PL222175B1 - 4'-O-β-D-glukopiranozylo-β-[1'''-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-α,β-dihydrochalkon i sposób jego otrzymywania - Google Patents

Description

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 222175 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 405698 ^{(51) Int.Cl.}

C07H 15/203 (2006.01) C12P 19/44 (2006.01) C12R 1/65 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 21.10.2013

4'-O-e-D-glukopiranozylo-e-[1'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,e-dihydrochalkon i sposób jego otrzymywania (73) Uprawniony z patentu:

UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WE WROCŁAWIU, Wrocław, PL (43) Zgłoszenie ogłoszono:

09.06.2014 BUP 12/14 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono:

29.07.2016 WUP 07/16 (72) Twórca(y) wynalazku:

JAROSŁAW POPŁOŃSKI,

Szklarska Poręba, PL

EWA HUSZCZA, Wrocław, PL (74) Pełnomocnik:

rzecz. pat. Anna Olszewska

PL 222 175 B1

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest 4'-O^-D-glukopiranozylo^-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a^-dihydrochalkon, o wzorze 2 przedstawionym na rysunku oraz sposób jego otrzymywania.

Związek ten jest biologicznie czynny i może mieć zastosowanie w przemyśle spożywczym i farmaceutycznym.

Dotychczas w literaturze nie jest znany 4'-O^-D-glukopiranozylo^-[1”-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon ani sposób jego wytwarzania.

Istotą wynalazku jest 4'-O^-D-glukopiranozylo^-[1”’-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a^-dihydrochalkon.

Natomiast istotą sposobu otrzymywania tego związku jest to, że otrzymuje się go na drodze reakcji mikrobiologicznej transformacji substratu, którym jest 3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2',4'-trihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon. Grzyby z gatunku Absidia coerulea, namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, charakterystycznym dla grzybów, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C. Następnie do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi się proces, aż do całkowitego zużycia substratu. Po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikami organicznymi niemieszającymi się z wodą, oddziela frakcję organiczną, osusza bezwodnym siarczanem magnezu, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się za pomocą technik chromatograficznych.

Korzystnie jest, gdy proces namnażania drobnoustroju prowadzi się w temperaturze 30°C.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w żywych komórkach kultury Absidia coerulea, następuje reakcja glukozylacji substratu.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie, w łagodnych warunkach, 4'-O^-D-glukopiranozylo^-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a^-dihydrochalkonu, o wzorze 2, jako głównego produktu reakcji w kulturze Absidia coerulea z wydajnością 93%.

Wynalazek jest bliżej objaśniony w przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d: Do kolby o pojemności 300 cm³, w której znajduje się 100 cm³ sterylnej pożywki ₃ zawierającej 3 g glukozy i 1 g aminobaku na 1 dm wody destylowanej, wprowadza się grzyby Absidia coerulea. Po 4 dniach wzrostu drobnoustrojów w temperaturze 30°C i przy ciągłym wstrząsaniu, dodaje się 15 mg 3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2',4'-trihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon, o wzorze 1, rozpuszczonego w 1 cm³ metanolu. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 8 dób. Następnie, uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymuje się 24 mg surowego produktu, który oczyszcza się chromatograficznie, używając jako eluentu mieszaninę chloroform: metanol w stosunku objętościowym 9:1.

Po oczyszczeniu otrzymuje się 19,4 mg 4'-O^-D-glukopiranozylo^-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkonu, o wzorze 2, z wydajnością 93%.

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (300 MHz, aceton-cfe) δ: 1,11 (3H, s, H-3””), 1,15 (3H, s, H-2””), 1,59 (3H, s, H-4”), 1,72 (3H, s, H-5”), 3,15 (1H, m, H-1”d₂), 3,34 (1H, m, H-1”d1), 3,39 (1H, m, H-β), 3,39 (1H, m, H-4'”), 3,54 (1H, m, H-3'”), 3,55 (1H, m, H-2'”), 3,63 (1H, m, H-5'”), 3,64 (1H, m, H-6'''bd1), 3,68 (2H, m, H-a), 3,68 (1H, m, H-6'”bd2), 3,93 (1H, m, H-6'”ad2), 3,98 (1H, m, H-6”'ad1), 3,98 (3H, s, C6'-OCH3), 5,06 (1H, d, J = 7,2 Hz, H-1'”d2), 5,08 (1H, d, J = 7,2 Hz, H-1'”d1), 5,17 (1H, m, H-2”), 6,44 (1H, s, H-5'd2), 6,45 (1H, s, H-5'd1), 6,68 (2H, pd, J = 8,5 Hz, H-3, H-5), 7,10 (2H, pd, J = 8,5 Hz, H-2, H-6).

¹³C NMR (75 MHz, aceton^) δ: 17,93 (C-5”), 22,12 (C-1”), 25,87 (C-4”), 26,96 (C-3””), 30,05 (C-2””), 46,16 (C^d₂), 46,22 (C^dO, 51,96 (C-β), 56,23 (C6'-OCH₂), 62,82 (C-6'”), 71,58 (C-4”'), 72,57 (C-1””), 74,67 (C-2”'), 78,33 (C-3'”), 78,39 (C-5'”), 91,04 (C-5'd2), 91,08 (C-5'd1), 101,50 (C-1'''d1), 101,60 (C-1”'d2), 107,49 (C-1'd2), 107,57 (C-1'd1), 110,84 (C-3'), 115,23 (C-3, C-5), 124,01 (C-2”d2), 124,03 (C-2''d2), 130,87 (C-3”), 131,18 (C-2, C-6), 134,26 (C-1d2), 134,29 (C-1d1), 156,57 (C-4), 162,01 (C-6'), 162,04 (C-4'), 164,12 (C-2'), 206,74 (C=O).

PL 222 175 B1

Claims (3)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. 4'-O-3-D-glukopiranozylo-3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon, o wzorze 2.
2. 2. Sposób otrzymywania 4'-O-3-D-glukopiranozylo-3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2'-dihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkonu, znamienny tym, że związek ten otrzymuje sie na drodze reakcji mikrobiologicznej transformacji substratu, którym jest 3-[1”'-hydroksyizopropylo]-4,2',4'-trihydroksy-6'-metoksy-3'-prenylo-a,3-dihydrochalkon o wzorze 1, polegającej na tym, że grzyby z gatunku Absidia coerulea, namnaża się w płynnym podłożu mikrobiologicznym, charakterystycznym dla grzybów, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 12-40°C, po czym do narośniętej hodowli dodaje się substrat i dalej prowadzi się proces, aż do całkowitego zużycia substratu, po czym po zakończeniu transformacji roztwór transformacyjny ekstrahuje się rozpuszczalnikami organicznymi niemieszającymi się z wodą, oddziela frakcję organiczną, osusza bezwodnym siarczanem magnezu, odparowuje rozpuszczalnik i tak otrzymany surowy produkt oczyszcza się pomocą technik chromatograficznych.
3. 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że proces prowadzi się w temperaturze 30°C.

   Rysunek