KR100652534B1

KR100652534B1 - 치료적 활성을 가진 단백질인 인터류킨-1 수용체안타고니스트를 체액으로부터 제조하는 방법

Info

Publication number: KR100652534B1
Application number: KR1020017009631A
Authority: KR
Inventors: 라이네케율리오; 마이져한스; 벨링페터
Original assignee: 오르토겐 아게
Priority date: 1999-02-01
Filing date: 2000-01-31
Publication date: 2006-12-01
Anticipated expiration: 2020-01-31
Also published as: DE19903876A1; US20030138910A1; CA2364386A1; JP2002540818A; DE50005985C9; DK1151004T3; PT1151004E; BRPI0007891B1; US6759188B2; DE19903876B4; ATE263782T1; KR20020007297A; ES2219311T3; EP1151004B1; WO2000046249A1; BR0007891A; JP2007244875A; AU758385B2; EP1151004A1; CA2364386C

Abstract

본 발명은 예방적 또는 치료적 활성을 가진 단백질인 인터류킨-1 수용체 안타고니스트의 제조 방법에 관한 것이다. 이 방법에서는 주사기를 체액으로 채운 후 항온 처리하여 예방적 또는 치료적 활성을 지닌 단백질을 체액 내에서 형성시킨다.

Description

치료적 활성을 가진 단백질인 인터류킨-1 수용체 안타고니스트를 체액으로부터 제조하는 방법{METHOD FOR PRODUCING INTERLEUKIN-1 RECEPTOR ANTAGONISTS, A THERAPEUTIC ACTIVITY PROTEIN, FROM BODY FLUIDS}

본 발명은 예방적 또는 치료적 활성을 가진 단백질의 제조 방법과, 이 방법에 이용되는 수단, 특히 주사기(Syringe)에 관한 것이다.

에리트로포이에틴(erythropoietin), 인슐린 또는 인터페론 등의 치료적 활성을 가진 단백질은 오래전부터 알려져 왔다. 이들 단백질 중 많은 것들은 의약으로 이미 인정됨에 따라 자주 사용되고 있다. 그러나, 이들 의약의 개발 및 승인과 관련한 비용이 커짐에 따라, 치료적 활성을 지닌 단백질의 제조를 위한 간단하고 비용 효율적인 대안책이 요구되고 있다. 또한, 치료적 활성을 가진 단백질들이 모두 의약으로서 허용되는 것은 아니다. 하지만, 그럼에도 불구하고 이들 단백질을 환자에게 투여해야 할 필요성이 빈번히 요구되고 있다. 이와 관련하여 이들 단백질은 생체 적합성이 우수한 것으로 추정되기 때문에 자기(autologue) 단백질, 즉 생체 고유 단백질인 것이 특히 중요하다. 이러한 단백질들로는 인터류킨 1 수용체 안타고니스트, 인터류킨 4, 인터류킨 10 및 종양 괴사 인자 수용체 타입 I 또는 타입 II가 있다. 또한, 생체 고유 단백질은, 글리코실화와 같은 자연적 번역 후 변성이 이루어진다고 하는 이점을 갖는다. 이것은 원핵 숙주에서 생성되기 때문에 대부분 통상적으로 입수할 수 있는 재조합 단백질의 경우와 다르다.

점착성 면역글로블린 G로 단핵구를 자극하여 인터류킨-1 수용체 안타고니스트를 형성시키는 것은 문헌[Arend und Leung in Immunological Reviews (1994) 139, 71-78] 및 문헌[Moore et al. in Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. (1992) 6, 569-575]에 기재되어 있다. 문헌[Andersen et al. Autommunity (1995) 22, 127-133]에서는 생체 내에서 관찰되는 면역 글로블린 G의 치료적 효과가 인터류킨-1 수용체 안타고니스트의 형성 증가에 기인할 수 없다는 점과, 단핵구에 의한 인터류킨-1 수용체 안타고니스트(IRAP, IL-1Ra)의 시험관내 형성이 폴리프로필렌 상에 흡착된 혈청 및 혈장 성분에 따라 좌우된다는 점을 설명하고 있다. 요법에 있어 치료적으로 흥미로운 단백질 형성을 자극하기 위해서 흡착된 혈청 및 혈장 성분을 치료적으로 사용하는 것은 비용적으로 부담스러울 뿐만 아니라 혈청 및 혈장 성분을 오염시킬 수 있는 감염성 입자에 의한 오염의 위험을 수반한다. 흡착된 혈청 및 혈장 성분을 사용하는 일 없이 요법에 직접 사용될 수 있는 IL-1Ra를 제조하는 방법은 전술한 문헌 어디에도 기재되어 있지 않다.

따라서, 본 발명이 기초로 하고 있는 기술적 과제는 종래의 약학 제품의 이용 및 제조에 신속하게 실시될 수 있는 안전하고 비용 효율적인 대안으로서 간주되는 IL-1Ra의 제조 방법 및 제조 수단을 제공하는 것이다.

본 발명은, 유리, 석영 또는 플라스틱으로 제조된 주사기 내에서 IL-1Ra를 제조하는 방법을 제공함으로써 그러한 과제를 해결하는데, 상기 방법에서는 상기 주사기에 유기체, 예를 들어 인간 또는 동물의 체액을 채운 후 항온 처리하여 IL-1Ra를 형성시킨다.

바람직한 실시양태로서, 본 발명은 특정 물질, 특히 유리, 플라스틱, 석영 및/또는 강옥으로 구성되어 있는 주사기의 내부 구조를 제공하는데, 상기 주사기 내부 구조의 표면은 본 발명의 특히 바람직한 실시양태에서 부식제, 예를 들어 산 또는 알칼리, 특히 크롬산/황산(crhomic/sulfuric acid)을 사용하여 개질시키고, 이어서 상기 부식제를 제거하고 상기 주사기를 세정한 후, 필요에 따라, 특히 바람직한 방식으로 살균, 특히 오토클레이브에서 살균한다. 이어서, 상기 주사기는 환자의 채액을 채운 후, 항온 처리하여 IL-1Ra를 형성시킨다. 이어서, 단백질 함량이 높은 체액은 환자, 예를 들어 환부 관절 내로 재주입할 수 있다. 그러나, 형성되는 IL-1Ra의 순도를 향상시키기 위해서는 체액을 원심분리한 후, 상청액을 살균 여과하고, 분취액으로 분리한 다음, 추후 처리를 위해 저장하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명은 바람직한 실시 양태에서 주사기 내부 구조의 표면을 특히 부식제, 예를 들어 산 또는 알칼리, 특히 크롬산/황산을 사용하여 개질시킨 후, 필요에 따라, 주사기 내부 구조의 표면을 특히 오토클레이브에서 살균하는 방법의 제1 단계를 제공한다. 건조 과정은 살균하기 이전 및/또는 이후에 실시할 수 있다. 개질 및 필요에 따른 후속적인 살균을 실시한 후에는, 방법의 제2 단계로서 주사기에 체액, 특히 혈액, 림프액, 타액, 소변 등을 채운 후 항온 처리한다. 체액은 환자로부터 상기 주사기로 직접 채취하는 것이 바람직하다. 바람직하게는 개질된 주사기 내부 구조의 표면은, 사용된 물질, 주사기의 내부 구조, 이용된 개질, 특히 내부 구조의 부식, 이용된 살균, 특히 오토클레이브에서의 살균, 및 사용된 체액에 따라 정량적으로 상이할 정도로, 체액 내에서 IL-1Ra의 형성을 특이적으로 유도하는데, 이로 인하여 상기 IL-1Ra는 주사기 내에 존재하는 체액 중에서 농축되거나 형성된다. 이러한 방식으로 농축된 체액은 주사기 내에 살균 상태로 저장할 수 있고, 필요한 경우, 추가 처리 없이 직접 환자에게 재주입하거나, 또는 바람직하게는 원심분리 및/또는 살균 여과 후에 환자에게 재주입할 수 있다.

따라서, 본 발명은 또한 인간 또는 동물 신체의 예방적 또는 치료적 처치, 예를 들어 류마티즘, 골관절염 및/또는 배부통의 처치를 위한 방법에 관한 것으로, 상기 방법에서는 인간 또는 동물의 신체로부터 본 발명에 따른 주사기에 의해 체액, 예를 들어 혈액을 채취하고, 이 체액을 주사기 내에서 항온 배양하여, IL-1Ra를 형성시키거나 또는 농축시킨 후, 상기 주사기를 사용하여 체액을 동일하거나 또는 다른 인간 또는 동물의 신체에 재주입한다.

형성되는 IL-1Ra는 유리하게 예를 들어 글리코실화를 통해 변성시킬 수 있다. 자명하게도, 본 발명은 또한 IL-1Ra의 다른 변성체 또는 변이체, 예를 들어 절단된 형태, 돌연변이체 또는 다른 유도체의 형성도 포함한다.

본 발명과 관련하여, 주사기의 내부 구조는 주사기 내부, 즉 샘플 수용 영역에 존재하고, 수용된 체액과 접촉할 수 있는 주사기의 임의 영역 또는 임의 구조를 의미한다. 주사기의 내부 구조는 그 내측 표면, 바람직하게는 표면적을 증가시키는 조직화(texturing)를 구비한 표면을 갖는 것이 특히 바람직하다. 자명하게도, 본 발명은 또한 자체 내부 동공의 특수 배치형태 없이 통상적으로 이용 가능한 주사기를 사용하여 수행할 수 있다. 이러한 경우, 내부 구조는 주사기 실린더의 내측 표면 및 실린더 내에 존재하는 피스톤 부분이다. 이러한 내부 구조는, 특히 바람직한 실시양태에서, 주사기의 내부 표면적을 확장하여 보다 큰 유도 면적을 제공하기 위해서, 주사기의 내부 내로 도입된 물품, 예를 들어 입자, 구(sphere), 구슬(bead), 겔, 유리 울, 강옥, 석영, 모래, 플라스틱 또는 유리 과립 또는 유리 분말 등에 의해 추가로 형성될 수 있다. 내부 구조를 구성하거나 또는 내부 구조 내에 존재하는 물질은 주사기의 나머지를 구성하는 물질과 다를 수 있다. 예를 들어, 주사기는 플라스틱으로 구성될 수 있으며, 그 내부 구조의 일부는, 예를 들어 유리 과립으로 구성될 수 있다.

예를 들어, 직경이 1 mm 내지 5 mm인 유리 구슬과 같은 전술한 유형의 추가 구조는, 본 발명의 바람직한 실시양태에 따르면, 사용된 주사기의 내부 용적의 50% 이하를 구성해야 한다. 사용된 주사기는, 예를 들어 10 ml 내지 100 ml의 주사기일 수 있다.

본 발명과 관련하여, 주사기 내부 구조의 개질된 표면은, 부식제로 처리되고, 인간 또는 동물의 체액 내에서 IL-1Ra의 형성을 유도하고/하거나 향상시킬 수 있는 표면을 의미한다. 개질된 표면은 매우 높은 세정성(clealiness), 즉 오염물질의 실질적이거나 또는 완전한 부재 및/또는 표면 특성 및/또는 표면 구조의 화학적/물리적 개질의 실질적이거나 또는 완전한 부재에 의해 구별될 수 있다. 내부 구조의 개질된 표면은, 알칼리 또는 산, 예를 들어 크롬산/황산, 특히 20% 내지 80% 세기, 특히 바람직하게는 50% 세기의 크롬산/황산을 사용함으로써 제조하는 것이 바람직하다. 주사기는 부식제, 특히 크롬산/황산과 함께 5 분 내지 30 분간 항온 처리하는 것이 바람직하다.

부식제를 제거한 후 주사기는 1회 이상의 세정 단계와, 필요에 따라 바람직하게는 살균 단계, 예를 들면 오토클레이브에서의 살균 단계, 특히 1 바 내지 5 바의 압력 하에 20 분 내지 60 분 동안 100∼150℃에서 수행하는 오토클레이브에서의 살균 단계를 실시하는 것이 바람직할 수 있다. 세정 후, 그리고 오토클레이브에서의 살균 이전 및/또는 이후에는, 필요에 따라, 예를 들어 건조용 오븐에서 60∼150℃, 바람직하게는 80℃ 하에 30분 내지 120분 동안 1회 이상의 건조 단계도 실시할 수 있다.

본 발명의 특히 유리한 배치형태에서는, 유리, 예를 들면 석영 유리, 강옥, 석영, 플라스틱(예, 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리염화비닐, 폴리프로필렌), 또는 유사 물질로 제조될 수 있는, 즉 이들 물질로 구성되거나, 또는 실질적으로 이들 물질 또는 이들 물질의 혼합물을 포함하는 주사기, 특히 주사기의 내부 구조를 제공한다.

본 발명의 교시내용의 범위 내에서, 유리로 구성된 주사기 및/또는 유리, 특히 유리 과립으로 구성된 내부 구조는 특히 강한 유도 효과를 나타내 보인다는 놀라운 사실을 알 수 있다.

특히 바람직한 실시양태에서, 가열된 유리, 특히 100∼210℃, 구체적으로 170∼200℃, 바람직하게는 180℃로 가열된 유리는 처리 이전, 즉 체액의 채취 이전에 사용하고, 본 발명에 따라 사용하기 이전에 냉각시킨다. 특히 바람직한 실시양태에서, 유리는 유리 분말 또는 유리 과립 형태로 사용할 수 있다.

그러나, 내부 구조는 또한 석영, 예를 들어 석영 분말 또는 석영 모래 및/또는 강옥, 예를 들어 수성 현탁액 형태의 강옥으로 구성되거나, 또는 이들을 포함한다.

특히 바람직한 실시양태에서, 이들 물질은, 필요한 경우 개질, 특히 부식을 실시한 후에, 그리고 필요한 경우 살균 후에 IL-1Ra 유도 특성을 나타내 보인다.

본 발명의 추가의 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 개질 가능하고 살균 가능한 층을 가진 주사기의 내부 구조를 제공하고, 후속적으로 개질 및 필요에 따른 살균을 수행할 수 있다.

본 발명은 간단히 수행하는 방법을 제공하고, 이 방법을 이용하면, 유도, 특히 표면 유도에 의해 생성될 수 있고, 그러한 생성된 형태, 즉 주사기에 존재하는 체액 중의 다른 성분들과 함께 생성된 형태로 환자에게 직접, 즉 예를 들어 다른 용기 내로의 이동과 같은 추가 조작 없이 재투여될 수 있는 자기 IL-1Ra를 제조할 있다는 점에서 그 자체 유리하다. 바람직한 실시양태에서, 형성된 IL-1Ra를 투여하기 전에, 고형 성분을 제거하기 위해서는, 원심 분리 및/또는 살균 여과를 실시할 수 있다. 따라서, 시판되고 있는 것으로 종종 가격이 비싼 약제의 사용이 불필요하게 된다. 결국, 본 발명은 약제의 제조가 환자 외부에서 이루어지는 약제의 제조로부터 기인하여 발생하는 IL-1Ra의 오염, 감염 등을 방지하기 때문에 유리한 것으로 입증된다.

따라서, 본 발명은 특히 바람직한 실시양태에서 인터류킨-1 수용체 안타고니스트의 제조 방법을 제공하는데, 상기 방법에서 상기 주사기의 내부 구조는 특수 처리된 물질, 특히 유리, 석영 또는 플라스틱로 구성되고, 주사기의 내부 구조 표면은 특히 부식제, 특히 크롬산/황산을 사용하여 개질시키고, 이어서 상기 주사기 내부 구조의 표면은 필요에 따라 특히 오토클레이브에서의 살균을 통해 살균시키며, 상기 주사기는 체액, 바람직하게는 혈액으로 채우고, 항온 처리하여, 체액 내에서 IL-1Ra를 형성시키고 농축시킨다. 본 발명에 따른 주사기는, 특히 주사기의 내부 구조 표면의 특이적 개질, 구체적으로 부식 및 그 표면의 특이적 살균, 구체적으로 오토클레이브에서의 살균 때문에, 혈액 내에 존재하는 단핵구를 자극하여 IL-1Ra를 형성시킴으로써 혈액 중에 IL-1Ra를 농축시키게 된다. 주사기 내에 존재하는 혈액은, 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 항온 처리후, 즉 IL-1Ra의 농축 후, 직접, 즉 예를 들어 이동과 같은 추가 조작 없이 주사기 내로 도입된 혈액을 채취한 환자에게 직접 재주입할 수 있다

본 발명의 바람직한 실시양태에서는, 고형 성분(예, 세포)을 제거하기 위해서, 주사기 내에 존재하는 혈액을 원심 분리 및/또는 살균 여과를 실시하는 것이 유리할 수 있다. 이어서, 필요에 따라 혈액은 분취액으로 분할한다. 따라서, 본 발명은 또한 특이적으로 개질되고 살균되며, 특히 오토클레이브에서 살균된 내부 구조의 표면을 구비한 주사기를 사용하여 혈액을 환자로부터 채취할 수 있고, 혈액을 주사기 내에 존재하는 상태로 항온 처리할 수 있으며, IL-1Ra 형성 후, 상기 혈액을 동일 환자 또는 다른 환자에게 그 주사기로 재주입할 수 있는 것도 제공한다. 이러한 절차는, 예를 들어 신경 정형외과 분야, 즉 예를 들어 신경학적 원인으로 발생하는 배부통에 특히 유리하다. 현재까지 그러한 증상에 적합한 치료로는 추간판 수술(intervertebral disk operation), 코르티손 치료, 식염수에 의한 세척 요법 등만이 있어 왔다. 또한. 본 발명에 따라 제공되는 IL-1Ra, 즉 특히 자기 IL-1Ra는 류마티즘 및 골관절염의 치료를 매우 간단하고 비용 효율적인 효과적인 방식으로 가능하게 한다.

본 발명은 또다른 실시양태에서, 항응고제, 특히 헤파린, 구연산염, EDTA, CPDM 또는 CPDA 층으로 추가 코팅된 주사기의 내부 구조를 제공한다. 본 발명의 교시내용의 범위 내에서, 본 발명은 항응고제로서 헤파린을 사용하면 우수한 유도를 달성한다는 것을 놀랍게도 보여줄 수 있다. 본 발명에 따르면, 본 발명은 또한 용기 내에 항응고제를 코팅으로서 아니라 유리된 상태로 사용할 수 있으며, 예를 들어 주사기 내에 동결건조 상태 또는 액체 상태로 도입할 수 있다.

그러나, 본 발명의 특히 바람직한 실시양태에서는 항응고제, 특히 헤파린을 주사기 내에 사용하지 않는다. 이는 항온 처리의 추가 개선을 유도한다.

본 발명은, 추가의 바람직한 실시양태에서, 12 시간 내지 72 시간 동안, 바람직하게는 24 시간 동안, 바람직하게는 실온, 즉 20∼41℃, 특히 37℃에서 실시하는 주사기내 체액의 항온 처리를 제공한다.

또한, 본 발명은, 본 발명의 한 실시양태에서, 체액 중의 치료적 또는 예방적 활성을 지닌 단백질을 형성시킨 후, 예를 들어 체액의 특정 성분, 예를 들어 혈장 또는 혈소판을 제거하기 위해서, 추가 처리된 체액을 제공한다. 이러한 제거는, 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 원심 분리 또는 여과를 통해 실시할 수 있다.

본 발명은, 추가의 실시양태에서, 예방적 또는 치료적 활성을 지닌 단백질, 특히 인터류킨-1 수용체 안타고니스트의 시험관내 유도에 적합한 주사기의 제조 방법에 관한 것으로, 여기서 상기 주사기는 주사기의 내부 구조의 특수 처리된 물질, 특히 플라스틱 또는 유리로 구성되어 있는 것을 특징으로 한다. 본 발명은 부식제, 특히 알칼리 또는 산, 특히 크롬산/황산에 의해 부식된 주사기 내부 구조의 표면을 제공한다. 본 발명은 부식제를 제거하고 주사기를 세정한 후, 살균된, 특히 오토클레이브 살균된 내부 구조의 표면을 제공할 수 있다. 또한, 본 발명은 사용하기 전에, 예를 들어 100∼210℃, 특히 170∼200℃로 주사기, 바람직하게는 유리로 제조된 주사기를 가열하는 것이 바람직할 수 있다.

또한, 본 발명은 물론 이러한 방식으로 제조된 주사기에 관한 것으로, 여기서 상기 주사기는 특히 바람직한 실시양태에서 유리, 석영 또는 플라스틱(특히, 폴리스티렌, 폴리염화비닐, 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌)으로 제조하고, 상기 주사기는 특히 유리, 석영 또는 플라스틱로 제조된 주사기 내부 구조의 표면을 특수 처리한다는 점을 특징으로 하며, 상기 특수 처리는 부식제에 노출시킴으로써 수행한다. 바람직한 방식으로, 주사기는 사용하기 전에, 바람직하게는 100∼210℃, 예를 들어 170∼200℃로 가열한다.

또한, 본 발명은 예방적 또는 치료적 활성을 가진 단백질, 바람직하게는 인터류킨-1 수용체 안타고니스트의 시험관내 유도를 위한 본 발명에 따른 주사기, 바람직하게는 폴리스티렌, 폴리염화비닐, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 석영 또는 유리로 제조된 주사기의 내부 구조 표면을 개질시키는 데 있어 알칼리 또는 산, 특히 크롬산/황산의 용도에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 전술한 방법에 사용하기 위한, 즉 특히 용기, 예를 들어 주사기내 IL-1Ra 형성을 위한 유도물질로서 사용하기 위한, 유리 분말, 유리 과립, 석영 분말, 석영 모래, 강옥, 구, 구슬, 모래 등과 같은 표면적을 확장시키는 장치 또는 물질의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 추가의 유리한 실시양태는 후술하는 특허청구범위에 의해 입증된다.

이하에서는 도면 및 예시적인 실시양태를 통해 본 발명을 예시한다.

도 1은 본 발명에 따른 주사기의 개요도를 나타낸 것이다.

도 2 내지 도 12는 다양한 조건 하에 본 발명에 따라 사용된 주사기 내에서 IL-1Ra 형성을 나타낸 것이다.

도 13 및 도 14는 세정을 통해 주사기에 사용된 부식제를 완전 제거한 상태를 나타낸 것이다.

실시예 1: 과립을 함유한 유리 주사기의 제조 및 사용

도 1은 유리로 구성된 50 ml 주사기(1)(Fortuna Optima, Order No. 7.102.-44, 이후 특별한 지시가 없는 한, 모든 실시예에서는 이 주사기를 사용함)를 나타낸 것으로, 이 주사기는 피스톤 또는 플런지(3), 돌려서 빼낼 수 있고 덮개 부착물(male Luer)(13)를 보유하는 덮개(5), 및 덮개 부착물(13) 위에 배치되어 그 부착물을 밀폐하고 격막을 보유하는 제거 가능한 캡(7)을 구비하였다. 상기 플런지(3)는 예비결정된 파괴점(breaking point)(15)을 보유하였다. 따라서, 플런지를 꺼낸 후에는 주사기를 직접 원심분리시킬 수 있었다. 또한, 유리 과립(9)(Roth사의 유리 구슬, Art. No. A 557.1)도 도시하였다. 과립(9)의 입자 크기는 직경 1 mm 내지 3 mm이지만, 보다 작은 입자, 특히 100 ㎛ 이상의 입자, 예를 들어 유리 분말을 사용할 수도 있었다. 물론, 예를 들어, 유리 또는 플라스틱로 구성되고 플런지 내에서 예비결정된 파괴점을 전혀 보유하지 않은 주사기를 사용할 수도 있었다.

주사기(1)는, 공장도 신제품으로서 제조원 포장된 주사기(1)의 내부 구조의 표면과 공장도 신제품으로서 제조원 포장된 과립(9)의 표면을 시판되는 크롬산/황산 제품을 사용하여 개질시킴으로써 제조하였는데, 상기 개질은 크롬산/황산 제품를 주사기 내에 넣고, 주사기 내벽, 즉 실린더 내벽과 피스톤, 그리고 과립을 함께 부식시킴으로써 수행하였다. 주사기는 50% 세기의 크롬산/황산(Merck, Darmstadt, Order. No. 1.02499.2500, 크롬산/황산을 원하는 농도로 희석될 때까지 바이오크롬 울트라퓨어 워터 No. L 0040로 희석한 것임)을 1회 내지 10회, 바람직하게는 3회 완전 인출 및 주입함으로써, 처리한 후 세정하고 개질시켰다. 마지막 인출 후, 주사기를 저부 밀봉하고 크롬산/황산으로 충전된 상태에서 5 분 내지 30 분 동안 항온 처리하였다. 이어서, 주사기 피스톤을 제거하고, 신선한 초정제수를 사용하여 주사기 실린더를 완전 충전 및 재배수함으로써 주사기를 2회 내지 10회, 바람직하게는 4회 완전히 세정하였는데, 이 경우에는 세정수를 완전 충전 및 배출시킨다는 점에 반드시 유의할 필요가 있다. 이어서, 주사기 피스톤을 50% 세기의 크롬산/황산 중에 침지시킨 후 증류수로 완전히 세정하였다.

주사기 내에 존재하는 물의 임의 잔류량은 주사기의 신속한 건조를 보정하기 위해서 Luer 커넥터를 면봉으로 훔쳐 냄으로써 모세관 흡인에 의해 제거하였다. 내부에 존재하는 임의의 유리 구슬을 포함하는 주사기 및 피스톤은 인디케이터 필드를 구비한 멜라그-필름(Melag-Film)으로 각각 별도로 밀봉하였다(Melag, Melaseal). 이러한 방식으로 포장된 주사기는 건조용 오븐(Melag 건조 살균기)에서 80℃ 하에 60 분 이상 동안 건조시켰다. 이어서, 건조된 포장 주사기는 2 바 하에, 132℃의 오토클레이브(Wolf Autoclave HRM 242 II)에서 30 분 동안 살균하고, 60 분 이상 동안 80℃ 하에 1회 이상 건조시켰다.

혈액 채취(이하 참조) 이전에, 후속 채취하는 혈액의 응고를 방지하기 위해서. 헤파린(Liquemin N 2500, 헤파린나트륨 2500 I.E.) 또는 구연산염(ACDA)을 주사기 내에 넣었다. 입증된 바에 의하면, 응고제를 사용하는 것은 IL-1Ra 함유 혈청의 가공시 유리할 수 있다.

주사기(1)는 도시되어 있지 않은 어댑터를 사용하여 환자로부터 혈액을 채취하는 데 사용하였는데, 상기 어댑터는 도시되어 있지 않은 캐눌라에, 도시되어 있지 않은 것으로 관에 의해 돌려 빼낼 수있는 캡(7)을 접속시켰다. 상기 어댑터는 니들을 갖추고 있으며, 덮개 부착물(13) 내에 존재하는 격막은 그 니들에 의해 관통되었다. 이어서, 어댑터를 제거하고, 전혈을 제거 가능한 캡(7)의 보호 하에 24 시간 동안 37℃에서 항온 처리하였는데, 이때 상기 캡의 격막은 자동적으로 밀폐되었다. 항온 처리는 수직으로 또는 수평으로 실시할 수 있었다. 수직 항온 처리 시에는, 격막 및 살균용 설치된 필터(0.2 ㎛)를 통해 혈장을 제거하였다. 추가적로 또는 대안적으로는, 원심분리를 실시할 수 있었다. 수평 항온 처리시에는, 혈액을 원심분리한 후, 살균 보조 필터(0.2 ㎛)를 통해 혈장을 제거하였다. 그러나, 또한 원심분리를 수행하는 일이 없이 격막을 통해 혈장을 제거하는 것도 가능하였다. 이어서, 혈장을, 예를 들어 환자의 신경근 또는 관절에 재주입하였다.

실시예 2: 과립을 함유한 플라스틱 주사기의 제조 및 사용

이 실시예에서는, 폴리스티렌, 유리 또는 또다른 개질 가능한 물질 및/또는 살균 가능한 물질로 구성된 살균 과립을 사용하였다. 과립의 표면은 시판되는 크롬산/황산 제품을 사용하여 실시예 1에서와 같이 배치(batch) 방식으로 개질시켰다. 이어서, 크롬산/황산 잔류물을 씻어내기 위해 상기 과립을 물로 헹구었다. 이어서, 상기 과립을 살균하고 물로 포화시키기 위해서, 2 바의 압력 하에 121℃에서 20 분 이상 동안 항온 처리하였다. 이어서, 상기 과립을 80℃에서 20 분동안 건조시켰다.

공장도 신제품으로서 제조원 포장된 종래의 비개질된 폴리프로필렌 주사기(50 ml, Becton Dickinson, Heidelberg, Art. No. 00137)에 개질되고 살균된 과립(1, 2, 4 또는 10 cm³)과 충분한 양의 항응고제, 예를 들어 헤파린(Liquemin, 헤파린나트륨 2500 I.E.) 또는 구연산염(예, ACDA)을 채워 넣었다.

채워진 주사기는 채취용 삽관 및 관을 포함하여 포장한 후, 감마선 또는 전자빔으로 살균하였다.

사용자는 그 살균된 키트를 꺼내어 환자로부터 혈액을 채취하였다. 주사기는 덮개 부착물내 오리피스 상에 채취용 악세서리, 즉 어댑터의 니들에 의해 관통되는 격막을 보유하였다. 어댑터의 제거 후에는 격막이 자동적으로 밀폐되었다. 혈액 채취 후, 주사기 플런지를 예비결정된 파괴점에서 꺼내었다.

혈액을 수용한 주사기는 37∼41℃에서 24 시간 동안 항온 처리하였다.

a) 수직 항온 처리 시에는, 격막 및 살균 보조 필터, 예를 들어 0.2 ㎛ 필터를 통해 혈장을 제거하였다.

b) 수평 항온 처리 시에는, 주사기의 원심 분리 후, 살균 보조 필터, 예를 들어 0.2 ㎛ 필터를 통해 혈장을 제거하였다.

혈장의 재주입은, 예를 들어 신경근, 관절 또는 추간판에 대해 실시하였다.

실시예 3: 과립을 함유하지 않은 주사기의 제조 및 사용

실시예 1에 제시한 바와 같이, 개질 및 살균 가능한 물질로 구성된 공장도 신제품으로서 제조원 포장된 주사기(5, 10, 20 또는 50 ml)를 크롬산/황산을 사용하여 개질시킨 후, 오토클레이브에서 살균하고 건조시켰다. 주사기는 유리, 폴리스티렌, 또는 특이적 개질 가능한 다른 물질로 구성하는 것이 바람직하였다.

개질 및 살균된 주사기에 충분량의 헤파린(Liquemin, 헤파린나트륨 2500 I.E.) 또는 구연산염(ACDA)를 채워 넣었다.

이어서, 채워진 주사기는 채취용 삽관 및 관을 포함하여 포장하고, 이어서 감마선 또는 전자빔으로 살균하였다.

사용자는 그 살균된 기트를 꺼내어 환자로부터 혈액을 채취하였다. 주사기는 덮개 부착물내 오리피스 상에 채혈하는 경우 채혈 악세서리, 즉 어댑터 니들에 의해 관통된 격막을 포함하였다. 어댑터의 제거 후에는, 격막이 다시 자동적으로 밀폐되었다. 혈액 채취 후, 주사기 플런저를 예비 결정된 파괴점에서 꺼내었다.

a) 수직 항온 처리 시(예, 시험관 호울더 내에서)에는, 격막을 통해 혈장을 제거하고, 살균 보조 필터, 예를 들어 0.2 ㎛ 필터를 통해 여과하였다.

b) 수평 항온 처리 시에는, 주사기의 원심 분리 후, 혈장을 격막을 통해 제거하고, 살균된 보조 필터, 예를 들어 0.2 ㎛의 필터를 통해 여과하였다.

혈장의 재주입은 예를 들어 신경근, 관절 또는 추간판에 대해 실시하였다.

실시예 4: 헤파린의 사용 하에 주사기 내에서 인터류킨-1 수용체 안타고니스트의 제조

실시예 1에서 나타낸 바와 같이, 공정도 신제품으로서 제조원 포장된 시판용 유리 주사기에 크롬산/황산을 채운 후, 실온에서 20 분 동안 항온 처리하였다, 이어서, 주사기를 증류수로 4회 세정한 후, 포장하고, 2 바 압력 하에 131℃에서 30 분 동안 오토클레이브에서 살균한 다음, 30 분 동안 100℃에서 건조시켰다.

개질 및 살균을 완료한 후, 주사기를 적절한 시간 동안 저장하였다. 약품에 관한 법률 하에 승인된 헤파린(Lequemin, 헤파린나트륨 2500 I.E.)을 주사기 내에 항응고제로서 넣었다.
이어서, 코팅된 주사기를 사용하여 살균 조건 하에 환자로부터 정맥 혈액을 채취하였다.

상기 주사기를 실온에서 12 시간 내지 72 시간 동안 항온 처리하였다. 이 시간 동안 혈장 내에 함유된 단백질, 특히 인터류킨-1 수용체 안타고니스트는 혈장 중에 고도로 농축되었다. 인터류킨-1 수용체 안타고니스트를 1 ng/ml 내지 50 ng/ml로 농축시킬 수 있었다.

이어서, 혈액 또는 혈장을 코팅된 주사기를 사용하여 환자에게 주입하였다.

실시예 5: 헤파린을 사용하는 일 없이 주사기 내에서 인터류킨-1 수용체 안타고니스트의 제조

실시예 1에 제시한 바와 같이, 공장도 신제품으로서 제조원 포장된 유리 주사기에 크롬산/황산을 채운 후, 실온에서 20 분 동안 항온 처리하였다, 이어서, 주사기를 증류수로 4회 헹군 후, 포장하고, 2바 압력 하에 131℃에서 30 분 동안 오토클레이브에서 살균한 다음, 30 분 동안 100℃에서 건조시켰다.

개질 및 살균을 완료한 후, 주사기를 적당한 시간 동안 저장하였다.

이어서, 코팅된 주사기를 사용하여 환자로부터 정맥 혈액을 채취하였다.

이어서, 희석된 혈액 또는 배양 상청액을 환자에게 재주입하였다.

실시예 6: 과립을 가진 폴리스티렌 미량역가 평판에서 IL-1Ra의 제조

과립은, 공장도 신제품으로서 제조원 포장된 과립을 배치 방식으로 시판용 크롬산/황산 제품을 사용하여 개질시킴으로써 제조하였는데, 상기 개질은 과립을 용기(예, 250 ml의 유리 비이커 XXX) 내에 넣고, 50% 세기의 크롬산/황산 제품(Merck, Darmstadt, Order No. 1.02499.2500, 크롬산/황산을 원하는 희석 농도가 될때까지 바이오크롬 울트라퓨어 워터 No. L 0040을 사용하여 희석한 것임)을 그 용기에 첨가하여, 그 과립을 처리한 후, 세정하고, 개질시킴으로써 달성하였다. 이어서, 상기 과립을 크롬산/황산과 함께 5분 내지 60분 동안 항온 처리하였다.

이어서, 크롬산/황산을 제거하고, 상기 구를 신선한 정제수로 2회 내지 10회 완전히 세정하였다. 세정은 최종 세정 단계에서 정제수 및 세정수의 pH 및 전도율이 동일하게 될 때까지 실시하였다.

이어서, 유리 비이커(예, 250 ml의 유리 비이커 XXX) 내 과립을 2 바 하에 132℃의 오토클레이브(Wolf Autoclave HRM 242 II)에서 살균시키고, 60∼100℃, 바람직하게는 80℃에서 30분 동안 건조시켰다. 대안적으로는, 과립을 120∼210℃, 바람직하게는 180℃에서 30분 동안 직접 가열 살균하였다(Melag 건조 살균기).

후속 채취되는 혈액의 응고를 방지하기 위해, 혈액을 채취하는 경우에는, EDTA, 구연산염, CPDA, CPDM 또는 헤파린을 가진 Sarstedt Monovettes을 사용하였다.

미량역가 평판(Nunc, Art. No. 150 687)의 웰 1개 당 3개 내지 12개의 유리 구슬을 넣고, 채취후 가능한 빨리 1 ml의 혈액을 첨가하였다.

24시간 동안 항온 처리(37℃, 5% CO₂)(Hereaus 항온 처리기)한 후,

밤새 혈병을 침강시키고, 고형 성분을 교반하거나 분리하는 일 없이 혈청 300 ㎕를 회수하고, IL-1Ra 단백질 농도를 결정하였다(ELISA, R&D, Wiesbaden, Quantikine Human IL-1Ra).

도 2: 과립의 존재 및 부재 하에 유리 주사기내 IL-1Ra의 제조

방법

IL-1Ra의 생성 실시예 1에 기재된 바와 같이 유리 주사기를 사용하

여 환자에 대하여 측정함.

유리구 Roth, 크롬산/황산으로 처리하고, 세정한 후 오토클

레이브에서 살균함.

RLW 반응 블랭크, 채취시 IL-1Ra 농도(IL-1Ra 제조 이전)

결과

유리 과립의 첨가는 IL-1Ra의 생성을 증가시켰다.

도 3: 항응고제의 존재 및 부재 하에 유리 주사기 내에서 IL-1Ra의 제조

방법

IL-1Ra의 생성 실시예 1에 기재된 바와 같이 유리 주사기를 사용

하여 환자에 대하여 측정함.

레이브에서 살균함.

CPDM 구연산염 인산염 덱스트로즈 만니톨

CPDA 구연산염 인산염 덱스트로즈 아데닌

결과

다양한 항응고제의 첨가는 다양한 정도로 IL-1Ra 생성의 효율에 영향을 미쳤다.

도 4: 항응고제의 존재 및 부재 하에 미량역가 평판 내에서 IL-1Ra의 제조

방법

IL-1Ra의 생성 실시예 6에 기재된 바와 같이 미량역가 평판을 사용

하여 환자에 대하여 측정함.

유리구 Duran, 크롬산/황산으로 처리하고, 세정한 후 오토클

레이브에서 살균하고, 12개의 구를 전혈 1 ml에 첨가 함.

삭제

RLW 반응 블랭크, 채취시 IL-1Ra 농도(IL-1Ra 생성

이전)

결과

도 5: 환자군에 있어 유리 과립을 가진 유리 주사기 및 플라스틱 주사기 내에서 IL-1Ra의 제조

방법

IL-1Ra의 생성 실시예 1 및 2에 기재된 바와 같이 유리 주사기를 사

용하여 정형외과 환자군에 대하여 측정함.

레이브에서 살균함.

결과

IL-1Ra는 유리 주사기와 플라스틱 주사기 내에서 모두 생성될 수 있는데, 유리 주사기 내에서 IL-1Ra 생성 효율이 유의적으로 더 높았다.

도 6: 환자군에 있어 유리 과립의 존재 및 부재 하에 유리 주사기 내에서 IL-1Ra의 제조

방법

여 정형외과 환자군에 대하여 측정함.

레이브에서 살균함.

결과

IL-1Ra는 유리 과립의 존재 및 부재 하에 모두 유리 주사기 내에서 생성될 수 있지만, 유리 과립의 존재 하에 IL-1Ra 생성 효율이 유의적으로 더 높았다.

도 7: 환자군에 있어 헤파린의 존재 및 부재, 그리고 유리 과립의 존재 및 부재 하에 유리 주사기 내에서 IL-1Ra의 제조

방법

여 정형외과 환자군에 대하여 측정함.

레이브에서 살균함.

결과

IL-1Ra는 유리 과립의 존재 및 부재 하에, 그리고 헤파린의 존재 및 부재 하에 모두 유리 주사기 내에서 형성될 수 있지만, 헤파린의 부재 하에, 그리고 유리 과립의 존재 하에서 IL-1Ra 생성 효율이 유의적으로 더 높았다.

도 8: 환자군에 있어 유리 과립을 가진 유리 주사기의 사용 하에 단백질 생성

방법

단백질의 생성 실시예 1에 기재된 바와 같이 유리 주사기를 사용하

여 정형외과 환자군에 대하여 측정함.

레이브에서 살균함.

TNFa 종양 괴사 인자 알파

IL-6 인터류킨-6

ELISA IL-1, TNFa 및 IL-6 농도를 R&D의 콤보-키트를 사용
하여 결정함.

결과

본 명세서에서 설명한 방법에 의해 특이적 IL-1Ra를 제조하였다. TNF-알파 및 IL-6 생성은 검출할 수 없었다. 또한, IL-1β는 소량으로 생성되었다. IL-1Ra:IL-1β의 비율이 생성된 IL-1Ra의 임상적 치료 효과에 대하여 100 이상이어야 하고(W.P. Arend et al., 1998, Annu. Rev. Immo. 16m 27-55), 기대되는 수치로서 평균 148을 갖기 때문에, 자가 생성된 IL-1Ra은 치료적으로 유용하였다.

도 9: 다양한 양의 유리 과립 및 다양한 혈액 농도에서 미량역가 평판의 사용 하에 IL-1Ra의 제조

방법

IL-1Ra의 생성 실시예 6에 기재된 바와 같이 미량역가 평판을 사용함.

단, 1 ml의 헤파린화된 전혈을 첨가하지 않고,

최종 부피가 1 ml되도록 충분한 헤파린화된 전혈을

첨가한 것에 차이를 두었음.

레이브에서 살균함.

3,9,12 3개, 9개 또는 12개 구를 첨가함.

1x, 2x, 4x RPMI 1640 하에 1x, 2x 및 4x로 희석되는 헤파린화된

전혈

RLW 반응 블랭크, 미희석된 혈액 중의 채취시 IL-1Ra의

농도(IL-1Ra의 생성 이전)

결과

각각의 혈액 희석 시에는, 유리 과립의 양이 증가함에 따라 IL-1Ra 생성량이 증가하였다. IL-1Ra 생성의 최대량은 구의 갯수와 혈액량 사이의 비율, 바람직하게는 유리 표면적과 혈액 세포수 사이의 비율에 의해 결정되었다.

도 10: 다양한 양의 유리 과립 및 2종의 유리 과립의 존재 하에 미량역가 평판의 사용 하에 IL-1Ra의 제조

방법

유리구 Duran 또는 Worf, 크롬산/황산으로 처리하고, 세정한

후 오토클레이브에서 살균함.

3,9,12 3개, 9개 또는 12개 구를 첨가함.

RLW 반응 블랭크, 채취시 IL-1Ra의

농도(IL-1Ra의 생성 이전)

결과

구의 갯수 또는 유리 표면적이 증가할수록, 소다석회 유리(예, Worf)와 붕규산 유리(예, Duran)의 경우 모두 IL-1Ra의 생성량이 보다 많아졌다.

도 11: 다양한 양의 유리 과립 및 2종의 유리 과립의 존재 하에 미량역가 평판의 사용 하에 IL-1Ra의 제조

방법

레이브에서 살균함.

RLW 반응 블랭크, 채취시 IL-1Ra의

농도(IL-1Ra의 생성 이전)

강옥 알파 Al₂O₃, 현탁액

석영 석영모래, 220 mg/ml

유리 분말 0.2 mg/ml

결과

상기 유리 과립(유리 과립에 대한 기술적 데이터 참조)의 성분인 산화규소 또는 산화알루미늄을 강옥 또는 석영 모래의 형태로 첨가한 경우 IL-1Ra의 생성량이 높았다.

도 12: 상이한 용기 물질 하에 IL-1Ra의 제조

방법

레이브에서 살균함.

RLW 반응 블랭크, 채취시 IL-1Ra의 농도(IL-1Ra의 생

성 이전)

PS 폴리스티렌, 미량역가 평판(Firma Nunc, Art. No.

150687)

PP 폴리프로필렌, 반응 용기(Firma Sarsted, Art. No.

62/554.502)

유리 오토클레이브에서 살균 처리된 시판용 반응 용기

결과

IL-1Ra는 유리 용기 및 플라스틱 용기에서 모두 생성될 수 있으나, 유리 용기 내에서의 IL-1Ra 생성 효율이 유의적으로 더 높았다.

도 13: 유리 과립을 크롬산/황산으로 처리한 후 세정수의 pH

방법

유리구 열거한 모든 구를 크롬산/황산으로 처리하고, 각각의

세정 단계 후 pH 측정기를 사용하여 pH 값을 측정함.

세정은 pH 6.0 내지 6.5의 초정제수(바이오크롬 울트

라퓨어 워터, Art. No. L0040)로 실시함.

결과

크롬산/황산 처리 후 상기 모든 구에 대해 모든 산 잔류물을 완전히 세정하는 것이 가능하였다.

도 14: 유리 과립을 크롬산/황산으로 처리한 후 세정수의 전도율

방법

유리구 열거한 모든 구를 크롬산/황산으로 처리하고, 각 세정

단계 후 전도율 측정계를 사용하여 세정수의 전도율을

측정함.

세정은 전도율 0 μS의 초정제수(바이오크롬 울트라

퓨어 워터, Art. No. L0040)로 실시함.

결과

구를 크롬산/황산 처리 및 세정한 후, 상기 구 중 어느 경우도 임의의 삼출액을 검출할 수 없었다. 이와 같이, 발열 활성에 의한 가능한 삼출액으로 인하여 IL-1Ra의 유도를 방해할 수 있었다.

유리 과립에 대한 기술적 데이터

1.1 Roth

크기 2.85∼3.3

물질 화학적 조성(하기 참조)

화학적 조성(%)

SiO₂68

CaO 3

BaO 6

K₂O 8

Na₂O 10

Al₂O₃1

B₂O₃2

납 무함유

1.2 SiLi 5506/89-6

크기 2.3∼2.5 mm

물질 붕규산 유리

처리 1. 연마 공정

2. 광택 공정

화학적 조성(%)

SiO₂82

Na₂O 2

Al₂O₃2

B₂O₃14

비중(kg/dm³) 223

모오스 경도 7

선형 연신 계수(20∼300℃) 325

가수분해 등급(DIN ISO 719) 1

산 등급(DIN 12116) 1

알칼리 등급(DIN ISO 695) 2

변형온도(℃) 530

1.3 SiLi 5004/99-5

크기 2.5 mm

물질 소다석회 유리

처리 압축 공정

화학적 조성(%)

SiO₂67

Na₂O 16

CaO 7

Al₂O₃5

B₂O₃3

MgO 2

PbO 무함유

모오스 경도 > = 6

1.4 Worf

크기 2∼3.5 mm

물질 소다석회 유리

처리 광택 및 열경화 공정

화학적 조성(%)

SiO₂65

Na₂O 16

CaO 7

Al₂O₃5

B₂O₃3

MgO 2

납 무함유

밀도(g/dm³) 2.54

모오스 경도 6

가수분해 등급 3

변형온도(℃) 530 ±10

1.5 Duran

크기 2∼3.5 mm

물질 붕규산 유리

처리 1. 연마 공정

2. 광택 공정

화학적 조성(%)

SiO₂ 81

Na₂O + K₂O 4

Al₂O₃2

B₂O₃13

밀도(g/dm³) 2.23

선형 연신 계수(20∼300℃) 3.25

가수분해 등급 1

산 등급(DIN 12116) 1

알칼리 등급(DIN ISO 695) 2

변형온도(℃) 525

Claims

부식제에 의해 개질된 내부구조를 갖거나 또는 비개질된 내부구조를 갖는 주사기에 유기체의 체액을 채우고, 항온 처리한 후, 체액 내에서 IL-1Ra를 형성시키는, 주사기 내에서의 IL-1Ra의 제조 방법.
제1항에 있어서, 상기 주사기는 유리, 플라스틱, 강옥 및/또는 석영으로 구성되거나, 또는 이들을 함유하는 것인 방법.
제2항에 있어서, 플라스틱이 폴리스티렌, 폴리염화비닐, 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 주사기는 부식제에 의해 개질된 내부 구조를 갖는 것인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 주사기는 비개질된 내부 구조를 갖는 것인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 주사기의 내부 구조는 그 내부 표면에 의해 형성되는 것인 방법.
제6항에 있어서, 주사기의 내부 구조는 표면적 확장 형상에 의해 형성되는 것인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 내부 구조는 주사기 내에 존재하는 유리, 플라스틱, 강옥 및/또는 석영으로 구성된 구슬, 구, 겔, 울, 분말, 과립 또는 입자에 의해 형성되는 것인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 내부 구조는 폴리스티렌, 폴리염화비닐, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌으로 구성되거나, 또는 이들을 함유하는 것인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 부식제가 알칼리 또는 산인 방법.
제10항에 있어서, 부식제가 크롬산/황산인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 체액이 혈액인 방법.
IL-1Ra의 시험관내 유도에 적합한 주사기의 제조 방법으로서,

주사기에 부식제를 채우고, 항온 처리한 후, 상기 부식제를 제거하는 방법.
제13항에 있어서, 주사기의 내부 구조는 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 폴리염화비닐, 폴리에틸렌, 강옥, 석영 또는 유리로 구성되거나, 또는 이들을 함유하는 것인 방법.
제13항 또는 제14항에 있어서, 부식제가 알칼리 또는 산인 방법.
제15항에 있어서, 부식제가 크롬산/황산인 방법.
제13항 또는 제14항에 있어서, 부식제의 제거 후에, 주사기의 내부 구조를 세정하고, 필요에 따라 살균하는 것인 방법.
주사기의 내부 구조가 플라스틱, 강옥, 석영 또는 유리로 구성되거나 또는 이들을 함유하고, 부식제로 처리하여 그 내부 구조의 개질된 표면을 형성시킨 것을 특징으로 하는 주사기.
제18항에 있어서, 플라스틱이 폴리스티렌, 폴리염화비닐, 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌인 것을 특징으로 하는 주사기.