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KR102580876B1 - 재조합 바실루스 세포 및 살곤충제를 포함하는 조성물 - Google Patents

재조합 바실루스 세포 및 살곤충제를 포함하는 조성물 Download PDF

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KR102580876B1
KR102580876B1 KR1020177009922A KR20177009922A KR102580876B1 KR 102580876 B1 KR102580876 B1 KR 102580876B1 KR 1020177009922 A KR1020177009922 A KR 1020177009922A KR 20177009922 A KR20177009922 A KR 20177009922A KR 102580876 B1 KR102580876 B1 KR 102580876B1
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데이미언 커티스
브라이언 톰슨
Original Assignee
바스프 코포레이션
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Abstract

본 발명은 a) (i) 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은 이러한 조성물의 용도, 뿐만 아니라 식물 성장을 증진시키고/거나, 식물 건강을 촉진하고/거나, 식물 및 식물 부분의 전체 손상을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

Description

재조합 바실루스 세포 및 살곤충제를 포함하는 조성물 {COMPOSITIONS COMPRISING RECOMBINANT BACILLUS CELLS AND AN INSECTICIDE}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2014년 9월 17일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/051,919를 우선권 주장하며, 상기 가출원의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
서열 목록의 공식 사본은 2015년 9월 14일에 생성되고 152 킬로바이트의 크기를 갖는 파일명 "BCS149059WO_ST25.txt"의 ASCII-포맷화 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출되며, 본 명세서와 함께 출원된다. 이러한 ASCII-포맷화 문서에 담긴 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 (i) (x) 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (y) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스(Bacillus) 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 (ii) 식물 성장 및/또는 건강을 개선시키는 능력 및/또는 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 나타내는 본원에 개시된 특정한 살곤충제로부터 선택된 적어도 1종의 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은 이러한 조성물의 용도, 뿐만 아니라 식물 성장을 증진시키고/거나, 식물 건강을 촉진하고/거나, 식물 및 식물 부분의 전체 손상을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
작물 보호에서, 식물의 건강 및/또는 성장을 개선시키는 적용에 대한 필요성이 계속 존재한다. 보다 건강한 식물은 일반적으로 식물 또는 그의 산물의 보다 높은 수확량 및/또는 보다 우수한 품질을 가져온다.
식물 건강을 촉진하기 위해, 무기 및 유기 물질 둘 다를 기재로 하는 비료가 전세계적으로 사용된다. 비료는 단일 물질 또는 조성물일 수 있고, 영양소를 식물에 제공하기 위해 사용된다. 비료의 적용에서 주요 돌파구는 약 1840년에 유스투스 폰 리비히(Justus von Liebig)에 의한 질소-기재 비료의 개발이었다. 그러나, 비료는 미네랄의 고갈 및 염과 중금속의 농축을 포함한, 토양 산성화 및 토양 내 영양 균형의 탈안정화를 유도할 수 있다. 추가로, 과도한 비료 사용은 토양 동물상의 변경을 유도할 수 있을 뿐만 아니라 지표수 및 지하수를 오염시킬 수 있다. 추가로, 건강에 해로운 물질, 예컨대 니트레이트가 식물 및 과실에 농축될 수 있다.
추가로, 살곤충제 및 살진균제가 해충을 방제하기 위해 전세계적으로 사용된다. 합성 살곤충제 또는 살진균제는 종종 비-특이적이고, 따라서 다른 자연 발생 유익 유기체를 포함한, 표적 유기체 이외의 다른 유기체에 대해서도 작용할 수 있다. 그들은 그의 화학적 성질 때문에 또한 독성일 수 있고 비-생분해성일 수 있다. 전세계 소비자는 특히 식품에서 화학물질의 잔류물과 연관된 잠재적인 환경 및 건강 문제를 점점 의식하고 있다. 이는 화학 (즉, 합성) 살충제의 사용 또는 적어도 그의 양을 감소시키도록 하는 소비자 압박을 증가시켰다. 따라서, 효과적인 해충 방제를 여전히 가능하게 하면서 먹이 사슬 요건을 관리하기 위한 필요성이 존재한다.
합성 살곤충제 또는 살진균제의 사용과 함께 발생하는 추가의 문제는 살곤충제 또는 살진균제의 반복적 및 독점적 적용이 종종 저항성 동물 해충 또는 미생물의 선택으로 이어진다는 점이다. 통상적으로, 이러한 균주는 또한 동일한 작용 방식을 갖는 다른 활성 성분에 대해 교차-저항성이다. 그러면 상기 활성 화합물을 사용한 병원체의 효과적인 방제는 더 이상 가능하지 않다. 그러나, 새로운 작용 메카니즘을 갖는 활성 성분을 개발하는 것은 어렵고 고비용이다.
식물 건강-증진제 및/또는 식물 보호제로서 작용하는 생물학적 방제제 (BCA)의 사용이 비료 및 합성 살충제에 대한 대안이다. 일부 경우에, BCA의 유효성은 특히 중증 감염 압박의 경우에는 통상적인 살곤충제 및 살진균제와 동일한 수준에서 나타나지 않는다. 결과적으로, 일부 상황에서, 생물학적 방제제, 그의 돌연변이체 및 그에 의해 생산된 대사물은 특히 낮은 적용률에서 전적으로 만족스럽지 않다. 따라서, 상기 언급된 요건을 충족시키도록 노력하기 위해, 합성 살진균제 및 살곤충제와 함께 사용되는 생물학적 방제제를 포함한, 새로운 식물 건강-증진 및/또는 식물 보호 조성물을 개발하기 위한 필요성이 일관되게 존재한다.
이를 고려하여, 특히 본 발명의 목적은 식물 성장을 개선시키고/거나 식물 건강을 증진시키는 증진된 능력을 갖거나 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대해 증진된 활성을 나타내는 조성물을 제공하는 것이었다.
따라서, 이들 목적은 하기에 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 조성물에 의해 달성되는 것으로 밝혀졌다. a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체 또는 해충으로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제를 적용함으로써, (i) 식물 성장, 식물 수확량 및/또는 식물 건강, 및/또는 (ii) 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 바람직하게는 초상가적 방식으로 증진시킬 수 있다.
본원에서 표적화 서열, 포자외막 단백질, 포자외막 단백질 단편, 융합 단백질 및 이러한 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막 생산 바실루스 세포에 대한 언급은 독립적 실시양태인 것으로 간주되어서는 안된다. 대신에, 본 출원 전반에 걸쳐, 표적화 서열, 포자외막 단백질, 포자외막 단백질 단편, 융합 단백질 및 이러한 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막 생산 바실루스 세포에 대한 언급은 단지 본원에 기재된 특정한 살곤충제 중 1종 이상과의 조합 (및 바람직하게는 상승작용적 조합)으로만 개시 및 청구된 것으로 간주되어야 한다. 추가로, "본원에 개시된 특정한 살곤충제"에 대한 언급은 하기 식별번호 <0221>-<0222> (영문 공보 단락 [000185]-[000186])에 기재된 살곤충제를 포괄하는 것으로 의도된다.
본 발명은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 아세타미프리드, 알디카르브, 아미트라즈, 베타-시플루트린, 카르바릴, 클로티아니딘, 시플루트린, 시페르메트린, 델타메트린, 엔도술판, 에티온, 에티프롤, 에토프로포스, 페나미포스, 페노부카르브, 펜티온, 피프로닐, 플루벤디아미드, 플루피라디푸론, 플루오피람, 포르메타네이트, 헵타노포스, 이미다클로프리드, 메타미도포스, 메티오카르브, 메토밀, 니클로사미드, 옥시데메톤-메틸, 포살론, 실라플루오펜, 스피로디클로펜, 스피로메시펜, 스피로테트라마트, 티아클로프리드, 티오디카르브, 트랄로메트린, 트리아조포스, 트리플루무론, 바미도티온, 1-{2-플루오로-4-메틸-5-[(R)-(2,2,2-트리플루오로에틸)술피닐]페닐}-3-(트리플루오로메틸)-1H-1,2,4-트리아졸-5-아민, 1-(3-클로로피리딘-2-일)-N-[4-시아노-2-메틸-6-(메틸카르바모일)페닐]-3-{[5-(트리플루오로메틸)-2H-테트라졸-2-일]메틸}-1H-피라졸-5-카르복스아미드 및 3종의 테르펜인 α-테르피넨, p-시멘 및 리모넨을 포함하는 살충 테르펜 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 표적화 서열은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35를 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35를 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 22-31을 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 22-33을 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 20-31을 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1을 포함하는 표적화 서열; 또는 서열식별번호: 2와 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 포자외막 단백질을 포함한다.
일부 실시양태에서, 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 세레우스(Bacillus cereus) 패밀리 구성원의 세포이다. 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 안트라시스(Bacillus anthracis), 바실루스 세레우스(Bacillus cereus), 바실루스 투린기엔시스(Bacillus thuringiensis), 바실루스 미코이데스(Bacillus mycoides), 바실루스 슈도미코이데스(Bacillus pseudomycoides), 바실루스 사마니이(Bacillus samanii), 바실루스 가에모켄시스(Bacillus gaemokensis), 바실루스 웨이헨스테파넨시스(Bacillus weihenstephanensis), 바실루스 토요넨시스(Bacillus toyonensis) 및 그의 조합 중 어느 하나일 수 있다. 추가 실시양태에서, 재조합 바실루스 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
특정 측면에서, 융합 단백질은 아세토인 리덕타제, 인돌-3-아세트아미드 히드롤라제, 트립토판 모노옥시게나제, 아세토락테이트 신테타제, α-아세토락테이트 데카르복실라제, 피루베이트 데카르복실라제, 디아세틸 리덕타제, 부탄디올 데히드로게나제, 아미노트랜스퍼라제, 트립토판 데카르복실라제, 아민 옥시다제, 인돌-3-피루베이트 데카르복실라제, 인돌-3-아세트알데히드 데히드로게나제, 트립토판 측쇄 옥시다제, 니트릴 히드롤라제, 니트릴라제, 펩티다제, 프로테아제, 아데노신 포스페이트 이소펜테닐트랜스퍼라제, 포스파타제, 아데노신 키나제, 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제, CYP735A, 5'리보뉴클레오티드 포스포히드롤라제, 아데노신 뉴클레오시다제, 제아틴 시스-트랜스 이소머라제, 제아틴 O-글루코실트랜스퍼라제, β-글루코시다제, 시스-히드록실라제, CK 시스-히드록실라제, CK N-글루코실트랜스퍼라제, 2,5-리보뉴클레오티드 포스포히드롤라제, 아데노신 뉴클레오시다제, 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제, 제아틴 리덕타제, 히드록실아민 리덕타제, 2-옥소글루타레이트 디옥시게나제, 지베렐산 2B/3B 히드롤라제, 지베렐린 3-옥시다제, 지베렐린 20-옥시다제, 키토사나제, 키티나제, β-1,3-글루카나제, β-1,4-글루카나제, β-1,6-글루카나제, 아미노시클로프로판-1-카르복실산 데아미나제 및 nod 인자를 생산하는데 수반되는 효소로 이루어진 군으로부터 선택된, 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소를 포함한다.
다른 측면에서, 융합 단백질은 셀룰라제, 리파제, 리그닌 옥시다제, 프로테아제, 글리코시드 히드롤라제, 포스파타제, 니트로게나제, 뉴클레아제, 아미다제, 니트레이트 리덕타제, 니트라이트 리덕타제, 아밀라제, 암모니아 옥시다제, 리그니나제, 글루코시다제, 포스포리파제, 피타제, 펙티나제, 글루카나제, 술파타제, 우레아제, 크실라나제 및 시데로포어로 이루어진 군으로부터 선택된, 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함한다.
또 다른 측면에서, 융합 단백질은 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드를 포함하고, 단백질 또는 펩티드는 살곤충 활성을 갖거나, 살연충 활성을 갖거나, 곤충 또는 벌레 포식을 억제하거나, 그의 조합을 갖는다. 이러한 단백질은 살곤충 박테리아 독소, 내독소, Cry 독소, 프로테아제 억제제 단백질 또는 펩티드, 시스테인 프로테아제 또는 키티나제를 포함할 수 있다. 단백질 또는 펩티드는 VIP 살곤충 독소, 트립신 억제제, 애로우헤드 프로테아제 억제제, Cry 독소 (예를 들어, 바실루스 투린기엔시스로부터의 Cry 독소)를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 살곤충제는 아세타미프리드, 알디카르브, 아미트라즈, 베타-시플루트린, 카르바릴, 클로티아니딘, 시플루트린, 시페르메트린, 델타메트린, 엔도술판, 에티온, 에티프롤, 에토프로포스, 페나미포스, 페노부카르브, 펜티온, 피프로닐, 플루벤디아미드, 플루피라디푸론, 플루오피람, 포르메타네이트, 헵타노포스, 이미다클로프리드, 메타미도포스, 메티오카르브, 메토밀, 니클로사미드, 옥시데메톤-메틸, 포살론, 실라플루오펜, 스피로디클로펜, 스피로메시펜, 스피로테트라마트, 티아클로프리드, 티오디카르브, 트랄로메트린, 트리아조포스, 트리플루무론, 바미도티온, 1-{2-플루오로-4-메틸-5-[(R)-(2,2,2-트리플루오로에틸)술피닐]페닐}-3-(트리플루오로메틸)-1H-1,2,4-트리아졸-5-아민, 1-(3-클로로피리딘-2-일)-N-[4-시아노-2-메틸-6-(메틸카르바모일)페닐]-3-{[5-(트리플루오로메틸)-2H-테트라졸-2-일]메틸}-1H-피라졸-5-카르복스아미드 및 3종의 테르펜인 α-테르피넨, p-시멘 및 리모넨을 포함하는 살충 테르펜 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 실시양태에서, 살곤충제는 클로티아니딘, 시페르메트린, 에티프롤, 피프로닐, 플루오피람, 플루피라디푸론, 이미다클로프리드, 메티오카르브 및 티오디카르브로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소 및 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소, 또는 식물을 병원체로부터 보호하는 또는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 클로티아니딘, 시페르메트린, 에티프롤, 피프로닐, 플루오피람, 플루피라디푸론, 이미다클로프리드, 메티오카르브 및 티오디카르브로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 포함한다.
상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살곤충제는 클로티아니딘이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살곤충제는 시페르메트린이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살곤충제는 에티프롤이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살곤충제는 피프로닐이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살곤충제는 플루오피람이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살곤충제는 플루피라디푸론이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살곤충제는 이미다클로프리드이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살곤충제는 메티오카르브이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살곤충제는 티오카르브이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 적어도 1종의 살진균제를 추가로 포함한다. 적어도 1종의 살진균제는 합성일 수 있다.
일부 측면에서, 조성물은 증량제, 용매, 자발성 촉진제, 담체, 유화제, 분산제, 결빙 보호제, 증점제 및 아주반트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 보조제를 추가로 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 조성물로 처리된 종자에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은 살곤충제 및/또는 살진균제로서의 개시된 조성물의 용도에 관한 것이다. 특정 측면에서, 개시된 조성물은 식물 및 식물 부분의 전체 손상, 뿐만 아니라 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의해 유발된 수확된 과실 또는 채소에서의 손실을 감소시키기 위해 사용된다. 다른 측면에서, 개시된 조성물은 식물 성장을 증진시키고/거나 식물 건강을 촉진하기 위해 사용된다.
추가로, 본 발명은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 나타내는 본원에 개시된 특정한 살곤충제로부터 선택된 적어도 1종의 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 식물, 식물 부분 및/또는 식물 생육지에 동시에 또는 순차적으로 적용하는 단계를 포함하는, 식물 성장을 증진시키고/거나 식물 건강을 촉진하기 위해 식물, 식물 부분, 예컨대 종자, 뿌리, 근경, 구경, 구근 또는 괴경, 및/또는 식물 또는 식물 부분이 성장하거나 근처에서 성장하는 생육지, 예컨대 토양을 처리하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 나타내는 본원에 개시된 특정한 살곤충제로부터 선택된 적어도 1종의 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 식물, 식물 부분, 예컨대 종자, 뿌리, 근경, 구경, 구근 또는 괴경, 및/또는 식물 또는 식물 부분이 성장하거나 근처에서 성장하는 생육지, 예컨대 토양에 동시에 또는 순차적으로 적용하는 단계를 포함하는, 식물 및 식불 부분의 전체 손상, 뿐만 아니라 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의해 유발된 수확된 과실 또는 채소에서의 손실을 감소시키는 방법이다.
상기 단락에서, 용어 "포함하다" 또는 그의 임의의 파생어 (예를 들어, 포함하는, 포함한다)는 "로 이루어지고" 또는 그의 적용가능한 상응하는 파생어로 대체될 수 있다.
도 1은 바실루스 안트라시스 스턴(Sterne) 균주 BclA의 아미노-말단 부분의 아미노산 서열과 바실루스 세레우스 패밀리 구성원으로부터의 다양한 포자외막 단백질로부터의 상응하는 영역과의 정렬을 제시한다.
일반적으로 "살충"은 식물 해충의 사멸률을 증가시키거나 성장률을 억제하는 물질의 능력을 의미한다. 상기 용어는 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 나타내는 물질의 특성을 기재하기 위해 본원에 사용된다. 본 발명의 관점에서 용어 "해충"은 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체를 포함한다.
NRRL은 미국 61604 일리노이주 피오리아 노스 유니버시티 스트리트 1815 소재 미국 농무부, 농업 연구소, 국립 농업 이용 연구 센터의 주소를 갖는 아그리컬쳐럴 리서치 서비스 컬쳐 콜렉션(Agricultural Research Service Culture Collection)에 대한 약어이다.
ATCC는 미국 10110 버지니아주 마나사스 유니버시티 불러바드 10801 소재 ATCC 특허 기탁소의 주소를 갖는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)에 대한 약어이다.
본원에 기재되고 접두어가 NRRL 또는 ATCC인 수탁 번호를 갖는 모든 균주는 특허 절차의 목적상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약에 따라 상기 기재된 각각의 기탁 기관에 기탁된 바 있다.
"식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소"는 식물 성장을 자극하거나 식물 구조를 변경하는 화합물에 대한 생물학적 합성 경로 내 임의의 단계를 촉매하는 임의의 효소, 또는 식물 성장을 자극하거나 식물 구조를 변경하는 화합물의 불활성 또는 덜 활성인 유도체를 화합물의 활성 또는 보다 활성인 형태로 전환시키도록 촉매하는 임의의 효소를 포함한다. 이러한 화합물은, 예를 들어 소분자 식물 호르몬, 예컨대 옥신 및 시토키닌, 생물활성 펩티드, 및 근권에서 박테리아 또는 진균에 의해 합성된 작은 식물 성장 자극 분자 (예를 들어, 2,3-부탄디올)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "식물 면역계 증진제 단백질 또는 펩티드"는 식물의 면역계에 대한 유익한 효과를 갖는 임의의 단백질 또는 펩티드를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드"는 단백질 또는 펩티드에 노출된 식물에서 식물 성장을 증가시키는 임의의 단백질 또는 펩티드를 포함한다.
용어 "식물 성장을 촉진하는" 및 "식물 성장을 자극하는"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 식물로부터 단백질 수확량을 증가시키거나 식물의 곡실 수확량을 증가시키기 위해 식물의 높이, 중량, 잎 크기, 뿌리 크기 또는 줄기 크기 중 적어도 하나를 증진 또는 증가시키는 능력을 지칭한다.
본원에 사용된 "식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드"는 식물을 병원체에 의한 감염에 덜 감수성인 단백질 또는 펩티드에 노출되도록 하는 임의의 단백질 또는 펩티드를 포함한다.
본원에 사용된 "식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드"는 식물을 스트레스에 보다 저항성이 있는 단백질 또는 펩티드에 노출되도록 하는 임의의 단백질 또는 펩티드를 포함한다.
용어 "식물 결합 단백질 또는 펩티드"는 식물의 임의의 부분 (예를 들어, 식물의 뿌리 또는 지상부, 예컨대 잎, 줄기, 꽃 또는 과실) 또는 식물 물질에 특이적으로 또는 비-특이적으로 결합할 수 있는 임의의 펩티드 또는 단백질을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "표적화 서열"은 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에 보다 긴 폴리펩티드 또는 단백질의 국재화를 유발하는 폴리펩티드 서열을 지칭한다.
융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포
융합 단백질은 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에 융합 단백질을 표적화하는 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편 및: (a) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; (b) 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드; (c) 식물의 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드; (d) 식물 결합 단백질 또는 펩티드; 또는 (e) 식물 면역계 증진제 단백질 또는 펩티드를 함유한다. 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 박테리아에서 발현되는 경우에, 이들 융합 단백질은 포자의 포자외막 층에 표적화되고, 단백질 또는 펩티드가 포자의 외부에 디스플레이되도록 물리적으로 배향된다.
이러한 바실루스 포자외막 디스플레이 (BEMD) 시스템은 펩티드, 효소 및 다른 단백질을 식물 (예를 들어, 식물 잎, 과실, 꽃, 줄기, 또는 뿌리)에 또는 식물 성장 배지, 예컨대 토양에 전달하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 방식으로 토양 또는 또 다른 식물 성장 배지에 전달된 펩티드, 효소 및 단백질은 연장된 기간 동안 토양에서 활성을 지속하고 나타낸다. 본원에 기재된 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 토양 또는 식물의 근권 내로 도입하는 것은 많은 상이한 토양 조건에서 식물 성장의 유익한 증진으로 이어진다. 이들 효소를 생성하기 위한 BEMD의 사용은 그들이 식물 수명의 최초 개월에 걸쳐 식물 및 근권에 대한 그의 유익한 결과를 계속 발휘하게 한다.
표적화 서열, 포자외막 단백질 및 포자외막 단백질 단편
참조의 용이성을 위해, 본원에 언급된 펩티드 및 단백질 서열에 대한 서열식별번호가 하기 표 1에 열거되어 있다.
표 1. 펩티드 및 단백질 서열
Figure 112017035661890-pct00004
Figure 112017035661890-pct00007
Figure 112017035661890-pct00008
AA = 아미노산
* 비. 안트라시스 스턴 균주 BclA는 비. 투린기엔시스 BclA와 100% 서열 동일성을 갖는다. 따라서, 서열식별번호: 1, 2 및 59는 또한 각각 비. 투린기엔시스 BclA의 아미노산 1-41, 전장 비. 투린기엔시스 BclA 및 비. 투린기엔시스 BclA의 아미노산 1-196을 나타낸다. 마찬가지로, 서열식별번호: 60은 또한 메티오닌 잔기 플러스 비. 투린기엔시스 BclA의 아미노산 20-35를 나타낸다.
** 비. 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720은 비. 미코이데스 가설 단백질 WP003189234와 100% 서열 동일성을 갖는다. 따라서, 서열식별번호: 57 및 58은 또한 각각 비. 미코이데스 가설 단백질 WP003189234의 아미노산 1-136 및 전장 비. 미코이데스 가설 단백질 WP003189234를 나타낸다.
바실루스는 막대형 박테리아의 속이다. 박테리아의 바실루스 세레우스 패밀리는 바실루스 안트라시스, 바실루스 세레우스, 바실루스 투린기엔시스, 바실루스 미코이데스, 바실루스 슈도미코이데스, 바실루스 사마니이, 바실루스 가에모켄시스, 바실루스 토요넨시스 및 바실루스 웨이헨스테파넨시스 종을 포함한다. 스트레스성 환경 조건 하에, 바실루스 세레우스 패밀리 박테리아는 포자형성을 겪고, 연장된 기간 동안 휴면에 머무를 수 있는 타원형 내생포자를 형성한다. 내생포자의 최외각 층은 포자외막으로 공지되어 있고, 헤어-유사 돌기의 외부 털에 의해 둘러싸여 있는 기저 층을 포함한다. 헤어-유사 털 상의 필라멘트는 콜라겐-유사 당단백질 BclA에 의해 우세하게 형성되고, 반면에 기저 층은 수많은 상이한 단백질로 구성된다. 또 다른 콜라겐-관련 단백질인 BclB가 또한 포자외막에 존재하고, 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 내생포자에 노출된다.
표면 털의 주요 구성성분인 BclA는 포자외막에 부착되며, 이때 그의 아미노-말단 (N-말단)은 기저 층에 위치하고 그의 카르복시-말단 (C-말단)은 포자로부터 외부로 연장되는 것으로 제시된 바 있다.
BclA 및 BclB의 N-말단 영역으로부터의 특정 서열은 바실루스 세레우스 내생포자의 포자외막에 펩티드 또는 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있었다는 것이 이전에 발견되었다 (미국 특허 공개 번호 2010/0233124 및 2011/0281316, 및 문헌 [Thompson, et al., "Targeting of the BclA and BclB Proteins to the Bacillus anthracis Spore Surface," Molecular Microbiology, 70(2):421-34 (2008)] 참조, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로 포함됨). 또한, 바실루스 안트라시스의 BetA/BAS3290 단백질은 포자외막에 국재화되었다는 것이 밝혀졌다.
특히, 바실루스 안트라시스 스턴 균주로부터의 BclA의 아미노산 20-35는 포자외막에의 표적화에 충분한 것으로 밝혀진 바 있다. BclA의 아미노산 1-41 (서열식별번호: 1)과, 관련 서열을 갖는 여러 다른 바실루스 세레우스 패밀리 포자외막 단백질 및 바실루스 세레우스 패밀리 단백질의 상응하는 N-말단 영역과의 서열 정렬이 도 1에 제시되어 있다. 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 모든 단백질 사이에서, BclA의 아미노산 20-41에 상응하는 영역에 높은-상동성의 영역이 존재한다. 그러나, 이들 서열에서, BclA의 아미노산 36-41에 상응하는 아미노산은 2차 구조를 함유하고, 포자외막에의 융합 단백질 국재화를 위해 필요하지 않다. BclA의 보존된 표적화 서열 영역 (서열식별번호: 1의 아미노산 20-35)은 도 1에서 볼드체로 제시되어 있고, 포자외막에의 국재화를 위해 필요한 최소 표적화 서열에 상응한다. 표적화 서열 내 BclA의 아미노산 25-35에 걸친 보다 고도로 보존된 영역은 도 1에서 서열에 밑줄표시되어 있고, 포자외막의 표면 상에서 기재된 단백질을 지시 및 조립하는 ExsFA/BxpB/ExsFB 및 상동체에 대한 인식 서열이다. 도 1에서 서열식별번호: 3, 5 및 7의 아미노산 서열은 각각 바실루스 안트라시스 스턴 균주 BetA/BAS3290의 아미노산 1-33, 메티오닌에 이어서 바실루스 안트라시스 스턴 균주 BAS4623의 아미노산 2-43, 및 바실루스 안트라시스 스턴 균주 BclB의 아미노산 1-34이다. (BAS4623에 대해, 천연 단백질에서 위치 1에 존재하는 발린을 메티오닌으로 대체하는 것은 보다 우수한 발현을 유발한 것으로 밝혀졌다.) 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 각각의 이들 서열은 BclA의 아미노산 20-35에 상응하는 보존된 영역 (서열식별번호: 1; 볼드체로 제시됨) 및 BclA의 아미노산 20-35에 상응하는 보다 고도로 보존된 영역 (밑줄표시됨)을 함유한다.
바실루스 세레우스 패밀리 구성원으로부터의 추가의 단백질은 또한 보존된 표적화 영역을 함유한다. 특히, 도 1에서, 서열식별번호: 9는 바실루스 안트라시스 스턴 균주 BAS1882의 아미노산 1-30이고, 서열식별번호: 11은 바실루스 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 2280 유전자 산물의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 13은 바실루스 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 3572 유전자 산물의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 15는 바실루스 세레우스 VD200 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 1-49이고, 서열식별번호: 17은 바실루스 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 1-33이고, 서열식별번호: 19는 바실루스 세레우스 VD200 가설 단백질 IKG_04663의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 21은 바실루스 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 23은 바실루스 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363의 아미노산 1-30이고, 서열식별번호: 25는 바실루스 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131의 아미노산 1-30이고, 서열식별번호: 27은 바실루스 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 삼중 나선 반복부 함유 콜라겐의 아미노산 1-36이고, 서열식별번호: 29는 바실루스 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyco0001_21660의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 31은 바실루스 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540의 아미노산 1-30이고, 서열식별번호: 33은 바실루스 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_21510의 아미노산 1-21이고, 서열식별번호: 35는 바실루스 투린기엔시스 35646 콜라겐 삼중 나선 반복부 단백질의 아미노산 1-22이고, 서열식별번호: 43은 바실루스 세레우스 가설 단백질 WP_69652의 아미노산 1-35이고, 서열식별번호: 45는 바실루스 세레우스 포자외막 리더 WP016117717의 아미노산 1-41이고, 서열식별번호: 47은 바실루스 세레우스 포자외막 펩티드 WP002105192의 아미노산 1-49이고, 서열식별번호: 49는 바실루스 세레우스 가설 단백질 WP87353의 아미노산 1-38이고, 서열식별번호: 51은 바실루스 세레우스 포자외막 펩티드 02112369의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 53은 바실루스 세레우스 포자외막 단백질 WP016099770의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 55는 바실루스 투린기엔시스 가설 단백질 YP006612525의 아미노산 1-36이고, 서열식별번호: 57은 바실루스 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720의 아미노산 1-136이다. 도 1에 제시된 바와 같이, 이들 단백질의 각각의 N-말단 영역은 BclA (서열식별번호: 1)의 아미노산 20-35로 보존된 영역 및 BclA의 아미노산 25-35에 상응하는 보다 고도로 보존된 영역을 함유한다.
아미노산 20-35를 포함하는 BclA의 임의의 부분은 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 추가로, 전장 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 포자외막에 융합 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 전장 BclA 또는 아미노산 20-35를 포함하는 BclA의 단편은 포자외막에 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 전장 BclA (서열식별번호: 2) 또는 카르복시-말단이 결여된 BclA의 중간크기 단편, 예컨대 서열식별번호: 59 (BclA의 아미노산 1-196)는 포자외막에 융합 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 중간크기 단편, 예컨대 서열식별번호: 59의 단편은 전장 BclA보다 더 적은 2차 구조를 갖고, 표적화 서열로서 사용하기에 적합한 것으로 밝혀진 바 있다. 표적화 서열은 또한 아미노산 20-35를 포함하는 BclA의 훨씬 더 짧은 부분, 예컨대 서열식별번호: 1 (BclA의 아미노산 1-41), 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35 또는 서열식별번호: 60 (메티오닌 잔기에 연결된 BclA의 아미노산 20-35)을 포함할 수 있다. 아미노산 20-35의 단지 일부만을 포함하는 BclA의 훨씬 더 짧은 단편도 또한 포자외막에 융합 단백질을 표적화하는 능력을 나타낸다. 예를 들어, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 22-31, 서열식별번호: 1의 아미노산 22-33 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 20-31을 포함할 수 있다.
대안적으로, BclA의 아미노산 20-35에 상응하는 아미노산을 포함하는 BetA/BAS3290, BAS4623, BclB, BAS1882, KBAB4 2280 유전자 산물, KBAB4 3572 유전자 산물, 비. 세레우스 VD200 포자외막 리더 펩티드, 비. 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드, 비. 세레우스 VD200 가설 단백질 IKG_04663, 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질, 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363, 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131, 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 삼중 나선 반복부 함유 콜라겐, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyco0001_21660, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_21510, 비. 투린기엔시스 35646 콜라겐 삼중 나선 반복부 단백질, 비. 세레우스 가설 단백질 WP_69652, 비. 세레우스 포자외막 리더 WP016117717, 비. 세레우스 포자외막 펩티드 WP002105192, 비. 세레우스 가설 단백질 WP87353, 비. 세레우스 포자외막 펩티드 02112369, 비. 세레우스 포자외막 단백질 WP016099770, 비. 투린기엔시스 가설 단백질 YP006612525, 또는 비. 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720의 임의의 부분은 표적화 서열로서의 역할을 할 수 있다. 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, BetA/BAS3290의 아미노산 12-27, BAS4623의 아미노산 23-38, BclB의 아미노산 13-28, BAS1882의 아미노산 9-24, KBAB4 2280 유전자 산물의 아미노산 18-33, KBAB4 3572 유전자 산물의 아미노산 18-33, 비. 세레우스 VD200 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 28-43, 비. 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 12-27, 비. 세레우스 VD200 가설 단백질 IKG_04663의 아미노산 18-33, 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질의 아미노산 18-33, 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363의 아미노산 9-24, 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131의 아미노산 9-24, 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 삼중 나선 반복부 함유 콜라겐의 아미노산 15-30, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyco0001_21660의 아미노산 18-33, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540의 아미노산 9-24, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_21510의 아미노산 1-15, 비. 투린기엔시스 35646 콜라겐 삼중 나선 반복부 단백질의 아미노산 1-16, 비. 세레우스 가설 단백질 WP_69652의 아미노산 14-29, 비. 세레우스 포자외막 리더 WP016117717의 아미노산 20-35, 비. 세레우스 포자외막 펩티드 WP002105192의 아미노산 28-43, 비. 세레우스 가설 단백질 WP87353의 아미노산 17-32, 비. 세레우스 포자외막 펩티드 02112369의 아미노산 18-33, 비. 세레우스 포자외막 단백질 WP016099770의 아미노산 18-33, 비. 투린기엔시스 가설 단백질 YP006612525의 아미노산 15-30, 및 비. 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720의 아미노산 115-130은 BclA의 아미노산 20-35에 상응한다. 따라서, 상기 열거된 상응하는 아미노산을 포함하는 이들 단백질의 임의의 부분은 표적화 서열로서의 역할을 할 수 있다.
추가로, BclA의 아미노산 20-35 또는 임의의 상기 열거된 상응하는 아미노산을 포함하는 임의의 아미노산 서열은 표적화 서열로서의 역할을 할 수 있다.
따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 1의 아미노산 22-31, 서열식별번호: 1의 아미노산 22-33 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 20-31을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35, 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 60으로 이루어진다. 대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 22-31, 서열식별번호: 1의 아미노산 22-33 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 20-31로 이루어질 수 있다. 대안적으로, 포자외막 단백질은 전장 BclA (서열식별번호: 2)를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질 단편은 카르복시-말단이 결여된 BclA의 중간크기 단편, 예컨대 서열식별번호: 59 (BclA의 아미노산 1-196)를 포함할 수 있다. 대안적으로, 포자외막 단백질 단편은 서열식별번호: 59로 이루어질 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 3의 아미노산 1-27, 서열식별번호: 3의 아미노산 12-27 또는 서열식별번호: 3을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 BetA/BAS3290 (서열식별번호: 4)을 포함할 수 있다. 또한, 메티오닌 잔기에 연결된 BetA/BAS3290의 아미노산 12-27이 표적화 서열로서 사용될 수 있는 것으로 밝혀진 바 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 61을 포함할 수 있다. 표적화 서열은 또한 서열식별번호: 3의 아미노산 14-23, 서열식별번호: 3의 아미노산 14-25 또는 서열식별번호: 3의 아미노산 12-23을 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 5의 아미노산 1-38, 서열식별번호: 5의 아미노산 23-38 또는 서열식별번호: 5를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 BAS4623 (서열식별번호: 6)을 포함할 수 있다.
대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 7의 아미노산 1-28, 서열식별번호: 7의 아미노산 13-28 또는 서열식별번호: 7을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 BclB (서열식별번호: 8)를 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 9의 아미노산 1-24, 서열식별번호: 9의 아미노산 9-24 또는 서열식별번호: 9를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 BAS1882 (서열식별번호: 10)를 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 BAS1882의 아미노산 9-24는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 69를 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 11의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 11의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 11을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 2280 유전자 산물 (서열식별번호: 12)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 2280 유전자 산물의 아미노산 18-33은 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 62를 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 13의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 13의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 13을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 3572 유전자 산물 (서열식별번호: 14)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 3572 유전자 산물의 아미노산 18-33은 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 63을 포함할 수 있다.
대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 15의 아미노산 1-43, 서열식별번호: 15의 아미노산 28-43 또는 서열식별번호: 15를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 VD200 포자외막 리더 펩티드 (서열식별번호: 16)를 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 17의 아미노산 1-27, 서열식별번호: 17의 아미노산 12-27 또는 서열식별번호: 17을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드 (서열식별번호: 18)를 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 12-27은 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 64를 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 19의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 19의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 19를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 VD200 가설 단백질 IKG_04663 (서열식별번호: 20)을 포함할 수 있다.
대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 21의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 21의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 21을 포함하거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질 (서열식별번호: 22)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질의 아미노산 18-33은 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 65를 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 23의 아미노산 1-24, 서열식별번호: 23의 아미노산 9-24 또는 서열식별번호: 23을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363 (서열식별번호: 24)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363의 아미노산 9-24는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 66을 포함할 수 있다.
표적화 서열은 서열식별번호: 25의 아미노산 1-24, 서열식별번호: 25의 아미노산 9-24 또는 서열식별번호: 25를 포함하거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131 (서열식별번호: 26)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131의 아미노산 9-24는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 67을 포함할 수 있다.
대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 27의 아미노산 1-30, 서열식별번호: 27의 아미노산 15-30 또는 서열식별번호: 27을 포함하거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB4 삼중 나선 반복부 함유 콜라겐 (서열식별번호: 28)을 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 29의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 29의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 29를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyco0001_21660 (서열식별번호: 30)을 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 31의 아미노산 1-24, 서열식별번호: 31의 아미노산 9-24 또는 서열식별번호: 31을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540 (서열식별번호: 32)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540의 아미노산 9-24는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 68을 포함할 수 있다.
대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 33의 아미노산 1-15, 서열식별번호: 33을 포함하거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_21510 (서열식별번호: 34)을 포함한다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 35의 아미노산 1-16, 서열식별번호: 35을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 투린기엔시스 35646 콜라겐 삼중 나선 반복부 단백질 (서열식별번호: 36)을 포함할 수 있다.
표적화 서열은 서열식별번호: 43의 아미노산 1-29, 서열식별번호: 43의 아미노산 14-29 또는 서열식별번호: 43을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 가설 단백질 WP_69652 (서열식별번호: 44)를 포함할 수 있다.
대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 45의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 45의 아미노산 20-35 또는 서열식별번호: 45를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 포자외막 리더 WP016117717 (서열식별번호: 46)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 세레우스 포자외막 리더 WP016117717의 아미노산 20-35는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 70을 포함할 수 있다.
표적화 서열은 서열식별번호: 47의 아미노산 1-43, 서열식별번호: 47의 아미노산 28-43 또는 서열식별번호: 47을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 포자외막 펩티드 WP002105192 (서열식별번호: 48)를 포함할 수 있다.
표적화 서열은 서열식별번호: 49의 아미노산 1-32, 서열식별번호: 49의 아미노산 17-32 또는 서열식별번호: 49를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 가설 단백질 WP87353 (서열식별번호: 50)을 포함할 수 있다.
대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 51의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 51의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 51을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 포자외막 펩티드 02112369 (서열식별번호: 52)를 포함할 수 있다.
표적화 서열은 서열식별번호: 53의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 53의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 53을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 포자외막 단백질 WP016099770 (서열식별번호: 54)을 포함할 수 있다.
대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 55의 아미노산 1-30, 서열식별번호: 55의 아미노산 15-30 또는 서열식별번호: 55를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 투린기엔시스 가설 단백질 YP006612525 (서열식별번호: 56)를 포함할 수 있다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 57의 아미노산 1-130, 서열식별번호: 57의 아미노산 115-130 또는 서열식별번호: 57을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720 (서열식별번호: 58)을 포함할 수 있다.
추가로, BclA의 아미노산 20-35가 보존되고 아미노산 25-35가 보다 보존되지만, 이러한 영역에서 단백질을 포자외막에 표적화하는 표적화 서열의 능력에 영향을 미치지 않으면서 어느 정도의 변이가 일어날 수 있다는 것이 도 1에서의 서열 정렬로부터 용이하게 관찰될 수 있다. 도 1은 BclA의 아미노산 20-35에 대한 각각의 서열의 각각의 상응하는 아미노산의 퍼센트 동일성 ("20-35% 동일성") 및 BclA의 아미노산 25-35에 대한 각각의 서열의 각각의 상응하는 아미노산의 퍼센트 동일성 ("25-35% 동일성")을 열거한다. 따라서, 예를 들어, BclA의 아미노산 20-35와 비교하여, BetA/BAS3290의 상응하는 아미노산은 약 81.3% 동일하고, BAS4623의 상응하는 아미노산은 약 50.0% 동일하고, BclB의 상응하는 아미노산은 약 43.8% 동일하고, BAS1882의 상응하는 아미노산은 약 62.5% 동일하고, KBAB4 2280 유전자 산물의 상응하는 아미노산은 약 81.3% 동일하고, KBAB4 3572 유전자 산물의 상응하는 아미노산은 약 81.3% 동일하다. 나머지 서열에 대한 이러한 영역에 걸친 서열 동일성은 도 1에 열거되어 있다.
BclA의 아미노산 25-35에 관하여, BetA/BAS3290의 상응하는 아미노산은 약 90.9% 동일하고, BAS4623의 상응하는 아미노산은 약 72.7% 동일하고, BclB의 상응하는 아미노산은 약 54.5% 동일하고, BAS1882의 상응하는 아미노산은 약 72.7% 동일하고, KBAB4 2280 유전자 산물의 상응하는 아미노산은 약 90.9% 동일하고, KBAB4 3572 유전자 산물의 상응하는 아미노산은 약 81.8% 동일하다. 나머지 서열에 대한 이러한 영역에 걸친 서열 동일성은 도 1에 열거되어 있다.
따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열로 이루어진다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 50% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 63%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 50% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 63%인 아미노산 서열로 이루어진다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 50% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 50% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열로 이루어진다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 56% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 63%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 56% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 63%인 아미노산 서열로 이루어진다.
대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 62% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 표적화 서열은 또한 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 62% 동일성을 가지며 여기서 서열식별번호: 1의 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.
표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 68% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 68% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열로 이루어진다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 75% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 75% 동일성을 가지며 여기서 서열식별번호: 1의 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열로 이루어진다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 75% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 75% 동일성을 가지며 여기서 서열식별번호: 1의 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열로 이루어진다.
표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 81% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 81% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열로 이루어진다.
표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 81% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 81% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열로 이루어진다.
표적화 서열이 BclA의 아미노산 20-35, BetA/BAS3290, BAS4263, BclB, BAS1882, KBAB4 2280 유전자 산물 또는 KBAB 3572 유전자 산물의 상응하는 아미노산을 포함하거나, 또는 BclA의 아미노산 20-35 및 25-35에 대해 임의의 상기 제시된 서열 동일성을 포함하는 서열이 존재하는 한, 통상의 기술자는 상기 서열의 변이체가 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다는 것을 인식할 것이다.
BclA의 아미노산 25-35에 대해 상동성을 갖는 영역이 결여된 특정 바실루스 세레우스 패밀리 포자외막 단백질도 또한 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에 펩티드 또는 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있다는 것이 추가로 발견되었다. 특히, 융합 단백질은 서열식별번호: 71 (비. 미코이데스 InhA)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 72 (비. 안트라시스 스턴 BAS1141 (ExsY))를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 73 (비. 안트라시스 스턴 BAS1144 (BxpB/ExsFA))을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 74 (비. 안트라시스 스턴 BAS1145 (CotY))를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 75 (비. 안트라시스 스턴 BAS1140)를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 76 (비. 안트라시스 H9401 ExsFB)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 77 (비. 투린기엔시스 HD74 InhA1)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 78 (비. 세레우스 ATCC 10876 ExsJ)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 79 (비. 세레우스 ExsH)를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 80 (비. 안트라시스 에임스 YjcA)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 81 (비. 안트라시스 YjcB)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 82 (비. 안트라시스 스턴 BclC)를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 83 (바실루스 투린기엔시스 혈청형 변이주 콘쿠키안 균주 97-27 산 포스파타제)을 포함하는 포자외막 단백질, 또는 서열식별번호: 84 (비. 투린기엔시스 HD74 InhA2)를 포함하는 포자외막 단백질을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 융합 단백질에 서열식별번호: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 또는 84를 포함하는 포자외막 단백질을 포함시키는 것은 비. 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에의 표적화를 유발할 것이다.
더욱이, 상기 기재된 임의의 전장 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편과 높은 정도의 서열 동일성을 갖는 포자외막 단백질이 또한 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에 펩티드 또는 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 융합 단백질은 서열식별번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 59, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 및 84 중 어느 하나와 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 포자외막 단백질을 포함할 수 있다. 대안적으로, 융합 단백질은 서열식별번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 59, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 및 84 중 어느 하나와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 포자외막 단백질을 포함할 수 있다.
대안적으로, 융합 단백질은 서열식별번호: 59와 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어진 포자외막 단백질 단편을 포함할 수 있다. 대안적으로, 융합 단백질은 서열식별번호: 59와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어진 포자외막 단백질 단편을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편에서, 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 그의 카르복시 말단에 아미노산 서열 GXT를 포함할 수 있으며, 여기서 X는 임의의 아미노산이다.
본원에 기재된 임의의 표적화 서열, 포자외막 단백질 및 포자외막 단백질 단편에서, 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 서열식별번호: 1의 아미노산 20에 상응하는 표적화 서열의 위치에 알라닌 잔기를 포함할 수 있다.
융합 단백질
융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는 펩티드 호르몬, 비-호르몬 펩티드, 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소, 또는 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함할 수 있다. 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 상기 기재된 임의의 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편일 수 있다.
융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 식물을 병원체로부터 보호하는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 상기 기재된 임의의 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편일 수 있다.
융합 단백질은 관련 기술분야에 공지된 표준 클로닝 및 분자 생물학 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 유전자 (예를 들어, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 유전자)는 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 증폭되고, 임의의 상기 기재된 표적화 서열을 코딩하는 DNA에 라이게이션되어 융합 단백질을 코딩하는 DNA 분자를 형성할 수 있다. 융합 단백질을 코딩하는 DNA 분자는 임의의 적합한 벡터, 예를 들어 플라스미드 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 벡터는 적합하게는 융합 단백질을 코딩하는 DNA 분자가 용이하게 삽입될 수 있는 다중 클로닝 부위를 포함한다. 벡터는 또한 적합하게는 선택 마커, 예컨대 항생제 저항성 유전자를 함유하여, 그 벡터로 형질전환, 형질감염 또는 메이팅된 박테리아가 용이하게 확인 및 단리될 수 있도록 한다. 벡터가 플라스미드인 경우에, 플라스미드는 적합하게는 또한 복제 기점을 포함한다. 융합 단백질을 코딩하는 DNA는 적합하게는 비. 세레우스 패밀리 구성원 내생포자의 포자외막 상에 융합 단백질의 발현을 유발할 포자형성 프로모터 (예를 들어, 비. 세레우스 패밀리 구성원으로부터의 천연 bclA 프로모터)의 제어 하에 있다. 대안적으로, 융합 단백질을 코딩하는 DNA는 비. 세레우스 패밀리 구성원 숙주의 염색체 DNA 내로 통합될 수 있다.
융합 단백질은 또한 표적화 서열, 포자외막 단백질, 포자외막 단백질 단편, 또는 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드, 또는 식물 결합 단백질 또는 펩티드의 부분이 아닌 추가의 폴리펩티드 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질은 융합 단백질의 정제 또는 시각화를 용이하게 하기 위한 태그 또는 마커 (예를 들어, 폴리히스티딘 태그 또는 형광 단백질, 예컨대 GFP 또는 YFP), 또는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 포자의 시각화를 용이하게 하기 위한 태그 또는 마커를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 표적화 서열, 포자외막 단백질 및 포자외막 단백질 단편을 사용하여 포자외막 상에 융합 단백질을 발현하는 것은 이들 서열의 아미노-말단에서의 2차 구조의 결여로 인해 증진되며, 이는 융합된 단백질의 천연 폴딩 및 활성의 보유를 가능하게 한다. 적절한 폴딩은 표적화 서열, 포자외막 단백질, 포자외막 단백질 단편과 융합 파트너 단백질 사이에 짧은 아미노산 링커를 포함시킴으로써 추가로 증진될 수 있다.
따라서, 본원에 기재된 임의의 융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편과 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드, 또는 식물 결합 단백질 또는 펩티드 사이에 아미노산 링커를 포함할 수 있다.
링커는 폴리알라닌 링커 또는 폴리글리신 링커를 포함할 수 있다. 알라닌 및 글리신 잔기 둘 다의 혼합물을 포함하는 링커가 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 표적화 서열이 서열식별번호: 1을 포함하는 경우에, 융합 단백질은 하기 구조 중 하나를 가질 수 있다:
링커 부재: 서열식별번호: 1 - 융합 파트너 단백질
알라닌 링커: 서열식별번호: 1-An-융합 파트너 단백질
글리신 링커: 서열식별번호: 1-Gn-융합 파트너 단백질
혼합된 알라닌 및 글리신 링커: 서열식별번호: 1 - (A/G)n - 융합 파트너 단백질
여기서 An, Gn 및 (A/G)n은 각각 임의의 수의 알라닌, 임의의 수의 글리신 또는 임의의 수의 알라닌 및 글리신의 혼합물이다. 예를 들어, n은 1 내지 25일 수 있고, 바람직하게는 6 내지 10이다. 링커가 알라닌 및 글리신 잔기의 혼합물을 포함하는 경우에, 글리신 및 알라닌 잔기의 임의의 조합이 사용될 수 있다. 상기 구조에서, "융합 파트너 단백질"은 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드, 또는 식물 결합 단백질 또는 펩티드를 나타낸다.
대안적으로 또는 추가로, 링커는 프로테아제 인식 부위를 포함할 수 있다. 프로테아제 인식 부위의 포함은 프로테아제 인식 부위를 인식하는 프로테아제에 대한 노출시에, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드, 또는 식물 결합 단백질 또는 펩티드의 표적화된 제거를 가능하게 한다.
식물 성장 자극 단백질 및 펩티드
상기 제시된 바와 같이, 융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는 펩티드 호르몬, 비-호르몬 펩티드, 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소, 또는 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함할 수 있다.
예를 들어, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드가 펩티드 호르몬을 포함하는 경우에, 펩티드 호르몬은 피토술포카인 (예를 들어, 피토술포카인-α), 클라바타 3 (CLV3), 시스테민, ZmlGF 또는 SCR/SP11을 포함할 수 있다.
식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드가 비-호르몬 펩티드를 포함하는 경우에, 비-호르몬 펩티드는 RKN 16D10, Hg-Syv46, eNOD40 펩티드, 멜리틴, 마스토파란, Mas7, RHPP, 폴라리스(POLARIS) 또는 쿠니츠 트립신 억제제 (KTI)를 포함할 수 있다.
식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소를 포함할 수 있다. 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소는 식물 성장을 자극하거나 식물 구조를 변경하는 화합물에 대한 생물학적 합성 경로 내 임의의 단계를 촉매하는 임의의 효소, 또는 식물 성장을 자극하거나 식물 구조를 변경하는 화합물의 불활성 또는 덜 활성인 유도체를 화합물의 활성 또는 보다 활성인 형태로 전환시키도록 촉매하는 임의의 효소일 수 있다.
식물 성장 자극 화합물은 근권에서 박테리아 또는 진균에 의해 생산된 화합물, 예를 들어 2,3-부탄디올을 포함할 수 있다.
대안적으로, 식물 성장 자극 화합물은 식물 성장 호르몬, 예를 들어, 시토키닌 또는 시토키닌 유도체, 에틸렌, 옥신 또는 옥신 유도체, 지베렐산 또는 지베렐산 유도체, 아브시스산 또는 아브시스산 유도체, 또는 자스몬산 또는 자스몬산 유도체를 포함할 수 있다.
식물 성장 자극 화합물이 시토키닌 또는 시토키닌 유도체를 포함하는 경우에, 시토키닌 또는 시토키닌 유도체는 키네틴, 시스-제아틴, 트랜스-제아틴, 6-벤질아미노퓨린, 디히드록시제아틴, N6-(D2-이소펜테닐) 아데닌, 리보실제아틴, N6-(D2-이소펜테닐) 아데노신, 2-메틸티오-시스-리보실제아틴, 시스-리보실제아틴, 트랜스-리보실제아틴, 2-메틸티오-트랜스-리보실제아틴, 리보실제아틴-5-모노포스페이트, N6-메틸아미노퓨린, N6-디메틸아미노퓨린, 2'-데옥시제아틴 리보시드, 4-히드록시-3-메틸-트랜스-2-부테닐아미노퓨린, 오르토-토폴린, 메타-토폴린, 벤질아데닌, 오르토-메틸토폴린, 메타-메틸토폴린 또는 그의 조합을 포함할 수 있다.
식물 성장 자극 화합물이 옥신 또는 옥신 유도체를 포함하는 경우에, 옥신 또는 옥신 유도체는 활성 옥신, 불활성 옥신, 공액 옥신, 자연 발생 옥신 또는 합성 옥신, 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 옥신 또는 옥신 유도체는 인돌-3-아세트산, 인돌-3-피루브산, 인돌-3-아세탈독심, 인돌-3-아세트아미드, 인돌-3-아세토니트릴, 인돌-3-에탄올, 인돌-3-피루베이트, 인돌-3-아세탈독심, 인돌-3-부티르산, 페닐아세트산, 4-클로로인돌-3-아세트산, 글루코스-공액 옥신 또는 그의 조합을 포함할 수 있다.
식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소는 아세토인 리덕타제, 인돌-3-아세트아미드 히드롤라제, 트립토판 모노옥시게나제, 아세토락테이트 신테타제, α-아세토락테이트 데카르복실라제, 피루베이트 데카르복실라제, 디아세틸 리덕타제, 부탄디올 데히드로게나제, 아미노트랜스퍼라제 (예를 들어, 트립토판 아미노트랜스퍼라제), 트립토판 데카르복실라제, 아민 옥시다제, 인돌-3-피루베이트 데카르복실라제, 인돌-3-아세트알데히드 데히드로게나제, 트립토판 측쇄 옥시다제, 니트릴 히드롤라제, 니트릴라제, 펩티다제, 프로테아제, 아데노신 포스페이트 이소펜테닐트랜스퍼라제, 포스파타제, 아데노신 키나제, 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제, CYP735A, 5'리보뉴클레오티드 포스포히드롤라제, 아데노신 뉴클레오시다제, 제아틴 시스-트랜스 이소머라제, 제아틴 O-글루코실트랜스퍼라제, β-글루코시다제, 시스-히드록실라제, CK 시스-히드록실라제, CK N-글루코실트랜스퍼라제, 2,5-리보뉴클레오티드 포스포히드롤라제, 아데노신 뉴클레오시다제, 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제, 제아틴 리덕타제, 히드록실아민 리덕타제, 2-옥소글루타레이트 디옥시게나제, 지베렐산 2B/3B 히드롤라제, 지베렐린 3-옥시다제, 지베렐린 20-옥시다제, 키토시나제, 키티나제, β-1,3-글루카나제, β-1,4-글루카나제, β-1,6-글루카나제, 아미노시클로프로판-1-카르복실산 데아미나제 또는 nod 인자를 생산하는데 수반되는 효소 (예를 들어, nodA, nodB 또는 nodI)를 포함할 수 있다.
효소가 프로테아제 또는 펩티다제를 포함하는 경우에, 프로테아제 또는 펩티다제는 단백질, 펩티드, 전구단백질 또는 전전구단백질을 절단하여 생물활성 펩티드를 생성하는 프로테아제 또는 펩티다제일 수 있다. 생물활성 펩티드는 생물학적 활성을 발휘하는 임의의 펩티드일 수 있다.
생물활성 펩티드의 예는 RKN 16D10 및 RHPP를 포함한다.
단백질, 펩티드, 전구단백질 또는 전전구단백질을 절단하여 생물활성 펩티드를 생성하는 프로테아제 또는 펩티다제는 서브틸리신, 산 프로테아제, 알칼리성 프로테아제, 프로테이나제, 엔도펩티다제, 엑소펩티다제, 써모리신, 파파인, 펩신, 트립신, 프로나제, 카르복실라제, 세린 프로테아제, 글루탐산 프로테아제, 아스파르테이트 프로테아제, 시스테인 프로테아제, 트레오닌 프로테아제 또는 메탈로프로테아제를 포함할 수 있다.
프로테아제 또는 펩티다제는 단백질-풍부 음식 (예를 들어, 대두 음식 또는 효모 추출물) 내 단백질을 절단할 수 있다.
식물 성장 자극 단백질은 또한 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함할 수 있다. 이러한 효소는 셀룰라제, 리파제, 리그닌 옥시다제, 프로테아제, 글리코시드 히드롤라제, 포스파타제, 니트로게나제, 뉴클레아제, 아미다제, 니트레이트 리덕타제, 니트라이트 리덕타제, 아밀라제, 암모니아 옥시다제, 리그니나제, 글루코시다제, 포스포리파제, 피타제, 펙티나제, 글루카나제, 술파타제, 우레아제, 크실라나제 및 시데로포어를 포함한다. 식물 성장 배지 내로 도입되거나 식물, 종자, 또는 식물 또는 식물 종자 주위 영역에 적용되는 경우에, 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함하는 융합 단백질은 식물의 부근에서 영양소의 가공을 보조하고, 식물의 부근에서 식물에 의한 또는 유익한 박테리아 또는 진균에 의한 증진된 영양소 흡수를 유발할 수 있다.
적합한 셀룰라제는 엔도셀룰라제 (예를 들어, 엔도글루카나제, 예컨대 바실루스 서브틸리스 엔도글루카나제, 바실루스 투린기엔시스 엔도글루카나제, 바실루스 세레우스 엔도글루카나제 또는 바실루스 클라우시이(Bacillus clausii) 엔도글루카나제), 엑소셀룰라제 (예를 들어, 트리코더마 레에세이(Trichoderma reesei) 엑소셀룰라제), 및 β-글루코시다제 (예를 들어, 바실루스 서브틸리스 β-글루코시다제, 바실루스 투린기엔시스 β-글루코시다제, 바실루스 세레우스 β-글루코시다제 또는 바실루스 클라우시이 B-글루코시다제)를 포함한다.
리파제는 바실루스 서브틸리스 리파제, 바실루스 투린기엔시스 리파제, 바실루스 세레우스 리파제 또는 바실루스 클라우시이 리파제를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 리파제는 바실루스 서브틸리스 리파제를 포함한다. 바실루스 서브틸리스 리파제는 하기 프라이머를 사용하여 PCR 증폭될 수 있다: ggatccatggctgaacacaatcc (정방향, 서열식별번호: 37) 및 ggatccttaattcgtattctggcc (역방향, 서열식별번호: 38).
또 다른 실시양태에서, 셀룰라제는 바실루스 서브틸리스 엔도글루카나제이다. 바실루스 서브틸리스 엔도글루카나제는 하기 프라이머를 사용하여 PCR 증폭될 수 있다: ggatccatgaaacggtcaatc (정방향, 서열식별번호: 39) 및 ggatccttactaatttggttctgt (역방향, 서열식별번호: 40).
또 다른 실시양태에서, 융합 단백질은 이. 콜라이(E. coli) 프로테아제 PtrB를 포함한다. 이. 콜라이 프로테아제 PtrB는 하기 프라이머를 사용하여 PCR 증폭될 수 있다: ggatccatgctaccaaaagcc (정방향, 서열식별번호: 41) 및 ggatccttagtccgcaggcgtagc (역방향, 서열식별번호: 42).
특정 실시양태에서, 융합 단백질은 서열식별번호: 104에서의 뉴클레오티드 서열로부터 유래되는 엔도글루카나제를 함유한다.
융합 단백질에서 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편 및 임의로 링커 서열, 예컨대 폴리-A 링커에 융합될 수 있는 예시적인 엔도글루카나제에 대한 아미노산 서열은 서열식별번호: 107로서 제공된다.
다른 실시양태에서, 융합 단백질은 서열식별번호: 105에 제시된 뉴클레오티드 서열로부터 유래되는 포스포리파제를 함유한다.
융합 단백질에서 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편 및 임의로 링커 서열, 예컨대 폴리-A 링커에 융합될 수 있는 예시적인 포스포리파제에 대한 아미노산 서열은 서열식별번호: 108로서 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 융합 단백질은 서열식별번호: 106에 제시된 뉴클레오티드 서열로부터 유래되는 키토사나제를 함유한다. 융합 단백질에서 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편 및 임의로 링커 서열, 예컨대 폴리-A 링커에 융합될 수 있는 예시적인 키토사나제에 대한 아미노산 서열은 서열식별번호: 109로서 제공된다.
융합 구축물을 생성하기 위해, 유전자는 중첩 연장에 의한 스플라이싱 (SOE) 기술을 사용하여 BclA의 최초 35개의 아미노산 (서열식별번호: 1의 아미노산 1-35)을 코딩하는 바실루스 투린기엔시스 DNA의 천연 bclA 프로모터에 융합될 수 있다. 정확한 앰플리콘을 이. 콜라이/바실루스 셔틀 벡터 pHP13 내로 클로닝하고, 정확한 클론을 DNA 서열분석에 의해 스크리닝한다. 정확한 클론을 바실루스 투린기엔시스 내로 전기천공하고 (Cry-, 플라스미드-), 클로람페니콜 저항성에 대해 스크리닝한다. 정확한 형질전환체를 30℃에서 밤새 뇌 심장 주입 브로쓰에서 성장시키고, 영양 한천 플레이트 상에 플레이팅하고, 30℃에서 3일 동안 인큐베이션한다. 융합 구축물을 발현하는 포자 (BEMD 포자)는 포스페이트 완충 염수 (PBS) 중 세척에 의해 플레이트로부터 수집될 수 있고, 원심분리 및 PBS 중 추가의 세척에 의해 정제될 수 있다.
이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 98% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
적합한 리그닌 옥시다제는 리그닌 퍼옥시다제, 락카제, 글리옥살 옥시다제, 리그니나제 및 망가니즈 퍼옥시다제를 포함한다.
프로테아제는 서브틸리신, 산 프로테아제, 알칼리성 프로테아제, 프로테이나제, 펩티다제, 엔도펩티다제, 엑소펩티다제, 써모리신, 파파인, 펩신, 트립신, 프로나제, 카르복실라제, 세린 프로테아제, 글루탐산 프로테아제, 아스파르테이트 프로테아제, 시스테인 프로테아제, 트레오닌 프로테아제 또는 메탈로프로테아제를 포함할 수 있다.
포스파타제는 인산 모노에스테르 히드롤라제, 포스포모노에스테라아제 (예를 들어, PhoA4), 인산 디에스테르 히드롤라제, 포스포디에스테라제, 삼인산 모노에스테르 히드롤라제, 포스포릴 무수물 히드롤라제, 피로포스파타제, 피타제 (예를 들어, 바실루스 서브틸리스 EE148 피타제 또는 바실루스 투린기엔시스 BT013A 피타제), 트리메타포스파타제 또는 트리포스파타제를 포함할 수 있다.
니트로게나제는 Nif 패밀리 니트로게나제 (예를 들어, 파에니바실루스 마실리엔시스(Paenibacillus massiliensis) NifBDEHKNXV)를 포함할 수 있다.
식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 및 펩티드
융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 식물을 병원체로부터 보호하는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다.
단백질 또는 펩티드는 식물 면역 반응을 자극하는 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 식물 면역 반응을 자극하는 단백질 또는 펩티드는 식물 면역계 증진제 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 식물 면역계 증진제 단백질 또는 펩티드는 식물의 면역계에 대한 유익한 효과를 갖는 임의의 단백질 또는 펩티드일 수 있다. 적합한 식물 면역계 증진제 단백질 및 펩티드는 하르핀, α-엘라스틴, β-엘라스틴, 시스테민, 페닐알라닌 암모니아-리아제, 엘리시틴, 데펜신, 크립토게닌, 플라젤린 단백질 및 플라젤린 펩티드 (예를 들어, flg22)를 포함한다.
대안적으로, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드는 항박테리아 활성, 항진균 활성, 또는 항박테리아 및 항진균 활성 둘 다를 갖는 단백질 또는 펩티드일 수 있다. 이러한 단백질 및 펩티드의 예는 박테리오신, 리소자임, 리소자임 펩티드 (예를 들어, LysM), 시데로포어, 비-리보솜 활성 펩티드, 콘알부민, 알부민, 락토페린, 락토페린 펩티드 (예를 들어, LfcinB), TasA 및 스트렙타비딘을 포함한다.
식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드는 또한 살곤충 활성을 갖거나, 살연충 활성을 갖거나, 곤충 또는 벌레 포식을 억제하거나, 또는 그의 조합을 갖는 단백질 또는 펩티드일 수 있다. 예를 들어, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드는 살곤충 박테리아 독소 (예를 들어, VIP 살곤충 단백질), 내독소, Cry 독소 (예를 들어, 바실루스 투린기엔시스로부터의 Cry 독소), 프로테아제 억제제 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, 트립신 억제제 또는 애로우헤드 프로테아제 억제제), 시스테인 프로테아제 또는 키티나제를 포함할 수 있다. Cry 독소가 바실루스 투린기엔시스로부터의 Cry 독소인 경우에, Cry 독소는 Cry5B 단백질 또는 Cry21A 단백질일 수 있다. Cry5B 및 Cry21A는 살곤충 및 살선충 활성 둘 다를 갖는다.
식물을 병원체로부터 보호하는 단백질은 효소를 포함할 수 있다. 적합한 효소는 프로테아제 및 락토나제를 포함한다. 프로테아제 및 락토나제는 박테리아 신호전달 분자 (예를 들어, 박테리아 락톤 호모세린 신호전달 분자)에 특이적일 수 있다.
효소가 락토나제인 경우에, 락토나제는 1,4-락토나제, 2-피론-4,6-디카르복실레이트 락토나제, 3-옥소아디페이트 엔올-락토나제, 악티노마이신 락토나제, 데옥시리모네이트 A-고리-락토나제, 글루코노락토나제 L-람노노-1,4-락토나제, 리모닌-D-고리-락토나제, 스테로이드-락토나제, 트리아세테이트-락토나제 또는 크실로노-1,4-락토나제를 포함할 수 있다.
효소는 또한 박테리아 또는 진균의 세포 성분에 특이적인 효소일 수 있다. 예를 들어, 효소는 β-1,3-글루카나제, β-1,4-글루카나제, β-1,6-글루카나제, 키토시나제, 키티나제, 키토시나제-유사 효소, 리티카제, 펩티다제, 프로테이나제, 프로테아제 (예를 들어, 알칼리성 프로테아제, 산 프로테아제 또는 중성 프로테아제), 뮤타놀리신, 스타폴리신 또는 리소자임을 포함할 수 있다.
식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 및 펩티드
융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다.
예를 들어, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드는 스트레스-관련 화합물을 분해하는 효소를 포함한다. 스트레스-관련 화합물은 아미노시클로프로판-1-카르복실산 (ACC), 반응성 산소 종, 산화질소, 옥시리핀 및 페놀계를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 반응성 산소 종은 히드록실, 과산화수소, 산소 및 슈퍼옥시드를 포함한다. 스트레스-관련 화합물을 분해하는 효소는 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 옥시다제, 카탈라제, 아미노시클로프로판-1-카르복실산 데아미나제, 퍼옥시다제, 항산화제 효소 또는 항산화제 펩티드를 포함할 수 있다.
식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드는 또한 식물을 환경적 스트레스로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 환경적 스트레스는, 예를 들어 가뭄, 홍수, 열, 동결, 염, 중금속, 낮은 pH, 높은 pH 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 식물을 환경적 스트레스로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드는 빙핵형성 단백질, 프롤리나제, 페닐알라닌 암모니아 리아제, 이소코리스메이트 신타제, 이소코리스메이트 피루베이트 리아제 또는 콜린 데히드로게나제를 포함할 수 있다.
식물 결합 단백질 및 펩티드
융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 적어도 식물 결합 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 식물 결합 단백질 또는 펩티드는 식물의 임의의 부분 (예를 들어, 식물 뿌리 또는 식물의 지상부, 예컨대 잎, 줄기, 꽃 또는 과실) 또는 식물 물질에 특이적으로 또는 비-특이적으로 결합할 수 있는 임의의 펩티드 또는 단백질일 수 있다. 따라서, 예를 들어, 식물 결합 단백질 또는 펩티드는 뿌리 결합 단백질 또는 펩티드, 또는 잎 결합 단백질 또는 펩티드일 수 있다.
적합한 식물 결합 단백질 및 펩티드는 어드헤신 (예를 들어, 리커드헤신), 플라젤린, 옴프틴, 렉틴, 엑스판신, 바이오필름 구조 단백질 (예를 들어, TasA 또는 YuaB) 필루스 단백질, 쿠를루스 단백질, 인티민, 인바신, 응집소 및 아핌브리알 단백질을 포함한다.
융합 단백질을 발현하는 재조합 바실루스
본원에 기재된 융합 단백질은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포에 의해 발현될 수 있다. 융합 단백질은 상기 논의된 임의의 융합 단백질일 수 있다.
재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 상기 논의된 임의의 융합 단백질 중 2종 이상을 공동발현할 수 있다. 예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 식물 결합 단백질 또는 펩티드를 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질을, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드를 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드를 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질, 또는 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드와 함께 공동발현할 수 있다.
재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 안트라시스, 바실루스 세레우스, 바실루스 투린기엔시스, 바실루스 미코이데스, 바실루스 슈도미코이데스, 바실루스 사마니이, 바실루스 가에모켄시스, 바실루스 웨이헨스테파넨시스, 바실루스 토요넨시스 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 세레우스, 바실루스 투린기엔시스, 바실루스 슈도미코이데스 또는 바실루스 미코이데스를 포함할 수 있다. 특히, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스를 포함할 수 있다.
융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 생성하기 위해, 임의의 바실루스 세레우스 패밀리 구성원은 관련 기술분야에 공지된 표준 방법을 사용하여 (예를 들어, 전기천공에 의해) 융합 단백질을 코딩하는 벡터와 접합되거나, 그에 의해 형질도입 또는 형질전환될 수 있다. 이어서, 박테리아는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 스크리닝되어 형질전환체가 확인될 수 있다. 예를 들어, 벡터가 항생제 저항성 유전자를 포함하는 경우에, 박테리아는 항생제 저항성에 대해 스크리닝될 수 있다. 대안적으로, 융합 단백질을 코딩하는 DNA는 비. 세레우스 패밀리 구성원 숙주의 염색체 DNA 내로 통합될 수 있다. 이어서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 포자형성을 유도할 조건에 노출될 수 있다. 포자형성을 유도하기에 적합한 조건은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 한천 플레이트 상에 플레이팅되고, 수일 (예를 들어, 3일) 동안 약 30℃의 온도에서 인큐베이션될 수 있다.
임의의 상기 종의 불활성화된 균주, 비-독성 균주 또는 유전자 조작된 균주가 또한 적합하게 사용될 수 있다. 예를 들어, Cry 독소가 결여되어 있는 바실루스 투린기엔시스가 사용될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 융합 단백질을 발현하는 재조합 비. 세레우스 패밀리 포자가 생성되었을 때, 그들은 사용시에 1회 추가의 발아를 방지하기 위해 불활성화될 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 박테리아 포자를 불활성화시키기 위한 임의의 방법이 사용될 수 있다. 적합한 방법은 비제한적으로, 열 처리, 감마선 조사, X선 조사, UV-A 조사, UV-B 조사, 화학적 처리 (예를 들어, 글루타르알데히드, 포름알데히드, 과산화수소, 아세트산, 표백제 또는 그의 임의의 조합을 사용한 처리), 또는 그의 조합을 포함한다. 대안적으로, 비독소생성 균주 또는 유전적으로 또는 물리적으로 불활성화된 균주로부터 유래된 포자가 사용될 수 있다.
식물-성장 촉진 효과 및/또는 다른 유익한 속성을 갖는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포
많은 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 균주는 고유의 유익한 속성을 갖는다. 예를 들어, 일부 균주는 식물-성장 촉진 효과를 갖는다. 본원에 기재된 임의의 융합 단백질은 이러한 균주에서 발현될 수 있다.
예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 박테리아의 식물-성장 촉진 균주를 포함할 수 있다.
박테리아의 식물-성장 촉진 균주는 살곤충 독소 (예를 들어, Cry 독소)를 생산하거나, 살진균 화합물 (예를 들어, β-1,3-글루카나제, 키토시나제, 리티카제 또는 그의 조합)을 생산하거나, 살선충 화합물 (예를 들어, Cry 독소)을 생산하거나, 살박테리아 화합물을 생산하거나, 1종 이상의 항생제에 저항성이 있거나, 1종 이상의 자유 복제 플라스미드를 포함하거나, 식물 뿌리에 결합하거나, 식물 뿌리를 콜로니화하거나, 바이오필름을 형성하거나, 영양소를 가용화시키거나, 유기 산을 분비하거나, 또는 그의 임의의 조합을 갖는 박테리아의 균주를 포함할 수 있다.
예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포가 박테리아의 식물-성장 촉진 균주를 포함하는 경우에, 박테리아의 식물 성장-촉진 균주는 바실루스 미코이데스 BT155 (NRRL 번호 B-50921), 바실루스 미코이데스 EE118 (NRRL 번호 B-50918), 바실루스 미코이데스 EE141 (NRRL 번호 B-50916), 바실루스 미코이데스 BT46-3 (NRRL 번호 B-50922), 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 EE128 (NRRL 번호 B-50917), 바실루스 투린기엔시스 BT013A (NRRL 번호 B-50924) 또는 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 EE349 (NRRL 번호 B-50928)를 포함할 수 있다. 바실루스 투린기엔시스 BT013A는 또한 바실루스 투린기엔시스 4Q7로 공지되어 있다. 각각의 이들 균주는, 미국 61604 일리노이주 피오리아 노스 유니버시티 스트리트 1815의 주소를 갖는 미국 농무부 (USDA) 농업 연구소 (ARS)에 2014년 3월 10일에 기탁되었고, 괄호 안에 제공된 NRRL 기탁 번호에 의해 확인된다.
이들 식물-성장 촉진 균주는 다양한 건강한 식물의 근권으로부터 단리되었고, 그의 16S rRNA 서열에 의해 및 생화학적 검정을 통해 확인되었다. 균주는 적어도 통상적인 생화학 및 형태학적 지시자에 의해 그의 속 명칭으로 확인되었다. 확인된 그람-양성 균주, 예컨대 바실루스에 대한 생화학적 검정은 PEA 배지 및 영양 한천 상의 성장, 현미경 검사, 5% 및 7.5% NaCl 배지 상의 성장, pH 5 및 pH 9에서의 성장, 42℃ 및 50℃에서의 성장, 셀로비오스, 락토스, 글리세롤, 글루코스, 수크로스, d-만니톨 및 전분을 사용한 발효시에 산을 생산하는 능력; 형광 안료 생산; 젤라틴 가수분해; 니트레이트 환원; 카탈라제 생산, 전분 가수분해; 옥시다제 반응, 우레아제 생산 및 운동성을 포함하였다.
예를 들어, 박테리아의 식물-성장 촉진 균주를 포함하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 미코이데스 BT155, 바실루스 미코이데스 EE141 또는 바실루스 투린기엔시스 BT013A를 포함할 수 있다. 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 본원에 기재된 임의의 융합 단백질, 예를 들어 서열식별번호: 60의 표적화 서열 및 비-호르몬 펩티드 (예를 들어, 쿠니츠 트립신 억제제 (KTI)), 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소 (예를 들어, 키토시나제), 식물 결합 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, TasA); 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, TasA), 또는 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소 (예를 들어, 포스파타제, 예컨대 PhoA 또는 피타제, 또는 엔도글루카나제)를 포함하는 융합 단백질을 발현할 수 있다.
프로모터
본원에 기재된 임의의 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포에서, 융합 단백질은 융합 단백질의 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편에 천연인 프로모터의 제어 하에 발현될 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질이 비. 안트라시스 스턴 BclA로부터 유래된 표적화 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35, 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 60)을 포함하는 경우 또는 융합 단백질이 전장 BclA (서열식별번호: 2) 또는 전장 BclA의 단편 (예를 들어, 서열식별번호: 59)을 포함하는 경우에, 융합 단백질은 비. 안트라시스 스턴의 게놈 내 BclA 유전자와 정상적으로 연관된 프로모터 (예를 들어, 서열식별번호: 85의 프로모터)의 제어 하에 발현될 수 있다.
대안적으로, 융합 단백질은 고발현 포자형성 프로모터의 제어 하에 발현될 수 있다. 일부 경우에서, 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편에 천연인 프로모터는 고발현 포자형성 프로모터일 것이다. 다른 경우에서, 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편에 천연인 프로모터는 고발현 포자형성 프로모터가 아닐 것이다. 후자의 경우에서, 천연 프로모터를 고발현 포자형성 프로모터로 대체하는 것이 유리할 수 있다. 고발현 포자형성 프로모터의 제어 하의 융합 단백질의 발현은 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막 상의 융합 단백질의 증가된 발현을 제공한다.
고발현 포자형성 프로모터는 1개 이상의 시그마-K 포자형성-특이적 폴리머라제 프로모터 서열을 포함할 수 있다.
바실루스 세레우스 패밀리 구성원에서 융합 단백질을 발현하는데 사용하기에 적합한 고발현 포자형성 프로모터는 하기 표 2에 열거된 것을 포함한다:
표 2. 프로모터 서열
Figure 112017035661890-pct00010
Figure 112017035661890-pct00011
Figure 112017035661890-pct00012
상기 표 2에 열거된 프로모터 서열에서, 시그마-K 포자형성-특이적 폴리머라제 프로모터 서열의 위치는 볼드체 및 밑줄표시 문자에 의해 나타나 있다. Cry1A 프로모터 (비. 투린기엔시스 HD-73; 서열식별번호: 90)는 표 2에서 이중 밑줄표시에 의해 나타나 있는 바와 같이, 2개가 서로 중첩되어 있는 총 4개의 시그마-K 서열을 갖는다.
바실루스 세레우스 패밀리 구성원에서 융합 단백질을 발현하는데 사용하기에 바람직한 고발현 포자형성 프로모터는 BetA 프로모터 (비. 안트라시스 스턴; 서열식별번호: 86), BclA 프로모터 (비. 안트라시스 스턴; 서열식별번호: 85), BclA 클러스터 글리코실 트랜스퍼라제 오페론 1 및 2 프로모터 (비. 안트라시스 스턴; 서열식별번호: 101 및 102) 및 YVTN β-프로펠러 단백질 프로모터 (비. 웨이헨스테파넨시스 KBAB 4; 서열식별번호: 89)를 포함한다.
본원에 기재된 임의의 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포에서, 융합 단백질은 서열식별번호: 85-103 중 어느 하나의 핵산 서열과 적어도 80% 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 포자형성 프로모터의 제어 하에 발현될 수 있다.
포자형성 프로모터가 서열식별번호: 85-103 중 어느 하나의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 경우에, 시그마-K 포자형성-특이적 폴리머라제 프로모터 서열 또는 서열들은 서열식별번호: 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 또는 103의 상응하는 뉴클레오티드와 바람직하게는 100% 동일성을 갖는다. 예를 들어, 상기 표 2에 예시된 바와 같이, 비. 안트라시스 스턴의 BclA 프로모터 (서열식별번호: 85)는 뉴클레오티드 24-32, 35-43 및 129-137에 시그마-K 포자형성-특이적 폴리머라제 프로모터 서열을 갖는다. 따라서, 포자형성 프로모터가 서열식별번호: 85의 핵산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경우에, 서열식별번호: 85의 뉴클레오티드 24-32, 35-43 및 129-137에 상응하는 포자형성 프로모터의 뉴클레오티드는 서열식별번호: 85의 뉴클레오티드 24-32, 35-43 및 129-137과 100% 동일성을 갖는 것이 바람직하다.
식물 성장을 자극하기 위한 본원에 기재된 임의의 방법에서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 특정한 살곤충제로부터 선택된 적어도 1종의 살곤충제를 포함하는 식물 성장 배지에서 성장한 식물은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 함유하지 않는 동일한 식물 성장 배지에서의 식물의 성장과 비교하여 증가된 성장을 나타낸다.
식물 성장을 자극하기 위한 본원에 기재된 임의의 조성물 및 방법에서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 상기 기재된 임의의 박테리아의 재조합 식물-성장 촉진 균주를 포함할 수 있다.
본원에 개시된 식물 성장을 자극하기 위한 임의의 조성물 및 방법에서, 융합 단백질은 상기 기재된 임의의 프로모터의 제어 하에 발현될 수 있다.
살곤충제
"살곤충제", 뿐만 아니라 용어 "살곤충"은 곤충의 사멸률을 증가시키거나 성장률을 억제하는 물질의 능력을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "곤충"은 "곤충강"의 모든 유기체를 포함한다. 용어 "성충전" 곤충은, 예를 들어 알, 유충 및 약충을 포함한, 성충 단계 이전의 유기체의 임의의 형태를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "살곤충제" 및 "살곤충"은 또한 "살선충제" 및 "살선충" 및 "살진드기제" 및 "살진드기"를 포괄한다.
"살선충제" 및 "살선충"은 선충류의 사멸률을 증가시키거나 성장률을 억제하는 물질의 능력을 지칭한다. 일반적으로, 용어 "선충류"는 상기 유기체의 알, 유충, 미숙 및 성숙 형태를 포함한다.
"살진드기제" 및 "살진드기"는 거미강, 응애아강에 속하는 외부기생충의 사멸률을 증가시키거나 성장률을 억제하는 물질의 능력을 지칭한다.
"일반 명칭"에 의해 본원에 명시된 활성 성분은 공지되어 있으며, 예를 들어 살충제 편람 ("The Pesticide Manual," 16th Ed., British Crop Protection Council 2012)에 기재되어 있거나, 인터넷 (예를 들어, http://www.alanwood.net/pesticides)에서 찾을 수 있다.
일부 실시양태에서, 살곤충제는 아세타미프리드, 알디카르브, 아미트라즈, 베타-시플루트린, 카르바릴, 클로티아니딘, 시플루트린, 시페르메트린, 델타메트린, 엔도술판, 에티온, 에티프롤, 에토프로포스, 페나미포스, 페노부카르브, 펜티온, 피프로닐, 플루벤디아미드, 플루오피람, 플루피라디푸론, 포르메타네이트, 헵타노포스, 이미다클로프리드, 메타미도포스, 메티오카르브, 메토밀, 니클로사미드, 옥시데메톤-메틸, 포살론, 실라플루오펜, 스피로디클로펜, 스피로메시펜, 스피로테트라마트, 티아클로프리드, 티오디카르브, 트랄로메트린, 트리아조포스, 트리플루무론, 바미도티온, 1-{2-플루오로-4-메틸-5-[(R)-(2,2,2-트리플루오로에틸)술피닐]페닐}-3-(트리플루오로메틸)-1H-1,2,4-트리아졸-5-아민, 1-(3-클로로피리딘-2-일)-N-[4-시아노-2-메틸-6-(메틸카르바모일)페닐]-3-{[5-(트리플루오로메틸)-2H-테트라졸-2-일]메틸}-1H-피라졸-5-카르복스아미드 및 3종의 테르펜인 α-테르피넨, p-시멘 및 리모넨을 포함하는 살충 테르펜 혼합물, 및 임의로 레퀴엠(REQUIEM)®으로서 판매되는 3종의 테르펜, 즉 α-테르피넨, p-시멘 및 리모넨의 혼합물을 포함하는 모의 천연 살충제를 포함한 소수의 테르펜 성분으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 바람직한 실시양태에 따르면 살곤충제는 클로티아니딘, 시페르메트린, 에티프롤, 피프로닐, 플루오피람, 플루피라디푸론, 이미다클로프리드, 메티오카르브 및 티오디카르브로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 조성물
본 발명에 따르면 조성물은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 포함한다.
본 발명에 따른 "상승작용적 유효량"은 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 또는 본원에 기재된 바와 같은 적어도 1종의 살곤충제 단독보다 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대해 더 효과적인, 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 살곤충제의 조합의 양을 나타낸다. 본 발명에 따른 "상승작용적 유효량"은 또한 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 또는 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제 단독보다 식물 성장을 증진시키고/거나 식물 건강을 촉진하는데 더 효과적인, 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 살곤충제의 조합의 양을 나타낸다.
본 발명은 본원에 개시된 각각의 특정한 살곤충제와 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포와의 각각의 및 모든 조합을 포함한다.
매우 바람직한 실시양태에서 본 발명은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체 또는 해충으로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제 (적어도 1종의 살곤충제는 아세타미프리드, 알디카르브, 아미트라즈, 베타-시플루트린, 카르바릴, 클로티아니딘, 시플루트린, 시페르메트린, 델타메트린, 엔도술판, 에티온, 에티프롤, 에토프로포스, 페나미포스, 페노부카르브, 펜티온, 피프로닐, 플루벤디아미드, 플루오피람, 플루피라디푸론, 포르메타네이트, 헵타노포스, 이미다클로프리드, 메타미도포스, 메티오카르브, 메토밀, 니클로사미드, 옥시데메톤-메틸, 포살론, 실라플루오펜, 스피로디클로펜, 스피로메시펜, 스피로테트라마트, 티아클로프리드, 티오디카르브, 트랄로메트린, 트리아조포스, 트리플루무론, 바미도티온, 1-{2-플루오로-4-메틸-5-[(R)-(2,2,2-트리플루오로에틸)술피닐]페닐}-3-(트리플루오로메틸)-1H-1,2,4-트리아졸-5-아민 및 1-(3-클로로피리딘-2-일)-N-[4-시아노-2-메틸-6-(메틸카르바모일)페닐]-3-{[5-(트리플루오로메틸)-2H-테트라졸-2-일]메틸}-1H-피라졸-5-카르복스아미드로 이루어진 군으로부터 선택됨)를 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서 본 발명에 따른 조성물은 적어도 1종의 살진균제를 추가로 포함한다.
일반적으로, "살진균"은 진균의 사멸률을 증가시키거나 성장률을 억제하는 물질의 능력을 의미한다. 용어 "진균" 또는 "진균류"는 클로로필이 결여된 매우 다양한 유핵 포자보유 유기체를 포함한다. 진균의 예는 효모, 곰팡이, 흰곰팡이, 녹병 및 버섯을 포함한다.
추가의 첨가제
본 발명의 한 측면은 증량제, 용매, 자발성 촉진제, 담체, 유화제, 분산제, 결빙 보호제, 증점제 및 아주반트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 보조제를 추가로 포함하는 상기 기재된 바와 같은 조성물을 제공하는 것이다. 그러한 조성물은 제제로서 언급된다.
따라서, 본 발명의 한 측면에서, 상기 제제 및 그로부터 제조된 적용 형태는 본 발명의 조성물을 포함하는 작물 보호제 및/또는 살충제, 예컨대 드렌치, 드립 및 분무액으로서 제공된다. 적용 형태는, 예를 들어 추가의 작물 보호제 및/또는 살충제 및/또는 활성-증진 아주반트, 예컨대 침투제, 예를 들어 식물성 오일, 예컨대, 예를 들어 평지씨 오일, 해바라기 오일, 미네랄 오일, 예컨대, 예를 들어 액체 파라핀, 식물성 지방산의 알킬 에스테르, 예컨대 평지씨 오일 또는 대두 오일 메틸 에스테르, 또는 알칸올 알콕실레이트 및/또는 전착제, 예컨대, 예를 들어, 알킬실록산 및/또는 염, 예를 들어 유기 또는 무기 암모늄 또는 포스포늄 염, 예를 들어 황산암모늄 또는 인산수소이암모늄, 및/또는 저류 촉진제, 예컨대 디옥틸 술포숙시네이트 또는 히드록시프로필구아 중합체 및/또는 함습제, 예컨대 글리세롤 및/또는 비료, 예컨대 암모늄, 칼륨 또는 인 비료를 포함할 수 있다.
전형적인 제제의 예는 수용성 액체 (SL), 유화성 농축물 (EC), 물 중 에멀젼 (EW), 현탁액 농축물 (SC, SE, FS, OD), 수분산성 과립 (WG), 과립 (GR) 및 캡슐 농축물 (CS)을 포함하고; 이들 및 다른 가능한 유형의 제제는, 예를 들어 문헌 [Crop Life International and in Pesticide Specifications, Manual on Development and Use of FAO and WHO Specifications for Pesticides, FAO Plant Production and Protection Papers - 173, prepared by the FAO/WHO Joint Meeting on Pesticide Specifications, 2004, ISBN: 9251048576]에 기재되어 있다. 제제는 본 발명의 1종 이상의 활성 화합물 이외의 다른 활성 농약 화합물을 포함할 수 있다.
해당 제제 또는 적용 형태는 바람직하게는, 예를 들어 보조제, 예컨대 증량제, 용매, 자발성 촉진제, 담체, 유화제, 분산제, 결빙 보호제, 살생물제, 증점제 및/또는 다른 보조제, 예컨대 아주반트를 포함한다. 이러한 문맥에서 아주반트는 그 자체로 생물학적 효과를 갖는 성분 없이, 제제의 생물학적 효과를 증진시키는 성분이다. 아주반트의 예는 저류, 전착, 잎 표면에 대한 부착 또는 침투를 촉진하는 작용제이다.
이들 제제는 공지된 방식으로, 예를 들어 활성 화합물을 보조제, 예컨대, 예를 들어 증량제, 용매 및/또는 고체 담체 및/또는 추가의 보조제, 예컨대, 예를 들어 계면활성제와 혼합함으로써 생산된다. 제제는 적합한 식물에서 제조되거나, 또는 다르게는 적용 전에 또는 그 동안에 제조된다.
활성 화합물의 제제 또는 이들 제제로부터 제조된 적용 형태 (예컨대, 예를 들어 사용가능한 작물 보호제, 예컨대 분무액 또는 종자 드레싱)에 특정한 특성, 예컨대 특정 물리적, 기술적 및/또는 생물학적 특성을 부여하는데 적합한 물질이 보조제로 사용하기에 적합하다.
적합한 증량제는, 예를 들어 물, 예를 들어 방향족 및 비-방향족 탄화수소 (예컨대 파라핀, 알킬벤젠, 알킬나프탈렌, 클로로벤젠), 알콜 및 폴리올 (이는 적절한 경우에 또한 치환되고/거나, 에테르화되고/거나 에스테르화될 수 있음), 케톤 (예컨대 아세톤, 시클로헥사논), 에스테르 (지방 및 오일 포함) 및 (폴리)에테르, 비치환 및 치환된 아민, 아미드, 락탐 (예컨대 N-알킬피롤리돈) 및 락톤, 술폰 및 술폭시드 (예컨대 디메틸 술폭시드)의 부류로부터의 극성 및 비극성 유기 화학 액체이다.
사용된 증량제가 물인 경우에, 예를 들어 유기 용매를 보조 용매로 사용하는 것이 또한 가능하다. 본질적으로, 적합한 액체 용매는 하기와 같다: 방향족, 예컨대 크실렌, 톨루엔 또는 알킬나프탈렌, 염소화 방향족 및 염소화 지방족 탄화수소, 예컨대 클로로벤젠, 클로로에틸렌 또는 메틸렌 클로라이드, 지방족 탄화수소, 예컨대 시클로헥산 또는 파라핀, 예를 들어 석유 분획, 미네랄 및 식물성 오일, 알콜, 예컨대 부탄올 또는 글리콜 및 또한 그의 에테르 및 에스테르, 케톤, 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤 또는 시클로헥사논, 강한 극성 용매, 예컨대 디메틸포름아미드 및 디메틸 술폭시드, 및 또한 물.
원칙적으로 모든 적합한 용매를 사용하는 것이 가능하다. 적합한 용매는, 예를 들어 방향족 탄화수소, 예컨대 크실렌, 톨루엔 또는 알킬나프탈렌, 예를 들어 염소화 방향족 또는 지방족 탄화수소, 예컨대 클로로벤젠, 클로로에틸렌 또는 메틸렌 클로라이드, 예를 들어 지방족 탄화수소, 예컨대 시클로헥산, 예를 들어 파라핀, 석유 분획, 미네랄 및 식물성 오일, 알콜, 예컨대, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올 또는 글리콜, 및 또한 그의 에테르 및 에스테르, 케톤, 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤 또는 시클로헥사논, 예를 들어 강한 극성 용매, 예컨대 디메틸 술폭시드, 및 물이다.
모든 적합한 담체가 원칙적으로 사용될 수 있다. 적합한 담체는 특히 하기와 같다: 예를 들어, 암모늄 염 및 분쇄된 천연 미네랄, 예컨대 카올린, 점토, 활석, 백악, 석영, 아타풀자이트, 몬모릴로나이트 또는 규조토, 및 분쇄된 합성 미네랄, 예컨대 미분된 실리카, 알루미나 및 천연 또는 합성 규산염, 수지, 왁스 및/또는 고체 비료. 이러한 담체의 혼합물이 마찬가지로 사용될 수 있다. 과립에 적합한 담체는 하기를 포함한다: 예를 들어, 분쇄 및 분획화된 천연 미네랄, 예컨대 방해석, 대리석, 부석, 세피올라이트, 돌로마이트, 및 또한 무기 및 유기 분말의 합성 과립, 및 또한 유기 물질, 예컨대 톱밥, 종이, 코코넛 쉘, 메이즈 속대 및 담배 자루의 과립.
액화된 기체상 증량제 또는 용매가 또한 사용될 수 있다. 표준 온도에서 및 표준 압력 하에 기체상인 그러한 증량제 또는 담체, 예를 들어 에어로졸 추진제, 예컨대 할로겐화 탄화수소, 및 또한 부탄, 프로판, 질소 및 이산화탄소가 특히 적합하다.
이온성 또는 비이온성 특성을 갖는 유화제 및/또는 거품-형성제, 분산제 또는 습윤제, 또는 이들 표면-활성 물질의 혼합물의 예는, 폴리아크릴산의 염, 리그노술폰산의 염, 페닐술폰산 또는 나프탈렌술폰산의 염, 에틸렌 옥시드와 지방 알콜 또는 지방산 또는 지방 아민, 치환된 페놀 (바람직하게는, 알킬페놀 또는 아릴페놀)과의 중축합물, 술포숙신산 에스테르의 염, 타우린 유도체 (바람직하게는, 알킬타우레이트), 폴리에톡실화 알콜 또는 페놀의 인산 에스테르, 폴리올의 지방산 에스테르, 및 술페이트, 술포네이트 및 포스페이트를 함유하는 화합물의 유도체, 예를 들어 알킬아릴 폴리글리콜 에테르, 알킬술포네이트, 알킬 술페이트, 아릴술포네이트, 단백질 가수분해물, 리그닌-술파이트 폐액 및 메틸셀룰로스이다. 표면-활성 물질의 존재는 활성 화합물 중 1종 및/또는 불활성 담체 중 1종이 물에 가용성이 아닌 경우 및 적용이 물 중에서 수행되는 경우에 유리하다.
제제 및 그로부터 유래된 적용 형태 중에 존재할 수 있는 추가의 보조제는 착색제, 예컨대 무기 안료, 예를 들어 산화철, 산화티타늄, 프러시안 블루, 및 유기 염료, 예컨대 알리자린 염료, 아조 염료 및 금속 프탈로시아닌 염료, 및 영양소 및 미량 영양소, 예컨대 철, 망가니즈, 붕소, 구리, 코발트, 몰리브데넘 및 아연의 염을 포함한다.
화학적 및/또는 물리적 안정성을 개선시키는 안정화제, 예컨대 저온 안정화제, 보존제, 항산화제, 광 안정화제 또는 다른 작용제가 또한 존재할 수 있다. 거품-형성제 또는 탈포제가 추가로 존재할 수 있다.
추가로, 제제 및 그로부터 유래된 적용 형태는 또한 추가의 보조제로서, 점착제, 예컨대 카르복시메틸셀룰로스, 분말, 과립 또는 라텍스 형태의 천연 및 합성 중합체, 예컨대 아라비아 검, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 아세테이트, 및 또한 천연 인지질, 예컨대 세팔린 및 레시틴, 및 합성 인지질을 포함할 수 있다. 추가의 가능한 보조제는 미네랄 및 식물성 오일을 포함한다.
제제 및 그로부터 유래된 적용 형태 중에 존재하는 추가의 보조제가 있을 수도 있다. 이러한 첨가제의 예는 향료, 보호 콜로이드, 결합제, 접착제, 증점제, 요변성 물질, 침투제, 저류 촉진제, 안정화제, 격리제, 착화제, 함습제 및 전착제를 포함한다. 일반적으로 말하면, 활성 화합물은 제제화 목적을 위해 흔히 사용되는 임의의 고체 또는 액체 첨가제와 조합될 수 있다.
적합한 저류 촉진제는, 예를 들어 동적 표면 장력을 감소시키는 모든 물질, 예컨대 디옥틸 술포숙시네이트, 또는 점탄성을 증가시키는 모든 물질, 예컨대 히드록시프로필구아 중합체를 포함한다.
본 발명의 문맥에서 적합한 침투제는 식물 내로의 활성 농약 화합물의 침투를 증진시키기 위해 전형적으로 사용되는 모든 그러한 물질을 포함한다. 이러한 문맥에서 침투제는, (일반적으로 수성) 적용액 및/또는 분무 코팅으로부터, 그들이 식물의 각피를 침투하여 각피에서의 활성 화합물의 이동성을 증가시킬 수 있는 것으로 정의된다. 이러한 특성은 문헌에 기재된 방법을 사용하여 결정될 수 있다 (Baur, et al., 1997, Pesticide Science 51, 131-152). 예는, 예를 들어 알콜 알콕실레이트, 예컨대 코코넛 지방성 에톡실레이트 (10) 또는 이소트리데실 에톡실레이트 (12), 지방산 에스테르, 예컨대 평지씨 또는 대두 오일 메틸 에스테르, 지방 아민 알콕실레이트, 예컨대 탈로우아민 에톡실레이트 (15), 또는 암모늄 및/또는 포스포늄 염, 예컨대 황산암모늄 또는 인산수소이암모늄을 포함한다.
제제는 바람직하게는 제제의 중량을 기준으로 하여 0.0001 중량% 내지 98 중량%의 활성 화합물, 특히 바람직하게는 0.01 중량% 내지 95 중량%의 활성 화합물, 보다 바람직하게는 0.5 중량% 내지 90 중량%의 활성 화합물을 포함한다. 활성 화합물의 함량은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제의 합계로 정의된다.
제제로부터 제조된 적용 형태 (작물 보호 제품)의 활성 화합물 함량은 넓은 범위 내에서 달라질 수 있다. 적용 형태의 활성 화합물 농도는 적용 형태의 중량을 기준으로 하여 전형적으로 0.0001 중량% 내지 95 중량%의 활성 화합물, 바람직하게는 0.0001 중량% 내지 1 중량%로 고려될 수 있다. 적용은 적용 형태에 적합화된 통상의 방식으로 수행된다.
추가로, 본 발명의 한 측면에서 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 공간적으로 분리된 배열로 포함하는 부분들의 키트가 제공된다.
본 발명의 추가 실시양태에서 상기 언급된 부분들의 키트는 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제를 추가로 포함한다. 살진균제 및/또는 살곤충제는 부분들의 키트의 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 성분 또는 부분들의 키트의 살곤충제 성분에, 공간적으로 분리되어 또는 이들 성분의 둘 다에 존재할 수 있다. 바람직하게는, 살진균제 및/또는 살곤충제는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 성분에 존재한다.
더욱이, 본 발명에 따른 부분들의 키트는 하기 언급된 바와 같이 증량제, 용매, 자발성 촉진제, 담체, 유화제, 분산제, 결빙 보호제, 증점제 및 아주반트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 보조제를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 적어도 1종의 보조제는 부분들의 키트의 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 성분 또는 부분들의 키트의 살곤충제 성분에, 공간적으로 분리되어 또는 이들 성분의 둘 다에 존재할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에서 상기 기재된 바와 같은 조성물은 식물 및 식물 부분의 전체 손상, 뿐만 아니라 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의해 유발된 수확된 과실 또는 채소에서의 손실을 감소시키기 위해 사용된다.
추가로, 본 발명의 또 다른 측면에서 상기 기재된 바와 같은 조성물은 전체 식물 건강을 증가시킨다.
용어 "식물 건강"은 일반적으로 해충의 방제에 연관되지 않은 식물의 다양한 종류의 개선을 포함한다. 예를 들어, 언급될 수 있는 유리한 특성은 다음을 포함한 개선된 작물 특징이다: 출아, 작물 수확량, 단백질 함량, 오일 함량, 전분 함량, 보다 발달된 뿌리계, 개선된 뿌리 성장, 개선된 뿌리 크기 유지, 개선된 뿌리 유효성, 개선된 스트레스 내성 (예를 들어 가뭄, 열, 염, UV, 물, 추위에 대한), 감소된 에틸렌 (감소된 생산 및/또는 수용 억제), 분얼 증가, 식물 높이의 증가, 보다 큰 잎새, 보다 적은 죽은 기부 잎, 보다 강한 분얼경, 보다 푸른 잎 색, 색소 함량, 광합성 활성, 보다 적은 투입 필요량 (예컨대 비료 또는 물), 보다 적은 종자 필요량, 보다 생산적인 분얼경, 보다 이른 개화, 이른 곡물 성숙, 보다 적은 식물 쓰러짐 (도복), 증가된 싹 성장, 증진된 식물 활력, 증가된 식물 생립 및 보다 이르고 보다 우수한 발아.
본 발명에 따른 용도에 관하여, 개선된 식물 건강은 바람직하게는 다음을 포함한 개선된 식물 특징을 지칭한다: 작물 수확량, 보다 발달된 뿌리계 (개선된 뿌리 성장), 개선된 뿌리 크기 유지, 개선된 뿌리 유효성, 분얼 증가, 식물 높이의 증가, 보다 큰 잎새, 보다 적은 죽은 기부 잎, 보다 강한 분얼경, 보다 푸른 잎 색, 광합성 활성, 보다 생산적인 분얼경, 증진된 식물 활력 및 증가된 식물 생립.
본 발명에 관하여, 개선된 식물 건강은 바람직하게는 특히 작물 수확량, 보다 발달된 뿌리계, 개선된 뿌리 성장, 개선된 뿌리 크기 유지, 개선된 뿌리 유효성, 분얼 증가 및 식물 높이의 증가로부터 선택된 개선된 식물 특성을 지칭한다.
본원에 정의된 바와 같은 식물 건강에 대한 본 발명에 따른 조성물의 효과는 식물 중 일부를 본 발명에 따른 조성물로 처리하고, 식물 중 또 다른 일부를 본 발명에 따른 조성물로 처리하지 않은, 동일한 환경 조건 하에서 성장시킨 상기 식물을 비교함으로써 결정될 수 있다. 대신에, 상기 다른 일부는 전혀 처리하지 않거나 위약으로 처리한다 (즉, 본 발명에 따른 조성물이 없는 적용, 예컨대 모든 활성 성분이 없는 (즉, 본원에 기재된 바와 같은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세레우스 패밀리 구성원-기재 생물학적 방제제가 없고 본원에 기재된 바와 같은 살곤충제가 없는) 적용, 또는 본원에 기재된 바와 같은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세레우스 패밀리 구성원-기재 생물학적 방제제가 없는 적용, 또는 본원에 기재된 바와 같은 살곤충제가 없는 적용).
본 발명에 따른 조성물은 임의의 목적하는 방식, 예컨대 종자 코팅, 토양 드렌치의 형태로 및/또는 직접 고랑내로 및/또는 엽면 분무로서 적용되고, 출아전, 출아후 또는 둘 다에 적용될 수 있다. 다시 말해서, 조성물은 종자, 식물 또는 수확된 과실 및 채소, 또는 식물이 성장하고 있거나 식물을 성장시키려는 토양 (식물의 성장 생육지)에 적용될 수 있다.
식물 및 식물 부분의 전체 손상을 감소시키는 것은 종종 보다 건강한 식물 및/또는 식물 활력 및 수확량의 증가를 유발한다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물은 통상적인 또는 트랜스제닉 식물 또는 그의 종자를 처리하기 위해 사용된다.
본 발명은 또한 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제를 포함하는 상기 기재된 임의의 조성물을 사용하여 식물 성장을 자극하는 방법에 관한 것이다. 식물 성장을 자극하는 방법은 (i) 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포, 및 본원에 개시된 적어도 1종의 추가의 특정한 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물을 식물, 식물 부분, 식물 주위 생육지 또는 식물이 식재될 생육지 (예를 들어, 토양 또는 다른 성장 배지)에 적용하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면에서 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 동시에 또는 순차적으로 적용하는 단계를 포함하는, 식물 및 식물 부분의 전체 손상, 뿐만 아니라 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의해 유발된 수확된 과실 또는 채소에서의 손실을 감소시키는 방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 조성물은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 특정한 살곤충제 이외에도 적어도 1종의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제를 포함한다. 한 실시양태에서, 적어도 1종의 살진균제는 합성 살진균제이다.
본 발명의 방법은 하기 적용 방법을 포함하며, 즉 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제 둘 다는 농업상 허용되는 보관 수명을 갖는 단일의 안정한 조성물로 제제화되거나 (소위 "단독-제제"), 또는 사용 전에 또는 사용 시에 조합될 수 있다 (소위 "조합-제제").
달리 언급되지 않는 한, 표현 "조합"은 단독-제제, 단일 "레디-믹스" 형태, 단독-제제로부터 구성된 조합 분무 혼합물, 예컨대 "탱크-믹스", 및 특히 순차적 방식으로, 즉 하나를 적용한 후에 상당히 짧은 기간, 예컨대 몇 시간 또는 며칠, 예를 들어 2시간 내지 7일 이내에 다른 것을 적용하는 경우의 단일 활성 성분의 조합 사용에 있어서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 적어도 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제의 다양한 조합을 나타낸다. 본 발명에 따른 조성물을 적용하는 순서는 본 발명을 실시하는데 필수적이지 않다. 따라서, 용어 "조합"은 또한, 예를 들어 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제를 식물, 그의 주위, 서식지 또는 저장 공간에 동시에 또는 순차적으로 적용한 후에, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제의 처리될 식물 또는 그의 주위, 서식지 또는 저장 공간 상 또는 그 내의 존재를 포괄한다.
재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제가 순차적 방식으로 이용 또는 사용되는 경우에, 식물 또는 식물 부분 (이는 종자 및 종자로부터 출아한 식물을 포함함), 수확된 과실 및 채소를 하기 방법에 따라 처리하는 것이 바람직하다: 첫번째로 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제 및 임의로 적어도 1종의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 추가의 살곤충제를 식물 또는 식물 부분에 적용하고, 두번째로 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 동일한 식물 또는 식물 부분에 적용하는 것. 이러한 적용 방식에 의해 수확시에 식물 상의 살곤충제/살진균제의 잔류물의 양이 가능한 한 낮아진다. (작물) 성장 사이클 내에서의 제1 및 제2 적용 사이의 기간은 달성하고자 하는 효과에 따라 달라지고 그에 의존할 수 있다. 예를 들어, 제1 적용은 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의한 식물 또는 식물 부분의 침입을 방지하거나 (이는 특히 종자를 처리하는 경우임) 또는 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의한 침입을 퇴치하기 위해 (이는 특히 식물 및 식물 부분을 처리하는 경우임) 수행되며, 제2 적용은 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의한 침입을 방지 또는 방제하고/거나 식물 성장을 촉진하기 위해 수행된다. 이러한 문맥에서 방제는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포가 해충 또는 식물병원성 진균을 완전히 근절할 수는 없지만 침입을 허용되는 수준으로 유지할 수는 있다는 것을 의미한다.
본 발명은 또한 다중 적용에 의해 본 발명의 조성물의 사멸, 억제, 방지 및/또는 기피 활성을 증진시키는 방법을 제공한다. 일부 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 임의의 목적하는 발달 단계 동안에 또는 임의의 미리 결정된 해충 압박 하에 약 1시간, 약 5시간, 약 10시간, 약 24시간, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 1주, 약 10일, 약 2주, 약 3주, 약 1개월 또는 그 초과의 간격으로, 2회 동안 식물 및/또는 식물 부분에 적용된다. 또한 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 임의의 목적하는 발달 단계 동안에 또는 임의의 미리 결정된 해충 압박 하에 약 1시간, 약 5시간, 약 10시간, 약 24시간, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 1주, 약 10일, 약 2주, 약 3주, 약 1개월 또는 그 초과의 간격으로, 2회 초과, 예를 들어 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회 또는 그 초과 동안 식물 및/또는 식물 부분에 적용된다. 각각의 적용 사이의 간격은 원하는 경우에 달라질 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 적용 횟수 및 간격의 길이를 식물 종, 식물 해충 종 및 다른 인자에 따라 결정할 수 있을 것이다.
상기 언급된 단계를 따름으로써, 처리된 식물, 식물 부분 및 수확된 과실 및 채소 상의 적어도 1종의 살진균제 및/또는 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제 및/또는 추가의 살곤충제의 잔류물의 매우 낮은 수준이 달성될 수 있다.
달리 언급되지 않는 한, 본 발명에 따른 조성물을 사용한 식물 또는 식물 부분 (이는 종자 및 종자로부터 출아한 식물을 포함함), 수확된 과실 및 채소의 처리는 통상의 처리 방법, 예를 들어 침지, 분무, 분무화, 관개, 증발, 살분, 연무, 산포, 발포, 도장, 전착, 살수 (드렌칭), 적하 관개를 사용하여 직접적으로 수행되거나 그의 주위, 서식지 또는 저장 공간에 대한 작업에 의해 수행된다. 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포, 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제를 단독-제제 또는 조합-제제로서 초저부피 방법에 의해 적용하거나, 또는 본 발명에 따른 조성물을 조성물로서 또는 단독-제제로서 토양 내로 (고랑에) 주입하는 것이 추가로 가능하다.
용어 "처리될 식물"은 각각 처리될 식물의 줄기 또는 경 주위의 적어도 10 cm, 20 cm, 30 cm 반경 내에 있거나 처리될 상기 식물의 뿌리계 주위의 적어도 10 cm, 20 cm, 30 cm에 있는, 뿌리계 및 물질 - 예를 들어, 토양 또는 영양 배지 - 를 포함한 식물의 모든 부분을 포괄한다.
임의로 적어도 1종의 살진균제의 존재 하에, 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제와 조합되어 사용 또는 이용되는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 양은 최종 제제, 뿐만 아니라 처리될 식물, 식물 부분, 종자, 수확된 과실 및 채소의 크기 또는 유형에 좌우된다. 통상적으로, 본 발명에 따라 이용 또는 사용될 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 그의 단독-제제, 또는 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제 및 임의로 살진균제와의 조합-제제 중 약 1% 내지 약 80% (w/w), 바람직하게는 약 1% 내지 약 60% (w/w), 보다 바람직하게는 약 10% 내지 약 50% (w/w)로 존재한다.
또한, 임의로 적어도 1종의 살진균제의 존재 하에, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포와 조합되어 사용 또는 이용되는 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제의 양은 최종 제제, 뿐만 아니라 처리될 식물, 식물 부분, 종자, 수확된 과실 또는 채소의 크기 또는 유형에 좌우된다. 통상적으로, 본 발명에 따라 이용 또는 사용될 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 그의 단독-제제, 또는 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제 및 임의로 적어도 1종의 살진균제와의 조합-제제 중 약 0.1% 내지 약 80% (w/w), 바람직하게는 1% 내지 약 60% (w/w), 보다 바람직하게는 약 10% 내지 약 50% (w/w)로 존재한다.
재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 적용은 엽면 분무로서, 토양 처리로서, 및/또는 종자 처리/드레싱으로서 수행될 수 있다. 엽면 처리로서 사용되는 경우에, 한 실시양태에서 에이커당 약 1/16 내지 약 5 갤런의 전체 브로쓰가 적용된다. 토양 처리로서 사용되는 경우에, 한 실시양태에서 에이커당 약 1 내지 약 5 갤런의 전체 브로쓰가 적용된다. 종자 처리를 위해 사용되는 경우에, 에이커당 약 1/32 내지 약 1/4 갤런의 전체 브로쓰가 적용된다. 종자 처리의 경우, 최종-사용 제제는 그램당 1 x 104, 적어도 1 x 105, 적어도 1 x 106, 1 x 107, 적어도 1 x 108, 적어도 1 x 109, 또는 적어도 1 x 1010 콜로니 형성 단위를 함유한다.
재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 존재하는 경우에 바람직하게는 또한 살진균제가 상승작용적 중량비로 사용 또는 이용된다. 통상의 기술자는 본 발명에 대한 상승작용적 중량비를 상용 방법에 의해 찾아낼 수 있다. 통상의 기술자는 이들 비가 조합-제제 내의 비, 뿐만 아니라 본원에 기재된 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제가 처리될 식물에 단일-제제로서 적용되는 경우에 두 성분의 계산상 비를 지칭한다는 것을 이해한다. 단일-제제 중 각각 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제의 부피 및 양이 통상의 기술자에게 공지되어 있기 때문에, 통상의 기술자는 상기 비를 간단한 수학에 의해 계산할 수 있다.
비는 본 발명에 따른 조합의 상기 성분을 식물 또는 식물 부분에 적용하는 시점에서의 적어도 1종의 특정한 살곤충제의 양, 및 본 발명에 따른 조합의 상기 성분을 식물 또는 식물 부분에 적용하기 직전 (예를 들어, 48시간, 24시간, 12시간, 6시간, 2시간, 1시간 전) 또는 그 시점에서의 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 양을 기준으로 하여 계산될 수 있다.
재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제의 식물 또는 식물 부분에의 적용은, 둘 다의 성분이 적용(들) 후 식물 상에 또는 그 내에 존재하는 한 동시에 또는 상이한 시간에 수행될 수 있다. 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 살곤충제가 상이한 시간에 적용되고 살곤충제가 뚜렷하게 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 전에 적용되는 경우에, 통상의 기술자는 식물 상/내 살곤충제의 농도를 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 적용하는 시점에 또는 그 직전에 관련 기술분야에 공지된 화학적 분석에 의해 결정할 수 있다. 그 반대의 경우, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포가 먼저 식물에 적용되는 경우에, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 농도는 살곤충제를 적용하는 시점에 또는 그 직전에 관련 기술분야에 또한 공지된 시험을 사용하여 결정될 수 있다.
특히, 한 실시양태에서 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제의 상승작용적 중량비는 1:1000 내지 1000:1의 범위, 바람직하게는 1:500 내지 500:1의 범위, 보다 바람직하게는 1:300 내지 500:1의 범위 내에 있다. 특히 바람직한 비는 20:1 내지 1:20, 예컨대 10:1, 5:1 또는 2:1이다. 이들 비 범위는 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원-기재 생물학적 방제제 (본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제 또는 적어도 1종의 특정한 살곤충제 제제와 조합됨)를 지칭한다는 것이 주목되어야 한다. 예를 들어, 100:1의 비는 재조합 포자외막-생산 바실루스-기재 생물학적 방제제의 포자 제제 100 중량부 및 살곤충제 1 중량부가 조합된다는 것 (단독 제제로서, 조합 제제로서, 또는 식물 상에 조합이 형성되도록 하는 식물에의 개별 적용에 의해)을 의미한다. 이러한 실시양태의 한 측면에서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 포자 제제는 적어도 약 1 x 104 cfu/g, 적어도 약 1 x 105 cfu/g, 적어도 약 1 x 106 cfu/g, 적어도 약 1 x 107 cfu/g, 적어도 약 1 x 108 cfu/g, 적어도 약 1 x 109 cfu/g, 적어도 약 1 x 1010 cfu/g, 또는 적어도 약 1 x 1011 cfu/g을 함유하는 건조 포자 제제이다.
또 다른 실시양태에서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제의 상승작용적 중량비는 1:100 내지 20,000:1의 범위, 바람직하게는 1:50 내지 10,000:1의 범위 또는 심지어 1:50 내지 1000:1의 범위 내에 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 분산 후에 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 농도는 적어도 50 g/ha, 예컨대 50 - 7500 g/ha, 50 - 2500 g/ha, 50 - 1500 g/ha; 적어도 250 g/ha (헥타르), 적어도 500 g/ha 또는 적어도 800 g/ha이다.
본 발명에 따라 이용 또는 사용될 조성물의 적용률은 달라질 수 있다. 통상의 기술자는 적절한 적용률을 상용 실험에 의해 찾을 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에서 상기 기재된 바와 같은 조성물로 처리된 종자가 제공된다.
식물의 종자를 처리하는 것에 의한 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체의 방제는 오랜 시간 동안 공지되어 왔으며, 계속적인 개선 대상이다. 그럼에도 불구하고, 종자의 처리는 항상 만족스러운 방식으로 해결될 수 있는 것은 아닌 일련의 문제를 수반한다. 따라서, 저장 도중에, 파종 후에 또는 식물의 출아 후에 작물 보호 조성물의 추가의 전달에 대한 필요성을 제거하거나 그를 적어도 유의하게 감소시키는, 종자 및 발아 식물을 보호하는 방법을 개발하는 것이 바람직하다. 추가로, 사용되는 활성 성분의 양을, 사용되는 활성 성분에 의한 식물 자체에 대한 손상을 유발하지 않으면서도 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의한 공격으로부터 종자 및 발아 식물에 대해 가능한 한 최고의 보호를 제공하도록 하는 방식으로 최적화하는 것이 바람직하다. 특히, 종자를 처리하는 방법은 또한 종자 및 발아 식물의 최적 보호를 작물 보호 조성물의 최소 사용으로 달성하기 위해, 해충-저항성 또는 해충-내성 트랜스제닉 식물의 고유 살곤충 및/또는 살선충 특성을 고려해야 한다.
따라서, 본 발명은 또한 특히, 종자를 상기 정의된 바와 같은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제를 상승작용적 유효량으로 처리함으로써, 종자 및 발아 식물을 해충에 의한 공격으로부터 보호하는 방법에 관한 것이다. 종자 및 발아 식물을 해충에 의한 공격으로부터 보호하기 위한 본 발명의 방법은 종자를 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제로 동시에 1회 작업으로 처리하는 방법을 포괄한다. 그것은 또한 종자를 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제로 상이한 시간에 처리하는 방법을 포괄한다.
본 발명은 마찬가지로 종자 및 생성된 식물을 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대해 보호하려는 목적으로 종자를 처리하기 위한 본 발명의 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제로 동시에 처리된 종자에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제로 상이한 시간에 처리된 종자에 관한 것이다. 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제, 및 임의로 적어도 1종의 살진균제로 상이한 시간에 처리된 종자의 경우에, 본 발명의 조성물 중 개별 활성 성분은 종자 상의 상이한 층에 존재할 수 있다.
추가로, 본 발명은 본 발명의 조성물로 처리한 후, 종자의 분진 마모를 방지하기 위해 필름-코팅 공정에 적용된 종자에 관한 것이다.
본 발명의 이점 중 하나는 본 발명의 조성물의 특정한 침투성 특성 때문에, 이들 조성물을 사용한 종자의 처리가 종자 자체, 뿐만 아니라 출아한 후 종자로부터 기원하는 식물에 대해 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체로부터의 보호를 제공한다는 점이다. 이러한 방식으로, 파종 시에 또는 그 직후에 작물을 직접적으로 처리하는 것이 필요하지 않을 수 있다.
추가의 이점은 본 발명의 조성물을 사용한 종자의 처리를 통해 처리된 종자의 발아 및 출아가 촉진될 수 있다는 사실에서 나타난다.
마찬가지로, 본 발명의 유리한 조성물은 또한 특히 트랜스제닉 종자에 사용될 수 있는 것으로 간주된다.
또한, 본 발명의 조성물은 신호전달 기술의 작용제와 조합되어 사용될 수 있으며, 이는 결과적으로, 예를 들어 공생체와의 콜로니화를 개선시키고, 예컨대, 예를 들어 리조비아, 근균 및/또는 식내서성 박테리아를 증진시키고/거나 질소 고정화를 최적화시키는 것으로 제시된다.
본 발명의 조성물은 농업, 온실, 임업 또는 원예에서 사용되는 임의의 다양한 식물의 종자를 보호하는데 적합하다. 보다 특히, 해당 종자는 곡류 (예를 들어, 밀, 보리, 호밀, 귀리 및 기장), 메이즈, 목화, 대두, 벼, 감자, 해바라기, 커피, 담배, 카놀라, 유지종자 평지, 비트 (예를 들어, 사탕무 및 사료용 비트), 땅콩, 채소 (예를 들어, 토마토, 오이, 콩, 브라시카, 양파 및 상추), 과실 식물, 잔디 및 관상식물의 종자이다. 곡류 (예컨대, 밀, 보리, 호밀 및 귀리), 메이즈, 대두, 목화, 카놀라, 유지종자 평지 및 벼의 종자의 처리가 특히 중요하다.
상기에 이미 언급된 바와 같이, 본 발명의 조성물을 사용한 트랜스제닉 종자의 처리가 특히 중요하다. 여기서 해당 종자는 일반적으로 특히 살곤충 및/또는 살선충 특성을 갖는 폴리펩티드의 발현을 제어하는 적어도 1종의 이종 유전자를 함유하는 식물의 종자이다. 트랜스제닉 종자에서의 이들 이종 유전자는 미생물, 예컨대 바실루스(Bacillus), 리조비움(Rhizobium), 슈도모나스(Pseudomonas), 세라티아(Serratia), 트리코더마(Trichoderma), 클라비박터(Clavibacter), 글로무스(Glomus) 또는 글리오클라디움(Gliocladium)으로부터 유래할 수 있다. 본 발명은 바실루스 종으로부터의 적어도 1종의 이종 유전자를 함유하는 트랜스제닉 종자의 처리에 특히 적합하다. 특히 바람직하게는, 해당 이종 유전자는 바실루스 투린기엔시스로부터 유래한다.
본 발명의 목적을 위해, 본 발명의 조성물은 종자에 단독으로 또는 적합한 제제로 적용된다. 종자는 바람직하게는 처리 도중에 손상이 일어나지 않을 정도로 안정성인 조건으로 처리된다. 일반적으로 말하면, 종자는 수확과 파종 사이의 시간 중 임의의 시점에 처리될 수 있다. 전형적으로, 식물로부터 분리하고, 속대, 겨, 줄기, 껍질, 털 또는 펄프를 제거한 종자가 사용된다. 따라서, 예를 들어 수확하고, 세정하고, 15 중량% 미만의 수분 함량으로 건조시킨 종자가 사용될 수 있다. 대안적으로, 건조 후에, 예를 들어 물로 처리한 다음, 다시 건조시킨 종자가 또한 사용될 수 있다.
종자를 처리하는 경우에는, 일반적으로 말하면, 종자에 적용되는 본 발명의 조성물 및/또는 다른 첨가제의 양을 종자의 발아에 부정적인 영향을 미치지 않고/거나 종자로부터 출아하는 식물을 손상시키지 않도록 선택하는 것을 보장하는 것이 필요하다. 이는 특정 적용률에서 식물독성 효과를 나타낼 수 있는 활성 성분의 경우에 특히 그러하다.
본 발명의 조성물은 직접적으로, 다시 말해서 추가의 성분을 포함하지 않고 희석되지 않으면서 적용될 수 있다. 일반적으로, 조성물을 적합한 제제 형태로 종자에 적용하는 것이 바람직하다. 종자 처리를 위한 적합한 제제 및 방법은 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 예를 들어 하기 문헌에 기재되어 있다: 미국 특허 번호 4,272,417 A; 4,245,432 A; 4,808,430 A; 5,876,739 A; 미국 특허 공개 번호 2003/0176428 A1; WO 2002/080675 A1; WO 2002/028186 A2.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 조합은 통상적인 종자-드레싱 제제, 예컨대 용액, 에멀젼, 현탁액, 분말, 발포체, 슬러리 또는 종자를 위한 다른 코팅 조성물, 및 또한 ULV 제제로 전환될 수 있다.
이들 제제는 공지된 방식으로, 조성물을 통상의 아주반트, 예컨대, 예를 들어 통상의 증량제 및 또한 용매 또는 희석제, 착색제, 습윤제, 분산제, 유화제, 소포제, 보존제, 2차 증점제, 점착제, 지베렐린 및 또한 물과 혼합함으로써 제조된다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 착색제는 이러한 목적에 통상적인 모든 착색제를 포함한다. 이러한 문맥에서, 물 중에서 낮은 용해도를 갖는 안료, 뿐만 아니라 수용성 염료를 사용하는 것이 가능하다. 예는 명칭 로다민 B, C.I. 피그먼트 레드 112 및 C.I. 솔벤트 레드 1 하에 공지된 착색제를 포함한다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 습윤제는 습윤을 촉진하고, 활성 농약 성분의 제제에 통상적인 모든 물질을 포함한다. 바람직하게는 알킬나프탈렌술포네이트, 예컨대 디이소프로필- 또는 디이소부틸-나프탈렌술포네이트가 사용될 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 분산제 및/또는 유화제는 활성 농약 성분의 제제에 통상적인 모든 비이온성, 음이온성 및 양이온성 분산제를 포함한다. 바람직하게는 비이온성 또는 음이온성 분산제, 또는 비이온성 또는 음이온성 분산제의 혼합물이 사용될 수 있다. 적합한 비이온성 분산제는 특히 에틸렌 옥시드-프로필렌 옥시드 블록 중합체, 알킬페놀 폴리글리콜 에테르 및 또한 트리스티릴페놀 폴리글리콜 에테르, 및 이들의 인산화 또는 황산화 유도체이다. 적합한 음이온성 분산제는 특히 리그노술포네이트, 폴리아크릴산의 염 및 아릴술포네이트-포름알데히드 축합물이다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 소포제는 활성 농약 성분의 제제에 통상적인 모든 발포 억제제를 포함한다. 바람직하게는 실리콘 소포제 및 스테아르산마그네슘이 사용될 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 보존제는 농약 조성물에서 이러한 목적을 위해 사용될 수 있는 모든 물질을 포함한다. 예는 디클로로펜 및 벤질 알콜 헤미포르말을 포함한다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 2차 증점제는 농약 조성물에서 이러한 목적을 위해 사용될 수 있는 모든 물질을 포함한다. 바람직하게 간주되는 것은 셀룰로스 유도체, 아크릴산 유도체, 크산탄, 개질 점토 및 고분산 실리카를 포함한다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 점착제는 종자-드레싱 제품에 사용될 수 있는 모든 통상의 결합제를 포함한다. 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 아세테이트, 폴리비닐 알콜 및 틸로스가 바람직하게 언급될 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 지베렐린은 바람직하게는 지베렐린 A1, A3 (= 지베렐산), A4 및 A7을 포함하며, 지베렐산이 특히 바람직하게 사용된다. 지베렐린은 공지되어 있다 (문헌 [R. Wegler, "Chemie der Pflanzenschutz- und Schaedlingsbekaempfungsmittel", Volume 2, Springer Verlag, 1970, pp. 401-412] 참조).
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제는 임의의 매우 다양한 유형의 종자를 처리하기 위해 직접적으로 또는 물로 사전 희석한 후에 사용될 수 있다. 따라서, 농축물 또는 물로의 희석에 의해 그로부터 수득가능한 제제는 곡류, 예컨대 밀, 보리, 호밀, 귀리 및 트리티케일의 종자, 및 또한 메이즈, 벼, 유지종자 평지, 완두, 콩, 목화, 해바라기 및 비트의 종자, 또는 임의의 매우 다양한 채소의 종자를 드레싱하는데 사용될 수 있다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 또는 그의 희석 제제는 또한 트랜스제닉 식물의 종자를 드레싱하는데 사용될 수 있다. 이러한 경우에, 추가의 상승작용적 효과가 발현을 통해 형성된 물질과 상호작용하여 일어날 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 또는 물의 첨가에 의해 그로부터 생산된 제제를 사용한 종자의 처리를 위해, 적합한 혼합 장비는 종자 드레싱을 위해 전형적으로 사용될 수 있는 모든 이러한 장비를 포함한다. 보다 특히, 종자 드레싱을 수행하는 경우의 절차는 종자를 혼합기에 넣고, 특정한 목적하는 양의 종자-드레싱 제제를 그 자체로 또는 사전에 물로 희석한 후에 첨가하고, 종자에 대한 제제의 분포가 균일해질 때까지 혼합을 수행하는 것이다. 이 후에 건조 작업이 이어질 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제의 적용률은 상대적으로 넓은 범위 내에서 달라질 수 있다. 그것은 제제 중 재조합 포자외막-생산 바실루스 세레우스 패밀리 구성원-기재 생물학적 방제제 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살곤충제의 특정한 양에 의해 및 종자에 의해 안내된다. 조성물의 경우에 적용률은 일반적으로 종자 킬로그램당 0.001 내지 50 g, 바람직하게는 종자 킬로그램당 0.01 내지 15 g으로 고려된다.
본 발명에 따른 조성물은, 그들이 우수한 식물 내성 및 온혈 동물에 대해 유리한 독성과 조합되며 환경에 의해 잘 허용되는, 살곤충 및 살응애 및/또는 살선충 활성을 나타내는 경우에, 식물 및 식물 기관을 보호하고, 수확량을 증가시키고, 수확된 물질의 품질을 개선시키고, 농업, 원예, 축산업, 산림, 정원 및 레저 시설에서, 저장 제품 및 물질의 보호에서, 및 위생 분야에서 대면하게 되는 동물 해충, 특히 곤충, 응애, 거미류, 연충, 선충류 및 연체동물을 방제하는데 적합하다. 그들은 바람직하게는 식물 보호제로서 사용될 수 있다. 특히, 본 발명은 살곤충제 및/또는 살진균제로서의 본 발명에 따른 조성물의 용도에 관한 것이다.
그들은 통상적으로 감수성이고 저항성인 종, 및 모든 또는 일부 발달 단계에 대해 활성이다. 상기 언급된 해충은 하기를 포함한다:
하기로부터의 해충: 절지동물문, 특히 거미강, 예를 들어 아카루스(Acarus) 종, 아세리아 쉘도니(Aceria sheldoni), 아쿨롭스(Aculops) 종, 아쿨루스(Aculus) 종, 암블리옴마(Amblyomma) 종, 암피테트라니쿠스 비엔넨시스(Amphitetranychus viennensis), 아르가스(Argas) 종, 부필루스(Boophilus) 종, 브레비팔푸스(Brevipalpus) 종, 브리오비아 그라미눔(Bryobia graminum), 브리오비아 프라에티오사(Bryobia praetiosa), 센트루로이데스(Centruroides) 종, 코리오프테스(Chorioptes) 종, 더마니수스 갈리나에(Dermanyssus gallinae), 더마토파고이데스 프테로니시누스(Dermatophagoides pteronyssinus), 더마토파고이데스 파리나에(Dermatophagoides farinae), 더마센토르(Dermacentor) 종, 에오테트라니쿠스(Eotetranychus) 종, 에피트리메루스 피리(Epitrimerus pyri), 유테트라니쿠스(Eutetranychus) 종, 에리오피에스(Eriophyes) 종, 글리시파구스 도메스티쿠스(Glycyphagus domesticus), 할로티데우스 데스트룩토르(Halotydeus destructor), 헤미타르소네무스(Hemitarsonemus) 종, 히알롬마(Hyalomma) 종, 익소데스(Ixodes) 종, 라트로덱투스(Latrodectus) 종, 록소셀레스(Loxosceles) 종, 메타테트라니쿠스(Metatetranychus) 종, 뉴트롬비쿨라 아우툼날리스(Neutrombicula autumnalis), 누페르사(Nuphersa) 종, 올리고니쿠스(Oligonychus) 종, 오르니토도루스(Ornithodorus) 종, 오르니토니수스(Ornithonyssus) 종, 파노니쿠스(Panonychus) 종, 필로코프트루타 올레이보라(Phyllocoptruta oleivora), 폴리파고타르소네무스 라투스(Polyphagotarsonemus latus), 프소로프테스(Psoroptes) 종, 리피세팔루스(Rhipicephalus) 종, 리조글리푸스(Rhizoglyphus) 종, 사르코프테스(Sarcoptes) 종, 스콜피오 마우루스(Scorpio maurus), 스테네오타르소네무스(Steneotarsonemus) 종, 스테네오타르소네무스 스핀키(Steneotarsonemus spinki), 타르소네무스(Tarsonemus) 종, 테트라니쿠스(Tetranychus) 종, 트롬비쿨라 알프레드두게시(Trombicula alfreddugesi), 바에조비스(Vaejovis) 종, 바사테스 리코페르시시(Vasates lycopersici);
특히, 클로버 응애, 갈색 응애, 헤이즐넛 잎응애, 아스파라거스 잎응애, 갈색 밀 응애, 콩과식물 응애, 괭이밥 응애, 회양목 응애, 텍사스 시트러스 응애, 오리엔탈 적색 응애, 시트러스 적색 응애, 유럽 적색 응애, 황색 잎응애, 무화과 잎응애, 루이스 잎응애, 6-점박이 잎응애, 윌라메트 응애, 유마 잎응애, 거미줄-생산 응애, 파인애플 응애, 시트러스 녹색 응애, 주엽나무 잎응애, 차응애, 남부 적색 응애, 아보카도 갈색 응애, 가문비나무 잎응애, 아보카도 적색 응애, 뱅크스 그래스 응애, 카르민 잎응애, 사막 잎응애, 채소 잎응애, 팽창 잎응애, 딸기 잎응애, 2-점박이 잎응애, 맥다니엘 응애, 퍼시픽 잎응애, 산사나무 잎응애, 4-점박이 잎응애, 쉐네이 잎응애, 칠레 가성 잎응애, 시트러스 플랫 응애, 쥐똥나무 응애, 플랫 스칼렛 응애, 백색-꼬리 응애, 파인애플 먼지 응애, 웨스트 인디안 사탕수수 응애, 구근 스케일 응애, 시클라멘 응애, 차먼지 응애, 윈터 그레인 응애, 붉은-다리 땅 응애, 개암나무 빅-버드 응애, 포도 에리늄 응애, 배 블리스터 잎 응애, 사과 잎 에지롤러 응애, 복숭아 모자이크 벡터 응애, 알더 비드 혹응애, 페리안 호두 잎 혹응애, 피칸 잎 에지롤 응애, 무화과 버드 응애, 올리브 버드 응애, 시트러스 버드 응애, 여지 에리늄 응애, 밀 오갈 응애, 코코넛 꽃 및 너트 응애, 사탕수수 블리스터 응애, 버팔로 그래스 응애, 버뮤다 그래스 응애, 당근 버드 응애, 고구마 잎 혹응애, 석류나무 잎 오갈 응애, 애쉬 스프랭글 혹응애, 메이플 블래더 혹응애, 알더 에리늄 응애, 레드베리 응애, 목화 블리스터 응애, 블루베리 버드 응애, 핑크 티 녹응애, 리브드 티 응애, 회색 시트러스 응애, 고구마 녹응애, 칠엽수 녹응애, 시트러스 녹응애, 사과 녹응애, 포도 녹응애, 배 녹응애, 플랫 니들 시스 소나무 응애, 야생 장미 버드 및 과실 응애, 드라이베리 응애, 망고 녹응애, 진달래 녹응애, 자두 녹응애, 복숭아 은 응애, 사과 녹응애, 토마토 적갈색 응애, 핑크 시트러스 녹응애, 곡류 녹응애, 벼 녹응애.
순각강, 예를 들어 게오필루스(Geophilus) 종, 스쿠티게라(Scutigera) 종;
톡토기목 또는 톡토기강, 예를 들어 오니키우루스 아르마투스(Onychiurus armatus);
배각강, 예를 들어 블라니울루스 구툴라투스(Blaniulus guttulatus);
곤충강, 예를 들어 바퀴목, 예를 들어 블라텔라 아사히나이(Blattella asahinai), 블라텔라 게르마니카(Blattella germanica), 블라타 오리엔탈리스(Blatta orientalis), 류코파에아 마데라에(Leucophaea maderae), 판클로라(Panchlora) 종, 파르코블라타(Parcoblatta) 종, 페리플라네타(Periplaneta) 종, 수펠라 롱기팔파(Supella longipalpa);
딱정벌레목, 예를 들어 아칼림마 비타툼(Acalymma vittatum), 아칸토셀리데스 오브텍투스(Acanthoscelides obtectus), 아도레투스(Adoretus) 종, 아겔라스티카 알니(Agelastica alni), 아그리오테스(Agriotes) 종, 알피토비우스 디아페리누스(Alphitobius diaperinus), 암피말론 솔스티티알리스(Amphimallon solstitialis), 아노비움 푼크타툼(Anobium punctatum), 아노플로포라(Anoplophora) 종, 안토노무스(Anthonomus) 종, 안트레누스(Anthrenus) 종, 아피온(Apion) 종, 아포고니아(Apogonia) 종, 아토마리아(Atomaria) 종, 아타게누스(Attagenus) 종, 브루키디우스 오브텍투스(Bruchidius obtectus), 브루쿠스(Bruchus) 종, 카시다(Cassida) 종, 세로토마 트리푸르카타(Cerotoma trifurcata), 세우토린쿠스(Ceutorrhynchus) 종, 카에톡네마(Chaetocnema) 종, 클레오누스 멘디쿠스(Cleonus mendicus), 코노데루스(Conoderus) 종, 코스모폴리테스(Cosmopolites) 종, 코스텔리트라 제알란디카(Costelytra zealandica), 크테니세라(Ctenicera) 종, 쿠르쿨리오(Curculio) 종, 크립토레스테스 페루기네우스(Cryptolestes ferrugineus), 크립토린쿠스 라파티(Cryptorhynchus lapathi), 실린드로코프투루스(Cylindrocopturus) 종, 데르메스테스(Dermestes) 종, 디아브로티카(Diabrotica) 종, 디코크로시스(Dichocrocis) 종, 디클라디스파 아르미게라(Dicladispa armigera), 딜로보데루스(Diloboderus) 종, 에필라크나(Epilachna) 종, 에피트릭스(Epitrix) 종, 파우스티누스(Faustinus) 종, 기비움 프실로이데스(Gibbium psylloides), 그나토세루스 코르누투스(Gnathocerus cornutus), 헬룰라 운달리스(Hellula undalis), 헤테로니쿠스 아라토르(Heteronychus arator), 헤테로닉스(Heteronyx) 종, 힐라모르파 엘레간스(Hylamorpha elegans), 힐로트루페스 바줄루스(Hylotrupes bajulus), 히페라 포스티카(Hypera postica), 히포메세스 스쿠아모수스(Hypomeces squamosus), 히포테네무스(Hypothenemus) 종, 라크노스테르나 콘산구이네아(Lachnosterna consanguinea), 라시오더마 세리코르네(Lasioderma serricorne), 라테티쿠스 오리자에(Latheticus oryzae), 라트리디우스(Lathridius) 종, 레마(Lema) 종, 렙티노타르사 데셈리네아타(Leptinotarsa decemlineata), 류코프테라(Leucoptera) 종, 리소로프트루스 오리조필루스(Lissorhoptrus oryzophilus), 릭수스(Lixus) 종, 루페로데스(Luperodes) 종, 릭투스(Lyctus) 종, 메가셀리스(Megascelis) 종, 멜라노투스(Melanotus) 종, 멜리게테스 아에네우스(Meligethes aeneus), 멜로론타(Melolontha) 종, 미그돌루스(Migdolus) 종, 모노카무스(Monochamus) 종, 나우팍투스 크산토그라푸스(Naupactus xanthographus), 네크로비아(Necrobia) 종, 닙투스 홀로레우쿠스(Niptus hololeucus), 오릭테스 리노세로스(Oryctes rhinoceros), 오리자에필루스 수리나멘시스(Oryzaephilus surinamensis), 오리자파구스 오리자에(Oryzaphagus oryzae), 오티오린쿠스(Otiorrhynchus) 종, 옥시세토니아 주쿤다(Oxycetonia jucunda), 파에돈 코클레아리아에(Phaedon cochleariae), 필로파가(Phyllophaga) 종, 필로파가 헬레리(Phyllophaga helleri), 필로트레타(Phyllotreta) 종, 포필리아 자포니카(Popillia japonica), 프렘노트리페스(Premnotrypes) 종, 프로스테파누스 트룬카투스(Prostephanus truncatus), 프실리오데스(Psylliodes) 종, 프티누스(Ptinus) 종, 리조비우스 벤트랄리스(Rhizobius ventralis), 리조페르타 도미니카(Rhizopertha dominica), 시토필루스(Sitophilus) 종, 시토필루스 오리자에(Sitophilus oryzae), 스페노포루스(Sphenophorus) 종, 스테고비움 파니세움(Stegobium paniceum), 스테르네쿠스(Sternechus) 종, 심필레테스(Symphyletes) 종, 타니메쿠스(Tanymecus) 종, 테네브리오 몰리토르(Tenebrio molitor), 테네브리오이데스 마우레타니쿠스(Tenebrioides mauretanicus), 트리볼리움(Tribolium) 종, 트로고더마(Trogoderma) 종, 티키우스(Tychius) 종, 크실로트레쿠스(Xylotrechus) 종, 자브루스(Zabrus) 종;
바람직하게는, 줄무늬 오이 딱정벌레 (디아브로티카 발테아타(Diabrotica balteata)), 북부 옥수수 뿌리벌레 (디아브로티카 바르베리(Diabrotica barberi)), 남부 옥수수 뿌리벌레 (디아브로티카 운데심푼크타타 호와르디(Diabrotica undecimpunctata howardi)), 서부 오이 딱정벌레 (디아브로티카 운데심푼크타타 테넬라(Diabrotica undecimpunctata tenella)), 서부 점박이 오이 딱정벌레 (디아브로티카 운데심푼크타타 운데심푼크타타(Diabrotica undecimpunctata undecimpunctata)), 서부 옥수수 뿌리벌레 (디아브로티카 비르기페라 비르기페라(Diabrotica virgifera virgifera)), 멕시칸 옥수수 뿌리벌레 (디아브로티카 비르기페라 제아에(Diabrotica virgifera zeae));
파리목, 예를 들어 아에데스(Aedes) 종, 아그로미자(Agromyza) 종, 아나스트레파(Anastrepha) 종, 아노펠레스(Anopheles) 종, 아스폰딜리아(Asphondylia) 종, 박트로세라(Bactrocera) 종, 비비오 호르툴라누스(Bibio hortulanus), 칼리포라 에리트로세팔라(Calliphora erythrocephala), 칼리포라 비시나(Calliphora vicina), 세라티티스 카피타타(Ceratitis capitata), 키로노무스(Chironomus) 종, 크리소미이아(Chrysomyia) 종, 크리솝스(Chrysops) 종, 크리소조나 플루비알리스(Chrysozona pluvialis), 코클리오미이아(Cochliomyia) 종, 콘타리니아(Contarinia) 종, 코르딜로비아 안트로포파가(Cordylobia anthropophaga), 크리코토푸스 실베스트리스(Cricotopus sylvestris), 쿨렉스(Culex) 종, 쿨리코이데스(Culicoides) 종, 쿨리세타(Culiseta) 종, 큐테레브라(Cuterebra) 종, 다쿠스 올레아에(Dacus oleae), 다시네우라(Dasyneura) 종, 델리아(Delia) 종, 더마토비아 호미니스(Dermatobia hominis), 드로소필라(Drosophila) 종, 에키녹네무스(Echinocnemus) 종, 판니아(Fannia) 종, 가스테로필루스(Gasterophilus) 종, 글로시나(Glossina) 종, 헤마토포타(Haematopota) 종, 히드렐리아(Hydrellia) 종, 히드렐리아 그리세올라(Hydrellia griseola), 힐레미아(Hylemya) 종, 히포보스카(Hippobosca) 종, 히포더마(Hypoderma) 종, 리리오미자(Liriomyza) 종, 루실리아(Lucilia) 종, 루트조미이아(Lutzomyia) 종, 만소니아(Mansonia) 종, 무스카(Musca) 종, 오에스트루스(Oestrus) 종, 오시넬라 프리트(Oscinella frit), 파라타니타르수스(Paratanytarsus) 종, 파라라우테르보르니엘라 서브신크타(Paralauterborniella subcincta), 페고미이아(Pegomyia) 종, 플레보토무스(Phlebotomus) 종, 포르비아(Phorbia) 종, 포르미아(Phormia) 종, 피오필라 카세이(Piophila casei), 프로디플로시스(Prodiplosis) 종, 프실라 로사에(Psila rosae), 라골레티스(Rhagoletis) 종, 사르코파가(Sarcophaga) 종, 시물리움(Simulium) 종, 스토목시스(Stomoxys) 종, 타바누스(Tabanus) 종, 테타놉스(Tetanops) 종, 티풀라(Tipula) 종;
노린재목, 예를 들어 아나사 트리스티스(Anasa tristis), 안테스티옵시스(Antestiopsis) 종, 보이세아(Boisea) 종, 블리수스(Blissus) 종, 칼로코리스(Calocoris) 종, 캄필롬마 리비다(Campylomma livida), 카벨레리우스(Cavelerius) 종, 시멕스(Cimex) 종, 콜라리아(Collaria) 종, 크레온티아데스 딜루투스(Creontiades dilutus), 다시누스 피페리스(Dasynus piperis), 디켈롭스 푸르카투스(Dichelops furcatus), 디코노코리스 휴에티(Diconocoris hewetti), 디스데르쿠스(Dysdercus) 종, 유쉬스투스(Euschistus) 종, 유리가스터(Eurygaster) 종, 헬리오펠티스(Heliopeltis) 종, 호르시아스 노빌렐루스(Horcias nobilellus), 렙토코리사(Leptocorisa) 종, 렙토코리사 바리코르니스(Leptocorisa varicornis), 렙토글로수스 필로푸스(Leptoglossus phyllopus), 리구스(Lygus) 종, 마크로페스 엑스카바투스(Macropes excavatus), 미리다에(Miridae), 모날로니온 아트라툼(Monalonion atratum), 네자라(Nezara) 종, 오에발루스(Oebalus) 종, 펜토미다에(Pentomidae), 피에스마 쿼드라타(Piesma quadrata), 피에조도루스(Piezodorus) 종, 프살루스(Psallus) 종, 슈다시스타 페르세아(Pseudacysta persea), 로드니우스(Rhodnius) 종, 살베르겔라 신굴라리스(Sahlbergella singularis), 스캅토코리스 카스타네아(Scaptocoris castanea), 스코티노포라(Scotinophora) 종, 스테파니티스 나쉬(Stephanitis nashi), 티브라카(Tibraca) 종, 트리아토마(Triatoma) 종;
매미목, 예를 들어 아시지아 아카시아에바일레야나에(Acizzia acaciaebaileyanae), 아시지아 도도나에아에(Acizzia dodonaeae), 아시지아 운카토이데스(Acizzia uncatoides), 아크리다 투리타(Acrida turrita), 아시르토시폰(Acyrthosipon) 종, 아크로고니아(Acrogonia) 종, 아에네올라미아(Aeneolamia) 종, 아고노세나(Agonoscena) 종, 알레이로데스 프롤레텔라(Aleyrodes proletella), 알레우롤로부스 바로덴시스(Aleurolobus barodensis), 알레우로트릭수스 플록코수스(Aleurothrixus floccosus), 알로카리다라 말라이옌시스(Allocaridara malayensis), 암라스카(Amrasca) 종, 아누라피스 카르두이(Anuraphis cardui), 아오니디엘라(Aonidiella) 종, 아파노스티그마 피리(Aphanostigma piri), 아피스(Aphis) 종, 아르보리디아 아피칼리스(Arboridia apicalis), 아리타이닐라(Arytainilla) 종, 아스피디엘라(Aspidiella) 종, 아스피디오투스(Aspidiotus) 종, 아타누스(Atanus) 종, 아울라코르툼 솔라니(Aulacorthum solani), 베미시아 타바시(Bemisia tabaci), 블라스토프실라 옥시덴탈리스(Blastopsylla occidentalis), 보레이오글리카스피스 멜라레우카에(Boreioglycaspis melaleucae), 브라키카우두스 헬리크리시(Brachycaudus helichrysi), 브라키콜루스(Brachycolus) 종, 브레비코리네 브라시카에(Brevicoryne brassicae), 카코프실라(Cacopsylla) 종, 칼리기포나 마르기나타(Calligypona marginata), 카르네오세팔라 풀기다(Carneocephala fulgida), 세라토바쿠나 라니게라(Ceratovacuna lanigera), 세르코피다에(Cercopidae), 세로플라스테스(Ceroplastes) 종, 카에토시폰 프라가에폴리이(Chaetosiphon fragaefolii), 키오나스피스 테갈렌시스(Chionaspis tegalensis), 클로리타 오누키이(Chlorita onukii), 콘드라크리스 로세아(Chondracris rosea), 크로마피스 주글란디콜라(Chromaphis juglandicola), 크리솜팔루스 피쿠스(Chrysomphalus ficus), 시카둘리나 음빌라(Cicadulina mbila), 코코미틸루스 할리(Coccomytilus halli), 코쿠스(Coccus) 종, 크립토미주스 리비스(Cryptomyzus ribis), 크립토네오사(Cryptoneossa) 종, 크테나리타이나(Ctenarytaina) 종, 달불루스(Dalbulus) 종, 디알레우로데스 시트리(Dialeurodes citri), 디아포리나 시트리(Diaphorina citri), 디아스피스(Diaspis) 종, 드로시카(Drosicha) 종, 디사피스(Dysaphis) 종, 디스미코쿠스(Dysmicoccus) 종, 엠포아스카(Empoasca) 종, 에리오소마(Eriosoma) 종, 에리트로네우라(Erythroneura) 종, 유칼립톨리마(Eucalyptolyma) 종, 유필루라(Euphyllura) 종, 유셀리스 빌로바투스(Euscelis bilobatus), 페리시아(Ferrisia) 종, 게오코쿠스 코페아에(Geococcus coffeae), 글리카스피스(Glycaspis) 종, 헤테로프실라 쿠바나(Heteropsylla cubana), 헤테로프실라 스피눌로사(Heteropsylla spinulosa), 호말로디스카 코아굴라타(Homalodisca coagulata), 히알로프테루스 아룬디니스(Hyalopterus arundinis), 이세리아(Icerya) 종, 이디오세루스(Idiocerus) 종, 이디오스코푸스(Idioscopus) 종, 라오델팍스 스트리아텔루스(Laodelphax striatellus), 레카니움(Lecanium) 종, 레피도사페스(Lepidosaphes) 종, 리파피스 에리시미(Lipaphis erysimi), 마크로시품(Macrosiphum) 종, 마크로스텔레스 파시프론스(Macrosteles facifrons), 마하나르바(Mahanarva) 종, 멜라나피스 사카리(Melanaphis sacchari), 메트칼피엘라(Metcalfiella) 종, 메토폴로피움 디로둠(Metopolophium dirhodum), 모넬리아 코스탈리스(Monellia costalis), 모넬리옵시스 페카니스(Monelliopsis pecanis), 미주스(Myzus) 종, 나소노비아 리비스니그리(Nasonovia ribisnigri), 네포테틱스(Nephotettix) 종, 네티고니클라 스펙트라(Nettigoniclla spectra), 닐라파르바타 루겐스(Nilaparvata lugens), 온코메토피아(Oncometopia) 종, 오르테지아 프라엘롱가(Orthezia praelonga), 옥시아 키넨시스(Oxya chinensis), 파키프실라(Pachypsylla) 종, 파라베미시아 미리카에(Parabemisia myricae), 파라트리오자(Paratrioza) 종, 파를라토리아(Parlatoria) 종, 펨피구스(Pemphigus) 종, 페레그리누스 마이디스(Peregrinus maidis), 페나코쿠스(Phenacoccus) 종, 플로에오미주스 파세리니이(Phloeomyzus passerinii), 포로돈 휴물리(Phorodon humuli), 필록세라(Phylloxera) 종, 핀나스피스 아스피디스트라에(Pinnaspis aspidistrae), 플라노코쿠스(Planococcus) 종, 프로소피도프실라 플라바(Prosopidopsylla flava), 프로토풀비나리아 피리포르미스(Protopulvinaria pyriformis), 슈다울라카스피스 펜타고나(Pseudaulacaspis pentagona), 슈도코쿠스(Pseudococcus) 종, 프실롭시스(Psyllopsis) 종, 프실라(Psylla) 종, 프테로말루스(Pteromalus) 종, 피릴라(Pyrilla) 종, 쿼드라스피디오투스(Quadraspidiotus) 종, 퀘사다 기가스(Quesada gigas), 라스트로코쿠스(Rastrococcus) 종, 로팔로시품(Rhopalosiphum) 종, 사이세티아(Saissetia) 종, 스카포이데우스 티타누스(Scaphoideus titanus), 쉬자피스 그라미눔(Schizaphis graminum), 셀레나스피두스 아르티쿨라투스(Selenaspidus articulatus), 소가타(Sogata) 종, 소가텔라 푸르시페라(Sogatella furcifera), 소가토데스(Sogatodes) 종, 스틱토세팔라 페스티나(Stictocephala festina), 시포니누스 필리레아에(Siphoninus phillyreae), 테날라파라 말라이옌시스(Tenalaphara malayensis), 테트라고노세펠라(Tetragonocephela) 종, 티노칼리스 카리아에폴리아에(Tinocallis caryaefoliae), 토마스피스(Tomaspis) 종, 톡소프테라(Toxoptera) 종, 트리알레우로데스 바포라리오룸(Trialeurodes vaporariorum), 트리오자(Trioza) 종, 티플로시바(Typhlocyba) 종, 우나스피스(Unaspis) 종, 비테우스 비티폴리이(Viteus vitifolii), 지기나(Zygina) 종;
막시목, 예를 들어 아크로미르멕스(Acromyrmex) 종, 아탈리아(Athalia) 종, 아타(Atta) 종, 디프리온(Diprion) 종, 호플로캄파(Hoplocampa) 종, 라시우스(Lasius) 종, 모노모리움 파라오니스(Monomorium pharaonis), 시렉스(Sirex) 종, 솔레놉시스 인빅타(Solenopsis invicta), 타피노마(Tapinoma) 종, 우로세루스(Urocerus) 종, 베스파 종(Vespa), 크세리스(Xeris) 종;
등각목, 예를 들어 아르마딜리디움 불가레(Armadillidium vulgare), 오니스쿠스 아셀루스(Oniscus asellus), 포르셀리오 스카베르(Porcellio scaber);
흰개미목, 예를 들어 코프토테르메스(Coptotermes) 종, 코르니테르메스 쿠물란스(Cornitermes cumulans), 크립토테르메스(Cryptotermes) 종, 인시시테르메스(Incisitermes) 종, 미크로테르메스 오베시(Microtermes obesi), 오돈토테르메스(Odontotermes) 종, 레티쿨리테르메스(Reticulitermes) 종;
인시목, 예를 들어 아크로이아 그리셀라(Achroia grisella), 아크로닉타 메이저(Acronicta major), 아독소피에스(Adoxophyes) 종, 아에디아 류코멜라스(Aedia leucomelas), 아그로티스(Agrotis) 종, 알라바마(Alabama) 종, 아미엘로이스 트란시텔라(Amyelois transitella), 아나르시아(Anarsia) 종, 안티카르시아(Anticarsia) 종, 아르기로플로세(Argyroploce) 종, 바라트라 브라시카에(Barathra brassicae), 보르보 신나라(Borbo cinnara), 부쿨라트릭스 투르베리엘라(Bucculatrix thurberiella), 부팔루스 피니아리우스(Bupalus piniarius), 부세올라(Busseola) 종, 카코에시아(Cacoecia) 종, 칼로프틸리아 테이보라(Caloptilia theivora), 카푸아 레티쿨라나(Capua reticulana), 카르포카프사 포모넬라(Carpocapsa pomonella), 카르포시나 니포넨시스(Carposina niponensis), 케이마토비아 브루마타(Cheimatobia brumata), 킬로(Chilo) 종, 코리스토네우라(Choristoneura) 종, 클리시아 암비구엘라(Clysia ambiguella), 크나팔로세루스(Cnaphalocerus) 종, 크나팔로크로시스 메디날리스(Cnaphalocrocis medinalis), 크네파시아(Cnephasia) 종, 코노포모르파(Conopomorpha) 종, 코노트라켈루스(Conotrachelus) 종, 코피타르시아(Copitarsia) 종, 시디아(Cydia) 종, 달라카 녹투이데스(Dalaca noctuides), 디아파니아(Diaphania) 종, 디아트라에아 사카랄리스(Diatraea saccharalis), 에아리아스(Earias) 종, 엑디톨로파 아우란티움(Ecdytolopha aurantium), 엘라스모팔푸스 리그노셀루스(Elasmopalpus lignosellus), 엘다나 사카리나(Eldana saccharina), 에페스티아(Ephestia) 종, 에피노티아(Epinotia) 종, 에피피아스 포스트비타나(Epiphyas postvittana), 에티엘라(Etiella) 종, 율리아(Eulia) 종, 유포에실리아 암비구엘라(Eupoecilia ambiguella), 유프록티스(Euproctis) 종, 육소아(Euxoa) 종, 펠티아(Feltia) 종, 갈레리아 멜로넬라(Galleria mellonella), 그라실라리아(Gracillaria) 종, 그라폴리타(Grapholitha) 종, 헤딜렙타(Hedylepta) 종, 헬리코베르파(Helicoverpa) 종, 헬리오티스(Heliothis) 종, 호프만노필라 슈도스프레텔라(Hofmannophila pseudospretella), 호모에오소마(Homoeosoma) 종, 호모나(Homona) 종, 히포노메우타 파델라(Hyponomeuta padella), 카키보리아 플라보파시아타(Kakivoria flavofasciata), 라피그마(Laphygma) 종, 라스페이레시아 몰레스타(Laspeyresia molesta), 류시노데스 오르보날리스(Leucinodes orbonalis), 류코프테라 종, 리토콜레티스(Lithocolletis) 종, 리토파네 안텐나타(Lithophane antennata), 로베시아(Lobesia) 종, 록사그로티스 알비코스타(Loxagrotis albicosta), 리만트리아(Lymantria) 종, 리오네티아(Lyonetia) 종, 말라코소마 뉴스트리아(Malacosoma neustria), 마루카 테스툴랄리스(Maruca testulalis), 맘스트라 브라시카에(Mamstra brassicae), 멜라니티스 레다(Melanitis leda), 모시스(Mocis) 종, 모노피스 오브비엘라(Monopis obviella), 미팀나 세파라타(Mythimna separata), 네마포곤 클로아셀루스(Nemapogon cloacellus), 님풀라(Nymphula) 종, 오이케티쿠스(Oiketicus) 종, 오리아(Oria) 종, 오르타가(Orthaga) 종, 오스트리니아(Ostrinia) 종, 오울레마 오리자에(Oulema oryzae), 파놀리스 플람메아(Panolis flammea), 파르나라(Parnara) 종, 펙티노포라(Pectinophora) 종, 페리류코프테라(Perileucoptera) 종, 프토리마에아(Phthorimaea) 종, 필록니스티스 시트렐라(Phyllocnistis citrella), 필로노릭테르(Phyllonorycter) 종, 피에리스(Pieris) 종, 플라티노타 스툴타나(Platynota stultana), 플로디아 인테르푼크텔라(Plodia interpunctella), 플루시아(Plusia) 종, 플루텔라 크실로스텔라(Plutella xylostella), 프라이스(Prays) 종, 프로데니아(Prodenia) 종, 프로토파르세(Protoparce) 종, 슈달레티아(Pseudaletia) 종, 슈달레티아 우니푼크타(Pseudaletia unipuncta), 슈도플루시아 인클루덴스(Pseudoplusia includens), 피라우스타 누빌랄리스(Pyrausta nubilalis), 라키플루시아 누(Rachiplusia nu), 스코에노비우스(Schoenobius) 종, 시르포파가(Scirpophaga) 종, 시르포파가 인노타타(Scirpophaga innotata), 스코티아 세게툼(Scotia segetum), 세사미아(Sesamia) 종, 세사미아 인페렌스(Sesamia inferens), 스파르가노티스(Sparganothis) 종, 스포도프테라(Spodoptera) 종, 스포도프테라 프라에피카(Spodoptera praefica), 스타트모포다(Stathmopoda) 종, 스토모프테릭스 서브세시벨라(Stomopteryx subsecivella), 시난테돈(Synanthedon) 종, 테시아 솔라니보라(Tecia solanivora), 테르메시아 겜마탈리스(Thermesia gemmatalis), 티네아 클로아셀라(Tinea cloacella), 티네아 펠리오넬라(Tinea pellionella), 티네올라 비셀리엘라(Tineola bisselliella), 토르트릭스(Tortrix) 종, 트리코파가 타페첼라(Trichophaga tapetzella), 트리코플루시아(Trichoplusia) 종, 트리포리자 인세르툴라스(Tryporyza incertulas), 투타 압솔루타(Tuta absoluta), 비라콜라(Virachola) 종;
메뚜기목 또는 살타토리아(Saltatoria), 예를 들어 아케타 도메스티쿠스(Acheta domesticus), 디크로플루스(Dichroplus) 종, 그릴로탈파(Gryllotalpa) 종, 히에로글리푸스(Hieroglyphus) 종, 로쿠스타(Locusta) 종, 멜라노플루스(Melanoplus) 종, 쉬스토세르카 그레가리아(Schistocerca gregaria);
이목, 예를 들어 다말리니아(Damalinia) 종, 헤마토피누스(Haematopinus) 종, 리노그나투스(Linognathus) 종, 페디쿨루스(Pediculus) 종, 프티루스 푸비스(Ptirus pubis), 트리코덱테스(Trichodectes) 종;
다듬이벌레목, 예를 들어 레피나투스(Lepinatus) 종, 리포셀리스(Liposcelis) 종;
벼룩목, 예를 들어 세라토필루스(Ceratophyllus) 종, 크테노세팔리데스(Ctenocephalides) 종, 풀렉스 이리탄스(Pulex irritans), 퉁가 페네트란스(Tunga penetrans), 크세노프실라 케옵시스(Xenopsylla cheopsis);
총채벌레목, 예를 들어 아나포트립스 오브스쿠루스(Anaphothrips obscurus), 발리오트립스 비포르미스(Baliothrips biformis), 드레파노트립스 레우테리(Drepanothrips reuteri), 엔네오트립스 플라벤스(Enneothrips flavens), 프란클리니엘라(Frankliniella) 종, 헬리오트립스(Heliothrips) 종, 헤르시노트립스 페모랄리스(Hercinothrips femoralis), 리피포로트립스 크루엔타투스(Rhipiphorothrips cruentatus), 시르토트립스(Scirtothrips) 종, 타에니오트립스 카르다모미(Taeniothrips cardamomi), 트립스(Thrips) 종;
좀목 (=티사누라(Thysanura)), 예를 들어 크테노레피스마(Ctenolepisma) 종, 레피스마 사카리나(Lepisma saccharina), 레피스모데스 인퀼리누스(Lepismodes inquilinus), 테르모비아 도메스티카(Thermobia domestica);
결합강, 예를 들어 스쿠티게렐라(Scutigerella) 종;
하기로부터의 해충: 연체동물문, 특히 이매패강, 예를 들어 드레이세나(Dreissena) 종, 및 복족강, 예를 들어 아리온(Arion) 종, 비옴팔라리아(Biomphalaria) 종, 불리누스(Bulinus) 종, 데로세라스(Deroceras) 종, 갈바(Galba) 종, 림나에아(Lymnaea) 종, 온코멜라니아(Oncomelania) 종, 포마세아(Pomacea) 종, 숙시네아(Succinea) 종;
하기로부터의 동물 해충: 편형동물문 및 선형동물문, 예를 들어 안실로스토마 두오데날레(Ancylostoma duodenale), 안실로스토마 세일라니쿰(Ancylostoma ceylanicum), 아실로스토마 브라질리엔시스(Acylostoma braziliensis), 안실로스토마(Ancylostoma) 종, 아스카리스(Ascaris) 종, 브루기아 말라이이(Brugia malayi), 브루기아 티모리(Brugia timori), 부노스토뭄(Bunostomum) 종, 카베르티아(Chabertia) 종, 클로노르키스(Clonorchis) 종, 쿠페리아(Cooperia) 종, 디크로코엘리움(Dicrocoelium) 종, 딕티오카울루스 필라리아(Dictyocaulus filaria), 디필로보트리움 라툼(Diphyllobothrium latum), 드라쿤쿨루스 메디넨시스(Dracunculus medinensis), 에키노코쿠스 그라눌로수스(Echinococcus granulosus), 에키노코쿠스 물티로쿨라리스(Echinococcus multilocularis), 엔테로비우스 베르미쿨라리스(Enterobius vermicularis), 파시올라(Faciola) 종, 헤몬쿠스(Haemonchus) 종, 헤테라키스(Heterakis) 종, 히메놀레피스 나나(Hymenolepis nana), 히오스트롱굴루스(Hyostrongulus) 종, 로아 로아(Loa Loa), 네마토디루스(Nematodirus) 종, 오에소파고스토뭄(Oesophagostomum) 종, 오피스토르키스(Opisthorchis) 종, 온코세르카 볼불루스(Onchocerca volvulus), 오스테르타기아(Ostertagia) 종, 파라고니무스(Paragonimus) 종, 쉬스토소멘(Schistosomen) 종, 스트롱길로이데스 푸엘레보르니(Strongyloides fuelleborni), 스트롱길로이데스 스테르코랄리스(Strongyloides stercoralis), 스트로닐로이데스(Stronyloides) 종, 타에니아 사기나타(Taenia saginata), 타에니아 솔리움(Taenia solium), 트리키넬라 스피랄리스(Trichinella spiralis), 트리키넬라 나티바(Trichinella nativa), 트리키넬라 브리토비(Trichinella britovi), 트리키넬라 넬소니(Trichinella nelsoni), 트리키넬라 슈도프시랄리스(Trichinella pseudopsiralis), 트리코스트롱굴루스(Trichostrongulus) 종, 트리쿠리스 트리쿠리아(Trichuris trichuria), 부케레리아 반크로프티(Wuchereria bancrofti);
하기로부터의 식물기생 해충: 선형동물문, 예를 들어 아펠렌코이데스(Aphelenchoides) 종, 부르사펠렌쿠스(Bursaphelenchus) 종, 디틸렌쿠스(Ditylenchus) 종, 글로보데라(Globodera) 종, 헤테로데라(Heterodera) 종, 롱기도루스(Longidorus) 종, 멜로이도기네(Meloidogyne) 종, 프라틸렌쿠스(Pratylenchus) 종, 라도폴루스(Radopholus) 종, 트리코도루스(Trichodorus) 종, 틸렌쿨루스(Tylenchulus) 종, 크시피네마(Xiphinema) 종, 헬리코틸렌쿠스(Helicotylenchus) 종, 틸렌코린쿠스(Tylenchorhynchus) 종, 스쿠텔로네마(Scutellonema) 종, 파라트리코도루스(Paratrichodorus) 종, 멜로이네마(Meloinema) 종, 파라펠렌쿠스(Paraphelenchus) 종, 아글렌쿠스(Aglenchus) 종, 벨로놀라이무스(Belonolaimus) 종, 나코부스(Nacobbus) 종, 로틸렌쿨루스(Rotylenchulus) 종, 로틸렌쿠스(Rotylenchus) 종, 네오틸렌쿠스(Neotylenchus) 종, 파라펠렌쿠스(Paraphelenchus) 종, 돌리코도루스(Dolichodorus) 종, 호플롤라이무스(Hoplolaimus) 종, 푼크토데라(Punctodera) 종, 크리코네멜라(Criconemella) 종, 퀴니술시우스(Quinisulcius) 종, 헤미시클리오포라(Hemicycliophora) 종, 안구이나(Anguina) 종, 수반구이나(Subanguina) 종, 헤미크리코네모이데스(Hemicriconemoides) 종, 프실렌쿠스(Psilenchus) 종, 슈도할렌쿠스(Pseudohalenchus) 종, 크리코네모이데스(Criconemoides) 종, 카코파우루스(Cacopaurus) 종, 히르슈마니엘라(Hirschmaniella) 종, 테틸렌쿠스(Tetylenchus) 종.
조성물이 식물 질병 및 해충을 방제하는데 요구되는 농도에서 식물에 의해 잘 허용된다는 사실은 식물의 지상 부분, 번식 스톡 및 종자, 및 토양의 처리를 가능하게 한다.
본 발명에 따라 모든 식물 및 식물 부분이 처리될 수 있다. 식물은 모든 식물 및 식물 집단, 예컨대 바람직한 및 바람직하지 않은 야생 식물, 재배품종 및 식물 품종 (식물 품종 또는 식물 육종가의 권리에 의해 보호가능한지 여부와 상관 없이)을 의미한다. 재배품종 및 식물 품종은 1종 이상의 생명공학적 방법, 예컨대 이중 반수체, 원형질체 융합, 무작위 및 지정 돌연변이유발, 분자 또는 유전자 마커의 사용에 의해 또는 생체공학 및 유전 공학 방법에 의해 보조 또는 보충될 수 있는 통상적인 번식 및 육종 방법에 의해 수득된 식물일 수 있다. 식물 부분은 식물의 모든 지상 및 지하 부분 및 기관, 예컨대 싹, 잎, 꽃 및 뿌리를 의미하며, 이에 의해 예를 들어 잎, 가시, 줄기, 가지, 꽃, 자실체, 과실 및 종자, 뿐만 아니라 뿌리, 구경 및 근경이 열거된다. 작물 및 영양 및 생식 번식 물질, 예를 들어 삽목, 구경, 근경, 포복경 및 종자가 또한 식물 부분에 속한다.
본 발명의 조성물은, 식물에 의해 잘 허용되고 유리한 항온동물 독성을 가지며 환경에 의해 잘 허용되는 경우에, 식물 및 식물 기관을 보호하고, 수확량을 증진시키고, 수확된 물질의 품질을 개선시키는데 적합하다. 그것은 바람직하게는 작물 보호 조성물로서 사용될 수 있다. 그것은 통상적으로 감수성이고 저항성인 종에 대해, 및 모든 또는 일부 발달 단계에 대해 활성이다.
본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물은 하기 주요 작물 식물을 포함한다: 메이즈, 대두, 알팔파, 목화, 해바라기, 브라시카(Brassica) 오일 종자, 예컨대 브라시카 나푸스(Brassica napus) (예를 들어 카놀라, 평지씨), 브라시카 라파(Brassica rapa), 비. 준세아(B. juncea) (예를 들어 (필드) 머스타드) 및 브라시카 카리나타(Brassica carinata), 아레카세아에(Arecaceae) 종 (예를 들어 기름야자, 코코넛), 벼, 밀, 사탕무, 사탕수수, 귀리, 호밀, 보리, 기장 및 소르굼, 트리티케일, 아마, 견과, 포도 및 덩굴 및 다양한 식물 분류군으로부터의 다양한 과실 및 채소, 예를 들어 로사세아에(Rosaceae) 종 (예를 들어 인과류, 예컨대 사과 및 배, 뿐만 아니라 핵과류, 예컨대 살구, 체리, 아몬드, 자두 및 복숭아, 및 장과류, 예컨대 딸기, 라즈베리, 레드 및 블랙 커런트 및 구스베리), 리베시오이다에(Ribesioidae) 종, 주글란다세아에(Juglandaceae) 종, 베툴라세아에(Betulaceae) 종, 아나카르디아세아에(Anacardiaceae) 종, 파가세아에(Fagaceae) 종, 모라세아에(Moraceae) 종, 올레아세아에(Oleaceae) 종 (예를 들어 올리브 나무), 악티니다세아에(Actinidaceae) 종, 라우라세아에(Lauraceae) 종 (예를 들어 아보카도, 시나몬, 캄포르), 무사세아에(Musaceae) 종 (예를 들어 바나나 나무 및 플랜테이션), 루비아세아에(Rubiaceae) 종 (예를 들어 커피), 테아세아에(Theaceae) 종 (예를 들어 차나무), 스테르쿨리세아에(Sterculiceae) 종, 루타세아에(Rutaceae) 종 (예를 들어 레몬, 오렌지, 만다린 및 그레이프프루트); 솔라나세아에(Solanaceae) 종 (예를 들어 토마토, 감자, 페퍼, 캅시쿰, 가지, 담배), 릴리아세아에(Liliaceae) 종, 콤포시타에(Compositae) 종 (예를 들어 상추, 아티초크 및 치커리 - 뿌리 치커리, 엔디브 또는 일반 치커리 포함), 움벨리페라에(Umbelliferae) 종 (예를 들어 당근, 파슬리, 셀러리 및 셀러리악), 쿠쿠르비타세아에(Cucurbitaceae) 종 (예를 들어 오이 - 게르킨, 호박, 수박, 조롱박 및 멜론 포함), 알리아세아에(Alliaceae) 종 (예를 들어 리크 및 양파), 크루시페라에(Cruciferae) 종 (예를 들어 백색 양배추, 적색 양배추, 브로콜리, 콜리꽃, 브뤼셀 스프라우트, 청경채, 콜라비, 무, 양고추냉이, 크레스 및 배추), 레구미노사에(Leguminosae) 종 (예를 들어 땅콩, 완두, 렌틸 및 콩 - 예를 들어 강낭콩 및 잠두), 케노포디아세아에(Chenopodiaceae) 종 (예를 들어 근대, 사료용 비트, 시금치, 비트루트), 리나세아에(Linaceae) 종 (예를 들어 대마), 칸나베아세아(Cannabeacea) 종 (예를 들어 칸나비스), 말바세아에(Malvaceae) 종 (예를 들어 오크라, 코코아), 파파베라세아에(Papaveraceae) (예를 들어 양귀비), 아스파라가세아에(Asparagaceae) (예를 들어 아스파라거스); 정원 및 목재에서의 유용한 식물 및 관상 식물, 예컨대 잔디, 잔디밭, 목초 및 스테비아 레바우디아나(Stevia rebaudiana); 및 각각의 경우에서의 이들 식물의 유전자 변형 유형.
식물 종 또는 식물 재배품종, 그의 위치 및 성장 조건 (토양, 기후, 식생 기간, 양분)에 따라, 본 발명에 따른 조성물을 사용 또는 이용하는 본 발명에 따른 처리는 또한 초상가적 ("상승작용적") 효과를 유발할 수 있다. 따라서, 예를 들어 본 발명의 조성물을 본 발명에 따른 처리에 사용 또는 이용하는 것에 의해, 감소된 적용률 및/또는 활성 스펙트럼의 확장 및/또는 활성의 증가, 보다 우수한 식물 성장, 고온 또는 저온에 대한 증가된 내성, 가뭄에 대한, 또는 물 또는 토양 염 함량에 대한 증가된 내성, 증가된 개화 성능, 보다 용이한 수확, 가속화된 성숙, 보다 높은 수확량, 보다 큰 과실, 보다 큰 식물 높이, 보다 푸른 잎 색, 보다 이른 개화, 수확된 산물의 보다 높은 품질 및/또는 보다 높은 영양가, 과실 내의 보다 높은 당도, 수확된 산물의 보다 우수한 저장 안정성 및/또는 가공성이 가능하며, 이는 실제로 예상되었던 효과를 초과한다.
본 발명에 따른 처리에 있어서 본 발명의 조성물의 특정 적용률에서 또한 식물에서의 강화 효과를 가질 수 있다. 원치않는 식물병원성 진균 및/또는 미생물 및/또는 바이러스에 의한 공격에 대한 식물의 방어 시스템이 동원된다. 식물-강화 (저항성-유발) 물질은 본 문맥에서, 원치않는 식물병원성 진균 및/또는 미생물 및/또는 바이러스로 후속적으로 접종되는 경우에, 처리된 식물이 이들 식물병원성 진균 및/또는 미생물 및/또는 바이러스에 대해 상당한 정도의 저항성을 나타내도록 하는 방식으로, 식물의 방어 시스템을 자극할 수 있는 그러한 물질 또는 물질의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물을 본 발명에 따른 처리에 사용 또는 이용하는 것에 의해, 식물은 처리 후 특정 기간 이내에 상기 언급된 병원체에 의한 공격에 대해 보호될 수 있다. 보호가 일어나는 기간은 일반적으로 식물을 활성 화합물로 처리한 후에 1 내지 10일, 바람직하게는 1 내지 7일까지 연장된다.
또한 본 발명에 따라 바람직하게 처리될 식물 및 식물 재배품종은 1종 이상의 생물적 스트레스에 대해 저항성이며, 즉 상기 식물은 동물 및 미생물 해충, 예컨대 선충류, 곤충, 응애, 식물병원성 진균, 박테리아, 바이러스 및/또는 바이로이드에 대해 보다 우수한 방어를 나타낸다.
또한 본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물 및 식물 재배품종은 1종 이상의 비생물적 스트레스에 대해 저항성인, 즉 스트레스 내성에 대해 증가된 식물 건강을 이미 나타내는 그러한 식물이다. 비생물적 스트레스 조건은, 예를 들어 가뭄, 저온 노출, 열 노출, 삼투 스트레스, 홍수, 증가된 토양 염분, 증가된 미네랄 노출, 오존 노출, 고도의 광 노출, 질소 영양소의 제한된 이용가능성, 인 영양소의 제한된 이용가능성, 음지 회피를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물을 사용한 이들 식물 및 재배품종의 처리는 전체 식물 건강을 추가로 증가시킨다 (상기 참조).
또한 본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물 및 식물 재배품종은 증진된 수확량 특징을 특징으로 하는, 즉 이러한 특색에 대해 증가된 식물 건강을 이미 나타내는 그러한 식물이다. 상기 식물에서의 증가된 수확량은, 예를 들어 개선된 식물 생리학, 성장 및 발달, 예컨대 물 사용 효율, 수분 저류 효율, 개선된 질소 사용, 증진된 탄소 동화, 개선된 광합성, 증가된 발아 효율 및 가속화된 성숙의 결과일 수 있다.
수확량은 추가로 이른 개화, 하이브리드 종자 생산을 위한 개화 조절, 묘목 활력, 식물 크기, 절간 수 및 거리, 뿌리 성장, 종자 크기, 과실 크기, 꼬투리 크기, 꼬투리 또는 이삭 수, 꼬투리 또는 이삭당 종자 수, 종자 질량, 증진된 종자 충실률, 감소된 종자 분산, 감소된 꼬투리 열개 및 도복 저항성을 포함하나 이에 제한되지는 않는 개선된 식물 아키텍쳐에 의해 (스트레스 및 비-스트레스 조건 하에) 영향을 받을 수 있다. 추가의 수확량 특성은 종자 조성, 예컨대 탄수화물 함량, 단백질 함량, 오일 함량 및 조성, 영양가, 항-영양 화합물의 감소, 개선된 가공성 및 보다 우수한 저장 안정성을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물을 사용한 이들 식물 및 재배품종의 처리는 전체 식물 건강을 추가로 증가시킨다 (상기 참조).
본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물은 일반적으로 보다 높은 수확량, 활력, 건강 및 생물 및 비생물적 스트레스 인자에 대한 저항성을 유발하는 잡종강세 또는 하이브리드 활력의 특징을 이미 발현하는 하이브리드 식물이다. 이러한 식물은 전형적으로 근교 웅성-불임 모계 (자성 모체)를 또 다른 근교 웅성-가임 모계 (웅성 모체)와 교배시킴으로써 만들어진다. 하이브리드 종자는 전형적으로 웅성 불임 식물로부터 수확되고, 재배자에게 판매된다. 웅성 불임 식물은 때때로 (예를 들어, 옥수수에서) 웅수제거, 즉 웅성 생식 기관 (또는 수꽃)의 기계적 제거에 의해 생산될 수 있지만, 보다 전형적으로 웅성 불임성은 식물 게놈 내의 유전자 결정기의 결과이다. 그러한 경우 및 특히 종자가 하이브리드 식물로부터 수확될 목적 산물인 경우에, 하이브리드 식물에서의 웅성 가임성이 완전히 회복되는 것을 보장하는 것이 전형적으로 유용하다. 이는 웅성 모체가, 웅성-불임성의 원인이 되는 유전자 결정기를 함유하는 하이브리드 식물에서 웅성 가임성을 회복할 수 있는 적절한 가임성 회복 유전자를 갖도록 보장함으로써 달성될 수 있다. 웅성 불임성에 대한 유전자 결정기는 세포질에 위치할 수 있다. 세포질 웅성 불임성 (CMS)의 예는, 예를 들어 브라시카 종에서 기재되었다. 그러나, 웅성 불임성에 대한 유전자 결정기는 또한 핵 게놈에 위치할 수 있다. 웅성 불임 식물은 또한 식물 생명공학 방법, 예컨대 유전 공학에 의해 수득될 수 있다. 웅성-불임 식물을 수득하는 특히 유용한 수단은 WO 89/10396에 기재되어 있으며, 여기서 예를 들어 리보뉴클레아제, 예컨대 바르나제는 수술의 융단 세포에서 선택적으로 발현된다. 이어서 가임성은 리보뉴클레아제 억제제, 예컨대 바르스타의 융단 세포에서의 발현에 의해 회복될 수 있다.
본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물 또는 식물 재배품종 (식물 생명공학 방법, 예컨대 유전 공학에 의해 수득됨)은 제초제-내성 식물, 즉 1종 이상의 주어진 제초제에 대해 내성을 갖게 된 식물이다. 이러한 식물은 유전자 형질전환에 의해, 또는 이러한 제초제 내성을 부여하는 돌연변이를 함유하는 식물의 선택에 의해 수득될 수 있다.
실시예
실시예 1: 다중 활성 성분의 조합의 효능에 대한 식
활성 성분의 상승작용적 효과는 활성 성분 조합의 활성이 개별적으로 적용될 때의 활성 성분의 총 활성을 초과하는 경우에 존재한다. 2종의 활성 성분의 주어진 조합에 대한 기대 활성은 하기와 같이 계산될 수 있다 (문헌 [Colby, S.R., "Calculating Synergistic and Antagonistic Responses of Herbicide Combinations," Weeds 1967, 15, 20-22] 참조):
X가 활성 성분 A를 m ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용할 때의 효능이고,
Y가 활성 성분 B를 n ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용할 때의 효능이고,
E가 활성 성분 A 및 B를 각각 m 및 n ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용할 때의 효능인 경우에,
이때
Figure 112017035661890-pct00013
실제 활성이 계산된 값을 초과하는 경우에, 이때 조합의 활성은 초상가적이며, 즉 상승작용적 효과가 존재한다. 이러한 경우에, 실제로 관찰된 효능은 상기 언급된 식으로부터 계산된 기대 효능 (E)에 대한 값보다 더 커야 한다.
예를 들어, 식 및 분석은 식물 성장 촉진의 평가에 적용될 수 있다. 이러한 검정은 식물에 적용한 지 수일 후에 평가된다. 100%는 비처리 대조군 식물의 것에 상응하는 식물 중량을 의미한다. 효능은 이러한 경우에 비처리 대조군의 것과 비교하여 식물 중량의 추가의 %를 의미한다. 예를 들어, 비처리 대조군 식물과 비교하여 120%인 식물 중량을 유발한 처리는 20%의 효능을 가질 것이다. 조합에 대한 식물 성장 촉진 효과 (즉, 조합으로 처리된 식물의 % 식물 중량에 대한 관찰된 효능)가 계산된 값을 초과하는 경우에, 이때 조합의 활성은 초상가적이며, 즉 상승작용적 효과가 존재한다.
식 및 분석은 또한 질병 대조군 검정에서 상승작용을 평가하는데 사용될 수 있다. %로 표현된 효능의 정도가 표시된다. 0%는 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하고, 반면에 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않는다는 것을 의미한다.
실제 살곤충 또는 살진균 활성이 계산된 값을 초과하는 경우에, 이때 조합의 활성은 초상가적이며, 즉 상승작용적 효과가 존재한다. 이러한 경우에, 실제로 관찰된 효능은 상기 언급된 식으로부터 계산된 기대 효능 (E)에 대한 값보다 더 커야 한다.
상승작용적 효과를 입증하는 추가의 방식은 타메스(Tammes)의 방법이다 (문헌 ["Isoboles, A Graphic Representation of Synergism in Pesticides," in Neth. J. Plant Path., 1964, 70, 73-80] 참조).
실시예 2: 플루피라디푸론 및 재조합 바실루스 투린기엔시스 세포를 사용한 식물 성장 촉진
플루피라디푸론 및 포스포리파제 C를 발현하는 재조합 바실루스 투린기엔시스 세포 ("BEPC")의 발효 제품의 조합의 효능을 분석하기 위해 실험을 수행하였다. 메이즈 종자를 25-28℃ 및 50% 습도에서 식물 성장실 내 조명 랙 상의 작은 3-인치 제곱 포트 안의 합성 배지 및 모래의 멸균 혼합물에서 약 14일 동안 성장시켰다. 2개의 종자를 각각의 포트에 심었다. 심을 때, 각각의 포트 안의 성장 배지를 하기 기재된 처리로 적셨다. 14일 후에, 식물을 전체 식물 바이오매스에 대해 측정하였다. 하기 표에서, UTC는 비처리 대조군을 지칭한다. "계산치"는 상기 기재된 콜비(Colby) 식을 사용하여 계산된 기대 효과를 지칭하고, "효능"은 관찰된 실제 효과를 지칭한다.
활성 성분으로서 플루피라디푸론 (17.09% 플루피라디푸론)을 함유하는 시반토(SIVANTO)® 제품을 50 mL 물 중에 희석하고, 희석 용액을 성장 배지를 적시는데 사용하였다. 하기 제시된 적용률은 성장 배지에 적용된 활성 성분 (즉, 플루피라디푸론)의 양을 지칭한다.
포자외막 상에 포스포리파제 C를 발현하는 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 (바실루스 투린기엔시스 BT013A) (BEPC)을 하기와 같이 생성하였다. 바실루스 세레우스 패밀리 구성원에서 융합 단백질의 발현을 위한 플라스미드를 생성하기 위해, BclA 프로모터 (서열식별번호: 85), 메티오닌 개시 코돈 및 BclA (서열식별번호: 1)의 아미노산 20-35, 이어서 6개의 알라닌 링커 서열과 이에 인 프레임 융합된 바실루스 투린기엔시스 BT013A 포스포리파제 (서열식별번호: 108)를 코딩하는 PCR 단편을 생성하였다. 이들 PCR 단편을 XhoI에 의해 소화시키고, pSUPER 플라스미드의 SalI 부위 내로 라이게이션하여 플라스미드 pSUPER-BclA 20-35-포스포리파제를 생성하였다. pSUPER 플라스미드는 pUC57 플라스미드 (암피실린 저항성 카세트를 함유함)와 바실루스로부터의 pBC16-1 플라스미드 (테트라시클린 저항성을 함유함)와의 융합을 통해 생성하였다. 이러한 5.5 kbp 플라스미드는 이. 콜라이 및 바실루스 종 둘 다에서 복제될 수 있다. pSUPER-BclA 20-35-포스포리파제 플라스미드를 dam 메틸라제 음성 이. 콜라이 균주 내로 형질전환 및 증식시키고, 최종적으로 바실루스 투린기엔시스 BT013A 내로 형질전환시켰다.
BEPC의 전체 브로쓰 배양물을 수득하기 위해, 뇌 심장 주입 배지 (BHI)를 함유하는 15 mL 원추형 용기에 BEPC를 접종하고, 300 rpm의 진탕기 셋팅으로 약 30℃에서 7-8시간 동안 성장시켰다. 다음날, 각각의 플라스크로부터의 250 μL 분취물을 50 mL의 효모 추출물-기재 배지를 함유하는 250 mL 플라스크 내로 접종하고, 약 30℃에서 성장시켰다. 대략 2일의 인큐베이션 후에, 포자형성이 적어도 95% 완료되었을 때, 배양 브로쓰를 수거하고, 콜로니 형성 단위를 계산하였다. 발효 브로쓰를 50 mL 물 중 5%로 희석하고, 하기 콜로니 형성 단위를 각각의 포트에 적용하였다.
표 3
Figure 112017035661890-pct00014
결과는 플루피라디푸론 및 BEPC를 조합하는 경우에 초상가적 식물 수확량 효과를 나타낸다.
실시예 3: 클로티아니딘 및 재조합 바실루스 투린기엔시스 세포를 사용한 식물 성장 촉진
메이즈 종자를 20℃ 및 70% 습도에서 온실 내 양질 사토에서 약 11일 동안 성장시킬 것이다. 처리 시로부터 약 11일 후에 묘목을 토양 위에서 절단하고, 생중량을 결정할 것이다.
서열식별번호: 107에 의해 코딩되는 엔도글루카나제 또는 서열식별번호: 108에 의해 코딩되는 포스포리파제 C를 발현하며 상기 기재된 바와 같이 제조된 재조합 바실루스 투린기엔시스 세포를 약 50 μg/커넬로 적용할 것이다. 클로티아니딘을 또한 약 250 μg/커넬로 적용할 것이다.
재조합 바실루스 투린기엔시스를 클로티아니딘과 조합하여 처리한 메이즈 식물의 % 싹 중량은 2종의 활성 성분을 단독으로 처리한 메이즈 식물로부터의 % 싹 중량을 기준으로 하여 계산된 값을 초과할 것이며, 즉 상승작용적 효과가 관찰될 것이라고 예상된다.
SEQUENCE LISTING <110> Bayer CropScience LP <120> COMPOSITIONS COMPRISING RECOMBINANT BACILLUS CELLS AND AN INSECTICIDE <130> BCS149059 WO <150> US 62/051,919 <151> 2014-09-17 <160> 109 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 41 <212> PRT <213> Bacillus anthracis <400> 1 Met Ser Asn Asn Asn Tyr Ser Asn Gly Leu Asn Pro Asp Glu Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ala Ser Ala Phe Asp Pro Asn Leu Val Gly Pro Thr Leu Pro Pro 20 25 30 Ile Pro Pro Phe Thr Leu Pro Thr Gly 35 40 <210> 2 <211> 332 <212> PRT <213> Bacillus anthracis <400> 2 Met Ser Asn Asn Asn Tyr Ser Asn Gly Leu Asn Pro Asp Glu Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ala Ser Ala Phe Asp Pro Asn Leu Val Gly Pro Thr Leu Pro Pro 20 25 30 Ile Pro Pro Phe Thr Leu Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Phe Thr Thr 35 40 45 Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly 50 55 60 Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Asp Thr Gly Thr Thr Gly Pro 65 70 75 80 Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr 85 90 95 Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr 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Bacillus weihenstephensis <400> 28 Met Lys Glu Arg Asp Arg Gln Asn Ser Leu Asn Ser Asn Phe Arg Ile 1 5 10 15 Ser Pro Asn Leu Ile Gly Pro Thr Phe Pro Pro Val Pro Thr Gly Phe 20 25 30 Thr Gly Ile Gly Ile Thr Gly Pro Thr Gly Pro Gln Gly Pro Thr Gly 35 40 45 Pro Gln Gly Pro Arg Gly Phe Gln Gly Pro Met Gly Glu Met Gly Pro 50 55 60 Thr Gly Pro Gln Gly Val Gln Gly Ile Gln Gly Pro Ala Gly Gln Met 65 70 75 80 Gly Ala Thr Gly Pro Glu Gly Gln Gln Gly Pro Gln Gly Leu Arg Gly 85 90 95 Pro Gln Gly Glu Thr Gly Ala Thr Gly Pro Gln Gly Val Gln Gly Leu 100 105 110 Gln Gly Pro Ile Gly Pro Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gln Gly Ile Gln 115 120 125 Gly Ile Gln Gly Leu Gln Gly Pro Ile Gly Ala Thr Gly Pro Glu Gly 130 135 140 Pro Gln Gly Ile Gln Gly Val Gln Gly Val Pro Gly Ala Thr Gly Ser 145 150 155 160 Gln Gly Ile Gln Gly Ala Gln Gly Ile Gln Gly Pro Gln Gly Pro Ser 165 170 175 Gly Asn Thr Gly Ala Thr Gly Val Thr Gly Gln Gly Ile Ser Gly Pro 180 185 190 Thr Gly Ile Thr Gly Pro Thr Gly Ile Thr Gly Pro Ser Gly Gly Pro 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taccaaaagc c 21 <210> 42 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Primer <400> 42 ggatccttag tccgcaggcg tagc 24 <210> 43 <211> 35 <212> PRT <213> Bacillus cereus <400> 43 Met Ser Asn Asn Asn Ile Pro Ser Pro Phe Phe Phe Asn Asn Phe Asn 1 5 10 15 Pro Glu Leu Ile Gly Pro Thr Phe Pro Pro Ile Pro Pro Leu Thr Leu 20 25 30 Pro Thr Gly 35 <210> 44 <211> 222 <212> PRT <213> Bacillus cereus <400> 44 Met Ser Asn Asn Asn Ile Pro Ser Pro Phe Phe Phe Asn Asn Phe Asn 1 5 10 15 Pro Glu Leu Ile Gly Pro Thr Phe Pro Pro Ile Pro Pro Leu Thr Leu 20 25 30 Pro Thr Gly Pro Thr Gly Ser Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Pro 35 40 45 Thr Gly Ala Thr Gly Pro Thr Gly Ala Thr Gly Pro Thr Gly Ala Thr 50 55 60 Gly Ala Thr Gly Ser Thr Gly Ala Thr Gly Pro Thr Gly Ala Thr Gly 65 70 75 80 Thr Phe Ser Ser Ala Asn Ala Ser Ile Val Thr Pro Ala Pro Gln Thr 85 90 95 Val Asn Asn Leu Ala Pro Ile Gln Phe Thr Ala Pro Val Leu Ile Ser 100 105 110 Lys Asn Val Thr Phe Asn Gly Ile Asp Thr Phe Thr Ile Gln Ile Pro 115 120 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<213> Bacillus anthracis <400> 82 Met Ser Arg Tyr Asp Asp Ser Gln Asn Lys Phe Ser Lys Pro Cys Phe 1 5 10 15 Pro Ser Ser Ala Gly Arg Ile Pro Asn Thr Pro Ser Ile Pro Val Thr 20 25 30 Lys Ala Gln Leu Arg Thr Phe Arg Ala Ile Ile Ile Asp Leu Thr Lys 35 40 45 Ile Ile Pro Lys Leu Phe Ala Asn Pro Ser Pro Gln Asn Ile Glu Asp 50 55 60 Leu Ile Asp Thr Leu Asn Leu Leu Ser Lys Phe Ile Cys Ser Leu Asp 65 70 75 80 Ala Ala Ser Ser Leu Lys Ala Gln Gly Leu Ala Ile Ile Lys Asn Leu 85 90 95 Ile Thr Ile Leu Lys Asn Pro Thr Phe Val Ala Ser Ala Val Phe Ile 100 105 110 Glu Leu Gln Asn Leu Ile Asn Tyr Leu Leu Ser Ile Thr Lys Leu Phe 115 120 125 Arg Ile Asp Pro Cys Thr Leu Gln Glu Leu Leu Lys Leu Ile Ala Ala 130 135 140 Leu Gln Thr Ala Leu Val Asn Ser Ala Ser Phe Ile Gln Gly Pro Thr 145 150 155 160 Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Ala Gly Ala Thr Gly 165 170 175 Ala Thr Gly Pro Gln Gly Val Gln Gly Pro Ala Gly Ala Thr Gly Ala 180 185 190 Thr Gly Pro Gln Gly Val Gln Gly Pro Ala Gly Ala Thr Gly Ala Thr 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tcatcatact atatgtttta 120 taagaagtaa aggtaccata cttaattaat acatatctat acacttcaat atcacagcat 180 gcagttgaat tatatccaac tttcatttca aattaaataa gtgcctccgc tattgtgaat 240 gtcatttact ctccctacta catttaataa ttatgacaag caatcatagg aggttactac 300 atg 303 <210> 87 <211> 173 <212> DNA <213> Bacillus anthracis <400> 87 aattacataa caagaactac attagggagc aagcagtcta gcgaaagcta actgcttttt 60 tattaaataa ctattttatt aaatttcata tatacaatcg cttgtccatt tcatttggct 120 ctacccacgc atttactatt agtaatatga atttttcaga ggtggatttt att 173 <210> 88 <211> 124 <212> DNA <213> Bacillus weihenstephensis <400> 88 ctatgattta agatacacaa tagcaaaaga gaaacatatt atataacgat aaatgaaact 60 tatgtatatg tatggtaact gtatatatta ctacaataca gtatactcat aggaggtagg 120 tatg 124 <210> 89 <211> 376 <212> DNA <213> Bacillus weihenstephensis <400> 89 ggtaggtaga tttgaaatat gatgaagaaa aggaataact aaaaggagtc gatatccgac 60 tccttttagt tataaataat gtggaattag agtataattt tatataggta tattgtatta 120 gatgaacgct ttatccttta attgtgatta atgatggatt gtaagagaag gggcttacag 180 tccttttttt atggtgttct ataagccttt ttaaaagggg taccacccca cacccaaaaa 240 cagggggggt tataactaca tattggatgt tttgtaacgt acaagaatcg gtattaatta 300 ccctgtaaat aagttatgtg tatataaggt aactttatat attctcctac aataaaataa 360 aggaggtaat aaagtg 376 <210> 90 <211> 225 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 90 aacccttaat gcattggtta aacattgtaa agtctaaagc atggataatg ggcgagaagt 60 aagtagattg ttaacaccct gggtcaaaaa ttgatattta gtaaaattag ttgcactttg 120 tgcatttttt cataagatga gtcatatgtt ttaaattgta gtaatgaaaa acagtattat 180 atcataatga attggtatct taataaaaga gatggaggta actta 225 <210> 91 <211> 125 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 91 taattccacc ttcccttatc ctctttcgcc tatttaaaaa aaggtcttga gattgtgacc 60 aaatctcctc aactccaata tcttattaat gtaaatacaa acaagaagat aaggagtgac 120 attaa 125 <210> 92 <211> 144 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 92 aggatgtctt tttttatatt gtattatgta catccctact atataaattc cctgctttta 60 tcgtaagaat taacgtaata tcaaccatat cccgttcata ttgtagtagt gtatgtcaga 120 actcacgaga aggagtgaac ataa 144 <210> 93 <211> 126 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 93 ttaatgtcac tccttatctt cttgtttgta tttacattaa taagatattg gagttgagga 60 gatttggtca caatctcaag accttttttt taaataggcg aaagaggata agggaaggtg 120 gaatta 126 <210> 94 <211> 103 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 94 atatattttc ataatacgag aaaaagcgga gtttaaaaga atgagggaac ggaaataaag 60 agttgttcat atagtaaata gacagaattg acagtagagg aga 103 <210> 95 <211> 169 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 95 aaactaaata atgagctaag catggattgg gtggcagaat tatctgccac ccaatccatg 60 cttaacgagt attattatgt aaatttctta aaattgggaa cttgtctaga acatagaacc 120 tgtccttttc attaactgaa agtagaaaca gataaaggag tgaaaaaca 169 <210> 96 <211> 111 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 96 attcactaca acggggatga gtttgatgcg gatacatatg agaagtaccg gaaagtgttt 60 gtagaacatt acaaagatat attatctcca tcataaagga gagatgcaaa g 111 <210> 97 <211> 273 <212> DNA <213> Bacillus anthracis <400> 97 cgcgcaccac ttcgtcgtac aacaacgcaa gaagaagttg gggatacagc agtattctta 60 ttcagtgatt tagcacgcgg cgtaacagga gaaaacattc acgttgattc agggtatcat 120 atcttaggat aaatataata ttaattttaa aggacaatct ctacatgttg agattgtcct 180 ttttatttgt tcttagaaag aacgattttt aacgaaagtt cttaccacgt tatgaatata 240 agtataatag tacacgattt attcagctac gta 273 <210> 98 <211> 303 <212> DNA <213> Bacillus anthracis <400> 98 tgaagtatct agagctaatt tacgcaaagg aatctcagga caacactttc gcaacaccta 60 tattttaaat ttaataaaaa aagagactcc ggagtcagaa attataaagc tagctgggtt 120 caaatcaaaa atttcactaa aacgatatta tcaatacgca gaaaatggaa aaaacgcctt 180 atcataaggc gttttttcca ttttttcttc aaacaaacga ttttactatg accatttaac 240 taatttttgc atctactatg atgagtttca ttcacattct cattagaaag gagagattta 300 atg 303 <210> 99 <211> 240 <212> DNA <213> Bacillus anthracis <400> 99 tatatcatat gtaaaattag ttcttattcc cacatatcat atagaatcgc catattatac 60 atgcagaaaa ctaagtatgg tattattctt aaattgttta gcaccttcta atattacaga 120 tagaatccgt cattttcaac agtgaacatg gatttcttct gaacacaact ctttttcttt 180 ccttatttcc aaaaagaaaa gcagcccatt ttaaaatacg gctgcttgta atgtacatta 240 <210> 100 <211> 267 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 100 tatcacataa ctctttattt ttaatatttc gacataaagt gaaactttaa tcagtggggg 60 ctttgttcat ccccccactg attattaatt gaaccaaggg ataaaaagat agagggtctg 120 accagaaaac tggagggcat gattctataa caaaaagctt aatgtttata gaattatgtc 180 tttttatata gggagggtag taaacagaga tttggacaaa aatgcaccga tttatctgaa 240 ttttaagttt tataaagggg agaaatg 267 <210> 101 <211> 124 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 101 attttttact tagcagtaaa actgatatca gttttactgc tttttcattt ttaaattcaa 60 tcattaaatc ttccttttct acatagtcat aatgttgtat gacattccgt aggaggcact 120 tata 124 <210> 102 <211> 170 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 102 acataaattc acctccataa agcgttcatt atatagtaga tgcaaaaccg aaagaaaatg 60 acacggacat ttgaattatt gaaaagaaat cttaaactac ttgaacaatt taaaaaaatg 120 gaaagtttag tatatgtata acatatgatt gatttggaag agggtgatta 170 <210> 103 <211> 212 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 103 ttctattttc caacataaca tgctacgatt aaatggtttt ttgcaaatgc cttcttggga 60 agaaggatta gagcgttttt ttatagaaac caaaagtcat taacaatttt aagttaatga 120 cttttttgtt tgcctttaag aggttttatg ttactataat tatagtatca ggtactaata 180 acaagtataa gtatttctgg gaggatatat ca 212 <210> 104 <211> 1500 <212> DNA <213> Bacillus subtilis <400> 104 atgaaacggt caatctcgat ttttattacg tgtttattga ttacgttatt gacaatgggc 60 ggcatgatag cttcgccggc atcagcagca gggacaaaaa cgccagtagc caagaatggc 120 cagcttagca taaaaggtac acagctcgtt aaccgagacg gtaaagcggt acagctgaag 180 gggatcagtt cacacggatt gcaatggtat ggagaatatg tcaataaaga cagcttaaaa 240 tggctgagag atgattgggg tatcaccgtt ttccgtgcag cgatgtatac ggcagatggc 300 ggttatattg acaacccgtc cgtgaaaaat aaagtaaaag aagcggttga agcggcaaaa 360 gagcttggga tatatgtcat cattgactgg catatcttaa atgacggtaa tccaaaccaa 420 aataaagaga aggcaaaaga attcttcaag gaaatgtcaa gcctttacgg aaacacgcca 480 aacgtcattt atgaaattgc aaacgaacca aacggtgatg tgaactggaa gcgtgatatt 540 aaaccatatg cggaagaagt gatttcagtt atccgcaaaa atgatccaga caacatcatc 600 attgtcggaa ccggtacatg gagccaggat gtgaatgatg ctgccgatga ccagctaaaa 660 gatgcaaacg ttatgtacgc acttcatttt tatgccggca cacacggcca atttttacgg 720 gataaagcaa actatgcact cagcaaagga gcacctattt ttgtgacaga gtggggaaca 780 agcgacgcgt ctggcaatgg cggtgtattc cttgatcaat cgagggaatg gctgaaatat 840 ctcgacagca agaccattag ctgggtgaac tggaatcttt ctgataagca ggaatcatcc 900 tcagctttaa agccgggggc atctaaaaca ggcggctggc ggttgtcaga tttatctgct 960 tcaggaacat tcgttagaga aaacattctc ggcaccaaag attcgacgaa ggacattcct 1020 gaaacgccat caaaagataa acccacacag gaaaatggta tttctgtaca gtacagagca 1080 ggggatggga gtatgaacag caaccaaatc cgtccgcagc ttcaaataaa aaataacggc 1140 aataccacgg ttgatttaaa agatgtcact gcccgttact ggtataaagc gaaaaacaaa 1200 ggccaaaact ttgactgtga ctacgcgcag attggatgcg gcaatgtgac acacaagttt 1260 gtgacgttgc ataaaccaaa gcaaggtgca gatacctatc tggaacttgg atttaaaaac 1320 ggaacgttgg caccgggagc aagcacaggg aatattcagc tccgtcttca caatgatgac 1380 tggagcaatt atgcacaaag cggcgattat tcctttttca aatcaaatac gtttaaaaca 1440 acgaaaaaaa tcacattata tgatcaagga aaactgattt ggggaacaga accaaattag 1500 <210> 105 <211> 852 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 105 atgaaaaaga aagtacttgc tttagcggca gctattacat tggttgctcc attacaaagt 60 gttgcatttg ctcatgaaaa tgatggggga cagagatttg gagttattcc gcgctggtct 120 gctgaagata aacataaaga aggcgtgaat tctcatttat ggattgtaaa tcgtgcaatt 180 gatattatgt ctcgtaatac aacacttgta aaacaagatc gagttgcact attaaatgaa 240 tggcgtactg agttagagaa cggtatttat gctgctgact atgaaaatcc ttattatgat 300 aatagcacat ttgcttcaca tttctatgac cctgacaatg ggaaaactta tattccgtat 360 gcaaagcagg caaaggaaac tggagctaaa tattttaaat tagctggtga gtcttacaaa 420 aataaagata tgcaacaagc attcttctat ttaggattat ctcttcatta tctaggggat 480 gtaaaccaac cgatgcatgc agcaaacttt acaaaccttt cgtatccaca agggttccat 540 tctaaatatg aaaactttgt agatacgata aaagataact ataaagtaac ggatggaaat 600 ggatattgga actggaaagg tacgaatcca gaagattgga ttcatggagc ggcagtagtt 660 gcgaaacaag attacgctgg cattgtaaat gataatacga aagattggtt cgtgagagct 720 gctgtatcac aagaatatgc agataaatgg cgcgctgaag ttacaccaat gacaggtaag 780 cgtttaatgg atgcacaacg tgttactgct ggatatattc agctttggtt tgatacgtac 840 ggagatcgtt aa 852 <210> 106 <211> 729 <212> DNA <213> Bacillus subtilis <400> 106 gcgggactga ataaagatca aaagcgccgg gcggaacagc tgacaagtat ctttgaaaac 60 ggcacaacgg agatccaata tggatatgta gagcgattgg atgacgggcg aggctataca 120 tgcggacggg caggctttac aacggctacc ggggatgcat tggaagtagt ggaagtatac 180 acaaaggcag ttccgaataa caaactgaaa aagtatctgc ctgaattgcg ccgtctggcc 240 aaggaagaaa gcgatgatac aagcaatctc aagggattcg cttctgcctg gaagtcgctt 300 gcaaatgata aggaatttcg cgccgctcaa gacaaagtaa atgaccattt gtattatcag 360 cctgccatga aacgatcgga taatgccgga ctaaaaacag cattggcaag agctgtgatg 420 tacgatacgg ttattcagca tggcgatggt gatgaccctg actcttttta tgccttgatt 480 aaacgtacga acaaaaaagc gggcggatca cctaaagacg gaatagacga gaagaagtgg 540 ttgaataaat tcttggacgt acgctatgac gatctgatga atccggccaa tcatgacacc 600 cgtgacgaat ggagagaatc agttgcccgt gtggacgtgc ttcgctctat cgccaaggag 660 aacaactata atctaaacgg accgattcat gttcgttcaa acgagtacgg taattttgta 720 atcaaataa 729 <210> 107 <211> 499 <212> PRT <213> Bacillus subtilis <400> 107 Met Lys Arg Ser Ile Ser Ile Phe Ile Thr Cys Leu Leu Ile Thr Leu 1 5 10 15 Leu Thr Met Gly Gly Met Ile Ala Ser Pro Ala Ser Ala Ala Gly Thr 20 25 30 Lys Thr Pro Val Ala Lys Asn Gly Gln Leu Ser Ile Lys Gly Thr Gln 35 40 45 Leu Val Asn Arg Asp Gly Lys Ala Val Gln Leu Lys Gly Ile Ser Ser 50 55 60 His Gly Leu Gln Trp Tyr Gly Glu Tyr Val Asn Lys Asp Ser Leu Lys 65 70 75 80 Trp Leu Arg Asp Asp Trp Gly Ile Thr Val Phe Arg Ala Ala Met Tyr 85 90 95 Thr Ala Asp Gly Gly Tyr Ile Asp Asn Pro Ser Val Lys Asn Lys Val 100 105 110 Lys Glu Ala Val Glu Ala Ala Lys Glu Leu Gly Ile Tyr Val Ile Ile 115 120 125 Asp Trp His Ile Leu Asn Asp Gly Asn Pro Asn Gln Asn Lys Glu Lys 130 135 140 Ala Lys Glu Phe Phe Lys Glu Met Ser Ser Leu Tyr Gly Asn Thr Pro 145 150 155 160 Asn Val Ile Tyr Glu Ile Ala Asn Glu Pro Asn Gly Asp Val Asn Trp 165 170 175 Lys Arg Asp Ile Lys Pro Tyr Ala Glu Glu Val Ile Ser Val Ile Arg 180 185 190 Lys Asn Asp Pro Asp Asn Ile Ile Ile Val Gly Thr Gly Thr Trp Ser 195 200 205 Gln Asp Val Asn Asp Ala Ala Asp Asp Gln Leu Lys Asp Ala Asn Val 210 215 220 Met Tyr Ala Leu His Phe Tyr Ala Gly Thr His Gly Gln Phe Leu Arg 225 230 235 240 Asp Lys Ala Asn Tyr Ala Leu Ser Lys Gly Ala Pro Ile Phe Val Thr 245 250 255 Glu Trp Gly Thr Ser Asp Ala Ser Gly Asn Gly Gly Val Phe Leu Asp 260 265 270 Gln Ser Arg Glu Trp Leu Lys Tyr Leu Asp Ser Lys Thr Ile Ser Trp 275 280 285 Val Asn Trp Asn Leu Ser Asp Lys Gln Glu Ser Ser Ser Ala Leu Lys 290 295 300 Pro Gly Ala Ser Lys Thr Gly Gly Trp Arg Leu Ser Asp Leu Ser Ala 305 310 315 320 Ser Gly Thr Phe Val Arg Glu Asn Ile Leu Gly Thr Lys Asp Ser Thr 325 330 335 Lys Asp Ile Pro Glu Thr Pro Ser Lys Asp Lys Pro Thr Gln Glu Asn 340 345 350 Gly Ile Ser Val Gln Tyr Arg Ala Gly Asp Gly Ser Met Asn Ser Asn 355 360 365 Gln Ile Arg Pro Gln Leu Gln Ile Lys Asn Asn Gly Asn Thr Thr Val 370 375 380 Asp Leu Lys Asp Val Thr Ala Arg Tyr Trp Tyr Lys Ala Lys Asn Lys 385 390 395 400 Gly Gln Asn Phe Asp Cys Asp Tyr Ala Gln Ile Gly Cys Gly Asn Val 405 410 415 Thr His Lys Phe Val Thr Leu His Lys Pro Lys Gln Gly Ala Asp Thr 420 425 430 Tyr Leu Glu Leu Gly Phe Lys Asn Gly Thr Leu Ala Pro Gly Ala Ser 435 440 445 Thr Gly Asn Ile Gln Leu Arg Leu His Asn Asp Asp Trp Ser Asn Tyr 450 455 460 Ala Gln Ser Gly Asp Tyr Ser Phe Phe Lys Ser Asn Thr Phe Lys Thr 465 470 475 480 Thr Lys Lys Ile Thr Leu Tyr Asp Gln Gly Lys Leu Ile Trp Gly Thr 485 490 495 Glu Pro Asn <210> 108 <211> 283 <212> PRT <213> Bacillus thuringiensis <400> 108 Met Lys Lys Lys Val Leu Ala Leu Ala Ala Ala Ile Thr Leu Val Ala 1 5 10 15 Pro Leu Gln Ser Val Ala Phe Ala His Glu Asn Asp Gly Gly Gln Arg 20 25 30 Phe Gly Val Ile Pro Arg Trp Ser Ala Glu Asp Lys His Lys Glu Gly 35 40 45 Val Asn Ser His Leu Trp Ile Val Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser 50 55 60 Arg Asn Thr Thr Leu Val Lys Gln Asp Arg Val Ala Leu Leu Asn Glu 65 70 75 80 Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn Gly Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn 85 90 95 Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr Phe Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp 100 105 110 Asn Gly Lys Thr Tyr Ile Pro Tyr Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly 115 120 125 Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala Gly Glu Ser Tyr Lys Asn Lys Asp Met 130 135 140 Gln Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp 145 150 155 160 Val Asn Gln Pro Met His Ala Ala Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro 165 170 175 Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asp 180 185 190 Asn Tyr Lys Val Thr Asp Gly Asn Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Thr 195 200 205 Asn Pro Glu Asp Trp Ile His Gly Ala Ala Val Val Ala Lys Gln Asp 210 215 220 Tyr Ala Gly Ile Val Asn Asp Asn Thr Lys Asp Trp Phe Val Arg Ala 225 230 235 240 Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Pro 245 250 255 Met Thr Gly Lys Arg Leu Met Asp Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr 260 265 270 Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr Tyr Gly Asp Arg 275 280 <210> 109 <211> 244 <212> PRT <213> Bacillus subtilis <400> 109 Leu Glu Ala Gly Leu Asn Lys Asp Gln Lys Arg Arg Ala Glu Gln Leu 1 5 10 15 Thr Ser Ile Phe Glu Asn Gly Thr Thr Glu Ile Gln Tyr Gly Tyr Val 20 25 30 Glu Arg Leu Asp Asp Gly Arg Gly Tyr Thr Cys Gly Arg Ala Gly Phe 35 40 45 Thr Thr Ala Thr Gly Asp Ala Leu Glu Val Val Glu Val Tyr Thr Lys 50 55 60 Ala Val Pro Asn Asn Lys Leu Lys Lys Tyr Leu Pro Glu Leu Arg Arg 65 70 75 80 Leu Ala Lys Glu Glu Ser Asp Asp Thr Ser Asn Leu Lys Gly Phe Ala 85 90 95 Ser Ala Trp Lys Ser Leu Ala Asn Asp Lys Glu Phe Arg Ala Ala Gln 100 105 110 Asp Lys Val Asn Asp His Leu Tyr Tyr Gln Pro Ala Met Lys Arg Ser 115 120 125 Asp Asn Ala Gly Leu Lys Thr Ala Leu Ala Arg Ala Val Met Tyr Asp 130 135 140 Thr Val Ile Gln His Gly Asp Gly Asp Asp Pro Asp Ser Phe Tyr Ala 145 150 155 160 Leu Ile Lys Arg Thr Asn Lys Lys Ala Gly Gly Ser Pro Lys Asp Gly 165 170 175 Ile Asp Glu Lys Lys Trp Leu Asn Lys Phe Leu Asp Val Arg Tyr Asp 180 185 190 Asp Leu Met Asn Pro Ala Asn His Asp Thr Arg Asp Glu Trp Arg Glu 195 200 205 Ser Val Ala Arg Val Asp Val Leu Arg Ser Ile Ala Lys Glu Asn Asn 210 215 220 Tyr Asn Leu Asn Gly Pro Ile His Val Arg Ser Asn Glu Tyr Gly Asn 225 230 235 240 Phe Val Ile Lys

Claims (27)

  1. a) (i) 서열식별번호: 107의 서열을 갖는 엔도글루카나제 및 서열식별번호: 108의 서열을 갖는 포스포리파제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드; 및
    (ii) 다음으로 이루어지는 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편:
    서열식별번호: 1의 아미노산 25-35로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 1-35로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 20-35로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 22-31로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 22-33으로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 20-31로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1로 이루어진 표적화 서열; 또는
    서열식별번호: 2로 이루어진 포자외막 단백질
    을 포함하는 융합 단백질을 발현하는, 바실루스 세레우스(Bacillus cereus) 패밀리 구성원의 재조합 포자외막-생산 바실루스(Bacillus) 세포; 및
    b) 클로티아니딘 및 플루피라디푸론에서 선택된 적어도 1종의 살곤충제
    를 상승작용적 유효량으로 포함하고,
    상기 상승작용은 a) 및 b) 간의 상승작용이고, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 적어도 1종의 살곤충제의 상승작용적 중량비는 1:1000 내지 1000:1의 범위인,
    식물 성장을 증진시키고/거나 식물 건강을 촉진하기 위한 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 바실루스 세레우스 패밀리 구성원이 바실루스 안트라시스(Bacillus anthracis), 바실루스 세레우스(Bacillus cereus), 바실루스 투린기엔시스(Bacillus thuringiensis), 바실루스 미코이데스(Bacillus mycoides), 바실루스 슈도미코이데스(Bacillus pseudomycoides), 바실루스 사마니이(Bacillus samanii), 바실루스 가에모켄시스(Bacillus gaemokensis), 바실루스 웨이헨스테파넨시스(Bacillus weihenstephanensis), 바실루스 토요넨시스(Bacillus toyonensis) 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 융합 단백질이 서열식별번호: 107을 포함하는 것인 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포가 바실루스 투린기엔시스 BT013A로부터 유래되는 것인 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 융합 단백질이 서열식별번호: 108을 포함하는 것인 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 융합 단백질이 융합 단백질의 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편에 천연인 포자형성 프로모터의 제어 하에 발현되는 것인 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 융합 단백질이 고발현 포자형성 프로모터의 제어 하에 발현되는 것인 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 고발현 포자형성 프로모터가 시그마-K 포자형성-특이적 폴리머라제 프로모터 서열을 포함하는 것인 조성물.
  9. 제6항에 있어서, 포자형성 프로모터가 서열식별번호: 85-103 중 어느 하나의 핵산 서열과 적어도 80% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  10. 제1항 또는 제2항에 있어서, 살곤충제가 플루피라디푸론인 조성물.
  11. 제1항 또는 제2항에 있어서, 살곤충제가 클로티아니딘인 조성물.
  12. 제1항 또는 제2항에 따른 조성물로 처리된 종자.
  13. 제1항 또는 제2항에 있어서, 통상적인 또는 트랜스제닉 식물 또는 그의 종자를 처리하기 위해 사용되는 조성물.
  14. a) (i) 서열식별번호: 107의 서열을 갖는 엔도글루카나제 및 서열식별번호: 108의 서열을 갖는 포스포리파제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드; 및
    (ii) 다음으로 이루어지는 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편:
    서열식별번호: 1의 아미노산 25-35로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 1-35로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 20-35로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 22-31로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 22-33으로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1의 아미노산 20-31로 이루어진 표적화 서열;
    서열식별번호: 1로 이루어진 표적화 서열; 또는
    서열식별번호: 2로 이루어진 포자외막 단백질
    을 포함하는 융합 단백질을 발현하는, 바실루스 세레우스(Bacillus cereus) 패밀리 구성원의 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포; 및
    b) 클로티아니딘 및 플루피라디푸론에서 선택된 적어도 1종의 살곤충제
    를 상승작용적 유효량으로 동시에 또는 순차적으로 적용하는 단계를 포함하고,
    상기 상승작용은 a) 및 b) 간의 상승작용이고, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 적어도 1종의 살곤충제의 상승작용적 중량비는 1:1000 내지 1000:1의 범위인,
    식물 성장을 증진시키고/거나 식물 건강을 촉진하기 위해 식물, 식물 부분 또는 식물 주위 생육지를 처리하는 방법.
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Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9573980B2 (en) 2013-03-15 2017-02-21 Spogen Biotech Inc. Fusion proteins and methods for stimulating plant growth, protecting plants from pathogens, and immobilizing Bacillus spores on plant roots
WO2016044575A1 (en) * 2014-09-17 2016-03-24 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising recombinant bacillus cells and an insecticide
AU2015317715B2 (en) * 2014-09-17 2019-10-03 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising recombinant Bacillus cells and a fungicide
UA121316C2 (uk) 2014-09-17 2020-05-12 Байєр Кропсайєнс Лп Композиція для посилення росту і/або сприяння життєздатності рослин, що містить рекомбінантні клітини представника сімейства bacillus cereus і інший агент біологічної боротьби
IL315468A (en) 2014-09-17 2024-11-01 Spogen Biotech Inc Fusion proteins, recombinant bacteria, and methods for using recombinant bacteria
EP3193616B1 (en) 2014-09-17 2024-06-26 BASF Corporation Compositions comprising recombinant bacillus cells and an insecticide
AR101961A1 (es) 2014-09-17 2017-01-25 Bayer Cropscience Lp Composiciones que comprenden células recombinantes de bacillus y otro agente de control biológico
HUE049475T2 (hu) * 2015-03-26 2020-09-28 Bayer Cropscience Lp Új paenibacillus törzs, gombaellenes vegyületek és az alkalmazásukra szolgáló eljárások
US11124460B2 (en) 2016-03-16 2021-09-21 Spogen Biotech Inc. Methods for promoting plant health using free enzymes and microorganisms that overexpress enzymes
US20200170258A1 (en) 2017-07-20 2020-06-04 Spogen Biotech Inc. Bioactive polypeptides for improvements in plant protection, growth and productivity
CN107236721B (zh) * 2017-07-28 2019-10-18 中科荣信（苏州）生物科技有限公司 一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用
AU2018337974B2 (en) 2017-09-20 2024-06-27 Spogen Biotech Inc. Fusion proteins, recombinant bacteria, and exosporium fragments for plant health
CN108018245A (zh) * 2018-01-12 2018-05-11 中国科学院成都生物研究所 一株产壳聚糖酶的枯草芽孢杆菌及其应用
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
CN109576233A (zh) * 2018-12-03 2019-04-05 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种蜱源性基因工程疫苗
KR20210142673A (ko) 2019-03-19 2021-11-25 바이엘 크롭사이언스 엘피 해충 방제 및 식물 건강을 위한 융합 단백질, 재조합 박테리아, 및 포자외막 단편
CN110343681B (zh) * 2019-08-01 2020-12-25 安徽农业大学 合成呋喃酮及其衍生物葡萄糖苷的糖基转移酶突变体蛋白
CN110934773A (zh) * 2019-12-21 2020-03-31 中山市川林生物科技有限公司 一种驱蚊霜及其制备方法
WO2023288294A1 (en) 2021-07-16 2023-01-19 Novozymes A/S Compositions and methods for improving the rainfastness of proteins on plant surfaces
WO2023225459A2 (en) 2022-05-14 2023-11-23 Novozymes A/S Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections
CN113005131B (zh) * 2021-04-21 2023-03-10 山西大学 一种只包含Cu的SOD基因及编码的蛋白质和其应用
CN113383770B (zh) * 2021-07-20 2022-04-15 柒久园艺科技(北京)有限公司 一种玫瑰鲜花保鲜方法
WO2023092050A1 (en) * 2021-11-20 2023-05-25 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with recombinant bacillus cells expressing a serine protease
CN115057915B (zh) * 2021-12-28 2024-04-26 四川农业大学 一种大肠杆菌表达蛋白Cry5B在制备抗大熊猫蛔虫成虫和L4期幼虫活性药物中的应用
CN114507653B (zh) * 2022-02-16 2023-06-30 河南农业大学 一种磷酸二酯酶bsp、生物制剂及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007117066A (ja) 2005-09-30 2007-05-17 Techno Giken Kk 植物種子の物理処理方法と育種、育苗方法
WO2013178649A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and a fungicide from the group consisting of inhibitors of the respiratory chain at complex i or ii.

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4272417A (en) 1979-05-22 1981-06-09 Cargill, Incorporated Stable protective seed coating
US4245432A (en) 1979-07-25 1981-01-20 Eastman Kodak Company Seed coatings
US4808430A (en) 1987-02-27 1989-02-28 Yazaki Corporation Method of applying gel coating to plant seeds
GB8810120D0 (en) 1988-04-28 1988-06-02 Plant Genetic Systems Nv Transgenic nuclear male sterile plants
DE4412834A1 (de) * 1994-04-14 1995-10-19 Bayer Ag Insektizide Mischungen
US5650372A (en) * 1995-05-30 1997-07-22 Micro Flo Company Plant treatment with bacillus strain ATCC
US5876739A (en) 1996-06-13 1999-03-02 Novartis Ag Insecticidal seed coating
IL121404A0 (en) 1997-07-27 1998-01-04 Yissum Res Dev Co Transgenic higher plants of altered structural morphology
US6333302B1 (en) 1997-09-03 2001-12-25 Cornell Research Foundation, Inc. Use of hypersensitive response elicitor protein or polypeptide from Clavibacter michiganensis for disease resistance, growth enhancement and insect control
US6503904B2 (en) 1998-11-16 2003-01-07 Syngenta Crop Protection, Inc. Pesticidal composition for seed treatment
AU2001273009A1 (en) 2000-06-26 2002-01-08 Maxygen, Inc. Methods and compositions for developing spore display systems for medicinal and industrial applications
US6660690B2 (en) 2000-10-06 2003-12-09 Monsanto Technology, L.L.C. Seed treatment with combinations of insecticides
US20020134012A1 (en) 2001-03-21 2002-09-26 Monsanto Technology, L.L.C. Method of controlling the release of agricultural active ingredients from treated plant seeds
US7615681B2 (en) 2002-02-05 2009-11-10 National Research Council Of Canada Methods for modifying plant responses to stress and correspondingly derived plants
CN103484486B (zh) * 2003-07-02 2018-04-24 维莱尼姆公司 葡聚糖酶，编码它们的核酸以及制备和使用它们的方法
KR100518953B1 (ko) 2003-09-19 2005-10-12 주식회사 제노포커스 포자 외막단백질을 이용한 목적단백질의 표면발현 방법
MXPA06011776A (es) * 2004-04-13 2006-12-15 Du Pont Insecticidas de antranilamida.
WO2006012366A2 (en) * 2004-07-20 2006-02-02 Phyllom Llc Methods for making and using recombinant bacillus thuringiensis spores
JP4630627B2 (ja) * 2004-10-26 2011-02-09 クミアイ化学工業株式会社 植物種子発芽率向上剤
KR100784261B1 (ko) 2006-01-02 2007-12-11 한국과학기술원 탄저균의 포자외막 단백질을 이용한 목적단백질의 미생물표면발현방법
EP2049669A2 (en) 2006-08-09 2009-04-22 DSMIP Assets B.V. Spore surface displays of bioactive molecules
US20100183557A1 (en) * 2006-10-24 2010-07-22 University Of Manitoba Ptra gene and uses thereof
CN101362799A (zh) * 2007-08-10 2009-02-11 中国科学院上海生命科学研究院 调控植物株高的基因及其应用
US9133251B2 (en) * 2008-02-22 2015-09-15 The Curators Of The University Of Missouri Bacillus based delivery system and methods of use
AU2009235695B2 (en) * 2008-04-07 2015-04-02 Basf Corporation Combinations of biological control agents and insecticides or fungicides
RU2376344C1 (ru) 2008-08-06 2009-12-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научнo-исследовательский и проектно-технологический институт механизации льноводства Россельхозакадемии (ГНУ ВНИПТИМЛ Россельхозакадемии) Способ получения пищевой муки из семян масличных культур, в частности семян льна (варианты)
WO2012001000A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Dsm Ip Assets B.V. Spore surface display of bioactive molecules
CN104168771B (zh) * 2011-12-13 2017-06-30 孟山都技术公司 植物生长促进微生物及其用途
AR091202A1 (es) * 2012-05-30 2015-01-21 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un insecticida
JP2014001179A (ja) * 2012-06-20 2014-01-09 Sumitomo Chemical Co Ltd 有害生物の防除方法
US20160100585A1 (en) 2012-11-22 2016-04-14 Basf Corporation Pesticidal Mixtures
US9573980B2 (en) 2013-03-15 2017-02-21 Spogen Biotech Inc. Fusion proteins and methods for stimulating plant growth, protecting plants from pathogens, and immobilizing Bacillus spores on plant roots
AU2015317715B2 (en) 2014-09-17 2019-10-03 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising recombinant Bacillus cells and a fungicide
WO2016044563A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising recombinant bacillus cells and a fungicide
WO2016044575A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising recombinant bacillus cells and an insecticide
AR101961A1 (es) 2014-09-17 2017-01-25 Bayer Cropscience Lp Composiciones que comprenden células recombinantes de bacillus y otro agente de control biológico
UA121316C2 (uk) 2014-09-17 2020-05-12 Байєр Кропсайєнс Лп Композиція для посилення росту і/або сприяння життєздатності рослин, що містить рекомбінантні клітини представника сімейства bacillus cereus і інший агент біологічної боротьби
EP3193616B1 (en) 2014-09-17 2024-06-26 BASF Corporation Compositions comprising recombinant bacillus cells and an insecticide
IL315468A (en) 2014-09-17 2024-11-01 Spogen Biotech Inc Fusion proteins, recombinant bacteria, and methods for using recombinant bacteria

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007117066A (ja) 2005-09-30 2007-05-17 Techno Giken Kk 植物種子の物理処理方法と育種、育苗方法
WO2013178649A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and a fungicide from the group consisting of inhibitors of the respiratory chain at complex i or ii.

Also Published As

Publication number Publication date
US10448647B2 (en) 2019-10-22
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RU2017113005A3 (ko) 2019-04-15
JP2017530966A (ja) 2017-10-19
US11856956B2 (en) 2024-01-02
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JP6923438B2 (ja) 2021-08-18
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EP4434344A2 (en) 2024-09-25
CN106998695B (zh) 2024-08-06
WO2016044542A1 (en) 2016-03-24
US20190387738A1 (en) 2019-12-26
ES2988421T3 (es) 2024-11-20

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