CZ398698A3

CZ398698A3 - Nový derivát aminokyseliny a jeho použití jako inhibitoru thrombinu

Info

Publication number: CZ398698A3
Application number: CZ983986A
Authority: CZ
Inventors: David Gustafsson; Jan-Erik Nyström
Original assignee: Astra Aktiebolag
Priority date: 1996-06-07
Filing date: 1997-06-05
Publication date: 1999-07-14
Also published as: EE9800425A; DE69718791D1; US6255301B1; TR199802536T2; ID17016A; CA2255625A1; IL127325A0; CN1129604C; WO1997046577A1; JP2000512631A; IL127325A; EP0910573B1; HUP0002404A3; DE69718791T2; US6838478B2; US20020019371A1; PL330482A1; NO985700L; ZA974542B; SK165398A3

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká farmaceuticky použitelných sloučenin, zejména kompetitivních inhibitorů serinových proteáz typu trypsinu, zejména trombinu, jejich použití v lécích, ve farmaceutických prostředcích, které je obsahují, a syntetických způsobů jejich výroby.

Dosavadní stav techniky

Srážení krve je klíčovým dějem, který se účastní hemostázy (to jest zabránění ztráty krve z poškozené cévy) i trombózy (to jest vytvoření krevní sraženiny v cévě, která někdy způsobí ucpání cévy).

Srážení krve je výsledkem komplexní řady enzymatických reakcí. Jeden z konečných kroků v této řadě reakcí je převedení proenzymu protrombinu na aktivní enzym trombin.

Je známo, že trombin hraje při srážení krve ústřední úlohu. Aktivuje krevní destičky, způsobuje agregaci destiček, převádí fibrinogen na fibrinové monomery, které spontánně polymerizují na fibrinové polymery a aktivuje faktor XIII, který způsobuje zesítování polymerů s vytvořením nerozpustného fibrinu. Trombin dále aktivuje faktor V a faktor VIII s vytvořením trombinu z protrombinu pozitivní zpětnou vazbou.

Lze tedy očekávat antitrombotickou aktivitu účinných inhibitorů trombinu způsobenou inhibici agregace destiček a tvorby a zesítování fibrinu. Navíc lze očekávat zvýšené ···· ·* j t · · · » * · ··· e 4 · *«·> * ·« »· * · · · • · · · $ 99 9 9 99

9

9 9 antitrombotické působení zvýšením účinné inhibice prostřednictvím pozitivní zpětné vazby.

Časný vývoj inhibitorů trombinu s nízkou molekulovou hmotností popsal Claesson v Blood Coagul. Fibrinol., 5, 411 (1994).

Blombáck a kol., J. Clin. Lab. Invest., 24, dodatek 107, 59 (1969) popisují inhibitory trombinu působící na základě sekvence aminokyselin rozmístěných okolo místa štěpení pro fibrinogenový řetězec Aa. Z diskutovaných sekvencí aminokyselin navrhují tito autoři tripeptidovou sekvenci Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, dále označovanou jako sekvence P3-P2-P1) jako nejúčinnější inhibitor.

Trombinové inhibitory založené na dipeptidylových derivátech s a,omega-aminoalkylguanidinem v poloze PÍ jsou známé z US patentu č. 4 346 078 a z mezinárodní patentové přihlášky WO 93/11152. Byly též popisovány podobné strukturně příbuzné dipeptidylové deriváty. Například mezinárodní patentová přihláška WO 94/29336 uveřejňuje sloučeniny mající v poloze PÍ například aminomethylbenzamidiny, cyklické aminoalkylamidiny a cyklické aminoalkylguanidiny. Evropská patentová přihláška 0 648 780 uveřejňuje sloučeniny, které mají v poloze PÍ například cyklické aminoalkylguanidiny.

Trombinové inhibitory založené na peptidylových derivátech mající též cyklické aminoalkylguanidiny (například buď 3- nebo 4-aminomethyl-l-aminopiperidin) v poloze Pl jsou známé z evropských patentových přihlášek 0 468 231,

559 046 a 0 641 779.

• ··» · · » 4

4 4 · «44 β «· · • * · 4 4444 4 444 444 « · · · 4 4 • i 4 ·*· * ·4 4·

První uveřejnění trombinových inhibitorů založených na tripeptidylových derivátech s argininaldehydem v poloze PÍ obsahuje evropská patentová přihláška 0 185 390.

Poměrně nedávno byl publikován popis peptidylových derivátů založených na argininaldehydu modifikovaných v poloze P3. Například mezinárodní patentová přihláška WO 93/18060 uveřejňuje hydroxykyseliny, evropská patentová přihláška 0 526 877 deaminokyseliny a evropská patentová přihláška 0 542 525 kyseliny 0-methyl mandlové v poloze P3.

Jsou též známy inhibitory serinových proteáz (například trombinu) založené na elektrofilních ketonech v poloze PÍ. Například evropská patentová přihláška 0 195 212 uveřejňuje peptidylové α-ketoestery a amidy, evropská patentová přihláška 0 362 002 fluoralkylamidové ketony, evropská patentová přihláška 0 364 344 α,Β,δ-triketosloučeniny a evropská patentová přihláška 0 530 167 α-alkoxyketonové deriváty argininu v poloze Pl.

Jiné strukturně odlišné inhibitory serinových proteáz typu trypsinu založené na C-terminálních boritých derivátech argininu a na analogických isothiouroniových sloučeninách jsou známy z evropské patentové přihlášky 0 293 881.

Poměrně nedávno byly trombinové inhibitory založené na peptidylových derivátech uveřejněny v evropské patentové přihlášce 0 669 317 a v mezinárodních patentových přihláškách WO 95/35309, WO 95/23609 a WO 94/29336.

Trvá však potřeba účinných inhibitorů serinových proteáz trypsinového typu, jako je trombin. Zvláště potřebné • · *4

• 4 4 • · · *

4'·· ř

9 $ ··*· • · · •u é • · Λ 4 « · · · • <9 9 · •44 44*

4

Λ 9 9 9 jsou sloučeniny, které jsou biologicky dostupné při perorál ním podání a selektivní při inhibici trombinu za přítomnost ostatních serinových proteáz. Sloučeniny vykazující, kompeti tivní inhibiční aktivitu pro trombin lze považovat; za zvláš tě užitečné jako antikoagulační prostředky, z čehož vyplývá jejich použitelnost při léčbě trombózy a příbuzných poruch.

Podstata vynálezu

Tento vynález poskytuje sloučeninu obecného vzorce .1

.1.

ve kterém

R¹ je atom vodíku, skupina C(O)R^1:I, SiP' ’R' 'R¹' nebo

C₃ alkylová skupina a poslední z těchto skupin muže být případně substituovaná či ukončená jedním či více substituenty zvolenými ze skupin 0R^,r nebo (CHJ R'' J

R^L’, R¹³ a R¹⁴ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, fenylová skupina nebo C alkylová skupina, _ » φφφφ φφ φ □ — φ φ φ φ φ · φφφφ φ ΦΦΦ φ » ♦ φ φφφφφ φ φ ΦΦΦ φ φ φ φ φ φ φ φ

Φ· «« • Φ φ ·

Φ · Φ Φ * ΦΦΦ Φ Φ Φ

Φ Φ

Φ · Φ Φ

ρ.ι.6 je C_n alkylová skupina, fenylová skupina, hydroxylová skupina, skupina C(O)OR¹⁷ nebo C(O)N(H)R^TR,

R^TR je atom vodíku, alkylová skupina nebo skupí na

CH^CfCOOR¹⁹,

R¹⁵ a R^1-7 jsou nezávisle na sobě atom vodíku, C alkylová skupina nebo alkylf enyJ.ová skupina,

R^{1 Ί} a R^1R jsou nezávisle na sobě atom vodíku nebo C alkylová skupina a q je 0, 1 nebo 2,

R^a a R³ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, C alkylová skupina, cyklohexylová skupina nebo fenylová skupina je strukturní fragment obecného vzorce Ila, lib nebo líc (CH₂)k (CH₂)|

R4 RS

Ila llb llc

9

9 ·» 9

9 9 9

99 9 9 9 « •99 9 9999 · • •99 ··· 99 9

9 • · 9 • 9 ·

9 9 9 9 9

9 * 09 ve kterých k, lam jsou nezávisle 0, 1, 2, 3 nebo 4,

R⁴ a R⁵ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, Si(Me)₃, 1- nebo 2-naftylová skupina, polycyklická hydrokarbylová skupina, skupina CHR^4XR⁴² nebo alkylová skupina (poslední z těchto skupin může být případně substituovaná jedním či více atomy fluoru) nebo C₃__s cykloalkylová skupina, fenylová skupina, methylendioxyfenylová skupina, benzodioxanylová skupina, benzofuranylová skupina, dihydrobenzofuranylová skupina, benzothiazolylová skupina, benzoxazolylová skupina, benzimidazolylová skupina, kumaranonylová skupina, kumarinylová skupina nebo dihydrokumarinylová skupina [kde posledních dvanáct skupin může být případně substituovaných jednou nebo více alkylovou skupinou, (kde alkylová skupina může být případně substituovaná jedním či více atomy halogenu), alkoxyskupinou, atomem halogenu, hydroxylovou skupinou, kyanoskupinou, nitroskupinou, skupinou SO₂NH₂, karboxylovou skupinou nebo skupinou N(H)R⁴³],

R^4X a R⁴² jsou nezávisle na sobě cyklohexylová nebo fenylová skupina,

R^s a R⁷ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina, C₃___a cykloalkylová skupina, fenylová skupina [kde poslední skupina je případně substituovaná jednou či více C_i_₄ alkylovými skupinami (které mohou být případně substituované jedním či více atomy halogenu) , alkoxyskupinou, atomem halogenu, hydroxylovou skupinou, kyanoskupinou, nitroskupinou, skupi• · · · · ·· 9 i

• * ·· * ♦ · ·

9 9 9

99999 · • · · • · 9

9·

9 · • · 9

9 9 9 9

9

99 nou SO₂NH₂, karboxylovou skupinou nebo skupinou N(H)R⁴⁴] nebo vytvářejí spolu s atomem uhlíku, ke kterému jsou připojeny, C₃__a cykloalkylový kruh,

R⁴³ a R⁴⁴ jsou nezávisle na sobě atom vodíku nebo C(0)R'^t'⁵ a

R^4S je atom vodíku, C __a alkylová skupina nebo C, alkoxyskupina,

Y je skupina CH^, (CH_a)₂, CH=CH, (CH₂)₃, CH₂CH=CH nebo

CH=CHCH₂, kde poslední tři skupiny mohou být případně substituované C alkylovou skupinou, methylenovou skupinou, oxoskupinou nebo hydroxylovou skupinou, n je 0, 1, 2, 3 nebo 4 a

B je strukturní fragment obecného vzorce IVa, IVb nebo

IVc

IVa

IVb

IVc

-*

I» · ΦΦ Μ

Φ · Φ · ^ · · ·

ΦΦ» · · · » · » · · • · · ····»» * · · ··· Φ · » » · Φ Φ

ΦΦΒΦΦΦ ΦΦ Φ · · φφ ve kterých

X¹ a X² jsou nezávisle na sobě jednoduchá vazba nebo skupina

CH nebo farmaceuticky přijatelnou sůl této sloučeniny.

Sloučenina obecného vzorce I může vykazovat tautomerii. Všechny tautomerní formy a jejich směsi patří do rámce tohoto vynálezu.

Sloučenina obecného vzorce I může též obsahovat jeden či více asymetrických atomů uhlíku a tak vykazovat optickou isomerii a/nebo diastereoisomerii. Veškeré diastereoisomery se mohou oddělovat s použitím konvenčních způsobů, například chromatografií nebo frakční krystalizací. Různé stereoisomery lze izolovat rozdělením racemické směsi či jiné směsi sloučenin konvenčními způsoby, jako je frakční krystalizace nebo vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Alternativně lze žádané optické izomery připravit reakcí příslušných opticky aktivních výchozích materiálů za podmínek, které nezpůsobí racemizaci či epimeraci, nebo derivatizací, například s homochirální kyselinou s následným oddělením diastereoisomerních derivátů konvenčními prostředky (například vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na silikagelu). Veškeré stereoisomery patří do rámce tohoto vynálezu.

Alkylové skupiny, které lze vyjádřit symboly R¹, R², R³, R⁴, R^s, R⁶, R⁷, R¹¹, R¹², R^X3, R¹⁴, R^ls, R¹®, R¹⁷, R^ia, R^1S a R^4S a kterými se mohou substituovat R⁴, R^s a Y, alkoxyskupiny, které lze vyjádřit symbolem R^4S a kterými se mohou substituovat skupiny R⁴ a R^s, cykloalkylové skupiny, které lze vyjádřit symboly R², R³, R⁴, R^s, R⁶, R⁷, R⁴¹ «· A * A ·

I

A A « A • '· A A • » A A A A A • A ·

A A A • A A · • A · • A · • A A AAA

A A »» AA a R⁴² a alkylfenylové skupiny, které lze vyjádřit symboly R^1S a R^1-7, mohou být přímé či rozvětvené, nasycené či nenasycené .

Atomy halogenu, kterými lze substituovat skupiny R⁴, R^s, R^s a R⁷ a kterými lze substituovat substituenty na R⁴, R⁵, R⁶ a R⁷, zahrnují atom fluoru, atom chloru a atom bromu.

Tečky u atomů uhlíku ve fragmentech vzorců Ha, lib a líc označují bod připojení fragmentu ke sloučenině obecného vzorce I.

Vlnovky u atomů uhlíku ve fragmentech vzorců IVa, IVb a IVc označují polohu navázání fragmentu.

Zkratky se uvádějí na konci této specifikace.

Podle dalšího aspektu tohoto vynálezu se poskytuje sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje výše, s podmínkou, že (a) jestliže R^x představuje strukturní fragment vzorce Ha, potom R⁴ a/nebo R_s (podle toho, co je příslušné) nepředstavuje/nepředstavují:

(i) fenylovou skupinu substituovanou C alkylovou skupinou, která je substituovaná atomem halogenu, (ii) methylendioxyfenylovou skupinu, benzodioxanylovou skupinu, benzofuranylovou skupinu, dihydrobenzofuranylovou skupinu, benzothiazolylovou skupinu, benzoxazolylovou skupinu, benzimidazolylovou skupinu, kumaranonylovou skupinu, kumarinylovou skupinu nebo dihydrokumarinylovou skupinu, (b) jestliže R^ představuje strukturní fragment • · · * · .· · « ft · · · 4

obecného vzorce líc, potom R^s a/nebo R”⁷ (platí to, co je příslušné) představuje (představují) nesubstituovanou fenylovou skupinu.

Další aspekt tohoto vynálezu poskytuje sloučeninu obecného vzorce I, jak se definuje výše, ve které (a) jestliže R^x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, potom R⁴ a/nebo R^s (platí to, co je příslušné) představuje (představují):

(i) fenylovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou, která je substituovaná atomem halogenu, (ii) methylendioxyfenylovou skupinu, benzodioxanylovou skupinu, benzofuranylovou skupinu, dihydrobenzofuranylovou skupinu, benzothiazolylovou skupinu, benzoxazolylovou skupinu, benzimidazolylovou skupinu, kumaranonylovou skupinu, kumarinylovou skupinu nebo dihydrokumarinylovou skupinu, (b) jestliže R^x představuje strukturní fragment obecného vzorce líc, potom R⁶ a/nebo R⁷ (platí to, co je příslušné) představuje (představují) substituovanou fenylovou skupinu.

Jestliže n je 2 a B je strukturní fragment obecného vzorce IVb, zahrnují preferované sloučeniny obecného vzorce I takové látky, ve kterých X¹ a X² nepředstavují zároveň skupinu CH .

Preferované sloučeniny obecného vzorce I jsou ty, ve kterých

0 • 00

0 0 0·0 • 00 0·0 ·

» 0 0 je případně substituovaná C alkylová skupina nebo zejména atom vodíku, je strukturní fragment obecného vzorce TTa, je CH₂ nebo (CH )₂, je rovno 1, je strukturní fragment obecného vzorce IVa.

Preferuji se sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých je fragment

Ύ

0' v konfiguraci S. Vlnovka u atomů dusíku a uhlíku ve fragmentu znázorněném výše značí místo navázání fragmentu.

Preferované sloučeniny obecného vzorce I zahrnují sloučeniny příkladů 1 až 7, 11, 12, 16 až 39, 41, 42, 43 a (R, S) -Ph-C (Me) (CH^OMe) -C (0.) -Aze-Pab.

Způsob přípravy • · * 4

4 · 4

4 4 4 4 *

4 • 4 4 4

Tento vynález též poskytuje způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I zahrnující (a) spojení sloučeniny obecného vzorce V

ve kterém

R¹, R², R³ a R^x jsou podle definice popsané výše, se sloučeninou obecného vzorce VI

NH

-(CH^n ve kterém

VI • ····

9 · »

9 9 9

9 9 999

9 9

9· 9

9 9 9

9 9 ·

9 9 9

9 9 9 <9

9

9 9 9

Υ, η a Β odpovídají definicím popsaným výše nebo (b) spojení sloučeniny obecného vzorce VII

VII ve kterém

R¹, R², R³, R^x a Y odpovídají definicím popsaným výše, se sloučeninou obecného, vzorce VIII

II N-(CH ) -B ^x 2 ' re

VIII ve kterém n a B odpovídají definicím popsaným výše, například za přítomnosti spojovacího prostředku (například oxalylchloridu v DMF, EDC, DCC, HBTU nebo TBTU), příslušné báze (například pyridinu, DMAP, TEA nebo DIPEA) a vhodného organického rozpouštědla (například dichlormethanu, aceto9999

9 99 99

9 · 9 9 9 9 9

Φ Φ * Φ ΦΦΦ · 9 9 9

999 9 9999 9 999 ··9 nitrilu či dimethylformamidu).

Sloučenina obecného vzorce V je komerčně dostupná, je dobře známá v literatuře nebo se může obdržet s použitím známých způsobů. Například se může sloučenina obecného vzorce V připravit hydrolýzou sloučeniny obecného vzorce IX

IX ve kterém je C₁₍_ alkylová skupina nebo skupina a alkylfenylová

R¹ , R^a, R’’ a R~ jsou podle definic popsaných výše, například při teplotě místnosti za přítomnosti vhodné báze (například hydroxidu lithného) a příslušného rozpouštědla (například tetrahydrofuranu a/nebo vody).

Sloučeninu obecného vzorce VI lze připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce X ····

Η-Ν.

Ο^^ΟΗ ve kterém

Υ je podle definice popsané výše, se sloučeninou obecného vzorce VIII, jak se definuje výše, například za podmínek popsaných výše pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I.

Sloučenina obecného vzorce VII se snadno obdrží s použitím známých způsobů.Například lze sloučeninu obecného vzorce VII připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce V, jak se definuje výše, se sloučeninou obecného vzorce X, jak se definuje výše, například za podmínek popsaných výše pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I.

Sloučenina obecného vzorce IX, ve kterém R¹ i R'^Apředstavují atom vodíku, se může připravit redukcí sloučeniny obecného vzorce XI • ··«♦ — 16 ^M · ^χυ · ··· • · ·· ♦ ··

9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9999 · 99 9

9 9 9 • · · 9 9

XI ve kterém R, a R² jsou podle definice popsané výše, například při teplotách nižších než je teplota místnosti (například mezi -70 ^CTC a -5 ^aC) za přítomnosti vhodného redukč ního činidla (například natriumborohydridu) a příslušného organického rozpouštědla (například methanolu či ethanolu).

Sloučenina obecného vzorce IX, ve které R' představu je atom vodíku a R³ představuje alkylovou skupinu, cyklohexylovou skupinu nebo fenylovou skupinu, se může připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce XI, jak se definuj výše, s některým organokovovým činidlem obecného vzorce XII

R³~M

XII ve kterém

R^3a představuje alkylovou skupinu, cyklohexylovou skupinu nebo fenylovou skupinu,

M je lithium nebo MgHal a Hal je chlor, brom či jod, • 9

9·9· • · 9 • · ····

9« • 9 *

9« » 9 ·

9 9

9« · • 9 «9 za podmínek, které jsou známy tomu, kdo má zkušenost v oboru, za přítomnosti příslušného organického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu).

Sloučenina obecného vzorce IX, ve které R¹ představu je atom vodíku, se též může připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce XIII

RO-C(O)-C(R~)H₃

XIII ve kterém

R a R^x jsou podle definice popsané výše, se sloučeninou obecného vzorce XIV

R²-C(O)-R³

XIV ve kterém

R² a R³ jsou podle definice popsané výše, za podmínek, které jsou dobře známy tomu, kdo má zkušenost v oboru.

Sloučenina obecného vzorce IX, ve které R¹, R² a R³představují vesměs atom vodíku, R^ představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, jak se definuje výše, ve kterém ani k ani 1 nepředstavuje 0, se může připravit redukcí sloučeniny obecného vzorce XV

♦ 99 ·

9 9

9 9 9

999 99999«

9 · 9

9 9

9 · 9

9

OH

OR ixa

XV ve kterém R¹'® představuje strukturní fragment obecného vzorce Ila, jak se definuje výše, ve kterém ani k ani 1 nepředstavuje 0 a R je podle definice popsané výše, za přítomnosti vhodného redukčního činidla (například boranu) a příslušného organického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu).

Sloučenina obecného vzorce XI je buď dobře známá ze způsobu popsaných v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) nebo se může připravit analogicky podle těchto způsobů.

Sloučenina obecného vzorce XV je dobře známá z literatury nebo se může připravit s použitím známých způsobů, například reakcí vhodného derivátu kyseliny malonové s některým alkylačním činidlem obecného vzorce XVI,

XVI ve kterém je odstupující skupina [například atom halogenu (chloru, bromu, jodu) nebo tosylová skupina] a

4 • 4 4 44

4 4

- :ι§·% .

• 4 44 4 444

4 • · 4

4 4 4

44444 • ♦ 4

4

4 4 4

444 444

4

4 4 4 je podle definice popsané výše, například za přítomnosti vhodné báze (například hydridu sodného a natriumethoxidu) a příslušného organického rozpouštědla .

Sloučeniny obecných vzorců VIII, X, XII, XIII, XIV a XVI jsou komerčně dostupné, jsou dobře známé z literatury nebo se mohou obdržet s použitím známých způsobů.

Substituenty včetně substituentů na fenylových skupinách obsažených ve sloučeninách obecných vzorců I, V, VII, IX, XI, XIII, XV a XVI se mohou podrobit interkonverzi standardními způsoby.

Sloučenina obecného vzorce I se může izolovat ze své reakční směsi konvenčními způsoby.

Ti, kdo mají zkušenost v oboru, ocení, že se ve výše popsaném způsobu může požadovat ochrana meziproduktů chránícími skupinami.

Funkční skupiny, které je vhodné chránit, zahrnují hydroxylovou skupinu, aminoskupinu a karboxylovou skupinu. Vhodné chránící skupiny pro hydroxylovou skupinu zahrnují trialkylsilylové nebo diarylalkylsilylové skupiny (například terc.butyldimethylsilylovou skupinu, terc.butyldifenylsilylovou skupinu nebo trimethylsilylovou skupinu) a tetrahydropyranylovou skupinu. Vhodné chránící skupiny pro karboxylovou skupinu zahrnují C_i__s alkylovou skupinu nebo benzylesterovou skupinu. Vhodné chránící skupiny pro aminoskupinu, amidinoskupinu a guanidinoskupinu zahrnují terc.butyloxykarbonylovou skupinu nebo benzyloxykarbonylovou • 00

0*00 00

Λ· · 00

0000 0 0 0 0 0 0 0 • 0 0 0

000 000 00

0 0000 0 » 0 0 ► 0 0

0

0· « skupinu. Amidinové a guanidinové atomy dusíku mohou být chráněny buď jednou nebo dvěma skupinami.

Zavedení a odstranění funkčních skupin může nastávat před připojením nebo po něm.

Zejména lze sloučeninu obecného vzorce I připravit způsobem zahrnujícím připojení aminokyseliny acylované na atomu dusíku nebo aminokyseliny chráněné na atomu dusíku. Jestliže se použije aminokyselina chráněná na atomu dusíku, může se dodat acylová skupina po připojení a deprotekce atomu dusíku se může uskutečnit poté s použitím standardních způsobů.

Chránící skupiny se mohou odstranit v souladu se způsoby, které jsou dobře známy tomu, kdo má zkušenost v oboru, jak se popisuje dále.

Určité chráněné deriváty sloučeniny obecného vzorce I, které se mohou připravit před konečným stupněm deprotekce pro vytvoření sloučeniny obecného vzorce 1, jsou nové.

V dalším aspektu tohoto vynálezu se poskytuje sloučenina obecného vzorce la

Ia

9 9 99 ve kterém

B³- představuje strukturní fragment obecného vzorce iVd,

IVe nebo IVf,

DlN^^NHDa

IVd

D1N^\_NHd2

IVf ve kterém

D¹ a D² představují nezávisle na sobě atom vodíku, hydroxylovou skupinu, skupinu 0R^a, OC(O)Rⁱ’, OC(O)OR”, C(O)OR^d, C(O)R~ a

R, R^1-', R^c', R^e a R** představují nezávisle na sobě fenylovou skupinu, bertzylovou skupinu, skupinu (CH)_OC(O)CH nebo C₁__ř. alkylovou skupinu a tato poslední skupina může být případně přerušena atomem kyslíku, a

R¹, R², R³, R^x, Y, η, X¹ a X² jsou podle definice uvedené výše, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, s podmínkou, že D^;t a D² nepředstavuji zároveň atom vodíku.

4444

9 99

9 4 9 9 · _· 9·· 9 9 · 9 · ·· 4 · · 4 · 4·9· 4 ·44 ··· • 4-4 · · 4 4

999 999 44 4 49 44

Alkylové skupiny, které může představovat R^a, R^to, R^c, S^d a R®, mohou být přímé či rozvětvené a mohou být nasycené či nenasycené.

Vlnovky u atomu uhlíku ve fragmentech obecného vzorce IVd, IVe nebo IVf znamenají polohu připojení fragmentu.

Preferované sloučeniny obecného vzorce Ia zahrnují ty, ve kterých D¹ představuje atom vodíku a D² představuje hydroxylovou skupinu, skupinu OCH₃, OC(o)R^to nebo C(O)OR^ca, ve kterých R^to a R'* jsou podle definice uvedené výše.

Preferovaná sloučenina obecného vzorce Ia zahrnuje sloučeniny příkladů 8, 9, 10, 13, 14, 15, 40 a (R,S)-Ph-C(Me)(CH₃OMe)-C(0)-Pro-Pab(Z).

Sloučenina obecného vzorce Ia se též může připravit přímo ze sloučeniny obecného vzorce I v souladu se způsoby, které jsou dobře známy tomu, kdo má zkušenost v oboru. Například sloučenina obecného vzorce Ia, ve které D¹ nebo D²představuje hydroxylovou skupinu, se může připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce Ia, ve které D¹ nebo D² (v závislosti na tom, co je příslušné), představuje skupiny COOR'³ a R**, jak se popisuje výše, s hydroxylaminem (nebo s jeho hydrohalidovou solí) například při teplotě 40 °C za přítomnosti vhodné báze (například triethanolaminu) a vhodného organického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu) .

Sloučenina obecného vzorce Ia se může alternativně připravit prostřednictvím jiného chráněného derivátu obecného vzorce Ia v souladu se způsoby dobře známými tomu, kdo má

4 • 9 • 4 9 · 994

4 4 4 4

994444 44 4

4 4 4 4

9 «4 94 zkušenost v oboru. Například sloučenina obecného vzorce Ia, ve které D¹ nebo D² představuje skupiny OC(O)OR° a R°, jak se definuje výše, se může připravit reakci odpovídající sloučeniny obecného vzorce Ia, ve které D¹ nebo D² (podle toho, co je příslušné) představuje hydroxylovou skupinu, se sloučeninou obecného vzorce XVII

R^CC(O)-O-C(O)R°

XVII ve kterém

R^c odpovídá definici popsané výše, například při teplotě místnosti za přítomnosti vhodné báze (například triethanolaminu, pyridinu nebo dimethylaminopyridinu) a příslušného organického rozpouštědla.

Sloučenina obecného vzorce Ia, ve které B¹představuje strukturní fragment obecného vzorce IVd nebo IVf, D¹ představuje atom vodíku a D² představuje hydroxylovou skupinu nebo skupinu 0R^a, ve které R^a je podle definice popsané výše, se může alternativně připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce XVIII • JU ·· · • · · ·· • · ·· · 9 9 ·· ·· » · · · ► · · · ··» ··· • · • 4 ··

B^a-CN

XVIII ve kterém

B*¹ představuje fenyl-l,4-en nebo cyklohexyl-l, 4-en a

R³, R², R³, R^x, Y a n jsou podle definice uvedené výše, se sloučeninou obecného vzorce XIX

H NOR^ř,r

XIX ve kterém představuje atom vodíku nebo R^CT a

R^a je podle definice popsané výše, například při teplotách mezi 40 a 60 °C za přítomnosti vhod né báze (například triethanolaminu) a vhodného organického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu, acetonitrilu, diΛ £- · ···· • ··· ♦ * • · ·«· ··· ·» · • · · • · · · • · · ··*· • · · ·· · ·· *· * · · · • · · · • ·«· ··· • · ·· ·· methylformamidu nebo dimethylsulfoxidu).

Sloučenina obecného vzorce XVIII se může připravit v souladu se způsoby vytváření peptidových vazeb, například způsobem analogickým výše popsaným způsobům pro sloučeninu obecného vzorce I. Sloučeniny obecných vzorců XVII a XIX jsou komerčně dostupné a jsou dobře známy v literatuře nebo jsou dosažitelné s použitím známých způsobů.

Použití chránících skupin se plně popisuje v Protective Groups in Organic Chemistry, redakce J. W. F. McOmie, Plenům Press (1973) a Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vydání, T. W. Greene a P. G. M. Wutz,

Wiley-Interscience (1991).

Ti, kteří mají zkušenost v oboru, rovněž ocení, že i když tyto chráněné deriváty sloučeniny obecného vzorce I (například sloučenina obecného vzorce Ia) nemusí vykazovat farmakologickou aktivitu jako takové, mohou se podávat parenterálně či perorálně a poté se mohou metabolizovat v těle s vytvořením sloučeniny podle tohoto vynálezu, která je farmakologicky účinná. Tyto deriváty se mohou proto popisovat jako prekurzory léků. Veškeré prekurzory léků odvozené od sloučeniny obecného vzorce I se zahrnují do rámce tohoto vynálezu.

Chráněné deriváty sloučeniny obecného vzorce I, které jsou zvláště užitečné jako prekurzory léků, zahrnují sloučeninu obecného vzorce Ia.

Sloučenina obecného vzorce I, její farmaceuticky přijatelné soli, tautomery a stereoizomery, stejně tak jako odpovídající prekurzory léků (včetně sloučenin obecného vzorce j :··* • · · · : :

O·· »9« »· »

1»?

« · • · 1 ··

Ia, které jsou prekurzory sloučenin obecného vzorce I) se dále uvádějí jako sloučenina podle tohoto vynálezu.

Způsoby lékařského a farmaceutického využití

Sloučenina podle tohoto vynálezu je použitelná vzhledem ke své farmakologické účinnosti. Indikuje se tedy jako léčivo.

Další aspekt tohoto vynálezu tedy poskytuje sloučeninu podle tohoto vynálezu pro použití ve formě léčiva.

Sloučenina podle tohoto vynálezu je zejména účinným inhibitorem trombinu jako taková nebo v případě prekurzorů po podání, jak například prokazují zkoušky popisované níže.

Očekává se tedy, že sloučenina podle tohoto vynálezu je použitelná za podmínek, při kterých se požaduje inhibice trombinu.

Sloučenina podle tohoto vynálezu se tedy indikuje při léčbě nebo prevenci trombózy a nadměrné srážlivosti v krvi a tkáních živočichů a člověka.

Je známo, že nadměrná srážlivost může vést k tromboembolickým onemocněním. Stavy spojené s nadměrnou srážlivostí a tromboembolická onemocnění, které lze uvést, zahrnují aktivovanou rezistenci na protein C, jako je mutace faktoru V (faktor V Leiden) a dědičná či získaná nedostatečnost antitrombinu III, proteinu C, proteinu S, kofaktoru II heparinu. Ostatní stavy, o kterých je známo, že souvisí s nadměrnou srážlivosti a tromboembolickým onemocněním, zahrnují cirkulační antifosfolipidové protilátky (Lupus anticoagu• ··· ·· « <fr· ·« • · · · 9 9 9 9 9 9

999 * >» » O 9 9 9 9 y »·* £···«· «·· »»« λ u · · · · «

999999 £ 4 * 9» «Μ9 lant), homocysteinemii, trombocytopénii indukovanou heparinem a poruchy fibrinolýzy. Sloučenina podle tohoto vynálezu se proto indikuje při terapeutickém i profylaktickém ošetřování těchto stavů.

Sloučenina podle tohoto vynálezu se dále indikuje při léčbě stavů s nežádoucím přebytkem trombinu bez známek nadměrné srážlivosti, například při neurodegenerativních onemocněních, jako je Alzheimerova choroba.

Zejména lze uvažovat stavy zahrnující léčebné a/nebo profylaktické ošetřování venózní trombózy a plicní embolie, arteriální trombózy (například infarkt myokardu, nestabilní angínu pectoris, mrtvici, která je následkem trombózy a periferní arteriální trombózu) a systémové embolie pocházející obvykle od atria během arteriální fibrilace nebo od levé komory po transmurálním infarktu myokardu.

Navíc se očekává použitelnost sloučeniny podle tohoto vynálezu při profylaxi reokluze (to jest trombózy) po trombolýze, perkutánní transluminální angioplastice (PTA) a po provedení koronárního bypasu, při prevenci retrombózy po mikrochirurgickém zákroku a obecně při cévních operacích.

Další indikace zahrnují terapeutické a/nebo profylaktické ošetřování disseminované intravaskulární koagulace způsobené bakteriemi, vícečetným poraněním, intoxikací či jakýmkoliv jiným mechanismem, antikoagulační léčbu v případech, ve kterých je krev ve styku s cizími povrchy v těle, jako jsou vaskulární štěpy, vaskulární stenty, vaskulární katetry, mechanické a biologické náhradní chlopně a jakákoliv jiná lékařská zařízení a antikoagulační léčbu v případech, ve kterých je krev v kontaktu s lékařskými pomůckami • 0 0 0 • ··

0»

0 0 0 0 0 0 • 0 · mimo tělo, jako je tomu při kardiovaskulárních operacích s použitím extrakorporálního oběhu nebo při hemodialýze.

Navíc k účinkům na proces koagulace je o trombinu známo, že aktivuje značný počet buněk (jako jsou neutrofily, fibroblasty, buňky endothelu a buňky hladkých svalů). Proto mohou být sloučeniny podle tohoto vynálezu též užitečné pro terapeutické a/nebo profylaktické ošetřování idiopatického a adultního syndromu respiračních obtíží, plicní fibrózy po léčbě zářením či chemoterapii, septického šoku, septikémie, zánětlivých odpovědí zahrnujících, avšak bez omezení pouze na tyto případy, edém, akutní či chronickou aterosklerózu, jako je koronární arteriální onemocnění, cerebrální arteriální onemocnění, periferní arteriální onemocnění, reperfuzní poškození a restenóza po perkutánní transluminální angioplastice (PTA).

Sloučenina podle tohoto vynálezu inhibující trypsin a/nebo trombin se též může použít při léčbě pankreatitidy.

V dalším aspektu tohoto vynálezu se poskytuje způsob léčby stavu, při kterém se požaduje inhibice trombinu zahrnující podání terapeuticky účinného množství látky podle tohoto vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelné soli osobě, která trpí takovým stavem, nebo je náchylná k takovému stavu.

Sloučenina podle tohoto vynálezu se bude normálně podávat perorálně, intravenózně, subkutánně, bukálně, rektálně, dermálně, nasálně, tracheálně, bronchiálně nebo jakoukoliv jinou parenterální cestou či inhalací ve formě farmaceutických přípravků zahrnujících účinnou sloučeninu buď ve formě volné báze nebo farmaceuticky přijatelnou netoxickou e ·· » •ν ί» · · 9» ·· · · · > · 4 « · • ··· . . « · « · · » . . 4 · ····.</ ·»· 4 ♦ · • 4 <* · · · · ·· · a· · · organickou či anorganickou adiční sůl ve farmaceuticky přijatelné dávkové formě. V závislosti na poruše a na pacientovi, který se má podrobit léčbě, a na cestě podávání lze podávat prostředky v různých dávkách.

Sloučenina podle tohoto vynálezu se může též kombinovat nebo současně podávat s jakýmkoliv antitrombotickým prostředkem s různým mechanismem působení, jako jsou přípravky působící proti destičkám s kyselinou acetylsalicylovou, tiklopidin, klopidogrel, tromboxanový receptor a/nebo inhibitory syntetázy, antagonisté fibrinogenových receptorů, prostacyklinová mimetika a fosfodiesterázové inhibitory a antagonisté ADP-receptorů (P₂T).

Sloučenina podle tohoto vynálezu se dále může kombinovat anebo současně podávat s trombolytiky, jako je aktivátor tkáňového plasminogenu (přírodní, rekombinantní či modifikovaný), streptokináza, urokináza, prourokináza, anisoylovaný komplex plasminogen-aktivátor streptokinázy (APSAC), živočišné aktivátory plasminogenu slinné žlázy a podobně, při léčbě trombotických onemocnění, zejména při infarktu myokardu.

Další aspekt tohoto vynálezu tedy poskytuje farmaceutický prostředek zahrnující sloučeninu podle tohoto vynálezu ve směsi s farmaceuticky přijatelnou adjuvantní látkou, zřeďovacím prostředkem či nosičem.

Vhodné denní dávky sloučeniny podle tohoto vynálezu při terapeutické léčbě u lidí jsou okolo 0,001 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti při perorálním podávání a 0,001 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti při parenterálním podávání.

99 9 «9 9 9 #99 9 9

9 γ 9

9 9

9 9 9

9 9 9 9 9 9

9 • » 9 «

Sloučenina podle tohoto vynálezu má tu výhodu, že může být účinnější, méně toxická, může mít delší dobu působení a širší rozmezí účinnosti, může vést k méně nežádoucím účinkům, může být snadněji absorbována nebo může mít jiné výhodné farmakologické vlastnosti ve srovnání s látkami, které byly v této oblasti známy dříve.

Biologické zkoušky

Zkouška A

Stanovení trombinového času (TT)

Lidský trombin (T 6769, Sigma Chem Co) v roztoku pufru, pH 7,4, 100 μΐ a v roztoku inhibitoru, 100 μΐ se inkubuje po dobu 1 min. Potom se přidá půlovaná normální citratová lidská krevní plazma, 100 μΐ a doba srážení se měří automatickým zařízením (KC 10, Amelung).

Doba srážení v s se vynese proti koncentraci inhibitoru a hodnota IC TT se stanoví interpolací.

Hodnota IC TT je koncentrace zkoušeného inhibitoru, ^J ' která zdvojnásobuje trombinový čas pro lidskou plazmu.

Zkouška B

Stanovení inhibice trombinu automatickou analýzou

Schopnost trombinového inhibitoru se měří chromogenní substrátovou metodou v automatickém zařízení na zpracování mikrodestiček Plato 3300 (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Švýcarsko) s použitím 96-jamkových poloobjemových mikroti31 • · · t * 9 · « • · 9 9 · · « ·· 9 • ’· φ »····» 99 9 9 99

9 9 9 9 9

9 9 9 W »» 9 9 tračních destiček (Costar, Cambridge, MA, USA,Cat. No.

3690). Zásobní roztoky zkoušené látky v dimethylsulfoxidu (72 μΐ), 1 mmol/litr se zředí sériově 1:3 (24 + 48 μΐ) dimethylsulf oxidem pro obdržení 10 různých koncentrací, které se analyzují jako vzorky v rozboru. 2 μΐ zkušebního vzorku se zředí 124 μΐ pufru pro rozbor, 12 μΐ chromogenního substrátového roztoku (S-2366, Chromogenix, Mólndal, Švédsko) v roztoku pro rozbor a konečně se přidá 12 μΐ roztoku a-trombinu (lidský α-trombin, Sigma Chemical Co.), oba v pufru pro rozbor, a vzorky se promíchají. Konečné koncentrace pro rozbor jsou: zkoušená látka 0,00068 až 13,3 μπιοΐ/litr, S-2366 0,30 mmol/litr, a-trombin 0,020 NIH U/ml. Přírůstek lineární absorbance během 40 min inkubace při 37 °C se použije pro výpočet inhibice v procentech pro zkušební vzorky ve srovnání s blanky bez inhibitoru. Automaticky stanovená hodnota IC_so odpovídající koncentraci inhibitoru způsobující 50% inhibici aktivity trombinu se vypočítá z křivky logaritmus dávky proti procentu inhibice.

Zkouška C

Stanovení konstanty inhibice Κ_χ pro lidský trombin

Stanovení K_± se provádějí pomocí chromogenní substrátové metody při 37 °C na centrifugačním analyzátoru Cobas Bio (Roche, Basel, Švýcarsko). Zbytková enzymatická aktivita po inkubaci lidského α-trombinu při různých koncentracích zkoušené látky se stanoví při třech různých koncentracích substrátu a měří se jako změna absorbance světla při 405 nm.

Roztoky zkoušené látky (100 μΐ, normálně v pufru nebo fyziologickém roztoku obsahující hovězí serumalbumin (10 g/1) se smíchají s 200 μΐ lidského α-trombinu (Sigma Chemi32 •99 99 99

9 9 9 99 · 9 9 9 ·9·9 · 99 9 9 »· 9

9 * 9 99999« 999 999

9*99 99

999999 99 9 *9 ·* cal Co) v pufru pro rozbor (0,05 mol/1 Tris-HCl, pH 7,4, iontová síla 0,15 upravená chloridem sodným) obsahujícím hovězí serumalbumin (10 g/1) a analyzují jako vzorky na zařízení Cobas Bio. Vzorek 60 μΐ spolu s vodou 20 μΐ se přidá k 320 μΐ substrátu S-2238 (Chromogenix AB, Mólndal, Švédsko) v pufru pro rozbor a sleduje se změna absorbance (deltaA/min). Konečné koncentrace pro S-2238 jsou 16,24 a 50 μιηοΐ/ΐ a pro trombin 0,125 NIH U/ml.

Reakční rychlost v ustáleném stavu se používá pro Dixonovo vynesení, to jest diagramy koncentrace inhibitoru proti 1/(deltaA/min). Pro reverzibilní kompetitivní inhibitory vytvářejí body pro různé koncentrace substrátu obvykle přímky s úsekem při x = -K .

Zkouška D

Stanovení aktivovaného parciálního tromboplastinového času (APTT)

APTT se určí v půlované lidské citrátované plazmě pomocí činidla PTT Automated 5 vyrobeného firmou Stago. Inhibitory se přidávají k plazmě (10 μΐ roztoku inhibitoru k 90 μΐ plazmy) s následným přídavkem činidla a roztoku chloridu vápenatého a APTT se určí ve směsi koagulačním analyzátorem KC10 (Amelung) podle instrukcí výrobce činidla. Čas srážení v s se vynese proti koncentraci inhibitoru v plazmě a IC_soAPTT se určí interpolací.

IC_sqAPTT se definuje jako koncentrace inhibitoru v lidské plazmě, která zdvojnásobí aktivovaný parciální tromboplastinový čas.

• · • « · · » 4 ··«· • * · 4 · • · · · · 9

9 19 9

9 19

199 999 19

1

19 « • « « · 99 9

9 9

11 · «

Zkouška E

Stanoveni trombinového času ex vivo

Inhibice trombinu po perorálním nebo parenterálním podání sloučenin obecného vzorce I a Ia rozpuštěných ve směsi ethanol:Solutol™:voda (5:5:90) se zjišťuje na krysách při vědomí, které byly jeden až dva dny před pokusem vybaveny katetrem pro odebírání krve z karotidy. V den experimentu se odeberou krevní vzorky při daných časech po podání sloučeniny do plastikových zkumavek obsahujících jeden díl roztoku citrátu sodného (0,13 mol/litr) a 9 dílů krve. Zkumavky se centrifugují pro obdržení plazmy chudé na destičky. Plazma se použije pro stanovení trombinového času, jak se popisuje níže.

Citratová krevní plazma , 100 μΐ, se zředí fyziologickým roztokem, 0,9 %, 100 μΐ a koagulace plazmy se zahájí přídavkem lidského trombinu (T 6769, Sigma Chem Co, USA) v roztoku pufru pH 7,4, 100 μΐ. Doba srážení se měří automatickým zařízením (KC 10, Amelung, Německo).

Při použití sloučeniny obecného vzorce Ia se koncentrace příslušného aktivního inhibitoru trombinu obecného vzorce I v krysí plazmě určí pomocí standardních křivek pro vztah mezi trombinovým časem v půlované citratové krevní plazmě a známými koncentracemi odpovídajícího aktivního¹¹trombinového inhibitoru rozpuštěného ve fyziologickém roztoku.

Na základě určených plazmatických koncentrací aktivního trombinového inhibitoru obecného vzorce I (za předpokladu, že prodloužení trombinového času je způsobeno výše • * ··» ·♦ ·« ♦ « · • ♦ · · • · « · · · · · · popsanou sloučeninou) u krys se plocha pod křivkou po perorálním a/nebo parenterálním podání odpovídajícího prekurzoru léku obecného vzorce I (AUCpd) vypočítá s použitím lichoběžníkového pravidla a extrapolace údajů k nekonečnu.

Biologická dostupnost aktivního trombinového inhibitoru obecného vzorce I po perorálním nebo parenterálním podání prekurzoru obecného vzorce Ia se vypočítá ze vzorce [ (AUCpd/dávka)(AUCaktivní,parenterálni/dávka)] x 100 kde AUCaktivní, parenterální představuje plochu pod křivkou obdrženou po parenterálním podání odpovídajícího aktivního trombinového inhibitoru obecného vzorce I krysám při vědomí, jak se popisuje výše.

Zkouška F

Stanovení trombinového času v moči ex vivo

Množství aktivního inhibitoru trombinu obecného vzorce I, které se vyloučí močí po perorálním nebo parenterálním podání sloučeniny podle tohoto vynálezu rozpuštěné ve směsi ethanol:Solutol™:voda (5:5:90), se určí stanovením trombinového času v moči ex vivo (s předpokladem, že prodloužení trombinového času je způsobeno výše popsanou sloučeninou).

Krysy při vědomí se umístí do metabolických klecí umožňujících oddělený sběr moči a stolice po dobu 24 h po perorálním podání sloučeniny podle tohoto vynálezu. Trombinový čas se určí ze sbírané moči, jak se popisuje níže.

Půlovaná normální citratová lidská plazma (100 μΐ) se

ΦΦΦΦ ·« φ φ ΦΦΦ • φ φ φ ΦΦΦ • φ φ φ

ΦΦΦ φ φ φ inkubuje s koncentrovanou krysí močí nebo s jejími zředěními fyziologickým roztokem po dobu 1 min. Koagulace plazmy se potom zahájí přidáním lidského trombinu (T 6769, Sigma Chem Company) v roztoku pufru (pH 7,4, 100 μΐ). Doba srážení se měří na automatickém zařízení (KC 10, Amelung).

Koncentrace aktivního inhibitoru trombinu obecného vzorce I v krysí moči se stanoví použitím standardních křivek znázorňujících vztah trombinového času v půlované normální citratové lidské plazmě a známých koncentrací výše popsaného aktivního inhibitoru trombinu rozpuštěného v koncentrované krysí moči (nebo v jejích zředěních fyziologickým roztokem). Násobením celkového množství krysí moči vytvořené za 24 h určenou střední koncentrací výše popsaného aktivního inhibitoru v moči lze vypočítat množství aktivního inhibitoru vyloučeného močí (MNOŽSTVÍpd). Biologická dostupnost aktivního trombinového inhibitoru obecného vzorce I po perorálním nebo parenterálním podání prekurzoru léku se vypočítá ze vzorce [ (MNOŽSTVÍpd/dávka)/(MNOŽSTVÍaktivní,parenterální/dávka)] x 100 kde MNOŽSTVÍaktivní,parenterální znamená množství vyloučené močí po parenterálním podání odpovídajícího aktivního trombinového inhibitoru obecného vzorce I krysám při vědomí, jak se popisuje výše.

Příklady provedení vynálezu

Obecné experimentální způsoby

Hmotnostní spektra se zaznamenávají na trojitém kva36

AAAA drupolovém hmotnostním spektrometru Finnigan MAT TSQ 700 vybaveném elektrosprejovým propojením (FAB-MS) a hmotnostním spektrometru VG Platform II vybaveném elektrosprejovým propojením (LC-MS). Měření ^ΧΗ NMR a ¹³C NMR se provádějí na spektrometrech BRUKER ACP 300 a Varian UNITY plus 400, 500 a 600 pracujících při frekvencích ^XH 300,13, 399,96, 499,82 a 599,94 MHz a na frekvencích ¹³C 75,46, 100,58, 125,69 a 150,88 MHz. Preparativní vysokovýkonná kapalinová chromatografie se provádí na sloupcích s reverzními fázemi (250 mm, 20 nebo 50 mm, fáze 5 až 7 μΜ Chromasil C8) při průtokové rychlosti 10 až 50 ml/min s použitím detektoru ultrafialového světla (270 až 290 ran).

Příprava výchozích materiálů

Příklad A

H-Aze-Pab(Z) (i) Boc-Aze-OH

Di-terc.butyldikarbonat (13,75 g, 63 mmol) se přidává za míchání při teplotě místnosti ke směsi kyseliny L-azetidin-2-karboxylová (H-Aze-OH, 5,777 g, 57 mmol) a uhličitanu sodného (6,04 g, 57 mmol) ve vodě (50 ml) a tetrahydrofuranu (100 ml). Po 60 h se tetrahydrofuran odstraní ve vakuu a směs se zředí vodou a poté se okyselí 2M roztokem hydrogensíranu draselného. Extrakce dichlormethanem s následným sušením síranem hořečnatým a odpařením rozpouštědla poskytuje zbytek, který se krystaluje ze směsi dichlormethanu a hexanu s obdržením 10,87 g (95 %) bezbarvých krystalů.

···· 44 • 4 · 4 4

4«4 4 4 • « 4 · 4 • 4 · 4 4 • 44 444 44 4

1H), ^ΧΗ MNR (300 MHz, CDC1₃): δ 4,85 až 4,7 4,0-3,75 (m, 2H), 2,65-2,35 (m, 2H) , 1,4 (široký s, (s, 9H).

(ii) Boc-Aze-Pab(Z)

Při teplotě místnosti se přidává EDC (13,5 g, 70 mmol) ke směsi Boc-Aze-OH [(10,87 g, 54 mmol, z kroku (i) výše)], H-Pab(Z) x HC1 (18,31 g, 57 mmol, připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 94/29336) a dimethylaminopyridin (9,9 g, 81 mmol) v acetonitrilu (270 ml). Po 16 h se rozpouštědlo odstraní ve vakuu a nahradí ethylacetátem. Směs se promyje vodou a vodným roztokem kyseliny citrónové. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu s obdržením zbytku, který poskytuje 17,83 g Boc-Aze-Pab(Z) krystalizací ze směsi dichlormethanu, toluenu, diisopropyletheru a petroletheru.

^ΧΗ NMR (300 MHz, CDC1J: 5 7,85-7,75 (d, 1H) ,

7,45-7,2 (m, 7H), 5,2 (s, 2H), 4,7 (t, 1), 4,6-4,4 (m, 2H), 3,95-3,8 (q, 1H), 3,8-3,7 (q, 1H), 2,5-2,3 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).

(iii) H-Aze-Pab(Z)

Boc-Aze-Pab(Z) (2,44 g, 5,2 mmol) se rozpustí ve směsi kyseliny trifluoroctové (10 ml) a dichlormethanu (10 ml). Po 30 min se rozpouštědlo a kyselina trifluoroctová odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Organická fáze se promyje 10% vodným roztokem uhličitanu sodného a vysuší uhličitanem draselným. Odstranění rozpouštědla ve vakuu poskytuje zbytek, který poskytne 1,095 g (57 %)

H-Aze-Pab(Z) ve formě bezbarvých krystalů krystalizací

4444 · 4 «4 * · • 4 4 4 · 4 · «

444 4 444 4 44 4

4 4 4 4444 4 444 «44

4 4 4 4 4 •444 44 4 ·4 44 z dichlormethanu.

^XH NMR (300 MHz, CD₃OD): 6 7,85-7,75 (d, 2H), 7,45-7,25 (m, 7H), 5,2 (s, 2H), 4,5 (s, 2H), 4,3 (d, 1H), 3,65 (q, 1H), 3,4-3,3 (m, 1H) , 2,7-2,5 (m, 1H), 2,4-2,2 (m, 1H) .

Příklad B

H-Pic-Pab(Z) . 2 HC1 (i) Boc-Pic-OH

Připraví se podle autorů M. Bodanszky a A. Bodanszky [The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag (1984)] s použitím tetrahydrofuranu jako rozpouštědla místo dioxanu.

NMR (300 MHz, CDC1₃): 5 5,0-4,8 (široký d, 1H),

4,0 (široký s, 1H), 3,0 (široký s, 1H), 2,20 (d, 1H), 1,65 (m, 2H), 1,5-1,3 (s + m, 13H).

(ii) Boc-Pic-Pab(Z)

Boc-Pic-OH [2,02 g, 8,8 mmol, z kroku (i) výše], H-Pab(Z).1HC1 (2,36 g, 7,4 mmol, připraví se podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 94/29336) a 3,9 g (32 mmol) dimethylaminopyridinu se rozpustí v dichlormethanu (40 ml). Směs se ochladí na 0 °C a přidá se 1,99 g (10,4 mmol) EDC. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 d. Směs se vylije do 0,2 M roztoku hydrogensíranu draselného a extrahuje dvakrát dichlormethanem. Organická vrstva se vysuší síranem sodným a odpaří. Surový « φφφ φφφ φφ φφ φφ · φ φ · · « · » • ··· * « φ * «φφφ φ φ φ φ φ φφφφ » ··» «φφ • · φ · · φ φ φφφ φφφ φφ φ «φφφ produkt se podrobí mžikové chromatografií na silikagelu s použitím směsi ethylacetat:toluen 7:3 jako elučního činidla s obdržením 1,59 g (44 %) produktu.

FAB-MS m/z 495 (M + 1)* ^XH NMR (400 MHz, CDCl₃): 5 7,83 (d, 2H) , 7,43 (d,

2H), 7,36-7,11 (m, 5H), 6,52 (bs, NH), 5,20 (s, 2H),

4,81-4,72 (m, 1H), 4,61-4,34 (m, 2H), 4,10-3,90 (m, 1H) ,

2,79-2,64 (m, 1H), 2,36-2,25 (m, 1H), 1,7-1,3 (m, 14H) .

(iíi) H-Pic-Pab(Z). 2HC1

Boc-Pic-Pab(Z) [1,59 g, 3,25 mmol, z kroku (ii) výše] se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu nasyceného chlorovodíkem. Reakční směs se odpaří po půl hodině s obdržením produktu podle nadpisu s kvantitativním výtěžkem.

FAB-MS m/Z 395 (M + 1)^ΧΗ NMR (300 MHZ, D^O): δ 7,82 (d, 2H), 7,63-7,41 (m, 7H), 5,47 (s, 2H), 4,69-4,49 (AB-systém centrovaný při δ 4,59, 2H), 4,03 (dd, 1H), 3,52 (bd, 1H), 3,10 (dt, 1H), 2,29 (dd, 1H), 2,08-1,61 (m, 5H).

Příklad C

H-Aze-Pig(Z). 2HC1 (i) Boc-Aze-Pig(Z)

Při teplotě místnosti se Boc-Aze-OH [1,03 g, 5,12 mmol, z příkladu A(i) výše] rozpustí v acetonitrilu (50 ml)

444 .-, 44 4 4 ~ · ·♦♦ ·

4 4 4

9 4 • 94 444

4 44 94

9 4 · 4 4 • 4 · · · · ·

9499 4 444 449

4 .· · • 9 4 44 4· a k výslednímu roztoku se přidá dimethylaminopyridin (1,57 g, 12,8 mmol). Poté se přidá H-Pig(Z).2HC1 (1,86 g, 5,12 mmol, připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 94/29336) v dimethylformamidu (20 ml) a dále EDC (1,47 g, 7,68 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 20 h. Následně se reakční směs odpaří, zředí dichlormethanem (100 ml) a promyje vodou (2 x 30 ml). Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Surový produkt (3,77 g) se vyčistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu elucí směsí dichlormethan:methanol (95:5) s obdržením 1,24 g (51 %) sloučeniny podle nadpisu.

¹H NMR (400 MHz,CDC1₃): 6 7,27-7,43 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,60-4,67 (t, 1 H), 4,16-4,26 (d, 2H), 3,86-3,95 (m, 1H), 3,74-3,82 (m, 1H), 3,11-3,30 (m, 2H), 2,78-2,89 (m,

2H), 2,33-2,52 (bs, 2H) , 1,71-1,83 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,15-1,29 (m, 2H).

(ii) H-Aze-Pig(Z).2HC1

Boc-Aze-Pig(Z) [1,2 g, 2,53 mmol, z kroku (i) výše] v ethylacetatu nasyceném chlorovodíkem (75 ml) se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 h. Reakční směs se odpaří, zředí vodou a extrahuje toluenem. Vodná vrstva se lyofilizuje s obdržením 1,085 g (96 %) sloučeniny podle nadpisu.

2H) ,	¹H NMR 4,99-5,05	(500 MHz,	CD₃OD): δ 7,32-7,46 (m, 5H), 5,28
(t,	1H) ,	4,08-4,16	(m,	1H),	3,91-3,99 (m,
3H),	3,13-3,25	(m,	4H),	2,79-2,88	(m,	1H) ,	2,47-2,57 (m,
1H) ,	1,82-1,96	(m,	3H),	1,26-1,40	(m,	2H) .

Příklad D • 444 • 4 4 44 44

4 «44 4444

444 4 444 9 49 9

944 94494 4 944 444

4 4 9 4 4 9

449 444 44 4 44 94 (R, S ) -Ph-CH ( CH₂OTBDMS) -C ( O) -Pro-OH (i) (R,S)-Ph-CH(CH₂OTBDMS)-C(O)OTBDMS

Kyselina (R,S)-tropová (6,6 g, 0,040 mol) se rozpustí v dimethylformamidu (20 ml). Přidá se imidazol (13,0 g,

0,192 mol) a TBDMS-C1 (14,4 g, 0,096 mol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Přidá se voda (0,5 litru) a směs se extrahuje 3x etherem. Spojené organické vrstvy se promyjí 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt (16 g) se použije v následující reakci bez dalšího čištění.

^ΧΗ NMR (500 MHz,CDCL₃): δ 7,17-7,40 (m, 5H),

4,16-4,23 (m, 1H), 3,77-3,87 (m, 2H), 0,88-0,92 (m, 18H) , 0,02-0,29 (m, 12H).

( i i) (R,S)-Ph-CH(CH₃OTBDMS)-C(O)OH

Směs (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)-C(O)OTBDMS [16,0 g, 0,040 mol, z kroku (i) výše], uhličitanu draselného (14,0 g, 0,10 mol), methanolu (400 ml) a vody (150 ml) se míchá při teplotě místnosti přes noc. Po odpaření se vodná vrstva extrahuje etherem. pH se upraví kyselinou citrónovou a vodná vrstva se opět extrahuje etherem 3x. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší a odpaří s obdržením 9,7 g (87 %) sloučeniny podle nadpisu.

^ΧΗ NMR (300 MHz,CDCl₃): δ 7,20-7,40 (m, 5H),

4,05-4,20 (m, 1H) , 3,75-3,90 (m, 2H), 0,85 (s, 9H),

0,00-0,10 (m, 6H).

0 4 4 · 0 0 0 0 • 000 0 000 · ·♦ ·

0 0 0 0 0000 0 000 000 0 0 0 0 0 0 0

000 040 44 4 40 40 ( iii) (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-OBn

EDC (volná báze, 1,45 ml, 8,4 mmol) se přidá při teplotě místnosti ke směsi (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)-C(O)OH [2,01 g, 7,2 mmol, z kroku (ii) výše], hydrochloridu benzylesteru prolinu (1,85 g, 7,6 mmol) a dimethylaminopyridinu (1,41 g, 11,5 mmol) v acetonitrilu (20 ml). Po 18 h se rozpouštědlo odstraní ve vakuu a surový produkt se podrobí mžikové chromatograf ii na silikagelu s použitím směsi ethylacetat:toluen (2:1) jako elučního činidla s obdržením 2,7 g (80 %) produktu.

( i v) (R,S)-PhCH(CH_aOTBDMS)-C(0)-Pro-OH (R,S)-PhCH(CH_aOTBDMS)-C(O)-Pro-OBn [2,6 g, 5,56 mmol, z kroku (iii) výše] se rozpustí v ethanolu (100 ml) a přidá se palladium na uhlí) (10%, 0,29 g). Směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku po dobu 3 h. Po zfiltrování se roztok odpaří. Výtěžek sloučeniny podle nadpisu je 1,7 g (81

^-H	NMR	(300	mhz,cdci₃;	1 : S	7,15·	-7,40 (m, 5H),
4,45-4,65	(m,	1H),	4,15-4,30	(m,	1H),	3,85-3,95 (m,	1H) ,
3,55-3,80	(m,	2H),	3,25-3,40	(m,	1H),	2,30-2,40 (m,	1H) ,
1,75-2,10	(m,	3H),	0,75-0,90	(m,	9H),	-0,20-0,05 (m,	6Η)

¹³C NMR (75,5 MHz, CDCl_a) amidinové a karbonylové uhlíky: 174,00, 172,63.

Příklad E

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxyfenyl)propionová • φφφ φ φ φ φφφ φφφ φφ φφ · • · φ φ φφφ φφ « φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφ φφ (i) Ethylester kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxyfenyl)propionové

K roztoku ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-methoxyfenyl)propionové [0,067 g, 0,3 mmol, připravenému podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989)] v ethanolu se přidá natriumborohydrid (2 ekvivalenty) při 70 °C. Po míchání po dobu 2 h při -70 °C a 4 h při -5 °C se přidá voda a reakční směs se odpaří a extrahuje ethylacetatem. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří s obdržením sloučeniny podle nadpisu.

(ii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxyfenyl)propionová

Ethylester kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxyfenyl ) propionové z kroku (i) výše se rozpustí ve směsi tetrahydrofuran:voda (1:1). Přidá se hydrát hydroxidu lithného (2 ekvivalenty) a reakční směs se míchá po dobu 1 h při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří a extrahuje dichlormethanem. Organická vrstva se suší síranem hořečnatým a odpaří s obdržením kyseliny 3-hydroxy-2-(3-methoxyfenyl)propionové, která se použila v následujícím kroku bez dalšího čištění.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 195 (M - 1)“.

^ΧΗ NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 6,73-6,79 (m, 1H), 6,34-6,46 (m, 3H), 3,57-3,66 (m, 1H), 3,30 (s, 3H), 3,22-3,29 (m, 2H).

Příklad F • 9 99 · ·9 ·· ··· · · 9 9 9 9 9 • · ·· 9 9 9 9 9 9 9 · • *999 999» 9 »99 999 • · · 9 9 9 9

999 999 99 9 9« 99

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,4-dimethoxyfeny1)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,4-dimethoxyfenyl)propionové jako výchozí látky.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 225 (M - 1) ^XH NMR (400 MHz, CD_aOD): 5 6,84-6,95 (m, 3H), 4,01-4,10 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,65-3,73 (m, 2H) .

Příklad G

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-naftyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(2-naftyl)propionové jako výchozí látky.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 215 (M - 1)~.

^XH NMR (400 MHz, CD₃OD): 5 7,77-7,85 (m, 4H), 7,41-7,50 (m, 3H), 4,14-4,22 (m, 1H), 3,89-3,95 (m, 1H) , 3,80-3,87 (m, 1H).

Příklad H

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimethylfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,5-dimethyl• ··· • · · · · ·· ·· · · · « · · · · • · · · · ··· · ·· · • · * · · ···· · »·· ··· • · · ♦ · · · ······ ·· · ·· ·· fenyl)propionové jako výchozí látky.

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: δ 6,94 (s, 1H) , 6,89 (s, 2H), 4,13 (dd, 1H), 3,80 (m, 2H), 2,3 (s, 6H).

Příklad I

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-trifluormethylfenyl)propionové

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-trifluormethylfenyl )propionové.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 233 (M - 1)”.

Příklad J

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-hydroxyfenyl)propionové

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-hydroxyfenyl)propionové jako výchozí látky.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 181 (M - 1).

Příklad K

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-fluorfenyl)propionové

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-fluorfenyl)propionové jako výchozí látky.

·««« «9 · • · · 9 9 9 9 ··· ··· ·· 9 99 ·9

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 183 (Μ - 1), FAB-MS m/z 185 (M + 1)*.

Příklad L

Kyselina (R,s)-3-hydroxy-2-(3-chlorfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-chlorfenyl)propionové jako výchozí látky.

^ΧΗ NMR (300 MHz, CDC1.J: S 7,34-7,30 (m, 3H) , 7,21 (dt, 1H), 5,67 (b, 2H), 4,15 (dd, 1H), 3,87 (m, 2H).

Příklad M

Kyselina 3-hydroxy-2-[3,5-bis(trifluormethyl)fenyl]propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-[3,5-bis(trifluormethyl ) fenyl jpropionové jako výchozí látky.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 301 (M - 1)~.

Příklad N

Kyselina 3-hydroxy-2-(3-methoxy-5-methylfenyl)propionová (i) 3-Brommethyl-5-methylanisol

Směs 3,5-methylanisolu (13,6 g, 0,1 mol), N-bromsukcinimidu (17,8 g, 0,1 mol) a ΑΙΒΝ (1,1 g, 6,7 mmol) ··· · · « · · · · • ··· · 1 · · 9 · · ·

1111 1111 · ··· ··· • · · 9 1 11

111 191 11 1 11 11 v tetrachlormethanu se vaří pod zpětným chladičem po dobu 2 h. Výsledná směs se ochladí, zfiltruje a odpaří. Surový produkt obsahující okolo 20 % výchozího materiálu se použije v dalším kroku.

^ΧΗ NMR (400 MHz, CDC1.J; <5 6,82 (S, IH) , 6,77 (S,

IH), 6,68 (S,.1H), 4,47 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,37 (s, 3H).

(ii) 3-Methoxy-5-methylfenylacetonitril

K roztoku 3-brommethyl-5-methylanisolu (17 g, 0,008 mol, z kroku (i) -výše] v dimethylsulfoxidu (25 ml) se přidá kyanid sodný (8,2 g, 0,16 mol). Směs, která se při přidávání kyanidu značně zahřeje, se ponechá ochladit na teplotu místnosti během 1 h. Poté se přidá acetonitril (25 ml) a směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 1 h. Reakční směs se odpaří, přidá se voda (200 ml) a výsledný roztok se extrahuje 3x etherem. Kombinované organické fáze se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 9 g (70 %) produktu podle dílčího nadpisu ve formě žluté olejovité kapaliny, která se použije v dalším kroku bez dalšího čištění.

^XH NMR (300 MHz, CDC1J: S 6,74 (s, IH) , 6,67 (2s, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,68 (s, 2H), 2,33 (s, 3H).

(iii) Kyselina 3-methoxy-5-methylfenyloctová

Roztok 3-methoxy-5-methylfenylacetonitrilu [9 g,

0,06 mol, z kroku (ii) výše] a hydroxidu draselného (17 g, 0,3 mol) ve 150 ml směsi vody s isopropanolem (2:1) se zahřívá za míchání v autoklávu při 120 °C přes noc a poté při teplotě místnosti po dobu 2 d. Reakční směs se odpaří a extrahuje etherem. Vodná fáze se okyselí a extrahuje 2x ethe48 • ··«· ♦· · ·· ·· ·» · · · · ···· • ··· ···* ···· • · · · »···· · ··· ··· • · Φ Φ φ · Φ ·Φ· ··· ·» · ·· ·· rem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením zbytku, který se rozpustí v ethanolu, zpracuje aktivním uhlím, zfiltruje a odpaří s obdržením sloučeniny podle dílčího nadpisu (8,1 g, 80 %) ve formě žlutých krystalů.

^XH NMR (300 MHZ, CDC1.J: δ 6,68 (s, 1H) , 6,63 (s,

2H), 3,78 (s, 3H), 3,58 (s, 2H) , 2,31 (s, 3H).

(iv) Ethyl-3-methoxy-5-methylfenylacetat

K roztoku kyseliny 3-methoxy-5-methylfenyloctové [8,1 g, 0,045 mol, z kroku (iii) výše] v ethanolu (100 ml) se přidá koncentrovaná kyselina sírová a roztok se ponechá stát po dobu 40 h. Reakční směs se odpaří a surový produkt se rozdělí mezi vodu a ether. Organická vrstva se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 8,0 g (85 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě hnědé olejovité kapaliny.

¹H NMR (400 MHz, CDC1J: δ 6,71 (s, 1H) , 6,65 (s,

1H), 6,64 (s, 1H), 4,16 (q, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,55 (s, 2H), 2,23 (s, 3H), 1,27 (t, 3H).

(v) Ethyl-3-oxo-2-(3-methoxy-5-methylfenyl)propionat

K roztoku ethyl-3-methoxy-5-methylfenylacetatu [3,0 g, 14 mmol, z kroku (iv) výše] a ethylformiatu (1,9 g, 26 mmol) v etheru (75 ml) se přidá sodík (0,39 g, 17 mmol) v malých kouscích. Roztok se ochladí na 0 °C a poté se přidá ethanol (absolutní, 0,24 ml). K výsledné suspenzi se přidává ether (100 ml), ethanol (5 ml) a voda do rozpuštění suspenze. Vodná fáze se odebere, okyselí na pH 2 (vodným roztokem ♦ ♦··

4 4 • 4

4 4 444 4444 • •44 4 444 4 44 4

4944 4444 4 444 444

4 4 4 4 * 4

444949 44 4 4« 44 kyseliny chlorovodíkové) a extrahuje etherem. Organická fáze se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 2 g (59 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^ΧΗ NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 12,12 (d, 0,5H), 7,31 (d, 0,5H), 6,62 (bs, 2H), 4,26 (q, 2H), 3,80 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 1,33 (t, 3H).

(vi) Ethyl-3-hydroxy-2-(3-methoxy-5-methylfenyl)propionat

Míchaný roztok ethyl-3-oxo-2-(3-methoxy-5-methylfenyl)propionátu [1,9 g, 8,1 mmol, z kroku (v) výše] v methanolu (50 ml) se ochladí na -15 °C. Poté se po částech přidává natriumborohydrid (0,61 g, 16 mmol). Směs se míchá po dobu 3 h při -15 až -5 °C. Poté se přidá voda a výsledná směs se odpaří. Vodná fáze se extrahuje ethylacetatem, organická fáze se promyje vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 2,0 g (59 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,65 (s, 1H), 6,63 (s,

1H), 6,58 (S, 1H), 4,3-4,05 (m, 3H), 3,8 (m, 5H), 2,30 (s, 3H), 1,32 (t, 3H).

(vii) Kyselina 3-hydroxy-2-(3-methoxy-5-methylfenyl)propionová

Roztok ethyl-3-hydroxy-2-(3-methoxy-5-methylfenyl)propionátu [1,7 g, 7,1 mmol, z kroku (vi) výše] a hydroxidu sodného (7,0 g, 180 mmol) ve 200 ml směsi methanol:voda (1:1) se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 h. Poté se reakční směs odpaří, promyje etherem a okyselí. Výsledná směs se extrahuje 2x etherem a spojené organické vrstvy se • 9 · · · ···· · ··· ··· • · · 9 · · 9

9 999 9 9 9 9 · 9 promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 1,47 g (98 %) .

^XH NMR (300 MHz, CDC1J: 6 6,70 (s, 1H) , 6,66 (s,

1H), 6,65 (s, 1H), 4,12 (dd, 1H), 3,85-3,75 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 2,32 (s, 3H).

Příklad 0

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-( 2,5-dimethoxyfeny1)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(2,5-dimethoxyfenyl)propionové jako výchozí látky.

^XH NMR (400 MHZ, CDC1J: S 6,89 (d, 1H) , 6,85 (d,

1H), 6,78 (dd, 1H), 4,86 (široký, 2H), 4,14 (dd, 1H), 3,98 (dd, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,67 (dd, 1H).

Příklad P

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimethoxyfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,5-dimethoxyfenyl)propionové jako výchozí látky.

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: S 6,44 (s, 2H) , 6,40 (s,

1H), 4,13 (dd, 1H), 3,85-3,75 (m, 2H), 3,75 (s, 6H).

Příklad 0

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,4-methylendioxyfenyl)51

A A ·' · A A A

AAA AAAA

A AAA A AA A

A AAAA· A ··· AAA AAA A A

A A · A A A A propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,4~methylendioxyfenyl)propionová jako výchozí látky.

^ΧΗ NMR (400 MHZ, CDC1₃): 6 6,78 (s, 1H), 6,73 (s,

2H), 5,95 (s, 2H), 4,08 (dd, 1H), 3,78 (m, 2H).

Příklad R

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(1-naftyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(1-naftyl)propionové jako výchozí látky.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 215 (M - l)~.

Příklad S (R, S)-3-Methoxyfenyl-CH(CH^OTBDMS)COOH ( i) (R, S)-3-Methoxyfenyl-CH(CH^OTBDMS)COOTBDMS

Imidazol (6,7 g, 97,8 mmol) a TBDMS-C1 (7,4 g, 48,9 mmol) se přidá k roztoku kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxyfenyl)propionové [(4 g, 20,4 mmol, z příkladu E(ii) výše) v dimethylformamidu (20 ml)]. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 d. Poté se přidá voda (0,5 litru) a směs se extrahuje 3x etherem. Spojené organické fáze se promyjí 10% roztokem kyseliny citrónové, vodou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší síranem φφφ · » φ · φ · · • ··· · · · φ « · φ φ

Φ φφφφ ΦΦΦΦ 9 «·Φ ΦΦΦ • «ΦΦΦ φ φ sodným a odpaří. Surový produkt (8,53 g, 98 % žluté olejovité kapaliny) se použije v následujícím kroku bez dalšího čištění.

	^XH	NMR	(400	MHz,	CDC1	_a): δ 7,22 (t, 1H)	, 6,90 (d,
1H) ,	6,88	(m,	1H) ,	6,81	(m,	1H), 4,16 (t, 1H),	3,80 (s,	3H) ,
3,82-	-3,72	(m,	2H),	0,88	(s,	6H), 0,87 (S, 6H),	0,22 (d,	6H),
0,02	(d,	6H) .

(ii) (R,S)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0TBDMS)C00H

Směs (R,S)-3-methoxyfenyl-CH(CH^OTBDMS)COOTBDMS (8,0 g, 18,8 mmol), uhličitanu draselného (6,25 g, 45,2 mmol), methanolu (120 ml) a vody (40 ml) se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po odpaření se vodná vrstva promyje etherem, okyselí kyselinou citrónovou a extrahuje 3x etherem. Spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 5,0 g (87 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě žluté olejovité kapaliny.

^XH NMR (400 MHz, CD_aOD): S 7,21 (t, 1H), 6,89 (s+d, 2H), 6,82 (m, 1H), 4,86 (b, 2H), 4,13 (dd, 1H), 3,76 (s,

3H), 3,8-3,7 (m, 2H), 0,86 (S, 9H), 0,02 (d, 6H).

Příklad T

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-Boc-aminofenyl)propionová (i) Ethylester kyseliny 3-aminofenyloctové

Roztok kyseliny m-aminobenzoové (3,0 g, 19,8 mmol) a koncentrované kyseliny sírové (2 ml) v absolutním ethanolu (20 ml) se zahřívá po dobu 3 d při 75 °C. Roztok se odpaří, • ···· 9» · • 9 9 9 9 9 +··»

9 99 9 9 9 9 9 9 9 ·

9 9 9 9 ···· 9 «99 999 • 9 9 9 9 9 9

999999 99 9 9« 99 přidá se vodný roztok uhličitanu sodného a směs se extrahuje etherem (80 ml). Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 2,9 g (82 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 7,10 (t, 1H), 6,77 (d,

1H), 6,62 (t, 1H), 6,58 (m, 1H), 4,15 (q, 2H), 3,65 (b, 2H),

3.52 (S, 2H), 1,25 (t, 3H).

(ii) Ethylester kyseliny 3-(Boc-amino)fenyloctové

Roztok ethylesteru kyseliny 3-aminofenyloctové [1,9 g, 11 mmol, z kroku (i) výše] a Boc_a0 (2,3 g, 11 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se míchá při teplotě místnosti přes noc. Výsledná směs se odpaří a přidá se vodný roztok kyseliny chlorovodíkové. Vodná směs se extrahuje etherem, organická vrstva se promyje vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 2,5 g (84 %) produktu podle dílčího nadpisu.

NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 7,33 (s, 1H), 7,24 (dd, 2H), 6,96 (m, 1H), 6,50 (b, 1H), 4,15 (q, 2H), 3,58 (s, 2H),

1.53 (s, 9H), 1,26 (t, 3H).

(iii) Ethylester kyseliny 2-[(3-Boc-amino)fenyl]-3-oxo-propionové

K roztoku ethylesteru kyseliny 3-(Boc-amino)fenyloctové [2,4 g, 8,6 mmol z kroku (ii) výše] a ethylformiatu (1,1 g, 15 mmol) v suchém ethyletheru (60 ml) se přidá v malých kouscích sodík (0,34 g, 15 mmol). Směs se ochladí na ledové lázni a poté se přidá 0,15 ml absolutního ethanolu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 d. Přidá ···· ·· · «« ·· ·· · · · · · · · · • · ·· · · · · · ·· · • · · · · ···· * «·· ··· • · · · · · · ··«··· 9 9 9 99 9 9 se směs ethylether:ethanol (50:5 ml) k takto vytvořené šedé suspenzi, roztok se chvíli míchá a přidá se voda do vytvoření čirého žlutého roztoku. Fáze se oddělí a organická fáze se jednou extrahuje vodou. Vodná fáze se okyselí 3% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 2 a přitom se vytvoří bílá sraženina. Přidá se malé množství roztoku chloridu sodného a vodná směs se extrahuje diethyletherem. Organická fáze se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 %), vysuší síranem sodným a odpaří. Sloučenina podle dílčího nadpisu (1,7 g, 64 %) se oddělí jako čirá hnědavá olejovitá kapalina, která je dostatečně čistá pro použití bez dalšího čištění.

¹H NMR (300 MHz, CDClJ: S 7,4 (m, 3H) , 7,0 (m, 1H) , 6,6 (b, 1H), 4,3 (m, 2H), 1,5 (s, 9H), 1,3 (m, 3H).

(iv) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-Boc-aminofenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného výše v příkladu E s použitím ethylesteru kyseliny 2-[3-Boc-amino)fenyl]-3-oxopropionové [z kroku (iii) výše].

¹H NMR (300 MHZ, CDC1₃): S 7,25 (m, 3H), 6,95 (d,

1H), 6,55 (b, 1H), 4,15 (m, 2H), 1,50 (s, 9H), 1,20 (t, 3H).

Příklad U

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-[3-(Boc-methylamino)fenyl]propionové (i) Ethylester kyseliny 3-(formylamino)fenyloctové

Roztok ethylesteru kyseliny 3-aminofenyloctové [3,0

4444 «· 4 ·♦ • 4 4 · 4 · · · · · • 4 44 4 9 · » 4 44 4 · 4 4 4 4··· 4 944 ···

9 4 4 4 4 4 g, 0,017 mol, z příkladu T(i) výše] a kyseliny mravenčí (1,5 g, 0,034 mol) v diisopropyletheru (150 ml) se vaří pod zpětným chladičem v Deanově-Starkově zařízení přes noc. Roztok se odpaří do sucha, zbytek se rozpustí v etheru a promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou pro odstranění zbývajícího výchozího materiálu. Sušení síranem sodným a odpaření poskytuje sloučeninu podle dílčího nadpisu (3,1 g, 89 %).

NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 8,65 (d, 1H), 8,40 (b,

1H), 7,45 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,05 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 3,55 (s, 2H), 1,30 (m, 3H).

(ii) Ethylester kyseliny 3-(methylamino)fenyloctové

Roztok komplexu boran-dimethylsulfid (2 M roztok v tetrahydrofuranu, 20 ml) se přidá k ledově chladnému roztoku ethylesteru kyseliny 3-(formylamino)fenyloctové [4,1 g, 0,02 mol, z kroku (i) popsaného výše] v tetrahydrofuranu (suchý, 100 ml) a reakční směs se míchá po dobu 1 h. Výsledný roztok se nalije do zředěné kyseliny chlorovodíkové a směs se ponechá po dobu 15 min a poté se promyje etherem pro odstranění nezreagovaného materiálu. Vodný roztok se zalkalizuje hydrogenuhličitanem sodným a extrahuje 3x etherem. Spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 3,0 g (78 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHz, CDC1J: δ 7,10 (t, 1H) , 6,60 (d,

1H), 6,50 (m, 2H), 4,10 (q, 2H), 3,50 (s, 2H), 2,80 (s, 3H), 1,20 (t, 3H).

(iii) Ethylester kyseliny 3-(N-Boc-methylamino)fenyloctové

- 56 ···· • · ·

Roztok ethylesteru kyseliny 3-(methylamino)fenyloctové [3,0 g, 0,016 mol, z kroku (ii) výše] a Boc₂0 (3,4 g, 0,016 mol) v tetrahydroíuranu (100 ml) se míchá při teplotě místnosti po dobu 12 d. Výsledný roztok se odpaří s obdržením sloučeniny podle dílčího nadpisu (4,9 g, s kvantitativním výtěžkem).

^XH NMR (300 MHZ, CDCl₃): δ 7,25 (d, 1H), 7,10 (m,

3H), 4,15 (q, 2H), 3,60 (s, 2H), 3,25 (s, 3H), 1,45 (s, 9H) , 1,25 (t, 3H).

(iv) Ethylester kyseliny 2-[(N-Boc-methylamino)fenyl]-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu T(iii) výše z ethylesteru kyseliny 3-(N-Boc-methylamino)fenyloctové [2,0 g, 6,8 mmol, z kroku (iii) výše] s obdržením 1,6 g (73 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 12,15 (d, 0,5H), 7,74 (s, 0,5H), 7,25 (m, 4H), 4,2 (m, 2H), 3,26 (S, 3H), 1,46 (s,

9H), 1,29 (m, 3H).

(v) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-Boc-aminofenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 2-[(N-Boc-methylamino)fenyl]-3-oxopropionové jako výchozí látky [z kroku (iv) výše].

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,25 (m, 1H), 7,15 (m,

3H), 7,05 (d, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,80 (m, 2H), 1,40 (s, 9H).

• 444 ·

«·· 444 4 444 • 444 4 444 4 44 4 • 4 4 4 4 ···· 4 444 444

4 4 4 4 4 4

444··· 44 4 44 44

Příklad V

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-chlor-5-methylfenyl)propi ono vá (i) 3-Chlor-5-methylbenzylbromid

Roztok 5-chlor-m-xylenu (14,06 g, 0,1 mol), N-bromsukcinimidu (17,8, 0,1 mol) a AIBN (1,1 g, 6,7 mmol) v tetrachlormethanu se vaří pod zpětným chladičem po dobu 2 h. Výsledná směs se ochladí a vytvořená tuhá látka se odstraní filtrací. Odpařeni poskytuje sloučeninu podle dílčího nadpisu (17,9 g, 80 %).

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: δ 7,20 (s, 1H) , 7,11 (s,

1H), 7,09 (s, 1H), 4,41 (s, 2H), 2,34 (s, 3H).

(ii) 3-Chlor-5-methylfenylacetonitril

Připraví se roztok 3-chlor-5-methylbenzylbromidu [17,6 g, 0,8 mol, z kroku (i) výše] a kyanidu sodného (8,2 g, 0,16 mol) v dimethylsulfoxidu (25 ml). Výsledná teplá směs se poněkud ochladí a poté se míchá při teplotě místnosti po dobu l h. Přidá se acetonitril (25 ml) a směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 1 h. Po ochlazení se přidá voda (200 ml) a výsledný roztok se extrahuje 3x etherem. Spojené organické fáze se promyjí 3x vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 16,6 g (80 %) surového produktu podle dílčího nadpisu, který se použije v dalším kroku bez dalšího čištění.

^ΧΗ NMR (400 MHz, CDC1J: δ 7,14 (s, 1H) , 7,12 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 3,69 (s, 2H), 2,35 (s, 3H).

φφ φφφφ φφ φ • φφφ φφφφ • ·Φ φφφφ φφφφ φφφ φ φφφφ « φφφ φφφ (iii) Kyselina 3-chlor-5-methylfenyloctová

Směs 3-chlor-5-methylfenylacetonitrilu [13,3 g, z kroku (ii) výše] a hydroxidu draselného (17 g, 0,3 mol) ve 150 ml směsi voda:isopropanol (2:1) se zahřívá za míchání v autoklávu při 120 °C přes noc a poté při teplotě místnosti po dobu 2 d. Isopropanol se odpaří a zbytek se okyselí 6 M roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 2 a extrahuje 3x etherem. Spojené organické vrstvy se promyjí 2x vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením sloučeniny podle dílčího nadpisu (10,4 g, 70 %).

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: 5 7,09 (s, 2H) , 6,97 (s,

1H), 3,57 (S, 2H), 2,18 (s, 3H) .

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 366 (M - l)“.

(iv) Ethyl-3-chlor-5-methylfenylacetat

Roztok kyseliny 3-chlor-5-methylfenyloctové [5,0 g, 27,09 mmol, z kroku (iii) výše] a kyseliny sírové (koncentrovaná (0,1 ml) v ethanolu (25 ml) se vaří pod zpětným chladičem přes noc. Roztok se odpaří a výsledná směs se vyjme roztokem uhličitanu sodného (75 ml). Po extrakci etherem (2x 75 ml) se spojené organické fáze promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 4,92 g (85 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: δ 7,07 (s, 1H) , 7,08 (s,

1H), 6,97 (s, 1H), 4,15 (g, 2H), 3,54 (s, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,25 (t, 3H).

(v) Ethyl-3-oxo-2-(3-chlor-5-methylfenyl)propionat

- 59 • · · 9 • · · · • 9 9 9 · · ·

9

99

Připraví se analogicky způsobu popsanému v příkladu N(v) výše z ethyl-3-chlor-5-methylfenylacetatu [4,89 g, 23 mmol, z kroku (iv) výše], ethylformiatu (3,3 g, 41,4 mmol) a sodíku (0,63 g, 27,6 mmol, přidávaného v malých kouscích) v suchém diethyletheru (50 ml) s obdržením 3,4 g (61 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě čirého oleje, který stáním pomalu krystaluje.

^XH NMR (500 MHZ, CDC1.J: S 12,2 (b, 1H) , 7,28 (s,

1H), 7,09 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 4,30 (q, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,30 (t, 3H).

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 238, 240 (M 1)'· (vi) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-chlor-5-methylfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethyl-3-oxo-2-(3-chlor-5-methylfenyl)propionatu jako výchozí látky [z kroku (v) výše].

^XH NMR (400 MHz, CDCl_a): 5 7,12 (s, 1H), 7,10 (s,

1H), 6,98 (s, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,82 (m, 2H), 2,30 (s, 3H).

Příklad W

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimethoxyfenyl)propionová (i) Ethyl-3,5-dimethoxyfenylacetat

Roztok kyseliny 3,5-dimethoxyfenyloctové (2,0 g, 10 • 4444 ·· 4 44

944 4 94 9 44 4

4444 9 944 9 94 4

4499 9944 4 449 499

9 9 9 4 4 4 mmol) a koncentrované kyseliny sírové (0,2 ml) v ethanolu (50 ml) se vaří přes noc pod zpětným chladičem. Roztok se odpaří a výsledná látka se rozpustí ve vodném roztoku hydroxidu sodného (1M). Po extrakci etherem (2 x 75 ml), promytí spojených organických fází roztokem chloridu sodného, vysušení síranem sodným a odpaření se obdrží 2,0 g (88 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

NMR (400 MHz, CDC1 ): δ 6,46 (d, 2H), 6,38 (t,

1H), 4,17 (q, 2H), 3,71 (s, 6H), 3,55 (s, 2H), 1,27 (t, 3H).

(ii) Ethylester kyseliny 2-(3,5-dimethoxyfenyl)-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) z ethyl-3,5-dimethoxyfenylacetatu [2,0 g,

8,9 mmol, z kroku (i) výše] s obdržením 3,4 g (61 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě čiré olejovíté kapaliny, která stáním pomalu krystaluje. Produkt je dostatečně čistý pro použití v následujícím kroku bez dalšího čištěni.

^H NMR (500 MHz, CDCl_a): δ 7,25 (m, 1H), 6,40 (m,

3H), 4,27 (q, 2H), 3,75 (S, 6H), 1,30 (t, 3H).

(iii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimethoxyfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného výše v příkladu E z ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3,5-dimethoxyfenyl)propionové [z kroku (ii) výše].

¹H NMR (300 MHz, CDCIJ: δ 6,44 (s, 2H) , 6,39 (s,

1H), 4,12 (m, 1H), 3,76 (m, 8H).

9119 ·· ·

• 9 • 9 9 · 9999 • 999 9 999 9 99 9 • 9999 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 9 · 9 9 9 9 9 ♦ · 9 9 99

Příklad X

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-[2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]propionová (i) 2-Chlor-5- (Boc-amino)benzylalkohol

K ledově chladnému roztoku kyseliny 5-amino-2-chlorbenzoové (9,0 g, 33 mmol) ve směsi tetrahydrofuran: cdimethylformamid (200 ml, 1:1) se přidá triethylamin (4,0 g, 40 mmol) a poté po kapkách isobutylchlorformiat (5,4 g, mmol). Směs se poté míchá po dalších 30 min, vytvořená bílá sraženina se odstraní filtrací, filtrát se ochladí na -15 °C a přidá se natriumborohydrid (3,8 g, 100 mmol) a voda (20 ml). Po 15 min se přidá voda (200 ml) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 h. Po odpaření se zbytek rozpustí v methanolu. Filtrace a odpaření poskytuje surový produkt, který se čistí mžikovou chromatografií [na silikagelu směsí dichlormethan:methanol (9:1)] s obdržením 7,4 g (87 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (500 MHz, CDC1J: 6 7,48 (s, 1H) , 7,27 (m,

2H), 6,58 (s, 1H), 4,74 (d, 2H), 1,52 (s, 9H).

(ii) 2-Chlor-5-(Boc-amino)benzylmesylat

K ledově chladnému roztoku 2-chlor-5-(Boc-amino)benzylalkoholu [7,4 g, 29 mmol, z kroku (i) výše] v dichlormethanu (100 ml) se přidá triethylamin (2,9 g, 29 mmol) a poté po kapkách mesylchlorid (3,3 g, 29 mmol). Po míchání po dobu 2 h se výsledná směs nalije do vody. Organická vrstva se oddělí, promyje vodou, vysuší síranem sodným

4444 • ·

4 44 4* • 4 4 4 9949

9·· · 944 4 44 4

4994 4494 9 449 944 • 4 4 9 4 9 9

494 449 44 4 4« 44 a odpaří s obdržením 10 g (100 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃): S 7,50 (m, 1H), 7,40 (m,

1H), 7,32 (s, 1H), 6,55 (b, 1H), 5,27 (s, 2H), 3,05 (s, 3H),

1,50 (s, 9H) .

(iii) [2-Chlor-5-(Boc-amino)fenyl]acetonitril

K míchanému roztoku 2-chlor-5-(Boc-amino)benzylmesylatu [z kroku (ii) výše] v dimethylsulfoxidu se přidá kyanid sodný (2,9 g, 60 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti přes noc. Směs se nalije do vody (300 ml) a vodná suspenze se extrahuje etherem (4 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří. Po mžikové chromatografii [na silikagelu směsí heptan:ethylacetat (8.2)] se obdrží 5,2 g (65 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃): 5 7,52 (d, 1H), 7,35 (m,

2H), 6,50 (b, 1H), 3,80 (s, 2H), 1,50 (s, 9H).

(iv) Kyselina [2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]octová

K roztoku [2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]acetonitrilu [5,2 g, 20 mmol, z kroku (iii) výše] ve směsi voda:isopropanol (37 ml, 2:1) se přidá hydroxid draselný (5 g, 89 mmol) a roztok se vaří pod zpětným chladičem přes noc. Směs se následně odpaří, přidá se směs vody a tetrahydrofuranu (50 ml, 1:1) a Boc__0 a tato směs se míchá přes noc. Tetrahydrofuran se odpaří, vodná fáze se promyje etherem (1 x 50 ml), okyselí se zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené organické vrstvy se ····

·· · • · · • · · · • · · ···· · • · · ·· · «· ·· · ·· ·· • · • · • · · • · promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 2,8 g (50 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,40 (b, IH), 7,26 (s,

IH), 7,21 (d, IH), 6,55 (b, IH), 3,77 (s, 2H), 1,50 (s, 9H).

(v) Ethyl-[2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]acetat

K roztoku kyseliny [2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]octové [2,8 g, 9,8 mmol, z kroku (iv) výše] v acetonu (100 ml) se přidá uhličitan draselný (2,1 g, 15 mmol). Poté se přidává za míchání a varu pod zpětným chladičem ethyljodid (70,6 g, 150 mmol). Roztok se odpaří a výsledná směs se rozdělí mezi ether a vodu (1:1, ml). Organická vrstva se oddělí a vodná vrstva se extrahuje jednou etherem (30 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 3,0 g (98 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,35 (b, IH), 7,25 (s,

IH), 7,20 (d, IH), 6,52 (b, IH), 4,15 (q, 2H), 3,70 (s, 2H),

1,50 (s, 9H), 1,25 (t, 3H).

(vi) Ethylester kyseliny 2-[2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) z ethyl-[2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]acetatu [3,0 g, 9,6 mmol, z kroku (v) výše] s obdržením 1,6 g (49 %) produktu podle dílčího nadpisu ve formě čiré hnědavé olejovité kapaliny, která je dostatečně čistá pro další použití bez čištění.

- 64 4 :*·· I ···?

0« ·»

.. . í :: i ···· · ··· · ·* • · · · ft ·· ·· ^XH NMR (300 MHz, MeOD): 5 8,98 (b, 0,5 H), 7,89 (s, 0,5 H), 7,25 (m, 3H), 4,88 (s, 2H), 4,15 (q, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,20 (t, 3H).

(vii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-[2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]propionová

Připraví se podle způsobu popsaného výše v příkladu E z ethylesteru kyseliny 2-[2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]-3-oxopropionové [z kroku (vi) výše].

^XH NMR (300 MHz, CDCl₃): 5 7,25 (m, 4H), 6,70 (b,

1H), 4,37 (m, 1H), 4,15 (b, 1H), 4,05 (t, 1H), 3,90 (d, 1H),

1,50 (S, 9H).

Příklad Y

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methylfenyl)propionové (i) Ethylester kyseliny 2-(3-methylfenyl)-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) s použitím 3-methylfenylacetatu (3,0 g, 17 mmol) jako výchozí látky s obdržením 2,5 g (72 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu, která je dostatečně čistá pro použití v dalším kroku bez dalšího čištění.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,25 (m, 2H), 7,05 (m,

3H), 4,30 (q, 2H), 2,40 (q, 2H), 1,30 (t, 3H).

(ii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methylfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše ♦ *·· • ·α «»« »« « «· ·· • 9 * 9 9 9«

9 99 9 99 9 • 9 9999 ί 99« 99« . « 9 · » »9 I «4 ·* z ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(3-methylfenyl)propionové [z kroku (i) výše] s obdržením 1,6 g (80 %) sloučeniny podle nadpisu.

¹H NMR (300 MHz, CDC1J: δ 7,20 (m, 1H) , 7,05 (m, 3H), 4,12 (t, 1H), 3,80 (m, 2H), 2,32 (s, 3H).

Příklad Z

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2,5-dimethylfenyl)propionové (i) Ethyl-(2,5-dimethylfenyl)acetat

Roztok kyseliny (2,5-dimethylfenyl)octové (3,0 g,

18,3 mmol) a koncentrované kyseliny sírové (0,1 ml) v ethanolu (40 ml) se vaří pod zpětným chladičem po dobu 6 dnů. Roztok se odpaří, přidá se ether (40 ml) a výsledná směs se promyje roztokem uhličitanu sodného (2 x 25 ml) a vody (1 x 25 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a odpaří s obdržením 2,94 g (84 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě čiré bezbarvé kapaliny. Čistota 97 %.

^ΧΗ NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 7,08 (d, 1H), 7,02 (d,

1H), 7,00 (s, 1H), 4,17 (q, 2H), 3,61 (s, 2H), 2,33 (s,

3H), 2,29 (s, 3H), 1,28 (t, 3H).

(ii) Ethylester kyseliny 2-(2,5-dimethylfenyl)-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) s použitím ethyl-(2,5-dimethylfenyl)acetatu [2,92 g, 15 mmol, z kroku (i) výše] jako výchozí látky s obdržením 2,89 g (86 %) produktu podle dílčího nadpisu ve • ··* • · • ··· · · · ·» ·· »····· · · · ··· . - « » · · · «»««>*« !· · »· formě hnědavě žluté olejovité kapaliny.

^ΧΗ NMR (400 MHz, CDC1J: δ 12,00 (d, 1H) , 7,10 (m, 2H), 6,92 (s, 1H), 4,25 (b, 2H) , 2,33 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H), 1,25 (t, 3H).

(iii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2,5-dimethylfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného výše v příkladu E z ethylesteru kyseliny 3-oxo-2-(2,5-dimethylfenyl)propionové [2,87 g, 13 mmol, z kroku (ii) výše] s obdržením 1,37 g (55 %) produktu podle nadpisu ve formě bílého prášku.

^XH NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 7,10 (d, 1H), 7,01 (d,

1H) , 7,00 (S, 1H), 4,14 (m, 2H), 3,73 (q, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,29 (s, 3H).

Příklad AA

Kyselina 2-(4-benzyloxy-3-methoxyfenyl)-3-hydroxypropionová (i) Benzyl-4-benzyloxy-3-methoxyfenylacetat

Uhličitan česný (17,88 g, 54,9 mmol) se přidá k roztoku kyseliny homovanilinové (2,0 g, 11 mmol) v acetonitrilu a poté se po kapkách přidává benzylbromid (4,3 g, 24,15 mmol) po dobu 10 min. Směs se vaří pod zpětným chladičem přes noc, filtruje Hyflo a odpaří. Výsledná směs se rozpustí v ethylacetatu (100 ml), přidá se voda (30 ml) a oddělí se vodná vrstva. Organická fáze se promyje roztokem kyseliny citrónové (5 %, l x 20 ml) a roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 4,25 g sloučeniny • · ·♦ • · » $ • ··*· »9 4 · 9 • 9 · • · · « •» *

podle dílčího	nadpisu s	kvantitativním	výtěžkem.
¹H NMR	(300 MHz,	CDC1 ): 5 7,43	(d, 2H), 7,34	(m,
8H), 6,82 (d,	2H), 6,74	(dd, 1H), 5,33	(s, 4H), 3,84	(s,
3H), 3,59 (s,	2H) .

(ii) Ethyl-2-(4-benzyloxy-3-methoxyfenyl)-3-oxopropionat

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) z benzyl-4-benzyloxy-3-methoxyfenylacetatu [4,12 g, 11,4 mmol, z kroku (i) výše] s obdržením 1,4 g (31,5 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 327 (M - 1)“.

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: 5 12,03 (d, 1H) , 7,44 (d, 2H), 7,30 (m, 5H), 6,85 (d, 2H), 6,72 (dd, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,27 (q, 2H), 3,88 (s, 3H), 1,30 (t, 3H).

(iii) Ethyl-2-(4-benzyloxy-3-methoxyfenyl)-3-hydroxypropionat

Roztok ethyl-2-(4-benzyloxy-3-methoxyfenyl)-3-oxopropionatu [1,356 g, 3,47 mmol, z kroku (ii) výše] ve směsi methanol:dichlormethan (3:1, 20 ml) se ochladí na -15 až -5 °C a po částech se přidává natriumborohydrid (0,264 g, 6,95 mmol). Ochlazená reakční směs se zamíchá a poté se ponechá dosáhnout teploty místnosti. Přidá se voda a směs se částeč ně odpaří. Po extrakci ethylacetatem (2 x 25 ml), promytí organické fáze chloridem sodným, vysušení síranem sodným a odpaření se obdrží 1,32 g (97,1 %) sloučeniny podle dílčí ho nadpisu.

• » · ·«' · 9 · ·

9 9 9 9 9 9 ·

M « « 9999 9 999 999 • 9 f 9 9 *Ν» 9 *♦ *9

	^XH	NMR	(400	MHZ,	CDC1₃): δ 7,42 (d, 2H), 7,32	(m,
4H) ,	6,82	(m,	2H),	6,74	(dd, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,15	(m,
3H) ,	3,88	(s,	3H),	3,78	(m, 2H), 1,23 (t, 3H).

(iv) Kyselina 2-(4-benzyloxy-3-methoxyfenyl)-3-hydroxypropionová

K roztoku ethyl-2-(4-benzyloxy-3-methoxyfenyl)-3-hydroxypropionatu [1,29 g, 3,29 mmol, z kroku (iii) výše] v tetrahydrofuranu (12,5 ml) se přidá roztok hydroxidu lithného (0,273 g, 6,75 mmol) ve vodě (5 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2,5 h. Výsledná směs se částečně odpaří, přidá se voda (25 ml), směs se promyje dvěma díly dichlormethanu, okyselí vodným 2M roztokem kyseliny chlorovodíkové a extrahuje 3 díly dichlormethanu. Spojené organické vrstvy se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 10,55 g žlutého prášku s kvantitativním výtěžkem. Čistota 83,2 %.

^XH NMR	(400	MHz, MeOH): δ 7,41	(ů,	2H), 7,32	(m, 4H),
6,94 (d, 2H),	6,82	(dd, 1H), 5,06 (s,	2H)	, 4,04 (m,	1H) ,
3,83 (S, 3H),	3,70	(m, 2H).
Příklad AB

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dichlorfenyl)propionová (i) 3,5-Dichlorbenzylalkohol

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu X(i) výše z kyseliny 3,5-dichlorbenzoové (15,3 g, 80 mmol), triethylaminu (8,9 g, 88 mmol), isobutylchlorformiatu (12 g, mmol) a natriumborohydridu (9,0 g, 240 mmol) s obdržením

Ϊ ···· *

Λ « nadpisu.

(t, 1H), 7,28 (d,

10,5 g (74 %) sloučeniny podle dílčího ^XH NMR (400 MHz, CDCl^): S 7,27 2H), 4,68 (s, 2H).

(ii) 3,5-Dichlorfenylacetonitril

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladech X(ii) a X(iii) výše z 3,5-dichlorbenzylalkoholu [10,3 g, 58 mmol, z kroku (i) výše], triethylaminu (6,5 g, 64 mmol) a mesylchloridu (7,0 g, 61 mmol) s obdržením 9,6 g (89 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 7,37 (m, 3H), 3,74 (s,

2H) .

(iii) Kyselina 3,5-dichlorfenyloctová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu X(iv) výše z 3,5-dichlorfenylacetonitrilu [9,6 g, 52 mmol, z kroku (ii) výše] a hydroxidu draselného (12,3 g, 220 mmol) s obdržením 7,6 g (72 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHZ, CDC1J: δ 7,31 (t, 1H) , 7,20 (d,

2H), 3,63 (s, 2H).

(iv) Ethyl-3,5-dichlorfenylacetat

Připraví se podle způsobu popsaného v přikladu T(ii) výše z kyseliny 3,5-dichlorfenyloctové [7,5 g, 37 mmol, z kroku (iii) výše] a koncentrované kyseliny sírové (0,1 ml) s obdržením 3,0 g (35 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

«»»« ·· 4 ♦·« ·· • · 4 4 4 4 4 f

444 4 4 4 · 4 44 4 ··· Í> 4 4 · 4 9 ·· 4 44 4

H NMR (400 MHz, CDCl₃): S 7,28 (t, 1H), 7,18 (d,

2H), 4,17 (q, 2H), 3,56 (s, 2H) , 1,27 (t, 3H).

(v) Ethylester kyseliny 2-(3,5-(dichlorfenyl)-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 5A, 3831 (1989) z ethyl-3,5-dichlorfenylacetatu [3,0 g,

12,9 mmol, z kroku (iv) výše] s obdržením produktu podle dílčího nadpisu (3,0 g, 89 %) ve formě čirého oleje, který je dostatečně čistý pro použití bez dalšího čištění v následujícím kroku.

^XH NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 12,20 (d, 1H), 7,29 (t, 1H), 7,23 (d, 2H), 4,32 (q, 2H), 1,33 (t, 3H).

(vi) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dichlorfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného výše v příkladu E z ethylesteru kyseliny 2-(3,5-dichlorfenyl)-3-oxopropionové [z kroku (v) výše].

NMR (400 MHz, CDC1J: δ 7,34 (t, 1H) , 7,24 (d,

2H), 4,12 (dd, 1H), 3,91 (dd, 1H). 3,84 (dd, 1H).

Příklad AC

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2,3-dimethoxyfenyl)propionová (i) Ethyl-2,3-dimethoxyfenylacetat

K roztoku kyseliny 2,3-dimethoxyfenyloctové (2,52 g, 12,8 mmol) v absolutním ethanolu (20 ml) se přidá kyselina « ·*9 ···

«

999 9 9

99

9 9 9

9 9 « • · 9 99 9

9

9 9 9 sírová (30 μΐ) a roztok se vaří pod zpětným chladičem po dobu 20 h. Výsledný roztok se odpaří, zbytek se rozpustí v etheru a etherový roztok se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 30 ml) a roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří s obdržením sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: δ 6,99 (m, 1H) , 6,83 (m,

2H), 4,16 (q, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,65 (s, 2H), 1,25 (t, 3H).

(ii) Ethylester kyseliny 2-(2,3-dimethoxyfenyl)-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) z ethyl-2,3-dimethoxyfenylacetatu [2,14 g,

9,5 mmol, z kroku (i) výše] s obdržením sloučeniny podle dílčího nadpisu (1,53 g, 64 %) ve formě čiré zelenavě žluté olejovité kapaliny, která je dostatečně čistá pro další použití bez čištění v dalším kroku.

	^XH	NMR	(400	MHZ,	CDC1	₃): δ 12,00 (d	, 1H), 7,19 (d,
1H) ,	7,05	(m,	2H),	6,91	(m,	2H), 6,74 (dd,	1H), 4,24 (q,
2H),	3,87	(S,	3H),	3,74	(s,	3H), 1,24 (t,	3H) .

(iii) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2,3-dimethoxyfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného výše v příkladu E z ethylesteru kyseliny 2-(2,3-dimethoxyfenyl)-3-oxopropionové [z kroku (ii) výše].

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 225 (M - l)~.

• * 4 « 4 9 9 9 9 9 99 «4 . · 4 4.. 4 • · 4 · · 9 9 4 · · 4 · • 4 . # 999999 999 999

9 9 9 9 9 »

9 999 99 > · * I · ^ΧΗ NMR (400 MHz, CDC1J: 6 7,05 (t, 1H) , 1H), 6,82 (dd, 1H), 4,15 (m, 3H), 3,85 (s, 6H) , 1H) .

6,87 (dd, 3,75 (m,

Příklad AD

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxy-5-chlorfenyl)propionová (i) 3-Methoxy-5-chlorbenzaldehyd

3,5-Dichloranisol (1,1 g, 6,8 mmol) se přidává po částech k hořčíkovým hoblinám (0,20 g, 8,2 mmol) v tetrahydrofuranu (suchý, 20 ml). Po prvním přídavku se pro zahájení reakce přidá ethylbromid (0,1 ml). Po skončení přidávání se reakční směs míchá při teplotě 60 °C přes noc a poté se ochladí na 0 °C a přidá se dimethylformamid. Po míchání po dobu 1 h se směs nalije do koncentrované vodné kyseliny chlorovodíkové a extrahuje etherem (3 x 50 ml). Kombinované organické fáze se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 2,35 g sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHZ, CDC1₃): δ 9,91 (s, 1H), 7,43 (t,

1H), 7,28 (t, 1H), 7,15 (t, 1H), 3,87 (s, 3H).

(ii) 3-Methoxy-5-chlorfenylacetaldehyd

Připraví se podle způsobu popsaného P. Weierstahlem a kol. v Liebigs Ann. 1389 (1995) s použitím 3-methoxy-5-chlorbenzaldehydu [2,35 g, 13,8 mmol, z kroku (i) výše] jako výchozí látky s obdržením 2,0 g (okolo 54 %) sloučeniny • » · · ··· • 9 ·« ·· • * * » • · 4 4 t · · · 4 · · * · • · 4 · podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: δ 9,71 (t, 1H) , 6,84 (t,

1H), 6,81 (t, 1H), 6,64 (t, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,62 (s, 2H).

(iii) Ky s e1ina (3-methoxy-5-chlorfenyl)octová

Připraví se podle způsobu popsaného autory S. E. de Laszlo a P. G. Willard v J. Am. Chem. Soc., 107. 199 (1985) z 3-methoxy-5-chlorfenylacetaldehydu [102 mg, 0,55 mmol, z kroku (ii) výše] s obdržením 37 mg (33,6 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 199 (Μ - 1)~^XH NMR (400 MHz, CDC1.J: δ 6,82 (t, 1H) , 6,75 (t,

1H), 6,62 (t, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,50 (s, 2H).

(iv) Ethyl-(3-methoxy-5-chlorfenyl)acetat

Roztok kyseliny 3-methoxy-5-chlorfenyl)octové [0,983 g, 4,9 mmol, z kroku (iii) výše] a koncentrované kyseliny sírové (0,1 ml) v ethanolu (25 ml) se vaří pod zpětným chladičem přes noc. Výsledná směs se odpaří a přidá se vodný roztok uhličitanu sodného (75 ml). Směs se extrahuje etherem (2 x 75 ml), spojené organické vrstvy se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,989 g (88,3 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě hnědé olejovíté kapaliny.

^XH NMR (500 MHz, CDC1J: δ 6,88 (t, 1H) , 6,81 (t,

1H), 6,72 (t, 1H), 4,16 (q, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,54 (s, 2H) , 1,26 (t, 4H).

» ··♦· 44 Φ · 4 Φ · 4

4 44 · 444 ··· 4 4444 · 4 · « •••«44 44 4

4 4 4

4 4 » « ·4 4

4 4 4 4 4 • * «· 4 4 (v) Ethylester kyseliny 2-(3-methoxy-5-chlorfenyl)-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) s použitím ethyl-3-methoxy-5-chlorfenyl)acetatu [0,989 g, 4,33 mmol, z kroku (iv) výše] jako výchozí látky s obdržením 0,347 g (31,3 %) produktu podle dílčího nadpisu, který je dostatečně čistý pro další použití bez čištění.

^XH NMR (500 MHz, CDCl_a): δ 12,15 (b, 1H), 7,31 (s,

1H), 6,86 (t, 1H), 6,82 (t, 1H), 6,70 (t, 1H), 4,30 (q, 2H), 3,80 (s, 3H), 1,31 (t, 3H).

(ví) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxy-5-chlorfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu E výše s použitím ethylesteru kyseliny 2-(3-methoxy-5-chlorfenyl)-3-oxopropionové [z kroku (v) výše].

^XH NMR (500 MHz, CDC1J: δ 6,89 (t, 1H) , 6,84 (t,

1H), 6,74 (t, 1H), 4,12 (dd, 1H), 3,83 (m, 2H), 3,79 (s,

3H) .

Příklad AE

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-methyl-5-methoxyfenyl)propionová (i) 2-(2-Brom-5-methoxyfenyl)-1,3-dioxolan • · « 4« ·· · 0 0 0 · 0000

0000 0 000 0 00 0 0 000 000000 000 000 0 4 4 0 0 0 ·

400400 09 4 04 44

K roztoku 2-brom-5-methoxybenzaldehydu (5,0 g, 23,2 mmol) v toluenu (300 ml) se přidá ethandiol (2,16 g, 34,2 mmol) a kyselina paratoluensulfonová (20 mg) a poté se směs vaří pod zpětným chladičem po dobu 12 h. Výsledná směs se ochladí na teplotu místnosti, promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 5,918 g (98 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (500 MHz, CDC1J: δ 7,44 (d, 1H) , 7,16 (d,

1H), 6,78 (dd, 1H), 6,04 (s, 1Η), 4,12 (m, 4Η), 3,80 (s,

3H).

(ii) 2—(2-Methyl-5-methoxyfenyl)-1,3-dioxolan

Roztok 2-(2-brom-5-methoxyfenyl)-l,3-dioxolanu [5,44 g, 21 mmol, z kroku (i) výše] v suchém tetrahydrofuranu (60 ml) se ochladí na teplotu -78 °C pod atmosférou dusíku a přidá se n-butyllithium (1,4 M, 19,5 ml) po kapkách z injekční stříkačky. Po přidání se roztok míchá při teplotě -78 °C po dobu 35 min a poté se přidá methyljodid (13,41 g,

94,5 mmol). Výsledná směs se pomalu míchá do ohřátí na teplotu místnosti a poté se přidá vodný roztok chloridu amonného a směs se extrahuje etherem. Organická fáze se suší síranem sodným a odpaří s obdržením 4,25 g sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě hnědě olejovité kapaliny s kvantitativním výtěžkem.

¹H NMR (500 MHz, CDC1J: δ 7,12 (d, 1H) , 7,08 (d,

1H), 6,81 (dd, 1H), 5,93 (s, 1H), 4,10 (m, 4H), 3,80 (S,

3H), 2,35 (S, 3H).

(iii) 2-Methyl-5-methoxybenzaldehyd ·· « *· « <· · · » φ « « η ··· · · > · 9 · · · • 99 «««··· · « · «« « • 9 · « · · ·»♦ ♦· · <· ·«

Ro z tok 2-(2-methyl-5-methoxyfenyl)-l,3-dioxolanu [4,2 g, 21,6 mmol, z kroku (ii) výše] ve směsi tetrahydrofuranu (60 ml) a vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové (5 %, 30 ml) se míchá přes noc při teplotě místnosti. Roztok se odpaří a směs se extrahuje etherem. Organická fáze se vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 2,956 g (91 %) tmavě hnědé kapaliny.

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: ď 10,28 (s, 1H) , 7,33 (d, 1H), 7,16 (d, 1H), 7,04 (dd, 1H), 3,84 (s, 3H), 2,60 (s,

3H).

(iv) Ethyl-(2-methyl-5-methoxy)acetat

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladech AD(ii) až AD(iv) výše z 2-methyl-5-methoxybenzaldehydu [z kroku (iii) výše] s obdržením 1,18 g (30 % ve třech krocích) produktu podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHz, CDC1.J: <S 7,08 (d, 1H) , 6,77 (d,

1H), 6,73 (dd, 1H), 4,16 (g, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,59 (s,

2H), 2,24 (S, 2H), 1,26 (t, 3H).

(v) Ethylester kyseliny 2-(2-methyl-5-methoxyfenyl)-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) s použitím ethyl-2-methyl-5-methoxyacetatu [1,16 g, 5,57 mmol, z kroku (iv) výše] jako výchozí látky s obdržením 0,745 g (57 %) produktu podle dílčího nadpisu, který je dostatečně čistý pro použití bez dalšího čištění.

^XH NMR (500 MHz, CDC1₃): 5 11,97 (d, 1H), 7,14 (d, • AAA • · A ♦ A ♦·

A AAA AAAA • AA A AAA 9 AA A

A AAA A A A A A A AAA AAA

A AAAA A A

1H), 7,10 (d, 1H), 6,67 (dd, 1H), 4,24 (q, 2H), 3,78 (s,

3H), 2,14 (s, 2H), 1,23 (t, 3H).

(vi) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-methyl-5-methoxyfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného výše v příkladu E z ethylesteru kyseliny 2-(2-methyl-5-methoxyfenyl)-3-oxopropionové [z kroku (v) výše], ^ΧΗ NMR (400 MHz, MeOD): δ 7,09 (d, 1H), 6,84 (d, 1H), 6,72 (dd, 1H), 4,03 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (dd, 1H), 2,32 (S, 2H).

Příklad AF (i) Methylester kyseliny tropové

K roztoku kyseliny tropové (5,0 g, 30 mmol) ve směsi toluen:dichlormethan (150 ml, 2:1) se přidá DBU (4,6 g, 30 mmol) a poté methyljodid (4,3 g, 30 mmol). Směs se míchá přes noc, přidá se voda a fáze se ponechají oddělit. Vodná fáze se extrahuje etherem a spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové a vodou, suší se síranem sodným a odpaří s obdržením 0,95 g (18 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

¹H NMR (300 MHz, CDCl_a): δ 7,25 (m, 5H), 4,25 (m,

1H), 3,88 (m, 2H), 3,73 (s, 3H).

(ii) Methylester kyseliny 2-methyl-2-fenyl-3-methoxypropionové

4444 ·· 4

4« 4« » 4 4 4 • 4 4 4

944 444 * «

9 4

K chladnému roztoku methylesteru kyseliny tropové [0,9 g, 5,0 mmol, z kroku (i) výše] v dimethylformamidu (10 ml) se přidá hydrid sodný (0,87 g, 20 mmol) a výsledná směs se míchá po dobu 15 min, poté se přidá methyljodid (2,8 g, mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Výsledná směs se vylije do vody (200 ml) a výsledná suspenze se extrahuje etherem (4 x 25 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,70 g (zhruba 65 %) surového materiálu, který se používá bez dalšího čištění v následujícím kroku.

NMR (300 MHz, CDC1₃): S 7,25 (m, 5H) , 4,00 (d,

1H), 3,67 (s, 3H), 3,60 (d, 1H), 3,35 (s, 3H), 1,67 (s, 3H).

(iii) Kyselina (R,S)-2-methyl-2-fenyl-3-methoxypropionová

K roztoku methylesteru kyseliny 2-methyl-2-fenyl-3-methoxypropionové [0,7 g, 3,4 mmol, z kroku (ii) výše] v methanolu (50 ml) se přidá vodný roztok hydroxidu sodného (2M, 50 ml) a směs se míchá po dobu 2 h. Směs se okyselí vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové a extrahuje etherem (3 x 50 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,40 g (zhruba 61 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHZ, CDC1J: S 7,35 (m, 5H) , 4,00 (d,

1H), 3,60 (d, 1H), 3,40 (s, 3H), 1,66 (s, 3H).

Příklad AG

Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-chlor-3-methylfenyl)propionová «99« • 9 9 · · 9 *

9 9 9 9 9 9 • · · 9 9 9 9 9 99 9

9*9 9 «999 · 99« 999

9 9 9 9 9 (i) Kyselina 2-chlor-3-methylbenzoová

Dusitan sodný (14,0 g, 0,2 mol) se přidá s roztoku kyseliny 2-amino-3-methylbenzoové (30,2 g, 0,2 mol) ve směsi vody (200 ml) a vodného roztoku hydroxidu sodného (30%, 24 ml). Roztok se ochladí na 0 °C a přidává se po kapkách za míchání ke směsi kyseliny chlorovodíkové (koncentrovaná,

87,6 ml) a ledu (100 g). Po míchání po dobu několika min se výsledný roztok přidá do ledově chladné směsi vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové (23 %, 100 g), chloridu měďného (20 g, 0,2 mol) a vody (40 ml). Roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 30 min a při teplotě 100 °C po dobu 30 min, ochladí a výsledná sraženina se izoluje filtrací, promyje vodou a suší přes noc s obdržením 27,4 g (80,3 %) bílé krystalické látky.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 169, 171 (M - 1)“.

^ΧΗ NMR (500 MHz, CDCl_a): δ 7,79 (d, 1H), 7,43 (d,

1H), 7,25 (t, 1H), 2,46 (s, 3H).

(ii) 2-Chlor-3-methylbenzylalkohol

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu X(i) výše z kyseliny 2-chlor-3-methylbenzoové [13,65 g, 0,08 mol, z kroku (i) výše] s obdržením 11,38 g (90,8 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě bílých krystalů.

NMR (500 MHz, CDC1J: δ 7,32 (d, 1H) , 7,31 (d,

1H), 7,18 (dd, 1H), 4,78 (d, 2H), 2,40 (s, 3H).

(iii) 2-Chlor-3-methylfenylacetonitril

9090 00 4

Ort ·· ♦ * · ·

OU 9 999 9 9 0 9

9 0 9 9 9999 9

9 9 9 9

990909 09 « ♦ 9 99 «9 9 ·9 9

9 9 9 0 9

9

9 9 9

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladech X(ii) a X(iii) výše z 2-chlor-3-methylbenzylalkoholu [11,3 g, 72,15 mmol, z kroku (ii) výše] s obdržením 11,4 g (93 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě červenohnědé tuhé látky.

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: S 7,35 (d, 1H) , 7,24 (t, 1H), 7,21 (d, 1H), 3,84 (s, 2H), 2,41 (s, 3H).

(iv) Ethyl-2-chlor-3-methylfenylacetat

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu T(ii) z 2-chlor-3-methylfenylacetonitrilu [5,28 g, 32 mmol, z kroku (iii) výše] s obdržením 6,3 g (88,2 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 7,12 (d, 2H), 7,16 (dd, 1H), 4,17 (q, 2H), 3,77 (s, 2H), 2,39 (s, 3H), 1,26 (t, 3H) (v) Ethylester kyseliny 2-(2-chlor-3-methylfenyl)-3-oxopropionové

Připraví se podle způsobu popsaného v J. Org. Chem., 54, 3831 (1989) z ethyl-2-chlor-3-methylfenylacetatu [6,28 g, 29,53 mmol, z kroku (iv) výše] s obdržením 5,418 g (76,2 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu. Tento produkt je dostatečně čistý pro použití bez dalšího čištění v následujícím kroku.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS (m/z 239, 241 (M 1)-.

*♦ ^XH NMR (500 MHz, CDC1J: δ 11,96 (b, 1H) , 7,21 (d, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,03 (d, 1H), 4,25 (m, 2H), 2,41 (s, 3H) , 1,23 (t, 3H).

(vi) Kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-chlor-3-methylfenyl)propionová

Připraví se podle způsobu popsaného výše v příkladu E z ethylesteru kyseliny 2-(2-chlor-3methylfenyl)-3-oxopropionové [5,39 g, 22,39 mmol, z kroku (v) výše] s obdržením 4,03 g (79,8 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHz, CDC1J: δ 7,25 (d, 1H) , 7,21 (m,

1H), 7,16 (d, 1H), 4,36 (dd, 1H), 4,02 (dd, 1H), 3,74 (dd, 1H), 2,38 (S, 3H).

Sloučenina podle vynálezu

Příklad 1 (R)- a (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab.HCl (i) (R)- a (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Směs kyseliny (R,S)-tropové (0,25 g, 1,5 mmol), H-Aze-Pab(Z).2HC1 [0,73 g, 1,7 mmol, z příkladu A výše] a TBTU (0,53 g, 1,7 mmol) v 10 ml dimethylformamidu se ochladí na ledové lázni. Přidá se DIPEA (0,78 g, 6,0 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 48 h. Reakční směs se následně odpaří, zředí 400 ml vody (pH se upraví na 8 hydrogenuhličitanem sodným) a extrahuje ethylacetatem (3 x 75 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 50 ml) a vo• 999 • ♦ · 9 9 — · 9 ·· · · • · 9 9 9 • 9 9 9 •99«9« 99 .· 9

9999

99

9 * ·

9 · 9 • 99 999 • 9 • * 9 9 dou (1 χ 50 ml), vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt (0,59 g) se vyčistí mžikovou chromatografii na sloupci silikagelu (120 g), eluuje dichlormethanem (300 ml), směsí dichlormethan: :tetrahydrofuran (500 ml, 3:1) a tetrahydrofuranem (1750 ml). Sbírají se frakce po 20 ml. Frakce 41 až 54 se odpaří s obdržením 150 mg sloučeniny 1A s poměrem diastereisomerů >99:1. Frakce 70 až 90 se odpaří s obdržením sloučeniny 1B s poměrem diastereoisomerů 89:11.

Sloučenina 1A:

^ΧΗ NMR (400 MHz, CDCl_a): S 8,27 (m, 1H) , 7,67 (d,

2H) , 7,38 (d, 2H), 7,3-7,1 (m, 10 H), 5,49 (d, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,73 (m, 1H), 4,4-4,2 (m, 2H), 4,10 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,71 (m, 1H), 3,63 (m, 2H), 2,34 (m, 1H), 2,23 (m, 1H).

^X3C NMR (100 MHz, CDC1₃) amidinové a karbonylové uhlíky: 173,7, 171,0, 168,5, 164,4.

Sloučenina 1B:

¹H NMR (400 MHz, CDC1₃): 5 8,27 (m, 1H, menší poměr diastereoisomer/rotamer), 8,14 (m, 1H, větší poměr diastereoisomer/rotamer), 7,9-7,7 (m, 2H), 7,5-7,1 (m, 12 H), 5,56 (d, 1H), 5,22 (s, 2H, větší poměr diastereoisomer/rotamer), 5,20 (s, 2H), menší poměr diastereoisomer/rotamer), 4,89 (m, 1H, větší poměr diastereoisomer/rotamer), 4,82 (m, 1H, menší poměr diastereoisomer/rotamer), 4,6-4,3 (m, 2H), 4,2-4,0 (m, 2H), 3,8-3,6 (m, 3H), 2,48 (m, 1H), 2,38 (m, 1H).

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃), amidinové a karbonylové uhlíky: 174,8, 170,8, 168,0, 164,7.

···· (ii) (R) — nebo (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab.HCl

Sloučenina IA [100 mg, 0,19 mmol, z kroku (i) výše] se rozpustí v 10 ml ethanolu a přidá se 5% palladium na uhlíku (52 mg). Směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po dobu 5 h. Po zfiltrování a odpaření se produkt rozpustí v 5 ml vody a 190 μΐ kyseliny chlorovodíkové (1 M). Po lyofilizaci se obdrží sloučenina podle nadpisu ve formě bílého prášku. Výtěžek je 60 mg (74 %), diastereoisomerní poměr 99:1.

^XH NMR (400 MHz, D₂0) : 6 8,75 (m, IH, větší poměr rotameru), 8,59 (m, IH, menší poměr rotameru), 7,69 (d, 2H, větší poměr rotameru), 7,63 (d, 2H, menší poměr rotameru), 7,5-7,0 (m, 7H), 5,10 (m, IH, ostatní signály od téhož protonu překrývající se se signálem HDO), 4,47 (bs, IH), 4,27 (m, IH, větší poměr rotameru), 4,17 (IH, menší poměr rotameru), 4,1-3,6 (m, 5H), 2,67 (m, IH, menší poměr rotameru), 2,40 (m, IH, větší poměr rotameru), 2,3-2,1 (m, IH).

^X3C NMR (75 MHz, D₂0), amidinové a karbonylové uhlíky (rotamery): 177,4, 176,4, 175,3, 174,8, 160,0, 157,6.

(iii) (S)- nebo (R)-PhCHCH₂OH-C(O)-Aze-Pab.HCl

Sloučenina podle nadpisu se připraví podle způsobu příkladu l(ii) z 50 mg (0,097 mmol) sloučeniny 1B [z kroku (i) výše]. Výtěžek je 32 mg (79 %), diastereoisomerní poměr 83:17.

^XH NMR (400 MHz, D_a0): 6 7,8-7,0 (m, 9H), 5,10 (m,

IH, menši poměr diastereoisomer/rotamer), 4,83 (m, IH, větší • Φ·

ΦΦΦ • · · · « φ φ poměr diastereoisomer/rotamer), 4,6-4,2 (m, 3Η), 4,1-3,4 (m, 4Η), 2,54 (m, 1Η, větší poměr diastereoisomer/rotamer), 2,39 (m, 1H, menši poměr diastereoisomer/rotamer), 2,2-2,1 (m,

1H) .

^X3C NMR (75 MHz, D^O) amidinové a karbonylové uhlíky: 176,6, 174,9, 168,9.

Příklad 2 (R)- a (S)-3-Methoxyfenyl-CH(CH OH)-C(O)-Aze-Pab.CH COOH (i) (R)- a (S)-3-Methoxyfenyl-CH(CH_0H)-C(0)-Aze-Pab(Z)

K roztoku kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxyfenyl)propionové (0,157 g, 0,8 mmol, z příkladu E výše) v dimethylformamidu (10 ml) se přidá H-Aze-Pab(Z).2HC1 (0,387 g, 0,88 mmol, z přikladu A výše) a směs se ochladí v ledové lázni. Přidá se TBTU (0,283 g, 0,88 mmol) a DIPEA (0,414 g, 3,20 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 48 h. Reakční směs se následně odpaří a zbytek se rozpustí ve vodě (100 ml) s následnou extrakcí ethylacetatem (3 x 25 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 25 ml) a vodou (25 ml), vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt se vyčistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu elucl směsí dichlormethan:methanol (98:2), ethylacetatem, směsí ethylacetat:ethanol (95:5), směsí ethylacetat:ethanol (9:1) a směsí ethylacetat:ethanol (85:15). Některé frakce se odpaří s obdržením 177 mg sloučeniny 2A s diastereoisomerním poměrem 88:12. Ostatní frakce se odpaří s obdržením 164 mg sloučeniny 2B s diastereoisomerním poměrem 88:12.

··«· ·· · ·· ·· • · · · • · · ·

Sloučenina 2Α:

	NMR	(500	MHZ, CDC1,	): δ 8,20	-8,27	(m,	NH)	t
7,79-7,85	(m,	2H) ,	7,18-7,48	(m, 8H),	6,70—6	,88	(m,	3H) ,
5,20-5,24	(m,	2H) ,	4,84-4,99	(m, 1H),	4,34-4	,64	(m,	2H) ,
3,98-4,16	(m,	2H),	3,56-3,82	(m, 6H),	2,26-2	,70	(m,	2H) .
Sloučenina	. 2B:
	NMR	(500	MHZ, CDC1	J: δ 8,14	-8,21	(m,	NH)	r
7,78-7,88	(m,	2H),	7,18-7,48	(m, 8H),	6,70-6	,87	(m,	3H),
5,20-5,24	(m,	2H),	4,86-5,00	(m, 1H),	4,34-4	,64	(m,	2H),
4,00-4,16	(m,	2H),	3,58-3,82	(m, 6H),	2,39-2	,69	(m,	2H) .

(ii) (R)- nebo (S)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab.CH COOH

K roztoku sloučeniny 2A [0,164 g, 0,30 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (7 ml) se přidá kyselina octová (0,018 g, 0,30 mmol) a palladium na uhlí. . (5%, 0,08 g). Reakční směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po dobu 4 h. Výsledná směs se zfiltruje celitem a filtrát se odpaří. Surový produkt se rozpustí ve vodě a lyofilizuje s obdržením 128 mg (91 %) sloučeniny podle nadpisu s diastereoisomerním poměrem 88:12.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 411 (Μ + l)^-1.

^XH NMR (500 MHz, D₂0): δ 7,67-7,85 (m, 2H), 7,25-7,62 (m, 3H), 6,89-7,04 (m, 2H), 6,74-6,83 (m, 1H), 5,16-5,22 (m, 1H), 4,24-4,66 (m, 2H), 3,97-4,19 (m, 3H), 3,64-3,94 (m,

5H), 2,18-2,82 (m, 2H).

4444

4 • 4 •44 4·<

<

44 (iii) (S)- nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab.CH COOH

K roztoku sloučeniny 2B [0,142 g, 0,26 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (7 ml) se přidá kyselina octová (0,016 g, 0,26 mmol) a palladium na uhlíl·/. (5%, 0,07 g). Reakční směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po dobu 4 h. Výsledná směs se zfiltruje celitem a filtrát se odpaří. Surový produkt se rozpustí ve vodě a lyofilizuje s obdržením 113 mg (92 %) sloučeniny podle nadpisu s diastereoisomerním poměrem 88:12.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 411 (M + l)^-*· ^XH NMR (500 MHZ, D_z0): δ 7,26-7,86 (m, 5H), 6,88-7,04 (m, 2H), 6,75-6,83 (m, 1H), 4,91-4,96 (m, 1H), 4,26-4,68 (m, 3H), 3,96-4,18 (m, 2H) , 3,64-3,94 (m, 5H), 2,18-2,70 (m,

2H) .

Příklad 3 (R, S)-3,4-Dimethoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab.CH₃COOH ( i) (R,S)-3,4-Dimethoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Aze-Pab(Z)

Směs kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,4-dimethoxyfenyl)propionové (0,23 g, 1,0 mmol, z příkladu F výše), H-Aze-Pab(Z).2HC1 (0,48 g, 1,1 mmol, z příkladu A výše) a TBTU (0,35 g, 1,1 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na ledové lázni. Přidá se DIPEA (0,52 g, 4,0 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Poté se reakční směs odpaří. Zbytek se zředí směsí ethylacetat:voda (1:2, 300 ml) a pH se upraví na 9 vodným

4 4 44 44

444 444 4444 —4 4 44 4 444 4 44 4

4444 4444 4 444 444

4 4 4 4 4 4

444444 44 4 44 44 roztokem hydrogenuhličitanu sodného s následnou extrakci ethylacetatem (3 x 100 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 100 ml) a vodou (3 x 125 ml), vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt (0,43 g) se vyčistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu (50 g), elucí ethylacetatem (200 ml), směsí ethylacetat:ethanol (95:5, 200 ml), ethylacetat:ethanol (9:1, 200 ml) a ethylacetat:ethanol (85:15, 200 ml). Výtěžek je 244 mg (42 %) sloučeniny podle nadpisu, diastereoisomerní poměr 52:48.

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 575 (M + l)'”.

^XH	NMR	(400	MHz, CDC1	₃): δ 8,18	—8,26 (m,	1H),	r
8,00-8,08	(m,	1H),	7,76-7,84	(d, 1H),	7,63-7,68	(d,	1H)
7,25-7,47	(m,	6H),	7,02-7,07	(d, 1H),	6,64-6,84	(m,	3H)
5,20 (S,	2H) ,	4,82-	-5,00 (m,	1H), 4,40-	•4,79 (m,	2H),
3,98-4,24	(m,	2H),	3,84-3,87	(m, 6H),	3,53-3,82	(m,	3H)
2,26-2,69	(m,	2H) .

(ii) (R,S)-3,4-Dimethoxyfenyl-CH(CH_,0H)-C(O)-Aze-Pab.CH_aCOOH (R,S)-3,4-Dimethoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) [0,095 g, 0,17 mmol, z kroku (i) výše], kyselina octová (0,010 g, 0,17 mmol) a palladium na uhlí . (5%, 0,087 g) se přidá k ethanolu (10 ml) a výsledná směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po dobu 5 h. Reakční směs se zfiltruje a filtrát se odpaří. Zbytek se rozpustí ve vodě a lyofilizuje s obdržením 70 mg (85 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílého prášku s diastereoisomerním poměrem 52:48.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 441 (M + 1)^·

··>· ··· · · · · · * * · • · · ······ ··· ··* • · · · · · ··· ·· · ·· ·· ^XH NMR (400 MHZ, D^O): δ 7,29-7,85 (m, 4H) , 6,85-7,09 (m, 2H), 6,71-6,81 (m, 1H), 4,90-5,19 (m, 1H) , 4,31-4,65 (m, 2H), 3,95-4,28 (m, 3H), 3,62-3,90 (m, 8H), 2,15-2,84 (m,

2H) .

Příklad 4 (R)- a (S)-2-Naftyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab.CH₃COOH (i) (R)- a (S)-2-Naftyl-CH(CH_OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Roztok H-Aze-Pab(Z).2HC1 (0,483 g, 1,1 mmol, z příkladu A výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí v ledové lázni. Přidá se kyselina (R,S)-3-hydroxy-2-(2-nafty1)propionové (0,216 g, 1,0 mmol, z příkladu G výše), TBTU (0,353 g, 1,1 mmol) a diisopropylethylamin (0,517 g,

4,0 mmol) a směs se míchá při teplotě místností po dobu 3 d. Poté se reakční směs odpaří a zbytek se rozpustí ve směsi ethylacetat:voda s následnou extrakcí ethylacetatem (2 x 75 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 30 ml) a vodou (25 ml), vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu elucí ethylacetatem, směsí ethylacetat:ethanol (95:5) a směsí ethylacetat:ethanol (9:1). Část frakcí se odpaří s obdržením 204 mg (36 %) sloučeniny 4A s diastereoisomerním poměrem (95:5). Ostatní frakce se odpaří s obdržením 219 mg (39 %) sloučeniny 4B s diastereoisomerním poměrem 90:10.

Sloučenina 4A:

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 565 (M + l)*.

• 4 4« 4 :·.

· 44 ··

4*4 4 4 4 4

444 · · · 4 • 4 4 4 4 4444 4 444 444 • 4 4 4 4 4 » • 44 941 44 4 44 44

^XH	NMR	(500	MHz, CDC1₃): δ 8,23-8,31 (t,	NH),
7,20-7,88	(m,	16H),	, 5,22 (S, 2H), 4,85-4,92 (m,	1H),
4,44-4,64	(m,	2H),	4,07-4,24 (m, 2H), 3,64-3,92	(m, 3H),
2,21-2,70	(m,	2H) .
Sloučenina	4B:

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 565 (M + i)*, 587 (M + Na)*.

^XH NMR (500 MHz, CDC1J: δ 8,13-8,21 (t, NH) , 7,20-7,90 (m, 16H), 5,24 (s, 2H), 4,95-5,02 (m, 1H), 4,31-4,65 (m, 2H), 4,09-4,24 (m, 2H), 3,62-3,92 (m, 3H), 2,38-2,76 (m, 2H).

(ii) (R)- nebo (S)-2-Naftyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab.CH₃COOH

K roztoku sloučeniny 4A [0,175 g, 0,31 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (7 ml) se přidá kyselina octová (0,019 g, 0,31 mmol) a palladium na uhlí) . (5%, 0,09 g). Reakční směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po dobu 4 h a poté se filtruje celitem a filtrát se odpaří. Surový produkt se rozpustí ve vodě a lyofilizuje s obdržením 136 mg (89 %) sloučeniny podle nadpisu s diastereoisomerním poměrem 95:5.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 431 (M + 1)*.

¹H NMR (500 MHz, D^O): δ 7,05-8,00 (m, 11H),

5,14-5,22 (m, 1H) , 3,60-4,58 (m, 8H), 2,12-2,81 (m, 2H).

(iii) (S)- nebo (R)-2-Naftyl-CH(CH_a0H)-C(0)-Aze-Pab.CH₃C00H

K roztoku sloučeniny 4B [0,194 g, 0,34 mmol, z kroku • » (i) výše] v ethanolu (7 ml) se přidá kyselina octová (0,021 g, 0,34 mmol) a palladium na uhlí./. (5%, 0,09 g). Reakční směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po dobu 4 h.

Poté se reakční směs zfiltruje celitem a filtrát se odpaří. Surový produkt se rozpustí ve vodě a lyofilizuje s obdržením 151 mg (90 %) sloučeniny podle nadpisu s diastereoisomerním poměrem 90:10.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 431 (M + l)^-1“.

^XH NMR (500 MHz, D_0): δ 7,00-8,00 (m, 11H),

4,92-4,99 (m, 1H), 3,60-4,62 (m, 8H), 2,12-2,83 (m, 2H) .

Příklad 5 (R)- a (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig.CH₃COOH (i) (R)- nebo (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Píg.CH₃COOH

Směs kyseliny (R,S)-tropové (0,132 g, 0,8 mmol), H-Aze-Pig(Z).2HC1 (0,393 g, 0,88 mmol, z příkladu C výše) a Ν,Ν,Ν*,N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,283 g, 0,88 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí v ledové lázni. Přidá se diisopropylethylamin (0,414 g, 3,20 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 48 h. Poté se reakční směs odpaří, zředí vodou (175 ml, úprava pH na 8 hydrogenuhličitanem sodným) a extrahuje ethylacetatem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 25 ml) a vody (25 ml), vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt (0,895 g) se vyčistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu elucí dichlormethanem, směsí dichlormethan:tetrahydrofuran (4:1, 1:1, 1:4) a směsí • 0 · ·

00

0 « 0 0 1 » 0 001 dichlormethan:methanol (95:5, 9:1). Některé frakce se odpaří s obdržením 117 mg sloučeniny s diastereoisomerním poměrem větším než 99:1.

¹H NMR (40%0 MHz, CDC1₃): S 7,88-7,95 (bt, NH), 7,21-7,41 (m, 10Η), 7,09 (bs, NH), 5,11 (s, 2H), 4,78-4,80 (m, 1H), 4,00-4,38 (m, 4H), 3,58-3,76 (m, 3H), 3,12-3,34 (m, 2H), 2,76-2,97 (m, 3H), 2,46-2,66 (m, 1H), 2,22-2,35 (m,

1H), 1,66-1,78 (m, 2H), 1,22-1,38 (m, 2H).

(Další frakce se odpaří s obdržením 156 mg epimeru výše popsané sloučeniny s diastereoisomerním poměrem 87:13).

(ii) (S)- nebo (R)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig.CH₃COOH (R)- nebo (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig(Z) [0,117 g, 0,22 mmol, charakterizovaná sloučenina z kroku (i) výše], ky selina octová (0,013 g, 0,22 mmol) a palladium na uhlí ..

(5%, 0,06 g) se přidá do ethanolu (5 ml) a směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po dobu 2,5 h. Reakční směs se zfiltruje celitem a filtrát se odpaří. Zbytek se rozpustí ve vodě a lyofilizuje s obdržením 92 mg (93 %) sloučeniny podle nadpisu s diastereoisomerním poměrem větším než 99:1.

^ΧΗ NMR (400 MHz, D_a0, komplikováno vzhledem k přítomnosti diastereoisomerů/rotamerů: 6 7,14-7,41 (m, 5H), 4,60-5,06 (m, 1H), 3,64-4,09 (m, 7H), 2,78-3,19 (m, 4H), 2,58-2,71 (m, 1H), 2,34-2,45 (m, 1H), 2,03-2,20 (m, 1H), 0,98-1,77 (m, 4H).

¹³C NMR (100,5 MHz, D₂O) amidinové a karbonylové signály 175,95, 172,69, 155,85.

• 9 ► 4 • · • · 4 • · 4 · ·

Příklad 6 (R,S)-PhCH(CH₂OH)-c(O)-Pro-(R,s)-Hig.CH₃COOH (i) (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)

1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid (0,24 g, 1,25 mmol) se přidá ke směsi (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-OH (0,38 g, 1,0 mmol, z příkladu D výše), (R,S)-H-Hig-Z.2HCl [0,36 g, 1,0 mmol, připravenému reakcí Boc-(R,S)-Hig(Z) (viz mezinárodní patentová přihláška WO 94/29336) s plynným chlorovodíkem v ethylacetatu s následným odpařením do sucha] a N,N-dimethylaminopyridin (0,49 g, 4,0 mmol) v acetonitrilu (10 ml) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Reakční směs se odpaří a zbytek se rozpustí ve vodě (300 ml, pH upraveno na 9). Vodná fáze se extrahuje ethylacetatem (3 x 150 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 150 ml) a vodou (3 x 150 ml), vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,48 g sloučeniny podle dílčího nadpisu, která se použije bez dalšího čištění v následujícím kroku.

(ii) (R,S)-PhCH(CH_aOH)-C(0)-Pro-(R,S)-HÍg(Z) (R,S)-PhCH(CH₂OTBDMS)-C(0)-Pro-(R,S)-Hig(Z) [0,265 g, 0,41 mmol, z kroku (i) výše] v kyselině trifluoroctové (6,5 ml, 10% roztok v dichlormethanu) se míchá při teplotě 0 °C po dobu 30 min. pH směsi se upraví na 9 vodným roztokem uhličitanu draselného s následnou extrakcí dichlormethanem (3 x 75 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt (0,24 g) se vy9 ·· ·

4 čistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu (50 g) elucí dichlormethanem (200 ml), směsí dichlormethan:ethanol (95:5, 200 ml) a směsí dichlormethan:ethanol (9:1, 400 ml ). Výtěžek je 109 mg (50 %) sloučeniny podle nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 536 (M + 1)*.

^XH NMR (400 MHz, CDC1₃):5 7,17-7,45 (m, 10H), 5,06-5,15 (m, 2H), 4,46-4,62 (m, 1H), 3,97-4,21 (m, 2H), 3,08-3,91 (m, 8H), 2,80-2,98 (m, 1H), 1,35-2,30 (m, 9H).

^X3C NMR (100,5 MHz, CDC1₃) amidinové a karbonylové signály: 172,72, 171,74, 163,77, 159,14.

(iii) (R,S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig.CH₃COOH

Směs (R,S)-PhCH(CH_aOH)-C(0)-Pro-HÍg-Z [0,11 g, 0,21 mmol, z kroku (ii) výše], palladia na uhlí (5%, 0,06 g) a kyseliny octové (0,012 g, 0,21 mmol) v ethanolu (10 ml) se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po dobu 4 h. Reakční směs se zfiltruje a filtrát se odpaří. Surový produkt se rozpustí ve vodě a lyofilizuje s obdržením 78 mg (82 %) sloučeniny podle nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 402 (M + 1)*.

^XH NMR (400 MHz, D₂0): δ 7,15-7,45 (m, 5H) , 4,20-4,38 (m, 1H), 3,89-4,14 (m, 2H), 3,67-3,81 (m, 2H), 2,70-3,64 (m, 7H), 1,40-2,37 (m, 9H).

¹³C NMR (75,5 MHz, D^O) amidinové a karbonylové signály: 174,90, 173,48, 154,84.

4 44 · 4 4 4 4 4 · · • 4 · 4 ····»* 4 4 4 4· · • >4·· t 4 • 44 ··· ·· · 44 44

Příklad 7 (R)- a (S)-2,5-Dimethoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab.CH₃C00H (i) (R)- a (S)-2,5-Dimethoxyfenyl-CH(CH_0H)-C(0)-Aze-Pab(Z)

A-Aze-Pab(Z). 2HC1 (0,387 g, 0,88 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí v ledové lázni. Přidá se kyselina 3-hydroxy-2-(2,5-dimethoxyfenyl)propionová (0,181 g, 0,8 mmol), Ν,Ν,Ν',N^,-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl )uroniumtetrafluorborat (0,283 g, 0,88 mmol) a diisopropylethylamin (0,414 g, 3,20 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Reakční směs se poté odpaří a zbytek se rozpustí ve směsi voda:ethylacetat (2:1, 150 ml) s následnou extrakcí ethylacetatem (3 x 25 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 25 ml) a vodou (25 ml), vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt (0,43 g) se vyčistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu elucí ethylacetatem, směsí ethylacetat:ethanol (99:1), směsí ethylacetat:ethanol (97:3) a směsí ethylacetat:ethanol (95:5). Některé frakce se odpaří s obdržením 165 mg sloučeniny 7A s diastereoisomerním poměrem větším než 99:1. Další frakce se odpaří s obdržením 185 mg sloučeniny 7B s diastereoisomerním poměrem 93:7.

Sloučenina 7A:

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 575 (Μ + 1)-, 597 (M + Na)-.

^XH NMR (500 MHz, CDC1J: 5 8,26-8,36 (m, NH) , 7,80-7,87 (d, 2H), 7,24-7,48 (m, 7H), 6,76-6,85 (m, 3H),

5,22 (s, 2H), 4,83-4,90 (m, 1H), 3,92-4,18 (m, 3H), 3,80 (s, 3H) , 2H) , 2,25-2,72 (m, 2H).

4···

4,43-4,59 (m, 3,75 (s, 3H),

2H),

3,58-3,72 (m,

Sloučenina 7B:

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 575 (M + l)^-“, 597 (M + Na)*.

^XH NMR (500 MHz, CDC1J: δ 8,11-8,19 (m, NH) , 7,79-7,88 (m, 2H) , 7,24-7,48 (m, 7H), 6,68-6,84 (m, 3H), 5,22 (s, 2H), 4,91-4,98 (m, 1H), 4,36-4,67 (m, 2H), 3,99-4,22 (m, 3H), 3,48-3,82 (m, 8H), 2,38-2,95 (m, 2H).

(ii) (R)- nebo (S)-2,5-Dimethoxyfenyl-CH(CH_a0H)-C(0)-Aze-Pab.CH COOH

Sloučenina 7A [0,141 g, 0,25 mmol, z kroku (i) výše] se rozpustí v ethanolu (7 ml). Přidá se kyselina octová (0,015 g, 0,25 mmol) a palladium na uhlí.'-- (5%, 0,07 g) a směs se hydrogneuje při atmosferickém tlaku po dobu 3 h. Reakční směs se zfiltruje celitem a filtrát se odpaří.

Zbytek se rozpustí ve vodě a lyofilizuje s obdržením 113 mg (90 %) sloučeniny podle nadpisu s diastereoisomerním poměrem větším než 99:1.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 441 (M + 1)*.

^XH NMR (400 MHz, D_a0): δ 7,34-7,84 (m, 4H), 6,82-7,14 (m, 3H), 5,06-5,13 (m, 1H), 3,72-4,37 (m, 13 H), 2,11-2,86 (m, 2H).

(iii) (R)- nebo (S)-2,5-Dimethoxyfenyl-CH(CH_a0H)-C(0)ΦΦΦΦ ♦ · φ φ φ φ φ • · φ · φ φ · • φφφ φ φφ φ

- - - φ φ φφφφ φ φφφ φφφ φ φφφφ φ φ φφφ φφφ φφ φ φφ φφ

-Aze-Pab.CH COOH

Sloučenina 5Β [0,164 g, 0,286 mmol, z kroku (i) výše] se roupustí v ethanolu (7 ml). Přidá se kyselina octová (0,017 g, 0,286 mmol) a palladium na uhlíř. (5%, 0,08 g) a směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku po dobu 3 h. Reakční směs se zfiltruje celitem a filtrát se odpaří. Zbytek se rozpustí ve vodě a lyofilizuje s obdržením 130 mg (91 %) sloučeniny podle nadpisu s diastereoisomerním poměrem 93:7.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 441 (M + l)’⁴“.

^XH NMR (400 MHz, D₂0): 5 7,34-7,86 (m, 4H), 6,78-7,10 (m, 3H), 4,89-4,96 (m, 1H), 3,70-4,68 (m, 13H), 2,16-2,73 (m, 2H).

Příklad 8 (R,S)-Ph-CH(CH₂ OH)-C(O)-Pro-Pab-OH ( i) (R,S)-Ph-CH(CH₂OTBDMS)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Směs (R,S)-Ph-CH(CH₂OTBDMS)-C(0)-Pro-OH (0,753 g,

2,0 mmol, viz příklad D výše), H-Pab(Z).HCl (0,681 g, 2,1 mmol), N,N-dimethylaminopyridin (0,366 g, 3,0 mmol) a 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid (500 μΐ, 2,7 mmol) v acetonitrilu (7 ml) se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 d. Reakční směs se odpaří a zbytek se vyčistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu elucí směsí ethylacetat:toluen (2:1) a tetrahydrofuran:toluen (3:7). Výtěžek sloučeniny podle dílčího nadpisu je 345 mg (27 %).

999· «* · ·· ·· · · *99·

999 9 999 9 9 9 9

999 9 9999 9 999 999 • 9 9 9 9 9

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 643 (M + 1)*.

^ΧΗ NMR (300 MHZ, CDCl₃): δ 6,85-7,85 (m, 14H), 5,15 (S, 2H), 3,15-4,80 (m, 8H), 1,60-2,30 (m, 4H), 0,65-0,90 (m, 9H), -0,80-0,05 (m, 6H).

(ii) (R,S)-Ph-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Ke směsi trifluoroctové (2 ml) v dichlormethanu (8 ml) se přidá (R,S)-PhCH(CH₃OTBDMS)-C(0)-Pro-Pab(Z) [0,345 g, 0,54 mmol, z kroku (i) výše] a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 h. Směs se zředí dichlormethanem a pH se upraví na 7 vodným roztokem uhličitanu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Zbytek se podrobí preparativní vysokoúčinné chromatografií s obrácenými fázemi s obdržením 111 mg (39 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 529 (M + 1)*, LC-MS m/z 527 (Μ - 1)^_, 529 (M + 1)*, 551 (M + Na)*.

^ΧΗ NMR (400 MHz, CDC1J: 5 7,10-7,86 (m, 14H), 5,18-5,25 (m, 2H), 3,05-4,69 (m, 8H), 1,66-2,28 (m, 4H).

(iii) (R,S)-Ph-CH(CH₃OH)-C(O)-Pro-Pab-OH (R,S)-Ph-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) [0,111 g, 0,21 mmol, z kroku (ii) výše] se přidá ke směsi hydroxylaminhydrochloridu (0,206 g, 3,0 mmol) a triethylaminu (1,3 ml,

9,3 mmol) v ethanolu (4 ml). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Surový produkt se podrobí preparativní vysokoúčinné chromatografií s obrácenými fázemi ··«·

AA A ·· ·♦

A A A A A ·

AAA A A A A

AAA A AAAA A AAA AAA

AAAA · A

AAAAAA ·· · ♦· ·* s obdržením 50 mg (23 %) sloučeniny podle nadpisu.

Hmotnostní spektroemtrie LC-MS m/z 411 (M + 1)*, 433 (M + Na)*.

Příklad 9 (R) - nebo (S)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab-0H

Roztok hydroxylaminhydrochloridu (0,083 g, 1,2 mmol) a triethylaminu (0,405 g, 4,0 mmol) v 11 ml tetrahydrofuranu se vystaví účinku ultrazvuku po dobu 35 min. (R)- nebo (S) -3-methoxyfenyl-CH(CH_OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) [sloučenina 2A z příkladu 2(i) výše, 0,109 g, 0,2 mmol] se přidá a směs se míchá při teplotě 40 °C přes noc. Rozpouštědlo se odpaří a surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu s gradientem dichlormethan:isopropylamin:kyselina octová (100:0:0 —> 90:10:0 —> 80:20:2) s následnou vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií [acetonitril:octan amonný (0,1 M) (32,5:67,5)]. Po lyofilizaci se obdrží 38 mg (44 %) ve formě bílého prášku.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 427 (M + 1)*Příklad 10 (S)- nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂OH)CO-Pro-Pab(Z)

H-Pro-Pab(Z) (0,5 g, 1,1 mmol, připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) , Ν,Ν,Ν',N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,353 g, 1,1 mmol) a diisopropylethylamid (0,517 g, 4,0 mmol) se postupně přidají k roztoku • · · «

··» * · · · · · · • · · · · · · • ··« · · · · • · ···· » ··· »·· • · · · · •» · 19 11 kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxyfenyl)- propionové [0,196 g, 1 mmol, z příkladu E (ii) výše] v dimethylformamidu (10 ml) při teplotě 0 °C. Po míchání po dobu 4 dnů při teplotě místnosti se reakční směs odpaří a vyčistí vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi [směs rozpouštědel acetonitrilzoctan amonný (1 M) (40:60)] Frakce se odpaří a extrahují 4x ethylacetatem. Spojené organické fáze se poté vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením surové směsi diastereoisomerů. Směs (0,84 g) se dělí chromatograf icky vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi [směs rozpouštědel acetonitril:octan amonný (1 M) (34:66)] s obdržením dvou diastereoisomerů: sloučeniny 10A (0,352 g, 83 %, diastereoisomer s vyšší pohyblivostí, čistota 90,5 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromátografie) a sloučeniny 10B (0,311 g, 74 %), diastereoisomer s nižší pohyblivostí, čistota 96,9 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie).

Sloučenina 10B:

^XH NMR (400 MHz, CDC1.J: S 7,83 (d, 2H) , 7,46 (dd, 2H), 7,4-7,3 (m, 8H), 6,84 (dd+S, 3H), 5,23 (s, 2H), 4,62 (dd, IH), 4,49 (ddd, 2H), 4,03 (dd, IH), 3,88 (dd, IH),

3,80 (S, 2H), 3,73 (dd, 2H), 3,63 (m, IH), 3,2 (m, IH), 2,3 (m, IH), 2,1-2,0 (m, 2H), 1,82 (m, 3H), 1,74 (b, 3H).

Příklad 11 (S)— nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.CH₃C00H

Palladium na uhlí; . (5%, 10 mg) se přidá k okyselenému (kyselinou octovou, 2,7 mg, 0,045 mmol) roztoku (S)- nebo (R)-3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (sloučenina

- 100 - ; ···

000 999 • 00 00 • · 0 0 9 0 0 • 0 0 0 · ·· 0 •9 9 9999 9 999 999

9 9 9 9

9 90 09

10Β z příkladu 10 výše, 10 mg, 0,018 mmol) v 10 ml ethanolu. Reakční směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku, při teplotě místnosti po dobu 3,5 h. Roztok se zfiltruje, odpaří a rozpustí ve 20 ml směsi acetonitril:voda (50:50). Tento roztok se lyofilizuje s obdržením 10 mg (100 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílého prášku.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 425 (Μ + l)⁴.

Příklad 12 (R,S)-3-Aminofeny1-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab.CH₃COOH (i) (R,S)-(3-Boc-aminofeny1)-CH(CH₂ OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-Boc-aminofenyl)- propionové (0,146 g, 0,8 mmol, z příkladu T výše) v dimethyIformamidu (10 ml) se ochladí na 0 °C. Přidá se H-Pro-Pab(Z).HC1 (0,339, 0,88 mmol), Ν,Ν,Ν',N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborát (0,283 g, 0,88 mmol) a diisopropylethylamin (0,414 g, 3,20 mmol) v uvedeném pořadí a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Poté se odpaří dimethy 1 formami d a zbytek se čistí preparativní vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií [acetonitril:octan amonný (10%)

- 42:58]. Acetonitril se odpaří a voda se odstraní lyofilizací s obdržením sloučeniny podle dílčího nadpisu (187 mg,

%).

^XH NMR (500 MHz, CDC1J: δ 9,48 (b, 1H) , 7,73 (d,

1H), 7,43 (t, 1H), 7,34 (m, 5H), 7,20 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 6,80 (d, 1H), 5,21 (d, 2H), 4,62 (m, 1H), 4,40 (m, 2H), 4,02

101 • 9 9 99 99

9 9 9 9 9 9 · 9 9 9 99 9

999 9 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 (m, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,70 (dd, 1H) , 3,65 (Dl, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,23 (m, 1H), 2,25 (m, 1H) , 1,87 (m, 4H) , 1,79 (m, 1H), 1,47 (d, 9H).

(ii) (R, S) - (3-Boc-aminofenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab.CH₃COOH

Palladium na uhlí?¹. (10%, 10 mg) se přidá k roztoku (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)-CH(CH_aOH)-C(O)-Pro-Pab(Z) [270 mg, 0,42 mmol, z kroku (i) výše] v 10 ml ethanolu a kyseliny octové (10 kapek). Reakční směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku při teplotě místnosti po dobu 2 h. Výsledná směs se filtruje pomocí Hyflo. Roztok se odpaří, přidá se voda a roztok se lyofilizuje s obdržením 214 mg (100 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílé pěnivé látky.

¹H NMR (400 MHZ, D_a0): δ 7,75 (d, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,25 (m, 2H), 7,05 (m, 1H), 4,50 (rn, 2H), 4,10 (m, 2H), 3,90 (m, 2H), 1,45 (d, 9H).

(iii) (R,S)-3-Aminofenyl-CH(CH_z0H)-C(0)-Pro-Pab.CH₃COOH

Ro z tok (R,S)-(3-Boc-aminofenyl)-CH(CH_aOH)-C(O)-Pro-Pab (172 mg, 0,42 mmol) v kyselině chlorovodíkové (6 M, 10 ml) se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 h a produkt se lyofilizuje s obdržením 153 mg (76 %, čistota 94,2 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílé látky.

¹H NMR (500 MHz, D_a0): 6 7,33 (m, 2H), 7,16 (t, 1H), 7,02 (m, 5H), 4,07 (m, 3H), 3,84 (q, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,24 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 1,83 (m, 1H), 1,50 (m, 3H) .

C NMR (100 MHz, D₂0) 174,6, 174,3 (rotamery a/nebo

4···

102 ·· 44 » · · « » 4 · ·

4 4 444

4

44 diastereoisomery), 172,1, 171,9 (rotamery a/nebo diastereoisomery), 166,1.

Příklad 13 (S)- nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab-0H

Roztok hydroxylaminhydrochloridu (149 mg, 2,15 mmol) a triethylaminu (725 mg, 7,16 mmol) v 11 ml tetrahydrofuranu se vystaví účinkům ultrazvuku po dobu 35 min. Přidá se (S)nebo (R)-3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)--C(0)-Pab(Z) (sloučenina

10B z příkladu 10 výše, 200 mg, 0,36 mmol) a směs se udržuje při teplotě 40 °C přes noc. Rozpouštědlo se odpaří a surový materiál se čistí, nejprve mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu elucí s gradientem dichlormethan:isopropylamin:kyselina octová (100:0:0 —> 80:20:2) a poté pomocí vysokovýkonné kapalinové chromatografie s obrácenými fázemi [acetonitril:octan amonný (0,1 M) (32,5:67,5)]. Lyofilizace poskytuje 119 mg (75 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílého prášku.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 441 (M + 1)^-1-.

^XH NMR (400 MHz, CD₃OD): 5 7,64 (d, 2H), 7,38 (d,

2H), 7,27 (t, 1H), 6,93 (m, 2H), 6,87 (m, 1H), 4,47 (s, 3H), 4,14 (dd, 1H), 4,03 (dd, 1H), 3,80 (s, 1H), 3,72 (dd, 1H), 3,38 (dt, 1H), 2,12 (m, 1H), 2,00 (m, 3H), 1,48 (m, 1H).

¹³C NMR (CD₃OD) amidinové a karbonylové uhlíky:

174,7, 173,4, 161,5.

Příklad 14

- 103 ·· ·· • · · • 4 · • · · · · · • · ·· 4· (S)- nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH_a0H)-C(0)-Pro-Pab-0C(0)Et (i) (R)- a (S)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0TBTMS)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok (R,S)-3-methoxyfenyl-CH(CH₂OTBDMS)COOH (3 g, 9,66 mmol, z příkladu S výše) v dimethylformamidu (100 ml) se ochladí v ledové vodě a postupně se přidají H-Pro-Pab(Z) (4,8 g, 10,63 mmol, připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284, Ν,Ν,Ν’,Ν’-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl) uroniumtetraf luorborat (3,4 g, 10,63 mg) a diisopropylethylamin (5,0 g, 38,65 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 d, roztok se odpaří a zbytek se rozpustí ve směsi 400 ml vody a 200 ml ethylacetátu. Organická vrstva se oddělí a vodná fáze se extrahuje ethylacetatem (3 x 50 ml). Spojené organické fáze se promyjí 2x vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10%), jednou vodou, vysuší se síranem sodným a odpaří. Surový produkt (6,25 g hnědé tuhé látky) se vyčistí mžikovou chromatografií na silikagelu [směsí ethylacetat:

:ethanol (95:5)] s obdržením 4,27 g husté hnědé olejovité kapaliny. Tento materiál se dále vyčistí pomocí vysokoúčinné chromatografie s obrácenými fázemi [směsí acetonitrilzoctan amonný (10%) (70:30)] s obdržením dvou diastereoisomerů sloučeniny 14A (1,49 g, isomer s vyšší pohyblivostí) a sloučenina 14B (1,0 g, isomer s nižší pohyblivostí).

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 672,6 (M + 1)* (racemat) (ii) (S) — nebo (R)-Methoxyfenyl-CH(CH₂OTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OH • ΦΦΦ

- 104 • · φ φ · · φ φ

• φφφ φφφ φφ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφφ φ φ φ ··

Roztok hydroxylaminhydrochloridu (0,43 g, 6,2 mmol) a triethylaminu (2,1 g, 20,8 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se vystaví působení ultrazvuku po dobu 2 h a poté se přidá sloučenina 14B [0,70 g, 1,04 mmol, z kroku (ii) výše]. Roztok se míchá přes noc při teplotě 56 °C. Po odpaření se produkt čistí vysokoúčinnou chromatografií s obrácenými fáze mi [acetonitril:octan amonný (10 %) (65:35)] s obdržením 0,396 g (69 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě bílého prášku.

	^XH	NMR	(400	MHz,	CDC1₃): δ 7,89 (bt, 1H), 7,	49 (d.
2H) ,	7,25	(d,	2H),	6,90	(s+d, 2H), 6,83 (m, 1H), 4,	93 (b,
2H),	4,66	(m,	2H) ,	4,24	(t, 1H), 4,20 (d, 1H), 3,88	(<id,
1H),	3,81	(s,	3H),	3,74	(m, 2H), 3,34 (m, 1H), 2,38	(m, 1H),
2,10	(m, :	1H),	1,82	(m,	2H), 0,83 (s, 9H), -0,05 (d,	6H) .

(iii) (S)- nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0TBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OC(O)Et

Směs (S)— nebo (R)-3-methoxyfenyl-CH(CH₂0TBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OH [130 mg, 0,23 mmol, z kroku (ii) výše], anhydridu kyseliny propionové (1 g, 7,7 mmol) a N,N-dimethylaminopyridinu (9 mg, 0,07 mmol) se míchá při teplotě místnosti po dobu 35 min. Výsledná směs se poté odpaří s obdržením žluté olejovité kapaliny, která se čistí vysokoúčinnou chromatografií s obrácenými fázemi [acetonitril :octan amonný (10%) (70:30)] s obdržením 75 mg (52 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu s čistotou 99,6 %.

	¹H	NMR	(400 MHz,	CDCl ): δ	7,66 (d,	2H) ,	7,62 (t,
1H) ,	7,33	(a,	2H), 6,90	(d+s, 3H)	, 6,82 (m	, 1H)	, 5,04 (b,
2H) ,	4,63	(t,	1H), 4,59	(a, 1H),	4,30 (dd,	1H),	4,23 (t,
1H),	3,88	(aa,	1H), 3,80	(S, 3H),	3,7 (m,	2H),	3,32 (m, 1H),

- 105 • ···· ·> ♦ ·· ·· «· 9 ··« «··« · ·· 9 ··· · ·< 9 • 9 9 9 9 9·«9 9 999 *99 • 9 9 9 9 9 9

9999·· 99 9 9 9 99

2,55 (q, 2Η), 2,43 (m, 1Η), 2,02 (m, 1Η), 1,85 (m, 1Η), 1,75 (m, 1H), 1,26 (t, 3H), 0,82 (s, 9H), -0,05 (d, 6H).

(iv) (S) — nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH_0H)-C(0)-Pro-Pab-OC(O)Et

Kyselina trifluoroctové se přidá k ledově chladnému roztoku (S) nebo (R)-3-methoxyfenyl-CH(CH_aOTBTMS)-C(0)-Pro-Pab-0C(0)Et [75 mg, 0,12 mmol, z kroku (iii) výše] v dichlormethanu. Roztok se míchá při teplotě 0 °C po dobu 35 min a poté se roztok zalkalizuje pevným uhličitanem sodným a extrahuje dichlormethanem. Organická fáze se sbírá, promývá vodou, suší síranem sodným a odpaří s obdržením 60 mg surového produktu. Po čištění vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi [acetonitril:octan amonný (10%) (42:58)] a lyofilizaci se obdrží 41 mg (67 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílého prášku.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 497 (M + l)*.

^XH NMR (500 MHz, CDCl_a): δ Ί,66 (d, 2H), 7,34 (d,

2H), 6,83 (dd, 3H), 5,11 (b, 2H), 4,63 (dd, 1H), 4,48 (ddd, 2H), 4,03 (dd, 1H), 3,88 (dd, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,73 (dd, 1H) , 3,64 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 2,54 (q, 2H), 2,35 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 1,82 (m, 2H), 1,27 (t, 3H).

Příklad 15 (S) — nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH 0H)-C(0)-Pro-Pab-0C(0)CH

3 (i) (S)- nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0TBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OC(O)CH_a

106

ΦΦΦΦ φφ · • · ·* • · φ • · φφφφφφ · 9« 99

ΦΦΦ Φ ·· Φ

Φ ΦΦΦ Φ Φ Φ Φ

Φ Φ ΦΦΦΦ Φ ΦΦΦ ΦΦΦ ΦΦφ Φ Φ

ΦΦ · ΦΦ ΦΦ

Směs (S)- nebo (R)-3-methoxyfenyl-CH(CH₂0TBTMS)-C(Ο)-Pro-Pab-OH [130 mg, 0,23 mmol, z příkladu 14(ii) výše], acetanhydridu (1 ml, 10 mmol) a N,N-dimethylaminopyridinu (9 mg, 0,07 mmol) se míchá při teplotě místnosti po dobu 90 min. Po odpaření se surový pro dukt vyčistí vysokoúčinnou chromatografií s obrácenými fáze mi [acetonitril:octan amonný (10%) (60:40)] s obdržením 78 mg (57 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 598 (M + 1)*.

(ii) (S)— nebo (R)-3-Methoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab—OC(O)CH ^x ' 3

0,2 ml kyseliny trifluoroctové se přidá k roztoku (S)- nebo (R)-3-methoxyfenyl-CH(CH_a0TBTMS)-C(0)-Pro-Pab-OC(O)CH₃ [125 mg, 0,21 mmol, z kroku (i) výše] v dichlormethanu (2,5 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 40 min a poté se roztok zalkalizuje vodným roztokem uhličitanu sodného a extrahuje dichlormethanem. Organická vrstva se promyje jednou vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 60 mg surového produktu. Po vyčištění vysokoúčinnou chromatografií s obrácenými fázemi [acetonitril:octan amonný (10%) (60:40)] a lyofilizaci se obdrží 36 mg (36 %) produktu ve formě bílého prášku.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 484 (M + 1)*.

Příklad 16 (R)- nebo (S)-3-Methylamino)fenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.2HCl

107 ····· · · · · ··· • · . · • «· · · (i) (R,S)-[(3-Boc-methylamino)fenyl]-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-Boc-aminofenyl)propionové (0,28 g, 0,95 mmol, z příkladu U výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se postupné H-Pro-Pab(Z).HCl (0,46 g, 0,88 mmol), Ν,Ν,Ν',Ν'-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,32 g, 1,0 mmol) a diisopropylethylamin (0,44 g, 3,4 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Následně se odpaří dimethylformamid a zbytek se čistí preparát i vní vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií [acetonitril:octan amonný (10%) (42:58)]. Acetonitril se odpaří a vodný roztok se lyofilizuje s obdržením sloučeniny podle dílčího nadpisu (220 mg, 43 %).

^XH NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 7,28 (d, 1H), 7,75 (d,

1H), 7,42 (m, 2H), 7,33 (m, 3H), 7,28 (m, 3H), 7,23 (m, 1H),

7,12 (d, 2H), 5,20 (d, 2H), 4,60 (m, 1H), 4,40 (m, 2H), 4,03 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,72 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,14 (S,

3H), 2,25 (m, 1H), 1,85 (m, 4H), 1,43 (s, 9H).

(ii) (R)- a (S)-((3-Boc-methylamino)fenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab

Palladium na uhlí? . (10%, 10 mg) se přidá k roztoku (R, S) - [ (3-Boc-methylamino)fenyl]-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) [270 mg, 0,42 mmol, z kroku (i) výše] v 10 ml ethanolu a kyseliny octové (10 kapek). Reakční směs se hydrogenuje při atmosferickém tlaku při teplotě místnosti po dobu 2 h a výsledná směs se filtruje pomocí Hyflo. Roztok se odpaří, přidá se voda a roztok se lyofilizuje s obdržením 214 mg (100 %) surové sloučeniny podle dílčího nadpisu ve formě bílé pě108 · 99 > 9 9 · » 9 · 9 nivé látky. Surový produkt se čistí vysokoúčinnou chromátografií s obrácenými fázemi [acetonitril:octan amonný (0,1 M), 32:68] pro separaci diastereoisomerů. Acetonitril se odpaří a vodný roztok se lyofilizuje s obdržením sloučeniny 16A (diastereoisomer s vyšší pohyblivostí) a sloučeniny 16B (diastereoisomer s nižší pohyblivostí).

Sloučenina 16A ^XH NMR (300 MHz, D₂0): δ 7,8 (d, 2H), 7,4 (d, 2H),

7.2 (m, 4H), 4,6 (m, 2H), 4,3 (d, 1H), 4,15 (m, 2H), 3,85 (m, 2H), 3,55 (m, 1H), 2,95 (s, 2H), 2,3 (m, 1H), 2,0 (d, 5H), 1,4 (d, 9H).

Sloučenina 16B ^XH NMR (300 MHz, D₂0): δ 7,8 (d, 2H), 7,5 (d, 2H),

7.3 (m, 4H), 4,5 (m, 2H), 4,4 (d, 1H), 4,1 (m, 2H), 3,8 (m, 2H), 3,4 (m, 1H), 3,2 (s, 2H), 2,2 (m, 1H), 2,0 (d, 5H), 1,4 (d, 9H).

(iii) (R)— nebo (S)-3-(Methylamino)fenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.HCl

Roztok (R)- nebo (S)-[(3-Boc-methylamino)fenyl]-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab [sloučenina 16B z kroku (ii) výše, 172 mg, 0,42 mmol] v HC1 (6M, 10 ml) se míchá při teplotě místnosti po 2 h a produkt se lyofilizuje s obdržením 153 mg (76 %, 94,2% čistota) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílé látky.

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 424 (M + 1)*.

109

0 ·00

0 0 · · · « · · 0 0 »00 0 0000 a 000 000 0 0 0 0 0 0 • 00 « » ·· 00 ¹H NMR (400 MHz, D^O): δ 8,77 (t, 1H), 7,80 (d, 2H), 7,72 (d, 1H), 7,63 (t, 1H), 7,54 (d, 2H), 7,50 (m, 2H), 4,55 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 4,46 (dd, 1H), 4,27 (t, 1H), 4,12 (m, 2H), 3,88 (m, 2H), 3,66 (dd, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,13 (s,

3H), 2,22 (m, 1H), 2,00 (m, 2H) , 1,90 (m, 1H) .

¹³C NMR (100 MHZ, D^O) 174,6, 171,9, 166,6.

Přiklad 17 (S)-PhCH(CH₂OH)-c(O)-Pro-Pab.HC1 (i) Kyselina (S)-tropová

Racemická kyselina tropová (10 g, 47 mmol) se rozdělí s použitím (lR:2R)-(-)-l-p-nitrofenyl-2-aminopropan-l,3-diolu (7,85 g, 47 mmol) podle způsobu popsaného G. Fodorem a kol. v Acta Chem. Hung., 28, 407 (1961) s obdržením 0,25 g (5 %) sloučeniny podle nadpisu.

Specifická otáčivost [a]^D3O = -77°, c = 0,5 (H^O) (Lit: -72°).

( i i) (S)-PhCH(CH₂OH)-c(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (S)-tropové [234 mg, 1,4 mmol, z kroku (i) výše], H-Pro-Pab(Z) (884 mg, 1,95 mmol, připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a triethylaminu (1 ml, 7 mmol) v dichlormethanu (30 ml) se připraví a ochladí na teplotu 0 °C. Poté se přidá N,N,N¹,N¹-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumhexafluorfosfat (570 mg, 1,5 mmol) a roztok se míchá přes noc. Dále se odpaří rozpouštědlo a surový produkt se čistí vyso110 • · ··· ·· · ·· · * · · • · · · · · · • · 4 ♦ · · • · · · • · · · · ti '» 9.koúčinnou chromatografií s obrácenými fázemi s obdržením 0,50 g (68 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 527 (M - 1).

(iii) (s)-PhCH(CH_a0H)-C(0)-Pro-Pab.HC1

Roztok (S)-PhCH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) [220 mg, 0,42 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (25 ml) s palladiem na uhlíku (10%, 161 mg) se hydrogenuje za atmosférického tlaku při teplotě místnosti po dobu 18 h. Výsledný roztok se zfiltruje Hyflo a odpaří. Vytvořená pevná látka se rozpustí ve vodě, přidá se 1 ml vodného 2M roztoku kyseliny chlorovodíkové a roztok se lyofilizuje. Sloučenina podle nadpisu (132 mg, 80 %) se obdrží ve formě bílé tuhé látky.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 394,5 (M + 1)*.

Příklad 18 (R, S)-3,5-Dimethylfenyl-CH(CH_OH)-C(0)-Aze-Pab.CH^COOH (i) (R,S)-3,5-Dimethylfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab.CH₃COOH

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimethylfenyl)propionové (0,155 g, 0,8 mmol, z příkladu H výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C. Při dá se postupně H-Aze-Pab(Z).2HC1 (0,387 g, 0,88 mmol, z příkladu A výše), Ν,Ν,Ν’,N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-1-yl)uroniumtetrafluorborat (0,283 g, 0,88 mmol) a diisopropylethylamin (0,414 g, 3,2 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Roztok se odpaří a výsledná směs se čistí vysokoúčinnou chromatografií s obrácenými fá111 zemi [acetonitril:octan amonný (10%) (40:60)]. Acetonitril se odpaří a vodná fáze se extrahuje ethylacetatem. Organická fáze se suší síranem sodným a odpaří do sucha. Produkt podle dílčího nadpisu (270 mg, 62 %) se izoluje ve formě bílé tuhé látky.

^XH NMR (500 MHz, CDC1₃): 5 8,27 (bt, 0,5H), 8,15 (bt, 0,5H), 7,80 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,34 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 6,91 (d, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 5,20 (d,

2H), 4,90 (m, 1H), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,1-4,0 (m, 2H),

3,8-3,5 (m, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,21 (s, 3H).

(ii) (R,S)-3,5-Dimethylfenyl-CH(CH^OH)-C(0)-Aze-Pab.CH₃COOH

K roztoku (R,S)-3,5-dimethylfenyl-CH(CH^OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,229 g, 0,42 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml) se přidá kyselina octová (24 μΐ) a palladium na uhlíku (5%, 0,115 g). Roztok se hydrogenuje při atmosferickém tlaku a teplotě místnosti po dobu 2,5 h. Směs se filtruje Hyflo a výsledný roztok se odpaří, rozpustí v minimálním množství vody a lyofilizuje s obdržením 0,174 g (88 %, čistota 93,6 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílé tuhé látky.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 409 (M + 1)*.

Příklad 19 (S) — nebo (R)-3-(Trifluormethyl)fenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.HCl (i) (R)— a (S)-3-(Trifluormethyl)fenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

- 112 -* · · 4 *4

4 · 4 4 · ♦

4 · 4 4 · · ·

444444 444 444 • 44 · 4

4 44 ··

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-trifluormethylfenyl)propionové (0,25 g, 1,07 mmol, z příkladu I výše), H-Pro-Pab(Z) (0,532 g, 1,17 mmol), připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a Ν,Ν,Ν',N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,377 g, 1,7 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C a přidá se diisopropylethylamin (0,72 g, 4,27 mmol). Výsledná směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 40 h. Reakční směs se odpaří, přidá se voda (400 ml) a pH se upraví na 9 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Výsledná směs se extrahuje ethylacetatem (3 x 100 ml). Spojené organické fáze se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří. Preparativní vysokoúčinná kapalinová chromatografíe [acetonitril: :octan amonný (0,1 M) (45:55)] poskytuje dva diastereoisomery, sloučeninu 19A (87 mg, 0,15 mmol, čistota 94,4 % na základě vysokoúčinné kapalinové chromatografíe, pohyblivější diastereoisomer) a sloučeninu 19B (120 mg, 0,20 mmol, čistota 91 % na základě vysokoúčinné kapalinové chromatografíe, diastereoisomer s nižší pohyblivostí).

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 597 (M + 1)* (oba diastereoisomery).

(ii) (S)— nebo (R)-3-(Trifluormethyl)fenyl-CH(CH_aOH)CO-Pro-Pab.HCl

Palladium na uhlí. (10%) se přidá k roztoku (R) nebo (S)-3-(trifluormethyl)fenyl-CH(CH_aOH)-C(0)-Pro-Pab(Z) [118 mg, 0,20 mmol, sloučenina 19B z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml) a vodném roztoku kyseliny chlorovodíkové (1M, 0,4 ml). Směs se hydrogenuje po dobu 3 h při teplotě místnosti

113 • «·· • · · • · ·· ·

9

9« ♦ ·

Ο 9 9 9

9 9 9 · · · 9 4 ·

«· *· a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se zfiltruje Hyflo a roztok se odpaří. Přidá se voda a roztok se lyofilizuje s obdržením 66 mg (66,9 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílé tuhé látky (čistota 94,5 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie).

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 463 (M + 1)*.

Příklad 20 (R, S)-3-Hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab.CH₃COOH (i) (R,S)-3-Hydroxyfenyl-CH(CH₂0H)—C(0}-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-hydroxyfenyl)propionové (0,146 g, 0,8 mmol, z příkladu J výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se H-Aze-Pab(Z).HCl (0,399 g, 0,88 mmol, z příkladu A výše), Ν,Ν,Ν',N’-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,283 g, 0,88 mmol) a diisopropylethylamin (0,414 g, 3,2 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Reakční směs se odpaří a výsledná směs se čistí vysokoúčinnou chromatografii s obrácenými fázemi [acetonitril:octan amonný (10%) (42:58)]. Acetonitril se odpaří a vodný roztok se lyofilizuje. Produkt podle dílčího nadpisu (187 mg, 43 %) se izoluje ve formě bílé tuhé látky.

	^XH NMR	(500	MHZ,	CD₃OD):	δ 7,82 (d, 2H), 7,41 (m,
3H),	7,34 (m,	2H),	7,25	(d, 1H),	7,13 (t, 1H), 6,78 (s+d,
2H),	6,66 (d,	1H),	5,18	(b, 2H),	4,5 (m, 2H), 4,07 (m, 1H),
3,93	(m, 1H),	3,79	(m,	1H), 3,65	(m, 1H), 3,5-3,3 (m, 2H),
3,30	(s, 1H),	2,2-:	2,0 (	m, 2H), 1	,95 (m, 3H), 1,81 (m, 1H).

····

114 • · · · • ··· ·

4· * • 4 «4 44

11 1 • 4 4 4 ·· 11 (i i) (R,S)—3-Hydroxyfenyl-CH(CH^OH)-C(O)-Pro-Pab.CH₃COOH

Kyselina octová (18 μΐ) a palladium na uhlí. (5%) se přidá k roztoku (R,S)-3-hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) [0,173 g, 0,32 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml). Roztok se hydrogenuje při atmosferickém tlaku a při teplotě místnosti po dobu 3 h. Směs se zfiltruje filtrem Hyflo a výsledný roztok se odpaří, rozpustí v minimálním množství vody a lyofilizuje s obdržením 0,133 g (89 %, čistota 94,2 %) lehkých jemných krystalků.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 411 (M + l)^.

Příklad 21 (R)- nebo (S)-(3-Chlor-5-methylfenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.HCl (i) (R)- nebo (S)-(3-Chlor-5-methylfenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro -Pab(Z)

Roztok (R,S)-3-hydroxy-2-(3-chlor-5-methylfenyl)propionové (0,30 g, 1,4 mmol, z příkladu V výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se postupně H-Pro-Pab(Z).HC1 (0,70 g, 1,54 mmol), Ν,Ν,Ν',Ν'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl )uroniumtetra- fluorborat (0,99 g, 1,5 mmol) a diisopropylethylamin (0,94 g, 5,5 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 d. Poté se dimethylformamid odpaří, výsledná směs se vylije do vody (400 ml) a pH se upraví na 9 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 %). Vodná směs se extrahuje ethylacetatem (3 x 100 ml), spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 %), vodou, • ♦ A A

115 • · A A A A AAAA • AAA A AA* A AA A

A AAAA AAAA A ··· AAA

A AAAA A A

AAAAAA AA A AA AA roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří. Surový produkt (0,674 g) se čistí vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi [eluce směsí rozpouštědel acetonitril:octan amonný (10 %) 45:55], při které se oddělí diastereoisomery. Acetonitril se odpaří a vodné roztoky se extrahují ethylacetatem. Organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením sloučeniny 21A (125 mg, 31 %, diastereoisomer s vyšší pohyblivostí) a sloučeniny 21B (102 mg, 25 %, diastereoisomer s nižší pohyblivosti).

Sloučenina 21B

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS (m/z) 577, 579 (M +

1)*.

¹H NMR (400 MHz, CDC1J: δ 7,76 (d, 2H) , 7,43 (m,

2H), 7,30 (m, 5H), 7,07 (d, 2H), 6,95 (s, 1H), 5,20 (S, 2H), 4,58 (dd, 1H), 4,42 (m, 2H), 3,97 (t, 1H), 3,85 (dd, 1H), 3,68 (m,-2H), 3,23 (m, 1H), 2,30 (S, 3H), 2,25 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,85 (m, 4H).

(ii) (R)— nebo (S)-(3-Chlor-5-methylfenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.HCl

Thioanisol (1,04 g, 8,83 mmol) se přidá k roztoku (R)- nebo (S)-((3-chlor-5-methylfenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z) [sloučenina 21B z kroku (i) výše, 0,102 g, 0,18 mmol] v 3,7 ml kyseliny trifluoroctové. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 h. Výsledná směs se rozpustí ve vodě, vodný roztok se promyje 2x etherem a výsledný roztok se lyofilizuje. Surový produkt se vyčistí preparativní vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií [eluce

- 116 -*

9 4 0 · 9 9

9 9 9 9 9 9 • 999 9 ·9 9

900090 909 999

9 9 0 0

9 99 99 směsí acetonitril:octan amonný (0,1 M), 35:65]. Acetonitril se odpaří a vodný roztok se lyofilizuje s obdržením 50 mg (59 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílého prášku.

	^XH NMR	(400	MHZ,	CDC1	₃): δ 9,2	3 (b, 2H),	8,74 (b,
2H) ,	7,78 (d,	2H),	7,57	(d,	2H), 7,18	(s, 1H),	7,12 (m, 2H),
4,52	(S, 2H),	4,52	(s,	2H),	4,46 (dd,	1H), 4,06	(m, 2H),
3,89	(m, 1H),	3,72	(m,	1H) ,	3,39 (m,	1H), 2,32	(s, 3H), 2,15
(m,	1H), 1,98	(m,	2H),	1,87	(m, 1H).

^X3C NMR (100 MHz, CD_aOD) 174,9, 173,1, 168,3.

Příklad 22 (S) — nebo (R)-3-Fluorfenyl-CH(CH₂0H)C0-Pro-Pab.HCl (i) (R)- a (S)-3-Fluorfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-fluorfenyl)propionové (0,2 g, 1,09 mmol, z příkladu K výše), H-Pro-Pab(Z) (0,542 g, 1,19 mmol, připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a Ν,Ν,Ν*,N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,383 g, 1,19 mmol) v dimethyIformamidu (10 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se diisopropylethylamin (0,73 g, 4,34 mmol). Výsledná směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 22 h. Reakční směs se odpaří, přidá se voda (400 ml) a pH se upraví na 9 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a poté roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří. Výsledná směs se poté extrahuje ethylacetatem (3 x 100 ml). Vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi [směs rozpouštědel

- 117 • 4 · ·· 4 4

4 4 * 4 4 · • 44« 4 49 4

94444 4 444 494

4 4 4 4 acetonitril:octan amonný (0,1 M) (45:55)] se oddělí dva diastereoisomery: sloučenina 22A (85 mg, 0,16 mmol, čistota 90 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie, diastereoisomer s vyšší pohyblivosti) a sloučenina 22B (95 mg, 0,17 mmol, čistota 91 % na základě vysokovýkonné kapali nové chromatografie, diastereoisomer s nižší pohyblivostí).

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 547 (M + l)^1- (oba diastereoisomery).

(ii) (S)- nebo (R)-3-Fluorfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.HCl

Palladium na uhlí (10 %) se přidá k roztoku slouče niny 22B [85 mg, 0,16 mmol, z kroku (i) -výše] v ethanolu (10 ml) a vodném roztoku kyseliny chlorovodíkové (1M, 0,4 ml) a směs se hydrogenuje po dobu 3 h při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo a roztok se odpaří. Přidá se voda a roztok se lyofili zuje s obdržením 62,9 mg (90,1 %) bílé tuhé látky (čistota 93,3 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie).

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 413 (M + 1)*.

Příklad 23 (S)- a (R)-3-Chlorfenyl-CH(CH OH)-C(0)-Pro-Pab.CH COOH

3 (i) (R,S)-3-Chlorfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-chlorfenyl)propionové (0,30 g, 1,5 mmol z příkladu L výše), H-Pro-Pab(Z) (0,77 g, 1,7 mmol, připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284),

118 ·

• ·

Ν,Ν,N',N’-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,55 g, 1,7 mmol) a diisopropylethylamin (0,41 g, 3,2 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se míchá po dobu 2 d. Výsledná směs se extrahuje směsí toluen:ethylacetat (1:1, 300 ml), organická vrstva se odebere, promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší síranem sodným a odpaří. Mžiková chromatografie [na silikagelu, směsí rozpouštědel dichlormethan:tetrahydrofuran (7:3)] poskytuje 0,50 g (59 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 562,4, 564,5 (M +

i)*.

(ii) (R)- a (S)-3-Chlorfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab.CH₃COOH

Kyselina trifluormethansulfonová (0,2 g, 1,3 mmol) se přidá k roztoku (R,S)-3-chlorfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) [0,15 g, 0,27 mmol, z kroku (i) výše] v dichlormethanu a anisolu (43 mg, 0,40 mmol). Výsledná směs se míchá po dobu lha následně se odpaří. Poté se přidá voda a pH vodného roztoku se upraví zhruba na 9 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Vodná fáze se promyje etherem a lyofilizuje s obdržením surového produktu. Kapalinová chromatografie s obrácenými fázemi oddělí dva diastereoisomery: sloučeninu 23A (11 mg, 19 %, čistota 81,7 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie (diastereoisomer s vyšší pohyblivostí) a sloučeninu 23B (11 mg, 19 %, čistota 90,0 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie, diastereoisomer s nižší pohyblivostí).

Sloučenina 23A:

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 428,4 (M + 1)*.

····

119

Sloučenina 23B:

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 431 (M + 1)-.

Příklad 24 (R,S)-3,5-Dimethylfenyl-CH(CH^OH)-C(0)-Pro-Pab.CH^COOH (i) (R,S)-(3,5-Dimethylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimethylfenyl)propionové (0,155 g, 0,8 mmol, z příkladu H výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na 0 °C.

H-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,399 g, 0,88 mmol, připravený podle způsobu v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284),

N, N, N',N’-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,283 g, 0,88 mmol) a diisopropylethylamin (0,414 g, 3,2 mmol) se přidají (v tomto pořadí) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 d. Reakční směs se odpaří a zbytek se vyčistí kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi [směsí rozpouštědel acetonitril:octan amonný (10%) (40:60)]. Acetonitril se odpaří a vodná fáze se extrahuje ethylacetatem. Organická fáze se vysuší síranem sodným a odpaří do sucha. Sloučenina podle dílčího nadpisu

(300	mg, 67 %) se izoluje ve formě světle	žluté tuhé	látky.
	^XH NMR (500 MHZ, CDC1.J: δ 7,83	(<*,	2H), 7,45	(m,
2H),	7,32 (m, 6H), 6,88 (s, 1H), 6,84	(s,	1H), 6,78	(s, 1H),
5,21	(d, 2H), 4,75-4,30 (m, 3H), 4,04	(m,	1H), 3,83	(m, 1H),
3,74	(dt, 1H), 3,63 (m, 1H), 3,47 (m,	1H),	3,19 (m,	1H),
2,28	(s, 3H), 2,16 (s, 3H), 1,95-1,75	(m,	3H) .

····

- 120 (ii) (R, S) - (3,5-Dimethylfenyl)-CH(CH_aOH)-C(O)-Pro-Pab.CH COOH

Kyselina octová (29 μΐ) a palladium na uhlí (5 %, 0,140 g) se přidá k roztoku (R,S)-(3,5-dimethylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) [0,280 g, 0,50 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml). Roztok se hydrogenuje při atmosferickém tlaku při teplotě místnosti po dobu 2,5 h. Poté se směs zfiltruje filtrem Hyflo a výsledný roztok se odpaří , rozpustí v minimálním množství vody a lyofilizuje s obdržením 0,174 g (88 %, čistota 92,1 %) bílých krystalů.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 423 (M + 1)*.

¹³C NMR (100 MHz, D₂0) karbonylové a amidinové uhlíky diastereisomery a/nebo rotamery) 174,93, 173,17, 173,02, 166,55, 166,40.

Příklad 25 (S)— nebo (R)-3,5-Bis(trifluormethyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab.HCl (i) (R)- a (S)-2-(3,5-Bis(trifluormethyl)fenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny 3-hydroxy-2-[3,5-bis(trifluormethyl)fenyl]propionové (284 mg, 0,94 mmol, z příkladu M výše), H-Pro-Pab(Z).2HC1 (468 mg, 1,03 mmol, připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a Ν,Ν,Ν’,N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborát (332 mg, 1,03 mmol) v dimethylforma• 999

121 • 9 9 ·· 99

9 9 9 9 9 9 9 9 ···· · · · 9 9 · · 9

9999 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 9 midu (10 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se diisopropylethylamin (485 mg, 3,76 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 60 h. Roztok se nalije do 400 ml vody, pH se upraví na 9 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztok se extrahuje 3 x 100 ml ethylacetátu. Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří. Preparativní vysokovýkonná kapalinová chromatografie [směs rozpouštědel acetonitril:octan amonný (0,1 M) (55:45)] oddělí dva diastereoisomery: sloučeninu 25A (161 mg, 0,24 mmol, čistota 86,9 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie, diastereoisomer s vyšší pohyblivostí) a sloučeninu 25B (241 mg, 0,36 mmol, čistota 90,9 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie, diastereoisomer s nižší pohyblivostí).

Sloučenina 25B:

	^XH	NMR	(500	MHz,	CDC1	₃): 7,80 (S, 3H), 7	,67	(d	, 2H),
7,56	(t,	1H) ,	7,41	(dd,	2H),	7,39-7,28 (m,	3H),	7,	21	(d,
1H),	5,19	(s,	2H),	4,57	(dd,	1H), 4,33 (m,	2H),	4,	12	(m,
1H),	3,96	(t,	1H),	3,84	(m,	1H), 3,77 (dd,	1H),	3,	36	(dd,
1H),	2,17	(m,	1H),	2,10-	-1,87	(m, 4H).

(ii) (S)- nebo (R)-3,5-Bis(trifluormethyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab

Palladium na uhlíA . (10%) se přidá k roztoku sloučeniny 25B [235 mg, 0,35 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml) a vodném roztoku kyseliny chlorovodíkové (1 M, 0,7 ml). Směs se hydrogenuje po dobu 3 h při teplotě okolí a atmosferickém tlaku. Reakční směs se zfiltruje a odpaří, přidá se voda a výsledný roztok se lyofilizuje s obdržením

ΦΦΦΦ

122 «φ φ φφ φφ φφφ φφφ φφφφ ···· « · · · · ·· · φ φφφφ φφφφ · φφφ φφφ φ φφφφ φ φ • ΦΦ φφφ φφ φ φφ φφ

174 mg (83,3 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílé pěnové látky (čistota 92,7 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie).

Hmotnostní spektrometrie LC-MS (m/z 531 (M + 1)^.

Příklad 26 (R, S)-3-Methoxy-5-methylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab.HCl (i) (R,S)-(3-Methoxy-5-methylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(o)-Pro-Pab(Z)

Směs kyseliny 3-hydroxy-2-(3-methoxy-5-methylfenyl)propionové (0,19 g, 0,9 mmol, z příkladu N),

A-Aze-Pab(Z).2HC1 (0,35 g, 0,99 mmol, z příkladu A výše) a Ν,Ν,Ν’,N’—tetramethyl-O—(benzotriazol—l-yl)uroniumtetrafluorboratu (0,32 mg, 0,99 mmol) v dichlormethanu se ochladí v ledové lázni a přidá se diisopropylethylamin (0,47 g, 3,7 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a poté se odpaří dichlormethan a surová směs se čistí mžikovou chromatografií [směs rozpouštědel dichlormethan:

:tetrahydrofuran:methanol (11:2:1), na silikagelu]. Sbírané frakce se rozpustí ve vodě a slabě zakalený vodný roztok se extrahuje ethylacetatem. Organická vrstva se vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,18 g (35 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

		NMR	(500 MHz, CDC1₃): δ 9,5 (b, 1H), 7,77	(dd,
2H), 7,	43	(m,	2H), 7,37-7,21 (m, 6H), 6,63 (d, 1H),	6,59	(m,
1H), 5,	20	(d,	2H), 4,67 (d, 0,5H), 4,58 (dd, 0,5H),	4,40	(m,
2H), 4,	07	(dd,	, 0,5H), 4,00 (dd, 0,5H), 3,82 (m, 1H)	, 3,7	5
(s, 3H)	, 3	,69	(m, 2H), 3,48 (m, 1H), 3,21 (m, 1H),	2,28	(s,

- 123 « ··· ·· · ·· 00 • · 9 0 0 0 0 0 0 0 • 0*0 0 000 0 00 0 • ·0· 0 0000 0 ·0· 000 0 0 0 0 · 00 000 000 00 0 00 0 0

3H), 2,05-1,94 (m, 1H) , 1,95-1,75 (m, 3H).

(ii) (R, S) — (3-Methoxy-5-methylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab.HC1

Směs (R,S)-(3-methoxy-5-methylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) [100 mg, 0,17 mmol, z kroku (i) výše], koncentrovaného vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové (10 kapek) a palladia na uhlí (10 %) v 10 ml ethanolu se hydrogenuje při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku po dobu 2 h. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo, odpaří a rozpustí v minimálním množství vody. Lyofilizace poskytuje 75 mg (90 %) sloučeniny podle nadpisu (čistota 92 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie).

Hmotnostní spektrometrie LC-LM m/z 440 (M + 1)⁺.

- 124 ·

4 · • · · ·

Příklad 27 (R, S)- ( 2,5-Dimethoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab.CH₃COOH (i) (R,S)-( 2,5-Dimethoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2,5-dimethoxyfenyl)propionové (0,23 g, 1,0 mmol, z příkladu O výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na 0 °C. H-Pro-Pab(Z).2HCl (0,500 g, 1,1 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284),

N,N, N' , N'-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,353 g, 1,1 mmol) a diisopropylethylamin (0,517 g, 4,0 mmol) se přidají v tomto pořadí a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 dnů. Dimethylformamid se odpaří a výsledná směs se vyčistí kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi [směs rozpouštědel acetonitril:octan amonný (10%) (40:60)]. Acetonitril se odpaří a vodná fáze se • · ·· • · 4

- 125 ·· *· • · · • · · • · · · · · extrahuje ethylacetatem. Organická fáze se vysuší síranem sodným a odpaří do sucha. Sloučenina podle dílčího nadpisu (400 mg, 68 %) se izoluje ve formě světle růžové tuhé látky ^XH NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 7,19 (d, 3H), 7,43 (dd,

1H),	7,43 (dt,	1H)	, 7,30 (d, 1H), 6,82-6,	72 (m, 4H),	, 6,68
(d,	1H), 5,20	(d,	3H), 4,70-4,57 (m, 1H),	4,52-4,30	(m,
5H),	3,96 (m,	1H),	3,72 (S, 3H), 3,70 (m,	1H), 3,60	(s,
3H),	3,65-3,45	(m,	2H), 3,18-3,02 (m, 1H)	, 2,29 (m,	1H),
2,04	-1,96 (m,	1H),	1,95-1,74 (m, 4H).
(ii)	(R,S)-(2,	5-Di	methoxyfenyl)-CH(CH₂ OH)	-C(0)-Pro-
-Pab	•CH COOH 3

Kyselina octová (36 μΐ) a palladium na uhlí. (5%, 0,190 g) se přidá s roztoku (R,S)-(2,5-dimethoxyfenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z) [0,375 g, 0,64 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml). Roztok se hydrogenuje při atmosfe rickém tlaku a teplotě místnosti po dobu 3,5 h. Směs se zfiltruje filtrem Hyflo a výsledný roztok se odpaří, rozpus tí v minimálním množství vody a lyofilizuje s obdržením 0,174 g (88 %, čistota 90,1 %) bílých krystalů.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 455 (M + 1)*.

Příklad 28 (R, S)-(3,5-Dimethoxyfeny1)-CH(CH.0H)-C(0)-Pro-Pab.HC1 (i) (R, S) - (3,5-Dimethoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Směs kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimethoxyfenyl)propionové (0,18 g, 0,8 mmol, z příkladu P výše),

- 126 ·· ·

Η-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,40 g, 0,88 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a Ν,Ν,Ν*,N’-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorboratu (0,28 g, 0,88 mmol) v 10 ml dimethylformamidu se ochladí v ledové lázni a přidá se diisopro pylethylamin (0,39 g, 3,0 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a poté se výsledná směs odpaří. Surový produkt se vyčistí mžikovou chromatografií [směs rozpouštědel dichlormethan:tetrahydrofuranzmethanol (10:3:1), silika gel]. Ke sbíraným frakcím se přidá voda a výsledná směs se extrahuje ethylačetatem. Organická vrstva se vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,32 g (68 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^ΧΗ NMR (500 MHz, CDC1₃): $ 7,76 (t, 1H), 7,43 (dd, 1H), 3,37-7,20 (m, 6H), 6,40 (d, 2H), 5,20 (d, 2H),

4,65-4,56 (m, 2H), 4,48-4,32 (m, 2H), 4,09-3,98 (m, 4H),

3,82 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 3,52-3,45 (m, 1H)

3,28-3,21 (m, 1H), 2,30-2,18 (m, 1H), 2,04-1,76 (m, 5H).

(ii) (R,S)-(3,5-Dimethoxyfenyl)-CH(CH^OH)-C(O)-Pro-Pab.HC1 kapek koncentrované kyseliny chlorovodíkové a palladium na uhlí (10%) se přidá k roztoku (R,S)-(3,5-dimethoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) [0,16 g, 0,27 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml). Směs se hydroge nuje při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku po dobu 2 h. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo a odpaří do sucha s obdržením 0,14 g (100 %) sloučeniny podle nadpisu (čistota 94,2 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie).

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 455 (M + 1)*.

·· ·

127

Příklad 29 (R, S) - (3 ,4-Methylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab.HCl (i) (R,S)—(3,4-Methylendioxyfenyl)-CH(CH_aOH) —C( O)-Pro-Pab( Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,4-methylendioxyfenyl)propionové (0,21 g, 1,0 mmol, z příkladu Q výše),

H-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,50 g, 1,1 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284, Ν,Ν,Ν',Ν'-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorboratu (0,35 g, 1,1 mmol) a diisopropylethylaminu (0,47 g, 3,7 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se míchá po dobu 7 d. Výsledná směs se odpaří a surový produkt se čistí mžikovou chromatografií [směs rozpouštědel dichlormethan:tetrahydrofuran (7:3)]. Spojené frakce se odpaří a surový produkt se rozpustí v ethylacetatu. Roztok se promyje vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,28 g (49 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHZ, CDC1J: $ 7,79 (d, 1H) , 7,72 (d, 1H) , 7,42 (m, 2H), 7,36-7,25 (m, 4H), 7,22 (dd, 2H), 6,76-7,57 (m, 3H), 5,91 (S, 2H), 5,87 (dd, 1H), 5,19 (d, 2H),

4,62-4,52 (m, 1H), 4,45-4,30 (m, 1H), 4,00-3,90 (m, 1H),

3,84-3,74 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 2,28-2,23 (m,

1H), 2,23-2,15 (m, 1H), 2,03-1,75 (m, 4H).

(ii) (R,S)-(3,4-Methylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab.HCl kapek koncentrované kyseliny chlorovodíkové a palladium na uhlí, (10%) se přidá k roztoku (R,S)-(3,4-methylendioxyfenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z) [90 mg, 0,16

- 128

ΦΦ φφ φ φ φ mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml). Směs se hydrogenuje při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku po dobu

h. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo a odpaří do sucha s obdržením 69 mg (92 %) sloučeniny podle nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS 439 (M + l)*“.

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) (karbonylové a amidinové uhlíky, komplexní vzhledem k přítomnosti rotamerů a/nebo diastereoisomerů) 174,96, 174,79, 173,04, 166,58, 172,99, 166,45.

Příklad 30 (S)- nebo (R)-3-(l-Naftyl)-CH(CH₂0H)-C(O)-Pro-Pab (i) (R)- a (S)-3-(l-Naftyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(l-naftyl)propionové (0,3 g, 1,39 mmol, z příkladu R výše), H-Pro-Pab(Z) (0,692 g, 1,53 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) a Ν,Ν,Ν’,N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborátu (0,490 g, 1,53 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se diisopropylethylamin (0,93 g, 5,55 mmol). Výsledná směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 60 h. Dimethylformamid se částečně odpaří a zbytek se nalije do 400 ml vody. pH se upraví na 9 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztok se extrahuje x 100 ml ethylacetátu. Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří. Preparativní vysokovýkonná kapalinová chromatografie [směs rozpouš129 • AAAA AA · AA ··

AAA AAA AAAA

AAAA A AAA A AA A

A AAAA AAAA A AAA AAA

A AAAA A A

AAAAAA AA A AA AA tědel acetonitril:octan amonný (0,1 M) (45:55)] oddělí dva diastereoisomery: sloučeninu 30A (262 mg, 0,45 mmol, čistota 92,4 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie, diastereoisomer s vyšší pohyblivostí) a sloučeninu 30B (199 mg, 0,34 mmol, čistota 99,9 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie, diastereoisomer s nižší pohyblivostí) .

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 580 (M + 1)* (oba diastereoisomery).

(ii) (S)- nebo (R)-3-(1-Naftyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.HCl

Palladium na uhlí) (10%) se přidá k roztoku sloučeniny 30B [190 mg, 0,16 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml) a vodné kyselině chlorovodíkové (1 M, 0,66 ml) a směs se hydrogenuje po dobu 3 h při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo a roztok se odpaří. Přidá se voda a roztok se lyofilizuje s obdržením 157 mg (99,4 %) bílé pěnivé látky (čistota 99,8 % na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie).

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 445 (M + 1)*.

Příklad 31 (R, S)-3,5-Dimethoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab.CH_aCOOH (i) (R,S)-3,5-Dimethoxyfenyl-CH(CH_aOH)-C(0)-Aze-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dimethoxyfenyl )propionové (0,27 g, 1,2 mmol, z příkladu w výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C.

130 • ···· ·· 4 • 4 4 4 4 4 · · 4 4 444

444 44444

4 4 4 4

444444 44 4

44

4 4

H-Aze-Pab(Z).2HC1 (0,57 g, 1,3 mmol, z příkladu A výše), přidá se postupně Ν,Ν,Ν’,N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetra- fluorborat (0,42 g, 1,3 mmol) a diisopropylethylaminu (0,54 g, 4,2 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 d. Dimethylformamid se odpaří a surový produkt se vyčistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu elucí směsí rozpouštědel dichlormethan:

:tetrahydrofuran:methanol (80:30:5) s obdržením 230 mg (34 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (400 MHZ, CDC1₃): δ 8,20 (d, 1H), 7,75 (t, 2H),

7,40 (t, 2H), 7,30 (m, 5H), 6,40 (S, 1H), 6,37 (m, 1H), 6,30 (S, 1H), 5,20 (d, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,40 (m, 2H), 4,05 (m,

2H), 3,75 (S, 6H), 3,65 (S, 3H), 2,55 (m, 1H), 2,35 (m, 1H).

(ii) (R,S)-3,5-Dimethoxyfenyl-CH(CH_a0H)-C(0)-Aze-Pab.CH₃COOH

Palladium na uhlí : (10%) se přidá k roztoku (R,S)-3,5 -dimethoxYfenyl-CH(CH_aOH)-C(0)-Aze-Pab(Z) [270 mg, 0,42 mmol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml) a kyselině octové (10 kapek) a směs se hydrogenuje po dobu 2 h při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo. Roztok se odpaří, přidá se voda a roztok se lyofilizuje s obdržením 170 mg (89 %) sloučeniny podle nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie FAB-MS m/z 441 (M + 1)*.

7,57

6,45

3,80

1 (m,	H NMR (400	MHZ, D_a0): δ 7,8	(m, 1H), 7,68 (d, 1H),
1H),	7,39	(d,	1H), 6,60	(m,	1H),	6,54	(m, 1H),
(m,	1H) ,	5,00	(m,	1H), 4,50	(m,	3H) ,	4,10	(m, 3H),
(m,	9H),	2,60	(m,	1H), 2,28	(m,	1H),	1,95	(S, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, D_a0) karbonylové a amidinové ····

- 131 ·· · ·· ·· • ··· 9 9 9 9

9 9 · ··· · ·· · • 9 9 · 9999 9 ··· 999

9 9 9 * · • 999 99 9 99 ·· uhlíky: δ 182,0, 174,4, 174,0, (rotamery a/nebo diastereoisomery), 173,2, 172,9, 172,8 (rotamery a/nebo diastereoisomery).

Příklad 32 (R,S)-2-Chlor-5-aminofenyl-CH(CH OH)-C(O)-Aze-Pab.CH COOH

3 (i) (R, S) - 2-Chlor-5-(Boc-amino)fenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-[2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl]propionové (0,22 g, 0,7 mmol, z příkladu X výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu o °C. Přidá se postupně H-Aze-Pab(Z).2HC1 (0,32 g, 0,75 mmol, z příkladu A výše), Ν,Ν,Ν',N^,-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,24 g, 0,75 mmol) a diisopropylethylamin (0,32 g, 2,5 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 d. Dimethylformamid se odpaří a surový produkt se vyčistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu elucí směsí rozpouštědel dichlormethan:tetrahydrofuran:methanol (85:15:5) s obdržením 180 mg (39 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 9,45 (b, 1H), 8,23 (m,

0,5 H), 7,95 (m, 0,5H), 7,65 (m, 3H), 7,20 (m, 10H), 5,15 (d, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,5-3,6 (m, 9H), 2,40 (m, 2H), 1,45 (S, 9H).

(ii) (R,S)-2-Chlor-5-aminofenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab,CH COOH

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu

- 132 • ···· ·· · ·· ··

0 0 · 0 0 0 0 0 0

0 0 0 · 0 0 0 · ·· · • · · · · 0000 · 000 000 0 0 0 0 0 0 0

000 000 00 0 00 00

23(ii) výše z (R,S)-2-chlor-5-(Boc-amino)fenyl-CH(CH_;20H)-C(O)-Aze-Pab(Z) [170 mg, 0,26 mmol, z kroku (i) výše], kyseliny trifluoroctové (5,3 ml, 69 mmol) a thioanisolu (1,6 g, 13 mmol) s obdržením 40 mg (32 %) sloučeniny podle nadpisu.

^ΧΗ NMR (400 MHZ, D_Q): 5 7,62 (m, 1H), 7,60 (d, 1H),

7,40 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,05 (t, 1H), 6,60 (m, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,41 (S, 1H), 3,90 (m, 3H), 3,65 (m, 1H), 3,60 (m,

1H), 2,40 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,80 (s, 3H).

Příklad 33 (S)- a (R)-3-Methylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab.CH₃COOH (i) (R, S)-3-Methylfenyl-CH(CH_aOH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methylfenyl)propionové (0,18 g, 1 mmol, z příkladu Y výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se postupně A-Aze-Pab(Z).2HC1 (0,48 g, 1,1 mmol, z příkladu A výše), Ν,Ν,Ν*,N*-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,35 g, 1,1 mmol) a diisopropylethylamin (0,52 g, 4 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 d. Dimethylformamid se odpaří, výsledná látka se rozpustí ve vodném roztoku hydrogenuhličitanu sodného (300 ml) a přidá se ethylacetat (100 ml). Fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje ethylacetatem (4 x 75 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (1 x 75 ml), vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt (0,3 g) se vyčistí vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi [směs rozpouštědel acetonitril:octan amonný (10%) (40:60)] s obdržením 118 mg

- 133 « ···· ·· · • »·· • · · • · ·»···» ·· · • · · • · · « • · ·»·· • · · *· · ♦ · ·« « · · · • · ♦ · • ··· «·· • ·

4« *« (20 %) sloučeniny podle dílčího nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 528 (M + l)-“.

	^XH	NMR	(500	MHz,	CDC1	₃ ) · δ 8,25 (ra,	1H),	r 7,77 (d,
1H),	7,40	(m»	8H),	7,12	(ra,	4H), 5,25 (S,	2H) ,	4,93 (m,
1H) ,	4,50	(m,	2H),	4,10	(ra,	2H), 3,70 (m,	2H),	3,60 (m,
1H),	2,60	(ra,	1H),	2,35	(s,	3H) ,

(ii) (S)- a (R).-3-Methylfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab.CH COOH

Palladium na uhlí?; (5%, 0,13 g) se přidá k roztoku (R,S)-3-methylfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab(Z) [114 mg, 0,22 mol, z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml) a kyselině octové (17 μΐ) a směs se hydrogenuje po dobu 3 h při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se filtruje filtrem Hyflo. Roztok se odpaří, přidá se voda, směs se promyje ethylacetátem a roztok se lyofilizuje s obdržením 48 mg surového produktu. Vysokovýkonná kapalinová chromatografie s obrácenými fázemi [směs rozpouštědel acetonitril:octan amonný (10%) (20:80)] oddělí diastereoisomery: sloučeninu 33A (diastereoisomer s vyšší pohyblivostí, 17 mg) a sloučeninu 33B (diastereoisomer s pomalejší pohyblivostí, 15 mg, čistota 99,1 %).

Sloučenina 33A:

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 395 (M + 1)*.

^XH NMR (400 MHz, D_O): 6 7,80 (d, 1H), 7,71 (d, 1H),

Ί ,5^ (d, 1H), 7,39 (d, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,24 (m, 2H), 7,17 (d, 1H), 5,17 (m, 0,5H), 4,80 (m, 0,5H), 4,60 (s, 2H),

134 • · 9 9

9 9 9

4,2-3,6 (m, 5H), 2,60 (m, 1H), 2,36 (s, 2H), 2,30 (s, 2H), 2,22 (m, 1H), 1,93 (s, 3H).

^X3C NMR (75 MHz, D^O) karbonylové a amidinové uhlíky: δ 175,7, 174,6 (rotamery), 173,5, 173,0 (rotamery).

Příklad 34 (S)- nebo (R)-2,5-Dimethylfenyl-CH-(CH_a0H)-C(0)-Pro-Pab.CH COOH (i) (R)- a (S)-2,5-Dimethylfenyl-CH-(CH₂QH)-C(Q)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2,5-dimethylfenyl)propionové (0,27 g, 1,2 mmol, z příkladu Z výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na 0 °C. Přidá se postupně H-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,75 g, 1,65 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) , Ν,Ν,Ν’,N’-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,53 g, 1,65 mmol) a diisopropylethylamin (0,78 g, 6 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 d. Dimethylformamid se odpaří, přidá se vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a vzniklý roztok se extrahuje ethylacetatem (3 x 30 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 20 ml), vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,35 g (42 %) surového produktu. Preparativní vysokovýkonná kapalinová chromatografie [směs rozpouštědel acetonitril: :octan amonný (10%), (45:55 až 80:20)] oddělí diastereisomery: sloučeninu 34A (diastereoisomer s vyšší pohyblivostí,

136 mg, 32 %, čistota 97,6 %) a sloučeninu 34B (diastereoisomer s nižší pohyblivostí, 197 mg, 47 %, čistota 98,4 %).

135 ···· ·· * 9» 99 • 9 9 9 9 9 9 9

99 9 9 9 9 9 9 9 9

999 9 9999 9 999 999 ·'·<·· · · • · 9 f» 9 9 9 9 9 9

Sloučenina 34B:

	^XH NMR	(500	MHz,	CDCl_a): δ 7,83 (d,	2H)	, 7,45 (d,
2H) ,	7,40 (m,	1H),	7,35	(m, 4H), 7,08 (d,	1H),	6,99 (d, 1H),
5,22	(S, 2H),	4,63	(d,	1H), 4,49 (m, 2H),	4,04	(dd, 1H),

3,95 (dd, 1H), 3,61 (dd, 1H) , 3,53 (dt, 1H), 2,92 (m, 1H), 2,34 (3H), 2,32 (m, 1H) , 2,26 (s, 3H), 1,73 (m, 3H).

(ii) (S)- nebo (R)-2,5-Dimethylfenyl-CH-(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.CH COOH

K roztoku (R)- nebo (S)-2,5-dimethylfenyl-CH-(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z) [61 mg, 0,11 mmol, sloučenina 34B z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml) a kyselině octové (10 kapek) se přidá palladium na uhlí' (5%, 45 mg) a směs se hydrogrjfěuje po dobu 5 h při teplotě místnsoti a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo, roztok se odpaří, přidá se voda a roztok se lyofilizuje s obdržením 45 mg (89 %, čistota 97,8 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílého prášku.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 423 (M + 1)*.

¹H NMR (500 MHz, D₂0): 5 7,65 (d, 2H), 7,56 (d, 1H),

7,40 (d, 2H), 7,10 (m, 2H), 7,00 (m, 2H), 4,41 (s, 2H), 4,32 (dd, 1H), 4,11 (dd, 1H), 3,91 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 3,55 (rn, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,05 (m, 1H), 1,80 (m, 6H), 1,65 (m, 2H).

Příklad 35 (S)- nebo (R)-4-Hydroxy-3-methoxyfenyl-CH-(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab.HCl * .4 ·

• 444

- 136 · 4 4 4 4 · 4 • · 4 * 4·· 4 44 4

44 444444 444 444

4 4 4 4 4

4449 '·Λ 4 44 44 (i) (R) — nebo (S)-4-Benzyloxy-3-methoxyfenyl-CH-(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(4-benzyloxy-3-methoxyfenyl)propionové (0,27 g, 1,2 mmol, z příkladu AA výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se postupně H-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,66 g, 1,46 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284), Ν,Ν,Ν’,N’-tetramethy1-0-(benzotriazol-l-yl ) uroniumtetraf luorborat (0,467 g, 1,46 mmol) a diisopropylethylamin (0,69 ml, 5,29 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 d. Dimethylformamid se odpaří, přidá se vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a daný roztok se extrahuje ethylacetatem (3 x 100 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (1 x 20 ml), vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,983 g surového produktu s kvantitativním výtěžkem. Preparativní vysokovýkonná kapalinová chromatografie [směs rozpouštědel acetonitril:octan amonný (10%) (50:50)] oddělí dva diastereoisomery: sloučeninu 35A (isomer s vyšší pohyblivostí,

136 mg, 32 %, čistota 98,5 %) a sloučenina 34B (diastereoisomer s nižší pohyblivostí, 163 mg, 47 %, čistota 99,2 %).

Sloučenina 35B:

	^LH NMR	(400	MHZ,	CDC1	): < 3 *	Ϊ 7,77 (d, 2H), 7,42 (m,
4H) ,	7,34 (m,	9H),	6,81	(m,	2H),	6,70 (dd, 1H), 5,20 (S,
2H) ,	5,11 (S,	2H),	4,59	(m,	1H),	4,44 (m, 2H), 4,00 (m, 1H),
3,83	(m, 1H),	3,66	(m,	2H),	3,23	(rn, 1H), 2,28 (m, 1H), 2,01
(m,	2H), 1,81	(m,	3H) .

• 4

- 137/(ii) (S)- nebo (R)-4-Hydroxy-3-methoxyfenyl-CH(CH₃0H)-C(0)-Pro-Pab.HCl

Palladium na uhlí (10%) se přidá k roztoku (R)nebo (S)-4-benzyloxy-3-methoxyfenyl-CH(CH₃QH)-C(Q)-Pro-Pab(Z) [157 mg, 0,24 mmol, sloučenina 35B z kroku (i) výše] v ethanolu (10 ml) a vodném roztoku kyseliny chlorovodíkové (1 M, 0,5 ml) a směs se hydrogenuje po dobu 4,5 h při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo, roztok se odpaří, přidá se voda a roztok se lyofilizuje s obdržením 104 mg (90,9 %, čistota 97,4 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílého prášku.

	H	motnostní :	spektrometrie LC-MS	m/z	441 (M +	D*.
	1	H NMR	(400	MHz, D₃O): δ 7,70	(d,	2H), 7,57	(d, 2H),
6,90	(S,	1H) ,	6,75	(s, 2H), 4,51 (s,	2H),	4,44 (dd,	IH),
4,07	(m,	IH),	3,95	(dd, 2H), 3,83 (s,	3H)	, 3,67 (dd	, 2H),
3,40	(m,	1H) ,	3,30	(m, IH), 2,11 (m,	IH),	1,97 (m,	2H), 1,82
(m,	IH) .

¹³C NMR (100 MHz, D^O) karbonylové a amidinové uhlíky: 6 174,8, 173,9, 173,1, 166,3 (rotamery).

Příklad 36 (S)- nebo (R)-3,5-Dichlorfenyl-CH(CH₃0H)-C(0)-Pro-Pab.CH COOH (i) (R)- a (S)-3,5-Dichlorfenyl-CH(CH₃0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3,5-dichlor• 999

138 «9 9 99 ··

9 9·9 9999 • · · · * 9 9-9 9 99 9

9999 9·99 9 999 999 · 9 9 9 · ·

999 999 99 · «· ·^Λ fenyl)propionová (0,35 g, 1,5 mmol, z příkladu AB výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se postupně H-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,75 g, 1,65 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WQ 97/02284), Ν,Ν,Ν’,N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,53 g, 1,65 mmol) a diisopropylethylamin (0,78 g, 6 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti přes noc. Dimethylformamid se odpaří, přidá se voda a vodný roztok se extrahuje ethylacetatem (3 x 30 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 20 ml), vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,32 g (36 %) surového produktu. Mžiková chromatografie na silikagelu (110 g) s použitím gradientu od 100% ethylacetátu ke směsi ethylacetat:ethanol (100:5) oddělí dva diastereoisomery: sloučeninu 36A (diastereoisomer s vyšší pohyblivostí, 153 mg, 34 % čistota 89,2 %) a sloučeninu 36B (diastereoisomer s nižší pohyblivostí, 166 mg, 37 %, čistota 85,2 %).

Sloučenina 36B:

^XH NMR (500 MHz, CDC1J: 5 7,73 (d, 2H) , 7,43 (d,

2H), 7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 2H), 7,19 (d, 2H), 5,20 (S, 2H), 4,56 (dd, 1H), 4,40 (m, 2H), 3,91 (m, 2H), 3,72 (m, 2H),

3,60 (b, 1H), 3,27 (q, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,94 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 1,75 (b, 1H).

(ii) (S)— nebo (R)-3,5-Dichlorfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab.CH COOH

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu 23(ii) z (R)- nebo (S)-3,5-dichlorfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z) [130 mg, 0,22 mmol, sloučenina 26B z kroku (i) • 9

- 139 výše], anisolu (35 mg, 0,33 mmol) a kyseliny trifluormethansulfonové (0,16 g, 1,1 mmol) s obdržením 15 mg (13 %) sloučeniny podle nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 463, 465 (M + 1)*.

	^XH	NMR	(500	MHz,	D 0) : δ	7,64 (d, 2H),	7,56 (d, 1H),
7,38	(t,	1H),	7,34	(t,	1H), 7,21	(d, 2H), 7,07	(s, 1H), 4,39
(d,	1H),	4,30	(dd,	1H),	4,00 (m,	3H), 3,68 (m,	2H), 3,50 (m,
1H) ,	3,26	(m,	1H) ,	2,10	(m, 1H),	2,08 (m, 1H),	1,81 (m, 3H),
1,73	(m,	1H) .

Příklad 37 (S)- nebo (R)-2,3-Dimethoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.CH COOH (i) (R)- a (S)-2,3-Dimethoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2,3-dimethoxyfenyl)propionové (0,21 g, 0,93 mmol, z příkladu AC výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na 0 °C. Postupně se přidá Η-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,46 g, 1,02 mmol, připravený podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284), Ν,Ν,Ν',N’-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,32 g, 1,0 mmol) a diisopropylethylamin (0,48 g, 3,7 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti přes noc. Dimethylfornamid se odpaří, přidá se vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a získaný roztok se extrahuje ethylacetatem (4 x 50 ml). Spojená organická fáze se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 20 ml), vodou, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,34 g (62 %) surového produktu. Preparativní vysokovýkonná

140

AA AA A A A

A A A

AAA AAA A A kapalinová chromatografie [směs rozpouštědel acetonitril: :octan amonný (10%) (40:60)] oddělí diastereoisomery: sloučeninu 37A (diastereoisomer s vyšší pohyblivostí, 70 mg, 24 %) a sloučeninu 37B (diastereoisomer s nižší pohyblivostí, 57 mg, 21 %).

Sloučenina 37B:

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 590 (M + 1)*.

(ii) (S)— nebo (R)-2,3-Dimethoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.CH COOH

Palladium na uhlí.;..: (5%, 44 mg) se přidá k roztoku (R)- nebo (S)-2,3-dimethoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z) [57 mg, 0,097 mmol, sloučenina 37B z kroku (i) výše] v ethanolu (io ml) a kyselině octové (15 mg) a směs se hydrogenuje po dobu 4,5 h při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo, roztok se odpaří, přidá se voda a roztok se lyofilizuje s obdržením 44 mg (88 %, čistota 97,2 %) sloučeniny podle nadpisu ve formě bílého prášku.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m]z 455 (M + 1)*· ^XH NMR (300 MHz, D₂<5) : 5 7,78 (d, 2H) , 7,50 (d, 2H) ,

7,20 (m, 2H), 6,90 (d, 1H), 4,50 (s, 2H), 4,40 (m, 4H), 4,08 (m, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,80 (m, 6H), 3,32 (m,

1H), 2,18 (m, 1H), 1,92 (m, 3H).

Příklad 38 (S)- nebo (R)-3-Methoxy-5-chlorfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro99 ·

- 141 ·· • · 9 · • · 9 9

-Pab.HCl (i) (R)- a (S)-3-Methoxy-5-chlorfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(3-methoxy-5-chlorfenyl)propionové (0,112 g, 0,49 mmol, z příkladu AD výše) v dimethylformamidu (4 ml) se ochladí na 0 °C.

Postupně se přidá H-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,242 g, 0,53 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284), Ν,Ν.,Ν’ ,Ν·-tetramethyl-O-(benzotr iazol-l-yl)uroniumtetrafluorborát (0,171 g, 0,53 mmol) a diisopropylethylamin (0,33 ml, 2,12 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 d. Dimethylformamid se odpaří, přidá se voda, pH roztoku se upraví na 9 (vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného) a získaný vodný roztok se extrahuje ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 20 ml), vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří s obdržením 0,242 g (83 %) surového produktu. Preparativní vysokovýkonná kapalinová chromatografie [směs rozpouštědel acetonitril:10% roztok octanu amonného (45:55)] rozdělí diastereoisomery: sloučeninu 38A, diastereoisomer s vyšší pohyblivostí (50 mg, 33 %) a sloučeninu 38B, diastereoisomer s nižší pohyblivostí (44,8 mg, 31 %).

Sloučenina 38B:

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 592, 594 (M + 1)*.

(ii) (S)- nebo (R)-3-Methoxy-5-chlorfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.HCl • 4 ·

- 142

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu 23(ii) výše z (R)- nebo (S)-3-methoxy-5-chlorfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z) [sloučenina 38B z kroku (i) výše, 44 mg, 0,074 mmol], kyseliny trifluoroctové (1,53 ml, 20 mmol) a thioanisolu (0,44 ml, 3,7 mmol) s obdržením 18 mg (49 %) sloučeniny podle nadpisu o čistotě 93,5 %.

^ΧΗ NMR (500 MHz, CD_aOD): δ 9,24 (b, 1H) , 8,73 (b,

1H), 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 6,96 (t, 1H), 6,86 (m, 2H), 4,51 (S, 2H), 4,45 (dd, 1H), 4,04 (m, 2H), 3,86 (m, 1H),

3,71 (m, 1H), 3,40 (m, 1Η),·2,15 (m, 1H), 1,99 (m, 2H), 1,87 (m, 1H).

Příklad 39 (S)— nebo (R)-2-Methyl-5-methoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.CH COOH (i) (R)- a (S)-2-Methyl-5-methoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2-methyl-5-methoxyfenyl)propionové(0,168 g, 0,8 mmol, z příkladu AE výše) v dimethyformamidu (10 ml) se ochladí na 0 °C. Přidá se postupně H-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,399 g, 0,88 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284) , Ν,Ν,Ν’,N’-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,283 g, 0,88 mmol) a diisopropylethylamin (0,414 g, 3,2 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 d. Dimethylformamid se odpaří, přidá se voda a vodný roztok se extrahuje ethylačetatem (3 x 30 ml). Spojené organické fáze se vysuší síranem sodným a odpaří. Preparativní vysokovýkonná kapalinová chromatografie [směs

143 • φφφφ ·· • · * φ · φφ φφ φ φ φ · • φ · φ φφφ φφφ φ φ rozpouštědel acetonitril/10% roztok octanu amonného (40:60)] oddělí diastereoisomery: sloučeninu 39A (diastereoisomer s vyšší pohyblivostí, 147 mg, 64 %, čistota 92,8 %) a sloučeninu 39B (diastereoisomer s nižší pohyblivostí 147 mg, 64 %, čistota 99,1 %).

Sloučenina 39B

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 573 (Μ + l).

	^XH	NMR	(400	MHz,	CDCl	): δ 7,	76 (d,	2H)	, 7,5	o (t,
1H) ,	7,42	(d,	2H),	7,33	(t,	1H), 7,2	7 (m,	3H),	7,08	(d, 1H),
6,71	(m,	2H),	4,58	(d,	1H),	4,40 (m,	2H),	4,03	(dd,	1H) ,
3,97	(t,	1H),	3,70	(S,	3H),	3,58 (m,	2H),	2,95	(q,	2H), 2,28
(S,	2H) ,	2,22	(m,	1H),	1,99	(m, 1H),	1,78	(m,	2H) .

(ii) (S)- nebo (R)-2-Methyl-5-methoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab.CH COOH

Palladium na uhlí. . (5%, 70 mg) se přidá k roztoku sloučeniny 39B (131 mg, 0,23 mmol) v ethanolu (10 ml) a kyselině octové (13 ml) a směs se hydrogenuje po dobu 3 h při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo, roztok se odpaří, přidá se voda a získaný roztok se lyofilizuje s obdržením 96 mg (84 %, čistota 95,9 %) sloučeniny podle nadpisu.

	¹H	NMR	(400	MHz, D_a0)	: δ	7,78	(d,	2H),	7,54	(d,	2H),
6,86	(m,	2H),	6,75	(d, 1H),	4,72	(d,	1H),	4,54	(s,	1H),	4,46
(dd,	2H),	4,25	; (m,	4,05 (t.	1H),	3,77	(s,	3H) ,	3,70	(dd
1H),	3,64	(m,	1H),	3,10 (m,	1H) ,	2,36	(s.	2H) ,	2,15	(m,	1H),
1,95	(m,	4H),	1,76	(m, 1H).

144 ·· ·· « · · · ¹³C NMR (100 MHz, D₂O): karbonylové a amidinové Uhlíky 176,0, 174,3, 167,6.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 439 (M + 1)*.

Přiklad 40 (R,S)-Ph-C(Me)(CH₂OMe)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny (R,S)-2-methyl-2-fenyl-3-methoxypropionové (0,40 g, 2,1 mmo.l, z příkladu AF výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na 0 °C. Přidá se postupně H-Pro-Pab(Z).2HC1 (0,93 g, 2,1 mmol, příprava podle způsobu popsaného v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/02284), Ν,Ν,Ν',N'-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborát (0,64 g, 2,1 mmol) a diisopropylethylamin (0,90 g, 7 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 d. Dimethylformamid se odpaří, přidá se vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a získaný roztok se extrahuje ethylacetatem (3 x 30 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 20 ml), vodou, vysuší se síranem sodným a odpaří s obdržením surového produktu, který se dále čistí mžikovou chromatograf ií na silikagelu, eluuje směsí dichlormethan:tetrahydrofuran :methanol (90:10:2) s obdržením 0,50 g (44 % během

finálních 3 kroků).
¹H	NMR	(500	MHZ,	CDC1₃): 5 7,83 (m,	2H), 7,41 (d,
2H), 7,30	(m,	9H) ,	7,11	(d, 1H), 5,21 (s,	2H), 4,77 (m,	1H),
4,70 (m,	1H) ,	4,53	(m,	1H), 4,43 (m, 1H),	4,12 (d, 1H),	3,90
(d, 1H),	3,62	(t,	1H),	3,23 (S, 3H), 2,90	(m, 2H), 2,18	(m,
1H), 2,03	(m,	1H) ,	1,8-	1,4 (m, 9H).

····

145

9· 9 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9 • ··· · 9 9 9 9 · 9 · • · · · · 9999 9 999 999 • · 9 9 9 · ·

99999· 99 · ·· ·· ¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové uhlíky: 6 174,6, 173,1, 172,2, 172,0, 167,9, 164,4 (diastereoisomery a/nebo rotamery).

Příklad 41 (R,S)-Ph-C(Me)(CH₂OMe)-C(O)-Pro-Pab.HC1

Palladium na uhlí. (10%, 20 mg) se přidá k roztoku (R,S)-Ph-C(Me)(CH₂0Me)-C(0)-Pro-Pab(Z) (190 mg, 0,34 mmol, z příkladu 40 výše) v ethanolu (10 ml) a vodné koncentrované kyseliny chlorovodíkové (10 kapek) a směs se hydrogenuje po dobu 2 h při teplotě místnosti a atmosferickém tlaku. Výsledná směs se zfiltruje filtrem Hyflo, roztok se odpaří, přidá se voda a získaný roztok se lyofilizuje s obdržením 160 mg (100 %, čistota 77 %) sloučeniny podle nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 423 (M + l)*.

^XH NMR (500 MHz, D_0): 5 7,80 (m, 2H), 7,55 (m, 2H),

7,35	(m,	5H) ,	4,50	(rn, 3H), 3,88	(d, 0,5H),	3,78 (m, 1H),
3,76	(<*,	0,5H;		21 (d, 3H), 3,	15 (m, 1H),	2,78 (m, 1H),
2,18	(m,	1H),	1,70	(m, 3H), 1,63	(d, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, D₂O): karbonylové a amidinové uhlíky: 5 176,4, 176,3, 176,1, 175,9, 167,2, 167,1 (diastereoisomery a/nebo rotamery).

Přiklad 42 (S) nebo (R)-2-Chlor-3-methylfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab.CH COOH

- 146 ·« · • · · · · · ···· · · · · • ··· 11111 • 1111 111 111 11 1 • ···

11 1 11 1 • 11 1

111 111 1 1

11 (i) (R) a (S)-2-Chlor-3-methylfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-PabZ)

Roztok kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2-chlor-3-methylfenyl)propionové (0,3 g, 1,4 mmol, z příkladu AG výše) v dimethylformamidu (10 ml) se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se postupně H-Aze-Pab(Z).2HC1 (0,739 g, 1,68 mmol, z příkladu A výše), N,N,N',N'-tetramethyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat (0,495 g, 1,54 mmol) a diisopropylethylamin (0,94 g, 5,6 mmol) a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 d. Reakční směs se odpaří, rozpustí ve vodě (400 ml) a poté se upraví pH na 9 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Výsledná směs se extrahuje ethylacetatem (3 x 100 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří. Surový produkt (0,636 g) se vyčistí vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi [směs rozpouštědel acetonitril:10% roztok octanu amonného (40:60)], kterou se oddělí diastereoisomery: sloučenina 42A (diastereosiomer s vyšší pohyblivostí, 127 mg, 32 %, čistota 95 %) a sloučenina 42B (diastereoisomer s nižší pohyblivostí, 131 mg, 33 %, čistota 85 %).

Sloučenina 42B:

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 563, 564 (M + l)““.

	^XH	NMR	(400	MHz,	CDC1 ): δ 8,23	(t,	IH)	, 7,80	(d,
2H) ,	7,44	(d,	2H),	7,33	(m, 4H), 7,18	(m,	3H),	5,21	(s, 2H),
4,86	(dd,	IH) ,	4,50	(m,	2H), 4,28 (dd,	IH)	, 4,	13 (m,	IH) ,
3,96	(dd,	IH),	3,75	(dd	, IH), 3,62 (g,	IH)	' 2,	60 (m,	IH),
2,41	(s,	3H) ,	2,31	(m,	IH) .

147 • ···» ft · • · ·« • 9 9

9

9 999

9

O 9 ♦ • · « · • ·9999

9 9

9

9 9

9 9 · • · « ·

999 999 ·

99 (ii) (R) nebo (S)-2-Chlor-3-methylfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze· -Pab.CH COOH

Připrav! se podle způsobu popsaného v příkladu 23(ii) výše z (R) nebo (S)-2-chlor-3-methylfenyl-CH(CH₂0H)-C(O)-Aze-Pab(Z) [sloučenina 42B z kroku (i) výše, 129 mg, 0,23 mmol], kyseliny trifluoroctové (4,7 ml, 62 mmol) a thioanisolu (1,35 ml, 11,5 mmol) s obdržením 45 mg (40,2 %) sloučeniny podle nadpisu (čistota 90,4 %).

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 429, 431 (M + 1)*.

	^XH	NMR	(400	MHZ,	CDC1₃): δ 7,77 (d, 2H), 7,55	(d,
2H),	7,26	(m,	2H),	7,19	(d, 1H), 4,75 (dd, 1H), 4,55	(s,
2H) ,	4,34	(m,	2H),	4,04	(dd, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,70	(dd,
1H),	2,48	(m,	1H),	2,40	(S, 3H), 2,27 (m, 1H), 1,89	(s, 3H)

¹³C NMR (100 MHz, CD₃OD) karbonylové a amidinové Uhlíky: δ 174,0, 172,9, 167,9.

Příklad 43 (S) nebo (R)-2,3-(Methylendioxyfenyl)-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab.CH COOH

Sloučenina podle nadpisu se připraví podle způsobu popsaného v příkladu 29 výše z kyseliny (R,S)-3-hydroxy-2-(2,3-methylendioxyfenyl)propionové (0,26 g) a přes (2,3-(methylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab(Z), který se rozdělí vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi na dva diastereoisomery: sloučeninu 43A (diastereoisomer s vyšší pohyblivostí, 0,27 g, 40 %) a sloučeni148

» ··♦ · • · · · • · • ♦

• · : i • · · • ♦ nu 43B (diastereoisomer s nižší pohyblivostí, 0,18 g, 26 %) . Odstraněním chránící skupiny se připraví (R)- nebo (S)-(2,3-(methylendioxyfenyl)-CH (CH^OH)--C (0)-Aze-Pab(Z) [sloučenina 43B, 130 mg, 81 mg (72 %)] sloučeniny podle nadpisu.

Hmotnostní spektrometrie LC-MS m/z 439 (M + 1)^4-.

Příklad 44

Sloučeniny z příkladů 1 až 7, 11, 12, 16 až 39, 41, a 43 (které jsou všechny sloučeninou obecného vzorce I) se testují ve zkoušce A výše a vykazují hodnotu IC_soTT nižší než 0,3 μΜ.

Příklad 45

Sloučeniny z příkladů 8, 9, 10, 13, 14, 15 a 40 (které jsou všechny sloučeninou obecného vzorce Ia) se testují ve zkoušce A výše a vykazují hodnotu IC_soTT vyšší než 1 μΜ.

Příklad 46

Sloučeniny z příkladů 8, 9, 10, 13, 14, 15 a 40 (které jsou všechny sloučeninou obecného vzorce Ia) se testují ve zkoušce C výše a vykazují perorální a/nebo parenterální biologickou dostupnost u krys jako odpovídající aktivní inhibitor obecného vzorce I.

Zkratky

AIBN aq azobisisobutyronitril vodný

149

\ t ·

O ·

4 «9 • « • w

9 9

Aze =	kyselina azetidin-2-karboxylová
Boc =	terč.buty1oxykarbony1
Bn	benzyl
Bu	butyl
Ch	cyklohexyl
DBU	1,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-en
DCC	di cyklohexylkarbodiimid
DIPEA =	diisopropylethylamin
DMAP	N,N-dimethylaminopyridin
DMF	dimethy1formamid
DMSO	dimethy1sulfoxid
EDC	l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid
Et	ethyl
EtOH	ethanol
h	hodiny
HBTU	Ν,Ν,Ν¹,Ν’-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumhexafluorfosfat
HCl	kyselina chlorovodíková
H-Hig =	l-amidino-3-aminoethylpyrrolidin
H-HÍg(Z) =	3-aminoethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)pyrrolidin
HOAc	kyselina octová
H-Pab =	l-amidino-4-ami nomethy1hen zen
H-Pab(Z) =	4-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)piperidin
H-Pig =	l-amidino-3-aminomethylpiperidin
H-Pig(Z) =	1-aminomethy1-1-(N-benzyloxykarbony1amidino)piperidin
HPLC	vysokovýkonná kapalinová chromatografie
Me	methyl
MeOH	methanol
MsCl	methansulfonylchlorid

• 44 4

- 150

4 • 4 4 44

4» <4

4 4 4 4 4 • 9 4 4 4 4 4> *44

4 4 4

4 4 4 4 «4

4 4 4 **

NBS

Ph

Pr i-PrOH

RPLC

TBDMS

TBTU

TEA

THF

THP

TMS p-TsOH

WSC1

Z

N-bromsukcinimid fenyl propyl isopropanol preparativní vysokovýkonná kapalinová chromatografíe s obrácenými fázemi terč.butyldimethylsilyl

N, N, N¹, N¹-tetramethyl-0-(benzotriazol-1-yl)uroniumtetrafluorborat triethylamin tetrahydrofuran tetrahydropyranyl trimethylsilyl kyselina p-toluensulfonová karbodiimid rozpustný ve vodě benzyloxykarbonyl

Předpony n, s, i a t mají své běžné významy: normální, iso, sek a terč. Stereochemie pro aminokyseliny je standardně (S), pokud není uvedeno jinak.

- 151 • 4 9, 4· 49 «44 4994 ··· 4 994 4 4 4 9 '««)» 44449 « 444 444

9 · 9 4 4

494 44 · 49 «9

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce I (I

NH-(CH^n ve kterém

R^x představuje atom vodíku, skupiny C(O)R^J \ SiR’-’R¹ ’R’ nebo alkylovou skupinu a tato alkylová skupina může být případně substituovaná nebo zakončená jedním či více substituenty zvolenými z OR^l’~’ nebo (CH ) R^1F;,

R^{1 3}, R^x‘’ a R^x4 představují nezávisle na sobě atom vodíku, fenylovou skupinu nebo C alkylovou skupinu, představuje alkylovou skupinu, fenylovou skupinu, hydroxylovou skupinu, skupinu C(O)OR’⁷ nebo C(O)N(H)R^lfil,

- 152

0000 0 0 0 0 0 • · 0 « 0 • • • 0 0 0 0 0 · 0 · 0 0 0 0 0 0 4 0 0 0 0 » 0 0 0 0 4 0 0 0 « 0 i • 0

• « ·

• · 0 • 0

R^1S představuje atom vodíku, C alkylovou skupinu nebo skupinu CH^Cf0)OR¹^, _rts _{a R}.i-z představují nezávisle atom vodíku, C alkylovou skupinu nebo C.₇__g alkylfenylovou skupinu,

R¹¹ a R^1S představují nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylovou skupinu a q představuje 0, 1 nebo 2,

R^a a R³ představují nezávisle na sobě atom vodíku, C alkylovou skupinu, cyklohexylovou skupinu nebo fenylovou skupinu,

R~ představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, lib nebo líc (CH₂)k (CH₂)| (Ha)

RS (CH2)m (Ifb)

153 (líc) ve kterých k, 1 a m představují nezávisle O, 1, 2, 3 nebo 4,

R⁴ a R^s představují nezávisle atom vodíku, skupinu Si(Me) ,

1- nebo 2-naftylovou skupinu, polycyklickou hydrokarbylovou skupinu, skupinu CHR^4XR⁴² nebo C alkylovou skupinu (tato poslední skupina může být případně substituovaná jedním či více atomy fluoru) nebo cykloalkylfenylovou skupinu, methylendioxyfenylovou skupinu, benzodioxanylovou skupinu, benzofuranylovou skupinu, dihydrobenzofuranylovou skupinu, benzothiazolylovou skupinu, benzoxazolylovou skupinu, benzimidazolylovou skupinu, kumaranonylovou skupinu, kumarinylovou skupinu nebo dihydrokumarinylovou skupinu [posledních dvanáct skupin může být případně substituovaných jednou či více C,alkylovými skupinami (které mohou být případně substituované jedním či více atomy halogenu), alkoxyskupinou, atomem halogenu, hydroxylovou skupinou, kyanoskupinou, nitroskupinou, skupinou SO₂NH₂, karboxylovou skupinou nebo skupinou N(H)R⁴³],

R^4X a R⁴² představují nezávisle na sobě cyklohexylovou skupinu nebo fenylovou skupinu,

4444 • 44 ······

154

R⁶ a R⁷ představují nezávisle na sobě atom vodíku, C alkylovou skupinu, C₃__s cykloalkylovou skupinu, fenylovou skupinu [fenylová skupina může být případně substituovaná jednou či více alkylovými skupinami (ty mohou být případně substituované jedním či více atomem halogenu), C_x_₄ alkoxyskupinou, atomem halogenu, hydroxylovou skupinou, kyanoskupinou, nitroskupinou, skupinou SO^NH^, karboxylovou skupinou nebo skupinou N(H)R⁴⁴] nebo vytvářejí spolu s atomem uhlíku, ke kterému jsou připojené, C₃__a cykloalkylový kruh,

R⁴³ a R⁴⁴ představují nezávisle na sobě atom vodíku nebo skupinu C(O)R^4S a

R^4S představuje atom vodíku, ϋ_χ_₄ alkylovou skupinu nebo C_x_₄ alkoxyskupinu, představuje skupiny CH₂, (CH₂)₂, CH=CH, (CH_a)₃

CH₂CH=CH nebo CH=CHCH₂, ze kterých poslední tři skupiny mohou být případně substituované alkylovou skupinou, methylenovou skupinou, oxoskupinou nebo hydroxylovou skupinou, představuje 0, 1, 2, 3 nebo 4 a představuje strukturní fragment obecných vzorců IVa IVb nebo IVc >» 9 9··

- 155 • 9 9* • 999 999«

999 9 999 9 9« 9 «'9 9 »9999 9 999 «99 • 9 9 9 9 « •99 ·· 9 99 99 «ΛΛ

W* (IVa) < >² ( TVb) (TVc)

Hbr ^nh₂

99·· «· *

- 156 • 9 99

9 9 9

9 9 9 · • 9* ·· 9 · 9 · • 9 9

9 9 9 9 ve kterých o

X a X představuji nezávisle na sobě jednoduchou vazbu nebo skupinu CH₂ nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

2. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1, ve kterém pokud n představuje 2 a B představuje strukturní fragment obecného vzorce IVb, nepředstavují X¹a X² zároveň skupinu CH₂.

3. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1 nebo nároku 2, ve kterém R¹ představuje případně substituovanou alkylovou skupinu nebo atom vodíku.

4. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 3, ve kterém R¹ představuje atom vodíku.

5. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v kterémkoliv z předcházejících nároků, ve kterém R^x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ila.

6. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v kterémkoliv z předcházejících nároků, ve kterém Y představuje skupinu CH₂ nebo (CH₂)₂.

7. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1 nebo v kterémkoliv z nároků 3 až 6, ve kterém n představuje 1.

8. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1 nebo v kterémkoliv z nároků 3 až 7, ve kterém B představuje strukturní fragment obecného vzorce IVa.

157

9. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v kterémkoliv z předchozích nároků, ve kterém fragment je v konfiguraci S

10. Sloučenina, jak se definuje v nároku 1, kterou je (R) -Ph(CH)(CH₂OH)-c(O)-Aze-Pab, (S) -Ph(CH)(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (R) -3-methoxyfenyl-CH (CH₂OH) -C (0) -Aze-Pab, (S) - 3 -methoxyf enyl-CH (CH₂OH) -C (O) -Aze-Pab, (R, S) -3,4-dimethoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Aze-Pab, (R) -2-naf tyl-CH (CH₂OH) -C (O) -Aze-Pab, (S) -2-nafty1-CH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (R) -PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig, (S) -PhCH(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pig, (R,S)-PhCH(CH₂OH)-C(0)-Pro-(R,S)-Hig, (R) -2,5-dimethoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab, (S) -2,5-dimethoxyf enyl-CH (CH₂OH) -C (O) -Aze-Pab, (R) -3 -methoxyf enyl-CH (CH₂OH) -C (O) -Pro-Pab, (S) -3 -methoxyf enyl-CH (CH₂OH) -C (0) -Pro-Pab, (R, S) -3 -aminof enyl-CH (CH₂OH) -C (O) -Pro-Pab, (R) - 3 - (methylamino) feny 1-CH (CH₂OH) -C (O) -Pro-Pab, (S) - 3 - (methylamino) feny 1-CH (CH₂OH) -C (O) -Pro-Pab,

158 • 9 99 β · 9 9

9 9 · (S)-PhCH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R,S)-3,5-dimethylfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Aze-Pab, (S)-3-(trifluormethyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R) - 3 - (tr ifluormethyl)feny1-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R,S)-3-hydroxyfeny1-CH(CH₂ OH)-C(0)-Pro-Pab, (R) -(3-chlor-5-methylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (S) -(3-chlor-5-methylfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (S)-3-fluorfenyl-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R) -3-fluorfeny1-CH(CH₂ OH)-C(0)-Pro-Pab, (S) -3-chlorfenyl-CH(CH.OH)-C(0)-Pro-Pab, (R) —3-chlorfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R, S)-3,5-dimethylfenyl-CH(CH.OH)-C(0)-Pro-Pab, (S) -3,5-bis(trifluormethyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R) -3,5-bis(trifluormethyl)fenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R,S)—3-methoxy-5—methylfenyl—CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R, S)-(2,5-dimethoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab, (R, S)-(3,5-dimethoxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R,S)-3,4-(methylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (S) -3-(2-naftyl)-CH(CH_OH)-C(O)-Pro-Pab, (R)-3-(2-nafty1)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R, S)-3,5-dimethoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Aze-Pab, (R,S)-2-chlor-5-aminofenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Aze-Pab, (R) -3-methylfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Aze-Pab, (S) -3-methylfeny1-CH(CH₂0H)-C(0)-Aze-Pab, (R) -2,5-dimethylfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (S) -2,5-dimethylfenyl-CH(CH₂OH}-C(0)-Pro-Pab, (R) -3-methoxy-4-hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (S) -3-methoxy-4-hydroxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R) -3,5-dichlorfenyl-CH(CH₂0H)-C(O)-Pro-Pab, (S) -3,5-dichlorfeny1-CH(CH_OH)-C(0)-Pro-Pab, (R) -2,3-dimethoxyfenyl-CH(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab, (S) -2,3-dimethoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (R)-3-methoxy-5-chlorfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab,

- 159

9999 99 9 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9

999 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 9999 9 999 999 • · · · · 9 9

9 9 99 99 9 99 9 9 (S) -3-methoxy-5-chlor f enyl-CH (CH₂OH) -C (0) -Pro-Pab, (R) -2-methyl-5-methoxyfeny1-CH (CH₂OH) -C (0) -Pro-Pab, (S) -2-methyl-5-methoxyfenyl-CH (CH₂OH) -C (0) -Pro-Pab, (R, S)-Ph-C(Me) (CH₂OMe)-C(0)-Pro-Pab, (R) -2-chlor-3-methylf enyl-CH (CH₂OH) -C (0) -Aze-Pab, (S )-2-chlor-3-methylf eny 1-CH (CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab, (R)-2,3-(methylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab, (s)-2,3-(methylendioxyfenyl)-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab nebo (R,S)-Ph-C(Me)(CH₂OMe)-C(O)-Aze-Pab nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

11. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1, s podmínkou, že když R^x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, potom R⁴ a/nebo R⁵ (platí to, co je příslušné) představuje/nepředstavuje fenylovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou, která je substituovaná atomem halogenu.

12. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1 s podmínkou, že jestliže R^x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, potom R⁴ a/nebo R⁵ (platí to, co je příslušné) představuje/nepředstavuje methylendioxyfenylovou skupinu, benzodioxanylovou skupinu, benzofuranylovou skupinu, dihydrobenzofuranylovou skupinu, benzothiazolylovou skupinu, benzoxazolylovou skupinu, benzimidazolylovou skupinu, kumaranonylovou skupinu, kumarinylovou skupinu nebo dihydrokumarinylovou skupinu.

13. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1 s podmínkou, že jestliže R^x představuje strukturní fragment obecného vzorce líc, potom R⁶ a/nebo R⁷ (platí to, co je příslušné) představují (představuje) nesubstituovanou fenylovou skupinu.

- 160

4· 4 49 44 «44 444 «444

444« φ 444 4 94 4

4444 4444 4 444 444

4 4 4 4 4 4

444444 44 4 44 44

14. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1, ve kterém jestliže R^x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, potom R⁴ a/nebo R⁵ (platí to, co je příslušné) představují (představuje) fenylovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou, která je substituovaná atomem halogenu.

15. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1, ve kterém jestliže R^x představuje strukturní fragment obecného vzorce Ha, potom R⁴ a/nebo R⁵ (platí to, co je příslušné) představují (představuje) methylendioxyfenylovou skupinu, benzodioxanylovou skupinu, benzofuranylovou skupinu, dihydrobenzofuranylovou skupinu, benzothiazolylovou skupinu, benzoxazolylovou skupinu, benzimidazolylovou skupinu, kumaranonylovou skupinu, kumarinylovou skupinu nebo dihydrokumarinylovou skupinu.

16. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v nároku 1, ve kterém jestliže R^x představuje strukturní fragment obecného vzorce líc, potom R⁶ a/nebo R⁷ (platí to, co je příslušné) představují (představuje) substituovanou fenylovou skupinu.

17. Sloučenina obecného vzorce Ia

NH-(CH^n ·♦··

- 161

99 • · · · • * · • 9 9 • · 9 9

99··· • · · ·· · ·· ·· • · · · • 9 · ·

9 · · · • · · · · ve kterém

B³ představuje strukturní fragment obecného vzorce IVd,

IVe nebo IVf (IVd)

D1N^^_Nhd2

X2 (IVO)

Ν'

D1N^

NHD²

ΛΛ?

(IVC)

D1N^X NHD²

162 • 4

44 4 • 4 4 • 4 4 ·· 4

44 ► 4 4 4

I 4 4 ·

4 4 4 44 • 4

4 · ·

D¹ a D² představují nezávisle na sobě atom vodíku, hydroxylovou skupinu, skupinu 0R^a, OC(O)R^l3, OC(O)OR^c, C(O)OR^d, C(O)R^e a

R^a, R^, r^c, R^d a R^e představují nezávisle na sobě fenylovou skupinu, benzylovou skupinu, skupinu (CH₂)₂OC(O)CH₃nebo C_1-6 alkylovou skupinu, z čehož poslední skupina může být případně přerušena atomem kyslíku, a

R¹, R², R³, R^x, Y, η, X¹ a X² mají význam vysvětlený v nároku 1 nebo farmaceuticky přijatelná sůl této sloučeniny s podmínkou, že D¹ a D² nejsou zároveň atomy vodíku.

18. Sloučenina obecného vzorce Ia, jak se definuje v nároku 17, ve kterém D¹ představuje atom vodíku a D² představuje hydroxylovou skupinu, skupinu OCH₃, OC(O)R^b nebo C(O)OR^d a R*⁵ a R^d se definují stejně jako v nároku 17.

19. Sloučenina podle nároku 17, kterou je (R,S)-Ph-CH(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab-OH, (R) -3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Aze-Pab-OH, (S) -3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Aze-Pab-OH, (S)-3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z), (R)-3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab(Z), (S )-3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab-OH, (R) -3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab-OH, (S) -3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab-OC(O)Et, (R) -3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab-OC(0)Et, (S) -3-methoxyfenyl-CH(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab-OC(0)CH₃, • 999

163

9

99

9 9

9 9

999 999

9

9 9 9 (R) -3-methoxyf enyl-CH( CH₂OH) -C(0) -Pro-Pab-OC(0) CH₃ , (R,S)-3-Ph-C(Me) (CH₂OMe)-C(O)-Pro-Pab(Z) nebo (R, S) -3-methylfenyl-CH (CH₂OAc) -C (O) -Pro-PabOMe nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

20. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje sloučeninu, jak se definuje v kterémkoliv z nároků 1 až 19 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvant, zředovací látkou nebo nosnou látkou.

21. Sloučenina, jak se definuje v kterémkoliv z nároků 1 až 19, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro použití jako léčivo.

22. Sloučenina, jak se definuje v kterémkoliv z nároků 1 až 19 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro použití při léčbě stavu, při kterém se požaduje inhibice trombinu.

23. Sloučenina, jak se definuje v kterémkoliv z nároků 1 až 19 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro použití při léčbě trombózy.

24. Sloučenina obecného vzorce I, jak se definuje v kterémkoliv z nároků 1 až 19 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro použití jako antikoagulačního prostředek.

25. Použití sloučeniny obecného vzorce I, jak se definuje v kterémkoliv z nároků 1 až 19 nebo její farmaceuticky přijatelné soli jako účinné složky při výrobě léku pro léčbu stavu, při kterém se vyžaduje inhibice trombinu.

44 4

- 164 • 4 · 44 44 • ··· *··· 444 4 444 4 44 4

444 4 4444 4 444 444

4 4 4 4 4

4 4 4 44 4 44 44

26. Použití podle nároku 25, kde tímto stavem je trombóza.

27. Použití sloučeniny, jak se definuje v kterémkoliv z nároků 1 až 19 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, jako účinné složky při výrobě antikoagulačního prostředku.

28. Způsob léčby stavu, kdy se požaduje inhibice trombinu, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny, jak se definuje v kterémkoliv z nároků 1 až 19 nebo její farmaceuticky přijatelné soli osobě, která trpí tímto stavem nebo je k němu náchylná.

29. Způsob podle nároku 28, vyznačuj ící se t í m, že tímto stavem je trombóza.

30. Způsob podle nároku 28, vyznačuj ící se t í m, že tímto stavem je nadměrná srážlivost v krvi a tkáních.

31. Použití sloučeniny, jak se definuje v kterémkoliv z nároků 17, 18 nebo 19 jako prekurzoru léku.

32. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, vyznačující se tím, že zahrnuje:

AA

165

A

A AAA ••A A AAA

A A A AAAAA

AAAA

A AAA AA A (a) připojení sloučeniny obecného vzorce V

ΌΗ (V) ve kterém

R^a, R² , R³ a R~ jsou podle definice v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce VI (VI)

NH ——(CHjJn -B ve kterém

Y, n a B jsou podle definice v nároku 1 nebo ····

166 (b) připojení sloučeniny obecného vzorce VII (VII) ve kterém

R^x , R³, R³ , R~ a Y se definují v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce VIII

H^N-(CH_?)^~B (VIII) ve kterém n a B se definují v nároku 1.