PT2532365T

PT2532365T - Composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção do cancro

Info

Publication number: PT2532365T
Application number: PT117398768T
Authority: PT
Inventors: Saito Takanori; Okano Fumiyoshi; Kobayashi Shinichi; Ido Takayoshi; Narita Yoshinori
Original assignee: Toray Industries
Priority date: 2010-02-04
Filing date: 2011-02-04
Publication date: 2016-07-28
Also published as: EP2532365A4; RU2607366C2; RU2012137498A; BR112012018947B8; JP5742714B2; KR20120123500A; PL2532365T3; US20120301476A1; CA2788715A1; KR101842893B1; CN102821788B; BR112012018947A8; ES2583627T3; JPWO2011096528A1; HUE030103T2; MX2012008999A; CN102821788A; BR112012018947B1; EP2532365B1; BR112012018947A2

Description

DESCRIÇÃO

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA O TRATAMENTO E/OU A PREVENÇÃO

DO CANCRO

Campo da Técnica A presente invenção refere-se a uma nova utilização farmacêutica de um anticorpo contra CAPRIN-1 ou um fragmento do mesmo, como um agente, para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro. Técnica Anterior 0 cancro é a principal causa de morte. A terapêutica conduzida atualmente compreende principalmente a terapêutica de combinação com terapêutica de radiação e quimioterapia. Apesar do desenvolvimento de novos procedimentos cirúrgicos e da descoberta de novos agentes anti-cancro nos últimos anos, os resultados do tratamento do cancro não tem melhorado muito recentemente, exceto para alguns tipos de cancro. Os avanços recentes em biologia molecular ou imunologia do cancro levam a identificação de anticorpos que reagem especificamente com o cancro, antigénios de cancro a serem reconhecidos por células T citotóxicas, genes que codificam antigénios de cancro, e semelhantes. As demandas por terapêuticas de cancro específicos dirigidas a antigénios de cancro estão aumentando (Literatura não patente 1).

Na terapêutica do cancro, é desejável que péptidos, polipéptidos, ou proteínas reconhecidos como antigénios estejam praticamente ausentes em células normais, mas que estejam presentes especificamente em células de cancro, com a finalidade de aliviar os efeitos secundários. Em 1991, Boon et al. (Ludwig Institute for Cancer Research, Bélgica) isolou um antigénio de melanoma humano MAGE 1 reconhecido por células T CD8 positivas pelo método de clonagem de expressão ADNc utilizando linhas celulares de cancro autólogas e as células T reativas a cancro (literatura não patente 2). Posteriormente, o método SEREX (identificação sorológica de antigénios através de clonagem de expressão recombinante) que compreende identificar antigénios de tumor reconhecidos pelos anticorpos que são produzidos in vivo em resposta a cancro autólogo de um paciente de cancro através de técnicas de clonagem de expressão génica foi relatado (literatura não patente 3 e literatura de patente 1) . Com a utilização deste método, alguns antigénios de cancro, que quase nunca são expressos em células normais, mas são expressos especificamente em células de cancro, foram isolados (literaturas não patente 4-9) . Além disso, ensaios clínicos foram conduzidos com terapêuticas de células dirigidas a alguns antigénios de cancro utilizando imunócitos especificamente reativos com antigénios de cancro, ou imunoterapêuticas específicas de cancro utilizando vacinas ou semelhantes contendo antigénios de cancro.

Entretanto, nos últimos anos, vários medicamentos de anticorpo que se direcionam a proteínas antigénicas em células de cancro para o tratamento do cancro têm aparecido em todo o mundo. Os medicamentos de anticorpos exibem alguns efeitos farmacológicos como agentes terapêuticos específicos de cancro e assim atraem a atenção. Contudo, a maioria das proteínas de antigénio a serem direcionadas também são expressas em células normais, de modo que não apenas as células de cancro, mas também células normais que expressam o antigénio também são danificadas como resultado da administração de anticorpos. Os efeitos secundários resultantes são uma causa de preocupação. Portanto, espera-se que a identificação de antigénios de cancro que sejam expressos especificamente na superfície de uma célula de cancro e a utilização de anticorpos direcionados a antigénios de cancro como agentes farmacêuticos torne o tratamento com medicamentos de anticorpos com menores efeitos secundários. A proteína 1 citoplasmática e associada com a proliferação (CAPRIN-1) é expressa quando células normais na fase dormente são ativadas ou passam por divisão celular, e é uma proteína intracelular conhecida por formar grânulos de estresse intracelular com ARN dentro das células, de modo que está envolvida na regulação traducional e transporte de ARNm. Entretanto, existem muitos outros nomes que representam CAPRIN-1, tais como a proteína 1 de membrana ancorada a GPI ou proteína 1 marcadora de superfície componente de membrana (M11S1), como se tais proteínas tinham sido conhecidas por ser proteínas de membrana celular. Estes nomes se originaram de um relatório que a sequência génica de CAPRIN-1 é uma proteína da membrana tendo uma região de ligação a GPI e expressa em células de cancro colorretal (literatura não patente 10). Contudo, a sequência génica de CAPRIN-1 proporcionada neste relatório foi posteriormente revelada que estava errada. O seguinte tem sido recentemente relatado; isto é, a deleção de um único nucleótido na sequência génica de CAPRIN-1 registada no GenBank, ou semelhante, causa um deslocamento do quadro de leitura, de modo que 80 aminoácidos são perdidos da terminação C, resultando na geração de um artefato (74 aminoácidos) que corresponde com a porção de ligação de GPI no relatório anterior, e adicionalmente, outro erro também está presente 5' da sequência génica, de modo que 53 aminoácidos foram perdidos da terminação N (literatura não patente 11).

Também foi relatado recentemente que a proteína codificada pela sequência génica de CAPRIN-1 registada no GenBank, ou semelhante, não é uma proteína da membrana celular (literatura não patente 11).

Alem disso, com base no relatório da literatura não patente 10 de que CAPRIN-1 é uma proteína da membrana celular, as literaturas de patente 2 e 3 descrevem que CAPRIN-1 (como uma proteína da membrana celular) sob o nome de MllSl pode ser usada como alvo de um medicamento de anticorpo na terapêutica do cancro, embora os exemplos de trabalho não descrevam o tratamento utilizando um anticorpo contra a proteína. Contudo, como relatado na literatura não patente 11, acreditava-se comumente do momento do depósito da literatura de patente 2 até agora que CAPRIN não é expressa na superfície de uma célula. Os conteúdos das literaturas de patente 2 e 3 baseados apenas na informação incorreta de que CAPRIN-1 é uma proteína da membrana celular não deve ser claramente entendido como conhecimento geral comum para peritos na especialidade. A Literatura de patente 4 descreve um anticorpo à proteína MllSl e literatura de não patente 12 descreve um anticorpo anti-CAPRIN-1 de coelho que é utilizado para a deteção de CAPRIN-1.

Literatura da Técnica Anterior Literatura de Patente

Literatura de patente 1: Patente U.S. N.° 5698396 Literatura de patente 2: US2008/0075722 Literatura de patente 3: US2008/100998 Literatura de patente 4: WO02/078524 Literatura Não Patente

Literatura Não Patente 1: Tsuyoshi Akiyoshi, "Cancer and Chemotherapy Publishers, Inc.," 1997, Vol. 24, p 551-519 (Cancer and Chemotherapy Publishers, Inc., Japão)

Literatura Não Patente 2 Bruggen P. et al., Science, 254: 1643-1647 (1991)

Literatura Não Patente 3: Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A, 92: 11810-11813 (1995)

Literatura Não Patente 4: Int. J. Cancer, 72: 965-971 (1997)

Literatura Não Patente 5: Cancer Res., 58: 1034-1041 (1998)

Literatura Não Patente 6: Int. J. Cancer, 29: 652-658 (1998)

Literatura Não Patente 7: Int. J. Oncol., 14: 703-708 (1999)

Literatura Não Patente 8: Cancer Res., 56: 4766-4772 (1996)

Literatura Não Patente 9: Hum. Mol. Genet6: 33-39, 1997

Literatura Não Patente 10: J. Biol. Chem., 270: 20717- 20723, 1995

Literatura Não Patente 11: J. Immunol., 172: 2389- 2400, 2004

Literatura Não Patente 12: Kolobova E. et al., Exp.

Cell Res., 315: 542-555 (2009)

Sumário da Invenção

Problema a ser Resolvido pela Invenção

Os objetivos da presente invenção são identificar proteínas antigénicas de cancro expressas especificamente sobre a superfície de uma célula de cancro e proporcionar a utilização de um anticorpo dirigido contra a proteína de antigénio de cancro para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro.

Meios para Resolução do Problema

Como resultado de estudos intensivos, os presentes inventores obtiveram agora um ADNc que codifica uma proteína que se liga a um anticorpo existente nos soros de cães com cancro de mama pelo método SEREX utilizando tanto bibliotecas de ADNc preparadas a partir de tecidos de testículos caninos e soros de cães com cancro de mama. Os presentes inventores ainda prepararam agora proteínas CAPRIN-1 tendo as sequências de aminoácidos de número par das SEQ ID NOS: 2 a 30 e anticorpos contra tais proteínas CAPRIN-1 com base no gene de cão obtido e os correspondentes genes homólogos de seres humanos, gado, cavalo, ratinho, e galinha. Assim, os presentes inventores encontraram agora que CAPRIN-1 é especificamente expressa em cancro de mama, tumor cerebral, leucemia linfoma, cancro pulmonar, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro colorretal, cancro gástrico, e células de cancro renal, e que uma porção da proteína CAPRIN-1 é especificamente expressa na superfície de cada célula de cancro. Assim os presentes inventores descobriram agora que um anticorpo ou anticorpos contra a porção de CAPRIN-1 expressa na superfície de cada célula de cancro é/são citotóxico (s) para as células de cancro que expressam CAPRIN-1. Com base nestas verificações, a presente invenção conforme descrita abaixo foi concluída. A presente invenção proporciona anticorpos, fragmentos, combinações e composições farmacêuticas, e agentes anti-tumorais para utilização, todos como são definidos nas reivindicações. Numa forma de realização, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, que compreende um anticorpo ou um fragmento do mesmo como um ingrediente ativo que se liga a um polipéptido parcial de CAPRIN-1, em que CAPRIN-1 é representada por qualquer das sequências de número par das SEQ ID NOS: 2 a 30, e compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 69 ou 70 ou uma sequência de aminoácidos tendo 80 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 69 ou 70.

Numa forma de realização, o cancro acima é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia linfoma, cancro pulmonar, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro colorretal, cancro gástrico, ou cancro renal.

Em outra forma de realização, o anticorpo é um anticorpo monoclonal ou um anticorpo policlonal.

Em outra forma de realização, o anticorpo é um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia simples, ou anticorpo bi- específico.

Em outra forma de realização, o anticorpo acima é um anticorpo que se liga a um polipéptido ou fragmento do mesmo, que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 69 ou 7 0 ou uma sequência de aminoácidos tendo 80 % ou mais, preferentemente 85 % ou mais, mais preferentemente 90 % ou mais, e ainda mais preferentemente 95 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 69 ou 70.

Em outra forma de realização, o anticorpo é qualquer um dos seguintes anticorpos (a) a (f) tendo reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1, ou a composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro é caracterizada por compreender tal anticorpo como um ingrediente ativo: (a) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 44, 45, e 46; (b) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ ID NOS: 48, 4 9, e 50 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 52, 53, e 54; (c) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 56, 57, e 58 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 60, 61, e 62; (d) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 73, 74, e 75 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 77, 78, e 79; (e) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 81, 82, e 83 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 85, 86, e 87; e (f) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 89, 90, e 91 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 93, 94, e 95.

Efeitos da Invenção Efeitos da Invenção 0 anticorpo contra CAPRIN-1 utilizado na presente invenção é citotóxico para células de cancro. Como tal, o anticorpo contra CAPRIN-1 é útil para o tratamento ou a prevenção do cancro.

Breve Descrição dos Desenhos A Fig. 1 mostra os padrões de expressão dos genes que codificam as proteínas de CAPRIN-1 nos tecidos normais e linhas celulares tumorais. O Número de referência 1 indica os padrões de expressão dos genes que codificam as proteínas CAPRIN-1, e o Número de referência 2 indica os padrões de expressão dos genes GAPDH. A Fig. 2 mostra a citotoxicidade para a linha de células de cancro de mama que expressam CAPRIN-1 por anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 (n.° 1, n.° 2, e n.° 3) que são reativos com as superfícies de células de cancro. A referência n° 3 indica a atividade exibida quando o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 n° 1 foi adicionado. A referência n° 4 indica a atividade exibida quando o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 n° 2 foi adicionado. A referência n° 5 indica a atividade exibida quando o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 n° 3 foi adicionado. A referência n° 6 indica a atividade exibida quando PBS foi adicionado em vez dos anticorpos. A Fig. 3 mostra os efeitos anti-tumorais dos anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 (n° 1, n.° 2, e n.° 3), que são reativos com as superfícies das células de cancro, em ratinhos Balb/c em que a linha celular de cancro da mama 4T1 que expressa CAPRIN-1 foi transplantada. A referência n° 7 indica o tamanho do tumor de ratinhos aos quais o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 n° 1 foi administrado. A referência n° 8 indica o tamanho do tumor de ratinhos aos quais o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 n° 2 foi administrado. A referência n° 9 indica o tamanho do tumor de ratinhos aos quais o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 n° 3 foi administrado. A referência n° 10 indica o tamanho do tumor de ratinhos aos quais PBS foi administrado em vez dos anticorpos.

Modo para levar a cabo a invenção A atividade antitumoral de um anticorpo contra um polipéptido representado por qualquer das sequências de número par das SEQ ID NOS: 2 a 30 utilizado na presente invenção pode ser avaliada pelo exame da supressão in vivo de crescimento tumoral em animais com cancro, ou, examinando se o anticorpo exibe ou não a citotoxicidade via imunócitos ou complementos para células tumorais que expressam o polipéptido in vitro, conforme descrito posteriormente.

No contexto, as sequências de nucleótidos dos polinucleótidos que codificam proteinas que compreendem as sequências de aminoácidos de número para (isto é, SEQ ID NOS: 2, 4, 6...28, 30) das SEQ ID NOS: 2 a 30 são representados pelas sequências de número impar (isto é, SEQ ID NOS: 1, 3, 5...27, 29) das SEQ ID NOS: 1 a 29.

As sequências de aminoácidos que são representadas pelas SEQ ID NOS: 6, 8, 10, 12, e 14 na Lista de Sequências revelada no presente documento são as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 isoladas como polipéptidos, que se liga a anticorpos especificamente existentes no soro de um cão com cancro, através do método SEREX usando uma biblioteca de ADNc de tecido de testiculos caninos e o soro de um cão com cancro de mama. As sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 2 e 4 são as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 isoladas como homólogos humanos. A sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 16 é a sequência de aminoácidos de CAPRIN-1 isolada como um homólogo de bovinos. A sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 18 é a sequência de aminoácidos de CAPRIN-1 isolada como um homólogo de cavalo. As sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 20 a 28 são as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 isoladas como homólogos de ratinho. A sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 30 é a sequência de aminoácidos de CAPRIN-1 isolada como um homólogo de galinha (veja-se o Exemplo 1 descrito posteriormente). CAPRIN-1 é conhecida por ser expressa quando células normais na fase de repouo são ativadas ou originar a divisão celular. É conhecido que CAPRIN-1 não foi expressa em superficies celulares. Contudo, como resultado do exame pelos presentes inventores, foi revelado agora que uma porção da proteína de CAPRIN-1 é expressa nas superfícies de várias células de cancro. Assim foi agora revelado que um anticorpo que reconhece um polipéptido parcial da proteína de CAPRIN-1, que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 69 ou 70, que está contido na sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de aminoácidos tendo 80 % ou mais, preferentemente 85 % ou mais, mais preferentemente 90 % ou mais, ainda preferentemente 95 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 69 ou 70, exibe atividade anti-tumoral. Exemplos dos anticorpos da presente invenção incluem todos os anticorpos que se ligam ma um fragmento da proteína CAPRIN-1 acima e exibem atividade anti-tumoral. O anticorpo anti-CAPRIN-1 descrito acima utilizado na presente invenção pode ser qualquer tipo de anticorpo desde que exiba atividade anti-tumoral. Exemplos de tais anticorpos incluem anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos recombinantes, tais como anticorpos sintéticos, anticorpos multiespecíficos, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, e anticorpos de cadeia simples (scFvs), anticorpos humanos, e fragmentos dos mesmos, tais como fragmentos Fab, F(ab')22 e Fv. Estes anticorpos e fragmentos dos mesmos podem ser preparados por meio de métodos conhecidos dos peritos na especialidade. Na presente invenção, os anticorpos tendo reatividade imunológica com proteínas de CAPRIN-1 ou polipéptidos parciais das mesmas (ou seja, se ligam a proteínas de CAPRIN-1 via reação antigénio-anticorpo) e preferentemente anticorpos capazes de se ligarem especificamente a proteínas de CAPRIN-1 são desejado. Preferentemente, são anticorpos monoclonais. Os anticorpos policlonais podem também ser utilizados desde que possam ser produzidos anticorpos homogéneos. Igualmente, quando um indivíduo é um ser humano, os anticorpos humanos ou humanizados são desejados com a finalidade de evitar ou suprimir a rejeição. 0 termo "especificamente se liga a proteína de CAPRIN-1" conforme é utilizado no presente documento significa que o anticorpo se liga especificamente a uma proteína de CAPRIN-1, mas não se liga substancialmente a proteínas que não sejam a proteína de CAPRIN-1. A atividade anti-tumoral de um anticorpo que pode ser utilizado na presente invenção pode ser avaliada conforme descrito abaixo pelo exame in vivo da supressão do crescimento tumoral em animais com cancro, ou, pelo exame se exibe ou não in vitro uma atividade de citotoxicidade, que é mediada por imunócitos ou complementos, a células tumorais que expressam o polipéptido.

Além disso, exemplos do indivíduo para o tratamento e/ou a prevenção de cancro na presente invenção incluem mamíferos, tais como seres humanos, animais de estimação, animais domésticos, e animais para competição. Um indivíduo preferível é um ser humano. A preparação de antigénios e anticorpos e composições farmacêuticas relacionados com a presente invenção são descritas abaixo. <Preparação de antigénios para a preparação de anticorpos>

As proteínas ou fragmentos das mesmas a serem utilizadas como antigénios de sensibilização para a obtenção de anticorpos anti-CAPRIN-1 utilizados na presente invenção podem ser derivadas de quaisquer espécies de animais sem limitação particular, tais como seres humanos, cães, gado, cavalos, ratinhos, ratos, e galinhas. Contudo, as proteínas ou fragmentos das mesmas são selecionadas de um modo preferido tendo em consideração a compatibilidade com as células parentais utilizadas para a fusão celular. No geral, são preferidas proteínas derivadas de mamíferos e, em particular, é preferida proteína derivada de ser humano. Por exemplo, quando a CAPRIN-1 é CAPRIN-1 humana, a proteína de CAPRIN-1 humana, um péptido parcial da mesma, ou células que expressam CAPRIN-1 humana podem ser utilizados.

As sequências nucleotídicas e as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 humana e homólogos das mesmas podem ser obtidas por acesso ao GenBank (NCBI, E.U.A.) e utilizando um algoritmo tal como BLAST ou FASTA (Karlin e Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 90: 5873-5877, 1993; Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997).

Na presente invenção, com base na sequência nucleotidica (SEQ ID NO: 1 ou 3) ou a sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 2 ou 4) de CAPRIN-1 humana, o ácido nucleico alvo ou a proteína alvo compreende uma sequência tendo de 70 a 100 %, preferentemente de 80% a 100 %, mais preferentemente de 90% a 100 %, ainda mais preferentemente de 95% a 100 % (por exemplo, de 97% a 100%, de 98% a 100%, de 99% a 100%, ou de 99,5% a 100 %) de identidade de sequência com a sequência nucleotidica ou a sequência de aminoácidos da ORF ou a porção madura da CAPRIN-1 humana. Conforme é utilizado no presente documento, o termo "% de identidade de sequência" refere-se a uma percentagem (%) de aminoácidos idênticos (ou nucleótidos) com relação ao número total de aminoácidos (ou nucleótidos), quando duas sequências são alinhadas para consequira maior semelhança com ou sem a introdução de lacunas. O comprimento de um fraqmento da proteína de CAPRIN-1 varia desde o comprimento do aminoácido de um epítopo (determinante antigénico), que é a unidade mínima reconhecida pelo anticorpo, até um comprimento menos do que o comprimento completo da proteína. O termo "epítopo" refere-se a um fragmento de polipéptido que tem antigenicidade ou imunogenicidade em mamíferos, preferentemente em seres humanos, a unidade mínima do epítopo consiste em cerca de 7 a 12 aminoácidos, por exemplo, de 8 a 11 aminoácidos. O anticorpo da presente invenção é caracterizado por reconhecer um fragmento que consiste na sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 69 ou 70 contida na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de aminoácidos tendo 80 % ou mais, preferentemente 85 % ou mais, mais preferentemente 90 % ou mais, e ainda preferentemente 95 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 69 ou 70.

Os polipéptidos que compreendem a proteína CAPRIN-1 humana mencionada acima ou péptidos parciais da proteína, podem ser sintetizados por um método de síntese química, tal como o método Fmoc (método de fluorenilmetiloxicarbonilo) ou o método de tBoc (método de t-butiloxicarbonilo) (editado por The Japanese Biochemical Society, Seikagaku Jikken Koza (Biochemical Experimental

Lecture Series) 1, Protein Chemistry IV, Chemical Modification and Peptide Synthesis, TOKYO KAGAKU DOZIN (Japão), 1981). Alternativamente, os polipéptidos mencionados acima podem também ser sintetizados por meio de métodos convencionais utilizando vários sintetizadores de péptido disponível comercialmente. Além disso, com a utilização de técnicas de engenharia genética conhecidas (por exemplo, Sambrook et ai., Molecular Cloning, 2a Edição, Current Protocols in Molecular Biology (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Ausubel et ai., Short Protocols in Molecular Biology, 3a edição, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley & Sons), um polinucleótido que codifica ο polipéptido acima é preparado e então incorporado num vetor de expressão, que é subsequentemente introduzido numa célula hospedeira com a finalidade de produzir um polipétido de interesse na célula hospedeira e então recuperá-lo.

Os polinucleótidos que codificam os polipéptidos acima podem ser facilmente preparados através de técnicas de manipulação genética conhecidas ou técnicas convencionais utilizando um sintetizador de ácidos nucleicos comercialmente disponível. Por exemplo, ADN que compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1 pode ser preparado por meio de PCR utilizando um ADN cromossómico humano pu biblioteca de ADNc, como um molde, e um par de iniciadores concebidos para ser capazes de amplificar a sequência nucleotídica representada pela SEQ ID NO: 1. As condições de PCR podem ser apropriadamente determinadas. Por exemplo, as condições de PCR compreendem conduzir 30 ciclos do ciclo de reação de: desnaturação a 94 °C durante 30 segundos; hibridização a 55 °C durante 30 segundos a 1 minuto; e extensão a 72 °C durante 2 min, utilizando uma ADN polimerase termoestável (por exemplo, Taq polimerase ou Pfu polimerase ) e tampão de PCR contendo Mg2+, seguido pela reação a 72 °C durante 7 minutos. Contudo, as condições de PCR não são limitadas ao exemplo acima. As técnicas, condições, de PCR e semelhantes são descritas em Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, 3a edição, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology (1995) , John Wiley & Sons (particularmente Capitulo 15) .

Também, com base nas informações da sequência nucleotidica e nas informações da sequência de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 1 a 30 na Listagem de Sequências descrita no presente documento, sondas ou iniciadores apropriados são preparados, e então uma biblioteca de ADNc ou semelhante é rastreada utilizando-os, de modo que o ADN pode ser isolado. Uma biblioteca de ADNc é preferentemente construída a partir de células, órgãos e tecidos, que expressam proteínas tendo sequências de números pares das SEQ ID NOS: 2 a 30. Exemplos de tais células ou tecidos incluem células ou tecidos derivados dos testículos, e cancro ou tumores, tais como leucemia, cancro da mama, linfoma, tumor cerebral, cancro pulmonar, cancro colorretal, e semelhantes. Procedimentos tais como a preparação de sondas ou iniciadores, construção de uma biblioteca de ADNc, rastreio de uma biblioteca de ADNc, e clonagem de genes alvo são conhecidos pelos peritos na especialidade e podem ser levados a cabo pelos métodos descritos em Sambrook et al., Molecular Cloning, 2a Edição, Current Protocols in Molecular Biology (1989), Ausbel et al., (acima), e semelhantes. O ADN que codifica uma proteína de CAPRIN-1 humana ou um péptido parcial da mesma pode ser obtido a partir do ADN assim obtido.

As células hospedeiras podem ser quaisquer células, desde que possam expressar o polipéptido mencionado acima. Exemplos de células procarióticas incluem, mas não são limitadas a, Escherichia coli e semelhantes. Exemplos de células eucarióticas incluem, mas não são limitadas a, células de mamíferos, tais como células de rim de macaco (COSI) e células de ovário de hamster chinês (CHO), linha de células renais fetais humanas (HEK293), linha de células de pele de ratinho fetal (NIH3T3), células de leveduras tais como brotamento de leveduras e leveduras fissiparidade, células de bicho-da-seda, e oócito de Xenopus.

Quando células procarióticas são utilizadas como as células hospedeiras, um vetor de expressão utilizado no presente documento contém uma origem replicável dentro de células procariotas, um promotor, um sítio de ligação a ribossoma, um sitio de clonagem múltipla, um terminador, um gene de resistência a fármacos, um gene complementar auxotrófico, e semelhantes. Exemplos de vetor de expressão de Escherichia coli incluem um vetor com base em pUC, pBluescript II, um sistema de expressão pET, e um sistema de expressão pGEX. ADN que codifica o polipéptido acima é incorporado em tal vetor de expressão; as células hospedeiras procarióticas são transformadas com o vetor, as células transformadas obtidas deste modo são cultivadas, e assim o polipéptido codificado pelo ADN pode ser expresso em células hospedeiras procarióticas. Neste momento, o polipéptido também pode ser expresso como uma proteína de fusão com outra proteína.

Quando células eucarióticas são utilizadas como as células hospedeiras, um vetor de expressão utilizado no presente documento é um vetor de expressão para células eucarióticas, que contém um promotor, uma região de splicing, um local de adição de poli(A), e semelhantes. Exemplos de tal vetor de expressão incluem pKAl, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV, pRS, pcDNA3, e pYES2. De uma maneira semelhante ao mencionado acima, ADN que codifica o polipéptido acima é incorporado em tal vetor de expressão, as células hospedeiras eucarióticas são transformadas com o vetor, as células transformadas obtidas deste modo são cultivadas, e assim o polipéptido codificado pelo ADN pode ser expresso em células hospedeiras eucarióticas. Quando pIND/VS-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-Nl, pEGFP-Cl, ou semelhante é utilizado como um vetor de expressão, o polipéptido acima pode ser expresso como uma proteína de fusão ao qual uma etiqueta de entre várias etiquetas tal como uma etiqueta His (por exemplo, (His)&-(His)io), uma etiqueta FLAG, uma etiqueta myc, uma etiqueta HA, e GFP foi adicionada.

Para a introdução de um vetor de expressão nas células hospedeiras, pode ser empregue um método conhecido, tal como eletroporação, um método de fosfato de cálcio, um método de lipossomas, um método de DEAE dextrano, microinjeção, infeção virai, lipofeção, e ligação a um péptido permeável a membrana celular. 0 polipéptido de interesse pode ser isolado e purificado a partir de células hospedeiras por uma combinação de procedimentos de separação conhecidos. Exemplos de tais procedimentos incluem, mas não são limitados a, tratamento com a utilização de um agente de desnaturação tal como ureia ou um tensioativo, ultrassonicação, digestão enzimática, salificação ou fracionamento e precipitação de solvente, diálise, centrifugação ultrafiltração, filtração em gel, SDS-PAGE, focagem isoelétrica, cromatografia de permuta iónica, cromatografia hidrofóbica, cromatografia de afinidade e cromatografia de fase reversa. <Estrutura dos anticorpos>

Um anticorpo é uma glicoproteína heteromultimérica que geralmente contém pelos menos duas cadeias pesadas e duas cadeias leves. Os anticorpos para além de IgM é uma glicoproteína heterotetraméricas de cerca de 150 kDa composta por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Tipicamente, cada cadeia leve está conetada a uma cadeia pesada através de uma ligação covalente dissulfureto, contudo, o número de ligações dissulfureto entre cadeias pesadas de vários isotipos de imunoglobulinas varia. Cada cadeia pesada ou cada cadeia leve também tem uma ligação dissulfureto intracadeia. Cada cadeia pesada tem um domínio variável (região VH) numa extremidade seguida de várias regiões constantes. Cada cadeia leve tem um domínio variável (região VL) numa extremidade seguida de várias regiões constantes. A região constante de uma cadeia leve está alinhada com a primeira região constante de uma cadeia pesada e um domínio variável de cadeia leve está alinhado com um domínio variável de cadeia pesada. Uma região específica de um domínio variável de um anticorpo exibe variabilidade específica gue é referida como região determinante de complementaridade (CDR), de forma a gue dá especificidade de ligação ao anticorpo. Uma porção de uma região variável, que está relativamente conservada, refere-se como uma região estrutural (FR). Os domínios variáveis das cadeias pesadas e cadeias leves completas contêm separadamente quatro FRs ligadas através de três CDRs. As três CDRs numa cadeia pesada referem-se como CRDHl CDRH2, e CDRH3 nesta ordem a partir da terminação N. De forma semelhante, no caso de uma cadeia leve, as CDRLs referem-se como CDRL1, CDRL2, e CDRL3. CDRH3 é mais importante para a especificidade de ligação de um anticorpo a um antigénio. Igualmente, as CDRs de cada cadeia mantém-se juntas num estado de adjacência entre si devido às regiões FR, contribuindo à formação do local de ligação a antigénios do anticorpo juntamente com as CDRs da outra cadeia. Uma região constante não contribui diretamente à ligação de um anticorpo a um antigénio mas exibe várias funções efetoras, tais como o envolvimento na citotoxicidade mediada por células dependentes de anticorpos (ADCC) , fagocitose através da união a um recetor Fcy, a taxa de semivida/depuração através de um recetor Fc de neonato (FcRn), e citotoxicidade dependente de complemento (CDC) através de um constituinte Clq da cascata do complemento. <Preparação do anticorpo> 0 termo "anticorpo anti-CAPRIN-1" conforme é utilizado no presente documento refere-se a um anticorpo tendo reatividade imunológica com uma poteína de CAPRIN-1 de comprimento completo ou um fragmento da mesma.

Conforme é utilizado no presente documento, o termo "reatividade imunológica" refere-se à propriedade de união in vivo de um anticorpo a um antigénio da CAPRIN-1. Através de uma tal ligação in vivo, exibe-se a função de deterioração de um tumor (por exemplo, morte, supressão, ou degeneração). Especificamente, um anticorpo utilizado na presente invenção pode ser qualquer tipo de anticorpo, desde que se ligue a uma proteina CAPRIN-1 de forma a ser capaz de deteriorar um tumor, tais como leucemia, linfoma, cancro da mama, tumor cerebral, cancro pulmonar, cancro esofágico, cancro gástrico, cancro renal, ou cancro colorretal.

Exemplos de um anticorpo incluem um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo sintético, um anticorpo multiespecifico, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico, um anticorpo de cadeia simples, e um fragmento de anticorpo (por exemplo, Fab e F(ab')2). Igualmente, um anticorpo pode ser uma molécula de imunoglobulina de qualquer tipo tal como IgG, IgE, IgM IgA, IgD e IgY, ou qualquer subtipo tal como IgGl, IgG2, IgG3, lgG4, IgAl, e IgA2. 0 anticorpo pode ser ainda modificado através de, adicionalmente à glicolisação, acetilação, formilação, amidação, fosforilação, peguilação (PEG), ou semelhante. Vários exemplos de preparação de anticorpo são como descritos abaixo.

Quando o anticorpo é um anticorpo monoclonal, por exemplo, a linha celular de cancro da mama SK-BR-3 expressando CAPRIN-1 é administrada a um ratinho para imunização, remove-se o baço do ratinho, separam-se as células, e posteriormente fusionam-se as células e células de mieloma de ratinho. De entre as células de fusão (hibridomas) assim obtidas, seleciona-se um clone que produz um anticorpo tendo o efeito de suprimir a proliferação de células cancerígenas. Um hibridoma que produz um anticorpo monoclonal que tem efeito de suprimir a proliferação de células cancerígenas é isolado, cultivado o hibridoma, e posteriormente purifica-se um anticorpo a partir do sobrenadante da cultura através de purificação por afinidade geral, de forma a que o anticorpo possa ser preparado. 0 hibridoma que produz um anticorpo monoclonal também pode ser preparado conforme descrito abaixo, por exemplo. Em primeiro lugar, imuniza-se um animal com um antigénio sensibilizante de acordo com um método conhecido. Leva-se a cabo um método geral injetando um antigénio sensibilizante a um mamífero intraperitonialmente ou subcutaneamente. Especificamente, dilui-se um antigénio com PBS (solução salina tamponada com fosfato), solução salina ou semelhante até uma quantidade adequada, seguido de suspensão. 0 resultante mistura-se então com uma quantidade adequada de um adjuvante geral conforme for necessário, tal como adjuvante completo de Freund. Após emulsificação, a solução administrou-se a um mamífero várias vezes por dia cada 4 a 21 dias. Além disso, pode utilizar-se também um veículo adequado após imunização com um antigénio sensibilizante.

Imuniza-se um mamífero conforme descrito acima no presente documento. Após confirmação de um aumento do nível de anticorpos séricos desejados, recolhem-se as células imunizadas a partir do mamífero e são posteriormente submetidas a fusão celular. As células imunizadas preferidas são particularmente esplenócitos.

Utilizam-se células de mieloma de mamíferos como as outras células parentais a ser fusionadas com as células imunizadas. Como as células de mieloma, utilizam-se preferentemente várias linhas celulares conhecidas, tais como P3U1 (P3-X63Ag8Ul), P3 (P3x63Ag8. 653) (J. Immunol. (1979) 123, 1548-1550), P3x63Ag8U.l (Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7), NS-1 (Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol. (1976) 6, 511-519), MPC-11 (Margulies. D. H. et al., Cell (1976) 8, 405-415), SP2/0 (Shulman, M. et. al., Nature (1978) 276, 269-270), FO (deSt. Groth, S. F. et al., J. Immunol. Methods (1980) 35, 1-21), SI 94 (Trowbridge, 1. S. J. Exp. Med. (1978) 148, 313-323), e R210 (Galfre, G. et al., Nature (1979) 277,131-133) . A fusão das células imunizadas e das células de mieloma pode ser levada a cabo de acordo com basicamente urn método tal como a técnica de Kohler e Millstein (Kohler, G. and Milstein, C. Methods Enzymol. (1981) 73, 3-46), por exemplo.

Mais especificamente, a fusão celular acima descrita é levada a cabo, por exemplo, em presença de um acelerador de fusão celular num meio de cultura nutriente habitual. Como este acelerador de fusão, utiliza-se polietilenoglicol (PEG), virus Sendai (HVJ), ou semelhante. Se for desejado, um agente auxiliar tal como o sulfóxido de dimetilo pode ser adicionado e utilizado com a finalidade de potenciar a eficiência da fusão. A razão entre as células imunizadas e as células de mieloma a ser utilizadas no presente documento pode ser estabelecida arbitrariamente. Por exemplo, o número de células imunizadas que são preferentemente utilizadas é de uma a dez vezes o número de células de mieloma. Como um meio de cultura a ser utilizado para a fusão celular acima mencionada, podem utilizar-se um meio de cultura RPMI 1640 adequado para a proliferação da linha celular de mieloma acima mencionada, um meio de cultura MEM, e outros meios de cultura habitualmente utilizados para cultivar este tipo de células. Adicionalmente, pode ser utilizado conjuntamente liquido que é suplementar ao soro tal como soro bovino fetal (FCS). A fusão celular pode ser realizada misturando minuciosamente as quantidades predeterminadas das células acima imunizadas e das células de mieloma no meio de cultura acima mencionado, e uma solução de PEG (por exemplo, tendo uma massa molecular média variando desde cerca de 1000 até 6000) pré-aquecida a cerca de 37 °C é adicionada normalmente a uma concentração de 30 %-60 % (p/v) e misturada, formando assim uma cultura contendo hibridomas de interesse. A seguir, adiciona-se exitosamente um meio de cultivo adequado à cultura assim obtida, a qual é posteriormente centrifugada para remover o sobrenadante, e repete-se este procedimento para remover o agente de fusão celular ou semelhante o qual não é preferível para o crescimento de hibridomas.

Os hibridomas assim obtidos cultivam-se para seleção num medio de cultura de seleção habitual (por exemplo, um meio de cultura HAT contendo hipoxantina, aminopterina e timidina). Continua-se a cultura neste meio de cultura HAT durante um período de tempo suficiente (habitualmente de vários dias a várias semanas) para que as células (células não fusionadas) para além dos hibridomas alvo morram. Subsequentemente, são realizados o rastreio e a clonagem individual do hibridoma que produz um anticorpo de interesse utilizando o método de diluição limitante geral.

Os hibridomas acima são obtidos a partir de um animal não humano imunizante com um antigénio. Adicionalmente a este método, os hibridomas que produzem um anticorpo humano tendo atividade desejada (por exemplo, atividade de supressão da proliferação celular) podem também obter-se através da sensibilização de linfócitos humanos in vitro. tais como linfócitos humanos que foram infetados com o vírus EB, com uma proteína, uma célula que expressar proteínas, ou um lisado da mesma, seguido de fusão dos linfócitos assim sensibilizados com células de mieloma derivadas de seres humanos tendo uma capacidade de divisão permanente, tais como U266 (N.° Acesso TIB 196). 0 hibridoma assim preparado que produz um anticorpo monoclonal de interesse pode ser passado num meio de cultura geral e pode ser armazenado em azoto líquido durante um longo período de tempo.

Especificamente, um hibridoma pode ser preparado por imunização através de um método geral de imunização utilizando, como agente sensibilizante, um antigénio desejado ou uma célula que expressa o antígeno desejado, fusionando a célula imunizada assim obtida com uma célula parental conhecida através de um método de fusão celular geral, e então rastreio para uma célula produtora de anticorpos monoclonais (isto é, um hibridoma) através de um método geral de rastreio.

Outro exemplo de um anticorpo que pode ser utilizado na presente invenção é um anticorpo policlonal. Um anticorpo policlonal pode ser obtido conforme descrito abaixo, por exemplo.

Um animal pequeno, tal como um ratinho, um ratinho produtor de anticorpos humanos, ou um coelho, é imunizado com uma proteína CAPRIN-1 natural, uma proteína recombinante CAPRIN-1 expressa num micro-organismo tal como Escherichia coli na forma de uma proteína de fusão com GST ou semelhantes, ou um péptido parcial da mesma, e então soro é obtido. Os soro é purificado por meio de precipitação de sulfato de amónio, coluna de proteína A, coluna de proteína G, cromatografia de permuta iónica DEAE, coluna de afinidade a qual um proteína de CAPRIN-1 ou um péptido sintético foi acoplada, ou semelhantes, de modo que o anticorpo pode ser preparado.

Como um ratinho produtor de anticorpos humanos, conhecem-se um ratinho KM (Kirin Pharma/Medarex) e um ratinho Xeno (Amgen) (por exemplo, Publicações de Patente Internacional WO02/43478 e W002/092812), por exemplo. Quando tal ratinho é imunizado com uma proteína CAPRIN-1 ou um fragmento da mesma, pode obter-se um anticorpo policlonal humano completo a partir do sangue. Igualmente, esplenócitos são recolhidos a partir do ratinho imunizado e posteriormente um anticorpo monoclonal de tipo humano pode ser preparado através de um método para fusão com células de mieloma.

Pode ser preparado um antigénio de acordo com um método utilizando células animais (Publicação de Patente JP (Kohyo) No. 2007-530068) ou baculovírus (por exemplo, Publicação de Patente Internacional W098/46777), por exemplo. Quando um antigénio tem baixa imunogenicidade, o antigénio pode estar ligado a uma macromolécula tendo imunogenicidade, tal como a albumina, e leva-se posteriormente a cabo a imunização.

Além disso, um gene de anticorpo é clonado a partir do dito hibridoma e posteriormente incorporado num vetor adequado. O vetor é posteriormente introduzido num hospedeiro, e o anticorpo geneticamente recombinado produzido utilizando técnicas de recombinação génica pode ser utilizado (por exemplo, veja-se Carl, A. K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Publicado no Reino Unido por MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990). Especificamente, o ADNc de uma região variável (região V) de um anticorpo é sintetizado a partir do ARNm do hibridoma utilizando transcriptase reversa. Quando o ADN que codifica a região V de um anticorpo de interesse pode ser obtido, este ADN está ligado a ADN que codifica a região constante (região C) de um anticorpo desejado, e então o produto de fusão resultante é incorporado num vetor de expressão. Alternativamente, o ADN que codifica a região V de um anticorpo pode ser incorporado num vetor de expressão contendo o ADN para a região C de um anticorpo. Neste momento, o ADN pode ser incorporado num vetor de expressão de modo que é expresso sob o controlo de regiões de controlo de expressão, tais como um potenciador e um promotor. A seguir, as células hospedeiras são transformadas com o vetor de expressão, de forma a que se possa expressar o anticorpo. 0 anticorpo anti-CAPRIN-1 da presente invenção é preferentemente um anticorpo monoclonal. Contudo, o anticorpo anti-CAPRIN-1 podem também s um anticorpo policlonal ou um anticorpo geneticamente modificado (por exemplo, um anticorpo quimérico ou anticorpo humanizado), por exemplo.

Exemplos de um anticorpo monoclonal incluem anticorpos monoclonais humanos, anticorpos monoclonais não humanos (por exemplo, um anticorpo monoclonal de ratinho, um anticorpo monoclonal de rato, um anticorpo monoclonal de coelho, e um anticorpo monoclonal de galinha), e anticorpos monoclonais quiméricos. Um anticorpo monoclonal pode ser preparado cultivando um hibridoma obtido a partir de fusão celular de um esplenócito a partir de um mamífero não humano (por exemplo, um ratinho, um ratinho produtor de anticorpos humanos, uma galinha, ou um coelho) imunizado com uma proteína de CAPRIN-1, com uma célula de mieloma. Um anticorpo quimérico prepara-se através da combinação de sequências a partir de diferentes animais, tal como um anticorpo que compreende regiões variáveis de cadeias pesadas e de cadeias leves de um anticorpo de ratinho e regiões constantes de cadeias pesadas e de cadeias leves de um anticorpo humano. Um anticorpo quimérico pode ser preparado utilizando um método conhecido. Por exemplo, um anticorpo quimérico pode ser obtido ligando ADN que codifica uma região V de um anticorpo a ADN que codificauma região C de um anticorpo humano, incorporando o produto de fusão resultante num vetor de expressão, e introduzindo posteriormente o vetor num hospedeiro para produção do anticorpo quimérico. Em Exemplos descritos posteriormente, foram preparados anticorpos monoclonais quiméricos humano-galinha e desta forma os seus efeitos anti-tumorais foram confirmados. Estes anticorpos monoclonais compreendem uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID N.°: 43 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID N.°: 47, em que a região VH compreende CDRl representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 40, CDR2 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41, e CDR3 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42, e a região VL compreende CDRl representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID N.°: 44, CDR2 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 45, e CDR3 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 46.

Exemplos de um anticorpo policlonal incluem um anticorpos obtido por imunização de um animal produtor de anticorpo humano (por exemplo, um ratinho) com uma proteína de CAPRIN-1,

Um anticorpo humanizado é um anticorpo modificado que também se refere como um anticorpo humano remodelado. Um anticorpo humanizado pode ser construído transplantando CDRs de um anticorpo a partir de um animal imunizado nas regiões determinantes de complementaridade de um anticorpo humano. Conhecem-se também técnicas de recombinação génica gerais para tal.

Especificamente, sequências de ADN concebidas para ter cada uma das CDRs de um anticorpo de ratinho ou galinha ligadas a cada uma das regiões estruturais (FRs) de um anticorpo humano são sintetizadaspelo método da PCR a partir de vários oligonucleótidos, que são preparados de forma a ter porções sobrepostas nas suas porções terminais, por exemplo. Um anticorpo humanizado pode ser obtido ligando o ADN assim obtido a ADN que codifica a região constante de um anticorpo humano, incorporando o produto de fusão resultante num vetor de expressão, introduzindo o vetor num hospedeiro, e provocando como tal que o hospedeiro produza o produto génico (veja-se a Publicação de Patente Europeia N.° 239400 e a Publicação de Patente Internacional WO96/02576) . Como as FRs de um anticorpo humano, que está ligado através de CDRs, FRs que permitem a formação de um sítio de ligação a antigénio com boas regiões determinantes de complementaridade são selecionadas. Se for necessário, para a formação de um sítio de ligação a antigénios tendo as regiões determinantes de complementaridade adequadas de um anticorpo humano remodelado, os aminoácidos das regiões estruturais de uma região variável de um anticorpo podem ser substituídos (Sato, K. et al. Cancer Research, 1993, 53: 851-856). Igualmente, os aminoácidos das FRs podem ser substituídos por aqueles das regiões estruturais a partir de vários anticorpos humanos (veja-se Publicação de Patente Internacional W099/51743).

Como as regiões estruturais (FRs) de um anticorpo humano, que estão ligadas através das CDRs, FRs que permitem a formação de um sítio de ligação a antigénios com boas regiões determinantes de complementaridade são selecionadas. Se for necessário, para a formação de um sítio de ligação a antigénios tendo as regiões determinantes de complementaridade adequadas de um anticorpo humano remodelado, os aminoácidos das regiões estruturais de uma região variável de um anticorpo podemser substituídos (Sato K. et al., Cancer Research 1993, 53: 851-856).

Após a preparação de um anticorpo quimérico ou de um anticorpo humanizado, os aminoácidos de uma região variável (por exemplo, FR) ou de uma região constante podem ser substituídos por outros aminoácidos. A substituição de aminoácidos é uma substituição de, por exemplo, menos de 15, menos de 10, 8 ou menos, 7 ou menos, 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, ou 2 ou menos aminoácidos e é preferentemente uma substituição de 1 a 5 aminoácidos, e mais preferentemente 1 ou 2 aminoácidos. Um anticorpo substituído deveria ser funcionalmente equivalente a um anticorpo não substituído. A substituição é desejavelmente uma substituição de um aminoácido conservative entre aminoácidos tendo propriedades análogas tais como carga elétrica, cadeia lateral, polaridade, e aromaticidade. Os aminoácidos com propriedades análogas podem classificar-se em aminoácidos básicos (arginina, lisina, e histidina), aminoácidos ácidos (ácido aspártico e ácido glutâmico), aminoácidos polares sem carga (glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, cisteina, e tirosina), aminoácidos não polares (leucina, isoleucina, alanina, valina, prolina, fenilalanina, triptofano, e metionina), aminoácidos com cadeias laterais (treonina, valina, e isoleucina), e aminoácidos aromáticos (fenilalanina, tirosina, triptofano, e histidina), por exemplo.

Exemplos de um produto de anticorpo modificado incluem anticorpos ligados a várias moléculas tais como o polietilenoglicol (PEG). As substâncias a ser ligadas no produto de anticorpo modificado da presente invenção não estão limitadas. Tal anticorpo modificado pode ser obtido submetendo o anticorpo assim obtido a modificação quimica. Já foram estabelecidos métodos para tal na técnica.

Conforme é utilizado no presente documento, o termo "funcionalmente equivalente" refere-se a que um anticorpo sujeito tenha atividade biológica ou bioquímica semelhante à do anticorpo da presente invenção, e refere-se especificamente a que um anticorpo sujeito tenha a função de prejudicar o tumor sem provocar essencialmente rejeição após a sua administração a um ser humano, por exemplo. Um exemplo de tal atividade inclui uma atividade de supressão da proliferação celular ou uma atividade de ligação.

Como um método conhecido pelos peritos na especialidade para a preparação de um polipéptido funcionalmente equivalente a um polipéptido, conhece-se um método para introduzir uma mutação num polipéptido. Por exemplo, os peritos na especialidade podem preparar um anticorpo funcionalmente equivalente ao anticorpo da presente invenção introduzindo adequadamente uma mutação no anticorpo utilizando mutagénese sitio-dirigida (Hashimoto-Gotoh, T. et al. (1995) Gene 152, 271-275; Zoller, MJ., e Smith, M. (1983) Methods Enzymol. 100, 468-500; Kramer, W. et al., (1984) Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456; Kramer, W. and Fritz, HJ., (1987) Methods Enzymol. 154, 350-367; Kunkel, TA., (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 488-492; Kunkel (1988) Methods Enzymol. 85, 2763-2766), por exemplo .

Um anticorpo que reconhece o epitopo de uma proteína de CAPRIN-1 reconhecida pelo anticorpo anti-CAPRIN-1 acima pode ser obtido através de um método conhecido pelos peritos na especialidade. Por exemplo, tal anticorpo pode ser obtido através de um método que envolve determinar um epitopo de uma proteína de CAPRIN-1 reconhecida por um anticorpo anti-CAPRIN-1, através de um método geral (por exemplo, mapeamento de epítopos) e preparar posteriormente um anticorpo utilizando um polipéptido tendo uma sequência de aminoácidos contida no epitopo como um imunógeno, ou um método que envolve determinar um epitopo de um tal anticorpo preparado através de um método geral, e selecionar posteriormente um anticorpo tendo o epitopo idêntico ao de um anticorpo anti-CAPRIN-1. Conforme é utilizado no presente documento, 0 termo "epitopo" refere-se a, num mamífero e preferentemente num ser humano, um fragmento polipeptídico tendo antigenicidade ou imunogenicidade. A unidade de tamanho mínimo do mesmo consiste em cerca de 7 a 12 aminoácidos, e preferentemente de 8 a 11 aminoácidos. A constante de afinidade Ka (k0n/k0ff) do anticorpo da presente invenção é preferivelmente pelo menos 107 M_1, pelo menos 108 M_1, pelo menos 5 x 108 M_1, pelo menos 109 M_1, pelo menos 5 x 109 M_1 pelo menos 1010 M_1, pelo menos 5 x IO10 M_1, pelo menos 1011 M_1 pelo menos 5 x 1011 M_1 pelo menos IO12 M_1, pelo menos 1013 M_1. O anticorpo da presente invenção pode ser conjugado com um agente anti-tumoral. A conjugação do anticorpo com um agente anti-tumoral pode ser levada a cabo através de um espaçador tendo um grupo reativo com um grupo amino, um grupo carboxilo, um grupo hidroxi, um grupo tiol ou semelhantes (por exemplo, um grupo succinimidil succinato, um grupo formilo, um grupo 2-piridilditio um grupo maleimidilo um grupo alcoxi carbonilo, e um grupo hidroxilo).

Exemplos do agente anti-tumoral incluem os seguintes agentes anti-tumorais conhecidos como em anteriores literaturas da técnica anterior e semelhantes, tais como paclitaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracilo, tiotepa, busulfan, improsulfano, pipossulfan, benzodopa, carboquona, meturedopa, uredopa, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trimetilolomelamina, bulatacina, bulatacinona, canfotecina, briostatina, calistatina, criptoficina 1, cryptophycin8, dolastatina, duocarmicina, eleuterobina, pancratistatina, sarcodictina, espongistatina, clorambucil, clornafazina, colofosmfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, hidrocloreto de óxido de mecloretamina, melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracilo, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina, caliqueamicina, dinemicina, clodronato, esperamicina, aclacinomicina, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicina, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, detorbicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, adriamicina, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina, denopterina, pteropterina, trimetrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, androgénios (por exemplo, calusterona, propionato de dromostalonona, epitiostanol, mepitiostano, e testolactona) , aminoglutetimida, mitotano, trilostano, ácido frolinico, aceglatona, glicósido de aldofosfamida, ácido aminolevulinico, eniluracilo, amsacrina, bestrabucilo, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquona, elfornitina, acetato de eliptinio, epotilona, etoglúcido, lentinan, lonidamina, maytarisina, ansamitocina, mitoguazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pirarrubicina, losoxantrona, ácido podofilinico, 2-etilidrazida, procarbazina, razoxano, rizoxina, esquizofilano, espirogermânio, ácido tenuazónico, triaziquona, roridina A, anguidina, uretano, vindesina, dacarbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobromano, gacitosina, docetaxel, clorambucilo, gencitabina, 6-tioguanina, mercaptopurina, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, vinblastina etopósido, ifosfamida, mitoxantrona, vincristina, vinorelbina, novantrona, tenipósido, edatrexata, daunomicina, aminopterina, xeloda, ibandronato, irinotecan, inibidor da topoisomerase, difluorometilornitina (DMFO), ácido retinóico, capecitabina, e sais ou derivados farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Através da administração do anticorpo da presente invenção em conjunto com um agente anti-tumoral, podem obter-se efeitos terapêuticos ainda mais elevados. Esta técnica é aplicável tanto antes como após cirurgia de um paciente de cancro com a expressão de CAPRIN-1. Em particular, através da aplicação da técnica após a cirurgia, uma prevenção mais eficaz de reincidências de cancro ou um período de sobrevivência prolongado pode ser obtido contra cancro com a expressão da CAPRIN-1, que tenham sido tratados com um agente anti-tumoral individualmente.

Exemplos do agente anti-tumoral a ser administrado em combinação com o anticorpo da presente invenção incluem os seguintes agentes anti-tumorais conhecidos como em documentos ou semelhantes, tais como paclitaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracilo, tiotepa, bussulfan, improsulfano, pipossulfan, benzodopa, carboquona, meturedopa, uredopa, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trimetlolomelamina, bulatacina, bulatacinona, canfotecina, briostatina, calistatina, criptoficina 1, cryptophycin8, dolastatina, duocarmicina, eleuterobina, pancratistatina, sarcodictina, espongistatina, clorambucil, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracilo, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina, caliqueamicina, dinemicina, clodronato, esperamicina, aclacinomicina, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicina, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, detorbicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, adriamicina, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina, denopterina, pteropterina, trimetrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, calusterona, propionato de dromostalonona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona, aminoglutetimida, mitotano, trilostano, ácido frolinico, aceglatona, glicósido de aldofosfamida, ácido aminolevulinico, eniluracilo, amsacrina, bestrabucil, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquona, elfornitina, acetato de eliptinio, epotilona, etoglúcido, lentinan, lonidamina, maitansina, ansamitocina, mitoguazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pirarrubicina, losoxantrona, ácido podofilinico, 2-etilidrazida, procarbazina, razoxano, rizoxina, esquizofilano, espirogermânio, ácido tenuazónico, triaziquona, roridina A, anguidina, uretano, vindesina, dacarbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobromano, gacitosina, docetaxel, clorambucilo, gencitabina, 6-tioguanina, mercaptopurina, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, vinblastina etopósido, ifosfamida, mitoxantrona, vincristina, vinorelbina, novantrona, tenipósido, edatrexato, daunomicina, aminopterina, xeloda, ibandronato, irinotecan, inibidor da topoisomerase, difluorometilornitina (DMFO), ácido retinóico, capecitabina, e sais (conhecidos) ou derivados (conhecidos) farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Dos exemplos mencionados acima, utilizam-se preferivelmente ciclofosfamida, paclitaxel, docetaxel, e vinorelbina são preferentemente utilizados.

Alternativamente, um radioisótopo conhecido conforme nas literaturas da técnica anterior ou semelhantes, tal como s 211At, 131I, 125I, 90Y, 186Re, 188Re 153Sm, 212Bi, 32P, 175Lu, ou 176Lu podem ser ligados ao anticorpo da presente invenção. Um radioisótopo desejável é eficaz para o tratamento ou diagnóstico de um tumor. 0 anticorpo da presente invenção é um anticorpo tendo reatividade imunológica com a CAPRIN-1, um anticorpo que reconhece especificamente CAPRIN-1, ou um anticorpo que se liga especificamente à CAPRIN-1, que exibe atividade citotóxica contra o cancro ou o efeito de supressão de crescimento tumoral. 0 anticorpo deve ter uma estrutura tal que a rejeição é quase ou completamente evitada num animal sujeito ao qual é administrado o anticorpo. Exemplos de um tal anticorpo incluem, quando o animal é um ser humano, anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico. (por exemplo, anticorpo quimérico ratinho-ser humano), anticorpo de cadeia simples, e anticorpo bi-específico. Estes anticorpos são: anticorpos recombinantes nos quais as regiões constantes e as regiões variáveis das cadeias pesadas e cadeias leves são ambas de um anticorpo humano; anticorpos recombinantes em que as regiões determinantes de complementaridade (CDRs) (CDR1, CDR2, e CDR3) das regiões variáveis das cadeias pesadas e cadeias leves são ambas de um anticorpo de animal não humano, e, regiões estruturais e as regiões constantes das cadeias pesadas e cadeias leves são de um anticorpo humano; ou anticorpos recombinantes nos quais as regiões variáveis das cadeias pesadas e cadeias leves são de um anticorpo animal não humano, e, as regiões constantes das cadeias pesadas e cadeias leves são de um anticorpo humano. Anticorpos preferíveis são os dois últimos anticorpos.

Estes anticorpos recombinantes podem ser preparados conforme segue clonando ADN codificando um anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (por exemplo, um anticorpo monoclonal humano, um anticorpo monoclonal de ratinho, um anticorpo monoclonal de rato, um anticorpo monoclonal de coelho, ou um anticorpo monoclonal de galinha) a partir de uma célula produtora de anticorpos tal como um hibridoma, preparando ADN que codifica uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada do anticorpo através de um método RT-PCR utilizando-o como molde, e determinando posteriormente a sequência de cada região variável da cadeia leve e da cadeia pesada ou cada sequência de CDR1, CDR2, e CDR3 com base num sistema de numeração Rabat EU (Rabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).

Além disso, prepara-se ADN codificando cada uma destas regiões variáveis ou ADN codificando cada CDR utilizando técnicas de recombinação genética (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)) ou um sintetizador de ADN. Aqui, o hibridoma produtor de anticorpos monoclonais humanos acima pode ser preparado imunizando um animal produtor de anticorpos humanos (por exemplo, um ratinho) com CAPRIN-1 humana e fusionando posteriormente esplenócitos excisados a partir do animal imunizado com células de mieloma. Alternativamente, preparam-se ADNs que codificam uma região variável e uma região constante de cadeia pesada ou cadeia leve a partir de um anticorpo humano conforme for necessário utilizando técnicas de recombinação génica ou um sintetizador de ADN.

No caso de um anticorpo humanizado, o ADN é preparado substituindo uma sequência codificante de CDR no ADN que codifica uma região variável de cadeia leve ou cadeia pesada derivada de um anticorpo humano, com uma sequência codificante de CDR correspondente ao mesmo de um anticorpo derivado de um animal não humano (por exemplo, um ratinho, um rato, ou uma galinha) e ligando posteriormente o ADN assim obtido a ADN que codifica uma região variável de cadeia leve ou de cadeia pesada derivada de um anticorpo humano. Assim, pode ser preparado ADN que codifica um anticorpo humanizado.

No caso de um anticorpo quimérico, o ADN que codifica um anticorpo quimérico pode ser preparado ligando ADN que codifica uma região variável de cadeia leve ou de cadeia pesada de um anticorpo de um animal não humano (por exemplo, um ratinho, um rato, e uma galinha) a ADN que codifica uma região variável de cadeia leve ou de cadeia pesada de um anticorpo humano.

No caso de um anticorpo de cadeia simples, este anticorpo é um anticorpo preparado ligando linearmente uma região variável de cadeia pesada a uma região variável de cadeia leve através de um ligante. Assim, o ADN que codifica um anticorpo de cadeia simples pode ser preparado ligando o ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada, ADN que codifica um ligante, e ADN que codifica uma região variável de cadeia leve. No presente documento, uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve são ambas de um anticorpo humano, ou, apenas as CDRs são substituídas com CDRs de um anticorpo de um animal não humano (por exemplo, um ratinho, um rato, ou uma galinha) embora as outras regiões sejam de um anticorpo humano. Igualmente, um ligante compreende d el2 a 19 aminoácidos, tais como (G4S>3 de 15 aminoácidos (G. -B. Kim et al., Protein Engineering Design and Selection 2007, 20 (9): 425-432).

No caso de um anticorpo bi-específico (diabody), este anticorpo é capaz de se ligar especificamente a dois epítopos diferentes. Por exemplo, o ADN que codifica um anticorpo bi-específico pode ser preparado ligando ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada A, ADN que codifica uma região variável de cadeia leve B, ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada B, e ADN que codifica uma região variável de cadeia leve A nesta ordem (aqui, o ADN que codifica uma região variável de cadeia leve B é ligado ao ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada B através de ADN que codifica o ligante acima). Aqui, uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve são ambas de um anticorpo humano, ou, apenas as CDRs são substituídas com CDRs de um anticorpo de um animal não humano (por exemplo, um ratinho, um rato, ou uma galinha) embora as outras regiões sejam de um anticorpo humano. 0 ADN recombinante preparado acima é incorporado num ou numa pluralidade de vetores adequados, estes são introduzidos em células hospedeiras (por exemplo, células de mamíferos, células de leveduras, ou células de insetos), e provoca-se posteriormente a (co)expressão, de modo que um anticorpo recombinante possa ser preparado (P. J. Delves., ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES., 1997 WILEY, P. Shepherd and C. Dean., Monoclonal Antibodies: 2000 OXFORD UNIVERSITY PRESS; J. W. Goding., Monoclonal Antibodies: principles and practice., 1993 ACADEMIC PRESS).

Exemplos do anticorpo da presente invenção preparados de acordo com o método acima incluem os seguintes anticorpos (a) a (f): (a) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 44, 45, e 46 (por exemplo, o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 47);

(b) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 48, 49, e 50 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 52, 53, e 54 (por exemplo, o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 51 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 55); (c) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 56, 57, e 58 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 60, 61, e 62 (por exemplo, o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 59 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 63); (d) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 73, 74, e 75 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 77, 78, e 79 (por exemplo, o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 76 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 80); (e) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 81, 82, e 83 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 85, 86, e 87 (por exemplo, o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 84 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 88); e (f) um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 89, 90, e 91 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 93, 94, e 95 (por exemplo, o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 92 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 96).

As sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 são CDRl, CDR2, e CDR3 de uma região variável de cadeia pesada de anticorpo de galinha. Igualmente, as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 44, 45, e 46 são CDRl, CDR2, e CDR3 de uma região variável de cadeia leve de anticorpo de galinha.

Também as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 48, 49, e 50, SEQ ID NOS: 56, 57, e 58, SEQ ID NOS: 73, 74, e 75, SEQ ID NOS: 81, 82, e 83, e SEQ ID NOS: 89, 90, e 91 são CDRl, CDR2, e CDR3 de uma região variável de cadeia pesada de anticorpo de ratinho, respetivamente. Também as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 52, 53, e 54, SEQ ID NOS: 60, 61, e 62, SEQ ID NOS: 77, 78, e 79, SEQ ID NOS:85, 86, e 87, e SEQ ID NOS: 93, 94, e 95 são CDRl, CDR2, e CDR3 de uma região variável de cadeia leve de anticorpo de ratinho, respetivamente.

Também, o anticorpo humanizado, o anticorpo quimérico, o anticorpo de cadeia simples, ou o anticorpo bi-especifico da presente invenção é o seguinte anticorpo (exemplificado como "anticorpo (a)"), por exemplo: (i) um anticorpo em que a região variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e as sequências de aminoácidos das regiões estruturais de um anticorpo humano, e, uma região variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 44, 45, e 46 e as sequências de aminoácidos das regiões estruturais de um anticorpo humano (por exemplo, o anticorpo em que uma região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43, e, a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 47). (ii) um anticorpo em que uma região variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e as sequências de aminoácidos das regiões estruturais de um anticorpo humano, e, uma região constante de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de um anticorpo humano, e, uma região variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 44, 45, e 46 e as sequências de aminoácidos das regiões estruturais de um anticorpo humano, e uma região constante de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos de um anticorpo humano (por exemplo, o anticorpo em que uma região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43, e, uma região constante de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de um anticorpo humano, bem como, uma região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 47, e, uma região constante de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos a partir de um anticorpo humano).

Adicionalmente, as sequências das regiões constantes e as regiões variáveis das cadeias pesadas e das cadeias leves podem ser obtidas do NCBI (por exemplo, U.S.A.: GenBank, UniGene), por exemplo. Por exemplo, a sequência de Número de Acesso J00228 pode referir-se como uma região constante de cadeia pesada de IgGl humana, a sequência de Número de Acesso J00230 pode referir-se como uma região constante de cadeia pesada de IgG2 humana, a sequência de Número de Acesso X03604 pode ser referida como uma região constante de cadeia pesada de IgG3 humana, a sequência de Número de Acesso K01316 pode ser referida como uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana, as sequências de Números de Acesso V00557, X64135, X64133, e semelhantes podem referir-se como regiões constantes κ de cadeia leve humanas, e as sequências de Números de Acesso X64132, X64134, e semelhantes podem ser referidas como regiões constantes λ de cadeia leve humanas.

Os anticorpos acima mencionados têm preferivelmente atividade citotóxica e como tal podem exibir efeitos anti tumorais.

Também, as sequências especificas das regiões variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve ou de CDRs nos anticorpos acima são dados para fins ilustrativos, e como tal claramente não estão limitadas a tais sequências específicas. Um hibridoma capaz de produzir outro anticorpo humano ou de animal não humano (por exemplo, um anticorpo de ratinho9) contra a CAPRIN-1 humana é preparado, um anticorpo monoclonal que é produzido pelo hibridoma é recolhido, e determina-se posteriormente se é ou não um anticorpo alvo através da capacidade de união imunológica com a CAPRIN-1 humana e da atividade citotóxica como marcadores. Após a identificação de um hibridoma que produz o anticorpo monoclonal alvo desta forma, o ADN que codifica as regiões variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve do anticorpo alvo é preparado a partir do hibridoma conforme descrito acima, leva-se a cabo a sequenciação, e o ADN é posteriormente utilizado para a preparação de outro anticorpo.

Além disso, o anticorpo da presente invenção acima mencionado, as sequências dos anticorpos (a) a (f) acima, particularmente a sequência da região estrutural e/ou a sequência da região constante de cada um dos anticorpos pode ter uma substituição, uma deleção, ou uma adição de um ou vários (preferentemente, 1 ou 2) aminoácidos. desde que tenha especificidade para o reconhecimento específico da CAPRIN-1. Aqui o termo "vários" refere-se a de 2 a 5, e preferentemente 2 ou 3. A presente invenção proporciona adicionalmente ADN codificando o anticorpo da presente invenção acima mencionado, ou, ADN que codifica a cadeia pesada ou cadeia leve do anticorpo acima mencionado, ou, ADN que codifica a região variável de cadeia pesada ou cadeia leve do anticorpo acima mencionado. Exemplos de tal ADN incluem, no caso do anticorpo (a), ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada que compreende as sequências nucleotídicas que codificam as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e ADN que codifica uma região variável de cadeia leve que compreende as sequências nucleotídicas que codificam as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 44, 45, e 46.

As regiões determinantes de complementaridade (CDRs) codificadas pelas sequências de ADN são regiões para determinar a especificidade de um anticorpo. Assim, sequências que codificam regiões num anticorpo para além da CDRs (especificamente, uma região constante e uma região estrutural) podem ser a partir de outros anticorpos. Aqui, exemplos de tais "outros anticorpos" incluem anticorpos de organismos não humanos, e são preferentemente de um ser humano com vista à redução dos efeitos secundários. Assim, no caso do ADN acima mencionado, as regiões que codificam cada região estrutural e cada região de contacto de cadeias pesadas e de cadeias leves compreendem preferentemente sequências nucleotidicas que codificam sequências de aminoácidos correspondentes a partir de um anticorpo humano.

Exemplos adicionais alternativos de ADN que codifica o anticorpo da presente invenção incluem, no caso do anticorpo (a) , ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência nucleotidicas que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: e 43 e ADN que codifica uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 47. Aqui, um exemplo da sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 é a sequência nucleotidica de SEQ ID NO: 71. Igualmente, um exemplo da sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 47 é a sequência nucleotidica de SEQ ID NO: 72. Nestes ADNs, as regiões que codificam cada região constante de cadeias pesadas e de cadeias leves compreendem preferentemente sequências nucleotidicas que codificam as sequências de aminoácidos correspondentes a partir de um anticorpo humano. 0 ADN da presente invenção pode obter-se através dos métodos acima mencionados no presente documento ou pelo seguinte método, por exemplo. Em primeiro lugar, prepara-se ARN total a partir de um hibridoma relacionado com o anticorpo da presente invenção utilizando um kit de extração de ARN disponível comercialmente, e depois o ADNc é sintetizado com transcriptase reversa utilizando iniciadores aleatórios, e semelhantes. Subsequentemente, o ADNc que codifica um anticorpo é amplificado através de um método de PCR utilizando como iniciadores os oligonucleótidos de sequências conservadas em cada região variável de genes de cadeia pesada e de cadeia leve de anticorpos de ratinho conhecidos. A sequência que codifica uma região constante pode ser obtida amplificando uma sequência conhecida através de um método de PCR. A sequência nucleotídica do ADN pode ser determinada através de um método convencional tal como a inserção num plasmídeo ou num fago para sequenciação.

Um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção é considerado que exibe os efeitos anti-tumorais contra células cancerígenas que expressam CAPRIN-1 devido a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) de células efetoras contra células que expressam CAPRIN-1, ou a citotoxicidade dependente de complemento (CDC) contra células que expressam CAPRIN-1.

Portanto, a atividade de um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção pode ser avaliada por, como especificamente descrito nos Exemplos abaixo, medição da atividade ADCC ou da atividade CDC contra células que expressam CAPRIN-1 acima mencionadas.

Um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção liga-se a uma proteína CAPRIN-1 numa célula cancerígena e exibe efeitos anti-tumorais devido à atividade acima mencionada, e como tal é útil para tratar ou prevenir o cancro. Especificamente, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, que compreende um anticorpo anti-CAPRIN-1 como um ingrediente ativo. Quando o anticorpo anti-CAPRIN-1 é utilizado para a administração do mesmo a um corpo humano (terapêutica de anticorpos), é preferivelmente um anticorpo humano ou um anticorpo humanizado de forma a diminuir a imunogenicidade.

Alem disso, quanto mais elevada a capacidade de união entre um anticorpo anti-CAPRIN-1 e uma proteína CAPRIN-1 nas superfícies de células cancerígenas, mais forte é a atividade anti-tumoral do anticorpo anti-CAPRIN-1 que pode ser obtido. Portanto, quando se pode adquirir um anticorpo anti-CAPRIN-1 tendo elevada afinidade de ligação com uma proteína CAPRIN-1, podem esperar-se efeitos anti-tumorais mais fortes e torna-se possível a aplicação de tal anticorpo como uma composição farmacêutica para a finalidade do tratamento e/ou prevenção do cancro. Tal afinidade de ligação elevada é desejadamente conforme segue. Conforme descrito anteriormente, a constante de ligação (constante de afinidade) Ka (k0n/k0ff) é preferentemente de pelo menos 107 M_1, pelo menos 108 M_1, pelo menos 5 x 108 M_1, pelo menos 109 M_1, pelo menos 5 x 109 M-1 pelo menos 1010 M_1, pelo menos 5 x 1010 M_1, pelo menos 1011 M_1 pelo menos 5 x 1011 M_1, pelo menos 1012 M_1, ou, pelo menos 1013 M_1. CLigação a célula que expressa o antigénio> A capacidade de um anticorpo de se unir à CAPRIN-1 pode ser especificada através de ensaios de união utilizando ELISA, um método de Western blot, imunofluorescência e análise de citometria de fluxo, ou semelhantes conforme descrito nos Exemplos. <Coloração imunohistoquímica>

Um anticorpo que reconhece CAPRIN-1 pode testar-se para a reatividade com CAPRIN-1 através de um método de imunohistoquímica conhecido pelos peritos na técnica utilizando seções congeladas fixadas em paraformaldeído ou em acetona ou seções teciduais fixadas em paraformaldeído e envolvidas em parafina, que é preparada a partir de amostras teciduais obtidas a partir de um paciente durante cirurgia, ou amostras teciduais obtidas a partir de um animal tendo um tecido de heterotransplante inoculado com uma linha celular que expressa CAPRIN-1, naturalmente ou após a transfeção.

Um anticorpo reativo a CAPRIN-1 pode ser tingido através de vários métodos de coloração imunohistoquímica. Por exemplo, um anticorpo de cabra anti-ratinho ou de cabra anti-galinha conjugado com uma peroxidase de rábano é submetido a reação, um anticorpo alvo pode ser visualizado. cComposição farmacêutica> A presente invenção proporciona ainda uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, que é caracterizado por conter o anticorpo acima ou fragmento do mesmo como um ingrediente ativo que tem reatividade imunológica com polipéptidos parciais de CAPRIN-1 representado pelas SEQ ID NOS com número par: 2 a 30, em que o polipéptido parcial tem a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 37, ou uma sequência de aminoácidos tendo 80 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37.

Um alvo da composição farmacêutica para o tratamento e/ou prevenção de um cancro da presente invenção não é particularmente limitado, desde que seja um cancro (célula) que expressa um gene da CAPRIN-1.

Os termos "tumor" e "cancro" conforme utilizados no presente documento referem-se a neoplasmas malignos e são utilizados de forma intercambiável.

O cancro a ser submetido à presente invenção é um cancro que expressa genes codificando proteínas CAPRIN-1 tendo as sequências de aminoácidos de número par das SEQ ID NOS: 2 a 30. Exemplos de tal cancro incluem preferentemente cancro da mama, tumor cerebral, leucemia cancro pulmonar, linfoma, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico, e cancro colorretal.

Exemplos de tal cancro especifico incluem, mas não são limitados a: adenocarcinoma da mama, adenocarcinoma da mama de tipo composto, tumor misto maligno da glândula mamária, adenocarcinoma papilar intraductal, adenocarcinoma pulmonar, carcinoma de células escamosas, carcinoma de pequenas células, carcinoma de grandes células, um glioma que é um tumor do tecido neuroepitelial, ependimoma, neurocitoma, tumor neuroectodérmico fetal, schwanoma, neurofibroma, meningioma, leucemia linfocitica crónica, linfoma, linfoma gastrointestinal, linfoma digestivo, linfoma de pequenas células a células médias, cancro do ceco, cancro do cólon ascendente, cancro do cólon descendente, cancro do cólon transversal, cancro do cólon sigmoide, e cancro retal.

Além disso, indivíduos preferíveis são mamíferos incluindo primatas, animais de estimação, animais domésticos, animais de corrida, e semelhantes e particularmente preferentemente seres humanos, cães, e gatos.

Quando um anticorpo a ser utilizado na presente invenção se utiliza como uma composição farmacêutica, pode ser formulado através de um método conhecido pelos peritos na especialidade. Por exemplo, o anticorpo pode ser utilizado parentericamente na forma de uma preparação de injeção tal como uma solução asséptica ou uma suspensão preparada com água ou uma solução farmacologicamente aceitável para além da água. Por exemplo, pode ser formulada através de mistura numa forma farmacêutica unitária requerida pela prática farmacêutica geralmente aceite em combinação adequada com um veículo ou meio farmacologicamente aceitável, especificamente, água estéril ou solução salina, óleo vegetal, um emulsificante, uma suspensão, um tensioativo, um estabilizante, um composto aromatizante, um excipiente, um veiculo, um antisséptico, um ligante, e semelhantes. As quantidades de ingredientes ativos nestas preparações são determinadas de modo que se possa obter uma dosagem adequada dentro do intervalo indicado.

Uma composição asséptica para injeção pode ser prescrita de acordo com a prática farmacêutica geral utilizando um veiculo tal como água destilada para a inj eção.

Exemplos de uma solução aquosa para injeção incluem solução salina, uma solução isotónica contendo dextrose ou outros adjuvantes, tais como D-sorbitol, D-manose, D-manitol, e cloreto de sódio. Estes exemplos podem ser utilizados em combinação com um agente solubilizante adequado tal como o álcool, especificamente etanol e poliálcool (por exemplo, propilenoglicol e polietilenoglicol) , e tensioativo não iónico (por exemplo, polissorbato 80 (TM) e HCO-60).

Exemplos do óleo incluem óleo de sésamo e óleo de soja, que podem ser utilizados em combinação com um agente solubilizante tal como benzoato de benzilo ou álcool benzilico. Igualmente, um agente tampão tal como tampão fosfato ou tampão acetato de sódio, um agente suavizante tal como cloridrato de procaina, um estabilizante tal como álcool benzilico ou fenol, e um antioxidante podem ser combinados com eles. Uma ampola adequada é geralmente preenchida com a solução de injeção assim preparada. A administração é uma administração perorai ou parentérica e é preferentemente uma administração parentérica. Exemplos específicos da via de administração incluem injeção, administração transnasal, administração pulmonar, e administração transdermal. Exemplos de injeção incluem injeção intravenosa, injeção intramuscular, injeção intraperitoneal, e injeção subcutânea. de forma a ser possível a administração sistémica ou local.

Também, os métodos de administração podem ser selecionados adequadamente dependendo da idade de um paciente, peso corporal, sexo, sintomas, e semelhantes. A dosagem por administração de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo ou um polinucleótido que codifica o anticorpo pode ser selecionada a partir do intervalo entre 0, 0001 mg e 1000 mg por quilo de peso corporal, por exemplo. Alternativamente, por exemplo, a dosagem pode ser selecionada a partir do intervalo entre 0,001 mg/corpo e 100000 mg/corpo por paciente. Contudo, o intervalo de dosagem não sempre está limitado a estes valores numéricos. A dosagem e o método de administração variam dependendo do peso corporal de um paciente, idade, género, sintomas, e semelhantes, mas podem ser adequadamente selecionados pelos peritos na especialidade. A composição farmacêutica acima mencionada contendo o anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção administra-se a um indivíduo, de modo que o cancro, preferentemente, cancro da mama, tumor cerebral, leucemia cancro pulmonar, linfoma, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico, e cancro colorretal possam ser tratados e/ou prevenidos. A presente invenção abrange ainda um método para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, que compreende administra a um indivíduo a composição farmacêutica da presente invenção em combinação com o agente anti-tumoral ou composição farmacêutica contendo o dito agente anti-tumoral acima exemplificados. O anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção e um agente anti-tumoral podem ser administrados simultaneamente ou separadamente a um indivíduo. Podem ser administrados separadamente independentemente da ordem de administração. Os intervalos de administração, dosagem, a via de administração, e a frequência de administração podem ser adequadamente selecionados por um especialista. Exemplos de outra formulação farmacêutica a ser administrada simultaneamente incluem composições farmacêuticas obtidas misturando o anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção com um agente anti-tumoral num veiculo (ou meio) farmacologicamente aceitável seguido de formulação. Além disso, tanto a composição acima descrita contendo um agente anti-tumoral como a formulação, explicações relativas à prescrição, formulação, a via de administração, dose, cancro, e semelhantes para administração de uma composição farmacêutica contendo o anticorpo da presente invenção são aplicáveis.

Portanto, a presente invenção proporciona também uma composição farmacêutica para tratar e/ou prevenir um cancro, compreendendo a composição farmacêutica da presente invenção, e a composição farmacêutica acima exemplificada contendo um agente anti-tumoral. Igualmente, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, compreendendo o anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção e um agente anti-tumoral juntamente com um veiculo farmacologicamente aceitável. <Polipéptido e ADN> A presente invenção proporciona ainda os seguintes polipéptidos e ADNs com relação aos anticorpos acima (a) a (f) . (i) polipéptidos compreendendo as sequências de aminoácidos da SEQ ID NOS: 43, 51, 59, 76, 84, e 92, e ADN que codificam os polipéptidos, em que os ADN compreendem as sequências nucleotidicas das SEQ ID NOS: 71, 103, 105, 97, 99, e 101. (ii) Polipéptidos compreendendo as sequências de aminoácidos da SEQ ID NOS: 47, 55, 63, 80, 88, e 96, e ADN que codificam os polipéptidos, em que os ADN compreendem as sequências nucleotidicas das SEQ ID NOS: 72, 104, 106, 98, 100, e 102.

(iii) polipéptidos de CDR de cadeia pesada selecionados a partir do grupo que consiste nas sequências de aminoácidos representadas nas SEQ id NOS: 40, 41, e 42, SEQ ID NOS: 48, 49, e 50, SEQ ID

NOS: 56, 57, e 58, SEQ ID NOS: 73, 74, e 75, SEQ ID

NOS: 81, 82, e 83, e SEQ ID NOS: 89, 90, e 91, e ADN que codificam os polipéptidos. (vi) polipéptidos de CDR de cadeia leve selecionados a partir do grupo que consiste nas sequências de aminoácidos representadas nas SEQ ID NOS: 44, 45, e 46, SEQ ID NOS: 52, 53, e 54, SEQ ID NOS: 60, 61, e 62, SEQ ID NOS: 77, 78, e 79, SEQ ID NOS: 85, 86, e 87, e SEQ ID NOS: 93, 94, e 95, e ADN que codificam os polipéptidos.

Estes polipéptidos e ADNs podem ser preparados utilizando técnicas de recombinação genética conforme descritas acima no presente documento. <Sumário da presente invenção>

Certos aspetos e formas de realização da presente invenção explicada acima são resumidos como se segue. (1) [APAGADO] (2) Uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, que compreende um anticorpo ou um fragmento do mesmo como um ingrediente ativo que se liga a um polipéptido parcial de CAPRIN-1, em que CAPRIN-1 é representada por qualquer das sequências de número par das SEQ ID NOS: 2 a 30, e em que o polipéptido parcial compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 69 ou 70 contida na sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de aminoácidos tendo 80 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 69 ou 70. (3) A composição farmacêutica de acordo com (1) ou (2) acima, em que o cancro é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia linfoma, cancro pulmonar, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico, ou cancro colorretal. (4) A composição farmacêutica de acordo com qualquer um de (1) a (3) acima, em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal ou um anticorpo policlonal. (5) A composição farmacêutica de acordo com qualquer um de (1) a (4) acima, em que o anticorpo é um anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia simples, ou anticorpo bi-especifico. (7) Um anticorpo que se liga a um polipéptido que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 69 ou 70 contida na sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de aminoácidos tendo 80 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 69 ou 70. (8) O anticorpo de acordo com (6) ou (7) acima, que tem uma atividade citotóxica contra uma célula de cancro que expressa uma proteína de CAPRIN-1. (9) Um anticorpo, que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 44, 45, e 46, e tem reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1. (10) Um anticorpo, que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 48, 49, e 50 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 52, 53, e 54, e tem reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1. (11) Um anticorpo, que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 56, 57, e 58 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 60, 61, e 62, e tem reatividade imunológica com uma proteina CAPRIN-1. (12) Um anticorpo, que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 73, 74, e 75 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 77, 78, e 79, e tem reatividade imunológica com uma proteina CAPRIN-1. (13) Um anticorpo, que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 81, 82, e 83 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 85, 86, e 87, e tem reatividade imunológica com uma proteina CAPRIN-1. (14) Um anticorpo, que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 89, 90, e 91 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 93, 94, e 95, e tem reatividade imunológica com uma proteina CAPRIN-1. (15) O anticorpo de acordo com qualquer um de (6) a (14) acima, que é um anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia simples, ou anticorpo bi-específico. (16) Uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, compreendendo o anticorpo de qualquer um de (6) a (15) acima como um ingrediente ativo ou um fragmento do mesmo. (17) A composição farmacêutica de acordo com (16) acima, em que o cancro é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia linfoma, cancro pulmonar, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico, ou cancro colorretal. (18) Uma combinação farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, que compreende a composição farmacêutica de qualquer um de (1) a (5) acima ou a composição farmacêutica de (16) ou (17) acima, e uma composição farmacêutica contendo um agente anti-tumoral.

Exemplos A presente invenção descreve-se mais especificamente com base nos Exemplos, mas o âmbito da presente invenção não se limita a estes exemplos específicos.

Exemplo 1 Identificação da nova proteína de antigénio de

cancro através do método SEREX (1) Preparação da biblioteca de ADNc 0 ARN total foi extraído a partir de tecido testicular de um cão saudável através do método de guanidínio ácido-fenol-clorofórmio. 0 ARN PoliA foi purificado de acordo com os protocolos unidos a um kit de purificação de ARNm Oligotex-dT30 (Takara Shuzo Co., Ltd.) utilizando o kit.

Uma biblioteca de fagos de ADNc de testículos caninos foi sintetizada utilizando o ARNm assim obtido (5 pg). Para a preparação da biblioteca de fagos de ADNc, foram utilizados um kit de síntese de ADNc, um kit de síntese ZAP-ADNc , e um kit de clonagem de ouro III gigapack ZAP-ADNc (STRATAGENE) e a biblioteca foi preparada de acordo com os protocolos incluídos no kit. 0 tamanho da biblioteca de fagos de ADNc assim preparada foi de 7,73 x 105 pfu/ml. (2) Rastreio da biblioteca de ADNc utilizando soro

Um imunorastreio foi levada a cabo utilizando a biblioteca de fagos de ADNc de testículos caninos acima preparada. Especificamente, uma Escherichia coli hospedeira (XLl-Blue MRF') foi infetada com o fago de modo que 2210 clones estavam presentes numa placa de agarose NZY de <p90 x 15 mm. As células foram cultivadas a 42 °C durante 3 a 4 horas, de forma a provocar a formação de placas. A placa foi coberta com uma membrana de nitrocelulose (Hybond C Extra: GE Healthcare Bio-Sciences) impregnada com IPTG (isopropil-p-D-tiogalactósido) a 37°C durante 4 horas. As proteínas foram induzidas, expressas, e transferidas posteriormente para a membrana. Subsequentemente, a membrana foi recuperada, imersa, e agitada em TBS (Tris-HCl a 10 mM, NaCl a 150 mM pH 7,5) contendo leite em pó a 0,5 % a 4 °C durante a noite, para que se suprimissem as reações não específicas. Provocou-se que o filtro reagisse com soros de cães com cancro diluído 500 vezes à temperatura ambiente durante 2 a 3 horas.

Como os soros acima mencionados a partir de cães com cancro, soros recolhidos de cães com cancro de mama foram utilizados. Os soros foram armazenados a -80 °C e foram posteriormente submetidos a pré-tratamento imediatamente antes da sua utilização. 0 pré-tratamento para os soros foi realizado através do seguinte método. Especificamente, E. coli hospedeira (XLl-Blure MRF') foi infetada com o fago λ ZAP Express no qual não tinha sido introduzido qualquer gene exógeno, e cultivada em meio de placa NZY a 37 °C durante a noite. Subsequentemente, um tampão de NaHCCb a 0,2 M (pH 8,3) contendo NaCl a 0,5 M foi adicionado à placa e deixou-se posteriormente repousar a placa a 4 °C durante 15 horas. Os sobrenadantes foram recolhidos como extratos de Escherichia coli/fago. A seguir, passou-se o extrato de E. coli/fago recolhido através de uma coluna NHS (GE Healthcare Bio-Sciences), de forma a imobilizar a proteína derivada a partir de Escherichia coli/fago. Passou-se o soro de um cão com cancro através da coluna na qual a proteína foi imobilizada para a reação, removendo assim Escherichia coli e os anticorpos adsorvidos ao fago do soro. Cada fração de soro que passou através da coluna foi diluída 500 vezes com TBS contendo leite desnatado em pó a 0,5 %, e o resultante foi utilizado como material de imunorrastreio.

Uma membrana, à qual o soro assim tratado e a proteína de fusão foram transferidos, foi lavada 4 vezes com TBS-T (Tween20/TBS a 0,05% ). A membrana foi feita reagir com IgG de cabra anti-cão (IgG de cabra anti-cão-h+I HRP conjugados: BETHYL Laboratories) diluído 5000 vezes como um anticorpo secundário com o TBS contendo leite desnatado em pó a 0,5 % a temperatura ambiente durante 1 hora. A deteção foi levada a cabo através da reação de coloração enzimática utilizando uma solução de reação NBT/BCIP (Roche). As colónias correspondendo ao sítio positivo para a reação de cor foram recolhidas da placa de agarose NZY φ90 x 15 mm, e dissolvidas posteriormente em 500 μΐ de tampão SM (NaCl a lOOmM, 10 mM de MgCISCh, Tris-HCl a 50 mM, gelatina a 0,0 1%, pH 7,5). Até à unificação das colónias positivas para a reação de cor, repetiram-se rastreios secundários e terciários através de um método semelhante ao descrito acima. Conseguentemente, 30940 clones de fagos que tinham reagido com IgG sérica foram rastreados de modo que foram isolados 5 clones positivos. (3) Pesquisa de homologia de gene de antigénio isolado

Realizou-se um procedimento para a conversão de vetores de fagos a vetores de plasmídeos para os 5 clones positivos isolados através do método acima mencionado com a finalidade de submeter os clones a análise de sequências nucleotídicas. Especificamente, 200 μΐ de uma solução de Escherichia coli hospedeira (XLl-Blue MRF') preparada para dar uma ϋΟεοο de absorvância de 1,0, 250 μΐ de uma solução de fagos purificada, e 1 μΐ de fago auxiliar ExAssist (STRATAGENE) foram misturados e deixados reagir a 37 °C durante 15 minutos. Posteriormente, 3 ml de meio LB foram adicionados, as células foram cultivadas a 37 °C durante 2,5 a 3 horas, e depois o resultante foi imediatamente posto em banho de água a 70 °C para incubação durante 20 minutos. Levou-se a cabo uma centrifugação a 4 °C, 1000 x g durante 15 minutos, e o sobrenadante foi posteriormente recuperado como uma solução de fagemídeo. Subsequentemente, 200 μΐ de uma solução preparada a partir do hospedeiro de fagemideos Escherichia coli SOLR para dar uma DOõoo de absorvância de 1,0 e 10 μΐ da solução de fago purificada foram misturados, seguido de 15 minutos de reação a 37 °C. 50 μΐ do resultante foram colocados em placa de meio de agar LB contendo ampicilina (a uma concentração final de 50 pg/ml) e cultivados posteriormente durante a noite a 37 °C.

Uma única colónia de SOLR transformada foi recolhida e cultivada posteriormente em meio LB contendo ampicilina (a uma concentração final de 50 pg/ml) a 37 °C. o ADN de plasmideo portando um inserto de interesse foi purificado utilizando o Kit Miniprep plasmid QIAGEN (QIAGEN). 0 plasmideo purificado foi submetido a análise da sequência completa do inserto através do método de primer walking utilizando o iniciador T3 da SEQ ID NO: 31 e o iniciador T7 de SEQ ID NO: 32. As sequências génicas das SEQ ID NOS: 5, 7, 9, 11, e 13 foram obtidas através da análise de sequência. Com a utilização das sequências nucleotidicas dos genes e as sequências de aminoácidos dos mesmos (SEQ ID NOS: 6, 8, 10, 12, e 14), uma pesquisa de homologia através do programa de pesquisa J_http://www.ncbi .nlm.nih.gov/BLAST) foi realizada para pesquisar homologias com genes conhecidos. Como um resultado, revelou-se que todos os cinco genes obtidos eram genes que codificam a CAPRIN-1. As identidades de sequência entre os cinco genes foram de 100 % a nivel de sequência nucleotidica e de 99 % a nivel de sequência de aminoácidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. As identidades de sequência entre estes genes e o gene que codifica o homólogo humano foram de 94 % a nivel de sequência nucleotidica e de 98 % a nivel de sequência de aminoácidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. As sequências nucleotidicas dos homólogos humanos são representadas pelas SEQ ID NOS: 1 e 3 e as sequências de aminoácidos dos mesmos são representadas pelas SEQ ID NOS: 2 e 4. Igualmente, as identidades de sequência entre os genes caninos obtidos e o gene que codifica o homólogo de gado foram de 94 % a nivel de sequência nucleotidica e de 97 % a nivel de sequência de aminoácidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. A sequência nucleotidica do homólogo de gado é representada pela SEQ ID NO: 15 e a sequência de aminoácidos do mesmo é representada pela SEQ ID NO: 16. Além disso, as identidades de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e o gene que codifica o homólogo de gado foram de 94 % a nível de sequência nucleotidica e de 93 % a 97 % a nível de sequência de aminoácidos as regiões a ser traduzidas em proteínas. Igualmente, as identidades de sequência entre os genes caninos obtidos e o gene que codifica o homólogo de cavalo foram de 93 % a nível de sequência nucleotidica e de 97 % a nível de sequência de aminoácidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. A sequência nucleotidica do homólogo de cavalo é representada pela SEQ ID NO: 17 e a sequência de aminoácidos do mesmo é representada pela SEQ ID NO: 18. Além disso, as identidades de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e o gene que codifica o homólogo de cavalo foram de 93 % a nível de sequência nucleotidica e de 96 % a nível de sequência de aminoácidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. Igualmente, as identidades de sequência entre os genes caninos obtidos e os genes que codificam o homólogo de ratinho foram de 87 % a 89 % a nível de sequência nucleotidica e de 95 % a 97 % a nível de sequência de aminoácidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. As sequências nucleotídicas dos homólogos de ratinho são representadas pelas SEQ ID NOS: 19, 21, 23, 25, e 27 e as sequências de aminoácidos dos mesmos são representadas pelas SEQ ID NOS: 20, 22, 24, 26, e 28. Além disso, as identidades de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e os genes que codificam o homólogo de ratinho foram de 89 % a 91 % a nível de sequência nucleotidica e de 95 % a 96 % a nível de sequência de aminoácidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. Igualmente, as identidades de sequência entre os genes caninos obtidos e o gene que codifica o homólogo de galinha foram de 82 % a nível de sequência nucleotídica e de 87 % a nível de sequência de aminoácidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. A sequência nucleotídica do homólogo de galinha é representada pela SEQ ID N.°: 29 e a sequência de aminoácidos do mesmo é representada pela SEQ ID NO: 30. Além disso, as identidades de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e o gene que codifica o homólogo de galinha foram de 81 % a 82 % a nível de sequência nucleotídica e de 86 % a nível de sequência de aminoácidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. (4) Análise de expressão génica em cada tecido A expressão de genes obtidos através do método acima foi examinada em tecidos normais de cães e seres humanos e várias linhas celulares através de um método de RT-PCR. A reação da transcriptase reversa realizou-se conforme segue. Especificamente, extraiu-se ARN total a partir de 50 mg a 100 mg do tecido ou 5 a 10 x 106 células da linha celular utilizando um reagente TRIZOL (Invitrogen) de acordo com os protocolos acompanhantes. Sintetizou-se ADNc com o ARN total utilizando um sistema System for RT-PCR (Invitrogen) de acordo com os protocolos acompanhantes. Uma PCR foi realizada conforme segue utilizando os iniciadores das SEQ ID NOS: 33 e 34 específicos para os genes obtidos. Especificamente, o reagentes e um tampão acompanhante foram adicionados a 0,25 μΐ da amostra preparada através da reação de transcrição reversa até um volume total de 25 μΐ, de modo que o resultante continha os iniciadores acima a 2 μΜ cada um, dNTPs de 0,2 mM cada um, e 0,65 U de polimerase ExTaq (Takara Shuzo Co., Ltd.). Uma PCR foi levada a cabo repetindo um ciclo de 94 °C durante 30 segundos, 60 °C durante 30 segundos, e 72 °C durante 30 segundos 30 vezes utilizando um aparelho Thermal Cycler (BIO RAD). Os iniciadores específicos de gene acima mencionados são capazes de amplificar a região abrangendo os nucleótidos 206 a 632 na sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 5 (gene da CAPRIN-1 canina) e a região abrangendo os nucleótidos 698 a 1124 na sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1 (gene da CAPRIN-1 humana). Como um controlo para comparação, os iniciadores específicos de GAPDH das SEQ ID NOS: 35 e 36 foram também utilizados simultaneamente. Como um resultado, conforme representado pela Fig. 1. observou-se forte expressão em testículos entre tecidos normais de cão, ao passo que se observou expressão em tecidos de cancro da mama e de adenocarcinoma de cão. Além disso, a observação da expressão dos homólogos humanos a partir dos genes obtidos também foi levada a cabo. Como um resultado, à semelhança do caso do gene da CAPRIN-1 canino, só se observou expressão em testículos entre tecidos normais. Contudo, no caso de células de cancro, detetou-se expressão em vários tipos de linhas celulares, incluindo linhas celulares de cancro da mama, tumor cerebral, leucemia cancro pulmonar, e cancro do esófago. Observou-se expressão particularmente em várias linhas celulares de cancro da mama. Confirmou-se através dos resultados que a expressão da CAPRIN-1 não é observada em tecidos normais para além de testículos, ao passo que a CAPRIN-1 foi expressa em várias células de cancro e particularmente em linhas celulares de cancro da mama.

Na Fig. 1, o número de referência 1 em cada eixo vertical indica os padrões de expressão dos genes identificados acima e o número de referência 2 indica aos padrões de expressão do gene GAPDH como controlo. (5) Coloração imunohistoquímica (5)-l Expressão de CAPRIN-1 em tecidos normais de ratinho e de cão

Ratinhos (Balb/c), fêmeas) e cães (beagles, fêmeas) foram exanguinados sob anestesia por éter e anestesia por cetamina/isoflurano. Após laparatomia, cada órgão (estômago, fígado, globo ocular, timo, músculo, medula óssea, útero intestino delgado, esófago, coração, rim, glândulas salivares, intestino grosso, glândulas mamárias, cérebro, pulmão, pele, glândulas supra-renais, ovário, pâncreas, baço, e bexiga) foram transferidos a uma placa de 10 cm contendo PBS. Cada órgão foi aberto em PBS e posteriormente submetido a fixação por perfusão durante a noite em tampão fosfato a 0,1 M (pH 7,4) contendo paraformaldeído (PFA) a 4%. Descartou-se a solução de perfusão, a superfície de tecido de cada órgão foi lavada com PBS, uma solução de PBS contendo sacarose a 10 % foi adicionada a um tubo de centrífuga de 50 ml, cada tecido foi adicionado ao tubo, e posteriormente o tubo foi agitado utilizando um rotor a 4 °C durante 2 horas. A solução foi substituída por uma solução de PBS contendo sacarose a 20 %, e posteriormente deixou-se repousar a 4 °C até que o tecido se afundou. A solução foi substituída por uma solução de PBS contendo sacarose a 30 % e posteriormente deixou-se repousar a 4 °C até que o tecido se afundou. O tecido foi removido e depois as porções necessárias foram excisadas com um bisturi cirúrgico. A seguir, um composto de OCT (Tissue Tek) foi adicionado ao tecido de forma a aplicá-lo meticulosamente à superfície tecidual. e o tecido foi posteriormente colocado num molde criogénico. Colocou-se o molde criogénico em gelo seco para congelação rápida. Posteriormente, o tecido foi fatiado a 10 μπι a 20 μπι utilizando um criostato (LEICA). As fatias foram secas ao ar em lâminas de vidro utilizando um secador de cabelo durante 30 minutos, para preparar o tecido fatiado montado numa lâmina de vidro. A seguir, cada amostra foi colocada num frasco de coloração preenchido com PBS-T (solução salina contendo Tween20 a 0,05%) e posteriormente submetida a substituição com PBS-T sendo repetido três vezes a cada 5 minutos. Removeu-se o excesso de água à volta das seções com KimWipes, e posteriormente as seções circundaram-se utilizando uma DAKOPEN (DAKO). Como soluções de bloqueio, um reagente de bloqueio de Ig de ratinhos MOM (VECTASTAIN) e uma solução de PBS-T contendo FBS a 10% foram sobrepostas em tecidos de ratinho e tecidos de cão, respetivamente, e posteriormente deixaram-se repousar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. A seguir, uma solução do anticorpo monoclonal contra CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n° 1) de 10 pg/ml ajustada com uma solução de bloqueio, que reage com as superfícies de células de cancro e tem a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 47, que foi preparada no Exemplo 4, foi colocada e deixada a repousar durante a noite numa câmara húmida a 4 °C. 10 minutos de lavagem com PBS-T foi realizada 3 vezes, e posteriormente colocou-se um anticorpo anti-IgG marcado com biotina de MOM (VECTASTIN) diluído 250 vezes com a solução de bloqueio e deixou-se posteriormente repousar à temperatura ambiente durante 1 hora numa câmara húmida. Depois dez (10) minutos de lavagem com PBS-T foi realizada três vezes, colocou-se um reagente ABC de avidina-biotina (VECTASTIN), e posteriormente deixou-se repousar a amostra numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 5 minutos. Depois dez (10) minutos de lavagem com PBS-T foi realizada três vezes, colocou-se uma solução corante DAB (DAB 10 mg + 30% H2O2 10 μ1/50 ml de Tris-HCl a 0,05 M (pH 7,6)), e posteriormente deixou-se repousar a amostra numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após enxaguar com água destilada, colocou-se um reagente de hematoxilina (DAKO), deixou-se repousar a amostra à temperatura ambiente durante 1 minuto, e posteriormente enxaguou-se com água destilada. A lâmina de vidro foi imersa em soluções de etanol a 70 %, 80%, 90%, 95%, e posteriormente 100% em tal ordem durante 1 minuto cada e posteriormente deixou-se repousar durante a noite em xileno. Removeu-se a lâmina de vidro, selou-se em meio de montagem Glycergel (DAKO), e posteriormente observou-se. Como um resultado, observou-se ligeiramente a expressão de CAPRIN-1 dentro das células de cada tecido de glândulas salivares, rim, cólon, e estômago, mas não se observou expressão da mesma em superfícies celulares. Além disso, não se observou expressão em tecidos de outros órgãos. Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de utilizar um anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n.° 2) compreendendo a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 47 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 55, Um anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n.° 3) que compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 59 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 63, Um anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n.° 4) que compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 7 6 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 80, Um anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n.° 5) que compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 84 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 88, e um anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n.° 6) que compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 92 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 96. (5)-2 Expressão de CAPRIN-1 em tecidos de cancro da mama de cão Lâminas de seções congeladas foram preparadas através de um método semelhante ao acima descrito utilizando 108 espécimes de tecidos de cancro da mama congelados de cães patologicamente diagnosticados como tendo cancro de mama maligno, e realizou-se uma coloração imunohistoquímica utilizando o anticorpo monoclonal n.° 1 preparado no Exemplo 4. Como um resultado, observou-se a expressão de CAPRIN-1 em 100 de 108 espécimes (92,5 %) e CAPRIN-1 foi fortemente expressa nas superfícies de células de cancro com um grau particularmente elevado de atipismo. Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais n.° 2. n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6. (5)-3 Expressão de CAPRIN-1 em tecidos de cancro da mama humanos

Uma coloração imunohistoquimica foi realizada utilizando 188 espécimes de tecido de cancro da mama numa matriz de tecidos de cancro da mama humanos envolvida em parafina (BIOMAX). Após 3 horas de tratamento da matriz de tecido de cancro da mama humano a 60 °C, a matriz foi colocada num frasco de coloração preenchido com xileno, seguido de substituição do xileno sendo repetida três vezes a cada 5 minutos. A seguir, realizou-se um procedimento semelhante com etanol e PBS-T em vez de xileno. A matriz de tecido de cancro da mama humano foi colocada num frasco de coloração preenchido com tampão citrato a 10 mM (pH 6,0) contendo Tween20 a 0,05 %. Após 5 minutos de tratamento a 125 °C, deixou-se repousar a matriz à temperatura ambiente durante 40 minutos ou mais. Removeu-se o excesso de água à volta das seções com KimWipes, circundaram-se as seções com uma DAKOPEN, e adicionou-se Peroxidase Block (DAKO) gota a gota em quantidades adequadas. Após ter sido deixada a repousar à temperatura ambiente durante 5 minutos, a matriz foi colocada num frasco de coloração preenchido com PBS-T, seguido de substituição do PSB-T sendo repetida três vezes a cada 5 minutos. Como solução de bloqueio, colocou-se uma solução de PBS-T contendo FBS a 10% na matriz, e posteriormente deixou-se repousar a matriz numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. A seguir, colocou-se uma solução do anticorpo monoclonal n.° 1 de 10 pg/ml ajustada com uma solução de PBS-T contendo FBS a 5 %, que reage com as superficies de células de cancro e foi preparada no Exemplo 4, e deixou-se repousar a matriz durante a noite numa câmara húmida a 4°C. Depois dez (10) minutos de lavagem com PBS-T foi realizada 3 vezes, adicionou-se Peroxidase Labeled Polymer Conjugated (DAKO) gota a gota em quantidades adequadas e posteriormente deixou-se repousar a matriz numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Depois dez (10) minutos de lavagem com PBS-T foi realizada três vezes, colocou-se uma solução corante DAB (DAKO) e posteriormente deixou-se repousar à temperatura ambiente durante 10 minutos. Descartou-se a solução de coloração, 10 minutos de lavagem com PBS-T foi realizada três vezes, e posteriormente enxaguou-se com água destilada. A matriz foi imersa em soluções de etanol a 70 %, 80%, 90%, 95%, e posteriormente 100% em tal ordem durante 1 minuto cada, e posteriormente deixou-se repousar em xileno durante a noite. Removeu-se a lâmina de vidro, selou-se em meio de montagem Glycergel (DAKO), e posteriormente observou-se. Como um resultado, observou-se a forte expressão de CAPRIN-1 em 138 de um total de 188 espécimes de tecido de cancro da mama (73 %) . Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais n.° 2. n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6. (5)-4 Expressão de CAPRIN-1 em tumores cerebrais malignos humanos

Coloração imunohistoquímica foi realizada de acordo com um método semelhante àquele utilizado em (5)-3 acima com 247 espécimes de tecido tumoral cerebral maligno numa matriz de tecido tumoral cerebral maligno humano envolvida em parafina (BIOMAX), utilizando o anticorpo monoclonal n.° 1 preparado no Exemplo 4. Como um resultado, observou-se a forte expressão de CAPRIN-1 em 227 de um total de 247 espécimes de tecido tumoral cerebral maligno (92 %) . Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais n.° 2. n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6. (5)-5 Expressão de CAPRIN-1 em nódulos linfáticos com metástase de cancro da mama humanos A coloração imunohistoquímica foi realizada de acordo com um método semelhante àquele utilizado em (5)-3 acima com 150 espécimes de tecidos de nódulos linfáticos com metástase de cancro da mama numa matriz de tecido de nódulos linfáticos com metástase de cancro da mama humanos envolvida em parafina (BIOMAX), utilizando o anticorpo monoclonal n.° 1 preparado no Exemplo 4. Como um resultado, observou-se a forte expressão de CAPRIN-1 em 136 de um total de 150 espécimes de tecido de nódulos linfáticos com metástase de cancro da mama (90 %). Especificamente, revelou-se que a CAPRIN-1 foi expressa fortemente também em tecidos de cancro que tinham metástase de cancro da mama. Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais n.° 2. n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6. (5)-6 Expressão de CAPRIN-1 em vários tecidos de cancro humanos A coloração imunohistoquimica foi realizada de acordo com um método semelhante ao mencionado acima com espécimes em várias matrizes de tecidos de cancro humanos envolvidas em parafina (BIOMAX), utilizando o anticorpo monoclonal n.° 1 preparado no Exemplo 4. Como um resultado, observou-se a forte expressão da CAPRIN-1 no cancro de esófago, cancro de cólon, cancro retal, cancro pulmonar, cancro renal, cancro da bexiga, e cancro da cérvix uterina, Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais n.° 2. n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6. Exemplo 2 Preparação de uma proteína de antigénio de cancro humana nova (1) Preparação de proteína recombinante

Com base no gene da SEQ ID NO: 1 obtido no Exemplo 1, preparou-se uma proteína recombinante a partir do gene homólogo humano através do seguinte método. Uma PCR foi realizada num volume total de 50 μΐ com 1 μΐ de ADNc, dois iniciadores (SEQ ID NOS: 38 e 39 compreendendo as sequências de clivagem das enzimas de restrição Sac I e Xho I) de 0,4 mM cada uma, dNTP a 0,2 mM, e 1,2 5 U de polimerase PrimeSTAR HS (Takara Shuzo Co., Ltd.)/ adicionando os reagentes e um tampão acompanhante. A expressão foi confirmada através de um método de PCR-RT para o ADNc utilizado no presente documento a partir de vários ADNcs derivados de tecidos ou células preparados no Exemplo 1. A PCR foi realizada repetindo um ciclo de 98 °C durante 10 segundos e 68 °C durante 2,5 minutos 30 vezes utilizando um aparelho Thermal Cycler (BIORAD). Os dois iniciadores acima mencionados são capazes de amplificar uma região que codifica a sequência de aminoácidos total da SEQ ID NO: 2. Após a PCR, o ADN assim amplificado foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1 %, e posteriormente um fragmento de ADN de cerca de 2,1 kbp foi purificado utilizando o QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN). O fragmento de ADN assim purificado foi ligado a um vetor de clonagem PCR-Blunt (Invitrogen). Após a transformação de Escherichia coli com o mesmo, recolheu-se um plasmideo. Verificou-se através de sequenciação que o fragmento génico assim amplificado tem a sequência de interesse. O plasmideo tendo a sequência coincidente com a sequência de interesse foi tratado com as enzimas de restrição Sac I e Xho I e depois foi purificado com um kit de extração em gel QIAquick. A sequência génica de interesse foi inserida num vetor de expressão de Escherichia coli pET30a (Novagen) tratado com as enzimas de restrição Sac I e Xho I. Uma proteína recombinante fusionada com um marcador His pode ser produzida utilizando o vetor. O plasmideo foi transformado em Escherichia coli para expressão recombinante, BL21(DE3), e posteriormente induziu-se a expressão com IPTG a 1 mM, de modo que a proteína de interesse foi expressa em Escherichia coli. (2) Purificação de proteína recombinante A Escherichia coli recombinante obtida acima expressando o gene da SEQ ID NO: 1 foi cultivada em meio LB contendo canamicina a 30 pg/ml a 37 °C até a absorvância a 600 nm ter alcançado cerca de 0,7, adicionou-se isopropil-β-D-l-tiogalactopiranósido a uma concentração final de 1 mM, e posteriormente as células foram cultivadas a 37 °C durante 4 horas. Subsequentemente, realizou-se centrifugação a 4800 rpm durante 10 minutos e posteriormente recolheram-se as células. o sedimento celular resultante foi suspenso em solução salina tamponada com fosfato e centrifugado a 4800 rpm durante 10 minutos, e posteriormente as células foram lavadas.

As células foram suspensas em solução salina tamponada com fosfato e posteriormente rompidas através de ultrassonicação em gelo. O lisado resultante da Escherichia coli ultrassonicada foi submetido a centrifugação a 6000 rpm durante 20 minutos, e posteriormente o sobrenadante resultante considerou-se como uma fração solúvel e o precipitado considerou-se como uma fração insolúvel. A fração solúvel foi adicionada a uma coluna de quelato de niquel ajustada de acordo com um método convencional (veiculo: Chelating Sepharose™ Fast Flow (GE Healthcare); capacidade de coluna de 5 ml; e tampão de equilíbrio: tampão cloridrato a 50 mM (pH 8,0)). As frações não adsorvidas foram lavadas com tampão cloridrato a 50 mM (pH 8,0) numa quantidade de 10 vezes a capacidade de coluna e tampão fosfato a 20 mM (pH 8,0) contendo imidazol a 20 mM. Imediatamente após a lavagem, eluíram-se 6 leitos com tampão fosfato a 20 mM (pH 8,0) contendo imidazol a 100 mM. A eluição da proteína de interesse foi confirmada através de coloração de Coomassie na fração de eluição com tampão fosfato a 20 mM (pH 8,0) contendo imidazol a 100 mM, e posteriormente a fração de eluição foi adicionada a uma coluna de permuta aniónica forte (veículo: Q Sepharose™ Fast Flow (GE Healthcare); capacidade de coluna de 5 ml; e tampão de fosfato a 20 mM (pH 8,0) como tampão de equilíbrio). Uma fração não adsorvida foi retirada por lavagem com tampão fosfato a 20 mM (pH 7,0) numa quantidade de 10 vezes a capacidade de coluna e tampão fosfato a 20 mM (pH 7,0) contendo cloreto de sódio a 200 mM. Imediatamente após a lavagem, eluíram-se 5 leitos com tampão fosfato a 20 mM (pH 7,0) contendo cloreto de sódio a 400 mM, e assim a fração purificada da proteína tendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 2 foi obtida. 200 μΐ de cada amostra purificada obtida através do método descrito acima foi dispensada em 1 ml de tampão de reação (Tris-HCl a 20 mM, 50 mM, NaCl, CaCl2 a 2 mM, pH 7,4), seguido da adição de 2 μΐ de enteroquinase (Novagen). Posteriormente, deixou-se o resultante repousar durante a noite à temperatura ambiente para reação de modo que o marcador His fosse clivado, e posteriormente realizou-se purificação utilizando um kit Enterokinase Cleavage Capture Kit (Novagen) de acordo com os protocolos acompanhantes. A seguir, 1,2 ml da amostra purificada obtida pelo método acima foi submetido a substituição do tampão com tampão fosfato fisiológico (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) utilizando um NANOSEP 10K OMEGA (PALL) de ultrafiltração. Adicionalmente, realizou-se filtração estéril utilizando HT Tuffryn Acrodisc 0,22 pm (PALL) e posteriormente o resultante utilizou-se para a seguinte experiência.

Exemplo 3 Preparação de anticorpos monoclonais de galinha e ratinho contra CAPRIN-1 300 pg da proteína de antigénio (CAPRIN-1 humana) representada pela SEQ ID NO: 2 preparada no Exemplo 2 foi misturado com uma quantidade equivalente de adjuvante completo de Freund, e a mistura foi utilizada como uma solução de antigénio para uma galinha. A solução de antigénio foi administrada intraperitonealmente a galinhas de 7 semanas de idade, e posteriormente a administração realizou-se 7 vezes a cada 4 semanas, e assim completou-se a imunização. Excisou-se cada baço no dia 4 após a imunização final, e interpôs-se entre duas lâminas de vidro esterilizadas e posteriormente esmagou-se. 0 resultante lavou-se com PBS(-) (Nissui) e posteriormente centrifugou-se a 1500 rpm durante 10 minutos para remover o sobrenadante. Este procedimento repetiu-se 3 vezes, de forma a obter-se esplenócitos. Misturaram-se os esplenócitos assim obtidos e células de mieloma de galinha deficientes em cadeia leve numa proporção de 5: 1. As células de mieloma de galinha utilizadas estabeleceram-se a partir de uma galinha por uma transformação utilizando um virus da reticuloendoteliose aviária. Uma solução de PEG preparada misturando 200 μΐ de meio IMDM contendo FBS a 10% aquecido a 37 °C e 800 μΐ de PEG1500 (Boehringer) foi adicionada à mistura, deixou-se repousar durante 5 minutos para fusão celular, e posteriormente submeteu-se a centrifugação a 1700 rpm durante 5 minutos. Após a remoção do sobrenadante, suspenderam-se as células em 300 ml de meio IMDM contendo FBS a 10%, suplementado com uma solução HAT (Gibco) (2 % equivalente) (meio seletivo HAT), e posteriormente colocou-se a suspensão celular em trinta placas de 96 poços (Nunc) a 100 μΐ por poço. As células foram cultivadas durante 7 dias a 37 °C sob condições de CO2 a 5 %, de modo que hibridomas preparados através de fusão de esplenócitos e células de mieloma de galinha foram obtidos.

Os hibridomas foram selecionados utilizando como um marcador a afinidade de ligação do anticorpo produzido pelos hibridomas preparados para a proteina CAPRIN-1. A solução de proteina CAPRIN-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 μΐ por poço e posteriormente deixada a repousar a 4 °C durante 18 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, 400 μΐ de uma solução de Albumina Sérica Bovina (BSA) (Sigma) a 0,5 % foi adicionado por poço, e posteriormente deixou-se repousar a placa à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida, e posteriormente os poços foram lavados três vezes com 400 μΐ de PBS-T por poço. O sobrenadante da cultura dos hibridomas obtidos acima foi adicionado a 100 μΐ por poço, e posteriormente deixou-se repousar à temperatura ambiente durante 2 horas. Após lavar cada poço três vezes com PBS-T, adicionou-se um anticorpo-anti-IgY de galinha marcado com HRP (SIGMA) diluído 5000 vezes com PBS a 100 μΐ por poço e o resultante deixou-se posteriormente repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Após lavar os poços três vezes com PBS-T, 100 μΐ de uma solução de substrato de TMB (Themo) foi adicionado por poço e posteriormente deixou-se repousar durante 15 a 30 minutos para reação de coloração. Após o desenvolvimento de cor, 100 μΐ de ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado por poço para parar a reação, e posteriormente mediram-se as absorvâncias a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como um resultado, vários hibridomas produzindo anticorpos com elevados valores de absorvância foram selecionados.

Os hibridomas assim selecionados foram adicionados a uma placa de 96 poços a 0,5 células por poço, e posteriormente cultivados. Após 1 semana, observaram-se hibridomas que formaram colónias individuais nos poços. Estas células nos poços foram adicionalmente cultivadas, e posteriormente selecionaram-se hibridomas utilizando como marcador a afinidade de ligação de anticorpos produzidos pelos hibridomas clonados para a proteína CAPRIN-1. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 μΐ por poço, e posteriormente deixou-se repousar a 4 °C durante 18 horas. Lavou-se cada poço com PBS-T três vezes, 400 μΐ de uma solução de BSA a 0,5 % foi adicionado por poço, e posteriormente deixou-se repousar o resultante à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida, e posteriormente os poços foram lavados três vezes com 400 μΐ de PBS-T por poço. 100 μΐ do sobrenadante de cada cultura dos hibridomas obtidos acima foi adicionado por poço, e posteriormente deixou-se repousar a placa à temperatura ambiente durante 2 horas. Após lavar cada poço três vezes com PBS-T, 100 μΐ de um anticorpo anti-IgY de galinha marcado com HRP (SIGMA) diluído 5000 vezes com PBS foi adicionado por poço e deixou-se posteriormente repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Após lavar os poços três vezes com PBS-T, 100 μΐ por poço de uma solução de substrato TMB foi adicionado (Thermo), e posteriormente deixou-se repousar durante 15 a 30 minutos para reação de coloração. Após o desenvolvimento de cor, 100 μΐ de ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado por poço para parar a reação e posteriormente mediram-se as absorvâncias a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como um resultado, obtiveram-se várias linhas celulares de hibridomas produzindo anticorpos monoclonais reativos com a proteína CAPRIN-1.

Em seguida, desses anticorpos monoclonais, anticorpos reativos com as superfícies celulares de células de cancro da mama que expressam CAPRIN-1 foram selecionados. Especificamente, 5 x 105 células da linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-231V foram submetidas a centrifugação num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml, e 100 μΐ do sobrenadante de cultura de cada um dos hibridomas acima foi adicionado ao tubo, e posteriormente o tubo deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, adicionou-se um anticorpo de cabra anti-IgG de galinha (H+L) marcado com FITC (SouthernBiotech) diluído 30 vezes com PBS contendo FBS a 0,1%, e posteriormente o resultante deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um calibre FACS (Becton, Dickinson and Company). Entretanto, realizaram-se procedimentos semelhantes aos mencionados acima para meio para a cultura de hibridomas, de forma a obter uma amostra controlo. Como um resultado, um anticorpo monoclonal (anticorpo monoclonal n.°l) que exibiu intensidade de fluorescência mais forte que o do controlo, isto é, que reagiram com as superficies celulares de células de cancro da mama que expressam CAPRIN-1, foi selecionado.

Além disso, 100 pg da proteína de antigénio (CAPRIN-1 humana) representada pela SEQ ID NO: 2 preparada no Exemplo 2 foi misturada com uma quantidade equivalente de um adjuvante MPL+TDM (Sigma) para preparar um anticorpo monoclonal de ratinho, de modo que a mistura foi preparada como uma solução de antigénio para um ratinho. Após a administração intraperitoneal da solução de antigénio a cada ratinho Balb/cc de 6 semanas de idade (Japan SLC Inc.), a administração foi realizada 7 vezes a cada 4 semanas, de modo que a imunização foi concluída. Excisou-se cada baço no dia 3 após a imunização final. Cada baço foi interposto entre duas lâminas de vidro esterilizadas e posteriormente esmagado. 0 resultante lavou-se com PBS(-) (Nissui) e posteriormente centrifugou-se a 1500 rpm durante 10 minutos para remover o sobrenadante. Este procedimento repetiu-se 3 vezes, de forma a obter-se esplenócitos. Os esplenócitos assim obtidos de células de mieloma de ratinho SP2/0 (adquiridas de ATCC) foram misturados numa razão de 10: 1. Uma solução de PEG preparada misturando 200 μΐ de meio RPMI1640 contendo FBS a 10 % aquecido a 37 °C e 800 μΐ de PEG1500 (Boehringer) foi adicionada à mistura, deixou-se repousar durante 5 minutos para fusão celular, e posteriormente submeteu-se durante 5 minutos a centrifugação a 1700 rpm. Após a remoção do sobrenadante, as células foram suspensas em 150 ml de meio RPMI1640 (meio seletivo de HAT) contendo FBS a 15 %, ao qual uma solução HAT (Gibco) (2 % equivalente) foi adicionada, e posteriormente foi colocadas em placa a suspensão celular em cinquenta placas de 96 poços (Nunc) a 100 μΐ por poço.

As células foram cultivadas durante 7 dias a 37 °C sob condições de CO2 a 5 %, de modo que células de fusão de hibridoma de esplenócitos e células de mieloma foram obtidas.

Os hibridomas foram selecionados utilizando como um marcador a afinidade de ligação do anticorpo produzido pelos hibridomas preparados para uma proteína CAPRIN-1. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 μς/πιΐ) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 μΐ por poço e posteriormente deixada a repousar a 4 °C durante 18 horas. Após lavar cada poço três vezes com PBS-T, 400 μΐ de uma solução de Albumina Sérica Bovina (BSA) (Sigma) a 0,5 % foi adicionado por poço, e posteriormente deixou-se repousar à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida, cada poço foi lavado três vezes com 400 μΐ de PBS-T, cada sobrenadante da cultura dos hibridomas obtido acima foi adicionado a 100 μΐ por poço, e posteriormente deixou-se repousar o resultante à temperatura ambiente durante 2 horas. Após lavar cada poço três vezes com PBS-T, um anticorpo anti-IgG (H+L) de ratinho marcado com HRP (Invitrogen) diluído 5000 vezes com PBS foi adicionado a 100 μΐ por poço, e então deixado a repousar a 4 °C a temperatura ambiente durante 1 hora. Após lavar os poços três vezes com PBS-T, uma solução de substrato TMB (Thermo) foi adicionada em quantidades de 100 μΐ por poço, e então deixou-se o resultante repousar durante 15 a 30 minutos para reação de coloração. Após o desenvolvimento de cor, 100 μΐ de ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado por poço para parar a reação e posteriormente mediram-se as absorvâncias a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como um resultado, vários hibridomas produzindo anticorpos com elevados valores de absorvância foram selecionados.

Os hibridomas assim selecionados foram adicionados a uma placa de 96 poços a 0,5 células por poço, e posteriormente cultivados. Após 1 semana, observaram-se hibridomas que formaram colónias individuais nos poços. Estas células nos poços foram adicionalmente cultivadas, e posteriormente selecionaram-se hibridomas utilizando como marcador a afinidade de ligação de anticorpos produzidos pelos hibridomas clonados para a proteína CAPRIN-1. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 3 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 μΐ por poço, e posteriormente deixou-se repousar a 4 °C durante 18 horas. Após lavar cada poço três vezes com PBS-T, 400 μΐ de uma solução de BSA a 0,5 % foi adicionado por poço, e posteriormente deixou-se repousar o resultante à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida. Após lavar os poços três vezes com 400 μΐ de PBS-T por poço, 100 μΐ do sobrenadante de cada cultura do hibridoma obtidos acima foi adicionado por poço, e posteriormente deixou-se repousar o resultante à temperatura ambiente durante 2 horas. Após lavar cada poço três vezes com PBS-T, 100 μΐ de um anticorpo anti-IgG de ratinho (H+L) marcado com HRP (SIGMA) diluído 5000 vezes com PBS foi adicionado por poço e deixou-se posteriormente repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Após lavar os poços três vezes com PBS-T, 100 μΐ por poço de uma solução de substrato TMB foi adicionado (Thermo), e posteriormente deixou-se repousar durante 15 a 30 minutos para reação de coloração. Após o desenvolvimento de cor, 100 μΐ de ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado por poço para parar a reação e posteriormente mediram-se as absorvâncias a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como um resultado, obtiveram-se 50 linhas celulares de hibridomas produzindo anticorpos monoclonais reativos com a proteína CAPRIN-1.

Em seguida, destes anticorpos monoclonais, anticorpos reativos com as superfícies celulares de células de cancro da mama que expressam CAPRIN-1 foram selecionados. Especificamente, 5 x 106 células da linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-231V foram submetidas a centrifugação num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml, 100 μΐ do sobrenadante de cultura de cada um dos hibridomas acima foi adicionado ao tubo, e então deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, adicionou-se um anticorpo de cabra anti-IgG de ratinho marcado com FITC (Invitrogen) diluído 500 vezes com PBS contendo FBS a 0,1 %, e posteriormente o resultante deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um calibre FACS (Becton, Dickinson). Entretanto, procedimentos semelhantes ao acima foram realizados utilizando uma amostra de soro não tratada (de um ratinho Balb/c de 6 semanas de idade) diluído 500 vezes com meio para cultivar hibridomas, em vez dos anticorpos, de forma a obter uma amostra controlo. Como um resultado, cinco anticorpos monoclonais (n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6) que tinham exibido intensidade de fluorescência mais forte que a do controlo, e especificamente, que tinham reagido com as superfícies celulares de células de cancro da mama foram selecionados. Exemplo 4 Caracterização dos anticorpos selecionados (1) Clonagem de genes de regiões variáveis de anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1

Extraiu-se ARNm a partir de uma linha celular de hibridoma derivada de galinha que produz anticorpos

monoclonais (selecionados no Exemplo 3) reativos com as superfícies de células de cancro da mama que expressam CAPRIN-1. Para tal realizou-se um método de RT-PCR utilizando iniciadores específicos para a sequência derivada de FR1 de galinha e a sequência derivada de FR4 de galinha, e obtiveram-se o gene da região variável de cadeia pesada (VH) e o gene da região variável de cadeia leve (VL) do anticorpo. Extraiu-se também ARNm a partir de duas linhas celulares de hibridoma derivadas a partir de ratinhos produzindo anticorpos monoclonais reativos com as superfícies de células de cancro da mama com expressão de CAPRIN-1. Realizou-se portanto um método de RT-PCR utilizando iniciadores específicos da sequência derivada de FR1 de ratinho e da sequência derivada de FR4 de ratinho, e obtiveram-se o gene da região variável de cadeia pesada (VH) e o gene da região variável de cadeia leve (VL) de cada anticorpo. Para a determinação de sequências, estes genes foram clonados num vetor pCR2.1 (Invitrogen).

(1)—1 RT-PCR

Após a extração do ARN total a partir de 106 células de cada linha celular de hibridoma utilizando um kit High Pure RN A Isolation Kit (Roche) , o ADNc foi sintetizado utilizando um kit PrimeScriptII 1st strand cDNA Synthesis Kit (Takara). Estes procedimentos foram realizados se de acordo aos protocolos anexos a cada kit. 0 gene da região variável de cadeia pesada de antigénio de galinha e o gene da região variável de cadeia leve de antigénio de galinha, e o gene da região variável de cadeia pesada de anticorpo de ratinho e o gene da região variável de cadeia leve de anticorpo de ratinho de acordo com um método convencional utilizando o ADNc assim sintetizado e KOD-Plus-DNA Polymerase (TOYOBO).

Para obter o gene da região VH de anticorpo de galinha, um iniciador específico da sequência FRl de cadeia pesada de galinha, e um iniciador específico da sequência FR4 de cadeia pesada de galinha. Além disso, para obter o gene da região VL, um iniciador específico da sequência FRl de cadeia leve de galinha e um iniciador específico da sequência FR4 de cadeia leve de galinha foram utilizados. Os genes das regiões VH e VL de anticorpo de ratinho foram obtidos de uma forma semelhante à descrita acima. Especificamente, um iniciador específico à sequência FRl de cadeia pesada de ratinho, um iniciador específico à sequência FR4 de cadeia pesada de ratinho, um iniciador especifico à sequência FRl de cadeia leve de ratinho, e um iniciador especifico à sequência FR4 de cadeia leve de ratinho.

Os produtos assim obtidos através de PCR foram submetidos cada um a eletroforese em gel de agarose, e excisaram-se as bandas de ADN da região VH e da região VL. Os fragmentos de ADN foram purificados utilizando um kit de purificação QIAquick Gel (QIAGEN) de acordo com os protocolos anexos. 0 ADN purificado foi clonado num vetor pCR2.1 utilizando um kit de clonagem TA (Invitrogen). 0 vetor ligado foi transformado em células competentes DH5 (TOYOBO) de acordo com um método convencional. 10 clones de cada transformante foram cultivados durante a noite em meio (ampicilina a 100 pg/ml) a 37 °C, e posteriormente o ADN de plasmideo foi purificado utilizando um kit Qiaspin Miniprep (QIAGEN). (1)—2 Determinação de sequências

As sequências génicas da região VH e da região VL em cada plasmideo obtido acima foram analisadas com um iniciador direto M13 (SEQ ID NO: 64) e um iniciador reverso M13 (SEQ ID NO: 65) num sequenciador de fluorescência (sequenciador ADN 3130XL; ABI), utilizando um kit Big Dye Terminator Ver3.1 Cycle Sequencing (ABI) de acordo com os protocolos anexos. Como um resultado, determinou-se cada sequência génica. As sequências foram idênticas entre os 10 clones. A sequência génica e sequência de aminoácidos assim obtidas que codificam a região variável de cadeia pesada do anticorpo monoclonal derivado de galinha são representadas pelas SEQ ID NOS: 71 e 43, respetivamente, e a sequência génica e sequência de aminoácidos que codificam a região variável de cadeia leve são representadas pelas SEQ ID NOS: 72 e 47, respetivamente.

Também, as sequências assim obtidas que codificam as regiões variáveis de cadeia pesada do anticorpo monoclonal derivado de ratinho são representadas pelas SEQ ID NOS: 71, 103, 105, 97, 99, e 101, as sequências de aminoácidos das mesmas são representadas pelas SEQ ID NOS: 51, 59, 76, 84, e 92, respetivamente, as sequências génicas que codificam as regiões variáveis de cadeia leve são representadas pelas SEQ ID NOS: 104, 106, 98, 100, e as sequências de aminoácidos das mesmas são representadas pelas SEQ ID NOS: 55, 63, 80, 88, e 96, respetivamente.

Especificamente, foi revelado que o anticorpo monoclonal n.° 1 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 47, em que CDR1, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia pesada consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 40, 41, e 42, respetivamente, e a CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia leve consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 44, 45, e 46, respetivamente. Também foi revelado que o anticorpo monoclonal n.° 2 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 51 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 55, em que CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia pesada consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 48, 49, e 50, respetivamente, e CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia leve consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 52, 53, e 54, respetivamente. Também foi revelado que o anticorpo monoclonal n.° 3 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 59 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 63, em que CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia pesada consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 56, 57, e 58, respetivamente, e CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia leve consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 60, 61, e 62, respetivamente. Também foi revelado que o anticorpo monoclonal n.° 4 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 76 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 80, em que CDR1, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia pesada consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 73, 74, e 75, respetivamente, e CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia leve consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 77, 78, e 79, respetivamente. Também foi revelado que o anticorpo monoclonal n.° 5 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 84 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 88, em que CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia pesada consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 82, 83, e 84, respetivamente, e CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia leve consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 85, 86, e 87, respetivamente. Também foi revelado que o anticorpo monoclonal n.° 6 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 92 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 96, em que CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia pesada consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 90, 91, e 92, respetivamente, e CDRl, CDR2, e CDR3 na região variável de cadeia leve consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 94, 95, e 96, respetivamente. (2) Preparação de anticorpos recombinantes quiméricos humano-galinha e anticorpos recombinantes quiméricos ratinho-galinha

Um fragmento de amplificação do gene da região variável de cadeia pesada (SEQ ID NO: 43) do anticorpo monoclonal n.°l de galinha obtido acima em (1) foi tratado em ambas as extremidades com enzimas de restrição e posteriormente foi purificado. O fragmento resultante foi inserido num vetor pcDNA4/myc-His (Invitrogen) de acordo com um método convencional, no qual uma sequência líder derivada de um anticorpo de galinha compreendendo a SEQ ID NO: 66 e uma região constante de cadeia H de IgGl humana compreendendo a SEQ ID NO: 67 já tinham sido inseridas. Além disso, um fragmento de amplificação do gene do da região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal de galinha n.° 1 (SEQ ID NO: 47) foram tratados em ambas as extremidades com enzimas de restrição e posteriormente purificados. 0 fragmento resultante foi inserido num vetor pcDNA3.1/myc-His (Invitrogen) de acordo com um método convencional, no qual uma sequência lider derivada de um anticorpo de galinha compreendendo a SEQ ID NO: 66 e uma região constante de cadeia L de IgGl humana compreendendo a SEQ ID NO: 68 já tinham sido inseridos.

Em seguida, o vetor recombinante mencionado acima no qual a região variável de cadeia pesada (SEQ ID NO: 43) do anticorpo monoclonal n.°l de galinha foi inserida, e o vetor recombinante acima no qual foi inserida a região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal n.°l de galinha (SEQ ID NO: 47), foram introduzidos em células CHO-Kl (obtidas do RIKEN Cell Bank) . Especificamente, 2 x 105 células CHO-Kl cultivadas em 1 ml de meio F12 de Ham (Invitrogen) contendo FBS a 10 % por poço de uma placa de cultura de 12 poços foram lavadas com PBS(-). Adicionou-se adicionalmente lml de meio F1 de Ham (Invitrogen) contendo FBS a 10% por poço e posteriormente adicionou-se uma mistura de 250 ng de cada um dos vetores mencionados acima dissolvidos em 30 ml de OptiMEM (Invitrogen) e 30 ml de um reagente de transfeção Polyfect (QIAGEN) a cada poço. Células CHO-Kl nas quais foi introduzido o vetor recombinante acima foram cultivadas em meio F12 de Ham contendo FBS a 10 %, suplementado com 200 mg/ml de Zeocina (Invitrogen) e 200 mg/ml de geneticina (Roche). Células CHO-Kl nas quais tinha sido introduzido o vetor recombinante acima foram colocadas em placas em placas de 96 poços a 0,5 células por poço. Assim, uma linha celular produzindo de forma estável um anticorpo quimérico humano-galinha n.° 1 (também referido como n.° 1) tendo a região variável do anticorpo monoclonal n.° 1 de galinha foi preparada. A linha celular assim preparada foi cultivada num frasco de 150 cm2 contendo 30 ml de meio OptiCHO (Invitrogen) isento de soro a 5 x 105 células/ml durante 5 dias. Depois, um sobrenadante da cultura contendo n.° 1 foi obtido.

Com um método semelhante ao acima, um fragmento de amplificação do gene da região variável de cadeia pesada ( representado pela SEQ ID NO: 43) do anticorpo monoclonal n.° 1 de galinha foi tratado em ambas as extremidades com enzimas de restrição e posteriormente foi purificado. O resultante foi inserido de acordo com um método convencional num vetor pcDNA4/myc-His (Invitrogen) no qual já tinha sido inserido uma sequência lider derivada de anticorpo de galinha e uma região constante de cadeia H de IgGl de ratinho. Além disso, um fragmento de amplificação do gene da região variável de cadeia leve (SEQ ID NO: 47) do anticorpo monoclonal n.° 1 de galinha foi tratado em ambas as extremidades com enzimas de restrição e posteriormente foi purificado. O resultante foi inserido de acordo com um método convencional num vetor pcDNA3.1/myc-His (Invitrogen) no qual já tinha sido inserido uma sequência líder derivada de anticorpo de galinha e uma região constante de cadeia L de IgGl de ratinho. O resultante foi introduzido em células CHO-Kl de uma forma semelhante à mencionada acima e assim uma linha celular produzindo de forma estável um anticorpo n.° 1 quimérico de ratinho-galinha compreendendo a região variável do anticorpo monoclonal n.° 1 de galinha foi preparado. As células foram cultivadas a 5 x 105 células/ml utilizando um frasco de 150 cm2 e 30 ml de meio OptiCHO (Invitrogen) isento de soro durante 5 dias. de forma a obter um sobrenadante de cultura contendo o anticorpo n.° 1 quimérico de ratinho-galinha. (3) Expressão de CAPRIN-1 em várias superfícies celulares cancerígenas utilizando anticorpos anti-CAPRIN-1 n.° 1 n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6

Em seguida, 7 linhas de células de cancro da mama (MDA-MB-157, T47D, MRK-nu-1, MDA-MB-2 3IV, BT20 SK-BR-3, e MDA-MB-231T) para as quais a expressão do gene de CAPRIN-1 tinha sido observada, e as outras 3 linhas celulares de cancro da mama (MDA-MB-231C, MCF-7, e ZR75-1), 5 linhas celulares de glioma (T98G, SNB19, U251, U87MG, e U373), 4 linhas de células de cancro renal (Caki-1, Caki-2, A498, e ACHN), 2 linhas celulares de cancro gástrico (MNK28 e MNK45), 5 linhas de células de cancro colorretal (HT29, LoVo, Caco2, SW480, e HCT116), 3 linhas de células de cancro pulmonar (A549, QG56, e PC8), 4 linhas de células de leucemia (AML5, Namalwa, BDCM, e RPI1788) , 1 linha celular de linfoma (Ramos), 1 linha de células de cancro da cérvix uterina (SW756), 1 linha de células de cancro da bexiga (T24), e 1 linha celular de cancro do esófago (KYSE180) para a expressão da proteína CAPRIN-1 nas superfícies celulares de cada linha celular utilizando os sobrenadantes das culturas de células CH0-K1 contendo n.°l obtido em (2) acima e os sobrenadantes de cultura de hibridomas gue produzem n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6 obtido no

Exemplo 3. 106 células de cada linha celular foram centrifugadas num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. Cada sobrenadante de cultura celular (100 ml) de células CHO-Kl contendo n.° 1 obtidas em (2) acima e hibridomas gue produzem n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6 obtido no

Exemplo 3 foi adicionado e depois deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, foram

adicionados um anticorpo de cabra anti-IgG humana (H+L) marcado com FITC (SouthernBiotech) e um anticorpo anti-IgG de ratinho (H+L) marcado com FITC (Invitrogen) diluído 500 vezes com PBS contendo FBS a 0,1 % e posteriormente deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um FACS

Calibur (Becton, Dickinson). Entretanto, realizaram-se procedimentos semelhantes aos mencionados acima utilizando um sobrenadante de cultura de células CH0-K1 nas quais não se introduziu nenhum gene de anticorpo e meio para cultivar hibridomas, de forma a preparar uma amostra controlo negativa. Como um resultado, células às quais os anticorpos n.° 1, n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6 tinham sido adicionados exibiram intensidade de fluorescência de 20 % ou mais, mais forte que a do controlo. Especificamente, quando o anticorpo n.° 1 foi utilizado, a intensidade de fluorescência foi potenciada a 4700% no caso de SK-BR-3 e 5500% no caso se MDA-MB-231 V. Também, quando os anticorpos n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6 foram utilizados, a intensidade de fluorescência foi melhorada. Revelou-se através destes resultados que a proteína CAPRIN-1 era expressa nas superfícies da membrana celular das linhas celulares de cancro acima mencionadas. A percentagem de melhoria da intensidade de fluorescência acima foi expressa como percentagem de aumento na intensidade de fluorescência média (nível de MFI) em cada tipo celular e calculada a partir da seguinte fórmula. A percentagem de aumento da intensidade de fluorescência média (percentagem de melhoria da intensidade de fluorescência) (%) = ( (nível de MFI em controlos tendo reagido com anticorpo anti-CAPRIN-1 humano) - (nível de MFI do controlo)) / (nível de MFI do controlo) x 100. (4) Efeitos anti-tumorais (atividade de ADCC) dos anticorpos anti-CAPRIN-1 n.° 1, n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6 em células de cancro

Em seguida, os anticorpos anti-CAPRIN-1 n.° 1, n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6 foram avaliados para sua atividade citotóxica contra várias células de cancro humano. Cada sobrenadante da cultura de células que produz n.° 1, n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, ou n.° 6 obtido no Exemplo 3 e (2) acima foi purificado utilizando Hitrap

ProteinA Sepharose FF (GE Healthcare), submetido a substituição do tampão com PBS (-) e posteriormente filtrado com um filtro de 0,22 pm (Millipore). Os resultantes foram utilizados como anticorpos para medir a atividade. 106 células da linha de células de cancro da mama humano MDA-MB-157 foram recolhidas num tubo de centrífuga de 50 ml, adicionaram-se 100 pCi de crómio-51, e posteriormente realizou-se incubação a 37 °C durante 2 horas. Subsequentemente, lavou-se o resultante três vezes com meio RPMI 1640 contendo FBS a 10%. As células foram adicionadas a uma placa de 96 poços de fundo em V a 103 células por poço para utilização como células alvo. Os anticorpos purificados acima (1 pg cada) foram adicionados às células. 5 x 104 células de linfócitos separadas de sangue periférico humano de acordo com um método convencional foram ainda adicionadas e posteriormente cultivadas durante 4 horas a 37°C sob condições de CO2 a 5 %. Após a cultura, mediu-se a quantidade de crómio-51 libertada pelas células de tumor danificadas num sobrenadante de cultura, e calculou-se a atividade citotóxica de cada anticorpo anti-CAPRIN-1 contra células de cancro. Como amostras de controlo negativas, uma amostra preparada adicionando PBS em vez dos anticorpos e uma amostra preparada adicionando um anticorpo de controlo de isótipos em vez de anticorpos foram utilizadas. Como um resultado, os anticorpos n.° 1, n.° 2, e n.° 3 exibiram 40 %, 26,4 %, e 32,4 % de atividade citotóxica, respetivamente, contra MDA-MB-157 (veja-se a Fig. 2). Igualmente, os anticorpos n.° 4, n.° 5, e n.° 6 exibiram 31,0%, 30,9%, e 19,0% de atividade citotóxica, respetivamente. Em contraste, a atividade na amostra preparada pela adição de PBS como controlo negativo e a atividade na amostra preparada pela adição do anticorpo de controlo de isótipos como controlo negativo foram de 1,1% e 2,0%, respetivamente. De forma semelhante, os anticorpos n.° 1, n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6 foram examinados para sua atividade citotóxica contra outras células de cancro humano incluindo as linhas de células de glioma T98G e U373, linhas de células de cancro pulmonar A549 e QG56, linhas celulares de cancro renal Caki-1 e ACHN, uma linha de células de cancro da cérvix uterina SW756, uma linha de células de cancro da bexiga T24, uma linha de células de cancro do esófago KYSE180, linhas celulares de cancro gástrico MNK28 e MNK45, uma linha de células de cancro colorretal SW480, uma linha de células de leucemia AML5, e uma linha de células de linfoma Ramos. Como um resultado, o anticorpo n.° 1 exibiu 18,0 % de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 12 % ou mais de atividades contra T98G (1,3 % no caso do controlo de isótipos) , o anticorpo n.° 1 exibiu 23,3% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 16% ou mais de atividades contra U373 (3% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 36,3% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 24% ou mais de atividades contra A549 (2, 6% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 33,0% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 20% ou mais de atividades contra QG56 (0,2% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 27,0% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 23% ou mais de atividades contra Caki-1 (3,0% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 26,0% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 14% ou mais de atividades contra ACHN (1,5% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 29,7% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 16% ou mais de atividades contra SW756 (2,5% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 25,6% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 18% ou mais de atividades contra T24 (2,1 % no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 27,6% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 22% ou mais de atividades contra KYSE180 (3,0% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 21,7% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 15% ou mais de atividades contra MNK28 (1,7% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 25,3% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 10% ou mais de atividades contra MNK45 (2,3% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 26,9% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 17% ou mais de atividades contra SW480 (1,3% no caso do controlo de isótipos), o anticorpo n.° 1 exibiu 13,1% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 10% ou mais de atividades contra AML5 (3,0% no caso do controlo de isótipos), e o anticorpo n.° 1 exibiu 11,7% de atividade e os anticorpos n.° 2 a n.° 6 exibiram 10% ou mais de atividades contra Ramos (4,1% no caso do controlo de isótipos), Foi demonstrado pelos resultados acima que os anticorpos anti-CAPRIN-1 assim obtidos (η. 1, n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6) danificam várias células de cancro humano que expressam CAPRIN-1. (5) Efeitos anti-tumorais (atividade de CDC) dos anticorpos anti-CAPRIN-1 n.° 1, n.° 2, e n.° 3 contra células de cancro

Em seguida, anticorpos anti-CAPRIN-1 n.° 1, n.° 2, e n.° 3 foram avaliados para a atividade citotóxica (atividade de CDC) contra células de cancro. Adicionou-se sangue recolhido de um coelho a um tubo Eppendorf, deixou-se repousar à temperatura ambiente durante 60 minutos, e posteriormente submeteu-se durante 5 minutos a centrifugação a 3000 rpm. Assim, preparou-se soro para a medição da atividade d CDC. 105 células da linha de células de cancro da mama humano MDA-MB-231V foram recolhidas num tubo de centrífuga de 50 ml, adicionaram-se 100 yCi de crómio-51, e posteriormente realizou-se incubação a 37 °C durante 2 horas, lavou-se o resultante três vezes com meio RPMI contendo FBS a 10%. Subsequentemente, suspenderam-se as células em meio RPMI contendo o soro de coelho preparado acima (50 %), e posteriormente adicionaram-se a uma placa de 96 poços de fundo em V a 103 células por poço. 1 mg de cada um dos anticorpos n.° 1, n.° 2, e n.° 3 obtidos no

Exemplo 3 e (2) acima foram adicionados às células e então as células foram cultivadas durante 4 horas a 37 °C sob condições de CO2 a 5 %. Após a cultura, mediu-se a quantidade de crómio-51 libertada pelas células de tumor danificadas num sobrenadante de cultura, e posteriormente a atividade CDC de cada anticorpo contra MDA-MB-231V foi calculada. Como um resultado, os anticorpos n.° 1, n.° 2, e n.° 3 exibiram pelo menos 30 % de atividade de CDC. Portanto, foi revelado que n.° 1, n.° 2, e n.° 3 podem danificar células tumorais expressando CAPRIN-1 também através de atividade de CDC. (6) Afinidade de ligação

Para calcular a constante de afinidade Ka para uma molécula de CAPRIN-1 do anticorpo n.° 1 acima, a proteína recombinante de CAPRIN-1 preparada no Exemplo 2 foi ajustada para ter uma concentração de 20 mg/ml con uma solução de acetato 4.5 (GE), e depois imobilizada a um chip sensor CM5 (GE) de acordo com um método convencional: que é, um método de imobilização de acoplamento de amina utilizando um kit de acoplamento de amina (GE) . Como um controlo de referência (célula de referência), um chip de sensor com 20 mg/ml de albumina derivada de soro bovino imobilizado ai pelo mesmo método foi utilizado. Um chip de sensor ao qual a molécula de CAPRIN-1 tenha sido imobilizada foi ajustada em BIACORE2000, 40 ml de cada uma das soluções de a anticorpo (analito) preparada para ter uma concentração (100, 80, 40, 20, 10, 5, ou 2,5 yg/ml) foi aplicada a uma taxa de fluxo de 20 μΐ/minuto, o ângulo de ressonância de plasmão superficial no momento da ligação de um anticorpo à molécula de CAPRIN-1 imobilizada no chip de sensor foi medido, de modo que cada valor de RU (Unidade de Ressonância) foi obtido. A seguir, uma solução tampão de corrida HBS-EP (GE) foi aplicado e então o ângulo de ressonância após dissociação do anticorpo da molécula de CAPRIN-1 foi medido, e então o valor de RU neste momento foi obtido. Uma solução de anticorpo foi aplicado de forma semelhante ao chip de sensor de controlo de referência (célula de referência) , o ângulo de ressonância no momento da reação de imobilização e o ângulo de ressonância no momento da reação de dissociação foram medidos, e assim os valores de RU de fundo foram obtidos. Antes da aplicação do anticorpo com cada concentração, glicina 2.0 (GE) foi aplicada de modo a regenerar um chip de sensor tendo CAPRIN-1 e albumina derivada de soro bovino imobilizada ai. Em seguida a seguinte amostra foi submetida a medição. A constante de taxa de associação (kon) e a constante de taxa de dissociação (k0ff) foram encontrada a partir do valor de RU assim obtido em cada concentração de anticorpo utilizando a avaliação de software de análise de afinidade BIA, de modo que a constante de afinidade Ka (=k0n/k0ff) foi constantes. Como um resultado, a constante de afinidade Ka do anticorpo n.° 1 foi dd 4,6 x 107M_1.

Exemplo 5 Efeitos anti-tumorais in vivo dos anticorpos anti-CAPRIN-1 n.° 1, n.° 2, e n.° 3 em ratinhos (1) Efeitos anti-tumorais em ratinhos em que células tumorais de ratinho foram transplantados

Em seguida, os anticorpos anti-CAPRIN-1 assim obtidos n.° 1, n.° 2, e n.° 3 assim obtidos foram avaliados para os seus efeitos anti-tumorais in vivo em ratinhos portadores de tumor. Os anticorpos utilizados no presente documento foram preparados através de purificação por meio de coluna do sobrenadante de cultura de cada célula produzindo n.° 1, n.° 2, ou n.° 3 de uma maneira semelhante ao mencionado acima.

Os efeitos anti-tumorais dos anticorpos n.° 1, n.° 2, e n.° 3 foram examinados utilizando ratinhos portadores de tumor nos quais uma linha celular de cancro derivada de ratinhos expressando CAPRIN-1 tinha sido transplantada. Células 4T1 (adquiridas de ATCC) foram transplantadas subcutaneamente na região dorsal de 40 ratinhos Balb/c (Japan SLC Inc.) a 5xl05 células (para um ratinho). Permitiu-se o crescimento dos tumores até alcançares um tamanho de cerca de 5 mm de diâmetro. Os anticorpos n.° 1, n.° 2, e n.° 3 foram cada um administrados intraperitonealmente a 10 ratinhos de entre os 30 ratinhos portando tumor numa quantidade de 200 pg (em 200 μΐ) para um ratinho. Subsequentemente, administrou-se a mesma quantidade de cada anticorpo intraperitonealmente a cada ratinho portador de tumor 3 vezes em total no espaço de 2 dias. Os tamanhos dos tumor foram medidos a cada dia e examinaram-se os efeitos anti-tumorais através de observação. Entretanto, como um grupo controlo, administrou-se PBS (-) em vez dos anticorpos aos restantes 10 ratinhos portadores de tumor. Como um resultado da observação dos efeitos anti-tumorais, no grupo de teste ao qual foi administrado o anticorpo anti-CAPRIN-1 n.° 1, n.° 2, ou n.° 3 tinha sido administrado, quando o volume tumoral na iniciação da administração do anticorpo foi designado 100 %, constatou-se que os tumores regrediram a cerca de 51 %, 84 %, e 93 % no dia 4, cerca de 31 %, 56%, e 70% no dia 6, e 9%, 34%, e 54% no dia 8, e constatou-se que os tumores regrediram quase completamente antes dos dias 10 a 14 (veja-se a Fig. 3). No grupo controlo ao qual PBS (-) tinha sido administrado, o tamanho tumoral aumentou a cerca de 230 %, 290%, 470%, e 800% nos dias 4, 6, 8, e 11, respetivamente) (veja-se a Fig. 3) . Foi demonstrado pelos resultados que os anticorpos obtidos (n.° 1, n.° 2, e n.° 3 exibiram fortes efeitos anti-tumorais in vivo contra células de cancro derivadas de ratinho que expressam CAPRIN-1. O tamanho tumoral foi calculado como um volume utilizando a fórmula: comprimento do eixo maior x comprimento do eixo menor x comprimento do eixo menor x 0,5. (2) Efeitos anti-tumorais em ratinhos em que células tumorais de humanas foram transplantadas

Em seguida, os efeitos anti-tumorais do anticorpo anti-CAPRIN-1 n.° 1 assim obtido no ratinho que porta tumor foram avaliados. O anticorpo n.° 1 utilizado no presente

documento foi preparado de uma maneira semelhante ao acima por meio de purificação de coluna de um sobrenadante da cultura de células que produzem o anticorpo. Uma linha celular de cancro derivado humano ZR75-1 (adquirido de ATCC) que expressa CAPRIN-1 foi transplantada através das regiões laterais em ratinhos Balb/c-nu/nu de 5 semanas de idade (Japan SLC Inc.) a 107 células/ratinho. A administração de anticorpo foi iniciada no dia 4 após o transplante de células. O anticorpo n.° 1 foi administrado intraperitonealmente aos ratinhos que portam tumor a 200 mg/ratinho. Como um controlo de referência, um anticorpo de controlo IgG humano (numa quantidade igual que a do anticorpo n.° 1) foi administrado aos cinco ratinhos que portam tumor. No dia 3 depois da administração, cada anticorpo foi administrado uma vez, e então os tamanhos de tumor foram medidos e assim os efeitos anti-tumorais foram observados. Como um resultado, encontrou-se que o volume de tumor médio no caso do grupo ao qual o anticorpo n.° 1 tinha sido administrado tinha regredido até 66 % no dia 21 após o transplante de células de cancro, quando o volume de tumor médio do controlo de referência foi designado 100 %.

Em seguida, os efeitos anti-tumorais do anticorpo anti-CAPRIN-1 n.° 3 assim obtido no ratinho que porta tumor foram avaliados. O anticorpo n.° 3 utilizado no presente documento foi preparado de uma maneira semelhante ao acima por meio de purificação de coluna de um sobrenadante da cultura de células que produzem o anticorpo. Uma linha celular de cancro derivado humano MCF7 (adquirido de ATCC) que expressa CAPRIN-1 foi transplantada subcutaneamente através das regiões dorsais em ratinhos Balb/c-nu/nu de 5 semanas de idade (Japan SLC Inc.) a 106 células/ratinho. Após o diâmetro de cada tumor ter alcançado cerca de 7 mm, a administração de anticorpo foi iniciada. PBS (-) (na mesma quantidade que a do anticorpo n.° 3) foi administrado como um controlo de referência aos restantes 5 ratinhos que portam tumor. Os tamanhos de tumor foram medidos e então os efeitos anti-tumorais foram observados. Como um resultado, encontrou-se que o volume de tumor médio no caso do grupo ao qual o anticorpo n.° 3 tinha sido administrado tinha regredido até 45% no dia 26 após o transplante de células de cancro, quando o volume de tumor médio do controlo de referência foi designado 100 %. Demonstrou-se através dos resultados que os anticorpos n.° 1 e n.° 3 assim obtidos exibem efeitos anti-tumorais in vivo em células de cancro derivadas de humano que expressam CAPRIN-1.

Exemplo 6 Identificação de epítopo em proteína CAPRIN-1, ao qual os anticorpos anti-CAPRIN-1 n.° 1, n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6 se ligam

Com a utilização dos anticorpos anti-CAPRIN-1 n.° 1, n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6 obtidos no Exemplo 4 (2) fazendo reagir com as superficies celulares de células de cancro, um péptido de epítopo numa proteína de CAPRIN-1 a ser reconhecido pelos anticorpos foi identificado. 93 péptidos candidatos, cada um consistindo em 12 a 16 aminoácidos na sequência de aminoácidos da proteína de CAPRIN-1 humana, foram sintetizados. Cada péptido foi dissolvido em DMSO a uma concentração de 1 mg/ml.

Cada péptido foi dissolvido em tampão de carbonato de sódio a 0,1 M (pH 9,6) a uma concentração de 30 pg/ml, adicionado a uma placa de 96 poços (Nunc, N.° de produto 436006) a 100 μΐ por poço, e então deixada a repousar a 4 °C durante a noite. A solução foi descartada, etanolamina a 10 mM/ tampão de carbonato de sódio a 0,1 M (pH 9,6) foi adicionado a 200 μΐ por poço, e posteriormente deixou-se repousar a placa à temperatura ambiente durante 1 hora. A solução foi descartada, a placa foi lavada duas vezes com PBS (PBST) contendo Tween 20 a 0,5 %, de modo que a placa com cada péptido imobilizado à mesma foi preparada.

Um sobrenadante da cultura celular contendo o anticorpo monoclonal quimérico de humano-galinha (n.° 1) e os anticorpos monoclonais de ratinhos (n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6) obtido no Exemplo 4 (2) foi adicionado à placa a 50 μΐ por poço. Após 1 hora de agitação a temperatura ambiente, a solução foi removida, e depois a placa foi lavada três vezes com PBST. A seguir, um anticorpo anti-IgG humana marcado com HRP (Invitrogen) diluído de 3000 a 4000 vezes com PBST (uma solução de anticorpo secundário) foi adicionado a cada poço do anticorpo monoclonal quimérico de humano-galinha e um anticorpo anti-IgG de ratinho marcado com HRP (Invitrogen) diluído de 3000 a 4000 vezes com PBST (uma solução de anticorpo secundário) foi adicionado a cada poço do anticorpo monoclonal quimérico de ratinho, a 50 μΐ por poço, e então a solução foi removido, seguido de lavagem seis vezes com PBST.

Uma solução de substrato TMB (Thermo) foi adicionada a 100 μΐ por poço, e deixou-se a placa repousar durante 15 a 30 minutos para reação de coloração. Após o desenvolvimento de cor, ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado a 100 μΐ por poço para parar a reação e posteriormente mediram-se as absorvâncias a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como um resultado, o polipéptido da SEQ ID NO: 37 foi identificado como sequência parcial de CAPRIN-1 que é reconhecida pela totalidade dos anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 n.° 1 a n.° 6. Além disso, o polipéptido da SEQ ID NO: 64 foi identificado como sequência parcial no polipéptido acima da SEQ ID NO: 37, que é reconhecido pelos anticorpos monoclonais n.° 1, n.° 4, e n.° 5. O polipéptido da SEQ ID NO: 70 também foi identificado como sequência parcial no polipéptido acima da SEQ ID NO: 37, que é reconhecido pelos anticorpos monoclonais n.° 2, n.° 3, e n. ° 6.

Como um resultado, revelou-se que o polipéptido da SEQ ID NO: 37 contém regiões de epítopo para os anticorpos anti-CAPRIN-1 n.° 1, n.° 2, n.° 3, n.° 4, n.° 5, e n.° 6. Aplicabilidade Industrial

Os anticorpos da presente invenção são úteis para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro.

Lista de sequências de texto livre

SEQ ID NOS: 31-36, 38, 39, 64, e 65: iniciadores LISTA SEQUÊNCIAS <110> Toray Industries, Inc. <120> Composição farmacêutica para o tratamento e prevenção de câncer

<130> PH-4601-PCT <150> JP 2010-023451 <151> 04-02-2010 <160> 106 <170> Patentln versão 3.1 <210> 1 <211> 5562

<212> ADN <213> Homo sapiens <220>

<221> CDS <222> (190) .. (2319) <223> <400> 1 cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg ccc teg gee aoe age eac age ggg age ggc age aag teg 231

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 15 10 tee gga ccg cca ccg ccg teg ggt tee tec ggg agt gag geg gee geg 279

Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gee ggg gee gee geg ccg get tet cag eac ccc gca ace ggc ace 327

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin. His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc get gtc cag ace gag gee atg aag cag att etc ggg gtg ate gac 375

Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp 50 55 60 aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ett gat gat tac 423

Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat caa gat cag ctg gat 471

Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp 80 85 90 gee gtt tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aaa 519

Ala val Ser Lys Tyr Gin Glu val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gca eta agt caa gat att cag aaa aca 567

Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr 115 120 125 ata aag aag aca gca cgt egg gag cag ctt atg aga gaa gaa get gaa 615 lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ctt gag cta cag tat gtt ttg gac aaa 663

Gin Lys Arg Leu Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg egg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711

Leu Gly Asp Asp Glu Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly 160 165 170 gtg cca ata ttg tcc gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa ttc tat 759

Vai Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 180 185 190 aag cta gta gac cat gaa egg gac atg age ttg agg ttg aat gaa cag 807

Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 200 205 tat gaa cat gee tcc att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855

Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga aee acc tat aaa gtt cta aag gaa att gtt gag 903

Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tea aac tac ttt gac age acc cac aac cac cag aat 951

Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gee tea gca cct gca gtt gaa gac 999

Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp 255 260 265 270 cag gta cct gaa get gaa cct gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047

Gin Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 280 285 agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1095

Ser Glu val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu 290 295 300 aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143

Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val 305 310 315 gaa aeg gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag get gca 1191

Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tcc cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag gca 1239

Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta caa gac ctt atg gca caa atg 1287

Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met 355 360 365 cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ctg gat ttt gaa aat 1335

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ctt gat cct gee att gta tct gca cag cct atg aat cca aca 1383

Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 335 390 395 caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tct gaa 1431

Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tct aga ctt get cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa geg aca 1479

Set Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tea tcc aca agt gag ggg tac aca gca tct caa 1527

Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 ccc ttg tac cag cct tct cat get aca gag caa ega cca cag aag gaa 1575

Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aca ate tct tta aat aca gac cag act 1623

Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tea tea tcc ctt cct get geg tct cag cct caa gta ttt cag 1671

Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin 480 435 490 get ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta aat gca 1719

Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn val Asn Ala 495 500 505 510 get cca ttc caa tcc atg caa aeg gtg ttc aat atg aat gcc cca gtt 1767

Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gcc agt tat aac cag age ttt tct agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin 545 550 555 aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911

Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His 560 565 570 ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959

Gly Ser Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat tac aat 2007

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tcc cgt ggt get aga ggc ttg atg 2055

Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac egg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac cgc cct tea ttc tet aac act cca aac agt ggt tat aca cag tet 2151

Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser 640 645 650 cag ttc agt get ccc egg gat tac tet ggc tat caa cgg gat gga tat 2199

Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gee 2247

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa 2295

Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin 690 695 700 atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt ttaatcgcca 2349 Met Asn Thr Gin Gin Vai Asn 705 aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct 2409 cccttteagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2469 tgtcagcttt ctattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca tgttctgtcc 2529 taagcgtcat cttgagcctt gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc ttaggagtaa 2589 aacaatatac tttacagggt gataataatc tccatagtta tttgaagtgg cttgaaaaag 2649 gcaagattga cttttatgac attggataaa atctacaaat cagccctcga gttattcaat 2709 gataactgac aaactaaatt atttccctag aaaggaagat gaaaggagtg gagtgtggtt 2769 tggoagaaca actgcatttc acagcttttc cagttaaatt ggagcactga acgttcagat 2829 gcataccaaa ttatgcatgg gtcctaatca cacatataag gctggctacc agctttgaca 2889 cagcactgtt catctggcca aacaactgtg gttaaaaaca catgtaaaat gctttttaac 2949 agctgatact gtataagaca aagccaagat gcaaaattag gctttgattg gcactttttg 3009 aaaaatatgc aacaaatatg ggatgtaatc cggatggccg cttctgtact taatgtgaaa 3069 tatttagata cctttttgaa cacttaacag tttctttgag acaatgactt ttgtaaggat 3129 tggtactatc tatcattcct tatgacatgt acattgtctg tcactaatcc ttggattttg 3189 ctgtattgtc acctaaattg gtacaggtac tgatgaaaat ctctagtgga taatcataac 3249 actctcggtc acatgttttt ecttcagctt gaaagctttt ttttaaaagg aaaagatacc 3309 aaatgcctgc tgctaccacc ettttcaatt gctatctttt gaaaggcacc agtatgtgtt 3369 ttagattgat ttccctgttt cagggaaatc acggacagta gtttcagttc tgatggtata 3429 agcaaaacaa ataaaacgtt tataaaagtt gtatcttgaa acactggtgt tcaacagcta 3489 gcagcttatg tgattcaccc eatgccacgt tagtgtcaca aattttatgg tttatctcca 3549 gcaacatttc tctagtactt gcacttatta tcttttgtct aatttaacct taactgaatt 3609 ctccgtttct cctggaggca tttatattca gtgataattc cttcccttag atgcataggg 3669 agagtctcta aatttgatgg aaatggacac ttgagtagtg acttagcctt atgtactctg 3729 ttggaatttg tgctagcagt ttgagcacta gttctgtgtg cctaggaagt taatgctgct 3789 tattgtctca ttctgacttc atggagaatt aatcccacct ttaagcaaag gctactaagt 3849 taatggtatt ttctgtgcag aaattaaatt ttattttcag catttagccc aggaattctt 3909 ccagtaggtg ctcagctatt taaaaacaaa actattctca aacattcatc attagacaac 3969 tggagttttt gctggttttg taaectacca aaatggatag gctgttgaac attccacatt 4029 caaaagtttt gtagggtggt gggaaatggg ggatcttcaa tgtttatttt aaaataaaat 4089 aaaataagtt cttgactttt ctcatgtgtg gttgtggtac atcatattgg aagggttaac 4149 otgttacttt ggeaaatgag tatttttttg ctagoacctc cccttgcgtg ctttaaatga 4209 catctgcctg ggatgtacca caaecatatg ttacctgtat cttaggggaa tggataaaat 4269 atttgtggtt tactgggtaa tccctagatg atgtatgctt gcagtcctat ataaaaotaa 4329 atttgctatc tgtgtagaaa ataatttcat gacatttaca atcaggactg aagtaagttc 4389 ttcacacagt gacctctgaa tcagtttcag agaagggatg ggggagaaaa tgccttctag 4449 gttttgaact tctatgcatt agtgcagatg ttgtgaatgt gtaaaggtgt tcatagtttg 4509 actgtttcta tgtatgtttt ttcaaagaat tgttcctttt tttgaactat aatttttctt 4569 tttttggtta ttttaccatc acagtttaaa tgtatatctt ttatgtctct actcagacca 4629 tatttttaaa ggggtgcctc attatggggc agagaacttt tcaataagtc tcattaagat 4689 ctgaatcttg gttctaagca ttctgtataa tatgtgattg cttgtcctag ctgcagaagg 4749 ccttttgttt ggtcaaatgc atattttagc agagtttcaa ggaaatgatt gtcacacatg 4809 tcactgtagc ctcfctggtgt agcaagcrtca catacaaaat acttttgtat atgcataata 4869 taaatcatct catgtggata tgaaacttct tttttaaaac ttaaaaaggt agaatgttat 4929 tgattacctt gattagggca gttttatttc cagatcctaa taattcctaa aaaatatgga 4989 aaagtttttt ttcaatcatt gtaccttgat attaaaacaa atatccttta agtafcfctcta 5049 atcagttagc ttctacagtt cttttgtctc cttttatatg oagctcttac gtgggagact 5109 tttccactta aaggagacat agaatgtgtg cttattctca gaaggttcat taactgaggt 5169 gatgagttaa caactagttg agcagtcagc ttcctaagtg ttttaggaca tttgttcatt 5229 atattttccg tcatataact agaggaagtg gaatgcagat aagtgccgaa ttcaaaccct 5289 tcattttatg tttaagctcc tgaatctgca ttccacttgg gttgttttta agcattctaa 5349 attttagttg attataagtt agatttcaca gaatcagtat tgcccttgat cttgtccttt 5409 ttatggagtt aacggggagg aagacccctc aggaaaacga aagtaaattg ttaaggctca 5469 tcttcatacc tttttccatt ttgaatccta caaaaatact gcaaaagact agtgaatgtt 5529 taaaattaca ctagattaaa taatatgaaa gtc 5562

<210> 2 <211> 709 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45 val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly val lie Asp Lys Lys 50 55 60

Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 80

Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly val Pro 165 170 175

He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala. Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin. Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gin Val 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285 val Glu Ser Thr Glu Tyr val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320 val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu val Cys Pro Pro val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val 420 425 430

Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie 450 455 460

Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640

Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn 690 695 700

Thr Gin Gin Val Asn 705

<210> 3 <211> 3553 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0>

<221> CDS <222> (190) .. (2274) <223> <400> 3 cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctcrtcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg ccc teg gee ace age cac age ggg age ggc age aag teg 231

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 15 10 tee gga ccg cca ccg ccg teg ggt tee tee ggg agt gag geg gee geg 279

Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gee ggg gee gee geg ccg get tet cag cac ccc gca ace ggc ace 327

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc get gtc cag aoc gag gee atg aag cag att etc ggg gtg ate gac 375

Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp 80 85 90 gee gtt tet aag tac eag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aaa 519

Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr 115 120 125 ata aag aag aca gca cgt egg gag cag ett atg aga gaa gaa get gaa 615 lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ett gag eta cag tat gtt ttg gac aaa 663

Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg egg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711

Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly 160 165 170 gtg cca ata ttg tcc gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa ttc tat 759

Val Pro Ele Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 180 185 190 aag eta gta gac cct gaa egg gae atg age ttg agg ttg aat gaa cag 807

Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 200 205 tat gaa eat gee tcc att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855

Tyr Glu His Ala Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt eta aag gaa att gtt gag 903

Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tea aac tac ttt gae age acc cac aac cac cag aat 951

Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gea gcc tea gca cct gca gtt gaa gac 999

Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat ccc ett gtg aga aga cag ega gta caa gac ett atg gca caa atg 1287

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ele Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ett gat cct gcc att gta tet gca cag cct atg aat cca aca 1383

Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ele Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tet gaa 1431

Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tet aga ett get cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa geg aca 1479

Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta toa tcc aca agt gag ggg tac aca gca tct caa 1527

Gin Vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 ccc ttg tac cag cct tct cat get aca gag caa cga cca cag aag gaa 1575

Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tea tea tcc ett cct get geg tct cag cct caa gta ttt cag 1671

Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin 480 485 490 get ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta aat gca 1719

Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala 495 500 505 510 get cca ttc caa tec atg caa aeg gtg ttc aat atg aat gee cca gtt 1767

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gee agt tat aac cag age ttt tct agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin 545 550 555 aca gag ett cag caa gaa cag ett caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911

Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His 560 565 570 ggt tec cca gac cag tec cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tec cgt ggt get aga ggc ttg atg 2055

Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac egg ggc cct gee aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac ege cct tea ttc tct aac act cca aac agt ggt tat aca cag tct 2151

Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser 640 645 650 cag ttc agt get ccc egg gat tac tct ggc tat caa egg gat gga tat 2199

Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca egg gga gee 2247

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca cga ggt aat att ttg tgg tgg tga tcctagctcc taagtggagc 2294

Pro Arg Gly Asn lie I>eu Trp Trp 690 ttctgttctg geettggaag agctgttaat agtctgcatg ttaggaatac atttatcctt 2354 tccagacttg ttgctaggga ttaaatgaaa tgctctgttt ctaaaactta atcttggacc 2414 caaattttaa tttttgaatg atttaatttt ccctgttact atataaactg tcttgaaaac 2474 tagaacatat tctcttctca gaaaaagtgt ttttccaact gaaaattatt tttcaggtcc 2534 taaaacctgc taaatgtttt taggaagtae ttactgaaae atttttgtaa gacatttttg 2594 gaatgagatt gaacatttat ataaatttat tattcctctt tcattttttt gaaacatgcc 2654 tattatattt tagggccaga caccctttaa tggeeggata agccatagtt aacatttaga 2714 gaaecattta gaagtgatag aactaatgga atttgcaatg ccttttggac ctctattagt 2774 gatataaata tcaagttatt tctgactttt aaacaaaaet cccaaattce taacttattg 2834 agetataett aaaaaaaatt acaggtttag agagtttttt gtttttcttt tactgttgga 2894 aaactacttc ccattttggc aggaagttaa cetatttaac aattagaget agcatttcat 2954 gtagtctgaa attctaaatg gttctctgat ttgagggagg ttaaacatca aacaggtttc 3014 ctetattgge cataacatgt ataaaatgtg tgttaaggag gaattacaac gtactttgat 3074 ttgaatacta gtagaaactg gccaggaaaa aggtacattt ttctaaaaat taatggatca 3134 ettgggaatt actgacttga ctagaagtat caaaggatgt ttgcatgtga atgtgggtta 3194 tgttctttcc caccttgtag catattcgat gaaagttgag ttaactgata gctaaaaatc 3254 tgttttaaca gcatgtaaaa agttatttta tctgttaaaa gteattatae agttttgaat 3314 gttatgtagt ttctttttaa cagtttaggt aataaggtct gttttcattc tggtgctttt 3374 attaattttg atagtatgat gttacttact actgaaatgt aagctagagt gtacactaga 3434 atgtaagctc catgagagca ggtaccttgt ctgtcttctc tgctgtatct attcccaacg 3494 ettgatgatg gtgcctggca catagtaggc actca&taaa tatttgttga atgaatgaa 3553

<210> 4 <211> 694 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Fro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys 50 55 60

Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 80

Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro 165 170 175 lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala val Glu Asp Gin val 260 265 270

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320

Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro val Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala He val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val 420 425 430

Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie 450 455 460

Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Vai Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr vai vai Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640

Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 ¢7(1

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Asn lie Leu Trp Trp 690

<210> 5 <211> 1605 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0>

<221> CDS <222> (46) .. (1392) <223> <4Ο0> 5 gtcacaaata acttggagtt tgcaaaagaa ttacagagga gtttc atg gca tta agt 57

Met Ala Leu Ser 1 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 105

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 5 10 15 20 dig aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag etc 153

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 25 30 35 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 201

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 40 45 50 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 249

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 55 60 65 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 297

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 70 75 80 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att cac ctg tgg gac 345

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 85 90 95 100 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 393

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 105 110 115 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 441

Leu Lys Glu Ele Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 120 125 130 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gee tea 489

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 135 140 145 gca cct aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag cct gag cca gca 537

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 150 155 160 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 585

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 165 170 175 180 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 633

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 185 190 195 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 681

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 200 205 210 cag caa cct cag get gcg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 729

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 215 220 225 act ccg gtg get cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag ega gtc cag 777

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 230 235 240 gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 825

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 245 250 255 260 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gcc att gta tet gca 873

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 265 270 275 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 921

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin leu Val Cys 280 285 290 cct cca gtt cat tct gaa tct aga ctt get caa cct aat caa gtt cct 969

Pro Pro Val Hi* Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin val Pro 295 300 305 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tcc aca agt gag 1017

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 310 315 320 ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat get aca gag 1065

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 325 330 335 340 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tct 1113

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro He Asp Gin lie Gin Ala Thr He Ser 345 350 355 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tcc ctt ccg get get tct 1161

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser leu Pro Ala Ala Ser 360 365 370 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1209

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 375 380 385 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tcc atg caa aeg gtg ttc 1257

Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr val Phe 390 395 400 aat atg aat gcc cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1305

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 405 410 415 420 caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag age ttt tct agt cag 1353

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 425 430 435 cct cac caa gta gaa caa aca gag gga tgc ege aaa tga acactcagca 1402

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 440 445 agtgaattaa tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta 1462 ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg 1522 taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg 1582 gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1605

<210> 6 <211> 448 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 6

Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg 1 5 10 15

Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr 20 25 30

Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val 35 40 45

Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu 50 55 60

Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu 65 70 75 80

Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie 85 90 95

His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr 100 105 110

Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn 115 120 125

Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu 130 135 140

Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu 145 150 155 160

Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr 165 170 175

Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly 180 185 190

Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val 195 200 205

Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu 210 215 220

Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg 225 230 235 240

Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe 245 250 255 lie Gin Asp Sec Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin The Leu Asp Pro Ala 260 265 270 lie Val Sec Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro 275 280 285

Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro 290 295 300

Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser 305 310 315 320

Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser 325 330 335

His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin 340 345 350

Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu 355 360 365

Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro 370 375 380

Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met 385 390 395 400

Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro 405 410 415

Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser 420 425 430

Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 435 440 445

<210> 7 <211> 4154 <212> ADN <213> Canis familiaris <220> <221> CDS <222> (1) .. (2154) <223> <4Ο0> 7 atg ccg teg gee ace age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Met Fro Ser Ala Ihr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ccg ccg ccc ccg teg ggt tee tee ggg age gag geg geg geg geg geg 96

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg geo ggg geg get geg ccc gee tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg acc ggc acc ggc get gtc cag acc gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240 lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag ctg gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat 336

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn LOO 105 110 aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 480

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag eaa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tee att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu HÍ3 Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 768

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gee tea 816

Thr His Asn His Gin A3n Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270 gca cct aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag cct gag cca gca 864

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 912

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin. Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 1008

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Aan Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get geg tet act tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 1104

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gee att gta tet gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1440

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tet 1488

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gcc cca gtt act cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1680

Gin Gin Asn. Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Pha Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ett cag caa gaa cag ett caa aca 1728

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tcc cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tet cgt ggt ggt tcc cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1920

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac 1968

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655 agt ggt tat aca cag tet cag ttc agt get ccc egg gac tac tet ggc 2016

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca egg gga gcc cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc 2112

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700 aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2154

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214 ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2274 gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag 2334 gaaactattt ttattctgca tgttcttcct aagegteate ttgagccttg cacatgatac 2394 tcagattcct cacccttgct taggagtaaa acataataca ctttacaggg tgatatctcc 2454 atagttattt gaagtggctt ggaaaaagca agattaaett ctgacattgg ataaaaatca 2514 acaaatcagc cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aactaaaata tttcccttcg 2574 agaaggagtg gaatgtggtt tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cggttaaatt 2634 ggagcactaa acgtttagat gcataccaaa ttatgcatgg gcccttaata taaaaggctg 2694 gctaccagct ttgacacagc actattoatc ctctggccaa acaactgtgg ttaaacaaca 2754 catgtaaatt gctttttaac agctgatact ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt 2814 gggctttgat tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tctggatggc 2874 cgcttctgta cttaatgtga agtatttaga tacctttttg aacacttaao agtttcttct 2934 gacaatgact tttgrtaagga ttggtactat ctatcattcc ttataatgta cattgtctgt 2994 cactaatcct cagatcttgc tgtattgtca cctaaattgg tacaggtact gatgaaaata 3054 tctaatggat aatcataaca ctcttggtca catgtttttc ctgcagcctg aaggttttta 3114 aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat cttttgaaaa 3174 gcaccagtat gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc 3234 agttctgatg gtataagcaa aacaaataaa acatgtttat aaaagttgta tcttgaaaca 3294 ctggtgttca acagctagca gcttatgtgg ttcaccccat gcattgttag tgtttcagat 3354 tttatggtta tctccagcag ctgtttctgt agtacttgca tttatctttt gtctaaccct 3414 aatattctca cggaggcatt tatattcaaa gtggtgatcc cttcacttag acgcataggg 3474 agagtcacaa gtttgatgaa gaggacagtg tagtaattta tatgctgttg gaatttgtgc 3534 tagcagtttg agcactagtt ctgtgtgcct atgaacttaa tgctgcttgt oatattccac 3594 tttgacttca tggagaatta atcccatcta ctcagcaaag gctatactaa tactaagtta 3654 atggtatttt ctgtgcagaa attgaatttt gttttattag catttagcta aggaattttt 3714 ecagtaggtg ctcagctact aaagaaaaac aaaaacaaga cacaaaacta ttctcaaaea 3774 ttcattgtta gacaactgga gtttttgctg gttttgtaac ctactaaaat ggataggctg 3834 ttgaacattc cacattcaaa agttttttgt agggtggtgg ggaagggggg gtgtcttcaa 3894 tgtttatttt aaaataaaat aagttcttga cttttctcat gtgtggttgt ggtacatcat 3954 attggaaggg ttatctgttt acttttgcaa atgagtattt ctcttgctag cacctcccgt 4014 tgtgcgettt aaatgacatc tgcctgggat gtaccacaac catatgttag ctgtatttta 4074 tggggaatag ataaaatatt cgtggtttat tgggtaatcc ctagatgtgt atgcttacaa 4134 tcctatatat aaaactaaat 4154

<210> 8 <211> 717 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 8

Hat Fro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly ser Sly Ser Lys Sar Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

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Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Fhe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

The His Asn His Gin &sn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Pha Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Fro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

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Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr The Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 4B5 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Fro Phe Gin. Ser Met Gin Thr val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715

<210> 9 <211> 4939 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2109) <223> <4Ο0> 9 atg ccg teg gee aec age etc age gga age gge age aag teg teg ggc 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Set Gly 15 10 15 cog cog ccc ccg teg ggt tee tee ggg age gag gog geg geg geg geg 96

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg ccc gee tec cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg ace ggc ace ggc get gtc cag ace gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gae aag aaa etc egg aac etg gag aag aaa aag 240 lie Leu Gly val He Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag etg gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aea aat 336

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu val Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aea ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 430

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160 cag tat gtt ttg gae aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gae etg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gae cct gaa egg gae atg age €24

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tee att cac etg tgg gae 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg etg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aea acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gae age 768

Leu Lys Glu ILe Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 816

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270 gca cct aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag cct gag cca gca 864

Ala Pro rhr val Glu Asp Gin val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 912

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gcc att gta tet gca 1200

Leu Asn rhr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gly lie Asn val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag gee agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1680

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ett cag caa gaa cag ett caa aca 1728

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tee cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tet cgt ggt ggt tee cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttc 1920

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca egg gga gee cca ega ggt aat att ttg tgg tgg tga 2109

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 695 700 tcctagctcc taagtggagc ttctgttctg geettggaag agctgttcca tagtetgeat 2169 gtaggttaca tgttaggaat acatttatca ttaccagact tgttgctagg gattaaatga 2229 aatgctctgt ttctaaaact tctcttgaac ccaaatttaa ttttttgaat gactttccct 2289 gttactatat aaattgtctt gaaaactaga acatttctcc tcctcagaaa aagtgttttt 2349 ccaactgcaa attatttttc aggtcctaaa acctgctaaa tgtttttagg aagtacttac 2409 tgaaacattt ttgtaagaca tttttggaat gagattgaac atttatataa atttattatt 2469 attcctcttt catttttgaa catgcatatt atattttagg gtcagaaatc ctttaatggc 2529 caaataagcc atagttacat ttagagaacc atttagaagt gatagaacta actgaaattt 2589 caatgccttt ggatcattaa tagcgatata aatttcaaat tgtttctgac ttttaaataa 2649 aacatccaaa atcctaacta aottcctgaa ctatatttaa aaattacagg tttaaggagt 2709 ttctggtttt ttttctctta ccataggaaa actgtttcct gtttggccag gaagtcaacc 2769 tgtgtaataa ttagaagtag catttcatat gatctgaagt tctaaatggt tctctgattt 2829 aagggaagbt aaattgaata ggtttcctct agttattggc cataacatgt ataaaatgta 2889 tattaaggag gaatacaaag tactttgatt tcaatgctag tagaaactgg ccagcaaaaa 2949 ggtgcatttt atttttaaat taatggatca cttgggaatt actgacttga agtatcaaag 3009 gatatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc tttctcacct tgtagcatat tctatgaaag 3069 ttgagttgac tggtagctaa aaatctgttt taacagcatg taaaaagtta ttttatctgt 3129 tacaagtcat tatacaattt tgaatgttat gtagtttctt tttaacagtt taggtaacaa 3189 ggtchgtttt tcattctggt gcttttatta attttgatag tatgatgtta cttactactg 3249 aaatgtaagc tagagtgtac actagaatgt aagctccatg agagcaggta ccttgtctgt 3309 cttcactgct gtatctattt ccaacgcctg atgacagtgc ctgacacata gtaggcactc 3369 aataaatact tgttgaatga atgaatgaat gagtactggt ggaatactcc attagctcta 3429 ctcttctttt agctagagaa catgagcaaa tttgcgcatg acaacttcca ggacaggtga 3489 acactgaaga attgacctct taaacctaat aatgtggtga caagctgccc acatgcttct 3549 tgacttcaga tgaaaatctg cttgaaggca aagcaaataa tatttgaaag aaaaaccaaa 3609 tgccattttt gtcttctagg tcgtggaggg cccccaagac ccaacagagg gatgccgcaa 3669 atgaacactc agcaagtgaa ttaatctgat tcaoaggatt atgtttaaac gccaaaaaca 3729 oactggccag tgtaccataa tatgttacca gaagagttat tatctatttg ttctcccttt 3789 caggaaactt attgtaaagg gactgttttc atcocataaa gacaggacta caattgtcag 3849 ctttatatta cctggatatg gaaggaaact atttttattc tgcatgttct tcctaagcgt 3909 catcttgagc cttgcacatg atactcagat tcctcaccct tgcttaggag taaaacataa 3969 tacactttac agggtgatat ctccatagtt atttgaagtg gcttggaaaa agcaagatta 4029 acttctgaca ttggataaaa atcaacaaat cagccctaga gttattcaaa tggtaattga 4089 caaaaactaa aatatttccc ttcgagaagg agtggaatgt ggtttggcag aacaactgca 4149 tttcacagct tttccggtta aabtggagca ctaaacgttt agatgcatac caaattatgc 4209 atgggccctt aatataaaag gctggctacc agctttgaca cagcactatt catcctctgg 4269 ccaaacaact gtggttaaac aacacatgta aattgctttt taacagctga tactataata 4329 agacaaagcc aaaatgcaaa aattgggctt tgattggcac tttttgaaaa atatgcaaca 4389 aatatgggat gtaatctgga tggcogcttc tgtacttaat gtgaagtatt tagatacctt 4449 tttgaacaot taaoagtttc ttotgacaat gacttttgta aggattggta ctatctatca 4509 ttccttataa tgtacattgt ctgtcactaa tcctcagatc ttgctgtatt gtcacctaaa 4569 ttggtacagg taotgatgaa aatatctaat ggataatcat aaeaetettg gtcacatgtt 4629 tttcctgcag ootgaaggtt tttaaaagaa aaagatatca aatgcotgot gctaccaecc 4689 ttttaaattg ctatcttttg aaaagcacoa gtatgtgttt tagattgatt tccctatttt 4749 agggaaatga cagacagtag tttcagttct gatggtataa gcaaaacaaa taaaacatgt 4809 ttataaaagt tgtatottgs aacactggtg ttcaacagct agcagcttat gtggttcacc 4869 ccatgcattg ttagtgtttc agattttatg gttatctcca gcagctgttt ctgtagtact 4929 tgcatttatc 4939

<210> 10 <211> 702 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 10

Met Pro Sec Ala The Sec Leu Sec Gly Sec Gly Sec Lys Sec Sec Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Sec Gly Sec Sec Gly Sec Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Sec Gin 35 40 45

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Gly Lys Leu Asp Asp Tyc Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pco Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 630 6S5

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 695 700

<210> 11 <211> 3306 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0>

<221> CDS <222> (1) .. (2040) <223> <4 0 0> 11 atg ccg teg gee aec age etc age gga age ggc age aag teg teg gge 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ccg ccg ccc ccg teg ggt tee tee ggg age gag geg geg geg geg geg 96

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg ccc gee tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg aec ggc ace ggc get gtc cag ace gag gee atg aag cag 192

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin lieu 130 135 140 atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag etc 480

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 1008 val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get gcg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350 act ccg gtg get cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag ega gtc cag 1104

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365 gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 4C5 410 415 cct cca gtt cat tct gaa tct aga ctt get caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tcc aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat get aca gag 1332

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tct 1440

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tcc ctt ccg get get tct 1488

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tcc atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly rie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gcc cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag age ttt tct agt cag 1680

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ctt cag caa gaa cag ctt caa aca 1728

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1324

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tcc cgt 1872

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tct aac act cca aac 1968

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655 agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt get ccc egg gac tac tet gge 2016

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gga tgc ege aaa tga acactcagca agtgaattaa tctgattcac 2070 Tyr Gin Arg Gly Cys Arg Lys 675 aggattatgt ttaaacgcoa aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag 2130 agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc 2190 cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag gaaactattt 2250 ttattctgca tgttettcct aagegteate ttgagccttg cacatgatae teagattcct 2310 cacccttgct taggagtaaa acataataca ctttacaggg tgatatctcc atagttattt 2370 gaagtggctt ggaaaaagca agattaaett ctgacattgg ataaaaatca acaaatcagc 2430 cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aactaaaata tttcccttcg agaaggagtg 2490 gaatgtggtt tggeagaaea actgcatttc acagetttte eggttaaatt ggageaetaa 2550 aegtttagat gcataceaaa ttatgcatgg gcccttaata taaaaggctg getaccaget 2610 ttgacacage actatteatc ctctggceaa acaaetgtgg ttaaacaaca eatgtaaatt 2670 gctttttaac agctgatact ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt gggctttgat 2730 tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tetggatggc cgcttctgta 2790 cttaatgtga agtatttaga tacctttttg aacacttaac agtttcttct gacaatgact 2850 tttgtaagga ttggtactat ctatcattcc ttataatgta cattgtctgt cactaatcct 2910 cagatettgc tgtattgtea cetaaattgg tacaggtaet gatgaaaata tetaatggat 2970 aatcataaca etettggtea catgtttttc ctgcagcctg aaggttttta aaagaaaaag 3030 atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgetat cttttgaaaa gcaccagtat 3090 gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc agttctgatg 3150 gtataagcaa aacaaataaa acatgtttat aaaagttgta tcttgaaaca ctggtgttca 3210 acagctagca gcttatgtgg ttcaccccat gcattgttag tgtttcagat tttatggtta 3270 tctccagcag ctgtttctgt agtaettgea tttatc 3306

<210> 12 <211> 679 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 12

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

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Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin. Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Set Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro val Pro Pro val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lye 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Sec Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Gly Cys Arg Lys 675

<210> 13 <211> 2281 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0>

<221> CDS <222> (1) . . (2154) <223> <4 0 0> 13 atg ccg teg geo aec ago etc ago gga ago ggc age aag teg teg ggc 48

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg gog geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg ccc gee tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg acc ggc aoc ggc got gtc cag acc gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lya Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240 lie leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag ctg gat gee gta tot aag tac cag gaa gtc aca aat 336

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 1B5 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser He His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca ace tat aaa gca 720

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag L344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag L392

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta ttc csg get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc L584

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin See Phe See See Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ett cag caa gaa cag ett caa aca 1728

Pro His Gin Val Glu Gin The Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Tbr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tee cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Val Val Gly Tbr Tyc His Gly Sec Gin Asp Gin Fro His Gin Val Tbr 580 585 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn The Gly Phe Pro Arg See 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tet cgt ggt ggt tee cgt 1872

See Gin Pro Tyr Tyc Asn See Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1920

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Pbe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac 1968

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700 aac aga ggg atg cog caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2154

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 tctgattoac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214 ttaccagaag agttattatc tatttggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2274 tgteage 2281 <210> 14 <211> 717

<212> PRT <213> Canis familiaris <400> 14

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Gin Ala Met Lys Gin 50 55 60 lie Leu Gly Val lie Asp Lye Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu B5 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Aen 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro Hia Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 <210> 15 <211> 3386 <212> ADN <213> Bos taurus <22 0>

<221> CDS <222> (82) .. (2208) <223> <4 Ο 0> 15 cgcgtctcgc cocgtccacc gattgactcg ccgctcttgt ccttcctccc gctctttctt 60 ctctcccctt acggtttcaa g atg cct teg gee ace age cac age gga age 111

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser 15 10 ggc age aag teg tee gga eeg cca ecg ccg teg ggt tec tee ggg aat 159

Gly Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Fro Ser Gly Ser Ser Gly Asn 15 20 25 gag geg ggg gee ggg gee gee geg eeg get tee caa cac ece atg ace 207

Glu Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Met Thr 30 35 40 ggc acc ggg get gtc cag acc gag gee atg aag cag att etc ggg gtg 255

Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val 45 50 55 ate gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggc aag ett gat 303 lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp 60 65 70 gat tat cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat caa gat cag 351

Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin 75 80 85 90 ctg gat gee gtg tet aag tac cag gaa gtc aca aat aac ttg gag ttt 399

Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn. Leu Glu Phe 95 100 105 gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta age caa gat att cag 447

Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin 110 115 120 aaa aca ata aag aag aca gca cgt egg gag cag ett atg aga gag gaa 495

Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu 125 130 135 get gaa cag aaa cgt tta aaa aca gta ett gag ctg cag tat gtt ttg 543

Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu 140 145 150 gac aaa eta gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg aag caa ggt ttg 591 Aôp LyS Léu Gly ASp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu LyS Gin Gly Leu 155 160 165 170 aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gag gag ttg teg ttg tta gat gag 639

Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu 175 180 185 ttc tac aaa tta gca gac cct gaa ega gac atg age ttg agg ttg aat 687

Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn 190 195 200 gag eag tat gaa cat gee tee att cac ctg tgg gac ttg ctg gaa gga 735

Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Giu Gly 205 210 215 aag gaa aaa cct gta tgt gga aca act tat aaa get eta aag gaa att 783

Lys Glu Lys Pro val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie 220 225 230 gtt gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gac age acc cac aac cac 831

Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His 235 240 245 250 cag aat ggt ctg tgt gag gaa gag gag gca gcc tea gca cct aca gtt 879

Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Fro Thr Val 255 260 265 gaa gac cag gca get gaa get gaa cct gag cca gtg gaa gaa tat act 927

Glu Asp Gin Ala Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Val Glu Glu Tyr Thr 270 275 2B0 gaa caa aat gag gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga caa ttt atg 975

Glu Gin Asn Glu Val Glu Ser The Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met 235 290 295 gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag gta gat gat tgg 1023

Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Asp Trp 300 305 310 aca gtt gaa aca gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag 1071

Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin 315 320 325 330 get gca tet cct tea gta cca gaa ccc cac tet ttg acc cca gtg get 1119

Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala 335 340 345 caa gcc gat ccc etc gtg aga aga cag ega gta cag gac ett atg gca 1167

Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala 350 355 360 caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt 1215

Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe 365 370 375 gaa aac cag aca ett gat cct gcc att gta tet gca cag ccg atg aat 1263

Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn 380 385 390 cca gca cag aac atg gac ata ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat 1311

Pro Ala Gin Asn Met Asp lie Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His 395 400 405 410 tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt tet gta cag cca gaa 1359

Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Ser Val Gin Pro Glu 415 420 425 get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag gga tat aca gca 1407

Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala 430 435 440 tet caa ccc ttg tac caa cct tet cat get act gac caa ega cca caa 1455

Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin 445 450 455 aag gaa ccg att gat cag att cag geg aeg ate tet tta aat aca gac 1503

Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp 460 465 470 cag act aca gca tea tea tee ett cct get get tet cag cct caa gtg 1551

Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val 475 480 485 490 ttc cag get ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta 1599

Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val 495 500 505 aat gca get cca ttc caa tec atg caa aeg gta ttc aat atg aat gcc 1647

Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala 510 515 520 cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag 1695

Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin 525 530 535 tac cag gcc agt tac aac cag age ttt tcc agt cag cct cac caa gta 1743

Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val 540 545 550 gaa caa aca gag ett cag caa gaa cag ett caa aca gtg gtt ggc act 1791

Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr 555 560 565 570 tat cat ggt tet cag gac cag ecc cat caa gtg act ggt aac cac cag 1839

Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin 575 580 585 cag cct cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat 1887

Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr 590 595 600 tac aac agt cgt ggt gtg tet cgt gga ggt tcc cgt ggt get aga ggc 1935

Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly 605 610 615 ttg atg aat gga tac aga gga cct get aat gga ttc aga gga gga tat 1983

Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr €20 625 630 gat ggt tac ege cct tea ttc tet act aac act cca aac agt ggt tat 2031

Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 635 640 645 650 aca caa tet caa ttc agt get ccc egg gac tac tet ggc tat cag egg 2079

Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 655 660 665 gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca 2127

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 670 675 680 egg gga gcc cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg 2175

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 685 690 695 atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt 2228

Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 700 705 ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc 2288 tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2348 ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca 2408 tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc 2468 ttaggagtaa aacataatat actttaatgg ggtgatatct ccatagttat ttgaagtggc 2528 ttggataaag caagactgac ttctgacatt ggataaaatc tacaaatcag ccctagagtc 2588 attcagtggt aactgacaaa actaaaatat ttcccttgaa aggaagatgg aaggagtgga 2648 gtgtggtttg gcagaacaac tgcatttcac agcttttcca cttaaattgg agcactgaac 2708 atttagatgc ataccgaatt atgcatgggc cctaatcaca cagacaaggc tggtgccagc 2768 cttaggcttg acacggcagt gttcaccctc tggccagacg actgtggttc aagacacatg 2828 taaattgctt tttaacagct gatactgtat aagacaaagc caaaatgcaa aattaggctt 2888 tgattggcac ttttcgaaaa atatgcaaca attaagggat ataatctgga tggccgcttc 2948 tgtacttaat gtgaaatatt tagatacctt tcaaacactt aacagtttct ttgacaatga 3008 gttttgtaag gattggtagt aaatatcatt ccttatgacg tacattgtct gtcactaatc 3068 cttggatctt gctgtattgt cacctaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa tctaatggat 3128 aatcataaca ctcttggtta catgtttttc ctgcagcctg aaagttttta taagaaaaag 3188 acatcaaatg cctgctgctg ccaccctttt aaat-tgctat cttttgaaaa gcaccagtat 3248 gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacagt cagtagtttc acttctgatg 3308 gtataagcaa acaaataaaa catgtttata aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3368 aaaaaaaaaa aaaaaaaa 3386 <210> 16 <211> 708 <212> PRT <213> Bos taurus <4 0 0> 16

Met Pro Set Ala Ihr Set His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Asn Glu Ala Gly Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Met Thr Gly Thr Gly Ala val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 SO 35

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr val Glu Asp Gin Ala Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Val Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Asn Glu val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Asp Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp 385 390 395 400 lie Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Pro Asn Gin Val Ser Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin 450 455 460 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 4B5 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser 645 650 655

Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn 660 665 670

Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly 675 680 685

Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr 690 695 700

Gin Gin Val Asn 705

<210> 17 <211> 3150 <212> ADN <213> Equus caballus <22 0>

<221> CDS <222> (1)..( 1917) <223> <4 0 0> 17 atg gag ggc aag etc gat gat tac caa gag ega atg aac aaa gga gaa 48

Met Glu Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu 15 10 15 agg ett aat cag gat cag ctg gat get gtg tet aag tac cag gaa gtc 96

Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val 20 25 30 aca aat aac ttg gag ttt geg aaa gaa ttg cag agg agt ttc atg geg 144

Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala 35 40 45 ttg agt cag gat att cag aaa aca ata aag aag aeg gca cgt egg gag 192

Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60 cag ett atg aga gaa gaa get gaa cag aaa cgt tta aaa act gta ett 240

Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu 65 70 75 80 gag ctg cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gaa gaa gtg ega act 288

Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Glu Vai Arg Thr 35 90 95 gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga gtg cca ata etc tct gaa gaa gag 336

Asp Lâu LyS Gin Gly Léu Asn Gly Vãl Pro Ilé Leu Set Glu Glu Glu 100 105 110 ttg teg ctg ttg gat gag ttc tac aag tta gca gac cct gta egg gac 384

Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Vai Arg Asp 115 120 125 atg age ttg agg ttg aat gag cag tat gag cat gee tcc att cac ctg 432

Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu 130 135 140 tgg gac ttg ctg gaa ggg aag gaa aaa tct gtc tgt gga aca acc tat 480

Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser vai Cys Gly Thr Thr Tyr 145 150 155 160 aaa get ctg agg gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tcc aac tac ttt 528

Lys Ala Leu Arg Glu ile Vai Glu Arg Vai Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 165 170 175 gac age acc cac aac cac cag aat ggg etc tgt gag gag gaa gag get 576

Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala ISO 185 190 acc tea get cca aca get gaa gac cag gga get gaa get gaa cct gag 624

Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gin Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu 195 200 205 cca gca gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat 672

Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr 210 215 220 gta aat aga cag ttt atg gca gaa gcg cag ttc agt ggt gag aag gag 720

Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Ala Gin Phe Ser Gly Glu Lys Glu 225 230 235 240 cag gtg gat gag tgg aca gtc gag aeg gtc gag gtg gta aat tea etc 768

Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu 245 250 255 cag cag caa cct cag get gca tct cct tea gta ccg gag ccc cac tct 816

Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His Ser 260 265 270 ttg act cca gtg get cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta 864

Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai 275 280 285 cag gac ctt atg gcg caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat 912

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp 290 295 300 tea atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ctt gat cct gee att gta tct 960

Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser 305 310 315 320 gca cag cct atg aat cca gca cag aat atg gac atg ccc cag ctg gtt 1008

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val 325 330 335 tgc cct cca gtt cat get gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt 1056

Cys Pro Pro Val His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 340 345 350 cct gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt 1104

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 355 360 365 gag ggg tat aca gca tet eag ccc ttg tae cag cct tet cat get aca 1152

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr 370 375 380 gag caa ega ccg caa aag gaa ccg act gac cag ate cag gca aca ate 1200

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin lie Gin Ala Thr lie 385 390 395 400 tet tta aat aca gac cag act aca gca tea tea tee ett cct get get 1248

Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 410 415 tet cag cct cag gtg ttc cag get ggg aca age aaa cct tta cac age 1296

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430 agt ggg ate aat gta aat gca geg cca ttc cag tee atg caa aeg gtg 1344

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445 ttc aac atg aat gee ccg gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta 1392

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu 450 455 460 aaa cag caa aat cag tae cag gee age tat aac cag age ttt tee agt 1440

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480 ccg cct cac caa gta gag cag aca gag ett ccg caa gag cag ett cag 1488

Pro Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Pro Gin Glu Gin Leu Gin 485 490 495 aeg gtg gtt ggt act tae cat get tec caa gac cag ccc cat caa gtg 1536

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Ala Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val 500 505 510 acc ggt aac cae cag cag cct ecc cag cag aac act ggg ttt cca cgt 1584

Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 515 520 525 age agt cag ccc tat tae aac agt cgt ggt gtg tet cgt gga ggc tee 1632

Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540 cgt ggt get aga ggc ttg atg aat gga tae agg ggc cct gee aat gga 1680

Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 545 550 555 560 ttc aga gga gga tat gat ggt tae ege cct teg ttc tet aac act cca 1728

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 565 570 575 aac age ggt tae aca cag tet cag ttc agt get ccc egg gac tae tet 1776

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 580 585 590 ggc tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg 1824

Gly Tyr Gin Arg Aap Gly Tyr Gin Gin Aan Phe Ly* Arg Gly Sac Gly 595 600 605 cag agt gga ccc egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga 1872

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 615 620 ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 1917

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Aen Ihr Gin Gin Val Asn 625 630 635 tctgattcac aggattatet ttaategcca aaacacactg gccagtgtae cataatatgt 1977 taeeagaaga gttattatet atttgttetc ectttcagga aaettattgt aaagggactg 2037 tttteateee ataaagacag gactaeagtt gtcagcttta tattaeetgg atatggaagg 2097 aaactatttt tactetgcat gttctgtcct aagegteate ttgagccttg cacatgatae 2157 tcagattcct ttcccttgot taggagtaaa acataatata ctttatgggg tgataatatc 2217 tccatagtta tttgaagtgg cttggaaaaa gcaagattga cttttgacat tggataaaat 2277 ctaeaaatea geectagagt ttcatggtca ttcacaaaac taaaatattt eeettgaaag 2337 gaagatggaa ggactggagt gtggtttggc agaacaactg cattteaeag etttteetat 2397 taaattggag cactgaatgt taaatgeata ceaaattatg catgggeeet taatcaeaea 2457 tacatggcta ccagctttga cacagcacta ttcatcctct ggccaaacga ctgtggttaa 2517 aaacacgtgt aaattgcttt ttaacagctg atactgtaaa agacaaagct aaaatgcaaa 2577 attaggettt cattggcact tttcgaaaaa tatgcaacaa atttgggatg taatctggat 2637 ggccacttct gtaettaatg tgaagtattt agataccttt ttgaacactt aacagtttct 2697 tcgacaatga cttttgtaag gattggtagt atatatcatt ccttatgaca tacattgtct 2757 gttgetaate ettggatett gctgtattgt cacctaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa 2817 tctctcatgg ataaacctaa cactcttcgt cacatgtttt tcctgcagcc tgaaggtttt 2877 taaaaggaaa agatatcaaa tgcctgctgc taccaccctt ttaaattgct atcttttgaa 2937 aagcaccagt atgtgttttt agattgattt ccctatttta gggaaatgac agtcagtagt 2997 ttcagttctg atggtataag caaagcaaat aaaacgtgtt tataaaagtt gtatcttgaa 3057 acactggtgt tcaacagcta gcagcttctg tggttcaccc cetgcettgt tagtgttacc 3117 catttatggt tatctccage agcaatttet eta 3150

<210> 18 <211> 638 <212> PRT <213> Equus caballus <400> 18

Met Glu Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu 15 10 15

Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val 20 25 30

Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala 35 40 45

Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60

Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu 65 70 75 80

Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Glu Val Arg Thr 85 90 95

Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu 100 105 110

Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro val Arg Asp 115 120 125

Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu 130 135 140

Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr 145 150 155 160

Lys Ala Leu Arg Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 165 170 175

Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala 180 185 190

Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gin Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu 195 200 205

Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr 210 215 220

Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Ala Gin Phe Ser Gly Glu Lys Glu 225 230 235 240

Gin val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr val Glu val val Asn Ser Leu 245 250 255

Gin Gin Gin Fro Gin Ala Ala Ser Pro Ser val Pro Glu Pro Bis Ser 260 265 270

Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 275 280 285

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Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 305 310 315 320

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val 325 330 335

Cys Pro Pro Val His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 340 345 350

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 355 360 365

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr 370 375 380

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin lie Gin Ala Thr lie 385 390 395 400

Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 410 415

Ser Gin Pro Gin val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445

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Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480

Pro Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Pro Gin Glu Gin Leu Gin 485 490 495

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Ala ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val 500 505 510

Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 515 520 525

Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540

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Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 625 630 635

<210> 19 <211> 6181 <212> ADN <213> Equus caballus <22 0>

<221> CDS <222> (179) .. (2302) <223> <4 0 0> 19 gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagccg 60 cggggacagg gcgaagcggc ctgcgcccac ggagcgcacg tctctgttct caacgcagca 120 ccacccttgc ccccctcggc tgcccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcacg 178 atg cec teg gee acc age cac age gga age ggc age aaa teg teg gga 226

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag geg geg gee ggg gca 274

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 get geg ccg get tet cag cat ccg gca acc ggc acc ggc gee gtc cag 322

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45 acc gag gcc atg aag cag att etc ggc gta ate gac aag aaa ett egg 37 0

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60 aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat tae cag gaa ega atg 418

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80 aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg gat gcc gta tet aag 466

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95 tae cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aag gaa tta cag agg 514

Tyr Gin Glu val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110 agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125 gea cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca gaa cag aag ege tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Ly3 Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160 gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175 tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc tac aag etc gta gat 754

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu val Asp 180 185 190 cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gcc 802

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205 tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgt 850

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220 gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag 898

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240 tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag geg get tea geg ccc aca gtg gag gac cag gta get gaa 994

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270 get gaa cct gag cca geg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285 tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca gaa aca cag ttc age 1090

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300 agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt gaa aca gtt gag 1138

Ser Gly Glu Lye Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320 gtt gta aac tea etc cag eag caa cct cag get geg tee ect tea gte 1186

Val val Aen Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335 cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg got cag tea gat coa ett gtg 1234

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350 aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa atg caa ggg ccc tat 1282

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365 aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa aat cag aeg ett gat 1330

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380 cct gcc att gta tcc gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat 1378

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400 atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet gaa tet aga ett gcc 1426

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415 caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcc aca cag gtt cct ttg 1474

Gin Ser Asn Gin val Pro val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430 gtt tea tcc aca agt gag ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tac cag 1522

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445 cca tet cat get aeg gag cag egg ccg cag aaa gag cca atg gat cag 1570

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lye Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag act aca gca tcc tea 1618 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480 tcc ett cct get get tet cag cct caa gtg ttc cag get ggg aca agt 1666

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495 aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat gca get cca ttc cag 1714

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510 tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca gte cct cct get aat 1762

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525 gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac cag gcc act tat aac 1810

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ett caa 185B

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560 caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac 1906

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575 cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac 1954

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590 act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta 2002

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605 tet ega gga ggg tet cgt ggt gee aga gge ttg atg aat gga tae agg 2050

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620 ggc cct gee aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea 2098

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640 ttc teg aac act cca aac agt ggt tat tea cag tet cag ttc act get 2146

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655 ccc egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat ttc 2194

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670 aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gee cca ega ggt cgt 2242

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685 gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag 2290

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700 caa gtg aat taa tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact 2342

Gin Val Asn 705 ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg 2402 aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgtcagcttt 2462 acattacctg gatatggaag gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagegteat 2522 ettgageett gcacacaata caatactcag attcctcacc ettgettagg agtaaaacat 2582 tatataetta tggggtgata atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg 2642 caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag ccctagaact attcagtggt 2702 aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta 2762 gcaaaactgc atttcatagc tttcccatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac 2822 caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca 2882 ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tetttagtag 2942 tggatactgt gtaagacaaa gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa 3002 atatgcatca aatatggggg ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaactat 3062 ttagatacct ttggaacact taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc 3122 ctgtttgtca ttcctcacca taattgcatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat 3182 tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca 3242 cttttggtca oatgttttct cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg 3302 cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga 3362 ttcatttccc tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa 3422 taaaaacatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa 3482 agtaattcaa occatgcatt gctagtgtca cagcctttgg ttatgtctag tagctgttto 3542 tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat ttaaocctgt ttgaattctc toctttcctc 3602 aaggagacac ttatgttcaa agtgttgatt ctttgcctta ggtgcataga gagtagacag 3662 tttggagatg gaaaggttag cagtgactta gccatatgtt ctgtgttgga atttgtgcta 3722 gcagtttgag cactagctct gcgtgcctat gaactgaatg ctgcttgtce cattccattt 3782 tatgtoatgg agaaataatt ccacttggta acaoaaaggc taagttaatg ttattttctg 3842 tacagaaatt aaattttact tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg 3902 gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttcatoatta gacaactgga gtttttgctg 3962 gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta 4022 gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg 4082 acttttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc 4142 aagactattt tgccagcacc tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac 4202 cacaaccata tgttaattgt attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat 4262 aatccctaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa 4322 ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca 4382 cgtttcgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac 4442 ttgtttattt tttaagttgo ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct 4502 accattgcag ttctagtgag ttttaacgte tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc 4562 actggacaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc 4622 ttotataata tgcaaatgct tgtctagagg cagaagacct tttgrtttggt caagtgtgta 4682 ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtce tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa 4742 aatcttttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgccccccc 4802 ctcccccagg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taccagggcc 4862 ttaatattcc taaaaagatg attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatct 4922 tgatattaaa aacatgaect tceaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt 4932 ctctatatgt attcatatat atgctattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca 5042 tgottattct caggttcatt caotaaggtg cttggoagao aaccagtttc taagtgcaga 5102 atgtagttaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac 5162 ttaaggaaat agggtattgt agottaggot gatoataocc ttcatttcaa ccttaagctc 5222 tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta 5232 acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa 5342 acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag 5402 oaaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga 5462 agaaacaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact 5522 gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcacc 5582 gttggcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa cttaaagtca ggttttggta 5642 tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga 5702 aatttattag cacatttggg tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag 5762 tggtgaaaaa attacccctc aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca 5822 tggttcaact gtgtgcfttaa tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact 5882 tgattgaaag ataattcagc tgacataagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag 5942 agtcaagaga cetgtattce agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct 6002 ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc 6062 tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag 6122 tgggtcatct aataaaactg ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6181

<210> 20 <211> 707 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 2B5

Ser Thr Glu Tyr val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met. Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala Ile Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 lie Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700

Gin Val Asn 705

<210> 21 <211> 6141 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) .. (2262) <223> <400> 21 cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtccogcgtc 60 tctcccogtc cgtctoctga ottgotggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg cco teg gee ace age cac ago gga age ggc 171

Met Fro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly 1 5 10 age aaa teg teg gga ccg ccg cog ccg tee ggt tee tee ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly ser Glu 15 20 25 gog gcg gcc ggg gca get gcg ccg get tet cag cat ccg gca acc ggc 267

Ala Ala Ala Sly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 acc ggc gee gtc cag acc gag gee atg aag cag att etc ggc gta ate 315

Thr Gly Ala Vai Gin Thr Glu Ala Het Lys Gin Ile Leu Gly Vai Ile 45 50 55 gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat 363

Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp 60 65 70 75 tac cag gaa cga atg aat aaa ggg gaa agg ctc aat caa gac cag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu 80 85 90 gat gcc gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459

Asp Ala Vai Ser Lys Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala 95 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lys 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt cgg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gca 555

Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala 125 130 135 gaa cag aag ege tta aaa act gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat 603

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Lys Leu Gly Asp Asp Asp Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc 699

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 180 185 tac aag ctc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lys Leu val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gcc tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

Gin Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys 205 210 215 gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa get cta aag gaa att gtt 843

Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu ile val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag gcg get tea gcg ccc aca gtg gag 939

Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu 255 260 265 gac cag gta get gaa get gaa cct gag cca geg gaa gaa tac aca gag 987

Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu 270 275 280 caa agt gag gtt gaa tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035

Gin Ser Glu Val Glu Ser rhr Glu Tyr val Asn Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

Glu Thr Gin Phe Ser ser Gly Glu Lys Glu Gin val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get 1131

Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tcc cct tea gtc oca gag ccc cae tot ttg act cca gtg get cag 1179

Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin 335 340 345 tea gat cca ett gtg aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa 1227

Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu 365 370 375 aat cag aeg ett gat cct gee att gta tcc gca cag cct atg aac cct 1323

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 380 385 390 395 acc cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet 1371

Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser 400 405 410 gaa tet aga ett gcc caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcc 1419

Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin val Pro val Gin Pro Glu Ala 415 420 425 aca cag gtt cct ttg gtt tea tcc aca agt gag ggg tat aca gca tet 1467

Thr Gin Val Pro Leu val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser 430 435 440 cag ccc ttg tac cag cca tet cat get aeg gag cag egg ccg cag aaa 1515

Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys 445 450 455 gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag 1563

Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aca gca tcc tea tcc ett cct get get tet cag cct caa gtg ttc 1611

Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe 480 485 490 cag get ggg aca agt aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat 1659

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn 495 500 505 gca get cca ttc cag tcc atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca 1707

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr val Phe Asn Met Asn Ala Pro 510 515 520 gtc cct cct get aat gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac 1755

Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr 525 530 535 cag gee act tat aac eag agt ttt tee agt cag ect cac caa gtg gaa IB03

Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Gin 540 545 550 555 caa aca gag ett caa caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac 1851

Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr 560 565 570 cat gga tee cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899

His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin 575 580 585 ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac 1947

Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr 590 595 600 aac agt cgt ggg gta tet ega gga ggg tet cgt ggt gee aga ggc ttg 1995

Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu 605 610 615 atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043

Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp 620 625 630 635 ggt tac ege cct tea ttc teg aac act cca aac agt ggt tat tea cag 2091

Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin 640 645 650 tet cag ttc act get ccc egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga 2139

Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly 655 660 665 tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga 2187

Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly 670 675 680 gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga cce aac aga ggg atg ccg 2235

Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro 685 690 695 caa atg aac act eag caa gtg aat taa tgtgatacac aggattatgt 2282

Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 700 705 ttaatcgcca aaaaeacact ggceagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattate 2342 tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2402 ggactgcaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag gaaactattt ttattctgca 2462 tgttetgtcc taagegteat ettgageett gcacacaata caatactcag attcctcaec 2522 ettgettagg agtaaaacat tatataetta tggggtgata atatctccat agttagttga 2582 agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag 2642 ccctagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg 2702 aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atttcatagc tttcccatta aattggagca 2762 ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg 2822 ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca 2882 tgtaaattgc tctttagtag tggatactgt gtaagacaaa gccaaattgc aaatcaggct 2942 ttgattggct cttctggaaa atatgcatca aatatggggg ataatctgga tgggctgctg 3002 ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaacact taacagtttc tctgaacaat 3062 gacttacatg gggattggtc ctgtttgtca ttcctcacca taattgcatt gtcatcacta 3122 atecttggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta 3182 atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct cctgcagcct gaaagttctt 3242 aaagaaaaag atatcaaatg cctgetgcta ccaccatttt aaattgctat ctttagaaaa 3302 gcaccggtat gtgttttaga ttcatttccc tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc 3362 agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacactggt 3422 gttcaacagc tagcagctaa agtaattcaa cccatgcatt gctagtgtca cagcctttgg 3482 ttatgtctag tagctgtttc tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat ttaaccctgt 3542 ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac tt.at.gt.t.caa agtgttgatt ctttgcctfca 3602 ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggtbag cagtgactta gccatatgtt 3662 ctgtgttgga atttgtgcta gcagtttgag cactagctct gcgtgcctat gaactgaatg 3722 ctgcttgtcc eattccattt tatgtcatgg agaaataatfc ccacttggta acacaaaggc 3782 taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaattttact tttagccttt tgtaaacttt 3842 tttttttttt ttccaagccg gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttcatcatta 3902 gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt 3962 ccacattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa 4022 ataaataaaa taagttcttg aottttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg 4082 gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc tacacttgtg tgctttaaaa 4142 gacaactacc tgggatgtac cacaaccata tgttaattgt attttattgg gatggataaa 4202 atgtttgtgg tttattggat aatccctaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt 4262 atgatagtaa gaaagoaaaa ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag 4322 tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta 4382 aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc ttattccttt caacagcaac 4442 atatcattag otgtcattct accattgcag ttctagtgag ttttaacgtc tgcattcaag 4502 actgttttaa aagcaacctc actggacaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg 4562 agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct tgtotagagg cagaagacct 4622 tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc tacatgtctc 4682 ttagtgtagt aagactataa aatottttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac 4742 cacgtgtata atgccccccc ctcococagg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg 4802 gccattttat taccagggcc ttaatattcc taaaaagatg attttttttc atcctttctc 4862 ctcttttgat cattgtatct tgatattaaa aacatgacct tccaatgatt gtagtaaatt 4922 aacttctata gttcttttgt ctctatatgt attcatatat atgctattgt atagagactt 4982 caaggagaca tggagatgca tgcttattct caggttcatt cactaaggtg cttggcagac 5042 aaccagtttc taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatttgt 5102 tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt agcttaggct gatcataccc 5162 ttcatttcaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta 5222 gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa 5282 tttatataca ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat 5342 gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt 5402 aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta 5462 gactactgta tgttagcact gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg 5522 catagccttg atccttcacc gttggcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa 5582 cttaaagtca ggttttggta tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc 5642 tctttagcga gacaacctga aatttattag cacatttggg tatctcttgc ttggcattat 5702 ggccagtgtt aactattcag tggtgaaaaa attacccctc aagacactgg agtgacccca 5762 gatgtgtgta gtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt 5822 cggtatgato tggaaagact tgattgaaag ataattcagc tgacataagg atgagtgagg 5882 agtggcaaac tggataaaag agtcaagaga cctgtattcc agtgactcct gttttgttta 5942 agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt 6002 ttgtctcaac atttggaagc tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt ttttttttgg 6062 ggggggggtg gccagaatag tgggtcatct aataaaactg ccatttaaaa gatcaaaaaa 6122 aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6141

<210> 22 <211> 707 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 250 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430 val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 lie Gin Ala Thr He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700

Gin Val Asn 705

<210> 23 <211> 6114 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) .. (2235) <223> <4Ο0> 23 cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60 tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg ccc teg gee ace age cac age gga age ggc 171

Met Pro Ser Ala rhr Ser His Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 geg geg gee ggg gca get geg ccg get tet cag cat ccg gca acc ggc 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 aec ggc gee gtc cag acc gag gee atg aag cag att etc ggc gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin He Leu Gly Val He 45 50 55 gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat 363

Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp 60 65 70 75 tac cag gaa ega atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu 80 85 90 gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459

Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala 95 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca 555

Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala 125 130 135 gaa cag aag ege tta aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat 603

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc 699

Gly Val Pro He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 180 185 tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gee tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys 205 210 215 gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt 843

Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg Val Phe Gin Sac Asn rye Phe Asp Sec The His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea geg ccc aca gtg gag 939

Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Sec Ala Pro The Val Glu 255 260 265 gac cag gta get gaa get gaa cct gag cca geg gaa gaa tae aea gag 987

Gin See Glu Val Glu Sec Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

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Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag aeg ett gat cct gee att gta 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val 365 370 375 tee gca cag cct atg aac cct ace cag aae atg gat atg cct cag ctg 1323

Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu 380 385 390 395 gtt tgc cct cag gtt cat tet gaa tet aga ett gee caa tet aat caa 1371

Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin 400 405 410 gtt cct gta caa cca gaa gee aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca 1419

Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr 415 420 425 agt gag ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tac cag cca tet cat get 1467

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Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His 480 485 490 age agt gga ate aat gta aat gca get cca ttc cag tee atg caa aeg 1659

Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr 495 500 505 gtg ttc aat atg aat get cca gtc cct act get aat gaa cca gaa aeg 1707

Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Gill Thr 510 515 520 tta aaa caa cag agt cag tac cag gee act tat aac cag agt ttt tee 1755

Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser 525 530 535 agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ett caa caa gac caa ctg 1303

Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu 540 545 550 555 caa aeg gtg gtt ggc act tac cat gga tee cag gac cag cct cat caa 1851

Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin 560 565 570 gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca 1899

Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro 575 580 585 cgt age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta tot ega gga ggg 1947

Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly 590 595 600 tet cgt ggt gee aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc cct gee aat 1995

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Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr 640 645 650 tet ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet 2139

Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser 655 660 665 ggg cag agt gga cca egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca 2187

Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro 670 675 680 aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2235

Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 685 690 695 tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2295 ttaccagaag agttattate tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2355 gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag 2415 gaaactattt ttattotgea tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacacaata 2475 oaatacteag attcctcacc ettgettagg agtaaaacat tatataetta tggggtgata 2535 atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct 2595 tggataaaat ctacaatcag cectagaact attcagtggt aattgaeaaa g-ttaaagcat 2655 tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc attteat age 2715 tttcecatta aattggagca ccgacagatt aaaageatac caaattatgc atgggtcctt 2775 actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa 2835 acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tetttagtag tggatactgt gtaagacaaa 2895 gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa atatgeatea aatatggggg 2955 ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaacact 3015 taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc ctgtttgtca ttccteacca 3075 taattgeatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata 3135 ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct 3195 cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt 3255 aaattgctafc ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga ttcatttccc tgttttaggg 3315 aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag 3375 ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tageagetaa agtaattcaa cccatgcatt 3435 gctagtgtca cagcctttgg ttatgtctag tagctgtttc tgaagtattt teatttatet 3495 tttgtcaaat ttaaccctgt ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac ttatgttcaa 3555 agtgttgatt etttgeetta ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag 3615 cagtgactta gccatatgtt ctgtgttgga atttgtgcta gcagtttgag cactagctct 3675 gcgtgcctat gaactgaatg ctgcttgtcc oattccattt tatgtcatgg agaaataatt 3735 ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaattttact 3795 tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttcoaagoog gtatcagcta otoaaaacaa 3855 ttctcagata ttcatcatta gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac 3915 tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa 3975 gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg acttttctca tgtgtggtta 4035 tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc 4095 tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac cacaaccata tgttaattgt 4155 attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat aatccctaga tggtgtgtta 4215 cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt 4275 attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttctacccaa 4335 agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc 4395 ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct aocattgcag ttctagtgag 4455 ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc aotggacaga gaactgctaa 4515 agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct 4575 tgtctagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa 4635 ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa aatcttttgt acatgcacaa 4635 ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgccccccc ctccccc&gg tagcatgcca 4755 ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taccagggcc ttaatattco taaaaagatg 4815 attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatct tgatattaaa aacatgacct 4875 tccaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt ctctatatgt attcatatat 4335 atgctattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca tgcttattct caggttcatt 4935 cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat 5055 atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt 5115 agcttaggct gatcataccc ttcatttcaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac 5175 ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaagc 5235 tttgccttta ctattttgaa tttatataoa ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat 5235 ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata 5355 caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctgg 5415 tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact gtacattaat agtctgttgt 5475 gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcacc gttggcattg aaaatagcag 5535 tatccctgat gtacttaaaa cttaaagtca ggttttggta tatttatttg taagtcttaa 5535 tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga aatttattag cacatttggg 5655 tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag tggtgaaaaa attacccctc 5715 aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagbggca tggttcaact gtgtggttaa 5775 tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact tgattgaaag ataattcagc 5835 tgacataagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag agtcaagaga cctgtattcc 5835 agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag 5355 ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc tattgaaggt tttaaaatgg 6015 tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag tgggtcatct aataaaactg 6075 ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6114

<210> 24 <211> 698 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 24

Met Fro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr LyS Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Fhe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gin Pro Met 370 375 380

Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val 385 390 395 400

His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro 405 410 415

Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr 420 425 430

Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro 435 440 445

Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr Tie Ser Leu Asn Thr 450 455 460

Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin 465 470 475 4Θ0

Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn 485 490 495

Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai Phe Asn Met Asn 500 505 510

Ala Pro Vai Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser 515 520 525

Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin 530 535 540

Vai Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Vai Vai Gly 545 550 555 560

Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Vai Pro Gly Asn His 565 570 575

Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro 580 585 590

Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg 595 600 605

Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly 610 615 620

Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 625 630 635 640

Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 645 650 655

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 660 665 670

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 675 680 685

Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 690 695

<210> 25 <211> 3548 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (179) .. (2257) <223> <400> 25 gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagccg 60 cggggacagg gcgaagcggc ctgegcccac ggagcgcacg tctctgttct caacgcagca 120 ccacccttgc ccccctcggc tgcccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcacg 118 atg ccc teg gee ace age cac age gga age ggc age aaa teg teg gga 226

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Sec Ser Gly 15 10 15 ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag geg geg gee ggg gca 274

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 get geg ccg get tet cag cat ccg gea acc ggc ace ggc gee gtc cag 322

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45 acc gag gee atg aag cag att etc ggc gta ate gac aag aaa ett egg 370

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60 aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat tac cag gaa ega atg 418

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80 aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg gat gee gta tet aag 466

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95 tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aag gaa tta cag agg 514

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125 gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca gaa cag aag ege tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190 cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gee 802

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Léu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Girt 225 230 235 240 tea aac tae ttt gat age act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin. Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag geg get tea geg ecc aca gtg gag gac cag gta get gaa 994

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270 get gaa cct gag cca geg gaa gaa tae aca gag caa agt gag gtt gaa 1042

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300 agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aea gtt gaa aca gtt gag 1138

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320 gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get geg tee cct tea gtc 1186

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335 cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag tea gat cca ett gtg 1234

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380 cct gee att gta tee gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat 1378

Pro Ala lie val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400 atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet gaa tet aga ett gee 1426

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415 caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gee aca cag gtt cct ttg 1474

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430 gtt tea tee aca agt gag ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tae cag 1522

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag act aca gca tee tea 1618 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480 tcc ctt cct get get tet cag cct caa gtg ttc cag get ggg aca agt 1666

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495 aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat gca get cca ttc cag Π14

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510 tec atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cea gtc cct cct get aat Π62

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525 gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac cag gee act tat aac 1810

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540 cag agt ttt tec agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ctt caa 1858

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560 caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac cat gga tec cag gac 1906

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605 tet ega gga ggg tet cgt ggt gee aga ggc ttg atg aat gga tac agg 2050

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670 aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gee cca ega ggt aat 2242

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc ttctgttctg geettggaag 2297 lie Leu Trp Trp 690 aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata catttatctt ttccagactt 2357 gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt catcttgaat ccaaatttta 2417 atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag aacattttct ctgcctcaga 2477 aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt tcaggtctta aaacctgcta aatgttttta 2537 ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa cgagcttgaa catttatata 2597 aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat atttaggctg agaagccctt 2657 caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat ttagaattga cataactaat 2717 ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa ataccaacat atttctgatg 2777 tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat taaaatttag aatgacaagc 2837 ttaagaggct ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa aataatttct tacatgggca 2897 gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg taatctgatg ttctaaatgg 2957 ttctcttatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca gtttttggct ggccatgaca 3017 tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt aatttgaatg ctagtggcaa 3077 ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg gtcatctggg aaaaatactg 3137 aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc ttctatccca ccttgtagca 3197 tattctatga aagttgagtt aaatgatagc taaaatatct gtttcaacag catgtaaaaa 3257 gttattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg ttctgtagtt tctttttaac 3317 agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgcttttt attaattttg atagtatgat 3377 gtcacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga atgtgagctc catgagagca 3437 ggtaccttgt ttgtcttcac tgctgtatct attcccaacg cctcatgaca gtgcctggca 3497 catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa aaaaaaaaaa a 3548

<210> 26 <211> 692 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 26

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Sly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Sly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Qlu val Thr Asn Asn Leu Glu Fhe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320 val val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala He Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 800 805

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg €10 815 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 lie Leu Trp Trp 690

<210> 27 <211> 3508 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) .. (2217) <223> <400> 27

cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc SO tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg ccc teg gee ace age cac age gga age ggc 171

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 geg geg gee ggg gca get geg ccg get tet cag cat ccg gca acc ggc 2S7

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 acc ggc gee gtc cag acc gag gee atg aag cag att etc ggc gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie 45 50 55 gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat 363

Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp 60 65 70 75 tac cag gaa cga atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg 411

Tyr Gin GLu Arg Met Asn Lys GLy Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu 80 35 90 gat gcc gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 180 185 tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea geg ccc aca gtg gag 939

Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tee cct tea gtc cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag 1179

Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin. 350 355 360 atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu 365 370 375 aat cag aeg ett gat cct gee att gta tee gca cag cct atg aac cct 1323

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 300 305 390 395 ace cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet 1371

Thr Gin Asn Met Asp Met Pro GLn Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser 400 405 410 gaa tet aga ett gee caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gee 1419

Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro val Gin Pro Glu Ala 415 420 425 aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag ggg tat aca gca tet 1467

Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys 445 450 455 gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag 1563 GLu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aca gca tee tea tee ett cct get get tet cag cct caa gtg ttc 1611

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn 495 500 505 gca get cca ttc cag tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca 1707

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met GLn Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro 510 515 520 gtc cct cct get aat gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac 1755

Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr 525 530 535 cag gee act tat aac cag agt ttt tee agt cag cct cac caa gtg gaa 1803 GLn Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu 540 545 550 555 caa aca gag ett caa caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac 1851 GLn Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr 560 565 570 cat gga tcc cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899

Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly 670 675 680 gee cca ega ggt aat ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc 2237

Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 685 690 ttctgttctg geettggaag aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata 2297 catttatctt ttccagactt gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt 2357 catcttgaat ccaaatttta atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag 2417 aacattttct ctgcctcaga aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt teaggtetta 2477 aaacctgcta aatgttttta ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa 2537 egagettgaa catttatata aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat 2597 atttaggctg agaagccctt caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat 2657 ttagaattga cataactaat ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa 2717 ataccaacat atttctgatg tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat 2777 taaaatttag aatgacaagc ttaagagget ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa 2837 aataatttct tacatgggca gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg 2897 taatctgatg ttctaaatgg ttetettatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca 2957 gtttttggct ggccatgaca tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt 3017 aatttgaatg ctagtggcaa ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg 3077 gtcatctggg aaaaatactg aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc 3137 ttctatccca ccttgtagca tattctatga aagttgagtt aaatgatagc taaaatatct 3197 gtttcaacag catçrtaaaaa çrbtattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg 3257 ttctcftagtt tctttttaac agtttaggta caaagcftctg ttttcattct ggtgcttttt 3317 attaattttg atagtatgat gtcacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga 3377 atgtgagctc catgagagca ggtaccttgt ttgtcttcac tgctgtatct attcccaacg 3437 cctcatgaca gtgcctggca catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa 3497 aaaaaaaaaa a 3508

<210> 28 <211> 692 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 28

Met Fro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

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Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro He Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Vai Asp 130 135 190

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Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Vai Glu Arg Vai Pbe Gin 225 230 235 240

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Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ser Asp Pro Leu Vai 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala Ile vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Gin Vai His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin ser Aan Gin val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

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Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Aen Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr See Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

<210> 29 <211> 2109 <212> ADN <213> Gallus gallus <22 0>

<221> CDS <222> (1) . . (2109) <223> <400> 29 atg ecc tog got acc aac ggc acc atg gog ago ago ago ggg aag gcg 48

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Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30 cag gcg teg ggc ggc age ate acc teg gtt cag acc gag gcc atg aag 144

Gin Ala Ser Gly Gly Ser lie Thr Ser Val Gin Thr Glu Ala Met Lys 35 40 45 oag ate ttg gga gtg ate gac aaa aag etc ego aac etc gag aag aaa 192

Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60 aag age aaa ett gac gat tac cag gaa ega atg aac aag ggg gaa cgt 240

Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 eta aat caa gat caa ctg gat gca gtg tea aaa tac cag gaa gtg aca 288

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr 85 90 95 aat aac ctg gaa ttc get aaa gaa ctg cag agg age ttt atg gca ctg 336

Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110 age caa gat ate cag aaa aca ata aaa aag aeg get ege agg gag oag 384

Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125 ctg atg aga gaa gag get gag cag aag cgt tta aag act gtg eta gag 432

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu 130 135 140 ctg cag ttc att ttg gac aag ttg ggt gac gat gaa gtg ege agt gac 480

Leu Gin Phe lie Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp 145 150 155 160 ttg aaa caa gga tea aat gga gta ccg gta ctg aca gag gag gaa ctg 528

Leu Lys Gin Gly Ser Asn Gly Val Pro Val Leu Thr Glu Glu Glu Leu 165 170 175 aca atg ctg gat gaa ttt tac aag eta gtt tac cct gaa agg gac atg 576

Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met 180 185 190 aac atg agg ttg aat gag cag tat gag caa gca tet gtt cac ctg tgg 624

Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser Val His Leu Trp 195 200 205 gac tta ctg gaa ggg aag gaa aaa ccc gtt tgt gga aca acc tat aaa 672

Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 215 220 gcc ctg aag gag gtt gtt gaa cgt att ett caa act agt tac ttt gat 720

Ala Leu Lys Glu Val Val Glu Arg lie Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240 age acc cat aac cat cag aac ggg tta tgt gag gaa gaa gag gca gca 768

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255 ccc aca cct gca gta gaa gac act gta gca gaa get gag cct gat cca 816

Pro Thr Pro Ala Val Glu Asp Thr Val Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270 gca gaa gaa ttt act gaa cct act gaa gtt gaa teg act gag tat gta 864

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val 275 280 285 aac aga caa ttc atg gca gag act cag ttc age agt agt gag aag gaa 912

Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 290 295 300 cag gta gat gag tgg aca gtt gaa aeg gtt gag gtt gta aat tea ctg 960

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 305 310 315 320 cag caa caa aca caa get aca tet cct cca gtt cct gaa cct cat aca 1008

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr 325 330 335 etc act act gtg get caa gca gat cct ett gtt aga aga cag aga gta 1056

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 340 345 350 cag gac ett atg gcc cag atg cag ggt cca tat aac ttc atg cag gac 1104

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365 tet atg ctg gag ttt gag aac cag aca ett gat cct gcc att gta tet 1152

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 370 375 380 gca cag ccc atg aat cca gca cag aat ttg gac atg ccg caa atg gtc 1200

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Leu Asp Met Pro Gin Met Val 385 390 395 400 tgc cat cca gtt cat act gag tea aga ett gcc cag cct aat caa gtt 1248

Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 405 410 415 cct gtg caa cca gaa get aeg cag gtt ccc ttg gtt tea tet aca agt 1296

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 425 430 gag gga tat aca gcc tcc cag ccc atg tat cag cct tct cat acc aca 1344

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser His Thr Thr 435 440 445 gag caa egg cca cag aag gaa tcc att gac cag att cag get tea atg 1392

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Ser lie Asp Gin lie Gin Ala Ser Met 450 455 460 tea ctg aat gca gac cag acc ccg tea tea tea tea ett ccc act gca 1440

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480

tcc cag ccg caa gtt ttc caa get gga tct age aaa cct ttg cat age 14BB

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser 4B5 490 495 age gga ate aat gtt aat gca get cca ttc caa tcc atg caa aca gta 1536

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 500 505 510 ttc aae atg aat gca cct gtt cct cct gtt aat gag cca gaa gcc ett 1584

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525 aag caa caa aat cag tac cag gcc agt tac aae cag agt ttc tcc aat 1632

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540 cag cca cac caa gta gaa caa tea gat ett cag caa gaa cag etc cag 1680

Gin Pro His Gin Val Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560 aca gtg gtt ggt act tac cat ggt tct ccg gac cag acc cat caa gtg 1728

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Val 565 570 575 gca gga aae cac cag caa cct ccc cag cag aat act gga ttt cca ege 1776

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590 aae agt cag cct tat tac aae agt egg gga gtg tct cgt ggt gga tea 1824

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605 cgt ggg act cgt gga ttg atg aat ggt tac agg gga cct gca aat gga 1872

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620 ttt aga gga gga tat gat ggc tac cgt cct tea ttt tcc aae act ccg 1920

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 630 635 640 aae agt ggt tac aeg cag ccc caa ttt aat get cct ega gat tat tea 1968

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655 aae tac cag egg gat gga tat cag cag aae ttc aaa cgt ggt tct gga 2016

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670 caa agt ggg cct egg gga get cct ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga 2064

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685 cca aae aga ggg atg cct caa atg aae get cag caa gtg aat taa 2109

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Val Asn 690 695 700 <210> 30 <211> 702

<212> PRT <213> Gallus gallus <400> 30

Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 15 10 15

Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30

Gin Ala Ser Gly Gly Ser lie Thr Ser Val Gin Thr Glu Ala Met Lys 35 40 45

Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60

Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr 85 90 95

Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110

Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu 130 135 140

Leu Gin Phe lie Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp 145 150 155 160

Leu Lys Gin Gly Ser Asn Gly Val Pro Val Leu Thr Glu Glu Glu Leu 165 170 175

Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met 180 185 190

Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser Vai His Leu Trp 195 200 205

Asp leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 215 220

Ala leu Lys Glu vai Vai Glu Arg lie leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255

Pro Thr Pro Ala Vai Glu Asp Thr Vai Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val 275 230 285

Asn. Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 290 295 300

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 305 310 315 320

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr 325 330 335

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 340 345 350

Gin. Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 370 375 380

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Leu Asp Met Pro Gin Met Val 385 390 395 400

Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 405 410 415

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 425 430

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser His Thr Thr 435 440 445

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Gin Ser lie Asp Gin lie Gin Ain Ser Met 450 455 460

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser 4B5 490 495

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 500 505 510

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540

Gin Pro His Gin Val Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Val 565 570 575

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 630 635 640

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin. Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Val Asn 690 695 700 <210> 31 <211> 20 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> T3 Iniciador <400> 31 aattaaccct cactaaaggg 20 <210> 32 <211> 19 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> T7 Iniciador <400> 32 taatacgact cactatagg 19 <210> 33 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 33 aaggtttgaa tggagtgc 18 <210> 34 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4Ο0> 34 tgctcctttt caccactg 18 <210> 35 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> GAPDH Iniciador <400> 35 gggctgcttt taactctg 18 <210> 36 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> GAPDH Iniciador <400> 36 ccaggaaatg agcttgac 18

<210> 37 <211> 63 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn 15 10 15

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin 20 25 30

Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin 35 40 45

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His Ser 50 55 60 <210> 38 <211> 22 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 38 aggtsharct gcagsagtcw gg 22 <210> 39 <211> 23 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 39 ctcgagttaa ttcacttgct gag 23

<210> 40 <211> 5 <212> PRT <213> Gallus gallus <4Ο0> 40

Ser Tyr Gin Met Asn 1 5

<210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 41

Ala. 11« Asn Lys Phe Gly Asn Ser Thr Gly His Gly Ala Ala Val Lys 15 10 15

Gly

<210> 42 <211> 19 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 42

His Ala Tyr Gly Tyr Cys Gly Ser Gly Thr Trp Cys Ala Ala Gly Glu 15 10 15 lie Asp Ala

<210> 43 <211> 128 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 43

Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gin Met Ser Arg Gly 15 10 15

Gly Leu Ser Leu Val Cys Lye Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gin Met Asn Trp He Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val 35 40 45

Ala Ala He Asn Lys Phe Gly Asn Ser Thr Gly His Gly Ala Ala Val 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Ser Arg Asp Asn Gly Gin Ser Thr Val Arg 65 70 75 80

Leu Gin Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala He Tyr Phe Cys 85 90 95

Thr Lys His Ala Tyr Gly Tyr Cys Gly Ser Gly Thr Trp Cys Ala Ala 100 105 110

Gly Glu lie Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val lie Val Ser Ser 115 120 125

<210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 44

Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly 1 5

<210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 45

Asn Asn Lys Arg Pro Ser Asp 1 5

<210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 46

Ser Gly Asp Ser Thr Asp Thr Ala Vai Phe 15 10

<210> 47 <211> 108 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 47

Gin Ala Ala Ser Thr Gin Pro Ser Ser Vai Ser Ala Asn Pro Gly Glu 15 10 15

Thr Val Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp 20 25 30

Phe Gin Gin Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Tyr 35 40 45

Asn Asn Lys Arg Pro Ser Asp lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys 50 55 60

Ser Gly Ser Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gin Ala Asp Asp 65 70 75 80

Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Ser Gly Asp Ser Thr Asp Thr Ala Val 85 90 95

Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105

<210> 48 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48

Asp Tyr Asn Met Asp 1 5

<210> 49 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 49

Asp lie Asn Pro Asn Tyr Asp Ser Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 50 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 50

Ser Arg Ser Tyr Asp Tyr Glu Gly Phe Ala Tyr 15 10

<210> 51 <211> 148 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 51

Met Glu Trp Ser Gly Val Phe lie Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 15 10 15

Val Leu Ser Glu Val Gin Leu His Gin Phe Gly Ala Glu Leu Val Lys 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Thr Asp Tyr Asn Met Asp Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu 50 55 60

Glu Trp lie Gly Asp lie Asn Pro Asn Tyr Asp Ser Thr Ser Tyr Asn 65 70 75 80

Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala val 100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Arg Ser Tyr Asp Tyr Glu Gly Phe Ala Tyr 115 120 125

Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro 130 135 140

Pro Ser val Tyr 145

<210> 52 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 52

Leu Ser lie Val Asn Arg Tyr His Tyr Met Ser 15 10 <210> 53

<211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 53

Glu Ala Ser lie Thr Lys 1 5

<210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 54

Gin His Asn Arg Gly Ser Phe Leu Pro 1 5

<210> 55 <211> 105 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 55

Gly Leu Phe Cys Ser Val Glu Arg Cys His Tyr Gin Leu Gin Ser Ser 1 5 10 15

Gin Asn Leu Leu Ser lie Val Asn Arg Tyr His Tyr Met Ser Gly Asn 20 25 30

Pro Pro Lys Leu Leu Val Tyr Pro Ala Leu Leu lie Tyr Glu Ala Ser 35 40 45 lie Thr Lys Ser Cys Val Pro Asp Arg Phe Thr Arg Ser Gly Ser Gly 50 55 60

Thr Asn Phe Thr Leu Thr He Asn Phe Val His Ala Asp Asp Leu He 65 70 75 80

Phe Tyr Tyr Cys Gin His Asn Arg Gly Ser Phe Leu Pro Ser Ser Ser 85 90 95

Val Gin Val Pro Arg Arg Arg Ser Asn 100 105

<210> 56 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 56

Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5

<210> 57 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 57

Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys 15 10 15

Gly

<210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 58

Ala Arg Ala Asn Trp Ala Phe Asp Tyr 1 5

<210> 59 <211> 109 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 59

Pro Arg Ala Ser Leu Gly Val Ser Glu Thr Leu Leu Cys Thr Ser Gly 15 10 15

Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly 20 25 30

Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe lie Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr 35 40 45

Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg 50 55 60

Asp Asn Ser Gin Ser lie Leu Tyr Leu Gin Met Asn Thr Leu Arg Ala 65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Asn Trp Ala Phe Asp 85 90 95

Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Lys 100 105

<210> 60 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 60

Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Tyr Leu His 15 10

<210> 61 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 61

Tyr Ala Ser Gin Ser lie Ser 1 5

<210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 62

Gin Gin Ser Asn Ser Trp Pro Tyr Thr 1 5

<210> 63 <211> 94 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 63

Ser Gly Asp Arg Vai Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Ile Ser 15 10 15

Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu 20 25 30

Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Ile Ser Gly lie Pro Ser Arg Plxe 35 40 45

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Vai 50 55 60

Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn Ser Trp €5 70 75 80

Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gin 85 90 <210> 64 <211> 15 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 64 agtcacgacg ttgta 15 <210> 65 <211> 17 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 65 caggaaacag ctatgac 17

<210> 66 <211> 240 <212> ADN <213> Gallus gallus <400> 66 accatgagcc cactcgtctc ctccctcctg ctcctggccg ccctgccagg tgagggcgct 60 gtggggctct atggggctct atggggtctc agcggggctc tgcgggctca atgggggcca 120 aagggggggt ctgcgggctc tatggggggg tcaacggggg gtctcacggg gggccggctc 180 cgcgaggcog tgtggcggcg geteegtcag cgctttctgt ecttccccac agggcgcgcc 240

<210> 67 <211> 1807 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 67 ctttctgggg caggccaggc ctgaccttgg ctttggggca gggagggggc taaggtgagg 60 caggtggcgc cagccaggtg cacacccaat gcccatgagc ccagacactg gacgctgaac 120 ctcgcggaca gttaagaacc caggggcctc tgcgccctgg gcccagctct gtcccacacc 180 gcggtcacat ggcaccacct ctcttgcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct 240 ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga 300 ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca 360 caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tggtgaccgt 420 gcectccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa 480 caccaaggtg gacaagaaag ttggtgagag gccagcacag ggagggaggg tgtctgctgg 540 aagccaggct cagcgctcct gcctggacgc atcccggcta tgcagcccca gtccagggca 600 gcaaggcagg ccccgtctgc ctcttcaccc ggaggcctct gcccgcccca ctcatgctca 660 gggagagggt cttctggctt tttccccagg ctctgggcag gcacaggcta ggtgccccta 720 acccaggccc tgcacacaaa ggggcaggtg ctgggctcag acctgccaag agccatatcc 780 gggaggaccc tgcccctgac ctaagcccac cccaaaggcc aaactctcca ctccctcagc 840 tcggacacct tctctcctcc eagattccag taactcccaa tcttctctct gcagagccca 900 aatettgtga eaaaactcac aeatgcceac cgtgcecagg taagecagcc caggcctcgc 960 cctccagctc aaggcgggac aggtgcccta gagtagcctg catccaggga caggccccag 1020 ccgggtgctg acacgtccac ctcoatctct tcctcagcac ctgaactcct ggggggaccg 1080 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 1140 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 1200 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 1260 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1320 tacaagtgca aggtctccaa eaaagecetc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1380 gccaaaggtg ggacccgtgg ggtgcgaggg ccacatggac agaggccggc tcggcccacc 1440 ctctgocctg agagtgaccg ctgtaccaac ctctgtccct acagggcagc cccgagaacc 1500 acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac 1560 ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca 1620 gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct 1680 ctacagcaag ctcaccgtgg acaagageag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc 1740 cgtgatgoat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg 1800 taaatga 1807

<210> 68 <211> 567 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 68 cagaatggct gcaaagagct ccaacaaaac aatttagaac tttattaagg aataggggga 60 agctaggaag aaactcaaaa catcaagatt ttaaatacgc ttcttggtct ccttgctata 120 attatctggg ataagcatgc tgttttctgt ctgtccataa oatgccctgt gattatccgc 180 aaacaacaca cccaagggca gaactttgtt acttaaacac catcatgttt gcttatttcc 240 tcaggaactg tggctgcacc atctgtcttc atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa 300 tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg aataacttct atcccagaga ggccaaagta 360 cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag 420 gacagcaagg acageaccta cagcctcagc agcaecetga agctgagcaa agcagactac 480 gagaaacaca aagtctacgc ctgegaagtc acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca 540 aagagcttca acaggggaga gtgttag 567

<210> 69 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu 15 10

<210> 70 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp 15 10

<210> 71 <211> 384 <212> ADN <213> Gallus gallus <400> 71 gcggtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagatgt ccagaggagg gctcagcctc 60 gtctgcaagg cctccgggtt cgacttcagc agctatcaga tgaactggat ccgacaggca 120 cccggeaaag ggctggagtt cgtcgctgct attaacaaat ttgggaatag taegggtcat 180 ggggcggcag tgaagggceg tgtcaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240 ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accgccatct acttctgcac aaaacatgcc 300 tacggttatt Cftggtagtgg tacttggtcft gctgctgcftg agatcgacgc atggggccac 360 gggaccgaag tcatcgtctc ctcc 384

<210> 72 <211> 324 <212> ADN <213> Gallus gallus <400> 72 caggcagcta gcactcagcc gtcctcggtg tcagcgaacc cgggagagac cgtcgagatc 60 acctgctccg ggggtggcag ctatagctat ggctggttcc agcagaagtc tcctggcagt 120

gcccctgtca ctgtgatcta ttacaacaac aagagaccct cggaoatccc ttcacgattc ISO tccggttcca aatccggctc cacgggcaca ttaaccatca ctggggtcca agccgacgac 240 gaggctgtct attactgtgg gagtggagac agcactgata ctgctgtatt gggggccggg 300 acaaocctga ccgtcotagg ccag 324

<210> 73 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 73

Asn Tyr Leu lie Val 1 5

<210> 74 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 74

Val lie Ser Pro Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 75 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 75

Glu Lys lie Tyr Asp Asp Tyr Tyr Glu Gly Tyr 15 10

<210> 76 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 76

Ala Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys 15 10 15

Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Leu lie Val Trp lie Lys Gin 20 25 30

Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Val lie Ser Pro Gly Ser 35 40 45

Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala lie Leu Thr 50 55 00

Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr

65 70 75 SO

Ser Asp Glu Phe Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Lys lie Tyr Asp 85 90 95

Asp Tyr Tyr Glu Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Pro Arg His 100 105 110

Leu Leu Ala Ser Leu Ser 115

<210> 77 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 77

Thr lie Ser Cys Ser Ala Ser Leu Gly He Gly Asn Tyr Leu Asn 15 10 15

<210> 78 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 78

Thr Ser Asn Leu His Ser Gly 1 5

<210> 79 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 79

His Tyr Ser Lys Leu Pro Leu Thr Phe 1 5

<210> 80 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 80

Gly Thr Arg Cys Asp lie Arg Leu Thr Gin Thr Thr Ser Ser Leu Ser 15 10 15

Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Ala Ser Leu Gly 20 25 30 lie Gly Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Val 35 40 45

Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser 65 70 75 80

Asn Leu Glu Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His Tyr Ser 85 90 95

Lys Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Pro Ser 100 105

<210> 81 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 81

Asp Tyr Asn Met Tyr 1 5

<210> 82 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 82

Tyr lie Tyr Pro Gly Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 83 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 83

Asp Tyr Asp Asp Gly Gly Tyr Ala Met Asp Tyr 15 10

<210> 84 <211> 113 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 84

Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys 15 10 15

Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Met Tyr Trp Val Lys Gin 20 25 30

Tbr Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Tyr lie Tyr Pro Gly Asn 35 40 45

Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 50 55 60

Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gin lie Ser Ser Leu Thr 65 70 75 80

Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Tyr Asp Asp Gly 85 90 95

Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 100 105 110

Ser

<210> 85 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 85

Ser Val Gly Glu Thr Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn 15 10 15

<210> 86 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 86

Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp 1 5

<210> 87 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 87

Gin His Phe Trp Asn lie Pro Trp Thr 1 5

<210> 88 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 88

Leu Leu Leu Trp Leu Thr Gly Ala Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin 15 10 15

Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr lie Thr 20 25 30

Cys Arg Ala Ser Gly Asn He His Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gin Gin 35 40 45

Lys Gin Gly Lys Ser Pro Gin Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu 50 55 €0

Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gin 65 70 75 80

Tyr Ser Leu Lys lie Asn Arg Leu Gin Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr 85 90 95

Tyr Cys Gin His Phe Trp Asn lie Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr 100 105 110

Lys Leu Asn Ser Arg 115 <210> 89

<211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 89

Asp His Ser lie His 1 5

<210> 90 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 90

Tyr lie Ser Pro Gly Asn Gly Asn lie Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 91 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 91

Ser Leu Gly Arg Gly Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr 15 10

<210> 92 <211> 114 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 92

Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Sec Cys Lye 15 10 15

Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Ser lie His Trp Val Gin Gin 20 25 30

Lys Pro Glu Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Tyr lie Ser Pro Gly Asn 35 40 45

Gly Asn lie Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 50 55 60

Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gin Leu Asn Ser Leu Thr 65 70 75 80

Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Lys Arg Ser Leu Gly Arg Gly 85 90 95

Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 100 105 110

Ser Ser

<210> 93 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 93

Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 15 10 15

<210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 94

Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5

<210> 95 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 95

Met Gin His Arg Glu Tyr Pro Val Thr 1 5

<210> 96 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 96

Asp lie Val Leu Thr Gin Ala Ala Pro Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Ser Val Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gin Arg Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu lie Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg He 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin His 85 90 95

Arg Glu Tyr Pro Val Thr Phe Gly Ser Gly Pro Asn 100 105

<210> 97 <211> 354 <212> ADN <213> Mus musculus <4Ο0> 97 gcagctgagc tggtaaggcc tgggacttca gtgaaggtgt cctgcaaggc ttctggatac 60 gccttcacta attacttgat agtgtggata aagcagaggc ctggacaggg ccttgagtgg 120 attggggtga ttagtcctgg aagtggtggt actaactaca atgagaagtt caagggcaag 180 gcaatactga ctgcagacaa atcctccagc actgcctaca tgcagctcag cagcctgaca 240 tctgatgagt ttgcggtgta tttctgtgca agagagaaaa tctatgatga ttactacgag 300 gggtacttcg atgtctgggg cgcaggacca cgtcaccttc tagcatctct gtca 354

<210> 98 <211> 321 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 98 ggtaecagat gtgatatccg gttgacacag actacatcct ccctgtctgc ctctctggga 60 gacagagtca ccatcagttg cagtgcaagt ctgggcattg gcaattattt aaactggtat 120 cagcagaaac cagatggaac tgttaaactc ctgatctatt acacatcaaa tttacactca 180 ggagtcacat caaggttaag tggcagtggg tctgggacag attattctct caccatcagc 240 aacctggaac ctgaagatat tgccacttac tattgtcagc actatacrtaa gcttccgctc 300 acgttcggtg ctggaccaag a 321

<210> 99 <211> 339 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 99 ggggctgagc tggtgaggtc tggggcctca gtgaagatgt cctgcaaggc ttctggctac 60 tcatttaccg attacaatat gtattgggta aaacagacac ctggacaggg cctggaatgg 120 attggatata tttatcctgg aaatggtggt actaactaca atcagaagtt caagggcaag 180 gccacattga ctgcagacac atcctccagc acagcctaca tgcagatcag cagcctgaca 240 tctgaagact ctgcggtota tttctgtgca agagactatg atgacggggg gtatgotatg 300 gactactggg gccaagggac cacggtcacg gtctcctca 339

<210> 100 <211> 351 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 100 ctgctgctgt ggcttacagg tgccagatgt gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc 60 ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc atcacatgtc gagcaagtgg gaatattcac 120 aattatttaa catggtatca gcagaaacag ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat 180 gcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa 240 tattctctca agatcaatag actgcagcct gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat 300 ttttggaata ttccgtggac gttcggtgga ggcaccaagc tgaatagccg c 351

<210> 101 <211> 342 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 101 gacgctgagt tggtgaaacc cggggcttca gtgaagatat cgtgcaaggc ttctggctac 60 accttcactg accattctat tcactgggtg cagcagaagc ctgaacaggg cctggaatgg 120 attggatata tttctcccgg aaatggtaat attaagtaca atgagaaatt caagggcaag 180 gccacactga ctgcagacaa atcctccagc actgcctaca tgcagctcaa cagcctgaca 240 tctgaggatt ctgcagtgta tttctgtaaa agatctctgg gacgtggggg cccgtactac 300 tttgactact ggggccaagg gaccacggtc accgtctcct ca 342

<210> 102 <211> 323 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 102 atattgtgct gactcaggct gcaccctctc tacctgtcac tcctggagag tcagtatcca 60 tctcctgcag gtctagtaag agtctcctgc atagtaatgg caacacttac ttgtattggt 120 tcctgcagag gccaggccag tctcctcagc tcctgatata tcggatgtcc aaccttgcct 180 caggagtccc agacaggttc agtggcagtg ggtcaggaac tgctttcaca ctgagaatca 240 gtagagtgga ggctgaggat gtgggtgttt attactgtat gcaacatcga gaatatccgg 300 tcacgttcgg ttctggacca aac 323

<210> 103 <211> 444 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 103 atggaatgga gcggggtctt tatctttctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccagctgc atcagtttgg agctgagctg gtgaagcctg gggctteagt gaagatatcc 120 tgcaaggctt ctggckacac attcactgac tacaacatgg actgggtgaa gcagagccat 180 ggaaagagcc ttgagtggat tggagatatt aatcctaact atgatagtac tagctacaac 240 cagaagttca agggaaaggc cacattgact gtagacaagt cctccagcac agcctacatg 300 gagctccgca gcctgacatc tgaggaeaet geagtctatt aetgtgcaag atcgaggagc 360 tatgattacg aaggatttgc ttactgggge eaagggactc tggtcactgt etetgcagcc 420 aaaacaacac ccccatcagt. ctat 444

<210> 104 <211> 317 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 104 ggactcttct gctctgtgga gagatgtcao tatcaactgc aatocagtca gaatottttg 60 agtattgtaa accggtatca ctacatgtcc ggaaaccctc ctaaactcct ggtctatcct 120 gcactgotta tctatgaggc atccattaca aaatcctgtg tccctgatcg çrttcacacga 180 agtggatctg ggacaaactt cactotcacc attaattttg tgcatgctga tgacctaatt 240 ttttattact gtcaacacaa tcgtggcagc tttctcccct caagttcggt gcaggtacca 300 agaaggagat caaacaa 317

<210> 105 <211> 329 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 105 ggccgcgtgc tagcctgggg gtctctgaga ctctcctgtg cacttctggg ttcaccttca 60 ctgattacta catgagctgg gtccgccagc ctccaggaaa ggcacttgag tggttgggtt 120 ttattagaaa caaagctaat ggttacacaa cagagtacag tgcatctgtg aagggtcggt 180 tcacoatctc cagagataat tcocaaagoa toctctatct tcaaatgaac accctgacfag 240 ctgaggacag tgccacttat tactgtgcaa gggctaactg ggcctttgac tactggggcc 300 aagggaccac ggtcaccgtc tcctcaaaa 329

<210> 106 <211> 284 <212> ADN <213> Mus musculus <4 0 0> 106 tcaggagata gagtcagtct ttcctgcagg gccagtcaaa gtattagcaa ctacctacac 60 tggtatcaac aaaaatcaca tgagtctcca aggcttctca tcaagtatgc ttcccagtcc 120 atctctggga tcccctccag gttcagtggc agtggatcag ggacagattt cactctcagt 180 atcaacagtg tggagactga agattttgga atgtatttct gtcaacagag taacagctgg 240 ccgtacacgt tcggaggagg taccaagctg gagatcaaac agaa 284

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 5698396 A [0007] • US 20080075722 A [0007] • WO 2005100998 A [0007] • WO 02078524 A [0007] • WO 0243478 A [0060] • WO 02092812 A [0060] • JP 2007530068 A [0061] • WO 9846777 A [0061] • EP 239400 A [0067] • WO 9602576 A [0067] • WO 9951743 A [0067] • PH 4601 W [0183] • JP 2010023451 A [0183]

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Molecular Biology. AUSUBEL et al. Short Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, 1995 [0032] [0033] • Current Protocols in Molecular Biology. SAMBROOK et al. Molecular Cloning. 1989 [0034] • J. Immunol., 1979, vol. 123, 1548-1550 [0049] • Current Topics in Microbiology and Immunology, 1978, vol. 81, 1-7 [0049] • KOHLER. G. ; MILSTEIN, C. Eur. J. Immunol., 1976, vol. 6, 511-519 [0049] • MARGULIES. D. H. et al. Cell, 1976, vol. 8, 405-415 [0049] • SHULMAN, M. et al. Nature, 1978, vol. 276, 269-270 [0049] • GROTH, S. F. et al. J. Immunol. Methods, 1980, vol. 35, 1-21 [0049] • TROWBRIDGE. 1. S. J. Exp. Med., 1978, vol. 148, 313- 323 [0049] • GALFRE, G. et al. Nature, 1979, vol. 277, 131-133 [0049] • KOHLER, G. ; MILSTEIN, C. Methods Enzymol., 1981, vol. 73, 3-46 [0050] • CARL, A. K. BORREBAECK ; JAMES, W. LARRICK.

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Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 [0083] • G. -B. KIM et al. Protein Engineering Design and

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Um anticorpo anti-CAPRIN-1, ou um fragmento do mesmo que exibe atividade anti-tumoral, em que o anticorpo ou fragmento se liga a um polipéptido da sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 69 ou 70 contida na sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de aminoácidos tendo 80 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 69 ou 70.
2. O anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1, em que o polipéptido é um polipéptido parcial de CAPRIN-1, em que CAPRIN-1 é representada por qualquer das sequências de número par das SEQ ID NOS: 2 a 30.
3. O anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, que tem uma atividade citotóxica contra uma célula de cancro que expressa uma proteína de CAPRIN-1.
4. O anticorpo ou fragmento do mesmo acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, que compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 44, 45, e 46; (ii) uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 48, 49, e 50 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 52, 53, e 54; (iii) uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 56, 57, e 58 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 60, 61, e 62; (iv) uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 73, 74, e 75 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 77, 78, e 79; (v) uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 81, 82, e 83 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 85, 86, e 87, ou, (vi) uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 89, 90, e 91 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 93, 94, e 95 .
5. O anticorpo ou fragmento do mesmo acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que o anticorpo ou fragmento do mesmo é monoclonal.
6. O anticorpo ou fragmento do mesmo acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que o anticorpo ou fragmento do mesmo é policlonal.
7. O anticorpo ou fragmento do mesmo acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, que é um anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia simples, ou anticorpo bi-especifico.
8. Uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores como um ingrediente ativo.
9. A composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8, que compreende ainda um agente anti-tumoral.
10. Uma composição farmacêutica, que compreende a composição farmacêutica da reivindicação 8 e uma composição farmacêutica contendo um agente anti-tumoral.
11. O anticorpo ou fragmento do mesmo acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 ou reivindicação 9 ou a combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 10, para utilização como um medicamento.
12. O anticorpo ou fragmento do mesmo acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 ou reivindicação 9 ou a combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 10, para utilização num método para tratar e/ou prevenir um cancro. 13. 0 anticorpo, fragmento ou composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 12, em que o método compreende administrar a um indivíduo o anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 ou a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 e um agente anti-tumoral.
14. Um agente anti-tumoral para utilização num método para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, em que o método compreende administrar a um sujeito o agente anti-tumoral e um anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 ou a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8.
15. O anticorpo, fragmento, composição farmacêutica, combinação farmacêutica ou agente anti-tumoral para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14, em que o cancro é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia linfoma, cancro de pulmão, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico, ou cancro colorretal.