JPH06234636A - インターロイキン８を阻害するためのレフルノミドの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 インターロイキン８を阻害するためのレフル
ノミドの使用。 【効果】 Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−
５−メチルイソキサゾール−４−カルボキサミド（レフ
ルノミド）は、インターロイキン８が関与する疾患を予
防および治療するための有効な化合物で、医薬として使
用される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】レフルノミド〔式 Ｎ−（４−トリフルオ
ロメチルフェニル）−５−メチルイソキサゾール−４−
カルボキサミド参照〕は、すでに化合物として知られて
いる（ＥＰ ００１３３７６， ＥＰ ０２１７２０６，
ＵＳ ４３５１８４１，ＵＳ４９６５２７６）。すでに
開示されている化合物の抗炎症作用のほかに、この物質
は、また自己免疫疾患および移植拒否反応の治療に使用
するために適した免疫調節作用を示す。また、Ｎ−（４
−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒ
ドロキシクロトンアミド〔式参照〕と称されている代謝
産物がレフルノミドの治療作用の原因であることもすで
に知られている。

【０００２】

【化１】

【０００３】この知見に対応して、上述したレフルノミ
ドの薬理学的作用は、また、上述した代謝産物を投与す
ることにより得ることもできる〔Bartlett等，Agents a
nd Actions 32 (1991) 10〜21〕。

【０００４】Axton等〔J. Chem. Soc. Perkin Trens. 1
(1992) 2203頁以下〕は、レフルノミドが活性作用を示
さずそしてその代りに、この主な代謝産物が生理学的作
用を示すという理由を記載している。文献〔Bartlett
等，Agents and Actions, 32 (1991) 10〜21〕および本
発明者等自身の実験の両方において、以下に詳述する治
療作用は、レフルノミド代謝産物を投与することによっ
ては得ることはできないということを証明することがで
きた。すなわち、本発明によって、レフルノミドはヒト
の血球からのシトキンの合成および遊離に対して強力な
阻害作用を示すが、これに反して、レフルノミド代謝産
物はこの有利な作用を示さないということが見出され
た。

【０００５】本発明により使用された実験条件下におい
ては、認め得るレフルノミドの代謝は行われず、そして
阻害作用はもっぱら物質レフルノミドに帰する。シトキ
ンは、その構造がすでに知られている種々な生物学的に
高度に強力なペプチドの一つである。同様に、シトキン
が伝達物質として内因的に誘発および合成されるという
ことがすでに知られている。これらのシトキンの過度な
レベルは多数の疾患の発生または突発の原因となり得る
ので、ヒトまたは動物の体内におけるシトキンの抑制は
医薬的に重要なことである。このような疾患は、体の器
官、細胞、組織および受容体系に対する、すでに存在す
るかも知れないシトキンの望ましくない作用を阻害する
医薬により治療することができる。しかしながら、レフ
ルノミドの使用がシトキンの実際の合成および遊離を阻
害し、その結果シトキンは生じることもなく、従って疾
患の出現が非常に初期の段階で防止され得るということ
は、本発明の有意な利点である。

【０００６】本発明は、インターロイキン８（ＩＬ−
８）と称せられるシトキンが関与するヒトおよび動物の
体の疾患の予防および治療用の医薬を製造するためのレ
フルノミドの使用に関するものである。さらに、本発明
はこのような疾患を治療するためのレフルノミドの使用
に関するものである。

【０００７】本発明は、また、医薬的に適当な且つ生理
学的に許容し得る賦形剤、希釈剤および（または）他の
活性化合物および補助物質のほかに、有効な量のレフル
ノミドを含有する医薬に関するものである。本発明は、
また、レフルノミドを、医薬的に適当な且つ生理学的に
許容し得る賦形剤、および必要に応じてさらに他の適当
な活性化合物、添加剤または補助物質と一緒に、適当な
製剤形態にすることからなるインターロイキン８が関与
する疾患を予防および治療するための医薬を製造する方
法に関するものである。ＩＬ−８およびその疾患−原因
作用は、Ibelgaufts，Lexikon Zytokine(Cytokine Dict
ionary)，Medikon Verlag, Munich 1992および該文献に
引用されている文献に詳細に記載されている。

【０００８】ＩＬ−８の種々な生理学的作用のために、
ＩＬ−８は、好中球化学走性因子（ＮＣＦ）または顆粒
球化学走性ペプチド（ＧＣＰ）または好中球活性化因子
（ＮＡＦ）またはＴ−細胞化学走性因子（ＴＣＦ）とし
て知られている。ＩＬ−８の種々な生理学的作用は、ま
た例えばYoshimura等、J. Immunol. 139(1987)788；Lar
sen等、Science 243(1989)1464；Schroeder等、J. Immu
nol. 139(1987)3474；Peveri等、J. Exp. Med. 167(198
8)1547；Djeu等、J. Immunol. 144(1990)2205；Farina
等、Faseb J. 3(1989) A 1333；Furuta等、J. Biochem.
106(1989)436；ならびにVan Damme等、J. Exp. Med. 1
67(1988)1364に詳細に記載されている。すなわち、この
シトキンは、好中球系における化学走性および過酸化物
陰イオンおよびリソソーム酵素の遊離の誘発剤としての
広いスペクトルの活性を有している。ＩＬ−８は、ま
た、内皮細胞に対する白血球の粘着を阻害しながら、好
塩基細胞およびＴリンパ球の化学走性活性を刺激する。
ＩＬ−８を腹腔内注射すると好中球増加を生ずる。ＩＬ
−８活性化された白血球は、滑膜から軟骨細胞に移行す
ることができそしてそこにおいて関節炎の発生の主たる
役割を果す。また、ＩＬ−８は、急性損傷の初期段階に
おいてさえも、そしてまた、特に皮膚に対する比較的小
さな損傷後においてさえも、血液中で検出することがで
きるということを強調しなければならない。このほか
に、ＩＬ−８は、皮膚細胞に対するミトゲン作用を有し
そして結果として皮膚癌を生ずることになる。

【０００９】それ故に、ＩＬ−８が、特に、種々な疾患
および疾患の症候に対する引き金としての中心的位置を
占有していることは明らかである。容易に治癒しない
傷、関節炎および皮膚癌は、現在全く治療されないかま
たは不十分に治療されるにすぎない非常に重大な疾患で
ある。このことからも、発見されたレフルノミドの作用
は、非常に重要なことである。さらに、本発明は、軟骨
破壊、容易に治癒しない傷または皮膚癌のような疾患
〔ElfordおよびCooper, Arthritis and Rheumatism, 34
(1991) 325頁〕を予防および治療するためのレフルノ
ミドの使用に関するものである。慣用のやり方で製造さ
れたレフルノミドの医薬形態および医薬製剤は、また、
特にこれらの疾患を治療するために使用することができ
る。

【００１０】適当な固体または液状の医薬製剤形態は、
例えば顆粒、粉剤、被覆錠剤、錠剤、（ミクロ）カプセ
ル、坐剤、シロップ、ジュース、懸濁液、乳濁液、滴下
剤または注射用溶液、ならびに活性化合物の放出を延長
する製剤でありそしてこれらの製剤においては、慣用の
補助剤、例えば賦形剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、膨潤
剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤または可溶化剤が
使用される。しばしば使用される補助物質は、例えば炭
酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニト
ールおよび他の糖類、タルク、牛乳蛋白質、ゼラチン、
殿粉、セルロースおよびその誘導体、動物および植物
油、ポリエチレングリコール、および溶剤、例えば滅菌
水および一価または多価アルコール、例えばグリセロー
ルである。

【００１１】ヒトの医薬においては、患者（体重７０k
g）１人当り３〜５mg、好ましくは１０mg、２５mgまた
は５０mgの投与量単位が投与される。もし医薬的に必要
である場合は、投与量単位は、患者１人につき１００m
g、２００mgまたは５００mgまで増量できる。投与は、
１日当り１回〜１週間当り１回、好ましくは１日当り３
回または４回まで行われる。投与は、経口的に、腹腔的
に、静脈内的に、関節内的にまたは経皮的に慣用のやり
方で行うことができる。家畜医薬において投与される相
当する投与量は、これらのデータから容易に計算するこ
とができる。

【００１２】最後に、上述した医薬製剤形態の製造にお
いて、レフルノミドは、また、他の適当な活性化合物、
例えば抗ウリコパテック剤（antiuricopathic agen
t）、血小板凝集阻害剤、鎮痛剤および他のステロイド
性または非ステロイド性抗炎症剤と一緒に処方すること
もできる。レフルノミドを決して認め得る程度にその代
謝産物に代謝しない、単離された血球フラクション（単
核細胞）に対するレフルノミドの作用を実験的に証明す
ることができた。

【００１３】実施例１ 新しく単離されたヒトのクエン酸塩添加血液からの単核
細胞を、既知の標準操作〔Tiku等、J. Immunol. 136／1
0 (1986) 3677〕により強化した。

【００１４】新しく製造したヒトのクエン酸塩添加血液
１０mlを、リンホプレプ（Lymphoprep^R〔Molter GmbH,
Heidelberg〕）１５mlで下張り（underlaid）しそして
それから２０℃で４０分４００×ｇで遠心分離した。相
境界において白色リングとして目に見える細胞フラクシ
ョンを、注射器で除去し、ＰＭ−１６緩衝液（ServaFei
nbiochemica GmbH ＆ CO. KG, Heidelberg）で希釈
〔１：１（v/v）〕しそしてそれから上述したように１
０分間遠心分離した。上澄液を、予めＬ−グルタミン３
００mg／リットルを加えたＲＰＭＩ １６４０緩衝液（G
ibco, Berlin）１０mlで洗浄した。洗浄した細胞フラク
ションを、予めＬ−グルタミン３００mg／リットル、Ｈ
ＥＰＥＳ（Gibco，Berlin）２５ミリモル／リットル、
ストレプトマイシン０.１ｇ／mlおよびペニシリン０.１
ｇ／mlを加えたＲＰＭＩ １６４０ １mlにとった。細胞
カウンター（ＩＴ型，Coulter Diagnostics, Krefeld）
を使用して、リンパ球約９０％および単球約１０％から
なる細胞懸濁液を、約５００万の細胞／mlに調節した。
既知の乳酸脱水素酵素法を使用して、阻害実験の前後に
細胞生育性を監視した。この場合において、生育性の変
化は観察されなかった。

【００１５】細胞のＩＬ−８の合成および遊離は、ジメ
チルスルホキシド／水〔１：１０（v/v）〕０.０１ml中
のリポ多糖類〔Salmonella abortus equi, Sigma GmbH,
Deisenhofen〕５００ngの溶液を、上述した細胞フラク
ション０.４８mlに加えることにより誘発した。同時
に、ジメチルスルホキシド０.０１ml中のレフルノミド
またはレフルノミド代謝産物の溶液（それぞれの場合に
おける最終濃度については、表１参照）を細胞フラクシ
ョンに加えそして混合物を、商業的に入手できるインキ
ュベーター中で３７℃で１時間放置した。０℃に冷却し
た後、試料をベンチ遠心分離機で１分間遠心分離しそし
てそれぞれの場合において、上澄液の一部０.０２５ml
を、“サンドイッチ”酵素免疫試験キット（Biermann G
mbH, Bad Nauheim）を使用して、製造業者の使用説明書
にしたがって、ＴＮＦアルファ含量について検査した。
レフルノミドまたはその代謝産物の添加なしに、比較対
照値を測定しそして１００％とした。特に、ＴＮＦアル
ファレベルに対するジメチルスルホキシドの考えられる
影響は、適当な比較測定により除去した。

【００１６】さらに、レフルノミドを含有する試験試料
の一部を、時間−依存的な方法で除去しそして高圧液体
クロマトグラフィー（Ｃ−１８カラム３.９×１５０m
m，Waters GmbH, Eschborn，FRG；溶離剤：メタノール
６００ml／水３５０ml／テトラヒドロフラン５０ml／燐
酸１ml；流速１平方吋当り２０００ポンド（psi）で０.
７ml／分；２７３nmの紫外線範囲で検出）を使用して、
レフルノミドまたはレフルノミド代謝産物の含量につい
て試験した。使用した条件下において、レフルノミド
は、極めて徐々にその代謝産物に代謝されるにすぎず、
約１０時間の半減期を有することが見出された。

【００１７】

【表１】 表１における実験は、レフルノミド代謝産物は、ＩＬ−
８レベルに対して特に作用しないが、これに反して、Ｉ
Ｌ−８レベルは、レフルノミドの添加によって明らかに
低下することを示す。

【００１８】実施例２ Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル
イソキサゾール−４−カルボキサミドの製造

【化２】 アセトニトリル２０ml中の５−メチルイソキサゾール−
４−カルボニルクロライド０.０５モル（７.３ｇ）の溶
液を室温で、アセトニトリル１５０ml中の４−トリフル
オロメチルアニリン０.１モル（１６.１ｇ）の溶液に滴
加する。２０分間撹拌した後、沈殿した４−トリフルオ
ロメチルアニリン塩酸塩を吸引濾去しそしてそれぞれの
場合においてアセトニトリル２０mlを使用して２回洗浄
しそして合した濾液を減圧下で濃縮する。収量：白色の
結晶性Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−
メチルイソキサゾール−４−カルボキサミド（レフルノ
ミド）１２.８ｇ。

【００１９】実施例３ 腹腔内投与後の急性毒性 試験物質の腹腔内投与後の急性毒性を、ＮＭＲＩマウス
（２０〜２５ｇ）およびＳＤラット（１２０〜１９５
ｇ）を使用して試験した。試験物質を、ナトリウムカル
ボキシメチルセルロースの１％の強度の溶液に懸濁し
た。試験物質の種々な投与量を、マウスには体重１kg当
り１０mlの容量でそしてラットには体重１kg当り５mlの
容量で投与した。１０匹の動物を１投与量当り使用し
た。３週間後、急性毒性を、LitchfieldおよびWilcoxon
の方法によって測定した。結果は、表２に要約する通り
である。

【００２０】

【表２】

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 インターロイキン８が関与する疾患の予
   防および治療用の医薬を製造するためのＮ−（４−トリ
   フルオロメチルフェニル）−５−メチルイソキサゾール
   −４−カルボキサミドの使用。
2. 【請求項２】 軟骨破壊、容易に治癒しない傷また皮膚
   癌のような疾患を予防および治療するための請求項１記
   載の使用。
3. 【請求項３】 Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニ
   ル）−５−メチルイソキサゾール−４−カルボキサミド
   の有効な含有量を有する、インターロイキン８が関与す
   る疾患を予防および治療するための医薬。
4. 【請求項４】 軟骨破壊、容易に治癒しない傷または皮
   膚癌のような疾患を予防および治療するための請求項３
   記載の医薬。
5. 【請求項５】 Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニ
   ル）−５−メチルイソキサゾール−４−カルボキサミド
   を、生理学的に許容し得る賦形剤およびさらに他の活性
   化合物、添加剤または補助物質と一緒に、適当な製剤に
   することからなる請求項３または４記載の医薬の製法。