未治療患者或用安慰劑治療之患者中量測之BUN含量減 少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、4、6、8或甚至10倍。

在某些實施例中，本發明之方法在低劑量半乳糖凝集素-3抑制劑(例如1.5mg/m²經修飾之果膠，諸如GCS-100)下使患者中之尿酸含量例如相對於在未治療患者或用安慰劑治療之患者中量測之尿酸減少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、4、6、8或甚至10倍。

在某些實施例中，本發明之方法在低劑量半乳糖凝集素-3抑制劑(例如1.5mg/m²經修飾之果膠，諸如GCS-100)下使患者中之半乳糖凝集素-3含量例如相對於在未治療患者或用安慰劑治療之患者中量測之半乳糖凝集素-3減少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、4、6、8或甚至10倍。

在某些實施例中，本發明之方法減少血清中之尿素濃度。詳言之，投與半乳糖凝集素-3抑制劑之後的血清中尿素濃度相對於未治療患者或用安慰劑治療之患者中量測之尿素可減少至少20%。

在某些實施例中，本發明之方法減少絕對及或相對血清肌酐含量。詳言之，在投與半乳糖凝集素-3抑制劑之後量測的血清中肌酐之相對濃度相對於在未治療患者或用安慰劑治療之患者中量測之肌酐可減少至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%或至少50%。在其他實施例中，肌酐之絕對濃度可減少約0.1-1.0mg/dl，諸如約0.1-0.5mg/dl或減少超過0.1mg/dl、超過0.2mg/dl，或超過0.3mg/dl。

在某些實施例中，本發明之方法改變諸如β-2微球蛋白、N-乙醯基-β-D-胺基葡糖苷酶及α₁-酸醣蛋白之近端小管損傷標記物的尿排泄。詳言之，在投與半乳糖凝集素-3抑制劑之後量測的尿中一或多種 小管損傷標記物之濃度相對於在未治療患者或用安慰劑治療之患者中量測之小管損傷標記物可減少至少20%。其他標記物可包括N-gal、胱抑素C及/或與腎臟活性及/或破壞相關之其他尿標記物。

發炎、纖維化及腎損傷之生物標記物

確定半乳糖凝集素-3之存在或含量亦可與偵測表現增加或減少與腎臟疾病相關之一或多種其他生物標記物組合。所選生物標記物可為適用於多類型腎臟疾病、發炎、纖維化及腎損傷之一般治療、診斷或預後標記物。此等標記物可包括但不限於嗜中性白血球明膠酶相關之脂質運載蛋白(NGAL)、膠原蛋白、介白素-6(IL-6)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、細胞內黏附分子-1(ICAM-1)、血紅蛋白Alc(HbAlc)及E-選擇素。

熟習此項技術者能夠選擇一或多種適於與半乳糖凝集素-3組合量測之治療、診斷或預後標記物。類似地，三種或三種以上、四種或四種以上或五種或五種以上或眾多生物標記物可一起用於確定患者之診斷或預後。

在某些實施例中，本發明之方法在低劑量半乳糖凝集素-3抑制劑(例如1.5mg/m²經修飾之果膠，諸如GCS-100)下使患者中之生物標記物之含量相對於在投與安慰劑之患者中量測之相同生物標記物的含量減少或增加0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、4、6、8或甚至10倍。

V.半乳糖凝集素-3及生物標記物蛋白質偵測技術

用於偵測例如半乳糖凝集素-3蛋白質及生物標記物之蛋白質的方法為熟習此項技術者所熟知，且包括ELISA(酶聯免疫吸附分析)、RIA(放射免疫分析)、西方墨點法及免疫組織化學。諸如ELISA或RIA之可極其迅速之免疫分析一般為更佳。此等方法使用抗體或抗體 相等物來偵測半乳糖凝集素-3蛋白質。亦可採用抗體陣列或蛋白質晶片，參見例如美國專利申請案第20030013208A1號、第20020155493A1號、第20030017515號及美國專利第6,329,209號、第6,365,418號，以以全文引用的方式併入本文中。

可進行ELISA及RIA程序，使得半乳糖凝集素-3標準品經標記(經諸如¹²⁵I或³⁵S之放射性同位素或諸如辣根過氧化酶或鹼性磷酸酶之可分析酶標記)，且與未經標記之樣品一起，接觸對應抗體，其中第二抗體用於結合第一抗體，且分析放射能或固定之酶(競爭性分析)。或者，允許樣品中之半乳糖凝集素-3與對應固定抗體反應，允許放射性同位素或酶標記之抗半乳糖凝集素-3抗體與該系統反應，且分析放射能或酶(ELISA夾心式分析)。適當時，亦可採用其他習知方法。

以上技術可基本上作為「一步」或「兩步」分析來進行。「一步」分析包含使抗原與固定抗體接觸且在不洗滌下使該混合物與標記抗體接觸。「兩步」分析包含在混合物與標記抗體接觸之前進行洗滌。適當時，亦可採用其他習知方法。

在某些實施例中，用於量測半乳糖凝集素-3含量之方法包含：使生物樣本與選擇性地結合半乳糖凝集素-3之抗體或其變異體(例如片段)接觸，及偵測該抗體或其變異體是否結合於該樣品且從而量測半乳糖凝集素-3之含量。一種方法可進一步包含使樣本與例如標記抗體之第二抗體接觸。該方法可進一步包含一或多個洗滌步驟，例如以移除一或多種試劑。

半乳糖凝集素-3及/或抗體之酶促及放射性標記可藉由任何適合之方式實現。此類方式一般可包括諸如藉由戊二醛特定地使酶與所討論之抗原或抗體共價連接，以免不利地影響酶之活性，此意謂酶必須仍然能夠與其受質相互作用，不過不一定所有酶都具活性，其條件為保持活性足以允許實現分析。實際上，一些用於結合酶之技術為非特 定的(諸如使用甲醛)，且可僅僅產生一部分活性酶。

可能需要將分析系統之一種組分固定在支撐物上，由此允許系統之其他組分接觸該組分且容易去除，不費力且不耗時。第二相可能遠離第一相固定，但一相通常足夠。

可將酶本身固定在支撐物上，但若需要固相酶，則此一般最佳藉由結合於抗體且使抗體附著於此項技術中熟知之支撐物、模型及系統來實現。簡單聚乙烯可提供適合支撐物。

可用於標記之酶不特別限制，但可選自例如氧化酶群之成員。此等藉由與其受質反應而催化過氧化氫產生，且葡萄糖氧化酶常常因其優良穩定性、易於獲得及廉價以及其受質(葡萄糖)即時可用而使用。氧化酶之活性可藉由量測在酶標記之抗體與受質在此項技術中熟知之控制條件下反應之後所形成的過氧化氫之濃度來分析。

基於本發明，根據從業者之偏好，可使用其他技術偵測半乳糖凝集素-3。一種此類技術為西方墨點法(Towbin等人，Proc.Nat.Acad.Sci.76：4350(1979))，其中經適當處理之樣品在SDS-PAGE凝膠上操作，接著轉移至固體支撐物，諸如硝化纖維過濾器。隨後抗-半乳糖凝集素-3抗體(未標記)接觸支撐物且藉由諸如標記蛋白A或抗免疫球蛋白之第二免疫試劑分析(適合標記包括¹²⁵I、辣根過氧化酶及鹼性磷酸酶)。亦可為使用層析偵測。

免疫組織化學可用於偵測例如生檢樣品中人類半乳糖凝集素-3之表現。使適合抗體接觸例如薄層細胞，洗滌，且接著與第二標記抗體接觸。標記可藉由螢光標記物、酶(諸如過氧化酶)、抗生素蛋白，或放射性標記。分析使用顯微法以肉眼評分。結果可例如如實例中所述來定量。

視情況與信號定量聯合之免疫組織化學分析可如下進行。可在組織中，藉由用例如抗生素蛋白-生物素標記之過氧化酶複合物系統 製備免疫組織化學染色之載片，來直接評估半乳糖凝集素-3及生物標記物表現。

色斑，亦即半乳糖凝集素-3或生物標記物之存在的評估亦可藉由定量免疫組織化學研究，例如用電腦化影像分析器(例如自動化細胞成像系統ACIS(ChromaVision Medical System Inc.,San Juan Capistrano,CA))進行，可用於評估免疫染色之組織樣品中半乳糖凝集素-3或生物標記物表現量。使用ACIS，可選擇「細胞質染色」作為半乳糖凝集素-3或生物標記物偵測之程式。可用ACIS系統分析免疫染色腫瘤樣品之不同區域。超過或低於1，例如約1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、2.5、3、5、10、30、100或更大的ACIS值平均值指示半乳糖凝集素-3或生物標記物表現提高或減少。

其他機械或自動成像系統亦可用於量測半乳糖凝集素-3之免疫染色結果。如本文所用，「定量」免疫組織化學係指對進行免疫組織化學之樣品掃描及評分以鑑別及定量諸如抗原或其他蛋白質之指定生物標記物之存在的自動化方法。給予樣品之評分為樣品之免疫組織化學染色強度之數值表示，且表示樣品中存在之標靶生物標記物之量。如本文所用，光學密度(OD)為表示染色強度之數值評分。如本文所用，半定量免疫組織化學係指藉由人眼對免疫組織化學結果評分，其中經培訓之操作員將結果用數字分等級(例如1、2或3)。

適合於免疫組織化學之各種自動化樣品加工、掃描及分析系統在此項技術中可獲得。此類系統可包括自動化染色(參見例如Benchmark^TM system,Ventana Medical Systems,Inc.)及顯微掃描、電腦化影像分析、連續切片比較(以對照樣品之取向及尺寸上的變化)、產生數位報告及封存及追蹤樣品(諸如置放組織切片之載片)。細胞成像系統可購得，其將習知光學顯微鏡與數位影像加工系統組合來對包括免疫染色樣品之細胞及組織進行定量分析。參見例如CAS-200系統 (Becton,Dickinson&Co.)。

可用於偵測及定量半乳糖凝集素-3或生物標記物蛋白質含量之另一方法為例如如實例中所述之西方墨點法。可將腫瘤組織冷凍且在裂解緩衝液中均質化。可使用增強化學發光系統(例如來自PerkinElmer Life Sciences,Boston,MA)用半乳糖凝集素-3抗體進行免疫偵測。可接著剝除膜且用例如來自Sigma(St.Louis,MO)之抗-肌動蛋白(A-2066)多株抗體之對照抗體再點墨。信號強度可藉由密度測定軟體(例如NIH Image 1.61)定量。在半乳糖凝集素-3、生物標記物及對照信號(例如肌動蛋白)定量之後，半乳糖凝集素-3或生物標記物之相對表現量藉由各色帶中肌動蛋白之量校正，亦即半乳糖凝集素-3或生物標記物信號之值除以對照信號之值。當相對含量超過1，例如約1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、2.5、3、5、10、30或甚至100時，半乳糖凝集素-3或生物標記物蛋白質表現視為提高。相反，當相對含量低於1，例如約1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、2.5、3、5、10、30或甚至100時，半乳糖凝集素-3或生物標記物蛋白質表現視為降低。

抗-半乳糖凝集素-3或生物標記物抗體亦可用於達成成像目的，例如偵測個體細胞及組織中半乳糖凝集素-3或生物標記物之存在。適合標記包括放射性同位素、碘(¹²⁵I、¹²¹I)、碳(¹⁴C)、硫(³⁵S)、氚(³H)、銦(¹¹²In)及鎝(⁹⁹mTc)、螢光標記(諸如螢光素及若丹明)及生物素。免疫酶促相互作用可使用諸如過氧化酶、鹼性磷酸酶之不同酶或諸如DAB、AEC或堅牢紅之不同色素原目測。

為達成活體內成像目的，抗體自身體外部本質上不可偵測，且因此必須標記，或以其他方式修飾，以允許偵測。出於此目的之標記物可為實質上不干擾抗體結合，但允許外部偵測之任何標記物。適合標記物可包括可藉由X放射照相術、NMR或MRI偵測之標記物。對於X放射照相技術，適合標記物包括發出可偵測放射線且對患者無明顯 害處之任何放射性同位素，諸如鋇或銫。NMR及MRI之適合標記物一般包括具有可偵測之特徵性旋轉的標記物，諸如氘，其可藉由例如適當標記相關融合瘤之養分而併入抗體中。

個體體型及使用之成像系統可決定產生診斷影像所需之成像部分的量。在放射性同位素部分之情況下，對於人類個體而言，所注射之放射能之量可通常在約5至20毫居里鎝-99m範圍內。標記抗體或抗體片段可接著優先積聚在含有半乳糖凝集素-3之細胞的位置。接著可使用已知技術偵測標記抗體或其變異體，例如抗體片段。

可用於偵測半乳糖凝集素-3之抗體包括足夠強且特異性地結合於待偵測之半乳糖凝集素-3(例如人類半乳糖凝集素-3)的任何抗體，無論天然還是合成、全長還是其片段、單株還是多株。抗體可具有至多約10^-6M、10^-7M、10^-8M、10^-9M、10^-10M、10^-11M、10^-12M之Kd。短語「特異性結合」係指例如抗體與抗原決定基或抗原或抗原決定子結合之方式使得結合可經一致或類似抗原決定基、抗原或抗原決定子之第二製劑取代或與其競爭。相對於其他蛋白質，諸如相關蛋白質，例如半乳糖凝集素1-15，抗體可優先結合於半乳糖凝集素-3。

可使用之抗體及其衍生物涵蓋多株或單株抗體、嵌合、人類、人類化、靈長類化(CDR移植)、鑲飾或單鏈抗體、噬菌體產生抗體(例如來自噬菌體呈現文庫)以及功能性抗體，亦即抗-半乳糖凝集素-3結合片段。舉例而言，可使用能夠結合於半乳糖凝集素-3或其部分之抗體片段，包括(但不限於)Fv、Fab、Fab'及F(ab')₂片段。此類片段可藉由酶裂解或藉由重組技術產生。舉例而言，木瓜蛋白酶或胃蛋白酶裂解可分別產生Fab或F(ab')₂片段。具有必需受質特異性之其他蛋白酶亦可用於產生Fab或F(ab')₂片段。抗體亦可使用其中一或多個終止密碼子已引入天然終止位點上游之抗體基因，以多種截短形式產生。舉例而言，編碼F(ab')₂重鏈部分之嵌合基因可經設計以包括編碼重鏈之 CH結構域及鉸鏈區之DNA序列。

在一些實施例中，使用特異性結合於半乳糖凝集素-3或除抗體外之試劑，諸如肽。特異性結合於半乳糖凝集素-3之肽可藉由此項技術中已知之任何方式鑑別。舉例而言，可使用肽噬菌體呈現文庫篩選半乳糖凝集素-3之特定肽結合劑。

一般而言，可使用能夠偵測半乳糖凝集素-3或生物標記物多肽，使得半乳糖凝集素-3或其他生物標記物之存在可偵測及/或定量的試劑。如本文所定義，「試劑」係指能夠鑑別或偵測生物樣品中之半乳糖凝集素-3(例如鑑別或偵測半乳糖凝集素-3或生物標記物mRNA、DNA及蛋白質)的物質。在一些實施例中，試劑為特異性結合於半乳糖凝集素-3或生物標記物多肽之經標記或可標記之抗體。如本文所用，短語「經標記或可標記」係指附接或包括標記(例如標記物或指示物)或能夠附接或包括標記(例如標記物或指示物)。標記物或指示物包括(但不限於)例如引起受質可偵測改變之放射性分子、比色分子及酶分子。

此外，可使用質譜分析，諸如MALDI/TOF(飛行時間)、SELDI/TOF、液相層析-質譜分析(LC-MS)、氣相層析-質譜分析(GC-MS)、高效液相層析-質譜分析(HPLC-MS)、毛細電泳法-質譜分析、核磁共振光譜法或串聯質譜分析(例如MS/MS、MS/MS/MS、ESI-MS/MS等)偵測半乳糖凝集素-3或生物標記物蛋白質。參見例如美國專利申請案第20030199001號、第20030134304號、第20030077616號，該等專利申請案以引用的方式併入本文中。

質譜分析方法為在此項技術中所熟知且已用於定量及/或鑑別生物分子，諸如蛋白質(參見例如Li等人(2000)Tibtech 18：151-160；Rowley等人(2000)Methods 20：383-397；以及Kuster及Mann(1998)Curr.Opin.Structural Biol.8：393-400)。此外，已研發允許對分離之 蛋白質進行至少部分重新測序之質譜技術。Chait等人，Science 262：89-92(1993)；Keough等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.96：7131-6(1999)；評述於Bergman,EXS 88：133-44(2000)中。

在某些實施例中，使用氣相離子分光光度計。在其他實施例中，雷射-解吸附/電離質譜分析用於分析樣品。現代雷射解吸附/電離質譜分析(「LDI-MS」)可以兩種主要變體實踐：基質輔助雷射解吸附/電離(「MALDI」)質譜分析及表面增強雷射解吸附/電離(「SELDI」)。在MALDI中，分析物與含有基質之溶液混合，且將一滴液體置於基板表面上。隨後基質溶液與生物分子共結晶。將基板插入至質譜儀中。雷射能量指向基板表面，在基板表面上其將生物分子解吸附及電離而不會顯著使其成碎片。然而，MALDI作為分析型工具具有侷限性。其未提供用於使樣品成碎片之方式，且基質材料可干擾偵測，尤其對於低分子量分析物。參見例如美國專利第5,118,937號(Hillenkamp等人)及美國專利第5,045,694號(Beavis及Chait)。

在SELDI中，基板表面經改質，使得其為解吸附過程中之積極參與者。在一種變體中，表面經選擇性地結合相關蛋白質之吸附及/或捕獲試劑衍生。在另一變體中，表面經在經雷射撞擊時不解除吸附之能量吸收分子衍生。在另一變體中，表面經結合相關蛋白質且含有在施加雷射時破裂之光解鍵的分子衍生。在此等方法每一者中，衍生劑一般定位於施加樣品之基板表面上的特定位置。參見例如美國專利第5,719,060號(Hutchens及Yip)及WO 98/59361(Hutchens及Yip)。兩種方法可藉由例如使用SELDI親和力表面捕獲分析物且添加含基質液體至捕捉之分析物以提供能量吸收物質來組合。

對於關於質量光譜儀之額外信息，參見例如Principles of Instrumental Analysis，第3版，Skoog,Saunders College Publishing,Philadelphia,1985；及Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology，第4版 第15卷(John Wiley & Sons,New York 1995)，第1071-1094頁。

偵測標記物或其他物質之存在可通常包括偵測信號強度。此又可反映結合於基板之多肽的數量及特徵。舉例而言，在某些實施例中，可比較(例如以肉眼、藉由電腦分析等)來自第一樣品及第二樣品之光譜的峰值信號強度，以確定特定生物分子之相對量。諸如Biomarker Wizard程式(Ciphergen Biosystems,Inc.,Fremont,Calif.)之軟體程式可用於幫助分析質譜。質量光譜儀及其技術為熟習此項技術者所熟知。

任何熟習此項技術者均瞭解，質譜儀之任一組分(例如解吸附來源、質量分析器、偵測等)及變化之樣品製劑可與本文所描述之其他適合組分或製劑或此項技術中已知之組分或製劑組合。舉例而言，在一些實施例中，對照樣品、參考樣品及或一或多種測試樣品可藉由重原子(例如¹³C)之存在，視情況藉由使用連接於在樣品陣列中有待偵測之受質的同位素區分標記來區分，由此允許在相同質譜分析操作中多個樣品組合且區分。

在某些較佳實施例中，使用雷射解吸附飛行時間(TOF)質譜儀。在雷射解吸附質譜分析中，將具有結合標記物之基板引入至人口系統中。標記物解除吸附且藉由來自電離來源之雷射電離至氣相中。產生之離子藉由離子光學組件收集，且接著在飛行時間質量分析器中，離子經由短高電壓電場加速且偏移至高真空室中。在高真空室之遠端，加速離子在不同時間衝擊靈敏偵測器表面。因為飛行時間為離子質量之函數，所以離子形成與離子偵測器撞擊之間的經過時間可用於鑑別特定質荷比之分子的存在或不存在。

在一些實施例中，第一或第二樣品中所存在之一或多種生物分子之相對量部分藉由用可程式化數位電腦執行演算法來確定。演算法 鑑別第一質譜及第二質譜中之至少一個峰值。隨後演算法將質譜之第一質譜之峰值信號強度與第二質譜之峰值信號強度比較。相對信號強度指示第一及第二樣品中所存在之生物分子之量。含有已知量之生物分子的標準品可作為第二樣品進行分析以更好地定量第一樣品中所存在之生物分子之量。在某些實施例中，第一及第二樣品中生物分子之身分亦可確定。

VI.半乳糖凝集素-3及生物標記物RNA偵測技術

可使用用於定性或定量偵測半乳糖凝集素-3/生物標記物RNA，例如mRNA之任何方法。

RNA轉錄物之偵測可藉由例如北方墨點法(Northern blotting)實現，其中RNA製劑在變性瓊脂糖凝膠上操作且轉移至適合支撐物，諸如活化纖維素、硝化纖維或玻璃或耐綸膜。隨後放射性標記之cDNA或RNA與製劑雜交，洗滌且藉由自動放射照相術分析。

RNA轉錄物之偵測可進一步使用擴增法實現。舉例而言，在本發明之範疇內，將mRNA逆轉錄成cDNA，接著進行聚合酶鏈反應(RT-PCR)；或如美國專利第5,322,770號中所述，使用單一酶用於兩個步驟，或如R.L.Marshall等人，PCR Methods and Applications 4：80-84(1994)所述，將mRNA逆轉錄成cDNA，接著進行對稱間隙接合酶鏈反應(RT-AGLCR)。

在某些實施例中，定量即時聚合酶鏈反應(qRT-PCR)用於評估半乳糖凝集素-3之mRNA含量(參見實例)。可在癌症組織及相鄰良性組織中定量半乳糖凝集素-3/生物標記物及對照mRNA，例如甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)mRNA含量。對此，可將冷凍組織切成5微米切片且可例如藉由Qiagen RNeasy微型套組(Qiagen,Inc.,Valencia,CA)提取總RNA。可藉由使用例如Qiagen Omniscript RT套組逆轉錄來自各組織之一定量RNA，例如五百奈克總RNA。可例如用ABI TaqMan PCR試劑套組(ABI Inc,Foster City,CA)及半乳糖凝集素-3引子及GAPDH引子以及用於兩基因之探針在ABI Prism 7700系統上進行兩步qRT-PCR。可使用之適合引子闡述於實例中。接著半乳糖凝集素-3/生物標記物複本數可除以GAPDH複本數且乘以1,000，得到特定個體之值。換言之，半乳糖凝集素-3/生物標記物mRNA之量用相同RNA提取中量測之GAPDH mRNA之量校正，從而獲得半乳糖凝集素-3/生物標記物/GAPDH比率。等於或超過1，例如約1.1、1.2、1.3、1.4、1.5.、2、2.5、3、5、10、30或100之比率可視為高半乳糖凝集素-3/生物標記物表現。

可用於本文中之其他已知擴增方法包括(但不限於)描述於PNAS USA 87：1874-1878(1990)中且亦描述於Nature 350(第6313期)：91-92(1991)中之所謂「NASBA」或「3SR」技術；如公開之歐洲專利申請案(EPA)第4544610號中所述之Q-β擴增；股置換擴增(如G.T.Walker等人，Clin.Chem.42：9-13(1996)及歐洲專利申請案第684315號中所述)；以及如PCT公開案WO9322461描述之標靶介導之擴增。

可用於擴增半乳糖凝集素-3核酸部分之引子闡述於實例中。

亦可採用原位雜交目測，其中放射性標記之反義RNA探針與薄生檢樣品切片雜交，洗滌，用RNA酶裂解且暴露於用於自動放射照相術之敏感乳液。樣品可用蘇木精染色以證實樣品之組織組成，且用適合濾光片進行暗場成像展示顯影乳液。亦可使用非放射性標記，諸如地高辛(digoxigenin)。

用於評估半乳糖凝集素-3/生物標記物表現之另一方法為藉由螢光原位雜交(FISH)偵測基因擴增。FISH為一種可直接鑑別細胞中DNA或RNA之特定區域且因此能夠肉眼測定組織樣品中半乳糖凝集素-3/生物標記物表現的技術。FISH方法具有更客觀之評分系統及存在由同一樣品中所有非贅生性細胞中所存在之半乳糖凝集素-3/生物標記 物基因信號組成的內置固有對照的優點。螢光原位雜交為相對迅速及靈敏之直接原位技術。FISH測試亦可自動化。當藉由單獨免疫組織化學難以確定半乳糖凝集素-3/生物標記物之表現量時免疫組織化學可與FISH方法組合。

或者，可在DNA陣列、晶片或微陣列上偵測mRNA表現。對應於半乳糖凝集素-3/生物標記物之寡核苷酸可固定在晶片上，隨後其與自患者獲得之測試樣品之標記核酸雜交。陽性雜交信號可用含有半乳糖凝集素-3/生物標記物轉錄物之樣品獲得。製備DNA陣列之方法及其使用為此項技術中所熟知。(參見例如美國專利第6,618,6796號、第6,379,897號、第6,664,377號、第6,451,536號、第548,257號、U.S.20030157485及Schena等人1995 Science 20：467-470；Gerhold等人1999 Trends in Biochem.Sci.24,168-173；以及Lennon等人2000 Drug discovery Today 5：59-65，其以全文引用的方式併入本文中)。亦可進行基因表現之系列分析(SAGE)(參見例如美國專利申請案20030215858)。

為監測mRNA含量，例如，可自待測試之生物樣品提取mRNA，逆轉錄，且產生螢光標記之cDNA探針。能夠與半乳糖凝集素-3/生物標記物cDNA雜交之微陣列隨後用標記cDNA探針探測，掃描載片且量測螢光強度。此強度與雜交強度及表現量相關。

用於偵測半乳糖凝集素-3/生物標記物RNA之探針類型包括cDNA、核糖核酸探針、合成寡核苷酸及基因組探針。使用之探針類型一般可由具體情況來定，諸如核糖核酸探針用於原位雜交，且例如cDNA用於北方墨點法。最佳地，探針針對半乳糖凝集素-3/生物標記物RNA所特有之核苷酸區域。探針可短至有差異地識別半乳糖凝集素-3/生物標記物mRNA轉錄物所需要之長度，且可短至例如15個鹼基；然而，至少17個鹼基、更佳18個鹼基及再更佳20個鹼基之探針為較 佳。較佳地，引子及探針在嚴格條件下與具有對應於半乳糖凝集素-3基因之核苷酸序列的DNA片段特異性地雜交。如本文中所使用，術語「嚴格條件」意謂雜交僅在序列之間存在至少95%且較佳至少97%一致性時才可發生。

探針標記之形式可為適當之任何標記，諸如使用例如³²P及³⁵S之放射性同位素。可藉由使用適當標記之鹼基，實現放射性同位素標記，無論探針在化學上或生物學上合成。

VII.用半乳糖凝集素-3抑制劑治療腎臟疾病之方法

本發明提供用半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠，例如GCS-100治療患者之腎臟疾病之方法。

A.劑量及給藥方案

在一些實施例中，向患者投與之組成物中治療有效物質(半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠，例如GCS-100)之總量為適合於該患者之量。熟習此項技術者將瞭解不同個體可能需要不同總量之半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠。在一些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之量為醫藥學上有效量。熟習此項技術者將能夠基於諸如患者年齡、體重及身體狀況之因素，確定治療患者所需之組成物中之半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠的量。半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之濃度部分視其在靜脈內投與溶液中之溶解性及可投與之流體體積而定。

在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)以在0.1mg/m²至30mg/m²範圍內之固定劑量投與個體。舉例而言，經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑可以0.1mg/m²、0.5mg/m²、1mg/m²、3mg/m²、6mg/m²、9mg/m²、12mg/m²、15mg/m²、18mg/m²、21mg/m²、24mg/m²、27mg/m²、30mg/m²、35mg/m²、40mg/m²、50mg/m²、60mg/m²、70mg/m²、80mg/m²、90 mg/m²、100mg/m²、110mg/m²、120mg/m²、130mg/m²、140mg/m²、150mg/m²、160mg/m²、170mg/m²、180mg/m²、190mg/m²、200mg/m²等固定劑量投與個體。任一以上提及之敍述值之間的值範圍亦意欲包括於本發明之範疇中，例如0.2mg/m²、0.6mg/m²、1.5mg/m²、2mg/m²、4mg/m²、8mg/m²、10mg/m²、13mg/m²、17mg/m²、20mg/m²、23mg/m²、25mg/m²、26mg/m²、28mg/m²、32mg/m²、45mg/m²、55mg/m²、65mg/m²、75mg/m²、85mg/m²、95mg/m²、105mg/m²、115mg/m²、125mg/m²、135mg/m²、145mg/m²、155mg/m²、165mg/m²、175mg/m²、185mg/m²、195mg/m²、205mg/m²，如基於前述劑量之範圍，例如0.1-5mg/m²、5-10mg/m²、10-15mg/m²、15-20mg/m²、20-25mg/m²、25-30mg/m²、30-80mg/m²、80-120mg/m²、120-150mg/m²、150-175mg/m²、175-200mg/m²。全身劑量不應超過每週1g/m²或每天200mg/m² 5次。

在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)以例如每週一次1-10mg範圍內之固定劑量投與個體。舉例而言，固定劑量可為1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg或10mg，在各情況下例如每週一次。在某些此類實施例中，經修飾之果膠，較佳GCS-100，每週投與一次，歷時初始時間段(例如誘發階段，諸如1-3個月，較佳2個月)，接著此後每兩週投與一次(例如維持或治療階段，諸如1-6個月或甚至無限期)。在某些此類實施例中，固定劑量在兩個階段中相同，在兩個階段之間僅僅投與頻率變化。

投與之組成物中半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之濃度可為至少16μg/ml。在一些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之濃度可為約1.0μg/ml、約2.0μg/ml、約3.0μg/ml、約4.0 μg/ml、約5.0μg/ml、約6.0μg/ml、約7.0μg/ml、約8.0μg/ml、約9.0μg/ml、約10.0μg/ml、約11.0μg/ml、約12.0μg/ml、約13.0μg/ml、約14.0μg/ml、約15.0μg/ml等。包括半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠的組成物可以足以實現諸如腎小球濾過率、腎血管阻力、腎血流量、濾過分數、平均動脈壓等一或多個生理參數或如本文中所論述之一或多種生物標記物含量增加或調節的速率投與。患者可與監測器耦接，該監測器提供在一部分或整個治療過程期間連續、週期性或不定期的量測。投與速率可人工(例如藉由醫師或護士)或自動(例如藉由能夠回應於自監測器接收之生理參數而調節組成物遞送之醫學裝置)調節以維持患者生理及/或生物標記物參數在所需範圍內或所需閾值以上或以下。或例如，可注射組成物中半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之投與速率可為約0.032ng/kg/min至約100μg/kg/min。在一些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之投與速率可為約0.4至約45μg/min、約0.12至約19μg/min、約3.8至約33.8μg/min、約0.16至約2.6μg/min等。在特定實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之投與速率可為約0.032ng/kg/min、約0.1ng/kg/min、約0.32ng/kg/min、約1ng/kg/min、約1.6ng/kg/min、約2ng/kg/min、約3ng/kg/min、約4ng/kg/min、約5ng/kg/min、約6ng/kg/min、約7ng/kg/min、約8ng/kg/min、約9ng/kg/min、約10ng/kg/min、約15ng/kg/min、約20ng/kg/min、約25ng/kg/min、約30ng/kg/min、約40ng/kg/min、約50ng/kg/min、約60ng/kg/min、約70ng/kg/min、約80ng/kg/min、約90ng/kg/min、約100ng/kg/min、約200ng/kg/min、約300ng/kg/min、約400ng/kg/min、約500ng/kg/min、約600ng/kg/min、約700ng/kg/min、約800ng/kg/min、約900ng/kg/min、約1μg/kg/min、約1.1μg/kg/min、約1.2μg/kg/min、約1.3μg/kg/min、約1.4μg/kg/min、約1.5μg/kg/min、約1.5μg/kg/min、約1.6 μg/kg/min、約1.7μg/kg/min、約1.8μg/kg/min、約1.9μg/kg/min、約2μg/kg/min、約2.1μg/kg/min、約2.2μg/kg/min、約2.3μg/kg/min、約2.4μg/kg/min、約2.5μg/kg/min、約2.6μg/kg/min、約2.7μg/kg/min、約2.8μg/kg/min、約2.9μg/kg/min、約3.0μg/kg/min、約3.1μg/kg/min、約3.2μg/kg/min、約3.3μg/kg/min、約3.4μg/kg/min、約3.5μg/kg/min、約3.6μg/kg/min、約3.7μg/kg/min、約3.8μg/kg/min、約3.9μg/kg/min、約4.0μg/kg/min、約4.1μg/kg/min、約4.2μg/kg/min、約4.3μg/kg/min、約4.4μg/kg/min、約4.5μg/kg/min、約4.6μg/kg/min、約4.7μg/kg/min、約4.8μg/kg/min、約4.9μg/kg/min、約5.0μg/kg/min、約6μg/kg/min、約7μg/kg/min、約8μg/kg/min、約9μg/kg/min、約10μg/kg/min、約11μg/kg/min、約12μg/kg/min、約13μg/kg/min、約14μg/kg/min、約15μg/kg/min、約16μg/kg/min、約17μg/kg/min、約18μg/kg/min、約19μg/kg/min、約20μg/kg/min、約25μg/kg/min、約30μg/kg/min、約31μg/kg/min、約32μg/kg/min、約33μg/kg/min、約33.8μg/kg/min、約34μg/kg/min、約35μg/kg/min、約40μg/kg/min、約45μg/kg/min、約50μg/kg/min、約55μg/kg/min、約60μg/kg/min、約65μg/kg/min、約70μg/kg/min、約75μg/kg/min、約80μg/kg/min、約85μg/kg/min、約90μg/kg/min、約95μg/kg/min、約100μg/kg/min等。

組成物可歷經選自至少8小時、至少24小時以及8小時至24小時之時段投與。組成物可不斷投與至少2-6天，諸如2-11天，不斷投與2-6天，一日8小時，歷經至少2-6天，諸如2-11天之時間段。在長期輸注之後中斷期(若干小時至若干天)可為有益的。在某些實施例中，治療持續時間可持續長達8週連續給藥或直至出現劑量限制性毒性。

B. 醫藥調配物

本發明之組成物可經由任何適合之路徑投與。在一些實施例 中，本發明之組成物適合於非經腸投與。此等組成物可例如經腹膜內、靜脈內、腎內或鞘內投與。在一些實施例中，本發明之組成物經靜脈內注射。熟習此項技術者將瞭解，投與本發明之治療有效物質調配物或組成物的方法將視諸如所治療之患者之年齡、體重及身體狀況以及所治療之疾病或病狀等因素而定。因此，熟習此項技術者將能夠基於個例選擇對於患者最佳之投與方法。

組成物可為含有至少0.5重量%、1重量%、5重量%或10重量%，例如高達約10重量%或15重量%半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠的溶液。在某些實施例中，提供呈膠態水溶液形式之經修飾之果膠。膠態粒子之尺寸直徑可低於1μm，較佳低於約0.65μm，且最佳低於約0.2μm。

調配物可包含適合賦形劑，包括醫藥學上可接受之緩衝劑、穩定劑、局部麻醉劑及此項技術中熟知之類似物。對於非經腸投與，示例性調配物可為無菌溶液或懸浮液；對於經口給藥，可為糖漿、錠劑或適口溶液；對於局部塗覆，可為洗劑、乳霜、噴霧或軟膏；對於陰道內或直腸內投與，可為子宮托、栓劑、乳霜或泡沫。較佳地，投與路徑為非經腸，更佳為靜脈內。

在替代實施例中，本發明之醫藥組成物可呈適於經口給藥之形式，諸如糖漿或適口溶液；適於局部塗覆之形式，諸如乳霜或軟膏；或適於藉由吸入投與之形式，諸如微晶粉末或適於噴霧之溶液。用於調配用於替代性投與途徑之醫藥成分之方法及方式為此項技術中所熟知，且預期熟習相關技術者可使此等已知之方法適於本發明之半乳糖凝集素-3抑制劑。

錠劑可藉由視情況與一或多種附屬成分一起壓縮或模製來製造。可使用黏合劑(例如明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如羥基乙酸澱粉鈉或交聯羧甲基纖維素 鈉)、表面活性劑或分散劑製備壓縮錠劑。可藉由在適合機器中模製經惰性液體稀釋劑濕潤之粉末狀化合物之混合物來製造模製錠劑。

本發明之醫藥組成物之錠劑及其他固體劑型可視情況刻痕或用包衣及殼製備，諸如腸溶衣及醫藥調配技術中熟知之其他包衣。其亦可使用例如不同比例之羥丙基甲基纖維素以提供所需釋放型態、其他聚合物基質、脂質體及/或微球體來調配以便提供其中經修飾之緩慢或控制釋放。其可藉由例如經由細菌截留過濾器過濾或藉由併入呈臨用前可溶解於無菌水或一些其他無菌可注射介質中之無菌固體組成物形式的滅菌劑來滅菌。此等組成物亦可視情況含有遮光劑且可為視情況以延遲方式僅僅或優先將活性成分釋放於胃腸道某一部分中之組成物。可使用之包埋組成物之實例包括聚合物質及蠟。半乳糖凝集素-3抑制劑亦可呈微囊封形式，適當時，與一或多種上述賦形劑一起。

用於經口投與本發明之半乳糖凝集素-3抑制劑的液體劑型包括醫藥學上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。除半乳糖凝集素-3抑制劑之外，液體劑型可含有此項技術中常用之惰性稀釋劑，諸如水或其他溶劑、增溶劑及乳化劑。

除惰性稀釋劑之外，經口組成物亦可包括佐劑，諸如濕潤劑、乳化劑及懸浮劑、甜味劑、調味劑、著色劑、芳香劑及防腐劑。

除活性化合物之外，懸浮液亦可含有懸浮劑，例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇及脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂及黃蓍膠及其混合物。

可指示藥劑投與用於治療輕度、中度或嚴重急性或慢性症狀或用於防治性治療。可瞭解，投與之精確劑量可視患者年齡及狀況、使用之特定具體藥劑及投與頻率而定，且最終可由主治醫師決定。通常，可每週投與一次，不過可以規則或不規則頻率投與，諸如每天或每月一次或其組合(例如每天一次，持續五天，隨後每月一次)。

適合於非經腸投與之本發明醫藥組成物包含本發明之半乳糖凝集素-3抑制劑；以及一或多種醫藥學上可接受之無菌等張水性或非水性溶液或臨使用前復原成無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、使調配物與既定接受者之血液等張之溶質或懸浮或增稠劑。

此等組成物亦可含有佐劑，諸如防腐劑、濕潤劑、乳化劑及分散劑。可藉由包括各種抗細菌及抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸及其類似物來預防微生物作用。亦可能需要在組成物中包括等張劑，諸如糖、氯化鈉及其類似物。

醫藥學上可接受之抗氧化劑之實例包括(但不限於)抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基大茴香醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、沒食子酸丙酯、α-生育酚及螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸及其類似物。

可注射儲槽形式藉由在諸如聚丙交酯-聚乙交酯之可生物降解聚合物中形成本發明化合物之微膠囊基質來製造。視藥物與聚合物之比率及所用具體聚合物之性質而定，可控制藥物釋放之速率。其他可生物降解之聚合物的實例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。可注射儲槽式調配物亦藉由將藥物截留於與身體組織相容之脂質體或微乳劑中來製備。

用於局部或經皮投與本發明化合物之劑型包括散劑、噴霧、軟膏、糊劑、乳霜、洗劑、凝膠、溶液、貼片及吸入劑。半乳糖凝集素-3抑制劑可在無菌條件下與醫藥學上可接受之載劑及與可能需要之任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。

pH調節劑可為有益的以藉由在本發明之組成物中包括pH調節劑調整組成物pH值。改變調配物或組成物之pH值可對例如治療有效物 質之穩定性或溶解性具有有益作用，或可用於製備適於非經腸投與之調配物或組成物。pH調節劑為此項技術中所熟知。因此，本文所述之pH調節劑並不意欲構成窮盡性清單，而是僅僅作為可用於本發明之組成物中之示例性pH調節劑提供。pH調節劑可包括例如酸及鹼。在一些實施例中，pH調節劑包括(但不限於)乙酸、鹽酸、磷酸、氫氧化鈉、碳酸鈉及其組合。本發明之組成物之pH值可為提供需要特性給調配物或組成物之任何pH值。所需特性可包含例如治療有效物質穩定性、相比於其他pH下之組成物增加之治療有效物質滯留及提高之過濾效率。在一些實施例中，本發明之組成物之pH值可為約3.0至約9.0，例如約5.0至約7.0。在具體實施例中，本發明之組成物之pH值可為5.5±0.1、5.6±0.1、5.7±0.1、5.8±0.1、5.9±0.1、6.0±0.1、6.1±0.1、6.2±0.1、6.3±0.1、6.4±0.1或6.5±0.1。

在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑為經製備實質上不含乙醇且適合於非經腸投與的經修飾之果膠。實質上不含乙醇意謂本發明之組成物含有低於5重量%乙醇。在較佳實施例中，組成物含有低於2重量%，且更佳低於0.5重量%乙醇。在某些實施例中，組成物進一步包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。此類組成物包括本發明之半乳糖凝集素-3抑制劑之水溶液。在此類水溶液之某些實施例中，果膠修飾以至少7mg/mL、至少10或15mg/ml或更大濃度發生。任一此類組成物實質上亦不含除乙醇外之有機溶劑。

緩衝劑可用於使化合物再懸浮於溶液中。在某些實施例中，緩衝劑可具有例如約5.5、約6.0或約6.5之pKa。熟習此項技術者將瞭解，可基於pKa及其他特性選擇適當緩衝劑包括在本發明之組成物中。緩衝劑為此項技術中所熟知。因此，本文所述之緩衝劑並不意欲構成窮盡性清單，而是僅僅作為可用於本發明之組成物中之示例性緩衝劑提供。在某些實施例中，緩衝劑可包括以下一或多種：Tris、 Tris HCl、磷酸鉀、磷酸鈉、檸檬酸鈉、抗壞血酸鈉、磷酸鈉與磷酸鉀之組合、Tris/Tris HCl、碳酸氫鈉、磷酸精胺酸、鹽酸精胺酸、鹽酸組胺酸、二甲基胂酸鹽、丁二酸鹽、2-(N-嗎啉基)乙磺酸(MES)、順丁烯二酸鹽、bis-tris、磷酸鹽、碳酸鹽及任何醫藥學上可接受之鹽及/或其組合。

可添加增溶劑以增加藥物或化合物之溶解性。在一些實施例中，包括增溶劑對半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠而言可為有益的。增溶劑可用於增加調配物或組成物之組分中之任一者(包括治療有效物質半乳糖凝集素-3抑制劑或賦形劑)之溶解性。本文所述之增溶劑並不意欲構成窮盡性清單，而是僅僅作為可用於本發明之組成物中之示例性增溶劑提供。在某些實施例中，增溶劑包括(但不限於)乙醇、第三丁醇、聚乙二醇、丙三醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、聚乙二醇、聚乙烯吡咯啶酮及其任何醫藥學上可接受之鹽及/或組合。

穩定劑可幫助增加治療有效物質在本發明之組成物中之穩定性。此可藉由例如減少治療有效物質降解或阻止其聚集進行。不希望受理論束縛，增強穩定性之機制可包括自溶劑螯合治療有效物質或抑制蒽環黴素化合物之自由基氧化。穩定劑為此項技術中所熟知。因此，本文所述之穩定劑並不意欲構成窮盡性清單，而是僅僅作為可用於本發明之組成物中之示例性穩定劑提供。穩定劑可包括(但不限於)乳化劑及界面活性劑。

可添加界面活性劑以減少液體組成物之表面張力。此可提供有利特性，諸如提高過濾簡易性。界面活性劑亦可充當乳化劑及/或增溶劑。界面活性劑為此項技術中所熟知。因此，本文所述之界面活性劑並不意欲構成窮盡性清單，而是僅僅作為可用於本發明之組成物中之示例性界面活性劑提供。可包括之界面活性劑包括(但不限於)脫水 山梨糖醇酯(諸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80))、脂多醣、聚乙二醇(例如PEG 400及PEG 3000)、泊洛沙姆(poloxamer)(亦即普洛尼克(pluronic))、氧化乙烯及聚氧化乙烯(例如特立通(Triton)X-100)、皂素、磷脂(例如卵磷脂)及其組合。

張力調節劑可用於促使調配物或組成物適用於投藥。當向患者投與組成物，例如藉由非經腸投與時液體組成物之張力為重要考慮因素。張力調節劑為此項技術中所熟知。因此，本文所述之張力調節劑並不意欲構成窮盡性清單，而是僅僅作為可用於本發明之組成物中之示例性張力調節劑提供。張力調節劑可為離子或非離子且包括(但不限於)無機鹽、胺基酸、碳水化合物、糖、糖醇及碳水化合物。示例性無機鹽可包括氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉及硫酸鉀。一示例性胺基酸為甘胺酸。示例性糖可包括糖醇，諸如丙三醇、丙二醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖及甘露糖醇。

B.製品及套組

本發明亦提供一種包裝醫藥組成物，其中半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)包裝在套組或製品內。本發明之套組或製品可含有適用於治療，包括改善及/或緩解、預防及/或診斷或監測腎臟疾病之物質。套組或製品可包含容器；及在容器上或與容器相聯之標籤或藥品說明書或印刷材料，其提供關於半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠用於治療腎臟疾病之用途的資訊。

在某些實施例中，本發明提供一種製品，其包含半乳糖凝集素-3抑制劑及藥品說明書，其中該藥品說明書指示該半乳糖凝集素-3抑制劑可用於治療eGFR在約15-44mL/min/1.73m²範圍內之患者的腎臟疾病。

術語「藥品說明書」用以指治療產品之商業包裝中通常包括之說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投藥、禁忌及/或關於使 用此類治療產品之警告的資訊。

在某些實施例中，本發明之製品包含(a)第一容器，其盛有包含半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠的組成物；以及(b)藥品說明書，其指示半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠可如何投與患者，如本文中所論述。在較佳實施例中，標籤或藥品說明書指示半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)用於治療腎臟疾病。在某些實施例中，本發明係關於一種套組，其包含足夠數目之容器以提供半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠的起始與維持劑量。舉例而言，套組可含有含約1.5及30mg/m²，或量在0.1-5mg/m²、5-10mg/m²、10-15mg/m²、15-20mg/m²、20-25mg/m²、25-30mg/m²、30-80mg/m²、80-120mg/m²、120-150mg/m²、150-175mg/m²、175-200mg/m²範圍內之經修飾之果膠供靜脈內注射的容器。各含有半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)之容器可例如提供足夠經修飾之果膠以每週經靜脈內投與一次，長達連續8週，或以另一適合頻率投與，諸如每天或每月投與一次。

適用於半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)之容器包括例如瓶子、小瓶、注射器(包括預負載/預填注射器)、筆(包括自動注射筆)等。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。容器盛有單獨或與有效治療、預防及/或診斷病狀且可具有無菌進入端口另一組成物組合的組成物。

在某些實施例中，醫藥組成物及相關製品適用於治療可有利地對經修飾之果膠起反應的某些患者群體。舉例而言，例如GCS-100之經修飾之果膠可用於治療對用於治療腎臟疾病之口服抗生素或藥物無反應或不耐受之患者的腎臟疾病。

在某些實施例中，醫藥組成物及/或相關製品可提供適用於治療腎臟疾病之治療劑投與的劑量。在某些實施例中，物品包括在療法開 始時投與之約1.5mg/m²之起始劑量。在某些實施例中，物品包括約0.5mg/m²之維持劑量，例如歷時此後多週，諸如始於第4週。舉例而言，本發明之套組可包括起始劑量及一或多個維持劑量。

在其他實施例中，物品提供適合於皮下注射之半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)。

在本發明之某些實施例中，套組包含半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠、包含其他治療劑之第二醫藥組成物及視情況存在之關於用於治療腎臟疾病之兩種藥劑投與的說明書。說明書可描述如何(例如皮下或靜脈內)及何時(例如在第0週、第2週及此後每週或每兩週)應向個體投與數劑經修飾之果膠及/或其他治療劑用於治療。

在某些實施例中，套組含有包含半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組成物及各包含適用於治療腎臟疾病(諸如CKD或NASH)或其症狀之藥物及醫藥學上可接受之載劑的一或多種其他醫藥組成物。或者，套組包含單一醫藥組成物，該醫藥組成物包含半乳糖凝集素-3抑制劑(諸如經修飾之果膠)、一或多種適用於治療腎臟疾病(諸如CKD或NASH)之藥物及醫藥學上可接受之載劑。

在另一個態樣中，本發明提供一種醫藥包裝，其包含含有呈可復原粉末或適合於注射或輸注之溶液形式的根據本發明之半乳糖凝集素-3抑制劑的小瓶或安瓿，視情況存連同用於向罹患腎毒性之患者投與組成物之說明書。說明書包括(但不限於)以下各者之書面及/或圖畫描述：活性成分、組成物稀釋至適合於投藥之濃度的指導、適合適應症、適合給藥方案、禁忌、藥物相互作用及在臨床試驗過程中注意到之任何有害副作用。

在替代實施例中，醫藥包裝可包含含有100mL至2L呈適合於靜脈內投藥之溶液形式的本發明之醫藥組成物的塑料袋，視情況連同如 上所述之說明書。

C.其他治療劑

半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(包括GCS-100)可單獨或與其他治療劑組合用於本發明之方法中，藉由熟習此項技術者選擇該其他藥劑以達成其預期目的。舉例而言，其他藥劑可為此項技術中公認為適用於治療藉由半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠治療的疾病或病狀的治療劑。

應進一步瞭解，將包括在本發明內之組合為適用於達成其預期目的之彼等組合。以下闡述之治療劑係出於例示性目的且並不意欲限制。作為本發明之一部分的組合可為半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠及至少一種選自以下清單之其他藥劑。若組合使得所形成之組成物可執行其預期功能，則組合亦可包括一種以上其他藥劑，例如兩種或三種其他治療劑。本文所描述之經修飾之果膠或半乳糖凝集素-3抑制劑可與用於治療癌症、心血管疾病、發炎、纖維化及腎損傷之其他治療劑組合使用，該等其他治療劑可與經修飾之果膠功能平行、依賴於其或與其一致起作用。本發明中使用之經修飾之果膠亦可與一或多種治療劑組合，該一或多種治療劑諸如甲胺喋呤(methotrexate)、美沙拉嗪(mesalazine)、奧沙拉嗪(olsalazine)、氯奎(chloroquine)、羥基氯奎(hydroxychloroquine)、青黴胺(pencillamine)、金硫蘋果酸酯(aurothiomalate)(肌肉內或經口)、秋水仙鹼(cochicine)、β-2腎上腺素受體促效劑(沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林(terbutaline)、沙美特羅(salmeterol))、黃嘌呤(茶鹼、胺茶鹼)、色甘酸鹽(cromoglycate)、奈多羅米(nedocromil)、酮替芬(ketotifen)、異丙托銨(ipratropium)、氧托銨(oxitropium)、環孢素(cyclosporin)、FK506、雷帕黴素(rapamycin)、黴酚酸嗎啉乙酯(mycophenolate mofetil)、來氟米特(leflunomide)、NSAID(例如布洛芬(ibuprofen))、皮質類固醇(諸如 (prednisolone)、甲基潑尼龍(methylprednisolone)及乙酸甲基潑尼龍(methylprednisolone acetate))、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素激導性劑、干擾促炎性細胞因子(諸如TNFα或IL1)信號傳導之藥劑(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑)、IL-1轉化酶抑制劑、TNFa轉化酶(TACE)抑制劑、T細胞信號傳導抑制劑(諸如激酶抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞因子受體及其衍生物(例如可溶性p55或p75 TNF受體及衍生物p75 TNFRiγG(Enbrel^TM及p55 TNFRiγG(來那西普(Lenercept))、siL-1RI、siL-1RII、siL-6R)、消炎細胞因子(例如IL-4、IL-10、IL-12、IL-13及TGFβ))、塞內昔布(celecoxib)、葉酸(folic acid)、硫酸羥基氯奎(hydroxychloroquine sulfate)、羅非考昔(rofecoxib)、依那西普(etanercept)、英利昔單抗(infliximab)、萘普生(naproxen)、伐地考昔(valdecoxib)、美洛昔康(meloxicam)、金色硫代蘋果酸鈉(gold sodium thiomalate)、阿司匹林(aspirin)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、萘磺酸丙氧吩(propoxyphene napsylate)、葉酸鹽、萘丁美酮(nabumetone)、雙氯芬酸(diclofenac)、吡羅昔康(piroxicam)、依託度酸(etodolac)、雙氯芬酸鈉(diclofenac sodium)、奧沙普嗪(oxaprozin)、羥考酮(oxycodone)、氫可酮酒石酸氫鹽(hydrocodone bitartrate)、雙氯芬酸鈉(diclofenac sodium)、迷索前列醇(misoprostol)、芬太尼(fentanyl)、阿那白滯素(anakinra)、曲馬多(tramadol)、雙水楊酸酯(salsalate)、舒林酸(sulindac)、氰鈷胺素(cyanocobalamin)、葉酸素(folacin)、吡哆醇(pyridoxine)、乙醯胺苯酚(acetaminophen)、阿侖膦酸鈉(alendronate sodium)、潑尼龍(prednisolone)、嗎啡硫酸鹽(morphine sulfate)、利多卡因(lidocaine)、 吲哚美辛(indomethacin)、葡糖胺硫酸鹽(glucosamine sulfate)、軟骨素(chondroitin)、阿米替林(amitriptyline)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、奧洛他定(olopatadine)、奧美拉唑(omeprazole)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、利妥昔單抗(rituximab)、IL-1 TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18 BP、抗-IL-18、抗-IL15、BIRB-796、SCI0-469、VX-702、AMG-548、VX-740、羅氟司特(Roflumilast)、IC-485、PSORIASIS C-801及美索普蘭(Mesopram)。

經修飾之果膠或其他半乳糖凝集素-3抑制劑可組合的腎臟疾病治療劑之非限制性實例包括以下：防腐劑及止汗劑(例如6.25%氯化鋁六水合物於無水乙醇中)、消炎或抗雄激素療法(諸如四環素(tetracycline)、病灶內曲安西龍(triamcinolone)或非那雄安(finasteride))。半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠亦可與諸如以下之藥劑組合：甲胺喋呤、環孢素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯、來氟米特、NSAID(例如布洛芬)、皮質類固醇(諸如潑尼龍)、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素激導性劑、干擾促炎性細胞因子(諸如TNFα或IL-1)信號傳導之藥劑(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑)、IL-1β轉化酶抑制劑、TNFα轉化酶抑制劑、T細胞信號傳導抑制劑(諸如激酶抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺胺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞因子受體及其衍生物(例如可溶性p55或p75 TNF受體、siL-1RI、siL-1RII、siL-6R)及消炎細胞因子(例如IL-4、IL-10、IL-12、IL-13及TGFβ)。

經修飾之果膠可組合的腎臟疾病治療劑之其他實例包括以下：D2E7(PCT公開案第WO 97/29131號；Humira®)、Ca2(Remicade®)、TNFR-Ig構築體、p75 TNFRiγG(Enbrel ^TM)及p55 TNFRiγG(來那西普)抑制劑及PDE4抑制劑。半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠可與 例如布替耐德(budenoside)及地塞米松(dexamethasone)之皮質類固醇組合。半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠亦可與諸如柳氮磺胺吡啶、5-胺基水楊酸及奧沙拉嗪之藥劑以及干擾促炎性細胞因子(諸如IL1)合成或作用之藥劑(例如IL-1β轉化酶抑制劑及IL-1rα)組合。半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠亦可與例如酪胺酸激酶抑制劑6-巰基嘌呤之T細胞信號傳導抑制劑一起使用。半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠可與IL-12組合。半乳糖凝集素-3或經修飾之果膠可與美沙拉嗪、潑尼松、硫唑嘌呤、巰基嘌呤、英利昔單抗、甲基潑尼龍、苯乙哌啶/硫酸阿托品、洛哌丁胺鹽酸鹽、甲胺喋呤、奧美拉唑、葉酸鹽、環丙沙星、氫可酮酒石酸氫鹽、四環素鹽酸鹽、醋酸氟輕鬆、甲硝噠唑、硫柳汞、消膽胺、環丙沙星鹽酸鹽、茛菪鹼硫酸鹽、麥啶鹽酸鹽、咪達唑侖鹽酸鹽、羥考酮、普敏太定鹽酸鹽、磷酸鈉、磺胺甲基異噁唑I三甲氧苄二胺嘧啶、塞內昔布、聚卡波非、丙氧吩萘磺酸鹽、羥皮質酮、多維生素、巴柳氮二鈉、可待因磷酸鹽、考來維侖(colesevelam)hcl、氰鈷胺素、葉酸、左氧氟沙星、甲基潑尼龍、那他珠單抗及干擾素-γ組合。半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠亦可與諸如以下之藥劑組合：阿侖單抗(alemtuzumab)、屈大麻酚(dronabinol)、達利珠單抗(daclizumab)、米托蒽醌(mitoxantrone)、紮利羅登鹽酸鹽(xaliproden hydrochloride)、胺吡啶(fampridine)、醋酸格拉替雷(glatiramer acetate)、那他珠單抗(natalizumab)、斯納雙醇(sinnabidol)、a-immunokine NNS03、ABR-215062、AnergiX.MS、趨化因子受體拮抗劑、BBR-2778、卡拉瓜林(calagualine)、CPI-1189、LEM(脂質體囊封米托蒽醌)、THC.CBD(類大麻酚促效劑)MBP-8298)、美索普蘭(PDE4抑制劑)、MNA-715、抗-IL-6受體抗體、諾若華(neurovax)、吡非尼酮阿洛品(pirfenidone allotrap)1258(RDP-1258)、sTNF-R1、他侖帕奈(talampanel)、特立氟胺(teriflunomide)、 TGF-β2、替利莫肽(tiplimotide)、VLA-4拮抗劑(例如TR-14035、VLA4 Ultrahaler、AntegranELAN/Biogen)、干擾素γ拮抗劑、IL-4促效劑及人類化IL-6抗體托西利單抗(tocilizumab)。

在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠可與此項技術中已知治療感染之抗病毒或抗細菌劑組合。如本文所用之術語「抗生素」係指抑制微生物生長或殺死微生物之化學物質。此術語涵蓋由微生物產生之抗生素以及此項技術中已知之合成抗生素(例如類似物)。抗生素包括(但不限於)克拉黴素(clarithromycin)(Biaxin®)、環丙沙星(Cipro®)及甲硝噠唑(metronidazole)(Flagyl®)。

在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠可與可造成腎毒性之化學治療劑組合。或者，半乳糖凝集素-3抑制劑可與除化學治療劑外或回應於諸如藥物濫用或暴露於重金屬(亦為腎毒性)之情況而可造成腎毒性的療法組合。

與腎毒性相關之癌症治療劑包括烷基化劑，諸如AZQ(地吖醌(diaziquone))、順鉑(Cisplatin)、順鉑類似物、異環磷醯胺(Ifosfamide)、亞硝基脲；抗腫瘤抗生素，諸如絲裂黴素C及普卡黴素(Plicamycin)；抗代謝物，諸如5-氮胞苷及甲胺喋呤；生物藥劑，諸如干擾素及介白素-2及其他藥物，諸如硝酸鎵、環孢靈及他克莫司(Tacrolimus)。化學治療劑可選自鉑複合物、順鉑、奧沙利鉑、卡鉑、奈達鉑(Nedaplatin)、賽特鉑(Satraplatin)、BBR3464或ZD0473。在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑與選自順鉑、甲胺喋呤、絲裂黴素、環孢靈、異環磷醯胺及唑來膦酸之化學治療劑或免疫抑制劑一起投與。

在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑與除化學治療劑外之選自抗生素、免疫抑制劑、降高血脂藥、ACE抑制劑、NSAID及阿司匹林之腎毒性藥物組合。抗生素可選自胺基糖苷類、磺醯胺、兩性黴素 B、膦甲酸、喹諾酮(例如環丙沙星、左氧氟沙星)、利福平(Rifampin)、四環素、阿昔洛韋(Acyclovir)、潘他米丁(Pentamidine)或萬古黴素(Vancomycin)。在某些實施例中，該方法包含投與半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠聯合兩種或兩種以上腎毒性療法，諸如化學治療劑及抗生素。治療腎臟疾病之方法可進一步包括投與其他治療劑，諸如消炎藥或抗氧化劑。在某些實施例中，抗氧化劑可選自安樂普利諾(Allopurinol)、依布硒啉(Ebselen)、厄多司坦(Erdosteine)、依達拉奉(Edaravone)、N-乙醯半胱胺酸、水飛薊素(Silymarin)、抽配基(Naringernin)、維生素C及維生素E。在某些實施例中，消炎劑係選自水楊酸鹽。

包括半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠的組成物可與其他藥劑組合投與以促進腎功能改善。在一些實施例中，其他藥劑為白蛋白，因為用經靜脈內給予之白蛋白擴展血漿體積已顯示改善肝腎症候群患者之腎功能。投與之其他藥劑之量可視包括半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠及該其他藥劑之治療的累積治療效應而變化。舉例而言，投與之白蛋白之量可為第一天每公斤體重經靜脈內給予1公克白蛋白，接著每天20至40公克。其他藥劑可為以下中之任一或多者：米多君(midodrine)、奧曲肽(octreotide)、生長抑素(somatostatin)、後葉加壓素(vasopressin)模擬物鳥胺酸加壓素(ornipressin)、特利加壓素(terlipressin)、己酮可可鹼(pentoxifylline)、乙醯半胱胺酸、去甲腎上腺素、迷索前列醇(misoprostol)等。在一些實施例中，其他利鈉肽亦可與半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠治療劑組合使用以彌補與如上文所述之疾病相關的鈉排泄損失。舉例而言，利鈉肽可包括任何類型之心房利鈉肽(ANP)、腦利鈉肽(BNP)、C-類型利鈉肽(CNP)及/或曼巴蛇屬(dendroaspis)利鈉肽等。若干利尿化合物可與半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠組合使用以誘發尿排出。舉例而言，以下 中之任一或多者可與半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠組合使用以治療患者：黃嘌呤，諸如咖啡鹼(caffeine)、茶鹼(theophylline)、可可豆鹼(theobromine)；噻嗪化物，諸如苄氟甲噻嗪(bendroflumethiazide)、氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)；保鉀利尿劑，諸如胺氯吡脒(amiloride)、螺內酯(spironolactone)、胺苯喋啶(triamterene)、烯睾丙酸鉀(potassium canrenoate)；滲透利尿劑，諸如葡萄糖(尤其在不受控之糖尿病中)、甘露糖醇；環利尿劑，諸如布美他尼(bumetanide)、依他尼酸(ethacrynic acid)、呋喃苯胺酸(furosemide)、托西邁(torsemide)；碳酸酐酶抑制劑，諸如乙醯唑胺(acetazolamide)及多佐胺(dorzolamide)；Na-H交換拮抗劑，諸如多巴胺；促水排泄藥，諸如秋麒麟草屬(goldenrod)、杜松(juniper)；精胺酸後葉加壓素受體2拮抗劑，諸如兩性黴素B、檸檬酸鋰；酸化鹽，諸如CaCl₂、NH₄Cl等。上述其他藥劑之清單僅僅為例示性且可包括任何其他可用於治療與本文中論述之任一腎臟疾病相關之腎衰竭的藥劑。

1.聯合投藥

半乳糖凝集素-3抑制劑與其他治療劑之聯合投藥可包括同時投藥。在具體實施例中，聯合投藥包含兩種藥劑彼此在約10分鐘、約20分鐘或約30分鐘內投與。在示例性實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑以與其他治療劑重疊之方式投與，例如其他治療劑經靜脈內投與且半乳糖凝集素-3抑制劑在該靜脈內給藥過程期間經口投與。

半乳糖凝集素-3抑制劑可在其他治療劑投與之後投與。半乳糖凝集素-3抑制劑可緊接著其他治療劑投與或在例如1小時、2小時、4小時、6小時或12小時內投與。在其他實施例中，其他治療劑可在半乳糖凝集素-3抑制劑之後投與。其他治療劑可緊接著半乳糖凝集素-3抑制劑投與或在例如1小時、2小時、4小時、6小時或12小時內投與。

半乳糖凝集素-3抑制劑可藉由任何適合之方式投與以接觸腎臟且累積足夠量來預防或治療腎疾病。半乳糖凝集素-3抑制劑或含有半乳糖凝集素-3抑制劑之組合治療劑可經口、藉由靜脈內注射非經腸、經皮、藉由肺吸入、藉由陰道內或直腸內插入、藉由皮下植入、肌肉內注射或藉由直接注射至患病組織，如例如藉由注射至腫瘤位點來投與。在一些情況下，該等物質可在進行手術時局部塗覆。

調配該等物質以適合所需投與路徑。半乳糖凝集素-3抑制劑及任何其他治療劑各可以有助於投與之方式調配。舉例而言，組合療法可調配用於靜脈內投與，而半乳糖凝集素-3抑制劑可調配用於噴霧。調配物之以下論述可應用於組合療法之個別調配物或半乳糖凝集素-3抑制劑或兩者組合。

半乳糖凝集素-3抑制劑無需以與其他組合療法相同之方式投與。舉例而言，半乳糖凝集素-3抑制劑可經口投與，而其他治療劑經靜脈內投與。此外，半乳糖凝集素-3抑制劑可在投與組合療法之前、期間或之後，諸如在投與組合療法之前投與。在較佳實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑以在腎中累積有效濃度半乳糖凝集素-3抑制劑的方式投與。單獨或組合之任一或多種以上提及之治療劑可與半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠組合，例如使用多變劑量治療方案投與罹患腎臟疾病之個體。

治療腎臟疾病之方法可進一步包含在聯合投與其他治療劑及半乳糖凝集素-3抑制劑之前、期間及/或之後用生理食鹽水向患者供水。

在一些實施例中，除用於治療癌症、心血管疾病、發炎等治療劑之外，單獨或組合之任一以上提及之治療劑亦可投與罹患腎臟疾病之個體。應瞭解其他治療劑可用於如上所述之組合療法，且亦可用於本文所描述之其中希望有益影響之其他適應症中。用於本文所描述之 方法及醫藥組成物中的藥劑組合可對治療靶向之病狀或疾病具有治療累加或協同效應。用於本文所描述之方法或醫藥組成物內的藥劑組合亦可減少與藥劑中之至少一者相關的當單獨或無特定醫藥組成物之其他藥劑下投與時的不利效應。舉例而言，一種藥劑之副作用之毒性可藉由組成物之另一藥劑減輕，因此允許更高劑量、改善患者順應性及/或改善治療後果。組成物之累加或協同效應、益處及優點適用於結構或功能類別之類別的治療劑或個別化合物本身。

VIII.半乳糖凝集素抑制劑及經修飾之果膠之功效

本發明亦提供用於評估半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠在個體體內之作用的方法。此類方法可用於確定半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之功效或回應於量測之作用而調整患者之劑量。使用本文所描述之方法，可確定或證實半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之作用，且視情況用於治療腎臟疾病之方法中。

在某些實施例中，本發明提供一種用於確定半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(包括GCS-100)治療個體之腎臟疾病之功效的方法，其使用基線eGFR之改變來確定功效。在某些實施例中，半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(包括GCS-100)治療個體之腎臟疾病之功效藉由偵測半乳糖凝集素-3含量及/或活性之改變來評估，其中半乳糖凝集素-3含量減少表明所需結果。其他適合標記物包括胱抑素C、肌酐、BUN、血漿分裂素、鉀、尿酸、尿素及腎功能及/或破壞之其他標記物。

在某些實施例中，本發明提供一種治療個體之腎臟疾病之方法，其包含向所述個體投與半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠(例如GCS-100)，使得腎臟疾病得以治療，例如其中半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠在患者或患者群體內實現統計顯著之臨床反應。

在某些實施例中，本發明之方法用於確定半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠之劑量是否為半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠對已用半乳糖凝集素-3或經修飾之果膠治療之患者的有效劑量。

在某些實施例中，本發明之方法包含向患者投與半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠且藉由確定患者之eGFR、半乳糖凝集素-3、生物標記物、血清含量的改變、改善、量測等(例如相對於患者之治療前情形、預定所需病狀或標準或者未經治療患者或用安慰劑治療之患者之情形)確定經修飾之果膠之功效。

一種用於確定功效之方法可包含評估包含半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠的給藥方案對患有腎臟疾病之個體的作用，以確定半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠是否為有效療法或是否將需要改變劑量。

本文所描述之實例及發現代表經修飾之果膠GCS-100，其有效治療腎臟疾病。因而，本文中之實例部分中所描述之研究及結果可用作使用半乳糖凝集素-3抑制劑或經修飾之果膠治療腎臟疾病之指南。

本發明之其他實施例描述於以下實例中。藉由以下實例進一步說明本發明，所述實例不應解釋為以任何方式限制。

範例

半乳糖凝集素-3抑制劑：GCS-100為一種複合多醣，其能夠結合於半乳糖凝集素-3且可能阻斷半乳糖凝集素-3之作用。GCS-100為果膠之衍生物，果膠為在包括柑橘果實之果肉及皮之各種植物結構中發現的天然存在之多醣。果膠由以具有多個側支鏈之複合聚合物組態配置之若干類型糖構成。詳言之，果膠具有多個含有糖β-半乳糖之側支鏈，β-半乳糖藉由半乳糖凝集素-3之碳水化合物結合結構域識別。因此，GCS-100能夠結合於且螯合細胞外(循環)半乳糖凝集素-3之多個分子(圖2)。另外，因為其高平均分子量，所以GCS-100長時間存在於 體內(半衰期為大約30小時)，增加與循環半乳糖凝集素-3相互作用且螯合其之時間。

實例1：GCS-100藥理學研究之概述

已在稱為非酒精性脂肪肝炎(NASH)之脂肪肝病的纖維化促炎性小鼠模型中研究GCS-100。此模型中，在小鼠中藉由在出生後單一皮下注射鏈佐黴素(streptozotocin)，接著在4週齡後隨意餵食高脂肪飲食來建立NASH。NASH在約第7週出現，證據為在第9週纖維化及在第11-12週形成肝結節。在本發明之研究中，在9週齡時將小鼠隨機化為靜脈內經失活安慰劑(對照物)、1mg/kg GCS-100或25mg/kg GCS-100治療之三個組。所有動物均在9-12週期間每週接受其相應投藥三次。在第12週結束時，收集血液及組織樣品且分析肝酶、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活性評分及纖維化。

總體而言，在NASH小鼠中用GCS-100治療耐受性良好且使血漿ALT減少。未觀測到對血糖含量有影響。組織學分析展示NAFLD評分顯著改善，其中微囊泡及大囊泡脂肪沈積、肝細胞鼓起及發炎性細胞浸潤減少。觀測到羥脯胺酸減少且如藉由天狼星紅(Sirius red)染色所量測，亦觀測到纖維化顯著減少。此研究證明GCS-100有效減少纖維化。

實例2：使用GCS-100治療慢性腎病患者

為實現所需治療作用，實現長時間足以結合於及中和有效含量下之血漿半乳糖凝集素-3的循環GCS-100濃度為有幫助的。ESRD患者中循環半乳糖凝集素-3之平均濃度為約64ng/mL，其等於每毫升血漿2.21×10^-6μmol半乳糖凝集素-3(de Boer等人，2011)。

基於人類藥物動力學資料，預期單一1.5mg/m²劑量之GCS-100產生超過預期半乳糖凝集素-3濃度之起始血漿濃度。在此劑量下，以莫耳計，GCS-100濃度為在GCS-100之C_max下循環半乳糖凝集素-3的約6 倍。血漿中GCS-100之近似平均半衰期為30小時，因此GCS-100之含量將在下一個治療之前降至此基線下(圖3)。

類似地，預期單一30mg/m²劑量之GCS-100產生超過預期半乳糖凝集素-3濃度之起始血漿濃度。在此劑量下，以莫耳計，GCS-100濃度為在GCS-100之C_max下循環半乳糖凝集素-3的約160倍，且GCS-100之含量將在下一個治療之前不降至此基線下。

基於前述基本原理，預期用於此研究之劑量組及給藥時程允許有效的半乳糖凝集素-3抑制，同時耐受性良好。

研究藥物投與及劑量時程

分配至治療組之患者在第1、8、15、22、29、36、43及50天接受安慰劑或GCS-100。待投與之GCS-100之量(以mg計)係基於身體表面積確定，身體表面積基於體重及高度，使用以下式III或IV計算。

或

給藥方案

患者每週給藥一次，歷時8週。在第1天計算各患者之研究藥物劑量。

治療

隨機分配患者來接受安慰劑(0.9%氯化鈉注射液，USP)、1.5mg/m² GCS-100或30mg/m² GCS-100。安慰劑及GCS-100作為靜脈內輸注液投與，每週一次，歷時8週。

表3-4展示對於注射30mg/m²(表3)及1.5mg/m²(表4)之患者，GFR自基線至第50天與第57天之平均值的平均改變。表5-8展示投與1.5mg/m² GCS-100及30mg/m² GCS-100之患者中基線GFR、BUN、尿 酸及半乳糖凝集素-3之改變。

實例3：慢性腎病(CKD)患者中GCS-100之2期研究

進行121個晚期CKD患者之多中心、隨機化、盲法、安慰劑對照之2期研究。2期研究達到腎功能在統計上顯著改善的主要療效終點。特定言之，1.5mg/m²劑量之GCS-100相對於安慰劑，在8週給藥之後，使估計之腎小球濾過率(eGFR)在統計上顯著(p=0.045)改善。與安慰劑相比之此改善在給藥結束後維持5週(p=0.07)。30mg/m²劑量組中未觀測到eGFR之統計顯著改善。

在糖尿病患者之預先界定子集中GCS-100對eGFR之作用更明顯(p=0.029)。此子集之分析係基於糖尿病性CKD患者之腎中半乳糖凝集素-3提高之觀測結果預先界定，且半乳糖凝集素-3之含量與此等患者中之蛋白尿(腎臟健康之標記物)相關。

GCS-100耐受性良好。在1.5mg/m²組中不存在嚴重不良事件、3/4級不良事件及早期研究中斷。在任何劑量組中均未觀測到對血壓之作用。

進行擴展研究，其中來自2期研究之患者再隨機化為接受1.5或30mg/m² GCS-100(至第16週可獲得完整資料)。在總計93個招收之患者中，在擴展研究中用GCS-100治療之前33個患者在2期研究中預先接受安慰劑。首次針對表示一組接受GCS-100之患者的此組分析功效。與盲法2期結果一致，1.5mg/m²組經歷eGFR之顯著改善。當將此等患者之反應與以下兩者比較時觀測到此：(1)接受30mg/m²之平行隨機化組中之反應(p=0.04)；以及(2)對於擴展研究中招收之安慰劑治療之患者，盲法2期研究中對安慰劑之先前反應(p=0.02)。

表12.在擴展研究中投與安慰劑、1.5mg/m² GCS-100及30mg/m²GCS-100之2期患者中基線eGFR之改變(mL/min/1.73m²)。*擴展研究中招收之安慰劑治療患者在盲法2期研究中對安慰劑之先前反應(基線至第12週)

參考文獻

本文所提及之所有公開案及專利，包括列於以下之彼等參考文獻，均以全文引用的方式併入本文中，引用程度如同各個別公開案或專利特定且個別地以引用的方式併入一般。在有矛盾的情況下，可以本申請案(包括本文中之任何定義)為準。

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相等物

熟習此項技術者將認識到或能夠至多使用常規實驗即可確定本文中所述之本發明之特定實施例的許多相等物。雖然本發明之特定實施例已加以論述，但以上說明書為例示性而非限制性。在評述本說明書時，本發明之許多變體可為熟習此項技術者顯而易見。本發明之完整範疇以及其相等物之完整範疇，及說明書，以及此類變體，應參考申請專利範圍確定。此類相等物欲由隨附申請專利範圍涵蓋。

Claims (41)

1. 一種用於治療患者之腎臟疾病之方法，其包含：向該患者投與至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑。
2. 如請求項1之方法，其中該腎臟疾病係選自NASH(非酒精性脂肪肝炎)、腎衰竭、CKD(慢性腎病)、肝腎症候群、酸中毒、ARF(急性腎衰竭)、發育不全、奧爾波特症候群(Alport syndrome)、澱粉樣變性、鎮痛劑腎病、抗-GBM病(古巴士德氏病(Goodpasture disease))、抗磷脂症候群、粥樣硬化栓子(膽固醇栓塞)、巴特症候群(Bartter syndrome)、良性家族性血尿、伯格氏病(Berger's disease)、布雷西亞-西米諾瘻管(Brescia-Cimino fistula)、鈣過敏、慢性腎盂腎炎(逆流性腎病)、CRF(慢性腎衰竭)、慢性腎機能不全、保守治療、新月體性腎炎(RPGN(迅速進展性絲球體腎炎))、膀胱炎、腎囊腫、緻密物沈積病或MCGN(腎小球膜毛細血管性絲球體腎炎)、尿崩症、糖尿病性腎病、排尿困難、水腫、ESRD或ESRF(末期腎病或末期腎衰竭)、法布立病(Fabry disease)、范康尼氏症候群(Fanconi syndrome)、原纖維性腎炎、FSGS(局部性節段性腎小球硬化症)、吉特曼症候群(Gitelman syndrome)、絲球體腎炎、血尿、HUS(溶血性尿毒症候群)、腎盂積水、亨諾-絲奇恩賴紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、肝腎症候群、腎上腺樣瘤、發育不全、IgA腎病(伯格氏病)、間質性腎炎、腰痛血尿症候群、惡性高血壓、髓質海綿腎、膜性腎病、膜增生性絲球體腎炎、MCGN(腎小球膜毛細血管性絲球體腎炎)、MPA(顯微性多血管炎)、腎病、腎病症候群、胡桃夾症候群、乏尿症、骨營養不良、佩奇腎(Page kidney)、多動脈炎、多囊性腎臟疾病(PKD)、感染後絲球體腎 炎、梅乾腹症候群、腎盂腎炎、逆流性腎病、腎小管性酸中毒、腹膜後纖維化、類肉瘤病、絲奇恩賴-亨諾紫癜、硬皮病腎危象、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、全身性硬化症、全身性脈管炎、薄GBM病、血栓性血小板減少性紫癜、TTP(血栓性血小板減少性紫癜)、結節性硬化症、尿道炎、脈管炎及韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)。
3. 如請求項1之方法，其中該患者患有CKD。
4. 如請求項1之方法，其中該患者患有NASH。
5. 如前述請求項中任一項之方法，其中該患者具有約15-44mL/min/1.73m²之基線eGFR(腎小球濾過率)。
6. 如請求項1之方法，其中半乳糖凝集素-3抑制劑為經修飾之果膠。
7. 如請求項6之方法，其中該經修飾之果膠之主鏈包含同聚半乳糖醛酸及/或鼠李半乳糖醛酸I。
8. 如請求項6之方法，其中該經修飾之果膠去酯化且部分解聚合，從而具有經破壞之鼠李半乳糖醛酸主鏈。
9. 如請求項6至8中任一項之方法，其中該經修飾之果膠的平均分子量在50與200kDa之間，較佳在80與150kDa之間。
10. 如請求項6至9中任一項之方法，其中該經修飾之果膠實質上不含分子量低於25kDa之經修飾之果膠。
11. 如請求項6之方法，其中該經修飾之果膠為GCS-100。
12. 如請求項6至11中任一項之方法，其中該經修飾之果膠藉由使經修飾或未經修飾之果膠通過切向流過濾器來製備。
13. 如請求項6至12中任一項之方法，其包含投與約0.1至2mg/m²劑量之該經修飾之果膠。
14. 如請求項13之方法，其中該劑量為約1.5mg/m²。
15. 如請求項6至12中任一項之方法，其包含投與約1-10mg劑量之該經修飾之果膠。
16. 如請求項15之方法，其中該劑量為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg，較佳為1、3或9mg。
17. 如前述請求項中任一項之方法，其中該半乳糖凝集素-3抑制劑每週或每兩週投與一次。
18. 如請求項17之方法，其中對於誘發階段，該半乳糖凝集素-3抑制劑每週投與一次，且接著對於維持階段，每兩週投與一次。
19. 如請求項18之方法，其中該誘發階段為1-3個月，較佳為2個月。
20. 如請求項18或19之方法，其中該維持階段為至少1個月，較佳至少3個月，或甚至六個月或更多個月。
21. 如前述請求項中任一項之方法，其中該至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少該患者血清中尿酸含量之量投與。
22. 如前述請求項中任一項之方法，其中該至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少該患者血清中BUN含量之量投與。
23. 如前述請求項中任一項之方法，其中該至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以引起該患者中GFR改變之量投與。
24. 如前述請求項中任一項之方法，其中該至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少該患者血清中半乳糖凝集素-3含量之量投與。
25. 如前述請求項中任一項之方法，其中該至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少該患者中半乳糖凝集素-3表現量之量投與。
26. 如前述請求項中任一項之方法，其中該至少一種半乳糖凝集素-3抑制劑以減少該患者中半乳糖凝集素-3活性之量投與。
27. 如前述請求項中任一項之方法，其中相對於對照，半乳糖凝集素-3之該濃度、表現量或活性降低0.5、1、2、3、4或5倍。
28. 如前述請求項中任一項之方法，其進一步包含1)在投與該半乳糖 凝集素-3抑制劑之前量測該患者中半乳糖凝集素-3之該濃度、含量或活性；及2)在投與該半乳糖凝集素-3抑制劑之後量測半乳糖凝集素-3之該濃度、含量或活性。
29. 如請求項28之方法，其中在投與該半乳糖凝集素-3抑制劑之後半乳糖凝集素-3之該濃度、含量或活性降低指示半乳糖凝集素-3抑制劑之該劑量為半乳糖凝集素-3抑制劑有效治療患者之腎臟疾病之劑量。
30. 如請求項29之方法，其中在投與該半乳糖凝集素-3抑制劑之後半乳糖凝集素-3之該濃度、含量或活性增加指示半乳糖凝集素-3抑制劑之該劑量為半乳糖凝集素-3抑制劑治療患者之腎臟疾病無效之劑量。
31. 如請求項30之方法，其進一步包含向該患者投與量比該先前投與低的第二劑量之該半乳糖凝集素-3抑制劑。
32. 如前述請求項中任一項之方法，其進一步包含投與其他治療劑。
33. 如前述請求項中任一項之方法，其中該其他治療劑適用於治療心血管疾病、腎衰竭、癌症、發炎、纖維化或感染。
34. 如前述請求項中任一項之方法，其中該其他治療劑係選自抗氧化劑、消炎藥、化學治療劑、抗感染劑、抗生素或抗纖維化藥物。
35. 如前述請求項中任一項之方法，其包含該半乳糖凝集素-3抑制劑與該治療劑同時投與。
36. 如請求項1至34中任一項之方法，其包含該半乳糖凝集素-3抑制劑在投與該治療劑之後投與。
37. 如請求項1至34中任一項之方法，其包含該治療劑在投與該半乳糖凝集素-3抑制劑之後投與。
38. 如前述請求項中任一項之方法，其包含在至少8週之時間段內投與多個劑量之該半乳糖凝集素-3抑制劑。
39. 如前述請求項中任一項之方法，其包含每週投與該半乳糖凝集素-3抑制劑一次。
40. 如前述請求項中任一項之方法，其中該半乳糖凝集素-3抑制劑藉由注射或靜脈內輸注來投與。
41. 如請求項40之方法，其中該半乳糖凝集素-3抑制劑藉由靜脈內輸注來投與。