ES2864131T3 - Derivados de [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina como inhibidores de PDE2 - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene fórmula (I) **(Ver fórmula)** o una forma estereoisomérica del mismo, en la que RA se selecciona del grupo que consiste en H, CH3, CN y CHF2; RB es un radical seleccionado del grupo que consiste en (a), (b) y (c): en los que R1 es H, F o CH3; R2 es H o alquilo C1-4; con la condición de que cuando R2 es H, entonces R1 sea F o CH3; R3 es Ar, Het o Ar-alquenilo C2-4; en el que Ar representa fenilo o naftilo, cada uno opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; CN; NR2AR2B en el que R2A y R2B se selecciona cada uno independientemente de H y CH3; OH; alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; alquilo C1-6 sustituido con CN; cicloalquilo C3-6; alquiloxi C1-6 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y pirazolilo; Het representa (i) un heteroarilo de 5 miembros seleccionado del grupo que consiste en 1H-pirrolilo; tienilo; furanilo; 1H-pirazolilo; 1H- imidazolilo; 1,2-oxazolilo; 1,3-oxazolilo; y tiazolilo; cada uno puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; NR3AR3B en el que R3A y R3B se selecciona cada uno independientemente de H y CH3; y furan-2-ilo; o (ii) un heteroarilo de 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en piridilo, pirimidinilo, pirazinilo y piridazinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; OH; CN; NR4AR4B en el que R4A y R4B se selecciona cada uno independientemente de H y CH3; alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; alquilo C1-4 sustituido con OH; cicloalquilo C3-6; cicloalquiloxi C3-6; alquiloxi C1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C1-4 alquilo C1-4; o (iii) un heterociclilo de 8 a 10 miembros bicíclico parcialmente saturado seleccionado del grupo que consiste en 2,3- dihidro-1-benzofuranilo; 2H-cromenilo; 3,4-dihidro-2H-cromenilo; 2,3-dihidro-1H-indolilo opcionalmente sustituido en la posición 1 con alquilo C1-4, metilsulfonilo, 1-acetilo o fluoroacetilo; 2,2-difluoro-1,3-benzodioxolilo; 1,3-benzodioxolilo opcionalmente sustituido con un sustituyente metilo; 3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazinilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-4; 5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridinilo; 5,6,7,8-tetrahidroquinolinilo opcionalmente sustituido con un sustituyente halo; y 2,3-dihidropirazolo[5,1-b][1,3]oxazolilo; o (iv) un heteroarilo de 9 a 10 miembros bicíclico seleccionado del grupo que consiste en 1-benzofuranilo; 1- benzotiofenilo; 1H-indolilo; 1,3-benzoxazolilo; 1,3-benzotiazolilo; indolizinilo; 1H-bencimidazolilo; imidazo[1,2- a]piridinilo; pirazolo[1,5-a]piridinilo; 1H-tieno[2,3-c]pirazolilo; imidazo[2,1-b]tiazolilo; pirrolo[2,3-c]piridinilo; tieno[3,2- b]piridinilo; quinolinilo; isoquinolinilo; quinoxalinilo; 1,8-naftiridinilo; y 1,6-naftiridinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo; OH; NR5AR5B en el que R5A y R5B se selecciona cada uno independientemente de H y CH3; alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; con la condición de que el compuesto no sea **(Ver fórmula)** o un N-óxido, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina como inhibidores de PDE2

Campo de la invención

La presente invención se refiere a derivados de [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidinilo novedosos como inhibidores de fosfodiesterasa 2 (PDE2). La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos, a procesos para preparar dichos compuestos y composiciones, y al uso de dichos compuestos y composiciones para la prevención y tratamiento de trastornos en que está implicada PDE2, tales como trastornos neurológicos y psiquiátricos.

Antecedentes de la invención

Las fosfodiesterasas (PDE) son una familia de enzimas codificadas por 21 genes y subdivididas 11 familias distintas de acuerdo con propiedades estructurales y funcionales. Estas enzimas inactivan metabólicamente segundos mensajeros intracelulares que se producen ampliamente, monofosfato de adenosina 3',5'-cíclico (AMPc) y monofosfato de guanosina 3',5'-cíclico (GMPc). Estos dos mensajeros regulan una amplia diversidad de procesos biológicos, incluyendo la producción y acción de mediadores proinflamatorios, la función de los canales de iones, la contracción muscular, el aprendizaje, la diferenciación, la apoptosis, la lipogénesis, la glucogenólisis y la gluconeogénesis. Hacen esto mediante activación de proteína cinasa A (PKA) y proteína cinasa G (PKG), que a su vez fosforilan una amplia diversidad de sustratos, incluyendo factores de transcripción y canales de iones que regulan innumerables respuestas fisiológicas. En las neuronas, esto incluye la activación de cinasas dependientes de AMPc y GMPc y la posterior fosforilación de proteínas implicadas en la regulación aguda de la transmisión sináptica, así como en la diferenciación y supervivencia neuronal. Las concentraciones intracelulares de AMPc y GMPc se regulan estrictamente mediante la tasa de biosíntesis por ciclasas y mediante la tasa de degradación por PDE. Las PDE son hidrolasas que inactivan el

Basándose en la especificidad de sustrato, las familias de PDE pueden dividirse en tres grupos: i) las PDE específicas de AMPc, que incluyen PDE4, 7 y 8; ii) las enzimas selectivas de GMPc PDE5, 6 y 9; y iii) las PDE de sustrato doble, PDE1,2 y 3, así como PDE10 y 11.

Además, las PDE se expresan de forma diferencial en todo el organismo, incluyendo el sistema nervioso central. Por lo tanto, diferentes isozimas de PDE pueden tener diferentes funciones fisiológicas. Los compuestos que inhiben selectivamente familias o isozimas de PDE pueden presentar actividad terapéutica particular, menos efectos secundarios, o ambos.

La fosfodiesterasa 2A (PDE2A) inactiva mecanismos de señalización intracelular dependiente de la señalización de nucleótidos cíclico mediada por AMPc y GMPc mediante su degradación (hidrolizando los segundos mensajeros biológicamente pertinentes AMPc y GMPc en AMP y GMP no señalizadores, respectivamente). Se sabe que dichas rutas de señalización desempeñan una función en la regulación de genes implicados en la inducción de la plasticidad sináptica. La inhibición farmacológica de PDE2, por lo tanto, provoca niveles aumentados de plasticidad sináptica (una correlación subyacente del aprendizaje y la memoria), lo que sugiere que la modulación de PDE2A puede ser una diana para aliviar las deficiencias cognitivas observadas en personas que padecen trastornos tales como, por ejemplo, esquizofrenia, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y otros trastornos del SNC asociados con la disfunción cognitiva.

La fosfodiesterasa 2A (PDE2A) se expresa más abundantemente en el cerebro con respecto a los tejidos periféricos. La alta expresión de PDE2 en el sistema límbico (isocorteza, hipocampo, amígdala, habénula, ganglios basales) sugiere que PDE2 puede modular la señalización neuronal implicada en las emociones, la percepción, la concentración, el aprendizaje y la memoria. Además, PDE2 se expresa en el núcleo accumbens, el bulbo olfativo, el tubérculo olfativo y la amígdala, lo que apoya la insinuación de que PDE2 también puede estar implicada en la ansiedad y la depresión. (véase, por ejemplo, Lakics, V. etal. (2010) Quantitative comparison of phosphodiesterase mRNA distribution in human brain and peripheral tissues. Neuropharmacol. 59, 367-374).

Además, se ha demostrado que los inhibidores de PDE2 son beneficiosos en la reducción de la ansiedad inducida por agresión oxidativa, lo que apoya su uso en el tratamiento de la ansiedad en trastornos neuropsiquiátricos y neurodegenerativos que implican agresión oxidativa, tal como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y esclerosis múltiple.

Los inhibidores de PDE2 han mostrado potenciar la potenciación a largo plazo de la transmisión sináptica y mejoran la adquisición y consolidación de la memoria en el reconocimiento de objetos y en los ensayos de reconocimiento social en ratas. Además, los inhibidores de PDE2 han demostrado invertir la falta de memoria de trabajo inducida por MK-801 en el laberinto en T en ratones. Los inhibidores de PDE2 también han mostrado presentar actividad en ensayo de nado forzado y modelos de caja de luz/oscuridad; y mostrar efectos de tipo ansiolítico en ensayos de laberinto en cruz elevado, tablero con orificios y campo abierto y evitar los cambios inducidos por agresión en apoptosis y comportamiento.

Por tanto, los inhibidores de PDE2 pueden ser útiles en el tratamiento de la falta de memoria, trastornos cognitivos, ansiedad, trastorno bipolar y depresión.

El documento WO2015/164508 (Dart Neuroscience, LLC) divulga compuestos de [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidinilo sustituidos como inhibidores de PDE2. El documento WO2017/076900 (Janssen Pharmaceutica NV) divulga [(3S,4R)-3-[5-(difluorometil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-4-metil-1-piperidil]-(2,6-dimetil-4-piridil)metanona.

Aún existe una necesidad de compuestos inhibidores de PDE2 con un equilibrio ventajoso de propiedades, por ejemplo, con potencia mejorada, mejor selectividad contra PDE3 y/o PDE10, y/o mejor estabilidad química o metabólica.

Sumario de la invención

El objeto de la presente invención es proporcionar inhibidores novedosos de PDE2 que pueden ser potencialmente útiles en el tratamiento de enfermedades relacionadas con la actividad enzimática de PDE2.

Por tanto, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I)

y las formas estereoisoméricas de los mismos, en la que

RA se selecciona del grupo que consiste en H, CH3, CN y CHF2;

RB es un radical seleccionado del grupo que consiste en (a), (b) y (c):

R¹ es H, F o CH³ ;

R² es H o alquilo C^1-4 , en particular metilo o n-butilo; con la condición de que cuando R² es H, entonces R¹ sea F o CH³ ;

R³ es Ar, Het o Ar-alquenilo C^2-4; en el que

Ar representa fenilo o naftilo, cada uno opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; CN; NR^{2 A}R^2B en el que R^2A y R^2B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; OH; alquilo C^1-6 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; alquilo C^1-6 sustituido con CN; cicloalquilo C^3-6; alquiloxi C^1-6 opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y pirazolilo; Het representa

(i) un heteroarilo de 5 miembros seleccionado del grupo que consiste en 1 H-pirrolilo; tienilo; furanilo; 1 H-pirazolilo; 1H-imidazolilo; 1,2-oxazolilo; 1,3-oxazolilo; y tiazolilo; cada uno puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; NR^3AR^3B en el que R^3A y R^3B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; y furan-2-ilo; o

(ii) un heteroarilo de 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en piridilo, pirimidinilo, pirazinilo y piridazinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; OH; CN; NR^4AR^4B en el que R^4A y R^4B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1 ,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; alquilo C^1-4 sustituido con OH; cicloalquilo C^3-6; cicloalquiloxi C^3-6; alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C^1-4alquilo C^1-4; o

(iii) un heterociclilo de 8 a 10 miembros bicíclico parcialmente saturado seleccionado del grupo que consiste en 2,3-dihidro-1-benzofuranilo; 2H-cromenilo; 3,4-dihidro-2H-cromenilo; 2,3-dihidro-1 H-indolilo opcionalmente sustituido en la posición 1 con alquilo C^1-4, metilsulfonilo, 1 -acetilo o fluoroacetilo; 2,2-difluoro-1,3-benzodioxolilo; 1,3-benzodioxolilo opcionalmente sustituido con un sustituyente metilo; 3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazinilo opcionalmente sustituido con alquilo C^1-4; 5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridinilo; 5,6,7,8-tetrahidroquinolinilo opcionalmente sustituido con un sustituyente halo; y 2,3-dihidropirazolo[5,1-b][1,3]oxazolilo; o

(iv) un heteroarilo de 9 a 10 miembros bicíclico seleccionado del grupo que consiste en 1-benzofuranilo; 1-benzotiofenilo; 1 H-indolilo; 1,3-benzoxazolilo; 1,3-benzotiazolilo; indolizinilo; 1H-bencimidazolilo; imidazo[1,2-a] piridinilo; pirazolo[1,5-a]piridinilo; 1H-tieno[2,3-c]pirazolilo; imidazo[2,1-b]tiazolilo; pirrolo[2,3-c]piridinilo; tieno[3,2-b] piridinilo; quinolinilo; isoquinolinilo; quinoxalinilo; 1,8-naftiridinilo; y 1,6-naftiridinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo; OH; NR^5AR^5B en el que R^5A y R^5B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente;

con la condición de que el compuesto no sea

y los N-óxidos, y las sales farmacéuticamente aceptables y los solvatos de los mismos.

Es ilustrativa de la invención una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de fórmula (I) como se describe en este documento, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Una ilustración de la invención es una composición farmacéutica hecha mezclando un compuesto de fórmula (I) como se describe en este documento, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Ilustrativo de la invención es un proceso para preparar una composición farmacéutica, que comprende mezclar un compuesto de fórmula (I) como se describe en este documento, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Adicionalmente ilustrativos de la invención son métodos para potenciar la plasticidad neuronal, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se describe en este documento, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o composiciones farmacéuticas descritas en este documento.

Ejemplificando la invención están métodos de tratamiento de un trastorno mediado por la enzima PDE2, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se describe en este documento, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o composiciones farmacéuticas descritas en este documento.

Ejemplificando adicionalmente la invención están métodos de inhibición de la enzima PDE2, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se describe en este documento, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o composiciones farmacéuticas descritas en este documento.

Un ejemplo de la invención es un método de tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo que consiste en trastornos neurológicos y psiquiátricos, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se describe en este documento, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o composiciones farmacéuticas descritas en este documento.

Un ejemplo de la invención es un método de tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo de trastornos neurológicos y psiquiátricos seleccionados de trastornos y afecciones psicóticas; trastornos de ansiedad; trastornos del movimiento; drogadicción; trastornos del estado de ánimo; trastornos neurodegenerativos; trastornos o afecciones que comprenden como síntoma una deficiencia en la atención y/o en las funciones intelectuales; apoplejía; y trastornos autistas, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se describe en este documento, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo o composiciones farmacéuticas descritas en este documento.

Un ejemplo de la invención es un método de tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo que consiste en trastornos neurológicos y psiquiátricos, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se describe en este documento, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o composiciones farmacéuticas descritas en este documento.

Un ejemplo de la invención es un método de tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo de trastornos neurológicos y psiquiátricos seleccionados de trastornos y afecciones psicóticas; trastornos de ansiedad; trastornos del movimiento; drogadicción; trastornos del estado de ánimo; trastornos neurodegenerativos; trastornos o afecciones que comprenden como síntoma una deficiencia en la atención y/o en las funciones intelectuales; trastornos relacionados con la adquisición y consolidación de la memoria; apoplejía; y trastornos autistas, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato del mismo, o composiciones farmacéuticas descritas en este documento.

También ejemplificando la invención está un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato del mismo, o una composición farmacéutica descrita en este documento, para su uso como medicamento.

Ejemplificando adicionalmente la invención está un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato del mismo, o una composición farmacéutica de acuerdo con la invención para su uso en el tratamiento, prevención, mejora, control o reducción del riesgo de diversos trastornos neurológicos y psiquiátricos asociados con disfunción de fosfodiesterasa 2 en un mamífero, incluyendo un ser humano, cuyo tratamiento o prevención se ve afectado o facilitado por la inhibición de fosfodiesterasa 2.

Un ejemplo de la invención es un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la presente invención o una composición farmacéutica de acuerdo con la invención para su uso en el tratamiento, prevención, mejora, control o reducción del riesgo de diversos trastornos seleccionados de trastornos y afecciones psicóticas; trastornos de ansiedad; trastornos del movimiento; drogadicción; trastornos del estado de ánimo; trastornos neurodegenerativos; trastornos o afecciones que comprenden como síntoma una deficiencia en la atención y/o las funciones intelectuales; trastornos relacionados con la adquisición y consolidación de la memoria; apoplejía; y trastorno autista.

Un ejemplo de la invención es un método de tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, deterioro cognitivo leve, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, síndrome de Down, demencia asociada con apoplejía, demencia asociada con enfermedad de Parkinson y demencia asociada con beta-amiloide, preferiblemente enfermedad de Alzheimer, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o composiciones farmacéuticas descritas en este documento.

Otro ejemplo de la invención es un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo descrito en este documento para su uso en el tratamiento de: (a) enfermedad de Alzheimer, (b) deterioro cognitivo leve, (c) senilidad, (d) demencia, (e) demencia con cuerpos de Lewy, (f) síndrome de Down, (g) demencia asociada con apoplejía, (h) demencia asociada con enfermedad de Parkinson, (i) demencia asociada con betaamiloide, (j) trastornos depresivos y (k) trastornos de ansiedad, en un sujeto que lo necesita.

Descripción de las figuras

La figura 1 muestra el efecto del compuesto 110 sobre la inducción por HFS débil de potenciación a largo plazo (LTP) en la sinapsis de fibra musgosa.

La figura 2 muestra el diseño experimental para estimulación por ráfagas teta.

La figura 3 muestra el efecto del compuesto 70 sobre la inducción por HFS débil de potenciación a largo plazo (LTP) en la sinapsis de fibra musgosa.

La figura 4 muestra el efecto del compuesto 25a sobre la inducción por HFS débil de potenciación a largo plazo (LTP) en la sinapsis de fibra musgosa.

La figura 5 muestra el efecto del compuesto 220 sobre la inducción por HFS débil de potenciación a largo plazo (LTP) en la sinapsis de fibra musgosa.

Las figuras 6 a 15 (compuestos 220, 110, 93, 32, 70, 25a, 281,295, 356 y 335, respectivamente) muestran la medición de los niveles de GMPc en LCR en perros Marshall Beagle. En

las figuras 6 a 15, las diferentes dosis de los compuestos de ensayo se representan de la siguiente manera: ■ 0 mg/kg;

• 0,5 mg/kg; ♦ 0,75 mg/kg ▲ 1 mg/kg; ▼ 1,25 mg/kg; * 1,5 mg/kg; V 2,5 mg/kg.

La figura 16 muestra los efectos agudos del compuesto 110 sobre la función sináptica in vivo en la sinapsis colateral de Schaffer (SC)-CA1. La figura 16a muestra una representación esquemática de la ubicación del electrodo estimulador en la trayectoria colateral de Schaffer y del electrodo de registro monopolar en el estrato radiado de la zona Cornu Ammonis CA1 del hipocampo; la figura 16b muestra un resumen de las curvas I/O generadas al aplicar estímulos de intensidad creciente y al medir las pendientes iniciales del fEPSP resultante que no reveló diferencias en la excitabilidad básica de la trayectoria SC-CA1; la figura 16c muestra morfologías de respuesta durante el estado basal, 30 min después del tratamiento y 30 min después del protocolo con HFS tetánico. Obsérvese similitud en la magnitud de las respuestas fEPSP durante los registros basales entre los grupos de tratamiento, que aumentaron por encima del estado basal y de las condiciones de vehículo en el grupo tratado con compuesto 110; la figura 16d muestra el ciclo temporal de la pendiente de fEPSP después de 30 min del registro basal, 30 min después de la administración de compuesto 110, y el protocolo de HFS tetánico se aplicó y se registró la pendiente de fEPSP durante otras 2 horas. Obsérvese que el compuesto 110 a la dosis de 20 y 40 mg/kg potenciaba la transmisión sináptica basal antes del protocolo de HFS tetánico y la pendiente de los fEPSP durante las 2 horas completas después del protocolo de HFS (diagrama insertado); la figura 16e muestra que, cuando se promediaban los fEPSP en periodos de 30 min, el compuesto 110 (40 mg/kg) potenciaba la magnitud de transmisión sináptica y la diferencia con el grupo tratado con vehículo se mantenía significativa. Los valores se expresan como un porcentaje de los valores registrados antes de HFS y los resultados se presentan como la media ± ETM. Se aplicó análisis unidireccional de la varianza (ANOVA) y ensayos de análisis a posteriori de diferencias significativas mínimas (LSD) para las comparaciones de grupos.

En la figura 16b y c los patrones tienen los siguientes significados:

vehículo (n = 10); ■ ■ compuesto 110 (mg/kg) (20) n = 9;

compuesto 110 (mg/kg) (40) n = 8; en la figura 16d y 16e los patrones tienen los siguientes significados: ■ vehículo (n ⁼ 10^);

compuesto 110 (mg/kg), (20) n = 9; ■ compuesto 110 (mg/kg) (40) n = 8

Descripción detallada de la invención

Definiciones

"Alquilo C^1-4", como se usa en este documento, en solitario o como parte de otro grupo, define un radical hidrocarbonado saturado, lineal o ramificado que tiene 1,2, 3 o 4 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, 1 -propilo, 1 -metilo, butilo, 1 -metil-propilo, 2-metil-1 -propilo, 1, 1 -dimetiletilo y similares. El término "alquilo C^1-6", como se usa en este documento, como un grupo o parte de un grupo representa un radical hidrocarbonado saturado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 átomos de carbono tal como los grupos definidos para alquilo C^1-4 y ⁿ -pentilo, ⁿ -hexilo, 2-metilbutilo y similares. ''Alquiloxi C^1-4" indicará un radical éter en el que alquilo C^1-4 es como se define en este documento. "Alquiloxi C^1-6" indicará un radical éter en el que alquilo C^1-6 es como se define en este documento. "Halo" indicará fluoro, cloro y bromo. "Cicloalquilo C^3-6" indicará ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. "Cicloalquiloxi C^3-6" indicará un radical éter en el que cicloalquilo C^3-6 es como se define en este documento.

Siempre que se usa el término "sustituido" en la presente invención, se entiende que, salvo que se indique de otro modo o esté claro por el contexto, indica que uno o más hidrógenos, preferiblemente de 1 a 3 hidrógenos, o de 1 a 2 hidrógenos, o 1 hidrógeno, en el átomo o radical indicado en la expresión que usa "sustituido" se remplaza con una selección del grupo indicado, con la condición de que no se exceda la valencia normal, y que la sustitución produzca un compuesto químicamente estable, es decir, un compuesto que sea suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento hasta un grado útil de pureza de una mezcla de reacción, y formulación en un agente terapéutico.

Se entiende que las formas de N-óxido de los compuestos de acuerdo con la fórmula (I) comprenden aquellos compuestos de fórmula (I) en la que uno o varios átomos de nitrógeno se oxidan en el llamado N-óxido, particularmente aquellos N-óxidos en los que está oxidado un átomo de nitrógeno en un radical piridinilo. Los N-óxidos puede formarse siguiente procedimientos conocidos por los expertos en la materia. La reacción de N-oxidación en general puede realizarse haciendo reaccionar el material de partida de fórmula (I) con un peróxido orgánico o inorgánico apropiado. Los peróxidos inorgánicos apropiados comprenden, por ejemplo, peróxido de hidrógeno, peróxidos de metales alcalino, por ejemplo, peróxido de sodio, peróxido de potasio; peróxidos orgánicos apropiados pueden comprender peroxiácidos tales como, por ejemplo, ácido bencenocarboperoxoico o ácido bencenocarboperoxoico halosustituido, por ejemplo, ácido 3-cloroperoxibenzoico (o ácido 3-cloroperbenzoico), ácidos peroxoalcanoicos, por ejemplo, ácido peroxoacético, alquilhidroperóxidos, por ejemplo, hidroperóxido de terc-butilo. Disolventes adecuados son, por ejemplo, agua, alcanoles inferiores, por ejemplo, etanol y similares, hidrocarburos, por ejemplo, tolueno, cetonas, por ejemplo, 2-butanona, hidrocarburos halogenados, por ejemplo, diclorometano, y mezclas de dichos disolvente.

Por tanto, en una realización particular, la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) en la que R³ es Het, y Het es un óxido de un radical piridilo opcionalmente sustituido como se describe en este documento, es decir, un radical óxido de piridinioilo opcionalmente sustituido.

El término "sujeto", como se usa en este documento, se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, mucho más preferiblemente un ser humano, que es o ha sido objeto de tratamiento, observación o experimento.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz", como se usa en este documento, significa esa cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta biológica o medicinal en un sistema de tejido, animal o ser humano que se espera por un investigador, veterinario, doctor en medicina u otro médico, que incluye alivio de los síntomas de la enfermedad o trastorno que se está tratando.

Como se usa en este documento, el término "composición" pretende abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.

Anteriormente en este documento y a partir de ahora en este documento, se entiende que la expresión "compuesto de fórmula (I)" incluye las sales de adición, los solvatos y los estereoisómeros del mismo.

Las expresiones "estereoisómeros" o "formas estereoquímicamente isoméricas" anteriormente en este documento o a partir de ahora en este documento se usan indistintamente.

La invención incluye todos los estereoisómeros del compuesto de fórmula (I) como un estereoisómero puro o como una mezcla de dos o más estereoisómeros.

Los enantiómeros son estereoisómeros que no son imágenes especulares superponibles entre sí. Una mezcla 1: 1 de un par de enantiómeros es un racemato o mezcla racémica. Los diastereómeros (o diastereoisómeros) son estereoisómeros que no son enantiómeros, es decir, no están relacionados como imágenes especulares. Por lo tanto, la invención incluye enantiómeros, diastereoisómeros, racematos.

En los compuestos de acuerdo con la invención, los enlaces mostrados con una cuña de líneas paralelas (

■ i i i i

) representan enlaces proyectados por debajo del plano del dibujo, mientras que los enlaces mostrados con una cuña en negrita (

) representan enlaces proyectados por encima del plano del dibujo.

La configuración absoluta se especifica de acuerdo con el sistema de Cahn-Ingold-Prelog. La configuración en un átomo asimétrico se especifica por R o S. Los compuestos resueltos cuya configuración absoluta no es conocida pueden denominarse (+) o (-) dependiendo de la dirección en que hacen rotar la luz polarizada en el plano.

Cuando se identifica un estereoisómero específico, esto significa que dicho estereoisómero está sustancialmente libre, es decir, asociado con menos de un 50 %, preferiblemente menos de un 20 %, más preferiblemente menos de un 10 %, incluso más preferiblemente menos de un 5 %, en particular menos de un 2 % y mucho más preferiblemente menos de un 1 %, de los otros isómeros. Por tanto, cuando un compuesto de fórmula (I) se especifica, por ejemplo, como (R), esto significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero (S).

Además, algunas de las formas cristalinas para los compuestos de la presente invención pueden existir como polimorfos y, por tanto, se pretende que estén incluidos en la presente invención. Además, algunos de los compuestos de la presente invención pueden formar solvatos con agua (es decir, hidratos) o disolventes orgánicos comunes, y se pretende también que dichos solvatos estén abarcados dentro del alcance de esta invención.

Para su uso en medicina, las sales de los compuestos de esta invención se refieren a "sales farmacéuticamente aceptables" atóxicas. Sin embargo, otras sales pueden ser útiles en la preparación de compuestos de acuerdo con esta invención o de sus sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas de los compuestos incluyen sales de adición de ácido que pueden formarse, por ejemplo, mezclando una solución del compuesto con una solución de un ácido farmacéuticamente aceptable tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbónico o ácido fosfórico. Además, cuando los compuestos de la invención portan un resto ácido, las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos adecuadas pueden incluir sales de metales alcalinos, por ejemplo, sales de sodio o potasio; sales de metales alcalinotérreos, por ejemplo, sales de calcio o magnesio; y sales formadas con ligandos orgánicos adecuados, por ejemplo, sales de amonio cuaternario.

Los ácidos representativos que pueden usarse en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, aunque sin limitación, los siguientes: ácido acético, ácido 2,2-dicloroacético, aminoácidos acilados, ácido adípico, ácido algínico, ácido ascórbico, ácido L-aspártico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido 4-acetamidobenzoico, ácido (+)-alcanfórico, ácido alcanforsulfónico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciclámico, ácido etano-1,2-disulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glucoheptónico, ácido D-glucónico, ácido D-glucurónico, ácido L-glutámico, ácido beta-oxo-glutárico, ácido glicólico, ácido hipúrico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido (+)-L-láctico, ácido (±)-DL-láctico, ácido lactobiónico, ácido maleico, ácido (-)-L-málico, ácido malónico, ácido (±)-DL-mandélico, ácido metanosulfónico, ácido naftaleno-2-sulfónico, ácido naftaleno-1,5-disulfónico, ácido 1-hidroxi-2-naftoico, ácido nicotínico, ácido nítrico, ácido oleico, ácido orótico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido fosfórico, ácido L-piroglutámico, ácido salicílico, ácido 4-amino-salicílico, ácido sebácico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tánico, ácido (+)-L-tartárico, ácido tiociánico, ácido p toluenosulfónico, ácido trifluorometilsulfónico y ácido undecilénico. Las bases representativas que pueden usarse en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, aunque sin limitación, las siguientes: amoniaco, L-arginina, benetamina, benzatina, hidróxido de calcio, colina, dimetiletanolamina, dietanolamina, dietilamina, 2-(dietilamino)-etanol, etanolamina, etilendiamina, W-metil-glucamina, hidrabamina, 1H-imidazol, L-lisina, hidróxido de magnesio, 4-(2-hidroxietil)-morfolina, piperazina, hidróxido de potasio, 1-(2-hidroxietil)-pirrolidina, amina secundaria, hidróxido de sodio, trietanolamina, trometamina e hidróxido de cinc.

Los nombres de los compuestos de la presente invención se generaron de acuerdo con las normas de nomenclatura acordadas por el Chemical Abstracts Service (CAS) usando el programa informático de Advanced Chemical Development, Inc. (producto ACD/Name versión 10.01; desarrollo 15494, 1 de diciembre de 2006 o producto ACD/ChemSketch versión 12.5; desarrollo 47877, 20 de abril de 2011) o de acuerdo con las normas de nomenclatura acordadas por la International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC) usando el programa informático de Advanced Chemical Development, Inc. (producto ACD/Name versión 10.01.0.14105, octubre de 2006). En el caso de formas tautoméricas, se generó el nombre de la forma tautomérica representada de la estructura. La otra forma tautomérica no representada también se incluye dentro del alcance de la presente invención.

La presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I) como se define anteriormente en este documento y sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos.

En una realización, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I)

y las formas estereoisoméricas de los mismos, en la que

R² es H o alquilo C^1-4 , en particular metilo o n-butilo; con la condición de que cuando R² es H, entonces R¹ sea F o CH³ ;

R³ es Ar o Het; en el que

Ar representa fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; CN; OH; alquilo C^1-6opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; alquilo C^1-6 sustituido con CN; cicloalquilo C^3-6; y alquiloxi C^1-6 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente;

Het representa

(i) un heteroarilo de 5 miembros seleccionado del grupo que consiste en 1 H-pirrolilo; tienilo; furanilo; 1 H-pirazolilo; 1H-imidazolilo; 1,2-oxazolilo; 1,3-oxazolilo; y tiazolilo; cada uno puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; NR^3AR^3B en el que R^3A y R^3B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; y furan-2-ilo; o

(ii) un heteroarilo de 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en piridilo, pirimidinilo, pirazinilo y piridazinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; OH; CN; NR^4AR^4B en el que R^4A y R^4B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1 ,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; cicloalquilo C^3-6; cicloalquiloxi C^3-6; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; o

(iii) un heterociclilo de 8 a 10 miembros bicíclico parcialmente saturado seleccionado del grupo que consiste en 2,3-dihidro-1-benzofuranilo; 2H-cromenilo; 3,4-dihidro-2H-cromenilo; 2,3-dihidro-1 H-indolilo opcionalmente sustituido en la posición 1 con alquilo C^1-4, metilsulfonilo, 1 -acetilo o fluoroacetilo; 2,2-difluoro-1,3-benzodioxolilo; 1,3-benzodioxolilo opcionalmente sustituido con un sustituyente metilo; 5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridinilo; 5,6,7,8-tetrahidroquinolinilo opcionalmente sustituido con un sustituyente halo; y 2,3-dihidropirazolo[5,1-b][1,3]oxazolilo; o (iv) un heteroarilo de 9 a 10 miembros bicíclico seleccionado del grupo que consiste en 1-benzofuranilo; 1-benzotiofenilo; 1 H-indolilo; 1,3-benzoxazolilo; 1,3-benzotiazolilo; indolizinilo; 1H-bencimidazolilo; imidazo[1,2ajpiridinilo; pirazolo[1,5-a]piridinilo; 1H-tieno[2,3-c]pirazolilo; tieno[3,2-b]piridinilo; quinolinilo; 1,8-naftiridinilo; y 1,6-naftiridinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo; OH; NR5AR5B en el que R5A y R5B se selecciona cada uno independientemente de H y CH3; alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C1-4 opcionalmente sustituido con 1 ,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente;

con la condición de que el compuesto no sea

y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En una realización particular, R^A es CH³ o CHF² ; y el resto de variables son como se definen en este documento.

En una realización particular, R^B se selecciona del grupo que consiste en (a) y (c) y el resto de variables son como se definen en este documento.

En una realización particular, R^A es CH³ o CHF² ; R^B se selecciona del grupo que consiste en (a) y (c) y el resto de variables son como se definen en este documento.

En una realización particular, R¹ es H y R² es alquilo C^1-4, en particular metilo o n-butilo; y el resto de variables son como se definen en este documento.

En una realización particular, R³ es Het y el resto de variables son como se definen en este documento.

En una realización particular, R³ es

(i) un heteroarilo de 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en piridilo, pirimidinilo, pirazinilo y piridazinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; OH; CN; NR^4AR^4B en el que R^4A y R^4B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1 ,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; cicloalquilo C^3-6; cicloalquiloxi C^3-6; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; o

(ii) un heteroarilo de 9 a 10 miembros bicíclico seleccionado del grupo que consiste en 1-benzofuranilo; 1-benzotiofenilo; 1 H-indolilo; 1,3-benzoxazolilo; 1,3-benzotiazolilo; indolizinilo; 1H-bencimidazolilo; imidazo[1,2-a]piridinilo; pirazolo[1,5-a]piridinilo; 1H-tieno[2,3-c]pirazolilo; tieno[3,2-b]piridinilo; quinolinilo; 1,8-naftiridinilo; y 1,6-naftiridinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo; OH; NR^5AR^5B en el que R^5A y R^5B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1 ,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1 ,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente;

y el resto de variables son como se definen en este documento.

En una realización adicional, R³ es

(i) un heteroarilo de 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en piridilo, pirimidinilo, pirazinilo y piridazinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; NR^4AR^4B en el que R^4A y R^4B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ;

alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; cicloalquilo C^3-6; cicloalquiloxi C^3-6; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; o

(ii) un heteroarilo de 9 a 10 miembros bicíclico seleccionado del grupo que consiste en 1-benzofuranilo; 1-benzotiofenilo; 1 H-indolilo; 1,3-benzoxazolilo; 1,3-benzotiazolilo; indolizinilo; 1H-bencimidazolilo; imidazo[1,2-a]piridinilo; pirazolo[1,5-a]piridinilo; 1H-tieno[2,3-c]pirazolilo; tieno[3,2-b]piridinilo; quinolinilo; 1,8-naftiridinilo; y 1,6-naftiridinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo; NR^5AR^5B en el que R^5A y R^5B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ;

alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente;

y el resto de variables son como se definen en este documento.

En una realización, el compuesto de fórmula (I) como se define en este documento, es en particular un compuesto de fórmula l-a o l-b

en la que todas las variables son como se definen en este documento.

Más en particular, el compuesto de fórmula (I) como se define en este documento, tiene la fórmula (l-b 1)

en la que todas las variables son como se definen en este documento.

en los que

R^3A y R^3b se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; halo; CN; NR^{4 a}R^4b en el que R^4a y R^4b se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; cicloalquilo C^3-6; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y

R^3c se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, alquilo C^1-3, ciclopropilo, alquiloxi C^1-3 , ciclopropiloxi y CF³ ; y R^3d y R^3e se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, Cl, CN, alquilo C ^1-3, ciclopropilo, alquiloxi C^1-3 , ciclopropiloxi, CHF² , CF³ , OCHF² y OCF³ ; con la condición de que R^3d y R^3e no sean simultáneamente hidrógeno.

En particular, R^3a y R^3b se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; cloro; -NH² ; alquilo C^1-4; -CF³ ; ciclopropilo; -OCH³ ; -OCH(CH³)² ; -OCHF² ; y -OCF³.

Más en particular, R^3a y R^3b se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en cloro; alquilo C ^1-4; -CF³ ; ciclopropilo; -OCH³ ; -OCH(CH³)² ; -OCHF² ; y -OCF³.

En particular, R^3a es Cl o CH³ y R^3b se selecciona del grupo que consiste en CH³ , -OCH³ , -CF³ y ciclopropilo.

En una realización adicional, R^3a es Cl o CH³ y R^3b es CH³ u -OCH³.

En particular, R^3c se selecciona del grupo que consiste en F, CH³ y -OCH³ ; R^3d se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, CH³ , ciclopropilo y -OCH³ ; y R^3e se selecciona del grupo que consiste en Cl, CH³ , ciclopropilo, -OCH³ ; -OCH(CH³)² ; ciclopropiloxi; CHF² y OCHF². En una realización adicional R^3c es F.

En una realización adicional, el compuesto de acuerdo con la invención es un compuesto que tiene fórmula (I-a), en la que R² es alquilo C^1-4, en particular metilo o n-butilo.

Preparación de los compuestos

Procedimiento experimental 1

Los compuestos finales en los que R^B es un radical de fórmula (a) o de fórmulas (b) o (c) denominados en este documento compuestos de fórmula (I-A) y fórmula (I-BC) en las que ---- representa CH² o CH²CH² , respectivamente, pueden prepararse convenientemente por reacción con un ácido carboxílico (III) apropiado siguiendo procedimientos de acoplamiento conocidos en la técnica (etapa A de reacción). Dicha conversión puede realizarse convenientemente por tratamiento de la funcionalidad de tipo piperidina en los intermedios de fórmula (II-a) o (II-b) con un agente de acoplamiento, tal como HBTU o EDCI, en presencia de una base, tal como DIPEA y trietilamina en un disolvente inerte a la reacción adecuado tal como, por ejemplo, DCM o DMF y similares, a una temperatura adecuada, por ejemplo, a temperatura ambiente; como alternativa, los intermedios de fórmula (II-a) o (II-b) pueden hacerse reaccionar con un anhídrido fosfónico, tal como anhídrido 1 -propanofosfónico, en presencia de una base apropiada, tal como trietilamina, en un disolvente inerte a la reacción adecuado tal como, por ejemplo, ACN seco. Los ácidos carboxílicos de fórmula (III) están disponibles en el mercado o pueden prepararse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica.

Procedimiento experimental 2

B: reacción con N,N-dimetilacetamida dimetil acetal

C, F: reacción con clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-3-amina

D: escisión del grupo protector

E: reacción con éster etílico del ácido 2,2,-difluoroacético

La formación de intermedios de fórmula (II-a), por ejemplo, en la que RA es metilo o CHF2, denominados en este documento intermedios de fórmula (II-a1) y (II-a2), respectivamente, pueden prepararse a partir de intermedios de fórmula (IV-a), en la que PG es un grupo protector de amino adecuado tal como, por ejemplo, terc-butiloxicarbonilo (Boc).

La reacción con N,N-dimetilacetamida dimetil acetal puede realizarse sin diluir, en condiciones térmicas tal como, por ejemplo, calentando a 100 °C.

La reacción con éster etílico del ácido 2,2-difluoroacético puede realizarse en presencia de una base, tal como KOtBu, en un disolvente inerte a la reacción, tal como tolueno, a una temperatura apropiada, tal como 0-5 °C, después a TA. El núcleo bicíclico puede formarse por reacción de intermedios (V-a) o (V-b) con clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-3-amina en un disolvente inerte a la reacción tal como, por ejemplo, DMF, en condiciones térmicas tal como, por ejemplo, calentamiento a 80 °C. En el caso de (V-b) a (VI-b), el grupo protector puede ser lábil y puede requerirse una etapa posterior de protección.

La escisión del grupo protector en los intermedios (VI-a) o (VI-b) puede realizarse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo, cuando el grupo protector es Boc, la escisión puede realizarse en condiciones ácidas tal como, por ejemplo, HCl en MeOH a TA, o TFA en DCM.

Procedimiento experimental 3

G: reacción con disulfuro de carbono y yoduro de metilo

H, L: reacción con clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-3-amina

I: oxidación

J: reacción con NaCN

K: reacción con N,N-dimetilformamida dimetil acetal

L: metilación

D: escisión del grupo protector

Los intermedios de fórmula (II-a), en la que RA es ciano en este documento denominados (II-a3) o en la que RA es hidrógeno y R1 es metilo, denominados en este documento (II-a4), pueden prepararse de acuerdo con una serie de etapas sintéticas a partir de intermedios de fórmula (IV-b), que están disponibles en el mercado o se preparan de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica (por ejemplo, R2 = H o metilo, PG = Boc)

Por tanto, la reacción con disulfuro de carbono seguido de yoduro de metilo en presencia de una base tal como NaH y un disolvente inerte a la reacción tal como THF a 0 °C proporciona (V-c), que entonces puede hacerse reaccionar con clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-5-amina en condiciones descritas en este documento proporcionando de este modo (VI-c, n = 0), seguida de oxidación con un peroxiácido apropiado tal como, por ejemplo, mCPBA, en presencia de un disolvente inerte a la reacción tal como, por ejemplo, DCM o CHCI³ , para producir (Vl-e, n = 2). El desplazamiento del grupo metilsulfona con una fuente de cianuro tal como, por ejemplo, NaCN en DMSO, produce (VII-c), que puede someterse a escisión del grupo protector en condiciones como se describe en este documento.

La reacción de (IV-b) con N,N-dimetilformamida dimetil acetal puede realizarse sin diluir en condiciones térmicas, tal como calentamiento a reflujo. La reacción con clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-3-amina en condiciones descritas en este documento produce (VI-d), que puede metilarse en condiciones conocidas en la técnica tal como, por ejemplo, haciéndolo reaccionar con yoduro de metilo en presencia de una base tal como NaH en un disolvente inerte a la reacción tal como DMF. La posterior escisión del grupo protector en las condiciones como se describe en este documento, produce intermedio (II-a4).

Procedimiento experimental 4

M: fluoración

N: metilación y/o saponificación

X: reducción

O: Suzuki (alquilación) y saponificación

P: hidrogenación

Q: saponificación

R: formación de amida de Weinreb

S: conversión de amida a cetona (por ejemplo, Grignard)

La formación de intermedios (IV-a) o (IV-b) puede realizarse mediante una serie de interconversiones de grupos funcionales, partiendo de intermedios (VIII), (IX) o (X) que están disponibles en el mercado o pueden prepararse, por ejemplo, de acuerdo con procedimientos tales como los descritos en este documento.

Los compuestos de fórmula (VIII), en la que R2a es hidrógeno o metilo, y PG es Boc están disponibles en el mercado o se preparan de acuerdo con una serie de procedimientos conocidos, tales como los descritos en este documento. Pueden fluorarse o alquilarse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica, tal como por reacción con N-fluorobencenosulfonimida en presencia de una base tal como LDA en un disolvente inerte a la reacción tal como THF, o por alquilación con yoduro alquilo después de tratamiento con una base tal como LiHMDS; opcionalmente, la posterior saponificación en condiciones conocidas en la técnica, produce (XI).

Los compuestos de fórmula (IX) también son conocidos en la técnica, y pueden alquilarse, por medio de procedimientos de tipo Suzuki, usando condiciones conocidas por los expertos en la materia, tal como el uso de un ácido/éster borónico, en presencia de un catalizador, tal como Pd(PPhm)4, en un disolvente inerte a la reacción, tal como 1,4-dioxano, en condiciones térmicas, tal como calentamiento. La posterior saponificación e hidrogenación en condiciones análogas a las descritas en este documento, produce intermedio de fórmula (XI).

La posterior formación de amida de Weinreb y conversión de amida en cetona con Grignard, como se describe en este documento, produce los intermedios deseados (IV-a) o (IV-b).

Procedimiento experimental 5

T: reacción con cianoformiato de metilo

U: reducción

V: deshidratación

W: hidrogenación

X: acoplamiento

Y: descarboxilación y escisión del grupo protector

La formación de intermedios de fórmula (II-bc), en la que ---- representa CH2 o CH2CH2 puede prepararse mediante una serie de etapas sintéticas partiendo de materiales de partida disponibles en el mercado de fórmula (XIV), tal como N-Boc-nortropinona [185099-67-6] o 6-Boc-3-oxo-6-azabiciclo[3.1.1]heptano [1246281-86-6]. La reacción con cianoformiato de metilo en presencia de una base tal como nBuLi y NHiPr2 en un disolvente inerte a la reacción, tal como THF a una temperatura apropiada, tal como a -78 °C, produce cetoéster (XV), que entonces puede reducirse en condiciones conocidas en la técnica con NaBH4, por ejemplo, en MeOH a aproximadamente 0 °C y posteriormente deshidratarse con, por ejemplo, anhídrido trifluoroacético en presencia de una base tal como trietilamina y DMAP en un disolvente inerte a la reacción tal como DCM, manteniendo la temperatura por debajo de 60 °C. La hidrogenación en condiciones conocidas en la técnica tal como, por ejemplo, en presencia de catalizador de paladio sobre carbono en MeOH produce intermedio (XVIII), que entonces puede hacerse reaccionar con intermedios de fórmula (XIX) que están disponibles en el mercado o se preparan de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica, en presencia de una base tal como, por ejemplo, LDA, en un disolvente inerte a la reacción, tal como THF a una temperatura entre -78 y -60 °C. La reacción con HCl concentrado en condiciones térmicas tal como, por ejemplo, calentamiento a 150 °C produce intermedio (II-bc) con escisión simultánea del grupo protector, cuando el lábil en ácido tal como, por ejemplo, Boc. Una manera alternativa de preparar un intermedio de fórmula (II-bc) en la que RA es CHF2 y --- es CH2CH2 a partir de material de partida disponible en el mercado, se describe en este documento en los ejemplos.

Farmacología

Los compuestos de acuerdo con la invención inhiben la actividad enzimática de PDE2, en particular PDE2A y, por tanto, elevan los niveles de AMPc o GMPc dentro de las células que expresan PDE2. Por consiguiente, la inhibición de la actividad enzimática de PDE2 puede ser útil en el tratamiento de enfermedades provocadas por cantidades insuficientes de AMPc o GMPc en las células. Los inhibidores de PDE2 también pueden ser de beneficio en casos en que la elevación de la cantidad de AMPc o GMPc por encima de los niveles normales provoque un efecto terapéutico. Los inhibidores de PDE2 pueden usarse para tratar trastornos neurológicos y psiquiátricos.

Por tanto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la presente invención, para su uso como medicina, así como al uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención o una composición farmacéutica de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento. La presente invención también se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la presente invención o una composición farmacéutica de acuerdo con la invención para su uso en el tratamiento o prevención de, en particular el tratamiento de, una afección en un mamífero, incluyendo un ser humano, cuyo tratamiento o prevención se ve afectado o facilitado por la inhibición de la enzima fosfodiesterasa 2. La presente invención también se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la presente invención o una composición farmacéutica de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de, en particular el tratamiento de, una afección en un mamífero, incluyendo un ser humano, cuyo tratamiento o prevención se ve afectado o facilitado por la inhibición de la enzima fosfodiesterasa 2.

La presente invención también se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención, o una composición farmacéutica de acuerdo con la invención para su uso en el tratamiento, prevención, mejora, control o reducción del riesgo de diversos trastornos neurológicos y psiquiátricos asociados con disfunción de fosfodiesterasa 2 en un mamífero, incluyendo un ser humano, cuyo tratamiento o prevención se ve afectado o facilitado por la inhibición de fosfodiesterasa 2.

Además, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención o una composición farmacéutica de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para tratar, prevenir, mejorar, controlar o reducir el riesgo de diversos trastornos neurológicos y psiquiátricos asociados con disfunción de fosfodiesterasa 2 en un mamífero, incluyendo un ser humano, cuyo tratamiento o prevención se ve afectado o facilitado por la inhibición de fosfodiesterasa 2.

Cuando se dice que la invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo o composición de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para, por ejemplo, el tratamiento de un sujeto, por ejemplo, un mamífero, se entiende que dicho uso se debe interpretar en determinadas competencias como un método de, por ejemplo, tratamiento de un sujeto, que comprende administrar a un sujeto que necesita, por ejemplo, tratamiento, una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo o composición de acuerdo con la invención.

En particular, las indicaciones que pueden tratarse con inhibidores de PDE2, en solitario o en combinación con otros fármacos incluyen, aunque sin limitación, aquellas enfermedades que se creen mediadas en parte por los ganglios basales, la corteza prefrontal y el hipocampo.

Estas indicaciones incluyen trastornos neurológicos y psiquiátricos seleccionados de trastornos y afecciones psicóticas; trastornos de ansiedad; trastornos del movimiento; drogadicción; trastornos del estado de ánimo; trastornos neurodegenerativos; trastornos o afecciones que comprenden como síntoma una deficiencia en la atención y/o las funciones intelectuales; trastornos relacionados con la adquisición y consolidación de la memoria; apoplejía; y trastorno autista o autismo.

En particular, los trastornos y afecciones psicóticas asociadas con disfunción de PDE2 incluyen una o más de las siguientes afecciones o enfermedades: esquizofrenia, por ejemplo, del tipo paranoide, desorganizado, catatónico, indiferenciado o residual; trastorno esquizofreniforme; trastorno esquizoafectivo, tal como de tipo delirante o depresivo; trastorno delirante; trastorno psicótico inducido por sustancias tal como psicosis inducida por alcohol, anfetaminas, hachís, cocaína, alucinógenos, inhalantes, opioides o fenciclidina; trastornos de la personalidad del tipo paranoide; y trastorno de la personalidad del tipo esquizoide.

En particular, los trastornos de ansiedad incluyen trastorno de pánico; agorafobia; fobia específica; fobia social; trastorno obsesivo-compulsivo; trastorno de estrés postraumático; trastorno de estrés agudo; y trastorno generalizado de ansiedad.

En particular, los trastornos del movimiento incluyen enfermedad de Huntington y discinesia; enfermedad de Parkinson; síndrome de las piernas inquietas y temblor hereditario. Además, pueden incluirse el síndrome de Tourette y otros trastornos de tic nervioso.

En particular, el trastorno del sistema nervioso central es un trastorno relacionado con sustancias seleccionado del grupo de alcoholismo; alcoholismo agudo; abstinencia alcohólica; delirio de abstinencia alcohólica; trastorno psicótico inducido por alcohol; anfetaminomanía; abstinencia de anfetaminas; cocainomanía; abstinencia de cocaína; nicotinomanía; abstinencia de nicotina; dependencia de opioides y abstinencia de opioides.

En particular, los trastornos del estado de ánimo y los episodios anímicos incluyen depresión, manía y trastornos bipolares. Preferiblemente, el trastorno del estado de ánimo se selecciona del grupo de trastornos bipolares (I y II); trastorno ciclotímico; depresión; trastorno distímico; trastorno depresivo mayor; depresión resistente a tratamiento; y trastorno del estado de ánimo inducido por sustancias.

En particular, los trastornos neurodegenerativos incluyen enfermedad de Parkinson; enfermedad de Huntington; demencia tal como, por ejemplo, enfermedad de Alzheimer; demencia multiinfarto; demencia relacionada con SIDA o demencia frontotemporal. El trastorno o afección neurodegenerativa comprende disfunción de las respuestas de las neuronas espinosas medianas estriatales.

En particular, los trastornos o afecciones que comprenden como síntoma una deficiencia en la atención y/o las funciones intelectuales incluyen demencia, tal como enfermedad de Alzheimer; demencia multiinfarto; demencia debida a enfermedad por cuerpos de Lewy; demencia alcohólica o demencia persistente inducida por sustancias; demencia asociada con tumores intracraneales o traumatismo cerebral; demencia asociada con enfermedad de Huntington; demencia asociada con enfermedad de Parkinson; demencia relacionada con SIDA; demencia debida a enfermedad de Pick; demencia debida a enfermedad de Creutzfeldt-Jakob; otras enfermedades incluyen delirio; trastorno amnésico; trastorno de estrés postraumático; apoplejía; parálisis supranuclear progresiva; retraso mental; un trastorno del aprendizaje; trastorno por déficit de atención con hiperactividad (ADHD); trastorno cognitivo leve; síndrome de Asperger; deterioro cognitivo senil; y deterioro cognitivo relacionado con la percepción, la concentración, el aprendizaje o la memoria.

En particular, los trastornos relacionados con la adquisición y consolidación de la memoria incluyen trastornos de la memoria, tales como pérdida de memoria senil, falta de memoria.

Preferiblemente, el trastorno psicótico se selecciona del grupo de esquizofrenia, trastorno delirante, trastorno esquizoafectivo, trastorno esquizofreniforme y trastorno psicótico inducido por sustancias.

Preferiblemente, el trastorno del sistema nervioso central es un trastorno de la personalidad seleccionado del grupo de trastorno obsesivo-compulsivo de la personalidad y trastorno esquizoide, esquizotípico.

Preferiblemente, el trastorno del sistema nervioso central es un trastorno del estado de ánimo seleccionado del grupo de trastornos bipolares (I y II), trastorno ciclotímico, depresión, trastorno distímico, trastorno depresivo mayor; depresión resistente a tratamiento; y trastorno del estado de ánimo inducido por sustancias.

Preferiblemente, el trastorno del sistema nervioso central es trastorno por déficit de atención con hiperactividad.

Preferiblemente, el trastorno del sistema nervioso central es un trastorno cognitivo seleccionado del grupo de delirio, delirio persistente inducido por sustancias, demencia, demencia debida a enfermedad por VIH, demencia debida a enfermedad de Huntington, demencia debida a enfermedad de Parkinson, demencia del tipo enfermedad de Alzheimer, demencia persistente inducida por sustancias y deterioro cognitivo leve.

Preferiblemente, los trastornos tratados mediante los compuestos de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención se seleccionan de esquizofrenia; trastorno obsesivocompulsivo; trastorno generalizado de ansiedad; enfermedad de Huntington; discinesia; enfermedad de Parkinson; depresión; trastornos bipolares; demencia tal como enfermedad de Alzheimer; trastorno por déficit de atención con hiperactividad; drogadicción; apoplejía; y autismo.

Preferiblemente, los trastornos tratados mediante los compuestos de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención son esquizofrenia, incluyendo los síntomas positivos y negativos de la misma, y deterioros cognitivos, tal como deterioro de la atención o la memoria.

De los trastornos mencionados anteriormente, el tratamiento de la ansiedad, el trastorno obsesivo-compulsivo, el trastorno de estrés postraumático; el trastorno generalizado de ansiedad, la esquizofrenia, la depresión, el trastorno por déficit de atención con hiperactividad, la enfermedad de Alzheimer, la demencia debida a enfermedad de Huntington, la demencia debida a enfermedad de Parkinson, la demencia del tipo enfermedad de Alzheimer, la demencia persistente inducida por sustancias y el deterioro cognitivo leve son de particular importancia.

De los trastornos mencionados anteriormente, el tratamiento de la ansiedad, el trastorno obsesivo-compulsivo, la esquizofrenia, la depresión, el trastorno por déficit de atención con hiperactividad y la enfermedad de Alzheimer son de particular importancia.

Otros trastornos del sistema nervioso central incluyen trastorno de esquizoansiedad y depresión y ansiedad concomitantes, en particular trastorno depresivo mayor concomitante con trastorno generalizado de ansiedad, trastorno de ansiedad social o trastorno de pánico; se entiende que la depresión y ansiedad concomitantes también pueden denominarse mediante las expresiones de depresión ansiosa, ansiedad y depresión mixtas, trastorno mixto de ansiedad-depresivo o trastorno depresivo mayor con síntomas de ansiedad, que se usan indistintamente en este documento.

Actualmente, la cuarta edición del Diagnostic & Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-IV) de la American Psychiatric Association proporciona una herramienta de diagnóstico para la identificación de los trastornos descritos en este documento. Los expertos en la materia reconocerán que existen nomenclaturas, nosologías y sistemas de clasificación alternativos para los trastornos neurológicos y psiquiátricos descritos en este documento, y que estos evolucionan con el progreso médico y científico. Por ejemplo, el "American Psychiatric Association: Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, quinta edición. Arlington, VA, American Psychiatric Association, 2013" (DSM-5™) utiliza términos tales como trastornos depresivos, en particular, trastorno depresivo mayor, trastorno depresivo persistente (distimia), trastorno depresivo inducido por sustancias-medicación; trastornos neurocognitivos (NCD) (tanto mayor como leve), en particular, trastornos neurocognitivos debidos a enfermedad de Alzheimer, NCD vascular (tal como NCD vascular presente con múltiples infartos), NCD debido a infección por VIH, NCD debido a lesión cerebral traumática (TBI), NCD debido a enfermedad de Parkinson, NCD debido a enfermedad de Huntington, NCD frontotemporal, NCD debido a enfermedad por priones y NCD inducido por sustancias/medicación; trastornos del neurodesarrollo, en particular, discapacidad intelectual, trastorno específico del aprendizaje, trastorno motor del neurodesarrollo, trastorno de la comunicación y trastorno por déficit de atención con hiperactividad (ADHD); trastornos relacionados con sustancias y trastornos adictivos, en particular, trastorno por consumo de alcohol, trastorno por consumo de anfetaminas, trastorno por consumo de hachís, trastorno por consumo de cocaína, trastorno por consumo de otros alucinógenos, trastorno por consumo de tabaco, trastorno por consumo de opioides y trastorno por consumo de fenciclidina; espectro de esquizofrenia y otros trastornos psicóticos, en particular, esquizofrenia, trastorno esquizofreniforme, trastorno esquizoafectivo, trastorno delirante, trastorno psicótico breve, trastorno psicótico inducido por sustancias/medicación; y trastorno ciclotímico (que según DSM-5™ está en la categoría de trastornos bipolares y relacionados). Dichos términos pueden usarlos los expertos en la materia como nomenclatura alternativa para algunas de las enfermedades o afecciones mencionadas en este documento. Un trastorno del neurodesarrollo adicional incluye trastorno del espectro autista (ASD), que abarca, de acuerdo con el DSM-5™, trastornos previamente conocidos por los términos de autismo infantil, autismo en la niñez, autismo de Kanner, autismo de elevada función, autismo atípico, trastorno generalizado del desarrollo no especificado de otro modo, trastorno desintegrativo de la infancia y trastorno de Asperger.

Por lo tanto, la invención también se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención, para su uso en el tratamiento de una cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente en este documento.

La invención también se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención, para su uso en tratar una cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente en este documento.

La invención también se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención, para el tratamiento o prevención, en particular tratamiento, de una cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente en este documento.

La invención también se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente en este documento.

La invención también se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente en este documento.

El compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención puede administrarse a mamíferos, preferiblemente seres humanos, para el tratamiento o prevención de una cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente en este documento.

En vista de la utilidad de los compuestos de fórmula (I), y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, de acuerdo con la invención, se proporciona un método de tratamiento de un trastorno o enfermedad mencionada anteriormente en este documento, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo o composiciones farmacéuticas descritas en este documento.

Dichos métodos comprenden la administración, es decir, la administración sistémica o tópica, preferiblemente administración oral, de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención a animales de sangre caliente, incluyendo seres humanos.

Por lo tanto, la invención también se refiere a un método para la prevención y/o tratamiento de una cualquiera de las enfermedades mencionadas anteriormente en este documento, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención a un paciente que lo necesita.

El inhibidor de PDE2 descrito en este documento puede usarse en solitario, en combinación o en combinación con otros agente farmacéuticos tales como otros agentes usados en el tratamiento de psicosis, tales como esquizofrenia y trastorno bipolar, trastorno obsesivo-compulsivo, enfermedad de Parkinson, deterioro cognitivo y/o pérdida de memoria, por ejemplo, agonistas nicotínicos a-7, inhibidores de PDE4 (Rolipram, GEBR-7b, GSK356278, GSK256066, Apremilast, MK-0952, Roflumilast, AN2898, AN2728, Ariflo Cilomilast, Dotraverina, Ronomilast Elbimilast, Revamilast, Tetomilast, E6005, GDP-1116, HT0712, Mk -0873), inhibidores de PDE5 (Sildenafil, Vardenafil, Tadalafil, Udenafil, Avanafil, Mirodenafil, Lodenafil, Dasantafil, PF-00489791), PDE9 (PF-04447943), otros inhibidores de PDE2 (Bay 60­ 7550, p F-999, ND-7001), inhibidores de PDE10 (PF-02545920, AMG579), inhibidores de PDE2 y 10, bloqueantes de los canales de calcio, moduladores muscarínicos m1 y m2, moduladores del receptor de adenosina, ampacinas, moduladores de NMDA-R, moduladores de mGluR, moduladores de dopamina, moduladores de serotonina, moduladores de canabinoides, inhibidores de HDAC (Vorinostat SAHA, Panobinostat, Quisinostat, ácido valproico) e inhibidores de colinesterasa (por ejemplo, donepezil, rivastigmina y galantamina). En dichas combinaciones, el compuesto de fórmula (I) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención puede utilizarse en combinación con uno o más fármacos distintos en el tratamiento, prevención, control, mejora o reducción del riesgo de enfermedades o afecciones para las que el compuesto de fórmula (I) o los otros fármacos pueden tener utilidad, donde la combinación de los fármacos conjuntamente son más seguros o más eficaces que cualquier fármaco en solitario.

Un experto en la materia reconocerá que una cantidad terapéuticamente eficaz del inhibidor de PDE2 de la presente invención es la cantidad suficiente para inhibir la enzima PDE2 y que esta cantidad varía, entre otras cosas, dependiendo del tipo de enfermedad, la concentración del compuesto en la formulación terapéutica y el estado del paciente. En general, una cantidad de inhibidor de PDE2 a administrar como agente terapéutico para tratar enfermedades en que la inhibición de la enzima PDE2 es beneficiosa, tal como los trastornos descritos en este documento, se determinará caso a caso por un médico a cargo.

En general, una dosis adecuada es una que provoque una concentración del inhibidor de PDE2 en el sitio de tratamiento en el intervalo de 0,5 nM a 200 pM, y más habitualmente de 5 nM a 50 pM. Para obtener estas concentraciones de tratamiento, a un paciente que necesite tratamiento probablemente se le administrará entre 0,001 mg/kg y 15 mg/kg de peso corporal, en particular de 0,01 mg/kg a 2,50 mg/kg de peso corporal, en particular, de 0,01 a 1,5 mg/kg de peso corporal, en particular de 0,1 mg/kg a 0,50 mg/kg de peso corporal. La cantidad de un compuesto de acuerdo con la presente invención, también denominado en esta ocasión ingrediente activo, que se requiere para conseguir un efecto terapéutico variará, por supuesto según el caso, con el compuesto particular, la vía de administración, la edad y estado del destinatario y el trastorno o enfermedad particular que se esté tratando. Un método de tratamiento también puede incluir administrar el ingrediente activo en una pauta entre una y cuatro ingestas al día. En estos métodos de tratamiento, el compuesto de acuerdo con la invención se formula preferiblemente antes de la admisión. Como se describe en este documento a continuación, se preparan formulaciones farmacéuticas adecuadas por procedimientos conocidos usando ingredientes bien conocidos y fácilmente disponibles.

Composiciones farmacéuticas

La presente invención también proporciona composiciones para prevenir o tratar enfermedades en que la inhibición de PDE2 es beneficiosa, tal como trastornos neurológicos y psiquiátricos. Dichas composiciones comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Aunque es posible que el ingrediente activo se administre en solitario, es preferible presentarlo como una composición farmacéutica. Por consiguiente, la presente invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la presente invención, junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. El vehículo o diluyente debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la composición y no perjudiciales para los destinatarios de los mismos.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden prepararse por cualquier método bien conocido en la técnica de farmacia. Una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto particular, en forma de base o forma de sal de adición, como ingrediente activo se combina en mezcla íntima con un vehículo farmacéuticamente aceptable, que puede adoptar una amplia diversidad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para administración. Estas composiciones farmacéuticas deseablemente están en forma farmacéutica unitaria adecuada, preferiblemente, para administración sistémica tal como administración oral, percutánea o parenteral; o administración tópica tal como mediante inhalación, un pulverizador nasal, colirio o mediante crema, gel, champú o similar. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en forma farmacéutica oral, puede emplearse cualquiera de los medios farmacéuticos habituales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones; o vehículos sólidos tales como almidones, glúcidos, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos. A causa de su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan la forma farmacéutica unitaria oral más ventajosa, en cuyo caso se emplean obviamente vehículos farmacéuticos sólidos. Para composiciones parenterales, el vehículo habitualmente comprenderá agua estéril, al menos en gran parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar en la solubilidad. Pueden prepararse, por ejemplo, soluciones inyectables en que el vehículo comprende solución salina, solución de glucosa o una mezcla de solución salina y solución de glucosa. También pueden prepararse suspensiones inyectables, en cuyo caso pueden emplearse vehículos líquidos, agentes de suspensión y similares apropiados. En las composiciones adecuadas para administración percutánea, el vehículo opcionalmente comprende un agente potenciador de la penetración y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones mínimas, que son aditivos que no provocan ningún efecto perjudicial importante en la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la administración a la piel y/o pueden ser de ayuda para preparar las composiciones deseadas. Estas composiciones pueden administrarse de diversas maneras, por ejemplo, como un parche transdérmico, como una unción puntual o como una pomada.

Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma farmacéutica unitaria por la facilidad de administración y la uniformidad de la dosificación. Forma farmacéutica unitaria como se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones en este documento se refiere a unidades físicamente diferenciadas adecuadas como dosificaciones unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. Ejemplos de dichas formas farmacéuticas unitarias son comprimidos (incluyendo comprimidos ranurados o recubiertos), cápsulas, píldoras, sobres de polvos, obleas, soluciones o suspensiones inyectables, cucharaditas, cucharadas y similares, y múltiplos segregados de los mismos.

Dependiendo del modo de administración, la composición farmacéutica comprenderá de un 0,05 a un 99 % en peso, preferiblemente de un 0,1 a un 70 % en peso, más preferiblemente de un 0,1 a un 50 % en peso del ingrediente activo, y de un 1 a un 99,95 % en peso, preferiblemente de un 30 a un 99,9 % en peso, más preferiblemente de un 50 a un 99,9 % en peso de un vehículo farmacéuticamente aceptable, estando basados todos los porcentajes en el peso total de la composición.

El presente compuesto puede usarse para administración sistémica tal como administración oral, percutánea o parenteral; o administración tópica tal como mediante inhalación, un pulverizador nasal, colirio o mediante crema, gel, champú o similar. El compuesto preferiblemente se administra por vía oral.

La dosificación exacta y frecuencia de administración dependen del compuesto, la afección particular que se esté tratando, la gravedad de la afección que se esté tratando, la edad, peso, sexo, grado del trastorno y estado físico general del paciente particular, así como otra medicación que el individuo pueda estar tomando, como es bien conocido por los expertos en la materia. Además, es evidente que dicha cantidad diaria eficaz puede reducirse o aumentarse dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescribe el compuesto de la presente invención.

La cantidad del compuesto de fórmula (I) que puede combinarse con un material de vehículo para producir una forma farmacéutica individual variará dependiendo de la enfermedad tratada, la especie de mamífero y el modo particular de administración. Sin embargo, como guía general, las dosis unitarias adecuadas para el compuesto de la presente invención pueden contener, por ejemplo, preferiblemente entre 0,1 mg y aproximadamente 1000 mg del compuesto activo. Una dosis unitaria preferida es entre 1 mg y aproximadamente 500 mg. Una dosis unitaria más preferida es entre 1 mg y aproximadamente 300 mg. Una dosis unitaria incluso más preferida es entre 1 mg y aproximadamente 100 mg. Dichas dosis unitarias pueden administrarse más de una vez al día, por ejemplo, 2, 3, 4, 5 o 6 veces al día, pero preferiblemente 1 o 2 veces al día, de modo que la dosificación total para un adulto de 70 kg esté en el intervalo de 0,001 a aproximadamente 15 mg por kg de peso del sujeto por administración. Una dosificación preferida es de 0,01 a aproximadamente 1,5 mg por kg de peso del sujeto por administración, y dicho tratamiento puede prolongarse varias semanas o meses y, en algunos casos, años. Se entenderá, sin embargo, que el nivel de dosis específico para cualquier paciente particular dependerá de una diversidad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del individuo que se esté tratando; el tiempo y vía de administración; la tasa de excreción; otros fármacos que se hayan administrado previamente; y la gravedad de la enfermedad particular sometida a tratamiento, como es bien comprendido por los expertos en la materia.

Una dosificación típica puede ser un comprimido de 1 mg a aproximadamente 100 mg o de 1 mg a aproximadamente 300 mg tomado una vez al día, o múltiples veces al día, o una cápsula o comprimido de liberación retardada tomado una vez al día y que contiene un contenido proporcionalmente mayor de ingrediente activo. El efecto de liberación retardada puede obtenerse mediante materiales de cápsula que se disuelven a diferentes valores de pH, mediante cápsulas que liberan lentamente por presión osmótica, o mediante cualquier otro medio conocido de liberación controlada.

Puede ser necesario usar dosificaciones fuera de estos intervalos en algunos casos, como será evidente para los expertos en la materia. Además, se aprecia que el médico o facultativo a cargo conocerá la manera y el momento de empezar, interrumpir, ajustar o terminar el tratamiento junto con la respuesta individual del paciente.

Para las composiciones, métodos y kits proporcionados anteriormente, un experto en la materia entenderá que el compuesto preferido para su uso en cada uno es el compuesto indicado en este documento.

Parte experimental

Como se usa en este documento, el término "ACN" significa acetonitrilo, "AcOH" o "TFA" significa ácido acético, "Boc" significa terc-butiloxicarbonilo, "Boc2O" significa dicarbonato de di-terc-butilo, "d" significa día(s), "DMAP" 4-dimetilaminopiridina, "DSC" significa calorimetría diferencial de barrido, "CLEM" significa cromatografía de líquidos/espectrometría de masas, "HPLC" significa cromatografía de líquidos de alto rendimiento, "RP HPLC" significa cromatografía de líquidos de alto rendimiento en fase inversa, "ac." significa acuoso, "DCM" significa diclorometano, "DIPE" significa éter diisopropílico, "DIPEA" significa diisopropiletilamina, "DMF" significa W,W-dimetilformamida, "DMSO" significa dimetilsulfóxido, "EDCI" significa 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida, "EtOH" significa etanol, "Et2O" significa éter dietílico, "EtOAc" significa acetato de etilo, "Et3N" o "TEA" significa trietilamina, "HATU" significa hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio, "HBTU" significa hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N'N,'-tetrametiluronio, "LiHMDS" significa bis(trimetilsilil)amida de litio, "THF" significa tetrahidrofurano, "min" significa minutos, "h" significa horas, "mCPBA" significa ácido 3cloroperbenzoico, "MeOH" significa metanol, "MTBE" significa éter terc-butilmetílico, "Pd/C" significa paladio sobre carbono, "Pd(PPh3)4" significa tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0), "iPrOH" significa 2-propanol, "MR" o "m.r." significa mezcla de reacción, "TA" o "t.a." significa temperatura ambiente, "CO" significa capa orgánica, "T^r " significa tiempo de retención (en minutos), "cuant." significa cuantitativo, "sat." significa saturado, "CFS" significa cromatografía de fuidos supercríticos, "sol." significa solución, "p.f." significa punto de fusión, "c.s." significa cantidad suficiente.

La cromatografía en capa fina (CCF) se realizó sobre placas de gel de sílice 60 F254 (Merck) usando disolventes de calidad de reactivo. La cromatografía en columna abierta se realizó sobre gel de sílice, tamaño de partícula de malla 230-400 y tamaño de poro de 60 Á (Merck) según técnicas convencionales. La cromatografía en columna ultrarrápida automatizada se realizó usando cartuchos listos para conectar de Merck, sobre gel de sílice irregular, tamaño de partícula de 15-40 pm (columnas ultrarrápidas desechables en fase normal) en un sistema SPOT o LAFLASH de Armen Instrument.

Cuando se indica un estereocentro con "RS" esto significa que se obtuvo una mezcla racémica en el centro indicado, salvo que se indique de otro modo. La configuración estereoquímica para centros en algunos compuestos puede denominarse "R" o "S" cuando se separaba la mezcla o mezclas; para algunos compuestos, la configuración estereoquímica en los centros indicados se ha denominado "*R" o "*S" cuando la estereoquímica absoluta no se ha determinado, aunque el propio compuesto se ha aislado como un estereoisómero individual y es enantioméricamente/diastereoisoméricamente puro.

La configuración estereoquímica absoluta para algunos de los compuestos se determinó usando dicroísmo circular vibratorio (VCD). Se midieron en un Bruker Equinox 55 equipado con un PMA 37, en una cubeta de líquidos de KBr usando CD2Cl2 como disolvente (PEM: 1350 cm-1, LIA: 1 mV, resolución: 4 cm-1). Puede encontrarse una descripción sobre el uso de VCD para la determinación de la configuración absoluta en Dyatkin A.B. et al., Chirality, 14:215-219 (2002). Cálculos desde el inicio: Se realizó una búsqueda conformacional minuciosa al nivel de mecanismos moleculares usando Macromodel para hacer un muestreo mixto de torsión/en modo bajo con el campo de fuerza OPLS-2005. Los mínimos ubicados se optimizaron usando Jaguar al nivel B3LYP/6-31G** con un modelo de solvatación continuo de Poisson-Boltzmann para imitar un disolvente de diclorometano. Todas las conformaciones con intervalo de 10 kJ/mol se usaron para simular el espectro VCD e IR. Se calcularon las fuerzas de dipolo y rotación al mismo nivel B3LYP/6-31G**, usando Jaguar. Los espectros VCD calculados, generados después de graduar las frecuencias con un factor de 0,97, convertir a una forma de banda lorentziana y sumando la contribución de cada confórmero suponiendo un conjunto de Boltzmann, se compararon visualmente con los espectros experimentales para asignar la estereoquímica correcta.

Como entenderán los expertos en la materia, los compuestos sintetizados usando los protocolos indicados pueden existir como un solvato, por ejemplo, hidrato y/o contienen disolvente o impurezas mínimas residuales. Los compuestos aislados como una forma salina, pueden ser de estequiometria entera, es decir, mono- o disales, o de estequiometria intermedia.

Se pretende que los siguientes ejemplos ilustren, pero no limiten, el alcance de la presente invención. Salvo que se indique de otro modo, todos los materiales de partida se obtuvieron de proveedores comerciales y se usaron sin purificación adicional.

A. Síntesis de intermedios

Intermedio 1

Procedimiento a: Se añadió clorhidrato de ácido 4-metil-3-piridincarboxílico (1:1) (40 g, 230,4 mmol) a una mezcla a reflujo de ácido sulfúrico (20 ml) y MeOH (400 ml). La mezcla se calentó a reflujo durante una noche, después se evaporó y la suspensión resultante se añadió a una solución fría de NaHCO3 (64 g) en agua (360 ml). El producto se extrajo con DCM y la CO se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó, produciendo intermedio 1 (28,70 g, 83 %). Procedimiento b: Un reactor metálico se cargó con 3-bromo-4-metil-piridina (200 g, 0,116 mol) y una mezcla de DMF/MeOH (1 l/1 l). A esto se le añadió Et3N (400 g, 0,395 mol), acetato de paladio (II) (8 g, 0,036 mol) y 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (16 g, 0,029 mol). El reactor se cerró y se presurizó con gas de CO (3 MPa) y la mezcla de reacción se agitó y se calentó durante una noche a 140 °C. La MR se enfrió, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (eluyente en gradiente: EtOAc/éter de petróleo de 1/1 a 1/0). Las fracciones de producto se recogieron y el disolvente se evaporó para producir el intermedio 1 deseado (90 g, 51 %).

Intermedio 2

Procedimiento a: Un matraz de hidrogenación se cargó con AcOH (500 ml) y después se le añadió Ptܲ (15,02 g, 66,2 mmol). Se añadió intermedio 1 (50 g, 330,8 mmol) y la mezcla se hidrogenó a 50 °C durante 7 días. La MR se filtró sobre dicalite® y el filtrado se evaporó para producir intermedio 2 (52 g), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

Procedimiento b: Se añadió óxido de platino (5 g, 0,022 mol) a una solución de intermedio 1 (90 g, 0,595 mol) y AcOH (1 l). La m.r. se agitó y se hidrogenó durante 5 días a 50 °C a una presión de 3,5 kPa. La MR enfriada se concentró al vacío para dar intermedio 2 como la sal de ácido acético (140 g, 97 %, 90 % de pureza determinada por RMN de ¹H).

Intermedio 3

Procedimiento a: A una solución de intermedio 2 (52 g, 330,8 mmol) en DCM (869 ml), se le añadieron DIPEA (85,5 g, 661,5 mmol) y DMAP (4,04 g, 33,08 mmol). Después se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (72,19 g, 330,8 mmol) a esta solución en pequeñas porciones y la reacción se agitó a TA durante 1 h. La MR se lavó con agua y salmuera y la capa orgánica se secó sobre MgSÜ⁴ , se filtró y se evaporó. El producto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, eluyente: DCM, 1 % de MeOH en d Cm , 2 %, 4 %). Las fracciones deseadas se evaporaron, produciendo intermedio 3 (64,1 g, 75 %).

Procedimiento b: A una solución agitada y enfriada (0 °C) de intermedio 2 (140 g, 0,595 mol) en DCM (1,5 l) se le añadió secuencialmente dicarbonato de di-terc-butilo (130 g, 0,596 mol), Et³N (225 g, 1,74 mol) y DMAP (10 g, 0,082 mol) y la agitación se continuó a TA durante 2 h. La mezcla de reacción se vertió en H²O (500 ml) y se extrajo con DCM (2 x 100 ml). Las capas orgánicas se separaron, se secaron (Na²SO⁴) y el disolvente se evaporó para dar intermedio 3 en bruto (150 g, 90 %, 90 % de pureza determinada por RMN de ¹H) que se usó tal cual a continuación.

Intermedio 4

Procedimiento a: El intermedio 3 (64,1 g, 249,1 mmol) se agitó en MeOH (500 ml) a TA. Se añadió NaOH (2 M, 747,3 ml) y la mezcla se agitó durante 2 h a TA. La MR se acidificó con HCl 1 N y el producto se extrajo con Et²O. La CO se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó, produciendo intermedio 4 (59,70 g) como un sólido blanco.

Procedimiento b: A una solución agitada de intermedio 3 (150 g, 90 % puro, 0,524 mol) en MeOH (0,9 l) se le añadió una solución de una solución 2 M de NaOH (1,8 mol). Después de 14 h a TA, la MR se extrajo con MTBE (2 x 0,8 l). La capa acuosa se acidificó con ácido cítrico al 10 % y después se extrajo con EtOAc (4 x 1 l). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na²SO⁴ , se filtraron y se concentraron al vacío para dar intermedio 4 en bruto (142 g, 90 % de pureza determinada por RMN de ¹H, 100 %) que se usó tal cual en la siguiente etapa.

Intermedio 5

Procedimiento a: A una solución de intermedio 4 (59,7 g, 0,25 mol) en THF (800 ml), se le añadió di-1 H-imidazol-1 -ilmetanona (54 g, 0,33 mol) y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. En otro matraz, a una suspensión de clorhidrato de N-metoxi-metanamina (1:1) (32,93 g, 0,34 mol) en ACN (500 ml), se le añadió trimetilamina (35,75 g, 0,35 mol). Ambas mezclas se combinaron y se agitaron a 50 °C mientras se controlaban. El producto intermedio cristalizó en la MR y no reaccionó con N-metoxi-metanamina para formar el producto deseado. Se añadió DCM hasta que se disolvió el intermedio. La reacción se dejó agitar durante 1 semana a 80 °C. Los disolventes se evaporaron. El residuo se disolvió en DCM y se lavó con agua, solución de AcOH al 20 % y finalmente con una solución saturada de NaHCO³. La CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó. El producto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, eluyente: 2 % de MeOH en DCM, 4 %). Las fracciones puras se evaporaron, produciendo intermedio 5 (70 g, cuantitativo). Procedimiento b: A una solución agitada y enfriada en hielo de intermedio 4 (140 g, 0,518 mol) en DCM (2 l) se le añadió N,O-dimetilhidroxilamina (113 g, 1,16 mol) y Et³N (113 g, 1,79 mol). Después se añadió HATU (235 g, 0,618 mol) y la agitación se continuó durante 14 h. El disolvente se evaporó y se añadió una solución de NaHCO³ (0,5 l) y después se extrajo con DCM (3 x 1 l). Las capas orgánicas combinadas se separaron, se secaron sobre Na²SO⁴ , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con un 1-10 % de EtOAc en éter de petróleo para producir intermedio 5 (152 g, 100 %).

Intermedio 6

Procedimiento a: El intermedio 5 (70 g, 244,4 mmol) en THF (250 ml) se cargó en un matraz en atmósfera de N² y se enfrió hasta -15 °C. Se añadió bromuro de metilmagnesio (1,4 M en tolueno/THF 75/25, 206 ml) gota a gota, sin que la temperatura excediera 0 °C. Después de la adición, la MR se agitó a TA durante 1 h. Después la MR se vertió en hielo con 20 ml de AcOH. El producto se extrajo con Et²O y la CO se lavó con una solución al 5 % de NaHCO³. La CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó para dar intermedio 6 (53,35 g, 90 %).

Procedimiento b: A una solución agitada y enfriada (0 °C) de intermedio 5 (150 g, 0,524 mol) en THF (2 l) se le añadió gota a gota una solución de bromuro de metilmagnesio 3 M en THF (0,75 l, 2,25 mol) y la agitación se continuó a TA durante 2 h. La mezcla de reacción se vertió en solución acuosa de NH⁴Cl y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na²SO⁴ , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un 1-5 % de EtOAc en éter de petróleo para producir intermedio 6 (120 g, 95 %).

Intermedio 7

El intermedio 6 (53,35 g, 0,22 mol) se agitó en tolueno (1500 ml) a 0 °C en atmósfera de N². Se añadió terc-butóxido de potasio (34,14 g) a 0-5 °C y se añadió éster etílico del ácido 2,2-difluoro-acético (33,01 g, 0,27 mol) gota a gota a 0-5 °C. La MR se agitó a TA durante 2 h, después se lavó con H²SO⁴ al 10 % en agua y la CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó, produciendo intermedio 7 (70,50 g, cuantitativo).

Intermedio 8

Se agitaron intermedio 7 (70,5 g, 220,8 mmol), clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-5-amina (1:1) (53,22 g, 441,52 mmol) y DMF (1500 ml) a 80 °C durante 24 h. Se añadieron Et³N (20 g) y dicarbonato de di-terc-butilo (20 g). La mezcla se agitó durante 30 min, se evaporó y después se disolvió en EtOAc, se lavó con agua y salmuera. La c O se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó. Se observaron cuatro isómeros. La primera fracción cristalizó en Et²O. Los cristales se retiraron por filtración y se secaron, produciendo intermedio 8 (24,60 g, 30 %). Las aguas madre produjeron una segunda fracción del compuesto. Los cristales se retiraron por filtración y se secaron, produciendo intermedio 8 (2,53 g, 3%). N.B. "RS" significa que el intermedio es una mezcla racémica de dos enantiómeros de configuración relativa trans.

Intermedios 9, 9A y 9B

A una solución de intermedio 8 (24,6 g, 67 mmol) en MeOH (350 ml), se le añadió HCl-iPrOH (350 ml) y la MR se agitó durante 2 h a TA. La MR se evaporó y el producto se cristalizó en EtOH. Los cristales se retiraron por filtración y se secaron, produciendo 20,33 g de un producto en bruto, al que se añadieron agua, Na²CO³ y DCM. La CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó, produciendo 12,80 g de intermedio 9. Esta base libre se separó en enantiómeros 9a y 9b por purificación por CfS prep. (fase estacionaria: Chiralpak Diacel AD 30 x 250 mm; fase móvil: CO² , ((MeOH - iPrOH 50/50) con iPrNH² al 0,4 %), produciendo intermedio 9a (5 g, 19 %, T^r = 7,57 min) e intermedio 9b (5,13 g, 19 %, T^r = 9,36 min).

Los intermedios 9a y 9b se aislaron como bases libres o, como alternativa, se disolvieron en MeOH, seguido de la adición de HCl/i-PrOH y la mezcla se evaporó. Las sales de clorhidrato (en cada caso, .HCl) se cristalizaron en ACN, se retiraron por filtración y se secaron.

Intermedio 10

Una mezcla agitada de I-6 (7,3 g, 0,03 mol) en N,N-dimetilacetamida dimetil acetal (20 ml, 0,91 g/ml, 0,14 mol) se calentó a 100 °C durante 4 h. La MR se concentró al vacío, se coevaporó con tolueno (2 x 20 ml) para producir 1-7 como un residuo pardo (9,4 g, rendimiento de un 100,1 %) que se usó tal cual en la siguiente etapa.

Intermedio 11 (I-11)

A una mezcla de I-10 (9,4 g, 0,03 mol) en AcOH (50 ml, 1,05 g/ml, 1,75 mol) se le añadió una mezcla de 3-amino-1,2,4-triazol (2,68 g, 0,03 mol) en HOAc (50 ml, 1,05 g/ml, 1,75 mol) y la MR resultante se calentó en un bloque térmico metálico Drysyn® de 130 °C durante 15 min. La MR se enfrió, se concentró al vacío, se diluyó con DCM (0,2 l) y se trató con NaOH 1 hasta pH ~8. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un aceite pardo oscuro que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando una columna ultrarrápida Redisep® de 120 g eluyendo con un gradiente de un 0-3 % de NH³7 N/MeOH en DCM para producir intermedio 11 como un aceite castaño, en una mezcla ~1:4 = cis:trans (2,15 g, rendimiento de un 21,42 %).

Intermedio 12

Una mezcla agitada de I-11 (2,15 g, 0,0065 mol) en MeOH (50 ml, 0,79 g/ml, 1,23 mol) se trató con HCl (6 M en iPrOH) (50 ml, 6 M, 0,3 mol) y después de 16 h a TA la MR se concentró al vacío para dar un sólido blanquecino. Esto se trituró con una mezcla de Et2O (200 ml) y ACN (30 ml) durante 16 h. El sólido se recogió por filtración y se secó para producir intermedio 12 como un sólido blanquecino como una mezcla cis/trans (18 %/82 %) (1,7 g, rendimiento de un 97,87 %).

Intermedio 12A e intermedio 12B

Una mezcla agitada de I-11 (23 g, 0,0694 mol) en MeOH (165 ml) se trató con HCl (6 M en iPrOH) (165 ml, 6 M, 0,986 mol) y después de 16 h a TA la MR se concentró al vacío para dar un sólido blanquecino. Esto se diluyó con agua y DCM y se trató con Na²CO³. La CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se concentró al vacío para producir un residuo que se purificó usando CFS (fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvil: CO² , MeOH-iPrOH (50-50) iPrNH² al 0,4 %) para producir intermedios 12a y 12b. Estos se disolvieron en MeOH (100 ml) y se trataron con HCl (6 M en iPrOH) (100 ml) a 0 °C durante 2 h. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y los residuos resultantes se agitaron a 0 °C en Et²O para dar intermedio 12a (9,25 g, 43 %, T^r = 3,54 min, [a]^20D = -17,47° (c 0,54, DMF)) e intermedio 12b (8,8 g, 42 %, T^r = 3,24 min, [a]^20D = 16,5°(c 0,52, DMF)).

Intermedio 13

A una solución de LDA (2 M en THF/heptano/etilbenceno, 42,7 ml, 2 M, 85,493 mmol) en 100 ml de THF (245 ml) se le añadió gota a gota una solución de intermedio 3 (20 g, 77,721 mmol) en THF (50 ml) a 0 °C. La solución se agitó durante 30 min y después se transfirió a una solución de N-fluorobencenosulfonimida (30,6 g, 97,1 mmol) en 100 ml de THF a 0 °C. La MR se agitó durante 15 min a 0 °C y después a t.a. durante una noche. La MR se evaporó, se añadió EtOAc y la MR se lavó posteriormente con agua, solución de HCl 0,1 N, solución saturada de NaHCO³ y salmuera. La CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó. El producto se purificó sobre gel de sílice, eluyente: DCM -> 1 % de MeOH en DCM. Las fracciones puras se evaporaron para producir intermedio 13 (21,4 g, cuantitativo).

Intermedio 14

Una solución de intermedio 13 (21,4 g, 77,728 mmol) se agitó en MeOH (500 ml) a TA. Se añadió NaOH (486 ml, 2 M, 973 mmol) y la mezcla se agitó durante 2 h a t.a. La MR se acidificó con HCl 1 N y el producto se extrajo con Et2O. La CO se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. El producto se purificó sobre gel de sílice, eluyente: DCM -> 5% de MeOH en DCM. Las fracciones puras se evaporaron para producir 14 (15 g, 74 %).

Intermedio 15

El intermedio 14 (15 g, 57,407 mmol) se disolvió en DCM (1000 ml). Después se añadieron clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (11,2 g, 114,8 mmol) y Et3N (17,4 g, 172 mmol). La mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C. Después se añadió HATU (24,0 g, 63,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 2 h. La MR se vertió en NaHCO3 ac. (100 ml). La Co se separó, se secó con MgSO4 y el disolvente se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyente: DCM -> 1 % de MeOH en DCM. Las fracciones de producto se recogieron y el disolvente se evaporó para dar el producto deseado 15 (8,49, 49 % g).

Intermedio 16

El intermedio 15 (8,49, 27,9 mmol) en THF (60 ml) se puso en un matraz en atmósfera de N2 y se enfrió hasta -15 °C. Se añadió bromuro de metilmagnesio (16,3 ml, 3 M, 48,8 mmol) gota a gota, sin que la temperatura excediera 0 °C. Después de la adición, la MR se agitó durante 1 h a TA. Después la MR se vertió en hielo con 20 ml de AcOH. El producto se extrajo con Et2O y la CO se lavó con una solución al 5 % de NaHCO3. La CO se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó y se purificó sobre gel de sílice, eluyente: DCM. Las fracciones puras se evaporaron para dar intermedio 16 (3,20 g, 44 %).

Intermedio 17

El intermedio 16 (3,2 g, 0,0123 mol) se agitó en tolueno (150 ml) a 0 °C en atmósfera de N2. Se añadió terc-butóxido de potasio (1,94 g, 17,3 mmol) a 0-5 °C, se añadió difluoroacetato de etilo (1,84 g, 0,0149 mol) gota a gota a 0-5 °C. La MR se agitó a TA durante 2 h. La MR se lavó con H2SO4 al 10 % en agua y la CO se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó para producir intermedio 17 (4,16 g, 99 %).

Intermedio 18

El intermedio 17 (4,16 g, 12,3 mmol) y clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-5-amina (2,97 g, 24,7 mmol) en DMF (40 ml) se agitaron a 80 °C durante 16 h. La MR se evaporó, se añadió DCM y se añadieron 2 g de (Boc)²O y 2 ml de Et³N. La mezcla se agitó durante 30 min, se lavó con agua, la CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó. El producto (4 isómeros) se purificó sobre gel de sílice, eluyente: DCM -> 2% de MeOH en DCM. Las fracciones se evaporaron, produciendo 3,55 g de un producto en bruto que se purificó mediante HPLC prep. (fase estacionaria: Uptisphere® C18 ODB - 10 gm, 200 g, 5 cm, fase móvil: solución de NH⁴ HCO³ al 0,25 % en agua, CH³CN) para producir intermedio 18 (730 mg, 15 %).

Intermedio 19

A intermedio 18 (0,73 g, 1,894 mmol) en MeOH (20 ml) se le añadió HCl (6 M en iPrOH) (20 ml, 6 M, 120 mmol) y esto se agitó a TA durante una noche. Los disolventes se evaporaron para producir intermedio 19 (600 mg, 99 %).

Procedimiento alternativo para el intermedio 19 y separación en intermedios 19A y 19B

A intermedio 18 (4,5 g, 11,7 mmol) en DCM (52 ml) se le añadió acido trifluoroacetico (TFA) (6 M en iPrOH) (5,4 ml, 6 M, 70 mmol) y esto se agitó a TA durante 1 h. Los disolventes se evaporaron y el residuo resultante se disolvió en DCM y se lavó con una solución saturada acuosa de NaHCO³. La CO se separó y la capa acuosa se volvió a extraer 2x con DCM. La CO combinada se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando como eluyente un gradiente de DCM/NH³ (MeOH), 99/1 a 93/7, para dar intermedio 19 (2,2 g, 66 % de rendimiento) como una mezcla racemica. Esta se separó en enantiómeros por CFS prep. (fase estacionaria: Chiralpak Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvil: CO² , EtOH iPrNH² al 0,4 %) para producir intermedios 19a (955 mg, 29 %, T^r = 2,36 min) y 19b (970 mg, 29 %, T^r =2,99 min).

Intermedio 20

Se agitó ester 8-(1,1-dimetiletil)2-metílico del ácido 8-azabiciclo[3.2.1]octano-2,8-dicarboxílico [1033820-28-8] (4,77 g, 17,71 mmol) en MeOH (41,608 ml) a TA. Se añadió NaOH (106 ml, 1 M, 106 mmol) y la mezcla se agitó durante una noche a t.a. El MeOH se evaporó. La MR se acidificó con HCl 1 N y el producto se extrajo con cloroformo. La CO se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó para dar intermedio 20 (4,52 g, 100 %).

Intermedio 21

El intermedio 20 (4,52 g, 17,704 mmol) se disolvió en DCM (200 ml). Después se añadieron clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (3,454 g, 35,407 mmol) y Et³N (5,37 g, 53,1 mmol). La mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C. Después se añadió HATU (7,41 g, 19,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 2 h. La mezcla de reacción se vertió en NaHCO3 ac. (100 ml). La CO se separó, se secó con MgSO⁴ y el disolvente se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyente: DCM -> 1 % de MeOH en DCM. Las fracciones de producto se recogieron y el disolvente se evaporó para dar el intermedio 21 (3,03 g, 57 %).

Intermedio 22

El intermedio 21 (3,03 g, 10,2 mmol) en THF (50 ml) se puso en un matraz en atmósfera de N² y se enfrió hasta -15 °C. Se añadió bromuro de metilmagnesio (12,7 ml, 1,4 M, 17,8 mmol) gota a gota, sin que la temperatura excediera 0 °C. Después de la adición, la MR se agitó durante 1 h a TA. Después la MR se vertió en hielo con AcOH (20 ml). El producto se extrajo con Et²O y la CO se lavó con una solución al 5 % de NaHCO³. La CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó y se purificó sobre gel de sílice, eluyente: DCM. Las fracciones puras se evaporaron para dar intermedio 22 (2,57 g, 100%).

Intermedio 23

El intermedio 22 (2,57 g, 0,0101 mol) se agitó en tolueno (150 ml) a 0 °C en atmósfera de N². Se añadió terc-butóxido de potasio (1,59 g, 14,2 mmol) a 0-5 °C, difluoroacetato de etilo (1,52 g, 0,0122 mol) gota a gota a 0-5 °C. La MR se agitó a TA durante 2 h. La MR se lavó con H²SO⁴ al 10 % en agua y la CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó para producir intermedio 23 (3,34 g, 99 %).

Intermedio 24

El intermedio 23 (3,34 g, 10,1 mmol) y clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-5-amina (2,43 g, 20,2 mmol) en DMF (30 ml) se agitaron a 80 °C durante 16 h. La MR se evaporó, se añadió DCM y se añadieron 2 g de (Boc)²O y Et³N (2 ml). La mezcla se agitó durante 30 min, se lavó con agua, la CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó. El producto (4 isómeros) se purificó sobre gel de sílice, eluyente: DCM -> 2 % de MeOH en DCM. Las fracciones se evaporaron, produciendo 3,07 g de un producto en bruto que se purificó mediante HPLC prep. (fase estacionaria: Uptisphere® C18 ODB - 10 pm, 200 g, 5 cm I.D., fase móvil: solución de NH⁴ HCO³ al 0,25 % en agua, MeOH) para dar intermedio 24 (1,07 g, 28 %).

Intermedio 25

A intermedio 24 (1,07 g, 2,82 mmol) en MeOH (30 ml) se le añadió HCl (6 M en iPrOH 30 ml, 6 M, 179 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante una noche. Los disolventes se evaporaron y el producto se cristalizó en éter. Los cristales se retiraron por filtración y se secaron para producir intermedio 25 como la sal de ácido clorhídrico (1,12 g, 112 %).

Procedimiento alternativo para el intermedio 25

Etapa 1. Intermedio 43

Se añadió n-butil-litio (nBuLi, 106,5 ml, 266,3 mmol, 2,5 M en hexanos) a 0 °C a una solución de diisopropilamina (26,95 g, 266,3 mmol) en THF (500 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 30 min, después se enfrió hasta -78 °C y se trató con una solución de N-Boc-nortropinona (50 g, 221,9 mmol) en THF (75 ml). La mezcla resultante se agitó a -78 °C durante 90 min, después se añadió cianoformiato de metilo (22,9 ml, 288,5 mmol). La MR se dejó calentar hasta TA y se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de NH4Cl, después se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se separó, después se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando como eluyente un gradiente: 100 % de DCM a 1 % de MeOH en DCM, para proporcionar intermedio 43 (60,25 g, 95,8 %).

Etapa 2. Intermedio 44

Se añadió borohidruro de sodio (16,02 g, 423,5 mmol) a una solución fría (baño de hielo) de intermedio 43 (60 g, 211,8 mmol) en metanol (700 ml) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 5 h. La reacción completada se interrumpió con una solución acuosa saturada de NH4Cl, después el disolvente se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo resultante se disolvió en agua y se extrajo 3x con DCM. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío, para producir intermedio 44 (59 g, 97,6 %) que se usó tal cual sin purificación adicional.

Etapa 3. Intermedio 45

Se añadió anhídrido trifluoroacético (57,5 ml, 413,5 mmol) gota a gota muy lentamente (PRECAUCIÓN exotérmica) a una solución de intermedio 44 (59 g, 206,8 mmol), trietilamina (115 ml, 827,1 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina (2,52 g, 20,7 mmol) en DCM (800 ml), mientras se mantenía la temperatura por debajo de 60 °C. La mezcla de reacción se agitó a TA durante una noche, después se enfrió en un baño de hielo y se inactivó con agua. El pH de la solución resultante se ajustó a 8-8,5 usando una solución acuosa saturada de NaHCO3 y se dejó en agitación a TA durante 1 hora. La capa acuosa se extrajo después 3x con DCM, después las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de 100 % de DCM a 2 % de MeOH en DCM, para producir intermedio 45 (33,7 g, 61 %).

Etapa 4. Intermedio 46

Se añadió MeOH (59 ml) a un matraz que contenía intermedio 45 (2,44 g, 9,13 mmol) y Pd/C (10 %) (0,971 g, 0,913 mmol) en una atmósfera de nitrógeno. Este se evacuó y se volvió a llenar con gas de hidrógeno y se agitó a TA durante una noche. La mezcla de reacción se filtró sobre una capa de Celite®, después el disolvente se retiró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de 100 % de DCM a 2 % de MeOH en DCM, para producir intermedio 46 (2 g, 81 %).

Etapa 5. Intermedio 47

Se añadió LDA (54,3 ml, 108,7 mmol, 2 M en ciclohexano/etilbenceno/THF) gota a gota a -78 °C hasta -60 °C a una solución de intermedio 46 (24,4 g, 90,6 mmol) en THF anhidro (363 ml), en una atmósfera de nitrógeno. Después de la adición, la mezcla de reacción se calentó hasta -30 °C y se agitó durante 10 min, antes de enfriarla de nuevo hasta -78 °C. Se disolvió 7-cloro-5-(difluorometil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina ([1340394-63-9], 18,5 g, 90,6 mmol) en una cantidad mínima de THF y se añadió gota a gota con una jeringa. La mezcla de reacción se agitó a -60 °C durante 1 h, después la temperatura se elevó hasta TA y la reacción se interrumpió con una solución acuosa saturada de NH4Cl. Los volátiles se evaporaron al vacío y el residuo resultante se repartió entre EtOAc y agua. Las capas se separaron, después la capa acuosa se extrajo 2x con EtOAc. La CO combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se cristalizó en éter dietílico, para producir intermedio 47 (23,8 g, 60 %). El filtrado se evaporó y el residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de 100 % de DCM a 2 % de MeOH en DCM, para producir intermedio 47 (2 g, 5 %), después de recristalización en éter dietílico.

Etapa 6. Intermedio 25, intermedio 25A e intermedio 25B

El intermedio 47 (25,8 g, 58,9 mmol) se agitó en una solución de HCl concentrado (266 ml, 3,19 mol, 37 % en H²O) a 150 °C durante una noche. Los volátiles se evaporaron al vacío y el residuo resultante se coevaporó dos veces con tolueno. El producto se trató con una solución acuosa saturada de NaHCO³ hasta pH básico. La capa acuosa se extrajo con DCM, después la capa orgánica se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de 100 % de DCM a 8 % de MeOH/NH³ en DCM, para producir el intermedio 25 como una mezcla racémica (13 g, 79 %). Este material se purificó mediante CFS prep. (fase estacionaria: Chiralpak Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvil: CO² , EtOH iPrNH² 0,4). El enantiómero 1S,4S,5S se convirtió en su sal HCl y se recristalizó en CH³CN para proporcionar intermedio 25a (5,58 g, 30 %, T^r = 2,91 min, [a]^20D = -66,6 (c = 0,48, DMF)).

Intermedio 26

Una mezcla de 4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)-5,6-dihidropiridin-1,3(2H)-dicarboxilato de 1 -terc-butil 3-metilo [161491­ 25-4] (15 g, 38,53 mmol, preparado de acuerdo con Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 12942-12946), ácido N-butilborónico [4426-47-5] (5,89 g, 57,8 mmol), Pd(PPh3)4 [14221-01-3] (1,78 g, 1,54 mmol) y Na2CO3 [497-19-8] (8,167 g, 77,052 mmol) en 1,4-dioxano [123-91-1] (300 ml) se agitó y se calentó a 90 °C durante una noche. Los volátiles se evaporaron al vacío y el residuo resultante se trató con una solución acuosa de HCl 1 N. La capa acuosa se extrajo con DCM, después la CO combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM-MeOH (9:1, v/v)/DCM, 0/100 a 30/70). Esto produjo 3,65 g de 1-terc-butil-5-metil-4-butil-3,6-dihidro-2H-piridin-1,5-dicarboxilato, que se disolvió en una mezcla de metanol y solución acuosa de NaOH 1 N (1:1, v/v, 200 ml) y se agitó durante una noche a TA. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y el residuo resultante se puso en hielo y se acidificó con una solución acuosa de HCl 1 N. La capa acuosa se extrajo con cloroformo, después la CO combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de 1 % de MeOH en DCM a 2 % de MeOH en DCM, para producir intermedio 26 (1,69 g, 15,5 % de rendimiento).

Intermedio 27

Se añadió intermedio 26 (1,47 g, 5,188 mmol) a una suspensión de Pd/C (10 %) (668 mg, 0,63 mmol) en MeOH [67­ 56-1 ] (134 ml). La mezcla después se puso en una atmósfera de H2 y se agitó durante 36 h. Después de este tiempo, el catalizador se filtró sobre una capa de Celite y el disolvente se evaporó a presión reducida para proporcionar intermedio 27 (1,45 g, 98 %).

Intermedio 28

Siguiendo un procedimiento similar al presentado para la síntesis de intermedio 8, se sintetizó intermedio 28 partiendo de intermedio 27, se obtuvo intermedio 28 (200 mg).

Intermedios 29, 29A y 29B

Se añadió NaH (dispersión al 60 % en aceite de vaselina, 1,5 g, 39,05 mmol) a una solución de 3-[5-(difluorometil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo que se preparó de manera análoga al intermedio 8 y 11, partiendo de ácido 3-piridincarboxílico (11,5 g, 32,54 mmol) en DMF (500 ml) a TA y en un flujo de N². La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a TA, después se añadió yoduro de metilo (5,54 g, 39,05 mmol) gota a gota y la mezcla se agitó durante una noche a TA. Se añadió agua y el producto se extrajo con EtOAc. La CO se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. (fase estacionaria: Uptisphere® C18 ODB - 10 pm, 200 g, 5 cm I.D., fase móvil: solución de NH⁴ HCO³ al 0,25 % en agua, MeOH) para dar intermedio 29 (4,32 g, 36 %) como una mezcla racémica. Esta se separó en enantiómeros por CFS prep. (fase estacionaria: Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm, fase móvil: CO² , iPrOH iPrNH² al 0,2 %) para producir intermedios 29a (2 g, 17 %) y 29b (2 g, 17 %).

n erme o

A intermedio 29a (500 mg, 1,36 mmol) en MeOH (20 ml) se le añadió HCl (6 M en iPrOH 20 ml, 6 M, 120 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante una noche. Los disolventes se evaporaron para dar intermedio 30a como la sal de ácido clorhídrico (400 mg, 97 %).

Intermedio 30B

El intermedio 30b se obtuvo de la misma manera que se describe para el intermedio 30a, partiendo de 29b (400 mg, 97 %).

Procedimiento alternativo para el intermedio 29

Etapa 1. Intermedio 31

Se añadió K²CO³ (33,15 g, 0,24 mol) a una solución agitada de ácido 1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-carboxílico [84358-12-3] (50,0 g, 0,22 mol) en DMF (600 ml) a TA. Se añadió yoduro de metilo (34,05 g, 0,24 mol) después de 30 minutos y la mezcla de reacción se agitó durante otras 2,5 h a t.a. Los volátiles se evaporaron al vacío y el residuo resultante se puso en agua y se extrajo con DIPE. La CO combinada se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó para proporcionar 54,75 g de intermedio 31, que se usó tal cual en la siguiente etapa.

Etapa 2. Intermedio 32

Se añadió LiHMDS (450 ml, 0,45 mol, 1 M) gota a gota a una solución de intermedio 31 (54,75 g, 0,22 mmol) en THF (1 l) a -78 °C y en una atmósfera de N². La solución se agitó a -78 °C durante 1 hora y después se añadió yoduro de metilo (63,9 g, 0,45 mmol) gota a gota a esta temperatura. Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar hasta TA. La MR después se trató con una solución acuosa saturada de NH⁴CL La capa acuosa se extrajo con Et²O. La CO combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida, usando como eluyente una solución al 20 % de EtOAc en heptano, para proporcionar intermedio 32 (55,5 g, 96 % de rendimiento).

Intermedio 29

Siguiendo un procedimiento similar al presentado para la síntesis de intermedio 8, partiendo de intermedio 32 se obtuvo intermedio 29 (36,7 g, 43,5 % de rendimiento).

Intermedio 33

Se añadió NaH (dispersión al 60 % en aceite de vaselina, 0,97 g, 24,2 mmol) a intermedio 6 (5 g, 20,7 mmol) en THF anhidro (35 ml), en un RBF de cuatro bocas de 250 ml, a 0 °C en flujo de N2. Después de 10 minutos, se añadió disulfuro de carbono (1,46 ml, 24,1 mmol) gota a gota y después se añadió yoduro de metilo (2,71 ml, 43,5 mmol) gota a gota. La mezcla se agitó durante una noche a TA. Se añadió agua y el producto se extrajo con EtOAc. La Co se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó produciendo intermedio 33 (8,2 g, 92 %) que se usó tal cual en la siguiente etapa.

Intermedio 34

El intermedio 33 (1 g, 2,89 mmol) y clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-5-amina (0,35 g, 2,89 mmol) se agitaron a 150 °C durante 3 horas en una reacción fundida. La MR se enfrió hasta TA y se disolvió en DCM. La CO se lavó con solución ac. sat. de NaHCO3, agua y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. El producto se purificó sobre gel de sílice, eluyente DCM/MeOH, 100/0 a 98/2 produciendo intermedio 34 (200 mg, 26 %).

Intermedio 35

A intermedio 34 (200 mg, 0,76 mmol) en DCM (3,3 ml) se le añadió (Boc)2O (199 mg, 0,91 mmol), Et3N (127 ul, 0,91 mmol) y la MR se agitó a TA durante una noche. El disolvente se evaporó, después el residuo se puso en DCM y se lavó con agua (3x), después salmuera. La CO se separó, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó, para dar intermedio 35 (199 mg, 72 %) que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.

Intermedio 36

A intermedio 35 (347 mg, 0,95 mmol) en CCI³ (12 ml) se le añadió mCPBA (659 mg, 3,82 mmol) y la MR se calentó a reflujo durante 2 horas. La MR se diluyó con CHCh, se lavó con NaOH 1 N, se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó, produciendo intermedio 36 (301 mg, 79 %) que se usó tal cual en la siguiente etapa.

Intermedio 37

El intermedio 36 (799 mg, 2,02 mmol) y cianuro de sodio (202 mg, 4,04 mmol) se agitaron en DMSO (5 ml) a TA durante 30 minutos. La MR se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La CO se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó para dar intermedio 37 (550 mg, 80 %) que se usó tal cual en la siguiente etapa. Intermedio 38

A intermedio 37 (520 mg, 1,52 mmol) en DCM (3,0 ml) se le añadió TFA (6 ml) y la MR se agitó durante 1 hora a 0 °C. La MR se vertió en solución saturada de Na2CO3, después la CO se lavó de nuevo con Na2CO3 saturado y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó, para dar intermedio 38 (273 mg, 73 %).

Intermedio 39

El intermedio 6' (obtenido de intermedio 31 siguiendo las mismas transformaciones que para los intermedios 3-6) (50 g, 0,22) se añadió a N,N-dimetilformamida dimetil acetal (110 ml) y la mezcla se calentó a reflujo durante 4 días. La mezcla de reacción se evaporó y se añadió N,N-dimetilformamida dimetil acetal adicional y la mezcla se calentó a reflujo durante 4 horas adicionales. El disolvente se evaporó y el producto se purificó sobre gel de sílice, eluyente: 1 % de MeOH en DCM, 2 %. Las fracciones puras se evaporaron, produciendo intermedio 39 (60 g, 97 %).

Intermedio 40

Una solución de intermedio 39 (60 g, 0,21 mol) y clorhidrato de 1H-1,2,4-triazol-5-amina (22,3 g, 0,27 mol) en ácido acético (53 ml) se agitó a reflujo durante 1 hora. Se añadió agua y el producto se extrajo con éter. La CO se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó, produciendo intermedio 40 (62 g, 96 %).

El intermedio 40 (500 mg, 1,65 mmol) se agitó en DMF (50 ml) a TA en flujo de N². Se añadió NaH (dispersión al 60 % en aceite de vaselina, 72 mg, 1,8 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 min. Se añadió yoduro de metilo (2,57 mg, 1,8 mmol) y la mezcla se agitó durante 2 horas a TA. La reacción se interrumpió con agua y se evaporó. Se añadió agua y el producto se extrajo con EtOAc. La CO se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó. Esto se purificó por HPLC prep. en (RP Vydac Denali C18 - 10 pm, 200 g, 5 cm; fase móvil (solución de NH⁴ HCO³ al 0,25 % en agua, MeOH), produciendo intermedio 41 (250 mg, 48 %).

Intermedio 42

El intermedio 41 (200 mg, 0,85 mmol) se agitó en MeOH (20 ml) y se añadió HCl 6 N en i-PrOH (23 ml). La mezcla se agitó durante 1 hora. La MR se evaporó, produciendo intermedio 42 (250 mg, 100 %).

Intermedio 48

Etapa 1. Intermedio 49

Se añadió NaH (1,37 g, 34,4 mmol, dispersión al 60 % en aceite de vaselina) a una suspensión de 2-hidroxi-6-metilisonicotinato de metilo (2,3 g, 13,76 mmol) en ACN (150 ml) a 0 °C y en una atmósfera de N². La m.r. se dejó alcanzar t.a. y se agitó durante 45 min. Después se añadió ácido 2,2-difluoro-2-(fluorosulfonil)acético (3,16 g, 17,76 mmol) gota a gota a la mezcla de reacción, que se agitó adicionalmente a t.a. durante 15 horas. Después de este tiempo, se inactivó con una solución saturada acuosa de NH⁴Cl, y la mezcla resultante se extrajo con DCM (100 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando como eluyente un gradiente de heptano/EtOAc, 100/0 a 50/50, para producir intermedio 49 (2,21 g, 73,9 %).

Etapa 2. Intermedio 48

Una solución acuosa de NaOH (15 ml, 15 mmol, 1 M) se añadió a una solución de intermedio 49 (2,11 g, 9,72 mmol) en etanol (15 ml). La mezcla resultante se agitó durante 1 h, después se trató con una solución acuosa de HCl (15 ml, 15 mmol, 1 N). Se formó un precipitado blanco y se filtró, se lavó con agua fría, después se secó en el horno de vacío durante una noche para dar intermedio 48 (1,75 g, 88,6 %).

Intermedio 50

Etapa 1. Intermedio 51

Se añadió H²SO⁴ concentrado (0,791 ml, 4,85 mmol, 1,84 g/ml) a una solución de ácido 2,6-dicloro-3-fluoroisonicotínico ([149468-00-8], 5,5 g, 26,19 mmol) en MeOH (99 ml) y la mezcla resultante se calentó hasta 85 °C durante 12 h. Después de este tiempo, se añadió más H²SO⁴ (0,791 ml, 14,846 mmol, 1,84 g/ml) y la m.r. se agitó a 90 °C durante 24 h. La reacción se enfrió hasta t.a., el disolvente se evaporó y se añadió hielo al residuo resultante. Se formó un precipitado y se filtró, se lavó con agua enfriada en hielo y se secó en el horno de vacío durante 2 d, para proporcionar intermedio 51 (4,35 g, 19,4 mmol) como un sólido beige.

Etapa 2. Intermedios 52A y 52B

Una solución de intermedio 51 (3,95 g, 17,6 mmol) y trimetilboroxina (1,66 ml, 5,82 mmol, 3,5 M en THF) en 1,4-dioxano anhidro (128 ml) se desgasificó durante 15 minutos. Se añadieron acetato de paladio (II) (198 mg, 0,88 mmol), triciclofenilfosfina (494 mg, 1,76 mmol) y fosfato de potasio tribásico (11,23 g, 53,0 mmol) secuencialmente y la mezcla resultante se desgasificó, después se agitó y se calentó a 110 °C durante 18 h en un tubo de presión. La m.r. se enfrió hasta t.a. y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo resultante se repartió entre agua y EtOAc. La mezcla bifásica resultante se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1x), se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de heptano/EtOAc, 100/0 a 90/10, para proporcionar intermedio 52a (980 mg, 27 %) y su regioisómero 52b (460 mg, 12,8 %).

Etapa 3. Intermedio 50

Una solución de LiOH (277 mg, 11,5 mmol) en agua (10 ml) se añadió a una solución agitada de intermedio 52a (785 mg, 3,85 mmol) en THF (10 ml). La m.r. se agitó a t.a. durante 1,5 h, después los volátiles se evaporaron al vacío. El pH del residuo acuoso resultante se llevó a ~2 por tratamiento con una solución acuosa de HCl (1 M). Se formó un precipitado blanco y se filtró, se lavó con agua enfriada en hielo y se secó en el horno de vacío durante 2 d, para dar intermedio 50 (491 mg, 67 %) como un sólido blanco.

Intermedio 53

Etapa 1. Intermedio 54

Se añadió metiltrioxorrenio (VII) (0,443 g, 1,78 mmol) en una porción a una solución fría (0 °C) de 5-fluoro-2-metoxiisonicotinato de metilo (4 g, 21,6 mmol) en DCM (71 ml), seguido de adición gota a gota de peróxido de hidrógeno (64,3 ml, 0,735 mol, 35 % en agua). La m.r. se dejó calentar hasta t.a. y después se calentó hasta 35 °C. Después de 24 h, se añadió más metiltrioxorrenio (VII) (0,2 g, 0,80 mmol) y la m.r. se dejó agitando a 35 °C durante 2 d. Se añadieron porciones de metiltrioxorrenio (VII) (0,2 g, 0,802 mmol) y peróxido de hidrógeno (30 ml, 0,343 mol, 35 % en agua) 3x durante 8 h y la m.r. se agitó a 27 °C durante 16 h. La m.r. se enfrió en un baño de hielo, después se inactivó por adición en porciones de dióxido de manganeso (PRECAUCIÓN fuere producción de gas y calor) hasta que cesó la producción de gas, dando una mezcla negra. Esta se combinó con otro lote de mezcla de reacción resultante de una reacción partiendo con 1 g de 5-fluoro-2-metoxiisonicotinato de metilo. Las mezclas de reacción combinadas se filtraron a través de un lecho de Celite®, que se lavó con DCM. El filtrado bifásico se separó y la fase acuosa se extrajo con DCM (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron al vacío. El residuo resultante (4,9 g) se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de heptano/EtOAc, 100/0 a 0/100, en intermedio 54 (585 mg).

Etapa 2. Intermedio 55

Una suspensión de intermedio 54 (585 mg, 2,91 mmol) en oxicloruro de fósforo (4,1 ml, 43,6 mmol) se agitó y se calentó hasta 105 °C en un baño de aceite. Después de 1,5 h, el disolvente se retiró al vacío. Se añadió hielo (10 ml) al residuo resultante y la mezcla acuosa se extrajo con DCM (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se evaporaron al vacío. El residuo resultante (580 mg) se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de heptano/DCM, 100/0 a 50/50, para proporcionar intermedio 55 (522 mg, 72,7 %).

Etapa 3. Intermedio 53

Una solución de LiOH (152 mg, 6,35 mmol) en agua (5,7 ml) se añadió a una solución agitada de intermedio 55 (522 mg, 2,12 mmol) en THF (5,7 ml). La m.r. se agitó a t.a. durante 1,5 h, después los volátiles se evaporaron al vacío. El pH del residuo acuoso resultante se llevó a ~3 por tratamiento con una solución acuosa de HCl (1 M). Se formó un precipitado blanco y se filtró, se lavó con agua enfriada en hielo y se secó en el horno de vacío para dar intermedio 53 (172 mg, 39 %) como un sólido blanco. El filtrado se evaporó a sequedad a presión reducida, para dar la sal de litio de compuesto 53 (366 mg).

B-Síntesis de compuestos finales

Compuesto 1A y compuesto 1B

Una mezcla de I-12 (0,27 g, 0,001 mol) y ácido 2,6-dimetilisonicotínico (0,16 g, 0,001 mol) en DCM (10 ml) se trató con DIPEA (0,69 ml, 0,75 g/ml, 0,004 mol) y HBTU (0,38 g, 0,001 mol). La agitación se continuó durante 16 h. La MR se diluyó con agua (5 ml), se acidificó con HCl 1 M hasta pH ~3 y las capas se separaron y la CO se lavó con NaOH 1 M hasta pH ~9, agua, después se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se concentró al vacío para dar un aceite (0,8 g). Se realizó una purificación mediante HPLC prep. (fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD-10 pm, 50 x 150 mm, fase móvil: solución de NH⁴ HCO³ al 0,25 % en agua, MeOH) produciendo dos fracciones. Se realizó una purificación usando CFS prep. (fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvil: CO² , EtOH con iPrNH² al 0,4 %) produciendo 4 fracciones de las dos produjeron compuestos 1 b (64 mg, 18 %) y 1a (70 mg, 19 %).

Los compuestos 2a a 3b se prepararon de una manera análoga a los compuestos 1a y 1b a partir del material de partida indicado:

Compuesto 4

Ácido 2-metil-6-(trifluorometil)isonicotínico (101 mg, 0,493 mmol) se agitó en DCM (20 ml). Se añadieron DIPEA (0,34 ml, 0,75 g/ml, 1,97 mmol) y HBTU (206 mg, 0,542 mmol), se continuó la agitación durante 20 min a TA. Se añadió I-13a (150 mg, 0,493 mmol) y la agitación se continuó durante una noche a TA. La MR se inactivó con agua, se agitó 20 min, después la CO se separó. La capa acuosa se volvió a extraer 2x con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, después se separaron y se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y se concentraron al vacío. Este material se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con un 0-5 % de MeOH en DCM para producir compuesto 4 en bruto (120 mg, rendimiento de un 52,931 %). Se realizó una purificación mediante HPLC prep. (fase estacionaria: RP Vydac Denali C18 - 10 gm, 200 g, 5 cm I.D., fase móvil: solución de NH⁴ HCO³ al 0,25 % en agua, MeOH) produciendo, después de coevaporación con MeOH y secando en el horno de vacío durante una noche, compuesto 4 (74 mg, 36 %).

Los comp 2 r r r n n m n r imil r l m n in rm i I-1 n ntiopuro.

Compuesto 24A y compuesto 24B

A una mezcla agitada de ácido 2-ciclopropil-6-metil-piridin-4-carboxílico (0,16 g, 0,00075 mol) en DCM (20 ml, 1,33 g/ml, 0,31 mol) se le añadió HBTU (0,28 g, 0,00075 mol) y DIPEA (0,54 ml, 0,75 g/ml, 0,0031 mol). Después de agitar la mezcla 30 min, se añadió I-19 (0,2 g, 0,00062 mol) en una porción. La MR se dejó agitando durante 1 h y después se añadió NaOH 1 M (5 ml), las capas se separaron y la CO se lavó con agua (10 ml), se secó sobre MgSÜ⁴ , se filtró y se concentró al vacío para producir un aceite. Esto se purificó por cromatografía ultrarrápida usando una columna ultrarrápida Redisep® de 24 g eluyendo con un gradiente de un 0-5 % de MeOH en DCM para producir un aceite que se cristalizó en DIPE (10 ml) para producir un sólido blanco (0,23 g, rendimiento de un 83,2 %). Se realizó una purificación mediante CFS prep. (fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AD 30 x 250 mm, fase móvil: Cܲ , iPrOH con iPrNH² al 0,2 %) para producir las dos fracciones. Ambas fracciones se transfirieron a tubos y se secaron en un horno de vacío (45 °C, 16 h) y esto produjo los sólidos amorfos co. n.° 24a (0,11 g, rendimiento de un 39,7 %) y co. n.° 24b (0,11 g, rendimiento de un 38,3 %).

Compuestos 25A y 25B

Se agitó ácido benzotiazol-6-carboxílico (142 mg, 0,792 mmol) en DCM (15 ml), se añadieron DIPEA (0,82 ml, 4,8 mmol) y HBTU (300 mg, 0,792 mmol). La agitación se continuó durante 0,5 h a TA. Se añadió intermedio 25 (250 mg, 0,792 mmol) a la solución y la agitación se continuó durante 2 h a TA. Se añadió solución de NaOH (1 N, 1 ml) y se agitó durante 5 min. El producto se filtró en un filtro Extrelute y el filtrado se evaporó. El producto se purificó sobre gel de sílice, eluyente: DCM -> 4 % de MeOH en DCM. Las fracciones puras se evaporaron para dar una mezcla de compuestos 25a y 25b (340 mg). Esto se purificó mediante CFS prep. (fase estacionaria: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, fase móvil: CO² , EtOH iPrNH20,4) para dar ambos productos que se cristalizaron en Et²O y produjeron co. n.° 25a (121 mg, 35 %) y co. n.° 25b (128 mg, 37 %).

Compuestos 26A y 26B

Ácido 2,6-dimetilisonicotínico (154,845 mg, 1,0 mmol) se agitó en DCM (10 ml). Se añadieron DIPEA (0,53 ml, 3,1 mmol) y HBTU (427 mg, 1,1 mmol), se continuó la agitación durante 0,5 horas a TA. El intermedio 38 (273 mg, 1,1 mmol) se disolvió en DCM (5 ml) y esta mezcla se añadió a la solución, que se agitó, se continuó durante 3,5 horas a temperatura ambiente. La MR se inactivó con agua, después las dos capas se separaron y la CA se volvió a extraer con DCM. La CO se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó. El producto se purificó sobre gel de sílice, eluyente: DCM/MeOH, 100/0 a 97/3 a 94/6 que produjo los dos pares de diastereoisómeros como una mezcla. Se realizó una purificación mediante CFS prep. (fase estacionaria: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, fase móvil: CO² , EtOH iPrNH² 0,4) que produjo los dos enantiómeros trans. Se realizó una purificación mediante HPLC prep. (fase estacionaria: RP XBridge Prep C18 ODB-5 pm, 30 x 250 mm, fase móvil: solución de NH⁴ HCO³ al 0,25 % en agua, CH³CN para dar compuesto 26a (26 mg, rendimiento de un 6,761 %) y 26b (20 mg, rendimiento de un 5,201 %).

Compuesto 321

El intermedio 9b (. 2HCl, 1,2 g, 3,527 mmol), ácido 2-(difluorometil)-6-metil-4-piridincarboxílico (660 mg, 3,527 mmol), EDCI (1,352 g, 7,053 mmol), y DIPEA (1,823 g, 14,107 mmol) en DCM (71,4 ml) se agitaron a Ta durante 4 h. La MR se lavó con NaOH 1 N, la CO se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. El producto se purificó sobre gel de sílice, eluyente MeOH/DCM 0/100 a 3/97. Las fracciones puras se evaporaron y se cristalizaron en DIPE. Los cristales se retiraron por filtración y se secaron para dar compuesto 321 (920 mg, 60 %).

Compuesto 333

A una solución agitada de intermedio 25a (100 mg, 0,317 mmol) en ACN seco (5 ml), se le añadió ácido 3,5-diclorobenzoico (72,593 mg, 0,38 mmol). Se añadió TEA (0,22 ml, 1,58 mmol), seguido de anhídrido 1-propanofosfónico ([68957-94-8], 0,28 ml, 0,48 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 3 h, dando un precipitado blanco en una solución parda. El disolvente se retiró al vacío y el producto en bruto se repartió entre DCM (10 ml) y una solución acuosa saturada de NaHCO3 (10 ml). La CO se lavó con una solución acuosa saturada de Na2CO3 (1 x 15 ml), se secó (MgSO4), se filtró, el disolvente se retiró al vacío y se coevaporó con tolueno (1 x 20 ml), dando un precipitado blanco en una solución parda, que se secó durante una noche para dar cristales pardos y blancos. La recristalización en Et²O produjo cristales blanquecino, que se secaron en horno durante una noche en un horno de vacío a 40 °C, dando compuesto 333 (88 mg, 61 %), como cristales blanquecinos.

La tabla 1 a continuación enumera compuestos adicionales que se prepararon por analogía a los ejemplos anteriores. En caso de que no se indique forma salina, el compuesto se obtuvo como una base libre. "Co. n.e" significa "compuesto número". Los reactivos usados en la síntesis de los compuestos están disponibles en el mercado o pueden prepararse por procedimientos conocidos por los expertos en la materia. Se indican compuestos preparados por analogía al compuesto 321 (N.B. acoplamiento de EDCI); se indican compuestos preparados por analogía al compuestos 333 (N.B. anhídrido de ácido fosfónico) en la columna de reactivos.

Tabla 1

Conversiones y síntesis de compuestos finales por otras rutas Compuesto 386 y compuesto 282/387

Etapa 1. Compuesto 388 y compuesto 389

Se añadió NaOMe (10,5 ml, 56,7 mmol, 30 % en MeOH) a una solución de compuesto 71 (654 mg, 1,42 mmol) en MeOH (13 ml) y la mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 1 h. La MR se inactivó con una solución acuosa saturada de NH⁴Cl. Los volátiles se retiraron al vacío y el residuo acuoso restante se repartió con DCM. La capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y se evaporaron al vacío para producir una mezcla de compuestos 388 y 389 como una espuma blanca (656 mg), que se usó tal cual en la siguiente etapa.

Etapa 2. Compuesto 386 y compuesto 282/387

La mezcla de la etapa previa se disolvió en 1,4-dioxano (10 ml) y la solución resultante se puso en un tubo de microondas y se desgasificó durante 5 minutos. Después se añadió K²CO³ (668 mg, 4,83 mmol), seguido de trimetilboroxina (0,789 ml, 2,76 mmol, 3,5 M en THF) y Pd(PPh³)⁴ (159,5 mg, 0,14 mmol). La mezcla de reacción después se calentó a 100 °C durante 2,5 h con irradiación microondas. Se añadió más trimetilboroxina (0,394 ml, 1,38 mmol, 3,5 M en THF) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C con irradiación microondas durante otra hora. El disolvente se evaporó al vacío y el residuo resultante se disolvió en una mezcla 1:1 de DCM/agua (40 ml). La mezcla bifásica se separó y la fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante (843 mg) se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH, 100/0 a 97/3. Las fracciones correspondientes a los compuestos del título se recogieron. Una fracción se recristalizó en DIPE, para proporcionar compuesto 282/387 (146 mg, 24 %). La segunda fracción se purificó por HPLC prep. usando como fase estacionaria: RP XBridge Prep C18 OBD-10 pm, 30 x 150 mm y como fase móvil: solución de NH⁴ HCO³ al 0,25 % en agua, CH³CN para proporcionar compuesto 386 como un sólido blanco (82 mg, 13,8 %).

Compuesto 390 (y compuesto 391)

Un tubo de presión se cargó con compuesto 271 (150 mg, 0,37 mmol), ácido ciclopropilborónico (127,2 mg, 1,48 mmol) y tolueno (3,0 ml) y este se desgasificó durante 15 min antes de añadir consecutivamente acetato de paladio (II) (4,1 mg, 0,0185 mmol), triciclohexilfosfina (10,4 mg, 0,037 mmol), agua destilada (0,734 ml, 40,65 mmol) y fosfato de potasio tribásico (235,7 mg, 1,11 mmol). El tubo se tapó y la MR resultante se puso en un baño de aceite de 100 °C y se agitó durante 16 h. La solución resultante se enfrió hasta TA y se filtró a través de una capa de Celite®, que se lavó con tolueno y EtOAc. El filtrado se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo resultante se disolvió en EtOAc y se lavó con agua y salmuera, después se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó al vacío. El residuo resultante (155 mg) se purificó mediante HPLC prep., usando como fase estacionaria: RP XBridge Prep C18 OBD-10 pm, 30 x 150 mm y fase móvil: solución de NH4Ac al 0,5 % en agua CH³CN al 10 %, MeOH, para proporcionar compuesto 390 (18 mg, 11,7 %) y compuesto 391 (66 mg, 43,4 %), después de trituración con heptano.

Compuesto 392

Etapa 1. Compuesto 393

Se añadió fluoruro de cesio (577 mg, 3,8 mmol) a una solución de compuesto 71 (436 mg, 0,95 mmol) en DMF (7,35 ml) y la mezcla resultante se agitó y se desgasificó durante 15 minutos. Se añadió ciclopropanol (0,072 ml, 1,14 mmol) y la MR se calentó a 110 °C durante 2 h con irradiación microondas. El disolvente se retiró al vacío, después el residuo resultante se disolvió en una mezcla 1:1 de DCM/agua (20 ml). La mezcla bifásica resultante se separó, después la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH, 100/0 a 99/1, para proporcionar compuesto 393 (308 mg) como un material impuro, que se usó tal cual en la siguiente etapa.

Etapa 2. Compuesto 392 Una solución de compuesto 393 (308 mg, 0,64 mmol) en 1,4-dioxano (4,6 ml) se desgasificó durante 15 minutos, después se añadieron secuencialmente K²CO³ (310 mg, 2,24 mmol), trimetilboroxina (0,550 ml, 1,92 mmol, 3,5 M en THF) y Pd(PPh³)⁴ (74,015 mg, 0,064 mmol) y la mezcla resultante se calentó a 100 °C durante 2,5 h en un tubo de presión. El disolvente se retiró al vacío y el residuo resultante se repartió entre DCM (10 ml) y agua (10 ml). La mezcla bifásica resultante se separó y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo resultante (340 mg) se purificó mediante HPLC prep., usando como fase estacionaria: RP Vydac® Denali® C18 -10 pm, 200 g, 5 cm I.D y fase móvil: MeOH, para dar compuesto 392 (55 mg, 18,6 %) como cristales blancos después de recristalización en DIPE.

Compuesto 394

Se añadieron consecutivamente EDCI (993 mg, 5,2 mmol) y ácido 6-cloro-3-fluoro-2-metil-isonicotínico (intermedio 50, 492 mg, 2,6 mmol) a una suspensión agitada de intermedio 9-b (750 mg, 2,47 mmol) en DCM (20 ml). Después se añadió DIPEA (1,78 ml, 10,4 mmol) a la mezcla y la solución amarilla resultante se agitó a TA durante 5 h. La MR se inactivó con una solución acuosa de NaOH (20 ml, 1 M). La capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 10 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante (1,5 g) se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH, 100/0 a 99/1, para proporcionar compuesto 395 (720 mg, 62 %), como una espuma blanca.

Etapa 2. Intermedio 56

Se añadió yodotrimetilsilano (0,065 ml, 0,46 mmol) a una solución de compuesto 395 (200 mg, 0,46 mmol) en propionitrilo (0,8 ml), en una atmósfera de nitrógeno. Después se añadió yoduro de sodio (205 mg, 1,37 mmol) y la solución resultante se calentó hasta 80 °C. Después de 5 h, el análisis por CLEM mostró conversión de solamente un 15 %, por lo tanto, se añadió otra porción de yodotrimetilsilano (0,065 ml, 0,456 mmol) y la MR se agitó a 80 °C durante 22 h. Después de este tiempo, se añadió otra porción de yodotrimetilsilano (0,065 ml, 0,456 mmol) y yoduro de sodio (205 mg, 1,37 mmol), y la MR se agitó durante 12 h. El disolvente se retiró al vacío, después el residuo resultante se repartió entre agua y DCM. La mezcla bifásica resultante se separó y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSÜ⁴ , se filtraron y el disolvente se retiró al vacío. El residuo resultante (1,5 g) se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH, 100/0 a 97,5/2,5, para dar intermedio 56 (162 mg) como un material impuro, usado tal cual en la siguiente etapa.

Etapa 3. Compuesto 394 Se añadió 2,2-difluoro-2-(fluorosulfonil)acetato de metilo (0,192 ml, 1,51 mmol) a una mezcla de intermedio 56 (160 mg, 0,3 mmol) y yoduro de cobre (75 mg, 0,39 mmol) en DMF anhidra (0,958 ml) en un tubo de presión. La mezcla resultante se calentó hasta 80 °C durante 2 h en un baño de aceite. La MR se enfrió hasta TA, después se inactivó con una solución acuosa saturada de NH⁴CL La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSÜ⁴ , se filtraron y el disolvente se retiró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida, usando como eluyente un gradiente de heptano/EtÜAc, 100/0 a 60/40, para proporcionar compuesto 394 (17,5 mg, 12 %).

Compuesto 396

Se añadieron EDCI (934 mg, 4,87 mmol) y ácido 2-cloro-3-fluoro-6-metil-isonicotínico (485 mg, 2,56 mmol) a una suspensión agitada de intermedio 9-b (740,1 mg, 2,44 mmol) en DCM (18,5 ml). Se añadió DIPEA (1,68 ml, 9,74 mmol) y la MR se agitó durante 2 h a TA. La MR se inactivó con una solución acuosa de NaÜH (30 ml, 1 M). La capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 15 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSÜ4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante (1,5 g) se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH, 100/0 a 99/1, para proporcionar compuesto 397 (854 mg, 80 %), como un polvo blanca.

Etapa 2. Intermedio 57

Se añadió yodotrimetilsilano (0,26 ml, 1,82 mmol) a una solución de compuesto 397 (400 mg, 0,91 mmol) en propionitrilo (1,6 ml), en una atmósfera de nitrógeno. Después se añadió yoduro de sodio (410 mg, 2,73 mmol) y la solución resultante se calentó hasta 80 °C durante 1,5 h. El disolvente se retiró al vacío, después el residuo resultante se repartió entre agua y EtOAc. La mezcla bifásica resultante se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH, 100/0 a 97,5/2,5, para dar intermedio 57 (197 mg) como un material impuro, que se usó tal cual en la siguiente etapa.

Etapa 3. Compuesto 396 Se añadió yoduro de cobre (92 mg, 0,48 mmol) a una solución de intermedio 57 (197 mg, 0,37 mmol) en DMF anhidra (1,18 ml) y la mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno durante 10 minutos. Después se añadió 2,2-difluoro-2-(fluorosulfonil)acetato de metilo (0,236 ml, 1,86 mmol) y la MR se agitó y se calentó a 80 °C durante 2 h, después de este tiempo se dejó enfriar hasta TA durante una noche. La MR se inactivó con una solución acuosa saturada de NH⁴CL La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (6 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se retiró al vacío. El residuo resultante (550 mg) se purificó mediante HPLC prep. usando como fase estacionaria: RP XBridge Prep C18 OBD-10 pm, 50 x 150 mm y como fase móvil: CH³CN, para proporcionar compuesto 396 (7,4 mg, 4 %).

Compuesto 398

Se añadió EDCI (320,5 mg, 1,67 mmol), seguido de DIPEA (0,57 ml, 3,34 mmol) a una solución agitada de intermedio 9-b (242, mg, 0,8 mmol) y ácido 2 -cloro-3-fluoro-6-metoxi-isonicotínico (intermedio 53, 172 mg, 0,84 mmol) en DCM (6,35 ml). La MR se agitó a TA durante una noche. Se añadió otra porción de EDCI (80 mg, 0,417 mmol) y DIPEA (0,1 ml, 0,75 g/ml, 0,58 mmol) y la MR se agitó durante 12 h, después se inactivó con una solución acuosa de NaOH (20 ml, 1 M). La capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 20 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante (600 mg) se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH, 100/0 a 98,5/1,5, para proporcionar compuesto 399 (136 mg, 80 %), como una espuma blanca.

Etapa 2. Compuesto 398

Una solución de compuesto 399 (136 mg, 0,299 mmol) en 1,4-dioxano (2,17 ml) se desgasificó durante 15 minutos en un tubo de presión. Se añadieron secuencialmente K²CO³ (144,6 mg, 1,05 mmol), trimetilboroxina (0,256 ml, 0,897 mmol, 3,5 M en THF) y Pd(PPh³)⁴ (34,5 mg, 0,03 mmol) y la mezcla resultante se calentó a 100 °C durante 2 h. El disolvente se retiró al vacío y el residuo resultante se repartió entre DCM y agua. La mezcla bifásica resultante se separó y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo resultante (220 mg) se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH, 100/0 a 96/4, para proporcionar compuesto 398 (88 mg, 68 %).

Compuesto 400

Etapa 1. Compuesto 401

Se añadieron DIPEA (0,65 ml, 3,77 mmol) y HBTU (300 mg, 0,79 mmol) a una solución de ácido 6-cloro-3-fluoro-2-metil-isonicotínico (intermedio 50, 150 mg, 0,79 mmol) en DCM (30 ml). Después se añadió intermedio 25-a (238 mg, 0,75 mmol) y la MR se agitó durante ~1,5 h a TA. La MR se inactivó con una solución acuosa de NaOH (1 ml, 1 M) y después se filtró a través de un filtro Extrelute®. El disolvente se retiró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH 100/0 a 98/2 para proporcionar compuesto 401 (320,5 mg, 83 %) como un aceite incoloro

Etapa 2. Compuesto 400

Una solución de compuesto 401 (320 mg, 0,71 mmol) en 1,4-dioxano (5,1 ml) se desgasificó durante 15 minutos. Se añadieron secuencialmente K2CO3 (343,3 mg, 2,45 mmol), trimetilboroxina (0,608 ml, 2,129 mmol, 3,5 M en THF) y Pd(PPh3)4 (82,0 mg, 0,071 mmol) y la mezcla resultante se calentó a 100 °C durante 2 h en un tubo de presión. El disolvente se retiró al vacío y el residuo resultante se repartió entre DCM (20 ml) y agua (20 ml). La mezcla bifásica se separó y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH 100/0 a 95/5. Esto proporcionó una mezcla de isómeros endo/exo (230 mg) que se separaron mediante HPLC prep., usando como fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD-10 pm, 50 x 150 mm y fase móvil: MeOH. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron y el residuo resultante se recristalizó en Et2O, para proporcionar compuesto 400 (57 mg, 18,6 %).

Compuesto 402

Se añadió mCPBA (307,825 mg, 1,25 mmol) a una solución de compuesto 1 del documento WO2017/076900 (250 mg, 0,624 mmol) en DCM (1,6 ml), a 10 °C y la mezcla resultante se agitó en un Easymax® durante 3 d. Después de este tiempo, la MR se inactivó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 (1,5 ml). La mezcla bifásica se separó y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 5 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, usando como eluyente un gradiente de DCM/MeOH, 100/0 a 96/4 para dar compuesto 402 (250 mg, 96 %) como un polvo blanco.

Parte analítica

Puntos de fusión

Los valores son valores de pico o intervalos de fusión, y se obtienen con imprecisiones experimentales que están habitualmente asociadas con este método analítico.

El punto de fusión se determinó con un DSC823e (Mettler-Toledo). El punto de fusión se midió con un gradiente de temperatura de 10 °C/min. La temperatura máxima fue 300 °C.

Tabla 2

La medición de cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC) se realizó usando una bomba de CL, una matriz de diodos (DAD) o un detector UV y una columna como se especifica en los métodos respectivos. Si era necesario, se incluían detectores adicionales (véase la tabla de métodos a continuación).

El flujo desde la columna se llevó al espectrómetro de masas (EM) que estaba configurado con una fuente de iones a presión atmosférica. Pertenece a los conocimientos de los expertos en la materia el ajuste de los parámetros de calibrado (por ejemplo, intervalo de exploración, tiempo de permanencia...) para obtener iones que permitan la identificación del peso molecular (PM) monoisotópico nominal del compuesto. La adquisición de datos se realizó con el programa informático apropiado. Los compuestos se describe por sus tiempos de retención experimentales (T^r ) e iones. Si no se especifica de forma diferente en la tabla de datos, el ion molecular presentado corresponde a [M+H]+ (molécula protonada) y/o [M-H]- (molécula desprotonada). En caso de que el compuesto no fuera directamente ionizable, se especifica el tipo de aducto (es decir [M+NH4]+, [M+HCOO]-, etc.). Para moléculas con múltiples patrones isotópicos (Br, Cl), el valor presentado es el obtenido para la masa más baja del isótopo. Todos los resultados se obtuvieron con imprecisiones experimentales que están habitualmente asociadas con el método usado. A partir de ahora en este documento, "SQD" significa detector de cuadrupolo único, "MSD" detector selectivo de masas, "TA" temperatura ambiente, "BEH" híbrido unido por puente de etilsiloxano/sílice, "DAD" detector de matriz de diodos, "HSS" sílice de alta resistencia.

Tabla 3A. Códigos de método de CLEM (flujo expresado en ml/min; temperatura de columna (T) en °C; tiempo de migración en minutos

Tabla 3B. Datos analíticos de CLEM - T^r significa tiempo de retención (en minutos), [M+H]+ significa la masa protonada del compuesto, método se refiere al método usado para análisis por CL EM.

Métodos de CFS-EM

La medición de CFS se realizó usando un sistema analítico de cromatografía de fluidos supercríticos (CFS) compuesto de una bomba binaria para suministrar dióxido de carbono (CO²) y modificado, un tomamuestras automatizado, un horno de columna, un detector de matriz de diodos equipado con una cubeta de flujo de alta presión que se mantiene a 400 bares. Si se configuraba con un espectrómetro de masas (EM) el flujo de la columna se llevaba al (EM). Pertenece a los conocimientos de los expertos en la materia el ajuste de los parámetros de calibrado (por ejemplo, intervalo de exploración, tiempo de permanencia...) para obtener iones que permitan la identificación del peso molecular (PM) monoisotópico nominal del compuesto. La adquisición de datos se realizó con el programa informático apropiado.

Tabla 4A. Métodos analíticos de CFS-EM (flujo expresado en ml/min; temperatura de columna (T) en °C; tiempo de migración en minutos, contrapresión BPR en bares.

Tabla 4B. Datos analíticos de CFS - T^r significa tiempo de retención (en minutos), [M+H]+ significa la masa protonada del compuesto, método se refiere al método usado para análisis por (CFS)EM de compuestos enantioméricamente puros.

Resonancia magnética nuclear (RMN)

El espectro de RMN de ¹H se registró en espectrómetro Bruker DPX-400 con secuencias de impulso convencionales, que funciona a 400 MHz o en un Bruker DPX-360 que funciona a 360 MHz, usando DMSO-afe (DMSO deuterado, sulfóxido de dimetilo-d6) como disolventes. Los desplazamientos químicos (5) se presentan en partes por millón (ppm) con respecto a tetrametilsilano (TMS), que se usó como patrón interno.

Co. n.225a: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-rá en 100 °C) 5 ppm 1,74 - 1,93 (m, 4 H) 1,97 - 2,11 (m, 3 H) 2,31 - 2,45 (m, 1 H) 4,06 - 4,23 (m, 1 H) 4,61 (s a, 1 H) 4,82 (s a, 1 H) 7,02 (t, J=54,2 Hz, 1 H) 7,50 (s, 1 H) 7,78 (dd, J=8,4, 1,8 Hz, 1 H) 8,17 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 8,44 (s a, 1 H) 8,47 (d, J=1,1 Hz, 1 H) 9,45 (s, 1 H);

Co. n.293: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-cfe en 100 °C) 5 ppm 0,84 (d, J=6,6 Hz, 3 H) 0,88 - 0,98 (m, 4 H) 1,45 (cd, J=12,4, 4,4 Hz, 1 H) 1,91 (dd a, J=13,4, 2,6 Hz, 1 H) 2,06 - 2,14 (m, 1 H) 2,42 (s, 3 H) 2,45 - 2,49 (m, 1 H) 3,13 (a t, J=11,6 Hz, 1 H) 3,37 (dd, J=12,9, 11,1 Hz, 1 H) 3,60 (td, J=10,9, 4,0 Hz, 1 H) 4,17 (s a, 2 H) 6,79 - 7,23 (m, 3 H) 7,57 (s, 1 H) 8,72 (s, 1 H);

Co. n.2108: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 0,77 (d, J=6,4 Hz, 3 H) 1,34 - 1,56 (m, 1 H) 1,68 - 2,00 (m, 1 H) 2,43 (s a, 1 H) 2,76 - 3,28 (m, 2 H) 3,49 - 3,74 (m, 2 H) 3,87 (s, 3 H) 4,46 - 4,76 (m, 1 H) 6,81 - 7,33 (m, 3 H) 7,65 (s, 1 H) 8,80 (s, 1 H);

Co. n.2110: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-a^fe en 100 °C) 5 ppm 0,83 (d, J=6,6 Hz, 3 H) 1,39 - 1,50 (m, 1 H) 1,85 - 1,95 (m, 1 H) 2,43 (s, 3 H) 2,44 - 2,48 (m, 1 H) 3,13 (a t, J=12,3 Hz, 1 H) 3,37 (dd, J=13,0, 11,2 Hz, 1 H) 3,58 (td, J=10,9, 4,0 Hz, 1 H) 3,88 (s, 3 H) 4,13 (s a, 2 H) 6,58 (s, 1 H) 6,82 (s, 1 H) 7,01 (t, J=54,2 Hz, 1 H) 7,56 (s, 1 H) 8,71 (s, 1 H); Co. n.2132: ¹H RMN (360 MHz, DMSO-a^fe) 5 ppm 0,78 (d, J=6,6 Hz, 3 H) 1,38 - 1,61 (m, 1 H) 1,67 - 2,01 (m, 1 H) 2,60 (s, 3 H) 2,86 - 3,30 (m, 2 H) 3,49 (d a, J=14,6 Hz, 1 H) 3,59 - 3,72 (m, 2 H) 4,48 - 4,79 (m, 1 H) 6,87 - 7,35 (m, 1 H) 7,54 - 7,89 (m, 3 H) 8,79 (s, 1 H);

Co. n.2228: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-a^fe en 100 °C) 5 ppm 0,85 (d, J=6,6 Hz, 4 H) 1,43 - 1,56 (m, 1 H) 1,86 - 1,99 (m, 1 H) 3,19 (td, J=12,9, 2,8 Hz, 1 H) 3,42 (dd, J=13,0, 11,2 Hz, 1 H) 3,64 (td, J=10,9, 4,0 Hz, 1 H) 4,15 - 4,26 (m, 1 H) 4,28 - 4,38 (m, 1 H) 7,01 (t, J=54,2 Hz, 1 H) 7,58 (s a, 1 H) 7,61 (dd, J=8,4, 1,5 Hz, 1 H) 8,11 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 8,27 (d, J=1,3 Hz, 1 H) 8,70 (s, 1 H) 9,40 (s, 1 H);

Co. n.2281: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-a^fe en 120 °C) 5 ppm 0,82 (d, J=6,40 Hz, 3 H) 1,46 (cd, J=12,47, 4,40 Hz, 1 H) 1.84 - 1,93 (m, 1 H) 2,41 - 2,53 (m, 1 H) 2,84 (s, 3 H) 3,07 - 3,18 (m, 1 H) 3,35 (dd, J=12,98, 11,22 Hz, 1 H) 3,58 (td, J=10,95, 3,85 Hz, 1 H) 3,88 - 4,33 (m, 2 H) 6,85 (s, 1 H) 6,98 (t, J=54,36 Hz, 1 H) 7,12 (s, 1 H) 7,53 (s, 1 H) 7,55 (t, J=73,07 Hz, 1 H) 7,74 (s, 1 H) 8,67 (s, 1 H);

Co. n.2295: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d^s en 100 °C) 5 ppm 1,67 - 1,87 (m, 4 H) 1,89 - 2,10 (m, 3 H) 2,26 - 2,38 (m, 1 H) 3,82 (s, 3 H) 4,13 (d a, J=12,10 Hz, 1 H) 4,56 (s a, 1 H) 4,86 (s a, 1 H) 6,55 (d, J=2,64 Hz, 1 H) 7,02 (t, J=55,00 Hz, 1 H) 7,35 (d, J=3,08 Hz, 1 H) 7,41 - 7,49 (m, 3 H) 7,90 (s, 1 H) 8,59 (s, 1 H);

Co. n.2321: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-a^fe en 100 °C) 5 ppm 0,81 (d, J=6,60 Hz, 3 H) 1,47 (cd, J=12,43, 4,29 Hz, 1 H) 1.85 - 1,93 (m, 1 H) 2,39 - 2,46 (m, 1 H) 2,94 (s, 3 H) 3,09 - 3,18 (m, 1 H) 3,33 - 3,40 (m, 1 H) 3,57 - 3,64 (m, 1 H) 3,83­ 4,52 (m, 2 H) 6,82 (m, 1 H) 7,00 (m, 1 H) 7,43 (s, 1 H) 7,46 (s, 1 H) 7,55 (s, 1 H) 8,69 (s, 1 H);

Co. n.2335: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d^s en 100 °C) 5 ppm 1,74 - 2,00 (m, 6 H) 2,02 - 2,08 (m, 1 H) 2,36 - 2,41 (m, 1 H) 2,42 (s, 3 H) 3,84 (s, 3 H) 4,08 - 4,14 (m, 1 H) 4,81 - 4,85 (m, 1 H) 5,13 - 5,17 (m, 1 H) 7,05 (t, J=54,40 Hz, 1 H) 7,56 (s, 1 H) 7,89 (s, 1 H) 8,69 (s, 1 H);

Co. n.2356: ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶ en 100 °C) 5 ppm 1,68 - 1,89 (m, 4 H) 1,92 - 2,04 (m, 3 H) 2,30 - 2,45 (m, 1 H) 4,01 - 4,07 (m, 1 H) 4,39 - 4,84 (m, 2 H) 7,01 (t, J=52,80 Hz, 1 H) 7,49 (s, 1 H) 7,58 (dd, J=8,25, 1,87 Hz, 1 H) 7,71 (d, J=8,14 Hz, 1 H) 7,83 (d, J=1,54 Hz, 1 H) 8,58 (s a, 1 H).

Ejemplos farmacológicos

Los compuestos proporcionados en la presente invención son inhibidores de PDE2, particularmente de PDE2A. Los resultados de ensayar los compuestos en varios ensayos farmacológicos se muestran a continuación.

Ensayo in vitro PDE2A

Se expresó PDE2A recombinante humana (hPDE2A) en células Sf9 usando una construcción vaculovírica de rPDE10A recombinante. Las células se recogieron después de 48 h de infección y la proteína hPDE2A se purificó por cromatografía de quelatos metálicos sobre Ni-sepharose 6FF. Los compuestos ensayados se disolvieron y diluyeron en DMSO al 100 % hasta una concentración de 100 veces la concentración final en el ensayo. Las diluciones de compuesto (0,4 gl) se añadieron en placas de 384 pocillos a 20 gl de tampón de incubación (Tris 50 mM pH 7,8, MgCl² 8,3 mM, EGTA 1,7 mM). Se añadieron 10 gl de enzima hPDE2A en tampón de incubación y la reacción se inició mediante la adición de 10 gl de sustrato hasta una concentración final de GMPc 10 gM y 0,01 gCi de ³H-GMPc. La reacción se incubó durante 45 minutos a temperatura ambiente. Después de la incubación, la reacción se detuvo con 20 gl de solución de parada que consistía en 17,8 mg/ml de microesferas SPA (ensayo de proximidad de centelleo) de PDE complementadas con ZnCl²200 mM. Después de la sedimentación de las microesferas durante 30 minutos, se midió la radioactividad en un contador de centello Perkin Elmer Topcount y los resultados se expresaron como cpm.

Para los valores de blanco se omitió la enzima de la reacción y se remplazó por tampón de incubación. Los valores de control se obtuvieron mediante la adición de una concentración final de DMSO al 1 % en lugar de compuesto. Una curva de mejor ajuste se ajusta mediante un método de mínima suma de cuadrados al diagrama del % del valor de control con el valor de blanco sustraído frente a la concentración de compuesto y el valor de la concentración inhibidora que es la mitad de la máxima (CI⁵⁰) se obtiene de esta curva.

Ensayo in v itro PDE3A

Se aportó PDE3B recombinante humana (hPDE3B) como un lisado de células de insecto parcialmente purificado de Scottish Biomedical, se clonó a partir de cerebro humano y se expresó en células Sf9. Los compuestos ensayados se disolvieron y diluyeron en DMSO al 100 % hasta una concentración de 100 veces la concentración final en el ensayo. Las diluciones de compuesto (0,4 pl) se añadieron en placas de 384 pocillos a 20 pl de tampón de incubación (Tris 50 mM pH 7,8, MgCl² 8,3 mM, EGTA 1,7 mM). Se añadieron 10 pl de enzima hPDE3B en tampón de incubación y la reacción se inició mediante la adición de 10 pl de sustrato hasta una concentración final de AMPc 0,4 pM y 2,4 pCi/ml de [³H]-AMPc. La reacción se incubó durante 60 min a temperatura ambiente. Después de la incubación, la reacción se detuvo con 20 pl de solución de parada que consistía en 17,8 mg/ml de microesferas SPA (ensayo de proximidad de centelleo) de PDE complementadas con ZnCl²200 mM. Después de la sedimentación de las microesferas durante 30 min, se midió la radioactividad en un contador de centello Perkin Elmer Topcount y los resultados se expresaron como cpm. Para los valores de blanco se omitió la enzima de la reacción y se remplazó por tampón de incubación. Los valores de control se obtuvieron mediante la adición de una concentración final de DMSO al 1 % en lugar de compuesto. Una curva de mejor ajuste se ajusta mediante un método de mínima suma de cuadrados al diagrama del % del valor de control con el valor de blanco sustraído frente a la concentración de compuesto y el valor de la concentración inhibidora que es la mitad de la máxima (CI⁵⁰) se obtiene de esta curva.

Ensayo in v itro PDE10A

Se expresó PDE10A recombinante de rata (rPDE10A2) en células Sf9 usando una construcción vaculovírica de rPDE10A recombinante. Las células se recogieron después de 48 h de infección y la proteína rPDE10A se purificó por cromatografía de quelatos metálicos sobre Ni-sepharose 6FF. Los compuestos ensayados se disolvieron y diluyeron en DMSO al 100 % hasta una concentración de 100 veces la concentración final en el ensayo. Se expresó PDE10A recombinante humana (hPDE2A) en células Sf9 usando una construcción vaculovírica de hPDE10A recombinante y se amplificó en el propio laboratorio. Las células se recogieron después de 72 h de infección y la proteína hPDE10A se purificó por cromatografía de quelatos metálicos sobre Ni-sepharose. Las diluciones de compuesto (0,4 pl) se añadieron en placas de 384 pocillos a 20 pl de tampón de incubación (Tris 50 mM pH 7,8, MgCl²8,3 mM, EGTA 1,7 mM). Se añadieron 10 pl de enzima rPDE10A o hPDE10A en tampón de incubación y la reacción se inició mediante la adición de 10 pl de sustrato hasta una concentración final de AMPc 60 nM y 0,008 pCi de ³H-AMPc. La reacción se incubó durante 60 minutos a temperatura ambiente. Después de la incubación, la reacción se detuvo con 20 pl de solución de parada que consistía en 17,8 mg/ml de microesferas SPA (ensayo de proximidad de centelleo) de PDE. Después de la sedimentación de las microesferas durante 30 minutos, se midió la radioactividad en un contador de centello Perkin Elmer Topcount y los resultados se expresaron como cpm. Para los valores de blanco se omitió la enzima de la reacción y se remplazó por tampón de incubación. Los valores de control se obtuvieron mediante la adición de una concentración final de DMSO al 1 % en lugar de compuesto. Una curva de mejor ajuste se ajusta mediante un método de mínima suma de cuadrados al diagrama del % del valor de control con el valor de blanco sustraído frente a la concentración de compuesto y el valor de la concentración inhibidora que es la mitad de la máxima (CI⁵⁰) se obtiene de esta curva.

Tabla 5. Datos in vitro para compuestos de la invención. Por defecto, los datos sobre inhibición de PDE10A se refieren al clon humano (también indicado como (h)) salvo que se indique como (r), que se refiere al clon de rata.

Ocupación de PDE2 por compuestos de ensayo

Métodos

La ocupación de PDE2A se evaluó por autorradiografía ex vivo usando [³H]B-17a (descrito en el documento WO2013/000924) como radioligando (compuesto 12 en Buijnsters et al., (2014). Structure-Based Design of a Potent, Selective, and Brain Penetrating PDE2 Inhibitor with Demonstrated Target Engagement. ACS Med Chem Lett. 5(9): 1049-53). Se trataron ratas Wistar macho (200-250 g) por administración oral de vehículo o dosis crecientes de [³H]B-17a y se sacrificaron una h después. Los cerebros se retiraron inmediatamente del cráneo y se congelaron rápidamente en 2-metilbutano enfriado en hielo seco (-40 °C). Se cortaron secciones estriatales de veinte gm de grosor usando un Leica CM 3050 criostato-micrótomo (van Hopplynus, Bélgica), se montaron descongeladas en portaobjetos de microscopio (SuperFrost Plus Slides LaboNord, Francia) y se almacenaron a -20 °C hasta su uso.

Después de descongelarlas, las secciones se secaron bajo una corriente fría de aire y se incubaron durante un minuto con [³H]B-17a 30 nM en Tris-HCl (50 mM, pH 7,4) que contenía BSA al 0,3 %. Se incubaron en paralelo secciones cerebrales de animales tratados con fármaco y tratados con vehículo. Se midió la unión no específica en secciones cerebelares, una zona cerebral que no contiene la enzima PDE2A. Después de la incubación, se retiró por lavado el exceso de [³H]B-17a en tampón enfriado en hielo 2 veces 10 minutos, seguido de una rápida inmersión en agua destilada. Las secciones después se secaron bajo una corriente de aire frío.

Las secciones cerebrales se cargaron en un p-Imager (Biospace, París) durante 4 h y se cuantificó la radioactividad que surgía de la zona cerebral delimitada usando el programa Beta vision (Biospace, París). Se determinó la unión específica como la diferencia entre la unión total en el cuerpo estriado y la unión no específica en el cerebelo. El porcentaje de ocupación del receptor del fármaco administrado al animal correspondía a un 100 % menos el porcentaje de receptor marcado en el animal tratado. Para la determinación de los valores de DE⁵⁰, el porcentaje de ocupación del receptor se representó frente a la dosis y se calculó la curva logarítmica sigmoidea de dosis-efecto de mejor ajuste por análisis de regresión no lineal, usando el programa GraphPad Prism. Las DE⁵⁰ (la dosis de fármaco que produce un 50 % de ocupación del receptor) con límites de confianza del 95 % se calcularon a partir de las curvas de dosisrespuesta.

Tabla 6. PO = oral; SC = subcutáneo

Efecto de compuesto 110 sobre la transmisión sinóptica Reactivos cruciales

El tampón de disección de sacarosa contenía (en mM) sacarosa (150), NaCI (40), KCl (4), NaH² PO⁴.H²O (0,3), MgCI.6H²O (7), NaHCO³ (26), CaCl².2H²O (0,5), D-glucosa (10), equilibrado con mezcla gaseosa de un 95 % de O² y un 5 % de CO². El líquido cefalorraquídeo artificial (LCRA) usado durante el equilibrado y el registro contenía (en mM): NaCl (124), KCl (2,7), NaH² PO⁴.H²O (1,25), MgSO⁴.7H²O (1,3), NaHCO³ (26), CaCl².2H²O (2), D-glucosa (10), ácido ascórbico (2), equilibrado con mezcla gaseosa de un 95 % de O² y un 5 % de CO². Se prepararon CNQX y ácido quinurénico en LCRA a una concentración 50 pM y 1 mM respectivamente. Los compuestos de ensayo se prepararon recientes a partir de solución madre (con DMSO) en LCRA y con una concentración de DMSO final que no excedía un 0,1 %. Todos los reactivos fueron de Sigma-Aldrich, salvo que se indique de otro modo.

Animales (especie, peso y género)

Los animales usados fueron ratas Sprague-Dawley macho con un intervalo de peso entre 145 y 200 g, proporcionadas por Charles River Alemania.

Preparación de cortes del hipocampo

Se obtuvieron cortes cerebrales horizontales (300 pm) del hipocampo central a ventral de ratas Sprague-Dawley macho anestesiadas con isofluorano de acuerdo con el protocolo convencional. Los cortes se cortaron usando un rebanador de cortes histológicos vibrador (Leica VT1200S) en tampón de disección de sacarosa frío (4 °C) a una velocidad de 0,1 mm/s. Después de cortarlos, los corres se pusieron para su equilibrado a 35 °C durante 20 min y después se dejaron recuperar hasta TA durante al menos una hora en líquido cefalorraquídeo artificial (LCRA). Se prepararon de tres a cuatro cortes de un cerebro.

Sistema de ensayo

Todos los datos se registraron con un sistema MEA disponible en el mercado de MultiChannel Systems MCS GmbH (Reutlingen, Alemania) compuesto de un generador de estímulos de 4 canales y un cabezal amplificador de 60 canales conectado a una tarjeta A/D de 60 canales. Los programas informáticos para estimulación, registros y análisis son los disponibles en el mercado de Multi Channel Systems: MC Stim (edición II 2.0.0) y MC Rack (edición 3.8.1.0), respectivamente. Todos los experimentos se realizaron con MEA tridimensional (Ayanda Biosystems, S.A., CH-1015 Lausanne, Suiza) que consistía en 60 electrodos con forma de punta y 60 pm de altura espaciados en 100 pm. Los electrodos MEA están hechos de platino con 600 kü < impedancia < 900 kü.

Diseño experimental

El efecto de los compuestos de ensayo sobre la transmisión sináptica se investigó registrando los potenciales de campo extracelulares en cortes del hipocampo. Está bien establecido que la transmisión sináptica a puede generar una desviación del potencial de campo extracelular que refleja la actividad sináptica sincronizada en la población de neuronas que rodea el electrodo de registro.

Registros de potencial de campo extracelular. Después de la recuperación, los cortes cerebrales se montan en chip MEA bajo el microscopio y ubicando los 60 electrodos de registro en la región de sinapsis de fibra musgosa (giro dentado - CA3) del hipocampo. Se perfundieron continuamente soluciones de LCRA a una tasa de 2 ml/min. La temperatura de la cámara MEA se mantuvo a 32 ± 0,1 °C con un elemento Peltier ubicado en el cabezal amplificador MEA. Todos los datos se registraron con un sistema MEA disponible en el mercado de MultiChannel Systems MCS GmbH (Reutlingen, Alemania). Se seleccionaron dos electrodos adyacentes del chip para estimular las fibras musgosas en la región hiliar del giro dentado y el fEPSP registró el área de la zona terminal de la región CA3 del hipocampo. Se provocaron potenciales posinápticos extracelulares de campo (fEPSP) por estimulación de la fibra musgosa aferente con dos impulsos eléctricos consecutivos separados por 30 ms y repetidos cada 60 s (anchura de impulso 100 ps, y potencia de estimulación de corriente (pA) 40 % de la amplitud máxima relativa). Se realizaron experimentos de control simultáneamente de cortes que se asignaron aleatoriamente para tratarlos con vehículo (DMSO). N representa el número de cortes y habitualmente se usaron 3-4 cortes por animal. Las respuestas provocadas a nivel de neuronas posinápticas (fEPSP) se registraron si satisfacían determinados criterios de calidad que incluyen: ubicación correcta, estado basal estable (fluctuación dentro de /- 10 % durante diez minutos consecutivos, amplitud >100 gV). El fEPSP de electrodos seleccionados se muestreó a 5 kHz y se registró en el disco duro de un PC para análisis sin conexión. En paralelo, se reunieron las amplitudes de fEPSP de electrodos seleccionados en línea (con el programa MC Rack) para controlar y hacer seguimiento de la calidad del experimento. Los datos se representan en un archivo de hoja de cálculo para análisis sin conexión.

Se provocó potenciación a largo plazo débil (LTP) mediante un solo estímulo de alta frecuencia (HFS) para producir una potenciación menor que la máxima del fEPSP.

Los resultados de este ensayo se muestran en la figura 1 para el efecto del compuesto 110 como inhibidor de PDE2 sobre la capacidad de facilitar la inducción de LTP con un protocolo de potenciación a largo plazo débil.

Efecto de compuestos 70, 25a y 220 (base libre) sobre la transmisión sinóptica

Reactivos cruciales

El tampón de disección de sacarosa contenía (en mM) NaCl (124), KCl (4,4), NaH² PO⁴.H²O (1,2), MgCl.6H²Ü (2), NaHCܳ (26), CaCl².2H²O (2), D-glucosa (10), equilibrado con mezcla gaseosa de un 95 % de O² y un 5 % de CO². El líquido cefalorraquídeo artificial (LCRA) usado durante el equilibrado y el registro contenía (en mM): NaCl (124), KCl (4,4), NaH² PO⁴.H²O (1,2), MgSO⁴.7H²O (2), NaHCO³ (26), CaCl².2H²O (2), D-glucosa (10), ácido ascórbico (2), equilibrado con mezcla gaseosa de un 95 % de O² y un 5 % de CO². El compuesto 1, 2 y 3 se prepararon recientes a partir de solución madre (con DMSO) en LCRA y con una concentración de DMSO final que no excedía un 0,1 %. Todos los reactivos fueron de Sigma-Aldrich, salvo que se indique de otro modo.

Animales (especie, peso y género)

Los animales usados fueron ratas Sprague-Dawley macho con un intervalo de peso entre 145 y 200 g, proporcionadas por Charles River Alemania.

Preparación de cortes del hipocampo

Las ratas se anestesiaron con isoflurano y se decapitaron completamente. El cerebro se puso a continuación en un bloque de agarosa y se cortó horizontalmente, con la cuchilla avanzando desde la parte anterior a la posterior. Los cortes se cortaron a un grosor de 350 gm usando un rebanador de cortes histológicos vibrador (Leica VT1200S) en líquido cefalorraquídeo artificial (LCRA) carbogenado frío (4 °C) a una velocidad de 0,08 mm/s y 0,75 mm de amplitud de vibración. Después de cortarlos, los cortes se equilibraron a 35 °C durante 20 minutos y después se dejaron recuperar a temperatura ambiente durante al menos una hora en LCRA. Normalmente, se prepararon de seis a ocho cortes de cada cerebro y de tres a cuatro se usaron para el experimento.

Sistema de ensayo

Todos los datos se registraron con un sistema Slicemaster disponible en el mercado de Scientifica (R.U.) compuesto de 4 estaciones de registro. Un electrodo de estimulación de platino recubierto con Isonel se puso en la zona CA3 del hipocampo de la rata. Los microelectrodos de registro (resistencia de aproximadamente 5 MÜ) se llenaron con LCRA y se pusieron dentro de CA1 del hipocampo de la rata. La colocación de los electrodos de estimulación y registro se confirmó aplicando una corriente de estimulación cada 20 s. Se aplicó un prerregistro de 20 min para ver si las respuestas de los cortes se estabilizaban. La corriente de estimulación se aplicó mediante un aislante de corriente A365 (World Precision Instruments). Los datos se adquirieron usando pClamp 10 conectado a una tarjeta de adquisición de datos Digidata 1440A (Molecular Devices, Sunnyvale, California, EE. UU.) a una tasa de muestreo de 10 kHz, paso bajo filtrado a 1 kHz, y paso alto filtrado a 3 Hz. Se usaron estímulos de cien gs que variaban de 0-100 gA para provocar fEPSP, y la magnitud del fEPSP se determinó midiendo la amplitud negativa del pico o la pendiente del 20 - 80 % de la fase ascendente. Los datos se analizaron sin conexión usando algoritmos hechos a medida en IGORpro (Wavemetrics).

Diseño experimental

El efecto de los compuestos 70, 25a y 220 (base libre) sobre la transmisión sináptica se investigó registrando los potenciales de campo extracelulares en cortes del hipocampo. Está bien establecido que la transmisión sináptica a puede generar una desviación del potencial de campo extracelular que refleja la actividad sináptica sincronizada en la población de neuronas que rodea el electrodo de registro.

Registros de potencial de campo extracelular. Después de la recuperación, los cortes se perfundieron continuamente con LCRA oxigenado (2,5 ml/min). La solución se precalentó en el baño de agua antes de bombearse en la cámara de registro. Los registros se realizaron a 32 °C. Se registraron simultáneamente los fEPSP de cuatro cortes cerebrales independientes. N representa el número de cortes y habitualmente se usaron 3-4 cortes por animal. Las respuestas provocadas a nivel de neuronas posinápticas (fEPSP) se registraron si satisfacían determinados criterios de calidad que incluyen: ubicación correcta, estado basal estable (fluctuación dentro de /- 10 % durante diez minutos consecutivos, amplitud >100 gV). El fEPSP de electrodos seleccionados se muestreó a 5 kHz y se registró en el disco duro de un PC para análisis sin conexión. En paralelo, se reunieron las amplitudes de fEPSP en línea (con pclamp) para controlar y hacer seguimiento de la calidad del experimento. Los datos se representan en un archivo de hoja de cálculo para análisis sin conexión.

Se generaron curvas de entrada-salida y la potencia de estimulación se estableció a un 50 % del intervalo entre el fEPSP mínimo y máximo (como se define por la potencia de estimulación suficiente para producir una réplica de población o una meseta en la amplitud del fEPSP). Para experimentos de LTP, entonces se estimularon cortes cada 60 s durante un periodo basal de 20 min (vehículo con o sin compuesto) e inmediatamente seguido de la estimulación por ráfagas teta (mostrado como en la figura 2). Después de la estimulación por ráfagas teta, los cortes entonces se estimularon cada 60 s durante 60 min para medir el nivel de LTP.

Los resultados de este ensayo se muestran en la figura 3 para el efecto del compuesto 70, la figura 4 para el efecto del compuesto 25a y la figura 5 para el efecto del compuesto 220 (base libre) sobre la capacidad de facilitar la inducción de LTP con un protocolo de potenciación a largo plazo débil.

Estudio en perros de una sola dosis PK/PD de PDE2i

Para estos estudios, se usaron perros Marshall Beagle macho y hembra (1-6 años): 2 machos y 2 hembras por grupo de tratamiento. Se muestreó líquido cefalorraquídeo (LCR) del ventrículo lateral mediante una sonda de aguja guía en animales conscientes instrumentados.

Se tomaron muestras de LCR y sangre en estado basal de 2 a 5 días antes de la dosificación. Los perros se mantuvieron en ayunas durante una noche y a la siguiente mañana se les dosificó con el estómago vacío (por vía oral mediante sonda gástrica). En puntos temporales predeterminados después de la dosificación, se recogió sangre y/o LCR para la medición de los niveles de compuesto y GMPc. El análisis de GMPc se hizo por CL-EM/EM: Se diluyeron 25 pl de LCR con 125 pl de LCR artificial (STIL (20 ng/ ml)), se centrifugaron y se inyectaron 25 pl. Los sistemas usados fueron: un sistema de UPLC de columna Shimadzu SIL-30 (Hypercarb (50 mm x 1 mm (3 pm)), gradiente de acuoso básico (carbonato de amonio 10 mM)-acetonitrilo (5 % a 98 % en 5,5 minutos) a un caudal de 250 pl/min) y un sistema API Sciex 5500 equipado con una fuente de IEN (transición MRM selectiva (m/z 346,1->152,1 (75 ms de tiempo de permanencia)). Los resultados de este estudio se resumen en las figuras 6-15.

La inhibición de PDE2 potenciaba la plasticidad sinóptica en el circuito colateral de Schaffer-CAI del hipocampo en ratas anestesiadas: Estudio de casos con compuesto 110

Introducción

La plasticidad sináptica es un mecanismo fundamental para muchas funciones neurobiológicas. La potenciación a largo plazo (LTP), un aumento muy localizado de larga duración en la fuerza sináptica en el hipocampo, así como en la corteza, es un sustrato sináptico para la memoria y el aprendizaje (Cooke y Bliss, Curr Opin Investig Drugs.

2005;6(1):25-34). El aumento y disminución en la fuerza sináptica depende de la actividad de las neuronas presinápticas y posinápticas, de la manera en que las redes en el cerebro funcionan al configurar la representación sensitiva de múltiples objetos en la memoria y producir respuesta motora. Las diferentes características de estas modificaciones sinápticas, en el cerebro intacto, son cruciales para el funcionamiento de los diferentes tipos de redes y el funcionamiento de varios circuitos cerebrales diferentes. Por lo tanto, se espera que la LTP se vea comprometida en trastornos psiquiátricos y neurodegenerativos seniles tales como enfermedad de Alzheimer (Bergado y Almaguer, Neural Plast. 2002;9(4):217-32; Rowan et al., Biochem Soc Trans. 2005 ;33: 563-7). En animales, el procedimiento realizado en anestesia en regiones cerebrales muy interconectadas intactas, proporciona una herramienta poderosa para investigar cambios duraderos en la conectividad y plasticidad eficaces en los circuitos del hipocampo-corteza después de una estimulación eléctrica tetánica con frecuencia baja y alta suministrada en impulsos individuales o emparejados (Albensi et al., Exp Neurol. 2007; 204A:1-13). Los estudios ayudan a ampliar la comprensión de los circuitos neurales subyacentes al desarrollo de una fuerza sináptica alterada, es decir, determinar la trayectoria directa del circuito y la función de la diana biológica específica alojada por conexiones de redes interregionales específicas en la mediación de la debilitación sináptica. El procedimiento permite ensayar agentes farmacológicos destinados a restablecer la neuroplasticidad patológica, por ejemplo, invertir las deficiencias en LTP y la conectividad de redes aumentando la eficacia sináptica, que se espera que tenga efectos beneficiosos sobre la capacidad cognitiva y de aprendizaje relacionada (Cooke y Bliss, 2005; Albensi et al., 2007).

Las fosfodiesterasas (PDE) son una clase de enzimas responsables de la inactivación metabólica de los mensajeros secundarios monofosfato de adenosina 3',5'-cíclico (AMPc) y monofosfato de guanosina 3',5'-cíclico (GMPc) (Francis et al. Physiol Rev. 2011, 9: 651-90). Se clasificaron hasta 11 familias de PDE basándose en su estructura, actividad enzimática y distribución (Omori y Kotera Circ Res. 2007;100:309-27). La función de las PDE en el aumento de la señalización de nucleótidos cíclicos hace que estas enzimas sean dianas atractivas para regular la excitabilidad y potenciar los efectos de la comunicación neuronal. En el cerebro, la PDE2 se expresa principalmente en la corteza, el hipocampo y el cuerpo estriado, donde controlas la hidrólisis de AMPc. Durante los últimos años, los grupos de investigación se han centrado en el desarrollo de inhibidores de PDE2 como una manera de modificar los segundos mensajeros intracelulares GMPc y AMPc para ejercer una acción sobre la plasticidad y los procesos cognitivos (Duinen et al., Curr Pharm Des. 2015; 21:3813-28; Gomez y Breitenbucher, Bioorg Med Chem Lett. 2013; 23: 6522-7; Xu etal., Neurobiol Aging. 2015; 36:955-70; Barco et al., Expert Opin Ther Targets 2003; 7: 101-114).

En el presente estudio, se investigó si la inhibición de PDE2, usando compuesto 110, da lugar a alteraciones en la excitabilidad o en la capacidad de expresar potenciación sináptica en las sinapsis colaterales de Shaffer-CA1 del hipocampo en ratas Sprague Dawley anestesiadas con uretano.

Material y métodos

Animales

Los presentes experimentos se realizaron en conformidad estricta con las directrices de la Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International (AAALAC), y con la European Communities Council Directive de 24 de noviembre de 1986 (86/609/EEC) y los aprobó un comité ético local. Ratas Sprague Dawley, que pesaban 170-200 g en el momento de la cirugía, se alojaron por grupos en jaulas ventiladas situadas en ciclo de 12-h de luz/oscuridad (luces encendidas a las 07:00 AM) después de su llegada a las instalaciones de animales mantenidas en condiciones ambientales controladas.

Cirugía y electrofisiología

Las ratas se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de uretano de 1,5 g/kg de peso corporal. Los animales se pusieron en una estructura estereotáctica para la inserción de electrodos y se controló constantemente su temperatura corporal a través de una sonda rectal y se mantuvieron a 37 °C con una almohadilla de calentamiento. Se dio administración complementaria de uretano (0,2-0,5 g/kg) cuando fue necesario para garantizar anestesia completa. Se perforaron dos orificios pequeños (1 mm de diámetro) en el cráneo en la posición de las estructuras izquierdas del hipocampo para los electrodos de estimulación y registro. Un electrodo de estimulación bipolar; un par de cables de tungsteno trenzados (75 gm) con las puntas separadas horizontalmente por un espacio de 0,125 gm, se colocaron en la trayectoria colateral de Schaffer-comisural (SC) (AP -3,4, ML -2,5, DV -1,9 a 2,4), y un electro de registro de tungsteno se colocó en el estrato radiado de la zona del Cornu Ammonis (CA1) del hipocampo dorsal (AP -4,2, ML -4,0, DV -2,5 a 3,4) (figura 16a). La dura madre se traspasó a través de ambos orificios, y se descendieron muy lentamente los electrodos de estimulación y registro (0,2 mm/min) a través de la corteza y las capas superiores del hipocampo en el mPP y el DG del hipocampo dorsal. Durante la cirugía, se hicieron todos los esfuerzos por minimizar el sufrimiento del animal.

La pendiente del potencial posináptico excitador de campo (fEPSP) se usa como medida de la transmisión sináptica excitadora. Se aplicaron impulsos individuales de onda cuadrada monofásica de 0,1 o 0,2 ms generados por una unidad de corriente constante (MC, Alemania), por ejemplo, al SC y se generan respuestas provocadas en el CA1. Los potenciales de campo extracelulares se amplifican; se filtra el paso de banda entre 1 Hz y 2 kHz, se digitalizan y se analizan usando un programa informático hecho a medida. Los electrodos se descendieron hasta que se observa un fEPSP de desviación negativo con la respuesta máxima. Se deja un mínimo de 30 min para garantizar la estabilización de la excitabilidad antes de las mediciones. Después, se suministran impulsos de corriente constante monofásicos con intensidades de estímulo que varían de 1 a 12 voltios para generar curvas de entrada/salida (I/O) y determinar las pendientes fEPSP máximas, y después se usó la intensidad del estímulo que producía un 50 % de la respuesta máxima (es decir, impulso de ensayo) en posteriores experimentos.

Inducción de LTP: Después de la determinación de las curvas I/O, se aplicó entonces estimulación de ensayo cada 30 s antes y después de la estimulación tetánica. Por cada punto temporal medido durante los experimentos, se promediaron cinco registros de respuestas provocadas a la frecuencia de 0,033 Hz. Se midió la actividad basal cada 5 min durante al menos 1 h para garantizar un estado basal estable. Los últimos 30 min del registro basal (6 puntos temporales), inmediatamente después de la aplicación de fármaco se promediaron y usaron como control para la inducción de LTP. La tetanización se indujo usando un protocolo de estimulación de alta frecuencia (HFS) de 200-Hz que consiste en impulsos cuadrados (duración del estímulo de 0,2 ms, 10 ráfagas de 20 estímulos, 2 s de intervalos entre ráfagas) a una intensidad de estímulo que provocaba una pendiente fEPSP que era aproximadamente un 50 % de la respuesta máxima. Los fEPSP se registraron durante 120 min después de HFS para determinar posibles cambios en la respuesta sináptica de neuronas SC-CA1. Las mediciones de LTP se obtuvieron de las relaciones de EPSP de campo del promedio de la pendiente normalizada obtenido 120 min después de HFS dividido por el promedio de la pendiente normalizada recopilado 30 min antes de HFS. Se midió la pendiente de supuestos fEPSP entre el final del artefacto de estímulo y el mínimo del pico negativo. En un intervalo del 80 % entre estos puntos, se usó un análisis de ajuste lineal de mínimos cuadrados para calcular la pendiente EPSP.

Histología

Al final del estudio electrofisiológico, se suministró estimulación eléctrica de 500 gA durante 30 s para producir una lesión en la punta final de los electrodos de estimulación y registro y se recogieron los cerebros para verificación histológica de la colocación de los electrodos. Se examinaron secciones cerebrales (20 gm) usando un microscopio óptico. Los animales con colocación incorrecta de los electrodos se excluyeron del estudio.

Se disolvió compuesto 110 en ciclodextrina (CD) al 20 % 1HCl. Para administración subcutánea, se disolvió compuesto 110 en CD al 20 % 1 HCl para conseguir concentraciones finales de 2 y 4 mg/ml.

Datos estadísticos

Para cada animal, se promediaron las respuestas en estado basal estable (pretétanos) durante 30 min y la media se normalizó como el 100 %, y los datos de respuesta tras tétanos se expresaron con respecto al promedio basal. Se realizó comparación de los efectos de vehículo y compuesto 110 después de tétanos en intervalos de 30 min usando análisis unidireccional de la varianza (ANOVA) y se aplicó análisis a posteriori de diferencias significativas mínimas (LSD) para comparaciones de grupos.

Resultados

No se encontraron diferencias en la pendiente de los fEPSP de la trayectoria SC-CA1 entre las I/O de los grupo de estudio, lo que sugiere que la excitabilidad de las células CA1 era similar en todos los animales (figura 16b, c). La transmisión sináptica basal se potenció ya que se encontraron cambios significativos entre el control tratado con 110 (20 y 40 mg/kg) y el tratado con vehículo durante el estado basal pretétanos (+8 y 9 %, respectivamente) (figura 16d, e). Durante el paradigma de inducción de LTP, la administración subcutánea de compuesto 110 (20 y 40 mg/kg) potenció una potenciación sináptica (137 ± 8 % y 142 ± 5 % en comparación con el nivel de vehículo 119 ± 4 %, respectivamente) duradera (>2 h) (figura 16d, diagrama insertado). A los 0-30 min después de completarse la tetanización, las pendientes fEPSP fueron 153 ± 5 % y 155 ± 4 % en comparación con el nivel de vehículo 139 ± 1 %, p < 0,05). En los posteriores intervalos de 30 min, el análisis de las curvas de estímulo-respuesta reveló un aumento duradero significativo en el fEPSP con la dosis de 40 mg/kg (30-60 min: 146 ± 6 %, 60-90 min: 137 ± 5 % y 90-120 min: 129 ± 5 % en comparación con los niveles de vehículo 125 ± 6, 116 ± 9 y 106 ± 13 %, p < 0,05, respectivamente). Globalmente, el compuesto 110 facilita la transmisión sináptica basal y LTP in vivo.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que tiene fórmula (I)

o una forma estereoisomérica del mismo, en la que

R² es H o alquilo C^1-4; con la condición de que cuando R² es H, entonces R¹ sea F o CH³ ;

R³ es Ar, Het o Ar-alquenilo C^2-4; en el que

Ar representa fenilo o naftilo, cada uno opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; CN; NR^2AR^2B en el que R^2A y R^2B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; OH; alquilo C^1-6 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; alquilo C^1-6 sustituido con CN; cicloalquilo C^3-6; alquiloxi C^1-6 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y pirazolilo;

Het representa

(i) un heteroarilo de 5 miembros seleccionado del grupo que consiste en 1 H-pirrolilo; tienilo; furanilo; 1 H-pirazolilo; 1H-imidazolilo; 1,2-oxazolilo; 1,3-oxazolilo; y tiazolilo; cada uno puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; NR^3AR^3B en el que R^3A y R^3B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; y furan-2-ilo; o

(ii) un heteroarilo de 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en piridilo, pirimidinilo, pirazinilo y piridazinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; OH; CN; NR^4AR^4B en el que R^4A y R^4B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1 ,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; alquilo C^1-4 sustituido con OH; cicloalquilo C^3-6; cicloalquiloxi C^3-6; alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C^1-4 alquilo C ^1-4; o

(iii) un heterociclilo de 8 a 10 miembros bicíclico parcialmente saturado seleccionado del grupo que consiste en 2,3-dihidro-1-benzofuranilo; 2H-cromenilo; 3,4-dihidro-2H-cromenilo; 2,3-dihidro-1 H-indolilo opcionalmente sustituido en la posición 1 con alquilo C^1-4, metilsulfonilo, 1 -acetilo o fluoroacetilo; 2,2-difluoro-1,3-benzodioxolilo; 1,3-benzodioxolilo opcionalmente sustituido con un sustituyente metilo; 3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxazinilo opcionalmente sustituido con alquilo C^1-4; 5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridinilo; 5,6,7,8-tetrahidroquinolinilo opcionalmente sustituido con un sustituyente halo; y 2,3-dihidropirazolo[5,1-b][1,3]oxazolilo; o

(iv) un heteroarilo de 9 a 10 miembros bicíclico seleccionado del grupo que consiste en 1-benzofuranilo; 1-benzotiofenilo; 1 H-indolilo; 1,3-benzoxazolilo; 1,3-benzotiazolilo; indolizinilo; 1H-bencimidazolilo; imidazo[1,2-a] piridinilo; pirazolo[1,5-a]piridinilo; 1H-tieno[2,3-c]pirazolilo; imidazo[2,1-b]tiazolilo; pirrolo[2,3-c]piridinilo; tieno[3,2-b] piridinilo; quinolinilo; isoquinolinilo; quinoxalinilo; 1,8-naftiridinilo; y 1,6-naftiridinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo; OH; NR^5AR^5B en el que R^5A y R^5B se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente;

o un N-óxido, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que

R³ es Ar o Het; en el que

Ar representa fenilo opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; CN; OH; alquilo C^1-6 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; alquilo C ^1-6 sustituido con CN; cicloalquilo C^3-6; y alquiloxi C^1-6 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente;

Het representa

(i) un heteroarilo de 5 miembros seleccionado del grupo que consiste en 1 H-pirrolilo; tienilo; furanilo; 1 H-pirazolilo; 1H-imidazolilo; 1,2-oxazolilo; 1,3-oxazolilo; y tiazolilo; cada uno puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; NR^{3 a}R^3b en el que R^3a y R^3b se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; y furan-2-ilo; o

(ii) un heteroarilo de 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en piridilo, pirimidinilo, pirazinilo y piridazinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; OH; CN; NR^{4 a}R^4b en el que R^4a y R^4b se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; cicloalquilo C^3-6; cicloalquiloxi C^3-6; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; o

(iii) un heterociclilo de 8 a 10 miembros bicíclico parcialmente saturado seleccionado del grupo que consiste en 2,3-dihidro-1-benzofuranilo; 2H-cromenilo; 3,4-dihidro-2H-cromenilo; 2,3-dihidro-1 H-indolilo opcionalmente sustituido en la posición 1 con alquilo C^1-4, metilsulfonilo, 1-acetilo o fluoroacetilo; 2,2-difluoro-1,3-benzodioxolilo; 1,3-benzodioxolilo opcionalmente sustituido con un sustituyente metilo; 5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridinilo; 5,6,7,8-tetrahidroquinolinilo opcionalmente sustituido con un sustituyente halo; y 2,3-dihidropirazolo[5,1-b][1,3]oxazolilo; o (iv) un heteroarilo de 9 a 10 miembros bicíclico seleccionado del grupo que consiste en 1-benzofuranilo; 1-benzotiofenilo; 1 H-indolilo; 1,3-benzoxazolilo; 1,3-benzotiazolilo; indolizinilo; 1H-bencimidazolilo; imidazo[1,2-a]piridinilo; pirazolo[1,5-a]piridinilo; 1H-tieno[2,3-c]pirazolilo; tieno[3,2-b]piridinilo; quinolinilo; 1,8-naftiridinilo; y 1,6-naftiridinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo; OH; NR^{3 a}R^3b en el que R^3a y R^3b se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente;

o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que R^A es CH³ o CHF².

4. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R^B es (a) o (c).

5. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R³ es Het.

6. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R³ es

(i) un heteroarilo de 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en piridilo, pirimidinilo, pirazinilo y piridazinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en halo; OH; CN; NR^{4 a}R^4b en el que R^4a y R^4b se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; cicloalquilo C^3-6; cicloalquiloxi C^3-6; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; o

(ii) un heteroarilo de 9 a 10 miembros bicíclico seleccionado del grupo que consiste en 1-benzofuranilo; 1-benzotiofenilo; 1 H-indolilo; 1,3-benzoxazolilo; 1,3-benzotiazolilo; indolizinilo; 1H-bencimidazolilo; imidazo[1,2-a]piridinilo; pirazolo[1,5-a]piridinilo; 1H-tieno[2,3-c]pirazolilo; tieno[3,2-b]piridinilo; quinolinilo; 1,8-naftiridinilo; y 1,6-naftiridinilo; cada uno de ellos puede estar opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en halo; OH; NR^{3 a}R^3b en el que R^3a y R^3b se selecciona cada uno independientemente de H y CH³ ; alquilo C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente; y alquiloxi C^1-4 opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes halo seleccionados independientemente.

7. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que tiene fórmula (I-a) o (I-b)

8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el compuesto es

o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

9. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, para su uso como medicamento.

11. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, para su uso en el tratamiento o prevención de un trastorno del sistema nervioso central seleccionado del grupo de trastornos y afecciones psicóticas; trastornos de ansiedad; trastornos del movimiento; drogadicción; trastornos del estado de ánimo; trastornos neurodegenerativos; trastornos o afecciones que comprenden como síntoma una deficiencia en la atención y/o las funciones intelectuales; trastornos relacionados con la adquisición y consolidación de la memoria; apoplejía; y trastorno autista.

12. Un compuesto o una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que los trastornos psicóticos se seleccionan del grupo de esquizofrenia; trastorno esquizofreniforme; trastorno esquizoafectivo; trastorno delirante; trastorno psicótico inducido por sustancias; trastornos de la personalidad del tipo paranoide; y trastorno de la personalidad del tipo esquizoide;

los trastornos de ansiedad se seleccionan del grupo de trastorno de pánico; agorafobia; fobia específica; fobia social; trastorno obsesivo-compulsivo; trastorno de estrés postraumático; trastorno de estrés agudo; y trastorno generalizado de ansiedad;

los trastornos del movimiento se seleccionan del grupo de enfermedad de Huntington y discinesia; enfermedad de Parkinson; síndrome de las piernas inquietas y temblor hereditario; síndrome de Tourette y otros trastornos de tic nervioso;

los trastornos relacionados con sustancias se seleccionan del grupo de alcoholismo; alcoholismo agudo; abstinencia alcohólica; delirio de abstinencia alcohólica; trastorno psicótico inducido por alcohol; anfetaminomanía; abstinencia de anfetaminas; cocainomanía; abstinencia de cocaína; nicotinomanía; abstinencia de nicotina; dependencia de opioides y abstinencia de opioides;

los trastornos del estado de ánimo se seleccionan de depresión; manía; trastorno bipolar I, trastorno bipolar II; trastorno ciclotímico; trastorno distímico; trastorno depresivo mayor; depresión resistente a tratamiento; y trastorno del estado de ánimo inducido por sustancias;

los trastornos neurodegenerativos se seleccionan del grupo de enfermedad de Parkinson; enfermedad de Huntington; demencia; enfermedad de Alzheimer; demencia multiinfarto; demencia relacionada con SIDA o demencia frontotemporal;

los trastornos o afecciones que comprenden como síntoma una deficiencia en la atención y/o las funciones intelectuales se seleccionan del grupo de demencia asociada con enfermedad de Alzheimer; demencia multiinfarto; demencia debida a enfermedad por cuerpos de Lewy; demencia alcohólica o demencia persistente inducida por sustancias; demencia asociada con tumores intracraneales o traumatismo cerebral; demencia asociada con enfermedad de Huntington; demencia asociada con enfermedad de Parkinson; demencia relacionada con SIDA; demencia debida a enfermedad de Pick; demencia debida a enfermedad de Creutzfeldt-Jakob; delirio; trastorno amnésico; trastorno de estrés postraumático; apoplejía; parálisis supranuclear progresiva; retraso mental; un trastorno del aprendizaje; trastorno por déficit de atención con hiperactividad (ADHD); deterioro cognitivo leve; síndrome de Asperger; deterioro cognitivo senil; y deterioro cognitivo relacionado con la percepción, la concentración, el aprendizaje o la memoria;

los trastornos relacionados con la adquisición y consolidación de la memoria se seleccionan de trastornos de la memoria.

13. Un proceso para preparar una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 9, caracterizado por que se mezcla íntimamente un vehículo farmacéuticamente aceptable con una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

14. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 en combinación con un agente farmacéutico adicional para su uso en el tratamiento o prevención de una afección citada en una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 12.

15. Un producto que comprende

(a) un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8; y

(b) un agente farmacéutico adicional,

como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento o prevención de una afección citada en una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 12.