JP7460998B2

JP7460998B2 - 皮膚外用剤

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Publication number: JP7460998B2
Application number: JP2017099267A
Authority: JP
Inventors: 英生岩野; 茂澤木; 茂豊澤木
Original assignee: 共栄化学工業株式会社
Priority date: 2017-05-18
Filing date: 2017-05-18
Publication date: 2024-04-03
Anticipated expiration: 2037-05-18
Also published as: JP2018193335A

Description

本発明は、皮膚外用剤又は育毛剤に配合可能であって、皮膚（頭皮も含む）の色素沈着の予防及び改善効果、血流改善効果、抗老化効果並びに育毛効果を奏し、かつ、皮膚（頭皮も含む）に対する刺激等が少なく生体安全性にもすぐれた新規有効成分に関する。

近年、細胞の老化現象や外的因子（例えば、紫外線、大気汚染物質や環境ホルモン等の化学物質、花粉等のアレルギー物質、環境ストレス等）による細胞へのダメージに関する研究が行われ、様々な細胞の老化現象や、細胞の損傷及び修復に関するメカニズムが解明されている。

例えば、皮膚細胞に関しては、加齢に伴う細胞増殖・分化の不活化、ホルモン分泌の低下、皮膚を構成する細胞外マトリックス成分（コラーゲン、ラミニン等）の量的低下、又は血行不良等の内的要因と、太陽光（紫外線）に誘発される活性酸素、大気汚染物質や環境ホルモン等の化学物質、花粉等のアレルギー物質、環境ストレス等の外的要因とが複雑に絡み合って、老化現象（シワ、タルミ等）や肌荒れ、色調の変化が生じることが知られている。

さらに、外的要因である紫外線、化学物質、アレルギー物質は、生体内の細胞や組織にダメージを与えて生体成分を変質させたり、又は活性酸素を発生させたりする。これにより、細胞内に抗原を発生し、生体において炎症が生じる。さらには、上記外的要因が細胞内のメラニン色素の異常沈着を誘発して皮膚にシミ、ソバカス、肝斑等を生じさせる。

以上のような細胞の不健全化や老化を予防及び改善する目的で、従来、種々の活性成分が提案され、それら活性成分を配合した化粧品、飲食品及び医薬品が上市されている。例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、カタラーゼ等の抗酸化剤；グリチルリチン酸又はその塩、アラントイン、トラネキサム酸等の抗炎症剤；各種紫外線吸収剤；α－ヒドロキシカルボン酸、胎盤抽出液、γ－アミノ－β－ヒドロキシ酪酸等の細胞賦活成分；コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸又はその塩等の細胞外マトリックス成分；尿素等の保湿剤；アミノグアニジン等のタンパク質糖化抑制剤が挙げられる。また、皮膚のシミ、ソバカス、肝斑等の色素沈着の発生を抑制する物質としては、コウジ酸やリノール酸等が知られており、美白剤の有効成分として広く使用されている。

本発明者らは、かかる従来技術の問題点に鑑みて、天然物由来の新たな有効成分を見出すべく鋭意研究を行った。その結果、キキョウ科ツルニンジン属に属する植物又はその抽出物の加水分解物が、紫外線による色素沈着（シミ、ソバカス及び肝斑等）に対してすぐれた抑制効果を有し、更に、血流改善効果を有し、当該加水分解物を配合することですぐれた皮膚（頭皮も含む）の健全化効果、抗老化効果、美白効果、及び育毛効果を奏し、かつ、生体安全性にすぐれた皮膚外用剤及び育毛剤の提供が可能になることを見出した。

従来、キキョウ科ツルニンジン属に属する植物の抽出物が美白効果を有することは、例えば、特許文献１により公開されているが、これらの植物又はその抽出物の加水分解物が、紫外線による色素沈着の抑制効果及び血流改善効果を有することについては、知られていなかった。
特開2005-145888号

本発明は、キキョウ科ツルニンジン属の植物又はその抽出物の加水分解物を有効成分とする皮膚外用剤である。
本発明は、キキョウ科ツルニンジン属の植物又はその抽出物の加水分解物を有効成分とする育毛剤である。

本発明は、キキョウ科ツルニンジン属の植物又はその抽出物の加水分解物を有効成分とする皮膚外用剤及び育毛剤であって、本発明によれば、有効成分である抽出物を配合することで、皮膚（頭皮も含む）の健全化効果、美白効果、及び育毛効果を発揮する皮膚外用剤及び育毛剤を提供することができる。

以下、本発明の好ましい実施の形態について詳細に説明する。
本発明において、

本発明において用いる植物は、キキョウ科（Campanulaceae）ツルニンジン属（Codonopsis）に属するものであって、例えば、ツルニンジン（Codonopsis lanceolata）、ヒカゲノツルニンジン（Codonopsis pilosula）、バアソブ（Codonopsis ussuriensis）、ジイソブ（Condonopsis laroceolata）、トウサン（Codonopsis tangshen）が挙げられる。

抽出物の調製は、ツルニンジン属植物の抽出対象部位（全草、根、花、葉、茎等）を、必要ならば予め水洗して異物を除いた後、そのままもしくは乾燥した上、必要に応じて細切或いは粉砕し、浸漬法、向流抽出法など常法に従って抽出溶媒と接触せしめることによって行うことができる。

抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノールなどの低級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３－プロパンジオール、１，３－ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチルなどのエステル類；アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類；ｎ－ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などが挙げられ、それらは単独でもしくは二種以上混合して用いられる。

混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水と１，３－ブチレングリコール若しくは１，３－プロパンジオールとの混合溶媒であれば、容量比（以下同じ）で１：１０～２０：１、水とエタノールとの混合溶媒であれば、１：１０～２５：１、水とグリセリンとの混合溶媒であれば１：１～２０：１の範囲とすることが好ましい。

また、各植物の乾燥部位と抽出溶媒との重量比は好ましくは１：１～１：８０の範囲であり、より好ましくは、１：５～１：５０の範囲である。

抽出物の調製に際して、そのｐＨに特に限定はないが、一般には３～９の範囲とすることが好ましい。かかる意味で、必要であれば、前記抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ性調整剤、又はクエン酸、塩酸、リン酸、硫酸等の酸性調整剤を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。

抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨによっても異なるが、例えば、水もしくはアルコール類（多価アルコールや低級アルコール等）、又は水とアルコール類との混液を溶媒とする場合であれば、抽出温度は一般的には０℃～９０℃の範囲であり、又抽出時間は一般的には０．５時間～７日間の範囲である。

本発明においては、上記抽出処理により得られる抽出物を、抽出前又は抽出後、或いは抽出と並行して、加水分解処理を行う。加水分解処理としては、酸、アルカリ、酵素などによる方法が挙げられるが、酵素を用いた加水分解処理が好ましい。酵素を用いて加水分解を行う場合であって、抽出物溶液の調製に、水或いは水と親水性溶媒との混合溶媒以外の溶媒を用いたときには、抽出物溶液から一旦抽出溶媒を除去し、ここに得られる抽出物を、水或いは水と親水性溶媒との混合溶媒に再溶解した上で、酵素分解処理を行うことが好ましい。

加水分解処理に用いる酵素としては、蛋白分解酵素、澱粉分解酵素、繊維素分解酵素、及び脂肪分解酵素が挙げられる。これらの酵素は植物種に応じて、それぞれの単独で使用しても複数の酵素を組み合わせて使用してもよい。

蛋白分解酵素としては、例えばアクチナーゼなどのアクチナーゼ類、ペプシンなどのペプシン類、トリプシン、キモトリプシンなどのトリプシン類、パパイン、キモパパインなどのパパイン類、グリシルグリシンペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼなどのペプチダーゼ類、ブロメライン、微生物由来の複合蛋白分解酵素［例えば、ニューラーゼ（天野エンザイム株式会社製）］などが挙げられる。蛋白分解酵素を使用する場合、上述した酵素のいずれかを単独で用いても、複数を組み合わせても良い。又、澱粉分解酵素としては、例えば、α－アミラーゼ、β－アミラーゼ、グルコアミラーゼ、β－ガラクトシダーゼなどを用いることができる。澱粉分解酵素を使用する場合、上述した酵素のいずれかを単独で用いても、複数を組み合わせても良い。又、繊維素分解酵素としては、例えば、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼなどが挙げられる。繊維素分解酵素を使用する場合、上述した酵素のいずれかを単独で用いても、複数を組み合わせても良い。また、脂肪分解酵素としては、例えば、リパーゼが挙げられる。なお、酵素による加水分解処理を行う場合に、上記各酵素群から選ばれる１種以上の酵素を複数組み合わせて使用しても良い。

酵素を用いた加水分解処理は、上述した植物の抽出物溶液に上記の酵素の１種又は２種以上を添加し、用いた酵素の至適ｐＨ及び至適温度付近の条件下で酵素反応させることによって実施される。２種以上の酵素を組み合わせ用いる場合は、用いる酵素の特性に応じて、２種以上の酵素を同時に作用させてもよく、又は、反応条件を変えもしくは変えずして順次作用させるようにしてもよい。酵素の使用量は、植物抽出物溶液の固形分１００重量部に対して、１種の酵素につき０．００１～５０重量部の範囲とするのがよく、より好ましくは０．１～１０重量部の範囲である。又、酵素処理の時間は、用いる酵素の種類等によっても異なるが、一般には０．５～２４時間の範囲であり、好ましくは１～６時間の範囲である。

以上の酵素を用いて加水分解処理終了後、酵素処理液を例えば８０℃以上に加熱する方法など適宜の方法を用いて酵素を失活させ、酵素処理分解物溶液を得る。

上述のように調製した加水分解処理物は、一般にはｐＨを４～８に調製した上で、これをそのままの状態で化粧料配合剤として使用しても良く、又減圧濃縮等により所望の濃度として使用しても良い。また、抽出物はスプレードライ法等の常法により乾燥物としても良い。

また、上述のように調製した加水分解物は、保存安定性等を高めるために、一定時間冷蔵保存した上で、上清を使用しても良い。

本発明に係る加水分解物を含む製剤（化粧料や医薬部外品も含む）としては、例えば、乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉、洗顔料、ボディシャンプー、毛髪用シャンプー、石けん等が挙げられ、また、育毛剤、さらには浴剤等も挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。

皮膚外用剤における本発明の抽出物の配合量は、加水分解物の固形分として、基礎化粧料の場合は、一般に０．００２～１．０重量％（固形分重量％、以下同じ）、好ましくは０．０２～０．２重量％の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に０．００２～１．０重量％、好ましくは０．０２～０．２重量％の範囲、又清浄用化粧料の場合は、一般に０．００２～１０．０重量％、好ましくは０．０２～７．０重量％の範囲である。また、毛髪用の化粧料又は育毛剤の場合は、抽出物の固形分として、一般的には０．０００１～５．０重量％であり、好ましくは、０．００１～３．０重量％である。

また、必須成分である加水分解物のほかに、通常、皮膚外用剤や育毛剤に用いられる成分、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。また、当該抽出物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分を組み合わせて配合することも何ら差し支えない。

ここで、油性成分としては、例えばハス油、オリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米糠油、米胚芽油、ヤシ油、カミツレ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、ローズヒップ油、ランベンダー油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワラン等の植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油等の動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリン等のロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワラン等の炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、エイコセン酸等の脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール等の高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２－エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）等の合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。

界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α－スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩等のアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級～第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２－アルキル－１－アルキル－１－ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ－ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩等のカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－アルキル－Ｎ－カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリアルキル－Ｎ－アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ－アシルアミドプロピル－Ｎ′，Ｎ′－ジメチル－Ｎ′－β－ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタイン等の両性界面活性剤等を使用することができる。

乳化剤又は乳化助剤としては、酵素処理ステビア等のステビア誘導体、サポニン又はその誘導体、カゼイン又はその塩（ナトリウム等）、糖と蛋白質の複合体、ショ糖又はそのエステル、ラクトース、大豆由来の水溶性多糖、大豆由来蛋白質と多糖の複合体、ラノリン又はその誘導体、コレステロール、ステビア誘導体（ステビア酵素処理物等）、ケイ酸塩（アルミニウム、マグネシウム等）、炭酸塩（カルシウム、ナトリウム等）、サポニン及びその誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀等）等を配合することもできる。

保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体等）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。

増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、アロエ多糖体、アルカリゲネス産生多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、ローカストビーンガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。

防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、ポリリン酸、プロパンジオール、１，２－ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、大根発酵液、サトウキビ等の植物由来のエタノール又は１，３－ブチレングリコール等がある。

粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビ等）のパウダー、豆類（大豆、小豆等）のパウダー等がある。

紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２－エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４－ジヒドロキシベンゾフェノン、２－ヒドロキシ－４－メトキシベンゾフェノン－５－スルホン酸塩、４－ターシャリーブチル－４－メトキシベンゾイルメタン、２－（２－ヒドロキシ－５－メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。

抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ムラサキシキブの抽出物、シラン根の抽出物、シャクヤク抽出物、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）等がある。

美白剤としては、ｔ－シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４－メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5,5'－ジプロピル－ビフェニル－2,2’－ジオール）、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α－ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。

上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレート等のコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシド等のコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ－アスコルビン酸－２－リン酸エステルナトリウム、Ｌ－アスコルビン酸－２－リン酸エステルマグネシウム、Ｌ－アスコルビン酸－２－硫酸エステルナトリウム、Ｌ－アスコルビン酸－２－硫酸エステルマグネシウム等のアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ－アスコルビン酸－２－グルコシド、Ｌ－アスコルビン酸－５－グルコシド、アスコルビルトコフェリルマレイン酸、アスコルビルトコフェリルリン酸Ｋ、ミリスチル３－グリセリルアスコルビン酸、カプリリル２－グリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基等）、Ｌ－アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ－アスコルビン酸テトララウリン酸エステル等のＬ－アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３－Ｏ－エチルアスコルビン酸、Ｌ－アスコルビン酸－２－リン酸－６－Ｏ－パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体、Ｌ－アスコルビン酸リン酸アミノプロピル、Ｌ－アスコルビン酸のヒアルロン酸誘導体、３－Ｏ－Ｄラクトース－Ｌ－アスコルビン酸、イソステアリルアスコルビルリン酸塩等が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン－β－Ｄ－グルコピラノシド）、α－アルブチン（ハイドロキノン－α－Ｄ－グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）等が挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４－ｎ－ブチルレゾルシノール、４－イソアミルレゾルシノール等が、２，５－ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５－ジアセトキシ安息香酸、２－アセトキシ－５－ヒドロキシ安息香酸、２－ヒドロキシ－５－プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α－ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α－ヒドロキシオクタン酸等がある。

生理活性成分としては、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、米糠抽出物又はその加水分解物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、乳酸菌醗酵米、ムラサキシキブ抽出物、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕抽出物又はそれに含まれるセラミド、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物等が挙げられる。また、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（ハス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、アンズ果実の抽出物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米抽出物又はその加水分解物、米醗酵エキス、発芽米抽出物又はその加水分解物、発芽米発酵物、黒豆抽出物又はその加水分解物、ダマスクバラの花の抽出物、タケノコの皮の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸等）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ－シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ－アミノ－β－ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、オタネニンジン抽出物又はその発酵物、紅参抽出物、ミツイシコンブ抽出物、ヘチマ抽出物、アナアオサ抽出物、モモ抽出物、桃仁抽出物、キウイ抽出物、ヒマワリ抽出物、ジュアゼイロ（Zizyphus joazeiro)抽出物、パウダルコ樹皮抽出物、萱草（デイリリー）抽出物または発酵物、ハイビスカスの花抽出物または発酵物、ハゴロモグサ抽出物、チェリモヤ抽出物、マンゴー抽出物、マンゴスチン抽出物、フノリ抽出物、烏龍茶抽出物、紅富貴抽出物、シラン抽出物、山椒果皮又は種皮の抽出物または加水分解物、ベニバナ花抽出物、カサブランカ抽出物、甘藷抽出物又はその発酵物、グアバ葉抽出物、ドクダミ抽出物、晩白柚抽出物、アロエ抽出物、イチジク花抽出物、リンゴ抽出物、ホワイトアスパラガス抽出物等がある。

次に、製造例、処方例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。

製造例１．加水分解物の調製（１）
ヒカゲノツルニンジン（Codonopsis pilosula）の根の乾燥細切物１００ｇに精製水１０００ｇを加え、４℃で１２時間抽出した。得られた抽出液１０００ｇに対して７００ｕのα－アミラーゼを加え、５５℃で1時間加水分解処理を行い、次いで８０℃で1時間酵素失活処理を行った。この液をろ過して、淡黄色透明の抽出物溶液（固形分濃度：１．７％）７２０ｇを得た。

製造例２．加水分解物の調製（２）
ヒカゲノツルニンジンの根の乾燥細切物１００ｇに精製水１０００ｇを加え、８０℃で１時間抽出した。得られた抽出液１０００ｇに対して８００ｕのパパインを加え、４０℃で２時間加水分解処理を行い、次いで８０℃で1時間酵素失活処理を行った。得られた抽出液をろ過して、黄色透明の抽出物溶液（固形分濃度：２．１％）６８０ｇを得た。酵素分解処理工程の追記をお願いいたします。

製造例３．加水分解物の調製（３）
ヒカゲノツルニンジンの全草の乾燥細切物１００ｇに３０％１，３－ブチレングリコール水溶液１０００ｇを加え、８０℃で１時間抽出した。１０００ｇに対して１５００ｕのα-アミラーゼを加え、５０℃で３時間加水分解処理を行い、次いで80℃で1時間酵素失活処理を行った。得られた抽出液をろ過して、黄褐色透明の抽出物溶液（固形分濃度：２．１％）７８０ｇを得た。

製造例４．加水分解物の調製（４）
ヒカゲノツルニンジン（Salicornea herbacea）の根の乾燥細切物１００ｇに５０％エタノール水溶液１０００ｇを加え、４℃で１２時間抽出した。１０００ｇに対して５００ＡＵＮのグルコアミラーゼを加え、６０℃で２時間加水分解処理を行い、次いで８０℃で1時間酵素失活処理を行った。得られた抽出液をろ過して、淡黄色透明の抽出物溶液（固形分濃度：１．９％）８２０ｇを得た。

製造例５．加水分解物の調製（５）
製造例１において、ヒカゲノツルニンジンの根に代えてツルニンジン（Codonopsis lanceolata）の根を用いるほかは製造例１と同様にして、黄色透明の抽出物溶液（固形分濃度：１．６％）７３０ｇを得た。

製造例６．加水分解物の調製（６）
製造例１において、ヒカゲノツルニンジンの根に代えてトウサン（Codonopsis tangshen）の根を用いるほかは製造例１と同様にして、黄色透明の抽出物溶液（固形分濃度：２．２％）６８０ｇを得た。

処方例１．化粧水
［成分］部
ホホバ油１．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール５．０
ブチルパラベン０．１
製造例１の加水分解物５．０
グリセリン５．０
１，３－ブチレングリコール５．０
水酸化カリウム適量
精製水全量が１００部となる量
香料適量

処方例２．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の加水分解物に代えて、製造例２の加水分解物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例３．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の加水分解物に代えて、製造例３の加水分解物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例４．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の加水分解物に代えて、製造例４の加水分解物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例５．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の加水分解物に代えて、製造例５の加水分解物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例６．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の加水分解物に代えて、製造例６の加水分解物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例７．乳液
［成分］部
流動パラフィン６．０
ヘキサラン４．０
ホホバ油１．０
ハス精油０．０２５
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート１．０
親油型ステアリン酸グリセリル１．０
水添大豆レシチン１．５
製造例１の加水分解物３．０
Ｌ－アスコルビン酸－２－グルコシド２．０
水酸化カリウム０．５
グリセリン３．０
１，３－ブチレングリコール２．０
カルボキシメチルセルロース０．３
ヒアルロン酸ナトリウム０．０１
水溶性コラーゲン０．１
精製水全量が１００部となる量
香料適量

処方例８．乳液
処方例７に含まれるＬ－アスコルビン酸－２－グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてトラネキサム酸２．０部を用いるほかは処方例７と同様にして乳液を得た。

処方例９．乳液
処方例７に含まれるＬ－アスコルビン酸－２－グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン３．０部を用いるほかは処方例７と同様にして乳液を得た。

処方例１０．乳液
処方例７に含まれるＬ－アスコルビン酸－２－グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてニコチン酸アミド５．０部を用いるほかは処方例７と同様にして乳液を得た。

処方例１１．乳液
［成分］部
スクワラン３．０
ベヘニルアルコール３．０
ヘキサラン４．０
ホホバ油１．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート１．０
グリセリン脂肪酸エステル１．０
大豆レシチン１．５
製造例１の加水分解物５．０
Ｌ－アスコルビン酸－２－グルコシド２．０
水酸化カリウム０．５
グリチルリチン酸ジカリウム０．１
グリセリン３．０
１，３－ブチレングリコール２．０
水溶性コラーゲン０．１
ヒアルロン酸ナトリウム０．０１
精製水全量が１００部となる量

処方例１２．乳液
処方例１１に含まれるグリチルリチン酸ジカリウム１．０部に代えてトラネキサム酸１．０部を用いるほかは処方例１１と同様にして乳液を得た。

処方例１３．ローション
［成分］部
製造例４の加水分解物１０．０
エタノール１０．０
グリセリン３．０
１、３－ブチレングリコール２．０
メチルパラベン０．２
クエン酸０．１
クエン酸ナトリウム０．３
カルボキシビニルポリマー０．１
キサンタンガム０．１
グアーガム０．１
香料適量
水酸化カリウム適量
精製水全量が１００部となる量

処方例１４．ローション
処方例１３に含まれる製造例４の加水分解物に代えて製造例５の加水分解物１０．０部を用いるほかは処方例１３と同様にしてローションを得た。

処方例１５．エッセンス
［成分］部
エタノール２．０
グリセリン５．０
１，３－ブチレングリコール５．０
メチルパラベン０．１
ヒアルロン酸０．１
加水分解ヒアルロン酸液０．１
製造例６の加水分解物５．０
クエン酸０．３
クエン酸ナトリウム０．６
精製水全量が１００部となる量

実施例１６．リキッドファンデーション
［成分］部
ステアリン酸２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール２．０
セトステアリルアルコール０．２
液状ラノリン２．０
流動パラフィン３．０
ミリスチン酸イソプロピル８．５
プロピルパラベン０．０５
製造例１の加水分解物５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム０．２
ベントナイト０．５
プロピレングリコール４．０
トリエタノールアミン１．１
メチルパラベン０．１
精製水全量が１００部となる量
酸化チタン８．０
タルク４．０
着色顔料適量

処方例１７．ボディシャンプー
［成分］部
Ｎ－ラウロイルメチルアラニンナトリウム２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％）２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド３．０
メチルパラベン０．１
製造例１の加水分解物５．０
１，３－ブチレングリコール２．０
精製水全量が１００部となる量

処方例１８．ヘアシャンプー
［成分］部
Ｎ－ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム１０．０
ポリオキシエチレン（３）アルキルエーテル硫酸ナトリウム２０．０
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン１０．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド４．０
メチルパラベン０．１
クエン酸０．１
製造例２の加水分解物２．０
１，３－ブチレングリコール２．０
精製水全量が１００部となる量

実施例１９．ヘアコンディショナー
［Ａ成分］部
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油１．０
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム１．５
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム２．０
２－エチルヘキサン酸グリセリル１．０
セタノール３．２
ステアリルアルコール１．０
メチルパラベン０．１
製造例３の加水分解物２．０
１，３－ブチレングリコール５．０
精製水全量が１００部となる量

処方例２０．育毛剤
［成分］部
グリチルリチン酸ジカリウム０．１
モノニトログアヤコールナトリウム０．０２
塩酸ピリドキシン０．０３
ｌ－メントール０．８
タマサキツヅラフジ根エキス０．３
褐藻エキス０．３
オタネニンジンエキス０．３
センブリエキス２．０
製造例１の加水分解物３．５
トリメチルグリシン０．５
乳酸０．２
１，３－ブチレングリコール１０．０
フェノキシエタノール０．２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油０．４
Ｌ－アルギニン適量
エタノール２０．０
精製水全量が１００部となる量

試験例１．MITF遺伝子発現評価試験
B16細胞を10％FBS含有イーグル最少必須培地にて6×10⁵個／ｍＬに調製し、φ６cmシャーレに１ｍＬを播種して、5％CO₂、飽和水蒸気下、37℃で培養した。24時間培養後、さらに、試料溶液（製造例1～6の加水分解物）を含んだ培養液（培養液全量に対して溶液として終濃度が10％となるように加水分解物をそれぞれ添加したもの）と終濃度1mMになるように調整したテオフィリン含有培地を添加し、同条件で4日間培養した。また、比較対照として、試料溶液に代えて、PBS(－)溶液のみを含んだ培養液（培養液全量に対する、PBS(－)の終濃度を10％に調整したもの）を添加した試験区（コントロール区）を設定した。4日間培養後、それぞれの試験区の細胞をTrizol試薬（Invitrogen社製）1ｍLで回収した。回収した細胞に対してクロロホルム（和光純薬工業社製）200μL添加して撹拌混合し遠心分離機（TOMY社製/MX-160）で15,000rpm、4℃の条件下で15分間遠心分離した後、水層のみを400μL分取した。回収した水層にイソプロパノール（和光純薬工業社製）500μLを添加して撹拌混合し、15,000rpm、4℃の条件下で15分間遠心分離してtotal RNAの沈殿物を得た。このtotal RNAに75％エタノールを１ｍＬ添加して撹拌して洗浄し、15,000rpm、4℃条件下で15分間遠心分離して沈殿を回収した。回収したtotal RNAを所定のキット（PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)[タカラバイオ社製]）を用いて逆転写反応し、cDNAを合成した。合成したcDNAをサンプルとして、Thermal Cycler Dice（登録商標）Real Time System Single（タカラバイオ社製）、及びSYBR（登録商標）Premix Ex TaqTM II (Perfect Real Time)［タカラバイオ社製］を用いて、MITF遺伝子の発現と、内部標準物質βアクチン遺伝子の発現の検出を行った。ここで、βアクチンは、ハウスキーピング遺伝子（多くの組織や細胞中に共通して一定量発現する遺伝子であって、常に発現され，細胞の維持，増殖に不可欠な遺伝子である）の一つであり、発現量が常に一定とされていることから、PCRの実験では内部標準として用いられるものである。試験結果は、βアクチン遺伝子の発現量を一定とした場合の、それぞれの試験区でのMITF遺伝子の発現量を比較した。本試験系においては、コントロール区のそれぞれの遺伝子の発現量を100としたときの他の試験区でのその遺伝子の発現量の相対値を求めた。

試験例1の結果を表1に示す。
［表１］

表１に示す通り、本発明に係る加水分解物を添加した区は、すぐれたMITF遺伝子の発現抑制効果が認められた。ここで、MITFは転写因子として働き、Tyrosinase、TRP1及びTRP2などのメラニン合成関連酵素の合成を亢進するものであって、過剰に合成されたメラニン合成関連酵素が、最終的に色素沈着を引き起こす。よって、本発明に係る加水分解物は、MITF遺伝子の発現を抑制することで、すぐれた色素沈着の抑制効果を有することが示唆される。

試験例２．血流促進効果の評価試験
本試験例２では、被験者（7名）の左右の手の甲部を用いて血流促進効果の評価試験を行った。まず、左右の手を洗浄し、空調管理室（室温：20±2℃、湿度；50±5％）で15分間安静な状態で待機した被験者の左右手甲部に対して、2cm×2cmの被験部位を設定した。次に、測定者は、被験者の正面から各部位の初期表面温度を、非接触体温計（サーモフォーカス、Tecnimed Srl 社製）を用いて3回ずつ測定し、初期値として記録した。次に、試験溶液として、製造例1～6の加水分解物を10％含む水溶液700mLを調製し、また、その比較対照として加水分解物の代わりに30％1,3－ブチレングリコール液を10％含有する水溶液700ｍLを調製した。それぞれの溶液をプラスティック容器（1L）にいれ、予め15℃程度に冷却した。被験者は一方の手を試験溶液に、他方の手を比較対照溶液に手首まで5分間浸した。5分後、被験者は、手を上げた後キムタオル等ですばやく、かつ水気を十分に拭き取り、測定者は、拭き取り後1、3、5、7、9、11分後の表面温度を3回ずつ測定し、記録した。各時間の表面温度の平均値から初期値を差し引いて各時間の変化量（Δ℃）を求めた。
試験例２の結果を表２に示す。本試験例においては、被験者7名中、6名に効果が認められ、それら効果が認められた6名の平均値を示す。

試験例２の結果を表２に示す。
［表２］

表２に示す通り、いずれの測定時間においても本発明に係る加水分解を添加した方が皮膚の温度が高くなることが明らかとなった。皮膚表面温度はその直下の血流の状態を表していると考えられることから、本発明に係る加水分解は血流を促進する効果を有し、皮膚（頭皮）の老化を予防し、また、健全化する効果を有することが示唆される。

Claims

キキョウ科（Campanulaceae）ツルニンジン属（Codonopsis）のヒカゲノツルニンジンの加水分解物又はヒカゲノツルニンジンの抽出物の加水分解物を有効成分とするMITF遺伝子発現抑制剤。