RU96108818A - Гены бутиробетаин-/кротонобетаин- l-карнитин-метаболизма и их применение для микробиологического получения l-карнитина - Google Patents

Claims (1)

1. Изолированный ДНК-фрагмент, включающий один или несколько генов

биосинтеза L-карнитина, которые кодируют γ-бутиробетаин - CoA-дегидрогеназу

γ-бутиробетаин-/кротонобетаин-CoA-синтетазу

соответственно, кротонобетаин-CoA-гидролазу

причем этот ДНК-фрагмент выбирают
а) из EcoRI-фрагмента величиной 10,6 кб, который встроен в плазмиду pVK100q, которая находится в

под номером DSM 8726; или его субфрагментов; и
б) из фрагментов, которые гибридизируются с этим EcoRI-фрагментом величиной 10,6 кб или его субфрагментами и кодируют ферменты с активностями γ-бутиробетаин-CoA-дегидрогеназы, γ-бутиробетаин-/кротонобетаин-CoA-синтетазы и/или кротонобетаин-CoA-гидролазы.

2. ДНК-Фрагмент по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно включает соотносимый к γ-бутиробетаин-/кротонобетаин-метаболизму, кодирующий потенциальный транспортный протеин ген

.

3. ДНК-Фрагмент по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что гены

и в случае необходимости

производятся от микроорганизмов родов

4. ДНК-Фрагмент по любому из пп.1 - 3, отличающийся тем, что гены оперативно связаны с необходимыми для экспрессии генетическими контрольными элементами.

5. ДНК-Фрагменты по любому из пп.1 - 4, отличающийся тем, что гены биосинтеза L-карнитина располагаются в последовательности

или, в случае необходимости,

и находятся в виде одной-единственной транскрипционной единицы.

6. ДНК-Фрагмент по любому из пп.4 и 5, отличающийся тем, что регуляторный элемент включает промотор природного

7. ДНК-Фрагмент по любому из пп. 1 - 6, отличающийся тем, что гены

характеризуются нижеприведенной картой рестрикции, приведенной на с.160.

8. Вектор, содержащий ДНК-фрагмент по любому из пп.1 - 7.

9. Вектор по п. 8, а именно плазмида pVK100q, которая находится в

под номером DSM 8726; плазмида pVK1011, характеризующаяся картой рестрикции согласно рис.3; и плазмида pAZ101, характеризующаяся картой рестрикции согласно рис.4.

10. Рекомбинантный микроорганизм, содержащий ДНК-фрагмент или вектор по любому из пп.1 - 9.

11. Микроорганизм по п.10, отличающийся тем, что его способность к катаболизму L-карнитина полностью или частично подавлена.

12. Микроорганизм по любому из пп.10 и 11, отличающийся тем, что его способность к рекомбинации ухудшена.

13. Микроорганизм по любому из пп.10 - 12, отличающийся тем, что его выбирают из микроорганизмов родов

14. Микроорганизм

содержащий плазмиду pVK100q, которая находится на хранении под номером DSM 8726; плазмиду pVK1011, характеризующуюся картой рестрикции согласно рис.3, или плазмиду pAZ101, характеризующуюся картой рестрикции согласно рис.4, а также производимые от таких микроорганизмов генетические варианты и мутанты со способностью к синтезу L-карнитина.

15. Микроорганизм

содержащий плазмиду pVK100q, которая находится в

под номером DSM 8726; плазмиду pVK1011, характеризующуюся картой рестрикции согласно рис.3, или плазмиду pAZ101, характеризующуюся картой рестрикции согласно рис.4, а также производимые от таких микроорганизмов генетические варианты и мутанты со способностью к биосинтезу L-карнитина.

16. Биотехнологический способ получения L-карнитина, отличающийся тем, что кротонобетаин и/или γ-бутиробетаин ферментируют, в присутствии пригодного источника углерода и азота, с помощью микроорганизма по любому из пп.10 - 15 и L-карнитин изолируют.