SK165398A3 - New amino acid derivatives and their use as thrombin inhibitors - Google Patents

Description

deriváty aminokyselín a ich použitie ako inhibítory trombínu

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka nových farmaceutický využiteľných zlúčenín, predovšetkým konkurenčných inhibítorov serínových proteáz podobných trypsínu, najmä trombínu, ich použitia ako medikamentov, farmaceutických kompozícií, ktoré ich obsahujú a syntetických spôsobov ich prípravy.

Doterajší stav techniky

Koagulácia krvi je kľúčovým procesom, ktorý sa týka jednak hemostázy (napríklad prevencie straty krvi z poškodených ciev) ako aj trombózy (napríklad tvorby krvných zrazenín v krvných cievach, ktoré vedie k upchatiu cievy).

Koagulácia je následkom komplexnej série enzymatických reakcií. Jedným z elementárnych krokov v tejto sérii reakcií je konverzia proenzýmu protrombínu na aktívny enzým trombín.

Je známe, že trombín hrá kľúčovú úlohu pri koagulácii. Aktivuje krvné doštičky, čo vedie ku zhlukovaniu krvných doštičiek, konvertuje fibrinogén na monoméry fibrínu, ktoré spontánne polymerizujú na polyméry fibrínu a aktivuje faktor XIII, ktorý j naopak zosieťuje polyméry na vzniku nerozpustného fibrínu. Okrem tcho trombín aktivuje faktor V a faktor VIII, čo vedie k vytvoreniu “pozitívnej spätnej väzby” trombínu z protrombínu.

Inhibíciou zhlukovania krvných doštičiek a tvorbou a zosieťovaním trombínu by sa teda dalo očakávať, že účinné inhibítory trombínu by mali vykazovať antitrombotickú aktivitu. Navyše, dalo by sa očakávať zvýšenie antitrombotickej aktivity pri účinnej inhibícii mechanizmu pozitívnej spätnej väzby.

Raný vývoj inhibítorov trombínu s nízkou molekulovou hmotnosťou opísal Claesson v Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5,411.

Blombäck a kol. (J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 59, (1969)) opísali inhibítory trombínu na báze aminokyselinového sledu situovaného okolo štiepnej strany fibrinogénu Αα reťazca. Pre uvedené aminokyselinové sledy, títo autori navrhli tripeptidylový sled Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, d^:alej uvádzané ako P3-P2-P1 sled), ktorý by mohol byť najúčinnejším inhibítorom.

Inhibítory trombínu na báze dipeptidylových derivátov s α,ω-aminoguanidínom v P1-polohe sú známe z amerického patentu US 4,346,078 a medzinárodnej patentovej prihlášky WO 93/11152. Podobne boli tiež opísané štruktúrne príbuzné dipeptidylové deriváty. Napríklad medzinárodná patentová prihláška WO 94/29336 uvádza zlúčeniny napríklad s aminometylbenzamidínmi, cyklickými aminoalkylamidínmi a cyklickými aminoalkylguanidínmi v P1 -polohe, európska patentová prihláška 0 648 780 opisuje zlúčeniny napríklad s cyklickými aminoalkylguanidínmi v P1polohe.

Inhibítory trombínu na báze peptidylových derivátov, ktoré obsahujú tiež aminoalkylguanidíny (napríklad buď 3- alebo 4-aminometyl-1-amidinopiperidín) v polohe P1 sú známe z európskej patentovej prihlášky 0 468 231, 0 559 046 a 0 641 779.

Inhibítory trombínu na báze tripeptidylových derivátov s arginínaldehydom v P1polohe boli po prvý raz zverejnené v európskej patentovej prihláške 0 185 390.

Pred nedávnom boli opísané peptidylové deriváty na báze arginín aldehydu, modifikované v P3-polohe. Napríklad medzinárodná patentová prihláška WO 93/18060 opisuje hydroxykyseliny, európska patentová prihláška 0 526 877 deaminokyseliny a európska patentová prihláška 0 542 525 O-metylmandľovú kyselinu v P3-polohe.

Inhibítory serín proteáz (napríklad trombín) na báze elektrofilných ketónov v P1polohe sú taktiež známe. Napríklad európska patentová prihláška 0 195 212 opisuje peptidyl-a-keto estery a amidy, európska patentová prihláška 0 362 002 fluóralkylamidketóny, európska patentová prihláška 0 364 344 α,β,δ-triketozlúčeniny a európska patentová prihláška 0 530 167 α-alkoxyketónové deriváty arginínu v P1polohe.

Ďalšie, štrukturálne rozdielne inhibítory serín proteáz podobné trypsinu na báze C-terminálnych derivátov kyseliny boritej arginínu a ich analógov izotiourónia sú známe z európskej patentovej prihlášky 0 293 881.

Pred nedávnom boli v európskej patentovej prihláške 0 669 317 a v medzinárodných patentových prihláškach WO 95/35309, WO 95/23609 a WO 94/29336 zverejnené inhibítory trombínu na báze peptidylových derivátov

Avšak pretrváva tu potreba účinného inhibítora serín proteáz podobného trypsínu, ako je trombín. Sú predovšetkým potrebné zlúčeniny, ktoré sú jednak orálne biovyužiuteľné a tiež selektívnejšie pri inhibícii trombínu ako iné serín proteázy. Dalo by sa očakávať, že zlúčeniny, ktoré vykazujú konkurenčnú inhibičnú aktivitu voči trombínu budú špecificky využiteľné ako antikoagulanty a teda použiteľné pri pri terapeutickej liečbe trombózy a príbuzných ochorení.

Podstata vynálezu

Vynález sa týka zlúčenín všeobecného vzorca I

v ktorom

R¹ predstavuje H, C(O)R¹¹, SiR¹²R¹³R¹⁴ alebo Ci-6alkyl, pričom posledne uvedená skupina môže byť substituovaná alebo zakončená jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo OR¹⁵ alebo (CH2)_qR¹⁶,

R¹², R¹³ a R¹⁴ nezávisle od seba predstavujú H, fenyl alebo Ci.₆alkyl,

R¹⁶ predstavuje C,.₄alkyl fenyl, OH, C(O)OR¹⁷ alebo C(O)N(H)R¹⁸,

R¹⁸ znamená H, Ci.₄alkyl alebo CH₂C(O)OR¹⁹,

R¹⁵ a R¹⁷ nezávisle od seba znamenajú H, Cvealkyl alebo C-_Z._salkylfenyl, R¹’ a R¹⁹ nezávisle od seba predstavujú H alebo C^alkyl a q znamená 0, 1 alebo 2,

R² a R³ nezávisle od seba znamenajú H, Ci-₄alkyl, cyklohexyl alebo fenyl, R* predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, llb alebo líc,

tla v ktorom k, I a m nezávisle od seba znamenajú 0, 1, 2, 3 alebo 4

R⁴ a R⁵ nezávisle od seba predstavujú H, Si(Me)3, 1- alebo 2-naftyl, polycyklickú uhľovodíkovú skupinu, CHR⁴¹R⁴² alebo Ci.4alkyl (pričom posledne menovaná skupina je prípadne substituovaná jedným alebo viacerými atómami fluóru) alebo C₃.₈cykloalkyl, fenyl, metyléndioxyfenyl, benzodioxanyl, benzofuranyl, díhydrobenzofuranyl, benzotiazolyl, benzoxazolyl, benzimidazolyl, kumaranonyl, kumarinyl alebo dihydrokumarinyl (pričom posledných dvanásť skupín je prípadne substituovaných jedným alebo viacerými zvyškami vybranými zo skupiny ako je Ci.₄alkyl, (ktorý môže byť prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami zvolenými z halogénu), C_v4alkoxy, halogén, hydroxyskupina, kyanoskupina, nitroskupina, SO₂NH₂, C(O)OH alebo N(H)R⁴³),

R⁴¹ a R⁴² nezávisle od seba predstavujú cyklohexyl alebo fenyl,

R⁶ a R⁷ nezávisle od seba predstavujú H, C^alkyl, C3.8cykloalkyl, fenyl (pričom posledne uvedená skupina je prípadne substituovaná jedným alebo viacerými zvyškami vybranými zo skupiny ako je Ci.4alkyl, (ktorý môže byť prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami zvolenými z halogénu), Ci-4alkoxy, halogén, hydroxyskupina, kyanoskupina, nitroskupina, SO2NH2, C(O)OH alebo N(H)R⁴⁴), alebo spolu s atómom uhlíka na ktorý sú viazané tvoria C3.₈cykloalkylový kruh,

R⁴³ a R⁴⁴, predstavujú nezávisle od seba H alebo C(O)R⁴⁵, a

R⁴⁵ znamená H, C^alkyl alebo Ci_₄alkoxy,

Y predstavuje CH₂, (CH₂)_2i CH=CH, (CH₂)₃, CH₂CH=CH alebo CH=CHCH_2l pričom posledne tri menované skupiny sú prípadne substituované skupinou Ci₄alkyl, metylén, oxo alebo hydroxy, n znamená 0, 1, 2, 3 alebo 4 a

B predstavuje štruktúrny fragment vzorca IVa, IVb alebo IVc

IVa

v ktorom

X¹ a X² nezávisle od seba predstavujú jednoduchú väzbu alebo CH₂, alebo ich farmaceutický prijateľné soli.

Zlúčeniny vzorca I môžu vykazovať tautomériu. Všetky tautomérne formy a ich zmesi sú zahrnuté do rozsahu vynálezu.

Zlúčeniny vzorca I môžu tiež obsahovať jednu alebo viac asymetrických atómov uhlíka a môžu teda vykazovať optickú stereoizomériu a/alebo diastereoizomériu. Všetky diastereoizoméme formy sa môžu oddeliť s použitím bežných metód, napríklad chromatografie alebo frakčnej kryštalizácie. Rozličné stereoizoméry sa môžu izolovať rozdelením racemickej alebo inej zmesi zlúčenín s použitím konvenčných metód, napríklad frakčnej kryštalizácie alebo HPLC. Alternatívne sa požadované optické izoméry môžu pripraviť reakciou vhodných opticky aktívnych východiskových materiálov pri podmienkach, ktoré nespôsobujú racemizáciu alebo epimerizáciu, alebo derivatizáciou, napríklad s homochirálnou kyselinou, a následnou separáciou diastereoizomérnych derivátov konvenčnými prostriedkami (napríklad HPLC, chromatografia na oxide kremičitom). Všetky stereoizoméry sú zahrnuté do rozsahu vynálezu.

Alkylové skupiny, ktoré môžu znamená R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R¹¹,R¹², R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁸, R¹⁹, a R⁴⁵, a v ktorými môžu byť substituované R⁴, R⁵, a Y, alkoxylové skupiny, ktoré môže znamenať R⁴⁵, a ktorými môžu byť substituované R⁴, a R⁵, cykloalkylové skupiny, ktoré môžu znamenať R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁴¹, a R⁴², a alkylfenylové skupiny, ktoré môžu znamenať R¹⁵ a R¹⁷, môžu byť lineárne alebo rozvetvené a môžu byť nasýtené alebo nenasýtené.

Halogénové skupiny, ktorými môžu byť substituované R⁴, R⁵, R⁶ a R⁷ a ktorými môžu byť substituované substituenty na R⁴, R⁵, R⁶ a R⁷, zahrňujú fluór, chlór a bróm.

Bodky pripojené k atómom uhlíka vo fragmentoch vzorca lla, llb a llc znamenajú bod pripojenia fragmentov ku zlúčenine vzorca I.

Vlnovkové čiary na atóme uhlíka vo fragmentoch vzorcov IVa, IVB a IVc znamenajú polohu väzby vo fragmente.

Zoznam skratiek je uvedený na konci tohto opisu.

Vynález sa ďalej týka zlúčeniny vzorca I, ako je definovaná vyššie, za predpokladu, že:

(a) ak R* predstavuje štruktúrny fragment vzorca Ha, potom R⁴ a/alebo R⁵ (podľa potreby) neznamená/rieznamenajú:

(i) fenyl substituovaný Cvealkylom, ktorý je substituovaný halogénom, (ii) metyléndioxyfenyl, benzodioxanyl, benzofuranyl, dihydrobenzofuranyl, benzotiazolyl, benzoxazolyl, benzimidazolyl, kumaranonyl, kumarinyl alebo dihydrokumarinyl, (b) ak R^x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lle, potom R⁶ a/alebo R⁷ (podľa potreby) predstavuje/predstavujú nesubstituovaný fenyl.

Vynález sa ďalej týka zlúčeniny vzorca I, ako je definovaná vyššie, pričom (a) ak R* predstavuje štruktúrny fragment vzorca I la, potom R⁴ a/alebo R⁵ (podľa potreby) predstavuje/predstavujú:

(i) fenyl substituovaný Ci.₆alkylom, ktorý je substituovaný halogénom, (ii) metyléndioxyfenyl, benzodioxanyl, benzofuranyl, dihydrobenzofuranyl, benzotiazolyl, benzoxazolyl, benzimidazolyl, kumaranonyl, kumarinyl alebo dihydrokumarinyl, (b) ak R* predstavuje štruktúrny fragment vzorca lle, potom R⁶ a/alebo R⁷ (podľa potreby) predstavuje/predstavujú substituovaný fenyl.

Ak n znamená 2 a B predstavuje štruktúrny fragment vzorca IVb, výhodnými zlúčeninami vzorca I sú také zlúčeniny, v ktorých X¹ a X² obidva nepredstavujú CH₂.

Výhodnými zlúčeninami vzorca I sú zlúčeniny, v ktorých:

R¹ predstavuje prípadne substituovaný C_v6alkyl alebo predovšetkým atóm vodíka, δ

R* znamená štruktúrny fragment vzorca Ila,

Y predstavuje CH₂. alebo (CH₂)₂, n znamenal,

B predstavuje štruktúrny fragment vzorca IVa.

Zlúčeniny vzorca I, v ktorom fragment

-N Y oA/ 't.

je v S-konfigurácií sú výhodné. Vlnité na atóme dusíka a uhlíka vo vyššie uvedenom fragmente znamenajú polohu väzby fragmentu.

Príprava

Vynález sa taktiež týka spôsobu prípravy zlúčenín vzorca I, ktorý zahrňuje (a) kondenzáciu zlúčeniny vzorca V,

kde R¹, R², R³ a R* sú definované vyššie, so zlúčeninou vzorca VI,

H—N Y

VI

NH -(CH^n -B kde Y, n a B sú definované vyššie, alebo (b) kondenzáciu zlúčeniny vzorca VII,

kde R¹, R², R³,R* a Y sú definované vyššie, so zlúčeninou vzorca VIII,

H₂N-(CH₂)_n-B kde n a B sú definované vyššie, napríklad v prítomnosti kondenzačného systému (napríklad oxalylchloridu v DMF, EDC, DCC, HBTU alebo TBTU), vhodnej zásady (napríklad pyridínu, DMAP, TEA alebo DIPEA) a vhodného organického rozpúšťadla (napríklad dichlórmetánu, acetonitrilu alebo DMF).

Zlúčeniny vzorca V sú komerčne dostupné, sú dobre známe z literatúry alebo sa dajú pripraviť bežne známymi spôsobmi. Zlúčenina vzorca V sa môže napríklad pripraviť hydrolýzou zlúčeniny vzorca IX,

kde R znamená C^alkyl alebo Ci-₆alkylfenyl a R¹, R² a R\ sú definované vyššie, napríklad pri laboratórnej teplote v prítomnosti vhodnej zásady (napríklad hydroxi du lítneho) a vhodného rozpúšťadla (napríklad THF a/alebo vody).

Zlúčeniny vzorca VI sa môžu pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca X

kde Y je definované vyššie, so zlúčeninou vzorca VIII, ktorá je definovaná vyššie, napríklad podmienkach, ktoré sú opísané vyššie pre syntézu zlúčeniny vzorca I.

Zlúčeniny vzorca VIII sa dajú ľahko pripraviť s použitím známych spôsobov. Zlúčenina vzorca VII sa napríklad môže pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca V, de finovanej vyššie, so zlúčeninou vzorca X, definovanou vyššie, napríklad pri podmienkach, ktoré sú opísané vyššie pre syntézu zlúčeniny vzorca I.

Zlúčeniny vzorca IX, v ktorom a R¹, a R³ obidva predstavujú atóm vodíka, sa môžu pripraviť redukciou zlúčeniny vzorca XI,

v ktorom a R, R^x, a R² sú definované vyššie, napríklad pri nižšej teplote (napríklad medzi -70°C a -5°C) v prítomnosti vhodného redukčného činidla (napríklad bórhyd ridu sodného) a vhodného organického rozpúšťadla (napríklad MeOH alebo EtOH).

Zlúčeniny vzorca IX, v ktorom a R¹ znamená atóm vodíka a R³ predstavuje Ci. ₄alkyl, cyklohexyl alebo fenyl, sa môžu pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca XI, definovanej vyššie, s organokovovým činidlom vzorca XII

R^3aM (XII) v ktorom R^3a predstavuje Ci.₄alkyl, cyklohexyl alebo fenyl, M znamená Li'alebo MgHal a Hal predstavuje Cl, Br alebo J, pri podmienkach, ktoré sú dobre známe odborníkom v odbore, v prítomnosti vhodného organického rozpúšťadla (napríklad THF).

Zlúčeniny vzorca IX, v ktorom R¹ predstavuje atóm vodíka sa môžu tiež pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca XIII

RO-C(O)-C(R^x)H₂ (XIII) v ktorom R a R* sú definované vyššie, so zlúčeninou vzorca XIV,

R²-C(O)-R³ (XIV) v ktorom R² a R³ sú definované vyššie, pri podmienkach, ktoré sú dobre známe odborníkom v odbore.

Zlúčeniny vzorca IX, v ktorom R¹, R² a R³ všetky znamenajú atóm vodíka, R* predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, ako je definovaný vyššie, v ktorom ani k ani I neznamená 0, sa môžu pripraviť redukciou zlúčeniny vzorca XV,

OR

XV kde R^xa predstavuje štruktúrny fragment vzorca 11a, definovaný vyššie, v ktorom ani k ani I nepredstavujú 0 a R má vyššie definovaný význam, v prítomnosti vhodného redukčného činidla (napríklad boránu) v prítomnosti vhodného organického rozpúšťadla (napríklad THF).

Zlúčeniny vzorca XI sú buď známe alebo sa môžu pripraviť analogicky podľa spôsobovOpísaných v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989).

Zlúčeniny vzorca XV sú dobre známe z literatúry alebo sa môžu pripraviť s použitím známych spôsobov, napríklad reakciou vhodného derivátu kyseliny malónovej s alkylačným činidlom vzorca XVI,

R^xaL (XVI) v ktorom L znamená odstupujúcu skupinu (napríklad halogén (Cl, Br, J) alebo tozyl) a R*³ má vyššie uvedený význam, napríklad v prítomnosti vhodnej zásady (napríklad hydridu sodného alebo etoxidu sodného) a vhodného organického rozpúšťadla. '

Zlúčeniny vzorca VIII, X, XII, XIV a XVI sú komerčne dostupné, sú známe z literatúry alebo sa dajú pripraviť známymi spôsobmi.

Substituenty na inter alia fenylových skupinách v zlúčeninách vzorcov l, V, Vil, IX, XI, XIII, XV a XVI sa môžu navzájom meniť s použitím štandardných postupov.

Zlúčeniny vzorca I sa môžu izolovať reakčných zmesí s použitím bežne známych postupov.

Odborníkom v odbore bude zrejmé, že vo vyššie opísaných spôsoboch môžu byť potrebné chrániť funkčné skupiny medziproduktov pomocou chrániacich skupín.

Funkčné skupiny, pri ktorých sa predpokladá, že bude potrebné ich chránenie, zahrňujú hydroxy, amino a karboxylovú kyselinu. Vhodnými chrániacimi skupinami pre hydroxylovú skupinu sú trialkylsilylová alebo diarylalkylsillylovú skupina (napríklad terc.butyldimetylsilyl, terc.butyldifenylsilyl alebo trimetylsilyl) a tetrahyd13 ropyranyl. Vhodnými chrániacimi skupinami pre karboxylovú kyselinu sú Ci.₆alkyl alebo benzylestery. Vhodnými chrániacimi skupinami pre amino, amidino a guanidinoskupiny sú terc.butyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl. Dusíkaté amidino a guanidinoskupiny môžu byť monochránené alebo dichránené.

Chránenie a deprotekcia funkčných skupín sa môže uskutočňovať pred alebo po kondenzácii.

Zlúčeniny vzorca I sa môžu pripraviť predovšetkým spôsobmi, ktoré zahrňujú kondenzáciu N-acylovanej aminokyseliny alebo N-chránenej aminokyseliny. Ak sa použije N-chránená aminokyselina, acylová skupina sa môže adovať po kondenzácii a deprotekcia atómu dusíka sa potom môže uskutočniť s použitím štandardných postupov opísaných nižšie.

Chrániace skupiny sa môžu odstrániť použitím spôsobov, ktoré sú dobre známe odborníkov v odbore a sú opísané nižšie.

Niektoré chránené deriváty zlúčenín vzorca I, ktoré sa môžu vytvoriť pred konečným stupňom deprotekcie za vzniku zlúčenín vzorca I, sú nové.

Vynález sa ďalej týka zlúčenín vzorca la,

la

-(CH^ — kde B¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca IVd, .d-.

< /^X2 dr

Dt

IVe

NHD^Z

IVd

B1

v ktorom D¹ a D² nezávisle od seba predstavujú H, OH, OR^a, OC(O)R^b, OC(O)R^C, OC(O)R^d, C(O)R®, a R^a, R^b, R^c, R^d a R^e nezávisle od seba predstavujú fenyl, benzyl, (CH₂)2OC(O)CH₃ alebo Ci._ealkyl, pričom posledne uvedená skupina je prípadne prerušená atómom kyslíka, a R¹, R², R³, R*, Y, n, X¹ a X² sú definované vyššie, alebo ich farmaceutický prijateľná soľ, za predpokladu, že D¹ a D² obidva nepredstavujú atóm vodíka.

Alkylové skupiny, ktoré môžu predstavovať R^a, R^b, R^c, R^d a R®, môžu byť lineárne alebo rozvetvené a môžu byť nasýtené alebo nenasýtené.

Vlnovkové čiary na atóme uhlíka vo fragmentoch vzorcov IVd, IVe alebo IVf znamenajú polohu väzby fragmentu.

Výhodnými zlúčeninami vzorca la sú také zlúčeniny, v ktorých D¹ znamená atóm vodíka a D² predstavuje OH, OOH_3l OC(O)R^b alebo OC(O)R^d, pričom R^b a R^d majú vyššie uvedený význam.

Výhodné zlúčeniny vzorca la zahrňujú zlúčeniny z príkladov 8, 9, 10, 13, 14, 15, 40 a (R,S)-Ph-C(Me)(CH₂OMe)-C(0)-Pro-Pab(Z).

Zlúčeniny vzorca la sa môžu tiež pripraviť priamo zo zlúčenín vzorca I podľa spôsobov, ktoré sú dobre známe odborníkom v odbore. Napríklad zlúčeniny vzorca la, v ktorých D¹ alebo D² znamenajú OH, sa môžu pripraviť reakciou zodpovedajúcej zlúčeniny vzorca la, v ktorej D¹ alebo D² (podľa potreby) predstavujú COOR^d a R^d má vyššie uvedený význam, s hydroxylamínom (alebo s jeho hydrohalogénovou soľou), napríklad pri teplote 40°C v prítomnosti vhodnej zásady (napríklad TEA) a vhodného organického rozpúšťadla (napríklad THF).

Zlúčeniny vzorca la sa môžu alternatívne pripraviť pomocou iných chránených derivátov vzorca la, spôsobmi, ktoré sú dobre známe odborníkom v odbore. Zlúčeniny vzorca la, v ktorých D¹ alebo D² predstavujú OC(O)OR^c, pričom R^c je definované vyššie, sa môžu pripraviť reakciou zodpovedajúcej zlúčeniny la, v ktorej D¹ alebo D² (podľa potreby) predstavujú OH so zlúčeninou vzorca XVII,

R^cC(O)-O-C(O)R^c (XVII) kde R^c má vyššie uvedený význam, napríklad pri laboratórnej teplote v prítomnosti vhodnej zásady (napríklad TEA, pyridínu alebo DMAP) a vhodného organického rozpúšťadla.

Zlúčeniny.vzorca la, v ktorých B¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca IVd alebo vzorca IVf, D¹ znamená H a D² predstavuje OH alebo 0R^a, kde R^a má vyššie uvedený význam, sa môžu alternatívne pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca XVIII,

XVIII kde B^a predstavuje fenyl-1,4-én alebo cyklohexyl-1,4-én a R¹, R², R³, R^x, Y a n majú vyššie uvedený význam, so zlúčeninou vzorca XIX,

H₂NOR^a1 (XIX) kde R^a1 predstavuje H alebo R^a, pričom R^a je definované vyššie, napríklad pri teplote medzi 40 a 60°C, v prítomnosti vhodnej zásady (napríklad TEA) a vhodného rozpúšťadla (napríklad THF, CH₃CN, DMF alebo DMSO).

Zlúčeniny vzorca XVIII sa môžu pripraviť použitím peptidových kondenzačných spôsobov, napríklad analogicky podľa spôsobu opísaného vyššie pre zlúčeniny vzorca I. Zlúčeniny vzorca XVlIa XIX sú komerčne dostupné, sú dobre známe v literatúre alebo sa dajú pripraviť pomocou známych spôsobov.

Použitie ochranných skupín je komplexne opísané v “Protective Groups in Organic Chemistry”, Ed. J.W.F. McOmíe, Plénum Press (1973) a “Protective Groups in Organic Synthesis”, 2^nd Edition, T.W. Green & P.G.M. Wutz, Wiley-lnterscience (1991).

Odborníci v odbore si budú vedomí toho, že hoci chránené deriváty zlúčeniny vzorca I (napríklad zlúčeniny vzorca la) samotné nemusia vykazovať farmakologickú účinnosť, môžu sa'podávať parenterálne alebo orálne a následne sa metabolizovať v tele, za vzniku zlúčenín podľa vynálezu, ktoré sú farmakologicky účinné. Takéto deriváty sa môže teda označovať ako “prekurzory”. Všetky prekurzory zlúčeniny vzorca I sú zahrnuté do rozsahu vynálezu.

Chránené deriváty zlúčenín vzorca I, ktoré sú predovšetkým využiteľné ako prekurzory zahrňujú zlúčeniny vzorca la.

Zlúčeniny vzorca I, ich farmaceutický prijateľné soli, tautoméry a steroizoméry ako aj ich prekurzory (vrátane zlúčenín vzorca la, ktoré sú prekurzormi zlúčenín vzorca I), sa v ďalšom označujú ako “zlúčeniny podľa vynálezu”.

Medicínske a farmaceutické použitie

Zlúčeniny podľa vynálezu sú využiteľné pretože vykazujú farmakologickú účinnosť. Ďalej sa označujú ako farmaceutické prostriedky.

Vynález sa ďalej týka zlúčenín podľa vynálezu na použitie ako farmaceutické prostriedky.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú predovšetkým účinné inhibítory trombínu buď samotné alebo, v prípade prekurzorov po podaní, ako je napríklad uvedené v nižšie opísaných testoch.

Očakáva sa teda, že zlúčeniny podľa vynálezu budú využiteľné v takých podmienkach, kde sa požaduje inhibícia trombínu.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú teda indikované na liečbu alebo profylaxiu trombózy a zvýšenej zrážanlivosti v krvi a tkanivách zvierat, vrátane človeka.

Je známe, že zvýšená zrážanlivosť môže viesť ku trombo-embolickým ochoreniam. Stavy spojené so zvýšenou zrážanlivosťou a trombo-embolickými ochore17 niami, ktoré je možné uviesť, zahrňujú aktivovanú rezistenciu proteínu C, ako je faktor V-mutácie (faktor V Leiden) a zdedenú alebo získanú nedostatočnosť antitrombínu III, proteínu C, proteínu S, kofaktora II heparínu. Ďalšie známe stavy , ktoré sú spojené so zvýšenou zrážanlivosťou a trombo-embolickými ochoreniami zahrňujú cirkuláciu antifosfolipidových protilátok (Lupus anticoagulant), homocysteinémiu, heparínom vyvolanú trombocytopéniu a poruchy fibrinolýzy. Zlúčeniny podľa vynálezu sú teda indikované na terapeutické a/alebo profylaktické liečenie týchto stavov.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú ďalej indikované na liečbu stavov, pri ktorých sa vyskytuje nežiadúci nadbytok trombínu bez znakov zvýšenej zrážanlivosti, napríklad pri neurodegeneratívnych ochoreniach, ako je Alzheimerova choroba.

Chorobné stavy, ktoré je možné predovšetkým uviesť zahrňujú terapeutické a/alebo profylaktické liečenie venóznej trombózy a pulmonárnej embólie, arteriálnej trombózy (napríklad pri infarkte myokardu, nestabilnej angíne, mŕtvice vyvolanej trombózou a periférnej arteriálnej trombóze) a systémovej embólii, zvyčajne predsiene, počas arteriálnej fibrilácie alebo komory, po transmurálnom infarkte myokardu.

Okre$oho sa očakáva, že zlúčeniny podľa vynálezu budú využiteľné pri profylaxii reoklúzie (napríklad trombózy) po trombolýze, perkuíánnej transluminálnej angioplastii (PTA) a koronárnych bypassových operáciách, prevencii retrombózy po, mikrochirurgii a vaskulámej chirurgii všeobecne.

Ďalšie indikácie zahrňujú terapeutické a/alebo profylaktické liečenie roztrúsenej intravaskulárnej koagulácie spôsobenej baktériami, viacnásobnou traumou, intoxikáciou alebo akýmkoľvek iným mechanizmom, antikoagulačnú liečbu, keď sa krv dostane do kontaktu s cudzími povrchmi v tele, ako sú vaskulárne štepy, vaskulárne stenty, vaskulárne katétre, mechanické a biologické protetické chlopne, alebo akékoľvek iné lekárske zariadenia, a antikoagulačné liečenie, ak krv je v kontakte s lekárskym zariadením mimo tela, ako počas kardiovaskulárnej chirurgie pri použití zariadenia srdce-pľúca alebo pri hemodialýze.

Okrem týchto vplyvov na koagulačný proces je známe, že trombín aktivuje veľké množstvo buniek (ako sú neurofily, fibroplasty, bunky endotelu a bunky hladkého svalstva). Zlúčeniny podľa vynálezu sa teda môžu tiež použiť na terapeutické a/alebo profylaktické liečenie idiopatického syndrómu a syndrómu respiračnej nedostatočnosti u dospelých, pulmonárnej fibrózy následkom liečby radiáciou alebo chemoterapiou, septického šoku, septikémie, zápalových reakcií, ktoré zahrňujú, ale nie sú obmedzené na, edém, akútnu alebo chronickú aterosklerózu, ako je koronárne arteriálne ochorenie, cerebrálne arteriálne ochorenie, periférne arteriálne ochorenie, poruchy reperfúzie a restenózy po perkutánnej transluminálnej angioplastii (PTA).

Zlúčeniny podľa vynálezu, ktoré inhibujú trypsín a/alebo trombín sa môžu tiež využiť pri liečbe pankreatitídy.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa budú bežne podávať orálne, intravenózne, subkutánne, bukálne, rektálne nasálne, tracheálne, bronchiálne, akýmkoľvek iným partenterálnym spôsobom alebo pomocou inhalácie, vo forme farmaceutických prípravkov obsahujúcich účinnú látku buď ako voľnú zásadu alebo vo forme farmaceutický prijateľnej netoxickej organickej alebo anorganickej soli, vo farmaceutický prijateľnej dávkovej forme. V závislosti od poruchy a pacienta, ktorý sa má liečiť a od spôsobu podávania, kompozícia sa môže podávať v rozličných dávkach.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu tiež kombinovať a/alebo podávať spoločne s antitrombotickým činidlom s odlišným mechanizmom účinku, ako sú antikoagulačné činidlá, kyselina salicylová, ticlopidín, clopidogrel, receptor tromboxánu a/alebo inhibítory syntetázy, antagonisty receptora fibrinogénu, prostacyklín mimetiká a inhibítory fosfodiesterázy antagonisty ADP-receptora (P₂T).

Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu ďalej kombinovať a/alebo podávať spolu s trombolytikami, ako je tkanivový aktivátor plazminogénu (prírodný, rekombinantný alebo modifikovaný), steptokináza, urokináza, prourokináza, anizoylovaný plazminogénno-streptokinázový aktivátorový komplex (APSAC), živočíšne plazminogénne aktivátory slinných žliaz a podobne, pri liečení trombotických ochorení, predovšetkým infarktu myokardu.

Vynález sa ďalej týka farmaceutických formulácií obsahujúcich zlúčeninu podľa vynálezu v zmesi s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom

Vhodné denné dávky zlúčenín podľa vynálezu pri terapeutickom liečení ľudí sú približne 0,001 až 100mg/kg telesnej hmotnosti pri perorálnom podaní a 0,001 až 50mg/kg pri parenterálnom podaní.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú výhodné v tom, že sú účinnejšie, menej toxické, majú dlhšiu účinnosť, širší rozsah účinnosti, sú silnejšie, vytvárajú menej vedľajších účinkov, ľahšie sa adsorbujú alebo môžu mať ďalšie užitočné farmakologické vlastnosti v porovnaní s doteraz známymi zlúčeninami.

Biologické testy

Test A

Stanovenie doby zrážanlivosti trombínu (TT)

Ľudský trombín (T 6769, Sigma Chem. Co.) v tlmivom roztoku, pH 7,4, 100 pl, a roztoku inhibítora, 100μΙ sa inkuboval počas jednej minúty. Potom sa pridala zásobná citrátovaná ľudská plazma , 100μΙ a odmerala sa doba zrážanlivosti v automatickom zariadení (KC 10, Amelung).

Doba zrážanlivosti v sekundách sa vyniesla oproti koncentrácii inhibítora a IC₅oTT sa stanovila interpoláciou.

IC50TT je koncentrácia inhibítora v teste, ktorá zdvojnásobuje dobu zrážanlivosti trombínu v ľudskej plazme.

Test B

Stanovenie inhibície trombínu s chromogénnou automatickou skúškou

Účinnosť inhibície trombínu sa merala pomocou chromogénnej substrátovej metódy v Plato 3300 automatickom mikrodoštičkovom procesore (Rosys AG, CH8634 Hombrechtikon, Švajčiarsko), s použitím 96-jamkových mikrotitračných doštičiek s polovičným objemom (Costar, Cambridge, MA, USA, Cat. No. 3690). Základný roztok testovanej látky v DMSO (72 μΙ), 1 mmol/l sa periodicky zriedil 1:3 (24 + 48 μΙ) s DMSO, čím sa získalo desať rozličných koncentrácií, ktoré sa v skúške analyzovali ako vzorky. 2μΙ testovanej vzorky sa zriedilo so 124μΙ tlmivého roztoku, 12μΙ chromogénneho roztoku substrátu (S-2366, Chromogenix, Mólndal, Švédsko) v tlmivom roztoku a napokon sa pridalo 12 μΙ roztoku α-trombínu (Human α-trombín, Sigma Chemical Co.) v tlmivom roztoku a vzorky sa zmiešali. Finálne koncentrácie skúšok boli: testovaná látka 0,00068 až 13,3 pmol/l, S-2366 0,30 mmol/l, a-trombín 0,020 NIHU/ml. Lineárne zvýšenie absorbancie v priebehu 40 minút inkubácie pri teplote 37°Csa použilo na výpočet inhibície testovaných vzoriek v percentách, a porovnalo sa so vzorkou naslepo bez obsahu inhibítora. IC50 automatická hodnota, zodpovedajúca koncentrácii inhibítora, ktorá vykazovala 50% inhibície aktivity trombínu, sa vypočítala z logaritmu dávky oproti krivke percentuálneho obsahu inhibítora.

TestC

Stanovenie konštanty inhibície K pre ľudský trombín

Stanovenie K sa uskutočnilo pomocou chromogénnej substrátovej metódy, uskutočnenej pri teplote 37°C na Cobas Bio centrifúgovom analyzátore (Roche, Basel, Švajčiarsko). Reziduálna enzýmová aktivita po inkubácii ľudského atrombínu s rozličnými koncentráciami testovanej zlúčeniny sa stanovila v troch rozdielnych koncentráciách substrátu a merala sa zmena optickej absorbancie pri 405 nm.

Roztoky testovanej zlúčeniny (100μΙ, v tlmivom roztoku alebo fyziologickom roztoku obsahujúcom BSA 10g/l) sa zmiešala s 200μΙ ľudského α-trombínu (Sigma

Chemical Co.) vo tlmivom roztoku (0,05mol/l Tris-HCI, pH 7,4, iónová sila 0,15, adjustované s NaCl) obsahujúcom BSA (1 Og/I) a analyzovali sa ako vzorky v Cobas Bio. Pridala sa 60μΙ vzorka, spolu s 20μΙ vody k 320μΙ substrátu S-2238 (Chromogenix, AB, Mólndal, Švédsko) v tlmivom roztoku a monitorovala sa zmena absorbancie (?A/min). Finálne koncentrácie S-2238 predstavovali 16,24 a 50pmol/l atrombín 0,125 NIH U/ml.

Použil sa stabilný reakčný pomer na vytvorenie Dixon diagramov, napríklad diagramy inhibície koncentrácie oproti 1/(?A/min.). Pri reverzibilných konkurenčných inhibítoroch údaje, ktoré poukazujú na rozdielne koncentrácie substrátov, typicky tvoria priamky s úsekom pri x = -K.

Test D

Stanovenie aktivovaného parciálneho času tromboplastínu (APTT)

APTT sa stanovil v zásobnej ľudskej citrátovanej plazme s činidlom PTT Automated 5, vyrobeným firmou Stago. K plazme sa pridali inhibítory (1 ΟμΙ roztoku inhibítora a 90μΙ plazmy) a následne sa pridalo činidlo a roztok chloridu vápenatého a v zmesi sa stanovilo APTT použitím koagulačného analyzéra KC10 (Amelung) podľa pokynov výrobcu činidla. Doba zrážanlivosti v sekundách sa vyniesla oproti koncentrácii inhibítora v plazme a IC50APTT sa stanovil interpoláciou.

IC50APTT sa definuje ako koncentrácia inhibítora v ľudskej plazme, ktorá zdvojnásobuje aktivovaný parciálny čas tromboplastínu.

Test E

Stanovenie doby trombínu ex vivo

Inhibícia trombínu po orálnom alebo parenterálnom podaní zlúčenín vzorca I a la, rozpustených v zmesi etanoľ’Solutol™:voda (5:5:90), sa skúmala pre potkany pri vedomí, ktorým sa jeden alebo dva dni pred pokusom zaviedol katéter na odber vzoriek krvi z krčnej atrérie. V deň experimentu sa vzorky krvi odobrali v určenom čase po podaní zlúčeniny do plastikových rúrok obsahujúcich 1 diel roztoku citrátu sodného (0,13 mol na I) a 9 dielov krvi. Rúrky sa centrifúgovali, čím sa získala plazma chudobná na krvné doštičky. Plazma sa použila na stanovenie doby trombínu ako je opísané nižšie.

Citrátovaná plazma, 100μΙ, sa zriedila fyziologickým roztokom, 0,9%, 100pl a koagulácia plazmy sa iniciovala pridaním ľudského trombínu (T6769, Sigma Chem.. Co., USA) v tlmivom roztoku, pH 7,4, 10ΟμΙ. Zrážanlivosť sa merala v automatickom zariadení (KC 10, Amelung, Nemecko).

V prípadoch, kedy sa podala zlúčenina vzorca la, koncentrácie príslušného aktívneho inhibítora trombínu vzorca I v plazme potkana sa stanovil použitím štandardných kriviek týkajúcich sa doba trombínu v plazme potkana chudobnej na krvné doštičky ku známym koncentráciám zodpovedajúceho inhibítora trombínu rozpusteného vo fyziologickom roztoku.

Na základe vyhodnotených koncentrácií plazmy aktívneho inhibítora trombínu vzorca I (čo predpokladá, že predĺženie doby trombínu je spôsobené vyššie uvedenou zlúčeninou) u potkanov, plocha pod krivkou po orálnom a/alebo parenterálnom podaní zodpovedajúcich prekurzorov vzorca la sa vypočítala (AUCpd) s použitím lichobežníkového pravidla a extrapolácie údaju na nekonečno.

Biologická dostupnosť aktívneho inhibítora trombínu vzorca I po orálnom alebo parenterálnom podaní prekurzora vzorca la sa vypočítalo nasledovne [(AUCpd/dávka)/(AUCaktívne,parenterálne/dávkaj x 100 kde AUCaktívne, parenterálne predstavuje AUC, ktoré sa dosiahne po parenterálnom podaní zodpovedajúceho účinného inhibítora trombínu vzorca I potkanom pri vedomí, ako je opísané vyššie.

Test F

Stanovenie času trombínu v moči ex vivo

Množstvo účinného inhibítora trombínu vzorca I, ktorý sa vylúčil do moču po orálnom alebo parenterálnom podaní zlúčenín podľa vynálezu, rozpusteného v zmesi etanol”Solutol™:voda (5:5:90), sa vyhodnotila stanovením času trombínu v moči ex vivo (za predpokladu, že čas predĺženia trombínu je spôsobený vyššie uvedenou zlúčeninou).

Potkany pri vedomí sa umiestnili do metabolizačných klietok, umožňujúcich separované odoberanie moču a výkalov, počas 24 hodín a nasledujúcich po orálnom podaní zlúčenín podľa vynálezu. Doba trombínu sa stanovila na zhromaždenom moči, ako je opísané nižšie.

Zásobná normálna citrátovaná ľudská plazma (100μΙ) sa počas jednej minúty inkubovala s koncentrovaným močom potkana, alebo s jeho roztokom, zriedeným použitím fyziologického roztoku. Koagulácia plazmy sa potom iniciovala podaním ľudského trombínu (T 6769, Sigma Chem. Company) v tlmivom roztoku (pH 7,4, 10ΟμΙ). Zrážanlivosť sa merala v automatickom zariadení (KC 10, Amelung).

Koncentrácie aktívneho inhibítora trombínu vzorca I v moči potkanov sa stanovil použitím štandardných kriviek týkajúcich sa trombínového času v zásobnej citrátovanej ľudskej plazme ku známym koncentráciám vyššie vyššie uvedeného aktívneho inhibítora trombínu rozpusteného v koncentrovanom moči potkanov (alebo jeho zriedenom fyziologickom roztoku). Násobením celkovej produkcie moču potkana v rozsahu 24 hodinového obdobia so zhodnotením priemernej koncentrácie vyššie uvedeného aktívneho inhibítora v moči, sa mohlo vypočítať množstvo aktívneho inhibítora vylúčeného močom (AMOUNTpd).

Biologická dostupnosť aktívneho inhibítora trombínu vzorca I po orálnom alebo parenterálnom podaní prekurzora sa vypočítala nasledovne:

[(AMOUNTpd/dávka)/(AMOUNTaktívne,parenterálne/dávkaj x 100 kde AMOUNTaktívne,parenterálne predstavuje množstvo vylúčené v moči po parenterálnom podaní zodpovedajúceho aktívneho inhibítora trombínu vzorca I potkanom pri vedomí, ako je opísané vyššie.

Vynález je ilustrovaný vyššie uvedenými príkladmi.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Všeobecné experimentálne postupy

Hmotnostné spektrá sa zaznamenávali na Finnigan MAT TSQ 700 trojnásobnom štvorpólovom hmotnostnom spektrometre vybavenom elektro-rozprašovacím rozhraním (FAB-MS) a VG Platform II hmotnostnom spektrometre vybavenom elektro-rozprašovacím rozhraním (LC-MS). ^{1 * * * *}H-NMR a ¹³C NMR merania sa uskutočnili na BRUKER ACP 300 a Varian UNITY plus 400, 500 a 600 spektrometroch, pracujúcich pri ¹H frekvenciách 300,13, 399,96, 499,82 a 599,94 MHz a pri ¹³C frekvenciách 75,46, 100,58, 125,69 a 150,88 MHz. Preparatívna HPLC sa uskutočnila na kolónach s reverznou fázou (250 mm, 20 alebo 50 mm, 5 až 7μΜ fáza Chromasil C8) s prietokmi 10 až 50 ml/min s použitím UV detektora (270 až 290 nm).

Príprava východiskových materiálov

Príklad A

H-Aze-Pab(Z) (i) Boc-Aze-OH

Di-terc.butyldiuhličitan (13,75 g, 63 mmol) sa za miešania pri laboratórnej teplote pridal k zmesi kyseliny L-azetidín-2-karboxylovej (H-Aze-OH, 5,777 g, 57 mmol) a Na₂CO₃ (6,04 g, 57 mmol) vo vode (50 ml) a THF (100 ml). Po 60 hodinách sa THF odstránil vo vákuu a zmes sa zriedila vodou a potom sa okyslila s 2M KHSO₄. Zmes sa extrahovala s CH₂CI₂, vysušila (MgSO₄) a rozpúšťadlo sa odparilo, čím sa získal zvyšok, ktorý sa kryštalizoval zo zmesi CH₂CI₂:hexán a poskytol

10,87 g (95%) bezfarebných kryštálov.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 4,85 - 4,7 (br s, 1 H), 4,0 - 3,75 (m, 2H), 2,65 - 2,35 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).

(ii) Boc-Aze-Pab(Z)

Pri laboratórnej teplote sa EDC (13,5 g, 70 mmol) pridalo k zmesi Boc-Aze-OH (10,87g, 54mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), H-Pab(Z) x HCI (18,31 g, 57mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 94/29336) a DMAP (9,9 g, 81 mmol) v acetonitrile (270 ml). Po 16 hodinách sa rozpúšťadlo odstránilo vo vákuu a nahradilo sa etylacetátom. Zmes sa premyla vodou a vodným roztokom kyseliny citrónovej. Organická vrstva sa vysušila (MgSO₄) a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal zvyšok, ktorý poskytol

17,83 g Boc-Aze-Pab(Z) po kryštalizácii zo zmesi CH₂CI₂, toluénu, diizopropyléteru a petroléteru.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): Ô 7,85 - 7,75 (d, 1 H), 7,45 - 7,2 (m, 7H), 5,2 (s, 2H), 4,7 (t, 1 H), 4,6 - 4,4 (m, 2H), 3,95 - 3,8 (q”, 1 H), 3,8 - 3,7 (q, 1 H), 2,5 - 2,3 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).

(iii) H-Aze-Pab(Z)

Boc-Aze-Pab(Z) (2,44 g, 5,2 mmol) sa rozpustil v zmesi kyseliny trifluóroctovej (10 ml) a CH₂CI₂ (10 ml). Po 30 minútach sa rozpúšťadlo a kyselina trifluóroctová odstránili vo vákuu a zvyšok sa rozpustil v CH₂CI₂. Organická fáza sa premyla vodným roztokom NaCO₃ (10%), a vysušila (K₂CO₃). Odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získal zvyšok, ktorý poskytol 1,095 g (57%) H-Aze-Pab(Z) vo forme bezfarebných kryštálov po kryštalizácii z CH₂CI₂.

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 7,85 - 7,75 (d, 2H), 7,45 - 7,25 (m, 7H), 5,2 (s, 2H),

4,5 (s, 2H), 4,3 (d, 1 H), 3,65 (q, 1H), 3,4 - 3,3 (m, 1H), 2,7-2,5 (m, 1H), 2,4-2,2 (m, 1H).

Príklad B

H-Pic-Pab(Z) x 2 HCI (i) Boc-Pic-OH

Pripravil sa podľa M. Bodanszkeho a A. Bodanszkeho (“The Practice of Peptide Synthesis”, Springer-Verlag (1984) s použitím THF ako rozpúšťadla, namiesto dioxánu.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 5,0 - 4,8 (br d, 1 H), 4,0 (br s, 2H), 3,0 (br s, 1 H), 2,20 (d, 1H), 1,65 (m, 2H), 1,5 -1,3 (s + m, 13H).

(ii) Boc-Pic-Pab(Z)

Boc-Pic-OH (2,02 g, 8,8 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), H-Pab(Z) x 1 HCI (2,36 g, 7,4 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 94/29336) a 3,9 g (32 mmol) DMAP sa rozpustilo v CH₂CI₂ (40 ml). Zmes sa ochladila na teplotu 0°C a pridalo sa 1,99 g (10,4 mmol) EDC. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas troch dní. Zmes sa vliala do 0,2 M roztoku KHSO₄ a dvakrát sa extrahovala s CH₂CI₂. Organická vrstva sa vysušila (NA₂SO₄) a odparila. Surový produkt sa chromatografoval okamžitou chromatografiou na silikagéle s použitím elučného činidla EtOAc:toluén v pomere 7:3, čím sa získalo 1,59 g (44%) produktu.

FAB.MS m/z 495 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,83 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36 - 7,11 (m, 5H), 6,52 (bs, NH), 5,20 (s, 2H), 4,81 - 4,72 (m, 1 H), 4,61 - 4,34 (m, 2H), 4,10 - 3,90 (m, 1H), 2,79-2,64 (m, 1H), 2,36-2,25 (m, 1H), 1,7 - 1,3 (m, 14H).

(iii) H-Pic-Pab(Z) x 2 HCI

Boc-Pic-Pab(Z) (1,59 g, 3,22 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie) sa rozpustil v 100 ml EtOAc nasýtenej s HCI. Reakčná zmes sa v priebehu pol hodiny, čím sa získal produkt v kvantitatívnom výťažku.

FAB.MS m/z 395 (M + 1)^{+ 1}H NMR (300 MHz, D₂O): δ 7,82 (d, 2H), 7,63 - 7,41 (m, 7H), 5,47 (s, 2H), 4,69 4,49 (AB-sysťém so stredom pri δ 4,59, 2H), 4,03 (dd, 1H), 3,52 (bd, 1H), 3,10 (dt, 1H), 2,29 (dd, 1H), 2,08 -1,61 (m, 5H).

Príklad C

H-Aze-Pig(Z) x 2 HCI (i) Boc-Aze-Pig(Z)

Pri laboratórnej teplote sa Boc-Aze-OH (1,03 g, 5,12 mmol, z príkladu A(i) uvedeného vyššie) rozpustil v acetonitrile (50 ml) a k výslednému roztoku sa pridal DMAP (1.57 g, 12,8 mmol). Potom sa pridal H-Pig(Z) x 2 HCI (1,86 g, 5,12 mmol, pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 94/29336) v DMF (20 ml) a EDC (1,47 g, 1,68 mmol) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 20 hodín. Reakčná zmes sa následne zahustila, zriedila s CH₂CI₂ (100 ml) a premyla sa vodou (2 x 30 ml). Organická vrstva sa vysušila (MgSO^ a odparila. Surový produkt (3,77 g) sa prečistil okamžitou chromatografiou na kolóne naplnenej silikagélom eluovaním so zmesou CH₂CI₂:MeOH (95:5), čím sa získalo 1,24 g (51%) zlúčeniny uvedenej v názve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,27 - 7,43 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,60 - 4,67 (t, 1H),

4,16 - 4,26 (d, 2H), 3,86 - 3,95 (m, 1H), 3,74 - 3,82 (m, 1H), 3,11 - 3,30 (m, 2H), 2,78-2,89 (m, 2H), 2,33-2,52 (bs, 2H), 1,71 -83 (m,3H), 1,44 (s, 9H), 1,15 - 1,29 (m, 2H).

(ii) H-Aze-Pig(Z) x 2 HCI

Boc-Aze-Pig(Z) (1,2 g, 2,53 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v etylacetáte nasýtenom s HCI (75 ml) sa miešal pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa odparila, zriedila vodou a extrahovala toluénom. Vodná vrstva sa vysušila vymrazením, čím sa získalo 1,085 g (96%) zlúčeniny uvedenej v názve.

¹H NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 7,32 - 7,46 (m, 5H), 5,28 (s, 2H), 4,99 - 5,05 (t, 1H), 4,08 - 4,16 (m, 1H), 3,91 - 3,99 (m, 3H), 3,13 - 3,25 (m, 4H), 2,79 - 2,88 (m, 1H),

2,47 - 2,57 (m, 1 H), 1,82 -1,96 (m, 3H), 1,26 -1,40 (m, 2H).

Príklad D (R,S)-Ph-CH-(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-OH (i) (R,S)-Ph-CH-(CH₂OTBDMS)-C(O)OTBDMS

Kyselina (R.S)-tropová (6,6 g, 0,040 mol) sa rozpustila v DMF (20 ml). Pridal sa imidazol (13,0 g, 0,192 mol) a TBDMS-CI (14,4 g, 0,096 mol) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Pridala sa H₂O (0,5 I) a zmes sa extrahovala trikrát éterom. Spojené éterové vrstvy sa premyli vodným roztokom kyseliny citrónovej (10%), H₂O, vodným roztokom NaHCO₃ a H₂O, vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Surový produkt (16 g) sa použil v nasledujúcej reakcii bez ďalšieho Čistenia.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃); δ 7,17 - 7,40 (m, 5H), 4,16 - 4,23 (m, 1H), 3,77 - 3,87 (m, 2H), 0,88 - 0,92 (m, 18H), 0,02 - 0,29 (m, 12H).

(ii) (R,S)-PhCH-(CH₂OTBDMS)-C(O)OH

Zmes (R,S)-PhCH-(CH₂OTBDMS)-C(O)OTBDMS (16,0 g, 0,040 mol, z kroku (i) uvedeného vyššie), K₂CO₃ (14,0 g, 0,10 mol), MeOH (400 ml) a H₂O (150 ml) sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Po zahustení sa vodná vrstva extrahovala éterom. pH sa adjustovalo kyselinou citrónovou a vodná vrstva sa znova trikrát extrahovala éterom. Spojené organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili a odparili, čím sa získalo 9,7 g (87%) zlúčeniny uvedenej v názve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,20 - 7,40 (m, 5H), 4,05 - 4,20 (m, 1H), 3,75 - 3,90 (m, 2H), 0,85 (s, 9H), 0,00 - 0,10 (m, 6H).

(iii) (R,S)-PhCH-(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-OBn

EDC (voľná zásada, 1,45 ml, 8,4 mmol) sa pridala pri laboratórnej teplote k zmesi (R,S)-PhCH-(CH₂OTBDMS)-C(O)OH (2,01 g, 7,2 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie, prolínbenzylester hydrochloridu (1,85 g, 7,6 mmol) a DMAP (1,41 g,

11,5 mmol) v acetónitrile (20 ml). Po 18 hodinách sa rozpúšťadlo odstránilo vo vákuu a surový produkt sa podrobil okamžitej chromatografii na silikagéle s použitím zmesi etylacetáťtoluén (2:1) ako elučného činidla, čím sa získalo 2.7 g (80%) produktu.

(iv) (R,S)-PhCH-(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-OH (R,S)-PhCH-(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-OBn (2,6 g, 5,56 mmol, z kroku (iii) uvedeného vyššie) sa rozpustil v etanole (100 ml) a pridalo sa Pd/C (10%, 0,29 g).

Zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 3 hodín. Po prefiltrovaní sa roztok odparil. Výťažok predstavoval 1,7 g (81%) zlúčeniny uvedenej v názve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,15 - 7,40 (m, 5H), 4,45 - 4,65 (m, 1H), 4,15 - 4,30 (m, 1H), 3,85 - 3,95 (m, 1H), 3,55 - 3,80 (m, 2H), 3,25 - 3,40 (m, 1H), 2,30 - 2,40 (m, 1H), 1,75 - 2,10 (m, 3H), 0,75 - 0,90 (m, 9H), -0,20 - 0,05 (m, 6H).

¹³C NMR (75,5 MHz, CDCI₃) uhlíky amidínu a karbonylu: 174,00, 172,63.

Príklad E

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metoxyfenyl)-propiónová (i) Etylester kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metoxyfenyl)-propiónovej

K roztoku etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-metoxyfenyl)-propiónovej (0,067 g, 0,3mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) v etanole sa pridal NaBH4 (2 ekvivalenty) pri teplote 70°C. Po miešaní počas 2 hodín pri teplote -70°C a počas 4 hodín pri teplote -5°C sa pridala vody a reakčná zmes sa zahustila a extrahovala etylacetátom. Organická fáza sa premyla soľankou, vysušila (MgSO₄) a zahustila, čím sa získala zlúčenina uvedená v názve.

(ii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metoxyfenyl)-propiónová

Etylester kyseliny (R,$)-3-hydroxy-2-(3-metoxyfenyl)-propiónovej z kroku (i) uvedeného vyššie, sa rozpustil v zmesi THF:voda (1:1). Pridal sa LiOH x H₂O (2 ekvivalenty) a reakčná zmes sa miešala počas jednej hodiny pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zahustila a extrahovala s CH₂CI₂. Organická fáza sa vysušila (MgSO₄)a zahustila, čím sa získala kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3metoxyfenyl)-propiónová, ktorá sa použila bez ďalšieho čistenia.

LC-MS m/z 195 (M-1)' ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 6,73 - 6,79 (m, 1H), 6,34 - 6,46 (m, 3H), 3,57 - 3,66 (m, 1H), 3,30 (s, 3H), 3,22 - 3,29 (m, 2H).

Príklad F

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,4-dimetoxyfenyl)-propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,4-dimetoxyfenyl)-propiónovej.

LC-MS m/z225 (M -1)' ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 6,84 - 6,95 (m, 3H), 4,01 - 4,10 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,65 - 3,73 (m, 2H).

Príklad G

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-naftyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(2-naftyl)propiónovej.

LC-MS m/z215(M-1)' ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 7,77 - 7,85 (m, 4H), 7,41 - 7,50 (m, 3H), 4,14 - 4,22 (m, 1 H), 3,89 - 3,95 (m, 1 H), 3,80 - 3,87 (m, 1 H).

Príklad H

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimetylfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,5-dimetylfenyl)propiónovej.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,94 (s, 1H), 6,89 (s, 2H), 4,13 (dd, 1 H), 3,80 (m, 2H), 2,3 (s, 6H).

Príklad I

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-trifluórmetylfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E vyššie, pričom sa vychá dzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-trifluórmetylfenyl)propiónovej.

LC-MS m/z 233 (M-1)'

Príklad J

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-hydroxyfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E vyššie, pričom sa vychá dzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-hydroxyfenyl)propiónovej.

LC-MS m/z 181 (M-1)'

Príklad K

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-fluórfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-fluórfenyl)propiónovej.

LC-MS m/z 183 (M -1)', FAB-MS m/z 185 (M + 1)⁺

Príklad L

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-chlórfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-chlórfenyl)propiónovej.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,34 - 7,30 (m, 3H), 7,21 (dt, 1H), 5,67 (b, 2H), 4,15 (dd, 1H), 3,87 (m, 2H).

Príklad M

Kyselina 3-hydroxy-2-(3,5-bis(trifluórmetyl)fenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,5-bís(trifluórmetyl)fenyl)propiónovej.

LC-MS m/z 301 (M -1)'

Príklad N

Kyselina 3-hydroxy-2-(3-metoxy-5-metylfenyl)propiónová (i) 3-Brómmetyl-5-metylanizol

Zmes 3,5-metylanizolu (13,6 g, 0,1 mol), NBS (17,8 g, 0,1 mol), a AIBN (1,1 g,

6,7 mmol) v CCI₄ sa refluxovala počas 2 hodín. Výsledná zmes sa ochladila, prefiltrovala a odparila. Surový produkt, ktorý obsahoval 20% východiskového materiálu, sa použil v nasledujúcom kroku.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,82 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,68 (s, 1H), 4,47 (s, 2H),

3,82 (s, 3H), 2,37 (s, 3H).

(ii) 3-Metoxy-5-metylfenylacetonitril

K roztoku 3-brómmetyl-5-metylanizolu (17 g, 0,008 mol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v DMSO (25 ml) sa pridal NaCN (8,2 g, 0,16 mol). Zmes, ktorá sa pri pridaní kyanidu veľmi zahriala, sa nechala vychladnúť na laboratórnu teplotu v priebehu jednej hodiny, Potom sa pridal CH₃CN (25 ml) a zmes sa refluxovala počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa zahustila, pridala sa voda (200 ml) a výsledný roztok sa trikrát extrahoval éterom. Spojené organické fázy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 9 g (70%) produktu uvedeného v podnázve, vo forme žltého oleja, ktorý sa bez ďalšieho čistenia použil v nasledujúcom kroku.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,74 (s, 1H), 6,67 (2s, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,68 (s, 2H),

2,33 (s, 3H).

(iii) Kyselina 3-metoxy-5-metylfenyloctová

Roztok 3-metoxy-5-metylfenylacetonitrilu (9 g, 0,06 mol, z kroku (ii) uvedeného vyššie) a KOH (17 g, 0,3 mol) v 150 ml zmesi voda:Í-PrOH (2:1) sa zahrievalo za miešania v autokláve pri teplote 120°C cez noc a potom pri laboratórnej teplote počas dvoch dní. Reakčná zmes sa zahustila a extrahovala éterom. Vodná fáza sa okyslila a dvakrát extrahovala éterom. Spojené organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili na zvyšok, ktorý sa rozpustil v EtOH, zmiešal s aktívnym uhlím, prefiltroval a odparil, čím sa získala zlúčenina uvedená v podnázve (8,1 g, 80%) vo forme žltých kryštálov.

¹H NMR (300 MHz, CĎCI₃): δ 6,68 (s, 1H), 6,63 (2s, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,58 (s, 2H),

2,31 (s, 3H).

(iv) Etylester kyseliny 3-metoxy-5-metylfenyloctovej

K roztoku kyseliny 3-metoxy-5-metylfenyloctovej (8,1 g, 0,045 mol, z kroku (iii) uvedeného vyššie) v EtOH (100 ml) sa pridala koncentrovaná kyselina sírová a roztok sa nechal stáť počas 40 hodín. Reakčná zmes sa zahustila a surový produkt sa rozdelil medzi vodu a éter. Organická vrstva sa premyla vodným roztokom NaHCO₃ a vodou, vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získal výťažok 8,0 g (85%) zlúčeniny uvedenej v názve forme hnedého oleja.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,71 (s, 1H), 6,65 (s, .1 H), 6,64 (s, 1H), 4,16 (q, 2H),

3,79 (s, 3H), 3,55 (s, 2H), 2,23 (s, 3H), 1,27 (t, 3H).

(v) Etylester kyseliny 3-oxo-2-(3-metoxy-5-metylfenyl)propiónovej

K roztoku etylesteru kyseliny 3-metoxy-5-metylfenyloctovej (3,0 g, 14 mmol, z kroku (iv) uvedeného vyššie) a etylformiátu (1,9 g, 26 mmol) v étere (75 ml) sa pridal Na (0,39 g, 17 mmol) v malých kúskoch. Roztok sa ochladil na teplotu 0°C a potom sa pridal EtOH (abs., 0,24 ml). K reakčnej zmesi sa pridal éter (100 ml), EtOH (5 ml) a voda, pokým sa zmes nerozpustila. Vodná fáza sa odobrala, okyslila na pH 2 (vodnou HCI) a extrahovala éterom. Organická fáza sa premyla vodným NaHCO₃, vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čim sa získal výťažok 2 g (59%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 12,12 (d, 0,5H), 7,31 (d, 0,5H), 6,62 (bs, 2H), 4,26 (q, 2H), 3,80 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 1,33 (t, 3H).

(vi) Etylester kyseliny 3-hydroxy-2-(3-metoxy-5-metylfenyl)propiónovej

Miešaný roztok etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-metoxy-5-metyifenyl)propiónovej (1,9g, 8,1 mmol, z kroku (v) uvedeného vyššie) v MeOH (50 ml) sa ochladil na teplotu -15°C. Potom sa po častiach pridal NaBH₄ (0,61 g, 16 mmol). Zmes sa miešala počas 3 hodín pri teplote -15 až -5°C. Následne sa pridala voda a výsledná zmes sa zahustila., Vodná fáza sa extrahovala EtOAc, organická fáza sa premyla vodou, vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získalo 2,0 g (59%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,65 (s, 1 H), 6,63 (s, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 4,3 - 4,05 (m, 3H), 3,8 (m, 5H), 2,30 (s, 3H), 1,32 (t, 3H).

(vii) Kyselina 3-hydroxy-2-(3-metoxy-5-metylfenyl)propiónová

Roztok etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-metoxy-5-metylfenyl)propiónovej (1,7 g,

7,1 mmol, z kroku (vi) uvedeného vyššie) a NaOH (7,0 g, 180 mmol) v 200 ml MeOH:H₂O (1:1) sa miešal pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Reakčná zmes sa zahustila, premyla éterom a okyslila. Výsledná zmes sa dvakrát extrahovala éterom a spojené organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 1,74 g (98%) zlúčeniny.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,70 (s, 1H), 6,66 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 4,12 (dd, 1H),

3,85 - 3,75 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 2,32 (s, 3H).

Príklad O

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2,5-dimetoxyfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E uvedenom vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(2,5-dimetoxyfenyl)propiónovej.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,89 (d, 1 H), 6,85 (d, 1 H), 6,78 (dd, 1 H), 4,86 (široký, 2H), 4,14 (dd, 1H), 3,98 (dd, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,67 (dd, 1H).

Príklad P

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimetoxyfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E uvedenom vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,5-dimetoxyfenyl)propiónovej.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,44 (s, 2H), 6,40 (s, 1 H), 4,13 (dd, 1H), 3,85 - 3,75 (m, 2H), 3,75 (s, 6H).

Príklad Q

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,4-metyléndioxyfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E uvedenom vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,4-metyléndioxyfenyl)propiónovej.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,78 (s, 1H), 6,73 (s, 2H), 5,95 (s, 2H), 4,08 (dd, 1H), 3,78 (m, 2H).

Príklad R

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(1-naftyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E uvedenom vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(1-naftyl)propiónovej.

LC-MS m/z215 (M-1)'

Príklad S (R,S)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OTBDMS)COOH (i) (R,S)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OTBDMS)COOTBDMS

Imidazol (6,7 g, 97,8 mmol) a TBDMS-CI (7,4 g, 48,9 mmol) sa pridali k roztoku kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metoxyfenyl)propiónovej (4 g, 20,4 mmol, z príkladu E(ii) uvedeného vyššie) v DMF (20 ml). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 3 dní. Potom sa pridala voda a zmes sa trikrát extrahovala éterom. Spojené organické fázy sa premyli kyselinou citrónovou (10%), vodou, vodným roztokom NaHCO₃ a vodou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Surový produkt (8,53 g, 98% žltého oleja) sa použil v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,22 (t, 1H), 6,90 (d, 1H), 6,88 (m, 1H), 6,81 (m, 1H),

4,16 (t, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,82 - 3,72 (m, 2H), 0,88 (s, 6H), 0,87 (s, 6H), 0,22 (d, 6H), 0,02 (d, 6H).

(ii) (R,S)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OTBDMS)COOH

Zmes (R,S)-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OTBDMS)COOTBDMS (8,0 g, 18,8 mmol), K₂CO₃ (6,25 g, 45,2 mmol), MeOH (120 ml) a vody (40 ml) sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Po zahustení sa vodná vrstva premyla éterom, okyslila kyselinou citrónovou a trikrát extrahovala éterom. Spojené organické fázy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 5 g (87%) zlúčeniny uvedenej v podnázve, vo forme žltého oleja.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 7,21 (t, 1H), 6,89 (s+d, 2H), 6,82 (m, 1 H), 4,86 (b, 2H), 4,13 (dd, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,8 - 3,7 (m, 2H), 0,86 (s, 9H), 0,02 (d, 6H).

Príklad T

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-Boc-aminofenyl)propiónová (i) Etylester kyseliny 3-aminofenyloctovej

Roztok kyseliny m-aminobenzoovej (3,0 g, 19,8 mmol) a koncentrovanej kyseliny sírovej (2 ml) v EtOH (abs., 20 ml) sa zahrieval počas troch dní pri teplote 75°C. Roztok sa zahustil, pridal sa vodný Na₂CO₃ a zmes sa extrahovala éterom (80 ml). Organická vrstva sa premyla soľankou, vysušila (Na₂SO₄) a zahustila, čím sa získalo 2,9 g (82%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,10 (t, 1H), 6,77 (d, 1H), 6,62 (t, 1H), 6,58 (m, 1H),

4,15 (q, 2H), 3,65 (b, 2H), 3,52 (s, 2H), 1,25 (t, 3H).

(ii) Etylester kyseliny 3-(Boc-amino)-fenyloctovej

Roztok etylesteru kyseliny 3-aminofenyloctovej (1,9 g, 11 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) a Boc₂O (2,3 g, 11 mmol) v THF (50 ml) sa miešal pri laboratórnej teplote cez noc. Výsledná zmes sa zahustila, a pridala sa vodná kyselina chlorovodíková. Vodná zmes sa extrahovala éterom, organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 2,5 g (84%) produktu uvedeného v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,33 (s, 1H), 7,24 (dd, 2H), 6,96 (m, 1H), 6,50 (b, 1Ή), 4,15 (q, 2H), 3,58 (s, 2H), 1,53 (s, 9H), 1,26 (t, 3H).

(iii) Etylester kyseliny 2-((3-Boc-amino)fenyl)-3-oxo-propiónovej

K roztoku etylesteru kyseliny 3-(Boc-amino)fenyloctovej (2,4 g, 8,6 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie) a etylformiátu (1,1 g, 15 mmol) v suchom etylétere (60 ml) sa pridal Na (0,34 g, 15 mmol) v malých kúskoch. Zmes sa ochladila na ľadovom kúpeli, potom sa pridalo 0,15 ml absolútneho etylalkoholu. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas troch dní. Pridala sa zmes etyléter:EtOH (50:5ml), pričom sa vznikla šedá zmes, roztok sa nechalo chvíľu miešať a potom sa pridala voda, pokým sa nevytvoril číry žltý roztok. Fázy sa oddelili, organická fáza sa jedenkrát extrahovala vodou. Vodná fáza sa okyslila 3% vodnou kyselinou chlorovodíkovou na pH 2, pričom sa vytvorila biela zrazenina. Pridalo sa malé množstvo soľanky a vodná zmes sa extrahovala etyléterom. Organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃ (10%), vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Izoloval sa produkt uvedený v podnázve (1,7 g, 64%), vo forme číreho hnedastého oleja, ktorý mal postačujúcu čistotu, aby sa mohol použiť bez ďalšieho čistenia.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,4 (m, 3H), 7,0 (m, 1H), 6,6 (b, 1H), 4,3 (m, 2H), 1,5 (s, 9H), 1,3 (m, 3H).

(iv) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-Boc-amino)fenylpropiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E uvedenom vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 2-((3-Boc-amino)fenyl)-3-oxo-propiónovej (z kroku (iii) uvedeného vyššie).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,25 (m, 3H), 6,95 (d, 1H), 6,55 (b, 1H), 4,15 (m, 2H),

1.50 (s, 9H), 1,20 (t, 3H).

Príklad U

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-(Boc-metylamino)fenyl)propiónová (i) Etylester kyseliny 3-(formylamino)fenyloctovej

Roztok etylesteru kyseliny 3-aminofenyloctovej (3,0 g, 0,017 mol, z príkladu T(i) uvedeného vyššie) a kyseliny mravčej (1,5 g, 0,034 mol) v diizopropylétere (150 ml) sa refluxoval v Dean-Starkovom odlučovači cez noc. Roztok sa zahustil do sucha, rozpustil v étere a premyl so zriedenou kyselinou chlorovodíkovou na odstránenie východiskového materiálu. Vysušením (Na2SO4) a zahustením sa získala zlúčenina uvedená v podnázve (3,1 g, 89 %).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 8,65 (d, 1 H), 8,40 (b, 1 H), 7,45 (m, 1 H), 7,25 (m, 1 H), 7,05 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 3,55 (s, 2H), 1,30 (m, 3H).

(ii) Etylester kyseliny 3-(metylamino)fenyloctovej

Roztok komplexu borán-dimetylsulfid (2M v THF, 20 ml) sa pridalo k ľadovému roztoku etylesteru kyseliny 3-(formylamino)fenyloctovej (4,1 g, 0,02 mol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v THF (suchý, 100 ml) a reakčná zmes sa miešala počas jednej hodiny. Výsledný roztok sa vlial do zriedenej kyseliny chlorovodíkovej a zmes sa nechala stáť 15 minút, potom sa premyla éterom, čím sa odstránil nezreagovaný materiál. Vodný roztok sa zalkalizoval (NaHCO₃) a extrahoval éterom (trikrát). Spojené organické fázy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 3 g (78%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,10 (t, 1H), 6,60 (d, 1H), 6,50 (m, 2H), 4,10 (q, 2H),

3.50 (s, 2H), 2,80 (s, 3H), 1,20 (t, 3H).

(iii) Etylester kyseliny 3-(N-Boc-metylamino)fenyloctovej

Roztok etylesteru kyseliny 3-(metylamino)fenyloctovej (3,0 g, 0,016 mol) z kroku (ii) uvedeného vyššie) a Boc₂O (3,4 g, 0,016 mol) v THF (100 ml) sa miešal pri laboratórnej teplote počas 12 dní. Výsledný roztok sa zahustil, čím sa získala zlúčenina uvedená v podnázve (4,9 g, kvantitatívne).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,25 (d, 1H), 7,10 (m, 3H), 4,15 (q, 2H), 3,60 (s, 2H),

3,25 (s, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,25 (t, 3H).

(iv) Etylester kyseliny 2-((N-Boc-metylamino)fenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v príklade T(iii) uvedeného vyššie, z etylesteru kyseliny 3-(N-Boc-metylämino)fenyloctovej (2,0 g, 6,8 mmol, z kroku (iii) uvedeného vyššie), čím sa získalo 1,6 g (73%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 12,15 (d, 0,5H), 7,74 (s, 0,5H), 7,25 (m, 4H), 4,2 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,29 (m, 3H).

(v) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-(Boc-metylamino)fenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E uvedeného vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 2-((N-Boc-metylamino)fenyl)-3-oxopropiónovej (z kroku (iv) uvedeného vyššie).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,25 (m, 1H), 7,15 (m, 3H), 7,05 (d, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,80 (m, 2H), 1,40 (s, 9H).

Príklad V

Kyselina (R,$)-3-hydroxy-2-(3-chlór-5-metylfenyl)propiónová (i) 3-Chlór-5-metylbenzylbromid

Roztok 5-chlór-m-xylénu (14,06 g, 0,1 mol), NBS (17,8 g, 0,1 mol) a AIBN (1,1 g,

6,7 mmol) v CCI₄ sa refluxoval počas dvoch hodín. Výsledná zmes sa ochladila a vzniknutá pevná látka sa odstránila filtráciou. Zahustením sa získala zlúčenina uvedená v podnázve (17,9 g, 80%).

¹H NMR (400 MHz, CDCi₃): δ 7,20 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 4,41 (s, 2H),

2.34 (s, 3H).

(ii) 3-Chlór-5-metylfenylacetonitril

Pripravil sa roztok 3-chlór-5-metylbenzylbromidu (17,6 g, 0,8 mol, z kroku (i) uvedeného vyššie) a NaCN (8,2 g, 0,16 mol) v DMSO (25 ml). Výsledná, skôr teplá zmes, sa mierne ochladila a potom sa miešala pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny. Následne sa pridal CH₃CN (25 ml) a zmes sa nechala refluxovať počas jednej hodiny. Po ochladení sa pridala voda (200 ml) a výsledný roztok sa trikrát extrahoval éterom. Spojené organické fázy sa trikrát premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 16,6 g (80%) surového produktu uvedeného v podnázve, ktorý sa bez ďalšieho čistenia použil v nasledujúcom kroku.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,14 (s, 1 H), 7,12 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 3,69 (s, 2H),

2.35 (s, 3H).

(iii) Kyselina 3-chlór-5-metylfenyloctová >

Zmes 3-chlór-5-metylfenylycetonitrilu (13,3 g, z kroku (ii) uvedeného vyššie) a KOH (17 g, 0,3 mol) v 150 ml zmesi vody a i-PrOH (2:1) sa za miešania zahrievalo v autokláve pri teplote 120°C cez noc a potom pri laboratórnej teplote počas dvoch dní. Izopropanol sa odparil a zvyšok sa okyslil (6M HCI) na pH 2 a trikrát sa extrahoval éterom. Spojené organické vrstvy sa dvakrát premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získala zlúčenina uvedená v podnázve (10,4 g, 70%).

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,09 (s, 2H), 6,97 (s, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,18 (s, 3H).

FAB-MS m/z 366 (M-1)‘ (iv) Etylester kyseliny 3-chlór-5-metylfenyloctovej

Roztok kyseliny 3-chlór-5-metylfenyloctovej (5,0 g, 27,09 mmol, z kroku (iii) uvedeného vyššie) a kyselina sírová (kone., 0,1 ml) v EtOH (25 ml) sa refluxoval cez noc. Roztok sa zahustil a výsledná zmes sa digerovala v roztoku Na₂CO₃ (75 ml). Po extrahovaní s éterom (2 x 75 ml) sa spojené organické fázy premyli soľankou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 4,92 g (85%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCb): δ 7,07 (s, 1 H). 7,08 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 4,15 (q, 2H),

3,54 (s, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,25 (t, 3H).

(v) Etylester kyseliny 3-oxo-2-(3-chlór-5-metylfenyl)propiónovej

Pripravil sa analogicky podľa spôsobu opísaného v príklade N(v) vyššie z etylesteru kyseliny 3-chlór-5-metylfenyloctovej (4,89 g, 23 mmol, z kroku (iv) opísaného vyššie, etylformiátu (3,3 g, 41,4 mmol) a Na (0,63 g, 27,6 mmol, pridaného v malých kúskoch) v suchom etylétere (50 ml), pričom sa získalo 3,4 g (61%) zlúčeniny uvedenej v podnázve vo forme číreho oleja, ktorý státím pomaly kryštalizoval.

¹H NMR (500 MHz, CDCb): δ 12,2 (b, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,07 (s, 1H),

6,94 (s, 1H), 4,30 (q, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,30 (t, 3H).

FAB-MS m/z 238, 240 (M - 1)' (vi) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-chlór-5-metylfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v príklade E uvedenom vyššie, pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-chlór-5-metylfenyl)propiónovej (z kroku (v) opísaného vyššie).

¹H NMR (400 MHz, CDCb): δ 7,12 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 4,12 (m, 1H),

3,82 (m, 2H), 2,30 (s, 3H).

Príklad W

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimetoxyfenyl)propiónová (i) Etylester kyseliny 3,5-dimetoxyfenyloctovej

Roztok kyseliny 3,5-dimetoxyfenyloctovej (2,0 g, 10 mmol) a kyseliny sírovej (kone., 0,2 ml) v EtOH (50 ml) sa refluxovalo cez noc. Roztok sa zahustil a výsledný materiál sa rozpustil vo vodnom NaOH (1M). Po extrakcii éterom (2 x 75 ml) sa spojené organické fázy premyli soľankou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 2,0 g (88%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,46 (d, 2H), 6,38 (t, 1H), 4,17 (q, 2H), 3,71 (s, 6H),

3,55 (s, 2H), 1,27 (t, 3H).

(ii) Etylester kyseliny 2-(3,5-dimetoxyfenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989) z etylesteru kyseliny 3,5-dimetoxyfenyloctovej (2,0 g, 8,9 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), čím sa získalo 3,4 g (61%) zlúčeniny uvedenej v podnázve vo forme číreho oleja, ktorý státím pomaly kryštalizoval Produkt bol dostatočne čistý a použil sa bez ďalšieho čistenia v nasledujúcom kroku.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 7,25 (m, 1H), 6,40 (m, 3H), 4,27 (q, 2H), 3,75 (s, 6H),

1,30 (t, 3H).

(iii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimetoxyfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade E z etylesteru kyseliny

3-oxo-2-(3,5-dimetoxyfenyl)propiónovej ( z kroku (ii) uvedeného vyššie).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,44 (s, 2H), 6,39 (s, 1 H), 4,12 (m, 1 H), 3,76 (m, 8H).

Príklad X

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-chlór-5-(Boc-amino)fenyl)propiónová (i) 2-Chlór-5-(Boc-amino)benzylalkohol

K ľadovo chladnému roztoku kyseliny 5-amino-2-chlórbenzoovej (9,0 g, 33mmol) v zmesi THFOMF (200 ml, 1:1) sa pridal TEA (4,0 g, 40 mmol) a následne izobutylchlórformiát (5,4 g, 40 mmol, pridaný po kvapkách). Zmes sa potom miešala počas ďalších 30 minút, vytvorená biela zrazenina sa odstránila filtráciou, filtrát sa ochladil na teplotu -15°C a pridal sa NaBH₄ (3,8 g, 10 mmol) a voda (20 ml). Po 15 minútach sa pridala voda (200 ml) a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 1 hodiny. Po odparení sa zvyšok rozpustil v metylalkohole. Prefiltro43 vaním a zahustením sa získal surový produkt, ktorý sa prečistil okamžitou chromatografiou (silikagél, CH₂Cl2.'MeOH (9:1)), čím sa získalo 7,4 g (87%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 7,48 (s, 1H), 7,27 (m, 2H), 6,58 (s, 1H), 4,74 (d, 2H), 1,52 (s, 9H).

(ii) 2-Chlór-5-(Boc-amino)benzylmezylát • K ľadovo chladnému roztoku 2-chlór-5-(Boc-amino)benzylakoholu (7,4g, 29 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v CH₂CI₂ (100 ml) sa pridal TEA (2,9 g, 29 mmol) a následne MsCI (3,3 g, 29 mmol, pridané po kvapkách). Po miešaní počas 2 hodín sa výsledná zmes vliala do vody. Organická vrstva sa oddelila, premyla vodou, vysušila (Na₂SO₄) a zahustila, čím sa získalo 10 g (100%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,50 (m, 1 H), 7,40 (m, 1 H), 7,32 (s, 1 H), 6,55 (b, 1 H),

5,27 (s, 2H), 3,05 (s,3H), 1,50 (s, 9H).

(iii) (2-Chlór-5-(Boc-amino)fenyl)acetonitril

K miešanému roztoku 2-chlór-5-(Boc-amino)benzylmezylátu z kroku (ii) uvedeného vyššie) v DMSO sa pridal NaCN (2,9 g, 60 mmol) a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote cez noc. Zmes sa vliala do vody (300 ml) a vodná suspenzia sa extrahovala éterom (4 x 50 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili. Po okamžitej chromatografii (silikagél, heptán:EtOAc (8:2)), sa získalo 5,2 g, (65%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,52 (d, 1H), 7,35 (m, 2H), 6,50 (b, 1H), 3,80 (s, 2H),

1,50 (s, 9H).

(iv) Kyselina (2-Chlór-5-(Boc-amino)fenyl)octová

K roztoku (2-chlór-5-(Boc-amino)fenyl)acetonitrilu (5,2 g, 20 mmol, z kroku (iii) uvedeného vyššie) v zmesi voda:izopropanol (37 ml, 2:1) sa pridal KOH (5 g, 89 mmol) a roztok sa refluxoval cez noc. Zmes sa potom zahustila, pridala sa vo44 da:THF (500 ml, 1:1) a Boc₂O a zmes sa miešala cez noc. THF sa odparil, vodná fáza sa premyla éterom (1 x 50 ml), okyslila sa zriedenou kyselinou chlorovodíkovou a extrahovala EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 2,8 g, (50%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,40 (b, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,21 (d, 1H), 6,55 (b, 1H),

3,77 (s, 2H), 1,50 (s, 9H).

(v) Etylester kyseliny (2-chlór-5-(Boc-amino)feny!)octovej

K roztoku kyseliny (2-chlór-5-(Boc-amino)fenyl)octovej (2,8 g, 9,8 mmol, z kroku (iv) uvedeného vyššie) v acetóne (100 ml) sa pridal K₂CO₃ (2,1 g, 15 mmol). Potom sa pridal etyljodid (70,6 g, 150 ml) za miešania a refluxovania reakčnej zmesi. Roztok sa zahustil a výsledná zmes sa rozdelila medzi éter a vodu (1:1, 60 ml). Organické vrstvy sa oddelili a vodná vrstva sa jedenkrát extrahovala éterom (30 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 3,0 g, (98%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,35 (b, 1H), 7,25 (s, 2H), 7,20 (d, 1H), 6,52 (b, 1H),

4,15 (q, 2H), 3,70 (s, 2H), 1,50 (s, 9H), 1,25 (t, 3H).

(vi) Etylester kyseliny 2-(2-ch!ór-5-(Boc-amino)fenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989)) z etylesteru kyseliny (2-chlór-5-(Boc-amino)fenyl)octovej (3,0 g, 9,6 mmol, z kroku (v) uvedeného vyššie), čím sa získalo 1,6 g, (49%) zlúčeniny uvedenej v podnázve vo forme číreho hnedastého oleja, ktorý bol dostatočne čistý a použil sa bez v ďalšom kroku bez čistenia.

¹H NMR (300 MHz, MeODCDCI₃): δ 8,98 (b, 0,5H), 7,89 (s, 0,5H), 7,25 (m, 3H), 4,88 (s, 2H), 4,15 (q, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,20 (t, 3H).

(vii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-chlór-5-(Boc-amino)fenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade E z etylesteru kyseliny

2- (2-chlór-5-(Boc-amino)fenyl)-3-oxo-propiónovej (z kroku (vi) uvedeného vyššie).

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,25 (m, 4H), 6,70 (b, 1H), 4,37 (m, 1H), 4,15 (b, 1H), 4,05 (t, 1H), 3,90 (d, 1H), 1,50 (s, 9H).

Príklad Y

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metylfenyl)propiónová (i) Etylester kyseliny 2-(3-metylfenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989), pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3-metylfenyloctovej (3,0 g, 17 mmol), čím sa získalo 2,5 g (72%) zlúčeniny uvedenej v podnázve, ktorá mala dostatočnú čistotu a použila sa v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

¹H NMR (300 MHz, CD.CI₃): δ 7,25 (m, 2H), 7,05 (m, 2H), 4,30 (q, 2H), 2,40 (q, 2H),

1,30 (t, 3H). , (ii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metylfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade E z etylesteru kyseliny

3- oxo-2-(3-metylfenyl)propiónovej (z kroku (i) uvedeného vyššie), čím sa získalo

1,6 g (80%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,20 (m, 1H), 7,05 (m, 3H), 4,12 (t, 1H), 3,80 (m, 2H),

2,32 (s, 3H).

Príklad Z

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2,5-dimetylfenyl)propiónová (i) Etylester kyseliny (2,5-dimetylfenyl)octovej

Roztok kyseliny (2,5-dimetylfenyl)octovej (3,0 g, 18,3 mmol) a kyseliny sírovej (kone., 0,1 ml) v EtOH (40 ml) sa refluxoval počas 6 dní. Roztok sa zahustil, pridal sa éter (40 ml) a výsledná zmes sa premyla roztokom Na₂CO₃ (2 x 25 ml) a vodou (1 x 25 ml). Organická fáza sa vysušila (MgSO₄) a odparila, čím sa získalo 2,94 g (84%) zlúčeniny uvedenej v podnázve vo forme čírej bezfarebnej kvapaliny s čistotou 97%.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,08 (d, 1 H), 7,02 (d, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,17 (q, 2H), 3,61 (s, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 1,28 (t, 3H).

(ii) Etylester kyseliny 2-(2,5-dimetylfenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989), pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny (2,5-dimetylfenyl)octovej (2,92 g, 15 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), čím sa získalo 2,89 g (86%) zlúčeniny uvedenej v podnázve, vo forme hnedožltého oleja.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 12,00 (d, 1 H), 7,10 (m, 2H), 6,92 (s, 1H), 4,25 (b, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,25 (t, 3H).

(iii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2,5-dimetylfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade E uvedeného vyššie, z etylesteru kyseliny 3-oxo-2-(2,5-dimetylfenyl)propiónovej (2,87 g, 13 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie), čím sa získalo 1,37 g (55%) zlúčeniny uvedenej v podnázve vo forme bieleho prášku.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,10 (d, 1H), 7,01 (d, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,14 (m, 2H), 3,73 (q, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,29 (s, 3H).

Príklad AA

Kyselina 2-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-hydroxy-propiónová (i) Benzylester kyseliny 4-benzyloxy-3-metoxyfenyloctovej

Uhličitan cézny (17,88 g, 54,9 mmol) sa pridal k roztoku kyseliny homovanilovej (2,0 g, 11 mmol) v CH₃CN), a následne sa v priebehu 10 minút pridal BnBr (4,3 g,

24,15 mmol). Zmes sa refluxovala cez noc, prefiltrovala sa cez Hyflo a zahustila. Výsledná zmes sa rozpustila v EtOAc (100 ml), pridala sa voda (30 ml) a vodná vrstva sa oddelila. Organická fáza sa premyla roztokom kyseliny citrónovej (5%, 1 x 20 ml) a soľankou, vysušila sa (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získalo 4,25 g (kvantitatívny výťažok ) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,43 (d, 2H), 7,34 (m, 8H), 6,82 (d, 2H), 6,74 (dd, 1 H), 5,33 (s, 4H), 3,84 (s, 3H), 3,59 (s, 2H).

(ii) Etylester kyseliny 2-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-oxo-propiónovej • Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989), pričom sa vychádzalo z benzylesteru kyseliny 4-benzyloxy-3-metoxyfenyloctovej (4,12 g,

11,4 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), čím sa získalo 1,4 g (31,5%) produktu uvedeného v podnázve.

LC-MS m/z 327 (M-1)' ¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 12,03 (d, 1H), 7,44 (d, 2H), 7,30 (m, 5H), 6,85 (d, 2H), 6,72 (dd, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,27 (q, 2H), 3,88 (s, 3H), 1,30 (t, 3H).

(iii) Etylester kyseliny 2-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-hydroxypropiónovej

Roztok etylesteru kyseliny 2-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-oxo-propiónovej (1,356 g, 3,47 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie) v zmesi MeOH:CH₂CI₂ (3:1, 20 ml) sa ochladil na teplotu -15 až -5°C a po častiach sa pridal NaBH₄ (0,264 g, 6,95 mmol).Ochladená reakčná zmes sa miešala, pričom sa teplota reakčnej zmesi nechala vystúpiť na laboratórnu teplotu. Pridala sa voda a zmes sa čiastočne zahustila. Po extrakcii s EtOAc (2 x 25 ml), premytí organickej fázy so soľankou, vysušení (Na₂SO₄) a odparení sa získalo 1,32 g (97,1% zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,42 (d, 2H), 7,32 (m, 4H), 6,82 (m, 2H), 6,74 (dd, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,15 (m, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,78 (m, 2H), 1,23 (t, 3H).

(iv) Kyselina 2-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-hydroxypropiónová

K roztoku etylesteru kyseliny 2-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)-3-hydroxypropiónovej (1,29 g, 3,29 mmol, z kroku (iii) uvedeného vyššie) v THF (12,5 ml) sa pridal roztok LiOH (0,273 g, 6,75 mmol) vo vode (5 ml) a zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 2,5 hodín. Výsledná zmes sa čiastočne zahustila, pridala sa voda (25ml) zmes sa premyla dvomi dielmi CH₂CI₂, okyslila sa vodnou kyselinou chlorovodíkovou (2M) a extrahovala sa troma dielmi CH₂CI₂. Spojené organické vrstvy sa premyli soľankou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 10,55 g (kvantitatívny výťažok) zlúčeniny vo forme žltého prášku s čistotou 83,2%.

¹H NMR (400 MHz, MeOH): δ 7,41 (d, 2H), 7,32 (m, 4H), 6,94 (d, 2H), 6,82 (dd, 1 H), 5,06 (s, 2H), 4,04 (m, 1 H), 3,83 (s, 3H), 3,70 (m, 2H).

Príklad AB

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-(3,5-dichlórfenyl)propiónová (i) 3,5-Dichlórbenzylalkohol

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade X(i) z kyseliny 3,5dichlórbenzoovej (15,3 g, 80 mmol), TEA (8,9 g, 88 mmol), izobutylchlórformiátu (12 g, 88 mmol) a NaBH₄ (9,0 g, 240 mmol), čím sa získalo 10,5 g (74%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,27 (t, 1H), 7,28 (d, 2H), 4,68 (s, 2H).

(ii) 3,5-Dichlórfenylacetonitril

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade X(ii) a X(iii) z 3,5dichlórbenzylalkoholu (10,3 g, 58 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), TEA (6,5 g, 64 mmol) a MsCI (7,0 g, 61 mmol), pričom sa získalo 9,6 g (89%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,37 (m, 3H), 3,74 (s, 2H).

(iii) Kyselina 3,5-dichlórfenyloctová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade X(iv) z 3,5-dichlórfenylacetonitrilu (9,6 g, 52 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie) a KOH (12,3g, 220 mmol), čím sa získalo 7,6 g (72%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCb): δ 7,31 (t, 1H), 7,20 (d, 2H), 3,63 (s, 2H).

(iv) Etylester kyseliny 3,5-dichlórfenyloctovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade T(ii) z kyseliny 3,5dichlórfenyloctovej (7,5 g, 37 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie) a kyseliny sírovej (kone., 0,1 ml), čím sa získalo 3,0 g (35%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCb): δ 7,28 (t, 1H), 7,18 (d, 2H), 4,17 (q, 2H), 3,56 (s, 2H),

1,27 (t, 3H).

(v) Etylester kyseliny 2-(3,5-dichlórfenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989), pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 3,5-dichlórfenyloctovej (3,0 g, 12,9 mmol, z kroku (iv) uvedeného vyššie), čím sa získala zlúčenina uvedená v podnázve (3,0 g, 89%), vo forme číreho oleja, ktorý bol dostatočne čistý a použil sa v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

¹H NMR (400 MHz, CDCb): δ 12,20 (d, 1H), 7,29 (t, 1H), 7,23 (d, 2H), 4,32 (q, 2H),

1,33 (t, 3H).

(vi) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dichlórfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade E z etylesteru kyseliny 2-(3,5-dichlórfenyl)-3-oxo-propiónovej (z kroku (v) uvedeného vyššie).

¹H NMR (400 MHz, CDCb): δ 7,34 (t, 1H), 7,24 (d, 2H), 4,12 (dd, 1H), 3,91 (dd, 1H), 3,84 (dd, 1H).

Príklad AC

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2,3-dimetoxyfenyl)propiónová (i) Etylester kyseliny 2,3-dimetoxyfenyloctovej

K roztoku kyseliny 2,3-dimetoxyfenyloctovej (2,52 g, 12,8 mmol) v Etanole (abs., 20 ml) sa pridala kyselina sírová (30 μΙ) a roztok sa refluxoval počas 20 hodín. Vý50.

sledný roztok sa zahustil, rozpustil v étere a éterový roztok sa premyl vodným NaHCO₃ (2 x 30 ml) a soľankou, vysušil (MgSO₄) a zahustil, čím sa získala zlúčenina uvedená v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,99 (m, 1H), 6,83 (m, 2H), 4,16 (q, 2H), 3,85 (s, 3H),

3,82 (s, 3H), 3,65 (s, 2H), 1,25 (t, 3H).

(ii) Etylester kyseliny 2-(2,3-dimetoxyfenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989), pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 2,3-dimetoxyfenyloctovej (2,14 g, 9,5 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), čím sa získala zlúčenina uvedená v podnázve (1,53 g, 64%), vo forme číreho nazelenalého oleja, ktorý bol dostatočne čistý a použil sa v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 12,00 (d, 1H), 7,19 (d, 1H), 7,05 (m, 2H), 6,91 (m, 2H), 6,74 (dd, 1 H), 4,24 (q, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 1,24 (t, 3H).

(iii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-(2,3-dimetoxyfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade E z etylesteru kyseliny

2-(2,3-dimetoxyfenyl)-3-oxo-propiónovej (z kroku (ii) uvedeného vyššie).

ĽC-MS m/z 225 (M-1)' ¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,05 (t, 1H), 6,87 (dd, 1H), 6,82 (dd, 1H), 4,15 (m, 3H), 3,85 (s, 6H), 3,75 (m, 1H).

Príklad AD

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metoxy-5-chlórfenyl)propiónová (i) 3-Metoxy-5-chlórbenzaldehyd

3,5-dichlóranizol (1,1 g, 6,8 mmol) sa po častiach pridal k horčíkovým stružlinám (0,20 g, 8,2 mmol) v THF (suchý, 20 ml). Po prvom pridaní sa na iniciáciu reakcie pridal etylbromid (0,1 ml). Po pridaní celého množstva sa reakčná zmes miešala pri teplote 60°C cez noc, reakčná zmes sa potom ochladila na teplotu 0°C a pridal sa DMF. Po miešaní počas jednej hodiny sa zmes vliala do vodnej kyseliny chlorovodíkovej, zahustila sa a extrahovala éterom (3 x 50 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 2,35 g zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 9,91 (s, 1H), 7,43 (t, 1H), 7,28 (t, 1H), 7,15 (t, 1H),

3,87 (s, 3H).

(ii) 3-Metoxy-5-chlórfenylacetaldehyd

Pripravil sa podľa spôsobu, ktorý opísali P. Weierstahl a kol., Liebigs Ann. 1389, (1995), pričom sa vychádzalo z 3-metoxy-5-chlórbenzaldehydu (2,35 g, 13,8 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), čím sa získalo 2,0 g (približne 54%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 9,71 (t, 1H), 6,84 (t, 1H), 6,81 (t, 1H), 6,64 (t, 1H),

3,79 (s, 3H), 3,62 (s, 2H).

(iii) Kyselina (3-metoxy-5-chlórfenyl)octová

Pripravila sa podľa spôsobu, ktorý opísali S. E. de Laszlo a P. G. Willars v J. Am. Chem. Soc. 107, 199 (1985) z 3-metoxy-5-chlórfenylacetaldehydu (102 mg, 0,55 mmol z kroku (ii) uvedeného vyššie), čím sa získalo 37 mg (33,6%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

LC-MS m/z 199 (M-1)' ¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,82 (t, 1H), 6,75 (t, 1H), 6,62 (t, 1H), 3,72 (s, 3H),

3,50 (s, 2H).

(iv) Etylester kyseliny (3-metoxy-5-chlórfenyl)octovej

Roztok kyseliny (3-metoxy-5-chlórfenyl)octovej (0,983 g, 4,9 mmol, z kroku (iii) uvedeného vyššie) a kyselina sírová (kone., 0,1 ml) v EtOH (25 ml) sa refluxoval cez noc. Výsledná zmes sa zahustila a pridal sa vodný Na₂CO₃ (75 ml). Zmes sa extrahovala éterom (2 x 75 ml), spojené organické vrstvy sa premyli soľankou, vy52 sušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 0,989 g (88,3%) zlúčeniny uvedenej v podnázve, vo forme hnedého oleja.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 6,88 (t, 1H), 6,81 (t, 1H), 6,72 (t, 1H), 4,16 (q, 2H),

3,79 (s, 3H), 3,54 (s, 2H), 1,26 (t, 4H).

t (v) Etylester kyseliny 2-(3-metoxy-5-chlórfenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989), pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny (3-metoxy-5-chlórfenyl)octovej (0,989 g, 4,33mmol, z kroku (iv) uvedeného vyššie), čím sa získalo 0,347 g, (31,3%), zlúčeniny uvedenej v podnázve, ktorá bola dostatočne čistá a použila sa v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 12,15 (b, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,86 (t, 1H), 6,82 (t, 1H),

6,70 (t, 1 H), 4,30 (q, 2H), 3,80 (s, 3H), 1,31 (t, 3H).

(vi) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metoxy-5-chlórfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade E z etylesteru kyseliny

2-(3-metoxy-5-chlórfenyl)-3-oxo-propiónovej (z kroku (v) uvedeného vyššie).

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 6,89 (t, 1H), 6,84 (t, 1H), 6,74 (t, 1H), 4,12 (dd, 1H),

3,83 (m, 2H), 3,79 (s, 3H).

Príklad AE

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-metyl-5-metoxyfenyl)propiónová (i) 2-(2-Bróm-5-metoxyfenyl)-1,3-dioxolán

K roztoku 2-bróm~5-metoxybenzaldehydu (5,0 g, 23,2 mmol) v toluéne (300 ml) sa pridal etándiol (2,16 g, 34,2 mmol) a p-TsOH (20 mg) a reakčná zmes sa potom refluxovala počas 12 hodín. Výsledná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu, premyla sa vodným NaHCO₃, vysušila (Na₂SO₄) a zahustila, čím sa získalo 5,918g (98%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 7,44 (d, 1H), 7,16 (d, 1H), 6,78 (dd, 1H), 6,04 (s, 1H),

4,12 (m, 4H), 3,80 (s, 3H).

(ii) 2-(2-Metyl-5-metoxyfenyl)-1,3-dioxolán

Roztok 2-(2-bróm-5-metoxyfenyl)-1,3-dioxolán (5,44 g, 21 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v THF (suchom, 60 ml) sa ochladil na teplotu -78°C pod dusíkovou atmosférou a po kvapkách sa pomocou injekčnej striekačky pridalo n-BuLi (1,4M, 19,5 ml). Po pridaní sa roztok miešal pri teplote -78°C počas 35 minút, potom sa pridal metyljodid (13,41 g, 94,5 mmol). Výsledná zmes sa pomaly miešala až po dosiahnutie laboratórnej teploty a potom sa zriedila vodným NH₄CI a extrahovala éterom. Organická fáza sa vysušila (Na₂SO₄) a zahustila, čím sa získalo

4,25 g (kvantitatívny výťažok) zlúčeniny uvedenej v podnázve vo forme hnedého oleja.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 7,12 (d, 1H), 7,08 (d, 1H), 6,81 (dd, 1H), 5,93 (s, 1H),

4,10 (m, 4H), 3,80 (s, 3H), 2,35 (s, 3H).

(iii) 2-Metyl-5-metoxybenzaldehyd

Roztok 2-(2-metyl-5-metoxyfenyl)-1,3-dioxolánu (4,2 g, 21,6 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie) v zmesi THF (60 ml) a vodnej kyseliny chlorovodíkovej (5%, 30ml) sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote. Roztok sa zahustila zmes sa extrahovala éterom. Organická fáza sa vysušila (Na₂SO₄) a zahustila, čím sa získalo 2,956 g (91%) tmavo hnedej kvapaliny.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 10,28 (s, 1H), 7,33 (d, 1 H), 7,16 (d, 1H), 7,04 (dd, 1H), 3,84 (s, 3H), 2,60 (s, 3H).

(iv) Etylester kyseliny (2-metyl-5-metoxy)octovej

Pripravil sa podľa postupu opísaného v príklade AD(ii) až AD(iv) uvedeného vyššie, z 2-metyl-5-metoxybenzaldehydu (z kroku (iii) uvedeného vyššie), čím sa získalo 1,18 g (30% v troch krokoch) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCb): δ 7,08 (d, 1H), 6,77 (d, 1H), 6,73 (dd, 1H), 4,16 (q. 2H), 3,78 (s, 3H), 3,59 (s, 2H), 2,24 (s, 2H), 1,26 (t, 3H).

(v) Etylester kyseliny 2-(2-metyl-5-metoxyfenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989), pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny (2-metyl-5-metoxy)octovej (1,16 g, 5,57 mmol, z kroku (iv) uvedeného vyššie), čím sa získalo 0,745 g, (57%), zlúčeniny uvedenej v podnázve, ktorá bola dostatočne čistá a použila sa v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

¹H^yNMR (500 MHz, CDCI₃): δ 11,97 (d, 1H), 7,14 (d, 1H), 7,10 (d, 1H), 6,67 (dd, 1H), 4,24 (q, 2H), 3,78 (s, 3H), 2,14 (s, 2H), 1,23 (t, 3H).

(vi) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-metyl-5-metoxyfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade E z etylesteru kyseliny 2-(2-metyl-5-metoxyfenyl)-3-oxo-propiónovej (z kroku (v) uvedeného vyššie).

¹H NMR (400 MHz, MeOD): δ 7,09 (d, 1H), 6,84 (d, 1H), 6,72 (dd, 1H), 4,03 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (dd, 1H), 2,32 (s, 2H).

Príklad AF (i) Metylester kyseliny tropovej

K roztoku kyseliny tropovej (5,0 g, 30 mmol) v zmesi to!uén:CH₂CI₂ (150 ml, 2:1) sa pridal DBU (4,6 g, 30 mmol) a následne metyljodid (4,3 g, 30 mmol). Zmes sa miešala cez noc, pridala sa voda a fázy sa nechali oddeliť. Vodná fáza sa extrahovala éterom a spojené organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃, vodnou kyselinou chlorovodíkovou a vodou, vysušili sa (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 0,95 g (18%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,25 (m, 5H), 4,25 (m, 1H), 3,88 (m. 2H), 3,73 (s. 3H).

(ii) Metylester kyseliny 2-metyl-2-fenyl-3-metoxypropiónovej

K chladnému roztoku metylesteru kyseliny tropovej (0,9 g, 5,0 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa pridal hydrid sodný (0,87 g, 20 mmol) a výsledná zmes sa miešala počas 15 minút, potom sa pridal metyljodid (2,8g, 20mmol) a zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Zmes sa vliala do vody (200 ml) a výsledná suspenzia sa extrahovala éterom (4 x' 25 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 0,70 g surového produktu (približne 65%), ktorý sa bez ďalšieho čistenia použil v nasledujúcom kroku.

¹H NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,25 (m, 5H), 4,00 (d, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,60 (d, 1H),

3,35 (s, 3H), 1,67 (s, 3H).

(iii) Kyselina (R,S)-2-metyl-2-fenyl-3-metoxypropiónová

K roztoku metylesteru kyseliny 2-metyl-2-fenyl-3-metoxypropiónovej (0,7 g, 3,4 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie) v MeOH (50 ml) sa pridal vodný NaOH (2M, 50 ml) a zmes sa miešala počas dvoch hodín. Zmes sa okyslila vodnou kyselinou chlorovodíkovou a extrahovala éterom (3 x 50 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získalo 0,40 g (približne 61%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,35 (m, 5H), 4,00 (d, 1H), 3,60 (d, 2H), 3,40 (s, 3H),

1,66 (s, 3H).

Príklad AG

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-chlór-3-metylfenyl)propiónová (i) Kyselina 2-chlór-3-metylbenzoová

Nitrit sodný (14,0 g, 0,2 mol) sa premyl roztokom kyseliny 2-amino-3-metylbenzoovej (30,2 g, 0,2 mol) v zmesi s vodou (200 ml) a vodným NaOH (30%, 24 ml). Roztok sa ochladil na teplotu O’C a za miešania sa po kvapkách pridal k zmesi kyseliny chlorovodíkovej (kone, 87,6 ml) a ľadu (100 g). Po miešaní počas niekoľkých minút sa výsledný roztok pridal k ľadovo chladnej zmesi vodnej kyseliny chlorovodíkovej (23%, 100 g), CuCI (20 g, 0,2 mol) a vody (40 ml). Roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 30 minút a pri teplote 100°C počas 30 minút, ochladil sa a výsledná zrazenina sa izolovala filtráciou, premyla sa vodou a vysušila cez noc, čím sa získalo 27,4 g (80,3%) bielej kryštalickej látky.

LC-MS m/z 169, 171 (M -1)’ ¹H NMR (5Q0 MHz, CDCI₃): δ 7,79 (d, 1H), 7,43 (d, 1H), 7,25 (t, 1H), 2,46 (s, 3H).

(ii) 2-Chlór-3-metylbenzylalkohol

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v príklade X(i) vyššie z kyseliny 2-chlór3-metylbenzoovej (13,65 g, 0,08 mol, z kroku (i) uvedeného vyššie), pričom sa získalo 11,38 g (90,8%) zlúčeniny uvedenej v podnázve vo forme bielych kryštálov.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 7,32 (d, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,18 (dd, 1H), 4,78 (d, 2H),

2.40 (s, 3H).

(iii) 2-Chlór-3-metylfenylacetonitril

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v príklade X(ii) a X(iii) vyššie z 2-chlór-3metylbenzylalkoholu (11,3 g, 72,15 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie), pričom sa získalo 11,4 g (93%) zlúčeniny uvedenej v podnázve vo forme červenohnedej pevnej látky.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,35 (d, 1H), 7,24 (t, 1H), 7,21 (d, 1H), 3,84 (s, 2H),

2.41 (s, 3H).

(iv) Etylester kyseliny 2-chlór-3-metylfenyloctovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v príklade T(ii) z 2-chlór-3-metylfsnylácetonitrilu (5,28 g, 32 mmol, z kroku (iii) uvedeného vyššie), pričom sa získalo 6,3 g (88,2%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,12 (d, 2H), 7,16 (dd, 1H), 4,17 (q, 2H), 3,77 (s, 2H),

2,39 (s, 3H), 1,26 (i, 3H).

(v) Etylester kyseliny 2-(2-chlór-3-metylfenyl)-3-oxo-propiónovej

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v J. Org. Chem. 54, 3831 (1989), pričom sa vychádzalo z etylesteru kyseliny 2-chlór-3-metylfenyloctovej (6,28 g, 29,53 mmol, z kroku (iv) uvedeného vyššie), čím sa získalo 5,418 g, (76,2%), zlúčeniny uvedenej v podnázve. Produkt bol dostatočne čistý a použil sa v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

LC-MS m/z 239, 241 (M-1)' ¹H NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 11,96 (b, 1H), 7,21 (d, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,03 (d, 1H), 4,25 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 1,23 (t, 3H).

(vi) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-chlór-3-metylfenyl)propiónová

Pripravila sa podľa spôsobu opísaného vyššie v príklade E z etylesteru kyseliny

2-(2-chlór-3-metylfenyl)-3-oxo-propiónovej (5,39 g, 22,39 mmol, z kroku (v) uvedeného vyššie), čím sa získalo 4,03 g (79,8%) zlúčeniny uvedenej v podnázve..

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 7,25 (d, 1H), 7,16 (d, 1H), 4,36 (dd, 1Ή), 4,02 (dd, 1H), 3,74 (dd, 1H), 2,38 (s, 3H).

Zlúčeniny podľa vynálezu

Príklad 1 (R)- a (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI (i) (R)- a (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Zmes kyseliny (R.S)-tropovej (0,25 g, 1,5 mmol), H-Aze-Pab(Z) x 2HCI (0,73 g,

1,7 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie) a TBTU (0,53 g, 1,7 mmol) v 10 ml DMF sa ochladilo na ľadovom kúpeli. Pridal sa DIPEA (0,78 g, 6,0 mmol) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 48 hodín. Reakčná zmes sa následne zahustila, zriedila so 400 ml vody (pH sa adjustovalo na 8 s NaHCO₃) a extrahovala etylacetátom (3 x 75 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli s vodným NaHCO₃ (3x 50 ml) a vodou (1 x 50 ml), vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Surový produkt (0,59 g) sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne (120 g) eluovaním s CH₂CI₂:THF (500 ml, 3:1) a THF (1750 ml). Odoberali sa frakcie s objemom 20 ml. Frakcie 41 až 54 sa zahustili, čím sa získalo 150 mg zlúčeniny 1A s diastereoizomérnym pomerom > 99:1. Frakcie 70 až 90 sa zahustili, čím sa získala zlúčenina 1B s diastereoizomérnym pomerom 89:11.

Zlúčenina 1A . ¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 8,27 (m, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,38 (d, 2H), 7,3 - 7,1 (m,

10H), 5,49 (d, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,73 (m, 1H), 4,4-4,2 (m, 2H), 4,10 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,71 (m, 1H), 3,71 (m, 1H), 33,63 (m, 2H), 2,34 (m, 1H), 2,23 (m, 1H).

¹³C NMR (10 MHz, CDCI₃) amidínové a karbonylové uhlíky: 173,7, 171,0, 168,5, 164,4.

Zlúčenina 1B ¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 8,27 (m, 1H, minoritný diastereoizomér/rotamér), 8,14 (m, 1H, majoritný diastereoizomér/rotamér), 7,9 - 7,7 (m, 2H), 7,5 - 7,1 (m, 12H),

5,56 (d, 1H), 5,22 (s, 2H, majoritný diastereoizomér/rotamér), 5,20 (s, 2H, minoritný diastereoizomér/rotamér), 4,89 (m, 1H, majoritný diastereoizomér/rotamér), 4,82 (m, 1H, minoritný diastereoizomér/rotamér),), 4,6 - 4,3 (m, 2H), 4,2 - 4,0 (m, 2H),

3,8 - 3,6 (m, 3H), 2,48 (m, 1 H), 2,38 (m, 1 H).

¹³C NMR (10 MHz, CDCI₃) amidínové a karbonylové uhlíky: 174,8, 170,8, 168,0,

164,7.

(ii) (R)- alebo (S)- PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI

Zlúčenina 1A (100 mg, 0,19 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) sa rozpustila v 10 ml etanolu a pridalo sa 5 % paládia na uhlí (52 mg). Zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 5 hodín. Po filtrácii a odparení sa produkt rozpustil v 5 ml vody a pridalo sa 190 μΙ kyseliny chlorovodíkovej (1M). Po vysušení vymrazením sa získal produkt uvedený v názve vo forme bieleho prášku. Výťažok bol 60 mg (74%), diastereoizomérny pomer 99:1.

¹H NMR (400 MHz, CDCb) δ 8,75 (m, 1H, majoritný rotamér), 8,59 (m, 1H, minoritný rotamér), 7,69 (dd. majoritný rotamér), 7,63 (d, 2H, minoritný rotamér), 7,5 - 7,0 (m, 7H), 5,10 (m, 1H, ostatné signály z toho istého protónu sa prekrývali s HDOsignálom), 4,47 (bs, 1H), 4,27 (m, 1H, majoritný rotamér), 4,17 (1H, minoritný rotamér), 4,1 - 3.6 (m, 5H), 2,67 (m, 1H, minoritný rotamér), 2,40 (m, 1H, majoritný rotamér), 2,3-2,1 (m, 1 H).

¹³C NMR (75 MHz, D₂O) amidínové a karbonylové uhlíky (rotaméry): 177,4, 176,4,

174,8, 160,0, 157,6.

(iii) (R)- alebo (S)- PhCHCH₂OH-C(O)-Aze-Pab x HCI

Zlúčenina uvedená v názve sa pripravila podľa spôsobu z príkladu 1 (ii) z 50 mg (0,097 mmol) zlúčeniny 1B (z kroku (i) uvedeného vyššie). Výťažok predstavoval 32 mg (79%), diastereoizomérny pomer 83:17.

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,8 - 7,0 (m, 9H), 5,10 (m, 1H, minoritný diastereoí izomér/rotamér), 4,83 (m, 1H, majoritný diastereoizomér/rotamér), 4,6 - 4,2 (m. 3H),

4,1 - 3,4 (m, 4H), 2,54 (m, 1H, majoritný diastereoizomér/rotamér), 2,39 (m, 1H, minoritný diastereoizomér/rotamér), 2,2 - 2,1 (m, 1H).

₁₃C NMR (75 MHz, D₂O) amidínové a karbonylové uhlíky: 176,6, 174,9, 168,9.

Príklad 2 (R)- a (S)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R)- a (S)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab(Z)

K roztoku kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metoxyfenyl)propiónovej (0,157 g, 0,8 mmol, z príkladu E uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa pridalo H-Aze-Pab(Z) x 2HCI (0,387 g, 0,88 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie) a zmes sa ochladila na ľadovom kúpeli. Pridalo sa TBTU (0,283 g, 0,88 mmol) a DIPEA (0m414 g, 3,20 mmol) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 48 hodín. Reakčná zmes sa následne odparila a zvyšok sa rozpustil vo vode (100 ml) a potom sa extrahoval etylacetátom (3 x 25 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli vodným

NaHCO₃ (3 x 25 ml) a vodou (25 ml), vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili. Surový produkt sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne eluovaním s CH₂CI₂:MeOH (98:2), etylacetát, etylacetát:EtOH (95:5), etylacetát:EtOH (9:1) a etylacetát:EtOH (85:15). Niektoré frakcie sa zahustili, čím sa získalo 177 mg zlúčeniny 2A s diastereoizomémym pomerom 88:12. Ďalšie frakcie sa zahustili pričom sa získalo 164 mg zlúčeniny 2B s diasteroizomémym pomerom 88:12.

Zlúčenina 2A ' ¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 8,20 - 8,27 (m, NH), 7,79 - 7,85 (m, 2H), 7,18 - 7,48 (m. 8H), 6,70 - 6,88 (m, 3H), 5,20 - 5,24 (m, 2H), 4,84 - 4,99 (m, 1 H,), 4,34 - 4,64 (m, 2H), 3,98 - 4,16 (m, 2H), 3,56 - 3,82 (m, 6H), 2,26 - 2,70 (m, 2H).

Zlúčenina 2B ¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 8,14 - 8,21 (m, NH), 7,78 - 7,88 (m, 2H), 7,18 - 7,48 (m. 8H), 6,70 - 6,87 (m, 3H), 5,20 - 5,24 (m, 2H), 4,86 - 5,00 (m, 1 H,), 4,34 - 4,64 (m, 2H), 4,00 - 4,16 (m, 2H), 3,58 - 3,82 (m, 6H), 2,39 - 2,69 (m, 2H).

(ii) (R)- alebo (S)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

K roztoku zlúčeniny 2A (0,164 g, 0,30 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v etanole (7 ml) sa pridala kyselina octová (0,018 g, 0,30 mmol) a paládium na uhlí (5%, 0,08 g). Reakčná zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 4 hodín. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit a filtrát sa zahustil. Surový produkt sa rozpustil vo vode a vysušil sa vymrazovaním, čím sa získalo 128 mg (91%) zlúčeniny uvedenej v názve, diastereoizomérny pomer 88:12.

LC-MS m/z 411 (M + 1)^{+ 1}H NMR (500 MHz, D₂O) δ 7,67 - 7,85 (m, 2H), 7,25 - 7,62 (m, 3H), 6,89 - 7,04 (m. 2H), 6,74 - 6,83 (m, 1H), 5,16 - 5,22 (m, 1H), 4,24 - 4,66 (m, 2H,), 3,97 - 4,19 (m, 3H), 3,64 - 3,94 (m, 5H), 2,18 - 2,82 (m, 2H).

(iii) (S)- alebo (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

K roztoku zlúčeniny 2B (0,142 g, 0,26 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v etanole (7 ml) sa pridala kyselina octová (0,016 g, 0,26 mmol) a paládium na uhlí (5%, 0,07 g). Reakčná zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 4 hodín. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit a filtrát sa zahustil. Surový produkt sa rozpustil vo vode a vysušil sa vymrazovaním, čím sa získalo 113 mg (92%) zlúčeniny uvedenej v názve, diastereoizomérny pomer 88:12.

LC-MS m/z 411 (M + 1)^{+ 1}H NMR (500 MHz, D₂O) δ 7,26 - 7,86 (m, 5H), 6,88 - 7,04 (m, 2H), 6,75 - 6,83 (m. 1H), 4,91 - 4,96 (m, 1H), 4,26 - 4,68 (m, 3H), 3,96 - 4,18 (m, 2H,), 3,64 - 3,94 (m, 5H), 2,18-2,70 (m, 2H).

Príklad 3 (R,S)-3,4-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3,4-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Zmes kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,4-dimetoxyfenyl)-propiónovej (0,23 g, 1,0 mmol, z príkladu F uvedeného vyššie), H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,48 g, 1,1 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie) a TBTU (0,35 g, 1,1 mmol) v DMF (10 ml) sa ochladila na ľadovom kúpeli. Pridal sa DIPEA (0,52 g, 4,0 mmol) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Reakčná zmes sa potom zahustila, zvyšok sa zriedil zmesou etylacetát:voda (1:2, 300 ml) a pH sa nastavilo na 9 použitím vodného NaHCO₃a potom sa zmes extrahovala etylacetátom (3 x 100 ml) a vodou (3 x 125 ml), vysušila sa (Na₂SO₄) a odparila. Surový produkt (0,43 g) sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne (50 g) eluovaním etylacetátom (200 ml), zmesou etylacetát:EtOH (95:5, 200 ml), etylacetát:EtOH (9:1, 200 ml) a etylacetát:EtOH (85:15, 200 ml). Výťažok predstavoval 244 mg (42%) zlúčeniny uvedenej v podnázve, diastereoizomérny pomer 52:48.

FAB-MS m/z 575 (M + 1)⁺ 'H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 8,18 - 8,26 (m, 1H), 8,00 - 8,08 (m, 1H), 7,76 - 7,84 (d. 1 H), 7,63 - 7,68 (d, 1 H), 7,25 - 7,47 (m, 6H), 7,02 - 7,07 (d, 1 H,), 6,64 - 6,84 (m,

3Η), 5,20 (s, 2H), 4,82 - 5,00 (m, 1H), 4,40 - 4,79 (m, 2H), 3,98 - 4,24 (m, 2H), 3,84 - 3,87 (m, 6H), 3,53 - 3,82 (m. 3H), 2,26 - 2,69 (m, 2H).

(ii) (R,S)-3,4-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab x l-lOAc (R,S)-3,4-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,095 g, 0,17 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), kyselina octová (0,010 g, 0,17 mmol) a Pd/C (5%, 0,087

g) sa pridalo k etanolu (10 ml) a výsledná zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 5 hodín. Reakčná zmes sa preflltrovala a filtrát sa odparil. Zvyšok sa rozpustil vo vode a vysušil vymrazovaním, čím sa získalo 70 mg (85%) zlúčeniny uvedenej v podnázve vo forme bieleho prášku, diastereoizomérny pomer 52:48.

LC-MS m/z 441 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, D₂O) Ô 7,29 - 7,85 (m, 4H), 6,85 - 7,09 (m, 2H), 6,71 - 6,81 (m. 1H), 4,90 - 5,19 (m, 1H), 4,31 -4,65 (m, 2H), 3,95 -4,28 (m, 3H,), 3,62 - 3,90 (m, 8H), 2,15-2,84 (m, 2H).

Príklad 4 (R)- a (S)-2-Naftyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R)- a (S)-2-Naftyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Roztok H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,483 g, 1,1 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na ľadovom kúpeli. Pridala sa kyselina (R,S)-3hydroxy-2-(2-naftyl)propiónová (0,216 g, 1,0 mmol, z príkladu G uvedeného vyššie), TBTU (0,353 g, 1,1 mmol) a DIPEA (0,517 g, 4,0 mmol) s reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 3 dní. Reakčná zmes sa potom odparila a zvyšok sa rozpustil v zmesi etylacetát.voda a potom sa extrahoval etylacetátom (2 x 75 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli vodným NaHCO₃ (3 x 30 ml) a vodou (25 ml), vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili. Surový produkt (0,43 g) sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne eluovaním etylacetátom, zmesou etylacetát:EtOH (95:5) a etylacetát:EtOH (9:1). Určité frakcie sa zahustili, čím sa získalo 204 mg (36%) zlúčeniny 4A s diastereoizomérnym pomerom 95:5. Ďalšie frakcie sa zahustili, čím poskytli 219 mg (39%) zlúčeniny 4B s diastereoizomérnym pomerom 90:10.

Zlúčenina 4A

LC-MS m/z 565 (M + 1)^{+ 1}H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 8,23 - 8,31 (t, NH), 7,20 - 7,88 (m, 16H), 5,22 (s. 2H),

4,85 - 4,92 (m, 1H), 4,44 - 4,64 (m, 2H), 4,07 - 4,24 (m, 2H,), 3,64 - 3,92 (m, 3H),

2,21 - 3,92 (m, 3H), 2,21 - 2,70 (m, 2H).

Zlúčenina 4B

LC-MS m/z 565 (M + 1)⁺, 587 (M + Na)^{+ 1}H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 8,13 - 8,21 (t, NH), 7,20 - 7,90 (m, 16H), 5,24 (s. 2H),

4,95 - 5,02 (m, 1H), 4,31 - 4,65 (m, 2H), 4,09 - 4,24 (m, 2H,), 3,62 - 3,92 (m, 3H), 2,38-2,76 (m, 2H).

(ii) (R)- alebo (S)-2-Naftyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

K roztoku zlúčeniny 4A (0,175 g, 0,31 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v etanole (7 ml), sa pridala kyselina octová (0,019 g, 0,31 mmol) a Pd/C (5%, 0,09 g). Reakčná zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 4 hodín a potom sa prefiltrovala cez celit a filtrát sa zahustil. Surový produkt sa rozpustil vo vode a vysušil vymrazovaním, čím sa získalo 136 mg (89%) zlúčeniny uvedenej v názve, diastereoizomérny pomer 95:5.

LC-MS m/z 431 (M + 1)^{+ 1}H NMR (500 MHz, D₂O) δ 7,05 - 8,00 (m, 11 H), 5,14 - 5,22 (m, 1H), 3,60 - 4,58 (m. 8Η), 2,12-2,81 (m, 2H).

(iii) (S)- alebo (R)-2-Naftyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

K roztoku zlúčeniny 4B (0,194 g, 0,34 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v etanole (7 ml), sa pridala kyselina octová (0,021 g, 0,34 mmol) a Pd/C (5%, 0,09 g). Reakčná zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 4 hodín. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit a filtrát sa zahustil. Surový produkt sa rozpustil vo vode a vysušil vymrazovaním, čím sa získalo 151 mg (90%) zlúčeniny uvedenej v názve, diastereoizomémy pomer 90:10.

LC-MS m/z 431 (M + 1)^{+ 1}H NMR (500 MHz, D₂O) δ 7,00 - 8,00 (m, 11 H), 4,92 - 4,99 (m, 1 H), 3,60 - 4,62 (m. 8H), 2,12 -2,83 (m, 2H).

Príklad 5 (R)- a (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig x HOAc (i) (R)- alebo (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig(Z)

Zmes kyseliny (R,S) tropovej (0,132 g, 0,8 mmol), H-Aze-Pig(Z) x 2HCI (0,393 g, 0,88 mmol, z príkladu C uvedeného vyššie) a TBTU (0,283 g, 0,88 mmol) v DMF (10 ml) sa ochladila na ľadovom kúpeli. Pridala sa DIPEA (0,414 g, 3,20 mmol) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 48 hodín. Reakčná zmes sa následne zahustila, zriedila vodou (175 ml, pH sa adjustovalo na 8 s NaHCO₃) a extrahovala etylacetátom (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli vodným NaHCO3, (3 x 25 ml) a vodou (25 ml), vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Surový produkt (0,895 g) sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne eluovaním s CH₂C!₂, CH₂CI₂:THF (4:1, 1:1, 1:4) a CH₂CI₂:MeOH (95:5. 9:1). Niektoré frakcie sa zahustili, čím sa získalo 117 mg zlúčeniny s diastereoizomérnym pomerom >99:1.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,88 - 7,95 (bt, NH), 7,21 - 7,41 (m, 10H), 7,09 (bs. NH), 5,11 (s, 2H), 4,78 - 4,80 (m, 1H), 4,00 - 4,38 (m, 4H), 3,58 - 3,76 (m. 3H), 3,12 - 3,34 (m, 2H), 2,76 - 2,97 (m, 3H), 2,46 - 2,66 (m, 1H), 2,22 - 2,35 (m. 1H),

1,66 -1,78 (m, 2H), 1,22 - 1,38 (m, 2H).

(Uvedené frakcie sa zahustili, čím sa získalo 156 mg epiméru vyššie uvedenej zlúčeniny s diastereoizomérnym pomerom 87:13).

(ii) (S)- alebo (R)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig x HOAc (R)- alebo (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig(Z) (0,117 g, 0,22 mmol), charakterizovaná zlúčenina z kroku (i) uvedeného vyššie), kyselina octová (0,013 g, 0,22 mmol) a Pd/C (5%, 0,06 g) sa pridalo k etanolu (5 ml) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 2,5 hodín. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit a filtrát sa odparil. Zvyšok sa rozpustil vo vode a vysušil vymrazením, čím sa získalo 92 mg (93%) zlúčeniny uvedenej v názve, s diastereoizomémym pomerom >99:1.

¹H NMR (400 MHz, D₂O, komplikácie vplyvom prítomnosti diastereoizomérov/rotamérov) δ 7,14 - 7,41 (m, 5H), 4,60 - 5,06 (m, 1H), 3,64 - 4,09 (n, 7H), 2,78-3,19 (m, 4H), 2,58-2,71 (m, 1H), 2,34-2,45 (m, 1H), 2,03-2,20 (m. 1H), 0,98-1,77 (m, 4H).

¹³C NMR (100,5 MHz, CDCI₂) amidínové a karbonylové signály: 175,95, 172,69,

155,85.

Príklad 6 (R,S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig x HOAc (i) (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)

EDC x HCI (0,24 g, 1,25 mmol) sa pridalo k zmesi (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)C(O)-Pro-OH (0,38 g, 1,0 mmol, z príkladu D uvedeného vyššie), (R,S)-H-Híg-Z x 2HCI (0,36 g, 1,0 mmol, pripraveného reakciou Boc-(R,S)-Hig(Z) (pozri medzinárodnú patentovú prihlášku WO 94/29336) s plynným HCI (g) v EtOAc a následným odparením do sucha) a DMAP (0,49 g, 4,0 mmol) v acetonitrile (10 ml) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Reakčná zmes sa odparila zvyšok sa rozpustil vo vode (300 ml, pH sa adjustovalo na 9).Vodná fáza sa extrahovala etylacetátom (3 x 150 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli vodným NaHCO₃ (2 x 150 ml) a vodou (3 x 150 ml), vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 0,48 g zlúčeniny uvedenej v podnázve, ktorá sa bez ďalšieho čistenia použila v nasledujúcom kroku.

(ii) (R,S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z) (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z) (0,265 g, 0,41 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v TFA (6,5 ml, 10% v CH₂CI₂) sa miešalo pri teplote 0°C počas 30 minút pH zmesi sa adjustovalo na 9 vodným K2CO3 a následne sa zmes extrahovala s CH₂CI₂ (3 x 75 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Surový produkt (0,24 g) sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne (50 g) eluovaním s CH₂CI₂ (200 ml), CH₂CI₂:EtOH (95:5, 200 ml) a CH₂CI₂:EtOH (9:1, 400 ml). Výťažok predstavoval 109 mg (50%) zlúčeniny uvedenej v názve.

LC-MS m/z 536(M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,17 - 7,45 (m, 10H), 5,06 - 5,15 (m, 2H), 4,46 - 4,62 (m. 1H), 3,97 - 4,21 (m, 2H), 3,08 - 3,91 (m, 8H), 2,80 - 2,98 (m, 1H), 1,35 - 2,30 (m. 9H).

¹³C NMR (100,5 MHz, CDCI₃) amidínové a karbonylové signály: 172,72, 171,74, 163,77, 159,14.

(iii) (R,S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig x HOAc

Zmes (R,S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Hig-Z (0,11 g, 0,21 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie), Pd/C (5 %, 0,06 g) a kyselina octová (0,012 g, 0,21 mmol) v EtOH (10 ml) sa hydrogenovalo pri atmosférickom tlaku počas 4 hodín. Reakčná zmes sa prefiltrovala a filtrát sa odparil. Surový produkt sa rozpustil vo vode a vysušil vymrazením, čím sa získalo 78 mg (82%) zlúčeniny uvedenej v názve.

LC-MS m/z 402 (M 1-1) ¹H NMR (400 MHz, D₂O): δ 7,15-7,45 (m, 5H), 4,20-4,38 (m, 1H), 3,89 - 4,14 (m. 2H), 3,67 - 3,81 (m, 2) 2,70 - 3,64 (m, 7H), 1,40 - 2,37 (m, 9H).

¹³C NMR (75,5 MHz, D₂O) amidínové a karbonylové signály: 174,90, 173,48,

154,84.

Príklad 7 (R)- a (S)-2,5-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R)-a (S)-2,5-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Aze-Pab(Z)

H-Aze-Pab(Z) (0,387 g, 0,88 mmol) v DMF sa ochladilo na ľadovom kúpeli. K reakčnej zmesi sa pridala kyselina 3-hydroxy-2(2,5-dimetoxyfenyl)-propiónová (0,181 g, 0,8 mmol), TBTU (0,283 g, 0,88 mmol) a DIPEA (0,414 g, 3,20 mmol) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Reakčná zmes sa následne odparila a zvyšok sa rozpustil v zmesi voda:etylacetát (2:1, 150ml) a následne sa extrahoval etylacetátom (3 x 25 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli vodným NaHCO₂ (3 x 25 ml) a vodou (25 ml), vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili sa. Surový produkt (0,43 g) sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne eluovaním s etylacetátom, zmesou etylacetát:EtOH (99:1), etylacetát:EtOH (97:3) a etylacetát (95:5).Niektoré frakcie sa zahustili, čím sa získalo 185 mg zlúčeniny 7B s diastereoizomérnym pomerom 93:7.

Zlúčenina 7A

LC-MS m/z 575 (M + 1)⁺, 597 (M + Na)⁺ 'H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 8,26 - 8,35 (m, NH), 7,80 - 7,87 (d, 2H), 7,24 - 7,48 (m, 7H), 6,76 - 6,85 (m, 3H), 5,22 (s, 2H), 4,83 - 4,90 (m, 1H), 4,43 - 4,59 (m, 2H),

3,92 - 4,18 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,58 - 3,72 (m, 2H), 2,25 .- 2,72 (m, 2H).

Zlúčenina 7B

LC-MS m/z 575 (M + 1)⁺, 597 (M + Na)^{+ 1}H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 8,11 -8,19 (m, NH), 7,79-7,88 (m, 2H), 7,24 - 7,48 (m, 7H), 6,68 - 6,84 (m, 3H), 5,22 (s, 2H), 4,91 - 4,98 (m, 1 H), 4,36 - 4,67 (m, 2H), 3,99-4,22 (m, 3H), 3,48 - 3,82 (m, 8H) 2,38 - 2,95 (m, 2H).

(ii) (R)- alebo (S)-2,5-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Zlúčenina 7A (0,141 g, 0,25 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) sa rozpustila v etanole (7 ml). Pridala sa kyselina octová (0,015 g, 0,25 mmol) a Pd/C (5%, 0,07 g) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 3 hodín. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit a filtrát sa odparil. Zvyšok sa rozpustil vo vode a vysušil sa vymrazením, čím sa získalo 113 mg (90%) zlúčeniny uvedenej v názve, s diastereoizomérnym pomerom >99:1.

LC-MS m/z 441 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,34 - 7,84 (m, 4H), 6,82 - 7,14 (m, 3H), 5,06 - 5,13 (m, 1 H), 3,72 -4,37 (m, 13H), 2,11 -2,86 (m, 2H), (iii) (R)- alebo (S)-2,5-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Zlúčenina 5B (0,164 g, 0,286 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) sa rozpustila v etanole (7 ml). Pridala sa kyselina octová (0,017 g, 0,286 mmol) a Pd/C (5%, 0,08 g) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku počas 3 hodín. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit a filtrát sa odparil. Zvyšok sa rozpustil vo vode a vysušil vymrazením, čím sa získalo 130 mg (91%) zlúčeniny uvedenej v názve, diastereoizomémy pomer 93:7.

LC-MS m/z 441 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,34 - 7,86 (m, 4H), 6,78 - 7,10 (m, 3H), 4,89 - 4,96 (m, 1 H), 3,70 - 4,68 (m, 13H), 2,16 - 2,73 (m, 2H).

Príklad 8 (R_;S)-Ph-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OH (i) (R,S)-Ph-CH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Zmes (R,S)-Ph-CH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-OH (0,753 g, 2,0 mmol, pozri príklad D uvedený vyššie), H-Pab(Z) x HCI (0,681 g, 2,1 mmol), DMAP (0,366 g, 3,0 mmol) a EDC (500 μΙ, 2,7 mmol) v acetonitrile (7 ml) sa miešala pri laboratórnej teplote počas 3 dní. Reakčná zmes sa odparila a zvyšok sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne eluovaním so zmesou etylacetáttoluén (2:1) a THF.toluén (3:7). Výťažok zlúčeniny uvedenej v podnázve bol 345 g (27%).

FAB-MS m/z 643 (M + 1)^{+ 1}H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 6.85 - 7,85 (m, 14H), 5,15 (s, 2H), 3,15 - 4,80 (m, 8H), 1,60 - 2,30 (m, 4H), 0,65 - 0,90 (m, 9H), -0,80 - 0,05 (m, 6H).

(ii) (R,S)-Ph-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

K zmesi kyseliny trifluóroctovej (2 ml) v CH₂CI₂ (8 ml) sa pridal (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,345 g, 0,54 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 hodín. Zmes sa zriedila dichlórmetánom a pH sa adjustovalo na 7 s vodným Na₂CO₃. Organická vrstva sa vysušila (MgSO₄) a odparila. Zvyšok sa podrobila preparatívnej RPLC, pričom sa získal výťažok 111 mg (39%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

FAB-MS m/z 529 (M + 1)⁺, LC-MS m/z 527 (M -1)', 529 (M + 1)⁺, 551 (M + Na)^{+ 1}H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,10 - 7,86 (m, 14H), 5,18 - 5,25 (m, 2H), 3,05 - 4,69 (m, 8H), 1,66-2,28 (m, 4H).

(iii) (R,S)-Ph-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OH (R,S)-Ph-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,111 g, 0,21 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie), sa pridal k zmesi hydroxylamín hydrochloridu (0,206 g, 3,0 mmol) a trietylamínu (1,3 ml, 9,3 mmol) v EtOH (4 ml). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Surový produkt sa podrobil preparatívnej RPLC, pričom sa získalo 50 mg (23%) zlúčeniny uvedenej v názve.

LC-MS m/z 411 (M + 1)+, 433 (M + Na)⁺

Príklad 9 (R)- alebo (S)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab-OH

K roztoku hydroxylamín hydrochloridu (0,083 g, 1,2 mmol) a TEA (0,405 g, 4,0 mmol) v 11 ml THF sa sonifikoval počas 30 minút. Pridal sa (R)- alebo (S)-3metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (zlúčenina 2A z príklad 2(i) uvedeného vyššie, 0,109 g, 0,2 mmol) a zmes sa miešala pri teplote 40°C cez noc. Rozpúš70 ťadlo sa odparilo a surový produkt sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne eluovaním s gradientom CH₂CI₂:IPA: HOAc (100:0:0 -> 90:10:0 -> 80:20:2) a následne pomocou HPLC (CH₃CN- :NH.,OHAc (0,1 M) (32,5:67,5)). Po vysušení vymrazením sa získalo 38 mg (44%) zlúčeniny vo forme bieleho prášku.

LC-MS m/z 427 (M + 1)⁺

Príklad 10 (S)- alebo (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-(Z)

H-Pro-Pab(Z) (0,5 g, 1,1 mmol, pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a následne TBTU (0,353 g, 1,1 mmol), a DIPEA (0,517 g, 4,0 mmol) sa pridali k roztoku kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3metoxyfenyl)propiónovej (0,196 g, 1 mmol, z príkladu E(ii) uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) pri teplote 0°C. Po miešaní počas 4 dní pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes zahustila a prečistila pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄NOAo (1M) (40:60)). Frakcie sa zahustili a extrahovali štyrikrát s EtOAc. Spojené organické fázy sa potom vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získala surová zmes diastereoizomérov. Zmes (0,84 g) sa chromatografovala pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄NOAc (1M) (34:66)), ktorá sa rozdelila na dva stereoizoméry. Zlúčenina 10A (0,352 g, 83%, rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér, čistota 90,5% pomocou HPLC a zlúčenina 10B (0,311 g, 74%, pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, čistota 96,9%, pomocou HPLC).

Zlúčenina 10B ¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,83 (d, 2H), 7,46 (dd, 2H), 7,4 - 7,3 (m, 8H), 6,84 (dd+s, 3H), 5,23 (s 2H), 4,62 (dd, 1H), 4,49 (ddd, 2H), 4,03 (dd, 1H), 3,88 (dd, 1H),

3,80 (s, 2H), 3,73 (dd, 2H), 3,63 (m, 1H), 3,2 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,1 - 2,0 (m, 2H), 1,82 (m, 3H), 1,74 (b, 3H).

Príklad 11 (S)- alebo (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc /

K okyslenému (HOAc, 2,7 mg, 0,045 mmol) roztoku (S)- alebo (R)-3metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (zlúčenina 10B z príkladu 10 uvedeného vyššie, 10 mg, 0,018 mmol) v 10 ml EtOH sa pridalo Pd/C (5%, 10 mg). Reakčná zmes sa hydrogenovala (1 atm.) pri laboratórnej teplote počas 3,5 hodín. Roztok sa prefiltroval, odparil a rozpustil v 20 ml CH₃CN:H₂O (50:50). Tento roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 10 mg (100%) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

ĽC-MS m/z 425 (M + 1)⁺

Príklad 12 (R,S)-3-Aminofenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-Boc-aminofenyl)propiónovej (0,146 g, 0,8 mmol, z príkladu T uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x HCI (0,339 g, 0,88 mmol), TBTU (0,283 g, 0,88 mmol) a DIPEA (0,414 g, 3,20 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Potom sa DMF odparil a zvyšok sa prečistil preparatívnou HPLC (CH₃CN:NH₄NOAc (10%), (42:58). CH₃CN sa odparil a vodný roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získala zlúčenina uvedená v podnázve (187 mg, 43%).

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 9,48 (b, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,43 (t, 1H), 7,34 (m, 5H),

7,20 (d 1H), 6,85 (d, 1 H), 6,80 (d, 1H), 5,21 (d, 2H), 4,62 (m, 1H), 4,40 (m, 2H), 4,02 (m, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,70 (dd, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,50 (m, 1H),

3,23 (m, 1H), 2.25 (m, 1H), 1,87 (m, 4H), 1,79 (m, 1H), 1,47 (d, 9H).

(ii) (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Pd/C (10%, 10 mg) sa pridalo k roztoku (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)- CH(CH₂OH) C(O)-Pro-Pab(Z) (270 mg, 0,42 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v 10 ml EtOH a HOAc (10 kvapiek). Reakčná zmes sa hydrogenovala (1 atm.) pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo. Roztok sa odparil, pridala sa voda a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 214 mg (100%) zlúčeniny uvedenej v podnázve, vo forme bielej penovitej látky.

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,75 (d, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,35 (d, 2H),

7,25 (m 2H), 7,05 (m, 1H), 4,50 (m, 2H), 4,10 (m, 2H), 3,90 (m, 2H), 1,45 (d, 9H).

(iii) (R,S)r3-Aminofenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Roztok (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab (172 mg, 0,42 mmol) v HCI (6M, 10 ml) sa miešal pri laboratórnej teplote počas 2 hodín a produkt sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 153 mg (76%, čistota 94,2%) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bielej látky.

¹H NMR (500 MHz, D₂O) δ 7,33 (m, 2H), 7,16 (t, 1 H), 7,02 (m, 5H), 4,07 (m, 3H),

3,84 (q 1H), 3,68 (m, 1H), 3,44 (m, 1 H), 3,24 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 1,83 (m, 1H),

1,50 (m, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, D₂O) 174,6, 174,3 (rotaméry a/alebo diastereoizoméry), 172,1,

171,9 (rotaméry a/alebo diastereoizoméry, 166,1.

Príklad 13 (S)- alebo (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OH

Roztok hydroxylamín hydrochloridu (149 mg_ľ 2,15 mmol) a TEA (725 mg, 7,16 mmol) v 11 ml THF sa sonifikoval počas 35 minút. Pridal sa (S)- alebo (R)-3metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (zlúčenina 10B z príkladu 10 uvedeného vyššie, 200 mg, 0,36 mmol) a zmes sa miešala pri teplote 40°C cez noc. Rozpúšťadlo sa odparilo a surový produkt sa prečistil najskôr okamžitou chromatografiou na silikagélovej kolóne eluovaním s gradientom CH₂CI₂:IPA: HOAc (100:0:0 -> 90:10:0 -> 80:20:2) a potom pomocou HPLC (CH₃CN:NH₄OHAc (0,1 M) (32,5:67,5)). Po vysušení vymrazením sa získalo 119 mg (75%) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

LC-MS m/z441 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7,64 (d, 2H), 7,38 (d, 2H), 7,27 (t, 1H), 6,93 (m, 2H),

6,87 (m 1H), 4,47 (s, 3H), 4,14 (dd, 1H), 4,03 (dd, 1H), 3,80 (s, 1H), 3,72 (dd, 1H),

3,38 (dt, 1H), 2,12 (m, 1H), 2,00 (m, 3H), 1,48 (m, 1H).

¹³C NMR (100 MHz, CD₃OD) amidínové a karbonylové uhlíky: 174,7, 173,4, 161,5.

Príklad 14 (S)- alebo (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et (i) (R)- a (S)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok (R,S)-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OTBTMS)-COOH (3 g, 9,66 mmol, z príkladu S uvedeného vyššie) v DMF (100 ml) sa ochladil ľadovou vodou a pridal sa HPro-Pab(Z) (4,8 g, 10,63 mmol, pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (3,4 g, 10,63 mg) a napokon DIPEA (5,0 mg, 38,65 mmol). Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 5 dní, roztok sa zahustil a zvyšok sa rozpustil v zmesi 400 ml vody a 200 ml EtOAc. Organická vrstva sa oddelila a vodná fáza sa extrahovala EtOAc (3 x 50 ml). Spojené organické fázy sa premyli dvakrát vodným NaHCO₃ (10%) a jedenkrát vodou, vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili. Surový produkt (6,25 g hnedého oleja) sa prečistil okamžitou chromatografiou na silikagéle (EtOAc:EtOH (95:5)), čím sa získalo 4,27 g hustého hnedého oleja. Táto látka sa ďalej prečistila pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄OHAc (10%) (70:30)), čím sa získali dva diastereoizoméry, zlúčenina 14A (1,49 g, rýchlejšie sa pohybujúci izomér) a zlúčenina 14B (1,0 g, pomalšie sa pohybujúci izomér).

LC-MS m/z 672,6 (M + 1)⁺ (racemát).

(ii) (S)- a (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OH

Roztok hydroxylamínu x HCI (0,43 g, 6,2 mmol) a TEA (2,1 g, 20,8 mmol) v THF (50 ml) sa sonifikoval počas 2 hodín, potom sa pridala zlúčenina 14B (0,70 g, 1,04 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie). Roztok sa miešal cez noc pri teplote 56°C. Po odparení sa produkt prečistil pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄OHAc (10%) (65:35)), čím sa získalo 0,396 g (69%) zlúčeniny uvedenej v podnázve, vo forme bieleho prášku.

Ή NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,89 (bt, 1H), 7,49 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 6,90 (s+d, 2H), 6,83 (m 1H), 4,93 (b, 2H), 4,66 (m, 2H), 4,24 (t, 1H), 4,20 (d, 1H), 3,88 (dd, 1 H), 3,81 (s, 3H), 3,74 (m, 2H), 3,34 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 1,82 (m, 2H), 0,83 (s, 9H), -0,05 (d, 6H).

(iii) (S)- aiebo (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et

Zmes (S)- alebo (R)-3-metoxyfenyl-CH(CH₂0TBTMS)-C(0)-Pro-Pab-0H (130 mg, 0,23 mmol, z kroku (ii) uvedeného vyššie), anhydrid kyseliny propiónovej (1 g, 7,7 mmol) a DMAP (9 mg, 0,07 mmol) sa miešal pri laboratórnej teplote počas 35 minút. Výsledná zmes sa potom odparila, čím sa získal žltý olej, ktorý sa prečistil pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄OHAc (10%) (70:30)), pričom sa získalo 75 mg (52%) zlúčeniny uvedenej v podnázve. (Čistota: 99,6%).

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,66 (d, 2H), 7,62 (t, 1H), 7,33 (d, 2H), 6,90 (s+d, 3H),

6,82 (m 1H), 5,04 (b, 2H), 4,63 (t, 1H), 4,59 (d, 1H), 4,30 (dd, 1H), 4,23 (t, 1H),

3,88 (dd, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,7 (m, 2H), 3,32 (m, 1H), 2,55 (q, 2H), 2,43 (m, 1H), 2,02 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 1,75 (m, 1H), 1,26 (t, 3H), 0,82 (s, 9H), -0,05 (d, 6H).

(iv) (S)- alebo (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(O)-Pro-Pab-OC(0)Et

TFA (0,2 ml) sa pridal k ľadovo ochladenému roztoku (S)- alebo (R)-3-metoxyfenylCH(CH₂OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et (75 mg, 0,12 mmol. z kroku (iii) uvedeného vyššie) v CH₂CI₂, Roztok sa miešal pri teplote 0§C počas 35 minút, potom sa roztok zalkalizoval pevným Na₂CO₃ a extrahoval s CH₂CI₂. Organické fázy sa spojili, premyli (voda), vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získal surový produkt. Po prečistení pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄OHAc (10%) (42:58)) a vysušení vymrazením sa získalo 41 mg (67%) produktu uvedeného v názve, vo forme bieleho prášku.

LC-MS m/z 497 (M + 1)⁺.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 7,66 (d, 2H), 7^34 (d, 2H), 6,83 (dd, 3H), 5,11 (b, 2H),

4,63 (dd 1H), 4,48 (ddd, 2H), 4,03 (dd, 1 H), 3,88 (dd, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,73 (dd, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,19 (m, 1 H), 2,54 (q, 2H), 2,35 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 1,82 (m, 2H), 1,27 (t, 3H).

Príklad 15 (S)- alebo (Rj-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH₃ (í) (S)- alebo (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH₃

Zmes (S)- alebo (R)-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OH (130 mg, 0,23 mmol, z príkladu 14(ii) uvedeného vyššie), anhydrid kyseliny octovej (1 ml, 10 mmol) a DMAP (9 mg, 0,07 mmol) sa miešal pri laboratórnej teplote počas 90 minút. Po odparení sa surový produkt prečistil pomocou RPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (10%) (60:40)), čím sa získalo 78 mg (57%) produktu uvedeného v podnázve.

LC-MS m/z 598 (M + 1)⁺.

(ii) (S)- alebo (R)-3-Metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab-OC(0)CH₃

K roztoku (S)- alebo (R)-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OC(O)CH₃) (125 mg, 0,21 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v CH₂CI₂ (2,5 ml), sa pridal TEA (0,2 ml) a zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 40 minút, roztok sa potom zalkalízoval vodným Na₂CO₃ a extrahoval dichlórmetánom. Organické vrstvy sa jedenkrát premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím poskytli 60 mg surového produktu. Po prečistení pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄OHAc (10%) (60:40)) a vysušení vymrazením sa získalo 36 mg (36%) produktu uvedeného v názve, vo forme bieleho prášku.

LC-MS m/z 484 (M+ 1)⁺.

Príklad 16

R)- alebo (S)-3-(Metylamino)fenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab x 2 HCI (i() (R,S)-((-3-Boc-metylamino)fenyl)-CH(CH₂OH)-C(.0)-Pro-Pab-(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-Boc-aminofenyl)propiónovej (0,28 g, 0,95 mmol z príkladu U uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x HCI (0,46, 0,88 mmol), TBTU (0,32 g, 1,0 mmol) a DIPEA (0,44 g, 3,4 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 dní. DMF sa potom odparil a zvyšok sa prečistil preparatívnou HPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (10%), 42:58). CH₃CN sa odparil a vodný roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získala zlúčenina uvedená v podnázve (220 mg, 43%).

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 7,28 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,42 (m, 2H), 7,33 (m, 3H),

7,28 (m, 3H), 7,23 (m, 1H), 7,12 (d, 2H), 5,20 (d, 2H), 4,60 (m, 1H), 4,40 (m, 2H),

4,03 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,72 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,14 (s, 3H), 2,25 (m, 1H),

1,85 (m, 4H), 1,43 (s, 9H).

(ii) (R)- a (S)-((-3-Boc-metylamino)fenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab

Pd/C (10%, 10 mg) sa pridalo k roztoku (R,S)-((-3-Boc-metylamino)fenyl)CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-(Z) (270 mg, 0,42 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v 10 ml EtOH a HOAc (10 kvapiek). Reakčná zmes sa hydrogenovala (1 atm.) pri laboratórnej teplote počas 2 hodín a výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo. Roztok sa odparil, pridala sa voda a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 214 mg (100%) surovej látky uvedenej v podnázve vo forme bieleho penovitého materiálu. Surový produkt sa prečistil pomocou RPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (0,1 M, 32:68), pričom sa diastereoizoméry oddelili. CH₃CN sa odparil a vodný roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získala zlúčenina 16A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér) a zlúčenina 16B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér).

Zlúčenina 16A ¹H NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,8 (d, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,2 (m, 4H), 4,6 (m, 2H), 4,3 (d, 1H), 4,15 (m, 2H), 3,85 (m, 2H), 3,55 (m, 1H), 2,95 (s, 2H), 2,3 (m, 1H), 2,0 (d, 5H),

1,4 (d, 9H).

Zlúčenina 16B ¹H NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,8 (d, 2H), 7,5 (d, 2H), 7,3 (m, 4H), 4,5 (m, 2H), 4,4 (d,

1H), 4,1 (m, 2H), 3,8 (m, 2H), 3,4 (m, 2H), 3,2 (s, 2H), 2,2 (m, 1H), 2,0 (d, 5H), 1,4 (d, 9H).

(iii) (R)- alebo (S)-3-(Metylamino)fenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

Roztok (Ŕ)- alebo (S)-((-3-Boc-metylamino)fenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab (zlúčenina 16B z kroku (ii) uvedeného vyššie, 172 mg, 0,42 mmol) v HCI (6M, 10 ml) sa miešala pri laboratórnej teplote počas 2 hodín a produkt sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 153 mg (76%, čistota 94,2%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej látky.

FAB-MS m/z 424 (M + 1)⁺.

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 8,77 (t, 1 H), 7,80 (d, 2H), 7,72 (d, 1 H), 7,63 (t, 1 H), 7,54 (d 2H), 7,50 (m, 2H), 4,55 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 4,46 (dd, 1H), 4,27 (t, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,88 (m, 2H), 3,66 (dd, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,13 (s, 3H), 2,22 (m, 1 H), 2,00 (m, 2H), 1,90 (m, 1H).

¹³C NMR (100 MHz, D₂O) 174,6 171,9, 166,6.

Príklad 17 (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) Kyselina (S)-tropová

Racemická kyselina tropová (10g, 47 mmol) sa rozpustila s použitím (1R:2R)-()-1-p-nitrofenyl-2-aminopropan-1,3-diolu (7,85 g, 47 mmol) podľa spôsobu opísaného G. Fodorom a kol. v Acta Chem. Hung. 28, 407 (1961), čím sa získalo 0,25 g (5%) zlúčeniny uvedenej v názve.

[a]°2o = -77°, c = 0,5 H₂O) (Lit. -72°) (ii) (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Pripravil sa roztok kyseliny (S)-tropovej (234 mg, 1,4 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), H-Pro-Pab(Z) (884 mg, 1,95 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a TEA (1 ml, 7 mmol) v dichlórmetáne (30 ml) a ochladil sa na teplotu 0°C. Potom sa pridal HBTU (570 mg, 1,5 mmol a roztok sa miešal cez noc. Rozpúšťadlo sa odparilo a surový produkt sa prečistil pomocou RPLC, čím sa získalo 0,50 g (68%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

LC-MS m/z 527 (M-1)'.

(iii) (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Roztok (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (220 mg, 0,42 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (25 ml) s Pd/C (10%, 161 mg) sa hydrogenoval pri atmosférickom tlaku pri laboratórnej teplote počas 18 hodín. Výsledný roztok sa prefiltroval cez Hyflo a odparil. Vzniknutá pevná látka sa rozpustila vo vode, pridal sa 1 ml 2M vodného roztoku HCI a roztok sa vysušil vymrazením. Získal sa produkt uvedený v názve vo forme bielej pevnej látky (132 mg, 80%).

LC-MS m/z 394,5 (M + 1)⁺.

Príklad 18 (R,S)-3,5-Dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3,5-Dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimetylfenyl)propiónovej (0,155 g, 0,8 mmol z príkladu H uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,387 g, 0,88 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie), potom sa pridal TBTU (0,283 g, 0,88 mmol) a následne DIPEA (0,414 g, 3,2 mmol) a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Roztok sa zahustil a výsledná reakčná zmes sa prečistila pomocou RPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (10%), (40:60)). CH₃CN sa odparil a vodná fáza sa extrahovala s EtOAc. Organická fáza sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila do sucha. Izoloval sa pevný produkt uvedený v podnázve (270 mg, 62%) vo forme bielej pevnej látky.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 8,27 (bt, 0,5H), 8,15 (bt, 0,5H), 7,80 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,34 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 6,91 (d, 1 H), 6,85 (s, 1 H), 6,65 (s, 1 H), 5,20 (d, 2H),

4,90 (m, 1H), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,1 -4,0 (m, 2H), 3,8 - 3,5 (m, 3H), 2,58 (m, 1H),

2,29 (s, 3H), 2,21 (s, 3H).

I (ii) (R,S)-3,5-Dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

K roztoku (R,S)-3,5-dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab-(Z) (0,229 g, 0,42 mmol z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) sa pridala kyselina octová (24μΙ) a Pd/C (5%, 0,115 g). Roztok sa hydrogenoval pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 2,5 hodín. Zmes sa prefiltrovala cez Hyflo a výsledný roztok sa zahustil, rozpustil v minimálnom množstve vody a vysušil vymrazením, čím sa získalo 0,174 g (88%, čistota 93,6%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky.

LC-MS m/z 409 (M + 1)⁺.

Príklad 19 (S)- alebo (R)-3-(Trifluórmetyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) (R)- a (S)-3-(trifluórmetyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-trifluórmetylfenyl)propiónovej (0,25 g, 1,07 mmol z príkladu I uvedeného vyššie), H-Pro-Pab(Z) (0,532 g, 1,17 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), a TBTU (0,377 g, 1,7 mmol) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C a následne sa pridal DIPEA (0,72 g, 4,27 mmol). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 40 hodín. Reakčná zmes sa zahustila, pridala sa voda a pH sa nastavilo na 9 (vodným NaHCO₃). Výsledná zmes sa extrahovala EtOAc (3 x 100 ml). Spojené organické fázy sa premyli soľankou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Preparatívnou HPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (0,1 M), (45:55)) sa získali dva diastereoizoméry. Zlúčenina 19A (87 mg, 0,15 mmol, čistota 94,4% pomocou HPLC, rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér) a zlúčenina 19B (120 mg, 0,20 mmol, čistota 91% pomocou HPLC, pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér).

LC-MS m/z 597 (M + 1)⁺ (obidva diastereoizoméry).

(ii) (S)- alebo (R)-3-(Trifluórmetyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Pd/C (10%) sa pridalo k roztoku (R)- alebo (S)-3-(trifluórmetyl)fenyl-CH(CH₂. OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (118 mg, 0,20 mmol, zlúčenina 19B z kroku (i) uvedeného vyššie), v EtOH (10 ml) a vodnom roztoku HCI (1M, 0,4 ml). Zmes sa hydrogenovala počas 3 hodín pri laboratórnej teplote a atmosférickom tlaku. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo a roztok sa odparil. Pridala sa voda a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 66 mg (66,9%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky (čistota 94,5%, (HPLC)).

LC-MS m/z 463 (M + 1)⁺.

Príklad 20 (R,S)-3-Hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)“Pro-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-Hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-hydroxyfenyl)propiónovej (0,146 g, 0,8 mmol z príkladu J uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Aze-Pab(Z) x HCI (0,399 g, 0,88 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie), a TBTU (0,283 g, 0,88 mmol) a roztok sa zahrieval pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Reakčná zmes sa zahustila, a výsledná zmes sa prečistila pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄OHAc (10%), (42:58)). CH₃CN sa odparil a vodný roztok sa vysušil vymrazení. Izoloval sa produkt uvedený v podnázve (187 mg, 43%) vo forme pevnej bielej látky.

¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 7,82 (d, 2H), 7,41 (m, 3H), 7,34 (m, 2H), 7,25 (d, 1H), 7,13 (t, 1H), 6,78 (s+d, 2H), 6,66 (d, 1 H). 5,18 (b, 2H), 4,5 (m, 2H), 4,07 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,5-3,3 (m, 2H), 3,30 (s, 1H), 2,22,0 (m, 2H), 1,95 (m, 3H), 1,81 (m, 1H).

(ii) (R,S)-3-Hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Kyselina octová (18 μΙ) a Pd/C (5%) sa pridalo k roztoku (R,S)-3-hydroxyfenylCH(CH₂.0H)-C(0)-Pro-Pab(Z) (0,173 g, 0,32 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), v EtOH (10 ml). Roztok sa hydrogenoval počas 3 hodín pri laboratórnej teplote a atmosférickom tlaku. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo a roztok sa zahustil, rozpustil v minimálnom množstve vody a vysušil vymrazením, čím sa získalo 0,133 mg (89%, čistota 94,2%) vločkových bielych kryštálov.

LC-MS m/z 411 (M + 1)⁺.

Príklad 21 (R)- alebo (S)-(3-Chlór-5-metylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) (R)- a (S)-(3-Chlór-5-metylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-chlór-5-metylfenyl)propiónovej (0,30 g,

1,4 mmol, z príkladu V uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x HCI (0,70 g, 1,54 mmol), TBTU (0,99 g, 1,5 mmol) a DIPEA (0,94 g, 5,5 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 4 dní. Potom sa DMF odparil, výsledná zmes sa vliala do vody (400 ml) a pH sa nastavilo na 9 s vodným roztokom NaHCO₃ (10%). Vodná zmes sa extrahovala s EtOAc (3 x 100 ml), spojené organické fázy sa premyli vodným roztokom NaHCO₃ (10%), vodou, soľankou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili. Surový produkt (0,674 g) sa prečistil pomocou RPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (10%), (45:55)), pričom sa oddelili vyššie uvedené diastereoizoméry. CH₃CN sa odparil a vodný roztok sa extrahoval s EtOAc. Organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a zahustili, čím sa získala zlúčenina 21A (125 mg, 31%, rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér) a zlúčenina 21B (102 mg, 25%, pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér).

Zlúčenina 21.B

FAB-MS (m/z) 577, 579 (M + 1)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,76 (d, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,30 (m, 5H), 7,07 (d, 2H),

6,95 (s, 1 H), 5,20 (s, 2H), 4,58 (dd, 1H), 4,42 (m, 2H), 3,97 (t, 1H), 3,85 (dd, 1H),

3,68 (m, 2H), 3.23 (m, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,25 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,85 (m, 4H).

(ii) (R)- alebo (S)-(3-Chlór-5-metylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Tioanizol (1,04 g, 8,86 mmol) sa pridal k roztoku (R)- alebo (S)-(3-chlór-5metylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (zlúčenina 21B z kroku (i) uvedeného vyššie, 0,102 g, 0,18 mmol) v 3,7 ml TFA. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 3 hodín. Výsledná zmes sa rozpustila vo vode, vodný roztok sa dvakrát premyl éterom a výsledný roztok sa vysušil vymrazením. Surový produkt sa prečistil pomocou preparatívnej HPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (0,1 M%), 35:65). CH₃CN sa odparil a vodný roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 50 mg (59%) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bieleho prášku.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 9,23 (b, 2H), 8,74 (b, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,18 (s, 1H), 7,12 (m, 2H), 4,52 (s, 2H), 4,46 (dd, 1H), 4,06 (m, 2H), 3,89 (m, 1H), 3,72 (m, 1H), 3,39 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,15 (m, 1H), 1,98 (m, 2H), 1,87 (m, 1H).

¹³C NMR (100 MHz, CD₃OD) 174,9, 173,1, 168,3.

Príklad 22 (S)- alebo (R)-3-Fluórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) (R)- a (S)-3-Fluórfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-fluórfenyl)propiónovej (0,2 g, 1,09 mmol, z príkladu K uvedeného vyššie), H-Pro-Pab(Z) (0,542 g, 1,19 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a TBTU (0,383 g, 1,19 mmol) v DMF (10ml) sa ochladil na teplotu 0°C a pridal sa DIPEA (0,73 g, 4,34 mmol). Výsledná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 22 hodín. Reakčná zmes sa zahustila, pridala sa voda (400 ml) a pH sa nastavilo na 9 s vodným roztokom NaHCO₃ (10%). Spojené organické fázy sa premyli vodným roztokom NaHCO₃, vodou, a potom soľankou, vysušili sa (Na₂SO₄) a zahustili. Výsledná zmes sa potom extrahovala s EtOAc (3 x 100 ml). Pomocou RPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (0,1 M), (45:55)), sa oddelili dva diastereoizoméry: zlúčenina 22A (85 mg, 0,16 mmol, čistota 90% pomocou HPLC, rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér) a zlúčenina 22B (95 mg, 0,17 mmol, čistota 91% pomocou HPLC, pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér).

LC-MS m/z 547 (M + 1)⁺ (obidva diastereoizoméry).

(ii) (S)- alebo (R)-3-Fluórfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Pd/C (10%) sa pridalo k roztoku zlúčeniny 22B (85 mg, 0,16 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) a vodného roztoku HCI (1M, 0,4 ml), a zmes sa hydrogenovala počas 3 hodín pri laboratórnej teplote a atmosférickom tlaku. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo a roztok sa odparil. Pridala sa voda a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 62,9 mg (90,1%) bielej pevnej látky (čistota 93,3% (HPLC)).

LC-MS m/z 413 (M + 1)⁺.

Príklad 23 (S)- a (R)-3-Chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-Chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-chlórfenyl)propiónovej (0,30 g, 1,5 mmol, z príkladu L uvedeného vyššie), H-Pro-Pab(Z) (0,77 g, 1,7 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a TBTU (0,55 g, 1,7 mmol) a DIPEA (0,41 g, 3,2 mmol) v DMF (20 ml) sa miešal počas 2 dní. Výsledná zmes sa extrahovala zmesou toluén:EtOAc (1:1, 300 ml), organické vrstvy sa spojili , premyli vodným roztokom NaHCO₃ a vodou, vysušil (Na₂SO₄) a odparili. Okamžitá chromatografia (silikagél, CH₂Ci₂:THF (7:3)) poskytla 0,50 g (59%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

FAB-MS m/z 562,4, 564,5 (M + 1)⁺.

(ii) (R)- alebo (S)-3-Chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

Kyselina trifluórmetansulfónová (0,2 g, 1,3 mmol) sa pridala k roztoku (R,S)-3chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,15 g, 0,27 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v CH₂CI₂ a anizole (43 mg, 0,40 mmol). Výsledná zmes sa miešala počas 1 hodiny a potom sa zahustila. Pridala sa voda a pH vodného roztoku sa upravilo na približne 9 vodným NaHCO₃. Vodná fáza sa premyla éterom a vysušila vymrazením, čím sa získal produkt. Pomocou RPLC sa separovali dva diastereoizoméry: zlúčenina 23A (11 mg, 19%, čistota 81,7%, pomocou HPLC, rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér) a zlúčenina 23B (11 mg, 19%, čistota 90,0%, pomocou HPLC, pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér).

Zlúčenina 23A

LC-MS m/z 428,4 (M + 1)⁺.

Zlúčenina 23B

FAB-MS m/z 431 (M + 1)⁺.

Príklad 24 (R,S)-3,5-Dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) (R,S)-(3,5-Dimetylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimetylfenyl)propiónovej (0,155 g, 0,8 mmol, z príkladu H uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,399 g, 0,88 mmol, pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,283 g, 0,88 mmol) a DIPEA (0,414 g, 3,2 mmol) (v takomto poradí) a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 5 dní. Reakčná zmes sa zahustila a zvyšok sa prečistil pomocou RPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (10%), (40:60)). CH₃CN sa odparil a vodná fáza sa extrahovala s EtOAc. Organická fáza sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila do sucha. Izoloval sa produkt uvedený v podnázve (300 mg, 97%), vo forme svetložltej pevnej látky.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 7,83 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,32 (m, 6H), 6,88 (s, 1H), 6,84 (s, 1 H), 6,78 (s, 1 H), 5,21 (d, 2H), 4,75 - 4,30 (m, 3H), 4,04 (m, 1 H), 3,83 (m, 1H), 3,74 (dt 1H), 3,63 (m, 1H), 3,47 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 1,95-1,75 (m, 3H).

(ii) (R,S)-(3,5-Dimetylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pabx HOAc

Kyselina octová (29 μΙ) a Pd/C (5%, 0,140 g) sa pridali k roztoku (R,S)-(3,5dimetylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,280 g, 0,50 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml). Roztok sa hydrogenoval pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 2,5 hodín. Zmes sa potom prefiltrovala cez Hyflo a výsledný roztok sa zahustil, rozpustil v minimálnom množstve vody a vysušil vymrazením, čím sa získalo 0,174 g produktu (88%, čistota 92,1%) vo forme bielych kryštálov.

LC-MS m/z 423 (M + 1)⁺.

¹³C NMR (100 MHz, D₂O) karbonylové a amidínové uhlíky, diastereoizoméry a/alebo rotaméry) 174,93, 173,17, 173,02, 166,55, 166,40.

Príklad 25 (S)- alebo (R)-3,5-Bis(trifluórmetyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) (R)- a (S)-2-(3,5-BÍs(trifluórmetyl)fenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny 3-hydroxy-2-(3,5-bis(trifluórmetyl)fenyl)propiónovej (284 mg, 0,94 mmol, z príkladu M uvedeného vyššie), H-Pro-Pab(Z) x 2HCI (468 mg, 1,03 mmol, pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a TBTU (332 mg, 1,03 mmol) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C a pridal sa DIPEA (485 mg, 3,76 mmol). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 60 hodín. Roztok sa vlial do 400 ml vody, pH sa nastavilo na hodnotu 9 (pomocou vodného roztoku NaHCO₃) a roztok sa extrahoval s EtOAc (3 x 100 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodným roztokom NaHCO₃, vodou a soľankou, vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili. Pomocou preparatívnej HPLC (CH₃CN:NH₄OHAc (0,1M), (55:45)), sa oddelili dva diastereoizoméry: zlúčenina 25A (161 mg, 0,24 mmol, čistota 86,9% pomocou HPLC, rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér) a zlúčenina 25B (241 mg, 0,36 mmol, čistota 90,9% pomocou HPLC, pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér).

Zlúčenina 25B ¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 7,80 (s, 3H), 7,67 (d, 2H), 7,56 (t, 1H), 7,41 (dd, 2H),

7,39 - 7,28 (m, 3H), 7,21 (d, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,57 (dd, 1H), 4,33 (m, 2H), 4,12 (m, 1H), 3,96 (t ,1H), 3,84 (m, 1H), 3,77 (dd, 1 H), 3,36 (dd, 1H), 2,17 (m, 1H), 2,10 -1,87 (m, 4H).

(ii) (S)- alebo (R)-3,5-Bis(trifluórmetyl)fenyl-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab

Pd/C (10%) sa pridalo k roztoku zlúčeniny 25B (235 mg, 0,35 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) a vodného roztoku HCI (1M, 0,7 ml). Zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 3 hodín. Reakčná zmes sa potom prefiltrovala a zahustila, pridala sa voda a výsledný roztok sa vysušil vymrazením, čím poskytol 174 mg (83,3%) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bielej penovitej látky (čistota 92,7%, pomocou HPLC).

LC-MS m/z 531 (M + 1)⁺.

Príklad 26 (R,S)-3-Metoxy-5-metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) (R,S)-(3-Metoxy-5-metylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Zmes kyseliny 3-hydroxy-2-(3-metoxy-5-metylfenyl)propiónovej (0,19 g, 0,9 mmol, z príkladu N uvedeného vyššie), H-Aze-Pab(Z) x 2HCI (0,35 g, 0,99 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie) a TBTU (0,32 g, 0,99 mmol) v CH₂Ci₂ sa ochladila na ľadovom kúpeli a pridal sa DIPEA (0,47 g, 3,7 mmol). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc, potom sa CH₂CI₂ odparil a surová zmes sa chromatografovala s použitím okamžitej chromatografie (CH₂CI₂:THF:MeOH (11:2:1), silikagél). Spojené frakcie sa rozpustili vo vode a mierne zakalený vodný roztok sa extrahoval s EtOAc. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získalo 0,18 g, (35%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 9,5 (b, 1H), 7,77 (dd, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,3 - 7,21 (m, 6H), 6,63 (d, 1H), 6,59 (m, 1H), 5,20 (d, 2H), 4,67 (d, 0,5H), 4,58 (dd, 0,5H), 4,40 (m, 2H), 4,07 (dd ,0,5H), 4,00 (dd, 0,5H), 3,82 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,69 (m, 2H), /'

3,48 (m, 1 H), 3,21 (m, 1 H), 2,28 (s, 3H), 2,05 - 1,94 (m, 1 H), 1,95 - 1,75 (m, 3H).

(ii) (R,S)-(3-Metoxy-5-metylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Zmes (R,S)-(3-Metoxy-5-metylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (100 mg, 0,17 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), koncentrovaný vodný HCI (10 kvapiek) a Pd/C (10%) v 10 ml EtOH sa hydrogenovalo pri laboratórnej teplote a atmosférickom tlaku počas 2 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo, zahustila a rozpustila v minimálnom množstve vody. Vysušenie vymrazením poskytlo 75 mg (90%) zlúčeniny uvedenej v názve (čistota 92% pomocou HPLC).

LC-MS m/z 440 (M + 1)⁺.

Príklad 27 (R,S)-(2,5-Dimetoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) (R,S)-(2,5-Dimetoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2,5-dimetoxyfenyl)propiónovej (0,23 g, 1,0 mmol, z príkladu Ó uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,500 g, 1,1 mmol, pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,353 g, 1,1 mmol) a DIPEA (0,517 g, 4,0 mmol) (v takomto poradí) a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 3 dní. DMF sa odparil a výsledná zmes sa prečistila pomocou RPLC (CH₃CN:-NH₄OHAc (10%), (40:60)). CH₃CN sa odparil a vodná fáza sa extrahovala s EtOAc. Organická fáza sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila do sucha. Izoloval sa produkt uvedený v podnázve (400 mg, 68%), vo forme svetloružovej pevnej látky.

¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 7,19 (d, 3H), 7,43 (dd, 1H), 7,43 (dt, 1H), 7,30 (d, 1H),

6,82 - 6,72 (m, 4H), 6,68 (d, 1 H), 5,20 (d, 3H), 4,70 - 4,57 (m, 1 H), 4,52 - 4,30 (m, 5H), 3,96 (m, 1H), 3,72 (s 3H), 3,70 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,65 - 3,45 (m, 2H), 3,18 - 3,02 (m, 1 H), 2,29 (m, 1 H), 2,04 - 1,96 (m, 1 H), 1,95 - 1,74 (m, 4H).

(ii) (R,S)-(2,5-Dimetoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Kyselina octová (36 μΙ) a Pd/C (5%, 0,190 g) sa pridali k roztoku (R,S)-(2,5dimetoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,375 g, 0,64 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml). Roztok sa hydrogenoval pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 3,5 hodín. Zmes sa potom prefiltrovala cez Hyflo a výsledný roztok sa zahustil, rozpustil v minimálnom množstve vody a vysušil vymrazením, čím sa získalo 0,174 g produktu (88%, čistota 92,1%) vo forme bielych kryštálov.

LC-MS m/z 455 (M + 1)⁺.

Príklad 28 (R,S)-(3,5-Dimetoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) (R,S)-(3,5-Dimetoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Zmes kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimetoxyfenyl)propiónovej (0,18 g, 0,8 mmol, z príkladu P uvedeného vyššie), H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,40 g, 0,88 mmol, pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a TBTU (0,28 g, 0,88 mmol) v 10 ml DMF sa ochladil na ľadovom kúpeli a pridal sa DIPEA (0,39 g, 3,0 mmol). Zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc, potom sa reakčná zmes zahustila. Surový produkt sa podrobil okamžitej chromatografii (CH₂CI₂:THF:MeOH (10:3:1), silikagél). K spojeným frakciám sa pridala voda a výsledná zmes sa extrahovala etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získalo 0,32 g (68%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (500 MHz, CDCb) δ 7,76 (t, 1H), 7,43 (dd, 1H), 7,37 - 7,20 (m, 6H), 6,40 (d, 2H), 5,20 (d, 2H), 4,65 - 4,56 (m, 2H), 4,48 - 4,32 (m, 2H), 4,09 - 3,98 (m, 4H),

S9

3,82 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,66 (s 3H), 3,52 - 3,45 (m, 1H), 3,28 - 3,21 (m, 1H), 2,30-2,18 (m, 1H), 2,04-1,76 (m, 5H).

(ii) (R,S)-(3,5-Dimetoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Koncentrovaná kyselina chlorovodíková (10 kvapiek) a Pd/C (10%) sa pridali k roztoku (R,S)-(3,5-dimetoxyfenyl)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,16g, 0,27 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml). Zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 2 hodín. Výsledná zmes sa potom prefiltrovala cez Hyflo a odparila do sucha, čím sa získalo 0,14 g (100%) zlúčeniny uvedenej v názve (čistota 94,2%, stanovené pomocou HPLC).

FAB-MS m/z 455 (M + 1)⁺.

Príklad 29 (R,S)-(3,4-Metylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) (R,S)-(3,4-Metylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,4-metylendioxyfenyl)propiónovej (0,21 g, 1,0 mmol, z príkladu Q uvedeného vyššie), H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,50 g, 1,1 mmol, pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,35 g, 1,1 mmol) a DIPEA (0,47 g, 3,7 mmol) v dichlórmetáne (10 ml) sa miešal počas 7 dní. Výsledná zmes sa odparila a surový produkt sa prečistil okamžitou chromatografiou (CH₂CI₂:THF (7:3)). Príslušné spojené frakcie sa zahustili a surový produkt sa rozpustil v EtOAc. Roztok sa premyl vodou, vysušil (Na₂SO4) a odparil, čím sa získalo 0,28 g (49%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 7,79 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,42 (m, 2H), 7,36 - 7,25 (m, 4H), 7,22 (dd, 2H), 6,76 - 7,57 (m, 3H), 5,91 (s, 2H), 5,87 (dd, 1H), 5,19 (d, 2H), 4,62 - 4,52 (m, 1 H), 4,45 - 4,30 (m, 1 H), 4,00 - 3,90 (m, 1 H), 3,84 - 3,74 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 2,28 -2,23 (m, 1H), 2,23-2,15 (m, 1H), 2,03 1,75 (m, 4H).

(ii) (R,S)-(3,4-Metylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Koncentrovaná kyselina chlorovodíková (6 kvapiek) a Pd/C (10%) sa pridali k roztoku (R,S)-(3,4-metylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (90 mg, 0,16 mmol, ž kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml). Zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 2 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo a odparila do sucha, čím sa získalo 69 mg (92%) zlúčeniny uvedenej v názve.

FAB-MS m/z 439 (M + 1)⁺.

¹³C NMR (100 MHz, CDCI₃) (karbonylové a amidínové uhlíky, komplex rotamérov a/alebo diastereoizomérov) 174,96, 174,,79, 173,04, 166,58, 172,99, 166,45.

Príklad 30 (S)- alebo (R)-3-(1-Naftyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab (i) (R)- a (S)-3-(1-Naftyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(1-naftyl)propiónovej (0,3 g, 1,39 mmol, z príkladu R uvedeného vyššie), H-Pro-Pab(Z) (0,692 g, 1,53 mmol, pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a TBTU (0,490 g, 1,53 mmol) v 10 ml DMF sa ochladil na teplotu 0°C a pridal sa DIPEA (0,93 g, 5,55 mmol). Výsledná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 60 hodín. DMF sa potom čiastočne odparil a zvyšok sa vlial do 400 ml vody. pH sa nastavilo na hodnotu 9 (vodným roztokom NaHCO₃) a roztok sa extrahoval 3 x 100 ml EtOAc. Spojené organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃, vodou a soľankou, vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili. Preparatívnou HPLC (CH₃CN:NH₄OAc (0,1 M) (45:55), sa oddelili dva diastereoizoméry: zlúčenina 30A (262 mg, 0,45 mmol, čistota 92,4%, pomocou HPLC, rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér) a zlúčenina 30B (199 mg, 0,34 mmol, čistota 99,9%, pomocou HPLC, pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér).

LC-MS m/z 580 (M + 1)⁺ (obidva diastereoizoméry).

(ii) (S)- alebo (R)-3-(1-Naftyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Pd/C (10%) sa pridalo k roztoku zlúčeniny 30B (190 mg, 0,16 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) a vodnej HCI (1M, 0,66 ml) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 3 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo a roztok sa odparil. Pridala sa voda a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 157 mg (99,4%) bielej penovitej látky (čistota 99,8%, stanovené pomocou HPLC).

LC-MS m/z 445 (M + 1)⁺.

Príklad 31 (R,S)-3,5-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3,5-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimetoxyfenyl)propiónovej (0,27 g, 1,2 mmol, z príkladu W uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,57 g, 1,3 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie),

I

TBTU (0,42 g, 1,3 mmol) a DIPEA (0,54 g, 4,2 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 2 dní. DMF sa potom odparil, surový produkt sa prečistil pomocou okamžitej chromatografie na silikagélovej kolóne eluovaním s CH₂CI₂:THF:MeOH (80:30:5), čím sa získalo 230 mg (34%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 8,20 (d, 1H), 7,75 (t, 2H), 7,40 (t, 2H), 7,30 (m, 5H),

6,40 (s, 1H), 6,37 (m, 1H), 6,30 (s, 1H), 5,20 (d, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,40 (m, 2H), 4,05 (m, 2H), 3,75 (s, 6H), 3,65 (s, 3H), 2,55 (m, 1 H), 2,35 (m, 1 H).

(íi) (R,S)-3,5-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (10%) sa pridalo k roztoku (R,S)-3,5-dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)Aze-Pab(Z) (270 mg, 0,42 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) a HOAc (10 kvapiek) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 2 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo. Roztok sa odparil, pridala sa voda a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 170 mg (89%) zlúčeniny uvedenej v názve.

FAB-MS m/z 441 (Μ + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,8 (m, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,57 (m, 1H), 7,39 (d, 1H),

6,60 (m, 1H), 6,54 (m, 1H), 6,45 (m, 1H), 5,00 (m, 1H), 4,5 (m, 3H), 4,10 (m, 3H),

3,80 (m, 9H), 2,60 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 1,95 (s, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, D₂O) karbonylové a amidínové uhlíky: δ 182,0, 174,4, 174,0 (rotaméry a/alebo diastereoizoméry), 173,2, 172,9, 172,8 (rotaméry a/alebo diastereoizoméry)

Príklad 32 (R,S)-2-Chlór-5-aminofenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-2-Chlór-5-(Boc-amino)fenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2-chlór-5-(Boc-amino)fenyl)propiónovej (0,22 g, 0,7 mmol, z príkladu X uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,32 g, 0,75 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie), TBTU (0,24 g, 0,75 mmol) a DIPEA (0,32 g, 2,5 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 2 dní. DMF sa potom odparil, surový produkt sa prečistil pomocou okamžitej chromatografie na silikagélovej kolóne eluovaním s CH₂CI₂:THF:MeOH (85:15:5), čím sa získalo 180 mg (39%) zlúčeniny uvedenej v podnázve.

¹H NMR (5300 MHz, CDCb) δ 9,45 (b, 1H), 8,23 (m, 0,5H), 7,95 (m, 0,5H), 7,65 (m, 3H), 7,20 (m, 10H), 5,15 (d, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,5 -3,6 (m, 9H), 2,40 (m, 2H), 1,45 (s, 9H).

(ii) (R,S)-2-Chlór-5-aminofenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v príklade 23(ii) uvedenom vyššie z (R,S)-2-chlór-5-(Boc-amino)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (170 mg, 0,26 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie), TFA (5,3 ml, 69 mmol) a tioanizolu (1,6 g, 13 mmol), pričom sa získalo 40 mg (32%) produktu uvedeného v názve.

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,62 (m, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,05 (t, 1H), 6,60 (m, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,41 (s, 1H), 3,90 (m, 3H), 3,65 (m, 1H),

3.60 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,80 (s, 3H).

Príklad 33 >

(S)- a (R)-3-Metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-Metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metylfenyl)propiónovej (0,18 g, 1 mmol, z príkladu Y uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,48 g, 1,1 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie), TBTU (0,35 g, 1,1 mmol) a DIPEA (0,52 g, 4 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 2 dní. DMF sa potom odparil a výsledný materiál sa rozpustil vo vodnom NaHCO₃ (300 ml) a pridal sa EtOAc (100 ml). Fázy sa oddelili a vodná fáza sa extrahovala s EtOAc (4 x 75 ml). Spojené fázy sa premyli vodným NaHCO₃ (1 x 75 ml), vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Surový produkt (0,3

g) sa prečistil pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄OAc (10%) (40:60)), čím sa získalo 118 mg (20%) produktu uvedeného v podnázve.

LC-MS m/z 528 (M + 1)^{+ 1}H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 8,25 (m, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,40 (m, 8H), 7,12 (m, 4H),

5,25 (s, 2H), 4,93 (m, 1H), 4,50 (m, 2H), 4,10 (m, 2H), 3,70 (m, 2H), 3,60 (m, 1H),

2.60 (m, 1H), 2,35 (s, 3H).

(ii) (S)- a (R)-3-Metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (5%, 0,13 g) sa pridalo k roztoku (R,S)-3-metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-AzePab(Z) (114 mg, 0,22 mmol, z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) a HOAc (17 pl) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 3 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo. Roztok sa odparil, pridala sa voda, zmes sa premyla s EtOAc a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 48 mg surového produktu. Pomocou RPLC (CH₃CN:NH₄OAc (10%) (20:80), sa oddelili dva diastereoizoméry: zlúčenina 33A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizo94 mér, 17 mg) a zlúčenina 33B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, 15 mg, čistota 99,1%).

Zlúčenina 33A

LC-MS m/z 395 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,80 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,35 (d, 1H),

7,24 (m, 2H), 7,17 (d, 1H), 5,17 (m, 0,5H), 4,80 (m, 0,5H), 4,60 (s, 2H), 4,2 - 3,6 (m, 5H), 2,60 (m, 1 H), 2,36 (s, 2H), 2,30 (s, 2H), 2,22 (m, 1 H), 1,93 (s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, D₂O) karbonylové a amidínové uhlíky: δ 175,7, 174,6 (rotaméry), 173,5, 173,0 (rotaméry)

Príklad 34 (S)- alebo (R)-2,5-Dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) (R) a (S)-2,5-Dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2,5-dimetylfenyl)propiónovej (0,27 g, 1,2 mmol, z príkladu Z uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu O’C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,75 g, 1,65 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,53 g, 1,65 mmol) a DIPEA (0,78 g, 6 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 2 dní. DMF sa potom odparil, pridal sa vodný roztok NaHCO₃ a vodný roztok sa extrahoval s EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃ (2 x 20 ml), vysušili (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 0,35 g (42%) surového produktu. Pomocou preparatívnej HPLC (CH₃CN:NH₄OAc (10%) (45:55 až 80:20)) sa oddelili dva diastereoizoméry: zlúčenina 34A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér, 136 mg, 32%, čistota 97,6%) a zlúčenina 34B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, 197 mg, 47%, čistota 98,4%).

Zlúčenina 34B ¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 7,83 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,40 (m, 1 H), 7,35 (m, 4H), 7,08 (d, 1H), 6,99 (d, 1H), 5,22 (s, 2H), 4,63 (d, 1H), 4,49 (m, 2H), 4,04 (dd, 1H),

3,95 (dd, 1H), 3,61 (dd, 1H), 3,53 (dt, 1H), 2,92 (m, 1H), 2,34 (3H), 2,32 (m, 1H),

2,26 (s, 3H), 1,73 (m, 3H).

(ii) (S)- alebo (R)-2,5-Dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

K roztoku (R) alebo (S)-2,5-dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (61 mg, 0,11 mmol, zlúčenina 34B z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) a HOAc (10 kvapiek) sa pridalo Pd/C (5%, 45 mg) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 5 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo, roztok sa zahustil, pridala sa voda, a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 45 mg (89%, čistota 97,8%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bieleho prášku.

LC-MS m/z 423 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,65 (d, 2H), 7,56 (d, 1H), 7,40 (d, 2H), 7,10 (m, 2H), 7,00 (m, 2H), 4,41 (s, 2H), 4,32 (dd, 1H), 4,11 (dd, 1H), 3,91 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,55 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,05 (m, 1H), 1,80 (m, 6H), 1,65 (m, 2H).

Príklad 35 (S)- alebo (R)-4-Hydroxy-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) (R) a (S)-4-Benzyloxy-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(4-benzyloxy-3-metoxyfenyl)propiónovej (0,27 g, 1,2 mmol, z príkladu AA uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,66 g, 1,46 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,467 g, 1,45 mmol) a DIPEA (0,69 g, 5,29 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 3 dní. DMF sa potom odparil, pridal sa vodný roztok NaHCO₃ a vodný roztok sa extrahoval s EtOAc (3 x 100 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃ (1 x 20 ml), vodou a soľankou, vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 0,983 g (kvantitatívny výťažok) surového produktu. Pomocou preparatívnej HPLC (CH₃CN:NH₄OAc (10%) (50:50)) sa oddelili dva diastereoizoméry: zlúčenina 35A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér, 136 mg, 32%, čistota 98,5%) a zlúčenina 35B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, 163 mg, 47%, čistota 99,2%).

Zlúčenina 35B ¹H NMR (400 MHz, CDCb) δ 7,77 (d, 2H), 7,42 (m, 4H), 7,34 (m, 9H), 6,81 (m, 2H),

6,70 (dd, 1 H), 5,20 (s, 2H), 5,11 (s, 2H), 4,59 (m, 1H), 4,44 (m, 2H), 4,00 (m, 1H),

3,83 (m, 1H), 3,66 (m, 2H), 3,23 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 2,01 (m, 2H), 1,81 (m, 3H).

(ii) (S)- alebo (R)-4-Hydroxy-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

K roztoku (R) alebo (S)-4-benzyloxy-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (157 mg, 0,24 mmol, zlúčenina 35B z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) a HCI (1M, 0,5 ml) sa pridalo Pd/C (10%) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 4,5 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo, roztok sa zahustil, pridala sa voda, a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 104 mg (90,9%, čistota 97,4%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bieleho prášku.

LC-MS m/z 441 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,70 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 6,90 (s, 1H), 6,75 (s, 2H),

4,51 (s, 2H), 4,44 (dd, 1H), 4,07 (m, 1H), 3,95 (dd, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,67 (dd, 2H),

3,40 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 2,11 (m, 1H), 1,97 (m, 1H), 1,82 (m, 1H).

¹³C NMR (100 MHz, D₂O) karbonylové a amidínové uhlíky: δ 174,8, 173,9 173,1,

166,3 (rotaméry).

Príklad 36 (S)- alebo (R)-3,5-Dichlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) (R) a (S)-3,5-Dichlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dichlórfenyl)propiónovej (0,35 g, 1,5 mmol, z príkladu AB uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,75 g, 1,65 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,53 g, 1,65 mmol) a DIPEA (0,78 g, 6 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote cez noc. DMF sa odparil, pridala sa voda a vodný roztok sa extrahoval s EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃ (2 x 20 ml), vodou, vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 0,32 g (36%) surového produktu. Okamžitou chromatografiou na silikagéle (110 g) s použitím gradientu od 100% EtOAc do EtOAc:EtOH (100:5) sa oddelili diastereoizoméry: zlúčenina 36A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér, 153 mg, 34%, čistota 89,2%) a zlúčenina 36B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, 166 mg, 37%, čistota 85,2%).

Zlúčenina 36B ¹H NMR (500 MHz, CDCI₃) δ 7,73 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 2H), 7,19 (d, 2H), 5,20 (s, 2H), ,4,56 (dd, 1H), 4,40 (m, 2H), 3,91 (m, 2H), 3,72 (m, 2H),

3,60 (b, 1H), 3,27 (q, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,94 (m, 1H), 1,89 (m, 1H),

1,75 (b, 1 H).

(ii) (S)- alebo (R)-3,5-Dichlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v príklade 23(ii) z (R) alebo (S)-3,5dichlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (130 mg, 0,22 mmol, zlúčenina 36B z kroku (i) uvedeného vyššie), anizolu (35 mg, 0,33 mmol) a kyseliny trifluórmetansulfónovej (0,16 g, 1,1 mmol), čím sa získalo 15 mg (13%) zlúčeniny uvedenej v názve.

LC-MS m/z 463, 465 (M + 1)^{+ 1}H NMR (500 MHz, D₂O) δ 7,64 (d, 2H), 7,56 (d, 1H), 7,38 (t, 1H), 7,34 (t, 1H), 7,21 (d, 2H), 7,07 (s, 1H), 4,39 (d, 1H), 4,30 (dd, 1H), 4,00 (m, 3H), 3,68 (m, 2H), 3,50 (m, 1H), 3,26 (m, 1 H), 2,10 (m, 1 H), 2,08 (m, 1H), 1,81 (m, 3H), 1,73 (m, 1H).

Príklad 37 (S)- alebo (R)-2,3-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) (R) a (S)-2,3-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2,3-dimetoxyfenyl)propiónovej (0,21 g, 0,93 mmol, z príkladu AC uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,46 g, 1,02 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,32 g, 1,0 mmol) a DIPEA (0,48 g, 3,7 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote cez noc. DMF sa odparil, pridal sa vodný roztok NaHCO₃ a vodný roztok sa extrahoval s EtOAc (4 x 50 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃ (2 x 20 ml), vodou, vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 0,34 g (62%) surového produktu. Preparatívnou HPLC (CH₃CN:NH₄OAc (10%) (40:60)) sa oddelili diastereoizoméry: zlúčenina 37A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér, 70 mg, 24%) a zlúčenina 37B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, 57 mg, 21%).

Zlúčenina 37B

LC-MS m/z 590 (M + 1)⁺ (ii) (S)- alebo (R)-2₁3-Dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

K roztoku (R) alebo (S)-2,3-dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (57 mg, 0,097 mmol, zlúčenina 37B z kroku (i) uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) a HOAc (15 mg) sa pridalo Pd/C (5%, 44 mg) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 4,5 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo, roztok sa zahustil, pridala sa voda, a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 44 mg (88%, čistota 97,2%) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bieleho prášku.

LC-MS m/z 455 (M + 1)^{+ 1}H NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,78 (d, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,20 (m, 2H), 6,90 (d, 1H), 4,50 (s, 2H), 4,40 (m, 4H), 4,08 (m, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,80 (m, 6H),

3,32 (m, 1H), 2,18 (m, 1H), 1,92 (m, 3H).

Príklad 38 (S)- alebo (R)-3-Metoxy-5-chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) (R) a (S)-3-Metoxy-5-cľilórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-metoxy-5-chlórfenyl)propiónovej (0,112 g, 0,49 mmol, z príkladu AD uvedeného vyššie) v DMF (4 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,242 g, 0,53 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,171g, 0,53 mmol) a DIPEA (0,33 g, 2,12 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 5 dní. DMF sa odparil, pridala sa voda, pH roztoku sa nastavilo na hodnotu 9 (vodným roztokom NaHC0₃) a vodný roztok sa extrahoval s EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃ (2 x 20 ml), vodou a soľankou, vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získalo 0,242 g (83%) surového produktu. Pomocou preparatívnej HPLC (CH3CN: 10% NH₄OAc (45:55)) sa oddelili diastereoizoméry: zlúčenina 38A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér, 50 mg, 33%) a zlúčenina 38B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, 44,8 mg, 31%).

Zlúčenina 38B

LC-MS m/z 592, 594 (M + 1)⁺ (ii) (S)- alebo (R)-3-Metoxy-5-chlórfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab x HCI

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v príklade 23(ii) z (R) alebo (S)-3-metoxy-5chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (zlúčenina 38B z kroku (i) uvedeného vyššie, 44mg, 0,074 mmol), TFA (1,53ml, 20 mmol) a tioanizolu (0,44 ml, 3,7mmol), čím sa získalo 18 mg (49%) zlúčeniny uvedenej v názve, s čistotou 93,5%.

¹H NMR (500 MHz, CD₂OD) δ 9,24 (b, 1H), 8,73 (b, 1H), 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H),

6,96 (t, 1H), 6,86 (m, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,45 (dd, 1H), 4,04 (m, 2H), 3,86 (m, 1H),

3,71 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 2,15 (m, 1H), 1,99 (m, 2H), 1,87 (m, 1H).

Príklad 39

100 (S)- alebo (R)-2-Metyl-5-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) (R) a (S)-2-Metyl-5-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2-metyl-5-metoxyfenyl)propiónovej (0,168 g, 0,8 mmol, z príkladu AE uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,399 g, 0,88 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,283g, 0,88 mmol) a DIPEA (0,414 g, 3,2 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 3 dní. DMF sa odparil, pridala sa voda a vodný roztok sa extrahoval s EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické fázy sa vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Pomocou preparatívnej HPLC (CH₃CN: 10% NH₄OAc (40:60)) sa oddelili diastereoizoméry: zlúčenina 39A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér, 147 mg, 64%, čistota 92,8%) a zlúčenina 39B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, 147 mg, 64%, čistota 99,1%).

Zlúčenina 39B

LC-MS m/z 573 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,76 (d, 2H), 7,50 (t, 1 H), 7,42 (d, 2H), 7,33 (t, 1H), 7,27 (m, 3H), 7,08 (d, 1H), 6,71 (m, 2H), 5,19 (s, 1H), 4,58 (d, 1H), 4,40 (m, 2H), 4,03 (dd, 1H), 3,97 (t, 1H), 3,58 (m, 2H), 2,95 (q, 2H), 2,28 (s, 2H), 2,22 (m, 1H), 1,99 (m, 1H), 1,78 (m, 2H).

(ii) (S)- alebo (R)-2-Metyl-5-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab x HOAc

K roztoku zlúčeniny 39B (131 mg, 0,23 mmol) v EtOH (10 ml) a HOAc (13 ml) sa pridalo Pd/C (5%, 70 mg) a zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku a laboratórnej teplote počas 3 hodín. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo, roztok sa zahustil, pridala sa voda, a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 96 mg (84%, čistota 95,9%) zlúčeniny uvedenej v názve.

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7,78 (d, 2H), 7,54 (d, 2H), 6,86 (m, 2H), 6,75 (d, 1H),

4,72 (d, 1H), 4,54 (s, 1H), 4,46 (dd, 2H), 4,25 (m), 4,05 (t, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,70

101 (dd, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,10 (m, 1 H), 2,36 (s, 2H), 2,15 (m, 1H), 1,95 (m, 4H), 1,76 (m, 1H).

¹³C NMR (100 MHz, D₂O) karbonylové a amidínové uhlíky 176,0, 174,3, 167,6. LC-MS m/z 439 (M + 1)⁺

Príklad 40 (R,S)-Ph-C(Me)(CH₂OMe)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-2-mety!-2-fenylpropiónovej (0,40 g, 2,1 mmol, z príkladu AF uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-ProPab(Z) x 2 HCI (0,93 g, 2,1 mmol, pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284), TBTU (0,64 g, 2,1 mmol) a DIPEA (0,90 g, 7 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 2 dní. DMF sa odparil, pridal sa vodný roztok NaHCO₃ a vodný roztok sa extrahoval s EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃ (2 x 20 ml), vodou a soľankou, vysušili sa (Na₂SO₄) a odparili, čím sa získal surový produkt, ktorý sa ďalej čistil pomocou okamžitej chromatografie na silikagéle eluovaním s CH₂CI₂:THF:MeOH (90:10:2), pričom sa získalo 0,50 g (44% po troch krokoch).

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,83 (m, 2H), 7,41 (d, 2H), 7,30 (m, 9H), 7,11 (d, 1 H),

5,21 (s, 2H), 4,77 (m, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 4,12 (d, 1H),

3,90 (d, 1H), 3,62 (t, 1H), 3,23 (s, 3H), 2,90 (m, 2H), 2,18 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,8 -1,4 (m, 9H).

¹³C NMR (100 MHz, CDCI₃) karbonylové a amidínové uhlíky: δ 174,6, 173,1, 172,2, 172,0,167,9,164,4 (diastereoizoméry a/alebo rotaméry).

Príklad 41 (R,S)-Ph-C(Me)(CH₂OMe)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Pd/C (10%, 20 mg) sa pridalo k roztoku (R,S)-Ph-C(Me)(CH₂OMe)-C(O)-ProPab(Z) (190 mg, 0,34 mmol, z príkladu 40 uvedeného vyššie) v EtOH (10 ml) a

102 vodnej HCI (kone., 10 kvapiek) a zmes sa hydrogenovala počas 2 hodín pri laboratórnej teplote a atmosférickom tlaku. Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo, roztok sa zahustil, pridala sa voda a roztok sa vysušil vymrazením, čím sa získalo 160 mg (100%, čistota 77%) zlúčeniny uvedenej v názve.

LC-MS m/z 423 (M + 1)^{+ 1}H NMR (500 MHz, D₂O) δ 7,80 (m, 2H), 7,55 (m, 2H), 7,35 (m, 5H), 4,50 (m, 3H),

3,88 (d, 0,5H), 3,78 (m, 1H), 3,76 (d, 0,5H), 3,21 (d, 3H), 3,15 (m, 1H), 2,78 (m, 1 H), 2,18 (m, 1 H), 1,70 (m, 3H), 1,63 (d, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, D₂O) karbonylové a amidínové uhlíky: δ 176,4, 176,3, 176,1,

175,9, 167,2, 167,1 (diastereoizoméry a/alebo rotaméry).

Príklad 42 (S)- alebo (R)-2-Chlór-3-metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R) a (sj-2-Chlór-3-metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2-chlór-3-metylfenyl)propiónovej (0,3 g, 1,4 mmol, z príkladu AG uvedeného vyššie) v DMF (10 ml) sa ochladil na teplotu 0°C. Pridal sa H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,739 g, 1,68 mmol, z príkladu A uvedeného vyššie), TBTU (0,495g, 1,54 mmol) a DIPEA (0,94 g, 5,6 mmol) vo vyššie uvedenom poradí a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 5 dní. Reakčná zmes sa zahustila, rozpustila vo vode (400 ml) a potom sa hodnota pH nastavila na 9 s vodným NaHCO₃. Výsledná zmes sa extrahovala s EtOAc (3 x 100 ml). Spojené organické fázy sa premyli vodným NaHCO₃, vodou a soľankou, vysušili sa (Na₂SO₄) a zahustili. Surový produkt (0,636 g) sa prečistil pomocou RPLC (CH₃CN: 10% NH₄OAc (40:60)), pričom sa oddelili diastereoizoméry: zlúčenina 42A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereoizomér, 127 mg, 32%, čistota 95%) a zlúčenina 42B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, 131 mg, 33%, čistota 85%).

Zlúčenina 42B

LC-MS m/z 563, 564 (M + 1)⁺

103 ¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 8,23 (t, 1H), 7,80 (d, 2H), 7,44 (d, 2H), 7,33 (m, 4H), 7,18 (m, 3H), 5,21 (s, 2H), 4,86 (dd, 1H), 4,50 (m, 2H), 4,28 (dd, 1H), 4,13 (m, 1H),

3,96 (dd, 1 H), 3,75 (dd, 1H), 3,62 (q, 1H), 2,60 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 2,31 (m, 1H).

(ii) (R)- alebo (S)-2-Chlór-3-metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pripravil sa podľa spôsobu opísaného v príklade 23(ii) uvedenom vyššie, z (R)alebo (S)-2-chlór-3-metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (zlúčenina 42B z kroku (i) uvedeného vyššie, 129 mg, 0,23 mmol), TFA (4,7 ml, 62 mmol) a tioanizolu (1,35 ml, 11,5 mmol), čím sa získalo 45 mg (40,2% zlúčeniny uvedenej v názve (čistota 90,4%).

LC-MS m/z 429, 431 (M + 1)^{+ 1}H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 7,77 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,26 (m, 2H), 7,19 (d, 1 H),

4,75 (dd, 1H), 4,55 (s, 2H), 4,34 (m, 2H), 4,04 (dd, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,70 (dd, 1 H), 2,48 (m, 1 H), 2,40 (s, 3H), 2,27 (m, 1 H), 1,89 (s, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, CD₂OD) δ karbonylové a amidínové uhlíky 174,0, 172,9,

167,9.

Príklad 43 (S)- alebo (R)-2,3-(Metylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Zlúčenina uvedená v názve sa pripravila podľa spôsobu opísaného v príklade 29 uvedenom vyššie, z kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2,3-metylendioxyfenyl)propiónovej (0,26 g) a cez (2,3-mety!endioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z), ktorý sa rozdelil na dva diastereoizoméry: zlúčenina 43A (rýchlejšie sa pohybujúci diasteroizomér, 0,27 g, 40%) a zlúčenina 43B (pomalšie sa pohybujúci diastereoizomér, 0,18g, 26%). Deprotekciou (R)- alebo (S)-2,3-(metylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)C(C)-Pro-Pab(Z) (zlúčenina 43B 130 mg, 81 mg (72%) sa pripravila zlúčenina uvedená v názve.

LC-MS m/z 439 (M + 1)

104

Príklad 44

Zlúčeniny z príkladov 1 až 7, 11, 12, 16 až 39, 41, 42 a 43 (ktoré všetky sú zlúčeninami vzorca I) sa testovali v teste A uvedenom vyššie a pri všetkých sa zistilo, že vykazujú hodnotu IC₅oTT menej ako 0,3 μΜ.

Príklad 45

Zlúčeniny z príkladov 8, 9, 10, 13, 14, 15 a 40 (ktoré všetky sú zlúčeninami vzorca la) sa testovali v teste A uvedenom vyššie a pri všetkých sa zistilo, že vykazujú hodnotu IC50TT viac ako 1 μΜ.

Príklad 45

Zlúčeniny z príkladov 8, 9, 10, 13, 14, 15 a 40 (ktoré všetky sú zlúčeninami vzorca la) sa testovali v teste C uvedenom vyššie a pri všetkých sa zistilo, že vykazujú orálnu a/alebo parenterálnu biologickú dostupnosť u potkanov ako zodpovedajúci aktívny inhibítor vzorca I.

Skratky

AIBN = azobisizobutyronitril

Aq = vodný

Aze = kyselina azetidín-2-karboxylová

Boe = terc.butyloxykarbonyl

Bn = benzyl

B u = butyl

Ch = cyklohexyl

DBU = 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-én

DCC = dicyklohexylkarbodiimid

105

DIPEA =	diizopropyletylamín
DMAP =	N,N-dimetylaminopyridín
DMF =	dimetyformamid
DMSO =	dimetylsulfoxid
EDC =	1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid.hydrochlorid
Ét =	etyl
EtOH =	etanol
HBTU =	[N, N, N', N'-tetrametyl-O-(benzotriazol-1 -yl)uróniumhexafluórfosfát]
HCI =	kyselina chlorovodíková
H-Hig =	1 -amidino-3-aminoetylpyrolidín
H-Hig(Z) =	3-aminoetyl-1-(N-benzyloxykarbonylamidino)pyrolidín
HOAc =	kyselina octová
H-Pab =	1 -amidino-4-aminometylbenzén
H-Pab(Z) =	; 4-aminometyl-1 -(N-benzyloxykarbonylamidino)benzén
H-Pig =	1 -amidino-3-aminometylpiperidín
H-Pig(Z) =	í 3-aminometyl-1 -(N-benzyloxykarbonylamidino)piperidín
HPLC =	vysokoúčinná kvapalinová chromatografia
Me =	metyl
MeOH =	metanol
MsCI =	metansulfonylchlorid
NBS =	N-brómsukcínimíd

106

Ph =	fenyl
Pr =	propyl
i-PrOH =	izopropanol
RPLC =	. preparatívna vysokoúčinná kvapalinová chromatografia s reverznou fázou
TBDMS =	terc.butyldimetylsilyl
TBTU =	[N.N.N'.N'-tetrametyl-O-íbenzotriazol-l-yOuróniumtetrafluórborát]
TEA =	trietyamín
THF =	tetrahydrofurán
THP =	tetrahydropyranyl
TMS =	trimetylsilyl
p-TsOH =	kyselina p-toluénsulfónová
WSCI =	karbodiimid rozpustný vo vode
z =	benzyloxykarbonyi

Predpony n, s, i a t majú svoj zvyčajný význam: normálny, izo, sekundárny a terciárny. Sterochémia pre aminokyseliny je (S), ak nie je uvedené inak.

Claims (28)

1. Zlúčeniny všeobecného vzorca I v ktorom

R¹ predstavuje H, C(O)R¹¹, SiR¹²R^l3R¹⁴ alebo C^alkyl, pričom posledne uvedená skupina môže byť substituovaná alebo zakončená jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo OR¹⁵ alebo (CH₂)_qR¹⁶,

R¹², R¹³ a R¹⁴ nezávisle od seba predstavujú H, fenyl alebo Ci.₆alkyl,

R¹⁶ predstavuje C^alkyl fenyl, OH, C(O)OR¹⁷ alebo C(O)N(H)R¹⁸,

R¹⁸ znamená H, C₁.₄alkyl alebo CH₂C(O)OR¹⁹,

R¹⁵ a R¹⁷ nezávisle od seba znamenajú H, C^alkyl alebo Cz-galkylfenyl,

R¹¹ a R¹⁹ nezávisle od seba predstavujú H alebo C₁.₄alkyl a q znamená 0, 1 alebo 2,

R² a R³ nezávisle od seba znamenajú H, Cv₄alkyl, cyklohexyl alebo fenyl,

R^x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, í lb alebo I lc

10S v ktorom (CH₂)k (CH₂)|

J (CH2)A!

llc lia

Ilb k, I a m nezávisle od seba znamenajú 0, 1, 2, 3 alebo 4

R⁴ a R⁵ nezávisle od seba predstavujú H, Si(Me)3, 1- alebo 2-naftyl, polycyklickú uhľovodíkovú skupinu, CHR⁴¹R⁴² alebo C1.₄alkyl (pričom posledne menovaná skupina je prípadne substituovaná jedným alebo viacerými atómami fluóru) alebo C^scykloalkyl, fenyl, metyléndioxyfenyl, benzodioxanyi, benzofuranyl, dihydrobenzofuranyl, benzotiazolyl, benzoxazolyl, benzimidazolyl, kumaranonyl, kumarinyl alebo dihydrokumarinyl (pričom posledných dvanásť skupín je prípadne substituovaných jedným alebo viacerými zvyškami vybranými zo skupiny ako je Ci.₄alkyl, (ktorý môže byť prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami zvolenými z halogénu), Cmalkoxy, halogén, hydroxyskupina, kyanoskupina, nitroskupina, SO₂NH₂, C(O)OH alebo N(H)R⁴³),

R⁴¹ a R⁴² nezávisle od seba predstavujú cyklohexyl alebo fenyl,

R⁶ a R⁷ nezávisle od seba predstavujú H, C1.4alkyl, C3.8cykloalkyl, fenyl (pričom posledne uvedená skupina je prípadne substituovaná jedným alebo viacerými zvyškami vybranými zo skupiny ako je C1.4alkyl, (ktorý môže byť prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami zvolenými zhalogénu), CMalkoxy, halogén, hydroxyskupina, kyanoskupina, nitroskupina, SO2NH2, C(O)OH alebo N(H)R⁴⁴), alebo spolu s atómom uhlíka na ktorý sú viazané tvoria C3-scykloalkylový kruh,

R⁴³ a R⁴⁴, predstavujú nezávisle od seba H alebo C(O)R⁴⁵, a

R⁴⁵ znamená H, Ci.₄alkyl alebo Ci.₄alkoxy,

109

Y predstavuje CH_2> (CH₂)₂, CH=CH, (CH₂)₃, CH_?CH=CH alebo CH=CHCH₂, pričom posledne tri menované skupiny sú prípadne substituované skupinou C^alkyl, metylén, oxo alebo hydroxy, n znamená 0,1, 2, 3 alebo 4 a

B predstavuje štruktúrny fragment vzorca IVa, IVb alebo IVc

IVa JVb IVc v ktorom

X¹ a X² nezávisle od seba predstavujú jednoduchú väzbu alebo CH_2i alebo ich farmaceutický prijateľné soli.

2. Zlúčenina vzorca I, podľa nároku 1, kde ak n predstavuje 2 a B znamená štruktúrny fragment vzorca IVb, X¹ a X² obidva nepredstavujú CH₂.

3. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1 alebo 2, kde R¹ znamená prípadne substituovaný Ci._salkyl alebo atóm vodíka.

4. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 3, kde R¹ znamená atóm vodíka.

5. Zlúčenina vzorca i podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde R^x znamená štruktúrny fragment vzorca Ila.

6. Zlúčenina vzorca I podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde Y znamená CH₂ alebo (CH₂)₂.

110

7. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1 alebo podľa ktoréhokoľvek z nárokov 3 až 6, kde n znamená 1.

8. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1 alebo ktoréhokoľvek z nárokov 3 až 7, kde B predstavuje štruktúrny fragment vzorca IVa.

9. Zlúčenina vzorca I podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde fragment je v S konfigurácii.

I

10. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1, ktorou je (R) -PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (S) -PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (R) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab, (S) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(O)-Aze-Pab, (R,S)-3,4-dimetoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab, (R) -2-naftyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (S) -2-naftyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (R) -PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig, (S) -PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig, (R,S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig, (R) -2,5-dimetoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab, (S) -2,5-dimetoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab, (S)-3-metoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(O)-Pro-Pab, (R)-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R,S)-3-aminofenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab,

111 (R) -3-(metylamino)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -3-(metylamino)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R,S)-3,5-dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (S)-3-(trifluórmetyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R)-3-(trifluórmetyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R,S)-3-hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R) -(3-chlór-5-metylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -(3-chlór-5-metylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S)-3-fluórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R) -3-fluórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -3-chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R) -3-chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-PrO'Pab, (R,S)-3_l5-dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -3,5-bis(trifluórmetyl)fenyl-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab, (RJ-S.S-bis-ítrifluórmetyOfenyl-CHíCHzOHJ-CíOJ-Pro-Pab, (R,S)-3-metoxy-5-metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab₁ (R,S)-(2,5-dimetoxyfenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab, (R₁S)-(3₍5-dimetoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab_I (R,S)-3,4-(metylendioxyfenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab, (S)-3-(2-naftyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R)-3-(2-naftyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (Ŕ,S)-3,5-dímetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (R,S)-2-chlór-5-aminofenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (R) -3-metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (S) -3-metylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (R) -2,5-dimetyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -2,5-dimetylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab₁ (R) -3-metoxy-4-hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -3-metoxy-4-hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R) -3,5-dichlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -3,5-dichlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab,

112 (R) -2,3-dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -2,3-dimetoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R) -3-metoxy-5-chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -3-metoxy-5-chlórfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R) -2-metyl-5-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (S) -2-metyl-5-metoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab, (R,S)-Ph-C(Me)-CH(CH₂OMe)-C(O)-Pro-Pab, (R) -2-chlór-3-metoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab, (S) -2-chlór-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (R) -2,3-(metylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S) -2,3-(metylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R,S)-Ph-C(Me)-CH(CH₂OMe)-C(O)-Aze-Pab alebo ich farmaceutický prijateľné soli.

11. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1 , kde ak R^x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, potom R⁴ a/alebo R⁵ (podľa potreby) nepredstavuje/nepredstavujú fenyl substituovaný halogén substituovaným Ci.₆.alkylom.

12. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1, kde ak R* znamená štruktúrny fragment vzorca lla, potom R⁴ a/alebo R⁵ (podľa potreby) nepredstavuje/nepredstavujú metyléndioxyfenyl, benzodioxanyl, benzofuranyl, dihydrobenzofuranyl, benzotiazolyl, benzoxazolyl, benzimidazolyl, kumaranoyl, kumarinyl alebo dihydrokumarinyl.

13. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1, kde ak R* znamená štruktúrny fragment vzorca llc, potom R⁶ a/alebo R⁷ (podľa potreby) predstavuje/predstavujú nesubstituovaný fenyl.

14. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1, kde ak R* znamená štruktúrny fragment vzorca lla, potom R⁴ a/alebo R⁵ (podľa potreby) predstavuje/predstavujú fenyl substituovaný halogén substituovaným C^.alkylom.

15. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1, kde ak R^x znamená štruktúrny fragment vzorca lla, potom R⁴ a/alebo R⁵ (podľa potreby) predstavuje/predstavujú mety113 léndioxyfenyl, benzodioxanyl, benzofuranyl, dihydrobenzofuranyl, benzotiazolyl, benzoxazolyl, benzimidazolyl, kumaranonyl, kumarinyl alebo dihydrokumarinyl.

16. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1, kde ak R^x znamená štruktúrny fragment vzorca llc, potom R⁶ a/alebo R⁷ (podľa potreby) predstavuje/predstavujú substituovaný fenyl.

la v ktorom B¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca IVd, IVe alebo IVf kde D¹ a D² nezávisle od seba predstavujú H, OH, OR^a, OC(O)R^b, OC(O)OR^c, C(O)OR^d, C(O)R^e, a (O)R^b, a R^a, R^b, R^c, R^d a R^e, nezávisle od seba znamenajú fenyl, benzyl, (CH₂)2OC(O)CH₃ alebo C^alkyl, pričom naposledy menovaná skupina je prípadne prerušená kyslíkom, a R¹, R², R³, R^x, Y, n a X¹ a X² sú definované v nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli, za predpokladu, že D¹ a D² obidva neznamenajú atóm vodíka.

114

18. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 17, kde D¹ predstavuje atóm vodíka a D² znamená OH, OCH₃, OC(O)R^b, alebo C(O)OR^da R^b a R^d sú definované v nároku 17.

19. Zlúčenina podľa nároku 17, ktorou je (R,S)-Ph-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OH, (R) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab-OH, (S) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab-OH, (S)-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-(Z), (R) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-(Z), (S) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab-0H, (R) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab-OH, (S) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et, (R) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et, (S) -3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH₃, (R)-3-metoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH_3l (R,S)-3-Ph-C(Me)(CH₂OMe)-C(O)-Pro-Pab-(Z) alebo (R,S)-3-metylfenyl-CH(CH₂OAc)-C(O)-Pro-Pab-OMe, alebo ich farmaceutický prijateľné soli.

20. Farmaceutická formulácia, vyznačujúca sa tým, že zahŕňa zlúčeninu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ, v zmesi s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom.

21. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie ako farmaceutický prostriedok.

22. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie pri liečbe stavov, pri ktorých sa požaduje inhibícia trombínu.

23. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie pri liečbe trombózy.

115

24. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie ako antikoagulačný prostriedok.

25. Použitie zlúčeniny I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli na použitie ako účinnej zložky pri výrobe liečiva na liečenie stavov, pri ktorých sa požaduje inhibícia trombínu.

26. Použitie podľa nároku 25, pri ktorom stavom jej trombóza.

27. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli, ako účinnej zložky pri výrobe antikoagulačného prostriedku.

28. Použite zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 17, 18 alebo 19 ako prekur zora.

29. Spôsob prípravy zlúčeniny vzorca I, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje (a) kondenzáciu zlúčeniny vzorca V, kde R¹, R², R³ a R^x sú definované v nároku 1, so zlúčeninou vzorca VI, 'Y

NH

-TOn kde Y, n a B sú definované v nároku 1, alebo vi

116 (b) kondenzáciu zlúčeniny vzorca VII, kde R¹, R², R³,R^X a Y sú definované v nároku 1, so zlúčeninou vzorca VIII,

H₂N-(CH₂)„-B kde n a B sú definované v nároku 1.