[go: up one dir, main page]

RS60050B1 - Kompozicije za modulaciju aktivnosti gama-c-citokina - Google Patents

Kompozicije za modulaciju aktivnosti gama-c-citokina

Info

Publication number
RS60050B1
RS60050B1 RS20200324A RSP20200324A RS60050B1 RS 60050 B1 RS60050 B1 RS 60050B1 RS 20200324 A RS20200324 A RS 20200324A RS P20200324 A RSP20200324 A RS P20200324A RS 60050 B1 RS60050 B1 RS 60050B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
peptide
cytokine
isolated
cells
cytokines
Prior art date
Application number
RS20200324A
Other languages
English (en)
Inventor
Yutaka Tagaya
Nazli Azimi
Original Assignee
Bioniz Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bioniz Llc filed Critical Bioniz Llc
Publication of RS60050B1 publication Critical patent/RS60050B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/004—Aftersun preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q3/00—Manicure or pedicure preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Predmetni primeri izvođenja se odnose na peptidne antagoniste γc-familije citokina, grupe sisarskih citokina koje uglavnom proizvode epitelne, stromalne i imunske ćelije i koji kontrolišu normalnu i patološku aktivaciju raznovrsnog niza limfocita. Predmetni primeri izvođenja takođe se odnose na terapeutske upotrebe ovih peptida za lečenje određenih humanih bolesti. Predmetni primeri izvođenja takođe se odnose na kozmeceutičke primene ovih peptida. Prikazani su opis ciljnih bolesti, kozmeceutičke primene, kao i načini primene, proizvodnja i komercijalizacija peptida.
OSNOV PRONALASKA
[0002] Citokini predstavljaju raznovrsnu grupu solubilnih faktora koji posreduju u različitim ćelijskim funkcijama kao što su rast, funkcionalana diferencijacija i promocija ili prevencija programirane ćelijske smrti (apoptotske ćelijske smrti). Citokine, za razliku od hormona, ne proizvode specijalizovana žlezdana tkiva, već može da ih proizvodi čitav niz ćelijskih vrsta, kao što su epitelne, stromalne i imunske ćelije.
[0003] Do sada je identifikovano više od 100 citokina i smatra se da su se oni razvili putem duplikacije gena iz skupa primordijalnih gena (videti Bazan, J.F.1990, Immunol. Today 11:350-354). Uobičajeno je da jedna grupa citokina ima istu komponentu u svom receptorskom sistemu sastavljenom od više subjedinica, što govori u prilog ovom viđenju. Najbolje dokumentovana zajednička subjedinica citokina kod T ćelija je zajednička γ subjedinica (yc-subjedinica). γcsubjedinica je zajednička za 6 poznatih citokina (interleukin-2 (IL- 2), interleukin-4 (IL-4), interleukin-7 (IL-7), interleukin-9 (IL-9), interleukin-15 (IL-15), i interleukin-21 (IL-21), koji se zajedničkim imenom zovu „γc-citokini“ ili „citokini γc-familije“) i ona igra nezamenjivu ulogu u prenošenju signala za aktivaciju ćelija za sve ove citokine. Osim toga, za svaki od γc-citokina, postoje jedna ili dve receptorske subjedinice karakteristične samo za njih, koje kada obrazuju kompleks sa γc-subjedinicom, daju potpuno funkcionalan receptor. (Videti Rochman et al., 2009, Nat Rev Immunol. 9: 480-90.)
[0004] Citokini γc-familije predstavljaju grupu sisarskih citokina koje uglavnom proizvode epitelne, stromalne i imunske ćelije i koji kontrolišu normalnu i patološku aktivaciju raznovrsnog niza limfocita. Ovi citokini su apsolutno neophodni za rani razvoj T ćelija u timusu kao i za njihovu homeostazu na periferiji. Na primer, kod miševa se u odsustvu γc-subjedinica, T, B i NK ćelije ne razvijaju. (Videti Sugamura et al., 1996, Annu. Rev. Immunol. 14:179-205).
Patološka stanja povezana sa γc-citokinima
[0005] Nedavno sprovedene studije su pokazale da poremećena regulacija ekspresije i poremećena funkcija γc-citokina može da dovede do niza imunskih i hematopoeznih bolesti kod ljudi.
IL-2
[0006] Premda je IL-2 istorijski smatran prototipom T ćelijskog faktora rasta, generisanje nokaut miševa kojima nedostaje ekspresija T ćelijskog faktora rasta, pokazala je da IL-2 nije neizostavan kada je u pitanju rast ili razvoj konvencionalnih T ćelija in vivo. Preterana ekspresija IL-2, međutim, dovodi do pretežne ekspanzije jedne podgurupe T ćelija; regulatornih T ćelija (T-regovi). (Videti Antony et al., 2006, J. Immunol. 176:5255-66.) T-regovi suprimiraju imunske odgovore drugih ćelija i time deluju tako što održavaju perifernu toleranciju (pregled je dat u publikaciji Sakaguchi et al., 2008, Cell 133:775-87). Smatra se da gubitak periferne tolerancije dovodi do autoimunskih bolesti kod ljudi. Dakle, smatra se da imunosupresivna funkcija T-regova sprečava razvoj autoimunskih bolesti (Videti Sakaguchi et al., 2008, Cell 133:775-87). T-regovi su takođe dovedeni u vezu sa kancerom, pri čemu su čvrsti tumori i hematološki maligniteti dovedeni u vezu sa povišenim brojem T-regova (Videti De Rezende et al., 2010, Arch. Immunol. Ther. Exp.58:179-190).
IL-4
[0007] IL-4 je neredundantni citokin uključen u diferencijaciju pomoćnih T ćelija u Th2 (pomoćne T ćelije tipa 2) podgrupu, koja promoviše diferencijaciju nezrelih B ćelija u plazma ćelije koje proizvode IgE. Nivoi IgE su povišeni kod alergijske astme. Thus, IL-4 je doveden u vezu sa razvojem alergijske astme. Antitela usmerena na IL-4 mogu da se koriste za lečenje ili čak prevenciju otpočinjanja alergijske astme. (Videti Le Buanec et al., 2007, Vaccine 25:7206-16.)
IL-7
[0008] IL-7 je od suštinskog značaja za razvoj B ćelija i rani razvoj T ćelija u timusu. Kod miševa, poremećena ekspresija IL-7 izaziva T-ćelijsku leukemiju. (Videti Fisher et al., 1993, Leukemia 2:S66-68.) Međutim, čini se da kod ljudi poremećena regulacija IL-7 ne izaziva T-ćelijsku leukemiju. Kod ljudi je povišena ekspresija IL-7, samog ili u kombinaciji sa drugim članom familije γc-citokina, IL-15, devedena u vezu sa leukemijom velikih granularnih limfocita (LGL).
IL-9
[0009] Uloga IL-9 je i dalje prilično neokarakterisana u poređenju sa drugim članovima familije γc-cytokina. Miševi kod kojih je uklonjen gen za IL-9 izgledaju normalno i ne nedostaje im niti jedan podskup ćelija u limfocitnim i hematopoeznim odeljcima. Skorašnje studije, međutim, otkrivaju in vivo ulogu IL-9 u obrazovanju Th17 (pomoćne T ćelije indukovane interleukinom-17) ćelija (Videti Littman et al., 2010, Cell 140(6):845-58; i Nowak et al., 2009, J. Exp. Med.
206: 1653-60).
IL-15
[0010] IL-15 je neizostavno uključen u razvoj NK ćelija, NK-T ćelija, nekih podgrupa intraepitelnih limfocita, (IEL), γδ-T ćelija, i CD8 T-ćelija memorijskog fenotipa (Videti Waldmann, 2007, J. Clin. Immunol. 27:1-18; i Tagaya et al., 1996, EMBO J. 15:4928-39.) Pojačana ekspresija IL-15 kod miševa dovodi do razvoja T-ćelijske leukemije NK-T ćelija i T-ćelijske leukemije CD8 ćelijskog tipa (Videti Fehniger et al., 2001, J. Exp. Med. 193:219-31; Sato et al.2011 Blood in press). Izgleda da su ove eksperimentalno indukovane leukemije slične LGL (leukemija velikih granularnih limfocita) leukemiji kod ljudi, pošto u oba slučaja leukemične ćelije eksprimiraju CD8 antigen.
[0011] Takođe se pretpostavlja da autokrini mehanizmi posredovani putem IL-15 mogu da budu uključeni u leukemijsku transformaciju CD4 T limfocita. (Videti Azimi et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. 95:2452-7; Azimi et al., 1999, J. Immunol. 163:4064-72; Azimi et al., 2000, AIDS Res. Hum. Retroviruses 16:1717-22; i Azimi et al., 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. 98:14559-64). Na primer, CD4-tropični HTLV-I, koji izaziva adultne T-ćelijske leukemije kod ljudi, indukuje autokrini rast virusom transfomisanih T ćelija putem proizvodnje IL-15 i IL-15Rα (Azimi et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci.95:2452-7).
[0012] Osim u leukemijsku transformaciju, IL-15 je, prema skorašnjim studijama uključen u patološki razvoj celijakije (CD), koja predstavlja autoimunsku bolest. Poznato je da IL-15 stimuliše diferencijaciju NK, CD8 i intestinalnih intraepitelnih limfocitnih (IEL) ćelija u limfokinima aktivirane ćelije-ubice (LAK), na taj način što indukuje ekspresiju citolitičkih enzima (tj., granzima i perforina), kao i interferona-γ. Celijakija (nadalje u ovom dokumentu označena kao CD) je imunski posredovana enteropatija za koju okidač predstavlja konzumacija hrane koja sadrži gluten, kod osoba koje eksprimiraju specifične HLA-DQ alele. Prevalenca ove bolesti u populaciji zapadnog sveta iznosi 1%. Jedini tretman koji trenutno postoji za CD je potpuno izbacivanje glutena iz ishrane pacijenta. Patologiju CD uglavnom izaziva intenzivno oštećenje intestinalne sluzokože, do koga dovode aktivirane CD8 T ćelije koje se infiltriraju u laminu propriu intestinuma. Izgleda da se ove CD8 T ćelije aktiviraju preko mehanizama koji uključuju IL-15. Jedna skorašnja publikacija pokazala je da kod miševa ektopična intenzivirana ekspresija IL-15 kod enterocita dovodi do razvoja enteropatije koja veoma liči na lezije kod pacijenata sa CD. Neutralizacija IL-15 aktivnosti dramatično je smanjila patološke promene. Dakle, izgleda da intervencija kojom se blokira aktivacija CD8 T ćelija do koje dovodi IL-15 obezbeđuje strategiju za regulisanje CD koja predstavlja alternativu bezglutenskoj ishrani.
IL-21
[0013] IL-21 je najskorije otkriveni član yc-familije. Za razliku od drugih članova familije, izgleda da IL-21 nema potenciju pri delovanju koje pospešuje rast. Umesto toga, smatra se da IL-21 više funkcioniše kao faktor diferencijacije nego faktor koji kontroliše proliferaciju ćelija (Videti Tagaya, 2010, J. Leuk. Biol.87:13-15).
Postojeće strategije za lečenje poremećaja koji su posredovani γc-citokinima
[0014] Zbog toga što se smatra da su γc-citokini uključeni u brojne ljudske bolesti, predloženo je nekoliko postupaka za lečenje bolesti koje su u vezi sa γc-citokinima, time što će biti inhibirane aktivnosti familije γc-citokina. Ovi postupci uključuju upotrebu monoklonskog antitela specifičnog za citokin, kako bi bila neutralisana aktivnost ciljnog citokina in vivo; upotrebu monoklonskih antitela koja ciljano deluju na receptorske subjedinice koje su specifične za samo jedan citokin (druge subjedinice koje nisu γc-subjedinica) tako da selektivno inhibiraju aktivnost citokina; i upotrebu hemijskih inhibitora koji blokiraju nizvodne unutarćelijske signalne puteve citokina. Premda antitela specifična za citokine često predstavljaju prvi izbor prilikom dizajniranja terapeutskih sredstava, citokini koji imaju zajedničke receptorske komponente prikazuju preklapajuće funkcije (Videti Paul, W.E., 1989, Cell 57:521-24) tako da više od jednog citokina u sadejstvu mogu da dovedu do bolesti (videti kasnije u tekstu opisan primer). Stoga pristupi koji uključuju neutralizaciju samo jednog citokina mogu da budu neefikasni u lečenju ljudskih bolesti u koje su uključeni citokini.
[0015] Takođe su predložene i strategije za dizajniranje terapeutskih sredstava koja inhibiraju funkcionisanje više citokina putem antitela koja prepoznaju zajedničku komponentu receptora. Međutim, pošto receptorski sistemi za citokine po prirodi imaju više subjedinica, kao i zbog činjenice da funkcionalni receptori za pojedinačne citokine mogu da zauzmu različite konfiguracije, ovaj pristup je težak. Na primer, funkcionalni IL-15 receptor može da bude IL-15Rβ/γc ili IL-15Rα/β/γc. (Videti Dubois et al., 2002, Immunity 17:537-47.) Antitelo protiv IL-15Rβ receptora (TMβ1), predstavlja efikasni inhibitor funkcije IL-15, ali samo kada molekul IL-15Rα nije prisutan u receptorskom kompleksu. (Videti Tanaka et al., 1991, J. Immunol.
147:2222-28.) Stoga efikasnost monoklonskog anti-receptorskog antitela, bilo da je sintetisano protiv zajedničke ili subjedinice koja nije zajednička, može da zavisi od konteksta i nije predvidiv in vivo.
[0016] Premda klinička upotreba monoklonskih antitela protiv biološki aktivnih faktora ili receptora koji se dovode u vezu sa patogenezom bolesti predstavlja ustanovljenu praksu, demonstriran je mali broj uspešnih ishoda. Štaviše, ustanovljenje klinički pogodnog lečenja monoklonskim antitelom je dugotrajan i težak proces, gde je uspešno stvaranje antitela za neutralizaciju u velikoj meri pitanje sreće. Na primer, usled nezaobilaznog značaja γcsubjedinice u posredovanju prenošenja signala poreklom od citokina γc-familije, bilo je brojnih pokušaja da se proizvedu poliklonska i monoklonska antitela protiv γc-subjedinice i mnoga komercijalna antitela prepoznaju γc-subjedinice kod miševa i kod ljudi. Interesantno je, međutim, da nijedna od ovih anti-γc-subjedinica antitela ne blokira funkcionisanje γc-citokina.
[0017] Još jedan problem sa terapeutskom upotrebom monoklonskih antitela je to što se monoklonska antitela obično obrazuju imunizacijom glodara humanim proteinima, tako da proizvedeno antitelo predstavlja strani protein i stoga je veoma imunogeno. Kako bi se zaobišao ovaj problem, amino kiselinska sekvenca monoklonskog antitela molekulski se modifikuje tako da se molekul antitela prepoznaje kao humani imunoglobulin (postupak koji se zove humanizacija), međutim za ovaj proces su neophodni vreme i materijalna sredstva.
Ciljano delovanje na JAK3, kao postojeći alternativni primer za inhibiciju više γc-citokina
[0018] Interakcija između yc-subjedinice i γc-citokina dovodi do aktiviranja unutarćelijske proteinske tirozin kinaze pod imenom Janus kinaza 3 (Jak3). Jak3, sa svoje strane, fosforiliše više signalnih molekula uključujući STAT5 i PI3 kinazu. Interakcija γc-subjedinica i Jak3 je veoma specifična. Zapravo, ne postoji drugi receptorski molekul koji regrutuje Jak3 za potrebe prenošenja signala. (Videti O’Shea, 2004, Ann. Rheum. Dis. 63:(suppl. II):ii67-7.) Stoga će inhibicija prenošenja signala poreklom od citokina putem γc-subjedinice da se ostvaruje preko blokiranja aktivnosti Jak3 kinaze. U skladu s tim, na tržištu su prisutni brojni inhibitori koji ciljano deluju na kinaznu aktivnost Jak3. (Videti Pesu et al., 2008, Immunol. Rev. 223:132-142.) Jedan takav primer je CP690,550.
[0019] Glavni nedostatak ovih inhibitora proteinskih kinaza je odsustvo specifičnosti za Jak3 kinazu. Ovi lekovi stopiraju vezivanje ATP (adenozin-trifosfat) molekula za Jak3 kinazu, što predstavlja zajedničku biohemijsku reakciju za mnoge proteinske kinaze, i tako imaju tendenciju da blokiraju dejstvo brojnih unutarćelijskih proteinskih kinaza koje nisu srodne sa Jak3 kinazom, a čije je delovanje apsolutno neophodno kad je u pitanju opstanak zdravih normalnih ćelija u različitim tkivima. Dakle, potrebni su specifičniji inhibitori prenošenja signala preko csubjedinica.
[0020] Postoji, dakle, velika potreba da se pronađe alternativna strategija za lečenje bolesti u koje su uključeni γc-citokini.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0021] Predmetni pronalazak je definisan patentnim zahtevima. Jedan aspekt pronalaska odnosi se na izolovan ili prečišćen peptid, koji sadrži centralni γc-blok amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO:1) (BNZ-gama), pri čemu peptid može da inhibira aktivnost jednog ili više yc-citokina odabranih iz grupe koja se sastoji od: IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 ili IL-21.
[0022] Jedan primer izvođenja odnosi se na izolovan ili prečišćen peptid, koji se u osnovi sastoji od 19-očlane amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) (ovde označene kao „BNZ-γ“ (BNZgama)).
[0023] Drugi primer izvođenja odnosi se na vitro postupak za blokiranje prenošenja signala poreklom od jednog ili više članova familije γc-citokina, koji obuhvata dovođenje u kontakt ćelije sa izolovanim ili prečišćenim peptidom koji se u osnovi sastoji od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1).
[0024] Drugi primer izvođenja odnosi se na vitro postupak za blokiranje prenošenja signala poreklom od jednog ili više članova familije γc-citokina, koji obuhvata dovođenje u kontakt ćelije sa izolovanim ili prečišćenim peptidom koji se u osnovi sastoji od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), pri čemu je ćelija imunska ćelija.
[0025] Drugi primer izvođenja odnosi se na vitro postupak za blokiranje prenošenja signala poreklom od jednog ili više članova familije γc-citokina, koji obuhvata dovođenje u kontakt ćelije sa izolovanim ili prečišćenim peptidom koji se u osnovi sastoji od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), pri čemu je član familije yc-citokina odabran iz grupe koja se sastoji od: IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 ili IL-21.
[0026] Drugi deo ovog prikaza se odnosi na peptidne derivate peptida koji se sastoji od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), pri čemu peptidni derivat ima slična fizičko-hemijska svojstva kao i peptid koji se sastoji od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), ali peptidni derivat ima drugačiju biološku aktivnost.
[0027] Drugi deo ovog prikaza se odnosi na prilagođeni peptid pri čemu se amino kiselinska sekvenca prilagođenog peptida razlikuje od amino kiselinske sekvence I-K-E-FL-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) po konzervativnoj supstituciji jedne ili više amino kiselina.
[0028] Drugi primer izvođenja odnosi se na prilagođeni peptid, koji se u osnovi sastoji od 19-očlane amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1).
[0029] Drugi deo ovog prikaza se odnosi na prilagođeni peptid pri čemu se amino kiselinska sekvenca prilagođenog peptida razlikuje od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-IV-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) po tome što je glutamin (Q) na poziciji 6 zamenjen drugom polarnom amino kiselinom.
[0030] Drugi deo ovog prikaza se odnosi na prilagođeni peptid pri čemu se amino kiselinska sekvenca prilagođenog peptida razlikuje od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) po supstituciji sa jednom ili više amino kiselina sličnih biohemijskih osobina kao i amino kiseline sadržane u sekvenci I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1).
[0031] Drugi deo ovog prikaza se odnosi na prilagođene peptidne derivate amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S, pri čemu amino kiselinska sekvenca prilagođenog peptida ima slična fizičko-hemijska svojstva kao i peptid amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), ali ima različitu biološku aktivnost, pri čemu amino kiselinska sekvenca prilagođenog peptida ima najmanje 50% homologije sekvence sa amino kiselinskom sekvencom I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1).
[0032] Drugi primer izvođenja se odnosi na konjugaciju peptida koji se u osnovi sastoji od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) sa N-terminusima, C-terminusima i/ili bočnim ostacima postojećih bioloških proteina/peptida u cilju efikasne isporuke i poboljšane biološke stabilnosti in vivo. Primeri takvih konjugacija su BSA, albumin, Fc region IgG, drugi biološki proteini koji funkcionišu kao nosači, polietilen glikol ili (PEG) različitih molekulskih težina ili druge slične komponente.
[0033] Drugi deo ovog prikaza se odnosi na konjugaciju prilagođenog peptidnog derivata amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) sa N-terminusima, C-terminusima i/ili bočnim ostacima postojećih bioloških proteina/peptida, pri čemu amino kiselinska sekvenca prilagođenog peptida ima slična fizičko-hemijska svojstva kao i peptid amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), ali ima različitu biološku aktivnost, pri čemu amino kiselinska sekvenca prilagođenog peptida ima najmanje 50% homologije sekvence sa amino kiselinskom sekvencom I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-IN-T-S (SEQ ID NO: 1). Primeri takvih konjugacija su BSA, albumin, Fc region IgG, drugi biološki proteini koji funkcionišu kao nosači, polietilen glikol ili (PEG) različitih molekulskih težina ili druge slične komponente.
[0034] Drugi primer izvođenja odnosi se na in vitro postupak inhibicije aktivnosti γc-citokina koji sadrži dovođenje u kontakt γc-citokina sa peptidom koji se u osnovi sastoji od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1).
[0035] Drugi deo ovog prikaza se odnosi na poliklonska i monoklonska antitela sintetisana protiv imunogenog peptida koji sadrži amino kiselinsku sekvencu I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1).
[0036] Drugi deo ovog prikaza se odnosi na poliklonska i monoklonska antitela sintetisana protiv prilagođenog peptidnog derivata amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), pri čemu peptidni derivat ima slična fizičko-hemijska svojstva kao i peptid amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), ali ima različitu biološku aktivnost, i pri čemu amino kiselinska sekvenca prilagođenog peptida ima najmanje 50% homologije sekvence sa amino kiselinskom sekvencom I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1).
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0037]
Slika 1A prikazuje poravnanje regiona D zavojnice članova familije humanih γc-citokina.
Slika 1B prikazuje γc-blok i motive IL-2/IL-15 bloka od kojih nastaje konsenzusna sekvenca u okolini regiona D zavojnice γc-citokina.
Slika 2 prikazuje u vidu dijagrama biohemijska svojstva amino kiselina.
Slika 3A prikazuje inhibiciju aktivnosti IL-2, IL-15 i IL-9 putem BNZ-γ u testu proliferacije PT-18.
Slika 3B prikazuje test proliferacije CTTL2 ćelija gajenih u prisustvu IL-2 ili IL-15 i 0, 0.1, 1 ili 10 uM BNZ-γ.
Slika 3C prikazuje inhibiciju fosforilacije tirozina u STAT5 pomoću BNZ-γ, koja je IL-15 posredovana.
Slika 4A prikazuje ex vivo test proliferacije T-ćelija, u HAM/TSP perifernoj krvi. Proliferacija T-ćelija inhibira se dodavanjem BNZ-γ.
Slika 4B pokazuje da je populacija CD4+CD25+ ćelija u ex vivo testu proliferacije T-ćelija u HAM/TSP perifernoj krvi smanjena nakon dodavanja BNZ-γ u kulturu.
Slika 4C pokazuje da je populacija CD4+Ki67 ćelija u ex vivo testu proliferacije T-ćelija u HAM/TSP perifernoj krvi smanjena nakon dodavanja BNZ-γ u kulturu.
Slika 4D pokazuje da nema uticaja na procenat živih ćelija detektovanih Guava bojenjem u ex vivo testu proliferacije T-ćelija u HAM/TSP perifernoj krvi, nakon dodavanja BNZ-γ u kulturu.
DETALJNI OPIS
Pregled
[0038] γc-citokini su važni učesnici u razvitku limfatičnih ćelija koje sačinjavaju imuni sistem, naročito T, B i NK ćelija. Osim toga, γc-citokini igraju ulogu u različitim ljudskim bolestima. Zato bi faktori koji inhibiraju aktivnost γc-citokina mogli da obezbede korisna oruđa za razjašnjavanje razvojnih mehanizama podskupova limfocita i za lečenje imunskih poremećaja i bolesti posredovanih γc-citokinima.
[0039] Zna se da uklanjanje gena koji kodiraju γc-subjedinice kod miševa ili mutacije γcsubjedinica kod ljudi izazivaju tešku kombinovanu imunodeficijenciju (SCID) tako što narušavaju normalan izgled ili funkcionisanje NK, T i B ćelija. Značaj γc-subjedinice u prenošenju signala γc-citokina IL-2, -4, -7, -9, 15, -21, naznačen je u studijama koje pokazuju odgovor limfocita iz ovih miševa i ljudskih pacijenata na γc-citokine (pregled dat u Sugamura et al., 1995 Adv. Immunol. 59:225-277). Ovo ukazuje na to da bi narušavanje interakcije između γc-subjedinica i γc-citokina moglo efikasno da blokira događaje unutarćelijskog prenošenje signala članova familije γc-citokina. Stoga se očekuje da antagonistički peptidi u skladu sa predmetnim primerima izvođenja efikasno blokiraju patogene promene kod ljudi koji pate od bolesti posredovanih poremećenom regulacijom članova familije γc-citokina.
[0040] Kao alternativa pristupima za modulaciju aktivnosti individualnih γc-citokina, a koji su posredovani antitelima, podnosioci ove patentne prijave su razvili nova jedinjenja niske molekulske težine, koja se ovde označavaju kao „Simul-Blok“, i koja suprimiraju aktivnost više γc-citokina. Ova jedinjenja niske molekulske težine, koja uključuju i hemikalije i peptide, manje su imunogena nego antitela. Ovim osobinama Simul-Blok se izdvajaju kao efikasnija strategija za posredovanje aktivnosti γc-citokina u kliničkim intervencijama.
Otkriće γc-bloka
[0041] C-terminus (D zavojnica) γc-citokina sadrži predloženo mesto za interakciju sa zajedničkom γc-subjedinicom receptora za citokine sa više subjedinica. (Bernard et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:24313-21.) Poređenje biohemijskih svojstava amino kiselina svih γc-citokina identifikovanih kod miševa i ljudi pokazalo je da hemijska priroda amino kiselina, na primer, hidrofobnost, hidrofilnost, bazna/kisela priroda, očuvana, ako ne i identična na mnogim pozicijama u D zavojnici kod različitih članova familije γc-citokina. Za razliku od toga, sekvenca IL-13, koji je srodan γc-citokinu, IL-4, ali se ne vezuje za γc-subjedinicu, ne iskazuje značajnu homologiju sa regionom D zavojnice γc-citokina, ukazujući time da je homologija sekvence u regionu D zavojnice u vezi sa vezivanjem za γc-subjedinicu. Kao što je prikazano na slici 1, poravnanje amino kiselinskih sekvenci regiona D zavojnice članova familije γc-citokina kod ljudi, otkriva motiv umerene homologije sekvence u ovim citokinima, koji se u ovom dokumentu označava kao „γc-blok“.
[0042] γc-blok sadrži 19 amino kiselina gde su od 19 pozicija, pozicije 4, 5 i 13 u potpunosti konzervisane kao fenilalanin, leucin i asparagin, redom. Manja konzervativnost se uočava na pozicijama 6, 7 i 11 γc-bloka, gde je amino kiselina jedna od dve ili tri srodne amino kiseline koje imaju ista fizičko-hemijska svojstva: poziciju 6 mogu da zauzimaju polarne amino kiseline glutamat, asparagin ili glutamin; nepolarne amino kiseline serin ili arginin mogu da zauzimaju poziciju 7; a poziciju 11 zauzima bilo koja od nepolarnih amino kiselina leucin ili izoleucin. Pozicije 9 i 16 mogu da zauzimaju ili nepolarna amino kiselina izoleucin ili polarna amino kiselina lizin. Videti sliku 1B. Neke razlike u amino kiselinskom sastavu γc-bloka su uočene na pozicijama 9 i 6 između subfamilija γc-citokina. Poređenje γc-citokina kod različitih vrsta, pokazuje da je izoleucin prisutan na pozicijama 9 i 6 u IL-2/15 subfamiliji, dok drugi članovi γcfamilije (npr., IL-4, IL-21) na ovim pozicijama imaju lizin. Bez želje za ograničavanjem nekom određenom teorijom, izoleucin i lizin su biohemijski različiti, pa tako mogu da omoguće specifične konformacione razlike između IL-2/15 subfamilije i drugih γc-citokina.
[0043] Konzervisanost motiva γc-bloka kod različitih γc-citokina podržavaju nalazi da je asparaginski (Asn, Q) ostatak smešten u regionu D zavojnice neizostavan kad je u pitanju vezivanje γc-citokina za γc-subjedinicu. (Bernard et al., 2004 J. Biol. Chem.279: 24313-21.) Peptidni inhibitori aktivnosti γc-citokina
[0044] Aktivnost γc-familije citokina može da se blokira narušavanjem interakcije između γccitokina i γc-subjedinice, na primer uvođenjem kompetitivnog inhibitora koji može da interaguje sa γc-subjedinicom bez stimulacije signala preko receptora za citokine sa više subjedinica. Neograničeno na bilo koju teoriju, konzervisani motiv γc-bloka, koji učestvuje u vezivanju citokina γc-familije za γc-subjedinicu, predstavlja centralnu baznu aminokiselinsku sekvencu koja može da se koristi kako bi se dizajnirali peptidni inhibitori prenošenja signala γc-citokina.
[0045] Centralna amino kiselinska sekvenca γc-bloka sadrži: D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q (SEQ ID NO: 2) (gde X označava bilo koju amino kiselinu). Ovde opisni delovi ovog prikaza odnose se na prilagođene peptidne derivate centralne amino kiselinske sekvence γcbloka, koji mogu da inhibiraju aktivnost jednog ili više γc-citokina. Prilagođeni peptidni derivati uključuju bilo koji peptid čija parcijalna amino kiselinska sekvenca pokazuje približno 50%, 50-60%, 60-70%, 70-80%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ili 99.8% identičnosti sa centralnom amino kiselinskom sekvencom γc-bloka. Prilagođeni peptidni derivati dodatno uključuju bilo koji peptid, pri čemu parcijalna amino kiselinska sekvenca tog peptidnog derivata sadrži amino kiseline sa fizičko-hemijskim svojstvima, sličnim amino kiselinama centralnog γc-bloka. Na primer, amino kiseline sa sličnim fizičko-hemijskim svojstvima bi uključivale fenilalanin, tirozin, triptofan i histidin, koji predstavljaju aromatične amino kiseline. Slika 2 prikazuje u vidu dijagrama amino kiseline sa sličnim fizičko-hemijskim svojstvima kojima mogu da budu supstituisane amino kiseline koje sačinjavaju centralni γc-blok. Peptidni derivati centralnog γcbloka mogu da budu dugački 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18,19, 20, 21, 22, 24, 25-30, 30-35, 35-40, 40-45, 45-50, ili više od 50 amino kiselina. U nekim primerima izvođenja, derivati prilagođenog peptida mogu da budu konjugovani sa N-terminusima, C-terminusima i/ili sa bočnim ostacima postojećih bioloških proteina/peptida.
[0046] Na osnovu identifikacije konzervisanih motiva γc-bloka u citokinima koji se vezuju za γc-subjedinicu, podnosioci patentne prijave su razvili novi, 19-očlani prilagođeni peptidni derivat koji predstavlja veštački složen peptid koji kombinuje amino kiselinsku sekvencu γc-bloka humanog IL-2 i IL-15.19-očlani peptid, ovde označen kao BNZ-γ, sastoji se od amino kiselinske sekvence: I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), gde su amino kiseline označene podebljanim slovima konzervisane u IL-2 i IL-15, a podvučene amino kiseline predstavljaju pozicije na kojima su fizičko-hemijska svojstva amino kiselina konzervisana.
[0047] Podnosioci patentne prijave su otkrili da 19-očlani BNZ-γ suprimira proliferaciju ćelija indukovanu sa IL-15 i IL-9, ali ne i proliferaciju ćelija indukovanu sa IL-2 ili IL-4. Videti sliku 3A i primer 2. Podnosioci patentne prijave su dalje pokazali da BNZ-γ inhibira IL-15 posredovanu fosforilaciju unutarćelijskog signalnog molekula citokina, STAT-5. Videti sliku 3C i primer 5. Ovi rezultati pokazuju da prilagođeni peptidni derivati konzervisanog motiva γcbloka, mogu da inhibiraju aktivnost više γc-citokina.
[0048] Nekoliko delova ovog prikaza odnosi se na prilagođene peptidne derivate 19-očlane BNZ-γ amino kiselinske sekvence, I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), koja može da da inhibira aktivnost više γc-citokina. Prilagođeni peptidni derivati 19-očlane BNZ-γ amino kiselinske sekvence, uključuju bilo koji peptid čija parcijalna amino kiselinska sekvenca pokazuje približno 50%, 50-60%, 60-70%, 70-80%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ili 99.8% identičnosti sa amino kiselinskom sekvencom: I-K-E-FL-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1). Prilagođeni peptidni derivati dodatno uključuju bilo koji peptid kod koga parcijalna amino kiselinska sekvenca peptidnog derivata uključuje amino kiseline sa sličnim fizičko-hemijskim svojstvima kao što su svojstva amino kiselina u sekvenci: I-K-E-F-L-QR-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1). U nekoliko delova ovog prikaza, amino kiselinski ostaci prilagođenih peptidnih derivata zadržavaju slična fizičko-hemijska svojstva kao i amino kiselinski ostaci BNZ-γ, ali ispoljavaju specifičnost biološke inhibicije u odnosu na 6 članova familijeγc-citokina, drugačiju od originalnog 19-očlanog peptida. Peptidni derivati BNZ-γ mogu da budu dugački 19, 20, 21, 22, 24, 25-30, 30-35, 35-40, 40-45, 45-50, ili više od 50 amino kiselina. U nekim primerima izvođenja, prilagođeni peptidni derivati mogu da budu konjugovani sa N-terminusima, C-terminusima i/ili sa bočnim ostacima postojećih bioloških proteina/peptida.
[0049] Nekoliko prikaza u ovom dokumentu, odnosi se na prilagođene peptidne derivate sa motivima γc-bloka IL-5, IL-2, IL-21, IL-4, IL-9 ili IL-7, koji su prikazani na slici 1A. Drugi delovi ovog prikaza se odnose na prilagođene peptidne derivate koji predstavljaju veštačke kompozitne peptide koji kombinuju amino kiselinsku sekvencu dva ili više motiva γc-bloka humanog IL-5, IL-2, IL-21, IL-4, IL-9 i IL-7. Nekoliko delova ovog prikaza odnosi se na prilagođene peptidne derivate sa motivima γc-bloka IL-5, IL-2, IL-21, IL-4, IL-9 ili IL-7 čija parcijalna amino kiselinska sekvenca pokazuje približno 50%, 50-60%, 60-70%, 70-80%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ili 99.8% identičnosti sa amino kiselinskim sekvencama motiva γcbloka IL-5, IL-2, IL-21, IL-4, IL-9 ili IL-7. Prilagođeni peptidni derivati sa motivima γc-bloka IL-5, IL-2, IL-21, IL-4, IL-9 ili IL-7 dodatno uključuju bilo koji peptid, pri čemu parcijalna amino kiselinska sekvenca tog peptidnog derivata sadrži amino kiseline sa sličnim fizičkohemijskim svojstvima kao i amino kiseline u sekvenci motiva γc-bloka IL-5, IL-2, IL-21, IL-4, IL-9 ili IL-7.
[0050] Nekoliko delova ovog prikaza se odnosi na prilagođene peptidne derivate koji bi inhibirali funkciju jednog, svih ili odabranih članova grupe γc-citokina. U nekim delovima ovog prikaza, prilagođeni peptidni derivati pokazuju selektivno ciljano delovanje na pojedinačne članove familije γc-citokina. Na primer, prilagođeni peptidni derivat može selektivno da inhibira funkciju IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 ili IL-21. U drugim delovima ovog prikaza, prilagođeni peptidni derivat može da inhibira 2 ili više članova familije γc-citokina. Na primer, prilagođeni peptidni derivati prema predmetnom pronalasku selektivno inhibiraju funkcionisanje IL-2 u kombinaciji sa jednim ili više od IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, i IL-21; IL-4 u kombinaciji sa jednim ili više od IL-7, IL-9, IL-15, i IL-21; IL-7 u kombinaciji sa jednim ili više od IL-9, IL-15, i IL-21; IL-9 u kombinaciji sa jednim ili više od IL-2, IL-4, IL-7, IL-15, i IL-21; IL-15 u kombinaciji sa jednim ili više od IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, i IL-21; ili IL-21 u kombinaciji sa jednim ili više od IL-2, IL-4, IL-7, IL-9 i IL-15. U drugim delovima ovog prikaza, prilagođeni peptidni derivati mogu da imaju sveobuhvatno ciljano delovanje na sve članove familije γc-citokina. Bez želje za ograničenjem nekom određenom teorijom, prilagođeni peptidni derivati mogu da inhibiraju funkcionisanje svih ili odabranih članova γc-citokina tako što smanjuju vezivanje γc-citokina za γc-subjedinicu, na primer, kao kompetitivni inhibitor. Ovakvi prilagođeni peptidni derivati mogu da se koriste u raznovrsnim primenama, uključujući primenu u vidu kliničkog leka.
[0051] Izrazi „oligopeptid“, „polipeptid“, „peptid“ i „protein“ mogu da se koriste naizmenično kada se odnose na prilagođene peptidne derivate obezbeđene u skladu sa predmetnim primerima izvođenja i mogu da se koriste kako bi se označila serija amino kiselinskih ostataka bilo koje dužine. Peptidi u skladu sa predmetnim primerima izvođenja takođe mogu da sadrže amino kiseline koje se ne nalaze u prirodi. Linkerski elementi mogu da budu pridruženi peptidima prema predmetnim primerima izvođenja putem peptidnih veza ili putem hemijskih veza. Peptidi prema predmetnim primerima izvođenja mogu da budu linearni ili ciklični, i mogu da uključuju (D) kao i (L) amino kiseline. Peptidi prema predmetnim primerima izvođenja takođe mogu da sadrže jednu ili više retkih amino kiselina (kao što je 4-hidroksiprolin ili hidroksilizin), organskih kiselina ili amida i/ili derivata običnih amino kiselina, kao što su amino kiseline koje imaju esterifikovanu ili amidovanu C-terminalnu karboksilnu grupu (npr., benzil, metil ili etil estar) i/ili koje imaju modifikacije N-terminalne amino grupe (npr., acetilacija ili alkoksikarbonilamino), sa bilo kojom od niza različitih modifikacija (npr., metilacija, benzoilacija, t-butilacija, tozilacija, alkoksikarbonilamino, i slično) i/ili supstitucija bočnog lanca, ili bez njih. Ostaci koji nisu obične amino kiseline, a koji mogu da budu prisutni, uključuju, ali nisu ograničeni na, penicilamin, tetrametilen cistein, pentametilen cistein, merkaptopropionsku kiselinu, pentametilen-merkaptopropionsku kiselinu, 2-merkaptobenzen, 2-merkaptoanilin, 2-merkaptoprolin, ornitin, diaminobutirnu kiselinu, aminoadipinsku kiselinu, maminometilbenzoevu kiselinu, i diaminopropionsku kiselinu.
[0052] Peptidi prema predmetnim primerima izvođenja mogu da se proizvode i da se dobiju pomoću različitih postupaka poznatih stručnjacima u oblasti. Na primer, peptid može da se proizvodi genetičkim inženjeringom, na bazi nukleotidne sekvence koja kodira peptide prema predmetnim primerima izvođenja, ili da se hemijski sintetiše posredstvom sinteze peptida u čvrstoj fazi i slično, ili da se proizvedu i dobiju u vidu svojih kombinacija. Stručnjak u oblasti može da sintetiše prilagođene peptidne derivate na osnovu predmetnog opisa konzervisanog motiva γc-bloka i poznavanja biohemijskih svojstava amino kiselina, kako su opisana na slici 2. Neki primeri izvođenja takođe se odnose na polinukleotide koji sačinjavaju nukleotidne sekvence koje kodiraju peptide prema predmetnom pronalasku. „Nukleotidna sekvenca“, „polinukleotid“ ili „nukleinska kiselina“ mogu da se koriste naizmenično, i podrazumeva se da označavaju ili dvolančanu DNK, jednolančanu DNK, ili proizvode transkripcije navedenih DNK (npr., RNK molekuli). Polinukleotidi mogu da se primenjuju kod ćelija ili kod subjekata i da budu eksprimirani od strane ćelija ili subjekata, umesto da se primenjuju sami peptidi. Nekoliko primera izvođenja takođe se odnosi na genetičke konstrukte koji sadrže polinukleotidnu sekvencu koja kodira peptide prema predmetnom pronalasku. Genetički konstrukti mogu takođe da sadrže dodatne regulatorne elemente kao što su promotori i enhenseri i, izborno, markere sa mogućnošću selekcije.
Postupci za lečenje bolesti posredovanih γc-citokinima
[0053] Nekoliko primera izvođenja odnosi se na upotrebu γc-antagonističkih peptida u lečenju bolesti posredovanih γc-citokinima. Upotreba prilagođenog peptidnog derivata u skladu sa predmetnim primerima izvođenja dozvoljava fleksibilnost dizajna terapeutskog sredstva (prilagođeni dizajn peptida) i omogućava sveobuhvatnije ishode, koji ne bi bili postignuti konvencionalnim strategijama u kojima se koriste antitela protiv citokina ili receptora za citokine.
[0054] Ovde je opisan novi postupak za blokiranje delovanja citokina γc familije. Ovakve manipulacije mogu da urode efikasnim postupcima za kliničke intervencije prilikom lečenja bolesti u vezi sa poremećajima regulacije ili funkcije γc-citokina. Primeri bolesti koje mogu da se leče narušavanjem interakcije između γc-citokina i γc-subjedinice uključuju autoimunske bolesti kao što su sistemski eritematozni lupus, Sjegrenov sindrom, Vegenerova granulomatoza, celijakija, Hašimoto ili autoimuni tireoiditis; kolagene bolesti uključujući reumatoidni artritis, inflamatornu bolest creva, dijabetes melitus, autoimunske bolesti kože kao što je psorijaza; degenerativne bolesti neurona kao što su multipla skleroza, uveitis ili zapaljenje oka i simpatička oftalmija, bolest „kalem protiv domaćina“ (GvHD) i mijastenija gravis.
[0055] U nekim primerima izvođenja, ovde opisani γc-antagonistički peptidi mogu da se koriste u lečenju bolesti povezanih sa 1- humanim T-ćelijskim limfotropnim tipom I i II (HTLV-I i HTLV-II), uključujući adultnu T-ćelijsku leukemiju (ATL), HTLV-asociranu mijelopatiju/tropsku spastičnu paraparezu (HAM/TSP), i druge ne-neoplastične inflamatorne bolesti povezane sa HTLV, kao što su uveitis (HU), artropatija, pneumopatija, dermatitis, egzokrinopatija i miozitis. U nekim primerima izvođenja ovde opisani γc-antagonistički peptidi mogu da se koriste u lečenju drugih virusnih bolesti, kao što su influenca, AIDS, HBV i herpes, ili parazitskih bolesti.
[0056] U nekoliko primera izvođenja, γc-antagonistički peptidi mogu da se primenjuju pre, tokom, ili nakon transplantacije različitih organa, kao imunosupresanti.
[0057] U nekim primerima izvođenja, ovde opisani γc-antagonistički peptidi mogu da se koriste u lečenju imunski-posredovanih bolesti kao što su astma i druge respiratorne inflamatorne bolesti, kao što su, ali ne i ograničeno na, sinuzitis, polensku groznicu, bronhitis, hroničnu opstruktivnu bolest pluća (COPD), alergijski rinitis, akutni i hronični otitis, plućnu fibrozu. U nekim primerima izvođenja, γc-antagonistički peptidi mogu da se primenjuju kako bi se lečile ili sprečile alergijske reakcije usled izlaganja alergenima, hemijskim agensima ili zbog drugih uobičajenih uzroka akutnih respiratornih bolesti. U nekim primerima izvođenja, γcantagonistički peptidi mogu da se primenjuju kako bi se lečili ili sprečili inflamatorni odgovori izazvani virusima, bakterijama, hemijskim reagensima i biohemijskim reagensima.
[0058] U nekoliko primera izvođenja, γc-antagonistički peptidi mogu da se primenjuju kako bi se lečile neke vrste maligniteta, kao što su LGL-leukemija, intraepitelni limfom i leukemija u refraktornoj celijakiji, NK leukemija/limfom i NK-T leukemija/limfom.
[0059] U nekim primerima izvođenja, prilagođeni peptidni derivati u skladu sa predmetnim prikazom mogu da se koriste u kozmetičke svrhe, kao što je tretman akni, gubitka kose, opekotina od sunca i održavanja noktiju, uključeni u meleme kao anti-ejdžing komponenta, zbog svoje antiinflamatorne prirode.
[0060] Nekoliko primera izvođenja odnosi se na terapeutske antagonističke peptide koji bi inhibirali funkciju svih ili odabranih članova γc-citokina. U nekim primerima izvođenja, terapeutski antagonistički peptidi selektivno inhibiraju pojedinačne članove familije γc-citokina (prilagođene peptide). U drugim primerima izvođenja, terapeutski antagonistički peptidi mogu sveobuhvatno da inhibiraju sve članove familije γc-citokina (Simul-Blok). U nekim primerima izvođenja, terapeutski antagonistički peptidi selektivno inhibiraju podskupove γc-citokina. Bez želje za ograničavanjem nekom određenom teorijom, peptidni antagonisti mogu da inhibiraju funkciju svih selektivnih članova γc-citokina tako što, na primer delujući kao kompetitivni inhibitori, smanjuju vezivanje γc-citokina za γc-subjedinicu.
[0061] Nekoliko članova familije γc-citokina, IL-2, IL-7 i IL-15, ali ne i IL-4, povezani su sa bolešću „kalem protiv domaćina“ (GvHD) u eksperimentalnom mišijem modelu. (Miyagawa et al., 2008 J. Immunol. 181:1109-19.) Jedan primer izvođenja se odnosi na upotrebu terapeutskih antagonističkih peptida koji selektivno inhibiraju aktivnost IL-2, IL-7 i IL-15 u cilju lečenja GvHD kod ljudi, omogućavajući opstanak presađenih tkiva ili ćelija koštane srži. Drugi primeri izvođenja odnose se na upotrebu terapeutskih antagonističkih peptida koji selektivno inhibiraju kombinaciju IL-2 i IL-7, IL-2 i IL-15, ili IL-7 i IL-15, u cilju lečenja GvHD. Drugi primeri izvođenja odnose se na upotrebu kombinacije terapeutskih antagonističkih peptida koji selektivno inhibiraju IL-2, IL-7 ili IL-15.
[0062] Drugi primeri izvođenja odnose se na upotrebu terapeutskih antagonističkih peptida koji selektivno inhibiraju funkciju IL-2, u cilju lečenja autoimunskih poremećaja, kada se pretpostavlja da T-regovi igraju određenu ulogu. U nekim primerima izvođenja, inhibicija T-regova posredovana peptidima, može da poboljša prirodnu antikancersku imunost kod ljudi, obezbeđujući novo sredstvo za antikancersku terapiju.
[0063] Nekoliko primera izvođenja odnosi se na upotrebu terapeutskih antagonističkih peptida koji selektivno inhibiraju IL-4, u cilju lečenja astme.
[0064] Neki primeri izvođenja odnose se na upotrebu terapeutskih antagonističkih peptida koji selektivno inhibiraju IL-7, bilo sami ili u kombinaciji sa terapeutskim antagonističkim peptidima koji selektivno inhibiraju člana familije γc-citokina, IL-15, u funkciji terapeutskog sredstva za LGL leukemiju. U nekim primerima izvođenja terapeutski antagonistički peptidi koji selektivno inhibiraju i aktivnost IL-7 i aktivnost IL-15 mogu da se koriste u lečenju LGL leukemije. Nekoliko primera izvođenja odnosi se na upotrebu BNZ-γ u lečenju LGL leukemije. U nekim primerima izvođenja, specifični γc-antagonistički peptidi koji selektivno samo IL-15 ili specifični γc-antagonistički peptidi koji selektivno IL-15 i IL-7, koriste se kao terapeutsko sredstvo za leukemije povezane sa CD4/CD8 T limfocitima, uključujući leukemiju koju izaziva HTLV-I.
[0065] Nekoliko primera izvođenja odnosi se na upotrebu γc-antagonističkih peptida koji selektivno inhibiraju aktivnost IL-9, samog ili u kombinaciji sa drugim članovima familije γccitokina, kao terapeutskog sredstva za ljudske bolesti koje uključuju poremećen razvoj Th17 ćelija.
[0066] Nekoliko primera izvođenja odnosi se na upotrebu γc-antagonističkih peptida koji selektivno inhibiraju aktivnost IL-15, kao terapeutskog sredstva za lečenje CD. Jedna skorašnja publikacija ukazala je na to da IL-21, uz IL-15, može da igra ulogu u patogenezi CD. (Videti Bodd et al., 2010, Mucosal Immunol. 3:594-601.) Ovo nagoveštava da bi optimalan tretman za CD konvencionalnim antitelima protiv citokina ili receptora za citokine mogao da ima koristi od kombinacije najmanje dva antitela koja prepoznaju komponentu koja pripada IL-15 i IL-21 sistemima. U nekim primerima izvođenja, prilagođeni derivati antagonističkih peptida koji selektivno inhibiraju aktivnost IL-15 i aktivnost IL-21, koriste se kao kao terapeutsko sredstvo za lečenje CD.
[0067] Osim što imaju terapeutske primene, γc-antagonistički peptidi imaju primene i u proizvodima za široku potrošnju. Nekoliko primera izvođenja odnosi se na upotrebu γcantagonističkih peptida u proizvodima za negu kože, kao što su aplikacije protiv starenja, protiv inflamacije i protiv akni, kao i druge srodne aplikacije. Neki primeri izvođenja odnose se na upotrebu γc-antagonističkih peptida u proizvodima za kosu, kao sastojaka koji pomažu protiv gubitka kose u cilju lečenja opadanja kose uzrokovanog autoimunim bolestima.
[0068] Drugi delovi ovog prikaza odnose se na razvijanje hemijskih jedinjenja (nepeptidnih, neproteinskih) koja imaju prostornu strukturu nalik na strukturu 19-očlane amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) i mogu da se smeste u džep γc-subjedinice tako da strukturno onemogućavaju pristup γc-citokina γc-subjedinici u cilju vezivanja. Neki primeri izvođenja odnose se na upotrebu strukturno sličnih hemijskih jedinjenja u funkciji inhibitora aktivnosti yc-citokina. Ova strategija molekulske mimikrije kojom se dalje dorađuje razvoj sintetskih jedinjenja koja po strukturi liče na postojeće biološke peptide/proteine, opisan je u publikaciji Orzaez et al., 2009 Chem. Med. Chem. 4:146-160. Drugi deo ovog prikaza se odnosi na primenu hemijskih jedinjenja (nepeptidnih, neproteinskih) koja imaju 3D strukturu nalik na strukturu 19-očlane amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) u lečenju bolesti posredovanih γc-citokinima.
[0069] Nekoliko delova ovog prikaza odnosi se na primenu peptida amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) u lečenju bolesti posredovanih γccitokinima. Drugi deo ovog prikaza odnosi se na primenu peptidnih derivata amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-VQ-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), pri čemu amino kiselinska sekvenca peptidnog derivata ima slična fizičko-hemijska svojstva kao i peptid amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), ali ima različitu biološku aktivnost, u lečenju bolesti posredovanih γc-citokinima. Drugi deo ovog prikaza odnosi se na primenu peptida amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) konjugovanog sa N- i C-terminusima ili sa bočnim ostacima postojećih bioloških proteina/peptida kod pacijenata, u cilju lečenja bolesti posredovanih γc-citokinima.
[0070] Nekoliko delova ovog prikaza odnosi se na primenu poliklonskih i monoklonskih antitela načinjenih protiv peptida koji sadrži amino kiselinsku sekvencu I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) kod pacijenta, kao imunogena, u cilju lečenja bolesti posredovanih γc-citokinima. Drugi deo ovog prikaza odnosi se na primenu, kod pacijenata, poliklonskih i monoklonskih antitela proizvedenih protiv peptidnih derivata amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), pri čemu amino kiselinska sekvenca peptidnog derivata ima slična fizičko-hemijska svojstva kao i peptid amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1), ali ima različitu biološku aktivnost, kao imunogena za lečenje bolesti posredovanih γc-citokinima.
Primena γc-antagonističkih peptida
[0071] Predmetni primeri izvođenja takođe obuhvataju upotrebu yc-antagonističkih peptida za proizvodnju medikamenta za lečenje bolesti. Predmetni primeri izvođenja takođe obuhvataju farmaceutsku kompoziciju koja uključuje γc-antagonističke peptide u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Farmaceutska kompozicija može da uključuje farmaceutski prihvatljiv nosač i netoksičnu, terapeutski efikasnu količinu yc-antagonističkih peptida, ili druge kompozicije prema predmetnim primerima izvođenja.
[0072] Predmetni primeri izvođenja obezbeđuju postupke za upotrebu farmaceutskih kompozicija koje sadrže efikasnu količinu antagonista za γc-citokine u pogodnom razblaživaču ili nosaču. γc-antagonist prema predmetnim primerima izvođenja može da bude formulisan u skladu sa poznatim postupcima koji se koriste za pripremu farmaceutski korisnih kompozicija. γc-antagonist može da se kombinuje u smeši, ili kao jedini aktivni materijal ili sa drugim poznatim aktivnim materijalima, sa farmaceutski pogodnim razblaživačima (npr., fosfat, acetat, Tris-HCl), konzervansima (npr., timerosal, benzil alkohol, parabeni), emulgatorskim jedinjenjima, sredstvima za povećanje rastvorljivosti, adjuvansima, i/ili nosačima kao što je goveđi serumski albumin. Pogodni nosači i njihove formulacije su opisani u publikaciji Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th ed. 1980 Mack Publishing CO. Osim toga, ovakve kompozicije mogu da sadrže γc-antagonist u kompleksu sa polietilen glikolom (PEG), jonima metala, ili inkorporiran u polimerna jedinjenja kao što su polisirćetna kiselina, poliglikolna kiselina, hidrogelovi itd., ili inkorporiran u lipozome, mikroemulzije, micele, unilamelarne ili multilamelarne vezikule, eritrocitne duhove ili sferoblaste. Ovakve kompozicije će uticati na fizičko stanje, rastvorljivost, stabilnost, brzinu oslobađanja in vivo, i brzinu in vivo klirensa γcantagonista. γc-antagonist može da bude konjugovan sa antitelima protiv ćelijski-specifičnih antigena, receptora, liganada, ili kuplovan sa ligandima za tkivno-specifične receptore.
[0073] Pogodni postupci za primenu γc-antagonista prema predmetnim primerima izvođenja mogu da budu odabrani, u zavisnosti od faktora kao što su vrste bolesti, stanje subjekata, i/ili mesto na koje je usmereno delovanje. γc-antagonisti mogu da se primenjuju topikalno, oralno, parenteralno, rektalno ili putem inhalacije. Izraz „parenteralno“ uključuje potkožne injekcije, inravensku, intramuskularnu, intraperitonealnu, intracisternsku injekciju, ili tehnike infuzije. Ove kompozicije će uobičajeno uključivati efiksnu količinu γc-antagonista, samog ili u kombinaciji sa efikasnom količinom bilo kog drugog aktivnog materijala. Količina peptida sadržanog u kompozicijama prema predmetnim primerima izvođenja, oblik doze farmaceutskih kompozicija, učestalost primene i slični faktori, mogu da se odaberu kao pogodni, u zavisnosti od faktora kao što su vrste bolesti, stanje subjekata, i/ili mesto na koje je usmereno delovanje. Ove doze i željene koncentracije lekova sadržane u kompozicijama, mogu da variraju usled pogođenosti brojnim parametrima, uključujući namenu, telesnu težinu i starosnu dob pacijenta, i rutu primene. Pilot studije će najpre biti sprovedene putem studija na životinjama, a zatim će ekstrapolacija na primenu kod ljudi biti sprovedena u skladu sa prihvaćenom praksom u oblasti.
[0074] U jednom delu ovog prikaza, ćelije domaćina koje su genetički modifikovane pomoću polinukleotida koji kodira najmanje jedan γc-antagonistički peptid, primenjuju se kod subjekta u cilju lečenja proliferativnog poremećaja i/ili u cilju smanjenja rasta malignih ćelija. Polinukleotid eksprimira ćelija domaćina, čime se peptidi proizvode u samom subjektu. Poželjno, ćelije domaćina su alogene ili autogene u odnosu na subjekta.
[0075] U dodatnom aspektu, γc-antagonistički peptidi mogu da se koriste u kombinaciji sa drugim vrstama terapije, na primer, sa terapijama koje inhibiraju proliferaciju i rast ćelija raka. Fraza „kombinovana terapija“ obuhvata primenu γc-antagonističkih peptida i dodatnog terapeutskog sredstva u vidu dela specifičnog režima lečenja čija je namena da obezbedi povoljno delovanje usled sadejstva ovih terapeutskih sredstava. Primena ovih terapeutskih sredstava u kombinaciji, uobičajeno se sprovodi tokom definisanog vremenskog perioda (obično su to minuti, sati, dani ili nedelje, u zavisnosti od toga koja je kombinacija odabrana).
[0076] Namena kombinovane terapije je da se obuhvati primena ovih terapeutskih sredstava na sekvencijalan način, to jest, tako što se svako terapeutsko sredstvo primenjuje u različito vreme, kao i primena ovih terapeutskih sredstava, ili najmanje dva terapeutska sredstva, na način koji je suštinski istovremen. Suštinski istovremena primena može da se postigne, na primer, primenjivanjem kod subjekta samo jedne kapsule koja ima fiksiran udeo svakog od terapeutskih sredstava, ili više kapsula, po jedna za svako od terapeutskih sredstava. Sekvencijalna ili suštinski istovremena primena svakog od terapeutskih sredstava može da se sprovede pogodnom rutom, uključujući, ali ne i ograničeno na, oralne rute, intravenske rute, intramuskularne rute, i direktnu apsorpciju kroz tkiva mukoznih membrana. Tu se terapeutska sredstva mogu primenjivati istom, ili različitim rutama. Redosled po kom se terapeutska sredstva primenjuju nije krucijalan.
[0077] Kombinovana terapija može takođe da obuhvati primenu terapeutskih sredstava koja su opisana prethodno u tekstu, u dodatnim kombinacijama sa drugim biološki aktivnim sastojcima (kao što su, ali ne i ograničeno na, drugo i različito terapeutsko sredstvo) i terapije bez lekova (kao što su, ali ne i ograničeno na, hirurško lečenje ili zračenje). Kada kombinovana terapija dodatno sadrži tretman zračenjem, taj tretman zračenjem može da se sprovede u bilo koje pogodno vreme, sve dotle dok se postiže povoljno delovanje usled sadejstva terapeutskih sredstava i tretmana zračenjem. Na primer, u pogodnim slučajevima povoljno delovanje se i dalje postiže kada se tretman zračenjem privremeno ukloni iz primene terapeutskih sredstava, možda na nekoliko dana ili čak nedelja.
[0078] U izvesnom delu ovog prikaza, γc-antagonistički peptidi mogu da se primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednim antiproliferativnim sredstvom odbranim iz grupe koja se sastoji od hemioterapijskog sredstva, antimetabolita i antitumorskog sredstva, kao i antimitotičkog sredstva, i antivirusnog sredstva, i antineoplastičnog sredstva, imunoterapeutskog sredstva, i radioterapeutskog sredstva.
[0079] U izvesnom delu ovog prikaza, γc-antagonistički peptidi mogu da se primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednim anti-inflamatornim sredstvom odabranim iz grupe koja se sastoji od steroida, kortikosteroida i nesteroidnih antiinflamatornih lekova.
[0080] U ovom dokumentu su takođe prikazani kitovi za izvođenje bilo kog od prethodno pomenutih postupaka. Kitovi mogu da uključuju γc-antagoniste u skladu sa predmetnim primerima izvođenja. U nekom delu ovog prikaza, kit može da uključuje uputstva. Uputstva mogu da budu u pisanom obliku ili obliku piktograma ili mogu da budu snimljena na nosačima uključujući audio traku, audio CD, video traku, DVD, CD-ROM, ili slično. Kitovi mogu da obuhvataju i pakovanje.
Definicije
[0081] Kako se ovde koristi, izraz „pacijent“ se odnosi na primaoca terapeutskog tretmana i uključuje sve organizme u okviru kraljevstva životinja. U poželjnim primerima izvođenja, životinja je iz familije sisara, kao što su ljudi, goveda, ovce, svinje, mačke, bafala, psi, koze, konji, magarci, jeleni i primati. Najpoželjnija životinja je čovek.
[0082] Kako se ovde koristi, izraz „tretirati“ ili bilo koja njegova varijacija (npr., , tretman, lečenje, itd.), odnosi se na bilo koji tretman pacijenta kod koga je dijagnostifikovano neko biološko stanje, kao što je CD4-, CD8- i LGL-leukemija, autoimunska bolest, sistemski eritematozni lupus, Sjegrenov sindrom, Vegenerova granulomatoza, celijakija, Hašimoto tireoiditis, kolagena bolest, reumatoidni artritis, inflamatorna bolest creva, diabetes melitus, psorijaza, degenerativna bolest neurona, multipla skleroza, uvietis, zapaljenje oka, bolest „kalem protiv domaćina“ (GvHD), mijastenija gravis, bolesti u vezi sa 1-humanim T ćelijskim limfotropnim tipa I i II (HTLV-I i HTLV-II), adultna T-ćelijska leukemija (ATL), mijelopatija/tropska spastična parapareza (HAM/TSP) u vezi sa HTLV, uveitis (HU), artropatija, pneumopatija, dermatitis, egzokrinopatija, miozitis, influenca, AIDS, HBV, herpes, astma, sinuzitis, polenska groznica, bronhitis, hronična opstruktivna bolest pluća (COPD), alergijski rinitis, akutni i hronični otitis, plućna fibroza, NK leukemija/limfom i NK-T leukemija/limfom. Izraz tretirati, kako se ovde koristi, uključuje: (i) sprečavanje ili odlaganje prezentacije simptoma povezanih sa biološkim stanjem od interesa kod pacijenta pod rizikom koji tek treba da ispolji simptome povezane sa biološkim stanjem; (ii) ublažavanje simptoma povezanih sa biološkim stanjem od interesa kod pacijenta kod koga je dijagnostifikovano to biološko stanje; (iii) sprečavanje, odlaganje ili poboljšavanje prezentacije simptoma povezanih sa komplikacijama, stanjima ili bolestima koje su uvezi sa biološkim stanjem od interesa, bilo kod pacijenta pod rizikom ili kod pacijenta sa dijagnozom tog biološkog stanja; (iv) usporavanje, odlaganje ili zaustavljanje progresije biološkog stanja; i/ili (v) sprečavanje, odlaganje, usporavanje, zaustavljanje ili ublažavanje ćelijskih događaja tokom inflamacije.
[0083] Izraz „simptom(i)“, kako se ovde koristi, odnosi se na uobičajene znakove i indikacije da pacijent pati od specifičnog stanja ili bolesti.
[0084] Izraz „efikasna količina“, kako se ovde koristi, odnosi se na količinu koja je neophodna da izazove željeni biološki odgovor. U skladu sa predmetnim primerima izvođenja, efikasna količina γc-antagonista je količina neophodna da obezbedi uočljivi efekat na najmanje jedan biološki faktor, za upotrebu u lečenju biološkog stanja.
[0085] „Tehnologija rekombinantne DNK“ ili „rekombinantan“, odnosi se na upotrebu tehnika i postupaka za proizvodnju specifičnih polipeptida iz mikrobijalnih (npr., bakterijskih, kvaščevih) ćelija, ćelija invertebrata (insekata), sisarskih ćelija ili organizama (npr., transgene životinje ili biljke) koje su transformisane ili transfektovane kloniranim ili sintetičkim DNK sekvencama, kako bi bila omogućena biosinteza heterologih peptida. Nativni obrazac glikozilacije biće ostvaren samo sa sisarskim ćelijskim ekspresionim sistemom. Prokariotskim ekspresionim sistemima nedostaje sposobnost glikozilacije sintetisanih proteina. Ćelije kvasca i insekata bezbeđuju jedinstven obrazac glikozilacije koji može da bude različit od nativnog obrasca.
[0086] „Nukleotidna sekvenca“ se odnosi na polinukleotid u obliku zasebnog fragmenta ili u vidu komponente većeg DNK konstrukta koji je dobijen od DNK ili RNK, najmanje jednom izolovanih u suštinski čistom obliku, bez kontaminirajućih endogenih materijala i u količini ili koncentraciji koja omogućava identifikaciju, manipulaciju i oporavak njenih sastavnih nukleotidnih sekvenci standardnim postupcima molekularne biologije (koji su prikazani u Current Protocols in Molecular Biology).
[0087] „Rekombinantni ekspresioni vektor“ se odnosi na plazmid koji sadrži transkripcionu jedinicu koja obuhvata sklop od (1) genetičkog elementa ili elemenata koji imaju regulatornu ulogu u ekspresiji gena, uključujući promotore i enhensere, (2) strukturnih ili kodirajućih sekvenci koje kodiraju polipeptid u skladu sa predmetnim primerima izvođenja, i (3) pogodnih sekvenci za inicijaciju transkripcije i translacije i, po želji, terminacionih sekvenci. Strukturni elementi namenjeni za upotrebu u sistemu kvasca ili sisarskom sistemu poželjno uključuju signalnu sekvencu koja omogućava ekstracelularno lučenje translatiranih polipeptida iz kvaščeve ili sisarske ćelije-domaćina.
[0088] „Rekombinantni mikrobijalni ekspresioni sistem“ odnosi se na suštinski homogenu monokulturu pogodnih organizama-domaćina, na primer, bakterija kao što je E. coli, ili kvasaca kao što je S. cerevisiae, koji imaju rekombinantnu transkripcionu jedinicu stabilno integrisanu u hromozomsku DNK ili nose rekombinantnu transkripcionu jedinicu u vidu komponente rezidentnog plazmida. U principu, ćelije domaćina, koje predstavljaju rekombinantan mikrobijalni ekspresioni sistem predstavljaju potomstvo samo jedne predačke transformisane ćelije. Rekombinantni mikrobijalni ekspresioni sistemi će eksprimirati heterologe polipeptide nakon indukcije regulatornih elemenata povezanih sa strukturnom nukleotidnom sekvencom koja se eksprimira.
[0089] Sledeći primeri su predstavljeni u svrhu ilustrovanja i ne treba ih tumačiti kao ograničenja.
PRIMERI
PRIMER 1
Postupak za procenu inhibitorne aktivnosti γc-antagonističkih peptida
[0090] Kapacitet bilo kog prilagođenog peptidnog derivata pripremljenog u skladu sa predmetnim primerima izvođenja, za inhibiciju delovanja jednog člana familije γc-citokina određuje se korišćenjem sisarskih ćelijskih testova kojima se meri njihov proliferativni odgovor u odnosu na tog člana familije γc-citokina.
[0091] Za svaki od šest yc-citokina, indikatorske ćelijske linije: CTLL-2, mišija CD8 T ćelijska linija koja može da se nabavi od Američke kolekcije tipskih kultura, i PT-18, mišija ćelijska linija mastocita i njen subklon PT-18β, transfektovane su humanim genom za IL-2Rβ, kako bi se ćelije učinile responsivnim za IL- 2 i IL-15 (Tagaya et al., 1996, EMBO J. 15:4928-39), i korišćene su za kavantitativno određivanje aktivnosti γc-citokina koje promovišu rast (metodološke reference potražiti u Current protocols in Immunology od izdavača Wiley and Sons). Indikatorske ćelije prikazuju polu-linearan dozno-zavistan odgovor kada se mere kolorimetrijskim testom WST-1 u određenom opsegu koncentracija (detaljan opis reagenasa i metoda potražiti u Clontech PT3946-1 i sa njim povezanom priručniku za korisnike). Kada su određene odgovarajuće doze citokina koje izazivaju 50% i 95% maksimalnog odgovora u inikatorskoj ćelijskoj liniji, u svaki bunarčić koji sadrži citokin i indikatorske ćelije dodate su različite koncentracije (u opsegu od 1 pM do 10 µM) prečišćenog ili sintetisanog prilagođenog peptidnog derivata. Smanjenje apsorpcije svetlosti na 450nm koristi se kao indikator inhibicije ćelijske proliferacije stimulisane citokinima. Uobičajeno, ćelije se stimulišu citokinima na takav način da apsorpcija u bunarčiću koji sadrži indikatorsku ćelijsku liniju i citokin iznosi između 2.0 i 3.0, što se spušta na opseg od 0.1 do 0.5 kada se dodaju inhibitorni peptidi.
PRIMER 2
BNZ-γ peptid specifično inhibira aktivnosti IL-9 i IL-15 koje promovišu rast
[0092] Koristeći PT-18β ćelije na način koji je prethodno opisan u tekstu, određena je sposobnost BNZ-γ peptida da specifično inhibira aktivnost odabranih γc-citokina koja promoviše rast (slika 3A). IL-3, koji nije γc-citokin, i koji podržava rast PT-18β ćelija, korišćen je kao negativna kontrola. Ukratko, PT-18β ćelije su inkubirane ili sa dva različita razblaženja BNZ-γ peptida, proizvedenog u HEK293T ćelijama (razblaženje originalnog supernatanta HEK293T ćelija transfektovanih ekspresionim konstruktom BNZ-γ u odnosu 1:20 ili 1:50) ili bez BNZ-γ peptida u prisustvu IL-3, IL-9, IL-15 ili IL-4 (1 nM svakog citokina u kulturi). Odgovori ćelija kad je u pitanju rast, određeni su 2 dana nakon uvođenja BNZ-γ peptida i citokina, upotrebom WST-1 testa. Aktivnost IL-3 (koji nije γc-citokin) koja promoviše rast nije bila inhibirana peptidom BNZ-γ. nasuprot tome, aktivnost IL-15 i IL- 9 bila je značajno (p<0.01 za Studentov T test) smanjena BNZ-γ peptidom. Na ćelijsku proliferaciju koju stimuliše IL-4, još jedan γccitokin, nije uticalo dodavanje BNZ-γ peptida. Rezultati za IL-3, IL-9, IL-15 i IL-4 su prikazani na slici 3A.
[0093] U sličnom testu je korišćena mišija ćelijska linija CTTL2. U ovom testu ćelije su gajene sa 0.5 nM rekombinantnog IL-2 u RPMI 10% fetalnog telećeg seruma. Kako bi se postavio test za proliferaciju, ćelije su 3 puta isprane od citokina. Ćelije su zasejane pri gustini od 1 x 10(5) ćelije po bunarčiću ploče sa 96 bunarčića, sa finalnom koncentracijom od 50 pM IL-2 ili IL-15. U svaki bunarčić je dodata različita koncentracija BNZ-γ peptida (0.1, 1, i 10 ug/ml). Ćelije su gajene tokom 20 sati i u toku prva 4 sata je u ploče dodat<3>H-timidin. Ćelije su sakupljene upotrebom čitača mikrotitar-ploča. Podaci su prikazani na slici 3B.
PRIMER 3
Postupak za merenje inhibicije aktivnosti γc-citokina testiranjem inkorporacije<3>H-timidina, kao markera ćelijske proliferacije
[0094] Inhibicija proliferacije indikatorske populacije ćelija indukovane γc-citokinom, pomoću prilagođenih antagonističkih peptidnih derivata, merena je testom inkorporacije<3>H-timidina. Ukratko, radioaktivno obeleženi timidin (1 mikroCi) primenjen je na 20-50,000 ćelija u proliferaciji, u prisustvu citokina. Radioaktivnost inkorporirana u ćelije merena je prebacivanjem radioaktivnosti vezane u ćelijama na filter od staklenih vlakana uz pomoć konvencionalnih harvestera (primer, Filtermate Universal Harvester kompanije Perkin- Elmer), nakon čega je radioaktivnost merena pomoću beta brojača (Primer 1450, Trilux scintilacioni brojač za mikrotitar ploče).
PRIMER 4
Postupak za merenje inhibicije aktivnosti γc-citokina testiranjem inkorporacije boje za praćenje ćelija sa funkcijom markera ćelijske proliferacije
[0095] Indikatorske ćelije su inkubirane u prisustvu odabranog γc-citokina ili u prisustvu odabranog γc-citokina i odabranog prilagođenog peptidnog derivata. Populacija ćelija je zatim obeležena in vitro pomoću boje za praćenje ćelija, na primer, CMFDA, C2925 od kompanije Invitrogen, i gubitak zelene fluorescencije u ćelijama, prilikom svake ćelijske deobe, praćen je na protočnom citometru (na primer, Beckton-Dickinson FACScalibur). Uobičajeno se, kao odgovor na stimulaciju γc-citokinom, na kanalu za zelenu fluorescenciju pojavi 7∼10 različitih pikova koji odgovaraju broju deoba koji su ćelije prošle. Inkubacija ćelija sa odabranim yc-citokinom i prilagođenim antagonističkim peptidnim derivatom smanjuje broj pikova na samo 1 do 3, u zavisnosti od stepena inhibicije.
PRIMER 5
Inhibicija unutarćelijskog prenošenja signala pomoću BNZ-γ i njegovih antagonističkih derivata
[0096] Pored toga što stimuliše ćelijsku proliferaciju, vezivanje γc-citokina za sopstvene receptore dovodi do raznovrsnog niza unutarćelijskih događaja. (Rochman et al. 2009 Nat. Rev. Immunol. 9:480-90, Pesu et al. 2005 Immunol. Rev. 203:127-142.) Odmah po vezivanju citokina za svoj receptor, tirozin kinaza po imenu Jak3 (Janus-kinaza 3) regrutuje se do receptora na plazma membrani. Ova kinaza fosforiliše tirozinske ostatke više proteina, uključujući γcsubjedinicu, STAT5 (prenosilac signala i aktivator transkripcije 5) i subjedinice PI3 (fosfatidilinozitol 3) kinaze. Od ovih fosforilacija, fosforilacija STAT5, prema brojnim studijama, ima ulogu u vezi sa proliferacijom ćelija koju inicira γc-citokin. (Pregled dat u Hennighausen and Robinson, 2008 Genes Dev. 22:711-21.) U skladu sa ovim objavljenim podacima, ispitivano je da li BNZ-γ peptid inhibira fosforilaciju tirozina u molekulu STAT5 u PT-18 ćelijama stimulisanim pomoću IL-15 (rezultati su prikazani na slici 3C).
[0097] PT-18β ćelije su stimulisane pomoću IL-15 u prisustvu ili odsustvu BNZ-γ peptida. Proteini citoplazme su ekstrahovani iz ćelija u skladu sa konvencionalnim postupkom opisanim u publikaciji Tagaya et al. 1996 EMBO J. 15:4928-39. Ekstrahovani proteini citoplazme su razdvojeni putem standardne SDS-PAGE (elektroforeze na natrijum dodecil sulfat poliakrilamidnom gelu) i fosforilacioni status je potvrđen pomoću antifosfo-STAT5 antitela (firma Cell Signaling Technology, kataloški br. 9354, Danvers MA) koristeći imunoblot tehniku (videti sliku 3C, gornji panel). Da bi se potvrdilo da je u svakoj koloni predstavljena slična ukupna količina proteina, membrana je potom stripovana, i ponovo testirana anti-STAT5 antitelom (firma Cell Signaling Technology, kataloški br.9358) (videti sliku 3C, donji panel).
[0098] Ovi rezultati su pokazali da je fosforilacija tirozina u STAT5, što predstavlja marker za prenošenje signala, indukovana pomoću IL-15 u PT-18β ćelijama, a da je fosforilacija tirozina u STAT5 značajno smanjena BNZ-γ peptidom.
PRIMER 6
Racionalni dizajn antagonističkih peptidnih derivata BNZ-γ
[0099] Peptidni derivati su pripremljeni na osnovu centralne sekvence D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q (SEQ ID NO: 2) (gde X označava bilo koju amino kiselinu), tako što su definisane amino kiseline centralne sekvence supstituisane amino kiselinama koje imaju identična fizičko-hemijska svojstva, kao što je prikazano na slici 2.
PRIMER 7
Postupak za identifikaciju inhibitorne specifičnosti prilagođenih antagonističkih peptidnih derivata
[0100] Inhibitorna specifičnost za yc-citokine prilagođenih antagonističkih peptidnih derivata određena je testiranjem sposobnosti prilagođenih peptidnih derivata da inhibiraju proliferativni odgovor na svih 6 γc-citokina kod ćelijske linije responsivne za neki citokin. Na primer, mišija ćelijska linija, CTLL-2, koristi se kako bi se odredilo da li peptidni kandidat inhibira funkciju IL-2 i IL-15. PT-18(β) ćelije se koriste kako bi se odredilo da li peptidni kandidat inhibira funkciju IL-4 i IL-9. PT-18 (7α) ćelije se koriste kako bi se odredilo da li peptidni kandidat inhibira funkciju IL-7, i PT-18(21α) ćelije se koriste kako bi se odredilo da li peptidni kandidat inhibira funkciju IL-21. PT-18(β) označava subklon PT-18 ćelija koji egzogeno eksprimira humani IL-2Rβ putem transfekcije gena (Videti Tagaya et al. 1996), PT-18(7α) označava subklon koji eksprimira humani IL-7Rα putem transfekcije gena i PT-18(21Rα) ćelije eksprimiraju humani IL-21Rα.
[0101] Druga alternativa je da se koriste druge ćelijske linije koje odgovaraju na niz citokina. Primer ovakve ćelijske linije je humana NK ćelijska linija NK92 koja je komercijalno dostupna kod ATCC (kataloški br. CRL-2407). Ova ćelijska linija je IL-2-zavisna ćelijska linija koja odgovara na druge citokine uključujući IL-9, IL-7, IL-15, IL-12, IL-18, IL-21 (Gong et al. 1994 Leukemia 8: 652-658,, Kingemann et al., 1996, Biol Blood Marrow Transplant 2:68;75, Hodge DL et al., 2002 J. Immunol. 168:9090-8)
PRIMER 8
Priprema γc-antagonističkih peptida
[0102] Prilagođeni derivati γc-antagonističkih peptida sintetišu se hemijski, ručnim i automatizovanim postupcima.
[0103] Ručna sinteza: Koristi se klasična sinteza u tečnoj fazi, koja uključuje kuplovanje karboksilne grupe C-terminusa jedne amino kiseline sa amino grupom ili N-terminusom druge. Alternativno, koristi se sinteza peptida u čvrstoj fazi (SPPS).
[0104] Automatizovana sinteza: Mnoge komercijalne kompanije obezbeđuju automatizovanu sintezu peptida po određenoj ceni. Ove kompanije koriste različite komercijalne aparate za sintezu peptida, uključujući sintetizere koje obezbeđuje kompanija Applied Biosystems (ABI). Prilagođeni derivati γc-antagonističkih peptida se sintetišu pomoću automatizovanih instrumenata za sintezu peptida.
PRIMER 9
Biološka proizvodnja prilagođenih derivata γc-antagonističkih peptida putem rekombinantne tehnologije
[0105] Prilagođeni derivati γc-antagonističkih peptida se biološki sintetišu u vidu propeptida koji se sastoje od pogodnog peptida za obeležavanje, signalnog peptida, ili peptida dobijenog od poznatog humanog proteina koji poboljšava ili stabilizuje strukturu BNZ-γ peptida i poboljšava njegovu biološku aktivnost. Po želji će biti dizajnirana i sekvenca pogodna za enzimsku degradaciju koja prethodi N-terminusu peptida, kako bi se iz finalnog proteina uklonio peptid za obeležavanje ili bilo koji deo peptida.
[0106] Nukleotidna sekvenca koja kodira prilagođeni peptidni derivat sa stop kodonom na 3’ kraju, inserira se u komercijalni vektor sa obeleživačem izvedenim iz tioredoksina E. coli i specijalnom peptidnom sekvencom koju prepoznaje i razgrađuje odgovarajući proteolitički enzim (na primer, enterokinaza) smešten između obeleživača i nukleotidne sekvence koja kodira prilagođeni peptidni derivat i stop kodon. Jedan primer pogodnog vektora je pThioHis plazmid koji je dostupan kod kompanije Invitrogen, CA. Moguća je i upotreba drugih ekspresionih vektora.
PRIMER 10
Konjugacija BNZ-γ i derivata za proteine nosača, u cilju imunizacije i stvaranja anti-BNZ-γ antitela
[0107] BNZ-γ i drugi prilagođeni peptidni derivati se koriste kako bi se životinje imunizovale u cilju dobijanja poliklonskih i monoklonskih antitela. Peptidi se konjuguju sa N- ili C-terminusom pogodnih proteina nosača (na primer, goveđi serumski albumin, hemocijanin iz prilepka (KLH), itd.) putem konvencionalnih postupaka u kojima se koriste glutaraldehid ili m-maleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estar. Konjugovani peptidi u sprezi sa pogodnim adjuvansom se zatim koriste za imunizaciju životinja kao što su zečevi, glodari ili magarci. Specifičnost dobijenih antitela se ispituje upotrebom konvencionalnih postupaka. Ako dobijena antitela reaguju sa imunogenim peptidom, onda se testira njihova sposobnost da inhibiraju aktivnost pojedinačnih γc-citokina u skladu sa testovima za ćelijsku proliferaciju opisanim u primerima 1-3. Usled složene prirode peptidnih derivata moguće je proizvesti jedno antitelo koje istovremeno prepoznaje dva različita citokina, zato što je priroda ovih peptida složena.
PRIMER 11
Postupak za proizvodnju velikih količina prilagođenih derivata γc-antagonističkih peptida
[0108] Rekombinantni proteini se proizvode u velikim količinama pomoću bezćelijskih sistema kao što je opisano na drugim mestima. (Videti Takai et al., 2010 Curr. Pharm. Biotechnol.
11(3):272-8.) Ukratko, cDNK koje kodiraju γc-antagonističke peptide i obeleživač subkloniraju se u pogodan vektor (Videti Takai et al., 2010 Curr. Pharm. Biotechnol. 11(3):272-8), koji se podvrgava in vitro transkripciji, nakon koje neposredno sledi in vitro translacija kako bi se proizveo obeleženi peptid. Pro-polipeptid se zatim prečišćava upotrebom imobilisanih antitela koja prepoznaju obeleženi epitop, tretira se proteolitičkim enzimom i čistoća eluata (koji uglavnom sadrži prilagođeni peptidni derivat od interesa) se testira konvencionalnom 18% tricin-SDS-PAGE (Invitrogen) elektroforezom i konvencionalnim komasi bojenjem. Ukoliko se ne postigne željeni stepen čistoće peptida (>98%), smeša se izlaže konvencionalnoj HPLC (tečna hromatografija visokog učinka) u cilju dodatnog prečišćavanja.
PRIMER 12
Upotreba prilagođenih derivata γc-antagonističkih peptida za blokiranje funkcije citokina kod HAM/TSP
[0109] HTLV-1-asocirana mijelopatija (HAM)/ tropska spastična parapareza (TSP) je hronična progresivna mijelopatija koja se sreće kod nekih ljudi zaraženih humanim T-limfotropnim virusom tipa I (HTLV-I). Infiltracija limfocita u kičmenu moždinu je povezana sa imunskim odgovorom na HTLV-I i uzrokuje oslobađanje nekih citokina. Neki od ovih citokina mogu takođe da oštete nerve.
[0110] Pacijenti sa HAM/TSP pokazuju stanje povišene aktivnosti imunskog sistema, slično stanju koje se uočava kod automunih bolesti (Oh et al. 2008 Neurol Clin. 26:781-785). Ovo stanje povišene aktivnosti se izražava u vidu sposobnosti T-ćelija kod HAM/TSP pacijenta da tokom otprilike nedelju dana spontano proliferišu u ex vivo kulturi, u odsustvu egzogeno dodatih citokina. Spontana proliferacija T-ćelija kod HAM/TSP pacijenata se bar delimično pripisuje autokrinim/parakrinim petljama IL-2, IL-9 i IL-15. Pokazano je da dodavanje antitela protiv IL-2 ili IL-15 receptora, koje blokira ove receptore, može da inhibira spontanu proliferaciju T-ćelija u sistemu HAM/TSP ex vivo kulture. Ova zapažanja, zajedno sa drugim podacima dobijenim iz ex vivo studija, obezbedila su osnov za uključivanje dva monoklonska antitela (anti-alfa lanac IL-2 receptora ili anti-Tac i anti-beta lanac IL-15 receptora) u kliničko lečenje HAM/TSP (Azimi et al. 2001 Proc. Natl. Acad. Sci.98:14559-64., Azimi et al., 1999 J. Immunol 163:4064-72). Antiantagonisti receptora za citokine u skladu sa ovde opisanim primerima izvođenja, bili bi ne samo dragoceni kao terapeutska imuno-modulatorna sredstva za lečenje HAM/TSP, već modulacija imunskog odgovora kod HAM/TSP pomoću antagonista receptora za citokine u skladu sa predmetnim primerima izvođenja, deluje kao dokaz ispravnosti koncepta prema kome se antagonisti receptora za citokine u skladu sa predmetnim primerima izvođenja, koriste u lečenju drugih autoimunskih bolesti.
[0111] Da bi pokazali efikasnost prilagođenih derivata γc-antagonističkih peptida u skladu sa ovde opisanim primerima izvođenja, testirali smo sposobnost BNZ-γ peptida da blokira imunski odgovor na HTLV-I, testom za spontanu proliferaciju T-ćelija u sistemu HAM/TSP ex vivo kulture. Testiranje proliferacije je sprovedeno na uzorcima krvi HAM/TSP pacijenata, sa i bez dodavanja BNZ-γ. Ovim testovim je ocenjena sposobnost BNZ-γ da blokira funkciju citokina, kao što su IL-2 i IL-15, koji su prisutni u ex vivo kulturi iz krvi HAM/TSP pacijenta i da spreče spontanu proliferaciju T-ćelija u ovim uzorcima.
[0112] U ex vivo testu spontane proliferacije T-ćelija, PBMC dobijene od HAM/TSP pacijenta su gajene pri gustini od 1 x 10(6) ćelija po bunarčiću, ploče sa 96 bunarčića u medijumu RPMI-10% FCS. U bunarčiće su dodavane rastuće koncentracije BNZ-γ peptida. Kao kontrola je, na sličan način, korišćen irelevantan peptid. Ćelije su inkubirane na 37°C u CO2inkubatoru tokom 3, 4 i 6 dana. Ćelijama je dodata količina od 1 uCi<3>H-timidina. Nakon dodatnih 6 sati inkubacije, ćelije su sakupljene i merena je stopa njihove proliferacije. Podaci za reprezentativnog HAM/TSP pacijenta su prikazani na slici 4A-D. Kao što je naznačeno na slici 4, BNZ-γ peptid inhibira spontanu proliferaciju T-ćelija u HAM/TSP kulturi pri koncentraciji od oko 1 ug/ml.
[0113] U ovom testu su dodatno mereni i drugi imunološki markeri. Procenat CD8 ćelija specifičnih za virus meren je tokom trajanja ex vivo kulture, pomoću tetramera virusnog proteina. Populacija CD4+CD25+ ćelija, markera T-ćelijske activacije, kao i bojenje Ki67, markera T-ćelijske proliferacije, praćeno je testom protočne citometrije.
[0114] Drugi oblici konjugovanog derivata BNZ-γ peptida mogu da se koriste u nekom sličnom budućem testu. Oni uključuju albumin, BSA, PEG, koji mogu da budu konjugovani sa peptidom nakon hemijske sinteze. Drugi biološki oblici BNZ-γ peptidnog konjugata mogu da uključuju regione poznatih proteinskih entiteta (uključujući, ali ne i ograničeno na Fc region humanog IgG), koji su fuzirani sa peptidnim derivatom BNZ-γ.
PRIMER 13
Postupak lečenja adultne T-ćelijske leukemije (ATL) kod humanog pacijenta, primenom derivata prilagođenog γc-antagonističkog peptida
[0115] Identifikovan je humani pacijent koji pati od adultne T-ćelijske leukemije. Efikasna doza derivata prilagođenog γc-antagonističkog peptida, na primer, BNZ- γ, koju je odredio lekar, primenjuje se kod pacijenta tokom vremenskog perioda koji je odredio lekar. Utvrđuje se da je lečenje efikasno ako pacijent uđe u remisiju.
PRIMER 14
Postupak lečenja HAM/TSP kod humanog pacijenta, primenom derivata prilagođenog γcantagonističkog peptida
[0116] Identifikovan je humani pacijent koji pati od HAM/TSP. Efikasna doza derivata prilagođenog γc-antagonističkog peptida, na primer, BNZ- γ, koju je odredio lekar, primenjuje se kod pacijenta tokom vremenskog perioda koji je odredio lekar. Utvrđuje se da je lečenje efikasno ako se simptomatologija pacijenta poboljša ili ako se progresija bolesti zaustavi ili uspori.
LITERATURA
[0117]
Antony, P.A., Paulos, C.M., Ahmadzadeh, M., Akpinarli, A., Palmer, D.C., Sato, N., Kaiser A., Heinrichs, C.S., Klebanoff, C.A., Tagaya, Y., i Restifo, NP., Interleukin-2-dependent mechanisms of tolerance and immunity in vivo.2006 J. Immunol. 176:5255-66.
Azimi, N., Nagai, M., Jacobson, S., Waldmann, T.A., IL-15 plays a major role in the persistence of Taxspecific CD8 cells in HAM/TSP patients. 2001 Proc. Natl. Acad. Sci.
98:14559-64.
Azimi, N., Mariner J., Jacobson S., Waldmann T.A., How does interleukin 15 contribute to the pathogenesis of HTLV type-1 associated myelopathy/tropical spastic paraparesis? 2000 AIDS Res. Hum. Retroviruses 16:1717-22.
Azimi, N., Jacobson, S., Leist, T., Waldmann, T.A., Involvement of IL-15 in the pathogenesis of human T lymphotropic virus type-I-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis: implications for therapy with a monoclonal antibody directed to the IL-2/15R beta receptor.1999 J. Immunol.163:4064-72.
Azimi, N., Brown, K., Bamford, R.N., Tagaya, Y., Siebenlist, U., Waldmann, T.A., Human T cell lymphotropic virus type I Tax protein trans-activates interleukin 15 gene transcription through an NF-kappaB site. 1998 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:2452-7.
Bazan, J.F., Hematopoietic receptors and helical citokines. 1990 Immunol. Today 11:350-354.
Bettini, M., i Vignali, D.A., Regulatory T cells and inhibitory citokines in autoimmunity.
2009 Curr. Opin. Immunol. 21:612-8.
Bodd, M., Raki, M., Tollefsen, S., Fallang, L.E., Bergseng, E., Lundin, K.E., Sollid, L.M., HLA-DQ2-restricted gluten-reactive T cells produce IL-21 but not IL-17 or IL-22. 2010 Mucosal Immunol. 3:594-601.
De Rezende, L.C., Silva I.V., Rangel, L.B., Guimaraes, M.C., Regulatory T cells as a target for cancer therapy. 2010 Arch. Immunol. Ther. Exp.58:179-90.
Dubois, S., Mariner, J., Waldmann, T.A., Tagaya, Y., IL-15Ralpha recycles and presents IL-15 In trans to neighboring cells.2002 Immunity 17:537-47.
Dodge DL. Et al., IL-2 i IL-12 alter NK cell responsiveness to IFN-gamma-inducible protein 10 by down-regulating CXCR3 expression.J. Immun.168:6090-8.
Fehniger, T.A., Suzuki, K., Ponnappan, A., Van- Deusen, J.B., Cooper, M.A., Florea, S.M., Freud, A.G., Robinson, M.L., Durbin, J., Caligiuri, M.A., Fatal leukemia in interleukin 15 transgenic mice follows early expansions in natural killer and memory phenotype CD8+ T cells. 2001 J. Exp. Med.193:219-31.
Fisher, A.G., Burdet, C., LeMeur, M., Haasner, D., Gerber, P., Cerediq, R., Lymphoproliferative disorders in an IL-7 transgenic mouse line.1993 Leukemia 2:S66-68.
Gong JH, et al. Characterization of a human cell line (NK-92) with phenotypical and functional characteristics of activated natural killer cells. Leukemia 8: 652-658, 1994.
Hennighausen, L., Robinson, G.W., Interpretation of cytokine signaling through the transcription factors STAT5A and STAT5B.2008 Genes Dev.22:711-21.
Klingemann HG, et al. A cytotoxic NK-cell line (NK-92) for ex vivo purging of leukemia from blood. Biol. Blood Marrow Transplant. 2: 68-75, 1996.
Krause, C.D. and Pestka, S., Evolution of the Class 2 cytokines and receptors, and discovery of new friends and relatives.2005 Pharmacol. i Therapeutics 106:299-346.
Kundig, T.M., Schorle, H., Bachmann, M.F., Hengartener, H., Zinkernagel, R.M., Horak, I., Immune Responses of the interleukin-2-deficient mice. 1993 Science 262:1059-61.
Le Buanec, H., Paturance, S., Couillin, I., Schnyder-Candrian, S., Larcier, P., Ryffel, B., Bizzini, B., Bensussan, A., Burny, A., Gallo, R., Zagury, D., Peltre, G., Control of allergic reactions in mice by an active anti-murine IL-4 immunization. 2007 Vaccine 25:7206-16.
Littman, D.R., Rudensky, AY., Th17 and regulatory T cells in mediating and restraining inflammation. 2010 Cell 140(6):845-58.
Miyagawa, F., Tagaya, Y., Kim, B.S., Patel, H.J., Ishida, K., Ohteki, T., Waldmann, T.A., Katz, S.I., IL-15 serves as a costimulator in determining the activity of autoreactive CD8 T cells in an experimental mouse model of graft-versus-host-like disease. 2008 J. Immunol.
181:1109-19.
Noguchi, M., Yi, H., Rosenblatt, H.M., Filipovich, A.H., Adelstein, S., Modi, W.S., McBride, O.W., Leonard, W.J., Interleukin 2 receptor gamma chain mutation results in X-linked severe combined immunodeficiency in humans. 1993 Cell 73:147-157.
OH, U., Jacobson S., Treatment of HTLV-1-Associated Myelopathy / Tropical Spastic Paraparesis: Towards Rational Targeted Therapy 2008 Neurol Clin. 200826: 781-785.
Orzaez, M., Gortat, A., Mondragon, L., Perez-Paya, E., Peptides and Peptide Mimics as Modulators of Apototic Pathways. 2009 Chem. Med. Chem. 4:146-160.
O’Shea, J.J., Targeting the Jak/STAT pathway for immunosuppression. 2004 Ann. Rheum. Dis. 63:(suppl II): ii67-71.
Paul, W.E., Pleiotropy and redundancy: T cell-derived lymphokines in the immune response. 1989 Cell 57:521-4.
Pesu M, Candotti F, Husa M, Hofmann SR, Notarangelo LD, i O’Shea JJ. Jak3, severe combined immunodeficiency, and a new class of immunosuppressive drugs. 2005 Immunol. Rev. 203:127-142.
Pesu, M., Laurence, A., Kishore, N., Zwillich, S., Chan, G., O’Shea, J.J., Therapeutic targeting of Janus kinases. Immunol. 2008 Rev.223:132-142.
Rochman, Y., Spolski, R., Leonard, W.J., New Insights into the regulation of T cells by gamma c family cytokines. 2009 Nat. Rev. Immunol. 9:480-90.
Sakaguchi, S., Yamaguchi, T., Nomura, T., Ono, M., Regulatory T cells and immune tolerance. 2008 Cell 133: 775-87.
Sato, N., Sabzevari, H., Fu, S., Ju, W., Bamford, R.N., Waldmann, T.A., i Tagaya, Y., Development of an IL-15-Autocrine CD8 T-cell Leukemia in IL-15 Transgenic mice requires the cis-expression of IL-15R apha. Blood 2011 in press.
Sugamura, K., Asao, H., Kondo, M., Tanaka, N., Ishii, N., Nakamura, M., Takeshita, T., The common gamma-chain for multiple citokin receptors. 1995 Adv. Immunol. 59: 225-277.
Sugamura, K., Asao, H., Kondo, M., Tanaka, N., Ishii, N., Ohbo, K., Nakamura, M., Takeshita, T., The interleukin-2 receptor gamma chain: its role in the multiple cytokine receptor complexes and T cell development in XSCID. 1996 Annu. Rev. Immunol. 14:179-205.
Tagaya, Y., Burton, J.D., Miyamoto, Y., Waldmann, TA., Identification of a novel receptor/signal transduction pathway for IL-15/T in mast cells.1996 EMBO J.15:4928-39.
Tagaya, Y., Memory CD8 T cells now join "Club 21".2010 J. Leuk. Biol.87:13-15.
Takai, K., Sawasaki, T., i Endo. Y. The Wheat-Germ Cell-Free Expression System, 2010 Curr. Pharm. Biotechnol. 11:272-8.
Tanaka, T., et al., A novel monoclonal antibody against murine IL-2 receptor beta-chain. Characterization of receptor expression in normal lymphoid cells i EL-4 cells. 1991 J. Immunol. 147:2222-28.
Takeshita, T., Asao, H., Ohtani, K., Ishii, N., Kumaki, S., Tanaka, N., Manukata, H., Nakamura, M., Sugamura, K., Cloning of the Gamma chain of the Human IL2 receptor.
1992 Science 257:379-382.
Waldmann, T.A., Anti-Tac (daclizumab, Zenapax) in the treatment of leukemia, autoimmune diseases, and in the prevention of allograft rejection: a 25-year personal odyssey. 2007 J. Clin. Immunol.27: 1-18.

Claims (14)

Patentni zahtevi
1. Izolovani ili prečišćeni peptid, koji sadrži centralni γc-blok amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO:1) (BNZ-gama), i pri čemu peptid može da inhibira aktivnost jednog ili više γc-citokina, odabranih iz grupe koja se sastoji od: IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 ili IL-21.
2. Izolovani ili prečišćeni peptid prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što se peptid u osnovi sastoji od amino kiselinske sekvence I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S (SEQ ID NO: 1) (BNZ-γ).
3. Izolovani ili prečišćeni peptid prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačen time što peptid inhibira aktivnost IL-15 i IL-9.
4. In vitro postupak za blokiranje prenošenja signala preko jednog ili više članova familije yc citokina, koji sadrži dovođenje u kontakt ćelije sa izolovanim ili prečišćenim peptidom prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3.
5. In vitro postupak za inhibiciju vezivanja γc citokina za γc subjedinicu, koji sadrži dovođenje u kontakt γc subjedinice sa izolovanim ili prečišćenim peptidom prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3.
6. Farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski efikasnu količinu izolovanog ili prečišćenog peptida prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ekscipijens ili njihovu kombinaciju.
7. Izolovani ili prečišćeni peptid prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 6, za upotrebu u cilju ublažavanja ili lečenja bolesti posredovane γc citokinom, naznačen time što je bolest posredovana γc citokinom odabrana iz grupe koja se sastoji od: CD4-leukemije, CD8-leukemije, LGL-leukemije, sistemskog eritematoznog lupusa, Sjegrenovog sindroma, Vegenerove granulomatoze, celijakije, Hašimoto tireoiditisa, reumatoidnog artritisa, inflamatorne boesti creva, dijabetesa melitusa, psorijaze, multiple skleroze, uveitisa, zapaljenja oka i bolesti „kalem protiv domaćina“ (GvHD).
8. Izolovani ili prečišćeni peptid prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 6, za upotrebu u cilju ublažavanja ili lečenja bolesti u vezi sa HTLV-1-asociranom mijelopatijom (HAM)/ tropskom spastičnom paraparezom (TSP).
9. Peptid ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 8, naznačeni time što je bolest u vezi sa HAM/TSP odabrana iz grupe koja se sastoji od: adultne T-ćelijske leukemije (ATL), HTLV-asocirane mijelopatije/tropske spastične parapareze (HAM/TSP) i drugih ne-neoplastičnih inflamatornih bolesti u vezi sa HTLV, kao što su uveitis (HU), artropatija, pneumopatija, dermatitis, egzokrinopatija i miozitis.
10. Izolovani ili prečišćeni peptid prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 6, za upotrebu u cilju ublažavanja ili lečenja inflamatorne respiratorne bolesti.
11. Peptid ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 10, naznačeni time što je inflamatorna respiratorna bolest odabrana iz grupe koja se sastoji od: astme, sinuzitisa, polenske groznice, bronhitisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), alergijskog rinitisa, akutnog i hroničnog otitisa, i plućne fibroze.
12. Upotreba izolovanog ili prečišćenog peptida prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 6, u kozmetičke svrhe, naznačena time što je kozmetička svrha odabrana iz grupe koja se sastoji od: tretmana gubitka kose, održavanja noktiju i smanjenje vidljivih znakova starenja.
13. Izolovani ili prečišćeni peptid prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 6, za upotrebu u ublažavanju ili lečenju akni ili opekotina od sunca.
14. Izolovani ili prečišćeni peptid prema patentnom zahtevu 2, naznačen time što je peptid konjugovan sa N-terminusima, C-terminusima ili bočnim ostacima postojećih bioloških proteina/peptida, pri čemu su postojeći biološki proteini/peptidi odabrani iz grupe koja se sastoji od, albumina i Fc regiona imunoglobulina G (IgG), ili
izolovani ili prečišćeni peptid prema patentnom zahtevu 2, pri čemu je peptid konjugovan sa poli etilen glikolom (PEG), ili izolovani ili prečišćeni peptid prema patentnom zahtevu 2, pri čemu je peptid konjugovan sa BSA.
RS20200324A 2011-01-18 2012-01-17 Kompozicije za modulaciju aktivnosti gama-c-citokina RS60050B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161433890P 2011-01-18 2011-01-18
US201161527049P 2011-08-24 2011-08-24
PCT/US2012/021566 WO2012099886A1 (en) 2011-01-18 2012-01-17 Compositions and mehthods for modulating gamma-c-cytokine activity
EP12736203.6A EP2665486B1 (en) 2011-01-18 2012-01-17 Compositions for modulating gamma-c-cytokine activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS60050B1 true RS60050B1 (sr) 2020-04-30

Family

ID=46516044

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20200324A RS60050B1 (sr) 2011-01-18 2012-01-17 Kompozicije za modulaciju aktivnosti gama-c-citokina

Country Status (19)

Country Link
US (10) US9133244B2 (sr)
EP (3) EP2665486B1 (sr)
JP (4) JP6395379B2 (sr)
CN (2) CN103501805B (sr)
AU (3) AU2012207456C1 (sr)
BR (1) BR112013018046B1 (sr)
CA (1) CA2824515C (sr)
CY (1) CY1122846T1 (sr)
DK (2) DK2665486T3 (sr)
ES (2) ES2989085T3 (sr)
FI (1) FI3636274T3 (sr)
HR (1) HRP20200470T1 (sr)
LT (1) LT2665486T (sr)
PL (2) PL2665486T3 (sr)
PT (2) PT2665486T (sr)
RS (1) RS60050B1 (sr)
SI (1) SI2665486T1 (sr)
SM (1) SMT202000142T1 (sr)
WO (1) WO2012099886A1 (sr)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI2665486T1 (sl) 2011-01-18 2020-07-31 Bioniz, Llc Sestavki za moduliranje aktivnosti gama-C-citokina
US9959384B2 (en) 2013-12-10 2018-05-01 Bioniz, Llc Methods of developing selective peptide antagonists
CN104789527B (zh) * 2015-05-15 2018-05-29 江苏杰晟生物科技有限公司 一种自体自然杀伤细胞鸡尾酒式培养的制备方法及其试剂盒产品
PT3359556T (pt) * 2015-10-09 2021-08-30 Bioniz Llc Modulação da atividade de citocinas gama-c
WO2017190684A1 (zh) * 2016-05-06 2017-11-09 王牧林 白细胞介素组合及其用途
EP3606940A4 (en) * 2017-04-07 2020-11-18 Bioniz, LLC STABLE MODULATORS OF CYTOKINE GAMMA-C ACTIVITY
WO2020017629A1 (ja) * 2018-07-19 2020-01-23 国立大学法人東京大学 Ｈｔｌｖ－１関連脊髄症（ｈａｍ）治療又は予防剤、及びｈａｍの治療方法
WO2020023702A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 AskGene Pharma, Inc. Novel il-21 prodrugs and methods of use thereof
WO2020033312A1 (en) 2018-08-06 2020-02-13 Medikine, Inc. Il-2 receptor binding compounds
EP3930687A4 (en) 2019-02-25 2023-06-07 The University of Chicago METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF INFLAMMATORY AND AUTOIMMUNE CONDITIONS USING ECM AFFINITY PEPTIDES LINKED TO ANTI-INFLAMMATORY AGENTS
BR112021021878A2 (pt) * 2019-05-03 2022-01-18 Bioniz Llc Modulação dos efeitos de sinalização da gama-c-citocina para tratamento da alopecia e distúrbios associados
US11845801B2 (en) 2019-06-12 2023-12-19 AskGene Pharma, Inc. IL-15 prodrugs and methods of use thereof
KR102265435B1 (ko) * 2019-08-20 2021-06-15 주식회사 케어젠 피부 미백 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
BR112022008750A2 (pt) 2019-11-05 2022-07-19 Medikine Inc Composto de ligação de receptor duplo, composição farmacêutica, método para tratar uma doença em um paciente, método para expandir células imunes, método para reforçar uma vacina, método para modificar a resposta imune e ácido nucleico
BR112022008744A2 (pt) 2019-11-05 2022-07-19 Medikine Inc Ligante de il-2rss, ligante de il-2r¿c, composto de ligação a il-2r¿¿c, composição farmacêutica, método para tratar uma doença em um paciente, método para expandir células imunes, método de uma terapia celular, método para reforçar uma vacina, método para modificar a resposta imune e ácido nucleico
MX2022009302A (es) 2020-02-03 2022-11-16 Medikine Inc Compuestos de unión a il-7r¿.
TW202342505A (zh) 2020-02-03 2023-11-01 美商麥地金公司 IL-7Rαγc結合化合物
CA3174786A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Sayantan Mitra Activatable cytokine constructs and related compositions and methods
US20230338473A1 (en) * 2020-06-24 2023-10-26 Bioniz, Llc Antagonistic peptide targeting il-2, il-9, and il-15 signaling for the treatment of cytokinerelease syndrome and cytokine storm associated disorders
WO2022054565A1 (ja) 2020-09-08 2022-03-17 デクソンファーマシューティカルズ株式会社 サイトカインストーム抑制剤、サイトカインストーム抑制剤の使用方法およびスクリーニング方法
BR112023018735A2 (pt) 2021-03-16 2023-11-28 Cytomx Therapeutics Inc Construtos de citocinas ativáveis mascarados e composições e métodos relacionados
JP6974892B1 (ja) 2021-05-27 2021-12-01 デクソンファーマシューティカルズ株式会社 癌悪液質の改善剤および癌悪液質の改善方法
US11999771B2 (en) 2022-04-07 2024-06-04 Medikine, Inc. IL-7Rαγc ligand immunoglobulin fusion proteins

Family Cites Families (87)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5700913A (en) 1982-12-15 1997-12-23 Ajinomoto Co., Inc. Unglycosylated human interleukin-2 polypeptides
US4518584A (en) 1983-04-15 1985-05-21 Cetus Corporation Human recombinant interleukin-2 muteins
IL80678A (en) 1985-11-19 1999-05-09 Schering Biotech Corp Human interleukin-4
US6028186A (en) 1991-06-10 2000-02-22 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity nucleic acid ligands of cytokines
US7008624B1 (en) 1995-02-22 2006-03-07 Immunex Corporation Antagonists of interleukin-15
US5795966A (en) 1995-02-22 1998-08-18 Immunex Corp Antagonists of interleukin-15
ZA967182B (en) 1995-08-24 1998-05-25 Magainin Pharma Asthma associated factors as targets for treating atopic allergies including asthma and related disorders.
IL130238A0 (en) 1999-06-01 2000-06-01 Peptor Ltd Conformationally constrained backbone cyclized interleukin-6 antagonists
WO1997043416A1 (en) 1996-05-10 1997-11-20 Biogen, Inc. Common gamma chain blocking agents
US6127387A (en) 1996-12-10 2000-10-03 Thomas Jefferson University Use of CD4-binding small molecules to inhibit immune responses
CA2296770A1 (en) * 1997-07-14 1999-01-28 Bolder Biotechnology, Inc. Derivatives of growth hormone and related proteins
US7198789B2 (en) 1998-03-17 2007-04-03 Genetics Institute, Llc Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
US7189400B2 (en) 1998-03-17 2007-03-13 Genetics Institute, Llc Methods of treatment with antagonists of MU-1
US6861227B2 (en) 1998-03-19 2005-03-01 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to cytokine receptor common gamma chain like
US6955807B1 (en) 1998-05-15 2005-10-18 Bayer Pharmaceuticals Corporation IL-2 selective agonists and antagonists
EP0972780A1 (en) * 1998-05-18 2000-01-19 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Il-6 antagonist peptides
US6307024B1 (en) 1999-03-09 2001-10-23 Zymogenetics, Inc. Cytokine zalpha11 Ligand
US7192713B1 (en) 1999-05-18 2007-03-20 President And Fellows Of Harvard College Stabilized compounds having secondary structure motifs
RU2270691C2 (ru) 2000-05-12 2006-02-27 Бет Израел Диконесс Медикал Сентер, Инк. Композиции и способы достижения иммунной супрессии
MXPA03002278A (es) * 2000-09-14 2004-12-03 Beth Israel Hospital Modulacion de respuestas de la celula t mediadas por il-2 e il-15.
MXPA03003407A (es) * 2000-10-18 2004-05-04 Immunex Corp Metodos para el tratamiento de artritis reumatoide usando antagonistas il-17.
US20040126900A1 (en) 2001-04-13 2004-07-01 Barry Stephen E High affinity peptide- containing nanoparticles
JP2005502621A (ja) 2001-07-06 2005-01-27 スキャンポ アーゲー インターロイキン２阻害剤および抗菌剤を含む局所投与用組成物
AU2002356858A1 (en) 2001-10-24 2003-05-06 National Jewish Medical And Research Center Structure of tall-1 and its cognate receptor
AU2002336676A1 (en) * 2001-11-05 2003-05-19 Zymogenetics, Inc Il-21 antagonists
ATE547430T1 (de) 2002-01-18 2012-03-15 Zymogenetics Inc Multimere des cytokinrezeptors zcytor17
EP1589990B1 (en) 2002-03-27 2012-11-14 The Government of the United States of America, represented by The Secretary Department of Health and Human services Il-21 for use in treating cancer
WO2003087320A2 (en) * 2002-04-09 2003-10-23 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Antagonists of il-21 and modulation of il-21-mediated t cell responses
AU2003243189B2 (en) 2002-05-01 2008-01-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of using cytokine antagonists to treat HIV infection and AIDS
AU2003243415A1 (en) * 2002-06-07 2003-12-22 Zymogenetics, Inc. Use of il-21 in cancer and other therapeutic applications
JP2005535636A (ja) 2002-06-28 2005-11-24 アメリカ合衆国 インターフェロンβおよびＩＬ−２Ｒアンタゴニストを用いて自己免疫疾患を治療する方法
WO2004003156A2 (en) 2002-07-01 2004-01-08 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Il-21 as a regulator of immunoglobin production
MXPA05000655A (es) 2002-07-15 2006-02-22 Harvard College Metodos y composiciones para modular el desarrollo y la funcion de las celulas t helper (th).
EP1554307A2 (de) * 2002-10-14 2005-07-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Il-15 antagonisten
EP1444989A1 (en) 2003-02-07 2004-08-11 Giorgio Dr. Stassi Sensitizing cells for apoptosis by selectively blocking cytokines
WO2004084835A2 (en) 2003-03-21 2004-10-07 Wyeth Treating immunological disorder using agonists of interleukin-21/ interleukin-21 receptor
WO2004103295A2 (en) * 2003-05-14 2004-12-02 Bayer Pharmaceuticals Corporation Interleukin-9 antagonist muteins and their pharmacological methods of use
US20050124044A1 (en) 2003-06-19 2005-06-09 Cunningham Mark R. Interleukin-21 analogs
DE602004031681D1 (de) 2003-07-21 2011-04-14 Transgene Sa Multifunktionelle Cytokine
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US7785580B2 (en) 2003-08-29 2010-08-31 Aerovance, Inc. Modified IL-4 mutein receptor antagonists
CA2538083A1 (en) 2003-09-25 2005-04-07 Zymogenetics, Inc. Methods of treating autoimmune diseases using il-21
US20060228331A1 (en) 2003-10-10 2006-10-12 Novo Nordisk A/S IL-21 Derivatives and variants
EP1708737A2 (en) 2004-01-15 2006-10-11 Novo Nordisk A/S Use of interleukin-21 for the treatment of autoimmune diseases and allograft rejection
ES2395087T3 (es) 2004-05-05 2013-02-08 Valorisation-Recherche, Société en Commandite Antagonistas del receptor de interleuquina-1, composiciones y métodos de tratamiento
AU2005244942A1 (en) 2004-05-19 2005-12-01 Wyeth Modulation of immunoglobulin production and atopic disorders
WO2006135385A2 (en) 2004-08-05 2006-12-21 Wyeth Antagonizing interleukin-21 receptor activity
CU23472A1 (es) 2004-09-17 2009-12-17 Ct Ingenieria Genetica Biotech Péptido antagonista de la interleucina-15
WO2006105538A2 (en) 2005-03-31 2006-10-05 Centocor, Inc. Methods and compositions for treating il-21 related pathologies
GT200600148A (es) 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
RU2412199C2 (ru) 2005-04-18 2011-02-20 Ново Нордиск А/С Варианты ил-21
EP1899364B2 (en) 2005-05-17 2024-10-30 University of Connecticut Compositions and methods for immunomodulation in an organism
US8512946B2 (en) * 2005-08-10 2013-08-20 Northwestern University Composite particles
EP1777294A1 (en) 2005-10-20 2007-04-25 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) IL-15Ralpha sushi domain as a selective and potent enhancer of IL-15 action through IL-15Rbeta/gamma, and hyperagonist (IL15Ralpha sushi -IL15) fusion proteins
PL1963369T3 (pl) 2005-11-28 2013-10-31 Zymogenetics Inc Antagoniści IL-21
EP2066689A4 (en) 2006-09-07 2010-04-28 Univ South Florida HYD1-PEPTIDE AS ANTICREMENT
CA2666426A1 (en) 2006-10-26 2008-05-02 Novo Nordisk A/S Il-21 variants
EP2109620B1 (en) * 2006-12-21 2012-08-22 Novo Nordisk A/S Interleukin-21 variants with altered binding to the il-21 receptor
US7910123B2 (en) 2007-09-05 2011-03-22 Warsaw Orthopedic Methods of treating a trauma or disorder of the knee joint by local administration and sustained-delivery of a biological agent
WO2009100035A2 (en) 2008-02-01 2009-08-13 Wyeth Interleukin-21 (il-21) and il-21 receptor (il-21r) modulation of regulatory t cells and forkhead box p3 (foxp3)
US8513208B2 (en) 2008-02-28 2013-08-20 Argos Therapeutics, Inc. Transient expression of immunomodulatory polypeptides for the prevention and treatment of autoimmune disease, allergy and transplant rejection
WO2009132821A1 (en) 2008-04-28 2009-11-05 Giuliani International Limited Interleukin (il-21) binding proteins and methods of making and using same
WO2009150650A2 (en) * 2008-06-12 2009-12-17 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Drug-eluting medical devices
EP2356139A4 (en) 2008-07-23 2013-01-09 Harvard College LIGURE COMBINED POLYPEPTIDES
CA2739357A1 (en) 2008-09-23 2010-04-08 Wyeth Llc Methods for predicting production of activating signals by cross-linked binding proteins
ES2620437T3 (es) 2008-11-17 2017-06-28 Københavns Universitet Péptidos derivados de IL-4 para la modulación de la respuesta inflamatoria crónica y el tratamiento de enfermedades autoinmunes
EP2384337A1 (en) 2009-01-05 2011-11-09 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Means and method for the treatment of antibody deficiency diseases based on il-21 and il-21 variants
RU2011140335A (ru) 2009-03-05 2013-04-10 Эбботт Лэборетриз Связывающие il-17 белки
EP2406282A1 (en) 2009-03-11 2012-01-18 Novo Nordisk A/S Interleukin-21 variants having antagonistic binding to the il-21 receptor
GB0908613D0 (en) 2009-05-20 2009-06-24 Immunocore Ltd T Cell Reseptors
AU2010273220B2 (en) 2009-07-13 2015-10-15 President And Fellows Of Harvard College Bifunctional stapled polypeptides and uses thereof
RU2597989C2 (ru) 2009-12-11 2016-09-20 Проекто Де Биомедисина Сима С.Л. Конъюгаты и композиции для иммунотерапии и противоопухолевого лечения
JP5835741B2 (ja) * 2010-02-26 2015-12-24 国立大学法人 長崎大学 抗原または薬物送達複合体
US9782454B2 (en) 2010-04-22 2017-10-10 Longevity Biotech, Inc. Highly active polypeptides and methods of making and using the same
CN103168048B (zh) 2010-06-09 2017-02-15 酶原遗传学有限公司 二聚vstm3融合蛋白和相关的组合物和方法
WO2012006585A2 (en) * 2010-07-09 2012-01-12 The Regents Of The University Of California Use of interleukin-15 to treat cardiovascular diseases
US20130224109A1 (en) 2010-07-20 2013-08-29 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Compositions and methods featuring il-6 and il-21 antagonists
SI2665486T1 (sl) 2011-01-18 2020-07-31 Bioniz, Llc Sestavki za moduliranje aktivnosti gama-C-citokina
EP2537933A1 (en) 2011-06-24 2012-12-26 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) An IL-15 and IL-15Ralpha sushi domain based immunocytokines
US9959384B2 (en) 2013-12-10 2018-05-01 Bioniz, Llc Methods of developing selective peptide antagonists
US9670672B2 (en) 2014-12-03 2017-06-06 Aleksandar Stevanov Roof panel system
US10858452B2 (en) 2015-09-16 2020-12-08 Insitut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Specific interleukin-15 (IL-15) antagonist polypeptide and uses thereof for the treatment of inflammatory and auto-immune diseases
US20170104927A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Little Star Media, Inc. Systems, methods and software programs for 360 degree video distribution platforms
PT3359556T (pt) 2015-10-09 2021-08-30 Bioniz Llc Modulação da atividade de citocinas gama-c
JP2019532996A (ja) 2016-11-08 2019-11-14 デリニア，インコーポレーテッド 自己免疫疾患を処置するためのｉｌ−２変異体
EP3606940A4 (en) 2017-04-07 2020-11-18 Bioniz, LLC STABLE MODULATORS OF CYTOKINE GAMMA-C ACTIVITY
BR112021021878A2 (pt) 2019-05-03 2022-01-18 Bioniz Llc Modulação dos efeitos de sinalização da gama-c-citocina para tratamento da alopecia e distúrbios associados

Also Published As

Publication number Publication date
PL2665486T3 (pl) 2020-09-21
EP4461742A2 (en) 2024-11-13
US20180237475A1 (en) 2018-08-23
WO2012099886A8 (en) 2013-09-06
EP3636274A1 (en) 2020-04-15
US9133243B2 (en) 2015-09-15
PT3636274T (pt) 2024-10-17
US9133244B2 (en) 2015-09-15
SI2665486T1 (sl) 2020-07-31
JP2020002154A (ja) 2020-01-09
US9951105B2 (en) 2018-04-24
EP4461742A3 (en) 2024-12-25
EP2665486B1 (en) 2019-12-25
ES2989085T3 (es) 2024-11-25
US8455449B2 (en) 2013-06-04
LT2665486T (lt) 2020-04-10
US20170051015A1 (en) 2017-02-23
AU2012207456C1 (en) 2017-05-04
WO2012099886A1 (en) 2012-07-26
CA2824515C (en) 2022-09-13
US20170204153A1 (en) 2017-07-20
DK3636274T3 (da) 2024-10-07
BR112013018046A2 (pt) 2020-01-21
US20200399316A1 (en) 2020-12-24
US11834519B2 (en) 2023-12-05
SMT202000142T1 (it) 2020-05-08
US11708392B2 (en) 2023-07-25
AU2019202527B2 (en) 2021-06-24
CN103501805A (zh) 2014-01-08
US20240209025A1 (en) 2024-06-27
US20130217858A1 (en) 2013-08-22
JP6395379B2 (ja) 2018-09-26
US20160000877A1 (en) 2016-01-07
PT2665486T (pt) 2020-03-30
US10227382B2 (en) 2019-03-12
EP3636274B1 (en) 2024-07-17
AU2012207456B2 (en) 2016-11-03
JP6820230B2 (ja) 2021-01-27
JP2024029182A (ja) 2024-03-05
CN109021069A (zh) 2018-12-18
AU2012207456A1 (en) 2013-08-01
AU2017200489A1 (en) 2017-02-16
JP2014508140A (ja) 2014-04-03
BR112013018046B1 (pt) 2023-01-31
CY1122846T1 (el) 2021-05-05
DK2665486T3 (da) 2020-03-09
HRP20200470T1 (hr) 2020-10-02
US9675672B2 (en) 2017-06-13
ES2778053T3 (es) 2020-08-07
AU2017200489B2 (en) 2019-01-24
EP2665486A4 (en) 2014-06-25
AU2019202527A1 (en) 2019-05-02
US20190194255A1 (en) 2019-06-27
JP2017222635A (ja) 2017-12-21
US20140148394A1 (en) 2014-05-29
CA2824515A1 (en) 2012-07-26
PL3636274T3 (pl) 2025-01-20
FI3636274T3 (fi) 2024-10-25
US20120329728A1 (en) 2012-12-27
CN103501805B (zh) 2018-09-14
US10808009B2 (en) 2020-10-20
EP2665486A1 (en) 2013-11-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240209025A1 (en) Compositions and methods for modulating gamma-c-cytokine activity
US20230060637A1 (en) Modulating gamma-c-cytokine activity
HK40028404B (en) Compositions for modulating gamma-c-cytokine activity
HK40028404A (en) Compositions for modulating gamma-c-cytokine activity
Class et al. Patent application title: COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING GAMMA-C-CYTOKINE ACTIVITY Inventors: Yutaka Tagaya (Rockville, MD, US) Nazli Azimi (San Juan Capistrano, CA, US) Nazli Azimi (San Juan Capistrano, CA, US)
HK1259668A1 (en) Modulating gamma - c -cytokine activity
HK1259668B (en) Modulating gamma - c -cytokine activity