RU2269356C2 - Способ лечения онкологических заболеваний - Google Patents
Способ лечения онкологических заболеваний Download PDFInfo
- Publication number
- RU2269356C2 RU2269356C2 RU2004108061/14A RU2004108061A RU2269356C2 RU 2269356 C2 RU2269356 C2 RU 2269356C2 RU 2004108061/14 A RU2004108061/14 A RU 2004108061/14A RU 2004108061 A RU2004108061 A RU 2004108061A RU 2269356 C2 RU2269356 C2 RU 2269356C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- blood
- agent
- extracellular
- dnase
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 title 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 62
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 62
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 23
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 108010067396 dornase alfa Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 9
- 230000003172 anti-dna Effects 0.000 claims abstract description 7
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 claims description 25
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 claims description 25
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 47
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 15
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 abstract 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 abstract 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 102
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 43
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 23
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 14
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 12
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 12
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 8
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 5
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 4
- 102000007537 Type II DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 4
- 108010046308 Type II DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000003468 Ehrlich Tumor Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 description 3
- 108090000829 Ribosome Inactivating Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 244000309464 bull Species 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710175070 Extracellular deoxyribonuclease Proteins 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 101150090724 3 gene Proteins 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035720 ATP-dependent RNA helicase DDX42 Human genes 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000576133 Alphasatellites Species 0.000 description 1
- 101000889706 Bombyx mori Putative ATP-dependent RNA helicase TDRD12 Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 102100026548 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000031448 Genomic Instability Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 101000874173 Homo sapiens ATP-dependent RNA helicase DDX42 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108050000637 N-cadherin Proteins 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100025731 Phosphatidate phosphatase LPIN1 Human genes 0.000 description 1
- 108050005456 Phosphatidate phosphatase LPIN1 Proteins 0.000 description 1
- 231100000742 Plant toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 108020004487 Satellite DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000354 acute hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000004611 cancer cell death Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 108060002430 dynein heavy chain Proteins 0.000 description 1
- 102000013035 dynein heavy chain Human genes 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001002 morphogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000010309 neoplastic transformation Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000003123 plant toxin Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 206010042863 synovial sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/21—Endodeoxyribonucleases producing 5'-phosphomonoesters (3.1.21)
- C12Y301/21001—Deoxyribonuclease I (3.1.21.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для лечения злокачественных опухолей. Для этого обеспечивают введение в кровь агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови. Этот агент вводят в дозах, обеспечивающих изменение электрофоретического профиля внеклеточной ДНК крови. Агент также можно вводить в дозах и режимах, обеспечивающих уровень ДНК-гидролитической активности плазмы крови, измеряемый в плазме крови и превышающий 150 единиц Кунца на литр плазмы, на протяжении суммарно более 12 часов в сутки. Лечение может осуществляться непрерывно не менее 2 суток. В качестве агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови, может быть использован ДНКаза, в частности, бычья панкреатическая ДНКаза или рекомбинантная человеческая ДНКаза. Способ предполагает также введение агента, связывающего внеклеточную ДНК крови, например, анти-ДНК антитела. Способ обеспечивает малотоксичное и эффективное лечение опухолей, в частности, при длительной, даже пожизненной терапии указанными средствами. 10 з.п. ф-лы, 6 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для лечения преимущественно солидных опухолей.
Популяции опухолевых клеток, развивающиеся в организме больного, обладают чрезвычайно высокой степенью генетической изменчивости, намного превышающей таковую у здоровых клеток. Генетическая изменчивость популяций раковых клеток позволяет им в процессе заболевания генерировать фенотипы, нечувствительные к иммунному и морфогенетическому контролю, способные к инвазии и метастазированию и нечувствительные к противоопухолевой терапии. Считается, что селекционный отбор и клональная экспансия раковых клеток лежат в основе биологической и клинической "прогрессии" опухолей. В соответствии с этими представлениями стратегия современной противоопухолевой терапии основана на принципе уничтожения клонов опухолевых клеток в организме больного с помощью методов - химиотерапии, радиотерапии, иммунотерапии, биотерапии, хирургического удаления и различных их комбинаций.
Из нехирургических методов лечения онкологических заболеваний наибольшее распространение получили способы химиотерапии, радиотерапии, биотерапии, а в последнее время и иммунотерапии, направленные на уничтожение, повреждение или инактивацию внутриклеточной ДНК опухолевой клетки.
Известны химиотерапевтические методы лечения при помощи препаратов платины, см. "Molecular mechanisms involved in cisplatin cytotoxicity". Jordan P, Carmo-Fonseca M, Cell Mol Life Sci 2000 Aug. v 57: pp.1229-35, антрациклиновых антибиотиков, см. "Daunorubicin and doxorubicin, anthracycline antibiotics, a physicochemical and biological review", Aubel-Sadron G, Londos-Gagliardi D, Biochimie 1984 May v.66: pp.333-52, алкилирующих агентов, см. "An overview of cyclophosphamide and ifosfamide pharmacology". Fleming RA, Pharmacotherapy 1997 Sep-Oct v.17: pp.146S-154S, и производных подофилотоксинов, см. "Podophyllotoxins: current status and recent developments", Damayanthi Y, Lown JW, Curr Med Chem 1998 Jun 5: v 3 205-52.
Получают распространение радиоиммунотералевтические методы, позволяющие облучать ядра опухолевых клеток, содержащие внутриклеточную ДНК, альфа-частицами из альфа-эмиттеров, специально доставляемых внутрь раковых клеток для повышения эффективности воздействия на внутриклеточную ДНК, см. "Targeted alpha therapy: evidence for potential efficacy of alpha-immunoconjugates in the management of micrometastatic cancer" Alien BJ, Australas Radiol 1999 Nov v.43: pp 480-6.
Известны биотерапевтические и иммунотерапевтические методы, направленные на индукцию апоптоза опухолевых клеток - процесса гибели раковой клетки, запускаемого активацией внутриклеточных нуклеаз и последующим разрушением внутриклеточной ДНК опухолевой клетки, например, путем введения больному генотерапевтических конструкций, содержащих гены, запускающие процесс апоптоза, см. "Phase I trial of adenovirus-mediated p53 gene therapy for recurrent glioma: biological and clinical results" Lang FF, Bruner JM, Fuller ON, Aldape K, Prados MD, Chang S, Berger MS, McDermott MW, Kunwar SM, Junck LR, Chandler W, Zwiebel JA, Kaplan RS, Yung WK, J Clin Oncol 2003 Jul 1 21:13 2508-18, или гены, кодирующие факторы, активирующие внутриклеточные индуцирующие апоптоз нуклеазы, см. "Adenovirus-mediated transfer of caspase-8 augments cell death in gliomas: implication for gene therapy." Shinoura N, Koike H, Furitu T, Hashimoto M, Asai A, Kirino T, Hamada H, Hum Gene Ther 2000 May 20 11:8 1123-37, или путем введения противоопухолевых вакцин, см. "Vaccine-induced apoptosis: a novel clinical trial end point?" Amin S, Robins RA, Maxwell-Armstrong CA, Scholefield JH, Durrant LG, Cancer Res 2000 Jun 60: 3132-6.
В патенте US 6455250 описано использование эндонуклеазы Endo-SR для лечения раковых заболеваний путем ее внутриклеточной доставки в клетку-мишень.
Среди перечисленных способов метод химиотерапевтического лечения опухолей с помощью Этопозида-4'-Деметилпиподофиллотоксин 9-[4,6-O-R)-этилиден]-b-D-гликопиранозида избран нами в качестве прототипа. Топоизомераза II является необходимым клеточным ферментом, регулирующим многие аспекты функционирования внутриклеточной ДНК. Фермент осуществляет интерконверсию различных топологических форм внутриклеточной ДНК, генерируя при этом транзиторные разрывы двухцепочечной ДНК. Этопозид, являясь ингибитором Топоизомеразы II, увеличивает внутриклеточную концентрацию комплексов Топоизомераза II - разрезанная ДНК. В результате воздействия препарата происходит накопление большого количества двухнитевых разрывов внутриклеточной ДНК, что и является причиной гибели клетки, см. "Topoisomerase II as a target for anticancer drugs: when enzymes stop being nice". Fortune JM, Osheroff N., Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 2000, v.64: pp.221-53.
Недостатком способа-прототипа, как и других известных способов, является низкая эффективность. Это объясняется следующим. Способ-прототип, как и другие известные способы, имеет мишенью терапевтического воздействия опухолевую клетку, в первую очередь ее внутриклеточную ДНК. Опыт подобной терапии свидетельствует, что:
- вследствие высокой генетической изменчивости опухолевые клетки, как правило, приобретают нечувствительность к применяемой терапии до того, как используемая методика позволяет их в необходимой степени уничтожить;
- внутриклеточная ДНК является относительно труднодоступной мишенью, что влечет за собой необходимость применения высоких доз противоопухолевых препаратов и/или сложных систем их доставки (Drug Delivery Systems).
Кроме того, следует отметить, что способ-прототип, предусматривающий воздействие на внутриклеточную ДНК опухолевых клеток, влечет за собой неизбежное разрушение ДНК здоровых клеток, что обуславливает его высокую токсичность.
В основу настоящего изобретения положено решение задачи создания высокоэффективного и малотоксичного способа лечения онкологических заболеваний.
Согласно изобретению эта задача решается за счет того, что вводят в кровь агент, разрушающий внеклеточную ДНК крови; этот агент может вводиться в дозах, обеспечивающих изменение электрофоретического профиля внеклеточной ДНК крови, выявляемое пульс-гельэлектрофорезом; этот агент может вводиться в дозах и режимах, обеспечивающих уровень ДНК-гидролитической активности плазмы крови, измеряемый в плазме крови и превышающий 150 единиц Кунца на литр плазмы, на протяжении суммарно более 12 часов в сутки; лечение может осуществляться непрерывно не менее 2 суток; в качестве агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови, может быть использован фермент ДНКазы, в частности, бычья панкреатическая ДНКаза, которую вводят парэнтерально в дозах от 50000 единиц Кунца до 250000000 единиц Кунца в сутки ежедневно на протяжении 5-360 дней, или рекомбинантная человеческая ДНКаза, при этом может быть использована рекомбинантная человеческая ДНКаза I (дорназу-альфа), которую вводят парэнтерально в дозах 0,15-500 мг/кг массы тела в сутки ежедневно на протяжении 5-360 дней; лечение может проводиться пожизненно; дополнительно в кровь может вводиться агент, связывающий внеклеточную ДНК крови; в качестве этого агента могут быть использованы анти-ДНК антитела.
Факт циркуляции внеклеточной ДНК в крови больных онкологическими заболеваниями описан в ряде работ (P.Anker et al., Clinica Chimica Acta, v.313, 2001, pp.143-146; Fedorov N.A. et.al., Bull.Exp.Biol.Med., v 102, 1986, pp.281-283). В патенте US 5952170 описано определение внеклеточной ДНК в крови для диагностики и прогнозирования течения онкологических заболеваний. В патентах US 6465177 и US 6156504 описывают использование внеклеточной ДНК крови для определения мутаций в онкогенах и микросателлитных участках генов, изучения геномной нестабильности в опухолях и использования результатов наблюдений для диагностики, мониторирования и прогнозирования течения заболевания.
Тем не менее, до настоящего времени отсутствовал систематический анализ спектра внеклеточной ДНК крови и ее биологической роли. Данные исследований внеклеточной ДНК крови без проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) в печати не обнаружены. ПЦР может сильно искажать состав внеклеточной ДНК крови в силу специфичности праймеров, применяемых для амплификации. До последнего времени проводился, в основном, генетический анализ ДНК плазмы, произведенный при помощи ПЦР или блот-гибридизации, и направленный на изучение изменений в определенных участках генома (например, в микростателлитах и отдельных генах) при опухолевом процессе (Sanchez-Cespedes M., et al., Ann Oncol, 1998, v 9(1), pp.113-116; Sozzi G., et al., Clin Can Res, 1999, v 5(10), pp.2689-2692; Chen X.Q., et al., Nat Med, 1996, v 2(9), pp.1033-1035).
Таким образом, в известных заявителю источниках отсутствуют знания о генетическом репертуаре внеклеточной ДНК крови больных при онкопатологии, биологической роли внеклеточной ДНК крови при онкопатологии и возможном терапевтическом эффекте ее уничтожения или инактивации для лечения этих заболеваний.
Заявителем было установлено, что внеклеточная ДНК крови онкологических больных содержит уникальный по своему качественному и количественному составу репертуар генов и регуляторных генетических элементов, резко отличающийся от репертуара ДНК, описанного в геноме человека. В отличие от внутриклеточной ДНК, внеклеточная ДНК крови онкологических больных содержит, в основном, уникальные гены человека, включая гены, вовлеченные в поддержание и формирование злокачественного поведения раковых клеток.
Показано, что внеклеточная ДНК крови при онкологической патологии способствует злокачественному росту.
Разрушение, в том числе вместе с модификацией и связыванием, внеклеточной ДНК крови при онкопатологии препятствует злокачественному росту. Подобное вмешательство имеет как самостоятельную терапевтическую ценность, так и повышает эффективность традиционных методов терапии.
Указанные выше новые свойства заявленного изобретения, базирующиеся на принципиально новых представлениях о механизме онкологических заболеваний, позволяют сделать вывод о соответствии заявленного способа критерию "изобретательский уровень".
Заявленный способ реализуется следующим образом.
Материалы и методы.
Использовали следующие агенты, разрушающие внеклеточную ДНК крови: бычью панкреатическую ДНКазу (Sigma и Самсон-Мед), рекомбинантную человеческую ДНКазу I (Дорназу альфа; Genetech), внеклеточную нуклеазу Serratia Mercenses. Раствор ДНКазы для введения готовился растворением матричного раствора ДНКазы в стерильном фосфатном буфере непосредственно перед введением.
ДНК плазмы крови выделяли следующим образом: свежую (не более 3-4 часов после забора) плазму крови с добавленным антикоагулянтом (цитрат натрия) центрифугировали на подушке из Ficoll-PlaquePlus (Amersham-Phannacia) при 1500g 20 минут при комнатной температуре. Плазму (1/2 от всего количества) аккуратно отбирали, не задевая остаток клеток на подушке фиколла, и откручивали при 10000g 30 минут, чтобы избавиться от обломков клеток и дебриса. Супернатант отбирали, не затрагивая осадок, добавляли до 1% саркозила, до 50 мМ трис-HCl, рН 7,6, до 20 мМ ЭДТА, до 400 мМ NaCl, и равный объем смеси фенол-хлороформ 1:1. Полученную эмульсию инкубировали при 65°С 2 часа, затем отделяли фенол-хлороформ центрифугированием при 5000g в течение 20 минут при комнатной температуре. Процедуру депротеинизации фенол-хлороформом повторяли идентичным способом трижды, после чего водную фазу обрабатывали хлороформом, затем диэтиловым эфиром. Отделение от органических растворителей производили центрифугированием при 5000g в течение 15 минут. К полученной водной фазе добавляли равный объем изопропанола и инкубировали в течение ночи при 0°С. После осаждения нуклеиновые кислоты отделяли центрифугированием при 0°С, 10000g в течение 30 минут. Осадок нуклеиновых кислот растворяли в буфере, содержащем 10 мМ трис-HCl, рН 7,6, 5 мМ ЭДТА, и наносили на подушку из ступенчатого хлористого цезия (1 М, 2.5 М, 5.7 М) в центрифужной пробирке для ротора SW60Ti. Объем ДНК составлял 2 мл, объем каждой ступеньки CsCL - по 1 мл. Ультрацентрифугирование проводили в приборе L80-80 (Beckman) 3 часа при 250000g. ДНК отбирали с поверхности ступеньки 5.7 М по фракциям. Фракции диализировали 12 часов при 4°С. Наличие ДНК во фракциях определяли агарозным электрофорезом, с визуализацией ДНК бромистым этидием. Количество ДНК определяли спектрофотометрически (Beckman DU70) в кювете объемом 100 мкл, снимая спектр от 220 до 320 нм.
В экспериментах использовались штаммы мышиной карциномы легких Люиса и карциномы Эрлиха. Клетки росли в среде RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% пенициллин-стрептомицина в среде с 5% углекислого газа.
Для индукции опухолей у мышей клетки выращивали до монослоя, отделяли с помощью раствора трипсин-ЭДТА. Клетки трижды отмывали центрифугированием в фосфатном буфере и ресуспендировали до 0,5·107 в миллилитре. Жизнеспособность определяли по включению метиленового синего в гемоцитометре. Для введения животным использовались суспензии с не менее 95% жизнеспособных клеток.
Использовались мыши линии С57В1 и белые беспородные мыши, полученные из питомника "Рапполово". Вес животных 24-26 грамм. Животные содержались по 6-7 штук в клетке на стандартной диете без ограничения воды. LLC клетки в дозе 5·105 в 100 мкл фосфатного буфера вводились в мягкие ткани бедра. Опухоль Эрлиха перевивалась под кожу правого бока введением 0,2 мл 10%-ной взвеси опухолевых клеток в изотоническом растворе хлорида натрия
В некоторых экспериментах исследовалось содержание внеклеточной ДНК в плазме крови. ДНК выделялась по ранее описанному протоколу. Содержание ДНК измерялось с помощью наборов Pico Green. Электрофорез внеклеточной ДНК крови проводили в 1% агарозном геле. ДНК окрашивали этидиум-бромидом. Сравнительное содержание высокомолекулярной (более 300 пар оснований) фракции ДНК в форезах оценивали денситометрически. В качестве маркера использовали фаг лямбда, обработанный рестриктазами EcoR и Hind III.
Пример 1. Торможение развития опухоли Эрлиха.
Использовали рекомбинантную человеческую ДНКазу I (Genetech).
1 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха - контроль. Мыши получали два раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли внутрибрюшинно инъекции 200 мкл фосфатного буфера.
2 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получавших ДНКазу четыре раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли в дозе 1 мг/кг внутрибрюшинно в 200 мкл фосфатного буфера.
3 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получавших ДНКазу четыре раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли в дозе 0,5 мг/кг внутрибрюшинно в 200 мкл фосфатного буфера.
4 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получавших ДНКазу четыре раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли в дозе 0,1 мг/кг внутрибрюшинно в 200 мкл фосфатного буфера.
5 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получавших ДНКазу четыре раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли в дозе 0,05 мг/кг внутрибрюшинно в 200 мкл фосфатного буфера.
Результаты экспериментов оценивали по торможению роста опухоли (ТРО, выраженное в процентах) в последний день введения ДНКазы. ТРО определяли по общепринятой методике. Определяли содержание внеклеточной ДНК крови и ее электрофоретическое фракционирование.
Результаты приведены в таблице 1: размер опухоли, содержание внеклеточной ДНК и ее электрофоретический профиль через 7 дней после перевивки опухоли.
| Таблица 1 | ||||
| Группа | Объем опухоли | Торможение в % | Содержание внеклеточной ДНК (нг/мл) | Наличие высокомолекулярных фракций во внеклеточной ДНК |
| Контроль | 98+/-14 | - | 104,8 | 100% |
| 1 мг\кг | 23+/-6 | 76% | 38,3 | 0 |
| 0,5 мг\кг | 32+/-6 | 67% | 55,1 | 25% |
| 0,1 мг\кг | 58+/-12 | 37% | 78,0 | 70% |
| 0,05 мг\кг | 87+/-11 | 10% | 98,7 | 100% |
Приведенные данные свидетельствуют, что для достижения наилучшего лечебного эффекта необходимо применение достаточно высоких доз препарата ДНКазы I.
Пример 2. Торможение развития опухоли Эрлиха.
Использовали рекомбинантную человеческую ДНКазу I (Genetech).
В эксперименте участвовало 5 групп мышей, привитых LLC.
1 группа - 7 мышей - контроль.
2 группа - 6 мышей, получавших внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки с 3 по 5 день после перевивки.
3 группа - 6 мышей, получавших внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки с 3 по 10 день после перевивки.
4 группа - 6 мышей, получавших терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки с 3 по 15 день после перевивки.
5 группа - 6 мышей, получавших терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки с 3 по 18 день после перевивки.
6 группа - 6 мышей, получавших терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки на 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 и 17 день после перевивки.
7 группа - 6 мышей, получавших внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 0,5 мг/кг 4 раза в сутки с 3 по 10 день после перевивки.
Результаты эксперимента оценивали по выживаемости животных на 30 и 50 день после перевивки опухоли - таблица 2
| Таблица 2. | ||
| Группа | 30 день(число живых/павших животных в группе) | 50 день(число живых/павших животных в группе) |
| 1 | 0-7 | 0-7 |
| 2 | 0-6 | 0-6 |
| 3 | 3-3 | 0-6 |
| 4 | 5-1 | 3-3 |
| 5 | 6-0 | 6-0 |
| 6 | 0-6 | 0-6 |
| 7 | 4-2 | 1-5 |
Приведенные данные свидетельствуют, что эффективность проводимого лечения увеличивается по мере увеличения длительности лечения. Эффективность лечения падает, если оно не является непрерывным. Многократное введение в течение суток является предпочтительным.
Пример 3. Лечение карциномы легких.
Больной мужчина, 54 лет поступил в клинику с диагнозом карцинома легких.
С согласия больного, с учетом исчерпания всех возможных методов лечения, ему были назначены ежедневные подкожные инъекции препарата дорназы альфа. Лечение начали с введения суточной дозы 50 мкг/кг. Каждый последующий день осуществляли измерение содержания внеклеточной ДНК крови и ее электрофоретическое фракционирование. Один раз в неделю осуществляли ЯМР и рентгенологический контроль первичной опухоли и метастазов. Через семь дней ввиду отсутствия изменений в содержании внеклеточной ДНК крови, ее электрофоретической картины и отсутствия реакции со стороны первичной опухоли и метастазов суточную дозу препарата увеличили до 100 мкг/кг. Ввиду отсутствия изменений еще через 7 дней произвели увеличение суточной дозы препарата до 150 мкг/кг. Через 2 дня после первого введения препарата в дозе 150 мкг/кг в препарате внеклеточной ДНК крови на фоне несущественного снижения общего количества внеклеточной ДНК крови (менее 20%) отмечалось существенное (более 50%) снижение содержания фракции внеклеточной ДНК крови с размером более 300 пар оснований. В последующие 4 дня самочувствие пациента значительно улучшилось, а по результатам контрольного ЯМР-исследования в конце семидневного цикла отмечалось уменьшение размера первичной опухоли на 25% и имелись рентгенологические признаки регрессии двух костных метастатических узлов.
Образцы внеклеточной ДНК данного больного, взятые до начала лечения и через 21 день после начала терапии, были клонированы с использованием метода, позволяющего конструировать неамплифицированные плазмидные библиотеки внеклеточной ДНК крови с представительностью до миллиона клонов со средним размером в 300-500 пар оснований.
Выделенная по ранее описанному протоколу ДНК была подвергнута дополнительной тщательной депротеинизации с применением протеиназы К (Sigma) при 65°С для удаления прочно связанных белков. После депротеинизации и однократной обработки фенол-хлороформом при 65°С, ДНК осаждали 2,5 объемами этанола в течение ночи. Затем ДНК либо обрабатывали рестриктазой EcoRI в течение 3 часов, либо Pfu полимеразой (Stratagene) в присутствии 300 мкМ всех дезоксинуклеотидтрифосфатов для удаления липких концов. Достроенную ДНК фосфорилировали полинуклеотидкиназой Т4 (30U, 2 ч). Полученные препараты лигировали в плазмиду pBluescript (Stratagene), переваренную EcoRI или PvuII соответственно и дефосфорилированную щелочной фосфатазой CIP (Fermentas) в течение 1 часа. Для лигирования обычно использовали 1 мкг вектора и 0,1-0,5 мкг сывороточной ДНК. Лигирование проводили при помощи Rapid Ligation Kit (Roche) 10 часов при 16°С. Объем лигазной смеси составлял 50 мкл. Лигированную библиотеку трансформировали в клетки DH12S (Life Technologies) с применением электропоратора Е.Coli porator (BioRad). Для трансформации одной библиотеки использовали 12-20 электропорационных кювет. Для контроля на чашки с 1,5% агаром и средой LB, содержащей 100 мкг/мл ампициллина, высевали разведения библиотеки 10-4, 10-5 и 10-6. В обоих случаях представительность библиотеки составляла примерно 2-3·106 клонов.
Анализ случайно выбранных 96 клонов с длиной от 300 до 1000 пар оснований из библиотеки, полученной из внеклеточной ДИК крови больного до начала лечения, показал, что 55 из 96 клонов представляют собой уникальные последовательности ДНК человека. Из 55 фрагментов уникальной ДНК функция или продукт соответствующего гена с помощью Human Gene Bank были идентифицированы для 15 последовательностей:
| Таблица 3 | |
| Gene or corresponding protein product | Reported role in cancerogenesis and cancer progression |
| G-protein coupled receptor protein | Key role in neoplastic transformation,apoptosis inhibition, hormone independence and metastasis |
| Snf2 coupled CBP activator (SCARP) | Transcription activator, reported in synovial sarcoma and leukemia. |
| SRY-box containing gene | Transcription modulator expressed in embryogenesis. Reported in medulloblastoma, gonadal tumors, highly metastatic melanoma. |
| Tyrosine kinase | Key role in cancer cell regulation network. Some class homologues are the products of cellular oncogenes. |
| Fibroblast activation protein, cell surface protease | Involved into cancer invasion and metastasis. |
| Brain testican | Reported in embryonic rhabdomyosarcoma. |
| KRAB domain, Zn-finger protein. | Reported in early embryogenesis, neuroblastoma, Ewing sarcoma, T-cell lymphoma, linked with acquisition of drug resistance in lung cancer. |
| Melanoma associated antigen | Antigen expressed in melanoma cells. |
| N-cadherin | Involved into cancer invasion and metastasis. |
| Interleukin 7 | Proposed essential autocrine-paracrine growth factor for many cancers |
| DEAD Box RNA helicaselike protein | Expressed in highly proliferating and cancer cells. |
| Lipin-1 | Involved into cancer cell response to cytotoxic drugs. |
| Dynein | Participate in p53 intracellular traffic, reported in prostate cancer and hepatocellular carcinoma. |
| Ramp protein | Reported in human embryonic carcinoma |
Анализ случайно выбранных 100 клонов из библиотеки, полученной из внеклеточной ДНК крови больного через 21 день после начала лечения, показал, что более 90% выявленных последовательностей клонов представляют собой короткие фрагменты повторяющейся ДНК генома человека, в основном альфа сателлитную ДНК.
Таким образом, применение доз ДНКазы, достаточных для разрушения внеклеточной ДНК крови с размером более 300 пар оснований, ведет к исчезновению из внеклеточной ДНК крови уникальных фрагментов генома человека, в том числе вовлеченных в процесс формирования и поддержания злокачественного поведения раковых клеток. При этом наблюдается регрессия опухоли согласно заявляемому способу.
Пример 4. Лечение злокачественной низкодифференцированной лимфомы с диффузным поражением селезенки и ворот печени с метастатическими узлами в печени.
Женщина 49 лет поступила в клинику в тяжелом состоянии, с лихорадкой до 39°С, прогрессирующей желтухой и проявлениями печеночной недостаточности с подозрением на острый гепатит. При исследовании выявлена злокачественная низкодифференцированная лимфома с диффузным поражением селезенки и ворот печени с многочисленными метастатическими узлами в печени. С согласия больной, с учетом невозможности применения специфического лечения и постоянно прогрессирующей картины заболевания, ей была прописана внутривенная инфузия бычьей панкреатической ДНКазы. Два раза в сутки осуществляли измерение содержания внеклеточной ДНК крови и ее электрофоретическое фракционирование. В первые сутки было введено 500000 ЕД фермента в виде двух шестичасовых инфузий. В дальнейшем суточную дозу увеличивали на 1000000 ЕД в сутки ежедневно.
При достижении суточной дозы в 5500000 ЕД отмечено значительное (более 50%) снижение содержания внеклеточной ДНК крови и исчезновение фракции ДНК с размером более 300 пар оснований при электрофоретическом фракционировании. На фоне продолжающихся инфузий в дозе 5500000 ЕД в сутки состояние больной начало улучшаться, исчезли лихорадка и желтуха, улучшились биохимические показатели крови. Контрольное ультразвуковое исследование, проведенное на 20 день после начала лечения, выявило значительное (более 40%) сокращение площади поражения селезенки и исчезновение более половины метастатических узлов в печени. Больная была переведена в другое лечебное учреждение для проведения химиотерапевтического лечения.
Таким образом, применение доз ДНКазы, достаточных для разрушения внеклеточной ДНК крови с размером более 300 пар оснований ведет к регрессии опухоли согласно заявляемому способу.
Пример 5. Исследование влияния поликлональной сыворотки, содержащей антитела против ДНК, на рост карциномы Эрлиха у мышей, получающих лечение ДНКазой.
Антитела против ДНК выделялись из крови больных системной красной волчанкой по методике Shuster A.M. (Shuster A.M. et.al., Science, v.256, 1992, pp.665-667). Подобные анти-ДНК антитела способны не только связывать, но и осуществлять гидролиз ДНК. В качестве ДНКазы использовалась человеческая рекомбинантная ДНКаза I (Genetech).
1 группа - 7 мышей с привитой карциномой Эрлиха - контроль.
2 группа - 6 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получивших на третий день после перевивки опухоли внутривенную инъекцию фракции человеческих анти-ДНК антител (IgG) по 200 мкг на одно животное. Животные также получали внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 0,5 мг/кг 4 раза в сутки с 3 по 7 день после перевивки.
3 группа - 6 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получивших на третий день после перевивки опухоли внутривенную инъекцию фракции неспецифического человеческого иммуноглобулина (IgG) по 200 мкг на одно животное. Животные также получали внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 0,5 мг/кг 4 раза в сутки с 3 по 7 день после перевивки.
4 группа - 6 мышей с привитой карциномой Эрлиха получали внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 0,5 мг/кг 4 раза в сутки с 3 по 7 день после перевивки.
Эффект определяли по торможению роста опухоли на 7 день после перевивки (ТРО, выраженное в процентах)
Размер опухоли через 7 дней после перевивки приведен в таблице 4
| Таблица 4 | ||
| Группа | Объем опухоли | Т % |
| 1 | 105+/-12 | - |
| 2 | 25+/-5 | ~75% |
| 3 | 37+/-6 | ~66% |
| 4 | 35+/-7 | ~67% |
Приведенные данные свидетельствуют, что совместное применение ДНКазы и агента, связывающего внеклеточную ДНК крови, приводит к более выраженному противоопухолевому эффекту. Ниже приводим электрофоретический профиль внеклеточной ДНК плазмы крови мышей в группах 1, 2 и 3 через 7 дней после перевивки опухоли.
Группы: 2 1 3
Отчетливо заметно, что совместное применение анти-ДНК антител и ДНКазы приводит к более выраженному разрушению внеклеточной ДНК крови, что проявляется не только в снижении ее содержания, но и исчезновении более высокомолекулярных фракций.
Пример 6. Изучение кинетики деградации фракции высокомолекулярной фракции (размер более 300 пар оснований) внеклеточной ДНК крови больной раком молочной железы в присутствии бычьей панкреатической ДНКазы, Протеиназы К и бычьей панкреатической ДНКазы, Липазы и бычьей панкреатической ДНКазы и внеклеточной дезоксирибонуклеазы Serratia Mercenses, обладающей рибонуклеазной активностью и являющейся как разрушающим, так и модифицирующим агентом.
В образцы плазмы больной добавляли фермент и инкубировали 45 минут при 37°С. Через 45 минут реакцию прекращали и осуществляли выделение и электрофоретическое фракционирование с денситометрией внеклеточной ДНК крови. Результаты представлены в таблице 5.
| Таблица 5 | |
| Способ обработки | % деградации высокомолекулярной фракции |
| Необработанный контроль | 0 |
| Протеиназа К (0,1 мкг/мл) | 0 |
| Панкреатическая липаза (0,1 мкг/мл) | 0 |
| Бычья панкреатическая ДНКаза (1 Kuntz Units/ml) | 25 |
| Бычья панкреатическая ДНКаза (1 Kuntz Units/ml) + Протеиназа К (0,1 мкг/мл) | 35 |
| Бычья панкреатическая ДНКаза (1 Kuntz Units/ml) + Панкреатическая липаза (0,1 мкг/мл) | 40 |
| Внеклеточная дезоксирибонуклеазы Serratia Mercenses (1 Kuntz Units/ml) | 45 |
Приведенные данные свидетельствуют, что совместное применение ДНКазы и агента, модифицирующего связь внеклеточной ДНК крови с белками, липидами и рибонуклеиновыми кислотами, приводит к более эффективной деградации высокомолекулярной (более 300 пар оснований) фракции внеклеточной ДНК крови.
Пример 7. Изучение влияния различных способов разрушения внеклеточной ДНК на ее патогенные свойства.
Мыши С57В1 получили прививку высокометастатического или низкометастатического штамма опухоли LLC. На 9 день после перевивки животных усыпляли и собирали суммарную плазму крови мышей. Суммарная фракция внеклеточной ДНК крови после выделения хранилась при -20°С в фосфатном буфере.
В эксперименте участвовало 7 групп мышей, привитых низкометастатическим штаммом LLC.
1 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC.
2 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции внеклеточной ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворялись в 500 мкл свежей гепаринизированной крови).
3 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей плазмы). Перед введением образец ДНК подвергали фотохимической дезинфекции (добавление 1 мкМ метиленового синего с последующим облучением красным светом в течение 10 минут (~60000 Люкс)).
4 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей плазмы). Перед введением образец ДНК смешивали с 10 мкг гидролитических анти-ДНК антител.
5 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей гепаринизированной крови). Перед введением в образец добавляли 1 мкг фрагмента А растительного токсина Рицина и инкубировали 1 час при 37°С. Рицин является представителем семейства RIP (белки инактивирующие рибосомы) токсинов, широко используемых для создания иммунотоксинов. Кроме способности инактивировать рибосомы эти белки обладают способностью деаденилировать и гидролизовать ДНК. Для реализации токсического эффекта каталитическая единица А токсинов RIP II типа должна быть доставлена в клетку субъединицей В. В отсутствие субъединицы В цепь А не токсична, однако полинуклеотид-аденингликозидазная активность цепи А может быть использована для разрушения ДНК, циркулирующей в плазме.
6 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей гепаринизированной крови. ДНК. Образец ДНК перед введением подвергалась ферментативному метилированию (I.Muiznieks et al., FEBS Letters, 1994, v.344, pp.251-254).
7 группа - 6 мышей мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции внеклеточной ДНК мышей, привитых низкометастатическим штаммом LLC.
8 группа - 6 мышей мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей гепаринизированной крови). Образец ДНК перед введением инкубировали в присутствии 200 нг/мл дорназы - альфа 30 минут при 37°С.
Оценивали количество метастатических узлов в легких на 15 день после перевивки.
Результаты эксперимента приведены в таблице 6.
| Таблица 6 | |
| Группа | Ncp. |
| 1 | 12,0 |
| 2 | 22,5 |
| 3 | 14,1 |
| 4 | 15,5 |
| 5 | 15,1 |
| 6 | 12,3 |
| 7 | 13,3 |
| 8 | 13,5 |
Таким образом, внеклеточная ДНК крови мышей с высокозлокачественным штаммом опухоли усиливает метастазирование менее злокачественной опухоли. Разрушение, связывание и модификация внеклеточной ДНК крови препятствуют этому согласно заявляемому способу.
Claims (11)
1. Способ лечения злокачественных опухолей, отличающийся тем, что обеспечивают введение в кровь агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что агент, разрушающий внеклеточную ДНК крови, вводят в дозах, обеспечивающих изменение электрофоретического профиля внеклеточной ДНК крови, выявляемое пульс-гельэлектрофорезом.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что агент, разрушающий внеклеточную ДНК крови, вводят в дозах и режимах, обеспечивающих уровень ДНК-гидролитической активности плазмы крови, измеряемый в плазме крови и превышающий 150 единиц Кунца на литр плазмы, на протяжении суммарно более 12 ч в сутки.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что лечение осуществляют непрерывно не менее 2 суток.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови, используют фермент ДНКазу.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что используют бычью панкреатическую ДНКазу, которую вводят парэнтерально в дозах от 50000 единиц Кунца до 250000000 единиц Кунца в сутки ежедневно на протяжении 5-360 дней.
7. Способ по п.5, отличающийся тем, что используют рекомбинантную человеческую ДНКазу.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что используют рекомбинантную человеческую ДНКазу I (дорназу-альфа), которую вводят парэнтерально в дозах 0,15-500 мг/кг массы тела в сутки ежедневно на протяжении 5-360 дней.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что лечение проводят пожизненно.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно обеспечивают введение в кровь агента, связывающего внеклеточную ДНК крови.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что в качестве агента, связывающего внеклеточную ДНК крови, используют анти-ДНК антитела.
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004108061/14A RU2269356C2 (ru) | 2003-07-14 | 2004-03-12 | Способ лечения онкологических заболеваний |
| EP04748955.4A EP1655036B1 (en) | 2003-07-14 | 2004-07-01 | Method for treating oncological diseases |
| US10/564,861 US7612032B2 (en) | 2003-07-14 | 2004-07-01 | Method for treating oncological diseases |
| PCT/RU2004/000261 WO2005004903A1 (fr) | 2003-07-14 | 2004-07-01 | Methode de traitement de maladies oncologiques |
| ES04748955T ES2427091T3 (es) | 2003-07-14 | 2004-07-01 | Método para el tratamiento de enfermedades oncológicas |
| PL04748955T PL1655036T3 (pl) | 2003-07-14 | 2004-07-01 | Sposób leczenia chorób onkologicznych |
| US10/564,615 US20080004561A1 (en) | 2003-07-14 | 2005-01-27 | Method for Treating Oncological, Virulent and Somatic Diseases, Method for Controlling Treatment Efficiency, Pharmaceutical Agents and Composition for Carrying Out Said Treatment |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RUPCT/RU03/00304 | 2003-07-14 | ||
| PCT/RU2003/000304 WO2005007187A1 (fr) | 2003-07-14 | 2003-07-14 | Methode de traitement des maladies oncologiques, infectieuses et somatiques, procedes de controle de l'efficacite du traitement, agents et compositions pharmaceutiques associes |
| RU2004108061/14A RU2269356C2 (ru) | 2003-07-14 | 2004-03-12 | Способ лечения онкологических заболеваний |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004108061A RU2004108061A (ru) | 2005-09-27 |
| RU2269356C2 true RU2269356C2 (ru) | 2006-02-10 |
Family
ID=34067504
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004108061/14A RU2269356C2 (ru) | 2003-07-14 | 2004-03-12 | Способ лечения онкологических заболеваний |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7612032B2 (ru) |
| EP (1) | EP1655036B1 (ru) |
| ES (1) | ES2427091T3 (ru) |
| PL (1) | PL1655036T3 (ru) |
| RU (1) | RU2269356C2 (ru) |
| WO (1) | WO2005004903A1 (ru) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8388951B2 (en) | 2003-07-14 | 2013-03-05 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating systemic DNA mutation disease |
| US8431123B2 (en) | 2003-07-14 | 2013-04-30 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection |
| US8710012B2 (en) | 2003-07-14 | 2014-04-29 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating oncological diseases |
| US8871200B2 (en) | 2006-11-28 | 2014-10-28 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating human diseases associated with an increased deoxyribonucleic acid content in extracellular spaces of tissues and a medicinal preparation for carrying out said method |
| US8916151B2 (en) | 2005-04-25 | 2014-12-23 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating a reduction of fertility |
| US10617743B2 (en) | 2014-06-19 | 2020-04-14 | Cls Therapeutics Limited | Method to improve safety and efficacy of anti-cancer therapy |
| RU2804775C2 (ru) * | 2017-06-27 | 2023-10-05 | Новартис Аг | Режимы дозирования для антител против tim-3 и их применения |
| US11905522B2 (en) | 2018-01-16 | 2024-02-20 | Cls Therapeutics Limited | Treatment of diseases by liver expression of an enzyme which has a deoxyribonuclease (DNase) activity |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2003298972A1 (en) * | 2003-07-14 | 2005-02-04 | Dmitry Dmitrievich Genkin | Method for treating oncological, virulent and somatic diseases, method for controlling treatment efficiency, pharmaceutical agents and composition for carrying out said treatment |
| GB0713074D0 (en) | 2007-07-05 | 2007-08-15 | Univ London | A method of hyperpolarising a magnetic resonance agent |
| US20110159569A1 (en) * | 2008-04-30 | 2011-06-30 | Ajou University IndustryAcademic Cooperation Found | Anti-nucleic acid antibody inducing cell death of cancer cells and composition for preventing or treating cancers comprising the same |
| WO2012071420A1 (en) * | 2010-11-23 | 2012-05-31 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Enzyme combinations to reduce brain tissue swelling |
| EP3597665A1 (en) | 2011-04-01 | 2020-01-22 | Yale University, Inc. | Cell-penetrating anti-dna antibodies and uses thereof to inhibit dna repair |
| WO2012166611A2 (en) | 2011-05-27 | 2012-12-06 | Immune Disease Institute, Inc. | Methods for treating and preventing neutrophil-derived net toxicity and thrombosis |
| WO2013114374A1 (en) | 2012-02-01 | 2013-08-08 | Protalix Ltd. | Dnase i polypeptides, polynucleotides encoding same, methods of producing dnase i and uses thereof in therapy |
| GB201208879D0 (en) * | 2012-05-21 | 2012-07-04 | London School Hygiene & Tropical Medicine | Therapeutic for treating Clostridium difficile infection |
| WO2015134607A1 (en) | 2014-03-04 | 2015-09-11 | Yale University | Cell penetrating anti-guanosine antibody based therapy for cancers with ras mutations |
| US10238742B2 (en) | 2014-06-25 | 2019-03-26 | Yale University | Cell penetrating nucleolytic antibody based cancer therapy |
| CN107406837A (zh) | 2015-01-04 | 2017-11-28 | 波塔力克斯有限公司 | 修饰的dna酶及其用途 |
| JP6745873B2 (ja) | 2015-05-22 | 2020-08-26 | ドミトリエヴィッチ ゲンキン，ドミトリー | 神経変性における治療標的としての細胞外ｄｎａ |
| ES2876437T3 (es) | 2015-10-29 | 2021-11-12 | Cls Therapeutics Ltd | Uso de una ADNasa para mejorar la seguridad y la eficacia de una quimioterapia anticáncer |
| DE102016001407A1 (de) | 2016-02-09 | 2017-08-24 | Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh | Blutbehandlung mit Inaktivierung von freien Nukleinsäuren |
| US11590242B2 (en) | 2016-06-15 | 2023-02-28 | Yale University | Antibody-mediated autocatalytic, targeted delivery of nanocarriers to tumors |
| EP3351263A1 (en) | 2017-01-20 | 2018-07-25 | Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf | Pharmaceutical preparation for treating or preventing tissue adhesion |
| US20190083636A1 (en) | 2017-04-25 | 2019-03-21 | Lipoxen Technologies Limited | Methods of treating diseases related to net formation with parenteral administration of polysialylated dnase i |
| JP7577314B2 (ja) | 2017-08-18 | 2024-11-05 | ニュートロリス インコーポレイテッド | 改変型ｄｎａｓｅ酵素及び治療における使用 |
| EP3685165B1 (en) | 2017-09-18 | 2022-04-20 | Santersus AG | Method and device for purification of blood from circulating cell free dna |
| WO2019212694A1 (en) * | 2018-04-30 | 2019-11-07 | Viktor Veniaminovich Tets | Tetz-proteins and prion-like proteins and associated methods |
| WO2020006357A1 (en) | 2018-06-29 | 2020-01-02 | Tets Viktor Veniaminovich | Methods for diagnosis and treatment of type 1 diabetes |
| AU2019358915A1 (en) | 2018-10-08 | 2021-05-20 | Neutrolis, Inc. | Engineering of DNASE enzymes for manufacturing and therapy |
| US10988746B2 (en) | 2018-10-08 | 2021-04-27 | Neutrolis, Inc. | Manufacturing and engineering of DNASE enzymes for therapy |
| US11058724B2 (en) | 2018-10-08 | 2021-07-13 | Neutrolis, Inc. | Methods of using DNASE1-like 3 in therapy |
| US11352613B2 (en) | 2019-02-04 | 2022-06-07 | Neutrolis, Inc. | Engineered human extracellular DNASE enzymes |
| US20230416707A1 (en) | 2020-10-07 | 2023-12-28 | Protalix Ltd. | Long-acting dnase |
| US20240327889A1 (en) * | 2021-04-05 | 2024-10-03 | Victor TETS | Regulation of cells and organisms |
| CN118946288A (zh) * | 2021-05-21 | 2024-11-12 | D·D·金基恩 | 肿瘤微环境的免疫调节 |
| US12053567B2 (en) | 2021-12-27 | 2024-08-06 | Santersus Ag | Method and device for removal of circulating cell free DNA |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5484589A (en) * | 1992-04-20 | 1996-01-16 | Rufeld, Inc. | Anti-viral methods using RNAse and DNAse |
| CH686982A5 (fr) | 1993-12-16 | 1996-08-15 | Maurice Stroun | Méthode pour le diagnostic de cancers. |
| RU2099080C1 (ru) * | 1994-02-11 | 1997-12-20 | Дмитрий Иванович Финько | Способ предотвращения развития рака |
| CA2248981C (en) | 1996-03-15 | 2009-11-24 | The Penn State Research Foundation | Detection of extracellular tumor-associated nucleic acid in blood plasma or serum using nucleic acid amplification assays |
| US6908948B1 (en) * | 1998-07-16 | 2005-06-21 | Research Development Foundation | DNA-cleaving antitumor agents |
| US6465177B1 (en) | 1998-10-26 | 2002-10-15 | John Wayne Cancer Institute | Detection of loss of heterozygosity in tumor and serum of melanoma patients |
| AU4430701A (en) * | 2000-04-03 | 2001-10-15 | Antisoma Research Limited | Compounds for targeting |
-
2004
- 2004-03-12 RU RU2004108061/14A patent/RU2269356C2/ru active
- 2004-07-01 WO PCT/RU2004/000261 patent/WO2005004903A1/ru active Application Filing
- 2004-07-01 US US10/564,861 patent/US7612032B2/en active Active
- 2004-07-01 ES ES04748955T patent/ES2427091T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-07-01 PL PL04748955T patent/PL1655036T3/pl unknown
- 2004-07-01 EP EP04748955.4A patent/EP1655036B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-01-27 US US10/564,615 patent/US20080004561A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DEOCHARAN B. et al. Alpha-actinin a cross-reactive renalt target pathogenic anti-DNA antibodies. J. Immunology. 2002 Mar 15; 168(6); 3072-8. MUTIRANGURA A. Serum/plasma viral DNA: mechanisms and diagnostic applications to nasopharyngeal and cervical carcinoma. Ann. N.Y. Acad. Sci., 2001 Sep: 945: 59-67. GORRINI G. et al. Effect of apoptogenic stimuli on colon carcinoma cell lenes with a different c-myc expression level. Int. J. Mol. Med 2003 Jun; 11(6): 737-42. * |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9463223B2 (en) | 2003-07-14 | 2016-10-11 | Cls Therapeutics Limited | Method for monitoring development of somatic mosaicism |
| US9770492B2 (en) | 2003-07-14 | 2017-09-26 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating systemic DNA mutation disease |
| US8535663B2 (en) | 2003-07-14 | 2013-09-17 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating delayed-type hypersensitivity |
| US8710012B2 (en) | 2003-07-14 | 2014-04-29 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating oncological diseases |
| US8796004B2 (en) | 2003-07-14 | 2014-08-05 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating systemic DNA mutation disease |
| US9845461B2 (en) | 2003-07-14 | 2017-12-19 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating oncological diseases |
| US8431123B2 (en) | 2003-07-14 | 2013-04-30 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection |
| US9248166B2 (en) | 2003-07-14 | 2016-02-02 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating oncological diseases |
| US9072733B2 (en) | 2003-07-14 | 2015-07-07 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection |
| US8388951B2 (en) | 2003-07-14 | 2013-03-05 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating systemic DNA mutation disease |
| US8916151B2 (en) | 2005-04-25 | 2014-12-23 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating a reduction of fertility |
| US8871200B2 (en) | 2006-11-28 | 2014-10-28 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating human diseases associated with an increased deoxyribonucleic acid content in extracellular spaces of tissues and a medicinal preparation for carrying out said method |
| US10617743B2 (en) | 2014-06-19 | 2020-04-14 | Cls Therapeutics Limited | Method to improve safety and efficacy of anti-cancer therapy |
| RU2804775C2 (ru) * | 2017-06-27 | 2023-10-05 | Новартис Аг | Режимы дозирования для антител против tim-3 и их применения |
| US11905522B2 (en) | 2018-01-16 | 2024-02-20 | Cls Therapeutics Limited | Treatment of diseases by liver expression of an enzyme which has a deoxyribonuclease (DNase) activity |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1655036A4 (en) | 2009-06-17 |
| WO2005004903A1 (fr) | 2005-01-20 |
| US20060233780A1 (en) | 2006-10-19 |
| RU2004108061A (ru) | 2005-09-27 |
| ES2427091T3 (es) | 2013-10-28 |
| US20080004561A1 (en) | 2008-01-03 |
| EP1655036A1 (en) | 2006-05-10 |
| PL1655036T3 (pl) | 2014-02-28 |
| EP1655036B1 (en) | 2013-07-17 |
| US7612032B2 (en) | 2009-11-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2269356C2 (ru) | Способ лечения онкологических заболеваний | |
| US9845461B2 (en) | Method for treating oncological diseases | |
| JP5307042B2 (ja) | アルギニンを欠乏させることによってヒト悪性腫瘍を治療する医薬品及び方法 | |
| JPS58157723A (ja) | インタ−ロイキン２を含有してなる免疫療法剤 | |
| JPH09511397A (ja) | 遺伝子型改変バクテリオファージによる抗菌治療 | |
| JP7239910B2 (ja) | 治療剤、ならびに腫瘍および／またはがんの治療のための薬物のためのその使用 | |
| CN101965361A (zh) | 生物材料及其应用 | |
| EP4146682A1 (en) | Masked chimeric antigen receptor specific to tyrosine-protein kinase like 7 (ptk7) and immune cells expressing such | |
| EP1666055A1 (en) | Method for treating oncological, virulent and somatic diseases, method for controlling treatment efficiency, pharmaceutical agents and composition for carrying out said treatment | |
| JPH11514990A (ja) | ２−メルカプトエタノールアミン（２−ｍｅａ）と類縁アミノチオール化合物および３，５−ジイソプロピルサリチル酸銅（▲ｉｉ▼）と類縁化合物の、各種疾患を予防および治療するための使用 | |
| US7662792B2 (en) | Modulation of Fas and FasL expression | |
| JP2009541319A (ja) | リポソマーゼによる治療物質の腫瘍特異的送達 | |
| JP2024515113A (ja) | 重篤な疾患を処置するためのｂ細胞ベースのタンパク質工場の操作 | |
| JP2005538709A (ja) | アルギニンを欠乏させることによってヒト悪性腫瘍を治療する医薬品及び方法 | |
| CN113227384A (zh) | 用于治疗肿瘤的药物组合物、药盒和方法 | |
| JPH07505893A (ja) | 免疫学的機能不全を伴う疾患の治療のための方法および組成物 | |
| WO2003092708A1 (fr) | Agents antitumoraux utilisant le hsv | |
| JPH09509649A (ja) | 免疫化同種異系骨髄ドナーからの活性腫瘍特異的免疫化の移入のための方法および組成物 | |
| US20030236189A1 (en) | Two synthetic peptides for treatment and prevention of cancers | |
| WO2023077925A1 (zh) | 一种治疗和/或预防癌症的药物和应用 | |
| AU2004217830B2 (en) | A recombinant constructed by a virus vector and a human tumor suppressor gene and its use | |
| US4559228A (en) | Composition and method for the treatment of cancer | |
| CN118001427A (zh) | miR-320抑制剂在制备治疗非酒精性脂肪性肝病或高脂血症药物中的应用 | |
| CN118576624A (zh) | 一种自溶沙门氏菌-纳米胶囊输送系统、免疫刺激水凝胶及其应用 | |
| WO2023084399A1 (en) | Genetically engineered immune cells expressing masked chimeric antigen receptors specific to protein tyrosine kinase 7 |