RU2744299C1 - Продукты лечебного питания и косметические средства для увеличения количества апоптотических клеток и уменьшения количества некротических клеток и способ получения компонента из прорастающих виноградных косточек для увеличения количества апоптотических клеток и уменьшения количества некротических клеток - Google Patents
Продукты лечебного питания и косметические средства для увеличения количества апоптотических клеток и уменьшения количества некротических клеток и способ получения компонента из прорастающих виноградных косточек для увеличения количества апоптотических клеток и уменьшения количества некротических клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2744299C1 RU2744299C1 RU2019127994A RU2019127994A RU2744299C1 RU 2744299 C1 RU2744299 C1 RU 2744299C1 RU 2019127994 A RU2019127994 A RU 2019127994A RU 2019127994 A RU2019127994 A RU 2019127994A RU 2744299 C1 RU2744299 C1 RU 2744299C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- grape seeds
- grape
- cells
- vitis
- aging
- Prior art date
Links
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 title claims abstract description 99
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 title claims abstract description 96
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 title claims abstract description 82
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 title claims abstract description 82
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 46
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 title claims abstract description 45
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 title description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 32
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 230000035784 germination Effects 0.000 claims abstract description 25
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 23
- 240000002503 Vitis amurensis Species 0.000 claims abstract description 8
- 235000004283 Vitis amurensis Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 240000000956 Vitis coignetiae Species 0.000 claims abstract description 8
- 235000007068 Vitis coignetiae Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 235000009356 Vitis shiragae Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 241000006238 Vitis shiragae Species 0.000 claims abstract description 7
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 241000894007 species Species 0.000 claims abstract description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 244000070384 Vitis labrusca Species 0.000 claims abstract 5
- 235000004282 Vitis labrusca Nutrition 0.000 claims abstract 5
- 229940087559 grape seed Drugs 0.000 claims description 105
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 6
- 101150115538 nero gene Proteins 0.000 claims description 6
- 239000010979 ruby Substances 0.000 claims description 6
- 229910001750 ruby Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229920002253 Tannate Polymers 0.000 claims description 4
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 claims description 4
- 238000007605 air drying Methods 0.000 claims 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 abstract description 154
- LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N Trans-resveratrol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1\C=C\C1=CC(O)=CC(O)=C1 LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N 0.000 abstract description 33
- QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N Resveratrol Natural products OC1=CC=CC(C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)=C1 QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 32
- 235000021283 resveratrol Nutrition 0.000 abstract description 32
- 229940016667 resveratrol Drugs 0.000 abstract description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 239000000843 powder Substances 0.000 abstract description 7
- 238000007654 immersion Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 176
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 84
- 239000000047 product Substances 0.000 description 57
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 47
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 31
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 14
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 12
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 12
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 8
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- -1 etc.) Natural products 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 4
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 4
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 3
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 3
- 241000235343 Saccharomycetales Species 0.000 description 3
- 241000219095 Vitis Species 0.000 description 3
- 235000009392 Vitis Nutrition 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 3
- JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N (3r)-2-(3,5-dihydroxy-4-methoxyphenyl)-8-[(2r,3r,4r)-3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3,4-dihydro-2h-chromen-4-yl]-3,4-dihydro-2h-chromene-3,5,7-triol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=C(O)C=C1C1[C@H](O)CC(C(O)=CC(O)=C2[C@H]3C4=C(O)C=C(O)C=C4O[C@@H]([C@@H]3O)C=3C=CC(O)=CC=3)=C2O1 JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001991 Proanthocyanidin Polymers 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- XDHNQDDQEHDUTM-UHFFFAOYSA-N bafliomycin A1 Natural products COC1C=CC=C(C)CC(C)C(O)C(C)C=C(C)C=C(OC)C(=O)OC1C(C)C(O)C(C)C1(O)OC(C(C)C)C(C)C(O)C1 XDHNQDDQEHDUTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002407 ATP formation Effects 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 1
- 229920001342 Bakelite® Polymers 0.000 description 1
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 1
- 102100033270 Cyclin-dependent kinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- QTANTQQOYSUMLC-UHFFFAOYSA-O Ethidium cation Chemical compound C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 QTANTQQOYSUMLC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 101000654471 Mus musculus NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-1 Proteins 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 229940123973 Oxygen scavenger Drugs 0.000 description 1
- YWPVROCHNBYFTP-UHFFFAOYSA-N Rubusoside Natural products C1CC2C3(C)CCCC(C)(C(=O)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C3CCC2(C2)CC(=C)C21OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O YWPVROCHNBYFTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006627 SLC12A9 Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- UEDUENGHJMELGK-HYDKPPNVSA-N Stevioside Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UEDUENGHJMELGK-HYDKPPNVSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 231100000460 acute oral toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 1
- 229930192649 bafilomycin Natural products 0.000 description 1
- XDHNQDDQEHDUTM-JQWOJBOSSA-N bafilomycin A1 Chemical compound CO[C@H]1\C=C\C=C(C)\C[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)\C=C(/C)\C=C(OC)\C(=O)O[C@@H]1[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)[C@]1(O)O[C@H](C(C)C)[C@@H](C)[C@H](O)C1 XDHNQDDQEHDUTM-JQWOJBOSSA-N 0.000 description 1
- XDHNQDDQEHDUTM-ZGOPVUMHSA-N bafilomycin A1 Natural products CO[C@H]1C=CC=C(C)C[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)C=C(C)C=C(OC)C(=O)O[C@@H]1[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)[C@]1(O)O[C@H](C(C)C)[C@@H](C)[C@H](O)C1 XDHNQDDQEHDUTM-ZGOPVUMHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000003150 biochemical marker Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 1
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- VLAPMBHFAWRUQP-UHFFFAOYSA-L molybdic acid Chemical compound O[Mo](O)(=O)=O VLAPMBHFAWRUQP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 108700042657 p16 Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxotungsten Chemical compound O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.OP(O)(O)=O IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- YWPVROCHNBYFTP-OSHKXICASA-N rubusoside Chemical compound O([C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YWPVROCHNBYFTP-OSHKXICASA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000004320 sodium erythorbate Substances 0.000 description 1
- 235000010352 sodium erythorbate Nutrition 0.000 description 1
- RBWSWDPRDBEWCR-RKJRWTFHSA-N sodium;(2r)-2-[(2r)-3,4-dihydroxy-5-oxo-2h-furan-2-yl]-2-hydroxyethanolate Chemical compound [Na+].[O-]C[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O RBWSWDPRDBEWCR-RKJRWTFHSA-N 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000012128 staining reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- OHHNJQXIOPOJSC-UHFFFAOYSA-N stevioside Natural products CC1(CCCC2(C)C3(C)CCC4(CC3(CCC12C)CC4=C)OC5OC(CO)C(O)C(O)C5OC6OC(CO)C(O)C(O)C6O)C(=O)OC7OC(CO)C(O)C(O)C7O OHHNJQXIOPOJSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940013618 stevioside Drugs 0.000 description 1
- 235000019202 steviosides Nutrition 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/87—Vitaceae or Ampelidaceae (Vine or Grape family), e.g. wine grapes, muscadine or peppervine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2250/00—Food ingredients
- A23V2250/20—Natural extracts
- A23V2250/21—Plant extracts
- A23V2250/2132—Other phenolic compounds, polyphenols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Botany (AREA)
- Public Health (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Birds (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к пищевой и косметической промышленности. Продукт питания или косметическое средство, содержащий компонент из стимулированных к прорастанию виноградных косточек, содержащий 60 вес. % или более полифенола грубой очистки, полученного из стимулированных к прорастанию виноградных косточек, при этом компонент из стимулированных к прорастанию виноградных косточек получен экстрагированием из виноградных косточек в состоянии прорастания, виноградные косточки представляют собой одну или более виноградных косточек винограда вида, выбранного из группы, состоящей из Vitis vinifera L., Vitis labrusca L., Vitis coignetiae L., Vitis amurensis L. и Vitis shiragai L., продукт питания обеспечивает увеличение количества апоптотических клеток и уменьшение количества некротических клеток. Способ получения компонента из стимулированных к прорастанию виноградных косточек для увеличения количества апоптотических клеток и уменьшения количества некротических клеток, включающий: (этап 1) погружение одной или более виноградных косточек винограда вида, выбранного из группы, состоящей из Vitis vinifera L., Vitis labrusca L., Vitis coignetiae L., Vitis amurensis L. и Vitis shiragai L., в воду при 30-60°С на 20-80 часов; (этап 2) удаление из воды виноградных косточек, погруженных на указанном этапе 1, и естественное высушивание их на воздухе; (этап 3) погружение виноградных косточек, естественным образом высушенных на указанном этапе 2, в воду при 15-45°С на 10-100 минут; (этап 4) удаление из воды виноградных косточек, погруженных на указанном этапе 3, и естественное высушивание их на воздухе; (этап 5) повторение указанных этапов 3 и 4 для стимулирования прорастания виноградных косточек до тех пор, пока зародышевая часть виноградных косточек, естественным образом высушенных на указанном этапе 4, слегка не вздуется и не набухнет; (этап 6) высушивание стимулированных к прорастанию виноградных косточек при 35-60°С; (этап 7) измельчение в порошок виноградных косточек, высушенных на указанном этапе 6; (этап 8) получение экстрагированной фракции, содержащей полифенол, полученный из виноградных косточек, путем погружения измельченных в порошок виноградных косточек, полученных на указанном этапе 7, в воду, этанол или смешанный растворитель из воды и этанола; и (этап 9) высушивание и измельчение в порошок полученной на указанном этапе 8 экстрагированной фракции, содержащей полифенол, полученный из виноградных косточек. Изобретение позволяет получить антивозрастной компонент из виноградных косточек, обладающий лучшим антивозрастным эффектом, чем ресвератрол. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 6 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0001] Настоящее изобретение относится к антивозрастным продуктам лечебного питания и косметическим средствам, а также к способу получения антивозрастного компонента из виноградных косточек, в частности к антивозрастным продуктам лечебного питания и косметическим средствам, обладающим улучшенным антивозрастным эффектом по сравнению с ресвератролом, и к способу получения антивозрастного компонента из виноградных косточек, обладающего улучшенным антивозрастным эффектом.
ОПИСАНИЕ УРОВНЯ ТЕХНИКИ
[0002] Предшествующее исследование относительно профилактики старения и контроля жизни показало, что соединение, например, ресвератрол (транс-3,4',5-тригидроксистильбен), должно оказывать антивозрастной эффект.
[0003] Например, Konrad Т. Howitz et al., Nature 425, и 191-196 (2003) сообщает, что у почкующихся дрожжей (Saccharomyces cerevisiae) ресвератрол стимулировал Sir2, фермент Caenorhabditis elegans, регулируя продолжительность жизни путем улучшения стабильности ДНК почкующихся дрожжей, увеличивая тем самым продолжительность жизни почкующихся дрожжей на 70%.
[0004] Однако, как описано в Richard A. Miller et al., Journal of Gerontology: BIOLOGICAL SCIENCES 191-201 (2010), сообщалось, что ресвератрол не увеличивает продолжительность жизни самцов и самок мышей и не оказывает какого-либо антивозрастного эффекта.
[0005] Соответственно, хотя ожидается, что ресвератрол обладает антивозрастным эффектом, не было подтверждено, действительно ли ресвератрол обладает антивозрастным эффектом.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0006] Как описано выше, не было подтверждено, действительно ли ресвератрол, по ожиданиям обладающий антивозрастным эффектом, обладает таким антивозрастным эффектом.
Соответственно, существует потребность в веществе, обладающем более надежным и лучшим антивозрастным эффектом, чем ресвератрол.
[0007] После серьезного рассмотрения авторами настоящего изобретения было обнаружено, что экстракт, состоящий из полифенола из виноградных косточек, обладает лучшим антивозрастным эффектом, чем ресвератрол.
[0008] Задача, решаемая настоящим изобретением, состоит в обеспечении антивозрастного компонента из виноградных косточек, обладающего лучшим антивозрастным эффектом, чем ресвератрол, и который, как ожидается, имеет такой антивозрастной эффект, и способа получения такого антивозрастного компонента из виноградных косточек, и в обеспечении антивозрастных продуктов лечебного питания и антивозрастных косметических средств, содержащих данный антивозрастной компонент.
СРЕДСТВА ДЛЯ РЕШЕНИЯ ЗАДАЧ
[0009] Настоящее изобретение в соответствии с первым аспектом относится к антивозрастным продуктам лечебного питания и косметическим средствам, содержащим антивозрастной компонент из виноградных косточек, содержащий 60 вес. % или больше полифенола грубой очистки, полученного из виноградных косточек.
[0010] Настоящее изобретение в соответствии со вторым аспектом относится к способу получения антивозрастного компонента из виноградных косточек, включающему:
(этап 1) предварительную обработку одной или более виноградных косточек винограда вида, выбранного из группы, состоящей из Vitis vinifera L., Vitis labrasca L., Vitis coignetiae L., Vitis amurensis L. и Vitis shiragai L., с тем чтобы вызвать прорастание этих виноградных косточек, и высушивание прорастающих виноградных косточек при 35°C-60°C;
(этап 2) измельчение в порошок виноградных косточек, высушенных на этапе 1;
(этап 3) получение экстрагированной фракции, содержащей полифенол, полученный из виноградных косточек, путем погружения измельченных в порошок виноградных косточек, полученных на этапе 2, в воду, этанол или смешанный растворитель из воды и этанола; и
(этап 4) высушивание и измельчение в порошок экстрагированной фракции, содержащей полифенол, полученный из виноградных косточек на этапе 3.
[0012] Настоящее изобретение в соответствии с третьим аспектом относится к антивозрастным продуктам лечебного питания и косметическим средствам по первому аспекту или способу по второму аспекту, где виноградная косточка представляет собой семя одного или нескольких сортов винного винограда, выбранных из группы, состоящей из: Агиоргитико, Вионье, Каберне Совиньон, Каберне Фран, Гаме, Кариньян, Карменер, Ксиномавро, Гренаш, Гевюрцтраминер, Кернер, Коломбард, Кошу Султана, Санджовезе, Шардоне, Шенин Блан, Сира, Зинфандель, Семильон, Совиньон Блан, Таннат, Цвайгельт, Темпранильо, Треббиано, Неббиоло, Неро дАвола, Барбера, Пинотаж, Пино Нуар, Пино Гри, Пино Блан, Пти Вердо, Блэк Квин, Мускат Бэйли А, Мальбек, Мюллер-Тургау Мурведр, Менье, Мелон де Бургонь, Мерло, Мускат, Яма-Совиньон, Рислинг и Руби Каберне.
Эффект настоящего изобретения
[0012] Согласно первому аспекту настоящего изобретения антивозрастные продукты лечебного питания и косметические средства содержат антивозрастной компонент из виноградных косточек, содержащий 60 вес. % или больше полифенола грубой очистки, полученного из виноградных косточек. Таким образом, можно обеспечить получение антивозрастных продуктов лечебного питания и косметических средств, обладающих хорошим антивозрастным эффектом.
[0013] Согласно второму аспекту настоящего изобретения антивозрастной компонент из виноградных косточек получают на этапах, где (этап 1) предварительно обрабатывают одну или более виноградных косточек винограда вида, выбранного из группы, состоящей из Vitis vinifera L., Vitis labrasca L., Vitis coignetiae L., Vitis amurensis L. и Vitis shiragai L., чтобы вызвать прорастание этих виноградных косточек, и высушивают прорастающие виноградные косточки при 35°C-60°C;
(этап 2) измельчают в порошок виноградные косточки, высушенные на этапе 1;
(этап 3) получают экстрагированную фракцию, содержащую полифенол, полученный из виноградных косточек, путем погружения измельченных в порошок виноградных косточек, полученных на этапе 2, в воду, этанол или смешанный растворитель из воды и этанола; и
(этап 4) сушат и измельчают в порошок экстрагированную фракцию, содержащую полифенол, полученный из виноградных косточек на этапе 3. Таким образом, можно изготовить антивозрастной компонент из виноградных косточек, обладающий хорошим антивозрастным эффектом.
[0014] Согласно третьему аспекту настоящего изобретения виноградная косточка, используемая для антивозрастных продуктов лечебного питания и косметических средств по первому аспекту или для способа по второму аспекту, представляет собой семя одного или более сортов винного винограда, выбранных из группы, состоящей из Агиоргитико, Вионье, Каберне Совиньон, Каберне Фран, Гаме, Кариньян, Карменер, Ксиномавро, Гренаш, Гевюрцтраминер, Кернер, Коломбард, Кошу Султана, Санджовезе, Шардоне, Шенин Блан, Сира, Зинфандель, Семильон, Совиньон Блан, Таннат, Цвайгельт, Темпранильо, Треббиано, Неббиоло, Неро д'Авола, Барбера, Пинотаж, Пино Нуар, Пино Гри, Пино Блан, Пти Вердо, Блэк Квин, Мускат Бэйли А, Мальбек, Мюллер-Тургау Мурведр, Менье, Мелон де Бургонь, Мерло, Мускат, Яма-Совиньон, Рислинг и Руби Каберне. Таким образом, можно изготовить антивозрастные продукты лечебного питания и косметические средства, обладающие лучшим антивозрастным эффектом, или можно изготовить антивозрастной компонент из виноградных косточек, обладающий лучшим антивозрастным эффектом.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0015] [Фиг. 1] На фиг. 1 представлен график, показывающий количество стареющих клеток, рассчитанное в примерах 1-3, сравнительном примере 1 и контроле. На (а) показано количество стареющих клеток среди клеток, культивируемых в течение 7 дней, (b) показано количество стареющих клеток среди клеток, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показано количество стареющих клеток среди клеток, культивируемых в течение 21 дня. Кроме того, предполагая, что количество стареющих клеток, рассчитанное в контроле, составляет 100%, количество стареющих клеток в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показано в соотношении с количеством стареющих клеток в контроле.
[Фиг. 2] На фиг. 2 представлен график, показывающий количество митохондрий, измеренное в примерах 1-3, сравнительном примере 1 и контроле. На (а) показано количество митохондрий в клетках, культивируемых в течение 7 дней, (b) показано количество митохондрий в клетках, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показано количество митохондрий в клетках, культивируемых в течение 21 дня. Кроме того, предполагая, что количество митохондрий, рассчитанное в контроле, составляет 100%, количество митохондрий в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показано в соотношении с количеством митохондрий в контроле.
[Фиг. 3] На фиг. 3 представлен график, показывающий рабочую нагрузку определенного количества митохондрий, измеренную в примерах 1-3, сравнительном примере 1 и контроле. На (а) показана рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в клетках, культивируемых в течение 7 дней, (b) показана рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в клетках, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показана рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в клетках, культивируемых в течение 21 дня. Кроме того, предполагая, что рабочая нагрузка определенного количества митохондрий, рассчитанная в контроле, составляет 100%, рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показана в соотношении с рабочей нагрузкой определенного количества митохондрий в контроле.
[Фиг. 4] На фиг. 4 представлен график, показывающий количество апоптотических клеток, измеренное в примерах 1-3, сравнительном примере 1 и контроле. На (а) показано количество апоптотических клеток среди клеток, культивируемых в течение 7 дней, (b) показано количество апоптотических клеток среди клеток, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показано количество апоптотических клеток среди клеток, культивируемых в течение 21 дня. Кроме того, предполагая, что количество апоптотических клеток, рассчитанное в контроле, составляет 100%, количества апоптотических клеток в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показаны в соотношении с количеством апоптотических клеток в контроле.
[Фиг. 5] На фиг. 5 представлен график, показывающий количество некротических клеток, измеренное в примерах 1-3, сравнительном примере 1 и контроле. На (а) показано количество некротических клеток среди клеток, культивируемых в течение 7 дней, (b) показано количество некротических клеток среди клеток, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показано количество некротических клеток среди клеток, культивируемых в течение 21 дня. Кроме того, предполагая, что количество некротических клеток, рассчитанное в контроле, составляет 100%, количества некротических клеток в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показаны в соотношении с количеством некротических клеток в контроле.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0016] Далее будут описаны антивозрастные продукты лечебного питания и косметические средства, а также способ получения антивозрастного компонента из виноградных косточек по настоящему изобретению.
Кроме того, в данном описании «старение» относится к состоянию, при котором способность клетки к удвоению уменьшается, или к состоянию, при котором клетка необратимо прекращает расти в фазе G1. Супрессия гена, способствующего прохождению клеточного цикла, и повышенная экспрессия генов p16INK4a и р53, ингибирующих клеточный цикл, и их целевого транскрипционного фактора, p21CIP1, вовлечены в эти состояния. Кроме того, стареющая клетка устойчива к митоген-индуцированной пролиферации клеток и, таким образом, увеличивается в размерах и сглаживается. Стареющая клетка проявляет общий биохимический маркер, такой как связанная со старением активность β-галактозидазы (SA β Gal). Хотя этот феномен старения охарактеризован на культивируемой клетке, было доказано, что он имеет место и в живом организме.
[0017] Антивозрастные продукты лечебного питания и косметические средства по настоящему изобретению содержат антивозрастной компонент из виноградных косточек, содержащий 60 вес. % или большее полифенола грубой очистки, полученного из виноградных косточек.
[0018] Антивозрастной компонент из виноградных косточек, состоящий из полифенола из виноградных косточек, содержащийся в антивозрастных продуктах лечебного питания и косметических средствах по настоящему изобретению, получают на следующих этапах получения.
[0019] <Этап 1>
На этапе 1 предварительно обрабатывают виноградную косточку, чтобы вызвать прорастание, и высушивают прорастающие виноградные косточки.
[0020] Разновидность винограда для виноградных косточек, используемых в настоящем изобретении, представляет собой, без ограничения, например, один или более видов винограда, выбранных из группы, состоящей из Vitis vinifera L., Vitis labrasca L., Vitis coignetiae L., Vitis amurensis L. и Vitis shiragai L.
[0021] Среди прочих предпочтительным виноградом является сорт винного винограда, такой как Агиоргитико, Вионье, Каберне Совиньон, Каберне Фран, Гаме, Кариньян, Карменер, Ксиномавро, Гренаш, Гевюрцтраминер, Кернер, Коломбард, Кошу, Султана, Санджовезе, Шардоне, Шенин Блан, Сира, Зинфандель, Семильон, Совиньон Блан, Таннат, Цвайгельт, Темпранильо, Треббиано, Неббиоло, Неро д'Авола, Барбера, Пинотаж, Пино Нуар, Пино Гри, Пино Блан, Пти Вердо, Блэк Квин, Мускат Бэйли А, Мальбек, Мюллер-Тургау Мурведр, Менье, Мелон де Буришь, Мерло, Мускат, Яма-Совиньон, Рислинг и Руби Каберне. В частности, Каберне Совиньон, Мерло, Сира и Пино Нуар являются более предпочтительными.
[0022] В этом описании «вызвать прорастание» означает стимуляцию виноградной косточки до состояния, в котором она начинает прорастать. Более конкретно, это означает состояние, при котором зародышевая часть виноградной косточки слегка вздулась и набухла.
Степень вздутия представляет собой, без ограничения, например, состояние, при котором поверхность зародышевой части вздулась на 1-2 мм больше, чем у виноградной косточки до прорастания.
Кроме того, в настоящем изобретении виноградные косточки в состоянии проростка, при котором виноградная косточка образует почку, не являются предпочтительными, поскольку они имеют низкую тенденцию к антивозрастному эффекту по сравнению с виноградными косточками в состоянии прорастания.
[0023] В настоящем изобретении способ предварительной обработки виноградных косточек, чтобы вызвать прорастание виноградной косточки, включает без ограничения любые способы, обычно используемые для стимуляции прорастания семян растений, например, физические способы, такие как низкотемпературная обработка, обработка на теплой бане и механическое разрушение, а также химические способы, такие как обработка газом (ацетилен, эфир, газообразный водород и т.д.), обработка ауксином и обработка гиббереллином.
[0024] Как описано выше, в настоящем изобретении способ предварительной обработки виноградных косточек, чтобы вызвать прорастание виноградной косточки, конкретно не ограничен. Например, более конкретно, можно вызвать прорастание виноградных косточек при помощи следующего способа предварительной обработки.
Во-первых, виноградные косточки погружают в воду при 30-60°С
Время погружения предпочтительно составляет, без ограничения, от 20 до 80 часов.
Во-вторых, виноградные косточки, погруженные в воду при 30-60°С, извлекают из воды и естественным образом высушивают на воздухе. Температура естественной сушки предпочтительно составляет, без ограничения, от 10 до 50°С. Время естественной сушки предпочтительно составляет, без ограничения, от 1 до 10 часов.
[0025] Затем виноградные косточки, естественным образом высушенные на воздухе, погружают в воду при температуре 15-45°С.
Время погружения предпочтительно составляет, без ограничения, от 10 до 200 минут.
Во-вторых, виноградные косточки, погруженные в воду при 15-45°С, извлекают из воды и естественным образом высушивают на воздухе.
Температура естественной сушки предпочтительно составляет, без ограничения, от 10 до 50°С
Время естественной сушки предпочтительно составляет, без ограничения, от 3 до 12 часов.
[0026] Этап погружения виноградных косточек в воду при температуре 15-45°С и этап их естественной сушки на воздухе (т.е. периодическое погружение виноградных косточек в воду) повторяют до тех пор, пока зародышевая часть виноградной косточки слегка не вздуется и не набухнет после естественной сушки.
Когда зародышевая часть виноградных косточек слегка вздулась и набухла после естественной сушки, виноградные косточки извлекают и дополнительно сушат в течение 2-5 дней при температуре, достаточной для стерилизации различных патогенных микроорганизмов (80°С или меньше).
Это время сушки можно соответствующим образом изменить в зависимости от сезона, температуры окружающей среды или влажности.
[0027] Эта стимуляция обработкой для прорастания отщепляет молекулу фенола от тонкого слоя фенолов в виноградных косточках. Затем молекула многократно связывается с образованием полифенола.
Хотя ресвератрол, разновидность полифенола, имеет молекулярную массу приблизительно 250, этот недавно полученный компонент характеризуется крупной полимерной структурой, содержащей компонент с молекулярной массой 4000.
[0028] <Этап 2>
На этапе 2 измельчают в порошок виноградные косточки в состоянии прорастания, высушенные на этапе 1.
В способе измельчения в порошок можно использовать, без ограничения, стандартные способы, такие как измельчение в порошок с помощью мельницы.
[0029] <Этап 3>
На этапе 3 экстрагируют измельченные в порошок виноградные косточки растворителем.
На этом этапе 3 можно получить антивозрастной компонент из виноградных косточек, состоящий из полифенола из виноградных косточек.
В качестве растворителя можно использовать воду, этанол или смешанный растворитель из воды и этанола.
Экстракцию можно выполнить путем добавления 50-1000 частей по весу растворителя к 100 частей по весу измельченных в порошок виноградных косточек.
Как описано выше, антивозрастной компонент из виноградных косточек, состоящий из полифенола из виноградных косточек, содержит полимерный компонент с молекулярной массой приблизительно 4000 (3500-4500).
[0030] <Этап 4>
Затем антивозрастной компонент из виноградных косточек, состоящий из полифенола из виноградных косточек, полученного на этапе 3, сушат и получают.
В способе сушки предпочтительно применяют, без ограничения, декомпрессионную сушку.
В способе измельчения в порошок можно использовать, без ограничения, стандартные способы, такие как измельчение в порошок с помощью мельницы.
Вышеуказанные этапы могут обеспечить антивозрастной компонент из виноградных косточек, состоящий из полифенола, полученного из измельченных в порошок виноградных косточек.
[0031] Антивозрастной компонент из виноградных косточек, полученный на указанных выше этапах, содержит 50-80 вес. % полифенола грубой очистки.
С точки зрения обеспечения существенного антивозрастного эффекта необходимо, чтобы антивозрастной компонент из виноградных косточек содержал вес. % полифенола грубой очистки.
Полифенол, содержащийся в антивозрастном компоненте из виноградных косточек, представляет собой полифенол, содержащийся в семенах каждого сорта винограда, например, ресвератрол, танин и т.п.
50-80 вес. % полифенола, содержащегося в антивозрастном компоненте из виноградных косточек, составляет проантоцианидиновый полимер.
Авторами настоящего изобретения было подтверждено, что антивозрастной компонент из виноградных косточек, содержащий вышеуказанный компонент, обеспечивает антивозрастной эффект.
Термин «грубой очистки» в данном документе означает состояние, при котором экстракт только высушен и измельчен в порошок, содержит посторонние вещества, и не проводится такая обработка, как концентрирование. Антивозрастной компонент из виноградных косточек, полученный на этапах 1-4, является результатом грубой очистки.
[0032] Содержание антивозрастного компонента из виноградных косточек в продуктах лечебного питания может обеспечить антивозрастные продукты лечебного питания по настоящему изобретению.
Благодаря антивозрастному компоненту из виноградных косточек, содержащемуся в продуктах лечебного питания, можно легко и регулярно принимать антивозрастной компонент из виноградных косточек.
Антивозрастные продукты лечебного питания по настоящему изобретению можно изготовить обычным способом путем соответствующего добавления вспомогательных веществ, используемых в качестве обычного пищевого сырья, например глюкозы, фруктозы, сахарозы, мальтозы, сорбита, стевиозида, рубусозида, кукурузного сиропа, лактозы, лимонной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, янтарной кислоты, молочной кислоты, L-аскорбиновой кислоты, d1-альфа-токоферола, эриторбата натрия, глицерина, пропиленгликоля, сложного эфира глицерина и жирных кислот, сложного эфира полиглицерина и жирных кислот, сложного эфира сахарозы и жирной кислоты, сложного эфира сорбитана и жирной кислоты, сложного эфира пропиленгликоля и жирных кислот, гуммиарабика, каррагенана, казеина, желатина, пектина, агара, витамина В, амида никотиновой кислоты, пантотената кальция, аминокислоты, соли кальция, пигмента, ароматизатора и консерванта.
[0033] Содержание антивозрастного компонента из виноградных косточек в косметических средствах может обеспечить антивозрастные косметические средства по настоящему изобретению.
Благодаря антивозрастному компоненту из виноградных косточек, содержащемуся в косметических средствах, можно регулярно наносить антивозрастной компонент из виноградных косточек.
Форма антивозрастного компонента из виноградных косточек, содержащегося в антивозрастных косметических средствах по настоящему изобретению, предпочтительно, но без ограничения, представляет собой многослойную микрокапсулу с точки зрения легкости проникновения через кожу.
Антивозрастные косметические средства по настоящему изобретению можно изготовить обычным способом путем соответствующего добавления обычно используемых вспомогательных веществ, таких как отбеливающее средство, средство для удаления активного кислорода, антиоксидант, ингибитор ультрафиолета и т.д.
[0034] Потребление антивозрастного компонента из виноградных косточек в антивозрастных продуктах лечебного питания и косметических средствах по настоящему изобретению предпочтительно, но без ограничения, составляет по меньшей мере 50 мг в день или больше с точки зрения обеспечения существенного антивозрастного эффекта.
Если потребление антивозрастного компонента из виноградных косточек в антивозрастных продуктах лечебного питания и косметических средствах по настоящему изобретению составляет менее 50 мг в день, антивозрастной эффект не может проявляться в достаточной степени, и, таким образом, потребление не желательно.
Более того, даже если потребление антивозрастного компонента из виноградных косточек в антивозрастных продуктах лечебного питания и косметических средствах по настоящему изобретению составляет более 7500 мг в день (на массу тела 60 кг), степень увеличения эффекта является небольшой.
Следовательно, потребление антивозрастного компонента из виноградных косточек в антивозрастных продуктах лечебного питания и косметических средствах по настоящему изобретению предпочтительно составляет 50-7500 мг в день.
В зависимости от применения в антивозрастные продукты лечебного питания и косметические средства по настоящему изобретению можно соответствующим образом добавить вспомогательное вещество, регулятор рН, консервант, хелатирующее средство, стабилизатор или т.п.
[0035] Кроме того, потребление антивозрастного компонента из виноградных косточек, содержащегося в антивозрастных продуктах лечебного питания и косметических средствах по настоящему изобретению, предпочтительно, но без ограничения, составляет, например, 0,8-125 мг/кг/день с точки зрения обеспечения существенного антивозрастного эффекта.
Если потребление антивозрастного компонента из виноградных косточек в антивозрастных продуктах лечебного питания и косметических средствах по настоящему изобретению составляет менее 0,8 мг/кг/день, антивозрастной эффект не может проявляться в достаточной степени, и, таким образом, потребление не желательно.
К тому же, даже если потребление антивозрастного компонента из виноградных косточек в антивозрастных продуктах лечебного питания и косметических средствах по настоящему изобретению составляет более 125 мг/кг/день, это не вызывает дополнительного эффекта.
Следовательно, потребление антивозрастного компонента из виноградных косточек в антивозрастных продуктах лечебного питания и косметических средствах по настоящему изобретению предпочтительно составляет 0,8-125 мг/кг/день.
ПРИМЕРЫ
[0036] Антивозрастные продукты лечебного питания и косметические средства, а также антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению подробно описаны на основе следующих примеров, но способ получения антивозрастных продуктов лечебного питания и косметических средств и антивозрастного компонента из виноградных косточек по настоящему изобретению не ограничивается этими примерами.
[0037] <Пример 1. Изготовление антивозрастного компонента из виноградных косточек>
Семена Каберне Совиньон погружали в воду приблизительно при 40°С на 45-60 часов, затем эти виноградные косточки извлекали из воды и естественным образом сушили на воздухе при комнатной температуре (приблизительно 25°С) в течение 3-5 часов (хранили в комнате).
Естественным образом высушенные виноградные косточки погружали в воду при 25-30°С на 60-80 минут, затем эти виноградные косточки извлекали из воды и естественным образом сушили на воздухе при комнатной температуре (приблизительно 25°С) в течение 3 часов (хранили в комнате).
Погружение в воду при 30°С и естественную сушку в течение 3 часов повторяли 3 раза, затем осматривали высушенные виноградные косточки. Подтверждено, что приблизительно 5-15% зародышевых частей виноградных косточек вздувались приблизительно на 1 мм. Вышеупомянутые процедуры называются обработкой для прорастания.
Процедуру для прорастания заканчивали, когда подтверждали вздутие зародышевой части виноградных косточек, и виноградные косточки дополнительно сушили при 45°С в течение 3 дней с помощью сушилки с длинноволновым инфракрасным излучением.
После сушки виноградных косточек в течение 3 дней семена измельчали в порошок в мельнице с получением порошка из виноградных косточек.
[0038] Затем 50 частей по весу порошка из виноградных косточек добавляли к 100 частей по весу воды и фракцию, растворенную в воде, экстрагировали с получением антивозрастного компонента из виноградных косточек.
После декомпрессионной сушки полученного антивозрастного компонента из виноградных косточек его измельчали в порошок в мельнице с получением измельченного в порошок антивозрастного компонента из виноградных косточек.
[0039] Общее количество полифенола, содержащегося в измельченном в порошок антивозрастном компоненте из виноградных косточек, определяли количественно.
Количественное определение проводили с использованием официального способа АОАС International (официальный способ АОАС 952.03, 15-е издание) (также называемый способом Фолина-Дени).
В способе Фолина-Дени количественно определяют общее количество полифенола путем измерения синего цвета (длина волны 700-770 нм) с помощью спектрофотометра, где синий цвет получают путем восстановления фосфорновольфрамовой кислоты и молибденовой кислоты фенольным гидроксилом в щелочных условиях.
В результате количественного определения было обнаружено, что антивозрастной компонент из виноградных косточек содержит 69 вес. % полифенола.
Также было подтверждено, что 71 вес. % полифенола, содержащегося в антивозрастном компоненте из виноградных косточек (т.е. 49 вес. % антивозрастного компонента из виноградных косточек), составлял проантоцианидиновый полимер.
[0040] В дальнейшем в качестве примера упоминается антивозрастной компонент из виноградных косточек, полученный в соответствии с этим примером, и ресвератрол (изготовленный SIGMA, продукт №: R5010), используемый в целях сравнения, упоминается как сравнительный пример.
В следующих примерах 3-5 исследовали антивозрастной эффект антивозрастного компонента из виноградных косточек по настоящему изобретению.
[0041] <Пример 2. Получение нормальных фибробластов человека, примера и сравнительного примера>
Получение нормальных фибробластов человека
Нормальные фибробласты человека для каждого теста готовили вначале.
После инициации нормальные фибробласты человека (KURABO INDUSTRIES LTD., продукт № KF-4109) культивировали в базальной среде (DMEM (Nacalai Tesque, Inc., продукт №08456-65)), 10% FBS (BioWest, продукт №S1820, лот №516536) и 1% антибиотике (смешанный раствор пенициллин-стрептомицин (Nacalai Tesque, Inc., продукт №26253-84)) в CO2-инкубаторе (5% СО2, 37°C) до получения необходимого количества клеток.
После культивирования нормальные фибробласты человека высвобождали смесью трипсин/EDTA (раствор 2,5 г/л трипсина/1 ммоль/л EDTA (Nacalai Tesque, Inc., продукт №32777-44) и использовали для каждого теста после подсчета числа клеток.
[0042] Получение примера и сравнительного примера
Затем готовили пример и сравнительный пример.
Пример и сравнительный пример измеряли соответственно и растворяли в базальной среде до концентрации 1% (вес./об.).
После растворения пример и сравнительный пример, растворенные в базальной среде, центрифугировали соответственно (120000 об./мин (2000 с-1), 10 минут) для удаления нерастворимых материалов.
После разделения центрифугированием супернатант собирали, фильтровали и стерилизовали через стерилизующий фильтр для использования в каждом тесте.
[0043] <Пример 3. Тест на подтверждение антивозрастного эффекта>
Антивозрастной эффект примера и сравнительного примера тестировали путем измерения активности β-галактозидазы (ассоциированной со старением β-галактозидазы; SA-β-gal), обычно используемой в качестве маркера старения клеток.
Избыточную экспрессию SA-β-gal подтверждали в стареющих клетках. Было подтверждено, что процесс старения клеток, измеряемый с помощью маркера старения, происходит не только в культивируемых клетках, но и в организме.
Количество стареющих клеток, распознаваемое в тесте для подтверждения антивозрастного эффекта, наиболее конкретно указывает на антивозрастной эффект в качестве всеобъемлющего параметра.
[0044] (Процедура теста)
Нормальные фибробласты человека, полученные в базальной среде, высевали на 96-луночный планшет так, чтобы они составляли 1×104 клеток/0,1 мл/лунку (черный планшет для наблюдения флуоресценции (Sumitomo Bakelite Co., Ltd., продукт № MS-8096F)), и культивировали в течение 24 часов.
После культивирования культуральный супернатант соответственно заменяли на указанные ниже среды с другими условиями и нормальные фибробласты человека снова культивировали.
[0045] Условия для каждой среды выглядят следующим образом. Каждая клетка, культивируемая со средами при каждом условии, упоминается как примеры 1-3, сравнительный пример 1 и контроль, соответственно.
Пример 1: базальная среда, содержащая 0,002 вес. % антивозрастных компонентов из виноградных косточек по настоящему изобретению.
Пример 2: базальная среда, содержащая 0,01 вес. % антивозрастных компонентов из виноградных косточек по настоящему изобретению.
Пример 3: базальная среда, содержащая 0,05 вес. % антивозрастных компонентов из виноградных косточек по настоящему изобретению.
Сравнительный пример 1: базальная среда, содержащая 0,0023 вес. % ресвератрола.
Контроль: базальная среда (не содержащая ни антивозрастных компонентов из виноградных косточек по настоящему изобретению, ни ресвератрола).
В дальнейшем вышеупомянутые примеры 1-3, сравнительный пример 1 и контроль также использовали в примерах 4-5.
Концентрацию ресвератрола в сравнительном примере 1 установили равной 0,0023 вес. %, поскольку некротические клетки слишком сильно увеличиваются, так что правильное измерение будет затруднено в упомянутом ниже измерительном тесте на некроз, если концентрация резвератрола установлена более 0,0023 вес. %.
[0046] Нормальные фибробласты человека культивировали в соответствии с условиями в течение 21 дня.
Среды заменяли каждые 2-3 дня.
После культивирования культуральный супернатант удаляли и клетки дважды промывали PBS (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd., продукт №05913).
К промытым нормальным фибробластам человека добавляли базальную среду, содержащую разбавленный в 1000 раз бафиломицин, и нормальные фибробласты человека культивировали при 37°С в течение 60 минут.
Затем к культуральному раствору добавляли базальную среду, содержащую разбавленный в 1000 раз рабочий раствор SPiDER-β Gal и разбавленный в 100 раз раствор Hoechst 33342 (DOJINDO LABORATORIES, продукт №346-07951) в качестве реагента, окрашивающего ядра, и нормальные фибробласты человека дополнительно культивировали при 37°С в течение 30 минут.
После культивирования нормальные фибробласты человека промывали в базальной среде.
После промывки базальную среду добавляли в нормальные фибробласты человека и окрашивали ядра (живых клеток) и окрашенные изображения стареющих клеток получали с помощью флуоресцентного микроскопа (Keyence Corporation, продукт № BZ-X7000).
Количество стареющих клеток рассчитывали на основе соответствующих флуоресцентных изображений.
Рабочие растворы бафиломицина А1 и SPiDER-P Gal были из набора для определения клеточного старения SPiDER-βGal (DOJINDO LABORATORIES, продукт № SG03).
[0047] (Результаты)
На фиг. 1 показан график, указывающий количество стареющих клеток, рассчитанное для примеров 1-3, сравнительного примера 1 и контроля.
На фиг. 1 (а) показано количество стареющих клеток среди клеток, культивируемых в течение 7 дней, (b) показано количество стареющих клеток среди клеток, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показано количество стареющих клеток среди клеток, культивируемых в течение 21 дня.
На фиг. 1, предполагая, что количество стареющих клеток в контроле составляет 100%, количество стареющих клеток в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показано в соотношении с количеством стареющих клеток в контроле.
[0048] Количество стареющих клеток в сравнительном Примере 1 при культивировании в течение 7 дней составляло 519% относительно контроля (см. фиг. 1(a)).
Количество стареющих клеток в примере 1 при культивировании в течение 7 дней составило 85%, количество стареющих клеток в примере 2 составило 137%, а количество стареющих клеток в примере 3 составило 73% относительно контроля (см. фиг. 1(a)).
Количество стареющих клеток в сравнительном примере 1 при культивировании в течение 14 дней составило 102% относительно контроля (см. фиг. 1(b)).
Количество стареющих клеток в примере 1 при культивировании в течение 14 дней составило 11%, количество стареющих клеток в примере 2 составило 9%, а количество стареющих клеток в примере 3 составило 7% относительно контроля (см. фиг. 1(b)).
Количество стареющих клеток в сравнительном примере 1 при культивировании в течение 21 дня составило 64% относительно контроля (см. фиг. 1(c)).
Количество стареющих клеток в примере 1 при культивировании в течение 21 дня составило 4%, количество стареющих клеток в примере 2 составило 3%, а количество стареющих клеток в примере 3 составило 2% относительно контроля (см. фиг. 1(c)).
[0049] Согласно этим результатам оказалось, что ресвератрол характеризовался большим числом стареющих клеток среди клеток, культивируемых в течение 7 дней, чем контроль, и способствовал старению клеток. Таким образом, считается, что ресвератрол обладает эффектом стимуляции старения в краткосрочной перспективе.
Кроме того, оказалось, что количество стареющих клеток в культуре клеток 21-го дня было подавлено приблизительно до 64% относительно контроля, таким образом, имеет место подавление старения клеток.
Хотя антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению представлял почти такое же количество стареющих клеток, что и контроль, в клетках, культивируемых в среднем в течение 7 дней, он подавлял количество стареющих клеток в культуре клеток 21-го дня приблизительно до 2-4% относительно контроля, таким образом подавляя старение клеток гораздо больше, чем ресвератрол.
Таким образом, антивозрастной компонент из виноградных косточек обладает лучшим антивозрастным эффектом, чем ресвератрол, а антивозрастные продукты лечебного питания и косметические средства, содержащие эти антивозрастные компоненты из виноградных косточек, также обладают существенным антивозрастным эффектом.
[0050] <Пример 4. Тест на измерение количества митохондрий и рабочей нагрузки определенного количества митохондрий>
После теста на подтверждение антивозрастного эффекта подтверждали влияние примера и сравнительного примера на количество митохондрий и рабочую нагрузку определенного количества митохондрий в клетках.
Традиционно считается, что ресвератрол оказывает влияние на количество митохондрий или рабочую нагрузку определенного количества митохондрий, обеспечивая свой антивозрастной эффект. Вследствие этого, подтверждали влияние антивозрастного компонента из виноградных косточек на количество митохондрий или рабочую нагрузку определенного количества митохондрий.
[0051] Количество митохондрий измеряли, используя митохондриально-селективные зонды Mito Tracker (Invitrogen, продукт № М7512), которые могут избирательно метить митохондрии в клетке.
Рабочую нагрузку определенного количества митохондрий измеряли при помощи анализа МТТ. Поскольку единственной целью анализа МТТ является дегидрогеназная активность митохондрий, результат анализа МТТ отражает рабочую нагрузку определенного количества митохондрий.
[0052] (Процедура теста)
После удаления супернатантов культуры нормальных фибробластов человека, культивированных в примере 2, нормальные фибробласты человека дважды промывали PBS (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd., продукт №05913).
К промытым клеткам добавляли базальную среду, содержащую разбавленный в 1000 раз раствор Hoechst 33342 (DOJINDO LABORATORIES, продукт №346-07951) и разбавленные в 2000 раз митохондриально-селективные зонды Mito Tracker (Invitrogen, продукт № М7512), и нормальные фибробласты человека культивировали при 37°С в течение 30 минут.
После культивирования культуральные супернатанты удаляли и нормальные фибробласты человека дважды промывали PBS (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd., продукт №05913).
После промывки PBS (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd., продукт №05913) снова добавляли в нормальные фибробласты человека и окрашивали ядра (живых клеток) и окрашенные изображения митохондрий получали с помощью флуоресцентного микроскопа (Keyence Corporation, продукт № BZ-X7000).
В дальнейшем каждую интенсивность флуоресценции измеряли с использованием флуоресцентного планшет-ридера (Thermo Fisher Scientific, продукт № VARIOSKAN FLASH) (Hoechst: длина волны возбуждения 356 нм, длина волны флуоресценции 465 нм, Mito Tracker: длина волны возбуждения 579 нм, длина волны флуоресценции 599 нм).
[0053] После измерения интенсивности флуоресценции супернатанты удаляли и нормальные фибробласты человека однократно промывали PBS (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd., продукт №05913).
После того, как нормальные фибробласты человека промывали, их заменяли на PBS (100 мкл/лунку), содержащим 0,5 мг/мл МТТ (тиазолиловый синий тетразолий бромид (SIGMA, продукт №M5655-1G)), и проводили реакцию при 37°С в течение 5 часов.
В дальнейшем 100 мкл 0,01 М HCl (SIGMA, продукт №13-1690) и 10% SDS (Wako Pure Chemical Corporation, продукт №191-07145) добавляли в каждую лунку и проводили реакцию при комнатной температуре в течение 24 часов.
После реакции формазан из МТТ растворялся.
После растворения формазана измеряли оптическую плотность с использованием планшет-ридера (Thermo Fisher Scientific, продукт № VARIOSKAN FLASH) (длина волны измерения 550 нм, эталонная длина волны 660 нм).
[0054] (Результаты)
На фиг. 2 показан график, указывающий количество митохондрий, измеренное в примерах 1-3, сравнительном примере 1 и контроле.
На фиг. 2 (а) показано количество митохондрий в клетках, культивируемых в течение 7 дней, (b) показано количество митохондрий в клетках, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показано количество митохондрий в клетках, культивируемых в течение 21 дня.
На фиг. 2, предполагая, что количество митохондрий в контроле составляет 100%, количество митохондрий в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показано в соотношении с количеством митохондрий в контроле.
[0055] В сравнительном примере 1 при культивировании в течение 7 дней количество митохондрий составляло 191% относительно контроля (см. фиг. 2(a)).
Количество митохондрий в примере 1 при культивировании в течение 7 дней составило 116% относительно контроля, количество митохондрий в примере 2 составило 126% и количество митохондрий в примере 3 составило 143% (см. фиг. 2(a)).
Количество стареющих клеток в сравнительном примере 1 при культивировании в течение 14 дней составило 228% относительно контроля (см. фиг. 2(b)).
Количество митохондрий в примере 1 при культивировании в течение 14 дней составило 123%, количество митохондрий в примере 2 составило 128% и количество митохондрий в примере 3 составило 172% относительно контроля (см. фиг. 2(b)).
Количество митохондрий в примере 1 при культивировании в течение 21 дня составило 246% относительно контроля (см. фиг. 2(c)).
Количество митохондрий в примере 1 при культивировании в течение 21 дня составило 115%, количество митохондрий в примере 2 составило 124% и количество митохондрий в примере 3 составило 178% относительно контроля (см. фиг. 2(c)).
[0056] Согласно этим результатам оказалось, что ресвератрол обладает эффектом увеличения количества митохондрий.
Также оказалось, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению обладает эффектом увеличения количества митохондрий.
[0057] На фиг. 3 показан график, указывающий рабочую нагрузку определенного количества митохондрий, измеренную в примерах 1-3, сравнительном примере 1 и контроле.
На фиг. 3 (а) показана рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в клетках, культивируемых в течение 7 дней, (b) показана рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в клетках, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показана рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в клетках, культивируемых в течение 21 дня.
На фиг. 3, предполагая, что рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в контроле составляет 100%, рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показана в соотношении с рабочей нагрузкой определенного количества митохондрий в контроле.
[0058] Рабочая нагрузка определенного количества митохондрий составила 22% в отношении сравнительного примера 1 при культивировании в течение 7 дней (см. фиг. 3(a)).
Рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примере 1 при культивировании в течение 7 дней составила 74%, рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примере 2 составила 58% и рабочая нагрузка определенного количества митохондрий составила 38% в примере 3 относительно контроля (см. фиг. 3(a)).
Рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в сравнительном примере 1 при культивировании в течение 14 дней составила 20% относительно контроля (см. фиг. 3(b)).
Рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примере 1 при культивировании в течение 14 дней составила 77%, рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примере 2 составила 63% и рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примере 3 составила 34% относительно контроля (см. фиг. 3(b)).
Рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в сравнительном примере 1 при культивировании в течение 21 дня составила 49% относительно контроля (см. фиг. 3(c)).
Рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примере 1 при культивировании в течение 21 дня составила 88%, рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примере 2 составила 76% и рабочая нагрузка определенного количества митохондрий в примере 3 составила 62% относительно контроля (см. фиг. 3(c)).
[0059] Эти результаты показали, что ресвератрол обладает эффектом снижения рабочей нагрузки определенного количества митохондрий.
Более того, оказалось, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению также обладает эффектом снижения рабочей нагрузки определенного количества митохондрий.
[0060] Результат примера 4 показал, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению обладает эффектом увеличения количества митохондрий и снижения рабочей нагрузки определенного количества митохондрий.
С увеличением количества митохондрий количество АТФ (а именно, рабочая нагрузка), которое должно продуцироваться в определенном количестве митохондрий, уменьшается. Считается, что уменьшение рабочей нагрузки определенного количества митохондрий, которое было подтверждено в примере 4, связано с увеличением количества митохондрий и уменьшением продукции АТФ на определенное количество митохондрий.
Это экономит «технические» способности митохондрий, уменьшает выработку активного кислорода, генерируемого митохондриями, и увеличивает выработку супероксиддисмутазы (SOD), являющейся ферментом для удаления активного кислорода, тем самым уменьшая количество активного кислорода, который приводит к повреждению митохондрий и клеток. Поскольку приблизительно 90% активного кислорода вырабатывается митохондриями, можно считать, что уменьшение количества активного кислорода, продуцируемого митохондриями, с помощью антивозрастного компонента из виноградных косточек по настоящему изобретению может защитить клетки и органы и т.д., состоящие из клеток, от повреждений и привести к антивозрастному эффекту.
[0061] <Пример 5. Измерительный тест на апоптоз и некроз>
Затем подтвердили влияние на количество апоптотических клеток и количество некротических клеток в примерах и сравнительном примере.
Поскольку традиционно считалось, что ресвератрол обладает антивозрастным эффектом, вызывая апоптоз, подтверждали влияние антивозрастного компонента из виноградных косточек по настоящему изобретению на количество апоптотических клеток.
Кроме того, также подтверждали влияние антивозрастного компонента из виноградных косточек по настоящему изобретению на количество некротических клеток, что также представляет собой гибель клеток, как и апоптоз.
[0062] Количество апоптотических клеток измеряли с применением аннексина V, который обычно используют в качестве маркера апоптоза. Более подробно, количество апоптотических клеток измеряли путем селективного флуоресцентного окрашивания апоптотических клеток флуоресцентно меченным аннексином V, используя его свойство, заключающееся в том, что аннексии V связывается с фосфатидилсерином, часто появляющимся на поверхности апоптотических клеток.
Количество некротических клеток измеряли с применением гомодимера этидия III (EthD-III), который обычно используют в качестве маркера некроза. Более подробно, EthD-III представляет собой не проникающий через мембраны зонд на основе нуклеиновой кислоты, и количество некротических клеток измеряли с использованием его свойства, заключающегося в том, что ни жизнеспособные клетки, ни апоптотические клетки не окрашиваются с помощью EthD-III, но некротические клетки окрашиваются в ярко-красный цвет.
[0063] (Процедура эксперимента)
После удаления супернатантов культуры нормальных фибробластов человека, культивированных в примере 2, нормальные фибробласты дважды промывали PBS (NISSUI PHARMACEUTICAL CO., LTD., продукт №05913).
К промытым нормальным фибробластам человека добавляли 1х буфер для связывания, содержащий разбавленный в 1000 раз раствор Hoechst 33342 (DOJINDO LABORATORIES, продукт №346-079511), разбавленный в 20 раз FITC-аннексин V и разбавленный в 20 раз EthD-III. Затем нормальные фибробласты человека культивировали при 37°С в течение 30 минут.
Затем, после удаления супернатантов культуры, нормальные фибробласты человека дважды промывали в 1х буфере для связывания.
Новый 1х буфер для связывания добавляли к нормальным фибробластам человека после промывки и получали изображения окрашивания ядра (жизнеспособные клетки), окрашивания аннексином V (апоптоз) и окрашивания EthD-III (некроз) с помощью флуоресцентного микроскопа.
Количество апоптотических клеток и количество некротических клеток рассчитывали по флуоресцентным изображениям исследования.
Кроме того, FITC-аннексин V, EthD-III и 1х буфер для связывания, использованные в примерах, были из набора для определения апоптотических/некротических/здоровых клеток (Takara Bio, Inc., продукт № D25517).
[0064] (Результаты)
На фиг. 4 представлен график, показывающий количество апоптотических клеток, измеренное в примерах 1-3, сравнительном примере 1 и контроле.
На фиг. 4 (а) показано количество апоптотических клеток среди клеток, культивируемых в течение 7 дней, (b) показано количество апоптотических клеток среди клеток, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показано количество апоптотических клеток среди клеток, культивируемых в течение 21 дня. В данном документе на фиг. 4, предполагая, что количество апоптотических клеток в контроле составляет 100%, количество апоптотических клеток в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показано в соотношении с количеством апоптотических клеток в контроле.
[0065] По сравнению с контролем количество апоптотических клеток при культивировании в течение 7 дней в сравнительном примере 1 составило 2184% (см. фиг. 4 (а)).
С другой стороны, по сравнению с контролем количество апоптотических клеток при культивировании в течение 7 дней в примере 1 составило 164%, количество апоптотических клеток в примере 2 составило 102% и количество апоптотических клеток в примере 3 составило 483% (см. фиг. 4 (а)).
По сравнению с контролем количество апоптотических клеток при культивировании в течение 14 дней в сравнительном примере 1 составило 1400% (см. фиг. 4 (b)).
С другой стороны, по сравнению с контролем количество апоптотических клеток при культивировании в течение 14 дней в примере 1 составило 107%, количество апоптотических клеток в примере 2 составило 313% и количество апоптотических клеток в примере 3 составило 226% (см. фиг. 4 (b)).
По сравнению с контролем количество апоптотических клеток в сравнительном примере 1 при культивировании в течение 21 дня составило 4525% (см. фиг. 4 (с)).
С другой стороны, по сравнению с контролем количество апоптотических клеток при культивировании в течение 21 дня в примере 1 составило 59%, количество апоптотических клеток в примере 2 составило 558% и количество апоптотических клеток в примере 3 составило 668% (см. фиг. 4 (с)).
[0066] Эти результаты показали, что ресвератрол обладает эффектом увеличения количества апоптотических клеток.
Более того, оказалось, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению также обладает эффектом увеличения количества апоптотических клеток.
[0067] На фиг. 5 представлен график, показывающий количество некротических клеток, измеренное в примерах 1-3, сравнительном примере 1 и контроле.
На фиг. 5 (а) показано количество некротических клеток среди клеток, культивируемых в течение 7 дней, (b) показано количество некротических клеток среди клеток, культивируемых в течение 14 дней, и (с) показано количество некротических клеток среди клеток, культивируемых в течение 21 дня. Кроме того, на фиг. 5 количество некротических клеток в контроле составляет 100% и количество некротических клеток в примерах 1-3 и сравнительном примере 1 показано как процент от количества некротических клеток в контроле.
[0068] По сравнению с контролем количество некротических клеток при культивировании в течение 7 дней в сравнительном примере 1 составило 125% (см. фиг. 5 (а)).
С другой стороны, по сравнению с контролем количество некротических клеток при культивировании в течение 14 дней в примере 1 составило 47%, количество некротических клеток в примере 2 составило 47% и количество некротических клеток в примере 3 составило 100% (см. фиг. 5 (а)).
По сравнению с контролем количество некротических клеток при культивировании в течение 14 дней в сравнительном примере 1 составило 801% (см. фиг. 5 (b)).
С другой стороны, по сравнению с контролем количество некротических клеток при культивировании в течение 14 дней в примере 1 составило 109%, количество некротических клеток в примере 2 составило 108% и количество некротических клеток в примере 3 составило 95% (см. фиг. 5 (b)).
По сравнению с контролем количество некротических клеток при культивировании в течение 21 дня в сравнительном примере 1 составило 608% (см. фиг. 5 (с)).
С другой стороны, по сравнению с контролем количество некротических клеток при культивировании в течение 21 дня в примере 1 составило 55%, количество некротических клеток в примере 2 составило 28% и количество некротических клеток в примере 3 составило 24% (см. фиг. 5 (с)).
[0069] Эти результаты показали, что ресвератрол обладает эффектом увеличения количества некротических клеток во всех временных периодах.
С другой стороны, оказалось, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению обладает эффектом уменьшения количества некротических клеток.
[0070] Результат примера 5 показал, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению обладает эффектом увеличения количества апоптотических клеток и уменьшения количества некротических клеток.
Апоптоз - это механизм, который вызывает гибель клеток в отношении причиняющей вред клетки или ненужной для организма клетки и удаляет такие клетки, тем самым приводя к образованию новых клеток путем своевременного удаления старых и поврежденных клеток. Апоптоз обычно функционирует для удаления стареющих клеток, что приводит к увеличению количества здоровых клеток на клеточном уровне. Орган, состоящий из здоровых клеток, молод.
Кроме того, апоптоз также приводит к удалению иммунных клеток, вызывающих аутоиммунную реакцию, которая является механизмом аутоиммунных заболеваний, и можно ожидать снижения тяжести аутоиммунных заболеваний за счет их правильного функционирования.
С другой стороны, некроз оказывает неблагоприятное влияние на окружающие ткани, такое как воспалительная реакция, поскольку клетки разрываются без предварительной обработки внутриклеточными ферментами и т.д., что приводит к внеклеточному высвобождению содержимого клетки, содержащего ферменты и т.д. Это неблагоприятное влияние способствует разрушению клеток и вызывает воспаление в организме, которое увеличивается по мере старения. Таким образом, некроз вызывает повреждение клеток путем неблагоприятного воздействия на окружающие ткани, такого как воспалительная реакция.
Следовательно, некроз способствует старению клеток.
Следовательно, чрезвычайно эффективно стимулировать апоптоз и подавлять некроз, чтобы подавлять старение клеток.
По этой причине понятно, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению, обладающий эффектом стимуляции апоптоза и подавления некроза, характеризуется существенным антивозрастным эффектом.
С другой стороны, оказалось, что ресвератрол способствует не только апоптозу но и некрозу.
Как описано выше, подавление некроза требуется для подавления старения клеток. Следовательно, считается, что ресвератрол, способствующий не только апоптозу, но и некрозу, обладает меньшим антивозрастным эффектом, чем антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению.
[0071] <Пример 6. Тест на токсичность>
Чтобы подтвердить токсичность антивозрастного компонента из виноградных косточек по настоящему изобретению, проводили тест на острую пероральную токсичность (испытание на предельное содержание) (на основе руководства OECD по тестированию химических веществ 420 (2001)) с использованием самок мышей.
[0072] (Способ испытания)
Измельченный в порошок антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению суспендировали в воде для инъекций с получением тестового раствора 100 мг/мл.
Пятинедельных самок мышей линии ICR приобретали у Japanese SLC, Inc. и предварительно выращивали в течение приблизительно одной недели. После подтверждения того, что в общем состоянии не было отклонений, их использовали для теста.
По пять самок мышей, используемых для теста, содержали в поликарбонатной клетке, соответственно, и кормили в комнате для разведения при комнатной температуре (23°C±2°C) и времени освещения 12 часов в день.
Мышей кормили лабораторным кормом (Nosan Corporation, название продукта: lab MR stock (гранула для мыши, крысы)) и питьевой водой (водопроводная вода).
[0073] Сформировали тестовую группу, которой вводили 2000 мг/кг антивозрастного компонента из виноградных косточек, и контрольную группу, которой вводили воду для инъекций в качестве контроля с растворителем, и для каждой группы использовали по пять самок мышей, соответственно.
Самки мышей, использованные для теста, голодали в течение приблизительно 4 часов перед введением.
После измерения массы каждой самки мыши тестовой группе и контрольной группе вводили перорально тестовый раствор и воду для инъекций в однократной дозе 20 мл/кг, соответственно, с использованием желудочного зонда.
Самок мышей наблюдали в течение 14 дней после введения.
Самок мышей наблюдали часто в день введения и один раз в день, начиная со следующего дня.
Массу самок мышей измеряли на 7-й и 14-й день после введения, и группы сравнивали с помощью t-критерия на 5% уровне значимости.
Всех самок мышей вскрывали после окончания периода наблюдения.
[0074] (Результаты)
Ни в одной из групп введения не было зарегистрировано ни одного случая гибели в течение периода наблюдения.
Ни в одной из групп введения не было обнаружено отклонений в течение периода наблюдения.
В таблице 1 показан результат изменения массы тестовой группы и контрольной группы.
При измерении массы тела на 7-й и 14-й день после введения оказалось, что у тестовой группы не было значительного различия в массе по сравнению с контрольной группой.
У всех самок мышей при вскрытии после окончания периода наблюдения не было обнаружено никаких отклонений.
Масса показана как среднее значение ± стандартное отклонение (единица измерения: г).
Количество самок мышей, массу которых измерили, указано в скобках.
[0076] Эти результаты показали, что при однократном пероральном введении самкам мышей значение LD50 для антивозрастного компонента из виноградных косточек по настоящей заявке превышало 2000 мг/кг у самок мышей.
[0077] Результаты примеров 3-5 показали, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению увеличивает количество митохондрий, уменьшает рабочую нагрузку определенного количества митохондрий, увеличивает количество апоптотических клеток и уменьшает количество некротических клеток, и, таким образом, обладает существенным антивозрастным эффектом.
Кроме того, в результате сравнения с одним ресвератролом, который, как ожидается, обладает антивозрастным эффектом, оказалось, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению обладает гораздо более существенным антивозрастным эффектом, чем один ресвератрол.
Кроме того, результат примера 6 показал, что антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению обладает более низкой цитотоксичностью и более существенным уровнем безопасности.
Таким образом, продукты лечебного питания и косметические средства, содержащие антивозрастной компонент из виноградных косточек по настоящему изобретению, обладают существенным антивозрастным эффектом и уровнем безопасности.
ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ
[0078] Согласно настоящему изобретению, поскольку антивозрастные продукты лечебного питания и косметические средства содержат антивозрастной компонент из виноградных косточек, содержащий 60 вес. % или больше полифенола грубой очистки, полученного из виноградных косточек, можно получить антивозрастные продукты лечебного питания и косметические средства, обладающие существенным антивозрастным эффектом.
Следовательно, настоящее изобретение применимо в качестве продуктов лечебного питания и косметических средств, обладающих антивозрастным эффектом.
Claims (21)
1. Продукт питания, содержащий компонент из стимулированных к прорастанию виноградных косточек, содержащий 60 вес. % или более полифенола грубой очистки, полученного из стимулированных к прорастанию виноградных косточек, при этом
компонент из стимулированных к прорастанию виноградных косточек получен экстрагированием из виноградных косточек в состоянии прорастания,
виноградные косточки представляют собой одну или более виноградных косточек винограда вида, выбранного из группы, состоящей из Vitis vinifera L., Vitis labrusca L., Vitis coignetiae L., Vitis amurensis L. и Vitis shiragai L.,
продукт питания обеспечивает увеличение количества апоптотических клеток и уменьшение количества некротических клеток.
2. Продукт питания по п. 1, где указанная виноградная косточка представляет собой семя одного или более сортов винного винограда, выбранных из группы, состоящей из: Агиоргитико, Вионье, Каберне Совиньон, Каберне Фран, Гаме, Кариньян, Карменер, Ксиномавро, Гренаш, Гевюрцтраминер, Кернер, Коломбард, Кошу, Султана, Санджовезе, Шардоне, Шенин Блан, Сира, Зинфандель, Семильон, Совиньон Блан, Таннат, Цвайгельт, Темпранильо, Треббиано, Неббиоло, Неро д'Авола, Барбера, Пинотаж, Пино Нуар, Пино Гри, Пино Блан, Пти Вердо, Блэк Квин, Мускат Бэйли А, Мальбек, Мюллер-Тургау, Мурведр, Менье, Мелон де Бургонь, Мерло, Мускат, Яма-Совиньон, Рислинг и Руби Каберне.
3. Косметическое средство, содержащее компонент из стимулированных к прорастанию виноградных косточек, содержащий 60 вес. % или более полифенола грубой очистки, полученного из стимулированных к прорастанию виноградных косточек, при этом
компонент из стимулированных к прорастанию виноградных косточек получен экстрагированием из виноградных косточек в состоянии прорастания,
виноградные косточки представляют собой одну или более виноградных косточек винограда вида, выбранного из группы, состоящей из Vitis vinifera L., Vitis labrusca L., Vitis coignetiae L., Vitis amurensis L. и Vitis shiragai L.,
косметическое средство обеспечивает увеличение количества апоптотических клеток и уменьшение количества некротических клеток.
4. Косметическое средство по п. 3, где указанная виноградная косточка представляет собой семя одного или более сортов винного винограда, выбранных из группы, состоящей из: Агиоргитико, Вионье, Каберне Совиньон, Каберне Фран, Гаме, Кариньян, Карменер, Ксиномавро, Гренаш, Гевюрцтраминер, Кернер, Коломбард, Кошу, Султана, Санджовезе, Шардоне, Шенин Блан, Сира, Зинфандель, Семильон, Совиньон Блан, Таннат, Цвайгельт, Темпранильо, Треббиано, Неббиоло, Неро д'Авола, Барбера, Пинотаж, Пино Нуар, Пино Гри, Пино Блан, Пти Вердо, Блэк Квин, Мускат Бэйли А, Мальбек, Мюллер-Тургау, Мурведр, Менье, Мелон де Бургонь, Мерло, Мускат, Яма-Совиньон, Рислинг и Руби Каберне.
5. Способ получения компонента из стимулированных к прорастанию виноградных косточек для увеличения количества апоптотических клеток и уменьшения количества некротических клеток, включающий:
(этап 1) погружение одной или более виноградных косточек винограда вида, выбранного из группы, состоящей из Vitis vinifera L., Vitis labrusca L., Vitis coignetiae L., Vitis amurensis L. и Vitis shiragai L., в воду при 30-60°С на 20-80 часов;
(этап 2) удаление из воды виноградных косточек, погруженных на указанном этапе 1, и естественное высушивание их на воздухе;
(этап 3) погружение виноградных косточек, естественным образом высушенных на указанном этапе 2, в воду при 15-45°С на 10-100 минут;
(этап 4) удаление из воды виноградных косточек, погруженных на указанном этапе 3, и естественное высушивание их на воздухе;
(этап 5) повторение указанных этапов 3 и 4 для стимулирования прорастания виноградных косточек до тех пор, пока зародышевая часть виноградных косточек, естественным образом высушенных на указанном этапе 4, слегка не вздуется и не набухнет;
(этап 6) высушивание стимулированных к прорастанию виноградных косточек при 35-60°С;
(этап 7) измельчение в порошок виноградных косточек, высушенных на указанном этапе 6;
(этап 8) получение экстрагированной фракции, содержащей полифенол, полученный из виноградных косточек, путем погружения измельченных в порошок виноградных косточек, полученных на указанном этапе 7, в воду, этанол или смешанный растворитель из воды и этанола; и
(этап 9) высушивание и измельчение в порошок полученной на указанном этапе 8 экстрагированной фракции, содержащей полифенол, полученный из виноградных косточек.
6. Способ по п. 5, где указанная виноградная косточка представляет собой семя одного или более сортов винного винограда, выбранных из группы, состоящей из: Агиоргитико, Вионье, Каберне Совиньон, Каберне Фран, Гаме, Кариньян, Карменер, Ксиномавро, Гренаш, Гевюрцтраминер, Кернер, Коломбард, Кошу, Султана, Санджовезе, Шардоне, Шенин Блан, Сира, Зинфандель, Семильон, Совиньон Блан, Таннат, Цвайгельт, Темпранильо, Треббиано, Неббиоло, Неро д'Авола, Барбера, Пинотаж, Пино Нуар, Пино Гри, Пино Блан, Пти Вердо, Блэк Квин, Мускат Бэйли А, Мальбек, Мюллер-Тургау, Мурведр, Менье, Мелон де Бургонь, Мерло, Мускат, Яма-Совиньон, Рислинг и Руби Каберне.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/JP2017/045207 WO2019116574A1 (ja) | 2017-12-15 | 2017-12-15 | 抗老化健康食品及び化粧品並びにブドウ種子由来抗老化成分の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2744299C1 true RU2744299C1 (ru) | 2021-03-05 |
Family
ID=66819198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019127994A RU2744299C1 (ru) | 2017-12-15 | 2017-12-15 | Продукты лечебного питания и косметические средства для увеличения количества апоптотических клеток и уменьшения количества некротических клеток и способ получения компонента из прорастающих виноградных косточек для увеличения количества апоптотических клеток и уменьшения количества некротических клеток |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20200306334A1 (ru) |
| EP (1) | EP3607835B1 (ru) |
| JP (2) | JP6929528B2 (ru) |
| KR (1) | KR20200005595A (ru) |
| CN (1) | CN111432660A (ru) |
| AU (1) | AU2017442781B2 (ru) |
| BR (1) | BR112020002163B1 (ru) |
| CA (1) | CA3054498C (ru) |
| ES (1) | ES2910095T3 (ru) |
| MX (1) | MX2019011489A (ru) |
| NZ (1) | NZ756986A (ru) |
| RU (1) | RU2744299C1 (ru) |
| SA (1) | SA519410730B1 (ru) |
| WO (1) | WO2019116574A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201907308B (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2021109836A (ja) * | 2020-01-07 | 2021-08-02 | 司 永尾 | 癌化学療法に伴う副作用を軽減するための組成物 |
| JP2022058005A (ja) * | 2020-09-30 | 2022-04-11 | 司 永尾 | 過剰な免疫応答を軽減するための組成物 |
| CN112553288B (zh) * | 2020-12-09 | 2022-06-07 | 汤臣倍健股份有限公司 | 一种筛选具有抗衰老潜力天然产物的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007145809A (ja) * | 2005-10-26 | 2007-06-14 | Kao Corp | 持久力向上剤 |
| US20090162457A1 (en) * | 2005-10-26 | 2009-06-25 | Kao Corporation | Resveratrol and/or grape leaf extract as i. a. endurance improver, anti-aging agent, muscle strength improver |
| JP5759438B2 (ja) * | 2012-10-04 | 2015-08-05 | 司 永尾 | 機能性組成物並びに該組成物を含有する健康食品及び化粧品 |
| EA023244B1 (ru) * | 2009-04-10 | 2016-05-31 | Хаян Ки | Способ предотвращения старения клеток |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0629528B2 (ja) * | 1983-05-26 | 1994-04-20 | ヤマハ発動機株式会社 | 自動二輪車塔載エンジンのクランク軸受潤滑構造 |
| JP4729660B2 (ja) * | 2005-01-07 | 2011-07-20 | 株式会社 シードライフテック | ブドウ種子を原材料としたポリフェノールの製造方法 |
| US20070003644A1 (en) * | 2005-04-16 | 2007-01-04 | Unitel Technologies, Inc. | Concentrated polyphenolic product and process for making the same |
| CA2732426C (en) * | 2008-07-31 | 2018-05-15 | Shaklee Corporation | Method of preparing a muscadine pomace extract |
| ITMI20130397A1 (it) * | 2013-03-15 | 2014-09-16 | Giuliani Spa | Composizione a base di flavonidi per uso farmaceutico, nutrizionale o cosmetico con potenziata azione antiossidante |
| CN103509642A (zh) * | 2013-05-24 | 2014-01-15 | 天津国纳科技发展有限公司 | 一种富含白藜芦醇葡萄籽油的生产工艺 |
-
2017
- 2017-12-15 ES ES17934367T patent/ES2910095T3/es active Active
- 2017-12-15 KR KR1020197036022A patent/KR20200005595A/ko not_active Ceased
- 2017-12-15 US US16/604,107 patent/US20200306334A1/en not_active Abandoned
- 2017-12-15 AU AU2017442781A patent/AU2017442781B2/en active Active
- 2017-12-15 WO PCT/JP2017/045207 patent/WO2019116574A1/ja active Application Filing
- 2017-12-15 CN CN201780089473.5A patent/CN111432660A/zh active Pending
- 2017-12-15 CA CA3054498A patent/CA3054498C/en active Active
- 2017-12-15 MX MX2019011489A patent/MX2019011489A/es unknown
- 2017-12-15 NZ NZ756986A patent/NZ756986A/en unknown
- 2017-12-15 EP EP17934367.8A patent/EP3607835B1/en active Active
- 2017-12-15 BR BR112020002163-6A patent/BR112020002163B1/pt active IP Right Grant
- 2017-12-15 JP JP2019558863A patent/JP6929528B2/ja active Active
- 2017-12-15 RU RU2019127994A patent/RU2744299C1/ru active
-
2019
- 2019-11-04 ZA ZA2019/07308A patent/ZA201907308B/en unknown
- 2019-12-05 SA SA519410730A patent/SA519410730B1/ar unknown
-
2021
- 2021-07-30 JP JP2021125818A patent/JP2021178850A/ja active Pending
-
2022
- 2022-06-29 US US17/852,916 patent/US20220347253A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007145809A (ja) * | 2005-10-26 | 2007-06-14 | Kao Corp | 持久力向上剤 |
| US20090162457A1 (en) * | 2005-10-26 | 2009-06-25 | Kao Corporation | Resveratrol and/or grape leaf extract as i. a. endurance improver, anti-aging agent, muscle strength improver |
| EA023244B1 (ru) * | 2009-04-10 | 2016-05-31 | Хаян Ки | Способ предотвращения старения клеток |
| JP5759438B2 (ja) * | 2012-10-04 | 2015-08-05 | 司 永尾 | 機能性組成物並びに該組成物を含有する健康食品及び化粧品 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPWO2019116574A1 (ja) | 2020-04-30 |
| AU2017442781B2 (en) | 2020-10-01 |
| EP3607835A1 (en) | 2020-02-12 |
| JP2021178850A (ja) | 2021-11-18 |
| CA3054498A1 (en) | 2019-06-20 |
| JP6929528B2 (ja) | 2021-09-01 |
| ES2910095T3 (es) | 2022-05-11 |
| CN111432660A (zh) | 2020-07-17 |
| MX2019011489A (es) | 2019-11-01 |
| AU2017442781A1 (en) | 2019-09-26 |
| CA3054498C (en) | 2022-08-02 |
| SA519410730B1 (ar) | 2022-11-10 |
| KR20200005595A (ko) | 2020-01-15 |
| EP3607835A4 (en) | 2020-12-02 |
| WO2019116574A1 (ja) | 2019-06-20 |
| ZA201907308B (en) | 2022-03-30 |
| US20220347253A1 (en) | 2022-11-03 |
| NZ756986A (en) | 2023-06-30 |
| US20200306334A1 (en) | 2020-10-01 |
| EP3607835B1 (en) | 2022-01-12 |
| BR112020002163B1 (pt) | 2023-02-07 |
| BR112020002163A2 (pt) | 2020-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yang et al. | In vitro and in vivo antifungal activity and preliminary mechanism of cembratrien-diols against Botrytis cinerea | |
| US20220347253A1 (en) | Health food and cosmetics for increasing the amount of apoptosis cells and decreasing the amount of necrosis cells and a method of manufacturing a sprout-forcing grape seed-derived ingredient for increasing the amount of apoptosis cells and decreasing the amount of necrosis cells | |
| Dżugan et al. | Physicochemical quality parameters, antibacterial properties and cellular antioxidant activity of Polish buckwheat honey | |
| Peng et al. | Biology of ageing and role of dietary antioxidants | |
| Doshi et al. | Phenolic compounds, antioxidant activity and insulinotropic effect of extracts prepared from grape (Vitis vinifera L) byproducts | |
| Cantos et al. | Postharvest UV-C-irradiated grapes as a potential source for producing stilbene-enriched red wines | |
| Lopera et al. | Antioxidant activity and cardioprotective effect of a nonalcoholic extract of Vaccinium meridionale Swartz during ischemia‐reperfusion in rats | |
| Mohan et al. | Cardioprotective potential of Punica granatum extract in isoproterenol-induced myocardial infarction in Wistar rats | |
| Vinosha et al. | Sulfated galactan from Halymenia dilatata enhance the antioxidant properties and prevents Aeromonas hydrophila infection in tilapia fish: in vitro and in vivo study | |
| KR102323299B1 (ko) | 항균 및 항산화 효과를 갖는 아로니아 발효 주정 추출물 및 이의 용도 | |
| Gumerova et al. | Effect of methyl jasmonate on growth characteristics and accumulation of phenolic compounds in suspension culture of tartary buckwheat | |
| Rebelo et al. | Phenolic profile of Douro wines and evaluation of their NO scavenging capacity in LPS-stimulated RAW 264.7 macrophages | |
| Amiri et al. | Prevention of decay and maintenance of bioactive compounds in strawberry by application of UV-C and essential oils | |
| Peinado et al. | Synergistic antioxidant interaction between sugars and phenolics from a sweet wine | |
| Umamahesh et al. | In vitro anti-oxidant, anti-microbial and anti-inflammatory activities of five Indian cultivars of mango (Mangifera indica L.) fruit peel extracts | |
| Ghamry et al. | Arthrospira platensis nanoparticles mitigate aging-related oxidative injured brain induced by D-galactose in rats through antioxidants, anti-inflammatory, and MAPK pathways | |
| Fan et al. | Study on antibacterial mechanism of electron beam radiation on Aspergillus flavus | |
| Liu et al. | Evaluation of the mechanistic basis for the antibacterial activity of ursolic acid against Staphylococcus aureus | |
| Marquez et al. | Antioxidant activity in relation to the phenolic profile during the winemaking of sweet wines Vitis vinifera cv. Cabernet Sauvignon | |
| Chung et al. | Evaluation of protective effects of fermented Ficus racemosa fruit extract against oxidative stress and hyperglycemia | |
| Nguyen et al. | Biochemical Conversion of Passion Fruit Waste Into Highly Bioaccessible, Stable, and Selectively Functional Products | |
| JP2016124845A (ja) | ワサビ抽出物とその製造方法、及び整肌剤 | |
| US20200215225A1 (en) | Coated implantable device | |
| Marinkovic et al. | Pomegranate Peel Extract Attenuates Isoprenaline-Induced Takotsubo-like Myocardial Injury in Rats. Pharmaceutics 2023, 15, 1697 | |
| Radojevic et al. | Unexplored biological properties and phytochemical characterization of metanolic extracts of Achillea ageratifolia subsp. serbica (Nyman) Heimerl |