KR20080094739A

KR20080094739A - 코르티코스테로이드 및 Ｈｈ/Ｓｍｏ 신호의 억제제를 포함하는 조성물

Info

Publication number: KR20080094739A
Application number: KR1020087024137A
Authority: KR
Inventors: 시난 타스; 옥타이 아비키
Original assignee: 시난 타스
Priority date: 2002-04-19
Filing date: 2003-03-17
Publication date: 2008-10-23
Also published as: ATE309802T1; DK1496895T3; US8025893B2; CA2452152A1; EP1411938A1; KR20040102117A; KR20080096605A; EP1496895A1; US20040072913A1; EA200401355A1; CN1835748A; EP1496895B1; JP2006512281A; US20080089915A1; DE60302348D1; US20040072914A1; US20080090790A1; CA2636960A1; US9757361B2; US7605167B2

Abstract

시클로파민을 함유하는 약제학적 조성물은 억제된 세포 분화를 나타내는 피부 세포가 상기 억제를 극복하도록 한다. 이러한 조성물은 세포 분화 손상과 관련된 질병을 치료하는데 효과적이다. 종양에서, 시클로파민에 의한 종양 세포의 분화의 유도는 보통 종양 세포의 세포자살과 수반되므로 치료 효과를 더해준다. 세포 분화 손상과 관련된 일반적 질병인 건선의 치료에서 시클로파민의 효과는 시클로파민 및 코르티코스테로이드를 포함하는 조성물을 사용하는 것에 의해 현저하게 향상된다.

시클로파민, 코르티코스테로이드, 건선, 세포 분화

Description

코르티코스테로이드 및 Ｈｈ/Ｓｍｏ 신호의 억제제를 포함하는 조성물 {COMPOSITION COMPRISED OF A CORTICOSTEROID AND INHIBITOR OF HEDGEHOG/SMOOTHENED SIGNALING}

본 발명은 건선 및 기타 피부 질병의 치료에서 시클로파민의 용도에 관한 것이다.

세포 분화는 다세포 기관의 발생에서 중요한 역할을 한다. 인간에서, 발생 중 뿐만 아니라 출생후 생존기간 동안, 많은 조직의 세포는 분화를 거쳐 적절한 기관작용에 필요한 새로운 세포 유형을 생성한다. 하나의 세포 유형이 다른 유형으로 분화하는 신호는 직접적인 환경 내의 다른 세포 및 비-세포 조직 성분 및/또는 더 떨어져 있는 조직 및 기관(예컨대 호르몬 형태)으로부터 유래할 수 있다. 들어오는 신호에 대한 세포의 반응을 결정하는 것은 또한 복잡하며 신호 또는 신호 세트의 성질 뿐만 아니라 고려중인 세포의 고유 특징(예컨대 그의 분화 상태 및 크로마틴의 구조)에 따라 다를 것이다. 인간의 일상 생활 동안 다양한 메카니즘에 의해 수 많은 세포가 손실되고 있다(급성 및 만성적 상해 및 손상으로 인하여 및 다른 이유로서 프로그램된 세포치사의 결과로서). 이러한 손실된 세포는 이들의 전구체인 선조세포 및 간세포(stem cell)의 조절된 증식 및 분화에 의해 일반적으로 교체된다. 인간의 피부는 다수의 내부 조직에 비하여 환경적 상해(예컨대 물리적 외상)에 비교적 더 민감하지만 환경에 잘 적응하여 최상층의 일정한 손실 및 교체를 나타낸다. 표피의 최상층으로부터 벗겨진 치사 세포는 보통 표피의 기저층 세포의 증식에 의해 및 이들 세포가 분화되어 초기저세포층을 생성하는 것에 의해 교체된다. 환경적 이유 및/또는 유전적 이유로 인하여 이러한 분화 과정에서 이상은 피부 징후가 일반적으로 용이하게 검출되는 다양한 질병을 초래한다. 비표피 피부 세포의 분화 이상을 포함하는 피부 질병은 또한 다양할 수 있다. 이들 질병의 원인에서의 차이는 상이한 징후와 임상적 표시를 초래하지만 세포 분화의 이상은 이들의 독특한 특징이다. 세포 분화의 이상을 나타내는 것으로 알려진 피부 질병의 비-제한적 예는 심상성 어린선, 층판상 어린선, 손발각화증, 모공성 홍색 비강진, 다리어씨병 및 몇 개 유형의 피부암을 포함한다. 이들 피부 질환의 원인은 일반적으로 잘 알려져 있지 않다. 그러나, 세포 분화의 조절과 다수의 조절 인자의 존재의 복잡성은, 분화의 이상이 때때로 주로 다른 과정에 영향을 주는 이상에 수반될 수 있다는 것을 의미한다. 원인과 메카니즘에 대한 명쾌한 이해없이는, 이들 질병에 대한 가능한 치료 전략도 일반적으로 덜 효과적일 것이다(Braun-Falco O. 등 (2000) Dermatology, 2^nd ed., Springer-Verlag, Berlin 참조).

시클로파민은 박새(Veratrum) 식물에 천연산출되는 스테로이드성 알칼로이드이다. 방목하는 임신 동물에 대한 상기 식물의 기형성(teratogenicity)은 활성 화합물로서 시클로파민의 확인에 도달하였다(Keeler R.F. (196() Phytochemistry 8: 223-225). 시클로파민이 어떻게 기형성을 나타내는지는 이것이 Hh/Smo(hedgehog/smoothened) 신호 도입의 억제제라는 발견에 의해 밝혀졌다(Incardona J.P. 등 (1998) Development 125: 3553-3562; Cooper M.K. 등 (1998) Science 280: 1603-1607). 소닉 Hh(sonic hedgehog) 단백질은 중앙 신경계의 발달에 있어서 복부 세포의 전구체의 분화를 유도하는 것으로 밝혀져 있다(Goodrich L.V. 등 (1998) Neuron 21: 1243-1257). 따라서 발생중인 닭 뇌의 발달에 있어서 시클로파민에 의한 Hh/Smo 신호 경로의 억제는 복부 세포 형성의 억제, 따라서 피질형성 이전의 선천성 뇌 기형 (holopresencephaly)의 예방에 관련되었다(Incardona J.P. 등 (1998) Development 125: 3553-3562; Cooper M. K. 등 (1998) Science 280: 1603-1607). 피질형성 이전의 선천성 뇌 기형은 박새 식물을 뜯어먹는 양의 새끼에서 일반적인 이상형성으로 알려져 있었다(Binns W. 등 (1963) Am J. Vet. Res. 24: 1164-1175). 시클로파민은 골수가 적혈구 세포로 분화하는 것을 비롯한 다른 계에서 세포 분화를 억제(Detmer K. 등 (2000) Dev. Biol.222: 242)하고 또 요생식동(urogenital sinus)이 전립선으로 분화하는 것을 억제(Berman D.M. 등 (2000) J. Urol. 163: 204)한다.

시클로파민이 세포 분화를 억제한다(Incardona J.P. 등 (1998) Development 125: 3553-3562; Cooper M. K. 등 (1998) Science 280: 1603-1607; Detmer K. 등 (2000) Dev. Biol. 222-242; Berman D.M. 등 (2000) J. Urol. 163: 204)는 상술한 종래 기술의 가르침으로부터는 예상치 못하고 또 상반되게도, 본 발명자는 시클로파민이 세포 분화를 방해하였던 기저세포 발암세포의 분화를 오히려 유발함을 밝혀내었다(Tas S. 등 (2001) PCT/TR01/00027호, WO 02/078703호). 유사하게 시클로파민은 건선 병소 표피의 표피세포가 정상적인 분화를 개시하도록 하였다(Tas S. 등 (2002) PCT/TR02/00017호, WO 02/078704호). 또한 시클로파민은 형질전환된 세포의 생존에 나쁜 영향을 주지 않는다는 기존의 보고로부터는 예상치 못하게, 기저세포 발암세포의 시클로파민-유발된 분화에 의해 이들 세포의 대량 세포자살이 수반되었다.

발명의 요약

시클로파민은 기저세포 암종에서 뿐만 아니라 다른 피부 종양에서 종양 세포 분화 및 세포자살의 유발제로서 효과적이다. 모낭/표피세포 계통으로부터 기인한 종양(예컨대 모낭상피종) 및 멜라닌세포로부터 기인한 종양(예컨대 멜라닌세포 모반)은 시클로파민으로 처리하면 급속하게 사라졌다. 건선 환자의 피부에서 건선 병소가 시클로파민에 의해 제거되는 것은 병소 표피에서의 세포 분화의 원인과 또한 관련이 있다. 본 발명자들은 건선 치료에서의 시클로파민의 효능은 시클로파민 및 코르티코스테로이드를 포함하는 치료용 조성물의 사용에 의해 및/또는 병소를 코르티코스테로이드로 예비치료하는 것에 의해 현저하게 향상됨을 개시한다.

발명의 상세한 설명

본 발명자는 시클로파민이 몇 개의 세포 유형의 분화를 유발하는데 효과적이고 또 이러한 분화의 유발은 본 발명자들이 개시하는 조건하의 생체내에서 충분한 선택성으로(과도한 나쁜 효과없이) 얻을 수 있기에, 세포 분화의 억제와 관련된 통일된 특징을 갖는 다수의 질병에 대하여 양호한 치료 효과를 얻을 수 있다고 개시한다. 종양(악성 종양이건 양성 종양이건)에서 시클로파민에 의한 종양 세포 분화의 유도는 통상 종양 세포의 세포자살(프로그래밍된 치사)과 공통적으로 관련되어 있다고 개시되어 있어, 시클로파민의 항-종양 치료 효과를 더해주고 있다. 건선에서 시클로파민의 유례없는 치료 효과(일찌기 PCT/TR02/00017호, WO 02/078704호에 기재됨)는 적합한 약제학적 담체에 시클로파민 및 코르티코스테로이드를 포함하는 치료 조성물을 사용하는 것에 의해 더욱 향상된다.

시클로파민은 에탄올 및 다른 적합한 용매에 용해될 수 있으며 또 소망하는 적용 형태에 따라서 적합한 약제학적 담체와 혼합될 수 있다. 국소 적용을 위해서는 시클로파민은 에탄올 또는 다른 적합한 용매에 용해될 수 있으며 또 적합한 베이스 크림, 연고 또는 젤과 혼합될 수 있다. 시클로파민은 또한 하이드로겔 또는 기타 서방을 가능하게 하는 약제학적 형태에 들어갈 수 있으며 피부 패치에 흡착될 수 있다. 도1A 내지 도1I, 도2A 내지 도2D 및 도3A 내지 도3F에 도시된 효과는 시클로파민을 에탄올에 용해시킨 용액을 지시된 최종 농도의 시클로파민을 얻도록 베이스 크림과 혼합하는 것에 의해 얻은 크림 제제에 의해 얻어질 수 있다. 사용된 베이스 크림은 파라핀 중유(10% w/w), 바셀린(10% w/w), 스테아릴 알코올(8% w/w), 폴리옥실스테아레트-40 (3% w/w) 및 물(68% w/w)으로 주로 제조되지만 다른 적합하게 제조된 베이스 크림도 사용가능하다. 시클로파민 및 코르티코스테로이드(양쪽 다 스테로이드성 분자)의 지질 대 물 용해도 특성과 분자 구조의 유사성으로 인하여 동일 약제학적 담체에서 혼합이 용이하다. 약제학적 형태중의 시클로파민 및 코르티코스테로이드의 최적 농도 뿐만 아니라 최적 투여량과 적용 계획은 특정 약제학적 형태, 특정 코르티코스테로이드 및 치료할 병소의 위치와 특성 등의 요인에 의해 분명히 영향을 받을 수 있다. 그러나 이들은 잘 공지된 최적 방법에 따라서 결정할 수 있을 것이다. 도1C 및 도1D에 도시된 효과를 얻기 위해 사용된 코르티코스테로이드는 베이스 크림(동일 크림에서 시클로파민의 농도는 ~9 mM이었다)중의 최종 농도 ~0.55 mM의 클로베타솔 17-프로피오네이트이었다. 상기 크림 중의 클로베타솔 17-프로피오네이트를 ~50 mM 히드로코르티손으로 치환하는 것에 의해서도 유사한 코르티코스테로이드 작용을 얻을 수 있다. 당분야에 공지된 다른 코르티코스테로이드 분자도 적합하며 상술한 코르티코스테로이드 분자를 적합한 농도에서 치환할 수도 있다(주어진 코르티코스테로이드에 대한 적합한 농도범위는 당분야에 공지되어 있다).

도1A는 치료하기 전의 29세 남성의 전주와 영역(antecubital region)상의 건선 플라크를 도시한다. 상기 병소에 약 20 ㎕의 시클로파민 크림(상술한 베이스 크림 중의 18mM 시클로파민)을 매 4시간 마다 24시간 동안 도포하였다. 치료를 중지하고 병소를 지켜보았다. 상기 병소는 치료한지 8시간 될 때 홍반 감소를 나타낸 다음 치료없이 지켜보는 동안 감소가 이어져 3일째에 도1B에 도시된 상태에 이르렀고 또 4일째에는 홍반이 확인되지 않게 되었다.

도1C는 치료하기 전에 동일 환자의 삼각근 영역에 있는 다른 건선 플라크를 도시한다. 상기 병소에 ~9 mM 시클로파민 및 ~0.55 mM 클로베타솔 17-프로피오네이트를 함유하는 크림 제제(베이스 크림 중에) 약 20 ㎕를 매 4시간 마다 24시간 동안 도포하였다. 상기 병소는 치료한지 8시간 될 때 홍반 감소를 나타낸 다음 3일째에는 홍반이 확인되지 않게 되었다(도1D는 68 시간 째의 외관을 도시한다). 동일 환자에서 ~1.1 mM 클로베타솔 17-프로피오네이트를 함유하는 크림 제제(시클로파민 함유하지 않음)를 매 4시간 또는 8시간 마다 도포한 다른 건선 병소는 동일 기간 동안 눈에 띄는 변화를 나타내지 않았다(즉, 병소는 3일째에도 계속 되었다). 동 일 환자의 다른 병소에 대해 본 발명자들이 사용한 농도의 절반에서도 시클로파민에 대한 향상된 치료 반응은 시클로파민 및 코르티코스테로이드를 포함하는 치료 조성물의 평가를 더욱 증진시켰다. 본 발명자들은 코르티코스테로이드의 국소 투여에 의한 건선 병소의 예비 치료에 이어 시클로파민 크림(베이스 크림 중의 18 mM 시클로파민)에 의한 치료를 평가하였다. 도1E는 시클로파민을 투여하기 전에 동일 환자의 하복부 영역상의 건선 플라크를 도시한다. 이 병소는 코르티코스테로이드 크림 만으로 48시간 치료한 다음 코르티코스테로이드를 중지하고 매 4시간 마다 ~20 ㎕ 시클로파민 크림(베이스 크림 중의 18mM 시클로파민) 투여로 변화시켰다. 도1F는 시클로파민 크림 적용한지 24시간 될 때의 병소를 도시하며 상기 크림에 의해 병소가 거의 완전히 소멸됨을 나타낸다.

건선 병소의 심각성은 병소의 홍반, 부종 및 딱지에 대한 각각의 갯수를 산출하여 병소의 EES 점수로 불리는 점수를 얻는 것에 의해 반-정량적 규모로 평가할 수 있다(Bowman P.H. 등(2002) J. Am. Acad. Dermatol. 46: 907-913). 표 1은 EES 점수에 의해 평가된 다양한 치료 형태에 대한 치료 반응을 대조한 것을 도시한다. 건선 병소의 치료에 있어서 시클로파민 및 코르티코스테로이드를 포함하는 치료 조성물의 사용은 활성 성분으로 시클로파민 만을 함유하는 조성물을 사용한 것과 대조하여 현저히 치료 효과를 향상시켰다. 병소를 코르티코스테로이드를 사용하여 하루 동안 예비 치료한 다음 시클로파민 크림(베이스 크림 중의 18 mM 시클로파민)으로 치료하는 것은 치료 효능을 유사하게 향상시켰다. 표 1은 시클로파민을 함유하는 조성물로 하루 동안 치료한 다음 치료없이 경과된 건선 병소는 퇴락되지만 비 교적 느린 속도로 퇴락됨을 보여준다. 후자의 특성은 임상실험에서 일부 이용될 수 있지만, 대부분의 환자는 이들 병소의 보다 신속한 제거를 기대하는 것으로 예상할 수 있다.

시클로파민 크림 단독은 상술한 종래의 치료법(PCT/TR02/0017호, WO 02/078704호)으로 얻은 속도보다는 훨씬 빠른 속도로 건선 병소의 퇴락과 제거를 유발하였다. 그러나 시클로파민을 코르티코스테로이드와 함께 사용하거나 또는 코르티코스테로이드를 사용하여 간단히 예비처리한 후에 시클로파민을 사용할 때 더욱 향상된 치료 반응을 얻을 수 있었다. 이러한 특성은 시클로파민 치료의 임상적 유용성을 증대시켰고 또 이것은 코르티코스테로이드의 항-염증 효과에 일부 관련되어 있을 수 있다. 건선 병소의 발현에 대한 염증 세포 및 사이토카인의 영향은 잘 알려져 있다(Krueger J. G. 등 (1990) J. Invest. Dermatol. 94: 135S-140S). 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 및 1개 이상의 그의 리간드(예컨대 형질전환성 성장 인자 알파)의 발현은 건선 병소 표피에서 현저히 증가되는 것으로 알려져 있다. 이들은 염증에 의한 표피 EGFR 증가에 의해 제공되는 자가분비 자극 루프를 조직할 수 있다(Krueger J. G. 등 (1990) J. Invest.Dermatol.94: 135S-140S). 그러나, 시클로파민 크림 단독에 대한 예외적으로 신속한 치료 반응(코르티코스테로이드 단독에 대해서가 아님) 및 시클로파민 적용을 중지한 후에 건선 병소의 연속적인 퇴락은 중요한/근사한 병원성 경우에 대한 시클로파민에 의한 효가적인 억제(코르티코스테로이드에 의해서가 아님)와 일치한다. 건선 병소 표피의 초기저층에서 EGFR 과발현은 자가분비 자극 루프를 형성할 수 있기 때문에 또 EGFR 발현이 표피의 기저층 으로 돌아가는 것은 다양한 양식에 의한 건선의 효과적인 치료의 첫 번째 징후의 하나로 간주되기 때문에(King L.E.Jr 등(1990) J. Invest. Dermatol.95:10S-12S), 시클로파민 치료에 대한 EGFR 발현 패턴의 반응을 평가하였다. 이 목적을 위하여 인간 EGFR에 대한 마우스 모노클로날 항체 EGFR.113 (Novocastra Labs. Ltd., U.K.)를 일차 항원으로 사용하였고 제조자에 의해 추천된 바와 같이 면역조직화학적 에세이를 실시하였다. 도1I는 시클로파민 크림을 건선 병소에 적용하면 EGFR 발현 패턴의 신속한 정상화를 유발하였고 또 면역조직화학적으로 확인된 EGFR은 24시간의 치료(도1I)에 의해 표피의 기저층에 대부분 다시 제한된다는 것을 도시한다. 병소의 시클로파민 치료에 이은 EGFR 발현 패턴(도1I)은 비-병소 피부에서 나타낸 패턴(도1G)과 구별할 수 없었다. 반면에, 위약 크림(즉 시클로파민을 갖지 않는 베이스 크림)으로 치료한 건선 병소 피부는 분명한 병원성 패턴을 계속 나타내었으며 표피의 초기저층에서 EGFR의 과발현을 나타내었다(도1H). 따라서 시클로파민 치료는 EGFR 발현의 기준에 의해서도 건선 병소에 대하여 신속한 치료 효과를 가졌다(King L.E. Jr 등 (1990) J. Invest.Dermatol.95: 10S-12S).

시클로파민에 의한 기저세포 발암세포의 분화의 야기는 이들의 세포자살(프로그래밍된 치사)과 관련되어 있는 것으로 밝혀졌다(PCT/TR 01/00027호, WO 02/078703호). 도2A 내지 도2D는 시클로파민의 이러한 효과는 기저세포 암종에만 한정되지 않음을 도시한다. 모낭상피종은 증가된 Hh-Smo(hedgehog-smoothened) 신호를 야기하는 유전자 변화와 관련된 종양이다(Vorechovsky I 등 (1997) Cancer Res. 57:4677-4681; Nilsson M. 등 (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:3438- 3443). 도2A는 치료하기 전의 82세 남성의 볼에 있는 모낭상피종을 도시하고 도2B는 시클로파민 크림(베이스 크림 중의 18 mM 시클로파민; ~25 ㎕ 크림을 매 3시간 마다 직접적으로 종양에 적용하였다)에 24시간만 노출된 후 동일 피부 영역을 도시한다. 신속한 퇴락으로 인하여, 상기 치료는 24시간쯤이면 중지되었고 원래 종양에 대응하는 전체 피부 영역을 연구를 위해 절제하였다. 도2C 및 도2D는 24시간일 때 잔류 종양 세포를 함유하는 조직 영역을 도시하며 이들 잔류 종양 세포중에서 현저한 세포자살 활성을 나타내었다. 종양 세포의 세포자살을 제거하는 것에 기인한 낭성 공간(도2C, 도2D) 뿐만 아니라 종양의 단핵성 세포 침투(도2D)를 도시한다. 상기 환자에서 다른 언급할 가치가 있는 발견은 24시간 치료했을 때 치료된 종양 근처에 위치한 점(mole)의 감소된 크기와 착색이었다(도2B 대 도2A). 시클로파민은 인접 적용 영역으로부터 확산되었을 수도 있기 때문에, 점(양성 멜라닌세포 종양)은 비교적 저농도의 시클로파민에 대하여 민감한 것으로 보인다. 다른 지원자에서 시클로파민 크림(베이스 크림 중의 18 mM 시클로파민)을 사용한 멜라닌세포 모반의 치료는 유사하게 신속한 탈색과 모반 상실을 초래하였다(데이터 나타내지 않음).

도3A는 치료하기 전의 59세 남성의 아래 눈꺼풀에서 착색된 기저 세포 암종(BCC)을 도시한다. 상기 환자에서 화살표로 표시한 노둘을 제외한 모든 노둘상에 시클로파민 크림(베이스 크림 중의 18 mM 시클로파민)을 적용하였다. 인접 처리 영역으로부터 확산에 의해서만 시클로파민을 수용할 수 있었던 상기 노둘은 비교적 저농도의 시클로파민에 노출될 것이다. 상기 종양의 착색된 성질은 임상적 추적치료를 촉진하기 때문에, 치료된 영역의 종양이 크게 퇴락되지만 가시적 부분을 여전히 함유(도3B)할 때, 3일 째 되는 날에 치료(4시간 마다 ~20 ㎕ 시클로파민 크림을 적용)를 중단하였다. 가능한 후속 효과의 연구를 위하여 치료없이 종양을 추적치료하였다. 치료가 없을 때에는 더 이상의 뚜렷한 임상적 퇴락은 관찰되지 않았고 원래 종양에 대응하는 피부 영역은 추적치료의 6일째되는 날에 절제하였다(치료개시로부터 9일째). 종양의 치료된 영역으로부터 헤마톡실렌-에오신 염색 부분은 종양 세포를 갖지 않는 다수의 낭성 공간을 나타내었다(도3C). 상피 라이닝 낭종의 부재(도3C)는 앞서 종양 세포에 의해 점유되었던 조직 영역의 낭종에 의해 나타내는 것과 일치한다. 이 시점에서(처리없는 추적치료의 제6일), 조직 부분은 생존 조직으로부터 세포자살 세포의 제거의 공지된 신속성과 관련된 세포자살 세포의 상대적 결핍(도3C)을 나타내었다. 한편 낭종의 단부 근처에 있는 잔류 종양 세포는 가시모양의 분화 특징을 나타내는 세포의 유별나게 높은 빈도를 나타내었다(예컨대 도3C의 하부 좌측으로 향한 영역; 도3D에 있는 다른 영역으로부터 예시되는 바와 같이 더 높은 배율에서 더욱 분명하게 보인다). 유사한 분화 영역 또는 낭종은 치료를 개시하기 전에 동일한 종양으로부터 얻은 펀치 생검조직 물질에는 존재하지 않았다(도3E). 비교적 저농도의 시클로파민(도3A에서 화살표로 표시)을 수용한 종양 노둘은 추적치료의 제6일에 대형 낭성 중심을 가졌다(도3F). 그러나 분화특징(예컨대 대형의 더 많은 호산성 세포질을 갖는)을 갖는 세포의 빈도는 다시 증가되고 더 작은 낭종은 상기 주변에 계속 존재(도3F)하지만, 이러한 노둘의 잔류 주변은 전형적인 BCC 형태를 갖는 세포를 계속 갖는다. 따라서, 최적 농도의 시클 로파민에 대한 종양 반응이 비교적 신속한 반면에, 최적 이하 농도에 대한 노출은 추적치료 기간 동안 계속 존재하는 종양 세포를 남긴다.

하기 실시예는 종양 세포 분화 및 세포자살의 야기 및 증가된 Hh-Smo 신호를 나타내는 종양의 신속한 임상적 제거에 있어서 기재된 치료법의 효능을 더욱 자세히 설명한다. 상이한 유전형을 갖는 미관련 환자에서 몇 개의 독립적인 종양에 대한 효능은 상기 기재된 치료의 일반적 단일성과 일치한다. 상기 기재된 조건하에서의 시클로파민을 사용한 치료는, 본 발명자들이 앞서 기재한 바와 같이(PCT/TR01/00027호, WO 02/078704호), 조직학적/면역조직화학적 기준에서 정상 조직 성분(임의의 간세포 포함)에 대하여 과도한 나쁜 영향을 나타내지 않았다. 또한 상기 논문 작성시에서 2년 이후까지 추적치료가 실시된 앞서의 시클로파민 적용 피부 부위는 건강하게 보이는 정상 피부와 모발을 계속 나타내었으며, 이는 간세포의 기능적 보존 및 장기간 안전성을 제시한다.

본 명세서에 개시되거나 앞서 개시된(WO 02/078703호, WO 02/078704호) 대부분의 시클로파민의 생물학적 및 치료학적 효과는 세포 분화의 유발과 관련되는 점에서 통일된 특징을 갖는다. 따라서 다른 분자가 시클로파민으로부터 유도될 수 있거나 시클로파민과 유사한 리셉터-결합 특성과 생물학적 및 치료학적 효과를 나타내도록 합성될 수 있다는 것을 특별히 고려할 수 있다. 이러한 분자를 소위 "시클로파민의 유도체"라 칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "시클로파민의 유도 체"는 다음과 같이 정의된다:

생물학적 표적에 시클로파민을 결합시키는 것에 관련된 시클로파민 분자의 영역을 함유하지만, 새로이 유도된 분자가 동일한 생물학적 표적(즉, Smo(Smoothened) 단백질)에 특이적으로 계속 결합될 수 있는 방식으로 시클로파민 모분자의 변형태를 또한 함유하는 분자는 본 발명 및 WO 02/078703호 및 WO 02/078704호에 기재된 시클로파민의 생물학적 효과를 발휘한다. 이러한 시클로파민의 변형태는 시클로파민 분자내에 1개 이상의 치환 또는 제거가능한 분자기를 포함할 수 있거나 또는 생성한 분자가 안정하고 시클로파민과 동일한 생물학적 표적에 대한 특수한 결합능을 갖는 한 시클로파민 분자에 1개의 분자 기(특히 메틸기와 같은 소형 분자 기)를 포함하여 본 발명 및 WO 02/078703호 및 WO 02/078704호에 기재된 시클로파민의 생물학적 효과를 발휘한다. 시클로파민으로부터의 이러한 새로운 분자의 유도는 당업자들이 용이하게 실시할 수 있으며 새로이 유도된 분자내의 시클로파민의 생물학적 효과를 계속 보유하는지 또는 제거되는지는 당업자에 의해, 예컨대 본 발명 및 WO 02/078703호 및 WO 02/078704호에 기재된 생물학적 효과에 대한 시험에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

* 홍반, 부종 및 딱지 개수의 합(Bowman P.H. 등(2002) J. Am. Acad. Dermatol. 46: 907-913에 의해 기재된 바와 같이 0.5씩 증가되는 0 내지 4 규모). "1일만 치료"에서, 시클로파민을 사용한 치료는 하루만 계속되었다. 이어 병소를 치료없이 추적하고 EES 점수를 결정하였다. 각 치료 분야에서 기록된 병소의 개수를 나타낸다. 조직병인학적/면역조직화학적 분석을 위해 제4일 전에 절제된 병소의 개수는 상기 평가 및 계산에 포함되지 않는다. (시클로파민 + CS) 크림은 ~9mM 시클로파민 및 ~0.55 mM 클로베타솔 17-프로피오네이트를 함유하는 크림 제제를 사용한 치료 또는 ~1.1 클로베타솔 17-프로피오네이트를 함유하는 크림 제제로 예비치료한지 하루후 ~18 mM 시클로파민을 함유하는 크림 제제로 치료하는 것을 나타낸다. 이들 2개 유형의 치료 결과는 유사하므로 단일 그룹으로 계산된다.

도1A는 치료하기 전에 29세 남성의 전주와 영역(antecubital region)에서 건선 병소(~7x8 mm)의 외관을 도시한다.

도1B는 24시간 동안 시클로파민 크림으로 치료한 다음 처리없이 44시간 지난 후(치료 개시로부터 68시간 경과)의 도1A에서와 동일한 병소를 도시한다.

도1C는 치료하기 전에 29세 남성의 삼각근 영역에서 건선 병소(~9x11 mm)를 도시한다.

도1D는 동일 부피의 시클로파민 크림 및 클로베타솔 17-프로피오네이트의 크림 제제를 함유하는 예비혼합된 크림(0.5 mg/g)으로 68시간 동안 치료할 때 도1C에서와 동일한 병소를 도시한다.

도1E는 클로베타솔 17-프로피오네이트의 크림 제제를 사용하여 48시간 치료한 후 29세 남성의 하복부 영역에서 건선 병소(~11x 12 mm)를 도시한다.

도1F는 클로베타솔 17-프로피오네이트(0.5 mg/g) 치료를 시클로파민 크림 치료로 변경한지 24시간 후 도1E에서와 동일 병소를 도시한다.

도1G는 면역조직화학적으로 검출된 EGFR을 갖는 비-병소 피부 조직을 도시한다. 표피에서 EGFR을 나타내는 세포는 기저층에 한정되는 것으로 보인다. 원래 크기의 200배율.

도1H는 면역조직화학적으로 검출된 EGFR을 갖는 치료되지 않은 건선 병소 피부 조직을 도시한다. 병소를 나타내는 표피에서 초기저 세포는 현저하게 증가된 EGFR 발현을 나타내는 것으로 보인다. 원래 크기의 200배율.

도1I는 절단하기 전에 24시간 동안 시클로파민 크림으로 치료된 다음 EGFR에 대해 면역조직화학적으로 염색된 건선 병소 피부 조직을 도시한다. 표피에서 EGFR을 나타내는 세포는 기저층에 한정되는 것으로 보인다. 원래 크기의 200배율.

도2A는 치료하기 전에 82세 남성의 볼에 모낭상피종 및 근모반(nearby nevus)을 도시한다.

도2B는 시클로파민을 사용하여 치료한지 24시간 후 도2A에서와 동일한 피부영역을 도시한다.

도2C는 잔류 종양 세포를 갖는 도2B에 도시된 절단된 피부 영역으로부터의 부분을 도시한다. H&E, 원래 크기의 400 배율.

2D는 도2C에서와 동일한 조직으로부터의 다른 영역을 도시한다. 수많은 자살세포 및 그의 제거에 의한 낭성구조의 형성 이외에, 종양은 단핵 세포에 의해 침투되는 것으로 보인다. H&E, 원래 크기의 400 배율.

도3A는 치료하기 전에 59세 남성의 아래 눈꺼풀에서 착색된 BCC를 도시한다.

도3B는 시클로파민을 사용하여 치료한지 3일째되는 날 도3A에서와 동일한 BCC를 도시한다.

도3C는 도3B에 도시한 BCC의 치료영역으로 부터의 부분을 도시한다. H&E, 원래 크기의 400 배율.

도3D는 도3B에 도시한 BCC의 치료 영역으로부터의 부분에서 잔류 종양 세포의 영역의 근접찰영도를 도시한다. H&E, 원래 크기의 400 배율.

도3E는 치료하기 전에 도3A에 도시된 BCC로부터 얻은 펀치 생체조직검사 재 료로 부터의 부분을 도시한다. H&E, 원래 크기의 400 배율.

도3F는 도3A에 화살표로 표시한 BCC 노둘의 일부를 함유하는 부분을 도시한다. 상기 조직은 3일간 치료한 다음, 치료없이 6일 경과한 후 절제하였다. H&E, 원래 크기의 400 배율.

칼러 프린트

영문 14, 15 페이지에 있는 도면과 동일한 도면의 칼러 프린트를 영문 14a, 15a 페이지에 첨부하였고, 이것은 상기 면역조직화학적 데이터 및 발견들이 그 성질상 흑백보다는 칼러일 때 더 잘 이해되어 질 수 있기 때문이다. 본 발명자는 특허 관계자들이 이러한 사실을 고려해 줄 것과 이들 페이지를 본 특허출원의 일부로 유지해 줄 것을 요청하는 바이다. 그러나, 14a, 15a 페이지는 특허관계자들이 필요하다고 인정할 때는 특허출원에서 제거할 수도 있다.

Claims

(ⅰ) 시클로파민 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 또는 유도체, 또는 Hh/Smo(Hedgehog/Smoothened) 신호를 특이적으로 억제하는 다른 화합물, 및 (ⅱ) 코르티코스테로이드를 포함하는 조성물.
제1항에 있어서,

(ⅰ) 시클로파민 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 또는 유도체, 및 (ⅱ) 코르티코스테로이드를 포함하는

조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,

상기 코르티코스테로이드는 클로베타솔 17-프로피오네이트 또는 히드로코르티손인

조성물.
제3항에 있어서,

(ⅰ) 10mM 내지 20mM 농도의 시클로파민 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 또는 유도체, 및 (ⅱ) 0.5㎎/g 내지 1.0㎎/g 농도의 클로베타솔 17-프로피오네이트 또는 10mM 내지 50mM 농도의 히드로코르티손을 포함하는

조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 조성물은 국소 투여용으로 제제화되는

조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 조성물은 비국소 투여용으로 제제화되는

조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 조성물은 제어 방출 포뮬레이션인

조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 조성물은 피부의 표피 세포의 분화 억제와 관련된 질병 치료용인

조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 조성물은 건선 치료용인

조성물.