JP2003155290A - エクチナサイジン７８６、その取得方法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 エクチナサイジン７４３の安定等価体である
新規なエクチナサイジン類化合物を提供する。 【解決手段】 下記構造式で表されるエクチナサイジン
７８６及び群体ホヤから分離精製する方法及び抗癌剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はエクチナサイジン７
４３の安定等価体である新規なエクチナサイジン類化合
物に関する。

【０００２】

【従来の技術】カリブ海に生息する群体ホヤ、エクチナ
サイジア種タービナータ(Ecteinascidia turbinate)の
エタノールエキスがインビボにおいて強力な抗腫瘍活性
を示すことが約４０年前に報告されて以来、そこに含ま
れる成分の検索が米国イリノイ大学のラインハルト(Rin
ehart)教授のグループによって精力的に行われ、その結
果、下記構造式で表されるエクチナサイジン７４３(Ect
einascidin743,Et743)が単離され、絶対配置を含めて構
造決定されている(例えばSakai, R. et al. J. Proc. N
atl. Acad. Sci. USA 1992, 89, 11456-11460を参照)。
エクチナサイジン７４３は強力な抗腫瘍活性を有するこ
とから、現在、欧米諸国において抗癌剤としてのフェー
ズ２の臨床試験が行われている。

【０００３】

【化２】

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、エクチ
ナサイジン７４３は天然から極微量にしか取得すること
ができないことに加え、α−アミノアルコール官能基を
有しているので化学的に不安定な物質である。従ってそ
の大量供給は必ずしも容易なことではなく、実用的供給
方法の開発とともにその安定等価体の探索が望まれてい
る。そこで、本発明においては、エクチナサイジン７４
３の安定等価体である新規なエクチナサイジン類化合物
を提供することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上記の点に鑑み、本発明
は下記構造式で表されるエクチナサイジン７８６であ
る。また、本発明はエクチナサイジア種に属する群体ホ
ヤを均質化（ホモジナイズ）した後、リン酸緩衝液を用
いてｐＨを５．５〜７．５に保ちながらシアン化カリウ
ムで処理し、そのメタノール抽出液からクロマトグラフ
ィー法により分離精製することによるエクチナサイジン
７８６の取得方法である。また、エクチナサイジン７４
３の製造中間体としてのエクチナサイジン７８６の使用
である。また、エクチナサイジン７８６を有効成分とす
る抗癌剤である。

【０００６】

【化３】

【０００７】

【発明の実施の形態】本発明のエクチナサイジン７８６
はエクチナサイジア種に属する群体ホヤを均質化（ホモ
ジナイズ）した後、リン酸緩衝液を用いてｐＨを５．５
〜７．５に保ちながらシアン化カリウムで処理し、その
メタノール抽出液からクロマトグラフィー法により分離
精製することにより取得される。クロマトグラフィー法
は、例えば、カラムクロマトグラフィーや薄層クロマト
グラフィーなど、天然有機化合物の分離精製のために通
常使用されるものを使用して行われる。カラムクロマト
グラフィーにおいては、例えば、順相系であるＴＳＫ−
Ｇ３０００Ｓ、ダイヤイオンＨＰ−２０、セファデック
スＬＨ−２０、ＤＥＡＥセファデックス、逆相系のＲＰ
−１８などが使用できる。また、薄層クロマトグラフィ
ーにおいてはシリカゲルのほか、ＲＰ−１８などが使用
できる。

【０００８】以下、本発明を実施例にて詳細に説明する
が、本発明は以下の記載に何ら限定されるものではな
い。

【０００９】

【実施例】図１に示す基本工程手順にてエクチナサイジ
ン７８６を取得した。詳細は以下の通りである。

【００１０】工程１：２０００年３月〜７月、タイ国プ
ーケット島東岸の水深１ｍ〜５ｍから群体ホヤ、エクチ
ナサイジア種スルストニ（Ecteinascidia thurstoni）
（湿重量３８ｋｇ）を採取し、これをメタノール（２０
Ｌ）中で均質化（ホモジナイズ）した後、リン酸緩衝液
にてｐＨを７．０に保ちながらシアン化カリウム（２５
ｇ）を徐々に添加してから５時間攪拌した。その後、析
出物をろ過して除くことによりメタノール抽出液を得
た。

【００１１】工程２：上記のメタノール抽出液を濃縮し
て得た水を含むメタノール濃縮液（２Ｌ）に酢酸エチル
（８Ｌ）を加えて分配して酢酸エチル抽出液を得た。

【００１２】工程３：上記の酢酸エチル抽出液を濃縮し
た後、得られた残留物（２０ｇ）にメタノール（１５０
ｍＬ）およびヘキサン（６００ｍＬ）を加えて分配し、
下層よりメタノール抽出液を得た。

【００１３】工程４：上記のメタノール抽出液を濃縮し
て得られた残留物（１２ｇ）からセファデックスＬＨ−
２０を用いてクロロホルム−メタノール１：１溶媒で溶
出される画分を得、続いて酢酸エチルで溶出される画分
を得、最後にヘキサン−酢酸エチル９：１溶媒で溶出さ
れる画分を得た。

【００１４】工程５：工程４で得られた画分（３５０ｍ
ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにアプライ
し、ヘキサン−酢酸エチル４：１溶媒を用いて分離精製
することにより、２種類の結晶性物質を得た。それぞれ
をメタノール再結晶することにより無色結晶物質Ａ（６
０．７ｍｇ）と無色結晶物質Ｂ（２２５．０ｍｇ）を得
た。

【００１５】構造解析の結果、無色結晶性物質Ａは、分
子式Ｃ₄₀Ｈ₄₂Ｎ₄Ｏ₁₁Ｓで表される新規なエクチナサイ
ジン類化合物であるエクチナサイジン７８６(Et786)で
あることが判明した。エクチナサイジン７８６の物理化
学的性状は以下の通りである。

【００１６】mp 197-199℃ (dec) [α]_D ²⁰ -156.9 (c 0.6, CHCl₃) CD Δεnm (c 0.13 mmol/L, methanol, 24℃) 0 (314),
-13.0 (291), -2.3 (247), -60.1 (223), 0 (214), +7
0.6 (207) HR-FABMS m/z (NBA) calcd. for C₄₀H₄₃N₄O₁₁S (M+H),
787.2649, found 787.2652 (+0.3 mmu). IR (KBr) 3430, 2930, 2250w, 1760, 1730, 1620, 1590
cm^-1.¹ H-NMR(500MHz)と¹³C-NMR(125MHz)は表１を参照のこと
(CDCl₃)。

【００１７】

【表１】

【００１８】エクチナサイジン７８６の構造式を以下に
示す（原子ナンバリングは表１に対応）。

【００１９】

【化４】

【００２０】また、無色結晶性物質Ｂは、既にラインハ
ルト教授のグループによって報告されている分子式Ｃ₄₀
Ｈ₄₂Ｎ₄Ｏ₁₀Ｓで表されるエクチナサイジン７７０(Et77
0)（米国特許第５０８９２７３号）と旋光度の符合を除
いて各種スペクトルデータが一致することが判明した。

【００２１】エクチナサイジン７７０の構造式を以下に
示す（原子ナンバリングは表１に対応）。

【００２２】

【化５】

【００２３】上記の方法によれば、シアン化カリウム処
理によりエクチナサイジン７４３の２１位の水酸基がシ
アノ基に変換されることから化学的に不安定なα−アミ
ノアルコール官能基が化学構造的に解消される。エクチ
ナサイジン７８６はエクチナサイジン７７０のＳ−オキ
サイド体であるが、エクチナサイジン７８６は、例え
ば、１）パラジウム触媒を用いた水素添加処理、２）メ
タノールなどの溶媒中での塩化チタン（ＩＩＩ）水溶液
処理、３）アセトン中でのヨウ化ナトリウムや無水トリ
フルオロ酢酸を用いた還元処理などによりエクチナサイ
ジン７７０に変換可能であり、エクチナサイジン７７０
は、例えば、含水アセトニトリル中での硝酸銀処理によ
りエクチナサイジン７４３に変換可能であることから、
エクチナサイジン７８６はエクチナサイジン７４３の製
造中間体としての安定等価体として有用な化合物とな
る。また、以下のようにエクチナサイジン７８６自体も
優れた抗腫瘍活性を有する。この際、エクチナサイジン
７８６はエクチナサイジン７７０に比べて水やアルコー
ルなどの高極性溶媒に対する溶解性に優れているという
特性を有するので、水溶性製剤化が容易となるといった
効果が期待される。

【００２４】エクチナサイジン７８６の抗腫瘍活性：10
％ウシ胎児血清を含むMcCoy's 5A培地を用いてインビト
ロ培養により維持したヒト大腸癌細胞株HCT116（ATCCよ
り入手）のシングルセルサスペンジョンをマイクロプレ
ート中に注入し（2×10³cell/well）、ここに各種濃度
のエクチナサイジン７８６を加え、４日間培養した後、
細胞計測キット（同仁化学研究所社製）を用いて細胞増
殖の程度を測定し、対照群と比較して細胞増殖を50％阻
害するエクチナサイジン７８６の濃度（IC₅₀）を求めた
ところ、0.014μMという高い抗腫瘍活性を示す数値であ
った。

【００２５】

【発明の効果】本発明によれば、エクチナサイジン７４
３の安定等価体である新規なエクチナサイジン類化合物
であるエクチナサイジン７８６が提供される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 エクチナサイジン７８６を取得するための基
本工程手順。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 プマングーラ スニポーン タイ国 10250、バンコック、プラベイ、 オン−ヌジュ、ミトラハップ モウ−バン 604 (72)発明者 スワンボリラック カニ タイ国 10900、バンコック、ラドプラオ ロード、ラドプラオ１ 230／37 Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 CB31 MA01 NA14 ZB26 4C087 AA01 AA02 AA04 AA05 BB27 CA40 NA14 ZB26

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記構造式で表されるエクチナサイジン
   ７８６。 【化１】
2. 【請求項２】 エクチナサイジア種に属する群体ホヤを
   均質化（ホモジナイズ）した後、リン酸緩衝液を用いて
   ｐＨを５．５〜７．５に保ちながらシアン化カリウムで
   処理し、そのメタノール抽出液からクロマトグラフィー
   法により分離精製することによるエクチナサイジン７８
   ６の取得方法。
3. 【請求項３】 エクチナサイジン７４３の製造中間体と
   してのエクチナサイジン７８６の使用。
4. 【請求項４】 エクチナサイジン７８６を有効成分とす
   る抗癌剤。