JPS5810055A - 免疫吸着器の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、血液中に溶肩した高分子量物質を除去し、血
液を浄化する免疫吸着器の製造方法に関する。さらに詳
しくは、生体の免疫機能の異常に関連した疾患の患者血
液中に認められる有害な自己抗体などのイムノグロブリ
ンおよび／ｉたはその複合体を、安全かつ効率よく吸着
除去できる免疫吸着器の製造方法に関する。

周知の如く、血液中に発見する自己抗体などのイムノグ
ロブリンおよび／またはその複合体は、癌や慢性関節リ
ウマチ、全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患、あ
るいはアレルギー、臓器移植時の拒絶反応等の生体の免
疫機能と深く関係した疾患の原因および病態の進行と密
接な関係をもっていると考えられている。

最近、患者血漿中の抗原、自己抗体、免疫複合体といっ
た悪性物質を除去する上から、患者血漿と他の新鮮凍結
血漿外いしは、アルブミン製剤と入れ換える血漿交換療
法が施行され、かなりの症状軽減、進行防止、あるいは
治癒効果が確認されるように表ってきた。

しかしながら、この血漿交換療法には、（１）除去した
血漿を補充するための新鮮凍結血漿ないしは血漿成分の
大量かつ持続的な入手が困難なこと、（２）他人の血漿
を利用するため、肝炎ウィルス等の感染の危険が高いと
いつ九欠点があり、一般に畳及できるものではない。

また、患者血漿中の悪性物質の除去には、限外テ過膜を
用いる方法があり、血漿成分の補給を要しないという長
所を有しながらも、（１）分子量により、きれいに分離
することができないこと、（２）除去に分子量以外の選
択性がないため、血漿中の有用な物質も除去してしまう
こと、（２）ＩＩの目づまシによる濾過速度の低下、カ
ットオフ分子量の変動などの問題点を有している。

さらに、担体にプロティンＡ、ＤＮＡ、補体の第１成分
などの生体高分子や変性生体高分子、合成核酸ポリマー
などを担体に固定し、自己抗体およびその複合体を除去
する方法も提案されている。

しかしながら、これらの方法は、固定化物質が高価であ
るうえに、その活性が不安定なため、固定化時Ｏ堆扱い
、固定化後の保存等により、失活を起こし易い欠点があ
った。特に致命的な問題点は、その不安定性により、治
療器として必須の要件である無菌状態をもたらすために
、滅菌操作を行なうことができないことである。滅菌操
作の一つとして、オートクレーブなどによる湿熱滅菌が
あり、１００℃以上に加熱することにより、その目的が
達成されるが、その加熱に際し、固定化物質が失活し、
自己抗体などの被結合物質との結合能が失われる。

本発明者らは、これらの問題点を克服すべく、簡便かつ
安全で、患者血液もしくは血漿中より自己抗体などの悪
性物質を効率よく除去でき、かつ滅菌処理が可能な吸着
材を鋭意研究した結果、水酸基を有する不溶性担体に被
吸着性物質と結合可能な有機低分子化合物を結合させる
ことにより、目的とする被吸着物質の除去が可能である
と同時に、固定化物質の変性がなく、滅菌処理が容易に
行えることを見い出し、本発明を完成するに至った。こ
れにより、安全に体外循環を行なうことができ、実際の
臨床応用上の困難を打破することができた。

すなわち、本発明は、水酸基を有する不溶性担体に、被
吸着物質と結合可能な官能部位を含有する有機低分子化
合物を結合させたのち、被処理液の流通が可能な容器内
に充填し、さらに温熱滅菌処理を行うことを特徴とする
免疫吸着器の製造方法である。

本発明において用いられる担体としては、粒状体、繊維
状物体、焼結体など、その形状をとわずに使用すること
が可能であるが、製造の容易さ、輸送時の破損の少なさ
などの点から、粒子状担体が最も好ましい形状である。

本発明に用いられる担体としては、水に不溶性のもので
あって、かつ水酸基を有する架橋高分子化合物であって
、保水量が０．５〜６９／９、より好ましくは１．０〜
５．０９７９の範囲にあるものが好適に使用できる。保
水量は担体を生理食塩水と平衡にした時、単位乾燥担体
当シ、担体内に含みうる生理食塩水の量として定義され
る。保水量が６９、像より大きくなると、担体の機械的
強度が低下し、製造、滅菌処理、輸送などにおいて、粒
子の破壊がおこシ好ましくない。保水量が０．５９／９
よシ小さくなると、担体粒子の孔量および表面積が減少
するために、吸着能力が低下し好ましくない。

担体は血液、血漿などの体液といった高粘度、高溶質濃
度の液を高流速で長時間安定に流通できると同時に、高
い吸着性能を保持させうる丸めには、平均粒径２５〜２
５００μ、より好ましくは４０〜１０００μのものが好
適に用いられるが、血液を流通させるためには４００μ
以上であることが望ましい。

本発明に用いられる担体は、血漿蛋白、血球成分などと
の相互作用を抑制する丸めと同時に、イムノグロブリン
および／またはイムノグロブリン複合体と結合可能な部
位を有する有機化合物を多量に保持させるために、５ｍ
０１以上の水酸基密度を有する担体が好適に用いられる
。

本発明に用いられる担体は、線状高分子化合物と架橋性
化合物とで構成され、架橋性化合物を線状高分子化合物
に対し５重量部以上、より好ましくは５〜５０重量部使
用することＫより、好適な担体が得られる。架橋性化合
物が少々い場合には、担体の物理的強度が低下し、温熱
滅菌処理にも耐ええなくなシ好ましくない。架橋性化合
物が多すぎると、水酸基密度が低下し、好ましくない相
互作用が増加してしまうので好ましくない。

水酸基を有する親水性架橋高分子化合物は、水酸基を有
するモノマーの重合またはポリマーの化学反応による水
酸基の導入によシ合成できる。両者を併用して合成する
こともできる。′重合方゛法としては、縮合重合、ラジ
カル重合、イオン重合、−環重合等の公知の重合法を用
いる、ことができる。

架橋剤は重合時共重合により導入するとよい。またポリ
マーの化学反応（ポリマー間、ポリマーと架橋剤）で導
入してもよい。

一例をあげるとビニル第七ツマ−ま九はビニレン系モノ
マーと、ビニル系またはアリル系架橋剤との共重合によ
り作ることができる。この場合の親水性架橋高分子化合
物としては、架橋ポリビニＡ’７＃コ−Ｊｚ、架１１２
−ハイドロオキシエチルアクリレート、架橋２−ハイド
ロオキシエチルメタアクリレート等の架橋ビニル系ポリ
マーを例示することができる。

架橋剤として社、トリアリルイソシアヌレート、トリア
リルシアヌレート等のアリル化合物類、エチレングリコ
ールジメタアクリレート、ジエチレングリコールジメタ
アクリレート等のジ（メタ）アクリレート類、ブタンジ
オールジビニルエーテル、ジエチレングリコールジビニ
ルエーテル、テトラビニルグリオキザール等のポリビニ
ルエーテル類、ジアリリデンペンタエリスリット、テト
ラアリルキシエタンのようなポリアリルエーテル類、グ
リシジルメタクリレート等のグリシジルアクリレート類
を用いることができる。特に機械的強度、硬さ、微細孔
構造、化学的特性の面よりトリアリルインシアヌレート
単位が好ましい。

ｔ　ｉ必要に応じてビニルエステル、ビニルエーテル等
のコモノマーを共重合したものも用いることができる。

ビニル系またはビニレン系共重合体の場合には、カルボ
ン酸のビニルエステルとインシアヌレート環を有するビ
ニル化合物（アリル化合物）を共重合し、共重合体を加
水分解して得られるポリビニル７　ルコールのトリアリ
ルイソシアヌレ−［１１１体が機械的強度、硬さ、細孔
の安定性、化学的特性の面で特に良好な担体を与える。

有機低分子化合物を担体に結合する方法は、共有結合、
イオン結合、物理吸着、包埋めるい祉重合体表面への沈
殿不溶化等あらゆる公知の方法を用いることができるが
、結合物の溶出性よりみて、共有結合により保持、不溶
化して用いることが好ましい。そのため通常固定化酵素
、アフイニテイクロマトグラフイで用いられる公知の担
体の活性化方法および結合方法を用いることができる。

活性化方法を例示すると、ハロゲン化シアン法、エピク
ロルヒドリン法、ビスエポキシド法、ハロゲン化トリア
ジン法、ブロモアセチルプロミド法、エチルクロロホル
マート法、１．１’−カルボニルジイミダゾール法等を
あけることができる。本発明の活性化方法は、該有機低
分子化合物のアミノ基、水酸基、カルボキシル基、チオ
ール基等の活性水素を有する求核反応基と置換および／
まｔａ付加反応できればよく、上記の例示に限定される
ものではない。

本発ＷＡＫ用いられる、自己抗原や自己抗体などのイム
ノグロブリンもしくはそれらの複合体と結合可能な官能
部位を有する有機低分子化合物としては、温熱滅薗時輸
熱によシ、その分子構造を変化させないものでなくては
ならない。たとえば、慢性リウマチ患者の血液中に高車
で検出されるリウマチ因子とよばれる自己抗体およびそ
の複合体と強い結合能を有する、ヒト凝集グロブリンや
トリプトファンなどの芳香族環を含む疎水性有機低分子
化合物などがあり、また全身性エリテマトーデス患者表
ど自己免疫疾患の患者の血液中に高頻度で見出される抗
核抗体や抗ＤＮＡ抗体、およびそれらの複合体と強い結
合能を有する熱変性デオキシリボ核酸やプリン塩基また
はピリミジン塩基を構成要素として含む化合物もしくは
その誘導体などがあり、さらに、各種自己免疫疾患にお
いて検出されつる細胞膜表面に存在する糖鎖や糖蛋白に
対して強い結合能を有する糖または／およびオリゴ糖な
いしはその誘導体などがある。

本発明に用いられる有機低分子化合物としては、臨床時
に担体より遊離した場合に、体内において抗原性を有し
ない化合物であることが望ましく、分子量が１万以下、
特にポリペプチド化合物では分子量が１０００以下であ
ることが好ましい。本発明で担体に結合させる有機低分
子化合物の量は、担体１−当り０．１−９ないし５０ｍ
９の範囲であることが望ましい。保持量が低すぎる場合
には、被吸着物質に対する吸着能が低すぎて実用的でな
く、保持量が大きすぎる場合に社、吸着の特異性が低下
するおそれがあり好ましくない。

本発明の免疫吸着器は、上述の如き吸着材を被処理液Ｏ
流通が可能な容器内に充填保持せしめ、温熱滅菌を行っ
たものである。

第１図は本発明の免疫吸着器の１実施例を示すものであ
や、円筒１の一端開口部に、内側にフィルター２を張つ
九バッキング３を介して流体導入口４を有する中ヤップ
５をネジ嵌合６し、円筒１の他端開口部Ｋ、内側にフィ
ルター２′を張ったバッキング３′を介して流体導出口
４′を有するキャップ５′をネジ嵌合６′シ、フィルタ
ー２および２′の間隙に吸着材を充填保持させて吸着材
層７を形成してなるものである。

吸着材層７には、本発明の前記吸着材を単独で充填して
もよく、他の吸着材と混合もしくは積層してもよい。吸
着材層７の容積は、体外循環に用温熱滅菌の方法として
は、「日本薬局法」に規定されるように、オートクレー
ブを用いて、１１５゛０３０分、１２１°Ｃ２０分もし
くは１３１℃１５分の中から滅菌条件を適宜選択するこ
とが必要である。

上述の滅菌の温度条件にたえるよう、免疫吸着器の容器
本体表どの部材の材質を選択することが必要である。ま
た加熱により内部充填物に急速な体積変化がないように
、免疫吸着材の脱泡を充分に行なうことが必要である。

そのためには、ｌ＊吸着材を核吸着器に充填する前に、
あらかじめオートクレーブにて加熱処理をしておくこと
も重要である。また、免疫吸着器の容器の容積変化と、
内部充填液の体積変化との差をうちけすために、緩衝作
用を有するゴム球などを用いることも有効である。

本発明の吸着器を体外循環で用いる場合には、大路次の
二通りの方法がある。一つには、体内から取り出した血
液を遠心分離機もしくは膜量血漿分離器を使用して、血
漿成分と血球成分とに分離したのち、血漿成分を本発明
の装置に通過させ、浄化した後、血球成分と合わせて体
内にもどす方法であや、他の一つは体内から取り出した
血液を直接本発明の吸着器に通過させ、浄化する方法で
ある。

体液の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるい
は設備の設置状況に応じて、連続的に通液してもよいし
、また断続的に通液使用してもよい。

本発明の吸着器は、以上述べてきたように、体液中の自
己抗原、自己抗体などのイムノグロブリンないしはそれ
らの複合体をきわめて効率よく除去でき、かつ臨床上安
全に使用できるものである。

以下、実施例により本発明の実施の態様をより詳細に説
明する。

実施例１ ２−ヒドロキシメタクリレート１００ｇ、エチレングリ
コールジメタクリレート２５ｇ、グリシジルメタクリレ
ート１２ｇ、酢酸エチル１２４ｇ、ヘプタン１２４９、
ポリ酢酸ビニル（重合度５００）３．１９および２，２
′−アゾビスイソブチロニＦリル３．１９よりなる均一
混合液と、ポリビニルアルコール１重量％、リン酸二水
素ナトリウムニ水和物０．０５重量におよびリン酸水素
二す）　ＩＪウム十二水和物１．５重量％を溶解した水
４００−とをフラスコに入れ、十分攪拌したのち、６０
℃で１８時間、さらに７５℃で５時間加熱攪拌して懸濁
重合を行ない、粒子状共重合体を得たＯ濾過水洗後、分
級を行ない、平均粒径１８０μの担体を得た。

また、得られた粒子状担体の保水量は４．５９／ｇであ
り、その比表面積ａ　１０　ｄ／９であった。標準球状
タンパク質のリン酸緩衝食塩水を用いて測定した排除限
界分子量は約１５０万であった。

表１に示した有機低分子化合物を、水酸化ナトリウム水
溶液を用いてｐＨを９，５に調節した０、１Ｍ炭酸水素
ナトリウムに溶解し、担体１０−に加え、２５℃にて１
６時間振盪、反応させ、未反応の活性化官能基をグリシ
ンによりブロッキングしたのち、Ｆ別と生理食塩水によ
る洗浄をくりかえし、免疫吸着材を得た。

該吸着剤を第１図に示す如き４−の容器に充填し、免疫
吸着器としたのち、オートクレーブ中にて、１２１℃、
２０分の条件にて滅菌処理を行った。

該吸着器中の吸着材および内容液の光学顕黴鋺による観
察結果からは、滅菌処理による吸着剤の破裂、くだけな
どの破壊はみとめられなかった。

滅菌前後の免疫吸着器を用い、第２図に示すモデル実験
系を用いて吸着実験を行なった。

すなわち、容器（８）に全身性エリテマトーデス患者血
漿（９）を１５ｄ入れ、ポンプ（１０）により毎分０．
５−の流速で汲み出し、免疫吸着器（１１）に送り、ド
リップチャンバー（１２）およびサンプリング口（１３
）を経て、容器（８）に返送されるようにチューブ（１
４）を配設した。

上記実験系によシ、血漿を３時間循環させた後、血漿を
サンプリングし、血漿中の自己抗体である抗ＤＮＡ抗体
は血球凝集法、抗核抗体は酵素抗体法により測定した。

免疫複合体はポリエチレングリコール沈殿物の補体消費
量測定により求めた。

結果を表１に示した。

頃　　　ｖ−４ｃＩｉ　　　　の　　　啼　　　哨　　
　の実施例２ 実施例１と同様にして作成し九担体に、表２に示した各
種有機低分子化合物を保持させて免疫歇着材とした。慢
性リウマチ患者血漿を用い、実施例１と同様の吸着実験
を行った。

自己抗体であるリウマチ因子は、ラテックス凝集法およ
びワーラー・ローズ法により測定した０免疫複合体は実
施例１と同様にして測定した。

結果を表２に示した。

く−　　〜　　−呻　　＆０　　の　　ト　　■　　−
一実施例１と同様にして作成した平均粒径４５０μの担
体に、Ｌ−）リプドアアンメチルエステルを２８μｍｏ
４Ａｄ結合せしめた吸着材を充填し、滅菌処理を施した
免疫吸着器を用い、第２図に示す実験系にて慢性リウマ
チ患者血液１５−を３時間再循環を行ったところ、循環
後の赤血球、白血球の減少率は５Ｘ以下であり、血小板
の減少率は４０Ｘ以下であった。リウマチ因子（ラテッ
クス凝集）は８分の１に減少していた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の免疫吸着器の１例を示す断面図、第２
図は本発明の免疫吸着器を用いたモデル実験説明図であ
る。　　　″ １・・・円筒、２．２′・・・フィルター、３．３’・
・・バッキング、４，４′・・・体液導出入口１．５，
５′・・・キャップ、６．６′・・・ネジ、７・・・吸
着材。 第１図 第２ｖＡ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 水酸基を有する不溶性担体に、被吸着物質と結合可能な
   官能部位を含有する有機低分子化合物を結合させたのち
   、被処理液の流通が可能な容器内に充填し、さらに湿熱
   滅菌処理を行うことを特徴とする免疫吸着器の製造方法
   。