PL168456B1 - Sposób wytwarzania cyklopeptydów PL PL PL - Google Patents

Abstract

1. Sposób wytwarzania cyklopeptydów o ogólnym wzorze I o dzialaniu agonistycznym w stosunku do ANP, - An-Bn-Cn-Dn-En-Fn-Gn-Hn-In-Kn- /I/ w którym kolejnosc czlonów Bn do Kn stanowi kolejnosc reszt aminokwasowych hANP Arg/27/-Phe/8/-Gly/9/-Gly/10/-Arg/11 /-Met/12/-Asp/13/-Arg/14/-Ile/15/- albo Bn oznacza reszte a -aminokwasu z jednym albo dwoma lancuchami bocznymi, której jeden lub obydwa lancuchy boczne zawiera/ja/jedna, dwie, trzy albo cztery zasadowe grupy, Cn oznacza reszte a -aminokwasu z jednym lub dwoma ewentualnie zawierajacymi -O-, -S-albo-C/O/O- alkilowymi lancuchami bocznymi, przy czym lancuchy boczne albo jeden z obydwu lancuchów bocznych zawiera/ja/ jeden albo dwa rodniki, przy czym kazdorazowy rodnik oznacza grupe cykloalkilowa o 3 do 10 atomach wegla, fenylowa, naftylowa, podstawiona (np. przez grupe hydroksylowa, fenylo/C1 -C4/-alkiloksylo- wa, /C 1-C4/-alkoksylowa, NO2), grupe fenylowa albo 5- lub 6-czlonowa aromatyczna grupe heterocykliczna, w której 2 czlony stanowia N, albo jeden czlon N, jeden czlon stanowi O albo S, albo jeden czlon stanowi N, S lub O, a pozostale czlony stanowia C, korzystnie tienyl, furyl, pirolil, imidazolil, pirazolil, pirydyl, pirazynyl, pirymidylyl, pirydazynyl, indolil, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolinyl, : Y oznacza grupe C 1 do C 14 alkilowa albo grupe arylo-/C1-C14/-alkilowa, a X1 oznacza /a/fenyl, /ß/ przez 1,2 lub 3 podstawniki (podstawniki: chlorowiec, trifluorometyl lub nitro) podstawiony fenyl, / ? /naftyl, /d/benzo/b/ tienyl, /?/pirydyl albo /?/pirazynyl oraz ich farmaceutycznie dopusz- czalnych soli, znamienny tym, ze buduje sie nastepujaca liniowa sekwencje peptydów An-Bn-Cn-Dn-En-Fn-Gn-Hn-In-Kn-OH z odpowiednich aminokwasów AnBnOH, CnOH, DnOH, EnOH, FnOH. GnOH, I nOH, InOH i KnOH, które kazdorazowo zawieraja grupe ochronna znana w chemii peptydów, metoda sprzegania i nastepnie cyklizuje sie liniowy peptyd i ewentualnie przeprowadza sie w odpowiednia sól. PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych cyklopeptydów zbudowanych z naturalnych i nienaturalnych reszt aminokwasowych. Peptydy są agonistami ANP.

Nowe cyklopeptydy stanowią sekwencje częściowe, sekwencje częściowo połączone ze sobą w sposób nieciągły, modyfikowane sekwencje częściowe i analogi tak zwanego przedsionkowego czynnika powodującego wydalanie sodu z moczem, ANF albo 'przedsionkowego peptydu powodującego wydalanie sodu z moczem, ANP.

ANP jest syntetyzowany głównie w komórkach mięśniowych przedsionków serca, tam również gromadzony jako prohormon i uwalniany wskutek mechanicznego bodźca podwyższonego napięcia ściany. Działa on rozluźniająco na naczynia, obniża ciśnienie krwi, działa diuretycznie i saluretycznie, podwyższa filtrację kłębuszkową, zmniejsza objętość plazmy i podwyższa hematokryt, obniża aktywność reninową plazmy i poziom aldosteronu w plazmie, działa spazmolitycznie wobec mięśni gładkich jelita oraz broncholitycznie. Działanie to jest przekazywane przez specyficzne receptory.

Stosowane w tym opisie i zastrzeżeniach skróty są zgodne z zaleceniami IUPAC-IUB Joint Commission of Biochemical Nomenclature /Eur.J.Biochem. 138, 9-37 (1984). Uzupełniono niektóre inne skróty. Poniżej podaje się niektóre z tych skrótów:

Aund	kwas ω-aminoundekanowy
Abut	kwas γ-imiinomasłowy
Aoc	kwa.s ω-aminooktariowy
Apen	kwas δ-aminopenlanowy
Aca	kwss ε-aminokapronowy
Aib	kwas c-ą^mnoiz^^c^naiskw^p'
Ala	alanńna
pAla	β-ałanina
Arg	argmma
Asp	kwas aspa-aginowy 0
Azt	‘1

168 456

Bum

BOC

Btu

Bzl

Bz

Cha

Cle

Clg

Ctr

Dap

DMF

DPPA

DCC

DIC

Gly

His

HOBt

Ile

Leu

Lys

Menoc

Me

Met

Mtr

Nal

Nle

Orn

Phe

Pmc

Ser

The

III-rz.butyloksymetyl

ΠI-rz.butyioksykcrbonsi

3-amino-1 -kcrboksymetylo-pirolidyn-2-on benzyl benzoli cykloheksyloalanina cykloleucyna

3- amino-1 -karboksymetylo-heksahydiOazepin-2-on cytralina kwas 23-L“diaminopropionowy

N,N-dimetyloformamid fosfoiydoazydek difenyllowy dίcykroheksyrokarbodiimid άϋζορΓορν^ϋΛ^ΐΐπύά giicyna hislydyna l-hydroksybenrotriarol izoleucyna leucyna iżzyna mentyooksykarbonyl meyyl meiiomna

4- meroksy-2,3,6-arimeSyrsSenyrosuironyl

CH-©CH©--CHNW-COOH oπliSyna fenyroaCanrna penCπmeSyrochromanosuirnsył seyyna

3cπmrno-7-karboksytletcahydroizochrnoirnl Thi

Tos

-CH₂-CH/NH₂/-C00H tozyl

Trt trytyl

Tyr tyrozyna

VA1 walina

Z brln<y!Qkkykacboίry!

Wyrażenie aminokwasy /jeśli w następującym tekście wyraźnie nie podano inaczej/ obejmuje naturalne i nienaturalne aminokwasy, zarówno formy D jak i L. Ponadto wyrażenie α aminokwasy obejmuje również α, α-dipodstawione aminokwasy.

Jeżeli aminokwas podany jest bez przedrostka /np. Orn/, to dana ta dotyczy formy L aminokwasu. Forma D jest wyraźnie podana /np. D-Orn/.

Wynalazek dotyczy cyklopeptydów o ogólnym wzorze I o działaniu agonistycznym wobec

ANP r-An-Bn-Cn-Dn-En-Fn-Gn-Hn-In-Kn-, /1/

168 456 w którym kolejność członów Bn i Kn oznacza kolejność reszt aminokwasowych hANP

-Arg/27/-Phe/8/-Gly/9/-Gly/ 10/-Arg/11 /

Met/12/-Asp/13/-Arg/14/-Ile/15/- albo ich równoważników pod względem budowy przestrzennej i funkcjonalnych, a An oznacza grupę spacer, która wiąże Bn z Kn i wpływa na budowę przestrzenną każdorazowej cząsteczki tak, że cyklopeptydy wiążą się z receptorami ANP, oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli.

Korzystne są cyklopeptydy, w których grupa spacer An w części najbliższej członu Bn zawiera grupę aromatyczną lub cykloalifatyczną.

Większość reszt aminokwasowych może występować w formie D lub L. Korzystne są cyklopeptydy, w których człony albo większość członów Bn, Cn, En, Fn, Gn, Hn, In i Kn występuje w formie L.

Grupa spacer An utrzymuje α-C-atomy członów Bn i Kn w odstępie 5 do 15 angstremów. (Konferencje z pomiaru 20-NMR w roztworze wodnym, wyniki jako warunki brzegowe dla symulacji dynamiki cząsteczki).

An nie wiąże się z receptorami ANP, wpływajednak na zdolność do wiązania z receptorami i w związku z tym na farmakologiczne działanie cyklopeptydów o ogólnym wzorze I.

Pod pojęciem równoważników pod względem budowy przestrzennej i równoważników funkcjonalnych reszt aminokwasowych ANP rozumie się reszty aminokwasowe względnie formy peptydowe (peptidtemplate) (zarówno formy L jak i formy D), które powodują, że cyklopeptydy o ogólnym wzorze I wiążą się z receptorami ANP. Dotychczasowe badania wykazały, że np. kolejność (Bn do Kn)-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile- wykazuje bardzo dobre wartości wiązania receptorów i działania farmakologiczne.

Poszczególne człony tej kolejności można zastąpić resztami o podobnej budowie przestrzennej i/lub funkcji, przy czym ma to większy lub mniejszy wpływ na zdolność cyklopeptydu do wiązania receptorów i stopień, a w niektórych przypadkach rodzaj działania farmakologicznego w obrębie znanego działania agonistycznego wobec ANP ulega zmianie. Wskutek zmiany poszczególnych członów można więc wpływać na rodzaj, stopień i czas trwania farmakologicznego działania. Gdy zmienia się więcej niż jeden człon Bn do Kn, wówczas według dotychczasowego stanu wiedzy zmiana właściwości farmakologicznych składa się ze zmian odpowiednich wariacji jednostkowych. Następujące zestawienie wykazuje na podstawie strukturalnie zbliżonych przykładów związek pomiędzy zdolnością do wiązania receptorów i kolejnością członów cyklopeptydów o ogólnym wzorze I.

(Opis testów podany jest dalej w tekście: Wiązanie do receptorów ANP/.

Związki oznaczone x/ wykazują wartości IC 50 w wymienionym teście wiązania receptorów o

ANP mniejszą niż 5.10' mola, inne związki wykazują mniejsze powinowactwo.

A1 a - p te e - A rr g - P le e -D- A1 a - G1 yA r g-Ile-Asp-Arg-Il t

D^X/

Ala-Phe-Arg-Phe-D-A la-Gly-Arg-Ile-A sp-D-Arg-Ile-ł

Ala—P hA-P—itrg-PSe-P-IlastAly-Urp—ASg—P SA-P—Aip-1 leZ-Dap—Arg—Cha—D—Ala—Gly—Arg—Ile—Asp—Arg—Ile-i ,x/ ,x/

168 456

H-Dap-Ar g-Cha-3-Ala-Gly-Arg-Ils-Asp-Arg-IleAla-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

Ala-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-D-Arg-Ile—

I - Ala-Phe-D-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-D-Arg-Ile-j ,x/ β Ala-Phe-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Il<

- Ala-Ar g-Cha-D-Ala-Gly-Arg-I le-Aso-Arg-Ile-j 'i

Jak już wyżej podano, wyrażenie aminokwasy obejmuje aminokwasy naturalne i nienaturalne. Korzystne są nienaturalne aminokwasy, o ile wyraźnie nie podano bliższych danych, w odniesieniu do ich ciężaru cząsteczkowego względnie długości łańcuchów bocznych, w rzędzie wielkości naturalnych aminokwasów.

Jako sole bierze się zwłaszcza pod uwagę sole z fizjologicznie dopuszczalnymi kwasami nieorganicznymi lub organicznymi, takimi jak np. HCl, HBr, H2SO4, H3PO4, kwas maleinowy, kwas fumarowy, kwas cytrynowy, kwas winowy, kwas octowy.

Centra chiralności w nowych peptydach mogą posiadać każdorazowo konfigurację R, S albo R, S.

Człony Bn, Fn i In odpowiadają Arg /27/, Arg /11/względnie Arg /14/ ANP albo ich równoważnikom pod względem budowy przestrzennej i równoważnikom funkcjonalnym. Bn, Fn i In mogą niezależnie od siebie stanowić reszty α-aminokwasowe o dwóch zasadowych łańcuchach bocznych albo korzystnie o jednym zasadowym łańcuchu bocznym. Pod pojęciem zasadowego łańcucha bocznego rozumie się tu korzystnie alkilowy lub cykloalkilowy łańcuch boczny zawierający 1 do 4 /korzystnie 1 lub 2/ grup zasadowych. Odpowiednimi grupami zasadowymi są np. -NH-, =NH, -ŃH₂, -HN-C/NH/-NH₂, -C/NH/-NH₂. Korzystnie co najmniej jedna z grup zasadowych każdorazowego łańcucha bocznego jest dwukończastą grupą zasadową. Ponadto korzystne są łańcuchy boczne, w których pierwsza grupa zasadowa jest związana z δ-atomem węgla α-aminokwasu albo z atomem węgla, który jest jeszcze bardziej oddalony od głównego łańcucha peptydu. Korzystne są alkilowe łańcuchyTłoczne o 1-6, zwłaszcza 3 lub 4 atomach węgla i cykloalkilowe łańcuchy boczne -/CH₂/_X- (CA) -/CH₂/_y-, w których x i y niezależnie od siebie oznaczają 0, 1 lub 2, a (CA) oznacza cykloalkil o 5 lub 6 atomach węgla. Korzystnie grupa zasadowa znajduje się na końcu łańcucha bocznego.

Człon Cn odpowiada, jak wyżej podano, Phe /8/ ANP albo jego równoważnikowi strukturalnemu i funkcjonalnemu. Cn może być resztą α-aminokwasu o dwóch lipofilowych łańcuchach bocznych albo korzystnie o jednym lipofilowym łańcuchu bocznym. Pod pojęciem lipofilowego łańcucha bocznego rozumie się na tej pozycji alkilowy łańcuch boczny o 1 do 7 atomach C (korzystnie 1 do 4 atomach C, zwłaszcza o 1 atomie C). Ten alkilowy łańcuch boczny może zawierać jedną lub dwie grupy oksy /-O-/, tio /-S-/ albo grupy -C/O/O-. Ten alkilowy łańcuch boczny zawiera jedną lub dwie reszty. Resztv te niezależnie od siebie sa resztami cvk1oalifatyczy «· j j cu fa„t~ ~ zl i ~ /U o-,-, r o z 4 ~ ~ -,,1i1^11 g ~ , ~ _Λ p .i O ujumui» «urnaiyv£uyuu. ANk^Ld ν^Μυωιιαψυζ,πα giupaujMUaiMiuwa; ζ,αwicia d do 10, korzystnie 4 do 7, atomów węgla. Resztą aromatyczną jest korzystnie grupa fenylowa, naftylowa, podstawiona/np. przez NO2, hydroksy, fenylo/Ci-4/ alkiloksy lub Ci -4-alkoksy/ grupa fenylowa albo 5- lub 6-członowa, ewentualnie też skondensowana z pierścieniem benzenowym, aromatyczna grupa heterocykliczna, w której 2 człony stanowią N, albo jeden człon stanowi N i jeden człon stanowi O lub S, albo jeden człon stanowi N, S lub O, a pozostałe człony stanowią C, korzystnie tienyl, furyl, pirolil, imidazolil, pirazolil, pirydyl, pirazynyl, pirymidynyl, pirydazynyl, indolil, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolinyl.

Człony Dn i En odpowiadają, jak podano, Gly /9/ względnie Gly /10/ ANP albo ich równoważnikom przestrzennie strukturalnym i funkcjonalnym.

Dn i En niezależnie od siebie mogą oznaczać Gly albo resztę α-aminokwasu, który odwzorowuje strukturę przestrzenną naturalnego aminokwasu /Gly/, albo Dn i En mogą razem oznaczać resztę ω-aminokwasu -NH/CH 2/2-11-CO- albo formę peptydową. Na pozycjach Dn i En korzystnie nadają się reszty aminokwasowe, które według statystycznych analiz Chou i Fasman /Biophysical Journal, tom 26, 1979, C67-C8C/ znajduje się często w β-turn-konformacjach. Podkreślić należy np. aminokwasy, które występują z podwyższoną częstotliwością w pozycjach i+1 i i+2, zwłaszcza takie o częstotliwości od 0,06 (tabela 1 wymienionej publikacji).

Jako odpowiednie formy peptydowe należy podkreślić takie, które mają β-turn-imitującą konformację.

Człony Gn i Kn odpowiadają, jak wyżej wspomniano, Met /12/ względnie Ile /15/ ANP albo ich przestrzennie strukturalnym i funkcjonalnym równoważnikom. Gn i Kn niezależnie od siebie mogą stanowić reszty α-aminokwasowe o dwóch lipofilowych łańcuchach bocznych albo korzystnie jednym lipofilowym łańcuchu bocznym. Pod pojęciem lipofilowego łańcucha bocznego rozumie się na tych pozycjach korzystnie alkilowy łańcuch boczny o 1 do 10 atomach C, korzystnie 1 do 6 atomach C, zwłaszcza o co najmniej C atomach C. Ten alkilowy łańcuch boczny może dodatkowo zawierać 1 lub 2 grupy oksy /-O-/ albo tio /-S-/ (jak na przykład w metioninie). Ten łańcuch boczny może też zawierać 1 do 2 grup alkilowych.

Człon Hn odpowiada, jak wyżej wspomniano, Asp /13/ ANP albo jego równoważnikom przestrzennie strukturalnym i funkcjonalnym. Człon ten działaj ako grupa przestrzenna. Hn może stanowić resztę a-aminokwasu, mianowicie Gly, albo resztę, która w łańcuchu bocznym nie zawiera grupy funkcyjnej albo -COOH i/lub -CONH2. Korzystnie łańcuch boczny stanowi alkilowy łańcuch boczny o 1 do 6 (korzystnie 1-C) atomach węgla, który może zawierać również grupę fenylową i/lub grupę HOOC/CH2/1-4 albo H2N-CO/CH2Ą-4-.

An stanowi, jak wyżej opisano, grupę spacer. Grupa ta może stanowić

a) grupę -A1-A2-A3b) grupę -A4-A5c) resztę aminokwasową o wzorze III

-NlL/CHT/m-CH/Ry-CO- /III/

A1 może stanowić Gly albo resztę α-aminokwasową o dwóch łańcuchach bocznych albo korzystnie jednym łańcuchu bocznym. Te łańcuchy boczne nie zawierają żadnych grup funkcyjnych. Korzystnie takim łańcuchem bocznym jest rozgałęziony lub nierozgałęziony alkilowy łańcuch boczny o 1-6 atomach węgla.

A2 oznacza wiązanie kowalencyjne albo resztę ω-aminokwasową o wzorze II -NH-/CH2/--CO- /II w którym n oznacza liczbę całkowitą 1 do 11 /korzystnie 1 do 6/

A3 może stanowić resztę α-aminokwasową o dwóch lipofilowych łańcuchach bocznych lub korzystnie jednym lipofilowym łańcuchu bocznym. Pod pojęciem lipofilowego łańcucha bocznego rozumie się na tej pozycji alkilowy łańcuch boczny o 1 do 7 atomach C/korzystnie 1 do 4 atomach C, zwłaszcza o 1 atomie C/. Ten alkilowy łańcuch boczny może zawierać jedną lub dwie grupy oksy /-O-/, tio /-S-/ albo grupy -C/O/O-. Ten alkilowy łańcuch boczny zawiera jedną lub dwie reszty. Reszty te niezależnie od siebie stanowią grupy cykloalkilfatyczne lub

168 456 aromatyczne. Grupa cykloalifatyczna (korzystnie grupa cykloalkilowa) zawiera 3 do i0, korzystnie 4 do 7, atomów węgla. Grupa aromatyczna stanowi korzystnie grupę fenylową, naftylową podstawioną /np. przez NO2, hydroksy, fenylo /Ci-C4--alkiloksy lub Ci^-alkoksy/ grupę fenylową albo 5- lub członową, ewentualnie też skondensowaną z pierścieniem benzenowym, aromatyczną grupę heterocykliczną, w której 2 człony stanowią N albo jeden człon stanowi N i jeden człon stanowi O lub S, albo jeden człon stanowi N, S lub O, a pozostałe człony stanowią C, korzystnie tienyl, furyl, pirolil, imidazolil, pirazolil, pirydyl, pirazynyl, pirymidyny! pirydazynyl, indolil, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolinyl.

A4 może stanowić formę peptydową peptidtemplat albo resztę ω-aminokwasową o wzorze -NH-/CH2/n -CO- /II/ w którym n oznacza liczbę całkowitą i do ii (korzystnie i do 6).

Pod pojęcie form peptydowych podpadaj ą grupy takie, jak na przykład Clg, Btu, Thc i Trc. A5 może oznaczać wiązanie kowalencyjne albo grupę α-aminokwasową o dwóch lipofilowych łańcuchach bocznych albo korzystnie o jednym lipofilowym łańcuchu bocznym. Jako lipofilowy łańcuch boczny rozumie się na tej pozycji alkilowy łańcuch boczny o i do 7 atomach C (korzystnie i do 4 atomach C, zwłaszcza o i atomie C). Ten alkilowy łańcuch boczny może zawierać jedną lub dwie grupy oksy /-O-/, tio /-S-/ albo -C/O/O-. Ten alkilowy łańcuch boczny zawiera jedną lub dwie reszty. Te reszty niezależnie od siebie są grupami cykloalifatycznymi lub aromatycznymi. Grupa cykloalifatyczna (korzystnie grupa cykloalkilowa) zawiera 3 do i0, korzystnie 4 do 7, atomów węgla. Grupa aromatyczna stanowi korzystnie grupę fenylową, naftylową, podstawioną (np. przez NO2, hydroksy, fenylo(Ci/4)-alkiloksy lub Ci-C4-alkoksy) grupę fenylową albo 5- lub 6-członową, ewentualnie też skondensowaną z pierścieniem benzenowym, aromatyczną grupę heterocykliczną, w której 2 człony stanowią N albo jeden człon stanowi N i jeden człon stanowi O lub S, albo jeden człon stanowi N, S lub O, a pozostałe człony stanowią C, korzystnie tienyl, furyl, pirolil, imidazolil, pirazolil, pirydyl, pirazynyl, pirymidyny! pirydazynyl, indolil, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolinyl.

An może też stanowić resztę aminokwasową o wzorze III ^-/0^2/^^/^-^ /III/, w którym m oznacza liczbę całkowitą i do ii, a R oznacza grupę NHX, OX, SX, NXY, -NH/H/-C/O/-CH2-Xi,

-N/H/-C/O/-CH2-O-Xi

-n/h/-c/o/-x!

-N/H/-C/O/-CH=CH-Xi albo

-N/H/ - C/O/-O-CH2-Xi w których

X oznacza atom wodoru, niepodstawioną albo podstawioną grupę benzoilową, niepodstawioną albo podstawioną grupę cykloheksyloksykarbonylową, niepodstawioną albo podstawioną grupę benzyloksykarbonylową, grupę 2-, 3- lub 4-pirydylometyloksykarbonylową albo grupę tozylową,

Y oznacza grupa Cudo CH-alkilową albo grubo grulo-/<H 1 do C1Zsalkilowk'i o

Xi oznacza /α/ fenyl, /β/ przez i, 2 lub 3 podstawniki (podstawniki: chlorowiec, grupa trifludromatylowa lub nitrowa) podstawiony fenyl, /γ/ naftyl, /δ/ benpo[b]tianyl, /ε/ pirydyl albo /η / pirazynyl.

Korzystna jest reszta aminokwasowa o wzorze III, w którym m oznacza i, 2, 3, lub 4, a R oznacza -NHX, -NXY,

-NH/H/-C/O/-CH2-X1

-N/H/-C/O/-CH2-O-Xi

-N/H/-C/O/-X\

-N/H/-C/O/-CH=CH-Xi albo

-N/H/-C/O/-O-CH2-Xi

Korzystnymi cyklopaptyZami o ogólnym wzorze są takie, w których: Bn, Fn i In niezależnie od siebie stanowią Arg, D-Arg, Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, homo-Arg, D-homo-Arg, Dap, D-Dap lub 4-amind-Pha, korzystnie Arg, D-Arg, Lys, D-Lys lub Orn;

168 456

Cn stanowi Phe, D-Phe, 4-NO2-Phe, Cha, D-Cha, Ser/Bzl/, D-Ser/Bzl/, Tyr, D-Tyr Tyr/Bzl/, D-Tyr/Bzl/, Nal, D-Nal, Thi, D-Thi, Asp/Bzl/, D-Asp/Bzl/, His, D-His, Glu/Bzl/ albo D-Glu/Bzl/, korzystnie Phe, Cha, Tyr, Nal, Tyr/Bzl/ albo /4-NO2/-Phs;

Pin 1 Prn rno τ' ^11 1 JL—/L1

Δία Λν1ν Pm Qp>r ,ηνι.?ιν Jiunv r» 14 i nu.) ν·*» j j x iw, _f

Δ cr» T vc Δ cn lnh Tbr inb

X mU) X xr£ X ill l-i-iuc AVH formy D, korzystnie Dn oznacza D-Ala, Gly, Pro, D-Pro, Ser lub D-Ser;

En oznacza Gly, Asp lub Asn; albo

Dn i En razem oznaczają resztę ω-aminokwasową o wzorze -NH-/CH2/2-5-CO- albo formę peptydową, korzystnie Btu, Clg, The lub Trc albo ich formy D, zwłaszcza D-Btu;

Gn i Kn niezależnie od siebie oznaczają Ile, D-Ile, Met, D-Met, Nle, D-Nle, Leu, D-Leu. Val albo D-Val; korzystnie Ile, Met, Nle lub Leu;

Hn oznacza HOOC-/CH2/1-4-CH-/-CO-, ich formy D, Gly, Ala, D-Ala, Asn, D-Asn, Phe albo D-Phe, korzystnie Asp, Glu albo Gly;

An a/ An stanowi grupę - Ai - A2 - A3 -, w której

Ai oznacza Ala, Gly, Phe, Val, Ile, Leu lub Nle albo ich postać D, korzystnie Gly, Ala albo D-Ala; '

A2 oznacza resztę ω-aminokwasową o wzorze II, w którym n oznacza 2, 3 lub 5;

A3 oznacza Phe, D-Phe, 4-NO2-Phe, Cha, D-Cha, Ser/Bzl/, D-Ser/Bzl/, Tyr, D-Tyr, Tyr/Bzl/, D-Tyr/Bzl/, Nal, D-Nal, Thi, D-Thi, Asp/Bzl/, D-Asp/Bzl/, His albo D-His, korzystnie P-s, Tyr, Cha, Nal albo /4-NO2/Phe; albo

b) grupę - A4 - A 5 -, w której A4 oznacza resztę ω-aminokwasową o wzorze II, w której n oznacza 2, 3 lub 5;

A5 oznacza Phe, D-Phs, 4-NO2Phs, Cha, D-Cha, Ser/Bzl/, D-Ser/Bzl/, Tyr, D-Tyr, Tyr/Bzl/, D-Tyr/Bzl/, Nal, D-Nal, Thi, D-Thi, Asp/Bzl/, D-Asp/Bzl/, His, D-His, Glu/Bzl/ albo D-Glu/Bzl/, korzystnie Phe, Tyr Cha, Nal lub /4-NO?/-Phe; albo

c) grupę aminokwasową o wzorze III, w którym m oznacza 1,2, 3 kfo4 cR.rpnccec-NHXlub -NXY, przy czym X oznacza atom wodoru, niepodstawioną albo przez chlor, metoksy lub /C1 do C3/ alkil podstawioną grupę benzoilową, grupę cykloheksyloksy- lub mentyloksykarbonylową, niepodstawioną albo przez metoksy, nitro, taiSluoaomstyl lub cyjano podstawioną grupę benzyloksykarbonylową, korzystnie grupę benzsloksskarbonslową, 4-metoksybsnzyloksykarbonylową, 2- lub 4-taifluoromstylobsnzylokαaronslową albo 4-nitaobenzyloksykaabonylową, zwłaszcza grupę benzyloksykarbonylową, 4-nitaobenzyloksskarbonylową albo 2- lub 4-triSluoaometylobenzyloksskaabonylową,

Y oznacza naupa Cl do C14-alk11ową albo/Cl do C 14-alk1lo/Teny^oseą, korzy stnie yst^nie· benzylową lub fenyloetylową; a X1 oznacza grupę fenylową albo mono- lub dipodstawioną grupę fenylową, grupę 2-dirydylową, 2-piraesnylbwą, 3-beneb[b]tienylbwą albo 2-naStylową, zwłaszcza takie, w których

An oznacza grupę - A1 -A2 -A3, w której

A1 oznacza Gly,

A2 oznacza Aca, pAla, Apen, Abut, Gly, albo kowalencyjne wiązanis, a

A3 oznacza Phe, Phs/4-NO2/, Tyr albo Tyr/Bzl/; albo

An oznacza grupę -A4 - A5, w której A4 benacea pAla, Aca, Thc, Aund, Btu albo D-Btu, a A5 benαcec kowalencyjne wiązanie, Phs, D-Phe, Phe/4-NO2/, Tyr, Tyr/Bzl/ albo Cha; albo

An oznacza resztę aminokwasową o wzbaee III

-NH-/kH2/r-kH/R/-CO, w którym m oznacza 1 albo 4, a R oznacza grupę -NHX, w której X oznacza H, Z, Bz, Menoc, M-NO2/Z, Tos, albo An oznacza χ2 - Lys -, gdzie χ2 oznacza jsdną z następujących grup

9r

168 456

Wyróżnić należy cyklopeptydy o ogólnym wzorze la pA^-A2-A3-Bⁿ-Cn-Dⁿ-Eⁿ-Fⁿ-Gn-Hn-In-Knoraz ich sole, gdzie A? oznacza Aund,

Aca, β-Ala,

Apen,

Abut albo

Gly albo wiązanie kowalencyjne;

A3 oznacza Phe,

Phe/4-NO₂/,

Cha,

Tyr albo Tyr/Bzl/;

Bn oznacza Arg;

Cn oznacza Phe,

Cha,

Tyr, albo Tyr/Bzl/;

Dn oznacza D-Ala,

168 456

Pro albo D-Pro;

En oznacza Gly; albo

Fin i Fn rn7Pm rGmcwaziz β-Ala,

Abut,

Aoc,

L-Clg,

L-Btu albo D-Btu;

Fn oznacza Arg albo Lys;

Gn oznacza Ile,

Met

Aib albo Nle;

Hn oznacza Asp albo Aib;

In oznacza Arg;

Kn oznacza Ile, a

Ai oznacza Gly.

Szczególnie korzystne są cyklopeptydy względnie ich sole, w których A2 oznacza resztę kwasu ω-aminoalkanowego o wzorze -NH-/CH2/2-4-CO-;

A3 oznacza Phe, Tyr, Cha, Nal albo 4-NO2-Phe;

Bn, Fn i In niezależnie od siebie oznaczają Arg, D-Arg, Lys, D-Lys, Orn albo Ctr; Cn oznacza Phe, Cha, Tyr, Nal albo Tyr/Bzl/;

Dn oznacza D-Ala, Gly, Phe albo D-Phe;

En oznacza Gly albo Ala; albo

Dn i En razem oznaczają D-Btu;

Gn i Kn niezależnie od siebie oznaczają Ile, Met, Nle albo Leu;

Hn oznacza Asp, Glu albo Gly; a Ai oznacza Gly, Ala albo D-Ala; zwłaszcza takie, w których

A2 oznacza β-Ala,

Apen albo Abut;

A3 oznacza Phe,

Phe/4-NO2/,

Cha albo Tyr;

Bn oznacza Arg;

Cn oznacza Phe,

Cha,

Tyr albo Tyr/Bzl/;

Dn oznacza D-Ala;

En oznacza Gly; albo

Dn i En razem oznaczają D-Btu;

Fn oznacza Arg albo Lys;

Gn oznacza Ile,

Met albo

168 456

Nle;

Hn oznacza Asp;

In oznacza Arg;

Kn oznacza Ile, a

Ai oznacza Gly.

Szczególnie korzystnymi związkami według wynalazku są:

1. i-Aund-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly2 . |-fica-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-ArG-Ile-Gly-| . -Aca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Ly s-I le-.-. sp-Arg-Ile-Gly-|

4. - (2>la-phh--Ag-phh----Bt--Ag--Il--Ss--Ag--ll-GGy5. -- βAla-Phe-AAg-Phe-D-Ala-G^ly^^i^i^c^^ULa^/Ssf^^i^igg^ll-Gly6 . f-Phs-/ 4-NG2/ -Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ils-Asp-Arg-Ile-Gly . pe?Ala-Phe-AAg-Phe-D-Ala-Gly-AAg-r,et-A ss-Arg-Ile-Gly } Ala-Cha-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Ass-Arg-Ile-Gly

- p Ale-Phe/A-NGg/ -Arg-Phe-D-Ala-Gly-AAg-Ils-Ass-AAg-Ile-Gly-β Ala- Phl/·4-NC2/-AAg-Cha-D-AIa-Gly-AAg-Ile-Ass-AΓg-Ile-Gly·

Ala-TyA-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ils-A ss-Arg-Ile-Gly

Ala-Tyr/Bzl/-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Ass-Arg-Ile-Gly

168 456 —Aca-Phe-Arg-Pheβ^Α la-Arg-Ile-Aso-Arg-Ile-Gly

-

ca-Phe-Arg-Phe-Abut-Arg-Ile-AsD-Arg-Ile-Gly—Apen-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ils-Asp-Arg-Ila—Gly-n

Abut-Phe-Arg—Phe—D—Ala—Gly—Arg—Ile—Asp-Arg—Ile—Gly-.

j-Gly-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-GlyAla-Arg-Phe-D—Ala—Gly—Arg—Ile—Asp—Arg—Ile—Gly—

-Aca-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-, —Aund—Arg—Phe—DTAla — GlyTArg—Ile—Asp-Arg-Ile-Gly-j —A, ca—Phe—Arg—Phe—Aoc-Arg—IlB—Asp—Arg—Ile-Gly— β p Ala-Phe-Arg-Phe-Dila—Gly—Arg—Aib—Asp—Arg—Ile—Gly p

— β AlaTPhs-Arg-Phe-D-AlaTGly-Arg-Ile-Aib-ArgTIleTGlyT — β AlaTPhe-Arg-Phe-LTBtu-Arg-Ile-AspTArg-Ile-GlyŁL_____I

- β Ala-Phe-Arg-Phe-DTBtuTArgTileTAsp-ArgTIleTGlyT

Ll______________ .. I

AlaTPhe-Arg-Phe-ProTGlyTArgTIle-AspT,Arg-IleTGly· β Ala—Phe—Arg—Phe—D—Pro—Gly—Arg-ile—Asp—Arg—Ile—Gly—

168 456

28. -Tyr-Ar g-P he-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Ar g-Ile-Gly-η . ,-Tyr/Bzl/-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Iłe-Gly . -Phe-Arg-Tyr-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-| i _________i . -Phe-Arg-Tyr/3zl/-D-Ala-Gly-Arg“Ile-Asp-Arg-Ile-Gly

ί.........11 — -........ ................ ....... 1·

32. p β? Ala-Phe-Arg-Phe-L-Clg-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-i

- r ÓAla—Phe-Arg-Pne-D-Ala-Gly-Arg-Nle-Asp-Arg-Ile-Gly oraz ich sole.

Wyróżnić należy cyklopeptydy o ogólnym wzorze Ib

-A.-A_c-Bn-Cn-Dn-En-Fn-Gn-Hn-In-Kn-r i 4 i oraz ich sole, w których

A4 oznacza Aund,

Aca, β-Ala

Clg, Thc, Btu albo D-Btu,

A5 oznacza Phe, D-Phe,

Phe/4-NO2/,

Cha,

Tyr,

Tyr/Bzl/ albo kowalencyjne wiązanie;

Bn oznacza Arg,

D-Arg,

Ctr,

Lys albo kowalencyjne wiązanie;

Cn oznacza Phe,

Cha,

Ser/Bzl/ albo uvi/ j-/ Z ί/ uiuu

Tyr/Mr/;

Dn oznacza D-Ala,

Gly albo Azt;

En oznacza Gly;

Fn oznacza Arg albo Lys;

Gn oznacza Ile, D-Ile,

Met albo

168 456

Nls;

Hn oznacza Asp, D-Asp,

Gly albo kowalencyjne wiązanis;

Tn b7·naί^’7A Aro- albo D-Arg; a

Kn oznacza Ile.

Szczególnie korzystne są uyklodedtydy względnie ich sols, w których

A4 oznacza resztę kwasu ω-aminbalkanowego o weoaee -NH-/CH2/2-4-CO- albo, gdy A5 benauea wiązanie kowalencyjne, Clg, Thc, Btu albo D-Btu;

A5 oznacza Phs, Tyr, Cha, Nal albo 4-NO2-Phs;

Bn, Fn i In niezależnie od siebis oznaczają Arg, D-Arg, Lys, D-Lys, Orn albo Ctr;

Cn oznacza Phe, Cha, Tyr, Nal albo Tsa/Bel/;

Dn oznacza D-Ala, Gly, Phe albo D-Phs;

En oznacza Gly albo Ala; albo

Dn i En razem oznaczają D-Btu;

Gn i Kn niezależnie od sisbie oznaczają Ile, Met, Nle albo Leu; a Hn oznauea Asp, Glu albo Gly; zwłaszcza takie, w których

A4 oznacza β-Ala,

Apen albo gdy A5 oznacza wiązanie kowalencyjne, Clg, Thc, Btu albo D-Btu;

A 5 oznacza Phs,

Phs/4-NO2/,

Cha albo Tyr; albo

Bn oznacza Arg;

Cn oznacza Phe,

Cha,

Tyr albo Tyr/Bzl/;

Dn oznacza D-Ala;

En oznacza Gly; albo

Dn i En razem oznaczają D-Btu;

Fn oznacza Arg albo Lys;

Gn oznacza Ils,

Met albo Nle;

Hn oznacza Asp;

In oznacza Arg; i

Kn oznacza Ils.

Korzystnymi związkami według wynalazku są:

1. — β> Ala-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IlsAca-Arg-Phs-D-Als-Gly-Arg-Ile-Asp—^: la-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ils

4. -Aca-P'ne-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-,

168 456

5. - ',6 Ala-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Aso-Arg-IleL Z:

_ Ch a i — /_n_- G._n>/_i , ,,,,χν .H_C-,.xy U.^4./ - -u.₇ .

-fil r, _ r~ r. __ Λ -r.r~._T 1 r, _ ' i X o — noj-» — .“IX U — X X C ’ . -Aca-P he-Ly s-Phe-D-Ala-Gly-Ar g-Ile-Asp-Ar g-Ile-\

L___ί

3. -Aca-Phe-Lys-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Ile-Asp-Arg-Ile9. ACaa-hhe-rgg-hha-D-Aaa-Gly-rgg-iee-spp-rrg-iee^

- A c a — D—P e-—A r-—P hs—A* a-— dy—Ag 11 θ—A sp-A--ΐle-i l----- . - - - - --- - - - .. _____ _ - ___ i . r,A(^i^pCh^·^^^ίrg·^|?hl-DpAIhpGllpArgpIllpAsppftr9pIllp

12. - β AIhpPhl·pAΓg-Clha-D-AIhpGllpArgpArgpIllpAsppArgpIllp_|

Ala-Pne-Arg-Cha—D-Ala—Gly—Arg-He—-Asp-rrę-H—> i

AIapphl/4-NG2/pArg-P he-D—Ala-Gly-Arg—Ile—-sp—Arg—Ilep

1-, j- (²} AIa-Phe-Lys-Cha-D-pAl^-GIy-Arg-Ill-AA□pArg-IIe

16. pCIgpArg-ChhpDpAIapGIypArgpIIe-As□pArg-IIe

17· p AIa-Phe/·P-NG2/-Arg-ChapDpAIapGllpArgpIle-Asp-Arg-IIep

18. - 2- AIapTlr/Bzl/pArgpCha-D-AIh-GllpArg-IlepAss-Arg-IIe

· -lapTyrpArg-Cha-D-Ala-GllpAΓgpIllpAsppArgpIle-.

168 456

-Thc-ArgCha-D-Als-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

-) i- pAla-Phe-Ltr-Lha-u-Ala-uly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

Thh c - P h ei - A r g - C h a - D - A1 a - G1 - - A g g - Ile - Spp- A r g -11 e -i

- Cl g-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-ile-η

Aund-Arg-Phe-O-Ala-Gly-Arg-He-Asp-Arg-I le-| prUnd-phe^'Phe-O-Ala-Gl^^-/Arig-^IIe--AS-Arg-Illę

-Aca-Arg-P he-D-A.la-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile—

-Aca-Arg-Seg/Bzl/-O-Ala-Gly-Ly s-Nl e-A sp-Agg-Il e-.

Aca-Phe-Agg-Phs-O-Ala-Gly-Lys-.NleAAggAIle

Ala-Phe-AΓg-phA-A-Ala-Gly-LyA-!'Jle-AΓA-IeA

Aca-AggΓPhe-O-Ala-GlyΓLys-NleΓAg--Ile

AlaΓAg--Phe-O-Ala-Gly-LysΓ_l\Jle-Agg-Ile .- β> Ala-Phe-Gly-Ser/Bzl/-O-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile-η

A ca-Phe-Gly-Ser/Bzl/ΓO-AlaΓGlyΓLys-Nle-As-ΓAg--Ile

Ala-Gly-Ser/Bzl/-D-Ala-Gly-Lys .'le-A sp-Arg-ile

168 456

35. -Aca-Gly-Ser/azl/-D-Ala-Gly-t_ys-Nle-Asp-Arg-IleI

6 _ n,Slo-^q_er / B_zl / _ D_ A 1 _e _ Gl _y _ i .,.---1 A _SS36 » | yy 1 . J. B Β Β X / BZI / D Ale Gly Lyc t*1.CS ASU· n y— nc i r·

37. _Aca_5er/3zl/_D_Ala_Gly_Lys-Nle-Asp-Arg-Ile33 . _ 3tu_Arg_P 'ne-D-.Ala-G1y-Arg-Ile-,-,sρ-AΓg-ϊ le .rD-3tu-Arg-,^E he-D-Aaa-lyy-Arg-iee-Ssp-Arg-Ile40. _ AIa_AΓg_Phe_D_A1aeG1y_AΓgyIIe_ArgeIIe41 . |eAca-AΓy_Phe_D-A1a_G1y-AΓy_I1e_Ary_I1e_|

42. β AIayPhe_Ary-Phe_D_A1a_G1y_Arg_I1e_Ass_AΓg_3tu

43. _Aca_PheyArg_Phe_D_A1a_G1y_AΓgyI1e_GIyyAΓg_IIe » e·Aca-Phe-AΓg-Tyr/lee/-y-Aae-Gye-AΓe-Iee-Sse-Are-Iee . _A ca_Phe_Ary_Phe_D_Ala_Gl.y_Ary_D_Ile_A sseAΓg_I1e_] . .-Aca-Phey^Ar^^^P^^E^y^E^-/^I^ć^-GI^¾^-/^J^^^·^1^3^!^^[^^ί^^|3^<^J^t^^^l^I^e . ,-Aca_Phe_D_Ary_Phe-D-AIa_G1y-Arg-I1e_A ss_Arg_Ile

48. _AcayDyPheyAΓgyPhe_D_fi1ayG1y_AΓg_IIeyAssyAryyI1e . -Phe-AΓy_Phe_D-A1a-G1yy^AI^^)^]^I^E^-^^^f^y^A'^I?^^^^I^^e

168 456 • d

50. - (β Ala-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-D-Arg-Ile

51. [- ίβ Ala-Phe-D-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-D-Arg-Ile

52. -Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

53. - βAla-Phe-D-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

54. r- βι Ala-Phe-Arg-Cha-Azt-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile55. .- ίβ Ala-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-.

. .-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

57. -Phe-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-j oraz ich sole.

Wyróżnić należy cyklopeptydy o ogólnym wzorze I oraz ich sole, w których

An oznacza H-Lys Z-Lys Bz-Lys Menoc-Lys /4-NO2/Z-Lys Bz-D-Lys Tos-Lys H-Dap albo Z-Dap;

Bn oznacza Arg,

Lys,

Phe albo Om;

Cn oznacza Phe,

Cha albo Ser/Bzl/;

Dn oznacza D-Ala;

En oznacza Gly; albo

Dn i En razem oznaczają L-Clg albo D-Clg;

Fn oznacza Arg albo

168 456

Lys;

Gn oznacza Ile albo

In oznacza Arg; a

Kn oznacza Ile.

Szczególnie korzystne są cyklopeptydy względnie ich sole, w których

An oznacza resztę kwasu aminoalkanowego o wzorze -NH-/CH2/_n-CH/R/-CO-, w którym n oznacza 1 albo 4, R oznacza NHX albo NXY, X oznacza benzyloksykarbonyl, 4- nitrobenzyloksykarbonyl, 2- lub 4-trifluorometylobenzyloksykarbonyl, cykloheksyloksykarbonyl lub metyloksykarbonyl, a Y oznacza benzyl lub fenyloetyl;

Bn, Fn i In niezależnie od siebie oznaczają Arg, D-Arg, Lys, D-Lys, Orn albo Ctr;

Cn oznacza Phe, Cha, Tyr, Nal, Tyr/Bzl/ albo 4-NO2-Phe;

Dn oznacza D-Ala, Gly, Phe albo D-Phe;

En oznacza Gly, Ala, albo Phe; albo

Dn i En razem oznaczają D-Btu, L-Clg, albo D-Clg;

Gn i Kn niezależnie od siebie oznaczają Ile, Met, Nle albo Leu; a Hn oznacza Asp, Glu albo Gly;

zwłaszcza takie, w których

An oznacza H-Lys Z-Lys Bz-Lys Menoc-Lys /4-NO2/Z-Lys Bz-D-Lys Tos-Lys H-Dap albo Z-Dap;

Bn oznacza Arg, Lys, Orn albo Phe;

Cn oznacza Phe,

Cha, albo Ser/Bzl/;

Dn oznacza D-Ala;

En oznacza Gly; albo

Dn i En razem oznaczają L-Clg albo D-Clg;

Fn oznacza Arg albo Lys;

Gn oznacza Ile albo Nle;

Hn oznacza Asp;

In oznacza Arg; a

Kn oznacza Ile.

Korzystnymi związkami według wynalazku są:

. H-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg . Z-L y s-Arg-P he-D-Ala-Gly-Ly s—Nle-A sp-Arg- Ile-.

. Z-Lys-Arg-Ser/3zl/-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile

168 456

4. Bz-Ly s-Arg-P he-D-Ala-Gly-L ys-Nle-A sp-Arg-Ile

7^1 * τ* ~__D Ηζ-Π- A Ί » X <_1- I I I C · LJ — i t _i .n w. • uj_ y . Z-Ly s-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Ar g-Ile-Asp-Arg-Ile-i

7. Mengc-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-i

S . f-iengc-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile9 . H-Ly s-Ly s-Cha-D-Ala-Gly-Ar g-I l e-A sp-Ar g-I l e-.

. Z-Lys-Lys-Cha-D-Ala-Gly-.Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-:

11. Z-Lys-Phe-Phe-D-Ala-Gly-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Iie

12. / 4-NC₉/ Z-Ly s-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Ara-Ile-i I ³_______1

13. Z-Lys-Crn-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile . H-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Ly s-i\il e-A so-Arg-Ile-j 1__:_!

15. h-Lys-Arg-Ser/Bzl/-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile-j

o. Bz-Ly s-Arg-P he-D-Ala-Gly-Ly s-Ml e-.A sp-Ar--l 1 e17. Bz-Lys-Arg-Ser/Bzl/-D-AlaeGIy-LyseNlleAsp-ArgeIlle

18. Bz-D-Lys-Arg-Ser/ Bzl/-D-A la-Gly-Ly s-fll--A 5--Αγ-^Ι1--.

19. TgseLys-AΓg-Phl-DeAIa-GlyeArg-IIseAsp-AΓg-IIl

168 456

20. H-Lys-Arg-Phe-L-Clg-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile21 . Z-Lys-Arg-Phe-L-Clg-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile—i

22. Z-Lys-Arg-Cha-L-Clg-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile23 . Z-Lys-Arg-Cha-D-Clg-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-1

I_i . H-Dap-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-η i_____I

25. Z-Dap-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-A sp-Arg-Ileoraz ich sole.

Wyróżnić należy cyklopeptydy o ogólnym wzorze I oraz ich sole, w których An ma znaczenie wyżej podane,

Bn oznacza Arg,

Lys,

Phe albo

Orn;

Cn oznacza Phe,

Cha albo

Ser/Bzl/;

Dn oznacza D-Ala;

En oznacza Gly; albo

Dn i En razem oznaczają

L-Clg albo

D-Clg;

Fn oznacza Arg albo

Lys;

Gn oznacza Ile albo

Nle;

Hn oznacza Asp;

In oznacza Arg; a

Kn oznacza Ile.

Szczególnie korzystne są cyklopeptydy względnie ich sole, w których An oznacza resztę kwasu aminoalkanowego o wzorze-NH-/CH2/_n-CH/R/-CO-, w którym n oznacza 1 albo 4,

R oznacza -NH/H/-C/O/-CH2-X¹,

-N/H/-C/O/-CH2-O-X‘,

-N/H/-C/O/-X‘,

-N/H/-C/O/-CH=CH-X¹ albo

-N/H/-C/O/-O-CH2-X‘, gdzie X1 oznacza /a/ fenyl, /b/ przez 1 albo 2 podstawniki podstawiony fenyl,/c/ 1-albo 2-naftyl, /d/ 3-benzo[b]tienyl, /e/ 2-pirydyl albo /f/ 2-pirazynyl;

168 456

Bn, Fn i In niezależnie od siebie oznaczają Arg, D-Arg, Lys, D-Lys, Orn albo Ctr;

Cn oznacza Phe, Cha, Tyr, Nal, Tsr/Bel/; albo 4-NO2-Phs;

Dn oznacza D-Ala. Gly, Phe albo D-Phe;

t?,., m oz ca.. «uKc; rm ;ako dr νζ,ηανζ,α oi) , ζ-νια, αιυυ r nc, αιυυ Dn i En razem benaceają D-Btu, L-Clg albo D-Clg;

Gn i Kn niezależnie od siebie oznaueaj/ Ile, Met, Nls albo Lsu; a Hn oznacza Asp, Glu albo Gly; zwłaszcza takie, w których

An oznacza -NH-/CH2/4-CH/R/-CO-. gdzie R ma znaczenie wyżej podane, a Er-Fr-Gr-Hr-Ir-Kn stanowią łańcuch -Aag-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ils-Asd-Arg-Ile-, zs szczególnym uwzględnieniem przykładów.

Związki wsdług wynalazku są ANP-agonistami. Wykazują one, jak naturalne ANP, następujące właściwości:

- specyficzne i powinowate wiązanie do receptorów ANP

- właściwości diuretyczne i saluretyczns

- działanie obniżające ciśnienie krwi

- podwyższanie hematbkiytu

- podwyższenie w plazmie poziomu cyklicznego GMP /GMP: prawdopodobnie hormon śródkomórkowy /second messengsr/, który można w większej ilości wykryć w plazmie po podaniu ANP/

- podwyższenie filtracji kłębuszkowej

- działanie rozluźniające naczynia

- działanie babnbuholityuene

- działanie sdcemblityuzne na mięśnie gładkie, zwłaszcza jelita.

Właściwości te związków wsdług wynalazku testuje się w poszczególnych przypadkach, jak następuje:

- Wi/panie z receptorami ANP

Wi/panie z ANT-receptorami komórek Zona glbmerulosa z nadnerczy wołowych oznacza się metodą Biirgisser i in. /Biochem. Biohys. Rss. Commun. 133, 1201 /1985//, modyfikowaną według Biirgisser/2nd World Congress on Biblbgically Active Atrial Psptides, maj 16-21, New York Am. Soc. Hydertens, Abstr. B181, str. 209 /1987// za pomocą dostępnego handlowo zestawu firmy ANAWA, Wangen, Szwajcaria.

- Obniżanie ciśnienia krwi, działanie diurstyczns/ salurstyuens, podwyższanie hematokaytu, podwyższanie uyklb-GMP.

Badania prowadzi się na uśpionych /Nembutal^R/ szczurach o samoistnym nadciśnieniu /lvanovas/. Do tchawicy wprowadza się kaniulę. Ciśnienie krwi rejestruje się z A. Carotis przez zmiennik ciśnieniowo-nadrężenibwy /Stathcm/ na urządzeniu zapisującym /W atcncbe Multiuoader/. Częstość udsrzsń serca wylicza się z liczby fal tętna na jednostkę czasu. Substancję podaje się poprzez kaniulę do V. Jugularis. Przez niewielkie rozcięcie brzucha wprowadza się kaniulę do pęcherza i chwyta mocz. Objętość moczu określa się grawimetrycznis. Sód i potas mierzy się fotometrycznis w płomieniu. khloask zc pomocą slsktromiαasczkbwanic. Hematokryt πιΐϋ«^; się z krwi tętniczej. Cykliczny GMP oznacza się z krwi tętniczej za pomocą dostępnego handlowo testu aadioimmunologiuznego /IBL, Hamburg/.

- Wpływ na filtrację kłębuszkową

Filtrację kłębuszkową mierzy się na uśpionym psie przse oznaczcnis klirensu inuliny standardowym sposobem F uhr i in. /Klin. Wschr. 33, 729 /1955//.

- Rozluźnianie naczyń

Działanie rozluźniające naczynia analogicznie do ANP oznacza się według zmodyfikowanej metody Faison i in. /Eur. J. Pharmacol. 102,169 /1984//. Aortę piersiową królika ściąga się za pomocą sudiamaksymαlnego stężenia serotoniny. W 15 minut po podaniu testowanej substancji mierzy się zwężenie serotoninbws w porównaniu z rozpuszczalnikową próbą kontrolną. Z wislu dawek określa się graficznie EC50.

168 456

- Działanie broncholityczne

Według metody Konzett i Rossler /Arch. exper. Path Pharmacol. 195, 71 /1940/ bada się antagonizowanie histaminowego skurczu oskrzeli po dożylnym podaniu testowanej substancji.

- Działanie spazmolityczne na odbytnicy kurzej

Według metody Currie i in. /Science, 221/4605, 71 /1983// oznacza się działanie spazmolityczne wobec karbacholowego zwężenia odbytnicy kurzej.

Związki według wynalazku można podawać dożylnie, podskórnie, domięśniowo, śródotrzewnowo, do nosa, inhalacyjnie, poprzezskórnie, korzystnie ze wsparciem jontoforezy lub znanych z literatury środków potęgujących, oraz doustnie. Dla zwierząt różnych rodzajów dawki, które wywołują wyraźne obniżenie ciśnienia krwi /> 20 mm Hg/ i/lub diurezę /+300%/ względnie salurezę /+300%/ oraz wzrost hematokrytu /+3%/ i cyklicznego GMP /+200%/, wynoszą pomiędzy ^g/kg a 50 mg/kg. Dawki dla działania broncholitycznego u świnki morskiej leżą w tym samym rzędzie wielkości. Wiązanie z receptorami ANP w komórkach Zona glomerulosa nadnerczy wołowych zachodzi przy IC50 pomiędzy 1· 10¹⁰ a 1-10'⁵ mollOli tr. Działanie rozluźniające naczynia występuje na pierśoieniach aorty królika in vitro przy EC ₅₀ pomiędzy 1 · 10^ź a 1 10⁴ mola/litr. Stężenie d la działania spazmolitycznego na odbytnicy kurzej występują w tym samym rzędzie wielkości.

Ponieważ wiązanie receptorów przez poszczególne związki według wynalazku oraz ANP pod względem sfiy dobrze są skorelowzne z działaniami biologicłujuni, można mówić o identycznośei mechamzmu dż^iatania ρκηηκ'όζν peRy.ami wyst^uiąawn w przyrodzie i tu opranymi zw im^im. T^u więc w prz^wdtai zwuyzkdw wedł^ wynąliyku możny oczeki wa^u rown© inn^h wta^-ci wara biolg^elzzy^po^c opernych ^yl w acłaaalghⁿo ^jrtydo ANR która 1u rzezagórowo nie aostnta opcs ano.

Rzu^y o i^ⁱk ztói w domłaniu związków według wynalazku jest porównywalny z działaniem ANP. Rząd^ nalolą nwiecków wadłag wo^,nal eekujesł kb macznie mπizłsen wielkośz canΓtoazik. Ze stanu technUó ąta moźm b^o wg iy/kowz^o, ^w zw^cązki c tak snacneⁱa mniojtzer wieUcoiści cząste^fo ^dą wykkk^uwί^oy dow d^^z^u deralania w zoⁿowΓtażącej Da^U mniejszej więlkośai ozżsteczh^e d^teza zwuizków wc^u⁰ w^eao^śću^mojzyt ej aaza^lo pros tszz i w kwienku z tym toźcz c ηϋ anaioze ANP ΚΛ paoóadaych ugNP a daZnm aiężaaan czerleuekowy rn ^ayli^yan^az do ANP.^{w i}o^dy/poe^aa yjność uw^ztów wc&Ag wyndazkm /zwiarze za ^ąszy mu doa/wz,sk^An^ρi jes^t znacta^yn w^lciza niż; w ^.νρη^υ. ANP z pochodn^an^a zbl^ihonych do ANP. Zwnązki według wynalzaku w pnezaiwie^aslwⁱh ^po ANA nio naw^lerąją mhrd^iów di^ihcz^Zowyc^c . przez aa pu^s/a tah me^za^aolicane trwatóść n pniówowuu z ANP i paahodn^olτi.

obliżonynM ze ANta

Następuj acn związki należy szczególnie wyróżnić, ponieważ ich wartości wiązania z receptorami ANP/opistzntu.ależ w^cz Wiązanta z recuptorann ANP/ IC50 tąmmc^jzaa oi^z z c Ϊ0*ζ mo ta.

Γ-^kuΓl^s-Phe-AΓg-Phe-D-Ala-Gly-AΓg-Ile-Asρ-AΓg-Ile-Gly-| |-Aca-Phe-Ar g-P he-D-Ala-Gly-Arg-IIe-A sp-Arg-I le-Gly-i r-A ca-P he-Arg-P he-D-Ala-Gly-Ly s-IIe-A sp-Arg-Ile-Gly

Ala-Phe-Ar g-P hę-D-3 tu-Ar g-I le-A sp-Arg-I le-Gly-|

A la-P ne-Arg-P he-D-Ala-Gly-Ar g-11 e-A sp-Arg-I le-Gly-t

168 456

Phe/Ą-NCgZ-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Ara-Ile-Gly

Ald-Phe-Arg-phe-D-Ala-Gly-Arg-iMei-A sp-Arg-Ile-Gly la-Cha-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly- y¹ Ala-Phie^-NCg/-Ar^^|3he-D-Al^^Gl^)^^/^j^^-^ sp-Arg-Ile-Gly- β Ala-Phe/ 4—iNO2/-A.rg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Ar g-Ile-Glyλ Ala-Tyr-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Aro-Ile-Gly-,

Lf βAlaT|yr/3zl/-Arh~CDa-D-AlG-yiy-Arg-iee-Asp-Arg-Ile-Gly

Apen-Phe-Arg-P he-D-AlaAG-y-AΓg-IleAAsp-AΓgAI-e-Gly ίlAb^JL-Phe-AΓg-PheADAA-a-Gly-AΓg-I-eAAspAArg-Ile-G-y

-Gly-P he-AΓg-PheADAAlaAGlyAAΓgA-leAAsp-AΓgA-le-G-yΗ ββ Ala-PheAAΓg-phe-DAβtuAAΓg^I-eAAsp-AΓg-I-eAGlyA l ’ _ _ _ !

β Ala-PheAAΓg-Phe-PΓo-Gly-AΓgAIIeAAspAAΓgAIle-Gly ρ β AlaAphe-Arg-Phe-D-Pro-G-yAAΓgA-le^^sD-^^^^^--eAG-y-₁

Li_:_i pTy^A^-Phie-D-Ala-Gly-Arg-Il e-A spAArgAIle-GlyA

Tyr/3y:l/-Arg-Phe-D-Ala - Gly-Arg—Ile—Asp—Arg-Ile- Gly32

168 456 —PheTArg-Tyr—DTAla-Gly-Arg—Ile—Asp—Arg-Ile-Gly p h ~ Γ I IC

A —. — T.^/D — Ii/ D AT — m.. A — — U - A__

-nx y— i y x / u x x/ — u—η χσ — ui y — nx y— χ χ β—η & μ*nx ym y.

• ux y · rl

Ala-Phe-TArg-Phe-L-Clg-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile—Gly—.

- β Ala-Phe-Arg-PheTD-.Ala-Gly-Arg-Nle-Asp-Arg—Ile-Gly

L!

|- β Ala-Arg—Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleAca-Arg—Phe-D—Ala-Gly-Arg—Ile-Asp-Arg-Ile' β Ala-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-ArgTIle-Asp-Arg—Ile-.

Aca-Phe-Arg—Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

Ala-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg—Ile

Ala-Phe-Arg-Ser/BzΊ/-D-Ala-Gly-Lys-Nls-Asp-Arg—Ile pAca-Phe—Lys-Phe-D-Ala-Gly—Arg—Ile-Asp-Arg—Ile— r-Aca-Phe-Lys-Phe-D-Ala-Gly-Ly s-Ile-Asp-Arg-Ile-Aca-Phe-Arg-Cha-T-lla-Gly-Arg-IlT-ssTAArT“llT-, !_________[

-Aca-D-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-ńsp-Arg-Ile—

T

Aca-Cha-Arg-Phe-D-Ala—Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

168 456

Ala-Phe-Arg-Cha-D-Ala-lly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-,

SlaePhigSAggChapDgSlagGlygSAggMitgSASgSAg^II^i

Ala-Phe/l-NC^/-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

Ala-P he-Ly s-C ha-DD-Aa-Gly-AAg-Ile-A sp-A.rg-Ile g —Ala-Phe/4—NO₉/-Arg-Cha-D-Ala-lly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile lj:

SlaeTyr/BzlXgAAggChagDgAlagGIygAAggIllgAss-SAg-Ile

SlagTyAgSAggChagDgSlagGlygSAggIllgAASg-AggIll

SlagPhlgCtAgChagDgSlagGlygSAgglllgSAS^S^A^ę^-^I^I^t^ gThc-PhieSrg-Cha—\

Dp

Sla pGIygSAgpIIlpAASgSAggIll gSundgSAggphieD-Sla-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ils

AundpphlgSAggPhlgDgAlapGIypAAgpIIlpAASpAAgpIll gAcapŚAgpphlg□pSIagGIypLyApNIlg-sspAAgpIll

P ca-Argg5iAX Bzl/gDgSlapGlypLyApNllpAASgAAgpIllg gBtUgAAggPhlgDg-lSgGlygSAgpIllgS AS-SAgpIl e-j

Dp3tu-SΓgpPhlgDpAlagGlypSAgpIllpAASpSAgpIllg,

168 456

Aca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ils-Gly-Arg-Ile

-Aca-Phe-Arg-Tyr/Me/-D-Ala-IAAr^^Il⁸Aca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-D-Ils-A sp-Arg-Ile

Aca-Phe-ArgΓphe-DΓAla-Gly-Arg-Il^-^^-^A£^p^Ar9-I]^e

ΓAcaΓPheΓDΓArg-Phe-D-Ala-GlyΓArg-Ile-Aί^pΓArgΓIle —A ne-O-A la-Gly-Arg-IleA,s pp-Agg-iee

-laΓPhlΓ-Γg-Phg-DΓ-laΓGlyΓ,-rgΓIllΓAspΓD-Arg-Ile

AlaΓPhl-D-AΓg-PhlΓDΓ-la-Gly-ArgΓIll--sp-AΓg-Ile

HΓLys-Arg-PhlΓDΓAl3-Gly-Ls s-He-A sp-Ar g-Ile -η

Z-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile

Z-Lys--rg-Se:^)^l3zl)^-D^Ala-Gly-LyA-Nll-AAp-ArgΓIlln

Bz-Lys-ArgΓPhl-D^AlaΓGly-Lys-Ill--Ap-Arg-Ile—.

i_1_1

Z-LyA-ArgΓPhl-D·sAla-Gly-Arg-Ill-Asp-Arg-Ill(_1__________1

Z-LyA-ArgsCl^a-DΓAlaΓGly-Arg-Ile--sp-Arg-IllΓ s___I

Mlnoc-LyssArgsPhe-D-Al^sGly-AΓg-Ils-Sps-Ags-Ies

168 456

Msnoc-Lys_AΓg-Cha_D_A1a_G1y-Arg_IIs-Asp-Arg-Ile

I_

H-Lys-Lys-Cha-D-Ala-Gly-Ara-Ile-A ss-Arg-Ilι:'

Z_Lys_Lys_Cha_D_A1a_GIyyAΓa_I1e_Ass_AΓgyI1e/4_NG /Z_Lys_ArQ_Cha_D_Ala-Gly_Ara_Ile_Ass_Ary_Ile ² i_:_:_;_

Z-Lys_Qrn_C'ha_D_A1a_GIy-Arg_I1e_Ass_Arg_I1sH-Lys_Arg_Ser/ Bzl/_D_Ala-Gly-Lys-Nle-Ass_Arg-IleBz-Lys-Arg-Pte-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Ass-Arg-Ile

Bz-Lys-Arg-Ser/ Bzl/_D_Ala-Gly_Lys_Nla_Ass_Arg_Ile_₁

Bz-D-Ly s-Arg-Ser/ Bzl/yD_A1a_u1y-Lys_N1e_Ass-AΓg-I le-i

Tos-Lys-Arg - P te e - D - A1 a - G1 y - A r g -11 e se-Age-Iee

H-Lys-Arg-Phe-L-Clg-Arg-Ile-Ass-Arg-Ile

Z-Lys_Arg-Phe_L_Clg_Arg_Ile_A ss_Arg_Ile

Z_Ly s_Arg- Cha-L—Clg—Arg—Ils—A ss—Arg— Ile-s

Z-Lys_Arg_Cha-D-Clg_Arg-Ile ss-Arg_Ile

ZyDap_AΓg_Cha_D_A1a_G1y_AΓg_I1s_Ass_AΓg_Ile

168 456 /4-NO₉/Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ret-A sp-Arg-Ileη i____I / 4-NO 2/ Z-Lys-Orn-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-j 1_______ _1 x2-Lys-Ara-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-A sp-Arg-Ile-j i ~' -1 gdzie x2 oznacza jedną z poniższych grup

168 456

Na podstawie zakresu działania ewiąeki według wynalazku można stosować jako środki daesuiw nadciśnieniu, jako środki podciśnieniowe, jako środki moczopędne, do polepszania krążenia /działanie abzszsazającs naczynia/, np. w daeydadku niewydolności naczyniowej i do lanzenin parno mawUfOrUnAPf» i ηοοτνή ίί non nran r r»V-ł maunrrlz-klnrar zm ρ-ιΛη 'm.n’''* Cł icvz.cina mv wy uvmv^zc ovnzu, uiv*» j nuv^j h miv^v w j vu, mv wy uiBiiiBooi niMZ^gUnuna^- uesnibwej, niewydolności nerek, ostrej niewydolności nerek oraz w przypadku obrzęków każdego pochbdeeniα, np. obrzęku mózgu, jak również w przypadku marskości wątroby, dalsj jako środki rozkurczowe dla wszystkich organów o mięśniach gładkich, zwłaszcza układu żbł/dkbwb-jelitowegb, włącznis z pęcherzykiem żółciowym oraz organami odprowadzającymi mocz oraz jako środki roesesazającs oskrzela.

Ponadto można je stosować w diagnostyce obrazów podanych chorób, a także do badania układów podanych organów. Dalsj można je stosować jako środki pomocniczs do wytwarzania i oczyszczania /chromatografia swoistej sbrpcji/ przeciwciał względnie preparatów receptorów πα w testach immunologicznych /np. RIA, ELISA/ i testach wiązania receptorów /np. tsst z receptorem promienibwania'jakb specyficzne i selektywne ligandy.

Związki o ogólnym o webaze I mogą być stosowane jako środki lecznicze i preparaty scarπcceutyuzne zawierające ts związki. Korzystne jsst stosowanie u ludzi.

Do podawania pozajelitowego związki wsdług wynalazku swsntualnie wraz ze zwykle stosowanymi substancjami, takimi jak substancje ułatwiające rozpuszczanie, emulgatory albo dalsze substancje pomocnicze przeprowadza się w roztwór, zawiesinę lub emulsję. Jako rozpuszczalniki stosuje się np. wodę, fizjologiczny roztwór soli kuchennej albo alkohole, np. etanol dabdcnodiol albo glicerynę, roztwory cukru, takie jak roztwory glukozy lub mannitu, albo też mieszaninę różnych rozpuszczalników.

Ponadto związki można aplikować za pomocą implcntatów, np. z polilaktydu, dbliglikolidu lub kwasu pblihydaoksymasłbwsgo. Innymi możliwościami aplikowania są podawanie oeonątrznosowe, podawanie inhalacyjne, /diszb-spreot, aerozol dawkujący, inhalator proszkowy/, aplikowanie dbdazszskóane /preparaty plastrows, kremy, maści, żel, plaster pasywny, przy czym działanie można wzmocnić za pomocą środka wspomagającego dla penetracji i/lub za pomocą pola elektrycznego /jontoforszą //, podawanie doustne /tabletki, kapsułki, drażetki itp./.

Związki o ogólnym wzorze I mogą być stosowane jako składniki i produkty pośrednie w wyżsj podanych sposobach biochsmiuensch, bibteuhnicznych i immunologicznych /wytwarzanie pieeuiwuiał, chromatografia swoistej soaduji. RIA, ELISA, tsst z receptorem promieniowania/.

Związki według wynalazku można wytwarzać wsdług ogólnie znanych metod chemii peptydów. Sposoby takie opisans są w Houben-Weyl, Methoden der oaganisuhen Chemie tom 15/2. Korzystne jest wytwarzanie wsdług syntezy peptydowej w fczis stałsj /np. G. Barany, R.B. Msarifield w The Peptides-Abalysis, Synthesis, Biologt, tom 2, 2-284 /1980/, Academic Press, Nowy Jork albo R.C. Sheppard, Int. J. Pspt. Prot. Rss. 21, 118 /1983// albo według równorzędnych znanych metod. Jako grupy ochronne dla grupy aminowej stosuje się grupy opisane w Houben-Weyl, Methoden der baganischen Chemie tom 15/1. Korzystnie stosuje się uretcnowe grupy ochronne, jak np. grupa flubrenylbmetoksskcrbbnylowc albo III-re.butyloksykaibonylowa. W celu zapobieżenia reakcjom ubocznym grupy swsntualnie obecne w łańcuchach bocznych aminokwasów są z reguły dodatkowo chronione odpowiednimi grupami ochronnymi /patrz np. Houben-Weyl tom 15/1 albo T.W.Greene, Protsctivs Groups in Organic Synthesis/. Stosuje się dazy tym Arg/NO2, Arg/di-Z/, Arg/Pmc/, Arg/Mtr/, Tyr/tBu/, Tya/Bel/, Tyr/2,6-dikl-Bel/, Ser/tBu/, Ser/Bzl/, Asp/tBu/, Asp/Bzl/, Glu/tBu/, Glu/Bzl/, His/Tat, His/Bum/, Lss/Boc/,

Lss · · /Z/, Z-Lys, Orn/Bbu/, Dcp/Bbc/, Hbmb-Aag/Mta/, Homo-Arg/Pnc/, Homo-Arg/NO 2/.

Do syntezy związków o ogólnym wzorze I wsdług syntezy w fazie stałej stosuje się znans żywice na podstawie polistyrenu, poliakaylocmidu i dblieteaów. Do syntezy uyklbdeptydów stosuje się korzystnie grupy funkcyjne, którs podczas odszcespiania dają kwasy peptydokarboksytowe. Szczególnie korzystnis stosuje się grupy funkcyjne, w przypadku których odszczspianis eauhodei w tak łagodnych warunkach, że swsntualnie obscns grupy ochronns w łańcuchach bocznych pozostają nienaruszone. W przypadku stosowania Fmbu-stratsgii bierze się pod uwagę takis grupy funkcyjne: grupa alkoholu 2-mstbkss-4-clkokssrenzslowsgo /MMergler i in., Piouesdings of the 10th Amsrican Peptide Symposium 1987, St. Louis, str. 259, G.R.Marsh^l, edEscom, Leiden /1988/, grupa hsdroksskrotonoiloamidbmetylowa/H.Kunz, BOombo, Angsw. Chem. Int. Ed. Engl. 27,

168 456

711 /1988// albo grupa alkoholu trialkoksybenzhydrylowego /H.Rink, P.Sieber, Peptides 1988, str. 139, G.Jung, E. Bayer Eds., W. deGruytter, Berlin 1989/.

Odszczepianie aminowej grupy ochronnej w przypadku grupy Boc prowadzi się zapomocą kwasu trifluorooctowego w dichlorometanie albo w przypadku grupy Fmoc korzystnie za pomocą zasad organicznych, zwłaszcza amin, takich jak np. piperydyna lub morfolina w DMF albo N-metylopirolidonie /NMP/. Zazwyczaj stosuje się stężenie 20 do 50% zasady w rozpuszczalniku, czas trwania reakcji wynosi 10-120 minut. Korzystnie rozszczepianie prowadzi się w dwóch etapach, przy czym pierwszy czas reakcji wynosi około 3 minut. Żywicę przemywa się następnie krótko rozpuszczalnikiem. Następnie prowadzi się dalsze odszczepianie za pomocą 20% piperydyny w DMF, po czym roztwór odsysa się, a żywicę dokładnie przemywa rozpuszczalnikiem. Jako korzystne rozpuszczalniki do tych etapów przemywania stosuje się DMF, NMP, dichlorometan, trichlorometan, metanol, etanol, izopropanol, wodę i tetrahydrofuran. Po całkowitym usunięciu piperydyny przyłącza się Fmoc-aminokwas potrzebny do następnego sprzęgania. Ten cykl powtarza się kolejno tak często, aż powstanie żądany peptyd związany z żywicą.

Do sprzęgania można stosować metody znane w chemii peptydów /patrz Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie tom 15/2/. Korzystnie stosuje się karbodiimidy, jak np. dicykloheksylokarbodiimid, diizopropylokarbodiimid, etylo-3/-dimetyloaminopropylo/-karbodiimid albo heksafluorofosforan lub tetrafluoroboran 0-benzotriazol-1 -ilo-tetrametylouroniowy /R. Knorr i in., THL 30, 1927 /1989// albo heksafluorofosforan benzotriazol-1-ilo-oksy-tris/dimetyloamino/-fosfoniowy /B. Castro i in., THL 1975,1219/. Przez dodanie 1-hydroksybenzotriazolu /HOBt/ albo 3-hydroksy-4-okso-3,4-dihydrobenzotriazyny /HOOBt/ można ewentualnie zmniejszyć racemizację względnie podwyższać szybkość reakcji. Aminokwasy Asn i Gln korzystnie sprzęga się w postaci ich N-chronionych estrów p-nitrofenylowych. Sprzęganie prowadzi się zazwyczaj przy użyciu 2-5-krotnego nadmiaru N-chronionego aminokwasu i reagentu sprzęgającego w rozpuszczalnikach, takich jak dichlorometan, dimetyloformamid, N-metylopirolidon /NMP/ albo ich mieszaniny. Przebieg reakcji sprzęgania sprawdza się za pomocą testu Kaisera /E. Kaiser i in., anal. Biochem. 34, 595 /1970/ albo testu TNBS. W przypadku stwierdzenia niecałkowitego acylowania, sprzęganie powtarza się aż do skutku. Syntezę w fazie stałej można prowadzić zarówno ręcznie jak i automatycznie za pomocą syntezatora peptydów.

Tak zsyntetyzowane liniowe peptydy cyklizuje się następnie za pomocą odpowiednich znanych z literatury sposobów. Jako środki cyklizujące można stosować substancje stosowane do sprzęgania aminokwasów albo też ester pentafluorofenylowy/ DMAP albo difenylofosforyloazydek /DPPA/. Do syntezy związków o ogólnym wzorze I stosuje się korzystnie syntezę w fazie stałej według Fmoc-strategii z zastosowaniem grupy funkcyjnej estru 2-metoksybenzyloksybenzylowego. Do budowania sekwencji jako metody sprzęgania korzystnie stosuje się sposób DCC/HOBt, DIC/HOBt albo TBTU. Po zbudowaniu sekwencji na żywicy N-końcową grupę Fmoc odszczepia się w znany sposób, żywicę po usunięciu piperydyny dokładnie przemywa się dichlorometanem i następnie w celu odłączenia peptydu traktuje 1% roztworem kwasu trifluorooctowego w dichlorometanie. Grupy ochronne w łańcuchach bocznych peptydów pozostają przy tym nienaruszone. Po oddestylowaniu rozpuszczalnika peptydy poddaje się reakcji ze środkiem cyklizującym, korzystnie z difenylofosforyloazydkiem, do odpowiednich cyklopeptydów. Następnie obecne jeszcze grupy ochronne w łańcuchach bocznych usuwa się za pomocą odpowiednich reagentów odszczepiających. Korzystnie stosuje się przy tym mieszaniny kwasu trifluorooctowego ze zmiataczem.

Jako zmiatacz stosuje się korzystnie substancje takie, jak np. anizol, tioanizol, krezol, tiokrezol, etanoditiol, woda albo podobne oraz mieszaniny takich zmiataczy. Następnie peptydy poddaje się obróbce i oczyszcza metodami znanymi z chemii peptydów.

Oczyszczanie otrzymanych surowych produktów prowadzi się za pomocą chromatografii żelowej, np. naSephadex G25/MR< 1400/albo G15 /MR< 1400/ za pomocą 1% lub 5% kwasu octowego. Jeśli to pożądane dalsze oczyszczanie prowadzi się za pomocą preparatywnej

RP-HPLC za pomocą gradientów metanol- albo acetonitryl-woda z dodatkiem 1-2% kwasu trifluorooctowego.

168 456

Do ocaysznzonio możno też stosowaU substancje kotiuao-wymieane ao pudstowia SephaCexu lub pulisayrenu.

Onzheanzoaie prowadzi się korzystnie za pumoną HPLC z oCmrónuny fazą z zosausowaniew gradientu woCo^/oceioniiohl z dudaantam 0,1-0,2% kwasu iriflauroontoma,gu.

Związki o uaólahw wzorze I bodo się ao nzysaośu zo pomony RP-HPLC. Każdorazowo prowadzi się analizę awinokwasóm na whmienianza jonowym /LKB/ i na nąromotografie gożomyw no kolumnie nątoalnej w celu duCatkomej koatroli oacemtaanji.

Ponadto robi się pumiΓ0h widma 13C-NMR /Boukeo 400 MHz/ uraa widmo masowego FAB /FianiganMAW 90/. Ożnacżania sekwencji prowaCżi się za pumoną sekwaAcjunomaata w fozie gaauwej po trhptnnznhm rozsanaepiaAia.

Następujące poaynłaCy wyjaśniają syntezę zmiąznów według whAalaana, nie ograninżająn jego zakzaea.

Przykład I.

Ala-P he-Arg-P he-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-j

ShAtaaę pepihCa prowaCai się w shntażatorze papthCuwym ACW200 firmy ACvΓAned ChemWaną z zaetosumoaiam Fmon-strategii i aΓetusowoaiaw wuCyfinumoaeau programu steoującegu. 50 wl reontuo wetraąeΓAy napełnia się 1 g dhwicy estru 2-matokey-banzylomego firmy Bachem, Sawajcoria, nΓehnonej 0,5 wwola Fmon-glichnh. Stosuje suo aaetępująne ponhoCna awinokwΓeów: Fmon-Ila-OH, Fwoc-Aog/Mtr/-OH, Fwon-Asp/tBa/-oH, Fmoc-Gly-OH, Fmon-D-Ala-OH, Fwun-Pąe-OH i Fmun-βAla-OH. Sprzęgania prowΓCai się z zoetosuwoataw naddooΓaowo 3 rómAUWΓdAtnóm Fmon-ΓmtnokmΓeu, 1-hyWoksybenaoiriożula i cśiny0luheksylokoobudiimidu /caae sprzoaoaia 40 minut/. Po przeprowadzeniu testu WNBS przy aiecałkowiahm onhlumania puwtoraa się sprzęganie z zasaueumantem tych sowych reagantóm i nadwtΓoów. W poz/poWAu nałnuwitago ΓnyłuwaAia rozpunahAO się naetępnh cykl shnteah. OCsznaepiania grup ucąroAnyną Fkoc prowaCai się nadCooaaomo za pomocą 20% piperydyny w DMF /oaz 3 minuty, raz 15 minut/. PowtęCzh reoncjawt dhwinę przemymo się kΓddurożOwu 10-nrotaia DMF. Po abuduwoAia ltniuwaj sekwencji H-βZla-Pąe-Aog/Mto/-Phe-D-Ala-Gly-Z.og/Mto/-Ile-Zsp/tBU/-Zog/Mto/-Ila-Gly - na puliklerycżnlym nośniku żywicę przawhwa się dunładnia dichlorometanem i naetępnie ΖογΑζ 5-krotnie porcjami po 20 ml 1% roztworu kwasu toifluuroocaumeao w Cinhlorowatanie nąjmhdej w ciągu 10 minut w temparoturaa pokojowej /do inteAShWAago zabarwienia lila dyminy/. Roztwory łączy się i aatożo w próżni. PuzostałuZU rozciera się z eterew, eter Cekantuja, pepahd suszy w strawianiu aaota i πΑπ^ο w 130 ml DMF, wartośU pH naeaamia się około 8,5 za pomocą trietyluawinh, ο^^οο chłodzi się do -20°C i CoCaje 0,2 g /0,75 wwoli/ Cifenhlofusfurhluazydku. Mieszaninę pozustomio się w ciągu 48 guCain w tawpaoatuoza -20°C i , w ciągu 48 godzin w tewpeoatuoza 4°C. WaoZuśU pH uioaymaje się aa 8,5 za powocą toiatyl,oammy. Następnie DMF usuwa się w próżni, puzostałuśU dwukrotnie roaciara z eterem, eter dakantuje, o pozustałośu suszy w strumieniu aaota. Grupy ochronne w łańcuchach bocznhną oCsznaepto się za puwoną kwasu toiflaorouctuwaao /aniaulu /90/10/ w ciągu 24 guCzin w iampaoatuoae pokojuwaj. Roztwór aaaoża się w próżni, poaostałośU rozciera się z eterem i sasah. Surowy paptyC unaheacza się na 3μ-kulumnte /10 x 2,14 cw/ z Dynamo* C18 z aasiusuwaniew gradientu z A: modΓ/anetonitohl/kmas toifluorounaowy 95/5/0,2 i B: dito 20/80/0,2 od 10% B do 80% B w ciągu 11 minut, strumień 20 wl, naΓe retencji 6,01 minut. Po suszeniu pożaż wywoadania otrzymuje się bezpostaciowy bezbarwny proszek. FAB-MS /M+H/ + = 1360,5.

Przykład II.

,-Aund-O he-Arg-P he-D-Ala-Gly-Ar g-I le-A sp-Arg-I le-GlyZ aasiusowantam Fmoc-Aund-OH zamiast Fwun-βAlo-OH utrzymaja się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza suo z zastosowaniem σpisanynh maounkóm chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 winut, czas retencji 7,45 miaui/.

FAB-MS /M+H/+ = 1473,2.

168 456

Przykład III.

-A_CaePhl-.Arg-Phe-D-AI^-GIyeArg-IIl-Asp-Arg-ΐle-GIy-|

Z zastosowaniem Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc^Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,00 minut/. FAB-MS /M+H/ + = 140C,1.

Przykład IV.

.-Aca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Ly s-Ile-Asp-Arg-Ile-GlyZ zastosowaniem Fmoc-Lys/BOC/-OH i Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-eAla-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii 15% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,80 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C74,9.

Przykład V.

- β βIaePhe-Arg-PhleD-Btu-ArgeIIl-Asp-Arg-I-le-Gly-j

Z zastosowaniem Fmoc-D-Btu-OH zamiast Fmoc-D-Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,05 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C72,7

Przykład VI.

.-/4-MO2/-Phe-Arg-Phe-D-Aaa-Gly-Ar g-Ile-Asp-Arg-iee-Gyy-.

Z zastosowaniem FmocaPhe/4aNO2/-OH i bez Fmoc-β—1aaOH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii 15% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,45 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1CC4,9.

Przykład VII.

I-P βAa-Phz-Arg-Phe---AAa-Gly-Arg-Net-Asp-Arg-Ile-GlyStosując dodatkowo ^oc-Met-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,10 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C78,8.

Przykład VIII.

- βAla-Cha-Arg-Cha-D-AlaLi

Gly-Arg-Ile-A sp-Arg-Ile-Gly

Z zastosowaniem Bmoc-Cha-OH zamiast Fmoc-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,75 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C7C,0

Przykład IX.

β A IaePhl/-t-KO2/eArgePhl-DeńIaeGIy-Arge-IeeAsp-Arge-Il-Gly-.

168 456

Z zastosowaniem Fmoc-Phe/4-NO2/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,50 minut/.

C A B Mę/MxU/x — 1 ΛΓ6Ζ O

Przykład X.

β Ala-Phe/4-NC₂/-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-He-A sp-Ar g-Ile-GlyZ zastosowaniem Fmoc-Cha-OH zamiast Fmoc-Phe/4-NO2/-OH zamiast Fmoc-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,40 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1412,0.

Przykład XI.

βl^-Tyr-Arg-Chιa-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-ΐle-GlyZ zastosowaniem Fmoc-Tyr/tBu/-OH i Fmoc-Cha-OH zamiast Fmoc-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,40 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1383,2.

Przykład XII.

Ala-Tyr/Bzl/-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-GlyZ zastosowaniem Fmoc-Tyr/Bzl/-OH i Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii / 5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 8,50 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1473,2

Przykład XIII.

-Aca-Phe-Arg-Phe- £? Ala-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-GlyZ zastosowaniem Fmoc-Aca-OH i Fmoc-βAla-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 4,60 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1345,9.

Przykład XIV.

,-Aca-Phe-Arg-Phe-AAuu-AAg-IIe-Asp-Arg-Ile-GlyZ zastosowaniem Fmoc-Aca-OH zamiast Emoc^na-OH i Fmoc-Abut-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 4,85 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1373,8

Przykład XV.

-Apen-P he-A rg-Phe-D-AAa-GGy-AAg-Il s-A 30-,^0- Ile-Gly-.

Z zastosowaniem FmocIApenIOH zamiast Fmoc-βAla-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 4,50 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1388,8

168 456

Przykład XVI.

(p S b u t g P hieftAgep hlgD--lagGly-ArggIllg-ASg-AggIll-Gly

Z zastosowaniem Fmoc-Abut-OH zamiast Fmoc--Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 4,35 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1374,8

Przykład XVII.

^Gl/pPhl--Γg-Phl-D^Ala-Glyg-rg-Illg-Apg-rg-Ill-Glyg|

Z zastosowaniem Fmoc-Gly-OH zamiast Fmoc--Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 4,45 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1346,8

Przykład XVHI.

β; PlagArggphl-D--l3-Glyg-rg-Ill-AASgAAggIllgGly·

Z zastosowaniem opisanych w przykładzie I Fmoc- aminokwasów otrzymuje się surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 3,25 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1213,8.

Przykład XIX.

_ΓAcag-AggphlgDgAlagGlygAAggIllgAASgAAggIllgGlyp^

Z zastosowaniem Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-—Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 3,45 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1255,8.

Przykład XX.

{pAundgAΓggphlgDgAla -Gly--ΓggIll--AS-AΓg-Ill-Glyp|

Z zastosowaniem Fmoc-Aund-OH zamiast Fmoc-—Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 5,15 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1325,8

Przykład XXI.

reAcagphl-Ar g-Phe-AocgAΓggIllgA Ap--rggIlep^G^l^y^-l

Z zastosowaniem Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-—Ala-OH i Fmoc-Aoc-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,10 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1416,2

Przykład XXII.

Ala-Phe-Arg-Phe-D-Ala - Gly -Arg-Aib-Asp-Arg-Ile-Gly-t

168 456

Stosując dodatkowo Fmdu-Aib-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii / 5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,70 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1217.8.

Przykład XXIII r- -IasPhls-ΓgsPhlsDs-IasGIys-ΓgsTIls-ibs-rgsIIlsGIyΓ

Z zastosowaniem Fmoc-Aib-OH zamiast Fmdu-Asp/tBu/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który duzvspupa się, stosując opisane warunki chromatografii /35% po 65% B w ciągu i3,5 minut, czas retencji 3,70 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1330,9.

Przykład XXIV.

-β -lasPhlsArgΓPhe-L-Btιn-AΓg-Ile-Aρp-Ags-IlsGllsη

Z zastosowaniem Fmdc-L-Btm-OH zamiast Fmdc-D-Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który duzyspupa się, stosując opisane warunki chromatografii 15% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,90 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = i 372,7

Przykład XXV.

- SIasphls-rgΓphssDs^tιτιs-rgsIIlΓ-_Sps-rgsIIlsGIys

Z zastosowaniem Fmoc-D-Btm-OH zamiast Fmou-D-Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który ocpyspupa się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,05 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1372,0.

Przykład XXVI.

- β -Iasphls-rgsPhlsProsGIys-,ΓgΓIlls-_Sp_-_Γg_;[l_e_Gly_

Z zastosowaniem Fmdu-Prd-OH zamiast Fmou-D-Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,15 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1386,8.

Przykład XXVII.

- β -IaΓphls-ΓgsphlsDspΓ_OsGIys-rg-ϊIls-_Sps-rgsϊIlsG;ly.,

Z zastosowaniem Fmoc-D-Pro-OH zamiast Fmoc-D-Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 1 i minut, czas retencji 6,35 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1386,8.

Przykład XXVIII.

sTyr--Γg—Phl-DΓ-la—GlysArgsIIlΓ-sp-Ars—Ill—GlyStosując dodatkowo Fmoc-Tyr/tBs/-OH i bez Fmoc-pAla-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który ocpvlzupa się, z p·altolowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,40 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1306,0.

168 456

Przykład XXIX.

_|τTyr/Bzl/·τArg-Phl-D-AlaτGlyτAΓgτIleτAspτArgτIllτGlyτ

Stosując dodatkowo Fmoc-Tyr/Bzl/-OH i bez F^oc-AAI- otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,10 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1395,9.

Przykład XXX.

_phe-Arg-Tyr-D-Al3-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-GlyT

Stosując dodatkowo Fmoc-Tyr/tBu/-OH i bez Fmoc-AAla-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,55 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1305,9.

Przykład XXXI.

^τPh^lτA^rgτT^yr/Bzl/τ^Dτ^Al3τG^lyτArg^τIllτ^Asp^τAr9^τIllτC^ly^τ.

Stosując dodatkowo Fmoc-Tyr/Bzl/-OH i bez Fmoc-AAla-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,10 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1395,9

Przykład XXXII.

Ala-Phl-ArgτPhl-L-Clg-ArgτIll-AspτArg-Ile-Gly-:

Z zastosowaniem Fmoc-L-Clg-OH zamiast Fmoc-D-Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,90 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1400,8

Przykład XXXIII.

AlaτPhl-AΓg-Phl-DτAlaτGlyτArg-NllτAsg-Arg-Ile-gly—

Stosując dodatkowo Fmoc-Nle-OH w sposób opisany w przykładzie I otrzymuje się surowy peptyd, który oczyszcza się. z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,40 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1360,4

Przykład XXXIV.

p

- 3) TlaτPhl-Arg·τChaτD-Ala-GlyτArgτ|'lltτAspτArgτIllτ

Syntezę peptydu prowadzi się przy użyciu syntezatora peptydowego ACT200 firmy Advanced ChemTech z zastosowaniem Fmoc-strategii i z zastosowaniem modyfikowanego programu sterującego. 50 ml-reaktor wstrząsany napełnia się 1 g żywicy z estru 2-metoksybeazylowego firmy Bachem, Szwajcaria, nasyconej 0,5 mmola Fmoc-izoleucyny. Stosuje się następujące pochodne aminokwasów: Fmoc-Arg/Mtr/-OH, Fmoc-Asp/tBu/-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-Cha-OH, Fmoc-Phe-OH i Fmoc-AAla-OH. Sprzęgania prowadzi się stosując każdorazowo 3 równoważniki Fmoc-aminokwasu, 1-hydroksybeazotriazolu i dicykloheksylokarbodiimidu /czas sprzęgania 40 minut/. Po przeprowadzeniu testu TNBS w przypadku niecałkowitego acylowania powtarza się sprzęganie z zastosowaniem tych samych reagentów i nadmiarów. W przypadku całkowitego acylowania rozpoczyna się następny cykl

168 456 syntezy. Odczepianie grup bchionnyuh Fmoc prowadzi się każdorazowo za pomocą 20% piperydyny w DMF /raz 3 minuty, raz 15 minut/. Pomiędzy reakcjami żywicę przemywa się kcżdoaceowb 10-krotnie za pombuą DMF. Po zbudowaniu liniowej sekwencji H-βAlα-Phs-Aig/Mtr/-khτ-D-Ala-Gly-Ag/Mto^,-Met-Aid/tBu/Aag/Mta/-Ile- na pblim.sascenyn nośniku żywicę pipsnywα się dbtłco.nie dichlorometanem i następnie traktuje 5-krotnis za pomocą kcżdbacpowo 20 ml 1% roztworu kwasu taίf!u(^rrooctbwego w dichlorometanie najwyżej w ciągu 10 minut w temperaturze pokojowej /cż do intensywnego zabarwienia lila żywicy/. Roztwór łączy się i zatoża w próżni. Pozostałość roecisic się z stersm, ster dekantuje, psptyd suszy w strumieniu azotu i roztwarza w 130 ml DMF, wartość pH nastawia się na około 8,5 za pomocą triety^i^, roztwór chłodzi się do temperatury -20°C i dodaje 0,2 g /0,75 mmola/ diSenyloSbsSorylbαzydku. Mieszaninę pozostawia się w ciągu 48 godzin w temperaturze -20°C i 48 godzin w temperaturze 4°C. Wartość pH utrzymuje się na 8,5 za pomocą trietyloaminy. Następnie DMF usuwa się w próżni, pozostałość dwukrotnie rozciera z eterem, eter dekantuje, a pozostałość suszy, w strumieniu azotu. Grupy ochronne w łańcuchach bocznych odczepia się za pomocą kwasu triSlubrbbctowego /anizolu /90/10/ w ciągu 24 godzin w temperaturze pokojowej. Roztwór zatęża się w próżni, pozostałość rozciera się z sterem i suszy. Surowy peptyd ozycza się na 3 μ kolumnie /10 x 2,14 cm/ z Dyncmax C18 z zastosowaniem gradientu z A: wodC/acetbnitayl/kwcs tπSlubibbutbO'y 95/5/0,2 i B: dito 20/80/0,2 od 5%B do 80% B w ciągu 11 minut, strumień 20 ml, czas rstsncji 7,80 minut. Po suszeniu dreee wymrcżanis otrzymuje się bezpostaciowy bezbarwny proszek.

FAB-MS /M+H/+ = 1327,9.

Przykład XXXV.

Ala-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp—Arg-Ile

Z zastosowaniem Fmoc-Ile-OH zamiast Fnoc-Met-OH i bez Fnoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się, stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% w 10 minut, czas retencji 3,25 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1156,7.

Przykład XXXVI.

-Aca-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-IleZ zastosowaniem Fnoc-Aca-OH zamiast Fmoc-lAla-OH i Fmou-Tle-OH zamiast FnocMet-OH i bez Fmbu-kha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 3,70 minut/. FaB-MS /M+H/+ = 1198,8.

Przykład XXXVII.

-Aund-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-i

Z zastosowaniem Fnoc-Aund-OH zamiast Fnoc-l Ala-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast FnocMet-OH i bez Fnoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oueysecpa się stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 ninut, czas retencji 5,55 ninut/.

FAB_-MS /M+H/+ = 1268,9.

Przykład XXXVIII. ’ «-Aca-Phe-Arg-P he-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowanien Fnoc-Aca-OH zamiast Fnoc-l Ala-OH i Fnoc-Ils-OH zamiast FnocMst-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki uhromctbgaaSii /20% po 80% B w ciągu 10 ninut, czas retencji 4,90 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1346,2.

168 456

Przykład XXXIX.

β) Ala-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile t

Z zastosowaniem Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 4,50 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1304,0.

Przykład XL.

j- β Ala-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile-j

Stosując dodatkowo Fmoc-Lys/BOC/-OH i Fmoc-Nle-OH zamiast F^toc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,10 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1275,0.

Przykład XLI.

r— ^β Al^a- Fhe- Ar g^-

Cr_

5er/Bzl/-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile

Stosując dodatkowo Fmoc-Lys/BOC/-OH i Fmoc-Ser/Bzl/IOH zamiast Fmoc-Cha-OH i Fmoc-Nle-OH zamiast Fmoc-Met-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 6,20 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1305,0

Przykład XLII.

- A ca-Phe-Lys-Phe- D-Ala-Gly -Ar g-1 le-A sp-Arg-Ile-.

Stosując Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-βAla-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i FmocILys/BOC/IOH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,60 minut/.

FAB-MS /M+H/+ =1318,2

Przykład XLIH.

-Aca-Phe-Lys-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Ile-Asp-Arg-Ilei---1

Stosując dodatkowo Fmoc-Lys/BOC/-OH i Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-βAla-OH i F^toc-Ile-OH zamiast FmocIMetIOH i bez FmocIChaIOH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,40 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1290,2.

Przykład XLIV.

«-Aca-Phe-Arg-Cha-D-Ala -Gly-Arg-Ile-Asp-Ar g-Ile-.

Z zastosowaniem Fmoc-Aca-OH zamiast FmocIβAla-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast FmocMet-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,35 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1352,2.

168 456

Przykład XLV.

pAca-D-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-j

Z zastosowaniem Fmoc-Aca-OH zamiast FmocjAla-OH i Fmoc-Iłe-OH zamiast Fmoc-Met-OH i Fmoc-D-Phe-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,35 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1346,2.

Przykład XLVI.

r-A ca-C ha -Ar o-P he-D-Ala-Gly-Arg-Ile- A sp-Arg-IleZ zastosowaniem Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-β Ala-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,35 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1352,0. Przykład XLVH.

Ala-Phe-Arg-Cha-D-Ala-Gly-A.rg-Ile-Asp-Arg-1 leZ zastosowaniem Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,90 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1309,5.

Przykład XLVIH.

Ala-/ l-NDg/Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-Ile-i

Stosując dodatkowo Fmoc-/4-NO2/Phe-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 6,85 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1348,9.

Przykład XLIX.

Ala-Phe-Lys-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

Stosując dodatkowo Fmoc-Lys/BOC/-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 6,75 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1281,9.

Przykład L.

p-Cl g-Αrg-Cha-D-A la-Gly-Arg-Ile-A sp-Arg-Ile-j

Z zastosowaniem Fmoc-Clg-OH zamiast FmocjAla-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast

Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,35 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1259,8.

168 456

Przykład LI.

- β> βI^e/4eNO2/PhleAΓgeCha-DeAIaeGIyeAΓgeIIleAspeArgeIlle

Z zastosowaniem Fmoca/4aNO2/Phe-OH zamiast Fmoc-PhzaOH i Fmoc-I1z-OH zamiast FmocaMztaOH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 6,50 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C54,7.

Przykład LII.

p β eia-Tyr/Bzl/-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-|

Z zastosowaniem FmocaTvr/Bz1/-OH zamiast Bmoc-Phe-OH i Bmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się w opisanych warunkach chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 8,20 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1415,9.

P rzy k ła d LIII.

- β) Ala-TyT-Arg-Cha-D-AAi-Gly-Aig-Ile-Asp-Arg-Ileii

Z zastosowaniem Fmoc-Tyr/tBu/-OH zamiast FmocaPhz-OH i Fmoc-I1z-OH zamiast Fmoc-MetaOH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 6,45 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C25,8.

Przykład LIV.

riThc-AAggCria---Ala-Aly-AAggIle-Asp-AAggIle-| i_._____i

Z zastosowaniem Fmoc-Thc-OH zamiast Bmoc-eAla-OH i FmocaI1eaOH zamiast Bmoc-Met-OH i bez Bmoc-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 6,45 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1279,7.

Przykład LV.

t- P? Ala-Pas-CtT-Cha-D--Aa~Gly-Arg-iye-As--Arg-lle-j

Stosując dodatkowo Bmoc-Ctr-OH i FmocaI1e-OH zamiast Fmoc-Met-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 7,00 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C10,6.

Przykład LVI.

_rTa--P ae-Al□-Cha---AAa-Aly-AlggIle-lΞp-AAggIaeA

1_I____I

Z zastosowaniem Fmoc-Thc-OH zamiast Fmoc-eAla-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast

FmocaMzt-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 7,60 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1426,7.

1618456

Przykład LVII.

-Clg-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

Z zaltolowaniam Fmoc-Clg-OH zamiast Fmou-βAla-0H i Fmou-Ile-OH zamiast FmocMet-OH i bez Fmoc-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oupyspcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 8,90 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1406,7.

Przykład LVIII.

_|sAca--rg-Phe-D-Ala-GlyΓLys-Nle-AspΓArg-Ill-.

Stosując dodatkowo Fmdc-Lys/BOC/-OH i Fmdu-Aca-OH zamiast Fmoc-pAla-OH i Fmoc-Nle-OH zamiast Fmou-Mat-0H i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyspcpa się z pastdsowaniam opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,45 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1170,6. Przykład LIX.

.-Aca--rg-Ser/Bzl/-D-Ala-Gly-Lys-Nll-Asp-Arg-Ile-₍

Z pastosdwaniem Fmdu-Aua-OH zamiast Fmou-βAla-OH, Fmoc-Nla-OH zamiast FmduMet-OH i Fmdc-Sar/Bzl/-OH zamiast Fmdc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,70 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1200,5.

Przykład LX.

fsAca-PhlΓAr s-hlsDS-ASs-lly^l_ys-Nle-AΓs^-Ils-_i

Stosując Zddatkdwd Fmou-Lys/BOC/-OH i Fmoc-Aua-OH zamiast Fmou-βAla-OH i Fmdc-Ile-OH i Fmdu-Nle-OH zamiast Fmdc-Mat-OH i bez Fmou-Cha-OH i Fmoc-Asp/tBs/-OH otrzymuje się w sposób opisany w prpykaadzia I surowy peptyd, który oczyszcza się z pastosdwagiem opisanych warunków chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,10 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1089,5.

Przykład LXI.

Ala-Phe-Arg-Phe-DΓAlaΓGly-Lys-Nle-Arg-.Ile

Z zastosowaniem Fmou-Lys/BOC/-OH i Fmdu-Nla-OH zamiast Fmdc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH i Fmdu-Asp/tBu/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,90 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1160,6.

Przykład LXH.

|sAca-AΓg-Phl-D-Ala-GlyΓLys--le-Arg-IleΓ

Z zastosowaniem Fmdc-Lys/BOC/-OH i Fmou-Aua-OH zamiast Fmoc-PAla-OH i FmocNle-OH zamiast Fmou-Mat-OH i bez Fmdc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii / 5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,95 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1055,7.

168 456

Przykład LXIB.

A1a-AΓC-Phs_D-A1a_G1y_Lys_N1s-Arg_I1s_.

Z zastosowaniem Fnou-Lys/BOk/-OH i Fnoc-Nle-OH zamiast Fnoc-Mst-OH i bez Fnoc-Chc-OH i Fnou-Asd/tBu/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który ozyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 ninut, czas rstsncji 5,90 ninut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1013,6.

Przykład LXIV.

- _l Ala-Phe-Gly-Ser/ Bzl/_D_AIa-Gly-i_ys-N1s-Asp-Arg_ϊ1s-, i k 1

Z zastosowaniem Fmbu-Lys/BOk/-OH i Fmbc-Sei/Bzl/-OH i Fmoc-Nls-OH zamiast Fnoc-Mst-OH i bsz Fnoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który ozyszza się stosując opisane warunki chaomαtograSii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,85 ninut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1206,4.

Przykład LXV.

._Aca_Phs_GIy_P hs_D_A1a_G1y_Lys-t\l1e_Asp~Arg_I1sy

Z zastosowaniem Fnoc-Aca-OH zamiast Fmbu-lAla-OH i Fnoc-Nle-OH zamiast Fnoc-Mst-OH i Fnbu-Lys/BOC/-OH i bez Fnoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w .przykładzie I surowy peptyd, który ozyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,40 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1248,5.

Przykład LXVI.

Ila-Gly-Ser/Bzl/ _D_A1a_GIy_Lys_N1s_Asp_Arg_I1s_.

Z zastosowaniem Fmbu-Lys/BOk/-OH i Fmoc-Ser/Bzl/-OH zamiast Fmoc-Phs-OH i Fnoc-Nls-OH zamiast Fnoc-Met-OH i bez Fmbu-kha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy psptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki uhronatograSii / 5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,80 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1059,4.

Przykład LXVII.

-Aca-Gly-Ser/Bzl/yDyA1a_G1y_Lys_NIs_Asp_Arg_I1s_

Z zastosowaniem Fnoc-Aca-OH zamiast Fmoc-lAla-OH, Fmoc-Ser/Bel/-OH zamiast Fnoc-Cha- i Fnoc-Nls-OH zamiast Fnoc-Met-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy psptyd, który ozyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,20 minut/.

FAB-MS /M+H/+= 1101,5.

Przykład LXVIIL

- _ Ala-Ser/Bzl/-D-A1a_G1y_Lys_N1s_Asρ_Arg_I1s_

Stosując Fmbc-Sea/Bzl/-OH zamiast Fnoc-Cha-OH i Fnoc-Ils-OH zanicst Fnoc-MetOH i dodatkowo Fmoc-Lys/BOk/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykłcdzis I surowy peptyd, który oczyszcza się z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /5% po 80%

B w ciągu 11 ninut, czas retencji 6,05 ninut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1002,6.

168 456

Przykład LXIX.

.-Aca-Ser/Bzl/-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile-j

Z zastosowaniem Fmoc-Aca-OH zawiasi Fkuc-βAlo-OH i Fwun-Ila-OH zamiast Fmon-Mai-OH i Fmun-Sao/Bzl/-OH zamiast Fmoc-Cha-OH i Fwoc-Lhs/BOC/-OH otoaywuja się w sposób opisany w przykładzie I suoomh papthd, .Atóin ucżhsznza się stosując opisaae warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 winut, czas retencji 6,60 winui/.

FAB-MS /M+H/+ = 1044,5.

Przykład LXX.

-Btu-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-,

1_____________!

Z zasaosumaniem Fmoc-Btu-OH zawiast Fwoc-eAla-OH i Fwun-Ile-OH zawiast FmonMet-OH i bez Fkoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób upisanh w przykładzie I suoumh paptyC, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas oatancji 5,35 —11^©

FAB-MS /M+H/+ = 1225,6.

Przykład LXXI.

—D—Btu—Arg—Phe—D—Ala — Gly-Arg—I le—Asp—Arg — Ile—.

Z zaetusomaAiem Fwuc-D-Btu-OH zawiast Fmon-βAla-OH i Fmon-Ila-OH zamiast Fwoc-Met-OH i bez Fwuc-Cha-OH otożywaje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który unzysanżo się stosując opisane maounni chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 winut, czas retencji 5,15 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1225,6.

Przykład LXXII.

-Ala-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Arg-Ilel_j__' '

Z zastusuwaniew Fmoc-Ila-OH zawiast Fmoc-Met-OH i bez Fwon-Cha-OH i Fmoc-Asp/tBu/-OH utrzywaje się w sposób opisony w przykładzie I surowy pepi/d, któon oczyszcza się stusająn opisane waruani chrowotografu /5% po 80% B w ciągu 11 winut, czas retencji 6,15 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1041,5.

Przykład LXXIII.

-Aca-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Iie-Arg-Iee-.

Z żostosomoniem Fwon-Aco-OH zawiast Fmuc-βAlo-OH i Fmun-Ila-OH zamiast Fmun-Met-OH i bez Fmon-Cho-OH i Fmun-Asp/tBa/-OH utraymaje się w sposób opisany w przykładzie I surowy paptnC, Atózn ocżnszcża się stosaZąn opisane mooanni chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,10 miaui/.

FAB-MS /M+H/+ = 1083,9.

Przykład LXXIV.

- Aca-Phe-Ar g-Phie-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Gly-Arg-IleZ zastosowaniem Fmoc-Ana-OH zawiist Fmoc-eAlo-OH, Fmon-Ila-OH zawiast Fwoc-Mat-OH i Fmoc-Gly-OH żamiasi Fwon-Zsρ/iBu/-OH i bez Fwon-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisaa/ w prżykładżie I surowy papthC, który onżhsznza się stosując opisone mΓIaani chrowatogiafii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,80 winut/.

FAB-MS /M+H/+= 1331,2.

168 456

Przykład LXXV.

-A ca-Phe-Arg-Tyr/ OMie/-D-Ala-Gly-Arg-Ile-A sp-Arg-IleZ zastosowaniem Fmoc-Tyr/OMe/-OH i Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-βAla-OH i FmocIle-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,85 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1376,2.

Przykład LXXVI.

pAca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-D-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-βAlaIOH i Fmoc-D-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,10 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1346,2.

Przykład LXXVII.

-Aca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-D-Asp-Arg-Ile-.

Z zastosowaniem Fmoc-DIAs-/tBu/IOH zamiast Fmoc-Asp/tBu/-OH, Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-βAlaIOH i Fmoc-IleIOH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,60 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1346,0.

Przykład LXXVIII.

-Aca-Phe-D-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem Fmoc-D-Ar-/Mtr/IOH i Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-βAlaIOH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,65 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1346,0.

Przykład LXXIX.

-Aca-D-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem Fmoc-D-Phe-OH i Fmoc-Aca-OH zamiast Fmoc-βAlaIOH i Fmoc-fleIOH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,55 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1346,0.

Przykład LXXX.

-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH i Fmoc-Aca-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,55 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1232,5.

Przykład LXXXXI.

— βAlaτPhl-Argτphl-DτAlaτGlyτArgτIleτAspτD-ArgτIleτ I__:_______________I

Z zastosowaniem Fmoc-D-Arg/Mtr/-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,15 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1303,7.

Przykład LXXXII — Q. Alaτphl-DτAroτPheτDτAlaτGlyτ&ro-IllτAspτDτArgτIllτ

L·-11------i

Z zastosowaniem Fmoc-D-Arg-/Mtr/-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,05 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1346,0.

Przykład LXXXIII.

.τArgτPhlτDτAlaτGly-ArgτIll-A sp—Arg—Ile—

Z zastosowaniem Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH i Fmoc- β Ala-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 5,45 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1085,5.

Przykład LXXXIV.

- β Ala-Phl-D-ArgτPhlτD-Ala-Gly-Arg-IllτA sg-Arg-Ile—

Z zastosowaniem Fmoc-D-Arg/Mtr/-OH zamiast Fmoc-Arg/Mtr/-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH i bez Fmoc-Cha-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,40 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1303,7.

Przykład LXXXV.

- β Ala-Phe—Arg—ChaT,Azt-Gly-Arg-Ile-Asp--Arg-IleZ zastosowaniem Fmoc-Azt-OH zamiast Fmoc-D-Ala-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast FmocMet-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 7,20 minut/. '

FAB-MS /M+H/+ = 1321,7.

Przykład LXXXVI.

T Aa Ala—Arg-Cha-DTAla-Gly-Arg-IleTAspTArgT Ile—

Z zastosowaniem Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 6,35 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1162,5.

168 456

Przykład LXXXVII.

-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Ar--ie--j

Z zastosowaniem Fnoc-Ile-OH zamiast Fnoc-Met-OH i bsz Fnoc-lAla-OH otrzymuje się w sposób opisans w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chrbnatbgrcSii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 6,10 minut/.

FAB-MS/M+H/+ = 1091,5.

Przykład LXXXVIH.

-P he-Arg-Cha-D-Als-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem Fnoc-Ile-OH zaniast Fmoc-Mst-OH i bez Fnoc-lAla-OH otrzymujs się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 8,25 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1238,8.

Przykład LXXXIX.

H-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-IleSyntezę psptydów prowadzi się w syntezatorze peptydowym ACT200 firny Advanced ChenTech z zastosowaniem Fnoc-strategii, stosując modyfikowany program sterujący. 50 ml reaktor wstrząsany napełnia się 1 g żywicy estru 2-netoksybeneylbwsgb firmy Bachem, Szwajcaria,. nasyconej 0,5 mmolaFnoc-ieblsuuyny. Stosuje się następujące pochodne aminokwasów: Fmou-Aag/Mtr/-OH, Fnou-Asp/tBu/-OH, Fnoc-Nle-OH, Fmou-Lys/BOk/-OH, Fnoc-Gly-OH, Fnoc-D-Ala-OH, Fnoc-Phe-OH, i BOk-Lys/Fmoc/-OH. Sprzęganie prowadzi się, stosując każdorazowo 3 równoważniki Fmoc-aninokwasu, 1-hsdroksybenzotriaeolu i dicykloheksslokaabbdiimidu /czas sprzęgania 40 ninut/. Po presdrowadesniu tsstu TNBS w przypadku niecałkowitego Tcstowania sprzęganie powtarza się z zastosowaniem tych sanych reagentów i nadmiarów. W przypadku całkowitego acylowania rozpozyna się następny cykl syntezy. Odczepianie grup ochronnych Fnoc prowadzi się każdorazowo za pomocą 20% piperydyny w DMF /raz 3 minuty, raz 15 minut/.

Pomiędzy reakcjami żywicę przemywa się każdorazowo 10-krotnie za ponocą DMF. Po zbudowaniu liniowej sekwencji B0k-Lys-Aag/Mtr/-Phe-D-Alα-Gly-Lys/BOk/-Nls-Asd/tBu/Arg/Mtr/-Ile- na polimeayznsm nośniku żywicę przemywa się dokładnie dichlorometanem i następnie traktuje 5-krotnis każdorazowo za pomocą 20 ml 1% roztworu kwasu taiSluorobctowsgo i w dichlbrometαnis najwyżej w ciągu 10 minut w temperaturze pokojowej /aż do intensywnego zabarwienia lila żywicy/. Roztwory łączy się i ^tęża w próżni. Pozostałość rozciera się z etersm, eter dekantuje, peptyd suszy w strumieniu azotu i roztwarza w 130 nl DMF, wartość pH nastawia się na około 8,5 za pomocą trietykiTminy, roztwór chłodzi do temperatury -20°C, i dodaje 0,2 g /0,75 mnoli/ diSenyloSbsfbaylbaesdku. Mieszaninę pozostawia się w ciągu 48 godzin w temperaturze -20°C i 48 godzin w temperaturze. 4°C. Wartość pH utrzymuje się na 8,5 za pomocą trietyloaniny. Następnie DMF usuwa się w próżni, pozostałość dwukrotnie rozciera z eterem, eter dekantuje, a pozostałość suszy w strunieniu azotu. Grupy ochronne w łańcuchach bocznych bdseczsdia się za pomocą kwasu trifluorooutbwsgb /αnieolu /90/10/ w ciągu 24 godzin w temperaturze pokojowej. Roztwór zaięża się w próżni, pozostałość rbecisra się z etsren i suszy. Surowy psptyd oczyszcza się na 3 μ kolumnie /10 x 2,14 cn/ przez Dynanax C18 z zastosowaniem gradientu z A: wbdy/auetbnitrylu/kwasu triSluorobctbwsgo 95/5/0,2 i.B: dito 20/80/0,2 od 5% do 80% B w ciągu 11 minut, strumień 20 nl, czas retencji 5,25 ninut. Po suszeniu przez wymrażanie otrzymuje się bezpostaciowy bezbarwny proszek.

FAB-MS /M+H/+ = 1186,0.

168 456

Przykład XM.

Z-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-i\Jle-Asp-Arg-Il--|

Z zastosowaniem Z-Lys/Fmoc/-OH zamiast BOCILys/Fmoc/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,60 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1320,0

Przykład XMI.

Z-Lys-Arg-Ser/Bzl/-D-Ala-Gly-Lys-Nlp-Asp-Arg-JleZ zastosowaniem Z-Lys/Fmoc/-OH zamiast BOC-Lys/Fmoc/-OH i Fmoc-Ser/Bzl/-OH zamiast Fmoc-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5%_:po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,95 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1350,0.

Przykład XMII.

Bz-Lys-Arg-P he-D-Ala-Gly-Lys-Nle-A sp-Arg-IleZ zastosowaniem BzILys/Fmoc/IOH zamiast BOC.-Lys/Fmoc/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut; czas retencji 6,00 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1290,0.

Przykład XMIH.

Z-Ly s-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem Z-Lys/Fmoc/-OH zamiast BOC-Lys/Fmoc/-OH i bez Fmoc-Nle-OH i FmocILys/BOC/IOH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,65 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1348,0.

Przykład XMIV.

H-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Ara-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem Fmoc-Cha-OH zamiast Fmoc-PheIOH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fm^c-Nle-OH i bez Fmoc-Lys/BOC/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,00 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1219,7.

Przykład XMV.

Z-LysL

Z zastosowaniem Z-Lys/Fmoc/-OH zamiast BOC-Lys/Fmoc/-OH, Fmoc-Cha-OH zamiast

Fmoc-Phe-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Nle-OH i bez Fmoc-Lys/BOC/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,35 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1353,7.

168 456

Przykład XMVI.

Menoc-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ilei I i- -------Z zastosowaniem Me-oc-Lys/Fino^-OH zamiast BOC-Lvs/Fmoc/-OH i ^oc-IIz-OH zamiast Fmoc-N1z-OH i bez Fmoc-Lys/BOC/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 8,20 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C95,8.

Przykład XMVII.

Menoc-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile- .

Z zastosowaniem Menoc-Lys/Fmoc/-OH zamiast BOCaLvs/Fmoc/aOH, Fmoc-Cha-OH zamiast Bmoc-Phe-OH i FmocaI1eaOH zamiast ^oc-Nle-OH i bez FmocaLys/BOC/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /20% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,00 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1402,0

Przykład XMVlll.

H-Lys-Lys-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile!_____L

Z zastosowaniem FmocaI1e-OH zamiast Bmoc-Nle-OH i bez Fmoc-ChaaOH zamiast Fmoc-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,40 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1191,8.

Przykład XMIX.

Z-Lys-Lys-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem ZaLys/Fmoc/-OH zamiast BOCaLys/Fmoc/-OH i FmocaI1z-OH zamiast Fmoc-Nle-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,75 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C26.0.

Przykład M.

Z-Lys-P.he-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem Z-Lvs/Fmoc/aOH ' zamiast BOC-Lys/Fmoc/aOH i Bmoc-Ile-OH zamiast hmoc-Nle-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 8,40 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1CC9,0.

Przykład MI.

/ 4-NO?/Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-.

ι I

Z zastosowaniem /4-NO2Z-Lys/Fmoc/-OH zamiast BOC-Lvs/Fmoc/-OH, FmocaI1e-OH zamiast Fmoc-N1z-OH i Fmoc-Cha-OH zamiast FmocaPhz-ΌH otrzymuje się w sposób opisany w przy kładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu minut, czas retencji 8,45 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1C98,9.

168 456

Przykład Mii.

Z-Lys-OΓa-Zha-Z-ΆZa-Gly-Azg-Ila-Zsp-Azg-Ilei I

------:

Z zaetoeomoAtamZ-Lhs/Fwoc/-OHzamtostBOC-Lhs/Fwuc/-OH, Fmon-Cąo-OH żowiaei Fmon-Phe-OH i Fmun-Ila-OH zawiast Fwuc-Nle-OH i dodotnuwo Fmun-Orn/BOC/-OH otożymaja eto w sposób opisany w prannłodzia I surowy peptyd, któon uczysznaa się stosując opisane mΓouAnt nhruwotogoofii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 7,80 wiAai/.

FAB-MS /M+H/+ = 1311,8.

Przykład MIII.

H-LLh-Azg-Ser/Bzl/-Z-Zlo-lly-Lhe-Nla-Zep-Z:rg-Ila-| i___I

Z żostusumoniam Fmon-Sao/Bal/-OH zamiast Fwon-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przynłoCate I surowy peptyd, który ucaysżnżo się stosując upieana ^1^.0. chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 winut, nżΓe retencji 5,55 winui/.

FAB-MS /M+H/+ = 1216,0.

Przykład MIV.

Bz -1- y s-Z r g - P h e-D -i Zl- G ly - L L/s -JNe - A sp - A zr -1 lei---i

Z zoeausowoAtam Ba-Lye/Fmun/-OH zawiast BOC-Lys/Fmuc/-OH utraymaje się w sposób opisony w praykłoCzie I surowy peptyd, który oczyszcza się sausująn upisona warunki chromatografii /5% po 80% B w ntyga 11 miauk, czas retencji 6,40 minui/.

FAB-MS /M+H/+ = 1290,0

Przykład MV.

Bz-Ly s-Azg-5er/ Bzl/-Z-Zlo-lly-Lys-Naa-Z ep-ZΓg-Iae-l

Z zastosowaniem Ba-Lys/Fmoc/-OH zamiast BOC-Lys/Fwun/-OH i Fmuc-Ser/Bzł/-OH zamiast Fmun-Pha-OH otożnmuja się w sposób opisany w pozynładaie I surowy peptyd, Atózn onzyszcao się stueujyn upisona mooanki chromatografii /5% po 80% B w niąga 11 minut,' naas retencji 6,35 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1319,7.

Przykład MVI.

Bz-D-t..Ly-Azr-SearBBZ/-Z-Zla-lly-LLh-Nne-Azp-Azr-ΐlai----1

Z aoetosomoniam Bz-D-Lys/Fmun/-OH żamiΓst BOC-Lhs/Fmoc/-OH i Fmon-Seo/Bżl/-OH zowiost Fmon-Phe-OH otrzymuje się w sposób opisaay w przykładzie I saromy paptnC, Otóoy oczyszcza się stosajyn opisane πι^αΑ chromatografii /5% po 80% B w niąga 11 minut, czas retencji 6,70 minut/.

FZB-MS /M+H/+ = 1319,8.

Przykład MVII.

Tos-Lys-Azg-Phe-ZzAZao-lanAzg-Ile-A se-Azz-ϊlaZ zosaoeuwoniam Wus-Lye/Fmon/-OH zamiast BOC-Lys/Fmon/-OH i Fmon-Ile-OH żomiast Fmuc-Nla-OH utoaymaje się w sposób upisaay w pozykłoCzia I surowy peptyd, który oczyszcza się stosajyn upieona wooanki chromatografii /5% po 80% B w niąga 11 minut, czas oeteacji 6,90 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1367,7.

168 456

Przykład MVIII.

H-Ly s-Ar g—P he-klg-Arg-I ls-A sp-Ar g-1lei__________!

Z zastosowaniem Fmou-Clg-OH zamiast rmoc-Gly-OH i zamiast Fmdc-D-Ala-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmdu-Nłe-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 4,85 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1253,8.

Przykład MIX.

Z-Lys-Arg-Phe-klg-Arg-He-Asp-Arg-IleZ zastosowaniem Z-Lys/MoU-OH zamiast BOC-Lys/Fmdu/-OH, Fmoc-Clg-OH zamiast Fmdu-Gly-OH i Fmdu-D-Ala-OH i Fmdu-Ile-OH zamiast Fmoc-Nla-OH i bez Fmoc-Lys/BOC/OH otrzymuje się w sposób opisany' w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 6,85 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1387,8.

Przykład MX.

Z-Lys-Arg-kha-klo-Arg-Ile-Asp-Arg-IleZ pastosdwaniam Z-Lys/Fmdu/-OH zamiast BOC-Lys/Fmdc/-OH, Fmdu-Cha-OH zamiast Fmou-Phe-OH i Fmou-Ile-0H zamiast Fmdc-Nła-OH i Fmdc-Clg-OH zamiast Fmdu-Gły-OH i zamiast Fmdu-D-Ała-OH i bez Fmdc-Lys/BOC/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który duzvszcpa się stosując dpisana warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 11 minut, czas retencji 8,70 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1394,0.

Przykład MXI.

Z-Ly ε-ΑΓρ-ΟΚΒ-Ο-ΟΟο-Α-ς-Ι!^-- sp-A-g-IleZpastosooanίemZ-Lys/Fms)u/-0HpamiastB0C-Lyss/Frkdc/~0H, Fmdu-Cha-OH zamiast Fmoc-Phe-OH, Fmoc-ClgiOH zamiast Fmoc-GlyiOH i Fmou-D-AlaΙOH i Fmoc-Ile-OH zamiast FmdUΙNlaΙOH i bez Fmdu-Lys/BOC/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który dupyspcza się stosując opisane warunki chromatografii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 9,80 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1393,9

Przykład MXII.

H-Q^p-A-g-Ch^-D-Α-l-Gly-A-g-Ila-Asp-Al--—IleZ zastdsdwaniam BOCiDap/Fmoc/-OH zamiast BOC-Lys/Fmoc/iOH, FmouΙIle-OH zamiast Fmoc-NleiOH i bez Fmdu-Lys/BOC/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki uhromato-rafii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 6,85 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1177,5

Przykład MXIII.

Z-Dap-A-g-kha-D-AAa-Gly-Arg-Ile-A sp-Arg-IleZ zastosowaniem ZΙDap/Fmou/-OH zamiast BOCΙLvs/Fmou/ΙOH, Fmou-Cha-OH zamiast FmocΙPaeΙOH i Fmou-Ila-0H zamiast Fmdu-Nle-OH i Fmdc-Lys/BOC/ΙOH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy peptyd, który dcpvszcpa się stosując opisane warunki cardmato-rafii /5% po 80% B w ciągu 10 minut, czas retencji 8,10 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1311,6

168 456

Analogicznie wytwarza się /4-NG2/ Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-f'let-A sp-Arg- Ile^ά 1 j

Oczyszczanie z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /10% po 90% B w ciągu 10 minut, czas retencji 7,4 minut/

FAB-MS /M+H/+ = 1417,0.

/4-NO2/Z-Lys-Orn-Cha-D-Ala-Gly-Ar g-Ile-Asp-Arg-11eOczyszczanie z zastosowaniem opisanych warunków chromatografii /10% po 90% B w ciągu 10 minut, czas retencji 7,8 minut/.

FAB-MS /M+H/+ = 1356,6.

Przykład MXIV.

Z-pirydyloacetylo-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleSyntezę peptydów prowadzi się za pomocą syntezatora peptydowego ACT200 firmy Advanced ChemTech z zastosowaniem Fmoc-strategii, stosując modyfikowany program sterujący. 50 ml-reaktor wstrząsany napełnia się 1 g żywicy estru 2-metoksybezylowego firmy Bachem, Szwajcaria, nasyconej 0,5 mmolaFmoc-izoleucyny. Stosuje się następujące pochodne aminokwasów: Fmoc-Arg/Mtr/-OH, Fmoc-Asp/tBu/-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-Cha-OH i 2-pirydyloacetylo-Lys/Fmoc/-OH. Sprzęganie prowadzi się z zastosowaniem każdorazowo 3 równoważników Fmoc-amiaokwasu, 1-hydroksybenzotnazoki i dicykloheksylokarbodiimidu /czas sprzęgania 40 minut/. Po przeprowadzeniu testu TNBS w przypadku niecałkowitego acylowania powtarza się sprzęganie przy użyciu tych samych reagentów i nadmiarów. W przypadku całkowitego acylowania rozpoczyna się następny cykl syntezy. Odszczepianie grup ochronnych Fmoc prowadzi się każdorazowo za pomocą 20% piperydyny W DMF /raz 3 minuty, raz 15 minut/.

Pomiędzy reakcjami żywicę przemywa się każdorazowo 10-krotnie za pomocą DMF. Po zbudowaniu liniowej sekwencji 2-pirydyloacetylo-Lys-Arg/Mtr/-Cha-D-Ała-Gly-Arg/Mtr/-IleAsp/tBu/-Arg/Mtr/-Ile- napolimerycznym nośniku żywicę przemywa się dokładnie dichlorometanem i następnie traktuje 5-krotnie każdorazowo za pomocą 20 ml 1% roztworu kwasu triflurooctowego w dichlorometanie najwyżej w ciągu 10 minut w temperaturze pokojowej /aż do wystąpienia intensywnego zabarwienia lila żywicy/. Roztwory łączy się i zatęża w próżni. Pozostałość rozciera się z eterem, eter dekantuje, peptyd suszy się w strumieniu azotu i roztworze w 130 ml DMF, wartość pH nastawia się na około 8,5 za pomocą Metyloaminy, roztwór chłodzi się do temperatury -20°C i dodaje 0,2 g /0,75 mmola/ difenylofosforyloazydku. Mieszaninę pozostawia się w ciągu 48 godzin w temperaturze -20°C i w ciągu 48 godzin w temperaturze 4°C. Wartość pH utrzymuje się na 8,5 za pomocą Metyloaminy. Następnie DMF usuwa się w próżni, pozostałość dwukrotnie rozciera z eterem, eter dekantuje, a pozostałość suszy w strumieniu azotu. Grupy ochronne w łańcuchach bocznych odszczepia się za pomocą kwasu trifluorooctowego/anizolu /90/10/ w ciągu 24 godzin w temperaturze pokojowej.

Roztwór zatęża się w próżni, pozostałość rozciera się z eterem i suszy. Surowy peptyd oczyszcza się na 3μ kolumnie /10 x 2,14 cm/ poprzez Dynamax C18 z zastosowaniem gradientu z A : woda/acetonitryl/kwas trifluorooctowy 95/5/0,2 i B: dito 20/80/0,2 od 10% B do 90% B w ciągu 11 minut, strumień 10 ml/minutę, czas retencji 8,2 minut. Po suszeniu przez wymrażanie otrzymuje się bezpostaciowy bezbarwny proszek.

FAB-MS /M+H/+ = 1338,6.

Przykłady MXV do MXXIV.

X-Lys-Ara-Cha-D-Ala-Gly-Aro-Ile-Asp-Arg-Ile60

168 456

Z zastosowaniem X-Lss/Fmou/-OH zamiast 2-diaydyloacetylo Lys/Fmoc/-OH otrzymuje się w sposób opisany w przykładzie I surowy psptyd, który oczyszcza się stosując opisane warunki chromatografii /10% po 90% B w ciągu 11 minut, czas retencji patrz następująca tabslc/.

Tabela

Przykład nr	X	kpas retencji /minuty/	FAB-MS /M+H/
1	2	3	4
MXIV	CTT	8,2	1338,6
MXV	OO 'χ/ b 0	9,5	1393,7
MXVI	σΧγ 0	9,9	1402,6
MXVII	(X. c	6,7	1325,8
MXVIII		8,3	1382,8
MXIX	r 0	8,7	1385,8
MXX	Gr □	7,8	1415,7 /1417.7/ 1Br
MXXI	X”2 H 0	7,6	1398,8
MXXII	cl~©-°©< 0	8,0	1388

168 456 ciąg dalszy tabeli

1	2	3	4
MXXIII	C	8,1	1404
MXXIV	0	7,5	1422

/1/: Odstępstwo od oczyszczania według przykładu 1:10% B do 90% w ciągu 10 minut, strumień 10 ml/minutę.

Żel /do stosowania -o-rzezskórnego, zwłaszcza w połączeniu z jontoforezą/

10% substancja czynna o ogólnym wzorze I w buforze cytrynianowym pH 4,1 /skład patrz poniżej/

0,25% agaroza

Skład buforu cytrynianowego pH 4,1 10,5 g monohydrat kwasu cytrynowego 100,0 ml ług sodowy 1 mol/litr do 500,0 ml woda destylowana	j>- roztwór I
100,0 ml kwas solny 0,1 mola/litr	1
do 250,0 ml roztwór I	/ roztwźr II

Powyższy roztwór ogrzewa się, mieszając do temperatury około 60°C i po rozpuszczeniu wszystkich cząstek agarozy pozostawia do ochłodzenia do temperatury pokojowej.

Roztwór iniekcyjny:

10.5 g NaH2PO4.2H2O ]

95.5 g Na2HPO4. 12H2O > bufor pH7,4

22,0 g NaCl J do 5.000 ml wody destylowanej

Ten roztwór buforowy przetrzymuje się w autoklawie w ciągu 30 minut w temperaturze 121°C i przy ciśnieniu 1 atmosfery nadciśnienia.

Do tego roztworu wprowadza się 1,5 g substancji czynnej o ogólnym wzorze I i cały roztwór sączy się sterylnie.

W tych przykładach preparatów można stosować np. związek

M-NOa/Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-;

1_ _I albo jeden z innych wyżej podanych związków.

168 456

Claims (20)

1. Sposób wytwarzania cyklopeptydów o ogólnym wzorze I o działaniu agonistycznym w stosunku do ANP,

-An-Bn-Cn-Dn-En-Fπ-Gn-Hn-In-Kn- _/T , w którym kolejność członów Bn do Kn stanowi kolejność reszt aminokwasowych hANP

Arg/27/-Phe/8/-Gly/9/-Gly/10/-Arg/11 /-Met/12/-Asp/13/-Arg/14/-Ile/l 5/- albo

Bn oznacza resztę α-aminokwasu z jednym albo dwoma łańcuchami bocznymi, której jeden lub obydwa łańcuchy boczne zawiera/ją/jedną, dwie, trzy albo cztery zasadowe grupy,

Cn oznacza resztę cc-aminokwasu z jednym lub dwoma ewentualnie zawierającymi -0-, -S-albo-C/O/O-alkilowymi łańcuchami bocznymi, przy czym łańcuchy boczne albo jeden z obydwu łańcuchów bocznych zawiera/ją/ jeden albo dwa rodniki, przy czym każdorazowy rodnik oznacza grupę cykloalkilową o 3 do 10 atomach węgla, fenylową, naftylową, podstawioną (np. przez grupę hydroksylową, fenylo/Ci-C4/-alkiloksylową, /Ci-Cy-alkoksylową, NO2), grupę fenylową albo 5- lub 6-członową aromatyczną grupę heterocykliczną, w której 2 człony stanowią N, albo jeden człon N, jeden człon stanowi O albo S, albo jeden człon stanowi N, S lub O, a pozostałe człony stanowią C, korzystnie tienyl, furyl, pirolil, imidazolil, pirazolil, pirydyl, pirazynyl, pirymidylyl., pirydazynyl, indolil, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolinyl,

Dn i En niezależnie od siebie oznaczają każdorazowo Gly albo resztę α-aminokwasu, który imituje budowę przestrzenną rodzimego aminokwasu Gly, albo

Dn i En razem oznaczają resztę ω-aminokwasu -NH-/CH2/2-1 ι-CO-, albo formę peptydową (templat),

Fn oznacza resztę α-aminokwasu z jednym albo dwoma łańcuchami bocznymi, przy czym łańcuchy boczne albo jeden z obydwu łańcuchów bocznych zawiera/ją/ jedną, dwie, trzy albo cztery zasadowe grupy,

Gn oznacza resztę α-aminokwasu z jednym albo dwoma lipofilowymi łańcuchami bocznymi,

Hn oznacza Gly albo resztę α-aminokwasu, która w łańcuchu bocznym albo w łańcuchach bocznych nie zawiera żadnej funkcjonalnej grupy albo zawiera jako grupę funkcyjną -COOH lub CONH2,

In oznacza resztę α,-aminokwasu z jednym albo dwoma łańcuchami bocznymi, przy czym jeden albo obydwa łańcuchy boczne zawiera/ją/ jedną, dwie, trzy lub cztery zasadowe grupy,

Kn oznacza resztę α-aminokwasu z jednym albo dwoma lipofilowymi łańcuchami bocznymi, zaś

An oznacza grupę spacer, która łączy Bn z Kn i wpływa na budowę przestrzenną każdorazowej cząsteczki tak, że cyklopeptydy wiążą się z receptorami ANP, przy czym

An oznacza

a) grupę -A1-A2-A3-, w której

Aj oznacza Gly albo resztę α-aminokwasu, w której łańcuch boczny lub łańcuchy boczne nie zawierają żadnej grupy funkcyjnej,

A2 oznacza kowalencyjne wiązanie albo resztę ω-aminokwasu o wzorze -NH-/CH2/11-CO- II w którym n oznacza liczbę całkowitą 1 do 11,

A3 oznacza resztę cc-aminokwasu z jednym albo dwoma ewentualnie zawierającymi -0-,

-S- albo -C/0/0 alkilowymi łańcuchami bocznymi, przy czym jeden albo obydwa łańcuchy boczne zawierają jeden albo dwa rodniki, przy czym każdorazowy rodnik oznacza grupę cykloalkilową o 3 do 10 atomach węgla, fenylową, naftylową, podstawioną (np. przez grupę hydroksylową, fenylo (Ci-C4/-alkoksylową (Ci-C4)-alkoksy]ową, NO?) grupę fenylową albo 5168456 lub 6-członową aromatyczną grupę heterocykliczną, w której 2 człony stanowią N, albo jeden człon stanowi N, a jeden, człon stanowi O albo S, albo jeden człon stanowi N, S lub O a pozostałe człony stanowią C, korzystnie tienyl, fuiyl, pirolil, imidazolił, pirazolil, pnydyl, pnazydyl, pirymidylyl, pirydazynyl, indolil, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolinyl, albo

b) grupę -A4-A5-, w której

A4 oznacza formę peptydową (templat) albo resztę ω-aminokwasu o wzorze -NH-/CH₂/„-CO- II w którym n oznacza liczbę całkowitą 1 do 11

A5 oznacza kowalencyjne wiązanie albo resztę α-aminokwasu z jednym albo dwoma ewentualnie zawierającymi -0-, -S- albo -C/0/0- alkilowymi łańcuchami bocznymi, przy czym jeden albo obydwa łańcuchy boczne zawierają rodnik albo dwa rodniki, przy czym każdorazowy rodnik oznacza grupę cykłoalkilową o 3 do 10 atomach węgla, grupę fenylową, naftylową, podstawioną (np. przez grupę hydroksylową, fenylo(Ci-C4)-alkoksylową, (Ci-C4)-alkoksylową, NO?) grupę fenylową albo 5- lub ó- członową aromatyczną grupę heterocykliczną, w której 2 człony stanowią N albo jeden człon stanowi N i jeden człon stanowi O lub S, albo jeden człon stanowi N, S, albo O, a pozostałe człony stanowią C, korzystnie tienyl, furyl, pirolil, imidazolił, pirazolil, pirydyl, pirazydyl, pirymidylyl, pirydazylyl, indolil, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolilyl albo

c) resztę aminokwasu o wzorze III

-NH-(CH₂)_m-CH(R)-CO- ΠΙ w którym m oznacza liczbę całkowitą 1 do 11, a R oznacza ΝΗΧ, OX, SX, ΝΧΥ, -NH/H/-C/O/-CH₂-X^ł, -N/H/-C/O/-CH₂-O-X¹, -N/H/-C/O/-X', -N/H/-C/O/-CH=CH-X¹ albo Ν/ΗΛΟΛΟ-Ο^-Χ¹, przy czym

X oznacza atom wodoru, niepodstawioną albo podstawioną grupę benzoilową, niepodstawioną albo podstawioną grupę cykloheksyloksykarbonylową, niepodstawioną albo podstawioną grupę benzyloksykarbonylową, grupę 2-, 3- lub 4-pirydylometyloksykarbonylową albo grupę tozylową,

Y oznacza grupę Ci do C14 alkilową albo grupę arylo-/Cl-C14/-alkilową, a

X^I oznacza/a/fenyl, /β/przez 1,2 lub 3 podstawniki (podstawniki: chlorowiec, trifluorometyl lub nitro) podstawiony fenyl, /y/naftyl, /Ó/benzo/b/ tienyl, /e/pirydyl albo /rj/pirazynyl oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli, znamienny tym, że buduje się następującą liniową sekwencję peptydów

An-Bn-Cn-Dn-En-Fn-Gn-Hn-In-Kn-OH z odpowiednich aminokwasów AnBnOH, CnOH, DnOH, EnOH, FnOH, GnOH, HnOH, InOH i KnOH, które każdorazowo zawierają grupę ochronną znaną w chemii peptydów, metodą sprzęgania i następnie cyklizuje się liniowy peptyd i ewentualnie przeprowadza się w odpowiednią sól.

2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się aminokwas AnBnOH, w którym An w części najbliższej Bn zawiera grupę aromatyczną lub cykloalifatyczną.

3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że stosuje się aminokwasy AnBnOH, CEnOH, EnOH, FnOH, GnOH, HnOH, InOH i KnOH w postaci L.

4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako BnOH stosuje się α-aminokwas o jednym lub 2 łańcuchach bocznych, z których jeden lub obydwa zawierają jedną, dwie, trzy lub cztery grupy zasadowe; jako CnOH stosuje się α-aminokwas o jednym lub dwóch ewentualnie zawierających -O-, -S- albo -C/O/O- alkilowych łańcuchach bocznych, przy czym łańcuchy boczne albo jeden z dwóch łańcuchów bocznych zawiera jedną grupę lub dwie grupy, każdorazowo oznaczające grupę cykłoalkilową o 3 do 10 atomów węgla, rodnik fenylowy, naftylowy, podstawiony (np. przez grupę hydroksylową, fenyło/Ci-C4/-alkiloksylową, /C1-C4/-alkoksylową, NO₂/ rodnik fenylowy albo 5- lub 6-członową aromatyczną grupę heterocykliczną, w której 2 człony stanowią N, albo jeden człon stanowi N i jeden człon stanowi O lub S, albo jeden człon stanowi N, S lub O, a pozostałe człony stanowią C, korzystnie tienyl, furyl, pirolil, imidazolił, pirazolil, pirydyl, pirazynyl, pirymidynyl, pirydazynyl, indolil, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolinyl;

168 456 jako DnOH i EnOH niezależnie od siebie stosuje się Gly albo α-aminokwas, który odtwarza budowę przestrzenną naturalnego aminokwasu Gly, albo Dn i En razem stanowią resztę «.-aminokwasu -NH-/CH2/2-11-CO- albo formę peptydową (templat);

Pn/FU Oho sla c; . α ^-InK AkPi WonauAbOk0 ł-ł VtArT//-» łn

J CŁTW A 11V_ZA A OLUÓUJU VA Ciii Hit Vi\ *v U.O w J VzVJ.11 j lii ivx vz vj *» wu runvuvuuvii zr\jzzZLŁj vn, z xwv/x j vii jeden lub obydwa zawierają jedną, dwie trzy lub cztery grupy zasadowe;

jako GnOH stosuje się α -aminokwas o jednym lub dwóch lipofilowych łańcuchach bocznych;

jako HnOH stosuje się Gly albo α-aminokwas, który w jednym lub więcej łańcuchach bocznych nie zawiera żadnej grupy funkcyjnej albo zawiera -COOH lub -CONH 2 jako grupę funkcyjną;

jako InOH stosuje się α-aminokwas o jednym lub 2 łańcuchach bocznych, z których jeden albo obydwa zawierają jedną, dwie, trzy lub cztery grupy zasadowe;

jako KnOH stosuje się α-aminokwas o jednym lub dwóch lipofilowych łańcuchach bocznych.

5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że jako BnOH, FnOH i InOH niezależnie od siebie stosuje się α-aminokwas z łańcuchem bocznym, który zawiera jedną lub dwie grupy zasadowe;

jako CnOH stosuje się α-cminokwcs z łańcuchem bocznym;

jako DnOH i EnOH niezależnie od siebie stosuje się Gly albo α-aminokwas, który odtwarza budowę przestrzenną naturalnego aminokwasu Gly, albo

Dn i En razem stanowią resztę ω-aminokwasu

-NH-CH2/2-5-CO- albo formę peptydową /templat/;

jako GnOH i KnOH niezależnie od siebie stosuje się α-aminokwas z lipofilowym łańcuchem bocznym, przy czym łańcuch boczny stanowi rodnik /Ci-Có/-alkilowy, który może też zawierać w łańcuchu jeden lub dwa atomy -S- lub -O-;

jako HnOH . stosuje, się Gly albo «-aminokwas, w którym łańcuch boczny stanowi /C\-C6alkil, fenylo-/Ci-C6-alkil, H2N-CO-/CH2/1-4 albo HOOC-/CH2/1-4-.

6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że jako BnOH i FnOH i InOH niezależnie od siebie stosuje się Arg, D-Arg, Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, Homo-Arg, D-Homo-Arg, Dap, D-Dap albo 4-amino-Phe, korzystnie Arg, D-Arg, Lys, D-Lys albo Orn; jako CnOH stosuje się Phe, D-Phe, 4-NO2-Phe, Cha, D-Cha, Ser/Bzl/, D-Ser/Bzl/, Tyr, D-Tyr, Tyr/Bzl/, D-Tyr/Bzl/, Nal, D-Nal, Thi, D-Thi, Asp/Bzl/, D-Asp/Bzl/, His, D-His, Glu/Bzl/ albo D-Glu/Bzl/, korzystnie Phe, Cha, Tyr, Nal, Tyr/Bzl/ albo /4-NO2/-Phe;

jako DnOH i EnOH niezależnie od siebie stosuje się Ala, Gly, Pro, Ser, Asn, Lys, Asp albo Thr albo ich postacie D, korzystnie Dn oznacza D-Ala, Gly, Pro, D-Pro, Ser albo D-Ser;

jako EnOH stosuje się Gly, Asp albo Asn; albo Dn i En razem oznaczają resztę ω-aminokwasu o wzorze -NH-/CH2/2-5-CO- albo formę peptydową (templat), korzystnie Btu, Clg, Thc albo Trc albo ich postacie D, zwłaszcza D-Btu;

jako GnOH i KnOH niezależnie od siebie stosuje się Ile, D-Ile, Met, D-Met, Nle, D-Nle, Leu, D-Leu, Val, albo D-Val, korzystnie Ile, Met, Nle albo Leu;

jako HnOH stosuje się HOOC-/CH2/1-4-CH/NH-/-COOH, ich postacie D, Gly, Ala, D-Ala, Asn, D-Asn, Phe albo D-Phe, korzystnie Asp, Glu albo Gly.

7. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że stosuje się aminokwas AnBnOH, w którym An oznacza

a) grapę - Ai - A2 - A3-, w której

Ai oznacza Gly albo resztę α-aminokwasu, w której jeden lub więcej łańcuchów bocznych nie zawiera żadnej grupy funkcyjnej;

A2 oznacza kowalencyjne wiązanie albo resztę ω-aminokwasu o wzorze

-NH- /CH2/11 -CO- /Π/ w której n oznacza liczbę całkowitą 1 do 11;

A3 ozacza resztę α-aminokwasu o jednym lub dwóch ewentualnie zawierających -O-, -Salbo -C/O/O- alkilowych łańcuchach bocznych, przy czym łańcuchy boczne albo jeden z dwóch łańcuchów bocznych zawiera jedną grupę lub dwie grupy, przy czym każdorazowa grupa oznacza grupę cykloalkilową o 3 do 10 atomach węgla, rodnik fenylowy, naftylowy, podstawio168 456 ny (np. przez grupę hydroksylową, fenylo/Ci-CzZ-alkiloksylową, /Ci-C^-alkoksylową, NO?) rodnik fenylowy albo 5- lub 6-czlonową aromatyczną grupę heterocykliczną, w której 2 człony stanowią N, albo jeden człon stanowi N i jeden człon stanowi O lub S, albo jeden człon stanowi N, S lub O, a pozostałe człony stanowią C, korzystnie tienyl, furyl, pirolil, imidazolil, pirazolil, pirydyl, pirazynyl, pirymidynyl, pirydazynyl, indołii, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolinyl; albo

b) grupę - A4 - As w której

A4 oznacza formę peptydową /templat/ albo resztę ω-aminokwasu o wzorze -NH-/CH₂/_n-CO- /11/ w której n oznacza liczbę całkowitą 1 do 11;

As oznacza wiązanie kowalencyjne albo resztę oc-aminokwasu o jednym lub dwóch ewentualnie zawierających -0-, -S- albo -C/0/0- alkilowych łańcuchach bocznych, przy czym łańcuchy boczne albo jeden z dwóch łańcuchów bocznych zawiera jedną grupę albo dwie grupy, przy czym każdorazowa grupa oznacza grupę cykloalkilową o 3 do 10 atomach węgla, rodnik fenylowy, naftylowy, podstawiony /np. przez grupę hydroksylową, fenylo/Ci-C4/alkiloksylową /Ci-C4/'aikoksyiową, ŃO2/rodnik fenylowy albo 5- lub ó-członową aromatyczną grupę heterocykliczną, w której 2 człony stanowią N, albo jeden człon stanowi N i jeden człon stanowi O albo S, albo jeden człon stanowi N, S albo O, a pozostałe człony stanowią C, korzystnie tienyl, furyl, pirolil, imidazolil, pirazolil, pirydyl, pirazynyl, pirymidynyl, pirydazynyl, indołii, izochinolil, chinolil, chromanyl, tiazolil, oksazolil, morfolinyl; albo

c) grupę aminokwasową o wzorze III

-NH-/CH₂/_m-CH/R/-CO- /111/ w której m oznacza liczbę całkowitą 1 do 11, a R oznacza ΝΗΧ, OX, SX, ΝΧΥ, -NH/H/-C/0/-CH?-X’,

-N/H/-C/O/-CH₂-O-X¹,

-N/H/-C/O/-X‘,

-N/H/-C/O/-CH=CH-X* albo

-N/HAC/Cy-O-CIM¹, w których

X oznacza atom wodoru, niepodstawioną albo podstawioną grupę benzoilową, niepodstawioną albo podstawioną grupę cykloheksyloksykarbonylową, niepodstawioną albo podstawioną grupę benzyloksykarbonylową, grupę 2-, 3- lub 4-pirydylometyloksykarbonylową albo grupę tozylową,

Y oznacza grupę Ci do Ci4-ałkilową albo grupę arylo-/Ci do C14-alkilową/, a X¹ oznacza /cc/fenyl, /β/ przez 1, 2 lub 3 podstawniki /podstawniki: chlorowiec, grupa trifluorometylowa lub nitrowa, podstawiony fenyl, /γ/ naftyl, /0/ benzo[b]tienyl, /ε/ pirydyl albo /η/ pirazynyl.

8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że stosuje się aminokwas AnBnOH, w którym An oznacza

a) grupę - Ai - A₂ - A3 -, w której Ai oznacza resztę α-aminokwasu o /Ci-CeZ-alkilowym łańcuchu bocznym;

A₂ oznacza resztę ω-aminokwasu o wzorze II, w którym n oznacza liczbę całkowitą 1 do 6;

A3 oznacza resztę oc-aminokwasu o łańcuchu bocznym; albo

b) grupę -A4 - A5 w której A4 oznacza resztę ω-aminokwasu o wzorze II, w którym n oznacza liczbę całkowitą 1 do 6

A5 oznacza resztę cc-aminokwasu o łańcuchu bocznym; albo

c) resztę aminokwasu I o wzor/c ΠΙ, w którym m oznacza 1,2,3 lub 4, a R oznacza -ΝΗΧ, ΝΧΥ,

-nh/h/-c/o/-ch₂-x’,

-n/h/-c/o/-ch₂-o-x*,

-Ν/Η/-0/0/-Χ¹,

-N/H/-C/O/-CH=CH-X* albo

-n/h/-c/o/-o-ch₂-x*

9. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że stosuje się aminokwas AnBnOH, w którym An oznacza

a) grupę - At - A₂ - A3 -, w której

168 456

Ai oznacza Ala, Gly, Phe, Val, Ile, Leu lub Nle, albo ich postacie D, korzystnie Gly, Ala albo D-Ala;

A? oznacza resztę ω-aminokwasu o wzorze II. w którym n oznacza 2, 3 lub 5;

a ~~_____ t\ nt,„ o atp tzu~ r> /-ί,_λ τλ c^nu-i/ τ~> τ.,..

Ph ezDa-pa mc, noik^, ‘t-nAC-f nc, vua, wna, lzi/jlui/, je-oci/jj/a/, ly-D —tv^ł,

Tyr/Bzl/, D-Tyr/Bzl/, Nal, D-Nal, Thi, D-Thi, Asp/Bzl/, D-Asp/Bzl/, His albo D-His, korzystnie phe, Tyr, Cha, Nal albo /4-NO2/Phe; albo

b) grupę -A4 - A5 -, w której A4 oznacza resztę ω-aminokwasu o wzorze II, w którym n oznacza 2, 3 albo 5;

A5 oznacza Phe, D-Phe, 4-NO^-Phe, Cha, D-Cha, Ser/Bzl/, D-Ser/Bzl/, Tyr, D-Tvr, Tyr/Bzl/, D-Tyr/Bzl, Nal, D-Nal, Thi, D-Thi, Asp/Bzl/, D-Asp/Bzl/, His, D-His, Glu/Bzl/ albo D-Glu/Bzl/, korzystnie Phe, Tyr,Cha, Nal albo /'4-NO2/'-Phe; albo

c) resztę aminokwasu o wzorze III, w którym m oznacza 1, 2, 3 lub 4, a R ma znaczenie podane w zastrz. 8, przy czym X oznacza atom wodoru, niepodstawioną albo podstawioną przez chlor, grupę metoksylową albo /Ci do C3/-alkilową grupę benzoilową, cykloheksyloksy- lub metyloksykarbonylową, niepodstawioną albo podstawioną przez grupę metoksylową, nitrową, trifluorometylową lub cyjanową grupę benzyloksykarbonylową, korzystnie grupę benzyloksykarbonylową, 4-metoksybenzyloksykarbonylową, 2- lub 4-trifluorometylobenzylokarbonylową albo4 nillsiaΞ/vs]c^ΰOl'OaVScrryk)olą,ottUϊ5zezaLgkV^lb^tyofcklvkαibonviswą4^itlobenzyloksykarbαnylową01bs2-lęb C-trifluorometylobenzyloksykarbonylową, Y oznacza grupę Ci do Ci4-alkilową albo /Ci do Ci4-alkilo/-fenylową, korzystnie grupę benzylową lub fenyloetylową; a

X ¹ oznacza grupę fenylową albo mono- lub di-podstawioną grupę fenylową, 2-pirvdylową,

2-pirazynvlową, 3-benzo[b]tienylową, albo 2-naftylową.

i0. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje się amin okwas AnB nOH, w którym:

An oznacza grupę - Ai - A2 - A3 -, w której Ai oznacza Gly, A2 oznacza Aca, pAla, Apen, Abut, Gly albo kowalencyjne wiązanie, a

A3 oznacza Phe, Phe/4-NO?/, Tyr albo Tyr/Bzl/; albo An oznacza grupę - A4 - A5 -, w której

A4 oznacza pAla, Aca, The, Aund, Btu albo D-Btu, a

A5 oznacza kowalencyjne wiazonia, Phe, D-Phe, Phe/4-NO2/, Tyr, Tyr/Bzl/ albo Cha; albo

An oznacza resztę aminokwasu o wzorze III

-NH-/CH2/mCH/R/-C0-, w którym m oznacza i albo 4, a R oznacza grupę -NHX, w której X oznacza H, Z, Bz, Menoc, /4-NO2/Z albo Tos albo An oznacza X2-Lys-, gdzie χ2 oznacza jedną z następujących grup

O

O'^\y li

168 456

Bn oznacza Arg, D-Arg, Lys, Orn, albo Ctr; a jako CnOH stosuje się Cha, Phe, Ser/Bzl/, Tyr, Tyr/Bzl/, albo Tyr/Me/; jako DnOH stosuje się D-Ala, Pro albo D-Pro; jako EnOH stosuje się Gly;

albo Dn i En razem oznaczają L-Clg, D-Clg albo D-Btu;

jako FnOH stosuje się Arg albo Lys;

jako GnOH stosuje się Ile, D-Ile, Nle albo Met;

jako HnOH stosuje się Asp, D-Asp albo Gly;

jako InOH stsouje się Arg albo D-Arg; a jako KnOH stosuje się Ile.

11. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że wytwarza się związek o wzorze 1, w którym An oznacza

-Gly-pAla-Phe-,

-Gly-eAla-Tyr/Bzl/-,

- β-Ala-Phe,

- β Ala-Phe/4-N O2/-Ly s -,

-/4-NO2/Z-Lys-,

O

Bn oznacza Arg, Lys, Ctr albo Orn; jako CnOH stosuje się Cha albo Phe ; jako ; DnOH stosuje się D-Ala; jako EnOH stosuje się Gly; jako FnOH stosuje się Arg; jako GnOH stosuje się Ile albo Met; jako HnOH stosuje się Asp; jako InOH stosuje się Arg; a jako KnOH stosuje się Ile

168 456 poprzez sprzęganie kolejnych sekwencji.

12. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w celu wytworzenia cyklopeptydu o poniższym wzorze

-pAla-Phe-Arg-Phe-B-Ala-Gly-Arg-Iie-Asp-Arg-Ile-Glystosuje się następujące pochodne aminokwasów

Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Arg/Mtr/-OH/, Fmoc-Asp/tBu/OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-D-AlaOH, Fmoc-Phe-OH i Fmoc-pAla-OH.

13. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w celu wytworzenia cyklopeptydu o poniższym wzorze

- ^)Ala-Tyr/Bzl/-Arg-Cha-D-Ala-gly-Arg-ile-Asp-Arg-Ile-Glystosuje się Fmoc-Tyr/Bzl/-OH i Fmoc-Cha-OH.

14. Sposób według zastrz. i, znamienny tym, że w celu wytworzenia cyklopeptydu o poniższym wzorze

- [iAla-Phe-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ilestosuje się Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH.

15. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w celu wytworzenia cyklopeptydu o poniższym wzorze a-Phe-Lys-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile- stosuje się dodatkowo Fmoc-Lys/BOC/-OH i Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH.

16. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w celu wytworzenia cyklopeptydu o poniższym wzorze

- ^Ala-Phe/Ą-NO^/-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ilestosuje się Fmoc-Cha-OH i Fmoc-Phe/4NO2-OH zamiast Fmoc-Phe-OH.

17. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w celu wytworzenia cyklopeptydu o poniższym wzorze la-Phe-Ctr-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile- stosuje się dodatkowo Fmoc-Ctr-OH i Fmoc Ile-OH zamiast Fmoc-Met-OH

18. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w celu wytworzenia cyklopeptydu o poniższym wzorze /4-N0₂/Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ilestosuje się /4NO2/Z-Lys/Fmoc/OH zamiast BOC-Lys/Fmoc/OH; Fmoc-Ile-OH zamiast Fmoc-Ile-OH i Fmoc-Cha-OH zamiast Fmoc-Phe-OH.

19. Sposób według zastrz, 1, znamienny tym, że w celu wytworzenia cyklopeptydu o poniższym wzorze

X²-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile168456 w którym X² oznacza t- r stosuje się X-Lys-Fmoc-OH zamiast-2-pirydyloacetyloLys/Fmoc/OH.

20. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w celu wytworzenia związku o poniższym wzorze /4-NO₂/Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ilestosuje się Z-Dep/Fmoc/-OH zamiast BOG-Lys/Fmoc/ '-OH.

21. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w celu wytworzenia cyklopeptydu o poniższym wzorze /4-NO₂/Z-Lys-Orn-Cha-D-Ala-Arg-Ile-Asp-Arg-Ilestosuje się Z-Dep/Fmoc/-OH zamiast BOC-Lys/Fmoc-OH.