JPH04504726A - アナフィラキシーの遅反応性物質に対する拮抗薬としてのリポキシンａ↓４およびその誘導体の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 アナフィラキシーの遅反応性物質に対する拮抗薬としてのりホキシンＡ４および その誘導体の使用 本発明は政府の援助と共になされたものであり、政府は本発明について一定の権 利を有する。

発明の分野 本発明は血管拡張薬の分野に属する。特に本発明は、リボキシンＡ４　（ＬＸＡ ４）もしくはこの化合物の誘導体を含有する医薬組成物について、またロイコト リエンが仲介する血管収縮を緩和するための、ロイコトリエンＤ４（ＬＴＤ４） 受容体拮抗薬としてのそれらの使用にに関する。これらの組成物および方法は、 動物における奮進、血管反応性および炎症、とりわけアナフィラキシ−およびア レルギー反応の治療に有効である。

発明の背景 アラキドン酸（エイコサテトラエン酸）のリポキノゲナーゼ産物は、様々な生物 活性を示す（Ｓａｍｕｅｌｓｓｏｎ、　Ｂ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　２３７：１１ ７１−１１７６　（１９８７））。リポキンゲナーゼ由来の主要なアラキドン酸 代謝産物は、少なくとも４つ同定されている。即ち、ヒドロペルオキシド（例、 １２−ＨＰＥＴＥ、　１５−ＨＰＥＴＥ）　、非ペプチド性ロイコトリエン（例 、ＬＴＤ４）、硫化ペプチドロイコトリエン（例、ＬＴＣ４、ＬＴＤ　４および ＬＴＥ　４　）およびリポキシンである。一般にこれらの代謝産物は、リポキシ ゲナーゼ由来のエイコサノイド（ＬＤＥ）としてまとめらている。しかし、各代 謝産物は異なった生物活性特性を有している。

リボキシン（リポキシゲナーゼ相互作用産物）は、最近になって初めて特徴づけ られた、アラキドン酸由来の中間代謝物の新規な−３９（１９８４））。リボキ シンの化学構造の際立った特徴は、トリヒドロキシ共役テトラエン構造の存在で ある。少なくとも２つの、生物ィコサテトラエン酸）およびＬ　Ｘ　Ｂ　４　（ （５ジ１４Ｒ，１５巨）−５，１４，１５−トリヒドロキン−６，１０，１２− ｔｒμ止−８−ψｊ−エイコサテトラエン酸）　（Ｓｅｒｈａｎ、Ｃ，Ｎ等、Ｊ 、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２６１：１６３４０−１６３４５　：　５ｅｒｈ ａｎ、　Ｃ，Ｎ等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　 ８３：１９８３−１９８７　（１９８６））。

リポキンンの生物学的役割あるいは生物活性についてはほとんどわかっていない 。喘息、関節炎、肉体的外傷および放射線被曝に見られるような、中性好性白血 球の活性化を通して仲介される炎症を特徴とする疾患を治療するために、ＬＸＢ ４を用いることが提案されている（Ｍｏｒｒｉｓ、　Ｊ、　、ｌｊ、　Ｓ、　４ ５７６７５８　；　Ｓａｍｕｅｌｓｓｏｎ、　Ｂ、等、Ｕ、　Ｓ、　４５６０５ １４）。

Ｌ　Ｘ　Ａ、は肺平滑筋（モルモット肺）を収縮させるが、モルモ・ソトの回腸 もしくは気管は収縮させず、また１μＭよりも低い濃度て血管平滑筋を弛緩（拡 張）させることが示された（Ｄａｈｌｅｎ、　Ｓ、　−Ｅ等、Ａｃｔａ　Ｐｈｙ ｓｉｏｌ、５ｃａｎｄ、　１３０：６４３−６４７　（１９８７））　ｏ　”ム スターの頬嚢へのＬＸＡ４の局所的投与は顕著な細動脈拡張を誘発するが、細静 脈の直径を変化させない（Ｄａｈｌｅｎ、　Ｓ、−Ｅ、等、Ａｄｖ、　Ｅｘｐｅ ｒ、　Ｍｅｄ、　Ｂｉ。

１．２２９：第９章、ｐｐ、　１０７−１３０．１９８８）。ＬＸＡ４が中性好 性白血球にスーパーオキサイドラジカルを発生させ、ニラスターセを放出させ、 また白血球による走化性を促進させることが示された（Ｓｅｒｈａｎ、　Ｃ，Ｎ 。

等、“プロスタグランジン、ロイコトリエンおよびリポキンン”、Ｊ、　Ｍ、　 ＢＢｉｌｅｙ、編、円ｅｎｕｍ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ｐｐ。３−１６．１９ ８５）。

ＬＸＢ４誘導体のような化合物の、中性好性白血球の炎症反応の阻害における有 効性を評価するための実験モデルを提供するために、ＬＸＡ４を用いて中性好性 白血球の炎症反応を誘発することが提案されている（Ｓａｍｕｅｌｓｏｎ、　Ｂ 　等、Ｕ、Ｓ、４５６０５１４）。またＬＸＡ４がＬＴＤ、受容体に結合するこ とによってその生物効果のいくつかを発揮しくＪａｃｑｕｅｓ、　Ｃ，Ａ、　Ｊ 　等、ＢｒＪ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　９５：５６２−５６８　（１９８８）） 、ＬＸＡ、とＬＴＤ４がおそらく共通の受容体を均等に共有する（Ｌｅｆｅｒ、 　Ａ、　Ｍ、等、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８５ ：８３４０−８３４４　（１９８８））ことも示唆された。

アナフィラキシ−の遅反応性物質（ＳＲＳ−Ａ）は、動物におけるアナフィラキ シ−およびアレルギー反応の生理学的メディエータであると考えられている。５ Ｒ３−Ａは主として、ＬＤＥロイコトリエン類ＬＴＣ４およびＬＴＤ４の混合物 から構成されている。

また５Ｒ３−Ａの放出は、粘液毛様体および心血管系の障害の潜在的原因として 関連づけられてきた。５Ｒ３−Ａによって誘発される気管支平滑筋の収縮は、ア レルギー性喘息における換気機能の損傷をもたらす。５Ｒ９−Ａによって誘発さ れる粘液クリアランスの損傷は、喘息を伴う患者に見られる気道の粘液閉塞およ び気管支の反応性亢進に至る。５Ｒ３−Ａによって誘発される肺の高血圧症は、 肺性心、慢性の気管士炎および肺気腫においである役割を果す。５Ｒ３−、Ａに よって誘発される負度カ性、冠状血管収縮および血管透過性の増大は、心血管系 に対する影響を有する。また５ＲＳ−Ａは、糸球体の炎症性損傷の機能性の結果 の仲介に関与する（Ｂａｄｒ、　Ｋ、　Ｆ、等、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、 　８１：１７０２−１７０９　（１９８８））。

５ＲＳ−Ａの阻害および５Ｒ３−、への生理学的結果の軽減は、５Ｒ８−４への 放出の遮断や、放出された５ＲＳ−Ａの作用の遮断によって起こり得る。したが って上記の障害を軽減し、治療するために、５Ｒ５−Ａの作用の阻害を用いるこ とができるであろう。

ＬＴＤ４受容体をＬＴＤ４受容体拮抗薬て遮断することによって、５Ｒ３−Ａに 対する生理学的応答を阻害することが知られている。５ｈｅａｒｄ等は、ＬＴＤ ４受容体拮抗薬として作用することによって５Ｒ３−Ａ応答を阻害する、合成化 合物ＦＰＬ　５５７１２およびその誘導体について記述した（Ｓｈｅａｒｄ、　 Ｐ、等、“抗喘息薬の開発”Ｄ、　Ｒ，Ｂｕｃｋｌｅ等、編、Ｂｕｔｔｅｒｗｏ ｒｔｈ、Ｌｏｎｄｏｎ、　１９８４．　ｐｐ、　１３３−１５８）　ｏ　しかし ＦＰＬ−５５７１２は短時間作用形である。ＦＰＬ　５５７１２と構造上の類似 性を保つ多（の拮抗薬（Ｆｌｅｆｓｃｈ、　Ｊ、　Ｈ，、等、Ｊ、　Ｐｈａｒｍ ａｃｏｌ、　ＥｘｐＴｈｅｒ、　２３３：１４８　（１９８５）　：　Ｙｏｕｎ ｇ、　Ｒ，Ｎ、等、Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、　２９：１５７３　（１９８６）　 ：　Ｏ’　Ｄｏｎｎｅｌｌ、　Ｍ、等、Ａｎｎ、Ａｌｌｅｒｇｙ　２７８　（１ ９８５））を含む、他の５ＲＳ−Ａの拮抗薬が報告されている（例えば、Ｇｌｅ ａｓｏｎ、　Ｊ、　Ｇ、等、ＬはＬ　Ｔ　Ｄ　４受容体に対して低い親和性を示 し、経口的に不活性で生物学的利用能が低い。現在知られているＬＴＤ４受容体 拮抗薬の情勢が最近概説された（Ｌｅｆｅｒ、　Ａ、　Ｍ、　、　ＩＳＩ　Ａｔ １ａｓ　Ｓｃｉ、　（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）２：１０９−１１５　（１９ ８８）　：　Ｃａｓｈｍａｎ、　Ｊ、　Ｒ等、Ｄｒｕｇｓ　ｏｆ　Ｔｏｄａｙ　 ２４ニア２３−７３２ヒト中性好性白血球の研究により、これらの細胞を１５− ＨＥＴＥおよびカルシウムイオノフオアＡ２３１８７にさらした後に起こる、ロ イコトリエンおよびリボキシンの生成の間の逆の関係が明らかになった（Ｓｅｒ ｈａｎ、　Ｃ，Ｎ、　、“プロスタグランジン、トロンボキサンおよびロイコト リエン研究の進歩”、Ｓａｍｕｅｌｓｓｏｎ、Ｂ、等、（編）、Ｒａｖｅｎ　’ Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、第１８巻）。さらに、活性化された白血球（ 例えば、細胞透過代謝の間）によって提供されると考えられる外因性のＬＴＡ４ 源から、糸球体間質細胞がリボキシンを生産できるということを最近の結果が示 している（Ｇａｒｒｉｃｋ、　Ｒ，、等、Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ、　Ｐｒｏｃｅ ｅｄｉｎｇｓ　２１ｔｈ、　Ａｎｎｕａｌ　Ｍｅｅｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａ ｍｅｒｉｃａｎ　５ｏｃｉｅｔｙ　。

ｆ　Ｎｅｐｈｒｌｏｇｙ、第２５巻、ｐ、２９２　（１９８９））　。したがっ てこれらの化合物の局所レベルは、おそらく白血球の糸球体への浸潤に引き続い て上昇するであろう。

天然の産物にもとづ＜ＬＴＤ４受容体拮抗薬の使用は、おそらくその天然の産物 が合成阻害剤よりも高い生物学的利用能と、より低い毒性を伴って、ロイコトリ エンによって誘発される生理学的損傷の生理学的結果を軽減するという点で、完 全に合成による化合物を使用するより好ましいてあろう。したがって天然の化合 物、もしくはその誘導体である５Ｒ３−Ａ拮抗薬の開発が望ましい。

発明の要約 本発明は、５Ｒ３−Ａに伴う血管収縮の制御の長年の必要性に答えて開発された 。現在ＬＴＤ４受容体の拮抗薬として使用されている化合物が、天然の産物とは 無関係な化学構造から導かれたということを認識して、本発明者らは天然の５Ｒ Ｓ−Ａ拮抗薬、もしくは天然の拮抗薬から導かれた構造をもつ化合物によって、 より少ない副作用とより高い生物学的利用能が得られると考えた。本発明は５Ｒ Ｓ−Ａ、とりわけＬＴＤ、の天然の拮抗薬を含有する組成物に関する。さらに本 発明は、動物において５Ｒ３−Ａ、特にＬＴＤ４を阻害する方法に関するもので あり、その方法にはその動物に対する拮抗有効量のＬ　Ｘ　Ａ４、もしくはその 活性な誘導体の投与が含まれる。

これらの拮抗薬および方法は、例えばデ血、血管反応性、特に血管収縮、炎症、 アナフィラキシ−およびアレルギー反応のような、ＬＴＤ４受容体が寄与する役 割を果す生理学的な障害の治療に有効である。

図面の簡単な説明 図１は、ラット糸球体間質細胞に対する［３Ｈ］Ｌ”ｒＤ、（１０μＭ）の結合 の、ＬＴＤ４（■）およびＬＸＡ４　（ム）による阻害率（％）の図表である。

各点は、二連で行った４回の実験の平均値を表す。

図２は、ＬＸＡ４およびＬＴＤ４に応答してラット間質細胞内に生成するイノシ ト−ル三リン酸（ＩＰｓ）　、および１００倍濃度のＳＫＦ　１０４３５３　（ ＳＫＦ）の存在下での、その完全な停止の図表である。右端の列は、細胞を１１ ００ｎ　ＬＸＡ４に１０分間前もってさらすことによって起こる、ＬＴＤ４によ って誘発されるＩＰ３生成図３は、ＬＸＡ、非存在下（■）およびＬＸＡ４存在 下（＝）で、投与量を増加させながら腎内勤脈に投与したＬＴＤ、に応答する糸 球体浸潤速度（ＧＦＲ，Ａ図）、および腎血漿流Ｊ１　（ＲＰＦ、Ｂ図）の減少 率（％）の図表である。平均絶対値については表１を参照の本明細書および請求 事項の、より明解で首尾一貫した理解を提供し、用語に与えられる範囲を明らか にするために、以下の定義を打体を意味し、体内でＬＸＡ４もしくはその活性な 誘導体に変換されるＬＸＡ４の合成類縁体、およびその医薬的に適切な塩を含む 。

医薬的に許容され得る塩　“医薬的に許容され得る塩”という用語は、医薬的に 許容され得る酸もしくは塩基（例えば、硫酸、塩酸、硝酸、リン酸などのような 酸、あるいは水酸化アルカリ金属、水酸化アルカリ土類金属、水酸化アンモニウ ム、水酸化アルキルアンモニウムなどのような塩基など）から形成される塩を意 味する。

動物　“動物”という用語は、その動物中てＬＸＡ４かＬＴＤ４受容体応答を阻 害し得るすべての動物を意味する。このような動物のうち最も重要なものはヒト であるが、本発明はこれに限定されず、本発明の有益な効果の及ぶあらゆる動物 を治療することが、本発明の意図するところに含まれる。

受容体　“受容体“という用語は一般に、ＬＤＥ、ホルモンおよび神経伝達物質 のような細胞の伝達物質のある群が、それらの伝達物質に対する生化学的および 生理学的応答が始まる前に、まず相互作用しなければならない機能性の高分子、 もしくは高分子の複合体を意味する。したがって“受容体”という用語は、本明 細書で用いられる場合、化学物質もしくは高分子化合物がその効果を開始するた めに特異的に結合する、あらゆる細胞の作用上の高分子（もしくは高分子複合体 ）を意味するために用いられる。

アゴニスト　“アゴニスト”という用語は一般に、天然の伝達物質に対する適切 な生理学的受容体との相互作用によって、天然の化学伝達物質の効果の少なくと も幾つかを模倣する化学薬剤を意味する。

拮抗薬　“拮抗薬”という用語は一般に、天然の化学伝達物質の受容体に対して 結合可能であるが、その受容体において固有の生理学的活性を有さず、その受容 体の活性化によって仲介される生理学的応答を惹起しない化学物質を意味する。

当業者に知られているように、拮抗薬の結合は、天然の配位子の効果もしくはア ゴニストの妨害をもたらす。本明細書で用いられる場合、それ自体は固有の薬理 学的活性を有しないが、受容体の結合部位を競合することによって特定の伝達物 質の作用を阻害して、影響を生じる化合物を拮抗薬と呼ぶ。したがって、５Ｒ３ −Ａのような特定の薬剤に対する応答を“阻害する”方法とは、特定の５Ｒ８− Ａ受容体に対する５Ｒ８−Ａの自然な結合を、その受容体の活性化を遮断するた めに妨害するような方法である。

応答　“応答”という用語は、ＬＴＤ４受容体と化学薬剤の相互作用に伴う影響 を測定し、記述するために用いることができる、あらゆるパラメーターの変化を 意味する。この応答は、血管反応性、腎糸球体動力学あるいは肺機能の変化のよ うな、身体的変化でもよいし、また、例えば中間代謝物（例、ＩＦ５）あるいは タンパク質のレベル、受容体、酵素あるいはゲノムの発現の変化のような、分子 的変化でもよい。

制御　応答の“制御”、例えば血管収縮の制御、という用語は、その応答の改善 、反転、制御あるいは阻害が、望ましい薬剤の抗応答有効量の投与の結果である ような、応答の改善、反転、制御あるいは阻害を意味する。したがって抗血管収 縮剤の抗血管収縮有効量の投与は、血管収縮の改善、反転、制御あるいは阻害を もたらす。

このような投与は、その応答に伴う医学的障害、疾患あるいは症状を改善するた めに、動物におけるその応答を医学的に治療するために用いることができる。

薬剤　“薬剤”、例えば抗血管収縮薬剤、という用語は、言明された受容体もし くは応答と相互作用するあらゆる化合物を包括的に意味する。

発明の詳細な説明 本発明は、Ｌ　Ｘ　Ａ４およびその誘導体の有効なレベルの投与による、ロイコ トリエンによって誘発される血管収縮に対する治療法を含んでいる。本発明の化 合物はＬＴＤ、受容体の拮抗薬であり、ＬＴＤ４受容体の作用を阻害する。この ことは、ロイコトリエンによって誘発される血管収縮が、寄与するか、もしくは 原因として働くメディエータとして関連する障害あるいは疾患状態、例えば、５ ＲＳ−１への放出がもたらす障害（ただしこれらに限定されない）、特に喘息、 アナフィラキンー反応、アレルギー反応、ショック、循環疾患状態および炎症反 応、例えば、リウマチ様関節炎、痛風、乾せん、アレルギー性鼻炎、成人の呼吸 困難症候群、クローン病、内毒素ショック、外傷性ショック、出血性ショック、 腸の虚血性ショック（即ち、内臓動脈閉塞ショック）、腎糸球体疾患、良性の前 立腺肥大、炎症性腸疾患、および／または、心筋の虚血症および梗塞、循環ショ ック、脳損傷、全身性紅斑性狼癒、および高血圧症、特に本態性高血圧および悪 性高血圧の治療および予防において、本発明の化合物を有効たらしめる。

本発明の方法は、麻酔したラットの腎動脈へのＬＸＡ４の選択的投与が、両線動 脈の血管拡張応答を誘発し、糸球体毛細血管の限外濾過係数（Ｋ、）を減少させ るという、本発明者らの発見にもとづ後者は、限外濾過のために利用可能な糸球 体毛細血管の面積を減少させ、したがってに、を減少させる、平滑筋を含有する 糸球体間質細胞の協奏的な収縮作用の結果として起こる。極性基の配向は、ペプ チド−ＬＴｓおよびＬＸＡ４において同じ（即ち、５３．６　Ｒ）であり、また これらのエイコサノイドの生物活性にとって極めて重要な必要条件でもあるので 、本発明者らは、ＬＸＡ４によって誘発されるに、の減少が、部分的に、間質細 胞ＬＴＤ、受容体との相互作用によるものかどうかを調べた。意外なことにＬＸ Ａ、が間質細胞ＬＴＤ４受容体に対して結合可能であり、ＬＴＤ、受容体の拮抗 薬として作用し得ることを、本発明者らは発見した。本発明者らは、ＬＴＤ４作 用に対する感受性を有するあらゆる組織において、ＬＸＡ４がＬＴＤ４受容体の 拮抗薬として作用するであろうと考えている。このような発見は、糸球体の炎症 反応の機能性の結果の治療において重要な進歩である（Ｂａｄｒ、　Ｋ、　Ｆ、 　、等、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、　８１：１７０２−１７０９（１９８８ ）　；　Ｂａｄｒ、　Ｋ、　Ｆ、、“プロスタグランジン、トロンボキサンおよ びロイコトリエン研究の進歩”　、Ｓａｍｕｅ、１ｓｓｏｎ、　Ｂ、　、等、（ 編）　、Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、第１８巻、（１９８９ ）、本明細書の一部を構成する）。

にさらした白血球から単離することができる（本明細書の一部を構成する）し、 また、化学的に合成することもできる（ｌｅｂｂｅｒ、　Ｓ、　Ｅ等、Ａｄｖ、 Ｅｘｐｅｒ、Ｍｅｄ、Ｂｉｏｌ、　２２９＋６１−７８　“リボキシン：生合成 、化学および生物活性”、Ｐ、Ｗｏｎｇ等、編、Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｕｂｌｉｓｈ ｉｎｇ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ。

ｎ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９８８）。

当業者には理解されるであろうが、ＬＴＤ、受容体の拮抗薬として作用する天然 化合物の能力を保持したまま、増大した生物学的利用能、半減期、ＬＴＤ４受容 体に対する親和性、あるいは他の望ましい性質を有するＬ　Ｘ　Ａ　４の誘導体 を構築し得る。このような誘導体には、ＬＸＡ４の３つの水酸基のうちの１つも しくは複数の、共有結合性の置換、および／または、ＬＸＡ４の末端カルボキシ ル基の共有結合性の置換が含まれ得る。特に、カルボキシル基のエステル化、好 ましくは、そのα−メチルエステル誘導体が、そのような置換基に含まれる。炭 素位置５．６および１５における置換基には、アセテート、メチル、ｎ−ブチル ボロネート誘導体の付加が含まれる。

ＬＸＡ、およびその誘導体は、目標のロイコトリエンにもとづく生理学的障害の 改善が起こるような、該ＬＸＡ４もしくはその誘導体の有効なレベルの送達をも たらす、あらゆる方法で投与することができる。例えば、所望に応じて従来の非 毒性の医薬的に許容され得る担体、佐剤および賦形剤を含有する投薬単位処方で 、非経口で、あるいは経口で、もしくは局所的にＬＸＡ、を投与できる。非経口 という用語には、本明細書において用いられる場合、皮下注射、静脈内注射、動 脈内注射、あるいは注入技術が含まれるが、これらに限定されない。“局所的に “という用語は、直腸内投与、吸入噴霧剤（エアゾル剤）による投与、およびよ り一般的な、皮膚、および口と鼻の粘膜経路による投与を包括する。

−回、もしくは分割投与量で被投与者に投与される、本発明の化合物の１日あた りの総投与量は、例えば、１日あたり約０．１ｍｇないし約１０ｍｇ／ｋｇ一体 重、より好ましくは、０．５ｍｇないし５ｍｇ／ｋｇ／日である。投与単位組成 物は、この１日の投票量を調合するために用いられるような、その約数の量を含 み得る。しかしあらゆる特定の患者に対する特定の投与量レベルは、体重、全身 の健康状態、性別、食事、投与の時間および投与経路、吸収および排泄速度、他 の薬品との組み合わせ、および治療中の該疾患の重篤度に依存することは理解さ れよう。

また本発明は、そのような治療を必要としているヒトもしくはそれより下等な動 物中のＬＴＤ４受容体活性を抑圧あるいは阻害するだめの、Ｌ　Ｘ　、Ａ　４も しくはその活性な誘導体および１または複数の非毒性で医薬的に許容され得る担 体、佐剤もしくは賦形剤を含有する、単位剤形の形の組成物をも提供する。一つ の剤形を調剤するためにそのような素材と配合される活性処方成分の量は、上述 のように様々な要因に依存して変化するであろう。本明細書に記載するように、 種々の素材を、医薬分野で利用てきるような担体、佐剤および賦形剤として、本 発明の組成物中に使用することができる。

油脂性溶液、懸濁剤もしくは乳剤のような注射製剤は、既知の技術に従って、適 当な分散剤あるいは湿潤剤および懸濁化剤を必要に応じて使用して、処方するこ とができる。活性化合物が水溶性の形態（例えば水溶性塩の形態）である場合に は、滅菌注射製剤に、非毒性で非経口的に許容され得る希釈剤あるいは溶媒（例 えば滅菌非発熱性水もしくは１．３−ブタンジオール）を利用できる。利用でき る他の許容され得る賦形剤および溶媒には、ＵＳＰ／ＮＦに記述されているよう に、５％デキストロース注射剤、リンケル注射剤および生理食塩液注射剤が含ま れる。活性化合物が非水溶性の形態である場合には、適当な親油性の溶媒もしく は賦形剤、例えば脂肪油（例、コマ油）あるいは合成脂肪酸エステル（例、オレ イン酸エチルあるいはトリグリセリド）を含有する滅菌した、適当な油状懸濁剤 を使用する。あるいは、粘性を増大させる物質、例えばカルボキシメチルセルロ ースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランを含有し、場合に より安定化剤をも含む、水性注射懸濁剤を使用することもできる。

本発明の医薬製剤は、自体既知の方法、例えば従来の混合、顆粒化、糖衣形成、 溶解あるいは凍結乾燥過程を用いて、製品化される。

したがって、要望あるいは必要があれば糖衣核の錠剤を得るために適当な添加剤 を加えた後、活性化合物を固体の添加剤と配合して、場合によっては得られた混 合物を顆粒化し、その混合物もしくは顆粒剤を加工することによって、経口的に 用いる医薬製剤を得ることができる。

適当な添加剤とは特に、賦形剤、例えば糖、例えば乳糖あるいはショ糖、マンニ トールあるいはソルビトール、セルロース製剤、および／またはリン酸カルシウ ム、例えば、リン酸三カルシウムあるいはリン酸水素カルシウム、および結合剤 、例えばデンプン、例えばトウモロコシデンプン、コメデンプン、コメデンプン を用いたパスタ剤、あるいはハレイショデンプン、ゼラチン、トラカント、メチ ルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ ースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン、および／または、必要 ならば、崩壊剤、例えば上述のデンプンおよびカルボキシメチルデンプン、架橋 ポリビニルピロリドン、寒天、あるいはアルキン酸もしくはその塩（例、アルギ ン酸ナトリウム）である。添加剤には、とりわけ、もし必要であれば、胃液に対 して耐性を有する剤皮（この目的のためには特に、濃糖液、場合によってアラヒ アゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、および／ま たは二酸化チタン、ラッカー溶液および適当な有機溶媒あるいは混合溶媒）を伴 った、流動調節剤および滑沢剤、例えばシｒツカ、タルク、ステアリン酸もしく はその塩（例、ステアリン酸マグネ／ウムあるいはステアリン酸カルシウム）が 含まれる。胃液に対して耐性を有する剤皮を調剤するためには、適当なセルロー ス製剤の溶液、例えばアセチルセルロースフタル酸塩あるいはヒドロキノプロピ ルメチルセルロースフタル酸塩、を使用する。染料あるいは色素を、例えば活性 化合物投与量の異なった配合を識別し、あるいは特徴づけるために、錠剤や糖衣 錠の剤皮に加えることもてきる。

他の経口的に使用できる医薬製剤は、ゼラチン製のブツシュフィツトカプセル剤 、セラチン製軟溶封カプセル剤、および可塑剤（例、グリセリンあるいはソルビ トール）である。ブツシュフィツトカプセル剤は顆粒状の活性化合物を、結合剤 （例、ラクトース）、結合剤（例、デンプン）、および／または滑沢剤（例、タ ルクあるいはステアリン酸マグネシウム）、および場合によって安定化剤と混合 して、含有することができる。軟カプセル剤中では、活性化合物を適当な液体（ 例、脂肪油、液体パラフィンあるいは液体ポリエチレングリコール）に溶解もし くは懸濁するのが望ましく、安定化剤を添加することも可能である。

この薬剤を適当な半割基剤、例えば非刺激性添加剤（例、ココアバター、天然あ るいは合成のトリグリセリド、パラフィン炭化水素、ポリエチレングリコールあ るいは高級アルカノール）、特に常温では固体であるが体温では液体であり、そ れゆえ直腸内で融解して薬剤を放出する基剤と混合することによって、本発明の 化合物の直腸内投与のための半開を調製することができる。さらに、活性化合物 と基剤の配合からなるセラチン大腸カプセルを使用することもてきる。可能な基 剤の素材は、例えば液体トリグリセリド、ポリエチレングリコールあるいはパラ フィン炭化水素である。

経口投与のための固体剤形には、カプセル剤、錠剤、火剤、口中錠、トローチ、 粉末薬および顆粒剤が含まれる。このような固体剤形中で、活性化合物を少なく とも１つの不活性な希釈剤（例えばショ糖、乳糖あるいはデンプン）と混合する ことができる。このような剤形は、通常行われているように、医薬的佐剤物質（ 例えばステアリン酸塩滑沢剤）をも含有できる。活性処方成分の放出を調節する 腸溶性の、あるいは他の剤皮を使って、固体経口製剤を調製することもできる。

経口投与のための液体剤形には、本技術分野において一般に用いられる不活性な 非毒性希釈剤（例えば、水およびアルコール）を含有する、医薬的に許容され得 る乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。またこのよ うな組成物は、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、着香剤および芳香剤のよう な佐剤を含有できる。

本発明の組成物は、それ自体、慢性のものであれ、急性のものであれ、血管収縮 の制御において有用である。本発明のための組成物は、血管収縮に対処するため の身体自体の機構を、最大限に導く。

静脈内剤形では、本発明の化合物は充分に早く作用を開始し、血管痙彎性応答や 悪性高血圧症に見られるような短時間作用の血管収縮の処置において有効である 。

さらに、低力側薬は軽い、あるいは慢性の血管収縮の処置にも有効である。この 低力側薬は本態性高血圧症および慢性腎疾患の処置に有効である。

さらに本発明の組成物が、心血管の疾患および糸球体性腎臓病に伴うような急性 で重症の血管収縮の処置に有効であることもわかった。

さらに本発明の化合物は、ロイコトリエン受容体活性化のための構造上の必要条 件への洞察を提供し、またペプチドロイコトリエンに対するより強力な受容体レ ベルの拮抗薬を設計するための構造モデルとして、リポキンンを利用できる事を 示す。

以下の実施例は、本発明の方法および組成物を例示するが、これらを限定するも のではない。この他の、当業者には自明で、臨床的治療において通常に直面する 種々の条件およびパラメーターの適当な適応および改良は、本発明の趣旨および 範囲内に含まれる。

（以下、余白） 衷奥至 統計　各群内および群間で、１つの期間から別の期間の間に起こる種々の全腎臓 および微小循環指数の変化を比較するために、多重計画比較のためのホンフェロ ｍ＝（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）改良を伴った。ＡＮ○ＶＡを使用した。ホスホイ ノシチト生成の研究では、アゴニスト処理した細胞中の［３Ｈ］−Ｉ　Ｐ３　Ｃ ＰＭの増加を、賦形剤処理した対照と、片側スチューデントを一検定を用いて比 較した。ｐ値≦０゜０５のとき、相違が有意であると判断した。全ての値を平均 ±ＳＥＭとして報告する。

実施例１ 腎臓間質細胞におけるＬＴＤ、受容体に対するＬＸＡ４の結合間質細胞ＬＴＤ、 受容体に対して濃度依存的に結合するＬＸＡ４の能力を間質細胞培養中で調べた 。

間質細胞培養・既に記載された方法でラット間質細胞を単離し、培養した（Ｈａ ｒｒｉｓ、　Ｒ，Ｃ，、等、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、　８２：１０２８− １０３９　（１９８８））。

簡単に述べると、滅菌条件下で２匹の若いスプラグードーリーラットから腎臓を 切開し、皮質を除去し、１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ　（ｐＨ７，４）、アムホテリシ ン（０，２５μｇ／ｍＩ）およびケンタマインン（５０μｇ／ｍｌ）を含有する ハング（Ｈａｎｋ’　ｓ）平衡塩類溶液中で数回洗浄した。次にこの組織を、孔 径２１２μｍ、１５０μｍの滅菌ステンレスメッシュフィルターに連続して通し 、最後に７５μｍメツシュにかける。単離した糸球体を７５μｍフィルターの表 面から回収して、バンク培地で２回洗浄した。この糸球体を１５％胎児ウシ血清 （キノコ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００ μｇ／ｍ１）（キノコ）と共に、ＲＰＭｌ　１６４０培地に懸濁させ、１００ｍ ｍ細胞培養ペト培養中に入れて、９５％空気および５％ＣＯ２の湿らせた雰囲気 下で３７℃でインキュベートした。間質細胞コロニーを５Ｑｍｍ培養皿中で継代 培養し、継代数２から１２の細胞中で実験を行った。間質細胞の同一性を確認す るために用いた規準は、過去に記述されているとうりである（ｔｌａｒｒｉｓ、 　Ｒ，Ｃ，、等、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、　８２：１０２８−１０３９　 （１９８８））。

細胞を通常の方法で、２０％胎児ウシ血清、ペニシリン１００Ｕ／ｍｌおよびス トレプトマイシン１００μｇ／ｍｌを追加したＲＰＭＩ−１６４０中で生育させ た。

［３Ｈ］　ＬＴＤ４結合の研究：　ＬＸＡ４はバイオモルリサーチラボラトリ− インク（フィラデルフィア、ＰＡ）から入手し、［１４゜１５−３Ｈ］　ＬＴＤ ４　（３２，ＯＣｉ／ｍｍｏｌ）はニューイングランドヌクレアーから入手した 。全てのエイコサノイドをメタノール中、−７０℃でアルゴン下に保存し、その 純度および量を定期的に紫外線スキャニングおよび高圧液体クロマトグラフィー を用いて検定した（Ｓｅｒｈａｎ、　Ｃ，Ｎ、等、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　 ２６１＋１６３４０　（１９８６））。

［３Ｈ］−ＬＴＤ４結合の研究を、２４穴クラスタ一皿中で集密的に生育した間 質細胞について行った。他の系中で［３Ｈ］−ＬＴＤ４結合が増加する事が、予 備実験によってわかった（Ｌｅｗｉｓ、　Ｍ、　Ａ、　、等、２２９　（１９８ ７））、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、ｌＱｍＭｃａｃ１２．１０ｍＭ　ＭｇＣＩ□、 ５ｍＭグリシンおよび５ｍＭｍメンインからなる緩衝液（緩衝液Ａ）中で、実験 を行った。結合実験は常に４℃で行った。細胞を緩衝液Ａて１回洗浄し、次いて 緩衝液Ａ中の適当な濃度の［３Ｈ］−ＬＴＤ、にさらした。この実験が完了した 時に、実験培地を除去して、細胞を水冷緩衝液で５回洗浄した。次に細胞を１Ｏ Ｎ　ＮａＯＨ１ｍｌで溶解し、ＭＣＩで中和して、アクアゾルにニューイングラ ンドヌクレアー、ボストン、ＭＡ）　１０ｍ１中に溶解し、結合した放射活性を シンチレーション計数器（ベックマンインスツルメント）を用いて決定した。１ ０００倍過剰の非標識ＬＴＤ４の存在下において結合したＩ３Ｈ］−ＬＴＤ４の 量を測定することによって、非特異的結合を決定した。コールタ−カウンターＺ Ｂｉ（コールタ−エレクトロニクスインク、ヒアリー、ＦＬ））を用いて複製ウ ェルの細胞を数えることによって、細胞密度を決定した。

間質細胞を１０ｎＭ　ｒ３Ｈ］−ＬＴＤ４と共にインキュベートし、１０倍ない し１０００倍濃度のＬＸＡ４を、平衡時に添加することによって、競争的結合阻 害の研究を行った。

図１は、ＬＴＤ、およびＬＸＡ４による１０ｎｒｎ　［３Ｈ］　ＬＴＤ４の結合 阻害率（％）を表している。初期の継代培養間質細胞において、ＬＸＡ４は非標 識ＬＴＤ、と同じ様式で、［３）（コーＬＴＤ４の結合に対して強力に競合した （図１）。ＬＸＡ４による半最大結合阻害は、ホモ配位子に対する値１１００ｎ に匹敵する１１００ｎであった。

ＬＸＡ４による拮抗はＬＴＥ、と同等であり、非ペプチドロイコトリエン、ＬＴ Ｂ、より数倍強かった。生物不活性な５Ｒ，６Ｓ−ＬＴＤ４異性体の比較的弱い 拮抗性と比較して、ＬＸＡ４が強力な［３Ｈ］−ＬＴＤ４結合阻害を示すことは 、Ｃ５およびＣ６における極性置換基の旦、旦配向が受容体認識および生物活性 にとって最適な利点を与えることを強く示唆している。このことは、５Ｓ　ＬＸ Ａ４（５Ｓ、６Ｓ、１５Ｓ、トリヒドロキシ−７、９，１３−ｔｒａｎｓ−１１ −ｃｉｓ−エイコサテトラエン酸）が、１０００倍過剰濃度でも［３Ｈ］−ＬＴ Ｄ、と競合しなかったという別の実験によって支持される。

ラット間質細胞に対する［３Ｈ］−ＬＴＤ４の結合が、このニイコサノイトに対 して特異的な膜結合性の受容体が間質細胞上に存在することを示唆するいくつか の特徴を示すことをこれらの結果か立証している。外因性のＬＴＤ、に対する上 に示した機能的応答および炎症性の糸球体損傷の間のそれらの関連性の可能性を 考慮すると、このような受容体の存在は特別な重要性を帯びる・ＬＴＤ４は培養 間質細胞を収縮させ（Ｂａｒｎｅｔｔ、　Ｒ１等、Ａｍ、Ｊ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、 　１９：Ｆ８３８−８４４（１９８６）　：　Ｓｉｍｏｎｓｏｎ、　Ｍ、　Ｓ等 、Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ、　３０：５２４−５３１　（１９８６））、インビボ でに、およびＧＦＲを著しく減少させ（Ｂａｄｒ、　Ｋ、　Ｆ％等、Ａｍ、　Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ、　２２：Ｆ２３９−２４３　（１９８７）　；　Ｂａｄｒ、　 Ｋ、　Ｆ、　、等、Ｃ１ｒｃ、Ｒｅｓ、　５４：４９２−４９９　（１９８４） ）　、これらの作用を通して、糸球体腎炎の実験モデルにおける糸球体の濾過お よび透過選択性機能の減損を仲介する際に重要な役割を果す（Ｂａｄｒ、　Ｋ、 　Ｆ、　、等、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、　８１：１７０２−１７０９　（ １９８８））。

実施例２ ＬＴＤ４によって誘発されるＩＰ３生成のＬ　Ｘ　Ａ　４による阻害ＬＸＡ、は ＬＴＤ４によって誘発される■Ｐ３生成の刺激作用をも遮断する（図２）。間質 細胞を［３Ｈ］−イノシトールで標識するために、６０ｍｍ培養皿中て集密的に 生育した細胞（１０６細胞／皿）を、総インキュヘーンヨン体積５ｍｌ中に１０ ％透析胎児ウシ血清および［３Ｈ］−イノシトール（１，ｃｚｃｉ／ｍｌ）を添 加したＲＰＭｌ中で培養した。標識の総取り込み量は４８時間で最大になり、７ ２時間まで安定であることが、予備実験によって明らかになった。

したがって、［３）１−イノシトールと共に４８−６０時間前もってインキュベ ートした細胞上で、以下の全ての実験を行った。

ＬＴＤ、やＬＸＡ、に応答している〔３Ｈ〕−イノシトール標識した間質細胞中 での、イノ／トール−リン酸（Ｉ　Ｐ、）　、イノシトールニリン酸（ＩＰ２） およびＩＰ３の生成を以下のようにして測定した：　１１８ｍＭ　ＮａＣＬ　４ ．６ｍＭ　ＫＣＩ、２４．９ｍＭＮａＨＣＯ３，１ｍＭ　ＫＨ２ＰＯ４，１１， １ｍＭグルコース、１．１ｍＭＭ　ｇ　Ｓ　Ｏ４，１，０ｍＭＣａＣｌ、５ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび０．１％ＢＳＡ　（ｐＨ７，４，３７°Ｃ）を含有するクレブ ス−リンガ−液でプレートを洗浄した。次いで細胞を１００倍濃度のＬＸＡ４と 共に１０分間前インキュベートした後、ＬＴＤ４、ＬＸＡ４もしくはＬＴＤ４を 、濃度を増大させながら（０，１から１０１００ｎ、温めた（３７°Ｃ）クレブ ス−リンカ−２ｍ１に添加し、その細胞を記載した時間インキュベートした。Ｌ ＴＤ４拮抗薬、ＳＫＦ　１０４３５３がＩＰ生成に与える影響を試験した実験に おいては、拮抗薬を添加する前に細胞をこの薬剤の存在下で１０分間前インキュ ベートした（Ｍｏｎｇ、　Ｓ、　、等、Ｍｏ１．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　３２ ：２２３−２２９　（１９８７）　：　Ｇｌｅａｓｏｎ。

ＪＧ、等、Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、　３０：９５９−９６１　（１９８７））　 、冷１０％　トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を添加することによって反応を停止させ 、上清をエーテル抽出に供し、０．１Ｍｈリス塩基を用いてその水層を中性にな るまで滴定した。ベリッシ等の方法（Ｂｅｒｒｉｄｇｅ、　Ｍ、　Ｊ、　、　Ｂ ｉｏｃｈｅｍＪ２２０：３４５−３６０　（１９８４））を用いて、アニオン交 換カラムクロマトグラフィーによって水層中の［３Ｈ］−ＩＰｌ、［３Ｈ］−Ｉ Ｐ２および［３Ｈ］−１Ｐ３を分離した。この分離技術の信頼性を確認するため に、それぞれ３：２１の比で混合した既知量の［３Ｈ］−Ｉ　Ｐ　ｌ、［３Ｈ］ −ＩＰ２および［３Ｈ］−Ｉ　Ｐ３標準品にューイングランドヌクレアー）につ いて、同じ抽出および分離方法を適用し、ＨＰＬＣによる分離に供した。後者は 、過去に記述された確立した方法論を用いて行った（Ｃｕｎｈａ−Ｍｅｌｏ、　 Ｊ、　Ｒ，、等、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２６２：１１４５５−１１４６３ 　（１９８７））。回収された計数の率（約８０％）および分離された３つのＩ Ｐの量比に関して、両分離技術の結果の間に区別し得る相違はなかった。

１　ｎＭ　（ｎ＝３）　、１０ｎＭ　（ｎ＝６）　１．５０ｎＭ　（ｎ＝３）お よび１００ｎＭ（１００ｎのＬＸＡ４を、Ｅ３Ｈコーイノントールテ標識した間 質細胞に添加した５秒後に、間質細胞におけるホスホイノンチド加水分解を測定 した。これらの細胞によるＩＰ３生成に対応する放射活性の計数値（ＣＰＭ）に 関して、賦形剤処理した試料（対照）に対して、低いけれども有意の増加（それ ぞれ、４６±１４％（ｐ＜０．０５）　、５０±２１％（ｐ＜０．０５）　、４ ４±２２％（ｐ＜０．０５）、および４５土２６％（ｐ＜０．０５））が観測さ れた。

１０ｎＭ　（ｎ＝５）および５０ｎＭ（ｎ＝４）のＬＴＤ４のこれらの細胞に対 する添加は、対照と比較して、１４６±２０％（ｐ＜０゜０１）および１０６± １３％（ｐ＜０．００５）の［３Ｈ］−ＩＰ３計数値の増加を伴った。これらの 値はＬＸＡ４の場合（ｐ＜０．０５）より著しく大きい。配位子の１００倍過剰 濃度のＬＴＤ、受容体拮抗薬、ＳＫＦ　１０４３５３と共に間質細胞をインキュ ベートした後、１０および５ＱｎＭ濃度のＬＴＤ４（それぞれｎ＝３）を添加し たところ、ＬＴＤ４によって誘発されるこれらの細胞における［３Ｈ］−Ｉ　Ｐ ３生成の刺激作用が完全に停止した。同様に、１０ｎＭＬＴＤ４　（ｎ＝３）を 添加する前に、これらの細胞を１００ｎＭ１００ｎと共に１０分間前インキュベ ートすると、ＬＴＤ、によって誘発されるＩＰ３生成が完全に阻害された。間質 細胞をＳＫＦ　１０１０４３５３（１００ｎと共にインキュベートした場合、や はりＬＸＡ４によって誘発されるＩＰ３生成の刺激作用が停止した（ｎ＝３）（ 図２）。

ＩＦ５の細胞内生成は、種々の血管作用性の薬剤に対する応答を仲介する際に重 要な役割を果すと、一般に考えられている。間質細胞へのＬＴＤ４の添加に続く 迅速な（５秒）ＩＦ５の生成が証明されたことは、ホスホイノシチド加水分解が ＬＴＤ４によって仲介される生物応答の信号中に含まれているという点に関して 、ラット好塩研究者による報告と一致している。ＬＴＤ、による間質細胞の収縮 が、ＩＦ５の生成および細胞内Ｃａ”″の流動を含む同様の機構を経て進行する 、と推定することは合理的である。実際、ＬＴＤ４の細胞内Ｃａ２＋濃度を増大 させる能力は、最近Ｂａｕｄ等によって、ＤＳＭ〇−分化したＨＬ−６０骨髄細 胞において立証された（Ｂａｕｄ、　Ｌ、　、等、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ 、　８０：９８３−９９１　（１９８７））　。本研究においてＬＸＡ４は、お そら＜ＬＴＤ、受容体を占拠することによって、かなり弱いが同様の、間質細胞 中での■Ｐ３生成の刺激作用を誘導した。ＬＸＡ４によって誘発されるＩＰ３生 成が実際にＬＴＤ４受容体活性化の結果であることは、特異的ＬＴＤ４受容体拮 抗薬、ＳＫＦ　１０４３５３の存在下でこれが完全に停止することによって支持 される（図２）。

１　（１９８７））でもアゴニスト活性を有さない、ＬＴＤ４およびＬＴＥ４の 構造類縁体であり、高度に強力で特異的な様式（Ｇｌｅａｓｏｎ、　Ｊ、　Ｇ、 、配位子のＬＴＤ４／ＬＴＥ４受容体に対する結合と競合する。これは、ｉｎ、 Ｉｎｖｅｓｔ、　８１：１７０２−１７０９　（１９８８））を含むいくつかの 組織において、ＬＴＤ４効果を阻害し、反転させることができる。試験された系 にして、［３Ｈ］−ＬＴＤ４と特異的に競合し、ＬＴＤ、が仲介するホスホイノ シチド加水分解、細胞内カルシウム流動およびトロンボキサン合成に関して得ら れる服量反応曲線を変化させる（Ｓａｒａｕ、　Ｈ，Ｍ、、−９６１（１９８７ ））ことがわかった。他の系においてこの化合物についｎ、Ｊ、Ｇ、、等、Ｊ、 ｆｌｅｄ、Ｃｈｅｍ、　３０：９５９−９６］、　（１９８７乃のと同様の様式 で、間質細胞の結合部位に対する［３Ｈ］−ＬＴＤ４の結合を阻害する能力をこ の拮抗薬が有することを、他の研究において、本発明者等は立証した。これらを 総合すると、ＬＸＡ４が、（１）［’Ｈ］−ＬＴＤ４の結合を遮断し、（２）Ｉ Ｆ５の生成に影響を及ぼし、（３）定義の明確なＬＴＤ４受容体拮抗薬（例、Ｓ ＫＦ　１０４３５３）によって阻害される、という発見は、これらの２つのエイ コサノイドの間質細胞上での作用の仲介に、共通の認識部位が含まれていること を９−Ｆ２４３　（１９８７））に従って外科的に調製した、イナクチン麻酔し た体重２２０−２４０ｇの雄ミュニッヒーウィスターラット中で、インビボでの 腎機能を測定した。イヌリンおよびパラアミノ馬尿酸塩（ＰＡＲ）クリアランス を、ＧＦＲおよび有効ＲＰＦを測定するために用いた。針を左腎動脈の起点に設 置し、これを通して０．９％Ｎａｃｌの維持注入を０．０５ｍ１／分の速度で開 始した。この注入液は、それぞれ０．０２５ｍ１／分で送っている２つの独立し たポンプから流れ出し、三方連結器を使用して腎動脈カテーテルに接続した。正 常体液量を維持するために過去に示された実験法（Ｂａｄｒ、　Ｋ。

Ｆ、等、Ａｍ、Ｊ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、　２２：Ｆ２３９−Ｆ２４３　（１９８７ ））に従って、同種のラット血漿を静脈内に投与した。Ｌ　Ｔ　Ｄ　４の腎内勤 脈内投与（１ｕｇ／ｋｇ、／分）は、本発明者らが過去にＬＴＣ４について報告 した（Ｂａｄ漿体積の進行性の損失を含むと同じ、全身性の血行動態の変化をも たらす。この全身性のＬＴＤ、の影響を最小限にし、腎機能パラメーターを適切 に評価しうるために、同種のラット血漿の注入速度をＬ　Ｔ　Ｄ　４を開始した 時に増大させ、約４−５ｍ１の血漿をＬＴ注入の間じゅう投与した。ヘマトクリ ットの変化の度合いはＬＴＤ、の投与量に伴って変化した（表１）。イヌリンお よびＰＡＨの濃度は、Ｆｕｈｒ等（Ｆｕｈｒ、Ｊ、、Ｋ１１ｎ、Ｗｏｃｈｈｅｎ ｓｃｈｒ、　３３ニア２９−４９９　（１９４５））お９４５）　）に従って決 定した。２つの実験群を以下のようにして調べた。

１群（ｎ＝１４）　第１期、賦形剤注入の間に排除を行った。第２期　注入ポン プの１つを通して左腎動脈内に０．５　（ｎ＝４）、７　（ｎ＝３）　、１４　 （ｎ＝３）　、および２０　（ｎ＝４）　μｇ／ｋｇ／分の投与量て送られるＬ ＴＤ４の２０分間の注入の間に、測定を繰り返した。

ＩＩ群（ｎ＝１２）、第１期、賦形剤注入の間に排除を行った。第２期。第２期 のようなＬＸＡ４の２０分間の注入の間に測定を繰り返し、第２のポンプを通し て１群と同様に０．５　（ｎ＝３）　、７　（ｎ＝３）　、１４　（ｎ＝３）　 、および２０　（ｎ＝３）　μｇ／ｋｇ／分の投与Ｉで、ＬＴＤ４注入を再び開 始した。

表　１ ＡＰ　ｏａｔ　ＲＰ！’　ＧｒＲ （＋ｒｍＨｇ）　ＴＶｏｌ−／ｄ１１　−−−−−−　ｏｗ１／分　−一−−Ｃ （ｎ＋３１　１２４±３　４９．４±１０　４．３３±０．１２　１．０１１± ０．０３０　（ｎ−４１１１ｍ４４ｇ、ｘ±Ｏ，８４，４５±０−０１１１．１ ２±０６０４−工ｎ４　ｘ　１２７±ｇ食　４８．３±１．２　３．４１Ｌ±ｏ 、ｓｏ　ｏ、ａｔ±０．１１Ｃ１４８±５貴　５９．２ｕ、２＊　１．５Ｌ＊ｏ 、４４會　ｏ、３２±ｏ、１ｏ＊ｐ　１２８±４會　５５．０±１．８會　１． ２０±Ｏ，１５＊　０．３４１０．ＩＩＯ會Ｂ　ｉｎ讃３）　１１５±１　４５ ．３±０．９　４．２９±１．０９　．０．９４±０．１０Ｃ（ｎ−３１１２９ ±３　４４．０±０．７　４．１５±０．３０　１．００±０．２０ｏ（ｎ−３ １ＬＩＯ±２　４５．２±Ｏ，１３，９８±０．４５　１ｏｌｌ±Ｏ，０ＳＩａ ＸＡ４　Ａ　１１±４　４３．７±０．９　４．５０±０．０８　１．２０±０ ６２０〔第２期］Ｂ　ｉ□。え。　４４．７よ０．２　４．７６カ。、８３．　 。、、８よ。、。６Ｃ１２７±２　４５．２±０．７　４．８’ｌｌ±０．１０ ★　１，３０±ｏ、ｘｏ＊１０８±３　４４．５土０．３　４．５１１±０．２ ０”　１２７±０．０４＊１−Ｘｈ４九ムエｎ４　Ａ　１２６±３　４４．３± ２．６　Ｊ、６０±０．４３ｔ　’ｈ、ＯＢ±０．１５［第３期］　Ｂ　□３゜ ヵ４ｔ５゜、３±。、７ｔ　２．９４ｔｈ。、４．↑　。、８８±。、１８１４ ７土７ｔ　ｓｔ、ｚ±ｘ、ａｔ　２．４０±０．３２士　０．７４ｔ０．２０ｔ １群の動物へのＬＴＤ４の投与（ＬＴＤ４投与量：Ｏ５，７０，１４，０、およ び２０．０（μｇ／ｋｇ／分））は、表１に要約したＧＦＲおよびＲＰＦの平均 値の投薬量依存性の減少を伴った。ＩＩ群の動物においては、ＬＸＡ４の投与は 、すべての動物においてＧＦＲおよびＲＰＦ両者の緩やかな増加を伴った（表１ ）。ＬＴＤ４およびＬＸＡ、に対するこれらの応答は、過去に報告された研究（ Ｂａｄｒ。

し、ＬＸＡ４の存在下でＬＴＤ４を投与量を増大させながら投与した場合（ＩＩ 群、第３期）　、ＬＴＤ４によって誘発されるＧＦＲの減少は著しく鈍った（第 ２期と第３期の比較）が、０ＴＤ４によって誘発されるＲＰＦの減少には影響を 与えなかった（表１）。ＬＴＤ４投与中のＧ　Ｆ　Ｒ／ＲＰ　Ｆの平均減少率（ ％）は、上記の投与量でそれぞれ、２７木／２４．２５木／４０本、７０木／６ ５本、および７３本／７０木てあった（木　ｐ＜０．０５　（基線に対して）） 。これらの値はＬＸＡ４の存在下ては、９／２０＊、１１／３７本、および４２ 本１５１本、および５０木／６８本であった。Ｌ　Ｘ　Ａ　４の存在下および非 存在下における、ＬＴＤ４によって誘発されるＧＦＲおよびＲＰＦの減少に関す る収量反応曲線を図３に示す。

微小破壊技術を用いた過去の実験において本発明者らは、ミュニッ糸球体微小循 環の応答を明らかにした。ＬＴＤ４は腎血管収縮剤であると同時に、これがＧＦ Ｒの減少を導く主要な機構は、間質細胞収縮の結果もたらされる強力なに「低下 作用である（Ｂａｄｒ、　Ｋ、　Ｆ、　、等、ＡｍＪ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、　２２ ：Ｆ２３９−Ｆ２４３　（１９８７））　。糸球体の潅流および機能に対するＬ ＴＤ４のこれらの効果は、このエイコサノイドについて作成した１群のラットに おける収量反応曲線によって立証される（図３）。一方、ＬＸＡ４の血管拡張お よびＧＦＲ増大効果（Ｂａｄｒ、　Ｋ、　Ｆ、、動物に見られるＧＦＲおよびＲ ＰＦの変化（第１期に対する第２期）に明らかである。しかし、ＬＸＡ４の注入 を継続しながらこれらのラットにＬＴＤ４を引き続いて投与すると、ＬＴＤ４に よって誘発されるＧＦＲの減少に関する収量反応曲線に劇的な変化（ＩＩ群のラ ットにおける第２期から第３期）が認められる。ＬＴＤ、の強力な血管収縮作用 がなにも変更されない（図３Ｂ）にもかかわらず、ＬＴＤ４のＧＦＲ抑制作用に 対する（　Ｌ　Ｘ　Ａ４によって与えられる）相対的な保護は、ＬＸＡ４によっ て仲介される、ＬＴＤ、が誘発するＫ。

の減少の阻害であると解される。ＬＸＡ４の心性細動脈拡張作用が糸球体内毛細 血管圧（Ｐ　ｃｃ）を増大させ、それゆえにＧＦＲを増加させたとも考えられる が、ＬＴＤ４注大の間に観測されたＰｃｃの値の増加（Ｂａｄｒ、　Ｋ、　Ｆ、 　、等、Ａｍ、Ｊ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、　２２：Ｆ２３９−Ｆ２４３　（１９８７ ））は、観測されたＧＦＲ保存の機構としての、このパラメーターのいっそうの 上昇に反する結論を示す。しかし、今のところまだ明らかにされていないＬＸＡ 、の作用が、このインビボ実験においてなんらかの役割を果たし得るという可能 性がある。それにもかかわらず、これらのインビボでの観測結果は、ＬＴＤ４間 質細胞受容体に対するＬＸＡ４の競合、およびこれらの細胞においてＬＴＤ、に よって誘発されるＩＰ３生成のその阻害を証明する、本発明者らのインビトロで の研究に強力な支持を与える。またこれらの結果は、糸球体の機能の制御（とり わけ炎症性の損傷の際の制御）におけるＬＴ／ＬＸ相互作用の考え得る関連性に ついての根拠を提供する（Ｂａｄｒ、　Ｋ、　Ｆ。

等、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、　８１：１７０２−１７０９　（１９８８） ）。

要約すると本発明者らは、ＬＸＡ、がＬＴＤ４をラット糸球体間質細胞上のその 結合部位から排除できること、およびＬＴＤ、によって誘発されるＩＦ５の生成 を遮断できること、またインビボでこれらの細胞におけるＬＴＤ４の生理学的な 収縮作用を相殺できることを示した。これらの発見は総合して、ＬＸＡ、、ヒト 白血球の産物が、インビボでペプチドロイコトリエンの作用を制御し得るという ことを示唆している。

ここに本発明を完全に記述し終えたので、本発明の趣旨あるいは範囲、もしくは そのあらゆる態様に影響を与える事なく、広範で相当する、条件、パラメーター などの範囲内で本発明が実施され得ることを、同業者は理解するであろう。

（以下、余白） 拐１度　（−Ｌｏｇ　Ｍ） ＦＩＧＵＲＥ　２ ム ＬＴＤ４　（μＣｌ／に９／分） ＦＩＧＵＲＥ　３Ａ ＦＩＧＵＲＥ　３Ｂ 国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　ＳＲＳ−Ａ拮抗有効量のＬＸＡ４もしくはその活性な誘導体を含有する組成 物を動物に投与することを含む、ＳＲＳ−Ａに対する該動物中の応答を阻害する ための方法。 ２　該ＳＲＳ−Ａがロイコトリエンである、請求項１に記載の方法。 ３　該ロイコトリエンがＬＴＤ４である、請求項２に記載の方法。 ４　ＳＲＳ−Ａに対する該応答が血管収縮である、請求項１に記載の方法。 ５　喘息、アナフィラキシー反応、アレルギー反応、ショック、炎症、リウマチ 様関節炎、痛風、乾せん、アレルギー性鼻炎、成人の呼吸困難症候群、クローン 病、内毒素ショック、外傷性ショック、出血性ショック、腸の虚血性ショック、 腎糸球体疾患、良性の前立腺肥大、炎症性腸疾患、心筋虚血症、心筋梗塞、循環 ショック、脳損傷、全身性紅斑性狼瘡、および高血圧症、からなる群から選択さ れる医学的障害を、ＳＲＳ−Ａに対する該応答が伴う、請求項１に記載の方法。 ６　抗血管収縮有効量のＬＸＡ４もしくはその活性な誘導体を含有する組成物を 動物に投与することを含む、該動物中の血管収縮を制御するための方法。 ７　該血管収縮がロイコトリエン受容体の活性化によるものである、請求項６に 記載の方法。 ８　該受容体がＬＴＤ４受容体である、請求項７に記載の方法。 ９　該血管収縮がＳＲＳ−Ａの放出の結果である、請求項６に記載の方法。 １０　喘息、アナフィラキシー反応、アレルギー反応、ショック、炎症、リウマ チ様関節炎、痛風、乾せん、アレルギー性鼻炎、成人の呼吸困難症候群、クロー ン病、内毒素ショック、外傷性ショック、出血性ショック、腸の虚血性ショック 、腎糸球体疾患、良性の前立腺肥大、炎症性腸疾患、心筋虚血症、心筋梗塞、循 環ショック、脳損傷、全身性紅斑性狼瘡、および高血圧症、からなる群から選択 される医学的障害を、該血管収縮が伴う、請求項６に記載の方法。 １１　該医学的障害が喘息である、請求項５あるいは１０に記載の方法。 １２　該医学的障害がアナフィラキシー反応である、請求項５あるいは１０に記 載の方法。 １３　該医学的障害がアレルギー反応である、請求項５あるいは１０に記載の方 法。 １４　該医学的障害が腎糸球体疾患である、請求項５あるいは１０に記載の方法 。 １５　該医学的障害が全身性紅斑性狼瘡である、請求項５あるいは１０に記載の 方法。 １６　該医学的障害が高血圧症である、請求項５あるいは１０に記載の方法。 １７　該有効量が約０．１ないし約１０ｍｇ／ｋｇ−体重／日である、請求項１ あるいは６に記載の方法。 １８　該有効量が約０．５ないし５ｍｇ／ｋｇ−体重／日である、請求項１７に 記載の方法。 １９　該誘導体がＬＸＡ４の３つの水酸基のうちの１つ、もしくは複数における 共有結合性置換を含有する、請求項１あるいは６に記載の方法。 ２０　該共有結合性置換が、アセテート、メチル、およびｎ−ブチルボロネート 置換からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。 ２１　該誘導体がＬＸＡ４の末端カルボキシル基における共有結合性置換を含有 する、請求項１あるいは６に記載の方法。 ２２　該共有結合性置換がそのカルボキシル基のエステル化を含む、請求項２１ に記載の方法。 ２３　該組成物が非経口的、経口的、もしくは局所的に投与される、請求項１あ るいは６に記載の方法。 ２４　該非経口的投与が皮下投与、静脈内投与、および動脈内投与からなる群か ら選択される、請求項２３に記載の方法。 ２５　該局所的投与が直腸内投与、およびエアゾル剤投与からなる群から選択さ れる、請求項２３に記載の方法。