JPS6120273B2

JPS6120273B2 -

Info

Publication number: JPS6120273B2
Application number: JP54164842A
Authority: JP
Inventors: Satoshi Oomura; Yuzuru Iwai; Akira Nakagawa; Takashi Igai; Toshihiko Oguchi; Yoshinori Ochiai; Takashi Furusato; Masao Takahashi; Hitoshi Ooiwa; Shinichi Matsumoto
Original assignee: Godo Shusei KK
Current assignee: Godo Shusei KK
Priority date: 1979-12-20
Filing date: 1979-12-20
Publication date: 1986-05-21
Also published as: JPS5687595A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規な生理活性物質ハービマイシン・
Ｂと、その製造法およびこれを有効成分とする農
園芸用薬剤に関するものである。さきに本発明者らは、ストレプトミセス属に属
する微生物を培地に培養することにより、培地中
にハービマイシン（J.Antibiotics32、255〜261、
（1979））が生成することを見出し、この物質を
「AM−3672物質」と命名して、特願昭53−
086080として特許出願した。本発明者らは、ハービマイシン生産菌のストレ
プトミセス・ハイグロスコピクス
（Streptomyces hygroscopicus）AM−3672株
が、ハービマイシン（AM−3672物質）の他に別
の未知化合物を生成することを見出した。この未
知化合物を分離精製しその理化学的生物学的性質
について分析を行なつた結果、この化合物は分子
式がC₂₈H₃₈N₂O₈の新規化合物であり「ハービマ
イシン・Ｂ」と命名した。またこのハービマイシン・Ｂは高等植物に対す
る発芽阻害作用、除草活性を有することを見出し
た。このハービマイシン・Ｂは広葉の雑草を発芽
前土壌処理することにより除草することができる
ので、除草剤として有用である。またこのハービマイシン・Ｂは植物ウイルス感
染の防除に極めて有効であり薬害も全く生じない
ことから、植物ウイルス病防除剤として有用であ
ることを見出した。これらの新知見に基づいてさ
らに研究を進めた結果、本発明を完成するに到つ
た。 (1) ハービマイシン・Ｂの理化学的性質本発明の化合物ハービマイシン・Ｂの理化学
的性状は第１表に示すとおりである。

【表】 (2) 生産菌の性状および培養ハービマイシン・Ｂの生産には、ストレプト
ミセス属放線菌としてストレプトミセス・ハイ
グロスコピクス（Streptomyces
hygroscopicus）微工研菌寄第4335号を使用す
ることができる。本菌の培養には、通常一般に用いられる放線
菌の培養法が可能である。培養のための栄養源
としては、炭素源としてグルコース、澱粉、マ
ニトール、フラクトース、イノシトールなどが
単独または組合わせて用いられる。窒素源とし
て無機および有機のものが可能であつて、塩化
アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸
アンモニウム、硝酸ソーダ等、また天然窒素源
のペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵
母、コーン・ステイープ・リカー、大豆粉、き
な粉、カザミノ酸、ソルブル・ベジタブル・プ
ロテイン等が、単独または組合わせて使用可能
である。その他食塩、塩化カリ、炭酸カルシウ
ム、燐酸塩等の無機塩類を加えるほか、本菌の
生育やハービマイシン・Ｂの生産を促進する有
機物または無機物を添加することをさまたげな
い。培養方法としては、液体培養法、特に深部撹
拌培養法が最も適している。培養温度は27〜32
℃、PHは中性付近で培養するのが望ましい。液
体培養で通常２日乃至４日培養を行なうと、本
発明の物質ハービマイシン・Ｂが培養液中に生
産される。ハービマイシン・Ｂの活性は、ダイ
コン種子の発芽抑制作用で確認し、また培養液
を酢酸エチルで抽出後、濃縮乾固しメタノール
に溶解し、アルカリ性にして、530nmの吸光度
により測定した。 (3) ハービマイシン・Ｂの精製単離培養液からの本発明の物質の精製単離に
は、一般に用いられる微生物代謝生産物の分離
精製法が利用可能である。本発明の物質は一般
の有機溶媒によく溶けるので、抽出には酢酸エ
チル、酢酸ブチル、酢酸イソアミル、クロロホ
ルム等が単独または組合わせて使用可能であ
る。次いで溶媒分画法、活性炭吸着、およびシ
リカゲルカラムクロマトグラフイー等の方法を
行なうことにより純化することができる。以下に精製単離の一例を示す。まず培養液を酢酸エチルで抽出し、速やか
に５％炭酸水素ナトリウム溶液、更に炭酸ナト
リウムと炭酸水素ナトリウムの飽和溶液で洗滌
して不純物を除き、得られる中性区分を濃縮し
て、メタノールに溶解した後、活性炭吸着を行
なう。次いで酢酸エチルで溶出し、その酢酸エチル
層に若干濁りがみとめられるまで濃縮し、５℃
に放置することにより、粗結晶が得られる。こ
れを酢酸エチルで再結晶を繰り返して純品が得
られる。 (4) ハービマイシン・Ｂを有効成分とする除草剤本発明の化合物、ハービマイシン・Ｂを有効
成分とする除草剤を調製するには、ハービマイ
シン・Ｂを公知の処方にしたがつて、不活性な
適当な担体と組合わせ、乳剤、水和剤、粉剤、
粒剤などの使用に便利な形態に適宜製剤するの
が良い。この場合用いられる担体は、固体の担体とし
ては、例えばクレー、タルク、ベントナイト、
硅藻土などが挙げられる。また液体の担体とし
ては、例えば水、アルコール類、アセトン、ジ
メチルホルムアマイドなどが挙げられる。製剤上の補取剤としては、乳化剤、分散剤、
浸透剤などの界面活性剤を適宜使用することが
できる。次に、ハービマイシン・Ｂを有効成分とする
除草剤の配合剤を具体的にあげて説明する。但
し、これら配合例のみに限定されるものではな
い。なお、以下の「部」は、重量部を示すもの
である。配合例１乳剤ハービマイシン・Ｂ 50部ジメチルホルムアマイド 35部トキシマル（三洋化成商品名） 15部以上を完全に混合溶解して乳剤とする。使用に
際しては、上記乳剤を水で50〜1000倍に希釈し
て、ハービマイシン・Ｂが10アール当り、0.01〜
１Kgになるように散布する。配合例２水和剤ハービマイシン・Ｂ 25部ジークライトＡ（商品名） 45部ソルポール5039（界面活性剤、東邦化学製）20部カープレツクス（固結防止剤） 10部以上を均一に混合粉砕して水和剤とする。使用
に際しては、上記水和剤を水で50〜1000倍に希釈
して、ハービマイシン・Ｂが10アール当り0.01〜
１Kgになるように散布する。 (5) ハービマイシン・Ｂを有効成分とする植物ウ
イルス病防除剤本発明の化合物、ハービマイシン・Ｂを有効
成分とする植物ウイルス病防除剤を調製するに
は、ハービマイシン・Ｂを公知の処方にしたが
つて、不活性な適当な担体と組合わせ、乳剤、
水和剤、粉剤などの使用に便利な形態に適宜製
剤するのが良い。この場合用いられる担体は、固体の担体とし
ては、例えばクレー、タルク、ベントナイト、
硅藻土などが挙げられる。また液体の担体とし
ては、例えば水、アルコール類、アセトン、ジ
メチルホルムアマイドなどが挙げられる。製剤上の補助剤としては、乳化剤、分散剤、
浸透剤などの界面活性剤を適宜使用することが
できる。次にハービマイシン・Ｂを有効成分とする植
物ウイルス病防除剤の配合例を具体的にあげて
説明する。但し、これら配合例のみに限定せれ
るものではない。配合例３水和剤ハービマイシン・Ｂ１部ジークライトＡ（商品名） 95部ソルポール5039（界面活性剤：東邦化学製）２部カープレツクス（固結防止剤：塩野義製薬製）
２部以上を均一に混合粉砕して水和剤とする。使用
に際しては、上記水和剤を水で希釈して所定濃度
に散布する。以下、実施例により本発明を詳細に説明する。実施例１グルコースが主成分であるワツクスマン寒天培
地に前培養したストレプトミセス・ハイグロスコ
ピクス（Streptomyces hygroscopicus）AM−
3672株（微工研菌寄第4335号）を、グルコース
2.5％、きな粉１％、塩化カリウム0.4％、酵母エ
キス0.25％、肉エキス0.1％、硫酸アンモニウム
0.5％、燐酸２カリウム0.02％、炭酸カルシウム
0.3％を含む培地（減菌前PH7.2）15ml（口径24
m/mの試験管）に接種し、30℃にて３日間振盪
培養を行なつて種培養液とした。この種培養液１
mlを上記と同一組成の培地100mlを含む500ml三角
フラスコに接種し、回転数240r.p.m.の振盪培養
機で30℃にて培養を行なつた。 72時間目に培養を停止し、精製を行なつた。こ
の培養液１を7000r.p.m.で遠心分離を行ない得
られた上澄液（PH6.6）を500mlおよび300mlの酢
酸エチルで２回抽出した。この抽出液を500mlの
５％炭酸水素ナトリウムで洗滌後、さらに500ml
および300mlの炭酸水素ナトリウムと炭酸ナトリ
ウムの飽和溶液で２回洗滌した。酢酸エチル層を濃縮乾固して450mgの粗粉末を
得た。この濃縮物を100mlのメタノールに溶解
後、活性炭「精製白鷺」１ｇを加えて１時間撹拌
した。これを過して得られた活性炭粉末を50ml
の酢酸エチルで抽出し、その酢酸エチル層を若干
濁りがみとめられるまで濃縮して５℃に放置する
と、粗結晶が得られた。これを繰返して再結する
ことにより、ハービマイシン・Ｂが結晶として
4.5mg得られた。このハービマイシン・Ｂの結晶
について、理化学的性質を測定したところ、第１
表の結果を得た。実施例２実施例１に示したと同様の組成の液体培地を、
30容のジヤーフアーメンター３基中に各20を
分注調整し、減菌後あらかじめ同一組成の培地で
72時間培養した種培養液を、各１基につき300ml
接種し、30℃にて43時間培養を行なつた（通気量
20／分、回転数350rpm、内圧0.5Kg/cm²）。この培養液をシヤープレス型遠心分離機
10000rpmで菌体を除去し、得られた上澄液を約
４分の１容に濃縮した後、10の酢酸エチルで抽
出した。この酢酸エチル層を５と２の５％炭
酸水素ナトリウム溶液および３の炭酸水素ナト
リウム飽和溶液で洗滌し、さらに７の蒸留水で
洗滌して不純物を除去し、酢酸エチル層を濃縮す
るとガム状物質が得られた。このガム状物質を２のメタノールに溶解し、
60ｇの活性炭「精製白鷺」を添加して１時間撹拌
した。これを過して得られた活性炭をメタノー
ル洗滌後、酢酸エチル2.5で抽出し、抽出液を
約150mlに濃縮して５℃に放置した。得られた粗
結晶を再結を繰り返して純品として、前述の第１
表の理化学的性質を有するハービマイシン・Ｂが
600mg得られた。実施例３縦15cm、横22cm、深さ６cmのプラスチツク製箱
に殺菌した洪積土壌を入れ、稲、ノビエ、メヒシ
バ、カヤツリグサ、コアガサ、スベリヒユ、イヌ
ガラシ、ハキダメキク、トウモロコシ、ダイズを
播種し、約1.5cm覆土した後、実施例２で得られ
た本発明の化合物ハービマイシン・Ｂおよび対照
薬剤の有効成分が、所定の割合となるように土壌
表面に散布した。散布の際の薬液は、前記配合例１の乳剤を所定
量の水で希釈したものを使用し、小型スプレーに
て土壌の全面に均一に散布した。薬液散布３週間
後に、稲および各種雑草に対する除草効果を下記
の判定基準に従い調査した。その結果を第２表に
示す。判定基準殺草率 90％以上…………………………５〃 70〜90％…………………………４〃 40〜70％…………………………３〃 20〜40％…………………………２〃５〜20……………………………１〃５％以下（ほとんど効果なし）０但し、上記の殺草率は、薬剤処理区の地上部生
草重および無処理区の地上部生草重を測定して下
記の式により求めたものである。殺草率（％）＝（１−処理区の地上部生草重／無処理区
の地上部生草重） ×100

【表】第２表の結果より、本発明の化合物ハービマイ
シン・Ｂの除草活性が大であり、稲、トウモロコ
シ、ダイズなどの作物に対して薬害がなく、コア
カザ、スベリヒユ、イヌガラシ、ハキダメギクな
どの広葉雑草に対して効力が高い。また一般に殺
草困難なカヤツリグサ科に対しても強い除草活性
を有している。即ち、ハービマイシン・Ｂは稲、
トウモロコシ、ダイズに対しては薬害がなく、広
葉雑草に対して強い除草活性を示しているので、
水稲陸稲作またはワタ畑、ダイズ畑で除草剤とし
て使用が可能である。実施例４タバコモザイクウイルス病感染阻止効果試験と
して、鉢に育成したタバコ〔品種：ニコチアナ・
グルチノーザ（Nicotiana glutinosa）〕を用い、
その１枚の葉の片側に所定濃度に調整したハービ
マイシン・Ｂ溶液を筆で塗布し、一方他の片側に
は水のみを塗布して無処理区とした。風乾し24時
間後、その両側にタバコモザイクウイルス液を、
カーボランダムと一緒にこすりつけて接種した。
接種後、葉の表面を水で洗い、そのまま25℃の温
室に静置し、３日後に生じた局部病斑数を数え、
阻害率を算出した。結果を第３表に示す。なお阻
害率の算出法は下記のとおりである。阻害率（％）＝（１−処理区の局部病斑数／無処理区の
局部病斑数） ×100

【表】【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の化合物ハービマイシン・Ｂの
紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液）を、第
２図は赤外部吸収スペクトル（KBr法）を、また
第３図はプロトン核磁気共鳴スペクトル（重ジメ
チルスルフオキシド）を示す。

Claims

【特許請求の範囲】１次の理化学的性質を有し、分子式
C₂₈H₃₈N₂O₈であらわされる新規化合物ハービマ
イシン・Ｂ。比旋光度：〔α〕^２５ _Ｄ＝＋109゜（Ｃ＝１、クロ
ロホルム）紫外部吸収スペクトル：第１図のとおり赤外部吸収スペクトル：第２図のとおりプロトン核磁気共鳴スペクトル：第３図のと
おり２ストレプトミセス属に属し、新規化合物ハー
ビマイシン・Ｂを生産する能力を有する放線菌菌
株を、炭素源、窒素源、無機塩類およびビタミン
等の栄養源を含む培地に好気的に培養し、培養液
中に新規化合物ハービマイシン・Ｂを生成蓄積せ
しめ、これを採取することを特徴とする新規化合
物ハービマイシン・Ｂの製造法。３ストレプトミセス属放線菌として、ストレプ
トミセス・ハイグロスピクス（Streptomyces
hygroscopicus）微工研菌寄第4335号を使用する
特許請求の範囲第２項記載の新規化合物ハービマ
イシン・Ｂの製造法。４新規化合物ハービマイシン・Ｂを有効成分と
して含有することを特徴とする農園芸用除草剤。５新規化合物ハービマイシン・Ｂを有効成分と
して含有することを特徴とする植物ウイルス病防
除剤。