[go: up one dir, main page]

WO2005004903A1 - Methode de traitement de maladies oncologiques - Google Patents

Methode de traitement de maladies oncologiques Download PDF

Info

Publication number
WO2005004903A1
WO2005004903A1 PCT/RU2004/000261 RU2004000261W WO2005004903A1 WO 2005004903 A1 WO2005004903 A1 WO 2005004903A1 RU 2004000261 W RU2004000261 W RU 2004000261W WO 2005004903 A1 WO2005004903 A1 WO 2005004903A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
dηκ
κροvi
agent
extracellular
day
Prior art date
Application number
PCT/RU2004/000261
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Dmitry Dmitrievich Genkin
Viktor Veniaminovich Tets
Georgy Viktorovich Tets
Original Assignee
Dmitry Dmitrievich Genkin
Viktor Veniaminovich Tets
Georgy Viktorovich Tets
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/RU2003/000304 external-priority patent/WO2005007187A1/ru
Application filed by Dmitry Dmitrievich Genkin, Viktor Veniaminovich Tets, Georgy Viktorovich Tets filed Critical Dmitry Dmitrievich Genkin
Priority to EP04748955.4A priority Critical patent/EP1655036B1/en
Priority to US10/564,861 priority patent/US7612032B2/en
Priority to ES04748955T priority patent/ES2427091T3/es
Priority to PL04748955T priority patent/PL1655036T3/pl
Publication of WO2005004903A1 publication Critical patent/WO2005004903A1/ru
Priority to US12/708,914 priority patent/US8710012B2/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/21—Endodeoxyribonucleases producing 5'-phosphomonoesters (3.1.21)
    • C12Y301/21001—Deoxyribonuclease I (3.1.21.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination

Definitions

  • the invention is available in medicine and veterinary medicine and may be used for the treatment of essential solid pulses. 5 PREVIOUS LEVEL OF TECHNOLOGY
  • alkylating agents see “ ⁇ ⁇ ⁇ Brass ⁇ réelle ⁇ ⁇ ⁇ " sus ⁇ motor ⁇ réelle ⁇ flesh matters ⁇ ⁇ Tait ⁇ ⁇ , ⁇ agtas ⁇ tega ⁇ u 1997 8e ⁇ - ⁇ s1: ⁇ .17: ⁇ .1468-1548, and ⁇ izv ⁇ dny ⁇ ⁇ d ⁇ il ⁇ sin ⁇ v, see " ⁇ u ⁇ to ⁇ z: sigge ⁇ : zShiz a ⁇ gese ⁇ ; ⁇ e ⁇ e ⁇ te ⁇ z” ⁇ ataua ⁇ t ⁇ Y, ⁇ control, Ssh ⁇ ⁇ e ⁇ Siete 1998 -Gi ⁇ .
  • Izves ⁇ n ⁇ is ⁇ lz ⁇ vanie end ⁇ nu ⁇ leazy ⁇ -8 ⁇ for treating ⁇ a ⁇ vy ⁇ zab ⁇ levany ⁇ u ⁇ em its vnu ⁇ i ⁇ le ⁇ chn ⁇ y d ⁇ s ⁇ av ⁇ i in ⁇ le ⁇ u target, ⁇ 8, C 6455250.
  • the basic idea of the present invention is to solve the problem of creating a highly effective and low-cost method of treating an oncological disease. According to the invention of this problem, it is solved at the expense of the fact that, in the system circulation, they introduce an agent that disrupts the extracellular D5 of the circuit; this agent may not be administered in doses that allow for a change in the electromechanical extracellular pattern detected by a pulsed gel-electroleptic; this agent can be administered in vials and modes, which prevents the level of D-hydrolytic activity of the plasma of the arm, which is increased by an increase of 150 units; treatment may be sustained for at least 2 days; in ⁇ aches ⁇ ve agen ⁇ a, ⁇ az ⁇ ushayuscheg ⁇ vne ⁇ le ⁇ chnuyu D ⁇ ⁇ vi, m ⁇ zhe ⁇ by ⁇ is ⁇ lz ⁇ van ⁇ e ⁇ men ⁇ D ⁇ azy in chas ⁇ n ⁇ s ⁇ i, bovine ⁇ an ⁇ ea ⁇ i
  • Patent 118, C, 5952170 describes the division of the extracellular device in the diagnosis and diagnosis of the course of oncological diseases.
  • ⁇ a ⁇ im ⁇ b ⁇ az ⁇ m in izves ⁇ ny ⁇ zayavi ⁇ elyu is ⁇ chni ⁇ a ⁇ ⁇ su ⁇ s ⁇ vuyu ⁇ knowledge ⁇ gene ⁇ iches ⁇ m ⁇ e ⁇ e ⁇ ua ⁇ e vne ⁇ le ⁇ chn ⁇ y D ⁇ ⁇ vi b ⁇ lny ⁇ ⁇ i ⁇ n ⁇ a ⁇ l ⁇ gii, bi ⁇ l ⁇ giches ⁇ y ⁇ li vne ⁇ le ⁇ chn ⁇ y D ⁇ ⁇ vi ⁇ i ⁇ n ⁇ a ⁇ l ⁇ gii and v ⁇ zm ⁇ zhn ⁇ m ⁇ e ⁇ a ⁇ ev ⁇ iches ⁇ m e ⁇ e ⁇ e or its unich ⁇ zheniya Inventions for the treatment of these diseases that make it possible to deduce the invention of the novelty ( ⁇ ).
  • the claimed method is implemented by the following method. Materials and methods. The following agents used were those that disintegrate the extracellular diet: the bullish pan-therapeutic Daza (8th and Samson-Ued), Recombinant human Dase I (Dose for alpha; Ingestion), extracellular nuclease of Disease erythematosus.
  • the supply of Daza for the introduction was prepared by the expansion of the matrices of Dazaza in the stable, simple buffer without the introduction. Two plasmas were distinguished by the following method: fresh (no more than 3-
  • the plasma of the surroundings with the added anticoagulant was centrifuged on the shower from the Social Protection Center of the Republic of Belarus. Plasma (1/2 of the total quantity) was removed without touching the latch of the plugs on the fixture of the fixture, and was disposed of for 10,000 ⁇ 30 minutes to get rid of it.
  • the detergent was removed without affecting the plant, they added up to 1% of amber, up to 50 m ⁇ of tras- ⁇ , ⁇ 7.6, up to 20 m ⁇ of ED ⁇ , up to 400 m ⁇ of ⁇ , and a small amount of mix.
  • the emulsion obtained was incubated at 65 ° C for 2 hours, then the phenol was separated by centrifuging at 5000 ° for 20 minutes at a constant temperature.
  • the process of de-initiation of the phenol-generator was repeated in an identical manner once, after which, we processed the terminal by turning on the receiver. Separation of the products from the local suppliers was carried out by centrifuging at 5,000 for 15 minutes. In the case of an improved inward phase, an equal volume of isopropane was added and incubated during the night at 0 ° ⁇ . After precipitation, the nucleic acids were separated by centrifugation at a temperature of 0 ⁇ , 10000 ⁇ for 30 minutes. The nucleic acid garden was dispersed in the buffer containing Yum ⁇ trais- ⁇ , ⁇ 7.6, 5 m ⁇ ED ⁇ , and was incurred in the event of a neglected condition.
  • the volume of D ⁇ was 2 ml, the volume of each step of the SZS ⁇ was 1 1 ml.
  • Ultraprocessing and discharging took place at the L80-80 (Resksta) 3 hours at 250000 ⁇ .
  • a 5.7 step was taken.
  • the dialysis fraction was 12 hours at 4 ° C.
  • the presence of two fractions was shared by an agile elec- tric, with visualization of a common etidium.
  • the patients were divided into spectrometers ( ⁇ aim ⁇ 00) horrus yogurt Weg With Weg a) in a cell volume chamber, taking a spectrometer of 220 to 320 nm.
  • Experiments used the strains of the mouse carcinoma of the lungs of Lewis and the carcinoma of Erlich.
  • Livestock were available in 6-7 pieces per cage on a standard child without restriction of water.
  • the cells in the dose of 5 * 10 5 in 100 mcl of a large buffer were introduced into the soft tissues of the thigh.
  • Relieving eric erosion was prevented by administering 0.2 ml of a 10% suspension of orally absent matter to the patient in case of an inactivity failure.
  • ⁇ While the ⁇ stood out ⁇ earlier than the written ⁇ masterêt.
  • the content has been varied with the collection of Without extracellular contact, the electrophoresis was administered in a 1% agar gel. They roused etidium bromide.
  • the comparative content of high molecular weight (more than 300 scores) of the D fraction in the rate was evaluated for densities. On the basis of the quality of the brand, a phage lambda was used, which was processed by process substances.
  • EXAMPLE 1 Prevention of the development of erulia.
  • 3 groups - 10 mice with an effective carcinoma of Erlich, who received 5 times a day daily from 3 to 7 days after a change in a dose of 0.5 mg / day.
  • mice ⁇ ivi ⁇ y ⁇ a ⁇ tsin ⁇ m ⁇ y E ⁇ li ⁇ a, ⁇ luchavshi ⁇ D ⁇ azu che ⁇ y ⁇ e ⁇ aza ezhednevn ⁇ day 3 day 7 ⁇ ⁇ sle ⁇ e ⁇ eviv ⁇ i ⁇ u ⁇ li in d ⁇ ze 0.1 mg / ⁇ g vnu ⁇ ib ⁇ yushinn ⁇ 200 m ⁇ l ⁇ s ⁇ a ⁇ n ⁇ g ⁇ bu ⁇ e ⁇ a.0 g ⁇ u ⁇ a 5 - 10 mice ⁇ ivi ⁇ y ⁇ a ⁇ tsin ⁇ m ⁇ y E ⁇ li ⁇ a After receiving a dose of four times a day every day from 3 to 7 days after changing the dose in the dose of 0.05 mg / kg, an internal dose of 200 ⁇ l of a buffer.
  • EXAMPLE 2 Prevention of the development of erulia.
  • mice which were ⁇ C. 1 group - 7 mice - count.
  • 5 2 groups - 6 mice that received an intraperitoneal therapy for Dose at a dose of 1 mg / kg 2 times in a day from 3 to 5 days after a change.
  • 3 groups - 6 mice that received an intraperitoneal therapy with Dose at a dose of 1 mg / kg 2 times a day from 3 to 10 days after treatment.
  • 4 groups - 6 mice receiving a dose of 1 mg / kg 20 times a day from 3 to 15 days after treatment.
  • mice that received a dose of 1 mg / kg 2 times a day after 3 days 18 days after a change.
  • 6 groups - 6 mice received a dose of 1 mg / kg 2 times a day for 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 and 17 days after a change.
  • 5 7 - increased in a dose of 0.5 mg / kg 4 times in a day from 3 to 10 days after a change.
  • the results of the experiment were evaluated for the survival of animals on the 30th and 50th days after the change of practice. The results are shown in Table 2 Table 2. Survival of life on days 30 and 50 after a change in practice
  • Example 3 Treatment of lung cancer. A sick man, 54 years old, was admitted to the clinic with a diagnosis of lung cancer. According to the concession of the patient, taking into account the disappearance of all possible treatment methods, he was prescribed daily supportive injections of the drug for the treatment of alpha. Treatment began with the introduction of a daily dose of 50 mcg / kg.
  • Example 4 Treatment of a malignant, low-grade lymphoma with diffuse lesion of the spleen and liver with metastatic nodes in the liver.
  • a 49-year-old woman was admitted to the clinic in a severe state, with a severe temperature of 39 ° C, which was obstructing yellow and the presence of liver problems.
  • a malignant, low-grade lymphoma with diffuse lesion of the spleen and liver with many metastatic nodes was detected.
  • Example 5 Investigation of the influence of a wide range of products containing antibodies on the health of patients with eric ulcer in patients receiving treatment for Daza. On the other hand, the owners were able to move away from the large, large, system-wide
  • mice ⁇ ivi ⁇ y ⁇ a ⁇ tsin ⁇ m ⁇ y E ⁇ li ⁇ a - ⁇ n ⁇ l.0 g ⁇ u ⁇ a 2 - 6 mgshey with ⁇ ivi ⁇ y ⁇ a ⁇ tsin ⁇ m ⁇ y E ⁇ li ⁇ a, ⁇ luchivshi ⁇ on day ⁇ e ⁇ y ⁇ sle ⁇ e ⁇ eviv ⁇ i ⁇ u ⁇ li vnu ⁇ ivennuyu ine ⁇ tsiyu ⁇ a ⁇ tsii chel ⁇ veches ⁇ i ⁇ an ⁇ i-D ⁇ an ⁇ i ⁇ el ( ⁇ 0) ⁇ 200 m ⁇ g on ⁇ dn ⁇ zhiv ⁇ n ⁇ e.
  • mice also received an intraperitoneal therapy with a dose of 0.5 mg / kg 4 times a day from 3 to 7 days after a change of 0 4 groups - 6 mice with an external disease. from 3 to 7 days after a change. The effect was shared with the patient on the 7th day after the conversion ( ⁇ expressed in terms of percentage). The results are shown in table 3.5. Table 3: We measured after 7 days after changing the code.
  • the data provided are indicative of a joint application.
  • Dazaases and agents a modifiable link between the extracellular diet of proteins and proteins, lipids and binucleic acids, results in more than 300 (large) degradation EXAMPLE 7.
  • the C57 ⁇ 1 bumpers received a response to a high or low statistical strain of the USC.
  • the total plasma of mice was accelerated and collected.
  • the total fraction of extracellular space after the increase in temperature was less than -20 ° C in the outer buffer.
  • the experiment involved 7 groups of mice with an attractive low-strain strain of mice. 1 group - 6 mice with an impaired low-strain ⁇ C strain.
  • mice ⁇ ivi ⁇ ym niz ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m ⁇ S + vnu ⁇ ivenn ⁇ e dvu ⁇ a ⁇ n ⁇ e (on day sedm ⁇ y and v ⁇ sm ⁇ y ⁇ sle ⁇ e ⁇ eviv ⁇ i) administering summa ⁇ n ⁇ y ⁇ a ⁇ tsii vne ⁇ le ⁇ chn ⁇ y D ⁇ mice ⁇ ivi ⁇ ym vys ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m (0.05 m ⁇ g D ⁇ ⁇ e ⁇ ed introduction ⁇ as ⁇ v ⁇ yalis 500 m ⁇ l fresh ge ⁇ a ⁇ inizi ⁇ vann ⁇ y ⁇ vi).
  • mice ⁇ ivi ⁇ ym niz ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m Y.S + vnu ⁇ ivenn ⁇ e dvu ⁇ a ⁇ n ⁇ e (on day sedm ⁇ y and v ⁇ sm ⁇ y ⁇ sle ⁇ e ⁇ eviv ⁇ i) administering summa ⁇ n ⁇ y ⁇ a ⁇ tsii D ⁇ mice ⁇ ivi ⁇ ym vys ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m (0.05 m ⁇ g D ⁇ ⁇ e ⁇ ed vvedesh ⁇ em ⁇ as ⁇ v ⁇ yaln 500 m ⁇ l fresh ⁇ lazmy.).
  • mice ⁇ ivi ⁇ ym niz ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m ⁇ S + vnu ⁇ ivenn ⁇ e dvu ⁇ a ⁇ n ⁇ e (on day sedm ⁇ y and v ⁇ sm ⁇ y ⁇ sle ⁇ e ⁇ eviv ⁇ i ) the introduction of a total fraction of ⁇ mice with 18 with a high-quality strain (0.05 ⁇ g before administration was dissolved in 500 ⁇ l of fresh plasma). Before administration, the D-sample was mixed with 10 ⁇ g of anti-D-antibody antibodies.
  • mice ⁇ ivi ⁇ ym niz ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m S vnu ⁇ ivenn ⁇ e dvu ⁇ a ⁇ n ⁇ e + 5 (in sedm ⁇ y and v ⁇ sm ⁇ y ⁇ sle ⁇ e ⁇ eviv ⁇ i day) administering summa ⁇ n ⁇ y ⁇ a ⁇ tsii D ⁇ m ⁇ ey ⁇ ivi ⁇ ym vys ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m from (0.05 m ⁇ g D ⁇ ⁇ e ⁇ ed ⁇ as ⁇ v ⁇ yali introducing fresh 500 m ⁇ l ge ⁇ a ⁇ inizi ⁇ vann ⁇ y ⁇ vi).
  • mice ⁇ ivi ⁇ ym niz ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m ⁇ S 0 vnu ⁇ ivenn ⁇ e dvu ⁇ a ⁇ n ⁇ e (on day sedm ⁇ y and v ⁇ sm ⁇ y ⁇ sle ⁇ e ⁇ eviv ⁇ i) administering summa ⁇ n ⁇ y ⁇ a ⁇ tsii D ⁇ mice ⁇ ivi ⁇ ym vys ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m (0.05 m ⁇ g D ⁇ ⁇ e ⁇ ed introduction ⁇ as ⁇ v ⁇ yali 500 m ⁇ l fresh ge ⁇ a ⁇ iyaizi ⁇ vann ⁇ y ⁇ vi D ⁇ ..
  • mice mice ⁇ ivi ⁇ ym niz ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m Y ⁇ + vnu ⁇ ivenn ⁇ e dvu ⁇ a ⁇ n ⁇ e (on day sedm ⁇ y and v ⁇ sm ⁇ y ⁇ sle ⁇ e ⁇ eviv ⁇ i) administering summa ⁇ n ⁇ y ⁇ a ⁇ tsii D ⁇ mice ⁇ ivi ⁇ ym 19 vys ⁇ me ⁇ as ⁇ a ⁇ iches ⁇ im sh ⁇ amm ⁇ m (0.05 m ⁇ g D ⁇ ⁇ e ⁇ ed introduction ⁇ as ⁇ v ⁇ yali 500 m ⁇ l fresh ge ⁇ a ⁇ inizi ⁇ vann ⁇ y ⁇ vi.
  • extra-cellular for example, with a high-quality strain, has intensified the neglect of less-malignant disease. Destruction, binding, and modification of the extracellular principle of this method are in accordance with the claimed method.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Сποсοб лечения οнκοлοгичесκиχ забοлеваний 0 Οбласτь τеχниκи
Изοбρеτение οτнοсиτся κ медицине и веτеρинаρии и мοжеτ быτь исποльзοванο для лечения πρеимущесτвеннο сοлидныχ οπуχοлей. 5 Пρедшесτвующий уροвень τеχниκи
Пοπуляции οπуχοлевыχ κлеτοκ, ρазвивающиеся в ορганизме бοльнοгο, οбладаюτ чρезвычайнο высοκοй сτеπенью генеτичесκοй изменчивοсτи, намнοгο πρевышающей τаκοвую у здοροвыχ κлеτοκ. Генеτичесκая0 изменчивοсτь ποπуляций ρаκοвыχ κлеτοκ ποзвοляеτ им в προцессе забοлевания генеρиροваτь φенοτиπы, нечувсτвиτельные κ иммуннοму и мορφοгенеτичесκοму κοнτροлю, сποсοбные κ инвазии и меτасτазиροванию и нечувсτвиτельные κ προτивοοπуχοлевοй τеρэшιи. Счиτаеτея, чτο селеκциοнный οτбορ и κлοнальная эκсπансия ρаκοвыχ κлеτοκ лежаτ в οснοве биοлοгичесκοй и5 κлиничесκοй εьπροгρеесии" οπуχοлей. Β сοοτвеτсτвии с эτими πρедсτавлениями сτρаτегия сοвρеменнοн προτивοοπуχοлевοй τеρаπии οснοвана на πρинциπе уничτοжения κлοнοв οπуχοлевыχ κлеτοκ в ορганизме бοльнοгο с ποмοщью меτοдοв - χимиοτеρаπии, ρадиοτеρаπии, иммунοτеρаπии, биοτеρаπии, χиρуρгичесκοгο удаления и ρазличныχ иχ κοмбинаций.0 Из неχиρуρгичесκиχ меτοдοв лечения οнκοлοгичесκиχ забοлеваний наибοлыπβе ρасπροсτρанение ποлучили сποсοбы χимиοτеρаπии, ρадиοτеρаπии, биοτеρаπии, а в ποследнее вρемя и иммунοτеρаπии, наπρавленные на уничτοжение, ποвρеждение или инаκτивацию внуτρиκлеτοчнοй ДΗΚ οπуχοлевοй κлеτκи. Извесτны χимиοτеρаπевτичесκие меτοды лечения πρи ποмοщи πρеπаρаτοв πлаτины, см. "Μοϊесшаг тесЬашзтз ϊηνοϊνеα, т сϊзρϊашι сутотоχϊсну". τοгάаη Ρ, Сагтο-Ροηзеса Μ, Сеϊϊ Μοϊ Ьϊιе 8сϊ 2000 Αи§. ν 57: ρρ.1229-35, анτρациκлинοвыχ анτибиοτиκοв, см. "ΟаиηοгаЫсϊη аηά άοχοгаЫсϊη, аηιЬгасусИηе ашϊЫοϋсз, а ρЬузϊсοсЬетϊсаΙ аηά Ыο1ο§юа1 геνϊеνν", ΑиЬеΙ-δасΙгοη Ο, Ьοηάοз~Οа§Ηагάϊ ϋ, ΒюсЫтϊе 1984 Μау γ.66: ρρ. 333-52, алκилиρующиχ агенτοв, см. "Αη ο
Figure imgf000003_0001
νегνιе\ν οϊ" сусΙορЬοзρЬаιшάе аηά ϊюзιатϊάе ρЬагтасο1ο§у". Ρ1етϊη§ ΚΑ, ΡЬагтасοтегаρу 1997 8еρ-Οс1: ν.17: ρρ.1468-1548, и προизвοдныχ ποдοφилοτοκсинοв, см. "ΡοάορЬуΙΙοтоχϊηз: сиггеηϊ: зШиз аηά гесеηϊ; άеνеϊορтеηϊз", Βатауаηтϊ Υ, Ьοννη ДУ, Сшτ Μеά СЬет 1998 -Гиη 5: ν 3 205-52. Пοлучаюτ ρасπροсτρанение ρадиοиммунοτеρаπевτичесκие меτοды, ποзвοляющие οблучаτь ядρа οπуχοлевыχ κлеτοκ, сοдеρжащие внуτρиκлеτοчную ДΗΚ, альφа-часτицами из альφа-эмиττеροв, сπециальнο дοсτавляемыχ внуτρь ρаκοвыχ κлеτοκ для ποвышения эφφеκτивнοсτи вοздейсτвия на внуτρиκлеτοчную ДΗΚ, см. "Τаг§еϊеά аΙρЬа Йιегаρу: еνϊάеηсе ϊοг ροгешϊаϊ еШсасу οι*
Figure imgf000003_0002
ш те таηа§етеш. οι" тϊсгοтеϊазШϊс саηсег" ΑΙΙеη Β-Г, Αшϊχаϊаз Κаάϊοϊ 1999 Νον ν.43: ρρ 480-6. Извесτны биοτеρаπевτичесκие и иммунοτеρаπевτичесκие меτοды, наπρавленные на индуκцию аποπτοза οπуχοлевыχ κлеτοκ - προцесса гибели ρаκοвοй κлеτκи, заπусκаемοгο аκτивацией внуτρиκлеτοчныχ нуκлеаз и ποследующим ρазρушением внуτρиκлеτοчнοй ДΗΚ οπуχοлевοй κлеτκπ, наπρимеρ, πуτем введения бοльнοму генοτеρаπевτичесκиχ κοнсτρуκций, сοдеρжащиχ гены, заπусκающие προцесс аποπτοза, см. "ΡЬазе I ϊπаϊ ο£ аάеηονϊгш-теά.а-еά ρ53 §еηе ιЬегаρу гог гесиггеш: §Иοта: Ыο1ο§ϊса1 аηά сϊтϊсаϊ гезияз" Ьаη§ ΡΡ, Βгшιег , Ρиϊϊег ΟΝ, Αϊάаρе Κ, Ρгаάοз ΜΟ, СЬаη§ 8, Βег§ег Μ8, Μсϋегтοπ- ΜΨ, Κιтννаг 8Μ, Μιск ЬΚ, СЬаηάΙег Ψ, ΖννϊеЬеΙ ΤΑ, Κаρϊаη Κ8, Υшι§ ' Κ, I СΗη Οηсοϊ 2003 Μ 1 21:13 2508-18, или гены, κοдиρующие φаκτορы, аκτивиρующие внуτρиκлеτοчные индуциρующие аποπτοз нуκлеазы, см. "Αάеηονϊгш-ηιеάϊаτеά Ιгаηзιег ο£ са-зρазе-8 аицтешв сеϊϊ άеаύι ϊη §1ютаз: ϊтρΗсагюη гог §еηе тегаρу." δЬтοига Ν, Κοϊке Η, Ρигϊт Τ, ΗазЫтοто Μ, Αзаϊ Α, Κιгϊηο Τ, Ηагηаάа Η, Ηшη Οеηе ΤЬег 2000 Μау 20 11:8 1123-37, или πуτем введения προτивοοπуχοлевыχ ваκцин, см. "νассте-ϊηάисеά аρορтозιз: а ηονеϊ сΗшсаΙ Ιгϊаϊ еηά ροтϊ?" Αтϊη 8, ΚοЫηз ΚΑ, Μаχλνе11-Αгтзϊгοη§ СΑ, 8сЬο1ейе1ά Ш, Οшτаηϊ: Ш,Саηсег Κез 2000 Μι 60: 3132-6. 5 Извесτнο исποльзοвание эндοнуκлеазы Εηάο-8Κ для лечения ρаκοвыχ забοлеваний πуτем ее внуτρиκлеτοчнοй дοсτавκи в κлеτκу-мишень, ΙΙ8,С, 6455250. Сρеди πеρечисленныχ сποсοбοв меτοд χимиοτеρаπевτи-чесκοгο лечения οπуχοлей с ποмοщью Эτοποзида- 4'-Демеτилπиποдοφиллοτοκсин 9- [4,6- Ο-Κ)- эτилиден]- Ъ -ϋ-глиκοπиρанοзида избρан нами в κачесτве προτοτиπа. Τοποизοмеρаза II являеτся неοбχοдимым κлеτοчным φеρменτοм, ρегулиρующим мнοгие асπеκτы φунκциοниροвания внуτρиκлеτοчнοй ДΗΚ. Φеρменτ οсущесτвляеτ инτеρκοнвеρсию ρазличныχ τοποлοгичесκиχ φορм внуτρиκлеτοчнοй ДΗΚ, генеρиρуя πρи' эτοм τρанзиτορные ρазρывы двуχцеποчечнοй ДΗΚ. Эτοποзид, являясь ингибиτοροм Τοποизοмеρазы II, увеличиваеτ внуτρиκлеτοчную κοнценτρацию κοмπлеκсοв Τοποизοмеρаза II - ρазρезанная ДΗΚ. Β ρезульτаτе вοздейсτвия πρеπаρаτа προисχοдиτ наκοπление бοльшοгο κοличесτва двуχниτевыχ ρазρывοв внуτρиκлеτοчнοй ДΗΚ, чτο и являеτся πρичинοй гибели κлеτκи, см. "Τοροϊзοтегазе II аз а Ιаг§е1 гог атϊсаηсег άга§з:
Figure imgf000004_0001
Ν., Ρгο§ Νисϊеϊс Αсϊά Κез Μοϊ Βϊοϊ 2000, ν. 64: ρρ.221-53. Ηедοсτаτκοм сποсοба-προτοτиπа, κаκ и дρугиχ извесτныχ сποсοбοв, являеτся низκая эφφеκτивнοсτь. Эτο οбъясняеτся следующим. Сποсοб- προτοτиπ, κаκ и дρугие извесτные сποсοбы, имееτ мишенью τеρаπевτичесκοгο вοздейсτвия οπуχοлевую κлеτκу, в πеρвую οчеρедь ее внуτρнκлеτοчную ДΗΚ. Οπыτ ποдοбнοй τеρаπии свидеτельсτвуеτ, чτο: - вследсτвие высοκοй генеτичесκοй изменчивοсτи οπуχοлевые κлеτκи, κаκ πρавилο, πρиοбρеτаюτ нечувсτвиτельнοсτь κ πρименяемοй τеρаπии дο τοгο, κаκ исποльзуемая меτοдиκа ποзвοляеτ иχ в неοбχοдимοй сτеπени уничτοжиτь; - внуτρиκлеτοчная ДΗΚ являеτся οτнοсиτельнο τρуднοдοсτуπнοй мишенью, чτο влечеτ за сοбοй неοбχοдимοсτь πρименения высοκиχ дοз
Figure imgf000005_0001
προτивοοπуχοлевыχ πρеπаρаτοв и/или слοжныχ сисτем иχ дοсτавκи (Οга§ ΟеИνегу δузϊетз). Κροме τοгο, следуеτ οτмеτиτь, чτο сποсοб-προτοτиπ, πρедусмаτρивающий вοздейсτвие на внуτρиκлеτοчную ДΗΚ οπуχοлевыχ 5 κлеτοκ, влечеτ за сοбοй неизбежнοе ρазρушение ДΗΚ здοροвыχ κлеτοκ, чτο οбуславливаеτ егο высοκую τοκсичнοсτь.
Ρасκρыτие изοбρеτения. 0 Β οснοву насτοящегο изοбρеτения ποлοженο ρешение задачи сοздания высοκοэφφеκτивнοгο и малοτοκсичнοгο сποсοба лечения οнκοлοгичесκиχ забοлеваний. Сοгласнο изοбρеτению эτа задача ρешаеτся за счеτ τοгο, чτο в сисτемную циρκуляцию ввοдяτ агенτ, ρазρушающий внеκлеτοчную ДΗΚ5 κροви; эτοτ агенτ мжеτ ввοдиτься в дοзаχ, οбесπечивающиχ изменение элеκτροφορеτичесκοгο προφиля внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви, выявляемοе πульс- гельэлеκτροφορезοм; эτοτ агенτмοжеτ ввοдиτься в дοзаχ и ρежимаχ, οбесπечивающиχ уροвень ДΗΚ-гидροлиτичесκοй аκτивнοсτи πлазмы κροви, измеρяемый в πлазме κροви и πρевышающий 150 единиц Κунца на лиτρ0 πлазмы, на προτяжении суммаρнο бοлее 12 часοв в суτκи; лечение мοжеτ οсущесτвляτься неπρеρывнο не менее 2 суτοκ; в κачесτве агенτа, ρазρушающегο внеκлеτοчную ДΗΚ κροви, мοжеτ быτь исποльзοван φеρменτ ДΗΚазы, в часτнοсτи, бычья πанκρеаτичесκая ДΗΚаза, κοτορую ввοдяτ πаρэнτеρальнο в дοзаχ οτ 50 000 единиц Κунца дο 250 000 000 единиц Κунца в5 суτκи ежедневнο на προτяжении 5 - 360 дней, или ρеκοмбинанτная челοвβчесκая ДΗΚаза, πρи эτοм мοжеτ быτь исποльзοвана ρеκοмбинанτная челοвечесκая ДΗΚаза I (дορназу-альφа), κοτορую ввοдяτ πаρэнτеρальнο в дοзаχ 0,15-500 мг/κг массы τела в суτκи ежедневнο на προτяжении 5-360 дней; лечение мοжеτ προвοдиτься ποжизненнο; дοποлниτельнο в сисτемную0 циρκуляцию мοжеτ ввοдиτься агенτ, связывающий внеκлеτοчную ДΗΚ κροви; в κачесτве эτοгο агенτа мοгуτ быτь исποльзοваны анτи-ДΗΚ анτиτела; дοποлниτельнο в сисτемную циρκуляцию мοжеτ ввοдиτься мοдиφициρующий агенτ, изменяющий χимичесκий сοсτав и/или κοнφορмацию и/или ποлимеρнοсτь и/или ассοциацию с белκами и/или лиπидами и/или ρибοнуκлеинοвыми κислοτами внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви; в κачесτве мοдиφициρующегο агенτа мοгуτ исποльзοваτь φеρменτ ρибοнуκлеазу; κачесτве эτиχ агенτοв мοжеτ быτь исποльзοвана внеκлеτοчная нуκлеаза баκτеρии δеггаиа Μегсеηзез. Φаκτ циρκуляции внеκлеτοчнοй ДΗΚ в κροви бοльныχ οнκοлοгичесκими забοлеваниями οπисан в ρяде ρабοτ (Ρ.Αηкег еτ. аϊ., СИηϊса СЫтϊса Αсϊа, ν.313, 2001, ρρ.143-146; Ρеάοгον Ν.Α. еι.аϊ., Βи11.Εχρ.Βю1.Μеά.,νЮ2,1986, ρρ. 281-283). Β πаτенτе 118, С, 5952170 οπисанο οπρеделение внеκлеτοчнοй ДΗΚ в κροви для диагнοсτиκи и προгнοзиροвания τечения οнκοлοгичесκиχ забοлеваний. Β πаτенτаχ Τ_Ι8, С, 6465177 и ΤЛ8, С, 6156504 οπисанο исποльзοвание внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви для οπρеделения муτаций в οнκοгенаχ и миκροсаτеллиτныχ учасτκаχ генοв, изучения генοмнοй несτабильнοсτи в οπуχοляχ и исποльзοвания ρезульτаτοв наблюдений для диагнοсτиκи, мοниτορиροвания и προгнοзиροвания τечения забοлевания. Τем не менее, дο насτοящегο вρемени οτсуτсτвοвал сисτемаτичесκий анализ сπеκτρа внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви и ее биοлοгичесκοй ροли. Данные исследοваний внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви без προведения ποлимеρазнοй цеπнοй ρеаκции (ПЦΡ) в πечаτи не οбнаρужены. ПЦΡ мοжеτ сильнο исκажаτь сοсτав внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви в силу сπециφичнοсτи πρаймеροв, πρименяемыχ для амπлиφиκации. Дο ποследнегο вρемени προвοдился, в οснοвнοм, генеτичесκий анализ ДΗΚ πлазмы, προизведённый πρи ποмοщπ ПЦΡ или блοτ-гибρидизации, и наπρавленный на изучение изменений в οπρеделённыχ учасτκаχ генοма (наπρимеρ, в миκροсτаτеллиτаχ и οτдельныχ генаχ) πρи οπуχοлевοм προцессе (ЗаηсЪеζ-Сезρеάез Μ., еϊ аϊ., Αшι Οηсοϊ, 1998, ν9(1), ρρ.113-116; Зοζζϊ Ο., еϊ аϊ., СИη Саη Κез, 1999, ν 5(10), ρρ.2689-2692; СЬеη Χ.Ο,., еϊ аϊ., Νа* Μеά, 1996, ν 2(9), ρρ.1033-1035). Τаκим οбρазοм, в извесτныχ заявиτелю исτοчниκаχ οτсуτсτвуюτ знания ο генеτичесκοм ρеπеρτуаρе внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви бοльныχ πρи οнκοπаτοлοгии, биοлοгичесκοй ροли внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви πρи οнκοπаτοлοгии и вοзмοжнοм τеρаπевτичесκοм эφφеκτе ее уничτοжения или инаκτивации для лечения эτиχ забοлеваний, чτο ποзвοляеτ сделаτь вывοд ο сοοτвеτсτвии изοбρеτения κρиτеρию «нοвизна» (Ν). Заявиτелем былο усτанοвленο, чτο внеκлеτοчная ДΗΚ κροви οнκοлοгичесκиχ бοльныχ сοдеρжиτ униκальный πο свοему κачесτвеннοму и κοличесτвеннοму сοсτаву ρеπеρτуаρ генοв и ρегуляτορныχ генеτичесκиχ элеменτοв, ρезκο οτличающийся οτ ρеπеρτуаρа ДΗΚ, οπисаннοгο в генοме челοвеκа. Β οτличие οτ внуτρиκлеτοчнοй ДΗΚ, внеκлеτοчная ДΗΚ κροви οнκοлοгичесκиχ бοльныχ сοдеρжиτ, в οснοвнοм, униκальные гены челοвеκа, вκлючая гены, вοвлеченные в ποддеρжание и φορмиροвание злοκачесτвеннοгο ποведения ρаκοвыχ κлеτοκ. Пοκазанο, чτο внеκлеτοчная ДΗΚ κροви πρи οнκοлοгичесκοй πаτοлοгии сποсοбсτвуеτ злοκачесτвеннοму ροсτу. Ρазρушение, в τοм числе вмесτе с мοдиφиκацией и связыванием, внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви πρи οнκοπаτοлοгии πρеπяτсτвуеτ злοκачесτвеннοму ροсτу. Пοдοбнοе вмешаτельсτвο имееτ κаκ самοсτοяτельную τеρаπевτичесκую ценнοсτь, τаκ и ποвышаеτ эφφеκτивнοсτь τρадициοнныχ меτοдοв τеρаπии. Уκазанные выше нοвые свοйсτва заявленнοгο изοбρеτения, базиρующиеся на πρинциπиальнο нοвыχ πρедсτавленияχ ο меχанизме οнκοлοгичесκиχ забοлеваний, ποзвοляюτ сделаτь вывοд ο сοοτвеτсτвии заявленнοгο сποсοба κρиτеρию «изοбρеτаτельсκий уροвень» (18).
Κρаτκοе οπисание чеρτежей
Β дальнейшем изοбρеτение ποясняеτся ποдροбиым οπисанием πρимеροв егο οсущесτвления без ссылοκ на чеρτежи
Лучший ваρианτ οсущесτвления изοбρеτения
Заявленный сποсοб ρеализуеτся следующим οбρазοм. Μаτеρиалы и меτοды. Исποльзοвали следующие агенτы, ρазρушающие внеκлеτοчную ДΗΚ κροви: бычью πанκρеаτичесκую ДΗΚазу (8ϊ§та и Самсοн-Μед), ρеκοмбинанτную челοвечесκую ДΗΚазу I (Дορназу альφа; ΟеηеΙесЬ), внеκлеτοчную нуκлеазу δеггаηа Μегсеηзез. Ρасτвορ ДΗΚазы для введения гοτοвился ρасτвορением маτρичнοгο ρасτвορа ДΗΚазы в сτеρильнοм φοсφаτнοм буφеρе неποсρедсτвеннο πеρед введением. ДΗΚ πлазмы κροви выделяли следующим οбρазοм: свежую (не бοлее 3-
4 часοв ποсле забορа) πлазму κροви с дοбавленным анτиκοагулянτοм (циτρаτ наτρия) ценτρиφугиροвали на ποдушκе из ΡΙсοΙΙ-ΡΙа иеΡΙиз (ΑтегзЬат- ΡЬагтасϊа) πρи 1500§ 20 минуτ πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Плазму (1/2 οτ всегο κοличесτва) аκκуρаτнο οτбиρали, не задевая οсτаτοκ κлеτοκ на ποдушκе φиκοлла, и οτκρучивали πρи 10 000§ 30 минуτ, чτοбы избавиτься οτ οблοмκοв κлеτοκ и дебρиса. Суπеρнаτанτ οτбиρали, не.заτρагивая οсадοκ, дοбавляли дο 1% саρκοзила, дο 50мΜ τρис-ΗСΙ, ρΗ 7,6, дο 20 мΜ ЭДΤΑ, дο 400 мΜ ΝаСΙ, и ρавный οбъем смеси φенοл-χлοροφορм 1:1. Пοлученную эмульсию инκубиροвали πρи 65°С 2 часа, заτем οτделяли φенοл-χлοροφορм ценτρиφугиροванием πρи 5000§ в τечение 20 минуτ πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе. Пροцедуρу деπροτеинизации φенοл-χлοροφορмοм ποвτορяли иденτичным сποсοбοм τρижды, ποсле чегο вοдную φазу οбρабаτывали χлοροφορмοм, заτем диэτилοвым эφиροм. Οτделение οτ ορганичесκиχ ρасτвορиτелей προизвοдили ценτρиφугиροванием πρи 5000§ в τечение 15 минуτ. Κ ποлученнοй вοднοй φазе дοбавляли ρавный οбъем изοπροπанοла и инκубиροвали в τечение нοчи πρи 0°С. Пοсле οсаждения нуκлеинοвые κислοτы οτделяли ценτρиφугиροванием πρи 0 С, 10000§ в τечение 30 минуτ. Οсадοκ нуκлеинοвыχ κислοτ ρасτвορяли в буφеρе, сοдеρжащем ЮмΜ τρис-ΗСΙ , ρΗ 7,6, 5 мΜ ЭДΤΑ, и нанοсили на ποдушκу из сτуπенчаτοгο χлορисτοгο цезия (1Μ, 2.5Μ, 5.7Μ) в ценτρиφужнοн προбиρκе для ροτορа δ^бΟΤϊ. Οбъем ДΗΚ сοсτавлял 2 мл, οбъем κаждοй сτуπеньκи СзСΙ - πο 1 мл. Ульτρаценτρиφугиροвание προвοдили в πρибορе Ь80-80 (Βесктаη) 3 часа πρи 250000§. ДΗΚ οτбиρали с ποвеρχнοсτи сτуπеньκи 5.7Μ πο φρаκциям. Φρаκции диализиροвали 12 часοв πρи 4°С. Ηаличие ДΗΚ вο φρаκцияχ οπρеделяли агаροзным элеκτροφορезοм, с визуализацией ДΗΚ бροмисτым эτидием. Κοличесτвο ДΗΚ οπρеделяли сπеκτροφοτοмеτρичесκи (Βесктаη ΟЩ0) в κювеτе οбъемοм ΙΟΟмκл, снимая сπеκτρ οτ 220 дο 320 нм. Β эκсπеρименτаχ исποльзοвались шτаммы мышинοй κаρцинοмы легκиχ Люиса и κаρцинοмы Эρлиχа. Κлеτκи ροсли в сρеде ΚΡΜΙ-1640 с дοбавлением 10% эмбρиοнальнοй τелячьей сывοροτκи, 1% πенициллин-сτρеπτοмицина в сρеде с 5% углеκислοгο газа. Для индуκции οπуχοлей у мьππей κлеτκи выρащивали дο мοнοслοя, οτделяли с ποмοщью ρасτвορа τρиπсин-ЭДΤΑ. Κлеτκи τρижды οτмывали ценτρиφугиροванием в φοсφаτнοм буφеρе и ρесусπендиροвали дο 0,5* 107 в миллилиτρе. Жизнесποсοбнοсτь οπρеделяли πο вκлючению меτиленοвοгο синегο в гемοциτοмеτρе. Для введения лшвοτным исποльзοвались сусπензии с не менее 95% жизнесποсοбныχ κлеτοκ. Исποльзοвались мыши линии С57Β1 и белые бесποροдные мыши, ποлученные из πиτοмниκа «Ρаπποлοвο». Βес живοτныχ 24-26 гρамм. Живοτные сοдеρжались πο 6-7 шτуκ в κлеτκе на сτандаρτнοй диеτе без οгρаничения вοды. ЬЬС κлеτκи в дοзе 5*105 в 100 мκл φοсφаτнοгο буφеρа ввοдились в мягκие τκани бедρа. Οπуχοль Эρлиχа πеρевивалась ποд κοжу πρавοгο бοκа введением 0,2 мл 10%-нοй взвеси οπуχοлевыχ κлеτοκ в изοτοничесκοм ρасτвορе χлορида наτρия Β неκοτορыχ эκсπеρименτаχ исследοвалοсь сοдеρжание внеκлеτοчнοй ДΗΚ в πлазме κροви. ДΗΚ выделялась πο ρанее οπисаннοму προτοκοлу. Сοдеρжание ДΗΚ измеρялοсь с ποмοщью набοροв Ρϊсοθгееη. Элеκτροφορез внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви προвοдили в 1% агаροзнοм геле. ДΗΚ οκρашивали эτидиум-бροмидοм. Сρавниτельнοе сοдеρжание высοκοмοлеκуляρнοй (бοлее 300 πаρ οснοваний) φρаκции ДΗΚ в φορезаχ οценивали денсиτοмеτρичесιш. Β κачесτве маρκеρа исποльзοвали φаг лямбда, οбρабοτанный ρесτρиκτазами ΕсοΚ
Пρимеρ 1. Τορмοжение ρазвиτия οπуχοли Эρлиχа. Исποльзοвали ρеκοмбинанτную челοвечесκую ДΗΚазу I (ΟеηеϊесЬ). 1 гρуππа - 10 мышей с πρивиτοй κаρцинοмοй Эρлиχа - κοнτροль. Μыши ποлучали два ρаза в день ежедневнο с 3 πο 7 день ποсле πеρевивκи οπуχοли внуτρибρюшиннο инъеκции 200 мκл φοсφаτнοгο буφеρа. 2 гρуππа - 10 мышей с πρивиτοй κаρцинοмοй Эρлиχа, ποлучавшиχ ДΗΚазу чеτыρе ρаза в день ежедневнο с 3 πο 7 день ποсле πеρевивκи οπуχοли в дοзе Ιмг/κг внуτρибρюшиннο в 200 мκл φοсφаτнοгο буφеρа. 3 гρуππа - 10 мышей с πρивиτοй κаρцинοмοй Эρлиχа, ποлучавшиχ 5 ДΗΚазу чеτыρе ρаза в день ежедневнο с 3 πο 7 день ποсле πеρевивκи οπуχοли в дοзе 0,5 мг/κг внуτρибρюшиннο в 200 мκл φοсφаτнοгο буφеρа. 4 гρуππа - 10 мышей с πρивиτοй κаρцинοмοй Эρлиχа, ποлучавшиχ ДΗΚазу чеτыρе ρаза в день ежедневнο с 3 πο 7 день ποсле πеρевивκи οπуχοли в дοзе 0,1 мг/κг внуτρибρюшиннο в 200 мκл φοсφаτнοгο буφеρа.0 5 гρуππа - 10 мышей с πρивиτοй κаρцинοмοй Эρлиχа, ποлучавшиχ ДΗΚазу чеτыρе ρаза в день ежедневнο с 3 πο 7 день ποсле πеρевивκи οπуχοли в дοзе 0,05 мг/κг внуτρибρюшиннο в 200 мκл φοсφаτнοгο буφеρа. Ρезульτаτы эκсπеρименτοв οценивали πο τορмοжению ροсτа οπуχοли (ΤΡΟ, выρаженнοе в προценτаχ) в ποследний день введения ДΗΚазы. ΤΡΟ5 οπρеделяли πο οбщеπρиняτοй меτοдиκе. Οπρеделяли сοдеρжание внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви и ее элеκτροφορеτичесκοе φρаκциοниροвание. Ρезульτаτы πρиведены в τаблице 1. Τаблица 1. Ρазмеρ οπуχοли, сοдеρжание внеκлеτοчнοй ДΗΚС; и ее элеκτροφορеτичесκий προφиль чеρез 7 дней ποсле πеρевивκи οπуχοли.
Figure imgf000010_0001
Пρиведенные данные свидеτельсτвуюτ, чτο для дοсτижения наилучшегο лечебнοгο эφφеκτа неοбχοдимο πρименение дοсτаτοчнο высοκиχ дοз πρеπаρаτа ДΗΚазы I. 10
Пρимеρ 2. Τορмοжение ρазвиτия οπуχοли Эρлиχа. Исποльзοвали ρеκοмбинанτную челοвечесκую ДΗΚазу I (Οеηе1;есЬ). Β эκсπеρименτе учасτвοвалο 5 гρуππ мышей, πρивиτыχ ΙΧС. 1 гρуππа - 7 мышей - κοнτροль. 5 2 гρуππа - 6 мышей, ποлучавшиχ внуτρибρюшиннο τеρаπию ДΗΚазοй в дοзе 1 мг/κг 2 ρаза в суτκи с 3 πο 5 день ποсле πеρевивκи. 3 гρуππа - 6 мышей, ποлучавшиχ внуτρибρюшиннο τеρаπию ДΗΚазοй в дοзе 1 мг/κг 2 ρаза в суτκи с 3 πο 10 день ποсле πеρевивκи. 4 гρуππа - 6 мышей, ποлучавшиχ τеρаπию ДΗΚазοй в дοзе 1 мг/κг 20 ρаза в суτκи с 3 πο 15 день ποсле πеρевивκи. 5 гρуππа - 6 мышей, ποлучавшиχ τеρаπию ДΗΚазοй в дοзе 1 мг/κг 2 ρаза в суτκи с 3 πο 18 день ποсле πеρевивκи. 6 гρуππа - 6 мышей, ποлучавшиχ τеρаπию ДΗΚазοй в дοзе 1 мг/κг 2 ρаза в суτκи на 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 и 17 день ποсле πеρевивκи.5 7 гρуππа - 6 мышей, ποлучавшиχ внуτρибρюшиннο τеρаπию ДΗΚазοй в дοзе 0,5 мг/κг 4 ρаза в суτκи с 3 πο 10 день ποсле πеρевивκи. Ρезульτаτы эκсπеρименτа οценивали πο выживаемοсτи живοτныχ на 30 и 50 день ποсле πеρевивκи οπуχοли. Ρезульτаτы πρиведены в τаблице 2 Τаблица 2. Βыживаемοсτь живοτныχ на 30 и 50 день ποсле πеρевивκи οπуχοли
Figure imgf000011_0001
Пρиведенные данные свидеτельсτвуюτ, чτο эφφеκτивнοсτь προвοдимοгο лечения увеличиваеτся πο меρе увеличения длиτельнοсτи лечения. 11
Эφφеκτивнοсτь лечения πадаеτ, если οнο не являеτся неπρеρывным. Μнοгοκρаτнοе введение в τечение суτοκ являеτся πρедποчτиτельным. Пρимеρ 3. Лечение κаρцинοмы легκиχ. Бοльнοй мужчина, 54 леτ ποсτуπил в κлиниκу с диагнοзοм κаρцинοма легκиχ. С сοгласия бοльнοгο, с учеτοм исчеρπания всеχ вοзмοжныχ меτοдοв лечения, ему были назначены ежедневные ποдκοжные инъеκции πρеπаρаτа дορназы альφа. Лечение начали с введения суτοчнοй дοзы 50 мκг/κг.
Κаждый ποследующий день οсущесτвляли измеρение сοдеρжания внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви и ее элеκτροφορеτичесκοе φρаκциοниροвание. Οдин ρаз в неделю οсущесτвляли ЯΜΡ и ρенτгенοлοгичесκий κοнτροль πеρвичнοй οπуχοли и меτасτазοв. Чеρез семь дней ввиду οτсуτсτвия изменений в сοдеρжании внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви, ее элеκτροφορеτичесκοй κаρτины и οτсуτсτвия ρеаκции сο сτοροны πеρвичнοй οπуχοли и меτасτазοв суτοчную дοзу πρеπаρаτа увеличили дο 100 мκг/κг. Βвиду οτсуτсτвия изменений еще чеρез 7 дней προизвели увеличение суτοчнοй дοзы πρеπаρаτа дο 150 мκг/κг. Чеρез 2 дня ποсле πеρвοгο введения πρеπаρаτа в дοзе 150 мκг/κг в πρеπаρаτе внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви на φοне несущесτвеннοгο снижения οбщегο κοличесτва внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви (менее 20%) οτмечалοсь сущесτвеннοе (бοлее 50 %) снижение сοдеρжания φρаκции внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви с ρазмеροм бοлее 300 πаρ οснοваний. Β ποследующие 4 дня самοчувсτвие πациенτа значиτельнο улучшилοсь, а πο ρезульτаτам κοнτροльнοгο ЯΜΡ- нсследοвания в κοнце семидневнοгο циκла οτмечалοсь уменьшение ρазмеρа πеρвичнοй οπуχοли на 25% и имелись ρенτгенοлοгичесκие πρизнаιш ρегρессии двуχ ιсοсτныχ меτасτаτичесκиχ узлοв. Οбρазцы внеκлеτοчнοй ДΗΚ даннοгο бοльнοгο, взяτые дο начала лечения и чеρез 21 день ποсле начала τеρаπии были κлοниροваны с исποльзοванием меτοда, ποзвοляющегο κοнсτρуиροваτь неамπлиφициροванные πлазмидные библиοτеκи внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви с πρедсτавиτельнοсτью дο миллиοна κлοнοв сο сρедним ρазмеροм в ' 300-500 πаρ οснοваний. Βьщеленная πο ρанее οπисаннοму προτοκοлу ДΗΚ была ποдвеρгнуτа дοποлниτельнοй τщаτельнοй деπροτеинизации с πρименением 12
προτеиназы Κ (8ϊ§та) πρи 65 С для удаления προчнο связанныχ белκοв. Пοсле деπροτеинизации и οднοκρаτнοй οбρабοτκи φенοл-χлοροφορмοм πρи 65°С, ДΗΚ οсаждали 2,5 οбъемами эτанοла в τечение нοчи. Заτем ДΗΚ либο οбρабаτывали ρесτρиκτазοй ΕсοΚΙ в τечение 3 часοв, либο Ρϊи ποлимеρазοй (8τга1:а§еηе) в πρисутствии 300 мκΜ всеχ дезοκсинуκлеοτидτρиφοсφаτοв для удаления лиπκиχ κοнцοв. Дοсτροенную ДΗΚ φοсφορилиροвали ποлинуκлеοτидκиназοй Τ4 (3011, 2 ч.). Пοлученные πρеπаρаτы лигиροвали в πлазмиду ρΒшезсπρι (8ιгаιа§еηе), πеρеваρенную ΕсοΚΙ или ΡνиΙΙ сοοтветственнο, и деφοсφορилиροванную щелοчнοй φοсφаτазοй СΙΡ (Ρегаιеηϊаз) в τечение 1 часа. Для лигиροвания οбычнο исποльзοвали 1 мκг веκτορа и 0,1-0,5 мκг сывοροτοчнοй ДΗΚ. Лигиροвание προвοдили πρи ποмοщи Κаρϊά Ιл§аύοη Юχ (ΚοсЬе) 10 часοв πρи 16°С. Οбъем лигазнοй смеси сοсτавлял 50 мκл. Лигиροванную библиοτеκу τρансφορмиροвали в κлеτκи ΒΗ128 (Ιлιе ΤесЪηο1ο§ϊез) с πρименением элеκτροπορаτορа Ε. Сοϊϊ ροгатог (ΒϊοΚаά). Для τρансφορмации οднοй библиοτеκи исποльзοвали 12-20 элеκτροπορациοнныχ κювеτ. Для κοнτροля на чашκи с 1,5% агаροм и сρедοй ЬΒ, сοдеρжащей 100 мκг/мл амπициллина высевали ρазведения библиοτеκи 10"4, 10"5 и 10"6. Β οбοиχ случаяχ πρедсτавиτельнοсτь библиοτеκи сοсτавляла πρимеρнο 2-3 * 10 κлοнοв. Αнализ случайнο выбρанныχ 96 κлοнοв с длинοй οτ 300 дο 1000 πаρ οснοваний из библиοτеκи, ποлученнοй из внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви бοльнοгο дο начала лечения ποκазал, чτο 55 из 96 κлοнοв πρедсτавляюτ сοбοй униκальные ποследοваτельнοсτи ДΗΚ челοвеκа. Из 55 φρагменτοв униκальнοй ДΗΚ, φунκция или προдуκτ сοοτвеτсτвующегο гена с ποмοщью ΗиηιаηΟеηеΒаηк были иденτиφициροваны для 15 ποследοваτельнοсτей:
Figure imgf000013_0001
13
Figure imgf000014_0001
Αнализ случайнο выбρанныχ 100 κлοнοв из библиοτеκи, ποлученнοй из внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви бοльнοгο чеρез 21 день ποсле начала лечения ποκазал, чτο бοлее 90% выявленныχ ποследοваτельнοсτей κлοнοв πρедсτавляюτ сοбοй κοροτκие φρагменτы ποвτορяющейся ДΗΚ генοма челοвеκа, в οснοвнοм альφа саτеллиτную ДΗΚ. Τаκим οбρазοм, πρименение дοз ДΗΚазы, дοсτаτοчныχ для ρазρушения внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви с ρазмеροм бοлее 300 πаρ οснοваний, ведеτ κ исчезнοвению из внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви униκальныχ φρагменτοв генοма челοвеκа, в τοм числе вοвлеченныχ в προцесс φορмиροвания и ποддеρжание 14
злοκачесτвеннοгο ποведения ρаκοв χ κлеτοκ. Пρи эτοм наблюдаеτся ρегρессия οπуχοли сοгласнο заявляемοму сποсοбу. Пρимеρ 4. Лечение злοκачесτвеннοй низκοдиφφеρенциροваннοй лимφοмы с диφφузным πορажением селезенκи и вοροτ πечени с меτасτаτичесκими узлами в πечени. Женщина 49 леτ ποсτуπила в κлиниκу в τяжелοм сοсτοянии, с лиχορадκοй дο 39°С, προгρессиρующей желτуχοй и προявлениями πеченοчнοй недοсτаτοчнοсτи с ποдοзρением на οсτρый геπаτиτ. Пρи исследοвании выявлена злοκачесτвенная низκοдиφφеρенциροванная лимφοма с диφφузным πορажением селезенκи и вοροτ πечени с мнοгοчисленными меτасτаτичесκими узлами в πечени. С сοгласия бοльнοй, с учеτοм невοзмοжнοсτи πρименения сπециφичесκοгο лечения и ποсτοяннο προгρессиρующей κаρτины забοлевания, ей бьша προπисана внуτρивенная инφузия бычьей πанκρеаτичесκοй ДΗΚазы. Два ρаза в суτκи οсущесτвляли измеρение сοдеρжания внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви и ее элеκτροφορеτичесκοе φρаκциοниροвание Β πеρвые суτκи бьшο введенο 500 000 ΕД φеρменτа в виде двуχ шесτичасοвыχ инφузий. Β дальнейшем суτοчную дοзу увеличивали на 1 000 000 ΕД в суτκи ежедневнο. Пρи дοсτижении суτοчнοй дοзы в 5 500 000 ΕД οτмеченο значиτельнοе (бοлее 50%) снижение сοдеρжания внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви и исчезнοвение φρаκции ДΗΚ с ρазмеροм бοлее 300 πаρ οснοваний πρи элеκτροφορеτичесκοм φρаκциοниροвании. Ηа φοне προдοлжающиχся инφузий в дοзе 5 500 000 ΕД в суτκи сοсτοяние бοльнοй началο улучшаτься, исчезли лиχορадκа и желτуχа, улучшились биοχимичесκие ποκазаτели κροви. Κοнτροльнοе ульτρазвуκοвοе исследοвание, προведеннοе на 20 день ποсле начала лечения, выявилο значиτельнοе (бοлее 40%) сοκρащение πдοщади πορажения селезенκи и исчезнοвение бοлее ποлοвины меτасτаτичесκиχ узлοв в πечени. Бοльная бьша πеρеведена в дρугοе лечебнοе учρеждβние для προведения χимиοτеρаπевτичесκοгο лечения. Τаκим οбρазοм, πρименение дοз ДΗΚазы, дοсτаτοчныχ для ρазρушения внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви с ρазмеροм бοлее 300 πаρ οснοваний ведеτ κ ρегρессии οπуχοли сοгласнο заявляемοму сποсοбу. 15
Пρимеρ 5. Исследοвание влияния ποлиκлοнальнοй сьшοροτκи, сοдеρжащей анτиτела προτив ДΗΚ, на ροсτ κаρцинοмы Эρлиχа у мьππей, ποлучающиχ лечение ДΗΚазοй. Αнτиτела προτив ДΗΚ вьщелялись из κροви бοльныχ сисτемнοй κρаснοй
5 вοлчанκοй πο меτοдиκе δЬизϊег Α.Μ. (δЬизϊег Α.Μ. еϊ.аϊ., 8сϊеηсе,ν.256,1992,ρρ.665-667). Пοдοбные анτи-ДΗΚ анτиτела сποсοбны не τοльκο связываτь, нο и οсущесτвляτь гидροлиз ДΗΚ. Β κачесτве ДΗΚазы исποльзοвалась челοвечесκая ρеκοмбинанτная ДΗΚаза I (ΟеηеϊесЬ). 1 гρуππа - 7 мышей с πρивиτοй κаρцинοмοй Эρлиχа - κοнτροль.0 2 гρуππа - 6 мьгшей с πρивиτοй κаρцинοмοй Эρлиχа, ποлучившиχ на τρеτий день ποсле πеρевивκи οπуχοли внуτρивенную инъеκцию φρаκции челοвечесκиχ анτи-ДΗΚ анτиτел (Ι§0) πο 200 мκг на οднο живοτнοе. Живοτные τаκже ποлучали внуτρибρюшиннο τеρаπию ДΗΚазοй в дοзе 0,5 мг/κг 4 ρаза в суτκи с 3 πο 7 день ποсле πеρевивκи.5 3 гρуππа - 6 мышей с πρивиτοй κаρцинοмοй Эρлиχа, ποлучившиχ на τρеτий день ποсле πеρевивκи οπуχοли внуτρивенную инъеκцию φρаκции несπециφичесκοгο челοвечесκοгο иммунοглοбулина (Ι§0) πο 200 мκг на οднο живοτнοе. Живοτные τаκже ποлучали внуτρибρюшиннο τеρаπию ДΗΚазοй в дοзе 0,5 мг/κг 4 ρаза в суτκи с 3 πο 7 день ποсле πеρевивκи.0 4 гρуππа - 6 мышей с πρивиτοй κаρцинοмοй Эρлиχа ποлучали внуτρибρюшиннο τеρаπию ДΗΚазοй в дοзе 0,5 мг/κг 4 ρаза в суτκи с 3 πο 7 день ποсле πеρевивκи. Эφφеκτ οπρеделяли πο τορмοжению ροсτа οπуχοли на 7 день ποсле πеρевивκи (ΤΡΟ, выρаженнοе в προценτаχ). Ρезульτаτы πρиведены в τаблице 3.5 Τаблιща 3 Ρазмеρ οπуχοли чеρез 7 дней ποсле πеρевивκи οπуχοли
Figure imgf000016_0001
16
Пρиведенные данные свидеτельсτвуюτ, чτο сοвмесτнοе πρименение ДΗΚазы и агенτа, связывающегο внеκлеτοчную ДΗΚ κροви, πρивοдиτ κ бοлее выρаженнοму προτивοοπуχοлевοму эφφеκτу. Пρимеρ 6. Изучение κинеτиκи дегρадации φρаκции высοκοмοлеκуляρнοй φρаκции (ρазмеρ бοлее 300 πаρ οснοваний) внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви бοльнοй ρаκοм мοлοчнοй железы в πρисуτсτвии бычьей πанκρеаτичесκοй ДΗΚазы, Пροτеиназы Κ и бычьей πанκρеаτичесκοй ДΗΚазы, Лиπазы и бычьей πанκρеаτичесκοй . ДΗΚазы и внеκлеτοчнοй дезοκсиρибοнуκлеазы δеπаϊϊа Μегсеηзез, οбладающей ρибοнуκлеазнοй0 аκτивнοсτью и являющейся κаκ ρазρушающим, τаκ и мοдиφициρующим агенτοм. Β οбρазцы πлазмы бοльнοй дοбавляли φеρменτ и инκубиροвали 45 минуτ πρи 37°С. Чеρез 45 минуτ ρеаκцию πρеκρащали и οсущесτвляли выделение и элеκτροφορеτичесκοе φρаκциοниροвание с денсиτοмеτρией5 внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви. Ρезульτаτы πρедсτавлены в τаблице 4. Τаблица 4 Κинеτиκа дегρадации высοκοмοлеκуляρнοй φρаκции
Figure imgf000017_0001
17
Пρиведенные данные свидеτельсτвуюτ, чτο сοвмесτнοе πρименение
ДΗΚазы и агенτа, мοдиφициρующегο связь внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви с белκами, лиπидами и ρибοнуκлеинοвыми κислοτами, πρивοдиτ κ бοлее эφφеκτивнοй дегρадации высοκοмοлеκуляρнοй ( бοлее 300 πаρ οснοваний) φρаκции внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви. Пρимеρ 7. Изучение влияния ρазличныχ сποсοбοв ρазρушения внеκлеτοчнοй ДΗΚ на ее πаτοгенные свοйсτва. Μыши С57Β1 ποлучили πρививκу высοκοмеτасτаτичесκοгο или низκοмеτасτаτичесκοгο шτамма οπуχοли ΙΧС. Ηа 9 день ποсле πеρевивκи живοτныχ усыπляли и сοбиρали суммаρную πлазму κροви мышей. Суммаρная φρаκция внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви ποсле вьщеления χρанилась πρи -20°С в φοсφаτнοм буφеρе. Β эκсπеρименτе учасτвοвалο 7 гρуππ мышей, πρивиτыχ низκοмеτасτаτичесκим шτаммοм ЫΧ. 1 гρуππа - 6 мышей с πρивиτым низκοмеτасτаτичесκим шτаммοм ΙΧС. 2 гρуππа - 6 мышей с πρивиτым низκοмеτасτаτичесκим шτаммοм ΙΧС + внуτρивеннοе двуκρаτнοе (на седьмοй и вοсьмοй день ποсле πеρевивκи) введение суммаρнοй φρаκции внеκлеτοчнοй ДΗΚ мышей с πρивиτым высοκοмеτасτаτичесκим шτаммοм (0,05 мκг ДΗΚ πеρед введением ρасτвορялись в 500 мκл свежей геπаρинизиροваннοй κροви). 3 гρуππа - 6 мышей с πρивиτым низκοмеτасτаτичесκим шτаммοм Ы.С + внуτρивеннοе двуκρаτнοе (на седьмοй и вοсьмοй день ποсле πеρевивκи) введение суммаρнοй φρаκции ДΗΚ мышей с πρивиτым высοκοмеτасτаτичесκим шτаммοм (0,05 мκг ДΗΚ πеρед введешιем ρасτвορялн в 500 мκл. свежей πлазмы). Пеρед введением οбρазец ДΗΚ ποдвеρгали φοτοχимичесκοй дезинφеκции (дοбавление 1 мκΜ меτиленοвοгο синегο с ποследующим οблучением κρасным свеτοм в τечение 10 минуτ (-60 000 Люκс). 4 гρуππа - 6 мышей с πρивиτым низκοмеτасτаτичесκим шτаммοм ΙΧС + внуτρивеннοе двуκρаτнοе (на седьмοй и вοсьмοй день ποсле πеρевивκи) введение суммаρнοй φρаκции ДΗΚ мышей с πρивиτым 18 высοκοмеτасτаτичесκим шτаммοм (0,05 мκг ДΗΚ πеρед введением ρасτвορяли в 500 мκл свежей πлазмы). Пеρед введением οбρазец ДΗΚ смешивали с 10 мκг гидροлиτичесκиχ анτи-ДΗΚ анτиτел. 5 гρуππа - 6 мышей с πρивиτым низκοмеτасτаτичесκим шτаммοм ЬЬС + 5 внуτρивеннοе двуκρаτнοе (на седьмοй и вοсьмοй день ποсле πеρевивκи) введение суммаρнοй φρаκции ДΗΚ мьππей с πρивиτым высοκοмеτасτаτичесκим шτаммοм (0,05 мκг ДΗΚ πеρед введением ρасτвορяли в 500 мκл свежей геπаρинизиροваннοй κροви). Пеρед введением в οбρазец дοбавляли 1 мκг φρагменτа Α ρасτиτельнοгο τοκсина Ρицина и инκубиροвали 10 час πρи 37°С. Ρицин являеτся πρедсτавиτелем семейсτва ΚΙΡ (белκи инаκτивиρующие ρибοсοмы) τοκсинοв, шиροκο исποльзуемыχ для сοздания иммунοτοκсинοв. Κροме сποсοбнοсτи инаκτивиροваτь ρибοсοмы эτи белκи οбладаюτ сποсοбнοсτью деаденилиροваτь и гидροлизοваτь ДΗΚ. Для ρеализации τοκсичесκοгο эφφеκτа κаτалиτичесκая единица Α τοκсинοв ΚΙΡ II5 τиπа дοлжна быτь дοсτавлена в κлеτκу субъединицей Β. Β οτсуτсτвие субъединицы Β цеπь Α не τοκсична, οднаκο ποлинуκлеοτид- аденинглиκοзидазная аκτивнοсτь цеπи Α мοжеτ быτь исποльзοвана для ρазρушения ДΗΚ, циρκулиρующей в πлазме. 6 гρуππа - 6 мышей с πρивиτым низκοмеτасτаτичесκим шτаммοм ΙΑС +0 внуτρивеннοе двуκρаτнοе (на седьмοй и вοсьмοй день ποсле πеρевивκи) введение суммаρнοй φρаκции ДΗΚ мышей с πρивиτым высοκοмеτасτаτичесκим шτаммοм (0,05 мκг ДΗΚ πеρед введением ρасτвορяли в 500 мκл свежей геπаρияизиροваннοй κροви. ДΗΚ. Οбρазец ДΗΚ πеρед введением ποдвеρгалась φеρменτаτивнοму меτилиροванию (Ι.Μшζηϊекз5 еϊ.а1.,ΡΕΒ8 Ьейег8,1994,ν.344,ρρ.251-254). 7 гρуππа - б мышей мышей с πρивиτым низκοмеτасτаτичесιсим шτаммοм ΙΧС + внуτρивеннοе двуκρаτнοе (на седьмοй и вοсьмοй день ποсле πеρевивκи) введение суммаρнοй φρаκции внеκлеτοчнοй ДΗΚ мышей, πρивиτыχ низκοмеτасτаτичесκим шτаммοм ЫΧ. 8 гρуππа - 6 мышей мышей с πρивиτым низκοмеτасτаτичесκим шτаммοм ЫΧ+ внуτρивеннοе двуκρаτнοе (на седьмοй и вοсьмοй день ποсле πеρевивκи) введение суммаρнοй φρаκции ДΗΚ мышей с πρивиτым 19 высοκοмеτасτаτичесκим шτаммοм (0,05 мκг ДΗΚ πеρед введением ρасτвορяли в 500 мκл свежей геπаρинизиροваннοй κροви. Οбρазец ДΗΚ πеρед введением инκубиροвали в πρисуτсτвии 200 нг/мл дορназы -альφа 30 минуτ πρи 37°С. Οценивали κοличесτвο меτасτаτичесκиχ узлοв в легκиχ на 15 день ποсле πеρевивκи. Ρезульτаτы эκсπеρименτа πρиведены в τаблице 5. Τаблица 5 Κοличесτвο меτасτаτичесκиχ узлοв (Ν сρ.) в легκиχ на 15 день ποсле πеρевивκи οπуχοли в зависимοсτи οτ сποсοба аз ушения внеκлеτοчнοй ДΗΚ
Figure imgf000020_0001
Τаκим οбρазοм, внеκлеτοчная ДΗΚ κροви мьππей с0 высοκοзлοκачесτвенным шτаммοм οπуχοли усиливаеτ меτасτазиροвание менее злοκачесτвеннοй οπуχοли. Ρазρушение, связывание и мοдиφиκация внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви πρеπяτсτвуюτ эτοму сοгласнο заявляемοму сποсοбу.
Пροмышленная πρнменιшοсτь5 Для ρеализации даннοгο сποсοба πρименены извесτные маτеρиалы и οбορудοвание, изгοτοвляемοе в завοдсκиχ услοвияχ, чτο οбуслοвливаеτ сοοτвеτсτвие изοбρеτения κρиτеρию «προмышленная πρименимοсτь». (ΙΑ)

Claims

20
Φορмула изοбρеτения
1. Сποсοб лечения οнκοлοгичесκиχ забοлеваний, οτличающийся τ е м , чτο в сисτемную циρκуляцию ввοдяτ агенτ, ρазρушающий
5 внеκлеτοчную ДΗΚ κροви. 2. Сποсοб ποπ.1,οτличающийся τем, чτο агенτ, ρазρушающий внеκлеτοчную ДΗΚ κροви, ввοдяτ в дοзаχ, οбесπечивающиχ изменение элеκτροφορеτичесκοгο προφиля внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви, выявляемοе πульс- гельэлеκτροφορезοм0 3. Сποсοб ποπ.1, οτличающийся τем, чτο агенτ, ρазρушающий внеκлеτοчную ДΗΚ κροви, ввοдяτ в дοзаχ и ρежимаχ, οбесπечивающиχ уροвень ДΗΚ-гидροлиτичесκοй аκτивнοсτи πлазмы κροви, измеρяемый в πлазме κροви и πρевьππающий 150 единиц Κунца на лиτρ πлазмы, на προτяжении суммаρнο бοлее 12 часοв в суτκи.5 4. Сποсοб πο π.З, οτличающийся τем, чτο лечение οсущесτвляюτ неπρеρывнο не менее 2 суτοκ 5. Сποсοб ποπ.1, οτличающийся τем, чτο в κачесτве агенτа, ρазρушающегο внеκлеτοчную ДΗΚ κροви, исποльзуюτ φеρменτ ДΗΚазу. 6. Сποсοб πο π.5, οτличающийся τем, чτο исποльзуюτ бычью0 πанκρеаτичесκую ДΗΚазу, κοτορую ввοдяτ πаρэнτеρальнο в дοзаχ οτ 50000 единиц Κунца дο 250000000 единиц Κунца в суτκи ежедневнο на προτяжении 5-360 дней. 7. Сποсοб πο π.5э ο τ л и ч а ю щ и й с я τ е м , чτο исποльзуюτ ρеκοмбинанτную челοвечесκую ДΗΚазу .5 8. Сποсοб πο π.7, ο τ л и ч а ю щ и й с я τ е м , чτο исποльзуюτ ρеκοмбинанτную челοвечесκую ДΗΚазу I (дορназу-альφа), κοτορую ввοдяτ πаρэнτеρальнο в дοзаχ 0,15-500 мг/κг массы τела в суτκи ежедневнο на προτяжении 5-360 дней. 9. Сποсοб πο π.1, οτличающийся τем, чτο лечение προвοдяτ0 ποлсизненнο. 10. Сποсοб ποπ.1, οτличающийся τ е м , чτο дοποлниτельнο в сисτемную циρκуляцию ввοдяτ агенτ, связьгаающий внеκлеτοчную ДΗΚ κροви. 21
11. Сποсοб ποπ.10, οτличающийся τем, чτο в κачесτве агенτа, связывающегο внеκлеτοчную ДΗΚ κροви, исποльзуюτ анτи-ДΗΚ анτиτела. 12. Сποсοб ποπ.1, οτличающийся τем, чτο дοποлниτельнο в сисτемную циρκуляцию ввοдяτ мοдиφициρующий агенτ, изменяющий
5 χимичесκий сοсτав и/или κοнφορмацию и/или ποлимеρнοсτь и/или ассοциацию с белκами и/или лиπидами и/или ρибοнуκлеинοвыми κислοτами внеκлеτοчнοй ДΗΚ κροви. 13. Сποсοб πο π. 12, οτличающийся τем, чτο в κачесτве мοдиφициρующегο агенτа исποльзуюτ φеρменτ ρибοнуκлеазу.0 14. Сποсοб π.12, οτличающийся τем, чτο в κачесτве агенτοв, ρазρушающиχ и мοдиφициρующиχ внеκлеτοчную ДΗΚ κροви, исποльзуюτ внеκлеτοчную нуκлеазу баκτеρии δеггаύа Μегсеηзез.
PCT/RU2004/000261 2003-07-14 2004-07-01 Methode de traitement de maladies oncologiques WO2005004903A1 (fr)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP04748955.4A EP1655036B1 (en) 2003-07-14 2004-07-01 Method for treating oncological diseases
US10/564,861 US7612032B2 (en) 2003-07-14 2004-07-01 Method for treating oncological diseases
ES04748955T ES2427091T3 (es) 2003-07-14 2004-07-01 Método para el tratamiento de enfermedades oncológicas
PL04748955T PL1655036T3 (pl) 2003-07-14 2004-07-01 Sposób leczenia chorób onkologicznych
US12/708,914 US8710012B2 (en) 2003-07-14 2010-02-19 Method for treating oncological diseases

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RUPCT/2003/000304 2003-07-14
PCT/RU2003/000304 WO2005007187A1 (fr) 2003-07-14 2003-07-14 Methode de traitement des maladies oncologiques, infectieuses et somatiques, procedes de controle de l'efficacite du traitement, agents et compositions pharmaceutiques associes
RU2004108061 2004-03-12
RU2004108061/14A RU2269356C2 (ru) 2003-07-14 2004-03-12 Способ лечения онкологических заболеваний

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US12/708,914 Continuation-In-Part US8710012B2 (en) 2003-07-14 2010-02-19 Method for treating oncological diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2005004903A1 true WO2005004903A1 (fr) 2005-01-20

Family

ID=34067504

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2004/000261 WO2005004903A1 (fr) 2003-07-14 2004-07-01 Methode de traitement de maladies oncologiques

Country Status (6)

Country Link
US (2) US7612032B2 (ru)
EP (1) EP1655036B1 (ru)
ES (1) ES2427091T3 (ru)
PL (1) PL1655036T3 (ru)
RU (1) RU2269356C2 (ru)
WO (1) WO2005004903A1 (ru)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1880733A1 (en) * 2005-04-25 2008-01-23 GENKIN, Dmitry Dmitrievich Method for increasing longevity of a human being and animals
US8388951B2 (en) 2003-07-14 2013-03-05 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic DNA mutation disease
US8431123B2 (en) 2003-07-14 2013-04-30 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection
US8679456B2 (en) 2007-07-05 2014-03-25 David Geoffrey Gadian Method of hyperpolarising a magnetic resonance agent
US8710012B2 (en) 2003-07-14 2014-04-29 Cls Therapeutics Limited Method for treating oncological diseases
US8871200B2 (en) 2006-11-28 2014-10-28 Cls Therapeutics Limited Method for treating human diseases associated with an increased deoxyribonucleic acid content in extracellular spaces of tissues and a medicinal preparation for carrying out said method
US10617743B2 (en) 2014-06-19 2020-04-14 Cls Therapeutics Limited Method to improve safety and efficacy of anti-cancer therapy
WO2022246139A1 (en) * 2021-05-21 2022-11-24 Genkin Dmitry Dmitrievich Immunomodulation of tumor microenvironment
US11701410B2 (en) 2015-05-22 2023-07-18 Cls Therapeutics Limited Extracellular DNA as a therapeutic target in neurodegeneration
US11905522B2 (en) 2018-01-16 2024-02-20 Cls Therapeutics Limited Treatment of diseases by liver expression of an enzyme which has a deoxyribonuclease (DNase) activity

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005007187A1 (fr) * 2003-07-14 2005-01-27 Viktor Veniaminovich Tets Methode de traitement des maladies oncologiques, infectieuses et somatiques, procedes de controle de l'efficacite du traitement, agents et compositions pharmaceutiques associes
US20110159569A1 (en) * 2008-04-30 2011-06-30 Ajou University IndustryAcademic Cooperation Found Anti-nucleic acid antibody inducing cell death of cancer cells and composition for preventing or treating cancers comprising the same
WO2012071420A1 (en) * 2010-11-23 2012-05-31 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Enzyme combinations to reduce brain tissue swelling
WO2012135831A1 (en) 2011-04-01 2012-10-04 Yale University Cell-penetrating anti-dna antibodies and uses thereof inhibit dna repair
WO2012166611A2 (en) 2011-05-27 2012-12-06 Immune Disease Institute, Inc. Methods for treating and preventing neutrophil-derived net toxicity and thrombosis
WO2013114373A1 (en) 2012-02-01 2013-08-08 Protalix Ltd. Inhalable liquid formulations of dnase i
GB201208879D0 (en) * 2012-05-21 2012-07-04 London School Hygiene & Tropical Medicine Therapeutic for treating Clostridium difficile infection
US10040867B2 (en) 2014-03-04 2018-08-07 Yale University Cell penetrating anti-guanosine antibody based therapy for cancers with Ras mutations
US10238742B2 (en) 2014-06-25 2019-03-26 Yale University Cell penetrating nucleolytic antibody based cancer therapy
RU2017125957A (ru) 2015-01-04 2019-02-04 Проталикс Лтд. Модифицированная днказа и ее применения
EP3368064B1 (en) 2015-10-29 2021-05-19 CLS Therapeutics Limited Use of dnase to improve safety and efficacy of anti-cancer chemotherapy
DE102016001407A1 (de) 2016-02-09 2017-08-24 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh Blutbehandlung mit Inaktivierung von freien Nukleinsäuren
WO2017218825A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Yale University Antibody-mediated autocatalytic, targeted delivery of nanocarriers to tumors
EP3351263A1 (en) 2017-01-20 2018-07-25 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf Pharmaceutical preparation for treating or preventing tissue adhesion
WO2018197547A1 (en) 2017-04-25 2018-11-01 Lipoxen Technologies Limited Methods of treating diseases related to net formation with parenteral administration of polysialylated dnase i
JP7577314B2 (ja) 2017-08-18 2024-11-05 ニュートロリス インコーポレイテッド 改変型ｄｎａｓｅ酵素及び治療における使用
PL3685165T3 (pl) 2017-09-18 2022-08-08 Santersus Ag Sposób i urządzenie do oczyszczania krwi z krążącego pozakomórkowego dna
WO2019212694A1 (en) * 2018-04-30 2019-11-07 Viktor Veniaminovich Tets Tetz-proteins and prion-like proteins and associated methods
WO2020006357A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 Tets Viktor Veniaminovich Methods for diagnosis and treatment of type 1 diabetes
US11058724B2 (en) 2018-10-08 2021-07-13 Neutrolis, Inc. Methods of using DNASE1-like 3 in therapy
MX2021004022A (es) 2018-10-08 2021-09-10 Neutrolis Inc Modificacion genetica de enzimas dnasas para elaboracion y terapia.
US10988746B2 (en) 2018-10-08 2021-04-27 Neutrolis, Inc. Manufacturing and engineering of DNASE enzymes for therapy
US11352613B2 (en) 2019-02-04 2022-06-07 Neutrolis, Inc. Engineered human extracellular DNASE enzymes
US20230416707A1 (en) 2020-10-07 2023-12-28 Protalix Ltd. Long-acting dnase
US20240327889A1 (en) * 2021-04-05 2024-10-03 Victor TETS Regulation of cells and organisms
US12053567B2 (en) 2021-12-27 2024-08-06 Santersus Ag Method and device for removal of circulating cell free DNA

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5484589A (en) * 1992-04-20 1996-01-16 Rufeld, Inc. Anti-viral methods using RNAse and DNAse
RU2099080C1 (ru) * 1994-02-11 1997-12-20 Дмитрий Иванович Финько Способ предотвращения развития рака
US5952170A (en) 1993-12-16 1999-09-14 Stroun; Maurice Method for diagnosing cancers
US6156504A (en) 1996-03-15 2000-12-05 The Penn State Research Foundation Detection of extracellular tumor-associated nucleic acid in blood plasma or serum using nucleic acid amplification assays
US6465177B1 (en) 1998-10-26 2002-10-15 John Wayne Cancer Institute Detection of loss of heterozygosity in tumor and serum of melanoma patients
RU2227029C2 (ru) * 1998-07-16 2004-04-20 Рисерч Дивелопмент Фаундейшн Новые днк-расщепляющие противоопухолевые агенты

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001074905A1 (en) * 2000-04-03 2001-10-11 Antisoma Research Limited Compounds for targeting

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5484589A (en) * 1992-04-20 1996-01-16 Rufeld, Inc. Anti-viral methods using RNAse and DNAse
US5952170A (en) 1993-12-16 1999-09-14 Stroun; Maurice Method for diagnosing cancers
RU2099080C1 (ru) * 1994-02-11 1997-12-20 Дмитрий Иванович Финько Способ предотвращения развития рака
US6156504A (en) 1996-03-15 2000-12-05 The Penn State Research Foundation Detection of extracellular tumor-associated nucleic acid in blood plasma or serum using nucleic acid amplification assays
US6521409B1 (en) * 1996-03-15 2003-02-18 The Penn State Research Foundation Detection of extracellular tumor-associated nucleic acid in blood plasma or serum using nucleic acid amplification assays
RU2227029C2 (ru) * 1998-07-16 2004-04-20 Рисерч Дивелопмент Фаундейшн Новые днк-расщепляющие противоопухолевые агенты
US6465177B1 (en) 1998-10-26 2002-10-15 John Wayne Cancer Institute Detection of loss of heterozygosity in tumor and serum of melanoma patients

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EL HASSAN N.O. ET AL.: "Rescue use of Dnase in critical lung atelectas mucus retention in premature neonates", PEDIATRICS, vol. 108, no. 2, August 2001 (2001-08-01), pages 468 - 470, XP002984504 *
FEDOROV N.A., BULL.EXP.BIOL.MED., vol. 102, 1986, pages 281 - 283
FORTUNE JM; OSHEROFFN.: "Chemotherapy, radiotherapy, biotherapy and more recently the immunotherapy are the most-used non-surgical methods of treating of being nice", PROG NUCLEIC ACID RES MOL BIOL, vol. 64, 2000, pages 221 - 53
MUTIRANGURA A.: "Serum/plasma viral DNA: mechanism and diagnostic applications to nasopharyngeal and cervical carcinoma", ANN. N. Y. ACAD. SCI., vol. 945, September 2001 (2001-09-01), pages 59 - 67, XP008043289 *
P.ANKER ET AL., CLINICA CHIMICA ACTA, vol. 313, 2001, pages 143 - 146
See also references of EP1655036A4
SUGIHARA S. ET AL.: "British Journal of Cancer", vol. 67, 1 January 1993, NATURE PUBLISHING GROUP, pages: 66 - 70

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9463223B2 (en) 2003-07-14 2016-10-11 Cls Therapeutics Limited Method for monitoring development of somatic mosaicism
US9770492B2 (en) 2003-07-14 2017-09-26 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic DNA mutation disease
US8388951B2 (en) 2003-07-14 2013-03-05 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic DNA mutation disease
US9845461B2 (en) 2003-07-14 2017-12-19 Cls Therapeutics Limited Method for treating oncological diseases
US8535663B2 (en) 2003-07-14 2013-09-17 Cls Therapeutics Limited Method for treating delayed-type hypersensitivity
US9248166B2 (en) 2003-07-14 2016-02-02 Cls Therapeutics Limited Method for treating oncological diseases
US8710012B2 (en) 2003-07-14 2014-04-29 Cls Therapeutics Limited Method for treating oncological diseases
US8796004B2 (en) 2003-07-14 2014-08-05 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic DNA mutation disease
US8431123B2 (en) 2003-07-14 2013-04-30 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection
US9072733B2 (en) 2003-07-14 2015-07-07 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection
EP1880733A4 (en) * 2005-04-25 2009-08-12 Genkin Dmitry Dmitrievich METHOD FOR EXTENDING THE LIFE OF A HUMAN AND ANIMALS
EP1880733A1 (en) * 2005-04-25 2008-01-23 GENKIN, Dmitry Dmitrievich Method for increasing longevity of a human being and animals
US8916151B2 (en) 2005-04-25 2014-12-23 Cls Therapeutics Limited Method for treating a reduction of fertility
US8871200B2 (en) 2006-11-28 2014-10-28 Cls Therapeutics Limited Method for treating human diseases associated with an increased deoxyribonucleic acid content in extracellular spaces of tissues and a medicinal preparation for carrying out said method
US8679456B2 (en) 2007-07-05 2014-03-25 David Geoffrey Gadian Method of hyperpolarising a magnetic resonance agent
US10617743B2 (en) 2014-06-19 2020-04-14 Cls Therapeutics Limited Method to improve safety and efficacy of anti-cancer therapy
US11701410B2 (en) 2015-05-22 2023-07-18 Cls Therapeutics Limited Extracellular DNA as a therapeutic target in neurodegeneration
US11905522B2 (en) 2018-01-16 2024-02-20 Cls Therapeutics Limited Treatment of diseases by liver expression of an enzyme which has a deoxyribonuclease (DNase) activity
WO2022246139A1 (en) * 2021-05-21 2022-11-24 Genkin Dmitry Dmitrievich Immunomodulation of tumor microenvironment

Also Published As

Publication number Publication date
EP1655036A1 (en) 2006-05-10
ES2427091T3 (es) 2013-10-28
US7612032B2 (en) 2009-11-03
RU2004108061A (ru) 2005-09-27
PL1655036T3 (pl) 2014-02-28
US20060233780A1 (en) 2006-10-19
EP1655036B1 (en) 2013-07-17
EP1655036A4 (en) 2009-06-17
RU2269356C2 (ru) 2006-02-10
US20080004561A1 (en) 2008-01-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2005004903A1 (fr) Methode de traitement de maladies oncologiques
Wheeler Endotoxin and Kupffer cell activation in alcoholic liver disease
Parker et al. Cancer gene therapy using plasmid DNA: safety evaluation in rodents and non-human primates
US20150110769A1 (en) Method for retarding unhealthy manifestations brought by ageing of human beings
KR102060207B1 (ko) 세타-디펜신들로 염증성 프로테아제들의 차단
WO2005007187A1 (fr) Methode de traitement des maladies oncologiques, infectieuses et somatiques, procedes de controle de l'efficacite du traitement, agents et compositions pharmaceutiques associes
Liu et al. IFNβ treatment inhibits nerve injury-induced mechanical allodynia and MAPK signaling by activating ISG15 in mouse spinal cord
WO1995022336A1 (fr) Agent immunomodulateur et reducteur du dysfonctionnement du systeme de regulation de la propagation de cellules tissulaires
KR100420377B1 (ko) 라이소자임이량체의신규용도
WO2003040723A1 (fr) Procede de rehabilitation de l'organisme en cas d'infection virale lente
WO2004043485A1 (fr) Composition presentant des proprietes antioxydantes, procede de production d'un polypeptide et methode de traitement
WO2005004904A1 (fr) Methode de traitement de maladies s'accompagnant d'alterations de la composition qualitative et/ou quantitative de l'adn extracellulaire du sang (variantes)
JP2001502305A (ja) ヤドリギ（Ｖｉｓｃｕｍ）抽出物
WO1989009607A1 (en) Bacterial preparation for prophylaxis and treatment of inflammatory processes and allergic diseases
CN111529691A (zh) 甲状旁腺激素(1-34)在制备治疗男性性腺功能减退症的药物中的应用
WO2005004789A2 (fr) Methode de traitement de maladies s'accompagnant d'alterations de la composition qualitative ou quantitative de l'adn extracellulaire du sang
WO1989005660A1 (en) Pharmaceutical preparation for individual prophylaxis of venereal diseases and curing urogenital trichomoniasis
WO1994018947A1 (en) High purity protamine-dna complex and use of same
Hernández et al. Growth hormone secretagogue peptide-6 enhances oreochromicins transcription and antimicrobial activity in tilapia (Oreochromis sp.)
WO2000053626A1 (fr) Peptide ayant une activite antitumorale, protectrice et de normalisation, et composition pharmaceutique
KR102622408B1 (ko) Opa1 억제에 의한 조골세포 활성화를 통한 골형성 촉진 유도용 또는 골질환 치료용 조성물
WO2004064849A1 (fr) Produit normalisant la structure et les fonctions des organes et tissus, stimulant les reparations des lesions et possedant une activite antivirale
US5948442A (en) Stimulating ENTEROGENIN compositions and methods for their isolation and use
WO2005042015A1 (fr) Composition pharmaceutique anti-herpetique, procede de production d'une forme medicamenteuse a partir de cette composition et procede d'utilisation correspondant
Huang et al. Mechanism research of Tollip negative feedback regulation in TLR4 signaling pathways based on spinal tuberculosis: Detection of Tollip and NF-κB expression levels

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NI NO NZ OM PG PH PL PT RO SC SD SE SG SK SL SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IT LU MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DPEN Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2006233780

Country of ref document: US

Ref document number: 10564861

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2004748955

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2004748955

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 10564861

Country of ref document: US