JP3987733B2 - 線維芽細胞賦活剤及びこれを含む皮膚外用剤 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚の老化防止や肌荒れの予防・改善に有効な新規線維芽細胞賦活剤、並びに該線維芽細胞賦活剤を含有する皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚の老化は、加齢に伴う細胞増殖・分化の不活性化、ホルモン分泌の低下などの内的要因と、日光（紫外線）暴露により誘発される活性酸素に基づく細胞・組織の損傷或いは炎症の発生などの外的要因が複雑に絡み合って生ずる現象である。
それらのうち内的要因に基づく皮膚の老化は、主として真皮の線維芽細胞の増殖能の低下や活性の低下が原因となって、該細胞の産生するコラーゲン、フィブロネクチン、ムコ多糖などの細胞外マトリックス成分の量が減少し、皮膚組織が柔軟性と弾力性を失うことによって生じ、形態的・生理的変化としては、シワ、たるみの発生や肌荒れなどとして現れる。
【０００３】
この細胞活性の低下に基づく皮膚の老化を予防或いは改善し、皮膚を若々しくハリのある状態に保持するため、従来より細胞賦活成分として、α−ヒドロキシカルボン酸類、ビタミン類、ホルモン類、胎盤エキスなどを皮膚外用剤中に配合することが提案されているが、いずれも有効性或いは安全性の点で必ずしも十分とは云えない面があり、より有用性の高い細胞賦活成分並びにこれを含む皮膚外用剤が求められている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者等は、上記の如き従来技術の問題点に鑑み、有効性と安全性の両面にすぐれた細胞賦活成分を見出すべく鋭意研究を行った結果、アブラナ科ブラシカ属の植物由来の抽出物が、線維芽細胞に対して強い賦活作用を示し、天然物由来であることに基づく高い安全性と共に、ここに有効性と安全性とを兼ね具えた新たな細胞賦活成分並びに該成分を活性成分として含む皮膚老化防止、肌荒れ予防・改善用の外用剤の提供が可能となること、さらには、該植物抽出物にアスコルビン酸もしくはその誘導体を組み合わせ用いた場合、意外なことにそれらの相乗的作用により細胞賦活効果が顕著に増強され、アスコルビン酸やその誘導体が良好な安全性を有することと相俟って、一段と有用性にすぐれた細胞賦活成分並びに皮膚外用剤が提供されることを知得し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
即ち、本発明は第一に、アブラナ科ブラシカ属植物の白芥子（Brassica hirta)の抽出物とアスコルビン酸類の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とを、固形分重量比で２：１〜１：１００の範囲で含んでなる線維芽細胞賦活剤に関するものである。
本発明は第二に、上記第一の発明の線維芽細胞賦活剤を含有する皮膚外用剤に関するものである。
【０００６】
以下、本発明について詳細に説明する。
アブラナ科ブラシカ属の植物としては、例えば白芥子（Brassica hirta）、黄芥子（Brassica juncea）、黒芥子（Brassica nigra）、アブラナ（Brassica ropa）などが挙げられるが、本発明に於いては、それらのうちでも、抽出物の線維芽細胞に対する賦活効果の観点から、白芥子（ Brassica hirta ）が用いられる。
【０００７】
上記アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物の調製は、該植物の種子、葉、茎、根、全草など適宜の部分、好ましくは種子を抽出原料として用い、必要に応じてこれを予め水洗、乾燥、細切もしくは粉砕した上、浸漬法、向流抽出法など適宜の手段により抽出溶媒と接触せしめることによって行われる。
【０００８】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノールなどの低級アルコール類、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、オクチルドデカノールなどの高級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチルなどのエステル類；アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などが挙げられ、それらは単独でもしくは二種以上混合して用いられる。
それら抽出溶媒のうちでも、得られる抽出物の細胞賦活効果の観点、さらには皮膚外用剤への幅広い適用が可能であるという点から、水、低級アルコール類及び多価アルコール類から選ばれた一種又は二種以上の混合溶媒、就中水もしくは水とエチルアルコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコールのいずれかとの混合溶媒を用いることが特に好ましい。
【０００９】
混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水とエチルアルコールとの混合溶媒であれば、容量比（以下同じ）で１：１〜２５：１、水とグリセリンとの混合溶媒であれば１：１〜１５：１、又水と１，３−ブチレングリコールとの混合溶媒であれば、１：１〜１５：１の範囲とすることが好ましい。
【００１０】
又、本発明の抽出物の調製に際して、抽出液のｐＨは５〜９の範囲に保持されることが好ましく、かかる意味で、必要ならば上記の抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤や、クエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤等を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。
【００１１】
抽出温度、時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類、植物の抽出部位・細切度等によっても異なるが、例えば浸漬法の場合であれば、抽出温度は、一般に20〜80℃、好ましくは30〜60℃の範囲であり、又抽出時間は、室温抽出の場合で10分〜１日程度、特に30分〜２時間程度が好適である。
【００１２】
ここに得られる抽出物溶液は、一般にはｐＨを４〜８に調整した上、これをそのままもしくは減圧濃縮等により適宜の濃度として皮膚外用剤に配合してもよく、又場合によっては、スプレードライ法、凍結乾燥法など常法に従って粉末化して配合してもよい。
【００１３】
以上の如くして調製される本発明のブラシカ属植物の抽出物は、後に試験例に示す通り、線維芽細胞に対して強い賦活作用を有し、しかも皮膚刺激性が少ないなど生体安全性にすぐれ、線維芽細胞賦活剤として有用なものである。
従って、該抽出物を単独で用いても、皮膚老化防止や肌荒れの予防・改善に有効でかつ安全性の高い皮膚外用剤が提供されるが、本発明者らの研究の結果、このブラシカ属植物の抽出物に、既存の皮膚外用剤配合成分のうちでも安全性の高いグループに属するアスコルビン酸類を組み合わせ用いた場合、かかる組み合わせによってブラシカ属植物抽出物の安全性が損なわれることがないことはもとより、意外なことにそれら組み合わせ成分の相乗的作用によって、線維芽細胞賦活作用が顕著に増強され、これによって、安全性の点で単独系に比して遜色がなく、しかも有効性のより一層改善された線維芽細胞賦活剤並びにこれを含む皮膚外用剤の提供が可能となることが明らかとなった。
【００１４】
ここで、ブラシカ属植物抽出物と組み合わせて有効なアスコルビン酸類としては、Ｌ−アスコルビン酸；及びＬ−アスコルビン酸誘導体として、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウムなどのアスコルビン酸エステル塩類；Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄグルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド（５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）などのアスコルビン酸糖誘導体；アスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基など）；Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステルなどのＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類等があるが、それらアスコルビン酸類のうちでも、ブラシカ属植物抽出物と併用した時の細胞賦活作用の増強効果の観点から、本発明に於いてはＬ−アスコルビン酸−２−グルコシドが用いられる。
【００１５】
ブラシカ属植物の抽出物とアスコルビン酸類とを組み合わせ線維芽細胞賦活剤として用いる場合、それら両成分の量比は、固形分重量比で２：１〜１：100の範囲とする。
【００１６】
ブラシカ属植物抽出物とアスコルビン酸類とを含む本発明の皮膚外用剤は、化粧料、医薬部外品、医薬等のいずれとしても使用可能であり、又適用部位としては頭皮を含む皮膚全般が対象となり、特に制限はない。従って、その剤形としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、軟膏、パック、ハップ剤、皮膚清浄料（石けん類など）、洗顔料、ヘアートニック、シャンプー、リンス、トリートメント、各種メークアップ化粧料、浴剤など多様なものとすることできる。
【００１７】
本発明の皮膚外用剤中に於けるブラシカ属植物抽出物とアスコルビン酸類の配合量は、皮膚外用剤の用途、適用部位等によっても異なるが、前記した両成分の量比の範囲内で、ブラシカ属植物抽出物を固形分で0.001〜0.8重量％、特に0.01〜0.5重量％、又アスコルビン酸類を0.01〜10重量％、特に0.1〜５重量％程度配合するのがよい。
【００１８】
本発明の皮膚外用剤には、上記のブラシカ属植物抽出物とアスコルビン酸類のほかに、通常皮膚外用剤に用いられる成分、例えば油性成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料、生理活性成分等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００１９】
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００２０】
界面活性剤としては，例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。
又、乳化剤乃至乳化助剤として、レシチン及びその誘導体、乳酸菌醗酵米等を配合することもできる。
【００２１】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、乳酸菌醗酵米、ヒアルロン酸及びその誘導体、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００２２】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻或いは紅藻由来成分、ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００２３】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール等がある。
【００２４】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、シルクパウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビなど）のパウダー、豆類（大豆、小豆など）のパウダー等がある。
【００２５】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル等がある。
【００２６】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体等がある。
【００２７】
生理活性成分としては、例えば美白成分として、コウジ酸及びその誘導体、アルブチン及びその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、米糠抽出物、米糠抽出物加水分解物、アナアオサ等の海藻の抽出物、アマモ等の海草の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸など）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体等が挙げられる。
又、本発明に於いて、ブラシカ属植物抽出物とアスコルビン酸類とを組み合わせ用いた場合には、ここに用いたアスコルビン酸類が細胞賦活成分としてのほかに美白成分としても有効に機能することは云うまでもない。
【００２８】
ここで、上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレートなどのコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシドなどのコウジ酸糖誘導体等が、レゾルシノール誘導体としては、例えば４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等がある。
【００２９】
又、本発明の線維芽細胞賦活剤の有効性を損なわない範囲で、他の皮膚老化防止・肌荒れ改善（美肌化）成分を併用してもよく、かかる成分としては、コラーゲン、ニコチン酸及びその誘導体（ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジルなど）、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩など）、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体（ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレートなど）、アラントイン、乳酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸などのα−ヒドロキシ酸類、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナエキス、甘草エキス、ハトムギエキス、カミツレエキス、ニンジンエキス、アロエエキスなどの生薬抽出エキス、米抽出物加水分解物、米醗酵エキス、ミツイシコンブ抽出物等がある。
【００３０】
次に、実施例（白芥子抽出物の調製例）、製造例（線維芽細胞賦活剤の調製例）、処方例（皮膚外用剤の処方例）及び試験例、並びに参考実施例、参考処方例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下に於いて、部はすべて重量部を、又％はすべて重量％を意味する。
【００３１】
実施例１．
白芥子の種子の粉砕物50ｇに精製水1000ｇを混合し、40℃で１時間抽出を行った後ろ過し、淡黄色透明の白芥子抽出物溶液820ｇを得た（固形分濃度0.96％）。
【００３２】
実施例２．
白芥子の種子の粉砕物50ｇに30％１，３−ブチレングリコール水溶液1000ｇを混合し、40℃で１時間抽出を行った後ろ過し、淡黄色透明の白芥子抽出物溶液800ｇを得た（固形分濃度0.94％）。
【００３３】
実施例３．
白芥子の種子の粉砕物50ｇに20％エタノール水溶液1000ｇを混合し、40℃で１時間抽出を行った後ろ過し、淡黄色透明の白芥子抽出物溶液880ｇを得た（固形分濃度0.91％）。
【００３４】
参考実施例１．
黄芥子の種子の粉砕物50ｇに精製水1000ｇを混合し、40℃で１時間抽出を行った後ろ過し、淡黄色透明の黄芥子抽出物溶液850ｇを得た（固形分濃度0.94％）。
【００３５】
参考実施例２．
黒芥子の種子の粉砕物50ｇに精製水1000ｇを混合し、40℃で１時間抽出を行った後ろ過し、淡黄色透明の黒芥子抽出物溶液820ｇを得た（固形分濃度1.01％）。
【００３６】
実施例４．
実施例１と同様にして調製した白芥子抽出物溶液500ｇを凍結乾燥した後粉砕し、微黄色の白芥子抽出物粉末4.7ｇを得た。
【００３７】
製造例１．線維芽細胞賦活剤の調製(1)
実施例１の白芥子抽出物溶液80ｇにＬ−アスコルビン酸−２−グルコシド20ｇを溶解し、白芥子抽出物とＬ−アスコルビン酸−２−グルコシドを含む混合溶液を得た。
【００３８】
製造例２．線維芽細胞賦活剤の調製(2)
実施例１の白芥子抽出物溶液50ｇに精製水30ｇを加えて希釈し、これにＬ−アスコルビン酸−２−グルコシド20ｇを溶解して白芥子抽出物とＬ−アスコルビン酸−２−グルコシドを含む混合溶液を得た。
【００３９】
試験例１．線維芽細胞賦活作用
ブラシカ属植物抽出物として実施例１で得られた白芥子抽出物溶液を、又アスコルビン酸類としてＬ−アスコルビン酸−２−グルコシドをそれぞれ用い、ブラシカ属植物抽出物単独の場合及びブラシカ属植物抽出物とアスコルビン酸類を併用した場合について、線維芽細胞賦活作用を調べた。
【００４０】
［試験方法］
ヒト真皮由来線維芽細胞NB1RGB［Lot.011201(9)] を、1.0％FCS含有イーグル最少必須培地を入れた96穴マイクロプレートに１×１０^４ 個／穴播種し、5.0％ＣＯ_２の雰囲気下に37℃で１日間プレ培養した後、培地に、実施例１の抽出物溶液を2.5％又は5.0％の濃度となるように添加するか、もしくは実施例１の抽出物溶液とＬ−アスコルビン酸−２−グルコシドとをそれぞれ2.5％及び0.5mM又は5.0％及び0.5mMの濃度となるように添加し、5.0％ＣＯ_２の雰囲気下に37℃でさらに３日間培養した。次に培地を除去し、0.03％のMTTを添加して37℃に１時間保持した後、生成したホルマザンを酸性イソプロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダー(Model 450、バイオラッド社製）を用いて波長570-630nmでMTT値を測定した。
なお比較のため、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシドを単独で添加した場合及び試料無添加の場合（ブランク）についても、同様の試験を行った。
【００４１】
［結果］
結果を図１に示す。なお、図１に於いて、AsGとはＬ−アスコルビン酸−２−グルコシドを意味する。
図１に示す通り、アブラナ科ブラシカ属植物の白芥子の抽出物（実施例１の抽出物溶液）は線維芽細胞のMTT取り込み活性を亢進し、該細胞を賦活する作用を有する。又、白芥子抽出物にＬ−アスコルビン酸−２−グルコシドを組み合わせ用いた場合、それら両成分の相乗的作用により、線維芽細胞賦活効果はより増強される。
【００４２】
試験例２．皮膚刺激性
［試料］
下記の成分を、各々日局親水ワセリンに５％の濃度となるように練合したものを試料として用いた。
(1)実施例１の抽出物溶液
(2)製造例１の混合溶液
【００４３】
［試験方法］
年齢２０〜５０歳の成人男子５名を被験者とし、各々の上腕部内側をエタノールで拭って皮脂を除去し、該部位に、フィンチャンバーのアルミ板に各試料及び対照として日局親水ワセリンをそれぞれ０．２ｇ宛塗布したものを貼付した。２４時間後にフィンチャンバーを除去し、皮膚刺激の程度をつぎに述べる方法並びに基準により判定した。
［判定］
パッチ除去後１時間後、２４時間後及び４８時間後に、貼付部位の紅斑及び浮腫の状況を、以下の「ドレイズ法による皮膚刺激性判定基準」に基づき目視判定し、被験者５名の平均値を求めた。
（紅斑）
スコア 皮膚の状態
０ ： 紅斑なし
１ ： 極く軽度の紅斑
２ ： 明らかな紅斑
３ ： 中程度から強い紅斑
４ ： 深紅色の強い紅斑に軽い痂皮形成
（浮腫）
スコア 皮膚の状態
０ ： 浮腫なし
１ ： 極く軽度の浮腫
２ ： 明らかな浮腫（周囲と明らかに区別可能）
３ ： 中程度の浮腫（１mm以上の盛り上がり）
４ ： 強い浮腫（さらに周囲にも広がり）
【００４４】
［結果］
結果を表１に示す。
【表１】
【００４５】
表１の結果から明らかな通り、白芥子抽出物或いは該抽出物とＬ−アスコルビン酸−２−グルコシドからなる線維芽細胞賦活剤は皮膚刺激が殆どなく、安全性に極めてすぐれている。
【００４６】
参考処方例１．クリーム
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ５．０
ヘキサラン （注１） ４．０
パラフィン ５．０
グリセリルモノステアレート ２．０
ポリオキシエチレン（20）ソルビタンモノステアレート ６．０
ブチルパラベン ０．１
（注１）株式会社テクノーブル製 トリオクタン酸グリセリル
［Ｂ成分］
実施例１の抽出物溶液 １０．０
グリセリン ５．０
メチルパラベン ０．１
モイストン・Ｃ （注２） １．０
精製水 全量が１００部となる量
（注２）株式会社テクノーブル製 ＮＭＦ成分
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合してクリームを得た。
【００４７】
参考処方例２．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
メチルパラベン ０．１５
エチルパラベン ０．０３
［Ｂ成分］
実施例１の抽出物溶液 １０．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。こ
れを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００４８】
処方例１．ローション
［成分］ 部
製造例１の混合溶液 １０．０
エタノール １０．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
メチルパラベン ０．２
クエン酸 ０．１
クエン酸ナトリウム ０．３
カルボキシビニルポリマー ０．１
香料 適量
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。
【００４９】
処方例２．化粧水
［Ａ成分］ 部
オリーブ油 １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルエーテル ０．５
ブチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
製造例２の混合溶液 １０．０
エタノール ５．０
グリセリン ５．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
メチルパラベン ０．１
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。
これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して化粧水を得た。
【００５０】
処方例３．クリーム
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ５．０
ヘキサラン ４．０
パラフィン ５．０
グリセリルモノステアレート ２．０
ポリオキシエチレン（20）ソルビタンモノステアレート ６．０
ブチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
実施例１の抽出物溶液 １０．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
グリセリン ５．０
メチルパラベン ０．１
モイストン・Ｃ １．０
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合してクリームを得た。
【００５１】
参考処方例３．クリーム
処方例３のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム３．０部を用いるほかは処方例３と同様にしてクリームを得た。
【００５２】
参考処方例４．クリーム
処方例３のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム３．０部を用いるほかは処方例３と同様にしてクリームを得た。
【００５３】
処方例４．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
メチルパラベン ０．１５
エチルパラベン ０．０３
［Ｂ成分］
実施例２の抽出物溶液 １０．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００５４】
処方例５．ローション
［成分］ 部
実施例１の抽出物溶液 １０．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
エタノール １０．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
メチルパラベン ０．２
クエン酸 ０．１
クエン酸ナトリウム ０．３
アルギン酸ナトリウム ０．１
水酸化カリウム 適量
香料 適量
精製水 全量が１００部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。
【００５５】
参考処方例５．リキッドファンデーション
［Ａ成分］ 部
ステアリン酸 ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール ２．０
セトステアリルアルコール ０．２
液状ラノリン ２．０
流動パラフィン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．５
プロピルパラベン ０．０５
［Ｂ成分］
実施例２の抽出物溶液 ５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．２
ベントナイト ０．５
プロピレングリコール ４．０
水酸化カリウム １．１
メチルパラベン ０．１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
酸化チタン ８．０
タルク ４．０
着色顔料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のＣ成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリキッドファンデーションを得た。
【００５６】
処方例６．クリームファンデーション
［Ａ成分］ 部
ステアリン酸 ５．０
セタノール ２．０
モノステアリン酸グリセリル ３．０
流動パラフィン ５．０
スクワラン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．０
ポリオキシエチレン（２０）モノステアリン酸グリセリル ２．０
プロピルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
実施例１の抽出物溶液 ５．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
ソルビトール ３．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
水酸化カリウム １．５
メチルパラベン ０．１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
酸化チタン ８．０
タルク ２．０
カオリン ５．０
ベントナイト １．０
着色顔料 適 量
［Ｄ成分］
香料 ０．３
Ｃ成分を混合し、粉砕機で粉砕した。Ｂ成分を混合し、これに粉砕したＣ成分を加え、コロイドミルで均一分散させた。Ａ成分及び均一分散させたＢ、Ｃ成分をそれぞれ８０℃に加温後、Ｂ、Ｃ成分にＡ成分を攪拌しながら加え、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを５０℃まで冷却した後、Ｄ成分を加えて攪拌混合し、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却してクリームファンデーションを得た。
【００５７】
参考処方例６．ヘアートニック
［Ａ成分］ 部
エタノール ６０．０
ｌ−メントール ０．５
香料 ０．１
メチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
グリセリン ２．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
実施例３の抽出物溶液 １０．０
精製水 全量が１００部となる量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ常温で溶解した後、Ａ成分にＢ成分を攪拌しながら加え溶解させてヘアートニックを得た。
【００５８】
参考処方例７．ヘアートリートメント
［成分］ 部
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム ６．０
ポリビニルピロリドン ４．０
グリセリン １．０
エチルパラベン ０．１
実施例２の抽出物溶液 ５．０
精製水 全量が１００部となる量
上記の成分を８０℃に加温した後混合攪拌してヘアートリートメントを得た。
本品はヘアーパックとしても好適なものであった。
【００５９】
参考処方例８．ヘアーシャンプー
［Ａ成分］ 部
Ｎ−ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０
ポリオキシエチレン(３)アルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン １０．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０
メチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
クエン酸 ０．１
実施例２の抽出物溶液 ５．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
精製水 全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してヘアーシャンプーを得た。
【００６０】
参考処方例９．ヘアーリンス
［Ａ成分］ 部
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油 １．０
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム １．５
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム ２．０
２−エチルヘキサン酸グリセリル １．０
セタノール ３．２
ステアリルアルコール １．０
メチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
実施例２の抽出物溶液 ５．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
精製水 全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してヘアーリンスを得た。
【００６１】
参考処方例10．ボディシャンプー
［Ａ成分］ 部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％） ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ３．０
メチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
実施例２の抽出物溶液 １０．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
精製水 全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してボディシャンプーを得た。
【００６２】
参考処方例11．石けん
［Ａ成分］ 部
硬化ヒマシ油 ２６．０
ヤシ油 １０．０
オリーブ油 ４．０
［Ｂ成分］
水酸化ナトリウム ６．０
砂糖 １０．０
グリセリン ５．０
実施例４の抽出物粉末 ０．５
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
エタノール ２０．０
香料 適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加えてケン化した。これを攪拌しながら５０℃まで冷却し、Ｃ成分を加えた。これを型に流し込み冷却した後、室温下で数日間乾燥させ、充分に乾燥したものを型から取りだして石けんを得た。
【００６３】
参考処方例12．乳液
参考処方例２のＢ成分中、実施例１の抽出物溶液に代えて参考実施例１の抽出物溶液を用いるほかは参考処方例２と同様にして乳液を得た。
【００６４】
参考処方例13．乳液
参考処方例２のＢ成分中、実施例１の抽出物溶液に代えて参考実施例２の抽出物溶液を用いるほかは参考処方例２と同様にして乳液を得た。
【００６５】
参考処方例14．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
メチルパラベン ０．１５
エチルパラベン ０．０３
［Ｂ成分］
実施例１の抽出物溶液 １０．０
コウジ酸 １．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００６６】
参考処方例15．乳液
参考処方例14のＢ成分中、コウジ酸1.0部に代えてアルブチン3.0部を用いるほかは参考処方例14と同様にして乳液を得た。
【００６７】
参考処方例16．乳液
参考処方例14のＢ成分中、コウジ酸1.0部に代えて米抽出物加水分解物（株式会社テクノーブル製、商品名「オリゼノーブル」、固形分濃度1.5％）5.0部を用いるほかは参考処方例14と同様にして乳液を得た。
【００６８】
参考処方例17．乳液
参考処方例14のＢ成分中、コウジ酸1.0部に代えてγ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸1.0部を用いるほかは参考処方例14と同様にして乳液を得た。
【００６９】
試験例３．パネル試験
本発明の線維芽細胞賦活剤を含むクリームについて、パネルテストにより皮膚に対する効果を調べた。
［試料］
(1)参考処方例１のクリーム
(2)処方例３のクリーム
(3)参考処方例１のＢ成分中、実施例１の抽出物溶液に代えて精製水を用いるほかは参考処方例１と同様にして得られたクリーム（対照）
【００７０】
［試験方法］
無作為に抽出した年齢１８〜５０歳の女性４０名を被験者として２０名ずつ２つのグループに分け、一方のグループに参考処方例１のクリームと対照のクリームを、又他方のグループに処方例３のクリームと対照のクリームを割り振り、それぞれ左右の頬部に、処方例又は対照のクリームを１日２回（朝、晩）、1ヵ月間塗布してもらった後、小ジワに対する改善効果及び肌のはり、艶に対する改善効果を、以下の評価基準に基づいて評価した。
【００７１】
［評価基準］
（小ジワに対する改善効果）
A：殆ど目立たなくなった
B：かなり目立たなくなった
Ｃ：わずかに目立たなくなった
Ｄ：変わらない
Ｅ：かえって増えた
（肌のはり、艶に対する改善効果）
Ａ：明らかに改善された
Ｂ：かなり改善された
C：僅かに改善された
D：変わらない
E：かえって悪くなった
【００７２】
［結果］
結果を表２に示す。なお、表２のＡ〜Ｅの各評価欄の数字は、被験者20名中当該評価を行った被験者の割合（％）を示す。
【００７３】
【表２】
【００７４】
表２の結果から、アブラナ科ブラシカ属植物抽出物もしくは該抽出物とアスコルビン酸類（Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド）からなる線維芽細胞賦活剤を配合したクリームが、すぐれた皮膚老化防止効果、肌荒れ改善効果を有すること、及びそれら効果は、特にアブラナ科ブラシカ属植物抽出物とアスコルビン酸類（Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド）からなる線維芽細胞賦活剤を配合したクリームに於いてより顕著に認められることが判る。
【発明の効果】
アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物は、皮膚線維芽細胞に対して強い賦活作用を示すと共に、天然物由来であるが故に生体安全性にもすぐれており、皮膚の老化防止、肌荒れの予防・改善を目的とする皮膚外用剤用の線維芽細胞賦活剤として用いて有用である。又本発明に従って、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物にアスコルビン酸類を組み合わせることにより、高い生体安全性はそのまま保持され、しかも有効性のより一層改善された線維芽細胞賦活剤が提供される。
従って本発明によれば、さらに、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物にアスコルビン酸類が組み合わされてなる上記線維芽細胞賦活剤が配合され、皮膚の老化防止、肌荒れの予防・改善に有効でかつ安全性の高い皮膚外用剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、試験例１の各試料のMTT値を示すグラフである（縦軸：MTT値）。

Claims (2)

1. アブラナ科ブラシカ属植物の白芥子（Brassica hirta)の抽出物とアスコルビン酸類の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とを、固形分重量比で２：１〜１：１００の範囲で含んでなる線維芽細胞賦活剤。
2. 請求項１に記載の線維芽細胞賦活剤を含有する皮膚外用剤。